TW202313082A - 大葉欖仁萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途 - Google Patents

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林詠翔
林曉鼐
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大江生醫股份有限公司
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一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途，其係關於大葉欖仁萃取物用於製備抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的組合物的用途。

Description

大葉欖仁萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途
本發明關於一種大葉欖仁萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途，特別是涉及一種大葉欖仁萃取物用於製備抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的組合物的用途。
自有機及/或天然的飲食概念興起後，生技公司及食品業者積極投入關於天然植物的相關產品之研發。為使植物相關產品對身體健康助益有科學驗證的基礎，植物的活性成分分析及功效評估成為產品開發的重點項目。
大葉欖仁（ Terminalia catappa）是一種熱帶島嶼獨有的特殊植物，為一落葉大喬木，株高約為 15~25公尺。於秋季或冬季落葉前，大葉欖仁的葉片會轉變為黃色、棕色或紫紅色。大葉欖仁對於外在環境具有極高耐受性，不僅耐旱、抗風、耐鹽性也極強，因此非常適合喜歡生長在高溫濕潤而光線充足的砂質土壤熱帶島嶼上。並且，成熟轉黃、棕或紅的大葉欖仁葉，含有極高量的單寧酸。因此，生技公司及食品業者積極研究大葉欖仁的活性成分分析及功效評估並據以開發成為相關產品。
在一些實施例中，一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物用於製備抗痘組合物的用途。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以減少肌膚發炎所致的痘痘。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌（ Propionibacterium acnes）來改善肌膚紫質。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以抑制及/或減少肌膚油脂量。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留。
在一些實施例中，一種大葉欖仁萃取物用於製備抗菌組合物的用途。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌。
在一些實施例中，一種大葉欖仁萃取物用於製備抗發炎組合物的用途。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以抑制角質細胞發炎。
在一些實施例中，一種大葉欖仁萃取物用於製備提升肌膚質感的組合物的用途。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以提升肌膚光澤。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以減少肌膚斑點。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以減少肌膚泛紅。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物用以抑制黑色素生成。
在一些實施例中，前述的大葉欖仁萃取物是以一溶劑對一大葉欖仁葉進行萃取而得。
在一些實施例中，前述的大葉欖仁葉為大葉欖仁紅色葉子。
綜上，任一實施例的大葉欖仁萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途是涉及一種大葉欖仁萃取物用於製備抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的組合物的用途，從而提供在施予一個體上時能在此個體上產生抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的作用的組合物。換言之，前述之組合物具有抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的功能。在一些實施例中，大葉欖仁萃取物所製得的組合物還具有下列功能中的一種或多種功能：減少肌膚發炎所致的痘痘、透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成、抑制及/或減少肌膚油脂量、透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留、抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌、抑制角質細胞發炎、提升肌膚光澤、減少肌膚斑點、減少肌膚泛紅、及抑制黑色素生成。在一些實施例中，大葉欖仁萃取物所製得的組合物能透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌來改善肌膚紫質。
以下將描述本案的部分具體實施態樣。在不背離本案精神下，本案尚可以多種不同形式之態樣來實踐，不應將保護範圍限於說明書所具體陳述的條件。
於本文中，在提及含量時所使用的含量單位「%」通常是指重量百分比。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物是以大葉欖仁（ Terminalia catappa）進行一萃取程序所得。
