TW202137984A - 用於治療癌症之PD-1拮抗劑、VEGFR/FGFR/RET酪胺酸激酶抑制劑及CBP/β-連環蛋白抑制劑之組合 - Google Patents

Abstract

本揭露內容描述了包含計劃性死亡1受體（PD-1）拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和(6S,9aS)-N-苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H-吡𠯤并[2,1-c][1,2,4]三𠯤-1(6H)-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽的組合療法，以及該組合療法用於治療癌症之用途。

Description

用於治療癌症之PD-1拮抗劑、VEGFR/FGFR/RET酪胺酸激酶抑制劑及CBP/β-連環蛋白抑制劑之組合

揭露了可用於治療癌症之組合療法。揭露了組合療法，其包含計劃性死亡1（PD-1）蛋白的拮抗劑、樂伐替尼、多受體酪胺酸激酶（多RTK）抑制劑或其藥學上可接受的鹽、以及E7386，CBP/β-連環蛋白抑制劑（其抑制CBP與β-連環蛋白之間的相互作用）或其藥學上可接受的鹽。還揭露了包含抗PD-1抗體、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽以及E7386或其藥學上可接受的鹽的組合之腫瘤治療劑。

PD-1被認為是免疫調節和維持外周耐受性的重要參與者。PD-1在原初T-、B-和天然殺傷性T（NKT）-細胞上適度表現，並藉由淋巴細胞、單核細胞和髓樣細胞上的T/B細胞受體傳訊上調（1）。

PD-1的兩個已知配位基PD-L1（B7-H1）和PD-L2（B7-DC）在各種組織中產生的人癌症中表現。在例如卵巢癌、腎癌、大腸直腸癌、胰臟癌、肝癌和黑素瘤的大樣品集中，顯示PD-L1表現與不良預後和總體存活降低相關，這與後續治療無關（2-13）。同樣，在乳腺癌和黑素瘤中，PD-1在腫瘤浸潤淋巴細胞上的表現被發現對功能異常的T細胞（14-15）進行標記，並且與腎癌的不良預後相關（16）。已經提出表現PD-L1的腫瘤細胞與表現PD-1的T細胞相互作用以減弱T細胞活化和逃避免疫監視，從而導致針對腫瘤的免疫反應受損。因此，針對PD-1受體或PD-L1配位基的抗體可以抑制兩者之間的結合，從而增強對腫瘤細胞之免疫作用（23）。

FDA批准使用幾種抑制PD-1及其配位基PD-L1和PD-L2中的一個或兩個之間相互作用的單株抗體，另外一些單株抗體正在臨床開發中，用於治療癌症。已經提出，如果與其他批准的或實驗的癌症療法（例如，放射、手術、化學治療劑、靶向療法，抑制腫瘤中失調的其他傳訊通路的藥劑和其他免疫增強劑）組合使用，則可以增強此類抗體的功效。

派姆單抗係一種抗PD-1抗體，在美國被批准為單一療法或與某些其他藥物組合使用，用於治療多種腫瘤類型，包括黑素瘤、非小細胞肺癌（NSCLC）、小細胞肺癌（SCLC）、頭頸鱗狀細胞癌（HNSCC）、經典何杰金氏淋巴瘤（cHL）、原發性縱隔大B細胞淋巴瘤（PMBCL）、尿路上皮癌，高微衛星不穩定性癌症、胃癌、食道癌、子宮頸癌、肝細胞癌（HCC）、默克爾細胞癌（MCC）、腎細胞癌（RCC）和子宮內膜癌。

酪胺酸激酶參與生長因子傳訊之調節，因此係癌症療法的重要靶標。樂伐替尼係一種口服受體酪胺酸激酶（RTK）抑制劑，其選擇性抑制以下項的激酶活性：參與腫瘤增殖的血管內皮生長因子（VEGF）受體（VEGFR1（FLT1）、VEGFR2（KDR）和VEGFR3（FLT4））以及成纖維細胞生長因子（FGF）受體FGFR1、2、3和4，以及其他促血管生成和致癌途徑相關的RTK（包括血小板衍生的生長因子（PDGF）受體PDGFRα；KIT；以及RET原癌基因（RET））。特別地，根據動力學分析，藉由X射線晶體結構分析證實，樂伐替尼具有與VEGFR2的新結合模式（V型），並表現出對激酶活性的快速有效抑制。

樂伐替尼的化學名稱為4-[3-氯-4-(環丙基胺基羰基)胺基苯氧基]-7-甲氧基-6-喹啉甲醯胺，其結構為：

。

甲磺酸樂伐替尼在美國獲得批准，至少 (a)用於治療具有局部復發或轉移性、進展性、放射性碘難治性分化的甲狀腺癌的患者，(b)與依維莫司組合治療在先前的抗血管生成療法後具有晚期腎細胞癌（RCC）的患者，(c)用於一線治療具有不可切除的肝細胞癌（HCC）患者，和 (d) 與派姆單抗組合用於治療具有晚期子宮內膜癌（其不是高微衛星不穩定性（MSI-H）或錯配修復缺陷（dMMR））的患者，該患者在先前的全身療法後疾病進展，並且不適合進行治癒性手術或放射。甲磺酸樂伐替尼正在臨床研究中，用於針對進一步的腫瘤類型的單一療法或與抗PD-1抗體組合療法，該腫瘤類型包括膀胱癌、黑素瘤、頭頸鱗狀細胞癌，尿路上皮癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、大腸直腸癌（CRC）、膠質母細胞瘤和膽道癌。

已經觀察到一些癌細胞具有被Wnt訊號激活的β-連環蛋白。已經研究了Wnt訊號通路的抑制劑作為抗癌劑；但是，還沒有實際應用。

在臨床上開發的作為抗癌劑的CBP/β-連環蛋白抑制劑比具有其他機制的常規Wnt抑制劑對人的毒性更低（J. Clin. Oncol .[臨床腫瘤學雜誌]31, 2013（增刊；摘要2501））。作為其機理，認為在抑制CBP（CREB結合蛋白）與β-連環蛋白之間的結合後，與CBP高度相似的P300結合β-連環蛋白而不是CBP，並且這種變化抑制癌增殖並誘導分化（EMBO Journal [歐洲分子生物學學會會刊] 2013, 32: 1977-1989）。

研究表明，膽管癌的主要通路可能是藉由Wnt-β-連環蛋白通路引起的腫瘤增殖；CBP/β-連環蛋白抑制劑ICG-001可抑制腫瘤增殖（J. Clin. Invest .[臨床研究雜誌]2015年3月2日；125(3): 1269-85. doi: 10.1172/JCI76452）。

常規Wnt抑制劑基於抑制Wnt配位基產生的機制來阻斷訊號，從而阻斷受體功能，促進β-連環蛋白降解等。由於這種機制，在臨床前研究和臨床試驗中會出現毒性問題，因此開發工作大多已停止。Wnt訊號通路係高度保守的通路，並且與障礙相關，並且涉及β-連環蛋白。Wnt/β-連環蛋白通路對正常發育很重要。不受理論的束縛，據信CBP/β-連環蛋白結合可減少Wnt傳訊，而p300/β-連環蛋白激活Wnt傳訊。

此外，還已知β-連環蛋白藉由抑制T細胞的分化來抑制T細胞的激活（J. Immunol. [免疫學雜誌]2011; 186:784-790）。因此，認為CBP/β-連環蛋白抑制劑促進T細胞的分化和T細胞的激活。

E7386，化學名稱為(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺係潛在的CBP/β-連環蛋白抑制劑，具有以下結構：

。

E7386可以單獨（美國專利10,259,817和9,174,998）或與抗PD-1抗體（美國專利公開2018/0185395）或樂伐替尼（加拿大專利公開3044658）的組合療法中顯示抗腫瘤作用。

通常，腫瘤治療劑當單獨施用時，經常並非對所有的患者有效。因此，已經嘗試藉由組合該等治療劑來提高其治癒率（22）。

如本文所揭露，(i) 不是阿特珠單抗的PD-1拮抗劑，(ii) 樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽，和 (iii) E7386或其藥學上可接受的鹽的組合施用獲得了意想不到的優異的抗腫瘤效果。

提供了一種用於治療個體中的癌症之方法，該方法包括對該個體施用包含不是阿特珠單抗的PD-1拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽的組合療法。在一些情況下，該個體就是人。癌症可以是實性瘤，例如腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、乳腺癌、非小細胞癌肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌、尿路上皮癌和頭頸鱗狀細胞癌。該癌症可以是晚期癌症或轉移性癌症。

該方法的PD-1拮抗劑可以是單株抗體或其抗原結合片段。在一些情況下，該拮抗劑係抗PD-1抗體。該拮抗劑可以是派姆單抗或納武單抗。

在一些情況下，該方法的PD-1拮抗劑係派姆單抗、西米普利單抗或納武單抗，較佳的是派姆單抗。在一些治療方案中，派姆單抗在樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和/或E7386或其藥學上可接受的鹽施用後進行施用。在一些情況下，樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽在派姆單抗和/或E7386或其藥學上可接受的鹽之後施用。

提供了一種用於治療被診斷患有癌症的人個體之方法，該方法包括對該個體施用組合療法持續至少24週。該組合療法包括派姆單抗、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、以及E7386或其藥學上可接受的鹽。樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽可以每日24 mg、20 mg、18 mg、12 mg或8 mg的劑量施用（各自以樂伐替尼計），而派姆單抗可以200 mg Q3W或400 mg Q6W的劑量施用。E7386或其藥學上可接受的鹽可以每天約0.01 mg/kg至1000 mg/kg個體體重的劑量施用。

提供了一種藥物，該藥物包含PD-1拮抗劑，用於與樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽組合使用以治療癌症。

還提供了一種藥物，該藥物包含樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽，用於與PD-1拮抗劑和E7386或其藥學上可接受的鹽組合使用以治療癌症。

還提供了一種藥物，該藥物包含E7386或其藥學上可接受的鹽，用於與PD-1拮抗劑和樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽組合使用以治療癌症。

還提供了治療性組合用於治療癌症之用途，並且該治療性組合包括PD-1拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、以及E7386或其藥學上可接受的鹽。

還提供了PD-1拮抗劑在藥物製備中之用途，該藥物用於當與樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽組合施用時治療個體的癌症。還提供了樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽在藥物製備中之用途，該藥物用於當與PD-1拮抗劑和E7386或其藥學上可接受的鹽組合施用時治療個體的癌症。還提供了E7386或其藥學上可接受的鹽在藥物製備中之用途，該藥物用於當與PD-1拮抗劑和樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽組合施用時治療個體的癌症。

還提供了PD-1拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽在製備用於治療個體的癌症的藥物中之用途。該藥物可以包括套組（kit），並且該套組還可以包括包裝插頁，該包裝插頁包括用於將PD-1拮抗劑與樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽組合使用以治療個體的癌症的說明。

在所有的治療方法、藥物和用途中，PD-1拮抗劑抑制PD-L1與PD-1的結合，並且較佳的是還抑制PD-L2與PD-1的結合。在上述一些治療方法、藥物和用途中，PD-1拮抗劑係單株抗體或其抗原結合片段，該單株抗體或其抗原結合片段特異性結合PD-1或PD-L1並阻斷PD-L1與PD-1的結合。例如，PD-1拮抗劑可以是抗PD-1抗體，其包含重鏈和輕鏈，並且其中該重鏈和輕鏈包含圖6所示的胺基酸序列（SEQ ID NO: 21和SEQ ID NO: 22）。還提供了一種治療腫瘤之方法，該方法可以包括抗PD-1抗體、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽的組合使用。

在組合療法、治療方法、藥物和用途中的一些中，該個體係人，該癌症係實性瘤，並且在一些情況下，該實性瘤係腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌、或此處揭露的任何癌症。

而且，如果癌症對PD-L1和PD-L2之一或兩者的表現測試呈陽性，則可以使用該組合療法、治療方法、藥物和用途中的任何。在其他情況下，癌症具有升高的PD-L1表現。

在組合療法、治療方法、藥物和用途中的一些中，該個體可以是人，該癌症對人PD-L1測試呈陽性，並且選自由以下組成之群組：腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌。在一個實施方式中，膀胱癌係尿路上皮癌。

序列表的引用

本申請包含序列表，該序列表已以ASCII格式電子提交，並藉由引用整體併入本文。在2020年10月27日創建的所述ASCII副本命名213597_0005_00_ST25並且大小為31,517位元組。相關申請之引用

