TW202342530A

TW202342530A - 多特異性抗體及其用途

Info

Publication number: TW202342530A
Application number: TW112107382A
Authority: TW
Inventors: 麗塔黛安艾戈斯汀李; 詹姆士瑞森納艾波葛; 亞力山德麥可蘇佛德巴榮; 艾瑞克馬修班尼特; 萊爾德布倫; 陳挺; 艾倫麥可迪安多納; 阿爾納伯德; 理查李三世傑塞克; 芳金; 馬里昂泰瑞莎卡賽安; 馬修艾里斯特拉姆伯特; 金柏莉安馬奎特; 維吉尼麥可瑪納斯; 德巴爾托洛潔西卡哈萬明; 尼可拉斯尼可莫麗莎皮奇; 理查湯瑪斯席爾頓; 理奧德米拉特奇斯泰科法; 鐘曉天
Original assignee: 美商輝瑞大藥廠
Priority date: 2022-03-03
Filing date: 2023-03-01
Publication date: 2023-11-01
Also published as: WO2023166418A2; WO2023166420A1; US20240117030A1; WO2023166418A3; TW202342531A

Abstract

本發明係關於特異性結合至IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者的抗體。本發明進一步關於結合至IL-4、IL-13、IL-33或TSLP中之一者的抗體。本發明進一步關於特異性結合至IL-4及IL-13以及至少一種其他目標之多特異性抗體。本發明係關於結合IL-4、IL-13、及IL-33、TSLP或p40中之一者之多特異性抗體。本發明亦關於相關分子，例如編碼此類抗體或多特異性抗體之核酸、組合物及相關方法，例如用於產生及純化此類抗體及多特異性抗體之方法，及其在診斷及治療中之用途。

Description

多特異性抗體及其用途

本發明係關於特異性結合至IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者的抗體及組合物、方法及其用途，包括使用本發明抗體治療一或多種選自由以下組成之群的疾病或病狀：異位性皮膚炎、異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病(Behcet's disease)、痛風、阿茲海默氏症(Alzheimer's disease)、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病(Crohn's disease)、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎，包括治療及預防一或多種與各別疾病或病狀相關之症狀。

IL-4及IL-13為免疫活化之關鍵驅動因子，引起異位性病症之發炎、水腫、纖維化及瘙癢(48、49)。IL-4及IL 13經由共同受體與細胞相互作用，該常見受體由在單核球、纖維母細胞、角質細胞、上皮細胞、平滑肌細胞及其他非淋巴細胞類型上表現之IL-4Rα及IL-13Rα1 (II型受體)組成(29)。IL-4亦可經由T細胞、B細胞及單核球上所表現之IL-4Rα/IL-2Rγ共同(I型受體)活化細胞。IL-4Rα與任一受體之接合活化STAT6以誘導特異性相關基因(29)。儘管IL-4及IL-13可接合共同受體及信號傳導路徑，但細胞介素可用性、定位及受體結合親和力之差異引起不同反應概況(49、50)。進一步分化可由I型受體(IL-4Rα/γc) (其驅動經由IL-4而非IL-13驅使Th2分化)(51)，及細胞表面「誘餌」IL-13Rα2 (其介導IL-13而非IL-4之中和及耗竭)(52、53)產生。

IL-4及IL-13在異位性疾病中之作用得到了基因關聯、臨床前模型之廣泛驗證及IL-4及IL-13中和在異位性適應症範圍內的臨床功效的支持(48)。抗IL-4Rα Dupixent®度匹魯單抗(dupilumab)；Sanofi/Regeneron)阻斷對兩種細胞介素之反應，且經批准用於治療中度-重度異位性皮膚炎(AD)、哮喘及患有鼻息肉之慢性鼻竇炎，其證明此等適應症中IL-4及IL-13之活性(54-56)。抗IL-13 mAb來瑞組單抗(lebrikizumab) (Lilly) (57)及曲羅蘆單抗(tralokinumab) (Adbry™；Leo Pharma) (58、59)亦已表明AD之功效，且在哮喘中之活性更有限(60、61)。抗IL-13 mAb在AD中之有效性表明IL-13中和在Dupixent®之功效中起主要作用。儘管如此，可獲得的後設分析(62、63)表明，Dupixent®具有優於來瑞組單抗及曲羅蘆單抗之優良活性，與IL-4阻斷之附加益處一致。

IL-33在細胞壞死期間或在組織受損時被動地釋放，表明其可充當一種報警素，在感染、物理應力或創傷期間內皮或上皮細胞損傷之後提醒免疫系統。IL-33經由其受體ST2，經由活化過敏性發炎相關嗜伊紅血球、嗜鹼性球、肥大細胞、巨噬細胞及第2組先天性淋巴細胞(ILC2)而在2型先天性免疫中起到重要作用(96)。

胸腺基質淋巴蛋白(TSLP)係一種上皮細胞介素，對炎症的引發及持續至關重要。Tezspire® (特澤佩魯單抗(Tezepelumab), Amgen)為經批准用於治療哮喘之TSLP抗體。

IL-4及IL-13主要連接至2型效應子反應。相比之下，IL-12及IL-23分別與1型及3型(Th17)反應有關聯(77)。IL-12驅動T輔助細胞1 (Th1)細胞分化及干擾素-γ (IFN-γ)產生，而IL-23促進Th17細胞之維持，產生IL-17及其他3型細胞介素。1型及3型反應已與一系列人類炎症及自體免疫疾病有關聯。經由許多藥物批准(75)確立含IL-12p40之細胞介素之因果作用(IL-12p40在下文中簡稱為p40)。p40中和劑Stelara® (烏司奴單抗(ustekinumab)；Janssen)中和IL-12及IL-23兩者，且經批准用於治療斑塊型牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎。IL-23-選擇性抗IL-23p19阻斷劑Tremfya® (古塞庫單抗(guselkumab); Janssen)、Skyrizi® (瑞莎珠單抗(risankizumab); Boehringer Ingelheim/AbbVie)及Ilumya® (替拉珠單抗(tildrakizumab); Sun Pharmaceutical)經審批用於治療一系列牛皮癬性病症。

儘管度匹魯單抗、特澤佩魯單抗、古塞庫單抗、瑞莎珠單抗及替拉珠單抗有效，但對於以炎症反應為特徵的眾多疾病來說，仍然需要安全有效的治療劑，以解決廣泛的致病機制。

本文提供特異性結合至IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者的抗體(包括其抗原結合片段)，以及其單體及多聚抗體、相關核酸、用途及其相關方法。本發明亦提供製得、製備及產生結合至IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者的抗體的製程。本發明抗體適用於診斷、預防或治療由IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40活性中之一或多者介導或與其相關之病症或病狀中之一或多者，該等病症或病狀包括(但不限於)異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。本發明進一步涵蓋抗體之表現及包含本發明抗體之組合物的製備及製造，諸如使用該等抗體之藥劑。

亦提供編碼結合IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者之抗體的聚核苷酸。亦提供編碼抗體重鏈或輕鏈或二者之聚核苷酸。提供表現抗體之宿主細胞。提供使用該等抗體之治療方法。此類方法包括(但不限於)一或多種治療疾病的方法或預防疾病的方法，該等疾病與IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現中之一或多者相關或由IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40結合中之一或多者介導：異位性皮膚炎、異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。

藉由參考以下對本發明之實施例及其中所包括之實例之詳細描述可更容易理解本發明。應理解，本發明不限於特定的製造方法，其當然可有所變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的且並不意欲為限制性的。熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗確定本文所描述之本發明特定實施例的許多等效物。該等等效物意欲由以下實施例(E)涵蓋。

E1. 一種特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 73之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO:78之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 63之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 71之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (iii) SEQ ID NO: 80之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 81之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E2. 一種特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 73之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 78之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E3. 一種特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列。 E4. 如E1至E3中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之IL33-VH構架序列：DP47、DP48、DP50、DP51、DP54及DP77。 E5. 如E1至E4中任一項之抗體，其包含衍生自人類DP54生殖系序列之IL33-VH構架序列。 E6. 如E1至E5中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列的IL33-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。 E7. 如E1至E6中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DPK9序列之IL33-VL構架序列。 E8. 如E1至E7中任一項之抗體，其包含IL33-VL構架序列及IL33-VH構架序列98%、99%或100%序列，且其中該IL33-VL構架序列及該IL33-VH構架序列中之一者或兩者與其來源的人類生殖系序列至少66%、76%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%一致。 E9. 如E1至E8中任一項之抗體，其包含IL33-VL構架序列及IL33-VH構架序列，且其中該IL33-VL構架序列或該IL33-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列一致。 E10. 如E1至E9中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 73至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL33-VH序列。 E11. 如E1至E10中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 78至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL33-VL序列。 E12. 如E1至E11中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 73之IL33-VH序列及SEQ ID NO: 78之IL33-VL；或 (ii) SEQ ID NO: 63之IL33-VH序列及SEQ ID NO: 71之IL33-VL；或 (iii) SEQ ID NO: 80之IL33-VH序列及SEQ ID NO: 81之IL33-VL。 E13. 如E1至E12中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 73一致之IL33-VH序列及與SEQ ID NO: 78一致之IL33-VL。 E14. 如E1至E13中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 202之核酸序列編碼之IL33-VH序列。 E15. 如E1至E14中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 203之核酸序列編碼之IL33-VL序列。 E16. 如E1至E15中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列。 E17. 如E1至E16中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列。 E18. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列。 E19. 如E1至E18之抗體，其中該抗體以小於選自由以下組成之群之值的K _D結合人類IL-33：100pM、50pM、40pM、30pM、25pM、20pM、15pM及10pM、5pM、2pM、1pM、750fM、500fM及250fM。 E20. 如E1至E19之抗體，其中該抗體以約或小於15 pM值之K _D結合人類IL-33。 E21. 如E1至E20之抗體，其中該抗體以約或小於1 pM值之K _D結合人類IL-33。 E22. 如E1至E21之抗體，其中該抗體以約或小於250 fM之值之K _D結合人類IL-33。 E23. 如E19至E22中任一項之抗體，其中K _D值藉由動力學排除分析量測。 E24. 如E19至E22中任一項之抗體，其中K _D值藉由表面電漿子共振(SPR)量測。 E25. 如E1至E24之抗體，其中在HEK Blue® IL-33中和SEAP分析中IL-33 IC ₅₀小於20 pM。 E26. 如E1至E25之抗體，其中在HEK Blue® IL-33中和SEAP分析中IL-33 IC ₅₀小於15 pM。 E27. 如E25至E26之抗體，其中HEK Blue® IL-33中和SEAP分析在37℃下進行20小時。 E28. 如E1至E27之抗體，其中IL-33 IC ₅₀小於15 pM，且藉由ELISA在用IL-33及IL-12處理之人類全血分析中量測IFNγ來計算。 E29. 如E28之抗體，其中該人類全血分析在37℃下進行22小時。 E30. 如E1至E29之抗體，其中該抗體結合食蟹獼猴IL-33。 E31. 如E1至E30之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-33之結合K _D在該抗體與人類IL-33之結合K _D之3個數量級內。 E32. 如E1至E31之抗體，其進一步包含恆定重鏈域(IL33-CH1)及恆定輕鏈域(IL33-CL)。 E33. 如E32之抗體，其中IL33-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。 E34. 如E32至E33之抗體，其中IL33-CH1包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E35. 如E32至E34之抗體，其中IL33-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。 E36. 如E32至E35之抗體，其中IL33-CL包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E37. 如E32至E36之抗體，其中IL33-CH1連接至IL33-VL，且IL33-CL連接至形成IL33-結合域-交換Fab域(IL33-xFab)之IL33-VH。 E38. 如E32至E37之抗體，其中IL33-CH1連接至IL33-VH，且IL33-CL連接至形成IL-33結合Fab域(IL33-Fab)之IL33-VL。 E39. 如E1至E38中任一項之抗體，其包含有包含第一Fc鏈及第二Fc鏈之抗體Fc域。 E40. 如E39之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之Fc域。 E41. 如E40之抗體，其中Fc域為IgG ₁之Fc域。 E42. 如E40之抗體，其中第一Fc鏈或第二Fc鏈之N端連接至IL33-CH1域之C端。 E43. 如E41至E42之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈自N端至C端各自包含：鉸鏈區、CH2區及CH3區。 E44. 如E43之抗體，其中鉸鏈區包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。 E45. 如E44之抗體，其中鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 7之序列。 E46. 如E44之抗體，其中第一Fc鏈上之鉸鏈區及第二Fc鏈上之鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。 E47. 如E43至E46之抗體，其中CH2區包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E48. 如E43至E47之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含選自由以下組成之群的一對序列： (i) SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 9； (ii) SEQ ID NO:111及SEQ ID NO: 106； (iii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iv) SEQ ID NO:114及SEQ ID NO: 117； (v) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (vi) SEQ ID NO:139及SEQ ID NO: 141；及 (vii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E49. 如E48之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區各自包含根據SEQ ID NO: 9之序列。 E50. 如E48之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含一對根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之序列。 E51. 如E1至E50中任一項之抗體，其包含攜帶IL33-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 143組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E52. 如E1至E51中任一項之抗體，其包含攜帶IL33-VH的多肽，該多肽包含選自由SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 143組成之群的胺基酸序列。 E53. 如E52至E53中任一項之抗體，其中攜帶IL33-VH的多肽包含根據SEQ ID NO: 74之序列。 E54. 如E52至E52中任一項之抗體，其中攜帶IL33-VH的多肽包含根據SEQ ID NO: 132之序列。 E55. 如E32至E54之抗體，其中IL33-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 113組成之群的胺基酸序列。 E56. 如E32至E55之抗體，其中IL33-CL包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列。 E57. 如E1至56中任一項之抗體，其包含攜帶IL33-VL的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 144及SEQ ID NO: 145組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E58. 如E1至E57中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 79之胺基酸序列的攜帶IL33-VL的多肽。 E59. 如E1至E58之抗體，其包含SEQ ID NO: 74之攜帶IL33-VH的多肽及SEQ ID NO: 79之攜帶IL33-VL的多肽。 E60. 如E1至E59之抗體，其包含SEQ ID NO: 132之攜帶IL33-VH的多肽及SEQ ID NO: 79之攜帶IL33-VL的多肽。 E61. 如E1至E60中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之攜帶IL33-VH的多肽序列。 E62. 如E1至E61中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之攜帶IL33-VL的多肽序列。 E63. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之攜帶IL33-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之攜帶IL33-VL的多肽序列。 E64. 一種特異性結合IL-33之經分離之抗體，其包含選自表82、85及87中之一或多者的抗體之CDR。 E65. 一種特異性結合IL-33之經分離之抗體，其包含選自表82、84及87中之一或多者的抗體之VH及VL。 E66. 一種特異性結合IL-33之經分離之抗體，其選自表82、84及87中之一或多者。 E67. 如E1至65中任一項之抗體，其用作藥劑。 E68. 如E67之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化。 E69. 如E67至E68中任一項之抗體，其中該用途用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E70. 如E67至E69中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E71. 如E67至E69中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E72. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E1至E71之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E73. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E1至E71中任一項之抗體或如E72之醫藥組合物。 E74. 如E73之方法，其中該病狀係選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化。 E75. 如E73至E74中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E76. 如E73至E75中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E77. 一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 93之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (iv) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 214之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (v) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (vi) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (vii) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 223之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E78. 一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E79. 一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含 (i) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列； (ii) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列； (iii) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列； (iv) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列； (v) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列；或 (vi) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列。 E80. 如E77至E79中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之TSLP-VH構架序列：DP47、DP49、DP50、DP54及DP53。 E81. 如E77至E80中任一項之抗體，其包含衍生自人類DP50生殖系序列之TSLP-VH構架序列。 E82. 如E77至E81中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列之TSLP-VL構架序列：DPL16、DPL23、V2-6、V2-8、V2-14及V2-17。 E83. 如E77至E82中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系V2-14序列之TSLP-VL構架序列。 E84. 如E77至E84中任一項之抗體，其包含TSLP-VL構架序列及TSLP-VH構架序列，且其中該TSLP-VL構架序列或該TSLP-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列至少66%、76%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E85. 如E77至E84中任一項之抗體，其包含TSLP-VL構架序列及TSLP-VH構架序列，且其中該TSLP-VL構架序列或該TSLP-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列一致。 E86. 如E77至E85中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 92至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的TSLP-VH序列。 E87. 如E77至E86中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 94至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的TSLP-VL序列。 E88. 如E77至E86中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 94之TSLP-VL； (ii) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 93之TSLP-VL； (iii) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 213之TSLP-VL； (iv) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 214之TSLP-VL； (v) SEQ ID NO: 221之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 215之TSLP-VL； (vi) SEQ ID NO: 221之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 99之TSLP-VL；或 (vii) SEQ ID NO: 221之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 224之TSLP-VL。 E89. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 92一致之TSLP-VH序列及與SEQ ID NO: 94一致之TSLP-VL。 E90. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 92一致之TSLP-VH序列及與SEQ ID NO: 93一致之TSLP-VL。 E91. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 92一致之TSLP-VH序列及與SEQ ID NO: 213一致之TSLP-VL。 E92. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 92一致之TSLP-VH序列及與SEQ ID NO: 214一致之TSLP-VL。 E93. 如E77至E89中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 205之核酸序列編碼之TSLP-VL序列。 E94. 如E91之抗體，其包含由SEQ ID NO: 217之核酸序列編碼之TSLP-VL序列。 E95. 如E92中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 218之核酸序列編碼之TSLP-VL序列。 E96. 如E77至E95中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 204之核酸序列編碼之TSLP-VH序列。 E97. 如E77至E96中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列。 E98. 如E77至E89中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之TSLP-VL序列。 E99. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之TSLP-VL序列。 E100. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-______之質體編碼之TSLP-VL序列。 E101. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-______之質體編碼之TSLP-VL序列。 E102. 如E77至E88中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-______之質體編碼之TSLP-VL序列。 E103. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-______之質體編碼之TSLP-VL序列。 E104. 如E77至E102中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中IC ₅₀小於10 pM。 E105. 如E77至E104中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中IC ₅₀小於7 pM。 E106. 如E77至E105中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中IC ₅₀小於6 pM。 E107. 如E77至E106之抗體，其中該抗體之熔融溫度為68℃。 E108. 如E77至E107之抗體，其中pH 3.4保持Δ%HMMS小於5，使得該pH 3.4保持Δ%HMMS定義為在該抗體在室溫下在pH 3.4下培育5小時之後由降解而產生的高分子量物質的百分比與在該抗體在室溫下在pH 7.2下培育5小時之後由降解而產生的高分子量物質的百分比之間的差。 E109. 如E77至E108之抗體，其中該抗體的低pH 3.4保持Δ%HMMS小於1。 E110. 如E77至E109之抗體，其中該抗體的低pH 3.4保持Δ%HMMS小於0.1。 E111. 如E77至E110之抗體，其進一步包含恆定重鏈域(TSLP-CH1)及恆定輕鏈域(TSLP-CL)。 E112. 如E111之抗體，其中TSLP-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。 E113. 如E111至E112之抗體，其中TSLP-CH1包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E114. 如E111至E113之抗體，其中TSLP-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。 E115. 如E111至E114之抗體，其中TSLP-CL包含根據SEQ ID NO: 95之序列。 E116. 如E111至E115之抗體，其中TSLP-CH1連接至TSLP-VL，且TSLP-CL連接至形成TSLP-結合域-交換Fab域(TSLP-xFab)之TSLP-VH。 E117. 如E111至E115之抗體，其中TSLP-CH1連接至TSLP-VH，且TSLP-CL連接至形成TSLP結合Fab域(TSLP-Fab)之TSLP-VL。 E118. 如E77至E117中任一項之抗體，其包含有包含第一Fc鏈及第二Fc鏈之Fc域。 E119. 如E118之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之Fc域。 E120. 如E118至E119中任一項之抗體，其中Fc域為IgG ₁之Fc域。 E121. 如E118至E120之抗體，其中第一Fc鏈或第二Fc鏈之N端連接至TSLP-CH1域之C端。 E122. 如E118至E121之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈各自自N端至C端包含：鉸鏈區、CH2區及CH3區。 E123. 如E122之抗體，其中鉸鏈區包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。 E124. 如E122至E123之抗體，其中鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 7之序列。 E125. 如E122至E123之抗體，其中第一Fc鏈上之鉸鏈區及第二Fc鏈上之鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。 E126. 如E122至E123之抗體，其中CH2區包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E127. 如E122至E126之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含選自由以下組成之群的一對序列： (i) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (ii) SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 9； (iii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (iv) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (v) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (vi) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E128. 如E127之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區各自包含根據SEQ ID NO: 9之序列。 E129. 如E128之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區包含一對根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之序列。 E130. 如E77至E129中任一項之抗體，其包含攜帶TSLP-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 165、SEQ ID NO: 222組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E131. 如E77至E130中任一項之抗體，其包含攜帶TSLP-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 165及SEQ ID NO: 222組成之群的胺基酸序列。 E132. 如E77至E131中任一項之抗體，其中攜帶TSLP-VH的多肽包含根據SEQ ID NO: 97之序列。 E133. 如E77至E131中任一項之抗體，其中攜帶TSLP-VH的多肽包含根據SEQ ID NO: 165之序列。 E134. 如E77至E133中任一項之抗體，其包含攜帶TSLP-VL的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 216及SEQ ID NO: 224組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E135. 如E77至E134中任一項之抗體，其包含攜帶TSLP-VL的多肽，該多肽包含選自由SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 216及SEQ ID NO: 224組成之群的序列。 E136. 如E77至E135中任一項之抗體，其包含有包含根據SEQ ID NO: 99之序列的攜帶TSLP-VL的多肽。 E137. 如E77至E135中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E138. 如E77至E135中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E139. 如E77至E135中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E140. 如E77至E139中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列。 E141. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E142. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E143. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。 E144. 一種經由p40結合域特異性結合至p40之經分離之抗體，且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由IL-4、IL-13、IL-33及TSLP組成之群的抗原的額外抗原結合域，且其中該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其包含SEQ ID NO: 169之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 175之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E145. 一種經由p40結合域特異性結合至p40之經分離之抗體，且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由IL-4、IL-13、IL-33及TSLP組成之群的抗原的額外抗原結合域，且其中該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列。 E146. 如E144至E145中任一項之抗體，其中該抗體進一步包含特異性結合至IL-4之IL-4結合域及特異性結合至IL-13之IL-13結合域中之一或兩者。 E147. 如E144至E146中任一項之抗體，其中p40結合域包含衍生自選自由DP3、DP7、DP73、DP75及DP88組成之群之人類生殖系VH序列的p40-VH構架序列。 E148. 如E144至E147中任一項之抗體，其中p40結合域包含衍生自人類DP73生殖系序列之p40-VH構架序列。 E149. 如E144至E148中任一項之抗體，其中p40結合域包含衍生自選自由DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9組成之群的人類生殖系VL序列之p40-VL構架序列。 E150. 如E144至E149中任一項之抗體，其中p40結合域包含衍生自人類生殖系DPK7序列之p40-VL構架序列。 E151. 如E144至E150中任一項之抗體，其中p40結合域包含p40-VL構架序列及p40-VH構架序列，且其中p40結合域p40-VL構架序列或p40結合域p40-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列至少66%、76%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E152. 如E144至E151中任一項之抗體，其中p40結合域包含p40-VL構架序列及p40-VH構架序列，且其中p40-VL構架序列或p40-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列一致。 E153. 如E144至E152中任一項之抗體，其中p40結合域包含與SEQ ID NO: 169至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的p40-VH。 E154. 如E144至E153中任一項之抗體，其中p40結合域包含與SEQ ID NO: 175至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的p40-VL。 E155. 如E144至E154中任一項之抗體，其中p40結合域包含SEQ ID NO: 169之p40-VH及SEQ ID NO: 175之p40-VL。 E156. 如E144至E155中任一項之抗體，其中p40結合域包含由SEQ ID NO: 206之核酸序列編碼之p40-VH序列。 E157. 如E145至E156中任一項之抗體，其中p40結合域包含由SEQ ID NO: 207之核酸序列編碼之p40-VL序列。 E158. 如E144至E157中任一項之抗體，其中p40結合域包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列。 E159. 如E144至E158中任一項之抗體，其中p40結合域包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列。 E160. 如E144至E159之抗體，其進一步包含恆定重鏈域(p40-CH1)及恆定輕鏈域(p40-CL)。 E161. 如E160之抗體，其中p40-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。 E162. 如E160至E161之抗體，其中p40-CH1包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E163. 如E160至E162之抗體，其中p40-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。 E164. 如E160至E163之抗體，其中p40-CL包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E165. 如E160至E164之抗體，其中p40-CH1連接至p40-VL，且p40-CL連接至形成p40-結合域-交換Fab域(p40-xFab)的p40-VH。 E166. 如E160至E164之抗體，其中p40-CH1連接至p40-VH，且p40-CL連接至形成p40結合Fab域(p40-Fab)的p40-VL。 E167. 如E144至E166中任一項之抗體，其包含有包含第一Fc鏈及第二Fc鏈之抗體Fc域。 E168. 如E167之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之Fc域。 E169. 如E168之抗體，其中Fc域為IgG ₁之Fc域。 E170. 如E167至E169中任一項之抗體，其中第一Fc鏈或第二Fc鏈之N端連接至p40-CH1域之C端。 E171. 如E167至E170之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈自N端至C端各自包含：鉸鏈區、CH2區及CH3區。 E172. 如E171之抗體，其中鉸鏈區包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。 E173. 如E171至E172之抗體，其中第一Fc鏈上之鉸鏈區及第二Fc鏈上之鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。 E174. 如E171至E172之抗體，其中CH2區包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E175. 如E171至E174之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含選自由以下組成之群的一對序列： (i) SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 9； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (iii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iv) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (v) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (vi) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E176. 如E171至E175之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區各自包含根據SEQ ID NO: 9之序列。 E177. 如E171至E176之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區包含一對根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之序列。 E178. 如E144至E177中任一項之抗體，其包含攜帶p40-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 185及SEQ ID NO: 186組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E179. 如E144至E178中任一項之抗體，其包含攜帶p40-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 185及SEQ ID NO: 186組成之群的胺基酸。 E180. 如E144至E179中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 186之胺基酸序列之攜帶p40-VH的多肽。 E181. 如E144至E180中任一項之抗體，其包含攜帶p40-VL的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 182及SEQ ID NO: 183組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E182. 如E144至E181中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 176之胺基酸序列之攜帶p40-VL的多肽。 E183. 如E144至E182中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之攜帶p40-VH的多肽序列。 E184. 如E144至E183中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之攜帶p40-VL的多肽序列。 E185. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之攜帶p40-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之攜帶p40-VL的多肽序列。 E186. 一種結合至p40及IL-4、IL-13中之一或兩者的經分離之抗體，其包含選自表86及表87中之一或多者的抗體之CDR。 E187. 一種結合至p40及IL-4、IL-13中之一或兩者的經分離之抗體，其包含選自表86及表87中之一或多者的抗體之VH及VL。 E188. 一種結合至p40及IL-4、IL-13中之一或兩者的經分離之抗體，其選自表86及表87中之一或多者。 E189. 如E144至E188中任一項之抗體，其用作藥劑。 E190. 如E189之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E191. 如E189至E190中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、異位性皮膚炎、哮喘(重度)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。 E192. 如E189至E191中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E193. 如E189至E191中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E194. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E144至E193之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E195. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E144至E193中任一項之抗體或如E194之醫藥組合物。 E196. 如E195之方法，其中該病狀選自由以下組成之群：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E197. 如E195至E196中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E198. 如E195至E196中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E199. 一種特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 26之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 19之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 28之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 29之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 30之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E200. 一種特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其包含SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 26之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E201. 一種特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。 E202. 如E199至E201中任一項之抗體，其包含衍生自選自由DP26、DP27、DP28及DP76組成之群之人類生殖系VH序列的IL4-VH構架序列。 E203. 如E199至E202中任一項之抗體，其包含衍生自人類DP76生殖系序列之IL4-VH構架序列。 E204. 如E199至E203中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列的IL4-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8、DPK9及DPK24。 E205. 如E199至E204中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DPK9序列之IL4-VL構架序列。 E206. 如E199至E205中任一項之抗體，其包含IL4-VL構架序列及IL4-VH構架序列，且其中IL4-VL構架序列或IL4-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列至少66%、76%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E207. 如E199至E206中任一項之抗體，其包含IL4-VL構架序列及IL4-VH構架序列，且其中IL4-VL構架序列或IL4-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列一致。 E208. 如E199至E207中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 22至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL4-VH序列。 E209. 如E199至E208中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 20至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL4-VL序列。 E210. 如E199至E209中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 26之IL4-VL； (ii) SEQ ID NO: 19之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 20之IL4-VL； (iii) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 20之IL4-VL； (iv) SEQ ID NO: 28之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 29之IL4-VL；或 (v) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 30之IL4-VL。 E211. 如E199至E210中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 22一致之IL4-VH序列及與SEQ ID NO: 26一致之IL4-VL序列。 E212. 如E199至E211中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 200之核酸序列編碼之IL4-VH序列。 E213. 如E199至E212中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 201之核酸序列編碼之IL4-VL序列。 E214. 如E199至E213中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列。 E215. 如E199至E214中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列。 E216. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列。 E217. 如E199至E216之抗體，其中該抗體以小於選自由約10 pM、5 pM、1 pM及800 fM組成之群之值的K _D結合人類IL-4。 E218. 如E199至E217之抗體，其中該抗體以小於約1 pM之值的K _D結合人類IL-4。 E219. 如E199至E218中任一項之抗體，其中K _D值藉由動力學排除分析量測。 E220. 如E199至E219之抗體，其中該抗體結合食蟹獼猴IL-4。 E221. 如E199至E220之抗體，其中該抗體不結合選自由犬、綿羊、兔、大鼠及小鼠組成之群的一或多者的IL-4。 E222. 如E199至E221之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-4之結合K _D在該抗體與人類IL-4之結合K _D之1個數量級內。 E223. 如E199至E222之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-4之結合K _D在該抗體與人類IL-4之結合K _D的兩倍差異內。 E224. 如E199至E223之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於10 pM。 E225. 如E199至E224之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 pM。 E226. 如E199至E225之抗體，其中該抗體在組胺酸-蔗糖pH 5.8緩衝液中的濃度為80 mg/mL時，在25℃下的黏度為20 cP或更低。 E227. 如E199至E226之抗體，其中該抗體在組胺酸-蔗糖pH 5.8緩衝液中的濃度為100 mg/mL時，在25℃下的黏度為20 cP或更低。 E228. 如E199至E227之抗體，其中該抗體在組胺酸-蔗糖pH 5.8緩衝液中的濃度為120 mg/mL時，在25℃下的黏度為20 cP或更低。 E229. 如E199至E228之抗體，其中該抗體包含輕鏈中殘基93處之離胺酸。 E230. 如E199至E229之抗體，其進一步包含恆定重鏈域(IL4-CH1)及恆定輕鏈域(IL4-CL)。 E231. 如E230之抗體，其中IL4-CH1包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E232. 如E230至E231之抗體，其中IL4-CL包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E233. 如E230至E232之抗體，其中IL4-CH1連接至IL4-VL，且IL4-CL連接至形成IL-4-結合域-交換Fab域(IL4-xFab)的IL-4-VH。 E234. 如E230至E232之抗體，其中IL4-CH1連接至IL4-VH，且IL4-CL連接至形成IL-4結合Fab域(IL4-Fab)的IL4-VL。 E235. 如E199至E234中任一項之抗體，其包含有包含第一Fc鏈及第二Fc鏈之Fc域。 E236. 如E235之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之Fc域。 E237. 如E235至E236之抗體，其中Fc域為IgG ₁之Fc域。 E238. 如E235至E237之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈或第二Fc鏈之N端連接至IL33-CH1域之C端。 E239. 如E235至E238之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈自N端至C端各自包含：鉸鏈區、CH2區及CH3區。 E240. 如E239之抗體或其抗原結合片段，其中鉸鏈區包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。 E241. 如E240之抗體或其抗原結合片段，其中鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 7之序列。 E242. 如E240之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈上之鉸鏈區及第二Fc鏈上之鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。 E243. 如E239至E242之抗體或其抗原結合片段，其中CH2區包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E244. 如E239至E243之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含選自由以下組成之群的一對序列： (i) SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 9； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (iii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iv) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (v) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (vi) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E245. 如E244之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區各自包含根據SEQ ID NO: 9之序列。 E246. 如E244之抗體或其抗原結合片段，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含一對根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之序列。 E247. 如E199至E246中任一項之抗體，其包含攜帶IL4-VH的多肽，該多肽包含與選自由以下組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列：SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 180及SEQ ID NO: 183。 E248. 如E199至E247中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的攜帶IL4-VH的多肽。 E249. 如E199至E241中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO8: 130之胺基酸序列的攜帶IL4-VH的多肽。 E250. 如E199至E249中任一項之抗體，其包含攜帶IL4-VL的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 109及SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 197及SEQ ID NO: 208組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E251. 如E199至E250中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的攜帶IL4-VL的多肽。 E252. 如E199至E251中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL4-VH的多肽序列。 E253. 如E199至E252中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之攜帶IL4-VL的多肽序列。 E254. 一種該抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL4-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之攜帶IL4-VL的多肽序列。 E255. 如E199至E254中任一項之抗體，其用作藥劑。 E256. 如E199至E255中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E257. 如E199至256中任一項之抗體，其中該用途用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。 E258. 如E199至257中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E259. 如E199至257中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E260. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E199至E259之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E261. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E199至E259中任一項之抗體或如E260之醫藥組合物。 E262. 如E261之方法，其中該病狀係選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化。 E263. 如E261至E262中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E264. 如E261至E263中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E265. 一種特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 51之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 54之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 44之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 46之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 49之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 68之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 57之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 59之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E266. 一種特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其包含SEQ ID NO: 51之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 54之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。 E267. 一種特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E268. 如E265至E267中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之IL13-VH構架序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77。 E269. 如E265至E268中任一項之抗體，其包含衍生自人類DP54生殖系序列之IL13-VH構架序列。 E270. 如E265至E269中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列的IL13-VL構架序列：DPK3、DPK4、DPK5、DPK8、DPK9、DPK10及DPK23。 E271. 如E265至E270中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DPK9序列之IL13-VL構架序列。 E272. 如E265至E271中任一項之抗體，其包含IL13-VL構架序列及IL13-VH構架序列，且其中該IL13-VL構架序列或該IL13-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列至少66%、76%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E273. 如E265至E272中任一項之抗體，其包含IL13-VL構架序列及IL13-VH構架序列，且其中IL13-VL構架序列或IL13-VH構架序列中之一或兩者與其來源的人類生殖系序列一致。 E274. 如E265至E273中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 51至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL13-VH。 E275. 如E265至E274中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 54至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的IL13-VL。 E276. 如E265至E275中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL； (ii) SEQ ID NO: 44之IL13-VH及SEQ ID NO: 46之IL13-VL； (iii) SEQ ID NO: 48之IL13-VH及SEQ ID NO: 49之IL13-VL； (iv) SEQ ID NO: 48之IL13-VH及SEQ ID NO: 68之IL13-VL；或 (v) SEQ ID NO: 57之IL13-VH及SEQ ID NO: 59之IL13-VL。 E277. 如E265至E276中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 51一致之IL13-VH，及與SEQ ID NO: 54一致之IL13-VL。 E278. 如E265至E277中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 198之核酸序列編碼的VH序列。 E279. 如E265至E278中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 199之核酸序列編碼的VL序列。 E280. 如E265至E279中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列。 E281. 如E265至E280中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E282. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E283. 如E265至E282之抗體，其中抗體以小於選自由以下組成之群之值的K _D結合人類IL-13：10 nM、5 nM、2 nM、1 nM、900 pM、800 pM、700 pM、600 pM、500 pM、400 pM、300 pM、250 pM、200 pM、150 pM、100 pM及60 pM。 E284. 如E265至E276之抗體，其中該抗體以小於60 pM之K _D結合人類IL-13。 E285. 如E283至E284中任一項之抗體，其中K _D值藉由動力學排除分析量測。 E286. 如E283至E285中任一項之抗體，其中K _D值藉由SPR量測。 E287. 如E265至E286之抗體，其中該抗體結合食蟹獼猴IL-13。 E288. 如E265至E287之抗體，其中該抗體不結合來自選自由犬、兔及小鼠組成之群之一或多種物種的IL-13。 E289. 如E265至E288之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-13之結合K _D在該抗體與人類IL-13之結合K _D之1個數量級內。 E290. 如E265至E289之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-13之結合K _D在該抗體與人類IL-13之結合K _D的五倍差異內。 E291. 如E265至E290之抗體，其中該抗體與食蟹獼猴IL-13之結合K _D在該抗體與人類IL-13之結合K _D的兩倍差異內。 E292. 如E265至E291之抗體，其中經藉由HT-29細胞中IL-13 pSTAT6磷酸化之中和所量測，IL-13 IC ₅₀小於100 pM。 E293. 如E265至E292之抗體，其中經在人類單核球分析中所量測，中和IL-13誘導CD23的IL-13 IC ₅₀小於20 pM。 E294. 如E265至E293之抗體，其中經在人類單核球分析中所量測，中和IL-13誘導CD23的IL-13 IC ₅₀小於15 pM。 E295. 如E265至E294之抗體，其中經在人類單核球分析中所量測，中和IL-13誘導CD23的IL-13 IC ₅₀小於12 pM。 E296. 如E265至E295之抗體，其進一步包含恆定重鏈域(IL13-CH1)及恆定輕鏈域(IL13-CL)。 E297. 如E296之抗體，其中IL13-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。 E298. 如E296至E297之抗體，其中IL13-CH1包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E299. 如E296至E298之抗體，其中IL13-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。 E300. 如E296至E299之抗體，其中IL13-CL包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E301. 如E296至E300之抗體，其中IL13-CH1連接至IL13-VL，且IL13-CL連接至形成IL-13-結合域-交換Fab域(IL13-xFab)的IL13-VH。 E302. 如E296至E301之抗體，其中IL13-CH1連接至IL13-VH，且IL13-CL連接至形成IL-13結合Fab域(IL13-Fab)之IL33-VL。 E303. 如E265至E302中任一項之抗體，其包含有包含第一Fc鏈及第二Fc鏈之Fc域。 E304. 如E303之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之Fc域。 E305. 如E303至E304之抗體，其中Fc域為IgG ₁之Fc域。 E306. 如E303至E305之抗體，其中第一Fc鏈或第二Fc鏈之N端連接至IL13-CH1域之C端。 E307. 如E303至E306之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈自N端至C端各自包含：鉸鏈區、CH2區及CH3區。 E308. 如E307之抗體，其中鉸鏈區包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。 E309. 如E307至E308之抗體，其中鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 7之序列。 E310. 如E307至E309之抗體，其中鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 102之序列。 E311. 如E307至E310之抗體，其中CH2區包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E312. 如E307至E311之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH3區包含選自由以下組成之群的一對序列： (i) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (ii) SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 9； (iii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (iv) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (v) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (vi) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E313. 如E307至E312之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區各自包含根據SEQ ID NO: 9之序列。 E314. 如E307至E312之抗體，其中第一Fc鏈上之CH3區及第二Fc鏈上之CH區包含一對根據SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之序列。 E315. 如E265至E314中任一項之抗體，其包含攜帶IL13-VH的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 209組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E316. 如E265至E315中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 209組成之攜帶IL13-VH的多肽。 E317. 如E264至E316中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 52之胺基酸序列的攜帶IL13-VH的多肽。 E318. 如E265至E316中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 122之胺基酸序列的攜帶IL13-VH的多肽。 E319. 如E265至E318中任一項之抗體，其包含攜帶IL13-VL的多肽，該多肽包含與選自由SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 163及SEQ ID NO: 196組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的胺基酸序列。 E320. 如E265至E319中任一項之抗體，其包含攜帶IL13-VL的多肽，該多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 196。 E321. 如E265至E320中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 55之胺基酸序列的攜帶IL13-VL的多肽。 E322. 如E265至E321中任一項之抗體，其包含有包含SEQ ID NO: 130之胺基酸序列的攜帶IL13-VL的多肽。 E323. 如E265至E322中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127193之質體編碼之攜帶IL13-VH的多肽序列。 E324. 如E265至E323中任一項之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL13-VL的多肽序列。 E325. 一種抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之攜帶IL13-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL13-VL的多肽序列。 E326. 如E265至E325中任一項之抗體，其用作藥劑。 E327. 如E326之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E328. 如E326至E327中任一項之抗體，其中該用途用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。 E329. 如E326至E328中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E330. 如E326至E329中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E331. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E265至E330之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E332. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E265至E330中任一項之抗體或如E331之醫藥組合物。 E333. 如E332之方法，其中該病狀選自由以下組成之群：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E334. 如E332至E333中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E335. 如E332至E334中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E336. 一種特異性結合至IL-33、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含IL-33結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。 E337. 如E336之抗體，其中與IL-33之特異性結合係經由如E1至E71中任一項之抗體。 E338. 如E336至E337之抗體，其中與IL-4之特異性結合係經由如E199至E259中任一項之抗體。 E339. 如E336至E338之抗體，其中與IL-13之特異性結合係經由如E265至E330中任一項之抗體。 E340. 如E336至E339中任一項之抗體，其中 (i) 該IL-33結合域包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，其中該IL-33結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列；及該IL-33結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E341. 如E336至E340之抗體，其中 (i) 該IL-33結合域包含SEQ ID NO: 73之IL33-VH及SEQ ID NO: 78之IL33-VL； (i) 該IL-4結合域包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；及 (ii) 該IL-13結合域包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。 E342. 如E336至341之抗體，其中 (i) 該IL-33結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列； (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E343. 如E336至E342之抗體，其中IL-33結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-13結合域。 E344. 如E336至E342之抗體，其中IL-33結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E345. 如E336至E342之抗體，其中IL-13結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E346. 如E343至E345中任一項之抗體，其中融合物具有連接子。 E347. 如E336至E346中任一項之抗體，其中IL-13結合域用連接子融合至IL-4結合域。 E348. 如E343至E347之抗體，其中連接子包含SEQ ID NO: 104。 E349. 如E336至E348中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。 E350. 如E349之抗體，其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。 E351. 如E349至E350之抗體，其中該第五多肽鏈在C端處包含序列EPKSC (SEQ ID NO: 122)。 E352. 如E349至E351之抗體，其中該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合IL-33。 E353. 如E349至E352之抗體，其中第一Fab域、第二Fab域及第三Fab域各自包含選自如下(i)、(ii)及(iii)之不同選項： (i) E38之IL33-Fab； (ii) E234之IL4-Fab；及 (iii) E302之IL13-Fab。 E354. 如E349至E353之抗體，其中第一Fab域為E302之IL13-Fab，第二Fab域為E234之IL4-Fab，且第三Fab域為E38之IL33-Fab。 E355. 如E349至E354之抗體，其中該第一多肽包含第一Fc鏈，且該第二多肽包含第二Fc鏈。 E356. 如E355之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈各自含有一或多個促進第一Fc鏈與第二Fc鏈之締合的胺基酸修飾。 E357. 如E349至E356之抗體，其中該第一Fc鏈包含第一CH3域，且該第二Fc鏈包含第二CH3域，且該第一CH3域及該第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對中之一者： (i) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iii) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (iv) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (v) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vi) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E358. 如E357之抗體，其中該第一CH3域及該第二CH3域包含SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127。 E359. 如E349至E358之抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 132，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO:145，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 107，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 115，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 119，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO:118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 115，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 120，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO:209，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 128，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 208，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (viii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 134，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 133，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO:79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ix) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO:144，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO:136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 143； (x) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 137，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 135，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 138，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO:136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 142，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 140，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO:79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E360. 如E349至E359中任一項之抗體，其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 132，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E361. 一種特異性結合IL-33、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含IL-33結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 132，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E362. 一種特異性結合IL-33、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含IL-33結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E363. 如E336至E362之抗體，其中該抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時的黏度小於20 cP。 E364. 如E336至E363之抗體，其中該抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時的黏度小於15 cP。 E365. 如E336至E364之抗體，其中該抗體在食蟹獼猴中具有至少12天之終末半衰期。 E366. 如E330至E365之抗體，其中該抗體在TG32小鼠中具有至少16天之終末半衰期。 E367. 如E330至E366之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於220 nM之結合親和力結合人類IL-4。 E368. 如E330至E367之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於220 nM之結合親和力結合人類IL-13。 E369. 如E336至E368之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。 E370. 如E336至E369之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於5 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-4。 E371. 如E336至E370之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-13。 E372. 如E336至E371之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。 E373. 如E336至E372之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM。 E374. 如E336至E373之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM。 E375. 如E336至E374之抗體，其中該抗體之特徵在於在野生型IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於30 nM。 E376. 如E336至E375之抗體，其中該抗體之特徵在於在重組組成性活性IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於15 pM。 E377. 如E336至E376中任一項之抗體，其用作藥劑。 E378. 如E377之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化。 E379. 如E377至378中任一項之抗體，其中該用途用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E380. 如E377至E379中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E381. 如E377至E379中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E382. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E336至E381之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E383. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E336至E381中任一項之抗體或如E382之醫藥組合物。 E384. 如E383之方法，其中該病狀係選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化。 E385. 如E383至E384中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E386. 如E383至E385中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E387. 一種特異性結合至TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含TSLP結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。 E388. 如E387之抗體，其中與TSLP之特異性結合係經由如E77至E143中任一項之抗體。 E389. 如E387至E388之抗體，其中與IL-4之特異性結合係經由如E199至E259中任一項之抗體。 E390. 如E387至E389之抗體，其中與IL-13之特異性結合係經由如E265至E330中任一項之抗體。 E391. 如E381至E384中任一項之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E392. 如E387至E391之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 94之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。 E393. 如E387至E392之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-127199之質體編碼之TSLP-VL序列； (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E394. 如E387至E393之抗體，其中TSLP結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-13結合域。 E395. 如E387至E393之抗體，其中TSLP結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E396. 如E387至E393之抗體，其中IL-13結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E397. 如E394至E396中任一項之抗體，其中融合物具有連接子。 E398. 如E394至E397中任一項之抗體，其中IL-13結合域用連接子融合至IL-4結合域。 E399. 如E394至E398之抗體，其中該連接子包含SEQ ID NO: 104。 E400. 如E387至E399中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。 E401. 如E400之抗體，其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。 E402. 如E400至E401之抗體，其中該第五多肽鏈在C端處包含序列EPKSC (SEQ ID NO: 122)。 E403. 如E400至E402之抗體，其中該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合TSLP。 E404. 如E400至E403之抗體，其中第一Fab域、第二Fab域及第三Fab域各自包含選自如下(i)、(ii)及(iii)之不同選項： (i) E117之TSLP-Fab； (ii) E234之IL4-Fab； (iii) E302之IL13-Fab。 E405. 如E400至E406之抗體，其中第一Fab域為E302之IL13-Fab，第二Fab域為E234之IL4-Fab，且第三Fab域為E117之TSLP-Fab。 E406. 如E400至E405之抗體，其中該第一多肽包含第一Fc鏈，且該第二多肽包含第二Fc鏈。 E407. 如E406之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈各自含有一或多個促進第一Fc鏈與第二Fc鏈之締合的胺基酸修飾。 E408. 如E400至E407之抗體，其中該第一Fc鏈包含第一CH3域，且該第二Fc鏈包含第二CH3域，且該第一CH3域及該第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對中之一者： (i) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iii) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (iv) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (v) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vi) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E409. 如E408之抗體，其中第一CH3域及第二CH3域包含SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127。 E410. 如E400至E409之抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 149，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 151，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 159，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 162，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 163； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 154，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 156，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (viii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 152，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (ix) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 153，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (x) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 157，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 160，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158；及 (xii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 164，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xiii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 215，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (xiv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 216，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E411. 如E411至E410中任一項之抗體，其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E412. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E413. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E414. 如E387至E413之抗體，其中該抗體在食蟹獼猴中具有至少14天之終末半衰期。 E415. 如E387至E414之抗體，其中該抗體在TG32小鼠中具有至少18天之終末半衰期。 E416. 如E387至E415中任一項之抗體，其特徵在於經在人類初代PBMC中之TARC生產生物分析所量測，抗TSLP生物活性的IC ₅₀小於10 pM。 E417. 如E387至E416中任一項之抗體，其特徵在於在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時的黏度為20 cP。 E418. 如E387至E417中任一項之抗體，其特徵在於當藉由分析型尺寸排阻層析(aSEC)測定時，高分子量物質之評分小於2%。 E419. 如E387至E418中任一項之抗體，其特徵在於在親和力捕獲自體相互作用奈米粒子光譜分析(AC SINS)分析中，評分小於12。 E420. 如E387至E419中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。 E421. 如E387至E420中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-4。 E422. 如E387至E421中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-13。 E423. 如E387至E422中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。 E424. 如E387至E423中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於5 pM之結合親和力結合至人類TSLP。 E425. 如E387至E424中任一項之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於20 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。 E426. 如E387至E425中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於25 pM。 E427. 如E387至E426中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。 E428. 如E387至E427中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於60 pM。 E429. 如E387至E428中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類初代PBMC中之TARC生產生物分析中，人類TSLP中和之IC ₅₀小於15 pM。 E430. 如E387至E429中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於在食蟹獼猴TSLP中和分析中IC ₅₀小於35 pM。 E431. 如E387至430中任一項之抗體，其用作藥劑。 E432. 如E431之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎。 E433. 如E431至E432中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E434. 如E431至433中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E435. 如E431至433中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E436. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之E387至E435之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E437. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E387至E435中任一項之抗體或如E436之醫藥組合物。 E438. 如E437之方法，其中該病狀選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎。 E439. 如E437至E438中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E440. 如E437至E439中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E445. 一種特異性結合至p40、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含p40結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。 E446. 如E445之抗體，其中與p40之特異性結合係經由E144至E193中任一項之抗體。 E447. 如E445至E446之抗體，其中與IL-4之特異性結合係經由如E199至E259中任一項之抗體。 E448. 如E445至E447中任一項之抗體，其中與IL-13之特異性結合係經由如E265至E330中任一項之抗體。 E449. 如E445至E448中任一項之抗體，其中 (i) 該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E450. 如E445至449之抗體，其中 (i) 該p40結合域包含SEQ ID NO: 169之p40-VH及SEQ ID NO: 175之p40-VL； (ii) 該IL-4結合域包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL； (iii) 該IL-13結合域包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。 E451. 如E445至450之抗體，其中 (i) 該p40結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列。 (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E452. 如E445至E451之抗體，其中p40結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-13結合域。 E453. 如E445至E451之抗體，其中p40結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E454. 如E445至E451之抗體，其中IL-13結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E455. 如E452至E454中任一項之抗體，其中該融合物具有連接子。 E456. 如E452至E455中任一項之抗體，其中IL-13結合域用連接子融合至IL-4結合域。 E457. 如E456之抗體，其中連接子包含SEQ ID NO: 104。 E458. 如E445至E457中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。 E459. 如E458之抗體，其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。 E460. 如E458至E459之抗體，其中該第五多肽鏈在C端處包含序列EPKSC (SEQ ID NO: 122)。 E461. 如E458至E460之抗體，其中該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合p40。 E462. 如E458至E461之抗體，其中第一Fab域、第二Fab域及第三Fab域各自包含選自如下(i)、(ii)及(iii)之不同選項： (i) E166之p40-Fab， (ii) E234之IL4-Fab，及 (iii) E302之IL13-Fab。 E463. 如E458至E462之抗體，其中第一Fab域為E302之IL13-Fab，第二Fab域為E234之IL4-Fab，且第三Fab域為E166之p40-Fab。 E464. 如E458至E463之抗體，其中該第一多肽包含第一Fc鏈，且該第二多肽包含第二Fc鏈。 E465. 如E464之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈各自含有一或多個促進第一Fc鏈與第二Fc鏈之締合的胺基酸修飾。 E466. 如E464至E465之抗體，其中該第一Fc鏈包含第一CH3域，且該第二Fc鏈包含第二CH3域，且該第一CH3域及該第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對中之一者： (i) SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO:111； (ii) SEQ ID NO:147及SEQ ID NO: 148；及 (iii) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO:127。 E467. 如E466之抗體，其中第一CH3域及第二CH3域包含SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127。 E468. 如E458至E467之抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 178，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 179，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 181，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 180，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 182，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 183，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 120，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 207，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E469. 如E458至E468中任一項之抗體，其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E470. 一種特異性結合至p40、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含p40結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E471. 一種特異性結合p40、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含p40結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E472. 如E445至E471之抗體，其中該抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時的黏度小於20 cP。 E473. 如E445至E472之抗體，其中該抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時的黏度小於12 cP。 E474. 如E445至E473之抗體，其中該抗體在食蟹獼猴中具有至少12天之終末半衰期。 E475. 如E445至E474之抗體，其中該抗體在TG-32小鼠中具有至少18天之終末半衰期。 E476. 如E445至E475之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於220 pM之親和力常數結合人類IL-4。 E477. 如E445至E476之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於220 pM之親和力常數結合人類IL-13。 E478. 如E445至E477之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於130 pM之親和力常數結合人類IL-12。 E479. 如E445至E478之抗體，經藉由SPR所量測，其中該抗體以小於100 pM之親和力常數結合人類IL-23。 E480. 如E445至E479之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。 E481. 如E445至E480之抗體，經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，其中該抗體以小於2 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。 E482. 如E445至E481之抗體，其中該抗體之特徵在於經在人類單核球分析中所量測，中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。 E483. 如E445至E482之抗體，其中該抗體之特徵在於經在人類單核球分析中所量測，中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。 E484. 如E445至E483之抗體，其中該抗體之特徵在於經在人類單核球分析中所量測，中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。 E485. 如E445至E484之抗體，其中該抗體之特徵在於經在人類單核球分析中所量測，中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於45 pM。 E486. 如E445至E485之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類周邊血液單核球之人類IL-12中和Kit-225分析中IC ₅₀小於600 pM。 E487. 如E445至E486之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類周邊血液單核球之食蟹獼猴IL-23 Kit-225中和分析中IC ₅₀小於2100 pM。 E488. 如E445至E487之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類全血之人類IL-12中和分析中IC ₅₀小於400 pM。 E489. 如E445至E488之抗體，其中該抗體之特徵在於在人類全血之食蟹獼猴IL-23中和分析中IC ₅₀小於10,000 pM。 E490. 如E445至489中任一項之抗體，其用作藥劑。 E491. 如E490之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、異位性皮膚炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E492. 如E490至E491中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、異位性皮膚炎、哮喘(重度)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。 E483. 如E490至E482中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E484. 如E490至E483中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E495. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如E445至E484之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E496. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E445至E494中任一項之抗體或如E495之醫藥組合物。 E497. 如E496之方法，其中該病狀選自由以下組成之群：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。 E498. 如E496至E497中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E499. 如E496至E498中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E500. 一種抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。 E501. 如E500之抗體，其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。 E502. 如E501之抗體，其中該第一Fab包含第一抗原相關VH (VH-1)、第一抗原相關VL (VL-1)、第一抗原相關CL (CL-1)及第一抗原相關CH1 (CH1-1)。 E503. 如E504之抗體，其中VH-1之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-1之N端。 E504. 如E502至E503之抗體，其中VL-1之C端藉由肽鍵共價融合至CL-1之N端。 E505. 如E501至E504之抗體，其中該第二Fab包含第二抗原相關VH (VH-2)、第二抗原相關VL (VL-2)、第二抗原相關CL (CL-2)及第二抗原相關CH1 (CH1-2)。 E506. 如E505之抗體，其中VH-2之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-2之N端。 E507. 如E505至E506之抗體，其中VL-2之C端藉由肽鍵共價融合至CL-2之N端。 E508. 如E501至E507之抗體，其中該第三Fab包含第三抗原相關VH (VH-3)、第三抗原相關VL (VL-3)、第三抗原相關CL (CL-3)及第三抗原相關CH1 (CH1-3)。 E509. 如E508之抗體，其中VH-3之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-3之N端。 E510. 如E508至E509之抗體，其中VL-3之C端藉由肽鍵共價融合至CL-3之N端。 E511. 如E500至510之抗體，其中該第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CL-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；該第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CL-1)；及該第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)。 E512. 如E500至E511之抗體，其中該第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及該第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。 E513. 如E508至E512之抗體，其中CH1-1域、CH1-2域及CH1-3域中之一或多者可包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。 E514. 如E508至E513之抗體，其中CL-1域、CL-2域及CL-3域中之一或多者包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。 E515. 如E512至E514之抗體，其中第一鉸鏈區及第二鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。 E516. 如E512至E515之抗體，其中第一CH2域及第二CH2域中之一或兩者包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E517. 如E512至E516之抗體，其中第一CH3域及第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對之一： (i) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iii) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (iv) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (v) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vi) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E518. 如E512至E517之抗體，其中 (i) 該CL-1包含根據SEQ ID NO: 16之序列，該連接子包含根據SEQ ID NO: 104之序列，該CH1-2包含根據SEQ ID NO: 6之序列，該第二鉸鏈包含根據SEQ ID NO: 129之序列，該第二CH2包含根據SEQ ID NO: 8之序列，及該第二CH3包含根據SEQ ID NO: 124之序列； (ii) 該CH1-1包含根據SEQ ID NO: 6之序列；及 (iii) 該CL-2包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E519. 如E508至518之抗體，其中CL-3包含根據選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108、SEQ ID NO: 113組成之群的序列的序列。 E520. 如E508至E519之抗體，其中CL-3包含根據SEQ ID NO: 95之序列。 E521. 如E508至E519之抗體，其中CL-3包含根據SEQ ID NO: 16之序列。 E522. 如E508至E521之抗體，其中CH1-3包含根據SEQ ID NO: 6之序列。 E523. 如E512至E522之抗體，其中第一鉸鏈包含根據SEQ ID NO: 131之序列。 E524. 如E512至E523之抗體，其中第一CH2包含根據SEQ ID NO: 8之序列。 E525. 如E512至E524之抗體，其中第一CH3包含根據SEQ ID NO: 127之序列。 E526. 一種E500至E525中任一項之經分離之抗體，其特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13，其包含IL-4結合域及IL-13結合域。 E527. 一種E1至E525中任一項之經分離之抗體，其特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13，其包含IL-4結合域及IL-13結合域。 E528. 一種經分離之抗體，其特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13，其包含IL-4結合域及IL-13結合域。 E529. 如E526至E528之抗體，其中與IL-4之特異性結合係經由如E199至E259中任一項之抗體。 E530. 如E526至E529中任一項之抗體，其中與IL-13之特異性結合係經由如E265至E330中任一項之抗體。 E531. 如E526至E530中任一項之抗體，其中該抗體包含至少一個結合至與IL-4及IL-13兩者中之至少一個不同的目標的額外抗原結合域。 E532. 如E531之抗體，其中該至少一個不同目標係選自由IL-33、TSLP及p40組成之群，且其中當該目標為IL-33時，可視情況進一步包含如E1至E71之抗體，且其中當該目標為TSLP時，可視情況進一步包含如E77至E143之抗體，且其中當該目標為p40時，可視情況進一步包含如E144至E193之抗體。 E533. 如E531之抗體，其中該至少一個不同目標不為IL-33。 E534. 如E531之抗體，其中該至少一個不同目標不為TSLP。 E535. 如E531之抗體，其中該至少一個不同目標不為p40。 E536. 如E526至E535中任一項之抗體，其中 (i) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (ii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E537. 如E526至E536之抗體，其中 (i) 該IL-4結合域包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL； (ii) 該IL-13結合域包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL； E538. 如E531至E537之抗體，其中額外抗原結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-13結合域。 E539. 如E531至E537之抗體，其中額外抗原結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E540. 如E531至E537之抗體，其中IL-13結合域在存在或不存在連接子之情況下融合至IL-4結合域。 E541. 如E538至E540中任一項之抗體，其中融合物具有連接子。 E542. 如E540至E541中任一項之抗體，其中IL-13結合域用連接子融合至IL-4結合域。 E543. 如E542之抗體，其中連接子包含SEQ ID NO: 104。 E544. 如E526至E543中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。 E545. 如E544之抗體，其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。 E546. 如E526至E545之抗體，其中 (i) 該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標； (ii) 該第一抗原結合位特異性結合IL-4，該第二抗體結合位特異性結合IL-13，且該第三抗原結合位特異性結合至該至少一種額外目標； (iii) 該第一抗原結合位特異性結合IL-4，該第二抗體結合位特異性結合該至少一種額外目標，且該第三抗原結合位特異性結合IL-13； (iv) 其中該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合該至少一種額外目標，且該第三抗原結合位特異性結合IL-4； (v) 該第一抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標，該第二抗體結合位特異性結合L-13，且該第三抗原結合位特異性結合IL-4；或 (vi) 該第一抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合IL-13。 E547. 如E544至E546之抗體，其中第一Fab域為E302之IL13-Fab，第二Fab域為E234之IL4-Fab，且第三Fab域為額外的目標-Fab。 E548. 如E44至E547之抗體，其中該第五多肽鏈在C端處包含序列EPKSC (SEQ ID NO: 122)。 E549. 如E544至E548之抗體，其中該第一多肽包含第一Fc鏈，且該第二多肽包含第二Fc鏈。 E550. 如E549之抗體，其中第一Fc鏈及第二Fc鏈各自含有一或多個促進第一Fc鏈與第二Fc鏈之締合的胺基酸修飾。 E551. 如E544至E550之抗體，其中該第一Fc鏈包含第一CH3域，且該第二Fc鏈包含第二CH3域，且該第一CH3域及該第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對中之一者： (i) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iii) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (iv) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (v) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vi) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E552. 如E551之抗體，其中第一CH3域及第二CH3域包含SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127。 E553. 如E544至E552之抗體，其中第二、第四及第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 145，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (ii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 107，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 115，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (v) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 208，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 133，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (viii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 144，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 143； (ix) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 135，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (x) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 140，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 149，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 151，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xiii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 159，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xiv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 162，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 163； (xv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 154，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (xvi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 156，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (xvii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 152，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (xviii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 153，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (xix) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 157，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xx) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 160，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xxi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 164，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (xxii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 178，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxiii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 179，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxiv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 180，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xxv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 183，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxvi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 207，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xxvii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E554. 如E544至E553中任一項之抗體，其中該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E555. 一種特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13以及至少一種額外目標之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含至少一種額外目標結合位之第三Fab域；且其中該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E556. 一種包含抗體Fc域之抗體，該抗體Fc域包含第一Fc鏈及第二Fc鏈，其中該第一Fc鏈及該第二Fc鏈各自含有促進該第一Fc鏈與該第二Fc鏈之締合的兩個胺基酸修飾，其特徵在於 (i) 該第一Fc鏈包含D(H232)R及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含D(H232)E及L(H391)E；或 (ii) 該第一Fc鏈包含D(H232)E及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含L(H391)R及D(H232)E。 E557. 如E556之抗體，其中第一Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第一CH3區連接之第一CH2區的第一鉸鏈區，且在本文中該第二Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第二CH3區連接之第二CH2區的第二鉸鏈區，且其中該第一鉸鏈區及該第二鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之一對序列，且該第一CH3區及該第二CH3區包含以下兩對序列中之任一者：SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127；或SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。 E558. 如E556至E557中任一項之抗體，其進一步包含如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484及E500至E557中之一或多者的抗體。 E559. 一種經分離之抗體，其包含選自表80、81、82、83、84、85、86及87中之一或多者的抗體之CDR。 E560. 一種經分離之抗體，其包含選自表80、81、82、83、84、85、86及87中之一或多者的抗體之VH及VL。 E561. 一種經分離之抗體，其選自表80、81、82、83、84、85、86及87中之一或多者。 E562. 一種經分離之聚核苷酸，其包含一或多個編碼如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484及E500至E561中任一項之抗體的核苷酸序列。 E563. 如E562之聚核苷酸，其中該聚核苷酸為RNA。 E564. 如E562至E563之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含至少一個化學修飾。 E565. 如E564之聚核苷酸，其中化學修飾係選自假尿苷、1-甲基假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲基尿苷、5-甲氧基尿苷及2'-O-甲基尿苷。 E566. 如E562至E563之聚核苷酸，其中該聚核苷酸不包含化學修飾。 E567. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合IL-33之抗體之VH、VL或兩者，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 202之核酸序列、SEQ ID NO: 203之核酸序列或兩者。 E568. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-33之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 190之核酸序列、SEQ ID NO: 191之核酸序列或兩者。 E569. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-33之抗體之VH、VL或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127209之質體的插入物的核酸序列，及由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127210之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E570. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-33之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127207之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127208之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E571. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合TSLP之抗體的VH、VL或兩者，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 204之核酸序列、SEQ ID NO: 205之核酸序列或兩者。 E572. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至TSLP之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 192之核酸序列、SEQ ID NO: 193之核酸序列或兩者。 E573. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至TSLP之抗體之VH、VL或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127200之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127199之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E574. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至TSLP之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127202之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127201之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E575. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至P40之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 194之核酸序列、SEQ ID NO: 195之核酸序列或兩者。 E576. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至p40之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127204之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127203之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E577. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合IL-4之抗體的VH、VL或兩者，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 200之核酸序列、SEQ ID NO: 201之核酸序列或兩者。 E578. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-4之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 188之核酸序列、SEQ ID NO: 189之核酸序列或兩者。 E579. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-4之抗體之VH、VL或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127198之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127197之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E580. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-4之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127194之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E581. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合IL-13之抗體的VH、VL或兩者，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 196之核酸序列、SEQ ID NO: 195之核酸序列或兩者。 E582. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-13之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 187之核酸序列、SEQ ID NO: 188之核酸序列或兩者。 E583. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-13之抗體之VH、VL或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127196之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127195之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E584. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-13之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127193之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體的插入物的核酸序列或兩者。 E585. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列； (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E586. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該經分離之抗體特異性結合IL-33，特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含IL-33結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E587. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-127199之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E588. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E589. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/p40抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列。 (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E590. 一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/p40抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含p40結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E591. 一種載體，其包含E562至E590之聚核苷酸。 E592. 一種經分離之宿主細胞，其包含如E562至E590之聚核苷酸或如E591之載體。 E593. 一種產生經分離之抗體之方法，其包含在引起該抗體產生之條件下培養如E592之宿主細胞且回收該抗體。 E594. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484及E500至E557中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E595. 一種用於產生包含雙Fab臂及單Fab臂之雜三聚抗體的方法，其中該雙Fab臂包含連接至與第一Fc域連接之第二Fab域之第一Fab域，且該單Fab臂包含連接至第二Fc域之第三Fab域，且該方法包含 (i) 第一預組裝步驟，其中該雙Fab臂在第一預組裝調節緩衝液中在2℃至10℃之間的溫度下培育且其中該第一預組裝調節緩衝液之pH比該雙Fab臂之等電點(pI)低1至3個單位；及 (ii) 第二預組裝步驟，其中該單Fab臂在第二預組裝調節緩衝液中在2℃至10℃之間的溫度下培育且其中該第二預組裝調節緩衝液之pH比該單Fab臂之等電點(pI)低1至3個單位；及 (iii) 第三組裝步驟，其中來自步驟(i)及(ii)之該雙Fab臂及單Fab臂在組裝緩衝液中混合在一起持續1至24小時。 E596. 一種特異性結合TSLP之經分離之抗體，其包含選自表83、84及87中之一或多者的抗體之CDR。 E597. 一種特異性結合TSLP之經分離之抗體，其包含選自表83、84及87中之一或多者的抗體之VH及VL。 E598. 一種特異性結合TSLP之經分離之抗體，其選自表83、84及87中之一或多者。 E599. 如E381至E384中任一項之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E600. 如E387至E390或E599之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 213之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。 E601. 如E387至E390或E599至E600之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E602. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 215，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E603. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (iv) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (v) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (vi) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E604. 如E381至E390中任一項之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。 E605. 如E387至E390或E604之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 214之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。 E606. 如E387至E390或E602至E603之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-_____之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。 E607. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 216，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。 E608. 一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。 E609. 如E77至E143或E596至E608中任一項之抗體，其用作藥劑。 E610. 如E609之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎。 E611. 如E147至E148或E596至E610中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E612. 如E147至E149或E596至E611中任一項之抗體，其中該用途係用於異位性皮膚炎。 E613. 如E147至E149或E596至E612中任一項之抗體，其中該用途係用於非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。 E614. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如E77至E143或E596至E608之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E615. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量之如E77至E143或E596至E608中任一項之抗體或如E614之醫藥組合物。 E616. 如E615之方法，其中該病狀選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎。 E617. 如E615至E616中任一項之方法，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E618. 如E615至E617中任一項之方法，其中該抗體或醫藥組合物係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E619. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557或E596至E612中任一項之抗體，其用於抑制腫瘤生長。 E620. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619中任一項之抗體，其用於抑制患者之惡性細胞生長之進展。 E621. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E620中任一項之抗體，其用於抑制患者之惡性細胞之轉移。 E622. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E621中任一項之抗體，其用於誘導患者之腫瘤消退。 E623. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E622中任一項之抗體，其用於治療呈現實體腫瘤之癌症。 E624. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E623中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma，HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。 E625. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E624中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：腎細胞癌(RCC)、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、小細胞肺癌(SCLC)或三陰性乳癌。 E626. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E625中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由血色素惡性疾病組成之群的一或多者，且在一些實施例中，血色素惡性疾病為急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。 E627. 一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑為針對IL-4、IL-13及TSLP中之一或多者的抗體，且其中該第二抗癌治療劑選自由以下組成之群：抗OX40抗體、抗4-1BB抗體、抗HER2抗體、PD-1路徑拮抗劑、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、TLR3促效劑、TLR 7/8促效劑、TLR9促效劑、雙特異性抗CD47/抗PD-L1抗體及雙特異性抗P-鈣黏素/抗CD3抗體。 E628. 如E627之方法，其中第一抗癌治療劑包含抗IL-4抗體。 E629. 如E627至E628之方法，其中該第一抗癌治療劑包含E199至E259中任一項之抗IL-4抗體。 E630. 如E627至E631之方法，其中該第一抗癌治療劑包含抗IL-13抗體。 E631. 如E627至E630之方法，其中該第一抗癌治療劑包含E265至E330中任一項之抗IL-13抗體。 E632. 如E627至E631之方法，其中該第一抗癌治療劑包含抗TSLP抗體。 E633. 如E627至E632之方法，其中該第一抗癌治療劑包含E77至E143或E596至E598中任一項之抗TSLP抗體。 E634. 如E627至E633之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13抗體。 E635. 如E627至E634之方法，第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13抗體，且其中該IL-4/IL-13抗體包含如E526至E558中任一項之IL-4/IL-13抗體。 E636. 如E627至E635之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13/TSLP抗體。 E637. 如E627至E636之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13/TSLP抗體，且其中該IL-4/IL-13/TSLP抗體包含如E387至E435或E599至E613中任一項之抗體。 E638. 如E627至E637之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13/TSLP抗體，且其中該IL-4/IL-13/TSLP抗體包含如E412中任一項之抗體。 E639. 如E627至E637之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13/TSLP抗體，且其中該IL-4/IL-13/TSLP抗體包含如E603中任一項之抗體。 E640. 如E627至E637之方法，其中該第一抗癌治療劑包含IL-4/IL-13/TSLP抗體，且其中該IL-4/IL-13/TSLP抗體包含如E607中任一項之抗體。 E641. 如E627至E640之方法，其中該第二抗癌治療劑為PD-1路徑拮抗劑。 E642. 如E627至E641之方法，其中該第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑。 E643. 如E627至E642之方法，其中該第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑，且該PD-1拮抗劑係選自由以下組成之群：薩善利單抗(sasanlimab)、BCD-100、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、傑諾珠單抗(genolimzumab)、MEDI0680、納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、信迪利單抗(sintilimab)、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、STI-A1110、替雷利珠單抗(tislelizumab)、阿替利珠單抗(atezolizumab)、度伐利尤單抗(durvalumab)、BMS-936559 (MDX-1105)、LY3300054、TSR-042。 E644. 如E627至E643之方法，其中第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑，且該PD-1拮抗劑為US10155037之包含如SEQ ID NO: 4中所示之VH及如SEQ ID NO: 8中所示之VL的抗體。 E644. 如E627至E643之方法，其中該第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑，且該PD-1拮抗劑為薩善利單抗。 E645. 如E627至E646之方法，其中該第二抗癌劑為PD-1拮抗劑，且該PD-1拮抗劑為薩善利單抗，且為包含HC及輕鏈之抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E646. 一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑為如E412之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E647. 一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑為如E603之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E648. 一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑為如E607之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E649. 一種包含第一抗癌劑及第二抗癌劑之藥劑，其中該第一抗癌治療劑為如E412之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E649. 一種包含第一抗癌劑及第二抗癌劑之藥劑，其中該第一抗癌治療劑為如E603之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E649. 一種包含第一抗癌劑及第二抗癌劑之藥劑，其中該第一抗癌治療劑為如E607之IL-4/IL-13/TSLP抗體，且該第二抗癌治療劑為包含HC及輕鏈之PD-1拮抗劑抗體，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，該輕鏈包含根據SEQ ID NO: 226之序列。 E650. 如E627至E649中任一項中所闡述之方法或藥劑，其中該癌症呈現實體腫瘤。 E651. 如E627至E650中任一項中所闡述之方法或藥劑，其中該癌症係選自由以下組成之群的一或多者：膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。 E652. 如E627至E651中任一項中所闡述之方法或藥劑，其中該癌症係選自由以下組成之群的一或多者：腎細胞癌(RCC)、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、小細胞肺癌(SCLC)或三陰性乳癌。 E653. 如E627至E652中任一項中所闡述之方法或藥劑，其中該癌症為選自由血色素惡性疾病組成之群的一或多者，且在一些實施例中，血色素惡性疾病為急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。 E654. 如E1至E653中任一項中所闡述之供使用之抗體、方法或藥劑，其中該等治療劑中之至少一者以一天一次、每兩天一次、每三天一次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每30天一次、每五週一次、每六週一次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次之時間間隔向個體投與。 E656. 如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E625中任一項之抗體之用途，其用於製造供治療選自由以下組成之群的一或多者用之藥劑：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、真菌角膜炎、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、血色素惡性疾病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。 E657. 一種醫藥組合物，其用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、真菌角膜炎、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、血色素惡性疾病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；該醫藥組合物包含如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E625中任一項之抗體。 E658. 一種抗疾病藥劑，其包含如E1至E71、E77至E143、E144至E193、E199至E259、E265至E330、E336至E381、E387至E435、E445至E484、E500至E557、E596至E612或E619至E625中任一項之抗體，其中該疾病係選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、真菌角膜炎、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)、血色素惡性疾病、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。

序列表之引用「本申請案含有序列表，該序列表已按.xml格式以電子方式提交且特此以全文引用之方式併入。2023年2月09日創建之該.xml檔案命名為PC072799 Sequence Listing.xml且大小為252KB。」

本文提供特異性結合至IL-4之抗體、特異性結合至IL-13之抗體、特異性結合至IL-33之抗體、特異性結合至TSLP之抗體，以及特異性結合至IL-4及IL-13連同IL-33、TSLP及p40中之一者的多特異性抗體。本文亦提供相關核酸、組合物及製備及使用該等抗體之方法。

通用技術本文所引用之所有參考文獻(包括專利申請案、專利公開案、UniProtKB登錄號)均以引用之方式併入本文中，如同具體地且單獨地指出各個別參考文獻以全文引用之方式併入本文中一般。

本文所描述或提及之技術及程序一般為熟習此項技術者充分理解且通常使用習知方法而採用，諸如以下中所描述之廣泛利用之方法：Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY(F. M. Ausubel, 等人編, (2003))；系列METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson、B. D. Hames及G. R. Taylor編(1995))、Harlow及Lane編(1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, and ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney編(1987))；Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R. I. Freshney)編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather及P. E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle、J. B. Griffiths及D. G. Newell編, 1993-8) J. Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir及C. C. Blackwell編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller及M. P. Calos編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan等人編, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C. A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty.編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd及C. Dean編, Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999))；The Antibodies (M. Zanetti及J. D. Capra編, Harwood Academic Publishers, 1995)；及其最新版本。

定義除非另外定義，否則本文所使用之所有技術術語、符號以及其他科學術語或術語集意欲具有涉及本發明之熟習此項技術者通常理解的含義。舉例而言，諸如本文中諸如「A及/或B」之片語中所使用之術語「及/或」意欲包括A及B；A或B、A (單獨)；及B (單獨)。同樣，諸如「A、B及/或C」之片語中所用之術語「及/或」意欲涵蓋以下實施例中之每一者：A、B及C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A及C；A及B；B及C；A (單獨)；B (單獨)；及C (單獨)。在一些情況下，出於清楚起見及/或方便參考，在本文中定義具有通常所理解含義之術語，且本文中包括此類定義不應必然解釋為表示與此項技術中一般所理解存在實質性差異。

如本文所用，除非上下文另外明確規定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該」包括其對應複數個提及物。

如本文所用，數值範圍包括定義範圍的數值。

本文中提及「約」某值或參數包括(及描述)針對該值或參數本身，以及針對可比該參數之所陳述數值低或高多達10%的值或參數的實施例。舉例而言，「約5 mg/kg」之劑量包括5 mg/kg且亦包括4.5 mg/kg與5.5 mg/kg之間的任何值。當在時間段(年、月、週、天數等)之上下文內使用術語「約」時，術語「約」意謂時間段加或減一個量的後續次級時間段(例如約1年意謂11-13個月；約6個月意謂6個月加或減1週；約1週意謂6-8天等)，或在指定值之10%內，以較大者為準。

「抗體」係指能夠經由位於免疫球蛋白分子之可變區中之至少一個抗原結合位特異性結合至目標，諸如多肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂質等之免疫球蛋白分子。如本文所用，術語「抗體」可涵蓋任何類型之抗體(例如單特異性、雙特異性、三特異性、多特異性)，且包括保持結合至既定抗原之能力的完整抗體的部分(例如「抗原結合片段」)及包含抗原結合位之免疫球蛋白分子之任何其他經修飾之組態。

抗體包括任何類別之抗體，諸如IgG、IgA或IgM (或其子類)，且該抗體無需為任何特定類別。免疫球蛋白可視其重鏈(HC)之恆定區之抗體胺基酸序列而歸為不同類別。免疫球蛋白有五個主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中數個類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、IgG ₄、IgA ₁及IgA ₂。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白之次單元結構及三維組態為熟知的。

抗體抗原結合片段及經修飾組態之實例包括(i) Fab片段(由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段)；(ii) F(ab')2片段(包含兩個藉由鉸鏈區處之二硫橋鍵連接之Fab片段的二價片段)；及(iii)由抗體之單臂之VL及VH域組成的Fv片段。此外，儘管Fv片段之兩個域VL及VH係藉由單獨的基因編碼，但其可使用重組方法藉由合成連接子接合，該合成連接子使得其能夠成為單個蛋白鏈，其中VL及VH區配對以形成單價分子(稱為單鏈Fv (scFv))；參見例如Bird等人, Science 1988; 242:423-426及Huston等人, Proc. Natl. Acad. Sci. 1988 USA 85:5879-5883。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功能抗體。

另外，進一步涵蓋重鏈多肽上之C端離胺酸(K)胺基酸殘基缺失的抗體(例如人類IgG1重鏈包含端離胺酸)。如此項技術中已知，C端離胺酸有時在抗體產生期間經剪切，產生重鏈缺乏C端離胺酸之抗體。或者，抗體重鏈可使用不包括C端離胺酸之核酸產生。

抗體之「可變區」係指單獨或呈組合形式之抗體輕鏈之可變區或抗體重鏈之可變區。如此項技術中已知，重鏈及輕鏈之可變區各自由四個藉由亦稱為高變區之三個互補決定區(CDR)所連接之構架區(FR)組成；且促進形成抗體之抗原結合位。若需要目標可變區之變異體(尤其在CDR區域外部之胺基酸殘基中具有取代(亦即，在構架區中))，則可藉由比較目標可變區與其他抗體(其含有與目標可變區相同的典型類別中之CDR1及CDR2序列)之可變區來鑑別適當的胺基酸取代，較佳地，保守胺基酸取代(Chothia及Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987)。

在某些實施例中，CDR之確定性描畫及包含抗體之結合位之殘基的確認藉由求解抗體之結構或求解抗體-配位體複合物之結構來實現。在某些實施例中，其可藉由熟習此項技術者已知之各種技術中任一者來實現，諸如X射線結晶法。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或估計CDR區。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或估計CDR區。此類方法之實例包括(但不限於) Kabat定義、Chothia定義、AbM定義、接觸定義、構形定義及實例1中所闡述之Pfabat編號方法。

Kabat定義為用於編號抗體中之殘基之標準且通常用以鑑別CDR區。參見例如Johnson及Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8。Chothia定義類似於Kabat定義，但Chothia定義考慮某些結構迴路區之位置。參見例如Chothia等人, 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17；Chothia等人, 1989, Nature, 342: 877-83。AbM定義使用藉由Oxford Molecular Group所產生之模型抗體結構之電腦程式的整合套件。參見例如Martin等人, 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272；「AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,」Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd。AbM定義使用知識資料庫及從頭計算法方法之組合使來自一級序列之抗體的三級結構模型化，諸如以下文獻所描述之方法：Samudrala等人, 1999,「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach,」in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198。接觸定義係基於可用複合晶體結構之分析。參見例如MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45。在另一方法(在本文中稱為CDR之「構形定義」)中，CDR之位置可鑑別為向抗原結合貢獻焓之殘基。參見例如Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。雖然其他CDR邊界定義可不嚴格遵循以上方法中之一者，但仍然將與Kabat CDR之至少一部分重疊，但其可根據以下預測或實驗發現而縮短或延長：具體殘基或殘基組並不顯著影響抗原結合。本申請案中所用之編號系統為實例1中所闡述之Pfabat編號方法。

如本文所用，CDR可指由此項技術中已知之任何方法，包括方法之組合所定義之CDR。本文所用之方法可利用根據此等方法中之任一者定義之CDR。對於任何含有超過一個之CDR之給定實施例，CDR可根據Kabat定義、Chothia定義、擴展定義、AbM定義、接觸定義、構形定義或Pfabat方法中之任何一或多者定義。本申請案之抗體係根據Kabat編號系統之經修飾版本進行編號且更詳細地闡述於實例1中。

如本文所用，術語「鉸鏈區」包括此項技術中已知之含義，其說明於例如Janeway等人, ImmunoBiology: the immune system in health and disease, Elsevier Science Ltd., NY (第4版, 1999)；Bloom等人, Protein Science, 6:407-415, 1997；及Humphreys等人, J. Immunol. Methods, 209:193-202, 1997。

抗體之「恆定區」係指單獨或呈組合形式之抗體輕鏈之恆定區或抗體重鏈之恆定區。IgG重鏈恆定區含有三個序列免疫球蛋白域(CH1、CH2及CH3)，其中鉸鏈區位於CH1與CH2域之間。IgG輕鏈恆定區含有單一免疫球蛋白域(CL)。

「Fc域」係指免疫球蛋白(Ig)分子中與藉由Ig分子之番木瓜蛋白酶消化獲得之可結晶片段相關的部分。如本文所用，該術語係關於抗體之2-鏈狀恆定區，各鏈不包括第一恆定區免疫球蛋白域。在Fc域內，存在兩個「Fc鏈」(例如，「第一Fc鏈」及「第二Fc鏈」)。「Fc鏈」一般係指抗體重鏈之C端部分。因此，Fc鏈係指IgA、IgD及IgG重鏈之最後兩個恆定區免疫球蛋白域(CH2及CH3)，及IgE及IgM重鏈之最後三個恆定區免疫球蛋白域，及視情況選用之此等域之可撓性鉸鏈N端。

雖然可改變Fc鏈之邊界，但人類IgG重鏈Fc鏈通常經界定以包含相對於其羧基端之殘基C226或P230，其中編號係根據Edelman等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1969; 63(1):78-85之EU索引及如描述於Kabat等人, 1991中。典型地，Fc鏈包含人類IgG1重鏈恆定區之約胺基酸殘基236至約447。「Fc鏈」可單獨指此多肽，亦可指在一個更大的分子中(例如在一個抗體重鏈或Fc融合蛋白中)。

「功能性」Fc域係指具有天然序列Fc域之至少一種效應功能的Fc域。例示性「效應功能」包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)下調；及B細胞活化等。此類效應功能通常需要Fc域與結合域(例如抗體可變區)組合且可以使用此項技術中已知的各種分析評估此類抗體效應功能。

「天然序列」Fc鏈或「野生型Fc鏈」係指包含與在自然界中發現之Fc鏈之胺基酸序列一致的胺基酸序列的Fc鏈。「變異型」Fc鏈包含藉助於至少一個胺基酸修飾而與天然序列Fc鏈之胺基酸序列不同但又保留野生型Fc鏈之至少一種效應功能的胺基酸序列。在一些實施例中，相比於野生型Fc鏈，變異型Fc鏈具有至少一個野生型Fc鏈中之胺基酸取代，例如約一個至約十個胺基酸取代，且較佳約一個至約五個胺基酸取代。本文中的變異型Fc鏈將較佳與野生型Fc鏈具有至少約80%序列一致性，且最佳與其具有至少約90%序列一致性，更佳與其具有至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%序列一致性。在一些實施例中，Fc鏈包含部分或所有野生型鉸鏈區(通常在其N端)。在一些實施例中，Fc多肽不包含功能性或野生型鉸鏈區。

命名本文中所揭示之抗體域可用該域與之最緊密相關的各別目標抗原之指示符作為字首。僅僅添加字首以提供區分整個本發明中所描述之不同域的簡寫形式的清晰度，且不置換各種域之實際功能或結構或與其相衝突。舉例而言，IL4-VH係指包含可特異性結合至IL-4之CDR的抗體之可變重鏈域。IL4-CH1係指位於IL-4可變域C端的CH1域，無論該可變域為可變輕鏈域(IL4-VL)亦或為可變重鏈域(IL4-VH)。如整個本發明中所描述，本發明抗體之域可與來自其他抗體之域組合或融合。因此，舉例而言，IL4-VH可存在於具有IL13-VL之多肽鏈上，且各自可獨立地或一起存在於同一抗體中，且該多肽可稱為IL4-VH及IL13-VL兩者(參見圖18)。此外，舉例而言，攜帶IL4-VH的多肽為包含IL4-VH域之任何多肽，亦即包含特異性結合至IL-4之CDR的VH域。攜帶IL4-VH的多肽可包含鉸鏈區、CH1域、CH2域及CH3域，如標準IgG形式，或可包含如本文所描述之各種域，諸如IL13-VL，連同與IL4-VH或IL13-VL融合之CH1及CL域(關於抗體域之不同組合之說明參見圖18)。舉例而言，IL41333-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705之DFab LC(1)-HC(2)臂(參見圖18I)自N端至C端各自包含IL13-VL、CL、連接子、IL4-VH、CH1、CH2及CH3，且可稱為攜帶IL4-VH的多肽及攜帶IL13-VL的多肽兩者。此外，構架區可按其CDR所具有特異性的目標來提及。舉例而言，本發明之IL-4抗體之構架區可稱為IL4-VL構架或IL4-VH構架。熟習此項技術者應瞭解，此等名稱既不賦予亦不暗示該構架區與CDR特異性結合之目標之間的任何關係。因此，IL4-VL構架區可衍生自與已知人類DPK9生殖系序列一致之人類生殖系DPK9序列。此命名法不限於此段落中所例示之特異性抗體，且適用於本發明內可能的所有抗體及抗體組合。

抗體IL13433-1258、IL134TSLP-1024及IL134p40-0705可各自描述為包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，其中第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CL-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；及第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CL-1)；及第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)；第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。在各情況下，VL-1及VH-1為IL13-VL及IL13-VH；VL-2及VH-2為IL4-VL及IL4-VH，且VH-3及VL-3為IL33-VH及IL33-VL；或TSLP-VH及TSLP-VL；或p40-VH及p40-VL。

「單株抗體」(mAb)係指自單一複本或殖株(包括例如任何真核、原核或噬菌體殖株)衍生之抗體。單株抗體為高度特異性的，其針對單一抗原位。此外，與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原上之單個決定子。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，根據本發明所使用之單株抗體可藉由首先由Kohler及Milstein, 1975, Nature 256:495所描述之融合瘤方法製造，或可藉由諸如美國專利第4,816,567號中所描述之重組DNA方法製造。在另一實例中，單株抗體亦可自使用McCafferty等人，1990, Nature 348:552-554中所描述之技術生成的噬菌體庫中分離。

「人類抗體」係指一種抗體，其胺基酸序列對應於由人類產生或已使用用於製備全人類抗體之任何技術製備的抗體的胺基酸序列。舉例而言，全人類抗體可藉由使用已經工程改造以表現特異性人類免疫球蛋白之可商購的小鼠或藉由製備全人類抗體之庫(例如噬菌體、酵母菌或核糖體)呈現技術獲得。人類抗體之此定義特別排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。

「嵌合抗體」係指其中可變區序列源於一個物種且恆定區序列源於另一物種之抗體，諸如可變區序列源於小鼠抗體且恆定區序列源於人類抗體之抗體。

「人類化」抗體係指非人類(例如鼠類)抗體，其為含有源於非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。較佳地，人類化抗體為具有所需特異性、親和力及能力之人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之CDR的殘基經來自諸如小鼠、大鼠或家兔之非人類物種(供體抗體)之CDR的殘基置換。人類化抗體可包含以下殘基：既不存在於受體抗體中亦不存在於所導入之CDR或構架序列中，但包括該等殘基以進一步改進且最佳化抗體效能。

