TW202202623A - 治療和預防冠狀病毒之成分和方法 - Google Patents

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Abstract

本文揭示工程化SARS-CoV核酸、基因、肽、或蛋白之免疫原性成分或產物組合，該等成分或產物組合可用於引起針對SARS-CoV感染或另一種冠狀病毒之感染的免疫反應，該另一種冠狀病毒包括SARS-CoV-2和其變異體。亦揭示在受試者中使用免疫原性成分或產物組合來產生針對SARS-CoV或另一種冠狀病毒之免疫反應和中和抗體的方法，該等方法藉由使用核酸預敏化和多肽補強方法來投與該等成分或組合而進行。

Description

治療和預防冠狀病毒之成分和方法
相關申請案之交互參考：本申請案要求2020年3月27日提交之美國臨時專利申請案第63/000,978號、2020年10月6日提交之美國臨時專利申請案第63/088,228號、2021年1月26日提交之美國臨時專利申請案第63/141,875號、及2021年3月4日提交之美國臨時專利申請案第63/156,660號的優先權權益，該等申請案各自據此明確以全文引用方式併入，包括與其一起提交之任何附錄。
序列表之參考：本申請案正連同電子格式之序列表一起申請。序列表以標題為SeqListingSVF006WO.TXT之檔案提供，該檔案在2021年3月24日建置並且大小為368,069個位元組。電子序列表中之資訊據此明確以全文引用方式併入。
本揭示案之態樣總體上係關於工程化SARS-CoV-2核酸、基因、肽、或蛋白之免疫原性成分或產物組合，該等成分或產物組合可用於引起針對SARS-CoV-2感染或另一種冠狀病毒之感染的免疫反應。此免疫反應包含活化細胞毒性免疫細胞及產生針對SARS-CoV-2或另一種冠狀病毒包括其變異體之中和抗體的免疫細胞。本揭示案總體上亦係關於使用或投與本文所述免疫原性成分或產物組合至受試者以產生免疫反應包括但不限於產生針對SARS-CoV-2或另一種冠狀病毒之中和抗體的方法，例如藉由使用同源或異源核酸及/或多肽預敏化及核酸及/或多肽補強方法來投與該等成分或組合。
由SARS-CoV-2 (2019-nCoV)病毒引起之2019年冠狀病毒大流行導致人類生命之毀滅性損失、對全球經濟之影響以及對全球公共衛生基礎設施之壓力。儘管針對SARS-CoV-2病毒之人冠狀病毒免疫療法或疫苗已開始獲得批準，但尚未進行長期療效和安全性研究。此外，還出現了SARS-CoV-2病毒之其他變異體或突變體，其中一些已顯示出比最初鑑定之毒株更具傳染性或毒性。因此，非常需要針對SARS-CoV-2和其他冠狀病毒之新療法和預防藥物。
針對SARS-CoV-2和其他潛在新的冠狀病毒株或突變體之治療和疫苗開發的速度至關重要。病毒之基因分析示出SARS-CoV-2和通常冠狀病毒之最易變組分係刺突(S)蛋白，該蛋白包含受體結合域(receptor binding domain，RBD)。SARS-CoV-2之RBD與2003之SARS病毒(SARS-CoV-1)和其他冠狀病毒具有大約75%同源性(Wu A等人「Genome Compositions and Divergence of the Novel Coronavirus (2019-nCoV) Originating in China」Cell Host Microbe .(2020); 27(3):325-328)。此表明針對其他冠狀病毒諸如SARS-CoV-1之現有免疫療法和候選疫苗不適用於防止SARS-CoV-2。
本文揭示作為針對SARS-CoV-2之免疫原性成分來使用的獨特候選物，該等候選物允許快速驗證和大規模產生。本文描述使用核酸(DNA或RNA)預敏化和多肽補強投與時程的異源預敏化-補強免疫方法之用途。核酸預敏化使得可在自單一劑量之一或兩週內偵測到中和抗體。此歸因於如與蛋白/佐劑混合物相比的更好T細胞預敏化。
在一些實施例中，本文所述免疫原性成分或產物成分係核酸及/或多肽。在一些實施例中，核酸為DNA或RNA。在一些實施例中，免疫原性成分或產物成分意欲投與動物，諸如哺乳動物、小鼠、兔、貓、犬、靈長類動物、猴、或人類，以便誘導針對SARS-CoV-2病毒或其他冠狀病毒之免疫原性反應。在一些實施例中，免疫原性反應包括形成活性免疫細胞，諸如細胞毒性T細胞或產生針對SARS-CoV-2病毒、其他冠狀病毒、或病毒之任何抗原、多肽、蛋白、核酸、或基因組組分之滅活抗體的免疫細胞、基本上由形成該等細胞組成、或由形成該等細胞組成。在一些實施例中，免疫原性成分或產物成分意欲投與動物，諸如哺乳動物、小鼠、兔、貓、犬、靈長類動物、猴、或人類，以便產生針對動物中之SARS-CoV-2病毒或其他冠狀病毒之中和抗體。在一些實施例中，將免疫原性成分或產物成分投與處於染上SARS-CoV-2之風險中或當前未感染SARS-CoV-2之個體。在一些實施例中，免疫原性成分或產物組合提供針對SARS-CoV-2感染之持續免疫原性保護。
本文所述的一些替代方案涉及包含至少一種SARS-CoV-2核酸組分、基本上由該組分組成、或由該組分組成的核酸，該等核酸較佳與編碼IgE前導序列之核酸(例如，編碼胺基酸序列MDWTWILFLVAAATRVHS(SEQ ID NO:44 之核酸)，或與SEQ ID NO:43 具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性之IgE前導核酸序列連接，以及此等核酸及/或由其編碼之蛋白作為藥物，包括治療或抑制SARS-CoV-2感染之藥物的用途。
在一些替代方案中，至少一種SARS-CoV-2核酸組分包含S蛋白序列、RBD序列、M蛋白序列、NP蛋白序列、E蛋白序列、或HE蛋白序列、基本上由該序列組成、或由該序列組成。在一些替代方案中，至少一種SARS-CoV-2核酸組分作為野生型序列存在。一些替代方案涉及核酸和其用途，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:1-12 中任何一者或多者之至少50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性或在前述百分比中任何兩者定義之範圍內的與SEQ ID NO:1-12 中任何一者或多者的一定量之序列同一性。在一些替代方案中，設想包含在本文所述成分和用途中之至少一種SARS-CoV-2核酸組分係前述野生型序列之人類密碼子最佳化序列。在一些替代方案中，例如，核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者之50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，或在前述百分比中任何兩者定義之範圍內的與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者的一定量之序列同一性。在一些替代方案中，以上提及之核酸用於預防、治療或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2感染。因此，一些替代方案包括與SEQ ID NO:1-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者具有至少50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性或與SEQ ID NO:1-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者具有在前述百分比中任何兩者定義之範圍內的一定量之序列同一性的核酸作為諸如用於預防、治療、改善、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2感染之藥物的用途，該受試者可視情況經選擇或鑑定來接受用於預防、治療、改善、或抑制SARS-CoV-2感染之藥物。此等受試者可藉由臨床評估或診斷評估或兩者來選擇或鑑定。
本文提供之一些替代方案涉及包含至少一種SARS-CoV-2多肽組分、基本上由該組分組成、或由該組分組成的多肽。在一些替代方案中，至少一種SARS-CoV-2多肽組分包含S蛋白序列、RBD序列、M蛋白序列、NP蛋白序列、E蛋白序列、或HE蛋白序列、基本上由該序列組成、或由該序列組成。在一些實施例中，可在本文所述成分或方法中提供之多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者之至少50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性或在前述百分比中任何兩者定義之範圍內的與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者的一定量之序列同一性。在一些替代方案中，多肽用作諸如用於預防、治療或抑制受試者諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物，該受試者可視情況經選擇或鑑定來接受用於預防、治療、改善、或抑制SARS-CoV-2感染之藥物。此等受試者可藉由臨床評估或診斷評估或兩者來選擇或鑑定。在一些實施例中，多肽自以上提及之野生型或密碼子最佳化序列轉譯。在一些實施例中，多肽係重組表現的。在一些實施例中，多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。因此，一些替代方案包括與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者具有至少50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性或與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者具有在前述百分比中任何兩者定義之範圍內的一定量之序列同一性的多肽作為諸如用於預防、治療、改善、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2感染之藥物的用途，該受試者可視情況經選擇或鑑定來接受用於預防、治療、改善、或抑制SARS-CoV-2感染之藥物。
在一些替代方案中，核酸或多肽亦包含至少一個自催化肽裂解位點。在一些替代方案中，至少一個自催化肽裂解位點來P2A自催化肽裂解位點。在一些替代方案中，至少一種SARS-CoV-2核酸組分或至少一種SARS-CoV-2多肽組分藉由至少一個自催化肽裂解位點來分隔。
在一些替代方案中，至少一個HDAg毒株序列在以上提及之核酸或多肽中提供，諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10個選自HDAg基因型1A、HDAg基因型1B、HDAg基因型2A、或HDAg基因型2B或其任何組合之HDAg毒株序列。在一些替代方案中，四個HDAg毒株序列在核酸或其提及之多肽中提供。在一些替代方案中，四個HDAg毒株序列包含各自為HDAg基因型1A、HDAg基因型1B、HDAg基因型2A、和HDAg基因型2B的一個複本。在一些替代方案中，在核酸或多肽中存在少於四個HDAg毒株序列。在一些替代方案中，HDAg毒株序列以串聯方式存在於核酸或多肽中。在一些替代方案中，HDAg毒株序列藉由自催化肽裂解位點來分隔。在其他替代方案中，HDAg毒株序列在沒有接頭的情況下以串聯方式存在，具有至少1個核苷酸或胺基酸之接頭，或在該等序列之間沒有自催化肽裂解位點。在一些替代方案中，SARS-CoV-2或其他冠狀病毒序列存在於HDAg毒株序列之上游或下游。在一些替代方案中，SARS-CoV-2或其他冠狀病毒序列藉由自催化肽裂解位點與HDAg毒株序列分隔。在一些替代方案中，自催化肽裂解位點為P2A自催化肽裂解位點。在一些替代方案中，構建體SVF-8(OC-8)和SVF-9(OC-9)包含HDAg毒株序列、基本上由該等序列組成、或由該等序列組成。
在一些替代方案中，免疫原性成分或產物成分包含如上所述核酸(例如，SEQ ID NO:1-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者)、和如上所述多肽(例如，SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者)、基本上由該核酸組成、或由該核酸組成。在一些替代方案中，免疫原性成分或產物成分在異源預敏化-補強方法中投與受試者。在一些替代方案中，預敏化劑量包含核酸並且補強劑量包含多肽。在一些替代方案中，預敏化劑量包含前述多肽中任何一者或多者並且補強劑量包含前述核酸中任何一者或多者。在一些替代方案中，免疫原性成分或產物成分作為同源預敏化-補強方法來投與受試者。在一些替代方案中，預敏化劑量包含前述核酸中任何一者或多者並且補強劑量包含相同核酸或不同核酸。在一些替代方案中，預敏化劑量包含前述多肽中任何一者或多者和補強劑量包含相同多肽或不同多肽。在一些替代方案中，免疫原性成分或產物成分進一步包含佐劑。在一些實施例中，佐劑為明礬及/或QS21。在一些替代方案中，核酸以重組載體形式提供。在一些替代方案中，重組載體為pVAX1。在一些替代方案中，免疫原性成分或產物成分用於預防、治療或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2，該受試者可視情況經選擇或鑑定來接受用於預防、治療、改善、或抑制SARS-CoV-2感染之藥物。此等受試者可藉由臨床評估或診斷評估或兩者來選擇或鑑定。
本文所述一些替代方案涉及使用如上所述免疫原性成分、產物成分、核酸、或多肽(例如，SEQ ID NO:1-36 、 39-42 、或 57-70 中任何一者或多者)在受試者，較佳人類中產生免疫反應之方法。在一些替代方案中，方法包含異源預敏化-補強方法。在一些替代方案中，將至少一個預敏化劑量投與受試者並且將至少一個補強劑量投與受試者。在一些替代方案中，至少一個預敏化劑量為核酸。在一些替代方案中，至少一個補強劑量為多肽。在一些替代方案中，至少一個補強劑量包含佐劑，諸如明礬及/或QS21。在一些替代方案中，至少一個補強劑量在投與至少一個預敏化劑量之後至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週投與或在藉由前述時間點中任何兩者來定義之時間範圍內投與。在一些替代方案中，方法包含同源預敏化-補強方法。在一些替代方案中，方法進一步包含投與抗病毒療法，諸如地塞米松(dexamethasone)、法維匹韋(favipiravir)、法維拉韋(favilavir)、瑞地昔韋(remdesivir)、托珠單抗(tocilizumab)、加利地韋(galidesivir)、沙利姆單抗(sarilumab)、洛匹那韋(lopinavir)、利托那韋(ritonavir)、達蘆那韋(darunavir)、利巴韋林(ribavirin)、干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素阿爾法-2b、康復期血清、AT-100、或TJM2、或幹細胞療法、或其任何組合。
額外替代方案涉及包含本文所述成分中任何一者或多者的注射裝置，諸如在SEQ ID NO:1-36 、 39-42 、或 57-70 中任何一者或多者中列出之核酸或多肽中任何一者或多者。此等注射裝置可包含單一劑量之此核酸或多肽並且此等注射裝置可具有被組配來增強核酸或多肽或兩者之遞送的經改良針設計。此等注射裝置可在使用或不使用電穿孔的情況下使用。可包括SEQ ID NO:1-36 ， 39-42 ，或 57-70 之核酸或多肽中任何一者或多者的設想注射裝置描述於美國專利申請公開案第2016/0235928號；PCT申請案公開案第WO2014064534號；美國專利第6,610,044號；第6,132,419號；第6,379,966號；第6,897,068號；第7,015,040號；第7,214,369號；第7,473,419號；和第7,589,059號，該等專利全部據此明確以引用方式全部併入。
本發明之一些態樣涉及以下編號替代方案：
1. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。
2. 替代方案1之核酸，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列和編碼NP多肽之核酸序列。
3. 替代方案1或2之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:1 或13 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
4. 替代方案1之核酸，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列、編碼M多肽之核酸序列、和編碼NP多肽之核酸序列。
5. 替代方案1-2或4中任一項之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:2-3 、 14 、 或15 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
6. 替代方案4之核酸，其中RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
7. 替代方案6之核酸，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
8. 替代方案6或7之核酸，其中編碼RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、 或47-50 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
9. 替代方案6-8中任一項之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:39 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
10. 替代方案1-2或4中任一項之核酸，進一步包含5’IgE前導核酸序列。
11. 替代方案10之核酸，其中5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
12. 替代方案10或11之核酸，其中RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
13. 替代方案12之核酸，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
14. 替代方案12或13之核酸，其中編碼RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、 或47-50 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
15. 替代方案10-14中任一項之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:40 、 57-60 、 或62 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
16. 替代方案10或11之核酸，其中RBD多肽包含RBD之三個串聯複本。
17. 替代方案16之核酸，其中RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
18. 替代方案16或17之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:61 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
19. 替代方案1之核酸，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列和編碼M多肽之核酸序列。
20. 替代方案1或9之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:4 或16 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
21. 替代方案1之核酸，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼刺突(S)多肽之核酸序列、編碼膜(M)多肽之核酸序列、或編碼NP多肽之核酸序列、或其任何組合。
22. 替代方案21之核酸，其中S多肽包含一或多種改良表現、溶解度、及/或免疫原性之突變。
23. 替代方案21或22之核酸，其中S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。
24. 替代方案21-23中任一項之核酸，其中編碼S多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:51 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
