TW202243680A - 玻尿酸用於製備治療肺纖維化藥劑之用途 - Google Patents

Abstract

本發明有關玻尿酸用於製備治療及預防肺纖維化藥物之用途。本發明提供玻尿酸可減少肺纖維化之功效，可用於治療、預防、甚至逆轉肺纖維化。

Description

玻尿酸用於製備治療肺纖維化藥劑之用途

本發明涉及玻尿酸用於治療肺纖維化之用途。

肺臟纖維化是由於肺部組織受到吸菸、細菌、病毒、空氣汙染、老化、氧化自由基、放射線、化療藥物、或遺傳性等傷害，導致肺部上皮細胞的損傷，使得肺部間質區域發生發炎反應、纖維母細胞增生，進而導致細胞外間質區域內膠原蛋白的沉積(Wynn, 2004; Wilson and Wynn, 2009)，造成氧氣與二氧化碳的交換受阻。肺臟纖維化對肺部的傷害是不可逆的，是漸進式的惡化，因此，當肺部纖維化現象越來越嚴重後，會使得病患發生呼吸衰竭進而導致死亡。

一旦確診為肺部纖維化，病患平均存活時間不超過三年(American Thoracic Society, 2000; Olson et al., 2007)。截至目前為止，臨床上並沒有任何藥物，可以有效治療肺部纖維化，僅靠類固醇投予以降低病患不適感。

在臨床實務上，大部分因為呼吸問題尋求診療的患者並不是處於早期階段，而是已經發展成肺纖維化的時候。有需要提供治療肺部的纖維化病症的有效醫療方法，特別是能逆轉肺纖維化的狀態。

本發明提供一種玻尿酸製備減少肺部的纖維化藥劑的用途，為治療肺部的纖維化病症的有效醫療方案。

一方面，本發明提供一種玻尿酸製備減少肺部的纖維化藥劑的用途。

另一方面，本發明提供一種玻尿酸用於製造治療、預防或逆轉肺纖維化藥劑的用途。

又一方面，本發明提供一種用於治療、預防或逆轉肺纖維化症狀的藥劑或醫藥組合物，其包含治療有效量之玻尿酸。

再一方面，本發明提供了一種治療、預防或逆轉肺纖維化症狀的方法，包含對有此需要之個體施用包含治療有效量之玻尿酸的藥劑或醫藥組合物。

根據本發明，本發明可使用分子量10 kDa-2 MDa之玻尿酸。

根據本發明實施例，對於肺纖維化的大白鼠施打玻尿酸，可有效改善肺纖維化的狀況，包括治療、預防或逆轉肺部的纖維化症狀。

根據本發明實施例，對於肺纖維化的大白鼠施打玻尿酸，可降低纖維化肺部內白血球浸潤、顯著減少纖維化組織，及增加肺臟體積。

根據本發明實施例，玻尿酸有效地增加降低的肺體積水平，降低的肺空間水平和/或降低的肺泡數量。

根據本發明實施例，該玻尿酸有效地改善降低的血氧飽和度水平，緩解增加的呼吸速率和恢復肺臟的萎縮。

根據本發明實施例，該玻尿酸有效促進已經在肺中發生的纖維化組織的降解。

根據本發明實施例，該玻尿酸有效促進肺泡上皮細胞功能逆轉。

根據本發明實施例，該玻尿酸可經由注射施用，例如，靜脈、動脈、皮下、肌肉、腹腔注射等。

根據本發明又一實施例，該玻尿酸可直接由口腔或呼吸道遞送至肺 。例如，直接由鼻腔或口腔送入、由鼻腔吸入、或經鼻腔或口腔以支氣管鏡送至氣管施予。

在下面的描述中闡述了本發明的一個或多個實施例的細節。 從以下幾個實施例的詳細描述以及從所附的權利要求中，本發明的其它特徵或優點將是顯而易見的。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的技術人員通常理解的相同的含義。

