KR20220160042A - 코로나바이러스의 치료 및 예방을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

코로나바이러스의 치료 및 예방을 위한 조성물 및 방법 Download PDF

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스벤스카 박신파브리셴 프로둑숀 아베
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Abstract

본원에서는 SARS-CoV 감염 또는 또 다른 코로나바이러스 (SARS-CoV-2 및 그의 변이체 포함)에 의한 감염에 대한 면역 반응을 유도하는 데 사용될 수 있는 조작된 SARS-CoV 핵산, 유전자, 펩티드, 또는 단백질로 이루어진 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 개시한다. 또한, 핵산 프라임 및 폴리펩티드 부스트 접근법을 사용하여 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 투여함으로써 대상체에서 상기 조성물 또는 조합물을 사용하여 SARS-CoV 또는 또 다른 코로나바이러스에 대한 면역 반응 및 중화 항체를 생성하는 방법도 개시한다.

Description

코로나바이러스의 치료 및 예방을 위한 조성물 및 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 27일 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/000,978, 2020년 10월 6일 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/088,228, 2021년 1월 26일 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/141,875, 및 2021년 3월 4일 출원된 미국 특허 가출원 번호 63/156,660의 우선권의 이익을 주장하고, 상기 특허는 각각 그와 함께 제출된 모든 부록을 포함하여 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 전자 포맷의 서열 목록과 함께 출원 중이다. 서열 목록은 2021년 3월 24일 작성되고, 크기가 368,069 바이트인 파일명 SeqListingSVF006WO.TXT로서 제공된다. 전자 서열 목록 중의 정보는 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다.
기술분야
본 개시내용의 측면은 일반적으로 SARS-CoV-2 감염 또는 또 다른 코로나바이러스에 대한 면역 반응을 유도하는 데 사용될 수 있는 조작된 SARS-CoV-2 핵산, 유전자, 펩티드, 또는 단백질의 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물에 관한 것이다. 상기 면역 반응은 SARS-CoV-2 또는 또 다른 코로나바이러스 (그의 변이체 포함)에 대한 세포독성 면역 세포 및 그에 대한 중화 항체를 생성하는 면역 세포 활성화를 포함한다. 본 개시내용은 또한 일반적으로 예를 들어, 동종성 또는 이종성 핵산 및/또는 폴리펩티드 프라임 및 핵산 및/또는 폴리펩티드 부스트 접근법과 함께 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 투여함으로써 대상체에게 본원에 기술된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 사용 또는 투여하여 SARS-CoV-2 또는 또 다른 코로나바이러스에 대한 중화 항체 생산을 포함하나, 이에 제한되지 않는 면역 반응을 생성하는 방법에 관한 것이다.
SARS-CoV-2 (2019-nCoV) 바이러스에 의해 유발된 2019 코로나바이러스 대유행은 엄청난 인명 손실, 세계 경제에 미치는 영향 및 전 세계 공중 보건 기반 시설에 대한 압박을 초래하였다. SARS-CoV-2 바이러스에 대한 인간 코로나바이러스 면역요법 또는 백신이 승인받기 시작했지만, 장기적인 효능 및 안전성 프로파일은 수행되지 않았다. 추가로, SARS-CoV-2 바이러스의 추가 변이체 또는 돌연변이체가 나타나고 있으며, 그 중 일부는 원래 확인된 균주보다 전염성이 높거나 독성이 강한 것으로 나타났다. 따라서, SARS-CoV-2 및 다른 코로나바이러스에 대한 새로운 치료법과 예방책이 크게 요구되고 있다.
SARS-CoV-2 및 다른 잠재적인 새로운 코로나바이러스 균주 또는 돌연변이체에 대한 치료 및 백신 개발 속도가 가장 중요하다. 바이러스의 유전자 분석 결과, 일반적으로 SARS-CoV-2 및 코로나바이러스의 가장 가변적인 성분은 수용체 결합 도메인 (RBD)을 포함하는 스파이크 (S) 단백질인 것으로 나타났다. SARS-CoV-2의 RBD는 2003년 SARS 바이러스 (SARS-CoV-1) 및 다른 코로나바이러스와 대략 75%의 상동성을 갖는다 (Wu A et al. "Genome Compositions and Divergence of the Novel Coronavirus (2019-nCoV) Originating in China" Cell Host Microbe. (2020); 27(3):325-328). 이는 예컨대, SARS-CoV-1과 같은 다른 코로나바이러스에 대한 기존 면역요법 및 백신 후보가 SARS-CoV-2에 대해 방어하는 데 유용하지 않을 것이라는 것을 시사하는 것이다.
본원에서는 신속한 검증 및 대규모 생산을 허용하는 SARS-CoV-2에 대한 면역원성 조성물로 사용하기 위한 고유한 후보물질을 개시한다. 본원에서는 핵산 (DNA 또는 RNA) 프라임 및 폴리펩티드 부스트 투여 스케줄을 사용하는 이종성 프라임-부스트 면역화 접근법의 사용을 기술한다. 핵산 프라임은 단일 투여로부터 1 또는 2주 이내에 대한 중화 항체를 검출 할 수 있게 한다. 이는 단백질/애주번트 믹스와 비교하여 더 우수한 T 세포 프라이밍에 기인하는 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 핵산 및/또는 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 DNA 또는 RNA이다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 포유동물, 마우스, 토끼, 고양이, 개, 영장류, 원숭이 또는 인간에게 투여되어 SARS-CoV-2 바이러스 또는 다른 코로나바이러스에 대한 면역원성 반응을 유도하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 반응은 SARS-CoV-2 바이러스, 다른 코로나바이러스, 또는 바이러스의 임의의 항원, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 또는 게놈 성분에 대한 활성 면역 세포, 예컨대 세포독성 T 세포, 또는 SARS-CoV-2 바이러스, 다른 코로나바이러스, 또는 바이러스의 임의의 항원, 폴리펩티드, 단백질, 핵산, 또는 게놈 성분에 대한 불활성화 항체를 생산하는 면역 세포의 형성을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 동물, 예컨대 포유동물, 마우스, 토끼, 고양이, 개, 영장류, 원숭이 또는 인간에게 투여되어 동물에서 SARS-CoV-2 바이러스 또는 다른 코로나바이러스에 대한 중화 항체를 생성하는 것으로 의도된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 SARS-CoV-2에 걸릴 위험이 있거나, 또는 현재 SARS-CoV-2로 감염되지 않은 개체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물은 SARS-CoV-2 감염에 대한 지속적인 면역원성 방어를 제공한다.
본원에 기술된 일부 대안은 바람직하게는, IgE 리더 서열을 코딩하는 핵산 (예컨대, 아미노산 서열 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열식별번호( SEQ ID NO:) 44)를 코딩하는 핵산), 또는 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 갖는 IgE 리더 핵산 서열과 연결된, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진 핵산 뿐만 아니라, SARS-CoV-2 감염을 치료 또는 억제하는 의약을 포함한, 의약으로서의 상기 핵산 및/또는 그에 의해 코딩된 단백질의 용도에 관한 것이다.
일부 대안에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분은 S 단백질 서열, RBD 서열, M 단백질 서열, NP 단백질 서열, E 단백질 서열, 또는 HE 단백질 서열을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분은 야생형 서열로서 발견된다. 일부 대안은 핵산이 서열식별번호 1-12 중 임의의 하나 이상과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성, 또는 서열식별번호 1-12 중 임의의 하나 이상과 상기 언급된 백분율 중 임의의 두 백분율로 정의된 범위 이내인 양의 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산 및 그의 용도에 관한 것이다. 일부 대안에서, 본원에 기술된 조성물 및 용도에 포함되는 것으로 고려되는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분은 상기 언급된 야생형 서열의 인간 코돈 최적화된 서열이다. 일부 대안에서, 예를 들어, 핵산은 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성, 또는 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 상기 언급된 백분율 중 임의의 두 백분율로 정의된 범위 이내인 양의 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 대안에서, 상기 언급된 핵산은 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료 또는 억제를 위해 사용된다. 따라서, 일부 대안은 임의적으로 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약을 받도록 선택되거나, 또는 확인될 수 있는 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 예컨대, SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약으로서의, 서열식별번호 1-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성, 또는 서열식별번호 1-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 상기 언급된 백분율 중 임의의 두 백분율로 정의된 범위 이내인 양의 서열 동일성을 갖는 핵산의 용도를 포함한다. 상기 대상체는 임상 평가 또는 진단 평가, 또는 그 둘 모두에 의해 선택 또는 확인될 수 있다.
본원에 제공된 일부 대안은 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 성분을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 성분은 S 단백질 서열, RBD 서열, M 단백질 서열, NP 단백질 서열, E 단백질 서열, 또는 HE 단백질 서열을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 조성물 또는 방법에 제공될 수 있는 폴리펩티드는 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성, 또는 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 상기 언급된 백분율 중 임의의 두 백분율로 정의된 범위 이내인 양의 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 대안에서, 폴리펩티드는 임의적으로 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약을 받도록 선택되거나, 또는 확인될 수 있는 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서 예컨대, SARS-CoV-2의 예방, 치료 또는 억제용 의약으로서 사용된다. 상기 대상체는 임상 평가 또는 진단 평가, 또는 그 둘 모두에 의해 선택 또는 확인될 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 상기 언급된 야생형 또는 코돈 최적화된 서열로부터 번역된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 재조합적으로 발현된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된다. 따라서, 일부 대안은 임의적으로 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약을 받도록 선택되거나, 또는 확인될 수 있는 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 예컨대, SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약으로서의, 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성, 또는 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 상기 언급된 백분율 중 임의의 두 백분율로 정의된 범위 이내인 양의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드의 용도를 제공한다.
일부 대안에서, 핵산 또는 폴리펩티드는 또한 적어도 하나의 자가촉매 펩티드 절단 부위를 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 자가촉매 펩티드 절단 부위는 P2A 자가촉매 펩티드 절단 부위이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분 또는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 성분은 적어도 하나의 자가촉매 펩티드 절단 부위에 의해 분리된다.
일부 대안에서, 예컨대 HDAg 유전자형 1A, HDAg 유전자형 1B, HDAg 유전자형 2A, 또는 HDAg 유전자형 2B 또는 그의 임의의 조합으로부터 선택되는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 HDAg 균주 서열과 같은, 적어도 하나의 HDAg 균주 서열은 상기 언급된 핵산 또는 폴리펩티드에 제공된다. 일부 대안에서, 4개의 HDAg 균주 서열이 그의 언급된 핵산 또는 폴리펩티드에 제공된다. 일부 대안에서, 4개의 HDAg 균주 서열은 HDAg 유전자형 1A, HDAg 유전자형 1B, HDAg 유전자형 2A, 및 HDAg 유전자형 2B 각각의 한 카피를 포함한다. 일부 대안에서, 핵산 또는 폴리펩티드는 4개 미만의 HDAg 균주 서열이 존재한다. 일부 대안에서, HDAg 균주 서열은 핵산 또는 폴리펩티드에서 탠덤으로 발견된다. 일부 대안에서, HDAg 균주 서열은 자가촉매 펩티드 절단 부위에 의해 분리된다. 다른 대안에서, HDAg 균주 서열은 링커 없이, 적어도 1개의 뉴클레오티드 또는 아미노산으로 이루어진 링커와 함께, 또는 그 사이의 자가촉매 펩티드 절단 부위 없이 탠덤으로 발견된다. 일부 대안에서, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스 서열은 HDAg 균주 서열의 상류 또는 하류에서 발견된다. 일부 대안에서, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스 서열은 자가촉매 펩티드 절단 부위에 의해 HDAg 균주 서열로부터 분리되어 있다. 일부 대안에서, 자가촉매 펩티드 절단 부위는 P2A 자가촉매 펩티드 절단 부위이다. 일부 대안에서, 구축물 SVF-8 (OC-8) 및 SVF-9 (OC-9)는 HDAg 균주 서열을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다.
일부 대안에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 상기 기술된 핵산 (예컨대, 서열식별번호 1-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상), 및 상기 기술된 폴리펩티드 (예컨대, 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상)을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 대안에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 이종성 프라임-부스트 접근법으로 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 프라임 용량은 핵산을 포함하고, 부스트 용량은 폴리펩티드를 포함한다. 일부 대안에서, 프라임 용량은 상기 언급된 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 포함하고, 부스트 용량은 상기 언급된 핵산 중 임의의 하나 이상을 포함한다. 일부 대안에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 동종성 프라임-부스트 접근법으로서 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 프라임 용량은 상기 언급된 핵산 중 임의의 하나 이상을 포함하고, 부스트 용량은 동일한 핵산 또는 상이한 핵산을 포함한다. 일부 대안에서, 프라임 용량은 상기 언급된 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 포함하고, 부스트 용량은 동일한 폴리펩티드 또는 상이한 폴리펩티드를 포함한다. 일부 대안에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 애주번트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 알룸 및/또는 QS21이다. 일부 대안에서, 핵산은 재조합 벡터에 제공된다. 일부 대안에서, 재조합 벡터는 pVAX1이다. 일부 대안에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조성물은 임의적으로 SARS-CoV-2 감염의 예방, 치료, 호전, 또는 억제용 의약을 받도록 선택되거나, 또는 확인될 수 있는 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 의 예방, 치료 또는 억제를 위해 사용된다. 상기 대상체는 임상 평가 또는 진단 평가, 또는 그 둘 모두에 의해 선택 또는 확인될 수 있다.
본원에 기술된 일부 대안은 상기 기술된 면역원성 조성물, 생성물 조성물, 핵산, 또는 폴리펩티드 (예컨대, 서열식별번호 1-36, 39-42, 또는 57-70 중 임의의 하나 이상)를 사용하여 대상체, 바람직하게는 인간에서 면역 반응을 생성하는 방법에 관한 것이다. 일부 대안에서, 본 방법은 이종성 프라임-부스트 접근법을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 프라임 용량이 대상체에게 투여되고, 적어도 하나의 부스트 용량이 대상체에게 투여된다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 프라임 용량은 핵산이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 부스트 용량은 폴리펩티드이다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 부스트 용량은 애주번트, 예컨대 알룸 및/또는 QS21을 포함한다. 일부 대안에서, 적어도 하나의 부스트 용량은 적어도 하나의 프라임 용량 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주, 또는 상기 언급된 시점 중 임의의 두 시점으로 정의된 시간 범위 이내에 투여된다. 일부 대안에서, 본 방법은 동종성 프라임-부스트 접근법을 포함한다. 일부 대안에서, 본 방법은 항바이러스 요법, 예컨대 덱사메타손, 파비피라비르, 파필라비르, 렘데시비르, 토실리주맙, 갈리데시비르, 사릴루맙, 로피나비르, 리토나비르, 다루나비르, 리바비린, 인터페론-α, PEG화된 인터페론-α, 인터페론 알파-2b, 회복기 혈청, AT-100, 또는 TJM2, 또는 줄기 세포 요법, 또는 그의 임의의 조합의 투여를 추가로 포함한다.
추가의 대안은 본원에 기술된 조성물 중 임의의 하나 이상, 예컨대 서열식별번호 1-36, 39-42, 또는 57-70 중 임의의 하나 이상에 기재된 핵산 또는 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 포함하는 주사 장치에 관한 것이다. 상기 주사 장치는 단일 용량의 상기 핵산 또는 폴리펩티드를 포함할 수 있고, 상기 주사 장치는 핵산 또는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두의 전달을 향상시키도록 구성된 변형된 니들 디자인을 가질 수 있다. 상기 주사 장치는 전기천공하에, 또는 그의 부재하에 사용될 수 있다. 서열식별번호 1-36, 39-42, 또는 57-70의 핵산 또는 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있는 고려되는 주사 장치는 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0235928; PCT 출원 공개 번호 WO2014064534; 미국 특허 번호 6,610,044; 6,132,419; 6,379,966; 6,897,068; 7,015,040; 7,214,369; 7,473,419; 및 7,589,059 (상기 특허들은 모두 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)에 기술되어 있다.
본 발명의 일부 측면은 하기 넘버링된 대안에 관한 것이다:
1. SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
2. 대안 1에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
3. 대안 1 또는 2에 있어서, 핵산이 서열식별번호 1 또는 13과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
4. 대안 1에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 및 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
5. 대안 1-2 또는 4 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 2-3, 14, 또는 15 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
6. 대안 4에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 핵산.
7. 대안 6에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
8. 대안 6 또는 7에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
9. 대안 6-8 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 39와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
10. 대안 1-2 또는 4 중 어느 한 대안에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
11. 대안 10에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열이 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
12. 대안 10 또는 11에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 핵산.
13. 대안 12에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
14. 대안 12 또는 13에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
15. 대안 10-14 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 40, 57-60, 또는 62 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
16. 대안 10 또는 11에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD의 3개의 탠덤 카피를 포함하는 것인 핵산.
17. 대안 16에 있어서, RBD의 3개의 탠덤 카피가 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는 것인 핵산.
18. 대안 16 또는 17에 있어서, 핵산이 서열식별번호 61과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
19. 대안 1에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
20. 대안 1 또는 9에 있어서, 핵산이 서열식별번호 4 또는 16과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
21. 대안 1에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 스파이크 (S) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 막 (M) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
22. 대안 21에 있어서, S 폴리펩티드가 발현, 가용성, 및/또는 면역원성을 개선시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 핵산.
23. 대안 21 또는 22에 있어서, S 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함하는 것인 핵산.
24. 대안 21-23 중 어느 한 대안에 있어서, S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 51과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
25. 대안 21-24 중 어느 한 대안에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
26. 대안 25에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열이 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
27. 대안 21-26 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 63과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
28. 서열식별번호 5-7, 17-19, 22-24, 73, 또는 75 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
29. SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 D형 간염 항원 (HDAg)을 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
30. 대안 29에 있어서, 핵산이 서열식별번호 8 또는 20과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
31. 대안 29에 있어서, P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
32. 대안 29 또는 31에 있어서, 핵산이 서열식별번호 9 또는 21과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
33. 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열 및 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 포함하는 폴리펩티드.
34. 대안 33에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
35. 대안 33 또는 34에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
36. 대안 33에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열, M 폴리펩티드 서열, 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
37. 대안 33, 34, 또는 36에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 26 내지 27 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
38. 대안 36에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 폴리펩티드.
