TW202313663A - Ｃ型利鈉肽變異體治療兒童骨骼發育不良 - Google Patents

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Abstract

本揭示案提供C型利鈉肽（CNP）之變異體之用途，用於治療兒童骨骼發育不良及改善骨骼發育不良之一或多種症狀（諸如長骨生長或生長速度），以及用於具有骨骼發育不良及/或CNP相關症狀或組分之其他病症。

Description

C型利鈉肽變異體治療兒童骨骼發育不良
本揭示案大體上關於C型利鈉肽（CNP）變異體治療兒童骨骼發育不良之用途。
利鈉肽家族由三個結構相關之肽組成：心房利鈉肽（ANP）（Genbank寄存編號NP_006163，用於ANP前驅蛋白，NPPA）、腦利鈉肽（BNP）（GenBank寄存編號NP_002512，用於BNP前驅蛋白，NPPB）及C型利鈉肽（CNP）（《生物化學與生物物理研究通訊（Biochem. Biophys. Res. Commun.）》, 168: 863-870 (1990)（GenBank寄存編號NP_077720，用於CNP前驅蛋白，NPPC）（《高血壓雜誌（J. Hypertens.）》, 10: 907-912 (1992)）。此等小單鏈肽（ANP、BNP、CNP）具有17個胺基酸環狀結構（Levin等人, 《新英格蘭醫學雜誌（N. Engl. J. Med.）》, 339: 863-870 (1998)）且在多種生物過程中具有重要作用。ANP及BNP結合於亦稱為鳥苷酸環化酶A（GC-A）的利鈉肽受體A（NPR-A）且將其活化，導致較高胞內環單磷酸鳥苷（cGMP）含量。同樣，CNP與NPR-B（GC-B）相互作用以刺激產生cGMP（《高血壓雜誌》, 10: 1111-1114 (1992)）。第三類型之受體NPR-C以高親和力結合各利鈉肽且主要用於自胞外區室捕捉肽且將肽沈積至溶酶體中，肽在溶酶體中降解（《科學（Science）》, 238: 675-678 (1987)）。ANP及BNP主要在心臟肌肉細胞內產生，並且咸信在心血管穩態中起重要作用（《科學》, 252: 120-123 (1991)）。CNP更廣泛表現於包括中樞神經系統、生殖道、骨骼及血管內皮中（《高血壓（Hypertension）》, 49: 419-426 (2007)）。
在人類中，CNP最初以單鏈126個胺基酸的前-原多肽形式產生自利鈉肽前驅體C（NPPC）基因（《生物化學與生物物理研究通訊》, 168: 863-870（1990））。移除信號肽產生原-CNP，且藉由內切蛋白酶弗林蛋白酶（endoprotease furin）進一步裂解產生活性53個胺基酸之肽（CNP-53），其經分泌且再次裂解以產生成熟的22個胺基酸之肽（CNP-22）（Wu, 《生物化學雜誌（J. Biol. Chem.）》 278: 25847-852（2003)）。CNP-53及CNP-22的不同之處在於其分佈，其中CNP-53在組織中占主導地位，而CNP-22主要發現於血漿及腦脊髓液中（J. Alfonzo, 《受體信號轉導研究（Recept. Signal. Transduct. Res.）》, 26: 269-297（2006））。軟骨中之主要CNP形式未知。CNP-53及CNP-22均與NPR-B類似地結合。此外，其皆以劑量依賴性方式及類似方式誘發cGMP產生（VT Yeung, 《肽（Peptides）》, 17: 101-106 (1996)）。
先前已描述天然CNP基因及多肽。美國專利第5,352,770號揭示自豬腦分離及純化的序列與人類CNP相同之CNP-22以及其治療心血管適應症之用途。美國專利第6,034,231號揭示原CNP（126個胺基酸）之人類基因及多肽以及人類CNP-53基因及多肽。
CNP自胞外空間之清除經由膜結合中性內肽酶（NEP）之作用發生，NEP會快速降解CNP（《生物化學雜誌（Biochem. J.）》, 291 (Pt 1): 83-88 (1993)），以及經由NPR-C發生，NPR-C結合於CNP且使CNP沈積至溶酶體中，CNP在溶酶體中降解。CNP已顯示在正常人類中之活體內半衰期為2.6 min（《臨床內分泌與代謝雜誌（J. Clin. Endocrinol. Metab.）》, 78: 1428-35 (1994)）。CNP之低血漿濃度《骨與礦物質研究雜誌（J. Bone Moner. Res.）》, 19 (增刊1)S20 (2004)）及其在多個組織中與NPR-B之共表現表明CNP主要經由自分泌/旁分泌機制起作用。
如上所描述，CNP結合且活化亦稱為鳥苷酸環化酶B（GC-B）的利鈉肽受體B（NPR-B），導致較高胞內環單磷酸鳥苷（cGMP）含量。cGMP產生介導之下游信號傳導影響許多不同生物過程，包括軟骨內骨化。因此，此路徑中任何組分的含量升高或降低可導致異常骨骼或軟骨生長。舉例而言，小鼠模型中之CNP或NPR-B之基因剔除導致矮化表型之動物具有較短的長骨及脊椎。已經鑑別出阻斷正常CNP信號傳導的人類NPR-B突變且其導致侏儒症（Olney等人, 《臨床內分泌與代謝雜誌》91（4）: 1229-1232（2006）；Bartels等人, 《美國人類遺傳學雜誌（Am. J. Hum. Genet.）》75: 27-34 (2004)）。相比之下，經工程改造以產生升高含量之CNP的小鼠展現延長的長骨及脊椎。
軟骨發育不全為纖維母細胞生長因子受體3（FGFR-3）之基因中體染色體顯性突變之結果，此導致軟骨形成異常。FGFR-3對軟骨細胞生長通常具有負調節作用，且因此對骨生長具有負調節作用。在軟骨發育不全中，FGFR-3之突變形式為組成性活性的，其導致骨嚴重縮短。軟骨細胞增殖及分化似乎皆受干擾，導致明顯短的生長板軟骨（P. Krejci等人, 《細胞科學雜誌（J. Cell Sci.）》 118: 5089-5100 (2005)）。軟骨內骨化為控管縱向長骨生長的過程。生長板具有四個區-靜止、增殖、肥大及鈣化區。在生長板中，NPR-B由增殖細胞表現，而NPR-C由肥大細胞表現（Yamashite等人, 《生物化學雜誌》127: 177-179 (2000)）。在正常軟骨內骨骼生長中，軟骨細胞組織成柱狀且在生長板的增殖區增殖。軟骨發育不全患者中的此等柱狀物雜亂無章。另外，肥大區為細胞變大且最終細胞凋亡（溶解）的區域，導致骨細胞侵入且礦化。軟骨發育不全患者中肥大軟骨細胞及區域整體尺寸比正常患者中小得多。CNP為NPR-B之促效劑，軟骨細胞及骨骼生長之正調控劑。CNP/NPR-B之下游信號傳導在促分裂原活化蛋白激酶（MAPK）水準上抑制FGFR-3路徑。MAPK抑制促進生長板之增殖區及肥大區中軟骨細胞增殖及分化，導致骨骼生長。
在人類中，FGFR-3之活化突變為遺傳性侏儒症的主要原因。具有活化FGFR-3之小鼠充當軟骨發育不全（骨骼發育不良之最常見形式）之模型，且CNP之過度表現拯救此等動物免遭侏儒症。因此，CNP及CNP之功能變異體為治療多種骨骼發育不良的潛在治療劑。
CNP之治療用途目前受其短血漿半衰期限制，該短血漿半衰期在人類活體內顯示為2.6分鐘（Hunt等人《臨床內分泌與代謝雜誌》, 78: 1428-35 (1994)）。為了增加CNP濃度高於人類血漿中通常存在之固有含量（約5 pM），在使用全身性投與之CNP的全部人類及動物研究中均必需連續輸注。人類血漿中CNP之半衰期降低的兩種機制為藉由中性內肽酶（NEP）分解及藉由利鈉肽受體C（NPR-C）清除（Olney, 《生長激素及IGF研究（Growth Horm. & IGF Res.）》, 16: S6-S14 (2006)）。具有更長活體內血清半衰期且展示與野生型CNP類似或改良之活性的CNP變異體對於可持續治療策略係重要的。
已評估CNP之多種類似物及衍生物的生物學活性。參看例如美國專利7,276,481；PCT公開案第WO 94/20534號，其揭示CNP-22與ANP之5-胺基酸C端的嵌合體，命名為血管鈉肽（VNP）。美國專利8,198,242、8,598,121、9,907,834及10,646,550揭示CNP變異體治療骨骼發育不良，諸如軟骨發育不全之用途。美國專利7,642,243及8,658,373描述CNP-22或CNP-53之變異體治療關節炎之用途。
本揭示案係關於CNP變異體肽用於治療兒童，例如2歲與5歲之間的兒童，且尤其小於或約2歲之兒童骨骼發育不良的用途，用於治療一或多種骨骼發育不良相關症狀，或當CNP變異體肽如本文所描述高於某一劑量進行投與及/或在某一藥物投與方案下時，改善罹患骨骼發育不良之個體的一或多種後果或生理學症狀。本文揭示投與CNP變異體肽可導致軟骨發育不全個體中生長速度提高。
在各種實施例中，本揭示案提供一種治療約2歲至約5歲之個體之骨骼發育不良的方法，其包含向該個體投與包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，該組合物的量可有效治療個體之骨骼發育不良，或改善骨骼發育不良之至少一種症狀或生理學後果，其中該CNP變異體選自由本文所揭示之CNP變異體組成之群組。
在各種實施例中，本揭示案提供一種治療小於或約2歲之個體之骨骼發育不良的方法，其包含向該個體投與包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，該組合物的量可有效治療個體之骨骼發育不良，或改善骨骼發育不良之至少一種症狀或生理學後果，其中該CNP變異體係選自由本文所揭示之CNP變異體組成之群組。
在各種實施例中，組合物以30 µg/kg之劑量投與。在各種實施例中，個體為約6個月至約2歲。在各種實施例中，個體為0至約6個月齡。在各種實施例中，個體為約3至約6個月齡。在各種實施例中，個體為0至約3個月齡。在各種實施例中，若個體在小於約2歲時開始治療，則劑量可在個體達到2歲時降低至15 µg/kg。
在一個實施例中，治療為一或多種選自由以下組成之群組的骨骼發育不良的症狀的改良：絕對生長增加、生長速度改良或增加、QCT骨礦物質密度（BMD）增加、生長板形態改善、長骨生長增加、脊柱形態改善、肘關節運動範圍改善或增加以及睡眠呼吸暫停減少。
在一個實施例中，骨骼發育不良選自由以下組成之群組：軟骨發育不全、軟骨生成減退、身材矮小、侏儒症、骨軟骨發育不良、致死性軟骨發育不全、成骨不全、軟骨成長不全、點狀軟骨發育異常、純合性軟骨發育不全、屈肢骨發育不良、先天性致死型低磷酸酶症、圍產期致死型成骨不全、短肋多指症候群、軟骨生成減退、肢根型點狀軟骨發育異常、揚森型幹骺端發育不良（Jansen-type metaphyseal dysplasia）、先天性脊椎骨骺發育不良、骨發育不全、畸型發育不良、先天性短股骨、蘭格型肢中骨發育不良（Langer-type mesomelic dysplasia）、尼維格型肢中骨發育不良（Nievergelt-type mesomelic dysplasia）、羅氏症候群（Robinow syndrome）、萊因哈特症候群（Reinhardt syndrome）、肢端發育不全、周圍骨發育障礙、克尼斯特發育不良（Kniest dysplasia）、纖維軟骨增生症、羅伯茨症候群（Roberts syndrome）、肢端肢中發育不全、小肢畸形、莫奎氏症候群（Morquio syndrome）、克尼斯特症候群、後生營養性發育不良、脊椎骨端發育不全、NPR2突變、SHOX突變（特納氏症候群（Turner's syndrome）/萊里維爾（Leri Weill））、PTPN11突變（努南氏症候群（Noonan's syndrome））及特發性身材矮小。在一個實施例中，骨骼發育不良為軟骨發育不全。
亦提供一種增加小於或約2歲之個體之長骨生長的方法，其包含向有需要之個體投與包含CNP變異體肽之組合物，其中該投與增加長骨生長。亦提供一種增加約2歲至約5歲之個體之長骨生長發方法，其包含向有需要之個體投與包含CNP變異體肽之組合物，其中該投與增加長骨生長。在一個實施例中，個體患有軟骨發育不全。
本揭示案亦涵蓋一種提高或增加小於或約2歲之個體之生長的速度（即生長速度）的方法，其包含向有需要之個體投與包含CNP變異體肽之組合物，其中該投與提高或增加個體中之生長速度。亦提供一種提高或增加約2歲至約5歲之個體之生長的速度（即生長速度）的方法，其包含向有需要之個體投與包含CNP變異體肽之組合物，其中該投與提高或增加個體中之生長速度。在一個實施例中，個體患有軟骨發育不全。在各種實施例中，生長速度之提高或增加為以個體中相對於基線改變25%-50%範圍內的年化生長速度之增加。在一個實施例中，生長速度之提高或增加為以個體中相對於基線改變至少約25%，更佳至少約40%的年化生長速度之增加。
經考慮生長速度之提高可藉由量測站立高度、坐立高度、體重、頭圍、上臂長度、下臂長度、大腿長度、小腿長度、手長及/或腳長來評定。
在本文所描述之各種方法及組合物中，CNP變異體肽選自由以下組成之群組： PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）； RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）； VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）； TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45）（SEQ ID NO: 13）；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42）（SEQ ID NO: 16）；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）；GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）；ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）；NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）；KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）； KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO: 39）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
在各種實施例中，CNP變異體選自由以下組成之群組： PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 1）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 43）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N)]（SEQ ID NO: 40）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP-37）（SEQ ID NO: 42）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP-37）（SEQ ID NO: 41）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP-37（M32N）（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 45）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；及PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）。
在各種實施例中，CNP變異體選自由以下組成之群組：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 1）；及LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）。
在本文所描述之各種方法中，所投與之CNP變異體肽之量在約15 µg/kg至約100 µg/kg範圍內，較佳約15 µg/kg至約60 µg/kg範圍內，更佳約30 µg/kg至約60 µg/kg範圍內。在各種實施例中，所投與之CNP變異體肽之量為至少約15 µg/kg或至少約30 µg/kg。
在本文所描述之各種方法中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物皮下或非經腸投與，較佳皮下投與。亦預期CNP變異體肽藉由其他途徑投與。例示性投與途徑包括（但不限於）皮下、關節內、靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮內、鞘內、腹膜內、肌肉內、皮內、鞘內、局部、經皮或經黏膜投與。
在本文所描述之各種方法中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物以單次治療或分多次劑量向個體投與。多次劑量可每日投與一次，或在治療過程中分多次劑量投與。在各種實施例中，經考慮CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物以單次劑量或分多次劑量每日、每隔一天、每3天、每週2次、每週3次、每週、每兩週、每3週、每月、每6週、每2個月、每3個月或治療醫師認為適當的其他間隔投與。在尤其較佳實施例中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物每日一次向個體投與持續至少一個月、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月或更長時段。
