KR20240035811A - 소아의 골격 이형성증 치료를 위한 c-형 나트륨이뇨 펩티드 변이체 - Google Patents

소아의 골격 이형성증 치료를 위한 c-형 나트륨이뇨 펩티드 변이체 Download PDF

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Abstract

본 개시내용은 소아의 골격 이형성증의 치료, 및 골격 이형성증의 하나 이상의 증상, 예를 들어 장골 성장 또는 성장 속도의 개선을 위한 C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP)의 변이체의 용도 및 골격 이형성증 및/또는 CNP 연관 증상 또는 구성 요소를 갖는 기타 장애에서의 용도를 제공한다.

Description

소아의 골격 이형성증 치료를 위한 C-형 나트륨이뇨 펩티드 변이체
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 7월 9일 출원된 미국 가특허 출원 제63/220,275호 및 2022년 6월 8일 출원된 미국 가특허 출원 제63/350,196호의 우선권을 주장하며, 이로써 그 전체 내용이 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 자료의 참조관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2021년 7월 9일 출원된 미국 가특허 출원 제63/220,275호 및 2022년 6월 8일 출원된 미국 가특허 출원 제63/350,196호의 우선권을 주장하며, 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 자료의 참조에 의한 통합
본 개시내용의 일부인 서열 목록은 .XML 형식으로 명세서와 동시에 제출된다. 서열목록을 함유하는 텍스트 파일의 명칭은 "57038_Seqlisting.xml"이며, 이는 2022년 7월 7일 생성되었고 크기는 65,087바이트이다. 서열목록의 주제 사안은 그 전체 내용이 참조로 본원에 포함된다.
개시내용의 분야
본 개시내용은 일반적으로 소아의 골격 이형성증 치료를 위한 C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체의 용도에 관한 것이다.
나트륨이뇨 펩티드 계열은 다음 세개의 구조적으로 관련된 펩티드로 구성된다: 심방 나트륨이뇨 펩티드(ANP)(유전자 등록번호(Genbank Accession No.) NP_006163, ANP 전구체 단백질인 NPPA의 경우), 뇌 나트륨이뇨 펩티드(BNP)(유전자 등록번호 NP_002512, BNP 전구체흑의 경우), 및 C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP)(Biochem. Biophys. Res. Commun., 168: 863-870(1990)(유전자 등록번호 NP_077720, CNP 전구체 단백질, NPPC의 경우)(J. Hypertens., 10: 907-912(1992)) 해당 작은 단일 사슬 펩티드(ANP, BNP, CNP)는 17개의 아미노산 루프 구조를 가지고 있으며(Levin 외, N. Engl. J. Med., 339 : 863-870(1998)), 다수의 생물학적 과정에서 중요한 역할을 갖는다. ANP 및 BNP는 구아날릴 사이클라제 A(GC-A)라고도 불리는 나트륨이뇨 펩티드 수용체 A(NPR-A)에 결합하고 활성화하여 세포내 사이클릭 구아노신 모노포스페이트(cGMP) 수준을 더 높이는 것으로 귀결된다. 마찬가지로, CNP는 NPR-B(GC-B)와 상호작용하여 cGMP의 생성을 자극한다(J. Hypertens., 10: 1111-1114(1992)). 세 번째 유형의 수용체인 NPR-C는 각각의 나트륨이뇨 펩티드에 높은 친화력으로 결합하고 주로 세포외 구획으로부터 펩티드를 포획하여 펩티드를 리소좀에 침착시켜서 분해하는 기능을 한다(Science, 238: 675-678(1987)). ANP 및 BNP는 주로 심장의 근육 세포내에서 생성되며, 심혈관 항상성에 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다(Science, 252: 120-123(1991)). CNP는 중추신경계, 생식관, 골 및 혈관 내피를 포함하여 보다 광범위하게 발현된다(Hypertension, 49: 419-426(2007)).
인간에서 CNP는 처음에 나트륨이뇨 펩티드 전구체 C(NPPC) 유전자로부터 단일 사슬 126개 아미노산 프리프로 폴리펩티드로서 생산된다(Biochem. Biophys. Res. Commun., 168:863-870(1990)). 신호 펩티드를 제거하면 프로-CNP가 수득되고, 엔도프로테아제 퓨린에 의한 추가 절단은 활성 53-아미노산 펩티드(CNP-53)를 생성하며, 이는 분비되고 다시 절단되어 성숙한 22-아미노산 펩티드(CNP-22)를 생산한다(Wu, J. Biol. Chem. 278: 25847-852(2003)). CNP-53 및 CNP-22는 그 분포가 다르며, CNP-53은 조직에서 우세한 반면, CNP-22는 혈장 및 뇌척수액에서 주로 발견된다(J. Alfonzo, Recept. Signal. Transduct. Res., 26: 269- 297(2006)). 연골에서 우세한 CNP 형태는 알려져 있지 않다. CNP-53 및 CNP-22는 모두 NPR-B와 유사하게 결합한다. 더욱이, 둘 다 용량 의존적이며 유사한 방식으로 cGMP 생산을 유도한다(VT Yeung, Peptides, 17: 101-106(1996)).
천연 CNP 유전자 및 폴리펩티드는 이전에 설명된 바 있다. 미국 특허 제5,352,770호는 인간 CNP와 서열이 동일한 돼지 뇌로부터 단리 및 정제된 CNP-22 및 심혈관 적응증 치료에 있어서의 이의 용도를 개시하고 있다. 미국 특허 제6,034,231호는 프로CNP(126개 아미노산)의 인간 유전자 및 폴리펩티드와 인간 CNP-53 유전자 및 폴리펩티드를 개시하고 있다.
세포외 공간으로부터 CNP의 청소(clearance)는 CNP를 빠르게 분해하는 막-결합 중성 엔도펩티다제(NEP)의 작용을 통해 일어나며(Biochem. J., 291(Pt 1): 83-88(1993)), 이는 CNP가 리소좀에 결합하고 CNP를 침착시켜 분해하는 NPR-C를 통한다. CNP는 정상인에서 2.6분의 생체내 반감기를 갖는 것으로 나타났다(J. Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35(1994)). CNP의 낮은 혈장 농도(J. Bone Moner. Res., 19(Suppl.1)S20(2004))와 다수의 조직에서 NPR-B와의 이의 공동발현은 CNP가 주로 오토크린/파라크린 메커니즘을 통해 기능한다는 것을 시사한다.
위에서 언급한 바와 같이, CNP는 구아닐릴 사이클라제 B(GC-B)라고도 하는 이뇨 펩티드 수용체 B(NPR-B)에 결합하여 활성화함으로써 세포 내 사이클릭 구아노신 모노포스페이트(cGMP) 수치를 높인다. cGMP 생성에 의해 매개되는 하류 신호화는 연골내 골화를 포함하는 다양한 생물학적 과정에 영향을 미친다. 따라서, 이 경로의 구성요소 중 어느 하나의 수준이 상승하거나 저하되면 비정상적인 골 또는 연골 성장이 발생할 수 있다. 예를 들어, 마우스 모델에서 CNP 또는 NPR-B가 녹아웃되면 동물의 장골과 척추가 더 짧아지는 왜소한 표현형을 갖게 된다. 적절한 CNP 신호전달을 차단하는 인간 NPR-B의 돌연변이가 확인되었으며 왜소증을 초래한다(Olney, 외, J. Clin. Endocrinol. Metab. 91(4): 1229-1232(2006); Bartels, 외, Am.J.Hum.Genet.75:27-34(2004)). 대조적으로, 높은 수준의 CNP를 생성하도록 조작된 마우스는 길쭉한 장골과 척추를 나타낸다.
연골무형성증은 섬유아세포 성장 인자 수용체 3(FGFR-3) 유전자의 상염색체 우성 돌연변이의 결과이며, 이는 연골형성의 이상을 유발한다. FGFR-3은 일반적으로 연골세포 성장, 즉 골 성장에 부정적인 조절 효과를 갖는다. 연골무형성증에서는 FGFR-3의 돌연변이된 형태가 구성적으로 활성화되며, 이에 골이 심각하게 짧아지게 된다. 연골세포 증식 및 분화 둘 모두 방해를 받아 성장판 연골이 현저히 짧아지게 되는 것으로 보인다(P. Krejci 외, J. Cell Sci. 118: 5089-5100(2005)). 연골내 골화는 세로 방향의 장골-성장을 조절하는 과정이다. 성장판에는 휴지기, 증식기, 비대기 및 석회화기의 4개 영역이 있다. 성장판에서 NPR-B는 증식성 세포에 의해 발현되는 반면, NPR-C는 비대성 세포에 의해 발현된다(Yamashite 외, J. Biochem. 127: 177-179(2000)). 정상적인 연골내 골 성장에서 연골세포는 기둥으로 조직되어 성장판의 증식 영역에서 증식한다. 연골무형성증 환자에서는 이 기둥이 조직적이지 않다. 또한, 비대성 영역은 세포가 커지고 결국 세포사멸(용해)되어 골세포 침입과 광화로 이어지는 곳이다. 연골무형성증 환자에서는 정상 환자에서에 비해 비대성 연골세포와 부위의 전반적인 크기가 훨씬 작다. CNP는 연골세포 및 골 성장의 양성 조절자인 NPR-B에 대한 작용제이다. CNP/NPR-B의 하류 신호화는 미토겐-활성화 단백질 키나제(MAPK) 수준에서 FGFR-3 경로를 억제한다. MAPK에서의 억제는 성장판의 증식 및 비대성 영역에서 연골세포의 증식 및 분화를 촉진하여 골 성장을 일으킨다.
인간에서는 FGFR-3의 활성화 돌연변이가 유전적 왜소증의 주요 원인이다. FGFR-3이 활성화된 마우스는 골격 이형성증의 가장 흔한 형태인 연골무형성증의 모델 역할을 하며, CNP의 과발현은 해당 마우스를 왜소증에서 벗어나게 한다. 따라서 CNP 및 CNP의 기능적 변이체는 다양한 골격 이형성증의 치료를 위한 잠재적 치료제이다.
CNP의 치료적 용도는 현재 인간의 생체내에서 2.6분인 것으로 밝혀진 이의 짧은 혈장 반감기에 의해 제한된다(Hunt 외, J Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35(1994)). 인간 혈장에서 일반적으로 발견되는 고유한 수준(약 5pM) 이상으로 CNP 농도를 증가시키기 위해 전신 투여된 CNP를 사용하는 모든 인간 및 동물 연구에서 지속적인 주입이 필요해 왔다. 인간 혈장에서 CNP의 반감기가 감소되게 하는 두 가지 메커니즘은 중성 엔도펩티다제(NEP)에 의한 분해 및 나트륨이뇨 펩티드 수용체 C(NPR-C)에 의한 청소이다(Olney, Growth Horm. & IGF Res., 16: S6- S14(2006)). 더 긴 생체내 혈청 반감기를 갖고 야생형 CNP의 활성과 유사하거나 향상된 활성을 나타내는 CNP 변이체는 지속 가능한 치료적 전략에 중요하다.
CNP의 다양한 유사체 및 유도체의 생물학적 활성이 평가되어 왔다. 예를 들어, CNP-22의 키메라 및 바소나트린 펩티드(VNP) 로 지정된 ANP의 5-아미노산 C-말단을 개시하는 미국 특허 7,276,481, PCT 공개 번호 WO 94/20534를 참조한다. 미국 특허 8,198,242, 8,598,121, 9,907,834 및 10,646,550은 연골무형성증과 같은 골격 이형성증을 치료하기 위한 CNP 변이체의 용도를 개시한다. 미국 특허 7,642,243 및 8,658,373은 관절염 치료를 위한 CNP-22 또는 CNP-53 변이체의 용도를 기술한다.
요약
본 개시내용은 CNP 변이 펩티드를 본원에 기술된 바와 같이 특정 용량 초과 및/또는 특정 약물 투여 레지멘 하에서 투여할 때, 소아, 예를 들어 2세 내지 5세의 소아, 및 특히 약 2세 미만 또는 약 2세인 소아의 골격 이형성증을 치료하고, 하나 이상의 골격 이형성증 관련 증상(들)을 치료하거나, 또는 골격 이형성증을 앓고 있는 대상체에서 골격 이형성증의 하나 이상의 결과(들) 또는 생리적 증상(들)을 개선하기 위한, CNP 변이 펩티드의 용도에 관한 것이다. CNP 변이 펩티드의 투여가 연골무형성증 대상체에서 성장 속도를 향상시킬 수 있다는 것이 본원에 개시되어 있다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 약 2세 내지 약 5세의 대상체에서 골격 이형성증을 치료하는 방법을 제공하는데, 이는 대상체에서 골격 이형성증을 치료하거나 골격 이형성증의 적어도 하나의 증상 또는 생리적 결과를 개선하는 데 유효한 양의 C형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 CNP 변이체는 본원에 개시된 CNP 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 2세 미만 또는 약 2세의 대상체에서 골격 이형성증을 치료하는 방법을 제공하는데, 이는 대상체에서 골격 이형성증을 치료하거나 골격 이형성증의 적어도 하나의 증상 또는 생리적 결과를 개선하는 데 유효한 양의 C형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 CNP 변이체는 본원에 개시된 CNP 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 30μg/kg의 용량으로 투여된다. 다양한 실시양태에서, 대상체는 약 6개월 내지 약 2세이다. 다양한 실시양태에서, 대상체는 0 내지 약 6개월령이다. 다양한 실시양태에서, 대상체는 약 3 내지 약 6개월령이다. 다양한 실시양태에서, 대상체는 0 내지 약 3개월령이다. 다양한 실시양태에서, 대상체가 약 2세 미만에 치료를 시작하는 경우, 대상체가 2세에 도달할 때 투여량은 15μg/kg으로 감소될 수도 있다.
일 실시양태에서, 치료는 절대 성장 증가, 성장 속도의 개선 또는 증가, QCT 골밀도(BMD) 증가, 성장판 형태 개선, 장골 성장 증가, 척추 형태 개선, 팔꿈치 관절 운동 범위 개선 또는 증가 및 수면 무호흡증 감소로 이루어진 군으로부터 선택되는 골격 이형성증의 하나 이상의 증상의 개선이다.
일 실시양태에서, 골격 이형성증은 연골무형성증, 연골저형성증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 골형성부전증, 연골무발생증, 점상 연골형성부전증, 동형접합성 연골형성부전증, 굴지 이형성증, 선천성 치사성저인산증, 주산기 치사형 골형성부전증, 단늑골 다지 증후군, 연골저형성증, 점상연골 이형성증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천척추골단이형성증, 아테로스테오생성, 이영양성 이형성증, 선천성 단발성 대퇴골, 랭거형 전완부이형성증, 니에버겔트형 전완부이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말단 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 이형성증, 소지증, 모르퀴오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, NPR2 돌연변이, SHOX 돌연변이(터너 증후군/레리 웨일), PTPN11 돌연변이(누난 증후군) 및 특발성 저신장으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 골격 이형성증은 연골무형성증이다.
또한 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물을 장골 성장을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 2세 미만 또는 약 2세인 대상체에서 장골 성장을 증가시키는 방법이 제공되며, 여기서 투여하는 것은 장골 성장을 증가시킨다. 또한 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물을 장골 성장을 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 약 2세 내지 약 5세 대상체에서 장골 성장을 증가시키는 방법이 제공되며, 여기서 투여하는 것은 장골 성장을 증가시킨다. 일 실시양태에서, 대상체는 연골무형성증을 앓고 있다.
본 발명은 또한 2세 미만 또는 약 2세인 대상체의 성장 속도(즉, 성장 속도)를 향상시키거나 증가시키는 방법을 고려하는데, 이는 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물을 성장 속도 향상 또는 증가를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 투여는 대상체의 성장 속도를 향상시키거나 증가시킨다. 또한, 약 2세 내지 약 5세인 대상체의 성장 속도(즉, 성장 속도)를 향상시키거나 증가시키는 방법이 제공되며, 이는 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물을 성장 속도 향상 또는 증가를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 투여하는 것는 대상체의 성장 속도를 향상시키거나 증가시킨다. 일 실시양태에서, 대상체는 연골 무형성증을 갖는다. 다양한 실시양태에서, 성장 속도의 향상 또는 증가는 대상체에서 기준선으로부터 25% 내지 50% 변화의 범위에서 연간 성장 속도의 증가이다. 일 실시양태에서, 성장 속도의 향상 또는 증가는 대상체에서 기준선으로부터 적어도 약 25%, 보다 바람직하게는 적어도 약 40% 변화의 연간 성장 속도 증가이다.
성장 속도의 향상은 기립 신장, 앉은 신장, 체중, 머리 둘레, 윗팔 길이, 아랫팔 길이, 윗다리 길이, 아랫다리 길이, 손 길이 및/또는 발 길이를 측정하여 평가될 수 있는 것으로 사료된다.
본원에 기술된 다양한 방법 및 조성물에서, CNP 변이 펩티드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP53)(서열번호: 2);
PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP53)(서열번호: 3);
MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP53)(서열번호: 4);
DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-53(M48N)](서열번호: 5);
LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-52)(서열번호: 6);
RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-51)(서열번호: 7);
VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-50)(서열번호: 8); DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-49)(서열번호: 9);
TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-48)(서열번호: 10); KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-47)(서열번호: 11); SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-46)(서열번호: 12); RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-45)(서열번호: 13); AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-44)(서열번호: 14); AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-43)(서열번호: 15); WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-42)(서열번호: 16); ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-41)(서열번호: 17); RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-40)(서열번호: 18); LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-39)(서열번호: 19); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24); NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-33)(서열번호: 25); ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-32)(서열번호: 26); RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-31)(서열번호: 27); KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-30)(서열번호: 28); YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-29)(서열번호: 29); KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-28)(서열번호: 30); GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-27)(서열번호: 31); ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-26)(서열번호: 32); NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-25)(서열번호: 33); KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-24)(서열번호: 34);
KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-23)(서열번호: 35);
LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-21)(서열번호: 36);
SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-20)(서열번호: 37);
KGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-19)(서열번호: 38);
GCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-18)(서열번호: 39);
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP37(M32N)(서열번호: 40); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP37)(서열번호: 41); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP37)(서열번호: 42); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP37)(서열번호: 43); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP37(M32N)](서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP37)(서열번호: 45); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(HSA-CNP27)(서열번호: 46); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[HSA-CNP27(M22N)](서열번호: 47); PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-HSA-CNP27)(서열번호: 48); MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-HSA-CNP27)(서열번호: 49); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 50); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 51); PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 52); MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 53); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 54); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 55); PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 56); PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 57); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 58); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 59); PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 60); PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 61); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 62); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 63); PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 64); 및 PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 65).
다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된다:
PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP-37)(서열번호: 1); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP-37)(서열번호: 43); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-37(M32N)](서열번호: 40); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP-37)(서열번호: 42); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP-37)(서열번호: 41); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP-37(M32N)(서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP-37)(서열번호: 45); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); 및 PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24).