39. 대안 38에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 폴리펩티드.
40. 대안 38 또는 39에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
41. 대안 38-40 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 41과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
42. 대안 33, 34, 또는 36 중 어느 한 대안에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
43. 대안 42에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열이 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
44. 대안 42 또는 43에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 폴리펩티드.
45. 대안 44에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 폴리펩티드.
46. 대안 44 또는 45에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
47. 대안 42-46 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 42, 64-67, 또는 69 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
48. 대안 42-43에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD의 3개의 탠덤 카피를 포함하는 것인 폴리펩티드.
49. 대안 48에 있어서, RBD의 3개의 탠덤 카피가 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는 것인 폴리펩티드.
50. 대안 48 또는 49에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 68과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
51. 대안 33에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열 및 M 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
52. 대안 33 또는 51에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 28과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
53. 대안 33에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 스파이크 (S) 폴리펩티드 및 NP 폴리펩티드를 포함하는 것인 폴리펩티드.
54. 대안 52에 있어서, S 폴리펩티드가 발현, 가용성, 및/또는 면역원성을 개선시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 폴리펩티드.
55. 대안 53 또는 54에 있어서, S 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함하는 것인 폴리펩티드.
56. 대안 53-55 중 어느 한 대안에 있어서, S 폴리펩티드가 서열식별번호 56과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
57. 대안 53-56 중 어느 한 대안에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
58. 대안 57에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열이 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
59. 대안 53-58 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 70과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
60. 서열식별번호 29-31, 34-36, 74, 또는 76 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
61. 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 및 적어도 하나의 HDAg 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
62. 대안 61에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 32와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
63. 대안 62에 있어서, 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 추가로 포함하는 폴리펩티드.
64. 대안 61 또는 63에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 33과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
65. 대안 1-32 중 어느 한 대안에 있어서, 대상체, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용하기 위한 핵산.
66. 대안 33-64 중 어느 한 대안에 있어서, 대상체, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용하기 위한 폴리펩티드.
67. 대안 33-64 또는 66 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현되는 것인 폴리펩티드.
68. 대안 67에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현되는 것인 폴리펩티드.
69. (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산; 또는
(b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함하는, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
70. 대안 69에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이
i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열;
vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는
vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
71. 대안 69 또는 70에 있어서, 핵산이 대안 1-32 중 어느 한 대안의 핵산인 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
72. 대안 69-71 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 1-12 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
73. 대안 69-71 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
74. 대안 73에 있어서, 핵산이 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
75. 대안 69-74 중 어느 한 대안에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드가
i) RBD 폴리펩티드 서열;
ii) NP 폴리펩티드 서열;
iii) M 폴리펩티드 서열;
iv) HDAg 폴리펩티드 서열;
v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열;
vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는
vii) S 폴리펩티드 서열;
또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
76. 대안 69-75 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 대안 33-64 중 어느 한 대안의 폴리펩티드인 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
77. 대안 69-76 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
78. 대안 69-77 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
79. 대안 78에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
80. 대안 69-79 중 어느 한 대안에 있어서, 애주번트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
81. 대안 80에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
82. 대안 69-81 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 재조합 벡터에 제공되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
83. a) 대상체에게 핵산을 포함하는 적어도 하나의 프라임 용량을 투여하는 단계;
b) 대상체에게 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 부스트 용량을 투여하는 단계를 포함하는,
대안 69-82 중 어느 한 대안에 기재된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 사용하여 대상체에서 면역 반응을 생성하고/거나, 중화 항체를 생성하는 방법.
84. 대안 83에 있어서, 적어도 하나의 부스트 용량이 애주번트를 추가로 포함하는 것인 방법.
85. 대안 84에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인 것인 방법.
86. 대안 83-85 중 어느 한 대안에 있어서, 적어도 하나의 부스트 용량이 적어도 하나의 프라임 용량 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주, 또는 상기 언급된 시점 중 임의의 두 시점으로 정의된 시간 범위 이내에, 예컨대 1-48일 또는 1-48주 이내에 투여되는 것인 방법.
87. 대안 83-86 중 어느 한 대안에 있어서, 투여가 장내로, 경구로, 비내로, 비경구로, 피하로, 근육내로, 진피내로, 또는 정맥내로 또는 그의 임의의 조합으로, 및 임의적으로 생체내 전기천공과 함께 제공되는 것인 방법.
88. 대안 83-87 중 어느 한 대안에 있어서, 투여가 항바이러스 요법과 함께 수행되는 것인 방법.
89. 대안 88에 있어서, 항바이러스 요법이 덱사메타손, 파비피라비르, 파필라비르, 렘데시비르, 토실리주맙, 갈리데시비르, 사릴루맙, 로피나비르, 리토나비르, 다루나비르, 리바비린, 인터페론-α, PEG화된 인터페론-α, 인터페론 알파-2b, 회복기 혈청, 또는 그의 임의의 조합의 투여를 포함하는 것인 방법.
90. (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산; 또는
(b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함하는, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
91. 대안 90에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이
i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열;
vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는
vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
92. 대안 91에 있어서, 핵산이 대안 1-32 중 어느 한 대안의 핵산인 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
93. 대안 90-92 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 서열식별번호 1-12 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
94. 대안 90-92 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
95. 대안 94에 있어서, 핵산이 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
96. 대안 90-95 중 어느 한 대안에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드가
i) RBD 폴리펩티드 서열;
ii) NP 폴리펩티드 서열;
iii) M 폴리펩티드 서열;
iv) HDAg 폴리펩티드 서열;
v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열;
vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는
vii) S 폴리펩티드 서열;
또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
97. 대안 90-96 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 대안 33-64 중 어느 한 대안의 폴리펩티드인 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
98. 대안 90-97 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 어느 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
99. 대안 90-98 중 어느 한 대안에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
100. 대안 99에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
101. 대안 90-100 중 어느 한 대안에 있어서, 애주번트를 추가로 포함하는, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
102. 대안 101에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
103. 대안 90-102 중 어느 한 대안에 있어서, 핵산이 재조합 벡터에 제공되는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
104. IgE 리더 서열을 코딩하는 핵산, 바람직하게는 아미노산 서열 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열식별번호 44)를 코딩하는 핵산, 또는 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 IgE 리더 핵산 서열에 연결된 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진 핵산.
105. SARS-CoV-2 감염을 치료 또는 억제하는 의약을 포함한 의약으로서의, 대안 104의 핵산, 또는 그에 의해 코딩된 단백질의 용도.
상기 기술된 특징 이외에도, 추가적인 특징 및 변형은 하기의 도면 및 예시적인 실시양태의 설명으로부터 쉽게 명백해질 것이다. 이들 도면은 전형적인 실시양태를 도시한 것이며, 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다는 것을 이해하여야 한다.
도 1은 예를 들어, 이종성 프라임-부스트 접근법을 사용하여 예컨대, 대상체에서 SARS-CoV-2의 예방, 치료, 또는 억제를 위한 의약으로서 사용될 수 있는 예시적인 재조합 면역원성 조성물을 도시한 것이다. 본원에 제시된 예시적인 조성물 중 임의의 것이 본원에 개시된 방법 또는 용도 중 임의의 것을 위해 사용될 수 있다.
도 2는 예를 들어, 이종성 프라임-부스트 접근법을 사용하여 예컨대, 대상체에서 SARS-CoV-2 (상이한 변이체 포함)의 예방, 치료, 또는 억제를 위한 의약으로서 사용될 수 있는 추가의 예시적인 재조합 면역원성 조성물을 도시한 것이다. 본원에 제시된 예시적인 조성물 중 임의의 것이 본원에 개시된 방법 또는 용도 중 임의의 것을 위해 사용될 수 있다.
도 3a-b는 본원에 개시된 예시적인 SARS-CoV-2 구축물을 이용한 BALB/c 및 C57BL/6 마우스의 면역화를 도시한 것이다. 도 3a는 RBD 및 S 단백질에 대한 마우스 혈청의 종점 ELISA를 보여주는 것이다. 도 3b는 면역화된 마우스로부터의 혈청을 이용한 시험관내 SARS-CoV-2 바이러스 중화를 보여주는 것이다.
도 4는 ELISpot에 의해 검출된, SARS-CoV-2 RBD, M, 및 NP 단백질을 커버하는 펩티드 풀에 대한 면역화된 마우스의 T 세포 반응을 도시한 것이다.
도 5a는 OC-2.3 DNA 및 QS21 애주번트와 함께 재조합 S 단백질 (rS/QS21)을 이용하여 프라임/부스트 접근법으로 면역화된 마우스에서의 항-S 단백질 항체 역가를 도시한 것이다. 시험된 조합은 1) OC-2.3 DNA 프라임 및 rS/QS21 단백질 부스트; 2) OC-2.3 DNA 프라임 및 OC-2.3 DNA 부스트, 3) rS/QS21 단백질 프라임 및 rS/QS21 단백질 부스트; 및 4) rS/QS21 단백질 프라임 및 OC-2.3 DNA 부스트였다.
도 5b는 SARS-CoV-2 RBD, M, 또는 NP 단백질, 또는 전장의 RBD, M, 또는 NP 단백질을 커버하는 펩티드 풀에 대한, 도 5a의 프라임/부스트 접근법으로 면역화된 마우스로부터의 T 세포 반응을 도시한 것이다.
도 6a는 OC-2.3 DNA로 면역화된 토끼에서 500, 1000, 또는 1500 ㎍의 DNA를 투여받았을 때의 제1 용량 (2주째) 또는 제2 용량 (5주째) 후 2주째에 시험된 항-S 단백질 항체 역가를 도시한 것이다.
도 6b는 2회의 1000 ㎍ 용량 후 0주 또는 5주째에 시험된 OC-2.3 DNA로 면역화된 사이노몰구스 마카크(cynomolgus macaque)에서의 항-S 또는 항-NP (N) 단백질 항체 역가를 도시한 것이다.
도 6c는 OC-2.3 DNA 또는 대조군 DNA로 면역화된 사이노몰구스 마카크에서의 SARS-CoV-2 챌린지 후 4 또는 20일째 SARS-CoV-2 RNA의 정량화를 도시한 것이다.
하기 상세한 설명에서, 그 일부를 형성하는 첨부 도면을 참조한다. 도면에서 유사한 기호는 문맥상 달리 명시되지 않는 한, 전형적으로 유사한 구성요소를 식별한다. 상세한 설명, 도면 및 청구범위에 기술된 예시적인 실시양태는 제한을 의미하지 않는다. 본원에 제시된 대상의 정신 또는 범주를 벗어남 없이, 다른 실시양태가 이용될 수 있고, 다르게 변경될 수 있다. 본원에 일반적으로 기술되고, 도면에서 예시된 바와 같이, 본 개시내용의 측면은 매우 다양한 상이한 구성으로 배열, 치환, 조합, 분리 및 디자인될 수 있으며, 이들 모두 본원에서 명시적으로 고려된다는 것을 쉽게 이해할 것이다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 언급된 모든 특허, 출원, 공개된 출원 및 다른 공개문헌은 달리 언급되지 않는 한, 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다. 본원의 용어에 대한 정의가 복수로 존재하는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 본 섹션의 정의가 우선한다.
본원에서 "하나"라는 단수형태는 단수형태의 하나, 또는 하나 초과의 (예를 들어, 적어도 하나의) 문법상 대상을 지칭하는 것으로 사용된다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 초과의 요소를 의미한다.
"약" 또는 "대략"이라는 용어는 기준 양, 수준, 값, 수치, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 30, 25, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1%만큼 다른 양, 수준, 값, 수치, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 지칭한다.
본 명세서 전역에 걸쳐, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, " 포함하다(comprise)", "포함하다(comprises)" 및 "포함하는"이라는 단어는 언급된 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군을 포함하고, 임의의 다른 단계 또는 요소 또는 단계 또는 요소의 군은 배제시키는 것으로 이해될 것이다.
"~으로 이루어진"은 "~으로 이루어진"이라는 어구 뒤에 오는 모든 것을 포함하고, 이에 제한되는 것을 의미한다. 따라서, "~으로 이루어진"이라는 어구는 열거된 요소가 요구되거나, 또는 필수적이고, 다른 요소는 존재하지 않을 수 있다는 것을 나타낸다. "본질적으로 ~으로 이루어진"은 상기 어구 뒤에 열거된 임의의 요소를 포함하고, 본 개시내용에서 열거된 요소에 대해 명시된 활성 또는 작용을 방해하거나, 또는 그에 기여하지 않는 다른 요소로 제한되는 것을 의미한다. 따라서, "본질적으로 ~으로 이루어진"이라는 어구는 열거된 요소가 요구되거나, 또는 필수적이지만, 다른 요소는 임의적이고, 열거된 요소의 활성 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는지 여부에 따라 존재할 수 있거나, 또는 존재하지 않을 수 있다는 것을 나타낸다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 관련 기술분야의 통상의 기술자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 용어에 대한 정의가 여러 개 있는 경우, 달리 명시되지 않는 한, 이 섹션의 정의가 우선한다. 본 개시내용의 실시는 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 범위 내에서 분자 생물학 및 재조합 DNA 기술의 통상적인 방법을 사용할 것이며, 이들 중 다수는 예시 목적으로 하기에 기재되어 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "개체", "대상체" 또는 "환자"는 인간 또는 비인간 포유동물, 예컨대 개, 고양이, 마우스, 래트, 소, 양, 돼지, 염소, 비인간 영장류, 또는 조류, 예컨대 닭 뿐만 아니라, 다른 척추동물 또는 무척추동물을 의미한다.
"포유동물"이라는 용어는 그의 일반적인 생물학적 의미로 사용된다. 따라서, 이는 구체적으로 유인원 (침팬지, 유인원, 원숭이) 및 인간을 포함한 영장류, 소, 말, 양, 염소, 돼지, 토끼, 개, 고양이, 설치류, 래트, 마우스, 기니아 피그 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 기술된 일부 실시양태는 유효량의 본원에 기술된 올리고뉴클레오티드, 단백질, 또는 그 둘 모두 및 제약상 허용되는 담체, 부형제, 또는 그의 조합을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진 제약 조성물에 관한 것이다. 본원에 기술된 제약 조성물은 인간 및/또는 수의학적 적용에 적합하다.
본원에서 사용된 바, "기능" 및 "기능성"이라는 용어는 생물학적, 효소적 또는 치료적 기능을 지칭한다.
본원에서 사용된 바, "단리된"이라는 용어는 보통 그의 천연 상태에서 그를 수반하는 구성요소가 실질적으로 또는 본질적으로 없는 물질을 지칭한다. 예를 들어, 본원에서 사용된 바, "단리된 세포"는 그의 자연적으로 발생된 상태의 환경 또는 유기체로부터 정제된 세포, 대상체로부터 또는 배양물로부터 제거된 세포를 포함하며, 예를 들어, 이는 생체내 또는 시험관내 물질과 유의적으로 회합되어 있지 않다.
"유효량" 또는 "유효 용량"이라는 용어는 명시된 생물학적 또는 의학적 반응을 유발하는 활성 화합물 또는 제약 제제의 양을 나타내는 데 사용된다. 예를 들어, 화합물의 유효량은 질환의 증상을 완화 또는 호전시키거나, 또는 치료받는 대상체의 생존을 연장시키는 데 필요한 양일 수 있다. 이 반응은 조직, 시스템, 동물 또는 인간에서 발생할 수 있으며, 치료되는 질환의 징후 또는 증상의 완화를 포함한다. 유효량의 결정은 본원에 제공된 개시내용을 고려하여 관련 기술분야의 통상의 기술자의 능력 범위 내에 있다. 용량으로서 요구되는 본원에 개시된 화합물의 유효량은 투여 경로, 치료받는 동물의 유형 (인간 포함), 및 고려 중인 특정 동물의 신체적 특징에 따라 달라질 것이다. 용량은 원하는 효과를 달성하도록 맞춤화될 수 있지만, 체중, 식이, 동시 약물 및 의료 분야의 숙련가가 인식할 다른 인자와 같은 인자에 따라 달라질 것이다.
용어 "제약상 허용되는 염"은 제한 없이, 진통제, 치료제, 다른 물질 등을 포함한, 조성물의 비교적 비독성, 무기 및 유기산, 또는 염기 부가 염을 포함한다. 제약상 허용되는 염의 예로는 예컨대, 염산, 황산과 같은 무기산으로부터 유도된 것과 예컨대, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 등과 같은 유기산으로부터 유도된 것을 포함한다. 염 형성에 적합한 무기 염기의 예는 암모니아, 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄, 아연 등의 인산염, 수산화물, 탄산염 및 중탄산염을 포함한다. 염은 또한 그러한 염을 형성하기에 충분히 강하고 비독성인 것을 포함하는 적합한 유기 염기로 형성될 수 있다. 예를 들어, 이러한 유기 염기의 부류로는 메틸아민, 디메틸아민 및 트리에틸아민을 포함하는 모노-, 디- 및 트리알킬아민; 모노-, 디- 및 트리에탄올아민을 포함하는 모노-, 디- 또는 트리히드록시알킬아민; 글리신, 아르기닌 및 리신을 포함하는 아미노산; 구아니딘; N-메틸글루코사민; N-메틸글루카민; L-글루타민; N-메틸피페라진; 모르폴린; 에틸렌디아민; N-벤질펜에틸아민; 또는 트리히드록시메틸 아미노에탄을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 바, "제제", "제약 조성물", 및 "조성물"은 대상체에 투여하기 위한 물질의 조성물을 지칭하는 등가 용어이다.
"제약상 허용되는"이라는 용어는 대상체, 및 특히, 인간에 대한 요법과 화합성을 나타낸다는 것을 의미한다.
