TW202413425A

TW202413425A - 抗il27r抗體及其使用方法

Info

Publication number: TW202413425A
Application number: TW112129032A
Authority: TW
Inventors: 萊爾德布倫; 軼潔郜; 尼可拉斯安德魯馬茲
Original assignee: 美商輝瑞大藥廠
Priority date: 2022-08-03
Filing date: 2023-08-02
Publication date: 2024-04-01

Abstract

本發明係關於特異性結合IL27RA及gp130中之一者或兩者的抗體。本發明進一步關於特異性結合IL27RA及gp130之雙特異性抗體。本發明亦關於相關分子，例如編碼此類抗體或雙特異性抗體之核酸；組合物；及相關方法，例如用於產生及純化此類抗體及雙特異性抗體之方法；及其用於診斷及治療之用途。

Description

抗IL27R抗體及其使用方法

發炎性腸病(IBD)，包括克羅恩氏病(Crohn's disease，CD)及潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis，UC)，係指腸之特發性慢性發炎性病症的集合。克羅恩氏病涉及迴腸及結腸，但其可通常不連續地影響腸之任何區域。潰瘍性結腸炎以不間斷之模式涉及直腸、部分結腸或整個結腸(全結腸炎(pancolitis))。IBD之發病機制仍不明確，但認為係多因素的，包括基因及環境組分，其中對共生細菌及/或食品抗原之異常免疫反應可構成中心部分。因此，為患者研發出用於調節過度免疫反應的高效治療方法係一個重要的尚未得到滿足的需求(Hazel K及O'Connor A. Emerging treatments for inflammatory bowel disease. Therapeutic Advances in Chronic Disease. 2020, 第11卷: 1-12)。

介白素(IL)-27為IL-12細胞介素家族中之雜二聚細胞介素。其由兩個子單元構成：埃-巴二氏病毒誘導之基因3 (Epstein-Barr virus-induced gene 3，EBi3)及IL-27p28。IL-27在結合其雜二聚受體之後發揮免疫調節作用，該受體含有IL-27選擇性子單元，IL27RA；及為多個信號傳導受體共有之子單元，醣蛋白130 (gp130)。已在T細胞、單核球、巨噬細胞、樹突狀細胞、結腸上皮細胞、角質細胞等上驗證兩種受體子單元之共表現。兩種受體子單元之接合直接活化JAK1、JAK2及Tyk2激酶，且誘導信號轉導子及轉錄活化因子(signal transducers and activators of transcription，STAT)之酪胺酸磷酸化，其形成均二聚體或雜二聚體且易位至細胞核中以調節基因表現。除Jak/STAT信號傳導路徑之外，亦報導IL-27在某些細胞環境下誘導p38MAPK、ERK及Akt信號傳導(Hunter CA及Kastelein R. Fifteen years of interleukin-27- discovery, advances and translation. Immunity. 2012年12月14日; 37(6): 960-969)。

IL-27已暗指為多個研究中IBD療法之候選。一項早發型IBD之全基因體關聯研究鑑別出北美洲-歐洲群體之易感性基因座(locus)內之IL-27。為了支撐彼結論，作者亦證明，具有兩個風險對偶基因之複本的健康個體相對於具有兩個非風險對偶基因之複本的個體表現顯著較少IL-27，且自具有早發型CD及UC病例之個體獲得之樣品中的IL-27結腸基因表現與在正常組織中相比顯著較低。Imielinski M、Baldassano RN及Griffiths A,等人,. Common variants at five new loci associated with early-onset inflammatory bowel disease. Nat Genet. 2009年12月; 41(12): 1335-1340。IL-27多形現象(polymorphism)亦與中國及韓國群體中IBD風險相關。Wang Z、Wang L、Fan R,等人Association of IL-27 gene three polymorphisms with Crohn's disease susceptibility in a Chinese Han population. Int J Clin Exp Pathol. 2014; 7(12):8952-8957及Li CS、Zhang Q、Lee KJ, 等人Interleukin-27 polymorphisms are associated with inflammatory bowel diseases in a Korean population. J Gastroenterol Hepatol. 2009; 24(10):1692-1696。

已展示IL-27改善了小鼠模型中之結腸炎，其通過IL-27投與及經由抗炎及抗菌基因之轉錄活化而直接促進腸上皮障壁功能來減輕所誘導之結腸發炎，且相反地，其通過歸因於基因剔除(genetic knockout)而缺乏IL-27Rα之小鼠中更嚴重的結腸炎得到證實。Hanson ML、Hixon JA及Li W, 等人, Oral Delivery of IL-27 Recombinant Bacteria Attenuates Immune Colitis in Mice. Gastroenterology 2014; 146:210-221；Troy AE、Zaph C及Du Y, 等人,. IL-27 Regulates Homeostasis of the Intestinal CD4_ Effector T Cell Pool and Limits Intestinal Inflammation in a Murine Model of Colitis. JI, 2009, 183: 2037-2044；Diegelmann J、Olszak T及Göke B, 等人,c. A Novel Role for Interleukin-27 (IL-27) as Mediator of Intestinal Epithelial Barrier Protection Mediated via Differential Signal Transducer and Activator of Transcription (STAT) Protein Signaling and Induction of Antibacterial and Anti-inflammatory Proteins. JBC. 2012, 287(1), 第286-298頁。更特定言之，已展示表現IL-27之食品級細菌乳酸乳球菌屬(LL-IL-27)的黏膜投與或用IL-27之皮下處理可保護小鼠免受小腸結腸炎(enterocolitis)以及T細胞轉移誘導之結腸炎及2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)誘導之結腸炎模型中的死亡。Hanson ML、Hixon JA及Li W, 等人,. Oral Delivery of IL-27 Recombinant Bacteria Attenuates Immune Colitis in Mice. Gastroenterology 2014; 146:210-221；Sasaoka T、Ito M及Yamashita J, 等人,. Treatment with IL-27 attenuates experimental colitis through the suppression of the development of IL-17-producing T helper cells. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2011, 300: G568-G576；Andrews C、McLean MH及Durum SK. IL-27 as a novel therapy for inflammatory bowel disease: a critical review of the literature. Inflamm Bowel Dis. 2016年9月; 22(9): 2255-2264。

已表明IL-27作為潛在治療方法對除IBD以外之多種自體免疫病狀(包括哮喘及過敏性疾病)的作用。[11, 12]諸如肥胖症及2型糖尿病之代謝病症亦將為值得考慮的有吸引力的治療領域，其中IL-27促效作用可為有益的。[13]

對於用以治療或改善包括UC及CD之IBD以及用以治療其他自體免疫性病狀之新穎療法的需要長期未得到滿足。儘管IL27R暗指為治療包括UC及CD之IBD的目標，但當前無靶向IL27R之有效治療。本發明滿足此等需求。

本文提供結合於介白素受體子單元α (IL27RA)及醣蛋白130 (gp130)中之一或多者之抗體(包括其抗原結合片段)，包括特異性結合於IL27RA及gp130之雙特異性抗體及其他相關抗體，以及該等抗體及相關方法之用途。

本發明亦提供製造、製備及產生結合於IL27RA及gp130中之一或多種者之抗體，包括特異性結合於IL27RA及gp130之雙特異性抗體的方法。本發明之抗體適用於診斷、預防或治療由IL27活性介導或與其相關之病症或病狀中之一或多者，包括但不限於發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉(celiac disease)、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。

本發明進一步涵蓋抗體之表現，及包含本發明抗體之組合物的製備及製造，諸如使用該等抗體之藥劑。

聚核苷酸編碼結合於IL27RA及gp130中之一或多者之抗體，包括特異性結合於IL27RA及gp130之雙特異性抗體。亦提供編碼抗體重鏈或輕鏈或兩者之聚核苷酸。提供表現抗體之宿主細胞。提供使用該等抗體之治療方法。此類方法包括但不限於一或多種對與IL27表現及/或結合於IL27受體相關或由其介導之疾病的治療方法或預防方法。與IL27表現及/或結合於IL27受體相關或由其介導之疾病包括發炎性腸病(IBD)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，包含SEQ ID NO: 7之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 8之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，包含根據SEQ ID NO: 1之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 2之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 3之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 4之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 5之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 6之CDR-L3序列。

在一些實施例中，提供一種經分離抗體，其包含由SEQ ID NO: 31之核酸序列編碼的IL27RA-VH序列且包含由SEQ ID NO: 32之核酸序列編碼的IL27RA-VL序列。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，提供有一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID: 14之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，提供一種經分離抗體，其與包含具有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VH及具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之VL的第二抗體競爭結合於IL27RA。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合IL27RA之抗體之VH的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO 31之核酸序列。

在一些實施例中，提供一種編碼結合IL27RA之抗體之VL的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合IL27RA之抗體之VH及VL的分離聚核苷酸，其中編碼VH之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 31之核酸序列且編碼VL之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於醣蛋白130 (gp130)之經分離抗體，其包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，包含SEQ ID NO: 21之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 22之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，包含根據SEQ ID NO: 15之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 16之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 17之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 18之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 19之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 20之CDR-L3序列。

在一些實施例中，提供有一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，提供有一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，提供有一種經分離抗體，其與包含具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之VH及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之VL的第二抗體競爭結合於gp130。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合gp130之抗體之VH的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合gp130之抗體之VL的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合gp130之抗體之VH及VL的分離聚核苷酸，其中編碼VH之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列且編碼VL之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的分離聚核苷酸，且其中該聚核苷酸包含：SEQ ID NO: 37之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。

在一些實施例中，提供有一種編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的分離聚核苷酸，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 40之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。

在一些實施例中，提供有一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，提供有一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，提供有一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3； b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3； c. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 d. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，提供有一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的第一抗原結合位點VH、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的第一抗原結合位點VL、包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的第二抗原結合位點VH及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二抗原結合位點VL。

在一些實施例中，提供有一種結合於IL27RA及gp130兩者之抗體，其包含第一重鏈及第一輕鏈，以及第二重鏈及第二輕鏈，其中第一重鏈及第一輕鏈包含結合IL27RA之第一抗原結合位點，且第二重鏈及第二輕鏈包含結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗體重鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，第一抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，第二抗體重鏈包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且第二抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。

序列表之引用本申請案含有序列表，該序列表已按. xml格式以電子方式提交且以全文引用之方式併入本文中。2023年6月30日創建之該. xml複本命名為PC072877序列表ST26.xml且大小為72,523位元組。

藉由參考以下對本發明之實施例及其中所包括之實例的詳細描述可更容易理解本發明。應理解，本發明不限於特定的製造方法，其當然可以有所變化。亦應理解，本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的且不意欲為限制性的。

本文提供的本發明之例示性實施例(E)包括： E1. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，包含SEQ ID NO: 7之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 8之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； E2. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，包含根據SEQ ID NO: 1之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 2之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 3之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 4之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 5之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 6之CDR-L3序列。 E3. 如E1或E2之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之IL27RA-VH構架序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77。 E4. 如E1或E2之抗體，其包含衍生自人類生殖系DP54序列之IL27RA-VH構架序列。 E5. 如E1至E4中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列之IL27RA-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。 E5. 如E1至E4中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DPK9序列之IL27RA-VL構架序列。 E6. 如E1至E5中任一項之抗體，其包含IL27RA-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列，其中IL27RA-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列中之一者或兩者與其所衍生之人類生殖系序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E7. 如E1至E6中任一項之抗體，其包含IL27RA-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列，且其中IL27RA-VL構架序列或IL27RA-VH構架序列中之一或兩者與其所衍生之人類生殖系序列一致。 E8. 如E1至E7中任一項之抗體，其包含與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之IL27RA-VH序列，且包含與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之IL27RA-VL序列。 E9. 如E1至E8中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 7之IL27RA-VH序列，且包含SEQ ID NO: 8之IL27RA-VL序列。 E10. 如E1至E9中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 31之聚核苷酸序列編碼之IL27RA-VH序列。 E11. 如E1至E10中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO 32之核酸序列編碼之IL27RA-VL序列。 E12 一種經分離抗體，其包含由SEQ ID NO: 31之核酸序列編碼之IL27RA-VH序列且包含由SEQ ID NO: 32之核酸序列編碼之IL27RA-VL序列。 E13. 如E1至E12中任一項之抗體，其進一步包含Fc域，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之同型。 E14. 如E1至E13中任一項之抗體，其包含IgG同型之Fc域。 E15. 如E1至E14中任一項之抗體，其包含IgG ₁同型之Fc域。 E16. 如E13至E15中任一項之抗體，其中Fc域具有人類IgG1，其包含選自由以下組成之群的一或多個取代：按照EU編號之L234A、L235A及G237A (該群組亦可按照Kabat編號稱為L247A、L248A及G250A)，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E17. 如E16之抗體，其中抗體包含Fc域，其包含取代L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E18. 如E1至E17中任一項之抗體，其中抗體包含Fc域，其包含取代D221E及L368E (按照EU編號)或D234E及L381E (按照Kabat編號)；其中編號係根據人類IgG1野生型。 E19. 如E1至E17中任一項之抗體，其中抗體包含Fc域，其包含取代D221R及K409R (按照EU編號)或D234R及K422R (按照Kabat編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E20. 如E1至E19中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO 27之胺基酸序列之重鏈。 E21. 如E1至E20中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈。 E22. 如E1至E20中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈。 E23. 如E1至E22中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之輕鏈。 E24. 如E1至E23中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之輕鏈。 E25. 如E1至E24中任一項之抗體，其中抗體拮抗IL27RA。 E26. 如E1至E25中任一項之抗體，其中抗體促效IL27RA。 E27. 如E1至E25中任一項之抗體，其中抗體結合食蟹獼猴(cynomolgus) IL27RA。 E28. 如E1至E27之抗體，其中以SPR量測，抗體與食蟹獼猴IL27RA之結合KD在抗體與人類IL27RA之結合KD的10個數量級內。 E29. 一種經分離抗體，其與包含具有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之VH及具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之VL的第二抗體競爭結合於IL27RA。 E30. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量的如E1至E29中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E31 一種分離聚核苷酸，其編碼如E1至E29中任一項之抗體 E32. 如E31之聚核苷酸，其中該聚核苷酸為RNA。 E33. 如E32之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含至少一種化學修飾。 E34. 如E33之聚核苷酸，其中化學修飾係選自假尿苷、1-甲基假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲基尿苷、5-甲氧基尿苷及2'-O-甲基尿苷。 E35. 如E31之聚核苷酸，其中該聚核苷酸不包含化學修飾。 E35. 一種編碼結合IL27RA之抗體之VH的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO 31之核酸序列。 E36. 一種編碼結合IL27RA之抗體之VL的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列。 E37. 一種分離聚核苷酸，其編碼結合IL27RA之抗體之VH及VL，其中編碼VH之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 31之核酸序列且編碼VL之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列。 E38. 一種分離聚核苷酸，其編碼結合IL27RA之抗體之重鏈、輕鏈或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 33之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者。 E39. 一種分離聚核苷酸，其編碼結合IL27RA之抗體之重鏈、輕鏈或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 39之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者。 E40. 一種載體，其包含如E31至E39中任一項之聚核苷酸。 E41. 一種分離宿主細胞，其包含如E31至E39中任一項之聚核苷酸或如E40之載體。 E42. 一種產生經分離抗體之方法，其包含在引起抗體產生之條件下培養如E41之宿主細胞及回收抗體。 E43. 如E1至E29中任一項之抗體或如E30之醫藥組合物，其用作藥劑。 E44. 如E1至E29中任一項之抗體或如E30之醫藥組合物，其用於治療發炎性疾病。 E45. 如E1至E29中任一項之抗體或如E30之醫藥組合物，其用於治療選自由以下組成之群的一或多者：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E46. 如E1至E29中任一項之抗體或E30之醫藥組合物，其用於治療發炎性腸病(IBD)。 E47. 如E1至E29中任一項之抗體或如E30之醫藥組合物，其係用於根據E46之用途，其中該用途係用於治療克羅恩氏病(CD)或潰瘍性結腸炎(UC)。 E48. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如E1至E29中任一項之抗體或如E30之醫藥組合物。 E49. 如E48之方法，其中病狀係選自由以下組成之群：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E50. 如E48之方法，其中病狀為發炎性疾病。 E51. 如E48之方法，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E52. 如E48至E51中任一項之方法或如E43至E47之用途，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E53. 如E48至E51中任一項之方法或如E43至E47之用途，其中該抗體或醫藥組合物約一週兩次、每週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、每月兩次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E54. 一種如E1至E29中任一項之抗體的用途，其用於製造供用於治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症之藥劑。 E55. 一種如E1至E29中任一項之抗體的用途，其用於製造供用於治療發炎性疾病之藥劑。 E56. 如E54或E55之抗體的用途，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E57. 一種特異性結合於醣蛋白130 (gp130)之經分離抗體，其包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，包含SEQ ID NO: 21之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 22之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； E58. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，包含根據SEQ ID NO: 15之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 16之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 17之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 18之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 19之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 20之CDR-L3序列。 E59 如E57或E58之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之gp130-VH構架序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77 E60. 如E57至E59中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DP10序列之gp130-VH構架序列。 E61. 如E57至E60中任一項之抗體，其包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列之gp130-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9 E62. 如E57至E61中任一項之抗體，其包含衍生自人類生殖系DPK9序列之gp130-VL構架序列。 E63. E57至E62中任一項之抗體，其包含gp130-VL構架序列及gp130-VH構架序列，其中gp130-VL構架序列及gp130-VH構架序列中之一者或兩者與其所衍生之人類生殖系序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。 E64. 如E57至E63中任一項之抗體，其包含gp130-VL構架序列及gp130-VH構架序列，且其中gp130-VL構架序列或gp130-VH構架序列中之一者或兩者與其所衍生自之人類生殖系序列一致。 E65. 如E57至E64中任一項之抗體，包含與SEQ ID NO: 21至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的gp130-VH序列，且包含與SEQ ID NO: 22至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致的gp130-VL序列。 E66. 如E57至E65中任一項之抗體，其包含SEQ ID NO: 21之gp130-VH序列，且包含SEQ ID NO: 22之gp130-VL序列。 E67. 如E57至E66中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO: 35之核酸序列編碼之gp130-VH序列。 E68. 如E57至E67中任一項之抗體，其包含由SEQ ID NO 36之核酸序列編碼之gp130-VL序列。 E69 一種抗體，其包含由SEQ ID NO: 35之核酸序列編碼之gp130-VH序列且包含由SEQ ID NO: 36之核酸序列編碼之gp130-VL序列。 E70. 如E57至E69中任一項之抗體，其進一步包含Fc域，其中Fc域為IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)之同型。 E71. 如E70之抗體，其包含IgG同型之Fc域。 E72. 如E70或E71之抗體，其包含IgG ₁同型之Fc域。 E73. 如E72之抗體，其中Fc域具有人類IgG1，其包含選自L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)之一或多個取代，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E74. 如E73之抗體，其中抗體包含取代L234A、L235A、G237A (按照EU編號)或L247A、L248A、G250A (按照Kabat編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E75. 如E57至E74中任一項之抗體，其中Fc域包含取代D221E及L368E (按照EU編號)或D234E及L381E (按照Kabat編號)；其中編號係根據人類IgG1野生型。 E76. 如E57至E74中任一項之抗體，其中Fc域包含取代D221R及K409R (按照EU編號)或D234R及K422R (按照Kabat編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。 E77. 如E57至E76中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO 30之胺基酸序列之重鏈。 E78. 如E57至E77中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈。 E79. 如E57至E77中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之重鏈。 E80. 如E57至E79中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之輕鏈。 E81. 如E57至E80中任一項之抗體，其包含具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之輕鏈。 E82. 如E57至E81中任一項之抗體，其中其抗體拮抗gp130。 E83. 如E57至E82中任一項之抗體，其中抗體結合食蟹獼猴gp130。 E84. 如E57至E83之抗體，其中以SPR量測，抗體與食蟹獼猴gp130之結合KD在抗體與人類gp130之結合KD的3個數量級內。 E85. 一種經分離抗體，其與包含具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之VH及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之VL的第二抗體競爭結合於gp130。 E86. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量的如E57至E85中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E87. 一種分離聚核苷酸，其編碼如E57至E87中任一項之抗體。 E88. 如E87之聚核苷酸，其中該聚核苷酸為RNA。 E89. 如E88之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含至少一種化學修飾。 E90. 如E89之聚核苷酸，其中化學修飾係選自假尿苷、1-甲基假尿苷、N1-甲基假尿苷、N1-乙基假尿苷、2-硫代尿苷、4'-硫代尿苷、5-甲基胞嘧啶、2-硫代-1-甲基-1-去氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-假尿苷、2-硫代-5-氮雜-尿苷、2-硫代-二氫假尿苷、2-硫代-二氫尿苷、2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、4-甲氧基-假尿苷、4-硫代-1-甲基-假尿苷、4-硫代-假尿苷、5-氮雜-尿苷、二氫假尿苷、5-甲基尿苷、5-甲氧基尿苷及2'-O-甲基尿苷。 E91. 如E87或E88之聚核苷酸，其中該聚核苷酸不包含化學修飾。 E92. 一種編碼結合gp130之抗體之VH的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列。 E93. 一種編碼結合gp130之抗體之VL的分離聚核苷酸，其中聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列。 E94. 一種編碼結合gp130之抗體之VH及VL的分離聚核苷酸，其中編碼VH之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列且編碼VL之聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列。 E95. 一種分離聚核苷酸，其編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者，且其中該聚核苷酸包含：SEQ ID NO: 37之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。 E96. 一種分離聚核苷酸，其編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 40之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。 E97. 一種載體，其包含如E87-E96中任一項之聚核苷酸。 E98. 一種分離宿主細胞，其包含如E87至E96中任一項之聚核苷酸或如E97之載體。 E99. 一種產生經分離抗體之方法，其包含在引起抗體產生之條件下培養如E98之宿主細胞及回收抗體。 E100. 如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物，其用作藥劑。 E101. 如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物，其用於治療發炎性疾病。 E102. 如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物，其用於治療選自由以下組成之群的一或多者：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E103. 如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物，其用於治療發炎性腸病(IBD)。 E104. 如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物，其係用於根據E46之用途，其中該用途係用於治療克羅恩氏病(CD)或潰瘍性結腸炎(UC)。 E105. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如E57至E85中任一項之抗體或如E86之醫藥組合物。 E106. 如E105之方法，其中病狀係選自由以下組成之群：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E107. 如E105之方法，其中病狀為發炎性疾病。 E108. 如E106或E107之方法，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E109. 如E105至E108中任一項之方法或如E100至E104之用途，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E110. 如E105至E108中任一項之方法或如E100至E104之用途，其中該抗體或醫藥組合物約一週兩次、每週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、每月兩次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E111. 如E57至E85中任一項之抗體的用途，其用於製造供用於治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症之藥劑。 E112. 如E57至E85中任一項之抗體的用途，其用於製造供用於治療發炎性疾病之藥劑。 E113. 如E111或E112之抗體的用途，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E114. 如E113之抗體的用途，其中病狀為克羅恩氏病(CD)及潰瘍性結腸炎(UC)。 E115. 一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3。 E116. 一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。 E117. 一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3； b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3； c. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 d. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。 E118. 一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列之第一抗原結合位點VH、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列之第一抗原結合位點VL、包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之第二抗原結合位點VH及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之第二抗原結合位點VL。 E119. 如E115至E118中任一項之抗體，其中抗體為雙特異性抗體。 E120. 如E115至E119中任一項之抗體，其中抗體包含含有第一及第二Fc鏈之Fc域。 E121. 如E120之抗體，其中Fc域為IgA (例如IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgM或IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之同型。 E122. 如E120或E121之抗體，其中Fc域為IgG1 Fc域、IgG2 Fc域或IgG4 Fc域。 E123. 如E120至E122中任一項之抗體，其包含IgG1同型之Fc域 E124. 如E123之抗體，其中第一及第二Fc鏈在人類IgG1之位置234、235及237 (按照EU編號)處包含一或多個胺基酸修飾。 E124. 如E124之抗體，其中第一及第二Fc鏈包含選自IgG1之L234A、L235A及G237A (按照EU編號)的一或多個取代。 E125. 如E124之抗體，其中第一及第二Fc鏈包含IgG1之取代L234A、L235A及G237A (按照EU編號)。 E126. 如E120至E125中任一項之抗體，其中Fc域之第一Fc鏈及第二Fc鏈各自含有促進第一Fc鏈與第二Fc鏈結合的一或多個胺基酸修飾。 E127. 如E126之抗體，其包含第一及第二臂，其中： a. 第一臂包含第一抗原結合位點及第一Fc鏈，其中第一Fc鏈包含人類IgG1之位置221及409 (EU編號)處的胺基酸修飾，且 b. 第二臂包含第二抗原結合位點及第二Fc鏈，其中第二Fc鏈包含人類IgG1之位置221及368 (按照EU編號)處的胺基酸修飾。 E128. 如E126之抗體，其包含第一及第二臂，其中： a. 第一臂包含第一抗原結合位點及第一Fc鏈，其中第一Fc鏈包含人類IgG1之位置221及368 (EU編號)處的胺基酸修飾，且 b. 第二臂包含第二抗原結合位點及第二Fc鏈，其中第二Fc鏈包含人類IgG1之位置221及409 (按照EU編號)處的胺基酸修飾。 E129. 如E126之抗體，其包含第一及第二臂，其中： a. 第一臂包含第一抗原結合位點及第一Fc鏈，其中第一Fc鏈包含人類IgG1之取代D221R及K409R (按照EU編號)， b. 第二臂包含第二抗原結合位點及第二Fc鏈，其中第二Fc鏈包含人類IgG1之取代D221E及L368E (按照EU編號)。 E130. 如E126之抗體，其包含第一及第二臂，其中： a. 第一臂包含第一抗原結合位點及第一Fc鏈，其中第一Fc鏈包含人類IgG1之取代D221E及L368E (按照EU編號)。 b. 第二臂包含第二抗原結合位點及第二Fc鏈，其中第二Fc鏈包含人類IgG1之取代D221R及K409R (按照EU編號)。 E131. 一種結合於IL27RA及gp130兩者之抗體，其包含第一重鏈及第一輕鏈以及第二重鏈及第二輕鏈，其中第一重鏈及第一輕鏈包含結合IL27RA之第一抗原結合位點，且第二重鏈及第二輕鏈包含結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗體重鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，第一抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，第二抗體重鏈包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且第二抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。 E132. 如E115至E131中任一項之抗體，其中以SPR量測，抗體對IL27RA之結合親和力高於對gp130之結合親和力。 E133. 如E115至E132中任一項之抗體，其中以SPR量測，抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少10倍。 E134. 如E115至E133中任一項之抗體，其中以SPR量測，抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少100倍。 E135. 如E115至E134中任一項之抗體，其中以SPR量測，抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少1000倍。 E136. 如E115至E135中任一項之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以小於1 nM之親和力結合於人類IL27RA E137. 如E115至E136中任一項之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以小於1000 nM之親和力結合於人類gp130 E138. 如E115至E135中任一項之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以0.01 nm與5 nM之間、0.05 nm與1 nM之間或0.1與1 nM之間的親和力結合於人類IL27RA，且以10 nm與1000 nM之間、50 nm與1000 nM之間、100 nm與1000 nM之間、10 nm與500 nM之間或10 nm與250 nM之間的親和力結合於人類gp130 E139. 如E115至E135中任一項之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以0.1與5 nM之間的親和力結合於人類IL27RA且以50 nm與1000 nM之間的親和力結合於人類gp130。 E140. 如E115至E139中任一項之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以0.1與1 nM之間的親和力結合於人類IL27RA且以100 nm與500 nM之間的親和力結合於人類gp130 E141. 如E115至E140中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞螢光流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於10 nm之EC50。 E142. 如E115至E141中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於5 nm之EC50。 E143. 如E115至E142中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於1 nm之EC50。 E144. 如E115至E143中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於0.5 nm之EC50。 E145. 如E115至E144中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於在10 nm與0.01 nm之間、10 nm與0.1 nm之間、1 nm與0.01 nm之間或1 nm與0.1 nm之間的EC50。 E146. 如E115至E145中任一項之抗體，其中在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於在1 nm與0.1 nm之間的EC50 E147. 如E115至E146中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於1 nm之EC50。 E148. 如E115至E147中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於0.5 nm之EC50。 E149. 如E115至E148中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於10 nm、小於1 nm、小於0.5 nm、小於0.3 nm、小於0.1 nm之EC50。 E150. 如E115至E149中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於小於0.3 nm之EC50。 E151. 如E115至E150中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於在10 nm與0.01 nm之間、10 nm與0.1 nm之間、1 nm與0.01 nm之間或1 nm與0.1 nm之間的EC50。 E152. 如E115至E151中任一項之抗體，其中在CD3+ T細胞中之磷酸化STAT3的流式細胞量測分析中，抗體之特徵在於在1 nm與0.1 nm之間的EC50。 E153. 如E115至E152中任一項之抗體，其中抗體之特徵在於CD3+ T細胞中磷酸化STAT 1及STAT 3之活化。 E154. 如E115至E153中任一項之抗體，其中抗體結合食蟹獼猴IL27RA及食蟹獼猴gp130。 E155. 如E115至E154中任一項之抗體，其中抗體能夠下調病原性細胞介素產生。 E156. 如E155之抗體，其中抗體能夠下調T輔助細胞中之Il-17產生。 E157. 如E115至E156中任一項之抗體，其中以Il-17免疫分析量測，抗體之特徵在於小於0.05 nm之IC50。 E158. 如E115至E157中任一項之抗體，其中以Il-17免疫分析量測，抗體之特徵在於小於0.01 nm之IC50。 E159. 如E115至E158中任一項之抗體，其中以Il-17免疫分析量測，抗體之特徵在於在1 nm與0.0001 nm之間、1 nm與0.01 nm之間、0.1 nm與0.0001 nm之間、0.1 nm與0.001 nm之間、0.01 nm與0.0001 nm之間或0.01 nm與0.001 nm之間的IC50。 E160. 如E115至E159中任一項之抗體，其中以Il-17免疫分析量測，抗體之特徵在於在0.01 nm與0.001 nm之間的IC50。 E161. 如E115至E160中任一項之抗體，其中抗體能夠促進調節性T細胞分化。 E162. 如E161之抗體，其中調節性T細胞為天然Treg (nTreg)及誘導型Treg (iTreg)。 E163. 如E115至E162中任一項之抗體，其中抗體能夠上調吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)表現 E164. 如E115至E163中任一項之抗體，其中抗體能夠上調CD14+人類單核球及/或人類結腸上皮細胞(colonocyte)中之吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)表現。 E165. 如E115至E164中任一項之抗體，其中根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗體之特徵在於小於100nm之EC50。 E166. 如E115至E165中任一項之抗體，其中根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗體之特徵在於小於10nm之EC50。 E167. 如E115至E166中任一項之抗體，其中根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗體之特徵在於在100nm與0.1nm之間、100nm與1nm之間、10nm與0.1nm之間或10nm與1nm之間的EC50。 E168. 如E115至E167中任一項之抗體，其中根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗體之特徵在於在10nm與1nm之間的EC50。 E169. 一種醫藥組合物，其包含治療有效量的如E115至E168中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。 E170. 一種載體，其包含E37或E39之聚核苷酸。 E171. 一種載體，其包含E94或E96之聚核苷酸。 E172. 一種分離宿主細胞，其包含E37或E39之聚核苷酸或E170之載體。 E173. 一種分離宿主細胞，其包含E94或E96之聚核苷酸或E171之載體。 E174. 一種分離宿主細胞，其包含： i) E94或E96之聚核苷酸或E170之載體，及 ii) E94或E96之聚核苷酸或E171之載體。 E175. 如E115至E168中任一項之抗體或E169之醫藥組合物，其用於治療發炎性疾病。 E176. 如E115至E168中任一項之抗體或如E169之醫藥組合物，其用於治療選自由以下組成之群的一或多者：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E177. 如E115至E168中任一項之抗體或E169之醫藥組合物，其用於治療發炎性腸病(IBD)。 E178. 如E115至E168中任一項之抗體或E169之醫藥組合物，其用於根據E46之用途，其中該用途係用於治療克羅恩氏病(CD)或潰瘍性結腸炎(UC)。 E179. 一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如E115至E168中任一項之抗體或如E169之醫藥組合物。 E180. 如E179之方法，其中病狀係選自由以下組成之群：發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。 E181. 如E179之方法，其中病狀為發炎性疾病。 E182. 如E180或E181之方法，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E183. 如E179至E182中任一項之方法或E175至E178之用途，其包含皮下投與該抗體或醫藥組合物。 E184. 如E175至E183中任一項之方法或用途，其中該抗體或醫藥組合物約一週兩次、每週一次、每兩週一次、每三週一次、每四週一次、每五週一次、每六週一次、每七週一次、每八週一次、每九週一次、每十週一次、一月兩次、每月一次、每兩個月一次、每三個月一次或每四個月一次投與。 E185. 如E115至E168中任一項之抗體的用途，其用於製造用於治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症之藥劑。 E186. 如E115至E168中任一項之抗體的用途，其用於製造用於治療發炎性疾病之藥劑。 E187. 如E185或E186之抗體的用途，其中病狀為發炎性腸病(IBD)。 E188. 如E187之抗體的用途，其中病狀為克羅恩氏病(CD)及潰瘍性結腸炎(UC)。 E189. 一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中抗體對人類IL27RA之結合親和力比對人類gp130之抗體結合親和力低至少兩個數量級。 E190. 如E1至E189中任一項之抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中抗體對人類IL27RA之結合親和力比對人類gp130之抗體結合親和力低至少兩個數量級。 E191. 如E189至E190中任一項之抗體，其中抗體對人類IL27RA之結合親和力比對人類gp130之抗體結合親和力低至少三個數量級。 E192 如E189至E191之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以小於1nM之親和力結合於人類IL27RA。 E193. 如E189至E192之抗體，其中當由SPR量測時，抗體以大於100nM之親和力結合於人類gp130。不希望受任何特定理論束縛，抗體與IL27R子單元IL27RA結合而不與IL27R之gp130子單元接合起到了拮抗IL27受體的作用。 E194. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)。 E195. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)。 E196. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)序列。 E197. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)。 E198. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)。 E199. 一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列。 E200. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)。 E201. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)。 E202. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列。 E203. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-HC)。 E204. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)。 E205. 一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。 E206. 一種特異性結合於IL27RA及gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列。 E207. 一種特異性結合於IL27R及gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。 E208. 如E194至E207中任一項之經分離抗體，其進一步包含E1至E30、E43至E47、E57至E85、E100至E104、E115至E168、E175至E178、E189至E193中之任一項之抗體