在本文所描述之方法之某些實施例中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物之投與經調節以允許預防性或治療性治療時段，繼之以恢復時段。舉例而言，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物可以關節內、皮下、靜脈內，或藉由另一模式每日投與或每週多次投與持續一段時間，繼之以無治療時段，接著重複該循環。在一些實施例中，初始治療時段（例如每日投與或每週多次投與CNP變異體肽）持續3天、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週或12週。在一相關實施例中，無治療時段持續3天、1週、2週、3週或4週。在某些實施例中，CNP變異體肽之給藥方案為每日投與持續3天，繼之以3天停藥；或每日投與或每週多次投與持續1週，繼之以3天或1週停藥；或每日投與或每週多次投與持續2週，繼之以1週或2週停藥；或每日投與或每週多次投與持續3週，繼之以1週、2週或3週停藥；或每日投與或每週多次投與持續4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週或12週，繼之以1週、2週、3週或4週停藥。
在本文所描述之各種方法中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物的投與較佳不會在個體中引起或導致評分為二級或更高級別的不良事件。在本文所描述之方法之其他實施例中，投與CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物不引起該個體之血液中血紅蛋白濃度、血液中血小板數目、血液電解質濃度、血液尿素氮濃度、血液肌酐濃度、血液鹼性磷酸酶濃度、血液丙胺酸轉胺酶濃度及/或血液天冬胺酸轉胺酶濃度的臨床顯著改變。
在本文所描述之各種方法中，在較佳實施例中，投與CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物引起（i）上身長度與下身長度之比，（ii）上臂長度與前臂長度之比，或（iii）大腿長度與小腿長度之比相較於基線（即在投與CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物之前）的變化介於約-0.25與約0.25之間、介於約-0.20與約0.20之間、介於約-0.15與約0.15之間、介於約-0.10與約0.10之間或介於約-0.05與約0.05之間。
在各種實施例中，本揭示案提供包含CNP變異體肽之組合物或調配物，或包含CNP變異體肽之組合物或調配物在本文所描述之方法中之用途。在一個實施例中，組合物或調配物進一步包含醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。在某些實施例中，組合物係由液體或凍乾調配物製備，該調配物包含pH為約4至約6之檸檬酸/檸檬酸鹽緩衝液或乙酸/乙酸鹽緩衝液。在各種實施例中，pH為約5.5。
亦涵蓋如本文所描述之治療方法，其進一步包含投與第二試劑。
在各種實施例中，本文所描述之方法及組合物或調配物中所用之CNP變異體肽可連接至一種疏水性酸，且可連接至一或多種疏水性酸。疏水性酸之非限制性實例包括直鏈或分支鏈飽和或不飽和C5-C12羧酸（例如戊酸、庚酸等）及天然脂肪酸。疏水性酸可連接於一或多個胺基酸殘基之N端、C端及/或側鏈。在一個實施例中，疏水性酸結合於N端。
在另一實施例中，本發明之方法及組合物中所用之CNP變異體肽為嵌合體或融合蛋白（包含CNP變異體肽及可裂解肽或蛋白質或肽標籤）。例示性可裂解蛋白質或肽包括（但不限於）組胺酸（例如六-His）標籤；TAF12：人類轉錄因子TAF12；KSI：酮類固醇異構酶；MBP：麥芽糖-結合蛋白；13-Gal：13-半乳糖苷酶；GST：麩胱甘肽-S-轉移酶；Trx：硫氧還蛋白；CBD：幾丁質結合域；BMPM：BMP-2突變、SUMO、CAT、TrpE、葡萄球菌蛋白質A、鏈球菌蛋白質、澱粉結合蛋白、內切葡聚糖酶A之纖維素結合域、外切葡聚糖酶Cex之纖維素結合域、生物素結合域、recA、Flag、c-Myc、聚(His)、聚(Arg)、聚(Asp)、聚(Gln)、聚(Phe)、聚(Cys)、綠色螢光蛋白、紅色螢光蛋白、黃色螢光蛋白、強化型藍螢光蛋白、生物素、抗生物素蛋白、鏈黴抗生物素蛋白、抗體抗原決定基以及其片段。
在各種實施例中，適用於該等方法之CNP變異體肽可為單體或二聚體。在一相關實施例中，二聚CNP變異體肽之單體可經連接子或不經連接子N端連接至N端、經連接子或不經連接子N端連接至C端或經連接子或不連接子C端連接至C端。
在本文所揭示之任何實施例中，CNP變異體肽可具有相比於野生型CNP-22實質上相同或更好的生物活性。舉例而言，例如關於與NPR-B（GC-B）之相互作用以促進cGMP產生，CNP變異體肽可保留至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高野生型CNP-22活性，或可具有比CNP-22更高之活性。或者或另外，關於調節軟骨內骨骼生長及軟骨細胞活性，包括（但不限於）軟骨細胞增殖、軟骨細胞分化、抑制有絲分裂原活化之蛋白（MAP）激酶/MEK（Raf-1）激酶信號傳導路徑，以及促進軟骨內骨化，CNP變異體肽可保留至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高野生型CNP-22活性，或可具有比CNP-22更高之活性。在本文所描述之任一實施例中，CNP變異體肽可包含與野生型CNP-22之胺基酸6-22或1-22至少40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或更高相同或同源之胺基酸序列。
在各種實施例中，CNP變異體肽可視情況在N及/或C端具有結合或擴展以促進軟骨靶向、降低腎清除率及/或提高對NEP分解之抗性。此類結合或擴展可包含自例如聚Asp、聚Glu、軟骨靶向肽、唾液蛋白、PEG、碳水化合物、疏水性酸、NPPC或非-CNP（多）肽或其組合形成或衍生之分子或序列。
另外預期CNP變異體肽可結合於疏水性聚合或非聚合部分，諸如庚酸、戊酸或脂肪酸。疏水性部分可結合於胺基酸殘基（包括（但不限於）離胺酸、絲胺酸、半胱胺酸或蘇胺酸）之側鏈，或可連接於CNP變異體之N端及/或C端。
在各種實施例中，CNP變異體包含合成聚合基團。在各種實施例中，變異體包含經由可水解連接子與變異體偶合之合成聚合基團。在各種實施例中，合成聚合基團包含親水性聚合物部分。在各種實施例中，親水性聚合物部分包含聚乙二醇（PEG）。
在各種實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物之用途，該醫藥組合物包含CNP變異體肽、視情況選用之另一生物活性劑以及視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。在各種實施例中，組合物為適於非經腸注射之無菌醫藥組合物。在一些實施例中，組合物包含實質上純CNP變異體肽，例如至少約90%或95%純。在一些實施例中，組合物含有小於約5%、4%、3%、2%、1%或0.5%污染物，諸如其他人類蛋白質、豬蛋白質或CNP-53或其片段（除所要CNP變異體肽以外）。在各種實施例中，向個體投與無菌組合物以治療或預防骨骼發育不良或本文所揭示之骨骼發育不良的一或多種症狀或生理學後果。
本文適用之CNP變異體肽有利地保留CNP活性且展現增加之血清半衰期。CNP活性之保留可例如顯示為在相同濃度下（例如1 µM CNP肽或大於ED80），保留所要活體內生物學作用或保留至少約50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少約100%CNP-22的cGMP刺激活性。在一些實施例中，CNP變異體肽展現血清半衰期相較於CNP-22增加至少約1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍或40倍。
在一相關實施例中，本文所描述之CNP變異體肽具有增加的NEP抗性且與野生型CNP-22相比展現增加之半衰期。在一個實施例中，CNP變異體肽之半衰期相較於野生型CNP-22增加約20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或約100%。
亦涵蓋前述CNP變異體肽或本文所描述之包含其之組合物或調配物中之任一者製備用於治療小於或約2歲之兒童骨骼發育不良及與骨骼發育不良相關的本文所描述之症狀或其他生理學表現的藥劑的用途。亦涵蓋前述CNP變異體肽或本文所描述之包含其之組合物或調配物中之任一者製備用於治療約2至約5歲之兒童骨骼發育不良及與骨骼發育不良相關的本文所描述之症狀或其他生理學表現的藥劑的用途。亦涵蓋注射器（例如單次使用或預填充注射器）、無菌密封容器（例如小瓶、瓶子、容器）及/或套組或封裝，其包含前述CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物中之任一者，視情況具有適合使用說明書。
亦預期CNP變異體在調配物中，其包含（a）本文所描述之CNP變異體肽及（b）一或多種選自由以下組成之群組的組分：緩衝劑、等張劑、穩定劑及抗吸附劑。在尤其較佳實施例中，調配物中採用之緩衝劑可為單水合檸檬酸、二水合檸檬酸鈉或兩者之組合。在其他較佳實施例中，本發明之調配物中採用的等張劑可為二水合海藻糖、D-甘露糖醇或兩者之組合。在其他較佳實施例中，本發明之調配物中採用的穩定劑為L-甲硫胺酸。在其他較佳實施例中，本發明之調配物中採用的抗吸附劑為聚山梨醇酯80。
在各種實施例中，本發明之調配物經凍乾、為液體形式或已從事先凍乾形式復原的液體形式。在某些實施例中，適用於方法之調配物不含防腐劑，且視情況可包含於1型未經處理之硼矽酸鹽玻璃小瓶內。視情況，調配物具有介於約5.0至約6.0範圍內，較佳約5.5的pH。
在一些實施例中，組合物為液體調配物。在某些實施例中，調配物包含之CNP變異體的濃度在約0.1 mg/ml至約20 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約20 mg/ml，或約1 mg/ml至約20 mg/ml，或約0.1 mg/ml至約10 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約10 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約5 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約3 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約2.0 mg/ml，或約0.8 mg/ml至約2.0 mg/ml或約1 mg/ml至約10 mg/ml範圍內。在各種實施例中，CNP變異體之濃度為0.5 mg/mL至2 mg/mL。在各種實施例中，CNP變異體之濃度為0.8 mg/mL至2 mg/mL。在各種實施例中，CNP變異體之濃度為0.8 mg/mL。在各種實施例中，CNP變異體之濃度為2.0 mg/mL。在各種實施例中，CNP變異體係由凍乾粉復原。在各種實施例中，調配物之CNP變異體肽為CNP-38或Pro-Gly-CNP-37（BMN111）。
在其他實施例中，適用於該等方法的調配物包含如本文所描述之CNP變異體肽、單水合檸檬酸、二水合檸檬酸鈉、二水合海藻糖、D-甘露糖醇、L-甲硫胺酸以及聚山梨醇酯80。在某些實施例中，CNP變異體肽以介於約0.5 mg/ml與約2.0 mg/ml之間的濃度存在，單水合檸檬酸以介於約0.15 mg/ml與約0.40 mg/ml之間的濃度存在，二水合檸檬酸鈉以介於約0.5 mg/ml與約1.5 mg/ml之間的濃度存在，二水合海藻糖以介於約30 mg/ml與約70 mg/ml之間的濃度存在，D-甘露糖醇以介於約10 mg/ml與約20.0 mg/ml之間的濃度存在，L-甲硫胺酸以介於約0.5 mg/ml與約1.5 mg/ml之間的濃度存在且聚山梨醇酯80以介於約0.01 mg/ml與約0.1 mg/ml之間的濃度存在。在各種實施例中，CNP變異體以約2.0 mg/ml之間的濃度存在，單水合檸檬酸以約0.28 mg/ml之間的濃度存在，二水合檸檬酸鈉以約1.08 mg/ml之間的濃度存在，二水合海藻糖以約58.01 mg/ml之間的濃度存在，D-甘露糖醇以約15.0 mg/ml之間的濃度存在，L-甲硫胺酸以約0.73 mg/ml之間的濃度存在且聚山梨醇酯80以約0.05 mg/ml之間的濃度存在。在各種實施例中，CNP變異體以約0.8 mg/ml之間的濃度存在，單水合檸檬酸以約0.28 mg/ml之間的濃度存在，二水合檸檬酸鈉以約1.08 mg/ml之間的濃度存在，二水合海藻糖以約58.01 mg/ml之間的濃度存在，D-甘露糖醇以約15.0 mg/ml之間的濃度存在，L-甲硫胺酸以約0.73 mg/ml之間的濃度存在且聚山梨醇酯80以約0.05 mg/ml之間的濃度存在。
應理解，本文所描述之各特徵或實施例或組合為本揭示案態樣中任一者的非限制性說明性實例，且同樣意謂可與本文所描述之任何其他特徵或實施例或組合進行組合。例如，在用諸如「一個實施例」、「一些實施例」、「進一步實施例」、「特定例示性實施例」及/或「另一實施例」之語言描述特性之情況下，此等類型之實施例中之各個均為意欲與本文所描述且不必列出各個可能性組合之任何其他特性或特性組合進行組合之特性的非限制性實例。此類特徵或特徵組合適用於本揭示案態樣中之任一者。在揭示落入範圍內之值之實例的情況下，考慮此等實例中之任一個作為範圍之可能性端點，考慮到此等端點之間之任何及所有數值，且設想具有上端點及下端點之任何及所有組合。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2021年7月9日申請之美國臨時專利申請案第63/220,275號及2022年6月8日申請之美國臨時專利申請案第63/350,196號之優先權，兩者均以其全文引用之方式併入本文中。 以引用之方式併入以電子方式提交的材料
作為本揭示案之一部分的序列表與說明書同時以.XML格式提交。含有序列表之正文檔案的名稱為「57038_Seqlisting.xml」，其創建於2022年7月7日，大小為65,087位元組。序列表之主題以全文引用之方式併入本文中。 具體實施方式
本揭示案係關於使用CNP變異體肽治療小於或約2歲之兒童骨骼發育不良、骨骼發育不良的一或多種症狀或生理學後果及具有骨骼發育不良及/或CNP相關症狀或組分的其他病症的方法。在骨骼發育不良中用CNP變異體肽治療減少骨骼發育不良的一或多種症狀或生理學後果，增加有需要個體的長骨生長，或改善或增加有需要個體，例如罹患骨骼發育不良之個體的生長速度。 定義
除非另外說明，否則用於本申請案（包括說明書及申請專利範圍）之以下術語具有下文給出之定義。
如本說明書及隨附申請專利範圍中所使用，除非上下文另外明確規定，否則不定冠詞「一（a/an）」以及定冠詞「該（the）」包括複數以及單數指示物。
術語「約（about）」或「大致（approximately）」意謂如由本領域中一般熟習此項技術者所測定之特定值之可接受誤差，其部分取決於如何量測或測定該值。在某些實施例中，術語「約」或「大致」意謂在1、2、3或4個標準差內。在某些實施例中，術語「約」或「大致」意謂在給定值或範圍的30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%或0.05%內。當術語「約」或「大致」冠於一系列兩個或更多個數值中的第一數值之前時，應理解術語「約」或「大致」適用於該系列中之數值中之每一者。
標準化學術語之定義可見於參考著作中，包括Carey及Sundberg之《高等有機化學（Advanced Organic Chemistry）》, 第3版, 第A及B卷（紐約普萊紐姆出版社（Plenum Press, New York） 1992）。除非另外指示，否則本揭示案的實踐可採用此項技術內的特定習知方法：合成有機化學方法、質譜法、預備型及分析型層析法、蛋白質化學方法、生物化學法、重組DNA技術以及藥理學。參看例如T.E. Creighton,《蛋白質：結構及分子特性（Proteins: Structures and Molecular Properties）》 (W.H.費曼公司（W.H. Freeman and Company）, 1993)；A.L. Lehninger, 《生物化學（Biochemistry）》 (沃茨出版公司（Worth Publishers, Inc.）, 第4版, 2004)；Sambrook等人, 《分子選殖：實驗室手冊（Molecular Cloning:  A Laboratory Manual）》 (第2版, 1989)；《酶學方法（Methods In Enzymology）》 (S. Colowick及N. Kaplan編, 學術出版公司（Academic Press, Inc.）)；《雷明頓醫藥科學（Remington's Pharmaceutical Sciences）》, 第18版 (賓夕法尼亞州伊斯頓：馬克出版公司（Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company）, 1990）。
本文引用之全部公開案、專利及專利申請案（不管同上或同下）以全文引用的方式併入本文中。
本文全文中使用以下胺基酸縮寫： 丙胺酸：Ala（A）               精胺酸：Arg（R） 天冬醯胺：Asn（N）          天冬胺酸：Asp（D） 半胱胺酸：Cys（C）           麩醯胺酸：Gln（Q） 麩胺酸：Glu（E）               甘胺酸：Gly（G） 組胺酸：His（H）               異白胺酸：Ile（I） 白胺酸：Leu（L）               離胺酸：Lys（K） 甲硫胺酸：Met（M）          苯丙胺酸：Phe（F） 脯胺酸：Pro（P）               絲胺酸：Ser（S） 蘇胺酸：Thr（T）               色胺酸：Trp（W） 酪胺酸：Tyr（Y）               纈胺酸：Val（V）
本文使用習知標記描繪多肽及肽序列：多肽或肽序列之左端為胺基末端；多肽序列之右端為羧基末端。
