KR20220092540A - 암을 치료하기 위한 pd-1 길항제, vegfr/fgfr/ret 티로신 키나제 억제제 및 cbp/베타-카테닌 억제제의 조합물 - Google Patents

Abstract

본 개시내용은 프로그램화된 사멸 1 수용체 (PD-1)의 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합 요법, 및 암의 치료를 위한 조합 요법의 용도를 기재한다.

Description

암을 치료하기 위한 PD-1 길항제, VEGFR/FGFR/RET 티로신 키나제 억제제 및 CBP/베타-카테닌 억제제의 조합물

서열 목록에 대한 참조

본 출원은 ASCII 포맷으로 전자 제출된 서열 목록을 함유하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 2020년 10월 27일에 생성된 상기 ASCII 사본은 213597_0005_00_ST25로 명명되고, 크기는 31,517 바이트이다.

관련 출원에 대한 참조

본 출원은 둘 다 2019년 10월 29일에 출원된 미국 가출원 번호 62/927,334 및 62/927,576에 대한 우선권 및 그의 이익을 주장하며, 그의 내용은 그 전문이 본원에 포함된다.

기술 분야

암의 치료에 유용한 조합 요법이 개시된다. 프로그램화된 사멸 1 (PD-1) 단백질의 길항제, 다중-수용체 티로신 키나제 (다중-RTK) 억제제인 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 CBP와 β-카테닌 사이의 상호작용을 억제하는 CBP/β-카테닌 억제제인 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합 요법이 개시된다. 항-PD-1 항체, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물을 함유하는 종양 치료제가 또한 개시된다.

PD-1은 면역 조절 및 말초 관용의 유지에서 중요한 역할을 하는 것으로서 인지된다. PD-1은 나이브 T-, B- 및 자연 킬러 T (NKT)- 세포 상에서 중간 정도로 발현되고, 림프구, 단핵구 및 골수 세포 상에서의 T/B-세포 수용체 신호전달에 의해 상향조절된다 (1).

PD-1에 대한 2종의 공지된 리간드인 PD-L1 (B7-H1) 및 PD-L2 (B7-DC)는 다양한 조직에서 발생하는 인간 암에서 발현된다. 예를 들어 난소암, 신장암, 결장직장암, 췌장암, 간암 및 흑색종의 다수 샘플 세트에서, PD-L1 발현은 불량한 예후와 상관관계가 있고 후속 치료와 무관하게 전체 생존을 감소시킨 것으로 나타났다 (2-13). 유사하게, 종양 침윤 림프구 상에서의 PD-1 발현은 유방암 및 흑색종에서 기능장애성 T 세포를 표시하고 (14-15), 신암에서 불량한 예후와 상관관계가 있는 (16) 것으로 밝혀졌다. PD-L1 발현 종양 세포는 PD-1 발현 T 세포와 상호작용하여 T 세포 활성화 감쇠 및 면역 감시 회피함으로써, 종양에 대한 손상된 면역 반응에 기여하는 것으로 제안되었다. 따라서, PD-1 수용체 또는 PD-L1 리간드에 대해 지시된 항체는 그 사이의 결합을 억제하여, 종양 세포에 대한 면역 작용을 증가시킬 수 있다 (23).

PD-1과 그의 리간드 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 둘 다 사이의 상호작용을 억제하는 여러 모노클로날 항체가 FDA에 의해 사용 승인되었고, 추가의 것이 암을 치료하기 위해 임상 개발 중에 있다. 이러한 항체의 효능은 다른 승인된 또는 실험적 암 요법, 예를 들어 방사선, 수술, 화학요법제, 표적화 요법, 종양에서 조절이상인 다른 신호전달 경로를 억제하는 작용제, 및 다른 면역 증진제와 조합되어 투여되는 경우에 증진될 수 있는 것으로 제안되었다.

펨브롤리주맙은 흑색종, 비소세포 폐암 (NSCLC), 소세포 폐암 (SCLC), 두경부 편평 세포암 (HNSCC), 전형적 호지킨 림프종 (cHL), 원발성 종격 대 B-세포 림프종 (PMBCL), 요로상피 암종, 고 미소위성체 불안정성 암, 위암, 식도암, 자궁경부암, 간세포성 암종 (HCC), 메르켈 세포 암종 (MCC), 신세포 암종 (RCC) 및 자궁내막 암종을 포함한 다수의 종양 유형의 치료를 위해 미국에서 단독요법으로서 또는 특정 다른 작용제와의 조합으로서 승인된 항-PD-1 항체이다.

티로신 키나제는 성장 인자 신호전달의 조절에 관여하며, 따라서 암 요법을 위한 중요한 표적이다. 렌바티닙은 종양 증식에 관여하는 다른 혈관신생촉진 및 종양원성 경로-관련 RTK (혈소판-유래 성장 인자 (PDGF) 수용체 PDGFRα; KIT; 및 RET 원종양유전자 (RET) 포함) 뿐만 아니라 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 수용체 (VEGFR1 (FLT1), VEGFR2 (KDR), 및 VEGFR3 (FLT4)), 및 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 수용체 FGFR1, 2, 3 및 4의 키나제 활성을 선택적으로 억제하는 경구 수용체 티로신 키나제 (RTK) 억제제이다. 특히, 렌바티닙은 X선 결정 구조 분석을 통해 확인된 바와 같이 VEGFR2에 대한 새로운 결합 방식 (유형 V)을 보유하고, 동역학적 분석에 따르면 키나제 활성의 신속하고 강력한 억제를 나타낸다.

렌바티닙의 화학 명칭은 하기 구조를 갖는 4-[3-클로로-4-(시클로프로필아미노카르보닐) 아미노페녹시]-7-메톡시-6-퀴놀린카르복스아미드이다:

렌바티닙 메실레이트는 적어도 (a) 국부 재발성 또는 전이성, 진행성, 방사성 아이오딘-불응성 분화 갑상선암을 갖는 환자의 치료에 대해, (b) 에베롤리무스와 조합하여, 1종의 선행 항혈관신생 요법 후 진행성 신세포 암종 (RCC)을 갖는 환자의 치료에 대해, (c) 절제불가능한 간세포성 암종 (HCC)을 갖는 환자의 1차 치료에 대해, 및 (d) 펨브롤리주맙과 조합하여, 고-미소위성체 불안정성 (MSI-H) 또는 미스매치 복구 결핍 (dMMR)이 아닌 진행성 자궁내막 암종을 가지며, 선행 전신 요법 후 질환 진행을 갖고 치유 수술 또는 방사선에 대한 후보가 아닌 환자의 치료에 대해 미국에서 승인되어 있다. 렌바티닙 메실레이트는 방광암, 흑색종, 두경부 편평 세포암, 요로상피 암종, 유방암, 위암, 난소암, 결장직장암 (CRC), 교모세포종 및 담도암을 포함하는 추가의 종양 유형을 위한 단독요법 또는 항-PD-1 항체와의 조합 요법으로서 사용하기 위한 임상 연구 하에 있다.