如本文所使用的，冠詞「一」和「一個」是指冠詞的一個或多於一個（即，至少一個）語法對象。 舉例來說，「一個元素」是指一個元素或多於一個元素。

術語「包括」或「包含」通常以包括/包括允許存在一個或多個特徵，成分或組分的意義來使用。 術語「包括」或「包含」涵蓋術語「由...組成」或「由......組成」。

如本文所使用，「玻尿酸(hyaluronan或hyaluronic acid)，簡稱HA)」，又稱透明質酸或醣醛酸，存在於人體的結締組織及真皮層中，是一種透明的膠狀物質。玻尿酸依照分子量，可以區分為低分子量玻尿酸 (MW 10 kDa - 100 kDa)、中分子量玻尿酸(MW 100 kDa - 1 MDa)、與高分子量玻尿酸 ( ＞ MW 1 MDa) (Tavianatou et al., 2019)。本發明使用之玻尿酸可包括以上不同分子量之玻尿酸或其鹽，或其混合，分子量範圍為10 kDa- 2 MDa。

如本文所使用，「肺纖維化（PF）」或肺中的纖維化病症是涉及肺組織的疤痕或纖維結締組織形成的肺部疾病或病症。在正常成人肺中，超過約25％（w / w）的肺是結締組織，主要由細胞外基質（ECM）組成，例如膠原蛋白，彈性蛋白，蛋白聚醣和糖蛋白。一般而言，當肺受損時，肺纖維母細胞被激活，以產生ECM。ECM可以被蛋白酶降解，例如，某些基質金屬蛋白酶（MMPs）。過量ECM的積聚導致壁增厚並導致呼吸問題。肺組織損傷也誘發炎症反應，增加肺中的細胞浸潤。肺中纖維化的其它特徵包括肺密度增加（例如，支氣管肺泡灌洗液（BALF）中的總細胞計數（TCC）），肺體積/容積減小，肺空間和肺泡數量增加以及肺萎縮。肺部纖維化病人可能表現為呼吸頻率快，氣體交換不良。其他常見症狀包括咳嗽，疲勞和虛弱，胸部不適，食慾不振，體重減輕。常規測試可用於鑑定患有肺纖維化病症的患者，例如胸部X射線，高分辨率計算機斷層掃描（HRCT），磁共振成像（MRI），肺功能測試，脈搏血氧計，動脈血氣體（ABG）測定，支氣管鏡檢查，支氣管肺泡灌洗（BAL），肺部活組織檢查，運動試驗，esophogram和超聲心動圖（ECHO）。

在臨床上，診斷為肺纖維化（pulmonary fibrosis，PF）的患者可以是特發性或非特發性（繼發性）。當沒有已知的肺纖維化發生的原因時，這種纖維化被稱為特發性肺纖維化（IPF）。如果纖維化與另一種疾病明顯相關，或者肺部纖維化/疤痕形成是特定藥物的副作用或暴露於已知引起肺纖維化的藥物，那麼這種纖維化被稱為非特發性肺纖維化。例如，與另一種疾病（例如，硬皮病或類風濕性關節炎）明顯相關的肺纖維化可以被認為是繼發於硬皮病或繼發於類風濕性關節炎的肺纖維化。被認為促進肺纖維化的因素的一些其他例子包括吸煙，暴露於環境污染物或粉塵，病毒或細菌肺感染，特定藥物如某些抗生素，化學治療劑或治療性輻射以及遺傳傾向。

如本文所用，如本文所述的與肺纖維化病症有關的指數或症狀的降低或升高的水平是參照其對照（或正常）水平。如本文所使用的，術語「正常水平」或「對照水平」是描述本領域普通技術人員和/或醫療專業人員預期一個健康的個體或具有類似身體特徵和病史的人群具有的值。例如，升高的水平表示高於對照（或正常）水平5％，10％，20％，30％，50％，70％，90％，100％，200％，300％，500％ 或更多，與對照（或正常）水平比較而言; 而降低的水平是指低於對照（或正常）水平5％，10％，20％，30％，50％，70％，90％，100％，200％，300％，500％或更多，與對照（或正常）水平相比而言。