25. 替代方案21-24中任一項之核酸，進一步包含5’IgE前導核酸序列。
26. 替代方案25之核酸，其中5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
27. 替代方案21-26中任一項之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:63 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
28. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列，該序列共享或包含與SEQ ID NO:5-7 、 17-19 、 22-24 、 73 、 或75 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
29. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼D型肝炎抗原(HDAg)之核酸序列。
30. 替代方案29之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:8 或20 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
31. 替代方案29之核酸，進一步包含至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。
32. 替代方案29或31之核酸，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:9 或21 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
33. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽序列和至少一個P2A自催化多肽裂解位點。
34. 替代方案33之多肽，其中至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和NP多肽序列。
35. 替代方案33或34之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO: 25 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
36. 替代方案33之多肽，其中至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列、M多肽序列、和NP多肽序列。
37. 替代方案33、34、或36之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO: 26-27 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
38. 替代方案36之多肽，其中RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
39. 替代方案38之多肽，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
40. 替代方案38或39之多肽，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、 或52-55 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
41. 替代方案38-40中任一項之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:41 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
42. 替代方案33、34、或36之多肽，進一步包含N末端IgE前導多肽序列。
43. 替代方案42之多肽，其中N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
44. 替代方案42或43之多肽，其中RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
45. 替代方案44之多肽，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
46. 替代方案44或45之多肽，其中RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、 或52-55 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
47. 替代方案42-46中任一項之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:42 、 64-67 、 或69 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
48. 替代方案42-43之多肽，其中RBD多肽包含RBD之三個串聯複本。
49. 替代方案48之多肽，其中RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
50. 替代方案48或49之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:68 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
51. 替代方案33之多肽，其中至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和M多肽序列。
52. 替代方案33或51之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO: 28 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
53. 替代方案33之多肽，其中至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含刺突(S)多肽和NP多肽。
54. 替代方案52之多肽，其中S多肽包含一或多種改良表現、溶解度、及/或免疫原性之突變。
55. 替代方案53或54之多肽，其中S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。
56. 替代方案53-55中任一項之多肽，其中S多肽共享或包含與SEQ ID NO:56 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
57. 替代方案53-56中任一項之多肽，進一步包含N末端IgE前導多肽序列。
58. 替代方案57之多肽，其中N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
59. 替代方案中任一項之多肽53-58，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:70 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
60. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽，該多肽共享或包含與SEQ ID NO:29-31 、 34-36 、 74 、 或76 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
61. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽和至少一個HDAg多肽。
62. 替代方案61之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO: 32 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
63. 替代方案62之多肽，進一步包含至少一個P2A自催化多肽裂解位點。
64. 替代方案61或63之多肽，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO: 33 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
65. 替代方案1-32中任一項之核酸，其用於諸如供預防、治療或抑制受試者，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
66. 替代方案33-64中任一項之多肽，其用於諸如供預防、治療或抑制受試者，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
67. 替代方案33-64或66中任一項之多肽，其中多肽係重組表現的。
68. 替代方案67之多肽，其中多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
69. 一種免疫原性成分或產物組合，其包含： (a) 包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸；或 (b) 包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。
70. 替代方案69之免疫原性成分或產物組合，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含： i) 編碼RBD多肽之核酸序列； ii) 編碼NP多肽之核酸序列； iii) 編碼M多肽之核酸序列； iv) 編碼HDAg多肽之核酸序列； v) 編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列； vi) 編碼IgE前導多肽之核酸序列；或 vii) 編碼S多肽之核酸序列； 或其任何組合。
71. 替代方案69或70之免疫原性成分或產物組合，其中核酸為替代方案1-32中任一項之核酸。
72. 替代方案69-71中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:1-12 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
73. 替代方案69-71中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。
74. 替代方案73之免疫原性成分或產物組合，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、 或75 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
75. 替代方案69-74中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中至少一種SARS-CoV-2多肽包含： i) RBD多肽序列； ii) NP多肽序列； iii) M多肽序列； iv) HDAg多肽序列； v) P2A自催化多肽裂解位點序列； vi) IgE前導多肽序列；或 vii) S多肽序列； 或其任何組合。
76. 替代方案69-75中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中多肽為替代方案33-64中任一項之多肽。
77. 替代方案69-76中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、 或76 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
78. 替代方案69-77中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中多肽係重組表現的。
79. 替代方案78之免疫原性成分或產物組合，其中多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
80. 替代方案69-79中任一項之免疫原性成分或產物組合，進一步包含佐劑。
81. 替代方案80之免疫原性成分或產物組合，其中佐劑為明礬及/或QS21。
82. 替代方案69-81中任一項之免疫原性成分或產物組合，其中核酸在重組載體中提供。
83. 一種使用替代方案69-82中任一項列出之免疫原性成分或產物組合在受試者中產生免疫反應及/或產生中和抗體的方法，其包括： a) 向受試者投與至少一個包含核酸之預敏化劑量；和 b) 向受試者投與至少一個包含多肽之補強劑量。
84. 替代方案83之方法，其中至少一個補強劑量進一步包含佐劑。
85. 替代方案84之方法，其中佐劑為明礬及/或QS21。
86. 替代方案83-85中任一項之方法，其中至少一個補強劑量在投與至少一個預敏化劑量之後至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週投與或在藉由前述時間點中任何兩者來定義之時間範圍內投與，例如，在1-48天內或在1-48週內。
87. 替代方案83-86中任一項之方法，其中投與係腸內、經口、鼻內、非經腸、皮下、肌肉內、皮內、或靜脈內或以其任何組合來提供，並且視情況使用活體內 電穿孔。
88. 替代方案83-87中任一項之方法，其中投與係聯合抗病毒療法來執行。
89. 替代方案88之方法，其中抗病毒療法包括投與地塞米松、法維匹韋、法維拉韋、瑞地昔韋、托珠單抗、加利地韋、沙利姆單抗、洛匹那韋、利托那韋、達蘆那韋、利巴韋林、干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素阿爾法-2b、康復期血清、或其任何組合。
90. 一種用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其包含： (a) 包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸；或 (b) 包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。
91. 替代方案90之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含： i) 編碼RBD多肽之核酸序列； ii) 編碼NP多肽之核酸序列； iii) 編碼M多肽之核酸序列； iv) 編碼HDAg多肽之核酸序列； v) 編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列； vi) 編碼IgE前導多肽之核酸序列；或 vii) 編碼S多肽之核酸序列； 或其任何組合。
92. 替代方案91之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中核酸為替代方案1-32中任一項之核酸。
93. 替代方案90-92中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO: 1-12 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
94. 替代方案90-92中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。
95. 替代方案94之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、 或75 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
96. 替代方案90-95中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中至少一種SARS-CoV-2多肽包含： i) RBD多肽序列； ii) NP多肽序列； iii) M多肽序列； iv) HDAg多肽序列； v) P2A自催化多肽裂解位點序列； vi) IgE前導多肽序列；或 vii) S多肽序列； 或其任何組合。
97. 替代方案90-96中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中多肽為替代方案33-64中任一項之多肽。
98. 替代方案90-97中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、 或76 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
99. 替代方案90-98中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中多肽係重組表現的。
100. 替代方案99之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
101. 替代方案90-100中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，進一步包含佐劑。
102. 替代方案101之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中佐劑為明礬及/或QS21。
103. 替代方案90-102中任一項之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中核酸在重組載體中提供。
104. 一種包含至少一個SARS-CoV-2核酸組分、基本上由該組分組成、或由該組分組成的核酸，該核酸連接至編碼IgE前導序列之核酸，較佳編碼胺基酸序列MDWTWILFLVAAATRVHS(SEQ ID NO:44 )之核酸，或共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性的IgE前導核酸序列。
105. 替代方案104之核酸或由其編碼之蛋白作為藥物，包括治療或抑制SARS-CoV-2感染之藥物的用途。
在以下具體實施方式中，參考隨附圖式，該等圖式形成具體實施方式之一部分。除非上下文另外規定，否則在附圖中，相似符號通常鑑定相似部件。在具體實施方式、附圖、和請求項中描述之示例性實施例不意欲具有限制性。可利用其他實施例，並且可產生其他變化，而不脫離本文提供之標的物之精神或範圍。容易理解如在本文中一般描述，並且在附圖中示出的本揭示案之態樣可以多種不同組態來佈置、取代、組合、分離、和設計，該等組態全部明確涵蓋在本文中。 定義
除非另外定義，否則本文所用之所有技術和科學術語均具有如一般熟習此項技術者通常所理解之相同意義。除非另外陳述，否則本文提及之所有專利、申請案、公開申請案和其他公開案明確以引用方式全部併入。若本文中之術語存在複數個定義，則除非另外陳述，否則以本部分之定義為準。
冠詞「一(個/種)」在本文中用於指代一個(種)或多於一個(種) (例如，至少一個(種))的該冠詞之語法對象。舉例而言，「一要素」意謂一個要素或一個以上的要素。
如本文使用，術語「約」或「大約」意指數量、位準、值、數目、頻率、百分比、尺寸、大小、量、重量或長度變化多達參考數量、位準、值、數目、頻率、百分比、尺寸、大小、量、重量或長度之30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%。
在本說明書全文中，除非上下文另外需要，否則「包含(comprise)」、「包含(comprises)」及「包含(comprising)」等詞將理解為暗示包括所述步驟或要素或步驟或要素之群組，而不排除任何其他步驟或要素或步驟或要素之群組。
「由以下組成」意指包括且限於片語「由以下組成」後接之內容。因此，片語「由以下組成」指示所列要素為必需或必備的，且不可存在其他要素。「基本上由以下組成」意指包括該片語之後所列的任何要素，且限於不干擾或貢獻於本揭示內容中對所列要素所規定的活性或作用之其他要素。因此，片語「基本上由以下組成」指示：所列要素為必需或必備的，但其他要素為可選的且可存在或可不存在，此取決於該等其他要素是否實質上影響所列要素之活性或作用。
除非另外定義，否則本文中使用之所有技術及科學術語皆具有與由一般熟習本揭示案所屬技術者通常理解相同之含義。若本文中之術語存在複數個定義，則除非另外陳述，否則以本部分之定義為準。除非具體相反地指示，否則本揭示之實踐將此項技術內採用分子生物學之習知方法及重組DNA技術，其中許多在以下出於說明之目的來描述。
如本文使用之術語「個體」、「受試者」、或「患者」意謂人類或非人類哺乳動物，例如，犬、貓、小鼠、大鼠、奶牛、綿羊、豬、山羊、非人類靈長類動物、或鳥，例如，雞，以及任何其他脊椎動物或無脊椎動物。