"작용제"라는 용어는 생물학적 활성을 갖고, 요법에 사용될 수 있는 활성제를 지칭한다. 또한, "작용제"는 "적어도 하나의 작용제", "화합물" 또는 "적어도 하나의 화합물"과 동의어일 수 있으며, 작용제의 임의의 형태, 예컨대 그의 유도체, 유사체, 염 또는 프로드럭을 지칭할 수 있다. 작용제는 다양한 형태, 분자 복합체의 성분, 및 제약상 허용되는 염 (예컨대, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 술페이트, 포스페이트, 니트레이트, 보레이트, 아세테이트, 말레에이트, 타르트레이트, 및 살리실레이트)으로 존재할 수 있다. 용어 "작용제"는 또한 임의의 제약 분자 또는 화합물, 치료 분자 또는 화합물, 매트릭스 형성 분자 또는 화합물, 중합체, 합성 분자 및 화합물, 천연 분자 및 화합물, 및 그의 임의의 조합을 지칭할 수 있다.
적절한 제제는 선택된 투여 경로에 의존한다. 본원에 기술된 화합물의 제제화 및 투여 기술은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 장내, 경구, 직장, 국소, 설하, 협측, 귀내, 경막외, 피부외, 에어로졸, 비경구, 근육내, 피하, 동맥내, 정맥내, 문맥내, 관절내, 진피내, 복강, 골수내 주사, 척추강내, 직접 뇌실내, 복강내, 비내 또는 안구내 주사를 포함하나, 이에 제한되지 않는, 화합물을 투여하는 다양한 기술이 관련 기술분야에 존재한다. 제약 조성물은 일반적으로 특정 의도된 투여 경로에 맞게 맞춤화될 것이다. 본원에 기술된 제약 조성물은 또한 예컨대, T 세포, 자연 살해 세포, B 세포, 대식세포, 림프구, 줄기 세포, 골수 세포 또는 조혈 줄기 세포와 같은 다른 요법과 함께 대상체에게 투여될 수 있다
제약 화합물은 또한 예를 들어, 종종 데포 또는 서방성 제제로 기관, 조직 또는 감염 부위에 화합물을 직접 주사함으로써 전신 방식보다는 국부적으로 투여될 수 있다. 추가로, 표적화된 약물 전달 시스템, 예를 들어, 조직 특이적 항체로 코팅된 리포솜으로 화합물을 투여할 수 있다. 리포솜은 기관, 조직, 암, 종양 또는 감염 부위로 표적화되고, 그에 의해 선택적으로 흡수될 수 있다.
본원에 개시된 제약 조성물은 예컨대, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 분쇄, 유화, 캡슐화, 포획 또는 정제화 프로세스에 의해 자체 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같이, 제약 조성물에 사용되는 화합물은 제약상 양립가능한 반대이온과의 염으로서 제공될 수 있다
본원에서 사용되는 바, "담체"는 세포, 조직 및/또는 신체 기관으로의 화합물의 통과, 전달 및/또는 혼입을 촉진하는 화합물, 입자, 고체, 반고체, 액체 또는 희석제를 지칭한다. 예를 들어, 제한 없이, 지질 나노입자 (LNP)는 올리고뉴클레오티드를 캡슐화하여 혈류를 통과하는 동안 분해로부터 올리고뉴클레오티드를 보호하고/거나, 원하는 기관, 예컨대 간으로의 전달을 촉진할 수 있는 담체 유형이다.
본원에서 사용되는 바, "희석제"는 약리학적 활성은 없지만, 제약상 필요하거나, 또는 바람직할 수 있는 제약 조성물 중의 성분을 지칭한다. 예를 들어, 희석제는 제조 및/또는 투여를 위해 질량이 너무 작은 강력한 약물의 벌크를 증가시키는 데 사용될 수 있다. 또한 주사, 섭취 또는 흡입에 의해 투여되는 약물의 용해를 위한 액체일 수 있다. 관련 기술분야 에서 일반적인 형태의 희석제는 예컨대, 제한 없이, 인간 혈액의 오스몰농도 및/또는 조성을 모방하는 포스페이트 완충처리된 염수와 같은 완충처리된 수용액이다.
용어 "부형제"는 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 이는 제한 없이, 벌크, 일관성, 안정성, 결합 능력, 활택성, 붕해 능력 등을 조성물에 제공하기 위해 제약 조성물에 첨가되는 불활성 물질(substance), 화합물, 또는 물질(material)을 지칭한다. 본원에 기술된 제제 중 임의의 하나 이상에 포함될 수 있는, 바람직한 특성을 갖는 부형제는 보존제, 애주번트, 안정화제, 용매, 완충제, 희석제, 가용화제, 계면활성제(detergent), 계면활성제(surfactant), 킬레이트제, 항산화제, 알콜, 케톤, 알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 시트르산, 염, 염화나트륨, 중탄산나트륨, 인산나트륨, 붕산나트륨, 시트르산나트륨, 염화칼륨, 인산칼륨, 황산마그네슘 당, 덱스트로스, 덱스트란, 프럭토스, 만노스, 락토스, 갈락토스, 수크로스, 소르비톨, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 메틸 셀룰로스 (히프로멜로스), 글리세린, 폴리비닐 알콜, 포비돈, 프로필렌 글리콜, 혈청, 아미노산, 폴리에틸렌글리콜, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 소듐 데옥시콜레이트, 소듐 타우로데옥시콜레이트, 스테아르산마그네슘, 옥틸페놀 에톡실레이트, 벤제토늄 클로라이드, 티메로살, 젤라틴, 에스테르, 에테르, 2-페녹시에탄올, 우레아 또는 비타민, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 부형제 양은 제약 조성물 중에서 0% w/w, 0.1% w/w, 0.2% w/w, 0.3% w/w, 0.4% w/w, 0.5% w/w, 0.6% w/w, 0.7% w/w, 0.8% w/w, 0.9% w/w, 1% w/w, 2% w/w, 3% w/w, 4% w/w, 5% w/w, 6% w/w, 7% w/w, 8% w/w, 9% w/w, 10% w/w, 20% w/w, 30% w/w, 40% w/w, 50% w/w, 60% w/w, 70% w/w, 80% w/w, 90% w/w, 95% w/w, 100% w/w 또는 상기 언급된 수치 중 임의의 두 수치로 정의된 범위 내의 임의의 중량%로 발견될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "애주번트"는 면역 반응을 자극시키고, 방어 면역의 효능을 증가시키고, 면역원성 항원, 에피토프, 또는 조성물과 함께 투여되는 물질(substance), 화합물, 또는 물질(material)을 지칭한다. 애주번트는 항원의 지속적인 방출, 시토카인 및 케모카인의 상향조절, 투여 부위에서의 세포 동원, 항원 제시 세포에서의 항원 흡수 및 제시 증가, 또는 항원 제시 세포 및 인플라마솜의 활성화를 가능하게 함으로써 면역 반응을 개선시키는 역할을 한다. 본원에 기술된 제제 중 임의의 하나 이상에 포함될 수 있는, 일반적으로 사용되는 애주번트로는 알룸, 알루미늄 염, 황산알루미늄, 수산화알루미늄, 인산알루미늄, 수산화인산칼슘, 황산알루미늄칼륨, 오일, 광유, 파라핀 오일, 수중유 에멀젼, 계면활성제, MF59®, 스쿠알렌, AS03, α-토코페롤, 폴리소르베이트 80, AS04, 모노포스포릴 지질 A, 바이로솜, 핵산, 폴리이노신:폴리시티딜산, 사포닌, QS-21, 단백질, 플라겔린, 시토카인, 케모카인, IL-1, IL-2, IL-12, IL-15, IL-21, 이미다조퀴놀린, CpG 올리고뉴클레오티드, 지질, 인지질, 디올레오일 포스파티딜콜린 (DOPC), 트레할로스 디마이콜레이트, 펩티도글리칸, 박테리아 추출물, 지질다당류, 또는 프로인트(Freund) 애주번트, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 바, 임의의 주어진 물질, 화합물 또는 물질의 "순도"라는 용어는 예상 존재비 대비 상기 물질, 화합물 또는 물질의 실제 존재비를 지칭한다. 예를 들어, 물질, 화합물 또는 물질은 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 또는 100% (그 사이의 소수 포함) 순수할 수 있다. 순도는 부산물, 이성질체, 거울상 이성질체, 분해 생성물, 용매, 담체, 비히클, 오염물질 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는 원치않는 불순물에 의해 영향을 받을 수 있다. 순도는 크로마토그래피, 액체 크로마토그래피, 기체 크로마토그래피, 분광법, UV-가시광선 분광분석법, 적외선 분광분석법, 질량 분광분석법, 핵 자기 공명, 중량 측정법, 또는 적정, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는 기술에 의해 측정될 수 있다.
본원에 개시된 일부 실시양태는 그를 필요로 하는 대상체 또는 환자를 선택하는 것에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2에 대한 면역원성을 필요로 하는 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 감염을 앓는 것으로, 또는 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2 치료를 필요로 하는 것으로 확인된 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, 이전에 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2에 대한 치료를 받았던 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, 이전에 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2 위험에 대한 치료를 받았던 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2가 재발된 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, 바이러스 감염, 예컨대 SARS-CoV-2에 대한 요법에 대한 내성이 발생한 환자가 선택된다. 일부 실시양태에서, 상기 언급된 선택 기준의 임의의 조합을 가질 수 있는 환자가 선택된다. 상기와 같은 선택은 대상체의 임상 및 진단 평가, 또는 그 둘 모두의 조합에 의해 이루어질 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "치료하다", "치료하는", "치료", "치료적" 또는 "요법"이라는 용어는 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 반드시 질환 또는 병태의 완전한 치유 또는 폐지를 의미하는 것은 아니다. 본원에서 사용되는 바 (및 관련 기술분야에서 널리 이해되고 있는 바와 같이), "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 또한 임상 결과를 포함하여 대상체의 병태에서 유익하거나, 또는 원하는 결과를 얻기 위한 접근법을 의미한다. 유익하거나, 또는 원하는 임상 결과는 하나 이상의 증상 또는 병태의 완화 또는 호전, 질환의 정도 감소, 질환 상태의 안정화 (즉, 악화되지 않음), 질환 전파 또는 확산 방지, 질환 진행의 확산, 지연 또는 저속화, 질환 상태의 호전 또는 경감, 질환 재발의 감소, 및 (부분적이든 전체적이든, 검출가능하든 검출불가능하든) 관해를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 바, "치료하는" 또는 "치료"는 모두는 아니지만, 일부 맥락에서, 예방적 치료를 포함할 수 있다. 치료 방법은 대상체에게 치료 유효량의 활성제를 투여하는 단계를 포함한다. 투여 단계는 단일 투여로 이루어질 수 있거나, 또는 연속 투여를 포함할 수 있다. 조성물은 환자를 치료하기에 충분한 양으로 및 그러한 기간 동안 대상체에게 투여된다. 치료 기간의 길이는 다양한 인자, 예컨대 병태의 중증도, 환자의 연령 및 유전적 프로파일, 활성제 농도, 치료에 사용되는 조성물의 활성, 또는 그의 조합에 의존한다. 또한, 치료 또는 예방에 사용되는 작용제의 유효 투여량은 특정 치료 또는 예방 요법의 과정에 걸쳐 증가 또는 감소될 수 있다는 것을 이해할 것이다. 투여량의 변경은 관련 기술분야에 공지된 표준 진단 검정법에 의해 야기될 수 있고, 명백해질 수 있다. 일부 경우에, 만성 투여가 필요할 수 있다. "예방적 치료"라는 용어는 아직 질환 또는 병태의 증상을 나타내지 않지만, 특정 질환 또는 병태에 민감하거나, 그의 위험이 있는 대상체를 치료하여 환자에서 질환 또는 병태가 발생할 가능성을 감소시키는 것을 지칭한다. "치료적 치료"라는 용어는 질환 또는 병태를 이미 앓고 있거나, 발병 중인 대상체에게 치료를 투여하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "억제하다"라는 용어는 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 예컨대 SARS-CoV-2와 같은 바이러스 감염의 감소를 지칭할 수 있다. 감소는 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%, 또는 상기 언급된 값 중 임의의 두 값으로 정의된 범위 이내의 양만큼 이루어질 수 있다. 본원에서 사용되는 바, "지연시키다"라는 용어는 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 예컨대 바이러스 감염과 같은 이벤트를 그렇지 않았다면 예상되는 시간보다 후속 시점으로 저속화, 연기, 또는 유예시키는 것을 지칭한다. 지연은 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 또는 상기 언급된 값 중 임의의 두 값으로 정의된 범위 이내의 양만큼의 지연일 수 있다. 억제하다 및 지연시키다라는 용어는 반드시 100% 억제 또는 지연을 나타내는 것은 아닐 수 있다. 부분 억제 또는 지연이 실현될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "면역원성 조성물"은 숙주에 투여되었을 때, 면역 반응을 유도하도록 의도된, 항원, 에피토프, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 다당류, 지질, 합텐, 톡소이드, 불활성화된 유기체, 또는 약독화된 유기체, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 물질 또는 물질들의 혼합물을 지칭한다. 면역 반응은 선천성 면역 반응 및 후천성 면역 반응, 둘 모두를 포함하며, 후자는 예컨대, 기억 T 세포 및 기억 B 세포와 같은 세포를 통해 지속적인 면역학적 기억을 확립한다. 면역원성 조성물에 대한 초기 면역 반응 동안 생성된 항체는 동일한 항원, 에피토프, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 다당류, 지질, 합텐, 톡소이드, 불활성화된 유기체 또는 약독화된 유기체, 또는 항원, 에피토프, 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 다당류, 지질, 합텐, 또는 톡소이드, 또는 그의 임의의 조합을 나타내는 살아있는 유기체 또는 병원체의 후속 챌린지에서 생성될 수 있다. 이러한 방식으로, 면역원성 조성물은 특정 병원체에 대한 백신 역할을 할 수 있다. 면역원성 조성물은 또한 면역 반응을 자극시키고, 방어호 면역의 효능을 증가시키기 위해 하나 이상의 애주번트도 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "생성물 조합물"은 통합 기능을 위해 함께 사용할 수 있는 2개 이상의 개별 화합물, 물질(substance), 물질(material), 또는 조성물 세트를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 생성물 조합물은 숙주에 투여되었을 때, 임의적으로, 오직 단 하나의 조성물 타입만이 투여된 경우에 유도되는 것보다 더 큰 정도로 면역 반응을 유도하기 위해 함께 사용되는 적어도 하나의 핵산 조성물 및 적어도 하나의 폴리펩티드 조성물을 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "핵산" 또는 "핵산 분자"는 폴리뉴클레오티드, 예컨대 데옥시리보핵산 (DNA) 또는 리보핵산 (RNA), 올리고뉴클레오티드, 중합효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 생성된 단편, 및 라이게이션, 절단, 엔도뉴클레아제 작용 및 엑소뉴클레아제 작용 중 임의의 것에 의해 생성된 단편을 지칭한다. 핵산 분자는 자연적으로 발생된 뉴클레오티드인 단량체 (예컨대, DNA 및 RNA), 또는 자연적으로 발생된 뉴클레오티드의 유사체 (예컨대, 자연적으로 발생된 뉴클레오티드의 거울상 이성질체 형태), 또는 그 둘 모두의 조합으로 구성될 수 있다. 변형된 뉴클레오티드는 당 모이어티 및/또는 피리미딘 또는 퓨린 염기 모이어티에서 변경을 가질 수 있다. 당 변형은 예를 들어, 하나 이상의 히드록실 기의 할로겐, 알킬 기, 아민 및 아지도 기로의 대체를 포함하거나, 또는 당은 에테르 또는 에스테르로서 관능화될 수 있다. 더욱이, 전체 당 모이어티는 입체 및 전자적으로 유사한 구조, 예컨대 아자-당 및 카르보시클릭 당 유사체로 대체될 수 있다. 염기 모이어티에서의 변형의 예는 알킬화된 퓨린 및 피리미딘, 아실화된 퓨린 또는 피리미딘, 또는 널리 공지된 다른 헤테로시클릭 치환체를 포함한다. 핵산 단량체는 포스포디에스테르 결합 또는 이러한 결합의 유사체에 의해 연결될 수 있다. 포스포디에스테르 결합의 유사체는 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로디셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포라닐리데이트 또는 포스포라미데이트를 포함한다. 용어 "핵산 분자"는 또한 폴리아미드 백본에 부착된 자연적으로 발생된 또는 변형된 핵산 염기를 포함하는 소위 "펩티드 핵산"을 포함한다. 핵산은 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. "올리고뉴클레오티드"는 핵산과 상호교환적으로 사용될 수 있으며, 이중 가닥 또는 단일 가닥 DNA 또는 RNA를 지칭할 수 있다. 핵산 또는 핵산들은 다양한 생물학적 시스템에서의 핵산 또는 핵산들의 증폭 및/또는 발현을 위해 사용될 수 있는 핵산 벡터 또는 핵산 구축물 (예컨대, 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 코스미드, 포스미드, 파지미드, 박테리아 인공 염색체 (BAC), 효모 인공 염색체 (YAC), 또는 인간 인공 염색체 (HAC))에 함유될 수 있다. 전형적으로, 벡터 또는 구축물은 또한 프로모터, 인핸서, 종결인자, 유도인자, 리보솜 결합 부위, 번역 개시 부위, 시작 코돈, 정지 코돈, 폴리아데닐화 신호, 복제 기점, 클로닝 부위, 다중 클로닝 부위, 제한 효소 부위, 에피토프, 리포터 유전자, 선별 마커, 항생제 선별 마커, 표적화 서열, 펩티드 정제 태그, 또는 부속 유전자, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는 요소를 함유할 것이다.