「抗原」係指用於對具有免疫潛能之脊椎動物免疫接種以產生識別抗原之抗體或篩選表現庫(例如噬菌體、酵母或核糖體呈現庫以及其他庫)以用於抗體選擇的分子實體。在本文中，抗原為較概括之稱呼且一般意欲包括藉由抗體特異性識別之目標分子，因此包括該分子之片段或模擬物，其用於使抗體產生之免疫接種法或篩選選擇抗體之庫中。

「抗原決定基」係指抗體特異性結合之抗原的區域或區，例如包含與抗體相互作用之殘基的區域或區，如此項技術中熟知之任何方法所確定。此項技術中已知許多對蛋白質上之抗原決定基位置進行定位及表徵的方法，包括求解抗體-抗原錯合物之晶體結構、競爭檢定、基因片段表現檢定、抗原決定基定位及基於合成肽之檢定，如例如Harlow及Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999之第11章中所描述。另外或替代地，在探索過程期間，抗體之生成及表徵可闡明關於所要抗原決定基之資訊。根據此資訊，隨後可競爭性篩選結合於相同抗原決定基之抗體。

如本文所用，術語「結合親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用之總和的強度。除非另外指明，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其配偶體Y之親和力通常可由解離常數(K _D)表示。分子X對其配偶體Y之親和力通常可由解離常數(Kd)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所描述之彼等方法)來量測親和力。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。此項技術中已知多種量測結合親和力的方法，其中任一者可用於本發明之目的。特定言之，術語「結合親和力」意欲指特定抗原-抗體相互作用之解離速率。K _D為解離速率(rate of dissociation) (亦稱為「解離速率(off-rate) (k _off)」)與締合速率(association rate) (或「締合速率(on-rate) (k _on)」)之比率。因此，K _D等於k _off/k _on且表示為莫耳濃度(M)。因此K _D愈小則結合親和力愈強。因此，與1 nM之K _D相比，1 μM之K _D指示較弱結合親和力。抗體之K _D值可使用此項技術中沿用已久之方法測定。一種測定抗體K _D之方法為藉由使用表面電漿子共振(SPR)，通常使用生物感測器系統，諸如BIACORE系統。BIACORE動力學分析包含分析抗原與在表面上具有固定分子(例如包含抗原決定基結合域之分子)之晶片的結合及解離。可例如使用基於表面電漿子共振之生物感測器，以在分析物關於結合經由捕獲試劑在低容量下固定於感測器表面上之配位體為單價之條件下表徵分析物/配位體相互作用，分別測定締合及解離速率常數k _on及k _off，以測定K _D及其他比率。可例如使用如Karlsson等人, Anal. Biochem349, 136-147, 2006中所描述之動力學滴定方法或使用多循環動力學分析進行分析。選擇用於給定分析之感測器晶片、捕獲試劑及分析緩衝劑以使配位體穩定捕獲至感測器表面上，使分析物與表面之非特異性結合最小化，且產生根據Myszka, J. Mol. Recognit12, 279-284, 1999中之建議適於動力學分析之分析物結合反應。根據分析物/配位體相互作用之分析結合反應經雙重參考，且擬合至1:1朗格繆爾(Langmuir)「質量輸送受限模型(mass transport limited model)」，其中k _a、k _d及R _max為如Myszka及Morton等人, Biophys. Chem 64, 127-137 (1997)中所描述之全局參數。平衡解離常數K _D由動力學速率常數之比率推導，K _D=k _off/k _on。此類測定較佳在25℃或37℃下進行。典型地，使用完全抗體及單體來量測速率常數(k _on或k _a及k _off或k _d)及平衡解離常數。另一種用於測定抗體之K _D之方法係藉由使用生物層干涉量測術(Bio-Layer Interferometry)，通常使用OCTET ^®技術(Octet QK ^e系統，ForteBio)。或者或另外，亦可使用KinExA (動力排除分析)分析，其購自Sapidyne Instruments (Boise, ID)。

如本文所用，術語「免疫特異性結合」、「免疫特異性識別」、「特異性結合」、「特異性識別」及類似術語係指特異性結合於抗原(例如抗原決定基或免疫複合物)且不特異性結合於另一分子的分子，例如結合域。特異性結合至抗原之分子可以較低親和力結合至其他肽或多肽，如藉由此項技術中已知之分析所測定，例如免疫分析、BIACORE™或其他分析。較佳地，特異性結合抗原之分子不與其他蛋白質交叉反應。

當參考抗體與蛋白質或肽之相互作用使用時，術語「特異性結合(specific binding)」或「特異性結合(specifically binding)」係指取決於蛋白質上特定結構(亦即抗原決定子或抗原決定基)之存在的相互作用；換言之，抗體識別且結合至特定蛋白質結構而非一般蛋白質。舉例而言，若抗體對抗原決定基「A」具有特異性，則含有抗原決定基A (或游離未標記A)之蛋白質在含有經標記「A」及抗體之反應中之存在將減少結合於抗體之經標記A的量。

在某些實施例中，「特異性結合」意謂例如抗體以約0.1 nM或更小，但更通常小於約1 μM之K _D結合蛋白質。在某些實施例中，「特異性結合」意謂抗體有時以至少約0.1 μM或更小、在其他時間至少約0.01 μM或更小且在其他時間至少約1 nM或更小之K _D結合目標。因為不同物種中之同源蛋白質之間的序列一致性，所以特異性結合可包括在超過一種物種中識別蛋白質的抗體。同樣，由於不同蛋白質之多肽序列之某些區域內的同源性，所以特異性結合可包括識別超過一種蛋白質之抗體。應理解，在某些實施例中，特異性結合第一目標之抗體或結合部分可或可不特異性結合第二目標。因此，「特異性結合」不一定需要(儘管其可包括)排他性結合，亦即結合於單一目標。因此，在一些實施例中，抗體可特異性結合超過一個目標。在某些實施例中，多個目標可結合於抗體上之同一抗原結合位。舉例而言，抗體可在某些情況下包含兩個相同抗原結合位，其中之每一者特異性結合兩個或更多個蛋白質上之相同抗原決定基。在某些替代實施例中，抗體可為多特異性的且包含至少兩個具有不同特異性之抗原結合位。作為非限制性實例，雙特異性抗體可包含識別一種蛋白質上之抗原決定基的一個抗原結合位且進一步包含識別第二蛋白質上之不同抗原決定基的第二不同抗原結合位。提及結合一般但未必意謂特異性結合。

特異性結合至抗原之抗體可以較低親和力結合至其他肽或多肽，如藉由此項技術中已知之分析，例如免疫分析、BIACORE™或其他分析所測定。較佳地，特異性結合抗原之抗體不與其他蛋白質交叉反應。

當關於抗體與蛋白質或肽之相互作用使用時，術語「非特異性結合」或「背景結合」係指不取決於特定結構之存在的相互作用(亦即，抗體一般地結合於蛋白質，而非特定結構，諸如抗原決定基)。

中和或「阻斷」抗體係指分別與選自由IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40組成之群中之一或多者結合的抗體，該抗體具有以下一或兩者：(i)干擾、限制或抑制IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40與適合配位體之間的相互作用；或(ii)按需要引起IL-4、IL-13、IL-33、TSLP或p40結合之至少一種生物功能的抑制。藉由本發明抗體確定中和的分析為此項技術中熟知的。

如本文所用，「結合至目標之抗體」；「識別目標之抗體」；「特異性結合目標之抗體」；「抗目標抗體」；「抗目標抗體分子」；「目標抗體」；或其類似物包含含有至少一個特異性結合至目標之結合域的分子。

「單特異性抗體」係指每分子包含一或多個抗原結合位以使得抗體之任何及所有結合位特異性識別抗原上之相同抗原決定基的抗體。因此，在單特異性抗體具有超過一個抗原結合位之情況下，結合位彼此競爭結合至一個抗原分子。

「雙特異性抗體」係指對至少兩個不同抗原決定基具有結合特異性的分子。在一些實施例中，雙特異性抗體可同時結合兩個不同抗原。在其他實施例中，兩個不同抗原決定基可存在於同一抗原上。

如本文所用，「三特異性抗體」為對三種不同抗原決定基具有結合特異性之抗體。在一些實施例中，三特異性抗體可同時結合三種不同抗原。在其他實施例中，三個不同抗原決定基可存在於同一抗原上。

如本文所用，「多特異性抗體」係對至少兩個不同抗原決定基具有結合特異性的抗體。在一些實施例中，多特異性抗體可同時結合至少兩種不同抗原。在其他實施例中，至少兩個不同抗原決定基可存在於相同抗原上。

如本文所用，術語「IL-4/IL-13/IL-33三特異性抗體」或「IL-4/IL-13/IL-33多特異性抗體」指經設計以特異性結合至IL-4、IL-13及IL-33之分子。如本文所用，術語「IL-4/IL-13/TSLP三特異性抗體」或「IL-4/IL-13/TSLP多特異性抗體」係指經設計以特異性結合於IL-4、IL-13及TSLP之分子。如本文所用，術語「IL-4/IL-13/p40三特異性抗體」或「IL-4/IL-13/p40多特異性抗體」指經設計以特異性結合至IL-4、IL-13及p40之分子。

術語「半數最大有效濃度(EC ₅₀)」係指在指定暴露時間之後引起介於基線與最大值之間一半的反應的治療劑濃度。治療劑可引起抑制或刺激。EC ₅₀值常用，且在本文中用作效能之度量。

術語「抑制濃度(IC ₅₀)」係指在其活性中達成50%抑制的抑制劑濃度。治療劑可引起抑制或刺激。IC ₅₀值常用，且在本文中用作效能之度量。

「促效劑」係指促進(亦即誘導、引起、增強或增加)另一分子之生物活性或作用的物質。術語促效劑涵蓋結合至分子以促進該分子之活性的物質(諸如抗體)。

「拮抗劑」係指防止、阻斷、抑制、中和或降低另一分子(諸如受體)之生物活性或作用的物質。術語拮抗劑涵蓋結合至分子以防止或降低該分子之活性的物質(諸如抗體)。

關於抗體，如本文所用之術語「競爭」意謂第一抗體以足夠類似於第二抗體之結合的方式結合至抗原決定基，使得在第二抗體存在下第一抗體與其同源抗原決定基之結合的結果與在缺乏第一抗體下第二抗體之結合相比可偵測地降低。替代方案可能但無需如此：在第一抗體存在下第二抗體與其抗原決定基之結合率亦可偵測地降低。亦即，在第二抗體不抑制第一抗體與其相應抗原決定基之結合的情況下，第一抗體可抑制第二抗體與其抗原決定基之結合。然而，當各抗體無論在相同、較大或較小的程度上可偵測地抑制另一抗體與其同源抗原決定基或配位體之結合時，該等抗體稱為彼此「交叉競爭」結合其各別抗原決定基。本發明涵蓋競爭及交叉競爭抗體兩者。無論該競爭或交叉競爭發生之機制(例如位阻、構形變化或結合至共同抗原決定基或其部分)如何，熟習此項技術者基於本文中所提供之教示內容將瞭解，該等競爭或交叉競爭抗體涵蓋於且可適用於本文中所揭示之方法中。

「宿主細胞」係指可為或已成為用於併入聚核苷酸插入物之一或多個載體之接受體的個別細胞或細胞培養物。宿主細胞包括單個宿主細胞之後代，且後代可能歸因於自然、偶然或故意突變而不一定與原始母細胞完全一致(在形態或基因體DNA互補序列方面)。宿主細胞包括經本發明之聚核苷酸活體內轉染之細胞。

「載體」係指構築體，其能夠在宿主細胞中遞送且較佳表現一或多種相關基因或序列(例如，抗體編碼基因)。載體之實例包括(但不限於)質體及病毒載體，且可包括裸核酸，或可包括與遞送輔助材料(例如陽離子縮合劑、脂質體等)相關之核酸。載體可包括DNA或RNA。如本文所用之「表現載體」係指包括與基因之轉錄或轉譯相關的至少一種多肽編碼基因、至少一種調節元件(例如啟動子序列、poly(A)序列)的載體。通常，本文所用之載體含有至少一種抗體編碼基因，以及調節元件或可選標記中之一或多者。載體組分可包括例如以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記基因；適合之轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於轉譯，亦可包括一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位、轉譯起始位及終止密碼子。

「經分離之」分子(例如經分離之抗體)係指如下分子：藉助於其來源或衍生源(1)不與在其天然狀態下伴隨其之天然相關組分締合；(2)基本上不含來自同一來源之其他分子，例如物種、表現其之細胞、庫等；(3)由來自不同物種之細胞表現；或(4)不在自然界中出現。因此，經化學合成或表現於與天然來源之系統不同之細胞系統中的分子將自其天然締合組分「分離」。使用此項技術中熟知之純化技術，藉由分離亦可使分子實質上不含天然締合組分。

如本文所用，術語「連接子」係指長度為兩個或更多個胺基酸之胺基酸序列。連接子可由中性極性或非極性胺基酸組成。連接子之長度可為例如2至100個胺基酸，諸如長度在2與50個胺基酸之間，例如長度為3、4、5、6、8、10、12、15、20、25、30、35、40、45或50個胺基酸。連接子可為「可裂解」的，例如藉由自裂解或酶裂解或化學裂解進行。胺基酸序列中之裂解位及在該等部位裂解之酶及化學物質為此項技術中熟知的且亦描述於本文中。在一些態樣中，連接子包含序列之一或多個重複單元，該序列包含甘胺酸及絲胺酸殘基。在一些態樣中，連接子包含一或多個G ₄S重複單元。在一些態樣中，連接子包含(G ₄S) _1-3。在一些態樣中，連接子為GGGGS (SEQ ID NO: 10)。

如本文所用，術語「二硫鍵」或「半胱胺酸-半胱胺酸二硫鍵」係指兩個半胱胺酸之間的共價相互作用，其中半胱胺酸之硫原子經氧化以形成二硫鍵。相比於氫鍵的1-2 kcal/mol，雙硫鍵之平均鍵能量為約60 kcal/mol。在本發明之上下文中，形成二硫鍵之半胱胺酸位於單鏈抗體之構架區內且用以使抗體之構形穩定。半胱胺酸殘基可例如藉由定點突變誘發引入，使得穩定二硫鍵可在分子內產生。

如本文所用，術語「連接」、「稠合」及「融合」可互換使用以指藉由任何手段，包括化學結合或重組手段使兩個更多個元件或組件接合在一起。

如本文所用，術語「共價連接」意謂特定部分直接彼此共價結合，或經由一或多個插入部分(諸如連接肽或部分)間接彼此共價連接。

如本文所用，術語「連接至」係指兩種或更多種蛋白質、多肽或其片段經由其個別肽主鏈之共線、共價連接或附接。舉例而言，一種多肽可經由編碼框內兩種多肽之單個聚核苷酸分子之基因表現而連接至另一種多肽。此類基因融合引起包含兩種多肽之單一連續蛋白質之表現。

如本文所用，術語「修飾」係指多肽序列中之胺基酸取代、插入或缺失；化學連接至蛋白質之部分改變；或蛋白質(例如抗體)功能之修飾。舉例而言，修飾可為改變的抗體功能或改變的連接於蛋白質之碳水化合物結構。如本文所用，「胺基酸修飾」係指抗體中之一或多個胺基酸殘基之突變(取代)、插入(添加)或缺失。術語「胺基酸突變」指示至少一個現存胺基酸殘基經另一不同胺基酸殘基之取代(例如置換胺基酸殘基)。術語「胺基酸缺失」表示在胺基酸序列中之預定位置移除至少一個胺基酸殘基。舉例而言，突變L234A指示抗體Fc區中位置234處之胺基酸殘基離胺酸經胺基酸殘基丙胺酸取代(離胺酸經丙胺酸取代) (編號根據EU索引編號系統)。

術語「試劑」在本文中用以指示生物大分子、由生物材料製成之提取物、生物大分子之混合物、化合物、化合物之混合物或化合物與生物大分子之混合物。術語「治療劑」係指具有生物活性之試劑。

「多肽」或「蛋白質」(在本文中可互換使用)係指任何長度之胺基酸鏈。鏈可為直鏈或分支鏈。鏈可包含經修飾之胺基酸中之一或多者。術語亦涵蓋已經天然或藉由干預修飾之胺基酸鏈；該干預例如形成雙硫鍵、醣基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或諸如與標記組分結合之任何其他操縱或修飾。該定義亦包括例如含有胺基酸之一或多種類似物(包括例如非天然胺基酸等)之多肽，以及此項技術中已知之其他修飾。應理解，多肽可作為單一鏈或相關鏈出現。

如本文所用，「第一多肽」為將與第二多肽結合之任何多肽。第一多肽及第二多肽在界面相接。除界面以外，第一多肽可包含一或多個額外域，諸如「結合域」(例如抗體可變域、受體結合域、配位體結合域或酶域)或抗體恆定域(或其部分)，包括CH2、CH1及CL域。通常，第一多肽將包含至少一個源於抗體之域。此域適宜地為恆定域，諸如抗體之CH3域且可形成第一多肽之界面。例示性第一多肽包括抗體重鏈多肽、組合抗體恆定域與異源多肽、受體多肽、配位體多肽及抗體可變域多肽之結合域的嵌合體(例如雙特異性抗體)。

除界面以外，第二多肽亦可包含額外域，諸如「結合域」(例如抗體可變域、受體結合域、配位體結合域或酶域)，或抗體恆定域(或其部分)，包括CH2、CH1及CL域。通常，第二多肽將包含至少一個源於抗體之域。此域適宜地為恆定區，諸如抗體之CH3域且可形成第二多肽之界面。例示性第二多肽包括抗體重鏈多肽、組合抗體恆定域與異源多肽及抗體可變域多肽之結合域的嵌合體(例如雙特異性抗體)。

「聚核苷酸」或「核酸」(在本文中可互換使用)係指任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼或其類似物，或任何可藉由DNA或RNA聚合酶併入鏈中之受質。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在，則可在鏈組裝之前或之後對核苷酸結構進行修飾。核苷酸序列可間雜有非核苷酸組分。聚核苷酸可進一步在聚合之後諸如藉由與標記組分結合而修飾。其他類型之修飾包括例如「封端」；用類似物取代天然存在之核苷酸中之一或多者；核苷酸間修飾，諸如具有不帶電鍵者(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)及具有帶電鍵者(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)，含有諸如蛋白質之側接部分者(例如核酸酶、毒素、抗體、訊號肽、聚-L-離胺酸等)、具有嵌入劑者(例如吖啶、補骨脂素等)、含有螯合劑者(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)、含有烷基化劑者、具有經修飾之鍵者(例如α變旋異構核酸等)以及聚核苷酸之未經修飾之形式。此外，一般存在於糖中之任何羥基可例如藉由膦酸酯基、磷酸酯基置換，藉由標準保護基保護，或經活化以製備與額外核苷酸之額外鍵聯，或可結合至固體支撐物。5'及3'端OH可經磷酸化或經1至20個碳原子之胺或有機封端基團取代。其他羥基亦可衍生成標準保護基。聚核苷酸亦可含有此項技術中一般已知之類似形式之核糖或去氧核糖，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-或β-變旋異構糖、差向異構糖(諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)；哌喃醣、呋喃醣、景天庚酮糖、非環類似物及無鹼基核苷類似物(諸如甲基核苷)。

如本文所用，分別地，核酸以5'至3'方向自左向右書寫；胺基酸序列以胺基至羧基方向自左向右書寫。對於此項技術之定義及術語，從業者尤其可參考Sambrook等人，1989及Ausubel FM等人，1993。應理解，本發明不限於所描述之特定方法、方案及試劑，因為其可變化。

本發明亦涵蓋與任何此類序列互補之聚核苷酸。聚核苷酸可為單股(編碼或解碼)或雙股的，且可為DNA (基因體、cDNA、或合成)或RNA分子。RNA分子包括成熟及未成熟mRNA，諸如前驅物mRNA (pre-mRNA)或異質核mRNA (hnRNA)及成熟mRNA。額外編碼或非編碼序列可能(但不必須)存在於本發明之聚核苷酸內，且聚核苷酸可能(但不必須)連接至其他分子或支撐物質。

一般熟習此項技術者應瞭解，由於遺傳密碼之簡併，存在許多編碼本文所提供之胺基酸序列的核苷酸序列。本發明尤其考慮由於密碼子使用差異而變化之聚核苷酸。

「保守性取代」係指由生物學上、化學上或結構上類似之殘基替代一種胺基酸。生物學上類似意謂取代基並不破壞生物活性。結構上類似意謂胺基酸之側鏈具有類似長度(諸如丙胺酸、甘胺酸及絲胺酸)或具有類似尺寸。化學相似性意謂殘基具有相同電荷或均為親水性或疏水性的。特定實例包括一種疏水性殘基(諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一種，或一種極性殘基取代另一種，諸如精胺酸取代離胺酸、麩胺酸取代天冬胺酸或麩醯胺酸取代天冬醯胺、絲胺酸取代蘇胺酸及類似取代。保守性取代之特定實例包括一種疏水性殘基(諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一種，一種極性殘基取代另一種，諸如精胺酸取代離胺酸、麩胺酸取代天冬胺酸或麩醯胺酸取代天冬醯胺及類似取代。保守性胺基酸取代通常包括例如以下基團內之取代：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸及白胺酸；天冬胺酸及麩胺酸；天冬醯胺酸及麩醯胺酸；絲胺酸及蘇胺酸；離胺酸及精胺酸；以及苯丙胺酸及酪胺酸。

本發明亦涵蓋對本文所提供之抗體的修飾，包括不顯著影響其特性的功能上等效之抗體及具有增強或降低之活性或親和力的變異體。舉例而言，胺基酸序列可經突變以獲得對IL-4、IL-13、IL-33、TSLP或p40具有所需結合親和力之抗體。經修飾多肽之實例包括具有胺基酸殘基之保守取代、胺基酸之一或多個缺失或添加的多肽，該等胺基酸不使功能活性產生顯著有害變化，或其使多肽對其配位體之親和力或化學類似物之使用成熟(增強)。

胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或超過一百個殘基之多肽範圍內的胺基端或羧基端融合，以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體或與抗原決定基標籤融合之抗體。抗體分子之其他插入型變異體包括與抗體在血液循環中之半衰期增加的酶或多肽之抗體的N或C端的融合體。

取代變異體將抗體分子中之至少一個胺基酸殘基移除且將不同殘基插入其位置。受到最大關注之取代型突變誘發位包括高變區，但亦涵蓋FR變化。保守取代以下展示為相同編號組(1至6)內之殘基。若此類取代導致生物活性變化，則可引入命名為「例示性取代」如下文關於胺基酸類別所進一步描述之更多實質性變化，且篩選產物。

抗體之生物特性的實質改變係藉由選擇取代實現，該等取代在其對維持以下的作用上顯著不同：(a)取代區域中多肽主鏈之結構，例如片或螺旋構形，(b)目標位處分子之電荷或疏水性，或(c)側鏈之體積。基於常見側鏈特性，將天然存在之胺基酸殘基劃分成以下組： (1)非極性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)極性，不帶電荷：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性(帶負電荷)：Asp、Glu； (4)鹼性(帶正電荷)：Lys、Arg； (5)影響鏈取向之殘基：Gly、Pro；及 (6)芳族：Trp、Tyr、Phe、His。

非保守性取代藉由將此等種類之一者中的一員換成另一種類來進行。

不參與維持抗體之適當構形之任何半胱胺酸殘基一般亦可經絲胺酸取代，以提高分子之氧化穩定性且防止異常交聯。反之，尤其當抗體為諸如Fv片段之抗體片段時，可將半胱胺酸鍵添加至抗體以提高其穩定性。

胺基酸修飾的範圍可為改變或修飾一或多個胺基酸至完全重新設計區域，諸如可變區。可變區之變化可改變結合親和力及/或特異性。在一些實施例中，在CDR域內進行不超過一至五個保守胺基酸取代。在其他實施例中，在CDR域內進行不超過一至三個保守胺基酸取代。在另其他實施例中，CDR域為VH CDR3或VL CDR3中之任一者或兩者。

修飾亦包括醣基化及非醣基化多肽，以及具有其他轉譯後修飾，諸如使用不同糖之醣基化、乙醯化及磷酸化之多肽。抗體在其恆定區中之保守位置處醣基化(Jefferis及Lund, Chem. Immunol. 65:111-128, 1997；Wright及Morrison, TibTECH 15:26-32, 1997)。免疫球蛋白之寡醣側鏈影響蛋白質功能(Boyd等人, Mol. Immunol. 32:1311-1318, 1996；Wittwe及Howard, Biochem. 29:4175-4180, 1990)及醣蛋白之各部分之間的分子內相互作用，其可影響醣蛋白之構形及所呈現之三維表面(Jefferis及Lund，同上；Wyss及Wagner, Current Opin. Biotech. 7:409-416 1996)。寡糖亦可用於使指定醣蛋白基於特異性識別結構而靶向某些分子。亦已報導抗體之醣基化影響抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。特定而言，據報導，具有β(1,4)-N-乙醯葡糖胺基轉移酶III (GnTIII) (一種糖基轉移酶，其催化等分GlcNAc的形成)之四環素調節之表現的CHO細胞具有提高之ADCC活性(Umana等人，Mature Biotech. 17:176-180, 1999)。

抗體之醣基化典型地為N-連接或O-連接的。N-連接係指碳水化合物部分與天冬醯胺殘基之側鏈附接。三肽序列天冬醯胺-X-絲胺酸、天冬醯胺-X-蘇胺酸及天冬醯胺-X-半胱胺酸(其中X為除了脯胺酸之外的任何胺基酸)為用於碳水化合物部分酶促附接至天冬醯胺側鏈之識別序列。因此，在多肽中此等三肽序列中之任一者的存在產生潛在醣基化位。O-連接之醣基化係指糖N-乙醯基半乳胺糖、半乳糖或木糖中之一者附接至羥胺基酸，最常見為絲胺酸或蘇胺酸，儘管亦可使用5-羥基脯胺酸或5-羥基離胺酸。

宜藉由改變胺基酸序列從而使其含有上述三肽序列中之一或多者，來實現向抗體添加醣基化位(針對N-連接之醣基化位)。亦可藉由向原始抗體之序列添加一或多個絲胺酸或蘇胺酸殘基或用該等殘基取代原始抗體之序列來進行改變(針對O-連接之醣基化位)。

亦可在不改變基本核苷酸序列之情況下改變抗體之醣基化模式。醣基化很大程度上視用以表現抗體之宿主細胞而定。因為用於重組醣蛋白，例如作為潛在治療劑之抗體之表現的細胞類型很少為原生細胞，所以可預期抗體醣基化模式之改變(參見例如Hse等人，J. Biol. Chem. 272:9062-9070, 1997)。

術語「一致性」或「與一致」係指聚合分子之間，例如核酸分子(例如DNA分子或RNA分子)之間或多肽分子之間的總體相關性。「一致性」量測間隙對準藉由電腦程式之特定數學模型(例如「演算法」)定址之兩個或更多個序列之間的一致匹配百分比，其為此項技術中熟知的。

術語「增加」、「提高」、「降低」或「減少」係指相對於基線量測值之值，諸如在開始本文所描述之治療之前相同個體之量測值，或在不存在本文所描述之治療情況下對照個體(individual或subject) (或多個對照個體)之量測值。在一些實施例中，「對照個體」為罹患與所治療之個體相同形式的疾病或損傷之個體。在一些實施例中，「對照個體」為未罹患與所治療之個體相同形式之疾病或損傷的個體。

術語「賦形劑」係指與所關注的活性成分(例如抗體)組合，允許活性成分保留生物活性之任何材料。賦形劑之選擇在很大程度上將視諸如投與模式、賦形劑對溶解性及穩定性之影響及劑型性質的因素而定。如本文所用，「賦形劑」包括生理學上相容的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑、載劑、稀釋劑及其類似物。賦形劑之實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及其類似物中之一或多者以及其組合，且在組合物中可包括等張劑，例如糖、氯化鈉或多元醇(諸如甘露醇)或山梨醇。

術語「癌症」、「癌性」或「惡性」係指或描述哺乳動物中之生理學病狀，其特徵典型地在於不受調控之細胞生長。癌症之實例包括但不限於癌瘤、淋巴瘤、白血病、母細胞瘤及肉瘤。該等癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌、骨髓瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、神經膠質瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性骨髓性白血病(AML)、多發性骨髓瘤、胃腸(道)癌、腎癌、卵巢癌、肝癌、淋巴母細胞白血病、淋巴球性白血病、大腸直腸癌、子宮內膜癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺癌、黑色素瘤、軟骨肉瘤、神經母細胞瘤、胰臟癌、多形性膠質母細胞瘤、子宮頸癌、腦癌、胃癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、大腸癌及頭頸癌。癌症之另一特定實例包括腎細胞癌。

「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之類別包括(但不限於)：烷基化劑、抗代謝劑、激酶抑制劑、紡錘體毒素植物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓樸異構酶抑制劑、光敏劑、抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)、抗孕酮劑、雌激素受體下調劑(ERD)、雌激素受體拮抗劑、黃體生成荷爾蒙釋放荷爾蒙促效劑、抗雄激素劑、芳香酶抑制劑、EGFR抑制劑、VEGF抑制劑及反義寡核苷酸，其抑制與異常細胞增殖或腫瘤生長有關之基因之表現。適用於本發明之治療方法之化學治療劑包括細胞生長抑制及/或細胞毒素劑。化學治療劑進一步描述於本文別處。

如本文所使用，「RECIST 1.1反應準則」意謂Eisenhauer等人, E.A.等人, Eur. J Cancer 45:228-247 (2009)中關於目標病灶或非目標病灶所闡述之定義，按需要基於其中量測反應之情形。

「持續反應」意謂在停止用治療劑或本文所描述之組合療法治療之後之持續治療效果。在一些實施例中，持續反應具有至少與治療持續時間相同或至少為治療持續時間之1.5、2.0、2.5或3倍長之持續時間。

「組織切片」係指單一部分或塊之組織樣品，例如，自正常組織或腫瘤之樣品切割之組織之薄切片。

如本文所用「治療(treat)」或「治療(treating)」癌症意謂向患有癌症或經診斷患有癌症之個體投與至少一種第一治療劑及第二治療劑的組合療法，以達成至少一種積極治療作用，諸如癌細胞數目減少、腫瘤尺寸減小、癌細胞浸潤至周邊器官中之速率降低或腫瘤轉移或腫瘤生長速率降低。可以多種方式量測癌症中之正性治療性作用(參見W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009))。舉例而言，關於腫瘤生長抑制(T/C)，根據國家癌症研究所(National Cancer Institute；NCI)標準，T/C小於或等於42%為抗腫瘤活性之最低水平。T/C ＜ 10%被視為高抗腫瘤活性水平，其中T/C (%) =經治療之腫瘤體積中值/對照物之腫瘤體積中值×100。在一些實施例中，藉由本發明之組合達成之治療係以下中之任一者：部分反應(PR)、完全反應(CR)、總體反應(OR)、無進展存活率(PFS)、無疾病存活率(DFS)及總存活率(OS)。PFS (亦稱為「腫瘤進展時間」)指示在癌症不生長之治療期間及之後的時間長度，且包括患者已經歷CR或PR之時間量以及患者已經歷穩定疾病(SD)之時間量。DFS係指在患者保持無疾病之治療期間及之後的時間長度。OS係指與未處理或未經治療之個體或患者相比預期壽命延長。在一些實施例中，對本發明之組合之反應為使用實體腫瘤中之反應評估準則(RECIST)1.1反應準則評估之PR、CR、PFS、DFS、OR或OS中之任一者。可有效治療癌症患者之本發明之組合之治療方案可根據諸如疾病病況、患者之年齡及體重以及療法引發個體中之抗癌反應之能力之因素而變化。儘管本發明之態樣中之任一者之一實施例在每一個個體中實現正性治療作用方面可能並不有效，但其應在統計顯著數目之個體中有效，如藉由此項技術中已知的任何統計測試所測定，諸如斯圖登氏t檢驗(Student's t - test)、chi2測試、根據Mann及Whitney之U測試、克拉斯卡-瓦立斯測試(Kruskal-Wallis test) (H測試)、瓊克希爾-特普斯特拉測試(Jonckheere-Terpstra-test)及威爾科克森測試(Wilcoxon-test)。

術語「治療方案」、「給藥流程」及給藥方案可互換地用於指本發明之組合中各種治療劑之投與劑量及時序。

如本文所用，「治療」為用於獲得有利的或所要臨床結果之途徑。有利或所要臨床結果包括(但不限於)以下中之一或多者：減少(或毀壞)贅生性或癌細胞之增殖，抑制贅生性細胞轉移，縮小或減小腫瘤尺寸。

如本文所用，「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」為用於獲得有益或所要結果之方法。出於本發明之目的，治療定義為向個體(例如患者)投與抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/抗IL-13雙特異性、抗IL-4/抗IL-13多特異性、抗IL-4/抗IL13/抗IL-33三特異性；抗IL-4/抗IL13/抗TSLP三特異性；抗IL-4/抗IL13/抗p40三特異性。此類投與可例如藉由向個體直接投與或藉由施用至來自個體之分離組織或細胞，其後返回至個體。抗體分子可單獨或與一或多種藥劑組合投與。治療可為治癒、癒合、減輕、緩解、改變、補救、改善、緩和、改良或影響病症、病症之症狀或病症之傾向性，例如一或多種選自由以下組成之群的疾病或病狀：異位性皮膚炎、異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。

術語「預防(prevent)」或「預防(prevention)」係指相關病症之至少一種徵象或症狀之發作延遲、頻率降低或嚴重程度降低中之一或多者。在一些實施例中，在群體基礎上評估預防以使得若在易患疾病、病症或病狀之群體中觀測到疾病、病症或病狀之一或多個症狀之發展、頻率或強度之統計學上顯著的降低，則藥劑被視為「預防」特定疾病、病症或病狀。當疾病、病症或病狀之發作已延緩預定時間段時，預防可視為完成。

術語「個體(subject)」、「個體(individual)」或「患者」(在本文中可互換使用)係指任何動物，包括哺乳動物。根據本發明之哺乳動物包括犬、貓、牛、山羊、馬、綿羊、豬、嚙齒動物、兔類動物、靈長類動物、人類以及類似動物，且涵蓋未出生之哺乳動物。在一實施例中，人類為適合個體。人類個體可為任何性別且處於任何發育階段。在一些實施例中，個體為患有一或多種選自由以下組成之群的疾病或病狀的患者：異位性皮膚炎、異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎。

術語「治療有效量」係指在組織、系統、動物、個體或人類中引發由研究人員、獸醫、醫生或其他臨床醫師探尋之生物或醫學反應之活性成分之量，其可包括以下中之一或多者： (1)預防疾病；例如，預防可能易患該疾病、病狀或病症但尚未經歷或顯示該疾病之病變或症狀之個體之疾病、病狀或病症； (2)抑制疾病；例如，抑制正經歷或顯示該疾病、病狀或病症之病變或症狀之個體之疾病、病狀或病症(亦即，遏制或延緩病變或症狀進一步發展)；及 (3)減輕疾病；例如，減輕正經歷或顯示該疾病、病狀或病症之病變或症狀的個體的疾病、病狀或病症(亦即，逆轉病變或症狀)。

對於治療用途，有益或所要結果包括諸如降低患者中癌症之一或多種症狀之發生率或改善的臨床結果。

「腫瘤」在應用於經診斷患有或懷疑患有癌症之個體時係指任何大小之惡性或潛在惡性贅瘤或組織塊狀物，且包括原發性腫瘤及繼發性贅瘤。實體腫瘤為通常不含囊腫或液體區域之組織之異常生長或塊狀物。不同類型之實體腫瘤以形成其之細胞類型而命名。實體腫瘤之實例為肉瘤、癌瘤及淋巴瘤。白血病(血液癌)通常不形成實體腫瘤(國家癌症學會(National Cancer Institute)，癌症術語詞典(Dictionary of Cancer Terms))。

「腫瘤負荷」亦稱為「腫瘤負載」，係指分佈於體內之腫瘤材料之總量。腫瘤負荷係指體內(包括淋巴結及骨髓)癌細胞之總數或腫瘤之總尺寸。腫瘤負荷可藉由此項技術中已知之多種方法，諸如藉由在自個體移出之後例如使用測徑規量測腫瘤之尺寸，或當在體內時使用成像技術，例如超音波、骨掃描、電腦斷層攝影術(CT)或磁共振成像(MRI)掃描來測定。

術語「腫瘤尺寸」係指可作為腫瘤之長度及寬度量測的腫瘤之總尺寸。腫瘤尺寸可藉由此項技術中已知之多種方法，諸如藉由在自個體移出之後例如使用測徑規量測腫瘤之尺寸，或當在體內時使用成像技術，例如骨掃描、超音波、CT或MRI掃描來測定。

IL-33 之抗體本發明提供與IL-33結合之抗體。IL-33抗體可結合一或多個額外目標。IL-33亦稱為9orf26、DVS27、IL1F11、NF-HEV、NFEHEV及IL-1F11。如本文中所使用，術語「IL-33」包括IL-33之變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-33 (諸如食蟹獼猴之IL-33)以及不同形式之IL-33交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-33完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL-33係指天然產生之人類IL-33。「IL-33抗體」「抗IL-33抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-33、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。IL-33之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號095760表示。鼠類IL-33之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號Q8BVZ5表示。在一些態樣中，本發明之IL-33抗體特異性結合人類IL-33之殘基112-270。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-33抗體，其具有如表82、84、85、86及87中之一或多者中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-33之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，抗體包含表82、84、85、86及87中之一或多者中所示的重鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表82、84、85、86及87中之一或多者中所示的輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含各自展示於表82、84、85、86及87中之一或多者中的重鏈可變區中之任一者的三個CDR及輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。

在一些實施例中，抗體包含選自表82、84、85、86及87中之一或多者的lL-33抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含選自表82、84、85、86及87中之一或多者的lL-33抗體的VH及VL。在一些實施例中，抗體包含選自表82、84、85、86及87中之一或多者的lL-33抗體的HC及LC。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-33抗體，其含有表82、84、85、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表82、84、85、86及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 63之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 71之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 80之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 81之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 73之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO:78之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，包含SEQ ID NO: 73之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 78之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 75之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 76之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 77之胺基酸序列。

IL-33抗體可包含有包含人類生殖系VH構架序列之IL33-VH構架序列。IL33-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL33-VH構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-33抗體包含IL33-VH構架序列，其相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之此等部分之VH的類似性。

在一些態樣中，IL33-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：DP47、DP48、DP50、DP51、DP54及DP77。在一些態樣中，IL33-VH構架序列衍生自DP54。

IL33-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：IGHV3-7*01/3-7*02/3-7*03、IGHV3-23*01/3-23D*01、IGHV3-23*04/3-23D*02、IGHV3-23*02、IGHV3-64*04、IGHV3-13*01/3-13*04、IGHV3-48*01/3-48*04、IGHV3-48*03、IGHV3-48*02、IGHV3-13*05、IGHV3-21*01/3-21*02/3-21*03/3-21*04及IGHV3-33*01/3-33*04。在一些態樣中，IL33-VH構架序列衍生自IGHV3-7*01/3-7*02/3-7*03。

本發明已鑑別出人類生殖系VH構架IGHV3-7*01/3-7*02/3-7*03 (DP-54)與本發明之IL33-VH CDR高度有利。有利地，其他生殖系亦可與本發明之IL33-CDR一起使用，諸如IGHV3-23*01/3-23D*01 (DP-47)及其他IGHV3-23基因座生殖系，包括IGHV3-23*04/3-23D*02及IGHV3-23*02、IGHV3-64*04、IGHV3-13*01/3-13*04 (DP-48)、IGHV3-48*01/3-48*04、IGHV3-48*03、IGHV3-48*02 (DP-51)、IGHV3-13*05、IGHV3-21*01/3-21*02/3-21*03/3-21*04 (DP-77)及IGHV3-33*01/3-33*04 (DP-50)。將前述構架模型化以與本發明之IL33-VH CDR相容。

IL-33抗體可包含有包含人類生殖系VL構架序列之IL33-VL構架序列。IL33-VL構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL33-VL構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-33抗體包含IL33-VL構架序列，其相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。

在一些態樣中，IL33-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。在一些態樣中，IL33-VL構架序列衍生自DPK9。

IL33-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列：IGKV1-39*01/1D-39*01、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-27*01、IGKV1-NL1*01、IGKV1-17*01、IGKV1-17、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03、IGKV1-33*01/1D-33*01、IGKV1-6*01/1-6*02、IGKV1-12*01/1-12*02/1D-12*01/1D-12*02、IGKV1-5*03、IGKV1-5、IGKV1-5*01、IGKV1-5*02、IGKV1D-16*01及IGKV1-9*01。在一些態樣中，IL33-VL構架序列衍生自IGKV1-39*01/1D-39*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VL構架IGKV1-39*01/1D-39*01 (DPK9)與本發明之IL33-VL CDR高度有利。移植至IL33-VL CDR之其他替代生殖系包括：IGKV1-16*01及其他IGKV1-16基因座生殖系，包括IGKV1-16*02、IGKV1-27*01 (DPK4)、IGKV1-NL1*01、IGKV1-17*01，以及其他IGKV1-17生殖系基因座，包括IGKV1-17*02及IGKV1-17*03、IGKV1-33*01/1D-33*01 (DPK1)、IGKV1-6*01/1-6*02 (DPK3)、IGKV1-12*01/1-12*02/1D-12*01/1D-12*02 (DPK5)、IGKV1-5*03，以及其他IGKV1-5基因座生殖系，包括IGKV1-5*01及IGKV1-5*02、IGKV1D-16*01 (DPK7)、IGKV1-9*01 (DPK8)。將前述構架模型化以與本發明之IL33-VL CDR相容。

在本發明之一些態樣中，抗體之IL33-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在本發明之一些態樣中，抗體之IL33-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。IL33-CL可包含根據SEQ ID NO: 16之序列。IL33-CH1可包含根據SEQ ID NO: 6之序列。IL33-CH1及IL33-CL可各為多特異性抗體之一部分。

IL33-CH1可連接至IL33-VL，且IL33-CL可連接至形成IL33-結合域-交換Fab域(IL33-xFab)之IL33-VH。域-交換Fab描繪於圖18D、G及H中。或者，IL33-CH1可連接至IL33-VH，且IL33-CL可連接至形成IL-33結合Fab域(IL33-Fab)之IL33-VL。Fab域描繪於圖18A、B、C、E、F及I中。

本發明之IL-33抗體可包含鉸鏈區。鉸鏈區可以選自任何適合的序列，包括選自表82、85及87中之任一者的序列。在一些態樣中，鉸鏈區選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群。

IL33-CL可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區接著連接至CH2域。或者，IL33-CH1可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區隨後連接至CH2域。CH2區可包含選自表80、81、82、83、85及87中之任一者的序列。CH2域可包含SEQ ID NO: 8。CH2區可連接至CH3區。CH3區可包含選自表80、81、82、83、85及87中之任一者的序列。CH3區可包含選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148組成之群的序列。

IL33-HC可包含選自表82、85及87中之任一者的序列。IL33-HC可包含與選自由SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 128、SEQ ID NO: 132、SEQ ID NO: 134、SEQ ID NO: 137、SEQ ID NO: 142及SEQ ID NO: 143組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

攜帶IL33-VL的多肽可包含選自表82、85及87中之任一者的序列。攜帶IL33-VL的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 121及SEQ ID NO: 138、SEQ ID NO: 144及SEQ ID NO: 145組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

本發明之IL-33抗體有利地在一個數量級或更低內結合至人類及食蟹獼猴兩者。此有助於使用動物及毒理學資料告知人類給藥。與親本抗體相比，本發明之IL-33抗體有利地具有改良之結合親和力及IL-33中和。

本發明之IL-33抗體表明CDRL1殘基28之去醯胺傾向減少。較佳地，藉由N28之突變移除及用替代殘基置換來達成減少之去醯胺。在一些態樣中，IL-33抗體包含在位置28處不包含Asn殘基之CDRL1。在一些態樣中，IL-33抗體在CDRL1之位置28處包含Pro殘基。

本發明之IL-33抗體表明CDRL1殘基30之去醯胺傾向減少。較佳地，藉由N30之突變移除及用替代殘基置換來達成減少之去醯胺。在一些態樣中，IL-33抗體包含在位置30處不包含Asn殘基之CDRL1。在一些態樣中，IL-33抗體在CDRL1之位置28處包含His殘基。

在一些態樣中，相較於親本抗體，IL-33抗體包含改良之結合親和力。改良可為至少10倍的較佳結合。本發明之IL-33抗體可以小於1 pM之親和力結合至IL-33。本發明之IL-33抗體可以小於500 fM之親和力結合至IL-33。本發明之IL-33抗體可以小於250 fM之親和力結合至IL-33。結合親和力可藉由動力學排除分析(KinExA)測定。KinExA可以用Sapidyne的KinExA Pro軟體4.3.1.1版進行分析。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-33之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)，其中IL33-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL33-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-33之經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列。在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-33之經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之攜帶IL33-VH的多肽序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之攜帶IL33-VL的多肽序列。

TSLP 之抗體本發明提供與TSLP結合之抗體。TSLP抗體可結合一或多個額外目標。TSLP亦稱為胸腺基質淋巴蛋白。如本文中所使用，術語「TSLP」包括TSLP之變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物中之一或多者。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之TSLP (諸如食蟹獼猴之TSLP)以及不同形式之TSLP交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類TSLP完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語TSLP係指天然產生之人類TSLP。「TSLP抗體」「抗TSLP抗體」或其他類似名稱意謂結合TSLP、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。TSLP之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號Q969D9表示。小鼠TSLP之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號Q9JIE6表示。

在一些實施例中，本發明提供TSLP抗體，其具有如表83、84、85、86及87中之一或多者中發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對TSLP之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，抗體包含表83、84、85、86及87中之一或多者中所示的重鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表83、84、85、86及87中之一或多者中所示的輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含各自展示於表83、84、85、86及87中之一或多者中的重鏈可變區中之任一者的三個CDR及輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。

在一些實施例中，抗體包含選自表83、84、85、86及87中之一或多者之TSLP抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含各選自表83、84、85、86及87中之一或多者的TSLP抗體的VH及VL。在一些實施例中，抗體包含各自選自表83、84、85、86及87中之一或多者的TSLP抗體的HC及LC。

在一些實施例中，本發明提供抗TSLP抗體，其含有表83、84、85、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表83、84、85、86及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 93之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 214之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (v) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (vi) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (vii) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 223之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 214之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列。

TSLP抗體可包含有包含人類生殖系VH構架序列之TSLP-VH構架序列。TSLP-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該TSLP-VH構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，TSLP抗體包含TSLP-VH構架序列，其相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之此等部分之VH的類似性。

在一些態樣中，TSLP-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：DP47、DP49、DP50、DP54及DP53。在一些態樣中，TSLP-VH構架序列衍生自DP50。

TSLP-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：IGHV3-33*01、IGHV3-7*01、IGHV3-33*02、IGHV3-30*03、IGHV3-30*04、IGHV3-30*01、IGHV3-23*01、IGHV3-23*03、IGHV3-74*01及IGHV3-74*03。在一些態樣中，TSLP-VH構架序列衍生自IGHV3-33*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VH構架IGHV3-33*01 (DP-50)對於本發明之TSLP-VH CDR高度有利。TSLP-0875 V _H與DP-50具有一個構架差異：V(H2)M。親本抗體亦與DP-50具有一個構架差異：V(H2)M。本發明人已在實驗測試中確認，將V _HCDR移植至具有V(H2)M構架反突變之IGHV3-7*01 (DP-54)上係具有完全活性的。模型化以有利於TSLP V _HCDR移植之其他生殖系包括IGHV3-33*02、IGHV3-30*03 (DP-49)、IGHV3-30*04，及其他IGHV3-30基因座生殖系，包括IGHV3-30*01、IGHV3-23*01 (DP-47)，及其他IGHV3-23基因座生殖系，包括IGHV3-23*03、IGHV3-74*01 (DP-53)，及其他IGHV3-74基因座生殖系，包括IGHV3-74*03。將前述構架模型化以與本發明之TSLP-VH CDR相容。

TSLP抗體可包含有包含人類生殖系VL構架序列之TSLP-VL構架序列。TSLP-VL構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該TSLP-VL構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，TSLP抗體包含TSLP-VL構架序列，其相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。

在一些態樣中，TSLP-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8、DPK9及DPK24。在一些態樣中，TSLP-VL構架序列衍生自DPK9。

TSLP-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列：IGKV1-39*01、IGKV4-1*01、1D-39*01、IGKV1-12*01、IGKV1-9*01、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-33*01/1D-33*01、IGKV1-27*01、IGKV1D-16*01、IGKV1-13*02/1D-13*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03及IGKV1-6*01/1-6*02。在一些態樣中，TSLP-VL構架序列衍生自IGKV1-39*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VL構架DPK9 (IGKV1-39*01)與本發明之TSLP-VL CDR高度有利。亦預測IGKV4-1*01 (DPK24)為高度有利的，因為其與GSK 3B9 VL功能良好。有利地，可與本發明之IL4-VH區一起使用之其他VH生殖系包括由以下組成之群：1D-39*01、IGKV1-12*01 (DPK5)、IGKV1-9*01 (DPK8)、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-33*01/1D-33*01 (DPK1)、IGKV1-27*01 (DPK4)、IGKV1D-16*01 (DPK7)、IGKV1-13*02/1D-13*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03及IGKV1-6*01/1-6*02 (DPK3)。將前述構架模型化以與本發明之TSLP-VL CDR相容。

在本發明之一些態樣中，抗體之TSLP-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在本發明之一些態樣中，抗體之TSLP-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。TSLP-CH1可包含根據SEQ ID NO: 6之序列。TSLP-CL可以包含根據SEQ ID NO: 95之序列。TSLP-CH1及TSLP-CL可各為多特異性抗體之一部分。

TSLP-CH1可連接至TSLP-VL，且TSLP-CL可連接至形成TSLP-結合域-交換Fab域(TSLP-xFab)之TSLP-VH。域-交換Fab描繪於圖18D、G及H中。替代地，TSLP-CH1可連接至TSLP-VH，且TSLP-CL可連接至形成TSLP-結合Fab域(TSLP-Fab)之TSLP-VL。Fab域描繪於圖18A、B、C、E、F及I中。

本發明之TSLP抗體可包含鉸鏈區。鉸鏈區可以選自任何適合的序列，包括選自表82、85及87中之任一者的序列。在一些態樣中，鉸鏈區選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群。

TSLP-CL可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區接著連接至CH2域。或者，TSLP-CH1可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區隨後連接至CH2域。CH2區可包含選自表80、81、82、83、85及87中之任一者的序列。CH2域可包含SEQ ID NO: 8。CH2區可連接至CH3區。CH3區可包含選自表80、81、82、83、85及87中之任一者的序列。CH3區可包含選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148組成之群的序列。

攜帶TSLP-VH的多肽可包含選自表83、84及87中之任一者的序列。攜帶TSLP-VH的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 97、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 155、SEQ ID NO: 158、SEQ ID NO: 161、SEQ ID NO: 165及SEQ ID NO: 222組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%一致的序列。

攜帶TSLP-VL的多肽可包含選自表83、84及87中之任一者的序列。攜帶TSLP-VL的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 98、SEQ ID NO: 99、SEQ ID NO: 150、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 160、SEQ ID NO: 215、SEQ ID NO: 216及SEQ ID NO: 224組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%一致的序列。

本發明之TSLP抗體有利地在一個數量級或更低內結合至人類及食蟹獼猴兩者。此有助於使用動物及毒理學資料來提供告知人類給藥。與親本抗體相比，本發明之TSLP抗體有利地具有改良之結合親和力及TSLP中和。

經人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中所量測，本發明之TSLP抗體展現改良之抗TSLP生物活性。經人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中所量測，TSLP抗體展現小於10 pM之IC ₅₀的抗TSLP生物活性。經人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中所量測，TSLP抗體展現小於6 pM之IC ₅₀的抗TSLP生物活性。

本發明之TSLP抗體展現改良的抗TSLP生物活性的組合，同時使黏度的增加降至最低。本發明之TSLP抗體在至少100 mg/mL濃度時的黏度為20 cP。本發明之TSLP抗體在至少110 mg/mL濃度時的黏度為20 cP。本發明之TSLP抗體在至少120 mg/mL濃度時的黏度為20 cP。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中TSLP-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及TSLP-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中TSLP-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及TSLP-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA------之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之TSLP-VL序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。

在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA------之質體編碼之TSLP-VL序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA------之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。

在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA------之質體編碼之TSLP-VL序列。在一些態樣中，本發明提供經分離之抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列。

p40 之抗體本發明提供與p40結合之抗體。本發明之抗p40抗體可結合一或多種額外目標。P40亦稱為IL12B、CLMF、CLMF2、IL-12B、IMD28、NKSF、NKSF2及IMD29。如本文中所使用，術語「p40」包括p40之變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物中之一或多者。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之p40 (諸如食蟹獼猴之p40)以及不同形式之p40交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類p40完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語p40係指天然產生之人類p40。「p40抗體」「抗p40抗體」或其他類似名稱意謂結合p40、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。p40之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P29460表示。食蟹獼猴p40之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號G7P6S2表示。

p40抗體可包含有包含人類生殖系VH構架序列之p40-VH構架序列。p40-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該p40-VH構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架序列與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，p40抗體包含p40-VH構架序列，其相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之此等部分之VH的類似性。

本發明提供一種經分離之抗體，其經由p40結合域特異性結合至p40且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由以下組成之群的抗原的額外抗原結合域：IL-4、IL-13、IL-33及TSLP，其中該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其包含SEQ ID NO: 169之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 175之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

本發明提供一種經分離之抗體，其經由p40結合域特異性結合至p40且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由以下組成之群的抗原的額外抗原結合域：IL-4、IL-13、IL-33及TSLP，其中該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列。

p40抗體亦可包含特異性結合至IL-4之IL-4結合域及特異性結合至IL-13之IL-13結合域中之一或兩者。

在一些態樣中，p40-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：DP3、DP7、DP73、DP75及DP88。在一些態樣中，TSLP-VH構架序列衍生自DP73。

p40-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：IGHV5-51*01/5-51*03、IGHV1-46*01/1-46*03、IGKV1-39*01、IGHV5-51*02、IGHV5-51*04、IGHV1-46*02、IGHV1-69-2*01、IGHV1-69*08、IGHV1-69*02、IGHV1-69*06/1-69*14、IGHV1-69*04/1-69*09及IGHV1-2*02。在一些態樣中，p40-VH構架序列衍生自IGHV5-51*01/5-51*03。

本發明已鑑別出人類生殖系IGHV5-51*01/5-51*03 (DP-73)對於本發明之p40-VH CDR高度有利。實驗資料表明，對於V _L及VK1-33 (具有L46S突變)，IGHV1-46*01/1-46*03 (DP-7)及IGKV1-39*01或DPK9 (具有L46S突變)在移植之後有利地能夠在約3-4倍範圍內保持結合。適用於本發明之p40-VH CDR之其他可能生殖系包括其他IGHV5-51基因座生殖系IGHV5-51*02及IGHV5-51*04，其他IGHV1-46基因座生殖系，諸如IGHV1-46*02、IGHV1-69-2*01 (DP-3)，及其他IGHV1-69基因座生殖系IGHV1-69*08、IGHV1-69*02、IGHV1-69*06/1-69*14 (DP-88)、IGHV1-69*04/1-69*09及IGHV1-2*02 (DP-75)。將前述構架模型化以與本發明之p40-VH CDR相容。

p40抗體可包含有包含人類生殖系VL構架序列之p40-VL構架序列。p40-VL構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該p40-VL構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，p40抗體包含p40-VL構架序列，其相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。

在一些態樣中，p40-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列：DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。在一些態樣中，p40-VL構架序列衍生自DPK7。

p40-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列：IGKV1D-16*01、IGKV1D-16*02、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-39*01、IGKV1-12*01/1-12*02/1D-12*01/1D-12*02、IGKV1-9*01、IGKV1-5*03、IGKV1-5*01及IGKV1-27*01。在一些態樣中，p40-VL構架序列衍生自IGKV1D-16*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VL構架IGKV1D-16*01 (DPK7)與本發明之p40-VL CDR高度有利。有利地，可與本發明之p40-VL區一起使用之其他VL生殖系包括其他IGKV1D-16基因座生殖系IGKV1D-16*02、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-39*01 (DPK9)、IGKV1-12*01/1-12*02/1D-12*01/1D-12*02 (DPK5)、IGKV1-9*01 (DPK8)、IGKV1-5*03、IGKV1-5*01、IGKV1-27*01 (DPK4)。將前述構架模型化以與本發明之p40-VL CDR相容。

在本發明之一些態樣中，抗體之p40-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在本發明之一些態樣中，抗體之p40-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。p40-CH1可包含根據SEQ ID NO: 16之序列。p40-CH1可包含根據SEQ ID NO: 6之序列。p40-CH1及p40-CL可各為多特異性抗體之一部分。

p40-CH1可連接至p40-VL，且p40-CL可連接至形成p40-結合域-交換域(p40-xFab)的p40-VH。域-交換Fab描繪於圖18D、G及H中。替代地，p40-CH1可連接至p40-VH，且p40-CL可連接至形成p40-結合Fab域(p40-Fab)的p40-VL。Fab域描繪於圖18A、B、C、E、F及I中。

本發明之p40抗體可包含鉸鏈區。鉸鏈區可以選自任何適合的序列，包括選自表82、85及87中之任一者的序列。在一些態樣中，鉸鏈區選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 113、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群。

p40-CL可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區接著連接至CH2域。或者，p40-CH1可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區隨後連接至CH2域。CH2區可包含選自表86及87中之任一者的序列。CH2域可包含SEQ ID NO: 8。CH2區可連接至CH3區。CH3區可包含選自表86及87中之任一者的序列。CH3區可包含選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148組成之群的序列。

攜帶p40-VH的多肽可包含選自表86及87中之任一者的序列。攜帶p40-VH的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 170、SEQ ID NO: 177、SEQ ID NO: 181、SEQ ID NO: 185及SEQ ID NO: 186組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%一致的序列。

攜帶p40-VL的多肽可包含選自表86及87中之任一者的序列。攜帶p40-VL的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 176、SEQ ID NO: 178、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 182及SEQ ID NO: 183組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%一致的序列。

在一些態樣中，本發明提供一種經分離之多聚抗體，其特異性結合p40及至少一個選自由IL-4、IL-13、IL-33及TSLP組成之群的額外目標，其包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中p40-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及p40-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供p40抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列。在一些態樣中，本發明提供p40抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之攜帶p40-VH的多肽序列。在一些態樣中，本發明提供p40抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之攜帶p40-VL的多肽序列。

IL-4 之抗體本發明提供與IL-4結合之抗體。IL-4抗體可結合一或多個額外目標。如本文中所使用，術語「IL-4」包括IL-4之變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物中之一或多者。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-4 (諸如食蟹獼猴之IL-4)以及不同形式之IL-4交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-4完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL4係指天然產生之人類IL-4。「IL-4抗體」「抗IL-4抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-4、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。IL-4之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P05112表示。鼠類IL-4之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P07750表示。食蟹獼猴IL-4之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P79339表示。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-4抗體，其具有如表80、84、85、86及87中之一或多者中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-4之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，抗體包含表80、84、85、86及87中之一或多者中所示的IL-4重鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表80、84、85、86及87中之一或多者中所示的IL-4輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。

在一些實施例中，抗體包含選自表80、84、85、86及87中之一或多者的lL-4抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含各自選自表80、84、85、86及87中之一或多者的lL-4抗體的VH及VL。在一些實施例中，抗體包含各自選自表80、84、85、86及87中之一或多者的lL-4抗體的HC及LC。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-4抗體，其含有表80、84、85、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表80、84、85、86及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 19之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 28之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 29之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 30之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 26之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，包含SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 26之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。

IL-4抗體可包含有包含人類生殖系VH構架序列之IL4-VH構架序列。IL4-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL4-VH構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-4抗體包含IL4-VH構架序列，其相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之此等部分之VH的類似性。

在一些態樣中，IL4-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：DP26、DP27、DP28及DP76。在一些態樣中，IL4-VH構架序列衍生自DP76。

IL4-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：IGHV2-5*02、IGHV2-5*08、IGHV2-5*09、IGHV2-5*05/2-5*06、IGHV2-5*01、IGHV2-70D*04/2-70D*14、IGHV2-70*11、IGHV2-70*01/2-70*13、IGHV2-70*10、IGHV2-70*12及IGHV2-26*01。在一些態樣中，IL4-VH構架序列衍生自IGHV2-5*02。

本發明已鑑別出人類生殖系VH構架IGHV2-5*02 (DP-76)與本發明之IL4-VH CDR高度有利。其他生殖系經模型化以有利於本發明之IL4-VH CDR，包括IGHV2-5基因座生殖系，諸如IGHV2-5*08、IGHV2-5*09、IGHV2-5*05/2-5*06及IGHV2-5*01；IGHV2-70D*04/2-70D*14 (DP-28)及其他IGHV2-7基因座生殖系，包括IGHV2-70*11、IGHV2-70*01/2-70*13 (DP-27)、IGHV2-70*10、IGHV2-70*12及IGHV2-26*01 (DP-26)。將前述構架模型化以與本發明之IL4-VH CDR相容。

IL-4抗體可包含有包含人類生殖系VL構架序列之IL4-VL構架序列。IL4-VL構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL4-VL構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-4抗體包含IL4-VL構架序列，其相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。

在一些態樣中，IL4-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8、DPK9及DPK24。在一些態樣中，IL4-VL構架序列衍生自DPK9。

IL4-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列：IGKV1-39*01、IGKV4-1*01、1D-39*01、IGKV1-12*01、IGKV1-9*01、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-33*01/1D-33*01、IGKV1-27*01、IGKV1D-16*01、IGKV1-13*02/1D-13*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03及IGKV1-6*01/1-6*02。在一些態樣中，IL4-VL構架序列衍生自IGKV1-39*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VL構架DPK9 (IGKV1-39*01)與本發明之IL4-VL CDR高度有利。亦預測IGKV4-1*01 (DPK24)為高度有利的，因為其與GSK 3B9 VL功能良好。其他生殖系經模型化以有利於本發明之IL4-VL CDR，包括由以下組成之群：1D-39*01、IGKV1-12*01 (DPK5)、IGKV1-9*01 (DPK8)、IGKV1-16*01、IGKV1-16*02、IGKV1-33*01/1D-33*01 (DPK1)、IGKV1-27*01 (DPK4)、IGKV1D-16*01 (DPK7)、IGKV1-13*02/1D-13*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03及IGKV1-6*01/1-6*02 (DPK3)。將前述構架模型化以與本發明之IL4-VL CDR相容。

在本發明之一些態樣中，抗體之IL4-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在本發明之一些態樣中，抗體之IL4-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。IL4-CH1可包含根據SEQ ID NO: 16之序列。IL4-CH1可包含根據SEQ ID NO: 6之序列。IL4-CH1及IL4-CL可各為多特異性抗體之一部分。

IL4-CH1可連接至IL4-VL，且IL4-CL可連接至形成IL-4-結合域-交換Fab域(IL4-xFab)的IL4-VH。域-交換Fab描繪於圖18D、G及H中。替代地，IL4-CH1可連接至IL4-VH，且IL4-CL可連接至形成IL-4-結合Fab域(IL4-Fab)的IL4-VL。Fab域描繪於圖18A、B、C、E、F及I中。

本發明之IL-4抗體可包含鉸鏈區。鉸鏈區可以選自任何適合的序列，包括選自表80、84、85、86及87中之任一者的序列。在一些態樣中，鉸鏈區選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群。

IL4-CL可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區接著連接至CH2域。或者，IL4-CH1可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區隨後連接至CH2域。CH2區可包含選自表80、84、85、86及87中之任一者的序列。CH2域可包含SEQ ID NO: 8。CH2區可連接至CH3區。CH3區可包含選自表80、84、85、86及87中之任一者的序列。CH3區可包含選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148組成之群的序列。

攜帶IL4-VH的多肽可包含選自表80、84、85、86及87中之任一者的序列。攜帶IL4-VH的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 107、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 144、SEQ ID NO: 146、SEQ ID NO: 151、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 153、SEQ ID NO: 156、SEQ ID NO: 157、SEQ ID NO: 159、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 164、SEQ ID NO: 179、SEQ ID NO: 180及SEQ ID NO: 183組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

攜帶IL4-VL的多肽可包含選自表90、84、85、86及87中之任一者的序列。攜帶IL4-VL的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 136、SEQ ID NO: 197及SEQ ID NO: 208組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

本發明之IL-4抗體有利地在一個數量級或更低內結合至人類及食蟹獼猴兩者。此有助於使用動物及毒理學資料來提供告知人類給藥。與親本抗體相比，本發明之IL-4抗體有利地具有改良之結合親和力及IL-4中和。

與親本抗體相比，本發明之IL-4抗體在CDRL1殘基28及29處展現出減少的轉譯後異構化。在一些態樣中，藉由在pH 4.5的麩胺酸及pH 7.5的Tris中培育，且隨後將樣品藉由LysC及胰蛋白酶經歷雙重消化且用Lumos C18管柱使用高保真度方法於LC/MS上進行分析，從而偵測出減少的轉譯後異構化。

經藉由安東帕(Anton Paar)方法所量測，本發明之IL-4抗體展現與親本抗體相比降低的黏度。在一些態樣中，安東帕方法在25℃下以150 rpm之恆定旋轉速度在MCR-302流變儀上使用CP25-1錐體及板。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中IL4-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL4-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供抗IL-4抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-4抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-4抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL4-VH的多肽序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-4抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之攜帶IL4-VL的多肽序列。

IL-13 之抗體本發明提供與IL-13結合之抗體。IL-13抗體可結合一或多個額外目標。如本文中所使用，術語「IL-13」包括IL-13之變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物中之一或多者。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-13 (諸如食蟹獼猴之IL-13)以及不同形式之IL-13交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-13完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL-13係指天然產生之人類IL-13。「IL-13抗體」「抗IL-13抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-13、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。IL-13之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P35225表示。鼠類IL-13之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號P20109表示。食蟹獼猴IL-13之全長成熟形式係由UniProtKB/Swiss-Prot寄存編號Q0PW92表示。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-13抗體，其具有如表81、84、85、86及87中之一或多者中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-13之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，抗體包含表81、84、85、86及87中之一或多者中所示的重鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表81、84、85、86及87中之一或多者中所示的輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含各自展示於表81、84、85、86及87中之一或多者中的重鏈可變區中之任一者的三個CDR及輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。

在一些實施例中，抗體包含選自表81、84、85、86及87中之一或多者的lL-13抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含各自選自表81、84、85、86及87中之一或多者的lL-13抗體的VH及VL。在一些實施例中，抗體包含各自選自表81、84、85、86及87中之一或多者的lL-13抗體的HC及LC。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-13抗體，其含有表81、84、85、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表81、84、85、86及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 44之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 46之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 49之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 68之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 57之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 59之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 51之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 54之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，包含SEQ ID NO: 51之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 54之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

IL-13抗體可包含有包含人類生殖系VH構架序列之IL13-VH構架序列。IL13-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL13-VH構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VH構架與人類生殖系VH構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-13抗體包含IL13-VH構架序列，其相對於人類生殖系VH構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之此等部分之VH的類似性。

在一些態樣中，IL13-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77。在一些態樣中，IL13-VH構架序列衍生自DP54。

IL13-VH構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列：IGHV3-7*01、IGHV3-7*02、IGHV3-7*03、IGHV3-23*01、IGHV3-23*03、IGHV3-48*01、IGHV3-48*02、IGHV3-21*01、IGHV3-11*01、IGHV3-53*01、IGHV3-64*04、IGHV3-33*01、IGHV1-46*01/1-46*03及IGHV1-69*01/1-69D*01/1-69*12/1-69*13。

本發明已鑑別出人類生殖系VH構架IGHV3-7*01 (DP54)與本發明之IL13-VH CDR尤其有利。用於移植IL-13V _HCDR之其他有利生殖系包括來自IGHV3-7基因座之生殖系(例如IGHV3-7*02及IGHV3-7*03)、IGHV3-23*01 (DP-47)，及來自IGHV3-23基因座之其他生殖系，包括IGHV3-23*03、IGHV3-48*01，及來自IGHV3-48基因座之其他生殖系，包括IGHV3-48*02 (DP-51)、IGHV3-21*01 (DP-77)、IGHV3-11*01 (DP-35)，及來自IGHV3-11基因座之其他生殖系，IGHV3-53*01、IGHV3-64*04，及來自IGHV3-64基因座之其他生殖系，IGHV3-33*01 (DP-50)，及來自IGHV3-33基因座之其他生殖系，IGHV1-46*01/1-46*03 (DP-7)，及來自IGHV1-46基因座之其他生殖系，IGHV1-69*01/1-69D*01/1-69*12/1-69*13 (DP-10)，及來自IGHV1-69基因座(DP-76)之其他生殖系。將前述構架模型化以與本發明之IL13-VH CDR相容。

IL-13抗體可包含有包含人類生殖系VL構架序列之IL13-VL構架序列。IL13-VL構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與衍生該IL13-VL構架序列之生殖系的功能及結構類似性。在一些態樣中，VL構架與人類生殖系VL構架序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致。在一些態樣中，IL-13抗體包含IL13-VL構架序列，其相對於人類生殖系VL構架序列包含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10個胺基酸取代、添加或缺失。在一些態樣中，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個胺基酸取代、添加或缺失僅處於構架區中。在一些態樣中，一致性%係基於與不包括在本文中定義為CDR之彼等部分之VL的類似性。

在一些態樣中，IL13-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群之人類生殖系VL序列：DPK3、DPK4、DPK5、DPK8、DPK9、DPK10及DPK23。在一些態樣中，IL13-VL構架序列衍生自DPK9。

IL13-VL構架序列可衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列：IGKV1-39*01、1D-39*01、IGKV1-12*01、IGKV1-9*01、IGKV1-5*01、IGKV1-27*01、IGKV1D-16*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03、IGKV1-6*01/1-6*02、IGKV1D-8*01/1D-8*03及IGKV3D-7*01。在一些態樣中，IL13-VL構架序列衍生自IGHV3-7*01。

本發明已鑑別出人類生殖系VL構架DPK9 (IGKV1-39*01)與本發明之IL13-VL CDR高度有利。有利地，可與本發明之IL13-VL區一起使用之其他VL生殖系包括1D-39*01、IGKV1-12*01 (DPK5)，及來自IGKV1-12基因座之其他生殖系，IGKV1-9*01 (DPK8)、IGKV1-5*01及其他IGKV1-5基因座生殖系；IGKV1-27*01 (DPK4)、IGKV1D-16*02、IGKV1-17*01、IGKV1-17*02、IGKV1-17*03、IGKV1-6*01/1-6*02 (DPK3)、IGKV1D-8*01/1D-8*03 (DPK10)及IGKV3D-7*01 (DPK23)。將前述構架模型化以與本發明之IL13-VL CDR相容。

在本發明之一些態樣中，抗體之IL13-CH1包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在本發明之一些態樣中，抗體之IL13-CL包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。IL13-CH1可包含根據SEQ ID NO: 16之序列。IL13-CH1可包含根據SEQ ID NO: 6之序列。IL13-CH1及IL13-CL可各為多特異性抗體之一部分。

IL13-CH1可連接至IL13-VL，且IL13-CL可連接至形成IL-13-結合域-交換Fab域(IL13-xFab)的IL13-VH。域-交換Fab描繪於圖18D、G及H中。替代地，IL13-CH1可連接至IL13-VH，且IL13-CL可連接至形成IL-33結合Fab域(IL13-Fab)之IL31-VL。Fab域描繪於圖18A、B、C、E、F及I中。

本發明之IL-13抗體可包含鉸鏈區。鉸鏈區可以選自任何適合的序列，包括選自表82、85及87中之任一者的序列。在一些態樣中，鉸鏈區選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群。

IL13-CL可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區接著連接至CH2域。或者，IL13-CH1可連接至鉸鏈區，該鉸鏈區隨後連接至CH2域。CH2區可包含選自表81、84、85、86及87中之任一者的序列。CH2域可包含SEQ ID NO: 8。CH2區可連接至CH3區。CH3區可包含選自表81、84、85、86及87中之任一者的序列。CH3區可包含選自由SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 106、SEQ ID NO: 111、SEQ ID NO: 114、SEQ ID NO: 117、SEQ ID NO: 124、SEQ ID NO: 127、SEQ ID NO: 139、SEQ ID NO: 141、SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148組成之群的序列。

攜帶IL13-VH的多肽可包含選自表81、84、85、86及87中之任一者的序列。攜帶IL13-VH的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO: 112、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 121、SEQ ID NO: 122、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 145、SEQ ID NO: 149、SEQ ID NO: 152、SEQ ID NO: 154、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO: 162、SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 209組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

攜帶IL13-VL的多肽可包含選自表81、84、85、86及87中之任一者的序列。攜帶IL13-VL的多肽可包含與選自由SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 125、SEQ ID NO: 130、SEQ ID NO: 133、SEQ ID NO: 135、SEQ ID NO: 140、SEQ ID NO: 163、SEQ ID NO: 164及SEQ ID NO: 196組成之群的序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的序列。

本發明之IL-13抗體有利地在一個數量級或更低內結合至人類及食蟹獼猴兩者。在人類與其食蟹獼猴對應物之間具有有利結合比率的抗體有助於使用動物及毒理學資料告知人類給藥。與已知抗體相比，本發明之IL-13抗體有利地具有改良之結合親和力及IL-13中和。

與已知IL-13抗體相比，本發明之IL-13抗體展示減少之非生殖系T細胞抗原決定基。有利地，本發明之IL-13抗體組合減少之T細胞抗原決定基與K保持在一個數量級內。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中IL13-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL13-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本發明提供抗IL-13抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-13抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-13抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之攜帶IL13-VH的多肽序列。在一些態樣中，本發明提供抗IL-13抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL13-VL的多肽序列。

IL-4/IL-13/IL-33 之抗體IL-33為儲存於上皮細胞、角質細胞、內皮細胞及纖維母細胞之細胞核中之細胞介素報警素，且在細胞損傷後釋放以介導2型發炎反應(66，67)。IL-33結合至雜二聚體受體，該雜二聚受體包含T細胞、ILC2、嗜鹼性球、肥大細胞、嗜伊紅血球及其他細胞類型上的ST2 (IL1RL1)及IL-1RAcP，以經由MyD88接合NFkB及MAPK路徑，且驅動IL-13、IL-5及其他下游細胞介素之產生。存在於循環中之可溶性ST2 (sST2)充當IL-33之誘餌受體(68)。IL-4及IL-13可活化產生IL-33之細胞，而IL-33反應導致2型細胞介素的產生，因此建立發炎級聯(69)。

抗IL-33 mAb依特吉單抗(Itepekimab) (REGN3500；Sanofi/Regeneron)有效地降低AD程度及高於安慰劑之嚴重程度(NCT03738423)，但似乎不如Dupixent®有效(NCT03736967)。若干其他靶向IL-33之藥劑(抗IL-33 mAb艾托奇單抗(Etokimab)，抗ST2 CNTO-7160)對AD缺乏顯著之臨床功效(70，71)。在AD中，依特吉單抗及Dupixent®之組合在降低疾病嚴重程度上不優於單獨使用的Dupixent®，但與單獨使用任何一種治療相比，組合使用後的瘙癢症有減少的趨勢(NCT03736967)。在哮喘中，依特吉單抗顯著改善哮喘控制及肺功能，但並不優於Dupixent® (72)。在COPD中，依特吉單抗降低了惡化率且改善了之前吸菸者的肺功能(73)。

在障壁表面處，上皮損傷釋放報警素TSLP及IL-33，其促進下游效應反應之級聯，包括局部產生IL-4、IL-5及IL-13。反過來，此等細胞介素促進且維持上皮細胞功能異常，導致組織損傷、發炎、纖維化及瘙癢之遞增循環(41，69，74)。

IL13433-1258及其他IL-4/IL-13/TSLP抗體經設計以實現對三種不同臨床驗證路徑之組合阻斷，以用於治療異位性病症。IL13433-1258尤其中和IL-4及IL-13，其中效能比Dupixent®大大致10倍。IL13433-1258包括具有與依特吉單抗相當之活性的IL-33結合域且與單獨的IL4/13中和相比，其具有提供更完全的2型效應反應(包括瘙癢)抑制的潛力。

本發明提供與IL-4、IL-13及IL-33結合之抗體。如本文中所使用，術語IL-4、IL-13及IL-33分別包括IL-4、IL-13及IL-33中之一或多者的變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-4、IL-13及IL-33 (諸如食蟹獼猴之IL-4、IL-13及IL-33)中之一或多者交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-4、IL-13及IL-33完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL-4、IL-13及IL-33係指天然產生之人類IL-4、IL-13及IL-33。「IL-4/IL-13/IL-33抗體」「抗IL-4/IL-13/IL-33抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-4、IL-13及IL-33、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-4/IL-13/IL-33抗體，其具有如表85中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-4/IL-13/IL-33之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，IL-4/IL-13/IL-33抗體包含選自表80及85中之一者的IL-4抗體的六個CDR、選自表81及85中之一者的IL-13抗體的六個CDR及選自表82及85中之一者的IL-33抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含選自表80及85之IL-4抗體的VH及VL、選自表81或表85之IL-13抗體的VH及VL及選自表82或表85之IL-33抗體的VH及VL。在一些實施例中，IL-4/IL-13/IL-33抗體包含選自表85之序列。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-4/IL-13/IL-33抗體，其含有表80、81、82、85及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表80、81、82、85及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

本發明係關於一種特異性結合至IL-33、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含IL-33結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。IL-4/IL-13/IL-33抗體可包含 (i) 包含重鏈可變區(IL33-VH)及輕鏈可變區(IL33-VL)之IL-33結合域，其中該IL-33結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 60之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 61之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 72之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO:75之胺基酸序列；該IL-33結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO:76之胺基酸序列；及該IL-33結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO:77之胺基酸序列；及 (ii) 包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)之IL-4結合域，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (iii) 包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)之IL-13結合域，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

在本發明之一些態樣中，IL-4/IL-13/IL-33抗體可包含 (i) 包含SEQ ID NO: 73之IL33-VH及SEQ ID NO: 78之IL33-VL的IL-33結合域； (ii) 包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL的IL-4結合域； (iii) 包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL的IL-13結合域。

IL-33結合域可融合至IL-4結合域。IL-33結合域可融合至IL-13結合域。IL-13結合域可融合至IL-4結合域。融合可具有或不具有連接子。若存在，連接子可包含長度在2與20個胺基酸之間的胺基酸序列。連接子可由選自甘胺酸、丙胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可由選自甘胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可包含SEQ ID NO: 104。

本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。

在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合IL-33。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合IL-33，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合IL-33。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合IL-33，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-33，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-33，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。

IL-4/IL-13/IL-33抗體可包含一或多個域-交換Fab域。域-交換Fab域可選自由IL33-xFab、IL4-xFab及IL13-xFab組成之群。

IL-4/IL-13/IL-33抗體可包含有包含IL13-Fab之第一Fab域、包含IL4-Fab之第二Fab域及包含IL33-Fab之第三Fab域。

為了促進多特異性抗體形成，第一多肽可包含第一Fc鏈且第二多肽可包含第二Fc鏈。第一Fc鏈及第二Fc鏈可各自包含一或多個促進第一Fc鏈與第二Fc鏈締合之胺基酸修飾。

在一些態樣中，第一Fc鏈包含第一CH3域，且第二Fc鏈包含第二CH3域，且第一CH3域及第二CH3域各自包含不同及互補序列，且不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對中之一者：(i) SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 111；(ii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148；及(iii) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127。

本發明提供一種IL-4/IL-13/IL-33抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性係選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 145，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 107，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 115，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 119，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 115，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 120，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 209，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 128，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 208，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 132，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (viii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 134，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 133，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ix) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 144，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 143； (x) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 137，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 135，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 138，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 142，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 140，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合IL-33、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含IL-33結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 132，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 79，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

相對於親本抗體，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體展現出改良之抗IL-4/IL-13/IL-33活性且同時使黏度增加最小化的組合。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少70 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時可具有小於80 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時可具有小於15 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少70 mg/mL時可具有小於15 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少80 mg/mL時可具有小於15 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時可具有小於15 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時可具有小於15 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時可具有小於13 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少94 mg/mL時可具有小於13 cP的黏度。

本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在TG32小鼠中可具有至少16天之終末半衰期。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體在食蟹獼猴中可具有至少12天之終末半衰期。

經藉由SPR所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於220 nM之結合親和力結合人類IL-4。有利地，抗IL-4/IL-13/IL-33抗體不特異性結合至小鼠或大鼠IL-4。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於5 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-4。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於0.5 pM之結合親和力結合至人類IL-4。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於3 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。

經藉由SPR所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於220 nM之結合親和力結合人類IL-13。有利地，抗IL-4/IL-13/IL-33抗體不特異性結合至小鼠、大鼠或兔IL-13。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-13。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。

經藉由KinExA在周邊血液單核球中所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於15 pM之結合親和力結合至人類IL-13。經藉由KinExA在周邊血液單核球中所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於55 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。經藉由KinExA在人類全血中所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於20 pM之結合親和力結合人類IL-13。經藉由KinExA在人類全血中所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可以小於55 pM之結合親和力結合食蟹獼猴IL-13。

本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於以下中之一或多者：(i)人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於70 nM；(ii)人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於70 nM；(iii)野生型IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於30 nM；及(iv)重組組成性活性IL-33 (mm2)中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於260 nM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於以下中之一或多者：(i)人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM；(ii)人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM；及(iii)野生型IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於30 nM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於以下中之一或多者：(i)人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM；(ii)人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於20 nM；及(iii)野生型IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於30 nM。

本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於10 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於25 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於35 pM。

本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。IL-4中和及IL-13中和可各自藉由在用抗體培育來自經IL-4刺激或經IL-13刺激之人類周邊血液單核細胞的閘控單核球之後進行CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於在IL-33中和HEK-藍SEAP分析中IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之特徵可在於在人類全血之IFNγ誘導的IL-33中和分析中IC ₅₀小於15 pM。

在一些態樣中，本揭示提供經分離之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體，其經由IL-33重鏈可變區(IL33-VH)及IL-33輕鏈可變區(IL33-VL)特異性結合IL-33；經由IL-4重鏈可變區(IL4-VH)及IL-4輕鏈可變區(IL4-VL)特異性結合IL-4；及經由IL-13重鏈可變區(IL13-VH)及IL-13輕鏈可變區(IL33-VL)特異性結合IL-13；其中IL33-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL33-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL4-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL4-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL13-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL13-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/IL-33抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/IL-33抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

IL-4/IL-13/TSLP 之抗體先天性報警素TSLP在AD升高且促進障壁表面處的2型免疫反應(41，42)。TSLP由上皮細胞、肥大細胞、角質細胞及纖維母細胞產生。短形式維持在恆穩條件下，而IL413TSLP-1024靶向之長形式與發炎相關(44)。在細胞受損之後，TSLP經釋放且結合至包含一系列免疫細胞類型上之包含TSLPR及IL 7Rα的雜二聚體受體(4)，引起DC及單核球活化、產生2型細胞介素及使Th2效應反應升級(64)。TSLP係2型細胞介素之上游調節因子，且亦觸發與STAT5相關的獨特信號傳導路徑，對其進行阻斷可提供單獨且額外之治療活性(64)。

抗TSLP mAb，Tezspire™ (特澤佩魯單抗；Amgen/AstraZeneca)經批准用於治療重度哮喘，其中其已顯示出強療效，相對於安慰劑明顯降低了惡化率(65)。重要地，此結果與基線血液嗜酸性球計數無關(65)，表明TSLP阻斷之功效可超出Dupixent®所靶向之2型疾病的概況。在AD中，特澤佩魯單抗顯示積極的趨勢，但作為獨立療法其療效跡象有限(47)。

IL413TSLP-1024及其他IL-4/IL-13/TSLP抗體經設計以實現對三種不同臨床驗證路徑之組合阻斷，以用於治療異位性病症。IL413TSLP-1024尤其中和IL-4及IL-13，其中效能比Dupixent®大大致10倍。IL413TSLP-1024包括活性與特澤佩魯單抗相當之TSLP結合域，且有可能將IL-4/13阻斷的功效擴展至2型概況以外的疾病內型。

本發明提供與IL-4、IL-13及TSLP結合之抗體。如本文中所使用，術語IL-4、IL-13及TSLP分別包括IL-4、IL-13及TSLP中之一或多者的變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-4、IL-13及TSLP (諸如食蟹獼猴之IL-4、IL-13及TSLP)中之一或多者交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-4、IL-13及TSLP完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL-4、IL-13及TSLP係指天然產生之人類IL-4、IL-13及TSLP。「IL-4/IL-13/TSLP抗體」「抗IL-4/IL-13/TSLP抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-4、IL-13及TSLP、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-4/IL-13/TSLP抗體，其具有如表84中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-4/IL-13/TSLP之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，IL-4/IL-13/TSLP抗體包含選自表80之IL-4抗體的六個CDR、選自表81之IL-13抗體的六個CDR及選自表83之TSLP抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含選自表80及表84之IL-4抗體的VH及VL、選自表81或表84之IL-13抗體的VH及VL及選自表83或表84之TSLP抗體的VH及VL。在一些實施例中，IL-4/IL-13/TSLP抗體包含選自表84之序列。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-4/IL-13/TSLP抗體，其含有表80、81、83、84及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表80、81、83、84及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

本發明亦提供針對IL-4/IL-13/TSLP之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，IL-4/IL-13/TSLP抗體包含選自表80及84中之一者的IL-4抗體的六個CDR、選自表81及84中之一者的IL-13抗體的六個CDR及選自表83及84中之一者的TSLP抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含選自表80及84之IL-4抗體的VH及VL、選自表81或表84之IL-13抗體的VH及VL及選自表83或表84之TSLP抗體的VH及VL。在一些實施例中，IL-4/IL-13/TSLP抗體包含選自表84之序列。

本發明係關於一種特異性結合至TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含TSLP結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含 (i) 該TSLP 3結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

在本發明之一些態樣中，IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含 (i) 包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 94之TSLP-VL的TSLP結合部分； (ii) 包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL的IL-4結合部分；及 (iii) 包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL的IL-13結合部分。

TSLP結合域可融合至IL-4結合域。TSLP結合域可融合至IL-13結合域。IL-13結合域可融合至IL-4結合域。融合可具有或不具有連接子。若存在，連接子可包含長度在2與20個胺基酸之間的胺基酸序列。連接子可由選自甘胺酸、丙胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可由選自甘胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可包含SEQ ID NO: 104。

本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。

在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合TSLP。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合TSLP，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合TSLP。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合TSLP，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合TSLP，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合TSLP，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。

IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含一或多個域-交換Fab域。域-交換Fab域可選自由TSLP-xFab、IL4-xFab及IL13-xFab組成之群。

IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含有包含IL13-Fab之第一Fab域、包含IL4-Fab之第二Fab域及包含TSLP-Fab之第三Fab域。

本發明提供IL-4/IL-13/TSLP抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性係選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 149，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 151，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 159，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 162，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 163； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 154，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 156，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 152，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (viii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 153，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (ix) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 157，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (x) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 160，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 164，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xiii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 215，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (xiv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 216，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 213之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 215，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-_____之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 214之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其中 (i) 該TSLP結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-_____之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 該IL-4結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 該IL-13結合域包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

在一些態樣中，本發明提供一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13的經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 216，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體在食蟹獼猴中可具有至少14天之終末半衰期。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體在TG32小鼠中可具有至少18天之終末半衰期。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少110 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少120 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體及其組合物可藉由當藉由分析型尺寸排阻層析(aSEC)測定時，高分子量物質之評分小於2%來表徵。包含本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體的組合物可藉由當藉由分析型尺寸排阻層析(aSEC)測定時，高分子量物質之評分小於1%來表徵。包含本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體的組合物可藉由當藉由分析型尺寸排阻層析(aSEC)測定時，高分子量物質之評分小於0.2%來表徵。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體及其組合物可藉由在親和力捕獲自體相互作用奈米粒子光譜分析(AC SINS)分析中，評分小於12來表徵。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體及其組合物可藉由在親和力捕獲自體相互作用奈米粒子光譜分析(AC SINS)分析中，評分小於10來表徵。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-4。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於0.5 pM之結合親和力結合至人類IL-4。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-13。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於0.3 pM之結合親和力結合至人類IL-13。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於5 pM之結合親和力結合至人類TSLP。經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於20 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13。

經藉由SPR所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可以小於320 nM之結合親和力結合人類IL-13。有利地，抗IL-4/IL-13/TSLP抗體不特異性結合至小鼠、大鼠或兔IL-13。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於10 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於8 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。IL-4中和及IL-13中和可各自藉由在用抗體培育來自經IL-4刺激或經IL-13刺激之人類周邊血液單核細胞的閘控單核球之後進行CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於25 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於10 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於8 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於11 pM。IL-4中和可藉由CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類全血分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於60 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於55 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類全血分析中中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於45 pM。IL-13中和可藉由CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類TSLP中和分析中IC ₅₀小於15 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於食蟹獼猴TSLP中和分析中IC ₅₀小於35 pM。TSLP中和可藉由人類初代PBMC中之TARC生產之流式細胞測量術測定來測定。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類全血中人類TSLP中和分析的IC ₅₀小於10 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之特徵可在於人類全血中食蟹獼猴TSLP中和分析的IC ₅₀小於35 pM。TSLP中和可藉由人類初代PBMC中之TARC生產之流式細胞測量術測定來測定。

