TW202328079A

TW202328079A - P2x3拮抗劑之製備

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Publication number: TW202328079A
Application number: TW111130903A
Authority: TW
Inventors: 卡琳維林那芙; 大衛Ｒ克羅南邵
Original assignee: 加拿大商貝盧斯醫療咳嗽病公司
Priority date: 2021-08-17
Filing date: 2022-08-17
Publication date: 2023-07-16
Also published as: WO2023021328A1; EP4387959A1; CN117858870A

Abstract

本文闡述P2X3拮抗劑之製備及合成製程中所用之化學中間體。

Description

P2X3拮抗劑之製備

P2X嘌呤受體係由細胞外三磷酸腺苷(ATP)激活之離子通道家族。嘌呤受體與多種生物功能有關。P2X3受體次單元係此家族之成員。其初始係自大鼠背根神經節選殖。Chen等人， Nature, 第377卷，第428-431頁(1995)。大鼠及人類P2X3之核苷酸及胺基酸序列現在均係已知的。Lewis等人， Nature, 第377卷，第432-435頁(1995)；及Garcia-Guzman等人， Brain Res. Mol. Brain Res., 第47卷，第59-66頁(1997)。

本文闡述合成P2X3拮抗劑之方法，其中該P2X3拮抗劑係(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)或其醫藥上可接受之鹽或共晶體。

在一個態樣中，係製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法： (化合物1A)，其包含使具有以下結構之化合物：與鹼在溶劑中接觸。在一些實施例中，鹼係氫氧化鈉水溶液。在一些實施例中，溶劑係選自四氫呋喃、N-甲基-2-吡咯啶酮、甲醇、異丙醇及第三丁醇。在一些實施例中，溶劑係異丙醇。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與氯化鋰及乙酸接觸。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與具有結構之化合物及鹼在溶劑之存在下接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、第三丁醇鉀及三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，鹼係三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，溶劑係四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑係2-甲基四氫呋喃。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二甲酯、碘化鉀及鹼接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。在一些實施例中，鹼係碳酸銫。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二乙酯、碘化鉀及鹼接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。在一些實施例中，鹼係碳酸銫。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與甲苯磺醯氯及鹼在溶劑之存在下接觸。在一些實施例中，鹼係三乙胺。在一些實施例中，溶劑係二氯甲烷。

本文進一步揭示製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物：； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)。

本文進一步揭示製備(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)； F) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化氫在乙酸乙酯中反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯甲酸甲酯及碳酸氫鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； F) 隨後使具有以下結構之化合物：與N-溴琥珀醯亞胺及酸反應，以產生具有以下結構之化合物：； G) 隨後使具有以下結構之化合物：與2-胺基-4-甲基吡啶及視情況硼氫化鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； H) 隨後使具有以下結構之化合物：與羰基二咪唑及甲胺或甲胺鹽酸鹽反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1)。

本文進一步揭示具有以下結構之化合物：；或其共晶體。

本文進一步揭示具有以下結構之化合物：。 以引用方式併入

本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案皆以引用方式併入本文中，其併入程度如同明確且個別地指示將每一個別公開案、專利或專利申請案以引用方式併入一般。

交叉參考

本申請案主張於2021年8月17日提出申請之美國臨時申請案第63/234,044號之優先權，其全部內容以引用方式併入本文中。

優良藥品製造規範通常為大規模製造臨床有用候選藥物所需的。本文提供製造(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A) (P2X3拮抗劑(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)或其醫藥上可接受之鹽或共晶體之合成中之關鍵合成中間體)之某些製程及方法。定義

除非說明相反之情形，否則說明書及隨附申請專利範圍中所用之以下術語具有下文所指示之含義。

除非上下文另外明確規定，否則如本文及隨附申請專利範圍中所用，單數形式「一(a、an)」及「該」包括複數個指示物。因此，例如，提及「藥劑」包括複數種此類藥劑，且提及「細胞」包括對一或多個細胞(或複數個細胞)及其等效物之提及。

在本文中針對物理性質(例如分子量)或化學性質(例如化學式)使用範圍時，意欲包括其中之範圍及特定實施例之所有組合及次組合。

在提及數量或數值範圍時，術語「約」意指所提及之數量或數值範圍係實驗可變性內(或統計實驗誤差內)之近似值，且由此數量或數值範圍在所述數量或數值範圍之1%與15%之間變化。

術語「包含(comprising)」(及諸如「包含(comprise或comprises)」或「具有」或「包括」等相關術語)並不意欲排除以下情形：例如，在其他某些實施例中，本文所闡述之任一物質組成、組合物、方法或製程或諸如此類之實施例「由所述特徵組成」或「基本上由所述特徵組成」。

術語「個體」或「患者」涵蓋哺乳動物或非哺乳動物。哺乳動物之實例包括(但不限於)哺乳動物綱之任何成員：人類；非人靈長類動物，例如黑猩猩及其他猿及猴類；農場動物，例如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家畜，例如兔、狗及貓；實驗室動物，包括齧齒類動物，例如大鼠、小鼠及天竺鼠及諸如此類。非哺乳動物之實例包括(但不限於)鳥、魚及諸如此類。在本文所提供方法及組合物之一個實施例中，哺乳動物係人類。