핵산 또는 핵산 분자는 상이한 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질을 코딩하는 하나 이상의 서열을 포함할 수 있다. 이들 하나 이상의 서열은 동일한 핵산 또는 핵산 분자에서 인접하게, 또는 그 사이에 추가 핵산, 예컨대 링커, 반복부 또는 제한 효소 부위, 또는 길이가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 또는 300개의 염기 길이, 또는 상기 언급된 길이 중 임의의 두 길이로 정의된 범위 내의 임의의 길이인 임의의 다른 서열과 함께 연결될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 핵산 상의 "하류"라는 용어는 핵산이 이중 가닥이라면, 코딩 서열을 함유하는 가닥 (센스 가닥) 상에서 이전 서열의 3'-말단 뒤에 있는 서열을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 핵산 상의 "상류"라는 용어는 핵산이 이중 가닥이라면, 코딩 서열을 함유하는 가닥 (센스 가닥) 상에서 후속 서열의 5'-말단 앞에 있는 서열을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 핵산 상에서 "그룹화된"이라는 용어는 2개 이상의 서열이 인접하게 직접적으로 또는 그 사이에 추가 핵산, 예컨대 링커, 반복부 또는 제한 효소 부위, 또는 길이가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 또는 300개의 염기 길이, 또는 상기 언급된 길이 중 임의의 두 길이로 정의된 범위 내의 임의의 길이인 임의의 다른 서열과 함께, 그러나, 일반적으로는 그 사이에 기능성 또는 촉매성 폴리펩티드, 단백질, 또는 단백질 도메인을 코딩하는 서열은 없이 존재하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, 핵산과 관련하여 "코돈 최적화된"이라는 용어는 표적 세포 세포질에서의 종 특이적 코돈 사용 편향 및 각 아미노아실-tRNA의 상대적인 이용가능성에 기초하여 폴리펩티드 서열을 변경하지 않고 특정 종의 숙주에서 번역을 증진시키거나, 또는 최대화하기 위해 핵산의 코돈을 치환하는 것을 지칭한다. 코돈 최적화 및 이러한 최적화를 수행하는 기술은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 코돈 최적화를 위한 알고리즘을 포함하는 프로그램은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 프로그램은 예를 들어, 옵티멈진(OptimumGene), 진GPS(GeneGPS)® 알고리즘 등을 포함할 수 있다. 추가로, 합성 코돈 최적화된 서열은 예를 들어, 인터그레이티드 DNA 테크놀러지즈(Integrated DNA Technologies) 및 다른 상업적으로 이용가능한 DNA 시퀀싱 서비스로부터 상업적으로 수득할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 유전자 발현 수준은 예컨대, 프로모터 서열 및 조절 요소와 같은 많은 인자에 의존한다는 것을 이해할 것이다. 대부분의 박테리아에 대해 언급된 바와 같이, 코돈의 작은 서브세트는 tRNA 종에 의해 인식되어 번역 선택으로 이어지며, 이는 단백질 발현에 중요한 제한이 될 수 있다. 이러한 측면에서, 많은 합성 유전자가 그들의 단백질 발현 수준을 증가시키도록 디자인될 수 있다.
본원에 기술된 핵산은 핵염기를 포함한다. 1차, 정규, 천연 또는 비변형된 염기는 아데닌, 시토신, 구아닌, 티민 및 우라실이다. 다른 핵염기로는 퓨린, 피리미딘, 변형된 핵염기, 5-메틸시토신, 슈도우리딘, 디히드로우리딘, 이노신, 7-메틸구아노신, 히포크산틴, 크산틴, 5,6-디히드로우라실, 5-히드록시메틸시토신, 5-브로모우라실, 이소구아닌, 이소시토신, 아미노알릴 염기, 염료 표지 염기, 형광성 염기, 또는 비오틴 표지된 염기를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "펩티드", "폴리펩티드", 및 "단백질"은 펩티드 결합에 의해 연결된 아미노산으로 구성된 거대분자를 지칭한다. 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질의 수많은 기능이 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 효소, 구조, 수송, 방어, 호르몬 또는 신호전달을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 펩티드, 폴리펩티드 및 단백질은 화학적 합성 또한 이용가능하지만, 항상 그러한 것은 아니지만, 대개는 핵산 주형을 사용하여 리보솜 복합체에 의해 생물학적으로 생산된다. 핵산 주형을 조작함으로써, 펩티드, 폴리펩티드, 및 단백질 돌연변이, 예컨대 하나 초과의 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질의 치환, 결실, 말단절단, 부가, 중복, 또는 융합을 수행할 수 있다. 이러한 하나 초과의 펩티드, 폴리펩티드, 또는 단백질의 융합은 동일한 분자에서 인접하게, 또는 그 사이에 추가 아미노산, 예컨대 링커, 반복부, 에피토프, 또는 태그, 또는 길이가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 또는 300개의 염기 길이, 또는 상기 언급된 길이 중 임의의 두 길이로 정의된 범위 내의 임의의 길이인 임의의 다른 서열과 함께 연결될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 폴리펩티드 상의 "하류"라는 용어는 이전 서열의 C-말단 뒤에 있는 서열을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 폴리펩티드 상의 "상류"라는 용어는 후속 서열의 N-말단 앞에 있는 서열을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공되고, 본 실시예에서 사용되는 핵산 또는 펩티드 서열은 인간, 마우스, 토끼, E. 콜라이, 효모, 및 포유동물 세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는 다양한 생물학적 시스템에서 기능적이다. 다른 실시양태에서, 본원에서 제공되고, 본 실시예에서 사용되는 핵산 또는 펩티드 서열과 적어도 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%, 또는 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 미만의 유사성, 또는 상기 언급된 유사성(%) 중 임의의 두 유사성(%)으로 정의된 범위 이내의 임의의 유사성(%)을 공유하는 핵산 또는 펩티드 서열 또한 생물학적 시스템에서 서열의 기능에 영향을 미치지 않으면서 사용될 수도 있다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "유사성"은 서열 내에 예컨대, 치환, 결실, 반복 삽입과 같은 특정 변이를 포함하는 주형 핵산 또는 펩티드 서열과 각각 뉴클레오티드 또는 아미노산 순서가 전반적으로 동일한 핵산 또는 펩티드 서열을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 0%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 정도로 낮은 유사성을 공유하는 두 핵산 서열은 번역 동안 동일한 아미노산을 코딩하는 상이한 코돈을 포함함으로써 동일한 폴리펩티드를 코딩할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "재조합적으로 발현"이라는 용어는 최적화되거나, 또는 적합화된 생물학적 시스템에서의 단백질 생산을 지칭한다. 이러한 시스템은 천연 숙주에서의 단백질 발현에 비해 높은 발현 (과다발현), 정제 용이, 형질전환 용이, 유도성, 저렴한 비용, 또는 단백질의 안정성을 포함하나, 이에 제한되지 않는 이점을 제공한다. 일부 실시양태에서, 단백질은 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 재조합 발현 시스템에서 발현된다. 각 시스템은 그의 고유한 이점 또는 단점이 있다. 예를 들어, 박테리아 발현 시스템은 과다발현을 위해 고도로 최적화되지만, 생산된 단백질의 미스폴딩 또는 응집을 유발할 수 있으며, 효모 시스템은 번역 후 변형이 필요할 때 유용하고, 곤충 및 포유동물 시스템은 고등 유기체에 존재하는 적절한 RNA 스플라이싱에 유용하다. 일부 실시양태에서, 재조합 폴리펩티드는 포유동물, 인간, 1차, 무한증식, 암, 줄기, 섬유모세포, 인간 배아 신장 (HEK) 293, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO), 박테리아, 에스케리키아 콜라이, 효모, 사카로마이세스 세레비시애, 피치아 파스토리스, 곤충, 스포돕테라 프루기페르다 Sf9, 또는 S. 프루기페르다 Sf21 세포에서, 또는 무세포 시스템에서 생산되고, 그로부터 정제된다. 일부 실시양태에서, 발현 유전자, 벡터, 또는 구축물은 플라스미드, 박테리오파지, 바이러스, 아데노 연관 바이러스 (AAV), 바큘로바이러스, 코스미드, 포스미드, 파지미드, BAC, YAC, 또는 HAC의 형태로 재조합 발현 시스템으로 전달된다. 재조합 발현 시스템에 관한 추가 논의를 위해, 문헌 [Gomes et al. "An Overview of Heterologous Expression Host Systems for the Production of Recombinant Proteins" ((2016) Adv. Anim. Vet. Sci. 4(7):346-356)] (상기 문헌은 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)을 참조한다.
본원에서 사용되는 바, "코로나바이러스"라는 용어는 포유동물 및 조류를 감염시키는 외피보유, 양성-센스, 단일 가닥 RNA 바이러스 패밀리를 지칭한다. 인간에서, 코로나바이러스 감염은 일반적인 감기와 같은 가벼운 증상, 또는 예컨대, 중증 급성 호흡기 증후군 (SARS), 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 기침, 울혈, 인후통, 숨가쁨, 폐렴, 기관지염 및 저산소증과 같은 좀 더 중증인 호흡기 병태를 유발할 수 있다. 다른 증상으로는 발열, 피로, 근육통, 및 위장 증상, 예컨대 구토, 설사, 복통을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 바이러스 외피는 스파이크 ("S"), 외피 ("E"), 막 ("M"), 및 헤마글루티닌 에스터라제 ("HE") 막횡단 구조 단백질을 포함한다. S 단백질은 바이러스 균주의 숙주 수용체 특이성을 결정하는 고도의 면역원성 영역인 수용체 결합 도메인 ("RBD")을 포함한다. 바이러스 뉴클레오캡시드는 RNA 게놈을 코팅하는 다중 뉴클레오캡시드("N" 또는 "NP") 단백질을 포함한다. 감염 동안 S 단백질은 숙주 세포 수용체에 부착되고, 외피 막의 엔도사이토시스 또는 융합을 통해 숙주 세포로의 진입을 개시한다. RNA 게놈은 숙주 리보솜에 의해 번역되어 바이러스 게놈을 복제하는 새로운 구조 단백질과 RNA 의존성 RNA 폴리머라제를 생성한다. 바이러스 입자는 숙주 소포체에서 어셈블리되고, 골지 매개 엑소사이토시스에 의해 배출된다. 코로나바이러스의 구조 및 감염 주기에 대한 추가 정보는 문헌 [Fehr AR & Perlman S. "Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis" Methods Mol . Biol . (2015); 1282:1-23] (상기 문헌은 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)에 살펴볼 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "SARS-CoV-2" 및 "2019-nCoV"라는 용어는 인간 코로나바이러스 질환 2019 (COVID-19) 대유행의 원인이 되는 코로나바이러스 균주 또는 균주들을 지칭한다. 전염성, 긴 잠복기 및 현대 세계화로 인해 바이러스가 전 세계적으로 확산되었다. 감염된 개체에서의 SARS 및 다른 호흡기 문제의 발생은 의료 기반 시설에 막대한 스트레스를 초래하였다. 인간에서의 SARS-CoV-2 및 다른 코로나바이러스에 대한 치료법과 백신이 승인받기 시작했지만, 추가 시험이 필요하다. 참조 서열은 NCBI 진뱅크 수탁 번호: MN908947.3 (예컨대, 완전한 게놈), YP_009724390 (예컨대, 표면 당단백질), YP_009724393.1 (예컨대, 막 당단백질), 및 YP_009724397.2 (예컨대, 뉴클레오캡시드 인단백질)에 의해 이용가능하다. 원래의 SARS 바이러스 (SARS-CoV-1)와 같이, SARS-CoV-2는 S 단백질의 RBD를 통해 안지오텐신 전환 효소 2 (ACE2)에 결합하여 인간 세포를 감염시킨다. RBD, M 단백질 및 NP 단백질은 SARS-CoV-2 및 다른 코로나바이러스에 대한 치료, 예방, 중재, 백신 또는 면역원성 조성물의 개발을 위한 좋은 후보이다. 본원에 개시된 실시양태는 HCoV-229E, HCoV-OC43, SARS-CoV-1, HCoV NL63, HCoV-HKU1, 및 MERS-CoV를 포함하나, 이에 제한되지 않는, 다른 코로나바이러스에도 적용될 수 있다.
COVID-19 대유행 동안, 새로운 유전자 변이체가 발견되었다. 이러한 변이체는 상이한 숙주 특이성 또는 증가된 전염성, 감염성 및/또는 병독성을 나타낼 수 있다. 추가로, 이러한 변이체 또는 새로운 변이체는 현재 승인받은 백신의 효능을 감소시킬 수 있다는 우려가 있다. 우려되는 1차 유전자 돌연변이는 바이러스가 숙주 수용체 결합에 사용하는 S 단백질 (및 상응하는 RBD)을 포함하며; 현재 백신은 이러한 S 단백질에 대한 면역원성을 나타내기 때문에, 이러한 돌연변이체 균주에 대한 효능이 감소할 수 있다. 3가지 두드러진 변이체는 영국에서 처음 확인된 균주 (20B/501Y.V1, VOC 20212/01, B.1.1.7), 남아프리카에서 처음 확인된 균주 (20C/501Y.V2, B.1.351), 및 일본에서 처음 확인된 브라질 변이체 (20J/501Y.V3, P.1)이다. 이러한 변이체는 전 세계적으로 빠르고, 광범위한 전파를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 상기 세 균주들 간의 공통된 돌연변이는 N501Y이며, 이는 인간 ACE2와 경계로 연결되어 있는 RBD의 6개 접촉 잔기 중 하나에 있으며, ACE2에 대한 친화도를 증가시키는 것으로 나타났다 (문헌 [Starr et al. "Deep Mutational Scanning of SARS-CoV-2 Receptor Binding Domain Reveals Constraints on Folding and ACE2 Binding" Cell; (2020) 182(5);1295-1310], 상기 문헌은 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다). 남아프리카 변이체는 또한 돌연변이 K417N 및 E484K도 포함한다. 브라질 변이체는 스파이크 단백질 수용체 결합 도메인에 K417T, E484K 및 N501Y 돌연변이를 포함하여 17개의 고유한 아미노산 변이 및 3개의 결실을 포함한다. 다른 변이체는 N439K 돌연변이를 포함한다. 이러한 돌연변이가 항체 인식을 방해하는 것으로 의심받고 있다. 본원에 개시된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물로서 사용하기 위한 핵산 및 폴리펩티드는 상기 돌연변이, 또는 S 단백질 또는 상응하는 RBD 내의 다른 돌연변이를 코딩하거나 포함할 수 있다. 이들 면역원을 본원에 기술된 제제 및 방법에 도입함으로써 접종받은 환자에서 항체 및 T 세포 반응을 다양하게 증가시킬 수 있고, 이를 통해 SARS-CoV-2 및 SARS-CoV-2 변이체에 대해 강건하게 방어할 수 있을 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 사용된 RBD 서열은 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 변이체이다. RBD 이량체는 면역원성을 개선시키고, 중화 항체 역가를 증가시키는 것으로 나타났다. 이황화-연결 이량체 및 단일 쇄 (공유적으로 연결된) 이량체, 둘 모두 본 측면에서 효과적이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체는 추가의 링커 또는 다른 아미노산을 이용하여, 또는 그의 부재하에서 2개의 코로나바이러스 RBD 서열을 융합시킴으로써 구축된다. RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드의 한 예는 서열식별번호 46에 구현되어 있다. RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열의 한 예는 서열식별번호 45에 구현되어 있다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체는 본원에 개시된 돌연변이 및/또는 하나 이상의 SARS-CoV-2 변이체와 연관된 추가의 돌연변이 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 예를 들어, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체는 SARS-CoV-2 변이체와 연관된, K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않을 수 있다 (여기서, 상기 돌연변이는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 기재된다). 본 개시내용 전역에 걸쳐, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체는 또한 RBD 버전 2 (RBDv2)로도 지칭될 수 있다. RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체에 대한 추가 식견은 문헌 [Dai et al. "A Universal Design of Betacoronavirus Vaccines against COVID-19, MERS, and SARS" Cell. (2020);182(3):722-733] (상기 문헌은 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)에서 살펴볼 수 있다.
일부 실시양태에서, RBD 서열은 다량체 변이체, 예컨대 하나 이상의 RBD 서열의 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 카피로 이루어진 변이체로 어셈블리된다. 일부 실시양태에서, RBD 서열은 삼량체 변이체로 어셈블리된다. 삼량체 RBD 변이체를 포함하는 구축물의 예는 OC-2.4이다. 일부 실시양태에서, 다량체 변이체 중의 각 RBD 서열은 본원에 개시된 돌연변이 및/또는 하나 이상의 SARS-CoV-2 변이체와 연관된 추가의 돌연변이 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 예를 들어, 다량체 변이체 중의 하나 이상의 RBD 서열은 SARS-CoV-2 변이체와 연관된, K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않을 수 있다 (여기서, 상기 돌연변이는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 기재된다).