在一些實施例中，在萃取程序中，進行萃取的大葉欖仁可為大葉欖仁的植株、根、莖、葉、或花。在一些實施例中，進行萃取的大葉欖仁為黃色的大葉欖仁葉、棕色的大葉欖仁葉或紅色的大葉欖仁葉。在一些實施例中，進行萃取的大葉欖仁可為成熟轉黃的大葉欖仁葉、成熟轉棕的大葉欖仁葉或成熟轉紅的大葉欖仁葉。舉例來說，在萃取程序中，利用溶劑對大葉欖仁紅色葉子進行萃取。在一些實施例中，進行萃取的大葉欖仁可為自然掉落的落葉。
在一些實施例中，在萃取程序中，進行萃取的大葉欖仁可為原材料（如，完整的紅色葉子），或為經物理前處理而分解成碎片、顆粒或粉末等細小尺寸的型態。採用的物理前處理可包括下列至少一種：粗碎、切碎、剪碎、搗碎、及研磨。
在一些實施例中，在萃取程序中，進行萃取的大葉欖仁可為剛拾取並收集的大葉欖仁、乾燥後的大葉欖仁或冷凍過的大葉欖仁。舉例來說，在萃取程序中，利用溶劑對乾燥後的大葉欖仁進行萃取。
在一些實施例中，在萃取程序中，以水於70℃-100℃下萃取大葉欖仁1小時至3小時以得到初萃取液。舉例來說，可將大葉欖仁浸泡在85±5℃水中60分鐘，使大葉欖仁中的效性成分溶解至水中而得到初萃取液。
在一些實施例中，在萃取程序中，水與大葉欖仁的重量比為15-30:1。舉例來說，水與大葉欖仁的重量比為15:1。在另一些實施例中，水與大葉欖仁的重量比為30:1。
在一些實施例中，在萃取程序中，初萃取液可進一步進行過濾，以去除經水萃取後的大葉欖仁等固體而得到濾液。舉例來說，初萃取液可以400目數的濾網進行過濾，以去除固體，並收集濾出的濾液。
在一些實施例中，在萃取程序中，濾液還可進一步進行濃縮以得到濃縮液。在一些實施例中，濾液可在45℃-70℃下進行減壓濃縮，以得到濃縮液。舉例來說，濾液可在60℃±5℃下進行減壓濃縮。在一些實施例中，可通過濃縮液所具有白利糖度值（Degrees Brix；°Bx）來決定進行濃縮的時長，但不限於此。承前例，所得的濃縮液的白利糖度值為3±0.5。換言之，濾液可在60℃±5℃下進行減壓濃縮至減壓濃縮後的濾液具有3±0.5°Bx，而此時的減壓濃縮後的濾液即為濃縮液。在一些實施例中，在萃取程序中，初萃取液亦可先進行濃縮，然後再進行過濾。
在一些實施例中，在萃取程序中，濃縮液可進一步過濾以得到濃縮過濾液。
應能理解的是，可依實際需求以萃取程序所得的初萃取液、濾液、濃縮液或濃縮過濾液作為大葉欖仁萃取物。
在一些實施例中，前述的大葉欖仁萃取物具有抗痘的能力。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抗痘的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有減少肌膚發炎所致的痘痘的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能減少此個體肌膚發炎所致的痘痘。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備減少肌膚發炎所致的痘痘的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能改善此個體肌膚紫質進而減少痘痘生成。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌（ Propionibacterium acnes）來改善肌膚紫質的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制及/或減少此個體痤瘡丙酸桿菌進而改善肌膚紫質。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌來改善肌膚紫質的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抑制及/或減少肌膚油脂量的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制及/或減少此個體肌膚油脂量。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抑制及/或減少肌膚油脂量的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制此個體黑色素生成進而減少痘疤殘留。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抗菌的能力。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抗菌的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制及/或減少此個體痤瘡丙酸桿菌。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抗發炎的能力。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抗發炎的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抑制角質細胞發炎的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制此個體角質細胞發炎。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抑制角質細胞發炎的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有提升肌膚質感的能力。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備提升肌膚質感的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有提升肌膚光澤的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能提升此個體肌膚光澤。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備提升肌膚光澤的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有減少肌膚斑點的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能減少此個體肌膚斑點。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備減少肌膚斑點的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有減少肌膚泛紅的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能減少此個體肌膚泛紅。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備減少肌膚泛紅的組合物。