일부 암 세포는 Wnt 신호에 의해 활성화된 β-카테닌을 갖는 것으로 관찰되었다. Wnt 신호 경로의 억제제는 항암제로서 연구되었지만; 어떠한 것도 실제 용도로 사용되지 않았다.

항암제로서 임상 개발 중인 CBP/β-카테닌 억제제는 다른 메카니즘을 갖는 통상적인 Wnt 억제제보다 인간에서 덜 독성이다 (J. Clin. Oncol. 31, 2013 (suppl; abstr 2501)). 그의 메카니즘으로서, CBP (CREB 결합 단백질)와 β-카테닌 사이의 결합의 억제 후, CBP와 높은 유사성을 갖는 P300은 CBP 대신에 β-카테닌에 결합하고, 이러한 변화는 암 증식을 억제하고 분화를 유도하는 것으로 간주된다 (The EMBO Journal 2013, 32:1977-1989).

담관암의 주요 경로는 Wnt-β-카테닌 경로에 의한 종양 증식일 수 있으며; CBP/β-카테닌 억제제인 ICG-001이 종양 증식을 억제할 수 있는 것으로 밝혀졌다 (J. Clin. Invest. 2015 Mar. 2; 125(3): 1269-85. doi: 10.1172/JCI76452).

통상적인 Wnt 억제제는 Wnt 리간드의 생산을 억제하고, 수용체의 기능을 차단하고, β-카테닌의 분해를 촉진하는 등의 메카니즘에 기초하여 신호를 차단한다. 이러한 메카니즘 때문에, 독성 문제가 전임상 연구 및 임상 시험에서 발생하고, 개발은 대부분 중단되었다. Wnt 신호전달 경로는 고도로 보존된 경로이고, 장애와 연관되고, β-카테닌을 수반한다. Wnt/β-카테닌 경로는 정상 발생에 중요하다. 이론에 얽매이지는 않지만, CBP/β-카테닌 결합은 Wnt 신호전달을 감소시키는 것으로 여겨지는 반면, p300/β-카테닌은 Wnt 신호전달을 활성화시키는 것으로 여겨진다.

또한, β-카테닌은 T 세포의 분화를 억제함으로써 T 세포의 활성화를 억제하는 것으로도 공지되어 있다 (J. Immunol. 2011; 186:784-790). 따라서, CBP/β-카테닌 억제제는 T 세포의 분화 및 T 세포의 활성화를 촉진하는 것으로 간주된다.

화학 명칭이 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드인 E7386은 하기 구조를 갖는 잠재적 CBP/β-카테닌 억제제이다:

E7386은 단독으로 (미국 특허 10,259,817 및 9,174,998) 또는 항-PD-1 항체 (미국 특허 공개 2018/0185395) 또는 렌바티닙 (캐나다 특허 공개 3044658)과의 조합 요법에서 항종양 효과를 나타낼 수 있다.

일반적으로, 종양 치료제는 종종 개별적으로 투여되는 경우 모든 환자에 대해 효과적이지는 않다. 따라서, 이러한 치료제의 치유율을 이들을 조합함으로써 증가시키려는 시도가 이루어져 왔다 (22).

본원에 개시된 바와 같이, (i) 아테졸리주맙이 아닌 PD-1 길항제, (ii) 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 (iii) E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물의 투여는 예상외로 탁월한 항종양 효과를 달성한다.

개체에게 아테졸리주맙이 아닌 PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 조합 요법을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 암을 치료하는 방법이 제공된다. 일부 예에서, 개체는 인간이다. 암은 고형 종양, 예컨대 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암, 요로상피암 및 두경부의 편평 세포 암종일 수 있다. 암은 진행성 암 또는 전이성 암일 수 있다.

방법의 PD-1 길항제는 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 일부 예에서, 길항제는 항-PD-1 항체이다. 길항제는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙일 수 있다.

일부 경우에, 방법의 PD-1 길항제는 펨브롤리주맙, 세미플리맙 또는 니볼루맙, 바람직하게는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙의 투여는 일부 치료 요법에서 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 후에 일어날 수 있다. 일부 경우에, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 펨브롤리주맙 및/또는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염 후에 투여된다.

암으로 진단된 인간 개체에게 적어도 24주 동안 조합 요법을 투여하는 것을 포함하는, 암으로 진단된 인간 개체를 치료하는 방법이 제공된다. 조합 요법은 펨브롤리주맙, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 각각 렌바티닙으로서 24 mg, 20 mg, 18 mg, 12 mg 또는 8 mg의 1일 용량으로 투여될 수 있고, 펨브롤리주맙은 200 mg Q3W 또는 400 mg Q6W의 용량으로 투여될 수 있다. E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1일에 약 0.01 내지 1000 mg/개체의 체중 kg 범위의 용량으로 투여될 수 있다.

암을 치료하기 위해 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용하기 위한 PD-1 길항제를 포함하는 의약이 제공된다.

또한, 암을 치료하기 위해 PD-1 길항제 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용하기 위한 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 의약이 제공된다.

암을 치료하기 위해 PD-1 길항제 및 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용되는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 의약이 또한 제공된다.

또한, 암을 치료하기 위한 치료 조합물의 용도가 제공되며, 치료 조합물은 PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다.

또한, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되는 경우에 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 PD-1 길항제의 용도가 제공된다. 또한, PD-1 길항제 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되는 경우에 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 또한, PD-1 길항제 및 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 투여되는 경우에 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다.

또한, 개체에서 암을 치료하기 위한 의약의 제조에서의 PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도가 제공된다. 상기 의약은 키트를 포함할 수 있고, 키트는 또한 개체에서 암을 치료하기 위해 PD-1 길항제를 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용하는 것에 대한 지침서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다.

모든 치료 방법, 의약 및 용도에서, PD-1 길항제는 PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 억제하고, 바람직하게는 또한 PD-1에 대한 PD-L2의 결합을 억제한다. 상기 치료 방법, 의약 및 용도 중 일부에서, PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고, PD-1에 대한 PD-L1의 결합을 차단하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편이다. 예를 들어, PD-1 길항제는 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-PD-1 항체일 수 있고, 여기서 중쇄 및 경쇄는 도 6에 제시된 아미노산 서열 (서열식별번호: 21 및 서열식별번호: 22)을 포함한다. 또한, 항-PD-1 항체, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합 사용을 포함할 수 있는 종양을 치료하는 방법이 제공된다.