在一些態樣中，本揭示提供經分離之抗IL-4/IL-13/TSLP3抗體，其經由TSLP重鏈可變區(TSLP-VH)及TSLP輕鏈可變區(TSLP-VL)特異性結合TSLP；經由IL-4重鏈可變區(IL4-VH)及IL-4輕鏈可變區(IL4-VL)特異性結合IL-4；及經由IL-13重鏈可變區(IL13-VH)及IL-13輕鏈可變區(IL33-VL)特異性結合IL-13；其中TSLP-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及TSLP-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL4-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL4-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL13-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL13-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/TSLP抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-127199之質體編碼之TSLP-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/TSLP抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

IL-4/IL-13/p40 之抗體本發明之IL-4/IL-13/p40抗體(例如IL134P40-0705)將p40結合域與IL-4及IL-13之結合域組合。p40 (亦稱為IL-12p40，亦稱為IL12B)為雜二聚體細胞介素IL-12及IL-23之次單元(75)。作為IL-12之組分，p40與IL-12p35二硫鍵結合(IL12A)；作為IL-23之組分，其與IL-23p19二硫鍵結合(IL23A)。IL-12及IL-23經由不同雜二聚受體複合物進行信號傳導，其中之每一者含有與p40結合之共同IL-12Rb1次單元，及賦予IL-12或IL-23選擇性的細胞介素特異性次單元(分別為IL-12Rb2或IL-23R)。IL-12及IL-23主要由先天免疫細胞(諸如單核球、巨噬細胞、樹突狀細胞及嗜中性球)產生，且為作用於先天性及後天性免疫界面的關鍵細胞介素(76)。

IL-4及IL-13主要連接至2型效應子反應。相比之下，IL-12及IL-23分別與1型及3型(Th17)反應有關聯(77)。IL-12驅動T輔助細胞1 (Th1)細胞分化及干擾素-γ (IFN-γ)產生，而IL-23促進Th17細胞之維持，產生IL-17及其他3型細胞介素。1型及3型反應已與一系列人類炎症及自體免疫疾病有關聯。含p40之細胞介素的因果作用已經由許多藥物的批准而得到證實(75)。p40中和劑Stelara® (烏司奴單抗；Jannsen)中和IL-12及IL-23兩者，且經批准用於治療斑塊型牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病及潰瘍性結腸炎。

人類疾病無法始終嚴格歸類為1型、2型或3型。舉例而言，雖然AD係2型驅動之疾病，但AD患者之某些亞群亦具有1型及3型特徵升高(78)。因此，雖然2型反應在AD中明顯為病因，且在AD試驗中單獨的p40抑制並不優於局部皮質類固醇(79，80)，但將p40抑制與IL-4及IL-13抑制組合可遏制未能藉由單獨的2型抑制而解決的疾病組分，以在AD患者中或在AD患者亞群中提供變革性功效(81)。其他人類疾病提供更突出的混合炎症特徵的實例。某些哮喘亞型之特徵在於嗜伊紅血球及嗜中性白血球性細胞浸潤，表明有2型及1/3型參與(82)。全身性硬化症具有潛在IL-4/13組分以及潛在Th17組分(83，84，85)，且人類遺傳研究已鑑別出導致IL-12及IL-23共同受體次單元IL-12Rb1表現減少的突變為保護性對偶基因(86)。另外，來自患有非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)患者之患者肝臟活組織檢查具有1型、2型及3型發炎之明顯特徵(87)。且作為最終實例，斑禿具有混合特徵(88)，且在用Dupixent®或Stelara®治療後的禿髮患者中存在積極資料(89, 90)。

此等資料支持以下假設：同時阻斷IL-4、IL-13、p40將在具有潛在1型及3型特徵之2型驅動之人類疾病中有效，且亦在不能簡單地分類為1型、2型或3型之具有複雜病因之疾病中有效。同時阻斷之另一潛在益處為1型、2型及3型反應彼此負向調節。舉例而言，臨床前研究已提出2型及3型反應相互調節，且其中一者之藥理學抑制可引起另一者中的「反彈」反應(91，92)。現有資料表明該相互調節亦可發生在人類中，因為目前存在服用Dupilumab®之AD患者出現與Th1及Th17介導之炎症相關之疾病(諸如牛皮癬、發炎性關節炎及肌腱炎)的實例(93，94)。與Dupixent®使用相關之結膜炎的副作用亦歸因於2型遏制個體之眼睛中Th1及Th17細胞浸潤的升高(95)。因此，IL-4、IL-13及p40與本發明之IL-4/IL-13/p40抗體(例如IL134P40-0705)之組合阻斷不僅解決疾病狀態中存在之基礎特徵，而且可能亦解決可能由單獨用1型、2型或3型阻斷試劑進行治療性干預而導致的任何非所需反彈反應。

本發明提供與IL-4、IL-13及p40結合之抗體。如本文中所使用，術語IL-4、IL-13及p40分別包括IL-4、IL-13及p40中之一或多者的變異體、同功異型物、同源物、異種同源物及同種同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL-4、IL-13及p40 (諸如食蟹獼猴之IL-4、IL-13及p40)中之一或多者交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL-4、IL-13及p40完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。除非上下文另有規定，否則如本文中所使用之術語IL-4、IL-13及p40係指天然產生之人類IL-4、IL-13及p40。「IL-4/IL-13/p40抗體」「抗IL-4/IL-13/p40抗體」或其他類似名稱意謂結合IL-4、IL-13及p40、其同功異型物、片段或衍生物或與其反應的任何抗體(如本文所定義)。

在一些實施例中，本發明提供一種IL-4/IL-13/p40抗體，其具有如表86中所發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變異體。

本發明亦提供針對IL-4/IL-13/p40之抗體之CDR部分。CDR區之測定定義於實例1中。在一些實施例中，IL-4/IL-13/p40抗體包含選自表80或86之IL-4抗體的六個CDR、選自表81或86之IL-13抗體的六個CDR及選自表86之p40抗體的六個CDR。在一些實施例中，抗體包含選自表80及表86之IL-4抗體的VH及VL、選自表81或表86之IL-13抗體的VH及VL及選自表86之p40抗體的VH及VL。在一些實施例中，IL-4/IL-13/p40抗體包含選自表86之序列。

在一些實施例中，本發明提供抗IL-4/IL-13/p40抗體，其含有表80、81、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區的變異，其中此類變異體多肽與表80、81、86及87中之一或多者中所揭示之胺基酸序列中之任一者共有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意圖為限制性的，且所敍述百分比之間的增量經特定地設想為本發明之一部分。

本發明係關於一種特異性結合至p40、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含p40結合域、IL-4結合域及IL-13結合域。IL-4/IL-13/p40抗體可包含 (i) 包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)之p40結合域，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO:171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO:172之胺基酸序列；及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO:173之胺基酸序列；及 (ii) 包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)之IL-4結合域，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (iii) 包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)之IL-13結合域，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。

在本發明之一些態樣中，IL-4/IL-13/TSLP抗體可包含 (i) 包含SEQ ID NO: 169之p40-VH及SEQ ID NO: 175之p40-VL的p40結合域； (ii) 包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL的IL-4結合域； (iv) 包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL的IL-13結合域。

p40結合域可融合至IL-4結合域。p40結合域可融合至IL-13結合域。IL-13結合域可融合至IL-4結合域。融合可具有或不具有連接子。若存在，連接子可包含長度在2與20個胺基酸之間的胺基酸序列。連接子可由選自甘胺酸、丙胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可由選自甘胺酸及絲胺酸之一或多個胺基酸組成。連接子可包含SEQ ID NO: 104。

本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。

在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合p40。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-4，第二抗體結合位特異性結合p40，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合p40。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合IL-13，第二抗體結合位特異性結合p40，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合p40，第二抗體結合位特異性結合IL-13，且第三抗原結合位特異性結合IL-4。在一些態樣中，第一抗原結合位特異性結合p40，第二抗體結合位特異性結合IL-4，且第三抗原結合位特異性結合IL-13。

IL-4/IL-13/p40抗體可包含一或多個域-交換Fab域。域-交換Fab域可選自由p40-xFab、IL4-xFab及IL13-xFab組成之群。

IL-4/IL-13/p40抗體可包含有包含IL13-Fab之第一Fab域、包含IL4-Fab之第二Fab域及包含p40-Fab之第三Fab域。

本發明提供一種IL-4/IL-13/p40抗體，其中第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈之特性係選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 178，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 179，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 181，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO 180，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 182，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 183，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 120，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 207，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

在一些態樣中，本發明提供特異性結合p40、特異性結合至IL-4且特異性結合於IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含p40結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。

相對於親本抗體，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體展現出改良之抗IL-4及抗IL-13活性且同時使黏度增加最小化的組合。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少110 mg/mL時可具有小於20 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時可具有小於16 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少110 mg/mL時可具有小於16 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時可具有小於12 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少70 mg/mL時可具有小於12 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少80 mg/mL時可具有小於12 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少90 mg/mL時可具有小於12 cP的黏度。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少94 mg/mL時可具有小於11 cP的黏度。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在食蟹獼猴中可具有至少12天之終末半衰期。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體在TG32小鼠中可具有至少18天之終末半衰期。

經藉由SPR所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體可以小於220 nM之結合親和力結合人類IL-4。有利地，抗IL-4/IL-13/p40抗體不特異性結合至小鼠、大鼠或兔IL-4。

經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體可以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4。經藉由動力學排除分析在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-4之親和力常數小於0.8 pM。經藉由動力學排除分析在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對食蟹獼猴IL-4之親和力常數小於1 pM。經藉由動力學排除分析在PBS中之固定抗原分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-4之親和力常數在0.7-0.8 pM之間。

經藉由動力學排除分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-13之親和力常數小於2 pM。經藉由PBS中之動力學排除分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-13之親和力常數小於1.6 pM。經藉由PBS中之動力學排除分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對食蟹獼猴IL-13之親和力常數小於0.5 pM。

經藉由SPR所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體可以小於220 nM之結合親和力結合至人類IL-13。有利地，抗IL-4/IL-13/p40抗體不特異性結合至小鼠、大鼠或兔IL-13。

經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-12之結合親和力常數小於130 pM。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-12之結合親和力常數在100-130 pM之間。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-12之結合親和力常數在110-120 pM之間。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對食蟹獼猴IL-12之結合親和力常數小於260 pM。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-23之結合親和力常數小於100 pM。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-23之結合親和力常數在80-100 pM之間。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-23之結合親和力常數在85-95 pM之間。經藉由表面電漿子共振所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對食蟹獼猴IL-23之親和力常數小於250 pM。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於25 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於20 pM。IL-4中和可藉由CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於45 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類單核球分析中中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於50 pM。IL-13中和可藉由CD23陽性細胞之流式細胞測量術測定來測定。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類IL-12中和Kit-225分析中IC ₅₀小於600 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類IL-23中和Kit-225分析中IC ₅₀小於2100 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於食蟹獼猴IL-12中和Kit-225分析中IC ₅₀小於400 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於食蟹獼猴IL-23中和Kit-225分析中IC ₅₀小於3100 pM。Kit-225分析係針對STAT4或STAT3之流式細胞量測術評估，以確定該抗體在KIT-225細胞株中分別防止IL-12誘導之STAT4磷酸化的能力或該抗體防止IL-23誘導之STAT3磷酸化的能力。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類IL-12中和全血分析中IC ₅₀小於400 pM。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於人類IL-23中和全血分析中IC ₅₀小於10,000 pM。全血分析係針對STAT4或STAT3之流式細胞量測術評估，以確定該抗體在人類全血細胞中分別防止IL-12誘導之STAT4磷酸化的能力或該抗體防止IL-23誘導之STAT3磷酸化的能力。

經藉由Kit-225分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-12之IC ₅₀在140-170 pM之間。經藉由Kit-225分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-12之IC ₅₀在150-160 pM之間。經藉由Kit-225分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-23之IC ₅₀在800-900 pM之間。經藉由Kit-225分析所量測，本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於針對人類IL-23之IC ₅₀在840-860 pM之間。Kit-225分析係針對STAT4或STAT3之流式細胞量測術評估，以確定該抗體在KIT-225細胞株中分別防止IL-12誘導之STAT4磷酸化的能力或該抗體防止IL-23誘導之STAT3磷酸化的能力。

本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於IL-12中和全血分析中IC ₅₀在210-300 pM之間。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於IL-12中和全血分析中IC ₅₀在250-270 pM之間。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於IL-23中和全血分析中IC ₅₀小於在4000-5000 pM之間。本發明之抗IL-4/IL-13/p40抗體之特徵可在於IL-23中和全血分析中IC ₅₀在4500-4520 pM之間。全血分析係針對STAT4或STAT3之流式細胞量測術評估，以確定該抗體在人類全血細胞中分別防止IL-12誘導之STAT4磷酸化的能力或該抗體防止IL-23誘導之STAT3磷酸化的能力。

在一些態樣中，本揭示提供經分離之抗IL-4/IL-13/p40抗體，其經由p40重鏈可變區(p40-VH)及p40輕鏈可變區(p40-VL)特異性結合p40；經由IL-4重鏈可變區(IL4-VH)及IL-4輕鏈可變區(IL4-VL)特異性結合IL-4；及經由IL-13重鏈可變區(IL13-VH)及IL-13輕鏈可變區(IL33-VL)特異性結合IL-13；其中p40-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及p40-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL4-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL4-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列，及IL13-VH包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及IL13-VL包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/p40抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

在一些態樣中，本揭示提供抗IL-4/IL-13/p40抗體，其包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之序列；由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

抗 PD-1 抗體及腫瘤學應用在本發明之一些態樣中，本發明之IL-4、IL-13、TSLP、IL-13、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/TSLP、IL-4/IL-13/IL-33及IL-4/IL-13/p40抗體中之一或多者可與PD-1路徑拮抗劑組合。在本發明之一些態樣中，本發明之IL-4、IL-13、TSLP、IL-13、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/TSLP及IL-4/IL-13/IL-33抗體中之一或多者可與PD-1路徑拮抗劑組合。在本發明之一些態樣中，本發明之IL-4、IL-13、TSLP、IL-13、IL-4/IL-13及IL-4/IL-13/TSLP抗體中之一或多者可與PD-1路徑拮抗劑組合。

在本發明之一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可與PD-1路徑拮抗劑組合。此提供組合多個正交路徑之顯著優勢，該等路徑可影響離散的腫瘤目標，而該等目標可能未藉由例如IL-4/IL-13與PD-1路徑拮抗劑的組合或藉由IL-4/IL-13/IL-33與PD-1拮抗劑所充分解決，其中IL-33拮抗作用可能冗餘而不提供拮抗TSLP路徑提供的額外優勢。

本發明因此提供IL-4抗體、IL-13抗體、TSLP抗體及PD-1路徑拮抗劑用於治療癌症、減少腫瘤及其類似者之用途。此外，本發明提供IL-4/IL-13/TSLP抗體及PD-1路徑拮抗劑用於治療癌症、減少腫瘤及其類似者之用途。較佳地，PD-1拮抗劑作為單獨分子投與至IL-4、IL-13及TSLP抗體中之每一者。

程式化細胞死亡蛋白1 (亦稱為PD-1及CD279 (分化簇279))係T及B細胞表面上的一種蛋白質，其在藉由下調免疫系統及藉由抑制T細胞發炎活性而促進自耐受來調節對人體細胞之免疫系統的反應中具有作用。此預防自體免疫疾病，但其亦可預防免疫系統殺死癌細胞。人類中之PD-1蛋白質由PDCD1基因編碼。PD-1為屬於免疫球蛋白超家族之細胞表面受體且表現於T細胞及促B細胞上。PD-1結合兩種配位體，PD-L1及PD-L2。

PD-1為免疫檢查點且經由兩種機制來防範自體免疫性。首先，其促進淋巴結中之抗原特異性T細胞之細胞凋亡(程式化細胞死亡)。其次，其減少調節T細胞(抗炎的抑制性T細胞)之細胞凋亡。

PD-L1 (PD1之配位體)在若干癌症中高度表現。許多腫瘤細胞表現PD-L1，免疫抑制PD-1配位體；PD-1與PD-L1之間的相互作用的抑制可增強活體外T細胞反應且介導臨床前抗腫瘤活性。此稱為免疫檢查點阻斷。

在本發明之一些態樣中，本發明之IL-4、IL-13、TSLP、IL-13、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/TSLP、IL-4/IL-13/IL-33及IL-4/IL-13/p40抗體中之一或多者可與PD-1路徑拮抗劑組合。PD-1路徑拮抗劑可為抗PD-1拮抗劑抗體或抗PD-L1抗體。程式化死亡1 (PD-1)受體及PD-1配位體1及2 (分別為PD-L1及PD-L2)在免疫調節中起一體式作用。於活化T細胞上表現之PD-1藉由PD-L1 (亦稱為B7-H1)活化且PD-L2由基質細胞、腫瘤細胞或兩者表現，引發T細胞死亡及局部免疫抑制(Dong等人, Nat Med 1999; 5:1365-69；Freeman等人, J Exp Med 2000; 192:1027-34)，潛在地為腫瘤發展及生長提供一個免疫耐受性環境。相反，在非臨床動物模型中抑制此相互相用可增強局部T細胞反應及介導抗腫瘤活性(Iwai Y等人, Proc Natl Acad Sci USA 2002; 99:12293-97)。

若干抗PD-1路徑治療劑已經審批通過，包括匹地利珠單抗(Pidilizumab) (CT-011, Cure Tech)、BMS-936559 (Bristol Myers Squibb)及特瑞普利單抗(Toripalimab) (JS-001, TopAlliance)。阿替利珠單抗(MPDL3280A, Roche)及阿維魯單抗(Avelumab) (Merck KGaA, Darmstadt, Germany & Pfizer)兩者靶向類似PD-L1受體。

適用於本發明之治療方法、藥劑及用途之抗PD-1抗體之實例包括BCD-100、卡瑞利珠單抗、西米普利單抗、傑諾珠單抗(CBT-501)、MEDI0680、納武單抗、帕博利珠單抗、信迪利單抗、斯巴達珠單抗、STI-A1110、替雷利珠單抗、阿替利珠單抗、度伐利尤單抗、BMS-936559 (MDX-1105)、LY3300054及TSR-042。在一些實施例中，抗PD-1抗體具有US10155037的如SEQ ID NO: 4中所示之VH及如SEQ ID NO: 8中所示之VL。在一些實施例中，抗PD-1抗體為薩善利單抗(PF-06801591 (RN888)、人類化IgG4單株拮抗劑抗體(Pfizer) (參見WO2016/092419)。

PD-1路徑拮抗劑抗體可具有任何適合形式。舉例而言，治療性抗體可具有如本文中其他地方所描述之任何形式。PD-1路徑拮抗劑抗體可為裸抗體。PD-1路徑拮抗劑抗體可連接至藥物/藥劑(亦稱為「抗體-藥物結合物」(ADC))。在一些實施例中，針對特定抗原之PD-1路徑拮抗劑抗體可併入多特異性抗體(例如雙特異性抗體)中。

在一些實施例中，針對抗原之抗體可與藥物/藥劑結合。經連接的抗體-藥物分子亦稱為「抗體-藥物結合物」(ADC)。藥物/藥劑可直接或經由連接子間接連接至抗體。最通常，毒性藥物與抗體連接，使得ADC與各別抗原之結合促進殺死表現該抗原之細胞。舉例而言，與毒性藥物連接之ADC尤其適用於靶向腫瘤相關抗原，以便促進殺死表現腫瘤相關抗原之腫瘤細胞。在其他實施例中，可連接至抗體之藥劑可為例如免疫調節劑(例如以調節ADC附近之免疫細胞的活性)、顯影劑(例如以促進個體中ADC或來自個體之生物樣品之成像)，或增加抗體血清半衰期或生物活性之藥劑。

用於將細胞毒性劑或其他治療劑與抗體結合之方法已在各種公開案中描述。舉例而言，化學修飾可經由離胺酸側鏈胺或經由藉由還原鏈間二硫鍵活化之半胱胺酸硫氫基在抗體中進行，以使結合反應發生。參見例如Tanaka等人, FEBS Letters 579:2092-2096, 2005，及Gentle等人, Bioconjugate Chem. 15:658-663, 2004。亦已描述在以界定化學計量進行特定藥物結合之抗體特定部位經工程改造的反應性半胱胺酸殘基。參見例如Junutula等人, Nature Biotechnology, 26:925-932, 2008。使用含有醯基供體麩醯胺酸之標籤或引起反應性之內源性麩醯胺酸(亦即能夠作為醯基供體形成共價鍵)藉由多肽工程改造在轉麩胺醯胺酶及胺(例如包含反應性胺或附接於反應性胺之細胞毒性劑)存在下的結合亦描述於國際申請案WO2012/059882及WO2015015448中。在一些實施例中，ADC可具有WO2016166629中所提供之ADC之特徵或特性中的任一者，其出於所有目的特此以引用之方式併入。

可以ADC形式連接至抗體之藥物或藥劑可包括例如細胞毒性劑、免疫調節劑、顯影劑、治療蛋白、生物聚合物或寡核苷酸。

可併入於ADC中之例示性細胞毒素劑包括蒽環黴素(anthracycline)、奧瑞他汀(auristatin)、海兔毒素(dolastatin)、康普瑞汀(combretastatin)、倍癌黴素(duocarmycin)、吡咯并苯并二氮呯二聚體、吲哚啉并苯并二氮呯二聚體、烯二炔、格爾德黴素(geldanamycin)、美登素(maytansine)、嘌呤黴素、紫杉烷、長春花生物鹼、喜樹鹼、特吡萊辛(tubulysin)、哈米特林(hemiasterlin)、斯考他汀(spliceostatin)、普拉二烯內酯(pladienolide)及其立體異構物、電子等排體、類似物或衍生物。

可併入於ADC中之例示性免疫調節劑之實例包括更昔洛韋(gancyclovier)、依那西普(etanercept)、他克莫司(tacrolimus)、西羅莫司(sirolimus)、伏環孢素(voclosporin)、環孢靈(cyclosporine)、雷帕黴素(rapamycin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、微酚酸酯(mycophenolgate mofetil)、甲胺喋呤(methotrextrate)、糖皮質激素及其類似物、細胞介素、幹細胞生長因子、淋巴毒素(lymphotoxin)、腫瘤壞死因子(TNF)、造血因子、介白素(例如介白素-1 (IL-1)、IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18及IL-21)、群落刺激因子(例如粒細胞群落刺激因子(G-CSF)及粒細胞巨噬細胞群落刺激因子(GM-CSF))、干擾素(例如干擾素-α、干擾素-β及干擾素-γ)、稱為「S 1因子」之幹細胞生長因子、紅血球生成素及血小板生成素或其組合。

可包括於ADC中之例示性成像劑包括螢光素、若丹明(rhodamine)、鑭系元素磷光體及其衍生物或與螯合劑結合之放射性同位素。螢光團之實例包括(但不限於)螢光異硫氰酸鹽(FITC) (例如5-FITC)、螢光素醯胺(FAM) (例如5-FAM)、曙紅、羧基螢光素、紅螢素、AlexaFluor® (例如Alexa 350、405、430、488、500、514、532、546、555、568、594、610、633、647、660、680、700或750)、羧基四甲基若丹明(TAMRA) (例如5,-TAMRA)、四甲基若丹明(TMR)及磺醯羅丹明(SR) (例如SR101)。螯合劑之實例包括(但不限於) 1,4,7,10-四氮雜環十二烷-N,N',N'',N'''-四乙酸(DOTA)、1,4,7-三氮雜環壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)、1,4,7-三氮雜環壬烷、1-戊二酸-4,7-乙酸(去鐵胺)、二伸乙三胺五乙酸(DTPA)及1,2-雙(o-胺基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸) (BAPTA)。

可包括於例示ADC中之性治療蛋白包括毒素、激素、酶及生長因子。

可併入於ADC中之例示性生物相容性聚合物包括水溶性聚合物，諸如聚乙二醇(PEG)或其衍生物，及含兩性離子之生物相容性聚合物(例如，含磷酸膽鹼之聚合物)。

可併入於ADC中之例示性生物相容性聚合物包括反義寡核苷酸。

在一些實施例中，PD-1路徑拮抗劑抗體拮抗PD-L1。結合至人類PD-L1之mAb之實例包括WO2013079174、WO2015061668、WO2010089411、WO/2007/005874、WO/2010/036959、WO/2014/100079、WO2013/019906、WO/2010/077634及美國專利第8552154、8779108及8383796號中所描述之抗體。

本文提供之組合療法可包含一或多種化學治療劑。化學治療劑之實例包括烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(cyclosphosphamide)；磺酸烷基酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯唑多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、米特多巴(meturedopa)及尤利多巴(uredopa)；乙烯亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、三伸乙基蜜胺(triethylenemelamine)、三伸乙基磷醯胺(trietylenephosphoramide)、三伸乙基硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；乙醯精寧(acetogenins)(尤其為布拉他辛(bullatacin)及布拉他辛酮(bullatacinone))；喜樹鹼(包括合成類似物拓朴替康(topotecan))；苔蘚蟲素(bryostatin)；海洋抑素(callystatin)；CC-1065 (包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin))；念珠藻素(cryptophycins)(特定言之，念珠藻素1及念珠藻素8)；海兔毒素；倍癌黴素(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；沙考地汀(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(cholophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥(mechlorethamine)、甲氮芥氧化物鹽酸鹽、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、芬司特瑞(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)，及雷莫司汀(ranimustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，諸如卡奇黴素γll及卡奇黴素phiI1(參見例如Agnew, Chem. Intl. Ed Engl. 33: 183-186 (1994))；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；雙膦酸鹽，諸如氯屈膦酸鹽；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素色素體)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麴黴素(authramycin)、偶氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C (cactinomycin)、卡拉比辛(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycins)、更生黴素(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-側氧基-L-正白胺酸、小紅莓(doxorubicin) (包括N-𠰌啉基-小紅莓、氰基-N-嗎啉基-小紅莓、2-吡咯啉基-小紅莓及去氧小紅莓)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、艾達黴素(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)，諸如絲裂黴素C、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、潑非黴素(potfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑黴素(streptonigrin)、鏈脲菌素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲胺喋呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、6-氮雜尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙去氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯(testolactone)；抗腎上腺藥物，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；乙醯葡醛酯(aceglatone)；醛磷醯胺醣苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布西(bestrabucil)；比山群(bisantrene)；艾達曲克(edatraxate)、得弗伐胺(defofamine)、地美可辛(demecolcine)、地吖醌(diaziquone)、艾福米辛(elformithine)、依利醋銨(elliptinium acetate)、埃坡黴素(epothilone)、依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基尿素；蘑菇多醣(lentinan)；氯尼達明(lonidamine)；類美登素(maytansinoid)，諸如美登素(maytansine)及安絲菌素(ansamitocin)；丙脒腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidamol)；二胺硝吖啶(nitracrine)；噴司他丁(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofuran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2, 2',2''-三氯三乙胺；單端孢黴烯(trichothecene) (尤其T-2毒素，弗納庫林A (verracurin A)、桿孢菌素A (roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；尿烷；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿拉伯醣苷(arabinoside) (「Ara-C」)；環磷醯胺；噻替派；類紫杉醇，例如紫杉醇及多西他賽(doxetaxel)；苯丁酸氮芥(chlorambucil)；吉西他濱(gemcitabine)；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲胺喋呤；鉑類似物，諸如卡鉑；長春鹼(vinblastine)；鉑；依託泊苷(etoposide) (VP-16)；異環磷醯胺；米托蒽醌；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine)；諾安托(novantrone)；替尼泊甙(teniposide)；依達曲沙(edatrexate)；柔紅黴素(daunomycin)；胺基喋呤(aminopterin)；希羅達(xeloda)；伊班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓樸異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸；卡培他濱(capecitabine)；及以上中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。亦包括用於調節或抑制腫瘤上之激素作用之抗激素劑，諸如抗雌性激素及選擇性雌性激素受體調節劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、雷諾昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及托瑞米芬(toremifene)(法樂通(Fareston))；抑制芳香酶之芳香酶抑制劑，其調節腎上腺中之雌性激素產生，諸如4(5)-咪唑、胺格魯米特(aminoglutethimide)、乙酸甲地孕酮(megestrol acetate)、依西美坦(exemestane)、福美司坦(formestane)、法屈唑(fadrozole)、伏羅唑(vorozole)、來曲唑(letrozole)及阿那曲唑(anastrozole)；及抗雄性激素，諸如氟他胺(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙立德(leuprolide)、氟里非(fluridil)、阿帕魯胺(apalutamide)、恩雜魯胺(enzalutamide)、西咪替丁(cimetidine)及戈舍瑞林(goserelin)；KRAS抑制劑；MCT4抑制劑；MAT2a抑制劑；酪胺酸激酶/血管內皮生長因子(VEGF)受體抑制劑，諸如舒尼替尼(sunitinib)、阿西替尼(axitinib)、索拉非尼(sorafenib)、替沃紮尼(tivozanib)；alk/c-Met/ROS抑制劑，諸如克卓替尼(crizotinib)、勞拉替尼(lorlatinib)；mTOR抑制劑，諸如坦羅莫司(temsirolimus)、格達列昔布(gedatolisib)；src/abl抑制劑，諸如伯舒替尼(bosutinib)；細胞週期素依賴性激酶(CDK)抑制劑，諸如帕柏西利(palbociclib)、PF-06873600；erb抑制劑，諸如達可替尼(dacomitinib)；PARP抑制劑，諸如拉唑帕尼(talazoparib)；SMO抑制劑，諸如格拉德吉(glasdegib)、PF-5274857；EGFR T790M抑制劑，諸如PF-06747775；EZH2抑制劑，諸如PF-06821497；PRMT5抑制劑；TGFRßr1抑制劑，諸如PF-06952229；及以上中之任一者的醫藥學上可接受之鹽、酸及衍生物。化學治療劑通常為小分子。

在本發明之治療方法、藥劑及用途之一實施例中，VEGFR抑制劑為阿西替尼或AG-013736。阿西替尼以及其醫藥學上可接受之鹽描述於美國專利第6,534,524號中。製造阿西替尼之方法描述於美國專利第6,884,890號及第7,232,910號、美國公開案第2006-0091067號及第2007-0203196號以及國際公開案第WO 2006/048745號中。阿西替尼之劑型描述於美國公開案第2004-0224988號中。阿西替尼之多晶型形式及醫藥組合物亦描述於美國公開案第2006-0094763號、第2008-0274192號及第2010-0179329號以及國際公開案第WO 2013/046133號中。以上列出之專利案及專利申請案以引用之方式併入本文中。

根據標準醫藥實踐，本發明之組合療法中之各治療劑可單獨或在包含該治療劑及一或多種醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及稀釋劑的藥劑(在本文中亦稱為醫藥組合物)中投與。

本發明之組合療法中之每一治療劑可同時((亦即，以同一藥劑)、並行(亦即，以按任何次序相繼投與之單獨藥劑)或按任何次序循序投與。當組合療法中之治療劑呈不同劑型(一種藥劑為錠劑或膠囊且另一藥劑為無菌液體)及/或以不同給藥時程投與，例如化學治療劑至少每天投與且生物治療劑不太頻繁地投與，諸如每週一次、每兩週一次或每三週一次時，依序投與為尤其適用的。

在一些實施例中，組合療法中之至少一種治療劑使用當該試劑用作治療相同癌症之單一療法時通常採用之相同給藥方案(治療之劑量、頻率及持續時間)投與。在其他實施例中，與當藥劑用作單一療法時相比，患者接收較低總量(例如較小劑量、不太頻繁給藥及/或較短治療持續時間)的組合療法中之至少一種治療劑。

在一些態樣中，本發明之抗體可經提供以用於選自由以下組成之群的一或多者：抑制腫瘤生長；抑制患者之惡性細胞生長進展；抑制患者之惡性細胞轉移；誘導患者之腫瘤消退；及治療呈現實體腫瘤之癌症。

在一些態樣中，用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。

在一些態樣中，用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：腎細胞癌(RCC)、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌(SCCHN)、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、小細胞肺癌(SCLC)或三陰性乳癌。

在一些態樣中，用途係用於治療選自由血色素惡性疾病組成之群的一或多者，且在一些實施例中，血色素惡性疾病為急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。

在一些態樣中，本發明提供一種治療個體之癌症的方法，其包含向該個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑為針對IL-4、IL-13及TSLP中之一或多者的抗體，且其中該第二抗癌治療劑選自由以下組成之群：抗OX40抗體、抗4-1BB抗體、抗HER2抗體、PD-1路徑拮抗劑、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、TLR3促效劑、TLR 7/8促效劑、TLR9促效劑、雙特異性抗CD47/抗PD-L1抗體及雙特異性抗P-鈣黏素/抗CD3抗體。

在一些態樣中，第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑，且該PD-1拮抗劑係選自由以下組成之群：薩善利單抗、BCD-100、卡瑞利珠單抗、西米普利單抗、傑諾珠單抗、MEDI0680、納武單抗、帕博利珠單抗、信迪利單抗、斯巴達珠單抗、STI-A1110、替雷利珠單抗、阿替利珠單抗、度伐利尤單抗、BMS-936559 (MDX-1105)、LY3300054、TSR-042。

在一些態樣中，第二抗癌治療劑包含US10155037的如SEQ ID NO: 4中所示之VH及如SEQ ID NO: 8中所示之VL，且更有利地，包含HC，該HC包含根據SEQ ID NO: 225之序列，及包含根據SEQ ID NO: 226之序列的輕鏈。

本發明提供一種治療個體之癌症的方法，其包含向個體投與包含第一抗癌治療劑及第二抗癌治療劑之組合療法，其中該第一抗癌治療劑係選自由以下組成之群：IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037，且該第二抗癌治療劑為PD-1拮抗劑，諸如薩善利單抗。

多特異性抗體形式在一些態樣中，本文提供一種抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域。

在一些態樣中，第一及第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含第一Fab域及第二Fab域之雙Fab臂，及包含第三Fab域之單Fab臂。

在一些態樣中，第一Fab包含第一抗原相關VH (VH-1)、第一抗原相關VL (VL-1)、第一抗原相關CL (CL-1)及第一抗原相關CH1 (CH1-1)。在一些態樣中，VH-1之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-1之N端。在一些態樣中，VL-1之C端藉由肽鍵共價融合至CL-1之N端。在一些態樣中，VH-1之C端藉由肽鍵共價融合至CL-1之N端。在一些態樣中，VL-1之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-1之N端。

在一些態樣中，第二Fab包含第二抗原相關VH (VH-2)、第二抗原相關VL (VL-2)、第二抗原相關CL (CL-2)及第二抗原相關CH1 (CH1-2)。在一些態樣中，VH-2之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-2之N端。在一些態樣中，VL-2之C端藉由肽鍵共價融合至CL-2之N端。在一些態樣中，VH-2之C端藉由肽鍵共價融合至CL-2之N端。在一些態樣中，VL-2之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-2之N端。

在一些態樣中，第三Fab包含第三抗原相關VH (VH-3)、第三抗原相關VL (VL-3)、第三抗原相關CL (CL-3)及第三抗原相關CH1 (CH1-3)。在一些態樣中，VH-3之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-3之N端。在一些態樣中，VL-3之C端藉由肽鍵共價融合至CL-3之N端。在一些態樣中，VH-3之C端藉由肽鍵共價融合至CL-3之N端。在一些態樣中，VL-3之C端藉由肽鍵共價融合至CH1-3之N端。

在一些態樣中，第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CL-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CL-1)；及第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)。第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。

在一些態樣中，第二多肽自N端至C端包含(VH-1)-(CH1-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；第五多肽自N端至C端包含(VL1)-(CL-1)；及第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)。第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。

在一些態樣中，第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CL-1)-(連接子)-(VL-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CH1-1)；及第四多肽包含(VH-2)-(CL-2)。第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。

在一些態樣中，第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CH1-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CL-1)；及第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)。第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；及第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)。

在一些態樣中，第五多肽在C端處包含序列EPKSC (SEQ ID NO: 122)。

在一些態樣中，CH1-1域可包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在一些態樣中，CH1-2域可包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。在一些態樣中，CH1-3域可包含選自由SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 110組成之群的序列。

CL-1可為恆定輕κ域。CL-2可為恆定輕κ域。CL-3可為恆定輕κ域。CL-1可為恆定輕λ域。CL-2可為恆定輕λ域。CL-3可為恆定輕λ域。

在一些態樣中，CL-1域包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。在一些態樣中，CL-2域包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。在一些態樣中，CL-3域包含選自由SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 108及SEQ ID NO: 113組成之群的序列。

在一些態樣中，第一鉸鏈包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。在一些態樣中，第二鉸鏈包含選自由SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 102、SEQ ID NO: 123、SEQ ID NO: 126、SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131組成之群的序列。在一些態樣中，第一鉸鏈區及第二鉸鏈區包含一對根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之序列。

在一些態樣中，第一CH2域及第二CH2域中之一或兩者包含根據SEQ ID NO: 8之序列。

在一些態樣中，第一CH3域及第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對之一： (i) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (ii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (iii) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (iv) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (v) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (vi) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。

在一些態樣中， (i) CL-1包含根據SEQ ID NO: 16之序列，連接子包含根據SEQ ID NO: 104之序列，CH1-2包含根據SEQ ID NO: 6之序列，第二鉸鏈包含根據SEQ ID NO: 129之序列，第二CH2包含根據SEQ ID NO: 8之序列，第二CH3包含根據SEQ ID NO: 124之序列， (ii) CH1-1包含根據SEQ ID NO: 6之序列， (iii) CL-2包含根據SEQ ID NO: 16之序列。

在一些態樣中，CL-3包含根據SEQ ID NO: 95之序列。在一些態樣中，CH1-3包含根據SEQ ID NO: 6之序列。在一些態樣中，第一鉸鏈包含根據SEQ ID NO: 131之序列。在一些態樣中，第一CH2包含根據SEQ ID NO: 8之序列。在一些態樣中，第一CH3包含根據SEQ ID NO: 127之序列。

本發明之抗體本發明抗體中之一或多者可涵蓋單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如，Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異結合抗體、單鏈(ScFv)、其突變異體、包含抗體片段之融合蛋白(例如，域抗體)、人類化抗體及包含所需特異性之抗原結合位的免疫球蛋白分子之任何其他經修飾組態，包括抗體之醣基化變異體、抗體之胺基酸序列變異體及經共價經修飾之抗體。抗體可為小鼠、大鼠、人類或任何其他來源(包括嵌合或人類化抗體)。在一些實施例中，抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗體為人類或人類化抗體。在一些實施例中，抗體為嵌合抗體。

本發明涵蓋表80、81、82、83、84、85、86及87中之一或多者中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區之修飾。舉例而言，本發明包括包含功能上等效的可變區及不顯著影響其特性之CDR的抗體以及具有加強或減少的活性或親和力之變異體。經修飾多肽之實例包括具有胺基酸殘基之保守取代、胺基酸之一或多個缺失或添加的多肽，該等胺基酸不使功能活性產生顯著有害變化，或其使多肽對其配位體之親和力或化學類似物之使用成熟(增強)。

修飾或突變亦可在構架區或恆定區中經進行以增加本文所提供之抗體的半衰期。參見例如PCT公開案第WO 00/09560號。亦可在構架區或恆定區中進行突變以改變抗體之免疫原性，提供共價或非共價結合於另一分子之部位，或改變諸如補體結合、FcR結合及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性之特性。在一些實施例中，在構架區或恆定區內進行不超過一至五個保守胺基酸取代。在其他實施例中，在構架區或恆定區內進行不超過一至三個保守胺基酸取代。根據本發明，單一抗體可在可變域之任何一或多個CDR或構架區中或在恆定區中具有突變。

在一些實施例中，抗體包含經修飾之恆定區，其對人類Fc γ受體具有增加或減少之結合親和力，為免疫學上惰性或部分惰性的，例如不觸發補體介導之溶解，不刺激抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)或不活化微神經膠質細胞；或在以下中之任何一或多個方面具有降低之活性(相比於未經修飾之抗體)：觸發補體介導之溶解、刺激ADCC或活化微神經膠質細胞。恆定區之不同修飾可用以達成效應功能之最佳水平或組合。參見例如Morgan等人, Immunology 86:319-324, 1995；Lund等人, J. Immunology 157:4963-9 157:4963-4969, 1996；Idusogie等人, J. Immunology 164:4178-4184, 2000；Tao等人, J. Immunology 143: 2595-2601, 1989；及Jefferis等人, Immunological Reviews 163:59-76, 1998。在一些實施例中，恆定區如Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624；PCT公開案第WO99/058572號中所描述經修飾。

在一些態樣中，本發明之抗體包含L247A、L248A及G250A (Kabat)或L234A、L235A及G237A (EU)以最小化效應功能。在一些態樣中，本發明抗體包含以下突變以延長半衰期：M459L及N465S (Kabat)或M428L及N434S (EU)。在一些態樣中，本發明之抗體在位置M459及N465 (Kabat)或M428及N434 (EU)處包含野生型殘基。因此，本發明亦提供如本文所描述之包含CH3域的抗體，其中包含該CH3域之多肽藉由在M459及N465 (Kabat)或M428及N434 (EU)處轉換為野生型殘基而與多肽的定義SEQ ID不同。

在一些態樣中，本發明之抗體包含突變以有助於D232R、K440R (Kabat)或D221R、K409R (EU)及D232E、K391E (Kabat)或D221E、L368E (EU)上分別成對的重鏈上的重鏈活體外雜二聚化的突變。

本發明亦提供出人意料地以僅兩個RR/EE突變(在鉸鏈區中之D(H232)及CH3區中之K(H440)處)製得的雙特異性抗體。殘基P228可為未突變的。本發明提供包含抗體Fc域之抗體，該抗體Fc域包含第一Fc鏈及第二Fc鏈，其中該第一Fc鏈及該第二Fc鏈各自含有促進該第一Fc鏈與該第二Fc鏈之締合的兩個胺基酸修飾，其特徵在於(i)第一Fc鏈包含D(H232)R及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含D(H232)E及L(H391)E；或該第一Fc鏈包含D(H232)E及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含L(H391)R及D(H232)E。本發明提供抗體，其中第一Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第一CH3區連接之第一CH2區的第一鉸鏈區，且在本文中該第二Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第二CH3區連接之第二CH2區的第二鉸鏈區，且其中該第一鉸鏈區及該第二鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之一對序列，且該第一CH3區及該第二CH3區包含以下兩對序列中之任一者：SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127；或SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。

本發明亦提供可出人意料地僅在CH3區中具有一個R/E突變(K(H440))製得的雙特異性抗體。本發明提供包含抗體Fc域之抗體，該抗體Fc域包含第一Fc鏈及第二Fc鏈，其中該第一Fc鏈及該第二Fc鏈各自含有促進第一Fc鏈與第二Fc鏈之締合的一個胺基酸修飾，其特徵在於(i)該第一Fc鏈包含K(H440)R，且該第二Fc鏈包含L(H391)E。本發明提供抗體，其中第一Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第一CH3區連接之第一CH2區的第一鉸鏈區，且在本文中該第二Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第二CH3區連接之第二CH2區的第二鉸鏈區，且其中該第一CH3區及該第二CH3區包含SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127之一對序列。此類抗體由IL13433-1261例示。

修飾亦包括醣基化及非醣基化多肽，以及具有其他轉譯後修飾的多肽，諸如利用不同糖之醣基化、乙醯化及磷酸化。抗體在恆定區中之保守位置經醣基化(Jefferis及Lund，1997, Chem. Immunol. 65:111-128；Wright及Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32)。免疫球蛋白之寡醣側鏈影響蛋白質之功能(Boyd等人，1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318；Wittwe及Howard, 1990, Biochem. 29:4175-4180)及醣蛋白之部分之間的分子內相互作用，該相互作用其可影響醣蛋白之構形及所呈現之三維表面(Jefferis及Lund，見上文；Wyss及Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416)。寡糖亦可用於使指定醣蛋白基於特異性識別結構而靶向某些分子。亦已報導抗體之醣基化影響抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。特定言之，據報導在β(1,4)-N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶III (GnTIII) (催化形成二等分GlcNAc之糖基轉移酶)之四環素調節之表現存在下，由CHO細胞所產生的抗體已提高ADCC活性(Umana等人，1999, Nature Biotech. 17:176-180)。

本發明亦涵蓋包含本文所揭示之抗體之一或多種組分的融合蛋白。在一些實施例中，可製得融合蛋白，其包含與另一多肽連接之全部或一部分的本發明抗體。在另一實施例中，僅將抗體之可變域鍵聯至多肽。在另一實施例中，將抗體之VH域連接至第一多肽，同時將抗體之VL域連接至第二多肽，該第二多肽以使得VH域與VL域可彼此相互作用以形成抗原結合位的方式與第一多肽締合。在另一個實施例中，藉由連接子使VH域與VL域分隔，從而使得VH與VL域可彼此相互作用。VH-連接子-VL抗體隨後連接至所關注之多肽。另外，可產生融合抗體，其中兩種(或更多種)單鏈抗體彼此連接。若想要在單一多肽鏈上產生二價或多價抗體或若想要產生雙特異性抗體，則可適用。

編碼抗體之聚核苷酸及製造方法本發明亦提供編碼本發明抗體中之任一者之聚核苷酸，包括本文所描述之抗體部分及經修飾之抗體。本發明亦提供製造本文所描述之抗體及聚核苷酸中之任一者的方法。可藉由此項技術中已知之程序製造聚核苷酸及表現蛋白質。

必要時，可對相關抗體(單株或多株)進行定序且隨後可將聚核苷酸序列選殖至載體中表現或繁殖。編碼相關抗體的序列可在宿主細胞中、在載體中維持且宿主細胞隨後可擴增及冷凍供將來使用。細胞培養物中重組單株抗體之產生可經由利用此項技術中已知之方式自B細胞選殖抗體基因來進行。參見例如Tiller等人, 2008, J. Immunol. Methods 329, 112；美國專利第7,314,622號。

在一些實施例中，本文提供一種聚核苷酸，其包含編碼本文所提供之抗體之重鏈或輕鏈可變區中之一者或兩者的序列。編碼所關注之抗體的序列可以在宿主細胞中、在載體中維持且宿主細胞接著可以擴增及冷凍供將來使用。本文中進一步描述載體(包括表現載體)及寄主細胞。

在一些實施例中，本發明提供編碼表80、81、82、83、84、85、86及87中之一或多者中所列之抗體中之任一者之胺基酸序列的聚核苷酸。在一個實施例中，本發明提供編碼IL41333-1258；IL413TSLP-1024；或IL413p40-0705之胺基酸序列的聚核苷酸。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-4抗體重鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 23、106、115、121、124、125、130、133、135、140、144、146、148、151、156、159、162、179、180及183。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-4抗體輕鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 27、109、116、136、197、207及208。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-4抗體VH多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 19、22及28。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-4抗體VL多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 20、26、29及30。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-13抗體重鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 52、66、112、118、121、122、145、149、152、154、160、162及209。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-13抗體輕鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 55、119、120、125、130、133、135、140、144、163、164、180及196。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-13抗體VH多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 44、48、51、57及65。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-13抗體VL多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 46、49、54、58、59及68。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-33抗體重鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 64、74、103、128、132、134、137、142及143。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-33抗體輕鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 79、145、107、115、121、138及144。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-33抗體VH多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 63、73及80。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗IL-33抗體VL多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 54、68、71、78及81。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗TSLP抗體重鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 97、155、149、151、152、153、158、159、161及165。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗TSLP抗體輕鏈多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 98、99、150、154、156、157及160。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗TSLP抗體VH多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 92。

在一些實施例中，本發明提供編碼一或多種抗TSLP抗體VL多肽之聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 94。

本發明提供一種編碼結合IL-33之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中核酸包含：SEQ ID NO: 202之核酸序列、SEQ ID NO: 203之核酸序列或兩者。本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-33之抗體的攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 190之核酸序列、SEQ ID NO: 191之核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-33之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127209之質體的插入物的核酸序列，及由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127210之質體的插入物的核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-33之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127207之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127208之質體的插入物的核酸序列或兩者。

本發明提供一種編碼結合TSLP之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 204之核酸序列、SEQ ID NO: 205之核酸序列或兩者。本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至TSLP之抗體的攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 192之核酸序列、SEQ ID NO: 193之核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至TSLP之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127200之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127199之質體的插入物的核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至TSLP之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127202之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127201之質體的插入物的核酸序列或兩者。

本發明提供一種編碼結合至p40之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 194之核酸序列、SEQ ID NO: 195之核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至p40之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127204之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127203之質體的插入物的核酸序列或兩者。

本發明提供一種編碼結合IL-4之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 200之核酸序列、SEQ ID NO: 201之核酸序列或兩者。本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-4之抗體的攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 188之核酸序列、SEQ ID NO: 189之核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-4之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127198之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127197之質體的插入物的核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-4之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127194之質體的插入物的核酸序列或兩者。

本發明提供一種編碼結合IL-13之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含：SEQ ID NO: 196之核酸序列、SEQ ID NO: 195之核酸序列或兩者。本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼結合至IL-13之抗體的攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者，其中該核酸包含SEQ ID NO: 187之核酸序列、SEQ ID NO: 188之核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-13之抗體之VH、VL或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127196之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127195之質體的插入物的核酸序列或兩者。本發明提供一種編碼結合至IL-13之抗體之攜帶VH的多肽及攜帶VL的多肽或兩者的經分離之聚核苷酸，其中該核酸包含由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127193之質體的插入物的核酸序列，由ATCC寄存且具有寄存編號PTA-127192之質體的插入物的核酸序列或兩者。

本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127210之質體編碼之IL33-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127209之質體編碼之IL33-VL序列； (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/IL-33抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該經分離之抗體特異性結合IL-33，特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含IL-33結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127208之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127207之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA0-127199之質體編碼之TSLP-VL序列。 (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/TSLP抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/p40抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含 (i) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體編碼之p40-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體編碼之p40-VL序列。 (ii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列；及 (iii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列。

本發明提供一種經分離之聚核苷酸，其編碼抗IL-4/IL-13/p40抗體之第一、第二、第三、第四或第五多肽中之一或多者，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含p40結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127204之質體編碼之序列；該第二多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之序列；該第三多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127203之質體編碼之序列；該第四多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之序列；及該第五多肽鏈包含由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之序列。

一般熟習此項技術者將瞭解，由於基因密碼之簡併，存在許多編碼如本文所描述之多肽之核苷酸序列。一些此等聚核苷酸攜帶與任何天然基因之核苷酸序列之最小同源性。儘管如此，本發明尤其預期因密碼子使用差異而改變之聚核苷酸。另外，包含本文所提供之聚核苷酸序列之基因的對偶基因在本發明範疇內。對偶基因為由於核苷酸之一或多個突變(諸如缺失、添加或取代)而變化的內源基因。所得mRNA及蛋白質可(但未必)具有變化的結構或功能。對偶基因可使用標準技術(諸如雜交、擴增或資料庫序列比較)來鑑別。

在一個實施例中，VH及VL域或全長HC或LC由單獨聚核苷酸編碼。或者，VH及VL或HC及LC均由單一聚核苷酸編碼。

本發明亦涵蓋與任何此類序列互補之聚核苷酸。聚核苷酸可為單股(編碼或解碼)或雙股的，且可為DNA (基因體、cDNA、或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式對應於DNA分子；及mRNA分子，其不含內含子。額外編碼或非編碼序列可能(但不必須)存在於本發明之聚核苷酸內，且聚核苷酸可能(但不必須)連接至其他分子或支撐物質。

本發明之聚核苷酸可使用化學合成、重組方法或PCR獲得。化學聚核苷酸合成方法為此項技術中所熟知且無需詳細描述於本文中。熟習此項技術者可使用本文所提供之序列及商用DNA合成器以產生所要DNA序列。

使用重組方法製備聚核苷酸，包含所需序列之聚核苷酸可插入適合載體中，且載體又可引入適合宿主細胞中進行複製及擴增，如本文中進一步論述。聚核苷酸可藉由此項技術中已知任何方法插入宿主細胞中。藉由利用直接吸收、內吞作用、轉染、F-配對或電穿孔將外源性聚核苷酸引入來使細胞轉型。一旦引入，外源性聚核苷酸可作為非整合型載體(諸如質體)保持在細胞內或整合至宿主細胞基因體中。

適合選殖載體可根據標準技術構築，或可選自大量在此項技術中可用之選殖載體。雖然所選選殖載體可根據意欲使用之宿主細胞而變化，但適用選殖載體一般將具有一或多個特徵，諸如i)自我複製之能力，ii)特定限制性核酸內切酶之單一目標，或iii)可攜帶標記物之基因，其可用於選擇含有載體之殖株。適合實例包括質體及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript (例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA及穿梭載體(諸如pSA3及pAT28)。此等及許多其他選殖載體可購自商業供應商，諸如BioRad、Strategene及Invitrogen。

進一步提供表現載體。表現載體通常為含有根據本發明之聚核苷酸之可複製聚核苷酸構築體。此意味著表現載體作為游離基因體或作為染色體DNA之整體部分在宿主細胞中必須為可複製的。適合表現載體包括(但不限於)質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒)、黏質體及PCT公開案第WO 87/04462號中所揭示之表現載體。載體組分可一般包括但不限於以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記物基因；適合轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於表現(亦即轉譯)，亦通常需要一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位、轉譯啟動位及終止密碼子。

含有相關聚核苷酸之載體可藉由許多適當手段中之任一者引入宿主細胞中，該等手段包括電穿孔、採用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-右旋糖苷或其他物質之轉染；微彈轟擊；脂質體轉染；及感染(例如其中載體為諸如痘瘡病毒之傳染劑)。引入載體或聚核苷酸之選擇將常常視宿主細胞之特點而定。

本發明亦提供包含本文所描述之聚核苷酸中之任一者的宿主細胞。能夠過度表現異源DNA之任何宿主細胞可用於分離編碼相關抗體、多肽或蛋白質之基因目標。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括(但不限於) COS、HeLa及CHO細胞。亦參見PCT公開案第WO 87/04462號。適合的非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如大腸桿菌( E. coli)或枯草芽胞桿菌( B.subtillis))及酵母(諸如啤酒酵母( S.cerevisae)、裂殖酵母( S.pombe)或乳酸克魯維酵母( K.lactis))。

另外，任何數目之可商購獲得及不可商購獲得的表現多肽或蛋白質之細胞株均可根據本發明使用。熟習此項技術者將瞭解，不同細胞株可具有不同營養需求及/或可需要不同培養條件以實現最佳生長及多肽或蛋白質表現，且將能夠視需要改變條件。

醫藥組合物在其他實施例中，本發明包含醫藥組合物。

「醫藥組合物」係指本發明抗體與一種或賦形劑之混合物。如本文所用，醫藥組合物可包含一或多種結合至IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40中之一或多者的抗體；一或多種結合至IL-4及IL-13之抗體；及一或多種結合至IL-4/IL-13/IL-33、或IL-4/IL-13/TSLP、或IL-4/IL-13/p40之抗體或一或多種包含編碼一或多種此等抗體之序列的聚核苷酸。此等組合物可進一步包含此項技術中熟知之適合賦形劑，諸如醫藥學上可接受之賦形劑，包括緩衝劑。

本發明之醫藥組合物可呈多種形式。此等形式包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射及可輸注溶液)、分散液或懸浮液及凍乾粉末。形式視預期投與模式及治療應用而定。

亦可使用醫藥技術中已知之其他賦形劑及投與模式。本發明之醫藥組合物可藉由熟知之藥學技術中之任一者，諸如有效調配及投與程序製備。上文關於有效調配及投與程序之考慮因素在此項技術中已熟知且描述於標準教科書中。藥物之調配論述於例如Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, 1975；Liberman等人編, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；及Kibbe等人編, Handbook of Pharmaceutical Excipients(第3版), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999中。

可接受之賦形劑所採用之劑量及濃度對接收者無毒，且可包含緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥四級銨；苯紮氯銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN ^TM、PLURONICS ^TM或聚乙二醇(PEG)。

本文所提供之本發明進一步涵蓋治療、預防或管理個體中之一或多種選自由以下組成之群的病症的方法及組合物：IL-4相關病症、IL-13相關病症、IL-33相關病症、TSLP相關病症、p40相關病症、發炎病症、異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎，其包含向該個體投與治療有效量之本文所提供之抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、多特異性抗IL4/IL-13、IL-4/Il-13/IL-33；IL-4/IL-13/TSLP；或IL-4/IL-13/p40抗體。

在一個態樣中，本發明提供一種治療個體中之與IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現中之一或多者相關之病狀的方法。在一些實施例中，治療個體之與IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現中之一或多者相關之病狀的方法包含向有需要之個體投與有效量之包含各別抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/IL-33、IL-4/IL-13/TSLP或IL-4/IL-13/p40多特異性抗體之組合物(例如醫藥組合物)。與IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現相關之病狀包括(但不限於) IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現中之一或多者之不正常表現、變化或異常的IL-4、IL-13、IL-33、TSLP及p40表現。

在一個態樣中，本發明提供選自由以下組成之群的一或多者：本文所描述之抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體，或包含此類抗體之醫藥組合物供療法使用。在一特定實施例中，本發明亦提供抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體中之一或多者用於治療與IL-4、IL-13、IL-33、TSALP、p40、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/IL-33、IL-4/IL-13/TSLP及IL-4/IL-13/p40中之一或多者相關之病症。

本發明進一步提供選自由以下組成之群的一或多者：本文所描述之抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體，包含此類抗體之醫藥組合物，其用於製造用於療法中之藥劑。在一些實施例中，療法為治療與IL-4、IL-13、IL-33、TSALP、p40、IL-4/IL-13、IL-4/IL-13/IL-33、IL-4/IL-13/TSLP及IL-4/IL-13/p40中之一或多者相關的病症。

治療、診斷及其他方法本發明之抗體及抗體結合物適用於各種應用，包括(但不限於)治療性治療方法及診斷性治療方法。

本發明之IL-4抗體可抑制IL-4活性且可適用於IL-4相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-4表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-4抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-4表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之IL-4抗體可抑制IL-4之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、癌症、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、禿髮、特發性肺部纖維化(IPF)及全身性硬化症。在一些態樣中，本發明之IL-4抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。在一些態樣中，本發明之IL-4抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。在一些態樣中，本發明之IL-4抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-4表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-4表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-4表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-4抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-4抗體亦包括包含抗IL-4抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之IL-13抗體可抑制IL-13活性且可適用於IL-13相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-13表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病及全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症、動脈粥樣硬化、真菌角膜炎、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡(SLE)、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-13抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-13表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之IL-13抗體可抑制IL-13之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。在一些態樣中，本發明之IL-13抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。在一些態樣中，本發明之IL-13抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。在一些態樣中，本發明之IL-13抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-13表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-13表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-13表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-13抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-13抗體亦包括包含抗IL-13抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之IL-33抗體可抑制IL-33活性且可適用於IL-33相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-33表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-33抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-33表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之IL-33抗體可抑制IL-33之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些態樣中，本發明之IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。在一些態樣中，本發明之IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。在一些態樣中，本發明之IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-33表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-33表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-33表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-33抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-33抗體亦包括包含抗IL-33抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之TSLP抗體可抑制TSLP活性且可適用於TSLP相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與TSLP表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之TSLP抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與TSLP表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之TSLP抗體可抑制TSLP之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。在一些態樣中，本發明之TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。在一些態樣中，本發明之TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。在一些態樣中，本發明之TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與TSLP表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與TSLP表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與TSLP表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗TSLP抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗TSLP抗體亦包括包含抗TSLP抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可抑制IL-4、IL-13及IL-33活性且可適用於IL-4、IL-13及IL-33相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-4、IL-13及IL-33表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、糖尿病性腎病、白塞氏病、痛風、阿茲海默氏症及動脈粥樣硬化，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-4/IL-13/IL-33抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-4/IL-13/IL-33表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可抑制IL-4、IL-13及IL-33之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎及斑禿。本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-4/IL-13/IL-33表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-4/IL-13/IL-33表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-4/IL-13/IL-33表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-4/IL-13/IL-33抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-4/IL-13/IL-33抗體亦包括包含抗IL-4/IL-13/IL-33抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可抑制IL-4、IL-13及TSLP活性且可適用於IL-4、IL-13及TSLP相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-4、IL-13及TSLP表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症及真菌角膜炎，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-4/IL-13/TSLP抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-4/IL-13/TSLP表現相關之一系列病症。

本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可抑制IL-4、IL-13及TSLP之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎及斑禿。本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-4/IL-13/TSLP表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-4/IL-13/TSLP表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-4/IL-13/TSLP表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-4/IL-13/TSLP抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-4/IL-13/TSLP抗體亦包括包含抗IL-4/IL-13/TSLP抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可抑制IL-4、IL-13及p40活性且可適用於IL-4、IL-13及p40相關疾病之治療、預防、抑制及改善。本發明提供一種治療與IL-4、IL-13及p40表現相關之病症的方法。本發明提供一種治療個體之選自由以下組成之群的病症中之一或多者的方法：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、牛皮癬、牛皮癬性關節炎、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、哮喘(重度)、過敏、禿髮、特發性肺部纖維化、全身性硬化症、瘢痕瘤、全身性紅斑狼瘡、原發性膽汁性肝硬化及化膿性汗腺炎，其包含向該有需要之個體投與有效量之包含如本文所描述之IL-4/IL-13/p40抗體中之任一者的醫藥組合物。前述語句提供與IL-4/IL-13/p40表現相關之一系列病症。

在一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可抑制IL-4、IL-13及p40之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善一或多種選自由以下組成之群的疾病：非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、異位性皮膚炎、哮喘(重度)、禿髮、特發性肺部纖維化及全身性硬化症。在一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可適用於治療、預防、抑制及改善異位性皮膚炎。在一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可適用於治療、預防、抑制及改善哮喘。在一些態樣中，本發明之IL-4/IL-13/p40抗體可適用於治療、預防、抑制及改善NASH。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於治療與IL-4/IL-13/p40表現相關之病症中之一或多者的所描述之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體用於製造供治療與IL-4/IL-13/p40表現相關之一或多種病症用之藥劑的用途。在另一態樣中，提供一或多種偵測、診斷或監測與IL-4/IL-13/p40表現相關之病症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗IL-4/IL-13/p40抗體可經諸如顯影劑及酶-受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色反應劑。關於本文所描述之所有方法，提及抗IL-4/IL-13/p40抗體亦包括包含抗IL-4/IL-13/p40抗體及一或多種其他藥劑之醫藥組合物。

投與及給藥典型地，本發明抗體係以有效治療如本文所描述之病狀的量投與。本發明之抗體可以本身抗體形式投與，或者以含有該抗體之醫藥組合物形式投與。

本發明之抗體藉由任何適合途徑以適於此類途徑之醫藥組合物形式且以有效用於所欲治療之劑量投與。

在一些實施例中，抗體可非經腸投與，例如直接投與至血流中、至肌肉中或至內部器官中。適用於非經腸投與之方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、心室內、尿道內、胸骨內、顱內、肌肉內及皮下。非經腸投與之適合裝置包括針(包括微針)注射器、無針注射器及輸注技術。

在一些態樣中，皮下投與本發明之IL-4/IL-13/IL-33抗體。在一些態樣中，皮下投與本發明之IL-4/IL-13/TSLP抗體。在一些態樣中，皮下投與本發明之IL-4/IL-13/p40抗體。

在另一實施例中，本發明化合物亦可局部投與至皮膚或黏膜，亦即經皮或透皮。在另一個實施例中，本發明之化合物亦可經鼻內或藉由吸入投與。在另一實施例中，本發明化合物亦可經直腸或經陰道投與。在另一實施例中，本發明之化合物亦可直接投與至眼或耳。

本發明抗體或含有該等抗體之組合物的給藥方案係基於多種因素，包括個體之類型、年齡、體重、性別及醫學病狀；病狀之嚴重程度；投與途徑；及所用特定抗體之活性。因此，給藥方案可廣泛變化。在一個實施例中，本發明之抗體之每日總劑量通常為約0.01至約100 mg/kg (亦即，毫克本發明之抗體/公斤體重)以治療本文所論述之指定病狀。在另一實施例中，本發明抗體之每日總劑量為約0.1至約50 mg/kg，且在另一實施例中約0.5至約30 mg/kg。

共投與本發明之抗體可單獨或與一或多種其他治療劑組合使用。本發明提供如本文所定義之用途、方法或組合物中之任一者，其中本發明之抗體與一或多種本文所論述之其他治療劑組合使用。

「組合地」投與兩種或更多種組合藥劑意謂所有藥劑在時間上足夠緊密地投與以影響對個體之治療。兩種或更多種藥劑可同時或依序投與。另外，同時投與可藉由在投與之前混合試劑或藉由在同一時間點但在投與之相同或不同部位作為個別劑型投與試劑進行。

本發明抗體之各種調配物(例如抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP、抗IL-4/IL-13/p40抗體中之一或多者)可用於投與。在一些實施例中，抗體可以純淨形式投與。在一些實施例中，抗體及醫藥學上可接受之賦形劑可呈各種調配物形式。醫藥學上可接受之賦形劑為此項技術中已知，且為有助於藥理學上有效物質之投與之相對惰性物質。舉例而言，賦形劑可提供形式或稠度，或充當稀釋劑。適合賦形劑包括(但不限於)穩定劑、濕潤劑及乳化劑、改變容積滲透濃度之鹽、囊封劑、緩衝劑及皮膚滲透增強劑。用於非經腸及經腸藥物遞送之賦形劑以及調配物闡述於Remington, The Science and Practice of Pharmacy第21版Mack Publishing, 2005中。

在一些實施例中，此等試劑經調配以用於藉由注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等)投與。因此，此等試劑可與醫藥學上可接受之媒劑，諸如生理鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液及其類似物組合。特定劑量方案，亦即，劑量、時序及重複將視特定個體及彼個體之病史而定。

如本文所描述之抗體(例如抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP、抗IL-4/IL-13/p40抗體中之一或多者)可使用任何適合的方法靜脈內投與，包括藉由注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌肉內等)。抗體，例如單株抗體或多特異性抗體，亦如本文所描述經由吸入投與。一般而言，對於本發明之抗體之投與，劑量視所治療之宿主及特定投與模式而定。在一個實施例中，本發明之抗體之劑量範圍將為約0.001 µg/kg體重至約20,000 µg/kg體重。術語「體重」在治療患者時適用。在處理經分離之細胞時，如本文所用，「體重」係指「總細胞體重」。術語「總體重」可應用於經分離之細胞處理及患者治療兩者。在本申請案中表示為「體重」或簡單地「kg」的所有濃度及治療/處理水準，亦視為涵蓋類似「總細胞體重」及「總體重」濃度。然而，一般熟習此項技術者將認識到多種劑量範圍之效用，例如0.01 µg/kg體重至20,000 µg/kg體重、0.02 µg/kg體重至15,000 µg/kg體重、0.03 µg/kg體重至10,000 µg/kg體重、0.04 µg/kg體重至5,000 µg/kg體重、0.05 µg/kg體重至2,500 µg/kg體重、0.06 µg/kg體重至1,000 µg/kg體重、0.07 µg/kg體重至500 µg/kg體重、0.08 µg/kg體重至400 µg/kg體重、0.09 µg/kg體重至200 µg/kg體重或0.1 µg/kg體重至100 µg/kg體重。此外，熟習此項技術者應認識到，使用多種不同劑量水平，例如選自由以下組成之群的一或多者：0.0001 µg/kg、0.0002 µg/kg、0.0003 µg/kg、0.0004 µg/kg、0.005 µg/kg、0.0007 µg/kg、0.001 µg/kg、0.1 µg/kg、1.0 µg/kg、1.5 µg/kg、2.0 µg/kg、5.0 µg/kg、10.0 µg/kg、15.0 µg/kg、30.0 µg/kg、50 µg/kg、75 µg/kg、80 µg/kg、90 µg/kg、100 µg/kg、120 µg/kg、140 µg/kg、150 µg/kg、160 µg/kg、180 µg/kg、200 µg/kg、225 µg/kg、250 µg/kg、275 µg/kg、300 µg/kg、325 µg/kg、350 µg/kg、375 µg/kg、400 µg/kg、450 µg/kg、500 µg/kg、550 µg/kg、600 µg/kg、700 µg/kg、750 µg/kg、800 µg/kg、900 µg/kg、1 µg/kg、5 µg/kg、10 µg/kg、12 µg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg及30 mg/kg。所有此等劑量為例示性的，且此等劑量點之間的任何劑量亦預期在本發明中適用。以上劑量範圍或劑量水平中之任一者均可用於本發明之抗體。對於歷經數日或更長時間之重複投與，視病狀而定，持續治療直至出現症狀之所需抑制或直至達成足夠治療水平為止。

一般而言，對於本文所提供之抗體之投與，候選劑量可每天、每週、每隔一週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週、每八週、每十週、每十二週或多於每十二週投與。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每日投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg、至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.01 mg/kg、約0.03 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg及約25 mg/kg之日劑量。

在一些實施例中，視上述因素而定，每週投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg、至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.01 mg/kg、約0.03 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg及約30 mg/kg之每週劑量。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每兩週投與候選劑量，其劑量範圍為約1 µg/kg、至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/Kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg及約30 mg/kg之每兩週劑量。

在一些實施例中，每三週投與候選劑量，視上述因素而定，劑量範圍為約1 µg/kg、至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg及約50 mg/kg之每三週劑量。

在一些實施例中，每個月或每四週投與候選劑量，視上述因素而定，劑量範圍為約1 µg/kg、至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg及約50 mg/kg之每月劑量。

在其他實施例中，視上述因素而定，每天投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約1200 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg或約1200 mg之每日劑量。

在其他實施例中，視上述因素而定，每週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg或2000 mg之每週劑量。

在其他實施例中，視上述因素而定，每兩週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg或2000 mg之每兩週劑量。

在其他實施例中，視上述因素而定，每三週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2500 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或約2500 mg之每三週劑量。

在其他實施例中，視上述因素而定，每四週或每月投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約3000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg，約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg之每月劑量。

其他給藥方案亦可適用，視醫師希望實現之藥物動力學衰變模式而定。在一個實施例中，本發明之抗體以初始準備劑量、隨後更高及/或連續的實質上恆定之劑量投與。在一些實施例中，考慮一週一至四次給藥。在其他實施例中，考慮每月一次或每隔一月或每三個月一次給藥。此療法之進程容易藉由習知技術及分析來監視。投與方案可隨時間變化。

出於本發明之目的，適當劑量之抗體將視所採用之抗體(例如一或多種選自由抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體組成之群)或其組合物、待治療症狀之類型及嚴重程度、是否投與試劑以用於治療性目的、先前療法、患者之臨床病史及對試劑的反應、患者對所投與試劑的清除速率及主治醫師之判斷而定。通常，臨床醫師將投與抗體直至達到獲得所要結果之劑量。劑量及/或頻率可在治療過程內變化。經驗考慮因素，諸如半衰期，一般將有助於確定劑量。舉例而言，與人類免疫系統相容之抗體(諸如人類化抗體或全人類抗體)可用於延長抗體半衰期且預防抗體受宿主之免疫系統攻擊。投與頻率可加以確定且在治療過程中加以調整，且通常(但不一定)基於癌症之治療及/或抑制及/或改善及/或延遲。或者，抗體之持續連續釋放調配物可為適當的。用於達成持續釋放的各種調配物及裝置為此項技術中已知的。

在一個實施例中，可在已給與抗體(例如一或多種選自由抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體組成之群)之一或多次投與的個體中憑經驗測定抗體之劑量。向個體給予遞增劑量之抗體。為評估功效，可跟蹤疾病之指標。

在一些實施例中，本文所提供之抗體(例如一或多種選自由抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP或抗IL-4/IL-13/p40抗體組成之群)可向先前已接受一或多種選自由以下組成之群的抗體的個體投與：抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP或抗p40抗體治療劑，以治療疾病。在一些實施例中，本文所提供之抗體可向先前已接受選自由以下組成之群的抗體的個體投與：抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP或抗p40抗體治療劑以用於治療疾病，且其中先前抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP或抗p40抗體治療劑對該個體具有療效有限或無療效(例如該個體之疾病對先前用抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP或抗p40治療劑治療具有抗性)。

根據本發明之方法投與抗體可例如視接受體之生理病狀、投與目的為治療性抑或預防性及熟練從業者已知之其他因素而定為連續或間斷的。抗體之投與可為在預選時間段內基本上連續的或可呈一系列間隔劑量形式。

藉由混合具有所要純度之抗體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(Remington, The Science and Practice of Pharmacy第21版, Mack Publishing, 2005)來製備根據本發明使用之抗體之治療性調配物，以凍乾調配物或水溶液形式儲存。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用劑量及濃度下對受體無毒性，且可包含：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥四級銨；氯化苯甲烴銨、苄索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)之多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、雙糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN ^TM、PLURONICS ^TM或聚乙二醇(PEG)。

套組本發明之另一態樣提供包含本發明之抗體或包含該抗體之醫藥組合物之套組。除本發明之抗體或其醫藥組合物以外，套組亦可包括診斷劑或治療劑。套組亦可包括診斷性或治療性方法中之使用說明書。在一些實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物及診斷劑。在其他實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物及一或多種治療劑。

本發明之另一態樣為一種套組，其包含選自由以下組成之群的一或多者：如本文上文所揭示之抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP及抗IL-4/IL-13/p40抗體，及根據本文所描述之任何方法的使用說明書。一般而言，此等說明書包含針對上述治療療法投與選自由以下組成之群的一或多者的描述：抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP及抗IL-4/IL-13/p40抗體。

在又一實施例中，本發明包含適用於進行本文所描述之治療方法的套組。在一個實施例中，套組含有以足以進行本發明之方法之量包含本發明之抗體中之一或多者的第一劑型。在另一實施例中，套組包含足以進行本發明之方法之量的一或多種本發明之抗體及至少用於第一劑量之第一容器及用於第二劑量之第二容器。

本發明之醫藥組合物、預防劑或治療劑之若干態樣較佳在用於人類中之前針對所要治療活性在活體外、在細胞培養系統中及在動物模型生物體，諸如嚙齒動物動物模型系統中測試。

本發明之預防及/或治療方案之毒性及功效可藉由細胞培養物或實驗動物中之例如用於測定LD ₅₀(50%群體致死劑量)及ED ₅₀(50%群體治療有效劑量)的標準醫藥程序測定。毒性作用與治療作用之間的劑量比率為治療指數且其可表示為比率LD ₅₀/ED ₅₀。呈現大治療指數之預防劑及/或治療劑較佳。

此外，可使用熟習此項技術者已知之任何分析來評價本文所揭示之療法或組合療法用於治療或預防癌症之預防及/或治療效用。

關於使用選自由如本文所描述之抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP及抗IL-4/IL-13/p40抗體組成之群的一或多者的說明書一般包括關於用於預期治療之劑量、給藥時程及投與途徑之資訊。容器可為單位劑量、散裝(例如，多劑量包裝)或次單位劑量。本發明套組中供應之說明書為通常在標記或藥品說明書(例如，套組中包括之紙片)上之書面說明書，但機器可讀說明書(例如，磁化或光學儲存盤上載有的說明書)亦為可接受的。

本發明之套組呈適合之封裝形式。對於包括試劑，例如緩衝劑、平衡鹽溶液等的各醫藥組合物及其他，適合包裝包括但不限於小瓶、安瓿、管、瓶、罐、可撓性包裝(例如密封聚酯薄膜或塑膠袋)及其類似物，用於向個體投與醫藥組合物。亦涵蓋用於與特定裝置，諸如吸入器、經鼻裝置(例如霧化器)或輸注裝置(諸如小型泵)組合之包裝。套組可具有無菌進入孔(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。容器亦可具有無菌進入孔(例如，容器可為靜脈內溶液袋或具有可藉由皮下注射針刺穿之塞子的小瓶)。組合物中至少一種活性劑選自由以下組成之群：抗IL-4、抗IL-13、抗IL-33、抗TSLP、抗IL-4/IL-13、抗IL-4/IL-13/IL-33、抗IL-4/IL-13/TSLP及抗IL-4/IL-13/p40抗體。容器可進一步包含第二醫藥活性劑。

通常，套組包含容器及在容器上或與容器相聯之標籤或包裝插頁。

出於所有目的，美國臨時專利申請案第62/949,120號(2019年12月17日申請)及第63/110,693號(2020年11月6日申請)之內容以引用的方式併入本文中。

如本文所用，「哺乳動物細胞」包括提及源於哺乳動物，包括人類、大鼠、小鼠、倉鼠、天竺鼠、黑猩猩或獼猴之細胞。細胞可在活體內或活體外培養。

如本文所用，術語「純化產物」係指自與產物通常相關之細胞成分或自可存在於所關注的樣品中之其他類型細胞中分離之產物的製劑。

如本文所使用，「實質上純的」係指至少50%純(亦即，無污染物)、更佳至少90%純、更佳至少95%純、又更佳至少98%純、且最佳至少99%純之物質。

除非另外指出，否則本發明之術語「非人類動物」包括所有非人類脊椎動物，例如非人類哺乳動物及非哺乳動物，諸如非人類靈長類動物、綿羊、犬、牛、雞、兩棲動物、爬行動物、小鼠、大鼠、兔或山羊等。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受」係指由聯邦政府或州政府之管理機構批准(或可批准)或列舉於美國藥典(U.S. Pharmacopeia)或其他公認藥典中用於動物，包括人類之產物或化合物。

如本文所用，術語「醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或佐劑」或「可接受之醫藥載劑」係指可與至少一種本發明之抗體一起向個體投與，且不會破壞抗體之活性的賦形劑、載劑或佐劑。當以足以遞送治療效應之劑量與抗體一起投與時，賦形劑、載劑或佐劑應為無毒性的。

如本文所用，術語「改善」意謂與未投與本發明之抗體分子相比一或多種症狀之減輕或改良。「改善」亦包括縮短或減少症狀之持續時間。

如本文所用，術語「預防(prevent)」、「預防(preventing)」及「預防(prevention)」係指由於投與預防劑或治療劑預防個體之病症之一或多種症狀的復發或發作。

效能為依據產生給定強度效應所需之量所表示之治療劑活性的量度。相較於在低濃度下引起較小反應之較低效能之試劑，高效試劑在低濃度下引起更大反應。效能為親和力及功效之函數。功效係指治療劑在與目標配位體結合時產生生物反應之能力及此反應之定量量值。

生物寄存本發明之代表性材料於2021年12月17日寄存於美國菌種保藏中心(American Type Culture Collection), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA。

具有ATCC寄存編號PTA-127192之載體「DFab IL13-LC-IL4-HC」包含編碼「DFab IL13-LC-IL4-HC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 188。具有ATCC寄存編號PTA-127193之載體「IL13-mFd」包含編碼「IL13-mFd」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 187。具有ATCC寄存編號PTA-127194之載體「IL4-Dfab LC」包含編碼「IL4-Dfab LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 189。具有ATCC寄存編號PTA-127195之載體「IL13-0001 VL」包含編碼「IL13-0001 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 199。具有ATCC寄存編號PTA-127196之載體「IL13-0001 VH」包含編碼「IL13-0001 VH」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 198。具有ATCC寄存編號PTA-127197之載體「IL4-1040 VL」包含編碼「IL4-1040 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 201。具有ATCC寄存編號PTA-127198之載體「IL4-1040 VH」包含編碼「IL4-1040 VH」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 200。具有ATCC寄存編號PTA-127199之載體「TSLP-0875 VL」包含編碼「TSLP-0875 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 205。具有ATCC寄存編號PTA-127200之載體「TSLP-0875 VH」包含編碼「TSLP-0875 VH」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 204。具有ATCC寄存編號PTA-127201之載體「SFab TSLP-LC」包含編碼「SFab TSLP-LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 193。具有ATCC寄存編號PTA-127202之載體「SFab TSLP-HC」包含編碼「SFab TSLP-HC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 192。具有ATCC寄存編號PTA-127203之載體「SFab p40-LC」包含編碼「SFab p40-LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 195。具有ATCC寄存編號PTA-127204之載體「SFab p40-HC」包含編碼「SFab p40-HC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 194。具有ATCC寄存編號PTA-127205之載體「p40-0003 VL」包含編碼「p40-0003 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 207。具有ATCC寄存編號PTA-127206之載體「p40-0003 VH」包含編碼「p40-0003 VH」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 206。具有ATCC寄存編號PTA-127207之載體「SFab IL33-LC」包含編碼「SFab IL33-LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 191。具有ATCC寄存編號PTA-127208之載體「SFab IL33-HC」包含編碼「SFab IL33-HC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 190。具有ATCC寄存編號PTA-127209之載體「IL33-0726 VL」包含編碼「IL33-0726 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 203。具有ATCC寄存編號PTA-127210之載體「IL33-0726 VH」包含編碼「IL33-0726 VH」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 202。

具有ATCC寄存編號PTA-_____之載體「TSLP-0855 VL」包含編碼「TSLP-0855 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 217。具有ATCC寄存編號PTA-_____之載體「TSLP-0855 LC」包含編碼「TSLP-0855 LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 219。具有ATCC寄存編號PTA-_____之載體「TSLP-0871 VL」包含編碼「TSLP-0871 VL」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 218。具有ATCC寄存編號PTA-_____之載體「TSLP-0871 LC」包含編碼「TSLP-0871 LC」之DNA插入物且包含SEQ ID NO: 220。

抗體	描述	ATCC 寄存編號	SEQ ID NO:
IL413TSLP-1024 IL413P40-0705 IL13433-1258	DFab IL13-LC-IL4-HC	PTA-127192	188
IL13-mFd	PTA-127193	187
IL4-Dfab LC	PTA-127194	189
IL13-0001 VL	PTA-127195	199
IL13-0001 VH	PTA-127196	198
IL4-1040 VL	PTA- 127197	201
IL4-1040 VH	PTA-127198	200
IL413TSLP-1024	TSLP-0875 VL	PTA-127199	205
IL413TSLP-1024	TSLP-0875 VH	PTA-127200	204
IL413TSLP-1024	SFab TSLP-LC	PTA-127201	193
IL413TSLP-1024	SFab TSLP-HC	PTA-127202	192
IL413P40-0705	SFab p40-LC	PTA-127203	195
IL413P40-0705	SFab p40-HC	PTA-127204	194
IL413P40-0705	p40-0003 VL	PTA-127205	207
IL413P40-0705	p40-0003 VH	PTA-127206	206
IL13433-1258	SFab IL33-LC	PTA-127207	191
IL13433-1258	SFab IL33-HC	PTA-127208	190
IL13433-1258	IL33-0726 VL	PTA-127209	203
IL13433-1258	IL33-0726 VH	PTA-127210	202
IL413TSLP-1028	TSLP-0855 VL	PTA-	217
IL413TSLP-1028	TSLP-0855 LC	PTA-	219
IL413TSLP-1037	TSPL-0871 VL	PTA-	218
IL413TSLP-1037	TSPL-0871 LC	PTA-	220

按照國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure) (布達佩斯條約(Budapest Treaty))及其下條例之規定進行存放。此確保自寄存日起維持寄存物之活培養物30年。寄存將由ATCC依據布達佩斯條約之條款提供，且受制於輝瑞公司與ATCC之間的協定，該協定確保在相關美國專利發佈後或在任何美國或外國專利申請案對公眾公佈後，以上不分先後，公眾可永久且無限制地利用寄存培養物之後代，且確保可利用由經授權之美國專利及商標局委員根據35 U.S.C.第122節及依據其之委員規則(包括特定參考886 OG 638之37 C.F.R.第1.14節)所確定之寄存培養物之後代。

本申請案之受讓人已同意，若在適合條件下培養時，寄存之材料的培養物死亡或丟失或毀壞；則將通知以即時用另一相同者替代該等材料。所寄存物質之可供使用性不應解釋為許可在違反由任何政府部門根據其專利法授予之權利的情況下實踐本發明。

材料及方法已描述用於產生抗體之各種技術，其包括用於製造單株抗體之傳統融合瘤方法、用於製造抗體(包括嵌合抗體，例如人類化抗體)之重組技術、在轉殖基因動物中產生抗體及用於製備「完全人類」抗體之最近描述之噬菌體呈現技術。

本文提供製造本文所提供之抗體中之任一者的方法。本發明之抗體可藉由此項技術中已知之程序製造。多肽可藉由抗體之蛋白分解或其他降解、藉由如上文所描述之重組方法(亦即，單一或融合多肽)或藉由化學合成來產生。抗體之多肽(尤其至多約50個胺基酸之較短多肽)宜藉由化學合成來製造。化學合成之方法為此項技術中已知的且為市售的。舉例而言，抗體可藉由採用固相方法之自動化多肽合成器產生。亦參見美國專利第5,807,715號；第4,816,567號；及第6,331,415號。

用於製備多特異性抗體之任何適合方法可用於製備本文所提供之多特異性抗體(例如視抗體特徵及組分之選擇而定)。

根據一種製造多特異性抗體之方法，使具有所要結合特異性之抗體可變域與免疫球蛋白恆定區序列融合。較佳與包含至少部分之鉸鏈、CH2及CH3區之免疫球蛋白重鏈恆定區進行融合。在一些實施例中，含有輕鏈結合位之第一重鏈恆定區(CH1)可存在於融合物中之至少一者中。在一些實施例中，可將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及(若需要)免疫球蛋白輕鏈之聚核苷酸插入至個別表現載體中，且可共轉染入合適宿主生物體中。在其他實施例中，當相等比率之至少兩條多肽鏈之表現產生高產率時或當比率不具有特定顯著性時，可將兩條或全部三條多肽鏈之編碼序列插入一個表現載體中。

在一個方法中，多特異性抗體係由一個臂中之具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈及另一臂中之雜交免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。此不對稱結構(其中免疫球蛋白輕鏈僅處於多特異性分子之一半)有助於將所要多特異性化合物自不合需要之免疫球蛋白鏈組合分離。此方法描述於PCT公開案第WO 94/04690號中。

在另一方法中，多特異性抗體由一個臂中之第一鉸鏈區中之胺基酸修飾構成，且第一鉸鏈區中之經取代胺基酸與另一臂中之第二鉸鏈區中之對應胺基酸具有相反電荷。該方法描述於國際專利申請案第PCT/US2011/036419號(WO2011/143545)中。

在另一方法中，藉由改變或工程改造第一與第二Fc鏈之間的界面來增強所要異多聚或異二聚蛋白質(例如雙特異性抗體)的形成。在此方法中，多特異性抗體可由CH3區構成，其中CH3區包含第一CH3多肽及第二CH3多肽，其在一起相互作用以形成CH3界面，其中CH3界面內之一或多個胺基酸使均二聚體形成不穩定且在靜電上不利於均二聚體形成。該方法描述於國際專利申請案第PCT/US2011/036419號(WO2011/143545)中。在一些實施例中，雙特異性抗體之一個Fc鏈可在人類IgG2之鉸鏈區中之位置223及228 (例如(C223E或C223R)及(P228E或P228R))及CH3區中之位置409 (例如K409R (EU編號方案))包含胺基酸修飾，且雙特異性抗體之另一Fc鏈可在人類IgG2之鉸鏈區中之位置223、225及228 (例如(C223E或C223R)、(E225R)及(P228E或P228R))及CH3區中之位置368 (例如L368E (EU編號方案))包含胺基酸修飾。在其他實施例中，雙特異性抗體之一個Fc鏈可在人類IgG2之鉸鏈區中之位置223及228 (例如(C223E或C223R)及(P228E或P228R))及CH3區中之位置368 (例如L368E (EU編號方案))包含胺基酸修飾，且雙特異性抗體之另一Fc鏈可在人類IgG2之鉸鏈區中之位置223、225及228 (例如(C223E或C223R)、(E225R)及(P228E或P228R))及CH3區中之位置409 (例如K409R (EU編號方案))包含胺基酸修飾。在一些實施例中，雙特異性抗體可在人類IgG1之鉸鏈區中之位置221及228 (例如(D221R或D221E)及(P228R或P228E))及CH3區中之位置409或368 (例如K409R或L368E (EU編號方案))包含胺基酸修飾。在一些實施例中，雙特異性抗體可在人類IgG4之鉸鏈區中之位置228 (例如(P228E或P228R))及CH3區中之位置409或368 (例如R409或L368E (EU編號方案))包含胺基酸修飾。

在一些實施例中，多特異性抗體在Fc鏈中可具有杵臼(knob-in-hole)突變。舉例而言，在一些實施例中，在具有杵臼突變之雙特異性抗體中，抗體Fc域之第一Fc鏈具有一或多個突變以形成「杵」，且抗體Fc域之第二Fc鏈具有一或多個突變以形成「臼」(或反之亦然)。抗體之例示性杵臼工程改造描述於美國專利第5,731,168號、PCT公開案第WO2009089004號、美國公開案第20090182127號、Marvin及Zhu, Acta Pharmacologica Sincia (2005) 26(6):649-658及Kontermann (2005) Acta Pharacol. Sin., 26:1-9中。