在一些實施例中，大葉欖仁萃取物具有抑制黑色素生成的能力。換言之，大葉欖仁萃取物施予一個體時能抑制此個體黑色素生成。因此，大葉欖仁萃取物適用於製備抑制黑色素生成的組合物。
在一些實施例中，前述的個體可為人。
在一些實施例中，在前述的組合物中，大葉欖仁萃取物的含量為1%。
在一些實施例中，製備得的組合物可為醫藥組合物、食品組合物、化妝品組合物或保養品組合物。
在一些實施例中，當前述的組合物為醫藥組合物時，此醫藥組合物包含有效含量的大葉欖仁萃取物。其中，此醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於經腸道地、非經腸道地（parenterally）、口服地（orally）、或局部地（topically）投藥劑型。
在一些實施例中，經腸道或口服地投藥劑型可為，但不限於，錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）或類似之物。
在一些實施例中，非經腸道地或局部地投藥劑型可為，但不限於，注射品（injection）[例如，無菌的水性溶液（sterile aqueous solution）或分散液（dispersion）]、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）或類似之物。
在一些實施例中，注射品的投藥方式可為，但不限於，腹膜內注射（intraperitoneal injection）、皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）、肌肉內注射（intramuscular injection）、靜脈內注射（intravenous injection）或病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，含有有效含量的大葉欖仁萃取物的醫藥組合物可進一步包含被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑可為下列載劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。其中，作為醫藥上可接受的載劑的溶劑可為水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝液（phosphate buffered saline，PBS）或含有醇的水性溶液（alcohol containing aqueous solution）。
在一些實施例中，含有有效含量的大葉欖仁萃取物的醫藥組合物可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑（external preparation）。在一些實施例中，外部製劑包括，但不限於：乳劑（emulsion）、凝膠（gel）、軟膏（ointment）、乳霜（cream）、貼片（patch）、擦劑（liniment）、粉末（powder）、氣溶膠（aerosol）、噴霧（spray）、乳液（lotion）、乳漿（serum）、糊劑（paste）、泡沫（foam）、滴劑（drop）、懸浮液（suspension）、油膏（salve）以及繃帶（bandage）。
在一些實施例中，當前述的醫藥組合物為外部製劑時，此醫藥組合物可由有效含量的大葉欖仁萃取物與為熟習此項技藝者所詳知的一基底（base）相混合而製成。
在一些實施例中，此基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑（additives）：水、醇（alcohols）、甘醇（glycol）、碳氫化合物（hydrocarbons）[諸如石油膠（petroleum, jelly）以及白凡士林（white petrolatum）]、蠟（wax）[諸如石蠟（paraffin）以及黃蠟（yellow wax）]、保存劑（preserving agents）、抗氧化劑（antioxidants）、界面活性劑（surfactants）、吸收增強劑（absorption enhancers）、安定劑（stabilizing agents）、膠凝劑（gelling agents）[諸如卡波普®974P （carbopol®974P）、微結晶纖維素（microcrystalline cellulose）以及羧基甲基纖維素（carboxymethylcellulose）]、活性劑（active agents）、保濕劑（humectants）、氣味吸收劑（odor absorbers）、香料（fragrances）、pH調整劑（pH adjusting agents）、螯合劑（chelating agents）、乳化劑（emulsifiers）、閉塞劑（occlusive agents）、軟化劑（emollients）、增稠劑（thickeners）、助溶劑（solubilizing agents）、滲透增強劑（penetration enhancers）、抗刺激劑（anti-irritants）、著色劑（colorants）以及推進劑（propellants）等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，當前述的組合物為食品組合物時，此食品組合物包含特定含量的大葉欖仁萃取物。其中，此食品組合物的型態可為粉末、顆粒、溶液、膠體或膏體。
在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的食品組合物可為食品產品或食品添加物（food additive）。