일부 조합 요법, 치료 방법, 의약 및 용도에서, 개체는 인간이고, 암은 고형 종양이고, 일부 경우에, 고형 종양은 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종, 또는 본원에 개시된 임의의 암이다.

또한, 암이 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 둘 다의 발현에 대해 검사하여 양성인 경우에, 조합 요법, 치료 방법, 의약 및 용도 중 어느 것이 사용될 수 있다. 또 다른 경우에, 암은 상승된 PD-L1 발현을 갖는다.

조합 요법, 치료 방법, 의약 및 용도 중 일부에서, 개체는 인간일 수 있고, 암은 인간 PD-L1에 대해 검사하여 양성이고, 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 방광암은 요로상피암이다.

도 1은 예시적인 항-PD-1 모노클로날 항체에 대한 경쇄 및 중쇄 CDR의 아미노산 서열 (서열식별번호: 1-6)을 나타낸다.
도 2는 또 다른 예시적인 항-PD-1 모노클로날 항체에 대한 경쇄 및 중쇄 CDR의 아미노산 서열 (서열식별번호: 7-12)을 나타낸다.
도 3은 예시적인 항-PD-1 모노클로날 항체에 대한 중쇄 가변 영역 및 전장 중쇄의 아미노산 서열 (서열식별번호: 13 및 서열식별번호: 14)을 나타낸다.
도 4는 예시적인 항-PD-1 모노클로날 항체에 대한 대안적 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열 (서열식별번호: 15-17)을 나타낸다.
도 5a 및 5b는 예시적인 항-PD-1 모노클로날 항체에 대한 대안적 경쇄의 아미노산 서열을 나타내며, 도 5a는 K09A-L-11 및 K09A-L-16 경쇄에 대한 아미노산 서열 (각각 서열식별번호: 18 및 19)을 나타내고, 도 5b는 K09A-L-17 경쇄에 대한 아미노산 서열 (서열식별번호: 20)을 나타낸다.
도 6은 펨브롤리주맙에 대한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 (각각 서열식별번호: 21 및 22)을 나타낸다.
도 7은 니볼루맙에 대한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 (각각 서열식별번호: 23 및 24)을 나타낸다.
도 8은 마우스에서 삼중 약물 요법 약물 조합 중 각각의 단독요법, 2-약물 요법 (렌바티닙 + E7386 및 펨브롤리주맙 + 렌바티닙) 및 삼중 약물 요법 (E7386 + 렌바티닙 + 펨브롤리주맙)의 생체내 요법에 대한 데이터를 도시한다. 평균±SE로서 도시된다. *: P< 0.05, ****: P<0.0001, 삼중 조합과 비교, 로그 변환된 값을 사용한 반복 측정된 던넷 다중 비교에 의한다. 렌바티닙은 렌바티닙 메실레이트이다.
도 9는 도 8에 제시된 바와 같은 각 군의 제29일의 상대 종양 부피를 나타낸다. 데이터는 평균±SE로 제시된다.
도 10a 내지 10c는 실시예 2에 기재된 연구에 사용된 마우스 세포주, 배양 배지, 동물 계통 및 조건을 요약한다.
도 11은 실시예 2에 기재된 연구에서 수득된 데이터를 도시한다. LEN= 렌바티닙. PD-1Ab 및 PD-1=항-PD-1 항체. LEN/PD-1 = 렌바티닙 및 항-PD-1 항체. E78386 =(6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드. E7386/LEN= E7386 및 렌바티닙. E7386/LENPD-1= E7386, 렌바티닙 및 항-PD-1 항체.
도 12a 내지 12g는 실시예 2에 기재된 바와 같이 정의된 최상의 평균 반응 (%)을 나타내는 폭포형 그래프를 나타낸다. 도 12a는 무처리 데이터를 도시한다. 도 12b는 항 PD-1 항체 (Ab)에 대한 데이터를 도시한다. 도 12c는 25 mg/kg의 E7386에 대한 데이터를 도시한다. 도 12d는 10 mg/kg의 렌바티닙에 대한 데이터를 도시한다. 도 12e는 E7386 및 렌바티닙의 조합에 대한 데이터를 도시한다. 도 12f는 렌바티닙 및 항-PD-1 항체의 조합에 대한 데이터를 도시한다. 도 12g는 E7386, 렌바티닙 및 항-PD-1 항체의 조합에 대한 데이터를 도시한다. 각 도면에서, 세포주는 데이터마다 지시된다. 수평 흑색 점선은 SD 및 PR (각각 상부 및 하부 선)을 나타낸다. SD = 안정 질환, PR= 부분 반응.

약어. 상세한 설명 및 실시예 전반에 걸쳐 하기 약어가 사용될 것이다:

BOR 최상의 전체 반응

BID 1일 2회 1회 용량

CBP CREB 결합 단백질

CBR 임상 이익률

CDR 상보성 결정 영역

CHO 차이니즈 햄스터 난소

CR 완전 반응

CRC 결장직장암

DCR 질환 제어율

DFS 무질환 생존

DLT 용량 제한 독성

DOR 반응 지속기간

DSDR 지속적인 안정 질환율

FFPE 포르말린-고정, 파라핀-포매

FR 프레임워크 영역

HCC 간세포 암종

IgG 이뮤노글로불린 G

IHC 면역조직화학 또는 면역조직화학의

irRC 면역 관련 반응 기준

IV 정맥내

MCC 메르켈 세포 암종

MTD 최대 허용 용량

NCBI 국립 생물 정보 센터

NCI 국립 암 연구소

NKT 자연 킬러 T 세포

NSCLC 비소세포 폐암

ORR 객관적 반응률

OS 전체 생존

PD 진행성 질환

PD-1 프로그램화된 세포 사멸 1

PD-L1 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 1, B7-H1로도 공지됨

PD-L2 프로그램화된 세포 사멸 1 리간드 2, B7-DC로도 공지됨

PFS 무진행 생존

PR 부분 반응

Q2W 2주마다 1회 용량

Q3W 3주마다 1회 용량

QD 1일에 1회 용량

RCC 신세포 암종

RECIST 고형 종양에서의 반응 평가 기준

RTK 수용체 티로신 키나제

SCLC 소세포 폐암

SD 안정 질환

VEGF 혈관 내피 성장 인자

VH 이뮤노글로불린 중쇄 가변 영역

VK 이뮤노글로불린 카파 경쇄 가변 영역

정의. 방법, 조성물 및 용도가 보다 용이하게 이해될 수 있도록, 특정 기술적 및 과학적 용어가 하기에 구체적으로 정의된다. 본원의 다른 곳에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 다른 기술 과학 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 갖는다.