如本文所用，「治療(treatment, treating)」或「緩解」或「改善」在本文中可互換使用。該等術語係指用於獲得有益或期望結果(包括但不限於治療益處及/或預防益處)之方法。「治療益處」意指根除或改善所治療之潛在病症。同樣，治療益處係利用根除或改善一或多種與潛在病症相關之生理症狀來達成，使得在患者中觀察到改良，但患者可能仍遭受潛在病症之折磨。對於預防益處而言，將組合物投與給處於發展特定疾病風險之患者、或已報告疾病之一或多種生理症狀之患者，即使已作出此疾病之診斷。

「醫藥上可接受之鹽」包括酸加成鹽及鹼加成鹽二者。本文所述任一化合物之醫藥上可接受之鹽意欲涵蓋任何及所有醫藥上適宜之鹽形式。本文所述化合物之較佳醫藥上可接受之鹽係醫藥上可接受之酸加成鹽及醫藥上可接受之鹼加成鹽。

「醫藥上可接受之酸加成鹽」係指彼等保持游離鹼之生物有效性及性質之鹽，該等鹽不會在生物學上或其他方面不合意，且係利用諸如以下之無機酸形成：鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫碘酸、氫氟酸、亞磷酸及諸如此類。亦包括利用諸如以下之有機酸形成之鹽：脂肪族單羧酸及二羧酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸、烷二酸、芳香族酸、脂肪族及芳香族磺酸等，且包括(例如)乙酸、三氟乙酸、丙酸、羥乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、對甲苯磺酸、柳酸及諸如此類。因此實例性鹽包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、酸性亞硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、辛酸鹽、異丁酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、杏仁酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、苯磺酸鹽、甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽及諸如此類。亦涵蓋胺基酸鹽(例如精胺酸鹽)、葡萄糖酸鹽及半乳糖醛酸鹽(例如，參見Berge S.M.等人，「Pharmaceutical Salts,」 Journal of Pharmaceutical Science, 66:1-19 (1997))。鹼性化合物之酸加成鹽係藉由使游離鹼形式與足夠量之期望酸接觸以產生鹽來製備。

「醫藥上可接受之鹼加成鹽」係指彼等保持游離酸之生物有效性及性質且不會在生物學上或其他方面不合意之鹽。該等鹽係將無機鹼或有機鹼添加至游離酸中來製備。在一些實施例中，醫藥上可接受之鹼加成鹽係利用金屬或胺(例如鹼金屬及鹼土金屬或有機胺)形成。衍生自無機鹼之鹽包括(但不限於)鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、錳鹽、鋁鹽及諸如此類。衍生自有機鹼之鹽包括(但不限於)一級胺、二級胺及三級胺、經取代胺(包括天然經取代胺)、環狀胺及鹼性離子交換樹脂之鹽，例如，異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、2-二甲基胺基乙醇、2-二乙基胺基乙醇、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普羅卡因(procaine)、N,N-二苄基乙二胺、氯普羅卡因(chloroprocaine)、哈胺(hydrabamine)、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、乙二苯胺、N-甲基葡萄糖胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可鹼、嘌呤、六氫吡嗪、六氫吡啶、N-乙基六氫吡啶、聚胺樹脂及諸如此類之鹽。參見Berge等人，見上文。

如本文所用，術語「醫藥組合」意指由混合或組合多於一種活性成分產生之產物且包括活性成分之固定及非固定組合二者。術語「固定組合」意指將活性成分以單一實體或劑量之形式同時投與給患者。術語「非固定組合」意指將活性成分作為單獨實體同時、並行或依序投與給患者而無特定介入時間限制，其中該投與在患者體內提供兩種化合物之有效含量。後者亦適用於雞尾酒療法，例如投與3種或以上之活性成分。

如本文所用，術語「共投與」或諸如此類意欲涵蓋向單一患者投與所選治療劑，且意欲包括該等藥劑藉由相同或不同投與途經或在相同或不同時間投與進行投與之治療方案。

在此說明書中使用術語「活化劑」來表示導致所指示受體活化之任何分子物種，無論當該物種局部投與時，該物種本身是否與受體結合或該物種之代謝物是否與受體結合。因此，活化劑可為受體之配體，或其可為代謝為受體之配體之活化劑，即，在組織中所形成且為試劑配體之代謝物。

如本文所用，術語「拮抗劑」係指與核激素受體結合且隨後降低激動劑誘導之核激素受體之轉錄活性之小分子藥劑。

如本文所用，術語「激動劑」係指與核激素受體結合且隨後在缺乏已知激動劑之情況下增加核激素受體轉錄活性之小分子藥劑。

如本文所用，術語「反向激動劑」係指與核激素受體結合且隨後降低在缺乏已知激動劑之情況下所呈現核激素受體轉錄活性之基礎位準之小分子藥劑。

如本文所用，術語「調節」意指直接或間接地與靶標蛋白質相互作用，以改變靶標蛋白質之活性，包括(僅以實例方式)抑制靶標之活性，或限制或降低靶標之活性。

如本文所用，術語「調節劑」係指改變靶標之活性之化合物。舉例而言，調節劑可使靶標之某一活性之幅值與在缺乏調節劑之情形中之活性幅值相比增加或減少。在某些實施例中，調節劑係降低靶標之一或多種活性之幅值之抑制劑。在某些實施例中，抑制劑完全阻止靶標之一或多種活性。 化合物

在一些實施例中，本文所述之P2X3拮抗劑係(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)或其醫藥上可接受之鹽或共晶體。化合物1具有結構：。