다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP-37)(서열번호: 1); 및 LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, 투여되는 CNP 변이 펩티드의 양은 약 15μg/kg 내지 약 100μg/kg, 바람직하게는 약 15μg/kg 내지 약 60μg/kg, 보다 바람직하게는 약 30μg/kg 내지 약 60μg/kg 범위이다. 다양한 실시양태에서, 투여되는 CNP 변이 펩티드의 양은 적어도 약 15μg/kg, 또는 적어도 약 30μg/kg이다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물은 피하 또는 비경구로, 바람직하게는 피하로 투여된다. CNP 변이 펩티드가 다른 경로에 의해 투여되는 것도 고려된다. 예시적인 투여 경로는 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내, 척수강내, 복강내, 근육내, 진피내, 경막내, 국소, 경피 또는 경점막 투여가 포함되나, 이에 국한되지 않는다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물은 단일 치료에서 또는 다회 용량으로 대상체에게 투여된다. 다회 용량은 1일 1회 투여되거나 치료 과정에 걸쳐 다회 용량으로 투여될 수도 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물은 단일 용량 또는 다회 용량으로 매일, 격일로, 3일마다, 주당 2회, 주당 3회, 매주, 격주, 3주마다, 매월, 6주마다, 2개월마다, 3개월마다 또는 기타 치료 의사가 적절하다고 간주하는 경우 투여되는 것이 고려된다. 특히 바람직한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물은 적어도 일 개월, 이 개월, 삼 개월, 사 개월, 오 개월, 육 개월, 칠 개월, 팔 개월, 구 개월, 십 개월, 십일 개월, 십이 개월 또는 그 이상의 기간 동안 매일 1회 대상체에게 투여된다.
본원에 기재된 방법의 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여는 예방적 또는 치료적 치료 기간에 이어 회복 기간을 허용하도록 조정된다. 예를 들어, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물은 일정 기간 동안 관절내, 피하, 정맥내 또는 또 다른 방식으로 매일 또는 주당 수회 투여될 수도 있으며, 무치료 기간이 뒤따르고, 이후 해당 주기가 반복된다. 일부 실시양태에서, 초기 치료 기간(예를 들어, CNP 변이 펩티드를 매일 또는 주당 수회 투여)은 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주 동안이다. 관련된 실시양태에서, 무치료 기간은 3일, 1주, 2주, 3주 또는 4주 동안 지속된다. 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드의 투여 레지멘은 3일간 매일 투여 후 3일간 휴약; 또는 1주일 동안 매일 또는 주당 수회 투여 후 3일 또는 1주일간 휴약; 또는 2주일 동안 매일 또는 주당 수회 투여 후 1 또는 2주 휴약; 또는 3주 동안 매일 또는 주당 수회 투여 후 1, 2 또는 3주 휴약; 또는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 동안 매일 또는 주당 수회 투여 후 1, 2, 3 또는 4주 휴약이다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여가 2등급 이상으로 평가된 대상체에서 이상 반응을 유발하지 않거나 초래하지 않는 것이 바람직하다. 본원에 기재된 방법의 기타 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여는 상기 대상체의 혈중 헤모글로빈 농도, 혈소판 수, 혈중 전해질 농도, 혈중 요소 질소 농도, 혈중 크레아티닌 농도, 혈중 알칼리성 포스파타제 농도, 혈중 알라닌 아미노 전달효소 농도 및/또는 혈중 아스파테이트 아미노 전달효소 농도에서 임상적으로 유의미한 변화를 초래하지 않았다.
본원에 기술된 다양한 방법에서, 바람직한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여는 (i) 상체 길이 대 하체 길이의 비율, (ii) 윗팔 길이 대 전완 길이의 비율, 또는 (iii) 윗다리 길이 대 아랫다리 길이 비율에 있어, 기준선(즉, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여 전)에 비해 약 -0.25 내지 약 0.25, 약 -0.20 내지 약 0.20, 약 -0.15 약 0.15, 약 -0.10 내지 약 0.10, 또는 약 -0.05 내지 약 0.05의 변화를 초래한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물 또는 제형물, 또는 본원에 기술된 방법에서 CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물 또는 제형물의 용도를 제공한다. 일 실시양태에서, 조성물 또는 제형물은 약학적으로 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 약 4 내지 약 6인 pH를 갖는 구연산/구연산염 완충제 또는 아세트산/아세트산염 완충제를 포함하는 액체 또는 동결건조된 제형물로부터 제조된다. 다양한 실시양태에서, pH는 약 5.5이다.
또한 제2 작용물질의 투여를 추가로 포함하는 본원에 기술된 치료 방법이 고려된다.
다양한 실시양태에서, 본원에 기술된 방법 및 조성물 또는 제형물에 사용된 CNP 변이 펩티드는 소수성 산에 부착될 수 있고, 하나 이상의 소수성 산에 부착될 수 있다. 소수성 산의 비제한적인 예는 직쇄 또는 분지형, 포화 또는 불포화 C5-C12 카르복실산(예를 들어, 펜탄산, 헵탄산 등) 및 천연 지방산을 포함한다. 소수성 산은 N-말단, C-말단 및/또는 하나 이상의 아미노산 잔기의 측쇄에 부착될 수 있다. 일 실시양태에서, 소수성 산은 N-말단에 접합(conjugated)된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 방법 및 조성물에 사용되는 CNP 변이 펩티드는 CNP 변이 펩티드 및 절단 가능한 펩티드 또는 단백질, 또는 펩티드 태그를 포함하는 키메라 또는 융합 단백질이다. 예시적인 절단 가능한 단백질 또는 펩티드는 히스티딘(예를 들어, 헥사-His) 태그; TAF12: 인간 전사 인자 TAF12; KSI: 케토스테로이드 이성화효소; MBP: 말토오스 결합 단백질; 13-Gal: 13-갈락토시다제; GST: 글루타티온-S-전달효소; Trx: 티오레독신; CBD: 키틴 결합 도메인; BMPM: BMP-2 돌연변이, SUMO, CAT, TrpE, 포도상구균 단백질 A, 연쇄상구균 단백질, 전분 결합 단백질, 엔도글루카나제 A의 셀룰로오스 결합 도메인, 엑소글루카나제 Cex의 셀룰로오스 결합 도메인, 비오틴 결합 도메인, recA, Flag, c-Myc, 폴리(His), 폴리(Arg), 폴리(Asp), 폴리(Gln), 폴리(Phe), 폴리(Cys), 녹색 형광 단백질, 적색 형광 단백질, 황색 형광 단백질, 청록색 형광 단백질, 비오틴, 아비딘, 스트렙타비딘, 항체 에피토프 및 이의 단편을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
다양한 실시양태에서, 방법에서 유용한 CNP 변이 펩티드는 단량체 또는 이량체일 수 있다. 관련된 실시양태에서, 이량체 CNP 변이 펩티드의 단량체는 링커를 통해 또는 링커 없이 N-말단에서 N-말단, 링커를 통해 또는 링커 없이 N-말단에서 C-말단, 또는 링커를 통해 또는 링커 없이 C-말단에서 C-말단에 부착될 수 있다.
본원에 개시된 임의의 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 야생형 CNP-22와 실질적으로 동일하거나 더 나은 생물학적 활성을 가질 수도 있다. 예를 들어, CNP 변이 펩티드는 야생형 CNP-22 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상을 보유할 수 있거나, 예를 들어 cGMP 생성을 자극하기 위한 NPR-B(GC-B)와의 상호작용과 관련하여 CNP-22보다 더 큰 활성을 가질 수도 있다. 대안적으로 또는 추가로, CNP 변이 펩티드는 야생형 CNP-22 활성의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상을 보유할 수 있거나, 연골세포 증식, 연골세포 분화, 미토겐 활성화 단백질(MAP) 키나제/MEK(Raf-1) 키나제 신호 전달 경로의 억제, 및 연골내 골화 촉진을 포함하나 이에 국한되지 않는 연골내 골 성장 및 연골세포 활성 조절과 관련하여 CNP-22보다 더 큰 활성을 가질 수 있다. 본원에 기술된 임의의 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 야생형 CNP-22의 아미노산 6-22 또는 1-22와 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 동일하거나 상동성인 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 연골 표적화를 촉진하고, 신장 청소를 감소시키고/시키거나 NEP 분해에 대한 저항성을 증가시키기 위해 예를 들어, N- 및/또는 C-말단에서 접합(들) 또는 연장(들)을 선택적으로 가질 수 있다. 이러한 접합(들) 또는 연장(들)은 예를 들어, 폴리Asp, 폴리Glu, 연골 표적화 펩티드, 시알로단백질, PEG, 탄수화물, 소수성 산, NPPC 또는 비-CNP(폴리)펩티드 또는 이의 조합으로부터 형성되거나 유래된 분자 또는 서열을 포함할 수 있다.
CNP 변이 펩티드는 예를 들어 헵탄산, 펜탄산 또는 지방산과 같은 소수성 중합체 또는 비중합체 모이어티에 접합될 수 있는 것으로 추가로 고려된다. 소수성 모이어티는 리신, 세린, 시스테인 또는 트레오닌을 포함하나 이에 국한되지 않는 아미노산 잔기의 측쇄에 접합될 수 있거나, 또는 CNP 변이체의 N-말단 및/또는 C-말단에 부착될 수 있다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 합성 중합체성 기를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 변이체는 가수분해성 링커를 통해 변이체에 결합된 합성 중합체성 기를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 합성 중합체성 기는 친수성 중합체 모이어티를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 친수성 중합체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 CNP 변이 펩티드, 선택적으로 기타 생물학적 활성제 및 선택적으로 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물의 사용을 제공한다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 비경구 주사에 적합한 멸균 약학적 조성물이다. 일부 실시양태에서, 조성물은 예를 들어, 적어도 약 90% 또는 95% 순도의 실질적으로 순수한 CNP 변이 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (원하는 CNP 변이 펩티드 이외의) 기타 인간 단백질, 돼지 단백질, 또는 CNP-53 또는 이의 단편과 같은 오염물질을 약 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 미만으로 함유한다. 다양한 실시양태에서, 멸균 조성물은 골격 이형성증, 또는 본원에 개시된 골격 이형성증의 하나 이상의 증상 또는 생리적 결과를 치료하거나 예방하기 위해 대상체에게 투여된다.
본원에 유용한 CNP 변이 펩티드는 유리하게는 CNP 활성을 보유하고 증가된 혈청 반감기를 나타낸다. CNP 활성의 보유는 예를 들어, 원하는 생체내 생물학적 효과의 보유, 또는 동일한 농도(예를 들어, 1μM의 CNP 펩티드 또는 ED80보다 큰)에서 CNP-22의 cGMP 자극 활성의 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 적어도 약 100%의 보유로 나타날 수 있다. 일부 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 CNP-22에 비해 혈청 반감기에 있어 적어도 약 1.5배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배의, 35배 또는 40배 증가를 나타낸다.
관련 실시양태에서, 본원에 기술된 CNP 변이 펩티드는 증가된 NEP 저항성을 가지며 야생형 CNP-22에 비해 증가된 반감기를 나타낸다. 일 실시양태에서, CNP 변이 펩티드의 반감기는 야생형 CNP-22와 비교하여 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 약 100% 증가한다.
2세 미만 또는 약 2세 소아의 골격 이형성증 및 골격 이형성증과 연관하여 본원에 기술된 증상 또는 기타 생리적 징후(manifestation)의 치료를 위한 약제를 제조하는 데 있어 본원에 기재된 임의의 전술한 CNP 변이 펩티드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 용도도 고려된다. 약 2세 내지 약 5세 소아의 골격 이형성증 및 골격 이형성증과 연관하여 본원에 기술된 증상 또는 기타 생리적 징후의 치료를 위한 약제를 제조하는 데 있어 본원에 기재된 임의의 전술한 CNP 변이 펩티드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 용도도 고려된다. 임의의 전술한 CNP 변이 펩티드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물을 포함하는 주사기, 예를 들어 일회용 또는 사전 충전된 주사기, 멸균 밀봉 용기, 예를 들어 바이알, 병, 용기 및/또는 키트 또는 패키지와 더불어 선택적으로 적합한 사용 설명서가 고려된다.
CNP 변이체는 (a) 본원에 기술된 CNP 변이 펩티드 및 (b) 완충제(buffering agent), 등장화제, 안정화제 및 항흡착제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구성요소를 포함하는 제형물 내에 있는 것도 고려된다. 특히 바람직한 실시양태에서, 제형물에 이용되는 완충제는 구연산 일수화물, 구연산 나트륨 이수화물, 또는 이 둘의 조합일 수도 있다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제형물에 이용되는 등장화제는 트레할로스 이수화물, D-만니톨, 또는 이 둘의 조합일 수 있다. 기타 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제형물에 이용되는 안정화제는 L-메티오닌이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제형물에 이용되는 항흡착제는 폴리소르베이트 80이다.
다양한 실시양태에서, 방법에 유용한 제형물은 액체 형태로 동결건조되거나, 이전에 동결건조된 형태로부터 재구성된 액체 형태이다. 특정 실시양태에서, 방법에 유용한 제형물은 보존제가 없으며, 선택적으로 유형 1 미처리된 붕규산 유리 바이알 내에 함유될 수도 있다. 선택적으로, 제형물은 약 5.0 내지 약 6.0의 범위, 바람직하게는 약 5.5의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, 조성물은 액체 제형물이다. 특정 실시양태에서, 제형물은 약 0.1mg/ml 내지 약 20mg/ml, 또는 약 0.5mg/ml 내지 약 20mg/ml, 또는 약 1mg/ml 내지 20mg/ml, 또는 약 0.1mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 0.5mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 0.5 내지 5mg/ml, 또는 약 0.5 내지 3mg/ml, 또는 약 0.5mg/ml 내지 약 2.0mg/ml, 또는 약 0.8 내지 약 2.0mg/ml, 또는 약 1mg/ml 내지 약 10mg/ml 농도 범위의 CNP 변이체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 0.5mg/ml 내지 2mg/ml의 농도 내에 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 0.8mg/ml 내지 2mg/mL의 농도 내에 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 0.8mg/ml의 농도에 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 2.0mg/ml의 농도에 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 동결건조된 분말로부터 재구성된다. 다양한 실시양태에서, 제형물의 CNP 변이 펩티드는 CNP-38 또는 Pro-Gly-CNP-37(BMN111)이다.
기타 실시양태에서, 방법에 유용한 제형물은 본원에 기술된 CNP 변이 펩티드, 구연산 일수화물, 구연산 나트륨 이수화물, 트레할로스 이수화물, D-만니톨, L-메티오닌 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 약 0.5mg/ml 내지 약 2.0mg/ml의 농도로 존재하고, 구연산 일수화물은 약 0.15mg/ml 및 약 0.40mg/ml의 농도로 존재하고, 구연산 나트륨 이수화물은 약 0.5mg/ml 내지 약 1.5mg/ml 농도로 존재하고, 트레할로스 이수화물은 약 30mg/ml 내지 약 70mg/ml 농도로 존재하고, D-만니톨은 약 10mg/ml 내지 약 20.0mg/ml 농도로 존재하고, L-메티오닌은 약 0.5mg/ml 내지 약 1.5mg/ml 농도로 존재하고, 폴리소르베이트 80은 약 0.01mg/ml 내지 약 0.1mg/ml 농도로 존재한다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 약 2.0mg/ml의 농도로 존재하고, 구연산 일수화물은 약 0.28mg/ml의 농도로 존재하며, 구연산 나트륨 이수화물은 약 1.08mg/ml의 농도로 존재하고, 트레할로스 이수화물은 약 58.01mg/ml의 농도로 존재하고, D-만니톨은 약 15.0mg/ml의 농도로 존재하고, L-메티오닌은 약 0.73mg/ml의 농도로 존재하고, 폴리소르베이트 80은 약 0.05mg/ml의 농도로 존재한다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 약 0.8mg/ml의 농도로 존재하고, 구연산 일수화물은 약 0.28mg/ml의 농도로 존재하며, 구연산 나트륨 이수화물은 약 1.08mg/ml의 농도로 존재하고, 트레할로스 이수화물은 약 58.01mg/ml의 농도로 존재하고, D-만니톨은 약 15.0mg/ml의 농도로 존재하며, L-메티오닌은 약 0.73mg/ml의 농도로 존재하고, 폴리소르베이트 80은 약 0.05mg/ml의 농도로 존재한다.
본원에 기술된 각 특징 또는 실시양태, 또는 조합은 본 개시내용의 임의의 양태의 비제한적이며 예시적인 실시예이고, 따라서 임의의 기타 특징 또는 실시양태, 또는 조합과 조합될 수 있음을 의미한다는 것이 이해된다. 여기에 설명되어 있다. 예를 들어, 특징이 "일 실시양태", "일부 실시양태", "추가적 실시양태", "특정 예시적 실시양태" 및/또는 "또 다른 실시양태"와 같은 언어로 기술되는 경우 이러한 유형의 실시양태 각각은 모든 가능한 조합을 나열할 필요 없이 여기에 설명된 임의의 다른 기능 또는 기능의 조합과 결합되도록 의도된 기능의 제한적인 예이다. 이러한 특징 또는 특징의 조합은 본 개시의 임의의 양태에 적용된다. 범위 내에 속하는 값의 예가 개시되는 경우, 이들 예 중 임의의 것이 범위의 가능한 기준선으로 고려되고, 그러한 기준선 사이의 임의의 및 모든 수치 값이 고려되고, 상한 및 하한 기준선의 임의 및 모든 조합이 구상된다.
도 1은 코호트 1 내지 3에서 52주 보소리티드 치료를 위한 연구군의 인구통계학적 구성을 보여준다.
도 2는 치료 52주차 연구 코호트 1 내지 3에 대한 기준선 Z 점수를 나타낸다.
도 3은 52주에 걸쳐 연구 코호트 1 내지 3에 대한 기준선 AGV 및 기준선 AGV의 변화를 나타낸다.
도 4는 52주 치료 후 시간 경과에 따른 신장 Z-점수의 긍정적인 변화를 설명한다.
본 개시내용은 2세 미만 또는 약 2세의 소아에서 골격 이형성증, 골격 이형성증의 하나 이상의 증상 또는 생리적 결과 및 골격 이형성증 및/또는 CNP-관련 증상 또는 구성요소를 갖는 기타 장애를 치료하기 위해 CNP 변이 펩티드를 사용하는 방법에 관한 것이다. 골격 이형성증에서 CNP 변이 펩티드를 사용한 치료는 골격 이형성증의 하나 이상의 증상 또는 생리적 결과를 감소시키거나, 장골 성장을 필요로 하는 대상체의 장골 성장을 증가시키거나, 또는 성장 속도 개선 또는 증가를 필요로 하는 대상체, 예를 들어 골격 이형성증을 앓고 있는 대상체에서 성장 속도를 개선 또는 증가시킨다.
정의
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서 및 청구범위를 포함하여 본원에 사용된 다음 용어는 하기에 주어진 정의를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 부정관사 "a" 및 "an" 및 정관사 "the"는 문맥에서 달리 명시되지 않는 한 복수형 및 단수형 대상을 포함한다.
용어 "약" 또는 "대략"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값에 대한 허용 가능한 오차를 의미하며, 이는 부분적으로 값이 측정되거나 결정되는 방법에 따른다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1, 2, 3 또는 4 표준편차 이내를 의미한다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.05% 이내를 의미한다. 용어 "약" 또는 "대략"이 일련의 2개 이상의 수치 값에서 첫 번째 수치 값 앞에 올 때마다, 용어 "약" 또는 "대략"이 해당 일련의 수치 값 각각에 적용되는 것으로 이해된다.