本申請要求於2019年10月29日提交的美國臨時申請案號62/927,334和號62/927,576的優先權和權益，其內容整體併入本文。

縮寫 . 貫穿詳細描述和實例，將使用以下縮寫： BOR        最佳總體反應 BID         每天兩次，每次一個劑量 CBP         CREB結合蛋白 CBR         臨床受益率 CDR        互補決定區 CHO        中國倉鼠卵巢 CR           完全反應 CRC         大腸直腸癌 DCR        疾病控制率 DFS         無病存活 DLT         劑量限制性毒性 DOR        反應持續時間 DSDR      持久的穩定疾病率 FFPE       福馬林固定，石蠟包埋 FR           框架區 HCC        肝細胞癌 IgG          免疫球蛋白G IHC         免疫組織化學或免疫組織化學的 irRC         免疫相關反應標準 IV           靜脈內 MCC        默克爾細胞癌 MTD        最大耐受劑量 NCBI       國家生物技術資訊中心 NCI         國立癌症研究所 NKT        自然殺傷T細胞 NSCLC     非小細胞肺癌 ORR        客觀反應率 OS           總體存活 PD           進展性疾病 PD-1        計劃性細胞死亡1 PD-L1      計劃性細胞死亡1配位基1，也稱為B7-H1 PD-L2      計劃性細胞死亡1配位基2，也稱為B7-DC PFS         無進展存活 PR           部分反應 Q2W        每兩週一個劑量 Q3W        每三週一個劑量 QD          每天一個劑量 RCC         腎細胞癌 RECIST    實性瘤反應評估標準 RTK         受體酪胺酸激酶 SCLC       小細胞肺癌 SD           穩定疾病 VEGF      血管內皮生長因子 VH          免疫球蛋白重鏈可變區 VK          免疫球蛋白κ輕鏈可變區

定義 . 為了使方法、組成物和用途更容易理解，下面具體定義了某些技術和科學術語。除非在本文檔的其他地方具體定義，否則本文使用的所有其他技術和科學術語具有熟悉該項技術者通常理解之含義。

「約」當用於修飾數字定義的參數（例如，PD-1拮抗劑（(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽）或樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽的劑量，或本文所述之組合療法的治療時間長度）時係指該參數可在該參數的該數值以下或之上變化多達10%。例如，約20 mg的劑量可以在18 mg和22 mg之間變化。

「較佳的是」表示更期望的選擇。例如，當用於修飾數字定義的參數時，它表示較佳的參數提供的結果優於該參數的另一個值。「較佳的是」的含義僅在美國以外適用。對於美國，任何使用「較佳的是」的句子都應理解為該術語不存在。

如本文所用，包括所附申請專利範圍，諸如「一」，「一個」和「該」的單數形式包括它們相應的複數指代，除非上下文另有明確說明。

適用於動物、人、實驗對象、細胞、組織、器官或生物流體的「施用」和「治療」係指外源性藥物、治療劑、診斷劑或組成物與動物、人、受試者、細胞、組織、器官或生物流體的接觸。細胞的處理包括試劑與細胞的接觸以及試劑與流體的接觸，其中該流體與細胞接觸。「施用」和「治療」還指例如藉由試劑、診斷、結合化合物或另一細胞對細胞進行的體外和離體治療。術語「受試者」包括任何生物，較佳的是動物，更較佳的是哺乳動物（例如，大鼠、小鼠、狗、貓和兔），最較佳的是人。

如本文所用，術語「抗體」係指表現出期望的生物學或結合活性的任何形式的抗體。因此，它以最廣義的方式使用，並且特別包括但不限於單株抗體（包括全長單株抗體）、多株抗體、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）、人源化抗體、完全人抗體、嵌合抗體和駱駝化單結構域抗體。「親本抗體」係藉由在將抗體修飾以用於預期用途之前將免疫系統暴露於抗原而獲得的抗體，該預期用途例如是用作人治療劑的抗體的人源化。

通常，該基本抗體結構單元包含四聚體。每個四聚體包括兩對相同的多肽鏈，每對具有一條「輕」鏈（約25 kDa）和一條「重」鏈（約50-70 kDa）。每條鏈的胺基末端部分包括約100至110個或更多個胺基酸的可變區，該可變區主要負責抗原識別。重鏈的羧基末端部分可以限定主要負責效應子功能的恒定區。通常，人輕鏈分為κ和λ輕鏈。此外，人重鏈通常被分類為μ、δ、γ、α或ε，並且抗體的同種型分別地定義為IgM、IgD、IgG、IgA、和IgE。在輕鏈和重鏈中，可變區和恒定區藉由約12個或更多個胺基酸的「J」區連接，其中重鏈還包括約10個以上的胺基酸的「D」區。一般請參見Fundamental Immunology [基礎免疫學]第7章（Paul, W. 編輯, 第二版, 瑞文出版社（Raven Press）, 紐約(1989)。

各輕鏈/重鏈配對的可變區形成抗體結合位點。因此，通常，完整的抗體具有兩個結合位點。除了雙功能或雙特異性抗體外，兩個結合位點通常相同。

通常，重鏈和輕鏈的可變結構域均包含三個高變區，也稱為互補決定區（CDR），其位於相對保守的框架區（FR）內。CDR通常藉由框架區對齊，使得能夠與特異性表位結合。通常，從N末端到C末端，輕鏈和重鏈可變結構域均包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。根據Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白質序列], Kabat等人 ; 國立衛生研究院（National Institutes of Health）,貝塞斯達（Bethesda）,馬里蘭州（Md.）; 第5版; 美國國立衛生研究院（NIH Publ.）第91-3242期 (1991); Kabat (1978)Adv. Prot. Chem. [蛋白質化學進展]32: 1-75; Kabat等人, (1977)J. Biol. Chem. [生物化學雜誌]252: 6609-6616; Chothia等人, (1987)J Mol. Biol [生物分子雜誌]. 196: 901-917 或Chothia等人, (1989)Nature [自然] 342: 878-883中定義，將將胺基酸分配給每個結構域。

如本文所用，術語「高變區」係指抗體中負責抗原結合的胺基酸殘基。高變區包含來自「互補決定區」或「CDR」（即輕鏈可變結構域中的CDRL1、CDRL2和CDRL3，以及重鏈可變結構域中的CDRH1、CDRH2和CDRH3）的胺基酸殘基。參見 Kabat 等人 (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest[免疫學目的蛋白質序列],第5版, 公共衛生服務局（Public Health Service）, 國立衛生研究院（National Institutes of Health）, 貝塞斯達, 馬里蘭州。（藉由序列定義抗體的CDR區）；另請參見Chothia和Lesk (1987)J. Mol. Biol [分子生物學雜誌].196: 901-917（藉由結構定義抗體的CDR區）。如本文所用，術語「框架」或「FR」殘基係指除本文定義為CDR殘基的高變區殘基以外的那些可變結構域殘基。

如本文所用，「可變區」或「V區」係指IgG鏈的片段，其在不同抗體之間在序列上係可變的。它延伸至輕鏈中的Kabat殘基109和重鏈中的殘基113。

如本文所用，除非另有說明，否則「抗體片段」或「抗原結合片段」係指抗體的抗原結合片段，即，保留與全長抗體結合的抗原特異性結合的能力的抗體片段，例如保留一個或多個CDR區的片段。抗體結合片段的實例包括但不限於Fab、Fab’、F(ab’)₂ 和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子（例如，sc-Fv）；奈米抗體以及從抗體片段形成的多特異性抗體。

「特異性結合」指定靶蛋白的抗體係與其他蛋白相比優先結合該靶的抗體，但是這種特異性不需要絕對的結合特異性。如果抗體的結合決定了樣品中靶蛋白的存在，例如不會產生非期望結果（如假陽性），則認為抗體對其預期靶係「特異性的」。抗體或其結合片段與靶蛋白結合的結合親和力比與非靶蛋白的親和力大至少兩倍、較佳的是大至少十倍、更較佳的是大至少20倍，並且最較佳的是大至少100倍。如本文所用，如果抗體與包含給定胺基酸序列的多肽結合但不與缺少該序列的蛋白質結合，則認為所述抗體特異性結合包含該給定胺基酸序列（例如成熟的人PD-1或人PD-L1分子的胺基酸序列）的多肽。

「嵌合抗體」係指這樣的抗體，其中重和/或輕鏈的一部分與對應的衍生自一個特定物種（例如人）的抗體或屬於一個特定抗體種類或亞類的序列相同或同源，而該一個或多個鏈的其餘部分係與衍生自另一個物種（例如小鼠）的抗體的或屬於另一個抗體種類或亞類的抗體連同此種抗體的片段中的對應序列相同或同源，只要它們表現出所需的生物活性即可。

「人抗體」係指僅包含人免疫球蛋白蛋白序列的抗體。如果在小鼠、小鼠細胞或衍生自小鼠細胞的雜交瘤中產生，人抗體可能含有鼠碳水化合物鏈。類似地，「小鼠抗體」或「大鼠抗體」係指分別僅包含小鼠或大鼠免疫球蛋白序列的抗體。

「人源化抗體」係指包含來自非人（例如，鼠）抗體以及人抗體的序列的抗體形式。這樣的抗體含有衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。總體上，人源化抗體將包括至少一個、並且典型地兩個可變結構域中的基本上全部，其中全部或基本上全部的高變環相應於非人免疫球蛋白的那些，並且全部或基本上全部的FR區係人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗體還視需要包括免疫球蛋白恒定區（Fc）的至少一部分，典型地是人免疫球蛋白的至少一部分。必要時，將前綴「hum」、「hu」或「h」添加到抗體殖株名稱中以區分人源化抗體與親本齧齒動物抗體。齧齒動物抗體的人源化形式通常包含與親本齧齒動物抗體相同的CDR序列，儘管為增加親和力、增加人源化抗體的穩定性或其他原因可以包括某些胺基酸取代。

「分離的抗體」和「分離的抗體片段」係指純化狀態，並且在這種上下文中是指命名的分子基本上不含其他生物分子，例如核酸、蛋白質、脂質、碳水化合物或其他材料（例如細胞碎片和生長培養基）。通常，術語「分離的」無意係指完全不存在這種材料或不存在水、緩衝液或鹽，除非它們的存在量顯著干擾本文所述之結合化合物的實驗用途或治療用途。

如本文所用，「Kabat」係指由Elvin A. Kabat（（1991）Sequences of Proteins of Immunological Interest [免疫學目的蛋白質序列]，第5版，國家衛生研究院，公共衛生服務，貝塞斯達，馬里蘭州）開創的免疫球蛋白比對和編號系統。

如本文所用，「單株抗體」或「mAb」或「Mab」係指基本上同質的抗體的群體， 即，構成該群體的抗體分子在胺基酸序列上相同，除了可能少量存在的可能天然發生的突變之外。相反，常規（多株）抗體製劑通常包括在其可變結構域（特別是其CDR，其通常對不同表位具有特異性）中具有不同胺基酸序列的多種不同抗體。修飾語「單株」表示從基本上同質的抗體群體獲得的抗體的特徵，而不應解釋為要求藉由任何特定方法來生產抗體。例如，根據治療方法、藥物和揭露之用途使用的單株抗體可以藉由首先由Kohler等人 (1975)Nature [自然]256: 495 描述的雜交瘤方法來製備，或可以藉由重組去氧核糖核酸（DNA）方法製備（參見，例如，美國專利案號4,816,567）。也可以使用Clackson等人 (1991)Nature [自然]352: 624-628和Marks等人 (1991)J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌]222: 581-597中所述之技術從噬菌體抗體文庫中分離「單株抗體」。另參見Presta (2005)J. Allergy Clin. Immunol. [ 過敏與臨床免疫學雜誌] 116: 731。

除非另有說明，否則本文所用的「CDR」或「CDRs」係指使用Kabat編號系統定義的免疫球蛋白可變區中的一個或多個互補決定區。

「抗腫瘤反應」當指接受治療方案（例如本文所述之組合療法）治療的癌症患者時，表示至少一種積極的治療效果，例如減少的癌細胞數量、減小的腫瘤大小、降低的癌細胞浸潤到周圍器官的速率、降低的腫瘤轉移或腫瘤生長速率或無進展存活。可以藉由多種方式來衡量癌症的積極治療效果（參見W. A. Weber,J. Null. Med .[核醫學雜誌] 50: 1S-10S (2009); Eisenhauer等人, 同上）。在一些情況下，使用RECIST 1.1標準（實性瘤中反應評估標準）、二維irRC（免疫相關反應標準）或一維irRC來評估對本文所述之組合療法的抗腫瘤反應。在一些情況下，抗腫瘤反應係SD、PR、CR、PFS或DFS中的任何一種。

「二維irRC」係指Wolchok JD,等人 「Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria[實性瘤免疫療法活性評估指南：免疫相關反應標準],」Clin Cancer Res .[臨床癌症研究] 15(23): 7412-7420 (2009)中描述的一組標準。該等標準利用靶病變的二維腫瘤測量，這係藉由將每個病變的最長直徑和最長垂直直徑（cm² ）相乘而獲得。