(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)或其醫藥上可接受之鹽係合成化合物1之關鍵中間體。化合物1A具有結構：。在一些實施例中，合成化合物1A之起始材料係。在一些實施例中，化合物1A合成中之中間體係。在一些實施例中，化合物1合成中之中間體係。在一些實施例中，化合物1合成中之中間體係。在一些實施例中，化合物1合成中之中間體係。在一些實施例中，化合物1合成中之中間體係。 化合物之其他形式

在一些情形中，本文所述化合物可呈非鏡像異構物、鏡像異構物或其他立體異構形式存在。本文所述化合物包括所有非鏡像異構物、鏡像異構物及差向異構物形式以及其適當混合物。立體異構物之分離可藉由層析或藉由形成非鏡像異構物並藉由再結晶或層析或其任一組合來實施。(Jean Jacques, Andre Collet, Samuel H. Wilen, 「Enantiomers, Racemates and Resolutions」, John Wiley And Sons, Inc., 1981, herein incorporated by reference for this disclosure)。立體異構物亦可藉由立體選擇性合成法獲得。

在一些情形中，化合物可呈互變異構物存在。所有互變異構物均包括在本文所述之化學式內。 醫藥上可接受之鹽

在一些實施例中，本文所述化合物以其醫藥上可接受之鹽形式存在。在一些實施例中，本文揭示之方法包括藉由投與該等醫藥上可接受之鹽治療疾病之方法。在一些實施例中，本文揭示之方法包括藉由投與呈醫藥組合物之該等醫藥上可接受之鹽治療疾病的方法。

在一些實施例中，本文所述之化合物具有酸性或鹼性基團且因此與許多無機或有機鹼及無機及有機酸中之任一者反應以形成醫藥上可接受之鹽。在一些實施例中，該等鹽係在本發明化合物之最終分離及純化期間原位製備，或藉由使呈其游離形式之純化化合物與適宜酸或鹼單獨反應並分離由此形成之鹽來製備。

在一些實施例中，化合物1之醫藥上可接受之鹽係乙酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、酒石酸氫鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、柳酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽或酒石酸鹽。在一些實施例中，化合物1之醫藥上可接受之鹽係單鹽酸鹽。在其他實施例中，化合物1之醫藥上可接受之鹽係單-鹽酸鹽。 溶劑合物

在一些實施例中，本文所述之化合物係呈溶劑合物存在。本發明提供藉由投與該等溶劑合物治療疾病之方法。本發明進一步提供藉由投與呈醫藥組合物之該等溶劑合物治療疾病的方法。

溶劑合物含有化學計量或非化學計量之溶劑，且在一些實施例中，係在利用醫藥上可接受之溶劑(例如水、乙醇及諸如此類)結晶之製程期間形成。水合物係在溶劑為水時形成，或醇合物係在溶劑為醇時形成。本文所述化合物之溶劑合物係在本文所述之製程期間便捷地製備或形成。僅以實例之方式，本文所述化合物之水合物係藉由使用有機溶劑(包括但不限於二噁烷、四氫呋喃或甲醇)自水性/有機溶劑混合物中再結晶便捷地製備。另外，本文所提供之化合物係以非溶劑化以及溶劑化形式存在。通常，出於本文所提供之化合物及方法之目的，溶劑化形式視為等效於非溶劑化形式。 經標記化合物

在一些實施例中，本文所述化合物以其同位素標記形式存在。在一些實施例中，本文所揭示之方法包括藉由投與該等同位素標記之化合物治療疾病的方法。在一些實施例中，本文所揭示之方法包括藉由投與呈醫藥組合物之該等同位素標記之化合物治療疾病的方法。因此，在一些實施例中，本文所揭示之化合物包括同位素標記之化合物，其中除一或多個原子由原子質量或質量數不同於自然界中通常發現之原子質量或質量數之原子代替之事實，該等化合物與彼等在本文中所列舉者相同。可併入本發明化合物中之同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟及氯之同位素，例如分別為 ²H、 ³H、 ¹³C、 ¹⁴C、 ¹⁵N、 ¹⁸O、 ¹⁷O、 ³¹P、 ³²P、 ³⁵S、 ¹⁸F及 ³⁶Cl。含有上文所提及同位素及/或其他原子之其他同位素之本文所述化合物及其醫藥上可接受之鹽、酯、溶劑合物、水合物或衍生物在本發明之範圍內。某些同位素標記之化合物(例如彼等併入諸如 ³H及 ¹⁴C等放射性同位素者)可用於藥物及/或受質組織分佈分析。氚化(即， ³H)及碳-14 (即， ¹⁴C)同位素因其易於製備及可檢測性而尤佳。此外，用重同位素(例如氘，即， ²H)取代產生某些治療優點，其係由較大代謝穩定性(例如增加之活體內半衰期或減少之劑量需求)而產生。與具有天然氘含量之化合物1相比，氘併入含量之增加產生可檢測動力學同位素效應(KIE)，其可影響化合物1之藥物動力學、藥理學及/或毒物學參數。在一些實施例中，同位素標記之化合物或其醫藥上可接受之鹽係藉由任何適宜方法製備。

