CN114432421B - 一种用于治疗急性肺损伤的KdPT多肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体公开了一种用于治疗急性肺损伤的KdPT多肽及其应用。本发明首次发现多肽KdPT具有明显的改善急性肺损伤大鼠的肺功能，降低急性肺损伤动物的死亡率，还可以显著降低肺通透系数、炎症因子的水平和肺脏组织病理评分，因此，KdPT多肽对急性肺损伤有明显的治疗作用，其效果优于或者不劣于现有治疗药物，有希望开发为治疗急性肺损伤的新型药物。本发明的KdPT多肽可以制备成口服剂或注射剂，用药更为简便。

Description

一种用于治疗急性肺损伤的KdPT多肽及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种用于治疗急性肺损伤的KdPT多肽及其应用。
背景技术
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)是由于各种原因引起的肺组织结构发生特征性的病理改变而出现的临床综合征。其病理特点为肺泡毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤，表现为广泛肺水肿和微小肺不张。病理生理改变主要是肺内分流增加和肺顺应性下降。临床上表现为低氧血症、呼吸频速和X线胸片出现双肺弥漫性浸润。ALI有着从轻到重的连续过程，目前仍缺乏有效的治疗急性肺损伤的药物和方法。
KdPT多肽为已报道的抗炎三肽，序列为：KPT，即序列为Lys-Pro-Thr三个氨基酸的寡肽，其中脯氨酸(Pro)为D型氨基酸。中国专利文件CN111150831A公开了多肽KdPT的应用，首次发现多肽KdPT可以用于干眼症的治疗，除此之外，多肽KdPT还可以用于治疗肠道炎症，例如炎性肠病等。目前，还未有技术公开KdPT多肽治疗急性肺损伤用途的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种用于治疗急性肺损伤的KdPT多肽及其应用。KdPT多肽可以降低急性肺损伤动物的死亡率，KdPT多肽可以显著降低急性肺损伤动物的肺通透性指数，控制炎症因子的释放。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
本发明提供了一种KdPT多肽在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用。
本发明的KdPT多肽可以有效治疗急性肺损伤，通过实验检测可知，1)死亡率：与模型对照组相比，中剂量和高剂量的KdPT多肽具有明显降低急性肺损伤动物的死亡率的疗效。2)肺通透指数测定：与模型对照组相比，KdPT多肽可以显著降低急性肺损伤大鼠的肺通透性指数(P<0.05或0.01)，且具有明显的量效关系。3)血液中炎症因子指标检测：与模型对照组相比，KdPT多肽可显著降低急性肺损伤大鼠的炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)的水平。4)肺组织病理形态学观察：KdPT多肽治疗组的动物肺脏病理评分降低明显降低，且量效关系显著，其中中、高剂量组具有统计学差异(P<0.05)
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述KdPT多肽的给药剂量为2mg/kg～8mg/kg。
更优选地，KdPT多肽的给药剂量为2mg/kg、4mg/kg或8mg/kg。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述药物的剂型为口服剂或注射剂。更优选地，所述药物的剂型为口服剂。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述KdPT多肽可以降低肺系数、肺通透性指数、炎症因子水平和肺脏病理评分。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述炎症因子包括IL-1β、TNF-α和IL-6。
本发明还提供了一种治疗急性肺损伤的药物，所述药物中包含KdPT多肽。
作为本发明所述药物的优选实施方式，所述药物中含有溶剂，所述溶剂为生理盐水。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明首次发现了所述KdPT多肽可以降低急性肺损伤动物死亡率，还可以降低急性肺损伤动物的肺通透性指数和炎症因子的水平，对急性肺损伤动物的肺组织病理形态也有明显改善，因此，KdPT多肽对急性肺损伤有明显的治疗作用，其效果优于或者不劣于现有治疗药物。本发明的KdPT多肽可以制备成口服剂或注射剂，用药更为简便。
附图说明
图1为KdPT多肽对急性肺损伤大鼠体重(A)和死亡率(B)的影响图；
图2为KdPT多肽对急性肺损伤模型大鼠肺通透性的影响图；
图3为KdPT多肽对急性肺损伤模型大鼠炎症因子水平的影响图；
图4为KdPT多肽对急性肺损伤模型大鼠肺脏病理评分的影响图。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
在以下实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、KdPT多肽对大鼠急性肺损伤的治疗作用。
造模：8周龄SPF级雄性SD大鼠麻醉后，用碘酒消毒大鼠颈部，于颈中下1/3中线位置做约1厘米纵向切口，显露甲状腺下缘并向上翻起，小心分离暴露气管前肌群，纵向锐性分离肌群显露气管，行头高脚底位斜放动物，于环状软骨环下约2个气管环处用1mL注射器(26G)插入气管中，推入2mg/kg LPS溶液，给药体积为0.8mL/kg，观察鼻部无气泡，推入后立即将大鼠竖立旋转20s，以确保药液在肺组织中均匀分布，保证药物充分进入肺部。行头高脚低位斜放动物，逐层缝合切口，斜放10min后放回鼠笼。
分组：挑选模型成功的大鼠，按体重随机分为6组，每组12只，分别为正常对照组、模型对照组、KdPT低剂量组、KdPT中剂量组、KdPT高剂量组、阳性对照组。正常对照组动物气管推入等体积的生理盐水，其它操作同模型对照组。