「杵」係指自第一多肽(例如，第一Fc鏈)之界面突出的至少一個胺基酸側鏈，且因此可定位於鄰近第二多肽(例如，第二Fc鏈)中之補償性臼中，以便使雜二聚體穩定化，且由此促進雜二聚體形成而非均二聚體形成。杵可存在於原始界面中或可以合成方式(例如藉由改變編碼界面之核酸)引入。通常，編碼第一多肽之界面的核酸經改變以編碼杵。為達成此目的，編碼第一多肽中之至少一個原始胺基酸殘基之核酸經編碼至少一個側鏈體積大於原始胺基酸殘基的「導入」胺基酸殘基之核酸置換。用於形成杵之某些輸入殘基通常為天然存在之胺基酸殘基，且較佳選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。

「臼」係指至少一個自第二多肽(例如第二Fc鏈)之界面凹入且因此容納鄰近第一多肽(例如第一Fc鏈)中之對應杵的胺基酸側鏈。臼可存在於原始界面中或可以合成方式(例如藉由改變編碼界面之核酸)引入。通常，編碼第二多肽之界面的核酸經改變以編碼臼。為實現此，編碼第二多肽之至少一個原始胺基酸殘基的核酸經編碼至少一個側鏈體積小於原始胺基酸殘基之「輸入」胺基酸殘基之DNA置換。用於形成臼之某些導入殘基通常為天然存在之胺基酸殘基且較佳選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)。

例示性杵臼(KiH) CH3域對包括：SEQ ID NO: 105及SEQ ID NO: 111；SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 111；SEQ ID NO: 106及SEQ ID NO: 112；SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117；以及SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141。

如本文所用，術語「界面」通常係指存在於可涉及第一多肽及第二多肽接點之域中的任何胺基酸殘基。「原始胺基酸」殘基為可經側鏈體積小於或大於原始殘基之「輸入胺基酸」殘基置換之一種殘基。導入胺基酸殘基可為天然存在或非天然存在之胺基酸殘基，但較佳為前者。「天然存在」之胺基酸殘基為由遺傳密碼編碼之彼等殘基。「非天然存在之」胺基酸殘基意指不由遺傳密碼編碼，但能夠共價結合多肽鏈中之相鄰胺基酸殘基的殘基。非天然存在之胺基酸殘基之實例為正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸及其他胺基酸殘基類似物，諸如Ellman等人，Meth. Enzym. 202:301-336 (1991)中所描述之彼等。

一旦已獲得編碼本發明之分子(亦即結合域)之核酸序列，用於產生分子之載體可藉由重組DNA技術使用此項技術中熟知之技術產生。

編碼本發明之抗體(結合域)之聚核苷酸可包括可操作地連接至抗體編碼序列之表現控制聚核苷酸序列，包括此項技術中已知之天然相關或異源啟動子區。表現控制序列可為載體中能夠轉化或轉染真核宿主細胞之真核啟動子系統，但亦可使用用於原核宿主之控制序列。一旦載體已併入適當的宿主細胞株中，宿主細胞便在適合於表現核苷酸序列之條件下繁殖，且視需要用於收集及純化抗體。真核細胞株包括CHO細胞株、各種COS細胞株、希拉細胞、骨髓瘤細胞株、經轉化之B細胞或人類胚胎腎細胞株。

在一個實施例中，編碼本發明抗體之DNA係使用習知程序(例如藉由使用能夠特異性結合至編碼抗體重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)分離及定序。DNA一經分離，則可置放於表現載體中，該等載體接著轉染至原本不產生免疫球蛋白蛋白質之宿主細胞，諸如猴COS細胞、CHO細胞或骨髓瘤細胞中，以在重組宿主細胞中達成單株抗體之合成。DNA亦可經修飾以例如改良對應抗體之一或多種特性(例如結合親和力、免疫原性等)。

在一個態樣中，本發明提供一種製造本文所描述之聚核苷酸中之任一者的方法。舉例而言，本發明之聚核苷酸可使用化學合成、重組方法或PCR獲得。化學聚核苷酸合成方法為此項技術中所熟知且無需詳細描述於本文中。熟習此項技術者可使用本文所提供之序列及商用DNA合成器以產生所要DNA序列。

使用重組方法製備聚核苷酸，包含所需序列之聚核苷酸可插入適合載體中，且載體又可引入適合宿主細胞中進行複製及擴增，如本文中進一步論述。聚核苷酸可藉由此項技術中已知任何方法插入宿主細胞中。藉由利用直接吸收、內吞作用、轉染、F-配對或電穿孔將外源性聚核苷酸引入來使細胞轉型。一旦引入，外源性聚核苷酸可作為非整合型載體(諸如質體)保持在細胞內或整合至宿主細胞基因體中。如此擴增之聚核苷酸可藉由此項技術內熟知之方法自宿主細胞分離(例如Sambrook等人，1989)。

或者，PCR允許DNA序列複製。PCR技術為此項技術中熟知的且描述於美國專利第4,683,195、4,800,159、4,754,065及4,683,202號以及PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis等人編, Birkauswer Press, Boston, 1994中。

RNA可藉由使用適當載體中之經分離DNA且將其插入適合宿主細胞內獲得。當細胞複製且DNA轉錄至RNA時，可隨後使用熟習此項技術者熟知方法分離RNA，例如，如Sambrook等人,1989前述所闡述。

適合選殖載體可根據標準技術構築，或可選自大量在此項技術中可用之選殖載體。雖然所選選殖載體可根據意欲使用之宿主細胞變化，但適用選殖載體將一般能夠自我複製，可具有特定限制核酸內切酶之單一目標，或可載有可用於選擇含有載體之純系的標記物之基因。適合實例包括質體及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript (例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA及穿梭載體(諸如pSA3及pAT28)。此等及許多其他選殖載體可購自商業供應商，諸如BioRad、Strategene及Invitrogen。

表現載體通常為含有根據本發明之聚核苷酸之可複製聚核苷酸構築體。此意味著表現載體作為游離基因體或作為染色體DNA之整體部分在宿主細胞中必須為可複製的。適合表現載體包括(但不限於)質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒)、黏質體及PCT公開案第WO87/04462號中所揭示之表現載體。載體組分可一般包括但不限於以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記物基因；適合轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於表現(亦即轉譯)，亦通常需要一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位、轉譯啟動位及終止密碼子。

能夠過度表現異源DNA之任何宿主細胞均可用於表現編碼相關抗體、多肽或蛋白質之基因的目的。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括(但不限於) COS、HeLa及CHO細胞。亦參見PCT公開案第WO87/04462號。適合的非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如大腸桿菌或枯草芽胞桿菌)及酵母(諸如啤酒酵母、裂殖酵母或乳酸克魯維酵母)。過度表現相關抗體或蛋白質之細胞可藉由已知篩選方法鑑別。

除了宿主細胞之選擇之外，在重組產生抗體期間影響醣基化之因素包括生長模式、培養基配方、培養物密度、加氧作用、pH值、純化流程及其類似因素。已提出各種方法來改變特定宿主生物體中實現之醣基化模式，包括引入或過度表現某些涉及寡醣產生之酶(美國專利第5,047,335號；第5,510,261號及第5,278,299號)。醣基化或某些類型醣基化可以酶促方式自醣蛋白移除，例如使用內切糖苷酶H(Endo H)、N-糖苷酶F、內切糖苷酶F1、內切糖苷酶F2、內切糖苷酶F3。另外，在處理某些類型之多醣中重組型宿主細胞可經基因工程改造為有缺陷的。此等及類似技術為此項技術中所熟知。

其他修飾方法包括使用此項技術中已知之偶合技術，包括(但不限於)酶促方式、氧化取代及螯合。修飾可用於例如附接免疫分析之標記。經修飾之多肽使用此項技術中已建立之程序製造且可使用此項技術中已知之標準分析來篩檢，其中一些描述於下文及實例中。

在本發明之一些實施例中，抗體包含經修飾之恆定區，諸如對人類Fc γ受體具有增加親和力的恆定區；其為免疫學上惰性的或部分惰性的，例如不觸發補體介導之溶解，不刺激抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)或不活化巨噬細胞；或在以下中之任何一或多個方面具有降低之活性(相比於未經修飾之抗體)：觸發補體介導之溶解、刺激抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)或活化微神經膠質細胞。恆定區之不同修飾可用以達成效應功能之最佳水平或組合。參見例如Morgan等人，Immunology 86:319-324, 1995；Lund等人，J. Immunology 157:4963-9 157:4963-4969, 1996；Idusogie等人，J. Immunology 164:4178-4184, 2000；Tao等人，J. Immunology 143: 2595-2601, 1989；及Jefferis等人，Immunological Reviews 163:59-76, 1998。在一些實施例中，恆定區如Eur. J. Immunol., 29:2613-2624, 1999；PCT申請案第PCT/GB99/01441號；及/或英國申請案第9809951.8號中所描述來修飾。在其他實施例中，使恆定區去醣基化，以供N-連接之醣基化。在一些實施例中，藉由使醣基化胺基酸殘基或作為恆定區中之N-醣基化識別序列之一部分的側接殘基突變，使恆定區對於N連接之醣基化去醣基化。舉例而言，N-醣基化位N297可突變成A、Q、K或H。參見Tao等人, J. Immunology 143: 2595-2601, 1989；及Jefferis等人, Immunological Reviews 163:59-76, 1998。在一些實施例中，使恆定區對於N連接之醣基化去醣基化。可以酶促方式(諸如藉由肽N-糖苷酶移除碳水化合物)或藉由有醣基化缺陷之宿主細胞之表現將恆定區去醣基化以供N-連接之醣基化。

其他抗體修飾包括如PCT公開案第WO99/58572號中所描述已經修飾之抗體。除了針對目標分子之結合域之外，此等抗體亦包含胺基酸序列與人類免疫球蛋白重鏈之恆定區的全部或一部分實質上同源的效應子域。此等抗體能夠結合目標分子而不觸發目標之顯著補體依賴性溶解或細胞介導之破壞。在一些實施例中，效應子域能夠特異性結合FcRn或FcγRIIb之任一者或兩者。此等典型地基於源於兩種或多種兩種人類免疫球蛋白重鏈CH2域的嵌合域。以此方式修飾之抗體尤其適用於慢性抗體療法，以避免習知抗體療法之發炎性及其他不良反應。

在一些實施例中，本文所提供之抗體之Fc鏈可經修飾以消除效應功能。舉例而言，由於結合至FcγRIII，人類IgG1之Fc鏈可使用標準引子-定向之PCR突變誘發經修飾以引入突變L234A、L235A及G237A，從而以由於與FcγRIII結合而使效應功能減弱，從而提供效應功能零表現型(Canfield等人, J. Exp. Med (1991) 173: 1483-1491；Shields等人, J. Biol. Chem. (2001) 276:6591-604)。

在一些實施例中，本文所提供之多特異性抗體可經工程改造以包含至少一個半胱胺酸殘基，其可與本發明之另一多肽鏈上之對應物半胱胺酸殘基相互作用以形成鏈間二硫鍵。鏈間二硫鍵可用以穩定多特異性抗體，改良重組系統中之表現及恢復，產生穩定且一致之調配物，以及改良活體內經分離及/或純化之產物的穩定性。一或多個半胱胺酸殘基可以單一胺基酸形式或以多肽鏈之任何部分中較大胺基酸序列，例如鉸鏈區之一部分形式引入。在一特定態樣中，至少一個半胱胺酸殘基經工程改造以存在於多肽鏈之C端處。

前述描述及以下實例詳述本發明之某些具體實施例，且描述本發明人預期之最佳模式。然而，將瞭解，無論以文字呈現之前述內容如何詳細，本發明可以許多方式實踐，且本發明應根據所附申請專利範圍及其任何等效物解釋。

雖然已參考不同申請案、方法、套組及組合物描述所揭示之教示內容，但將瞭解在不背離本文中之教示內容及下文所主張之本發明的情況下可進行不同變化及修改。提供以下實例以更好地說明本發明之教示內容，且並不意欲限制本文中所呈現之教示內容的範疇。儘管已在此等例示性實施例方面描述本發明教示內容，但熟習此項技術者將容易理解在無不當實驗情況下此等例示性實施例之大量變化及修改為可能的。所有此類變化及修改皆在本教示內容之範疇內。

實例用於實行本發明之特定態樣之以下實例僅出於說明之目的提供，且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。

實例 1 用於一致的抗體編號開發的 Pfabat 編號方法Pfabat編號方法係基於Kabat編號系統(Sequences of Proteins of Immunological Interest，第五版，Kabat等人, NIH公開案編號: 91-3242, 1991)之用於一致的抗體編號之定義演算法。與其他許多Kabat編號的計算方法不同，Pfabat對整個人類IgG1重鏈及輕鏈進行編號，包括恆定(C)區及重鏈鉸鏈。圖1顯示例示性編號，其中互補決定區(CDR)的殘基用帶下劃線的粗體表示。對於輕鏈，CDR定義為：來自殘基L24至L34之CDRL1；來自殘基L50-L56之CDRL2；來自殘基L89-L97之CDRL3；來自殘基H26-H35之CDRH1 (包括插入位置，諸如H35B)；來自殘基H50-H65之CDRH2；及來自殘基H95-H102之CDRH3。應注意，本文所用之CDRH1之定義包括位置H26-H29，其不包括在Kabat編號之一些其他解釋中。

Pfabat演算法不經設計以對將抗IL-13輕鏈之羧基端(Cys L214)接合至抗IL-4重鏈之胺基端(Glu H1)之甘胺酸-絲胺酸連接子(GGGGS: SEQ ID NO: 104)進行編號，儘管該連接子之第一Gly編號為輕鏈恆定區(Gly L215)的一部分。

實例2 IL-4、IL-13、TSLP、IL-33、IL-12及IL-23重組蛋白之生成編碼全長人類IL-13 (AAK53823)及食蟹獼猴IL-13 (ABG75889)之互補DNA (cDNA)片段融合至原核表現載體內N端之FLAG親和力純化標籤，表現於BL21DE3大腸桿菌宿主細胞中且蛋白質自細菌包涵體中純化。小鼠IL-13及大鼠IL-13購自R&D Systems (Minneapolis, MN)，目錄號分別為413-ML及1945-RL。

人類IL-4細胞介素(P05112)在Syngene產生。食蟹獼猴IL-4細胞介素(P79339)購自Kingfisher Biotech(目錄號RP1184Y-025)。小鼠、大鼠及兔子IL-4購自R&D Systems (Minneapolis, MN)，目錄號分別為404-ML、504-RL及6939-RB。

將編碼全長(長形式或lf)人類胸腺基質淋巴生成素(lfhTSLP，NP_149024)、食蟹獼猴TSLP (cynoTSLP，XP_005557555)、小鼠TSLP (mTSLP，NP_067342)、大鼠TSLP (ratTSLP，XP_008770274)、兔TSLP (RabTSLP，G1TYN9)之互補DNA (cDNA)片段選殖至哺乳動物表現載體中。TSLP之N端與具有插入TEV (菸草蝕刻病毒)蛋白酶識別位的人類IgG1之CH2及CH3域融合。在CH3域中引入突變以破壞分子二聚化(1)。TSLP之C端融合至Avi標籤(部位特異性生物素化)、V5標籤及聚His標籤(CH23LS-TSLP-avi-v5-his10)。cDNA根據製造商的方案轉染至Expi293F™細胞中(Thermo Fisher, Grand Island, NY, USA)。為產生生物素化抗原，將編碼TSLP及大腸桿菌生物素接合酶BirA (2)之cDNA共轉染至Expi293F™細胞中。使用MabSelect™ SuRe™ LX樹脂(GE Life Sciences)及/或Ni Superflow樹脂(Qiagen)分離及純化抗原，隨後使用製備型Superdex 200預裝填尺寸排阻層析管柱(GE Life Sciences)。在裂解全長人類及食蟹獼猴TSLP生成(lfTSLP-avi-v5-his10)之情況下，經純化之蛋白質藉由AcTEV蛋白酶(Invitrogen™)在30℃下裂解72小時。使裂解反應通過MabSelect™ SuRe™ LX (GE Life Sciences)管柱以移除CH23片段，且收集並濃縮流過物。使用製備型Superdex 200管柱(GE Life Sciences)進一步純化具有裂解之TSLP的流過物。

使用源於下列寄存編號之胺基酸序列生成重組人類及食蟹獼猴IL-12 (p35+p40)及IL-23 (p19+p40)，且將相應核酸序列暫時表現至Expi293F™細胞中(表1)。簡言之，將編碼細胞介素之cDNA片段選殖至哺乳動物表現載體中且暫時轉染至Expi293F™細胞(Thermo Fisher)中。將經分泌之抗原分離且使用基於親和力之管柱，隨後尺寸排阻層析管柱純化，類似於上文所描述之方法。使用分析型尺寸排阻層析及SDS-PAGE分析確認抗原純化後之純度。小鼠IL-12及大鼠IL-12購自R&D Systems (Minneapolis, MN)，目錄號分別為419-ML及1760-RL。小鼠IL-23及大鼠IL-23購自R&D Systems (Minneapolis, MN)，目錄號分別為1887-ML及3136-RL。表 1. 人類及食蟹獼猴 p35 及 p40 細胞介素之寄存編號。

名稱	寄存編號
人類IL12A p35	NP_000873
人類IL12B p40	NP_002178
人類IL23A p19	NP_057668
食蟹獼猴IL12A p35	XP_005546300
食蟹獼猴IL12B p40	NP_001274204
食蟹獼猴IL23A p19	NP_001274588

在大腸桿菌中製備的重組人類IL-33胺基酸序列Ser112-Thr270 (寄存編號095760)購自R&D Systems (Minneapolis, MN，目錄號3625-IL，SEQ ID. NO.539)。為消除IL-33之基於氧化之失活(Cohen等人,2015)，產生了IL-33 (mm2)，其為人類IL-33之變異體，其中所有四個半胱胺酸殘基變成絲胺酸殘基。用異丙基β-D-1-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導表現IL-33 (mm2)之大腸桿菌( E.coli)細胞，收集且藉由高剪切均質化(Microfluidizer MV1, Microfluidics, Westwood MA)進行裂解。將胞溶質部分離心，分批結合至TALON樹脂(Clontech, Mountain View, CA)，在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中在10 mM咪唑中洗滌，且在PBS中在200 mM咪唑中溶離。將彙集之溶離份濃縮且在PBS中在Superdex 75 16/60管柱(GE Healthcare Life Sciences, Pittsburgh, PA)上藉由尺寸排阻層析進一步純化。食蟹獼猴IL-33 WT (Pfizer, WRS-072216)在含有1 mM DTT之PBS中提供。

抗IL-4 FAB結合域之衍生實例3 具有增加之短暫表現滴定之人類化抗IL-4抗體IL4-1285的衍生自Holmes等人美國專利號5,928,904 SmithKline Beecham Corporation 1999年7月27日(SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 14，Holmes等人)獲得之人類化抗IL-4重鏈及輕鏈可變區胺基酸序列(分別為SEQ ID NO: 5及SEQ ID NO: 15)接合至攜帶突變L(247)A、L(248)A及G(250)A (Pfabat編號)之人類IgG1以將效應功能及人類κ恆定區減至最小，分別產生IL4-1284重鏈(SEQ ID NO: 10)及IL4-1284輕鏈(SEQ ID NO: 17)。編碼抗IL-4 IL4-1284抗體之DNA短暫轉染至COS-1細胞中以產生蛋白質且使用總人類IgG ELISA定量含有IL4-1284之所得條件培養基。IL4-1284抗體展現次佳表現量，尤其＜10毫克/公升/48小時(表2)，因此需要進一步改造以改良生物物理學特性。可替代人類化抗IL-4 V _L變異體藉由將IL4-1284 V _LCDR區移植至IGKV1-39*01 (DPK9)人類生殖系構架上來構築。精確而言，將如由Pfabat (SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12及SEQ ID NO: 13)定義之CDR移植至具有JK4區段(SEQ ID NO: 14)之IGKV1-39*01人類生殖系受體構架上，且此胺基酸序列闡述為SEQ ID NO: 21 IL4-1286 V _L(hu3B9 V _Lv2.6 V _L)。基於IL4-1284抗體之另一人類化V _L變異體經工程改造以在親本小鼠CDRL3中存在之L97 (Pfabat編號)處恢復蘇胺酸(T)殘基，該殘基在人類化IL4-1284變異體IL4-1285 V _L(hu3B9 VL v2.0)中突變成精胺酸(R)。IL4-1285 V _L及IL4-1286 V _L隨後在專有表現載體內融合至人類κ恆定區(SEQ ID NO: 16)以產生IL4-1285 LC及IL4-1286 LC。IL4-1285及IL4-1286輕鏈均個別地與IL4-1284重鏈(SEQ ID NO: 10)組合以分別產生IL4-1285抗體及IL4-1286抗體。非洲綠猴腎細胞(COS-1)用編碼IL4-1285及IL4-1286抗體之DNA短暫轉染以產生蛋白質且使用總人類IgG夾心ELISA定量含有抗體之所得條件培養基。IL-4生物活性使用pSTAT6磷酸化分析測定。IL-4與I型結合(IL-4Rα/γ共同)或IL-4或IL-13與II型(IL-4Rα/IL-13Rα1)受體結合觸發轉錄因子STAT6之磷酸化及核易位。對於此分析，表現IL-4Rα/IL-13Rα1之HT-29人類結腸上皮細胞(美國菌種保藏中心，Manassas, VA)作為黏附單層生長，且接著使用胰蛋白酶自燒瓶中移出，洗滌進入新鮮培養基中且添加不同濃度之重組人類IL-4或IL-13。關於測試抗體對細胞介素反應之抑制的分析，將重組人類IL-4 (0.1 - 0.5 ng/ml；R&D Systems)與範圍為500至0.4 ng/mL的抗體稀釋液一起添加。細胞在37℃下培育30分鐘且接著用含有1%牛血清白蛋白(BSA)之冰冷的磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌。藉由在37℃下與含1%多聚甲醛之PBS一起培育15分鐘來固定細胞，且隨後用含有1% BSA之PBS洗滌。為滲透細胞核，細胞在-20℃下於絕對甲醇中培育隔夜，用含有1% BSA之PBS洗滌且接著用AlexaFluor 488標記之抗體染色至STAT6 (pY641; BD Biosciences, San Diego, CA)。藉由流式細胞測量術(BD Biosciences)分析螢光且使用FlowJo軟體版本7.2.4 (Tree Star Inc, Ashland, OR)分析。EC50及IC ₅₀值係使用GraphPad PRISM版本5.02 (GraphPad Software Inc, La Jolla, CA)由細胞介素及抗體劑量滴定資料來計算。

IL4-1285 (hu3B9 VL v2.0)抗體相對於IL4-1284 (hu3B9)抗體的表現量改良了6倍，以及HT-29細胞中IL-4誘導之STAT6磷酸化生物活性亦有1.7倍的較小改良(表2及IL13433-1258生物學實例1.1中所描述之方法)。此外，在IGKV1-39*01人類生殖系CDR移植的V _L內CDRL3的L97處存在蘇胺酸而非精胺酸殘基，明顯改善了IL-4誘導之磷酸化及pSTAT6轉錄因子的核易位的中和，且略微增加了短暫表現量(IL4-1285與IL4-1286，表2)。表 2. 人類化抗 IL-4 抗體變異體之短暫 COS-1 表現滴定及 IL-4 誘導之 pSTAT6 磷酸化生物活性

抗體變異體	變異體別名	表現滴定 (mg/L/48 小時 )	pSTAT6 IC ₅₀[pM]
IL4-1284	IL13433-1284, hu3B9	4.0	125.0
IL4-1285	IL13433-1285, hu3B9 VL v2.0	24.7	71.5
IL4-1286	IL13433-1286, hu3B9 VL v2.6	15.0	750.0

實例4 工程改造IL4-1285抗體以增加IL-4細胞介素之結合親和力及中和效力人類化IL4-1285抗體經歷工程改造工作以提高IL-4結合親和力，從而增加IL-4細胞介素中和之效力。為了促進噬菌體呈現，IL4-1285抗體之可變域區域在噬菌粒呈現載體pWRIL-1內使用VL-VH定向及(G4S)3可撓性連接子以單鏈可變片段(scFv)形式進行選殖。測定具有IL-4共晶體結構之抗IL-4 IL4-1285 scFv (實例13)且用於指導親和力成熟過程。IL4-1285 V _H域藉由噬菌體呈現使用構建於軟突變誘發及同源物掃描突變誘發上之庫進行最佳化，靶向CDR中之胺基酸，基於其已知的與抗原接觸或影響CDR結構之潛力位置進行選擇。針對子庫中之每一者採用兩輪選擇操作，涉及對100 pM生物素化人類IL-4進行極嚴格的初始第一輪選擇，其中併入有隔夜的『解離速率』攻擊，其中人類IL-4過量1000倍(100 nM)。在第二輪選擇中，使用50 pM生物素化人類IL-4，無任何『解離速率』攻擊。自各輪噬菌體選擇輸出物隨機挑選一組殖株用於抗IL-4選擇。經由誘導scFv表現及在均相時差式螢光(HTRF)競爭分析中使用大腸桿菌周質製備物(periprep)來進行此等所選殖株之分析。經識別獨特殖株與親本IL4-1285 scFv相比展示出增加之競爭性，且繼續進行進一步分析。將此等殖株重新格式化成全長IgG1-效應功能降低的/人類κ抗體，且蛋白質在HEK-293細胞中短暫產生以進一步評估。

基於HTRF競爭分析中改善之IL-4結合活性選擇的變異體，藉由生物分析監測增加的生物活性。因為其具有最大敏感性範圍，所以主要使用初代人類單核球之CD23表現分析用於此分析。特別地，藉由對健康人類供者的新鮮血液進行Histopaque密度離心來製備周邊血液單核細胞(Sigma Aldrich)。將細胞洗滌至含有10%熱滅活胎牛血清(FCS)、50 U/mL青黴素、50 µg/mL鏈黴素、2 mM L-麩醯胺酸之RPMI培養基中及接種於48孔組織培養盤(Costar/Corning)中。重組人類IL-4以100至0.01 ng/mL範圍內之稀釋度添加。關於分析測試細胞介素反應之抗體抑制，添加0.5 ng/mL人類IL-4以及稀釋度在500至0.4 ng/mL範圍內之抗體變異體。將細胞在5% CO ₂培育箱中在37℃下培育隔夜。次日，使用非酶促細胞解離溶液(Sigma Aldrich)自孔收集細胞，且隨後洗滌至含有1% BSA的冰冷PBS中。細胞用藻紅素(PE)標記之抗體培育至人類CD23 (BD Biosciences)，且用Cy-Chrome標記之抗體培育至人類CD11b (BD Biosciences)。單核球基於高前向及側向光散射及CD11b之表現進行閘控。單核球上之CD23表現使用流式細胞儀(BD Biosciences)測定，且使用CellQuest軟體(BD Biosciences)分析CD23陽性細胞百分比。因為用人類周邊血液進行CD23表現分析，所以單核球CD23表現分析顯示基於供體之反應的細微變化。因此，親和力最佳化之變異體的反應分別與IL4-1285親本對照相比較，在各個別分析中進行。資料表示為最大反應%，其通常在65-85% CD23+單核球範圍內。亦量測HT-29細胞中IL-4誘導之STAT6磷酸化生物活性中和，以選擇變異體作為親本抗IL-4變異體的比較物。

識別出若干抗IL-4變異體，該等變異體在CD23表現生物分析中對IL-4中和之效力有10至48倍之改善範圍的顯著增加，且在HT-29細胞的中和IL-4誘導pSTAT6磷酸化生物活性方面有適度改良，因為此分析窗為狹窄的(表3)。在CD23表現生物分析中具有IL-4中和之效力之適度或5至10倍增加的IL4-1285的變異體亦使用此噬菌體呈現方法獲得。表 3. 選擇親和力成熟抗 IL-4 抗體變異體 ，在 CD23 表現生物分析中展現出 IL-4 中和之效力的顯著增加及 pSTAT6 生物活性方面的適度改良

抗IL-4 抗體變異體	變異體別名	IL-4 誘導之pSTAT6 磷酸化的中和	IL-4 誘導之CD23 表現的中和
IC ₅₀[pM]	相對於IL4-1284 之生物活性倍數	相對於IL4-1285 之生物活性倍數	IC ₅₀[pM]	相對於IL4-1285 之生物活性倍數
IL4-1284	IL13433-1284, hu3B9	125.0	1	0.6	ND	ND
IL4-1285	IL13433-1285, hu3B9 VL v2.0	71.5	1.8	1	96.2	1
IL4-1286 §	IL13433-1286, hu3B9 VL v2.6	750.0	0.2	0.1	ND	ND
IL4-1287 †	IL13433-1287, hu3B9_A01-CDRH1	82.0	1.5	0.9	5.6	17.2
IL4-1288 †	IL13433-1288, hu3B9_A02-CDRH1	56.0	2.2	1.3	5.0	19.2
IL4-1289 †	IL13433-1289, hu3B9_A08-CDRH1	20.0	6.2	3.6	2.2	43.7
IL4-1290	IL13433-1290, hu3B9_B02-CDRH1	110.0	1.1	0.6	37.3	2.6
IL4-1291 †	IL13433-1291, hu3B9_B03-CDRH1	26.0	4.8	2.8	7.5	12.8
IL4-1292 †	IL13433-1292, hu3B9_B08-CDRH1	27.0	4.6	2.6	2.0	48.1
IL4-1293 †	IL13433-1293, hu3B9_B11-CDRH1	36.0	3.5	2.0	2.8	34.4
IL4-1294 †	IL13433-1294, hu3B9_C08-CDRH1	40.0	3.1	1.8	3.0	32.1
IL4-1295 ◊	IL13433-1295, hu3B9_C09-CDRH1	51.0	2.4	1.4	13.0	7.4
IL4-1296	IL13433-1296, hu3B9_D04-CDRH1	150.0	0.8	0.5	106.0	0.9
IL4-1297 †	IL13433-1297, hu3B9_F02-CDRH1	64.0	2.0	1.1	6.4	15.0
IL4-1298 †	IL13433-1298, hu3B9_G07-CDRH1	120.0	1.0	0.6	4.2	22.9
IL4-1299 §	IL13433-1299, hu3B9_G10-CDRH1	280.0	0.4	0.25	269.0	0.4
IL4-1300	IL13433-1300, hu3B9_H06-CDRH1	ND	ND	ND	23.8	4.0
IL4-1301	IL13433-1301, hu3B9_H07-CDRH1	130.0	1.0	0.55	146.0	0.7
IL4-1302	IL13433-1302, hu3B9_A03-CDRH2	47.0	2.7	1.5	53.5	1.8
IL4-1303	IL13433-1303, hu3B9_A09-CDRH2	42.0	3.0	1.7	32.8	2.9
IL4-1304	IL13433-1304, hu3B9_D01-CDRH2	99.0	1.3	0.7	70.7	1.4

ND=未測定；§=具有生物活性之實質性損失的變異體；†=中和CD23表現之效力的實質性(≥10倍)增加；◊=中和CD23表現之效力的適度(5至10倍)增加。

實例5 鑑別及移除IL4-1285衍生變異體之酪胺酸硫酸化轉譯後修飾且產生抗IL-4抗體IL4-0002 使用製備型陰離子交換層析法(MonoQ, GE Healthcare)純化人類化IL4-1285抗體出乎意料地產生三個不同峰(P1、P2及P3)，其中P1、P2及P3分別表示總溶離池之63%、23%及3%。分析陰離子交換顯示IL4-1285抗體含有酸性帶電荷物質。為了進一步評價此酸性帶電荷物質，藉由製備型強陰離子交換(SAX)成功地分離峰P1及P2用於分析。結果指示峰2 (P2)在生物分析中具有增加之效力，且相對於主SAX峰(P1)對IL-4具有較高親和力。此外，P2展示為部分硫酸化，而P1未被硫酸化且第三峰(P3)完全硫酸化。

液相層析質譜分析(LC/MS)分析用於鑑別造成IL-4之生物活性及結合親和力損失的轉譯後修飾位置。對IL4-1285抗體進行LysC溶解及TCEP (參(2-羧基乙基)膦)還原以產生三種物質：輕鏈抗原結合片段(Fab)、重鏈Fab及片段可結晶(Fc)區。使用Waters Xevo Q-TOF儀器進行之MS分析顯示修飾大小為80道爾頓(Da)且位於輕鏈上(圖2)。使用Thermo Orbitrap XL質譜儀之進一步評估指示其為在經部分硫酸化之V _LCDR1中之位置L27d (Pfabat編號)處的酪胺酸(Tyr)。

努力對IL4-1285 CDRL1 (KASQSVDYDGDSYMN，SEQ ID NO: 11)進行工程改造以移除在抗IL-4抗體中之酪胺酸殘基L27d (Pfabat編號)處發生之硫酸化轉譯後修飾。IL4-1285 scFv與IL-4共晶體複合物之蛋白質結構模型化表明此酪胺酸殘基可有助於細胞介素結合且引起使用天冬醯胺(IL4-1345 V _L或hu3B9-VL v2.7, V _L)、苯丙胺酸(IL4-1346 V _L或hu3B9 _VL v2.8 V _L)或麩胺酸(IL4-1347 V _L或hu3B9_VL v2.9 V _L，SEQ ID NO: 20)來置換IL4-1285 VL v2.0中L27d處的酪胺酸殘基。另外，L28 (Kabat編號)處之天冬胺酸殘基變成麩胺酸(IL4-1348 V _L, hu3B9_VL v2.10 V _L)以評估Tyr (L27d)上之硫酸化程度。此等經修飾之抗IL-4 IL4-1285 V _LcDNA與表現載體內之人類κ恆定區接合以產生輕鏈(LC)來評估轉譯後修飾，且命名為IL4-1345 LC、IL4-1346 LC、IL4-1347 LC (SEQ ID NO: 197)及IL4-1348 LC。編碼此等含有胺基酸取代以假定防止Tyr (L27d)部分硫酸化之修飾輕鏈(IL4-1345 LC、IL4-1346、IL4-1347 LC或IL4-1348 LC)的DNA與IL4-1285 HC (SEQ ID NO: 10)共轉染至HEK-293細胞中，且蛋白質經純化以用於進一步表徵。LC/MS分析顯示Tyr(27d)Phe突變成功地消除硫酸化酪胺酸轉譯後修飾(圖3)。

使用具有本文先前所描述之初代人類單核球之CD23表現分析，評定攜帶經工程改造以移除轉譯後修飾之輕鏈變異體的IL4-1285衍生抗體的生物活性，導致Y(L27d)的部分硫酸化。編碼IL4-1285修飾輕鏈之DNA與IL4-1285重鏈或抗IL-4親和力最佳化之重鏈變異體在HEK-293細胞中經短暫共轉染，且相對於IL4-1285抗體評估所得蛋白質之CD23表現的抑制活性。當與親本IL4-1285重鏈組合時，與親本IL4-1285抗體相比，苯丙胺酸(IL4-1346或hu3B9-VLv2.8)或麩胺酸(IL4-1347或hu3B9-VLv2.9)取代此酪胺酸殘基均能在單核球CD23生物分析中保持活性(表4)。當與親本IL4-1285重鏈組合時，將Y(L27d)取代為天冬醯胺殘基的抗IL-4輕鏈(IL4-1345或hu3B9-VLv2.7)或將天冬胺酸(L28)突變為麩胺酸(IL4-1348或hu3B9-VLv2.10)亦保持活性，但不如IL4-1346及IL4-1347變異體有力(表4)。將源自親和力成熟過程中的排名靠前的抗IL-4抗體重鏈與IL4-1346或IL4-1347組合，使得相對於親本抗IL-4抗體IL4-1285，其效力提高了2至24倍(表4)。表 4. 攜帶經工程改造之輕鏈的抗 IL-4 抗體變異體用於移除部分酪胺酸硫酸化修飾後保持效力

抗 IL-4 抗體變異體	變異體別名	IL-4 誘導之CD23 表現的中和[pM]	相對於IL4-1285 之生物活性倍數
IL4-1285	IL13433-1285, hu3B9 VL v2.0	96.2	1
IL4-1345	IL13433-1345, hu3B9-VLv2.7	559.0	0.2
IL4-1346	IL13433-1346, hu3B9-VLv2.8	73.4	1.3
IL4-1347	IL13433-1347, hu3B9-VLv2.9	65.2	1.5
IL4-1348	IL13433-1348, hu3B9-VLv2.10	229.0	0.4
IL4-1349 ◊	IL13433-1349, hu3B9-A02_VLv2.8	14.8	6.5
IL4-1350 ◊	IL13433-1350, hu3B9-A02_VL v2.9	17.9	5.4
IL4-1351	IL13433-1351, hu3B9-A08_VLv2.8	26.4	3.6
IL4-1352 ◊	IL13433-1352, hu3B9-A08_VLv2.9	19.6	4.9
IL4-1353 ◊	IL13433-1353, hu3B9-B08_VLv2.8	10.5	9.2
IL4-1354 †	IL13433-1354, hu3B9-B08_VLv2.9	6.3	15.3
IL4-1355	IL13433-1355, hu3B9-B11_VLv2.8	23.4	4.1
IL4-1356	IL13433-1356, hu3B9-B11_VLv2.9	44.9	2.1
IL4-1357 ◊	IL13433-1357, hu3B9-C08_VLv2.8	14.5	6.6
IL4-1358 ◊	IL13433-1358, hu3B9-C08_VLv2.9	16.8	5.7
IL4-1322 †	IL13433-1322, hu3B9-G07_VLv2.8	7.2	13.4
IL4-1359 †	IL13433-1359, hu3B9-G07_VLv2.9	4.0	24.0

†=中和CD23表現之效力的實質性(≥10倍)增加；◊=中和CD23表現之效力的適度(5至10倍)增加。

IL4-1359抗IL-4抗體變異體經修飾以藉由用麩胺酸(E)取代Q(H1)產生IL4-1305 (hu3B9_G07-VLv2.9)，而減少重鏈N端麩醯胺酸(Q)殘基向焦麩胺酸鹽之自發環化。抗IL-4抗體IL4-1305藉由將H105處之精胺酸(R)取代Q及H108處之苯丙胺酸(F)取代蘇胺酸(T)而經進一步工程改造成包括生殖系JH6區域(SEQ ID NO: 21)，以產生IL4-0002抗體。

實例6 工程改造抗IL-4 IL4-0002抗體以移除轉譯後異構化修飾且降低黏度將源於IL4-0002抗體變異體之抗原結合片段(Fab)併入tri-Fab-Fc (IL13433-0006)中，以中和IL-4活性。抗IL-4抗體IL4-0002之CDRL1在D28/G29處含有「DG」模體，該模體常常為轉譯後異構化修飾之熱點。對IL13433-0006 tri-Fab-Fc進行強制降解分析以詢問物理或化學傾向之存在。特定言之，IL13433-0006 tri-Fab-Fc以5 mg/mL調配於三種不同緩衝液中：Tris pH 7.5，組胺酸pH 5.8及麩胺酸pH 4.5。接下來，調配之IL13433-0006 tri-Fab-Fc樣品在40℃下培育且在2及4週時移除等分試樣。使用LC/MS肽圖譜分析測定麩胺酸pH 4.5及Tris pH 7.5 IL13433-0006 tri-Fab-Fc強制降解樣品之轉譯後修飾水平。對於此方法，強制降解樣品用LysC及胰蛋白酶進行雙重消化，且使用高保真度方法用Lumos C18管柱進行MS分析。在D(L28)處抗IL-4抗體IL4-0002輕鏈CDR1肽(跨越A25-K42)中偵測轉譯後異構化修飾。4週(T4)麩胺酸pH 4.5樣品具有最高異構化水平，為78.3%，然而，相對於在PBS-CMF中調配之時間零(T0)樣品中偵測到的5.9%異構化，4週(T4) Tris pH 7.5樣品亦展示55.1%之顯著異構化(表5)。表 5. 藉由 LC/MS 肽圖譜偵測之轉譯後異構化改變百分比

樣品	I soD 肽 %	丁二醯亞胺肽 %	總異構化 %	原生肽 %
IL13433-0006 PBS-CMF (T0)	3.8	1.9	5.9	94.3
IL13433-0006 Tris pH 7.5 (T4)	54.3	2.0	55.1	45.1
IL13433-0006 麩胺酸pH 4.5 (T4)	61.8	18.2	78.3	23.0

IL4-1285 Fab/IL-4複合物結構被用來提出胺基酸修飾，其移除IL4-1285衍生之抗體變異體之CDRL1中D(L28)處的轉譯後異構化責任。使用IL4-1285 Fab/IL-4複合物結構結果，蛋白質結構模型化表明此Asp殘基可有助於細胞介素結合且因此建議在此位置取代麩胺酸(Glu, E)。CDRL1中之D(L28)突變成E(D28E)且併入至IL4-0002以及K(L24)R突變中，用於移除電腦模擬預測之T細胞抗原決定基，此等變化之同化產生IL4-0749抗體。IL4-0749抗體變異體保留中和IL-4誘導之CD23在初代人類單核球上之表現的能力，因此證明D(L28)E取代為容許的(表6)。IL4-0749亦攜帶K(L24)R突變，意欲移除CDRL1內之經預測T細胞抗原決定基且藉由僅將此取代引入IL4-0002中來探究K(L24)R變化之存在，由此產生IL4-0754抗體變異體。在CD23生物分析中，IL4-0754抗體完全保留相對於IL4-0002的中和IL-4的能力，證明此CDRL1胺基酸取代不改變IL-4結合特性(表6)，且支持此殘基不接觸細胞介素的觀測結果，如IL4-1285 Fab/IL-4複合物結構結果所示。除K(L24)R、N(H60)S、P(H61)T、S(H65)T突變以外，將D(L28)E併入至IL4-0002中用於減少電腦模擬預測之T細胞抗原決定基，外加併入N(L92)H及E(L93)K以降低黏度，產生IL4-0157抗體變異體(分別為SEQ ID NO: 28及SEQ ID NO: 29，VH及VL)。相對於IL4-0002，IL4-0157抗體內之組合突變導致在CD23生物分析中中和IL-4之能力低約5倍(表6)。研究組合至IL4-0157抗體中之個別突變之檢查，以確定哪個突變或突變組合導致此變異體中和IL-4之能力降低。IL4-0037抗體係藉由在IL4-0002重鏈可變區之CDR2內併入N(H60)S、P(H61)T、S(H65)T胺基酸取代而產生，且此變異體能夠相對於IL4-0002有效地中和IL-4生物活性(表6)。然而，攜帶N(H60)S、P(H61)T、S(H65)T突變之重鏈與含有N(L92)H及E(L93)K取代之任何輕鏈的組合以降低黏度，在CD23生物分析中導致中和IL-4之能力降低(表6)。對含有N(L92)H、E(L93)K或N(L92)H外加E(L93)K之IL4-0002抗體經工程改造之輕鏈的檢查顯示，僅E(L93)K突變不改變此抗體變異體在初代單核球上中和IL-4誘導之CD23表現的能力，但N(L92)H單獨或與E(L93)K組合之取代降低IL-4結合特性(表6)。表 6. 針對經工程改造之變異體在 CD23 表現生物分析中評估 IL-4 中和以移除異構化責任且消除黏度

抗體變異體	相對於 IL4- 0002 之突變	IL-4 誘導之CD23 表現的中和[pM]	相對於IL4-0002 之生物活性倍數
V _H	V _L
IL4-0002	-	-	2.1	1
IL4-0037	N60S, P61T, S65T	-	1.6	1.3
IL4-0092	-	K24R, N92H, E93K	3.3	0.6
IL4-0093	N60S, P61T, S65T	K24R, N92H, E93K	4.1	0.5
IL4-0157	N60S, P61T, S65T	K24R, D28E, N92H, E93K	9.3	0.2
IL4-0749	-	K24R, D28E	2.4	0.9
IL4-0751	-	N92H, E93K	6.6	0.3
IL4-0752	-	N92H	5.1	0.4
IL4-0753	-	E93K	2.5	0.8
IL4-0754	-	K24R	1.9	1.1
IL4-1040	-	K24R, D28E, E93K	3.2	0.7

無突變(-)

實例7 IL4-0002衍生之抗體變異體中之E(L93)K輕鏈CDR3取代降低黏度評估經調配之IL4-0002衍生抗體變異體之黏度。安東帕方法用於評估黏度。特定言之，使用50 kDa分子量截止值之Amicon離心式過濾器單元(EMD Millipore，Billerica，MA)，將蛋白質樣品濃縮至170 mg/mL之目標。對於各蛋白質，使用組胺酸-蔗糖pH 5.8緩衝液作為稀釋劑連續稀釋25至160 mg/mL範圍內之一組樣品。藉由在SoloVPE可變路徑長度系統(SoloVPE Variable Pathlength System) (C Technologies, Inc, Bridgewater, NJ)上進行之280 nm分析來測定蛋白質濃度。在25℃下以150 rpm之恆定轉速使用CP25-1圓錐及培養盤在MCR-302流變計(Anton Paar USA Inc., Ashland, VA)上進行黏度量測。每個樣品收集總計10次量測結果(每次10秒)且使用Rheoplus (Anton Paar USA Inc.) V 3.62軟體分析資料。安東帕黏度分析展示IL4-0751及IL4-0753變異體(其包括E(L93)K取代)的黏度相對於IL4-0002降低。此外，因為僅IL4-0002中之N(L92)H突變不會造成黏度降低，所以E(L93)K突變負責改良黏度概況(表7)。20 cP及更低之黏度典型地用於SC注射。在一些情況下，15 cP與20 cP之間的黏度最有利，因為極低黏度可能在注射部位處造成疼痛。表 7. IL4-0002 衍生之抗體變異體之安東帕黏度分析。

抗體變異體	突變	20cP 時的濃度 (mg/mL)
IL4-0002	-	~72
IL4-1305	Q(H105)R, T(H108)P	~95
IL4-0749	K(L24)R, D(L28)E	~60
IL4-0751	N(L92)H, E(L93)K	~122
IL4-0752	N(L92)H	~82
IL4-0753	E(L93)K	~126

抗IL-13 FAB結合域之衍生實例8 結合且中和人類IL-13活性之小鼠單株抗體IL13-1306之分離藉由用重組人類IL-13 (R&D Systems, Minneapolis, Minn.)對雌性BALB/c小鼠進行免疫接種來製備多株抗血清。藉由ELISA針對與人類IL-13之結合篩選血清。將展現高血清抗體滴定之小鼠的脾細胞與P3X63_AG8.653骨髓瘤(ATCC)融合且接種於選擇性培養基中。藉由限制稀釋法進行三輪次選殖來分離融合物，且篩選出用於產生對人類IL-13具有結合親和力之抗體。三種單株抗體能夠結合IL-13，干擾形成功能性IL-13信號傳導複合物及中和一或多種IL-13相關活性。單株抗體IL13-1306 (mu13.4)基於其強效的細胞介素中和活性及有利抗原決定基，被選擇用於人類化。

實例9 選殖小鼠單株抗體IL13-1306重鏈及輕鏈可變區使用SMART® cDNA合成系統(Clontech Laboratories Inc. of Mountain View, CA)選殖IL13-1306 (mu13.4)抗IL-13抗體重鏈及輕鏈可變區，接著進行PCR擴增。使用寡核苷酸(dT)及SMART® IIA寡核苷酸(Clontech Laboratories Inc.)以及POWERSCRIPT™反轉錄酶(Clontech Laboratories Inc.)由自IL13-1306融合瘤細胞分離之1 µg總量合成cDNA。隨後，藉由PCR使用黏合至SMART® IIA寡核苷酸序列之引子及小鼠恆定區特異性引子(對於輕鏈，為小鼠κ；及對於重鏈，為小鼠IgG1)、用VENT®聚合酶(New England Biolabs Inc. of Ipswich, MA)來擴增cDNA。將重鏈及輕鏈PCR產物次選殖至pED6表現載體中且測定核酸序列。此方法為有利的，因為不需要關於該DNA序列之先前知識。此外，不藉由使用簡併PCR引子來改變所得DNA序列。IL13-1306 (mu13.4)重鏈可變區之胺基酸序列闡述為SEQ ID NO: 44。L13-1306 (mu13.4)輕鏈可變區之胺基酸序列闡述為SEQ ID NO: 46。

實例10 小鼠抗 IL-13 抗體 IL13-1306 之人類化如下文進一步描述，小鼠IL13-1306 (mu13.4)抗IL-13抗體藉由互補決定區(CDR)移植進行人類化。小鼠IL13-1306抗體之CDR使用Pfabat編號定義鑑別(實例1)。構築人類化重鏈可變區(V _H)以包括移植至來自具有JH4區段(SEQ ID NO: 47)之VH3子組的人類IGHV3-7*01 (DP-54)構架區上的小鼠IL13-1306 V _H(SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42及SEQ ID NO: 43)的CDR，且此胺基酸序列闡述為SEQ ID NO: 48，IL13-1307 (hu13.4) V _H。類似地，來自VKI子組之IGKV1D-39*01 (DPK9)人類生殖系受體構架用於工程改造具有JK4區段(SEQ ID NO: 14)之CDR移植型式的人類化輕鏈可變區，且此胺基酸序列闡述於SEQ ID NO: 49 IL13-1307 (hu13.4) V _L中。人類化IL13-1307 (hu13.4) V _H(SEQ ID NO: 48)接合至經修飾以削弱效應功能之人類IgG1恆定區(L247A、L248A及G250A、Pfabat編號；SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 9)，因此產生IL13-1307 (hu13.4) HC且次選殖至表現載體中。人類化IL13-1307 V _L(hu13.4 VL，SEQ ID NO: 49)融合至人類κ恆定區(SEQ ID NO: 16)以產生hu13.4 LC且次選殖至表現載體中。IL-13生物活性使用pSTAT6磷酸化分析測定(參見實例3中之方法)。關於測試抗體對IL-13細胞介素反應之抑制的分析，將重組人類IL-13 (1 ng/ml；R&D Systems)與範圍為500至0.4 ng/mL的抗體稀釋液一起添加。

相對於親本小鼠單株抗體IL13-1306及基準抗體IL13-1283，人類化IL13-1307抗體保留在初代單核球上中和IL-13誘導之CD23表現及pSTAT6磷酸化的能力(表8)。表 8. 人類化 IL13-1307 抗體保留在初代單核球上中和 IL-13 誘導之 CD23 表現及 pSTAT6 磷酸化的能力

抗體	IL-13 誘導之pSTAT6 磷酸化的中和[pM]	IL-13 誘導之CD23 表現的中和[pM]
IL13-1307 (hu13.4)	224.6	213.9
IL13-1283 (IMA-638)	427.1	260.8
IL13-1306 (mu13.4)	290.5	ND

ND=未測定。

實例11 工程改造人類化IL13-1307抗體以增加IL-13細胞介素之結合親和力及中和效能人類化IL13-1307 (hu13.4)抗體經歷工程改造工作以提高IL-13結合親和力，從而增加IL-13細胞介素中和之效力。為了促進噬菌體呈現，IL13-1307抗體(SEQ ID NO: 48及SEQ ID NO: 49)之可變域區域在噬菌粒呈現載體pWRIL-1內使用V _L-V _H定向及(G4S)3可撓性連接子以單鏈可變片段(scFv)形式進行選殖。對於IL13-1307，三個階層方法經設計以涵蓋不同庫設計且使所獲得之命中物的數目最大化。在第一種方法中，進行了隨機『軟』型式突變誘發，其在各靶向位置處保留庫中約50%親本野生型殘基，加上其他50%之隨機胺基酸含量。所採用的第二種方法涉及使用『同源物掃描』變性寡核苷酸，其各野生型殘基交換成結構上同源的胺基酸，每個位置具有兩種可能性。第三突變誘發方法使用藉由在各CDR位置選擇之胺基酸構建的文庫，其基於對抗體序列之統計分析以及對IL13-1307 (hu13.4)抗體與IL-13之共晶體結構中之結合界面的計算及手動檢查(實例14)。針對子庫中之每一者採用兩輪選擇操作，涉及對100 pM生物素化人類IL-13進行極嚴格的初始第一輪選擇，其中併入有隔夜的『解離速率』攻擊，其中人類IL-13過量1000倍(100 nM)。在第二輪中，使用50 pM生物素化人類IL-13，無任何『解離速率』攻擊。

自各輪噬菌體選擇輸出物隨機挑選一組殖株用於抗IL-13選擇。經由誘導scFv表現及在均相時差式螢光(HTRF)競爭分析中使用大腸桿菌周質製備物來進行此等所選殖株之分析。經識別獨特殖株與親本IL13-1307 scFv相比展示出增加之競爭性，且繼續進行進一步分析。將此等殖株重新格式化成全長IgG1-效應功能降低的/人類κ抗體，且蛋白質在HEK-293細胞中短暫產生以進一步評估。

基於HTRF競爭分析中改善之IL-13結合活性選擇的變異體，藉由生物分析監測增加的生物活性。因為其具有最大敏感性範圍，所以主要使用初代人類單核球之CD23表現分析用於此分析。特別地，藉由對健康人類供者的新鮮血液進行Histopaque密度離心來製備周邊血液單核細胞(PBMC)。將細胞洗滌至含有10%熱滅活胎牛血清、50 U/mL青黴素、50 µg/mL鏈黴素、2 mM L-麩醯胺酸之RPMI培養基中及接種於48孔組織培養盤(Costar/Corning)中。重組人類IL-13以100至0.01 ng/mL範圍內之稀釋度添加。關於分析測試細胞介素反應之抗體抑制，添加1 ng/mL IL-13以及稀釋度在500至0.4 ng/mL範圍內之抗體。將細胞在5% CO ₂培育箱中在37℃下培育隔夜。次日，使用非酶促細胞解離溶液(Sigma Aldrich)自孔收集細胞，且隨後洗滌至含有1% BSA的冰冷PBS中。細胞用藻紅素(PE)標記之抗體培育至人類CD23 (BD Biosciences)，且用Cy-Chrome標記之抗體培育至人類CD11b (BD Biosciences)。單核球基於高前向及側向光散射及CD11b之表現進行閘控。單核球上之CD23表現使用流式細胞儀(BD Biosciences)測定，且使用CellQuest軟體(BD Biosciences)分析CD23陽性細胞百分比。因為用人類周邊血液進行CD23表現分析，所以單核球CD23表現分析顯示基於供體之反應的細微變化。因此，親和力最佳化之變異體的反應與IL13-1307 (hu13.4)親本抗體對照物相比較，在各個別分析中進行。資料表示為最大反應%，其通常在65-85% CD23+單核球範圍內。亦量測HT-29細胞中IL-13誘導之STAT6磷酸化生物活性中和，以選擇變異體作為親本抗IL13-1307 (hu13.4)抗體的比較物。識別出若干抗IL-13親和力最佳化之變異體，該等變異體在CD23表現生物分析中對IL-13中和之效力有10至46倍之改善範圍的顯著增加，且在HT-29細胞的中和IL-13誘導pSTAT6磷酸化生物活性方面有適度改良，因為此分析窗為狹窄的(表9)。表 9. 選擇親和力成熟抗 IL-13 抗體變異體 ，在 CD23 表現生物分析中展現出 IL-13 中和之效力的顯著增加及 pSTAT6 生物活性方面的適度改良

抗 IL-13 抗體變異體	變異體別名	IL-13 誘導之 pSTAT6 磷酸化的中和	IL-13 誘導之 CD23 表現的中和
IC ₅₀[pM]	相對於 IL13-1307 之生物活性倍數	相對於 IL13-0001 之生物活性倍數	IC ₅₀[pM]	相對於 IL13-1307 之生物活性倍數	相對於 IL13-0001 之生物活性倍數
IL13-1307	IL13433-1307, hu13.4	140.0	1	0.7	305.9	1	0.03
IL13-0001 †	IL13433-0001	92.0	1.5	1	10.5	29.1	1
IL13-1308 †	IL13433-1308, VLA4	42.7	3.3	2.2	14.4	21.3	0.7
IL13-1309 †	IL13433-1309, VLA6	50.00	2.8	1.8	16.31	18.8	0.6
IL13-1310 †	IL13433-1310, VLA7	41.33	3.4	2.2	9.35	32.7	1.1
IL13-1311 †	IL13433-1311, VLA10	54.50	2.6	1.7	16.7	18.3	0.6
IL13-1312 †	IL13433-1312, VLA12	34.3	4.1	2.7	9.8	31.2	1.1
IL13-1313 †	IL13433-1313, VLB6	60.0	2.3	1.5	14.8	20.6	0.7
IL13-1314 †	IL13433-1314, VLB11	52.3	2.7	1.8	8.8	35.0	1.2
IL13-1315 †	IL13433-1315, VLB12	77.0	1.8	1.2	26.65	11.5	0.4
IL13-1316 †	IL13433-1316, VLC7	36.5	3.8	2.5	8.8	34.8	1.2
IL13-1317 †	IL13433-1317, VLC12	71.0	2.0	1.3	28.4	10.8	0.4
IL13-1318	IL13433-1318, 1RVLC1	310.0	0.5	0.3	101	3.0	0.1
IL13-1319 †	IL13433-1319, 1RVLE3	110.0	1.3	0.8	19.8	15.4	0.5
IL13-1320 †	IL13433-1320, 3RVLA11	190.0	0.7	0.5	25.9	11.8	0.4
IL13-1321 †	IL13433-1321, 1RVLG2	120.0	1.2	0.8	22.4	13.7	0.5
IL13-1323 †	IL13433-1323, 1RVLA3	170.0	0.8	0.5	29.7	10.3	0.4
IL13-1324 ◊	IL13433-1324, 1RVLB11	180.0	0.8	0.5	36.8	8.3	0.3
IL13-1325 ◊	IL13433-1325, 1RVLG3	150.0	0.9	0.6	33.2	9.2	0.3
IL13-1326 †	IL13433-1326, 1RVLC7	130.0	1.1	0.7	25.4	12.0	0.4
IL13-1327 †	IL13433-1327, 1RVLC10	160.0	0.9	0.6	15.8	19.4	0.7
IL13-1328 †	IL13433-1328, 2RVLF12	190.0	0.7	0.5	26.3	11.6	0.4
IL13-1329 †	IL13433-1329, 1VHC4	67.0	2.1	1.4	11.6	26.3	0.9
IL13-1330	IL13433-1330, 2VHD4	120.0	1.2	0.8	80.3	3.8	0.1
IL13-1331 ◊	IL13433-1331, 1VHD12	150.0	0.9	0.6	57.5	5.3	0.2
IL13-1332 †	IL13433-1332, 1VHC6	53.5	2.6	1.7	20.9	14.6	0.5
IL13-1333 ◊	IL13433-1333, 1VHC9	89.0	1.6	1.0	45	6.8	0.23
IL13-1334 †	IL13433-1334, 2VHE12	71.0	2.0	1.3	12.3	24.8	0.8
IL13-1335 ◊	IL13433-1335, 1RVHA9	150.0	0.9	0.6	42.2	7.2	0.2
IL13-1336 ◊	IL13433-1336, 1RVHB12	160.0	0.9	0.6	50.6	6.0	0.21
IL13-1337 †	IL13433-1337, 1RVHB8	120.0	1.2	0.8	15.0	20.4	0.7
IL13-1338 †	IL13433-1338, 1RVHC9	87.0	1.6	1.1	11.5	26.5	0.9
IL13-1339 ◊	IL13433-1339, 1RVHC10	140.0	1.0	0.7	33.7	9.1	0.3
IL13-1340 †	IL13433-1340, 1RVHD7	190.0	0.7	0.5	25.4	12.0	0.4
IL13-1341	IL13433-1341, 1RVHD12	170.0	0.8	0.5	97.9	3.1	0.1
IL13-1342 ◊	IL13433-1342, 1RVHE6	150.0	0.9	0.6	47.9	6.4	0.2
IL13-1343 ◊	IL13433-1343, 1RVHE7	81.0	1.7	1.1	46.5	6.6	0.2
IL13-1344 †	IL13433-1344, 2RVHF10	170.0	0.8	0.5	20.4	15.0	0.5

ND=未測定；†=變異體中和CD23表現之效力的實質性(≥10倍)增加；◊=中和CD23表現之效力的適度(5至10倍)增加。

實例12 自抗IL-13抗體IL13-0001移除電腦模擬預測之抗原決定基努力減少IL13-0001 CDR中電腦模擬預測之非生殖系T細胞抗原決定基含量，以潛在地降低含有此結合域之Tri-Fab-Fc分子的整體免疫原性概況。使用以下兩種方法進行免疫原性分析。IL13-0001 V _H及V _L序列經提交至ISPRI軟體包中之EpiMatrix分析(ISPRI v 1.8.0, EpiVax Inc., Providence, RI; 26)，且原始結果提供各9-寡聚物胺基酸片段與8種不同HLA類型結合之可能性排名。亦提供序列以使用IEDB中之MHC-II結合共識法(27)進行分析(IEDB MHC-II Binding Predictions, Vita等人, 2015)，且原始結果提供各9-寡聚物及15-寡聚物胺基酸片段與八種不同HLA類型結合的機率排名。接著，各抗原決定基歸類為生殖系或非生殖系抗原決定基，且對於抗體，吾等基於其在抗體內之位置對各抗原決定基進行進一步分類(CDR或非CDR)。IL13-0001之分析鑑別出七個經預測之非生殖系T細胞抗原決定基，四個在V _H中且三個在V _L中。使用結構引導方法以及IL13-1307 (hu13.4)抗體與IL-13 (實例14)之共晶體結構中結合界面的計算及手動檢查的來選擇胺基酸取代，以識別不干擾IL13-0001之強效中和能力的變化。三十六個獨特的變異體被設計成IgG1-效應功能降低的/人類κ抗體，且蛋白質在HEK-293細胞中短暫產生以進一步評估。

使用初代人類單核球之CD23表現分析(實例11中所描述)係用於評估此等變異體相對於IL13-0001之生物活性。使用表面電漿子共振(SPR)測定來自生物測定篩選中識別的10種主導變異體的親和力值(K _D)。為評估動力學速率常數以測定1:1結合親和力，將抗人類IgG抗體(GE Healthcare, BR-1008-39)共價胺偶合至CM5羧基甲基化聚葡萄糖塗佈之感測器晶片之所有流槽上，根據製造商之方案達到約10,000共振單位(RU)的密度，且隨後捕獲抗IL-13抗體變異體達到約60-90 RU之水平。接下來，將濃度在1.56-50 nM範圍內之人類IL-13蛋白質注射於表面上，且在37℃下用離子緩衝液再生表面，隨後用HBS-EP+平衡。用於AC-SINS、DNA及胰島素非特異性分析之方法描述於實例16中。

評估攜帶引入IL13-0001 CDR中之胺基酸取代以降低非生殖系T細胞抗原決定基含量之變異體，鑑別出不顯著改變IL-13結合及中和特性之取代。特定言之，經識移除四個V _H及三個V _L經預測之T細胞抗原決定基中之兩個的變異體，然而注意到此等排名靠前的殖株之IL-13生物活性損失較小(表10)。此外，在37℃下使用SPR量測之結合人類IL-13之變異體之親和力(K _D)亦展示對IL-13之親和力少量損失，且支持生物活性結果(表10)。使用AC-SINS、DNA及胰島素分析進行之非特異性評估顯示，併入以減少經預測之T細胞抗原決定基的突變不改變親本IL13-0001評分之評估(表10)。表 10. 經設計以減少電腦模擬預測免疫原性之主導抗 IL-13 變異體的生物活性及親和力之概述。

抗體	多鏈免疫原性評分 (tReg 經調節 )	CDR 非生殖系抗原決定基	非特異性評分	生物活性： IL-13 誘導之 CD23 表現的中和	K _D[pM] SPR 37 ℃
V _H	V _L	AC-SINS	DNA	胰島素	IC ₅₀[pM] Ave. n = 2	相對於 IL13-0001 之倍數
IL13-0001	-45.39	4	3	10.00	2	2	6.0	1	57.7 ± 0.2
IL13-0258	-49.33	0	2	11.00	4	2	8.2	0.73	67 ± 19.4
IL13-0259	-51.93	0	2	10.00	4	4	7.4	0.81	71.75 ± 3.45
IL13-0265	-61.30	0	1	6.00	2	1	9.2	0.65	88.8 ± 0.8
IL13-0266	-63.90	0	1	8.00	5	2	7.9	0.76	80.3 ± 0.6
IL13-0270	-58.80	0	1	5.00	1	1	9.0	0.67	93.25 ± 0.45
IL13-0271	-61.40	0	1	8.00	3	2	5.9	1.01	73.55 ± 4.15
IL13-0277	-62.60	0	1	7.00	3	1	7.4	0.81	109 ± 2
IL13-0278	-65.20	0	1	8.00	3	2	9.6	0.62	90.9 ± 2.8
IL13-0282	-60.10	0	1	8.00	2	1	9.6	0.62	106.5 ± 11.5
IL13-0283	-62.70	0	1	8.00	3	2	7.0	0.86	80.45 ± 3.25

實例13 人類化IL4-1285抗體-人類IL-4複合物結構之測定為確定人類化IL4-1285抗體(hu3B9-VLv2.0或RA1-2)中之哪些殘基與人類IL4細胞介素直接接觸，且實現基於結構之庫設計，確定IL4-1285抗體與人類IL-4之複合物的結構。為獲得此結構，IL-4於大腸桿菌細胞株BL21 (DE3)中過度表現。在完全蛋白酶抑制劑(Merck)存在下經由微流化器裂解細胞。在25,000 g下離心之後，將包涵體洗滌且用6M Guanadinium-HCl (GuHCl)、20 mM DTT及1 mM EDTA (pH 8.8)再溶解。進行依序透析步驟以逐漸移除GuHCl，同時引入氧化麩胱甘肽(最終濃度為1 mM)以幫助再摺疊。在完全移除GuHCl之後，經由HiTrap SP瓊脂糖FF、HiTrap Phenyl HP及Superdex 75 16/60 (所有三根管柱經由GE Healthcare提供)純化再摺疊之IL4，以獲得用於結構研究的蛋白質。抗IL-4 IL4-1285抗體根據製造商方案用固定化番木瓜蛋白酶消化(Thermo/Pierce)。預裝填蛋白A瓊脂糖FF (GE Healthcare)用於純化來自經消化混合物之Fab片段。將IL4-1285 Fab及人類IL-4細胞介素(配位體)以1:1.2之比率混合，其中配位體過量以驅動複合物形成。使用Superdex 200尺寸排阻管柱(GE Healthcare)進行最終純化。將IL4-1285 Fab/IL-4複合物濃縮至13.5 mg/mL以用於結晶配置。含有IL4至1285 Fab及IL-4之蛋白複合物之最佳晶體使用以下條件獲得：100 mM MES pH 6.0、150 mM硫酸銨、14% PEG 4000。IL4-1285 Fab/IL-4複合物之較大晶體繞射至約2.4Å。對晶體進行短暫低溫保護，且在先進光子來源(APS)下遠端進行同步加速器資料收集。使用軟體AutoPROC (Global Phasing有限公司)處理影像圖框。在2.40Å解析度下獲得完整資料集。資料屬於空間群P3 ₁21，其中單位晶胞如下： a= 114.175Å, b= 114.175Å, c= 160.790Å, α = ß = 90°, γ= 120°，其中每不對稱單位有2個複合物。分子置換使用IL4-1285 Fab及IL-4結構之同源性模型搜尋所產生的各組分之有說服力之解決方案。使用軟體BUSTER進行精化，且2.4Å下的最終R/R _自由因子分別為0.2099及0.2593，且鍵之RMSD為0.013Å，角度之RMSD為1.947°。

根據對此等結構結果之分析，IL4-1285重鏈中之以下殘基(Pfabat編號)涉及與人類IL-4：S32、G33、W53、R94、E96、T97、V98、F99、Y100、Y(100B)直接接觸。另外，抗IL-4 IL4-1285 Fab輕鏈中之以下殘基涉及與IL-4細胞介素：Y(27D)、D28、D30、Y32、L46、Y49、A50、E55、S56直接接觸。亦確定以下IL-4胺基酸涉及與抗IL-4 IL4-1285 Fab：E19、Q20、A68、T69、A70、Q71、F73、H74、R75、K77、Q78、R81、F82、K84、R85直接接觸。

IL4-1285 Fab/IL-4複雜結構結果亦用於嘗試理解為何在IL4-1285抗體之親和力最佳化過程期間引入至IL4-1359中之胺基酸取代有助於對IL-4之較高親和力，引起IL-4中和之效力增加。抗IL-4抗體IL4-1285主要經由IL-4螺旋C之N端一半形成與其同源配位體之穩定複合物。雖然IL4-1285與IL-4之間的整體界面並不廣泛，但CDRH3由CDRL1及CDRL2接合以覆蓋螺旋C之大部分暴露表面。基於IL4-1285抗體與IL-4複合之結構資訊，CDRL3埋入CDRH3下方，且CDRH2遠離Fab-配位體界面；兩者均不能促進IL4-1285與IL-4結合之親和力。然而，CDRH1非常接近IL-4，但僅與配位體稀疏地相互作用。因此，經由CDRH1最佳化結合更可能對與IL-4之結合親和力作出顯著貢獻，如經最佳化之IL4-1359變異體中所表明。以下分析揭露IL4-1359在IL4-1285之親和力最佳化後更緊密地結合至IL-4之基礎原因。

IL4-1285/IL-4複雜結構結果亦用於嘗試理解為何在IL4-1285抗體之親和力最佳化過程期間引入至IL4-1359 V _H中之變化有助於對IL-4之較高親和力，引起IL-4中和之效力增加。相較於IL4-1285/IL-4複合物之解析結構，使用IL4-1359親和力最佳化變異體的結構模型化，相對於IL4-1285，IL4-1359 V _HCDRH1中併入以下變化對IL-4之親和力增加具有最大影響(圖4)： 1. T31N：用天冬醯胺置換Thr31使得Asn31有可能與IL-4之螺旋C上的Arg75形成兩個額外鹽橋。此等相互作用可能會改良IL-4與IL4-1285 Fab之間的結合親和力。 2. IL4-1359 V _H中之位置32的苯丙胺酸提供與IL-4螺旋A之C端以及其延伸環之更好的穩定相互作用。 3. M34E：在T31N處於適當位置之情況下，M34E差異使原始甲硫胺酸側鏈『變小』，從而提供更多空間以容納T31N。另外，M34E變化最佳化此殘基之表面性質，因此其可與周圍較好地摻合，此為更親水性的。 4. V(35A)L：白胺酸之較長疏水性側填充由L4、F24、F27、V78、W36、C22及C92包圍之疏水性袋內部之空隙。V(35A)L變化提供額外力以加強Ig摺疊之兩個β片之間的相互作用且強化重鏈之區域結構。

IL4-1285抗體之生物物理表徵揭露，IL4-1285 CDRL1 (KASQSVDYDGDSYMN，SEQ ID NO: 11)中在Tyr殘基L27d處存在非所需轉譯後修飾(O-硫酸化)。使用IL4-1285 Fab/IL-4複合物結構結果，蛋白質結構模型化表明此Tyr殘基可有助於細胞介素結合且引起使用天冬醯胺(IL4-1345 V _L或hu3B9-VL v2.7, V _L)、苯丙胺酸(IL4-1346 V _L或hu3B9 _VL v2.8 V _L)或麩胺酸(IL4-1347 V _L或hu3B9_VL v2.9 V _L，SEQ ID NO: 20)來置換IL4-1285 VL v2.0中L27d處的酪胺酸殘基。另外，L28 (Kabat編號)處之天冬胺酸殘基變成麩胺酸(IL4-1348 V _L, hu3B9_VL v2.10 V _L)以評估Tyr (L27d)上之硫酸化程度。來自結構模型化之結果顯示Y(L27d)E亦可與IL-4之R81形成鹽橋相互作用且進一步使配位體-IL4-1285抗體界面穩定且提高結合親和力(參見圖5)。

實例14 人類化IL13-1307 (hu13.4)抗體-人類IL-13複合物結構之測定為確定人類化IL13-1307 (hu13.4)抗體中之哪些殘基與人類IL-13細胞介素直接接觸且實現基於結構之庫設計，確定IL13-1307抗體與IL-13之複合物的結構。另外，解決與人類IL-13複合之另一人類化抗IL-13抗體IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)之結構且與IL13-1307 (hu13.4)之結構相比較，以理解為何IL13-1307抗體在pSTAT6磷酸化(實例3及實例10中前述之方法)及單核球CD23表現生物分析(實例11中所描述之方法)中比IL13-1283 (IMA-638)的效力略高，儘管此等抗體之間共用高序列同源性(表11)。表 11. pSTAT6 磷酸化及單核球 CD23 表現生物分析中 IL13-1307 相較於 IL13-1283 之生物活性

抗體	IL-13 誘導之pSTAT6 磷酸化的中和[pM]	IL-13 誘導之CD23 表現的中和[pM]
IL13-1307 (hu13.4)	224.6	213.9
IL13-1283 (IMA-638)	427.1	260.8

對此結構，人類IL-13過度表現於大腸桿菌細胞株BL21 (DE3)中。在完全蛋白酶抑制劑(Merck)存在下經由微流化器裂解細胞。在25,000 g下離心之後，將包涵體洗滌且用6M Guanadinium-HCl (GuHCl)、20 mM DTT及1 mM EDTA (pH 8.8)再溶解。進行依序透析步驟以逐漸移除GuHCl，同時引入氧化麩胱甘肽(最終濃度為1 mM)以幫助再摺疊。在完全移除GuHCl之後，經由HiTrap SP瓊脂糖FF、HiTrap Phenyl HP及Superdex 75 16/60 (所有三根管柱經由GE Healthcare提供)純化再摺疊之IL-13，以獲得用於結構研究的蛋白質。隨後，IL13-1307抗體之Fab片段經由用固定化番木瓜蛋白酶根據製造商方案(Thermo/Pierce)消化抗體來產生，且隨後經由預裝填蛋白質A瓊脂糖FF (GE Healthcare)進行純化。IL13-1307抗體片段之分離在蛋白A瓊脂糖上用反向pH梯度進行，在此方法下，在Fab之前將Fc自管柱溶離。

為形成複合物，以1:1.2之比率混合IL13-1307 Fab及人類IL-13，其中配位體過量以驅動複合物形成。使用Superdex 200尺寸排阻管柱(GE Healthcare)進行最終純化。將複合物濃縮至10.8 mg/mL以用於結晶配置。含有IL13-1307 Fab及人類IL-13之蛋白複合物之最佳晶體在以下條件下獲得：100 mM HEPES pH 7.0、1000 mM檸檬酸三鈉。將複合物之較大晶體繞射至約2.7Å股解析度。對晶體進行短暫低溫保護，且在先進光子來源(APS)下遠端進行同步加速器資料收集。使用軟體AutoPROC (Global Phasing有限公司)處理影像圖框。在2.8Å解析度下獲得完整資料集。資料屬於空間群I222，其中單位晶胞如下： a= 65.184Å, b= 167.870Å, c= 245.172Å, α = ß = γ= 90°，其中每不對稱單位有2個複合物。分子置換使用先前報導之IL13-1283 (IMA-638) Fab及人類IL-13結構之同源性模型搜尋所產生的各組分之有說服力之解決方案。使用軟體BUSTER進行精化，且2.8Å下的最終R/R _自由因子分別為0.1699及0.2362，且鍵之RMSD為0.01Å，角度之RMSD為1.30°。

根據結構結果之分析，IL13-1307重鏈中之以下殘基涉及與人類IL-13：T28、S30、S31、Y32、A33、W47、S50、S52、S53、Y58、L95、D96、G97、Y98、Y99、F100(Kabat編號)直接接觸。IL13-1307輕鏈中之以下殘基涉及與人類IL-13：H(27D)、Y49、R50、E55、N92、D94、W96直接接觸。確定人類IL-13中之以下殘基涉及與IL13-1307 Fab: T2、A3、E6、L42、E43、I46、E55、K56、Q58、R59、M60、S62、G63、F64、C65、P66、H67、K68直接接觸。

IL13-1307 (hu13.4)抗體對其預期目標IL-13之親和力比IL13-1283 (IMA-638)略高，儘管序列同源性較高，但在生物分析中產生增加之效力。IL13-1283與IL13-1307之間不同的CDR區中存在七個殘基，其位於V _H內：I30S、G55D、N56T、A101P，且位於V _L內：Y28S、K30S、N(27D)H。歸因於此等7個胺基酸差異，IL13-1307 Fab與IL-13之間的界面自IL13-1283 Fab與IL-13之間的界面具有細微但可見的角位移(約5度) (圖6)，具有稍廣泛的界面(IL13-1307 Fab之內埋表面積為2042.89 Å2，而IL13-1283 Fab之內埋表面積為1982.5 Å2)。更重要的是，IL13-1307 Fab中存在涉及廣泛相互作用之五個殘基。另外，IL13-1307中存在更多殘基涉及鹽橋相互作用(IL13-1307 Fab中有七個，而IL13-1283 Fab中有四個)，其實質上比凡得瓦爾力接觸更強。

IL13-1283 Fab之輕鏈中之Y28及K30分別與人類IL-13之螺旋C與D (殘基67-83)之間的長環上的R80及N47相互作用。此外，IL13-1283 Fab之輕鏈中之N(27D)亦與上文提及之環中的K68以及人類IL-13之螺旋B上的E43相互作用。總體而言，此等相互作用(如IL13-1283 Fab-IL13複合結構中觀測到)必然地使界面向人類IL-13之周邊側傾斜，且因此弱化涉及IL-13的螺旋A及C與IL13-1283 Fab的CDRH1及2的相互作用。在IL13-1307 Fab中，S28及S30不涉及與IL-13之任何接觸，且H(27D)亦失去其與K68之鹽橋接觸。在不存在周邊繫栓效應之情況下，IL13-1307 Fab之CDRH1及CDRH2能夠與IL-13之螺旋A及C接合更緊密，且因此產生較佳配合界面及較強相互作用(圖7)。

除了如上文詳述改良配位體接合之外，IL13-1307 Fab相較於IL13-1283，以下三個胺基酸差異亦協同地貢獻，此共同地引起較高結合親和力及在生物分析中觀測到的增加效力： (1) P101之側鏈(hu13.2 Fab中之丙胺酸)填充在緊鄰D96之空隙中，且為IL13-1307 Fab之CDRH3提供額外結構強化，其與IL-13之螺旋B及C充分相互作用。因此，諸如F100之殘基獲得與IL-13之實質性相互作用(圖8)。 (2) IL13-1307 Fab之絲胺酸(H30)似乎與IL-13之N端區更相容，其表面在本質上為親水性的。因此，IL13-1307中所含之S30相對於IL13-1283中之異白胺酸(H30)殘基將有可能在熱力學上促進改良之結合親和力(圖9)。 (3) IL13-1307 Fab重鏈中之位置55處之天冬胺酸相對於IL13-1283中之此位置處之甘胺酸，雖然本身不涉及與IL-13相互作用，但可能使CDRH2之構形穩定以與IL-13之螺旋C最佳接合(圖10)。

亦使用結構結果嘗試理解為何在IL13-1307抗體之親和力最佳化過程期間引入至IL13-0001 (1RVHC9-VLA4)中之突變有助於對IL-13之較高親和力，引起IL-13中和之效力增加。相對於IL13-1307，併入至IL13-0001 V _H(SEQ ID NO: 51) CDRH3中之變化對於增加與IL-13之親和力具有最大影響(參見圖11)。 (1) L95N及F(100B)L：L95N及F(100B)L減少CDRH3與mAb之其餘核心區之間的疏水性錨定相互作用。與P101T一起，此三個殘基為CDRH3提供最佳接合IL-13之額外靈活性。 (2) D96E：D96E使帶負電殘基延伸至更接近mAb-配位體界面且與IL-13之Arg59相互作用。此兩個殘基連同CDRL2中之E55一起產生帶負電表面以確保與IL-13之Arg59之穩定相互作用。 (3) P101T：為了容納D96E，P101T為Glu之延伸側鏈提供所需空間，且與CDRL2之D96E及E55產生更親水性環境，以吸引IL-13之Arg59。 (4) Y102L：Y102L提供與重鏈N端區之Val2的較佳凡得瓦爾力接觸，且有助於提供Ig摺疊之進一步穩定性。類似地，併入VLA4 V _L(SEQ NO: 83) CDRL1中之胺基酸差異亦促進對IL-13之親和力增加(參見圖12)。 (1) S28F及S30W：S30W經由氫鍵獲得與IL-13之Asn47的額外相互作用。兩者均有利地在噬菌體呈現親和力最佳化期間突變成龐大疏水性側鏈，可能有助於吸引IL-13之暴露之Trp29。 (2) M33之側鏈緊密地封裝於具有笨拙構形之較小疏水性袋內部。M33V變化(具有較小分支疏水性側鏈)提供與V27B及F71之較好凡得瓦爾力相互作用，且促進局部結構穩定性。

抗 IL-33 FAB 結合域之衍生實例15 自IL-33結合域CDRL1移除去醯胺作用傾向中和抗IL-33抗體IL33-0232重鏈及輕鏈可變區之衍生，分別為SEQ ID NO. 63及SEQ ID NO. 68，先前經描述(WO17187307)。進行質譜分析(LC-MS/MS)以評估IL33-0232抗體之熱及pH應力，且評估CDR區內在初始條件(T=0)及加壓條件(T=4w)下各修飾之水平。對於此分析，調配成20 mM組胺酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL EDTA、0.2 mg/mL PS80、pH 5.8 (T=0)之IL33-0232緩衝更換為：Tris pH 7.5、組胺酸pH 5.8、麩胺酸pH 4.5緩衝液，且接著經受熱應力(40℃)持續4週。接著，在pH 6.0及pH 8.2下進行低假影Lys-C/胰蛋白酶(LATD)肽圖譜LC-MS/MS方法。結果鑑別在CDRL1內的N ³⁰(K ASQNIN ³⁰K HLD：SEQ ID NO:65-下劃線區域顯示殘基25-31之肽片段)有一個高水平(＞5%)的去醯胺熱點，在N ²⁸(KASQ N ²⁸INKHLD：SEQ ID NO:65；-下劃線區域顯示殘基25-31之肽片段)有一個低水平(1%-5%)的去醯胺熱點(表12)。

為理解天冬醯胺(Asn/N)向天冬胺酸(Asp/D)之完全(100%)轉化對中和IL-33之能力的影響，N ³⁰殘基經Asp殘基取代以產生IL33-0216抗體變異體。IL33-0216抗體之生物活性係使用NF-κB/AP-1-誘導型分泌胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因分析測定。對於此IL-33中和分析，HEK-Blue™ IL-33細胞(Invivogen)為經工程改造缺乏TNF及IL-1信號傳導且穩定地表現IL1RL1及NF-κB/AP-1-誘導型分泌胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因兩者的基於HEK-293之細胞株。在IL-33刺激後，此等細胞分泌SEAP，其可隨後使用比色檢定定量以評估IL-33活性。HEK-Blue™ IL-33細胞在補充有1X pen/strep/glu (Invitrogen 10378-016)、10%熱滅活FBS (Gibco 16140-171)、10 µg/ml殺稻瘟菌素(Invitrogen A11139-03)、300 µg/mL吉歐黴素(Invitrogen R25001)的DMEM (Gibco 11995-085)在37℃具有5% CO ₂的培育箱中維持。在分析之前，細胞自具有trypLE (Gibco)之維持燒瓶中釋放，洗滌，且以10 ⁶個細胞/毫升再懸浮。接著在分析盤中以5×10 ⁴個細胞/孔接種細胞(Falcon 353072)。藉由添加1.5 µL之IL-33儲備溶液至1.5 µL DTT(Sigma 646563)及培養基之147 µL中，將100 µg/mL重組人類IL-33 (R&D Systems 3625-IL)之儲備溶液按1:100稀釋。DTT添加防止IL-33之氧化還原介導失活，其將禁止下游讀取。或者，使用最終濃度為0.1 ng/mL之重組IL-33 mm2 Cys蛋白質，其為IL-33之組成型活性突變體。然而，此分析讀數不如具有還原的IL-33蛋白的讀數動態。向各孔中之50 µL細胞中依序添加25 µL抗IL-33抗體稀釋液，接著為25 µL經稀釋之IL-33混合物，最終濃度為0.1 ng/mL之IL-33。細胞在具有5% CO ₂之37℃保溫箱中刺激大約20小時，此時自培養盤之各孔移除75 µL培養基用於SEAP定量。將160 µL之QUANTI-Blue試劑(Invivogen)添加至分析盤(Falcon 353072)之各孔中。將40 µL細胞條件培養基添加至各孔中且將培養盤放回37℃培育箱中維持約3小時。隨後使用650 nm下之分光光度計(Spectramax M5e)評定SEAP活性。藉由抑制IL-33-誘導之SEAP活性之能力評估抗體活性。

來自IL-33 (R&D Systems 3625-IL)誘導之SEAP報導基因生物分析之結果表明，IL33-0232之CDRL1內位置30 (Pfabat編號)之Asn殘基的完全(100%)轉化，導致IL-33中和活性的顯著損失，如IL33-0216變異體與IL33-0232相比，活性明顯損失所指示(表13)。當與攜帶N(L30)H之親和力最佳化變異體IL33-0726相比時，此損失甚至更明顯(表13)。IL33-0726結合域之衍生描述於實例16中。

努力工程改造IL33-0232以分別移除N(L30)及Q(L27)的高水平及低水平去醯胺位兩者。藉由計算及人工檢查親本人類化7E8抗體與人類IL-33之共晶體結構中之結合界面來引導置換N(L30)及N(L28)之突變的選擇。使用此結構引導途徑，Ser(S)、Gln(Q)及Tyr(Y)經鑑別為置換N(L30)之可能取代。另外，一種變異體(IL33-0224)經N(L28)P及N(L30)S工程改造，意欲移除高水平及低水平去醯胺責任。K(L24)R突變亦併入此等變異體中，因為其移除電腦模擬預測之T細胞抗原決定基，且當併入至IL33-0232中時此胺基酸取代導致變異體IL33-0217展示為耐受的且不改變IL-33中和能力(表14)。在用IL-33 mm2 Cys組成型活性突變蛋白誘導之SEAP報導基因分析中評估此等變異體之生物活性之評估。結果指示Ser及Gln均可經N取代(L30)以移除高水平去醯胺責任且IL33-0224中之N(L30)S+N(L28)P組合突變為耐受的且不改變IL-33中和活性(表14)。選擇變異體IL33-0224作為IL-33親和力最佳化之模板，因為移除高水平及低水平去醯胺傾向責任(實例16)。表12.藉由LATD肽圖譜LC-MS/MS方法測定之天冬醯胺去醯胺化熱點的定量。

K A ²⁵ SQNIN ³⁰K ³¹ HLD 肽(SEQ ID NO: 65之25-31帶下劃線的部分)	K A ²⁵SQ ²⁷NINK ³¹ HLD 肽(SEQ ID NO: 65之25-31帶下劃線的部分)
LATD: His	pH 8.2	pH 6.0	LATD: His	pH 8.2	pH 6.0
% Asn (N)	82.1	87.3	% Asn (N)	97.1	95.2
% Asp/isoAsp	17.9	12.7	% Asp/isoAsp	2.9	4.8
丁二醯亞胺形成	ND	ND	丁二醯亞胺形成	ND	ND

Asn=天冬醯胺；Asp=天冬胺酸；isoAsp=異天冬胺酸；ND=未偵測。表13. IL33-0232之變異體的IL-33中和活性經設計以檢查N(L30)去醯胺化責任。

抗體	描述	相對於人類還原之IL-33 (R&D) 的IC ₅₀[pM]
實驗 1	實驗 2
IL33-0232	N(L30)	35	ND
IL33-0216	N(L30)D	*677	*1235
IL33-0726	具有N(L30)H之親和力最佳化變異體	ND	6

*估計兩個實驗中IL13433-0216 IC ₅₀值，因為其無法達成完全抑制；ND=未測定。表14. IL33-0232之變異體的IL-33中和活性經設計以移除N(L30)及N(L28)去醯胺化責任。

抗體	CDRL1 突變	相對於人類IL-33 mm2 Cys 的IC ₅₀[pM]
IL33-0216	N(L30)D	237
IL33-0217	K(L24)R	158
IL33-0219	K(L24)R, N(L30)Q	142
IL33-0220	K(L24)R, N(L30)Y	176
IL33-0224	K(L24)R, N(L28)P, N(L30)S	115
IL33-0232	無	142