如本文所用的術語「需要治療方法的個體」是表示需要治療肺纖維化或肺部的纖維化病症的人類或非人類動物。具體而言，需要治療方法的個體是患有肺部的一或多種纖維化病症的個體。

在一些具體實施態樣中，需要本發明治療方法的個體表現出以下一種或多種病症：肺部的膠原蛋白沉積水平升高，肺部的細胞浸潤水平升高，肺部的密度水平升高，和/或肺部的纖維母細胞的活化水平升高，與正常水平相比而言。

在一些具體實施態樣中，需要本發明的治療方法的個體表現出以下一或多種病症：降低的肺部體積水平，降低的肺部空間水平，降低的肺泡數量，與正常水平相比。

在一些具體實施態樣中，需要本發明治療方法的個體表現出下降的血氧飽和度水平和/或升高的呼吸速率(由於肺功能受損導致)，與正常水平相比。

在某些具體實施態樣中，需要本發明治療方法的個體是被診斷患有肺纖維化（PF）的患者。

在此使用的術語「個體」或「主體」包括人類和非人類動物，如伴侶動物（如狗，貓等），農場動物（如牛，綿羊，豬，馬等）， 或實驗動物（如大鼠，小鼠，豚鼠等）。

如本文所用的術語「治療」是指將包含一種或多種活性劑的組合物施用或施用於患有疾病，疾病病症或疾病症狀或疾病進展(惡化)的對象，目的是 治愈，治愈，緩解，舒解，改變，改善，改良，增進或影響該疾病，該疾病的病症或症狀，疾病誘發的障礙或障礙的進展。 具體而言，如本文中所使用的，治療肺纖維化或肺部纖維化的症狀包括完全地或部分地幫助從纖維化恢復或逆轉為正常狀態。

本文使用的術語「治療有效量」是指活性成分在治療對像中提供所需的治療或生物作用的量。 例如，用於治療肺部的纖維化症狀的有效量可以是玻尿酸的量，其足以使疾病狀態完全地或部分地從疾病狀態朝向正常水平逆轉。

在一些具體實施態樣中，治療有效量的玻尿酸是足以引起ECM（例如膠原蛋白）在肺中的ECM(如膠原蛋白)沉積，肺中的細胞浸潤，肺密度和/或肺部的纖維母細胞的活化，降低5％，5％，10％，20％，30％，50％，70％，90％，100％，200％，300％或500％或更多，相對於施用玻尿酸之前的對應水平。

在一些具體實施態樣中，治療有效量的玻尿酸是足以引起肺體積，肺空間(air space)，肺泡數量和/或肺功能增加5％，5％，10％，20％，30％，50％，70％，90％，100％，200％，300％或500％或更多，相對於施用玻尿酸之前的對應水平。

在一些具體實施態樣中，治療有效量的玻尿酸是足以引起提升ECM（例如膠原蛋白）的降解和/或肺上皮的恢復，相對於施用玻尿酸之前的對應水平。具體而言，ECM的降解可由某些特定基質金屬蛋白酶（MMP）的活化引起，如MMP9。此外，肺上皮的修復可能涉及Ⅱ型肺泡上皮細胞（AEC2s）的增殖，並轉分化為Ⅰ型肺泡上皮細胞（AEC1s）。

治療有效量可以根據各種原因而改變，例如給藥途徑和頻率，接受所述藥物的個體的體重和種類，以及給藥目的。 本領域技術人員可以根據本文的公開內容，確定的方法和他們自己的經驗確定每種情況下的劑量。

根據本發明，可以通過本領域已知的各種程序來施用玻尿酸，例如經由血液注射、或皮下注射施用。或直接由呼吸道遞送至氣管、或肺，例如，直接由鼻腔吸入；或經鼻腔或口腔至氣管的支氣管鏡施予，或經氣切手術給予。