표준 화학 용어의 정의는 Carey and Sundberg, Advanced Organic Chemistry, 3rd Edition, Vols. A와 B(Plenum Press, New York 1992)를 포함하는 참고 문헌에서 찾아볼 수 있다. 본 개시내용의 실시는 달리 명시되지 않는 한, 당업계의 기술 내에서 합성 유기 화학, 질량 분석법, 제조 및 분석 크로마토그래피, 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학의 특정한 통상적인 방법을 이용할 수 있다. 예를 들어, TE Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties(WH Freeman and Company, 1993); AL Lehninger, Biochemistry(Worth Publishers, Inc., 4판, 2004); Sambrook, 외, Molecular Cloning: A Laboratory Manual(2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology(S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition(Easton Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990)을 참고한다.
상기 또는 하기에 인용된 일체의 간행물, 특허 및 특허 출원은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
본문 전반에 걸쳐 하기과 같은 아미노산 약어가 사용된다.
알라닌: Ala(A) 아르기닌: Arg(R)
아스파라긴: Asn(N) 아스파르트산: Asp(D)
시스테인: Cys(C) 글루타민: Gln(Q)
글루탐산: Glu(E) 글리신: Gly(G)
히스티딘: His(H) 이소류신: Ile(I)
류신: Leu(L) 라이신: Lys(K)
메티오닌: Met(M) 페닐알라닌: Phe(F)
프롤린: Pro(P) 세린: Ser(S)
트레오닌: Thr(T) 트립토판: Trp(W)
티로신: Tyr(Y) 발린: Val(V)
폴리펩티드 및 펩티드 서열을 묘사하기 위해 본원에서는 전통적 표기법이 사용된다: 폴리펩티드 또는 펩티드 서열의 왼쪽 끝은 아미노 말단이고; 폴리펩티드 서열의 오른쪽 끝은 카르복실 말단이다.
일 실시양태에서, 방법에서 유용한 본원에 기재된 CNP 변이 펩티드는 CNP 변이 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 사용하여 재조합 수단을 통해 생성된다. 해당 폴리뉴클레오티드에 의해 발현된 CNP 변이 펩티드는 CNP 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건 하에서 배양 배지 내 숙주 세포를 성장시키고, 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 발현 생성물을 단리하는 것을 포함하는 방법에 의해 생산될 수도 있다. 실제 발현 생성물은 번역 후 처리에 따라 암호화된 단백질 생성물과는 약간 다를 수도 있다. 본 발명의 CNP 변이 펩티드를 생산하는 방법은 적어도 본원에 참고로 포함된 미국 특허 제8,198,242호에 개시되어 있다.
2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열 측면에서 용어 "동일한" 및 "동일성"은 하기의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하거나 육안 검사를 통해 측정하여 최대한 일치하도록 비교 및 정렬했을 때 동일하거나 특정 비율의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 갖는 2개 이상의 서열 또는 하위서열을 지칭한다.
2개의 핵산 또는 폴리펩티드 측면에서 "실질적으로 상동인" 또는 "실질적으로 동일한"이라는 문구는 일반적으로 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하거나 육안 검사를 통해 측정했을 때 최대 일치성을 위해 비교하고 정렬했을 때 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 98%의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 동일성을 갖는 둘 이상의 서열 또는 서열을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 실질적인 상동성 또는 동일성은 길이가 적어도 약 25, 50, 100 또는 150 잔기인 서열 영역에 걸쳐 존재한다. 다른 실시양태에서, 서열은 비교 생체중합체 중 하나 또는 둘 다의 전체 길이에 걸쳐 실질적으로 상동하거나 동일하다.
서열 비교의 경우 전형적으로 하나의 서열이 테스트 서열과 비교되는 참조 서열 역할을 한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 테스트 및 참조 서열이 컴퓨터에 입력되고, 필요한 경우 하위서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수가 지정된다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 매개변수에 기초하여 참조 서열에 관한 테스트 서열(들)의 서열 동일성 비율을 산정한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어 Smith & Waterman, Adv. Appl. Math., 2: 482 (1981)의 국소 상동성 알고리즘, Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol., 48: 443 (1970)의 상동성 정렬 알고리즘, Pearson & Lipman, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 2444 (1988)의 유사성 검색 방법, 해당 알고리즘의 컴퓨터 구현(GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI), 또는 육안 검사에 의한 것이다. 유용한 알고리즘의 일 예는 Feng & Doolittle, J. Mol. Evol., 35: 351-360(1987)의 점진적 정렬 방법의 단순화를 사용하며 Higgins & Sharp, CABIOS, 5: 151-153(1989)에 기술된 방법과 유사한 PILEUP이다. 서열의 다중 정렬을 생성하는 데 유용한 또 다른 알고리즘은 Clustal W(Thompson 외, Nucleic Acids Research, 22: 4673￢4680(1994))이다. 서열 동일성 및 서열 유사성 비율을 결정하는데 적합한 알고리즘의 일 예는 BLAST 알고리즘이다(Altschul 외, J. Mol. Biol., 215: 403-410(1990); Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad.Sci.USA, 89:10915(1989); Karlin & Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 5873-5787(1993)). BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립 생명공학 정보 센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 이용 가능하다.
"야생형"(wt)은 종 내 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 서열을 포함하는 자연적인 형태를 지칭하는 용어이다. 야생형은 유전적 돌연변이(들)로 인해 발생하는 폴리뉴클레오티드, 폴리펩티드 또는 단백질의 돌연변이 형태와 구별된다.
일 실시양태에서, 제2 펩티드의 "유사체", 또는 "변이체" 또는 "유도체"인 제1 펩티드는 제2 펩티드와 적어도 약 50%, 60% 또는 70%의 서열 상동성을 갖지만, 100% 미만의 서열 상동성을 갖는 펩티드이다. 해당 유사체, 변이체 또는 유도체는 천연 발생 아미노산 잔기뿐만 아니라 호모아르기닌, 오르니틴, 페니실라민 및 노르발린을 포함하나 이에 국한되지 않는 비천연 발생 아미노산 잔기로 구성될 수도 있다.
나트륨이뇨 펩티드 전구체 C(NPPC) 폴리펩티드는 단일 사슬 126-아미노산 프리-프로 폴리펩티드며, 절단 시 궁극적으로 야생형 CNP-22(wtCNP-22)가 생성된다. NPPC에서 신호 펩티드를 제거하면 프로-CNP가 생성되고 엔도프로테아제 퓨린에 의해 추가로 절단되면, 활성 53-아미노산 펩티드(CNP-53)를 생성하며, 이는 분비되고 다시 절단되어 성숙한 22-아미노산 펩티드(CNP 또는 CNP-22)를 생성한다. 일 실시양태에서, "CNP 변이 펩티드"는 동일한 수의 아미노산 잔기에 대해 야생형 NPPC와 적어도 약 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 상동성을 갖는다. CNP 변이 펩티드는 약 1 내지 약 53, 또는 1 내지 약 38, 또는 1 내지 37, 또는 1 내지 35, 또는 1 내지 34, 또는 1 내지 33, 또는 1 내지 32, 또는 1 내지 31, 또는 1 내지 27, 또는 1 내지 22, 또는 10 내지 35, 또는 약 15 내지 약 37의 NPPC 폴리펩티드 잔기로 구성될 수도 있다는 것이 추가로 고려될 수 있다. 일 실시양태에서, CNP 변이체는 NPPC 폴리펩티드로부터 유래된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 또는 53개 아미노산의 서열을 포함할 수 있다.
용어 "유효량"은 대상체의 건강 상태, 병리, 또는 질병에 대해 원하는 결과를 생성하거나 진단 목적을 위한 충분한 용량을 의미한다. 원하는 결과는 투여량 수여자의 주관적 또는 객관적 개선을 포함할 수 있다. "치료적 유효량"은 건강에 의도된 유익한 효과를 생산하는데 효과적인 작용물질의 양을 지칭한다. 임의의 개별적인 경우에 적절한 "유효한" 양은 일상적인 실험을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수도 있다. 임의의 특정 환자에 대한 특정 용량 수준 및 투여 빈도는 이용된 특정 화합물의 활성; 해당 화합물의 생체 이용률, 대사 안정성, 배설 속도 및 작용 기간; 화합물의 투여 방식 및 시간; 환자의 연령, 체중, 전반적인 건강, 성별 및 식이요법; 및 특정 병태의 중증도를 포함하는 다양한 요인에 따라 다양하며 달라질 수 있음을 이해하게 될 것이다.
"치료"는 예방적 치료 또는 치료적 치료 또는 진단적 치료를 지칭한다. 특정 실시양태에서, "치료"는 치료, 예방 또는 진단 목적으로 대상체에게 화합물 또는 조성물을 투여하는 것을 지칭한다.
"예방적" 치료는 질병의 징후를 나타내지 않거나 질병의 초기 징후만을 나타내는 대상체에게 병리 발생 위험을 감소시킬 목적으로 투여되는 치료이다. 본 개시내용의 화합물 또는 조성물은 병리가 발생할 가능성을 감소시키거나 발생하더라도 병리의 중증도를 최소화하기 위한 예방적 치료로서 주어질 수 있다.
"치료적" 치료는 병리의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게 병리학적 징후 또는 증상을 감소시키거나 제거할 목적으로 해당 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게 투여되는 치료이다. 징후 또는 증상은 생화학적, 세포적, 조직학적, 기능적 또는 신체적, 주관적 또는 객관적일 수도 있다. 본 개시내용의 화합물은 또한 치료적 치료로서 또는 진단을 위해 주어질 수 있다.
"약학적 조성물" 또는 "제형물"은 인간 및 포유동물을 포함하는 대상 동물에서 약학적 사용하기에 적합한 조성물을 지칭한다. 약학적 조성물은 치료적 유효량의 CNP 변이 펩티드, 선택적으로 또 다른 생물학적 활성제, 및 선택적으로 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 포함한다. 일 실시양태에서, 약학적 조성물은 활성 성분(들), 및 담체를 구성하는 비활성 성분(들)을 포함하는 조성물뿐만 아니라, 임의의 둘 이상의 성분의 조합, 복합체화 또는 응집, 또는 하나 이상의 성분의 해리, 또는 하나 이상의 성분의 기타 유형의 반응 또는 상호작용으로부터 직접 또는 간접적으로 발생하는 임의의 생성물을 포괄한다. 따라서, 본 개시내용의 약학적 조성물은 본 개시내용의 화합물과 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 희석제를 혼합하여 제조된 임의의 조성물을 포괄한다.
"약학적으로 허용되는 담체"는 인산염 완충된 식염수 용액, 5% 포도당 수용액 및 에멀젼(예를 들어, 오일/물 또는 물/오일 에멀젼)과 같은 임의의 표준 약학적 담체, 완충제 등을 지칭한다. 부형제의 비제한적인 예는 보조제, 결합제, 충전제, 희석제, 붕해제, 유화제, 습윤제, 윤활제, 활택제, 감미제, 향미제 및 착색제를 포함한다. 적합한 약학적 담체, 부형제 및 희석제는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th Ed. (Mack Publishing Co., Easton, 1995)에 기술되어 있다. 바람직한 약학적 담체는 활성제의 의도된 투여 방식에 따라 달라진다. 전형적인 투여 방식은 장내(예를 들어, 경구) 또는 비경구(예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내 또는 복강내 주사; 또는 국소, 경피, 또는 경점막 투여)를 포함한다.
"약학적으로 허용되는 염"은 금속염(예를 들어, 나트륨, 칼륨, 마그네슘, 칼슘 등) 및 암모니아 또는 유기 아민의 염을 포함하나 이에 국한되지 않는 약학적 용도를 위한 화합물로 제형화될 수 있는 염이다.
"약학적으로 허용되는" 또는 "약리학적으로 허용되는"이란 생물학적으로 또는 달리 바람직하지 않지 않은 물질, 즉 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지 않으면서 또는 해당 물질이 함유된 조성물의 임의의 구성 요소 또는 개인의 신체 상에 또는 내에 존재하는 구성 요소와 해로운 방식으로 상호 작용하지 않으면서 개인에게 투여될 수 있는 물질을 의미한다.
"생리적 상태"는 동물(예를 들어, 인간)의 신체 내 상태를 의미한다. 생리적 상태는 체온 및 생리적 이온 강도, pH 및 효소의 수성 환경이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 생리적 상태는 또한 예를 들어 사람의 정상 체온인 대략 37℃와 다르거나 사람의 정상 혈액 pH인 대략 7.4와 다른 대부분의 대상체에게 존재하는 “정상” 상태와 다른 특정 대상체의 신체 내 상태를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 "대상체"는 포유동물 및 비포유동물을 포괄한다. 포유동물의 예는 인간, 침팬지와 같은 비인간 영장류, 및 기타 유인원 및 원숭이 종; 소, 말, 양, 염소, 돼지 등의 농장 동물; 토끼, 개, 고양이 등의 가축; 래트, 마우스, 기니피그 등의 설치류를 포함한 실험 동물 등 포유류의 모든 구성원을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 비포유동물의 예는 새, 물고기 등을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 해당 용어는 특정 연령이나 성별을 나타내지 않는다.
용어 "폴리에틸렌 글리콜", "PEG", "폴리에틸렌 옥사이드" 및 "PEO"는 달리 명시되지 않는 한 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 숫자 n과 연관된 "PEOn" 중합체에 아미노기를 통해 접합된 CNP 변이체는 일반적으로 CH3-[-O-CH2CH2-]n-C(=O)-NHR의 식을 갖고, 여기서 n은 에틸렌 옥사이드 단위의 수이고 R은 펩티드의 나머지 부분을 나타낸다. "PEOn" 중합체는 카르보닐 탄소와 반복되는 에틸렌 옥사이드 단위 사이에 선택적으로 알킬렌기인 (CH2)m을 가질 수 있으며, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이다. 해당 "PEOn"(예를 들어, PEO12 또는 PEO24) 중합체는 단분산, 즉 특정 분자량의 단일 개별 중합체이다. 유사하게, 숫자 nK와 연관된 "PEGnK" 중합체에 아미노기를 통해 접합된 CNP 변이체는 일반적으로 CH3-[-O-CH2CH2-]p-C(=O)-NHR의 식을 가지며, 여기서 p는 1을 초과하는 정수이다. "PEGnK" 중합체는 또한 카르보닐 탄소와 반복되는 에틸렌 옥사이드 단위 사이에 선택적으로 알킬렌기인 (CH2)m을 가질 수 있으며, 여기서 m은 1 내지 5의 정수이다. 그러나 해당 "PEGnK"(예를 들어, PEG1K, PEG2K, PEG5K 또는 PEG20K) 중합체는 다분산, 즉 분자량 분포를 갖는 중합체의 혼합물을 함유하며, 여기서 숫자 nK는 중합체 수평균 분자량(Mn)을 킬로 달톤으로 나타낸다. 예를 들어, CNP 변이체에 접합된 "PEG2K"는 약 2kDa의 중합체 수평균 분자량을 갖는 다분산된 PEG 중합체를 나타낸다.
중합체(예를 들어, PEG)의 질량 범위가 주어지면(예를 들어, kDa 단위로), 범위는 달리 명시적으로 나타내지 않는 한 중합체 수평균 분자량의 범위를 지칭하는 것이지, 다분산된 혼합물 내 다중 중합체의 분자량 범위를 의미하는 것이 아니다.
CNP 변이 펩티드
CNP-22의 치료제로서의 사용은 혈장에서의 이의 짧은 반감기로 인해 제한된다(J. Clin. Endocrinol. Metab., 78: 1428-35(1994)). 인간 혈장에서 CNP-22의 농도는 전형적으로 오 피코몰 미만이다. CNP-22는 인간의 NEP 및 NPR-C에 의해 분해되어 순환계에서 청소된다(Growth Hormone & IGF Res., 16: S6-S14). 전신 투여된 CNP-22를 사용한 모든 인간 및 동물 연구에서, 대상체에서 CNP-22 농도를 증가시키기 위해 연속 주입이 사용되었다. 보다 긴 반감기와 적어도 유사한 수준의 기능성을 갖는 CNP 펩티드는 CNP 기반 치료적 전략에 유익할 것이다. 개선된 특성을 갖는 CNP 변이 펩티드는 국제 출원 제WO 2009/067639호 및 제WO 2010/135541호 및 미국 특허 제8,198,242호, 제8,598,121호, 제8,377,884호, 제9,907,834호 및 제10,646,550호에 개시되어 있으며 모두 구체적으로 본원에 참조로 포함되어 있다.
방법에 사용하기 위해 고려되는 예시적인 CNP 변이 펩티드는 하기를 포함한다: PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP53)(서열번호: 2);
PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP53)(서열번호: 3);
MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP53)(서열번호: 4);
DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-53(M48N)](서열번호: 5);
LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-52)(서열번호: 6); RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-51)(서열번호: 7); VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-50)(서열번호: 8); DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-49)(서열번호: 9); TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-48)(서열번호: 10); KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-47)(서열번호: 11); SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-46)(서열번호: 12); RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-45)(서열번호: 13); AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-44)(서열번호: 14); AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-43)(서열번호: 15); WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-42)(서열번호: 16); ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-41)(서열번호: 17); RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-40)(서열번호: 18); LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-39)(서열번호: 19); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21);
EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24); NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-33)(서열번호: 25); ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-32)(서열번호: 26); RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-31)(서열번호: 27); KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-30)(서열번호: 28); YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-29)(서열번호: 29); KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-28)(서열번호: 30);
GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-27)(서열번호: 31);
ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-26)(서열번호: 32);
NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-25)(서열번호: 33);
KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-24)(서열번호: 34);
KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-23)(서열번호: 35);
LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-21)(서열번호: 36);
SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-20)(서열번호: 37);
KGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-19)(서열번호: 38);
GCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-18)(서열번호: 39);
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP37(M32N)(서열번호: 40); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP37)(서열번호: 41); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP37)(서열번호: 42); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP37)(서열번호: 43); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP37(M32N)](서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP37)(서열번호: 45); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(HSA-CNP27)(서열번호: 46); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[HSA-CNP27(M22N)](서열번호: 47); PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-HSA-CNP27)(서열번호: 48); MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-HSA-CNP27)(서열번호: 49);
GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 50); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 51); PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 52); MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 53); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 54); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 55); PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 56); PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 57); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 58); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 59); PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 60); PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 61); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 62); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 63); 및/또는 PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 64).
특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 CNP-37 또는 CNP-38의 유도체이다. CNP-37 변이 펩티드는 CNP-37의 37개 위치 중 하나 이상에서 아미노산 첨가(들), 결실(들) 및/또는 천연 또는 비천연 아미노산(들) 또는 펩티드 모방체(들)(예를 들어, 펩티드 결합 등배체(들))로의 치환(들)을 포함할 수 있다. CNP-22의 넘버링에 기초하여 CNP-37에서 이루어질 수 있는 치환의 비제한적인 예는 K4R, G5S, G5R, G8S, K10R, G15S, S16Q, M17N, G19R 및 이들의 조합을 포함한다.
일 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 소수성 모이어티를 포함하도록 변형된 CNP-38, CNP-37, CNP-36, CNP-35, CNP-34, CNP-33 또는 CNP-32이다. 다양한 실시양태에서 소수성 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜이다.