實例 16 增加 IL-33 之抗體結合親和力及中和活性同時維持低非特異性相互作用針對經IL4-0002、IL13-0001及IL33-0232結合域工程改造且具有或不具有白胺酸-絲胺酸(LS)半衰期延長突變之IL13433-0006原型三特異性分子進行劑量預測模型化。LS突變(M(H459)L及N(H465)S (Pfabat編號)經工程改造至Tri-Fab-Fc分子中以增加給藥靈活性窗。劑量預測模型化表明IL33-0232 Fab之IL-33中和效力將需要增加10倍以允許目標覆蓋度，不管LS半衰期延長突變如何。親本人類化7E8抗體與人類IL-33之共晶體結構展示五個CDR與IL-33相互作用，且表明此複雜界面將需要平行噬菌體呈現方法來鑑別親和力提高10倍之變異體。IL33-0224重鏈及輕鏈可變區(SED ID NO: 63及SED ID NO: 71)分別經選擇以針對噬菌體呈現工程改造親本單鏈可變片段(scFv)模板，因為CDRL1的高水平及低水平去醯胺責任均被消除。作為不可知方法，構築隨機軟突變誘發噬菌體呈現庫，其在各靶向位置處在噬菌體庫中留下約50%親本野生型殘基，加上在其他50%中之隨機胺基酸含量。各軟突變誘發子庫採用兩輪選擇操作，其涉及針對一系列生物素化人類IL-33: 200 pM、100 pM、10 pM、1 pM之嚴格初始第一輪選擇，其中併入有隔夜的『解離速率』攻擊，使用過量1000倍的人類IL-33。在第二輪選擇中，以200 pM、100 pM、10 pM、1 pM使用生物素化人類IL-33，其中進行100倍過量人類IL-33的『解離速率』攻擊。自各選擇分支收集殖株且產生含有scFv之周質製備物(周質製備物)用於使用均相時差式螢光(HTRF)分析篩選以確定相對於親本IL33-0224及IL33-0232 scFv之中和能力。對於此HTRF分析，使用JANUS®液體處理器(PerkinElmer)將10 µL/孔周邊製備物等分至384孔盤中。隨後，每孔5 µL IL33-0232 IgG稀釋至4 nM，與1:100經稀釋之抗人類IgG-Fc-銪一起添加至384孔盤中，最終濃度及比例分別為1 nM及1:400。接著，將在5 mM二硫蘇糖醇(DTT)中預稀釋的生物素化人類IL-33稀釋至4 nM，且在384孔盤的每個孔中添加5 μL與1:750稀釋的Steptavidin (SA)-XL665，最終濃度及比例分別為1 nM及1:3000。HTRF樣品在384孔盤內在室溫下培育3小時且使用EnVision多模式盤讀取器(PerkinElmer)量測時差式螢光(TRF)。

亦採用結構引導合理方法，其中基於7E8抗體/人類IL-33結合界面之計算及手動檢驗，在各CDR位置選擇胺基酸來構建噬菌體庫。亦將兩輪選擇操作用於合理設計子庫，包括針對一系列生物素化人類IL-33: 10 pM、1 pM、0.1 pM之嚴格初始第一輪選擇，其中併入有隔夜的『解離速率』攻擊，使用過量1000倍的人類IL-33。在第二輪選擇中，以10 pM、1 pM、0.1 pM使用生物素化人類IL-33，其中進行100倍過量人類IL-33的『解離速率』攻擊。自各選擇分支收集殖株且產生含有scFv之周質製備物用於使用先前針對軟突變誘發噬菌體呈現方法所描述之HTRF分析篩選以確定相對於親本IL33-0224及IL33-0232 scFv之中和能力。

將自軟突變誘發及合理方法鑑別之命中物重新排列且在HTRF分析中確認活性。對經確認之命中物進行定序以確定V _H及V _L之獨特性。獨特的命中物轉化為IgG形式且蛋白質經由暫時HEK-293表現系統產生。將分別重新格式化至重鏈及輕鏈表現載體中之軟突變誘發方法分離的選擇V _H及V _L共轉染以增加殖株多樣性,且鑑別某些組合是否會產生對IL-33之結合親和力的協同增加。在NF-κB/AP-1-誘導型SEAP報告基因分析(實例15)中，評估所得IgG蛋白相對於IL33-0232及IL33-0352 (一種將IL-33抗體依特吉單抗(REGN3500；Regeneron)的可變區移植至人類IgG1效應功能無效的恆定區以代替原始人類IgG4的抗體，參見US20140271658的SEQ ID NO: 274及SEQ ID NO: 282)中和IL-33的能力，並使用一組活體外分析進行評估，該等分析檢查可能導致不利及有利的藥物動力學(PK)的抗體的各種物理化學特性。因為7E8抗體歸因於與IL-33之基於電荷之相互作用而展現較高的非特異性評分，因此在活體外非特異性分析(AC-SINS、DNA及胰島素結合ELISA)之套件中的評估被併入至篩選分類中，以鑑別IL-33親和力最佳化候選物。

AC-SINS分析為用於偵測傾向於自我締合之抗體的高通量方法，且利用金奈米粒子之光學特性。簡言之，藉由塗佈於金奈米粒子上之抗人類Fc抗體捕獲抗體，且若抗體往往會與自身相互作用，則存在奈米粒子之集結，其導致吸光度波長出現紅移。此分析亦已描述於文獻中作為用於鑑別與溶解度、黏度及聚集相關之可開發性問題的潛在篩選工具。對於AC-SINS分析，20 nm金奈米粒子(Ted Pella, Inc.，目錄號15705)塗佈有80%山羊抗人類Fc (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，目錄號109-005-098)及20%非特異性山羊多株抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，目錄號005-000-003)之混合物，該混合物緩衝更換至20 mM乙酸鈉pH4.3，且稀釋至0.4 mg/mL。培養盤在室溫下培育1小時。接下來，金奈米粒子上之未佔據位用硫醇化聚乙二醇(2 kD)封閉。接著使用針筒過濾器將經塗佈/阻斷之奈米粒子濃縮10倍，且將10 µL添加至100 µL含0.05 mg/mL PBS pH 7.2之樣品(Tri-Fab-Fc或抗體)。將經塗佈/阻斷之奈米粒子與所關注之樣品一起在96孔聚丙烯盤中培育2小時，轉移至384孔聚苯乙烯盤中且用Tecan M1000以2 nm增量自450至650讀取吸光度。使用Microsoft Excel巨集鑑別最大吸光度，且使用二階多項式使資料平滑且擬合。自樣品之經光滑最大吸光度減去平均空白(單獨PBS緩衝液)之經光滑最大吸光度以測定AC-SINS評分。AC-SINS評分之等級如下：良好0至5，中度＞5且＜10，高＞10。

DNA及胰島素結合ELISAs使用Janus自動工作站液體搬運機器人(PerkinElmer)，採用以下改編來自Tiller等人的方法，量測抗體之低親和力基於電荷之相互作用，作為多反應性的量測。對於此等分析，將分別稀釋於PBS-CMF pH 7.2至10 µg/mL或5 µg/mL中之DNA (Sigma-Aldrich, D1626)或胰島素(Sigma-Aldrich, I9278-5mL)吸入384孔ELISA培養盤(Nunc Maxisorp)中且在4℃下培育隔夜。隨後將培養盤用水洗滌，在室溫下用50 μL多反應性ELISA緩衝液(含有0.05% Tween-20、1 mM EDTA之PBS)阻斷1小時且用水沖洗三次。一式四份地將連續稀釋之樣品添加至孔中且在室溫下培育1小時。培養盤用水中洗滌三次，且將稀釋至10 ng/mL的與辣根過氧化酶結合之山羊抗人類IgG (Jackson ImmunoResearch, 109-035-008)添加至培養盤中且在室溫下培育1小時。接著，培養盤用水洗滌三次且接著將TMB受質(Sigma-Aldrich, T-0440)添加至板。約7分鐘後藉由向各孔中添加0.18 M正磷酸來停止反應，且讀取在450 nm下之吸光度。DNA及胰島素結合評分計算為10 µg/mL樣品(Tri-Fab-Fc或抗體)之ELISA信號相對於含有緩衝液而非初代抗體之對照孔的信號的比率。多反應性評分之等級如下：良好0至5，中度＞5且＜10，高＞10。

自軟突變誘發方法分離多個親和力最佳化殖株且對排名靠前的scFv進行定序，揭示38個V _L及32個V _H獨特的命中物。排名靠前的scFv經重新格式化成IgG後，對人類IL-33中和的效力亦展現出明顯的增加，其使用NF-κB/AP-1-誘導型SEAP報導基因分析測定的，且相對於IL33-0232，顯示出4-10倍的改良(表15)。此等變異體之生物活性相對於臨床基準抗體IL33-0352亦為可比較的或稍微改良的。然而，如所預期，IL-33中和能力之增加與非特異性評分之顯著增加相關(圖13及表15)。自合理設計方法鑑別多個經改良殖株，自初代HTRF篩選鑑別176個scFv殖株且選自篩選鑑別的102個殖株以用於定序。排名靠前的scFv變異體經重新格式化成IgG後，對人類IL-33中和的效力亦呈現出明顯的增加，其使用NF-κB/AP-1-誘導型SEAP報導基因生物分析測定的，其中相對於IL33-0232，顯示出4-16倍的改良(表16)。此等變異體之生物活性相對於臨床基準抗體IL33-0352亦為可比較的或稍微改良的(表16)。與使用軟突變誘發噬菌體呈現衍生變異體之觀測結果類似，相對於IL33-0232，生物分析中IL-33中和之效力增加與非特異性評分之顯著增加相關(表16)。IL33-0721及IL33-0726在由軟突變誘發及合理設計方法篩選之殖株中呈現出效力及非特異性評分之最佳平衡(表16)。

進行動力學排除分析(KinExA)溶液親和力，以評估親和力最佳化之IL33-0726 IgG相對於親本IL33-0232 IgG及IL33-0352基準抗體與人類IL-33之結合。在含有0.1%疊氮化鈉及1.0 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)之PBS中製備樣品。使用固定抗原分析形式之親和力測定藉由將抗體以122 fM至1000 pM及244 fM至2000 pM 244 fM範圍內之兩倍稀釋系列滴定至固定濃度之生物素化人類IL 33中來進行。所使用之生物素化人類IL 33之固定活性結合濃度(ABC)為10 pM及100 pM。生物素化人類IL-33野生型(WT)在使用之前在室溫下用3 mM二硫蘇糖醇(DTT)還原2小時。使樣品在室溫下平衡至少72小時，隨後使其穿過流通槽，該流通槽含有經評估吸附至聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)珠粒(Sapidyne)的測試製品抗IL-33抗體。用0.5 µg/mL Alexa Fluor 647結合之鏈黴抗生物素蛋白(Jackson Immunoresearch)偵測用所評估之測試物品抗IL-33抗體捕獲的游離生物素化IL-33細胞介素。使用KinExA Pro軟體版本4.3.11 (Sapidyne)進行資料分析。使用『親和力標準』模型分析資料且測定IL-33細胞介素之K _D及活性濃度。當反應在重複注射之間變化時，使用『漂移校正』擬合選項。在獨立實驗中獲得兩個曲線，且使用『n-曲線分析』工具分析以獲得IL-33細胞介素之KD及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果顯示，二價IL33-0726 IgG親和力似乎低於KinExA之偵測界限，因此預計其相對於IL33-0232抗體具有高約14倍的親和力(＜236.88 fM相對於3.4 pM)及相對於IL33-0352基準抗體具有高約3倍的親和力(＜236.88 fM相對於659.99 fM，表17)。另外，經測定人類IL-33 WT KinExA對IL13433-1258 Tri-Fab Fc的親和力量測值為106.10 fM，其含有單價IL33-0726 Fab結合域，且因此與IL33-0232 IgG及IL33-0352基準抗體相比，親和力分別增加了約32倍及約6倍(表17)。亦經IL33-0726 Fab結合域工程改造之IL13433-1270 Tri-Fab Fc與IL33-0232 IgG相比具有約4倍的親和力增加，且與IL33-0352臨床基準抗體相似(表17)。表15.自軟突變誘發噬菌體方法分離之主導抗IL-33抗體變異體的IL-33中和之效力及非特異性評分。

抗體	AC-SINS Δ 最大吸光度( 平均值)	多反應性評分	相對於還原之人類IL-33 (R&D) 的IC ₅₀[nM]
DNA	胰島素	IC ₅₀(AVE)	SDM	n
IL33-0232	3	6	5	0.071	0.013	3
IL33-0352 (臨床基準)	8	13	14	0.018	0.005	2
IL33-0698	17	45	20	0.014	0.002	4
IL33-0701	17	45	15	0.013	0.002	4
IL33-0702	19	49	19	0.008	0.002	4
IL33-0704	16	30	28	0.015	0.006	2
IL33-0705	13	22	32	0.007	0.000	2
IL33-0706	7	32	32	0.018	0.005	2
IL33-0707	15	35	36	0.014	0.000	2
IL33-0710	19	32	22	0.013	0.000	2
IL33-0711	21	32	29	0.007	0.000	2
IL33-0712	19	35	22	0.010	0.000	2
IL33-0713	19	28	20	0.012	0.002	2
IL33-0714	20	42	31	0.009	0.002	2
IL33-0715	17	39	27	0.012	0.004	2

表16.自合理設計噬菌體方法分離之主導抗IL-33抗體變異體的IL-33中和之效力及非特異性評分。

抗體	AC-SINS Δ 最大吸光度( 平均值)	多反應性評分	相對於還原之人類IL-33 (R&D) 的IC ₅₀[nM]
DNA	胰島素	IC ₅₀(AVE)	SDM	n
IL33-0232	3	3	5	0.109	0.049	2
IL33-0352 (臨床基準)	7	10	16	0.011	0.003	2
IL33-0718	15	29	28	0.008	0.002	3
IL33-0719	11	20	14	0.020	0.006	3
IL33-0721	17	3	7	0.026	0.004	3
IL33-0722	14	15	16	0.015	0.003	3
IL33-0723	10	16	13	0.017	0.005	3
IL33-0724	17	16	23	0.015	0.002	3
IL33-0726	5	15	13	0.008	0	3
IL33-0727	15	22	15	0.017	0.002	3
IL33-0728	14	21	17	0.016	0.002	3
IL33-0737	15	38	44	0.007	0.002	2
IL33-0738	16	29	24	0.007	0.002	2
IL33-0739	17	29	27	0.010	0.000	2
IL33-0740	16	27	22	0.012	0.004	2
IL33-0741	16	33	33	0.016	0.010	2

表17.使用KinExA溶液親和力固定抗原分析形式，測定IgG變異體及攜帶IL33-0726結合域之Tri-Fab-Fc分子對人類IL-33的親和力。

樣品	參考常數	全局擬合KinExA K _D [fM]
IL33-0726 IgG	人類IL-33	＜ 236.88
IL33-0232 IgG	人類IL-33	3400
IL33-0352 IgG (臨床基準)	人類IL-33	659.99
IL13433-1258 Tri-Fab-Fc	人類IL-33	106.10
IL13433-1270 Tri-Fab-Fc	人類IL-33	753.31

TSLP結合域之衍生實例17 抗TSLP域之變異體的構架移植及產生抗TSLP抗體特澤佩魯單抗為具有人類構架(FW) IGVH3-33及IGLV3-21*02之IgG2/λ (3)。共晶體結構結果已揭露特澤佩魯單抗與TSLP之結合互補位(4)。除來自HCDR之結合位以外，HFW1之位置2處的甲硫胺酸(生殖系處的纈胺酸)及HFW3之位置94處的生殖系精胺酸亦促成TSLP結合。將VH CDR1 (SEQ ID NO: 82)、VH CDR2 (SEQ ID NO: 83)及VH CDR3 (SEQ ID NO: 84)移植至各種構架上，且與攜帶CDR、VL CDR1 (SEQ ID NO: 86)、VL CDR2 (SEQ ID NO: 87)及VL CDR3 (SEQ ID NO: 89)之各種輕鏈構架組合表現。含有相關CDR供體序列之人類受體構架的cDNA自Blue Heron Biotech合成。在框架中次選殖合成cDNA產物，且與人類IgG1恆定區在哺乳動物表現載體中融合，該恆定區具有重鏈的效應功能無效突變(EFN, Pfabat編號: L247A, L248A, G250A; EU編號L234A L235A及G237A) (SEQ ID NO: 6, 7, 8, 9)及輕鏈(SEQ ID NO: 95)的人類λ。

實例18 經抗TSLP構架(FW)工程改造之變異體之初代篩選所有變異體係使用此項技術中熟知之標準表現及純化技術作為IgG分子產生，且經由高通量八位元組解離速率篩選(圖14a)、AC-SIN (親和力捕獲自體相互作用奈米粒子光譜分析，量測mAb之自締合傾向)、DNA及胰島素多反應性(DNA及胰島素結合ELISA，以量測抗體非特異性多反應性)作為初代篩選方法進行評估。

OctetRed (ForteBio)之高通量解離速率篩選檢定經設計以評估與TSLP-0001抗體((SEQ ID NO: 484 (HC)及488 (LC))相比，變異體與醣基化TSLP (lfhTSLP-avi-v5-his6)之結合活性。所有的試劑都在黑色平底384孔盤(Fortebio，目錄號18-5080)中映射，且使用16個生物感測器模式來加快篩選過程。使用抗人類IgG動力學生物感測器(Fortebio)捕獲濃度為20 ug/ml之抗TSLP抗體180秒，隨後在PBS中觀測60秒，接著浸漬至5-10 ug/ml可溶性人類TSLP抗原中240秒以用於締合，且最後在PBS中解離400秒。檢驗感測器圖譜以確定抗原是否結合至抗體，且使用八位元組資料分析8.1軟體確定指定時間點之反應(R, nm)。計算締合指數及解離指數。締合指數=樣品(Rt ₂₄₀-Rt ₀)/TSLP-0001 (Rt ₂₄₀-Rt ₀)。解離指數=樣品(Rt ₆₄₀-Rt ₂₄₀)/TSLP-0001 (Rt ₆₄₀-Rt ₂₄₀)。當締合開始時(時間零)，Rt ₀為反應值。Rt ₂₄₀為在時間240秒時之反應值(當締合結束，且解離開始時)。Rt ₆₄₀為在時間640秒時之反應值(當解離結束時)。各組16個生物感測器中包括陽性對照TSLP-0001及陰性對照mab8.8。用於各測試樣品之TSLP-0001 (Rt ₂₄₀-Rt ₀)值來自一組相同的16個生物感測器。若締合指數＞0.8且解離指數＜1.2，則選擇變異體用於下一輪篩選。篩選結果展示於圖14b處。變異體亦藉由AC-SIN及DNA/胰島素多反應性分析篩選(7)。小於10之評分表示可接受之自體締合及多反應性。

DNA及胰島素評分分析之結合ELISA使用最初為偵測來自狼瘡患者之低親和力自體抗體而開發的低嚴格度方案。簡言之，將PBS中5 μg/ml之胰島素或10 μg/ml之單股或雙股DNA塗佈於384孔Nunc Maxisorp ELISA培養盤隔夜。孔經水洗滌3次，隨後在室溫下用ELISA緩衝液(PBS/0.05% Tween/1 mM EDTA)阻斷1小時。將25 ul於ELISA緩衝液中連續稀釋之mAb添加至培養盤中，且在室溫下培育1小時，且將孔用水洗滌3次，與HRP結合之山羊抗人類IgG 1:5000一起在ELISA緩衝液中在室溫下培育1小時。用水洗滌3次後，用BioFX TMB (BioFX Laboratories，目錄號TMBW-0100-01)顯色5分鐘，用0.1 M硫酸停止反應。

在Perkin-Elmer Janus液體搬運機器人上以384孔形式標準化AC-SINS分析。測試抗體用80%山羊抗人類Fc (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，目錄號109-005-098)與20%非特異性山羊多株抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.，目錄號005-000-003)之混合物塗佈的20 nm金奈米粒子(Ted Pella, Inc.，目錄號15705)進行捕獲。以2 nm增量讀取450-650 nm之吸光度，且使用Microsoft Excel巨集來識別最大吸光度，使資料平滑，且使用二階多項式擬合資料。自抗體樣品之經光滑最大吸光度減去平均空白(單獨PBS緩衝液)之經光滑最大吸光度以測定抗體AC-SINS評分。

將通過初代篩選標準之命中物用於競爭ELISA分析。進行競爭ELISA以評定人類化變異體是否可與TSLP-0001競爭TSLP結合。重組TSLP在4℃下在25 ul含1 μg/mL PBS塗佈於384孔Maxisorp培養盤(NUNC)隔夜。接著阻斷培養盤(具有3% BSA之PBS)且在標準ELISA方案下洗滌(具有0.02% tween20之PBS)。4倍連續稀釋變異體或陰性對照抗體mab8.8與恆定水平(69 pM)之生物素化TSLP-0001混合。隨後將25 µL此類混合物添加至經抗原塗佈之培養盤中且在室溫下培育1小時。在洗掉未結合物之後，藉由HRP結合之鏈黴抗生物素蛋白(Southern biotech，目錄號7100-05)偵測結合的生物素-TSLP-0001之量。用BioFX TMB (BioFX Laboratories，目錄號TMBW-0100-01)顯影顏色5分鐘，且用0.1 M硫酸停止反應。

四種習知二價IgG命中物顯示與TSLP-0001類似的IC ₅₀(表18)。在四個變異體之中，4個中的3個係在IGVH3-33 FW中，而TSLP-0104係在IGVH3-21*02 FW中。表 18 ： 藉由競爭 ELISA 之抗 TSLP 變異體之 IC ₅₀

抗體名稱	樣品標識	競爭ELISA IC ₅₀(nM)
TSLP-0001	TSLP-0001	0.599
TSLP-0010	IL413TSLP-0010	0.88
TSLP-0015	IL413TSLP-0015	0.53
TSLP-0100	IL413TSLP-0100	0.87
TSLP-0104	IL413TSLP-0104	0.88

實例19 FW工程改造之主導TSLP-0100之表徵 TSLP中和生物分析檢查由TSLP刺激之單核球誘導之趨化介素TARC釋放的抗體抑制。使用RosetteSep單核球套組(Stemcell，#15068)自人類全血中富集初代人類單核球，且以0.5x10 ⁶/mL的速度在150 uL/孔的培養基中接種於96孔平底培養盤(Falcon，#353072)。添加經醣基化之長形式人類TSLP及mAb的稀釋液以使總體積達到200 uL。培養盤在37℃下培育24小時。收集上清液且使用人類TARC MSD 96孔VPLEX (V-PLEX人類TARC套組(MESO SCALE DIAGNOSTICS LLC, K151NTD-2))分析TARC濃度。表19之資料展示IL134TSLP-0100與親本TSLP-0001維持類似TSLP中和活性(表19)，且選擇作為構架工程改造之主導且用作親和力改良工程改造之模板。

差示掃描熱量測定(DSC, 5, 6)用於評定IL13TSLP-0100之熱穩定性。將處於0.3 mg/mL之樣品藉由自動取樣器(Malvern Instruments公司)分配至MicroCal VP-毛細管DSC之樣品盤中，在10℃下平衡5分鐘，且接著以每小時100℃之速率掃描直至110℃。選擇了一個16秒的過濾週期。將原始資料經基線校正且將蛋白質濃度標準化。Origin軟體7.0 (OriginLab Corporation, Northampton, MA)係用於利用適當轉譯數目將資料擬合至MN2-狀態模型。資料展示於表19中。與TSLP-0001抗體相比IL4123TSLP-0100展示出改良之熱穩定性。

進行低pH保持實驗以評估抗體在pH 3.4下之穩定性。將濃度為1.5 mg/mL之50 ug抗體酸化至pH 3.4 (使用5 µL 0.04 M甘胺酸，pH 2.8)且在室溫下培育5小時。高分子量物種百分比(%HMMS)在中和至pH 7.2之後藉由分析型SEC進行分析。相同的抗體在PBS pH7.2下作為對照。計算Delta %HMMS ((Δ%HMMS(樣品-對照))來評估穩定性。資料展示於表19中。與TSLP-0001抗體相比IL4123TSLP-0100改良了低pH保持穩定性。

進行iCE (成像毛細管電泳)以評估在高電壓下之電荷異質性及在吸收度280 nm下之偵測。載體兩性電解質產生pH梯度且蛋白質遷移，直至其淨電荷為零。分析電泳圖以確定酸性、主要及鹼性物種之pI值及峰面積。使用具有PrinCE自動取樣器之Protein Simple iCE3儀器分析樣品。將蛋白質於水中稀釋至2 mg/mL。樣品稀釋劑含有0.01 mg/mL pI標記物4.65、0.01 mg/mL pI標記物9.5、4.0% Pharmalyte (pH 3-10)、0.25%甲基纖維素及2.0 M脲。樣品含有15 μL 2 mg/mL之蛋白質及85 μL樣品稀釋劑。將樣品在1500伏下聚焦1分鐘且接著在3000伏下聚焦6分鐘。資料展示於表19中。與TSLP-0001抗體相比IL4123TSLP-0100降低了酸性物質。

TSLP-0100包含TSLP-0001親本可變重鏈，但在HFW3及親本輕鏈具有生殖系化T70S及N79Y。TSLP-0100與親本TSLP-0001之間的序列比較表明T70S及N79Y胺基酸變化造成生物物理學特性改善。多反應性及AC-SINS評分保持與親本TSLP-0001抗體類似(表19)。表 19 ： TSLP-0100 之表徵

抗體名稱	VH突變	VL突變	a-TSLP生物分析(IC ₅₀, pM)	Tm Fab(℃)	Tm1(℃)	低pH3.4保持Δ%HMMS	T0 iCE (酸性物質%)	AC-SINs	DNA評分	胰島素評分
TSLP-0001	VH-0001	VL-0001	19.2 ± 1.55	66.8	66.7	7.3	41.2	0	2	2
TSLP-0100	T70S, N79Y, SEQ	VL-0001	24.6 ± 3.97	69.9	69.1	0.2	27.1	1	3	2

藉由 Epivax及 IEDB分析免疫原性以用於電腦模擬預測潛在T細胞抗原決定基。胺基酸序列使用ISPRI軟體(ISPRI v 1.8.0, EpiVax Inc., Providence, RI; 26) EpiMatrix分析進行分析，其提供各9-聚體胺基酸片段與8種不同HLA類型結合之可能性分級。命中物定義為具有前5%之Z評分及前1%之強命中物的彼等。將其鑑別為4種或更多種對偶基因或1種強命中物視為所預測的T細胞抗原決定基。第二種方法使用IEDB (IEDB MHC-II結合預測)中之MHC-II結合共識法(27)分析序列，其提供9-聚體及15-聚體與8種HLA類型結合之可能性分級。藉由此等方法確定之各抗原決定基歸類為生殖系或非生殖系抗原決定基，隨後基於其在抗體內之位置進行進一步分類(CDR或非CDR)。小於-50之評分為可接受的。電腦模擬免疫原性預測分析展示2種潛在非生殖系T細胞抗原決定基經由N79Y生殖系消除，且改良了整體免疫原性評分(表20)。表 20 ： TSLP-0001 及 TSLP-0100 之免疫原性分析

抗體名稱	電腦模擬免疫原性評分(整體)	經預測T細胞抗原決定基(VH)之9-聚體	AA位置(Pfabat)	SEQ ID NO: 91中之位置編號
TSLP-0001	-55.61	LNLQMNSLR - NLQMNSLRA - VYYCARAPQ	H78-H86 H79-H87 H89-H97	79-87 80-88 93-101
TSLP-0100	-70.83	- VYYCARAPQ -	H89-H97	93-101

註釋：AA：胺基酸

實例20 改良抗TSLP活性之工程改造策略實施綜合的工程改造策略，包括基於共晶體結構之合理突變誘發及噬菌體呈現(scFv庫)。經FW工程改造之TSLP 0100用作模板。計算模型化用於鑑定預測增加抗體對TSLP之親和力或增加抗體與TSLP域之間的新相互作用的突變，同時耐受而不損失穩定性及溶解度(13)。此等計算中所用之方法使用來自蛋白質資料庫之x射線晶體結構(wwww.rcsb.org)，PDB ID: 5J13，為TSLP與抗TSLP抗體之複合物(TSLP-0001)。

經預測穩定性及親和力藉由兩種應用，Discovery Studio及Fold X確定(14，15)。對於Discovery Studio計算，初始PDB格式化結構藉由應用Discovery Studio 4.5 (Accelrys Inc.)之「準備蛋白質」方案而轉化成.dsv格式化結構。藉由使用B-C-A鏈 dsv格式化結構自Discovery Studio 4.5應用「計算突變能量(結合)」方案計算突變後結合親和力之變化。探索所有6個CDR中之所有點突變體。除親和力以外，使用B-C鏈.dsv檔案計算突變後Fab之穩定性變化。此處吾人應用自Discovery Studio 4.5「計算突變能量(穩定性)」方案。自此預測集合，吾人鑑別出可潛在地增加親和力(預測ddG親和力＜0 kcal/mol)或在重新封裝複合物結構中引入新相互作用，同時維持穩定性(預測ddG穩定性＜1.0 kcal/mol)的多個目標位及突變。經選擇用於進一步分析之部位及突變之清單展示於表21中。

表21為引入至抗TSLP域的位置及突變之清單，用於合理突變誘發及基於合理的噬菌體呈現庫。表 21 ： 引入至抗 TSLP 親和力改良之位置及突變

CDR	Kabat 編號	WT	合理突變誘發之突變	合理噬菌體呈現庫之突變	作為單點突變之改良
CDRH1	H28	T	W Y F L I S H K R	W Y F L I S H K R	否
H30	R	K H Y	K H Y	否
H31	T	H Q N V S	H Q N V S	否
H32	Y	F W	F W	否
CDRH2	H52A	Y	Q W H	Q W H	否
CDRH3	H96	P	L N Q F Y D E H R K	L N Q F Y D E H R K	否
H99	E	Q Y	Q Y	是，E99Y
H100	L	D E S	D E S	否
H100A	V	D E S	D E S	否
H100B	H	F M W Y	F M W Y	否
H100D	A	H R K F Y	H R K F Y	否
H101	D	W	W S Q	否
H102	I	Y W V L	Y W V L	否

CDRL1	L30	S	D E	D E	否
L32	S	D E	D E	否
CDRL2	L50	D	Y F R Q E K W S T	Y F R Q E K W S T A G H I L P V	否
L53	D	Q N S T R K E	Q N S T R K E A F I G H P Q Y W	否
L55	P	W Y H L I K R N Q	W Y H L I K R N Q A D E F G M S T V	否
L56	S	W R L I H V K Y	W R L I H V K Y A E F G N P Q R T	是，56R或56W
CDRL3	L93	S	D E K R	D E	否

合理設計突變誘發之突變作為單一突變選殖至哺乳動物表現載體中，且使用此項技術中熟知之標準表現及純化技術產生為IgG分子。

靶向重鏈及輕鏈CDR之合理設計庫製備為單一及組合突變。靶向CDRH1、CDRH2或CDRH3的三個基於VH之軟隨機化庫(4，5)經構築以及與野生型輕鏈偶合。拯救突變體噬菌體庫，且進行兩輪溶液相選擇方法(稱為Hammer-hug) (4，5)。簡言之，在具有或不具有熱量攻擊(70℃)之情況下進行噬菌體選擇，其開始於第1輪之Hammer選擇(2 pM生物素化之hTSLP-avi-v5-his10)，隨後侵襲性解離速率競爭隔夜(2 mM非生物素化之TSLP-avi-v5-his10)及第2輪之Hug選擇(1 pM生物素化之長形式人類TSLP-avi-v5-his10，在不存在解離速率競爭的情況下)，分為兩個分支。所有輸出均表現為粗製周質提取物中之scFv，且在競爭HTRF分析中篩選，其評定對TSLP-0100 scFv之效能(4)。

將源於合理設計及軟隨機分組噬菌體呈現庫之變異體選殖至哺乳動物表現載體中，且使用此項技術中熟知之標準表現及純化技術產生為IgG分子。

實例21 工程改造抗TSLP結合域以降低黏度對TSLP-0001與TSLP-0260之親和力工程改造引入HC E99Y及LC S93E中之CDR突變以及生殖系HC突變T70S及N79Y。此親和力最佳化殖株儘管展示高於親本TSLP-0001的黏度增加，因此吾人設法識別突變以降低黏度。先前已發現，CDR中之過量負電荷可為抗體黏度之驅動因素，但試圖顯著降低黏度且保持親和力尚未始終成功(16, 17, 19, 20, 21, 22, 23)。試圖降低黏度，吾人鑑別出耐受打破IL4IL13TSLP-0260上之負電荷斑塊的淨正電荷突變。此等電荷斑塊係藉由使用Poisson Boltzmann Calculator Delphi (其為Discovery Studio 4.5的一部分)計算靜電表面電位來鑑別。在圖15中，黑色的負電荷斑塊經標記且分別覆蓋CDR L1-L2、L3-H2-H3及H2之部分。使用如針對親和力最佳化所描述之Discovery Studio及Fold X，吾等預測在具有淨正電荷變化但在結構中耐受之電荷斑塊中或周圍的突變(ddG親和力＜1 kcal/mol且ddg穩定性＜1 kcal/mol)。自此組發現具有可容許突變成Arg或Lys之中性或負殘基的部位及可容許突變成中性或正殘基之負電位。選擇用於測試之突變展示於表22中。另外，對HC進行了設計，將E95S突變與其他HC突變體結合起來，並將一組置信度較高的LC突變結合在一起在同一簇中或在兩個簇中，包括D52S/S94K、S52K/S94K、D52H/S94K、D50T/S94K、S30K/S94K、S30K/D53S、S30K/S52K、S30K/D51H、S30K/D50T、S52K/D53S、D51H/D53Q、D51H/S52K、D50K/D53Q、D50T/S52K及D50K/D51L。表 22 ： 經選擇以潛在地降低黏度之電荷變化突變之清單。

Pfabat 位	WT (VH SEQ ID 16, VL SEQ ID 18)	突變體
L29	G	K	R
L30	S	K	R
L32	S	K	R
L50	D	K	R	S	T
L51	D	H	K	L	R
L52	S	K	R
L53	D	K	Q	R	S
L93	E	K	R	S
L94	S	K	R
L95	S	K	R
L95a	D	H	K	Q	R
H53	D	G	K	P	R	T
H61	D	K	Q	R	T
H100	L	K	R
H100a	V	K	R
H100c	E	Q
H100d	A	K	R

將源於此等設計之變異體選殖至哺乳動物表現載體中且使用此項技術中熟知之標準表現及純化技術產生為IgG分子。

實例22 變異體改良人類初代單核球中之抗TSLP生物活性抗TSLP中和活性經由人類初代PBMC中之TARC生物分析量測。展示改良之抗TSLP生物活性的抗體變異體列於表23。活性改良以相對親本抗體TSLP-0001之變化倍數說明。驚人地，除了TSLP-0520及0560之外，所有變異體均具有在VH-CDR3下之E99Y (Pfabat編號)突變展示改良之生物活性。除E99Y突變外，具有與親本TSLP-0001相同之構架及可變區的TSLP-0821變異體與親本TSLP-0001相比展示出3倍改良之抗TSLP生物活性。攜有與FW最佳化TSLP-0100相同之構架及可變區(除E99Y突變外)的TSLP-0156變異體(SEQ ID NO: 97 (HC)及98 (LC))，展現相比於親本TSLP-0001 3.9倍改良之抗TSLP生物活性。自合理突變誘發方法及噬菌體呈現庫篩選出此E99Y突變。當此E99Y突變工程改造至TSLP-0104重鏈(SEQ ID NO: 222(HC)，其具有IGVH3-21*02 FW，且與各種輕鏈配對時亦觀測到甚至兩至七倍的抗TSLP活性(表23，TSLP-0820、0825、2000, 2002, 2004)。SEQ ID NO在表83中。基於共晶體結構之分子模型化說明，此酪胺酸在位置H99處可潛在地與TSLP上之Asn(N)71及Arg(R)149形成新氫鍵。此亦將增加整體包裝(圖16)。需要此2-3倍之抗TSLP生物活性改良以便維持經預測有效給藥之TSLP目標覆蓋度水平。

實例23 抗TSLP黏度變異體篩選具有改良之抗TSLP生物活性之一些變異體的黏度最初在最高可能抗體濃度下經由基於單點DLS (動態光散射)之珠粒方法進行篩選(18，表23)。使用膜卡匣裝置10K MWCO (Thermo Scientific)，將PBS中之經純化之抗體針對20 mM組胺酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL EDTA (pH 6.0)充分透析。使用Viva spin離心式濃縮器10K MWCO (GE Healthcare)濃縮抗體。隨著蛋白質體積減小且蛋白質濃度增加，自濃縮器滲餘物移除樣品等分試樣(12 μL)。將300 nm珠粒(Nanosphere，Thermo Scientific)添加至蛋白質樣品及空白緩衝液(buffer blank)。將珠粒以1:10稀釋於20 mM組胺酸、85 mg/mL蔗糖、0.05 mg/mL EDTA (pH 6.0)中且將0.75 μL經稀釋之珠粒摻入蛋白質樣品中。藉由平緩渦流混合蛋白質/珠粒及緩衝液/珠粒樣品。將8 μL樣品轉移至1536孔盤(SensoPlate，玻璃底，Greiner Bio-One)以藉由動態光散射量測(DLS)進行分析。用光學透明膠帶密封該培養盤且以2000 RPM離心2分鐘以移除氣泡。

使用DynaPro盤式讀取器(Wyatt Technology，Santa Barbara，Calif.)進行DLS量測。在25℃下培育樣品且在15次連續25秒獲取情況下進行量測。珠粒之半徑經平均化以獲取具有可接受衰減曲線之資料。基於斯托克斯-愛因斯坦方程式(Stokes-Einstein equation)計算黏度。樣品黏度計算為所量測之表觀半徑除以標稱珠粒半徑乘以0.893 cP，亦即在25℃下水之黏度。

攜帶IGVH3-33 FW的親本TSLP-0001、TSLP-0156、TSLP-0260及TSLP-0708之間的黏度結果比較表明，減少表面的負電荷斑塊可以提高抗體的黏度。在輕鏈突變上經設計用於破壞負電荷斑塊的9種變異體展示提高之黏度但維持了生物活性，且經選擇用於進一步劑量反應黏度量測。

當與具有IGVH3-21*02 FW之TSLP-0820重鏈配對時，分別攜帶D95aK或S52K/S94K或S93K突變之抗TSLP輕鏈的TSLP-2000、TSLP-2002及TSLP-2004亦展現提高的黏度及生物活性。表 23 ： 具有改良之抗 TSLP 生物活性及黏度量測之變異體 (Pfabat 編號 ) 。

抗體名稱	樣品標識	VH突變	VL突變	aTSLP TARC生物分析(相對TSLP-0001之變化倍數)	最高濃度(mg/mL)	最高濃度下的厘泊(cP)
TSLP-0001	TSLP-0001	VH-0001	VL-0001	1.0	152.5	43.2
TSLP-0100	IL413TSLP-0100	T70S, N79Y	VL-0001	0.9	ND	ND
TSLP-0874	IL413TSLP-0874	T70S, N79Y, E99Y	D51H S94K	2.1	ND	ND
TSLP-0520	IL413TSLP-0520	T70S, N79Y, L100E, I102L	S93E	2.1	ND	ND
TSLP-0698	IL413TSLP-0698	T70S, N79Y, F29Y, Y52aH, K57E, A60G, D61E, V63A, K64E, P96E, E99Y, A100dS, I102L	S93E	2.1	ND	ND
TSLP-0560	IL413TSLP-0560	T70S, N79Y, D61E K64E	S93E	2.2	ND	ND
TSLP-0846	IL413TSLP-0846	T70S, N79Y, E99Y	D53K	2.3	ND	ND
TSLP-0862	IL413TSLP-0862	T70S, N79Y, E99Y	S52K D53S	2.3	ND	ND
TSLP-0825	IL413TSLP-0825	Q1E, V11L, R16G, T70S, S74A, T77S, N79Y	S93E	2.3	145.3	167.7
TSLP-0820	IL413TSLP-0820	Q1E, V11L, R16G, T70S, S74A, T77S, N79Y	VL-0001	2.5	148.3	105.6
TSLP-0929	IL413TSLP-0929	T70S, N79Y, E99Y, L100K	VL-0001	2.7	ND	ND
TSLP-0829	IL413TSLP-0829	T70S, N79Y, E99Y	S30K	2.8	ND	ND
TSLP-0867	IL413TSLP-0867	T70S, N79Y, E99Y	S30K S93K	2.8	ND	ND
TSLP-0707	IL413TSLP-0707	T70S, N79Y, A59G D61E E99Y	S93E	3.0	ND	ND
TSLP-0821	IL413TSLP-0821	E99Y	VL-0001	3.0	148.2	91.1
TSLP-0824	IL413TSLP-0824	E99Y	S93E	3.0	ND	ND
TSLP-0849	IL413TSLP-0849	T70S, N79Y, E99Y	S94K	3.1	ND	ND
TSLP-0260	IL413TSLP-0260	T70S, N79Y, E99Y	S93E	3.4	144.6	153.0
TSLP-0827	IL413TSLP-0827	T70S, N79Y, E99Y	G29K	3.7	ND	ND
TSLP-0156	IL413TSLP-0156	T70S, N79Y, E99Y	VL-0001	3.9	159.0	107.1
TSLP-0708	IL413TSLP-0708	T70S, N79Y, D61E K64E E99Y	S93E	3.9	146.2	203.5
TSLP-0913	IL413TSLP-0913	T70S, N79Y, E99Y	S30K S52K S93E	4.0	ND	ND
TSLP-0928	IL413TSLP-0928	T70S, N79Y, E99Y, D61K	VL-0001	4.0	ND	ND
TSLP-0847	IL413TSLP-0847	T70S, N79Y, E99Y	S93K	4.2	ND	ND
TSLP-0930	IL413TSLP-0930	T70S, N79Y, E99Y, L100R	VL-0001	4.2	ND	ND
TSLP-0258	IL413TSLP-0258	T70S, N79Y, E99Y	S56R	4.3	ND	ND
TSLP-0261	IL413TSLP-0261	T70S, N79Y, E99Y	S56R, S93E	4.3	ND	ND
TSLP-0841	IL413TSLP-0841	T70S, N79Y, E99Y	S52K	4.8	127.3 (溶解度極限)	22.1
TSLP-0865	IL413TSLP-0865	T70S, N79Y, E99Y	S30K S52K	5.0	163.1	75.5
TSLP-0872	IL413TSLP-0872	T70S, N79Y, E99Y	D53S S93K	5.0	160.7	151.6
TSLP-0875	IL413TSLP-0875	T70S, N79Y, E99Y	S52K S94K	5.0	162.1	64.3
TSLP-0876	IL413TSLP-0876	T70S, N79Y, E99Y	D53S S94K	5.0	ND	ND
TSLP-2002	IL413TSLP-2002	Q1E, V11L, R16G, T70S, S74A, T77S, N79Y, E99Y	S52K S94K	5.1	150.0	34.4
TSLP-0259	IL413TSLP-0259	T70S, N79Y, E99Y	S56W	5.2	ND	ND
TSLP-0855	IL413TSLP-0855	T70S, N79Y, E99Y	D95aK	5.3	158.8	47.0
TSLP-0927	IL413TSLP-0927	T70S, N79Y, E99Y,D61R	VL-0001	5.3	ND	ND
TSLP-0851	IL413TSLP-0851	T70S, N79Y, E99Y	S95K	6.3	ND	ND
TSLP-0871	IL413TSLP-0871	T70S, N79Y, E99Y	S52K S93K	6.3	161.8	60.8
TSLP-0891	IL413TSLP-0891	T70S, N79Y, E99Y	S52K S93E	6.3	ND	ND
TSLP-0903	IL413TSLP-0903	T70S, N79Y, E99Y	S93E D95aK	6.3	157.2	74.1
TSLP-0904	IL413TSLP-0904	T70S, N79Y, E99Y	S93E D95aR	6.3	161.6	90.4
TSLP-0918	IL413TSLP-0918	T70S, N79Y, E99Y	S52K S93E S94K	6.3	ND	ND
TSLP-0926	IL413TSLP-0926	T70S, N79Y, E99Y, D61Q	VL-0001	6.3	ND	ND
TSLP-2004	IL413TSLP-2004	Q1E, V11L, R16G, T70S, S74A, T77S, N79Y, E99Y	S93K	6.4	150.0	46.3
TSLP-2000	IL413TSLP-2000	Q1E, V11L, R16G, T70S, S74A, T77S, N79Y, E99Y	D95aK	7.2	150.0	36.3
TSLP-0848	IL413TSLP-0848	T70S, N79Y, E99Y	S93R	7.3	ND	ND
TSLP-0922	IL413TSLP-0922	T70S, N79Y, E99Y, D53T	VL-0001	7.3	ND	ND
TSLP-0925	IL413TSLP-0925	T70S, N79Y, E99Y, D61T	VL-0001	8.3	149.7	91.3
TSLP-0868	IL413TSLP-0868	T70S, N79Y, E99Y	S30K S94K	11.0	ND	ND

註釋：VH-0001：來自TSLP-0001之可變重鏈。VL-0001：來自TSLP-0001之可變λ鏈。

實例24 對抗TSLP抗體活性具有影響之位置及組合在篩選過程期間經由解離速率篩選、競爭ELISA及TARC生物分析鑑別多種位置及組合對抗TSLP活性具有負面影響。相比於親本TSLP-0001，抗體變異體展示快速解離速率、在競爭ELISA中之高IC ₅₀，且在TARC生物分析中不太有效。變異體列於表24中。抗hTSLP生物活性呈現為相對TSLP-0001之變化倍數：變異體之生物活性/TSLP-0001之生物活性。此處，50%的TSLP-0001生物活性(0.5)設定為截止值。當輕鏈陽性55處之脯胺酸(P55，Pfabat編號)經W、Y、H、L、I、K、R、N、Q取代且與W57G/G78V突變組合，且與TSLP-0001重鏈或構架最佳化重鏈配對時，觀測到抗TSLP中和活性顯著減少。以單一或組合形式將位置30 (R30)處之精胺酸取代成離胺酸展示顯著生物活性降低。在位置50 (D50)處發現輕鏈天冬胺酸之觀測結果相同。重鏈上之W52T及Y52a突變僅展示29%的TSLP-0001抗TSLP生物活性。表 24 ： 具有降低之抗 TSLP 活性的變異體

抗體名稱	樣品標識	VH突變	VL突變	抗hTSLP TARC生物活性(相對TSLP-0001之變化倍數)
TSLP-0001	TSLP-0001	VH-0001	VL-0001	1.00
TSLP-0100	IL413TSLP-0100	T70S, N79Y	VL-0001	0.90
TSLP-0218	IL413TSLP-0218	VH-0001	W57G, G78V, P55W	0.10
TSLP-0219	IL413TSLP-0219	VH-0001	W57G, G78V, P55Y	0.10
TSLP-0220	IL413TSLP-0220	VH-0001	W57G, G78V, P55H	0.10
TSLP-0221	IL413TSLP-0221	VH-0001	W57G, G78V, P55L	0.06
TSLP-0222	IL413TSLP-0222	VH-0001	W57G, G78V, P55I	0.11
TSLP-0223	IL413TSLP-0223	VH-0001	W57G, G78V, P55K	0.13
TSLP-0224	IL413TSLP-0224	VH-0001	W57G, G78V, P55R	0.10
TSLP-0225	IL413TSLP-0225	VH-0001	W57G, G78V, P55N	0.23
TSLP-0226	IL413TSLP-0226	VH-0001	W57G, G78V, P55Q	0.18
TSLP-0210	IL413TSLP-0210	T70S, N79Y	W57G, G78V, P55N	0.35
TSLP-0211	IL413TSLP-0211	T70S, N79Y	W57G, G78V, P55Q	0.42
TSLP-0214	IL413TSLP-0214	T70S, N79Y	S32D	0.10
TSLP-0192	IL413TSLP-0192	T70S, N79Y	D53T	0.50
TSLP-0552	IL413TSLP-0552	T70S, N79Y, R30K	S93E	0.31
TSLP-0538	IL413TSLP-0538	T70S, N79Y, T28I, R30G	S93E	0.42
TSLP-0542	IL413TSLP-0542	T70S, N79Y,T28S, R30T	S93E	0.09
TSLP-0557	IL413TSLP-0557	T70S, N79Y, T28S, R30G	S93E	0.32
TSLP-0536	IL413TSLP-0536	T70S, N79Y, T28S, F29Y, R30K	S93E	0.20
TSLP-0565	IL413TSLP-0565	T70S, N79Y, W52T, Y52aF	S93E	0.29
TSLP-0859	IL413TSLP-0859	T70S, N79Y, E99Y	D50K D53Q	0.1
TSLP-0836	IL413TSLP-0836	T70S, N79Y, E99Y	D50K	0.2
TSLP-0835	IL413TSLP-0835	T70S, N79Y, E99Y	D50R	0.3
TSLP-0857	IL413TSLP-0857	T70S, N79Y, E99Y	D50K D51L	0.4

註釋：VH-0001：TSLP-0001可變重鏈。VL-0001：TSLP-0001可變λ鏈。

實例25 人類初代單核球中之主導變異體之抗TSLP生物活性測定 TSLP-0156、TSLP-0260、TSLP-0855、TSLP-0871及TSLP-0875之可變區中的變化列於表25中。抗TSLP生物活性係藉由TARC生物分析在人類初代PBMC中量測。相對於親本TSLP-0001，所有變異體展示極強力單一pM (IC ₅₀) TSLP中和活性及4倍改良。表 25 ：抗 TSLP 變異體之 TSLP 中和活性 (Pfabat 編號 )

抗體名稱	樣品標識	VH 突變	VL 突變	TARC 生物分析 (IC ₅₀, pM)
TSLP-0001	TSLP-0001	VH-0001	VL-0001	19.1 ± 1.42
TSLP-0156	IL413TSLP-0156	T70S, N79Y, E99Y	VL-0001	4.25 ± 0.59
TSLP-0260	IL413TSLP-0260	T70S, N79Y, E99Y	S93E	6.65 ± 0.30
TSLP-0855	IL413TSLP-0855	T70S, N79Y, E99Y	D95aK	4.12 ± 0.66
TSLP-0871	IL413TSLP-0871	T70S, N79Y, E99Y	S52K S93K	5.69 ± 0.89
TSLP-0875	IL413TSLP-0875	T70S, N79Y, E99Y	S52K S94K	5.56 ± 0.95

實例26 所選擇之抗TSLP變異體之生物物理特性及非特異性評分之表徵抗體變異體TSLP-0156、TSLP-0260、TSLP-0855、TSLP-0871、TSLP-0875、TSLP-2000、TSLP-2002及TSLP-2004變異體之生物物理特性經由熱穩定性、低pH保持穩定性、非特異性、電荷異質性分析及黏度進一步表徵。資料展示於表26及表23中。所有五種抗體變異體均呈現與親本TSLP-0001相當或較佳熱穩定性(亦在表26中)。此等變異體展示比親本抗體TSLP-0001較佳的低pH保持穩定性及更低的酸性物質異質性水平。除了TSLP-0855以外，此等變異體亦顯示非特異性之可接受水平，顯示高水平之自體締合傾向。

經由基於珠粒之DLS方法在劑量反應下量測黏度。移除S93E突變(TSLP-0156)，其干擾表面負電荷斑塊，展示出改良之黏度。設計成取代帶正電荷胺基酸以減小負電荷斑塊之三種變異體TSLP-0855、TSLP-0871及TSLP-0875恢復黏度且顯示與TSLP-0001相當的黏度(表26及圖17)。表 26 ： 非特異性評分及生物物理特性的表徵僅參考最低的三列(TSLP-2000、TSLP-2002、TSLP-2004)，#表示次佳的，*表示可接受，及***表示有利。

抗體名稱	樣品標識	AC-SINs	DNA評分	胰島素評分	Tm1(℃)	低pH3.4保持Δ%HMMS	T0 iCE酸性%	黏度(在20cP時的mg/mL)
TSLP-0001	TSLP-0001	0	2	2	66.7± 0.10	7.3	41.2	135
TSLP-0156	IL413TSLP-0156	7	4	3	67.46± 0.10	-0.2	ND	110
TSLP-0260	IL413TSLP-0260	4	5	5	67.47 ± 0.13	0.1	28.3	90
TSLP-0855	IL413TSLP-0855	17	5	3	70.64 ± 0.00	0.17	18.5	123
TSLP-0871	IL413TSLP-0871	8	3	3	66.40 ± 0.08	0.13	21.7	126
TSLP-0875	IL413TSLP-0875	8	3	3	68.53 ± 0.00	0.07	16.7	122
TSLP-2000	TSLP-2000	7*	7*	10#	70.01 ± 0.00	-0.10	21.8
TSLP-2002	TSLP-2002	6*	7*	10#	67.74 ± 0.00	-0.01	32.4
TSLP-2004	TSLP-2004	5***	5***	7*	66.58 ± 0.00	-0.03	23.5

抗p40 FAB結合域之衍生及表徵實例27 抗IL12/p40結合域p40-0003抗體之衍生 IL-12p40 (或亦稱為p40)為由p40及p35次單元構成的雜二聚細胞介素IL-12及由p40及p19次單元構成之IL-23的一個共用次單元。用於產生抗p40結合域的方法係衍生出人類抗p40抗體C230 (烏司奴單抗, Stelara®) VH及VL，該抗體自Giles-Komar等人的美國專利號6902734 (Centocor Inc.,2005年6月7號)獲得。C230 V _L在專有表現載體內融合至人類κ恆定區(SEQ ID NO: 16)且產生p40-0003 LC。C230 V _H在專用表現載體內與人類IgG1恆定區(SEQ ID NO: 6、7、8、9)融合，其中CH1中之突變根除效應功能(Pfabat編號：L247A、L248A、G250A；EU編號：Leu234Ala、Leu235Ala及Gly237Ala，SEQ ID: 6)，以產生p40-0003 HC。Expi293F™ HEK細胞經編碼p40-0003 LC及HC之DNA暫時轉染且藉由MabSelect™ SuRe™管柱純化以產生抗p40抗體(p40-0003)。

實例28 使用表面電漿子共振動力學評估抗p40 p40-0003抗體結合人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23 進行表面電漿子共振(SPR)以測定抗體p40-0003對含有p40次單元之人類及食蟹獼猴IL-12及人類及食蟹獼猴IL-23的親和力常數。針對此等分析，在BIAcore™ T200儀器(GE Healthcare)上以10 Hz之收集速率在37℃下進行動力學分析。根據製造商方案，將抗人類IgG抗體(抗人類Fc，目錄號109-005-098，Jackson ImmunoResearch)與羧甲基化聚葡萄糖塗佈的感測器晶片(CM5) (GE Healthcare)的所有四個流通槽進行胺偶合。隨後，p40-0003 mAb固定至約100個反應單位(RU)，且注射各種濃度之人類IL-12或食蟹獼猴IL-12或人類IL-23或食蟹獼猴IL-23。p40-0003抗體針對人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23之量測親和力常數呈現於下表27中。抗p40 p40-0003抗體以低pM親和力結合至人類IL-12及IL-23(表27)。P40-0003對人類IL-12及人類IL-23之親和力亦比食蟹獼猴IL-12及IL-23大約2至3倍。表 27. 使用表面電漿子共振獲得之親和力常數

p40 mAb P40-0003	人類 IL-12	食蟹獼猴 IL-12	人類 IL-23	食蟹獼猴 IL-23
親和力(pM)	156 ± 7.07	368 ± 12.0	159.5 ± 0.71	316.5 ± 40.3

實例 29 使用不同分子形式及雜二聚突變進行工程改造 Tri-Fab-Fc 變異體以最小化副產物若干多官能形式設計經工程改造以鑑別可同時結合及中和三個不同目標同時賦予標準單株抗體之可開發性參數的分子。用於工程改造三官能變異體之設計考慮因素係為了解決多個挑戰：除了同時結合及阻斷3個目標以外，分子亦需要有效配對五種不同蛋白鏈、伴隨極少非所需副產物之高蛋白質表現量、高暫時及穩定表現滴定、有效細胞株生成及蛋白質純化過程，以及與標準單株抗體一致之藥物動力學特性。

所有分子均以基於人類IgG1之相同通式結構構建。人類IgG1片段可結晶區域(Fc區) (通常均二聚體)經工程改造以優先藉由Fc界面處之不對稱置放之突變形成Fc雜二聚體(參見下文)。不對稱Fc區中之一者經由人類IgG1鉸鏈連接至單一Fab域且稱為單Fab臂(SFab)。另一不對稱Fc經由人類IgG1鉸鏈連接至內Fab域，該內Fab域反過來連接至外Fab域；此稱為雙Fab臂(DFab；圖18)。DFab臂設計不同，但外部Fab (稱為Fab1位置)始終藉由單一短可撓連接子(SEQ ID NO: 104)連接至內部Fab (Fab2位置)。單Fab臂中之Fab稱為Fab3位置。

圖18指示Fab1、Fab2及Fab3之位置，且示出雙Fab (DFab)及單Fab (SFab)臂之位置。可變重鏈(V _H)及可變輕鏈(V _L)區以及重鏈之第一恆定域(CH1)及輕鏈恆定域(C 或C )的多個佈置亦示於圖18中，且將在以下實例中詳細描述。

為清楚起見，術語「鏈」將用於指單一多肽鏈，而術語「臂」將用於指成對多肽鏈(例如，SFab臂由成對重鏈及輕鏈組成)。完整三特異性分子將稱為Tri-Fab-Fc。因為Tri-Fab-Fc分子含有兩個或更多個輕鏈，所以各鏈之名稱亦包括指示可應用Fab位置的編號。含有處於Fab3位置之Fab的SFab臂由被稱作SFab HC(3)之重鏈及被稱作SFab LC(3)之輕鏈組成。DFab臂由與兩個其他鏈配對之雙Fab鏈組成，視形式而定。舉例而言，使用經修飾之Fd形式之DFab臂(圖18)由稱為DFab LC(1)-HC(2)之雙Fab鏈、稱為DFab LC(2)之輕鏈及稱為經修飾之Fd(1)之鏈構成，其含有連接至CH1域之Fab1的VH。在此實例中，DFab LC(2)與Fab2位置中之VH及CH1配對，且經修飾之Fd(1)與Fab1位置中之VL及Ck配對。

兩種方法用於使IgG Fc區雜二聚。第一種方法係藉由在一個重鏈CH3域的界面上設計工程改造突起(「凸塊」或「杵」)及在第二個重鏈CH3域的界面上工程改造一個相應的空腔(臼)來驅動兩個不同的重鏈配對，使得突起可定位於空腔中以便促進雜二聚體形成且阻礙均二聚體形成(9，10)。此後一方法將在本文中稱為杵臼(KiH)。特定言之，將杵突變T(389)W與Y(370)C (Pfabat編號)工程改造至IgG1-CH3域中之一者中，且將臼突變T(389)S、L(391)A及Y(438)V與S(375)C (Pfabat編號)引入至第二IgG1-CH3域中。[使用此雜二聚化策略之分子將描述於實例30、31、32、33、34、35中]。所用第二方法為兩種抗體或基於抗體之分子分別在雙細胞株或雙暫時表現池中表現，一種在二聚體界面處之互補位置經過量正電荷工程改造且另一種經過量負電荷工程改造(12, WO2011/143545)。兩種抗體分別純化，混合且接著在適當條件下還原，以允許氧化，由此優先形成雜二聚體雙特異性或三特異性分子。此後一方法此處將稱為基於電荷(CB)突變以用於雙細胞生產。亦針對雙細胞方法評估杵臼Fc雜二聚突變。使用表現後化學氧化還原方法產生雙特異性分子之一個優點為各重鏈-輕鏈對在單獨細胞株中表現，消除同源輕鏈之錯配。然而，添加三特異性分子之第三Fab結合域需要在一個細胞中共表現兩個重鏈-輕鏈對，產生需要使用其他工程設計解決之併發情況。(使用雙細胞方法之分子將描述於實例41中)。

為了促進使用五個獨特蛋白質鏈之三官能分子的有效產生，採用多個設計策略來併入第三Fab結合域且緩解輕鏈誤配之混雜性，此導致形成多個不合需要的雙產物。(此等設計描述於實例31至35中)。

實例30 用未經修飾之Fab1形式的單細胞產生之三特異性物為在單一細胞中表現所有五個蛋白質鏈時使輕鏈錯配減至最少，將靜電互補S1及S1反向突變(11)引入至Fab2及Fab3人類κ (CL)及人類IgG1-CH1恆定域(圖18)。對於S1設計，藉由置換S(L176)D連同支撐突變V(L133)S (SEQ ID NO: 113)將負電荷工程改造成人類κ CL。互補S1設計正電荷L(H124)K引入具有支撐突變V(H190)S (SEQ ID NO: 110)之Fab3 CH1中。對於S1-反向設計，藉由置換S(L176)K連同支援突變V(L133)S (SEQ ID NO: 108)而將正電荷工程改造至人類κ CL上。互補S1-反向設計負電荷L(H124)E與支撐突變S(H188)G (SEQ ID NO. 105)一起引入CH1中。Fab1位置中之域的恆定區未經修飾。

構築含有針對TSLP、IL-4及IL-13之Fab的兩個三特異性分子(IL413TSLP-0003 (SEQ ID NO: 109、196、146、98及152)及IL413TSLP-0004 (SEQ ID NO: 109、112、196、98及153)) (圖19a、19b)，其中S1及S1反向突變與Fab 2及Fab3位置中之IL-4及IL-13域一起使用，而Fab1位置中之TSLP Fab之序列不含影響鏈配對之修飾。抗TSLP Fab域設計為位於Fab1位置(雙Fab臂之外域)的習知Fab，在Fab2位置(雙Fab臂之內域)具有抗IL-13域(在Tri-Fab-Fc IL413TSLP-0003中)或抗IL-4域(在Tri-Fab-Fc IL413TSLP-0004中)。抗TSLP Fab經由連接子GGGGS (SEQ ID NO: 104)連接至抗IL-13或抗IL-4域。此形式中之三特異性物藉由在Expi293F™細胞中共同轉染五個質體表現，該等質體編碼蛋白質鏈中之每一者。

意欲用於哺乳動物轉染之高品質DNA經由Qiagen endo-free Maxi/Giga套組(Qiagen)製備。編碼Tri-Fab-Fc變異體之五個表現載體根據製造商方案(Thermo Fisher，目錄號A14635)共轉染至200 mL Expi293F™細胞中。在第5天收集條件培養基，且藉由5 mL HiTrap MabSelect™ SuRe™ LX (GE Healthcare Life Sciences)捕獲，隨後製備型SEC Superdex 200管柱(GE Healthcare Life Sciences)。使用含有20 mM磷酸鈉及400 mM NaCl之緩衝液(pH 7.2)在YMC-Pack Diol-200 SEC管柱中進行需要HPLC分析型SEC (aSEC)分析之樣品。使用5 µL分子量標準物、25 µL AAB001及50 µg每個樣品之注射體積，在150 µL/min時繪製且噴出兩者。記錄主峰之滯留時間及峰值寬度以及主峰、低分子量物質(LMMS)峰及高分子量物質(HMMS)峰之面積及百分比面積。

蛋白質A捕獲之後IL413TSLP-0003及IL413TSLP-0004 Tri-Fab-Fc分子之暫時表現量分別為12.34及14.33 mg/L。兩種不同之處在於在蛋白質A上捕獲之材料中具有正確表觀分子量(MW)之分子的比例。IL413TSLP-0003在分析型尺寸排阻層析上具有84.4%之預期理論大小的峰(圖19c)，而IL413TSLP-0004具有64.9%，但兩者均可使用尺寸排阻層析進一步純化至＞97%純度。

進行液相層析-質譜(LC/MS)分析以評估Tri-Fab-Fc之鏈配對。Tri-Fab-Fc分子之分子量由各鏈之獨特胺基酸序列定義，且準確的分子量測定提供正確配對及錯配之分子存在的證據。對於完整分子分析，在37℃下將Tri-Fab-Fc樣品與重組肽N-糖苷酶F(New England Bio Labs)一起培育1小時以移除N-連接之寡醣。對於還原鏈分析，去醣基化的Tri-Fab-Fc經胍及DTT還原。接著，將25 ug樣品注射於BioResolve聚苯450A管柱上且藉由在與Bruker maXis II Q-ToF質譜儀耦接的Waters Acquity H-Class HPLC上進行LC/MS分析。對製備型SEC純化之最終峰之完整LC/MS分析(圖19d、19e)展示IL413TSLP-0003及IL413TSLP-0004之Fab1位置((DFab LC(1))之TSLP域輕鏈不僅可與DFab VH (1) CH1-HC(2)鏈中正確的TSLP VH-CH1配對，且亦與IL-4及IL-13 VH-CH1域(不管存在於DFab HC(1)-HC(2)或存在於SFab HC(3)鏈中)配對，表明需要採取額外的工程量測來防止輕鏈錯配。

實例 31 對於單細胞表現五種獨特蛋白鏈之恆定輕域交換 (CkS 及 CλS) 及 V 區交換 (VDS) 設計在一組改良Fab組件保真度之設計中，Fab1 (外部)位置中之Fab的鏈配對係藉由修飾Fab1內之域佈置，抑或藉由交換可變重及輕(VH及VL)域或交換恆定輕域(C κ或C λ)與重鏈CH1域(圖20A至圖20D)來驅動。在V域交換(VDS)組態中，經修飾之輕鏈由連接至CL域而非正常VL-CL之VH組成，且雙Fab鏈之對應部分由連接至CH1域而非正常VH-CH1之VL組成。在C κ交換(CkS)組態中，經修飾之輕鏈由連接至CH1域之VL組成，且雙Fab鏈之對應部分由連接至恆定(C) κ域之VH組成。經修飾之輕鏈亦含有來自IgG1上部鉸鏈區之一段胺基酸EPKSC (SEQ ID NO: 102)，添加至CH1之C端以在雙Fab鏈上形成具有C κ域之二硫鍵。類似地，在C λ交換(CλS)組態中，經修飾之輕鏈由連接至CH1域之VL(具有C端EPKSC (SEQ ID NO: 102)延伸部分)組成，且雙Fab鏈之對應部分由連接至Cλ域之VH組成。在各情況下，預期經修飾之域佈置有利於相應經修飾之鏈之配對(例如VH-CK與VL-CH1)。

使用上述設計之Tri-Fab-Fc抗體實例用針對IL-4、IL-13之抗體及針對IL-33或TSLP之第三抗體製備。藉由使用S1及S1rev互補電荷突變維持Fab2及Fab3位置中之域的正確鏈配對。鏈配對突變之特定位置描述於表28中。表 28. 在 Fab1 位置中使用 C λ S 及 VDS 及在 Fab2 及 Fab3 位置中使用 S1/S1rev 來表現 Tri-Fab-Fc 變異體

抗體或Tri-Fab-Fc名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	滴定(ProA, mg/L) Expi293F™	主峰% (ProA)	MS (prepSEC之後)	Tm1 (℃)	pH保持在3.4 ↑%HMMS
TSLP-0001	IgG							66.7	7.3
TSLP-0100	IgG							69.1	0.2
IL413TSLP-0001	KiH	TSLP-0001CλS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev	2.7	78.8	完整	56.99 ± 0.05
IL413TSLP-0002	KiH	TSLP-0001CλS	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	3.4	54.6	完整	56.84 ± 0.05	51.2
IL413TSLP-0249	KiH	TSLP-0100CλS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev	ND	ND	ND	59.90 ± 0.02	15.9
IL413TSLP-0007	KiH	TSLP-0001VDS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev	7.7	74.1	95%完整 5%錯配	56.97 ± 0.06
IL413TSLP-0008	KiH	TSLP-0001VDS	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	7.2	41.0	完整	56.90 ± 0.05

ND：未完成表 29.在Fab1位置中使用CλS及VDS及在Fab2及Fab3位置中使用S1/S1rev之Tri-Fab-Fc變異體的活性

抗體或Tri-Fab-Fc名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	a-TSLP TARC生物分析(IC ₅₀; pM)	a-hIL-4生物分析(IC ₅₀; pM)	a-hIL-13生物分析(IC ₅₀; pM)
IL-4-0002	IgG					3.42
IL-13-0001	IgG						4.83
TSLP-0001	IgG				2.32
IL413TSLP-0001	KiH	TSLP-0001CλS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1Rev	12.6	7.15	47
IL413TSLP-0002	KiH	TSLP-0001CλS	IL4-0002 S1Rev	IL13-0001 S1	16.4	8.59	10.6
IL413TSLP-0249	KiH	TSLP-0100CλS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1Rev	ND	ND	ND
IL413TSLP-0007	KiH	TSLP-0001VDS	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1Rev	11.7	7.09	46.8
IL413TSLP-0008	KiH	TSLP-0001VDS	IL4-0002 S1Rev	IL13-0001 S1	17.7	9.07	10.6

ND：未完成

Tri-Fab-Fc變異體經轉染且經由MabSelect™ SuRe™ LX捕獲，接著MonoQ陰離子交換層析純化。表28及表29中所示之結果指示可產生CλS、CκS及VDS形式之分子，且呈此等形式之各結合域能夠接合其目標。質譜法分析(表28)顯示，在所檢查之分子IL413TSLP-0001 (SEQ ID NO: 109、196、146、149及150)及IL413TSLP-0002 ((SEQ ID NO: 109、112、196、150及151)；CλS形式中的Fab1)及IL413TSLP-0007 (SEQ ID NO: 109、196、146、154及155)及IL413TSLP-0008 ((SEQ ID NO: 109、112、196、155及156)；VDS形式中的Fab1)中有極少或無鏈錯配。此觀測結果表明Fab1域佈置之工程改造克服IL413TSLP-0003及IL413TSLP-0004中所觀測到之錯配，其缺乏驅動Fab1配對之修飾。

在Fab1位置具有抗TSLP域TLSP-0001之所有四種分子(IL413TSLP-0001及IL413TSLP-0002 (CλS形式中的Fab1)以及IL413TSLP-0007及IL413TSLP-0008 (VDS形式中的Fab1))的TSLP中和類似(表29)。此觀測結果表明，CλS及VDS Fab1域佈置均支持在Fab1位置的類似抗體結合活性。Fab在Fab2位置的中和之效力在CλS及VDS構築體中亦類似(比較IL413TSLP-0002的IL-4中和，IC ₅₀8.59 pM，CλS，及IL413TSLP-0008的中和，IC ₅₀9.07 pM，VDS；亦比較IL413TSLP-0001的IL-13中和，IC ₅₀47 pM，CλS，及IL413TSLP-0007的中和，IC ₅₀46.8 pM，VDS；表29)。此觀測結果表明，Fab1位置中Fab之特定CλS或VDS佈置對Fab在Fab2位置之結合具有極小影響。

在IgG形式中，相對於IL413TSLP-0001 (66.7℃ Tm1)，TSLP-0100在T0 iCE研究時展現改良的熱穩定性(69.1℃ Tm1)及改良的低pH保持能力及減少的酸性物質(表19及28)。IgG中之相同生物物理學特性改良在Tri-Fab-Fc中顯而易見(表28)，表明習知IgG至Tri-Fab-Fc之可轉譯性。

不同結合域之生物活性因置放於Fab2位置(亦即，另一個Fab與N端融合)而與當其處於Fab3位置時所觀測到的生物活性(在N端處無任何融合蛋白)相比而言受到不同影響。IL4-0002域在存在於Fab2 (IL413TSLP-0002，IC ₅₀8.59 pM；IL413TSLP-0008，IC ₅₀9.07 pM)及Fab3 (IL413TSLP-0001，IC ₅₀7.15 pM；IL413TSLP-0007，IC ₅₀7.09 pM；表29)時顯示出等效中和活性，表明此形式之Tri-Fab-Fc分子與Fab2位置之域的完全域相容。然而，IL13-0001域對其在分子中之位置敏感，顯示出當在Fab2位置時之活性相對於其在Fab3中之活性顯著降低(比較IL413TSLP-0002，在Fab3的IC ₅₀為10.6 pM，與IL413TSLP-0001，在Fab2的IC ₅₀為47 pM；以及IL413TSLP-0008，在Fab3的IC ₅₀為10.6 pM，與IL413TSLP-0007，在Fab2的IC ₅₀為46.8 pM)。如實例33中所描述，IL13-0001對置放在Fab2與Fab3位置的敏感性自身視存在於Fab1位置的域而定，在一些情況下，當處於Fab2位置時，展示IL13-0001活性之極少降低。綜合而言，此等結果表明TriFab-Fc形式與Fab2域之完全活性相容，但Fab2域本身與Fab1域均可影響特定結合域當處於Fab2位置時是否具有完全活性。

進一步強調域位置對活性之影響，橋接夾心ELISA (圖21)顯示，在Fab2及Fab3位置中IL13-0001之置放引起兩個IL413TSLP Tri-Fab-Fc變異體同時結合IL-13及TSLP目標之能力顯著差異。對於此方法，25 µL/孔的1 µg/mL重組人類TSLP (在PBS pH 7.2中)在4℃下塗佈至384孔透明平底Maxisorp培養盤(NUNC)隔夜，且用不含Mg ²⁺及Ca ²⁺的PBS以及3% BSA進行阻斷。將經連續稀釋之Tri-Fab-Fc變異體添加至培養盤中且在室溫(RT)下培育1小時。在用緩衝液(不含Mg ²⁺及Ca ²⁺的PBS以及0.05% tween 20)洗去未結合的Tri-Fab-Fc後，向培養盤中添加25 µL/孔的100 ng/mL IL-13-FLAG (Pfizer Inc)且在室溫下培育一小時。與TSLP及IL-13結合的Tri-Fab-Fc由HRP結合的抗-FLAG二級抗體(Sigma，目錄號A8592)偵測。IL413TSLP-0001及IL413TSLP-0007 (其中IL13-0001域位於Fab2位置中)觀測到的結合信號顯著低於IL413TSLP-0002及IL413TSLP-0008(其中IL13-0001域位於Fab3位置中)的結合信號。此觀測結果與其中IL13-0001位於Fab2位置之兩個Tri-Fab-Fc變異體之較低IL-13中和活性一致。

與其對結合活性的影響類似，域位置亦影響表現期間正確大小的分子的比例。在蛋白質A上純化之材料之尺寸排阻層析(表28)指示，在IL4-0002在Fab3的置放及IL13-0001在Fab2的置放與相反的佈置相比，正確大小的蛋白部分要高得多(比較Tri-Fab-Fc及IL13-0001位於Fab2位置(IL413TSLP-0001，79-91%正確，及IL413TSLP-0007，74-85%正確)與Tri-Fab-Fc及IL13-0001在Fab3位置(IL413TSLP-0002，52-54%正確，及IL413TSLP-0008，41-47%正確)。

綜合而言，個別結合域對整體分子行為之影響及分子結構對個別結合域之活性的影響指示，特異性結合域對此形式之適合性的經驗確定為必需的。

實例32 在暫時轉染中藉由調節表現載體之DNA比率來改良IL413TSLP Tri-Fab-Fc鏈配對根據製造商的方案(Thermo Fisher，目錄號A29133)將編碼具有三種不同DNA比率(表30)之IL413TSLP-0002之5條鏈中之每一者的cDNA共轉染至ExpiCHO-S細胞中。收集條件培養基且藉由5 mL HiTrap MabSelect™ SuRe™ LX (GE Healthcare Life Sciences)捕獲。用具有或不具有還原劑二硫蘇糖醇(DTT)的4×樣品緩衝液(ThermoFisher，目錄號NP0007)處理蛋白A溶離液。隨後在NuPAGE Bis-Tris凝膠(ThermoFisher，目錄號NP0321BOX)上裝載及分析樣品(圖22a)。在非還原條件下之NuPAGE資料展示75 kDa譜帶之顯著減少及完整分子譜帶之增加。LC/MS分析顯示75 kDa譜帶係未配對SFab臂抗IL-13域。分析型SEC資料(圖22b；表30)展示，藉由調節DNA比率，POI (完整分子)之百分比自40%增加至70%。吾人之資料證明，操控DNA轉染比率可進一步驅動恰當鏈配對。表 30 ：轉染 IL413TSLP-0002 之 DNA 比率

IL413TSLP-0002	域描述	DNA Tx比率#1	DNA Tx比率#2	DNA Tx比率#3
1: sFab HC (3)	a-IL-13 HC	1	0.75	0.5
2: sFab LC (3)	a-IL-13 kC	1	0.75	0.5
3. DFab VHCL(1)-HC (2)	a-TSLP-IL-4	1	1.25	1.5
4: DFab LC (2)	a-IL-4 kC	1	1	1
5: DFab VLCH1 (1)	a-TSLP CλS	1	1	1.5
所關注之峰的百分比		40.5%	55.5%	70.5%

注意：Tx：轉染。a-IL-4：抗IL-4。a-IL-13：抗IL-13。sFab：單Fab。DFab：雙Fab。

實例 33 經修飾之 Fd (mFd) 設計用於單細胞 表現編碼 Tri-Fab-Fc 變異體 的五條鏈在增強鏈配對保真度之第二組設計中，在Fab1位置中之域採用稱為「經修飾之Fd」(mFd)的Fab佈置。在此佈置中，Fab1之輕鏈(LC)(外部位置)經由表現載體內之(Gly)4-Ser連接子接合至Fab2之重鏈(HC)之胺基末端(內部位置)。此蛋白鏈稱為雙Fab LC(1)-HC(2)。經修飾之Fd鏈經設計以與Fab1 LC配對，且其由Fab1 VH、人類IgG1-CH1 (SEQ ID NO: 6)及在H230處含有Cys之上部人類IgG1鉸鏈(SEQ ID NO: 102)構成，用於經工程改造至表現載體中之Fab1 κ恆定域中之Cys(L214)進行鏈間二硫化物形成。此設計亦使用靜電互補S1及S1反向突變以使Fab2及Fab3臂中之錯配最小化。

使用單細胞方法對用抗IL-4、抗IL-13及抗IL-33、抗TSLP或抗p40製成之多種Tri-Fab-Fc變異體進行工程改造，其中Fc雜二聚由杵臼突變驅動，且輕鏈之錯配藉由在Fab2/Fab3位置併入靜電互補S1及S1-反向突變以及Fab1位置包括經修飾之Fd鏈來緩解。其他設計考慮因素係各種Fab結合域在雙Fab LC(1)-HC(2)鏈之外部(Fab1)或內部(Fab2)位置以及單Fab域(Fab3)中之的定位或幾何佈置。在一些情況下，IL-33、TSLP或p40結合域被固定在Dual Fab LC(1)-HC(2)鏈的外側位置作為Fab1，而IL-13結合域位於內側位置(Fab2)，且IL-4結合域位於Fab3位置的SFab臂上(圖23A)，或IL-4域位於內部(Fab2)位置，且IL-13域位於Fab1位置，且IL-33、TSLP或p40結合域固定為Fab3位置的SFab臂(圖23D)，或IL-4域位於內部(Fab2)位置，且IL-33、TSLP或p40結合域被用作Fab1，且IL-13結合域位於Fab3位置的SFab臂上(圖23B)。在一些情況下，圖23A及23B中之設計經修飾以包括用於Tri-Fab-Fc分子之半衰期延長的IgG1-CH3域中之白胺酸-絲胺酸(LS)突變(M(H459)L及N(H465)S，Pfabat編號)，產生圖23C及圖23D中所示之設計。表 31. 在 Fab1 位置中使用經修飾之 Fd(mFd) 及在 Fab3 及 Fab2 位置使用 S1/S1rev 互補突變進行 Tri-Fab-Fc 變異體之表現滴定、分析型表徵及熱穩定性

Tri-Fab-Fc名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	滴定(ProA, mg/L) Epi293	aSEC主峰% (ProA)	MS	cGE %完整NR	Tm1 (℃)	滴定(ProA, mg/L) ExpiCHO
IL413TSLP-0005	KiH	TSLP-0001 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev	6.82	61
IL413TSLP-0006	KiH mFd S1-S1 rev	TSLP-0001 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	12.3	32
IL413TSLP-0248	KiH	TSLP-0100 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	n/a	69.6 (CHO)	完整(CHO)		67.91 ± 0.12	229.3
IL413TSLP-0250	KiH	TSLP-0100 mFd	IL13-0001 S1rev	IL4-0002 S1	n/a	73.8 (CHO)	完整(CHO)		67.46 ± 0.09	175.0
IL13433-0005	KiH	IL33-0232 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev	25.2	78.3	完整
IL13433-0006	KiH	IL33-0232 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	34.3	77.6	完整	98.2
IL413p40-0043	KiH	p40-0003 mFd	IL13-0001 S1rev	IL4-0002 S1	25.7	74.5	完整		73.45	n/a
IL413p40-0044	KiH	p40-0003 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	31.7	83.2	完整		73.39	462
IL413p40-0642	KiH	IL13-0001 mFd	IL4-0002 S1rev	p40-0003 S1	n/a	n/a			n/a	77
IL413p40-0648	KiH	p40-0003 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1					70.18	119
IL413TSLP-0575	KiH	TSLP-0260 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1	3		完整	99.3	70.2	85
IL13433-0606	KiH	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0259 S1	8.1				71.52
IL13433-0607	KiH	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1	7.1	58.2			71.60
IL13433-1269	KiH	IL33-0726 mFd	IL4-1040 S1rev	IL13-0001 S1	10
IL13433-1270	KiH	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	172	76.8	主要完整 ^*	97.1	70.92
IL13433-1279	KiH 無eng Cys CH3	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	195	37.7	主要完整 ^**

*痕量Tri-Fab-Fc減去SFab LC(3) **痕量Tri-Fab-Fc減去SFab LC(3)或DFab LC(2) n/a：不可用表 32. 具有經修飾之 Fd(mFd) Fab1 形式及 Fab2 及 Fab3 中之 S1/S1rev 互補突變的 Tri-Fab-Fc 變異體的中和活性

Tri-Fab-Fc或抗體名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	a-IL-33生物分析 (WT IL33) IC ₅₀(pM)	a-IL-33生物分析 cys突變體IL33) IC ₅₀(pM)	抗IL12生物分析IC ₅₀(nM)	a-TSLP TARC生物分析(IC ₅₀; pM)	a-hIL-4 生物分析IC ₅₀, pM)	a-hIL-13生物分析(IC ₅₀, pM)
IL4-0002	IgG								2.39
IL13-0001	IgG									5.79
TSLP-0001	IgG							18
IL413TSLP-0005	KiH	TSLP-0001 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev
IL413TSLP-0006	KiH	TSLP-0001 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1
IL413TSLP-0248	KiH	TSLP-0100 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1				37	5.11	15.6
IL413TSLP-0250	KiH	TSLP-0100 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1 rev				39	3.68	102.1
IL13433-0005	KiH	IL33-0232 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1 rev	ND	45*			3.2	12.5
IL13433-0006	KiH	IL33-0232 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	112	158, 40*			10.3	9.01
p40-0003	IgG						0.286
IL413p40-0043	KiH	p40-0003 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1rev			2.6		5.10	15.1
IL413p40-0044	KiH	p40-0003 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1			3.03		8.11	9.14
IL413p40-0642	KiH	IL13-0001 mFd	IL4-0002 S1rev	p40-0003 S1			n/a		n/a	n/a
IL413p40-0648	KiH	p40-0003 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1					26.4	18.7
IL413TSLP-0575	KiH	TSLP-0260 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1				21	18.5	12
IL13433-0606	KiH	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0259 S1	ND	ND			ND	ND
IL13433-0607	KiH	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1	ND	182			66.9	20.3
IL13433-1269	KiH	IL33-0726 mFd	IL4-1040 S1rev	IL13-0001 S1
IL13433-1270	KiH	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	12	ND			16.5	7.58
IL13433-1279	KiH 無eng Cys CH3	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	13	ND			13.7	9.13

* IL-33中和IC ₅₀值在IL13433-0005及IL13433-0006之相同實驗中測定。ND=未測定。n/a：不可用

可產生具有在Fab3及Fab2中分別攜帶S1及S1rev互補突變之呈mFd形式的Fab1的分子(表31)，且顯示能中和其所有三個目標(表32)。質譜法分析展示，具有在Fab1位置之mFd形式加上Fab3及Fab2中之S1及S1rev突變的經純化之Tri-Fab-Fc的鏈配對很大程度上正確：對應於IL413p40-0043、IL413p40-0044、IL13433-0005、IL13433-0006及IL13433-1270之Tri-Fab-Fc分子的經純化材料含極少或幾乎不含錯配物質。此觀測結果與在Fab1位置中攜帶V及Cl域交換以及在Fab3及Fab2中攜帶S1及S1rev突變之分子的觀測結果類似(實例31)。此外，藉由比較含有鏈間二硫化物的IL13433-1270 (76.8%的所關注峰)及缺乏二硫化物的IL13433-1279 (37.7%的所關注峰)的蛋白A純化後的所關注的主峰的百分比，證明了與KiH雜二聚化突變一起引入CH3域的鏈間二硫化物對減少錯配物質的重要性。綜合而言，獨立的工程改造策略集中於增強Fab1、Fab2、Fab3及Fc界面處之鏈間配對，各自有助於減少錯配物質。

在Fab1位置中使用mFd、在Fab2位置中使用S1rev及在Fab3位置中使用S1之KiH Tri-Fab-Fc變異體集中之特異性結合域的位置可影響表現。舉例而言，IL13433-1269及IL13433-1270具有相同結合域，但IL13433-1269在Fab3位置具有IL13-0001及在Fab1位置具有IL33-0726且在HEK293中表現10 mg/L，而IL13433-1270在相對位置具有相同域且以172 mg/L表現。類似地，IL413p40-0044及IL413p40-0642具有相同結合域，但在暫時CHO中之表現相差6倍，其中IL413p40-0044 (p40-0003在Fab 1位置中，IL13-0001在Fab3位置中)表現＞450 mg/L，而IL413p40-0642(p40-0003在Fab3位置中，IL13-0001在Fab1位置中)表現為77 mg/L。此資料集指示，對於實例31中所描述之mFd Tri-Fab-Fcs以及CkS/CλS/VDS Tri-Fab-Fc，Tri-Fab-Fc分子中之特異性結合域及其佈置均可影響表現滴定及生物活性，說明實驗評估之重要性。

在八個測試分子中使用mFd形式之Tri-Fab-Fc變異體的熱穩定性始終較高，其中藉由差示掃描熱量測定(DSC)量測各分子之第一熔融轉移(Tm1)高於67℃ (表28)。比較IL413TSLP-0249 (其在Fab1位置中具有呈CλS形式之TSLP-0100；Tm1 59.9℃；表28)與IL413TSLP-0250 (其在相同位置中具有相同結合域集，但在Fab1位置使用TSLP-0100之mFd，展示Tm1增加至67.4℃) (表31)。

如上文針對Fab1配對由VH-VL或Ck/Cl-CH1位置反轉驅使的分子所描述，Fab2 (內部)位置之Fab能夠在與Fab1 (外部)位置之mFd格式之Fab融合時有效地結合至其目標。基於細胞之活性資料(表32)指示Fab2位置中之Fab顯示IC ₅₀值通常在Fab3位置中相同Fab之2至3倍內(無任何東西融合至N端)。舉例而言，IL13433-0005中之抗IL4活性(IL4在Fab3位置中，IC ₅₀3.2 pM)類似於IL13433-0006之活性(IL4在Fab2位置，IC ₅₀10.3 pM)，且IL413p40-0043中之抗IL4活性(IL4在Fab3位置中，IC ₅₀5.1 pM)類似於IL413p40-0043-0044之活性(IL4在Fab2位置中，IC ₅₀8.1 pM)。類似地，IL13433-0006 (IL-13在Fab3位置中，IC ₅₀9.0 pM)及IL13433-0005 (IL13在Fab2位置中，IC ₅₀12.5 pM)中之IL-13活性彼此非常接近，IL413p40-0044 (IL13在Fab3位置中，IC ₅₀9.1 pM)及IL413p40-0043 (IL13在Fab2位置中，IC ₅₀15 pM)中之IL-13活性亦如此。一個例外為IL413TSLP-0250，其在Fab2位置具有IL13-0001且展現的IL-13中和活性(IC ₅₀102.1 pM)明顯比其在Fab3位置具有IL13-0001、IL413TLSP-0248之對應物要弱(IC ₅₀15.6 pM)。因此，Fab2域之活性受其位置影響的程度受Fab1位置中之特異性結合域的影響。

實例 34 具有不同結合域組成及幾何形狀之抗 IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc 分子之暫時表現量為了評估Tri-Fab-Fc幾何形狀及個別域序列對單一細胞內五個獨立蛋白質鏈之表現的影響，使用單細胞方法設計的一組抗IL-4/13/33 Tri-Fab Fc變異體係使用暫時HEK-293表現系統產生且與IgG形式中之組分結合域的表現進行比較。使用製造商推薦的方案，在Expi293F™宿主細胞中用PEI-MAX轉染編碼包含Tri-Fab-Fc的五條鏈的DNA進行暫時表現。轉染後5天或當細胞存活率降至低於60%時收集條件培養基。使用暫時或穩定表現系統產生之條件培養基之表現滴定使用以下方法測定。在Agilent 1200系列HPLC梯度系統(Agilent Technologies, Santa Clara, CA)中，經由0.2 µm膜過濾之條件培養基(0.9 mL)通過經PBS-CMF (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na ₂HPO ₄, 2.7 mM KH ₂PO ₄, pH 7.2)預平衡之1 mL蛋白A樹脂(Cytiva, Westborough, MA)。在使用150 mM甘胺酸、40 mM NaCl (pH 3.5)之100%步驟溶離蛋白質之前，用10 mL PBS緩衝液洗滌管柱。經由用藉由消光係數調節之經純化之人類IgG抗體對照產生的線性標準曲線，將A280中之溶離峰面積整合且轉化成蛋白質量。