在一些實施例中，化合物1中之至少一個氫經氘替代。

在一些實施例中，本文所述化合物藉由其他方式標記，包括(但不限於)使用發色團或螢光部分、生物發光標記或化學發光標記。 製備方法

在一些實施例中，本文所述化合物之合成係使用化學文獻中所述之方法、使用本文所述之方法或藉由其組合來完成。另外，本文所呈現之溶劑、溫度及其他反應條件可有所變化。

在其他實施例中，合成本文所述化合物所用之起始材料及試劑係合成或自市售來源獲得，例如但不限於Sigma-Aldrich、FischerScientific (Fischer Chemicals)及AcrosOrganics。在其他實施例中，本文所述之化合物及具有不同取代基之其他相關化合物係使用本文所述之技術及材料以及此領域中公認之彼等來合成，例如如在以下中所闡述：Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis, 第1-17卷(John Wiley and Sons, 1991)；Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds, 第1-5卷及增補(Elsevier Science Publishers, 1989)；Organic Reactions, 第1-40卷(John Wiley and Sons, 1991), Larock’s Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989), March, Advanced Organic Chemistry 第4版, (Wiley 1992)；Carey及Sundberg, Advanced Organic Chemistry 第4版, 第A及B卷(Plenum 2000, 2001)，及Green及Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis 第3版, (Wiley 1999) (所有均以引用的方式併入此揭示內容)。本文所揭示製備化合物之一般方法可源自反應且反應可藉由使用適當試劑及條件進行修改，以引入如本文所提供式中所見之不同部分。

在一些實施例中係製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法，其包含使具有以下結構之化合物：與鹼在溶劑中接觸。在一些實施例中，鹼係氫氧化鈉水溶液。在一些實施例中，溶劑係選自四氫呋喃、N-甲基-2-吡咯啶酮、甲醇、異丙醇及第三丁醇。在一些實施例中，溶劑係異丙醇。在一些實施例中，溶劑係第三丁醇。在一些實施例中，溶劑係四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑係N-甲基-2-吡咯啶酮。在一些實施例中，溶劑係甲醇。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與具有以下結構之化合物：及鹼在溶劑之存在下接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、第三丁醇鉀及三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，鹼係三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，鹼係第三丁醇鉀。在一些實施例中，鹼係雙(三甲基矽基)胺化鋰。在一些實施例中，鹼係氫化鈉。在一些實施例中，溶劑係四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑係2-甲基四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑係四氫呋喃。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二甲酯、碘化鉀及鹼接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。在一些實施例中，鹼係碳酸銫。在一些實施例中，鹼係碳酸鈉。在一些實施例中，鹼係碳酸鉀。在一些實施例中，鹼係雙(三甲基矽基)胺化鉀。在一些實施例中，鹼係雙(三甲基矽基)胺化鈉。在一些實施例中，鹼係雙(三甲基矽基)胺化鋰。在一些實施例中，鹼係氫化鈉。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與具有結構之化合物及鹼在溶劑之存在下接觸。在一些實施例中，鹼係選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、第三丁醇鉀及三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，鹼係三乙胺/氯化鎂。在一些實施例中，溶劑係四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。在一些實施例中，溶劑係2-甲基四氫呋喃。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二烷基酯、碘化鉀及鹼接觸。在一些實施例中，鹼選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。在一些實施例中，鹼係碳酸銫。

在製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法的一些實施例中，具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與甲磺醯氯或甲烷磺酸酐及鹼在溶劑之存在下接觸。在一些實施例中，鹼係三乙胺。在一些實施例中，溶劑係二氯甲烷。

在一些實施例中，本文進一步揭示製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)。

在一些實施例中，本文進一步揭示製備(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)； F) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯化氫在乙酸乙酯中反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使具有以下結構之化合物：與氯甲酸甲酯及碳酸氫鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； F) 隨後使具有以下結構之化合物：與N-溴琥珀醯亞胺及酸反應，以產生具有以下結構之化合物：； G) 隨後使具有以下結構之化合物：與2-胺基-4-甲基吡啶及視情況硼氫化鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； H) 隨後使具有以下結構之化合物：與羰基二咪唑及甲胺或甲胺鹽酸鹽反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1)。 醫藥組合物及投與方法

本文所述P2X3拮抗劑之投與可成任何藥理學形式，其包括單獨的治療有效量之P2X3拮抗劑或與醫藥上可接受之載劑之組合。

醫藥組合物可以習用方式使用一或多種生理上可接受之載劑進行調配，該等載劑包括促進將活性化合物處理成可用於製藥之製劑之賦形劑或輔助劑。適當調配物取決於所選投與途徑。關於用於本文所述醫藥組合物之適宜賦形劑的額外細節可見於(例如) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第十九版(Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)；Hoover、John E., Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975；Liberman, H.A.及Lachman, L.編輯, Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980；及Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 第七版(Lippincott Williams & Wilkins1999)，本文以引用的方式併入此揭示內容。

如本文所用，醫藥組合物係指本文所述化合物1與其他化學組分(例如載劑、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑)之混合物。醫藥組合物促使將化合物投與給生物體。在實踐本文所提供之治療方法或用途中，本文所述化合物之治療有效量係在醫藥組合物中投與給患有所治療疾病、病症或病況之哺乳動物中。在一些實施例中，哺乳動物係人類。治療有效量可端視疾病之嚴重程度、個體的年齡及相對健康狀況、所用化合物之功效及其他因素而廣泛變化。化合物1可單獨使用或與一或多種治療劑作為混合物之組分組合使用(如在組合療法中)。