수치적으로 정의된 파라미터 (예를 들어, PD-1 길항제, (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염 또는 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용량 또는 본원에 기재된 조합 요법을 사용한 치료 기간)를 수식하는데 사용되는 경우에 "약"은 파라미터가 그 파라미터에 대해 언급된 수치 값의 10% 미만 또는 초과만큼 달라질 수 있다는 것을 의미한다. 예를 들어, 약 20 mg의 용량은 18 mg 내지 22 mg으로 달라질 수 있다.

"바람직하게는"은 보다 바람직한 선택을 의미한다. 예를 들어, 수치적으로 정의된 파라미터를 수식하는데 사용되는 경우, 이는 바람직한 파라미터가 파라미터에 대한 또 다른 값에 비해 개선된 결과를 제공한다는 것을 나타낸다. "바람직하게"의 이러한 의미는 미국 밖에서만 적용된다. 미국의 경우, "바람직하게는"을 사용하는 임의의 문장은 상기 용어가 존재하지 않는 것처럼 해석되어야 한다.

첨부된 청구범위를 포함하여 본원에 사용된 단수 형태의 단어는 문맥이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 그의 상응하는 복수 지시대상을 포함한다.

동물, 인간, 실험 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체에 적용되는 "투여" 및 "치료"는 외인성 제약, 치료제, 진단제 또는 조성물과 동물, 인간, 대상체, 세포, 조직, 기관 또는 생물학적 유체의 접촉을 지칭한다. 세포의 치료는 세포에 대한 시약의 접촉, 뿐만 아니라 세포와 접촉하는 유체에 대한 시약의 접촉을 포괄한다. "투여" 및 "치료"는 또한, 예를 들어 시약, 진단, 결합 화합물 또는 또 다른 세포에 의한 세포의 시험관내 및 생체외 치료를 의미한다. 용어 "대상체"는 임의의 유기체, 바람직하게는 동물, 보다 바람직하게는 포유동물 (예를 들어, 래트, 마우스, 개, 고양이 및 토끼), 가장 바람직하게는 인간을 포함한다.

본원에 사용된 용어 "항체"는 목적하는 생물학적 또는 결합 활성을 나타내는 임의의 형태의 항체를 지칭한다. 따라서, 이는 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로 모노클로날 항체 (전장 모노클로날 항체 포함), 폴리클로날 항체, 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 인간화, 완전 인간 항체, 키메라 항체 및 낙타화 단일 도메인 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "모 항체"는 의도된 용도를 위한 항체의 변형, 예컨대 인간 치료제로서 사용하기 위한 항체의 인간화 전에 항원에 대한 면역계의 노출에 의해 수득된 항체이다.

일반적으로, 기본 항체 구조 단위는 사량체를 포함한다. 각각의 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각각의 쌍은 1개의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 1개의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 중쇄의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 정의할 수 있다. 전형적으로, 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로 분류된다. 또한, 인간 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로 분류되고, 항체의 이소형을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로 정의한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다.

각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 일반적으로, 무손상 항체는 2개의 결합 부위를 갖는다. 이기능적 또는 이중특이적 항체를 제외하고는, 2개의 결합 부위는 일반적으로 동일하다.

전형적으로, 중쇄 및 경쇄 둘 다의 가변 도메인은 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR) 내에 위치하는, 상보성 결정 영역 (CDR)으로도 칭하는 3개의 초가변 영역을 포함한다. CDR은 통상적으로 프레임워크 영역에 의해 정렬되어, 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 한다. 일반적으로, 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 N-말단에서 C-말단까지 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 대한 아미노산의 할당은 일반적으로 문헌 [Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5^th ed.; NIH Publ. No. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32: 1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem. 252: 6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol. 196: 901-917 or Chothia, et al., (1989) Nature 342: 878-883]의 정의에 따른다.

본원에 사용된 용어 "초가변 영역"은 항원-결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR" (즉, 경쇄 가변 도메인 내의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 및 중쇄 가변 도메인 내의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3)로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. 문헌 [Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.] (서열에 의해 항체의 CDR 영역을 정의함)을 참조하고; 또한 문헌 [Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917] (서열에 의해 항체의 CDR 영역을 정의함)을 참조한다. 본원에 사용된 용어 "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 CDR 잔기로서 본원에 정의된 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기를 지칭한다.

본원에 사용된 "가변 영역" 또는 "V 영역"은 상이한 항체들 사이에 서열이 가변적인 IgG 쇄의 절편을 의미한다. 이는 경쇄 내의 카바트 잔기 109 및 중쇄 내의 113까지 연장된다.

달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 "항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 항체의 항원 결합 단편, 즉 전장 항체에 의해 결합되는 항원에 대해 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체 단편, 예를 들어 1개 이상의 CDR 영역을 보유하는 단편을 지칭한다. 항체 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')₂, 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체; 단일쇄 항체 분자, 예를 들어, sc-Fv; 나노바디 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

명시된 표적 단백질에 "특이적으로 결합하는" 항체는 다른 단백질과 비교하여 그 표적에 대한 우선적 결합을 나타내는 항체이지만, 이러한 특이성이 절대적 결합 특이성을 요구하지는 않는다. 항체는 그의 결합이, 예를 들어 바람직하지 않은 결과, 예컨대 가양성을 생성하지 않으면서 샘플 내 표적 단백질의 존재를 결정하는 경우에 그의 의도된 표적에 대해 "특이적"인 것으로 간주된다. 항체 또는 그의 결합 단편은 비-표적 단백질과의 친화도보다 적어도 2배 더 큰, 바람직하게는 적어도 10배 더 큰, 보다 바람직하게는 적어도 20배 더 큰, 가장 바람직하게는 적어도 100배 더 큰 친화도로 표적 단백질에 결합할 것이다. 본원에 사용된 항체는 주어진 아미노산 서열, 예를 들어 성숙 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1 분자의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드에는 결합하지만 그 서열이 결여된 단백질에는 결합하지 않는 경우에, 그 서열을 포함하는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 것으로 언급된다.

"키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 한 부분이 특정한 종 (예를 들어, 인간)으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 상동이며, 한편 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종 (예를 들어, 마우스)으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 항체, 뿐만 아니라 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다.

"인간 항체"는 인간 이뮤노글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 인간 항체는 마우스, 마우스 세포 또는 마우스 세포로부터 유래된 하이브리도마에서 생산되는 경우에 뮤린 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게, "마우스 항체" 또는 "래트 항체"는 각각 마우스 또는 래트 이뮤노글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다.

"인간화 항체"는 비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체 뿐만 아니라 인간 항체로부터의 서열을 함유하는 항체의 형태를 지칭한다. 이러한 항체는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유한다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 이뮤노글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 이뮤노글로불린 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 임의로 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 이뮤노글로불린의 것을 포함할 것이다. 접두어 "hum", "hu" 또는 "h"는 인간화 항체를 모 설치류 항체와 구별하기 위해 필요한 경우에 항체 클론 명칭 앞에 부가된다. 설치류 항체의 인간화 형태는 일반적으로 모 설치류 항체의 동일한 CDR 서열을 포함할 것이지만, 친화도를 증가시키거나, 인간화 항체의 안정성을 증가시키거나 또는 다른 이유로 특정 아미노산 치환이 포함될 수도 있다.