본원에서 사용되는 바, 용어 "자가촉매 펩티드 절단 부위" 또는 "2A 펩티드"는 두 구성 아미노산 사이의 펩티드 결합이 절단되어 서열에 플랭킹된 두 단백질이 분리되는 펩티드 서열을 지칭한다. 절단은 2A 펩티드 서열에서 C-말단 프롤린과 글리신 사이의 펩티드 결합 형성의 리보솜 "스키핑"의 결과인 것으로 여겨진다. 현재까지 확인된 4개의 자가촉매 펩티드 절단 부위 서열은 생체의학 연구에서 실질적으로 유용하다: 구제역 바이러스 2A (F2A); 말 비염 A 바이러스 (ERAV) 2A (E2A); 돼지 테스코바이러스-1 2A (P2A), 및 토세아 아시그나(Thosea asigna) 바이러스 2A (T2A). 일부 실시양태에서, P2A 자가촉매 펩티드 절단 부위 핵산 (서열식별번호 37) 및 폴리펩티드 (서열식별번호 38) 서열이 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용되는 P2A 핵산 또는 폴리펩티드는 F2A, E2A, 또는 T2A 핵산 또는 폴리펩티드로 치환될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서 사용되는 핵산 또는 펩티드는 D형 간염 항원 (HDAg) 변이체를 나타내는 서열을 포함한다. D형 간염은 복제를 위해 B형 간염 동시 감염 또는 중복 감염에 의존하는 바이루소이드(virusoid)이다. D형 간염의 고리형 단일 가닥 RNA는 숙주 RNA 폴리머라제를 사용하여 증폭될 뿐만 아니라, 단일 D형 간염 항원 (HDAg) 유전자도 함유한다. B형 간염 및 D형 간염 동시 감염 또는 중복 감염 동안, 무손상 D형 간염 바이러스는 HDAg 단백질로 코팅된 RNA 게놈을 둘러싼 B형 간염 표면 항원을 함유하는 외피로 패키징된다. D형 간염은 그 자신의 수용체 결합 단백질을 코딩하지 않기 때문에, B형 간염 표면 항원을 포함하는 것이 D형 간염 감염성에 필수적이다. D형 간염과의 동시 감염 또는 중복 감염은 더 중증의 합병증을 유발하고, 간부전, 간경변 및 암의 위험을 증가시킨다. HDAg에 대해 작은 이소폼 (24 kDa) 및 큰 이소폼 (27 kDa, 시작 메티오닌을 제외하고 213개의 아미노산)이 존재하고, 이는 HDV 게놈의 동일한 오픈 리딩 프레임에서 번역된다. 코딩 서열의 코돈 196에 있는 UAG 정지 코돈에서 아데노신의 탈아미노화를 통해 번역이 계속 진행되어 큰 이소폼이 생성될 수 있다. 달리 명시적으로 언급되지 않는 한, 본원에 기술된 실시양태는 HDAg의 큰 이소폼을 포함한다. 일부 실시양태에서, HDAg 서열은 4개의 상이한 HDAg 균주 서열: "HDAg 유전자형 1A", "HDAg 유전자형 1B", "HDAg 유전자형 2A", 또는 "HDAg 유전자형 2B" 중 적어도 하나를 포함한다. HDAg 서열 및 그의 용도에 대한 추가 정보는 PCT 공개 WO 2017/132332 (이는 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)에서 살펴볼 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "IgE 리더 서열"이라는 용어는 아미노산 서열 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열식별번호 44)를 지칭하며, 번역 증진 및 면역원성 증가, 이 둘 모두를 위해 단백질의 N-말단에 부가될 수 있다. IgE 리더 서열이 기능성 코작 서열과 조합하여 사용될 때 번역은 특히 상향조절된다. 아미노산 IgE 리더 서열을 코딩하는 핵산 서열의 예시적인 실시양태는 서열식별번호 43으로서 제시된다. 그러나, 번역시 동일한 아미노산 서열을 생성할 수 있는 대안적 핵산 서열을 개발하는 것도 관련 기술분야의 통상의 기술자에게는 매우 자명할 것이다. IgE 리더 서열의 용도에 관한 추가 식견은 문헌 [Vijayachari et al. "Immunogenicity of a novel enhanced consensus DNA vaccine encoding the leptospiral protein LipL45" Hum. Vaccin . Immunother. (2015);11(8):1945-53] (상기 문헌은 그 전문이 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다)에서 살펴볼 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "생체내 전기천공", "전기천공", 및 "EP"는 관련 기술분야에 공지된 기술을 사용하여 전류를 사용하여 살아있는 조직 또는 유기체의 세포로 유전자, 핵산, DNA, RNA, 단백질, 또는 벡터를 전달하는 것을 지칭한다. 전기천공은 예컨대, 바이러스 (형질도입), 리포펙션, 유전자총 (바이오리스틱스), 미세주사, 소포 융합 또는 화학적 형질전환과 같은 다른 유전자 전달 방법의 대안으로 사용될 수 있다. 전기천공은 세포 게놈의 면역원성 및 유해한 통합 또는 돌연변이유발의 위험을 제한한다. 예컨대, 플라스미드와 같은 DNA 벡터는 세포 핵에 접근할 수 있고, 이로써, 구성 유전자의 전사 및 번역을 가능하게 한다. 일부 실시양태에서, 유전자, 핵산, DNA, RNA, 단백질, 또는 벡터는 피하, 근육내 또는 진피내 주사에 의해 표적 조직 또는 유기체에 첨가된다. 이어서, 전기천공기는 주입된 샘플 내부 또는 근처에 배치된 전극을 통해 짧은 전기 펄스를 전달한다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "im/EP"는 근육내로 ("im") 전달된 샘플의 생체내 전기천공을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "K18-hACE2" 또는 "B6.Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J"는 인간 세포를 감염시키는 데 사용되는 코로나바이러스, 예컨대 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2 수용체인 인간 ACE2를 발현하는 트랜스제닉 마우스 모델을 지칭한다. 인간 ACE2의 발현은 인간 시토케라틴 18 프로모터에 의해 구동된다. 이들 마우스는 SARS-CoV-2 바이러스 감염을 위한 실험 모델로서 사용될 수 있다. 다른 유사 마우스 모델이 대안으로서 사용될 수 있다.
값의 범위로 제공되는 경우, 상한 및 하한, 및 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 중간 값이 실시양태 내에 포함되는 것으로 이해된다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "% w/w" 또는 "% wt/wt"는 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 조성물의 전체 중량 대비 성분 또는 작용제의 중량에 100을 곱한 값으로 표시되는 비율(%)을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "% v/v" 또는 "% vol/vol"은 본 명세서에 비추어 이해되는 바와 같은 그의 일반적인 의미를 가지며, 조성물의 전체 액체 부피 대비 화합물, 물질, 성분, 또는 작용제의 액체 부피에 100을 곱한 값으로 표시되는 비율(%)을 지칭한다.
예시적인 면역원성 조성물 실시양태
본원에서는 예를 들어, 대상체에서 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스에 대한 면역 반응을 생성하고/거나, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스에 대한 중화 항체를 생성하기 위한 면역원성 조성물 또는 면역원성 생성물 조합물의 일부로서 사용될 수 있는 핵산을 개시한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 수용체 결합 도메인 (RBD) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 핵단백질 (NP) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 1 또는 13과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 및 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 2-3, 또는 14-15 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 39와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD (또는 RBDv2)의 3개의 탠덤 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD의 3개의 탠덤 카피는 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다.
본원에 개시된 핵산 중 임의의 것에 적용되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, 핵산은 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 5' IgE 리더 핵산 서열은 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 40, 57-60, 또는 62 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD (또는 RBDv2)의 3개의 탠덤 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD의 3개의 탠덤 카피는 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 61과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 4 또는 16과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 스파이크 (S) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 막 (M) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 핵단백질 (NP) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드는 발현, 가용성, 및/또는 면역원성 개선을 촉진시키는 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열식별번호 51과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 5' IgE 리더 핵산 서열은 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 5' IgE 리더 핵산 서열은 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 63과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 5-7, 17-19, 22-24, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 D형 간염 항원 (HDAg)을 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 8 또는 20과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 9 또는 21과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
본원에 개시된 핵산 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 핵산은 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 5' IgE 리더 핵산 서열은 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
본원에 개시된 핵산 중 임의의 것에서, 핵산은 본원에 개시된 또는 다르게는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 SARS-CoV-2 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 코딩할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 RBD 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 SARS-CoV-2 바이러스 또는 그의 변이체로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 10 또는 22에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 34에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 어느 하나에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 11 또는 23에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, M 폴리펩티드는 서열식별번호 35에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 12 또는 24에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, NP 폴리펩티드는 서열식별번호 36에 의해 제시된다.
본원에 개시된 핵산 중 어느 하나는 의약에서 또는 의약 제조를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 의약은 대상체에서 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스의 예방, 치료 또는 억제를 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
또한, 본원에서는 예를 들어, 대상체에서 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스에 대한 면역 반응을 생성하고/거나, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스에 대한 중화 항체를 생성하기 위한 면역원성 조성물 또는 면역원성 생성물 조합물의 일부로서 사용될 수 있는 폴리펩티드를 개시한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열 및 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열은 RBD 폴리펩티드 서열 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열은 RBD 폴리펩티드 서열, M 폴리펩티드 서열, 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 26 또는 27과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 41과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD (또는 RBDv2)의 3개의 탠덤 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD의 3개의 탠덤 카피는 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다.
본원에 개시된 폴리펩티드 중 임의의 것에 적용되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열은 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 42, 64-67, 또는 69 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD (또는 RBDv2)의 3개의 탠덤 카피를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD의 3개의 탠덤 카피는 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 68과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열은 RBD 폴리펩티드 서열 및 M 폴리펩티드 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 28과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 스파이크 (S) 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 NP 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드는 발현, 가용성, 및/또는 면역원성 개선을 촉진시키는 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, S 폴리펩티드는 서열식별번호 56과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열은 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 70과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 29-31, 34-36, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 및 적어도 하나의 HDAg 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 32와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 33과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
본원에 개시된 폴리펩티드 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열은 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 42와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다.
본원에 개시된 폴리펩티드 중 임의의 것에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 또는 다르게는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 SARS-CoV-2 폴리펩티드 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 RBD 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 SARS-CoV-2 바이러스 또는 그의 변이체로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 10 또는 22에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 34에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 임의의 하나 이상에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 임의의 하나 이상에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산은 서열식별번호 11 또는 23에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, M 폴리펩티드는 서열식별번호 35에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산는 서열식별번호 12 또는 24에 의해 제시된다. 일부 실시양태에서, NP 폴리펩티드는 서열식별번호 36에 의해 제시된다.
본원에 개시된 폴리펩티드 중 어느 하나는 의약에서 또는 의약 제조를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 의약은 대상체에서 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스의 예방, 치료 또는 억제를 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 개시된 폴리펩티드 중 어느 하나는 재조합적으로 발현될 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된다.
치료 방법 또는 용도
본원에서 사용되는 바, 용어 "프라임" 및 "부스트"는 이종성 프라임-부스트 면역화 접근법에서 사용되는 별개의 면역원성 조성물과 관련된 것이다. 면역화 또는 백신은 일반적으로 숙주에서 표적 병원체에 대한 성공적인 면역을 유도하기 위해 면역원성 조성물의 1회 초과의 투여를 필요로 한다. 모든 투여에 대해 동일한 조성물이 제공되는 상기 동종성 접근법과 비교하여, 이종성 프라임-부스트 투여는 예컨대, 바이러스, 코로나바이러스, SARS-CoV-2, 박테리아, 기생충, 원생동물, 연충와 같은 일부 병원체에 대해 더 큰 항체 수준 및 개선된 제거 또는 내성으로 강건한 면역을 확립하는 데 더 효과적일 수 있다. 이종성 프라임-부스트 투여에서, 한 타입의 면역원성 조성물을 포함하는 적어도 하나의 프라임 용량이 먼저 제공된다. 적어도 하나의 프라임 용량 제공 후, 이어서, 또 다른 타입의 면역원성 조성물을 포함하는 적어도 하나의 부스트 용량이 제공된다. 적어도 하나의 부스트 용량 투여는 적어도 하나의 프라임 용량 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주, 또는 상기 언급된 시점 중 임의의 두 시점으로 정의된 시간 범위 이내에, 예컨대 1-48일 또는 1-48주 이내에 수행된다. 일부 실시양태에서, 프라임 용량은 하나 이상의 항원 또는 에피토프를 코딩하는 핵산 (예컨대, DNA 또는 RNA)을 포함하고, 부스트 용량은 하나 이상의 항원 또는 에피토프를 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 숙주에서, 핵산 프라임은 생체내에서 번역되어 면역 반응을 유도하고, 후속 폴리펩티드 부스트에 대해 더 큰 반응을 유발한다.
일부 실시양태에서, 핵산 프라임은 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스 (그의 변이체 포함)로부터의 서열을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스로부터의 서열은 S, RBD, M, E, 또는 NP 폴리펩티드 (그의 돌연변이된 폴리펩티드 또는 변이체 폴리펩티드 포함)를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 핵산 프라임은 또한 적어도 하나의 HDAg 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 서열은 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드 부스트는 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스로부터의 폴리펩티드를 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스로부터의 폴리펩티드는 S, RBD, M, E, 또는 NP 폴리펩티드이다. 일부 실시양태에서, 프라임 용량은 폴리펩티드이고, 부스트 용량은 핵산이다. 이종성 프라임-부스트 접근법에 대한 일반 정보는 PCT 공개 WO 2006/013106, WO 2006/040334, WO 2008/094188에서 살펴볼 수 있으며, 이들은 각각 프라임-부스트 방법을 기술하기 위한 목적으로 본원에서 명시적으로 참조로 포함된다.
본원에서는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 개시한다. 일부 실시양태에서, 상기 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물은 프라임-부스트 접근법에서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물은 (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산, 또는 (b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함한다.
본원에 개시된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열; vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는 vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에 개시된 핵산 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 1-12 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용된다. 다른 실시양태에서, 핵산은 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 SARS-CoV-2 바이러스 또는 그의 변이체로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 재조합 벡터에 제공된다. 일부 실시양태에서, 재조합 벡터는 pVAX1이다.
본원에 개시된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나의 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 i) RBD 폴리펩티드 서열; ii) NP 폴리펩티드 서열; iii) M 폴리펩티드 서열; iv) HDAg 폴리펩티드 서열; v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열; vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는 vii) S 폴리펩티드 서열; 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 폴리펩티드 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용된다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 SARS-CoV-2 바이러스 또는 그의 변이체로부터의 것이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 46, 또는 52- 55 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 재조합적으로 발현된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나는 애주번트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 임의의 애주번트이다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 알룸 및/또는 QS21이다.
또한, 본원에서는 본원에 개시된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나를 사용하여 대상체에서 면역 반응을 생성하고/거나, 중화 항체를 생성하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 대상체에게 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나의 핵산을 포함하는 적어도 하나의 프라임 용량을 투여하는 단계; 및 대상체에게 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나의 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 부스트 용량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역 반응 및/또는 중화 항체는 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스에 대한 것이다. 일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물, 예컨대 마우스, 래트, 원숭이, 고양이, 개, 또는 인간이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 부스트 용량은 애주번트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 임의의 애주번트이다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 알룸 및/또는 QS21이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 부스트 용량은 적어도 하나의 프라임 용량 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주, 또는 상기 언급된 시점 중 임의의 두 시점으로 정의된 시간 범위 이내에, 예컨대 1-48일 또는 1-48주 이내에 투여된다. 일부 실시양태에서, 투여는 장내로, 경구로, 비내로, 비경구로, 피하로, 근육내로, 진피내로, 또는 정맥내로 또는 그의 임의의 조합, 및 임의적으로, 생체내 전기천공으로 제공된다. 일부 실시양태에서, 투여는 항바이러스 요법과 함께 수행된다. 일부 실시양태에서, 항바이러스 요법은 덱사메타손, 파비피라비르, 파필라비르, 렘데시비르, 토실리주맙, 갈리데시비르, 사릴루맙, 로피나비르, 리토나비르, 다루나비르, 리바비린, 인터페론-α, PEG화된 인터페론-α, 인터페론 알파-2b, 회복기 혈청, 또는 그의 임의의 조합의 투여를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물 중 어느 하나의 대상체 (예컨대, 마우스, 토끼, 원숭이, 인간)에서의 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스의 성분을 포함하는 핵산 프라임 및 폴리펩티드 부스트 투여는 관련 기술분야에 공지된 예컨대, ELISA에 의해 정량화된 바, 핵산 단독 또는 폴리펩티드만으로 면역화되거나, 또는 비면역화된 대조군 유기체와 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 50, 100, 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 5000, 10000, 100000, 또는 1000000의 비, 또는 상기 언급된 비 중 임의의 두 비로 정의된 범위 이내의 임의의 비로 더 큰 항-S, 항-RBD, 항-M, 항-E, 항-NP, 항-SARS-CoV-2, 또는 항-코로나바이러스 항체 역가를 초래한다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 SARS-CoV2 또는 다른 코로나바이러스의 성분을 포함하는 핵산 프라임 및 폴리펩티드 부스트 투여는 핵산 단독 또는 폴리펩티드만으로 면역화되거나, 또는 비면역화된 대조군 유기체로부터의 혈청과 비교하여 혈청은 더욱 효과적으로 SARS-CoV2 또는 다른 코로나바이러스의 시험관내 또는 생체내 감염성을 중화시키고, 0.00001, 0.00005, 0.0001, 0.0005, 0.001, 0.005, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0의 비, 또는 상기 언급된 비 중 임의의 두 비로 정의된 범위 이내의 임의의 비로 감염 발생률 또는 감염 다중도 (MOI)를 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 대상체에서 SARS-CoV2 또는 다른 코로나바이러스의 성분을 포함하는 핵산 프라임 및 폴리펩티드 부스트 투여는 핵산 단독 또는 폴리펩티드만으로 면역화되거나, 또는 비면역화된 대조군 유기체로부터의 혈청과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 5000, 또는 10000의 비, 또는 상기 언급된 비 중 임의의 두 비로 정의된 범위 이내의 임의의 비로 더 많은 개수의 인터페론 감마 (IFNγ) 양성 세포 (예컨대, T 세포, 대식세포, 자연 살해 (NK) 세포)를 생성한다.
또한, 본원에서는 SARS-CoV-2 또는 다른 코로나바이러스의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 개시한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물은 (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산, 또는 (b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열은 i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열; vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는 vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에 개시된 핵산 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 1-12 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 실시양태에서, 핵산은 서열식별번호 13-24, 또는 39-40 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드는 i) RBD 폴리펩티드 서열; ii) NP 폴리펩티드 서열; iii) M 폴리펩티드 서열; iv) HDAg 폴리펩티드 서열; v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열; vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는 vii) S 폴리펩티드 서열; 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 폴리펩티드 중 어느 하나이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호 25-36, 또는 41-42 중 임의의 하나 이상과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체이다. 일부 실시양태에서, RBD 폴리펩티드는 서열식별번호 46과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 재조합적으로 발현된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물은 애주번트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 임의의 애주번트이다. 일부 실시양태에서, 애주번트는 알룸 및/또는 QS21이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 재조합 벡터에 제공된다. 일부 실시양태에서, 재조합 벡터는 pVAX1이다.
본 발명은 일반적으로 다수의 실시양태를 설명하기 위해 긍정적인 표현을 사용하여 개시된다. 본 발명은 또한 예컨대, 물질(substance) 또는 물질(material), 방법 단계 및 조건, 프로토콜 또는 절차와 같은 대상이 전체 또는 부분적으로 제외되는 실시양태를 포함한다.
실시예
상기에서 논의된 실시양태의 일부 측면은 하기 실시예에서 추가로 상세하게 개시되며, 이는 어느 방식으로든 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원 상기에 및 청구범위에 기술된 바와 같이 다수의 다른 실시양태 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다는 것을 이해할 것이다.