本文所用之章節標題僅出於組織目的，且不應理解為限制所描述之主題。

本文所引用之所有參考文獻，包括專利申請案、專利公開案、UniProtKB登錄號，均以引用之方式併入本文中，如同具體地且單獨地指出各個別參考文獻以全文引用之方式併入本文中一般。

本文所描述或提及之技術及程序一般為熟習此項技術者充分理解且通常使用習知方法來採用，諸如以下文獻中所描述之廣泛利用的方法：Sambrook等人, Molecular Cloning: A Laboratory Manual 第3版(2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY (F. M. Ausubel, 等人編, (2003))；系列METHODS IN ENZYMOLOGY (Academic Press, Inc.): PCR 2: A PRACTICAL APPROACH (M. J. MacPherson、B. D. Hames及G. R. Taylor 編(1995))、Harlow及Lane,編(1988) ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL及ANIMAL CELL CULTURE (R. I. Freshney, 編(1987))；Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, 編, 1984)；Methods in Molecular Biology, Humana Press；Cell Biology: A Laboratory Notebook (J. E. Cellis, 編, 1998) Academic Press；Animal Cell Culture (R. I. Freshney), 編, 1987)；Introduction to Cell and Tissue Culture (J. P. Mather及P. E. Roberts, 1998) Plenum Press；Cell and Tissue Culture Laboratory Procedures (A. Doyle、J. B. Griffiths及D. G. Newell, 編, 1993-8) J. Wiley and Sons；Handbook of Experimental Immunology (D. M. Weir及C. C. Blackwell, 編)；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller及M. P. Calos, 編, 1987)；PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人, 編, 1994)；Current Protocols in Immunology (J. E. Coligan等人, 編, 1991)；Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)；Immunobiology (C. A. Janeway及P. Travers, 1997)；Antibodies (P. Finch, 1997)；Antibodies: A Practical Approach (D. Catty., 編, IRL Press, 1988-1989)；Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd及C. Dean, 編, Oxford University Press, 2000)；Using Antibodies: A Laboratory Manual (E. Harlow及D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999))；The Antibodies (M. Zanetti及J. D. Capra, 編, Harwood Academic Publishers, 1995)；及其更新版本。

定義除非本文中另外定義，否則結合本發明使用之科學與技術術語具有一般熟習此項技術者通常所瞭解之含義。

如本文所用，除非另外規定，否則單數形式「一(a)」、「一(an)」及「該(the)」包括複數個參考物。舉例而言，「一」抗體包括一或多種抗體。

當本發明之態樣或實施例根據馬庫西群組(Markush group)或其他替代群組進行描述時，本發明不僅涵蓋整體列出之全部群組，而且涵蓋獨立群組之各成員及主群組之所有可能子組，且亦涵蓋缺乏一或多個群組成員之主群組。本發明亦設想明確排除所主張之發明中之任何群組成員中之一或多者。

在術語「例如(e.g.)」或「例如(for example)」之後的任何實例並不意謂窮盡性或限制性。

如本文所用，當用於修改數值定義之參數(例如***之劑量)時，術語「約」意謂參數可在低於或高於該參數之所陳述數值變化多達10%。舉例而言，約5 mg之劑量意謂5% ± 10%，亦即，其可在4.5 mg與5.5 mg之間變化。

抗體「抗體」係指能夠經由位於免疫球蛋白分子之可變區中之至少一個抗原結合位點與目標，諸如多肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂質等特異性結合之免疫球蛋白分子。如本文所用，術語「抗體」可涵蓋任何類型之抗體(例如單特異性、雙特異性)，且包括保留與既定抗原結合之能力的完整抗體之部分(例如「抗原結合片段」)及包含抗原結合位點之免疫球蛋白分子的任何其他經修飾之組態。

抗體包括任何類別之抗體，諸如IgG、IgA或IgM (或其子類)，且抗體無需為任何特定類別。免疫球蛋白可視其重鏈(HC)之恆定區之抗體胺基酸序列而歸為不同類別。免疫球蛋白有五個主要類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中數個類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃、IgG ₄、IgA ₁及IgA ₂。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定區分別稱為α、δ、ε、γ及μ。不同類別之免疫球蛋白之子單元結構及三維組態為熟知的。

抗體抗原結合片段及經修飾組態之實例包括(i) Fab片段(由VL、VH、CL及CH1域組成之單價片段)；(ii) F(ab')2片段(包含兩個藉由鉸鏈區處之二硫橋鍵連接之Fab片段的二價片段)；及(iii)由抗體之單臂之VL及VH域組成的Fv片段。此外，儘管Fv片段之兩個域VL及VH係由獨立基因編碼，但其可使用重組方法藉由合成連接子接合，使得其能夠成為單一蛋白質鏈，其中VL及VH區配對以形成單價分子(稱為單鏈Fv (scFv))；參見例如Bird等人, Science 1988; 242:423-426及Huston等人, Proc. Natl. Acad. Sci. 1988 USA 85:5879-5883。亦涵蓋單鏈抗體之其他形式，諸如雙功能抗體。

另外，進一步涵蓋重鏈多肽上缺失C端離胺酸(K)胺基酸殘基的抗體(例如人類IgG1重鏈包含末端離胺酸)。如此項技術中已知，C端離胺酸有時在抗體產生期間經剪除，從而產生重鏈缺乏C端離胺酸之抗體。替代地，抗體重鏈可使用不包括C端離胺酸之核酸產生。

可變區抗體之「可變區」係指單獨或呈組合形式的抗體輕鏈之可變區或抗體重鏈之可變區。如此項技術中已知，重鏈及輕鏈之可變區各自由四個藉由亦稱為高變區之三個互補決定區(CDR)所連接之構架區(FR)組成，且促進形成抗體之抗原結合位點。若需要個體可變區之變體，尤其在CDR區外部(亦即，在構架區中)之胺基酸殘基取代之情況下，則可藉由比較個體可變區與含有與個體可變區相同規範類別之CDR1及CDR2序列之其他抗體的可變區來鑑別適當胺基酸取代，較佳保守胺基酸取代(Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 196(4): 901-917, 1987)。

在某些實施例中，CDR之確定性描繪及包含抗體之結合位點的殘基的鑑別藉由求解抗體之結構或求解抗體-配位體複合物之結構來實現。在某些實施例中，其可藉由熟習此項技術者已知之各種技術中任一者來實現，諸如X射線結晶法。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或估計CDR區。在某些實施例中，可採用各種分析方法以鑑別或估計CDR區。此類方法之實例包括但不限於Kabat定義、Chothia定義、AbM定義、接觸定義、擴展定義及構形定義。

Kabat定義為用於編號抗體中之殘基的標準且通常用於鑑別CDR區。參見例如Johnson及Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8。Chothia定義類似於Kabat定義，但Chothia定義考慮某些結構迴路區之位置。參見例如Chothia等人, 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17；Chothia等人, 1989, Nature, 342: 877-83。延伸定義為Kabat定義與Chothia定義之組合。AbM定義使用藉由Oxford Molecular Group所產生之模型化抗體結構之電腦程式的整合套件。參見例如Martin等人，1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272；「AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies,」 Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd。AbM定義使用知識資料庫與全始演算法之組合模型化來自一級序列之抗體的三級結構，該等方法諸如藉由以下所描述之彼等者：Samudrala等人，1999，「Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach」, PROTEINS, Structure, Function and Genetics增刊, 3:194-198。接觸定義係基於對可用複雜晶體結構之分析。參見例如MacCallum等人, 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45。在另一方法(在本文中稱為CDR之「構形定義」)中，CDR之位置可鑑別為向抗原結合貢獻焓之殘基。參見例如Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。雖然其他CDR邊界定義可不嚴格遵循以上方法中之一者，但仍然將與Kabat CDR之至少一部分重疊，但其可根據以下預測或實驗發現而縮短或延長：特定殘基或殘基組並不顯著影響抗原結合。如本文所用，CDR可指由此項技術中已知之任何方法，包括方法之組合所定義的CDR。本文所用之方法可利用根據此等方法中之任一者定義之CDR。對於含有超過一個CDR之任何既定實施例，CDR可根據Kabat定義、Chothia定義、延伸定義、AbM定義、接觸定義或構形定義中之任一或多者定義。

針對一致的抗體編號研發的 Pfabat 編號方法Pfabat編號方法係基於Kabat編號系統(Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第五版，Kabat等人, NIH公開案編號: 91-3242, 1991)之用於一致的抗體編號之定義演算法。不同於Kabat編號之許多其他計算實施方式，Pfabat對整個人類IgG1重鏈及輕鏈進行編號，包括恆定(C)區及重鏈鉸鏈。除非另外說明，否則本文所用之編號系統為Pfabat系統。

恆定區抗體之「恆定區」係指單獨或呈組合形式的抗體輕鏈之恆定區或抗體重鏈之恆定區。IgG重鏈恆定區含有三個依序免疫球蛋白域(CH1、CH2及CH3)，其中鉸鏈區位於CH1域與CH2域之間。IgG輕鏈恆定區含有單一免疫球蛋白域(CL)。

Fc 域及 Fc 鏈「Fc域」係指免疫球蛋白(Ig)分子中與藉由番木瓜蛋白酶消化Ig分子獲得之可結晶片段相關的部分。如本文所用，該術語係關於抗體之2-鏈狀恆定區，各鏈不包括第一恆定區免疫球蛋白域。在Fc域內，存在兩個「Fc鏈」(例如「第一Fc鏈」及「第二Fc鏈」)。「Fc鏈」一般係指抗體重鏈之C端部分。因此，Fc鏈係指IgA、IgD及IgG重鏈之最後兩個恆定區免疫球蛋白域(CH2及CH3)，及IgE及IgM重鏈之最後三個恆定區免疫球蛋白域，及視情況選用之此等域N端之可撓性鉸鏈。

雖然Fc鏈之邊界可變化，但人類IgG重鏈Fc鏈通常定義為包含殘基C226或P230至其羧基端，其中編號係根據Edelman等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1969; 63(1):78-85之EU索引及如Kabat等人, 1991中所描述。典型地，Fc鏈包含人類IgG1重鏈恆定區之約胺基酸殘基236至約447。「Fc鏈」可指分離狀態或在較大分子之情形中(例如在抗體重鏈或Fc融合蛋白中)的此多肽。

「功能性」Fc域係指具有天然序列Fc域之至少一種效應功能的Fc域。例示性「效應功能」包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)下調；及B細胞活化等。此類效應功能一般需要Fc域與結合域(例如抗體可變區)組合，且可使用此項技術中已知之用於評估此類抗體效應功能的各種分析加以評定。

「天然序列」Fc鏈係指包含與在自然界中發現的Fc鏈之胺基酸序列一致的胺基酸序列的Fc鏈。「變體」Fc鏈包含與天然序列Fc鏈之胺基酸序列相差至少一個胺基酸修飾的胺基酸序列。

單株抗體「單株抗體」(mAb)係指自單一複本或純系(包括例如任何真核、原核或噬菌體純系)衍生之抗體。單株抗體為高度特異性的，其針對單一抗原位點。此外，與典型地包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體的多株抗體製劑相反，各單株抗體針對抗原上之單一決定子。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群體獲得，且不應解釋為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，根據本發明所使用之單株抗體可藉由首先由Kohler及Milstein, 1975, Nature 256:495所描述之融合瘤方法製造，或可藉由諸如美國專利第4,816,567號中所描述之重組DNA方法製造。在另一實例中，單株抗體亦可自使用McCafferty等人，1990, Nature 348:552-554中所描述之技術生成的噬菌體庫中分離。

人類抗體「人類抗體」係指如下一種抗體，其胺基酸序列對應於由人類產生或已使用用於製備全人類抗體之任何技術製備的抗體的胺基酸序列。舉例而言，全人類抗體可藉由使用已經工程改造以表現特異性人類免疫球蛋白之可商購的小鼠或藉由製備全人類抗體之庫(例如噬菌體、酵母菌或核糖體)呈現技術獲得。人類抗體之此定義特別排除包含非人類抗原結合殘基之人源化抗體。

嵌合抗體「嵌合抗體」係指其中可變區序列衍生自一個物種且恆定區序列衍生自另一物種之抗體，諸如其中可變區序列衍生自小鼠抗體且恆定區序列衍生自人類抗體之抗體。

人源化抗體「人源化」抗體係指非人類(例如鼠類)抗體，其為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的嵌合抗體。較佳地，人源化抗體為具有所需特異性、親和力及能力之人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來自受體之CDR的殘基經來自諸如小鼠、大鼠或家兔之非人類物種(供體抗體)之CDR的殘基置換。人源化抗體可包含既不存在於受體抗體中亦不存在於所輸入之CDR或構架序列中之殘基，但包括該等殘基以進一步改進及最佳化抗體效能。

抗原「抗原」係指用於對免疫活性脊椎動物免疫接種以產生識別抗原之抗體或篩選表現庫(例如噬菌體、酵母或核糖體呈現庫等)以用於抗體選擇的分子實體。在本文中，抗原為較概括之稱呼，且一般意欲包括藉由抗體特異性識別之目標分子，因此包括用於產生抗體之免疫接種過程或用於選擇抗體之庫篩選中的分子之片段或模擬物。

抗原決定基「抗原決定基」係指抗體特異性結合之抗原的區域或區，例如包含與抗體相互作用之殘基的區域或區，藉由此項技術中熟知之任何方法所確定。此項技術中已知多種用於定位及表徵蛋白質上抗原決定基之位置的方法，包括求解抗體-抗原複合物之晶體結構、競爭分析、基因片段表現分析、抗原決定基定位及基於合成肽之分析，如例如Harlow及Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999之第11章中所描述。另外或替代地，在探索過程期間，抗體之產生及表徵可闡明關於所需抗原決定基之資訊。根據此資訊，隨後可競爭性篩選結合於相同抗原決定基之抗體。

另外，可在系統篩選中藉由使用衍生自抗原之重疊肽及測定抗體之結合來確定抗體所結合之抗原決定基。根據基因片段表現分析，編碼抗原之開放閱讀框架(open reading frame)可隨機地或藉由特異性基因構築片段化，且測定抗原之所表現片段與待測試之抗體的反應性。基因片段可例如藉由PCR產生，且隨後在放射性胺基酸存在下活體外轉錄且轉譯成蛋白質。隨後藉由免疫沈澱及凝膠電泳測定抗體與放射性標記之抗原片段的結合。

某些抗原決定基亦可藉由使用呈現於噬菌體粒子(噬菌體庫)或酵母(酵母呈現)之表面上之隨機肽序列的大型庫來鑑別。替代地，可在簡單結合分析中測試重疊肽片段之所定義文庫與測試抗體的結合。在一額外實例中，可進行抗原之突變誘發、域交換實驗及丙胺酸掃描突變誘發以鑑別抗原決定基結合所需、足夠或必需的殘基。

在其最詳細之程度上，用於抗原與抗體之間相互作用之抗原決定基可藉由定義存在於抗原-抗體相互作用中之原子觸點之空間座標以及關於其對結合熱力學之相對貢獻的資訊來定義。在較不詳細之程度上，抗原決定基可藉由定義抗原與抗體之間原子觸點的空間座標來表徵。在更不詳細之程度上，抗原決定基可藉由其所包含之胺基酸殘基表徵，如由特定準則所定義，例如藉由抗體與抗原中之原子(例如重原子，亦即非氫原子)之間的距離表徵。在更不詳細之程度上，抗原決定基可藉由功能，例如藉由與其他抗體之競爭結合來表徵。抗原決定基亦可更一般地定義為包含胺基酸殘基，對於該等胺基酸殘基，經另一胺基酸取代將更改抗體與抗原之間的相互作用之特徵(例如使用丙胺酸掃描)。

根據視所使用之抗原決定基定位法而定，在不同細節程度下獲得抗原決定基之描述及定義的事實，由此得出可類似地在不同細節程度下執行對同一抗原上之不同抗體之抗原決定基的比較。

若以例如由X射線結晶法、核磁共振(NMR)光譜法、氫/氘交換質譜法(H/D-MS)測定之胺基酸水準進行描述之抗原決定基含有相同胺基酸殘基組，則稱該等抗原決定基為一致的。若抗原決定基共用至少一個胺基酸，則將該等抗原決定基稱為重疊的。若抗原決定基不共用胺基酸殘基，則將該等抗原決定基稱為獨立(獨特)的。

可用於表徵抗體之另一方法為使用與已知結合至相同抗原之其他抗體的競爭分析，以確定所關注之抗體是否與其他抗體結合至相同的抗原決定基。競爭分析已為熟習此項技術者所熟知的。若對應抗體之結合為相互獨佔式的，亦即一個抗體之結合排除另一抗體之同時或連續結合，則稱特徵在於競爭結合之抗原決定基為重疊的。若抗原能夠同時容納兩個對應抗體之結合，則稱抗原決定基為獨立(獨特)的。

抗原決定基可為線性或構形的。在線性抗原決定基中，蛋白質與相互作用分子(諸如抗體)之間的所有相互作用點沿著蛋白質之一級胺基酸序列線性存在。「非線性抗原決定基」或「構形抗原決定基」包含在對抗原決定基具有特異性之抗體所結合之抗原蛋白質內的非連續多肽(或胺基酸)。

結合親和力術語「結合親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用之總和強度。除非另外指明，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間1:1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(K _D)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法來量測。低親和力抗體一般緩慢結合抗原且傾向於容易解離，而高親和力抗體一般較快結合抗原且傾向於較長時間保持結合狀態。特定言之，術語「結合親和力」意欲指特定抗原-抗體相互作用之解離速率。K _D為解離速率(rate of dissociation)，亦稱為「解離速率(off-rate) (k _off)」或「k _d」相對於締合速率(association rate) (或「締合速率(on-rate) (k _on)」)或「k _a」之比率。因此，K _D等於k _off/k _on(或k _d/k _a)且表示為莫耳濃度(M)。因此K _D愈小則結合親和力愈強。因此，相較於1 nM之K _D，1 μM之K _D指示更弱的結合親和力。抗體之K _D值可使用此項技術中沿用已久之方法測定。一種用於測定抗體之K _D的例示性方法為藉由使用表面電漿子共振(SPR)，通常使用諸如BIACORE系統之生物感測器系統。BIACORE動力學分析包含分析抗原與在表面上具有固定分子(例如包含抗原決定基結合域之分子)之晶片的結合及解離。另一種用於測定抗體之K _D的方法係藉由使用生物層干涉量測術(Bio-Layer Interferometry)，通常使用OCTET ^®技術(Octet QK ^e系統，ForteBio)。替代地或另外，亦可使用動力排除分析(Kinetic Exclusion Assay，KinExA分析)，其可獲自Sapidyne Instruments (Boise, ID)。

單特異性抗體「單特異性抗體」係指每分子包含一或多個抗原結合位點以使得抗體之任何及所有結合位點特異性識別抗原上之相同抗原決定基的抗體。因此，在單特異性抗體具有超過一個抗原結合位點之情況下，結合位點彼此競爭與一個抗原分子結合。

雙特異性抗體「雙特異性抗體」係指對至少兩種不同抗原決定基具有結合特異性的分子。在一些實施例中，雙特異性抗體可同時結合兩個不同抗原。在其他實施例中，兩個不同抗原決定基可存在於同一抗原上。

半最大有效濃度 ( EC ₅₀ )術語「半最大有效濃度(EC ₅₀)」係指在指定暴露時間之後引起介於基線與最大值之間的一半反應的治療劑之濃度。治療劑可引起抑制或刺激。EC ₅₀值常用，且在本文中用作效能之量度。

促效劑「促效劑」係指促進(亦即，誘導、引起、增強或增加)另一分子之生物活性或作用的物質。術語促效劑涵蓋與分子結合以促進該分子之活性的物質(諸如抗體)。

拮抗劑「拮抗劑」係指防止、阻斷、抑制、中和或降低另一分子(諸如受體)之生物活性或作用的物質。術語拮抗劑涵蓋與分子結合以防止或降低該分子之活性的物質(諸如抗體)。

競爭如本文所用，關於抗體之術語「競爭」意謂第一抗體以足夠類似於第二抗體之結合的方式與抗原決定基結合，以使得在第一抗體存在下第二抗體與其同源抗原決定基之結合的結果相較於在不存在第一抗體下的第二抗體之結合可偵測地降低。替代方案可能但不必如此：在第二抗體存在下第一抗體與其抗原決定基之結合亦可偵測地減少。亦即，在第二抗體不抑制第一抗體與其各別抗原決定基之結合的情況下，第一抗體可抑制第二抗體與其抗原決定基之結合。然而，當各抗體無論在相同、較大或較小的程度上可偵測地抑制另一抗體與其同源抗原決定基或配位體之結合時，該等抗體稱為彼此「交叉競爭」結合其各別抗原決定基。本發明涵蓋競爭及交叉競爭抗體兩者。無論此類競爭或交叉競爭發生之機制(例如位阻、構形變化或結合於共同抗原決定基或其部分)如何，熟練技術人員基於本文所提供之教示內容將瞭解，此類競爭或交叉競爭抗體涵蓋於且可適用於本文所揭示之方法中。

Fc 受體「Fc受體」 (FcR)係指結合於抗體之Fc區的受體。在一些實施例中，FcR為天然人類FcR。在一些實施例中，FcR為結合IgG抗體之FcR (γ受體)且包括FcgRI、FcgRII及FcgRIII子類之受體，包括彼等受體之對偶基因變體及交替剪接形式。FcgRII受體包括FcgRIIA (「活化受體」)及FcgRIIB (「抑制受體」)，其具有主要在其細胞質域方面不同之類似胺基酸序列。活化受體FcgRIIA在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之活化模體(ITAM)。抑制受體FcgRIIB在其細胞質域中含有基於免疫受體酪胺酸之抑制模體(ITIM) (參見例如Daeron, Annu. Rev. Immunol. 1997; 15:203-234)。FcR綜述於例如Ravetch及Kinet, Annu. Rev. Immunol 1991; 9:457-92；Capel等人, Immunomethods 1994; 4:25-34；及de Haas等人, J. Lab. Clin. Med. 1995; 126:330-41中。其他FcR，包括將來待鑑別之FcR，由本文中之術語「FcR受體」涵蓋。術語「Fc受體」亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人, J. Immunol. 1976; 117:587及Kim等人, J. Immunol. 1994; 24:249)及調節免疫球蛋白之內穩定。量測與FcRn之結合的方法為已知的(參見例如Ghetie及Ward., Immunol. Today 1997; 18(12):592-598；Ghetie等人, Nature Biotechnology, 1997; 15(7):637-640；Hinton等人, J. Biol. Chem. 2004; 279(8):6213-6216；WO 2004/92219)。

效應細胞「效應細胞」係指表現一或多種FcR且執行效應功能之白血球。在某些實施例中，效應細胞至少表現FcgRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之白血球的實例包括周邊血液單核細胞(PBMC)、自然殺手(NK)細胞、單核球、巨噬細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性白血球。效應細胞可自天然來源，例如自血液分離。

抗體依賴性細胞介導之細胞毒性 ( ADCC )術語「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指一種細胞毒性形式，其中分泌之Ig結合至某些細胞毒性細胞(例如NK細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)上所存在的Fc受體(FcR)上，使得此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合至攜有抗原之目標細胞且隨後用細胞毒素殺滅該目標細胞。用於介導ADCC之初代細胞NK細胞僅表現FcgRIII，而單核球表現FcgRI、FcgRII及FcgRIII。為評估所關注分子之ADCC活性，可進行活體外ADCC分析，諸如美國專利第5,500,362號、第5,821,337號或第6,737,056號中所描述。可用於此類分析的效應細胞包括PBMC及NK細胞。替代地或另外，可活體內(例如在動物模型中，諸如Clynes等人, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 1998; 95:652-656中所揭示之動物模型)評估所關注分子之ADCC活性。具有變化之Fc區胺基酸序列及提高或降低之ADCC活性的額外抗體描述於例如美國專利第7,923,538號及美國專利第7,994,290號中。

增強之 ADCC 活性術語「增強之ADCC活性」係指與親本抗體相比在活體外或活體內更有效介導ADCC之抗體，其中該抗體與親本抗體在至少一個結構態樣中不同，且當用於分析中時，此類抗體與親本抗體之量基本上相同。在一些實施例中，抗體及親本抗體具有相同胺基酸序列，但抗體經去岩藻醣基化而親本抗體經岩藻醣基化。在一些實施例中，將使用活體外ADCC分析測定ADCC活性，但涵蓋用於測定ADCC活性之其他分析或方法，例如在動物模型中等。在一些實施例中，具有增強之ADCC活性的抗體對FcgRIIIA具有增強之親和力。

變化之 FcR 結合或 ADCC 活性術語「變化之」FcR結合親和力或ADCC活性係指與親本抗體相比，對FcR結合活性或ADCC活性中之一或多者具有增強或減弱之活性的抗體，其中該抗體與親本抗體在至少一個結構態樣中不同。「展示」與FcR「提高之結合」的抗體以比親本抗體更高之親和力結合至少一種FcR。「展示」與FcR「減少之結合」的抗體以比親本抗體更低之親和力結合至少一種FcR。相比於天然序列IgG Fc區，展示與FcR之結合減少的此類抗體與FcR可具有極少結合或無明顯結合，例如0-20百分比結合於FcR。

補體依賴性細胞毒性 ( CDC )術語「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下目標細胞之溶解。經典補體路徑之活化係藉由補體系統之第一組分(Clq)與(適當子類之)抗體結合起始，該等抗體與其同源抗原結合。為評定補體活化，可進行CDC分析，例如Gazzano-Santoro等人, J. Immunol. Methods 1996; 202: 163中所描述。例如在美國專利第6,194,551號、美國專利第7,923,538號、美國專利第7,994,290號及WO 1999/51642中描述具有變化之Fc區胺基酸序列及提高或降低之Clq結合能力的抗體。

宿主細胞「宿主細胞」係指個別細胞或細胞培養物，其可為或已成為用於聚核苷酸插入物併入之載體的受體。宿主細胞包括單個宿主細胞之子代，且子代可能由於自然、偶然或有意突變而不一定與原始母細胞完全一致(在形態或基因體DNA補體方面)。宿主細胞包括經本發明之聚核苷酸活體內轉染之細胞。

載體「載體」係指構築體，其能夠在宿主細胞中遞送且較佳表現一或多種所關注之基因或序列(例如抗體編碼基因)。載體之實例包括但不限於質體及病毒載體，且可包括裸核酸，或可包括與遞送輔助材料(例如陽離子縮合劑、脂質體等)相關之核酸。載體可包括DNA或RNA。如本文所用，「表現載體」係指包括與基因之轉錄或轉譯相關的至少一個多肽編碼基因、至少一個調節元件(例如啟動子序列、聚腺苷酸序列)的載體。通常，本文所用之載體含有至少一種抗體編碼基因，以及調節元件或可篩選標記中之一或多者。載體組分可包括例如以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記基因；適合之轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於轉譯，亦可包括一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位點、轉譯起始位點及終止密碼子。

分離「分離」分子(例如抗體)係指如下分子：藉助於其來源或衍生源(1)不與在其天然狀態下伴隨其之天然結合組分結合；(2)實質上不含來自同一來源(例如物種、表現其之細胞、庫等)之其他分子；(3)由來自不同物種之細胞表現；或(4)不在自然界中出現。因此，經化學合成或在與天然來源之系統不同之細胞系統中表現的分子將與其天然結合組分「分離」。使用此項技術中熟知之純化技術，藉由分離亦可使分子實質上不含天然結合組分。

多肽 / 蛋白質「多肽」或「蛋白質」(在本文中可互換使用)係指任何長度之胺基酸鏈。鏈可為直鏈或分支鏈。鏈可包含一或多個經修飾之胺基酸。該等術語亦涵蓋已經過天然修飾或藉由干預修飾之胺基酸鏈；例如形成雙硫鍵、醣基化、脂質化、乙醯化、磷酸化或諸如與標記組分結合之任何其他操縱或修飾。該定義亦包括例如含有一或多個胺基酸類似物(包括例如非天然胺基酸等)，以及此項技術中已知之其他修飾之多肽。應理解，多肽可呈單一鏈或結合鏈出現。

聚核苷酸 / 核酸「聚核苷酸」或「核酸」(在本文中可互換使用)係指任何長度之核苷酸鏈，且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾之核苷酸或鹼基或其類似物，或任何可藉由DNA或RNA聚合酶併入鏈中之受質。聚核苷酸可包含經修飾之核苷酸，諸如甲基化核苷酸及其類似物。若存在，則可在鏈組裝之前或之後對核苷酸結構進行修飾。核苷酸序列可間雜有非核苷酸組分。聚核苷酸可進一步在聚合之後，諸如藉由與標記組分結合而修飾。其他類型之修飾包括例如「帽」、一或多個天然存在之核苷酸經類似物取代、核苷酸間修飾，諸如例如：具有不帶電荷鍵聯(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、胺基磷酸酯、胺基甲酸酯等)之彼等修飾，及具有帶電荷鍵聯(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)之彼等修飾；含有側接部分，諸如蛋白質(例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、聚-L-離胺酸等)之彼等修飾；具有嵌入劑(例如吖啶、補骨脂素(psoralen)等)之彼等修飾；含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼(boron)、氧化金屬等)之彼等修飾；含有烷基化劑之彼等修飾；具有經修飾之鍵聯(例如α變旋異構核酸等)的彼等修飾；以及未經修飾形式之聚核苷酸。此外，一般存在於糖中之任何羥基可例如藉由膦酸酯基、磷酸酯基置換，藉由標準保護基保護，或經活化，以製備與額外核苷酸之額外鍵聯，或可結合至固體支撐物。5'及3'末端OH可經磷酸化或經胺或1至20個碳原子之有機封端基團部分體取代。其他羥基亦可衍生化為標準保護基。聚核苷酸亦可含有此項技術中一般已知之類似形式的核糖或去氧核糖，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-疊氮基-核糖、碳環糖類似物、α-或β-變旋異構糖、差向異構糖(諸如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖)；哌喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖(sedoheptulose)、非環類似物及無鹼基核苷類似物(諸如甲基核糖苷)。

保守取代「保守取代」係指由生物學上、化學上或結構上類似之殘基置換一個胺基酸。生物學上類似意謂取代基不破壞生物活性。結構上類似意謂胺基酸具有類似長度之側鏈(諸如丙胺酸、甘胺酸及絲胺酸)或類似尺寸。化學相似性意謂殘基具有相同電荷或均為親水性或疏水性的。特定實例包括一種疏水性殘基(諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一種，或一種極性殘基取代另一種，諸如精胺酸取代離胺酸、麩胺酸取代天冬胺酸或麩醯胺酸取代天冬醯胺、絲胺酸取代蘇胺酸及類似取代。保守取代之特定實例包括一種疏水性殘基(諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一種，一種極性殘基取代另一種，諸如精胺酸取代離胺酸、麩胺酸取代天冬胺酸或麩醯胺酸取代天冬醯胺及類似取代。保守胺基酸取代通常包括例如以下基團內之取代：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、異白胺酸、白胺酸；天冬胺酸、麩胺酸；天冬醯胺酸、麩醯胺酸；絲胺酸、蘇胺酸；離胺酸、精胺酸；及苯丙胺酸、酪胺酸。

一致性術語「一致性」或「與...一致」係指聚合分子之間，例如核酸分子(例如DNA分子或RNA分子)之間或多肽分子之間的總體相關性。「一致性」量測間隙對準藉由電腦程式之特定數學模型(例如「演算法」)定址之兩個或更多個序列之間的一致匹配百分比，其為此項技術中熟知的。