結果顯示Tri-Fab-Fc之暫時表現滴定在7至172 mg/L之間變化。IL13433-0005及IL13433-0006所用之設計展現Tri-Fab-Fc之適度產量，分別具有25.2 mg/L及32.0 mg/L之表現滴定。然而，當結合域IL4-0157、IL33-0224及IL13-0259或IL13-0271經工程改造成用於IL13433-0006之相同形式，因此分別產生IL13433-0606及IL13433-0607，所得表現滴定出乎意料地低得多(表33)。此為驚人的，因為標準IgG抗體形式中產生之IL4-0157、IL33-0224、IL13-0259及IL13-0271變異體均顯示預期高暫時表現滴定(表33)。此等結果指示引入至IL-4、IL-13及IL-33結合域中之小型胺基酸變化以減少電腦模擬預測之非生殖系T細胞抗原決定基，且CDR區域中之序列責任顯著地影響自細胞分泌之完整Tri-Fab-Fc的量。另外，當比較Tri-Fab-Fc變異體IL13433-1269與IL13433-1270時(圖14C與圖14D)，個別結合域之定位或幾何形狀之影響顯而易見，因為兩者經相同結合域工程改造，然而相對於IL13433-1269，IL13433-1270展現顯著更高(約17倍)的暫時表現(表17)。此外，Tri-Fab-Fc IL13433-1270之暫時表現滴定為172 mg/L，處於具有有利表現圖譜之典型抗體獲得的表現滴定範圍內。

表33亦示出可使用替代性鏈配對策略產生額外Tri-Fab-Fc形式。IL13433-0005中使用之結合域置放於IL13433-0021(IL33-0232在Fab1中；IL13-0001在Fab2中；及IL4-0002在Fab3中)中之相同位置中，但在IL13433-021中，IL13-0001 (Fab2)鏈配對藉由使用C κ交換而非S1來驅動(圖20e)。類似地，在IL13433-021中，IL33-0232 (Fab1)鏈配對藉由使用S1突變而非IL13433-0005中發現之mFd佈置來驅動。表33示出Tri-Fab-Fc分子之蛋白質產量均類似。另外，IL13433-0022觀測到類似表現(圖20f)，分子經設計以藉由添加兩個絲胺酸殘基來增加CκS形式之IL13-0001 Fab2之VL與CH1域之間的連接子之可撓性，以模擬在人類IgG1中之第一位置處的丙胺酸殘基之前所有人類J-區段的保守C末端兩個胺基酸(SS)。此外，使用IL-13誘導之CD23上調生物分析評估的IL-13中和活性對於具有在IL-13結合域中的SS肘的IL13433-0022相對於IL13433-0021而言略微更有效，尤其17.46 pM相對於27.19 pM。表33.針對單細胞產生之Tri-Fab-Fc及IgG格式之組分域的來自Expi293™細胞表現系統的暫時表現滴定

蛋白質名稱	Fc 形式	結合域 / 方向	滴定 [mg/L]
Fab1	Fab2	Fab3
IL4-0002	IgG				313.7
IL4-0157	IgG				382.3
IL13-0001	IgG				204.9
IL13-0259	IgG				415.6
IL13-0271	IgG				376.4
IL33-0232	IgG				203.2
IL33-0224	IgG				285.6
IL13433-0005	KiH	IL33-0232 mFd	IL13-0001 S1	IL4-0002 S1 rev	25.2
IL13433-0006	KiH	IL33-0232 mFd	IL4-0002 S1Rev	IL13-0001 S1	34.3
IL13433-0021	KiH	IL33-0232 S1	IL13-0001 CkS	IL4-0002 S1 rev	30.8
IL13433-0022	KiH	IL33-0232 S1	具有SS-肘之IL13-0001 CkS	IL4-0002 S1 rev	32.5
IL13433-0606	KiH, LS	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1Rev	IL13-0259 S1	8.1
IL13433-0607	KiH, LS	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1Rev	IL13-0271 S1	7.1
IL13433-1269	KiH, LS	IL33-0726 mFd	IL4-1040 S1Rev	IL13-0001 S1	10
IL13433-1270	KiH, LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1Rev	IL33-0726 S1	172

CH1-κ交換=Fab交換了CH1及κ恆定域；KiH=杵臼；LS=Leu/Ser半衰期延長突變；mFd=經修飾之Fd鏈；S1-S1rev=靜電互補S1及S1-反向突變；SS肘=插入於V _L與CH1之間的Ser-Ser胺基酸。

實例35 由單細胞株產生之抗IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc變異體之穩定CHO表現評估穩定CHO表現以對使用單細胞方法工程改造之選擇抗IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc變異體進行評價，以測量穩定細胞株發展之可行性。使用以下佈置將包含Tri-Fab-Fc之五個獨特鏈次選殖至CHO SS1載體(Lonza)中：經修飾之Fd(1)→DFab LC(2)→DFab LC(1)-HC(2)→SFab LC(3)→SFab HC(3)。製備穩定CHO表現之修飾為在Tri-Fab-Fc變異體之重鏈上包括C端離胺酸(CTK)，其中其在暫時HEK-293表現中已省略。在一種情況下，CTK添加至原型IL13433-0006變異體產生Tri-Fab-Fc變異體IL13433-0300 (圖23C)。併入LS突變，尤其M(H459)L及N(H465)S (Pfabat編號)以增加治療劑之血清半衰期以提供增加之給藥靈活性。LS突變經工程改造至IL13433-0300中，產生IL13433-0717 Tri-Fab-Fc變異體作為直接比較，以確保此等蛋白質之修飾不改變表現滴定水平。各Tri-Fab-Fc變異體產生三個獨立穩定CHO池，且由600 mL搖瓶培養物測定表現滴定。在一些情況下，合併三個獨立池，隨後測定表現滴定，得到「組合池」。結果指示，包括LS突變不顯著改變Tri-Fab-Fc之暫時表現量(表34)。然而，最小胺基酸序列取代顯著暗示IL13433-0606及IL13433-0607之表現滴定，其僅在IL13域之TriFab中相差4個胺基酸(表4)。此外，對來自彙集的條件培養基的等量的蛋白A純化蛋白進行還原無染色SDS-PAGE評估表明，與來自IL13433-0300 (-LS)及IL13433-0717 (+LS)的等量鏈相比，IL13433-0606及IL13433-0607 DFab LC(1)-HC(2)蛋白鏈的分泌量最小，圖24。分析大小排阻層析(aSEC)結果(表34)與來自蛋白質A純化蛋白質之非還原無染色SDS-PAGE評定的觀測結果相關，其中相對於IL13433-0300及IL13433-0717，IL13433-0606及IL13433-0607變異體觀測到的所關注峰(POI)最少。此等組合結果亦表明，包括LS突變不改變Tri-Fab-Fc自細胞之表現滴定及分泌，但引入至DFab LC(1)-HC(2)鏈內之IL4-0157 V _H及IL13-0271 V _L域之較小序列變化可能經由減少DFab LC(1)-HC(2)鏈之分泌而引起完整Tri-Fab-Fc之分泌發生顯著變化。表34.使用穩定CHO SSI表現系統進行單細胞產生之Tri-Fab-Fc變異體之穩定CHO表現滴定及分析型SEC。

Tri-Fab-Fc	Fc 形式	結合域 / 方向	滴定 [mg/L]	經由分析型 SEC 的 POI%
Fab1(mFd形式)	Fab2(S1rev形式)	F ab3(S1形式)
IL13433-0300	KiH	IL33-0232	IL4-0002	IL13-0001	376	70.94
IL13433-0717	KiH,LS	IL33-0232	IL4-0002	IL13-0001	102	56.69, 69.82,79.53*
IL13433-0606	KiH, LS	IL33-0224	IL4-0157	IL13-0259	72	11.17
IL13433-0607	KiH, LS	IL33-0224	IL4-0157	IL13-0271	9	13.69

KiH=杵臼；LS=半衰期延長之CH3突變；mFd=經修飾之Fd鏈；pA=蛋白質A；彙集材料=組合自三個獨立穩定CHO池600 mL搖瓶培養物；S1-S1rev=靜電互補S1及S1-反向突變。 * 600 mL搖瓶培養物中之3個獨立穩定CHO池

實例 36 使用 RRR-EE 基於電荷之 (CB) Fc 雜二聚化方法進行工程改造 Tri-Fab-Fc 變異體為闡明IL13433-0606及IL13433-0607 Tri-Fab-Fc之低暫時HEK-293及穩定CHO表現滴定之意外觀測結果，且促進系統地生產不同Tri-Fab-Fc分子，採用替代性Tri-Fab-Fc設計。Strop等人(12)描述的基於電荷(CB)之雜二聚方法在雙特異性抗體產生之情形下，允許不對稱雜二聚分子之兩個部分的單獨表現及隨後接合以形成雜二聚體。此技術依賴於在兩個IgG之鉸鏈及CH3域中之等同位置中安置帶相反電荷之殘基，即精胺酸及麩胺酸。此等IgG單獨地表現及純化為均二聚體，但接著混合且用還原劑處理以使兩條重鏈之間的二硫鍵斷裂。在Fc界面處對相反電荷之定位引起來自兩個初始IgG中之每一者到一個重鏈的優先配對，且當混合物接著再氧化時，二硫鍵重新形成，產生主要雜二聚之混合物。此方法適於藉由在一個細胞中單獨表現雙Fab組分且在另一個細胞中單獨表現單Fab組分而形成Tri-Fab-Fc抗體。舉例而言，在圖25中所示之分子中，在一個細胞中表現由Fab1或外部位置之抗IL-13結合域及Fab2或內部位置之抗IL-4構成的雙Fab臂，而第二細胞產生SFab臂，其中抗TSLP Fab在Fab3位置(圖25)。在此情況下，將三個帶正電殘基(稱為RRR)引入人類IgG1恆定區中：將兩個突變D(H232)R及P(H241)R引入鉸鏈中且將K(H440)R引入單Fab鏈之CH3區中。併入至雙Fab臂之人類IgG1恆定區中的三個相對負電荷配對突變為D(H232)E及P(H241)E進入鉸鏈區中且L(H391)E進入CH3域中，共同稱為EEE。在此實例中，Fab 3之輕鏈與其相應重鏈之正確配對在不使用任何突變之情況下實現，因為僅一個重鏈及一個輕鏈表現於細胞中。雙Fab臂中之鏈之正確配對藉由對Fab1使用上述的CkS或mFd設計來達成，而Fab 2不具有任何突變。

將編碼各鏈之cDNA選殖入表現載體中。根據製造商的方案(Thermo Fisher Scientific)，將編碼抗TSLP SFab HC(3)鏈及SFab LC(3)λ鏈的單Fab RRR臂的兩個cDNA載體或編碼抗IL-13/IL-4雙Fab長鏈及兩個相關短鏈的雙Fab EEE臂的三個cDNA載體分別轉染至ExpiCHO-S細胞或Expi293F™細胞。在第7天收集均二聚體RRR臂及EEE臂之條件培養基，且用5mL HiTrap MabSelect™ SuRe™ LX (GE Healthcare Life Sciences)進行捕獲。溶離之抗體用2M HEPES pH 8.0中和。藉由將RRR及EEE臂之等莫耳比之混合物與1 mM麩胱甘肽(GSH)在37℃下培育6小時(還原步驟)，隨後在冷PBS中透析隔夜(氧化步驟)來製備Tri-Fab-Fc分子之雜二聚。純化在AKTA探測器(Agilent, Santa Clara, CA)上進行，首先裝載至陰離子交換管柱Mono Q 5/50 GL (GE Healthcare；編號17516601；批次：10265412)。若需要，藉由Superdex 200 (GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, N.J)進一步純化最終Tri-Fab-Fc。藉由分析型SEC (表35)及LC/MS (完整及還原次單元分析)檢驗Tri-Fab-Fc之品質。各Tri-Fab-Fc之實際分子量(MWs) (包括完整及次單元)與理論MW匹配(MS資料未示出)。

經由分析型尺寸排阻層析(aSEC)、DSC、熱強迫聚集傾向、低pH保持及非特異性評估(AC-SINS及多反應性)評估生物物理學特性。對於HPLC aSEC分析，使用含有20 mM磷酸鈉及400 mM NaCl之緩衝液(pH 7.2)在YMC-Pack Diol-200 SEC管柱中運行樣品。使用5 µL分子量標準物(MWS)、25 µL對照IgG1抗體及50 µg每個樣品之注射體積，在150 µL/min時繪製且噴出兩者。記錄主峰之滯留時間及峰值寬度以及主峰、LMMS峰及HMMS峰之面積及百分比面積。主峰、LMMS峰及HMMS峰之面積用於計算各樣品之質量回收率及質量回收率百分比。表 35 ： 使用基於電荷之雜二聚的 Tri-Fab-Fc 分子之表現滴定、 aSEC 及熱穩定性

Tri-Fab-Fc 名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	滴定(ProA, mg/L) Epi293	aSEC %主峰(ProA)	滴定(ProA, mg/L) Epi293	aSEC %主峰(ProA)	DSC Tm1 (℃)
單Fab臂	單Fab臂	雙Fab臂	雙Fab臂
IL413TSLP-0251	CB EEE-RRR	IL13-0001 (CkS)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)	115.2 *CHO	97.6	246.3 *CHO	95.3	70.24
IL413TSLP-0252	CB EEE-RRR	IL13-0001 (mFd)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)	115.2 *CHO	97.6	347.8 *CHO	95.5	70.50
IL13433-1042	CB EEE-RRR	IL13-0001 (mFd)	IL4-0749 (天然Fab)	IL33-0726 (天然Fab)	263		155		69.84
IL413p40-0698	CB EEE-RRR	IL13-0001(mFd)	IL4-0749 (天然Fab)	p40-0003(天然Fab)	23.5	97.8	157	45.7	71.7
IL413p40-0700	CB EEE-RRR	IL13-0001 (mFd)	IL4-1040 (天然Fab)	p40-0003 (天然Fab)	23.5	97.8	26	51.4	70.99

*在ExpiCHO細胞中短暫產生；其他在HEK293中產生表 36 ：使用 EEE/RRR 基於電荷之雜二聚的 Tri-FAB-Fc 分子的生物活性

Tri-Fab-Fc名稱	Tri-Fab-Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	a-IL-33生物分析 (WT) IC ₅₀[pM]	抗IL12生物分析 IC ₅₀[nM]	抗IL23生物分析 IC ₅₀[nM]	a-TSLP TARC生物分析 IC ₅₀[pM]	a-hIL-4 IC ₅₀[pM]	a-hIL-13 IC ₅₀[pM]
IL413TSLP-0251	CB EEE-RRR	IL13-0001 (CkS)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)				58	6.11	13.7
IL413TSLP-0252	CB EEE-RRR	IL13-0001 (mFd)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)				42	3.65	11.2
IL13433-1042	CB EEE-RRR	IL13-0001 (mFd)	IL4-0749 (天然Fab)	IL33-0726 (天然Fab)	28	ND	ND	ND	7.1	12.4
IL413p40-0698	CB EEE-RRR	IL13-0001(mFd)	IL4-0749 (天然Fab)	p40-0003 (天然Fab)		1.56E-10	2.10E-10		12.2	11.75
IL413p40-0700	CB EEE-RRR	IL13-0001(mFd)	IL4-1040 (天然Fab)	p40-0003 (天然Fab		7.71E-10	2.03E-09		13.2	12.24

ND：未測定

可使用EEE-RRR基於電荷之雜二聚化策略生產Tri-Fab-Fc分子，並被證明可以中和其所有的三個目標。值得注意的是，除鉸鏈及CH3突變之外，在兩個不同細胞中產生兩個部分之各Tri-Fab-Fc分子能夠使用三個Fab域中之僅一者中的突變實現成功三特異性生成，以驅動正確鏈配對。成功地產生用Fab1域構建之經修飾之Fd(mFd)或C κ交換(CkS)形式(Fab2及Fab3使用天然序列用於鏈配對)的Tri-Fab-Fc分子且展示為功能性的。

表35中測試的Tri-Fab-Fc分子的熱穩定性一致很高，對於所評估的四個分子均大於70℃。IL413TSLP-0251 (CkS形式)及IL413-TSLP-0252 (mFd形式)之完整質譜分析展示大部分純化材料為正確組裝之Tri-Fab-Fc，未偵測到錯配物質。樣品含有低水平之SFab臂及雙Fab臂，表明樣品在雙特異性組裝期間已不完全氧化。重要的是，不存在錯配指示，儘管在Fab2中不存在促進配對之突變，但Fab1中CkS或mFd修飾足以在構成雙Fab臂之三個鏈之共表現期間驅動Fab1與Fab2兩者之特異性配對。

測試在Fab1位置中之IL13-0001域以mFd形式(在Tri-Fab-Fc IL413TSLP-0252中)及CkS形式(在其他相同的Tri-Fab-Fc IL413TSLP-0251中)的中和效力，且兩者形式均具有高度類似的活性(IC ₅₀分別為11.2及13.7 pM；表36)。同樣，在此兩種TSLP Tri-Fab-Fc變異體中Fab2位置之IL4-0002域具有類似活性(IC ₅₀分別為3.65及6.11 pM；表36)。雖然表36中之其他分子在獨立分析中測試且無法直接比較，但在雙Fab臂上針對IL-13及IL-4 Fab觀測到的一致的高中和效力表明，在CB雜二聚體形式中，Fab3位置的結合域對Fab1及Fab2的功能幾乎沒有影響，且因此單獨產生之分子的部分可單獨進行工程改造。

藉由DSC及熱強迫聚集傾向評估Tri-Fab-Fc三特異性物。熱強迫聚集傾向用於測定在熱應力條件下之蛋白質穩定性。該方法先前由Fennel BJ等人描述(5)。簡言之，經過一些修飾，將PBS中1 mg/mL的20 uL蛋白質樣品放入96孔光學反應培養盤(Applied Biosystems)，用30 µL礦物油(Sigma-Aldrich)覆蓋，並用黏附性薄膜(Applied Biosystems)密封。將盤置於具有40至64℃範圍內之恆定溫度梯度的PCR阻斷加熱器(Bio-Rad C1000 Touch Thermal Cycler)中。在24小時培育之後，在具有QC-PAK-GFC300管柱(Tosoh Bioscience LLC)的Agilent 1200系列HPLC (Agilent Technologies)上分析10 μl的加熱樣品中之每一者及保持在4℃的對照樣品，且使用PBS作為操作緩衝液。對於各樣品，聚集百分比計算為各溫度下剩餘的抗體分子峰面積與4℃對照樣品的峰面積之比。針對各抗體製作%HMMS與溫度之曲線圖，且與臨床mAb之歷史資料相比以確定聚集傾向。

在三個TSLP Tri-Fab-Fc分子中，與具有Fab1 (呈CλS形式)之等效Tri-Fab-Fc IL413TSLP-0249相比，兩個具有一致結合域及具有Fab1 (呈mFd形式)的三特異性物(IL413TSLP-0248及0250)展現較高Tm1及改良的聚集傾向(表37)。此外，與具有不同位置中之相同結合域之杵臼Tri-Fab-Fc相比，基於電荷之Tri-Fab-Fcs IL413TSLP-0251及IL413TSLP-0252 (其中IL13-0001在Fab1位置，IL4-0002在Fab2位置)展示熱穩定性之進一步改良(表37)。因此，鏈配對策略及域位置均會影響使用相同結合域的Tri-Fab-Fc的生物物理學特性，強調需要進行實驗來確定最佳佈置。表 37 ： 熱穩定性及聚集傾向比較

Tri-Fab-Fc名稱	Fc形式	Fab1	Fab2	Fab3	pH保持在3.4 ↑%HMMS	Tm1 (℃)	聚集傾向
IL413TSLP-0248	KiH	TSLP-0100 (mFd)	IL4-0002 (S1Rev)	IL13-0001 (S1)	11.5	67.91 ± 0.12	低
IL413TSLP-0250	KiH	TSLP-0100 (mFd)	IL13-0001 (S1)	IL4-0002 (S1Rev)	13.2	67.46 ± 0.09	低
IL413TSLP-0249	KiH	TSLP-0100 (CλS)	IL4-0002(S1Rev)	IL13-0001 (S1)	15.9	59.90 ± 0.02	高
IL413TSLP-0251	CB EEE-RRR	IL13-0001(CkS)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)	11.1	70.24 ± 0.40	低
IL413TSLP-0252	CBEEE-RRR	IL13-0001(mFd)	IL4-0002 (天然Fab)	TSLP (0100) (天然Fab)	10.0	70.50 ± 0.01	低

實例37 具有mFd設計及經由暫時Expi293™表現系統產生之雙Fab IL-4/IL-13 EEE臂之最佳化為使用EEE-RRR基於電荷(CB)之Fc雜二聚方法研發穩固抗IL-4/IL-13雙Fab臂，抗IL-13/抗IL-4雙Fab臂之若干設計要素系統地變化：雙Fab臂中IL-4及IL-13域之位置；各結合域之VH及VL之序列；及使用CκS及mFd驅動Fab1配對。此類雙Fab臂之有利之處在於其可用於產生僅有第三獨特功能臂不同之多種不同抗IL-4/IL-13 Tri-Fab-Fc變異體。另外，CB方法之表現邏輯之複雜度較低，有助於研究以理解哪些CDR序列負責兩種高度類似KiH TriFab Fc (IL13433-0606及IL13433-0607)之出乎意料地低的暫時HEK-293及穩定CHO表現滴定(表34)。此等兩個TriFab-Fc分子之Fab1 (IL33-0224, mFd形式)及Fab2 (IL4-0157, S1 rev)域相同且其Fab3域不同(IL13-0259在IL13433-0606中，及IL13-0271在IL13433-0607中)。此外，IL13-0259及IL13-0271具有一致的VH，但不同第VL，其中與IL13-0271之CDRL2有顯著胺基酸差異。IL-4及IL-13 Fab中之變異體VH及VL域序列系統地組合以鑑別與KiH及CB TriFab-Fc兩者中之不良表現相關之序列。

將各種雙Fab臂鏈及相關輕鏈或mFd/VL-CH1鏈工程改造至表現載體中，在Expi293F™宿主細胞中暫時表現，且如先前關於蛋白A管柱所描述測定所得條件培養基之表現滴定。毛細管凝膠電泳(cGE; LabChip, Perkin Elmer)用於在蛋白質A捕獲之後規測合乎需要的半/均二聚體百分比及非合乎需要的非半/均二聚體百分比之缺失鏈的百分比。表 38. 攜帶 IL-4 及 IL-13 結合域與呈 mFd 形式之 Fab1 的雙 Fab 臂的暫時表現滴定及 cGE 分析

IL-13 Fab	IL-4 Fab	IL-13 Fab1 ( 外部 ) ； IL-4 Fab2 ( 內部 )	IL-4Fab1 ( 外部 ) ； IL-13 Fab2 ( 內部 )
VL	VH	VL	VH	雙Fab EEE臂名稱	暫時表現滴定 (mg/L)	半/均二聚體%	雙Fab EEE臂名稱	暫時表現滴定 (mg/L)	半/均二聚體%
IL13-0271	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0666	14	91.8	IL134-0731	87.6	77.4
IL13-0259	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0667	15	89.4	IL134-0732	186.3	78.2
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0669	23	92.9	IL134-0734	70.6	79.8
IL13-0259	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0670	55	82.3	IL134-0735	90.2	74.8
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0672	96	94.7	IL134-0737	88.9	79.3
IL13-0271	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0673	32	85.6	IL134-0738	52.2	76.7
IL13-0259	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0157				IL134-0733	92	78
IL13-0259	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0002				IL134-0736	90.4	77.7
IL13-0001	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0668	16	88.9
IL13-0001	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0671	66	93
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0002	IL4-0002	IL134-0674	184	92.8

蛋白A管柱測定暫時表現之條件培養基之滴定，且藉由cGE分析經純化之Fab1抗IL-13/Fab 2抗IL-4雙Fab臂。 註釋： IL13-0259 及 IL13-0271 具有相同 V _H

為了測試兩個變數，即IL4及IL13結合域的序列變化以及IL4及IL13結合域在雙Fab臂中的位置，設計了一組雙Fab臂，對蛋白滴定及蛋白A純化後表現的物質大小進行了檢查。在此組內，所有構築體均在蛋白質A上純化之材料池中具有高比例之預期大小之分子，雙Fab臂之均二聚體或由一個雙Fab臂組成之半分子(dFab及相關LC及mFd)。在Fab1 (外部)位置具有抗IL4之構築體及在Fab2 (內部)位置具有抗IL-13之構築體在75-79%均二聚體/半分子範圍內，而相反定向中之構築體具有一致地稍微較高比例之均二聚體/半分子(82-94%；表38)。此模式在對兩個方向進行檢查的6個實例中均明顯。

經藉由蛋白質A上捕獲之蛋白質所量測，此等雙Fab臂之表現量顯著變化，且似乎與特定位置中之特定序列相關。舉例而言，當抗IL4 Fab位於Fab2 (內部)位置時，與含有IL4-0002之VH域及IL4-0157之VL域之構築體相比，含有IL4-0157之VH及VL域之構築體具有一致的低滴定(表38)：IL134-0666 (IL4-0157 VH的Fab2，IL4-0157 VL；IL13-0259 VH的Fab1，IL13-0271 VL)之滴定為14 mg/L，而IL134-0673為32 mg/L，後者除了含有IL4-0002 VH而非IL4-0157 VH外，其餘完全相同。類似地，IL134-0667 (IL4-0157 VH的Fab2，IL4-0157 VL；IL13-0259 VH的Fab1，IL13-0259 VL)之滴定為15 mg/L，而其對應的IL134-0670 (除了含有IL4-0002 VH而非IL4-0157 VH外，其他相同)的滴度為55 mg/L。當IL4-0157之VH經IL4-0002之VH置換時，其他兩對構築體的滴定亦有類似的增加：IL134-0668 (IL134-0671為16 mg/L上升至66 mg/L)及IL134-0669 (IL134-0672為23 mg/L上升至96 mg/L)。此等觀測結果表明當抗IL-4在Fab2位置中時IL4-0157 VH對低表現有顯著貢獻。

當抗IL-4域在Fab1位置、抗IL-13在Fab2位置時，與相同的結合域在相反方向的構築體相比，表現量通常較高(表38)。此對於IL4-0157 VH/IL4-0157 VL尤其明顯；在此情況下，當IL4域自Fab2移動至Fab1時表現量上升3至12倍。例如，構築體IL134-0666、IL134-0667及IL134-0669 (其中抗IL-4在Fab2位置)，表現量分別為9、15及23 mg/L，而其對應物IL134-0731、IL134-0732及IL134-0734 (其中抗IL-4在Fab1位置)，表現量分別為87.5、186.3及70.6 mg/L。

當抗IL-4域處於Fab1位置時，抗IL-4域序列(IL4-0157 VH/IL4-0157 VL及IL4-0002 VH/IL4-0157 VL)均與高滴定相容。此等觀測結果表明當IL4-0157 VH位於Tri-Fab-Fc之雙Fab LC(1) HC(2)鏈中時，在Fab2方向上表現時發揮其對表現之負面影響，而不像IL4在Fab1位置時那樣在VH-CH1經修飾之Fd鏈上表現。

在抗IL-13域中，IL13-0271 VL序列作為低表現之促成因素。在此組中分析IL-4域序列之情形下，與IL13-0259 VH配對之抗IL13-0271 VL的滴定比與其中IL13-0259 VL與IL13-0259 VH配對之等效構築體低大致兩倍(表38)。舉例而言，當IL13-0271 VL經IL13-0259 VL置換時，在Fab1位置中具有抗IL13之構築體之滴定自9 mg/L (IL134-0666)增加至15 mg/L (IL134-0667)及自32 mg/L (IL134-0673)增加至55 mg/L (IL134-0670)。

與IL4-0259 VH域之位置依賴性表現相反，當抗IL-13域在Fab1或Fab2位置時IL13-0271 VL之不利影響係類似的。當IL13-0271 VL經IL13-0259 VL置換時，在Fab2位置具有抗IL13之構築體之滴定自87.6 mg/L (IL134-0731)增加至186.3 mg/L (IL134-0732)及自52 mg/L (IL134-0738)增加至90 mg/L (IL134-0735)，與抗IL13在Fab1位置之影響程度類似。當在Fab1與Fab2位置時，由IL13-0001 VH及IL13-0001 VL構成之抗IL13域與一般高滴定相關聯。

實例38 用CkS設計工程改造的抗IL-4/IL-13雙Fab EEE臂且經由暫時Expi293™表現系統產生在抗IL-4及抗IL-13域之情形下，測試在雙Fab臂中迫使特異性重鏈配對之兩種替代方法(即經修飾之Fd (mFd)及CkS (CH-Cκ交換))在如上所描述之Fab1及Fab2位置中對表現及純度之影響。Fab1 (外部)域之VH-κ藉由GGGGS (SEQ ID NO: 104)連接子融合至Fab2 (內部Fab)重鏈之VH。

對於各DFab EEE臂表現，根據製造方案(Thermo Fisher Scientific)將編碼相應抗IL-13/IL-4鏈(圖28)三個cDNA載體轉染至Expi 293細胞中。在第5天收穫表現雙Fab臂之細胞之條件培養基且用MabSelect™ SuRe™ LX(GE Healthcare Life Sciences)捕獲。溶離之抗體用2M HEPES pH 8.0中和。使用非還原cGE評估所需物質(由雙Fab HC(1)-HC(2)鏈、VL-Ck(1)鏈及LC(2)鏈構成之「半分子」之混合物，以及此等「半分子」的均二聚體)與非所需錯配物質(非半/均二聚體)之百分比。使用蛋白A管柱測定所得條件培養基之表現滴定。表 39 ： 帶有變異體 IL-4 及 IL-13 域以及 Fab1 (CkS 及 mFd 形式 ) 之雙 Fab 臂的表現

		IL-13 Fab1 ( 外部 ) ； IL-4 Fab2 ( 內部 )	IL-4 Fab1 ( 外部 ) ； IL-13 Fab2 ( 內部 )
a-IL-13	a-IL-4	CkS	mFd	CkS	mFd
VL	VH	VL	VH	雙Fab EEE臂名稱	滴定(mg/L, proA	雙Fab EEE臂名稱	滴定(mg/L, proA	雙Fab EEE臂名稱	滴定(mg/L, proA	雙Fab EEE臂名稱	滴定(mg/L, proA
IL13-0271	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0675	97	IL134-0666	14	IL134-0745	100	IL134-0731	87.6
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0676	110	IL134-0669	23	IL134-0746	140	IL134-0734	70.6
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0677	147	IL134-0672	96	IL134-0747	342	IL134-0737	88.9

當使用Fab1以C κ交換(CkS)形式構建雙Fab臂時，所測試六個構築體中之HEK293表現較高(97-342 mg/L)；表39。此觀測與Fab1呈mFd形式時所觀測到之可變表現量形成對比，其中IL13-0271 VL域(在Fab1中)及IL4-0157 VH (在Fab2中)與低於23 mg/L (雙Fab臂IL134-0666及IL134-0667)之低表現相關。此等觀測結果強調某些胺基酸序列與其在雙fab臂內之位置之間的相互作用對表現的重要性；可變區IL13-0271 VL及IL4-0157 VH之影響僅當其在攜有mFd之雙重Fab之長鏈時才明顯。表 40 ： 帶有變異體 IL-4 及 IL-13 域以及 Fab1 (CkS 及 mFd 形式 ) 之雙 Fab 臂的均質性

		IL-13 Fab1 ( 外部 ) ； IL-4 Fab2 ( 內部 )	IL-4 Fab1 ( 外部 ) ； IL-13 Fab2 ( 內部 )
a-IL-13	a-IL-4	CkS	mFd	CkS	mFd
VL	VH	VL	VH	雙Fab EEE臂名稱	cGE (非還原) 半/均二聚體%	雙Fab EEE臂名稱	cGE (非還原) 半/均二聚體%	雙Fab EEE臂名稱	cGE (非還原) 半/均二聚體%	雙Fab EEE臂名稱	cGE (非還原) 半/均二聚體%
IL13-0271	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0675	66.4	IL134-0666	91.8	IL134-0745	91.4	IL134-0731	77.4
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0157	IL134-0676	84.2	IL134-0669	92.8	IL134-0746	94.2	IL134-0734	79.8
IL13-0001	IL13-0001	IL4-0157	IL4-0002	IL134-0677	87.9	IL134-0672	94.7	IL134-0747	86.3	IL134-0737	79.3

當使用Fab1以C κ交換(CkS)形式構建雙Fab臂時，蛋白質A純化後之蛋白質均質性通常較高(所要均二聚體或半分子＞84%；表40)，除了IL134-0675 (其在Fab1位置含有結合域IL13-0271 VL/IL13-0259 VH且在Fab2位置含有IL4-0157 VL/IL4-0157 VH)為66.4%。在所檢測的構築體中，低均勻性並沒有明顯的模式可循。

綜合而言，累積資料表明，在三個結合域之某些序列的情形下，所有經檢查的雜二聚方法及Fab配對策略均能夠支持穩定的、良好表現的及生物學上活性的Tri-Fab-Fc分子。

實例39 用mFd設計工程改造的抗IL-4/IL-13雙Fab EEE臂之穩定CHO表現為評估經由暫時Expi293FF™細胞產生之Tri-Fab-Fc分子之表現及表現/配對穩定性特徵是否可轉譯成穩定CHO細胞，在穩定CHO細胞中檢查呈mFd格式之三個雙Fab EEE臂，IL134-0666、-0667及-0670。將三個獨特鏈(雙Fab LC(1)-HC(2) EEE鏈，經修飾之Fd鏈及抗IL-4輕鏈)次選殖至Lonza之CHO SSI 2.0載體中。針對各雙Fab EEE臂產生三個獨立穩定CHO池(各200 mL)且用蛋白A管柱測定所得條件培養基之表現滴定。表39中所示之表現滴定為三個池之平均值。毛細管凝膠電泳(cGE; LabChip, Perkin Elmer)用於規測半/均二聚體及非半/均二聚體之百分比。

三個雙Fab臂在表現於經穩定轉染之CHO細胞而非經暫時轉染之Expi293F中時，顯示出出人意料的表現量及純度差異(表41)。舉例而言，儘管IL134-0667及IL134-0666在暫時HEK293系統中的表現量相似，但在穩定轉染之CHO細胞中，IL134-0667與IL134-0666相比，表現滴度提高了5.5倍(1337 mg/L與240 mg/L)。類似地，在穩定轉染之CHO細胞中，IIL134-0667所要的均二聚體/半分子物質的比例明顯高於IL134-0666 (93.6%與53.8%)。

與此等觀測結果相反，IL134-0670在暫時Expi293F™中之表現量比IL134-667高3.6倍，但在經穩定轉染之CHO細胞中之表現量低2倍。

自此有限分子組中，穩定CHO細胞中之最低表現與IL13-0271的VL在雙Fab LC(1)-HC(2)鏈的外部位置相關，而IL4-0002的VH在雙Fab LC(1)-HC(2)鏈的內部位置的存在與低表現無關。此與在暫時Expi293F™表現中觀測到之模式形成對比，其中此位置中IL4-0002之VH與最差表現相關聯。儘管在兩種表現系統中，少數胺基酸變化引起表現及純度之較大差異，但特定序列之影響無法自一個系統向另一系統轉譯。表 41 ：穩定 CHO 及暫時 Expi293F™ 細胞中 mFd EEE DFab 臂設計之表現量及純度

雙Fab EEE臂名稱	Fab 1 抗 IL-13 ( 外部 )	Fab 2 抗 IL-4 ( 內部 )	暫時 Expi293F™ 細胞	穩定 CHO 細胞
VL	VH	VL	VH	表現滴定 (mg/L)	cGE (非還原) 半/均二聚體%	表現滴定 (mg/L)	cGE (非還原) 半/均二聚體%
IL134-0666	IL13-0271	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	14	91.8	240	53.8
IL134-0667	IL13-0259	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0157	15	89.4	1337	96.3
IL134-0670	IL13-0259	IL13-0259	IL4-0157	IL4-0002	55	82.3	655	88.9

實例40 3種細胞介素藉由Tri-Fab-Fc變異體之同時結合表面電漿子共振(SPR)用於測定Tri-Fab-Fc是否可同時結合三種細胞介素。對於此分析，使用BIAcore 8K+ (GE Healthcare)儀器研發半定量SPR方法。為進行此評估，遵循製造商之方案抗人類IgG抗體(GE Healthcare, BR-1008-39)共價胺偶合至CM5羧基甲基化聚葡萄糖塗佈之感測器晶片之所有流槽上，達到約10,000個共振單位(RU)之密度，且接著將IL13433-0006 Tri-Fab-Fc捕獲至約60-90 RU之水平。接著，在第一循環中，Tri-Fab-Fc用三種細胞介素中之一者飽和，接著在後續循環中用其他細胞介素飽和或僅在循環1及循環2中用緩衝液飽和(表42)。表42.

替代細胞介素	僅緩衝液，繼之以細胞介素
循環	5	7	9	循環	11	13	15
第 1 次注射	IL-13	IL-33	IL-4	第 1 次注射	緩衝液	緩衝液	IL4
第 2 次注射	IL-33	IL-4	IL-13	第 2 次注射	緩衝液	緩衝液	IL13
第 3 次注射	IL-4	IL-13	IL-33	第 3 次注射	緩衝液	緩衝液	IL-33

來自此SPR評估之結果指示IL13433-0006 Tri-Fab-Fc可同時結合IL-4、IL-13及IL-33細胞介素(圖29)。另外，第3次注射活性百分比結果對於緩衝液-緩衝液-細胞介素及細胞介素1-細胞介素2-細胞介素3循環類似，進一步證實，當Tri-Fab-Fc分子結合至一或兩種細胞介素時，其可在無其他兩種細胞介素的情況下儘可能多地結合第三種細胞介素。

類似地，使用上述之方法測試IL413p40-0705與IL-4、IL-13及IL-23 (具有40次單元)之同時結合，不同之處在於在感測器表面上捕獲約100個Tri-Fab-Fc之共振單位。IL413p40-0705同時結合至所有三種同源細胞介素IL-13、IL-4及IL-23 (具有p40次單元)，不管注射次序如何(圖30)。

實例41 最佳化用於改良藥物動力學特性之基於電荷之Fc雜二聚方法使用雙細胞方法設計一系列抗IL-4/IL-13/IL-33 (IL13433) Tri-Fab-Fc變異體用於表現，其中雙Fab臂及單Fab臂表現於各別細胞中。變異體主要經工程改造，其中Fc雜二聚藉由相反電荷配對突變介導(圖31A、31B及31C)，但杵臼突變亦用於工程改造Tri-Fab-Fc變異體IL13433-1275 (圖31D)。所有雙細胞方法設計利用與IL13433-1270中相同的Fab域定位(圖23D)。特定言之，一個細胞產生在Fab3位置具有抗IL-33結合域IL33-0726之單Fab臂，且第二細胞產生由Fab1或外部位置中呈mFd形式之抗IL-13結合域IL13-0001及Fab2或內部位置中呈天然Fab形式之抗IL-4域構成的雙Fab臂(圖31)。抗IL-4域IL4-1040用於Tri-Fab-Fc分子IL13433-1258、IL13433-1261、IL13433-1270及IL13433-1275中，而抗IL4域IL4-0749用於IL13433-1042中。在一種情況下，將三個帶正電殘基引入人類IgG1恆定區中以驅動Fc雜二聚化；將兩個突變D(H232)R及P(H241)R引入鉸鏈中且將K(H440)R引入CH3區中。併入人類IgG1恆定區中之三種相反負電荷配對突變為D(H232)E及P(H241)E併入鉸鏈區中及L(H391)E併入CH3域中。利用三個電荷配對突變(稱為「EEE/RRR」)的此設計用於工程改造Tri-Fab-Fc變異體IL13433-1042(圖31A)。相反電荷配對突變之變化用於構築Tri-Fab-Fc分子，其中抗體鉸鏈區中過量電荷之量減少。Tri-Fab-Fc IL13433-1258經工程改造以僅在鉸鏈區中包括D(H232)R或D(H232)E及僅在CH3域中包括L(H391)E或K(H440)R (「EE/RR」；圖31B)，儘管IL13433-1261在鉸鏈區不含有電荷突變，僅在CH3域含有L(H391)E或K(H440)R (「E/R」；圖31C)。

實例 42 藉由單細胞及雙細胞方法產生之 Tri-Fab-Fc 變異體蛋白質之純化用於藥物動力學評估使用單細胞及雙細胞方法產生抗IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc變異體且按照製造商提出之方案使用Expi293F™宿主細胞產生含有此等Tri-Fab-Fc蛋白質之條件培養基。用於純化單細胞衍生之Tri-Fab-Fc變異體之通用方法使用三管柱步驟：MabSelect™ SuRe™ LX (GE Life Sciences)，接著單-S陽離子交換、Superdex 200凝膠過濾且接著緩衝液交換成PBS-CMF pH 7.4 (表43)。在一些情況下，對於單細胞所產生之Tri-Fab-Fc，Superdex 200凝膠過濾步驟可在製程開發最佳化之後消除。雙細胞產生之Tri-Fab-Fc變異體之通用純化方法如下，其中分子特異性細節參見表43中。MabSelect™ SuRe™ LX捕獲雙Fab均二聚體及單Fab均二聚體，氧化還原反應隨Fc區中之相反電荷配對突變之選擇而變化，隨後將緩衝液交換、單-S陽離子交換及最終緩衝液交換成PBS-CMF pH 7.4。此外，對於一些雙細胞產生之Tri-Fab-Fc，在陽離子交換步驟之後包括Superdex 200凝膠過濾層析。此等結果支持可開發出方法來純化經由單細胞或雙細胞方法產生之Tri-Fab-Fc變異體，該等方法各自具有其自身益處及挑戰。對於雙細胞方法，氧化還原條件視利用何種Fc雜二聚突變而變化，且需要廣泛篩選適當條件。對於單細胞方法而言，儘管表現可具有挑戰性，因為包含Tri-Fab-Fc之5條鏈需要在單細胞中產生，整體純化方法更接近標準抗體製程方法且不需要多個純化步驟來獲得所關注之分子。自分析視角來看，單細胞方法具有增加之複雜性，因為需要自各雙細胞產生組分，尤其雙Fab(1)-Fab(2)均二聚體及單Fab(3)均二聚體來分析錯配物質。表43.用於單細胞及雙細胞Expi293F™產生之Tri-Fab-Fc變異體之純化流程。

Tri-Fab-Fc 變異體	方法	ProA 捕獲	氧化還原	氧化還原後純化	分析型
IL13433-1042	雙細胞： EEE/RRR	+平台	+在25℃下20x Cys	+2個管柱純化步驟(CEX，SEC)	+在雙細胞形式下表現時，LC配對正確 +用aCEX (Agilent 1290)偵測親本均二聚體
IL13433-1258	雙細胞： EE/RR	+平台	-高還原劑莫耳過量(300×GSH)	+CEX上之良好分離(2步純化)	+在雙細胞形式下表現時，LC配對正確 +用aCEX (Agilent 1290)偵測親本均二聚體
IL13433-1261	雙細胞： E/R	+平台	-高Cys莫耳過量(150x) -在37℃下反應隔夜	+CEX上之良好分離(2步純化)	+在雙細胞形式下表現時，LC配對正確 +用aCEX (Agilent 1290)偵測親本均二聚體
IL13433-1275	雙細胞：KiH，CH3域中無經工程改造之Cys	-三/精胺酸以穩定KiK及HiH二聚體	-高GSH莫耳過量(600×) -在37℃下反應隔夜	+CEX上之良好分離(2步純化)	+在雙細胞形式下表現時，LC配對正確 +用aCEX (Agilent 1290)偵測親本
IL13433-1270	單細胞： KiH，S1-S1反向	+平台	+不需要氧化還原	+CEX上之良好分離(2步純化)	-偵測除LCMS以外之LC錯配之有限分析型方法
IL13433-1279	單細胞： KiH，S1-S1反向，CH3域中無工程改造之Cys	+平台	+不需要氧化還原	+CEX上之良好分離(2步純化)	-偵測除LCMS以外之LC錯配之有限分析型方法

+=有利特性；- =不利特性；aCEX=分析型陽離子交換；CEX=單-S陽離子交換；Cys=半胱胺酸；GSH=麩胱甘肽；HiH=臼臼；KiH=杵臼；KiK=杵杵；平台=根據製造商建議的方案。

實例 43 Tri-Fab-Fc 變異體之生物分析及生物物理學表徵使用單細胞或雙細胞方法產生之Tri-Fab-Fc變異體經受廣泛生物分析及生物物理學表徵，以瞭解此等複合分子之特性，該等複合分子使用不同Fc雜二聚及電荷配對突變來製備以限制蛋白質鏈之錯配且促進完整Tri-Fab-Fc分子之最大產量。特定言之，以下方法用於評定關鍵分子特性：分析型尺寸排阻層析(aSEC)以測定高分子量物質(HMMS)百分比作為聚集指示、使用差示掃描熱量測定(DSC)之熱穩定性、非還原cGE評估所關注的峰(POI)值百分比、用於未加壓樣品(T0)之成像毛細管電泳(iCE)以評估電荷異質性、電腦模擬免疫原性評估評分及非特異性評估。用於各自各方法之細節如下。

使用YMC-Pack Diol-200 SEC管柱在20 mM Na ₃PO ₄、400 mM NaCl、pH 7.2緩衝液中進行分析型SEC。記錄了主峰的滯留時間及峰寬以及主峰(POI)、低分子量物質峰(LMMS)及HMMS峰的面積和百分比，並用於計算主峰(POI)、HMMS峰及LMMS峰的百分比。

對於DSC方法，將處於0.3 mg/mL之樣品藉由自動取樣器(Malvern Instruments, Inc.)分配至MicroCal VP-毛細管DSC之樣品盤中，在10℃下平衡5分鐘，且接著以每小時100℃之速率掃描直至110℃。選擇16秒之過濾期。將原始資料經基線校正且將蛋白質濃度標準化。Origin軟體7.0 (Origin Lab Corporation, Northampton, MA)係用於利用適當轉譯數目將資料擬合至MN2-狀態模型。

使用Caliper LabChip GXII (PerkinElmer Inc., Hopkinton, MA)根據製造商建議的方案執行非還原性cGE。

使用具有PrinCE自動取樣器ProteinSimple, San Jose, CA)之蛋白質簡單iCE3儀器分析無應力(T0) Tri-Fab-Fc樣品之電荷異質性。將蛋白質於水中稀釋至2 mg/mL。樣品稀釋劑包含0.01 mg/mL pI標記物4.65、0.01 mg/mL pI標記物9.5、4.0% Pharmalyte (pH 3-10)、0.25%甲基纖維素及2.0 M脲。樣品含有15 μL 2 mg/mL之蛋白質及85 μL樣品稀釋劑。將樣品在1500伏下聚焦1分鐘且接著在3000伏下聚焦6分鐘。

為了計算免疫原性評分，提供序列以用於ISPRI套裝軟體(ISPRI v 1.8.0，EpiVax公司，Providence，RI; 26)中之EpiMatrix分析。原始結果提供各9-聚體胺基酸片段針對8種不同HLA類型之結合的可能性等級。臨床抗藥物抗體(ADA)資料及已知風險因素(諸如目標位置或生物物理學特性)之分析引起使用T-reg調整之Pfizer評分的指導。評分之等級如下：良好≤-50，中度≤-30且≥-50，差≥-30。

AC-SINS分析及DNA及胰島素直接結合描述於實例15中之ELISA方法。評分之等級如下：良好0至5，中度＞5且＜10，高＞10。

抗IL-4/IL-13/IL-33、IL-4/IL-13/TSLP及IL-4/IL-13/p40 Tri-Fab-Fc變異體的生物物理學及生物分析評估結果之概述表明，所有變異體一般具有與標準良好表現之抗體相當的有利分子特性(表44)。所有均展現良好熱穩定性，T _m1值＞65℃。完整Tri-Fab-Fc之完整度＞95%，經藉由非還原cGE分析所測定，且藉由分析型SEC分析認為聚集傾向較低。此等Tri-Fab-Fc變異體存在良好的電腦模擬預測之免疫原性及可接受的非特異性評分，其為包含經工程改造用於此等有利特徵之Tri-Fab-Fc的結合域的複合物。不同於表現良好的抗體，Tri-Fab-Fc變異體注意到一個觀測結果為電荷異質性增加，其可能歸因於攜帶三個獨立Fab結合域之單分子的複雜性。表44. 對 Tri-Fab-Fc 變異體評估之關鍵生物物理及生物分析特性之概述。

Tri-Fab-Fc 變異體	描述	aSEC % HMMS	DSC T _m1 ( ℃ )	cGE % 完整 NR	iCE T0	免疫原性 Pfizer T-reg 調節評分 ( 多鏈 )	非特異性評分 ( 若報導多個值，則 n=2 個獨立分析 )
酸性 %	主要 %	鹼性 %	AC-SINS	DNA	胰島素
IL13433-1042	雙細胞： EEE/RRR	0.7	69.84	ND	37.6	55.0	7.4	-53.70	12	3	3
IL13433-1258	雙細胞： EE/RR	1.33	70.47	98.1	24.5	66.4	9.2	-53.32	1, 6	6, 5	6, 5
IL13433-1261	雙細胞： E/R	1.84	70.30	96.7	21.8	69.8	8.4	-53.32	1, 5	5, 6	6, 6
IL13433-1275	雙細胞：KiH，CH3中無Cys	0.74	70.10	95.8	48.1	46.1	5.9	-53.32	1, 4	6, 5	6, 6
IL13433-1270	單細胞：KiH，S1-S1rev	0.26	70.92	97.1	25.2	65.8	9.0	-53.32	1, 5	7, 5	7, 6
IL13433-0006	單細胞：KiH，S1-S1rev	0.5	71.52	ND	41.6	49.5	8.9	-49.74	1	3	2
IL13433-0607	單細胞：KiH，S1-S1rev	0.09	71.60	ND	26.6	61.5	11.9	-60.40	3	4, 5	6, 7
IL413TSLP-1024	雙細胞：EE/RR	0.18	69.01	99.0	27.2	65.3	7.5	-57.01	9	4	6
IL413TSLP-1028	雙細胞：EE/RR	0.45	70.48	91.6	23.7	72.2	4.1	-56.94	4,2	2,3	9, 6
IL413TSLP-1037	雙細胞：EE/RR	0.71	68.82	91.4	25.0	70.6	4.4	-57.01	4,2	1,3	9, 6
IL413p40-0705	雙細胞： EE/RR	0.98	69.47	99.5	27.3	56.3	16.3	-30.83	3,2	5,4	8,7

對於非特異性評分而言，多個評分表示n=2個獨立分析；免疫原性評分之等級如下：良好≤-50，中度≤-30且≥-50，差≥-30；評分如下：良好0至5，中度＞5且＜10，高＞10；AC-SINS及多反應性評分之等級如下：良好0至5，中度＞5且＜10，高＞10，KiH=杵臼；ND=未測定；S1-S1rev=靜電互補S1及S1-反向突變。

對所選Tri-Fab-Fc變異體進行完整液相層析-質譜(LCMS)分析，以確定最終純化產物內存在之所需完整正確配對之Tri-Fab-Fc分子的量。在37℃下，將Tri-Fab-Fc樣品與肽N-糖苷酶F (New England Biolabs, Ipswich MA)一起培育1小時。接著，將25 µg樣品注射於C4 BEH300管柱(Waters™)上且藉由在與Bruker maXis II QToF質譜儀耦接的Waters Acquity H-Class HPLC上進行LCMS分析。來自完整LCMS分析之結果顯示，對於使用單細胞或雙細胞方法生產的此等變異體，所需的完整的Tri-Fab-Fc係主要的分子實體(＞95%)，其中在最終純化產物中僅有痕量(＜5%)非所需雙產物，且用替代的Fc雜二聚化突變進行工程改造(表45及46)。表45.單細胞產生之Tri-Fab-Fc變異體之完整LCMS分析結果

Tri-Fab-Fc 變異體 ID	完整 Tri-Fab-Fc	非所需雙產物
Tri-Fab-Fc 減 SFab LC	Tri-Fab-Fc 減 Dfab LC
IL13433-1270	大量	痕量	ND
IL13433-1279	大量	痕量	痕量

ND=未偵測；偵測到的量：痕量(＜5%)、少量(＜50%)及大量(＞50%) 表46.雙細胞產生之Tri-Fab-Fc變異體之完整LCMS分析結果

Tri-Fab-Fc 變異體 ID	完整 Tri-Fab-Fc	非所需雙產物
EE/E/ 臼雙 Fab 臂均二聚體	Tri-Fab-Fc 減 SFab LC	Tri-Fab-Fc 減 DFab LC	Tri-Fab-Fc 減 mFd	EE/E/ 臼雙 Fab 臂單體
IL13433-1258	大量	痕量	痕量	痕量	痕量	痕量
IL13433-1261	大量	痕量	痕量	痕量	痕量	痕量
IL13433-1275	大量	ND	痕量	痕量	痕量	痕量
IL413TSLP-1024	大量	ND	痕量	痕量	痕量	ND
IL413TSLP-1028	大量	ND	痕量	痕量	痕量	ND
IL413TSLP-1037	大量	ND	痕量	痕量	痕量	ND
IL413p40-0705	大量	ND	痕量	痕量	痕量	痕量

ND=未偵測；偵測到的量：痕量(＜5%)、少量(＜50%)及大量(＞50%)

對使用雙細胞製程產生之IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL313p40-0705 Tri-Fab-Fc變異體進行綜合的分子評估(圖31)，該等變異體由固定幾何形狀之以下結合域構成：IL13-0001 (Fab1)、IL4-1040 (Fab2)，以及IL33-0726、TSLP-0875、TSLP-0855、TSLP-0871或p40-0003 (Fab3)。對使用單細胞製程產生之IL13433-1270，IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc進行綜合的分子評估(圖32)，其具有與IL13433-1258相同之結合域幾何形狀。此進一步分析之目標為瞭解Tri-Fab-Fc變異體經受熱量及高濃度挑戰對分子完整性及潛在化學責任誘導的影響。為了進行高濃度溶解性及穩定性評估，將Tri-Fab-F變異體調配成150 mg/mL，放入三種調配物緩衝液(20 mM Tris，8.5%蔗糖pH 7.5，20 mM組胺酸，8.5%蔗糖，0.05 mg/mL EDTA pH 5.8及20 mM麩胺酸，8.5%海藻糖pH 4.5)，且在25℃下進行分析。對於評估固有蛋白質序列之化學修飾的加壓樣品分析，將Tri-Fab-Fc變異體調配成5 mg/mL，放入三種調配物緩衝劑減賦形劑(20 mM Tris pH 7.5、20 mM組胺酸pH 5.8及20 mM麩胺酸pH 4.5)中，在40℃下培育且在0、2及4週移除樣品用於評估。

綜合分子分析的結果支持來自初始生物物理學及生物分析評估之發現(表44)，即所有IL13433-1258、IL13433-1270、IL413TSLP-1024及IL413p40-0705 Tri-Fab-Fc變異體均具有與標準IgG形式的良好表現之抗體一致的總體上可接受的良好特性(表47)。在所有高濃度(約150 mg/mL)的IL13433-1258、IL13433-1270、IL413TSLP-1024及IL413p40-0705 Tri-Fab-Fc變異體中，在平台His-蔗糖調配緩衝液中，電荷概況藉由iCE分析測定為穩定的。在所有的IL13433-1258、IL13433-1270、IL413TSLP-1024及IL413p40-0705 Tri-Fab-Fc變異體中，藉由cGE在25℃下儲存6週之樣品的片段化增加極小。如所預期，片段化程度對於儲存於40℃下4週之樣品較高，但在無賦形劑之情況下在His pH 5.8緩衝液中仍然極小。重要的是，在大部分變異體中，電荷概況(iCE)穩定，其中鹼性或酸性物質在25℃及40℃強制降解之後的增加最小至可接受，但IL413p40-0705在25℃有適度的鹼性物質增加，此在其他Tri-Fab-Fc變異體中未觀測到。在所有的IL13433-1258、IL13433-1270、IL413TSLP-1024及IL413p40-0705 Tri-Fab-Fc變異體中，在25℃及40℃強制降解後未觀測到生物活性的損失，此支持了藉由工程改造移除所有Tri-Fab-Fc變異體中的IL-4 CDR及抗IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc中的IL-33 CDR的序列責任。此等結果亦展示雙細胞及單細胞方法均可成功地用於產生具有與標準單株抗體一致之良好溶解度及穩定性的Tri-Fab-Fc分子。表47.使用單細胞或雙細胞模式工程改造之IL-4/IL-13/IL-33、IL-4/IL-13/TSLP及IL-4/IL-13/p40 Tri-Fab-Fc變異體之綜合分子評估。

特性	IL13433-1258 Tri-Fab-Fc	IL13433-1270 Tri-Fab-Fc	IL413TSLP-1024 Tri-Fab-Fc	IL1413p40-0705 Tri-Fab-Fc
pH 3.4保持時之穩定性	EE及RR均二聚體穩定	在pH 4.0下穩定；少量不穩定性	EE及RR均二聚體穩定	EE及RR均二聚體穩定
≥150 mg/mL的溶解度	達成	達成	His/Suc中在高濃度＞130 mg/mL下之蛋白質損失	達成
在≥150 mg/mL時的穩定性(在25℃下長達6週之HMMS及/或LMMS的增加率)	少量	少量	少量	少量
25℃穩定性(iCE) (在25℃下長達6週之酸性及/或鹼性物質的增加率)	少量	少量	少量	酸性物質中的中度增加，在25℃下6週
25℃穩定性(cGE) (在25℃下長達6週之片段化的增加率)	無明顯增加	無明顯增加	無明顯增加	無明顯增加
40℃穩定性(在40℃下長達6週之HMMS及/或LMMS的增加率)	少量	少量	少量	可接受
40℃穩定性(aSEC-MALS) (在40℃下長達4週偵測到的寡聚聚集物之水平)	少量	未進行	未偵測	未進行
40℃穩定性(iCE) (在40℃下長達4週之酸性及/或鹼性物質的增加率)	可接受	可接受	少量於His緩衝液中	可接受
40℃穩定性(cGE) (在40℃下長達4週偵測到的片段化)	少量	少量	少量	少量
40℃穩定性(生物分析) (生物活性損失)	未偵測	未偵測	未偵測	未偵測

HMMS=高分子量物質：LMMS=低分子量物質。

實例 44 在 IL-4 結合域之 CDRL3 中併入 E(L93)K 可降低 IL13433-1258 及 IL413p40-0700 Tri-Fab-Fc 變異體的黏度展示單胺基酸取代E(L93)K (Pfabat編號)降低抗IL-4抗體變異體IL4-0002 (實例7)之黏度，因此此突變經工程改造成抗IL-4/13/33 Tri-Fab-Fc形式，以理解其是否亦將降低此多特異性分子之環境中的黏度。經由相反電荷突變用雙細胞方法產生之IL13433-1042 Tri-Fab-Fc變異體(圖31A)由經工程改造成指定幾何形狀之以下結合域組成：IL13-0001 (Fab1)、IL4-0749 (Fab2)及IL33-0726 (Fab3)。將E(L93)K引入IL4-0749 V _LCDRL3中產生IL4-1040抗IL-4抗體變異體(V _HSEQ ID NO. 30及V _LSEQ ID NO. 34)。使用基於相反電荷之雙細胞(圖31B)及單細胞KiH (圖31D)設計將攜帶E(L93)K之IL4-1040 Fab以及IL13-0001及IL33-0726 Fab工程改造成Tri-Fab-Fc模式，因此分別產生IL13433-1258及IL13433-1270。IL13433-1258及IL13433-1270之結合域(Fab)幾何形狀與IL13433-1042之幾何形狀一致。使用DLS方法評定Tri-Fab-Fc變異體之黏度。準確地說，使用Vivaspin離心濃縮器10K MWCO (GE Healthcare)濃縮交換成20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之蛋白質緩衝液，且當蛋白質濃度增加時自濃縮器滲餘物中移出等分試樣。隨後，將1:10稀釋至20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0緩衝液中之300 nm珠粒(Nanosphere, Thermo Scientific)添加至蛋白質樣品及緩衝液空白。輕輕地混合蛋白質/珠粒樣品，且將樣品轉移至1536孔盤(SensoPlate，玻璃底，Greiner Bio-One)以藉由動態光散射(DLS)使用DynaPro盤讀取器(Wyatt Technology, Santa Barbara, CA)分析。來自DLS黏度評估之結果證實IL-4結合域內之E(L93)K單胺基酸取代亦降低IL13433-1258及IL13433-1270 Tri-Fab-Fc變異體之黏度，且此降低在較高濃度下更明顯(表48)。此外，此等結果顯示，黏度概況類似於由相同結合域構成之Tri-Fab-Fc變異體，但使用雙細胞產生(IL13433-1258，圖31B)或單細胞方法(IL13433-1270，圖31D)，且指示製備之模式或方法不影響黏度(表48)。表48.如使用DLS方法所示，IL-4結合域內之E(L93)K單胺基酸取代降低IL13433-1258 Tri-Fab-Fc之黏度。

IL13433-1042	IL13433-1258 (+E93K)	IL13433-1270 (+E93K)
濃度 [mg/mL]	黏度 cP	STD DEV	濃度 [mg/mL]	黏度 cP	STD DEV	濃度 [mg/mL]	黏度 cP	STD DEV
23.5	8.2	2.1	23.5	4.3	0.9	23.5	6.0	1.3
47.1	11.8	2.2	70.6	8.6	1.4	47.1	6.7	1.3
94.1	22.6	4.7	94.1	12.2	1.7	94.1	8.0	1.4
117.6	47.6	7.4	117.6	19.4	2.1	117.6	14.2	1.4
141.2	77.4	13.8	141.2	37.2	5.8	141.2	24.7	3.1
174.1	207.8	42.3	177.9	83.3	11.0	174.9	72.7	13.7

類似地，DLS黏度分析展示出IL413p40-0700 (其含有攜帶E93K之抗IL-4域IL4-1040)相對於IL413p40-0698 (其具有抗IL-4域IL4-0749)具有降低的黏度(表49)。此結果證實，在標準IgG結構中引起個別結合域中之黏度改良的突變可轉譯成Tri-Fab-Fc形式。圖33展示IL413p40-0700在高達170 mg/mL之濃度下量測的黏度比IL413p40-0698低。表49.如使用DLS方法所示，IL-4結合域內之E(L93K)胺基酸取代降低IL413p40-0700 Tri-Fab-Fc之黏度。

IL413p40-0698	IL413p40-0700 (+E93K)
濃度 mg/mL	黏度 cP	標準偏差	濃度 mg/mL	黏度 (cP)	標準偏差
23.5	5.5	0.8	23.5	4.5	0.7
47.1	5.1	0.8	-	-	-
70.6	7.7	1	70.6	6.8	1
94.1	11.4	1.2	94.1	10.6	2.9
117.6	20.6	2	117.6	15.1	2.9
141.2	55.5	7.2	141.2	21.1	3.8
174.1	166.5	21	170.1	37	7.4

實例 45 評估 Tg32 轉殖基因小鼠模型及食蟹獼猴中 IL13433 Tri-Fab-Fc 變異體及 IL413TSLP-1024 tri-Fab-Fc 之藥物動力學人類FcRn (hFcRn)轉殖基因32 (Tg32)同型接合小鼠係用於預測抗體人類清除(CL)之活體內工具(7)。進行此評估以規測Tri-Fab-Fc變異體與含有已建立人類PK之抗體的抗IL-33 LS的相似程度。簡而言之，6-10週齡之小鼠(Jackson Labs, #014565)接受一次5 mg/kg IV劑量，並收集血漿樣品至8週(4隻小鼠/組)。在Pfizer公司進行研究，且根據動物使用方案且遵守Pfizer機構動物護理及使用委員會法規設計及執行研究。使用在Gyrolab®平台上開發之配位體結合分析(通用人類IgG分析形式)進行血漿樣品之定量分析。

結果指示，經LS突變工程改造以延長半衰期之Tri-Fab-Fc變異體IL413TSLP-1024、IL13433-1258、IL13433-1261、IL13433-1270及IL13433-1275之預測臨床藥物動力學參數與攜帶LS突變之抗IL-33抗體之參數相當，且在Tg32小鼠中具有類似藥物動力學參數(圖34及表50)。此外，此等發現表明，具有有利藥物動力學概況之Tri-Fab-Fc分子可使用雙細胞或單細胞方法製備之不同模式經工程改造，該等分子經基於電荷(CB)或杵臼Fc雜二聚突變工程改造(圖34及表50)。有趣的是，IL13433-1042展現出乎意料短半衰期，其表明鉸鏈區內之P(H241)R突變係快速清除的原因，因為IL13433-1258 (其在H241處具有野生型序列，但除了在抗IL-4域具有單一突變，其他方面與IL13433-1258相同)具有與帶有LS之對照抗IL-33抗體類似的藥物動力學參數(圖34及表50)。類似地，IL413p40-0700 (與IL13433-1042一樣攜帶P(H241)R突變，且除在Fab3位置中存在p40-0003以外與IL13433-1258一致)亦展現快速清除率，進一步強調P(H241)R之重要性。

亦在食蟹獼猴中測定IL13433-1258及IL413TSLP-1024之藥物動力學參數。IL13433-1258或IL413TSLP-1024以每個分子單次IV推注注射劑量向6隻雌性食蟹獼猴投與，劑量水平在0.03 mg/kg至300 mg/kg範圍內。給藥前及給藥後至1680小時收集血液樣品。該研究在UL Lafayette-New Iberia (New Iberia, LA 70560)進行且根據動物使用方案執行。使用在Gyrolab®平台上開發之配位體結合分析(通用人類IgG分析形式)進行血漿樣品之定量分析。使用Phoenix 64軟體(建構8.0.0.3176)進行非隔室分析。估計IL13433-1258及IL413TSLP-1024在食蟹獼猴中的平均終末半衰期分別為12天及14天。表50.與Tg32小鼠中攜帶LS突變的抗IL-33抗體相比，測定LS工程改造之Tri-Fab-Fc變異體之終末半衰期。

樣品	表現方法 /Fc 形式	結合域 / 方向	終末半衰期 ( 天數 )
Fab1	Fab2	Fab3
IL-33抗體	IgG，LS	NR	NR	NR	15
IL13433-1042 Tri-Fab-Fc	雙細胞： CB：EEE/RRR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-0749 天然Fab	IL33-0726天然Fab	4
IL413p40-0700 Tri-Fab-Fc	雙細胞： CB：EEE/RRR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	P40-0003天然Fab	4.4
IL13433-1258 Tri-Fab-Fc	雙細胞： CB：EE/RR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	16
IL13433-1261 Tri-Fab-Fc	雙細胞： CB：E/R，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	22
IL13433-1270 Tri-Fab-Fc	單細胞：KiH，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	25
IL13433-1275 Tri-Fab-Fc	雙細胞：KiH，CH3中無Cys，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	25
IL413TSLP-1024	雙細胞： CB：EE/RR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	TSLP-0875	18

CB=基於電荷的；KiH=杵臼；mFd=經修飾之Fd鏈；LS=Leu/Ser半衰期延長突變；NR=不相關。IL33抗體係IL33-158LS (WO17187307之SEQ ID NO: 244 SEQ ID NO: 209)。

實例 46 使用不同 Tri-Fab-Fc 模式產生之 IL-4/13/33 Tri-Fab-Fc 變異體之生物活性評估為了確定用於製備Tri-Fab-Fc分子之不同模式、幾何形狀或生產方法是否不利地影響結合域之強效細胞介素中和能力，進行生物分析以量測針對各細胞介素之生物活性。Tri-Fab-Fc模式內個別Fab結合域之中和活性應比標準IgG形式中的親本抗體變異體小約50%，因為結合反映單價相較於二價的中和能力。

使用初代人類單核球之CD23表現分析用於測定IL-4及IL-13細胞介素之中和效力。對於IL-4誘導之CD23表現，藉由對健康人類供者的新鮮血液進行Histopaque密度離心來製備周邊血液單核細胞(Sigma Aldrich)。將細胞洗滌至含有10%熱滅活胎牛血清(FCS)、50 U/mL青黴素、50 µg/mL鏈黴素、2 mM L-麩醯胺酸之RPMI培養基中及接種於48孔組織培養盤(Costar/Corning)中。重組人類IL-4以100至0.01 ng/mL範圍內之稀釋度添加。關於分析測試細胞介素反應之Tri-Fab-Fc抑制，添加0.25 ng/mL IL-13或0.1 ng/mL IL-4以及稀釋度在100至0.8 pM範圍內之Tri-Fab-Fc或抗體。將細胞在5% CO ₂培育箱中在37℃下培育隔夜。次日，使用非酶促細胞解離溶液(Sigma Aldrich)自孔收集細胞，且隨後洗滌至含有1% BSA的冰冷PBS中。細胞用藻紅素(PE)標記之抗體培育至人類CD23 (BD Biosciences)，且用Cy-Chrome標記之抗體培育至人類CD11b (BD Biosciences)。單核球基於高前向及側向光散射及CD11b之表現進行閘控。單核球上之CD23表現使用流式細胞儀(BD Biosciences)測定，且使用CellQuest軟體(BD Biosciences)分析CD23陽性細胞百分比。因為用人類周邊血液進行CD23表現分析，所以單核球CD23表現分析顯示基於供體之反應的細微變化。資料表示為最大反應%，其通常在65-85% CD23+單核球範圍內。

對於IL-33中和分析，HEK-Blue™ IL-33細胞(Invivogen)為經工程改造缺乏TNF及IL-1信號傳導且穩定地表現IL1RL1及NF-κB/AP-1-誘導型分泌胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因兩者的基於HEK293之細胞株。在IL-33刺激後，此等細胞分泌SEAP，其可隨後使用比色檢定定量以評估IL-33活性。HEK-Blue™ IL-33細胞在補充有1X pen/strep/glu (Invitrogen 10378-016)、10%熱滅活FBS (Gibco 16140-171)、10 µg/mL殺稻瘟菌素(Invitrogen A11139-03)、300 µg/mL吉歐黴素(Invitrogen R25001)的DMEM (Gibco 11995-085)在37℃具有5% CO ₂的培育箱中維持。在分析之前，細胞自具有trypLE (Gibco)之維持燒瓶中釋放，洗滌，且以10 ⁶個細胞/毫升再懸浮。接著在分析盤中以5×10 ⁴個細胞/孔接種細胞(Falcon 353072)。藉由添加1.5 µL之IL-33儲備溶液至1.5 µL DTT(Sigma 646563)及培養基之147 µL中，將100 µg/mL重組人類IL-33 (R&D Systems 3625-IL)之儲備溶液按1:100稀釋。DTT添加防止IL-33之氧化還原介導失活，其將禁止下游讀取。或者，使用最終濃度為0.1 ng/mL之重組IL-33 mm2 Cys，其為IL-33之組成型活性突變體，然而，此分析讀數不如具有還原的IL-33蛋白的讀數動態。向各孔中之50 µL細胞中依序添加25 µL測試Tri-Fab-Fc稀釋液，接著為25 µL經稀釋之IL-33混合物，最終濃度為0.1 ng/mL之IL-33。細胞在具有5% CO ₂之37℃保溫箱中刺激大約20小時，此時自培養盤之各孔移除75 µL培養基用於SEAP定量。將160 µL之QUANTI-Blue試劑(Invivogen)添加至分析盤(Falcon 353072)之各孔中。將40 µL細胞條件培養基添加至各孔中且將培養盤放回37℃培育箱中維持約3小時。隨後使用650 nm下之分光光度計(Spectramax M5e)評定SEAP活性。藉由抑制IL-33-誘導之SEAP活性之能力評估Tri-Fab-Fc活性。

對Tri-Fab-Fc有效中和IL-4、IL-13及IL-33能力之生物活性評估的綜合結果表明，使用單細胞或雙細胞方法產生的不同Tri-Fab-Fc模式能夠賦予親本抗體預期效力(表51)。此外，若結合域之修飾導致該抗體變異體之中和活性損失，則此轉譯為Tri-Fab-Fc分子且由於與細胞介素之單價相互作用而更顯著。特定言之，IL4-0157變異體經設計以移除CDRL1中之異構化責任、較低CDR中T細胞抗原決定基含量及降低黏度(實例5)，當併入至IL13433-0607 Tri-Fab-Fc時，相對於攜帶親本IL4-0002 Fab之Tri-Fab-Fc變異體展現IL-4中和能力之實質性損失(約6.5倍) (比較IL13433-0607與IL13433-0006，表51)。另一觀測結果為，相對於使用靜電S1互補突變將Fab2工程改造之Tri-Fab-Fc變異體IL-13433-0005，IL13433-0021 Tri-Fab-Fc中用於將IL-13結合域工程改造為Fab2的CH1-κ交換似乎或多或少地降低(約2倍) IL-13中和能力(表51)。此外，當在Fab2 IL-13結合域中包括SS肘經工程改造至IL13433-0021產生IL13433-0022時，此變異體展現出稍有效的IL-13中和能力，其中IC ₅₀值為17.5 pM相對於27.2 pM (表51)。表51.使用不同Tri-Fab-Fc設計製備之IL-4/IL-13/IL-33 Tri-Fab-Fc變異體之細胞介素中和的效力

Tri-Fab-Fc	表現細胞數目/Fc形式	結合域 / 方向	細胞介素中和之效力 [pM]
Fab1	Fab2	Fab3	IL-4 誘導之 CD23 表現	IL-13 誘導之 CD23 表現	SEAP 報導細胞之 IL-33 WT 活化	SEAP 報導細胞之 IL-33 mm2 Cys 活化
IL13433-0005	單細胞，KiH	IL33-0232 mFd	IL13-0001 S1rev	IL4-0002 S1	3.2	12.5	ND	45*
IL13433-0006	單細胞，KiH	IL33-0232 mFd	IL4-0002 S1rev	IL13-0001 S1	10.3	9.01	112	158, 40*
IL13433-0021	單細胞，KiH	IL33-0232 S1	IL13-0001 CkS	IL4-0002 S1rev	6.1	27.2	ND	255
IL13433-0022	單細胞，KiH	IL33-0232 S1	IL13-0001 CkS-SS肘	IL4-0002 S1rev	4.5	17.5	ND	251
L13433-0607	單細胞，KiH，LS	IL33-0224 mFd	IL4-0157 S1rev	IL13-0271 S1	66.9	20.3	ND	182
IL13433-1042	雙細胞： EEE/RRR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-0749 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	7.1	12.4	28	ND
IL13433-1258	雙細胞： EE/RR，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	13.0	9.35	13	ND
IL13433-1261	雙細胞： E/R，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	13.9	8.97	21	ND
IL13433-1270	單細胞：KiH，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	16.5	7.58	12	ND
IL13433-1275	雙細胞：KiH，CH3中無Cys，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 天然Fab	IL33-0726 天然Fab	14.9	8.88	13	ND
IL13433-1279	單細胞： KiH，CH3中無經工程改造之Cys，LS	IL13-0001 mFd	IL4-1040 S1rev	IL33-0726 S1	13.7	9.13	13	ND

* IL-33中和IC ₅₀值在IL13433-0005及IL13433-0006之相同實驗中測定。CH1-κ交換=Fab交換了CH1及κ恆定域；KiH=杵臼；mFd=經修飾之Fd鏈；LS=Leu/Ser半衰期延長突變；ND=未測定。

TRI-FAB-FC表徵：IL-4結合域實例47 全血中mAb IL4-1285及IL-4-1305之IL-4中和活性 IL4-1285為用於親和力工程改造工作之模板變異體。IL4-1305為親和力改良之變異體。mAb IL4-0002為具有生殖系JH區段之IL4-1305之變異體。IL4-1040經工程改造以用於改良生物物理學特性。IL4-1040結合域(Fab)併入三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705中。

IL-4與I型結合(IL-4Rα/γ共同)或IL-4或IL-13與II型(IL-4Rα/IL-13Rα1)受體結合觸發轉錄因子STAT6之磷酸化及核易位(28)。B細胞及單核球表現II型(IL-4Rα/IL-13Rα1)受體且對IL-4及IL-13兩者作出反應。相比之下，T細胞表現I型(IL-4Rα/γ共同)而非II型受體，且因此對IL-4而非IL-13起反應(28, 29)。使用實例 3中所描述之pSTAT6分析證實IL4-1305有效地抑制人類全血中B細胞、T細胞及單核球作為閘控亞群之IL-4反應( 表 52)。除了單核球及B細胞中之反應之外，IL4-1305阻止周邊血液T細胞中之STAT6磷酸化的論證證實經由I型及II型受體兩者之IL-4反應得到抑制。表 52. 全血中 IL-4 抗體之細胞介素中和活性

		閘控細胞類型中之STAT6磷酸化之IC ₅₀(pM) ^a
抗體	細胞介素目標 ^b	單核球	B細胞	T細胞
IL4-1285	IL-4	320	210	180
IL4-1305	IL-4	100	73	75
^a在37℃下用IL-4攻擊人類全血30分鐘。細胞經固定、滲透，且用PE標記之pSTAT6抗體以及APC標記之抗CD3、PerCP Cy5.5標記之抗CD20及FITC標記之抗CD14染色。在淋巴球部分內，B細胞鑑別為CD20+ CD3-，且T細胞鑑別為CD20- CD3+。用中等側光散射(SSC)將單核球鑑別為CD14+細胞。 ^b針對各細胞類型，在80%有效濃度(EC80)下測試IL-4。

實例48 mAb IL4-1040及IL4-0002以及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705在單核球CD23生物分析中之IL-4中和活性三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705均利用特性工程改造之IL-4結合域，IL4-1040。mAb IL4-1040衍生自親和力改良之抗IL-4殖株IL4-1305，其中引入胺基酸取代以消除電腦模擬預測之T細胞抗原決定基，移除異構化責任且改良黏度。mAb IL4-0002為具有生殖系JH區段之IL4-1305之變異體。

IL-4及IL-13驅動人類周周邊血液單核球上之活化標記物之表現，包括低親和力IgE受體CD23 (30，31)。IL-4中和活性使用單核球CD23表現生物分析評估，如實例4中所描述進行。表 53展示三特異性IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705的IL-4中和概況，與組成性IL-4結合域、IL4-1040及前驅體親和力改良的IL4-0002相比。IL4-1040經工程改造以獲得優於IL4-0002之改良的生物物理特性。因為mAb IL4-1040為二價的且三特異性物含有用於細胞介素結合之單價Fab，所以預期三特異性物具有以莫耳計降低之中和能力。對於IL-4，三特異性L13433-1258之效力比mAb IL4-1040低約3.1倍，IL413TSLP-1024之效力比mAb IL4-1040低約2.5倍，且IL413P40-0705之效力比mAb IL4-1040低約3.2倍。然而，三特異性物保留強效IL-4中和活性。IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705抑制IL-4生物活性的IC ₅₀值分別為10.0 pM、8.27 pM、12.8 pM、10.5 pM及10.3 pM( 表 53)。表 53. 三特異性物 IL13433-1258 、 IL413TSLP-1024 、 IL413TSLP-1028 、 IL413TSLP-1037 及 IL413P40-0705 ，以及 mAb IL4-1040 及 IL4-0002 之 IL-4 中和活性 (IC ₅₀ ； pM)

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM)
rHu IL-4	IL13433-1258	中值	10.0
s.e.m.	0.71
N	13
IL134TSLP-1024	中值	8.27
s.e.m.	1.13
N	7
IL413TSLP-1028	中值	12.8
s.e.m.
N	1
IL413TSLP-1037	中值	10.5
s.e.m.
N	1
IL413P40-0705	中值	10.3
s.e.m.	0.97
n	3
IL4-1040	中值	3.23
s.e.m.
n	1
IL4-0002	中值	2.09
s.e.m.	0.16
n	18
將人類周邊血單核細胞與重組人類IL-4 (0.1 ng/ml；R&D Systems)，以及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037或IL413P40-0705，或mAb IL4-1040及IL4-0002的稀釋液一起在37℃培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

實例49 mAb IL4-1040及IL4-0002以及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705在全血CD23生物分析中之IL-4中和活性 CD23表現分析適於全血收集至肝素鈉抗凝劑中。在深孔培養盤中，將80 µl全血與IL-4或IL-13，以及如上文所指示濃度之三特異性物一起添加，總體積為100 ul。培養盤在37℃ 5% CO2下培育隔夜，隨後在37℃下與抗CD11b-PE-Cy5及含抗CD23-PE之PBS/1% BSA (BD Biosciences)一起再培育30分鐘。細胞用Optilyse溶液(BD Biosciences)溶解，用PBS洗滌，且藉由流動式細胞量測術分析。實驗證實，除人類周邊血液單核球以外，三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705亦阻斷人類全血中之細胞介素活性( 表 54)。

實例50 三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705對人類及食蟹獼猴IL-4之中和活性為了證實抗體針對食蟹獼猴細胞介素之活性，用周邊血液單核球或全血在單核球CD23表現生物分析中測試三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705之中和活性。藉由各三特異性物有效抑制人類或食蟹獼猴IL-4之生物活性。對於各種，當對單核球進行分析時，針對食蟹獼猴IL-4之中和活性與人類細胞介素相比降低約1.1-1.4倍( 表 54)。表 54. 三特異性 IL13433-1258 對人類或食蟹獼猴 IL-4 之中和活性

		周邊血液單核球(IC ₅₀; pM)	人類全血 (IC ₅₀; pM)
		人類	食蟹獼猴	人類	食蟹獼猴
IL13433-1258	中值	10.0	13.60	23.25	32.10
s.e.m.	0.71	0.80	3.59	4.09
N	13	7	6	6
IL413TSLP-1024	中值	8.27	10.12	23.55	16.45
s.e.m.	1.13	0.76	4.47	4.39
N	7	7	6	6
IL413P40-0705	中值	10.3	11.2	23.2	17.24
s.e.m.	0.97	1.49	0.94	0.3
n	3	3	3	3
將人類全血或分離的單核細胞與重組人類IL-4 (0.1 ng/ml；R&D Systems)或食蟹獼猴IL-4 (0.25 ng/ml；Pfizer)，以及三特異性IL13433-1258的稀釋液在37℃下培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

實例51 抗-IL-4 mAb IL4-1305之物種特異性為評估抗IL-4 mAb IL4-1305之物種特異性，測試小鼠、大鼠、犬、兔、綿羊及食蟹獼猴IL-4競爭抗體與重組人類IL-4結合之能力。各物種IL-4與人類序列之間的胺基酸同源性百分比展示於表 55中。IL4-1305結合至人類及食蟹獼猴IL-4，但不結合至來自所測試其他物種之IL-4 ( 表 55)。表 55. 測試物種 IL-4 對人類 IL-4 與 mAb IL4-1305 結合的競爭

IL-4	寄存編號	胺基酸序列一致性(%) ^a	競爭結合至IL4-1305 ^b
人類	M23442	100	+++
食蟹獼猴	AB000515	92	++
犬	EF095771	49	-
綿羊	NM_001009313	57	-
兔	DQ852343.1	54	-
大鼠	NM_201270	43	-
小鼠	NM_021283	41	-
^aIL-4及各種人類細胞介素的胺基酸序列之間的一致性百分比係使用基本局部對準搜尋工具(BLAST)進行比較。顯示細胞介素序列之GenBank寄存編號。 ^b藉由ELISA分析來自指定物種之IL4與生物素化人類IL4競爭結合至IL4-1305之能力。重組人類、小鼠、大鼠、犬及兔的IL4購自R&D Systems (Minneapolis, MN)。重組食蟹獼猴及綿羊IL-4藉由Pfizer (Cambridge, MA)製備。

實例52 藉由表面電漿子共振研究IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-4之結合使用表面電漿子共振(SPR)進行的跨物種研究表徵三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-4的結合。所有實驗均使用Biacore 8K+儀器(GE HealthCare，Marlborough，MA)進行。使用由GE HealthCare提供之標準胺偶合方案將抗人類Fc (J Jackson Immunoresearch)或抗小鼠Fc (GE HealthCare，Marlborough，MA)固定於CM5感測器晶片上。捕獲三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024或IL413P40-0705、小鼠之對照抗體(殖株1D11；BD Biosciences)或大鼠之對照抗體(MAB5041；R&D Systems) IL-4，然後捕獲濃度為200 nM的人類(Pfizer-Syngene)、食蟹獼猴(Kingfisher Biotech)、小鼠(R&D Systems)或大鼠(R&D Systems) IL-4的流動。締合及解離階段分別為60秒及300秒。在解離階段結束時，使用一個30秒的3M MgCl ₂脈衝，接著一個30秒的10 mM甘胺酸(pH 1.7)脈衝使含有抗人類或抗小鼠Fc之表面再生。圖 35顯示IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705以200 nM的濃度結合至人類及食蟹獼猴IL-4，但不結合至小鼠或大鼠IL-4。亦針對兔IL-4測試IL413P40-0705，且未結合。

實例53 藉由KinExA測試IL13433-1258、IL413TSLP-1024或IL413P40-0705與人類及食蟹獼猴IL-4之結合親和力動力學排除分析(KinExA)儀器(模型3200，Sapidyne)用於確定三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024或IL413P40-0705對人類IL-4及食蟹獼猴IL-4之結合親和力。在含有0.1%疊氮化鈉及1.0 mg/ml BSA的PBS中製備樣品。使用固定抗原分析方法確定結合親和力。三特異性IL13433-1258自2 nM連續稀釋2倍至12.21 fM，且用人類IL-4 (Pfizer-Syngene)或食蟹獼猴IL-4 (Kingfisher Biotech)滴定，其中人類IL-4之濃度保持恆定在10 pM及50 pM，且食蟹獼猴IL-4之濃度保持恆定在20 pM及200 pM。各三特異性及IL-4細胞介素在室溫下平衡至少72小時，隨後穿過含有聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)珠粒之流通槽，該等珠粒塗佈有含有與三特異性物相同的IL-4結合域的抗IL-4 Ab-0002 (Pfizer)。非競爭性大鼠抗IL-4抗體(Abnova MAB3293)捕獲游離IL-4，且用1 ug/ml Alexa Fluor 647結合之F(ab')2山羊抗大鼠IgG (H+L) (Jackson Immunoresearch)偵測。使用KinExA Pro軟體版本4.3.11 (Sapidyne)進行資料分析。使用『親和力標準』模型分析資料且測定IL-4細胞介素之K _D及活性濃度。當反應在重複注射之間變化時，使用『漂移校正』擬合選項。在獨立實驗中獲得兩個曲線，且使用『n-曲線分析』工具分析以獲得IL-4細胞介素之K _D及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果顯示IL13433-1258與食蟹獼猴IL4之結合比人類IL-4之親和力值弱約6.2倍( 表 56)。IL413TSLP-1024以在人類IL-4親和力值的2倍內結合至食蟹獼猴IL-4 (表56)。IL413P40-0705以在人類IL-4親和力值的1.2倍內結合至食蟹獼猴IL-4 ( 表 56)。表 56. 藉由 KinExA 測試 IL13433-1258 與 人類或食蟹獼猴 IL-4 之結合親和力

三特異性		人類IL-4 (K _D; pM)	食蟹獼猴IL-4 (K _D; pM)
IL13433-1258	平均值	0.477	2.960
s.d.	0.012	0.068
IL413TSLP-1024	平均值	0.323	＜ 0.661
s.d.	0.017
IL413P40-0705	平均值	0.739	0.918
s.d.
所示資料係使用重組形式之人類 IL-4 (R&D Systems) 或食蟹獼猴 IL-4 (Pfizer) 的平均值 +/-s.d 。

實例54 三特異性IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705之IL-4中和活性與度匹魯單抗的比較旨在中和IL-4及IL-13在異位性皮膚炎中之生物活性的主要分子為抗IL-4R度匹魯單抗(Dupixent®; Sanofi/Regeneron) (32)，其為經批准用於治療AD之第一生物製劑(33)。度匹魯單抗靶向IL-4及IL-13信號傳導複合物共用之IL-4Rα鏈，且中和兩種細胞介素之活性(34)。

吾等在單核球CD23表現生物分析中比較三特異性物針對度匹魯單抗之細胞介素中和活性。三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705之IL-4中和活性分別比度匹魯單抗高出約10倍、13倍和10倍( 表 57)。表 57. IL13433-1258 、 IL413TSLP-1024 、 IL413P40-0705 及度匹魯單抗 之 IL-4 中和活性

細胞介素	抗體		IC ₅₀(pM) ^a
rHu IL-4	IL13433-1258	中值	10.0
s.e.m.	0.71
n	13
IL413TSLP-1024	中值	8.27
s.e.m.	1.13
n	7
IL413P40-0705	中值	10.3
s.e.m.	0.9
n	3
度匹魯單抗	中值	104.4
s.e.m.	9.85
n	6
^a將分離自人類周邊血液的單核細胞與重組人類IL-4 (0.1 ng/ml；R&D Systems)以及三特異性物或度匹魯單抗的稀釋液在37℃下培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

TRI-FAB-FC表徵：IL-13結合域實例55 抗IL-13 mAb IL13-1307及IL13-0001之IL-13中和活性抗IL-13模板變異體IL13-1307為用於親和力工程改造工作。在30分鐘分析中，其抑制人類HT-29上皮細胞中STAT6之磷酸化，且在24小時分析中，對人類周邊血液單核球上之IL-13誘導之CD23表現進行中和( 表 58)。親和力工程改造之殖株IL13-0001在CD23表現生物分析中比IL13-1307強29倍( 表 58)。IL13-0001結合域(Fab)併入三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705中。

實例56 mAb IL13-0001對多態性變異體人類IL-13 (R110Q)之反應性以大約20%之對偶基因頻率表現之人類IL-13 (R110Q)之多態性變異體形式與血清IgE濃度增加及特異性風險增加相關(35，36)。IL13-0001對人類IL-13的非多態性(R110)及多態性變異體(Q110)形式均有相當的中和活性( 表 58)。除了重組細胞介素以外，IL13-0001中和源於Th2偏斜、有絲分裂原活化之臍帶血液人類T細胞的天然人類IL 13 ( 表 58)。表 58. 基於細胞之分析中 IL-13 抗體之細胞介素中和活性