術語「哺乳動物」以其通常生物學含義來使用。因此，其具體包括但不限於靈長類動物，包括猿猴(黑猩猩、類人猿、猴子)和人、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、犬、貓、齧齒動物、大鼠、小鼠、豚鼠、或類似物。
本文所述之一些實施例涉及醫藥成分，該等成分包含有效量之本文所述寡核苷酸、蛋白、或兩者，及醫藥學上可接受之載劑、賦形劑、或其組合，基本上由該等物質組成，或由該等物質組成。本文所述醫藥成分適合於人類及/或獸醫應用。
如本文使用之術語「功能」和「功能性」係指生物學、酶促、或治療功能。
如本文使用之術語「分離」係指如下材料，該材料實質上或基本上不具有通常在其天然狀態下伴隨其之組分。例如，如本文使用，「經分離之細胞」包括自其天然存在狀態下之環境或生物體純化之細胞，自受試者或自培養物移除之細胞，例如，其不顯著與活體內或活體外物質相關。
術語「有效量」或「有效劑量」用於指示引起所指示生物學或醫學反應的活性化合物、或藥劑之量。例如，有效量化合物可為減輕或改善疾病之症狀或延長所治療受試者之存活所需要之量。此反應可在組織、系統、動物或人類中發生並且包含減輕所治療之疾病之體征或症狀。依據本文提供之揭示內容，有效量之確定完全在熟習本技術者之能力範圍內。本文揭示之化合物所需要的作為劑量之有效量取決於投與途徑、所治療之包括人類之動物之類型、和所考量之特定動物之實體特性。劑量可定製以便達成所需效應，但是取決於諸如體重、飲食、並行藥療法之因素和熟習醫學技術者識別之其他因素。
術語「醫藥學上可接受之鹽」包括成分之相對無毒、無機和有機酸、或鹼加成鹽，包括不限於止痛劑、治療劑、其他材料、以及類似物質。醫藥學上可接受之鹽之實例包括衍生自無機酸，諸如鹽酸、硫酸之鹽，和衍生自有機酸，諸如乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、及其類似酸之鹽。用於形成鹽之合適無機鹼之實例包括氨、鈉、鋰、鉀、鈣、鎂、鋁、鋅、及其類似物之磷酸鹽、氫氧化物、碳酸鹽、和碳酸氫鹽。鹽亦可用合適有機鹼來形成，包括無毒並且足夠強以形成此等鹽的鹼。例如，此等有機鹼之類別可包括但不限於單烷基胺、二烷基胺、和三烷基胺，包括甲胺、二甲胺、和三乙胺；單羥烷基胺、二羥烷基胺、或三羥烷基胺，包括單乙醇胺、二乙醇胺、和三乙醇胺；胺基酸，包括甘胺酸、精胺酸和離胺酸；胍；N-甲基葡萄糖胺；N-甲基葡萄胺；L-麩醯胺酸；N-甲基哌嗪；嗎啉；乙二胺；N-苄基苯乙胺；或三羥甲基胺基乙烷。
如在本文中可互換使用之「調配物」、「醫藥成分」、和「成分」係提及待投與受試者之物質成分的等效術語。
術語「醫藥學上可接受」意謂與用於受試者和尤其人類之療法相容。
術語「劑」係指具有生物活性並且可用於療法中之活性劑。又，「劑」可與「至少一種劑」、「化合物」或「至少一種化合物」同義並且可係指任何形式之劑，諸如衍生物、類似物、鹽或其前藥。劑可以各種形式、分子複合物之組分、和醫藥學上可接受之鹽(例如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、硼酸鹽、乙酸鹽、馬來酸酯、酒石酸鹽、和水楊酸鹽)存在。術語「劑」亦可係指任何醫藥分子或化合物、治療分子或化合物、基質形成分子或化合物、聚合物、合成分子和化合物、天然分子和化合物、及其任何組合。
適當調配物視所選投藥途徑而定。配製和投與本文描述之化合物之技術為熟習此項技術者已知的。在此項技術中存在投與化合物之多種技術，包括但不限於腸內、經口、直腸、局部、舌下、口腔、耳內、硬膜上、表皮、氣溶膠、非經腸、肌肉內、皮下、動脈內、靜脈內、門靜脈內、關節內、皮內、腹膜、髓內注射、鞘內、直接心室內、腹膜內、鼻內或眼內注射。醫藥成分通常對具體規定投與途徑來定製。本文所述之醫藥成分亦可與其他療法一起投與受試者，諸如T細胞、自然殺手細胞、B細胞、巨噬細胞、淋巴球、幹細胞、骨髓細胞、或造血幹細胞。
醫藥化合物亦可以局部而非全身方式投與，例如，經由通常以積存或持續釋放調配物形式將化合物直接注射至器官、組織、或患病區域。此外，可在靶向藥物遞送系統中，例如，在塗有組織特異性抗體之脂質體中投與化合物。脂質體可靶向並且由器官、組織、癌症、腫瘤、或患病區域來選擇性地吸收。
本文揭示之醫藥成分可以本身已知之方式製造，例如藉助於習知混合、溶解、粒化、糖衣錠製備、磨細、乳化、囊封、覆埋或壓錠製程。如本文描述，用於醫藥成分中之化合物可作為具有醫藥學上相容相對離子之鹽來提供。
如本文使用，「載劑」係指促進將化合物傳送、遞送及/或併入細胞、組織及/或身體器官中之化合物、顆粒、固體、半固體、液體、或稀釋劑。例如，無限制地，脂質奈米顆粒(lipid nanoparticle，LNP)為一種類型之載劑，該載劑可囊封寡核苷酸以便由此在穿過血流期間保護寡核苷酸以免降解且/或促進遞送至所需器官，諸如肝臟。
如本文使用，「稀釋劑」係指醫藥成分中的缺少藥理學活性但是可在醫藥學上必不可少或合乎需要的組成部分。例如，稀釋劑可用於增加對於製造及/或投與而言質量太小的有效藥物之體積。其亦可為將藥物溶解以便藉由注射、攝取或吸入來投與之液體。在此項技術中之常見形式之稀釋劑為模擬人類血液之滲透性及/或成分的緩衝水溶液，例如不限於磷酸鹽緩衝鹽水。
術語「賦形劑」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義，並且係指添加至醫藥成分以便為該成分提供不限於體積、堅實度、穩定性、結合能力、潤滑、崩解能力等的惰性物質、化合物、或材料。可併入本文所述任何一種或多種調配物中的具有所需性質之賦形劑包括但不限於防腐劑、佐劑、穩定劑、溶劑、緩衝劑、稀釋劑、增溶劑、洗滌劑、界面活性劑、螯合劑、抗氧化劑、醇、酮、醛、乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸、鹽、氯化鈉、碳酸氫鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、氯化鉀、磷酸鉀、硫酸鎂糖、右旋糖、右旋糖酐、果糖、甘露糖、乳糖、半乳糖、蔗糖、山梨糖醇、纖維素、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素)、甘油、聚乙烯醇、聚維酮、丙二醇、血清、胺基酸、聚乙二醇、聚山梨酯20、聚山梨酯80、去氧膽酸鈉、牛磺去氧膽酸鈉、硬脂酸鎂、辛基酚乙氧基化物、苄索氯銨、硫柳汞、明膠、酯、醚、2-苯氧基乙醇、尿素或維生素、或其任何組合。可存在於醫藥組合物中之賦形劑之量為0%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、100% w/w之百分比或藉由前述數字中任何兩者所定義之範圍內之任何重量百分比。
如本文使用之術語「佐劑」係指刺激免疫反應並且增加保護性免疫之功效並且聯合免疫原性抗原、抗原決定基、或成分來投與之物質、化合物、或材料。佐劑用來藉由實現抗原之連續釋放、細胞介素和趨化因子之上調、投與位點處之細胞募集、增加抗原呈遞細胞中之抗原吸收和呈遞、或活化抗原呈遞細胞和炎性體來改良免疫反應。可以包含在本文所述任何一種或多種調配物中之常用佐劑包括但不限於明礬、鋁鹽、硫酸鋁、氫氧化鋁、磷酸鋁、磷酸鈣、氫氧化鈣、硫酸鋁鉀、油、礦物油、石蠟油、水包油乳液、洗滌劑、MF59®、角鯊烯、AS03、α-生育酚、聚山梨酯80、AS04、單磷醯脂質A、病毒體、核酸、聚肌苷酸:聚胞苷酸、皂苷、QS-21、蛋白質、鞭毛蛋白、細胞介素、趨化因子、IL-1、IL-2、IL-12、IL-15、IL-21、咪唑并喹啉、CpG寡核苷酸、脂質、磷脂、二油醯基磷脂醯膽鹼(dioleoyl phosphatidylcholine，DOPC)、海藻糖二黴菌酸酯、肽聚糖、細菌提取物、脂多醣或弗氏佐劑或其任何組合。
如本文使用之任何給定物質、化合物、或材料之術語「純度」係指物質、化合物、或材料相對於預期豐度之實際豐度。例如，物質、化合物、或材料可為至少80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、或100%純，包括之間之所有小數。純度可受不當雜質影響，該等雜質包括但不限於副產物、異構體、對映異構體、降解產物、溶劑、載劑、媒劑、或污染物、或其任何組合。純度可藉由包括但不限於層析、液相層析、氣相層析、光譜、UV-可見光譜法、紅外光譜法、質譜、核磁共振、重量測定、或滴定、或其任何組合之技術來量測。
本文揭示之一些實施例涉及選擇有需要之受試者或患者。在一些實施例中，選擇需要針對病毒感染諸如SARS-CoV-2之免疫原性的患者。在一些實施例中，選擇患者作為被鑑定為患有SARS-CoV-2感染之患者或作為需要治療病毒感染諸如SARS-CoV-2之患者。在一些實施例中，選擇先前已針對病毒感染諸如SARS-CoV-2而進行過治療之患者。在一些實施例中，選擇先前由於處於病毒感染諸如SARS-CoV-2之風險中而進行過治療之患者。在一些實施例中，選擇出現病毒感染諸如SARS-CoV-2之復發的患者。在一些實施例中，選擇出現對於病毒感染諸如SARS-CoV-2之療法的抗性的患者。在一些實施例中，選擇可具有前述選擇標準之任何組合的患者。此等選擇可藉由受試者之臨床和診斷評估或兩者之組合來產生。
如本文使用之術語「治療(「treat/treating/treatment/therapeutic」)」或「療法「therapy」」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義，並且不一定意謂完全治癒或消除疾病或病狀。如本文使用(並且亦在此項技術中理解)之術語「治療(「treating/treatment」)」亦意謂獲得受試者病狀之有益或所需結果，包括臨床結果的方法。有益或所需臨床結果可包括但不限於減輕或改善一或多種症狀或病狀、減少疾病程度、穩定(亦即，不惡化)疾病狀態、預防疾病之傳播或擴散、延遲或減緩疾病進展、改善或減緩疾病狀態、減少疾病之復發、以及緩解，不論是否部分或完全緩解以及是否可偵測或不可偵測之緩解。如本文使用之「治療(「treating/treatment」)」可在一些但是並非所有情境下包括預防性治療。治療方法包含投與受試者治療有效量之活性劑。投與步驟可由單一投與組成或可包含一系列投與。成分以足以治療患者之量和持續時間來投與受試者。治療期之長度取決於各種因素，諸如病狀之嚴重程度、患者之年齡和基因概況、活性劑之濃度、用於治療之成分之活性、或其組合。亦應認識到用於治療或預防之劑的有效劑量可在特定治療或預防方案之過程中增加或減少。劑量之變化可發生並且藉由在此項技術中已知之標準診斷檢定而變得顯而易知。在一些情況下，可需要長期投與。術語「預防性治療」係指治療尚未表現出疾病或病狀之症狀，但是易患或另外處於特定疾病或病狀之風險中的受試者，其中治療降低患者患上疾病或病狀之可能性。術語「治療性治療」係指向已經患有或患上疾病或病狀之受試者投與治療。
如本文使用之術語「抑制」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義，並且可意指減少病毒感染，諸如SARS-CoV-2。減少可為10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、或100%，或在前述值中任何兩者定義之範圍內的量。如本文使用，術語「延遲」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義，並且係指將諸如病毒感染之事件減緩、推遲、或延期至某一時間，該時間比原本預期時間更晚。延遲可為0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%之延遲，或在前述值中任何兩者定義之範圍內的量。術語抑制和延遲可能不一定指示100%抑制或延遲。可實現部分抑制或延遲。
如本文使用之術語「免疫原性成分」係指意欲在投與宿主時引起免疫反應的物質或物質之混合物，包括但不限於抗原、抗原決定基、核酸、肽、多肽、蛋白、多醣、脂質、半抗原、類毒素、滅活生物體、或減毒生物體、或其任何組合。免疫反應包含先天性和適應性免疫反應兩者，後者經由細胞諸如記憶T細胞和記憶B細胞來建立持久免疫記憶。在對於免疫原性成分之初始免疫反應期間建置之抗體可在相同抗原、抗原決定基、核酸、肽、多肽、蛋白、多醣、脂質、半抗原、類毒素、滅活生物體、或減毒生物體、或活生物體或病原體之後續攻擊中產生，該活生物體或病原體展現抗原、抗原決定基、核酸、肽、多肽、蛋白、多醣、脂質、半抗原、或類毒素或其任何組合。以此方式，免疫原性成分可充當針對特定病原體之疫苗。免疫原性成分亦可包括一或多種刺激免疫反應並且增加保護性免疫之功效的佐劑。
如本文使用之術語「產物組合」係指可一起用於統一功能之兩個或兩個以上個別化合物、物質、材料、或成分之集合。在一些實施例中，產物組合包含一起用於在投與宿主時引起免疫反應的至少一種核酸成分和至少一種多肽成分，引起免疫反應之程度視情況比僅投與一種成分類型時的程度更大。
如本文使用之術語「核酸」或「核酸分子」係指多核苷酸，諸如脫氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、藉由聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)所產生的片段、以及藉由連接、切斷、內切核酸酶作用、和外切核酸酶作用中之任一者所產生的片段。核酸分子可由單體組成，該等單體為天然存在之核苷酸(諸如DNA和RNA)、或天然存在之核苷酸之類似物(例如，天然存在之核苷酸之對映異構體形式)、或兩者之組合。經修飾之核苷酸可具有糖部分及/或嘧啶或嘌呤鹼基部分中之變化。糖修飾包括例如一或多個羥基用鹵素、烷基、胺、和疊氮基置換，或糖可官能化為醚或酯。另外，整個糖部分可用立體和電子類似結構，諸如氮雜糖和碳環糖類似物來置換。鹼基部分中之修飾之實例包括烷基化嘌呤和嘧啶、醯化嘌呤或嘧啶、或其他熟知雜環取代物。核酸單體可藉由磷酸二酯鍵或此等鍵聯之類似物來連接。磷酸二酯鍵聯之類似物包括硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、縮苯胺硫代磷酸酯、縮苯胺磷酸酯、或胺基磷酸酯。術語「核酸分子」亦包含所謂「肽核酸」，該等肽核酸包含附接至聚醯胺主鏈的天然存在或經修飾之核酸鹼基。核酸可為單鏈或雙鏈的。「寡核苷酸」可與核酸互換使用並且可意指雙鏈或單鏈DNA或RNA。一或多種核酸可包含在核酸載體或核酸構建體(例如質體、病毒、噬菌體、黏粒、福斯質粒、噬菌粒、細菌人工染色體(bacterial artificial chromosome，BAC)、酵母人工染色體(yeast artificial chromosome，YAC)、或人類人工染色體(human artificial chromosome，HAC))中，該核酸載體或核酸構建體可用於在各種生物系統中擴增及/或表現一或多種核酸。通常，載體或構建體亦含有要素，包括但不限於啟動子、增強子、終止子、誘導物、核糖體結合位點、轉譯開始位點、起始密碼子、終止密碼子、多聚腺苷酸信號、複製起點、選殖位點、多個選殖位點、限制酶位點、抗原決定基、報道基因、選擇標記物、抗生素選擇標記物、靶向序列、肽純化標籤、或輔助基因、或其任何組合。
核酸或核酸分子可包含一或多個編碼不同肽、多肽、或蛋白的序列。此等一或多個序列可在同一核酸或核酸分子中相鄰地，或在其之間存在額外核酸的情況下加以連接，該等額外核酸例如接頭、重複序列或限制酶位點，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、或300個鹼基長度，或藉由前述長度中任何兩者所定義之範圍中之任何長度的任何其他序列。如本文使用之核酸的術語「下游」係指當核酸為雙鏈核酸時，在含有編碼序列之鏈(有義鏈)上，在先前序列之3’末端之後的序列。如本文使用之核酸的術語「上游」係指當核酸為雙鏈核酸時，在含有編碼序列之鏈(有義鏈)上，在後續序列之5’末端之前的序列。如本文使用之核酸的術語「分組」係指直接或在其之間具有額外核酸的情況下相鄰出現的兩個或兩個以上序列，該等額外核酸例如接頭、重複序列、或限制酶位點，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、或300個鹼基長度，或藉由前述長度中任何兩者所定義之範圍中之任何長度的任何其他序列，但是通常在該等兩個或兩個以上序列之間不具有編碼功能或催化多肽、蛋白、或蛋白域之序列。
如本文使用之關於核酸之術語「密碼子最佳化」係指基於物種特異性密碼子使用偏性和各胺醯基-tRNA在靶細胞細胞質中之相對可利用性，對核酸之密碼子進行取代以便增強或最大限度地提高在特定種類之宿主中之轉譯，而不改變多肽序列。密碼子最佳化和執行此最佳化之技術在此項技術中為已知的。程式含有演算法密碼子最佳化之熟習此項技術者已知的。程式可包括，例如，OptimumGene、GeneGPS®演算法等。另外，合成密碼子最佳化序列可例如自Integrated DNA Technologies和其他商購DNA測序服務購得。熟習此項技術者認識到基因表現水準取決於許多因素，諸如啟動子序列和調控元件。如對於大多數細菌所發現，較小密碼子子集按照tRNA種類來識別，從而產生轉譯選擇，此情況對於蛋白表現而言可為重要限制。在此方面，可設計許多合成基因來增加其蛋白表現水準。
本文所述核酸包含核苷鹼基。一級、典型、天然、或未修飾鹼基為腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤、胸腺嘧啶、和尿嘧啶。其他核苷鹼基包括但不限於嘌呤、嘧啶、經修飾之核苷鹼基、5-甲基胞嘧啶、假尿苷、二氫尿苷、肌苷、7-甲基鳥苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、5,6-二氫尿嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、5-溴尿嘧啶、異鳥嘌呤、異胞嘧啶、胺基烯丙基鹼基、染料標記之鹼基、螢光鹼基、或生物素標記之鹼基。
如本文使用之術語「肽」、「多肽」、和「蛋白」係指包含藉由肽鍵連接之胺基酸的大分子。肽、多肽、和蛋白之許多功能在此項技術中為已知的，並且包括但不限於酶、結構、運輸、防禦、激素、或信號傳導。肽、多肽、和蛋白通常但是不一定藉由核糖體複合物使用核酸模板來生物學產生，但是亦可利用化學合成。藉由操縱核酸模板，可執行肽、多肽、和蛋白突變諸如取代、缺失、截斷、添加、複製、或一個以上肽、多肽、或蛋白之融合。一個以上肽、多肽、或蛋白之此等融合物可在同一分子上相鄰地，或在其之間存在額外胺基酸的情況下加以連接，該等額外胺基酸例如接頭、重複序列、抗原決定基、或標籤，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、或300個鹼基長度，或藉由前述長度中任何兩者所定義之範圍中之任何長度的任何其他序列。如本文使用之多肽的術語「下游」係指先前序列之C末端之後的序列。如本文使用之多肽的術語「上游」係指後續序列之N末端之前的序列。
在一些實施例中，本文提供並且在實例中使用之核酸或肽序列在包括但不限於人、小鼠、兔、大腸桿菌 、酵母、和哺乳動物細胞之各種生物系統中起作用。在其他實施例中，亦可使用與本文提供並且在實例中使用之核酸或肽序列共享至少或低於0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%相似性，或在前述百分比中任何兩者定義之範圍內之任何百分比之相似性的核酸或肽序列，並且對於序列在生物系統中之功能沒有影響。如本文使用，術語「相似性」係指核酸或肽序列具有與模板核酸或肽序列相同的總體相應核苷酸或胺基酸順序，並且在序列內具有特定變化諸如取代、缺失、重複、或插入。在一些實施例中，在轉譯期間，藉由包含編碼相同胺基酸之不同密碼子，共享低至0%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%相似性之兩個核酸序列可編碼相同多肽。
如本文使用之術語「重組表現」係指在最佳化或適應性生物系統中產生蛋白。此等系統提供超過天然宿主中之蛋白表現的優勢，包括但不限於蛋白之高表現(過度表現)、純化簡易性、轉型簡易性、可誘導性、低成本、或穩定性。在一些實施例中，蛋白在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞重組表現系統中表現。各系統具有其自身優點或缺點。例如，細菌表現系統對於過度表現而言係高度最佳化的，但是可導致所產生蛋白之錯誤折疊或聚集，當需要轉譯後修飾時，酵母系統為適用的，並且昆蟲和哺乳動物系統適用於在高階生物體中發生的正確RNA剪接。在一些實施例中，重組多肽自哺乳動物、人類、原代、永生化、癌症、幹細胞、纖維母細胞、人類胚胎腎(human embryonic kidney，HEK)293、中國倉鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary，CHO)、細菌、大腸桿菌 (Escherichia coli) 、酵母、釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 、巴斯德畢赤酵母 (Pichia pastoris) 、昆蟲、草地貪夜蛾 (Spodoptera frugiperda) Sf 9、 或草地貪夜蛾 (S. frugiperda) Sf 21細胞、或在無細胞系統中產生和純化。在一些實施例中，將表現基因、載體、或構建體以質體、噬菌體、病毒、腺病毒相關病毒(adeno-associated viruse，AAV)、桿狀病毒、黏粒、福斯質粒、噬菌粒、BAC、YAC、或HAC形式遞送至重組表現系統。對於重組表現系統之更多論述，參見Gomes等人「An Overview of Heterologous Expression Host Systems for the Production of Recombinant Proteins」 ((2016) Adv.Anim.Vet.Sci.4(7):346-356)，該參考文獻據此明確以全文引用方式併入。