在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的食品產品可為飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）、健康食品（health foods）或膳食補充品（dietary supplements）等。在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的食品產品可更包括一佐劑。舉例來說，佐劑可為麥芽糖糊精（Maltodextrin）、蘋果酸、蔗糖素、檸檬酸、水果香料、蜂蜜香料、甜菊糖苷或其組合等。關於選用之載劑的種類與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的食品添加物可為調味料、甜味料、香料、pH值調整劑、乳化劑、著色料或穩定劑等。
在一些實施例中，當前述的組合物為化妝品組合物或保養品組合物。換言之，化妝品組合物或保養品組合物包含有效含量的大葉欖仁萃取物。
在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的化妝品組合物或保養品組合物可為下列任一種型態：化妝水、凝膠、凍膜、泥膜、乳液、乳霜、唇膏、粉底、粉餅、蜜粉、卸妝油、卸妝乳、洗面乳、沐浴乳、洗髮精、護髮乳、防曬乳、護手霜、指甲油、香水、精華液及面膜。
在一些實施例中，含有大葉欖仁萃取物的化妝品組合物或保養品組合物可視需要更包含外用品可接受成分。在一些實施例中，外用品可接受成分例如可為乳化劑、滲透促進劑、軟化劑、溶劑、賦型劑、抗氧化劑、或其組合。
下列範例中若無特別敘明，所進行的實驗步驟是在室溫（25℃-30℃）且常壓（1 atm）下進行。
例一
A. 原料：
1. 乾燥後的大葉欖仁 （ Terminalia catappa）的紅色葉子（產地：台灣），以下簡稱「大葉欖仁葉」。
2. 二次水，又稱RO水（逆滲透；Reverse Osmosis）或二次蒸餾水，以下簡稱「水」。
B. 製備流程：
1. 將水加熱至85±5℃後，投入大葉欖仁葉，並且使大葉欖仁葉於85±5℃的水中浸泡60分鐘，以形成含有固體的初萃取液。於此，投入的大葉欖仁葉與水的重量比為1：15。
2. 將冷卻至室溫（25℃-30℃）的初萃取液以400目數的濾網進行過濾，以去除固體（即萃取後的大葉欖仁葉），而得到濾液。
3. 將濃縮機（型號：Rotavapor R-100；廠牌：BUCHI）溫度設定為60℃±5℃後，利用濃縮機對濾液進行減壓濃縮而得到3±0.5°Bx的濃縮液，即為大葉欖仁萃取物。
例二
A. 試驗流程：
提供例一製得的大葉欖仁萃取物並委託SGS台灣檢驗科技進行檢測。此檢測流程為接種一定菌量（2.7x10 5CFU/mL）的痤瘡丙酸桿菌（ Propionibacterium acnes，ATCC編號：6919）後，添加大葉欖仁萃取物並作用30分鐘至8小時，並接著檢測作用後的痤瘡丙酸桿菌量。其中，大葉欖仁萃取物的添加量為1%(v/v)。
B. 試驗結果：
請參閱表1。相對於痤瘡丙酸桿菌的原接種的菌量，添加例1製得的大葉欖仁萃取物並作用30分鐘後，降低約25.7%的菌量；而相對於痤瘡丙酸桿菌的原接種的菌量，添加例1製得的大葉欖仁萃取物並作用8小時後，降低約96.4%的菌量。換言之，在30分鐘的作用時間下，大葉欖仁萃取物具有25.7%的滅菌率；而在8小時的作用時間下，大葉欖仁萃取物具有96.4%的滅菌率。
表1
組別 原接種的菌量 (CFU/mL) 作用時間 作用後的菌量 (CFU/mL) 滅菌率R (%)
1 2.7x10 5 30分鐘 2.0x10 5 25.7
2 8小時 9.5x10 3 96.4
由此可知，大葉欖仁萃取物能降低痤瘡丙酸桿菌量。痤瘡丙酸桿菌是一種會引起痤瘡或粉刺的病原菌。因此，大葉欖仁萃取物能夠減少及/或降低痤瘡丙酸桿菌，進而降低/抑制痘痘（痤瘡）或粉刺的生成。再者，肌膚紫質為痤瘡丙酸桿菌代謝物，因而大葉欖仁萃取物還能夠透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌來改善該肌膚紫質。
例三
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：人類初代皮膚角質細胞（Human primary epidermal keratinocytes），購自ATCC，細胞編號PCS-200-011，以下簡稱HPEK-50細胞。
2. 細胞培養基：角質細胞專用之無血清培養基（Keratinocyte-SFM），購自Gibco，產品編號10724-011。
3. 檢測套組：ELISA Kit for Interleukin 8（IL8），購自Cloud-Clone Corp.，產品編號SEA080Hu。
4. 檢測儀器：酵素免疫分析儀（ELISA reader），購自BioTek公司（美國）。
B. 試驗流程：
1. 將HPEK-50細胞以每孔5×10 4個的密度接種於每孔含500 μL的細胞培養基的24孔培養盤中，並在37 ℃下培養24小時。於此，HPEK-50細胞分為三個試驗組別，其分別為：空白組、控制組與實驗組。各組進行三重複（意即各組各有三孔）。
2. 培養24小時後，將各組更換為500 μL的實驗培養基，並於37℃下繼續培養2小時。其中，空白組及控制組的實驗培養基為不含樣本的細胞培養基，而實驗組的實驗培養基為含有0.0625%(v/v)的例一製得的大葉欖仁萃取物的細胞培養基。
3. 控制組與實驗組的HPEK-50細胞於紫外線輻射箱中於UVB（紫外光，照射能量為300 mJ）照射4.99分鐘且於37℃下繼續培養24小時。空白組的HPEK-50細胞則不施予UVB照射直接於37℃下繼續培養24小時。
4. 將培養後的各組於每孔中取出120 μL的實驗培養基，並使用ELISA Kit for Interleukin 8（IL8）測定各組HPEK-50細胞的IL-8分泌量。於此，依照ELISA Kit for Interleukin 8（IL8）所提供的試驗流程處理各組取出的實驗培養基後，利用酵素免疫分析儀測量每孔450 nm的吸光值（OD 450值）。
C. 試驗結果：
所有組別的相對IL-8分泌量係依下列公式計算：相對IL-8分泌量（%）=（各組OD 450值/空白組OD 450值）×100%。