在一個實施例中，適用於該等方法的本文所描述之CNP變異體肽使用編碼CNP變異體肽之聚核苷酸經重組方式產生。此類聚核苷酸表現之CNP變異體肽可藉由以下方法產生，包括在適於表現編碼CNP變異體之聚核苷酸的條件下使宿主細胞在培養基中生長，且自宿主細胞或培養基分隔表現產物。視任何轉譯後處理而定，實際表現產物與編碼之蛋白質產物可略微不同。用於製造本發明之CNP變異體肽之方法至少揭示於美國專利第8,198,242號中，其以引用的方式併入本文中。
在兩個或更多個聚核苷酸或多肽序列的情形中，術語「相同」及「一致性」百分比係指如使用以下序列比較算法中之一者或藉由目測量測，當針對最大對應性比較及比對時，兩個或更多個序列或子序列相同或其中指定百分比的核苷酸或胺基酸殘基相同。
在兩種核酸或多肽之情形中，片語「實質上同源」或「實質上相同」一般係指如使用以下序列比較算法中之一者或藉由目測量測，當針對最大對應性比較及比對時，兩個或更多個序列或子序列具有至少40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或98%核苷酸或胺基酸殘基一致性。在某些實施例中，至少約25、50、100或150個殘基長度的序列區域上存在實質上同源或一致性。在另一實施例中，序列在任一個或兩個比較生物聚合物的整個長度上實質上同源或相同。
就序列比較而言，通常一個序列充當參考序列，測試序列與其比較。當使用序列比較算法時，將測試序列及參考序列輸入至電腦中，必要時指定子序列座標，且指定序列算法程式參數。接著，序列比較算法根據所指定之程式參數來計算測試序列相對於參考序列之序列一致性百分比。
用於比較之序列之最佳比對可例如藉由以下進行：藉由Smith及Waterman,《應用數學進展（Adv. Appl. Math.）》, 2: 482 (1981)的局部同源算法，藉由Needleman及Wunsch, 《分子生物學雜誌（J. Mol. Biol.）》, 48: 443 (1970)的同源比對算法，藉由Pearson及Lipman, 《美國國家科學院院刊（Proc. Natl. Acad. Sci. USA）》, 85: 2444 (1988)的檢索相似性方法，藉由此等算法的計算機化實現(威斯康辛遺傳軟體包（Wisconsin Genetics Software Package）之GAP、BESTFIT、FASTA及TFASTA，來自威斯康星麥迪遜科學大道575號的Genetics Computer Group)，或藉由目視檢查。適用算法的一個實例為PILEUP，其使用Feng及Doolittle, 《分子分類雜誌（J. Mol. Evol.）》, 35: 351-360 (1987)之漸近比對法且類似於Higgins及Sharp, CABIOS, 5: 151-153 (1989)所描述之方法。適用於產生多個序列比對之另一算法為Clustal W（Thompson等人, 《核酸研究（Nucleic Acids Research）》, 22: 4673-4680 (1994)）。適於測定序列一致性百分比及序列相似性百分比之算法的實例為BLAST算法（Altschul等人, 《分子生物學雜誌》, 215: 403-410 (1990)；Henikoff及Henikoff, 《美國國家科學院院刊》, 89: 10915 (1989)；Karlin及Altschul, 《美國國家科學院院刊》, 90: 5873-5787 (1993)）。進行BLAST分析之軟體為可經由國家生物技術資訊中心（National Center for Biotechnology Information）公開獲得。
「野生型」（wt）為指物種中聚核苷酸、多肽或蛋白質的天然形式（包括序列）之術語。野生型形式與遺傳學突變引起的聚核苷酸、多肽或蛋白質的突變形式不同。
在一個實施例中，為第二肽之「類似物」或「變異體」或「衍生物」的第一肽為與第二肽具有至少約50%、60%或70%序列同源性，但小於100%序列同源性的肽。此類類似物、變異體或衍生物可包含非天然存在之胺基酸殘基，包括（但不限於）高精胺酸、鳥胺酸、青黴胺及正纈胺酸，以及天然存在的胺基酸殘基。
利鈉肽前驅體C（NPPC）多肽為單鏈126胺基酸前-原多肽，且其裂解時最終產生野生型CNP-22（wtCNP-22）。自NPPC移除信號肽產生原-CNP，且藉由內切蛋白酶弗林蛋白酶進一步裂解產生活性53個胺基酸之肽（CNP-53），其經分泌且再次裂解以產生成熟的22個胺基酸之肽（CNP或CNP-22）。在一個實施例中，「CNP變異體肽」與野生型NPPC在相同數目之胺基酸殘基上至少約40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%或95%同源。經進一步考慮CNP變異體肽可包含約1至約53、或1至38、或1至37、或1至35、或1至34、或1至33、或1至32、或1至31、或1至27、或1至22、或10至35、或約15至約37個NPPC多肽殘基。在一個實施例中，CNP變異體可包含具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52或53個源自NPPC多肽之胺基酸的序列。
術語「有效量」意謂足以對個體之健康狀況、病變或疾病產生所要結果或足以用於診斷目的之劑量。所要結果可包含劑量之接受者的主觀或客觀改善。「治療有效量」係指可有效產生所預期的對健康有益的效果的藥劑量。在任何個別情況下之適當「有效」量可由本領域中一般熟習此項技術者使用常規實驗來測定。應理解，針對任何具體患者之特定劑量水準及劑量頻率可變化且將取決於多種因素，包括所採用之特定化合物的活性；生物可用性、代謝穩定性、分泌速率以及該化合物之作用時間長度；化合物之投與模式及投與時間；患者之年齡、體重、總體健康狀況、性別以及飲食；以及具體病況之嚴重程度。
「治療」係指防治性治療或治療性治療或診斷性治療。在某些實施例中，「治療」係指出於治療性、預防性或診斷性目的而向個體投與化合物或組合物。
「預防性」治療為出於降低產生病變之風險的目的，向未展現疾病之病徵或僅展現疾病之早期病徵的個體所投與之治療。本揭示案之化合物或組合物可作為預防性治療給予以降低產生病變之可能性或使病變（若產生）之嚴重程度降至最低。
「治療性」治療為出於減輕或消除病變之病徵或症狀的目的，向展現彼等病徵或症狀之個體所投與之治療。病徵或症狀可為生物化學、細胞、組織學、功能或物理、主觀或客觀的。本揭示案化合物亦可作為治療性治療給出或針對診斷給出。
「醫藥組合物」或「調配物」係指適用於個體動物（包括人類及哺乳動物）中之醫藥用途的組合物。醫藥組合物包含治療有效量之CNP變異體肽、視情況選用之另一生物活性劑以及視情況選用之醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑。在一實施例中，醫藥組合物涵蓋包含一或多種活性成分及構成載劑之一或多種惰性成分的組合物，以及直接或間接由任何兩種或更多種成分之組合、複合或聚集或由一或多種以上成分的解離或由一或多種成分的其他類型之反應或相互作用而產生的任何產物。因此，本揭示案之醫藥組合物涵蓋藉由將本揭示案之化合物與醫藥學上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑摻和製得之任何組合物。
「醫藥學上可接受之載劑」係指標準醫藥學載劑、緩衝劑及其類似者中之任一者，諸如磷酸鹽緩衝鹽水溶液、5%右旋糖水溶液及乳液（例如油/水或水/油乳液）。賦形劑之非限制性實例包括佐劑、黏合劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、乳化劑、潤濕劑、潤滑劑、助滑劑、甜味劑、調味劑及著色劑。適合的醫藥學載劑、賦形劑及稀釋劑描述於《雷明頓氏醫藥科學（Remington's Pharmaceutical Sciences）》, 第19版（馬克出版公司（Mack Publishing Co.）, Easton, 1995）中。較佳醫藥學載劑視活性劑之預期投與模式而定。投與之典型模式包括經腸（例如，經口）或非經腸（例如，皮下、肌肉內、靜脈內或腹膜內注射；或局部、經皮或經黏膜投與）。
「醫藥學上可接受之鹽」為可調配為用於醫藥用途之化合物的鹽，包括（但不限於）金屬鹽（例如鈉、鉀、鎂、鈣等）及氨或有機胺之鹽。
「醫藥學上可接受的」或「藥理學上可接受的」意謂不為生物學上或以其他方式非所要之物質，亦即可在不導致任何非所要生物效應之情況下或在不以有害方式與含有其之組合物之任何組分或與存在於個體身體之上或之中之任何組分相互作用的情況下向個體投與之物質。
「生理學條件」係指動物（例如人類）體內之條件。生理學條件包括（但不限於）體溫以及具有生理離子強度、pH及酶之水性環境。生理學條件亦涵蓋特定個體體內之條件，其不同於大多數個體中存在之「正常」條件，例如其不同於大致37℃之正常人體溫度或不同於大致7.4之正常人血液pH。
如本文所用，術語「個體」涵蓋哺乳動物及非哺乳動物。哺乳動物之實例包括（但不限於）哺乳動物類之任何成員：人類、非人類靈長類動物，諸如黑猩猩以及其他猿及猴物種；農畜，諸如牛、馬、綿羊、山羊、豬；家畜，諸如兔子、狗及貓；實驗室動物，包括嚙齒動物，諸如大鼠、小鼠及天竺鼠，及類似動物。非哺乳動物之實例包括（但不限於）鳥類、魚及類似動物。術語並不指示特定年齡或性別。
除非另外規定，否則術語「聚乙二醇」、「PEG」、「聚氧化乙烯」以及「PEO」在本文中可互換使用。經胺基結合於與數目n相關之「PEOn」聚合物的CNP變異體一般具有化學式：CH3- [-O-CH2CH2-]n-C(=O)-NHR，其中n為環氧乙烷單元數目且R表示其餘肽。「PEOn」聚合物在羰基碳與重複環氧乙烷單元之間可視情況具有伸烷基(CH2)m，其中m為整數1至5。此類「PEOn」（例如PEO12或PEO24）聚合物為單分散的，即具有具體分子量之單個離散聚合物。類似地，經胺基結合於與數目nK相關之「PEGnK」聚合物的CNP變異體一般具有化學式CH3-[-O-CH2CH2-]p-C(=O)-NHR，其中p為大於1之整數。「PEGnK」聚合物亦可視情況在羰基碳與重複環氧乙烷單元之間具有伸烷基(CH2)m，其中m為整數1至5。然而，此類「PEGnK」（例如PEG1K、PEG2K、PEG5K或PEG20K）聚合物為多分散的，即含有具有分子量分佈的聚合物的混合物，其中數目nK表示以千道爾頓為單位之聚合物數目平均分子量（Mn）。舉例而言，結合於CNP變異體之「PEG2K」表示聚合物數目平均分子量為約2 kDa的多分散PEG聚合物。
除非另外指示，否則當指出聚合物（例如PEG）之質量範圍（例如以kDa為單位）時，該範圍係指聚合物數目平均分子量之範圍，而非多分散混合物中多種聚合物的分子量範圍。 CNP 變異體肽
CNP-22作為治療劑的使用受到其在血漿中短半衰期的限制（《臨床內分泌與代謝雜誌》, 78: 1428-35 (1994)）。在人類血漿中，CNP-22之濃度通常低於五皮莫耳。在人類中，CNP-22藉由NEP及NPR-C降解且自循環清除（《生長激素及IGF研究（Growth Hormone & IGF Res.）》, 16: S6-S14）。在使用全身性投與之CNP-22的全部人類及動物研究中，已使用連續輸注增加個體中之CNP-22濃度。具有較長半衰期及至少類似含量之官能度的CNP肽將有益於基於CNP之治療策略。具有改良特性之CNP變異體肽揭示於國際申請案第WO 2009/067639號及第WO 2010/135541號以及美國專利第8,198,242號、第8,598,121號、第8,377,884、第9,907,834號及第10,646,550號中，其全部以引用的方式特定併入本文中。
預期用於方法中之例示性CNP變異體肽包括：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45）（SEQ ID NO: 13）；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42）（SEQ ID NO: 16）；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）； EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）； GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）； ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）； NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）； KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）； KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO: 39）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO:48 ）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）； GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO:54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；及/或PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64)。
在某些實施例中，CNP變異體肽為CNP-37或CNP-38之衍生物。CNP-37變異體肽可在CNP-37的37個位置中的任何一或多個處含有胺基酸添加、缺失及/或經天然或非天然胺基酸或肽模擬物（例如肽鍵電子等排體）取代。CNP-37中可進行之取代的非限制性實例（基於CNP-22之編號）包括K4R、G5S、G5R、G8S、K10R、G15S、S16Q、M17N、G19R以及其組合。
在一個實施例中，CNP變異體肽為CNP-38、CNP-37、CNP-36、CNP-35、CNP-34、CNP-33或CNP-32，其已經修飾以包含疏水性部分。在各種實施例中，疏水性部分為聚乙二醇。
其他CNP變異體揭示於國際申請案PCT/US2020/045885中，該CNP變異體描述適用於治療骨骼發育不良的CNP變異體的疏水性肽鹽，且以引用的方式併入本文中。預期使用之其他CNP變異體描述於PCT/US2020/051100（以引用的方式併入本文中）中，其揭示CNP序列變異體PGQEHPQARRYRGAQRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC（SEQ ID NO: 66）；PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（SEQ ID NO: 1）； PGQEHPNARRYRGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC（SEQ ID NO: 67）；及 PGQEHPQARKYKGAQKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（SEQ ID NO: 68），視情況其中該變異體進一步包含乙醯基。在各種實施例中，乙醯基在肽之N端上。在各種實施例中，肽於C端進一步包含OH或NH2基團。在各種實施例中，變異體肽包含結合部分。在各種實施例中，結合部分在CNP環狀域之殘基上或在除該CNP環狀域之外的位點處。在各種實施例中，結合部分位於離胺酸殘基上。在各種實施例中，結合部分包含一或多個酸部分。在各種實施例中，酸部分為疏水性酸。在各種實施例中，結合部分包含一或多個與親水性間隔基連接之酸部分。在各種實施例中，親水性間隔基為任何胺基酸。在各種實施例中，親水性間隔基為γ麩胺酸（γGlu）。在各種實施例中，親水性間隔基為OEG（8-胺基-3,6-二氧雜辛酸）。在各種實施例中，親水性間隔基為γ麩胺酸（γGlu）或OEG（8-胺基-3,6-二氧雜辛酸）。在各種實施例中，親水性間隔基為與一或兩個或更多個OEG（8-胺基-3,6-二氧雜辛酸）連接之γ麩胺酸（γGlu）。在各種實施例中，酸部分為脂肪酸。例示性脂肪酸包括短鏈、中鏈或長鏈脂肪酸或二羧基脂肪酸。在各種實施例中，脂肪酸為飽和或不飽和的。考慮C-6至C-20脂肪酸，包括（但不限於）C-6、C-8、C-10、C-12、C-14、C-16、C-18或C-20飽和或不飽和脂肪酸。在各種實施例中，脂肪酸為癸酸、十二酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、二十酸或其二酸。
在一個實施例中，CNP變異體肽為在弗林蛋白酶裂解位點處具有突變/取代之經修飾CNP-37或CNP-38肽，其經設計以提高對弗林蛋白酶之活體內抗性，及/或在N端處含有甘胺酸或脯胺酸-甘胺酸，其經設計以提高血漿穩定性及防止焦麩醯胺酸形成。例示性CNP-37變異體包括（但不限於）： QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N)]（SEQ ID NO: 40）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP-37）（SEQ ID NO: 42）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP-37）（SEQ ID NO: 41）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP-37（M32N）（SEQ ID NO: 44）；PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP-37）（SEQ NO: 1）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO:45 ）；及GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 43).