"단리된 항체" 및 "단리된 항체 단편"은 정제 상태를 지칭하고, 이러한 문맥에서 명명된 분자는 다른 생물학적 분자, 예컨대 핵산, 단백질, 지질, 탄수화물 또는 다른 물질, 예컨대 세포 파편 및 성장 배지가 실질적으로 없는 것을 의미한다. 일반적으로, 용어 "단리된"은 이러한 물질 또는 물, 완충제 또는 염이 본원에 기재된 바와 같은 결합 화합물의 실험 또는 치료 용도를 실질적으로 방해하는 양으로 존재하지 않는 한, 이러한 물질의 완전한 부재 또는 물, 완충제 또는 염의 부재를 지칭하는 것으로 의도되지는 않는다.

본원에 사용된 "카바트"는 엘빈 에이. 카바트(Elvin A. Kabat) ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)에 의해 개척된 이뮤노글로불린 정렬 및 넘버링 시스템을 의미한다.

본원에 사용된 "모노클로날 항체" 또는 "mAb" 또는 "Mab"는 실질적으로 동종인 항체의 집단을 지칭하며, 즉 집단을 구성하는 항체 분자는 미량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 아미노산 서열이 동일하다. 대조적으로, 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제는 전형적으로 종종 상이한 에피토프에 특이적인 그의 가변 도메인, 특히 그의 CDR에 상이한 아미노산 서열을 갖는 다수의 상이한 항체를 포함한다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동종인 항체 집단으로부터 수득되는 바와 같은 항체의 특징을 나타내고, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들어, 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler et al. (1975) Nature 256:495]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나 또는 재조합 데옥시리보핵산 (DNA) 방법 (예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567 참조)에 의해 제조될 수 있다. "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어 문헌 [Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 and Marks et al. (1991) J. Mol. Biol. 222: 581-597]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 또한, 문헌 [Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731]을 참조한다.

본원에 사용된 "CDR" 또는 "CDR들"은, 달리 나타내지 않는 한, 카바트 넘버링 시스템을 사용하여 정의된 이뮤노글로불린 가변 영역에서의 상보성 결정 영역(들)을 의미한다.

치료 요법, 예컨대 본원에 기재된 조합 요법으로 치료된 암 환자를 지칭하는 경우에 "항종양 반응"은 적어도 1종의 양성 치료 효과, 예컨대 예를 들어 감소된 암 세포 수, 감소된 종양 크기, 감소된 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 속도, 감소된 종양 전이 또는 종양 성장 속도 또는 무진행 생존을 의미한다. 암에서의 양성 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Null. Med. 50: 1S-10S (2009); Eisenhauer et al., supra] 참조). 일부 경우에, 본원에 기재된 조합 요법에 대한 항종양 반응은 RECIST 1.1 기준 (고형 종양에서의 반응 평가 기준), 2차원 irRC (면역 관련 반응 기준), 또는 1차원 irRC를 사용하여 평가된다. 일부 예에서, 항종양 반응은 SD, PR, CR, PFS 또는 DFS 중 임의의 것이다.

"2차원 irRC"는 문헌 [Wolchok JD, et al. "Guidelines for the evaluation of immune therapy activity in solid tumors: immune-related response criteria," Clin Cancer Res. 15(23): 7412-7420 (2009)]에 기재된 기준 세트를 지칭한다. 이들 기준은 각각의 병변의 최장 직경 및 최장 수직 직경의 곱 (cm²)에 의해 얻어지는 표적 병변의 2차원 종양 측정치를 이용한다.

"생물요법제"는 종양 유지 및/또는 성장을 지지하거나 항종양 면역 반응을 억제하는 임의의 생물학적 경로에서 리간드 / 수용체 신호전달을 차단하는 생물학적 분자, 예컨대 항체 또는 융합 단백질을 의미한다. 생물요법제의 부류는 VEGF, 표피 성장 인자 수용체 (EGFR), Her2/neu, 다른 성장 인자 수용체, CD20, CD40, CD-40L, CTLA-4, OX-40, 4-1BB 및 ICOS에 대한 항체를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.

용어 "암", "암성", "종양" 또는 "악성"은 전형적으로 비조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 기재한다. 암의 예는 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암 예컨대 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 암의 또 다른 특정한 예는 신세포 암종 (RCC)을 포함한다. 암의 추가의 특정한 예는 투명 세포 신장암을 포함한다. 암은 원발성 암일 수 있지만, 전이성 질환 (예를 들어, 림프 또는 다른 기관 침범)을 포함한 암 병기에서 진행될 가능성이 더 클 수 있다. 개시된 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 따라 치료될 수 있는 암은 시험된 조직 샘플에서 PD-L1 및 PD-L2 중 하나 또는 둘 다의 상승된 발현을 특징으로 하는 것을 포함한다.

"CBR" 또는 "임상 이익률"은 CR + PR + 지속적인 SD를 의미한다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 본원에 기재된 치료 조합물 및 그의 방법 및 용도와 조합되어 사용될 수 있는 화학요법제의 부류는 알킬화제, 항대사물, 키나제 억제제, 방추체 독 식물 알칼로이드, 세포독성/항종양 항생제, 토포이소머라제 억제제, 광증감제, 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조정제 (SERM), 항프로게스테론, 에스트로겐 수용체 하향-조절제 (ERD), 에스트로겐 수용체 길항제, 황체형성 호르몬-방출 호르몬 효능제, 항-안드로겐, 아로마타제 억제제, EGFR (표피 성장 인자 수용체) 억제제, VEGF (혈관 내피 성장 인자) 억제제, VEGFR (혈관 내피 성장 인자 수용체) 억제제 및 비정상적 세포 증식 또는 종양 성장에 연루된 유전자의 발현을 억제하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본원에 개시된 치료 방법에 유용한 화학요법제는 세포증식억제제 및/또는 세포독성제를 포함한다.

본원에 사용된 "코티아"는 문헌 [Al-Lazikani et al., JMB 273: 927-948 (1997)]에 기재된 항체 넘버링 시스템을 의미한다.

"포함하는" 또는 변형, 예컨대 "포함하다", "포함한다" 또는 "로 구성된"은 언어 또는 필요한 함축을 표현하기 위해 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 포괄적 의미로, 즉 언급된 특색의 존재를 명시하지만, 개시된 치료 방법, 의약 및 개시된 용도 중 임의의 것의 작업 또는 유용성을 실질적으로 증진시킬 수 있는 추가의 특색의 존재 또는 추가를 배제하지 않도록 사용된다.