在與控制組比較下，其他各組的相對IL-8分泌量的統計學顯著差異是以學生t檢驗（student t-test）統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與控制組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與控制組比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與控制組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖1。空白組未以UVB刺激也未使用樣本進行處理，因此空白組的試驗結果代表HPEK-50細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對IL-8分泌量為100%的情況下，控制組的相對IL-8分泌量為117.21%，而實驗組的相對IL-8分泌量為73.2%。也就是說，相對於空白組，控制組的HPEK-50細胞經由UVB刺激後，其相對IL-8分泌量顯著提升約17.21%；而相對於空白組，實驗組的HPEK-50細胞經由UVB刺激以及使用大葉欖仁萃取物進行處理後，其相對IL-8分泌量降低約26.8%。相對於控制組，空白組的HPEK-50細胞未以UVB刺激也未使用樣本進行處理，其相對IL-8分泌量顯著降低約17.21%；而相對於控制組，實驗組的HPEK-50細胞經由UVB刺激以及使用大葉欖仁萃取物進行處理後，其相對IL-8分泌量顯著降低約44.01%。
在許多生物體內，在受到環境刺激因子（例如：UVB）的刺激下，會釋放出IL-8，並引發發炎反應，因此透過IL-8的檢測，可間接地評估發炎狀態。
由實驗結果可知，大葉欖仁萃取物能明顯地降低HPEK-50細胞經由UVB刺激後所提升的IL-8分泌量，還降低到遠低於HPEK-50細胞在正常的生理代謝情況下所產生的IL-8分泌量。換言之，大葉欖仁萃取物能明顯抑制角質細胞分泌IL-8，進而降低角質細胞的發炎狀態。
因此，大葉欖仁萃取物能夠降低及/或抑制發炎狀態，並且能夠降低及/或抑制角質細胞發炎。大葉欖仁萃取物亦能夠降低及/或抑制受外在環境刺激所導致的發炎，進而能夠降低/抑制肌膚發炎所致的痘痘（痤瘡）。換言之，大葉欖仁萃取物具有抗發炎的作用。
例四
A. 材料與儀器：
1. 細胞株：小鼠黑色素瘤細胞，購自ATCC，細胞編號6475，以下簡稱B16F10細胞。
2. 細胞培養基：DMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium，購自Gibco，產品編號12800017），添加10% FBS（Fetal Bovine Serum，購自Gibco，產品編號10437-028）以及1%抗生素（購自Gibco，產品編號15240-062）。
3. 麴酸（Kojic acid），購自Sigma，產品編號K3125。
4. 1N NaOH：以水及NaOH（購自Sigma，產品編號221465）配製而成。
5. 胰蛋白酶，購自Thermo，產品編號15400054。
6. 酵素免疫分析儀（ELISA reader），購自BioTek公司（美國）。
B. 試驗流程：
1. 將B16F10細胞以每孔1.5×10 5個的密度接種於每孔含2 mL的細胞培養基的6孔培養盤中，並在37 ℃下培養24小時。於此，B16F10細胞分為三個試驗組別，其分別為：空白組、麴酸組與實驗組。各組進行三重複（意即各組各有三孔）。
2. 培養24小時後，將各組更換為2 mL實驗培養基，並於37℃下繼續培養48小時。其中，空白組的實驗培養基為不含麴酸或樣本的細胞培養基；麴酸組的實驗培養基為含有0.125%(v/v)的麴酸的細胞培養基，其中麴酸已被廣泛認知為具有降低黑色素生成效果之物質；以及實驗組的實驗培養基為含有0.125%(v/v)的例一製得的大葉欖仁萃取物的細胞培養基。
3. 移除培養後的各組的實驗培養基，並以PBS進行潤洗2次。
4. 於潤洗後，添加200 μL胰蛋白酶至各孔中反應3分鐘。反應後，添加6 mL細胞培養基以終止反應。而後收集各孔中之懸浮細胞與細胞培養基至對應的離心試管內。
5. 將各離心試管離心使細胞沉澱後，移除各組離心試管內的上清液，再以PBS清洗並懸浮沉澱細胞，然後反覆進行2次後，得到以200 μL PBS回溶的細胞懸浮液。
6. 將細胞懸浮液以液態氮冷凍10分鐘後，置於室溫約30分鐘至完全解凍。
7. 完全解凍後，將離心試管離心。而後移除離心試管內的上清液後，加入120 μL 1N NaOH至各離心試管後置於60℃的乾浴槽加熱60分鐘使黑色素溶出，以獲得各組的待檢測樣本。
8. 各組取100 μL的待檢測樣本至96孔培養盤，並利用酵素免疫分析儀測量每孔405 nm的吸光值（OD 405值）。
C. 試驗結果：
所有組別的相對黑色素含量係依下列公式計算：相對黑色素含量（%）=（各組OD 405值/空白組OD 405值）×100%。
在與空白組比較下，其他各組的相對黑色素含量的統計學顯著差異是以學生t檢驗統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與空白組比較下其p值小於0.05、「**」代表在與空白組比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與空白組比較下其p值小於0.001。
請參閱圖2。空白組未使用麴酸或樣本進行處理，因此空白組的試驗結果代表B16F10細胞在正常的生理代謝情況下的表現。於此，在設定空白組的相對黑色素含量為100%的情況下，麴酸組的相對黑色素含量為95.85%，而實驗組的相對黑色素含量為82.26%。也就是說，相對於空白組，麴酸組的B16F10細胞在添加麴酸後，其相對黑色素含量顯著降低約4.15%；而相對於空白組，實驗組的B16F10細胞在添加大葉欖仁萃取物後，其相對黑色素含量顯著降低約17.74%。相對於麴酸組，實驗組的B16F10細胞在添加大葉欖仁萃取物後，其相對黑色素含量降低約13.59%。
肌膚受到紫外線的刺激，因此激活了酪氨酸酶，進而促使黑色素生成，造成皮膚變黑。而當肌膚在發炎的狀態下直接接收紫外線讓表皮细胞受損，進而激活了酪氨酸酶，促使黑色素生成，讓肌膚產生了痘疤。