兩個聚合分子之間的一致性百分比計算可由此類對準計算為NN/T*`100，其中N為序列共用一致殘基之位置數目，且T為所比較之包括間隙及包括或不包括懸垂(overhanging)序列之位置總數。在一個實施例中，懸垂序列包括於計算中。

術語「增加」、「提高」、「降低」或「減少」係指相對於基線量測值之值，諸如在開始本文所描述之治療之前相同個體之量測值，或在不存在本文所描述之治療情況下對照個體(individual或subject) (或多個對照個體)之量測值。在一些實施例中，「對照個體」為罹患與所治療之個體相同形式的疾病或損傷之個體。在一些實施例中，「對照個體」為未罹患與所治療之個體相同形式之疾病或損傷的個體。

賦形劑術語「賦形劑」係指與所關注的活性成分(例如抗體)組合，允許活性成分保留生物活性之任何材料。賦形劑之選擇將在很大程度上視諸如投與模式、賦形劑對溶解性及穩定性之影響及劑型性質之因素而定。如本文所用，「賦形劑」包括生理學上相容的任何及所有溶劑、分散介質、包衣、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑、載劑、稀釋劑及其類似物。賦形劑之實例包括水、鹽水、磷酸鹽緩衝鹽水、右旋糖、甘油、乙醇及其類似物中之一或多者以及其組合，且在組合物中可包括等張劑，例如糖、氯化鈉或多元醇(諸如甘露糖醇或山梨糖醇)。

治療術語「治療(treating)」、「治療(treat)」或「治療(treatment)」係指任何類型之治療，諸如用於緩解、減輕或減緩患者之疾病、病症或病狀或與疾病相關之任何組織損傷的進展。在一些實施例中，疾病、病症或病狀為發炎性腸病(IBD)。在一些實施例中，疾病、病症或病狀為克羅恩氏病(CD)。在一些實施例中，疾病、病症或病狀為潰瘍性結腸炎(UC)。

預防術語「預防(prevent)」或「預防(prevention)」係指使特定疾病、病症或病狀(例如發炎性腸病(IBD))之至少一種病徵或症狀之發作延緩、頻率降低或嚴重程度降低中之一或多者。在一些實施例中，在群體基礎上評定預防以使得若在易患疾病、病症或病狀之群體中觀測到疾病、病症或病狀之一或多個症狀之發展、頻率或強度之統計學上顯著的降低，則藥劑被視為「預防」特定疾病、病症或病狀。當疾病、病症或病狀之發作已延緩預定時段時，預防可視為完成。

個體術語「個體(subject)」、「個體(individual)」或「患者」 (在本文中可互換使用)係指任何動物，包括哺乳動物。根據本發明之哺乳動物包括犬、貓、牛、山羊、馬、綿羊、豬、嚙齒動物、兔類動物、靈長類動物、人類及類似動物，且涵蓋未出生之哺乳動物。在一實施例中，人類為適合之個體。人類個體可為任何性別且處於任何發育階段。在一些實施例中，個體為患有發炎性腸病(IBD)之患者。

治療有效量術語「治療有效量」係指在組織、系統、動物、個體或人類中引發由研究人員、獸醫、醫生或其他臨床醫師探尋之生物或醫學反應的活性成分之量，該反應可包括以下中之一或多者： (1) 預防疾病；舉例而言，預防可能易患疾病、病狀或病症，但尚未經歷或顯示該疾病之病理學或症狀學之個體中的疾病、病狀或病症； (2) 抑制疾病；舉例而言，抑制正經歷或顯示疾病、病狀或病症之病理學或症狀學之個體中的疾病、病狀或病症(亦即，遏制或減緩病理學或症狀學進一步發展)；及 (3) 改善疾病；舉例而言，改善正經歷或顯示疾病、病狀或病症之病理學或症狀學之個體中的疾病、病狀或病症(亦即，逆轉病理學或症狀學)。

IL27RA 之抗體本發明提供與亦稱為類細胞介素受體1、細胞介素受體WSX-1、Zcytor1、T細胞及1型細胞介素受體之介白素27受體子單元α (IL27RA)結合的抗體。

如本文所用，術語IL27RA包括IL27RA之變體、同功異型物、同源物、直系同源物及旁系同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之IL27RA (諸如食蟹獼猴之IL27RA)以及不同形式之IL27RA交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類IL27RA具有完全特異性且可不展現物種交叉反應性(例如不結合小鼠IL27RA)或其他類型之交叉反應性。如本文所用，除非上下文另外規定，否則術語IL27RA係指天然存在之人類IL27RA。因此，「IL27RA抗體」、「抗IL27RA抗體」或其他類似名稱意謂與IL27RA、其同功異型物、片段或衍生物結合或反應的任何抗體(如本文所定義)。如由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q6UWB1表示之IL27RA的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 41提供。如由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號O70394表示之小鼠IL27RA的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 44提供。如由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號A0A2K5WKA4表示之食蟹獼猴IL27RA的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 42提供。

不希望受任何特定理論束縛，抗體與IL27R子單元IL27RA結合而不與IL27R之gp130子單元接合起到了拮抗IL27受體的作用。

IL27RA之「生物功能」或「生物活性」意欲改良發炎且改良先天性免疫及T細胞中之調節功能。IL27RA之生物功能或生物活性可但未必係由IL27與其配位體之間的相互作用介導。

在一些實施例中，本發明之抗IL27RA抗體涵蓋以下中之一者或兩者的抗體：i)競爭結合於人類IL27RA，或ii)與具有如SEQ ID NO: 31所闡述之重鏈可變區之胺基酸序列及如SEQ ID NO: 32所闡述之輕鏈可變區之胺基酸序列的抗體結合相同的抗原決定基。

本發明之抗IL27RA抗體可涵蓋單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異結合抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體片段(例如域抗體)之融合蛋白質、人源化抗體及包含所需特異性之抗原結合位點之免疫球蛋白分子的任何其他經修飾之組態，包括抗體之醣基化變體、抗體之胺基酸序列變體及經共價修飾之抗體。抗體可為鼠類、大鼠、人類或任何其他來源(包括嵌合或人源化抗體)。在一些實施例中，抗IL27RA抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗IL27RA抗體為人類或人源化抗體。在一些實施例中，抗IL27RA抗體為嵌合抗體。

在一些實施例中，本發明提供一種抗體，其具有如表13中發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列，或其變體。

本發明亦提供IL27RA之抗體的CDR部分。CDR區之測定完全在此項技術之技能範疇內。應瞭解，在一些實施例中，CDR可為Kabat與Chothia CDR之組合(亦稱為「組合CDR」或「延長CDR」)。在另一方法(在本文中稱為CDR之「構形定義」)中，CDR之位置可鑑別為向抗原結合貢獻焓之殘基。參見例如Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。一般而言，「構形CDR」包括Kabat CDR及游標區(Vernier zone)中之殘基位置，其經約束以維持抗體結合特定抗原之適當環結構。構形CDR之測定完全在此項技術之技能範疇內。在一些實施例中，CDR為Kabat CDR。在其他實施例中，CDR為Chothia CDR。在其他實施例中，CDR為延伸、AbM、構形或接觸CDR。換言之，在具有超過一個CDR之實施例中，CDR可為Kabat、Chothia、延伸、AbM、構形、接觸CDR中之任一者或其組合。

在一些實施例中，抗體包含表13中所示之重鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表13中所示之輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。在一些實施例中，抗體包含表13中所示之重鏈可變區中之任一者的三個CDR及表13中所示之輕鏈可變區中之任一者的三個CDR。

在一些實施例中，抗體包含來自表13之三個輕鏈CDR及三個重鏈CDR。

在一些實施例中，抗體包含以下中之一者或兩者：i)具有或不具有C端離胺酸之全長重鏈，或ii)抗Il27RA-4701或抗Il27RA 4880 EE之抗IL27RA抗體的全長輕鏈。抗體之全長重鏈及輕鏈之胺基酸序列示於下表13中。

表13亦提供本發明之mAb之重鏈及輕鏈序列。

在一些實施例中，抗體可包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，其包含SEQ ID NO: 7之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 8之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些實施例中，抗體可包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，其包含根據SEQ ID NO: 1之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 2之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 3之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 4之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 5之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 6之CDR-L3序列。

在一些實施例中，抗體包含由SEQ ID NO: 31之核酸序列編碼的IL27RA-VH序列且包含由SEQ ID NO 32之核酸序列編碼的IL27RA-VL序列。

在一些實施例中，抗體包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之IL27RA-VH構架序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77。在一些實施例中，IL27RA-VH構架序列可衍生自人類生殖系DP54序列。

在一些實施例中，抗體包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列之IL27RA-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。在一些實施例中，抗體包含可衍生自人類生殖系DPK9序列之IL27RA-VL構架序列。

在一些實施例中，IL27RA-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與其所衍生之生殖系的功能及結構類似性。在一些實施例中，IL27RA-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列中之一者或兩者可與其所衍生之人類生殖系序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。在一些實施例中，IL27RA-VL構架序列或IL27RA-VH構架序列中之一或兩者可與其所衍生之人類生殖系序列一致。

在一些實施例中，IL27RA-VH序列可與SEQ ID NO: 7至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致，且IL27RA-VL序列與SEQ ID NO: 8至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。

在一些實施例中，IL27RA抗體包含具有SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，IL27RA抗體包含具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的輕鏈。

在一些實施例中，IL27RA抗體包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，IL27RA抗體包含具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的輕鏈。

gp130 之抗體本發明提供與亦稱為介白素6受體子單元β、CD130及介白素-6細胞介素家族信號轉導子之醣蛋白130 (gp130)結合的抗體。

如本文所用，術語gp130包括gp130之變體、同功異型物、同源物、直系同源物及旁系同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種之gp130 (諸如食蟹獼猴之gp130)以及不同形式之gp130交叉反應。在一些實施例中，抗體可對人類gp130完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性(例如不結合小鼠gp130)或其他類型之交叉反應性。如本文所用，除非上下文另外規定，否則術語gp130係指天然存在之人類gp130。因此，「gp130抗體」、「抗gp130抗體」或其他類似名稱意謂與gp130、其同功異型物、片段或衍生物結合或反應的任何抗體(如本文所定義)。如由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號P40189表示之gp130的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 45提供。如由UniProtKB/Swiss-Prot登錄號Q00560表示之小鼠gp130的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 48提供。如由基因ID號3572表示之食蟹獼猴gp130的全長、成熟形式在本文中作為SEQ ID NO: 46提供。

IL27RA之生物功能或生物活性可但未必由gp130與其配位體之間的相互作用介導。

在一些實施例中，本發明之抗gp130抗體涵蓋以下中之一者或兩者的抗體：i)競爭結合於人類gp130，或ii)與具有如SEQ ID NO: 20所闡述之重鏈可變區之胺基酸序列及如SEQ ID NO: 21所闡述之輕鏈可變區之胺基酸序列的抗體結合相同的抗原決定基。

本發明之抗gp130抗體可涵蓋單株抗體、多株抗體、抗體片段(例如Fab、Fab'、F(ab') ₂、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、異結合抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體片段(例如域抗體)之融合蛋白質、人源化抗體及包含所需特異性之抗原結合位點之免疫球蛋白分子的任何其他經修飾之組態，包括抗體之醣基化變體、抗體之胺基酸序列變體及經共價修飾之抗體。抗體可為鼠類、大鼠、人類或任何其他來源(包括嵌合或人源化抗體)。在一些實施例中，抗gp130抗體為單株抗體。在一些實施例中，抗gp130抗體為人類或人源化抗體。在一些實施例中，抗gp130抗體為嵌合抗體。

本發明亦提供gp130之抗體的CDR部分。CDR區之測定完全在此項技術之技能範疇內。應瞭解，在一些實施例中，CDR可為Kabat與Chothia CDR之組合(亦稱為「組合CDR」或「延長CDR」)。在另一方法(在本文中稱為CDR之「構形定義」)中，CDR之位置可鑑別為向抗原結合貢獻焓之殘基。參見例如Makabe等人, 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166。一般而言，「構形CDR」包括Kabat CDR及游標區中之殘基位置，其經約束以維持抗體結合特定抗原之適當環結構。構形CDR之測定完全在此項技術之技能範疇內。在一些實施例中，CDR為Kabat CDR。在其他實施例中，CDR為Chothia CDR。在其他實施例中，CDR為延伸、AbM、構形或接觸CDR。換言之，在具有超過一個CDR之實施例中，CDR可為Kabat、Chothia、延伸、AbM、構形、接觸CDR中之任一者或其組合。

表13提供本文所提供之抗gp130抗體之CDR序列的實例。在一些實施例中，抗體包含來自表13之三個輕鏈CDR及三個重鏈CDR。

在一些實施例中，抗體包含以下中之一者或兩者：i)具有或不具有C端離胺酸之全長重鏈，或ii)抗gp130抗體，抗gp130 4574或抗gp130-4875 RR之全長輕鏈。抗體，抗gp130 4574或抗gp130-4875 RR之全長重鏈及輕鏈的胺基酸序列示於下文表13中。

在一些實施例中，特異性結合於醣蛋白130 (gp130)之抗體包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，其包含SEQ ID NO: 21之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 22之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列。

在一些實施例中，抗體包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，其包含根據SEQ ID NO: 15之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 16之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 17之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 18之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 19之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 20之CDR-L3序列。

在一些實施例中，抗體包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VH序列之gp130-VH構架序列：DP7、DP10、DP35、DP47、DP50、DP51、DP54及DP77。在一些實施例中，抗體包含衍生自人類生殖系DP10序列之gp130-VH構架序列。

在一些實施例中，抗體包含衍生自選自由以下組成之群的人類生殖系VL序列之IL27RA-VL構架序列：DPK1、DPK3、DPK4、DPK5、DPK7、DPK8及DPK9。在一些實施例中，抗體包含衍生自人類生殖系DPK9序列之gp130-VL構架序列。

在一些實施例中，gp130-VL構架序列及gp130-VH構架序列可包含一或多個胺基酸取代、添加或缺失，同時仍保持與其所衍生之生殖系的功能及結構類似性。在一些實施例中，gp130-VL構架序列及IL27RA-VH構架序列中之一者或兩者可與其所衍生之人類生殖系序列至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致。在一些實施例中，gp130-VL構架序列或gp130-VH構架序列中之一者或兩者可與其所衍生自之人類生殖系序列一致。

在一些實施例中，抗體包含與SEQ ID NO: 21至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之gp130-VH序列，且包含與SEQ ID NO: 22至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%一致之gp130-VL序列。

在一些實施例中，抗體包含SEQ ID NO: 21之gp130-VH序列且包含SEQ ID NO: 22之gp130-VL序列。

在一些實施例中，抗體包含由SEQ ID NO: 35之核酸序列編碼的gp130-VH序列。在一些實施例中，抗體包含由SEQ ID NO 36之核酸序列編碼的gp130-VL序列。在一些實施例中，抗體包含由SEQ ID NO: 35之核酸序列編碼的gp130-VH序列，且包含由SEQ ID NO: 36之核酸序列編碼的gp130-VL序列。

在一些實施例中，抗體包含具有SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO 30之胺基酸序列的重鏈。在一些實施例中，抗體包含具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，抗體包含具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈。在一些實施例中，抗體包含具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列的重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的輕鏈。

IL27RA 及 gp130 之抗體IL-27已表明在自體免疫、發炎性疾病中發揮關鍵作用，且受體之促效作用提供了一種可下調與自體免疫、發炎性疾病相關之病原性免疫反應的手段。因此，且不希望受任何特定理論束縛，本文所揭示之雙特異性IL27RA/gp130抗體，例如實例中定義為mAb-4894之抗體，充當IL27R之促效劑且結合於IL27受體子單元IL27RA及gp130誘導免疫調節效應。雙特異性IL27RA/gp130抗體之免疫調節效應的實例包括抑制腸道發炎及促進消化道障壁完整性。

IL-27經由由IL27RA及gp130鏈組成之雜二聚受體起作用，經由信號轉導子及轉錄活化因子(STAT)1及STAT3調節信號傳導。因此，如實例8中所示，以與天然IL27R配位體IL27類似之方式，本文所揭示之結合於IL27RA及gp130兩者的雙特異性抗體能夠結合於IL27RA/gp130雜二聚體之兩個子單元且誘導STAT 1及3信號傳導之磷酸化。

不希望受任何特定理論束縛，IL27RA/gp130抗體之免疫抑制效應可歸因於由IL27受體之活化產生的抗體之多種作用，其包括以下。

IL27RA/gp130抗體可減少Th17及Th2反應，使得抗體在Th2細胞分化期間下調GATA-3及IL13表現且在Th17細胞分化期間下調IL-17A表現，如實例9中所示。CD4+ T輔助細胞在包括IBD之各種自體免疫疾病的發展及維持中發揮多種重要作用。基於不同分泌之轉而介導獨特細胞活性的細胞介素組(panel)，CD4+ T輔助細胞可表徵為不同子型：Th1、Th2及Th17細胞。

IL27RA/gp130抗體可上調CD14+單核球細胞質及人類結腸上皮細胞中之IDO1表現，因此提供免疫保護及免疫抑制效應，如實例8中所示。IDO1係具有血基質(Fe2+)輔基之胞溶質酶，其催化色胺酸(Trp)代謝且將其轉化成犬尿胺酸(Kyn)。IDO1路徑最初描述為保護宿主生物體免於感染之先天性免疫機制。提高之IDO1含量很大程度上抑制效應T細胞之增殖及誘導效應T細胞之細胞凋亡，且累積Trp代謝物誘導Treg之分化，共同地引起免疫抑制。IDO1及Trp代謝物之免疫保護及免疫抑制作用受可獲得之局部因素的化學計量嚴格控制。此等局部活性之所得效應調節IDO1表現且幫助維持整體免疫恆定及周邊免疫耐受性。

IL27RA/gp130抗體可誘導PD-L1表現，如實例8中所示。PD-L1 (CD274)為PD-1 (計劃性細胞死亡蛋白質1，亦稱為CD279)之主要抑制性配位體。PD-1與PD-L1之接合以多種方式，諸如抑制T細胞增殖、存活、細胞介素產生及其他效應功能來改變T細胞之活性。

IL27RA/gp130抗體可上調IL-10基因表現及LAG3表現，其在與T細胞活化接合時遞送負免疫調節信號。調節性T (Treg)細胞係維持周邊耐受性、預防自體免疫疾病及限制慢性發炎性疾病所必需的。存在兩種類型之Treg：天然Treg (nTreg)及誘導型Treg (iTreg)。相比於對照抗體，IL27RA/gp130抗體誘導更多來自未曾經過處理之(naïve) CD4+ T細胞的CD4+CD25+FOXP3+ iTreg，亦上調LAG3+群體，上調Tim-3表現量且增加Tim-3+細胞群體。

IL27RA/gp130抗體可誘導對由三種類型之DC (不成熟DC、免疫原性DC及耐受性DC)介導之同種異體T細胞增殖的抑制作用，從而IL27RA/gp130抗體顯著下調細胞表面CD83表現且上調ILT4表現。

在一個實施例中，IL27RA/gp130抗體確實誘導抗炎反應。在一個實施例中，IL27RA/gp130抗體不誘導促發炎反應。在一個實施例中，gp130抗體不誘導Th1細胞之IFN γ表現。

gp130子單元廣泛分佈且存在於諸如介白素6受體(IL-6R)、介白素11受體(IL-11R)、抑瘤素M受體(Oncostatin M Receptor，OSMR)及LIF受體子單元α (LIFR)之其他含gp130受體上，從而可能存在與結合於含有受體之非目標gp130子單元相關的脫靶效應。

因此，在一個實施例中，且如實例6中所示，當相比於更廣泛分佈之gp130子單元時，IL27RA/gp130抗體之兩個臂的結合親和力已經調諧，使得抗體對IL27RA子單元具有更高親和力。此差異親和力實現IL27R中促效劑活性之足夠效能，同時最小化與其他含gp130受體之結合。在一些實施例中，以SPR量測，IL27RA/gp130抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少10倍。在一些實施例中，以SPR量測，IL27RA/gp130抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少100倍。在一些實施例中，以SPR量測，IL27RA/gp130抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少1000倍。在一些實施例中，當由SPR量測時，IL27RA/gp130抗體以小於1 nM之親和力結合於人類IL27RA。在一些實施例中，當由SPR量測時，IL27RA/gp130抗體以小於1000 nM之親和力結合於人類gp130。在一些實施例中，當由SPR量測時，IL27RA/gp130抗體以在0.01 nm與5 nM之間、0.05 nm與1 nM之間或0.1與1 nM之間的親和力結合於人類IL27RA，且以10 nm與1000 nM之間、50 nm與1000 nM之間、100 nm與1000 nM之間、10 nm與500 nM之間或10 nm與250 nM之間的親和力結合於人類gp130。在一些實施例中，當由SPR量測時，IL27RA/gp130抗體以0.1與5 nM之間的親和力結合於人類IL27RA且以50 nm與1000 nM之間的親和力結合於人類gp130。在一些實施例中，當由SPR量測時，IL27RA/gp130抗體以0.1與1 nM之間的親和力結合於人類IL27RA且以100 nm與500 nM之間的親和力結合於人類gp130。

本發明提結合於IL27RA及gp130之抗體。如本文所用，術語IL27RA及gp130包括分別為IL27RA及gp130之變體、同功異型物、同源物、直系同源物及旁系同源物。在一些實施例中，本文所揭示之抗體與來自除人類以外之物種的IL27RA及gp130 (諸如食蟹獼猴之IL27RA及gp130)中之一或多者交叉反應。在一些實施例中，抗體可對IL27RA及gp130完全具有特異性且可不展現物種交叉反應性或其他類型之交叉反應性。如本文所用，除非上下文另外規定，否則術語IL27RA及gp130係指天然存在之人類IL27RA及gp130。「IL27RA/gp130抗體」、「抗IL27RA/gp130抗體」或其他類似名稱意謂與IL27RA及gp130、其同功異型物、片段或衍生物結合或反應的任何抗體(如本文所定義)。

在一些實施例中，本發明提供IL27RA/gp130抗體，其具有如表13或14中發現之輕鏈可變區(VL)序列及重鏈可變區(VH)序列或其變體。

本發明亦提供IL27RA/gp130抗體之CDR部分。定義CDR區之測定。在一些實施例中，IL27RA/gp130抗體包含表13之IL27RA抗體的三個CDR及表13或14之gp130抗體的三個CDR。

在一些實施例中，本發明提供抗IL27RA/gp130抗體，其含有表13及14中所示之CDR、VH、VL、HC及LC區之變化形式，其中此類變體多肽與表13及14中之一或多者中所揭示的胺基酸序列中之任一者具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意欲為限制性的，且所列舉百分比之間的增量經特定設想為本發明之一部分。

在某些實施例中，本文所描述之抗體包含Fc域。Fc域可衍生自IgA (例如IgA ₁或IgA ₂)、IgG、IgE或IgG (例如IgG ₁、IgG ₂、IgG ₃或IgG ₄)。在一些實施例中，抗IL27RA抗體為IgG ₂抗體。在一些實施例中，抗IL27RA抗體為IgG ₁抗體。

本發明涵蓋對表13或14中所示之可變區、CDR以及重鏈及輕鏈序列的修飾。舉例而言，本發明包括包含功能上等效的可變區及不顯著影響其特性之CDR的抗體以及具有增強或降低之活性或親和力的變體。舉例而言，胺基酸序列可經突變以獲得對IL27RA及gp130具有所需結合親和力之抗體。多肽修飾為此項技術中之常規實務且無需在本文中詳細描述。經修飾多肽之實例包括具有胺基酸殘基之保守取代、胺基酸之一或多個缺失或添加的多肽，其不會顯著有害地改變功能活性，或使多肽對其配位體之親和力或化學類似物之使用成熟(增強)

修飾或突變亦可在構架區或恆定區中經進行以增加本文所提供之抗體的半衰期。參見例如PCT公開案第WO 00/09560號。亦可在構架區或恆定區中進行突變以改變抗體之免疫原性，提供共價或非共價結合於另一分子之位點，或改變諸如補體結合(complement fixation)、FcR結合及抗體依賴性細胞介導之細胞毒性的特性。在一些實施例中，在構架區或恆定區內進行不超過一至五個保守胺基酸取代。在其他實施例中，在構架區或恆定區內進行不超過一至三個保守胺基酸取代。根據本發明，單一抗體可在可變域之任何一或多個CDR或構架區中或在恆定區中具有突變。

在一些實施例中，抗體包含經修飾之恆定區，其對人類Fc γ受體具有增加或減少之結合親和力，為免疫學上惰性或部分惰性的，例如不觸發補體介導之溶解，不刺激抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)或不活化微神經膠質細胞；或在以下中之任何一或多個方面具有降低之活性(相比於未經修飾之抗體)：觸發補體介導之溶解、刺激ADCC或活化微神經膠質細胞。恆定區之不同修飾可用以達成效應功能之最佳水平或組合。參見例如Morgan等人，Immunology 86:319-324, 1995；Lund等人，J. Immunology 157:4963-9 157:4963-4969, 1996；Idusogie等人，J. Immunology 164:4178-4184, 2000；Tao等人，J. Immunology 143: 2595-2601, 1989；及Jefferis等人，Immunological Reviews 163:59-76, 1998。在一些實施例中，恆定區如Eur. J. Immunol., 1999, 29:2613-2624；PCT公開案第WO99/058572號中所描述經修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類同型IgG ₁中之一或多個位置L234、L235及G237 (按照EU編號)或L247、L248及G250 (按照Kabat編號)處的胺基酸修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類IgG ₁中之位置L234、L235及G237 (按照EU編號)或L247、L248及G250 (按照Kabat編號)處的胺基酸修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類IgG ₁中之L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)中之一或多者的胺基酸修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類IgG ₂中之L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)中之一或多者的胺基酸修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類IgG ₃中之L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)中之一或多者的胺基酸修飾。

在一些實施例中，抗體可包含人類IgG ₄中之L234A、L235A及G237A (按照EU編號)或L247A、L248A及G250A (按照Kabat編號)中之一或多者的胺基酸修飾。

修飾亦包括醣基化及非醣基化多肽，以及具有諸如利用不同糖之醣基化、乙醯化及磷酸化之其他轉譯後修飾的多肽。抗體在其恆定區中之保守位置發生醣基化(Jefferis及Lund，1997, Chem. Immunol. 65:111-128；Wright及Morrison, 1997, TibTECH 15:26-32)。免疫球蛋白之寡醣側鏈影響蛋白質之功能(Boyd等人，1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318；Wittwe及Howard, 1990, Biochem. 29:4175-4180)及醣蛋白之各部分之間的分子內相互作用，其可影響醣蛋白之構形及所呈現之三維表面(Jefferis及Lund, 見上文；Wyss及Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409-416)。寡糖亦可用於使指定醣蛋白基於特異性識別結構而靶向某些分子。亦已報導抗體之醣基化影響抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。特定言之，據報導在β(1,4)-N-乙醯葡萄糖胺基轉移酶III (GnTIII) (催化形成二等分GlcNAc之醣基轉移酶)之四環素調節之表現存在下，由CHO細胞所產生的抗體已提高ADCC活性(Umana等人，1999, Nature Biotech. 17:176-180)。

在一些實施例中，本發明提供含有表13中所示之可變區、CDR或重鏈及輕鏈序列之變化形式的抗抗體，其中此類變體多肽與表13中所揭示的胺基酸序列中之任一者具有至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少87%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%胺基酸序列一致性。此等量不意欲為限制性的，且所列舉百分比之間的增量經特定設想為本發明之一部分。

本發明亦涵蓋包含本文所揭示之抗體之一或多種組分的融合蛋白質。在一些實施例中，可製得融合蛋白質，其包含與另一多肽連接之全部或一部分的本發明抗體。在另一實施例中，僅抗體之可變域連接至多肽。在另一實施例中，將抗體之VH域連接至第一多肽，而將抗體之VL域連接至第二多肽，該第二多肽以使得VH域與VL域可彼此相互作用以形成抗原結合位點的方式與第一多肽締合。在另一實施例中，藉由連接子使VH域與VL域分隔，從而使得VH域與VL域可彼此相互作用。VH-連接子-VL抗體隨後連接至所關注之多肽。另外，可產生融合抗體，其中兩種(或更多種)單鏈抗體彼此連接。若想要在單一多肽鏈上產生二價或多價抗體或若想要產生雙特異性抗體，則此係有用的。

除了結合於IL27RA及gp130上之抗原決定基之外，本發明之抗IL27RA/gp130抗體亦可針對雙特異性抗IL27RA/gp130抗體mAb-4894介導生物活性，如實例中所示。

亦即，本發明包括特異性結合IL27RA及gp130且介導至少一種選自以下之可偵測活性的經分離抗體： i) 下調病原性細胞介素產生。在一些實施例中，抗IL27RA/gp130抗體藉由減少例如17型(Th17)之T輔助細胞中的介白素17產生而下調病原性細胞介素產生，其可藉由免疫分析量測且描述於實例9中。因此，在一些實施例中，以Il-17免疫分析量測，抗IL27RA/gp130抗體具有小於0.05nm之IC50。在一些實施例中，以Il-17免疫分析量測，抗IL27RA/gp130抗體具有小於0.01nm之IC50。在一些實施例中，以Il-17免疫分析量測，抗IL27RA/gp130抗體具有在1nm與0.0001nm之間、1nm與0.01nm之間、0.1nm與0.0001nm之間、0.1nm與0.001nm之間、0.01nm與0.0001nm之間或0.01nm與0.001nm之間的IC50。在一些實施例中，以Il-17免疫分析量測，抗IL27RA/gp130抗體具有在0.01nm與0.001nm之間的IC50。在一些實施例中，抗IL27RA/gp130抗體可藉由抑制T輔助細胞2型(Th2)反應，例如減少介白素13 (IL-13)產生及GATA-3表現而下調病原性細胞介素產生； ii) 促進調節性T細胞分化，例如促進天然Treg (nTreg)與誘導型Treg (iTreg)之分化，如實例8中所示。在一些實施例中，iTreg之特徵在於CD4+CD25+FOXP3+之表現。 iii) 上調免疫檢查點分子，諸如Tim‐3、LAG‐3及IL-10之表現。在一些實施例中，IL-10、Tim‐3及LAG‐3之表現可以轉錄含量及蛋白質含量兩者測定，例如藉由如實例9中所示之流式細胞量測測定。 iv) 遏制T細胞增殖； v) 誘導單核球中之計劃性死亡-配位體1 (PD-L1)表現，其可藉由流式細胞量測來量測且描述於實例8中；及 vii) 上調結腸上皮細胞及/或單核球中之吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)表現，其可藉由根據液相層析-質譜法(LC-MS)分析測定犬尿胺酸(Kyn)之產生量測以反映IDO1活性，如實例8中所描述。因此，在一些實施例中，根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗IL27RA/gp130抗體具有小於100nm之EC50。在一些實施例中，根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗IL27RA/gp130抗體具有小於10nm之EC50。在一些實施例中，根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗IL27RA/gp130抗體具有在100nm與0.1nm之間、100nm與1nm之間、10nm與0.1nm之間或10nm與1nm之間的EC50。在一些實施例中，根據LC-MS分析測定酸產生之犬尿胺酸，抗IL27RA/gp130抗體具有在10nm與1nm之間的EC50

因此，作為實例中定義為mAb-4894之抗體，本文所揭示之雙特異性抗體具有下調病原性T輔助17細胞(Th17)之潛力，同時上調與調節性T細胞(Treg)相關之細胞表面標記物，且更特定言之，上調天然Treg (nTreg)及誘導型Treg (iTreg)之兩個亞群。另外，靶向IL27RA及gp130兩者使得能夠減少2型細胞介素且上調單核球及樹突狀細胞上之負調節子。雙特異性IL27R促效劑對人類初代結腸上皮細胞具有直接作用，如藉由吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)之上調顯而易見，該上調已知與免疫抑制及黏膜癒合相關。

在一些實施例中，雙特異性抗體包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，雙特異性抗體包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中以下中之一者或兩者： a. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 b. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，雙特異性抗體包含結合於IL27RA之第一抗原結合位點及結合於gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗原結合位點包含VH及VL，其中第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中： a. 第一抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3； b. 第一抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3； c. 第二抗原結合位點VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3；且 d. 第二抗原結合位點VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3。

在一些實施例中，雙特異性抗體包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中抗體包含含有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的第一抗原結合位點VH、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的第一抗原結合位點VL、包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的第二抗原結合位點VH及包含ID NO: 22之胺基酸序列的第二抗原結合位點VL。

在一些實施例中，雙特異性抗體包含第一重鏈及第一輕鏈以及第二重鏈及第二輕鏈，其中第一重鏈及第一輕鏈包含結合IL27RA之第一抗原結合位點，且第二重鏈及第二輕鏈包含結合gp130之第二抗原結合位點，其中第一抗體重鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，第一抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，第二抗體重鏈包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且第二抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列。