在某些實施例中，CNP變異體可包含合成聚合基團。在各種實施例中，變異體包含經由可水解連接子與變異體偶合之合成聚合基團。在各種實施例中，合成聚合基團包含親水性聚合物部分。在一個實施例中，親水性聚合物為水溶性的，使得與其結合之CNP肽不在水性（例如生理）環境中沈澱出來。此外，親水性聚合物係生物相容的，亦即不會在活體內引起損傷、毒性或免疫反應。親水性聚合物可為分支或未分支的。在一個實施例中，親水性聚合物不為分支鏈的。在各種實施例中，親水性聚合物部分包含聚乙二醇（PEG）。CNP變異體與親水性聚合物之結合的多個位點為可能的，包括（但不限於）：（1）僅在N端；（2）僅在C端；（3）僅在內部位點（例如Lys4及/或Lys 10）；（4）在N端與C端兩處；（5）在N端及內部位點；以及（6）在C端及內部位點。
製備聚乙二醇化CNP變異體肽之方法一般包含以下步驟：（a）使CNP變異體與聚乙二醇化試劑在適於使PEG連接至CNP肽（例如在N端）之條件下反應，及（b）使用此項技術中已知的技術獲得反應產物。 CNP 變異體肽之合成及純化
在一些實施例中，適用於本文之CNP變異體肽藉由重組表現使用某些實施例中的此項技術中已知的特定技術製造。參見例如Sambrook, Fritsch & Maniatis, 《分子選殖：實驗指南（Molecular Cloning: A Laboratory Manual）》, 第二版。冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）（紐約冷泉港（Cold Spring Harbor, N.Y.）(1989)）；《DNA選殖：實用方法（DNA Cloning: A Practical Approach）》, 第I卷及第II卷, D. N. Glover編.(1985)；及《分子生物學的當前指南（Current Protocols in Molecular Biology）》, 約翰威立出版社公司（John Wiley & Sons, Inc.）（1994）。
在某些實施例中，CNP變異體肽藉由重組方法製造，包含在導致表現聚核苷酸編碼之融合多肽表現的條件下在培養基中培養宿主細胞，該宿主細胞包含編碼連接至第二聚核苷酸之CNP變異體肽的第一聚核苷酸，該第二聚核苷酸編碼可裂解肽或蛋白質，其中融合多肽包含直接連接於可裂解肽或蛋白質或經連接子間接連接於可裂解肽或蛋白質的CNP變異體肽。在一些實施例中，宿主細胞用包含編碼CNP變異體肽之聚核苷酸的表現載體轉型，該CNP變異體肽連接於編碼可裂解肽或蛋白質之聚核苷酸。在某些實施例中，融合多肽表現為可溶性蛋白質或包涵體。表現之融合多肽可自宿主細胞或培養基分離，且分離之融合多肽可與裂解劑接觸以釋放CNP變異體肽。
製造CNP變異體肽之方法描述於以引用的方式併入本文中的美國專利8,198,242、8,377,884、8,598,121、9,907,834及10,646,550中。
用於製造CNP變異體肽之宿主細胞可為細菌、酵母、昆蟲、非哺乳動物脊椎動物或哺乳動物細胞。細菌細胞包括（但不限於）大腸桿菌細胞株及菌株。大腸桿菌細胞株及菌株之非限制性實例包括BL21、BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pGro7、ArcticExpress(DE3)、C41 [亦稱為C41(DE3)]、C43 [亦稱為C43(DE3)]、Origami B(DE3)、Origami B(DE3)pLysS、KRX以及Tuner(DE3)。在一實施例中，CNP變異體肽及CNP融合蛋白使用BL21(DE3)細胞製造。哺乳動物細胞包括（但不限於）倉鼠、猴、黑猩猩、犬、貓、牛、豬、小鼠、大鼠、兔、綿羊及人類細胞。宿主細胞可為永生化細胞（細胞株）或非永生化（一級或二級）細胞，且可為多種細胞類型中之任一種，諸如（但不限於）纖維母細胞、角質細胞、上皮細胞（例如乳房上皮細胞、腸道上皮細胞）、卵巢細胞（例如中國倉鼠卵巢或CHO細胞）、內皮細胞、膠細胞、神經細胞、血液之形成元素（例如淋巴球、骨髓細胞）、軟骨細胞及其他骨骼源細胞，以及此等體細胞類型之前驅體。含有CNP變異體DNA或RNA之宿主細胞在適於細胞生長、DNA或RNA表現以及表現CNP變異體肽之細胞的鑑別/選擇的條件下培養。
在某些實施例中，CNP變異體肽以包含CNP變異體肽及可裂解載體蛋白或可裂解標籤（例如肽標籤）之融合蛋白形式重組表現，其中融合蛋白包含直接連接於可裂解載體蛋白或標籤或經連接子間接連接於可裂解載體蛋白或標籤之CNP變異體肽。載體蛋白或標籤之使用促進例如融合蛋白之偵測、分離及/或純化。可裂解載體蛋白及標籤包括（但不限於）組胺酸（例如六-His）標籤；人類轉錄因子TAF12（TAF12）、TAF12片段、TAF12組蛋白摺疊域、TAF12及其片段之突變體、TAF12(C/A)、TAF12(D/E)、TAF12(4D/4E)、TAF12(6D/6E)、TAF12(10D/10E)、TAF12(C/A及D/E)、TAF12(C/A及4D/4E)、TAF12(C/A及6D/6E)、TAF12(C/A及10D/10E)；酮類固醇異構酶（KSI）；麥芽糖-結合蛋白（MBP）；ß-半乳糖苷酶（ß-Gal）；麩胱甘肽-S-轉移酶（GST）；硫氧還蛋白（Trx）；幾丁質結合域（CBD）；BMP-2、BMP-2突變體、BMP-2(C/A)；SUMO；以及其突變體及片段。
在其他實施例中，本文所描述之CNP變異體肽使用肽合成器合成且根據此項技術中已知之方法，例如根據Atherton及Sheppard, 《固相肽合成：實踐方法（Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach）》, IRL出版社 (英國牛津（Oxford, England） (1989)）之方法純化。 使用 CNP 變異體肽之方法 骨相關病症 / 骨骼發育不良
纖維母細胞生長因子（FGF）在骨骼形成中起重要作用，且FGF受體基因（FGFR 1、2以及3）中之突變引起多種遺傳性骨骼畸形（《當代生物學（Curr. Biol.）》, 5: 500-507 (1995)）。特定言之，FGFR-3之活化突變導致長骨病症，包括軟骨發育不全，其為人類遺傳侏儒症之最常見形式（《自然（Nature）》, 371: 252-254 (1994)；《細胞（Cell）》, 78: 335-342 (1994)）、輕度病症軟骨發育不全（《紐約科學院年報（Ann. N.Y. Acad. Sci.）》, 785: 182-187 (1996)），以及更嚴重及新生兒致死性軟骨發育不全（TD）I型及II型（《人類分子遺傳學（Hum. Mol. Genet.）》, 5: 509-512 (1996)；《自然遺傳學（Nat. Genet.）》, 9: 321-328 (1995)）。過度表現FGF-2且必然地活化FGFR-3之小鼠模型顯示縮短的長骨及大頭畸形（《分子生物細胞（Mol. Biol. Cell）》, 6: 1861-73 (1995)）。與此模型相符，缺乏FGFR-3之小鼠顯示顯著骨骼過度生長且生長板較寬（《自然遺傳學》, 12: 390-397 (1996)）。
藉由刺激軟骨細胞之基質產生、增殖及分化以及增加長骨生長，本揭示案之CNP變異體肽適用於治療罹患骨骼相關病症（諸如骨骼發育不良）之哺乳動物，包括人類。CNP反應性骨相關病症及骨骼發育不良之非限制性實例包括軟骨發育不全、軟骨生成減退、身材矮小、侏儒症、骨軟骨發育不良、致死性軟骨發育不全、成骨不全、軟骨成長不全、點狀軟骨發育異常、純合性軟骨發育不全、屈肢骨發育不良、先天性致死型低磷酸酶症、圍產期致死型成骨不全、短肋多指症候群、軟骨生成減退、肢根型點狀軟骨發育異常、揚森型幹骺端發育不良、先天性脊椎骨骺發育不良、骨發育不全、畸型發育不良、先天性短股骨、蘭格型肢中骨發育不良、尼維格型肢中骨發育不良、羅氏症候群、萊因哈特症候群、肢端發育不全、周圍骨發育障礙、克尼斯特發育不良、纖維軟骨增生症、羅伯茨症候群、肢端肢中發育不全、小肢畸形、莫奎氏症候群、克尼斯特症候群、後生營養性發育不良、脊椎骨端發育不全、NPR2突變、SHOX突變（特納氏症候群/萊里維爾）、PTPN11突變（努南氏症候群）及特發性身材矮小。此外，CNP變異體適用作用於治療特發性身材矮小及其他骨骼發育不良之生長激素的佐劑或替代物。
另外，CNP變異體肽適用於治療其他骨相關病況及病症，諸如佝僂病、低磷酸鹽血性佝僂病[包括X連鎖低磷酸鹽血性佝僂病（亦稱為維生素D耐藥性佝僂病）及體染色體顯性低磷酸鹽血性佝僂病]，及骨質軟化[包括腫瘤誘導之骨質軟化（亦稱為致癌骨質軟化或致癌低磷酸鹽血性骨質軟化）]。
在各種實施例中，骨相關病症、骨骼發育不良或身材矮小病症由NPR2突變、SHOX突變（特納氏症候群/萊里維爾（Turner's syndrome/Leri Weill））或PTPN11突變（努南氏症候群（Noonan's syndrome））引起。
在各種實施例中，骨相關病症、骨骼發育不良或身材矮小病症由NPR2突變、SHOX突變（特納氏症候群/萊里維爾）或PTPN11突變（努南氏症候群）或胰島素生長因子1受體（insulin growth factor 1 receptor；IGF1R）引起。
在各種實施例中，CNP變異體適用於治療生長板病症及身材矮小，包括家族性身材矮小、顯性家族性身材矮小（其亦稱為顯性遺傳性身材矮小）或特發性身材矮小。在各種實施例中，身材矮小或生長板病症為膠原蛋白（COL2A1、COL11A1、COL9A2、COL10）、聚集蛋白聚糖（ACAN）、印度刺蝟因子（indian hedgehog；IHH）、PTPN11、NPR2、NPPC或FGFR3之突變的結果。
在各種實施例中，生長板病症或身材矮小與相關於拉索病（RASopathy）之基因中之一或多個突變相關。
在各種實施例中，骨相關病症、骨骼發育不良或身材矮小病症由拉索病引起。在各種實施例中，拉索病為努南氏症候群、科斯特洛症候群（Costello syndrome）、心臉皮膚症候群、1型神經纖維瘤或LEOPARD症候群。
在一個實施例中，拉索病為遺傳性1型齒齦纖維瘤病。
在各種實施例中，CNP變異體適用於治療生長板病症及身材矮小，包括家族性身材矮小、顯性家族性身材矮小（其亦稱為顯性遺傳性身材矮小）或特發性身材矮小。在各種實施例中，身材矮小或生長板病症為膠原蛋白（COL2A1、COL11A1、COL9A2、COL10）、聚集蛋白聚糖（ACAN）、印度刺蝟因子（IHH）、PTPN11、NPR2、NPPC、FGFR3或胰島素生長因子1受體（IGF1R）之突變的結果。
在各種實施例中，身材矮小與相關於拉索病之基因中之一或多種突變相關。
拉索病為由Ras/促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase；MAPK）路徑基因中之突變引起的一組罕見遺傳病況。拉索病為特徵在於經由RAS/MAPK路徑之信號傳導增加的一組病症。此路徑導致RAF/MEK/ERK路徑之下游活化。身材矮小為某些拉索病之典型特徵。舉例而言，CNP信號傳導抑制RAF且使得MEK及ERK活化降低。
本文涵蓋拉索病之治療。與身材矮小相關之拉索病包括努南氏症候群、科斯特洛症候群、心臉皮膚症候群、1型神經纖維瘤及LEOPARD症候群。遺傳性1型齒齦纖維瘤病亦為本文所涵蓋之拉索病。拉索病患者（包括努南氏症候群、科斯特洛症候群、心臉皮膚症候群、1型神經纖維瘤、LEOPARD症候群、遺傳性1型齒齦纖維瘤病）包括具有以下基因中之一或多者中之異型接合變異體的患者：BRAF、CBL、HRAS、KRAS、LZTR1、MAP2K1、MAP2K2、MRAS、NF1、NRAS、PPP1CB、PTPN11、RAF1、RRAS、RIT1、SHOC2、SOS1或SOS2（Tajan等人 《內分泌綜述》 2018;39(5):676-700）。
多個基因之突變可引起努南氏症候群，其特徵在於身材矮小、心臟缺陷、出血問題及骨骼畸形。PTPN11基因之突變引起努南氏症候群之所有病例之約一半。SOS1基因突變引起額外10%至15%病例，且RAF1及RIT1基因各自占病例之約5%。其他基因之突變各自占少數病例。15%至20%患有此病症之人群的病因為未知的。
PTPN11、SOS1、RAF1及RIT1基因均編碼在RAS/MAPK細胞信號傳導路徑中重要之蛋白質，該路徑對於細胞分裂及生長（增殖）、分化及細胞遷移係必需的。與努南氏症候群相關之基因中之許多突變使所得蛋白質被打開（活化），且此長時間活化改變正常RAS/MAPK信號傳導，其破壞細胞生長及分裂調節，從而導致努南氏症候群之典型特徵。參見例如Chen等人, 《美國國家科學院院刊（Proc Natl Acad Sci U S A.）》111(31):11473-8, 2014，Romano等人, 《嬰兒病學（Pediatrics.）》126(4):746-59, 2010，及Milosavljević等人, 《美國醫學遺傳學雜誌（Am J Med Genet）》 170(7):1874-80, 2016。經考慮具有活化MAPK路徑之突變的個體將受益於用如本文所描述之CNP變異體治療，以改善骨生長及身材矮小。亦經考慮具有活化MAPK路徑之突變的個體將受益於用如本文所描述之CNP變異體治療，以改善與整個身體之其他細胞（其中NPR2受體表現於其表面上）中之過度活化MAPK路徑相關的其他共患病。
在某些實施例中，本文所描述之CNP變異體肽及組合物及調配物適用於改善骨骼發育不良之一或多種症狀或生理學後果，其中改善可為絕對生長增加、生長速度增加、定性電腦斷層攝影（QCT）骨礦物質密度增加、生長板形態改善、長骨生長增加、脊柱形態改善、肘關節運動範圍改善及/或睡眠呼吸暫停減少。就此而言，應注意術語「經改善（improved）」、「改善（improvement）」、「增加」、「降低」及其文法等效術語當相對於疾病病況之症狀或生理學後果使用時均為相對術語，係指用本發明之CNP變異體肽（或包含其之組合物或調配物）治療後疾病之症狀或生理學後果相較於用本發明之CNP變異體肽（或包含其之組合物或調配物）治療之前的疾病之相同症狀或生理學後果（即相較於「基線」）的狀態。如上文所描述，「基線」狀態可經由治療之前的個體狀態之量測（其可隨後與治療後之同一個體的狀態相比），或經由罹患共用相同或類似特徵（例如年齡、性別及/或疾病病況或進展）之相同病痛之個體群體的狀態之量測確定。 增加或提高生長速度
本揭示案之組合物及調配物亦可出於提高或增加罹患骨骼發育不良之個體的生長速度的目的而投與。在一較佳實施例中，個體罹患軟骨發育不全。藉由各種參數來量測治療功效。在各種實施例中，功效評估為自基線期至干預期按年計算之生長速度的變化。功效亦將評估為如使用CDC生長曲線所量測之自基線至治療結束之身高標準差評分（SDS）（亦稱為身高Z評分）的變化，且生長速度SDS係基於兒童研究中之骨礦物質密度（Kelly等人, 《臨床內分泌與代謝雜誌》2014;99(6):2104-2112）。
個體中生長速度之量測可隨時間使用此項技術中熟知的標準技術進行。在某些實施例中，可經指定時段進行諸如站立高度、坐立高度、體重、頭圍、上臂長度、下臂（前臂）長度、大腿長度、小腿長度（膝蓋至腳部）、手長（手腕至手指末端）及/或腳長之參數的量測來測定特定生長速率，以藉由任何具體參數（即生長速度）所量測。指定時間段之生長速度的量測可「年化」，其中經特定時段計算之生長速率轉化成一年時段的預期生長速率。用本發明之CNP變異體肽治療之前的個體中生長速度之量測（即「基線」生長速度）可與用本發明之CNP變異體肽治療期間或之後的生長速度量測比較，測定治療對個體中生長速度之改變的作用。「基線」生長速度亦可自與使用本發明之CNP變異體肽治療的個體具有相同通用年齡、性別及疾病況態之個體群體測定。
可定量量測如用本發明之CNP變異體肽（或包含其之組合物或調配物）治療有需要之個體誘發或引起的一或多個上文所描述之參數（例如站立高度等）之評定量測的生長速度之改良。就此而言，在某些實施例中，用本發明的CNP變異體（或包含其之組合物或調配物）治療的個體中任何具體參數的生長速度的年化之增加或改良高於基線至少約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%或更高。在某些實施例中，本文所描述之方法導致如站立高度所量測之生長速度年化之增加高於基線至少約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%或更高。在其他實施例中，本文所描述之方法導致如坐立高度、體重、頭圍、上臂長度、下臂（前臂）長度、大腿長度、小腿長度（膝蓋至腳部）、手長（手腕至手指末端）或腳長所量測的生長速度的年化之增加高於基線至少約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50%或更高。如本文所描述，基線比較器可為用本發明的CNP變異體肽治療同一個體之前的特定參數所量測的年化之生長速度，或可為自與用本發明的CNP變異體肽治療之個體具有相同通用年齡、性別及疾病況態之個體群體所測定的生長速度。
與特定身體區段與其他區段之比例有關的人體量測資料亦可獲自用CNP變異體肽治療之前及之後的個體，以測定投與CNP變異體肽是否導致此類比例的改變。舉例而言，上身長度（腰部至頭頂）與下身長度（腰部至腳部）之比可在用CNP變異體肽治療之前（即基線）及用CNP變異體肽治療之後計算以測定用CNP變異體肽治療是否對身體比例具有不良影響。在較年輕個體，例如0至2歲患者中，在量測年化之生長速度及Z評分時，身體長度及頭至臀的長度之量測結果可優先於站立高度及坐立高度。
亦可計算及比較上臂比前臂長度的比率或大腿比小腿（膝蓋至腳部）的比率以測定CNP變異體肽治療對身體比例之影響。在一較佳實施例中，向個體投與CNP變異體肽不會導致以藉由任何特定比率與基線相比所量測的身體比例顯著改變。就此而言，在某些實施例中，用本發明之CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物治療導致任一上文所描述比率的改變不超過0.5、0.25、0.20、0.15、0.10或0.05，較佳不超過0.05。
在本文所描述之各種方法中，CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物的投與較佳不導致所治療個體中二級或更高級別，或三級或更高級別的與研究藥物有關的不良事件。就此而言，美國國立衛生研究院（the US National Institute for Health，NIH）根據不良事件之通用術語準則（CTCAE）v5.0（快速參考指南，不良事件通用術語準則（CTCAE）5.0版發佈：2017年11月27日）維護量測及分級與用化合物治療個體相關的生理事件的技術，以及分級不良事件的清單，其以引用的方式併入本文中。
此外，在本文所描述之各種方法中，投與CNP變異體肽或包含其之組合物或調配物較佳不導致以下一或多個生理學參數臨床顯著改變（相較於基線增加或降低）；血液中血紅蛋白濃度、血液中血小板數目、血液電解質濃度、血液尿素氮濃度、血液肌酐濃度、血液鹼性磷酸酶濃度、血液丙胺酸轉胺酶濃度或血液天冬胺酸轉胺酶濃度。藉由「臨床顯著改變」意謂觀測到導致個體之整體健康狀況發生可偵測/可觀測不良生理學改變的上述參數中任何一或多個的改變。 CNP 變異體肽的醫藥組合物及調配物
在額外實施例中，本揭示案涵蓋包含CNP變異體肽以及一或多種醫藥學上可接受之賦形劑、載劑及/或稀釋劑的醫藥組合物及調配物的用途。在某些實施例中，組合物進一步包含一或多種其他生物活性劑（例如蛋白酶抑制劑、受體酪胺酸激酶及/或清除受體NPR-C）。