由實驗結果可知，大葉欖仁萃取物能明顯地降低B16F10細胞的黑色素含量，且大葉欖仁萃取物的降低黑色素含量的能力甚至優於麴酸。換言之，大葉欖仁萃取物有降低黑色素含量的作用。
因此，大葉欖仁萃取物能夠抑制黑色素生成，以及減少已生成的黑色素，進而有益於減少個體的黑色素的量以提升個體皮膚的通透與亮白程度。並且，大葉欖仁萃取物亦有益於透過抑制黑色素生成來減少個體的痘疤生成或痘疤殘留。
例五
A. 試驗流程：
令8位健康之成人受試者於臉部（已清潔）使用（貼敷）大葉欖仁面膜15分鐘後取下，再以指腹稍加按摩以促進吸收。
於此，大葉欖仁面膜含有92.4%水、0.6%馨鲜酮、0.6%己二醇、5% 1,3-丁二醇、0.2%三仙膠、0.1%增稠劑 U21 、0.1%三乙醇胺及1%的例一製得的大葉欖仁萃取物。
受試者於使用前（未貼敷大葉欖仁面膜之前）及使用15分鐘後進行肌膚檢測。肌膚檢測為依據不同檢測項目，使用對應的儀器及測量方式，紀錄臉部肌膚之數值、並拍攝使用前及使用15分鐘後的照片。並且，於使用前及使用15分鐘後進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對肌膚所造成的影響。
於此，肌膚檢測項目有肌膚紫質（skin porphyrin）及肌膚光澤（skin brightness）。
肌膚紫質係使用購自美國Canfield scientific公司的VISIA高階數位膚質檢測儀（VISIA Complexion Analysis System）對受試者的面部肌膚進行檢測。由於痤瘡桿菌在生長時會分泌紫質（痤瘡桿菌代謝物），而紫質在紫外線（UV光）照射中會產生螢光反應。此檢測儀係透過UV光對面部肌膚進行拍攝，並偵測肌膚紫質含量以得到可代表肌膚的紫質含量的一數值（以下稱肌膚紫質含量值）。於此，所得到的肌膚紫質含量值越高，說明肌膚紫質含量越高，痤瘡桿菌生長越旺盛，越容易產生痤瘡或粉刺。然後，再以下列公式計算出相對肌膚紫質含量：相對肌膚紫質含量（%）=（各組肌膚紫質含量值 /使用前肌膚紫質含量值）×100%。
肌膚光澤係使用德國Courage+Khazaka electronic公司的肌膚光澤度檢測探頭Glossymeter GL200 (C+K Multi Probe Adapter System，Germany)對受試者的面部肌膚進行檢測。此探頭係利用照射到肌膚表面的光的直接反射和散反射進行計算以得到可代表肌膚的光澤程度的一數值（以下稱肌膚光澤程度值）。於此，所得到的肌膚光澤程度值越高，說明肌膚光澤程度越高。然後，再以下列公式計算出相對肌膚光澤程度：相對肌膚光澤程度（%）=（各組肌膚光澤程度值 /使用前肌膚光澤程度值）×100%。
B. 試驗結果：
使用前與使用15分鐘後的檢測結果之間的統計學顯著差異是以學生t檢驗統計分析得到。於圖式中，「*」代表在與使用前比較下其p值小於0.05、「**」代表在與使用前比較下其p值小於0.01，以及「***」代表在與使用前比較下其p值小於0.001。
1.「肌膚紫質」的檢測結果
參照圖3。將8位受試者使用前的肌膚紫質含量值視為100%的相對肌膚紫質含量。受試者在使用大葉欖仁面膜15分鐘後（使用15分鐘後），其平均相對肌膚紫質含量為87.5%。換言之，相較於使用前，使用含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁面膜15分鐘後可使此些受試者的相對肌膚紫質含量減少12.5%。肌膚紫質為痤瘡桿菌代謝物，並且當痤瘡桿菌代謝物的量越多時，越容易長粉刺及/或痤瘡。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可改善肌膚紫質，進而減少受試者痘痘（痤瘡）或粉刺生成。換言之，大葉欖仁萃取物能透過改善肌膚紫質來抑制及/或減少痘痘（痤瘡）或粉刺產生。
2. 關於「肌膚光澤」的檢測結果
參照圖4。將8位受試者在使用大葉欖仁面膜前（使用前）的肌膚光澤程度值視為100%的相對肌膚光澤程度。此時，受試者在使用大葉欖仁面膜15分鐘後（使用15分鐘後），其平均相對肌膚光澤程度為108.8%。換言之，相較於使用前，使用含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁面膜15分鐘後可使此些受試者的相對肌膚光澤程度增加8.8%。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可增加肌膚光澤，並改善受試者肌膚狀況，即大葉欖仁萃取物具有提升肌膚光澤，使個體肌膚通透、明亮，進而提升肌膚質感。
例六
A. 試驗流程：
令8位健康之成人受試者於左、右臉頰分別使用相同量的安慰劑精華液、大葉欖仁精華液一次，並以指腹稍加按摩以促進吸收。於此，使用安慰劑精華液的那一側臉頰為控制組，而使用大葉欖仁精華液的那一側臉頰為實驗組。
其中，安慰劑精華液的成分為93.4%水、0.6%馨鲜酮、0.6%己二醇、5% 1,3-丁二醇、0.2%三仙膠、0.1%增稠劑 U21 及0.1%三乙醇胺。
大葉欖仁精華液的成分為92.4%水 、0.6%馨鲜酮、0.6%己二醇、5% 1,3-丁二醇、0.2%三仙膠、0.1%增稠劑 U21 、0.1%三乙醇胺及1%的例一製得的大葉欖仁萃取物。
並且，受試者分別於使用前（臉部已清潔）及使用8小時後進行肌膚檢測。於此，肌膚檢測項目為肌膚油脂（skin oil）。並且，不論是於使用前還是於使用8小時後，在進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對肌膚所造成的影響。
肌膚油脂係使用購自德國Courage+Khazaka electronic公司的肌膚油脂含量檢測探頭Sebumeter® SM815 (C+K Multi Probe Adapter System，Germany)在使用前以及使用8小時後對受試者的左臉頰與右臉頰進行檢測。此探頭係利用光度計原理，先以探頭中的試紙吸取皮膚油脂後，根據試紙透光程度計算出可代表肌膚的油脂含量的一數值（以下稱肌膚油脂含量值）。並且，得到的肌膚油脂含量值越高，說明肌膚油脂含量越高。然後，再以下列公式計算出相對肌膚油脂含量：相對肌膚油脂含量（%）=（各組肌膚油脂含量值 /使用前肌膚油脂含量值）×100%。
B. 試驗結果：