「生物治療劑」係指在支持腫瘤維持和/或生長或抑制抗腫瘤免疫反應的任何生物通路中阻斷配位基/受體傳訊的生物分子，例如抗體或融合蛋白。生物治療劑的種類包括但不限於針對以下的抗體：VEGF、表皮生長因子受體（EGFR）、Her2/neu、其他生長因子受體、CD20、CD40、CD-40L、CTLA-4、OX-40、4-1BB和ICOS。

術語「癌症」、「癌性」、「腫瘤」或「惡性」係指或描述哺乳動物中通常以細胞生長不受調節為特徵的生理病症。癌症的實例包括但不限於腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌如尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌。癌症的另一個特定實例包括腎細胞癌（RCC）。癌症的另一個特定實例包括透明細胞腎癌。癌症可以是原發性癌症，但是更可能在包括轉移性疾病（例如淋巴或其他器官受累）的癌症分期中發展。可以根據所揭露的治療方法、藥物和所揭露之用途來治療的癌症包括特徵在於被測試的組織樣品中PD-L1和PD-L2之一或兩者的表現升高的那些癌症。

「CBR」或「臨床受益率」係指CR + PR + 持久性SD。

「化學治療劑」係可用於治療癌症的化合物。可與本文所述之治療組合及其方法和用途組合使用的化學治療劑類別包括但不限於：烷化劑、抗代謝物、激酶抑制劑、紡錘體毒性植物生物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓撲異構酶抑制劑、光敏劑、抗雌激素和選擇性雌激素受體調節劑（SERM）、抗孕激素、雌激素受體下調劑（ERDs）、雌激素受體拮抗劑、黃體化激素釋放激素促效劑、抗雄激素、芳香酶抑制劑、EGFR（表皮生長因子受體）抑制劑、VEGF（血管內皮生長因子）抑制劑、VEGFR（血管內皮生長因子受體）抑制劑和抑制與異常細胞增殖或腫瘤生長有關的基因表現的反義寡核苷酸。可用於本文揭露的治療方法的化學治療劑包括細胞生長抑制劑和/或細胞毒性劑。

「Chothia」在本文中是指在Al-Lazikani等人,JMB 273: 927-948 (1997)中描述的抗體編號系統。

在整個說明書和申請專利範圍中以包括性含義使用「包含（comprising）」或變型，例如「包含（comprise）」、「包含（comprises）」或「包含（comprised of）」，該包括性含義即指定所闡述特徵的存在，但不排除其他特徵的存在或添加，該其他特徵的存在或添加可能實質性增強揭露的治療方法、藥物和揭露用途中任何的操作或效用，除非上下文中由於表現語言或必要的暗示另有要求。

「保守修飾的變體」或「保守取代」係指蛋白質中的胺基酸被具有相似特徵（例如，電荷、側鏈大小、疏水性/親水性、骨架構象和剛度等）的其他胺基酸取代，使得該改變可以經常進行而不改變蛋白質的生物學活性或其他期望特性，例如抗原親和力和/或特異性。熟悉該項技術者認識到，通常，多肽的非必需區域中的單個胺基酸取代基本上不會改變生物學活性（參見，例如，Watson等人, (1987)Molecular Biology of the Gene [ 基因分子生物學 ] , 本傑明/卡明斯出版公司（The Benjamin/Cummings Pub. Co.）, 第224頁（第4版））。另外，結構或功能上相似的胺基酸的取代不太可能破壞生物活性。示例性的保守取代在下表1中列出。 [表 1 ]. 示例性的保守胺基酸取代

原始殘基	保守取代
Ala (A)	Gly；Ser
Arg (R)	Lys；His
Asn (N)	Gln；His
Asp (D)	Glu；Asn
Cys (C)	Ser；Ala
Gln (Q)	Asn
Glu (E)	Asp；Gln
Gly (G)	Ala
His (H)	Asn；Gln
Ile (I)	Leu；Val
Leu (L)	Ile；Val
Lys (K)	Arg；His
Met (M)	Leu；Ile；Tyr
Phe (F)	Tyr；Met；Leu
Pro (P)	Ala
Ser (S)	Thr
Thr (T)	Ser
Trp (W)	Tyr；Phe
Tyr (Y)	Trp；Phe
Val (V)	Ile；Leu

貫穿說明書和申請專利範圍所使用的「基本上由……組成（consists essentially of）」和諸如「基本上由……組成（consist essentially of）」或「基本上由……組成（consisting essentially of）」之類的變型表示包括任何列舉的要素或要素組，以及視需要包括具有與所列舉的要素相似或不同的性質的其他要素，其實質上不改變指定劑量方案、方法或組成物的基本或新穎性質。作為非限制性實例，基本上由所列舉的胺基酸序列組成的PD-1拮抗劑也可以包括一個或多個胺基酸，包括一個或多個胺基酸殘基的取代，其實質上不影響結合化合物的特性。

「DCR」或「疾病控制率」係指CR + PR + SD。

「診斷性抗PD-L單株抗體」係指與某些哺乳動物細胞表面表現的指定PD-L（PD-L1或PDL2）的成熟形式特異性結合的mAb。成熟的PD-L缺乏分泌前導序列，也稱為前導肽。術語「PD-L」和「成熟PD-L」在本文中可互換使用，並且將被理解為表示相同分子，除非另外指出或從上下文容易看出。

如本文所用，診斷性抗人PD-L1 mAb或抗hPD-L1 mAb係指與成熟人PD-L1特異性結合的單株抗體。成熟人PD-L1分子由以下序列的胺基酸19-290組成：

(SEQ ID NO: 25)。

用作IHC檢測FFPE腫瘤組織切片中PD-L1表現的診斷性mAb的診斷性抗人PD-L1 mAb的具體實例係抗體20C3和抗體22C3，它們在2013年12月18日提交的國際申請PCT/US 13/075932中進行了描述，該申請於2014年6月26日發佈為WO 2014/100079。已報導的可用於IHC檢測FFPE組織切片中PD-L1表現的另一種抗人PD-L1 mAb（Chen, B.J.等人,Clin. Cancer Res. [臨床癌症研究] 19: 3462-3473 (2013)）係兔抗人PD-L1 mAb，可從義翹神州生物有限公司（Sino Biological, Inc.）（北京，中國；目錄號10084-R015）公共獲得。

「DSDR」或「持久穩定疾病率」係指SD ≥ 23週。

本文所用的術語「框架區」或「FR」係指不包括CDR區的免疫球蛋白可變區。

「同源性」係指兩個多肽序列在最佳對齊時的序列相似性。當兩個比較序列的位置被相同的胺基酸單體亞基佔據時，例如，如果兩個不同的抗體的輕鏈CDR中的位置被丙胺酸佔據，則兩個抗體在該位置處係同源的。同源性百分比係兩個序列共有的同源位置數量除以所比較的位置總數量 × 100。例如，如果當兩個序列最佳對齊時，兩個序列中10個位置中的8個係匹配或同源的，那麼兩個序列係80%同源的。通常，當兩個序列對齊時進行比較以給出最大同源性百分比。例如，可以藉由基本局部比對搜索工具（BLAST®）演算法執行比較，該演算法係美國國立醫學圖書館（National Library of Medicine）的註冊商標，其中選擇演算法的參數以在對應參考序列的整個長度上在對應序列之間提供最大匹配。

以下代表性參考文獻涉及經常用於序列分析的BLAST®演算法：BLAST演算法：Altschul, S.F.等人, (1990)J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌]215: 403-410；Gish, W.等人, (1993)Nature Genet .[自然遺傳學]3: 266-272；Madden, T.L.等人, (1996)Meth. Enzymol .[酶學方法]266: 131-141；Altschul, S.F.等人, (1997)Nucleic Acids Res .[核酸研究] 25:3389-3402；Zhang, J.等人, (1997)Genome Res .[基因組研究] 7: 649-656；Wootton, J.C.等人, (1993)Comput. Chem. [計算化學] 17: 149-163；Hancock, J.M. 等人, (1994)Comput. Appl. Biosci .[計算與應用生物科學] 10: 67-70；對齊計分系統: Dayhoff, M.O., 等人,「A model of evolutionary change in proteins.」 in Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白質序列和結構圖集中的「蛋白質進化變化的模型」], (1978)卷5, 增刊3. M.O. Dayhoff (編輯), 第345-352頁, Natl. Biomed. Res. Found.[國家生物醫學研究基金],華盛頓特區（Washington, DC）；Schwartz, R.M., 等人, 「Matrices for detecting distant relationships.」 in Atlas of Protein Sequence and Structure[蛋白質序列和結構圖集中的「用於檢測遠距離關係的矩陣」], (1978)卷5, 增刊3.」M.O. Dayhoff (編輯), 第353-358頁, Natl. Biomed. Res. Found.[國家生物醫學研究基金], 華盛頓特區（Washington, DC）；Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol .[生物分子雜誌] 219: 555-565；States, D.J., 等人, (1991)Methods [方法]  3: 66-70；Henikoff, S., 等人, (1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國科學院院刊] 89: 10915-10919；Altschul, S.F., 等人, (1993)J. Mol. Evol .[分子進化雜誌]36: 290-300；對齊統計: Karlin, S., 等人, (1990)Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國科學院院刊] 87: 2264-2268；Karlin, S., 等人, (1993)Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國科學院院報院刊]  90: 5873-5877；Dembo, A., 等人, (1994)Ann. Prob.[ 概率年鑒 ] 22: 2022-2039；和Altschul, S.F.「Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments.」 In Theoretical and Computational Methods in Genome Research [基因組研究中的理論和計算方法中的「評估多個不同的局部比對的統計顯著性」] (S. Suhai, 編輯), (1997)第1-14頁, Plenum, 紐約。

當提及對用本文所述之組合療法治療有特異性抗腫瘤反應時，「無反應患者」係指該患者未表現出抗腫瘤反應。

在一些情況下，「ORR」或「客觀反應率」係CR + PR，並且ORR_{（第 24 週）} 係在佇列中每位患者接受甲磺酸樂伐替尼與派姆單抗組合治療24週後使用irRECIST測量的CR和PR。

「患者」或「受試者」或「個體」係指需要治療或正在參加臨床試驗、流行病學研究或用作對照的任何單個受試者，包括人和哺乳動物獸醫患者，例如牛、馬、狗和貓。

PD-1 拮抗劑。 抗PD1拮抗劑包括以下。「PD-1拮抗劑」係指任何化合物或生物分子，該化合物或生物分子阻斷癌細胞上表現的PD-L1與免疫細胞（T細胞、B細胞或NKT細胞）上表現的PD-1的結合，較佳的是還阻斷在癌細胞上表現的PD-L2與免疫細胞表現的PD-1的結合。PD-1及其配位基的可替代名稱或同義詞包括：PD-1的PDCD1、PD1、CD279和SLEB2；PD-L1的PDCD1L1、PDL1、B7H1、B7-4、CD274和B7-H；和PD-L2的PDCD1L2、PDL2、B7-DC、Btdc和CD273。在治療人個體的該治療方法、藥物和揭露之用途中的任何中，該PD-1拮抗劑阻斷人PD-L1與人PD-1的結合，較佳的是阻斷人PD-L1和PD-L2與人PD-1的結合。人PD-1胺基酸序列可在NCBI基因座號：NP_005009中找到。人PD-L1和PD-L2胺基酸序列可分別在NCBI基因座號：NP_054862和NP_079515中找到。PD-1拮抗劑不是抗PD-L1單株抗體阿特珠單抗。

可用於該治療方法、藥物和揭露用途中的任何中的PD-1拮抗劑包括單株抗體（mAb）或其抗原結合片段，其特異性結合PD-1或PD-L1，並較佳的是特異性結合人PD-1或人PD-L1。mAb可以是人抗體、人源化抗體或嵌合抗體，並且可以包括人恒定區。該人恒定區選自由IgG1、IgG2、IgG3和IgG4恒定區組成之群組，較佳的是，人恒定區係IgG1或IgG4恒定區。在一些情況下，該抗原結合片段選自由Fab、Fab’-SH、F(ab’)₂ 、scFv和Fv片段組成之群組。

任何與PD-1多肽、PD-1多肽10片段、PD-1肽或PD-1表位結合並阻斷PD-1及其配位基PD-L1或PD-L2之間的相互作用的單株抗體都可以使用。在一些實施方式中，該抗人PD-1單株抗體結合PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位並阻斷PD-1和PD-L1之間的相互作用。在其他實施方式中，該抗人PD-1單株抗體結合PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位並阻斷PD-1和PD-L2之間的相互作用。在其他實施方式中，該抗人PD-1單株抗體結合PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位並阻斷PD-1和PD-L1之間以及PD-1和PD-L2之間的相互作用。