"보존적으로 변형된 변이체" 또는 "보존적 치환"은 단백질의 생물학적 활성 또는 다른 목적하는 특성, 예컨대 항원 친화도 및/또는 특이성을 변경하지 않으면서 변화가 빈번하게 이루어질 수 있도록 단백질 내의 아미노산을 유사한 특징 (예를 들어, 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 백본 입체형태 및 강성 등)을 갖는 다른 아미노산으로 치환하는 것을 지칭한다. 통상의 기술자는 일반적으로 폴리펩티드의 비-필수 영역 내의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않음을 인지한다 (예를 들어, 문헌 [Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p. 224 (4th Ed.)] 참조). 또한, 구조적으로 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 파괴할 가능성이 적다. 예시적인 보존적 치환은 하기 표 1에 제시된다.

표 1. 예시적인 보존적 아미노산 치환

명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 바와 같은 "본질적으로 이루어지다", 및 변형 예컨대 "본질적으로 이루어진다" 또는 "본질적으로 이루어진"은 임의의 언급된 요소 또는 요소 군의 포함, 및 명시된 투여 요법, 방법 또는 조성물의 기본 또는 신규 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 언급된 요소와 유사하거나 상이한 성질의 다른 요소의 임의적 포함을 나타낸다. 비제한적 예로서, 언급된 아미노산 서열로 본질적으로 이루어진 PD-1 길항제는 또한 결합 화합물의 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 1개 이상의 아미노산 (1개 이상의 아미노산 잔기의 치환 포함)을 포함할 수 있다.

"DCR" 또는 "질환 제어율"은 CR + PR + SD를 의미한다.

"진단 항-PD-L 모노클로날 항체"는 특정 포유동물 세포의 표면 상에서 발현되는 성숙 형태의 지정된 PD-L (PD-L1 또는 PD-L2)에 특이적으로 결합하는 mAb를 의미한다. 성숙 PD-L에는 리더 펩티드로도 지칭되는 분비전 리더 서열이 결여되어 있다. 용어 "PD-L" 및 "성숙 PD-L"은 달리 나타내지 않는 한 또는 문맥으로부터 용이하게 명백하지 않는 한 본원에서 상호교환가능하게 사용되고, 동일한 분자를 의미하는 것으로 이해될 것이다.

본원에 사용된 진단 항-인간 PD-L1 mAb 또는 항-hPD-L1 mAb는 성숙 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체를 지칭한다. 성숙 인간 PD-L1 분자는 하기 서열의 아미노산 19-290으로 이루어진다:

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (서열식별번호: 25).

FFPE 종양 조직 절편에서의 PD-L1 발현의 IHC 검출을 위한 진단 mAb로서 유용한 진단 항-인간 PD-L1 mAb의 구체적 예는 2013년 12월 18일에 출원되고 2014년 6월 26일에 WO2014/100079로 공개된 국제 출원 PCT/US13/075932에 기재된 항체 20C3 및 항체 22C3이다. FFPE 조직 절편에서의 PD-L1 발현의 IHC 검출에 유용한 것으로 보고된 또 다른 항-인간 PD-L1 mAb (Chen, B.J. et al., Clin. Cancer Res. 19: 3462-3473 (2013))는 시노 바이올로지칼, 인크.(Sino Biological, Inc.) (중화인민공화국 베이징; 카탈로그 번호 10084-R015)로부터 공개적으로 입수가능한 토끼 항-인간 PD-L1 mAb이다.

"DSDR" 또는 "지속적인 안정 질환율"은 ≥ 23주 동안의 SD를 의미한다.

본원에 사용된 "프레임워크 영역" 또는 "FR"은 CDR 영역을 제외한 이뮤노글로불린 가변 영역을 의미한다.

"상동성"은 최적으로 정렬될 때 2개의 폴리펩티드 서열 사이의 서열 유사성을 지칭한다. 2개의 비교된 서열 둘 다에서의 위치가 동일한 아미노산 단량체 서브유닛에 의해 점유되는 경우, 예를 들어 2개의 상이한 Ab의 경쇄 CDR에서의 위치가 알라닌에 의해 점유되는 경우에, 2개의 Ab는 그 위치에서 상동이다. 상동성의 퍼센트는 2개의 서열에 의해 공유되는 상동 위치의 수를 비교되는 위치의 총 수로 나눈 것 x100이다. 예를 들어, 서열이 최적으로 정렬될 때 2개의 서열에서의 위치 10개 중 8개가 매치되거나 상동인 경우에, 2개의 서열은 80% 상동이다. 일반적으로, 비교는 2개의 서열이 최대 퍼센트 상동성을 제공하도록 정렬될 때 이루어진다. 예를 들어, 비교는, 미국 국립 의학 도서관의 등록 상표인 베이직 로컬 얼라인먼트 서치 툴 (BLAST®) 알고리즘에 의해 수행될 수 있으며, 여기서 알고리즘의 파라미터는 각 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 각 서열 사이의 최대 매치를 제공하도록 선택된다.

하기 대표적인 참고문헌은 서열 분석에 종종 사용되는 BLAST® 알고리즘에 관한 것이다: BLAST ALGORITHMS: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3: 266-272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266: 131-141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7: 649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17: 149-163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10: 67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219: 555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3: 66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36: 290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22: 2022-2039; and Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.

본원에 기재된 조합 요법으로의 치료에 대한 특이적 항종양 반응을 언급할 때의 "비-반응자 환자"는 환자가 항종양 반응을 나타내지 않았다는 것을 의미한다.

"ORR" 또는 "객관적 반응률"은 일부 경우에 CR + PR을 지칭하고, ORR_(제24주)은 펨브롤리주맙과 조합된 렌바티닙 메실레이트로의 24주 치료 후에 코호트에서 각각의 환자에서 irRECIST를 사용하여 측정된 CR 및 PR을 지칭한다.

"환자" 또는 "대상체" 또는 "개체"는 요법이 요구되거나 또는 임상 시험, 역학적 연구에 참여 중이거나 또는 대조군으로서 사용되는 임의의 단일 대상체를 지칭하며, 인간 및 포유동물 수의학적 환자 예컨대 소, 말, 개 및 고양이를 포함한다.