추가 CNP 변이체는 골격 이형성증 치료에 유용한 CNP 변이체의 소수성 펩티드 염을 기술하는 국제 출원 PCT/US2020/045885에 개시되어 있으며, 본원에 참조로 포함되어 있다. 사용을 고려중인 또 다른 CNP 변이체는 PCT/US2020/051100(본원에 참조로 포함됨)에 기술되어 있으며, 이는 CNP 서열 변이체 PGQEHPQARRYRGAQRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC(서열번호: 66); PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(서열번호: 1); PGQEHPNARRYRGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC(서열번호: 67); 및 PGQEHPQARKYKGAQKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(서열번호: 68)를 개시하고, 여기에서 선택적으로 변이체는 아세틸기를 추가로 포함한다. 다양한 실시양태에서, 아세틸기는 펩티드의 N-말단에 있다. 다양한 실시양태에서, 펩티드는 C-말단에 OH 또는 NH2 기를 추가로 포함한다. 다양한 실시양태에서, 변이 펩티드는 접합체 모이어티를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 접합체 모이어티는 CNP 사이클릭 도메인의 잔기 상에 또는 CNP 사이클릭 도메인 이외의 부위에 있다. 다양한 실시양태에서, 접합체 모이어티는 리신 잔기 상에 있다. 다양한 실시양태에서, 접합체 모이어티는 하나 이상의 산 모이어티를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 산 모이어티는 소수성 산이다. 다양한 실시양태에서, 접합체 모이어티는 친수성 스페이서에 연결된 하나 이상의 산 모이어티를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 친수성 스페이서는 임의의 아미노산이다. 다양한 실시양태에서, 친수성 스페이서는 감마 글루탐산(γ이다. 다양한 실시양태에서, 친수성 스페이서는 OEG(8-아미노-3,6-디옥사옥탄산)이다. 다양한 실시양태에서, 친수성 스페이서는 감마 글루탐산(γ또는 OEG(8-아미노-3,6-디옥사옥탄산)이다. 다양한 실시양태에서, 친수성 스페이서는 1개 또는 2개 이상의 OEG(8-아미노-3,6-디옥사옥탄산)에 연결된 감마 글루탐산(γ이다. 다양한 실시양태에서, 산 모이어티는 지방산이다. 예시적인 지방산은 단쇄, 중쇄, 또는 장쇄 지방산, 또는 디카르복실 지방산을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 지방산은 포화되었거나 불포화되었다. 고려되는 지방산은 C-6, C-8, C-10, C-12, C-14, C-16, C-18 또는 C-20 지방산을 포함하나 이에 국한되지 않는 포화 또는 불포화된 C-6 내지 C-20 지방산이다. 다양한 실시양태에서, 지방산은 데칸산, 도데칸산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 아라키드산, 또는 이의 이산이다.
일 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 퓨린 프로테아제에 대한 생체내 내성을 개선하도록 설계된 퓨린 절단 부위에 돌연변이(들)/치환(들)을 갖고/거나, 혈장 안정성을 개선하고 파이로글루타민 형성을 방지하도록 설계된 N-말단에 글리신 또는 프롤린-글리신을 함유하는, 변형된 CNP-37 또는 CNP-38 펩티드이다. 예시적인 CNP-37 변이체는 하기를 포함하나 이에 국한되지는 않는다:
QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-37(M32N)](서열번호: 40); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP-37)(서열번호: 42); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP-37)(서열번호: 41); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP-37(M32N)(서열번호: 44); PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP-37)(서열번호: 1); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP-37)(서열번호: 45); 및 GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP-37)(서열번호: 43).
특정 실시양태에서, CNP 변이체는 합성 중합체성 기를 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 변이체는 가수분해성 링커를 통해 변이체에 연결된 합성 중합체성 기를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 합성 중합체성 기는 친수성 중합체 모이어티를 포함한다. 실시양태에서, 친수성 중합체는 수용성이므로 이에 접합된 CNP 펩티드가 수성(예를 들어 생리적) 환경에서 침전되지 않는다. 또한, 친수성 중합체는 생체적합성이며, 즉 생체내 손상, 독성 또는 면역학적 반응을 유발하지 않는다. 친수성 중합체는 분지형이거나 비분지형일 수 있다. 일 실시양태에서, 친수성 중합체는 분지되지 않는다. 다양한 실시양태에서, 친수성 중합체 모이어티는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 친수성 중합체에 대한 CNP 변이체의 다양한 접합 부위는 다음을 포함하나 이에 국한되지 않는다: (1) N-말단에서만; (2) C-말단에서만; (3) 내부 부위에서만(예를 들어, Lys4 및/또는 Lys 10); (4) N-말단 및 C-말단 모두에서; (5) N-말단 및 내부 부위에서; 및 (6) C-말단 및 내부 부위에서.
PEG화된 CNP 변이 펩티드를 제조하는 방법은 일반적으로 (a) PEG를 CNP 펩티드에(예를 들어 N-말단에서) 부착하기에 적합한 조건 하에서 CNP 변이체를 PEG화 시약과 반응시키는 단계, 및 (b) 당업계에 공지된 기법을 사용하여 반응 생성물(들)을 얻는 단계를 포함한다.
CNP 변이 펩티드의 합성 및 정제
일부 실시양태에서, 본원에서 유용한 CNP 변이 펩티드는 특정 실시양태에서 당업계에 공지된 특정 기법을 사용하여 재조합 발현에 의해 생산된다. 예를 들어, Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press (Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)); DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes I and II, D. N. Glover, Ed. (1985); 및 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)를 참조한다.
특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 융합 폴리펩티드의 발현을 초래하는 조건 하에서 절단 가능한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 제 2 폴리뉴클레오티드에 연결된 CNP 변이 펩티드를 암호화하는 제 1 폴리뉴클레오티드를 포함하는 호스트 세포를 배지에서 배양하는 것을 포함하는 재조합 과정에 의해 생산되며, 여기서, 융합 폴리펩티드는 절단 가능한 펩티드 또는 단백질에 직접 연결되거나 링커를 통해 간접적으로 연결된 CNP 변이 펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 절단 가능한 펩티드 또는 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 연결된 CNP 변이 펩티드를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터로 형질 전환된다. 특정 실시양태에서, 융합 폴리펩티드는 가용성 단백질 또는 봉입체로서 발현된다. 발현된 융합 폴리펩티드는 숙주 세포 또는 배양 배지로부터 단리될 수 있으며, 단리된 융합 폴리펩티드는 절단제와 접촉하여 CNP 변이 펩티드를 방출할 수 있다.
CNP 변이 펩티드를 생산하는 방법은 본원에 참고로 포함된 미국 특허 8,198,242, 8,377,884 및 8,598,121, 9,907,834 및 10,646,550에 기술되어 있다.
CNP 변이 펩티드를 생산하는 데 사용되는 숙주 세포는 박테리아, 효모, 곤충, 비포유류 척추동물 또는 포유류 세포일 수 있다. 박테리아 세포는 대장균 세포주 및 균주를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 대장균 세포주 및 균주의 비제한적인 예로는 BL21, BL21(DE3), BL21(DE3)pLysS, BL21(DE3)pGro7, 아틱익스프레스(DE3), C41[C41(DE3)이라고도 함], C43[C43(DE3)이라고도 함], 오리가미 B(DE3), 오리가미 B(DE3)pLysS, KRX 및 튜너(DE3) 등을 포함한다. 일 실시양태에서, CNP 변이 펩티드 및 CNP 융합 단백질은 BL21(DE3) 세포를 사용하여 생산된다. 포유동물 세포는 햄스터, 원숭이, 침팬지, 개, 고양이, 소, 돼지, 마우스, 래트, 토끼, 양 및 인간 세포를 포함하지만 이에 국한되지 않는다. 숙주 세포는 불멸화 세포(세포주) 또는 불멸화되지 않은(1차 또는 2차) 세포일 수 있고, 섬유아세포, 각질세포, 상피 세포(예를 들어, 유방 상피 세포, 장 상피 세포), 난소 세포(예를 들어, 중국 햄스터 난소 또는 CHO 세포), 내피 세포, 신경 교세포, 신경 세포, 혈액의 형성 요소(예를 들어, 림프구, 골수 세포), 연골 세포 및 기타 뼈 유래 세포, 이러한 체세포 유형의 전구체 세포와 같이 다양한 세포 유형 중 임의의 것일 수 있다. CNP 변이 DNA 또는 RNA를 함유하는 숙주 세포는 세포의 성장, DNA 또는 RNA의 발현 및 CNP 변이 펩티드를 발현하는 세포의 식별/선별에 적절한 조건에서 배양된다.
특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 CNP 변이 펩티드와 절단 가능한 운반체 단백질 또는 절단 가능한 태그(예를 들어, 펩티드 태그)를 포함하는 융합 단백질로서 재조합적으로 발현되며, 여기서 융합 단백질은 절단 가능한 운반체 단백질 또는 태그에 직접 연결되거나 링커를 통해 간접적으로 연결된 CNP 변이 펩티드를 포함한다. 운반체 단백질 또는 태그의 사용은 예를 들어 융합 단백질의 검출, 단리 및/또는 정제를 용이하게 한다. 절단 가능한 운반체 단백질 및 태그에는 히스티딘(예를 들어, 헥사-His) 태그; 인간 전사인자 TAF12(TAF12), TAF12 단편, TAF12 히스톤 폴드 도메인, TAF12의 돌연변이체 및 그 단편, TAF12(C/A), TAF12(D/E), TAF12(4D/4E), TAF12(6D/6E), TAF12(10D/10E), TAF12(C/A & D/E), TAF12(C/A & 4D/4E), TAF12(C/A & 6D/6E), TAF12(C/A & 10D/10E); 케토스테로이드 이성질화효소(KSI); 말토오스 결합 단백질(MBP); ß갈락토시다제(ß글루타티온-S-전달효소(GST); 티오레독신(Trx); 키틴 결합 도메인(CBD); BMP-2, BMP-2 돌연변이체, BMP-2(C/A); SUMO; 및 그 돌연변이 및 단편들을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
기타 실시양태에서, 본원에 기술된 CNP 변이 펩티드는 펩티드 합성기를 사용하여 합성되고 당업계에 공지된 방법에 따라, 예를 들어 Atherton and Sheppard, Solid Phase Peptide Synthesis: a Practical Approach, IRL Press (Oxford, England (1989))의 방법에 따라 정제된다.
CNP 변이 펩티드를 사용하는 방법
골 관련 장애/골격 이형성증
섬유아세포 성장 인자(FGF)는 골 형성에 중요한 역할을 하며, FGF 수용체 유전자(FGFR 1, 2 및 3)의 돌연변이는 다양한 유전성 골격 기형을 유발한다(Curr. Biol., 5: 500-507(1995))). 특히, FGFR-3의 활성화 돌연변이는 인간 유전적 왜소증의 가장 일반적인 형태인 연골무형성증(Nature, 371: 252-254(1994); Cell, 78: 335-342(1994))), 더 경미한 장애 저연골형성증(Ann. NY Acad. Sci., 785: 182-187(1996)), 더 심각하고 신생아에게 치명적인 치사 이형성증(TD) 유형 I 및 II(Hum. Mol. Genet., 5: 509-512(1996); Nat. Genet., 9: 321-328(1995))을 비롯한 장골 장애의 원인이 된다. FGF-2를 과발현하고 결과적으로 FGFR-3을 활성화시키는 마우스 모델은 단축된 장골 및 대두증을 나타낸다(Mol. Biol. Cell, 6: 1861-73(1995)). 이 모델과 일치하게, FGFR-3이 결핍된 마우스는 더 성장판이 더 넓어져 골격이 현저하게 과성장하는 것으로 나타났다(Nature Genet., 12: 390-397(1996)).
기질 생성, 연골세포의 증식 및 분화를 자극하고 장골 성장을 증가시킴으로써, 본 개시내용의 CNP 변이 펩티드는 골격 이형성증과 같은 골 관련 장애를 앓고 있는 인간을 포함한 포유동물을 치료하는 데 유용하다. CNP 반응성 골 관련 장애 및 골격 이형성증의 비제한적 예는 연골무형성증, 연골저형성증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 골형성부전증, 골형성부전증, 점상 연골형성부전증, 동형접합성 연골형성부전증, 굴지 이형성증, 선천성 치사성저인산증, 주산기 치사형 골형성부전증, 단늑골 다지 증후군, 연골저형성증, 점상연골 이형성증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천척추골단이형성증, 아테로스테오생성, 이영양성 이형성증, 선천성 단발성 대퇴골, 랭거형 전완부이형성증, 니에버겔트형 전완부이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말단 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 이형성증, 소지증, 모르퀴오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, NPR2 돌연변이, SHOX 돌연변이(터너 증후군/레리 웨일), PTPN11 돌연변이(누난 증후군) 및 특발성 저신장을 포함한다. 또한, CNP 변이체는 특발성 저신장 및 기타 골격 이형성증을 치료하기 위한 성장 호르몬의 보조제 또는 대안으로 유용하다.
또한, CNP 변이 펩티드는 구루병, 저인산혈증 구루병[X-연결 저인산혈증 구루병(비타민 D 저항성 구루병이라고도 함) 및 상염색체 우성 저인산혈증 구루병 포함] 및 골연화증[종양 유발성 골연화증(발암성 골연화증 또는 발암성 저인산증이라고도 함) 포함 골연화증)]과 같은 기타 골 관련 병태 및 장애를 치료하는 데 유용하다.
다양한 실시양태에서, 골 관련 장애, 골격 이형성증 또는 저신장 장애는 NPR2 돌연변이, SHOX 돌연변이(터너 증후군/레리 웨일), 또는 PTPN11 돌연변이(누난 증후군)로부터 발생한다.
다양한 실시양태에서, 골 관련 장애, 골격 이형성증 또는 저신장 장애는 NPR2 돌연변이, SHOX 돌연변이(터너 증후군/레리 웨일), 또는 PTPN11 돌연변이(누난 증후군), 또는 인슐린 성장 인자 1 수용체(IGF1R)로 인해 발생한다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 성장판 장애 및 가족성 저신장, 우성 유전성 저신장으로도 알려진 우성 가족성 저신장, 또는 특발성 저신장을 포함하는 저신장을 치료하는 데 유용하다. 다양한 실시양태에서, 저신장 또는 성장판 장애는 콜라겐(COL2A1, COL11A1, COL9A2, COL10), 아그레칸(ACAN), 인디언 헤지호그(IHH), PTPN11, NPR2, NPPC 또는 FGFR3의 돌연변이의 결과이다.
다양한 실시양태에서, 성장판 장애 또는 저신장은 RAS병증과 연관된 유전자의 하나 이상의 돌연변이와 연관되어 있다.
다양한 실시양태에서, 골 관련 장애, 골격 이형성증 또는 저신장 장애는 RAS병증으로부터 발생한다. 다양한 실시양태에서, RAS병증은 누난 증후군, 코스텔로 증후군, 심근피부 증후군, 제1형 신경섬유종증, 또는 LEOPARD 증후군이다.
일 실시양태에서, RAS병증은 유전성 치은 섬유종증 1형이다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 성장판 장애 및 가족성 저신장, 우성 유전성 저신장으로도 알려진 우성 가족성 저신장, 또는 특발성 저신장을 포함하는 저신장을 치료하는 데 유용하다. 다양한 실시양태에서, 저신장 또는 성장판 장애는 콜라겐(COL2A1, COL11A1, COL9A2, COL10), 아그레칸(ACAN), 인디언 헤지호그(IHH), PTPN11, NPR2, NPPC, FGFR3 또는 인슐린 성장 인자 1 수용체(IGF1R)의 돌연변이의 결과이다.
다양한 실시양태에서, 저신장은 RAS병증과 연관된 유전자의 하나 이상의 돌연변이와 연관되어 있다.
RAS병증은 Ras/미토겐 활성화 단백질 키나제(MAPK) 경로 유전자의 돌연변이로 인해 발생하는 희귀한 유전적 병태군이다. RAS병증은 RAS/MAPK 경로를 통한 신호 증가가 특징인 장애군이다. 이 경로는 RAF/MEK/ERK 경로의 하류 활성화로 이어진다. 저신장은 특정 RAS병증의 특징이다. 예를 들어, CNP 신호 전달은 RAF를 억제하고 MEK 및 ERK 활성화를 감소시킨다.
RAS병증의 치료가 본원에서 고려된다. 저신장과 관련된 RAS병증에는 누난 증후군, 코스텔로 증후군, 심근피부 증후군, 제1형 신경섬유종증 및 LEOPARD 증후군이 있다. 유전성 치은 섬유종증 1형도 본원에서 고려되는 RAS병증이다. RAS병증 환자(누난 증후군, 코스텔로 증후군, 심근피부 증후군, 신경섬유종증 1형, LEOPARD 증후군, 유전성 치은 섬유종증 1형 포함)는 다음 유전자 중 하나 이상의 이형접합 변이를 가진 환자가 포함된다: BRAF, CBL, HRAS, KRAS, LZTR1, MAP2K1, MAP2K2, MRAS, NF1, NRAS, PPP1CB, PTPN11, RAF1, RRAS, RIT1, SHOC2, SOS1 또는 SOS2(Tajan 외 Endocr. Rev. 2018;39(5):676-700).
여러 유전자의 돌연변이는 저신장, 심장 결함, 출혈 문제 및 골격 기형을 특징으로 하는 누난 증후군을 유발할 수 있다. PTPN11 유전자의 돌연변이는 전체 누난 증후군 사례의 약 절반을 유발한다. SOS1 유전자 돌연변이는 추가로 10 내지 15%를 유발하며, RAF1 및 RIT1 유전자는 각각 사례의 약 5%를 차지한다. 다른 유전자의 돌연변이는 각각 소수의 경우를 차지한다. 해당 장애가 있는 사람 중 15 내지 20%에서 누난 증후군의 원인은 알려져 있지 않다.