本文所述醫藥調配物可藉由多種投與途徑投與給個體，包括(但不限於)經口、非經腸(例如，靜脈內、皮下、肌內)、鼻內、經頰、局部、直腸或經皮投與途徑。此外，本文所述包括本文所述化合物1之醫藥組合物可調配成任何適宜劑型，包括(但不限於)水性口服分散液、液體、凝膠、糖漿劑、酏劑、漿液、懸浮液、氣溶膠、受控釋放調配物、速溶調配物、泡騰調配物、凍乾調配物、錠劑、粉劑、丸劑、糖衣劑、膠囊、延遲釋放調配物、緩釋調配物、脈衝式釋放調配物、多微粒調配物及混合之立即釋放與受控釋放調配物。

在一些實施例中，化合物1係調配成錠劑劑型。在一些實施例中，化合物1係調配成膠囊劑型。在一些實施例中，化合物1係調配成懸浮液劑型。在一些實施例中，化合物1係調配成膠囊裝粉劑(powder-in-capsule)劑型。在一些實施例中，化合物1係調配成瓶裝粉劑(powder-in-bottle)用於複水成懸浮液。

包括本文所述化合物之醫藥組合物可依習用方式製造，例如僅供舉例而言，藉助習用混合、溶解、製粒、製糖衣、磨細、乳化、囊封、包埋或壓縮製程。

可端視劑量調配物之藥物動力學參數及所用投與途徑而重複投與劑量。

尤其有利地係將組合物調配成劑量單位形式，以便於劑量之投與及均勻性。如本文所用，劑量單位形式係指適於呈單一劑量(unitary dosage)用於欲治療哺乳動物個體之物理離散單位；每一單位含有經計算以產生期望治療效應之預定量之活性化合物與所需醫藥載劑之組合。劑量單位形式之規格取決於且直接依賴於下列因素：(a) 化合物1之獨特特性及欲達成之特定治療效應，及(b) 複合此活性化合物以治療個體敏感性之技術中之固有限制。特定劑量可容易地由熟習此項技術者根據例如患者之大致體重或體表面積或所佔據身體空間之體積來計算。劑量亦將端視所選之特定投與途徑來計算。熟習此項技術者按慣例將對確定適當治療劑量所需之計算進行進一步改進。確切劑量係結合標準劑量反應研究來確定。應理解，實際所投與組合物之量將由醫師根據包括以下之相關情況確定：欲治療之一或多種病況、所投與組合物之選擇、個別患者之年齡、體重及反應、患者症狀之嚴重程度及所選投與途徑。 給藥方法及治療方案

本文所述之化合物可用於製備藥劑用於調節P2X3或用於治療將至少部分地受益於P2X3調節之疾病或病況。另外，治療需要該治療之個體中本文所述之任何疾病或病況之方法涉及將醫藥組合物以治療有效量投與給該個體，該醫藥組合物含有至少一種本文所述之化合物或其醫藥上可接受之鹽或醫藥上可接受之溶劑合物或水合物。

含有本文所述化合物之組合物可經投與用於預防性及/或治療性治療。在治療性應用中，將組合物以足以治癒或至少部分地阻止疾病或病況之症狀之量投與給已患有該疾病或病況之患者。對於此應用有效之量將取決於疾病或病況之嚴重程度及病程、先前療法、患者之健康狀況、體重及對藥物之反應及治療醫師之判斷。

在預防性應用中，將含有本文所述化合物之組合物投與給易感染特定疾病、病症或病況或以其他方式處於特定疾病、病症或病況之風險下之患者。此一量定義為「預防有效量或劑量」。在此應用中，精確量亦取決於患者之健康狀況、體重及諸如此類。當用於患者中時，用於此應用之有效量將取決於疾病、病症或病況之嚴重程度及病程、先前療法、患者之健康狀況及對藥物之反應及治療醫師之判斷。

在其中患者之病況未改良之情形中，根據醫生之判定，化合物之投與可係長期投與，換言之，持續延長時間段，包括貫穿患者生命之持續時間，以改善或以其他方式控制或限制患者之疾病或病況之症狀。

在其中患者之狀況確實改良之情形中，根據醫生之判定，可繼續給予化合物之投與；或者，可將所投與藥物之劑量暫時降低或暫時中止一段時間(即，「藥物假期」)。藥物假期之長度可在2天與1年之間變化，包括(僅以實例之方式) 2天、3天、4天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。藥物假期期間之劑量降低可自約10%至約100%，包括(僅以實例之方式)約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%、約50%、約55%、約60%、約65%、約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%。

一旦患者之狀況發生改良，便視需要投與維持劑量。隨後，可根據症狀將投與劑量或投與或二者降低至維持經改良之疾病、病症或病況之含量。然而，在任何症狀復發時，患者可需要長期間歇治療。

將相當於此一量之既定藥劑之量將端視各種因素而變化，例如特定化合物、疾病或病況及其嚴重程度、需要治療之個體或宿主之特性(例如，重量)，但仍可根據與該病例相關之特定情況(包括例如正投與之特定藥劑、投與途徑、所治療之病況及所治療之個體或宿主)以此領域中公認之方式確定。一般而言，然而，用於成人治療之劑量通常將在約0.01 mg/天至約5000 mg/天、在一些實施例中約1 mg/天至約1500 mg/天之範圍內。期望劑量可便捷地以單一劑量或作為同時(或在短時間段內)或以適當間隔(例如每天兩個、三個、四個或更多個分劑量)投與之分開劑量存在。