賦形劑、載劑及稀釋劑的非限制性實例包括媒劑、液體、緩衝劑、等張劑、添加劑、穩定劑、防腐劑、增溶劑、界面活性劑、乳化劑、濕潤劑、佐劑等。組合物可含有液體（例如水、乙醇）；多種緩衝液內容物（例如Tris-HCl、磷酸鹽、乙酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液）之稀釋劑、pH及離子強度；清潔劑及增溶劑（例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80）；抗氧化劑（例如甲硫胺酸、抗壞血酸、偏亞硫酸氫鈉）；防腐劑（例如硫柳汞（Thimerosol）、苯甲醇、間甲酚）；以及膨化物質（例如乳糖、甘露糖醇、蔗糖）。在醫藥組合物之調配中使用之賦形劑、稀釋劑及載劑為本領域中已知的；參見例如《雷明頓氏藥物科學（Remington's Pharmaceutical Sciences）》, 第18版, 第1435-1712頁, 馬克出版公司（Mack Publishing Co.）（Easton, Pennsylvania（1990）），其以全文引用之方式併入本文中。
舉例而言，載劑包括（但不限於）稀釋劑、媒劑及佐劑，以及植入物載劑，及惰性、無毒固體或液體填充劑及囊封材料，其不與一或多種活性成分反應。載劑之非限制性實例包括磷酸鹽緩衝鹽水、生理鹽水、水以及乳液（例如油/水乳液）。載劑可為含有例如乙醇、多元醇（例如丙三醇、丙二醇、液體聚乙二醇及其類似物）、植物油以及其混合物的溶劑或分散介質。
在一些實施例中，組合物為液體調配物。在某些實施例中，調配物包含之CNP變異體肽的濃度在約0.1 mg/ml至約20 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約20 mg/ml，或約1 mg/ml至約20 mg/ml，或約0.1 mg/ml至約10 mg/ml，或約0.5 mg/ml至約10 mg/ml，或約1 mg/ml至約10 mg/ml，或約2 mg/ml至約10 mg/ml範圍內，或約2 mg/ml或約10 mg/ml。在其它實施例中，調配物可為凍乾調配物或可為事先自凍乾調配物復原之液體調配物。
在其他實施例中，組合物包含緩衝溶液或緩衝劑以將含有CNP之溶液或懸浮液之pH維持在所要範圍內。緩衝溶液之非限制性實例包括磷酸鹽緩衝鹽水、Tris緩衝鹽水及漢克氏緩衝鹽水（Hank's buffered saline）。緩衝劑包括（但不限於）乙酸鈉、磷酸鈉、單水合檸檬酸以及二水合檸檬酸鈉。亦可使用緩衝劑之混合物。在某些實施例中，緩衝劑為乙酸/乙酸鹽或檸檬酸/檸檬酸鹽。組合物中適合的緩衝劑之量部分取決於所使用之特定緩衝劑以及溶液或懸浮液之所要pH。舉例而言，乙酸鹽在pH 5下為比pH 6下更高效之pH緩衝劑，因此pH 5時溶液中使用之乙酸鹽可少於pH 6時。在一些實施例中，緩衝劑之濃度為約10 mM±5 mM。在某些實施例中，組合物之pH為約pH 3至約pH 7.5，或約pH 3.5至約pH 7，或約pH 3.5至約pH 6.5，或約pH 4至約pH 6，或約pH 4至約pH 5，或為約pH 5.0 ± 1.0，或為約pH 5.5 ± 1.0。
在其他實施例中，組合物含有等張劑賦予溶液或懸浮液等張性且與注射更相容。等張劑之非限制性實例包括NaCl、海藻糖、甘露糖醇、右旋糖、葡萄糖、丙三醇、山梨糖醇、木糖醇以及乙醇。在某些實施例中，等張劑為海藻糖或甘露糖醇，其可個別地或組合採用。在某些實施例中，海藻糖或甘露糖醇濃度為約160 ± 20 mM，或約140 mM ± 20 mM，或約120 ± 20 mM，或約100 mM ± 20 mM，或約80 mM ± 20 mM，或約60 mM ± 20 mM。
在各種實施例中，組合物可包含防腐劑。防腐劑包括（但不限於）間甲酚及苯甲醇。在某些實施例中，防腐劑之濃度為約0.4%±0.2%、或約1%±0.5%、或約1.5%±0.5%、或約2.0%±0.5%。在本發明之某些實施例中，組合物或調配物不含防腐劑。
在各種實施例中，組合物含有抗吸附劑（例如降低CNP變異體至玻璃或塑膠之吸附）。抗吸附劑包括（但不限於）苯甲醇、聚山梨醇酯20以及聚山梨醇酯80。在某些實施例中，抗吸附劑濃度為約0.001%至約0.5%，或約0.01%至約0.5%，或約0.1%至約1%，或約0.5%至約1%，或約0.5%至約1.5%，或約0.5%至約2%，或約1%至約2%。
在各種實施例中，組合物包含穩定劑。穩定劑之非限制性實例包括甘油、丙三醇、硫甘油、甲硫胺酸以及抗壞血酸及其鹽。在一些實施例中，當穩定劑為硫甘油或抗壞血酸或其鹽時，穩定劑濃度為約0.1%至約1%。
在各種實施例中，組合物含有抗氧化劑。例示性抗氧化劑為（但不限於）抗壞血酸。在某些實施例中，抗氧化劑與CNP變異體肽之莫耳比為約0.1:1至約15:1，或約1:1至約15:1，或約0.5:1至約10:1，或約1:1至約10:1或約3:1至約10:1。
醫藥學上可接受之鹽可用於組合物，包括（但不限於）無機酸鹽（例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽）、有機酸鹽（例如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、甲苯磺酸鹽）及胺（例如異丙胺、三甲胺、二環己胺、二乙醇胺）鹽。醫藥學上可接受之鹽之充分論述見於《雷明頓氏醫藥科學》, 第18版, 馬克出版公司,（Easton, Pennsylvania（1990））中。
用於非經腸投與之調配物可以製備為例如液體溶液或懸浮液形式、適於在注射之前溶解或懸浮於液體介質中的固體形式或乳液形式。舉例而言，無菌可注射溶液及懸浮液可根據本領域中已知的技術使用適合的稀釋劑、載劑、溶劑（例如緩衝水溶液、林格氏溶液（Ringer's solution）、等張氯化鈉溶液）、分散劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑及其類似者調配。另外，可使用無菌不揮發性油、脂肪酯、多元醇及/或其他非活性成分。作為其他實例，用於非經腸投與之調配物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使調配物與預期接受者血液等張之溶質的水性無菌注射溶液；以及可含有懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。
例示性含CNP肽調配物描述於美國專利8,198,242、8,598,121、9,907,834及10,646,550中。預期使用pH在約4至約6範圍內的CNP調配物。
在各種實施例中，組合物為延釋組合物。
在多個實施例中，CNP變異體肽可在醫藥載劑中調配從而向受骨骼發育不良影響的個體投與。在一些實施例中，CNP變異體肽之液體調配物根據成分之任何組合調配且其量或濃度在下文中描述：
成分類別 成分 濃度範圍
活性成分 CNP變異體肽 10 mg/mL ± 9.9 mg/mL
緩衝劑 乙酸/乙酸鹽 10 mM ± 5 mM，或 pH 5 ± 1
緩衝劑 檸檬酸/檸檬酸鹽 10 mM ± 5 mM，或 pH 5 ± 1
等張性調節劑 NaCl 140 mM ± 20 mM
等張性調節劑 海藻糖；甘露糖醇 10% ± 5%
防腐劑 間甲酚 0.4% ± 0.1%或0.2%
成分類別 成分 濃度範圍
防腐劑/抗吸附劑 苯甲醇 1.5% ± 0.5%
穩定劑 甘油（丙三醇） 5% - 100%（淨）
穩定劑 甲硫胺酸 0.01% - 0.2%
穩定劑 抗壞血酸/ 抗壞血酸鹽 0.1% - 1%
穩定劑 硫代甘油 0.1% - 1%
抗吸附劑 聚山梨醇酯20 聚山梨醇酯80 苯甲醇 0.001% - 0.5% 0.001% - 0.5% 0.5% - 1.5%
包含CNP變異體肽之組合物亦可為凍乾調配物。在某些實施例中，凍乾調配物包含緩衝劑及膨化劑，以及視情況存在之抗氧化劑。例示性緩衝液包括（但不限於）乙酸鹽緩衝液及檸檬酸鹽緩衝液。例示性膨化劑包括（但不限於）甘露糖醇、蔗糖、聚葡萄糖、乳糖、海藻糖及聚維酮（PVP K24）。在某些實施例中，甘露糖醇及/或海藻糖之量為約3%至約10%，或約4%至約8%，或約4%至約6%。在某些實施例中，蔗糖之量為約6%至約20%、或約6%至約15%、或約8%至約12%。
在各種實施例中，CNP變異體肽之凍乾調配物自根據任何成分組合調配之調配物製備且所描述成分之量或濃度在下文中描述：
成分類別 成分 濃度範圍
活性成分 CNP變異體 10 mg/mL ± 9.9 mg/mL
緩衝劑 乙酸/乙酸鹽 10 mM ± 5 mM，或 pH 5 ± 1
緩衝劑 檸檬酸/檸檬酸鹽 10 mM ± 5 mM，或 pH 5 ± 1
等張性調節劑/ 膨化劑 山梨糖醇 5% ± 3%
等張性調節劑/ 膨化劑 甘露糖醇/海藻糖 5% ± 3%
等張性調節劑/ 膨化劑 蔗糖 10% ± 5%
防腐劑 間甲酚 0.4% ± 0.2%
防腐劑/抗吸附劑 苯甲醇 1.5% ± 0.5%
成分類別 成分 濃度範圍
穩定劑 甘油（丙三醇） 5% - 100%（淨）
穩定劑 甲硫胺酸 0.01% - 0.2%
穩定劑 抗壞血酸/ 抗壞血酸鹽 0.1% - 1%
穩定劑 硫代甘油 0.1% - 1%
抗吸附劑 聚山梨醇酯20 聚山梨醇酯80 苯甲醇 0.001% - 0.5% 0.001% - 0.5% 0.5% - 1.5%
在各種實施例中，包含CNP變異體肽之調配物的pH為約3-7，或約3-6，或約3.5-6.5，或約4-6，或約4-5，或約4.5-5.5。在一些實施例中，對於pH 4-5.5，適合緩衝劑為乙酸/乙酸鹽（例如乙酸鈉），且對於pH 5.5-6，適合緩衝劑為檸檬酸/檸檬酸鹽。檸檬酸/檸檬酸鹽（例如檸檬酸鈉）亦為pH 3-6或pH 4-6範圍內的適合緩衝劑。在某些實施例中，緩衝劑於調配物中的濃度為約2-50 mM，或約2-40 mM，或約2-30 mM，或約5-30 mM，或約2-20 mM，或約5-20 mM，或約5-15 mM。
亦為了使CNP變異體肽之脫醯胺降至最低或避免CNP變異體肽之脫醯胺，可藉由凍乾自調配物移除水。在一些實施例中，凍乾調配物含有具有以下組分之任何組合：緩衝劑：乙酸鈉及乙酸，或檸檬酸鈉及檸檬酸；等張劑/膨化劑：甘露糖醇（例如3-10%、2-8%或4-6%）；蔗糖（例如6-20%、5-15%或8-12%）；抗氧化劑：各抗氧化劑比CNP變異體肽之莫耳比為約0.1:1至約1:1，或約0.5:1至約5:1，或約1:1至約15:1，或約1:1至約10:1，或約3:1至約10:1的甲硫胺酸及/或抗壞血酸。
亦可藉由在諸如約5℃、0℃、-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-80℃、-90℃或-100℃之低溫下儲存CNP組合物（例如液體調配物或凍乾調配物）使脫醯胺降至最低或避免脫醯胺。
為了使CNP變異體肽中之可氧化殘基（例如甲硫胺酸）降至最低或避免其氧化，變異體可用一或多種抗氧化劑調配。例示性抗氧化劑包括（但不限於）甲硫胺酸、抗壞血酸及硫代甘油。亦可藉由用氮氣或氬氣自液體介質（若液體調配物）淨化氧氣，及/或藉由用氮氣或氬氣自容器或封裝淨化氧氣使例如甲硫胺酸殘基之氧化降至最低或避免例如甲硫胺酸殘基之氧化。
在一些實施例中，為了使吸附（例如CNP變異體肽吸附至塑膠或玻璃）降至最低或防止吸附，向CNP調配物中添加聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或苯甲醇，或其組合。在某些實施例中，各抗吸附劑之濃度為約0.001%至約0.5%，或約0.01%至約0.5%，或約0.1%至約1%，或約0.5%至約1%，或約0.5%至約1.5%，或約0.5%至約2%，或約1%至約2%。抗吸附劑於調配物中之例示性範圍包括（但不限於）約0.001%至約0.5%聚山梨醇酯20、約0.001%至約0.5%聚山梨醇酯80及/或約0.5%至約1.5%苯甲醇。
在各種實施例中，調配物包含檸檬酸、檸檬酸鈉、海藻糖、甘露糖醇、甲硫胺酸、聚山梨醇酯80及視情況存在之注射用無菌水（WFI）。
本揭示案亦提供套組，其含有例如包含液體（例如無菌可注射）調配物或固體（例如凍乾）調配物之瓶、小瓶、安瓿、管、藥筒及/或注射器。套組亦可含有醫藥學上可接受之媒劑或載劑（例如溶劑、溶液及/或緩衝液），其用於將固體（例如凍乾）調配物復原為溶液或懸浮液以用於投與（例如藉由注射），包括（但不限於）復原注射器中之凍乾調配物以用於注射或將濃縮物稀釋至較低濃度。此外，即用型注射溶液及懸浮液可自例如包含含有CNP之組合物的無菌粉末、顆粒或錠劑製備。套組亦可包括施配裝置（諸如噴霧或注射施配裝置）、筆式噴射器、自噴射器、無針噴射器、注射器及/或針。 劑量及給藥頻率
如本文所用，術語活性劑（例如CNP變異體肽）之「治療有效量」係指向患者提供治療益處的量。各個體的量可不同且可取決於許多因素，包括患者之整體身體狀況。熟習此項技術者使用公眾可獲得之材料及程序容易確定CNP變異體肽之治療有效量。舉例而言，療法所用之CNP變異體肽之量應產生基於0-17歲年齡的患有軟骨發育不全兒童（214名女性及189名男性）的生長曲線表的可接受之生長速率，該生長曲線表列出針對年齡之身高、頭圍及區段生長（Horton WA等人, 軟骨發育不全之標準生長曲線（Standard growth curves for achondroplasia）, 《世界兒科雜誌（J. Pediatr.）》, 93: 435-8 (1978)）。CDC圖表可用於評定針對年齡之體重、以及針對身高之體重或針對年齡之BMI。亦可量測更長期週期的輔助結果。
具體個體之給藥頻率可視多種因素而變化，包括所治療病症及病況及個體對療法之反應。在某些實施例中，約每天一次、每兩天一次、每三天一次或每週一次、每週兩次、每週三次、每兩週一次或每月一次向個體投與含有CNP變異體肽之醫藥組合物。在一個實施例中，對於治療骨骼相關病症（例如骨骼發育不良，包括軟骨發育不全），向患者投與每日或每週劑量之CNP變異體肽直至成人期及/或貫穿成人期。
在某些實施例中，本文所描述之CNP變異體組合物以在約3、4、5、6、7、8、9或10 nmol/kg至約300 nmol/kg，或約20 nmol/kg至約200 nmol/kg範圍內之劑量投與。在一些實施例中，CNP組合物以約3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、750、1000、1250、1500、1750或2000 nmol/kg或由治療醫師認為適當的其他劑量投與。在一些實施例中，CNP變異體組合物以約3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、125、130、140、150、160、170、175、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、350、400、450、500、750、1000、1250、1500、1750或2000 nmol/kg或由治療醫師認為適當的其他劑量投與。在其他實施例中，CNP變異體組合物以約3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000 mg/kg，或約0.5、0.8、1.0、1.25、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5或10 mg/kg，或由治療醫師認為適當的其他劑量投與。本文所描述之CNP或CNP變異體之劑量可根據本文所描述之給藥頻率/投與頻率投與，包括（但不限於）每日一次、每週2次或3次、每週一次、每2週一次、每3週一次、每月一次等。在各種實施例中，CNP或CNP變異體係每日皮下投與。在各種實施例中，CNP或CNP變異體係每週皮下投與。在各種實施例中，CNP變異體係以2.5 µg/kg/天至60 µg/kg/天、10 µg/kg/天至45 µg/kg/天或15 µg/kg/天至30 µg/kg/天之劑量投與。在各種實施例中，CNP變異體係以15 µg/kg/天之劑量投與。在各種實施例中，CNP變異體係以30 µg/kg/天之劑量投與。CNP變異體肽之投與可經長時間進行，在一些情況下，經一個月、三個月、六個月、12個月或更久。在各種實施例中，治療可以在3個月或6個月時開始，或在例如藉由基因測試確定個體患有骨骼發育不良時開始，且可以繼續治療直至生長板閉合。
CNP變異體或其組合物亦可藉由在目標作用部位（例如異常或退化的關節或軟骨區域）植入藥物儲槽來投與。可替代地，CNP變異體可藉由經皮遞送（例如藉助於皮膚上之貼片）在舌下（例如舌下錠劑）以舌下方式投與，或以微球、微膠囊、脂質體（不帶電或帶電（例如陽離子））、聚合微粒（例如聚醯胺、聚丙交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-乙交酯)、微乳液及其類似形式經口投與。
本文所描述之CNP變異體組合物可以治療有效劑量向有需要之患者投與，以治療、改善或預防骨相關病症（例如骨骼發育不良，包括軟骨發育不全）。CNP變異體之安全性及治療功效可藉由細胞培養物或實驗動物中之標準藥理學程序測定，諸如藉由測定LD50（對於50%之群體致死性的劑量）及ED50（在50%之群體中治療有效的劑量）。毒性作用與治療作用之間的劑量比為治療指數且其可以比率LD50/ED50表示。展現較大治療指數之活性劑通常係較佳的。
針對具體個體之給藥頻率/CNP變異體肽投與可視多種因素而變化，包括所治療病症及病況及個體對療法之反應。CNP變異體肽可以每次給藥單次劑量或多次劑量投與。在某些實施例中，CNP變異體肽以單次劑量或多次劑量每日一次、每隔一天一次、每3天一次、每週2次、每週3次、每週一次、每兩週一次、每3週一次、每月一次、每6週一次、每2個月一次、每3個月一次或如治療醫師認為適當投與。
在一些實施例中，投與CNP變異體肽從而允許生長週期（例如軟骨生成），繼之以恢復時段（例如成骨）。舉例而言，CNP變異體肽可靜脈內、皮下、關節內或藉由另一模式每日一次或每週多次投與一段時間，繼之以無治療之時段，接著重複該循環。在一些實施例中，初始治療時段（例如每日投與或每週多次投與CNP變異體肽）持續3天、1週、2週、3週、4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週或12週。在一相關實施例中，無治療時段持續3天、1週、2週、3週或4週。在某些實施例中，CNP變異體肽之給藥方案為每日投與持續3天，繼之以3天停藥；或每日投與或每週多次投與持續1週，繼之以3天或1週停藥；或每日投與或每週多次投與持續2週，繼之以1週或2週停藥；或每日投與或每週多次投與持續3週，繼之以1週、2週或3週停藥；或每日投與或每週多次投與持續4週、5週、6週、7週、8週、9週、10週、11週或12週，繼之以1週、2週、3週或4週停藥。 投與模式
CNP變異體肽或包含其之醫藥組合物或調配物可以多種方式向個體投與，諸如藉由皮下、關節內、靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮內或鞘內注射。在一個實施例中，CNP變異體肽藉由每天一次、每隔一天一次、每三天一次或一週一次單次皮下、關節內、靜脈內、動脈內、腹膜內、肌肉內、皮內或鞘內注射投與。
CNP變異體肽亦可藉由在疾病部位處或附近直接注射投與。另外，CNP變異體肽可藉由在目標作用部位（例如異常或退化的關節或軟骨區域）植入藥物儲槽來投與。或者，CNP變異體肽可在舌頭下部舌下投與（例如舌下錠劑）或藉由吸入至肺部（例如吸入劑或氣霧劑噴霧）、藉由傳遞至鼻腔（例如鼻內噴霧）、藉由傳遞至眼睛（例如滴眼劑）或藉由經皮傳遞（例如藉助於皮膚上之貼片）。CNP變異體肽可以微球體、微膠囊、脂質體（不帶電或帶點（例如陽離子））、聚合微粒（例如聚醯胺、聚乳酸交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-乙交酯)）、微乳液及其類似物形式經口投與。
另一投與方法為藉由滲透泵（例如Alzet泵）或微泵（例如Alzet微滲透泵），其允許經預定時段控制、連續及/或緩慢釋放傳遞CNP變異體肽或醫藥組合物。滲透泵或微泵可皮下植入，或在目標部位（例如肢體長骨、松果體等）附近。