실시예 1: SARS- CoV -2 면역원성 조성물 구축물 디자인
SARS-CoV-2 바이러스의 성분을 함유하는 수개의 재조합 구축물을 제조하고, 이는 표 1 및 도 1-2에 도시되어 있다. S 단백질의 RBD는 면역원성이 높은 것으로 알려져 있는 바, 대부분의 구축물은 RBD 서열을 포함한다. 일부 경우에서, RBD 서열은 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 서열이다. 그러나, 구축물은 SARS-CoV-2 바이러스 또는 임의의 다른 코로나바이러스로부터 임의의 순서로 코딩 서열의 임의의 조합을 가질 수 있다고 구상된다. 이는 RBD 서열이 없는 구축물을 포함한다. 이는 또한 코로나바이러스 복제 단백질 또는 헤마글루티닌 에스테라제에 대한 서열도 포함한다.
RBD 서열은 SVF-1 (OC-1), SVF-2 (OC-2), SVF-3 (OC-3), SVF-4 (OC-4), SVF-5 (OC-4), SVF-6 (OC-6), SVF-7 (OC-7), SVF-8 (OC-8), SVF-9 (OC-9), SVF-10 (OC-10), SVF-14 (OC-14), SVF-2.2 (OC-2.2), SVF-2.3 (OC-2.3), 및 SVF-2.4 (OC-2.4) (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰될 수 있다.
RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체는 SVF-2.2 및 SVF-2.3, 및 SVF-14 (OC-14) (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다.
삼량체 RBD 구축물은 SVF-2.4 (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다.
S 단백질 서열은 SVF-13 (OC-13) 및 SVF-15 (OC-15) (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다.
NP 단백질 서열은 SVF-1, SVF-2, SVF-3, SVF-5, SVF-6, SVF-12 (OC-12), SVF-14, SVF-15, SVF-2.2, SVF-2.3, 및 SVF-2.4 (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다.
M 단백질 서열은 SVF-2, SVF-3, SVF-4, SVF-6, SVF-7, SVF-11 (OC-11), SVF-2.2, SVF-2.3, 및 SVF-2.4 (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다.
적어도 하나의 P2A 자가촉매 펩티드 절단 부위는 SVF-1, SVF-2, SVF-3, SVF-4, SVF-9, SVF-14, SVF-15, SVF-2.2, SVF-2.3, 및 SVF-2.4 (그의 임의의 유도체 및/또는 돌연변이체 포함)에서 관찰된다. (또 다른 자가촉매 펩티드 절단 부위로 사소하게 치환될 수 있는) P2A 자가촉매 펩티드 절단 부위가 존재함에 따라 하나 이상의 인접 핵산 유전자 또는 카세트로부터 별개의 단백질의 번역을 표적 세포에서 허용할 수 있다. 자가촉매 펩티드 절단 부위의 존재는 또한 재조합 단백질 발현 및 상기 구축물의 정제를 통해 정제하기 어려울 수 있는 별개의 폴리펩티드 성분을 수득할 수 있을 것이라는 것도 시사한다. (예컨대, 동일하거나 또는 상이한 에피토프 태그를 사용하는 것과 같이) 여전히 가능하지만, 면역원성 투여를 위한 단백질을 제조하기 위해 다른 구축물을 사용하는 것이 더 실현가능하다.
일부 실시양태에서, 재조합 구축물은 B형 간염 바이러스 또는 D형 간염 바이러스에 대한 성분을 추가로 함유한다. 이는 4개의 상이한 컨센서스 서열 (유전자형 1A, 1B, 2A, 및 2B)의 HDAg 카피가 제공되는 SVF-8 및 SVF-9의 경우에 관찰된다. HDAg는 또한 면역원성이 높은 폴리펩티드인 바, HDAg 서열을 포함하는 것이 RBD 또는 다른 코로나바이러스 서열에 대한 면역원성 반응을 개선시키는 것으로 구상된다. 또한 이들 구축물이 SARS-CoV-2 (또는 다른 코로나바이러스) 및 B형 간염 또는 D형 간염에 대해 이중 면역원성 반응을 제공할 것으로 구상된다.
구축물 SVF-10 (RBD), SVR-11 (M), SVF-12 (NP), 및 SVF-13 (S)은 상이한 성분의 상대적인 면역원성을 평가하기 위한 단일 SARS-CoV-2 서열 조성물로서 제공된다.
표 1: SARS- CoV -2 면역원성 조성물 후보
Figure pct00001
실시예 2: 방법
동물
BALB/c, C57BL/6 및 K18-hACE2 (B6.Cg-Tg(K18-ACE2)2Prlmn/J) 마우스를 잭슨 라보라토리(Jackson Laboratory)로부터 입수할 수 있다. 모든 마우스는 실험 시작시 8-10주령이고, 표준 조건하에서 유지시킨다. 뉴질랜드 화이트 토끼는 상업적 판매처에서 구입한 것이다.
재조합 벡터
SARS-CoV-2에 대한 서열은 NCBI 진뱅크 수탁 번호: MN908947.3 (예컨대, 완전한 게놈), YP_009724390 (예컨대, 표면 당단백질), YP_009724393.1 (예컨대, 막 당단백질), 및 YP_009724397.2 (예컨대, 뉴클레오캡시드 인단백질)로부터 입수한다. 유전자형 1 및 2의 HDAg 서열은 4개의 상이한 임상 분리주; US-2 및 CB, 및 7/18/83 및 TW2476으로부터 각각 입수하고, 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화한다.
DNA 면역원성 조성물을 위해, 제한 부위 BamHI 및 XbaI를 사용하여 유전자를 pVAX1 백본 (써모피셔(ThermoFisher))으로 클로닝한다. 플라스미드를 TOP10 E. 콜라이 세포 (써모피셔)에서 성장시키고, 생체내 주사를 위해 제조업체의 설명서에 따라 퀴아젠 엔도프리(Qiagen Endofree) DNA 정제 키트 (퀴아젠 게엠베하(Qiagen GmbH))를 사용하여 정제한다. 제한 효소 분해에 의해 정확한 유전자 크기를 확인한다. 추가로, 클로닝된 유전자 서열 모두 시퀀싱하여 정확한 뉴클레오티드 서열을 확인하였다.
단백질 발현 구축물을 위해, 유전자를 pET100 E. 콜라이 T7 발현 벡터 (써모피셔)로 클로닝한다. 다른 상업적으로 이용가능한 발현 벡터를 사용할 수 있다. 발현 벡터를 BL21(DE3) E. 콜라이 (또는 다른 T7 발현 E. 콜라이 균주)로 형질전환하고, 관련 기술분야에 공지된 프로토콜에 따라 정제를 위해 유도한다.
웨스턴 블롯
관련 기술분야에 공지된 바와 같이 웨스턴 블롯을 수행한다. HeLa 세포를 리포펙타민(Lipofectamine) 3000 형질감염 시약 (써모피셔)을 사용하여 각 pVAX1 구축물로 형질감염시킨다. 대조군으로서 GFP 리포터 유전자를 포함하는 pVAX1 플라스미드를 사용한다. 단백질 검출을 위해, SARS-CoV-2 pVAX1 조성물 또는 상업적으로 이용가능한 항-SARS-CoV-2 항체 중 하나 및 적절한 HRP 2차 항체로 면역화된 토끼로부터의 혈청을 사용한다. 피어스 TM ECL 플러스 웨스턴 블롯팅 기질(Pierce TM ECL Plus Western Blotting Substrate)을 사용하여 화학발광을 유도하고, 겔 Doc XR+ 시스템(Gel Doc XR+ System) (바이오래드(Biorad))를 이용하여 이미지를 수집한다.
면역화 프로토콜
생체내 구축물의 면역원성을 평가하기 위해, 마우스 및 토끼를 매월 간격으로 면역화시키고, 비장 및 혈액 수집을 위해 2주 후에 희생시킨다. 간략하면, 마우스 (군당 5-10마리)를 정규 니들 (27G) 주사에 의해 멸균 PBS 중 30-50 ㎕ 부피의 1-50 ㎍ 플라스미드 DNA로 전방 경골근 (TA) 근육에 근육내로 (i.m.) 면역화한 후, 이어서, 클리니포레이터2(Cliniporator2) 장치 (IGEA: 이탈리아 카르피)를 사용하여 생체내 전기천공 (EP)을 수행한다. 생체내 전기천공 동안, 1 ms 600 V/cm 펄스에 이어 400 ms 60 V/cm 펄스 패턴을 사용하여 DNA 흡수가 더욱 잘 이루어질 수 있도록 촉진시킨다. 백신 주사 전, 마우스에 진통제를 제공하고, 백신접종 동안 이소플루란 마취하에 유지시킨다. 토끼에서의 연구를 위해, 군당 2-4마리씩 뉴질랜드 화이트 토끼를 100 ㎍ 내지 900 ㎍ 플라스미드 DNA로 면역화시킨다. 백신을 300 ㎕ 멸균 PBS 중에서 우측 TA 근육으로 i.m. 주사에 의해 투여한 후, 생체내 EP를 수행한다.
효소 결합 면역스폿 검정법 ( ELISpot )에 의한 IFNγ 세포의 검출
마지막 면역화 2주 후, 각 면역화된 마우스 군으로부터의 비장세포를 풀링하고, 상업적으로 이용가능한 ELISpot 검정법 (맙테크(Mabtech: 스웨덴 나카 스트랜드))으로 SARS-CoV-2 유래 펩티드 및/또는 단백질을 이용하여 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 48 h 동안 IFN-γ 분비에 기초하여 SARS-CoV-2 특이적 T 세포를 유도할 수 있는 그의 능력에 대해 시험하였다.
ELISA에 의한 항체 검출
관련 기술분야에 공지된 프로토콜을 사용하여 다양한 SARS-CoV-2 펩티드 및/또는 단백질에 대한 마우스 및 토끼 IgG 검출을 수행한다. 항체 역가는 (예컨대, 405 nm 또는 492 nm에서의) OD 값이 동일한 희석률에서의 음성 대조군 (비면역화된 또는 대조군 동물 혈청)의 OD의 적어도 2배인 종점 혈청 희석률로서 결정된다.
시험관내 SARS- CoV -2 중화 검정법
동물로부터의 면역화 혈청의 중화 능력을 시험관내에서 평가한다. Vero E6 세포를 배양 플레이트에서 전면생장시까지 성장시킨다. SARS-CoV-2 조성물로 면역화된 동물의 혈청 또는 대조군 동물의 혈청을 함유하는 배지를 세포에 첨가한다. 이어서, 세포를 SARS-CoV-2 바이러스 입자로 감염시킨다. 바이러스 게놈/유전자(들)의 검출에 의한 바이러스 플라크 또는 바이러스 역가를 계수함으로써 바이러스 감염성 및 혈청 중화를 평가한다.
hACE2 마우스 모델에서의 생체내 SARS- CoV -2 중화 검정법
야생형 또는 K18-hACE2 마우스를 SARS-CoV-2 면역원성 조성물 또는 대조군으로 면역화시킨다. DNA 단독 조성물, 단백질 단독 조성물, DNA 프라임/단백질 부스트 조성물, 또는 단백질-프라임/DNA-부스트 조성물을 포함하나, 이에 제한되지 않는 상이한 조합을 사용한다. 이어서, K18-hACE2 마우스를 SARS-CoV-2 바이러스 입자로 감염시킨다. 야생형 마우스의 경우, SARS-CoV-2로 감염시키기 1-5일 전에 유체역학적 주사, 또는 다른 관련 기술에 의해 야생형 마우스를 일시적으로 hACE2에 대해 트랜스제닉으로 만들었다. 마우스 체중, 증상, 이환율 및 사망률, 바이러스 부하를 포함한 바이러스 감염의 영향을 평가한다.
통계 분석
데이터를 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) V.5 및 V.8 소프트웨어 및 마이크로소프트 엑셀(Microsoft Excel) V.16.13.1을 사용하여 분석하였다.
실시예 3: SARS- CoV2 DNA 및 단백질 조성물이 동물에서 면역원성을 나타낸다
면역원성 조성물 및 백신은 전통적으로 전체 유기체 또는 항원성 단백질이었지만, 살아있는 조직에의 DNA 생체내 투여 및 후속된 항원성 단백질의 전사 및 번역 또한 면역 반응을 유발하는 데 매우 효과적이라는 것이 최근 밝혀졌다. 이러한 DNA 프라임/단백질 부스트 면역원성 조성물은 다양한 질환에 대한 잠재적인 백신 후보로서 탐색되고 있다.
마우스를 (1) 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 DNA 조성물 (50 ㎍ DNA 3회 연속 용량), (2) 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 폴리펩티드 조성물 (알룸 애주번트와 함께 20 ㎍ 단백질 3회 연속 용량), 또는 (3) 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 DNA 조성물, 이어서, 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 폴리펩티드 조성물 (50 ㎍ DNA 2회 용량, 이어서, 알룸과 함께 20 ㎍ 단백질 2회 용량)로 면역화시킨다.
1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10주, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12개월, 또는 상기 언급된 시간 중 임의의 두 시간으로 정의된 범위 이내의 어느 시간이든 DNA 프라임/단백질 부스트 조성물 투여 지속 기간으로서 그러한 시간이 경과한 후, SARS-CoV-2 항원에 대한 마우스의 면역을 평가한다. 백혈구를 마우스 전혈 샘플로부터 정제하고, S 단백질, RBD, M 단백질, 및 NP 단백질을 포함한, 정제된 폴리펩티드 항원과 함께 인큐베이션시킨다. 세포를 또한 양성 대조군으로서 콘카나발린 A ("ConA")와 함께, 및 음성 대조군으로서 두 오브알부민 펩티드 ("OVA Th" 및 "OVA CTL")와 함께 인큐베이션시킨다. 항원 노출에 대한 반응으로 나타나는 인터페론 감마 (IFNγ) 생산 세포의 집단 빈도를 효소 결합 면역스폿 검정법 (ELISpot)에 의해 평가한다. 간략하면, 백혈구를 IFNγ 항체로 코팅된 웰에서 항원과 함께 인큐베이션시킨다. 이어서, 세포를 제거하고, 비오티닐화된 IFNγ 항체, 알칼리성 포스파타제-가교결합된 스트렙타비딘 및 알칼리성 포스파타제 기질 비색 시약을 중간에 철저히 세척하면서 웰에 연속하여 첨가한다. 이어서, 플레이트를 건조시키고, IFNγ-분비 세포에 상응하는 잔여 착색 스폿을 현미경법으로 계수한다.
처리된 마우스는 전반적으로 비교적 더 강력한 면역 세포 반응을 나타낸다. 이는 상기 DNA 프라임/단백질 부스트 접근법이 특정 병원체에 대하여 전통적인 단백질 또는 유기체 기반 조성물보다 더 큰 강건한 면역원성 반응을 유도하는 데 효과적일 수 있다는 것을 입증하는 것이다.
상응하는 실험 또한 토끼 (오릭토라구스 쿠니쿠러스(Oryctolagus cuniculus))에서 수행한다. 뉴질랜드 화이트 토끼를 (1) 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 DNA 조성물, (2) 본원에 개시된 조성물 중 하나 이상을 포함하는 단백질 단독 조성물, 또는 (3) 본원에 개시된 조성물 중 하나를 포함하는 DNA 프라임/단백질 부스트 조성물로 면역화시킨다. 조성물을 0, 4, 8, 및 12주째에 4회에 걸쳐 투여하고, 여기서, 각 용량당 900 ㎍ DNA im/EP 또는 알룸과 함께 300 ㎍ 단백질을 투여한다. DNA-단백질 조성물 (3)의 경우, 제1 용량을 위해 0주째 900 ㎍ DNA im/EP 투여하고, 제2, 제3, 및 제4 용량을 위해 4, 8, 및 12주째에 알룸과 함께 300 ㎍ 단백질을 투여한다. 혈청 중 항-RBD 역가는 0, 2, 10, 및 14주째 (즉, 각 투여 후 2주째) 평가한다. DNA 프라임/단백질 부스트 조성물 (3)은 DNA 단독 (1) 및 단백질 단독 (2) 조성물에 비해 더 큰 전체 역가를 초래할 뿐만 아니라, 2주째까지 단백질 단독 조성물에 비해 더 신속하게 강건한 항체 생산을 유도한다.
본원에 기술된 면역원성 조성물을 사용한 능동 면역화는 SARS-CoV-2 또는 코로나바이러스 항원에 대한 기능성 T 세포를 유도할 수 있다.
실시예 4: 면역원성 DNA 조성물은 동물에서 SARS- CoV -2 중화 항체의 생산을 유도한다
조성물 SVF-2, SVF-2.2, SVF-2.3, 또는 오직 스파이크 단백질만 (대조군으로서)을 포함하는 DNA 발현 카세트를 50 ㎍의 단일 용량으로 BALC/c 및 C57BL/6 마우스에 투여하였다. 투여 2주 후 시험 마우스로부터 혈청 샘플을 수득하고, ELISA (종점 역가) 및 시험관내 중화 검정법에 의해 SARS-CoV-2 단백질 성분에 특이적인 중화 항체의 존재를 평가하였다. 결과는 하기 표 2 (BALB/c) 및 3 (C57BL/6)에 제시되어 있다. 조성물 SVF-2.3은 스파이크 단백질로만 이루어진 조성물과 유사하게 항-SARS-CoV-2 스파이크 단백질 항체를 생산하였지만, BALB/c 마우스에서 SARS-CoV-2 핵단백질에 대한 면역원성도 부여하였다. 조성물 SVF-2.3으로 처리된 BALB/c 마우스로부터의 혈청도 시험관내 검정법에서 SARS-CoV-2 감염을 성공적으로 중화시켰다. (S=스파이크 단백질; RBD=수용체 결합 도메인; NP=핵단백질). 1차 면역화 후 3주째에 투여된 2차 면역화 후 2주째에 동일한 반응이 나타난다 (표 4 및 5).
표 2: DNA 조성물 투여 후 BALB /c 마우스 혈청의 정량화
Figure pct00002
표 3: DNA 조성물 투여 후 C57BL /6 마우스 혈청의 정량화
Figure pct00003
표 4: 2 라운드의 DNA 조성물 투여 후 BALB /c 마우스 혈청의 정량화
Figure pct00004
표 5: 2 라운드의 DNA 조성물 투여 후 C57BL /6 마우스 혈청의 정량화
Figure pct00005
실시예 5: 추가의 예시적인 구축물은 마우스에서 면역원성을 나타낸다.