本文所述之醫藥組合物可呈適於單次投與精確劑量之單位劑型形式。在單位劑型中，將調配物分成含有適當量之一或多種化合物之單位劑量。單位劑量可呈含有調配物之離散量之包裝的形式。非限制性實例係包裝錠劑或膠囊及存於小瓶、膠囊、瓶或安瓿中之粉劑。水性懸浮液組合物可包裝於單一劑量不可再封容器中。或者，可使用多劑量可再封容器，在此情形中組合物中通常包括防腐劑。僅以實例之方式，用於非經腸注射之調配物可以單位劑型(其包括但不限於安瓿)存在，或存於多劑量容器中，且添加防腐劑。實例

當可獲得時，所有化學品、試劑及溶劑均商業來源購買且不經進一步純化即使用。實例 1 ： (S)-2-(3-(2,6- 二氟 -4-( 甲氧基羰基 ) 苯基 )-3- 側氧基丙基 ) 嗎啉 -4- 甲酸甲酯 ( 化合物 1A) 之合成

步驟1：在0℃下向化合物 A(30.0 g, 138.0 mmol, 1.00 eq)於DCM (300 mL)中之溶液中添加TsCl (39.4 g, 207 mmol, 1.5 eq)及Et ₃N (15.3 g, 151 mmol, 21.1 mL, 1.10 eq)。將混合物在20℃下攪拌16小時。將混合物用H ₂O (500 mL)稀釋並用DCM (200 mL * 2)萃取。將合併之有機層用鹽水(500 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮以獲得殘餘物。粗產物與MTBE/PE (5/1, 100 mL)一起研磨15 min，過濾並在減壓下乾燥，以獲得呈白色固體之化合物 B(46.2 g, 87.1%產率, 96.8%純度)。

步驟2：向化合物 B(25.0 g, 67.3 mmol)於DMF (250 mL)中之溶液中添加Cs ₂CO ₃(65.7 g, 201毫莫耳, 3.00 eq)、丙二酸二甲酯(26.6 g, 201 mmol, 23.2 mL, 3.00 eq)及KI (11.1 g, 67.3 mmol, 1.00 eq)。將混合物在80℃下攪拌6小時。將混合物用10%檸檬酸溶液(200 mL)及水(300 mL)稀釋並用1:1甲苯-庚烷(3 × 100 mL)萃取。合併之有機層用10%碳酸鈉(200 mL)、及亞硫酸氫鈉(200 mL)且然後鹽水(200 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮以獲得呈黃色油狀物之化合物 C(24.1 g,73%產率, 72%純度)，其不經進一步純化便用於下一步驟。

步驟3：在10℃下向化合物 C(24.0 g, 72.4 mmol)於2-MeTHF (360 mL)中之溶液中添加MgCl ₂(6.90 g, 72.4 mmol, 1.00 eq)及Et ₃N (36.6 g, 362 mmol, 9.45 mL, 5.00 eq)。在10℃下向混合物中添加化合物 D(27 g, 97.7 mmol, 1.35 eq)並將反應在25℃下攪拌2小時。反應混合物藉由添加在0℃下之DMAP (1.40 eq)及TEA (1.80 eq)驟冷，並在20℃下攪拌2小時。然後添加甲苯:正庚烷= 1: 1 (200.0 mL)，隨後添加10% Na ₂CO ₃(300 mL)，並將混合物在20℃下攪拌30 min。有機相用10% Na ₂CO ₃(300 mL)、10%檸檬酸(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥。過濾並在減壓下濃縮以獲得39.1 g粗製化合物 E，其不經進一步純化便用於下一步驟。

步驟4：向化合物 E(39.1 g, 68.4 mmol)於NMP (390 mL)中之溶液中添加LiCl ( 29.0 g, 684 mmol, 10.0 eq)及HOAc (12.3 g, 205 mmol, 3.00 eq)。將反應混合物在85℃下攪拌8 h，用1:1甲苯/庚烷(200 mL)稀釋並用10%檸檬酸溶液(3 X 200 mL)洗滌。將合併之檸檬酸溶液利用1:1甲苯/庚烷(100 mL)反萃取，且然後合併之有機層用10%碳酸鈉(3 X 200 mL)及鹽水(300 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮以獲得呈褐色油狀物之粗製化合物 F(26.1g)，其不經進一步純化便用於下一步驟。

步驟5：向化合物 F(5.10 g, 11.2 mmol, 1.00 eq)於i-PrOH (51 mL)中之溶液中添加NaOH (1 M, 33.5 mL, 3.00 eq)。將混合物在25℃下攪拌6小時。向反應混合物中緩慢添加10%檸檬酸以將pH調整至4 ~ 5 (50 mL)並用甲苯80 mL (40 mL * 2)萃取。將合併之有機層用鹽水(80 mL)洗滌，經Na ₂SO ₄乾燥，過濾並在減壓下濃縮以獲得殘餘物。粗產物與MeCN (3V)在-10℃下一起研磨30 min。然後將混合物之懸浮液過濾且固體在減壓下乾燥，以獲得呈白色固體之化合物 1A(2.23 g, 5.52 mmol, 49.2%產率, 98.8%純度)。將母液在減壓下濃縮，以獲得呈黃色油狀物之額外化合物 1A(2.10 g, 3.71 mmol, 33.1%產率, 70.5%純度)。此程序係以26 g輸入規模在以上步驟4中使用化合物 F來實施並產生23.3 g粗製化合物 1A。 化合物 D 之合成