PD-1 길항제. 항-PD1 길항제는 하기를 포함한다. "PD-1 길항제"는 면역 세포 (T 세포, B 세포 또는 NKT 세포) 상에서 발현된 PD-1에 대해 암 세포 상에서 발현된 PD-L1이 결합하는 것을 차단하고, 바람직하게는 또한 면역-세포 발현된 PD-1에 대해 암 세포 상에서 발현된 PD-L2가 결합하는 것을 차단하는 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 의미한다. PD-1 및 그의 리간드에 대한 대체 명칭 또는 동의어는 PD-1에 대해 PDCD1, PD1, CD279 및 SLEB2; PD-L1에 대해 PDCD1L1, PDL1, B7H1, B7-4, CD274 및 B7-H; 및 PD-L2에 대해 PDCD1L2, PDL2, B7-DC, Btdc 및 CD273을 포함한다. 인간 개체를 치료하는 임의의 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에서, PD-1 길항제는 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1의 결합을 차단하고, 바람직하게는 인간 PD-1에 대한 인간 PD-L1 및 PD-L2 둘 다의 결합을 차단한다. 인간 PD-1 아미노산 서열은 NCBI 유전자좌 번호: NP_005009에서 찾아볼 수 있다. 인간 PD-L1 및 PD-L2 아미노산 서열은 각각 NCBI 유전자좌 번호: NP_054862 및 NP_079515에서 찾아볼 수 있다. PD-1 길항제는 항-PD-L1 모노클로날 항체 아테졸리주맙이 아니다.

임의의 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 유용한 PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 (mAb) 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. mAb는 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수 있고, 인간 불변 영역을 포함할 수 있다. 인간 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 불변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 바람직하게는 인간 불변 영역은 IgG1 또는 IgG4 불변 영역이다. 일부 예에서, 항원 결합 단편은 Fab, Fab'-SH, F(ab')₂, scFv 및 Fv 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

PD-1 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드 10 단편, PD-1 펩티드 또는 PD-1 에피토프에 결합하고, PD-1과 그의 리간드 PD-L1 또는 PD-L2 사이의 상호작용을 차단하는 임의의 모노클로날 항체가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 PD-1 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드 단편, PD-1 펩티드 또는 PD-1 에피토프에 결합하고, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용을 차단한다. 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 PD-1 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드 단편, PD-1 펩티드 또는 PD-1에피토프에 결합하고, PD-1과 PD-L2 사이의 상호작용을 차단한다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 PD-1 폴리펩티드, PD-1 폴리펩티드 단편, PD-1 펩티드 또는 PD-1에피토프에 결합하고, PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용 및 PD-1과 PD-L2 사이의 상호작용을 차단한다.

PD-L1 폴리펩티드, PD-L1 20 폴리펩티드 단편, PD-L1 펩티드 또는 PD-L1 에피토프에 결합하고, PD-L1과 PD-1 사이의 상호작용을 차단하는 임의의 모노클로날 항체가 또한 사용될 수 있다.

특정 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 세미플리맙, 피딜리주맙 (미국 특허 번호 7,332,582), AMP-514 (메드이뮨 엘엘씨(MedImmune LLC), 메릴랜드주 게이더스버그), PDR001 (미국 특허 번호 25 9,683,048), BGB-A317 (미국 특허 번호 8,735,553) 및 MGA012 (마크로제닉스(MacroGenics), 메릴랜드주 록빌)로 이루어진 군으로부터 선택된다.

한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 펨브롤리주맙이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 니볼루맙이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 세미플리맙이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 피딜리주맙이다. 한 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 AMP-514이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 PDR001이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 BGB-A317이다. 또 다른 실시양태에서, 항-인간 PD-1 모노클로날 항체는 MGA012이다.

인간 PD-1에 결합하고 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 유용한 mAb의 예는 미국 특허 번호 7488802, 7521051, 8008449, 8354509, 및 8168757; 국제 특허 공개 WO2004/004771, WO2004/072286, 및 WO2004/056875 및 미국 공개 번호 2011/0271358에 기재되어 있다. 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특이적 항-인간 PD-1 mAb는 문헌 [WHO Drug Information, Vol. 27, No. 2, pages 161-162 (2013)]에 기재된 구조를 갖고 도 6에 제시된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 인간화 IgG4 mAb인 펨브롤리주맙 (또한 MK-3475로 공지됨), 문헌 [WHO Drug Information, Vol. 27, No. 1, pages 68-69 (2013)]에 기재된 구조를 갖고 도 7에 제시된 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열을 포함하는 인간 IgG4 mAb인 니볼루맙 (BMS-936558), 인간화 모노클로날 항체인 피딜리주맙, AMP-224 및 AMP-514; WO2008/156712에 기재된 인간화 항체 h409A11, h409A16 및 h409A17, 및 메드이뮨에 의해 개발 중인 AMP-514를 포함한다.

인간 PD-L1에 결합하고 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 유용한 mAb의 예는 WO2013/019906, WO2010/077634 A1 및 미국 특허 번호 8383796에 기재되어 있다. 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 구체적 항-인간 PD-L1 mAb는 BMS-936559, 세미플리맙, MEDI4736, MSB0010718C 및 WO2013/019906의 각각 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 21의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다.

임의의 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 유용한 다른 PD-1 길항제는 PD-1 또는 PD-L1에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는 인간 PD-1 또는 인간 PD-L1에 특이적으로 결합하는 이뮤노어드헤신, 예를 들어 불변 영역 예컨대 이뮤노글로불린 분자의 Fc 영역에 융합된 PD-L1 또는 PD-L2의 세포외 또는 PD-1 결합 부분을 함유하는 융합 단백질을 포함한다. PD-1에 특이적으로 결합하는 이뮤노어드헤신 분자의 예는 WO2010/027827 및 WO2011/066342에 기재되어 있다. 본원에 기재된 치료 방법, 의약 및 용도에서 PD-1 길항제로서 유용한 특이적 융합 단백질은 PD-L2-FC 융합 단백질이고 인간 PD-1에 결합하는 AMP-224 (B7-DCIg로도 공지됨)를 포함한다.

치료 방법, 의약 및 개시된 용도는 (a) 경쇄 CDR 서열식별번호: 1, 2 및 3 및 중쇄 CDR 서열식별번호: 4, 5 및 6; 또는 (b) 경쇄 CDR 서열식별번호: 7, 8 및 9 및 중쇄 CDR 서열식별번호: 10, 11 및 12를 포함하는 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 PD-1 길항제를 제공한다.

치료 방법, 의약 및 개시된 용도는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열식별번호: 13 또는 그의 변이체를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 (b) 서열식별번호: 15 또는 그의 변이체; 서열식별번호: 16 또는 그의 변이체; 및 서열식별번호: 17 또는 그의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 PD-1 길항제를 제공한다. 중쇄 가변 영역 서열의 변이체는 프레임워크 영역 (즉, CDR의 외부)에 17개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 참조 서열과 동일하고, 바람직하게는 프레임워크 영역에 10, 9, 8, 7, 6 또는 5개 미만의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 경쇄 가변 영역 서열의 변이체는 프레임워크 영역 (즉, CDR의 외부)에 5개 이하의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 참조 서열과 동일하고, 바람직하게는 프레임워크 영역에 4, 3 또는 2개 미만의 보존적 아미노산 치환을 갖는다.