熟習此項技術者顯而易知，CNP變異體肽或其組合物亦可藉由其他模式投與。CNP變異體肽或其組合物之最有效投與模式的測定在熟習此項技術者技能範圍內。 生物標記
為了治療骨相關病症，可量測生長指標，諸如子宮內及新生兒之長骨生長量測，及量測骨生長生物標記，諸如CNP、cGMP、膠原蛋白II、膠原蛋白X、骨鈣化素及增殖細胞核抗原（PCNA）。
適用於評定骨骼發育不良之治療的生物標記亦包括NTproCNP、膠原蛋白X之N端片段（CXM）、CNP、cGMP、II型膠原蛋白及其片段之前肽、II型膠原蛋白及其片段、I型膠原蛋白及其片段之前肽、I型膠原蛋白及其片段、骨鈣化素、增殖細胞核抗原（PCNA）、聚集蛋白聚糖硫酸軟骨素、膠原蛋白X及鹼性磷酸酶。可量測任何適當生物樣品中之軟骨相關及骨相關的生物標記，包括（但不限於）組織、血液、血清、血漿、腦脊髓液、滑液及尿液。在一些實施例中，在來自進行活體內功效/藥效學研究之動物及/或來自離體研究之經調節之培養基的血液、血漿或血清中量測生物標記。
一種CNP信號傳導標記為cGMP（3',5'環狀單磷酸鳥苷）。此胞內信號傳導分子之含量在與CNP結合及活化其同源受體NPR-B之後增加。升高的cGMP含量可在CNP暴露之後自細胞培養提取物（活體外）、來自CNP暴露之後的骨外植研究之經調節之培養基（離體）及在皮下、靜脈內或經由本領域中已知之其他投與途徑投與CNP幾分鐘內的血漿內（活體內）量測。
亦可量測軟骨及骨特異性分析物（或軟骨及骨相關標記）以評估CNP功效。舉例而言，裂解之II型膠原蛋白的片段為軟骨更新之軟骨特異性標記。II型膠原蛋白為軟骨之主要有機成分且II型膠原蛋白之片段（裂解之膠原蛋白）係釋放至循環中，且隨後在軟骨更新後分泌至尿液中。軟骨更新先於新骨形成。
可量測之骨形成之骨特異性生物標記為I型原膠原（PINP）之N端前肽。I型膠原蛋白之合成為骨形成中之重要步驟，因為I型膠原蛋白係骨基質中之主要有機組分。在膠原蛋白合成期間，前肽自原膠原分子釋放且可在血清中偵測到。另外，I型膠原蛋白之片段可量測為骨再吸收之標記。
軟骨及骨形成及生長之其他潛在生物標記包括聚集蛋白聚糖硫酸軟骨素（軟骨更新之軟骨特異性標記）、II型膠原蛋白之前肽（軟骨形成之軟骨特異性標記）、I型膠原蛋白C端肽（CTx）、鹼性磷酸酶（骨特異性）及骨鈣化素（骨形成之骨特異性標記）。軟骨及骨相關生物標記可使用市售套組例如在來自功效/藥效學活體內研究，及來自離體研究之經調節之培養基之血清中量測。可量測任何適當生物樣品中之軟骨相關及骨相關的生物標記，包括（但不限於）組織、血液、血清、血漿、腦脊髓液、滑液及尿液。
在一個實施例中，在已投與本文所描述之CNP變異體或組合物之個體中分析或量測至少一種骨相關或軟骨相關的生物標記之含量，以便監測CNP組合物對活體內骨及軟骨形成及生長之作用。舉例而言，至少一種骨相關或軟骨相關的生物標記之含量增加可指示投與CNP變異體或組合物對骨生長具有積極作用，且適用於治療骨骼發育不良及與CNP活性降低相關之其他骨相關或軟骨相關的疾病或病症。例示性骨相關或軟骨相關的生物標記包括（但不限於）CNP（例如CNP之內源性含量）、cGMP、II型膠原蛋白及其片段之前肽、II型膠原蛋白及其片段、I型膠原蛋白C端肽（CTx）、骨鈣化素、增殖細胞核抗原（PCNA）、I型原膠原之前肽（PINP）及其片段之前肽、I型膠原蛋白及其片段、膠原蛋白X、聚集蛋白聚糖硫酸軟骨素及鹼性磷酸酶。在各種實施例中，經量測的生物標記包括NTproCNP、膠原蛋白X之N端片段（CXM）、CNP、cGMP、II型膠原蛋白及其片段之前肽、II型膠原蛋白及其片段、I型膠原蛋白及其片段之前肽、I型膠原蛋白及其片段、骨鈣化素、增殖細胞核抗原（PCNA）、聚集蛋白聚糖硫酸軟骨素、膠原蛋白X及鹼性磷酸酶。
在各種實施例中，藉由自將投與、正投與或已投與CNP變異體之個體獲得生物樣品來量測生物標記。可使用本領域中已知的技術量測生物標記，包括（但不限於）西方墨點（Western Blot）、酶聯免疫吸附分析（enzyme linked immunosorbant assay；ELISA）及酶活性分析。生物樣品可為血液、血清、尿液或其他生物流體。
本揭示案之額外態樣及細節將自以下實例顯而易知，該等實例旨在說明性而非限制性的。 實例 實例1-CNP變異體在0-5歲軟骨發育不全患者中之2期試驗
為了測定CNP變異體肽對較年輕軟骨發育不全患者中骨骼發育不良（諸如軟骨發育不全）之症狀及長骨生長及/或生長速度的作用（以藉由治療後患者站立高度的增加速率與治療前比較所量測），在如臨床證據所記錄且由遺傳學測試所確認記載ACH的小於2歲（包含端點）及2至5歲軟骨發育不全（ACH）兒童中進行劑量研究。
在投與包含如本文所描述之CNP變異體肽之調配物之前。更具體言之，Pro-Gly-CNP-37肽調配成不含防腐劑之無菌組合物，其包含2.0 mg/ml CNP肽與0.28 mg/ml單水合檸檬酸、1.08 mg/ml二水合檸檬酸鈉、58.01 mg/ml二水合海藻糖、15 mg/ml D-甘露糖醇、0.73 mg/ml L-甲硫胺酸以及0.05 mg/ml聚山梨醇酯80，pH 5.5之組合。此液體組合物自包含所描述之組分之初始凍乾調配物復原且在無菌單次使用I型未經處理之硼矽酸鹽透明玻璃小瓶中供應。此復原液體調配物用於本文所描述之全部人類臨床治療研究中。
為評定每日SC注射伏索利肽對患有ACH之較年輕兒童之安全性及功效，自0至5歲兒童進行2期、隨機、雙盲、安慰劑對照、全球、多中心研究（研究111-206及擴展研究111-208）。
群組1-年齡≥24至＜60個月的兒童（總計n≥30名：三名前哨個體接受伏索利肽，以及至少27名額外個體以1:1的比例隨機分配至治療組或安慰劑對照組），按年齡分層（≥24至＜36個月以及≥36個月至＜60個月）。所有個體群組1：15 μg/kg/天皮下注射（所有個體）。
群組2-年齡≥6至＜24個月的兒童（總計n≥20名：三名前哨個體接受伏索利肽，以及至少17名額外個體以1:1的比例隨機分配至治療組或安慰劑對照組），按年齡分層（≥6個月至＜15個月以及≥15個月至＜24個月）。當個體達到2歲時，此群組中之所有個體經30 μg/kg/天調整至每天15 μg/kg/天進行治療。
群組3-年齡0至＜6個月的兒童（總計n≥20名：三名前哨個體接受伏索利肽，以及至少17名額外個體以1:1的比例隨機分配至治療組或安慰劑對照組）。治療在觀測3個月之後≥3個月至＜6個月開始。
群組1及2個體必須在篩選前立即進行至少6個月之治療前生長評估，且在111-206篩選訪問前最少6個月進行一次身高/體長的記錄量測。群組3個體在治療前必須進行至少3個月的觀測。該觀察期可（1）經由先前入選另一項相關研究或（2）經由入選此111-206在開始治療前進行最少3個月的非治療觀測來獲得。
主要終點包括在第52週時之長度/身高Z評分及任何不良事件之評估。次要指標包括第52週之AGV、雙側下肢X射線片、腰椎X射線片、全身及脊柱DXA、AUC0-∞、AUC0-t、C max、T max、t 1/2、CL/F、V z/F、髖關節監測臨床評估、Bayley-III、WeeFIM及ITQOL評分、CBCL評分、抗伏索利肽總抗體（TAb）、抗伏索利肽抗體與內源性CNP、ANP及BNP的交叉反應（TAb）、抗伏索利肽中和抗體（NAb）、CXM及骨特異性鹼性磷酸酶、II型膠原蛋白（CTX-II）、環單磷酸鳥苷（cGMP）、人體量測值、上肢與下肢區段比、上臂長度與下臂（前臂）長度比、大腿長度（大腿）與膝蓋至腳跟長度比、大腿長度（大腿）與脛骨長度比以及臂展與站立高度的比。
探索性成像評定資料包括脊柱、長骨及肢端之量測及形態，以及生長板、骨骼年齡及骨礦物質密度的量測。分析法包括用於基線髖評定的骨盆之前後軸（AP）x射線；評定骨骼年齡（Greulich, 1971, 史丹福大學出版社（Stanford University Press.））；（Tanner, 1975, 學術出版社（Academic Press.））、生長板、手長度及皮層厚度的左手及手腕後前軸（PA）放射照片；評定生長板、脛骨長度、皮層厚度及肘部之AP下肢放射照片；評定橫向椎弓根間距之腰部脊柱的AP放射照片。進行腰部脊柱之橫向放射照片來評定胸腰椎脊柱前彎症角度、脊椎形態以及與脊柱狹窄有關的其他可能性改變、評定骨礦物質密度、生長板形態及骨骼長度的前臂及脛骨之QCT掃描。此掃描可使用標準CT掃描儀、校準模體以及指定軟體使用避免直接輻射頭部及軀幹的預定低輻射劑量方案獲得。
使用測角計量測肘關節運動範圍之屈曲-伸展量測值。
生物標記物藉由相對於基線之改變評估且包括（但不限於）軟骨轉換（CTX-II）、軟骨細胞及成骨細胞活性（骨骼特異性鹼性磷酸酶）、骨骼形成（P1NP）、骨骼轉換（骨鈣化素）；以及CNP生物活性（cGMP、NT-proCNP以及ANP）之標記物以及額外生物標記之評定。在指定時間點收集膠原蛋白及骨骼轉換的血液及尿液生物化學標記物以及CNP活性之標記的樣品。
不良事件。每一個上述群組中之全部患者針對不良事件（具體由CNP變異體肽治療引起）之存在進行定期評定（如不良事件之通用術語準則（CTCAE）（5.0版發佈：2017年11月27日）所定義）。三個研究群組中任一群組中均無患者顯示二級或更高級別的確定與研究藥物有關的不良事件，表明用CNP變異體肽治療軟骨發育不全患者不會導致嚴重不良生理學事件。
各研究群組中之全部患者均定期監測血液中血紅蛋白濃度、血液中血小板數目、血液電解質濃度、血液尿素氮濃度、血液肌酐濃度、血液鹼性磷酸酶濃度、血液丙胺酸轉胺酶濃度及血液天冬胺酸轉胺酶濃度。
與來自疾病控制中心（CDC）的平均身材兒童的可用參考資料進行比較，將站立高度的每個量測值轉換為適合年齡及性別的標準差評分（SDS），亦稱為身高Z評分。身高Z評分及其在第26週及第52週相對於基線之變化經總結且按群組及整體呈現給前哨個體。
AGV、上肢與下肢比例以及站立及坐立高度與身高Z評分相似進行概述。按群組及整體概述前哨個體的結果。在各時間點概述其他人體量度（坐立高度、頭圍等）且評估其相對於基線之改變。對於較年輕個體，量測身體長度且將其用於分析，而非站立高度。類似地，量測頭至臀而非坐立高度。
44名個體入選研究111-206中且接受治療，群組1中四名前哨個體及31名隨機分組個體，以及群組2中4名前哨個體及16名隨機分組個體。群組3包括3名前哨個體及4名隨機分組個體。在第一個評估期，在群組1中，四名前哨個體已完成52週之治療，而所有26名隨機分組個體均已完成第13週的訪問，且九名隨機分組個體已完成第39週的訪問。在群組2中，兩名前哨個體已完成第26週的訪問。無個體在資料截止日期時停止研究藥物或111-206研究。在隨後的評估期，已入選67名個體，且所有37名接受治療的個體均包括在安全性分析群體及被視為係主要功效分析集的完整分析集（FAS）中。此外，研究206及研究208兩者均在進行中，且隨機分組個體在資料截止點仍處於不知情，因此下面呈現的結果係來自前哨個體的結果。圖1提供研究參與者之人口統計資料。
結果：52週治療
前哨個體之結果概述呈現於表1中。 表1.年化生長速度、身高Z評分及身體比例相對於基線的變化（前哨個體）
指標 分析訪問 a ） 群組（ n=4 ） 群組 2 （ n=4 ） 群組 3 （ n=3 ）
AGV（cm /年） c ） 基線 b ） 6.21±1.73（n=4） 11.93±1.32（n=4） 24.78±5.39（n=3）
第26週 6.90±1.64（n=4） 10.40±2.15（n=4） 14.43（n=1）
自基線至第26週的變化 0.69±1.70（n=4） -1.53±3.03（n=4） -5.03（n=1）
第52週 6.78±1.00（n=4） 9.17±1.06（n=4） -
自基線至第52週的變化 0.57±0.91（n=4） -2.75±1.65（n=4） -
第78週 6.48±0.90（n=4） 9.39（n=1） -
自基線至第78週的變化 0.27±1.13（n=4） -3.26（n=1） -
第104週 6.45±0.70（n=3） - -
自基線至第104週的變化 -0.27±1.09（n=3） - -
身高Z評分 基線 -4.51±0.33（n=4） -4.72±0.53（n=4） -4.18±0.77（n=3）
第26週 -4.35±0.23（n=4） -4.29±0.65（n=4） -4.39（n=1）
自基線至第26週的變化 0.15±0.19（n=4） 0.43±0.69（n=4） 0.08（n=1）
第52週 -4.16±0.47（n=4） -3.88±0.35（n=4） -
自基線至第52週的變化 0.34±0.27（n=4） 0.84±0.25（n=4） -
第78週 -4.06±0.50（n=4） -3.35（n=1） -
自基線至第78週的變化 0.45±0.29（n=4） 0.78（n=1） -
第104週 -3.77±0.41（n=3） - -
自基線至第104週的變化 0.62±0.36（n=3） - -
上肢與下肢之比 基線 2.25±0.36（n=4） 2.56±0.25（n=4） 3.12±0.37（n=3）
第26週 2.21±0.35（n=4） 2.49±0.22（n=4） 3.00（n=1）
自基線至第26週的變化 -0.04±0.06（n=4） -0.07±0.05（n=4） -0.37（n=1）
第52週 2.23±0.24（n=4） 2.37±0.21（n=4） -
自基線至第52週的變化 -0.02±0.12（n=4） -0.19±0.28（n=4） -
第78週 2.15±0.29（n=4） 2.30（n=1） -
自基線至第78週的變化 -0.11±0.08（n=4） -0.29（n=1） -
第104週 2.19±0.22（n=3） - -
自基線至第104週的變化 -0.19±0.10（n=3） - -
平均值±SD，2個或更少個體的個別值，-：未量測 AGV：年化生長速度。 a）自研究206開始的時期。 b）對於群組1及2，計算係基於研究901過去6個月的身高資料；對於群組3，計算係基於研究901過去3個月的身高資料。 c）在各訪問時的AGV係用過去12個月的身高資料計算的。
身高Z評分相對於基線之變化
對於群組1前哨個體，平均（SD）基線身高Z評分為-4.51（0.33）。對於群體1前哨個體（N=4），在第26週身高Z評分相對於基線之平均（SD）變化為+0.15（0.19）且在第52週則為+0.34（0.27）。
對於群組2前哨個體，平均（SD）基線身高Z評分為-4.72（0.53）。對於群體2前哨個體（N=4），在第26週相對於基線之平均（SD）變化為+0.43（0.69）且在第52週則為+0.84（0.25）。對於群組3前哨個體，平均（SD）基線身高Z評分為-4.18（0.77）。對於群體3前哨個體（N=3），在第26週身高Z評分相對於基線之平均（SD）變化為+0.08。
相對於基線之年化生長速度變化
群組1前哨個體之基線AGV為6.21 cm/年，群組2前哨個體之基線AGV為11.93 cm/年，且群組3前哨個體之基線AGV為24.78 cm/年。在群組1前哨個體（N=4）中，在26週治療之後，AGV相對於基線平均（SD）增加0.69（1.70）cm/年，且在52週治療之後，AGV相對於基線平均（SD）增加0.57（0.91）cm/年。
在四個群組2前哨個體中，在26週治療之後，AGV相對於基線平均（SD）降低1.53（3.03）cm/年，且在第52週，AGV相對於基線平均（SD）降低2.75（1.65）cm/年。在群組3前哨個體中，在26週治療之後，AGV相對於基線平均（SD）降低5.03 cm/年。
上肢與下肢之比
在初始檢查點，兩個群組的上肢與下肢之比未隨時間變化。在群體1前哨個體（N=4）中，自基線至第26週上肢與下肢之比的平均（SD）變化為-0.04（0.06）且至第52週則為-0.02（0.12）。對於群體2前哨個體（N=2），自基線至第26週上肢與下肢之比的平均（SD）變化為-0.07（0.05）且在第52週則為-0.19（0.28）。在隨後的檢查點處，群組3注意到相同效應，其中在第26週的比率變化為-0.37。
站立高度及坐立高度
在群體1前哨個體（N=4）中，在第26週站立高度相對於基線之平均（SD）變化為3.38（0.82）cm且在第52週則為6.78（1.12）。在每個個體的2年治療期間，注意到站立高度的持續改善。在第26週坐立高度相對於基線之平均（SD）變化為1.98（1.12）cm且在第52週則為4.69（0.43）。
在群體2前哨個體（N=2）中，在第26週站立高度相對於基線之平均（SD）變化為5.15（1.01）cm且在第52週則為9.22（0.98）。在2名前哨個體中在第26週坐立高度相對於基線之平均（SD）變化為3.70（0.19）cm。
四肢的身體比例相對於基線的變化及生長量測值相對於基線的變化
在第26週及第52週，身體比例無臨床上顯著之變化。在所有生長量測值（頭圍、臂展、上臂長度、下臂長度、下身長度、大腿長度、膝蓋至腳跟長度及脛骨長度）中，群組1及群組2的生長均有一致的積極改善。
在研究111-206中，經15 µg/kg每日治療持續52週，2至5歲之ACH個體之平均Cmax及AUC0-∞一般與15 µg/kg大齡ACH個體（年齡為5至18歲）一致，分別在3810至6860 pg/mL及118000至350000 pg-min/mL範圍內。中值Tmax在14.0至15.5分鐘範圍內，且平均t1/2在15.2至29.3分鐘範圍內。平均CL/F及Vz/F範圍分別為82.1至150 mL/min/kg及2650至3800 mL/kg。證據表明，在15 rig/公斤下，研究111-206中2至＜5歲之群組1個體的暴露與研究111-301中5至18歲之個體的暴露相似。
群組2前哨使用相同的15 µg/kg劑量。群組2之PK資料之分析指示，實現所需暴露之適當劑量為30 µg/kg/天，隨後3名前哨增加至30 µg/kg/天直至個體達到2歲，在此時該等個體恢復至15 µg/kg劑量。群組3將以相同的方式進行評估。
在52週時安慰劑組及群組1-3之完整資料集（FAS）之分析呈現如下。 表2第52週身高Z評分的協方差分析（整體，群組1、2及3）
分析 評估 整體 群組 1 群組 2 群組 3
群體 安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽
FAS （隨機） N 32 32 16 15 8 8 8 9
基線，平均值（SD） -4.28（0.26） -3.79（0.17） -5.13（1.15） -4.27（0.81） -4.21（1.24） -3.39（0.84） -2.65（0.28） -3.34（0.34）
LSM相對於基線之變化（95% CI） -0.31 （-0.48，-0.13） -0.06 （-0.26，0.15） -0.06 （-0.28，0.16） 0.27 （0.04，0.50） -0.19 （-0.58，0.20） 0.02 （-0.38，0.41） -0.91 （-1.36，-0.45） c -0.68 （-1.21，-0.15） c
LSM之差值（95% CI） a 0.25 （ -0.02 ， 0.53 ） 0.33 （ 0.00 ， 0.67 ） 0.21 （ -0.37 ， 0.79 ） 0.23 （ -0.45 ， 0.91 ） c
p值 b 0.0712 0.0510 0.4427 0.5083
FAS N 32 43 16 19 8 12 8 12
基線，平均值（SD） -4.28（0.26） -3.88（0.14） -5.13（1.15） -4.32（0.73） -4.21（1.24） -3.67（0.83） -2.65（0.28） -3.39（0.28）
LSM相對於基線之變化（95% CI） -0.30 （-0.47，-0.13） 0.01 （-0.15，0.17） -0.03 （-0.24，0.18） 0.26 （0.07，0.45） -0.17 （-0.53，0.18） 0.24 （-0.05，0.52） -0.91 （-1.33，-0.49） c -0.64 （-1.08，-0.20） c