BALB/c 및 C57BL/6 마우스를 0 및 3주째에 생체내 EP를 사용하여 50 ㎍의 플라스미드 구축물 DNA로 면역화시켰다. 사용된 구축물은 OC-2, OC-2.2, OC-2.3, OC-10, OC-10.2, OC-10.3, OC-12 및 OC-13이었으며, QS21 애주번트를 사용한 재조합 S 단백질을 대조군으로 사용하였다. 제2 용량 투여 2주 후에 시험 마우스로부터 혈청 샘플을 수득하고, ELISA에 의해 SARS-CoV-2 RBD 및 S 단백질에 특이적인 중화 항체의 존재를 평가하였다 (도 3a). 수준은 동일한 희석률에서 음성 대조군의 2배인 450 nm에서의 광학 밀도를 제공하는 최고 희석률로 정의되는 종점 역가로서 제시된다. 구축물 OC-2.3, OC-10.3, 및 OC-13은 BALB/c 및 C57BL/6 마우스, 둘 모두에서 강건한 면역원성 특성을 보였다.
SARS-CoV-2에 대한 면역화된 마우스 혈청의 시험관내 중화를 평가하였다. 각 마우스 군으로부터 얻은 풀링된 혈청 샘플을 SARS-CoV-2와 함께 인큐베이션시킨 후, 이어서, Vero-E6 세포에 첨가하였다. 바이러스 세포변성 효과 (CPE)의 수준을 현미경 검사에 의해 결정하고, 바이러스 신경화 역가 ID50은 CPE의 50% 억제를 제공하는 혈청의 희석률로서 결정하였다 (도 3b). 구축물 OC-2.3, OC-10.3, 및 OC-13으로 면역화된 마우스에서는 혈청이 SARS-CoV-2 감염성을 강건하게 중화시켰다.
실시예 6: 면역원성 조성물은 마우스에서 T 세포 반응을 유도한다
QS21 애주번트를 사용한 재조합 S 단백질을 대조군으로 사용하여, BALB/c 및 C57BL/6 마우스를 0 및 3주째에 생체내 EP를 사용하여 50 ㎍의 OC-2.3 및 OC-10.3 구축물 DNA로 면역화시켰다. RBD, M, 및 NP 단백질에 이르는 펩티드 풀에 대한 마우스 T 세포 반응을 인터페론 감마 ELISpot에 의해 검출하였다 (도 4). "S-KTH"는 왕립 공과대학교(Royal Technical University (KTH))로부터 제공받은 재조합 S 단백질을 나타낸다. "S-GS"는 진스크립트(Genscript)로부터 입수한 재조합 S 단백질 (#Z03501)을 나타낸다. "RBD-GS"는 진스크립트로부터 입수한 S 단백질 (#Z03479)의 재조합 RBD를 나타낸다. 상기 펩티드 풀은 10개 아미노산이 중첩되는 20개 아미노산 길이의 펩티드로 생성되었다. 오브알부민 펩티드를 음성 대조군으로 사용하고, 콘카나발린 A를 양성 대조군으로 사용하였다. RBD, M, 및 NP 단백질에 대한 서열을 함유하는 OC-2.3으로 면역화된 마우스에서는 RBD 및 N 펩티드 및 단백질에 대해 강력한 T 세포 활성화가 일어났지만, M 펩티드는 반응성이 더 작았다. 오직 RBD만을 포함하는 OC-10.3로 면역화된 마우스에서는 오직 RBD 펩티드 및 단백질에 대해서만 강건한 T 세포 활성화가 일어났다.
실시예 7: 면역화된 동물로부터의 혈청은 SARS- CoV -2 감염을 중화시키는 데 효과적이다.
생체내에서 SARS-CoV-2 감염을 중화시킬 수 있는 유도된 항체의 능력을 K18-hACE2 마우스 모델 또는 일시적 hACE2-트랜스제닉 야생형 마우스를 사용하여 추가로 결정한다. 면역화된 토끼 및 비면역화된 토끼로부터 전체 IgG를 정제하고, 마우스에 주사한다. DNA 프라임/단백질 부스트 유도 항체는 모든 챌린지된 마우스에서 DNA 단독 또는 단백질 단독 조성물보다 더욱 잘 바이러스혈증을 방어하거나, 또는 피크 바이러스혈증을 유의적으로 지연시킨다.
실시예 8: SARS- CoV -2 에피토프에 대한 T 세포 반응은 프라임 / 부스트 접근법으로 증진될 수 있다
BALB/c 마우스에서 OC-2.3 DNA 구축물 및 QS21 애주번트 (rS/QS21)와 함께 재조합 S 단백질을 사용하여 동종성 (DNA 단독 프라임 및 부스트; 또는 단백질 단독 프라임 및 부스트) 및 이종성 프라이밍 (DNA 프라임, 단백질 부스트; 또는 단백질 프라임, DNA 부스트)의 효과를 시험하였다. 마우스를 0 및 3주째에 생체내 EP를 사용하여 50 ㎍의 플라스미드 구축물 DNA, 또는 QS21 애주번트와 함께 재조합 S 단백질로 면역화시켰다. 도 5a는 면역화된 마우스 (시험된 5마리의 마우스, "0", "1", "3", "10", 및 "30"으로 표지)로부터의 혈청 중 항-S 단백질 역가를 보여주는 것이다. 4가지 조건 각각 (즉, 프라임 또는 부스트, 또는 그 둘 모두로서 S/QS21 펩티드 및 OC-2.3 DNA의 상이한 조합). 도 5b는 ELISpot에 의해 검출된, SARS-CoV-2 RBD, M, 및 NP 단백질에 이르는 펩티드 풀에 대한 면역화된 마우스로부터의 T 세포 반응을 보여주는 것이다. 상기 펩티드 풀은 10개 아미노산이 중첩되는 20개 아미노산 길이의 펩티드로 생성되었다. 오브알부민 펩티드를 음성 대조군으로 사용하고, 콘카나발린 A를 양성 대조군으로 사용하였다. OC-2.3 DNA 프라임 및 rS/QS21 부스트 접근법 및 rS/QS21 프라임 및 OC-2.3 DNA 프라임 접근법, 둘 모두에 대하여 알 수 있는 바와 같이, 이종성 조합은 NP 펩티드 및 단백질에 대한 반응성도 생성함과 동시에, RBD 단백질 및 펩티드에 대한 강건한 면역원성도 생성한다. SARS-CoV-2 바이러스 성분의 이러한 개선된 커버리지가 바이러스 뿐만 아니라, 특정 성분이 보존되는 다양한 균주 또는 돌연변이체에 대한 방어를 개선시킬 것이다.
실시예 9: 면역원성 조성물은 토끼 및 비인간 영장류에서 면역원성을 나타낸다.
토끼 및 사이노몰구스 마카크에서 OC-2.3 DNA 구축물의 면역원성 능력을 평가하였다. 0 및 3주째에 생체내 EP를 사용하여 500, 1000, 또는 1500 ㎍의 OC-2.3 DNA를 토끼에 투여하였다. 0 및 3주째에 생체내 EP를 사용하여 1000 ㎍의 OC-2.3 DNA를 마카크에 투여하였다. 맞춤형 주사 장치를 사용하여 단일 단계 절차를 사용함으로써 주사를 수행하였다. 동물에서의 항-S 항체 수준은 2차 투여 후 평가하였다 (도 6a-b). 수준은 동일한 희석률에서 음성 대조군의 2배인 450 nm에서의 광학 밀도를 제공하는 최고 희석률로 정의되는 종점 역가로서 제시된다.
0 및 3주째에 사이노몰구스 마카크 (3마리로 이루어진 군)를 2개 용량으로 1000 ㎍ OC-2.3 또는 대조군 DNA (HBV DNA)로 면역화시킨 후, 이어서, SARS-CoV-2로 챌린지하였다 (106 pfu/mL하에, 0.5 mL는 비내로 및 4.5 mL는 기관내로). 챌린지 후 4 및 20일째 기관지폐포 세척 (BAL) 샘플을 채취하고, qPCR에 의해 SARS-CoV-2 RNA를 정량화하였다 (도 6c). Ct 값이 40 초과라면, 이는 RNA 수준이 검출 한계 미만이라는 것을 나타내는 것이다. OC-2.3으로 면역화된 원숭이는 4 및 20일째 둘 모두에서 본질적으로 검출불가능한 수준의 SARS-CoV-2 RNA를 보인 반면, 대조군 DNA로 면역화된 원숭이는 4일째 검출가능한 SARS-CoV-2 감염을 보이고, 20일째까지 감염 제거를 보였다. BAL에서 항체 역가의 정량화 및 SARS-CoV-2 RNA의 존재는 표 6에 제공되어 있다. 대상체 4 및 5에서 면역화시 누출이 관찰되었다.
표 6. 시험된 사이노몰구스 마카크의 정량화
Figure pct00006
실시예 10: 예시적인 면역원성 조성물 후보를 이용한 인간 임상 시험
하기 실시예는 코로나바이러스, 예컨대 SARS-CoV-2에 의해 유발되는 바이러스 감염을 치료 또는 예방하는 데 사용되는, 임의적으로, 핵산 성분 및 폴리펩티드 성분으로 구성된, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 이용하는 실시양태를 기술한다.
DNA 프라임/단백질 부스트 조성물을 인간 환자에게 장내로, 경구로, 비내로, 비경구로, 피하로, 근육내로, 진피내로, 또는 정맥내로 투여한다. 상기 인간 환자는 현재 SARS-CoV-2로 감염된 상태이거나, SARS-CoV-2로 이전에 감염된 적이 있거나, SARS-CoV-2로 감염될 위험이 있거나, 또는 SARS-CoV-2로 감염되지 않은 것일 수 있다.
DNA 프라임 용량은 먼저 1, 10, 100, 1000 ng, 또는 1, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 ㎍, 또는 1, 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 mg, 또는 상기 언급된 양 중 임의의 두 양으로 정의된 범위 이내의 어느 양이든 그러한 양으로, 또는 인간에서 최적의 효능을 발휘하는 데 적절한 임의의 다른 양으로 투여된다. 제1 DNA 프라임 용량 후, 1, 2, 3, 4, 또는 5회의 추가 DNA 프라임 용량은 이전 DNA 프라임 용량 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주 또는 상기 언급된 시간 중 임의의 두 시간으로 정의된 범위 이내에 언제든지, 예컨대 1-48일 또는 1-48주 이내에 투여될 수 있다. 단백질 부스트 용량은 DNA 프라임 용량 후, 1, 10, 100, 1000 ng, 또는 1, 10, 50, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 ㎍, 또는 1, 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 mg, 또는 상기 언급된 양 중 임의의 두 양으로 정의된 범위 이내의 어느 양이든 그러한 양으로, 또는 인간에서 최적의 효능을 발휘하는 데 적절한 임의의 다른 양으로 투여된다. 제1 단백질 부스트 용량은 최종 DNA 프라임 용량 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주 또는 상기 언급된 시간 중 임의의 두 시간으로 정의된 범위 이내에 언제든지 투여된다. 제1 단백질 부스트 용량 후, 1, 2, 3, 4, 또는 5회의 추가 단백질 부스트 용량은 이전 단백질 부스트 용량 투여 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주 또는 상기 언급된 시간 중 임의의 두 시간으로 정의된 범위 이내에 언제든지 투여될 수 있다.
환자는 SARS-CoV-2에 대한 성공적인 반응, 예를 들어, 항-S 단백질, 항-RBD, 항-M 단백질, 항-NP 단백질, 항-SARS-CoV2 또는 항-코로나바이러스 항체 생성에 대해 모니터링될 것이다. HDAg 서열이 포함된 조건하에서는 혈청 중 항-HDAg 항체도 시험한다. SARS-CoV-2 또는 코로나바이러스 항원에의 노출시 T 세포 및 다른 면역 세포의 신속한 활성화, 및 SARS-CoV-2 또는 코로나바이러스에 의한 추후 감염으로부터의 방어 또한 예상된다.
SARS-CoV-2 또는 코로나바이러스로 현재 감염된 상태이거나, 이전에 감염된 적이 있거나, 또는 감염 위험이 있는 환자에서, DNA 프라임/단백질 부스트 조성물 투여는 항바이러스 요법과 함께 수행될 수 있다. 잠재적인 항바이러스 요법 치료제로는 덱사메타손, 파비피라비르, 파필라비르, 렘데시비르, 토실리주맙, 갈리데시비르, 사릴루맙, 로피나비르, 리토나비르, 다루나비르, 리바비린, 인터페론-α, PEG화된 인터페론-α, 인터페론 알파-2b, 회복기 혈청, 또는 그의 임의의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 환자는 부작용, 예컨대 현기증, 메스꺼움, 설사, 우울증, 불면증, 두통, 가려움증, 발진, 발열 또는 제공된 항바이러스 치료제의 공지된 다른 부작용에 대해 모니터링될 것이다.
앞서 기술된 실시양태들 중 적어도 일부에서, 한 실시양태에서 사용된 하나 이상의 요소는 교체가 기술상 실현불가능하지 않는 한, 또 다른 실시양태에서 상호교환적으로 사용될 수 있다. 청구된 대상의 범주로부터 벗어남 없이, 상기 기술된 방법 및 구조에 대해 다양한 다른 생략, 추가 및 수정이 이루어질 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 이러한 모든 수정 및 변경은 첨부된 청구범위에 의해 정의된 바와 같이 대상의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다.
실질적으로 임의의 복수 및/또는 단수 용어의 사용과 관련하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 맥락 및/또는 적용에 맞게 적절히 복수에서 단수로 및/또는 단수에서 복수로 번역할 수 있다. 명료함을 위해 다양한 단수/복수 순열이 본원에서 명시적으로 기술될 수 있다.
일반적으로, 본원에서 및 특히 첨부된 청구범위 (예컨대, 첨부된 청구범위의 본문)에서 사용되는 용어는 일반적으로 "개방형" 용어로서 의도된다는 것 (예를 들어, "포함하는"이라는 용어는 "~을 포함하나, 이에 제한되지 않는"으로 해석되어야 하고, "가지는"이라는 용어는 "적어도 ~을 갖는"으로 해석되어야 하고, "포함하다"라는 용어는 "~을 포함하나, 이에 제한되지 않는다"로 해석되어야 한다는 것 등)이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 특정 번호의 도입된 청구범위 인용이 의도된 경우, 그러한 의도는 청구범위에 명시적으로 인용될 것이며, 그러한 인용이 없을 경우, 그러한 의도가 존재하지 않는다는 것도 추가로 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 것이다. 예를 들어, 이해를 돕기 위해 하기 첨부된 청구범위는 청구범위 인용을 도입하기 위해 "적어도 하나의" 및 "하나 이상의"라는 도입 어구의 사용을 포함할 수 있다. 그러나, 그러한 어구의 사용이 단수형태 "하나"에 의한 청구범위 인용의 도입이 그러한 도입된 청구범위 인용을 포함하는 임의의 특정 청구범위를 오직 단 하나의 상기 인용만 포함하는 실시양태로 제한한다는 것을 의미하는 것으로 해석되어서는 안되며, 심지어 동일한 청구범위가 "하나 이상의" 또는 "적어도 하나의"라는 도입 어구 및 "예컨대, "하나"라는 단수형태를 포함하는 경우에도 그러하며 (예컨대, "하나" (예컨대, "하나" 및/또는 "하나")는 "적어도 하나의" 또는 "하나 이상의"를 의미하는 것으로 해석되어야 하며); 청구범위 인용을 도입하기 위해 사용되는 정관사를 사용하는 경우에도 마찬가지이다. 추가로, 특정 번호의 도입된 청구범위 인용이 명시적으로 언급되는 경우에도, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 그러한 인용은 적어도 인용된 번호를 의미하는 것 (예를 들어, 다른 수식어 없이, "2개 인용"이라는 기본적 인용은 적어도 2개 인용, 또는 2개 이상 인용을 의미한다는 것)으로 해석되어야 한다는 것을 인식할 것이다. 추가로, "A, B, 및 C 등 중 적어도 하나"와 유사한 관례가 사용되는 경우, 일반적으로 그러한 구성은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 관례를 이해하는 의미 (예컨대, "A, B 및 C 중 적어도 하나의 것을 갖는 시스템"은 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B를 함께, A 및 C를 함께, B 및 C를 함께, 및/또는 A, B, 및 C를 함께 갖는 시스템 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다는 것)로 의도된다. "A, B, 또는 C 등 중 적어도 하나"와 유사한 관례가 사용되는 경우, 일반적으로 그러한 구성은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 관례를 이해하는 의미 (예컨대, "A, B, 또는 C 중 적어도 하나의 것을 갖는 시스템"은 A 단독, B 단독, C 단독, A 및 B를 함께, A 및 C를 함께, B 및 C를 함께, 및/또는 A, B, 및 C를 함께 갖는 시스템 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다는 것)로 의도된다. 설명 또는 청구범위에서든지 간에 둘 이상의 대안적 용어를 나타내는 이접적 단어 및/또는 어구는 사실상 용어 중 하나, 용어 중 어느 것이든 하나, 또는 그 둘 모두의 용어를 포함할 가능성을 고려하는 것으로 이해되어야 한다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 추가로 이해될 것이다. 예를 들어, "A 또는 B"라는 어구는 "A" 또는 "B" 또는 "A 및 B"의 가능성을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
또한, 본 개시내용의 특징 또는 측면이 마쿠쉬(Markush) 그룹으로 기술되는 경우, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용이 이에 의해 마쿠쉬 그룹의 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 서브군으로 기술되는 것을 인식할 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 예컨대 서면 설명을 제공하는 것과 같은 임의의 모든 목적을 위해, 본원에 개시된 모든 범위는 그의 임의의 및 모든 가능한 하위 범위 및 하위 범위의 조합을 포함한다. 임의의 열거된 범위는 동일한 범위를 적어도 동일한 절반, 3분의 1, 4분의 1, 5분의 1, 10분의 1 등으로 나눌 수 있도록 충분히 설명하고 가능하게 하는 것으로 쉽게 인식될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본원에서 논의된 각 범위는 하위 1/3, 중간 1/3 및 상위 1/3 등으로 쉽게 분류될 수 있다. 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 예컨대 "최대", "적어도", "초과", "미만" 등과 같은 모든 표현은 언급된 수치를 포함하고, 후속하여 상기 논의된 서브 범위로 나뉠 수 있는 범위를 지칭한다. 마지막으로, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 범위는 각각의 개별 구성원을 포함한다. 따라서, 예를 들어, 1-3개의 항목을 갖는 군은 1, 2 또는 3개의 항목을 갖는 군을 의미한다. 유사하게, 1-5개의 항목을 갖는 군은 1, 2, 3, 4 또는 5개의 항목을 갖는 군 등을 지칭한다.