編碼本發明之抗體的聚核苷酸本發明亦提供編碼本發明之任何抗體，包括本文所描述之抗體部分及經修飾之抗體的聚核苷酸。本發明亦提供製造本文所描述之抗體及聚核苷酸中之任一者的方法。可藉由此項技術中已知之程序製造聚核苷酸及表現蛋白質。

必要時，可對所關注之抗體(單株或多株)進行定序且隨後可將聚核苷酸序列選殖至載體中以用於表現或繁殖。編碼所關注之抗體的序列可維持在宿主細胞中之載體中，且隨後可擴增及冷凍宿主細胞供將來使用。細胞培養物中重組單株抗體之產生可經由利用此項技術中已知之手段自B細胞選殖抗體基因來進行。參見例如Tiller等人, 2008, J. Immunol. Methods 329, 112；美國專利案第7,314,622號。

在一些實施例中，本文提供一種聚核苷酸，其包含編碼本文所提供之抗體之重鏈或輕鏈可變區中之一者或兩者的序列。編碼所關注之抗體的序列可維持在宿主細胞中之載體中，且隨後可擴增及冷凍宿主細胞供將來使用。本文進一步描述載體(包括表現載體)及宿主細胞。

在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼表13或14中所列之抗體中之任一者的胺基酸序列。

在一個實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼抗IL27RA抗體之胺基酸序列

在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含選自SEQ ID NO: 13或27之胺基酸序列的抗IL27RA抗體重鏈多肽。在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的抗IL27RA抗體輕鏈多肽。

在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的抗IL27RA抗體VH多肽。在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的抗IL27RA抗體VL多肽。

在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含選自由SEQ ID NO: 23或30組成之群的胺基酸序列的抗gp130抗體重鏈多肽。在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的抗gp130抗體輕鏈多肽。在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的抗gp130抗體VH多肽。在一些實施例中，本發明提供一種聚核苷酸，其編碼一或多種包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的抗gp130抗體VL多肽。

在一些實施例中，編碼抗IL27RA抗體HC的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 33之核酸序列。在一些實施例中，編碼抗IL27RA抗體LC多肽的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之核酸序列。在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其編碼包含SEQ ID NO: 33之核酸序列的抗IL27RA抗體HC多肽及包含SEQ ID NO: 34之核酸序列的抗IL27RA抗體LC多肽。

在一些實施例中，編碼抗IL27RA抗體HC的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 39之核酸序列。在一些實施例中，編碼抗IL27RA抗體LC多肽的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 34之核酸序列。在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其編碼包含SEQ ID NO: 39之核酸序列的抗IL27RA抗體HC多肽及包含SEQ ID NO: 34之核酸序列的抗IL27RA抗體LC多肽。

在一些實施例中，編碼抗gp130抗體HC的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 37之核酸序列。在一些實施例中，編碼抗gp130抗體LC多肽的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 38之核酸序列。在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其編碼包含SEQ ID NO: 37之核酸序列的抗gp130抗體HC多肽及包含SEQ ID NO: 38之核酸序列的抗gp130抗體LC多肽。

在一些實施例中，編碼抗gp130抗體HC的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 40之核酸序列。在一些實施例中，編碼抗gp130抗體LC多肽的聚核苷酸包含SEQ ID NO: 38之核酸序列。在一些實施例中，本發明提供聚核苷酸，其編碼包含SEQ ID NO: 40之核酸序列的抗gp130抗體HC多肽及包含SEQ ID NO: 38之核酸序列的抗gp130抗體LC多肽。

在一些實施例中，本發明提供編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的聚核苷酸，且其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 37之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。在一些實施例中，本發明提供編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的聚核苷酸，且其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 40之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者。

一般熟習此項技術者將瞭解，由於基因密碼之簡併，存在許多編碼如本文所描述之多肽之核苷酸序列。一些此等聚核苷酸攜帶與任何天然基因之核苷酸序列之最小同源性。儘管如此，本發明尤其涵蓋因密碼子使用差異而改變之聚核苷酸。此外，包含本文所提供之聚核苷酸序列之基因的對偶基因在本發明之範疇內。對偶基因係由於核苷酸之一或多個突變(諸如缺失、添加或取代)而改變的內源基因。所得mRNA及蛋白質可但未必具有變化的結構或功能。對偶基因可使用標準技術(諸如雜交、擴增或資料庫序列比較)來鑑別。

在一個實施例中，VH及VL域或全長HC或LC由單獨聚核苷酸編碼。替代地，VH及VL或HC及LC均由單一聚核苷酸編碼。

本發明亦涵蓋與任何此類序列互補之聚核苷酸。聚核苷酸可為單股(編碼或反義)或雙股，且可為DNA (基因體、cDNA或合成)或RNA分子。RNA分子包括HnRNA分子，其含有內含子且以一對一方式對應於DNA分子；及mRNA分子，其不含內含子。其他編碼或非編碼序列可但未必存在於本發明之聚核苷酸內，且聚核苷酸可但未必連接至其他分子或支撐材料。

製造方法已描述用於產生抗體之各種技術，其包括用於製造單株抗體之傳統融合瘤方法、用於製造抗體(包括嵌合抗體，例如人源化抗體)之重組技術、轉殖基因動物中之抗體產生及用於製備「完全人類」抗體之最近描述之噬菌體呈現技術。

本文提供製造本文所提供之任一抗體之方法。本發明之抗體可藉由此項技術中已知之程序製造。多肽可藉由抗體之蛋白分解或其他降解、藉由如上文所描述之重組方法(亦即，單一或融合多肽)或藉由化學合成來產生。抗體之多肽(尤其至多約50個胺基酸之較短多肽)宜藉由化學合成來製造。化學合成之方法為此項技術中已知的且為可商購的。舉例而言，抗體可藉由採用固相方法之自動化多肽合成器產生。亦參見美國專利第5,807,715號；第4,816,567號；及第6,331,415號。

用於製備多特異性抗體之任何適合方法可用於製備本文所提供之多特異性抗體(例如視抗體特徵及組分之選擇而定)。

根據一種製造多特異性抗體之方法，使具有所需結合特異性之抗體可變域與免疫球蛋白恆定區序列融合。較佳與包含至少部分之鉸鏈、CH2及CH3區之免疫球蛋白重鏈恆定區進行融合。在一些實施例中，含有輕鏈結合位點之第一重鏈恆定區(CH1)可存在於融合物中之至少一者中。在一些實施例中，可將編碼免疫球蛋白重鏈融合物及(若需要)免疫球蛋白輕鏈之聚核苷酸插入個別表現載體中，且可共轉染至合適宿主生物體中。在其他實施例中，當相等比率之至少兩條多肽鏈之表現產生高產率時或當比率不具有特定顯著性時，可將兩條或全部三條多肽鏈之編碼序列插入一個表現載體中。

在一個方法中，多特異性抗體係由一個臂中之具有第一結合特異性之雜交免疫球蛋白重鏈及另一臂中之雜交免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。此不對稱結構(其中免疫球蛋白輕鏈僅處於一半多特異性分子中)有助於將所需多特異性化合物與不合需要之免疫球蛋白鏈組合分離。此方法描述於PCT公開案第WO 94/04690號中。

在另一方法中，多特異性抗體係由一個臂中之第一鉸鏈區中之胺基酸修飾構成，且第一鉸鏈區中之經取代胺基酸與另一臂中之第二鉸鏈區中之對應胺基酸具有相反電荷。此方法描述於國際專利申請案第PCT/US2011/036419號(WO2011/143545)中。

在另一方法中，藉由改變或工程改造第一Fc鏈與第二Fc鏈之間的界面來增強所需雜多聚或雜二聚蛋白質(例如雙特異性抗體)的形成。在此方法中，多特異性抗體可由CH3區構成，其中CH3區包含第一CH3多肽及第二CH3多肽，其在一起相互作用以形成CH3界面，其中CH3界面內之一或多個胺基酸使均二聚體形成不穩定且在靜電上不利於均二聚體形成。此方法描述於國際專利申請案第PCT/US2011/036419號(WO2011/143545)中。在一些實施例中，雙特異性抗體之一個恆定區可在鉸鏈區中之位置221 (例如(D221E或D221R))及人類IgG1之CH3區中之位置409 (例如K409R (EU編號方案))處包含胺基酸修飾，且雙特異性抗體之另一恆定區可在鉸鏈區之位置221 (例如D221E或D221R)及人類IgG1之CH3區中之位置368 (例如L368E (EU編號方案))處包含胺基酸修飾。在一些實施例中，雙特異性抗體之一個恆定區可在鉸鏈區中之位置221 (例如(D221E或D221R))及人類IgG2之CH3區中之位置409 (例如K409R (EU編號方案))處包含胺基酸修飾，且雙特異性抗體之另一恆定區可在鉸鏈區之位置221 (例如(D221E或D221R)及人類IgG2之CH3區中之位置368 (例如L368E (EU編號方案))處包含胺基酸修飾。在一些實施例中，雙特異性抗體之一個恆定區可在鉸鏈區中之位置221 (例如(D221E或D221R))及人類IgG4之CH3區中之位置409 (例如K409R (EU編號方案))處包含胺基酸修飾，且雙特異性抗體之另一恆定區可在鉸鏈區之位置221 (例如D221E或D221R)及人類IgG4之CH3區中之位置368 (例如L368E (EU編號方案))處包含胺基酸修飾。

在一些實施例中，多特異性抗體在Fc鏈中可具有杵-臼突變。舉例而言，在一些實施例中，在具有杵-臼突變之雙特異性抗體中，抗體Fc域之第一Fc鏈具有一或多個突變以形成「杵」，且抗體Fc域之第二Fc鏈具有一或多個突變以形成「臼」(或反之亦然)。抗體之例示性杵-臼工程改造描述於美國專利第5,731,168號、PCT公開案第WO2009089004號、美國公開案第20090182127號、Marvin及Zhu, Acta Pharmacologica Sincia (2005) 26(6):649-658及Kontermann (2005) Acta Pharacol. Sin., 26:1-9中。

「杵」係指自第一多肽(例如第一Fc鏈)之界面突出的至少一個胺基酸側鏈，且因此可定位於鄰近第二多肽(例如第二Fc鏈)中之補償性臼中，以便使雜二聚體穩定，且由此促進雜二聚體形成而非均二聚體形成。杵可存在於原始界面中或可以合成方式(例如藉由改變編碼界面之核酸)引入。通常，改變編碼第一多肽之界面的核酸以編碼杵。為了達成此，編碼第一多肽中之至少一個原始胺基酸殘基的核酸經編碼至少一個側鏈體積大於原始胺基酸殘基之「輸入(import)」胺基酸殘基的核酸置換。用於形成杵之某些輸入殘基通常為天然存在之胺基酸殘基，且較佳選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)。

「臼」係指自第二多肽(例如第二恆定域)之界面凹入的至少一個胺基酸側鏈，且因此容納鄰近第一多肽(例如第一恆定域)中之對應杵。臼可存在於原始界面中或可以合成方式(例如藉由改變編碼界面之核酸)引入。通常，改變編碼第二多肽之界面的核酸以編碼臼。為實現此，編碼第二多肽之至少一個原始胺基酸殘基的核酸經編碼至少一個側鏈體積小於原始胺基酸殘基之「輸入」胺基酸殘基之DNA置換。用於形成臼之某些輸入殘基通常為天然存在之胺基酸殘基，且較佳選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)。

如本文所用，術語「界面」通常係指存在於可涉及第一多肽及第二多肽接觸點之域中的任何胺基酸殘基。「原始胺基酸」殘基為可經側鏈體積小於或大於原始殘基之「輸入胺基酸」殘基置換的一種殘基。輸入胺基酸殘基可為天然存在或非天然存在之胺基酸殘基，但較佳為前者。「天然存在」之胺基酸殘基為由基因密碼編碼之彼等殘基。「非天然存在」之胺基酸殘基意謂不由基因密碼編碼，但能夠共價結合多肽鏈中之鄰近胺基酸殘基的殘基。非天然存在之胺基酸殘基之實例為正白胺酸、鳥胺酸、正纈胺酸、高絲胺酸及其他胺基酸殘基類似物，諸如Ellman等人，Meth. Enzym. 202:301-336 (1991)中所描述之彼等者。

本發明之聚核苷酸可使用化學合成、重組方法或PCR獲得。化學聚核苷酸合成方法為此項技術中所熟知且無需詳細描述於本文中。熟習此項技術者可使用本文所提供之序列及商用DNA合成器以產生所需DNA序列。

為使用重組方法製備聚核苷酸，包含所需序列之聚核苷酸可插入適合載體中，且載體又可引入適合宿主細胞中進行複製及擴增，如本文中進一步論述。聚核苷酸可藉由此項技術中已知任何方法插入宿主細胞中。藉由利用直接吸收、內吞作用、轉染、F-配對或電穿孔將外源性聚核苷酸引入來使細胞轉型。一旦引入，外源性聚核苷酸可作為非整合型載體(諸如質體)保持在細胞內或整合至宿主細胞基因體中。

適合選殖載體可根據標準技術構造，或可選自大量在此項技術中可用之選殖載體。雖然所選擇選殖載體可根據意欲使用之宿主細胞而變化，但適用選殖載體一般將具有一或多個特徵，諸如i)自我複製之能力，ii)特定限制性核酸內切酶之單一目標，或iii)可攜帶可用於選擇含有載體之純系之標記的基因。適合之實例包括質體及細菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript (例如pBS SK+)及其衍生物、mp18、mp19、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌體DNA及穿梭載體(諸如pSA3及pAT28)。此等及許多其他選殖載體可購自諸如BioRad、Strategene及Invitrogen之商業供應商。

進一步提供表現載體。表現載體通常為含有根據本發明之聚核苷酸之可複製聚核苷酸構築體。此意味著表現載體作為游離基因體或作為染色體DNA之整體部分在宿主細胞中必須為可複製的。適合表現載體包括但不限於質體、病毒載體(包括腺病毒、腺相關病毒、反轉錄病毒)、黏質體及PCT公開案第WO 87/04462號中所揭示之表現載體。載體組分可一般包括但不限於以下中之一或多者：信號序列；複製起點；一或多種標記基因；適合轉錄控制元件(諸如啟動子、強化子及終止子)。對於表現(亦即，轉譯)，亦通常需要一或多種轉譯控制元件，諸如核糖體結合位點、轉譯啟動位點及終止密碼子。

含有所關注之聚核苷酸的載體可藉由許多適當手段中之任一者引入宿主細胞中，該等手段包括電穿孔；採用氯化鈣、氯化銣、磷酸鈣、DEAE-聚葡萄糖(DEAE-dextran)或其他物質轉染；微彈轟擊；脂質體轉染；及感染(例如其中載體為諸如痘瘡病毒(vaccinia virus)之傳染原)。引入載體或聚核苷酸之選擇將常常視宿主細胞之特徵而定。

本發明亦提供包含本文所描述之任一聚核苷酸的宿主細胞。能夠過度表現異源DNA之任何宿主細胞可用於分離編碼所關注之抗體、多肽或蛋白質的基因的用途。哺乳動物宿主細胞之非限制性實例包括但不限於COS、HeLa及CHO細胞。亦參見PCT公開案第WO 87/04462號。適合的非哺乳動物宿主細胞包括原核生物(諸如大腸桿菌( E . coli)或枯草芽胞桿菌( B . subtillis))及酵母(諸如啤酒酵母( S . cerevisae)、裂殖酵母( S . pombe)或乳酸克魯維酵母( K . lactis))。

另外，任何數目之可商購獲得及不可商購獲得的表現多肽或蛋白質之細胞株均可根據本發明使用。熟習此項技術者將瞭解，不同細胞株可具有不同營養需求，或可能需要不同培養條件以實現最佳生長及多肽或蛋白質表現，且將能夠視需要修改條件。

醫藥組合物在另一實施例中，本發明包含醫藥組合物。

「醫藥組合物」係指本發明抗體與一或多種賦形劑之混合物。

本發明之醫藥組合物可呈多種形式。此等形式包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射及可輸注溶液)、分散液或懸浮液及凍乾粉末。形式視預期投與模式及治療應用而定。

亦可使用醫藥技術中已知之其他賦形劑及投與模式。本發明之醫藥組合物可藉由熟知之藥學技術中之任一者，諸如有效調配及投與程序製備。上文關於有效調配及投與程序之考慮因素在此項技術中已熟知且描述於標準教科書中。藥物之調配論述於例如Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, 1975；Liberman等人編, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；及Kibbe等人編, Handbook of Pharmaceutical Excipients (第3版), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999中。

可接受之賦形劑在所採用之劑量及濃度下對受體無毒，且可包含緩衝液，諸如磷酸、檸檬酸及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨(hexamethonium chloride)；氯化苯甲烴銨、苄索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；或非離子界面活性劑，諸如TWEEN ^TM、PLURONICS ^TM或聚乙二醇(PEG)。

治療性、診斷性及其他方法本發明之抗體及抗體結合物適用於各種應用，包括但不限於治療性治療方法及診斷性治療方法。

在一些實施例中，本發明之抗體可促效或調節IL27受體之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善發炎性疾病，諸如IBD或由IL27介導之疾病、病症及病狀。在另一實施例中，本發明抗體可促效或調節IL27受體之活性且可適用於治療、預防、抑制及改善多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症。

在一個態樣中，本發明提供一種用於治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症之方法。在一個態樣中，本發明提供一種用於治療發炎性腸病(IBD)之方法。在一些實施例中，治療個體之發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症的方法包含向有需要之個體投與有效量的包含如本文所描述之抗體中之任一者的醫藥組合物。在一些實施例中，提供一種治療個體之IBD的方法，其包含向有需要之個體投與有效量的包含本文所提供之抗體的組合物。

在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於所描述之治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症之方法中。在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於所描述之治療自體免疫疾病之方法中。在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於所描述之治療發炎性腸病(IBD)之方法中。在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於所描述之治療潰瘍性結腸炎或克羅恩氏病之方法中。在另一態樣中，本發明進一步提供如本文所描述之抗體或醫藥組合物，其用於所描述之治療潰瘍性結腸炎之方法中。本發明亦提供如本文所描述之抗體的用途，其用於製造用於治療發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症之藥劑。

在另一態樣中，提供偵測、診斷或監測發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病或癌症中之一或多者的方法。舉例而言，如本文所描述之抗體可經諸如成像劑及酶受質標記之可偵測部分標記。如本文所描述之抗體亦可用於活體內診斷分析，諸如活體內成像(例如PET或SPECT)或染色試劑。

就本文所描述之所有方法而言，提及抗體亦包括包含該等抗體及一或多種額外藥劑之醫藥組合物。

投與及給藥通常，本發明之抗體係以有效治療如本文所描述之病狀的量投與。本發明之抗體可以本身抗體形式投與，或替代地以含有該抗體之醫藥組合物形式投與。

本發明之抗體係藉由任何適合途徑以適於此類途徑之醫藥組合物形式且以有效用於預期治療之劑量投與。

在一些實施例中，抗體可非經腸投與，例如直接投與至血流中、至肌肉中或至內部器官中。非經腸投與之適合方式包括靜脈內、動脈內、腹膜內、鞘內、心室內(intraventricular)、尿道內、胸骨內、顱內、肌肉內及皮下。在一實施例中，可皮下投與抗體。非經腸投與之適合裝置包括針(包括微針)注射器、無針注射器及輸注技術。

在另一實施例中，本發明化合物亦可局部投與至皮膚或黏膜，亦即經皮或透皮。在另一實施例中，本發明化合物亦可經鼻內或藉由吸入投與。在另一實施例中，本發明化合物亦可經直腸或經陰道投與。在另一實施例中，本發明化合物亦可直接投與至眼或耳。

本發明抗體或含有該等抗體之組合物的給藥方案係基於多種因素，包括個體之類型、年齡、體重、性別及醫學病狀；病狀之嚴重程度；投與途徑；及所採用特定抗體之活性。因此，給藥方案可廣泛變化。在一個實施例中，對於本文論述之指示病狀之治療，本發明抗體之每日總劑量通常為約0.01至約100 mg/kg (亦即，mg本發明抗體/kg體重)。在另一實施例中，本發明抗體的每日總劑量為約0.1至約50 mg/kg，且在另一實施例中為約0.5至約30 mg/kg。

本發明之抗體可單獨或與一或多種其他治療劑組合使用。本發明提供如本文所定義之用途、方法或組合物中之任一者，其中本發明之抗體與一或多種本文所論述之其他治療劑組合使用。

「組合」投與兩種或更多種藥劑意謂所有藥劑在時間上足夠近地投與足以影響對個體之治療。兩種或更多種藥劑可同時或依序投與。另外，同時投與可藉由在投與之前混合藥劑或藉由在同一時間點但在相同或不同投與位點以單獨劑型投與藥劑來進行。

本發明抗體之各種調配物(例如抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體中之一或多者)可用於投與。在一些實施例中，抗體可以純淨形式投與。在一些實施例中，抗體及醫藥學上可接受之賦形劑可呈各種調配物形式。醫藥學上可接受之賦形劑為此項技術中已知的，且為有助於藥理學上有效物質之投與之相對惰性物質。舉例而言，賦形劑可提供形式或稠度，或充當稀釋劑。適合賦形劑包括但不限於穩定劑、潤濕劑及乳化劑、改變容積滲透濃度之鹽、囊封劑、緩衝劑及皮膚滲透增強劑。用於非經腸及經腸藥物遞送之賦形劑以及調配物闡述於Remington, The Science and Practice of Pharmacy第21版Mack Publishing, 2005中。

在一些實施例中，此等藥劑經調配以用於藉由注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌肉內等)投與。因此，此等藥劑可與醫藥學上可接受之媒劑，諸如生理鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、右旋糖溶液及其類似物組合。特定給藥方案，亦即劑量、時序及重複將視特定個體及彼個體之病史而定。

如本文所描述之抗體(例如抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體中之一或多者)可使用任何適合之方法投與，包括藉由注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌肉內等)投與。抗體，例如單株抗體或多特異性抗體，亦如本文所描述經由吸入投與。一般而言，對於本發明之抗體之投與，劑量視所治療之宿主及特定投與模式而定。在一個實施例中，本發明之抗體之劑量範圍將為約0.001 µg/kg體重至約20,000 µg/kg體重。術語「體重」在治療患者時適用。在處理分離細胞時，如本文所用，「體重」係指「總細胞體重」。術語「總體重」可應用於分離細胞及患者治療兩者。在本申請案中表示為「體重」或簡單地「kg」的所有濃度及治療(處理)水準，亦視為涵蓋類似「總細胞體重」及「總體重」濃度。然而，一般熟習此項技術者將認識到各種劑量範圍之效用，例如0.01 µg/kg體重至20,000 µg/kg體重、0.02 µg/kg體重至15,000 µg/kg體重、0.03 µg/kg體重至10,000 µg/kg體重、0.04 µg/kg體重至5,000 µg/kg體重、0.05 µg/kg體重至2,500 µg/kg體重、0.06 µg/kg體重至1,000 µg/kg體重、0.07 µg/kg體重至500 µg/kg體重、0.08 µg/kg體重至400 µg/kg體重、0.09 µg/kg體重至200 µg/kg體重或0.1 µg/kg體重至100 µg/kg體重。此外，熟習此項技術者應認識到，將使用例如選自由以下組成之群中之一或多者的多種不同劑量(dosage level)：0.0001 µg/kg、0.0002 µg/kg、0.0003 µg/kg、0.0004 µg/kg、0.005 µg/kg、0.0007 µg/kg、0.001 µg/kg、0.1 µg/kg、1.0 µg/kg、1.5 µg/kg、2.0 µg/kg、5.0 µg/kg、10.0 µg/kg、15.0 µg/kg、30.0 µg/kg、50 µg/kg、75 µg/kg、80 µg/kg、90 µg/kg、100 µg/kg、120 µg/kg、140 µg/kg、150 µg/kg、160 µg/kg、180 µg/kg、200 µg/kg、225 µg/kg、250 µg/kg、275 µg/kg、300 µg/kg、325 µg/kg、350 µg/kg、375 µg/kg、400 µg/kg、450 µg/kg、500 µg/kg、550 µg/kg、600 µg/kg、700 µg/kg、750 µg/kg、800 µg/kg、900 µg/kg、1 µg/kg、5 µg/kg、10 µg/kg、12 µg/kg、15 mg/kg、20 mg/kg及30 mg/kg。所有此等劑量均為例示性的，且此等點之間的任何劑量亦預期在本發明中使用。以上劑量範圍或劑量中之任一者均可用於本發明之抗體。對於歷經數日或更長時間之重複投與，視病狀而定，持續治療直至出現症狀之所需抑制或直至達成足夠治療水平為止。

一般而言，對於本文所提供之抗體之投與，候選劑量可為每天、每週、每隔一週、每三週、每四週、每五週、每六週、每七週、每八週、每十週、每十二週或超過每十二週投與。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每日投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.01 mg/kg、約0.03 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg及約25 mg/kg之每日劑量。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每週投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.01 mg/kg、約0.03 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約0.5 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg及約30 mg/kg之每週劑量。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每兩週投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/Kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg及約30 mg/kg之每兩週劑量。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每三週投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg及約50 mg/kg之每三週劑量。

在一些實施例中，視上文所提及之因素而定，每月或每四週投與候選劑量的劑量範圍為約1 µg/kg至30 µg/kg、至300 µg/kg、至3 mg/kg、至30 mg/kg、至100 mg/kg或更多中之任一者。舉例而言，可使用約0.1 mg/kg、約0.3 mg/kg、約1 mg/kg、約2.5 mg/kg、約3 mg/kg、約5 mg/kg、約10 mg/kg、約15 mg/kg、約25 mg/kg、約30 mg/kg、約35 mg/kg、約40 mg/kg、約45 mg/kg及約50 mg/kg之每月劑量。

在其他實施例中，視上文所提及之因素而定，每天投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約1200 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg或約1200 mg之每日劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與100 mg之間的每日劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與1 mg之間的每日劑量。在一個實施例中，可使用0.1 mg與100 mg之間的每日劑量。在一個實施例中，可使用1 mg與100 mg之間的每日劑量。

在其他實施例中，視上文所提及之因素而定，每週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg或2000 mg之每週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與0.1 mg之間的每週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與100 mg之間的每週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與1 mg之間的每週劑量。在一個實施例中，可使用0.1 mg與100 mg之間的每週劑量。在一個實施例中，可使用1 mg與100 mg之間的每週劑量。

在其他實施例中，視上文所提及之因素而定，每兩週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg或2000 mg之每兩週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與0.1 mg之間的每兩週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與100 mg之間的每兩週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與1 mg之間的每兩週劑量。在一個實施例中，可使用0.1 mg與100 mg之間的每兩週劑量。在一個實施例中，可使用1 mg與100 mg之間的每兩週劑量。

在其他實施例中，視上文所提及之因素而定，每三週投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約2500 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg、約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg或約2500 mg之每三週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與0.1 mg之間的每三週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與100 mg之間的每三週劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與1 mg之間的每三週劑量。在一個實施例中，可使用0.1 mg與100 mg之間的每三週劑量。在一個實施例中，可使用1 mg與100 mg之間的每三週劑量。

在其他實施例中，視上文所提及之因素而定，每四週或每月投與候選劑量的劑量範圍為約0.01 mg至約3000 mg或更多。舉例而言，可使用約0.01 mg、約0.1 mg、約1 mg，約10 mg、約50 mg、約100 mg、約200 mg、約300 mg、約400 mg、約500 mg、約600 mg、約700 mg、約800 mg、約900 mg、約1000 mg、約1100 mg、約1200 mg、約1300 mg、約1400 mg、約1500 mg、約1600 mg、約1700 mg、約1800 mg、約1900 mg、約2000 mg、約2100 mg、約2200 mg、約2300 mg、約2400 mg、約2500 mg、約2600 mg、約2700 mg、約2800 mg、約2900 mg或約3000 mg之每月劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與0.1 mg之間的每月劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與100 mg之間的每月劑量。在一個實施例中，可使用0.01 mg與1 mg之間的每月劑量。在一個實施例中，可使用0.1 mg與100 mg之間的每月劑量。在一個實施例中，可使用1 mg與100 mg之間的每月劑量。

其他給藥方案亦可適用，視醫師希望實達成之藥物動力學衰減模式而定。在一個實施例中，本發明之抗體以初始初次劑量(priming dose)、隨後更高及/或連續的實質上恆定之劑量投與。在一些實施例中，考慮一週一至四次給藥。在其他實施例中，考慮每月一次或每隔一月或每三個月一次給藥。此療法之進程容易藉由習知技術及分析來監測。投藥方案可隨時間變化。

出於本發明之目的，抗體(例如選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體組成之群的一或多者)的適當劑量將視所採用之抗體或其組合物、待治療症狀之類型及嚴重程度、藥劑是否出於治療目的投與、先前療法、患者之臨床病史及對藥劑之反應、患者對所投與之藥劑之清除率及主治醫師之判斷而定。通常，臨床醫師將投與抗體直至達到達成所需結果之劑量。劑量及/或頻率可在治療過程內變化。經驗考慮因素，諸如半衰期，一般將有助於確定劑量。舉例而言，與人類免疫系統相容之抗體(諸如人源化抗體或全人類抗體)可用於延長抗體半衰期且預防抗體受宿主之免疫系統攻擊。投與頻率可加以確定且在治療過程中加以調整，且通常但不一定基於症狀之治療及/或抑制及/或改善及/或延緩。替代地，抗體之持續連續釋放調配物可為適當的。用於達成持續釋放的各種調配物及裝置為此項技術中已知的。

在一個實施例中，抗體(例如選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體組成之群的一或多者)的劑量可在已給與抗體之一或多次投與的個體中憑經驗測定。向個體給與遞增劑量之抗體。為評估功效，可跟蹤疾病之指標。

在一些實施例中，可向先前已接受一或多種選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體治療劑組成之群的抗體以用於疾病治療的個體投與本文所提供之抗體(例如選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體組成之群的一或多者)。在一些實施例中，可向先前已接受選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體治療劑組成之群的抗體以用於疾病治療的個體投與本文所提供之抗體，且先前抗IL27RA、抗gp130及抗IL27A/gp130抗體治療劑在個體中之功效有限或無功效(例如其中個體之疾病對先前治療劑之治療具有抗性)。

視受體之生理病狀、投與目的為治療性抑或預防性及熟練醫師已知之其他因素而定，根據本發明之方法投與抗體可例如為連續或間斷的。抗體之投與可在預選時段內係基本上連續的或可呈一系列隔開之劑量。藉由混合具有所需純度之抗體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑來製備用於儲存之呈凍乾調配物或水溶液形式的根據本發明使用之抗體的治療性調配物(Remington, The Science and Practice of Pharmacy 第21版Mack Publishing, 2005)。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所採用劑量及濃度下對受體無毒性，且可包含緩衝液，諸如磷酸、檸檬酸及其他有機酸；鹽，諸如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨、苄索氯銨；酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)之多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。

套組本發明之另一態樣提供一種套組，其包含本發明之抗體或包含該抗體之醫藥組合物。除本發明之抗體或其醫藥組合物以外，套組亦可包括診斷劑或治療劑。套組亦可包括診斷性或治療性方法之使用說明書。在一些實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物及診斷劑。在其他實施例中，套組包括抗體或其醫藥組合物及一或多種治療劑。

在又另一實施例中，本發明包含適用於進行本文所描述之治療方法的套組。在一個實施例中，套組含有以足以進行本發明之方法之量包含本發明之抗體中之一或多者的第一劑型。在另一實施例中，套組包含足以進行本發明之方法之量的一或多種本發明之抗體，及至少用於第一劑量之第一容器及用於第二劑量之第二容器。

本發明之另一態樣為一種套組，其包含選自由以上所揭示之抗IL27RA、抗gp130及抗IL27RA/gp130抗體組成之群的一或多者及根據本文所描述之本發明方法中之任一者使用的說明書。一般而言，此等說明書包含用於上述治療性治療的選自由抗IL27RA、抗gp130及抗IL27RA/gp130抗體組成之群的一或多者的投與描述。

本發明之另一態樣為一種套組，其包含如本文上文所揭示之抗IL27RA/gp130抗體及根據本文所描述之本發明方法中之任一者使用的說明書。

用於實行本發明之特定態樣的以下實例僅出於說明之目的提供，且不意欲以任何方式限制本發明之範疇。

前述描述及以下實例詳述本發明之某些特定實施例，且描述本發明人所預期之最佳模式。然而，將瞭解，無論以文字呈現之前述內容如何詳細，本發明可以許多方式實踐，且本發明應根據所附申請專利範圍及其任何等效物解釋。

雖然已參考不同申請案、方法、套組及組合物描述所揭示之教示內容，但將瞭解在不背離本文中之教示內容及下文所主張之本發明的情況下可進行不同變化及修改。提供以下實例以更好地說明本發明之教示內容，且並不意欲限制本文中所呈現之教示內容的範疇。儘管已在此等例示性實施例方面描述本發明教示內容，但熟習此項技術者將容易理解在無不當實驗情況下此等例示性實施例之大量變化及修改為可能的。所有此類變化及修改皆在本教示內容之範疇內。

生物寄存本發明之代表性材料於2021年12月17日寄存於美國菌種中心(American Type Culture Collection), 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2209, USA。