PTPN11, SOS1, RAF1 및 RIT1 유전자는 모두 세포 분열 및 성장(증식), 분화 및 세포 이동에 필요한 RAS/MAPK 세포 신호 전달 경로에서 중요한 단백질을 암호화한다. 누난 증후군과 관련된 유전자의 많은 돌연변이로 인해 생성된 단백질이 활성화(활성)되고, 이러한 장기간의 활성화는 정상적인 RAS/MAPK 신호 전달을 변경하여 세포 성장과 분열의 조절을 방해하여 누난의 특징을 갖게 된다. 증후군. 예를 들어, Chen 외, Proc Natl Acad Sci US A. 111(31):11473-8, 2014, Romano 외, Pediatrics. 126(4):746-59, 2010, and Milosavljevi 외, Am J Med Genet 170(7):1874-80, 2016를 참조한다. MAPK 경로를 활성화하는 돌연변이가 있는 대상체는 본원에 기술된 CNP 변이체는 골 성장 및 단신을 개선한다. MAPK 경로를 활성화하는 돌연변이가 있는 대상체는 NPR2 수용체가 표면에서 발현되는 신체 전체의 다른 세포에서 과잉활성 MAPK 경로와 연관된 다른 동반질환을 개선하기 위해 본원에 기술된 바와 같은 CNP 변이체를 사용한 치료로부터 이익을 얻을 수 있을 것으로 고려된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기술된 CNP 변이 펩티드 및 조성물 및 제형물은 골격 이형성증의 증상(들) 또는 생리적 결과 중 하나 이상을 개선하는 데 유용하며, 여기서 개선은 절대 성장 증가, 성장 속도 증가, 컴퓨터 단층촬영(QCT) 골밀도 질적 증가, 성장판 형태 개선, 장골 성장 증가, 척추 형태 개선, 팔꿈치 관절 운동 범위 개선 및/또는 수면 무호흡증 감소일 수 있다. 이와 관련하여, 용어 "개선된", "개선", "증가", "감소" 및 이들의 문법적 동등어는 모두 질병 상태의 증상 또는 생리적 결과와 관련하여 사용될 때 다음을 참조하는 상대적인 용어라는 점에 유의한다. 본 발명의 CNP 변이 펩티드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물)로 치료하기 전의 질병의 동일한 증상 또는 생리적 결과와 비교하여 본 발명의 CNP 변이 펩티드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물)로 치료한 후의 질병의 증상 또는 생리적 결과의 상태를 지칭한다(즉, "기준선"과 비교). 전술한 바와 같이, "기준선" 상태는 치료 전 대상체의 상태를 측정하거나(이후 치료 후 동일한 대상체의 상태와 비교할 수 있음), 동일하거나 유사한 특성(예를 들어, 연령, 성별 및/또는 질병 상태 또는 진행)을 공유하는 동일한 질환을 앓고 있는 대상체 집단에서 해당 상태를 측정함으로써 결정될 수 있다.
성장 속도 증가 또는 향상
본 개시내용의 조성물 및 제형물은 또한 골격 이형성증을 앓고 있는 대상체에서 성장 속도를 향상시키거나 증가시키기 위한 목적으로 투여될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 대상체는 연골무형성증을 앓고 있다. 치료의 효능은 다양한 매개변수로 측정된다. 다양한 실시양태에서, 효능은 기준선 기간으로부터 개입 기간까지의 연간 성장 속도의 변화로서 평가된다. 효능은 또한 CDC 성장 곡선을 사용하여 측정된 기준선부터 치료 종료까지 신장 Z-점수라고도 하는 신장 표준 편차 점수(SDS)의 변화로 평가되며, 성장 속도 SDS는 Bone Mineral Density in Childhood Study(Kelly 외, J. Clin. Endocrinol. Metab. 2014;99(6):2104-2112)에 기반한다.
대상체의 성장 속도 측정은 당업계에 잘 알려진 표준 기술을 사용하여 시간 경과에 따라 이루어질 수 있다. 특정 실시양태에서, 기립 신장, 앉은 신장, 체중, 머리 둘레, 윗팔 길이, 아랫팔(팔뚝) 길이, 윗 다리 길이, 아랫 다리 길이(무릎에서 발까지), 손 길이(손목에서 손가락 끝까지) 및/또는 발 길이와 같은 매개변수의 측정은 특정 매개변수(즉, 성장 속도)에 의해 측정된 특정 성장률을 결정하기 위해 특정 기간에 걸쳐 이루어질 수 있다. 특정 기간 동안의 성장 속도 측정은 "연율화"될 수 있으며, 여기서 특정 기간 동안 산정된 성장률은 1년 동안의 예상 성장률로 변환된다. 본 발명의 CNP 변이 펩티드로 치료하기 전 대상체의 성장 속도 측정(즉, "기준선" 성장 속도)은 본 발명의 CNP 변이 펩티드로 치료하는 동안 또는 치료 후의 성장 속도 측정치와 비교할 수 있다. 대상체의 성장 속도 변화에 대한 치료 효과를 결정하기 위해. "기준선" 성장 속도는 또한 본 발명의 CNP 변이 펩티드로 치료받는 개체와 동일한 일반적인 연령, 성별 및 질병 상태의 대상체 집단으로부터 결정될 수 있다.
본 발명의 CNP 변이 펩티드(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물)를 이용한 치료를 필요로 하는 대상체의 치료에 의해 유도되거나 유발된 상기 기재된 매개변수(예를 들어, 기립 신장 등) 중 하나 이상의 평가에 의해 측정된 성장 속도의 개선을 정량적으로 측정할 수 있다. 이와 관련하여, 특정 실시양태에서, 본 발명의 CNP 변이체(또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물)로 치료된 대상체에서 임의의 특정 매개변수의 성장 속도의 연간 증가 또는 개선은 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% 이상 높다. 특정 실시양태에서, 본원에 기술된 방법은 기립 신장으로 측정된 성장 속도의 연간 증가가 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 또는 50% 이상이게 한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기술된 방법은 앉은 키, 체중, 머리 둘레, 윗팔 길이, 아랫팔(팔뚝) 길이, 윗다리 길이, 아랫다리 길이(무릎에서 발까지), 손 길이(손목에서 손가락 끝까지) 또는 발 길이로 측정된 성장 속도의 연간 증가가 기준선보다 적어도 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% 또는 50% 이상이게 한다. 본원에 기술된 바와 같이, 기준선 비교 기준은 동일한 대상체를 본 발명의 CNP 변이 펩티드로 치료하기 전에 특정 매개변수에 의해 측정된 연간 성장 속도일 수 있거나, 본 발명의 CNP 변이 펩티드로 치료받는 개인과 동일한 일반적인 연령, 성별 및 질병 상태를 가진 대상체 군으로부터 결정된 성장 속도일 수 있다.
CNP 변이 펩티드의 투여가 그러한 비례성의 변화를 가져오는지 여부를 결정하기 위해 CNP 변이 펩티드로 치료하기 전 및 후에 대상체로부터 특정 신체 분절의 다른 부분에 대한 비례성에 관한 인체 측정 데이터를 얻을 수도 있다. 예를 들어, 상체 길이(허리부터 머리 꼭대기까지) 대 하체 길이(허리부터 발까지)의 비율은 CNP 변이 펩티드로 치료하기 전(즉, 기준선)과 CNP 변이 펩티드로 치료한 후에 산정되어 CNP 변이 펩티드를 사용한 치료가 신체 비례성에 이상 반응을 미치는지 여부를 확인한다. 더 어린 대상체, 예를 들어, 0 내지 2세의 경우, 연간 성장 속도 및 Z-점수 측정을 위해 신체 길이와 정수리에서 엉덩이까지의 길이를 측정하는 것이 기립 신장과 앉은 신장보다 우선할 수 있다.
윗팔 대 팔뚝 길이 또는 윗다리 대 아랫다리(무릎에서 발)의 비율을 산정하고 비교하여 신체 비례성에 대한 CNP 변이 펩티드 치료의 효과를 결정할 수도 있다. 바람직한 실시양태에서, 대상체에게 CNP 변이 펩티드를 투여하면 기준선과 비교하여 임의의 특정 비율로 측정한 신체 비례성의 유의미한 변화가 발생하지 않는다. 이와 관련하여, 특정 실시양태에서, 본 발명의 CNP 변이 펩티드, 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물로 치료하면, 상술한 비율 중 어느 하나에서 0.5, 0.25, 0.20, 0.15, 0.10 또는 0.05 이하, 바람직하게는 0.05 이하의 변화가 발생한다.
본원에 기술된 다양한 방법에 있어서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여가 치료 대상체에서 2등급 이상 또는 3등급 이상의 연구 약물과 관련된 이상 반응을 초래하지 않는 것이 바람직하다. 이와 관련하여, 화합물을 이용한 대상체의 치료와 관련된 생리적 사건을 측정하고 등급을 매기는 기법과 등급화된 이상 반응 목록은 미국 국립 보건원(NIH)에서 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) v5.0(빠른 참조 가이드, 이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE) 버전 5.0 게시일: 2017년 11월 27일)에 의해 유지되며, 이는 본원에 참고로 포함된다.
더욱이, 본원에 기술된 다양한 방법에서, CNP 변이 펩티드 또는 이를 포함하는 조성물 또는 제형물의 투여가 다음 생리적 매개변수 중 하나 이상에서 임상적으로 유의미한 변화(기준선과 비교하여 증가 또는 감소)를 초래하지 않는 것이 바람직하다: 혈중 헤모글로빈 농도, 혈소판 수, 혈중 전해질 농도, 혈중 요소질소 농도, 혈중 크레아티닌 농도, 혈중 알칼리 포스파타제 농도, 혈중 알라닌 아미노 전달효소 농도 또는 혈중 아스파테이트 아미노 전달효소 농도. "임상적으로 유의미한 변화"는 대상체의 전반적인 건강에 있어서 검출 가능/관찰 가능한 불리한 생리적 변화를 초래하는 것으로 관찰되는 상기 매개변수 중 하나 이상의 변화를 의미한다.
CNP 변이 펩티드의 약학적 조성물 및 제형물
추가 실시양태에서, 본 개시내용은 CNP 변이 펩티드, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 부형제, 담체 및/또는 희석제를 포함하는 약학적 조성물 및 제형물의 사용을 고려한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 하나 이상의 다른 생물학적 활성제(예를 들어, 프로테아제 억제제, 수용체 티로신 키나제 및/또는 청소 수용체 NPR-C)를 추가로 포함한다.
부형제, 담체 및 희석제의 비제한적인 예에는 비히클, 액체, 완충제, 등장화제, 첨가제, 안정화제, 보존제, 가용화제, 계면활성제, 유화제, 습윤제, 보조제 등이 포함된다. 조성물은 액체(예를 들어, 물, 에탄올); 다양한 완충제 함량의 희석제(예를 들어, Tris-HCl, 인산염, 아세트산염 완충제, 구연산염 완충제), pH 및 이온 강도; 세제 및 가용화제(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80); 항산화제(예를 들어, 메티오닌, 아스코르브산, 메타중아 황산나트륨); 보존제(예를 들어, 티메로솔, 벤질 알코올, m-크레졸); 및 증량 물질(예를 들어, 락토스, 만니톨, 수크로스)을 함유할 수 있다. 약학적 조성물의 제형화에 있어서 부형제, 희석제 및 담체의 사용은 당업계에 공지되어 있으며; 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, pages 1435-1712, Mack Publishing Co.(Easton, Pennsylvania(1990))를 참조하며, 이는 전체 내용이 참고로 본원에 포함된다.
예를 들어, 담체에는 희석제, 비히클 및 보조제뿐만 아니라 임플란트 담체, 불활성, 무독성 고체 또는 액체 충전제 및 활성 성분(들)과 반응하지 않는 캡슐화 물질이 제한 없이 포함된다. 담체의 비제한적인 예는 인산염 완충 식염수, 생리 식염수, 물 및 에멀젼(예를 들어, 오일/물 에멀젼)을 포함한다. 담체는 예를 들어 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일 및 이들의 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.
일부 실시양태에서, 조성물은 액체 제형물이다. 특정 실시양태에서, 제형물은 약 0.1mg/ml 내지 약 20mg/ml, 또는 약 0.5mg/ml 내지 약 20mg/ml, 또는 약 1mg/ml 내지 약 20mg/ml, 또는 약 0.1mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 0.5mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 1mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 2mg/ml 내지 약 10mg/ml, 또는 약 2mg/ml 또는 약 10mg/ml 농도 범위의 CNP 변이 펩티드를 포함한다. 기타 실시양태에서, 제형물은 동결건조 제형물일 수 있거나, 동결건조 제형물로부터 사전에 재구성된 액체 제형물일 수 있다.
추가 실시양태에서, 조성물은 CNP 함유 용액 또는 현탁액의 pH를 원하는 범위 내로 유지하기 위해 완충 용액 또는 완충제를 포함한다. 완충 용액의 비제한적인 예에는 인산염 완충 식염수, 트리스 완충 식염수 및 행크 완충 식염수가 포함된다. 완충제는 아세트산나트륨, 인산나트륨, 구연산 일수화물 및 구연산나트륨 이수화물을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 완충제의 혼합물도 사용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 완충제는 아세트산/아세트산염 또는 구연산/구연산염이다. 조성물에 적합한 완충제의 양은 부분적으로 사용되는 특정 완충제 및 용액 또는 현탁액의 원하는 pH에 따라 달라진다. 예를 들어, 아세트산염은 pH 6보다 pH 5에서 더 효율적인 pH 완충제이므로 pH 6보다 pH 5의 용액에 더 적은 양의 아세트산염이 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 약 10mM ± 5mM의 농도를 갖는다. 특정 실시양태에서, 조성물의 pH는 약 pH 3 내지 약 pH 7.5, 또는 약 pH 3.5 내지 약 pH 7, 또는 약 pH 3.5 내지 약 pH 6.5, 또는 약 pH 4 내지 약 pH 6, 또는 약 pH 4 내지 약 pH 5, 또는 약 pH 5.0 ± 1.0, 또는 약 pH 5.5 ± 1.0이다.
기타 실시양태에서, 조성물은 용액 또는 현탁액을 등장성으로 만들고 주사에 더욱 적합하도록 등장화제를 함유한다. 등장화제의 비제한적인 예에는 NaCl, 트레할로스, 만니톨, 덱스트로스, 글루코스, 글리세린, 소르비톨, 자일리톨 및 에탄올이 포함된다. 특정 실시양태에서, 등장화제는 트레할로스 또는 만니톨이며, 이는 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 트레할로스 또는 만니톨은 약 160 ± 20mM, 또는 약 140mM ± 20mM, 또는 약 120 ± 20mM, 또는 약 100mM ± 20mM, 또는 약 80mM ± 20mM, 또는 약 60mM ± 20mM이다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 보존제를 포함할 수 있다. 보존제에는 m-크레졸 및 벤질 알코올이 포함되나 이에 국한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 보존제는 약 0.4% ± 0.2%, 또는 약 1% ± 0.5%, 또는 약 1.5% ± 0.5%, 또는 약 2.0% ± 0.5%의 농도로 존재한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 조성물 또는 제형물은 보존제를 함유하지 않는다.
다양한 실시양태에서, 조성물은(예를 들어, 유리 또는 플라스틱에 대한 CNP 변이체의 흡착을 완화하기 위해) 항흡착제를 함유한다. 항흡착제는 제한 없이 벤질 알코올, 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항흡착제는 약 0.001% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.1% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1.5%, 또는 약 0.5% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 2%이다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 안정화제를 포함한다. 안정화제의 비제한적인 예는 글리세린, 글리세롤, 티오글리세롤, 메티오닌, 아스코르브산 및 이의 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, 안정화제가 티오글리세롤 또는 아스코르브산 또는 이의 염일 때, 안정화제의 농도는 약 0.1% 내지 약 1% 내에 있다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 항산화제를 함유한다. 예시적인 항산화제는 제한 없이 아스코르브산이다. 특정 실시양태에서, 항산화제 대 CNP 변이 펩티드의 몰비는 약 0.1:1 내지 약 15:1, 또는 약 1:1 내지 약 15:1, 또는 약 0.5:1 내지 약 10:1, 또는 약 1:1 내지 약 10:1, 또는 약 3:1 내지 약 10:1이다.
무기산염(예를 들어, 염산염, 브롬화수소산염, 인산염, 황산염), 유기산의 염(예를 들어, 아세트산염, 프로피오네이트, 말로네이트, 벤조에이트, 메실레이트, 토실레이트) 및 아민의 염(예를 들어, 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디사이클로헥실아민, 디에탄올아민)을 포함하나 이에 국한되지 않는 약학적으로 허용되는 염이 조성물에 사용될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염에 대한 자세한 논의는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Company, (Easton, Pennsylvania (1990))에서 찾아볼 수 있다.
비경구 투여용 제형물은 주사 전에 액체 매질에 용해 또는 현탁하기에 적합한, 예를 들어 액체 용액 또는 현탁액, 고체 형태로, 또는 에멀젼으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 멸균 주사용 용액 및 현탁액은 적합한 희석제, 담체, 용매(예를 들어, 완충 수용액, 링거 용액, 등장성 염화나트륨 용액), 분산제, 습윤제, 유화제, 현탁화제 등을 사용하여 당업계에 공지된 기법에 따라 제형화될 수 있다. 또한 멸균 고정 오일, 지방 에스테르, 폴리올 및/또는 기타 비활성 성분이 사용될 수 있다. 추가 예로서, 비경구 투여를 위한 제형물은 항산화제, 완충제, 정균제 및 제형물을 의도된 수여자의 혈액과 등장성으로 만드는 용질을 함유할 수 있는 수성 멸균 주사용 용액; 현탁화제 및 증점제를 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다.
예시적인 CNP 펩티드 함유 제형물은 미국 특허 8,198,242, 8,598,121, 9,907,834 및 10,646,550에 기술되어 있다. 약 4 내지 약 6 범위의 pH를 갖는 CNP 제형물의 사용이 고려된다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 서방형 조성물이다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 골격 이형성증을 앓는 대상체에게 투여하기 위해 약학적 담체로 제형화될 수 있다. 일부 실시양태에서, CNP 변이 펩티드의 액체 제형물은 성분의 임의의 조합에 따라 제형화되며, 이의 양 또는 농도는 하기에 기재되어 있다:
CNP 변이 펩티드를 포함하는 조성물은 또한 동결건조된 제형물일 수 있다. 특정 실시양태에서, 동결건조된 제형물은 완충제 및 증량제, 및 선택적으로 항산화제를 포함한다. 예시적인 완충제는 아세트산염 완충제 및 구연산염 완충제를 제한 없이 포함한다. 예시적인 증량제는 만니톨, 수크로스, 덱스트란, 락토스, 트레할로스 및 포비돈(PVP K24)을 제한 없이 포함한다. 특정 실시양태에서, 만니톨 및/또는 트레할로스는 약 3% 내지 약 10%, 또는 약 4% 내지 약 8%, 또는 약 4% 내지 약 6%의 양이다. 특정 실시양태에서, 수크로스는 약 6% 내지 약 20%, 또는 약 6% 내지 약 15%, 또는 약 8% 내지 약 12%의 양이다.
다양한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드의 동결건조된 제형물은 하기에 기술된 성분 및 이의 양 또는 농도의 임의의 조합에 따라 제형화된 제형물로부터 제조된다:
다양한 실시양태에서, CNP 변이 펩티드를 포함하는 제형물은 약 3 내지 7, 또는 약 3 내지 6, 또는 약 3.5 내지 6.5, 또는 약 4 내지 6, 또는 약 4 내지 5, 또는 약 4.5 내지 5.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, pH 4 내지 5.5의 경우 적합한 완충제는 아세트산/아세트산염(예를 들어, 아세트산나트륨)이고, pH 5.5 내지 6의 경우 적합한 완충제는 구연산/구연산염이다. 구연산/구연산염(예를 들어, 구연산나트륨)도 pH 3 내지 6 또는 pH 4 내지 6 범위 내의 적합한 완충제이다. 특정 실시양태에서, 완충제는 약 2 내지 50mM, 또는 약 2 내지 40mM, 또는 약 2 내지 30mM, 또는 약 5 내지 30mM, 또는 약 2 내지 20mM, 또는 약 5 내지 20mM, 또는 약 5 내지 15mM의 제형물 내 농도를 갖는다.