任何與PD-L1多肽、PD-L1 20多肽片段、PD-L1肽或PD-L1表位結合並阻斷PD-L1和PD-1之間的相互作用的單株抗體都可以使用。

在某些實施方式中，抗人PD-1單株抗體選自由以下組成之群組：派姆單抗、納武單抗、西米普利單抗、吡非珠單抗（美國專利案號7,332,582）、AMP-514（醫藥免疫公司（MedImmune LLC），蓋瑟斯堡（Gaithersburg），馬里蘭州（MD））、PDR001（美國專利案號25 9,683,048）、BGB-A317（美國專利案號8,735,553）和MGA012（宏基因公司（MacroGenics），羅克維爾（Rockville），馬里蘭州）。

在一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係派姆單抗。在另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係納武單抗。在另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係西米普利單抗。在又另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係吡非珠單抗。在一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係AMP-514。在另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係PDR001。在又另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係BGB-A317。在仍另一個實施方式中，抗人PD-1單株抗體係MGA012。

結合人PD-1並且可用於該治療方法、藥物和揭露用途中的mAb的實例描述於美國專利案號7488802、7521051、8008449、8354509、和8168757；國際專利公開WO 2004/004771、WO 2004/072286和WO 2004/056875中以及美國公開案號2011/0271358中。在該治療方法、藥物和揭露用途中可用作PD-1拮抗劑的特異性抗人PD-1 mAb包括：派姆單抗（也稱為MK-3475）（一種人源化IgG4 mAb，其結構在WHO Drug Information [WHO藥物資訊], 第27卷, 第2號, 第161-162頁(2013)中描述，並且其包含圖6中所示的重鏈和輕鏈胺基酸序列），納武單抗（BMS-936558）（一種人IgG4 mAb，其結構在WHO Drug Information [WHO藥物資訊], 第27卷, 第1號, 第68-69頁(2013)中描述，並且其包含圖7中所示的重鏈和輕鏈胺基酸序列），吡非珠單抗（一種人源化單株抗體），AMP-224和AMP-514；人源化抗體h409A11、h409A16和h409A17（在WO 2008/156712中進行了描述）和AMP-514（由醫藥免疫公司開發）。

結合人PD-L1並且可用於該治療方法、藥物和揭露用途中的mAb的實例描述於WO 2013/019906、WO 2010/077634 A1和美國專利案號8383796中。在該治療方法、藥物和揭露之用途中用作PD-1拮抗劑的特異性抗人PD-L1 mAb包括BMS-936559、西米普利單抗、MEDI4736、MSB0010718C和包含WO 2013/019906的重鏈和輕鏈可變區（分別為SEQ ID NO: 24和SEQ ID NO: 21）的抗體。

可用於該治療方法、藥物和揭露用途中的任何中的其他PD-1拮抗劑包括特異性結合PD-1或PD-L1，並較佳的是特異性結合人PD-1或人PD-L1的免疫黏附素，例如，融合蛋白，其含有與恒定區如免疫球蛋白分子的Fc區融合的PD-L1或PD-L2的細胞外或PD-1結合部分。特異性結合PD-1的免疫黏附素分子的實例描述於WO 2010/027827和WO 2011/066342中。在本文所述之治療方法、藥物和用途中用作PD-1拮抗劑的特定融合蛋白包括AMP-224（也稱為B7-DCIg），其係PD-L2-FC融合蛋白並與人PD-1結合。

該治療方法、藥物和揭露用途提供了PD-1拮抗劑為單株抗體或其抗原結合片段，該單株抗體或其抗原結合片段包括：(a) 輕鏈CDR SEQ ID NO: 1、2和3和重鏈CDR SEQ ID NO: 4、5和6；或 (b) 輕鏈CDR SEQ ID NO: 7、8和9和重鏈CDR SEQ ID NO: 10、11和12。

該治療方法、藥物和揭露用途提供PD-1拮抗劑為單株抗體或其抗原結合片段，該單株抗體或其抗原結合片段特異性結合人PD-1並包含 (a) 包含SEQ ID NO: 13或其變體的重鏈可變區，和 (b) 輕鏈可變區，其包含選自由SEQ ID NO: 15或其變體、SEQ ID NO: 16或其變體、和SEQ ID NO: 17或其變體組成之群組的胺基酸序列。重鏈可變區序列的變體與參考序列相同，除了在框架區（即，CDR的外部）具有多達17個保守胺基酸取代，並且在框架區較佳的是具有少於十、九、八、七、六個或五個保守胺基酸取代。輕鏈可變區序列的變體與參考序列相同，除了在框架區（即，CDR的外部）具有多達五個保守胺基酸取代，並且在框架區較佳的是具有少於四個，三個或兩個保守胺基酸取代。

用於該治療方法、藥物和揭露用途中的任何中的PD-1拮抗劑可以是與人PD-1特異性結合的單株抗體並且包含 (a)包含SEQ ID NO: 14的重鏈和 (b)包含SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 20的輕鏈。

該治療方法、藥物和揭露用途提供了PD-1拮抗劑為單株抗體，該單株抗體與人PD-1特異性結合並且包含 (a) 包含SEQ ID NO: 14的重鏈和 (b) 包含SEQ ID NO: 18的輕鏈。

下表2提供了用於該治療方法、藥物和揭露用途中的示例性抗PD-1 mAb的胺基酸序列的列表，並且該序列顯示在圖1-5B中。

[表 2 ]. 示例性抗人 PD-1 單株抗體
A.包含WO 2008/156712中的hPD-1.08A的輕鏈和重鏈CDR
CDRL1	SEQ ID NO: 1
CDRL2	SEQ ID NO: 2
CDRL3	SEQ ID NO: 3
CDRH1	SEQ ID NO: 4
CDRH2	SEQ ID NO: 5
CDRH3	SEQ ID NO: 6
B.包含WO 2008/156712中的hPD-1.09A的輕鏈和重鏈CDR
CDRL1	SEQ ID NO: 7
CDRL2	SEQ ID NO: 8
CDRL3	SEQ ID NO: 9
CDRH1	SEQ ID NO: 10
CDRH2	SEQ ID NO: 11
CDRH3	SEQ ID NO: 12
C.包含WO 2008/156712中的成熟h109A重鏈可變區、和成熟K09A輕鏈可變區之一
重鏈VR	SEQ ID NO: 13
輕鏈VR	SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 17
D.包含WO 2008/156712中的成熟409重鏈、和成熟K09A輕鏈之一
重鏈	SEQ ID NO: 14
輕鏈	SEQ ID NO: 18或SEQ ID NO: 19或SEQ ID NO: 20

如本文所用，「PD-L1」或「PD-L2」表現係指細胞表面上指定PD-L蛋白、或細胞或組織內指定PD-L mRNA的任何可檢測水平的表現。可以在腫瘤組織切片的IHC測定中或藉由流動式細胞測量術用診斷性PD-L抗體檢測PD-L蛋白表現。可替代地，可以使用與期望PD-L靶（例如，PD-L1或PD-L2）特異性結合的結合劑（例如抗體片段、親和抗體等）藉由正電子發射斷層攝影（PET）成像來檢測腫瘤細胞的PD-L蛋白表現。檢測和測量PD-L mRNA表現的技術包括RT-PCR和即時定量RT-PCR。

已經描述了幾種在腫瘤組織切片的IHC測定中定量PD-L1蛋白表現之方法。參見, 例如, Thompson, R. H.等人,PNAS 101 [美國科學院院刊]101 (49): 17174-17179 (2004)；Thompson, R. H.等人,Cancer Res. [癌症研究] 66: 3381-3385 (2006)；Gadiot, J.等人,Cancer [癌症] 117: 2192-2201 (2011); Taube, J. M.等人,Sci Transl Med [科學轉化醫學]4: 127-37 (2012); 和Toplian, S. L.等人,New Eng. J Med. [新英格蘭醫學雜誌] 366(26): 2443-2454 (2012)。

一種方法採用PD-L1表現陽性或陰性的簡單二元終點，其中陽性結果根據表現出細胞表面膜染色的組織學證據的腫瘤細胞的百分比來定義。將腫瘤組織切片計數為PD-L1表現陽性係總腫瘤細胞的至少1%，較佳的是5%。

在另一種方法中，在腫瘤細胞以及主要包含淋巴細胞的浸潤性免疫細胞中，對腫瘤組織切片中的PD-L1表現進行定量。表現出膜染色的腫瘤細胞和浸潤性免疫細胞的百分比分別量化為 ＜ 5%、5%到9%，然後以10%的增量遞增到100%。對於腫瘤細胞，如果得分 ＜ 5%，則PD-L1表現計為陰性；如果得分 ≥ 5%，則PD-L1表現計為陽性。免疫浸潤液中的PD-L1表現被報導為一種半定量測量值，稱為調整後的炎症得分（AIS），其藉由將膜染色細胞的百分比乘以浸潤液強度來確定，其分等級為無（0）、輕度（得分為1，罕有淋巴細胞）、中度（得分為2，由淋巴組織細胞聚集體引起的腫瘤局部浸潤）或重度（得分為3，彌漫性浸潤）。如果AIS ≥ 5，則藉由免疫浸潤將腫瘤組織切片計為PD-L1表現陽性。

可以將PD-L mRNA的表現水平與定量RT-PCR中經常使用的一種或多種參考基因，例如泛素C的mRNA表現水平進行比較。

在一些情況下，基於與適當對照的PD-L1表現水平（蛋白質和/或mRNA）的比較，惡性細胞和/或腫瘤內浸潤性免疫細胞的PD-L1表現水平（蛋白質和/或mRNA）被確定為「過表現」或「升高」。例如，對照PD-L1蛋白或mRNA表現水平可以是在相同類型的非惡性細胞中或在來自匹配的正常組織（即非惡性組織）的切片中定量的水平。如果樣品中的PD-L1蛋白（和/或PD-L1 mRNA）比對照中的至少高10%、20%或30%，則較佳的是確定腫瘤樣品中的PD-L1表現升高。

「派姆單抗生物類似物」係指由默克公司（Merck & Co., Inc.）（以默沙東公司（Merck Sharp and Dohme（MSD）名義）以外的實體生產的生物產品，並已獲得任何國家/地區監管機構的批准，可作為派姆單抗生物類似物行銷。派姆單抗生物類似物可以包括派姆單抗變體或具有與派姆單抗相同的胺基酸序列的抗體作為原料藥。

如本文所用，「派姆單抗變體」係指包含重鏈和輕鏈序列的單株抗體，該重鏈和輕鏈序列與派姆單抗中的重鏈和輕鏈序列相同，不同之處在於，在輕鏈CDR外部具有三個、兩個或一個保守胺基酸取代和在重鏈CDR外部（例如，變體位置位於FR區和/或恒定區中）具有六個、五個、四個、三個、兩個或一個保守胺基酸取代。換句話說，派姆單抗和派姆單抗變體包含相同的CDR序列，但是由於在其全長輕鏈和重鏈序列中分別在不超過三個或六個其他位置處具有保守胺基酸取代而彼此不同。派姆單抗變體在以下特性方面與派姆單抗基本相同：與PD-1的結合親和力和阻斷PD-L1和PD-L2各自與PD-1結合的能力。

患者 / 癌症 / 反應定義 . 如本文所用，「RECIST 1.1反應標準」係指在Eisenhauer等人, E.A.等人,Eur. J. Cancer[ 歐洲癌症雜誌 ] 45: 228-247 (2009)中針對靶病變或非靶病變所列出的定義，根據測量反應的情況而定。

當提及對用本文所述之組合療法治療有特異性抗腫瘤反應時，「反應患者」係指該患者表現出抗腫瘤反應。

「持續反應」係指在停止用本文所述之治療劑或組合療法治療後的持續治療效果。在一些情況下，持續反應的持續時間至少與治療持續時間相同，或者比治療持續時間長至少1.5、2.0、2.5或3倍。