將羧酸 D-1(100 g, 0.387莫耳)於2-甲基四氫呋喃(400 mL)及DMF (1.61 g, 0.022莫耳)中之溶液冷卻至10℃至20℃。然後將溶液利用草醯氯(61.45 g, 0.48莫耳)逐滴處理，使得溫度維持在10℃至20℃並將所得混合物在10℃至20℃下攪拌1-3 h。所得醯氯 D之溶液直接用於下一步驟。實例 2 ： (S)-2-((2-(2,6- 二氟 -4-( 甲基胺甲醯基 ) 苯基 )-7- 甲基咪唑并 [1,2-a] 吡啶 -3- 基 ) 甲基 ) 嗎啉 -4- 甲酸甲酯 ( 化合物 1) 之合成

將於乙酸乙酯中之化合物1A (130 g)用於乙酸乙酯中之4M HCl (5 eq)處理。將反應在15℃至25℃下攪拌並藉由HPLC檢測以確保完成(約2小時)。將固體過濾，用乙酸乙酯洗滌並在50℃下乾燥10小時，以獲得化合物 G(108.2 g)。

將化合物 G(20 g, 0.06莫耳)之溶液加載至燒瓶，隨後加載THF (100 mL)及水(30 mL)。將混合物冷卻至-5℃並添加碳酸氫鈉(22.5 g, 0.27莫耳；4.5 eq)。將Moc-Cl (6.77 g, 0.072莫耳；1.2 eq)經30分鐘逐滴添加至混合物，同時將溫度維持在-5℃至0℃。起始 G消耗之後，將所得固體過濾並用水(約40 mL)洗滌且然後在45℃至55℃下乾燥，以獲得 H之鈉鹽(29.55 g)。藉由添加水並使用3M HCl將pH調整至3將鈉鹽轉化為羧酸。將所得混合物用乙酸乙酯萃取並將有機萃取物濃縮。將產物 H自乙酸乙酯: 甲基環己烷(1.5 V: 10 V)再結晶。

製備化合物 H(80 g，基於起始鈉鹽, 0.224莫耳)於二氯甲烷(400 mL)中之溶液。在室溫下添加N-溴琥珀醯亞胺(NBS；39.6 g, 0.224莫耳)並將所得混合物冷卻至-5℃。逐滴添加三氟甲磺酸(1 eq)並將所得混合物在25℃至30℃下攪拌。添加額外NBS (0.02 eq)並將混合物再攪拌1 hr。將反應冷卻至-5℃並加載至7%碳酸氫鈉冷水溶液中。所得pH為5-6。添加抗壞血酸(0.01 eq)，將各層分離，且水層用二氯甲烷(2 X 250 mL)萃取。將合併之有機層用水洗滌且所得化合物 I之溶液(對於2種非鏡像異構物，分析產率為101%)直接用於隨後步驟。

將 I於DCM中之溶液濃縮至小體積並將DCM交換為乙腈(10 V)。添加2-胺基-4-甲基吡啶(相對於 I，5當量)並將反應在50℃下攪拌24小時且然後在80℃下攪拌16小時。將反應混合物濃縮以去除乙腈並添加二氯甲烷(8體積)-水(3 V)之混合物。將混合物冷卻至0-10℃並使用2N HCl將pH調整至2.5。水層用二氯甲烷萃取並將有機層濃縮且溶劑交換為THF。添加10% NaOH水溶液(1.5 eq)、隨後NaBH ₄(0.45 eq)並在20℃下攪拌2-5小時。添加水(4 V)且混合物用MTBE洗滌。將二氯甲烷(5體積)添加至含有產物之鈉鹽的水層並使用2N HCl將pH調整至5.6-5.8。將水層用二氯甲烷萃取，濃縮且溶劑用乙醇交換並濃縮至約0.4體積。添加2體積之乙酸乙酯並將混合物在0℃下攪拌並過濾，以獲得化合物 J。藉由在甲醇(5 V)中在55-60℃下加熱、隨後添加種晶且然後經1小時冷卻至0-5℃使化合物 J再結晶。在-5至5℃下逐滴添加水(10體積)並將混合物攪拌15小時，過濾並將化合物 J用1:2甲醇-水洗滌並在55-60℃下在真空下乾燥。

將 M(26 g)於THF (115 mL)中之溶液在20℃至30℃下攪拌並添加19 g CDI (1,1-羰基二咪唑)。將混合物攪拌0.5 hr至1 hr且然後分批添加7.9 g甲胺鹽酸鹽，隨後逐滴添加18.9 g二異丙基乙胺。將反應在20℃至30℃下攪拌2至34小時，且然後利用水逐滴稀釋，同時維持溫度。添加二氯甲烷(173 g)，攪拌混合物，且各層分離。水層用二氯甲烷萃取且合併之有機層用27%氯化銨溶液洗滌兩次且然後用水洗滌兩次。使用CUNO過濾器使含有化合物1之有機層循環穿過活性碳達1至3小時。將濾液在低於35℃下濃縮至1-2 V並藉助連續添加/蒸發操作將二氯甲烷用乙酸乙酯交換，直至殘餘二氯甲烷＜1%。添加乙酸乙酯(2-4 V)。將化合物1於乙酸乙酯中之混合物在45℃至55℃下攪拌1至2小時，冷卻至20℃至30℃且然後攪拌1至2小時，將化合物1過濾並用乙酸乙酯洗滌，並乾燥。實例 3 ：對於人類 P2X3 及 P2X2/3 受體之功效及選擇性