參照圖5。將8位受試者在使用前所測得的肌膚油脂含量視為100%的相對肌膚油脂含量。此時，在使用8小時後，實驗組（即使用大葉欖仁精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚油脂含量為64.2%，而控制組（即使用安慰劑精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚油脂含量為121.9%。換言之，相較於使用前，使用含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液8小時後可使此些受試者的相對肌膚油脂含量減少35.8%。並且，相較於使用8小時安慰劑精華液，使用含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液8小時後可使此些受試者的相對肌膚油脂含量減少57.7%。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可減少肌膚油脂，並改善受試者肌膚狀況，即大葉欖仁萃取物具有抑制及/或減少肌膚油脂量、控油，以改善個體臉部泛油狀況，進而達到抗痘的作用。
例七
A. 試驗流程：
令8位健康之成人受試者每日早晚於左、右臉頰分別使用相同量的安慰劑精華液、大葉欖仁精華液一次，並連續使用4週（即28日）。於此，使用安慰劑精華液的那一側臉頰為控制組，而使用大葉欖仁精華液的那一側臉頰為實驗組。
其中，安慰劑精華液的成分為93.4%水、0.6%馨鲜酮、0.6%己二醇、5% 1,3-丁二醇、0.2%三仙膠、0.1%增稠劑 U21 及0.1%三乙醇胺。
大葉欖仁精華液的成分為92.4%水 、0.6%馨鲜酮、0.6%己二醇、5% 1,3-丁二醇、0.2%三仙膠、0.1%增稠劑 U21 、0.1%三乙醇胺及1%的例一製得的大葉欖仁萃取物。
並且，受試者於開始使用前（臉部已清潔但尚未使用精華液時，以下稱第0週）及使用28日（於使用最後一次精華液後且臉部已清潔，以下稱第4週）後進行肌膚檢測。肌膚檢測為依據不同檢測項目，使用對應的儀器及測量方式，紀錄臉部肌膚之數值、並拍攝使用前及使用後的照片。肌膚檢測項目為肌膚紫質（skin porphyrin）、肌膚泛紅（skin redness）及肌膚斑點（skin spot）。並且，不論是第0週還是第4週，在進行檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對肌膚所造成的影響。
肌膚紫質係使用購自美國Canfield scientific公司的VISIA高階數位膚質檢測儀（VISIA Complexion Analysis System）在第0週與第4週對受試者的左臉頰與右臉頰進行檢測。由於痤瘡桿菌在生長時會分泌紫質（痤瘡桿菌代謝物），而紫質在紫外線（UV光）照射中會產生螢光反應。此檢測儀係透過UV光對面部肌膚進行拍攝，偵測肌膚紫質含量以得到可代表肌膚的紫質含量的一數值（以下稱肌膚紫質含量值）。並且，肌膚紫質含量值越高，說明肌膚紫質含量越高，痤瘡桿菌生長越旺盛，越容易產生痤瘡或粉刺。然後，再以下列公式計算出相對肌膚紫質含量：相對肌膚紫質含量（%）=（各組肌膚紫質含量值 /使用前肌膚紫質含量值）×100%。
肌膚泛紅係使用VISIA高階數位膚質檢測儀在第0週與第4週對受試者的左臉頰與右臉頰進行檢測。此檢測儀係透過RBX偏振光技術對面部肌膚進行拍攝，偵測皮膚深層血管或血紅素以得到可代表皮膚的泛紅狀況的一數值（以下稱肌膚泛紅程度值）。並且，得到的肌膚泛紅程度值越高，說明肌膚泛紅程度越高。然後，再以下列公式計算出相對肌膚泛紅程度：相對肌膚泛紅程度（%）=（各組肌膚泛紅程度值 /使用前肌膚泛紅程度值）×100%。
肌膚斑點係使用VISIA高階數位膚質檢測儀在第0週與第4週對受試者的左臉頰與右臉頰進行檢測。此檢測儀係透過可見光（白光）拍攝高解析度之肌膚圖像，並以內建軟體根據肉眼可見的色素斑點數量與面積進行分析以得到可代表皮膚的斑點狀況的一數值（以下稱肌膚斑點程度值）。並且，得到的肌膚斑點程度值越高，說明肌膚斑點程度越高。然後，再以下列公式計算出相對肌膚斑點程度：相對肌膚斑點程度（%）=（各組肌膚斑點程度值 /使用前肌膚斑點程度值）×100%。
B. 試驗結果：
1. 關於「肌膚紫質」的檢測結果
參照圖6。將8位受試者第0週的肌膚紫質含量值視為100%的相對肌膚紫質含量。此時，在第4週（即持續使用4週後），實驗組（即使用大葉欖仁精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚紫質含量為93.7%，而控制組（即使用安慰劑精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚紫質含量為115.2%。換言之，相較於使用前，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚紫質含量減少6.3%。並且，相較於持續使用4週安慰劑精華液，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚紫質含量減少21.5%。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可改善肌膚紫質，進而減少受試者痘痘（痤瘡）或粉刺生成。
2. 關於「肌膚泛紅」的檢測結果
參照圖7。將8位受試者第0週的肌膚泛紅程度值視為100%的相對肌膚泛紅程度。此時，在第4週（即持續使用4週後），實驗組（即使用大葉欖仁精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚泛紅程度為82.6%，而控制組（即使用安慰劑精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚泛紅程度為103.8%。換言之，相較於使用前，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚泛紅程度減少17.4%。並且，相較於持續使用4週安慰劑精華液，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚泛紅程度減少21.2%。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可減少肌膚泛紅，以改善受試者肌膚狀況，進而提升肌膚質感。