「組織切片」係指組織樣品的單個部分或片段，例如，從正常組織或腫瘤的樣品切下的組織薄片。

如本文所用，「治療（treat或treating）」癌症係指將PD-1拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽的組合療法施用給患有癌症或被診斷出患有癌症的受試者，以實現至少一種積極的治療效果，例如減少的癌細胞數量、減小的腫瘤大小、降低的癌細胞浸潤到周圍器官的速率或降低的腫瘤轉移或腫瘤生長速率。可以藉由多種方式來衡量癌症的積極治療效果（參見, W. A. Weber,J. Nucl. Med. [核醫學雜誌] 50:1S-10S (2009)）。例如，關於腫瘤生長抑制，根據NCI標準，T/C ≦ 42%係最小水平的抗腫瘤活性。T/C ＜ 10%被認為係高抗腫瘤活性水平，其中T/C（%）= 治療的中位腫瘤體積/對照的中位腫瘤體積 × 100。在一些情況下，使用RECIST 1.1標準或irRC（二維或一維）評估對本文所述組合療法的反應，並藉由樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽、和PD-1拮抗劑的組合實現的治療係PR、CR、OR、PFS、DFS和OS中的任何。PFS，也稱為「腫瘤進展時間」指的是在治療期間和治療後癌症不生長的時間長度，並且包括患者經歷CR或PR的時間量，以及患者經歷過SD的時間量。DFS係指在治療期間和治療後患者保持無病的時間長度。OS係指與原初或未治療的個體或患者相比預期壽命的延長。在一些情況下，對樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽、和PD-1拮抗劑的組合的反應係PR、CR、PFS、DFS、OR和OS中的任何，其均使用RECIST 1.1反應標準進行評估。有效地治療癌症患者的所揭露的組合的治療方案可以根據諸如患者的疾病狀態、年齡和體重以及該療法在受試者中引起抗癌反應的能力等因素而變化。治療方法、藥物和揭露用途可能無法有效地在每個受試者中實現積極治療效果，它們應在統計學上顯著數量的受試者中實現積極治療效果，如本領域已知的任何統計測試所確定的，例如學生t檢驗、chi² 檢驗、根據曼（Mann）和惠特尼（Whitney）進行的U檢驗、克魯斯卡爾-沃利斯（Kruskal-Wallis）檢驗（H檢驗）、喬卡契爾-特波斯特拉（Jonckheere-Terpstra）核對總和威爾科克森（Wilcoxon）檢驗。

術語「治療方案」、「給藥計畫」和「給藥方案」可互換使用，指以下的組合中的每種治療劑的施用劑量和施用時間：樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽、和PD-1拮抗劑。

當應用於診斷患有或懷疑患有癌症的受試者時，「腫瘤」係指任何大小的惡性或潛在惡性腫瘤或組織塊，包括原發性腫瘤和繼發性腫瘤。實性瘤係通常不包含囊腫或液體區域的異常生長或組織塊。不同類型的實性瘤因形成它們的細胞類型而命名。實性瘤的實例係肉瘤、上皮癌和淋巴瘤。

「腫瘤負荷」也稱為「腫瘤負載」，係指整個體內分佈的腫瘤物質的總量。腫瘤負荷係指整個體內癌細胞的總數或一個或多個腫瘤的總大小，包括淋巴結和骨髓。腫瘤負荷可以藉由本領域已知的多種方法來確定，例如藉由從受試者移除後例如使用卡尺或在體內使用成像技術（例如超音波、骨掃描、電腦斷層掃描（CT）或磁共振成像（MRI）掃描）測量一個或多個腫瘤的尺寸。

術語「腫瘤大小」係指腫瘤的總大小，其可以測量為腫瘤的長度和寬度。腫瘤大小可以藉由本領域已知的多種方法來確定，例如藉由從受試者移除後例如使用卡尺或在體內使用成像技術（例如骨掃描、超音波、CT或MRI掃描）測量一個或多個腫瘤的尺寸。

「一維irRC」指Nishino M、Giobbie-Hurder A、Gargano M、Suda M、Ramaiya NH、Hodi FS. 「Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensional measurements [開發用於免疫治療的腫瘤反應的通用語言：使用一維測量的免疫相關反應標準],」Clin. Cancer Res. [臨床癌症研究] 2013, 19(14): 3936-3943)中描述的一組標準。該等標準利用了每個病變的最長直徑（cm）。

「多RTK抑制劑」係指抑制至少以下每個RTK的受體酪胺酸激酶（RTK）活性的小分子化合物：(i) VEGFR2，和 (ii) 至少一種選自由FGFR1、2、3和4組成之群組的FGFR。示例性的多RTK抑制劑係樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽。

β-連環蛋白充當Wnt訊息傳遞的介質，與轉錄因子Tcf/Lef（T細胞因子/淋巴細胞增強因子）結合，促進Wnt訊息傳遞中涉及的各種基因（週期蛋白D1，c-Myc等）的表現，並控制細胞的增殖和分化（He等人, 1998Science [科學] 281: 1509-1512; Kolligs等人,Mol. Cell. Biol .[分子與細胞生物學] 19: 5696-5706, 1999; Crawford等人,Oncogene [癌基因] 18: 2883-2891, 1999; Shtutman等人,Proc. Natl. Acad. Sci. USA [美國科學院院刊], 11: 5522-5527, 1999; Tetsu和McCormick, 1999Nature [自然],398: 422-426）。

CBP（環AMP反應元件結合蛋白（CREB）結合蛋白）在CREB結合結構域中與β-連環蛋白直接相互作用，並促進Tcf/Lef的轉錄激活（Ken-Ichi Takemaru和Randall T. Moon, 2000, J. Cell. Biol .[細胞生物學雜誌] 149(2): 249-254）。

對CBP/β-連環蛋白抑制劑沒有特別限制，只要其抑制CBP與連環蛋白特別是β-連環蛋白之間的相互作用，並且如下實施方式係較佳的，其中抑制β-連環蛋白與CBP的結合，並且導致藉由β-連環蛋白複合物的基因表現被抑制。

CBP/β-連環蛋白的抑制可以藉由本身已知的結合測定法（放射結合測定法等）、報導子測定法、其他體外及體內測定法等進行測量。可以藉由用WO 2009/148192中所述之報導子測定法測量Wnt訊息傳遞的基因表現來確認抑制。

本發明之CBP/β-連環蛋白抑制劑沒有特別限定，只要其如上述定義。較佳的是，其係具有CBP/β-連環蛋白抑制活性的α-螺旋模擬化合物，並且其實例包括如WO 2003/031448、WO 2004/093828、WO 2005/116032、WO 2009/148192、WO 2010/044485、WO 2010/128685、WO 2012/115286等中所述之α-螺旋模擬化合物、其藥學上可接受的鹽等。示例性的CBP/β-連環蛋白抑制劑包括(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）。

本文揭露的組合療法中的PD-1拮抗劑、樂伐替尼和E7386中的每一種均可單獨施用或以藥物/配製物（在本文中也稱為藥物組成物）施用，該藥物/配製物包含治療劑和根據標準製藥規範的一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑和稀釋劑。每種治療劑可以藉由配製樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、抗PD-1抗體和/或E7386或其藥學上可接受的鹽來製備，可以同時或分開施用。此外，該配製物可以置於單一包裝中來提供所謂的套組配製物。

樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽可以藉由參考文獻17中所述之方法生產。藥學上可接受的鹽的實例包括無機酸的鹽、有機酸的鹽、無機鹼的鹽、有機鹼的鹽以及酸性或鹼性胺基酸的鹽。無機酸的鹽的較佳的實例包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、以及類似物。有機酸的鹽的較佳的實例包括乙酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、硬脂酸鹽、苯甲酸鹽、甲基磺酸鹽、乙基磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽以及類似物。無機鹼的鹽的較佳的實例包括鹼金屬鹽，例如鈉鹽和鉀鹽；鹼土金屬鹽（例如鈣鹽以及鎂鹽）；鋁鹽；和銨鹽。有機鹼的鹽的較佳的實例包括二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、甲基葡胺鹽、N,N-二苄基乙二胺鹽以及類似物。酸性胺基酸鹽的較佳的實例包括天冬胺酸鹽、麩胺酸鹽以及類似物。鹼性胺基酸鹽的較佳的實例包括精胺酸鹽、離胺酸鹽、鳥胺酸鹽以及類似物。更較佳的藥學上可接受的鹽係有機酸的鹽，並且特別較佳的藥學上可接受的鹽係甲磺酸的鹽。

在本文揭露的組合療法中的PD-1拮抗劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽可以同時（即，在同一藥物中）、併發（即，在以任何順序一個緊接一個地施用的分開的藥物中）或以任何順序依序施用。當組合療法中的治療劑處於不同劑型（一種藥劑係片劑或膠囊劑，另一種藥劑係無菌液體）和/或按照不同的給藥方案（例如至少每天施用一次的化學療法，以及較低頻率施用的生物療法，例如每週一次、每兩週一次、或每三週一次）施用時，依序施用可以是特別有用的。

在一些情況下，樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係在PD-1拮抗劑和/或CBP/β-連環蛋白抑制劑施用之前施用，而在其他情況下，多RTK抑制劑係在PD-1拮抗劑和/或E7386或其藥學上可接受的鹽施用之後施用。

在一些情況下，組合療法中的至少一種治療劑使用與當該藥劑用作治療相同癌症的單一療法時通常採用的相同劑量方案（劑量、治療頻率和治療時間）來施用。在其他情況下，與當藥劑用作單一療法時相比，患者在組合療法中接受的治療劑中的至少一種的總量更低，例如，更小的劑量、更不頻繁的劑量和/或更短的治療持續時間。

本文揭露的組合療法中的每種小分子治療劑可以以固體配製物的形式（例如片劑、顆粒劑、細粒劑、粉劑或膠囊劑）或以液體、果凍、糖漿劑等的形式口服施用。本文揭露的組合療法中的每種小分子治療劑可以腸胃外施用，包括靜脈內、肌內、腹膜內、皮下、直腸、局部和透皮施用途徑。

本文揭露的組合療法可以在手術去除腫瘤之前或之後使用，並且可以在放射治療之前、期間或之後使用。

在一些情況下，將本文揭露的組合療法施用於先前未曾用生物治療劑或化學治療劑治療的患者，即未進行過治療的患者。在其他情況下，將組合療法施用於在用生物治療劑或化學治療劑的先前療法後未能實現持續反應（即，經歷過治療）的患者。

本文揭露的組合療法通常用於治療足夠大以藉由觸診或藉由本領域眾所周知的成像技術（例如磁共振成像（MRI）、超音波或電腦軸向斷層掃描（CAT）掃描）發現的腫瘤。

較佳的是，將本文揭露的組合療法施用於具有對PD-L1表現測試呈陽性的癌症的人患者。較佳的是，在從患者中去除的腫瘤樣品的FFPE或冷凍組織切片的IHC測定中，使用診斷性抗人PD-L1抗體或其抗原結合片段檢測PD-L1表現。通常，在開始用PD-1拮抗劑、E7386或其藥學上可接受的鹽和樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽開始治療之前，患者的醫師會要求進行診斷測試以確定從患者中去除的腫瘤組織樣品中的PD-L1表現，但是可以預想的是，醫師可以在治療開始後的任何時候，例如在完成治療週期之後，要求進行首次或隨後的診斷測試。

選擇用於本文揭露的組合療法的劑量方案（本文中也稱為施用方案）取決於幾個因素，包括實體的血清或組織周轉速率、症狀的水平、實體的免疫原性和被治療個體中的靶細胞、組織或器官的可及性。較佳的是，劑量方案在符合可接受的副作用水平情況下，使遞送到患者的每種治療劑的量最大化。因此，組合中每種生物治療劑和化學治療劑的劑量和給藥頻率部分取決於特定的治療劑、所治療癌症的嚴重程度和患者特徵。選擇抗體、細胞介素和小分子的適當劑量的指南可用。參見，例如，Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy [抗體療法], 生物科學出版有限公司（Bios Scientific Pub. Ltd）, 牛津郡（Oxfordshire）, 英國；Kresina (編輯）(1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis [單株抗體，細胞介素和關節炎], 馬塞爾·德克（Marcel Dekker）, 紐約, 紐約州）；Bach (編輯）(1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases [自體免疫性疾病中的單株抗體和肽治療], 馬塞爾·德克（Marcel Dekker）, 紐約, 紐約州; Baert等人 (2003)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 348: 601-608; Milgrom等人 (1999)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 341: 1966-1973; Slamon等人 (2001)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 344: 783-792; Beniaminovitz 等人 (2000)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 342: 613-619; Ghosh 等人 (2003)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 348: 24-32; Lipsky 等人 (2000)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 343: 1594-1602; Physicians’ Desk Reference[醫師桌上參考] 2003（Physicians’ Desk Reference[醫師桌上參考], 第57版）; 醫學經濟學公司（Medical Economics Company）; ISBN: 1563634457; 第57版（2002年11月）。合適的劑量方案的確定可以由臨床醫生例如使用本領域已知或懷疑會影響治療或預計會影響治療的參數或因素進行，並且將取決於例如患者的臨床病史（例如，先前的治療）、要治療的癌症的類型和階段以及對組合療法中的一種或多種治療劑的反應的生物標誌物。