如本文使用之術語「冠狀病毒」係指感染哺乳動物和鳥類的包膜、正義、單鏈RNA病毒之家族。在人類中，冠狀病毒感染可導致如普通感冒之輕微症狀，或諸如嚴重急性呼吸症候群(severe acute respiratory syndrome，SARS)、急性呼吸窘迫症候群(acute respiratory distress syndrome，ARDS)、咳嗽、充血、喉嚨痛、呼吸困難、肺炎、支氣管炎、和缺氧之更嚴重呼吸病狀。其他症狀包括但不限於發熱、疲勞、肌痛，和胃腸症狀諸如嘔吐、腹瀉、和腹部疼痛。病毒包膜包含刺突(「S」)、包膜(「E」)、膜(「M」)、和血凝素酯酶(「HE」)跨膜結構蛋白。S蛋白包含受體結合域(receptor binding domain，「RBD」)，亦即確定病毒株之宿主受體特異性的高度免疫原性區域。病毒核殼體包含多種核殼體(「N」或「NP」)蛋白，該等蛋白塗覆RNA基因組。在感染期間，S蛋白附接至宿主細胞受體並且經由包膜之胞吞或融合來開始進入宿主細胞。RNA基因組藉由宿主核糖體轉譯來產生新的結構蛋白和RNA依賴性RNA聚合酶，該等聚合酶複製病毒基因組。病毒顆粒在宿主內質網中組裝並且藉由高爾基介導之胞吐來排出。關於冠狀病毒之結構和感染週期的更多資訊可發現於Fehr AR & Perlman S. 「Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis」Methods Mol.Biol. (2015); 1282:1-23，該參考文獻據此明確以全文引用方式併入。
如本文使用之術語「SARS-CoV-2」和「2019-nCoV」係指造成人類冠狀病毒疾病2019(COVID-19)大流行之一或多種冠狀病毒毒株。傳染性、潛伏期長和現代全球化已導致該病毒在世界範圍內傳播。感染個體中SARS和其他呼吸系統問題之發展已導致醫療基礎設施承受巨大壓力。針對人類SARS-CoV-2和其他冠狀病毒之治療方法和疫苗已開始獲得批准，但還需要進行其他測試。參考序列可藉由NCBI GenBank登錄號來獲得：MN908947.3(例如完整基因組)、YP_009724390(例如表面醣蛋白)、YP_009724393.1(例如膜醣蛋白)、和YP_009724397.2(例如核殼體磷蛋白)。如同原始SARS病毒(SARS-CoV-1)，SARS-CoV-2經由S蛋白之RBD來結合至血管緊張素轉化酶2(ACE2)而感染人類細胞。RBD、M蛋白、和NP蛋白為開發針對SARS-CoV-2和其他冠狀病毒之治療、預防、干預措施、疫苗、或免疫原性成分的良好候選物。本文揭示之實施例可應用於其他冠狀病毒，包括但不限於HCoV-229E、HCoV-OC43、SARS-CoV-1、HCoVNL63、HCoV-HKU1、和MERS-CoV。
在COVID-19大流行期間，發現了新興遺傳變異體。此等變異體可表現出不同宿主特異性或增加的傳播性、傳染性、及/或毒力。此外，擔心此等變異體或新變異體可能降低當前批准之疫苗的功效。所關注的主要遺傳突變涉及S蛋白(和對應RBD)，病毒使用該蛋白用於宿主受體結合；因為當前疫苗涉及針對此等S蛋白之免疫原性，所以該等突變可導致針對此等突變體毒株之功效減少。三種主要變異體係首先在英國鑑定之毒株(20B/501Y.V1, VOC 20212/01, B.1.1.7)、首先在南非鑑定之毒株(20C/501Y.V2, B.1.351)、和首先在日本鑑定之巴西變異體(20J/501Y.V3, P.1)。已經發現此等變異體在世界範圍內表現出快速和廣泛傳播。此等三個毒株之中的共同突變係N501Y，該突變係RBD的與人類ACE2對接並且已被證明增加對於ACE2之親和力的六個接觸殘基中之一者(Starr等人「Deep Mutational Scanning of SARS-CoV-2 Receptor Binding Domain Reveals Constraints on Folding and ACE2 Binding」Cell ; (2020) 182(5);1295-1310，該參考文獻據此明確以全文引用方式併入)。南非變異體亦包含突變K417N和E484K。巴西變異體具有17個獨特胺基酸變化和三個缺失，包括刺突蛋白受體結合域中之K417T、E484K、和N501Y突變。其他變異體包含N439K突變。已懷疑此等突變干擾抗體識別。如本文揭示，在一些實施例中，作為免疫原性成分來使用之核酸和多肽可編碼或包含此等突變，或S蛋白或對應RBD內之其他突變。將此等免疫原併入本文描述之調配物和方法中使接種患者中之抗體和T細胞反應之多樣性增加，從而提供針對SARS-CoV-2和SARS-CoV-2變異體之穩健保護。
在一些實施例中，本文使用之RBD序列係串聯重複單鏈二聚體變異體。RBD二聚體已被證明可改良免疫原性並且增加中和抗體效價。在此方面，二硫化物連接之二聚體和單鏈(共價連接)二聚體係有效的。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體藉由在使用或不使用額外接頭或其他胺基酸的情況下融合兩個冠狀病毒RBD序列來構建。RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之實例體現於SEQ ID NO: 46 中。編碼RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列之實例體現於SEQ ID NO: 45 中。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體可包含本文揭示之突變及/或與一或多種SARS-CoV-2變異體相關之額外突變中任何一者或多者。例如，RBD串聯重複單鏈二聚體可包含與SARS-CoV-2變異體相關之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者(其中應瞭解此等突變關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)來列出)。在本揭示案全文中，RBD串聯重複單鏈二聚體亦可稱為RBD型式2(RBDv2)。對於RBD串聯重複單鏈二聚體之額外洞悉可見於Dai等人「A Universal Design of Betacoronavirus Vaccines against COVID-19, MERS, and SARS」Cell .(2020);182(3):722-733，該參考文獻據此明確以全文引用方式併入。
在一些實施例中，RBD序列組裝於多聚體變異體中，諸如具有一或多種RBD序列之3、4、5、6、7、8、9、或10個複本的變異體。在一些實施例中，將RBD序列組裝至三聚體變異體中。具有三聚體RBD變異體之構建體之實例係OC-2.4。在一些實施例中，多聚體變異體中之各RBD序列可包含本文揭示之突變及/或與一或多種SARS-CoV-2變異體相關之額外突變中任何一者或多者。例如，多聚體變異體中之一或多個RBD序列可包含與SARS-CoV-2變異體相關之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者(其中應瞭解此等突變關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)來列出)。
如本文使用之術語「自催化肽裂解位點」或「2A肽」係指經歷兩個組成胺基酸之間之肽鍵之裂解，導致側接該序列之兩個蛋白分離的肽序列。咸信該裂解係由於2A肽序列中之C末端脯胺酸與甘胺酸之間之肽鍵形成的核糖體「跳過」所導致。迄今為止所鑑定之四種自催化肽裂解位點序列已在生物醫學研究中得到了廣泛應用：口蹄疫病毒2A(F2A)；馬A型鼻炎病毒(ERAV)2A(E2A)；豬捷申病毒-12A(P2A)，和明脈扁刺蛾 (Thosea asigna) 病毒2A(T2A)。在一些實施例中，使用P2A自催化肽裂解位點核酸(SEQ ID NO:37 )和多肽(SEQ ID NO:38 )序列。在一些實施例中，所使用的P2A核酸或多肽可經F2A、E2A、或T2A核酸或多肽取代。
在一些實施例中，本文使用之核酸或肽包含代表D型肝炎抗原(HDAg)變異體之序列。D型肝炎係依賴於B型肝炎共同感染或重複感染來複製的類病毒。D型肝炎之圓形單鏈RNA使用宿主RNA聚合酶來擴增，但是亦含有單一D型肝炎抗原(HDAg)基因。在B型和D型肝炎共同感染或重複感染期間，完整D型肝炎病毒用含有B型肝炎表面抗原之包膜來封裝，該等抗原包圍用HDAg蛋白塗佈之RNA基因組。併入B型肝炎表面抗原對於D型肝炎傳染性而言係必不可少的，因為D型肝炎不編碼其自身受體結合蛋白。具有D型肝炎之共同感染或重複感染導致更嚴重併發症，並且肝功能衰竭、肝硬化、和癌症之風險增加。存在HDAg之較小(24 kDa)和較大(27 kDa，213個胺基酸，不包括起始甲硫胺酸)同功型並且該同功型自HDV基因組上之相同開放解讀碼組來轉譯。編碼序列之密碼子196處之UAG終止密碼子中之腺苷之脫胺基作用允許繼續轉譯並且產生較大同功型。除非另有明確說明，否則本文所述之實施例包含HDAg之較大同功型。在一些實施例中，HDAg序列包含四種不同HDAg毒株序列中之至少一者：「HDAg基因型1A」、「HDAg基因型1B」、「HDAg基因型2A」、或「HDAg基因型2B」。關於HDAg序列和其用途之額外資訊可見於PCT公開案WO 2017/132332中，該公開案據此明確以全文引用方式併入。
如本文使用之術語「IgE前導序列」係指胺基酸序列MDWTWILFLVAAATRVHS(SEQ ID NO: 44 )，該序列可附加至蛋白之N末端以便同時增強轉譯和增加免疫原性。尤其當IgE前導序列與功能性Kozak序列組合使用時，轉譯得以上調。編碼胺基酸IgE前導序列之核酸序列之示例性實施例表示為SEQ ID NO: 43 。然而，開發出在轉譯時將產生相同胺基酸序列之替代核酸序列對熟習此項技術者係顯而易見的。對於IgE前導序列之用途的額外洞悉可見於Vijayachari等人「Immunogenicity of a novel enhanced consensus DNA vaccine encoding the leptospiral protein LipL45」Hum.Vaccin.Immunother .(2015);11(8):1945-53，該參考文獻據此明確以全文引用方式併入。
如本文使用之術語「活體內 電穿孔」、「電穿孔」、和「EP」係指使用在此項技術中已知的技術，使用電流，將基因、核酸、DNA、RNA、蛋白、或載體遞送至活組織或生物體之細胞中。電穿孔可用作其他基因轉移方法諸如病毒(轉導)、脂質轉染、基因槍(生物彈道技術)、顯微注射、囊泡融合、或化學轉型之替代方案。電穿孔限制免疫原性和細胞基因組之有害整合或突變誘發的風險。DNA載體諸如質體能夠接近細胞核，使得能夠對組成基因進行轉錄和轉譯。在一些實施例中，藉由皮下、肌肉內、或皮內注射，將基因、核酸、DNA、RNA、蛋白、或載體添加至靶組織或生物體。然後，電穿孔器經由安置在所注射樣品內或近側之電極來輸送短的電脈衝。如本文使用，術語「im/EP」係指肌肉內(「im」)輸送之樣品之活體內 電穿孔。
如本文使用之術語「K18-hACE2」或「B6.Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J」係指表現人類ACE2之轉殖基因小鼠模型，冠狀病毒諸如SARS-CoV-1和SARS-CoV-2使用該ACE2來感染人類細胞之受體。人類ACE2之表現藉由人類細胞角蛋白18啟動子來驅動。此等小鼠可用作SARS-CoV-2病毒感染之實驗模型。其他類似小鼠模型可用作替代方案。
在提供值之範圍時，應理解，上限和下限以及該範圍之上限和下限之間的每個中間值都包含在實施例內。
如本文使用之術語「% w/w」或「% wt/wt」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義並且係指按照組成部分或劑之重量相比於成分之總重量乘以100來表示的百分比。如本文使用之術語「% v/v」或「% vol/vol」具有其鑒於本說明書來理解之普通含義並且係指按照化合物、物質、組成部分、或劑之液體體積相比於成分之總液體體積乘以100來表示的百分比。 示例性免疫原性成分實施例
本文揭示可用作例如免疫原性成分或免疫原性產物組合之部分，以便在受試者中產生針對SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之免疫反應，且/或產生針對SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之中和抗體的核酸。
在一些實施例中，核酸包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼受體結合域(RBD)多肽之核酸序列和編碼核蛋白(NP)多肽之核酸。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:1 或13 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列、編碼M多肽之核酸序列、和編碼NP多肽之核酸序列。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:2-3 、或 14-15 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出))之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、或 47-50 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO: 39 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽包含RBD(或RBDv2)之三個串聯複本。在一些實施例中，RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
如應用於本文揭示之任何核酸，在一些實施例中，核酸進一步包含5’IgE前導核酸序列。在一些實施例中，5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、或 47-50 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:45 、或 47-50 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:40 、 57-60 、或 62 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽包含RBD(或RBDv2)之三個串聯複本。在一些實施例中，RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:61 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列和編碼M多肽之核酸序列。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:4 或16 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼刺突(S)多肽之核酸序列。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼膜(M)多肽之核酸序列。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列進一步包含編碼核蛋白(NP)多肽之核酸序列。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼S多肽之核酸序列、編碼M多肽之核酸序列、或編碼NP多肽之核酸序列、或其任何組合。在一些實施例中，S多肽包含突變以便促進改良表現、溶解度、及/或免疫原性。在一些實施例中，S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。在一些實施例中，編碼S多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:51 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸進一步包含5’IgE前導核酸序列。在一些實施例中，5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:63 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，核酸包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO: 5-7 、 17-19 、 22-24 、 73 、或 75 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，核酸包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼D型肝炎抗原(HDAg)之核酸序列。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:8 或20 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸進一步包含至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:9 或21 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在本文揭示之核酸中任何一者之一些實施例中，核酸進一步包含5’IgE前導核酸序列。在一些實施例中，5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在本文揭示之任何一種核酸中，核酸可編碼本文揭示或另外在此項技術中通常已知之SARS-CoV-2多肽中任何一者或多者。在一些實施例中，一或多種SARS-CoV-2多肽包含RBD多肽。在一些實施例中，RBD多肽來自SARS-CoV-2病毒或其變異體。在一些實施例中，RBD多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD多肽之核酸藉由SEQ ID NO:10 或 22 來表示。在一些實施例中，RBD多肽藉由SEQ ID NO:34 來表示。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合、或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD多肽之核酸藉由SEQ ID NO: 45 、或 47-50 中任一者來表示。在一些實施例中，RBD多肽藉由SEQ ID NO:46 、或 52-55 中中任一者來表示。在一些實施例中，編碼M多肽之核酸藉由SEQ ID NO:11 或 23 來表示。在一些實施例中，M多肽藉由SEQ ID NO:35 來表示。在一些實施例中，編碼NP多肽之核酸藉由SEQ ID NO:12 或 24 來表示。在一些實施例中，NP多肽藉由SEQ ID NO:36 來表示。
本文揭示之核酸中任一者可用於藥物中或用於製造藥物。在一些實施例中，藥物用於預防、治療、或抑制受試者之SARS-CoV-2或其他冠狀病毒。在一些實施例中，受試者為人類。
本文亦揭示可用作例如免疫原性成分或免疫原性產物組合之部分，以便在受試者中產生針對SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之免疫反應，且/或產生針對SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之中和抗體的多肽。