3. 關於「肌膚斑點」的檢測結果
參照圖8。將8位受試者第0週的肌膚斑點程度值視為100%的相對肌膚斑點程度。此時，在第4週（即持續使用4週後），實驗組（即使用大葉欖仁精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚斑點程度為96.6%，而控制組（即使用安慰劑精華液那一側的臉頰）的平均相對肌膚斑點程度為104.0%。換言之，相較於使用前，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚斑點程度減少3.4%。並且，相較於持續使用4週安慰劑精華液，持續使用4週含1%大葉欖仁萃取物的大葉欖仁精華液後可使此些受試者的相對肌膚斑點程度減少7.4%。由此可知，大葉欖仁萃取物確實可減少肌膚斑點，以並改善受試者肌膚狀況，進而提升肌膚質感。
綜上，任一實施例的大葉欖仁萃取物於調理肌膚與抗發炎上的用途是涉及一種大葉欖仁萃取物用於製備抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的組合物的用途，從而提供在施予一個體上時能在此個體上產生抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的作用的組合物。換言之，前述之組合物具有抗痘、抗菌、抗發炎或提升肌膚質感的功能。在一些實施例中，大葉欖仁萃取物所製得的組合物還具有下列功能中的一種或多種功能：減少肌膚發炎所致的痘痘、透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成、抑制及/或減少肌膚油脂量、透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留、抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌、抑制角質細胞發炎、提升肌膚光澤、減少肌膚斑點、減少肌膚泛紅、及抑制黑色素生成。在一些實施例中，大葉欖仁萃取物所製得的組合物能透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌來改善肌膚紫質。
無
圖1是相對IL-8分泌量的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖2是相對黑色素含量的細胞實驗結果的柱狀圖。 圖3是使用前及使用15分鐘後的相對肌膚紫質含量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖4是使用前及使用15分鐘後的相對肌膚光澤程度的人體實驗結果的柱狀圖。 圖5是使用前及使用8小時後的相對肌膚油脂含量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖6是第0週及第4週的相對肌膚紫質含量的人體實驗結果的柱狀圖。 圖7是第0週及第4週的相對肌膚泛紅程度的人體實驗結果的柱狀圖。 圖8是第0週及第4週的相對肌膚斑點程度的人體實驗結果的柱狀圖。

Claims (17)

  1. 一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物用於製備抗痘組合物的用途。
  2. 如請求項1所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以減少肌膚發炎所致的痘痘。
  3. 如請求項1所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物透過改善肌膚紫質來減少痘痘生成。
  4. 如請求項3所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物透過抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌來改善該肌膚紫質。
  5. 如請求項1所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以抑制及/或減少肌膚油脂量。
  6. 如請求項1所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物透過抑制黑色素生成來減少痘疤殘留。
  7. 一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物用於製備抗菌組合物的用途。
  8. 如請求項7所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以抑制及/或減少痤瘡丙酸桿菌。
  9. 一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物用於製備抗發炎組合物的用途。
  10. 如請求項9所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以抑制角質細胞發炎。
  11. 一種大葉欖仁（ Terminalia catappa）萃取物用於製備提升肌膚質感的組合物的用途。
  12. 如請求項11所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以提升肌膚光澤。
  13. 如請求項11所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以減少肌膚斑點。
  14. 如請求項11所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以減少肌膚泛紅。
  15. 如請求項11所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物用以抑制黑色素生成。
  16. 如請求項1、7、9或11所述的用途，其中該大葉欖仁萃取物是以一溶劑對一大葉欖仁葉進行萃取而得。
  17. 如請求項16所述的用途，其中該大葉欖仁葉為大葉欖仁紅色葉子。
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