根據本發明實施例，可以將玻尿酸直接遞送至呼吸道（例如鼻或氣管）並因此遞送至肺。而作為活性成分的玻尿酸也可以與藥學上可接受的載體一起配製以形成適合形式的藥物組合物（例如，作為細胞懸浮液）以用於遞送。取決於給藥方式，本發明的藥物組合物可包含約0.1重量％至約100重量％的活性成分，其中基於整個組合物的重量計算重量百分比。「醫藥上可接受的載體」在所採用的劑量和濃度下對個體是無毒的，且與玻尿酸和包含玻尿酸的任何製劑的任何其他成分相容。

在一些具體實施態樣中，可以在合適的等滲液體，例如，磷酸鹽緩衝鹽水，生理鹽水，葡萄糖水溶液和/或其混合物以及本領域技術人員已知的其它合適的液體中製備玻尿酸溶液。應該保護最終的治療形式免受污染，並應該能夠抑制微生物如細菌或真菌的生長。可以施用單一的靜脈內劑量。或者，可以使用緩慢的長期輸注或多個短期的每日輸注。如果需要，也可以使用每隔幾天交替一天或一次給藥。其中該玻尿酸經由血液注射、或皮下注射施用。

通過以下實施例進一步說明本發明，這些實施例僅用於說明而不是限制。 根據本公開內容，本領域技術人員應該理解，可以在所公開的具體實施方式中做出許多改變，並且仍然獲得相似或相似的結果，而不偏離本發明的精神和範圍。

實例

1. 材料與方法

1.1 左肺纖維化動物模式的建立

取雄性大白鼠 (250g SD Rat)，於左支氣管內注入5 mg 博來黴素 （bleomycin，簡稱BLM），造成嚴重的、一致性的、穩定的、左肺纖維化的動物模式(Chu et al., 2019)。

1.2 玻尿酸的給予

玻尿酸依照分子量，可以區分為低分子量玻尿酸 (MW 10 kDa - 100 kDa)、中分子量玻尿酸(MW 100 kDa - 1 MDa)、與高分子量玻尿酸 ( ＞ MW 1 MDa) (Tavianatou et al., 2019)。分別將低分子量玻尿酸(MW 10 kDa - 100 kDa)、與混合分子量玻尿酸(MW 10 kDa - 2 MDa) 溶在200 µl生理食鹽水，在BLM注射後第21天開始，即第四週給予三次玻尿酸、第五週、第六週、與第七週都給予兩次玻尿酸 ，也就是分別在BLM損傷後第21、23、26、29、33、36、40、43、46天 (共九次) (圖1)。

實驗設計第0天為給予BLM傷害，肺功能是在BLM傷害之前進行。接著，每隔七天進行肺功能檢測，即在第7、14、21、28、35、42、49天。

1.3 實驗分組

大白鼠分為五組：

第一組為正常(Normal)組，即在第0天，大白鼠氣管內接受200 μl 生理食鹽水(saline)注射的正常大白鼠，在第21天開始，經氣管內只注射200 μl 生理食鹽水(圖 1)。

第二組為BLM組，即在第0天，大白鼠氣管內接受BLM注射的大白鼠，在第21天開始，並沒有接受治療，僅給予saline的肺纖維化病鼠組 (圖1)。

第三組為BLM+LHA組，即在第0天，大白鼠左側支氣管內接受BLM注射，在傷害後第21天開始，打入低分子量的玻尿酸 ( MW 10 kDa - 100 kDa) (共九次)。

第四組為BLM+HHA組，即在第0天，大白鼠左側支氣管內接受BLM注射，在傷害後第21天開始，打入高分子量的玻尿酸 (＞ MW 1 MDa) (共九次)。

第五組為BLM+MIX HA組，即在第0天，大白鼠左側支氣管內接受BLM注射，在傷害後第21天開始，打入混合各分子量之玻尿酸 (MW 10 kDa - 2 MDa) (共九次)。