本文揭露的組合療法中的生物治療劑（即PD-1拮抗劑，樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽）可以藉由連續輸注或以例如每天、隔天、每週三次或每週一次、兩週、三週、每月、每兩個月等的間隔按劑量施用。每週總劑量通常為至少0.05 μg/kg、0.2 μg/kg、0.5 μg/kg、1 μg/kg、10 μg/kg、100 μg/kg、0.2 mg/kg、1.0 mg/kg、2.0 mg/kg、10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg體重或更多。參見，例如， Yang 等人 (2003)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌]349: 427-434；Herold 等人 (2002)New Engl. J. Med. [新英格蘭醫學雜誌] 346: 1692-1698；Liu 等人 (1999)J. Neurol. Neurosurg. Psych. [英國精神病學雜誌] 67: 451-456；Portielji 等人 (2003)Cancer Immunol. Immunother. [癌症免疫學免疫療法] 52: 133-144。西米普利單抗-rwlc（LIBTAYO®）係另一種PD-1拮抗劑。它可以靜脈內施用，其中經30分鐘施用350 mg，每3週一次（Q3W）。

可以對樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽的劑量進行適當地選擇，這取決於症狀的程度，患者的年齡、性別以及體重，施用敏感性、途徑、時間以及施用間隔的差異，藥物配製物的類型，和/或類似物。通常，在對於成人（60 kg體重）口服施用的情況下，該劑量係每天1 mg至600 mg，較佳的是5 mg至400 mg，更較佳的是5 mg至200 mg。該劑量可以一次施用，也可以分成每天提供2至3次的較小劑量。

在組合療法中採用抗人PD-1 mAb作為PD-1拮抗劑的某些情況下，給藥方案將包括在整個治療過程中，以約14天（±2天）或約21天（±2天）或約30天（±2天）的間隔，以1、2、3、5或10 mg/kg的劑量施用抗人PD-1 mAb。可以以與上述相同的方式適當地選擇抗PD-1抗體的劑量。通常，在對成人（60 kg體重）靜脈內施用的情況下，劑量可以是2 mg/kg，以6週為週期每3週一次的方案（共2個劑量）。可以以適當的間隔將抗體施用1至10個週期。

在組合療法中採用抗人PD-1 mAb作為PD-1拮抗劑的其他情況下，給藥方案將包括以約0.005 mg/kg至約10 mg/kg的劑量（其中病人本身劑量增加）施用抗人PD-1 mAb。劑量之間的間隔可以逐漸縮短，例如，在第一劑量和第二劑量之間約30天（±2天），在第二劑量和第三劑量之間約14天（±2天）。在某些實施方式中，對於第二劑量之後的劑量，給藥間隔將是約14天（±2天）。

在特定情況下，可以給受試者靜脈內（IV）輸注包含本文所述之任何PD-1拮抗劑的藥物。

在一些情況下，組合療法中的PD-1拮抗劑較佳的是為納武單抗，其以選自以下群組的劑量靜脈內施用，該群組由以下組成：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、和10 mg Q3W。PD-1拮抗劑也可以是以350 mg Q3W的劑量靜脈內施用的西米普利單抗-rwlc。

在一些情況下組合療法中的PD-1拮抗劑較佳的是為派姆單抗、派姆單抗變體或派姆單抗生物類似物，其在液體藥物中以選自以下群組的劑量施用，該群組由以下組成：1 mg/kg Q2W、2 mg/kg Q2W、3 mg/kg Q2W、5 mg/kg Q2W、10 mg Q2W、1 mg/kg Q3W、2 mg/kg Q3W、3 mg/kg Q3W、5 mg/kg Q3W、10 mg Q3W以及該等劑量中的任何一個的直接劑量（flat-dose）當量，即，例如200 mg Q3W和400 mg Q6W。在一些情況下，派姆單抗作為液體藥物提供，其在10 mM組胺酸緩衝液pH 5.5中包含25 mg/ml派姆單抗、7%（w/v）蔗糖、0.02%（w/v）聚山梨酯80。

在一些情況下，經25至40分鐘或約30分鐘的時間藉由IV輸注施用派姆單抗的選定劑量。

派姆單抗與樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽（例如，樂伐替尼甲磺酸鹽）和CBP/β-連環蛋白抑制劑（例如，E7386）組合使用的最佳劑量可以藉由該等試劑中的一個或兩個的劑量遞增或劑量遞減來確定。在一些情況下，組合療法包括21天的治療週期，其中以200 mg Q3W藉由IV（或400 mg Q6W藉由IV）施用派姆單抗，CBP/連環蛋白抑制劑，甲磺酸樂伐替尼以 (a) 每天口服24 mg、(b) 每天口服20 mg 或 (c) 每天口服14 mg施用，各自以樂伐替尼計。

可以首先用以下來治療患者：每天量的CBP/β-連環蛋白抑制劑，藉由IV 200 mg派姆單抗Q3W（或藉由IV 400 mg Q6W）和每天口服24 mg（以樂伐替尼計）甲磺酸樂伐替尼，直到觀察到至少一個DLT並且然後甲磺酸來伐替尼的劑量可以減少到每天20或14 mg（各自以樂伐替尼計），同時派姆單抗劑量可以繼續在200 mg派姆單抗Q3W（或藉由IV 400 mg Q6W）並且CBP/β-連環蛋白抑制劑可以以相同的每日劑量繼續服用或減少。

作為給藥方案的實例，可以在21天週期中，每天同一時間，在進食或沒有進食的情況下用水口服每天一次施用樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽。樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽可以4 mg和10 mg（各自以樂伐替尼計）膠囊提供。在每個週期的第1天（D1），可以在完成派姆單抗施用和/或E7386或其藥學上可接受的鹽施用後約1小時內施用樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽。派姆單抗可作為無菌、不含防腐劑的白色至灰白色凍乾粉劑提供在一次性使用的小瓶中。每個小瓶可以重構並稀釋用於靜脈內輸注。每2 mL重構溶液可包含約50 mg派姆單抗。在一些情況下，派姆單抗可作為無菌、不含防腐劑、澄清至微乳白色、無色至微黃色的溶液提供，其需要稀釋用於靜脈內輸注。每個小瓶在4 mL溶液中可包含100 mg派姆單抗。每1 mL溶液可包含25 mg派姆單抗。派姆單抗可以作為200 mg的劑量作為30分鐘靜脈內輸注施用，Q3W（例如，25分鐘至40分鐘）。

在製備口服固體配製物的情況下，可以將藥學上可接受的運載體以及根據需要的黏合劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、調味劑和/或類似物添加到主要成分中，該主要成分係由式 (I) 表示的化合物或其藥學上可接受的鹽、CBP/β-連環蛋白抑制劑和/或抗PD-1抗體，此後，以根據常規之方法製備片劑、顆粒劑、細粒劑、粉末劑、膠囊劑或類似物。運載體的實例包括乳糖、玉米澱粉、綿白糖、葡萄糖、山梨糖醇、結晶纖維素以及二氧化矽。黏合劑的實例包括聚乙烯醇、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯樹膠、羥丙基纖維素以及羥丙基甲基纖維素。潤滑劑的實例包括硬脂酸鎂、滑石以及矽石。著色劑的實例包括氧化鈦、三氧化二鐵、黃色三氧化二鐵、胭脂蟲紅、洋紅以及核黃素。調味劑的實例包括可可粉、抗壞血酸、酒石酸、薄荷油、冰片以及肉桂粉。該等片劑和顆粒可以如所要求地進行包衣。

在一些情況下，用組合療法治療患者至少24週，例如八個3週週期。在一些情況下，繼續進行組合療法治療直至患者表現出PD或CR的跡象。

在一些情況下，如果患者已經被診斷出患有腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌或頭頸鱗狀細胞癌，則選擇用本文揭露的組合療法治療患者。

用於癌症的「治療藥物」或「組合療法」包括免疫檢查點抑制劑（例如，抗PD-1抗體）、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽。可以對藥物進行配製，以使3種藥物中的每一種都分開並分別施用或以三種藥物中的兩種的組合施用，或藉由適合期望施用方式（例如口服、經鼻、黏膜、直腸、陰道、局部、靜脈內、腹膜內、皮內、皮下和肌內施用等）之方法一起施用。

劑量的確定，以及針對癌症的包含免疫檢查點抑制劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽的治療有效量的組合療法的施用時間完全在熟悉該項技術者的知識範圍內。例如，可以從細胞培養或其他體外測定中假定初始有效量。可以設定劑量以產生循環濃度或組織濃度，例如藉由細胞培養測定法和/或在動物模型中確定的IC₅₀ 濃度等。

施用方法的選擇取決於治療中的病症和治療藥物。免疫檢查點抑制劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽可以藉由各種方法進行施用。例如，可以藉由以下任何一種途徑將一種或多種組分施用於受試者：皮下、靜脈內、腹膜內、肌內和全身施用，並且在一些情況下，直接注射到特定器官或腫瘤等中。免疫檢查點抑制劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽可以藉由單一途徑或藉由幾個途徑同時或依序按本文所述施用。

E7386或其藥學上可接受的鹽可以每天一次、每天兩次、每天幾次或進一步每天多次施用，這取決於（除別的以外）治療適應症和處方醫師的判斷。

為達到治療效果所必需的免疫檢查點抑制劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽和E7386或其藥學上可接受的鹽的量可根據針對特定對象的常規程序憑經驗確定。通常，當出於治療目的而施用時，以藥理學有效劑量給予細胞。「藥理學有效量」或「藥理學有效劑量」係指足以產生期望的生理作用或能夠達到所需的結果（例如減輕或去除障礙或疾病等的一種或多種症狀或適應症）以治療特定的障礙或疾病狀態的量。

組合療法可以是免疫檢查點抑制劑、樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽、以及E7386或其藥學上可接受的鹽的組合，其可以進一步與其他癌症治療相結合，例如手術切除、放射療法、化學療法、免疫療法和輔助療法（例如，止痛藥、利尿藥、抗利尿藥、抗病毒藥、抗生素、營養補充劑、貧血治療、凝血治療、骨治療以及精神病理和心理治療）等。

根據本文所包含的教導，本文所揭露的該等和其他方面，包括下面列出的示例性具體治療方法、藥物和用途，將是顯而易見的。具體治療方法，藥物和用途

[1].    一種在人受試者中治療癌症之方法，該方法包括對個體施用組合療法，該組合療法包含： (i) 計劃性死亡1蛋白（PD-1）的拮抗劑； (ii) 樂伐替尼，其具有以下結構：

或其藥學上可接受的鹽；和 (iii) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386），其具有以下結構：

或其藥學上可接受的鹽， 其中該PD-1拮抗劑不是阿特珠單抗。

[2].    如[1]中所述之方法，其中該癌症係實性瘤。

[3].    如[1]中所述之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、乳腺癌、和非小細胞肺癌（NSCLC）。

[4].    如[1]中所述之方法，其中該癌症係RCC。

[5].    如[1]-[4]中任一項所述之方法，其中該PD-1拮抗劑係單株抗體或其抗原結合片段。

[6].    如[1]-[5]中任一項所述之方法，其中該PD-1拮抗劑係抗PD-1抗體。

[7].    如[1]-[6]中任一項所述之方法，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗或納武單抗。

[8].    如[1]-[7]中任一項所述之方法，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗。

[9].    如[1]-[8]中任一項所述之方法，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽每天施用；並且派姆單抗每三週施用一次。

[10].  如[9]中所述之方法，其中以每日24 mg、20 mg、18 mg、12 mg或8 mg的劑量施用樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；並且派姆單抗對於成人以200 mg或對於兒科以2 mg/kg（至多200 mg）的劑量每三週施用一次。

[11].  如[1]-[10]中任一項所述之方法，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。

[12].  一種用於治療癌症的藥物組成物，其包含(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽，其中E7386或其藥學上可接受的鹽與(a)樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；和 (b) 抗PD-1抗體組合施用。

[13].  一種用於治療癌症的藥物組成物，其包含抗PD-1抗體，其中該抗PD-1抗體與(a)樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；和 (b) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽組合施用。

[14].  一種用於治療癌症的藥物組成物，其包含樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽與 (a) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽；和 (b) 抗PD-1抗體組合施用。

[15].  如[12]-[14]中任一項所述之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。

[16].  如[12]-[15]中任一項所述之藥物組成物，其中該癌症係實性瘤。

[17].  如[12]-[15]中任一項所述之藥物組成物，其中該癌症選自由以下組成之群組：腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌。

[18].  如[17]所述之藥物組成物，其中該癌症係RCC。

[19].  如[12]-[18]中任一項所述之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係單株抗體或其抗原結合片段。

[20].  如[12]-[18]中任一項所述之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係抗PD-1抗體。

[21].  如[12]-[20]中任一項所述之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗或納武單抗。

[22].  如[12]-[21]中任一項所述之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗。

[23].  如[12]-[22]中任一項所述之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽每天施用；並且該PD-1拮抗劑係派姆單抗並且每三週施用一次。