在一些實施例中，多肽包含至少一個SARS-CoV-2多肽序列和至少一個P2A自催化多肽裂解位點。在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和NP多肽序列。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:25 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列、M多肽序列、和NP多肽序列。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:26 或 27 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合、或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、或 52-55 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性中任一者。在一些實施例中，多肽共享或包含至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性SEQ ID NO:41 。在一些實施例中，RBD多肽包含RBD(或RBDv2)之三個串聯複本。在一些實施例中，RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
如應用於本文揭示之任何多肽，在一些實施例中，多肽進一步包含N末端IgE前導多肽序列。在一些實施例中，N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合、或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、或 52-55 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:42 、 64-67 、或 69 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽包含RBD(或RBDv2)之三個串聯複本。在一些實施例中，RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:68 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和M多肽序列。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO: 28 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽包含刺突(S)多肽。在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽進一步包含NP多肽。在一些實施例中，S多肽包含突變以便促進改良表現、溶解度、及/或免疫原性。在一些實施例中，S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。在一些實施例中，S多肽共享或包含與SEQ ID NO:56 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽進一步包含N末端IgE前導多肽序列。在一些實施例中，N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:70 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，多肽包含至少一個SARS-CoV-2多肽，該多肽共享或包含與SEQ ID NO:29-31 、 34-36 、 74 、或 76 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在一些實施例中，多肽包含至少一個SARS-CoV-2多肽和至少一個HDAg多肽。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:32 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽進一步包含至少一個P2A自催化多肽裂解位點。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:33 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在本文揭示之多肽中任何一者之一些實施例中，多肽進一步包含N末端IgE前導多肽序列。在一些實施例中，N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:42 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
在本文揭示之任何多肽中，多肽可包含本文揭示或另外在此項技術中通常已知之SARS-CoV-2多肽中任何一者或多者。在一些實施例中，一或多種SARS-CoV-2多肽包含RBD多肽。在一些實施例中，RBD多肽來自SARS-CoV-2病毒或其變異體。在一些實施例中，RBD多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD多肽之核酸藉由SEQ ID NO:10 或 22 來表示。在一些實施例中，RBD多肽藉由SEQ ID NO:34 來表示。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。在一些實施例中，RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合、或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，編碼RBD多肽之核酸藉由任何一者或多者SEQ ID NO:45 、或 47-50 來表示。在一些實施例中，RBD多肽藉由SEQ ID NO:46 、或 52-55 中任何一者或多者來表示。在一些實施例中，編碼M多肽之核酸藉由SEQ ID NO:11 或 23 來表示。在一些實施例中，M多肽藉由SEQ ID NO:35 來表示。在一些實施例中，編碼NP多肽之核酸藉由SEQ ID NO:12 或 24 來表示。在一些實施例中，NP多肽藉由SEQ ID NO:36 來表示。
本文揭示之任何一種多肽可用於藥物中或用於製造藥物。在一些實施例中，藥物用於預防、治療、或抑制受試者之SARS-CoV-2或其他冠狀病毒。在一些實施例中，受試者為人類。
本文揭示之任何一種多肽可為重組表現的。在一些實施例中，多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。 治療或使用方法
如本文使用之術語「預敏化」和「補強」涉及用於異源預敏化-補強免疫化方法中之單獨免疫原性成分。預防接種或疫苗通常需要投與免疫原性成分一次以上，以便誘導針對宿主中之靶標病原體的成功免疫。與其中提供相同成分用於所有投與的此同源方法相比，異源預敏化-補強投與可以針對一些病原體諸如病毒、冠狀病毒、SARS-CoV-2、細菌、寄生蟲、原生動物、蠕蟲的更大抗體水準和經改良之清除或抗性來更有效地建立穩健免疫。在異源預敏化-補強投與中，首先提供包含一種類型之免疫原性成分的至少一個預敏化劑量。在提供至少一個預敏化劑量之後，然後提供包含另一種類型之免疫原性成分的至少一個補強劑量。至少一個補強劑量之投與在投與至少一個預敏化劑量之後至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週執行或在藉由前述時間點中任何兩者來定義之時間範圍內執行，例如，在1-48天內或在1-48週內。在一些實施例中，預敏化劑量包含編碼一或多種抗原或抗原決定基之核酸(例如DNA或RNA)，並且補強劑量包含包含一或多種抗原或抗原決定基之多肽。在宿主中，核酸預敏化在活體內 轉化以引起免疫反應並且導致針對後續多肽補強之更大反應。
在一些實施例中，核酸預敏化包含來自SARS-CoV-2或包括其變異體之其他冠狀病毒之序列、基本上由該等序列組成、或由該等序列組成。在一些實施例中，來自SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之序列編碼S、RBD、M、E、或NP多肽，包括其突變或變異體多肽。在一些實施例中，核酸預敏化亦包含至少一個HDAg序列。在一些實施例中，核酸序列經密碼子最佳化以便在人類中表現。在一些實施例中，多肽補強包含來自SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之多肽、基本上由該等多肽組成、或由該等多肽組成。在一些實施例中，來自SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之多肽為S、RBD、M、E、或NP多肽。在一些實施例中，預敏化劑量為多肽，並且補強劑量為核酸。關於異源預敏化-補強方法之一般資訊可發現於PCT公開案WO 2006/013106、WO 2006/040334、WO 2008/094188中，出於描述預敏化-補強方法之目的，該等公開案各自據此明確以引用方式併入。
本文揭示免疫原性成分或產物組合。在一些實施例中，此等免疫原性成分或產物組合可用於預敏化-補強方法中。在一些實施例中，免疫原性成分或產物組合包含(a)包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸，或(b)包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。
在本文揭示之免疫原性成分或產物組合中任一者之一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含i)編碼RBD多肽之核酸序列；ii)編碼NP多肽之核酸序列；iii)編碼M多肽之核酸序列；iv)編碼HDAg多肽之核酸序列；v)編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列；vi)編碼IgE前導多肽之核酸序列；或vii)編碼S多肽之核酸序列；或其任何組合。在一些實施例中，核酸為本文揭示之核酸中任一者。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:1-12 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。在其他實施例中，核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體。在一些實施例中，RBD多肽來自SARS-CoV-2病毒或其變異體。在一些實施例中，RBD多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，RBD多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、或 52-55 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸在重組載體中提供。在一些實施例中，重組載體為pVAX1
在本文揭示之免疫原性成分或產物組合中任一者之一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽包含i)RBD多肽序列；ii)NP多肽序列；iii)M多肽序列；iv)HDAg多肽序列；v)P2A自催化多肽裂解位點序列；vi)IgE前導多肽序列；或vii)S多肽序列；或其任何組合。在一些實施例中，多肽為本文揭示之多肽中任一者。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、或 76 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，其視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體。在一些實施例中，RBD多肽來自SARS-CoV-2病毒或其變異體。在一些實施例中，RBD多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。在一些實施例中，RBD多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、或 52-55 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽係重組表現的。在一些實施例中，多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
在一些實施例中，本文揭示之免疫原性成分或產物組合中任一者進一步包含佐劑。在一些實施例中，佐劑為在此項技術中通常已知之任何佐劑。在一些實施例中，佐劑為明礬及/或QS21。
本文亦揭示使用本文揭示之免疫原性成分或產物組合中任一者在受試者中產生免疫反應及/或產生中和抗體的方法。在一些實施例中，此等方法包含向受試者投與包含免疫原性成分或產物組合中任一者之核酸的至少一個預敏化劑量；和向受試者投與包含免疫原性成分或產物組合中任一者之多肽的至少一個補強劑量。在一些實施例中，免疫反應及/或中和抗體係針對SARS-CoV-2或其他冠狀病毒。在一些實施例中，受試者為哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、猴、貓、犬、或人類。在一些實施例中，至少一個補強劑量進一步包含佐劑。在一些實施例中，佐劑為在此項技術中通常已知之任何佐劑。在一些實施例中，佐劑為明礬及/或QS21。在一些實施方案中，至少一個補強劑量在投與至少一個預敏化劑量之後至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週投與或在藉由前述時間點中任何兩者來定義之時間範圍內投與，例如，在1-48天內或在1-48週內。在一些實施例中，投與係腸內、經口、鼻內、非經腸、皮下、肌肉內、皮內、或靜脈內或以其任何組合來提供，並且視情況使用活體內 電穿孔。在一些實施例中，投與係聯合抗病毒療法來執行。在一些實施例中，抗病毒療法包括投與地塞米松、法維匹韋、法維拉韋、瑞地昔韋、托珠單抗、加利地韋、沙利姆單抗、洛匹那韋、利托那韋、達蘆那韋、利巴韋林、干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素阿爾法-2b、康復期血清、或其任何組合。
在一些實施例中，藉由在此項技術中已知的技術諸如ELISA來定量，與僅核酸或僅多肽免疫接種、或未接受免疫接種之對照生物體相比，在受試者(例如小鼠、兔、猴、人類)中投與包含本文揭示之免疫原性成分或產物組合中任一者之SARS-CoV-2或其他冠狀病毒組分的核酸預敏化和多肽補強以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、50、100、150、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、5000、10000、100000、或1000000之比率或在前述比率中任何兩者定義之範圍內的任何比率導致更大抗-S、抗-RBD、抗-M、抗-E、抗-NP、抗-SARS-CoV-2、或抗-冠狀病毒抗體效價。在一些實施例中，與來自僅核酸或僅多肽免疫接種、或未接受免疫接種之對照生物體的血清相比，在受試者中投與包含SARS-CoV2或其他冠狀病毒組分之核酸預敏化和多肽補強導致血清更有效地中和SARS-CoV2或其他冠狀病毒之活體外 或活體內 傳染性並且將感染發生率或感染複數(multiplicity of infection，MOI)降低至0.00001、0.00005、0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、或1.0之比率或在前述比率中任何兩者定義之範圍內的任何比率。在一些實施例中，與僅核酸或僅多肽免疫接種、或未接受免疫接種之對照生物體相比，在受試者中投與包含SARS-CoV2或其他冠狀病毒組分之核酸預敏化和多肽補強以1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950、1000、5000、或10000之比率，或在前述比率中任何兩者定義之範圍內的任何比率導致更大數目之干擾素γ(IFNγ)陽性細胞(例如T細胞、巨噬細胞、自然殺手細胞(NK)細胞)。
本文亦揭示用於治療或抑制SARS-CoV-2或其他冠狀病毒之免疫原性成分或產物組合。在一些實施例中，免疫原性成分或產物組合包含(a)包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸，或(b)包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。在一些實施例中，至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含：i)編碼RBD多肽之核酸序列；ii)編碼NP多肽之核酸序列；iii)編碼M多肽之核酸序列；iv)編碼HDAg多肽之核酸序列；v)編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列；vi)編碼IgE前導多肽之核酸序列；或vii)編碼S多肽之核酸序列；或其任何組合。在一些實施例中，核酸為本文揭示之核酸中任一者。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:1-12 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。在一些實施例中，核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、或 39-40 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，至少一個SARS-CoV-2多肽包含：i)RBD多肽序列；ii)NP多肽序列；iii)M多肽序列；iv)HDAg多肽序列；v)P2A自催化多肽裂解位點序列；vi)IgE前導多肽序列；或vii)S多肽序列；或其任何組合。在一些實施例中，多肽為本文揭示之多肽中任一者。在一些實施例中，多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 ，或 41-42 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體。在一些實施例中，RBD多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。在一些實施例中，多肽係重組表現的。在一些實施例中，多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。在一些實施例中，免疫原性成分或產物組合進一步包含佐劑。在一些實施例中，佐劑為在此項技術中通常已知之任何佐劑。在一些實施例中，佐劑為明礬及/或QS21。在一些實施例中，核酸在重組載體中提供。在一些實施例中，重組載體為pVAX1。
本發明通常在本文中使用肯定語言揭示來描述許多實施例。本發明亦包含完全或部分排除標的物諸如物質或材料、方法步驟和條件、方案、或程序的實施例。 實例
以上論述之實施例之一些態樣在以下實例中進一步詳細地揭示，該等實例不以意欲任何方式限制本揭示案之範圍。熟習此項技術者認識到許多其他實施例亦屬於在上文和請求項中描述的本發明範圍內。 實例1：設計SARS-CoV-2免疫原性成分構建體
將含有SARS-CoV-2病毒之組分的多種重組構建體製備並且描述於表1和第1圖至第2圖中。因為S蛋白之RBD已知為高度免疫原性的，所以大部分構建體包含RBD序列。在一些情況下，RBD序列為RBD串聯重複單鏈二聚體序列。然而，預期構建體可具有來自SARS-CoV-2病毒或任何其他冠狀病毒的呈任何順序之編碼序列之任何組合。此包含缺少RBD序列之構建體。此亦包含冠狀病毒複製蛋白或血凝素酯酶之序列。
RBD序列可發現於SVF-1(OC-1)、SVF-2(OC-2)、SVF-3(OC-3)、SVF-4(OC-4)、SVF-5(OC-4)、SVF-6(OC-6)、SVF-7(OC-7)、SVF-8(OC-8)、SVF-9(OC-9)、SVF-10(OC-10)、SVF-14(OC-14)、SVF-2.2(OC-2.2)、SVF-2.3(OC-2.3)、和SVF-2.4(OC-2.4)中，包括其任何衍生物及/或突變體。
RBD串聯重複單鏈二聚體發現於SVF-2.2和SVF-2.3、和SVF-14(OC-14)中，包括其任何衍生物及/或突變體。
三聚體RBD構建體發現於SVF-2.4中，包括其任何衍生物及/或突變體。
S蛋白序列發現於SVF-13(OC-13)和SVF-15(OC-15)中，包括其任何衍生物及/或突變體。
NP蛋白序列發現於SVF-1、SVF-2、SVF-3、SVF-5、SVF-6、SVF-12(OC-12)、SVF-14、SVF-15、SVF-2.2、SVF-2.3、和SVF-2.4中，包括其任何衍生物及/或突變體。
M蛋白序列發現於SVF-2、SVF-3、SVF-4、SVF-6、SVF-7、SVF-11(OC-11)、SVF-2.2、SVF-2.3、和SVF-2.4中，包括其任何衍生物及/或突變體。