各組大白鼠都在第49天犧牲，觀察肺臟。動物分組、與實驗流程圖參見圖1。

1.4 實驗動物肺功能檢測-動脈血氧濃度的測定

在第0、7、14、21、28、35、42、49天，使用脈衝式血氧濃度器夾住大白鼠的後肢(Veterinary Vital Signs Monitor Capnograph/Pulse Oximeter，Nonin LifeSense®Vet LS1-10R)，用以偵測動脈血中的氧氣濃度。

1.5 實驗動物灌流固定、組織石蠟包埋及切片

在第49天，大白鼠灌流後，取出肺臟，進行石蠟包埋、與肺臟連續組織切片，最後，以各種染色，如蘇木紫-伊紅染色(Hematoxylin & Eosion Stain，簡稱 HE Stain)、天狼星紅染色(sirius red，以分析肺臟病理情況。

1.6 蘇木紫-伊紅染色(Hematoxylin & Eosion Stain，簡稱 HE Stain)

肺組織切片先進行脫蠟，依序放入二甲苯(Xylene)、濃度遞減的酒精中(100%、95%、80%、70%酒精)、置於蘇木精(Hematoxylin)溶液 (武藤化學，No.3008-1) 中染5分鐘，接著，將肺組織片置於伊紅(Eosin)溶液 (武藤化學，No.3200-2) 中染2.5分鐘，隨即，組織片浸泡於冰醋酸3秒，再以流動的水沖洗。肺組織切片浸泡至濃度遞增的酒精內進行脫水 (依序為50%、70%、80%、90%、95%、100%)，再浸泡於二甲苯兩次，每次5分鐘。最後，以封片膠 (Permount, Fisher Scientific SP15-500) 封片，進行光學顯微鏡觀察及拍照。

1.7 天狼星紅染色 (Sirius Red Stain)

肺組織切片脫蠟、復水後，置入0.1% 天狼星紅(Sigma 2610-10-8)於 苦味酸(Picric acid)中染10分鐘，隨即，肺組織片浸泡於二次水清洗，接著，將肺組織片切片浸泡置濃度遞增的酒精內進行脫水 (依序為50%、70%、80%、90%、95%、100%)，再浸泡於二甲苯。最後，以封片膠封片，進行光學顯微鏡觀察及拍照。

1.8 統計分析

所有實驗數據以以平均值標準誤差(Mean±SEM, Standard error of the mean) 表示。各平均值間的比較以單因子變異細數分析 (One-Way ANOVA)分析，再以LSD進行多重比較。實驗數據皆以p ＜ 0.05作為具有顯著差異的最低起始標準。

2. 結果

2.1 給予玻尿酸能改善肺纖維化病鼠的肺部功能

以脈衝式血氧濃度儀分析動脈血氧飽和度(SpO ₂)，藉此評估肺部氣體交換的功能。結果顯示，在實驗時間的49天內，正常組大白鼠的血氧飽和度均維持在99 %左右 (圖2A及2B)。在給予BLM傷害後第7天，各組大白鼠的血氧飽和度都有明顯下降的現象，約為86.6±1.5 %，一直到第49天，BLM組大白鼠的動脈血氧飽和度都沒有改善，與正常組大白鼠相較，均呈現明顯的減少 (圖2A及2B)。

BLM+LHA組、和BLM+HHA組大白鼠，在後第35天開始，一直持續到第49天，動脈血氧飽和度顯著升高，與BLM傷害組相較，都呈現統計上的提升 (圖2A及2B)。BLM+MIX HA組大白鼠，在第35天開始，一直持續到第49天，動脈血氧飽和度都顯著升高，與BLM傷害組相較，都呈現統計上的提升。並且，BLM+MIX HA組大白鼠的動脈血氧飽和度，從第35天開始，相較BLM+LHA組、和BLM+HHA組，都有明顯的差異 (圖2A及2B) ，顯示給予玻尿酸，都可以提高肺纖維化病鼠肺部的氧氣交換功能，而給予混合分子量的玻尿酸治療效果最好，因此，動脈血內的含氧飽和濃度從85%，逐週地上升到93%，達到逆轉修復的效果。