[24].  如[23]所述之藥物組成物，其中以每日24 mg、20 mg、18 mg、12 mg或8 mg的劑量施用樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；並且派姆單抗對於成人以200 mg或對於兒科以2 mg/kg（至多200 mg）的劑量每三週施用一次。

[25].  如[12]-[24]中任一項所述之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。

[26].  如[12]-[25]中任一項所述之藥物組成物用於製造治療癌症的藥物之用途。

[27].  如[12]-[25]中任一項所述之藥物組成物，用於治療癌症。

一般方法 . 分子生物學中的標準方法描述於Sambrook, Fritsch和Maniatis（1982和1989第二版, 2001第三版）Molecular Cloning, A Laboratory Manual[分子選殖，實驗室手冊], 冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）, 冷泉港（Cold Spring Harbor）, 紐約州；Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning[分子選殖], 第三版, 冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）, 冷泉港（Cold Spring Harbor）, 紐約州；Wu (1993) Recombinant DNA[重組DNA], 第217卷, 學術出版社（Academic Press）, 聖地牙哥（San Diego）, 加利福尼亞州）。標準方法也出現在Ausbel, 等人 (2001) Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學的當前方案], 第1-4卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc）紐約, 紐約州，其描述了細菌細胞中的選殖和DNA誘變（第1卷），哺乳動物細胞和酵母中的選殖（第2卷），糖軛合物和蛋白質表現（第3卷）和生物資訊學（第4卷）。

描述了用於蛋白質純化之方法，包括免疫沈澱、層析、電泳、離心和結晶（Coligan, 等人 (2000) Current Protocols in Protein Science[蛋白質科學中的當前方案], 第1卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc.）, 紐約）。描述了化學分析、化學修飾、翻譯後修飾、融合蛋白的產生，蛋白的糖基化（參見,例如 , Coligan, 等人 (2000)Current Protocols in Protein Science[蛋白質科學中的當前方案], 第2卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc.）, 紐約；Ausubel, 等人 (2001) Current Protocols in Molecular Biology[分子生物學的當前方案], 第3卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc.）, 紐約州, 紐約州, 第16.0.5-16.22.17頁；西格瑪奧德里奇公司（Sigma-Aldrich, Co.）(2001) Products for Life Science Research[生命科學研究的產品], 聖路易斯（St. Louis）, 密蘇里州; 第45-89頁；安瑪西亞藥物科技公司（Amersham Pharmacia Biotech）(2001)BioDirectory [生物目錄], 皮斯卡塔維（Piscataway）, 新澤西州, 第384-391頁）。描述了多株和單株抗體的產生、純化和片段化（Coligan, 等人 (2001) Current Protcols in Immunology[免疫學當前方案], 第1卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc.）, 紐約；Harlow和Lane (1999) Using Antibodies[使用抗體], 冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）, 冷泉港（Cold Spring Harbor）, 紐約州；Harlow和Lane, 同上）。表徵配位基/受體相互作用的標準技術係可用的（參見, 例如, Coligan, 等人 (2001) Current Protocols in Immunology[免疫學當前方案], 第4卷, 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons, Inc.）, 紐約）。

可以製備單株的、多株的和人源化的抗體（參見, 例如, Sheperd和Dean (編輯）(2000)Monoclonal Antibodies [單株抗體], 牛津大學出版社（Oxford Univ. Press）, 紐約, 紐約州；Kontermann和Dubel (編輯) (2001)Antibody Engineering [抗體工程], 斯普林格出版社（Springer-Verlag）, 紐約；Harlow和Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual[ 抗體實驗室手冊 ] , 冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）, 冷泉港（Cold Spring Harbor）, 紐約州, 第139-243頁；Carpenter, 等人 (2000)J. Immunol .[免疫學雜誌] 165:6205；He, 等人 (1998)J. Immunol .[免疫學雜誌] 160:1029；Tang 等人 (1999) J. Biol. Chem.[生物化學雜誌]274:27371-27378；Baca 等人 (1997)J. Biol. Chem .[生物化學雜誌]272:10678-10684；Chothia等人 (1989)Nature [自然] 342:877-883；Foote 和Winter (1992)J. Mol. Biol. [分子生物學雜誌] 224:487-499; 美國專利案號6,329,511)。

抗體人源化的替代方法係使用在噬菌體上展示的人抗體文庫或轉基因小鼠中的人抗體文庫（Vaughan 等人 (1996)Nature Biotechnol.[自然生物技術] 14: 309-314；Barbas (1995)Nature Medicine [自然醫學] 1: 837-839; Mendez 等人 (1997)Nature Genetics [自然遺傳學] 15: 146-156; Hoogenboom 和Chames (2000)Immunol. Today [今日免疫學] 21: 371-377; Barbas 等人 (2001)Phage Display: A Laboratory Manual [噬菌體展示：實驗室手冊], 冷泉港實驗室出版社（Cold Spring Harbor Laboratory Press）, 冷泉港（Cold Spring Harbor）, 紐約；Kay 等人 (1996)Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual [肽和蛋白質的噬菌體展示：實驗室手冊], 學術出版社（Academic Press）, 聖地牙哥, 加利福尼亞；de Bruin 等人 (1999)Nature Biotechnol. [自然生物技術] 17: 397-399）。

抗原的純化對於產生抗體不是必需的。可以用帶有目的抗原的細胞免疫動物。然後可以從被免疫的動物中分離脾細胞，並且可以將脾細胞與骨髓瘤細胞系融合以產生雜交瘤（參見, 例如, Meyaard 等人 (1997)Immunity [免疫] 7: 283-290；Wright 等人 (2000)Immunity [免疫] 13: 233-242；Preston 等人, 同上; Kaithamana等人 (1999)J. Immunol. [免疫學雜誌]163:5157-5164）。

抗體可以例如軛合至小的藥物分子、酶、脂質體、聚乙二醇（PEG）。抗體可用於治療劑、診斷劑、套組或其他目的，並且包括例如與染料、放射性同位素、酶或金屬（例如膠體金）偶聯的抗體（參見, 例如, Le Doussal 等人 (1991)J. Immunol .[免疫學雜誌] 146: 169-175；Gibellini 等人 (1998)J. Immunol .[免疫學雜誌] 160:3891-3898；Hsing和Bishop (1999)J. Immunol .[免疫學雜誌] 162: 2804-2811；Everts 等人 (2002)J. Immunol .[免疫學雜誌] 168: 883-889）。

可以使用流動式細胞測量術之方法，包括螢光激活細胞分選（FACS），（參見, 例如, Owens, 等人 (1994)Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice [流動式細胞測量術原理用於臨床實驗室實踐], 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons）, 霍博肯（Hoboken）, 新澤西州；Givan (2001)Flow Cytometry [流動式細胞測量術], 第二版; 威利-力士出版社（Wiley-Liss）, 霍博肯, 新澤西州；Shapiro (2003)Practical Flow Cytometry [實用流動式細胞測量術], 約翰·威利父子公司（John Wiley and Sons）, 霍博肯, 新澤西州）。適用於修飾核酸（包括核酸引物和探針）、多肽和抗體（用作例如診斷試劑）的螢光試劑係可獲得的（Molecular Probesy (2003)Catalogue [分子探針（2003）目錄], 分子探針公司（Molecular Probes, Inc.）, 尤金（Eugene）, 俄勒岡州；Sigma-Aldrich (2003)Catalogue[ 西格瑪奧德里奇(2003)目錄] , 聖路易斯, 密蘇里州）。

描述了免疫系統組織學的標準方法（參見, 例如, Muller-Harmelink (編輯）(1986)Human Thymus: Histopathology and Pathology [人胸腺：組織病理學和病理學], 斯普林格出版社（Springer-Verlag）, 紐約, 紐約州；Hiatt, 等人. (2000)Color Atlas of Histology [組織學彩色圖譜], Lippincott, Williams, 和Wilkins, 費拉（Phila）, 賓夕法尼亞州；Louis, 等人 (2002)Basic Histology: Text and Atlas [基本組織學：文本和圖譜], 麥格勞希爾公司（McGraw-Hill）, 紐約, 紐約州）。

用於確定例如抗原片段、前導序列、蛋白質折疊、功能結構域、糖基化位點和序列比對的套裝軟體和數據庫係可獲得的（參見, 例如, GenBank, Vector NTI®套件（Informax公司, 貝塞斯達（Bethesda）,馬里蘭州）；GCG威斯康辛州包裝（Accelrys公司（Accelrys, Inc.）, 聖地牙哥, 加利福尼亞州）；DeCypher®（時間邏輯公司（TimeLogic Corp.）, 水晶灣（Crystal Bay）, 內華達州）；Menne, 等人 (2000)Bioinformatics[ 生物資訊學] 16: 741-742；Menne, 等人 (2000)Bioinformatics Applications Note [生物資訊學應用說明] 16: 741-742；Wren,等人 (2002)Comput. Methods Programs Biomed. [計算方法程式生物醫學] 68: 177-181；von Heijne (1983)Eur. J. Biochem. [歐洲生物化學雜誌] 133: 17-21；von Heijne (1986)Nucleic Acids Res. [核酸研究] 14: 4683-4690）。

表3提供了序列表中序列的簡要說明。 [表 3 ]

SEQ ID NO:	說明
1	hPD-1.08A輕鏈CDR1
2	hPD-1.08A輕鏈CDR2
3	hPD-1-08A輕鏈CDR3
4	hPD-1.08A重鏈CDR1
5	hPD-1.08A重鏈CDR2
6	hPD-1.08A重鏈CDR3
7	hPD-1.09A輕鏈CDR1
8	hPD-1.09A輕鏈CDR2
9	hPD-1.09A輕鏈CDR3
10	hPD-1.09A重鏈CDR1
11	hPD-1.09A重鏈CDR2
12	hPD-1.09A重鏈CDR3
13	109A-H重鏈可變區
14	409A-H重鏈全長
15	K09A-L-11輕鏈可變區
16	K09A-L-16輕鏈可變區
17	K09A-L-17輕鏈可變區
18	K09A-L-11輕鏈全長
19	K09A-L-16輕鏈全長
20	K09A-L-17輕鏈全長
21	派姆單抗重鏈
22	派姆單抗輕鏈
23	納武單抗重鏈
24	納武單抗輕鏈
25	人PD-L1

實例 實例 1 ： E7386 、樂伐替尼和抗 PD-1 抗體三聯組合的抗腫瘤作用

使用含有10%胎牛血清（FBS）和青黴素/鏈黴素（各100單位/mL）的伊戈爾（Eagle）最小基本培養基（E-MEM）培養小鼠腎細胞癌細胞系RAG（ATCC編號：CCL-142）。使用胰蛋白酶-EDTA從燒瓶中收集對數生長的細胞。離心細胞懸浮液以去除上清液。接下來，使用漢克斯平衡鹽溶液（HBSS）製備濃度為2.5 x 10⁷ 個細胞/mL的細胞懸浮液。將細胞懸浮液以0.1 mL的劑量皮下移植到7週齡小鼠（BALB/cAnNCrlCrlj，雌性，日本查理斯河實驗室公司（Charles River Laboratories Japan Inc.））的每隻身體的右側面。移植後八（8）天，使用電子數位卡尺（電子數顯卡尺（TM）；三豐公司（Mitutoyo Corporation））測量目的腫瘤的短徑和長徑。以下等式用於計算腫瘤體積TV和RTV。 EQ. 1: 腫瘤體積TV（mm³ ）= 長直徑（mm）× 短直徑（mm）× 短直徑（mm）/2。 EQ.2: 相對腫瘤體積RTV = 第n天TV/第1天TV。

基於施用第一天的腫瘤體積，進行分組以使腫瘤體積的平均值幾乎相同。使用3 mM HCl製備1 mg/ml的樂伐替尼溶液，並以0.2 mL/20 g小鼠體重的劑量口服施用28天，每天一次。腹膜內施用（劑量200 μg/小鼠）含有1.0 mg/mL抗小鼠PD-1抗體（殖株：RMP1-14，BioXCell，目錄號：BE0146）的0.2 mL施用樣品（其已經用PBS稀釋）每週兩次，共8次（第1天，第4天，第8天，第11天，第15天，第18天，第22天和第25天，並將分組的日期設置為第1天）。使用0.1 M HCl製備2.5 mg/ml的E7386溶液，並以0.2 mL/20 g小鼠體重的劑量口服施用28天，每天一次。對照組不進行任何治療。每組包括8隻小鼠用於進行實驗。每週兩次（第1天、第4天、第8天、第11天、第15天、第18天、第22天、第25天和第29天），分別確定以下各組的腫瘤體積（TV）：對照組、樂伐替尼施用組、抗小鼠PD-1抗體施用組、樂伐替尼 + 抗小鼠PD-1抗體施用組、E7386 + 樂伐替尼施用組和三聯組合組。藉由重複測量的鄧尼特多重比較，將藉由對數轉換腫瘤體積獲得的值用於進行統計分析。E7386係(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺。