具有ATCC登錄號PTA-127622之載體「mAb-4894 IL267RA VH」包含編碼「mAb-4894 IL267RA VH」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA-127623之載體「mAb-4894 IL267RA VL」包含編碼「mAb-4894 IL267RA VL」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA127626之載體「mAb-4894 IL267RA HC」包含編碼「mAb-4894 IL267RA HC」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA-127627之載體「mAb-4894 IL267RA LC」包含編碼「mAb-4894 IL267RA LC」之DNA插入物。

具有ATCC登錄號PTA-127624之載體「mAb-4894 gp130 VH」包含編碼「mAb-4894 gp130VH」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA-127625之載體「mAb-4894 gp130VL」包含編碼「mAb-4894 gp130 VL」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA127628之載體「mAb-4894 gp130 HC」包含編碼「mAb-4894 gp130 HC」之DNA插入物。具有ATCC登錄號PTA-127629之載體「mAb-4894 gp130 LC」包含編碼「mAb-4894 gp130 LC」之DNA插入物。

描述	抗體	ATCC 登錄號
IL27RA-VH	mAb-4894 IL267RA VH	PTA-127622
IL27RA-VL	mAb-4894 IL267RA VL	PTA-127623
gp130-VH	mAb-4894 gp130 VH	PTA-127624
gp130-VL	mAb-4894 gp130 VL	PTA-127625
IL27RA-HC	mAb-4894 IL267RA HC	PTA-127626
IL27RA-LC	mAb-4894 IL267RA LC	PTA-127627
gp130-HC	mAb-4894 gp130 HC	PTA-127628
gp130-LC	mAb-4894 gp130 LC	PTA-127629

按照國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約(Budapest Treaty on the International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purpose of Patent Procedure)之規定及其下條例(布達佩斯條約(Budapest Treaty))進行寄存。此保證維持自寄存之日起30年之寄存物之活力培養。寄存將由ATCC依據布達佩斯條約之條款提供，且受制於Pfizer Inc.與ATCC之間的協定，該協定確保在相關美國專利發佈後或在任何美國或外國專利申請案對公眾公佈後(以先者為準)，公眾可永久且無限制地利用寄存培養物之後代，且確保可利用由經授權之美國專利及商標局委員(U.S. Commissioner of Patents and Trademarks)根據35 U.S.C.第122章節及依據其之委員規則(包括特定參考886 OG 638之37 C.F.R.第1.14章節)所確定之寄存培養物之後代。

本申請案之受讓人已同意，若寄存材料之培養物在適合條件下培養時死亡或丟失或毀壞；則將在收到通知後立即將該等材料更換為其他相同材料。寄存材料之可用性不應解釋為許可在違反由任何政府部門根據其專利法授予之權利的情況下實踐本發明。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的IL27RA-VH。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的IL27RA-VL。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的IL27RA-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的IL27RA-VL序列。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的IL27RA-HC。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的IL27RA-LC。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的IL27RA-HC及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的IL27RA-LC序列。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的gp130-VH。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的gp130-VL。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的gp130-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的gp130-VL序列。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的gp130-HC。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的gp130-LC。

本發明提供一種聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的gp130-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的gp130-LC序列。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)序列。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-HC)。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)。

本發明提供一種特異性結合於gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。

本發明提供一種特異性結合於IL27RA及gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列。

本發明提供一種特異性結合於IL27R及gp130之經分離抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。

實例為了能更好地理解本發明，闡述以下實例。此等實例僅為達成說明之目的且不應解釋為以任何方式限制本發明之範疇。

實例 1 . 產生 gp130 / IL27a / il27 重組蛋白質 產生重組抗原用於免疫接種及融合瘤篩選藉由以下2種表現質體之轉染來產生人類gp130及IL27RA受體細胞外域(ECD)複合物-Fc融合物(huGP130_IL27RA杵及臼huFc)：一種表現質體編碼與在CH3區中具有杵突變之人類Fc融合的hugp130 ECD (VEC-40821：CID1452-IgVHSS_huGP130_ECD_TEV_杵Fc_2xST)，且另一種表現質體編碼與在其CH3區中具有臼突變之人類Fc融合的IL27RA ECD (VEC-40820：CID1451-IgVHSS_huIL27R_ECD_TEV_臼Fc_Flag)。Fc區中之杵及臼突變經由各別Fc內的杵及臼相互作用來促進gp130與IL27RA Fc融合物之間有效形成雜二聚複合物。

Expi293F™細胞(Gibco A14527)在表現培養基(Gibco A14351)及無擋板(non-baffled)搖瓶中，在8.0% CO2、36℃下，以120 RPM旋轉，在Kuhner ISF1-X培育箱中繁殖。轉染之前一天，細胞培養物在無擋板搖瓶或Sartorius Wave細胞培養袋中稀釋至1.6E6/ml。必要時，在轉染當天，將細胞培養物調整至3.0E6/ml。在即將轉染之前，將表現質體DNA (1.3 mg/1 L細胞培養物)及聚乙烯亞胺(2.6 mg/1 L細胞培養物，Polyscience，24765)分別於OptiMEM (Gibco 31985-070)中稀釋，隨後經過0.2 µM過濾。在室溫下培育5分鐘之後，將經稀釋之試劑合併以在室溫下再培育6分鐘，隨後添加至細胞培養物中。在轉染之後2.5小時，添加丙戊酸(Sigma P4543)直至3 mM之最終濃度。在轉染之後120小時，將細胞培養物轉移至無菌1 L Nalgene瓶中且以1-3,000×g離心5-10 min。澄清之經調理培養基經過0.8/0.2 μM深度過濾(Sartopore 2 XLG)，隨後進一步處理或在-20C下冷凍儲存。

將經調節培養基分批結合至蛋白質A樹脂(MabSelect SuRe，Cytiva)，經平衡且在緩衝液A (含20 mM咪唑之PBS)中洗滌。結合之蛋白質使用緩衝液B (150 mM甘胺酸pH 3.5、40 mM NaCl)溶離，其立即用10% 1 M Tris-HCl pH 8.0中和。彙集含有所關注之蛋白質的溶離份，使用10K MWCO Amicon Ultra濃縮器(Millipore)濃縮，且施加至HiLoad Superdex S200 16/60 pg管柱(Cytiva)。

另外，重組獼猴(cyno) huGP130_IL27RA杵及臼Fc蛋白質之表現及純化以類似方式進行。

產生重組 IL27 配位體用於活性分析配位體IL27存在兩個子單元：p28及Ebi3。產生兩種形式之配位體複合物： 1. 單Fc型式： IL27 huIL27p28_C107S_L212C_CH23LSFc_His6/huEBI3_M99C_Flag，如下文在圖6中所示。

IL27 p28單Fc構築體序列作為SEQ ID NO: 49提供且EBI3構築體序列作為SEQ ID NO: 50提供

以與針對抗原之方式所描述的類似方式進行表現，且純化過程如CM分批結合至已用15 CV緩衝液A (137mM NaCl、2.7mM KCl、8.1mM Na2HPO4、1.47mM KH2PO4、20mM咪唑)洗滌之蛋白質A樹脂。使用低pH緩衝液(緩衝液B：150 mM甘胺酸pH 3.5、40 mM NaCl)溶離樣品且用緩衝液C (1 M Tris pH8)以1:10 V:V比率(緩衝液相對於樣品)中和。不同溶離份隨後在凝膠上運作且彙集具有蛋白質之彼等溶離份，且使用10K MWCO Amicon Ultra 4管濃縮。在4℃下，使用藉由PBS+1MNaCl平衡之HiLoad Superdex管柱進行最終純化。收集之溶離份在凝膠上運行且彙集含有蛋白質之彼等溶離份。用平衡緩衝液(PBS或PBS與1M NaCl)對最終樣品進行分析型SEC。

雜二聚杵及臼型式：IL27_huIL27A_C107S_L212C_TEV_knobFc_His6/huEBI3_M99C_Flag/Hole如圖7中所示係空的。

EBI3作為SEQ ID NO: 50提供。IL27 p28 Fc杵[杵突變Y349C-T366W]作為SEQ ID NO: 51提供。Fc臼(空) [臼突變S354C-T366S-L368A-Y407V]作為SEQ ID NO: 52提供。

以與針對抗原之方式所描述的類似方式進行表現，且純化過程如CM分批結合至已用15 CV緩衝液A (PBS)洗滌之蛋白質A樹脂。使用低pH緩衝液(緩衝液B，150 mM甘胺酸pH 3.5、40 mM NaCl)溶離樣品且用緩衝液C (1 M Tris pH8)以1:10 V:V比率(緩衝液相對於樣品)中和。不同溶離份隨後在凝膠上運作且彙集具有蛋白質之彼等溶離份，且使用10K MWCO Amicon Ultra 4管濃縮。蛋白質隨後分批結合至已用PBS洗滌之anti-flag樹脂(10 ml)。在隔夜分批結合之後，將蛋白質用低pH緩衝液B溶離且用緩衝液C (1:10 V:V比率，緩衝液相對於樣品)中和。不同溶離份隨後在凝膠上運作且彙集具有蛋白質之彼等溶離份，且使用10K MWCO Amicon Ultra 4管濃縮。在4℃下，使用藉由PBS平衡之HiLoad Superdex管柱進行最終純化。收集之溶離份在凝膠上運行且彙集含有蛋白質之彼等溶離份且在-80C下儲存。

實例 2 . 經由融合瘤方法衍生 IL27RA 及 gp130 結合域 自人源化小鼠產生及分離結合人類及獼猴 gp130 之單株抗體用可溶性hIL-27RA_gp130杵及臼hFc蛋白質與TLR促效劑之混合物組合作為佐劑，每週對AlivaMab κλ小鼠進行一次免疫接種。其根據下表1中所示之以下時程進行免疫接種：表 1 - 小鼠免疫接種時程

方案之天數	免疫原	免疫接種部位
0	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質+ TLR促效劑混合物	頸根部尾根部踝關節(Hock)
7	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質+ TLR促效劑混合物	皮下腹膜內
14	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質+ TLR促效劑混合物	頸根部尾根部踝關節
21	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質+ TLR促效劑混合物	皮下腹膜內
56	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質+ TLR促效劑混合物	頸根部尾根部踝關節
62 (兩隻小鼠)	50 μg可溶性hIL-27Rα_gp130 K/H-hFc蛋白質	尾部靜脈

TLR促效劑混合物由以下組分組成：表 2 - TLR 相對於混合物

組分	目錄號	儲備液濃度	量/小鼠	體積/小鼠
MPLA-SM	InvivoGen vac-mpla	1 mg/mL	10 μg	10 μL
ODN1826	InvivoGen vac-1826-1	2 mg/mL	20 μg	10 μL
R848	InvivoGen vac-r848	1 mg/mL	10 μg	10 μL
聚肌苷酸:聚胞苷酸(Poly(I:C))	InvivoGen vac-pic	1 mg/mL	10 μg	10 μL

將蛋白質與指定體積之TLR促效劑混合物(40 μL/小鼠)組合且注射。

在第28天，收集免疫血清。其以蛋白質ELISA型式篩選與hIL-27RA_gp130杵及臼hFc及與對照hFc標記之蛋白質的結合。亦藉由流式細胞量測篩選血清與表現天然IL27RA/gp130受體之HEK293細胞及與表現重組IL-27RA/gp130之CHO細胞的結合。最後，在pSTAT3 HTRF分析中篩選血清之IL-27RA/gp130促效活性。具有最佳滴定之兩隻小鼠在第56天接受額外增強免疫(boost)且在第62天接受最終增強免疫，50 μg免疫原而無佐劑。四天後，將小鼠安樂死，且藉由電融合使其脾細胞及淋巴結細胞與Sp2mIL6小鼠骨髓瘤細胞融合。

融合瘤以蛋白質ELISA型式篩選與hIL-27RA_gp130杵及臼hFc及與對照hFc標記之蛋白質的結合。其亦藉由流式細胞量測來測試與CHO親本細胞、僅表現IL27RA鏈之CHO細胞、僅表現gp130之CHO細胞及表現完全IL-27RA-gp130受體之CHO細胞的結合。產生採用κ輕鏈且結合至CHO-gp130及CHO IL-27RA_gp130細胞之抗體的優先化(prioritized)融合瘤被鑑別為gp130特異性抗體且經歷VH-VL分子選殖。

簡言之，使用SMARTer IIA寡核苷酸(Clontech)及寡聚(dT)20由經純化之RNA產生cDNA。cDNA隨後使用RACE PCR擴增。為擴增重鏈，採用寡聚SMART 2ndF (GTGGTATCAACGCAGAGTACGCG) (SEQ ID No: 55)作為正向引子，且對小鼠IgG具有特異性之GGGTGCCAGGGGGAAGACSGA (SEQ ID NO: 56)作為反向引子。為擴增κ輕鏈，寡聚SMART 2ndF (GTGGTATCAACGCAGAGTACGCG) - SEQ ID No: 53亦用作正向引子，且κ特異性引子GAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCAC - SEQ ID No: 54作為反向。隨後經由輸注選殖將VH擴增子選殖入pTT5-hIgG_EFN_EEE_Flag (SAPI，SMART)載體中且將VL擴增子選殖入pTT5-hκ (SAPI，SMART)載體中。鑑別且選擇十三個獨特的成對序列以用於進一步表徵(純系2194、2211、2191、2203、2200、2207、2183、2214、2202、2187、2189、2199及2201)。衍生自融合瘤13B10之純系2187提供主要結合域(lead binding domain)。

分離結合人類及食蟹獼猴 IL27RA 之大鼠單株抗體用在Ribi佐劑(Sigma S6322)中乳化之20 μg可溶性hIL-27Rα_gp130杵及臼hFc蛋白質的12次IP注射對史泊格多利大鼠(Sprague-Dawley rat)進行免疫接種。前9次免疫接種每週進行兩次；剩餘的3次免疫接種每週進行一次。篩選免疫血清與HEK293細胞之結合，且HEK293細胞藉由CRISPR減弱(knockdown)而使天然IL-27Rα/gp130表現不足。亦在pSTAT3 HTRF分析中測試其之促效活性。具有最佳滴定之一隻大鼠接受20 μg無佐劑之免疫原的最終增強免疫。七天後，將大鼠安樂死，且藉由電融合使其脾細胞與P3X小鼠骨髓瘤細胞融合。

融合瘤以蛋白質ELISA型式篩選與hIL-27RA_gp130杵及臼hFc及與對照hFc標記之蛋白質的結合，以及藉由流式細胞量測篩選與HEK293細胞及HEK293 IL-27RA/gp130 CRISPR減弱細胞的結合。使優先化融合瘤經受限制稀釋次選殖。次純系藉由ELISA測試與hIL-27RA_gp130杵及臼hFc的結合，且藉由流式細胞量測測試與CHO親本細胞、僅表現IL-27RA鏈之CHO細胞、僅表現gp130之CHO細胞及表現完全IL-27RA-gp130受體之CHO細胞的結合。對23個對IL-27RA鏈具有特異性之融合瘤表現抗體進行VH-VL分子選殖。衍生自融合瘤1C5_A6-10-7之純系0917提供主要結合域。

篩選抗體對以鑑別 IL27RA / gp130 促效劑自實例2中所描述之融合瘤篩選針對IL27RA或針對gp130之抗體未能鑑別出以STAT3磷酸化量測之可促效CHO細胞中之IL-27RA/gp130過度表現的單一mAb。因此，以雙特異性型式測試抗體之基質以鑑別雜二聚體之促效劑。

自實例2中所描述之融合瘤篩選及自篩選噬菌體展示庫(資料未示出)收集一組87種抗IL27RA抗體，其表示44種不同CDR H3家族及72種獨特CDR H3-CDR L3序列以及IL-27功能性抑制劑與非抑制劑之混合物。自類似來源收集一組89種抗gp130抗體，其表示76種不同CDR H3家族及89種獨特CDR H3-CDR L3序列以及IL-27功能性抑制劑與非抑制劑之混合物。藉由將抗IL-27RA抗體選殖入攜帶經工程改造之精胺酸殘基D221R、P228R及K409R (EU編號)的人類IgG1載體(「RRR」)，及將抗gp130抗體選殖入攜帶經工程改造之麩胺酸殘基D221E、P228E及L368E (EU編號)的人類IgG1載體(「EEE」)來產生雙特異性抗體。在輕度還原及再氧化情況下，攜帶RRR及EEE突變之抗體的混合物將優先形成RRR-EEE雜二聚體(Strop等人, 2012)。此氧化還原程序經小型化，使得雙特異性抗體可由20微克之各種起始抗體的混合物形成，首先在37C下用還原之1 mM麩胱甘肽(GSH)培育1小時，且隨後用1 mM麩胱甘肽二硫化物(GSSG)再氧化。所得材料展示與IL-27R活性之細胞及全血分析相容，包括過度表現IL-27RA及gp130之CHO細胞中STAT3之磷酸化(描述於實例2中)及人類全血中之CD3+ T細胞中STAT3及STAT1之磷酸化(描述於實例8中)。

產生總共2156種雙特異性IgG。其中，50種在CHO pSTAT3分析中顯示促效作用，且(在29種所測試之強促效劑中)，12種顯示pSTAT 1在人類全血中之CD3+ T細胞中的穩定促效作用(資料未示出)。在此等12種雙特異性抗體以多毫克規模產生且自氧化還原緩衝液及任何其餘親本抗體純化時，複製此等觀測結果。此等12種表示4種抗gp130抗體(Ab 2187及三種不相關抗體)與5種抗IL-27RA抗體(Ab 917及四種不相關抗體)之組合，各具有獨特VH及VL序列。在此抗體組內，顯而易見兩種「群集(cluster)」：一組三種抗gp130抗體(包括Ab-2187)之任何成員可與一組三種抗IL27RA抗體(包括Ab-0917)之任何成員配對以形成活性雙特異性促效劑。自雙特異性Ab-0917及Ab-2187對觀測到最強力的活性，且選擇此等抗體作為用於人源化及最佳化之主要結合域(實例3)。

實例 3 . 結合域之人源化及最佳化 抗 gp130 結合域之人源化及最佳化將抗gp130純系2187之重鏈可變域次選殖入含有未經標記之人類Fc的表現載體中，且將由此產生之蛋白質重新命名為純系2246，其將稱作用於描述人源化及最佳化之親本純系。

2246結合域具有人類構架IGHV4-4*07_IGHJ4*03 (對於VH)及IGKV3-20*01_IGKJ4*01 (對於VL)。就生理特性及可製造性而言，IGHV4-4*07_IGHJ4*03為與較佳構架相比較不最佳之構架。另外，電腦模擬T細胞抗原決定基分析揭露2246 VH序列之極其不良的Epivax ISPRI免疫原性傾向評分(+6.2，相比於較佳評分＜-50)。雖然此高評分主要藉由生殖系抗原決定基而非非生殖系抗原決定基調節，但此評分仍指示增加的免疫原性風險，除非與已在多個後期程序中憑經驗降低風險的較佳生殖系中之一者有關。因此進行再人源化以將VH CDR移植至具有6個回復突變(A24V、M48I、I69M、A71V、E73T、A78F) (Pfabat編號)之另一構架IGHV1-69*01 中以恢復結合活性。2246 VL CDR亦移植至無回復突變之構架IGKV1-39*01中。再人源化純系4247完全保留親本純系2246之結合活性。然而，其仍具有CDR中之3個非生殖系T細胞抗原決定基，VH中之2個及VL中之1個，以及-40.05之適當較高的免疫原性評分(當前標準，Pfizer TReg調節v1.00)；其在CDR-H2中亦具有N連接之醣基化位點。

在2246系列之共晶結構的可獲得性之前，設計、合成且表徵了一組經預測在對穩定性具有最小影響的情況下減少T細胞抗原決定基含量且消除H2中N連接之醣基化位點的96點突變，以保留gp130結合。無突變能夠移除H2中之醣基化位點而不顯著損失結合活性。然而，此可能性(liability)確定為具有低風險且經實驗證實未被佔用。因此，未進一步努力將其移除。當求解gp130/Fab3754 (親本2246之再人源化變體)之共晶結構時，亦將第二組突變設計成可能增強結合活性而不添加新的T細胞抗原決定基，以避免結合活性損失。將20種親和力突變與9種結合驗證之抗原決定基移除突變組合，產生一組54條VH鏈及7條VL鏈，其經基質化以產生378種抗體最佳化變體。此等突變型變體針對gp130結合活性之保留率進行篩選，且不降低結合活性或分子特性之10種構築體隨後與2種新穎組合變體一起進入下一輪篩選分類。同時，針對降低之電腦模擬免疫原性風險及gp130結合之保留率評估4247的20種回復突變變體；3種此等變體加未經修飾之4247進入下一篩選輪。在最終篩選輪中，12種經最佳化之CDR構築體與4種構架變體雜交且分析gp130結合及分子特性。最終所得IgG分子純系4574併入5種總突變：2種突變併入至VH CDR中，2種突變併入至VL CDR中，且1種突變併入至FW-H中。突變S(H54)T、S(H65)D、F(H78)H及S(L52)E (Pfabat編號)減少T細胞抗原決定基含量，而突變S(L94)Y似乎補償gp130結合中之小損失。純系4574不含預測之非生殖系抗原決定基及其他第1層(tier)序列可能性。

抗 IL27RA 結合域之人源化及最佳化將抗IL27RA純系0917之重鏈可變域次選殖入含有未經標記之人類Fc的表現載體中，且將由此產生之蛋白質重新命名為純系2255，其將稱作用於描述人源化及最佳化之親本純系。

關於人源化，將2255之VH CDR移植至具有2個回復突變V48I及A49G (Pfabat編號)之構架IGHV3-7*01中；及VL CDR移植至具有3個回復突變L46R、L47V、Y49F (Pfabat編號)之IGKV1-39*01中。所得人源化分子完全保留親本純系2255之結合活性。然而，其具有在所有3個重鏈CDR之間展開的6種非生殖系T細胞抗原決定基、L2中之2種額外非生殖系T細胞抗原決定基、CDR-L1中之1種潛在第1層去醯胺位點及極高多反應性評分(DNA 26、胰島素14，同時所需評分＜5)。針對降低T細胞抗原決定基含量之16種CDR變體的有限篩選揭露K(L53)G突變(純系4207)顯著降低了DNA結合多反應性評分，同時維持許多親本IL27R結合活性且移除T細胞抗原決定基。具有替代K(L53)D突變之人源化2255的變體(約500種純系)及同源人源化2257抗體之變體(約150種純系)的額外篩選鑑別出若干具有假定免疫原性或DNA親和力降低益處的突變，該等突變可能作為4207之突變而經耐受。將此等篩選之結果與IL27R/Fab2255之新可用共晶結構之結構分析組合以產生4207之一組48種單一CDR變體，各自含有1至3種突變，經預測以在對穩定性及親和力具有最小影響的情況下減少T細胞抗原決定基含量及/或多反應性，或可能增強結合活性，以防需要補償因移除突變之可能性而導致的結合活性損失。針對IL27R結合之保留率及DNA多反應性篩選突變型變體，且將具有有利概況之約10種變體的突變重組成80種VH及9種VL序列，其隨後經基質化以產生一組最終的720種抗體最佳化變體。以類似方式合成、篩選及分類經最佳化變體以鑑別最終所得IgG分子純系4701。純系4701將5種突變併入VH CDR中，且將額外突變併入L2中。突變N(H35)Q、I(H51)T、I(H57E)及K(L53)G (Pfabat編號)各自減少T細胞抗原決定基含量，且似乎至少稍微有助於減少之DNA結合；突變S(H30)E似乎減少DNA結合，而A(H96)K似乎補償經由其他突變損失之IL-27R結合活性。未鑑別出移除CDR-L1中之潛在NS去胺基位點的耐受突變，然而，此去胺基可能性在擴增之階段I評估中已降低風險且因此未進一步探究。純系4701不含預測之非生殖系抗原決定基，且在CDR-L1中僅保留風險降低的第1層序列可能性。其亦具有大大降低之多反應性評分，DNA 10-13且胰島素5-7。當在雙特異性分子中與經最佳化抗gp130臂(4574)組合時，多反應性評分進一步降低至＜5之可接受範圍。

實例 4 . 多反應性 / 非特異性相互作用評估gp130及IL27Ra兩者的最終經最佳化結合域在生理特性之分子評估組(suit)中被評估為單特異性均二聚IgG (抗gp130臂之純系4574及抗IL27RA臂之純系4701)，且亦評估為最終雙特異性分子mAb-4894。進行3種類型之分析以評估如下文所描述之多反應性/非特異性相互作用傾向。

DNA 及胰島素 ELISA384孔ELISA盤(Nunc Maxisorp)在4℃下用含DNA (10μg/ml)及胰島素(5μg/ml)之PBS pH 7.2塗覆隔夜。在PerkinElmer Janus液體搬運機器人上進行根據Tiller等人, J. Immunol. Methods 329, 112, 2008；美國專利第7,314,622號中所描述之分析調適的ELISA。用水洗滌孔，在室溫下用50μl多反應性ELISA緩衝液(PEB；含有0.05% Tween-20之PBS pH 7.2，1 mM EDTA)阻斷1小時，且用80μl水沖洗一次。將10μg/ml測試樣品(在PBS pH 7.2、0.05% Tween-20、1 mM EDTA中)一式四份添加至孔中且在室溫下培育1小時。用80μl水將盤洗滌3次，且將含25μl之與辣根過氧化酶(Jackson ImmunoResearch)結合之32ng/ml山羊抗人類IgG (Fcγ片段特異性)的PBS pH 7.2、0.05% Tween-20、1 mM EDTA添加至各孔中。盤在室溫下培育1小時，用80μl水洗滌3次，且將25μl TMB受質(Sigma Aldrich)添加至各孔中。在6分45秒之後，藉由將25μl之0.18 M正磷酸添加至各孔中來停止反應，且讀取在450nm下之吸光度。DNA及胰島素結合評分計算為10μg/ml抗體之ELISA信號相對於含有緩衝液之孔信號的比率。

親和捕捉自相互作用奈米粒子光譜法 ( Affinity Capture Self - Interaction Nanoparticle Spectroscopy ， AC - SINS )蛋白質有可能與自身相互作用，尤其在增加之濃度下。此自相互作用可引起在藥物研發期間與調配物相關之黏度難題，以及增加之清除風險。(Avery等人MAbs. 2018; 10(2): 244-255)。AC-SINS分析量測自相互作用且用於幫助預測高黏度及不良藥物動力學特性之可能。

在Perkin-Elmer Janus液體搬運機器人上以384孔格式標準化AC-SINS分析。20 nm金奈米粒子(Ted Pella, Inc.，目錄號15705)用80%山羊抗-人類Fc (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. 目錄號109-005-098)與20%非特異性山羊多株抗體(Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc. 目錄號005-000-003)之混合物塗覆，該混合物緩衝液更換為20 mM乙酸鈉pH 4.3，且稀釋至0.4 mg/ml。在室溫下培育一小時之後，用硫醇化聚乙二醇(2 kD)阻斷金奈米粒子上未佔用之位點。隨後，使用針筒過濾器對經塗覆之奈米粒子進行10倍濃縮，且將10 μl添加至100 μl含0.05 mg/mL測試樣品之PBS pH 7.2中。將經塗覆之奈米粒子與測試樣品一起在96孔聚丙烯盤中培育2小時，且隨後轉移至384孔聚苯乙烯盤中且在Tecan分光光度計上讀取。讀取增量為2 nm之450-650 nm之吸光度，且使用Microsoft Excel巨集來鑑別最大吸光度，使資料光滑，且使用二階多項式擬合資料。自樣品之經光滑最大吸光度減去平均空白(單獨PBS緩衝液)之經光滑最大吸光度以測定AC-SINS評分。

人類 FcRn 管柱人類FcRn親和管柱如先前Koch等人, mAbs 5:576-586, 2013中所描述製備(參見下文)。為測定人類FcRn管柱滯留時間，將50 µg調節至pH 5.5之測試樣品注射至塗覆有內部表現及純化之生物素標記之hFcRn的GE高效能鏈黴抗生物素蛋白瓊脂糖凝膠(Sepharose)管柱(目錄號17-5113-01)上，且在150 mM NaCl存在下應用pH 5.5 (MES)至8.8 (Tris)之線性pH梯度以溶離樣品。FcRn管柱資料報導為相對滯留時間，其中自分析效能對照mAb-A之滯留時間減去樣品之溶離時間以標準化分析內之變化。

基於如下表3中所示之此等分析的結果，確定最終雙特異性分子mAb-4894之單株抗體的典型可接受之低水平風險。表 3 - 多反應性 / 非特異性相互作用評估之結果

*多反應性* / *非特異性相互作用評估*
分析	H/M/L評分(DNA/胰島素/AC-SINS) 高評分= ＞8 中等評分= 6-8 低評分= 0-5	註解例如與陽性及陰性對照比較。
DNA結合(ELISA)評分 (2個獨立實驗中之n)	HEK (II期) = 4,4 CHO (ETS) = 5,3	雙特異性之非特異性評分對於HEK/CHO材料較低且與表現良好之mAb (分析陰性對照)相當。基於mAb確立H/M/L評分準則。mAb之高評分傾向於與不合需要之特性，諸如脫靶結合及快速清除相關。非特異性活體外/活體內相關性資料對於多種特異性係有限的。應注意IL27RA mAb (4701)之DNA結合評分較高。DNA結合評分差異(雙特異性較低且IL27R mAb較高)可歸因於價數。
胰島素結合(ELISA)評分 (2個獨立實驗中之n)	HEK (II期) = 4,4 CHO (ETS) = 5,4
AC-SINS評分 ( 2個獨立實驗中之n)	HEK (II期) = 1,0 CHO (ETS) = 1,2
人類FcRn層析相對滯留時間(rRT，min)	HEK (II期) = 0.02 CHO (ETS) = 0.14	HEK/CHO材料之FcRn rRT與表現良好之mAb (分析陰性對照)相當。FcRn資料對於多種特異性係有限的。

實例 5 . 大規模產生主要抗體 產生穩定 CHO 細胞池以大規模產生mAb-4894 最終雙特異性分子mAb-4894之兩個結合臂單獨地表現為IgG (均二聚體)，其中其IgG1 Fc域中之EE或RR突變有助於之後在純化中進行的氧化還原反應期間形成雜二聚體。特定言之，其Fc中具有RR突變之抗gp130結合臂命名為純系抗gp130 4875 RR (衍生自4574，亦稱為抗gp130 - 4574)，且具有EE突變之抗IL27RA臂命名為純系抗IL27RA 4880 EE (衍生自4701，稱為IL27RA - 4701)。重鏈恆定區中之EE/RR突變有助於雜二聚體形成：在EE側，D221E及L368E (按照EU編號)或D234E及L381E (按照Kabat編號)；在RR側，D221R及K409R (按照EU編號)或D234R及K422R (按照Kabat編號)。EE臂容納抗IL27RA結合可變域且RR側臂容納抗gp130可變域。最終雙特異性抗體之結合臂亦含有丙胺酸突變以使效應功能降至最低：根據人類IgG1之L234A、L235A、G237A (按照EU編號或L247A、L248A、G250A (按照Kabat編號)。

在SSI系統中構築含有編碼純系抗gp130 4875 RR及IL27RA 4880 EE之表現載體，分別如pSSI2.0-IL27-4574-2X及pSSI2.0-IL27-4701-2X。使用氖電穿孔(Bio-Rad)將兩種表現載體各自轉染至CHOK1 SV SSI 7876 (HCLIB-53)細胞中以產生兩個獨立穩定池。選擇穩定表現相關抗體蛋白質之轉染物在CDCHO (Invitrogen)培養基中利用麩醯胺酸合成及殺稻瘟菌素(blasticidin) (Gibco Cell Culture)抗性。

隨後使用10L在Pfizer生產培養基中生長之CHO細胞分開表現兩池。在第12天採集兩種均二聚體(EE及RR)之經調節培養基且處理以用於稍後描述之純化。(使用Pfizer之生物治療劑醫藥科學(PharmSci)細胞株研發實驗室的方案(CLD_SSI 2.0 v1)產生分泌IL-27R抗體均二聚體(稱為IL-27R-4880 EE及gp130-4875 RR)之CHO細胞株)