細胞介素	抗體		IC ₅₀(pM) 單核球 CD23 表現 ^a	IC ₅₀(pM) STAT6 磷酸化 ^b
rHu IL-13	IL13-1307	中值	305.9	140
s.e.m.	38.1	38.2
n	17	18
IL13-0001	中值	10.5	92.0
s.e.m.	1.3	8.1
n	17	15
rHu IL-13 R110Q	IL13-0001	中值	10.1	104.5
s.e.m.	0.08	3.9
n	2	2
天然Hu IL-13	IL13-0001	中值		79.0
s.e.m.		4.2
n		2
^a CD23表現係在37℃下暴露於IL-13 (1 ng/ml) 24小時的人類周邊血液單核球中進行分析。 ^bSTAT6磷酸化係在37℃下暴露於IL-13 (1 ng/ml) 30分鐘的HT-29人類上皮細胞中進行分析。

實例57 人類全血中mAb IL13-0001之IL-13中和活性使用pSTAT6分析證實IL13-0001有效地抑制人類全血中B細胞及單核球作為閘控亞群之IL-13反應( 表 59)。在B細胞及單核球兩者中，IL13-0001顯示有效IL-13中和活性( 表 59)。表 59. 全血中 IL13-0001 之細胞介素中和活性

			閘控細胞類型中之STAT6磷酸化之IC ₅₀(pM) ^a
抗體	細胞介素目標 ^b		單核球	B細胞	T細胞
IL13-0001	IL-13	中值	525.0	66.5	n.d. ^c
s.e.m.	24.7	3.2
n	2	2
^a在37℃下用IL-13攻擊人類全血30分鐘。細胞經固定、滲透，且用PE標記之pSTAT6抗體以及APC標記之抗CD3、PerCP Cy5.5標記之抗CD20及FITC標記之抗CD14染色。在淋巴球部分內，B細胞鑑別為CD20+ CD3-，且T細胞鑑別為CD20- CD3+。用中等側光散射(SSC)將單核球鑑別為CD14+細胞。 ^b針對各細胞類型，在80%有效濃度(EC80)下測試IL-13。 ^c n.d.：不可偵測。T細胞對IL-13無反應。

實例58 mAb IL13-0001及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705之IL-13中和活性 IL13-0001結合域(Fab)併入三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705中。使用人類單核球CD23表現生物分析 ( 實例 4)評估了三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705之IL-13中和活性，且與親和力改良之抗IL-13殖株IL13-0001進行比較。因為mAb IL13-0001為二價的IgG且三特異性物對於細胞介素結合為單價，所以預期三特異性物具有以莫耳計降低之中和能力。對於IL-13中和，L13433-1258之效力比IL13-0001低約2.7倍，IL413TSLP-1024之效力比IL13-0001低約3.0倍，且IL413P40-0705之效力比IL13-0001低約2.4倍 ( 表 60)。然而，三特異性物保留強效IL-13中和活性。IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037及IL413P40-0705中和IL-13生物活性的IC ₅₀值分別為11.74 pM、12.98 pM、12.9 pM、13.1 pM和10.4 pM ( 表 60)。表 60. 三特異性物 IL13433-1258 、 IL413TSLP-1024 、 IL413TSLP-1028 、 IL413TSLP-1037 、 IL413P40-09705 及 mAb IL13-0001 之 IL-13 中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM)
rHu IL-13	IL13433-1258	中值	11.74
s.e.m.	0.50
n	13
IL413TSLP-1024	中值	12.98
s.e.m.	1.51
n	7
IL413TSLP-1028	中值	12.9
s.e.m.
N	1
IL413TSLP-1037	中值	13.1
s.e.m.
N	1
IL413P40-0705	中值	10.4
s.e.m.	0.3
n	3
IL13-0001	中值	4.38
s.e.m.	0.42
n	5
將人類周邊血單核細胞與重組人類IL-13 (0.25 ng/ml；R&D Systems)，以及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028、IL413TSLP-1037、IL413P40-0705，或mAb IL13-0001的稀釋液一起在37℃培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

實例59 mAb IL4-1040及IL4-0002以及三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705在全血CD23生物分析中之IL-13中和活性 CD23表現分析適合於全血，如實例 49中所描述。實驗證實，使用適合於全血形式之CD23表現分析，三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705除阻斷人類全血中的細胞介素活性外，亦阻斷人類周邊血液單核球中的細胞介素活性 ( 表 61)。

實例60 IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705對人類及食蟹獼猴IL-13之中和活性人類單核球CD23表現生物分析證明，三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705保持針對食蟹獼猴IL-13之中和活性。對於IL13433-1258而言，與人類細胞介素相比，針對食蟹獼猴IL-13之中和活性減少約4.5倍 ( 表 61)。對於IL413TSLP-1024，與人類細胞介素相比，針對食蟹獼猴IL-13之中和活性降低約2.4倍 ( 表 61)。對於IL413P40-0705而言，與人類細胞介素相比，針對食蟹獼猴IL-13之中和活性減少約4.0倍 ( 表 61)。表 61. IL13433-1258 、 IL413TSLP-1024 及 IL413P40-0705 對 人類或食蟹獼猴 IL-13 之中和活性

		周邊血液單核球 (IC ₅₀; pM)	人類全血 (IC ₅₀; pM)
		人類	食蟹獼猴	人類	食蟹獼猴
IL13433-1258	中值	11.74	52.80	16.05	50.50
s.e.m.	0.50	1.87	2.04	2.99
n	13	7	6	6
IL413TSLP-1024	中值	12.98	31.65	10.23	41.85
s.e.m.	1.51	3.14	3.27	10.68
n	7	8	6	6
IL413P40-0705	中值	10.4	41.5	10.8	44.6
s.e.m.	0.3	3.3	0.3	1.69
n	3	3	3	3
將人類全血或分離的單核細胞與重組人類IL-13 (0.25 ng/ml；R&D Systems)或食蟹獼猴IL-13 (0.25 ng/ml；Pfizer)，以及三特異性IL13433-1258的稀釋液在37℃下培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

實例61 抗IL-13、IL13-0001之物種特異性為評估IL13-0001之物種特異性，測試小鼠、犬、兔、綿羊及食蟹獼猴IL 13競爭抗體與重組人類IL-13之結合的能力。各物種IL 13與人類序列之間的胺基酸同源性百分比展示於表 62中。IL13-0001結合至人類、食蟹獼猴及綿羊IL 13，但不結合至小鼠、犬或兔之IL 13 ( 表 62)。表 62. 測試物種 IL-13 對人類 IL-13 與 IL13-0001 結合的競爭

IL-13	寄存編號	胺基酸序列一致性(%) ^a	競爭結合至IL4-1305 ^b
人類	U31120	100	+++
食蟹獼猴	DQ676797	94	+++
犬	NM_001003384	72	-
綿羊	NM_001082594	70	+++
兔	XM_002710092.2	66	-
小鼠	NM_008355	59	-
^a IL-13及各種人類細胞介素的胺基酸序列之間的一致性百分比係使用基本局部對準搜尋工具(BLAST)進行比較。顯示細胞介素序列之GenBank寄存編號。 ^b 藉由ELISA分析來自指定物種之IL-13與生物素化人類IL-13競爭結合至IL13-0001之能力。重組人類、小鼠、大鼠及犬IL 13購自R&D Systems (Minneapolis, MN)。重組綿羊及兔IL-13藉由Pfizer Global Biotechnologies (PGBT, Cambridge, MA)產生。重組食蟹獼猴IL 13購自Sino Biological (Beijing, China)。

實例62 藉由表面電漿子共振研究IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-13之結合使用表面電漿子共振(SPR)之跨物種研究表徵IL13433-1258與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-13之結合。所有實驗均使用Biacore 8K+儀器(GE HealthCare，Marlborough，MA)進行。使用由GE HealthCare提供之標準胺偶合方案將抗人類Fc (Jackson Immunoresearch)或抗小鼠Fc (GE HealthCare，Marlborough，MA)固定於CM5感測器晶片上。捕獲三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024或IL413P40-0705、小鼠之對照抗體(MAB413；R&D Systems)或大鼠之對照抗體(MAB1945；R&D Systems) IL-13，然後捕獲濃度為200 nM的人類(Pfizer)、食蟹獼猴(Pfizer)、小鼠(R&D Systems)或大鼠(R&D Systems) IL-13的流動。締合及解離階段分別為60秒及300秒。在解離階段結束時，使用一個30秒的3M MgCl ₂脈衝，接著一個30秒的10 mM甘胺酸(pH 1.7)脈衝使含有抗人類或抗小鼠Fc之表面再生。圖 36顯示三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705以200 nM的濃度結合至人類及食蟹獼猴IL-13，但不結合至小鼠或大鼠IL-13。亦針對兔IL-13測試IL413P40-0705，且未結合。

實例63 藉由KinExA測試IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705與人類及食蟹獼猴IL-13之結合親和力動力學排除分析(KinExA)儀器(模型3200，Sapidyne)用於確定三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024及IL413P40-0705對人類IL-13及食蟹獼猴IL-13之結合親和力。在含有0.1%疊氮化鈉及1.0 mg/ml BSA的PBS中製備樣品。使用固定抗原分析方法確定結合親和力。三特異性IL13433-1258自600 pM連續稀釋2倍至12.21 fM，且用人類IL-13 (Pfizer)或食蟹獼猴IL-13 (Pfizer)滴定，其中人類IL-13之濃度保持恆定在10 pM及100 pM，且食蟹獼猴IL-13之濃度保持恆定在5 pM及30 pM。三特異性IL13433-1258及IL-13細胞介素在室溫下平衡至少72小時，隨後穿過含有聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)珠粒之流通槽，該等珠粒塗佈有含有與三特異性物相同的IL-13結合域的抗hIL-13抗體-0271 (Pfizer)。非競爭性大鼠抗IL-13抗體MJ2-7 (Pfizer)捕獲游離IL-13，且用0.5 ug/ml Alexa Fluor 647結合之AffiniPure山羊抗大鼠IgG (Jackson Immunoresearch)偵測。使用KinExA Pro軟體版本4.3.11 (Sapidyne)進行資料分析。使用『親和力標準』模型分析資料且測定IL-13細胞介素之K _D及活性濃度。當反應在重複注射之間變化時，使用『漂移校正』擬合選項。在獨立實驗中獲得兩個曲線，且使用『n-曲線分析』工具分析以獲得IL-13細胞介素之K _D及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果證實IL13433-1258及IL413TSLP-1024以在人類IL-13親和力值的2倍內結合至食蟹獼猴IL-13。IL413P40-0705對食蟹獼猴IL-13之親和力相比於人類細胞介素而言相對較高 ( 表 63)。表 63. 藉由 KinExA 測試 IL13433-1258 、 IL413TSLP-1024 及 IL413P40-0705 結合至 人類及食蟹獼猴 IL-13 之親和力

三特異性物		人類IL-13 (K _D; pM)	食蟹獼猴IL-13 (K _D; pM)
IL13433-1258	平均值	0.612	0.866
s.d.	0.012	0.034
IL413TSLP-1024	平均值	0.266	0.581
s.d.	0.022	0.020
IL413P40-0705	平均值	1.570	0.3121
s.d.
所示資料係使用重組形式之人類 IL-13 (R&D Systems) 或食蟹獼猴 IL-13 (Pfizer) 的平均值 +/-s.d 。

實例64 三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-1024、及IL413P40-0705與度匹魯單抗相比之IL-13中和活性旨在中和IL-4及IL-13在異位性皮膚炎中之生物活性的主要行業抗體為抗IL-4R度匹魯單抗(Dupixent®; Sanofi/Regeneron) (32)，其為經批准用於治療AD之第一生物製劑(33)。度匹魯單抗靶向IL-4及IL-13信號傳導複合物共用之IL-4Rα鏈，且中和兩種細胞介素之活性(34)。

吾等在單核球CD23表現生物分析中比較三特異性物對度匹魯單抗之細胞介素中和活性。三特異性物IL13433-1258、IL413TSLP-0124及IL413P40-0705之IL-13中和活性分別比度匹魯單抗高出約7.9倍、7.2倍和8.9倍 ( 表 64)。表 64. IL13433-1258 及度匹魯單抗之 IL-13 中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM) ^a
rHu IL-13	IL13433-1258	中值	11.74
s.e.m.	0.50
n	13
IL413TSLP-1024	中值	12.98
s.e.m.	1.51
n	7
IL413P40-0705	中值	10.4
s.e.m.	0.3
n	3
度匹魯單抗	中值	93.2
s.e.m.	6.11
n	6
^a將分離自人類周邊血液的單核細胞與重組人類IL-13 (0.25 ng/ml；R&D Systems)以及三特異性物或度匹魯單抗的稀釋液在37℃下培育隔夜。藉由流式細胞量測術定量閘控單核球上之CD23表現，且測定CD23陽性細胞百分比。

IL413P40-0705 TRI-FAB-FC表徵：IL-12/23結合域實例65 Tri-Fab-Fc IL413P40-0705在KIT225細胞及全血中中和IL-12介導之STAT4磷酸化及IL-23介導之STAT3磷酸化的生物活性 IL-12與由IL-12Rβ1及IL-12Rβ2構成的IL-12受體複合物結合，以及IL-23與由IL-12Rβ1及IL-23R構成的IL-23受體複合物結合，分別導致受體複合物活化及近端信號傳導事件，其包括STAT4及STAT3的磷酸化。評估了IL413P40-0705在KIT-225 T細胞株中防止IL12誘導之STAT4磷酸化或IL23誘導之STAT3磷酸化的能力，該T細胞株係一種來自人類慢性淋巴球性白血病周邊血液的IL-2依賴型細胞株。100 ng/mL(1.7 nM) IL-12用於誘導pSTAT4，且200 ng/mL (3.64 nM) IL-23用於誘導pSTAT3，與分析中各刺激物之預定EC65值一致。將細胞固定且藉由流動式細胞量測術評估pSTAT4或pSTAT3。分析之可比版本使用人類全血而非Kit-225細胞，其中使用40 ng/mL (0.68 nM)之IL-12或150 ng/mL (2.73 nM)之IL-23，與分析中各刺激之預定EC65值一致。

Tri-Fab-Fc IL413p40-0705及p40-0003 (烏司奴單抗)在Kit-225及全血分析中均能中和IL-12及IL-23 ( 表 65)。因為p40-0003為二價的且Tri-Fab-Fc對於細胞介素結合為單價，所以預期Tri-Fab-Fc具有以莫耳計降低之中和能力。在Kit-225分析中，IL413p40-0705對IL-12及IL-23的中和能力分別比p40-0003低2.9倍及2.6倍 ( 表 65)。在全血分析中，IL413p40-0705對IL-12及IL-23的中和能力分別比p40-0003低1.5倍及2.4倍 ( 表 65)。表 65. 在基於細胞之分析中 IL413P40-0705 及 p40-0003 ( 烏司奴單抗 ) 針對 IL-12 及 IL-23 之細胞介素中和活性

細胞介素	抗體		IC ₅₀ (pM) Kit-225 分析 ^a	IC ₅₀ (pM) 全血分析 ^b
rHu IL12	IL413p40-0705	平均值 s.e.m. n	501 113 4	369 60 4
P40-0003 (烏司奴單抗)	平均值 s.e.m. n	155 33 4	262 33 4
rHu IL23	IL413p40-0705	平均值 s.e.m. n	2,072 212 4	9,998 726 4
P40-0003 (烏司奴單抗)	平均值 s.e.m. n	850 115 4	4,511 389 4
^aKit-225細胞用100 ng/mL (1.7 nM) IL-12或200 ng/mL (3.64 nM) IL-23刺激且藉由流式細胞測量術分別分析磷酸化STAT4或磷酸化STAT3。基於細胞群體之總平均螢光強度隨抗體濃度變化來計算IC ₅₀值。 ^b人類全血用40 ng/mL (0.68 nM) IL-12或150 ng/mL (2.73 nM) IL-23刺激且藉由流式細胞測量術分別分析磷酸化STAT4或磷酸化STAT3。基於細胞群體之總平均螢光強度隨抗體濃度變化來計算IC ₅₀值。

實例66 Tri-Fab-Fc IL413p40-0705對人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23之中和活性使用Kit-225細胞比較IL413p40-0705對人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23的中和。100 ng/mL(1.7 nM) IL-12用於誘導pSTAT4，且200 ng/mL (3.64 nM) IL-23用於誘導pSTAT3，與分析中各刺激物之預定EC65值一致。將細胞固定且藉由流動式細胞量測術評估pSTAT4或pSTAT3。人類及食蟹獼猴重組細胞介素IL-12及IL-23均由IL413P40-0705抑制，其中對於各自各別細胞介素，人類與食蟹獼猴之間的效力差異＜2倍 ( 表 66)。表 66. Kit-225 分析中 Tri-Fab-Fc IL413p40-0705 對 重組人類或食蟹獼猴 IL-12 或 IL-23 之中和活性

	Kit-225分析 ^a
IC ₅₀(pM)	r人類IL-12	r食蟹獼猴IL-12	r人類IL-23	r食蟹獼猴IL-23
中值	501	375	2,072	3,049
s.e.m.	113	53	212	294
n	4	4	4	4
^a Kit-225細胞用100 ng/mL (1.7 nM) IL-12或200 ng/mL (3.64 nM)人類或食蟹獼猴IL-23刺激且藉由流式細胞測量術分別分析磷酸化STAT4或磷酸化STAT3。基於細胞群體之總平均螢光強度隨抗體濃度變化來計算IC ₅₀值。重組細胞介素指定為r物種，諸如r人類。

實例67 Fab幾何形狀對抗IL-4/IL-13/p40 Tri-Fab-Fc變異體之生物活性的比較 Tri-Fab-Fc形式內個別Fab定位(幾何形狀)之影響藉由量測各種Tri-Fab-Fc構築體內的個別目標中和進行表徵( 圖 37)。各種Tri-Fab-Fc構築體之中和活性在單核球CD23表現生物分析中針對IL-4 (詳見實例 4)及IL-13 (詳見實例 10)以及在KIT225細胞株STAT4磷酸化生物分析中針對IL-12 (詳見實例 58)進行測試。表67展示進行比較的Tri-Fab-Fc形式之3種Fab的不同佈置。由於個別Fab與標準二價抗體相比之單價，預期IL413p40-0705之生物活性比各別親本抗體小至少2倍至3倍。如表67中所示，個別Fab之定位並不導致大於約3倍之活性損失，表明Fab無論在Tri-Fab-Fc形式中的位置如何，均能保持生物活性。表 67. 不同 Tri-Fab-Fc 構築體中之個別目標中和效力

Tri-Fab-Fc 構築體名稱	結合域	IL-4 誘導之CD23 上調 (IC ₅₀; pM)	IL-13 誘導之CD23 上調 (IC ₅₀; pM)	IL-12 誘導之STAT4 磷酸化 (IC ₅₀; nM)
構築體名稱	Fab1	Fab2	Fab3	Tri-Fab-Fc	親本 IgG	Tri-Fab-Fc	親本 IgG	Tri-Fab-Fc	親本 IgG
IL413p40-0043	p40-0003	IL13-0001	IL4-0002	5.10	2.06	15.1	4.7	2.61	1.77
IL413p40-0044	p40-0003	IL4-0002	IL13-0001	8.11	2.06	9.14	4.7	3.03	1.77
IL413p40-0705*	IL13-0001	IL4-1040	p40-0003	10.3	3.23	10.4	4.38	0.50	0.155

*用IL413p40-0705測試之親本IgG之中和IC50由於自個別實驗產生之值而不同。

實例68 使用表面電漿子共振動力學評估抗IL-4/IL-13/p40 Tri-Fab-Fc IL413p40-0705結合人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23 進行表面電漿子共振(SPR)以測定Tri-Fab-Fc對含有p40結合域之IL-12及IL-23的親和力常數。針對此等分析，在BIAcore™ 8K儀器(GE Healthcare)上以10 Hz之收集速率在37℃下進行動力學分析。根據製造商方案，將抗人類IgG抗體(目錄號BR-1008-39，GE Healthcare)與羧甲基化聚葡萄糖塗佈的感測器晶片(CM5) (GE Healthcare)的所有四個流通槽進行胺偶合，且IL413p40-0705固定至約10RU。接下來，將各種濃度之人類IL-12、食蟹獼猴IL-12、人類IL-23或食蟹獼猴IL-23注射於表面上。表 68展示IL413p40-0705對人類及食蟹獼猴IL-12及IL-23之量測親和力常數。

抗IL-4及抗IL13結合域對其同源目標展現極其緩慢之解離速率(kd)，使其難以精確限定親和力常數，因為其處於偵測極限下。因此，KinExA™方法論用於準確測定Tri-Fab-Fc對人類IL-4及IL-13之親和力 ( 實例 25)。表 68. 使用針對重組人類或食蟹獼猴 IL-12 或 IL-23 之表面電漿子共振獲得的 IL413p40-0705 親和力常數

Tri-Fab-Fc	r 人類 IL-12	r 食蟹獼猴 IL-12	r 人類 IL-23	r 食蟹獼猴 IL-23
親和力(pM)	114.32 ± 4.87	253.79 ± 6.84	91.5 ± 4.61	235.94 ± 8.62

實例 69使用KinExA™方法論動力學評估IL413p40-0705 Tri-Fab-Fc結合至重組人類及食蟹獼猴IL-4及IL-13細胞介素動力學排除分析(KinExA™)儀器(模型3200，Sapidyne)用於精確確定抗IL4/IL-13/p40 Tri-Fab-Fc對重組人類IL-4及IL-13之結合親和力。使用KinExA™ Pro軟體版本3.6.5 (Sāpidyne)進行資料分析。使用「親和力標準」模型分析資料，確定重組人類及食蟹獼猴IL-13以及人類及食蟹獼猴IL-4之表觀KD及表觀活性濃度。適當時使用「漂移校正」。自獨立實驗獲得受體及KD控制之多個曲線，且使用「n-曲線分析」工具分析以獲得KD及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果顯示，Tri-Fab-Fc IL413p40-0705分別以739 fM及1.57 pM親和力結合至人類IL-4及IL-13，且分別以1.57 pM及312.1 fM結合至食蟹獼猴IL-4及IL-13 ( 表 69)。表 69. 使用動力學排除分析 (KinExA™) 獲得的 IL413p40-0705 親和力常數

Tri-Fab-Fc	人類 IL-4	食蟹獼猴 IL-4	人類 IL-13	食蟹獼猴 IL-13
親和力(fM)	739.0	918.0	1570	312.1

實例70 藉由表面電漿子共振之IL413p40-0705的物種特異性為了評估Tri-Fab-Fc之物種特異性，除人類及食蟹獼猴之外，小鼠、大鼠及兔IL-12、IL-23、IL-13及IL-4亦藉由表面電漿子共振進行測試。針對此等分析，在BIAcore™ 8K儀器(GE Healthcare)上以10 Hz之收集速率在37℃下進行動力學分析。根據製造商方案，將抗人類IgG抗體(目錄號BR-1008-39，GE Healthcare)與羧甲基化聚葡萄糖塗佈的感測器晶片(CM5) (GE Healthcare)的所有四個流通槽進行胺偶合，且以RU約100捕獲Tri-Fab-Fc IL413p40-0705。接下來，將200 nM人類、食蟹獼猴、大鼠、兔或小鼠IL-12、IL-23、IL-13及IL-4注射於表面上。如其在感測器圖譜 ( 圖 38)所示，IL413p40-0705結合至人類及食蟹獼猴細胞介素IL-12、IL-23、IL-4及IL-13，但不結合至小鼠、大鼠或兔同源物。

實例71 抗p40抗體p40-0003在KIT225細胞及全血中中和IL-12介導之STAT4磷酸化及IL-23介導之STAT3磷酸化的生物活性 IL-12與包含IL-12Rβ1及IL-12Rβ2的IL-12受體複合物結合，以及IL-23與包含IL-12Rβ1及IL-23R的IL-23受體複合物結合，分別導致受體複合物活化及近端信號傳導事件，其包括STAT4及STAT3的磷酸化。評估了P40-0003在KIT-225 T細胞株中防止IL12誘導之STAT4磷酸化或IL23誘導之STAT3磷酸化的能力，該T細胞株係一種來自人類慢性淋巴球性白血病周邊血液的IL-2依賴型細胞株。100 ng/mL(1.7 nM) IL-12用於誘導pSTAT4，且200 ng/mL (3.64 nM) IL-23用於誘導pSTAT3，與分析中各刺激物之預定EC65值一致。將細胞固定且藉由流動式細胞量測術評估pSTAT4或pSTAT3。分析之可比版本使用人類全血而非Kit-225細胞，其中使用40 ng/mL (0.68 nM)之IL-12或150 ng/mL (2.73 nM)之IL-23，與分析中各刺激之預定EC65值一致。抗p40抗體p40-0003在KIT225細胞及全血中中和IL-12介導之STAT4磷酸化及IL-23介導之STAT3磷酸化 ( 表 70)。表 70.

細胞介素	抗體		IC ₅₀ (pM) Kit-225 分析 ^a	IC ₅₀ (pM) 全血分析 ^b
rHu IL12	P40-0003	平均值 s.e.m. n	155 33 4	262 33 4
rHu IL23	P40-0003	平均值 s.e.m. n	850 115 4	4,511 389 4
^aKit-225細胞用100 ng/mL (1.7 nM) IL-12或200 ng/mL (3.64 nM) IL-23刺激且藉由流式細胞測量術分別分析磷酸化STAT4或磷酸化STAT3。基於細胞群體之總平均螢光強度隨抗體濃度變化來計算IC ₅₀值。 ^b人類全血用40 ng/mL (0.68 nM) IL-12或150 ng/mL (2.73 nM) IL-23刺激且藉由流式細胞測量術分別分析磷酸化STAT4或磷酸化STAT3。基於細胞群體之總平均螢光強度隨抗體濃度變化來計算IC ₅₀值。

IL33433-1258 TRI-FAB-FC表徵：IL-33結合域實例72 報導細胞分析中IL33-158-152、IL33-158LS、IL33-0726及IL13433-1258之IL-33中和活性 IgG抗體殖株IL33-158-152為用於親和力及去醯胺責任移除工程改造工作之模板變異體。IL33-158LS為延長之半衰期變異體。殖株IL33-0726為親和力生物物理學特性改良之IgG抗體。IL33-0726結合域(Fab)併入三特異性三特異性IL13433-1258中。

IL-33與包含IL1RL1 (亦稱為ST2)及IL1RAP的IL-33受體複合物結合，導致細胞內信號傳導級聯，活化MyD88/NF-kB及MAPK/AP-1信號傳導路徑(37)。HEK-Blue™ IL-33細胞(Invivogen)為經工程改造缺乏TNF及IL-1信號傳導且穩定地表現IL1RL1及NF-κB/AP-1-誘導型分泌胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導基因兩者的基於HEK293之細胞株。在IL-33刺激後，此等細胞分泌SEAP，其可隨後使用比色檢定定量以評估IL-33活性，如實例 46中所描述。三特異性IL13433-1258、mAb IL33-158-152、用於親和力工程改造工作的模板變異體、延長半衰期的變異體IL33-158LS及親和力改良的IgG形式IL33-0726均能夠抑制IL-33活性，其可藉由抑制HEK-Blue™ IL-33細胞的SEAP活性的能力所證明。然而，與用於親和力工程改造工作的模板相比，IL13433-1258表現出優良的中和活性，其可藉由其較低的IC ₅₀值13.40 pM，而IL33-158-152為42.85 pM，IL33-158LS為56.22 pM證明 ( 表 71)。親和力改良之IgG殖株IL33-0726展示與IL13433-1258相比略微較低之IC ₅₀值；然而，重要的係應注意IL33-0726具有IgG形式中之兩個IL-33結合抗原決定基(相較於三特異性形式IL13433-1258中發現的單一結合抗原決定基)。

實例73 初代細胞分析中IL33-158LS及IL13433-1258之IL-33中和活性亦報導IL-33與IL-12協同作用以誘導T淋巴球表現IFNγ (38, 39)。為評估其IL-33中和活性，分析殖株抑制此與IL-12協同以產生IFNγ之能力。簡言之，將來自健康供體之175 µL肝素化全血移入96孔v型底培養盤中。將重組人類IL-12 (R&D Systems 219-IL)在補充有1X pen/strep/glu (Invitrogen 10378-016)及10%熱滅活FBS (Gibco 16140-171)的RPMI 1640 (Gibco 21870-078)中稀釋至40 ng/mL。將5 µL 40 ng/mL IL-12添加至含有肝素化血液的各孔中，且在具有5% CO ₂的37℃培育箱中培育3小時。此時，將10 µL測試抗體稀釋液添加至各孔中的180 µL細胞/IL-12中，然後添加10 µL經純化之IL-33-mm2 (Pfizer)，使IL-33最終濃度達到0.125 nM。IL33-mm2變異體為人類IL-33變異體，其中IL-33內之全部四個半胱胺酸殘基突變成絲胺酸，以便防止氧化還原誘導之IL-33降解，其將抑制全血中之信號傳導及分析窗。細胞隨後在具有5% CO ₂之37℃培育箱中培育約22小時。此時，藉由離心自血液分離血漿，且藉由ELISA (Meso Scale Discovery L151AEB-2)定量IFNγ含量。藉由抑制IL-33/IL-12誘導之IFNγ來評估抗體活性。IL13433-1258、殖株IL33-158-152、用於親和力及去醯胺責任移除工程改造工作的模板變異體、延長半衰期的變異體IL33-158LS及親和力改良的IgG形式IL33-0726均能夠抑制IL-33活性，其藉由經IL-33及IL-12刺激後T淋巴球的IFNg釋放減少所證明。相比於IL33-158-152及IL33-158LS，三特異性IL13433-1258展現優良IL-33中和活性 ( 表 71)。表 71. 基於細胞之分析中 針對 IL-33 之細胞介素中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM) HEK-Blue™ IL-33 SEAP ^a	IC ₅₀(pM) IFN g 全血 ^b
rHu IL-33	IL33-158LS	平均值	56.22
s.e.m.	6.05
N	6
IL33-158-152	平均值	42.85
s.e.m.	8.10
N	8
IL33-0726	平均值	8.27
s.e.m.	1.57
N	7
IL13433-1258	平均值	13.40
s.e.m.	2.61
n	16
IL-33 MM2-Cys (0.125 nM)	IL33-158LS	平均值		16.20
s.e.m.		4.03
n		5
IL13433-1258	平均值		12.48
s.e.m.		1.74
n		9
^aSEAP活性係在37℃下暴露於IL-33 (0.1 ng/mL) 20小時的HEK-Blue™細胞中進行分析。 ^b FNg含量係在37℃下用IL-12 (1 ng/mL)及IL-33 mm2-Cys突變體(0.125 nM)刺激22小時後，自肝素化的人類全血中獲得的上清液中量測。

實例74 細胞報導分析中IL13433-1258中的IL-33之物種特異性亦使用HEK-Blue™ IL-33細胞(Invivogen)對人類及食蟹獼猴IL-33進行比較，如實例 72中所描述。與SPR資料一致，IL13433-1258抑制人類及食蟹獼猴IL-33；然而，食蟹獼猴IL-33與IL13433-1258結合的程度比人類IL-33弱 ( 表 72)。表 72. 三特異性 IL13433-1258 對人類或食蟹獼猴 IL-33 之中和活性

IL-33	人類IL-33 (IC ₅₀; pM)	食蟹獼猴IL-33 (IC ₅₀; pM)
中值	13.40	274.4
s.e.m.	2.61	30.62
n	16	10
所示資料為來自指定數目之個別生物分析實驗之 IC ₅₀(pM) 之中值及 s.e.m. 。使用重組形式的人類 IL-33 (R&D Systems) 或食蟹獼猴 IL-33 (Pfizer) ，在 37 ℃ 下暴露於 IL-33 (0.1 ng/mL) 20 小時的 HEK-Blue™ IL-33 SEAP 細胞中的 SEAP 活性分析測定 IL-33 中和活性。

實例75 使用表面電漿子共振之IL13433-1258中的IL-33之物種特異性使用Biacore T-200之表面電漿子共振(SPR)來評估三特異性IL13433-1258 (Pfizer, 00705757-0296)對人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-33的跨物種特異性。實驗在37℃下以10 Hz之收集速率使用HBS-EP+ pH 7.4進行，含有3 mM DTT作為操作及稀釋緩衝液。人類IL-33野生型(WT) (Pfizer, 42564-166)、鼠類IL-33 WT (R&D 3626-101/CF)及大鼠IL-33 WT (Creative Biomart IL33-583R)在室溫下用3 mM DTT (Pierce No-Weigh，20291)還原2小時。食蟹獼猴IL-33 WT (Pfizer, WRS-072216)在含有1 mM DTT之PBS中提供。簡而言之，根據製造商方案，使用胺偶合套組(GE Healthcare, Marlborough, MA BR100050)將蛋白質A/G (Pierce, 21186)固定在CM5感測器晶片(GE Healthcare, Marlborough, MA 29-1496-03)的所有4個流通槽上。藉由以10 µL/min之流動速率注射30秒，在流動槽3及4上以1.5 µg/mL之濃度捕獲IL13433-1258。將稀釋至10 µg/mL的抗大鼠及小鼠陽性對照抗體M36 (Pfizer, L4295010-051)在流動槽2上以10 µL/min的速度進行了60秒的捕獲。流動槽1用作參考。藉由在所有4個流通槽上注射各細胞介素之200 nM稀釋液，以50 µL/min的速度持續60秒，然後進行300秒的解離來評估結合。藉由在50 µL/min下單次注射10 mM甘胺酸(pH 1.5) 60秒使表面再生。對資料進行雙重參考，並使用Biacore T-200分析軟體版本3.2對所得的感測器圖譜進行覆蓋 ( 圖 39)。人類及食蟹獼猴IL-33結合至IL13433-1258；然而鼠類及大鼠IL-33在200 nM下未顯示可觀測的結合。食蟹獼猴IL-33與IL13433-1258的結合比人類IL-33弱。鼠類及大鼠IL-33如所預期確實結合至大鼠及小鼠特異性對照抗體M36。

SPR用於評估IL13433-1258與所有三種目標細胞介素之同時結合，且證實IL-4、IL-13及IL-33可同時結合至三特異性IL13433-1258，無論注射次序如何 ( 實例 40)。

實例76 藉由KinExA測試IL13433-1258與人類或食蟹獼猴IL-33之結合親和力動力學排除分析(KinExA)儀器(模型3200，Sapidyne)用於確定三特異性IL13433-1258對人類IL-33及食蟹獼猴IL-33之結合親和力。在含有0.1%疊氮化鈉及1.0 mg/ml BSA的PBS中製備樣品。使用固定抗原分析方法確定結合親和力。三特異性IL13433-1258自2 nM連續稀釋2倍至31 fM，且用生物素化人類IL-33 (Pfizer)或生物素化食蟹獼猴IL-33 (Pfizer)滴定，其中人類IL-33及食蟹獼猴IL-33之濃度保持恆定在5 pM及100 pM。在使用之前在室溫下用3mM DTT使生物素化人類IL-33還原2小時。三特異性IL13433-1258及IL-33細胞介素在室溫下平衡至少72小時，隨後穿過含有聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)珠粒之流通槽，該等珠粒塗佈有含有與三特異性IL13433-1258相同的IL-33結合域的抗hIL-33抗體0726 (Pfizer)。用0.5 ug/ml Alexa Fluor 647結合之鏈黴抗生物素蛋白(Jackson Immunoresearch)偵測用抗hIL-33抗體-0726捕獲的游離IL-33。使用KinExA Pro軟體版本4.3.11 (Sapidyne)進行資料分析。使用『親和力標準』模型分析資料且測定IL-33細胞介素之K _D及活性濃度。當反應在重複注射之間變化時，使用『漂移校正』擬合選項。在獨立實驗中獲得兩個曲線，且使用『n-曲線分析』工具分析以獲得IL-33細胞介素之K _D及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果證實IL13433-1258與食蟹獼猴IL-33之結合比人類IL-33親和力值弱約280倍 ( 圖 39 ，表 73 )。表 73. 藉由 KinExA 測試 IL13433-1258 結合至 人類或食蟹獼猴 IL-33 之親和力

IL-33	人類IL-33 (K _D; pM)	食蟹獼猴IL-33 (K _D; pM)
平均值	0.151	43.30
s.d.	0.0016	0.580
所示資料係使用重組形式之人類 IL-33 (Pfizer) 或食蟹獼猴 IL-33 (Pfizer) 的平均值 +/-s.d 。

實例77 三特異性IL13433-1258與已知IL-33抗體相比之IL-33中和活性已知若干抗體中和IL-33之生物活性，包括IL33-265、IL33-310、IL33-301及IL33-303。IL33-265係一種將IL-33抗體依特吉單抗(REGN3500；Regeneron Pharmaceuticals, Inc.：參見US2014/0271658的SEQ ID NO: 274及282)的可變區移植至人類IgG1效應功能無效恆定區，以代替原始人類IgG4的抗體。IL33-265除了IL33-265編碼重鏈C端處之額外殘基以外，序列與IL33-0352一致。此離胺酸殘基在哺乳動物細胞中表現期間通常自蛋白質裂解，因此所得IL33-265及IL33-0352在蛋白質序列中一致。IL33-310由來自US2016168242 (Genentech, Inc.)的SEQ ID NO: 306 (HC)、SEQ ID NO: 307 (LC)構成。IL33-301及IL33-303源自WO2015/106080 (AnaptysBio)。GBT-IL33-0301含有SEQ ID NO: 124 (VH)與SEQ ID NO: 142 (VL)配對，而GBT-IL33-0303含有與SEQ ID NO: 173 (VL)配對之相同VH。IL33-0301與艾托奇單抗(AnaptysBio, Inc.)密切相關，區別在於VH中的兩個胺基酸(FW1中的V5M，CDRH2中的D56N；Kabat編號)及VL中的兩個胺基酸(CDRL3中的Q92K S93T)。此外，IL33-0301及IL33-0303使用具有突變之人類IgG1恆定區以使效應功能降至最低，而艾托奇單抗使用野生型人類IgG1。進行一系列實驗以比較此等已知抗體與IL13433-1258之活性。

簡言之，使用人類IL-33評估IL13433-1258及已知的IL-33抗體之中和活性，使用HEK-Blue™ IL-33細胞(Invivogen)，如實例 72中所描述。IL13433-1258、IL33-265、IL33-301、IL33-303及IL33-310均能夠抑制IL-33活性，藉由抑制HEK-Blue™ IL-33細胞中之SEAP活性的能力所證明。然而，與IL33-301、IL33-303及IL33-310相比，IL13433-1258展示優良的中和活性，同時具有與IL33-265之活性相當的活性 ( 表 74)。表 74. 基於細胞的分析中 IL13433-1258 及已知 IL-33 抗體之 細胞介 素中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM) HEK-Blue™ IL-33 SEAP ^a
rHu IL-33	IL33-301	平均值	596.5
s.e.m.	149.5
n	13
IL-33-303	平均值	769.1
s.e.m.	186.0
n	7
IL33-310	平均值	56.40
s.e.m.	8.99
n	6
IL33-265	平均值	15.91
s.e.m.	1.31
n	12
IL13433-1258	平均值	13.40
s.e.m.	2.61
n	16
^aSEAP活性係在37℃下暴露於IL-33 (0.1 ng/mL) 20小時的HEK-Blue™細胞中進行分析。

IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037 TRI-FAB-FCS表徵：TSLP結合域實例78 mAb TSLP-0001、mAb TSLP-0875、mAb TSLP-0855、mAb TSLP-0871及三特異性IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037之TSLP中和活性先天性細胞介素報警素TSLP在AD及哮喘中升高且已涉及促進障壁表面的2型免疫反應(40-42)。TSLP由上皮細胞、角質細胞及纖維母細胞產生。TSLP結合至包含一系列免疫細胞類型上之包含TSLPR及IL-7Rα的雜二聚體受體，且促進上皮串擾，引起DC活化、產生2型細胞介素及使Th2效應反應活化(4，43)。

TSLP-0001為用於親和力工程改造工作之模板變異體。TSLP-0855、TSLP-0871及TSLP-0875為親和力改良之mAb殖株。在基於細胞之生物分析中評估TSLP-0001、TSLP-0855、TSLP-0871、TSLP-0875及三特異性物IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037之TSLP中和活性。TSLP生物分析檢查藉由經刺激之單核球釋放的趨化介素TARC，如實例 19中所描述。自周邊血液分離之初代人類單核球與0.5 ng/ml醣基化重組人類TSLP (Pfizer BMD)，連同抗體之稀釋液或三特異性物一起在37℃下培育隔夜。收集上清液且藉由MSD分析TARC。

抗TSLP殖株TSLP-0001 (特澤佩魯單抗; AZ/Amgen)在單核球TARC產生分析中抑制TSLP生物活性 ( 表 75)。親和力改良之TSLP-結合域TSLP-0875、TSLP-0855及TSLP-0871衍生自殖株TSLP-0001，且分別併入三特異性IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037中。表 75比較三特異性IL413TSLP-1024、IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037與組成性TSLP結合域TSLP-0875、TSLP-0855及呈mAb形式之TSLP-0871相比之TSLP中和活性。因為mAb為二價的且三特異性物對於細胞介素結合為單價，所以預期三特異性物具有以莫耳計降低之中和能力。對於TSLP，三特異性物比mAb之效力低約2.5倍 ( 表 75)。表 75. mAb TSLP-0001 、 mAb TSLP-0875 、 TSLP-0855 及 TSLP-0871 及 三特異性 IL413TSLP-1024 、 IL413TSLP-1028 及 IL413TSLP-1037 之 TSLP 中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM)
rHu TSLP	TSLP-0001	中值	19.15
s.e.m.	1.42
n	30
TSLP-0875	中值	5.56
s.e.m.	0.95
n	4
TSLP-0855	中值	4.12
s.e.m.	0.66
n	2
TSLP-0871	中值	5.69
s.e.m.	0.89
n	2
IL413TSLP-1024	中值	13.99
s.e.m.	1.49
n	11
IL413TSLP-1028	中值	12.5
s.e.m.	7.5
n	2
IL413TSLP-1037	中值	18.5
s.e.m.	4.5
n	2
TARC生產係在37℃下暴露於TARC (4 ng/mL) 24小時的人類周邊血液單核球或人類全血中進行分析。

實例79 IL413TSLP-1024針對短形式及長形式TSLP之反應性 TSLP以短形式存在，維持在恆穩條件下，而長形式，由炎症誘導(44)。短形式之功能及其細胞表面受體尚未得到良好表徵，但已提出抗微生物活性(45)。結構分析表明，特澤佩魯單抗靶向長形式，很可能不會與短形式之序列形成接觸(46)。因為結合域TSLP-0875衍生自特澤佩魯單抗(TSLP-0001)，所以其不大可能與短形式相互作用。為了證實結合特異性，產生短形式及長形式之TSLP構築體且產生蛋白質。SPR用於確定三特異性IL413TSLP-1024及抗TSLP抗體TSLP-0001及TSLP-0875對TSLP短形式及長形式蛋白質之結合特異性。高濃度(300nM)之短形式或長形式TSLP注射於抗Fab捕獲之IL413TSLP-1024、TSLP-0001及TSLP-0875上，其中結合係藉由表面電漿子共振偵測，如實例 52中所描述。SPR分析證實TSLP-0001、TSLP-0875及IL413TSLP-1024不結合至短形式 ( 圖 40)。TSLP-0001、TSLP-0875或IL413TSLP-1024由固定在Biacore CM5感測器晶片上的抗Fab抗體(GE HealthCare, Marlborough, MA)捕獲。將濃度為300 nM之短形式(TSLPsf Avi V5 His 10生物素)或長形式(TSLPlf Avi V5 His 10生物素) TSLP異構體注射於所捕獲的三特異性物/mAb上以測試結合。在37℃下使用Biacore 8K進行此分析。藉由SPR評估，TSLP-0001、TSLP-0875或IL413TSLP-1024未顯示出與短形式TSLP的任何結合。如所預期，TSLP-0001、TSLP-0875或IL413TSLP-1024結合長形式TSLP。

類似地，短形式在單核球TARC生產生物分析中無活性 ( 圖 41)。此等發現證實IL413TSLP-1024具有針對長形式TSLP的選擇性反應性。

實例80 單核球及全血中IL413TSLP-1024對人類及食蟹獼猴TSLP之中和活性為了證實針對食蟹獼猴細胞介素之抗體活性，在單核球TARC生產生物分析中測試IL413TSLP-1024之中和活性。藉由三特異性IL413TSLP-1024有效抑制人類或食蟹獼猴TSLP (Pfizer)之生物活性。與人類細胞介素相比，針對食蟹獼猴TSLP之中和活性減少約2.1倍 ( 表 76)。經調適用於全血形式之單核球TARC產生分析中之實驗證實，三特異性IL413TSLP-1024阻斷除了經分離單核球以外人類及食蟹獼猴全血中之細胞介素活性 ( 表 76)。表 76. 三特異性 IL413TSLP-1024 對人類或食蟹獼猴 TSLP 之中和活性

	周邊血液單核球 (IC ₅₀; pM)	人類全血 (IC ₅₀; pM)
TSLP	人類	食蟹獼猴	人類	食蟹獼猴
中值	13.99	30.00	8.44	32.67
s.e.m.	1.49	2.02	2.29	9.85
n	11	7	6	6
TSLP 中和活性係使用單核球 TARC 生產生物分析，使用人類 TSLP (Pfizer) 或食蟹獼猴 TSLP (Pfizer) 之重組形式進行分析。TARC生產係在37℃下暴露於TARC (4 ng/mL) 24小時的人類周邊血液單核球或人類全血中進行分析。

實例81 藉由表面電漿子共振測試之IL413TSLP-1024與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠TSLP之結合使用表面電漿子共振(SPR)之跨物種研究表徵IL413TSLP-1024與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠TSLP之結合。所有實驗均使用Biacore 8K儀器(GE HealthCare，Marlborough，MA)進行。按照製造商(GE HealthCare, Marlborough, MA)提供的說明書，使用生物素CAP套組(GE HealthCare, Marlborough, MA)來捕獲生物素化人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠TSLP。將三特異性IL413TSLP-1024或對照組抗小鼠TSLP抗體(AF555；R&D Systems)以300 nM的濃度流過所捕獲的生物素化TSLP。締合及解離階段分別為60秒及300秒。在解離階段結束時，含有鏈黴抗生物素蛋白之表面係使用新鮮製備的3:1 8M胍鹽酸鹽:1M NaOH之一個120秒的脈衝再生。圖 42展示濃度為300 nM之IL413TSLP-1024僅結合至人類及食蟹獼猴TSLP。

實例82 藉由KinExA測試IL413TSLP-1024與人類及食蟹獼猴TSLP之結合親和力動力學排除分析KinExA)儀器(模型3200，Sapidyne)用於確定三特異性IL413TSLP-1024對人類及食蟹獼猴TSLP之結合親和力。在含有0.1%疊氮化鈉及1.0 mg/ml BSA的PBS中製備樣品。使用固定抗原分析方法來確定結合親和力。三特異性IL413TSLP-1024自400 pM連續稀釋2倍至12f M，且用來自人類(Pfizer)食蟹獼猴(Pfizer)之生物素化TSLP滴定，其中生物素化TSLP之濃度保持恆定在10 pM及100 pM。三特異性IL413TSLP-1024及TSLP細胞介素在室溫下平衡至少72小時，隨後穿過含有聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)珠粒之流通槽，該等珠粒塗佈有含有與三特異性IL413TSLP-1024相同的TSLP結合域的抗TSLP mAb TSLP-0875 (Pfizer)。用1ug/ml Alexa Fluor 647-鏈黴抗生物素蛋白偵測結合之生物素化TSLP (Jackson Immunoresearch)。使用KinExA Pro軟體版本4.3.11 (Sapidyne)進行資料分析。使用親和力標準樣品模型分析資料且測定生物素化TSLP抗原之K _D及活性濃度。當反應在重複注射之間變化時，選擇『漂移校正』選項。在獨立實驗中獲得兩個曲線，且使用『n-曲線分析』工具分析以獲得生物素化TSLP之K _D及活性濃度的整體最佳擬合值。該軟體報導各最佳擬合值以及95%信賴區間。結果證實IL413TSLP-1024以在人類TSLP親和力值的約2倍內結合至食蟹獼猴TSLP。 ( 圖 8 ，表 77)。表 77. 藉由 KinExA 測試 IL413TSLP -1024 結合至人類或食蟹獼猴 TSLP 之親和力

	人類TSLP (K _D; pM)	食蟹獼猴TSLP (K _D; pM)
平均值	3.03	6.31
誤差%	2.6%	1.7%
所示資料係使用重組形式之人類 TSLP (Pfizer) 或食蟹獼猴 TSLP (Pfizer) 的平均值及誤差 % 。誤差%為曲線擬合質量測，且由最佳擬合理論曲線與量測資料點之間的定量比較產生。

實例83 藉由表面電漿子共振使IL-4、IL-13及TSLP與IL413TSLP同時結合 SPR用於評估IL413TSLP-1024同時結合至所有三種目標細胞介素，人類IL-4、IL-13及TSLP。用直接固定在CM5感測器晶片上之抗人類Fc抗體捕獲三特異性IL413TSLP-1024。使用三個不同注射階將900 nM之高濃度人類IL-4、IL-13及TSLP依序注射於所捕捉之三特異性物中，且如實例 52中所描述藉由SPR偵測結合。此分析使用Biacore 8K儀器在37℃之溫度下進行。結果證實所有三種細胞介素可同時結合至三特異性IL413TSLP-1024，不管注射次序如何 ( 圖 43)。

實例84 三特異性IL413TSLP-1024與特澤佩魯單抗相比之中和活性抗TSLP特澤佩魯單抗(Tezspire™; AMG157; MEDI9929; Amgen/MedImmune)已顯示出對哮喘的療效(46)，以及對AD的活性趨勢(47)。其當前經批准用於治療重度哮喘。

吾等在單核球TARC生產生物分析中比較三特異性IL413TSLP-1024對特澤佩魯單抗(TSLP-0001)之細胞介素中和活性。IL413TSLP-1024之TSLP中和活性與特澤佩魯單抗的相當 ( 表 78)。表 78. IL413TSLP-1024 及特澤佩魯單抗之 TSLP 中和活性

細胞介素	抗體或三特異性物		IC ₅₀(pM) ^a
rHu TSLP	特澤佩魯單抗	中值	19.15
s.e.m.	1.42
n	30
IL413TSLP-1024	中值	13.99
s.e.m.	1.49
n	11
^a將分離自人類周邊血液的單核細胞與重組人類TSLP (4 ng/ml; Pfizer)以及三特異性IL413TSLP-1024或特澤佩魯單抗的稀釋液在37℃一起培育隔夜。細胞上清液中之TARC生產係藉由MSD定量。

單獨阻斷IL-4、IL-13及TSLP或與阻斷PD1聯合的活體內抗腫瘤功效。實例85 單獨阻斷IL-4、IL-13及TSLP或與阻斷PD1聯合的活體內腫瘤生長抑制。測試阻斷鼠類IL-4 (mAb殖株11B11)、IL-13 (mIL13Ra2-mFc)、TSLP (mAb殖株28F12)或PD1 (mAb殖株F2:SEQ ID NO: 227及SEQ ID NO: 228)之替代物大分子之活體內抑制腫瘤生長的能力。

皮下CT26腫瘤模型形式：先前的研究展示使用CT26大腸癌細胞株之皮下腫瘤植入模型對IL-4阻斷有反應(97)。選擇此模型以比較阻斷IL-4、IL-13、TSLP及PD1之各種組合對負載腫瘤之小鼠的影響，如以下實驗中所描述：

向雌性Balb/C J小鼠右後側腹皮下植入約500,000個CT26細胞，其自單一低代小瓶(具有1,000,000個細胞)新鮮解凍且培養建立植入足夠的細胞所需之最短時間。當獲得足夠的具有大約75 mm ³(如(長度*寬度 ²)/2所定義) (定義為第9天)之可見腫瘤質量之動物時，緊接著在給藥之前將小鼠隨機分為群組(n=10隻動物)。治療組為：(1)同型對照，(2)抗IL-4加mIL13Ra2-mFc，(3)抗PD1，(4)抗IL-4加mIL13Ra2-mFc加抗PD1，(5)抗IL-4加mIL13Ra2-mFc加抗TSLP或(6)抗IL-4加mIL13Ra2-mFc加抗TSLP加抗PD1 (概述於表88中)。每3至4天將抗IL-4 (10 mg/kg)及mIL13Ra2-mFc (10 mg/kg)皮下注射(頸背)，而抗PD1 (10 mg/kg)及抗TSLP (10mg/kg)腹膜內注射，經14天總共5次給藥至給定組之各動物中。將等體積的同型匹配對照抗體投與給定組之各動物中，使得在治療組中每劑量投與之蛋白質總質量相等。在整個實驗過程中追蹤腫瘤體積(圖44A以及圖45)。在腫瘤植入後第22天處死動物且記錄各治療組內之動物之腫瘤體積(圖44B)。在PRISM版本9.0.0 (Graphpad)中繪製腫瘤體積，且藉由ANCOVA與事後成對的Tukey檢驗來分析治療組與同型對照組之間的差異。結果證明單獨阻斷IL-4、IL-13及TSLP之組合以及與PD-1拮抗作用聯合可抑制腫瘤生長。表 88.皮下CT26研究之研究設計

組	藥物	n/ 組	劑量 (mg/kg/ 劑 )	給藥
途徑	療程
1	同型(mIgG2a，mIgG1，rIGg2a)	10	8 10 10	SC (mIgG2a) IP (rIgG2a，mIgG1)	Q3D x 5
2	抗mIL-4 (殖株11B11) +抗IL-13 (mIL-13Ra2-mFc)	10	10 8	SC SC	Q3D x 5
3	抗PD-1 (殖株F2)	10	10	IP	Q3D x 5
4	抗IL-4 +抗IL-13 +抗PD-1	10	10 8 10	SC SC IP	Q3D x 5
5	抗IL-4 +抗IL-13 +抗mTSLP (殖株28F12)	10	10 8 10	SC SC SC	Q3D x 5
6	抗IL-4 +抗IL-13 +抗TSLP +抗PD-1	10	10 8 10 10	SC SC SC IP	Q3D x 5

活體外阻斷IL-4和TSLP使初代人類T細胞重新極化從而實現腫瘤生長控制。實例86 IL-4或TSLP之阻斷防止活體外初代人類T細胞的干擾素γ分泌抑制。 CD4及CD8 T細胞之1型極化與腫瘤之免疫控制及對免疫檢查點抑制劑之反應相關(97-101)。T細胞之干擾素γ產生係1型極化之標誌，且其產生與腫瘤生長抑制相關(102，103)。測試序列最佳化之抗IL4殖株1040及親和力最佳化之抗TSLP殖株0875在外源性重組人類IL-4或TSLP存在下恢復來自經活化之初代人類CD4及CD8 T細胞之干擾素γ分泌的能力。

生物分析形式：識別A375腫瘤細胞之初代人類T細胞的極化。人類T細胞暴露於IL-4或TSLP使其向2型反應極化且抑制干擾素γ產生(99，104-106)。為了測試mAb IL4-1040及mAb TSLP-0875阻止腫瘤反應性初代人類T細胞抑制干擾素γ分泌的能力，吾等使用以下生物分析。使用磁珠(Stemcell Technologies)自冷凍保存之周邊血液單核細胞純化單獨的CD4及CD8 T細胞群。將CD4或CD8 T細胞(500,000個細胞/孔)分別地與絲裂黴素C失活之A375人類腫瘤細胞(500,000個細胞/孔)共培養。此等培養物在24孔G-Rex培養盤(Wilson Wolf)中使用補充有10%彙集人類AB血清(Sigma-Aldrich)及重組人類IL-2 (20 ng/mL)及IL-7 (10 ng/mL)之X-Vivo 15培養基(Lonza Whittaker)進行。對於此實驗，一些孔用不相關的同型匹配抗體(1.5 pM)處理，一些孔用此同型對照抗體(1.5 pM)及重組人類IL-4 (10 pg/mL)或長形式TSLP (10 pg/mL)處理，一些孔用重組人類IL-4 (10 pg/mL)及mAb IL4-1040 (1.5 pM)處理且一些孔用重組人類TSLP (10 pg/mL)及mAb TSLP-0875 (1.5 pM)處理。A375反應性CD4或CD8 T細胞在此等條件下在37℃下在5% CO ₂培育箱中發生極化及擴增13天。在此時間結束時，將T細胞轉移至缺乏細胞介素之新鮮培養基，且計數抗體，調節至1,000,000個細胞/毫升且藉由在5% CO ₂培育箱中於37℃下培育隔夜而靜置。

生物分析形式：再刺激A375反應性初代人類T細胞以量測干擾素γ分泌。表現核定位GFP之A375細胞以5,000個細胞/孔接種於黑色光底96孔盤(珀金Elmer)中且在37℃、5% CO ₂下培育隔夜。將上述靜置的A375反應性CD4及CD8 T細胞混合，且添加至含有表現GFP之活A375腫瘤細胞之盤(50,000個CD4及50,000個CD8 T細胞/孔)中。此等培養發生在37℃下在5% CO ₂培育箱中，使用補充有10%混合人類AB血清之X-Vivo 15培養基持續5天。一些孔用不相關的同型匹配抗體(1.5 pM)處理，一些孔用此同型對照抗體(1.5 pM)及重組人類IL-4 (10 pg/mL)或長形式TSLP (10 pg/mL)處理，一些孔用重組人類IL-4 (10 pg/mL)及mAb IL4-1040 (1.5 pM)處理且一些孔用重組人類TSLP (10 pg/mL)及mAb TSLP-0875 (1.5 pM)處理。處理細節列於表89中。第5天，將培養盤離心，且收集一半培養基以藉由多重ELISA (Meso Scale Discovery)定量干擾素γ蛋白。分泌的細胞介素之濃度自Excel (Microsoft)中之標準曲線外推。繪製資料，且在PRISM版本9.0.0 (GraphPad)中藉由ANOVA與事後Šídák多重比較測試來測試組之間的差異。

如上文所描述測試來自六種不同供體之CD4及CD8 T細胞。向上述分析添加重組人類IL-4或TSLP減少干擾素γ分泌。IL-4與mAb IL4-1040之中和防止干擾素γ分泌的抑制，且增強干擾素γ分泌，高於僅用無關同型對照抗體處理的再刺激T細胞(圖46A)。TSLP與mAb TSLP-0875之中和預防一些供體的干擾素γ分泌受到抑制(圖46B)。表 89.實例87中所描述之初代人類T細胞之啟始及再刺激中所用的治療。

治療	劑量	圖 46 中之名稱	啟始	再刺激
同型抗體	1.5pM	同型	是	是
同型抗體+IL4	1.5pM 10pg/mL	IL4	是	是
mAb IL4-1040 +IL4	1.5pM 10pg/mL	IL4+抗IL4	是	是
同型抗體+TSLP	1.5pM 10pg/mL	TSLP	是	是
mAb TSLP-0875 +TSLP	1.5pM 10pg/mL	TSLP +抗TSLP	是	是

實例87 IL4或TSLP之阻斷改善活體外人類癌細胞株的T細胞介導之生長控制。初代人類CD4及CD8 T細胞如實例87中所描述經極化且再刺激。使用Incucyte S3 (Sartorius)每三個小時製得表現GFP之A375細胞的計數。在各時間點之細胞計數正規化為初始細胞計數。繪製此等正規化的縱向計數，且計算每個供體各治療組之曲線下面積(AUC)。MAb IL4-1040逆轉外源重組IL4對腫瘤生長的抑制(圖47A)，mAb TSLP-0875逆轉外源重組TSLP對腫瘤生長的抑制(圖47B)，mAb IL4-1040及TSLP-0875的組合逆轉外源重組IL4及TSLP對腫瘤生長的抑制(圖47C)。分泌至培養基中之干擾素γ的濃度與腫瘤細胞數目之間存在顯著反相關(圖47D)。繪製資料，且在PRISM版本9.0.0 (GraphPad)中藉由ANOVA與事後Šídák多重比較測試及斯皮爾曼(Spearman)相關性來進行組之間的差異。總之，資料展示IL-4藉由mAb IL4-1040及/或TSLP藉由mAb TSLP-0875中和增強了活體外A375人類癌細胞株生長之T細胞控制。

實例88 重組IL-4及TSLP降低表現細胞毒性蛋白穿孔素及顆粒酶B之活體外活化之初代人類CD8 T細胞的比例初代人類CD8 T細胞如實例87中所描述在無外源性細胞介素的情況下或在0.8 ng/mL重組人類IL-4或0.8 ng/mL各重組人類IL-4及TSLP的存在下進行極化。在極化之後，對CD8 T細胞進行計數且收集來自各條件之250,000個細胞以供藉由流式細胞測量術分析。將細胞用冷PBS洗滌且在黑暗中在室溫下用Live/Dead Aqua存活染料(ThermoFisher)標記20分鐘。在流式細胞測量術染色緩衝液(ThermoFisher)中洗滌之後，細胞在4℃下用R718標記之抗人類CD3、BUV496標記之抗人類CD4及BUV737標記之抗人類CD8 (全部來自BD Biosciences)染色20分鐘。細胞再次用含有流式細胞測量術染色緩衝液洗滌且在室溫下用FoxP3/轉錄因子固定/滲透溶液(ThermoFisher)固定20分鐘。細胞隨後用滲透緩衝液(ThermoFisher)洗滌且在黑暗中在室溫下用APC標記之抗人類顆粒酶B及BV421標記之抗人類穿孔素(兩者均來自Biolegend)染色20分鐘。基於正向及側向光散射、較低Live/Dead Aqua信號及CD3及CD8之表現來閘控單一活CD8 T細胞。CD8 T細胞的穿孔素及顆粒酶B兩者表現藉由流式細胞測量術測定，且用FlowJo軟體(BD Biosciences)定量雙陽性細胞百分比。單獨重組人類IL-4及重組人類IL-4及TSLP之組合降低表現細胞毒性蛋白穿孔素及顆粒酶B兩者之A375極化的初代人類CD8 T細胞的比例(圖48)。繪製資料，且在PRISM版本9.0.0 (GraphPad)中藉由ANOVA與事後Šídák多重比較測試來測試組之間的差異。

總之：重組人類IL-4及/或TSLP降低表現細胞毒性蛋白穿孔素及顆粒酶B之腫瘤反應性初代人類CD8 T細胞的比例。此等細胞介素單獨或組合亦減少了極化及再刺激之初代人類T細胞的干擾素γ分泌，且削弱了此等T細胞活體外對A375腫瘤細胞生長之控制。在極化及再活化期間，用mAb IL4-1040中和外源性重組IL-4及/或用mAb TSLP-0875中和外源性重組TSLP，逆轉或傾向於逆轉由此等細胞介素引起之干擾素γ分泌減少及腫瘤生長控制。

活體外阻斷IL-4及IL13可減少人類透明細胞腎癌細胞分泌趨化介素CCL17/TARC。實例89 基於細胞之分析中三特異性物IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037的IL-4中和活性。趨化介素CCL17/胸腺及活化調節趨化介素(TARC)之血清含量在阻斷IL-4及IL-13信號傳導之抗體臨床試驗中用作藥效學生物標記(107)。CCL17之表現亦與免疫抑制腫瘤微環境相關(108-110)。在以下生物分析中測試三特異性IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037之IL-4及IL-13中和活性。

769-P IL-4及IL-13 CCL17生物分析形式：對於此分析，769-P人類透明細胞腎細胞癌細胞(美國菌種保藏中心，Manassas, VA)在96孔培養盤中以5×10^5個細胞/孔接種生長為貼壁單層形式。為了測試細胞介素反應之抗體抑制，添加預定EC ₉₀濃度之30 ng/mL重組人類IL-13或1 ng/mL重組人類IL-4。在接受IL-4的孔中使用濃度範圍為6.7至0.0523 nM之不同濃度的三特異性抗體，而在接受IL-13的孔中使用23至0.1797 nM。細胞在37℃下培育約20小時，其後收集條件培養基，且藉由Legendplex液相多重免疫分析(Biolegend)分析所分泌蛋白質之含量。使用由Biolegend提供的基於雲端之工具自標準曲線外推所分泌的細胞介素之濃度。使用PRISM版本9.0.0 (GraphPad)，由抗體劑量滴定資料計算IC ₅₀值。

IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037之IL-4中和活性：三特異性IL413TSLP-1037包含IL-13結合域0001 (1RVHC9 VLA4)、IL-4結合域1040及TSLP結合域0855。三特異性IL413TSLP-1028包含IL-13結合域0001 (1RVHC9 VLA4)、IL-4結合域1040及TSLP結合域0871。IL413TSLP-1037以劑量依賴性方式中和769-P細胞的IL-4誘導之CCL17分泌(圖49A)。此分析法中IL413TSLP-1037之IC ₅₀為0.1794 nM。IL413TSLP-1028以劑量依賴性方式中和769-P細胞的IL-4誘導之CCL17分泌(圖49A)。此分析法中IL413TSLP-1028之IC ₅₀為0.1392 nM。

IL413TSLP-1037及IL413TSLP-1028之IL-13中和活性：IL413TSLP-1037以劑量依賴性方式中和769-P細胞的IL-13誘導之CCL17分泌(圖49B)。此分析法中IL413TSLP-1037之IC ₅₀為0.5928 nM。IL413TSLP-1028以劑量依賴性方式中和769-P細胞的IL-4誘導之CCL17分泌(圖49B)。此分析法中IL413TSLP-1028之IC ₅₀為0.8115 nM。

總之：在此基於人類腫瘤細胞株之分析中，三特異性物IL413TSLP-1037及IL413TSLP-1028為人類IL-4及IL-13生物活性的強效中和劑。

參考文獻 1. US 2015/0322135 A1. Engineered monomeric antibody fragments. Ishino Tetsuya等人. 2. Mechold U,等人. Codon optimization of the BirA enzyme gene leads to higher expression and an improved efficiency of biotinylation of target proteins in mammalian cells. J Biotechnol. 2005;116(3):245-9. 3. US 2009/0238823 Al. antigen binding proteins capable of binding thymic stromal lymphopoietin. Micheael R. Comeau等人. 4. Verstraete K,等人, Structure and antagonism of the receptor complex mediated by human TSLP in allergy and asthma Nat Commun. 2017 Apr 3; 8:14937. doi: 10.1038/ncomms14937. 5. Brian J Fennell,等人. CDR-restricted engineering of native human scFvs creates highly stable and soluble bifunctional antibodies for subcutaneous delivery. MAbs 2013, 5, 882-895. 6. Adam Root等人, Development of PF-06671008, a Highly Potent Anti-P-cadherin/Anti-CD3 Bispecific DART Molecule with Extended Half-Life for the Treatment of Cancer. Antibodies 2016, 5(1), 6 7. Lindsay B. Avery等人. Establishing in vitro in vivo correlations to screen monoclonal antibodies for physicochemical properties related to favorable human pharmacokinetics mAbs, 2018 10:2, 244-255, 8. Avery LB,等人. Utility of a human FcRn transgenic mouse model in drug discovery for early assessment and prediction of human pharmacokinetics of monoclonal antibodies. mAbs. 2016; 8:1064-1078. 9. US5731168. Paul J. Carter、Leonard G. Presta、John B. Ridgway. Method for making heteromultimeric polypeptides. 10. US7183076. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components. 11. WO 2015/173756A2. Bispecific antibodies. 12. Pavel Strop,等人. Generating Bispecific Human IgG1 and IgG2 Antibodies from Any Antibody Pair. J. Mol. Biol. (2012) 420, 204-219 13. Sarah Sirin,等人. AB‐Bind: Antibody binding mutational database for computational affinity predictions. Protein Sci. 2016 Feb; 25(2): 393-409. 14. Guerois R,等人. (2002) Predicting changes in the stability of proteins and protein complexes: a study of more than 1000 mutations. J Mol Biol 320:369-387. 15. Schymkowitz J,等人(2005) The FoldX web server: an online force field. Nucleic Acids Res 33: W382-W38 16. Sharma VK,等人. In silico selection of therapeutic antibodies for development: viscosity, clearance, and chemical stability. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2014;111(52):18601-6. 17. Tomar DS,等人. In-silico prediction of concentration-dependent viscosity curves for monoclonal antibody solutions. mAbs. 2017;9(3):476-89. 18. Apgar JR,等人. (2020) Modeling and mitigation of high-concentration antibody viscosity through structure-based computer-aided protein design. PLoS ONE 15(5): e0232713. https://doi. org/10.1371/journal.pone.0232713T 19. Chow CK,等人. Therapeutic Antibody Engineering To Improve Viscosity and Phase Separation Guided by Crystal Structure. Molecular pharmaceutics. 2016;13(3):915-23. 20. Geoghegan JC,等人. Mitigation of reversible self-association and viscosity in a human IgG1 monoclonal antibody by rational, structure-guided Fv engineering. mAbs. 2016;8(5):941-50. 21. Nichols P,等人. Rational design of viscosity reducing mutants of a monoclonal antibody: hydrophobic versus electrostatic inter-molecular interactions. mAbs. 2015;7(1):212-30. 22. Yadav S,等人. The influence of charge distribution on self-association and viscosity behavior of monoclonal antibody solutions. Molecular Pharmaceutics. 2012;9(4):791-802. 23. Agrawal NJ,等人. Computational tool for the early screening of monoclonal antibodies for their viscosities. mAbs. 2016;8(1):43-8. 24. US6902734. 25. Cohen ES,等人. Oxidation of the alarmin IL-33 regulates ST2-dependent inflammation. Nat Commun 2015; 6:8327-36. 26. Schafer JR,等人. Prediction of well-conserved HIV-1 ligands using a matrix-based algorithm, EpiMatrix. Vaccine 1998; 16 (19): 1880-1884. 27. Wang P,等人. Peptide binding predictions for HLA DR, DP and DQ molecules. BMC Bioinformatics. 2010;11.1:568. 28. Junttila, I.S. 2018. Tuning the Cytokine Responses: An Update on Interleukin (IL)-4 and IL-13 Receptor Complexes. Front Immunol. 9: 888. 29. Wills-Karp, M.等人. 2008. Untangling the complex web of IL-4- and IL-13-mediated signaling pathways. Sci Signal. 1: pe55. 30. de Waal Malefyt, R.,等人. 1993. Effects of IL-13 on phenotype, cytokine production, and cytotoxic function of human monocytes. Comparison with IL-4 and modulation by IFN-gamma or IL-10. J Immunol. 151: 6370-81. 31. Vercelli, D.,等人. 1988. Human recombinant interleukin 4 induces Fc epsilon R2/CD23 on normal human monocytes. J Exp Med. 167: 1406-16. 32. Wu, J.等人. 2020. Efficacy of biologics in atopic dermatitis. Expert Opin Biol Ther. 33. Shirley, M. 2017. Dupilumab: First Global Approval. Drugs. 77: 1115-1121. 34. Harb, H.等人. 2019. Mechanisms of Dupilumab. Clin Exp Allergy. 35. DeMeo, D.L.、C. Lange、E.K. Silverman、J.M. Senter、J.M. Drazen、M.J. Barth、N. Laird及S.T. Weiss. 2002. Univariate and multivariate family-based association analysis of the IL-13 ARG130GLN polymorphism in the Childhood Asthma Management Program. Genet Epidemiol. 23: 335-48. 36. Heinzmann, A.,等人. 2000. Genetic variants of IL-13 signalling and human asthma and atopy. Hum Mol Genet. 9: 549-59. 37. Kakkar, R.等人. 2008. The IL-33/ST2 pathway: therapeutic target and novel biomarker. Nat Rev Drug Discov. 7: 827-40. 38. Smithgall, M.D.,等人. 2008. IL-33 amplifies both Th1- and Th2-type responses through its activity on human basophils, allergen-reactive Th2 cells, iNKT and NK cells. Int Immunol. 20: 1019-30. 39. Yang, Q.,等人. 2011. IL-33 synergizes with TCR and IL-12 signaling to promote the effector function of CD8+ T cells. Eur J Immunol. 41: 3351-60. 40. Divekar, R.等人. 2015. Recent advances in epithelium-derived cytokines (IL-33, IL-25, and thymic stromal lymphopoietin) and allergic inflammation. Curr Opin Allergy Clin Immunol. 15: 98-103. 41. Hammad, H.等人. 2015. Barrier Epithelial Cells and the Control of Type 2 Immunity. Immunity. 43: 29-40. 42. Ziegler, S.F.等人. 2010. Sensing the outside world: TSLP regulates barrier immunity. Nat Immunol. 11: 289-93. 43. Liu, Y.J.,等人. 2007. TSLP: an epithelial cell cytokine that regulates T cell differentiation by conditioning dendritic cell maturation. Annu Rev Immunol. 25: 193-219. 44. Varricchi, G.,等人. 2018. Thymic Stromal Lymphopoietin Isoforms, Inflammatory Disorders, and Cancer. Front Immunol. 9: 1595. 45. Bjerkan, L.,等人. 2016. Multiple Functions of the New Cytokine-Based Antimicrobial Peptide Thymic Stromal Lymphopoietin (TSLP). Pharmaceuticals (Basel). 9. 46. Corren, J.,等人. 2017. Tezepelumab in Adults with Uncontrolled Asthma. N Engl J Med. 377: 936-946. 47. Simpson, E.L.,等人. 2019. Tezepelumab, an anti-thymic stromal lymphopoietin monoclonal antibody, in the treatment of moderate to severe atopic dermatitis: A randomized phase 2a clinical trial. J Am Acad Dermatol. 80: 1013-1021. 48. May, R. D.等人. 2015. Strategies targeting the IL-4/IL-13 axes in disease. Cytokine.75: 89-116. 49. Roesner, L. M.,等人. 2019. Common and different roles of IL-4 and IL-13 in skin allergy and clinical implications. Curr Opin Allergy Clin Immunol.19: 319-327. 50. Perkins, C.,等人. 2006. IL-4 induces IL-13-independent allergic airway inflammation. J Allergy Clin Immunol.118: 410-9. 51. Munitz, A.,等人. 2008. Distinct roles for IL-13 and IL-4 via IL-13 receptor alpha1 and the type II IL-4 receptor in asthma pathogenesis. Proc Natl Acad Sci U S A.105: 7240-5. 52. Lupardus, P. J.,等人. 2010. Molecular basis for shared cytokine recognition revealed in the structure of an unusually high affinity complex between IL-13 and IL-13Ralpha2. Structure.18: 332-42. 53. Kawakami, K.,等人. 2001. The interleukin-13 receptor alpha2 chain: an essential component for binding and internalization but not for interleukin-13-induced signal transduction through the STAT6 pathway. Blood.97: 2673-9. 54. Bachert, C.,等人. 2019. Efficacy and safety of dupilumab in patients with severe chronic rhinosinusitis with nasal polyps (LIBERTY NP SINUS-24 and LIBERTY NP SINUS-52): results from two multicentre, randomised, double-blind, placebo-controlled, parallel-group phase 3 trials. Lancet.55. Blauvelt, A等人. 2017. Long-term management of moderate-to-severe atopic dermatitis with dupilumab and concomitant topical corticosteroids (LIBERTY AD CHRONOS): a 1-year, randomised, double-blinded, placebo-controlled, phase 3 trial. Lancet.389: 2287-2303. 56. Busse, W. W.,等人. 2018. Liberty Asthma QUEST: Phase 3 Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled, Parallel-Group Study to Evaluate Dupilumab Efficacy/Safety in Patients with Uncontrolled, Moderate-to-Severe Asthma. Adv Ther.35: 737-748. 57. Guttman-Yassky等人. 2020. Efficacy and Safety of Lebrikizumab, a High-Affinity Interleukin 13 Inhibitor, in Adults With Moderate to Severe Atopic Dermatitis: A Phase 2b Randomized Clinical Trial. JAMA Dermatol.156: 411-420. 58. Wollenberg, A.,等人. 2021. Tralokinumab in atopic dermatitis. J Dtsch Dermatol Ges.19: 1435-1442. 59. Silverberg, J. I.,等人. 2021. Tralokinumab plus topical corticosteroids for the treatment of moderate-to-severe atopic dermatitis: results from the double-blind, randomized, multicentre, placebo-controlled phase III ECZTRA 3 trial. Br J Dermatol.184: 450-463. 60. Hanania, N. A., P.等人. 2016. Efficacy and safety of lebrikizumab in patients with uncontrolled asthma (LAVOLTA I and LAVOLTA II): replicate, phase 3, randomised, double-blind, placebo-controlled trials. Lancet Respir Med.4: 781-796. 61. Panettieri, R. A., Jr.,等人. 2018. Tralokinumab for severe, uncontrolled asthma (STRATOS 1 and STRATOS 2): two randomised, double-blind, placebo-controlled, phase 3 clinical trials. Lancet Respir Med.6: 511-525. 62. Seger, E. W.,等人. 2019. Relative efficacy of systemic treatments for atopic dermatitis. J Am Acad Dermatol.80: 411-416 e4. 63. Silverberg, J. I.,等人. 2021. Comparative efficacy and safety of systemic therapies used in moderate-to-severe atopic dermatitis: a systematic literature review and network meta-analysis. J Eur Acad Dermatol Venereol.35: 1797-1810. 64. Adhikary, P. P.,等人. 2021. TSLP as druggable target - a silver-lining for atopic diseases? Pharmacol Ther. 217: 107648. 65. Menzies-Gow,等人. 2021. Tezepelumab in Adults and Adolescents with Severe, Uncontrolled Asthma. N Engl J Med. 384: 1800-1809. 66. Cayrol, C.等人. 2014. IL-33: an alarmin cytokine with crucial roles in innate immunity, inflammation and allergy. Curr Opin Immunol. 31: 31-7. 67. De la Fuente, M., T等人. 2015. The IL-33/ST2 axis: Role in health and disease. Cytokine Growth Factor Rev. 26: 615-23. 68. Homsak, E.等人. 2020. Soluble ST2: A complex and diverse role in several diseases. Clin Chim Acta. 507: 75-87. 69. Imai, Y. 2019. Interleukin-33 in atopic dermatitis. J Dermatol Sci. 70. Yang, N.,等人. 2021. Novel Targeted Biological Agents for the Treatment of Atopic Dermatitis. BioDrugs. 35: 401-415. 71. Nnane, I.,等人. 2020. The first-in-human study of CNTO 7160, an anti-interleukin-33 receptor monoclonal antibody, in healthy subjects and patients with asthma or atopic dermatitis. Br J Clin Pharmacol. 86: 2507-2518. 72. Wechsler, M. E.,等人. 2021. Efficacy and Safety of Itepekimab in Patients with Moderate-to-Severe Asthma. N Engl J Med. 385: 1656-1668. 73. Rabe, K. F.,等人. 2021. Safety and efficacy of itepekimab in patients with moderate-to-severe COPD: a genetic association study and randomised, double-blind, phase 2a trial. Lancet Respir Med. 9: 1288-1298. 74. Nguyen, J. K.,等人. 2020. The IL-4/IL-13 axis in skin fibrosis and scarring: mechanistic concepts and therapeutic targets. Arch Dermatol Res. 312: 81-92. 75. Teng MW,等人. IL-12 and IL-23 cytokines: from discovery to targeted therapies for immune-mediated inflammatory diseases. Nat Med. 2015 Jul;21(7):719-29. 76. Langrish CL,等人. IL-12 and IL-23: master regulators of innate and adaptive immunity. Immunol Rev. 2004 Dec;202:96-105. 77. Tuzlak S,等人. Repositioning T _Hcell polarization from single cytokines to complex help. Nat Immunol. 2021 Oct;22(10):1210-1217. 78. Noda S,等人. The translational revolution and use of biologics in patients with inflammatory skin diseases. J Allergy Clin Immunol. 2015 Feb;135(2):324-36. 79. Khattri S,等人. Efficacy and safety of ustekinumab treatment in adults with moderate-to-severe atopic dermatitis. Exp Dermatol. 2017 Jan;26(1):28-35. 80. Saeki H,等人. Efficacy and safety of ustekinumab in Japanese patients with severe atopic dermatitis: a randomized, double-blind, placebo-controlled, phase II study. Br J Dermatol. 2017 Aug;177(2):419-427. 81. Czarnowicki T,等人. Atopic dermatitis endotypes and implications for targeted thet alapeutics. J Allergy Clin Immunol. 2019 Jan;143(1):1-11. 82. Svenningsen S,等人. Asthma Endotypes and an Overview of Targeted Therapy for Asthma. Front Med (Lausanne). 2017 Sep 26;4:158. 83. Allanore Y,等人. A randomised, double-blind, placebo-controlled, 24-week, phase II, proof-of-concept study of romilkimab (SAR156597) in early diffuse cutaneous systemic sclerosis. Ann Rheum Dis. 2020 Dec;79(12):1600-1607. 84. Radstake TR,等人. The pronounced Th17 profile in systemic sclerosis (SSc) together with intracellular expression of TGFbeta and IFNgamma distinguishes SSc phenotypes. PLoS One. 2009 Jun 17;4(6):e5903. 85. Yang X,等人. Increased frequency of Th17 cells in systemic sclerosis is related to disease activity and collagen overproduction. Arthritis Res Ther. 2014 Jan 7;16(1):R4. 86. López-Isac E,等人. Identification of IL12RB1 as a novel systemic sclerosis susceptibility locus. Arthritis Rheumatol. 2014 Dec;66(12):3521-3. 87. Lake AD,等人. Analysis of global and absorption, distribution, metabolism, and elimination gene expression in the progressive stages of human nonalcoholic fatty liver disease. Drug Metab Dispos. 2011 Oct;39(10):1954-60. 88. Suárez-Fariñas M,等人. Alopecia areata profiling shows TH1, TH2, and IL-23 cytokine activation without parallel TH17/TH22 skewing. J Allergy Clin Immunol. 2015 Nov;136(5):1277-87. 89. Guttman-Yassky E,等人. Extensive alopecia areata is reversed by IL-12/IL-23p40 cytokine antagonism. J Allergy Clin Immunol. 2016 Jan;137(1):301-304. 90. Guttman-Yassky E,等人. Phase 2a randomized clinical trial of dupilumab (anti-IL-4Rα) for alopecia areata patients. Allergy. 2021 Aug 30. 91. Choy DF,等人. TH2 and TH17 inflammatory pathways are reciprocally regulated in asthma. Sci Transl Med. 2015 Aug 19;7(301):301ra129. 92. Eming SA,等人. Inflammation and metabolism in tissue repair and regeneration. Science. 2017 Jun 9;356(6342):1026-1030. 93. Parker JJ,等人. Psoriasiform dermatitis during dupilumab treatment for moderate-to-severe atopic dermatitis in children. Pediatr Dermatol. 2021 Nov;38(6):1500-1505. 94. Bridgewood C,等人. Unexpected connections of the IL-23/IL-17 and IL-4/IL-13 cytokine axes in inflammatory arthritis and enthesitis. Semin Immunol. 2021 Nov 16:101520. 95. Bakker DS,等人. Conjunctival inflammation in dupilumab-treated atopic dermatitis comprises a multicellular infiltrate with elevated T1/T17 cytokines: A case series study. Allergy. 2021 Dec;76(12):3814-3817. 96. Chan BCL,等人. IL-33: Roles in Allergic Inflammation and Therapeutic Perspectives. Front. Immunol., 04 March, 2019. 97. Ito SE,等人. IL-4 blockade alters the tumor microenvironment and augments the response to cancer immunotherapy in a mouse model. Cancer Immunol Immunother 66, 1485-1496 (2017). 98. Villacres MC，Bergmann CC. Enhanced cytotoxic T cell activity in IL-4-deficient mice. J Immunol 162, 2663-2670 (1999). 99. Riou C,等人. IL-4 influences the differentiation and the susceptibility to activation-induced cell death of human naive CD8+ T cells. Int Immunol 18, 827-835 (2006). 100. Kemp RA，Ronchese F. Tumor-specific Tc1, but not Tc2, cells deliver protective antitumor immunity. J Immunol 167, 6497-6502 (2001). 101. Maier B, 等人 .A conserved dendritic-cell regulatory program limits antitumour immunity. Nature 580, 257-262 (2020). 102. Cui C, 等人. Ratio of the interferon-gamma signature to the immunosuppression signature predicts anti-PD-1 therapy response in melanoma. Npj Genomic Medicine 6, (2021). 103. Karachaliou N, 等人 .Interferon gamma, an important marker of response to immune checkpoint blockade in non-small cell lung cancer and melanoma patients. Ther Adv Med Oncol 10, 1758834017749748 (2018). 104. De Monte L, 等人 .Intratumor T helper type 2 cell infiltrate correlates with cancer-associated fibroblast thymic stromal lymphopoietin production and reduced survival in pancreatic cancer. J Exp Med 208, 469-478 (2011). 105. Tatsuno K,等人. TSLP Directly Interacts with Skin-Homing Th2 Cells Highly Expressing its Receptor to Enhance IL-4 Production in Atopic Dermatitis. J Invest Dermatol 135, 3017-3024 (2015). 106. Rengarajan J,等人. Transcriptional regulation of Th1/Th2 polarization. Immunol Today 21, 479-483 (2000). 107. Hamilton JD,等人 .Dupilumab suppresses type 2 inflammatory biomarkers across multiple atopic, allergic diseases. Clin Exp Allergy 51, 915-931 (2021). 108. Maruyama T,等人 .CCL17 and CCL22 chemokines within tumor microenvironment are related to infiltration of regulatory T cells in esophageal squamous cell carcinoma. Dis Esophagus 23, 422-429 (2010). 109. Mizukami Y,等人 .CCL17 and CCL22 chemokines within tumor microenvironment are related to accumulation of Foxp3+ regulatory T cells in gastric cancer. Int J Cancer 122, 2286-2293 (2008). 110. Kakinuma T,等人 .Thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) in mycosis fungoides: serum TARC levels reflect the disease activity of mycosis fungoides. J Am Acad Dermatol 48, 23-30 (2003). 表 80 ： IL-4 抗體。所有抗體 CH1 ： SEQ ID NO: 6 、鉸鏈區 ： SEQ ID NO: 7 ； CH2 ： SEQ ID NO: 8 ； CH3 ： SEQ ID NO: 9 ； JK 區 (LC) ： SEQ ID NO: 14 ； CL ： SEQ ID NO: 16 。 在特定序列之後括弧中為 SEQ ID 編號，且在重複時無括弧。參考 IL4-1284 之突變 表 81 ： IL-13 抗體。 IL13-1306 為鼠類 ； 所有其他 Ab 係 人類化的 ， 具體如下 ： CH1 為 SEQ ID NO: 6 ；鉸鏈 為 SEQ ID NO: 7 ； CH2 為 SEQ ID NO: 8 ， CH3 為 SEQ ID NO: 9 。 IL13-0259 及 IL13-0271 包含 SEQ ID NO: 56 之 JH 。 所有其他人類化 Ab 具有 SEQ ID NO: 47 之 JH 。 JK 為 SEQ ID NO: 14 ； CL 為 SEQ ID NO: 16 。突變係參考基準抗體 IMA-638 (IL13-1283) 。表 81 ( 續 ) ： IL-13 抗體。 IL13-1306 為鼠類 ； 所有其他 Ab 係 人類化的 ， 具體如下 ： CH1 為 SEQ ID NO: 6 ；鉸鏈 為 SEQ ID NO: 7 ； CH2 為 SEQ ID NO: 8 ， CH3 為 SEQ ID NO: 9 。 IL13-0259 及 IL13-0271 包含 SEQ ID NO: 56 之 JH 。所有其他人類化 Ab 具有 SEQ ID NO: 47 之 JH 。 JK 為 SEQ ID NO: 14 ； CL 為 SEQ ID NO: 16 。突變係參考基準抗體 IMA-638 (IL13-1283) 。表 82 ： IL-33 抗體。 JH 為 SEQ ID NO: 111 ； CH1 為 SEQ ID NO: 6 ；鉸鏈 為 SEQ ID NO: 7 ； CH2 為 SEQ ID NO: 8 ； CH3 為 SEQ ID NO: 9 ； JK 為 SEQ ID NO: 14 ； CL 為 SEQ ID NO: 16 。 IL33-0232 之 HC 為 SEQ ID NO: 251 。參考抗體為 IL33-0232 。表 82 ( 續 ) ： IL-33 抗體。 JH 為 SEQ ID NO: 111 ； CH1 為 SEQ ID NO: 6 ；鉸鏈 為 SEQ ID NO: 7 ； CH2 為 SEQ ID NO: 8 ， CH3 為 SEQ ID NO: 9 ； JK 為 SEQ ID NO: 14 ； CL 為 SEQ ID NO: 16 。 IL33-0232 之 HC 為 SEQ ID NO: 251 。參考抗體為IL33- 0232。表 83 ： TSLP 抗體。 JH 為 SEQ ID NO: 100 ； CH1 為 SEQ ID NO: 6 ；鉸鏈 為 SEQ ID NO: 7 ； CH2 為 SEQ ID NO: 8 ， CH3 為 SEQ ID NO: 9 ； J λ 為 SEQ ID NO: 101 ； CL 為 SEQ ID NO: 95 。 突變與參考抗體 TSLP - 0001 比較。 表84. IL4IL13TSLP 多特異性抗體。相關片段及域之 SEQ ID 編號。 VH 在 [] 括弧中。