在皮下（s.c.）RAG移植模型中，E7386、樂伐替尼和抗小鼠PD-1抗體的三聯組合顯示出比二聯組合（即樂伐替尼 + 抗PD-1抗體組合或樂伐替尼 + E7386組合）或每種藥物作為單一療法單獨施用顯著更高的抗腫瘤效果。例如，在第29天，三聯組合組的腫瘤體積比對照組和E7386組小200倍以上。與樂伐替尼組和抗PD-1抗體組相比，三聯組合的腫瘤體積分別減小了30倍和120倍以上。另外，與樂伐替尼 + 抗PD-1抗體組合組和E7386 + 樂伐替尼組合組相比，三聯組合組的腫瘤體積分別減小了9倍和17倍以上。

在CR率方面，三聯療法組（樂伐替尼、派姆單抗和E7386）觀察到的比率優於其他治療組（CR比率：對照組、樂伐替尼組、抗PD-1抗體組、E7386組、樂伐替尼 + 抗PD-1抗體組、E7386 + 樂伐替尼組和三聯組合組分別為8隻小鼠中的0、0、2、1、4、1和7隻）觀察到的比率。

腫瘤體積的每日變化示於表4。另外，在施用期間腫瘤體積的時程變化以及每組在第29天的相對腫瘤體積分別顯示在圖8和圖9中。 [表 4 ]

	第 1 天	第 4 天	第 8 天	第 11 天	第 15 天	第 18 天	第 22 天	第 25 天	第 29 天
對照組	62	93	152	297	419	618	822	1101	1160
樂伐替尼組	62	82	102	134	152	175	162	166	151
抗PD-1抗體組	62	86	124	165	222	274	347	414	482
E7386組	62	93	148	210	301	408	588	723	923
樂伐替尼 + 抗PD-1抗體二聯組合組	62	73	78	92	86	72	58	49	38
E7386 + 樂伐替尼二聯組合組	62	70	74	83	84	83	78	71	68
三聯組合組	62	70	61	55	31	21	12	7	4

實例 2 ： E7386 、樂伐替尼和抗 PD-1 抗體三聯組合的抗腫瘤作用

各種培養基用於培養小鼠細胞系（參見圖10A-10C，A列）。使用胰蛋白酶-EDTA從燒瓶中收集對數生長的細胞。離心細胞懸浮液以去除上清液。接下來，使用漢克斯平衡鹽溶液（HBSS）來製備具有一定細胞濃度的細胞懸浮液（參見圖10A-10C，B列）。將細胞懸浮液以0.1 mL的劑量皮下移植到7週齡的免疫感受態小鼠的每隻身體的右側面（參見圖10A-10C，C列）。

移植後幾天（參見圖10A-10C，D欄），使用電子數位卡尺（電子數顯卡尺（TM）；三豐公司）測量動物中腫瘤的短徑和長徑。以下等式用於計算腫瘤體積TV和RTV。 EQ.1: 腫瘤體積TV（mm3）= 長直徑（mm）× 短直徑（mm）× 短直徑（mm）/2。 EQ.2: 相對腫瘤體積RTV = 第n天TV/第1天TV。

基於施用第一天的腫瘤體積，進行分組以使腫瘤體積的平均值幾乎相同。使用3 mM HCl製備1 mg/ml的樂伐替尼溶液，並以0.2 mL/20 g小鼠體重的劑量口服施用28天，每天一次。腹膜內施用（劑量200 μg/小鼠）含有1.0 mg/mL抗小鼠PD-1抗體（殖株：RMP1-14，BioXCell，目錄號：BE0146）的0.2 mL施用樣品（其已經用PBS稀釋）每週兩次，持續3或4週（參見圖10A-10C，E列）。使用0.1 M HCl製備2.5 mg/ml的E7386溶液，並以0.2 mL/20 g小鼠體重的劑量口服施用每天一次，持續3或4週（參見圖10A-10C，E列）。對照組不進行任何治療。每組包括8隻小鼠用於進行實驗。每週兩次，持續3或4週（參見圖10A-10C，E列），分別確定以下各組的腫瘤體積（TV）：對照組、樂伐替尼施用組、抗小鼠PD-1抗體施用組、樂伐替尼 + 抗小鼠PD-1抗體施用組、E7386 + 樂伐替尼施用組和三聯組合療法組。藉由重複測量的鄧尼特多重比較，將藉由對數轉換腫瘤體積獲得的值用於進行統計分析。E7386係(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺。

如圖11和圖12A-12G所示，E7386、樂伐替尼和抗小鼠PD-1抗體的三聯組合療法顯示出比二聯組合（即樂伐替尼 + 抗PD-1抗體組合或樂伐替尼 + E7386組合）或每種藥物作為單一療法單獨施用更高的抗腫瘤效果。

藉由以下公式計算時間t 處的相對腫瘤體積（RTV）： EQ.3: RTV = TV _t /TV _初始 x 100%。

我們將最佳平均反應（BestAvgResponse）定義為t ≥ 8 d（EQ. 4）的（RTV-100%）的平均值的最小值。該指標將反應的速度、強度和持久性組合成為單一值。反應標準（mRECIST）從RECIST標準改編而成，並且定義如下（按此順序應用）：mCR，最佳平均反應 ＜ -95%；mPR，最佳平均反應 ＜ -50%；mSD，最佳平均反應 ＜ 30%；mPD，未以其他形式分類。參考文獻

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[圖1]顯示了示例性抗PD-1單株抗體的輕鏈和重鏈CDR之胺基酸序列（SEQ ID NO: 1-6）。

[圖2]顯示了另一種示例性抗PD-1單株抗體的輕鏈和重鏈CDR之胺基酸序列（SEQ ID NO: 7-12）。

[圖3]顯示了示例性抗PD-1單株抗體的重鏈可變區和全長重鏈之胺基酸序列（SEQ ID NO: 13和SEQ ID NO: 14）。

[圖4]顯示了示例性抗PD-1單株抗體的可替代的輕鏈可變區之胺基酸序列（SEQ ID NO: 15-17）。

[圖5A和5B]顯示了示例性抗PD-1單株抗體的可替代的輕鏈的胺基酸序列，其中圖5A顯示了K09A-L-11和K09A-L-16輕鏈的胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 18和19）並且圖5B顯示了K09A-L-17輕鏈之胺基酸序列（SEQ ID NO: 20）。

[圖6]顯示了派姆單抗的重鏈和輕鏈之胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 21和22）。

[圖7]顯示了納武單抗的重鏈和輕鏈之胺基酸序列（分別為SEQ ID NO: 23和24）。

[圖8]描繪了三聯藥物療法藥物組合中的每一種藥物的單一療法、二聯藥物療法（樂伐替尼 + E7386和派姆單抗 + 樂伐替尼）和三聯藥物療法（E7386 + 樂伐替尼 + 派姆單抗）之小鼠體內療法數據。描繪為平均值±SE。*：P ＜ 0.05，****：P ＜ 0.0001相比於三聯組合，藉由使用對數轉換值重複測量的鄧尼特（Dunnet）多重比較。樂伐替尼係甲磺酸樂伐替尼。

[圖9]顯示了第29天時如圖8所示的每組之相對腫瘤體積。數據顯示為平均值±SE。

[圖10A至10C]總結了實例2中描述的研究中採用的小鼠細胞系、培養基、動物品系和條件。

[圖11]描繪了在實例2中描述的研究中獲得的數據。LEN = 樂伐替尼。PD-1Ab和PD-1 = 抗PD-1抗體。LEN/PD-1 = 樂伐替尼和抗- = PD-1抗體。E78386 = (6S,9aS)-N-苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H-吡𠯤并[2,1-c][1,2,4]三𠯤-1(6H)-甲醯胺。E7386/LEN = E7386和樂伐替尼。E7386/LENPD-1 = E7386、樂伐替尼和抗PD-1抗體。

[圖12A]至[圖12G]示出了瀑布圖，該瀑布圖顯示了最佳平均反應（%），其如實例2中所述被定義，圖12A未描繪出治療數據。圖12B描繪了抗PD-1抗體（Ab）的數據。圖12C描繪了25 mg/kg的E7386的數據。圖12D描繪了10 mg/kg的樂伐替尼的數據。圖12E描繪了E7386和樂伐替尼的組合的數據。圖12F描繪了樂伐替尼和抗PD-1抗體的組合的數據。圖12G描繪了E7386、樂伐替尼和抗PD-1抗體的組合的數據。在每個圖中，針對數據指示了細胞系。水平黑色虛線表示SD和PR（分別為頂線和底線）SD = 穩定疾病。PR = 部分反應。

Claims (29)

1. 一種在人受試者中治療癌症之方法，該方法包括對個體施用組合療法，該組合療法包含： (i) 計劃性死亡1蛋白（PD-1）的拮抗劑； (ii) 樂伐替尼，其具有以下結構：

   

   或其藥學上可接受的鹽；和 (iii) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386），其具有以下結構：

   

   或其藥學上可接受的鹽， 其中該PD-1拮抗劑不是阿特珠單抗。
2. 如請求項1之方法，其中該癌症係實性瘤。
3. 如請求項1之方法，其中該癌症選自由以下組成之群組：腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌。
4. 如請求項1之方法，其中該癌症係RCC。
5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該PD-1拮抗劑係單株抗體或其抗原結合片段。
6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該PD-1拮抗劑係抗PD-1抗體。
7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗或納武單抗。
8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗。
9. 如請求項1至8中任一項之方法，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽每日施用；並且派姆單抗每三週施用一次。
10. 如請求項9之方法，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽以24 mg、20 mg、18 mg、12 mg或8 mg的日劑量施用；並且派姆單抗對於成人受試者以200 mg或對於兒科受試者以2 mg/kg（至多200 mg）的劑量每三週施用一次。
11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。
12. 一種用於治療癌症的藥物組成物，該藥物組成物包含(6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽，其中E7386或其藥學上可接受的鹽與 (a) 樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；和 (b) 抗PD-1抗體組合施用。
13. 一種用於治療癌症的藥物組成物，該藥物組成物包含抗PD-1抗體，其中該抗PD-1抗體與 (a) 樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽；和 (b) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽組合施用。
14. 一種用於治療癌症的藥物組成物，該藥物組成物包含樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽與 (a) (6S ,9aS )-N -苄基-8-({6-[3-(4-乙基哌𠯤-1-基)氮雜環丁烷-1-基]吡啶-2-基}甲基)-6-(2-氟-4-羥基苄基)-4,7-二側氧基-2-(丙-2-烯-1-基)六氫-2H -吡𠯤并[2,1-c ][1,2,4]三𠯤-1(6H )-甲醯胺（E7386）或其藥學上可接受的鹽；和 (b) 抗PD-1抗體組合施用。
15. 如請求項12至14中任一項之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。
16. 如請求項12至15中任一項之藥物組成物，其中該癌症係實性瘤。
17. 如請求項12至15中任一項之藥物組成物，其中該癌症選自由以下組成之群組：腎細胞癌（RCC）、大腸直腸癌（CRC）、肝細胞癌（HCC）、黑素瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、乳腺癌、非小細胞肺癌（NSCLC）、子宮內膜癌和頭頸鱗狀細胞癌。
18. 如請求項17之藥物組成物，其中該癌症係RCC。
19. 如請求項12至18中任一項之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係單株抗體或其抗原結合片段。
20. 如請求項12至18中任一項之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係抗PD-1抗體。
21. 如請求項12至20中任一項之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗或納武單抗。
22. 如請求項12至21中任一項之藥物組成物，其中該PD-1拮抗劑係派姆單抗。
23. 如請求項12至22中任一項之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽每日施用；並且該PD-1拮抗劑係派姆單抗並且每三週施用一次。
24. 如請求項23之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽以24 mg、20 mg、18 mg、12 mg或8 mg的日劑量施用；並且派姆單抗對於成人受試者以200 mg或對於兒科受試者以2 mg/kg（至多200 mg）的劑量每三週施用一次。
25. 如請求項12至24中任一項之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽係甲磺酸樂伐替尼；並且E7386或其藥學上可接受的鹽係E7386。
26. 一種如請求項12至25中任一項之藥物組成物之用途，其用於製備用於治療癌症的藥物。
27. 如請求項12至25中任一項之藥物組成物，用於治療癌症。
28. 如請求項1至27中任一項之方法、套組或用途。
29. 如請求項12至22中任一項之藥物組成物，其中樂伐替尼或其藥學上可接受的鹽每日施用；並且該PD-1拮抗劑係派姆單抗並且每六週施用一次。

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