또한 CNP 변이 펩티드의 탈아미드화를 최소화하거나 피하기 위해 동결 건조를 통해 제형물에서 물을 제거할 수 있다. 일부 실시양태에서, 동결건조 제형물은 다음 성분의 임의의 조합을 함유한다: 완충제: 아세트산나트륨 및 아세트산, 또는 구연산나트륨 및 구연산; 등장성제/증량제: 만니톨(예를 들어, 3 내지 10%, 2 내지 8% 또는 4 내지 6%); 수크로스(예를 들어, 6 내지 20%, 5 내지 15% 또는 8 내지 12%); 항산화제: 각 항산화제와 CNP 변형 펩티드의 몰 비율이 약 0.1:1 내지 약 1:1, 또는 약 0.5:1 내지 약 5:1, 또는 약 1:1 내지 약 15:1, 또는 약 1:1 내지 약 10:1, 또는 약 3:1 내지 약 10:1인 메티오닌 및/또는 아스코르브산.
탈아미드화는 CNP 조성물(예를 들어, 액체 제형물 또는 동결건조 제형물)을 약 5℃, 0℃, -10℃, -20℃, -30℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -80℃, -90℃,또는 -100℃와 같이 보다 낮은 온도에서 보관함으로써 최소화하거나 피할 수 있다.
CNP 변형 펩티드에서 산화성 잔기(예를 들어, 메티오닌)의 산화를 최소화하거나 피하기 위해 변이체는 하나 이상의 항산화제와 함께 제형화될 수 있다. 예시적인 항산화제는 메티오닌, 아스코르브산 및 티오글리세롤을 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 예를 들어, 메티오닌 잔기의 산화는 또한 액체 매질(액체 제형물인 경우)에서 질소 또는 아르곤으로 산소를 퍼징하고/하거나 질소 또는 아르곤으로 용기 또는 패키지로부터 산소를 퍼징함으로써 최소화되거나 방지될 수 있다.
일부 실시양태에서, 흡착(예를 들어, 플라스틱 또는 유리에 대한 CNP 변이 펩티드의 흡착)을 최소화하거나 방지하기 위해, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80 또는 벤질 알코올, 또는 이의 조합이 CNP 제형물에 첨가된다. 특정 실시양태에서, 각각의 항흡착제(들)는 약 0.001% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.01% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.1% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1%, 또는 약 0.5% 내지 약 1.5%, 또는 약 0.5% 내지 약 2%, 또는 약 1% 내지 약 2%의 농도로 존재한다. 제형물 내 항흡착제(들)의 예시적인 범위(들)에는 약 0.001% 내지 약 0.5%의 폴리소르베이트 20, 약 0.001% 내지 약 0.5%의 폴리소르베이트 80, 및/또는 약 0.5% 내지 약 1.5%의 벤질 알코올이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
다양한 실시양태에서, 제형물은 구연산, 구연산나트륨, 트레할로스, 만니톨, 메티오닌, 폴리소르베이트 80 및 선택적으로 주사용 멸균수(WFI)를 포함한다.
본 개시내용은 또한 액체(예를 들어 멸균 주사용) 제형물 또는 고체(예를 들어 동결건조된) 제형물을 포함하는 병, 바이알, 앰플, 튜브, 카트리지 및/또는 주사기를 함유하는 키트를 제공한다. 키트는 또한 고체(예를 들어, 동결 건조) 제형물을 투여(예를 들어, 주사)를 위해 용액 또는 현탁액으로 재구성하기 위한 약학적으로 허용되는 비히클 또는 담체(예를 들어, 용매, 용액 및/또는 완충액)를 함유할 수 있으며, 이는 주사용 주사기에서 동결건조된 제형물을 재구성하거나 농축액을 더 낮은 농도로 희석하는 단계를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 또한, 즉석 주사 용액 및 현탁액은 예를 들어 CNP 함유 조성물을 포함하는 멸균 분말, 과립 또는 정제로부터 제조될 수 있다. 키트에는 에어로졸 또는 주사 분배 장치, 펜 주사기, 자동 주사기, 바늘 없는 주사기, 주사기 및/또는 바늘과 같은 분배 장치도 포함될 수 있다.
투여량 및 투여 빈도
본원에 사용된 바와 같이, 활성제(예를 들어, CNP 변이 펩티드)의 "치료적 유효량"이라는 용어는 환자에게 치료적 이점을 제공하는 양을 지칭한다. 양은 개인마다 다를 수도 있으며 환자의 전반적인 신체적 상태를 포함하는 여러 요인에 따라 달라질 수 있다. CNP 변이 펩티드의 치료적 유효량은 공개적으로 이용 가능한 자료 및 절차를 사용하여 당업자에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 예를 들어, 요법에 사용되는 CNP 변이 펩티드의 양은 연령, 머리 둘레 및 분절 성장에 대한 키가 나열된 연골무형성증이 있는 0 내지 17세 소아(여성 214명, 남성 189명)의 성장 차트를 기준으로 허용 가능한 성장률을 제공해야 한다(Horton WA 외, Standard Growth curve for achondroplasia, J. Pediatr., 93: 435-8(1978)). CDC 차트는 연령별 체중, 신장별 체중, 연령별 BMI를 평가하는 데 사용될 수 있다. 보다 만성적인 경과가 있는 이차적인 결과도 측정될 수 있다.
특정 개인에 대한 투여 빈도는 치료 중인 장애, 및 요법에 대한 개인의 병태 및 반응을 포함하는 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드를 함유하는 약학적 조성물은 약 1일 1회, 2일 1회, 3일 1회, 또는 주당 1회, 주당 2회, 주당 3회, 2주 1회, 또는 매월 1회 대상체에게 투여된다. 일 실시양태에서, 골 관련 장애(예를 들어, 연골무형성증을 포함하는 골격 이형성증)의 치료를 위해, CNP 변이 펩티드의 일일 또는 매주 용량이 성인기까지 및/또는 성인기에 걸쳐 환자에게 투여된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기술된 CNP 변이 조성물은 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10nm/㎏ 내지 약 300nm/㎏, 또는 약 20nm/㎏ 내지 약 200nm/㎏ 범위의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서 CNP 조성물은 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1750 또는 2000nmol/kg 또는 치료 의사가 적절하다고 간주하는 기타 용량으로 투여된다. 기타 실시양태에서, CNP 변이 조성물은 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 120, 125, 130, 140, 150, 160, 170, 175, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1000, 1250, 1500, 1750 또는 2000nmol/kg 또는 치료 의사가 적절하다고 간주하는 기타 용량으로 투여된다. 기타 실시양태에서, CNP 변이 조성물은 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 250, 300, 350, 400,450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950 또는 1000mg/kg, 또는 약 0.5, 0.8, 1.0, 1.25, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10mg/kg 또는 치료 의사가 적절하다고 간주하는 기타 용량으로 투여된다. 본원에 기술된 CNP 또는 CNP 변이체의 용량은 제한 없이 매일, 주당 2 또는 3회, 매주, 2주 1회, 3주 1회, 매월 등을 포함하여 본원에 기술된 투여 빈도/투여의 빈도에 따라 투여될 수 있다. 다양한 실시양태에서, CNP 또는 CNP 변이체는 매일 피하 투여된다. 다양한 실시양태에서, CNP 또는 CNP 변이체는 매주 피하 투여된다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 2.5μg/kg/일 내지 60μg/kg/일, 10μg/kg/일 내지 45μg/kg/일, 또는 15μg/kg/일 내지 30μg/kg/일의 용량으로 투여된다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 15μg/kg/일의 용량으로 투여된다. 다양한 실시양태에서, CNP 변이체는 30μg/kg/일의 용량으로 투여된다. CNP 변이 펩티드의 투여는 연장된 기간에 걸쳐, 어떤 경우에는 일 개월, 삼 개월, 육 개월, 12 개월 이상에 걸쳐 이루어질 수도 있다. 다양한 실시양태에서, 치료는 3개월 또는 6개월 차에 시작할 수도 있거나, 대상체가 골격 이형성증을 갖는 것으로 예를 들어 유전자 검사에 의해 결정될 때 시작할 수 있고, 성장판이 닫힐 때까지 계속될 수도 있다.
CNP 변이체 또는 이의 조성물은 또한 표적 작용 부위(예를 들어, 비정상적이거나 퇴행화된 관절 또는 연골 부위)에 저장소를 이식하여 투여될 수 있다. 대안적으로, CNP 변형은 경피 전달(예를 들어, 피부 패치의 수단으로)을 통해 혀 아래 설하(예를 들어, 설하 정제)로 투여되거나 마이크로-스피어, 마이크로캡슐, 리포솜(비하전되거나 하전된(예를 들어, 양이온성)), 중합체성 미립자(예를 들어, 폴리아미드, 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 폴리(락티드-글리콜리드)), 마이크로에멀젼 등의 형태로 경구 투여될 수 있다.
본원에 기술된 CNP 변이 조성물은 골 관련 장애(예를 들어, 연골무형성증을 포함하는 골격 이형성증)를 치료, 개선 또는 예방하기 위해 치료를 필요로 하는 환자에게 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. CNP 변이체의 안전성 및 치료적 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 약리학적 절차, 예를 들어 LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료적으로 유효한 용량)을 결정함에 의해서와 같이 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료적 효과 사이의 용량 비율은 치료적 지수이며 이는 LD50/ED50 비율로 표현될 수 있다. 큰 치료적 지수를 나타내는 활성제가 일반적으로 바람직하다.
특정 대상체에 대한 CNP 변이 펩티드의 투약/투여 빈도는 치료 중인 장애, 요법에 대한 대상체의 병태 및 반응을 비롯한 다양한 요인에 따라 달라질 수 있다. CNP 변이 펩티드는 투약 당 단회 용량 또는 다회 용량으로 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 단회 용량 또는 다회 용량으로 매일, 격일로, 3일마다, 주당 2회, 주당 3회, 매주, 격주, 3주마다, 매월, 6주마다, 2개월마다, 3개월마다 또는 치료 의사가 적절하다고 간주하는 대로 투여된다.
일부 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 성장 기간(예를 들어, 연골형성)에 이어 회복 기간(예를 들어, 골 형성)을 허용하도록 투여된다. 예를 들어, CNP 변이 펩티드는 일정 기간 동안 매일 또는 주당 여러 번 정맥내, 피하, 관절내 또는 또 다른 방식으로 투여될 수 있으며, 그 후 무 치료 기간이 이어진 후 사이클이 반복된다. 일부 실시양태에서, 초기 치료 기간(예를 들어, 매일 또는 주당 CNP 변이 펩티드의 다회 투여)은 3일, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주 또는 12주 동안이다. 관련 실시양태에서, 무치료 기간은 3일, 1주, 2주, 3주 또는 4주 동안 지속된다. 특정 실시양태에서, CNP 변이 펩티드의 투약 레지멘은 3일간 매일 투여 후 3일간 휴약; 또는 1주일간 매일 또는 주당 여러 번 투여 후 3일 또는 1주일간 휴약; 또는 2주일간 매일 또는 주당 다회 투여 후 1주 또는 2주 휴약; 또는 3주 동안 매일 또는 주당 다회 투여 후 1, 2 또는 3주 휴약; 또는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12주 동안 매일 또는 주당 다회 투여 후 1, 2, 3 또는 4주 휴약이다.
투여 방식
CNP 변이 펩티드, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물 또는 제형물은 예를 들어 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내 또는 척추강내 주사와 같은 다양한 방법으로 대상체에게 투여될 수 있다. 일 실시양태에서, CNP 변이 펩티드는 1일 1회, 격일 1회, 3일 1회, 또는 주 1회 피하, 관절내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피내 또는 척추강내 주사로 투여된다.
CNP 변이 펩티드는 질병 부위 또는 그 근처에 직접 주사하여 투여될 수도 있다. 또한, CNP 변형 펩티드는 표적 작용 부위(예를 들어, 비정상적이거나 퇴행된 관절 또는 연골 부위)에 저장소를 이식하여 투여될 수 있다. 또는, CNP 변형 펩티드는 설하로(예를 들어, 설하 정제), 또는 폐로 흡입(예를 들어, 흡입기 또는 에어로졸 스프레이), 비강으로 전달(예를 들어, 비강 내 스프레이) 눈에 전달(예를 들어, 점안액) 또는 경피 전달(예를 들어, 피부 상의 패치 수단을 통한)로 투여될 수 있다. CNP 변이 펩티드는 또한 마이크로스피어, 마이크로캡슐, 리포좀(비하전되거나 하전된(예를 들어, 양이온성)), 중합체성 미세입자(예를 들어, 폴리아미드, 폴리락티드, 폴리글리콜라이드, 폴리(락티드-글리콜라이드)), 마이크로에멀젼 등의 형태로 경구 투여될 수도 있다.
추가 투여 방법은 삼투성 펌프(예를 들어, Alzet 펌프) 또는 미니 펌프(예를 들어, Alzet 미니-삼투성 펌프)에 의한 것이며, 이는 미리 정해진 기간에 걸쳐 CNP 변이 펩티드 또는 약학적 조성물이 제어되고 연속적이고/이거나 서서히 방출되도록 전달하는 것을 허용한다. 삼투성 펌프 또는 미니 펌프는 피하 또는 표적 부위(예를 들어, 사지의 장골, 골단 등) 근처에 이식될 수 있다.
당업자에게는 CNP 변이 펩티드 또는 이의 조성물이 다른 방식으로도 투여될 수 있음이 명백할 것이다. CNP 변이 펩티드 또는 이의 조성물의 가장 효과적인 투여 방식을 결정하는 것은 당업자의 기술 내에 있다.
바이오마커
골 관련 장애의 치료를 위해, 자궁 내 및 신생아에서의 장골 성장 측정 및 CNP, cGMP, 콜라겐 II, 콜라겐 X, 오스테오칼신 및 증식세포핵항원(PCNA)과 같은 골 성장 바이오마커 측정과 같은 성장 지표가 측정될 수 있다.
골격 이형성증의 치료를 평가하는 데 유용한 바이오마커는 또한 NTproCNP, 콜라겐 X의 N 말단 단편(CXM), CNP, cGMP, 콜라겐 II형의 프로펩티드 및 이의 단편, 콜라겐 II형 및 이의 단편, 콜라겐 I형의 프로펩티드 및 이의 단편, 콜라겐 I형 및 이의 단편, 오스테오칼신, 증식세포핵항원(PCNA), 아그레칸 콘드로이틴 황산염, 콜라겐 X 및 알칼리성 포스파타제를 포함한다. 연골 및 골 관련 바이오마커는 조직, 혈액, 혈청, 혈장, 뇌척수액, 윤활액 및 소변을 포함하나 이에 국한되지 않는 임의의 적절한 생물학적 검체에서 측정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이오마커는 생체내 효능/약력학 연구를 진행 중인 동물 및/또는 생체외 연구의 조건화된 배지로부터의 혈액, 혈장 또는 혈청에서 측정된다.
CNP 신호전달 마커 중 하나는 cGMP(구아노신 3',5' 사이클릭 모노포스페이트)이다. 이 세포내 신호전달 분자의 수준은 CNP가 동족 수용체 NPR-B에 결합하여 활성화한 후에 증가한다. CNP 노출 후 세포 배양 추출물(시험관 내), CNP 노출 후 뼈 이식 연구 후 조건화된 배지(생체 외), 피하, 정맥 또는 당업계에 공지된 다른 투여 경로를 통해 CNP를 투여한 후 몇 분 이내에 혈장(생체 내)에서 cGMP의 상승된 수준을 측정할 수 있다.
연골 및 골 특이적 분석물(또는 연골- 및 골-연관 마커)를 측정하여 CNP 효능을 평가할 수도 있다. 예를 들어, 절단된 콜라겐 II형의 단편은 연골 교체에 대한 연골 특이적 마커이다. II형 콜라겐은 연골의 주요 유기 성분이며 II형 콜라겐 단편(절단된 콜라겐)은 순환계로 방출된 후 연골 교체에 따라 소변으로 분비된다. 연골 교체는 새로운 골 형성보다 우선한다.
측정될 수 있는 골 형성에 대한 골 특이적 바이오마커는 I형 프로콜라겐의 N-말단 프로펩티드(PINP)이다. I형 콜라겐은 골 기질의 주요 유기 성분이기 때문에 I형 콜라겐의 합성은 골 형성의 중요한 단계이다. 콜라겐 합성 과정에서 프로펩티드는 프로콜라겐 분자에서 방출되어 혈청에서 검출될 수 있다. 또한, 콜라겐 I형 단편은 골 흡수에 대한 지표로 측정될 수 있다.
연골 및 골 형성 및 성장에 대한 기타 잠재적인 바이오마커는 아그레칸 콘드로이틴 황산염(연골 교체에 대한 연골 특이적 마커), II형 콜라겐의 프로펩티드(연골형성에 대한 연골 특이적 마커), 콜라겐 I형 C- 텔로펩티드(CTx), 알칼리성 포스파타제(골 특이적) 및 오스테오칼신(골 형성을 위한 골 특이적 마커)를 포함한다. 연골- 및 골-연관 바이오마커는 예를 들어 시판되는 키트를 사용하여 생체내 효능/약력학 연구 및 생체 외 연구의 조건화된 배지로부터 혈청에서 측정될 수 있다. 연골 및 골 관련 바이오마커는 조직, 혈액, 혈청, 혈장, 뇌척수액, 활액 및 소변을 포함하나 이에 국한되지 않는 임의의 적절한 생물학적 검체에서 측정될 수 있다.
일 실시양태에서, 생체내 골 및 연골형성 및 성장에 대한 CNP 조성물의 효과를 모니터링하기 위해, 본원에 기술된 CNP 변이체 또는 조성물을 투여 받아온 대상체에서 적어도 하나의 골- 또는 연골-연관 바이오마커의 수준을 검정하거나 측정한다. 예를 들어, 적어도 하나의 골- 또는 연골-연관 바이오마커 수준의 증가는 CNP 변이체 또는 조성물의 투여가 골 성장에 긍정적인 영향을 미치고 골격 이형성증 및 CNP 활성 감소와 연관된 기타 골 또는 연골 관련 질병 또는 장애에 대한 유용한 치료임을 나타낼 수 있다. 예시적인 골- 또는 연골-연관 바이오마커는 CNP(예를 들어, CNP의 내인성 수준), cGMP, 콜라겐 II형의 프로펩티드 및 이의 단편, 콜라겐 II형 및 이의 단편, 콜라겐 I형 C- 텔로펩티드(CTx), 오스테오칼신, 증식 세포 핵 항원(PCNA), I형 프로콜라겐의 프로펩티드(PINP) 및 이의 단편, 콜라겐 I형 및 이의 단편, 콜라겐 X, 아그레칸 콘드로이틴 황산염 및 알칼리성 포스파타제를 포함하나 이에 국한되지는 않는다. 다양한 실시양태에서, 측정된 바이오마커는 NTproCNP, 콜라겐 X의 N 말단 단편(CXM), CNP, cGMP, 콜라겐 II형의 프로펩티드 및 이의 단편, 콜라겐 II형 및 이의 단편, 콜라겐 I형의 프로펩티드 및 이의 단편, 콜라겐 I형 및 이의 단편, 오스테오칼신, 증식세포핵항원(PCNA), 아그레칸 콘드로이틴 황산염, 콜라겐 X 및 알칼리성 포스파타제를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 바이오마커는 CNP 변이체가 투여될 것이거나, 투여되고 있거나 투여된 대상체로부터 생물학적 검체를 얻음으로써 측정된다. 바이오마커는 웨스턴 블롯, 효소면역흡착 검정(ELISA) 및 효소 활성 검정을 포함하나 이에 국한되지 않는 당업계에 공지된 기법을 사용하여 측정될 수 있다. 생물학적 검체는 혈액, 혈청, 소변 또는 기타 생물학적 체액일 수 있다.