공개 및 비공개 출원, 특허, 및 문헌 참고문헌을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 본원에서 인용된 모든 참고 문헌은 그 전문이 본원에서 참조로 포함되며, 본원에서 본 명세서의 일부를 구성한다. 참조로 포함된 공개문헌 및 특허 또는 특허 출원이 본 명세서에 포함된 개시내용과 모순되는 정도로 본 명세서는 그러한 모순되는 자료를 대체 및/또는 우선하도록 의도된다.
본원에서 다양한 측면 및 실시양태가 개시되었지만, 다른 측면 및 실시양태가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다. 본원의 다양한 측면 및 실시양태는 예시 목적으로 개시된 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않고, 진실된 범주 및 정신은 하기 청구범위에 의해 명시된다.
SEQUENCE LISTING <110> Svenska Vaccinfabriken Produktion Ab <120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING AND PREVENTING CORONAVIRUSES <130> SVF.006PR4 <160> 76 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2117 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SVF-1 wild-type DNA sequence <220> <221> BamHI_restriction_site <222> (1)..(6) <220> <221> Kozak <222> (7)..(15) <220> <221> RBD <222> (12)..(776) <220> <221> P2A <222> (777)..(842) <220> <221> NP <222> (843)..(2108) <220> <221> XbaI_restriction_site <222> (2112)..(2117) <400> 1 ggatccgcac catggcctta aaatataatg aaaatggaac cattacagat gctgtagact 60 gtgcacttga ccctctctca gaaacaaagt gtacgttgaa atccttcact gtagaaaaag 120 gaatctatca aacttctaac tttagagtcc aaccaacaga atctattgtt agatttccta 180 atattacaaa cttgtgccct tttggtgaag tttttaacgc caccagattt gcatctgttt 240 atgcttggaa caggaagaga atcagcaact gtgttgctga ttattctgtc ctatataatt 300 ccgcatcatt ttccactttt aagtgttatg gagtgtctcc tactaaatta aatgatctct 360 gctttactaa tgtctatgca gattcatttg taattagagg 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attccaaagt gggcgggaac tacaattatc tgtaccggct gttcagaaag 420 tccaatctga aaccctttga gagggacatc agtactgaaa tctaccaggc cgggtcaacc 480 ccttgcaatg gggtggaggg attcaactgt tactttccac tgcagagtta tggatttcag 540 cccacctatg gagtgggcta ccagccttat cgcgtggtgg tgctgtcttt cgaactgctg 600 cacgctccag ctacagtgtg cggacccaag aaatcaacta acctggtgaa gaacaagcgg 660 gtgcagccta ctgagagcat cgtgagattt cctaacatta ccaatctgtg cccattcggc 720 gaagtgttta atgctacaag attcgccagc gtgtacgctt ggaataggaa gcgcatctca 780 aattgcgtgg ctgactacag cgtgctgtat aacagtgctt cattcagcac ttttaagtgc 840 tacggagtga gtccaactaa actgaatgac ctgtgcttta ccaacgtgta tgctgactca 900 tttgtgatta ggggcgatga ggtgcgccag atcgctcctg gccagacagg gaagattgct 960 gactataatt acaaactgcc agacgatttc actggatgcg tgattgcctg gaactctaac 1020 aagctggata gtaaagtggg aggcaactat aattacctgt ataggctgtt ccgcaagtct 1080 aatctgaaac catttgagcg ggacatcagc accgagatct accaggccgg ctccaccccc 1140 tgcaatggag tggagggctt caactgctat tttccactgc agagctatgg gtttcagccc 1200 acatatgggg tgggatacca 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<220> <221> IgE-leader <222> (12)..(65) <220> <221> RBDv2 <222> (69)..(1382) <220> <221> XbaI_restriction_site <222> (1392)..(1397) <400> 75 ggatccgcac catggactgg acctggattc tgttcctggt ggccgccgcc acacgggtgc 60 acagcgcccg agtccagcct actgagtcta ttgtccgctt tcctaacatc actaatctgt 120 gcccttttgg cgaggtcttc aacgctacac ggtttgcttc cgtgtacgcc tggaatcgga 180 agagaatctc taactgcgtg gccgactaca gtgtgctgta taacagcgcc tccttctcta 240 cctttaagtg ctacggcgtg tcccccacca aactgaatga cctgtgcttc acaaacgtgt 300 atgccgactc ttttgtgatc cggggggatg aggtgagaca gattgcccca ggacagactg 360 gcaagatcgc tgactacaat tataaactgc ccgacgattt caccggctgc gtgatcgcct 420 ggaacagcaa caatctggat tccaaagtgg gcgggaacta caattatctg taccggctgt 480 tcagaaagtc caatctgaaa ccctttgaga gggacatcag tactgaaatc taccaggccg 540 ggtcaacccc ttgcaatggg gtggagggat tcaactgtta ctttccactg cagagttatg 600 gatttcagcc caccaacgga gtgggctacc agccttatcg cgtggtggtg ctgtctttcg 660 aactgctgca cgctccagct acagtgtgcg gacccaagaa atcaactaac ctggtgaaga 720 acaagcgggt gcagcctact gagagcatcg tgagatttcc taacattacc aatctgtgcc 780 cattcggcga agtgtttaat gctacaagat tcgccagcgt gtacgcttgg aataggaagc 840 gcatctcaaa ttgcgtggct gactacagcg tgctgtataa cagtgcttca ttcagcactt 900 ttaagtgcta cggagtgagt ccaactaaac tgaatgacct gtgctttacc aacgtgtatg 960 ctgactcatt tgtgattagg ggcgatgagg tgcgccagat cgctcctggc cagacaggga 1020 agattgctga ctataattac aaactgccag acgatttcac tggatgcgtg attgcctgga 1080 actctaacaa tctggatagt aaagtgggag gcaactataa ttacctgtat aggctgttcc 1140 gcaagtctaa tctgaaacca tttgagcggg acatcagcac cgagatctac caggccggct 1200 ccaccccctg caatggagtg gagggcttca actgctattt tccactgcag agctatgggt 1260 ttcagcccac aaacggggtg ggataccagc cttatagagt ggtggtgctg tccttcgaac 1320 tgctgcatgc ccctgctaca gtgtgcggcc caaagaaatc taccaacctg gtcaagaaca 1380 agtaataata gtctaga 1397 <210> 76 <211> 457 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SVF-10.3 (OC-10.3) polypeptide sequence <220> <221> IgE-leader <222> (1)..(18) <220> <221> RBDv2 <222> (20)..(457) <400> 76 Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val 1 5 10 15 His Ser Ala Arg Val Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn 20 25 30 Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe 35 40 45 Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala 50 55 60 Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys 65 70 75 80 Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val 85 90 95 Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala 100 105 110 Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp 115 120 125 Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser 130 135 140 Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser 145 150 155 160 Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala 165 170 175 Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro 180 185 190 Leu Gln Ser Tyr Gly Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro 195 200 205 Tyr Arg Val Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr 210 215 220 Val Cys Gly Pro Lys Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys Arg Val 225 230 235 240 Gln Pro Thr Glu Ser Ile Val Arg Phe Pro Asn Ile Thr Asn Leu Cys 245 250 255 Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg Phe Ala Ser Val Tyr Ala 260 265 270 Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr Ser Val Leu 275 280 285 Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly Val Ser Pro 290 295 300 Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn Val Tyr Ala Asp Ser Phe 305 310 315 320 Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile Ala Pro Gly Gln Thr Gly 325 330 335 Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe Thr Gly Cys 340 345 350 Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp Ser Lys Val Gly Gly Asn 355 360 365 Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys Ser Asn Leu Lys Pro Phe 370 375 380 Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln Ala Gly Ser Thr Pro Cys 385 390 395 400 Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe Pro Leu Gln Ser Tyr Gly 405 410 415 Phe Gln Pro Thr Asn Gly Val Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val Val Val 420 425 430 Leu Ser Phe Glu Leu Leu His Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly Pro Lys 435 440 445 Lys Ser Thr Asn Leu Val Lys Asn Lys 450 455

Claims (105)

  1. SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
  2. 제1항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 핵산이 서열식별번호( SEQ ID NO:) 1 또는 13과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  4. 제1항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 및 NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
  5. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 2-3, 14, 또는 15 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  6. 제4항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 핵산.
  7. 제6항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
  8. 제6항 또는 제7항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 39와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  10. 제1항, 제2항 및 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
  11. 제10항에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열이 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 핵산.
  13. 제12항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 45, 또는 47-50 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  15. 제10항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 40, 57-60, 또는 62 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  16. 제10항 또는 제11항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD의 3개의 탠덤 카피를 포함하는 것인 핵산.
  17. 제16항에 있어서, RBD의 3개의 탠덤 카피가 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는 것인 핵산.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 61과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  19. 제1항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열 및 M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 것인 핵산.
  20. 제1항 또는 제9항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 4 또는 16과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  21. 제1항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이 스파이크 (S) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 막 (M) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 핵단백질 (NP) 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 핵산.
  22. 제21항에 있어서, S 폴리펩티드가 발현, 가용성, 및/또는 면역원성을 개선시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 핵산.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, S 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함하는 것인 핵산.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열이 서열식별번호 51과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
  26. 제25항에 있어서, 5' IgE 리더 핵산 서열이 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 63과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  28. 서열식별번호 5-7, 17-19, 22-24, 73, 또는 75 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
  29. SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열 및 D형 간염 항원 (HDAg)을 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산.
  30. 제29항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 8 또는 20과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  31. 제29항에 있어서, P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 추가로 포함하는 핵산.
  32. 제29항 또는 제31항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 9 또는 21과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 핵산.
  33. 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열 및 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 포함하는 폴리펩티드.
  34. 제33항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  36. 제33항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열, M 폴리펩티드 서열, 및 NP 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
  37. 제33항, 제34항 및 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 26 또는 27과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  38. 제36항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 폴리펩티드.
  39. 제38항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 폴리펩티드.
  40. 제38항 또는 제39항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  41. 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 41과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  42. 제33항, 제34항 및 제36항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
  43. 제42항에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열이 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  44. 제42항 또는 제43항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드인 폴리펩티드.
  45. 제44항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 폴리펩티드.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, RBD 탠덤 반복 단일 쇄 이량체 폴리펩티드가 서열식별번호 46, 또는 52-55 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 42, 64-67, 또는 69 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  48. 제42항 또는 제43항에 있어서, RBD 폴리펩티드가 RBD의 3개의 탠덤 카피를 포함하는 것인 폴리펩티드.
  49. 제48항에 있어서, RBD의 3개의 탠덤 카피가 각각 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K417N, N439K, E484K, 또는 N501Y 돌연변이, 또는 그의 임의의 조합을 포함하거나, 또는 상기 돌연변이 중 어느 것도 포함하지 않는 것인 폴리펩티드.
  50. 제48항 또는 제49항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 68과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  51. 제33항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 RBD 폴리펩티드 서열 및 M 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인 폴리펩티드.
  52. 제33항 또는 제51항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 28과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  53. 제33항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 서열이 스파이크 (S) 폴리펩티드 및 NP 폴리펩티드를 포함하는 것인 폴리펩티드.
  54. 제52항에 있어서, S 폴리펩티드가 발현, 가용성, 및/또는 면역원성을 개선시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 것인 폴리펩티드.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, S 폴리펩티드가 전체 S 단백질 (예컨대, NCBI 수탁 번호 YP_009724390에 제시된 바와 같음) 기준으로 K968P 또는 V987P 돌연변이, 또는 그 둘 모두를 포함하는 것인 폴리펩티드.
  56. 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, S 폴리펩티드가 서열식별번호 56과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  57. 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열을 추가로 포함하는 폴리펩티드.
  58. 제57항에 있어서, N-말단 IgE 리더 폴리펩티드 서열이 서열식별번호 44와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  59. 제53항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 70과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  60. 서열식별번호 29-31, 34-36, 74, 또는 76 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
  61. 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드 및 적어도 하나의 HDAg 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드.
  62. 제61항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 32와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  63. 제62항에 있어서, 적어도 하나의 P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 추가로 포함하는 폴리펩티드.
  64. 제61항 또는 제63항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 33과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인 폴리펩티드.
  65. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용하기 위한 핵산.
  66. 제33항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용하기 위한 폴리펩티드.
  67. 제33항 내지 제64항 및 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현되는 것인 폴리펩티드.
  68. 제67항에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현되는 것인 폴리펩티드.
  69. (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산; 또는
    (b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함하는, 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  70. 제69항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이
    i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열;
    vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는
    vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  71. 제69항 또는 제70항에 있어서, 핵산이 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 핵산인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  72. 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 1-12 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  73. 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  74. 제73항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  75. 제69항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드가
    i) RBD 폴리펩티드 서열;
    ii) NP 폴리펩티드 서열;
    iii) M 폴리펩티드 서열;
    iv) HDAg 폴리펩티드 서열;
    v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열;
    vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는
    vii) S 폴리펩티드 서열;
    또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  76. 제69항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 제33항 내지 제64항 중 어느 한 항의 폴리펩티드인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  77. 제69항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하며, 임의적으로 대상체, 예컨대 포유동물, 바람직하게는 인간에서의 SARS-CoV-2 예방, 치료, 또는 억제를 위한 것과 같은 의약에서 사용되는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  78. 제69항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  79. 제78항에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  80. 제69항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 애주번트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  81. 제80항에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  82. 제69항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 재조합 벡터에 제공되는 것인 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  83. a) 대상체에게 핵산을 포함하는 적어도 하나의 프라임 용량을 투여하는 단계;
    b) 대상체에게 폴리펩티드를 포함하는 적어도 하나의 부스트 용량을 투여하는 단계를 포함하는,
    제69항 내지 제82항 중 어느 한 항에 기재된 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물을 사용하여 대상체에서 면역 반응을 생성하고/거나, 중화 항체를 생성하는 방법.
  84. 제83항에 있어서, 적어도 하나의 부스트 용량이 애주번트를 추가로 포함하는 것인 방법.
  85. 제84항에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인 방법.
  86. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 부스트 용량이 적어도 하나의 프라임 용량 투여 후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48일 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 또는 48주, 또는 상기 언급된 시점 중 임의의 두 시점으로 정의된 시간 범위 이내에, 예컨대 1-48일 또는 1-48주 이내에 투여되는 것인 방법.
  87. 제83항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 장내로, 경구로, 비내로, 비경구로, 피하로, 근육내로, 진피내로, 또는 정맥내로 또는 그의 임의의 조합으로, 및 임의적으로 생체내 전기천공과 함께 제공되는 것인 방법.
  88. 제83항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 투여가 항바이러스 요법과 함께 수행되는 것인 방법.
  89. 제88항에 있어서, 항바이러스 요법이 덱사메타손, 파비피라비르, 파필라비르, 렘데시비르, 토실리주맙, 갈리데시비르, 사릴루맙, 로피나비르, 리토나비르, 다루나비르, 리바비린, 인터페론-α, PEG화된 인터페론-α, 인터페론 알파-2b, 회복기 혈청, 또는 그의 임의의 조합의 투여를 포함하는 것인 방법.
  90. (a) SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 핵산; 또는
    (b) 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드를 포함하는 폴리펩티드, 또는 그 둘 모두를 포함하는, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  91. 제90항에 있어서, SARS-CoV-2 폴리펩티드를 코딩하는 적어도 하나의 핵산 서열이
    i) RBD 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    ii) NP 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    iii) M 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    iv) HDAg 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위를 코딩하는 핵산 서열;
    vi) IgE 리더 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열; 또는
    vii) S 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열;
    또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  92. 제91항에 있어서, 핵산이 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항의 핵산인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  93. 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 1-12 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  94. 제90항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 인간에서의 발현을 위해 코돈 최적화된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  95. 제94항에 있어서, 핵산이 서열식별번호 13-24, 39-40, 57-63, 71, 73, 또는 75 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  96. 제90항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 SARS-CoV-2 폴리펩티드가
    i) RBD 폴리펩티드 서열;
    ii) NP 폴리펩티드 서열;
    iii) M 폴리펩티드 서열;
    iv) HDAg 폴리펩티드 서열;
    v) P2A 자가촉매 폴리펩티드 절단 부위 서열;
    vi) IgE 리더 폴리펩티드 서열; 또는
    vii) S 폴리펩티드 서열;
    또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  97. 제90항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 제33항 내지 제64항 중 어느 한 항의 폴리펩티드인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  98. 제90항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호 25-36, 41-42, 64-70, 72, 74, 또는 76 중 어느 하나와 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성 또는 서열 동일성을 공유하거나 또는 포함하는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  99. 제90항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 재조합적으로 발현된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  100. 제99항에 있어서, 폴리펩티드가 포유동물, 박테리아, 효모, 곤충, 또는 무세포 시스템에서 재조합적으로 발현된 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  101. 제90항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 애주번트를 추가로 포함하는, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  102. 제101항에 있어서, 애주번트가 알룸 및/또는 QS21인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  103. 제90항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 재조합 벡터에 제공되는 것인, SARS-CoV-2의 치료 또는 억제에서 사용하기 위한 면역원성 조성물 또는 생성물 조합물.
  104. IgE 리더 서열을 코딩하는 핵산, 바람직하게는 아미노산 서열 MDWTWILFLVAAATRVHS (서열식별번호 44)를 코딩하는 핵산, 또는 서열식별번호 43과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 상동성을 갖는 IgE 리더 핵산 서열에 연결된 적어도 하나의 SARS-CoV-2 핵산 성분을 포함하거나, 본질적으로 그로 이루어지거나, 또는 그로 이루어진 핵산.
  105. SARS-CoV-2 감염을 치료 또는 억제하는 의약을 포함한 의약으로서의, 제104항의 핵산, 또는 그에 의해 코딩된 단백질의 용도.
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