LSM之差值（95% CI） a 0.30 （ 0.07 ， 0.54 ） 0.29 （ -0.01 ， 0.58 ） 0.41 （ -0.06 ， 0.87 ） 0.27 （ -0.34 ， 0.89 ） c
p值 b 0.0110 0.0589 0.0804 0.3876 c
CI：信賴區間；FAS：全分析集；SD：標準差
a差值係伏索利肽減去安慰劑。 b雙邊p值。 c基於10個設算資料集。
LS平均值及LS平均值之差值獲自協方差模型之分析。模型項包括治療、性別、年齡層、基線年齡、基線AGV及基線身高Z評分。
對於年齡＜24個月之參與者而言，身體長度優先於站立高度。個體在基線處＜24個月且在第52週時＞=24個月時，身體長度優先。
若在第52週分析訪問窗內不存在可用的身高評估，則在第52週時之身高Z評分係基於所設算身高導出。
表3.第52週年化生長速度的協方差分析（整體，群組1、2及3）
分析群體 評估 總體 群組 1 群組 2 群組 3
安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽 安慰劑 伏索利肽
FAS （隨機） N 32 32 16 15 8 8 8 9
基線，平均值（SD） 9.60（1.37） 11.06（1.34） 4.20（1.78） 4.74（1.68） 10.55（4.78） 11.51（4.66） 19.45（2.67） 21.19（0.93）
LSM相對於基線之變化（95% CI） -2.95 （-3.45，-2.45） -2.17 （-2.76，-1.58） 0.89 （0.23，1.55） 1.99 （1.31，2.67） -3.00 （-3.86，-2.13） -2.36 （-3.22，-1.50） -10.14 （-11.48，-8.79） c -9.34 （-10.78，-7.91） c
LSM之差值（95% CI） a 0.78 （ 0.02 ， 1.54 ） 1.10 （ 0.13 ， 2.07 ） 0.63 （ -0.60 ， 1.87 ） 0.79 （ -1.08 ， 2.67 ） c
p值 b 0.0452 0.0276 0.2802 0.4072
FAS N 32 43 16 19 8 12 8 12
基線，平均值（SD） 9.60（1.37） 11.66（1.19） 4.20（1.78） 5.07（1.74） 10.55（4.78） 11.66（4.61） 19.45（2.67） 22.09（1.07）
LSM相對於基線之變化（95% CI） -3.32 （-3.81，-2.84） -2.41 （-2.88，-1.94） 0.77 （0.14，1.40） 1.78 （1.20，2.35） -3.14 （-3.96，-2.31） -2.23 （-2.90，-1.55） -10.84 （-12.11，-9.57） c -9.79 （-10.97，-8.62） c
LSM之差值（95% CI） a 0.92 （ 0.24 ， 1.59 ） 1.00 （ 0.13 ， 1.88 ） 0.91 （ -0.17 ， 1.99 ） 1.04 （ -0.62 ， 2.71 ） c
p值 b 0.0075 0.0256 0.0932 0.2200
CI：信賴區間；FAS：全分析集；SD：標準差 a差值係伏索利肽減去安慰劑。 b雙邊p值。 c基於10個設算資料集。 LS平均值及LS平均值之差值獲自協方差模型之分析。模型項包括治療、性別、年齡層、基線年齡及基線AGV。 對於群組1及2中之個體，基線時的AGV定義為[(基線時的身高-基線前6個月111-901的最後一次身高量測值)/(基線日期-基線前6個月111-901的最後一次身高評估日期)]×365.25。對於群組3的參與者，使用111-901或111-206中基線前3個月的身高。基線後訪問時之AGV於係基線導出。例如，第52週的AGV=[(第52週訪問時的身高-基線訪問時的身高)/(第52週訪問的日期-基線訪問的日期）]×365.25。
圖2表示各群組在治療52週時的基線Z評分。圖3表示各群組在52週內的基線AGV，圖4說明治療52週後身高Z評分隨時間的積極變化。第52週的整體結果顯示，與安慰劑（n=32）相比，伏索利肽（n=43）：身高Z評分增加0.30 SD（95% CI 0.07，0.54），AGV增加0.92 cm/年（95% CI 0.24，1.59），且未惡化上肢與下肢的比例，氣變化為-0.06（95% CI -0.15，0.03）。第52週之資料展示，相比於所有群組中之對照，伏索利肽治療提高年化生長速度，且亦提高經治療患者之整體身高Z評分。
亦分析不同患者群體中之伏索利肽之藥物動力學以發現PK之任何變化（表4）。可獲得接受30 μg/kg伏索利肽之4個前哨個體及33個隨機分組個體（年齡≥24至＜60個月）之PD資訊（血漿cGMP及血清CXM）。 表4. BMN 111之多次皮下劑量下的藥物動力學參數
群組 （年齡） 劑量 （ μg/kg ） 分析訪問 n Cmax （ ng/mL ） AUC0-t （ ng ･ min/mL ） tmax （ min ） t1/2 （ min ） CL/F （ mL/min/kg ） Vz/F （ mL/kg ）
群組1 （24至＜60個月） 15 第1天 3 4.47±3.30 167±110 15.0 [15.0，15.0] 21.9±3.4 111±58.6 3700±2410
第13週 4 3.81±1.67 114±64.3 15.5 [15.0，16.0] 15.2±2.7 150±58.5 3240±1180
第26週 4 6.86±4.59 327±336 15.0 [15.0，17.0] 29.3±11.0 82.1±57.6 3800±3950
第39週 4 4.98±1.33 204±123 15.0 [15.0，21.0] 27.1±9.0 90.3±51.6 3170±1350
第52週 4 5.65±3.01 218±138 14.0 [7.0，17.0] 21.8±4.2 85.7±44.4 2650±1470
群組2 （6個月至＜24個月） 15 第1天 3 2.84±1.23 65.9±33.6 15.0 [4.0，15.0] 26.1 a ） 147 a ） 5550 a ）
第26週 1 10.1 398 17.0 37.6 35.4 1920
第39週 2 1.01，4.39 29.9，229 5.0，35.0 22.1 a ） 63.1 a ） 2010 a ）
第52週 2 1.01，2.87 17.7，77.1 5.0，15.0 12.5 a ） 182 a ） 3290 a ）
30 第13週 3 12.5±9.19 530±370 13.0 [5.0，16.0] 25.8±4.67 77.3±54.2 2740±1820
第26週 1 8.96 243 6.0 6.41 123 1130
第39週 1 6.18 333 15.0 22.3 86.0 2770
第52週 1 17.6 798 14.0 22.6 35.9 1170
群組3 （出生至＜6個月） 30 第1天 3 12.3±3.68 372±119 5.0 [5.0，13.0] 60.4±14.9 82.0±25.9 6800±577
第13週 1 16.4 489 5.0 23.3 59.3 1990
第39週 1 23.6 638 12.0 - - -
平均值±SD，tmax：中值[最小值，最大值]，2個或更少個體之個別值，-：未計算， Cmax：最大血漿濃度，AUC0-t：在投與之後時間0至t之血漿濃度-時間曲線下面積，tmax：達至最大血漿濃度所花費的時間，t1/2：末期消除半衰期，CL/F：表觀總身體清除率，Vz/F：表觀分佈體積 a）n=1
表5顯示尿液cGMP/Cr在各評估時間點相對於基線的變化，表6顯示血清CXM相對於基線隨時間的變化。PD參數僅在群組1及2中的前哨個體中進行分析。 表5.各評估時間點尿液cGMP/Cr與給藥前相比的變化
群組 年齡 劑量 （ μg/kg ） 收集時間 第 1 天 第 13 週 第 26 週 第 39 週 第 52 週
群組1 （24至＜60個月） 15 給藥前 4620±1730 （4） 3350±515 （4） 3290±917 （4） 3420±1230 （4） 3290±400 （3）
給藥後2-4小時 4880±6710 （4） 2450±1130 （4） 6290±4790 （4） 7620±4220 （4） 4820±4110 （3）
群組2 （6個月至＜24個月） 15 給藥前 6770±3440 （3） 9020 （1） 4940 （1） - -
給藥後2-4小時 -1260±2230 （3） -1260 （1） 6040 （1） - -
30 給藥前 - 3340 （1） 5600±1120 （3） 8900 （1） -
給藥後2-4小時 - 10300 （1） 5090±5140 （3） 4910 （1） -
平均值±SD（n），2個或更少個體的個別值，-：未計算，單位：pmol cGMP/mg Cr， a）使用投與後約2至4小時的值進行評估。 表6.各評估時間點血清CXM a ）相對於基線的變化
群組 劑量 （ μg/kg ） 基線 第 8 天 第 6 週 第 20 週 第 39 週
群組1 （24至＜60個月） 15 8050±1017（4） 3645±4392（4） 10325±7962（4） 5750±2859（4） 4880±3724（4）
群組2 （6個月至 ＜24個月） 15 8920±3662（4） 5180±2963（4） 2325±1633（4） 10300（1） -
30 - - - -2790，6210（2） -
平均值±SD（n），2個或更少個體的個別值，-：未計算，單位：pg/mL， a）使用BMN 111投與前的值評估血清CXM。
觀測到給藥後血漿cGMP濃度之增加，其在52週之時間段內保持恆定且類似於在大齡組中觀測到之變化。相比於基線及安慰劑，在整個研究期間（長達39週），伏索利肽之CXM（平均值及中值）在血清中增加。然而，伏索利肽及安慰劑之間的值顯著重疊。在量測參數中注意到高可變性。
群組1個體（19名經伏索利肽治療個體與16名經安慰劑治療個體年齡≥24至＜60個月）的更新盲法分析顯示，血清CXM含量（在所有訪問及每一治療期間平均）大致類似於在針對各別治療之大齡兒童（亦即研究111-301）中觀測到之彼等含量。
結果：大於100週的治療
經100週治療之個體的更新結果展現出與第52週類似的結果。群組1（N=4）中的個體接受伏索利肽的中值時間為978天（範圍：921至1012天），而群組2（N=4）中的個體中值時間為733.5天（範圍：706至741天）。群組1中之所有前哨個體在兩項研究111-206/208中進行至少130週的治療隨訪，而群組2中之所有前哨個體治療隨訪直至第104週；值得注意的係，群組2中的一名個體在第104週訪問時未進行身高評估，因為該訪問係在資料截止日期之後安排的。
身高Z評分
在群組1前哨中，通過身高Z評分評估之身高缺陷的減少在伏索利肽治療後持續了2.5年。在第104週，三名前哨個體中的兩名顯示出+0.77 SDS及+0.86 SDS的身高Z評分的改善，而其他兩名個體觀察到+0.27 SDS（在第78週）及+0.20 SDS的改善。群組1在第52週（N=4）相對於基線的平均（標準差[SD]）變化為+0.34（0.27）標準差評分（SDS），在第104週（N=3）為+0.62（0.36）SDS，且在第130週（N=4）為+0.49（0.34）SDS。對於群組2前哨，第52週（N=4）時身高Z評分相對於基線的平均（SD）變化為+0.84（0.25）SDS，且在第104週（N=3）持續，其相對於基線的（SD）變化為+0.69（0.55）SDS。
AGV
在群組1前哨中，基線時的平均（SD）AGV為6.21（1.73）cm/年。2名個體第104週及1名個體第78週的AGV高於基線時的AGV；其中僅在第104週第四名個體中注意到輕微下降。AGV下降之個體具有高基線AGV且在群組中最年輕；AGV下降可能歸因於個體處於生長減退之較陡曲線中。111-206年治療之第一年的平均（SD）AGV保持在6.78（1.00）cm/年，而在111-208治療之第二年為5.85（0.39）cm/年。在群組2前哨中，基線時之平均（SD）AGV為11.93（1.32）cm/年，治療第一年為9.17（1.06），且治療第二年為6.55（0.38）。AGV中之此下降不如此年齡範圍內未經治療之ACH兒童所預期的那樣明顯，因此說明伏索利肽對生長速度的積極作用。
站立高度/身體長度
對於群組1前哨，在第104週，注意到每個個體的上肢與下肢之比一致降低。在第52週，站立高度相對於基線之平均（SD）增加為6.78（1.12）cm，在第104週為12.91（1.61）且在第130週為15.28（1.39）。在群組2前哨中，在第52週站立高度相對於基線之平均（SD）變化為9.22（0.98）cm且在第104週則為15.76（1.42）。
上身與下身之比
在群組1前哨中，隨著時間的推移，上身與下身之比隨著治療時間的推移而降低，在第52週時，相對於基線的平均（SD）比率變化為-0.02（0.12），在第104週（N=3）時為-0.19（0.10），且在第130週（N=4）時為-0.19 0.14（。在群組2前哨中，第52週（N=4）時上肢與下肢之比的平均（SD）降低為-0.19（0.28），在第104週（N=3）觀測到進一步下降，其相對於基線的平均（SD）變化為-0.33（0.20）。
基於生物學/機理考慮因素，只要患有ACH之所有患者的生長板為開放狀態，則預期伏索利肽在所有患者中均能發揮有利作用，儘管具有較高生長潛力之年輕患者之益處可能大於大齡兒童之益處。
基於上文所描述之人類臨床資料，亦將如上文所描述測試每日向兒童及嬰兒軟骨發育不全患者皮下投與30 µg/kg/天之劑量的功效及安全性。完全預期此類投與方案將為人類患者的軟骨發育不全提供有效及安全的治療。
預期熟習此項技術者會想到如本文所描述之實施例及說明性實例中所闡述的本揭示案之許多改良及變化。因此，僅在隨附申請專利範圍中出現的此類限制應列入本揭示案中。
無
圖1顯示群組1-3中52週伏索利肽（vosoritide）治療的研究組的人口構成。
圖2表示研究群組1-3在治療52週時的基線Z評分。
圖3表示52週內研究群組1-3之基線AGV及基線AGV的變化。
圖4說明治療52週後身高Z評分隨時間的積極變化。
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Claims (22)

  1. 一種治療小於或約2歲之個體之骨骼發育不良的方法，其包含向該個體投與有效治療該個體之骨骼發育不良之量的包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，其中該CNP變異體選自由以下組成之群組：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO:1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48)（SEQ ID NO: 10)；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45）（SEQ ID NO: 13）；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42)（SEQ ID NO: 16)；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）；GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）；ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）；NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）；KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）；KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO: 39）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
  2. 一種增加小於或約2歲之個體之長骨生長的方法， 其包含向該個體投與有效增加長骨生長之量的包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，其中該CNP變異體選自由以下組成之群組：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO:1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP- 53(M48N)]（SEQ ID NO: ）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45）（SEQ ID NO: 13）；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42)（SEQ ID NO:16)；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）；GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）； ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）； NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）； KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）； KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO: 39）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO:40 ）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
  3. 一種增加小於或約2歲之個體之生長速度的方法，其包含向該個體投與有效增加該個體之生長速度之量的包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，其中該CNP變異體選自由以下組成之群組：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45)（SEQ ID NO: 13)；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42）（SEQ ID NO: 16）；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）；GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）；ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）；NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）；KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）；KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-18）（SEQ ID NO: 39）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）； GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)] ）（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59)；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