IL27RA - 4880 EE 均二聚體細胞株產生 ：在300V及900uF下，使用5μg的編碼抗IL27RA-4880 EE均二聚體抗體之pSSI2.0表現質體(VEC-38718)及45 μg pFlpE重組酶質體(AVEC-25020)進行CHOK1 SV SSI 7876細胞(HCLIB-53)之電穿孔。一式三份地進行轉染以產生三個獨立池(DX18-1、DX18-2及DX18-3)。在轉染後24小時，將所得池流體改變成不含L-麩醯胺酸之培養基(CDCHO- Invitrogen目錄號10743-029批次2085431)。以3-4天時程監測培養物。確立之後，藉由用0.3×106個細胞/毫升接種200 mL體積培養物於CDCHO完全確定之預負載培養基(MFR H000002813)中來進行小規模生產研究。在第3天至第6天及第10天及第11天，對培養物取樣且饋入5.4 mL完全確定之饋料6.2A版本(CDFv6.2A)及5.0 mL 10%葡萄糖。在第7天，對培養物取樣且饋入16.2mL CDFv6.2A及15.0 mL 10%葡萄糖。在第12天，自DX18-1、DX18-2及DX18-3池採集經調節培養基以用於粗蛋白質A效價評估。兩個10 L工作體積受控反應器接種有細胞培養物，其含有含池(DX18-1、DX18-2及DX18-3，1:1:1比率DX18-PoP)中之一種池的8L M310生產培養基(PFP SOI AN LAB 0701：GS AU8，具有精胺4HCl、12 mM天冬醯胺、12 mM天冬胺酸、8 g/L葡萄糖、+14 mM KCl (M310)**批次號0A215201026026)。將培養物保持在36.5℃之溫度下，以18 RPM呈12°之角度擺動。向培養物饋入每天3.4% M391 (EXP M391批次號0A215201028002) (第3-12天)及每天2.5%之10%葡萄糖(第4-12天)。pH控制至7.05 +/- .15。溶解氧設定點為30%。在第12天，藉由經30'' 5 μm Pall Profile® II過濾器(目錄號NP8Y050BP1G)及10'' 0.22 μm Pall Suport過濾器(目錄號NP6EKVP1GA)過濾來採集經調節培養基。表 4 對來自穩定 CHO SSI 池之 IL27R - 4880 EE 均二聚體的小規模 ( 200 mL ) 及大規模 ( 10 L ) 表現分析

池	規模(mL)	晶種VCD (細胞/毫升)	採集日期	峰VCD (細胞/毫升)	採集VCD (細胞/毫升)	採集 V %	採集效價(mg/L)
DX18-1	200	0.3	2020年8月26日	12.8	12.1	93.2	1489
DX18-2	200	0.3	2020年8月26日	12.1	10.5	90.2	1460
DX18-3	200	0.3	2020年8月26日	11.8	10.4	88.0	1257
DX18-PoP	2×10,000	2.1/1.8	2020年11月11日	29.1/30.1	21.7/29.0	94.2/98.9	971/1288
VCD =活細胞密度

抗 gp130 - 4875 RR 均二聚體細胞株產生 ：在300V及900uF下，使用5μg的編碼抗gp130-4875 RR均二聚體抗體之pSSI2.0表現質體(VEC-38719)及45 μg pFlpE重組酶質體(AVEC-25020)進行CHOK1 SV SSI 7876細胞(HCLIB-53)之電穿孔。一式三份地進行轉染以產生三個獨立池(DX19-1、DX19-2及DX19-3)。在轉染後24小時，將所得池流體改變成不含L-麩醯胺酸之培養基(CDCHO- Invitrogen目錄號10743-029批次2085431。以3-4天時程監測培養物。確立之後，藉由用0.3×106個細胞/毫升接種200 mL體積培養物於CDCHO完全確定之預負載培養基(MFR H000002813)中來進行小規模生產研究。在第3天至第6天及第10天及第11天，對培養物取樣且饋入5.4 mL完全確定之饋料6.2A版本(CDFv6.2A)及5.0 mL 10%葡萄糖。在第7天，對培養物取樣且饋入16.2mL CDFv6.2A及15.0 mL 10%葡萄糖。在第12天，自DX19-1、DX19-2及DX19-3池採集經調節培養基以用於粗蛋白質A效價評估。10 L工作體積受控反應器接種有細胞培養物，其含有含池(DX19-1、DX19-2及DX19-3，1:1:1比率DX19-PoP)中之一種池的8L M310生產培養基(PFP SOI AN LAB 0701：GS AU8，具有精胺4HCl、12 mM天冬醯胺、12 mM天冬胺酸、8 g/L葡萄糖、+14 mM KCl (M310)**批次號0A215201026026)。將培養物保持在36.5℃之溫度下，以18 RPM呈12°之角度擺動。向培養物饋入每天3.4% M391 (EXP M391批次號0A215201028002) (第3-12天)及每天2.5%之10%葡萄糖(第4-12天)。pH控制至7.05 +/- .15。溶解氧設定點為30%。在第12天，藉由經30'' 5 μm Pall Profile® II過濾器(目錄號NP8Y050BP1G)及10'' 0.22 μm Pall Suport過濾器(目錄號NP6EKVP1GA)過濾來採集經調節培養基。表 5 對來自穩定 CHO SSI 池之 IL27R - 4875 RR 的小規模 ( 200 mL ) 及大規模 ( 25 L ) 表現分析

池	規模(mL)	晶種VCD (細胞/毫升)	峰VCD (細胞/毫升)	採集VCD (細胞/毫升)	採集 V %	採集效價(mg/L)
DX19-1	200	0.3	13.0	12.5	91.4	1489
DX19-2	200	0.3	12.2	10.8	87.7	1460
DX19-3	200	0.3	11.0	9.8	94.9	1257
DX19-PoP	10,000	1.7	32.2	32.2	93.6*	2590

主要雙特異性抗體之氧化還原及純化在Akta Avant (GE Healthcare Life Sciences)上之MabSelect Sure LX樹脂上分開捕捉EE及RR均二聚體之經調節培養基。在活體外進行產生雜二聚體之氧化還原反應。1:1比率之均二聚體與莫耳過量之半胱胺酸一起培育。在具有在50 mM Tris，pH 8.1中以弱分區模式(weak-partitioning mode)平衡之Fractogel TMAE Hicap (M) (EMD Millipore)樹脂的管柱上純化氧化還原後材料。進一步使用離子交換(IEX)及疏水相互作用層析(HIC)樹脂之微管柱篩選使純化最佳化。材料用800 mM硫酸鈉、700 mM磷酸鈉、100 mM Tris，pH 7.2經1:1稀釋，且使用丁基HP HIC樹脂(Cytiva)使用溶離緩衝液(50 mM磷酸鈉，pH 7.2)之梯度純化。與His/蔗糖緩衝液(20 mM組胺酸、8.5%蔗糖，pH 5.8)更換之最終緩衝液利用30 kDa再生纖維素膜(EMD Millipore)。使用所計算之吸收係數，使用280 nm下之吸光度定量蛋白質濃度。

藉由高效能-疏水性相互作用層析(HP-HIC)進行轉化%之評估-該方法利用兩種均二聚體/組分(抗IL27RA (IL27R-4880 EE)及抗gp130 (IL27R-4875 RR))與最終產物蛋白質(雜二聚體)之疏水性差異。樣品在ProPac HIC-10管柱(Thermo Fisher)上使用1 M硫酸鈉、50 mM磷酸鈉，pH 7.2之梯度運行。藉由將15 µL反應混合物注入配備有YMC-pack-Diol 200管柱及UV偵測器(280 nM)之HPLC中來進行HP-SEC。管柱溫度設定為25℃，且使用等度溶離(緩衝液50 mM磷酸鈉)使流動速率維持在0.3 mL/min。

實例 6 . 評估結合於人類及食蟹獼猴 IL27RA 及 gp130 之 IL27RA / gp130 結果mAb-4894與人類及食蟹獼猴抗原gp130 (人類-SEQ ID NO: 45，食蟹獼猴-SEQ ID NO: 46)及IL27RA (人類-SEQ ID NO: 41，食蟹獼猴-SEQ ID NO: 42)之交叉反應性係藉由在biacore晶片上mAb-4894之抗FAB捕捉(含有抗IL27RA-4880 EE及抗gp130-4875 RR之臂)由表面電漿子共振來量測。使人類或食蟹獼猴IL27RA或gp130在晶片上方流動且測定締合及解離速率，且計算親和力常數。

如表6中所示，mAb-4894雙特異性抗體能夠結合至人類及食蟹獼猴gp130及IL27RA兩者。mAb-4894之兩個臂的結合親和力經調諧以具有約1000倍的差異，其中與IL27RA子單元之親和力接近0.1nM，但對廣泛分佈之gp130子單元之親和力超過100nM。預期此差異親和力允許促效劑活性之足夠效能，同時最小化與其他含gp130受體之結合。表 6 . mAb - 4894 雙特異性抗體對人類及獼猴 GP130 及 IL27R 之 Biacore 親和力

分析物	配位體	ka (1/Ms)	kd (1/s)	KD (nM) ± Std	n
人類GP130	mAb-4894	3.37E+05	5.66E-02	169.86 ± 27.67	2
獼猴GP130	mAb-4894	2.15E+05	4.03E-02	187.59 ± 1.42	2
人類IL27R	mAb-4894	9.98E+05	1.10E-04	0.11 ± 0.01	2
獼猴IL27R	mAb-4894	1.17E+06	1.95E-03	1.68 ± 0	2

材料及方法製備生物感測器晶片根據製造商說明書，藉由抗人類Fab抗體與所有八個通道之CM5感測器晶片的胺偶合來製備抗Fab感測器晶片。藉由以10微升/分鐘之流動速率注射400 mM 1-乙基-3-(3二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及100 mM N羥基丁二醯亞胺(NHS)之1:1混合物持續7分鐘來使流動通道活化。在10 mM乙酸鈉pH 5.0中將抗Fab IgG抗體稀釋至25 μg/mL，且以10微升/分鐘經所有流槽注射7分鐘。以10微升/分鐘用1M乙醇胺-HCl (ETH)阻斷所有通道7分鐘。捕捉抗體之最終固定量為大致14,000共振單位(RU)。用於固定化及動力學之操作緩衝液為HBS-EP+ (10 mM 4-(2-羥乙基)-1-哌𠯤乙磺酸(HEPES) (pH 7.4)、150 mM氯化鈉、3 mM乙二胺四乙酸(EDTA)、0.05% (v/v) Tween-20)。

SPR 分析使用BIAcore 8K+儀器(Cytiva)在37℃下以10 Hz之收集速率測定mAb-4894與人類及食蟹獼猴gp130及IL27RA之結合親和力。mAb-4894雙特異性抗體在HBS-EP+緩衝液中稀釋至0.08 μg/mL，且藉由固定於所有八個通道之流槽2上的抗Fab IgG以10微升/分鐘之流動速率捕捉100秒，以達成約50 RU之捕捉含量。各通道之流槽1用作參考流槽。在抗體捕捉之後，將濃度範圍為405 nM至15nM (huGP130及cyGP130)及45nM至1.67nM (huIL27R及cyIL27R)的三倍稀釋系列之細胞介素或HBS-EP+緩衝液以50微升/分鐘注射於感測器表面上持續60秒。監測解離持續600秒且以30微升/分鐘用2次10 mM甘胺酸pH 1.7之注射使表面再生。資料經雙重參考(Myszka, D., J. Mol. Recognit 1999; 279-284)。藉由在BIAcore Insight評估軟體3.0.12.15655版(Cytiva)中針對1:1朗格繆爾模型(Langmuir model)擬合所得感測器圖譜資料來測定人類及獼猴GP130及IL27R之結合親和力及速率常數。

實例 7 . IL27RA 臂針對配位體 IL27 之抗原決定基重疊評估 ：結果因為IL27配位體複合物(由p28及Ebi3構成)及mAb-4894均結合IL-27受體，所以配位體及mAb-4894可能結合於受體複合物上之類似抗原決定基，因此其可能引起mAb-4894之IL27RA臂針對配位體之拮抗活性。因此，本發明人使用Octet系統評估mAb-4894之結合域與配位體複合物之間可能的抗原決定基競爭。

簡言之，兩組感測器尖端首先塗覆有IL27重組配位體複合物(實例1中所描述之複合物產生)，隨後使一組受IL27RA之飽和度約束，之後使其經受IL27RA結合純系2255 (親本純系)以發現配位體是否可同時結合至IL27RA及抗體2255兩者。然而，在經受2255之前，將另一組在純(plain)緩衝液中培育作為2255與配位體之結合的陽性對照。

如圖8中所示，2255未能展示與已受IL27RA (感測器B6)約束之配位體感測器尖端的任何可偵測結合，而與僅預先暴露於緩衝液(感測器C6)之裸感測器尖端的結合係容易顯而易見的。此結果指示當用作單特異性抗體時，mAb-4894 (抗IL27RA-4880 EE)之IL27RA結合域針對IL27配位體的潛在拮抗活性。

材料及方法使用1×樣品稀釋緩衝液(Sartorius)稀釋樣品且其亦用作分析緩衝液。在30℃下，在實驗步驟之間振盪該盤。將感測器一式兩份地使用。

胺反應性第2代(AR2G)感測器(Sartorius)係藉由浸漬於11.0 mM 1-乙基-3-(3二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及5.8 mM N羥基丁二醯亞胺(NHS)之1:1混合物中持續180秒來活化。隨後將感測器浸漬於10 mM乙酸鈉pH 5.0中之稀釋至25 μg/mL的hIL27R-CH23Fc-Flag中持續300秒，以將hIL27R-CH23Fc-Flag直接固定至感測器上。最後，將感測器浸漬於1M乙醇胺-HCl (ETH)中持續200秒以阻斷所有胺結合位點。hIL27R之最終固定量為大致1.0 nm。

在將同一組感測器浸漬於樣品緩衝液中持續100秒以建立基線之後，將感測器在300nM下浸漬於hIL27:EBi3中260秒以允許hIL27:EBi3與hIL27RA之結合(締合1)。在300nM高濃度之hIL27:EBi3情況下，假定感測器上的幾乎所有hIL27R結合至hIL27:EBi3。緊接著將感測器浸漬於300nM GBT-IL27R-2255中持續260秒，以評估GBT-IL27R-2255是否仍可結合hIL27:EBi3及hIL27R-CH23Fc-Flag之複合物。

一組感應器藉由在結合hIL27:EBi3之後浸漬於緩衝溶液而非GBT-IL27R-2255中來用作陰性對照，以顯示hIL27:EBi3自固定hIL27RA的解離。應在此等感測器下未觀測到結合。

在建立基線之後，一組感測器藉由浸漬於緩衝溶液而非hIL27:EBi3中而用作陽性對照。此等生物感測器之組在不結合hIL27:EBi3之情況下隨後浸漬於GBT-IL27R-2255中以展現GBT-IL27R-2255與固定於感測器上之hIL27RA的結合。表 7 - 用於抗原決定基測試之感應器尖端分配

感測器	直接固定	第1締合	第2締合
B6	Il27R	IL27:Ebi3	GBT-IL-27R-2255
C6	Il27R	緩衝液	GBT-IL-27R-2255
D6	Il27R	IL27:Ebi3	緩衝液

實例 8 . 人類及食蟹獼猴 T 細胞、單核球及結腸上皮細胞上 IL27RA / gp140 雙特異性之生物活性評估 結果關鍵藥理學終點用於評估IL27RA/gp140雙特異性mAb-4894之生物活性，尤其確定其活化路徑之能力，且包括與Il27R之促效作用相關之因子的表現，該促效作用包括評估CD3+ T細胞中之信號轉導子及轉錄活化因子1及3 (pSTAT1及pSTAT3)的磷酸化，以及CD14+ 單核球及初代培養之結腸上皮細胞中的諸如計劃性死亡配位體1 (PD-L1)及酶吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)之抗炎介體的活性。結果描述於下文且概述於表9中。

mAb-4894誘導來自人類全血之CD3+ T細胞中的pSTAT1及pSTAT3，平均EC50分別為0.43 nM及0.23 nM (n=3)。STAT3磷酸化之窗小於STAT1且展示較高供體-供體可變性。在食蟹獼猴全血中，mAb-4894誘導CD3+ T細胞中之pSTAT1及pSTAT3，平均EC50分別為1.74 nM及1.17 nM (n=4)。

IDO1係具有血基質(Fe2+)輔基之胞溶質酶，其催化色胺酸(Trp)代謝且將其轉化成犬尿胺酸(Kyn)。IDO1路徑最初描述為保護宿主生物體免於感染之先天性免疫機制。提高之IDO1含量很大程度上抑制效應T細胞之增殖及誘導效應T細胞之細胞凋亡，且累積Trp代謝物誘導Treg之分化，共同地引起免疫抑制。IDO1及Trp代謝物之免疫保護及免疫抑制作用受可獲得之局部因素的化學計量嚴格控制。此等局部活性之所得效應調節IDO1表現且幫助維持整體免疫恆定及周邊免疫耐受性。IL-27係誘導IDO1之免疫調節細胞介素中之一者。在人類周邊血液單核細胞(PBMC)群體中，IL-27雙特異性抗體mAb-4894以劑量依賴性方式上調CD14+單核球細胞質中之IDO1表現。單核球群體(流動式細胞量測分析)平均EC50為0.005nM (n=3)。在來自兩個供體之初代培養之人類結腸上皮細胞中，IDO1 mRNA表現藉由mAb-4894顯著上調，平均EC50為20nM。亦藉由LC-MS分析評估細胞培養物上清液中之所分泌之IDO1的活性。來自兩個供體之結腸上皮細胞之IDO1活性分析的平均EC50為5.4nM (n=2)，結果概述於表9中。

PD-L1 (CD274)為PD-1 (計劃性細胞死亡蛋白質1，亦稱為CD279)之主要抑制性配位體。PD-1與PD-L1之接合以多種方式，諸如抑制T細胞增殖、存活、細胞介素產生及其他效應功能來改變T細胞之活性。在人類全血中，mAb-4894以劑量依賴性方式誘導PD-L1表現，平均EC50為0.002nM(n=2)，結果概述於表9中。表 9 IL27RA / gp140 雙特異性誘導之 pSTAT1 及 pSTAT3 以及人類及食蟹獼猴 T 細胞、單核球及結腸上皮細胞中之 PD - L1 及 IDO1 的表現

分析	物種	促效劑	EC50(nM)	n
T細胞pSTAT1	人類	mAb-4894	0.4	3
	獼猴	mAb-4894	1.74	4
T細胞pSTAT3	人類	mAb-4894	0.2*	3
	獼猴	mAb-4894	1.17	4
單核球PD-L1	人類	mAb-4894	0.002	2
單核球IDO1	人類	mAb-4894	0.005	3
初代結腸上皮細胞IDO1	人類	mAb-4894	5.4	2

* 由於供體可變性較高，按照MAX誘導百分比(MAX%)計算資料

材料及方法根據製造商說明書，將來自健康人類供體或未經處理之食蟹獼猴的全血收集在含有抗凝劑之管中，分配於96孔盤中，且升溫至37℃且藉由連續稀釋濃度之mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體刺激15分鐘(人類)或20分鐘(食蟹獼猴)，之後為額外溶解/固定(Lyse/Fix)緩衝液(BD Biosciences，目錄號558049)。細胞在FACS緩衝液中洗滌且隨後滲透於預冷卻之90%甲醇(對於人類樣品)中或BD Phosflow Perm緩衝液III (對於食蟹獼猴樣品)中。在促效劑刺激期間，用抗CD3抗體標記T細胞。再次洗滌細胞且與識別磷酸化STAT1 (pY701)或STAT3 (pY705)的經螢光標記之抗體(表10)一起培育，接著用流式細胞儀評估且用FlowJo軟體分析。藉由將pSTAT+細胞之百分比乘以平均螢光強度(MFI)來計算閘控T細胞群體中之平均相對螢光單位(RFU)。EC50值(表9)係藉由使用來自GraphPad Prism 9 (GraphPad Software, Inc)之非線性3參數最佳擬合分析軟體，對所有供體之促效劑濃度相對於RFU反應進行繪圖來測定。

將95 µl健康人類全血等分至深96孔盤中，接著在37℃培育箱中用5 µl連續稀釋之mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體處理3小時。將細胞在37℃培育箱中用人類FC嵌段(BD Biosciences，目錄號564220)、抗CD3、抗CD14及抗PDL-1抗體再染色30分鐘，其中稀釋倍數分別為1:10、1:50、1:5及1:20 (表10)。根據製造商說明書，在37C下藉由預溫熱之1×溶解/固定緩衝液來溶解/固定樣品20 min。細胞經離心，洗滌且用FACS緩衝液再懸浮。藉由流式細胞儀評估單核球PD-L1表現且用FlowJo軟體10.7.1 (FlowJo，LLC)分析MFI。EC50值(0.002 nM，表9)係藉由使用來自GraphPad Prism 9之非線性3參數最佳擬合分析軟體，對所有供體之促效劑濃度相對於MFI進行繪圖來測定。

使用SepMate管(Stemcell technologies，目錄號85450)及15 ml之Ficoll-Paque優質試劑(GE Healthcare，目錄號17-5442-02)，用密度梯度離心方法自健康人類全血分離人類PBMC。將190 µl新鮮分離之人類PBMC細胞(在10% FBS RPMI中，5×10^6個細胞/毫升)等分至96孔盤(Corning Costar，目錄號3879，聚丙烯)中，接著在37℃培育箱中用10 µl連續稀釋之mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體處理20小時。細胞經洗滌且進一步用Live/Dead Fixable Aquaous Cell染色套組(Invitrogen，目錄號L34966)、人類FC嵌段及抗CD14 (表10)染色，接著在4℃下用Cyto Fix/Cyto Perm緩衝液(BD，目錄號554722)固定/滲透20分鐘，最終在4℃下用抗IDO1以1:100 (表9)染色30分鐘。藉由流式細胞儀評估單核球IDO1表現且用FlowJo軟體10.7.1分析MFI。EC50值(0.005 nM，表9)係藉由使用來自GraphPad Prism 9之非線性3參數最佳擬合分析軟體，對所有供體之促效劑濃度相對於MFI進行繪圖來測定。

購買人類初代結腸上皮細胞(Cell Biologics，H-6047)之兩個供體(批次號02130、批次號041417ABC)，且將其接種至完全DMEM/F-12培養基中之48孔盤中，直至達成90%匯合度，接著在37℃培育箱中用連續稀釋之mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體處理24小時。保存上清液樣品並進行品質控制，接著用額外乙腈試劑進行蛋白質沈澱。以內標形式添加經同位素標記之色胺酸及犬尿胺酸。上清液在氮氣下蒸發，用注射緩衝液復原，且藉由LC-MS分析來評估犬尿胺酸(Kyn)之生產以反映IDO1活性。平均EC50值(5.4 nM，表9)係藉由使用來自GraphPad Prism 9之非線性3參數最佳擬合分析軟體，對所有供體之促效劑濃度相對於Kyn生產進行繪圖來測定。表 10 - IL27RA / gp130 雙特異性之生物評估中所用的抗體

抗體名稱	供應商	目錄號	結合螢光團	純系編號
小鼠抗人類CD3	BD Biosciences	557705	Alexa Fluor® 488	SP34-2
小鼠抗人類CD3	BD Biosciences	562426	BV421	UCHT1
小鼠抗人類CD4	BD Biosciences	555346	FITC	RPA-T4
小鼠抗人類CD14	BD Biosciences	555398	PE	M5E2
小鼠抗人類CD25	BD Biosciences	341009	PE	2A3
小鼠抗人類CD127	BD Biosciences	560822	PE-Cy7	HIL-7R-M21
小鼠抗人類CD274(PD-L1)	BD Biosciences	563741	APC	MIH1
小鼠抗人類FOXP3	BD Biosciences	560045	Alexa Fluor® 647	259D/C7
小鼠抗人類IDO1	BD Biosciences	566648	Alexa Fluor® 648	V50-1886
小鼠抗人類LAG3	BD Biosciences	745640	BUV395	T47-530
小鼠抗人類TIM-3	BD Biosciences	565566	BV711	7D3
小鼠抗Stat1 (pY701)	BD Biosciences	612597	Alexa Fluor® 647	4a
小鼠抗Stat3 (pY705)	BD Biosciences	557815	Alexa Fluor® 647	4/P-STAT3
人類IL-4抗體	Invitrogen	16-7048-81	無(功能性級別)	MP4-25D2

實例 9 . IL27RA / gp140 雙特異性對 T 輔助及 T reg 細胞的生物效應 結果CD4+ T輔助細胞在包括IBD之各種自體免疫疾病的發展及維持中發揮多種重要作用。基於不同分泌之轉而介導獨特細胞活性的細胞介素組，CD4+ T輔助細胞可表徵為不同子型：Th1、Th2及Th17細胞等。在活體外，未曾經過處理之CD4+ T細胞可經誘導且分化成此等三種類型之T輔助細胞。在偏斜(skewing)週期期間，mAb-4894在Th1細胞分化期間上調IFNγ及T-bet表現(資料未示出)，但對完全分化之Th1細胞中之促發炎IFNγ的表現無影響，表明mAb-4894不誘導促發炎反應，如圖4中所示。mAb-4894在Th2細胞分化期間下調GATA-3及IL-13表現(資料未示出)且在Th17細胞分化期間下調IL-17A表現。mAb-4894亦下調完全分化之Th17細胞中的IL-17A及顆粒球巨噬細胞群落刺激因子(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor，GM-CSF)。資料示於表11中。表 11 - 下調 Th17 細胞中之 IL - 17A

分析	物種	促效劑	IC50(nM)	n	分析
Th17細胞IL-17A	人類	mAb-4894	0.0055	2	Th17細胞IL-17A

調節性T (Treg)細胞係維持周邊耐受性、預防自體免疫疾病及限制慢性發炎性疾病所必需的。存在兩種類型之Treg：天然Treg (nTreg)及誘導型Treg (iTreg)。Treg亦表現若干免疫檢查點分子，包括Tim‐3及LAG‐3，其在與T細胞活化接合時遞送負免疫調節信號。與陰性對照抗體8.8相比，mAb-4894誘導更多來自未曾經過處理之CD4+ T細胞的CD4+CD25+FOXP3+ iTreg，上調LAG3+群體，上調Tim-3表現量且同樣增加Tim-3+細胞群體。在nTreg中，mAb-4894上調2個供體中之IL-10基因表現且以轉錄含量(n=2)及蛋白質含量(n=2)兩者上調LAG3表現。資料示於圖5中。

在以下三種類型之樹突狀細胞(DC)分化條件中測試mAb-4894：不成熟DC、免疫原性DC及耐受性DC。周邊中之CD83表現可對淋巴球成熟、存活或功能具有功能性意義及影響。據報導，CD83藉由抗原呈現細胞(APC)之過度表現增強活體外T細胞增殖。類免疫球蛋白轉錄物4 (ILT4)為主要表現於骨髓細胞中之免疫抑制分子。mAb-4894顯著下調細胞表面CD83表現且上調ILT4表現，其亦可促進mAb-4894對由所有三種類型DC介導之同種異體T細胞增殖的誘導性抑制作用。在兩種測試供體中，諸如HLA-DR及PD-L1之其他標記物亦由不成熟DC及免疫原性DC中之雙特異性抗體mAb-4894上調。

材料及方法未經過處理之人類CD4+ T細胞用Easysep人類未經過處理之CD4+ T細胞分離套組(Stemcell technologies，目錄號17555)自人類白血球採集物(Leukopak)分離。細胞培養於人類Th17分化混合物(IL-6、TGFb1、IL-1b、IL-21及IL-23，表12)中，且在37℃培育箱中在具有或不具有連續稀釋之mAb-4894情況下進行免疫培養(immunocult) (Stemcell Technologies，目錄號10971) 4天。上清液中IL-17A之濃度係藉由MSD分析(V-PLEX人類IL-17A套組，Meso Scale Discovery，目錄號：K151RFD-2)評估，且用GraphPad Prism 9分析。自兩個獨立供體對IL17A抑制IC50 (0.0055nM，表11)求平均值。

自健康人類全血中分離出未曾經過處理之人類CD4+ T細胞，且在37℃培育箱中用Th1偏斜混合物(免疫培養，IL-12、IL-18、抗IL-4抗體，表10)處理7天。靜置1天之後，用連續稀釋之mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體(0.15 pM至3 nM)處理細胞1天。保存上清液且藉由MSD研究(Meso Scale Discovery，目錄號K151QOD-2)量測IFNg產量。用Graphpad Prism軟體分析資料。

用Easysep人類未曾經過處理之CD4+ T細胞分離套組自人類白血球採集物分離未曾經過處理之人類CD4+ T細胞，且與RPMI完全培養基加抗CD3/CD28珠粒(戴諾磁珠(Dynabead)人類T活化因子CD3/CD28，Gibco，目錄號11131D)、IL-2 (5 ng/ml) (表12)一起在具有或不具有mAb-4894或同型對照IgG8.8抗體處理(1.35 nM)之情況下在37℃培育箱中培養4天。在移除珠粒之後，使細胞在完全RPMI培養基中靜置隔夜，且接著經螢光標記之抗體識別CD4、CD25、LAG3、Tim3、CD127及FOXP3 (表10)。資料藉由流式細胞儀評估且用FlowJo軟體10.7.1分析。表 12 - Il27RA / gp130 雙特異之生物評估中所用的重組蛋白質

名稱	供應商	目錄號
重組人類IL-1 β/IL-1F2蛋白質	R&D Systems	201-LB
重組人類IL-2蛋白質	R&D Systems	202-IL
重組人類IL-6	R&D Systems	206-IL
重組人類IL-12蛋白質	R&D Systems	219-IL
重組人類IL-18/IL-1F4蛋白質	R&D Systems	9124-IL
重組人類IL-21蛋白質	R&D Systems	8879-IL
重組人類IL-23蛋白質	R&D Systems	1290-IL
重組人類TGF-β 1 (經人類細胞表現)蛋白質	R&D Systems	7754-BH

實例 9 . IL27RA / gp140 雙特異性之活體內生物效應 結果mAb-4894抗IL27RA/gp130雙特異性之藥理學活性之活體內標記物中的變化(IDO-1活性、CXCL10及CXCL11濃度、血小板計數)展現於食蟹獼猴中。注意到CXCL10 (亦稱為IP-10) (相比於基線5.30×-20.96×範圍)及CXCL11 (4.76×-74.44×)的血清趨化因子濃度之mAb-4894相關增加。亦觀測到IDO-1活性增加，量測為未標記之犬尿胺酸及13C-犬尿胺酸之函數。在1毫克/公斤/劑下觀測到最大增加(相比於基線4.29×-9.81×)。結果示於表17及表18中。

此等結果展現抗IL27RA/gp130雙特異性抗體mAb-4894調節與IL-27活性/促效作用一致之活體內藥理學生物標記物。表17：在第1天及第8天對猴靜脈內給藥mAb-4894 (研究1)

量測		相比於處理前基線之倍數變化增加
分析	參數	性別	0.1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (IV)	10 mg/kg (IV)	100 mg/kg (IV)
IDO-1 活性 ¹	¹³C標記之犬尿胺酸	M	2.53	4.29	3.15	1.27
F	1.80	9.81	4.13	0.79
未標記之犬尿胺酸	M	4.68	6.68	2.61	3.62
F	3.20	5.55	4.68	2.34
血清趨化因子濃度 ²	CXCL10	M	14.08	13.70	16.31	20.37
F	5.30	10.87	10.18	20.96
CXCL11	M	19.83	74.44	30.86	22.07
F	4.76	9.71	28.69	10.22
血漿暴露	性別	0.1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (IV)	10 mg/kg (IV)	100 mg/kg (IV)
AUC _0-72h(μg*h/mL) ³	M	65	944	9890	125000
F	109	1260	12400	122000
¹在第1-15天，在血漿中量測之IDO-1活性的峰值倍數變化增加。 ²在第1-15天，血清中CXCL10或CXCL11蛋白質之濃度的峰值倍數變化增加。 ³在第8-11天，血漿中PF-07314477濃度之AUC。

表18：在第1天、第8天、第15天、第22天及第29天對猴靜脈內或皮下給藥mAb-4894 (研究2)

量測		相比於處理前基線之倍數變化增加
分析	參數	性別	媒劑 (IV/SC)	0.01 mg/kg (IV)	0.1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (SC)
IDO-1 活性 ¹	¹³C標記之犬尿胺酸	M	1.78	1.47	5.58	9.60	6.04
F	2.89	7.02	4.20	2.96	3.63
未標記之犬尿胺酸	M	1.62	2.21	5.20	5.58	4.15
F	0.98	2.48	3.28	3.85	2.81
血清CXCL10濃度 ²	M	1.57	2.04	18.76	9.63	15.82
F	1.59	2.35	4.61	17.99	12.98
血漿暴露	性別	媒劑 (IV/SC)	0.01 mg/kg (IV)	0.1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (IV)	1 mg/kg (SC)
AUC _0-360h(μg*h/mL) ³	M	NT	N/A	31.7	632	352
F	NT	N/A	36.6	675	741
¹在第1-36天，在血漿中量測之IDO-1活性的峰值倍數變化增加。 ²在第1-36天，血清中CXCL10蛋白質之濃度的峰值倍數變化增加。 ³在第29-43天，血漿中PF-07314477濃度之AUC。