本文所述化合物1作為P2X3及P2X2/P2X3通道(由人類P2RX2及P2RX3基因編碼且在HEK293細胞中穩定表現)之拮抗劑的能力係利用Fluo-8鈣套組進行評估。化合物 1係在12個濃度下評估。

對於拮抗劑效應評價，將細胞與化合物1一起預培育20分鐘，然後利用P2X3及P2X2/P2X3激動劑α,β-亞甲基ATP (meATP)以3 μM及30 μM之最終濃度進行刺激。添加meATP後4分50秒，以5 μM之最終濃度添加離子黴素，以自細胞中獲得可能之最大鈣流入量及螢光信號。螢光係在添加meATP前10秒開始持續記錄10分鐘。使用以上方法獲得之IC ₅₀指示，化合物 1係選擇性P2X3拮抗劑(P2X3 IC ₅₀= 11 nM；P2X2/3 IC ₅₀＞ 30 μM)。

本文闡述之實例及實施例僅用於說明目的，且在一些實施例中，各種修改或變化將包括在揭示內容之範圍及隨附申請專利範圍之範圍內。

Claims

一種用於製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法， (化合物1A)，該方法包含使具有以下結構之化合物：與鹼在溶劑中接觸。
如請求項1之方法，其中該鹼係氫氧化鈉水溶液。
如請求項1或2之方法，其中該溶劑係選自四氫呋喃、N-甲基-2-吡咯啶酮、甲醇、異丙醇及第三丁醇。
如請求項1至3中任一項之方法，其中該溶劑係異丙醇。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與氯化鋰及乙酸接觸。
如請求項1至5中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與具有以下結構之化合物：及鹼在溶劑之存在下接觸。
如請求項6之方法，其中該鹼係選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、第三丁醇鉀、及三乙胺/氯化鎂。
如請求項6或7之方法，其中該鹼係三乙胺/氯化鎂。
如請求項6至8中任一項之方法，其中該溶劑係四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。
如請求項6至9中任一項之方法，其中該溶劑係2-甲基四氫呋喃。
如請求項1至10中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二甲酯、碘化鉀及鹼接觸。
如請求項11之方法，其中該鹼係選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。
如請求項12之方法，其中該鹼係碳酸銫。
如請求項1至4中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與氯化鋰及乙酸接觸。
如請求項14之化合物，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與具有以下結構之化合物：及鹼在溶劑之存在下接觸。
如請求項15之方法，其中該鹼係選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、第三丁醇鉀、及三乙胺/氯化鎂。
如請求項15或16之方法，其中該鹼係三乙胺/氯化鎂。
如請求項15至17中任一項之方法，其中該溶劑係四氫呋喃或2-甲基四氫呋喃。
如請求項15至18中任一項之方法，其中該溶劑係2-甲基四氫呋喃。
如請求項15至19中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與丙二酸二甲酯、碘化鉀及鹼接觸。
如請求項20之方法，其中該鹼係選自氫化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鋰、雙(三甲基矽基)胺化鈉、雙(三甲基矽基)胺化鉀、碳酸鉀、碳酸鈉及碳酸銫。
如請求項21之方法，其中該鹼係碳酸銫。
如請求項1至22中任一項之方法，其中該具有以下結構之化合物：係藉由包含以下之方法製備：使具有以下結構之化合物與甲苯磺醯氯及鹼在溶劑之存在下接觸。
如請求項23之方法，其中該鹼係三乙胺。
如請求項23或24之方法，其中該溶劑係二氯甲烷。
一種製備(S)-4-(3-(4-(第三丁氧基羰基)嗎啉-2-基)丙醯基)-3,5-二氟苯甲酸(化合物1A)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使該具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)。
一種用於製備(S)-2-((2-(2,6-二氟-4-(甲基胺甲醯基)苯基)-7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)甲基)嗎啉-4-甲酸甲酯(化合物1)之方法，其包含： A) 使具有以下結構之化合物：與甲苯磺醯氯及三乙胺反應，以產生具有以下結構之化合物：； B) 隨後使該具有以下結構之化合物：與丙二酸二甲酯、碘化鉀及碳酸銫反應，以產生具有以下結構之化合物：； C) 隨後使具有以下結構之化合物：及，與三乙胺/氯化鎂反應，以產生具有以下結構之化合物：； D) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氯化鋰及乙酸反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氫氧化鈉水溶液反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1A)； F) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氯化氫在乙酸乙酯中反應，以產生具有以下結構之化合物；； E) 隨後使該具有以下結構之化合物：與氯甲酸甲酯及碳酸氫鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； F) 隨後使該具有以下結構之化合物：與N-溴琥珀醯亞胺及酸反應，以產生具有以下結構之化合物：； G) 隨後使該具有以下結構之化合物：與2-胺基-4-甲基吡啶及視情況硼氫化鈉反應，以產生具有以下結構之化合物：； H) 隨後使該具有以下結構之化合物：與羰基二咪唑及甲胺或甲胺鹽酸鹽反應，以產生具有以下結構之化合物： (化合物1)。
一種化合物，其具有以下結構：；或其共晶體。
一種化合物，其具有以下結構：；或其共晶體。
一種化合物，其具有以下結構：；或其共晶體。
一種化合物，其具有以下結構：；或其共晶體。
一種化合物，其具有以下結構：；或其共晶體。
一種化合物，其具有以下結構：。