2.2 由外型巨觀顯示，給予玻尿酸能改善肺纖維化病鼠肺臟萎縮的現象

在BLM傷害後的第49天，犧牲各組大白鼠，觀察肺部的外觀型態，由前面觀(圖3上排)、與背面觀(圖3下排)照片顯示，正常組大白鼠的左、右肺均可以看見白色肺泡結構，肺泡呈現完整、平滑的情形。BLM組的左肺明顯萎縮，僅存一些的肺泡出現在左肺的外周圍，左肺的中央區域已經呈現沒有肺泡的結疤組織。BLM+LHA組與BLM+MIX HA組大白鼠，他們左肺的總體積，都有明顯的較BLM組多 (圖3)。其中，BLM+ MIX HA組的大白鼠，其左肺的白色肺泡區域，又比BLM+LHA組有較多的趨勢 (圖3)。

2.3 由蘇木紫-伊紅染色，顯示給予玻尿酸能修復肺纖維化病鼠的肺泡結構

各組大白鼠左肺連續的組織切片，經HE染色，由低倍率圖片(圖4A)，分別放大左肺的中央區域 (圖4B)、與周邊區域 (圖4C)。結果顯示，正常組大白鼠左肺肺泡完整，結締組織多存在於支氣管周圍，肺泡與肺泡之間的結締組織極少。BLM組大白鼠的左肺，肺泡結構只出現在左肺的外周圍，中央區域多為大量細胞浸潤的現象。而BLM+LHA組 、BLM+HHA組、與BLM+MIX HA組大白鼠，他們左肺的中央區域內，雖然大多是細胞浸潤的情形，但仍然有少許肺泡空間的出現 (圖4B)。值得注意的是，正常組的肺泡型態都較小，BLM組左肺外周圍的肺泡型態都較大，而BLM+LHA組與BLM+MIX HA組大白鼠，他們左肺外周圍的肺泡型態都較小，比較接近正常組的肺泡結構 (圖4C)。

加總所有HE染色的左肺組織切片，經由統計定量，結果顯示，BLM組左肺總體積明顯萎縮，萎縮左肺內的肺泡體積大量減少 (圖5A及5B)。然而，BLM+LHA組、BLM+HHA組、與BLM+MIX HA組大白鼠的左肺體積都較BLM組明顯增加。並且，BLM+MIX HA組的大白鼠，其左肺的總體積，又比BLM+HHA組與BLM+LHA組有較多的情形。推測給予玻尿酸，可以刺激肺泡再生，提升肺纖維化病鼠左肺的總體積，而給予混合分子量的玻尿酸治療，肺臟的體積增加最多 (圖5A及5B)。

2.4 由天狼星紅染色顯示，給予玻尿酸能降低肺纖維化病鼠肺部內的膠原蛋白

在BLM傷害後的第49天，犧牲各組大白鼠，觀察肺部的纖維化的情形。各組大白鼠的左肺組織切片，經天狼星紅(Sirius red)染色，由低倍率(圖6A)到高倍率放大(圖6B)的照片顯示，染上紅色為膠原蛋白存在的位置，即纖維化的區域。在正常組大白鼠的左肺中，膠原蛋白主要出現在支氣管周邊、血管旁邊，含量極低 (圖6A及6B)。BLM組的左肺，染上紅色膠原蛋白的面積明顯上升，則代表肺纖維化的病況也明顯增加 (圖6C)。BLM+LHA組、BLM+HHA組、和BLM+MIX HA組大白鼠左肺膠原蛋白的沉積量，與正常組大白鼠相比，都有統計上增加的情形 (圖6B 及6C)。然而，BLM+LHA組和BLM+MIX HA組大白鼠左肺內膠原蛋白的沉積量，與BLM組大白鼠相較，都有明顯的減少 (圖6B及6C)。並且，BLM+MIX HA組的大白鼠，其左肺內膠原蛋白表現量，又比BLM+LHA組和BLM+HHA組有較少的情形。推測給予玻尿酸，可以降低肺纖維化病鼠左肺內膠原蛋白，因此，減低肺臟的纖維化，而給予混合分子量的玻尿酸治療，肺臟內的纖維化體最少。