본 개시내용의 추가적인 양태 및 세부사항은 하기의 실시예에서 명백하게 드러나며, 제한하기보다는 예시하기 위한 것으로 의도되었다.
실시예
실시예 1 - 0 내지 5세 연골무형성증 환자에서 CNP 변이체의 2상 시험
CNP 변이 펩티드가 연골 무형성증과 같은 골격 이형성증 증상과 어린 연골 무형성증 환자의 장골 성장 및/또는 성장 속도(치료 전 대비 치료 후 환자의 기립 신장 증가율로 측정)에 미치는 영향을 확인하기 위해, 임상 근거가 있고 유전자 검사로 확인된 2세 미만(포함) 및 2 내지 5세 연골 무형성증(ACH) 소아를 대상으로 용량 연구가 실시되었다.
본원에 기술된 바와 같은 CNP 변이 펩티드를 포함하는 제형물을 투여하기 전. 보다 구체적으로, Pro-Gly-CNP-37 펩티드는 0.28mg/ml 구연산 일수화물, 1.08mg/ml 구연산 나트륨 이수화물, 58.01mg/ml 트레할로스 이수화물, 15mg/ml D-만니톨, 0.73mg/ml L-메티오닌 및 0.05mg/ml 폴리소르베이트 80, pH 5.5를 조합하여 2.0mg/ml CNP 펩티드를 포함하는 멸균, 무보존제 조성물로 제형화되었다. 이 액체 조성물은 설명된 성분을 포함하는 원래의 동결건조된 제형물로부터 재구성되었으며 멸균, 일회용, 유형 I 미처리 보로실리케이트 투명 유리 바이알에 공급되었다. 이 재구성된 액체 제형물은 본원에 기술된 모든 인간 임상 치료 연구에 사용되었다.
ACH가 있는 어린 소아에서 매일 보소리티드 SC 주사의 안전성 및 효능을 평가하기 위해 0 내지 5세를 대상으로 한 무작위, 이중맹검, 위약-대조, 글로벌, 다기관 2상 임상시험이 진행되었다(연구 111-206 및 연장 연구 111-208).
코호트 1 - 24개월령 이상 60개월령 미만의 소아(총 30명 이상: 보소리티드를 투여받는 감시 대상체 3명, 및 치료 또는 위약 대조군으로 1:1 무작위 배정된 적어도 27명의 추가 대상체), 연령별로 계층화(24개월 이상 36개월 미만, 및 36개월 이상 60개월 미만)함. 모든 대상체 코호트 1: 15μg/kg/일 피하 주사(모든 대상체)
코호트 2 - 6개월령 이상 24개월령 미만의 소아(총 20명 이상: 보소리티드를 투여받는 감시 대상체 3명, 치료 또는 위약 대조군으로 1:1 무작위 배정된 적어도 17명의 추가 대상체), 연령별로 계층화(6개월 이상 15개월 미만, 및 15개월 이상 24개월 미만)함. 해당 코호트의 모든 대상체는 30μg/kg/일로 치료받다가 대상체가 2세가 되면 15μg/kg/일로 조정된다.
코호트 3 - 0개월령 내지 6개월령 미만 소아(총 20명 이상: 보소리티드를 투여받는 감시 대상체 3명, 치료 또는 위약 대조군으로 1:1 무작위 배정된 적어도 17명의 추가 대상체). 치료는 3개월 관찰 후 3개월 이상 6개월 미만에서 개시한다.
코호트 1 및 2 대상체는 스크리닝 직전에 반드시 적어도 6개월의 치료 전 성장 평가 기간을 거쳐야 하며, 111-206에 대한 스크리닝 방문 전 최소 6개월 동안 신장/신체 길이에 대한 문서화된 측정을 1회 받아야 한다. 코호트 3 대상체는 반드시 치료 전 최소 3개월의 관찰을 가져야 한다. 해당 관찰 기간은 (1) 또 다른 관련 연구에 사전 등록을 통해 또는 (2) 치료 시작 전 최소 3개월 동안 비치료 관찰 동안 해당 111-206에 등록을 통해 확보될 수 있다.
1차 평가변수에는 52주차의 길이/신장 Z-점수 및 이상 반응 평가가 포함된다. 2차 평가변수는 52주차의 AGV, 하지의 양측 X선, 요추 X선, 전신 및 척추의 DXA, AUC0-∞, AUC0-t, Cmax, Tmax, t1/2, CL/F, Vz/F, Hip 모니터링 임상 평가, Bayley-III, WeeFIM 및 ITQOL 점수, CBCL 점수, 항-보소리티드 총 항체(TAb), 내인성 CNP, ANP 및 BNP와의 항-보소리티드 항체 교차 반응성(TAb), 항-보소리티드 중화항체(NAb), CXM 및 골-특이성 알칼리성 포스파타제, 콜라겐 II형(CTX-II), 사이클릭 구아노신 모노포스페이트염(cGMP), 인체 측정, 상하체 분절 비율, 윗팔 길이 대 아랫팔(전완) 길이 비율, 윗 다리 길이(허벅지) 대 무릎에서 발뒤꿈치 길이 비율, 윗 다리 길이(허벅지) 대 경골 길이 비율, 팔 길이 대 기립 신장 비율을 포함한다.
탐색적 영상 평가 데이터는 척추, 장골 및 사지의 측정 및 형태뿐만 아니라 성장판, 골 연령 및 골밀도 측정을 포함했다. 검정은 기준선 고관절 평가를 위한 골반의 전후방(AP) X선; 골 연령을 평가하기 위한 왼손 및 손목의 후방-전방(PA) 방사선 사진(Greulich, 1971, Stanford University Press.); (Tanner, 1975, Academic Press.), 성장판, 손 길이 및 피질 두께; 성장판, 경골 길이, 피질 두께 및 휘어짐을 평가하기 위한 AP 하지 방사선 사진, 가로 추간 거리를 평가하기 위한 요추의 AP 방사선 사진 촬영이 포함된다. 흉요추 전만 각도, 척추 형태 및 척추 협착증과 관련된 기타 잠재적인 변화를 평가하기 위한 요추의 측면 방사선 사진, 골밀도, 성장판 형태 및 골 길이를 평가하기 위한 팔뚝 및 경골의 QCT 스캔이 수행된다. 해당 스캔은 머리와 몸통에 대한 직접적인 방사선을 피하는 사전 결정된 저선량 프로토콜을 사용하여 표준 CT 스캐너, 보정 팬텀 및 지정된 소프트웨어를 사용하여 획득될 수 있다.
팔꿈치 관절 운동 범위의 굴곡-신전 측정은 각도계를 사용하여 측정된다.
바이오마커는 기준선으로부터의 변화에 의해 평가되며 연골 교체(CTX-II), 연골세포 및 조골세포 활성(골 특이적 알칼리성 포스파타제), 골 형성(P1NP), 골 교체(오스테오칼신)에 대한 평가; CNP 생체활성 마커(cGMP, NT- proCNP 및 ANP)뿐만 아니라 추가 바이오마커를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 콜라겐과 골 교체의 혈액 및 소변 생화학적 지표와 CNP 활성 지표에 대한 검체는 지정된 시점에 수집된다.
이상 반응. 상기 기술된 각 코호트의 모든 환자는 CNP 변이 펩티드 치료로 인해 특별히 발생된 이상 반응(이상 반응에 대한 공통 용어 기준(CTCAE)(버전 5.0 발행일: 2017년 11월 27일)에 정의된 바와 같음)의 유무에 대해 정기적으로 평가받았다. 임의의 3개의 연구 코호트 중 어떤 환자도 연구 약물과 관련이 있는 것으로 결정된 2등급 이상의 이상 반응을 보이지 않았으며, 이는 연골무형성증 환자를 CNP 변이 펩티드로 치료해도 심각한 생리적 이상 반응이 발생하지 않음을 입증한다.
각 연구 코호트의 모든 환자는 혈중 헤모글로빈 농도, 혈소판 수, 혈중 전해질 농도, 혈중 요소질소 농도, 혈중 크레아티닌 농도, 혈중 알칼리성 포스파타제 농도, 혈중 알라닌 아미노전달효소 농도 및 혈중 아스파테이트 아미노전달효소 농도를 정기적으로 모니터링 받는다.
기립 신장에 대한 각 측정값은 질병통제센터(CDC)의 평균 신장 아동에 대해 제공되는 참조 데이터와 비교하여 신장 Z-점수라고도 하는 연령 및 성별에 적합한 표준 편차 점수(SDS)로 변환되었다. 신장 Z-점수, 및 26주차와 52주차 기준선으로부터의 변화가 코호트별 및 전체별로 감시 대상체에 대해 요약되어 제시되었다.
AGV, 상하체 분할 비율, 기립 신장 및 앉은 신장은 신장 Z-점수와 유사하게 요약되었다. 감시 대상체에 대한 결과는 코호트별 및 전체로 요약되었다. 기타 인체 측정 측정값(앉은 신장, 머리 둘레 등)을 각 시점에 요약하고 기준선으로부터의 변화를 평가했다. 어린 대상체의 경우 기립 신장 대신 신체 길이를 측정하여 분석에 사용했다. 마찬가지로 앉은 신장 대신 정수리부터 엉덩이까지의 높이를 측정했다.
44명의 대상체가 111-206 연구에 등록하여 치료를 받았고, 코호트 1에는 감시 대상체 4명과 무작위 배정 대상체 31명이, 코호트 2에는 감시 대상체 4명과 무작위 배정 대상체 16명이 포함되었다. 코호트 3에는 감시 대상체 3명과 무작위 대상체 4명이 포함되었다. 첫 번째 평가 기간에 코호트 1에서는 4명의 감시 대상체가 52주간의 치료를 완료했으며, 무작위 배정 대상체 26명 전원이 13주차 방문을 완료하고 9명의 무작위 배정 대상체가 39주차 방문을 완료했다. 코호트 2에서는 2명의 감시 대상체가 26주차 방문을 완료했다. 데이터 종료일 당시 연구 약물 또는 111-206 연구를 중단한 대상체는 없었다. 이후 평가 기간에 67명의 대상체가 등록되었고, 치료받은 37명의 대상체 모두 안전성 분석 집단과 1차 효능 분석 집단으로 간주되는 전체 분석 세트(FAS)에 포함되었다. 또한, 연구 206과 연구 208은 모두 진행 중이며, 데이터 종료일 시점을 기준으로 무작위 배정된 대상체들은 여전히 맹검 상태였으므로 하기에 제시된 결과는 감시 대상체의 결과이다. 도 1은 연구 참여자의 인구통계학적 특성을 보여준다.
결과: 52주간의 치료
감시 대상체에 대한 결과 요약이 표 1에 제시되어 있다.
표 1. 연간 성장 속도, 신장 Z-점수 및 신체 비율의 기준선 대비 변화(감시 대상체)
평균±SD, 2명 이하 대상체에 대한 개별 값, - : 측정되지 않음
AGV: 연간 성장 속도.
a) 연구 206 시작부터 기간
b) 코호트 1 및 2의 경우, 산정은 지난 6개월에 걸친 연구 901의 신장 데이터를 기반으로 했다. 코호트 3의 경우, 산정은 지난 3개월에 걸친 연구 901의 신장 데이터를 기반으로 했다.
c) 각 방문 시 AGV는 지난 12개월 동안의 신장 데이터를 사용하여 산정되었다.
기준선 대비 신장 Z-점수 변화
코호트 1 감시 대상체의 경우 평균(SD) 기준선 신장 Z-점수는 -4.51(0.33)이었다. 코호트 1 감시 대상체(N=4)의 경우, 26주차에 신장 Z-점수의 기준선으로부터의 평균(SD) 변화는 +0.15(0.19)였고 52주차에 +0.34(0.27)였다.
코호트 2 감시 대상체의 경우 평균(SD) 기준선 신장 Z-점수는 -4.72(0.53)였다. 코호트 2 감시 대상체(N=4)의 경우, 26주차 기준선 대비 평균(SD) 변화는 +0.43(0.69)이었고 52주차에는 +0.84(0.25)였다. 코호트 3의 경우, 감시 대상체의 평균(SD) 기준선 신장 Z-점수는 -4.18(0.77)이었다. 코호트 3 감시 대상체(N=3)의 경우, 26주차에 신장 Z-점수의 기준선으로부터의 평균(SD) 변화는 +0.08이었다.
기준선 대비 연간 성장 속도 변화
기준선 AGV는 코호트 1 감시 대상체의 경우 6.21cm/년, 코호트 2 감시 대상체의 경우 11.93cm/년, 코호트 3의 경우 24.78cm/년이었다. 코호트 1 감시 대상체(N=4)의 경우 26주 치료 후 기준선 대비 AGV의 평균(SD) 증가는 0.69(1.70)cm/년이었고, 치료 52주 후에 기준선 대비 AGV의 평균(SD) 증가는 0.57(0.91)cm/년이었다.
4명의 코호트 2 감시 대상체에서 26주 치료 후 기준선 대비 AGV의 평균(SD) 감소는 1.53(3.03)cm/년, 52주차의 기준선 대비 AGV 평균 감소는 2.75(1.65)cm/년이었다. 코호트 3 감시 대상체에서 26주간의 치료 후 기준선 대비 AGV의 평균(SD) 감소는 5.03cm/년이었다.
상체 대 하체 분절 비율
초기 체크포인트에서는 두 코호트 모두 시간이 지남에 따라 상체 대 하체 비율에 변화가 없었다. 코호트 1 감시 대상체(N=4)에서 기준선부터 26주차까지 상체 대 하체 분절 비율의 평균(SD) 변화는 -0.04(0.06) 및 52주차까지 -0.02(0.12)였다. 코호트 2 감시 대상체의 경우(N=2), 기준선에서 26주차까지 상체 대 하체 분절 비율의 평균(SD) 변화는 52주차에 -0.07(0.05) 및 -0.19(0.28)cm였다. 이후 체크포인트에서도 코호트 3의 경우 26주차에 -0.37의 비율 변화가 나타나 동일한 효과가 나타났다.
기립 신장과 앉은 신장
코호트 1 감시 대상체(N=4)에서 기준선 대비 기립 신장의 평균(SD) 변화는 26주차에 3.38(0.82)cm, 52주차에 6.78(1.12)cm였다. 각 대상체의 기립 신장은 치료 2년에 걸쳐 일관되게 개선된 것으로 나타났다. 기준선 대비 앉은 신장의 평균(SD) 변화는 26주차에 1.98(1.12)cm, 52주차에 4.69(0.43)cm였다.
코호트 2 감시 대상체(N=2)에서 기준선 대비 기립 신장의 평균(SD) 변화는 26주차에 5.15(1.01)cm, 52주차에 9.22(0.98)cm였다. 2명의 감시 대상체의 기준선 대비 앉은 신장의 평균(SD) 변화는 26주차에 3.70(0.19)cm였다.
기준선 대비 사지 변화의 신체 비율 및 기준선 대비 성장 측정 변화
26주차와 52주차에 신체 비율에는 임상적으로 유의미한 변화가 없었다. 모든 성장 측정(머리 둘레, 팔 길이, 윗팔 길이, 아랫팔 길이, 아래쪽 신체 길이, 윗다리 길이, 무릎에서 발뒤꿈치 길이, 경골 길이) 전반에 걸쳐 코호트 1과 2 모두에서 지속적으로 긍정적인 성장 개선이 있었다.
111-206 연구에서 매일 15μg/kg씩 52주에 걸쳐 치료한 결과, 2 내지 5세 ACH 대상체의 평균 Cmax 및 AUC0-∞는 각각 3810 내지 6860pg/mL, 118000 내지 350000pg-분/mL 범위로 더 나이든 ACH 대상체(5 내지 18세)의 15μg/kg과 대체로 일관되게 나타났다. Tmax 중앙값은 14.0분 내지 15.5분, 평균 t1/2는 15.2분 내지 29.3분 범위였다. 평균 CL/F 및 Vz/F는 각각 82.1 내지 150mL/분/kg 및 2650 내지 3800mL/kg 범위였다. 연구 111-206 코호트 1의 2세 내지 5세 미만 대상체의 노출은 15rig/kg에서 연구 111-301의 5 내지 18세 대상체의 노출과 유사함을 시사하는 증거이다.
코호트 2 감시원에 대해 동일한 용량인 15μg/kg이 사용되었다. 코호트 2의 PK 데이터 분석 결과, 원하는 노출량에 도달하기 위한 적정 용량은 30μg/kg/일로 나타났으며, 이후 3명의 감시원은 대상체가 2세에 도달할 때까지 30μg/kg/일로 용량을 늘린 후 다시 15μg/kg 용량으로 돌아갔다. 코호트 3도 같은 방식으로 평가될 것이다.
52주차의 위약 및 코호트 1 내지 3에 대한 전체 데이터 세트(FAS) 분석이 하기에 제시되어 있다.
표 2. 52주차 신장 Z-점수의 공분산 분석(전체, 코호트 1, 2 및 3))
CI: 신뢰 구간; FAS: 전체 분석 세트; SD: 표준편차
차이는 보소리티드에서 위약을 뺀 것이다. b양측 p-값. c10개의 귀속된 데이터 세트를 기반으로 함.
LS 평균과 LS 평균의 차이는 공분산 모델 분석을 통해 얻어졌다. 모델 용어는 치료, 성별, 연령층, 기준 연령, 기준 AGV 및 기준 신장 Z-점수를 포함한다.
24개월령 미만 참가자의 경우 신체 길이가 기립 신장보다 우선한다. 기준선에서 24개월령 미만, 52주차에서 24개월령 이상의 대상체는 신체 길이가 우선한다.
52주차 분석 방문 기간 내에 이용 가능한 신장 평가가 없는 경우, 52주차의 신장 Z-점수는 귀속된 신장을 기준으로 도출되었다.
표 3. 52주차 연간 성장 속도의 공분산 분석(전체, 코호트 1, 2, 3)
CI: 신뢰 구간; FAS: 전체 분석 세트; SD: 표준편차
차이는 보소리티드에서 위약을 뺀 것이다. b 양측 p-값. c10개의 귀속된 데이터 세트를 기반으로 함.
LS 평균과 LS 평균의 차이는 공분산 모델 분석을 통해 얻어졌다. 모델 용어는 치료, 성별, 연령층, 기준 연령 및 기준 AGV를 포함한다.
코호트 1 및 2의 대상체에 대해, 기준선에서의 AGV는[(기준선에서의 신장 - 기준선 6개월 전 111-901에서 마지막 신장 측정)/(기준선 날짜 - 111-901에서 6개월 동안 마지막 신장 평가 날짜)로 정의된다. 기준선 이전)] x 365.25. 코호트 3 참가자의 경우 111-901 또는 111-206의 기준선 3개월 전 신장이 대신 사용된다. 기준선 이후 방문 시 AGV는 기준선에 대해 도출되었다. 예를 들어, 52주차 AGV =[(52주차 방문 시 신장 - 기준점 방문 시 신장)/(52주차 방문 날짜 - 기준선 방문 날짜)] x 365.25.