方法食蟹獼猴中mAb-4894之活體內藥理學在開始給藥之前，使年齡大於2.5歲之來自毛里求斯(Mauritius)的雄性及雌性食蟹獼猴最少適應30天。在研究1中，含有一隻雄性及一隻雌性猴之劑量組在第1天及第8天藉由靜脈內(IV)注射以0.1、1、10或100 mg/kg投與PF-08314470。在研究2中，含有一隻雄性及一隻雌性猴之劑量組在第1天、第8天、第15天、第22天及第29天藉由IV及皮下(SC)注射投與媒劑對照，或以0.01、0.1或1 mg/kg IV或1 mg/kg SC投與PF-08314470。在各研究過程之不同時間收集血液以評估吲哚胺2,3-雙加氧酶1 (IDO-1)酶活性或血清趨化因子濃度。在最終劑量之後，在72小時(研究1)或360小時(研究2)內之不同時間點收集血液用於毒理動力學分析。使用配位體結合分析測定血清中之總mAb-4894濃度且評估各個別動物之曲線下面積(AUC)濃度。

IDO1活性分析在給藥之前及在投與mAb-4894之後的不同時間點，將收集在抗凝劑中之全血樣品與13C標記之色胺酸離體混合且在37℃下儲存。在隔夜培育之後，藉由離心分離血漿且儲存於-80℃下。在各研究結束時，藉由LC-MS/MS量測各血漿樣品中之13C標記及未標記之犬尿胺酸(分別為13C標記之及內源性色胺酸之IDO-1酶轉化的最終產物)的濃度。藉由與其在給藥前樣品中之各別濃度相比來測定各動物中兩種犬尿胺酸產物之倍數變化。對於各動物而言，針對各犬尿胺酸產物測定在開始給藥與最後一次給藥之後七天之間的峰值倍數變化增加。

血清CXCL10及CXCL11 在不同時間點自所有動物收集血清，且使用配位體結合分析測定C-X-C趨化因子(CXCL10及CXCL11)之濃度。在各動物中測定相比於各趨化因子之給藥前含量的峰值倍數變化增加。

實例 11 ： IL27RA / gp130 雙特異性之抗原決定基實驗方法。 IL27Ra (D1-D2) + FAb-2255 。與GBT-IL27R-2255之FAb片段結合之IL27Ra(D1-D2)的共晶體係藉由懸滴蒸氣擴散方法(hanging-drop vapor-diffusion method)自含有20% PEG 4000、200 mM硫酸鋰、100 mM MES pH 6之條件獲得。晶體與單斜晶空間群P21具有一致對稱性，其中單位晶胞參數a=83.97 Å；b=235.16 Å；c=84.22 Å、β=90.6°且在結晶不對稱單元中具有4個複合物複本。使用20% EG作為低溫保護劑溶液，將晶體在液氮中快速冷凍。自在阿岡國家研究所(Argonne National Laboratory，APS)之IMCA光束線17-ID處之單一冷凍晶體收集設定成3.2 Å解析度之資料。使用自動PROC (autoPROC)對資料進行處理及縮放，且最終資料集完成82.5%。藉由用PHASER進行分子置換來解析結構。使用COOT進行若干輪反覆的手動調整及模型重建，以及使用自動BUSTER (autoBUSTER)進行結晶優化，產生具有結晶23.1% R _work及26.2% R _free之最終模型，其中R _work= ||F _obs| - |F _calc|| / |F _obs|且R _free等效於R _work，但經計算用於自優化過程省略掉之隨機選擇之5%的反射。共晶結構之帶狀(ribbon)圖示於圖2中。

gp130(D1-D2-D3)+Fab-3754 ( 人源化 2246)結合至Fab-3754 (抗體2246之人源化變體)之gp130(D1-D2-D3)的共晶體係藉由懸滴蒸氣擴散方法自含有20% PEG 6000、200 mM氯化鈣、100 mM MES pH 6之條件獲得。晶體與基元空間群P1具有一致對稱性，其中單位晶胞參數a=67.98 Å；b=93.97 Å；c=100.63 Å、α=62.8°、β=77.36°、γ=86.1°且在結晶不對稱單元中具有2個複合物複本。使用20%甘油作為低溫保護劑溶液，將晶體在液氮中快速冷凍。自在阿岡國家研究所(APS)之IMCA光束線17-ID處之單一冷凍晶體收集設定成2.72 Å解析度之資料。使用自動PROC對資料進行處理及縮放，且最終資料集完成72%。藉由用PHASER進行分子置換來解析結構。使用COOT進行若干輪反覆的手動調整及模型重建，以及使用自動BUSTER進行結晶優化，產生具有結晶22% R _work及24.4% R _free之最終模型，其中R _work= ||F _obs| - |F _calc|| / |F _obs|且R _free等效於R _work，但經計算用於自優化過程省略掉之隨機選擇之5%的反射。共晶結構之帶狀圖示於圖3中。

結果與抗IL-27RA抗體2255及gp130抗體3754之緊密接觸(在3.80A內)之IL-27RA及gp130胺基酸分別展示於表19及表20中。簡言之，兩種Fab之抗原決定基描述如下：Fab-2255利用除CDR-L1之外的所有CDR環進行接觸，僅與受體之域D2結合。結合界面藉由極性及靜電相互作用(總共9個氫鍵結觸點)控制，其中重鏈環CDR-H2及CDR-H1對相互作用貢獻最大。抗原上之內埋表面積為廣泛的-1,714 Å ²。

Fab-3754在gp130之域D1的尖端處結合。除CDR-L2之外，所有CDR環與抗原接觸。結合界面在其中心處主要為極性的，具有9個特異性氫鍵結觸點。重鏈環CDR-H3、CDR-H2、CDR-H1對相互作用貢獻最大。結合界面之尺寸為1,461 Å ²，其位於mAb-抗原界面之中低端。表 19 抗體 2255 之 3 . 80 埃內的 IL - 27RA 殘基

抗原鏈	抗原殘基	抗體鏈	抗體殘基
I	100	H	57
I	102	H	57
I	103	H	56
I	104	H	52
I	104	H	53
I	104	H	54
I	104	H	55
I	104	H	56
I	104	H	57
I	105	H	53
I	106	H	31
I	106	H	33
I	106	H	50
I	106	H	53
I	107	H	31
I	107	H	32
I	109	H	2
I	109	H	32
I	109	H	98
I	110	L	46
I	110	L	49
I	114	L	49
I	118	H	52
I	118	H	57
I	118	H	59
I	119	H	57
I	120	H	57
I	155	L	93
I	158	L	94
I	160	L	92
I	197	H	31
I	198	H	31

表 20 抗體 3754 之 3 . 80 埃內的 gp130 殘基

抗原鏈	抗原殘基	抗體鏈	抗體殘基
G	35	H	100
G	34	H	101
G	35	H	101
G	37	H	101
G	35	H	102
G	36	H	102
G	37	H	102
G	1	H	31
G	2	H	31
G	35	H	32
G	35	H	33
G	36	H	33
G	91	H	33
G	2	H	52
G	91	H	52
G	90	H	56
G	87	H	58
G	88	H	58
G	89	H	58
G	35	H	98
G	37	L	33
G	86	L	93
G	86	L	94
G	87	L	94
G	87	L	95

實例 12 ： 替代性雙特異性型式變體之表現、純化及表徵使用來自呈替代型式之GBT-IL-27R-4894的相同可變重鏈區及可變輕鏈區構築IL27RA/gp130雙特異性抗體GBT-IL-27R-4933，以檢查修改雜二聚化策略對雙特異性功能及製造特性的影響。利用杵-臼Fc (KiH)雜二聚化之替代型式稱為KiH mFd (圖9)。其利用Fab配置，其稱為「經修飾Fd」(mFd)且用於抗gp130 FAb。在此配置中，將抗gp130輕鏈(表21)與人類IgG1-效應功能-最小化Fc區之下鉸鏈區(DKTHTCPPCP)接合，以產生此雙特異性模態之VL-CL-Fc蛋白質鏈。經修飾之Fd鏈經設計以與VL-CL-Fc鏈內之抗gp130 LC配對，且其由抗gp130 VH、人類IgG1-CH1 (表21)及上部人類IgG1鉸鏈胺基酸EPKSC構成，該等胺基酸在線性位置221處含有Cys以用於在抗gp130 Fab κ恆定域中與Cys (線性位置214)形成鏈間二硫鍵。使用KiH mFd雙特異性模態構築GBT-IL-27R-4933雙特異性。

特定言之，將gp130-4875 (SEQ ID NO: 24)之LC與用臼雜二聚化突變T(360)S、L(362)A及Y(401)V以及S(348)C (線性編號)工程改造的IgG1-效應功能-最小化Fc之下鉸鏈區接合，以產生GBT-IL-27R-4933 VL-CL-Fc鏈(表21)。經GBT-IL-27R-4933修飾之Fd鏈(表21)係藉由使gp130-4875 VH (SEQ ID NO: 21)融合至IgG1 CH1 (SEQ ID NO: 9)及上鉸鏈序列EPKSC來構築。將IL-27RA 4880 VH (SEQ ID NO: 7)融合至IgG CH1 (SEQ ID NO: 9)及含有杵雜二聚化突變T(364)W加Y(347)C (線性編號)之IgG1-效應功能-最小化Fc，以產生GBT-IL-27R-4933 HC (表21)。GBT-IL-27R-4933 LC與IL-27RA 4880 LC (SEQ ID NO: 14)一致。表21 GBT-IL-27R-4933之鏈的序列

鏈	序列
gp130 VL-CL-Fc-(臼) SEQ ID NO: 57	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSVS SSYLAWYQQK PGKAPKLLIY GTESRATGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYGGYPTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGE CDKTHTC PPCP APEAAG APSVFLFPPK PKDTLMISRT PEVTCVVVDV SHEDPEVKFN WYVDGVEVHN AKTKPREEQY NSTYRVVSVL TVLHQDWLNG KEYKCKVSNK ALPAPIEKTI SKAKGQPREP QVYTLPP CRE EMTKNQVSL SC AVKGFYPSD IAVEWESNGQ PENNYKTTPP VLDSDGSFFL VSKLTVDKSR WQQGNVFSCS VMHEALHNHY TQKSLSLSPG K
gp130 VH-CH1 (mFd) SEQ ID NO: 58	QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKVSGGSIS SYYWSWVRQA PGQGLEWIGR IYITGNTNYN PSLKDRVTMT VDTSTSTHYM ELSSLRSEDT AVYYCAREGP KLGIFDYWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKV EPKS C
IL-27R重鏈(杵) SEQ ID NO: 59	EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE YFGLQWVRQA PGKGLEWIGY TSSGGNYEYY EETLKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARTK TGDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP EAAGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQV CTLP PSREEMTKNQ VSL WCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK
IL-27R輕鏈(與IL-27RA 4880 LC (SEQ ID NO: 14)部分一致)	RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ SKQYPYTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
杵或臼突變以粗體指示。涉及gp130 CH1 (mFd)與gp130 VL-CL-Fc-(臼)中之gp-130 Fab κ恆定域之間的鏈間二硫鍵形成的半胱胺酸殘基展示為帶下劃線的斜體。gp130 VH-CH1 (mFd)中之下鉸鏈及gp130 VL-CL-Fc-(臼)中之上鉸鏈由斜體指示。

KiH-mFd IL27RA/gp130雙特異性抗體GBT-IL-27R-4933係藉由使用製造商建議方案在Expi293F™宿主細胞中短暫地共表現所有四種蛋白質鏈來產生，或藉由使用實例5中所描述之方法產生穩定CHO細胞株來產生。雙特異性抗體之純化係在多步驟方法中進行，首先如實例5中所描述使用標準蛋白質A (MabSelect SuRe LX)及TMAE層析(在50 mM Tris，pH 8.3下運行)，接著在苯基650 M管柱(TOSOH)上進行混合模式陰離子交換層析(CaptoAdhere，Cytiva)及疏水性相互作用層析(HIC)。如實例5中所描述進行最終緩衝液更換。

兩種IL27RA/gp130雙特異性抗體(GBT-IL-27R-4894 (EE-RR型式)及GBT-IL-27R-4933 (KiH-mFd型式))之過程產量及純度的比較展示於表22中。觀測到兩種型式之間的顯著差異。儘管GBT-IL-27R-4894 (EE-RR型式)在氧化還原之前需要兩個獨立蛋白質A層析管柱用於EE及RR親本分子之初始純化，但整個方法需要較少非標準步驟且產生產量及純度比GBT-IL-27R-4933 (KiH-mFd型式)更高之蛋白質。以蛋白質A產量量測，GBT-IL-27R-4933之穩定CHO池表現為0.35/g/L，而GBT-IL-27R-4894之表現高約3倍。在蛋白質A純化之後，以SEC量測，GBT-IL-27R-4894之EE及RR臂＞99%純，而GBT-IL-27R-4933僅為55%純，具有接近40%高分子量物質，其不由TMAE移除。儘管藉由混合模式及HIC步驟自GBT-IL-27R-4933移除高分子量材料，但5-10%殘餘均二聚體仍存在於最終產物中。相比之下，GBT-IL-27R-4894 (EE-RR型式)蛋白質可經純化至＞99%純度，其中最終材料中剩餘＜0.01%均二聚體。表 22 由穩定 CHO 表現之 GBT - IL - 27R - 4894 ( EE - RR 型式 ) 及 GBT - IL - 27R - 4933 ( KiH - mFd 型式 ) 的純化過程

方法步驟	GBT-IL-27R-4894 (EE-RR型式)	GBT-IL-27R-4933 (KiH-mFd型式)
細胞株數目	2	1
蛋白質A後產量	0.9-1.3 g/L	0.35 g/L
蛋白質A後純度(aSEC)	＞99% (殘餘HMMS)	55% (殘餘HMMS、LMMS)
蛋白質A後均二聚體百分比	N/A	5-10%
TMAE回收率	97%	~80%
額外管柱步驟	HIC	可需要額外的混合模式陰離子交換、HIC
最終產物純度(aSEC)	＞99%	96%
最終產物中之均二聚體	＜0.01%	5-10%
N/A，不適用；SEC，尺寸排阻層析；TMAE，三甲基胺基乙基；HMMS，高分子量物質；LMMS，低分子量物質

生理及生物分析評估： IL27RA/gp130雙特異性抗體GBT-IL27R-4933 (杵-臼)及GBT-IL27R-4894 (EE-RR)經廣泛表徵以評估此等複雜分子之生物分析及生理特性。特定言之，以下方法用於評估關鍵分子特性：分析型尺寸排阻層析(aSEC)，確定高分子量物質(HMMS)百分比作為聚集之指示；使用差示掃描熱量測定(DSC)之熱穩定性；非還原性毛細管凝膠電泳(cGE)，評估所關注峰(POI)百分比；成像毛細電泳法(iCE)，評估電荷異質性；動態光散射(DLS)，評估黏度；及用於非特定性之AC-SINS、DNA ELISA、胰島素ELISA及人類FcRn層析。

使用YMC-Pack Diol-200 SEC管柱在20 mM Na ₃PO ₄、400 mM NaCl，pH 7.2緩衝液中進行分析型SEC。記錄了主峰的滯留時間(min)及50%高(min)之峰寬以及主峰(POI)、低分子量物質(LMMS)峰及HMMS峰的曲線下面積，且用於計算主峰(POI)、HMMS及LMMS百分比。蛋白質樣品濃縮至大致150 mg/mL且保持在25C下至多6週，或濃縮至5 mg且經受40C應力至多4週。

對於DSC方法，將樣品以0.3 mg/mL分配至自動化MicroCal PEAQ-DSC (Malvern Panalytical, Ltd)之樣品盤中，平衡在10℃下5分鐘，且隨後以每小時100℃之速率掃描至110℃。將原始資料經基線校正且將蛋白質濃度標準化。MicroCal PEAQ-DSC軟體(Malvern Panalytical, Ltd.)用於使資料擬合至具有適當轉換數目的非兩種狀態模型(non-two-state model)。

藉由基於動態光散射(DLS)珠粒之方法以高達約175 mg/mL之濃度來量測黏度。使用膜卡匣裝置10K MWCO (Thermo Scientific)，將磷酸鹽緩衝鹽水pH 7.2 (PBS)中之純化抗體針對20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 5.8充分透析。使用Viva自旋離心式濃縮器10K MWCO (GE Healthcare)濃縮抗體。將蛋白質濃縮至約175 mg/ml且藉由用樣品緩衝液稀釋來製備較低濃度。所有樣品均以12 μL製備。將300 nm珠粒(Nanosphere，Thermo Scientific)添加至蛋白質樣品及空白緩衝液(buffer blank)。將珠粒以1:100稀釋於20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 5.8中，且將0.75 μL經稀釋之珠粒摻入蛋白質樣品中。藉由平緩渦流混合蛋白質/珠粒及緩衝液/珠粒樣品。將8 μL樣品轉移至1536孔盤(SensoPlate，玻璃底部(glass bottom)，Greiner Bio-One)以藉由DLS分析。用光學透明膠帶密封該盤且以2000 RPM離心2分鐘以移除氣泡。使用DynaPro盤式讀取器(Wyatt Technology，Santa Barbara，Calif.)進行DLS量測。在25℃下培育樣品且在15次連續25秒獲取之情況下進行量測。珠粒之半徑經平均化以獲取具有可接受衰減曲線之資料。基於斯托克斯-愛因斯坦方程式(Stokes-Einstein equation)計算黏度。樣品黏度計算為所量測之表觀半徑除以標稱珠粒半徑10乘以0.893 cP，亦即在25℃下水之黏度。

使用Caliper LabChip GXII (PerkinElmer Inc., Hopkinton, MA)根據製造商建議方案進行非還原性cGE。使用具有PrinCE自動取樣器(ProteinSimple, San Jose, CA)之蛋白質簡單iCE3儀器來根據以下規格分析電荷異質性。將蛋白質稀釋於水中至2 mg/mL。樣品稀釋劑由0.01 mg/mL pI標記物7.55、0.01 mg/mL pI標記物10.1、1.0% Pharmalyte pH 5-8、3.0% Pharmalyte pH 8-10.5、0.25%甲基纖維素、2.0 M脲及4.25 mM精胺酸構成。樣品含有15 µL在2 mg/mL下之蛋白質及85 µL樣品稀釋劑。將樣品在1500伏下聚焦1分鐘且隨後在3000伏下聚焦9分鐘。IL27RA/gp130雙特異性抗體另外經受DNA/胰島素多反應性、AC-SINS自締合及人類FcRn層析生理特徵分析以評估非特異性特性，如實例4中所描述。

GBT-IL27R-4933 (杵-臼)及GBT-IL27R-4894 (EE-RR)之生理及生物分析評估之結果的概述指示兩者一般均具有與標準良好表現之抗體類似的有利分子特性(表23)。兩者均展現良好熱穩定性，其中Tm1值＞65℃，且在20 mM組胺酸、8.5%蔗糖、0.05 mg/mL EDTA pH 5.8中具有低黏度(在175 mg/ml下處於或低於15 cP)。兩種變體在25C及40C下激發或在小鼠血清存在下培育之後，由aSEC、cGE及iCE呈現出可接受的非特異性結合概況及可接受的穩定性(表23)。表 23 . 針對雙特異性變體評估之關鍵生理及生物分析特性的概述

特性	GBT-IL-27R-4933 (KiH)	GBT-IL-27R-4894 (EE/RR)
DSC	His-蔗糖平台緩衝液中之Tm1 - 70.81 ± 0.03	His-蔗糖平台緩衝液中之Tm1 - 70.70℃
黏度(DLS)	在175 mg/ml下約13.2 cP	在175 mg/ml下約15 cP
FcRn層析	0.01 min (rRT)	0.02 min (rRT)
非特異性(AC-SINS評分)	0,1	1,0
非特異性(DNA ELISA評分)	3,3	4,4
非特異性(胰島素ELISA評分)	3,2	4,4
在20 mM組胺酸/8.5%蔗糖pH 5.8中在約150+ mg/ml下之穩定性	6週時可接受的HMMS/LMMS	6週時可接受的HMMS/LMMS
25C穩定性iCE (約150 mg/ml)	酸性/鹼性物質之極少增加，6週25C (20 mM Tris/8.5%蔗糖pH7.5樣品受損)	酸性/鹼性物質之極少增加，6週25C
25C穩定性cGE (約150 mg/ml)	無顯著片段化，6週25C	無顯著片段化，6週25C
40C穩定性aSEC (5mg/ml)	HMMS/LMMS之極少增加，4週40C	HMMS/LMMS之極少增加，4週40C
40C穩定性aSEC-MALS (5mg/ml)	(未進行分析)	未偵測到高階寡聚物
40C穩定性iCE (5mg/ml)	酸性/鹼性物質之可接受的增加速率，4週40C	酸性/鹼性物質之可接受的增加速率，4週40C
40C穩定性cGE (5mg/ml)	極少片段化，4週40C	極少片段化，4週40C
40C穩定性(5mg/ml)生物分析	無顯著活性損失(結合ELISA/pSTAT1分析)	功能活性略微損失；藉由ELISA保持與gp130及IL27R之結合
蛋白分解易感性(小鼠血清)	未偵測到顯著片段化	未偵測到顯著片段化

功能活性：功能活性之比較展示在人類全血中之三個分析中，GBT-IL27R-4933 (杵-臼)具有比GBT-IL27R-4894 (EE-RR)略微更低的促效效能。(表24)。如實例8中所描述進行分析。CD3+ T細胞中用於STAT1磷酸化之EC ₅₀分別對於4933及4894為0.233及0.083 nM (2.8倍比)。CD14+單核球中之PD-L1上調的EC ₅₀對於4933及4894分別為0.006及0.002 nM (3倍比)，且CD14+單核球中之IDO1表現的EC ₅₀對於4933及4894分別為0.015及0.008 nM (1.8倍比)。

基於生物活性及製造特性之觀測差異，GBT-IL27R-4894 (EE-RR型式)顯示優於GBT-IL27R-4933 (杵-臼)的一致優勢。表 24 . 全血中 EE / RR 及杵 - 臼型式中的 IL27RA / gp130 雙特異性抗體之活性

	CD3+ T細胞中之pSTAT1 EC ₅₀(nM)	CD14+單核球中之PD-L1 EC ₅₀(nM)	CD14+單核球中之IDO1 EC ₅₀(nM)
GBT-IL27R-4894 (EE/RR)	0.083	0.002	0.008
GBT-IL27R-4933 (杵-臼)	0.233	0.006	0.015
	n=3個供體	n= 2個供體	n=3個供體

表 13 IL27RA 及 gp130 抗體序列

抗體	IL27RA及gp130抗體序列
VH CDR1	VH CDR2	VH CDR3	VL CDR1	VL CDR2	VL CDR3	VH	VL	CH1	鉸鏈	CH2	CH3	HC	LC
抗IL27RA - 4701	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14
抗gp130-4574	15	16	17	18	19	20	21	22	9	10	11	12	23	24
抗IL-27RA-4880 EE	1	2	3	4	5	6	7	8	9	25	11	26	27	14
抗gp130-4875 RR	15	16	17	18	19	20	21	22	9	28	11	29	30	24

表 14 IL27RA / gp130 雙特異性抗體 mAb - 4894 序列

雙特異性臂	IL27RA/gp130雙特異性抗體序列(在本文中稱為mAb-4894)
VH CDR1	VH CDR2	VH CDR3	VL CDR1	VL CDR2	VL CDR3	VH	VL	CH1	鉸鏈	CH2	CH3	HC	LC
來自抗IL27RA-4880 EE之第一臂	1	2	3	4	5	6	7	8	9	25	11	26	27	14
來自抗gp130-4875 RR之第二臂	15	16	17	18	19	20	21	22	9	28	11	29	30	24

表 15 抗體編碼序列

抗體	IL27RA及gp130抗體編碼序列
VH	VL	HC	LC
抗IL27RA - 4701	31	32	33	34
抗gp130-4574	35	36	37	38
抗IL27RA-4880 EE	31	32	39	34
抗gp130-4875 RR	35	36	40	38