3.結論

本實驗給予博來黴素(bleomycin)，成功建立單側、嚴重的、一致性、穩定的肺臟纖維化動物模式，也利於實驗大白鼠繼續存活。當給予博來黴素21天後，左肺不僅萎縮，並且纖維化已經達到明顯的、飽和的狀態，此時，才給予玻尿酸，治療四星期後，左肺的纖維化減少、肺泡增加、肺臟體積又再次上升、與肺功能顯著再提升。因此，給予玻尿酸可以逆轉修復肺臟的纖維化。 參考文獻 1.          American Thoracic Society. Idiopathic pulmonary fibrosis: diagnosis and treatment. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000; 161, 646- 664. 2.          Olson AL, Swigris JJ, Lezotte DC, Norris JM, Wilson CG, Brown KK. Mortality from pulmonary fibrosis increased in the United States from 1992 to 2003. Am J Respir Crit Care Med. 2007; 176(3): 277- 284. 3.          Wilson MS and Wynn TA. Pulmonary fibrosis: pathogenesis, etiology and regulation. Mucosal Immunol 2009; 2, 103- 121. 4.          Wynn TA. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 2004; 4: 583- 594. 5.          Tavianatou, A.G.; Caon, I.; Franchi, M.; Piperigkou, Z.; Galesso, D.; Karamanos, N.K. Hyaluronan: molecular size-dependent signaling and biological functions in inflammation and cancer. FEBS J. 2019. 286: 2883- 2908. 6.          Chu KA, Wang SY, Yeh CC, Fu TW, Fu YY, Ko TL, Chiu MM, Tsai PJ, Fu YS. Reversal of bleomycin-induced rat pulmonary fibrosis by a xenograft of human umbilical mesenchymal stem cells from Wharton’s jelly. Theranostics. 2019; 9(22): 6646- 6664.

無

當結合附圖閱讀時，將更好地理解前面的概述以及以下對本發明的詳細描述。 為了說明本發明，在附圖中示出了目前較佳的實施例。 然而，應該理解的是，本發明不限於所示的精確佈置和手段。

在附圖中：

圖1顯示誘發大白鼠左肺纖維化以及施予玻尿酸治療的實驗流程圖及動物分組。大白鼠共分為五組，實驗組中，第0天將博來黴素（bleomycin，簡稱BLM）打入大白鼠的左支氣管，第21天開始給予藥物治療 ，第49天犧牲動物。

圖2顯示給予玻尿酸能增加肺纖維化病鼠動脈血的含氧飽和度。圖2A為第49天，各組大白鼠進行脈衝式動脈血氧儀檢測的照片，其中箭頭所指為動脈血氧飽和度的數值。圖2B定量各組大白鼠，在不同時間裡，動脈血氧濃度的數值。圖2B定量各組大白鼠，在不同時間裡，動脈血氧濃度的數值。圖2顯示，給予BLM傷害後第七天，大白鼠的動脈血氧飽和度降到最低，BLM組大白鼠的動脈血氧飽和度之後沒有太大的改變。給予玻尿酸治療組別的大白鼠，從第35天開始，他們的動脈血氧飽和度都較BLM組高。其中， BLM+MIX HA組大白鼠的動脈血氧飽和度又比BLM+LHA組、 和BLM+HHA組，明顯高出許多，此種趨勢一直維持到第49天。ß：與同日正常組大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。＃：與同日BLM組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。♠：與同日BLM+MIX HA組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。ß：與同日正常組大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。＃：與同日BLM組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。♠：與同日BLM+MIX HA組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。