도 2는 치료 52주차의 각 코호트에 대한 기준선 Z 점수를 나타낸다. 도 3은 52주에 걸친 각 코호트의 기준선 AGV를 나타내고 도 4는 52주 치료 후 시간 경과에 따른 신장 Z-점수의 양의 변화를 보여준다. 52주차의 전체 결과에 따르면 보소리티드(n=43)는 위약(n=32)에 비해 신장 Z-점수가 0.30 SD(95% CI 0.07, 0.54) 증가했으며 AGV는 0.92cm/년(95% CI 0.24, 1.59) 증가하고, 상하체분절비는 -0.06(95% CI -0.15, 0.03) 변화하여 악화되지 않았다. 52주차 데이터에 따르면 보소리티드 치료는 모든 코호트에서 대조군에 비해 치료받은 환자의 연간 성장 속도를 개선하고 전체 신장 Z-점수도 개선하는 것으로 나타났다.
상이한 환자 집단에서 보소리티드의 약물동력학도 분석되어 PK의 임의의 변화를 확인했다(표 4). 30μg/kg 보소리티드를 투여받은 4명의 감시 대상체와 33명의 무작위 배정 대상체(24개월령 이상 내지 60개월령 미만)의 PD 정보(혈장 cGMP 및 혈청 CXM)가 이용 가능했다.
표 4. BMN 111의 다중 피하 투여 시 약동학적 매개변수
평균±SD, tmax: 중앙값[최소, 최대], 2명 이하의 대상체에 대한 개별값, -: 미산정
Cmax: 최대혈장농도, AUC0-t: 투여 후 0시 내지 t시 혈장농도-시간 곡선 하 면적, tmax: 최대 혈장 농도에 도달하는 데 걸리는 시간, t1/2: 말기 단계의 제거 반감기, CL/F: 겉보기 전신 청소율, Vz /F: 겉보기 분포 용적
a) n=1
표 5는 각 평가 시점의 소변 cGMP/Cr의 기준선 대비 변화를 나타내고, 표 6은 혈청 CXM의 기준선 대비 시간 경과에 따른 변화를 보여준다. PD 매개변수는 코호트 1과 2의 감시 대상체에서만 분석되었다.
표 5. 각 평가 시점에서 소변 cGMP/Cr의 투약 전 대비 변화
평균±SD(n), 2명 이하 대상체의 개인값, -: 미산정, 단위: pmol cGMP/mg Cr
a) 투여 후 약 2 내지 4시간 후의 값을 이용하여 평가함.
표 6. 혈청 CXMa) 각 평가 시점에서 기준선 대비 변화
평균±SD(n), 2명 이하 대상체에 대한 개별값, -: 미산정, 단위: pg/mL
a) 혈청 CXM은 BMN 111 투여 전의 값을 사용하여 평가되었다.
투약 후 혈장 cGMP 농도의 증가가 관찰되었으며, 이는 52주 동안 일정하게 유지되었고 더 나이든 군에서 관찰된 변화와 유사했다. 보소리티드에 대한 CXM(평균 및 중앙값)은 기준선 및 위약과 비교하여 연구 전반에 걸쳐(최대 39주에 걸쳐) 혈청에서 증가했다. 그러나 보소리티드와 위약 간에는 값이 상당히 겹쳤다. 측정된 매개변수에서 높은 변동성이 나타났다.
코호트 1 대상체(24개월령 이상 내지 60개월령 미만의 보소리티드 치료된 대상체 19명, 위약 치료된 대상체 16명)에 대한 업데이트된 맹검 분석은 혈청 CXM 수준(모든 방문 및 치료당 평균)이 각 치료에서 나이가 많은 소아(즉, 111-301 연구)에서 관찰된 수치와 거의 유사하다는 것을 보여주었다.
결과: 100주 이상의 치료
100주 이상 치료받은 대상체에 대한 업데이트된 결과에서도 52주째와 유사한 결과가 나타났다. 코호트 1(N=4)의 대상체는 중앙값 978일(범위: 921 내지 1012일), 코호트 2(N=4)의 대상체는 중앙값 733.5일(범위: 706 내지 741일) 동안 보소리티드를 투여받았다. 코호트 1의 모든 감시 대상체는 111-206/208 두 연구에 걸쳐 적어도 130주 동안, 코호트 2의 경우 104주차까지 치료를 추적 관찰했으며, 코호트 2의 한 대상체는 데이터 종료일 이후에 방문이 예정되어 있어 104주차 방문 시 신장 평가가 이루어지지 않았음에 유의해야 한다.
신장 Z-점수
코호트 1 감시원에서는 보소리티드 치료를 통해 2.5년에 걸쳐 신장 Z-점수로 평가한 신장 결손의 감소가 지속되었다. 104주차에 감시 대상체 세 명 중 두 명은 신장 Z-점수에서 +0.77 SDS 및 +0.86 SDS의 개선을 보인 반면, 나머지 두 대상체는 +0.27 SDS(78주차) 및 +0.20 SDS의 개선이 나타났다. 코호트 1은 52주차(N=4)에 +0.34(0.27) 표준편차점수(SDS), 104주차(N=3)에 +0.62(0.36) SDS, 및 130주차(N=4)에 +0.49(0.34) SDS의 기준선 대비 평균(표준편차[SD]) 변화를 나타냈다. 코호트 2 감시원의 경우, 52주차(N=4)에 신장 Z-점수의 기준선 대비 평균(SD) 변화는 +0.84(0.25) SDS였으며 104주차(N=3)에 기준선 대비 평균(SD) 변화는 +0.69(0.55) SDS로 유지되었다.
AGV
코호트 1 감시원에서 기준선의 평균(SD) AGV는 6.21(1.73) cm/년이었다. 2명의 대상체에서 104주차 및 1명의 대상체에서 78주차의 AGV는 기준선의 AGV보다 높았으며, 104주차에 네 번째 대상체에서는 약간의 감소만 나타났다. AGV가 감소한 대상체는 기준선 AGV가 높았고 코호트에서 가장 어렸으며, AGV의 감소한 것은 대상체가 성장 감소의 더 가파른 곡선에 속했기 때문일 가능성이 높다. 111-206 내 치료 첫 해의 평균(SD) AGV는 6.78(1.00)cm/년으로 유지되었고, 111-208 내 치료 2년차에는 5.85(0.39)cm/년이었다. 코호트 2 감시원에서 기준선의 평균(SD) AGV는 11.93(1.32)cm/년이었고, 치료 첫 해에는 9.17(1.06), 치료 2년차에는 6.55(0.38)였다. AGV의 이러한 감소는 치료를 받지 않은 같은 연령대의 ACH 아동에서 예상되는 것만큼 두드러지지 않아 보소리티드가 성장 속도에 긍정적인 영향을 미쳤음을 보여준다.
기립 신장/신체 길이
코호트 1 감시원의 경우 104주차에 각 대상체의 상체 대 하체 분절 비율이 지속적으로 감소한 것으로 나타났다. 52주차에서 기준선 대비 기립 신장의 평균(SD) 증가는 6.78(1.12)cm, 104주차에는 12.91(1.61), 130주차에는 15.28(1.39)cm였다. 코호트 2 감시원에서 기준선 대비 기립 신장의 평균(SD) 변화는 52주차에 9.22(0.98)cm였고 104주차에 15.76(1.42)였다.
상체 대 하체 비율
코호트 1 감시원에서는 치료가 진행됨에 따라 상체 대 하체 분절 비율이 감소했으며, 52주차에 기준선 대비 비율의 평균(SD) 변화는 -0.02(0.12), 104주차(N=3)에 -0.19(0.10), 130주차(N=4)에 -0.19(0.14)로 나타났다. 코호트 2 감시원의 경우, 52주차(N=4)에 상체 대 하체 분절 비율의 평균(SD) 감소는 -0.19(0.28)였으며 104주차(N=3)에 더 감소하여 기준선 대비 평균(SD) 변화는 -0.33(0.20)으로 나타났다.
생물학적/역학적 고려 사항에 따르면, 보소리티드는 성장판이 열려 있는 한 모든 ACH 환자에게 유리한 효과를 발휘할 것으로 예상되지만, 성장 잠재력이 더 높은 어린 환자에게는 연령이 많은 소아보다 클 가능성이 높다.
상기에서 기술된 인간 임상 데이터를 기반으로 소아 및 유아 연골무형성증 환자에게 30μg/kg/일의 용량을 매일 피하 투여하여 상기에서 기술한 대로 효능과 안전성을 테스트할 예정이다. 이러한 투여 레지멘은 인간 환자의 연골무형성증 치료에 효과적이고 안전할 것으로 충분히 기대된다.
본원에 기술된 실시양태 및 예시적인 실시예에 명시된 바와 같이, 당업자에게는 본 개시 내용에 대한 다양한 수정 및 변형이 이루어질 것으로 예상된다. 따라서 본 개시내용에는 첨부된 청구범위에 나타나는 해당 제한사항만이 적용되어야 한다.

Claims (22)

  1. 2세 미만 또는 약 2세인 대상체의 골격 이형성증을 치료하는 방법으로서, C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물을 대상체의 골격 이형성증을 치료하는데 유효한 양으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 CNP 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
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  2. 2세 미만 또는 약 2세인 대상체에서 장골 성장을 증가시키는 방법으로서, C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물을 장골 성장을 증가시키는데 유효한 양으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 CNP 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
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  3. 2세 미만 또는 약 2세인 대상체에서 성장 속도를 증가시키는 방법으로서, C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물을 대상체의 성장 속도를 증가시키는데 유효한 양으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하며, 여기서 CNP 변이체는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
    GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP53)(서열번호: 2);
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    DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-53(M48N)](서열번호: 5);
    LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-52)(서열번호: 6); RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-51)(서열번호: 7); VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-50)(서열번호: 8); DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-49)(서열번호: 9); TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-48)(서열번호: 10); KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-47)(서열번호: 11); SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-46)(서열번호: 12); RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-45)(서열번호: 13); AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-44)(서열번호: 14); AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-43)(서열번호: 15);WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-42)(서열번호: 16); ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-41)(서열번호: 17); RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-40)(서열번호: 18); LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-39)(서열번호: 19); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24); NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-33)(서열번호: 25); ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-32)(서열번호: 26); RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-31)(서열번호: 27); KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-30)(서열번호: 28); YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-29)(서열번호: 29); KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-28)(서열번호: 30); GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-27)(서열번호: 31); ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-26)(서열번호: 32); NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-25)(서열번호: 33); KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-24)(서열번호: 34); KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-23)(서열번호: 35);
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    SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-20)(서열번호: 37);
    KGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-19)(서열번호: 38);
    GCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-18)(서열번호: 39); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP37(M32N)(서열번호: 40); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP37)(서열번호: 41); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP37)(서열번호: 42); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP37)(서열번호: 43);
    GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP37(M32N)](서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP37)(서열번호: 45); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(HSA-CNP27)(서열번호: 46); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[HSA-CNP27(M22N)](서열번호: 47); PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-HSA-CNP27)(서열번호: 48); MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-HSA-CNP27)(서열번호: 49); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[CNP27(K4,5,9R)])(서열번호: 50); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 51); PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 52); MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 53); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 54); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 55); PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 56); PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 57); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 58); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 59); PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 60); PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 61); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 62); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 63); PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 64); 및 PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 65).
  4. 제3항에 있어서, 성장 속도의 증가는 상기 대상체의 기립 신장이 기준선보다 적어도 25% 초과하는 것으로 측정된 연간 성장 속도의 증가이거나, 여기서 성장 속도의 증가는 상기 대상체의 기립 신장이 기준선보다 적어도 40% 초과하는 것으로 측정된 연간 성장 속도의 증가인, 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 성장 속도의 증가는 기립 신장, 앉은 신장, 체중, 머리둘레, 윗팔 길이, 아랫팔 길이, 윗다리 길이, 아랫다리 길이, 손 길이 또는 발 길이를 측정하여 평가되는, 방법.
  6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체의 혈중 헤모글로빈 농도, 혈소판 수, 혈중 전해질 농도, 혈중 요소질소 농도, 혈중 크레아티닌 농도, 혈중 알칼리성 포스파타제 농도, 혈중 알라닌 아미노전달효소 농도 또는 혈중 아스파테이트 아미노전달효소 농도에 임상적으로 유의미한 변화를 초래하지 않는, 방법.
  7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) -0.05 내지 0.05의 상체 길이 대 하체 길이 비율의 변화;
    (b) -0.05 내지 0.05의 윗팔 길이 대 전완 길이 비율의 변화; 및/또는
    (c) -0.05 내지 0.05의 윗다리 길이 대 아랫다리 길이 비율의 변화
    를 초래하는, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 상기 조성물은 1일 1회 투여되고;
    (b) 상기 조성물은 적어도 6개월의 기간에 걸쳐 1일 1회 투여되거나;
    (c) 상기 조성물은 적어도 12개월의 기간에 걸쳐 1일 1회 투여되는,
    방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 피하 투여를 통해 대상체에게 투여되는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 매일, 격일, 주 3회, 주 2회, 또는 주 1회 투여되는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 30μg/kg의 용량으로 투여되는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 약 6개월령 내지 약 2세인, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 약 0개월령 내지 약 6개월령인, 방법.
  14. 제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 2세일 때 투여량이 15μg/kg으로 감소될 수 있는, 방법.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 골격 이형성증은 저인산혈증 구루병, 연골무형성증, 연골저형성증, 저신장증, 왜소증, 골연골이형성증, 치사성 이형성증, 골형성부전증, 연골무발생증, 점상 연골형성부전증, 동형접합성 연골형성부전증, 굴지 이형성증, 선천성 치사성저인산증, 주산기 치사형 골형성부전증, 단늑골 다지 증후군, 연골저형성증, 점상연골 이형성증, 얀센형 골간단 이형성증, 선천척추골단이형성증, 아테로스테오생성, 이영양성 이형성증, 선천성 단발성 대퇴골, 랭거형 전완부이형성증, 니에버겔트형 전완부이형성증, 로비노 증후군, 라인하르트 증후군, 선단이골증, 말단 이골증, 니스트 이형성증, 섬유연골형성, 로버츠 증후군, 전완하퇴말단 이형성증, 소지증, 모르퀴오 증후군, 니스트 증후군, 영양위축성 이형성증, 척추골단골간단 이형성증, NPR2 돌연변이, SHOX 돌연변이(터너 증후군/레리 웨일), PTPN11 돌연변이(누난 증후군) 및 특발성 저신장으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  16. 제9항에 있어서, 골격 이형성증이 연골무형성증인, 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물이 하나 이상의 약학적 부형제를 추가로 포함하는, 방법.
  18. 제17항에 있어서, 조성물이 구연산 일수화물, 구연산나트륨 이수화물, 트레할로스 이수화물, D-만니톨, L-메티오닌 및 폴리소르베이트 80을 포함하는, 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, CNP 변이체가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP-37)(서열번호: 1); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP-37)(서열번호: 43); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-37(M32N)](서열번호: 40); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP-37)(서열번호: 42); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP-37)(서열번호: 41); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP-37(M32N)(서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP-37)(서열번호: 45);
    QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); 및 PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24).
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, CNP 변이체가 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP-37)(서열번호: 1); 및 LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20).
  21. 2세 미만의 대상체에서 골격 이형성증을 치료하는데 사용하기 위한 C형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 조성물로서, 상기 CNP 변이 펩티드는 대상체에게 약 30μg/kg의 양으로 투여되고 하기로 이루어진 군에서 선택되는, 조성물:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
    GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP53)(서열번호: 2);
    PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP53)(서열번호: 3);
    MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP53)(서열번호: 4);
    DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-53(M48N)](서열번호: 5);
    LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-52)(서열번호: 6); RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-51)(서열번호: 7); VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-50)(서열번호: 8); DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-49)(서열번호: 9); TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-48)(서열번호: 10); KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-47)(서열번호: 11); SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-46)(서열번호: 12); RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-45)(서열번호: 13); AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-44)(서열번호: 14);
    AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-43)(서열번호: 15); WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-42)(서열번호: 16); ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-41)(서열번호: 17); RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-40)(서열번호: 18); LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-39)(서열번호: 19); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24); NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-33)(서열번호: 25); ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-32)(서열번호: 26); RKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-31)(서열번호: 27); KYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-30)(서열번호: 28); YKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-29)(서열번호: 29); KGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-28)(서열번호: 30); GANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-27)(서열번호: 31); ANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-26)(서열번호: 32); NKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-25)(서열번호: 33); KKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-24)(서열번호: 34); KGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-23)(서열번호:35); LSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-21)(서열번호: 36);
    SKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-20)(서열번호: 37);
    KGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-19)(서열번호: 38);
    GCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-18)(서열번호: 3* );
    QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP37(M32N)(서열번호: 40); PQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP37)(서열번호: 41); MQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP37)(서열번호: 42);
    GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP37)(서열번호: 43); GQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[Gly-CNP37(M32N)](서열번호: 44); MGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-Gly-CNP37)(서열번호: 45); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(HSA-CNP27)(서열번호: 46); GHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[HSA-CNP27(M22N)](서열번호: 47); PGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-HSA-CNP27)(서열번호: 48); MGHKSEVAHRFKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-HSA-CNP27)(서열번호: 49); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 50); GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 51); PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 52); MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 53); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 54); PEG1K-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEG1K-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 55); PEG1K-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 56); PEG1K-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEG1K-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 57); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 58); PEO12-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO12-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 59); PEO12-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 60); PEO12-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO12-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 61); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 62); PEO24-GANRRGLSRGCFGLKLDRIGSNSGLGC[PEO24-CNP27(K4,5,9R, M22N)](서열번호: 63); PEO24-PGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Pro-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 64); 및 PEO24-MGANRRGLSRGCFGLKLDRIGSMSGLGC[PEO24-Met-CNP27(K4,5,9R)](서열번호: 65).
  22. 2세 미만의 대상체에서 골격 이형성증을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 C-형 나트륨이뇨 펩티드(CNP) 변이체를 포함하는 제형물의 용도로서, 상기 CNP 변이 펩티드는 대상체에게 약 30μg/kg의 양으로 투여되며 하기로 이루어진 군에서 선택되는, 제형물의 용도:
    PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-Gly-CNP37)(서열번호: 1);
    GDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Gly-CNP53)(서열번호: 2);
    PDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Pro-CNP53)(서열번호: 3);
    MDLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(Met-CNP53)(서열번호: 4);
    DLRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSNSGLGC[CNP-53(M48N)](서열번호: 5);
    LRVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-52)(서열번호: 6); RVDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-51)(서열번호: 7); VDTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-50)(서열번호: 8); DTKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-49)(서열번호: 9); TKSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-48)(서열번호: 10); KSRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-47)(서열번호: 11); SRAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-46)(서열번호: 12); RAAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-45)(서열번호: 13); AAWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-44)(서열번호: 14); AWARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-43)(서열번호: 15); WARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-42)(서열번호: 16); ARLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-41)(서열번호: 17); RLLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-40)(서열번호: 18); LLQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-39)(서열번호: 19); LQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-38)(서열번호: 20); QEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-37)(서열번호: 21); EHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-36)(서열번호: 22); HPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-35)(서열번호: 23); PNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-34)(서열번호: 24); NARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-33)(서열번호: 25); ARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC(CNP-32)(서열번호: 26);
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