表 16 序列表

SEQ	描述	序列
1	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VH CDR1	GFTFEYFGLQ
2	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VH CDR2	YTSSGGNYEYYEETLKG
3	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VH CDR3	TKTGDY
4	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VL CDR1	RASQDIGNSLT
5	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VL CDR2	GATGLAA
6	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VL CDR3	LQSKQYPYT
7	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VH	EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFEYFGLQWVRQAPGKGLEWIGYTSSGGNYEYYEETLKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARTKTGDYWGQGTLVTVSS
8	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 EE VL	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIGNSLTWYQQKPGKAPKRVIFGATGLAAGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLQSKQYPYTFGQGTKLEIK
9	CH1	ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSC
10	抗IL27RA -4701/抗gp130-4574鉸鏈	DKTHTCPPCP APEAAGA
11	CH2	PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAK
12	抗IL27RA -4701/抗gp130-4574 CH3	GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
13	抗IL27RA -4701 HC	EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE YFGLQWVRQA PGKGLEWIGY TSSGGNYEYY EETLKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARTK TGDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP EAAGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK
14	抗IL27RA -4701/抗IL-27RA-4880 LC	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQDIG NSLTWYQQKP GKAPKRVIFG ATGLAAGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ SKQYPYTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
15	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VH CDR1	GGSISSYYWS
16	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VH CDR2	RIYITGNTNY NPSLKD
17	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VH CDR3	EGPKLGIFDY
18	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VL CDR1	RASQSVSSSY LA
19	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VL CDR2	GTESRAT
20	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VL CDR3	QQYGGYPT
21	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VH	QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKVSGGSIS SYYWSWVRQA PGQGLEWIGR IYITGNTNYN PSLKDRVTMT VDTSTSTHYM ELSSLRSEDT AVYYCAREGP KLGIFDYWGQ GTLVTVSS
22	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VL	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSVS SSYLAWYQQK PGKAPKLLIY GTESRATGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYGGYPTFGGGTKVEIK
23	抗gp130-4574 HC	QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKVSGGSIS SYYWSWVRQA PGQGLEWIGR IYITGNTNYN PSLKDRVTMT VDTSTSTHYM ELSSLRSEDT AVYYCAREGP KLGIFDYWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CDKTHTCPPC PAPEAAGAPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
24	抗gp130-4574/抗gp130-4875 LC	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSVS SSYLAWYQQK PGKAPKLLIY GTESRATGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYGGYPTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC
25	抗IL-27RA-4880 EE鉸鏈	EKTHTCPPCP APEAAGA
26	抗IL-27RA-4880 EE CH3	GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCEVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
27	抗IL-27RA-4880 EE HC	EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE YFGLQWVRQA PGKGLEWIGY TSSGGNYEYY EETLKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARTK TGDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCEK THTCPPCPAP EAAGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQVYTLP PSREEMTKNQ VSLTCEVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK
28	抗gp130-4875 RR鉸鏈	RKTHTCPPCP APEAAGA
29	抗gp130-4875 RR CH3	GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK
30	抗gp130-4875 RR HC	QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKVSGGSIS SYYWSWVRQA PGQGLEWIGR IYITGNTNYN PSLKDRVTMT VDTSTSTHYM ELSSLRSEDT AVYYCAREGP KLGIFDYWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKVEPKS CRKTHTCPPC PAP E AAGAPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV E WESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
31	抗IL27RA - 4701/抗IL-27RA-4880 EE VH DNA	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGAGTACTTTGGATTGCAGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGATACACCAGTAGTGGTGGAAATTACGAGTACTATGAAGAAACGCTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAACGAAGACCGGGGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
32	抗IL27RA - 4701/抗IL-27RA-4880 EE VL DNA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGACATTGGAAATTCTTTAACCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGTGTGATCTTTGGTGCAACCGGCTTGGCAGCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCTACAGAGTAAACAGTATCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA
33	抗IL27RA - 4701 HC DNA	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGAGTACTTTGGATTGCAGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGATACACCAGTAGTGGTGGAAATTACGAGTACTATGAAGAAACGCTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAACGAAGACCGGGGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
34	抗IL27RA - 4701/抗IL-27RA-4880 EE LC DNA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGGACATTGGAAATTCTTTAACCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCGTGTGATCTTTGGTGCAACCGGCTTGGCAGCTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCTACAGAGTAAACAGTATCCTTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
35	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VH DNA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTCTCTGGAGGCTCCATCAGCAGCTATTACTGGAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATTGGACGTATCTATATCACCGGTAACACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGGACAGAGTCACGATGACCGTAGACACGTCCACGAGCACACACTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGGGCCCAAACTGGGGATCTTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA
36	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR VL DNA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTACAGAGAGTAGGGCCACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGTATGGTGGCTACCCTACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAA
37	抗gp130-4574 HC DNA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTCTCTGGAGGCTCCATCAGCAGCTATTACTGGAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATTGGACGTATCTATATCACCGGTAACACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGGACAGAGTCACGATGACCGTAGACACGTCCACGAGCACACACTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGGGCCCAAACTGGGGATCTTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
38	抗gp130-4574/抗gp130-4875 RR LC DNA	GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTGTTAGCAGCAGCTATTTAGCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGGTACAGAGAGTAGGGCCACTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGTATGGTGGCTACCCTACTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGT
39	抗IL-27RA-4880 EE HC DNA	GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGAGTACTTTGGATTGCAGTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGATACACCAGTAGTGGTGGAAATTACGAGTACTATGAAGAAACGCTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAACGAAGACCGGGGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTGAGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAAGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCGAGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
40	抗gp130-4875 RR HC DNA	CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGTCTCTGGAGGCTCCATCAGCAGCTATTACTGGAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATTGGACGTATCTATATCACCGGTAACACCAACTACAACCCCTCCCTCAAGGACAGAGTCACGATGACCGTAGACACGTCCACGAGCACACACTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGGGCCCAAACTGGGGATCTTTGACTACTGGGGCCAAGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCGTCGACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTTGAGCCCAAATCTTGTCGGAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCTGGGGCACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAGGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCCCCGGGAAAA
41	IL27RA人類	MRGGRGAPFW LWPLPKLALL PLLWVLFQRT RPQGSAGPLQ CYGVGPLGDL NCSWEPLGDL GAPSELHLQS QKYRSNKTQT VAVAAGRSWV AIPREQLTMS DKLLVWGTKA GQPLWPPVFV NLETQMKPNA PRLGPDVDFS EDDPLEATVH WAPPTWPSHK VLICQFHYRR CQEAAWTLLE PELKTIPLTP VEIQDLELAT GYKVYGRCRM EKEEDLWGEW SPILSFQTPP SAPKDVWVSG NLCGTPGGEE PLLLWKAPGP CVQVSYKVWF WVGGRELSPE GITCCCSLIP SGAEWARVSA VNATSWEPLT NLSLVCLDSA SAPRSVAVSS IAGSTELLVT WQPGPGEPLE HVVDWARDGD PLEKLNWVRL PPGNLSALLP GNFTVGVPYR ITVTAVSASG LASASSVWGF REELAPLVGP TLWRLQDAPP GTPAIAWGEV PRHQLRGHLT HYTLCAQSGT SPSVCMNVSG NTQSVTLPDL PWGPCELWVT ASTIAGQGPP GPILRLHLPD NTLRWKVLPG ILFLWGLFLL GCGLSLATSG RCYHLRHKVL PRWVWEKVPD PANSSSGQPH MEQVPEAQPL GDLPILEVEE MEPPPVMESS QPAQATAPLD SGYEKHFLPT PEELGLLGPP RPQVLA
42	IL27RA食蟹獼猴	MRGGRGAPFW PWPLPKLALL PLLWLLFQRT RPQGSAGPLQ CYGVGPLGDL NCSWEPLGDL GAPSELHFQS QKYRSNKTQT VAVAAGQSWV AIPREQLTMS DKLLVWGTKA GQPLWTPIFV NLETQMKPNA PQLGPDVDVS EDEPLEAIVH WAPPTWPSHK VLICQFHYRR CQEAAWTLLE LELKTIPLAP VEIQDLELAT GYQVYGRCRM EKEEDLWGEW SPILSFQTPP AAPKDVWVSG NLCGTPGGEE PLLLWKAPGP CVQVSYKVWF WVGGRELSPE GVTCCGSLIP SGAEWARVSA INATSWEPLT NLSLVCLDSA SAPHSVAVSS IAGSTELLVT WRPGPGEPRE HVVDWTRDGD PLEKLNWVRL PPGNFSALLP GNFTVGVPYR ITVTAVSASG LAPAPSIWGF REELAPLVGP TLWRLQDAPP GTPAIAWGEV PRHQLRGHLT HYTLCAQGGT SPSVCMNVSG NTQSVTLPDL PWGPCELWVT ASTIAGQGPP GPILRLHLPD NTLRWKVLPG ILFLWGLFLM GCGLSLATSG RCYHLWHKVL PRWVWEKVPD PANSSSGQPH MEQVPEAQPL ADLPILEVEE MEPPPVMESS QPPQVTAPLD SGYEKHFLPT PEELGLLGTL RPQVLA
43	IL27RA大鼠	MSWLRVARLK PLELLLPLLP LLLGTRPHGS PGPLQCYSVG PLGILNCSWE PLGDLETPPV LYHQSQKYHP NRTKEVKVPS RQSWVTIPRK QFTTADELLI WGTQEGQLLW PPVSVNLETQ MKPDTPQIFS DVDFFKEETL EAIVQWEPPK WPLHKVLICQ FRYKKCQTKE WTQLEPQLKT DLMTPIEMQN LEPGTGYQVS GRCQVENGYP WGEWSPDLSF PTPFLAPEDV WVSGTICETS GKPAALLFWK DPGPCVQVTY TVWLGVGDVT TTQEEVPCCK SPIPAQIEWA VVSTGNQTSW MPLTNLSLVC LAPESAPCDV RVSSTDGSPG IKVTWKQETG KPWAYVVDWA QDGDSLDKLN WTRLPPENLS TLLSGDFQAG VPYRITVTSV YSGGLAAAPS VWGFIKELAP LAGPAVWRLP DDPTGTPVVA WGEVPRHQLR GQATHYTFCR QSRGIPTICM NVSSQTKTVT LPNLYSGPFK LWVMVSTAAG QGPPGPSLSL HIPDNRIRWK FLPWVLSLWG LLLVGCGLSL APPRCLYQRH KLLPQWIWER VPDPANSNSG QPYIKEVSLP QPPKDGPILE VEEMELQPVT ESPKASVPLY SGYEKHFLPT PEELGLLRPP APRVLDCSAS G
44	IL27RA小鼠	MNRLRVARLT PLELLLSLMS LLLGTRPHGS PGPLQCYSVG PLGILNCSWE PLGDLETPPV LYHQSQKYHP NRVWEVKVPS KQSWVTIPRE QFTMADKLLI WGTQKGRPLW SSVSVNLETQ MKPDTPQIFS QVDISEEATL EATVQWAPPV WPPQKVLICQ FRYKECQAET WTRLEPQLKT DGLTPVEMQN LEPGTCYQVS GRCQVENGYP WGEWSSPLSF QTPFLDPEDV WVSGTVCETS GKRAALLVWK DPRPCVQVTY TVWFGAGDIT TTQEEVPCCK SPVPAWMEWA VVSPGNSTSW VPPTNLSLVC LAPESAPCDV GVSSADGSPG IKVTWKQGTR KPLEYVVDWA QDGDSLDKLN WTRLPPGNLS TLLPGEFKGG VPYRITVTAV YSGGLAAAPS VWGFREELVP LAGPAVWRLP DDPPGTPVVA WGEVPRHQLR GQATHYTFCI QSRGLSTVCR NVSSQTQTAT LPNLHLGSFK LWVTVSTVAG QGPPGPNLSL HLPDNRIRWK ALPWFLSLWG LLLMGCGLSL ASTRCLQARC LHWRHKLLPQ WIWERVPDPA NSNSGQPYIK EVSLPQPPKD GPILEVEEVE LQPVVESPKA SAPIYSGYEK HFLPTPEELG LLV
45	gp130人類	MLTLQTWLVQ ALFIFLTTES TGELLDPCGY ISPESPVVQL HSNFTAVCVL KEKCMDYFHV NANYIVWKTN HFTIPKEQYT IINRTASSVT FTDIASLNIQ LTCNILTFGQ LEQNVYGITI ISGLPPEKPK NLSCIVNEGK KMRCEWDGGR ETHLETNFTL KSEWATHKFA DCKAKRDTPT SCTVDYSTVY FVNIEVWVEA ENALGKVTSD HINFDPVYKV KPNPPHNLSV INSEELSSIL KLTWTNPSIK SVIILKYNIQ YRTKDASTWS QIPPEDTAST RSSFTVQDLK PFTEYVFRIR CMKEDGKGYW SDWSEEASGI TYEDRPSKAP SFWYKIDPSH TQGYRTVQLV WKTLPPFEAN GKILDYEVTL TRWKSHLQNY TVNATKLTVN LTNDRYLATL TVRNLVGKSD AAVLTIPACD FQATHPVMDL KAFPKDNMLW VEWTTPRESV KKYILEWCVL SDKAPCITDW QQEDGTVHRT YLRGNLAESK CYLITVTPVY ADGPGSPESI KAYLKQAPPS KGPTVRTKKV GKNEAVLEWD QLPVDVQNGF IRNYTIFYRT IIGNETAVNV DSSHTEYTLS SLTSDTLYMV RMAAYTDEGG KDGPEFTFTT PKFAQGEIEA IVVPVCLAFL LTTLLGVLFC FNKRDLIKKH IWPNVPDPSK SHIAQWSPHT PPRHNFNSKD QMYSDGNFTD VSVVEIEAND KKPFPEDLKS LDLFKKEKIN TEGHSSGIGG SSCMSSSRPS ISSSDENESS QNTSSTVQYS TVVHSGYRHQ VPSVQVFSRS ESTQPLLDSE ERPEDLQLVD HVDGGDGILP RQQYFKQNCS QHESSPDISH FERSKQVSSV NEEDFVRLKQ QISDHISQSC GSGQMKMFQE VSAADAFGPG TEGQVERFET VGMEAATDEG MPKSYLPQTV RQGGYMPQ
46	gp130食蟹獼猴	MLTLQTWVVQ ALFIFLTTES IGELLDPCGY ISPESPVVQL HSNFTAVCVL KEKCMDYFHV NANYIVWKTN HFTIPKEQYT IINRTASSVT FTDISSLNIQ LTCNILTFGQ LEQNVYGITI ISGLPPEKPK NLSCIVNEGK KMRCEWNRGR ETHLETNFTL KSEWATHKFA DCKAKRDTPT SCTVDYSTVY FVNIEVWVEA ENALGKVTSD HINFDPVYKV KPNPPHNLSV INSEELSSIL KLTWTNPSIK SVIRLKYNIQ YRTKDASTWS QIPPEDTAST RSSFTVQDLK PFTEYVFRIC CMKEDGKGYW SDWSEEANGI TYEDRPSKAP SFWYKIDPSH AQGYRTVQLM WKTLPPFEAN GKILDYEVTL TRWKSHLQNY TVNDTKLTVN LTNDRYVATL TARNLVGKSD AAVLTIPACD FQATHPVMDL KAFPKDNMLW VEWTTPRESV KKYILEWCVL SDKAPCIADW QQEDGTVHRT HLRGNLAESK CYLITVTPVY ADGPGSPESI KAYLKQAPPS KGPTVRTKKV GKNEAVLEWD QLPVDVQNGF IRNYTIFYRT IIGNETAVNV DSSHTEYTLS SLTSDTLYMV RMAAYTDEGG KDGPEFTFTT PKFAQGEIEA IVVPVCLAFL LTTLLGVLFC FNKRDLIKKH IWPNVPDPSK SHIAQWSPHT PPRHNFSSKD QMYSDGNFTD VSVVEIEAND KKPFPEDLKS LDLFKKEKIN TEGHSSGIGG SSCMSSSRPS ISSSDENESS QNTSSTVQYS TVVHSGYRHQ VPSVQVFSRS ESTQPLLDSE ERPEDLQLVD HVDGSDDILP RQQYFKQNCS QHESSPDISH FERSKQVSSV NEEDFVRLKQ QISDHISQSC GSGEMKMFQE VSAADPFGPG TEGQVERFET IGMEAAIDEG MPKSYLPQTV RQGGYMPQ
47	gp130大鼠	MSALRIWLMQ ALLIFLTTES IGQLVEPCGY IYPEFPVVQR GSNFTATCVL KEKCLQVYSV NATYIVWKTN HVAVPKEQVT VINRTASSVT FTDVVFQNVQ LTCNILSFGQ IEQNVYGITI LSGYPPDIPT NLSCIVNEGK NMLCQWDPGR ETYLETNYTL KSEWATEKFP DCRTKHGTSS CMMGYTPIYF VNIEVWVEAE NALGNVSSEP INFDPVDKVK PSPPHNLSVT NSEELSSILK LAWVNSGLDS ILRLKSDIQY RTKDASTWIQ VPLEDTVSPR TSFTVQDLKP FTEYVFRIRS IKENGKGYWS DWSEEASGTT YEDRPSKAPS FWYKVNANHP QEYRSARLIW KTLPLSEANG KILDYEVVLT QSKSVSQTYT VNGTELIVNL TNNRYVASLA ARNVVGKSPA TVLTIPGSHF KASHPVVDLK AFPKDNLLWV EWTPPSKPVN KYILEWCVLS ENSPCIPDWQ QEDGTVNRTH LRGSLLESKC YLITVTPVFP GGPGSPESMK AYLKQAAPSK GPTVRTKKVG KNEAVLEWDH LPVDVQNGFI RNYSISYRTS VGKEMVVRVD SSHTEYTLSS LSSDTLYMVH MAAYTEEGGK DGPEFTFTTL KFAQGEIEAI VVPVCLAFLL TTLLGVLFCF NKRDLIKKHI WPNVPDPSKS HIAQWSPHTP PRHNFNSKDQ MYSDANFTDV SVVEIEANNK KPCPDDLKSL DLFKKEKIST EGHSSGIGGS SCMSSSRPSI SSSEENESAQ STASTVQYST VVHSGYRHQV PSVQVFSRSE STQPLLDSEE RPEDLQLVDS VDSGDEILPR QQYFKQSCSQ PGASPDVSHF ERSSQVPSGS EEDFVRLKQQ QVSDHISEPY GSEQRRLFQE GSVADALGTG TDGQIERFES VGMETAMDED ISKSYLPQTV RQGGYMPQ
48	gp130小鼠	MSAPRIWLAQ ALLFFLTTES IGQLLEPCGY IYPEFPVVQR GSNFTAICVL KEACLQHYYV NASYIVWKTN HAAVPREQVT VINRTTSSVT FTDVVLPSVQ LTCNILSFGQ IEQNVYGVTM LSGFPPDKPT NLTCIVNEGK NMLCQWDPGR ETYLETNYTL KSEWATEKFP DCQSKHGTSC MVSYMPTYYV NIEVWVEAEN ALGKVSSESI NFDPVDKVKP TPPYNLSVTN SEELSSILKL SWVSSGLGGL LDLKSDIQYR TKDASTWIQV PLEDTMSPRT SFTVQDLKPF TEYVFRIRSI KDSGKGYWSD WSEEASGTTY EDRPSRPPSF WYKTNPSHGQ EYRSVRLIWK ALPLSEANGK ILDYEVILTQ SKSVSQTYTV TGTELTVNLT NDRYVASLAA RNKVGKSAAA VLTIPSPHVT AAYSVVNLKA FPKDNLLWVE WTPPPKPVSK YILEWCVLSE NAPCVEDWQQ EDATVNRTHL RGRLLESKCY QITVTPVFAT GPGGSESLKA YLKQAAPARG PTVRTKKVGK NEAVLAWDQI PVDDQNGFIR NYSISYRTSV GKEMVVHVDS SHTEYTLSSL SSDTLYMVRM AAYTDEGGKD GPEFTFTTPK FAQGEIEAIV VPVCLAFLLT TLLGVLFCFN KRDLIKKHIW PNVPDPSKSH IAQWSPHTPP RHNFNSKDQM YSDGNFTDVS VVEIEANNKK PCPDDLKSVD LFKKEKVSTE GHSSGIGGSS CMSSSRPSIS SNEENESAQS TASTVQYSTV VHSGYRHQVP SVQVFSRSES TQPLLDSEER PEDLQLVDSV DGGDEILPRQ PYFKQNCSQP EACPEISHFE RSNQVLSGNE EDFVRLKQQQ VSDHISQPYG SEQRRLFQEG STADALGTGA DGQMERFESV GMETTIDEEI PKSYLPQTVR QGGYMPQ
49	IL27 p28單Fc	FPRPPGRPQL SLQELRREFT VSLHLARKLL SEVRGQAHRF AESHLPGVNL YLLPLGEQLP DVSLTFQAWR RLSDPERLSF ISTTLQPFHA LLGGLGTQGR WTNMERMQLW AMRLDLRDLQ RHLRFQVLAA GFNLPEEEEE EEEEEEEERK GLLPGALGSA LQGPAQVSWP QLLSTYRLLH SLECVLSRAV RELLLLSKAG HSVWPLGFPT LSPQPGGGGS TGGGPSVFLF PPKPKDTLMI SRTPEVTCVV VDVSHEDPEV KFNWYVDGVE VHNAKTKPRE EQYNSTYRVV SVLTVLHQDW LNGKEYKCKV SNKALPAPIE KTISKAKGQP REPQVYTLPP SREEMTKNQV NLTCLVKGFY PSDIAVEWES NGQPENNYKT TPPVLDSDGS FFLNSTLTVD KSRWQQGNVF SCSVLHEALH SHYTQKSLSL SPKHHHHHH
50	EBI3	RKGPPAALTL PRVQCRASRY PIAVDCSWTL PPAPNSTSPV SFIATYRLGM AARGHSWPCL QQTPTSTSCT ITDVQLFSCA PYVLNVTAVH PWGSSSSFVP FITEHIIKPD PPEGVRLSPL AERQLQVQWE PPGSWPFPEI FSLKYWIRYK RQGAARFHRV GPIEATSFIL RAVRPRARYY VQVAAQDLTD YGELSDWSLP ATATMSLGKG SGDYKDDDDK
51	IL27 p28 Fc杵突變Y349C-T366W粗體且帶下劃線，Fc部分斜體。	FPRPPGRPQL SLQELRREFT VSLHLARKLL SEVRGQAHRF AESHLPGVNL YLLPLGEQLP DVSLTFQAWR RLSDPERLSF ISTTLQPFHA LLGGLGTQGR WTNMERMQLW AMRLDLRDLQ RHLRFQVLAA GFNLPEEEEE EEEEEEEERK GLLPGALGSA LQGPAQVSWP QLLSTYRLLH SLECVLSRAV RELLLLSKAG HSVWPLGFPT LSPQPENLYF QGVTG EPKSS DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQV C T LPPSREEMTK NQVSL W CLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGHHHHHH
52	Fc臼(空)臼突變S354C-T366S-L368A-Y407V粗體且帶下劃線	EPKSSDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE PQVYTLPP C R EEMTKNQVSL S C A VKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP PVLDSDGSFF L V SKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP G
53	κ輕鏈F引子	GTGGTATCAACGCAGAGTACGCG
54	κ輕鏈R引子	GAAGATGAAGACAGATGGTGCAGCCAC
55	小鼠IgG f引子	GTGGTATCAACGCAGAGTACGCG
56	小鼠IgG R引子	GGGTGCCAGGGGGAAGACSGA
57	gp130 VL-CL-Fc-(臼)	DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCRASQSVS SSYLAWYQQK PGKAPKLLIY GTESRATGVP SRFSGSGSGT DFTLTISSLQ PEDFATYYCQ QYGGYPTFGG GTKVEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGE CDKTHTC PPCP APEAAGA PSVFLFPPKPK DTLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPP CREEMT KNQVSL SC AV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFL VSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSPGK
58	gp130 VH-CH1 (mFd)	QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKVSGGSIS SYYWSWVRQA PGQGLEWIGR IYITGNTNYN PSLKDRVTMT VDTSTSTHYM ELSSLRSEDT AVYYCAREGP KLGIFDYWGQ GTLVTVSSAS TKGPSVFPLA PSSKSTSGGT AALGCLVKDY FPEPVTVSWN SGALTSGVHT FPAVLQSSGL YSLSSVVTVP SSSLGTQTYI CNVNHKPSNT KVDKKV EPKS C
59	IL-27R重鏈(杵)	EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFE YFGLQWVRQA PGKGLEWIGY TSSGGNYEYY EETLKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRAED TAVYYCARTK TGDYWGQGTL VTVSSASTKG PSVFPLAPSS KSTSGGTAAL GCLVKDYFPE PVTVSWNSGA LTSGVHTFPA VLQSSGLYSL SSVVTVPSSS LGTQTYICNV NHKPSNTKVD KKVEPKSCDK THTCPPCPAP EAAGAPSVFL FPPKPKDTLM ISRTPEVTCV VVDVSHEDPE VKFNWYVDGV EVHNAKTKPR EEQYNSTYRV VSVLTVLHQD WLNGKEYKCK VSNKALPAPI EKTISKAKGQ PREPQV CTLP PSREEMTKNQ VSL WCLVKGF YPSDIAVEWE SNGQPENNYK TTPPVLDSDG SFFLYSKLTV DKSRWQQGNV FSCSVMHEAL HNHYTQKSLS LSPGK
60	IL-27R輕鏈(與IL-27RA 4880 LC (SEQ ID NO: 14)一致)	RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCLQ SKQYPYTFGQ GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG LSSPVTKSFN RGEC

圖1 本發明之雙特異性抗IL27RA/gp130抗體的示意圖。Fc雜二聚化係經由工程改造於CH3域中之突變驅動。圖2 具有人類IL27RA細胞外域重組蛋白質之複合物中的親本抗IL27RA純系2255 Fab片段之共晶體結構可以3.2Å解析度獲得。蛋白質組分由HEK293表現。圖3 具有人類gp130細胞外域重組蛋白質之複合物中的親本抗gp130純系2246 Fab片段之人源化版本(3754)的共晶體結構可以2.7 Å解析度獲得。蛋白質組分由HEK293表現。圖4展示在分化後IL-27R促效劑對Th1細胞中之IFNγ產生無作用。圖5 本發明之抗IL27RA/gp130抗體增加CD4+CD25+FoxP3+ iTreg群體且增加LAG-3及TIM-3表面表現。圖6. IL27配位體複合物之單Fc版本的圖示。CH23LS-Fc：具有使單體Fc穩定之突變的人類IgG1 Fc；Flag：Flag標籤；H6：His標籤；p28 (f29-p243)-C107-L212C：IL27配位體之p28子單元，胺基酸序列F29至P243藉由C107至S及L212至C處之突變以允許在p28之L212與Ebi3之M99之間使二硫鍵形成穩定；Ebi3 (R21-K229)-M99C：IL27配位體胺基酸R21至K229之Ebi3子單元，具有M99至C突變以允許用p28子單元之L212C使二硫鍵形成穩定。CID1613及1617：構築體編號。圖7 IL27配位體複合物之杵(Knob)及臼(Hole)版本的圖示。huIgG1Fc「杵」：具有「杵」突變之人類IgG1 Fc；huIgG1Fc「臼」：具有「臼」突變之人類IgG1 Fc ；Flag：Flag標籤；H6：His標籤；p28 (f29-p243)-C107-L212C：IL27配位體之p28子單元，胺基酸序列F29至P243，在C107至S及L212至C處之突變允許在p28之L212與Ebi3之M99之間使二硫鍵形成穩定；Ebi3 (R21-K229)-M99C：起始於胺基酸R21結束於K229之IL27配位體的Ebi3子單元，具有M99至C突變以允許用p28子單元之L212C使二硫鍵形成穩定。CID1353、1643及1617：構築體編號。圖8. 2255相對於IL27配位體對於IL27RA之Octet競爭分析感測圖譜在第1締合步驟(association step) (約1059s)結束時對準。1060秒之感測圖譜評估GBT-IL-27R-2255是否能夠在hIL27:EBi3存在下結合hIL27R-CH23Fc-Flag。(右圖上之中線)具有hIL27：結合於hIL27R之EBi3且GBT-IL-27R-2255未展示任何結合。此表明IL27Ra引導IgG GBT-IL-27R-2255與IL-27配位體在結合IL27R中競爭。在此分析型式中，感測器C6 (右圖上之上方線條)在感測器上僅具有hIL27R而無hIL27LEBi3展示與GBT-IL-27R-2255之結合。感測器D6 (右圖上之下方線條)為緩衝液對照。當浸漬於緩衝液中時，可能歸因於感測器D6上hIL27:EBi3之解離，感測器D6不與B6重疊。圖9：兩種雙特異性型式之示意圖。左：EE/RR型式(GBT-IL27R-4894)。右：杵-臼(knob-in-hole) mFd型式(GBT-IL27R-4933)。標記IL-27RA及gp130結合Fab以及其VH、VL、CH1及CL組分。指示用於雜二聚化之特徵(E及R突變或杵及臼)。

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Claims

一種特異性結合IL27RA之經分離抗體，其包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)，係選自由以下組成之群： (i) 包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)之抗體，其包含SEQ ID NO: 7之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列，以及SEQ ID NO: 8之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列； (ii) 包含重鏈可變區(IL27RA-VH)及輕鏈可變區(IL27RA-VL)之抗體，其包含根據SEQ ID NO: 1之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 2之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 3之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 4之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 5之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 6之CDR-L3序列； (iii) 包含SEQ ID NO: 7之IL27RA-VH序列、包含SEQ ID NO: 8之IL27RA-VL序列的抗體； (iv) 包含由SEQ ID NO: 31之核酸序列編碼之IL27RA-VH序列且包含由SEQ ID NO 32之核酸序列編碼之IL27RA-VL序列的抗體； (v) 與第二抗體競爭結合IL27RA的抗體，該第二抗體包含具有SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的VH及具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的VL；及 (vi) 特異性結合IL27RA之抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的重鏈可變區(IL27RA-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的輕鏈可變區(IL27RA-VL)序列。
如請求項1之抗體，其進一步包含Fc域，其中該Fc域為IgA、IgD、IgE、IgM或IgG之同型，且視情況為人類IgG1，其包含選自由以下組成之群中之一或多者的一或多個取代： (i) 按照EU編號之L234A、L235A及G237A，其中編號係根據人類IgG1野生型； (ii) D221E及L368E (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型；及 (iii) D221R及K409R (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。
如請求項1至2中任一項之抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，係選自由以下組成之群： (i) 包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之輕鏈的抗體； (ii) 包含具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之輕鏈的抗體；及 (iii) 由編碼結合IL27RA之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的經分離聚核苷酸編碼之抗體，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 33之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者； (iv) 由編碼結合IL27RA之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的經分離聚核苷酸編碼之抗體，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 39之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者；及 (v) 特異性結合IL27RA之抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列。
如請求項1至3中任一項之抗體，其中該抗體拮抗IL27RA。
如請求項1至3中任一項之抗體，其中該抗體進一步包含針對第二目標之結合域，且該第二目標視情況為gp130。
一種經分離抗體，其特異性結合醣蛋白130 (gp130)，包含重鏈可變區(gp130-VH)及輕鏈可變區(gp130-VL)，包含選自由以下組成之群的一或多者： (i) 包含SEQ ID NO: 21之CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3序列以及SEQ ID NO: 22之CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3序列的抗體； (ii) 包含根據SEQ ID NO: 15之CDR-H1序列；根據SEQ ID NO: 16之CDR-H2序列；根據SEQ ID NO: 17之CDR-H3序列，且包含根據SEQ ID NO: 18之CDR-L1序列；根據SEQ ID NO: 19之CDR-L2序列，及根據SEQ ID NO: 20之CDR-L3序列的抗體； (iii) 包含SEQ ID NO: 21之gp130-VH序列且包含SEQ ID NO: 22之gp130-VL序列的抗體； (iv) 包含由SEQ ID NO: 35之核酸序列編碼之gp130-VH序列且包含由SEQ ID NO: 36之核酸序列編碼之gp130-VL序列的抗體； (v) 與第二抗體競爭結合pg130的抗體，該第二抗體包含具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的VH及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的VL；及 (vi) 包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的重鏈可變區(gp130-VH)，及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列的抗體。
如請求項6之抗體，其進一步包含Fc域，其中該Fc域為IgA、IgD、IgE、IgM或IgG之同型，且視情況為人類IgG1，其包含選自由以下組成之群中之一或多者的一或多個取代： (i) 按照EU編號之L234A、L235A及G237A，其中編號係根據人類IgG1野生型； (ii) D221E及L368E (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型；及 (iii) D221R及K409R (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。
如請求項6至7中任一項之抗體，其包含重鏈(HC)及輕鏈(LC)，係選自由以下組成之群： (i) 包含具有SEQ ID NO: 30之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO 24之序列之輕鏈的抗體； (ii) 包含具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之輕鏈的抗體； (iii) 由編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的經分離聚核苷酸編碼之抗體，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 33之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者； (iv) 由編碼結合gp130之抗體之重鏈、輕鏈或兩者的經分離聚核苷酸編碼之抗體，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 40之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者；及 (v) 特異性結合gp130之抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。
如請求項6至8中任一項之抗體，其中該抗體進一步包含針對第二目標之結合域，且該第二目標視情況為IL27RA。
一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中該第一抗原結合位點包含如請求項1至5中任一項之抗體，且其中該第二抗原結合位點包含如請求項6至9中任一項之抗體。
一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中該第一抗原結合位點包含IL27RA-VH及IL27RA-VL，其中該第二抗原結合位點包含gp130-VH及gp130-VL，該抗體選自由以下組成之群： (i) 抗體，其中： a) 該IL27RA-VH包含(i)包含SEQ ID NO: 1之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的VH CDR3； b) 該IL27RA-VL包含(i)包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 5之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的VL CDR3； c) 該gp130-VH包含(i)包含SEQ ID NO: 15之胺基酸序列的VH CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的VH CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的VH CDR3； d) 且該gp130-VL包含(i)包含SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的VL CDR1；(ii)包含SEQ ID NO: 19之胺基酸序列的VL CDR2；及(iii)包含SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的VL CDR3； (ii) 抗體，其包含：包含SEQ ID NO: 7之胺基酸序列的IL27RA-VH、包含SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的IL27RA-VL、包含SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的gp130-VL及包含SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的gp130-VL；及 (iii) 抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的IL27RA-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的IL27RA-VL序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的gp130-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的輕鏈可變區(gp130-VL)序列。
如請求項10至11中任一項之抗體，其進一步包含Fc域，其中該Fc域為IgA、IgD、IgE、IgM或IgG之同型，且視情況為人類IgG1，其包含選自由以下組成之群中之一或多者的一或多個取代： (i) 按照EU編號之L234A、L235A及G237A，其中編號係根據人類IgG1野生型； (ii) D221E及L368E (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型；及 (iii) D221R及K409R (按照EU編號)，其中編號係根據人類IgG1野生型。
如請求項12之抗體，其中該抗體包含含有第一Fc鏈及第二Fc鏈之Fc域，該第一Fc鏈及該第二Fc鏈各自含有促進該第一Fc鏈與該第二Fc鏈結合的一或多個胺基酸修飾。
如請求項13之抗體，其中該第一Fc鏈包含人類IgG1之位置221及位置409 (EU編號)處之胺基酸修飾，且其中該第二Fc鏈包含人類IgG1之位置221及位置368 (按照EU編號)處之胺基酸修飾，且其中該等修飾視情況為該第一鏈中之D221R及K409R以及該第二鏈中之D221E及L368E。
一種經分離抗體，其包含結合IL27RA之第一抗原結合位點及結合gp130之第二抗原結合位點，其中該第一抗原結合位點包含VH及VL，其中該第二抗原結合位點包含VH及VL，且其中該抗體對人類IL27RA之結合親和力比對人類gp130之抗體結合親和力低至少兩個數量級。
如請求項1至15中任一項之抗體，其選自由以下組成之群： (i) 抗體，其包含第一重鏈及第一輕鏈以及第二重鏈及第二輕鏈，其中該第一重鏈及該第一輕鏈包含結合IL27RA之第一抗原結合位點，且該第二重鏈及該第二輕鏈包含結合gp130之第二抗原結合位點，其中該第一抗體重鏈包含SEQ ID NO: 27之胺基酸序列，該第一抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列，該第二抗體重鏈包含SEQ ID NO: 30之胺基酸序列，且該第二抗體輕鏈包含SEQ ID NO: 34之胺基酸序列；及 (ii) 抗體，其包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的重鏈(IL27RA-HC)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的輕鏈(IL27RA-LC)序列，且進一步包含由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的重鏈(gp130-VH)及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的輕鏈(gp130-LC)序列。
如請求項9至16中任一項之抗體，其中該抗體具有選自由以下組成之群的一或多個特徵： (i) 以SPR量測，對IL27RA之結合親和力高於對gp130之結合親和力； (ii) 以SPR量測，對IL27RA之結合親和力比對gp130之結合親和力高至少10倍； (iii) 當由SPR量測時，該抗體以小於1 nM之親和力結合人類IL27RA； (iv) 當由SPR量測時，該抗體以小於1000 nM之親和力結合人類gp130； (v) 該抗體促效IL27RA； (vi) 該抗體結合食蟹獼猴(cynomolgus) IL27RA； (vii) 以SPR量測，抗體與食蟹獼猴IL27RA之結合KD在該抗體與人類IL27RA之結合KD的10個數量級內； (viii) 該抗體拮抗gp130； (ix) 該抗體結合食蟹獼猴gp130； (x) 以SPR量測，該抗體與食蟹獼猴gp130之結合KD在該抗體與人類gp130之結合KD的3個數量級內； (xi) 以SPR量測，該抗體對IL27RA之結合親和力比對gp130高至少100倍； (xii) 當由SPR量測時，該抗體以小於1 nM之親和力結合人類IL27RA； (xiii) 當由SPR量測時，該抗體以小於1000 nM之親和力結合人類gp130； (xiv) 當由SPR量測時，該抗體以0.01 nm與5 nM之間的親和力結合人類IL27RA且以10 nm與1000 nM之間的親和力結合人類gp130； (xv) 在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞螢光流式細胞量測分析中，該抗體之特徵在於小於10 nm之EC50； (xvi) 在磷酸化STAT1 CD3+ T細胞之流式細胞量測分析中，該抗體之特徵在於小於5 nm之EC50； (xvii) 該抗體能夠下調病原性細胞介素產生； (xviii) 該抗體能夠下調T輔助細胞中之Il-17產生； (xix) 以Il-17免疫分析量測，該抗體之特徵在於小於0.05 nm之IC50； (xx) 該抗體能夠促進調節T細胞分化； (xxi) 該抗體能夠上調吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)表現； (xxii) 該抗體能夠上調CD14+人類單核球及/或人類結腸上皮細胞(colonocyte)中之吲哚胺-吡咯2,3-雙加氧酶(IDO1)表現；及 (xxiii) 根據LC-MS分析測定產生之犬尿胺酸，該抗體之特徵在於小於100 nm之EC50。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量的如請求項1至17中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
如請求項1至17中任一項之抗體或如請求項18之醫藥組合物，其用於疾病之治療，且其中視情況，發炎性疾病為選自由以下組成之群的一或多者：發炎性疾病、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(Crohn's disease，CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉(celiac disease)、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。
一種治療醫學病狀之方法，其包含向有需要之個體投與治療有效量的如請求項1至17中任一項之抗體或如請求項18之醫藥組合物，且其中視情況，該醫學病狀為選自由以下組成之群的一或多者：發炎性疾病、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病(CD)、潰瘍性結腸炎(UC)、多發性硬化症、類風濕性關節炎、乳糜瀉、哮喘、過敏性疾病、肥胖症、2型糖尿病及癌症。
一種經分離聚核苷酸，其編碼如請求項1至17中任一項之抗體。
如請求項21之聚核苷酸，其中該聚核苷酸為RNA。
一種經分離聚核苷酸，其包含選自由以下組成之群的一或多者： (i) 編碼結合IL27RA之抗體之該VH的聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO 31之核酸序列； (ii) 編碼結合IL27RA之抗體之該VL的聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列； (iii) 編碼結合IL27RA之抗體之該VH及該VL的聚核苷酸，其中編碼該VH之該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 31之核酸序列且編碼該VL之該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 32之核酸序列； (iv) 編碼結合IL27RA之抗體之該重鏈、該輕鏈或兩者的聚核苷酸，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 33之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者； (v) 編碼結合IL27RA之抗體之該重鏈、該輕鏈或兩者的經分離聚核苷酸，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 39之核酸序列、SEQ ID NO: 34之核酸序列或兩者； (vi) 編碼結合gp130之抗體之該VH的聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列； (vii) 編碼結合gp130之抗體之該VL的聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列； (viii) 編碼結合gp130之抗體之該VH及該VL的聚核苷酸，其中編碼該VH之該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 35之核酸序列且編碼該VL之該聚核苷酸包含SEQ ID NO: 36之核酸序列； (ix) 編碼結合gp130之抗體之該重鏈、該輕鏈或兩者的聚核苷酸，且其中該聚核苷酸包含：SEQ ID NO: 37之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者； (x) 編碼結合gp130之抗體之該重鏈、該輕鏈或兩者的聚核苷酸，且其中該核酸包含：SEQ ID NO: 40之核酸序列、SEQ ID NO: 38之核酸序列或兩者； (xi) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的IL27RA-VH； (xii) 由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的IL27RA-VL； (xiii) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127622之質體編碼的IL27RA-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127623之質體編碼的IL27RA-VL序列； (xiv) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的IL27RA-HC； (xv) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的IL27RA-LC； (xvi) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127626之質體編碼的IL27RA-HC及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127627之質體編碼的IL27RA-LC序列； (xvii) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的gp130-VH； (xviii) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的gp130-VL； (xix) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127624之質體編碼的gp130-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127625之質體編碼的gp130-VL序列； (xx) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的gp130-HC； (xxi) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的gp130-LC；及 (xxii) 聚核苷酸，其編碼由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127628之質體編碼的gp130-VH及由寄存在ATCC且具有ATCC登錄號PTA-127629之質體編碼的gp130-LC序列。
一種載體，其包含如請求項23中任一項之聚核苷酸。
一種經分離宿主細胞，其包含如請求項23之聚核苷酸或如請求項24之載體。
一種產生經分離抗體之方法，其包含在引起產生該抗體之條件下培養如請求項25之宿主細胞，及回收該抗體。