圖3顯示給予玻尿酸能提升肺纖維化病鼠的左肺體積。圖為各組大白鼠在第49天的肺臟外觀圖，上排為各組肺臟正面照，下排為各組肺臟的背面照。

圖4顯示給予玻尿酸能修復肺纖維化病鼠的肺泡結構。圖4A為第 49天的各組大白鼠左肺組織片經過HE染色的低倍率圖片。圖4B為第49天的各組左肺組織片經過HE染色高倍率放大中央區域的照片。圖4C為第49天的各組左肺組織片經過HE染色高倍率放大左肺外周圍的照片。其中圖4B及4C中的直線比例尺代表100 µm。

圖5顯示給予玻尿酸能增加肺纖維化病鼠的左肺體積。圖5A為第49天的各組大白鼠左肺組織片經過HE染色的低倍率圖片。圖5B為加總所有左肺組織切片，定量左肺的總體積。結果顯示，給予玻尿酸，能明顯增加肺纖維化病鼠左肺體積。其中，BLM+MIX HA組的左肺體積，又比BLM+LHA組、 BLM+HHA組、明顯增多。ß：與正常組大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。＃：與BLM組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。♠：與BLM+MIX HA組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。

圖6顯示給予玻尿酸能降低肺纖維化病鼠左肺內膠原蛋白的沉積。圖6A為第49天的各組大白鼠左肺組織切片， 經過 Sirius red 染色的低倍率左肺圖片。圖6B為第49天的各組大白鼠左肺組織切片， 經過 Sirius red 染色的高倍率放大圖片，Sirius red 染色呈現紅色區域，即代表膠原蛋白存在位置。圖6C為定量各組大白鼠左肺內膠原蛋白所佔之面積百分比。結果顯示， BLM的左肺，染上紅色膠原蛋白的面積明顯上升。BLM+LHA組、 BLM+HHA組、和 BLM+MIX HA組大白鼠的左肺內，膠原蛋白的沉積量，都較BLM組別低。並且， BLM+MIX HA組大白鼠的左肺內膠原蛋白的沉積量，明顯又比BLM+LHA組、和 BLM+HHA組來得少。 ß：與正常組大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。＃：與BLM組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。♠：與BLM+MIX HA組的大白鼠相比，有統計差異，p＜0.05。

無

Claims (14)

1. 一種玻尿酸製備減少肺部的纖維化藥劑的用途。
2. 如請求項1之用途，其該藥劑用於治療、預防或逆轉肺纖維化症狀。
3. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸之分子量為10 kDa-2MDa。
4. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸有效提升一或多種選自以下所組成的群組的症狀：降低的肺部體積水平，降低的肺部空間水平，和降低的肺泡數量，上述症狀是與正常水平相比而言。
5. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸有效地改善降低的血氧飽和度水平，緩解增加的呼吸速率和恢復肺臟的萎縮。
6. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸有效促進已經在肺中發生的纖維化組織的降解。
7. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸有效促進肺泡上皮細胞功能逆轉。
8. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸經由注射施用。
9. 如請求項8之用途，其中該玻尿酸經由靜脈、動脈、皮下、肌肉、或腹腔注射施用。
10. 如請求項1之用途，其中該玻尿酸直接由口腔或呼吸道遞送至肺 。
11. 如請求項10之用途，其中該玻尿酸直接由鼻腔或口腔送入。
12. 如請求項10之用途，其中該玻尿酸直接由鼻腔吸入。
13. 如請求項10之用途，其中該玻尿酸經鼻腔或口腔以支氣管鏡送至氣管施予。
14. 如請求項10之用途，其中該玻尿酸經氣切手術給予施予。

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