至少一個P2A自催化肽裂解位點發現於SVF-1、SVF-2、SVF-3、SVF-4、SVF-9、SVF-14、SVF-15、SVF-2.2、SVF-2.3、和SVF-2.4中，包括其任何衍生物及/或突變體。此P2A自催化肽裂解位點(其可不重要地經另一個自催化肽裂解位點取代)之存在允許轉譯來自一或多個連續核酸基因或組件的靶細胞中之單獨蛋白。自催化肽裂解位點之存在亦表明重組蛋白表現和該等構建體之純化產生單獨多肽組分，該等組分難以純化。雖然使用其他構建體來產生供免疫原性投與之蛋白仍然為可能的(例如使用相同或不同抗原決定基標籤)，但是此舉更為可行的。
在一些實施例中，重組構建體進一步含有B型肝炎病毒或D型肝炎病毒之組分。對於SVF-8和SVF-9觀察到此情形，其中提供4種不同共有序列(基因型1A、1B、2A、和2B)之HDAg複本。HDAg亦為高度免疫原性多肽，並且預期將HDAg序列包含在內改良對於RBD或其他冠狀病毒序列之免疫原性反應。亦預期此等構建體提供針對SARS-CoV-2(或其他冠狀病毒)和B型或D型肝炎之雙重免疫原性反應。
構建體SVF-10(RBD)、SVR-11(M)、SVF-12(NP)、和SVF-13(S)提供為單一SARS-CoV-2序列成分以便評估不同組分之相對免疫原性。 表1:SARS-CoV-2免疫原性成分候選物
成分 野生型 DNA 序列 人類密碼子最佳化序列 多肽序列 形式
SVF-1 (OC-1) SEQ ID NO: 1 SEQ ID NO: 13 SEQ ID NO: 25 DNA
SVF-2 (OC-2) SEQ ID NO: 2 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 26 DNA
SVF-3 (OC-3) SEQ ID NO: 3 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 27 DNA
SVF-4 (OC-4) SEQ ID NO: 4 SEQ ID NO: 16 SEQ ID NO: 28 DNA
SVF-5 (OC-5) SEQ ID NO: 5 SEQ ID NO: 17 SEQ ID NO: 29 DNA或蛋白
SVF-6 (OC-6) SEQ ID NO: 6 SEQ ID NO: 18 SEQ ID NO: 30 DNA或蛋白
SVF-7 (OC-7) SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 19 SEQ ID NO: 31 DNA或蛋白
SVF-8 (OC-8) SEQ ID NO: 8 SEQ ID NO: 20 SEQ ID NO: 32 DNA或蛋白
SVF-9 (OC-9) SEQ ID NO: 9 SEQ ID NO: 21 SEQ ID NO: 33 DNA
SVF-10 (OC-10) SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 22 SEQ ID NO: 34 DNA或蛋白
SVF-11 (OC-11) SEQ ID NO: 11 SEQ ID NO: 23 SEQ ID NO: 35 DNA或蛋白
SVF-12 (OC-12) SEQ ID NO: 12 SEQ ID NO: 24 SEQ ID NO: 36 DNA或蛋白
SVF-2.2 (OC-2.2) N/A SEQ ID NO: 39 SEQ ID NO: 41 DNA
SVF-2.3 (OC-2.3) N/A SEQ ID NO: 40 SEQ ID NO: 42 DNA
SVF-2.3 (OC-2.3) - N501Y N/A SEQ ID NO: 57 SEQ ID NO: 64 DNA
SVF-2.3 (OC-2.3) - N439K, N501Y N/A SEQ ID NO: 58 SEQ ID NO: 65 DNA
SVF-2.3 (OC-2.3) - K417N, E484K, N501Y N/A SEQ ID NO: 59 SEQ ID NO: 66 DNA
SVF-2.3 (OC-2.3) - K417N, N439K, E484K, N501Y N/A SEQ ID NO: 60 SEQ ID NO: 67 DNA
SVF-2.4 (OC-2.4) N/A SEQ ID NO: 61 SEQ ID NO: 68 DNA
SVF-14 N/A SEQ ID NO: 62 SEQ ID NO: 69 DNA
SVF-15 N/A SEQ ID NO: 63 SEQ ID NO: 70 DNA
SVF-13 (OC-13) N/A SEQ ID NO: 71 SEQ ID NO: 72 DNA或蛋白
SVF-10.2 (OC-10.2) N/A SEQ ID NO: 73 SEQ ID NO: 74 DNA或蛋白
SVF-10.3 (OC-10.3) N/A SEQ ID NO: 75 SEQ ID NO: 76 DNA或蛋白
實例2：方法動物
BALB/c、C57BL/6和K18-hACE2 (B6.Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J)小鼠可獲自Jackson Laboratory。所有小鼠在開始實驗時為8-10週齡並且保持在標準條件下。New Zealand白兔購自商業供應商。重組載體
SARS-CoV-2之序列獲自NCBI GenBank登錄號：MN908947.3(例如完整基因組)、YP_009724390(例如表面醣蛋白)、YP_009724393.1(例如膜醣蛋白)、和YP_009724397.2(例如核殼體磷蛋白)。基因型1和2之HDAg序列分別獲自四個不同臨床分離株；US-2和CB，和7/18/83和TW2476，並且經密碼子最佳化以便在人類中表現。
對於DNA免疫原性成分，使用限制位點BamHI和XbaI，將基因選殖至pVAX1主鏈(ThermoFisher)中。將質體在TOP10大腸桿菌 細胞(ThermoFisher)中生長並且遵循製造商說明，使用Qiagen Endofree DNA純化套組(Qiagen GmbH)來純化用於活體內 注射。正確的基因尺寸藉由限制酶消化來確認。另外，將所有選殖基因序列測序以便確認正確的核苷酸序列。
對於蛋白表現構建體，將基因選殖至pET100大腸桿菌 T7表現載體(ThermoFisher)中。可使用其他商購表現載體。將表現載體轉型至BL21(DE3)大腸桿菌 (或其他T7表現大腸桿菌 菌株)中並且誘導以便根據在此項技術中已知之方案來純化。西方墨點法
西方墨點法如在此項技術中已知來執行。使用脂質體3000轉染試劑(ThermoFisher)，將HeLa細胞用各pVAX1構建體轉染。具有GFP報道基因之pVAX1質體用作對照。對於蛋白偵測，使用來自兔子之血清，該等兔子用SARS-CoV-2pVAX1成分或商購抗-SARS-CoV-2抗體、和合適HRP次級抗體中之一者來免疫接種。化學發光用Pierce TM ECL Plus西方墨點受質來誘導並且影像用Gel Doc XR+系統(BioRad)來收集。免疫接種方案
為了評估構建體在活體內 之免疫原性，將小鼠和兔子以每月一次的時間間隔來免疫接種並且在兩週後處死以便收集脾臟和血液。簡言之，藉由常規針(27G)注射，隨後使用Cliniporator2裝置(IGEA, Carpi, Italy)來活體內電穿孔(EP)，使用30-50 μL體積的無菌PBS中之1-50 μg質體DNA，將小鼠(每組五至十隻)在脛骨頭側前肌(tibialis cranialis anterior；TA)中進行肌肉內(i.m.)免疫接種。在活體內電穿孔期間，使用1 ms 600 V/cm脈衝隨後400 ms 60 V/cm脈衝模式來促進DNA之更好吸收。在疫苗注射之前，給予小鼠止痛劑並且在預防接種期間保持在異氟醚麻醉下。對於兔子中之研究，將每組2-4只New Zealand白兔用100 μg至900 μg質體DNA來免疫接種。藉由300μL無菌PBS中之i.m.注射至右TA肌肉，隨後活體內EP，來投與疫苗。藉由酶聯免疫斑點檢定 (ELISpot) 來偵測 IFNγ 細胞
最後一次免疫接種之後兩週，將來自彙集小鼠之各免疫接種組之脾細胞收集並且在商購ELISpot檢定(Mabtech, Nacka Strand, Sweden)中，使用SARS-CoV-2衍生肽及/或蛋白，基於如在此項技術中已知之IFN-γ分泌48h，測試該等脾細胞誘導SARS-CoV-2-特異性T細胞之能力。藉由 ELISA 之抗體偵測
針對各種SARS-CoV-2肽及/或蛋白之小鼠和兔IgG的偵測使用在此項技術中已知之方案來執行。抗體效價確定為端點血清稀釋度，在該等稀釋度下，OD值(例如在405 nm或492 nm下)為相同稀釋度之陰性對照(未免疫接種或對照動物血清)之OD的至少兩倍。活體外 SARS-CoV-2 中和檢定
來自動物之免疫接種血清之中和能力在活體外 評定。Vero E6細胞在培養板上生長至匯合。將含有來自用SARS-CoV-2成分免疫接種之動物之血清，或來自對照動物之血清的培養基添加至細胞。然後，將細胞用SARS-CoV-2病毒顆粒感染。病毒傳染性和血清中和藉由偵測病毒基因組/基因來計數病毒斑或病毒效價而評定。hACE2 小鼠模型中之活體內 SARS-CoV-2 中和檢定
野生型或K18-hACE2小鼠用SARS-CoV-2免疫原性成分或對照來免疫接種。使用不同組合，包括但不限於僅DNA成分、僅蛋白成分、DNA預敏化/蛋白補強成分、或蛋白預敏化/DNA補強成分。然後，將K18-hACE2小鼠用SARS-CoV-2病毒顆粒感染。對於野生型小鼠，在用SARS-CoV-2感染之前1-5天，藉由流體動力學注射、或其他相關技術來使其變得對於hACE2而言為瞬時轉殖基因的。評定病毒感染之影響，包括小鼠體重、症狀、發病和死亡、和病毒負載。統計分析
資料使用GraphPad Prism V.5 and V.8軟體和Microsoft Excel V.16.13.1來分析。 實例3：SARS-CoV2 DNA和蛋白成分在動物中為免疫原性的。
雖然免疫原性成分和疫苗傳統上為完整生物體或抗原蛋白，但是最近展示活體內 投與DNA至活組織和隨後轉錄和轉譯抗原蛋白亦可高度有效地觸發免疫反應。研究此等DNA預敏化/蛋白補強免疫原性成分作為針對各種疾病之潛在候選疫苗。
小鼠用以下各者來免疫接種：(1)包含本文揭示之成分中之一者的DNA成分(3個依序劑量之50 μg DNA)，(2)包含本文揭示之成分中之一者的多肽成分(3個依序劑量之20 μg蛋白與明礬佐劑)，或(3)包含本文揭示之成分中之一者的DNA成分，繼之以包含本文揭示之成分中之一者的多肽成分(2個劑量之50 μg DNA，然後2個劑量之20 μg蛋白與明礬)。
在作為投與DNA預敏化/蛋白補強成分之持續時間的1、2、3、4、5、6、或7天，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10週，或1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12月或藉由在前述時間中任何兩者定義之範圍內的任何時間之後，評定小鼠針對SARS-CoV-2抗原之免疫性。將白血球自小鼠全血樣品中純化並且與經純化之多肽抗原，包括S蛋白、RBD、M蛋白、和NP蛋白一起孵育。細胞亦與作為陽性對照之刀豆蛋白A(「ConA」)，和作為陰性對照之兩種卵白蛋白肽(「OVA Th」和「OVA CTL」)一起孵育。響應於抗原剌激而產生干擾素γ(IFNγ)之細胞的群體頻率藉由酶聯免疫斑點檢定(ELISpot)來評定。簡言之，在用IFNγ抗體塗佈之孔，白血球與抗原一起孵育。然後將細胞移除，並且將生物素化IFNγ抗體、鹼性磷酸酶交聯之鏈黴親和素、和鹼性磷酸酶受質比色試劑順次添加至孔，並且在其之間徹底清洗。然後允許板乾燥並且對應於IFNγ分泌細胞之剩餘有色斑點藉由顯微術來計數。
經治療之小鼠總體上顯示相對更強的免疫細胞反應。此證明與用於某些病原體的傳統基於蛋白或生物體之成分相比，此DNA預敏化/蛋白補強方法可有效地誘導更大的穩健免疫原性反應。
相應實驗亦在兔子(家兔 (Oryctolagus cuniculus) )中執行。New Zealand白兔用以下各者來免疫接種：(1)包含本文揭示之成分中之一者的僅DNA成分，(2)包含本文揭示之成分中之一者的僅蛋白成分，或(3)包含本文揭示之成分中之一或多者的DNA預敏化/蛋白補強成分。成分在第0週、第4週、第8週、和第12週投與四次，其中各劑量投與900 μg DNA im/EP或300 μg蛋白與明礬。對於DNA-蛋白成分(3)，在第0週對於第一劑量投與900 μg DNA im/EP，並且在第4週、第8週、和第12週對於第二、第三、和第四劑量投與300 μg蛋白與明礬。血清中之抗-RBD效價在第0週、第2週、第10週、和第14週(亦即各劑量之後2週)評定。與僅DNA(1)和僅蛋白(2)成分相比，不僅DNA預敏化/蛋白補強成分(3)導致更大總體效價，而且相對於僅蛋白成分，到第2週更快速地誘導穩健抗體產生。
使用本文所述的免疫原性成分來主動免疫接種能夠誘導對於SARS-CoV-2或冠狀病毒抗原之功能性T細胞。 實例4：免疫原性DNA成分誘導動物中之SARS-CoV-2中和抗體之產生
將單一50 μg劑量之包含成分SVF-2、SVF-2.2、SVF-2.3、或僅刺突蛋白(作為對照)之DNA表現組件投與BALC/c和C57BL/6小鼠。在投與之後兩週獲得來自測試小鼠之血清樣品，並且對於SARS-CoV-2蛋白組分具有特異性之中和抗體的存在藉由ELISA(終點效價)和活體外 中和檢定來評定。結果在以下表2(BALB/c)和3(C57BL/6)中示出。成分SVF-2.3導致產生與僅刺突蛋白之成分可比較的抗-SARS-CoV-2刺突蛋白抗體，而且賦予針對BALB/c小鼠中之SARS-CoV-2核蛋白的免疫原性。來自用成分SVF-2.3治療之BALB/c小鼠之血清亦在活體外 檢定中成功地中和SARS-CoV-2感染。(S=刺突蛋白；RBD=受體結合域；NP=核蛋白)。在第一免疫接種之後三週投與的第二免疫接種之後兩週，展示相同反應(表4和5)。 表2：DNA成分投與之後的BALB/c小鼠血清之量化
成分 抗 -S ELISA 抗 -RBD ELISA 抗 -NP ELISA 中和 SARS-CoV-2
SVF-2 ＜60 ＜60 2160 ＜8
SVF-2.2 60 60 1080 ＜8
SVF-2.3 1440 720 1080 8
S DNA 1440 360 ＜60 8
表3：DNA成分投與之後的C57BL/6小鼠血清之量化
成分 抗 -S ELISA 抗 -RBD ELISA 抗 -NP ELISA 中和 SARS-CoV-2
SVF-2 ＜60 ＜60 360 ＜8
SVF-2.2 ＜60 ＜60 135 ＜8
SVF-2.3 360 210 ＜60 ＜8
S DNA 360 360 ＜60 8
表4：2輪DNA成分投與之後的BALB/c小鼠血清之量化
成分 抗 -S ELISA 抗 -RBD ELISA 抗 -NP ELISA 中和 SARS-CoV-2
SVF-2 ＜60 ＜60 未測試 ＜8
SVF-2.2 60 720 未測試 ＜8
SVF-2.3 51480 64800 未測試 256
S DNA 12960 12960 未測試 256
表5：2輪DNA成分投與之後的C57BL/6小鼠血清之量化
成分 抗 -S ELISA 抗 -RBD ELISA 抗 -NP ELISA 中和 SARS-CoV-2
SVF-2 ＜60 ＜60 未測試 ＜8
SVF-2.2 ＜60 ＜60 未測試 ＜8
SVF-2.3 36360 8280 未測試 128
S DNA 25960 25960 未測試 512
實例5：額外示例性構建體在小鼠中為免疫原性的
BALB/c和C57BL/6小鼠在第0週和第3週以50 μg質體構建體DNA使用活體內 EP來免疫接種。所使用之構建體為OC-2、OC-2.2、OC-2.3、OC-10、OC-10.2、OC-10.3、OC-12、和OC-13，並且重組S蛋白與QS21佐劑用作對照。來自測試小鼠之血清樣品在投與第二劑量之後兩週獲得，並且對於SARS-CoV-2RBD和S蛋白具有特異性之中和抗體的存在藉由ELISA來評定(第3A圖)。水準作為終點效價給出，該終點效價定義為給出相同稀釋度下之陰性對照兩倍的450 nm下之光密度的最高稀釋度。構建體OC-2.3、OC-10.3、和OC-13在BALB/c和C57BL/6小鼠中均表現出穩健免疫原性性質。
評定免疫接種小鼠血清針對SARS-CoV-2之活體外 中和。來自各組小鼠之彙集血清樣品與SARS-CoV-2一起孵育，然後添加至Vero-E6細胞。病毒細胞病變效應(cytopathic effect，CPE)之水準藉由在顯微鏡下檢查來確定並且病毒中和效價ID50確定為給出50%抑制CPE之血清之稀釋度(第3B圖)。用構建體OC-2.3、OC-10.3、和OC-13免疫接種之小鼠導致血清穩健地中和SARS-CoV-2傳染性。 實例6：免疫原性成分誘導小鼠中之T細胞反應
BALB/c和C57BL/6小鼠在第0週和第3週以50 μg OC-2.3和OC-10.3構建體DNA使用活體內 EP來免疫接種，並且重組S蛋白與QS21佐劑作為對照。小鼠T細胞針對囊括RBD、M、和NP蛋白之肽池的反應藉由干擾素γ ELISpot來偵測(第4圖)。「S-KTH」指示藉由Royal Technical University (KTH)提供之重組S蛋白。「S-GS」指示獲自Genscript(#Z03501)之重組S蛋白。「RBD-GS」指示獲自Genscript(#Z03479)之重組RBDS蛋白。此等肽池作為具有10個胺基酸重疊之20個胺基酸長度之肽產生。卵白蛋白肽用作陰性對照，並且刀豆蛋白A用作陽性對照。小鼠用含有RBD、M、和NP蛋白之序列的OC-2.3來免疫接種，導致針對RBD和N肽和蛋白之穩健T細胞活化，而M肽具有更少反應性。小鼠用包含僅RBD之OC-10.3來免疫接種，導致僅針對RBD肽和蛋白之穩健T細胞活化。 實例7：來自免疫接種動物之血清可有效地中和SARS-CoV-2感染
經誘導之抗體在活體內 中和SARS-CoV-2感染之能力使用K18-hACE2小鼠模型或瞬時hACE2轉殖基因野生型小鼠來進一步測定。總IgG自經免疫接種和未經免疫接種之兔子中純化並且注射於小鼠中。在所有受攻擊小鼠中，DNA預敏化/蛋白補強誘導之抗體比僅DNA或僅蛋白成分更好地保護、或顯著延遲峰病毒血症。 實例8：針對SARS-CoV-2抗原決定基之T細胞反應可使用預敏化/補強方法來增強
在BALB/c小鼠中測試使用OC-2.3 DNA構建體和重組S蛋白與QS21佐劑(rS/QS21)之同源(僅DNA預敏化和補強；或僅蛋白預敏化和補強)和異源敏化(DNA預敏化，蛋白補強；或蛋白預敏化，DNA補強)之效應。小鼠在第0週和第3週以50 μg之質體構建體DNA使用活體內 EP，或重組S蛋白與QS21佐劑來免疫接種。第5A圖示出來自免疫接種小鼠(所測試的5只小鼠，標記為「0」、「1」、「3」、「10」、和「30」)之血清中之抗-S蛋白效價。4種條件(亦即S/QS21肽和OC-2.3 DNA作為預敏化或補強，或同時作為兩者的不同組合)中之各者。第5B圖示出如藉由ELISpot偵測到的來自經免疫接種小鼠對於囊括SARS-CoV-2 RBD、M、和NP蛋白之肽池的T細胞反應。此等肽池作為具有10個胺基酸重疊之20個胺基酸長度之肽產生。卵白蛋白肽用作陰性對照，並且刀豆蛋白A用作陽性對照。如對於OC-2.3 DNA預敏化和rS/QS21補強方法以及rS/QS21預敏化和OC-2.3 DNA預敏化方法兩者所觀察到，異源組合導致針對RBD蛋白和肽之穩健免疫原性，同時亦導致對於NP肽和蛋白之反應性。SARS-CoV-2病毒組分之此經改良之覆蓋範圍提供針對該病毒以及其中某些組分得以保守的各種毒株或突變體之經改良之保護。 實例9：免疫原性成分在兔子和非人類靈長類動物中為免疫原性的
評定OC-2.3 DNA構建體在兔子和食蟹猴中之免疫原性能力。在第0週和第3週，使用活體內 EP，向兔子投與500、1000、或1500 μg之OC-2.3 DNA。在第0週和第3週，使用活體內 EP，向獼猴投與1000 μg之OC-2.3 DNA。使用單一步驟程序使用定製注射裝置來執行注射。動物中之抗-S抗體水準在第二投與之後評定(第6A-B圖)。水準作為終點效價給出，該終點效價定義為給出相同稀釋度下之陰性對照兩倍的450 nm下之光密度的最高稀釋度。
在第0週和第3週，食蟹猴(3只動物之多個群組)用1000 μg OC-2.3或對照DNA (HBV DNA)以兩個劑量來免疫接種，並且隨後用SARS-CoV-2(0.5 mL鼻內和4.5 mL氣管內，以106 pfu/mL)攻擊。在攻擊後第4天和第20天獲得支氣管肺泡灌洗(Bronchoalveolar lavage，BAL)樣品，並且SARS-CoV-2RNA藉由qPCR來定量(第6C圖)。大於40之Ct值表示RNA水準低於偵測極限。在第4天和第20天，用OC-2.3來免疫接種之猴子顯示基本上不可偵測水準之SARS-CoV-2 RNA，而用對照DNA來免疫接種之猴子在第4天表現出可偵測SARS-CoV-2感染，並且在第20天清除感染。抗體效價之量化和BAL中之SARS-CoV-2 RNA之存在提供於表6中。對於受試者4和5之免疫接種，發現洩漏。 表6. 所測試食蟹猴之量化