给药：各组给予相应受试样品(给药方案见表1)，每天给药3次，分别于造模前、造模后12h、造模后22h给药一次；正常对照组和模型对照组给予生理盐水，阳性对照组给予0.75mg/kg的醋酸地塞米松。
表1
检测：造模24h后进行小动物肺功能检测，检测完毕后麻醉取材测量其余指标。
1、一般状态观察和死亡率：造模24h后测定各组大鼠的体重，记录死亡率。
2、肺通透指数测定：处死大鼠后，留取血清标本并测量其蛋白含量，然后收集肺泡灌洗液，并采用考马斯亮蓝测定其蛋白含量，肺通透指数＝支气管肺泡灌洗液蛋白/血清蛋白。肺泡灌洗液制备方法为：大鼠麻醉后，仰面固定，暴露气管，选用5mL一次性注射器，将针头倾斜30°轻柔地从气管1/2处切入，随即水平插入气管，动作要小心，防止扎穿气管，在气管切开处将气管与针头结扎，术者左手拇指和食指压紧针头与气管接口处，防止针头滑出。抽取5mL无菌生理盐水缓慢注入支气管，间隔1min后，将其抽回，如此进行3次，收集所有灌洗液。
3、血液中炎症因子指标检测：采用试剂盒方法(大鼠TNF-αELISA试剂盒：批号：201906，上海巧伊生物科技有限公司；大鼠IL-6ELISA试剂盒：批号：201906，上海巧伊生物科技有限公司；大鼠IL-1βELISA试剂盒：批号：201906，上海巧伊生物科技有限公司)检测血液中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子含量。
4、肺脏病理形态学观察：待动物处死后，迅速外科手术开胸，游离出完整的肺组织，肉眼进行大体观察后，取同一位置部分肺组织进行多聚甲醛固定，HE染色分别从炎症程度、肺泡壁增厚程度、嗜酸性物质、细胞脱落程度分别考虑病理变化，并按病理改变程度评价肺损伤：根据病变由轻到重的程度，依次半定量为极少量或无病变为阴性“-”记0；轻度或少量“+”记1；中度或中等量“++”记2；重度或多量“+++”记3；极重度或大量“++++”记4，将每个指标分数统计总分后进行分析。
数据处理：实验数据由GraphPad Prism 7.0生物统计学软件进行统计学处理：计量数据以Mean±SD表示，采用two-way ANOVA结合Dunnett's多重比较法进行分析；采用方差分析结合Dunnett’s多重比较法进行分析；计数资料采用Kruskal-Wallis秩和检验进行分析；采用one-way ANOVA结合Dunnett's多重比较法进行分析。
结果：
1、一般状态观察和死亡率：
造模前动物的状态均良好，活动自如，呼吸均匀，摄食量未见明显异常。动物造模后均会出现动物呼吸加重，呼吸音较大，属动物造模后正常表现，未发现其他异常表现。与模型对照组相比，治疗24h后各治疗组体重均无明显统计学差异(P>0.05，见表2、图1-A)。
死亡率：造模并治疗24h后，正常对照组、模型对照组、KdPT低、中、高剂量组、阳性对照组分别有0、4、4、2、1、1只动物死亡，KdPT治疗组显示出降低急性肺损伤动物的死亡率的趋势(见表2、图1-B)。
表2 各治疗组对急性肺损伤大鼠模型死亡率的影响(N＝12，Mean±SD)
2、肺通透指数测定：
与正常对照相比，模型对照组的肺通透性指数显著升高，具有显著的统计学差异(P<0.01)，表明造模成功；与模型对照组相比，多肽KdPT治疗组显著降低急性肺损伤大鼠的肺通透性指数(P<0.05或0.01)，且具有明显的量效关系，见表3、图2。
表3 各治疗组对急性肺损伤模型大鼠肺通透性的影响(N＝6，Mean±SD)
注：与模型对照组相比，*：P<0.05；**：P<0.01。
3、血液中炎性因子的检测：
与正常对照组相比，模型对照组的IL-1β、TNF-α、IL-6水平显著升高，且有统计学差异(P<0.01)；与模型对照组相比，KdPT治疗组均可剂量依赖的降低IL-1β、TNF-α、IL-6的水平(见表4、图3)，且有统计学意义(P<0.01)，表明多肽KdPT治疗可显著降低急性肺损伤大鼠的炎症因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)的水平。
表4 受试样品对大鼠急性肺损伤模型血液中炎症因子水平的影响(N＝12，Mean±SD)
注：与模型对照组相比，*：P<0.05；**：P<0.01。
4、肺脏病理形态学观察：
与正常对照组相比，模型对照组的肺脏病理评分显著升高，具有显著的统计学差异(P<0.01)，说明造模成功；与模型对照组相比，KdPT治疗组均可降低急性肺损伤大鼠的肺组织病理评分，且量效关系显著，其中中、高剂量组具有统计学差异(P<0.05)，见表5、图4。
表5 各治疗组对急性肺损伤模型大鼠肺脏病理评分的影响(N＝6，Mean±SD)
注：与模型对照组相比，*：P<0.05；**：P<0.01。
综上所述，本发明首次发现多肽KdPT具有明显的改善急性肺损伤大鼠的肺功能，降低急性肺损伤动物的死亡率，还可以显著降低肺通透系数和肺脏组织病理评分，有希望开发为治疗急性肺损伤的新型药物。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (5)

1.一种KdPT多肽在制备治疗急性肺损伤的药物中的应用，其特征在于，所述KdPT多肽的序列为Lys Pro Thr。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述KdPT多肽的给药剂量为2mg/kg～8mg/kg。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为口服剂或注射剂。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述KdPT多肽可以降低肺系数、肺通透性指数、炎症因子水平和肺脏病理评分。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述炎症因子包括IL-1β、TNF-α和IL-6。
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