  4. 如請求項3之方法，其中該生長速度之增加為以藉由該個體站立高度高於基線至少25%所量測的年化生長速度之增加，或其中該生長速度之增加為以藉由該個體站立高度高於基線至少40%所量測的年化生長速度之增加。
  5. 如請求項3或4之方法，其中該生長速度之增加藉由量測站立高度、坐立高度、體重、頭圍、上臂長度、下臂長度、大腿長度、小腿長度、手長或腳長來評定。
  6. 如請求項3至5中任一項之方法，其不引起該個體之血液中血紅蛋白濃度、血液中血小板數目、血液電解質濃度、血液尿素氮濃度、血液肌酐濃度、血液鹼性磷酸酶濃度、血液丙胺酸轉胺酶濃度或血液天冬胺酸轉胺酶濃度的臨床顯著改變。
  7. 如請求項3至6中任一項之方法，其引起 上身長度與下身長度之比的變化在-0.05至0.05之間； 上臂長度與前臂長度之比的變化在-0.05至0.05之間；及/或 大腿長度與小腿長度之比的變化在-0.05至0.05之間。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中 該組合物每日投與一次； 該組合物在至少6個月之時段內每日投與一次；或 該組合物在至少12個月之時段內每日投與一次。
  9. 如前述請求項中任一項之方法，其中該組合物經由皮下投與向該個體投與。
  10. 如前述請求項中任一項之方法，其中該組合物每天、每隔一天、每週3次、每週2次或每週一次投與。
  11. 如前述請求項中任一項之方法，其中該組合物以30 µg/kg之劑量投與。
  12. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為約6個月至約2歲。
  13. 如前述請求項中任一項之方法，其中該個體為約0至約6個月齡。
  14. 如請求項11至13中任一項之方法，其中當該個體為2歲時，該劑量可降低至15 µg/kg。
  15. 如前述請求項中任一項之方法，其中該骨骼發育不良選自由以下組成之群組：低磷酸鹽血性佝僂病、軟骨發育不全、軟骨生成減退、身材矮小、侏儒症、骨軟骨發育不良、致死性軟骨發育不全、成骨不全、軟骨成長不全、點狀軟骨發育異常、純合性軟骨發育不全、屈肢骨發育不良、先天性致死型低磷酸酶症、圍產期致死型成骨不全、短肋多指症候群、軟骨生成減退、肢根型點狀軟骨發育異常、揚森型幹骺端發育不良（Jansen-type metaphyseal dysplasia）、先天性脊椎骨骺發育不良、骨發育不全、畸型發育不良、先天性短股骨、蘭格型肢中骨發育不良（Langer-type mesomelic dysplasia）、尼維格型肢中骨發育不良（Nievergelt-type mesomelic dysplasia）、羅氏症候群（Robinow syndrome）、萊因哈特症候群（Reinhardt syndrome）、肢端發育不全、周圍骨發育障礙、克尼斯特發育不良（Kniest dysplasia）、纖維軟骨增生症、羅伯茨症候群（Roberts syndrome）、肢端肢中發育不全、小肢畸形、莫奎氏症候群（Morquio syndrome）、克尼斯特症候群、後生營養性發育不良、脊椎骨端發育不全、NPR2突變、SHOX突變（特納氏症候群（Turner's syndrome）/萊里維爾（Leri Weill））、PTPN11突變（努南氏症候群（Noonan's syndrome））及特發性身材矮小。
  16. 如請求項9之方法，其中該骨骼發育不良為軟骨發育不全。
  17. 如前述請求項中任一項之方法，其中該組合物進一步包含一或多種醫藥賦形劑。
  18. 如請求項17之方法，其中該組合物包含單水合檸檬酸、二水合檸檬酸鈉、二水合海藻糖、D-甘露糖醇、L-甲硫胺酸以及聚山梨醇酯80。
  19. 如前述請求項中任一項之方法，其中該CNP變異體選自由以下組成之群組： PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 1）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 43）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-37(M32N)]（SEQ ID NO: 40）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP-37）（SEQ ID NO: 42）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP-37）（SEQ ID NO: 41）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP-37（M32N）（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 45）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；及PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）。
  20. 如前述請求項中任一項之方法，其中該CNP變異體選自由以下組成之群組： PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP-37）（SEQ ID NO: 1）；及LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）。
  21. 一種包含C型利鈉肽（CNP）變異體之組合物，其用於治療小於2歲之個體之骨骼發育不良，其中該CNP變異體肽以約30 µg/kg之量向該個體投與且選自由以下組成之群組： PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45）（SEQ ID NO: 13）；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）； AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42）（SEQ ID NO: 16）；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）；RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）；KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）；YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）；KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）；GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）；ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）；NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25)(SEQ ID NO: 33)；KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）；KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO:35）；LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO:3* ）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）； GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
  22. 一種包含C型利鈉肽（CNP）變異體之調配物用於製造用於治療小於2歲之個體之骨骼發育不良的藥物的用途，其中該CNP變異體肽以約30 µg/kg之量向該個體投與且選自由以下組成之群組：PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 1）； GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP53）（SEQ ID NO: 2）； PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP53）（SEQ ID NO: 3）； MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP53）（SEQ ID NO: 4）； DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP-53(M48N)]（SEQ ID NO: 5）； LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-52）（SEQ ID NO: 6）；RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-51）（SEQ ID NO: 7）；VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-50）（SEQ ID NO: 8）；DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-49）（SEQ ID NO: 9）；TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-48）（SEQ ID NO: 10）；KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-47）（SEQ ID NO: 11）；SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-46）（SEQ ID NO: 12）；RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-45)（SEQ ID NO: 13)；AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-44）（SEQ ID NO: 14）；AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-43）（SEQ ID NO: 15）；WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-42）（SEQ ID NO: 16）；ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-41）（SEQ ID NO: 17）；RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-40）（SEQ ID NO: 18）；LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-39）（SEQ ID NO: 19）；LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-38）（SEQ ID NO: 20）；QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-37）（SEQ ID NO: 21）；EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-36）（SEQ ID NO: 22）；HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-35）（SEQ ID NO: 23）；PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-34）（SEQ ID NO: 24）；NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-33）（SEQ ID NO: 25）；ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-32）（SEQ ID NO: 26）； RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-31）（SEQ ID NO: 27）； KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-30）（SEQ ID NO: 28）； YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-29）（SEQ ID NO: 29）； KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-28）（SEQ ID NO: 30）； GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-27）（SEQ ID NO: 31）； ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-26）（SEQ ID NO: 32）； NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-25）（SEQ ID NO: 33）； KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-24）（SEQ ID NO: 34）； KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-23）（SEQ ID NO: 35）； LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-21）（SEQ ID NO: 36）； SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-20）（SEQ ID NO: 37）； KGCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-19）（SEQ ID NO: 38）； GCFGLKLDRIGSMSGLGC（CNP-18）（SEQ ID NO: 39）； QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP37(M32N）（SEQ ID NO: 40）；PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-CNP37）（SEQ ID NO: 41）；MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-CNP37）（SEQ ID NO: 42）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 43）；GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [Gly-CNP37(M32N)]（SEQ ID NO: 44）；MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-Gly-CNP37）（SEQ ID NO: 45）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 46）；GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC [HSA-CNP27(M22N)]（SEQ ID NO: 47）；PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Pro-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 48）；MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC（Met-HSA-CNP27）（SEQ ID NO: 49）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 50）；GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 51）；PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 52）；MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 53）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 54）；PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 55）；PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 56）；PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 57）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 58）；PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 59）；PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 60）；PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 61）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 62）；PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC [PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)]（SEQ ID NO: 63）；PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 64）；及PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC [PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)]（SEQ ID NO: 65）。
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