組織學發現 對照DNA (HBV) SARS-CoV-2 DNA (IgL- 2xRBD-M-N; OC-2.3)
受試者1 受試者2 受試者3 受試者4 受試者5 受試者6
抗-S效價 ＜ 50 ＜ 50 ＜ 50 31250 1250 156250
抗-HBV PreS1效價 50 31250 31250 ＜ 50 ＜ 50 ＜ 50
第4天BAL中之SARS-CoV-2 RNA (Ct值) 31.52 31.86 37.14 37.34 ＞ 40 ＞ 40
第20天BAL中之SARS-CoV-2 RNA (Ct值) 38.39 ＞ 40 未測試 ＞ 40 37.04 ＞ 40
實例10：使用示例性免疫原性成分候選物之人類臨床試驗
以下實例描述使用視情況包含核酸組分和多肽組分之免疫原性成分或產物組合之實施例，該免疫原性成分或產物組合用於治療或預防由冠狀病毒諸如SARS-CoV-2導致之病毒感染的。
將DNA預敏化/蛋白補強成分腸內、經口、鼻內、非經腸、皮下、肌肉內、皮內、或靜脈內投與人類患者。此等人類患者可當前感染SARS-CoV-2、先前感染SARS-CoV-2、處於感染SARS-CoV-2之風險中、或未感染SARS-CoV-2。
首先以1、10、100、1000 ng、或1、10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000 μg、或1、10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000 mg之量、或在前述量中任何兩者定義之範圍內的任何量、或適合於人類中之最佳功效之任何其他量來投與DNA預敏化劑量。在第一DNA預敏化劑量之後，可在投與先前DNA預敏化劑量之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週或藉由在前述時間中任何兩者定義之範圍內的任何時間投與1、2、3、4、或5個額外DNA預敏化劑量，例如，在1-48天或1-48週內。在DNA預敏化劑量之後，以1、10、100、1000 ng、或1、10、50、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000 μg、或1、10、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000 mg之量、或在前述量中任何兩者定義之範圍內的任何量、或適合於人類中之最佳功效之任何其他量來投與蛋白補強劑量。第一蛋白補強劑量在投與最終DNA預敏化劑量之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週或藉由在前述時間中任何兩者定義之範圍內的任何時間投與。在第一蛋白補強劑量之後，可在投與先前蛋白補強劑量之後1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週或藉由在前述時間中任何兩者定義之範圍內的任何時間投與1、2、3、4、或5個額外蛋白補強劑量。
監測患者針對SARS-CoV-2之成功反應，例如，產生抗-S蛋白、抗-RBD、抗-M蛋白、抗-NP蛋白、抗-SARS-CoV2或抗冠狀病毒抗體。在其中包含HDAg序列之條件中，亦測試血清中之抗-HDAg抗體。亦預期在暴露於SARS-CoV-2或冠狀病毒抗原時之T細胞和其他免疫細胞之快速活化，和針對將來SARS-CoV-2或冠狀病毒感染的保護。
在當前感染、先前感染、或處於感染SARS-CoV-2或冠狀病毒之風險中之患者中，投與DNA預敏化/蛋白補強成分可聯合抗病毒療法來執行。潛在抗病毒療法治療劑包括但不限於地塞米松、法維匹韋、法維拉韋、瑞地昔韋、托珠單抗、加利地韋、沙利姆單抗、洛匹那韋、利托那韋、達蘆那韋、利巴韋林、干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素阿爾法-2b、康復期血清、或其任何組合。將監測患者之副作用，例如頭暈，噁心，腹瀉，抑鬱，失眠，頭痛，瘙癢，皮疹，發燒或所提供抗病毒治療劑之其他已知副作用。
在至少一些先前描述實施例中，在一實施例中使用之一或多個要素可互換地在另一實施例中使用，除非此置換技術上不可行。熟習此項技術者認識到各種可產生如上所述之方法和結構的其他省略、添加和修改而不脫離所請求標的物之範圍。所有此等修改及變化意欲落入如所附請求項界定之標的物之範疇內。
關於本文中之實質上任何複數及/或單數術語之使用，熟習此項技術者可自複數轉換至單數及/或自單數轉換至複數，只要對於上下文及/或申請案係適合的。為了清楚起見，各種單數/複數變換可在本文中明確列出。
熟習此項技術者理解，通常，在本文中並且尤其在附加請求項(例如，附加請求項之主體)中使用之術語通常意欲作為「開放」術語(例如，術語「包括」應解釋為「包括但不限於」、術語「具有」應解釋為「具有至少」、術語「包括」應解釋為「包括但是不限於」等)。熟習此項技術者進一步理解若規定特定數目之所引入請求項敘述對象，則此意圖在請求項中明確敘述，並且在不存在此敘述時，不存在此意圖。例如，為了幫助理解，以下附加請求項可包含使用介紹性片語「至少一個(種)」和「一或多個(種)」來引入請求項敘述對象。然而，此等片語之使用不應理解為暗示藉由不定冠詞「一(個/種)」來引入請求項敘述對象將含有此引入請求項敘述對象之任何特定請求項限於僅包含一個此類敘述對象的實施例，即使當同一請求項包含介紹性片語「一或多個(種)」或「至少一個(種)」和不定冠詞諸如「一(個/種)」(例如，「一(個/種)」應解釋為意謂「至少一個(種)」或「一或多個(種)」)；對於用於引入請求項敘述對象的定冠詞同樣如此。另外，即使特定數目之所引入請求項敘述對象得到明確敘述，熟習此項技術者應認識到此敘述應解釋為意謂至少所敘述數目(例如，在沒有其他修飾詞的情況下，僅僅敘述「兩個敘述對象」意謂至少兩個敘述對象，或兩個或兩個以上敘述對象)。此外，在其中使用與「A、B、和C中之至少一者等」類似之約定的實例中，通常此結構以熟習此項技術者理解約定之含義來規定(例如，「具有A、B、和C中之至少一者的系統」包括但是不限於具有單獨A、單獨B、單獨C、A和B一起、A和C一起、B和C一起、及/或A、B、和C一起等之系統)。在其中使用與「A、B、或C中之至少一者等」類似之約定的實例中，通常此結構以熟習此項技術者理解約定之含義來規定(例如，「具有A、B、或C中之至少一者的系統」包括但是不限於具有單獨A、單獨B、單獨C、A和B一起、A和C一起、B和C一起、及/或A、B、和C一起等之系統)。熟習此項技術者進一步理解實際上不論在說明書或請求項中，呈現兩個或兩個以上替代術語之任何析取性措詞及/或片語應理解為涵蓋包括術語中之一者、兩個術語中之任一者、或兩個術語的可能性。例如，片語「A或B」應理解為包括「A」或「B」或「A和B」的可能性。
另外，在本發明之特徵或態樣係關於馬庫什組經描述的情況下，熟習此項技術者將認識到本發明亦由此關於馬庫什組之任何個別成員或成員之子組經描述。
熟習此項技術者將理解，出於任何及所有目的，諸如就提供書面描述而言，本文揭示之所有範圍亦包括其任何及所有可能子範圍及其子範圍之組合。任何所列出範圍可容易地識別為充分描述並且使得相同範圍能夠分解為至少相等的一半、三分之一、四分之一、五分之一、十分之一等。作為非限制性實例，本文論述之各範圍可容易地分解為下三分之一、中三分之一和上三分之一等。如熟習此項技術者亦理解，所有措辭諸如「多達」、「至少」、「大於」、「少於」及其類似措辭包括所敘述之數目並且意指範圍可隨後分解為如以上論述之子範圍。最後，如熟習此項技術者應理解，範圍包括各個別成員。因此，例如，具有1至3個成員之群組係指具有1、2、或3個成員之群組。類似地，具有1至5個成員的群組係指具有1、2、3、4或5個成員等等的群組。
本文所述之所有參考(包括但不限於經公開及未公開之申請案、專利及文獻參考)均以全文引用方式併入本文且據此構成本說明書之一部分。倘若以引用方式併入之公開案及專利或專利申請案與本說明書中所含之揭示內容相矛盾，則本說明書意欲取代及/或優先於任何此類矛盾材料。
雖然本文已經揭示各種態樣及實施例，但是其他態樣及實施例將對熟習此項技術者顯而易見。本文揭示之各種態樣和實施例出於說明之目的並且不意欲具有限制性，並且真實範圍和精神藉由以下請求項來指示。
無
除了如上所述特徵以外，額外特徵和變化自附圖和示例性實施例之以下描述很容易地顯而易知。應瞭解此等附圖描述典型實施例並且不意欲在範圍方面具有限制性。
第1圖描繪示例性重組免疫原性成分，該等成分可用作諸如供例如使用異源預敏化-補強方法來預防、治療、或抑制受試者中之SARS-CoV-2的藥物。本文示出之任何示例性成分可用於本文揭示之任何方法或用途。
第2圖描繪額外示例性重組免疫原性成分，該等成分可用作諸如供例如使用異源預敏化-補強方法來預防、治療、或抑制受試者中之包括不同變異體之SARS-CoV-2的藥物。本文示出之任何示例性成分可用於本文揭示之任何方法或用途。
第3A-B圖描述使用本文揭示之示例性SARS-CoV-2構建體來對BALB/c和C57BL/6小鼠進行免疫接種。第3A圖示出針對RBD和S蛋白之小鼠血清的終點ELISA。第3B圖示出使用來自經免疫接種小鼠之血清的活體外 SARS-CoV-2病毒中和。
第4圖描繪如藉由ELISpot偵測到之經免疫接種小鼠針對涵蓋SARS-CoV-2 RBD、M、和NP蛋白之肽池的T細胞反應。
第5A圖描繪以使用OC-2.3 DNA和重組S蛋白與QS21佐劑(rS/QS21)之預敏化/補強方法來免疫接種的小鼠中之抗-S蛋白抗體效價。測試組合為：1) OC-2.3 DNA預敏化和rS/QS21蛋白補強；2) OC-2.3 DNA預敏化和OC-2.3 DNA補強，3) rS/QS21蛋白預敏化和rS/QS21蛋白補強；和4) rS/QS21蛋白預敏化和OC-2.3 DNA補強。
第5B圖描繪用第5A圖之預敏化/補強方法來免疫接種之小鼠針對涵蓋SARS-CoV-2 RBD、M、或NP蛋白，或全長RBD、M、或NP蛋白之肽池的T細胞反應。
第6A圖描繪兔子中之抗-S蛋白抗體效價，該等兔子用在第一劑量(第2週)或第二劑量(第5週)之後兩週測試之OC-2.3 DNA來免疫接種，並且投與500、1000、或1500 μg之DNA。
第6B圖描繪食蟹猴中之抗-S或抗-NP(N)蛋白抗體效價，該等食蟹猴用在第0週或在兩個1000 μg劑量之後第5週測試之OC-2.3 DNA來免疫接種。
第6C圖描繪食蟹猴中之SARS-CoV-2 RNA之定量，該等食蟹猴在SARS-CoV-2攻擊之後第4天或第20天用OC-2.3 DNA或對照DNA來免疫接種。
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Figure 12_A0101_SEQ_0305
Figure 12_A0101_SEQ_0306
Figure 12_A0101_SEQ_0307
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Claims (105)

  1. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。
  2. 如請求項1所述之核酸，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列和編碼NP多肽之核酸序列。
  3. 如請求項1或2所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:1 或13 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  4. 如請求項1所述之核酸，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列、編碼M多肽之核酸序列、和編碼NP多肽之核酸序列。
  5. 如請求項1至2或4中任一項所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:2-3 、 14 、 或15 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  6. 如請求項4所述之核酸，其中該RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
  7. 如請求項6所述之核酸，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
  8. 如請求項6或7所述之核酸，其中編碼該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之該核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、 或47-50 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  9. 如請求項6或7所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:39 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  10. 如請求項1至2或4中任一項所述之核酸，其進一步包含5’IgE前導核酸序列。
  11. 如請求項10所述之核酸，其中該5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  12. 如請求項10所述之核酸，其中該RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
  13. 如請求項12所述之核酸，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
  14. 如請求項12所述之核酸，其中該編碼該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:45 、 或47-50 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  15. 如請求項10所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:40 、 57-60 、 或62 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  16. 如請求項10所述之核酸，其中該RBD多肽包含RBD之三個串聯複本。
  17. 如請求項16所述之核酸，其中RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
  18. 如請求項16所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:61 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  19. 如請求項1所述之核酸，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼RBD多肽之核酸序列和編碼M多肽之核酸序列。
  20. 如請求項1所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:4 或16 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  21. 如請求項1所述之核酸，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含編碼刺突(S)多肽之核酸序列、編碼膜(M)多肽之核酸序列、或編碼核蛋白(NP)多肽之核酸序列、或其任何組合。
  22. 如請求項21所述之核酸，其中該S多肽包含一或多種改良表現、溶解度、及/或免疫原性之突變。
  23. 如請求項21或22所述之核酸，其中該S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。
  24. 如請求項21或22所述之核酸，其中該編碼S多肽之核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:51 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  25. 如請求項21或22所述之核酸，其進一步包含5’IgE前導核酸序列。
  26. 如請求項25所述之核酸，其中該5’IgE前導核酸序列共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  27. 如請求項21或22所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:63 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  28. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列，該序列共享或包含與SEQ ID NO:5-7 、 17-19 、 22-24 、 73 、 或75 中任何一者或多者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  29. 一種核酸，其包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列和至少一個編碼D型肝炎抗原(HDAg)之核酸序列。
  30. 如請求項29所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:8 或20 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  31. 如請求項29所述之核酸，其進一步包含至少一個編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列。
  32. 如請求項29或31所述之核酸，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:9 或21 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  33. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽序列和至少一個P2A自催化多肽裂解位點。
  34. 如請求項33所述之多肽，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和NP多肽序列。
  35. 如請求項33或34所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO: 25 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  36. 如請求項33所述之多肽，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列、M多肽序列、和NP多肽序列。
  37. 如請求項33、34、或36所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:26 或27 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  38. 如請求項36所述之多肽，其中該RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
  39. 如請求項38所述之多肽，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
  40. 如請求項38或39所述之多肽，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、 或52-55 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  41. 如請求項38或39所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:41 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  42. 如請求項33、34、或36所述之多肽，其進一步包含N末端IgE前導多肽序列。
  43. 如請求項42所述之多肽，其中該N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  44. 如請求項42所述之多肽，其中該RBD多肽為RBD串聯重複單鏈二聚體多肽。