可變域形式	IL13 mFd	IL13 mFd
CH或CL工程改造	RR-EE, LS	RR-EE, LS
	triFab-Fc
域	IL413TSLP-1028	IL413TSLP-1037
	IL13-0001/VH	IL13-0001/VH
VL(1)/ [VH(1)]	[51]	[51]
	CH1 (1) SEQ ID NO: 6
上鉸鏈(1)	102	102
	經修飾之 Fd (1)
SEQ	122	122
VH (1)	IL13-0001/VL	IL13-0001/VL
VL (1) [VH(1)]	54	54
CL(1)/ CH1(1)	16	16
上鉸鏈(1)	-	-
連接子	104	104
	IL4-1040/VH	IL4-1040/VH
VH(2)	[22]	[22]
CH1(2)	6	6
鉸鏈(2)	129	129
CH2(2)	8	8
CH3(2)	124	124
DFab SEQ	DFab LC(1)-HC(2)
130	130
	IL4-1040/VL	IL4-1040/VL
VL(2)	26	26
CL(2)	16	16
DFab LC(2)	27	27
VH (3)	TSLP-0855/VH	TSLP-0871/VH
VH(3)	[92]	[92]
CH1(3)	6	6
SFab HC鉸鏈(3)	131	131
CH2(3)	8	8
CH3 (3)	127	127
SFab HC(3)	165	165
VL (3)	TSLP-0855/VL	TSLP-0871/VL
VL(3)	213	214
CL(3)	95	95
SFab LC(3)	215	216

表 84 ( 續 ). IL4IL13TSLP 多特異性抗體。相關片段及域之SEQ ID編號。VH在[]括弧中。

域	Tri-Fab-Fc
IL13433-0005	IL13433-0006	IL13433-0606	IL13433-0607	IL13433-0717	IL13433-1042	IL13433-1258	IL13433-1261	IL13433-1269	IL13433-1270	IL13433-1275
VH (1)	IL33-0232	IL33-0232	IL33-0224	IL33-0224	IL33-0232	IL13-0001	IL13-0001	IL13-0001	IL33-0726	IL13-0001	IL13-0001
V _H(1)	63	63	63	63	63	51	51	51	73	51	51
CH1(1)	6	6	6	6	6	6	6	6	6	6	6
上鉸鏈(1)	102	102	102	102	102	102	102	102	102	102	102
經修飾之 Fd(1)	103	103	103	103	103	122	122	122	143	122	122
VL (1)	IL33-0232	IL33-0232	IL33-0224	IL33-0224	IL33-0232	IL13-0001	IL13-0001	IL13-0001	IL33-0726	IL13-0001	IL13-0001
V _L(1)	68	68	71	71	68	54	54	54	78	54	54
CL(1)	16	16	16	16	16	16	16	16	16	16	16
連接子	104	104	104	104	104	104	104	104	104	104	104
VH(2)	IL13-0001	IL4-0002	IL4-0157	IL4-0157	IL4-0002	IL4-0749	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040
V _H(2)	51	22	28	28	22	22	22	22	22	22	22
CH1(2)	110	105	105	105	105	6	6	6	105	105	6
鉸鏈(2)	7	7	7	7	7	123	129	7	7	7	7
CH2(2)	8	8	8	8	8	8	8	8	8	8	8
CH3(2)	111	106	114	114	114	124	124	124	114	114	139
DFab LC(1)-HC(2)	145	107	115	115	121	125	130	133	144	135	140
LC (2)	IL13-0001	IL4-0002	IL4-0157	IL4-0157	IL4-0002	IL4-0749	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040	IL4-1040
V _L(2)	54	20	29	29	20	30	26	26	26	26	26
CL(2)	113	108	108	108	108	16	16	16	108	108	16
DFab LC(2)	196	109	116	116	109	208	27	27	136	136	27
HC(3)	IL4-0002	IL13-0001	IL13-0259	IL13-0271	IL13-0001	IL33-0726	IL33-0726	IL33-0726	IL13-0001	IL33-0726	IL33-0726
V _H(3)	22	51	57	57	51	73	73	73	51	73	73
CH1(3)	105	110	110	110	110	6	6	6	110	110	6
SFab HC鉸鏈(3)	7	7	7	7	7	126	131	7	7	7	7
CH2(3)	8	8	8	8	8	8	8	8	8	8	8
CH3 (3)	106	111	117	117	117	127	127	127	117	117	141
SFab HC(3)	146	112	118	118	209	128	132	134	121	137	142
LC (3)	IL4-0002	IL13-0001	IL13-0259	IL13-0271	IL13-0001	IL33-0726	IL33-0726	IL33-0726	IL13-0001	IL33-0726	IL33-0726
V _L(3)	20	122	58	59	122	78	78	78	122	78	78
CL(3)	108	113	113	113	113	16	16	16	113	113	16
SFab LC(3)	109	196	119	120	196	79	79	79	196	138	79

表 85 ： IL4IL13IL33 多特異性抗體。相關片段及域之SEQ ID編號。JH1 SEQ ID NO:111。

域	Tri-Fab-Fc
IL413p40-0043	IL413p40-0044	IL413p40-0642	IL13433-0648	IL413p40-0698	IL413p40-0700	IL413p40-0705
VH(1)	P40-0003/VH	P40-0003/VH	IL13-0001/VH	P40-0003/VH	IL13-0001/VH	IL13-0001/VH	IL13-0001/VH
V _H(1)	169	169	51	169	51	51	51
CH1(1)	6	6	6	6	6	6	6
上鉸鏈(1)	102	102	102	102	102	102	102
經修飾之Fd(1)	177	177	122	177	122	122	122
VL(1)	P40-0003/VL	P40-0003/VL	IL13-0001/VL	P40-0003/VL	IL13-0001/VL	IL13-0001/VL	IL13-0001/VL
V _L(1)	175	175	54	175	54	54	54
CL(1)	16	16	16	16	16	16	16
連接子	104	104	104	104	104	104	104
VH(2)	IL13-0001/VH	IL4-0002/VH	IL4-0002/VH	IL4-0157/VH	IL4-0749/VH	IL4-1040/VH	IL4-1040/VH
V _H(2)	51	22	22	28	22	22	22
CH1(2)	110	105	105	105	6	6	6
鉸鏈(2)	7	7	7	7	123	123	129
CH2(2)	8	8	8	8	8	8	8
CH3(2)	111	106	114	114	124	124	124
DFab LC(1)-HC(2)	178	179	180	183	125	125	130
VL(2)	IL13-0001/VL	IL4-0002/VL	IL4-0002/VL	IL4-0157/VL	IL4-0749/VL	IL4-1040/VL	IL4-1040/VL
V _L(2)	54	20	20	29	30	26	26
CL(2)	113	108	108	108	16	16	16
DFab LC(2)	196	109	109	116	208	27	27
VH(3)	IL4-0002/VH	IL13-0001/VH	P40-0003/VH	IL13-0271/VH	P40-0003/VH	P40-0003/VH	P40-0003/VH
V _H(3)	22	51	169	57	169	169	169
CH1(3)	105	110	110	110	6	6	6
SFab HC鉸鏈(3)	7	7	7	7	126	126	131
CH2(3)	8	8	8	8	8	8	8
CH3 (3)	106	111	111	111	127	127	127
SFab HC(3)	146	112	181	118	185	185	186
VL(3)	IL4-0002/VL	IL13-0001/VL	P40-0003/VL	IL13-0271/VL	P40-0003/VL	P40-0003/VL	P40-0003/VL
V _L(3)	20	54	175	59	175	175	175
CL(3)	108	113	16	113	16	16	16
SFab LC(3)	109	196	182	120	176	176	176

表 86 ： IL4IL13p40 多特異性抗體。相關片段及域之SEQ ID編號。表87：序列表

SEQ ID NO:	描述	序列
1	IL4-1284 CDRH1[IL13433-1284 CDRH1] (hu3B9 CDRH1)	GFSLSTSGMGVS
2	IL4-1284 CDRH2[IL13433-1284 CDRH2] (hu3B9 CDRH2)	HIYWDDDKRYNPSLKS
3	IL4-1284 CDRH3[IL13433-1284 CDRH3] (hu3B9 CDRH3)	RETVFYWYFDV
4	IL4-1284 JH[IL13433-1284 JH] (hu3B9 JH)	WGRGTPVTVSS
5	IL4-1284 V _H [IL13433-1284 V _H] (hu3B9 V _H)	QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGRGTPVTVSS
6	CH1	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
7	鉸鏈	EPKSCDKTHTCPPCP
8	CH2	APEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK
9	CH3	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
10	IL4-1284 HC[IL13433-1284 HC] (hu3B9 HC)	QVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSTSGMGVSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGRGTPVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
11	IL4-1284 CDRL1[IL13433-1284 CDRL1] (hu3B9 CDRL1)	KASQSVDYDGDSYMN
12	IL4-1284 CDRL2[IL13433-1284 CDRL2] (hu3B9 CDRL2)	AASNLES
13	IL4-1284 CDRL3[IL13433-1284 CDRL3] (hu3B9 CDRL3)	QQSNEDPPR
14	IL4-1284 JK[IL13433-1284 JK] (hu3B9 JK)	FGGGTKVEIK
15	IL4-1284 V _L [IL13433-1284 V _L] (hu3B9 V _L)	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIY AASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQSNEDPPRFGGGTKVEIK
16	CL ( κ )	(R)TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
17	IL4-1284 LC[IL13433-1284 LC] (hu3B9 LC)	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KASQSVDYDGDSYMNWYQQKPGQPPKLLIY AASNLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QQSNEDPPRFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
18	IL4-1305 CDRH1[IL13433-1305 CDRH1] (hu3B9_G07_VLv2.9 CDRH1)	GFSLSNFGEGLS
19	IL4-1305 V _H [IL13433-1305 V _H] (hu3B9_G07-Q1E_VLv2.9 V _H)	EVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGRGTPVTVSS
20	IL4-1305 V _L [IL13433-1305 V _L] (hu3B9_G07_VLv2.9 V _L)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQSVDEDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPPTFGGGTKVEIK
21	IL4-0002 JH[IL13433-0002 JH] (抗IL-4 JH)	WGQGTTVTVSS
22	IL4-0002 V _H [IL13433-0002 V _H](抗IL-4 V _H)	EVTLRESGPA LVKPTQTLTL TCTFS GFSLS NFGEGLSWIR QPPGKGLEWL A HIYWDDDKR YNPSLKSRLT ISKDTSRNQV VLTMTNMDPV DTATYYCAR R ETVFYWYFDVWGQGTTVTVS S
23	IL4-0002 HC[IL13433-0002 HC] (抗IL-4 HC)	EVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
24	IL4-1040 CDRL1[IL13433-1040 CDRL1] (抗IL-4 CDRL1)	RASQSVDEEGDSYMN
25	IL4-1040 CDRL3[IL13433-1040 CDRL3] (抗IL-4 CDRL3)	QQSNKDPPT
26	IL4-1040 V _L [IL13433-1040 V _L](抗IL-4 V _L)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNKDPPTFGGGTKVEIK
27	IL4-1040 LC[IL13433-1040 LC] (抗IL-4 LC)	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITC RASQSVD EEGDSYMNWY QQKPGKAPKL LIY AASNLESGVPSRFSGSG SGTDFTLTIS SLQPEDFATY YC QQSNKDPP TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
28	IL4-0157 V _H [IL13433-0157 V _H]	EVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYSTSLKTRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSS
29	IL4-0157 V _L [IL13433-0157 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSHKDPPTFGGGTKVEIK
30	IL4-0749 V _L [IL13433-0749 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPPTFGGGTKVEIK
31	IL13-1283 CDRH1[IL13433-1283 CDRH1}或(IMA-638 CDRH1)	GFTFISYAMS
32	IL13-1283 CDRH2[IL13433-1283 CDRH2]或9IMA-638 CDRH2)	SISSGGNTYYPDSVKG
33	IL13-1283 CDRH3[IL13433-1283 CDRH3]或(IMA-638 CDRH3)	LDGYYFGFAY
34	IL13-1283 V _H [IL13433-1283 V _H]或(IMA-638 V _H)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFISYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR LDGYYFGFAYWGQGTLVTVSS
35	IL13-1283 HC[IL13433-1283 HC]或(IMA-638 HC)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFISYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGGNTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR LDGYYFGFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
36	IL13-1283 CDRL1[IL13433-1283 CDRL1]或(IMA-638 CDRL1)	KASESVDNYGKSLMH
37	IL13-1283 CDRL2[IL13433-1283 CDRL2]或(IMA-638 CDRL2) 亦[IL13433-1306 CDRL2] (mu13.4 CDRL2)	RASNLES
38	IL13-1283 CDRL3[IL13433-1283 CDRL3]或(IMA-638 CDRL3) 亦[IL13433-1306 CDRL3] (mu13.4 CDRL3)	QQSNEDPWT
39	IL13-1283 V _L [IL13433-1283 V _L}或(IMA-638 V _L)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDNYGKSLMHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIK
40	IL13-1283 LC[IL13433-1283] LC或(IMA-638 LC)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDNYGKSLMHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
41	IL13-1306 CDRH1[IL13433-1306 CDRH1] (mu13.4 CDRH1)	GFTFSSYAMS
42	IL13-1306 CDRH2[IL13433-1306 CDRH2] (mu13.4 CDRH2)	SISSGDTTYYPDSVKG
43	IL13-1306 CDRH3[IL13433-1306 CDRH3] (mu13.4 CDRH3)	LDGYYFGFPY
44	IL13-1306 V _H [IL13433-1306 V _H] (mu13.4 V _H)	EVKLVESGGDLVKPGGSLKLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQSPDKRLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNARNILYLQMTSLRSEDTAMYYCAR LDGYYFGFPYWGQGTLVTVSA
45	IL13-1306 CDRL1[IL13433-1306 CDRL1] (mu13.4 CDRL1)	KASESVDHSGSSLMH
46	IL13-1306 V _L [IL13433-1306 V _L] (mu13.4 V _L)	DTVLTQSPASLAVSLGQRATISC KASESVDHSGSSLMHWYQQKPGQSPKLLIY RASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYC QQSNEDPWTFGGGTKLEIK
47	IL13-1307 JH[IL13433-1307 JH] (hu13.4 JH)	WGQGTLVTVSS
48	IL13-1307 V _H [IL13433-1307 V _H] (hu13.4 V _H)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR LDGYYFGFPYWGQGTLVTVSS
49	IL13-1307 V _L [IL13433-1307 V _L] (hu13.4 V _L)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHSGSSLMHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIK
50	IL13-0001 CDRH3[IL1343-0001 CDRH3]	NEGYYFGLTL
51	IL13-0001 V _H [IL1343-0001 V _H]	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTLWGQGTLVTVSS
52	IL13-0001 HC[IL1343-0001 HC]	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
53	IL13-0001 CDRL1[IL1343-0001 CDRL1]	KASESVDHFGWSLVH
54	IL13-0001 V _L [IL1343-0001 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIK
55	IL13-0001 LC[IL1343-0001 LC]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
56	IL13-0259 JH[IL13433-0259 JH]	WGRGTLVTVSS
57	IL13-0259 V _H [IL13433-0259 V _H]	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISTGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTQWGRGTLVTVSS
58	IL13-0259 V _L [IL13433-0259 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIK
59	IL13-0270 V _L [IL13433-0270 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RADSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIK
60	IL33-0232 CDRH1(IL33-158-152 CDRH1)	GFTFSSYWMY
61	IL33-0232 CDRH2(IL33-158-152 CDRH2)	AITPNAGEDYYPESVKG
62	IL33-0232 CDRH3(IL33-158-152 CDRH3)	GHYYYTSYSLGY
63	IL33-0232 V _H (IL33-158-152 V _H)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GHYYYTSYSLGYWGQGTLVTVSS
64	IL33-0232 HC(IL33-158-152 HC)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GHYYYTSYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
65	IL33-0232 CDRL1(IL33-158-152 CDRL1)	KASQNINKHLD
66	IL33-0232 CDRL2(IL33-158-152 CDRL2)	FTNNLQT
67	IL33-0232 CDRL3(IL33-158-152 CDRL3)	FQYNQGWT
68	IL33-0232 V _L (IL33-158-152 V _L)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQNINKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIK
69	IL33-0232 LC(IL33-158-152 LC)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQNINKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
70	IL33-0224 CDRL1[IL13433-0224 CDRL1]	RASQPISKHLD
71	IL33-0224 V _L [IL13433-0224 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPISKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIK
72	IL33-0726 CDRH3[IL13433-0726 CDRH3]	GQYYYTKYSLGY
73	IL33-0726 V _H [IL13433-0726 V _H]	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSS
74	IL33-0726 HC[IL13433-0726 HC]	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
75	IL33-0726 CDRL1[IL13433-0726 CDRL1]	RASQPIHNHLD
76	IL33-0726 CDRL2[IL13433-0726 CDRL2]	FGKNLQE
77	IL33-0726 CDRL3[IL13433-0726 CDRL3]	FQYKKGWS
78	IL33-0726 V _L [IL13433-0726 V _L]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPIHNHLDWYQQKPGKAPKLLIY FGKNLQEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYKKGWSFGGGTKVEIK
79	IL33-0726 LC[IL13433-0726 LC]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPIHNHLDWYQQKPGKAPKLLIY FGKNLQEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYKKGWSFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
80	IL33-0721 V _H	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFEFSHYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GYYRYTKYSLGYWGQGTLVTVSS
81	IL33-0721 V _L	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPIHQFLDWYQQKPGKAPKLLIY FGHILQEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYKQGWSFGGGTKVEIK
82	TSLP-0001 CDRH1 TSLP-0100 CDRH1 TSLP-0156 CDRH1 TSLP-0260 CDRH1 TSLP-0821 CDRH1 TSLP-0855 CDRH1 TSLP-0871 CDRH1 TSLP-0875 CDRH1 TSLP-0820 CDRH1 TSLP-2000 CDRH1 TSLP-2002 CDRH1 TSLP-2004 CDRH1 IL413TSLP-1024 CDRH1 IL413TSLP-1028 CDRH1 IL413TSLP-1037 CDRH1	GFTFRTYGMH
83	TSLP-0001 CDRH2 TSLP-0100 CDRH2 TSLP-0156 CDRH2 TSLP-0260 CDRH2 TSLP-0821 CDRH2 TSLP-0855 CDRH2 TSLP-0871 CDRH2 TSLP-0875 CDRH2 TSLP-0820 CDRH1 TSLP-2000 CDRH1 TSLP-2002 CDRH1 TSLP-2004 CDRH1 IL413TSLP-1024 CDRH2 IL413TSLP-1028 CDRH2 IL413TSLP-1037 CDRH2	VIWYDGSNKHYADSVKG
84	TSLP-0001 CDRH3 TSLP-0100 CDRH3	APQWELVHEAFDI
85	TSLP-0156 CDRH3 TSLP-0260 CDRH3 TSLP-0821 CDRH3 TSLP-0855 CDRH3 TSLP-0871 CDRH3 TSLP-0875 CDRH3 TSLP-0820 CDRH1 TSLP-2000 CDRH1 TSLP-2002 CDRH1 TSLP-2004 CDRH1 IL413TSLP-1024 CDRH3 IL413TSLP-1028 CDRH3 IL413TSLP-1037 CDRH3	APQW YLVHEAFDI
86	TSLP-0001 CDRL1 TSLP-0100 CDRL1 TSLP-0156 CDRL1 TSLP-0260 CDRL1 TSLP-0821 CDRL1 TSLP-0855 CDRL1 TSLP-0871 CDRL1 TSLP-0875 CDRL1 TSLP-0820 CDRL1 TSLP-2000 CDRL1 TSLP-2002 CDRL1 TSLP-2004 CDRL1IL413TSLP-1024 CDRL1 IL413TSLP-1028 CDRL1 IL413TSLP-1037 CDRL1	GGNNLGSKSVH
87	TSLP-0001 CDRL2 TSLP-0100 CDRL2 TSLP-0156 CDRL2 TSLP-0260 CDRL2 TSLP-0821 CDRL2 TSLP-0855 CDRL2 TSLP-0820 CDRL2 TSLP-2000 CDRL2 TSLP-2004 CDRL2	DDSDRPS
88	TSLP-0871 CDRL2 TSLP-0875 CDRL2 TSLP-2002 CDRL2 IL413TSLP-1024 CDRL2	DDKDRPS
89	TSLP-0001 CDRL3 TSLP-0100 CDRL3 TSLP-0156 CDRL3 TSLP-0821 CDRL3 TSLP-0820 CDRL3	QVWDSSSDHVV
90	TSLP-0875 CDRL3 TSLP-2002 CDRL3 IL413TSLP-1024 CDRL3	QVWDS KSDHVV
91	TSLP-0001 VH	QMQLVESGGG VVQPGRSLRL SCAAS GFTFR TYGMHWVRQA PGKGLEWVA V IWYDGSNKHY ADSVKGRFTI T RDNSKNTL N LQMNSLRAED TAVYYCAR AP QWELVHEAFD IWGQGTMVTV SS
92	TSLP-0156 VH TSLP-0260 VH TSLP-0855 VH TSLP-0871 VH TSLP-0875 VH IL413TSLP-1024 VH	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVA VIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR APQWYLVHEAFDIWGQGTMVTVSS
93	TSLP-0001 VL TSLP-0100 VL TSLP-0156 VL TSLP-0820 VL TSLP-0821 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY DDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSDHVVFGGGTKLTVL
94	TSLP-0875 VL IL413TSLP-1024 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY DDKDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSKSDHVVFGGGTKLTVL
95	人類λ鏈恆定區	GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
96	TSLP-0001 HC	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
97	TSLP-0156 HC TSLP-0260 HC TSLP-0855 HC TSLP-0871 HC TSLP-0875 HC	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWYLVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
98	TSLP-0001 LC TSLP-0100 LC TSLP-0156 LC TSLP-0821 LC IL413TSLP-0003 IL413TSLP-0004	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
99	TSLP-0875 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDKDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSKSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
100	JH (TSLP)	WGQGTMVTVSS
101	Jλ (TSLP)	FGGGTKLTVL
102	IL13433-0006 上鉸鏈 (1)	EPKSC
103	IL13433-0006 mFd(1)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GHYYYTSYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
104	IL13433-0006 連接子	GGGGS
105	IL13433-0006 CH1(2)	ASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
106	IL13433-0006 CH3(2)	GQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	IL13433-0006 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQNINKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
108	IL13433-0006 CL(2)	(R)TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
109	IL13433-0006 LC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQSVDEDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
110	IL13433-0006 CH1(3)	ASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV
111	IL13433-0006 CH3(3)	GQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
112	IL13433-0006 HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAA SGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
113	IL13433-0006 CL(3)	(R)TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
114	IL13433-0606 CH3(2)	GQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
115	IL13433-0606 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPISKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYSTSLKTRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
116	IL13433-0606 LC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSHKDPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
117	IL13433-0606 CH3(3)	GQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
118	IL13433-0606 HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISTGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTQWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
119	IL13433-0606 LC(3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
120	IL13433-0607 LC(3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RADSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
121	IL13433-0717 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQNINKHLDWYQQKPGKAPKLLIY FTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYNQGWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
122	IL13433-1042 Fd(1) (IL13 VH-CH1 mFd) (IL431TSLP-1024, 1028, 1037)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
123	IL13433-1042 鉸鏈 (2)	EPKSCEKTHTCPECP
124	IL13433-1042 CH3(2)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
125	IL13433-1042 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEKTHTCPECPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
126	IL13433-1042 鉸鏈 (3)	EPKSCRKTHTCPRCP
127	IL13433-1042 CH3(3)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
128	IL13433-1042 SFab HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPRCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
129	IL13433-1258 鉸鏈 (2)	EPKSCEKTHTCPPCP
130	IL13433-1258 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
131	IL13433-1258 鉸鏈 (3)	EPKSCRKTHTCPPCP
132	IL13433-1258 SFab HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
133	IL13433-1261 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
134	IL13433-1261 SFab HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
135	IL13433-1270 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
136	IL13433-1270 DFab LC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNKDPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLKSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
137	IL13433-1270 SFab HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
138	IL13433-1270 SFab LC(3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPIHNHLDWYQQKPGKAPKLLIY FGKNLQEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYKKGWSFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
139	IL13433-1275 CH3(2)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
140	IL13433-1275 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
141	IL13433-1275 CH3(3)	GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
142	IL13433-1275 SFab HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
143	IL13433-1269 Fd(1)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYWMYWVRQAPGKGLEWVA AITPNAGEDYYPESVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR GQYYYTKYSLGYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
144	IL13433-1269 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQPIHNHLDWYQQKPGKAPKLLIY FGKNLQEGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC FQYKKGWSFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFS GFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLA HIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCAR RETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
145	IL13433-0005 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNINKHLDWYQQKPGKAPKLLIYFTNNLQTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCFQYNQGWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
146	IL13433-0005 SFab HC(3)	EVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
147	RRR臂CH3 w/o LS	QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
148	EEE臂CH3 w/o LS	QPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
149	IL413TSLP-0001 DFab VH-CL(1)-HC(2)IL413TSLP-0001 抗TSLP/IL-13雙Fab (杵臂VHCL(1)VHCH (2)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
150	IL413TSLP-0001, 0002, 0249 VL-CH1 (1)IL413TSLP-0001 抗TSLP VLCH1	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
151	IL413TSLP-0002 DFab VH-CL(1)-HC(2)IL413TSLP-0002 抗TSLP/IL-4雙Fab (臼臂VHCLVHCH	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
152	IL413TSLP-0003 DFab VH-CH1(1)-HC(2)抗TSLP/IL-13雙Fab (杵臂VH1CH1VHCH(2)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
153	IL413TSLP-0004 DFab VH-CH1(1)-HC(2) 抗TSLP/IL-4雙Fab (臼臂VH1CH1VHCH (2)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
154	IL413TSLP-0007 DFab VL-CH1(1)-HC(2)抗TSLP/IL-13雙Fab (杵臂VLCH1-VHCH (2)	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
155	IL413TSLP-0007 VH1-CL (1)抗TSLP VHCL (1)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTITRDNSKNTLNLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
156	IL413TSLP-0008 DFab VL-CH1(1)-HC(2)抗TSLP/IL-4雙Fab (臼臂VLCH1(1)-VHCH(2)	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
157	IL413TSLP-0248 DFab LC(1)-HC(2)抗TSLP/IL-4雙Fab (臼臂	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
158	IL413TSLP-0248, 0250 經修飾之 Fd (1)抗TSLP VHCH1	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
159	IL413TSLP-0249 DFab VH-CL(1)-HC(2)抗TSLP/IL-4雙Fab (臼臂VHCL(1)VHCH(2)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
160	IL413TSLP-0250 DFab LC(1)-HC(2)抗TSLP/IL-13雙Fab杵臂	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
161	IL413TSLP-0251, 0252 SFab HC(3)抗TSLP單Fab重鏈(RRR臂)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPRCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
162	IL413TSLP-0251 DFab VH-CL(1)-HC(2)抗IL-13/IL-4雙Fab (EEE臂)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEKTHTCPECPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
163	IL413TSLP-0251 VL-CH1 (1)抗IL-13 VKCH1	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIYRASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIKASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
164	IL413TSLP-0252 DFab LC(1)-HC(2)抗IL-13/4雙Fab EE臂	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIYRASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCEKTHTCPECPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCEVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
165	IL413TSLP-1024 IL413TSLP-1028 IL413TSLP-1037 SFab HC(3)抗TSLP單Fab重鏈(RR臂)	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWYLVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
166	P40-0003 CDRH1	GYSFTTYWLG
167	P40-0003 CDRH2	IMSPVDSDIRYSPSFQG
168	P40-0003 CDRH3	RRPGQGYFDF
169	P40-0003 VH	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSS
170	P40-0003 HC	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
171	P40-0003 CDRL1	RASQGISSWLA
172	P40-0003 CDRL2	AASSLQS
173	P40-0003 CDRL3	QQYNIYPYT
174	P40-0003 JK	FGQGTKLEIK
175	P40-0003 VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIK
176	P40-0003 LC	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
177	IL413p40-0043 Fd(1) IL413p40-0044 Fd(1)	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
178	IL413p40-0043 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVASISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
179	IL413p40-0044 DFab LC (1)-HC (2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
180	IL413p40-0642 DFab LC (1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIYRASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYNPSLKSRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
181	IL413p40-0642 HC (3)	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
182	IL413p40-0642 LC (3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIKTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
183	IL413p40-0648 DFab LC(1)-HC(2)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQGISSWLAWYQQKPEKAPKSLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQYNIYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSEVTLRESGPALVKPTQTLTLTCTFSGFSLSNFGEGLSWIRQPPGKGLEWLAHIYWDDDKRYSTSLKTRLTISKDTSRNQVVLTMTNMDPVDTATYYCARRETVFYWYFDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPEAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLGSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPCREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
184	IL413p40-0648 LC(3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RADSLETGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
185	IL413p40-0698 SFab HC(3)	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPRCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
186	IL413p40-0705SFab HC(3)	EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGS GYSFTTYWLGWVRQMPGKGLDWIG IMSPVDSDIRYSPSFQGQVTMSVDKSITTAYLQWNSLKASDTAMYYCAR RRPGQGYFDFWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCRKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
187	IL13-mFd ( 核酸 )	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGGCTTGGTGCAACCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGCCATGTCTTGGGTTCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCATCCATTAGTAGTGGTGACACCACCTACTATCCAGACAGCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGATAATGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAAATGAACAGTCTGAGGGCTGAGGACACCGCCGTGTATTACTGTGCACGAAACGAGGGTTACTACTTCGGACTGACCCTGTGGGGCCAAGGGACCCTGGTCACCGTCTCCTCTGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGT
188	DFab IL13-LC-IL4-HC ( 核酸 )	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAAGCCAGTGAAAGTGTTGATCACTTTGGTTGGTCTCTCGTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCGTGCATCCAACCTGGAATCTGGCGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAAAGTAATGAAGATCCCTGGACCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTGGCGGTGGCGGGTCCGAGGTCACACTGAGAGAGTCCGGCCCTGCCCTGGTGAAACCCACCCAGACCCTGACCCTGACATGCACCTTCTCCGGCTTCTCCCTGTCCAACTTCGGCGAGGGCCTATCCTGGATTCGGCAGCCTCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGCGGTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGCTGACCATCTCCAAGGACACCTCCCGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAGACGGGAAACCGTGTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGTCCTCTGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAAGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCGAGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGCTGCATGAGGCTCTGCACAGCCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
189	DFab IL4-LC ( 核酸 )	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCTCCCAGTCCGTGGACGAAGAGGGCGACTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGCCGCCTCCAACCTGGAATCCGGCGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTCCAACAAGGACCCCCCCACCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
190	SFab IL33-HC [IL13433-1258 SFab HC] ( 核酸 )	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCAGTTCCTACTGGATGTACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCGCCATTACTCCTAATGCCGGTGAGGACTACTATCCAGAGTCTGTGAAAGGCCGGTTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTCCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCAGTATTACTATACCAAGTATTCCCTTGGATACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCTGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTCGGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGCTGCATGAGGCTCTGCACAGCCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
191	SFab IL33-LC [IL13433-1258 SFab HC] ( 核酸 )	GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCTTCTCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCAAGTCAGCCTATTCACAACCACTTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAGCTGCTGATCTACTTTGGAAAGAATTTGCAAGAAGGCGTGCCTTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTCCAGCCTGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCTTTCAGTATAAGAAGGGGTGGAGCTTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAGATCAAGCGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
192	SFab TSLP-HC [IL413TSLP-1024, IL413TSLP-1028, IL413TSLP-1037 抗 TSLP 單 Fab 重鏈 ] ( 核酸 )	CAGATGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGAACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAACACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGCCCCTCAGTGGTACCTCGTTCATGAGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTCGGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGCTGCATGAGGCTCTGCACAGCCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
193	SFab TSLP-LC [IL413TSLP-1024 抗 TSLP 單 Fab 輕鏈 ] ( 核酸 )	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAAGGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAAGAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
194	SFab p40-HC [IL413p40-0705 SFab HC(3] ( 核酸 )	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCACCTACTGGCTGGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGATTGGATAGGGATCATGAGCCCTGTGGACTCTGATATTAGATACAGCCCCTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATGTCAGTGGACAAGTCCATCACCACCGCCTACCTGCAGTGGAATAGCCTGAAGGCCTCCGACACCGCCATGTATTACTGTGCCAGACGACGCCCTGGTCAAGGTTATTTCGATTTTTGGGGGCAAGGAACATTGGTGACCGTCAGTTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTCGGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGCTGCATGAGGCTCTGCACAGCCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
195	SFab p40-LC [IL413p40-0705 LC (3)] ( 核酸 )	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCCAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATATTTATCCCTACACCTTCGGACAAGGTACAAAACTGGAGATCAAACGAACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
196	IL13433-0006 LC(3)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASESVDHFGWSLVHWYQQKPGKAPKLLIY RASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVSCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLDSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
197	IL4-1305 LC[IL13433-1305 LC] (hu3B9_G07_VLv2.9 LC)	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC KASQSVDEDGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIY AASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC QQSNEDPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
198	IL13-0001 VH	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGGCTTGGTGCAACCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACTTTCAGTAGCTATGCCATGTCTTGGGTTCGTCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCGCATCCATTAGTAGTGGTGACACCACCTACTATCCAGACAGCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGATAATGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAAATGAACAGTCTGAGGGCTGAGGACACCGCCGTGTATTACTGTGCACGAAACGAGGGTTACTACTTCGGACTGACCCTGTGGGGCCAAGGGACCCTGGTCACCGTCTCCTCT
199	IL13-0001 VL	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAAAGCCAGTGAAAGTGTTGATCACTTTGGTTGGTCTCTCGTGCACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATCGTGCATCCAACCTGGAATCTGGCGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAAAGTAATGAAGATCCCTGGACCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
200	IL4-1040 VH	GAGGTCACACTGAGAGAGTCCGGCCCTGCCCTGGTGAAACCCACCCAGACCCTGACCCTGACATGCACCTTCTCCGGCTTCTCCCTGTCCAACTTCGGCGAGGGCCTATCCTGGATTCGGCAGCCTCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGCTGGCCCACATCTACTGGGACGACGACAAGCGGTACAACCCCAGCCTGAAGTCCCGGCTGACCATCTCCAAGGACACCTCCCGGAACCAGGTGGTGCTGACCATGACCAACATGGACCCCGTGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAGACGGGAAACCGTGTTCTACTGGTACTTCGACGTGTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACCGTGTCCTCT
201	IL4-1040 VL	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCCTCCCAGTCCGTGGACGAAGAGGGCGACTCCTACATGAACTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCTCCTAAGCTCCTGATCTATGCCGCCTCCAACCTGGAATCCGGCGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGCACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTCCAACAAGGACCCCCCCACCTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
202	IL33-0726 VH	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGCTCTCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCTCCGGCTTCACCTTCAGTTCCTACTGGATGTACTGGGTGAGGCAGGCCCCTGGCAAGGGCCTGGAGTGGGTGGCCGCCATTACTCCTAATGCCGGTGAGGACTACTATCCAGAGTCTGTGAAAGGCCGGTTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCCCTGTACCTCCAGATGAACTCCCTGAGGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGGCCAGTATTACTATACCAAGTATTCCCTTGGATACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGTCCTCT
203	IL33-0726 VL	GACATCCAGATGACCCAGTCCCCCTCTTCTCTGTCTGCCTCTGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGTAGAGCAAGTCAGCCTATTCACAACCACTTGGACTGGTATCAGCAGAAGCCTGGCAAGGCTCCCAAGCTGCTGATCTACTTTGGAAAGAATTTGCAAGAAGGCGTGCCTTCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGATTTCACCCTGACCATCTCCTCCCTCCAGCCTGAGGATTTCGCCACCTACTACTGCTTTCAGTATAAGAAGGGGTGGAGCTTTGGCGGCGGAACAAAGGTGGAGATCAAG
204	TSLP-0875 VH	CAGATGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCGTCTGGATTCACCTTCAGAACCTATGGCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTGGCAGTTATATGGTATGATGGAAGTAATAAACACTATGCAGACTCCGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGCCCCTCAGTGGTACCTCGTTCATGAGGCTTTTGATATCTGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCTTCA
205	TSLP-0875 VL TSLP-2002 VL	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAAGGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAAGAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
206	p40-0003 VH	GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCAGAGGTGAAAAAGCCCGGGGAGTCTCTGAAGATCTCCTGTAAGGGTTCTGGATACAGCTTTACCACCTACTGGCTGGGCTGGGTGCGCCAGATGCCCGGGAAAGGCCTGGATTGGATAGGGATCATGAGCCCTGTGGACTCTGATATTAGATACAGCCCCTCCTTCCAAGGCCAGGTCACCATGTCAGTGGACAAGTCCATCACCACCGCCTACCTGCAGTGGAATAGCCTGAAGGCCTCCGACACCGCCATGTATTACTGTGCCAGACGACGCCCTGGTCAAGGTTATTTCGATTTTTGGGGGCAAGGAACATTGGTGACCGTCAGTTCA
207	p40-0003 VL	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCACTGTCTGCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGTCGGGCCAGTCAGGGTATTAGCAGCTGGCTGGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGAGAAAGCCCCTAAGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATATTTATCCCTACACCTTCGGACAAGGTACAAAACTGGAGATCAAA
208	IL4-0749 LC[IL13433-0749 LC]	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSVDEEGDSYMNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSNEDPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
209	IL13433-0717 HC(3)	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVA SISSGDTTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR NEGYYFGLTLWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPKAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSSVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVCTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
210	TSLP-0100 VH	QMQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASG FTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTI S RDNSKNTL Y LQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWELVHEAFDIWGQGTMVTVSS
211		QVWDSSSKHVV
212	TSLP-0871 CDRL3	QVWDKSSDHVV
213	TSLP-0855 VL TSLP-2000 VL IL413TSLP-1028 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY DDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDSSSKHVVFGGGTKLTVL
214	TSLP-0871 VL IL413TSLP-1037 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITC GGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVY DDKDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYC QVWDKSSDHVVFGGGTKLTVL
215	TSLP-0855 LC TSLP-2000 LC IL413TSLP-1028 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDSSSKHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
216	TSLP-0871 LC IL413TSLP-1037 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDKDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDKSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
217	TSLP-0855 VL TSLP-2000 VL IL413TSLP-1028 VL	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTAAGCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
218	TSLP-0871 VL IL413TSLP-1037 VL	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAAGGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAAGAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
219	TSLP-0855 LC TSLP-2000 LC IL413TSLP-1028 LC	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAGCGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAGTAGTAGTAAGCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
220	TSLP-0871 LC IL413TSLP-1037 LC	TCCTATGTGCTGACTCAGCCACCCTCCGTGTCAGTGGCCCCAGGACAGACAGCCAGGATTACCTGTGGGGGAAACAACCTTGGAAGTAAAAGTGTGCACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGGCCCCTGTGCTGGTCGTCTATGATGATAAGGACCGGCCCTCATGGATTCCTGAGCGATTCTCTGGCTCCAACTCTGGGAACACCGCCACCCTGACCATCAGCAGGGGCGAAGCCGGGGATGAGGCCGACTATTACTGTCAGGTGTGGGATAAGAGTAGTGATCATGTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCA
221	TSLP-0820 VH TSLP-2000 VH TSLP-2002 VH TSLP-2004 VH	EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWYLVHEAFDIWGQGTMVTVSS
222	TSLP-0820 HC TSLP-2000 HC TSLP-2002 HC TSLP-2004 HC	EMQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFRTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPQWYLVHEAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
223	TSLP-2004 VL	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDKSSDHVVFGGGTKLTVL
224	TSLP-2004 LC	SYVLTQPPSVSVAPGQTARITCGGNNLGSKSVHWYQQKPGQAPVLVVYDDSDRPSWIPERFSGSNSGNTATLTISRGEAGDEADYYCQVWDKSSDHVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
225	薩善利單抗，(PF-06801591 (RN888) 抗PD-1 HC CDR粗體且加下劃線	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFT SY WINWVRQAPGQGLEWMG NI YPGSSLTNYNEKFKN RVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR LSTGTFAY WGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
226	薩善利單抗，(PF-06801591 (RN888) 抗PD-1 LC CDR粗體且加下劃線	DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC KSSQSLWDSGNQKNFLT WYQQKPGQPPKLLIY WTSYRES GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC QNDYFYPHT FGGGTKVEIKRGTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
227	PD1-F2 HC	EVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSY WMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKENWGSYFDLWGQGTTVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFIYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK
228	PD1-F2 LC	DIVMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGRAPKVLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPWTFGQGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC

[] =一般資料別名；() =舊版別名。

圖1A描繪例示性序列，其示出抗IL-13及抗IL-4結合臂之輕鏈部分的Pfabat編號。位置名稱垂直地出現在單一行中，且短劃線(「-」)指示對準中之間隙。舉例而言，抗IL-13 CDR-L1之殘基L27D為His，且抗IL-4結合臂中之等效殘基為Glu。被視為CDR的一部分的位置以粗體文字展示，且相應胺基酸用粗體且下劃線表示。圖1B描繪例示性序列，其示出抗IL-13、抗IL-4及抗IL-33結合臂之重鏈部分的Pfabat編號。位置名稱垂直地出現在單一行中，且短劃線(「-」)指示對準中之間隙。舉例而言，抗IL-4 CDR-L1之殘基H100C為Phe，且具有較短CDRH3之抗IL-13結合臂不具有對應殘基。被視為CDR的一部分的位置以粗體文字展示，且相應胺基酸用粗體且下劃線表示。大部分多特異性抗體序列中所用之抗IL-13重鏈片段不含完全鉸鏈或Fc。Pfabat演算法將序列編號為獨立的Fab域且不對較小的上鉸鏈片段(「EPKSC」(SEQ ID NO: 102))進行編號，儘管在此將其手動包括在內(小寫字母，位置H226-H230)以供參考。圖2描繪概述IL4-1285抗體之LC/MS分析結果的圖。揭示了轉譯後修飾位於輕鏈上。峰1 (P1)相對於峰2 (P2)之質譜分析展示P2中存在80道爾頓(Da)的物質，質量為23755.0 Da。P1係指在藉由離子交換純化方法分析時分離且亦藉由使用輕鏈LC/MS分析(在LysC+TCEP之後)偵測之「主峰」物質。P2係指藉由離子交換純化方法分離且亦藉由使用輕鏈LC/MS分析(在LysC+TCEP之後)偵測之「峰2」。峰2對Tyr(L27a)具有額外硫酸化，因此其在MS中具有80 Da位移。圖3描繪比較IL4-1346 (hu3B9-VLv2.8) [下部兩個圖]及IL4-1285 (hu3B9-VLv2.0)抗體輕鏈[上部兩個圖]之LC/MS分析的圖。輕鏈CDR1肽處之O連接之硫酸化(DRVTITCKASQSVD Y)藉由LC/MS分析鑑別且 Y(L27d)F突變移除異質性。頂部及底部之左圖為肽含量圖譜資料(AspN酶)。頂部及底部之右圖為使用LysC方法之次單元。肽圖譜(AspN消化)展示在左上方光譜中，其中DFD輕鏈不含有硫酸化且DYD輕鏈確實具有一些硫酸化(+79.9568 Da's)。次單元分析顯示DFD輕鏈不具有硫酸化物質(右上光譜)且DYD輕鏈具有一些硫酸化Da物質(右下光譜)。圖4描繪併入至IL4-1359 (VH1 G07_VLv2.9) VH CDRH1中之變化，其有助於提高對IL-4的親和力。圖5描繪Tyr(L27d)E處之改變，其可進行以移除O-硫酸化轉譯後修飾且進一步使IL-4/IL4-1285 (RA1-2或hu3B9-VLv2.0)界面穩定。圖6描繪IL-13複合物之對準，其展現IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)相對於IL13-1307 (hu13.4)之結合取向。圖7描繪IL13-1307 (hu13.4)相對於IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)之CDRL1差異，有助於提高對人類IL-13的親和力。圖8描繪IL13-1307 (hu13.4)與IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)之間的CDRH3胺基酸差異，有助於提高對IL-13的親和力。圖9描繪相對於IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)，在IL13-1307 (hu13.4) CDRH1中殘基30處絲胺酸之存在如何有助於提高對IL-13的親和力。圖10描繪相對於IL13-1283 (IMA-638或hu13.2)，IL13-1307 (hu13.4) CDRH2中之位置55處之天冬胺酸而非IL13-1283中之此位置處之甘胺酸如何有助於提高對IL-13的親和力。圖11描繪併入IL13-0001 (1RVHC9-VLA4) VH CDRH3中之變化如何有助於提高對IL-13的親和力。圖12描繪併入IL13-0001 (1RVHC9-VLA4) VL CDRL1中之變化如何有助於提高對IL-13的親和力。圖13描繪展示IL-33中和之增加效力如何與增加的多反應性相關聯的圖。圖14描繪抗TSLP變異體之高通量解離速率篩選。圖14A：解離速率篩選感測器圖譜。R表示反應(nM)。t0、t240以及t640表示時間點。締合指數=樣品(Rt240-Rt0)/TSLP-0001 (Rt240-Rt0)。解離指數=樣品(Rt640-Rt240)/TSLP-0001 (Rt640-Rt240)。圖14B：締合指數與解離指數之Spotfire圖。正方形方塊內部之變異體為滿足選擇標準之命中物。圖15描繪TSLP-0260 Fv區域之靜電表面圖。使用泊松波茲曼(Poisson Boltzmann)計算器Delphi測定靜電表面圖。此處，正電荷電位顯示為白色，及負電荷電位顯示為黑色。為降低黏度而重點關注的區域為用黑色虛線圈出的負電荷斑塊。此等三個斑塊分別含有CDR L1-L2、L3-H2-H3及H2的一部分。圖16描繪抗體:TSLP之界面的細節。VH-E99Y之突變潛在地在TSLP-Ab界面引入新的氫鍵網狀結構。所選界面殘基經標記且展示為棒。N71及R149來自TSLP。短劃線表示鹽橋及氫鍵。具有a-螺旋結構的淺灰色：TSLP。深灰色：抗體。此亦增加整體包裝。圖17描繪展示抗TSLP變異體之黏度分析的圖。黏度係藉由基於DLS珠粒之方法來量測。圖18A、圖18B、圖18C、圖18D、圖18E、圖18F、圖18G、圖18H及圖18I描繪三特異性Tri-Fab-Fc及Fab域之一般示意圖及命名法。圖18A描繪Tri-Fab-Fc之示意圖，表明域Fab1、Fab2及Fab3及單一Fab (SFab)及雙Fab (DFab)臂在各別細胞中表現。圖18：描繪習知Fab之示意圖。圖18C描繪經修飾之Fd之示意圖。圖18D描繪VH-VL交換之示意圖。圖18E描繪S1之示意圖。圖18F描繪S1Rev之示意圖。圖18G描繪CH-Ck交換之示意圖。圖18H描繪CH-Cl交換之示意圖。圖18描繪Tri-Fab-Fc之分解視圖，指示個別蛋白質鏈：SFab HC(3)及SFab LC(3)鏈，其共同組成SFab臂；及DFab LC(1)-HC(2)、經修飾之Fd(1)及DFab LC(2)鏈，其共同組成DFab臂。注意：VL表示輕鏈可變域；VH表示重鏈可變域；Ck表示κ恆定輕鏈域，Cl表示λ恆定輕鏈域；CH1表示重鏈恆定域1。EPKSC (SEQ ID NO: 102)：來自IgG1上鉸鏈區的一段胺基酸與CH1的C端融合，與CL (Fab1)形成二硫鍵。圖19描繪在Fab1位置中具有天然鏈配對之Tri-Fab-Fc之組態及特徵。圖19A及圖19B描繪兩種天然鏈配對Tri-Fab-Fc變異體之組態，其中全部三種Fab具有習知鏈配對。S1：CH1/CK上之S1突變。S1rev：CH1/CK上之S1rev突變。帶正電荷(+)突變為實心黑環。帶負電荷(-)突變為虛線黑環。圖19C描繪展示在Mab Select SuRe溶離之後及在prepSEC superdex 200純化之後IL413TSLP-0003及IL413TSLP-0004之分析SEC之圖。圖19D及圖19E描繪分別展示對IL413TSLP-0003及IL413TSLP-0004之LCMS分析之圖。表列舉三特異性之各鏈及對應理論鏈質量。將數值1至5置放於各鏈前方以提供LCMS中主要峰之鏈組成的簡寫描述。圖20A、圖20B、圖20C、圖20D、圖20E及圖20F描繪展示CλS、CκS及VDS Tri-Fab-Fc變異體之組態的草圖，其中Fab1域(抗TSLP)含有融合至VH1域之C端的Cl域，及融合至VL1域之C端的CH1域。由IL413TLSP-0001 (圖20A)及IL413TSLP-0002 (圖20B)示出之CλS組態具有Fab1輕鏈，其在雙Fab臂之N端具有結構VL-CH1及VH-Cl。由IL413TLSP-0007 (圖20C)及IL413TSLP-0008 (圖20D)示出之VDS組態在雙Fab鏈及VH-Cl Fab1輕鏈之N端具有Fab1 Vl-CH1。由IL13433-0021 (圖20E)示出之CkS組態具有分別攜帶S1及S1 rev突變的Fab1及Fab3，Fab2含有VL-CH1結構且VH-CL融合至Fc之N端。由IL13433-0022 (圖20F)示出之CkS組態具有分別攜帶S1及S1 rev突變的Fab1及Fab3，Fab2含有VL-CH1結構，其包括VL及CH1域之間的SS彎頭，且VH-CL融合至Fc之N端。圖21描繪顯示藉由橋接ELISA評估域幾何結構對Tri-Fab-Fc結合活性之影響的圖。TPP-9662為S1/S1rev及KiH之IL-4/IL-13雙特異性抗體。mab8.8為陰性對照抗體。圖22描繪藉由在短暫轉染中調節DNA比率來改良Tri-Fab-Fc鏈配對。圖22A描繪NuPAGE Bis-tris凝膠分析。R：還原。NR：非還原。圖22B描繪展示aSEC分析之圖。圖23描繪經修飾之Fd形式及S1/S1rev互補突變工程改造之Tri-Fab-Fc變異體之草圖。圖24描繪穩定CHO產生之Tri-Fab-Fc的非還原及還原無染色SDS-PAGE分析。圖25描繪使用基於電荷之雜二聚化，Fab1之CκS或mFd配對之代表性Tri-Fab-Fc三特異性組態的草圖。RRR或EEE電荷突變：兩個RR/EE在鉸鏈區且一個R/E在CH3處。抗IL-13域設計成CkS (由IL413TSLP-0251例示)或mFd (由IL413TSLP-0252例示)。圖26描繪抗IL-13/IL-4雙Fab EEE臂設計之草圖，其中抗IL-13域在Fab1位為mFd，且抗IL-4域在Fab2位。圖27描繪抗IL-13/IL-4雙Fab EEE CB臂設計之草圖，其中抗IL-4結合域在Fab1位為mFd，且抗IL-13域在Fab2位。圖28描繪抗IL-13/IL-4雙Fab EEE臂設計之草圖，其中CκS在Fab 1位處。圖29描繪展示Tri-Fab-Fc IL13433-0006可同時結合人類IL-4、IL-13及IL-33之圖。圖30描繪IL413p40-0705與人類IL-4、IL-13及IL-23按各種次序注射之SPR感測器圖譜。圖31描繪具有mFd形式及S1-S1rev互補突變之雙細胞設計Tri-Fab-Fc變異體。圖32描繪用經修飾之Fd形式工程改造且使用單細胞製程產生之Tri-Fab-Fc。圖33描繪展示藉由差異光散射(DLS)量測之IL413p40-0698及IL413p40-0700之黏度的圖。圖34描繪Tg32小鼠中之抗IL-4/13/33 Tri-Fab-Fc IV藥物動力學。抗體名稱縮寫為其四位數參考如下：1042係指IL13433-1042，1258係指IL13433-1258，1261係指IL13433-1261，1270係指IL13433-1270，1275係指IL13433-1275，且抗IL-33 Ab LS係指IL33-0232 VH及VL，其中Fc域進一步包含如本文所描述之LS突變。圖35描繪展示藉由表面電漿子共振，三特異性物與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-4之結合的圖。三特異性物：(A) IL13433-1258、(B) IL413TSLP-1024、(C) IL413P40-0705固定於CM5感測器晶片上，且藉由表面電漿子共振測定200 nM人類(hu)、食蟹獼猴(cy)、小鼠(mu)、兔(rb)或大鼠(rt) IL-4之結合。圖36描繪展示藉由表面電漿子共振，三特異性物與人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠IL-13之結合的圖。三特異性物：(A) IL13433-1258、(B) IL413TSLP-1024、(C) IL413P40-0705固定於CM5感測器晶片上，且藉由表面電漿子共振測定200 nM人類(hu)、食蟹獼猴(cy)、小鼠(mu)、兔(rb)或大鼠(rt) IL-13之結合。圖37為描繪具有經修飾之Fd (mFd)設計之Tri-Fab-Fc構築體內的不同Fab位置的草圖。圖38描繪Tri-Fab-Fc IL413p40-0705與人類(hu)、食蟹獼猴(cy)、小鼠(mu)、大鼠(rt)及兔(rb) IL-12、IL-23、IL-4及IL-13之SPR感測器圖譜。圖39描繪藉由表面電漿子共振展示IL-33與三特異性IL13433-1258結合之物種特異性的圖。圖40描繪藉由表面電漿子共振展示短形式及長形式TSLP與TSLP-0001、mAb TSLP-0875及三特異性IL413TSLP-1024之結合的圖。圖41描繪展示短形式及長形式TSLP在誘導單核球TARC生產中的生物活性的圖。自人類周邊血液分離之單核細胞在37℃下用0.31 pg/mL-20 ng/ml重組人類TSLP (Pfizer)、短形式TSLP (TSLPlf Avi V5 His 10生物素)或長形式TSLP (TSLPlf Avi V5 His 10生物素)培育隔夜。細胞上清液中之TARC生產係藉由MSD定量。資料呈現為平均值+/-S.D。hTSLP、sfTSLP及lfTSLP之EC50值分別為0.3680、N/A及7.472 ng/mL。圖42描繪展示藉由表面電漿子共振，人類、食蟹獼猴、小鼠及大鼠TSLP與三特異性IL413TSLP-1024之結合的圖。將生物素化人類(hu)、食蟹獼猴(cy)、小鼠(mu)或大鼠(rt) TSLP捕獲於生物素CAP感測器晶片上，且藉由表面電漿子共振測定IL413TSLP-1024三特異性物的結合。圖43描繪藉由表面電漿子共振展示IL-4、IL-13及TSLP與IL413TSLP-1024之同步結合的圖。圖44描繪展示平均CT26腫瘤體積隨時間及在研究結束時之圖。研究結果，其中攜帶CT26腫瘤之Balb/c小鼠用表88中所列之化合物給藥。(A)在第9天(藥物注射第一天)開始，各治療組的植入腫瘤隨時間推移之平均體積(mm3)及平均值之標準誤差。(B)植入後第22天(研究最後一天)的植入腫瘤之體積(mm3)。條形圖及晶鬚表示各治療組之平均值及標準差。各點表示彼治療組中各小鼠之最終腫瘤體積。與同型治療之動物相比，用抗PD-1抗體、抗IL-4抗體加mIL13Ra2-mFc或抗IL-4抗體加mIL13Ra2-mFc加抗PD-1抗體治療不顯著改變腫瘤生長特徵。相反，相對於同型，經抗IL-4加抗TSLP抗體加mIL13Ra2-mFc (40%腫瘤生長抑制，p=0.043)或用抗IL-4加抗TSLP加抗PD-1抗體加mIL13Ra2-mFc (54%腫瘤生長抑制，p=0.002)治療之小鼠展現顯著腫瘤生長抑制。圖45描繪展示各治療組中每隻小鼠之CT26腫瘤體積隨時間變化之圖。於第9天(藥物注射第一天)開始，各治療組中之個別小鼠之皮下植入的CT26腫瘤之體積(mm3)隨時間的變化。圖46描繪展示IL-4與mAb IL4-1040或TSLP與mAb TSLP-0875之中和抑制初代人類腫瘤反應性T細胞抑制干擾素γ分泌的圖。如實例87中所描述用表2中所列之處理極化且再刺激之初代A375反應性人類T細胞的干擾素γ分泌。(A)顯示了經過多天的測試，來自六個不同供體的干擾素γ分泌。使T細胞極化且用單獨的同型抗體、同型抗體及0.8 ng/mL重組人類IL-4或mAb IL4-1040及0.8 ng/mL重組人類IL-4再刺激。(B)顯示了與(A)相同的六個供體的干擾素γ分泌，用同型抗體、同型抗體及0.8 ng/mL重組人類TSLP或mAb TSLP-0875及0.8 ng/mL重組人類TSLP極化且再刺激。(A及B)中的資料以平均值及標準差表示。(A及B)中的統計檢定為方差分析，條形圖上方顯示的為來自事後Šídák多重比較檢定的P值。圖47描繪展示IL-4與mAb IL4-1040及/或TSLP與mAb TSLP-0875之中和改善T細胞介導之人類A375癌細胞活體外生長的對照之圖，其與干擾素γ分泌相關。初代人類T細胞如實例87中所描述經極化且再刺激。如實例88中所描述產生T細胞再刺激期間A375腫瘤細胞之生長曲線。(A)使初代人類T細胞極化且用以下再刺激：(A)單獨的同型抗體、同型抗體及0.8 ng/mL重組人類IL-4或mAb IL4-1040及0.8 ng/mL重組人類IL-4；(B)單獨的同型抗體、同型抗體及0.8 ng/mL重組人類TSLP或mAb TSLP-0875及0.8 ng/mL重組人類TSLP；(C)單獨的同型抗體、同型抗體及0.8 ng/mL各重組人類IL-4及TSLP或mAb1040、mAb及0.8 ng /mL各重組人類IL-4及TSLP之組合。(D)如實例87中所描述，對在再刺激第5天收集之條件培養基中之干擾素γ進行定量。分泌的干擾素γ之含量與來自相同孔之正規化A375 AUC相關。(A-C)為來自供體1923之資料且(D)來自供體8385。(A-C)中之資料呈現為六個技術複本之平均值及標準差且例示了來自三個不同供體之資料。(D)中之資料呈現為六個技術複本之平均值且例示了來自四個供體之資料。圖48描繪展示重組人類IL-4或IL-4與TSLP之組合降低了表現穿孔素及顆粒酶B兩者之A375極化初代人類CD8 T細胞之頻率的圖。如實例89中所描述藉由流式細胞量測術測定表現穿孔素及顆粒酶B兩者之A375極化CD8 T細胞的比例。資料呈現為三個技術複本之平均值及標準差且表示來自兩個不同供體之資料。圖49描繪展示三特異性物IL413TSLP-1028及IL413TSLP-1037中和來自人類透明細胞腎細胞株769-P之IL4-誘導之及IL13-誘導之CCL17分泌之圖。將769-P人類透明細胞腎細胞癌細胞與重組人類IL-4 (A)或IL-13 (B)連同三特異性IL413TSLP-1028或IL413TSLP-1037之稀釋液一起在37℃下培育約20小時。藉由Legendplex對CCL17分泌進行定量且自標準曲線外推濃度。

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Claims

一種特異性結合至IL-4之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 26之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 19之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 20之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 28之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 29之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 22之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 30之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
如請求項1之抗體，其包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列。
如請求項1至2中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 26之IL4-VL； (ii) SEQ ID NO: 19之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 20之IL4-VL； (iii) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 20之IL4-VL； (iv) SEQ ID NO: 28之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 29之IL4-VL；或 (v) SEQ ID NO: 22之IL4-VH序列及SEQ ID NO: 30之IL4-VL； (vi) 由SEQ ID NO: 200之核酸序列編碼的IL4-VH序列，及由SEQ ID NO: 201之核酸序列編碼的IL4-VL序列； (vii) 由SEQ ID NO: 188之核酸序列編碼的攜帶IL4-VH的多肽序列，及由SEQ ID NO: 189之核酸序列編碼的攜帶IL4-VL的多肽序列； (viii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼之IL4-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼之IL4-VL序列； (ix) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL4-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體編碼之攜帶IL4-VL的多肽序列。
如請求項1至3中任一項之抗體，其具有以下中之一或多者之特徵： (i) 該抗體以小於選自由約10 pM、5 pM、1 pM及800 fM組成之群之值的K _D結合人類IL-4； (ii) 該抗體結合食蟹獼猴IL-4； (iii) 該抗體不結合選自由犬、綿羊、兔、大鼠及小鼠組成之群的一或多者的IL-4； (iv) 該抗體與食蟹獼猴IL-4之結合K _D在該抗體與人類IL-4之結合K _D之1個數量級內； (v) 該抗體之特徵在於人類單核球分析中中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於10 pM； (vi) 該抗體在組胺酸-蔗糖pH 5.8緩衝液中的濃度為80 mg/mL時，在25℃下的黏度為20 cP或更低； (vii) 該抗體包含該輕鏈中殘基93處之離胺酸。
一種特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 51之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 54之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 44之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 46之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 49之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 48之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 68之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (v) SEQ ID NO: 57之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 59之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
如請求項1至5中任一項之抗體，其特異性結合至IL-13，包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
如請求項1至6中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL； (ii) SEQ ID NO: 44之IL13-VH及SEQ ID NO: 46之IL13-VL； (iii) SEQ ID NO: 48之IL13-VH及SEQ ID NO: 49之IL13-VL； (iv) SEQ ID NO: 48之IL13-VH及SEQ ID NO: 68之IL13-VL； (v) SEQ ID NO: 57之IL13-VH及SEQ ID NO: 59之IL13-VL； (vi) 由SEQ ID NO: 198之核酸序列編碼的IL13-VH序列，及由SEQ ID NO: 199之核酸序列編碼的IL13-VL序列； (vii) 由SEQ ID NO: 187之核酸序列編碼的攜帶IL13-VH的多肽序列，及由SEQ ID NO: 188之核酸序列編碼的攜帶IL13-VL的多肽序列； (viii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼之IL13-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼之IL13-VL序列；或 (ix) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體編碼之攜帶IL13-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體編碼之攜帶IL13-VL的多肽序列。
如請求項1至7中任一項之抗體，其具有以下中之一或多者之特徵： (i) 該抗體以小於選自由10 nM、5 nM、2 nM、1 nM、900 pM、800 pM、700 pM、600 pM、500 pM、400 pM、300 pM、250 pM、200 pM、150 pM、100 pM及60 pM組成之群之值的K _D結合人類IL-13； (ii) 該抗體視情況在該抗體與人類IL-13之結合K _D之1個數量級內與食蟹獼猴IL-13結合； (iii) 經藉由HT-29細胞中IL-13 pSTAT6磷酸化之中和所量測，IL-13 IC ₅₀小於100 pM； (iv) 經在人類單核球分析中所量測，中和IL-13誘導CD23的IL-13 IC ₅₀小於20 pM； (v) 該抗體在食蟹獼猴中具有至少14天之終末半衰期； (vi) 該抗體在TG32小鼠中具有至少18天之終末半衰期； (vii) 該抗體不結合來自選自由犬、兔及小鼠組成之群之一或多種物種的IL-13。
如請求項1至8中任一項之抗體，其特異性結合至IL-4，且特異性結合至IL-13，該抗體包含IL-4結合域及IL-13結合域，其中 (i) 該IL-4結合域如請求項1至3中任一項中所闡述，或 (ii) 該IL-13結合域如請求項4至6中任一項中所闡述，或 (iii) 該IL-4結合域如請求項1至3中任一項中所闡述，且該IL-13結合域如請求項4至6中任一項中所闡述。
如請求項9之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂。
如請求項10之抗體，其中 (i) 該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標； (ii) 該第一抗原結合位特異性結合IL-4，該第二抗體結合位特異性結合IL-13，且該第三抗原結合位特異性結合至該至少一種額外目標； (iii) 該第一抗原結合位特異性結合IL-4，該第二抗體結合位特異性結合該至少一種額外目標，且該第三抗原結合位特異性結合IL-13； (iv) 其中該第一抗原結合位特異性結合IL-13，該第二抗體結合位特異性結合該至少一種額外目標，且該第三抗原結合位特異性結合IL-4； (v) 該第一抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標，該第二抗體結合位特異性結合L-13，且該第三抗原結合位特異性結合IL-4；或 (vi) 該第一抗原結合位特異性結合該至少一種額外目標，該第二抗體結合位特異性結合IL-4，且該第三抗原結合位特異性結合IL-13。
一種特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13以及至少一種額外目標之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈且其中該第二多肽鏈、該第四多肽鏈及該第五多肽鏈之特性係選自由以下組成之群： (i) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 145，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (ii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 107，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 115，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (iv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 121，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 103； (v) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 208，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 133，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (viii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 144，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 143； (ix) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 135，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 136，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (x) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 140，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 149，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 151，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xiii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 159，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (xiv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 162，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 163； (xv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 154，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (xvi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 156，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (xvii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 152，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (xviii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 153，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (xix) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 157，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xx) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 160，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xxi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 164，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (xxii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 178，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxiii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 179，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxiv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 180，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xxv) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 183，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (xxvi) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 207，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xxvii) 該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。
一種特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13以及至少一種額外目標之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含至少一種額外目標結合位之第三Fab域；且其中該第二多肽鏈自N端包含SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 16、包含SEQ ID NO: 10之視情況存在之連接子、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 6、CH2域及CH3域；該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27；及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。
一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，包含 (i) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 93之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iv) SEQ ID NO: 92之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 214之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (v) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 213之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (vi) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 94之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列；或 (vii) SEQ ID NO: 221之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 223之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。
一種特異性結合至TSLP之經分離之抗體，其包含 (i) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列； (ii) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列；或 (iii) 重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列。
如請求項14至15中任一項之抗體，其包含 (i) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 94之TSLP-VL； (ii) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 93之TSLP-VL； (iii) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 213之TSLP-VL； (iv) SEQ ID NO: 92之TSLP-VH序列，及SEQ ID NO: 214之TSLP-VL； (v) 由SEQ ID NO: 204之核酸序列編碼之TSLP-VH序列；及由SEQ ID NO: 205之核酸序列編碼之TSLP-VL序列， (vi) 由SEQ ID NO: 204之核酸序列編碼之TSLP-VH序列；及由SEQ ID NO: 217之核酸序列編碼之TSLP-VL序列； (vii) 由SEQ ID NO: 204之核酸序列編碼之TSLP-VH序列；及由SEQ ID NO: 218之核酸序列編碼之TSLP-VL序列； (viii) 由SEQ ID NO: 192之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列；及由SEQ ID NO: 193之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列； (ix) 由SEQ ID NO: 192之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列；及由SEQ ID NO: 193之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列； (x) 由SEQ ID NO: 192之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列；及由SEQ ID NO: 193之核酸序列編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列； (xi) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼之TSLP-VH序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼之TSLP-VL序列；或 (xii) 由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體編碼之攜帶TSLP-VH的多肽序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體編碼之攜帶TSLP-VL的多肽序列。
如請求項1至16中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於以下中之一或多者： (i) 在人類周邊血液單核球之TARC生產生物分析中IC ₅₀小於10 pM； (ii) 熔融溫度為68℃； (iii) 其中pH 3.4保持Δ%HMMS小於5，使得該pH 3.4保持Δ%HMMS定義為在該抗體在室溫下在pH 3.4下培育5小時之後由降解而產生的高分子量物質的百分比與在該抗體在室溫下在pH 7.2下培育5小時之後由降解而產生的高分子量物質的百分比之間的差； (iv) 經在人類初代PBMC中之TARC生產生物分析所量測，抗TSLP生物活性的IC ₅₀小於10 pM； (v) 在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時的黏度為20 cP； (vi) 當藉由分析型尺寸排阻層析(aSEC)測定時，高分子量物質之評分小於2%； (vii) 在親和力捕獲自體相互作用奈米粒子光譜分析(AC SINS)分析中，評分小於12； (viii) 在人類初代PBMC中之TARC生產生物分析中，人類TSLP中和之IC ₅₀小於15 pM； (ix) 在食蟹獼猴TSLP中和分析中，IC ₅₀小於35 pM。
一種特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含如請求項1至13中任一項之抗體，且其中該抗體進一步特異性結合至TSLP，且其中該抗體視情況包含如請求項14至17中任一項之抗體。
如請求項18之抗體，其中 (i) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，以及 (ii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列；且其中： (iii) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 88之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 90之胺基酸序列；或 (iv) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 211之胺基酸序列；或 (v) 該TSLP結合域包含重鏈可變區(TSLP-VH)及輕鏈可變區(TSLP-VL)，其中該CDR-H1包含SEQ ID NO: 82之胺基酸序列；該CDR-H2包含SEQ ID NO: 83之胺基酸序列；該CDR-H3包含SEQ ID NO: 85之胺基酸序列；該CDR-L1包含SEQ ID NO: 86之胺基酸序列；該CDR-L2包含SEQ ID NO: 87之胺基酸序列；及該CDR-L3包含SEQ ID NO: 212之胺基酸序列。
如請求項18至19中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域；該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域；且該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈、該第二多肽鏈、該第三多肽鏈、該第四多肽鏈及該第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 149，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 151，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 159，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 150； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 162，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 163； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 154，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 156，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 155； (viii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 152，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (ix) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 153，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 98； (x) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 157，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158； (xi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 160，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 158；及 (xii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 161，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 164，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 98，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 197，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xiii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 215，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122；及 (xiv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 216，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (xv) 該第一多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 192之核酸編碼的序列，該第二多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 188之核酸編碼的序列，該第三多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 193之核酸編碼的序列，該第四多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 187之核酸編碼的序列，及該第五多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 122之核酸編碼的序列；以及 (xvi) 該第一多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127202之核酸編碼的序列，該第二多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127192之核酸編碼的序列，該第三多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127201之核酸編碼的序列，該第四多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127194之核酸編碼的序列，及該第五多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127193之核酸編碼的序列。
如請求項18至20中任一項之抗體，其中 (i) 該TSLP結合部分包含SEQ ID NO: 92之TSLP-VH及SEQ ID NO: 94之TSLP-VL； (ii) 該IL-4結合部分包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL；且 (iii) 該IL-13結合部分包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。
一種特異性結合TSLP、特異性結合至IL-4且特異性結合至IL-13之經分離之抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，且其中 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含IL-13結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含IL-4結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含TSLP結合位之第三Fab域；且其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 165，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 99，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。
一種經由p40結合域特異性結合至p40之經分離之抗體，且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由IL-4、IL-13、IL-33及TSLP組成之群的抗原的額外抗原結合域，且其中該p40結合域包含 (i) 重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其包含SEQ ID NO: 169之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 175之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) 重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其包含SEQ ID NO: 169之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，及SEQ ID NO: 175之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (iii) 包含根據SEQ ID NO: 169之序列的p40-VH，及根據SEQ ID NO: 175之p40-VL； (iv) 包含根據SEQ ID NO: 186之序列的攜帶p40-VH的多肽，及包含根據SEQ ID NO: 176之序列的攜帶p40-VL的多肽； (v) 根據SEQ ID NO: 206之p40-VH，及根據SEQ ID NO: 207之p40-VL； (vi) 根據SEQ ID NO: 194之攜帶p40-VH的多肽，及根據SEQ ID NO: 195之攜帶p40-VL的多肽； (vii) 包含由對應於ATCC寄存PTA-127206之核酸編碼的序列的p40-VH，及包含由對應於ATCC寄存PTA-127205之核酸編碼的序列的p40-VL；或 (viii) 包含由對應於ATCC寄存PTA-127204之核酸編碼的序列的攜帶p40-VH的多肽，及包含由對應於ATCC寄存PTA-127203之核酸編碼的序列的攜帶p40-VL的多肽。
一種經由p40結合域特異性結合至p40之經分離之抗體，且其中該抗體包含至少一個特異性結合至選自由IL-4、IL-13、IL-33及TSLP組成之群的抗原的額外抗原結合域，且其中該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列。
如請求項23至24中任一項之抗體，其中該p40結合域包含SEQ ID NO: 169之p40-VH及SEQ ID NO: 175之p40-VL。
如請求項23至25中任一項之抗體，其中該抗體包含特異性結合至IL-4之IL-4結合域及特異性結合至IL-13之IL-13結合域，且其中該抗體進一步包含如請求項1至8中任一項之抗體。
如請求項23至26中任一項之抗體，其中 (i) 該p40結合域包含重鏈可變區(p40-VH)及輕鏈可變區(p40-VL)，其中該p40結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 166之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 167之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 168之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 171之胺基酸序列；該p40結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 172之胺基酸序列，及該p40結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 173之胺基酸序列；及 (ii) 該IL-4結合域包含重鏈可變區(IL4-VH)及輕鏈可變區(IL4-VL)，其中該IL-4結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列；該IL-4結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 12之胺基酸序列，及該IL-4結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 25之胺基酸序列，及 (iii) 該IL-13結合域包含重鏈可變區(IL13-VH)及輕鏈可變區(IL13-VL)，其中該IL-13結合域之CDR-H1包含SEQ ID NO: 41之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H2包含SEQ ID NO: 42之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-H3包含SEQ ID NO: 50之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L1包含SEQ ID NO: 53之胺基酸序列；該IL-13結合域之CDR-L2包含SEQ ID NO: 37之胺基酸序列，及該IL-13結合域之CDR-L3包含SEQ ID NO: 38之胺基酸序列。
如請求項23至27中任一項之抗體，其中 (i) 該p40結合域包含SEQ ID NO: 169之p40-VH及SEQ ID NO: 175之p40-VL； (ii) 該IL-4結合域包含SEQ ID NO: 22之IL4-VH及SEQ ID NO: 26之IL4-VL； (iii) 該IL-13結合域包含SEQ ID NO: 51之IL13-VH及SEQ ID NO: 54之IL13-VL。
如請求項23至28中任一項之抗體，其中該抗體包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域；該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域；且該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域，且其中該第一多肽鏈、該第二多肽鏈、該第三多肽鏈、該第四多肽鏈及該第五多肽鏈之特性選自由以下組成之群： (i) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (ii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 146，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 178，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (iii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 112，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 179，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 196，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (iv) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 181，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 180，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 182，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 109，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (v) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 118，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 183，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 120，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 116，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 177； (vi) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 207，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (vii) 該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 185，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 125，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122； (viii) 該第一多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 194之核酸編碼的序列，該第二多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 188之核酸編碼的序列，該第三多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 195之核酸編碼的序列，該第四多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 187之核酸編碼的序列，及該第五多肽鏈包含由根據SEQ ID NO: 122之核酸編碼的序列；以及 (ix) 該第一多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127204之核酸編碼的序列，該第二多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127192之核酸編碼的序列，該第三多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127203之核酸編碼的序列，該第四多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127194之核酸編碼的序列，及該第五多肽鏈包含由對應於ATCC寄存PTA-127193之核酸編碼的序列。
如請求項29之抗體，其中該第一多肽鏈包含SEQ ID NO: 186，該第二多肽鏈包含SEQ ID NO: 130，該第三多肽鏈包含SEQ ID NO: 176，該第四多肽鏈包含SEQ ID NO: 27，及該第五多肽鏈包含SEQ ID NO: 122。
如請求項1至30中任一項之抗體，其中該抗體之特徵在於以下中之一或多者： (i) 在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少100 mg/mL時的黏度小於20 cP； (ii) 在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 6.0之緩衝液中，濃度為至少50 mg/mL時的黏度小於12 cP； (iii) 在食蟹獼猴中終末半衰期為至少12天； (iv) 在TG-32小鼠中終末半衰期為至少18天； (v) 經藉由SPR所量測，該抗體以小於220 pM之親和力常數結合人類IL-4； (vi) 經藉由SPR所量測，該抗體以小於220 pM之親和力常數結合人類IL-13； (vii) 經藉由SPR所量測，該抗體以小於130 pM之親和力常數結合人類IL-12； (viii) 經藉由SPR所量測，該抗體以小於100 pM之親和力常數結合人類IL-23； (ix) 經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，該抗體以小於1 pM之結合親和力結合至人類IL-4； (x) 經藉由KinExA在PBS中之固定抗原分析所量測，該抗體以小於2 pM之結合親和力結合至食蟹獼猴IL-13； (xi) 經在人類單核球分析中所量測中和IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM； (xii) 經在人類單核球分析中所量測中和食蟹獼猴IL-4誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM； (xiii) 經在人類單核球分析中所量測中和食蟹獼猴IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於12 pM； (xiv) 經在人類單核球分析中所量測中和IL-13誘導CD23的IC ₅₀小於45 pM； (xv) 在人類周邊血液單核球之人類IL-12中和Kit-225分析中IC ₅₀小於600 pM； (xvi) 在人類周邊血液單核球之食蟹獼猴IL-23 Kit-225中和分析中IC ₅₀小於2100 pM； (xvii) 在人類全血之人類IL-12中和分析中IC ₅₀小於400 pM； (xviii) 在人類全血之食蟹獼猴IL-23中和分析中IC ₅₀小於10,000 pM。
一種抗體，其包含第一、第二、第三、第四及第五多肽鏈，使得 (i) 該第二多肽鏈及該第五多肽鏈一起形成包含第一抗原結合位之第一Fab域； (ii) 該第二多肽鏈及該第四多肽鏈一起形成包含第二抗原結合位之第二Fab域； (iii) 該第一多肽鏈及該第三多肽鏈一起形成包含第三抗原結合位之第三Fab域；其中該第一多肽鏈及該第二多肽鏈締合在一起形成包含兩個臂之抗體；包含該第一Fab域及該第二Fab域之雙Fab臂，及包含該第三Fab域之單Fab臂；且其中該第一Fab包含第一抗原相關VH (VH-1)、第一抗原相關VL (VL-1)、第一抗原相關CL (CL-1)及第一抗原相關CH1 (CH1-1)，且其中該VH-1之C端藉由肽鍵共價融合至該CH1-1之N端，且其中該VL-1之C端藉由肽鍵共價融合至該CL-1之N端，且其中該第二Fab包含第二抗原相關VH (VH-2)、第二抗原相關VL (VL-2)、第二抗原相關CL (CL-2)及第二抗原相關CH1 (CH1-2)，且其中該VH-2之C端藉由肽鍵共價融合至該CH1-2之N端，且其中該VL-2之C端藉由肽鍵共價融合至該CL-2之N端，且其中該第三Fab包含第三抗原相關VH (VH-3)、第三抗原相關VL (VL-3)、第三抗原相關CL (CL-3)及第三抗原相關CH1 (CH1-3)，且其中該VH-3之C端藉由肽鍵共價融合至該CH1-3之N端，且其中該VL-3之C端藉由肽鍵共價融合至該CL-3之N端，且其中該第一多肽自N端至C端包含(VH-3)-(CH1-3)-(第一鉸鏈)-(第一CH2)-(第一CH3)；該第二多肽自N端至C端包含(VL-1)-(CL-1)-(連接子)-(VH-2)-(CH1-2)-(第二鉸鏈)-(第二CH2)-(第二CH3)；該第三多肽包含(VL-3)-(CL-3)；該第四多肽包含(VL-2)-(CL-2)；及該第五多肽自N端至C端包含(VH1)-(CL-1)。
如請求項1至32中任一項之抗體，其包含第一Fc鏈及第二Fc鏈，其中第一Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第一CH3區連接之第一CH2區的第一鉸鏈區，且在本文中該第二Fc鏈在N端至C端次序上包含連接至與第二CH3區連接之第二CH2區的第二鉸鏈區，且其中該第一鉸鏈區及該第二鉸鏈區包含根據SEQ ID NO: 129及SEQ ID NO: 131之一對序列，且該第一CH3區及該第二CH3區包含以下兩對序列中之任一者：SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127；或SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。
如請求項33之抗體，其中該第一CH3域及該第二CH3域各自包含不同及互補序列，且該等不同及互補序列係選自以下不同及互補序列對之一： (vii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 106； (viii) SEQ ID NO: 111及SEQ ID NO: 114； (ix) SEQ ID NO: 114及SEQ ID NO: 117； (x) SEQ ID NO: 124及SEQ ID NO: 127； (xi) SEQ ID NO: 139及SEQ ID NO: 141；及 (xii) SEQ ID NO: 147及SEQ ID NO: 148。
一種包含抗體Fc域之抗體，該抗體Fc域包含第一Fc鏈及第二Fc鏈，其中該第一Fc鏈及該第二Fc鏈各自含有促進該第一Fc鏈與該第二Fc鏈之締合的兩個胺基酸修飾，其中 (iii) 該第一Fc鏈包含D(H232)R及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含D(H232)E及L(H391)E；或 (iv) 該第一Fc鏈包含D(H232)E及K(H440)R，且該第二Fc鏈包含L(H391)R及D(H232)E。
如請求項1至35中任一項之抗體，其包含一或多個序列，該一或多個序列由選自由以下組成之群的序列中所闡述之核酸編碼：SEQ ID NO: 187、SEQ ID NO: 188、SEQ ID NO: 189、SEQ ID NO: 190、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 103、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 198、SEQ ID NO: 199、SEQ ID NO: 200、SEQ ID NO: 210、SEQ ID NO: 202、SEQ ID NO: 203、SEQ ID NO: 204、SEQ ID NO: 205、SEQ ID NO: 206、SEQ ID NO: 207、SEQ ID NO: 217、SEQ ID NO: 218、SEQ ID NO: 219及SEQ ID NO: 220。
如請求項1至36中任一項之抗體，其包含一或多個序列，該一或多個序列由與選自由以下組成之群的ATCC寄存對應的核酸編碼：PTA-127192、PTA-127193、PTA-127194、PTA-127195、PTA-127196、PTA-127197、PTA-127198、PTA-127199、PTA-127200、PTA-127201、PTA-127202、PTA-127203、PTA-127204、PTA-127205、PTA-127206、PTA-127207、PTA-127208、PTA-127209及PTA-127210。
如請求項1至37中任一項之抗體，其用作藥劑。
如請求項38之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、及真菌角膜炎及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)。
如請求項1至39中任一項之抗體，其中該用途係用於治療選自由以下組成之群的一或多者：癌症、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma，HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；血色素惡性疾病；急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)。
如請求項40之抗體，其中該用途包含有包含如請求項1至34中任一項之抗體的第一抗癌治療劑及選自由以下組成之群的第二抗癌治療劑：抗OX40抗體、抗4-1BB抗體、抗HER2抗體、PD-1路徑拮抗劑、抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、TLR3促效劑、TLR 7/8促效劑、TLR9促效劑、雙特異性抗CD47/抗PD-L1抗體及雙特異性抗P-鈣黏素/抗CD3抗體、薩善利單抗(sasanlimab)、BCD-100、卡瑞利珠單抗(camrelizumab)、西米普利單抗(cemiplimab)、傑諾珠單抗(genolimzumab)、MEDI0680、納武單抗(nivolumab)、帕博利珠單抗(pembrolizumab)、信迪利單抗(sintilimab)、斯巴達珠單抗(spartalizumab)、STI-A1110、替雷利珠單抗(tislelizumab)、阿替利珠單抗(atezolizumab)、度伐利尤單抗(durvalumab)、BMS-936559 (MDX-1105)、LY3300054及TSR-042。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如請求項1至41中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
一種治療一或多種病症之方法，該一或多種病症選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、及真菌角膜炎及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、癌症、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；血色素惡性疾病；急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；該方法包含向該個體投與治療量之如請求項1至41中任一項之抗體或如請求項42之醫藥組合物。
一種用於治療一或多種病症之藥劑，該一或多種病症選自由以下組成之群：異位性皮膚炎、哮喘、COPD、食物過敏、過敏性鼻炎、嗜伊紅性食道炎、帶有鼻息肉之慢性鼻竇炎、斑禿、結節性癢疹、瘢痕瘤、大皰性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、IPF、硬皮病、全身性硬化症、及真菌角膜炎及非酒精性脂肪變性肝炎(NASH)、癌症、膀胱癌、乳癌、透明細胞腎癌、頭部/頸部鱗狀細胞癌、肺部鱗狀細胞癌、惡性黑色素瘤、非小細胞肺癌(NSCLC)、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎細胞癌、小細胞肺癌(SCLC)、三陰性乳癌、尿道上皮癌、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)或小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；血色素惡性疾病；急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)、EBV-陽性DLBCL、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤、富於T細胞/組織細胞之大B細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤(HL)、套細胞淋巴瘤(MCL)、多發性骨髓瘤(MM)、骨髓細胞白血病-1蛋白(Mcl-1)、骨髓發育不良症候群(MDS)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)及小淋巴球性淋巴瘤(SLL)；該藥劑包含治療量之如請求項1至41中任一項之抗體或如請求項42之醫藥組合物。
如請求項38至41中任一項之抗體或如請求項42之醫藥組合物或如請求項43之治療方法或如請求項44之藥劑，其中該抗體、醫藥組合物或藥劑係皮下投與。
如請求項38至41中任一項或請求項45之抗體或如請求項42或請求項45之醫藥組合物或如請求項43或請求項45之治療方法或如請求項44或請求項45之藥劑，其中該抗體、該醫藥組合物或該藥劑係約一週兩次、一週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、一月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。
一種經分離之核酸，其選自由以下組成之群： (i) 編碼結合IL-4之抗體之IL4-VH、IL4-VL或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 200之核酸序列、SEQ ID NO: 201之核酸序列或兩者； (ii) 編碼結合IL-4之抗體的攜帶IL4-VH的多肽、攜帶IL4-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 188之核酸序列、SEQ ID NO: 189之核酸序列或兩者； (iii) 編碼結合IL-4之抗體之IL4-VH、IL4-VL或兩者，且其中該核酸包含：由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127198之質體編碼的序列的核酸序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127197之質體編碼的序列的核酸序列或兩者； (iv) 編碼結合IL-4之抗體之攜帶IL4-VH的多肽、攜帶IL4-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體的核酸序列，及在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127194之質體或兩者； (v) 編碼結合IL-13之抗體之IL13-VH、IL13-VL或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 198之核酸序列、SEQ ID NO: 199之核酸序列或兩者； (vi) 編碼結合IL-13之抗體之攜帶IL13-VH的多肽、攜帶IL13-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 187之核酸序列、SEQ ID NO: 188之核酸序列或兩者； (vii) 編碼結合IL-13之抗體之IL13-VH、IL13-VL或兩者，且其中該核酸包含：由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127196之質體編碼的序列的核酸序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127195之質體編碼的序列的核酸序列或兩者； (viii) 編碼結合IL-13之抗體之攜帶IL13-VH的多肽、攜帶IL13-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127193之質體的核酸序列，及在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127192之質體或兩者； (ix) 編碼結合TSLP之抗體之TSLP-VH、TSLP-VL或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 204之核酸序列、SEQ ID NO: 205之核酸序列或兩者； (x) 編碼結合TSLP之抗體之攜帶TSLP-VH的多肽、攜帶TSLP-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 192之核酸序列、SEQ ID NO: 193之核酸序列或兩者； (xi) 編碼結合TSLP之抗體之TSLP-VH、TSLP-VL或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 204之核酸序列、SEQ ID NO: 217之核酸序列或兩者； (xii) 編碼結合TSLP之抗體之TSLP-VH、TSLP-VL或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 204之核酸序列、SEQ ID NO: 218之核酸序列或兩者； (xiii) 編碼結合TSLP之抗體之TSLP-VH、TSLP-VL或兩者，且其中該核酸包含：由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127200之質體編碼的序列的核酸序列，及由在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127199之質體編碼的序列的核酸序列或兩者； (xiv) 編碼結合TSLP之抗體之攜帶TSLP-VH的多肽、攜帶TSLP-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127202之質體的核酸序列，及在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127201之質體或兩者； (xv) 編碼結合p40之抗體之攜帶p40-VH的多肽、攜帶p40-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 195之核酸序列、SEQ ID NO: 194之核酸序列或兩者；及 (xvi) 編碼結合p40之抗體之攜帶p40-VH的多肽、攜帶p40-VL的多肽或兩者，且其中該核酸包含：在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127206之質體的核酸序列，及在ATCC寄存且具有ATCC寄存編號PTA-127205之質體或兩者。
一種載體，其包含如請求項47之聚核苷酸。
一種經分離之宿主細胞，其包含如請求項47之經分離之核酸或如請求項48之載體。
一種產生經分離之抗體之方法，其包含在引起該抗體產生之條件下培養如請求項49之宿主細胞且回收該抗體。
如請求項50之方法，其中該經分離之抗體為包含雙Fab臂及單Fab臂之雜三聚抗體，其中該雙Fab臂包含連接至與第一Fc域連接之第二Fab域之第一Fab域，且該單Fab臂包含連接至第二Fc域之第三Fab域，且該方法包含 (i) 第一預組裝步驟，其中該雙Fab臂在第一預組裝調節緩衝液中在2℃至10℃之間的溫度下培育且其中該第一預組裝調節緩衝液之pH比該雙Fab臂之等電點(pI)低1至3個單位；及 (ii) 第二預組裝步驟，其中該單Fab臂在第二預組裝調節緩衝液中在2℃至10℃之間的溫度下培育且其中該第二預組裝調節緩衝液之pH比該單Fab臂之等電點(pI)低1至3個單位；及 (iii) 第三組裝步驟，其中來自步驟(i)及(ii)之該雙Fab臂及該單Fab臂在組裝緩衝液中混合在一起持續1至24小時。