  45. 如請求項44所述之多肽，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變，或其任何組合。
  46. 如請求項44或45所述之多肽，其中該RBD串聯重複單鏈二聚體多肽共享或包含與SEQ ID NO:46 、或 52-55 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  47. 如請求項42所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:42 、 64-67 、或 69 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  48. 如請求項42所述之多肽，其中該RBD多肽包含RBD之三個串聯複本。
  49. 如請求項48所述之多肽，其中RBD之三個串聯複本各自包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K417N、N439K、E484K、或N501Y突變、或其任何組合，或不含此等突變中任何一者。
  50. 如請求項48所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:68 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  51. 如請求項33所述之多肽，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含RBD多肽序列和M多肽序列。
  52. 如請求項33或51所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO: 28 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  53. 如請求項33所述之多肽，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽序列包含刺突(S)多肽和NP多肽。
  54. 如請求項52所述之多肽，其中該S多肽包含一或多種改良表現、溶解度、及/或免疫原性之突變。
  55. 如請求項53所述之多肽，其中該S多肽包含關於完整S蛋白(例如，如在NCBI登錄號YP_009724390中列出)之K968P或V987P突變，或兩者。
  56. 如請求項53所述之多肽，其中該S多肽共享或包含與SEQ ID NO:56 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  57. 如請求項53所述之多肽，其進一步包含N末端IgE前導多肽序列。
  58. 如請求項57所述之多肽，其中該N末端IgE前導多肽序列共享或包含與SEQ ID NO:44 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  59. 如請求項53所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:70 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  60. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽，該多肽共享或包含與SEQ ID NO:29-31 、 34-36 、 74 、 或76 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  61. 一種多肽，其包含至少一個SARS-CoV-2多肽和至少一個HDAg多肽。
  62. 如請求項61所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO: 32 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  63. 如請求項62所述之多肽，其進一步包含至少一個P2A自催化多肽裂解位點。
  64. 如請求項61或63所述之多肽，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO: 33 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  65. 如請求項1至32中任一項所述之核酸，其用於諸如供預防、治療或抑制受試者，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
  66. 如請求項33至64中任一項所述之多肽，其用於諸如供預防、治療或抑制受試者，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
  67. 如請求項33至64中任一項所述之多肽，其中該多肽係重組表現的。
  68. 如請求項67所述之多肽，其中該多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
  69. 一種免疫原性成分或產物組合，其包含： (a) 包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸；或 (b) 包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。
  70. 如請求項69所述之免疫原性成分或產物組合，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含： i) 編碼RBD多肽之核酸序列； ii) 編碼NP多肽之核酸序列； iii) 編碼M多肽之核酸序列； iv) 編碼HDAg多肽之核酸序列； v) 編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列； vi) 編碼IgE前導多肽之核酸序列；或 vii) 編碼S多肽之核酸序列； 或其任何組合。
  71. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸係如請求項1至32中任一項所述之核酸。
  72. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:1-12 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，該核酸視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
  73. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。
  74. 如請求項73所述之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、或 75 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，該核酸視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
  75. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽包含： i) RBD多肽序列； ii) NP多肽序列； iii) M多肽序列； iv) HDAg多肽序列； v) P2A自催化多肽裂解位點序列； vi) IgE前導多肽序列；或 vii) S多肽序列； 或其任何組合。
  76. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽係如請求項33至64中任一項所述之多肽。
  77. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、 或76 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性，該核酸視情況用於諸如供預防、治療、或抑制受試者，諸如哺乳動物，較佳人類中之SARS-CoV-2的藥物中。
  78. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽係重組表現的。
  79. 如請求項78所述之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
  80. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其進一步包含佐劑。
  81. 如請求項80所述之免疫原性成分或產物組合，其中該佐劑為明礬及/或QS21。
  82. 如請求項69或70所述之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸在重組載體中提供。
  83. 一種使用請求項69至82中任一項列出之免疫原性成分或產物組合在受試者中產生免疫反應及/或產生中和抗體的方法，其包括以下步驟： a) 向該受試者投與至少一個包含該核酸之預敏化劑量；和 b) 向該受試者投與至少一個包含該多肽之補強劑量。
  84. 如請求項83所述之方法，其中該至少一個補強劑量進一步包含佐劑。
  85. 如請求項84所述之方法，其中該佐劑為明礬及/或QS21。
  86. 如請求項83至85中任一項所述之方法，其中該至少一個補強劑量在投與該至少一個預敏化劑量之後至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36、或48天或週投與或在藉由前述時間點中任何兩者來定義之時間範圍內投與，例如，在1-48天內或在1-48週內。
  87. 如請求項83至85中任一項所述之方法，其中該投與係腸內、經口、鼻內、非經腸、皮下、肌肉內、皮內、或靜脈內或以其任何組合來提供，並且視情況使用活體內 電穿孔。
  88. 如請求項83至85中任一項所述之方法，其中該投與係聯合抗病毒療法來執行。
  89. 如請求項88所述之方法，其中該抗病毒療法包括投與地塞米松、法維匹韋、法維拉韋、瑞地昔韋、托珠單抗、加利地韋、沙利姆單抗、洛匹那韋、利托那韋、達蘆那韋、利巴韋林、干擾素-α、聚乙二醇化干擾素-α、干擾素阿爾法-2b、康復期血清、或其任何組合。
  90. 一種用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其包含： (a) 包含至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列的核酸；或 (b) 包含至少一個SARS-CoV-2多肽的多肽，或兩者。
  91. 如請求項90所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該至少一個編碼SARS-CoV-2多肽之核酸序列包含： i) 編碼RBD多肽之核酸序列； ii) 編碼NP多肽之核酸序列； iii) 編碼M多肽之核酸序列； iv) 編碼HDAg多肽之核酸序列； v) 編碼P2A自催化多肽裂解位點之核酸序列； vi) 編碼IgE前導多肽之核酸序列；或 vii) 編碼S多肽之核酸序列； 或其任何組合。
  92. 如請求項91所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸係如請求項1至32中任一項所述之核酸。
  93. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO: 1-12 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  94. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸經密碼子最佳化以便在人類中表現。
  95. 如請求項94所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸共享或包含與SEQ ID NO:13-24 、 39-40 、 57-63 、 71 、 73 、 或75 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  96. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該至少一個SARS-CoV-2多肽包含： i) RBD多肽序列； ii) NP多肽序列； iii) M多肽序列； iv) HDAg多肽序列； v) P2A自催化多肽裂解位點序列； vi) IgE前導多肽序列；或 vii) S多肽序列； 或其任何組合。
  97. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽係如請求項33至64中任一項所述之多肽。
  98. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽共享或包含與SEQ ID NO:25-36 、 41-42 、 64-70 、 72 、 74 、 或76 中任一者之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性。
  99. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽重組表現。
  100. 如請求項99所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該多肽在哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲、或無細胞系統中重組表現。
  101. 如請求項中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合90-92，進一步包含佐劑。
  102. 如請求項101所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該佐劑為明礬及/或QS21。
  103. 如請求項90至92中任一項所述之用於治療或抑制SARS-CoV-2之免疫原性成分或產物組合，其中該核酸在重組載體中提供。
  104. 一種包含至少一個SARS-CoV-2核酸組分、基本上由該組分組成、或由該組分組成的核酸，該核酸連接至編碼IgE前導序列之核酸，較佳編碼胺基酸序列MDWTWILFLVAAATRVHS(SEQ ID NO:44 )之核酸，或共享或包含與SEQ ID NO:43 之至少90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、或100%同源性或序列同一性的IgE前導核酸序列。
  105. 如請求項104所述之核酸或由其編碼之蛋白作為藥物，包括治療或抑制SARS-CoV-2感染之藥物的用途。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW202330575A (zh) * 2021-09-29 2023-08-01 瑞典商斯文斯卡疫苗生產股份有限公司 用於治療及預防冠狀病毒之組成物及方法
WO2023079528A1 (en) * 2021-11-05 2023-05-11 King Abdullah University Of Science And Technology Compositions suitable for use in a method for eliciting cross-protective immunity against coronaviruses

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6132419A (en) 1992-05-22 2000-10-17 Genetronics, Inc. Electroporetic gene and drug therapy
US6379966B2 (en) 1999-02-26 2002-04-30 Mirus Corporation Intravascular delivery of non-viral nucleic acid
US6261281B1 (en) 1997-04-03 2001-07-17 Electrofect As Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells
US7015040B2 (en) 1999-02-26 2006-03-21 Mirus Bio Corporation Intravascular delivery of nucleic acid
US6897068B2 (en) 1999-02-26 2005-05-24 Mirus Bio Corporation Polynucleotide complex delivery
US7214369B2 (en) 2003-05-05 2007-05-08 Mirus Bio Corporation Devices and processes for distribution of genetic material to mammalian limb
WO2004011060A2 (en) 2002-07-26 2004-02-05 Mirus Corporation Delivery of molecules and complexes to mammalian cells in vivo
GB0417494D0 (en) 2004-08-05 2004-09-08 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
KR20070104881A (ko) 2004-10-14 2007-10-29 크루셀 홀란드 비.브이. 말라리아 프라임/부스트 백신
US8926993B2 (en) 2006-07-17 2015-01-06 Aduro Biotech Methods and compositions using Listeria for enhancing immunogenicity by prime boost
CN102770156B (zh) 2009-12-16 2016-01-20 克洛恩泰克制药股份公司 密码子优化的乙型肝炎病毒核心抗原(hbcag)
WO2014064534A2 (en) 2012-10-05 2014-05-01 Chrontech Pharma Ab Injection needle, device, immunogenic compositions and method of use
US10905760B2 (en) 2016-01-28 2021-02-02 Svenska Vaccinfabriken Produktion Ab Chimeric hepatitis D virus antigen and hepatitis B virus pre S1 genes for use alone or in vaccines containing hepatitis B virus genes
KR20230170803A (ko) * 2016-12-14 2023-12-19 뵈링거 잉겔하임 애니멀 헬스 유에스에이 인코포레이티드 조류 병원체의 다중 항원을 발현하는 재조합 hvt 벡터 및 그를 포함하는 백신
RU2733832C1 (ru) * 2020-07-28 2020-10-07 Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора) Искусственный ген Stbl_RBD_TrM_SC2, кодирующий бицистронную структуру, образованную последовательностями рецепторсвязывающего домена гликопротеина S коронавируса SARS-CoV-2, трансмембранного региона, P2A-пептида и гликопротеина G VSV, рекомбинантная плазмида pStem-rVSV-Stbl_RBD_TrM_SC2, обеспечивающая экспрессию искусственного гена, и рекомбинантный штамм вируса везикулярного стоматита rVSV-Stbl_RBD_TrM_SC2, используемый для создания вакцины против коронавируса SARS-CoV-2

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