임의의 치료 방법, 의약 및 개시된 용도를 위한 PD-1 길항제는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열식별번호: 14를 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 18, 서열식별번호: 19 또는 서열식별번호: 20을 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체일 수 있다.

치료 방법, 의약 및 개시된 용도는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하고 (a) 서열식별번호: 14를 포함하는 중쇄 및 (b) 서열식별번호: 18을 포함하는 경쇄를 포함하는 모노클로날 항체인 PD-1 길항제를 제공한다.

하기 표 2는 치료 방법, 의약 및 개시된 용도에 사용하기 위한 예시적인 항-PD-1 mAb의 아미노산 서열의 목록을 제공하고, 서열은 도 1-5b에 제시된다.

표 2. 예시적인 항-인간 PD-1 모노클로날 항체

본원에 사용된 "PD-L1" 또는 "PD-L2" 발현은 세포 표면 상의 지정된 PD-L 단백질 또는 세포 또는 조직 내의 지정된 PD-L mRNA의 임의의 검출가능한 수준의 발현을 의미한다. PD-L 단백질 발현은 종양 조직 절편의 IHC 검정에서 진단 PD-L 항체로 또는 유동 세포측정법에 의해 검출될 수 있다. 대안적으로, 종양 세포에 의한 PD-L 단백질 발현은 목적하는 PD-L 표적, 예를 들어 PD-L1 또는 PD-L2에 특이적으로 결합하는 결합제 (예를 들어, 항체 단편, 아피바디 등)를 사용하여 양전자 방출 단층촬영 (PET) 영상화에 의해 검출될 수 있다. PD-L mRNA 발현을 검출하고 측정하기 위한 기술은 RT-PCR 및 실시간 정량적 RT-PCR을 포함한다.

종양 조직 절편의 IHC 검정에서 PD-L1 단백질 발현을 정량화하기 위한 여러 접근법이 기재되었다. 예를 들어, 문헌 [Thompson, R. H., et al., PNAS 101 (49): 17174-17179 (2004); Thompson, R. H. et al., Cancer Res. 66: 3381-3385 (2006); Gadiot, J., et al., Cancer 117: 2192-2201 (2011); Taube, J. M. et al., Sci Transl Med 4: 127-37 (2012); 및 Toplian, S. L. et al., New Eng. J Med. 366(26): 2443-2454 (2012)]을 참조한다.

한 접근법은 PD-L1 발현에 대해 양성 또는 음성인 단순한 2원 종점을 사용하며, 양성 결과는 세포-표면 막 염색의 조직학적 증거를 나타내는 종양 세포의 백분율의 관점에서 정의된다. 종양 조직 절편은 총 종양 세포의 적어도 1%, 바람직하게는 5%인 PD-L1 발현에 대해 양성으로 계수된다.

또 다른 접근법에서, 종양 조직 절편에서의 PD-L1 발현은 종양 세포에서 뿐만 아니라 주로 림프구를 포함하는 침윤 면역 세포에서 정량화된다. 막 염색을 나타내는 종양 세포 및 침윤 면역 세포의 백분율은 <5%, 5 내지 9%, 이어서 10% 증분으로 100%까지 개별적으로 정량화된다. 종양 세포의 경우, PD-L1 발현은 점수가 < 5% 점수인 경우에 음성으로, 점수가 ≥ 5%인 경우에 양성으로 계수된다. 면역 침윤물에서의 PD-L1 발현은 조정된 염증 점수 (AIS)로 칭하는 반-정량적 측정으로서 보고되며, 이는 막 염색 세포의 퍼센트에 침윤물의 강도를 곱함으로써 결정되고, 이는 없음 (0), 경도 (1의 점수, 희귀 림프구), 중등도 (2의 점수, 림프조직구성 응집체에 의한 종양의 초점성 침윤), 또는 중증 (3의 점수, 미만성 침윤)으로 등급화된다. 종양 조직 절편은 AIS가 ≥ 5인 경우에 면역 침윤물에 의한 PD-L1 발현에 대해 양성으로 계수된다.

PD-L mRNA 발현의 수준은 정량적 RT-PCR에 빈번하게 사용되는 1종 이상의 참조 유전자, 예컨대 유비퀴틴 C의 mRNA 발현 수준과 비교될 수 있다.

일부 경우에, 악성 세포에 의한 및/또는 종양 내의 침윤 면역 세포에 의한 PD-L1 발현 (단백질 및/또는 mRNA)의 수준은 적절한 대조군에 의한 PD-L1 발현 (단백질 및/또는 mRNA)의 수준과의 비교에 기초하여 "과다발현" 또는 "상승"된 것으로 결정된다. 예를 들어, 대조군 PD-L1 단백질 또는 mRNA 발현 수준은 동일한 유형의 비악성 세포에서 또는 매칭된 정상 조직 (즉, 비-악성 조직)으로부터의 절편에서 정량화된 수준일 수 있다. 종양 샘플에서의 PD-L1 발현은 바람직하게는 샘플에서의 PD-L1 단백질 (및/또는 PD-L1 mRNA)이 대조군에서보다 적어도 10%, 20% 또는 30% 더 큰 경우에 상승된 것으로 결정된다.

"펨브롤리주맙 바이오시밀러"는 머크 앤 캄파니, 인크. 디.비.에이. 머크 샤프 및 돔 (Merck & Co., Inc. d.b.a. Merck Sharp and Dohme) (MSD)이외의 기관에 의해 제조되고 펨브롤리주맙 바이오시밀러로서 판매하기 위해 임의의 국가에서 규제 기관에 의해 승인된 생물학적 제품을 의미한다. 펨브롤리주맙 바이오시밀러는 펨브롤리주맙 변이체 또는 펨브롤리주맙과 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체를 약물 물질로서 포함할 수 있다.

본원에 사용된 "펨브롤리주맙 변이체"는 경쇄 CDR의 외부에 위치하는 위치에서 3, 2 또는 1개의 보존적 아미노산 치환 및 중쇄 CDR의 외부에 위치하는 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 보존적 아미노산 치환을 갖는 것을 제외하고는 펨브롤리주맙에서의 것과 동일한 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 모노클로날 항체를 의미하며, 예를 들어 변이체 위치는 FR 영역 및/또는 불변 영역에 위치한다. 즉, 펨브롤리주맙 및 펨브롤리주맙 변이체는 동일한 CDR 서열을 포함하지만, 각각 그의 전장 경쇄 및 중쇄 서열 내의 3 또는 6개 이하의 다른 위치에서 보존적 아미노산 치환을 갖기 때문에 서로 상이하다. 펨브롤리주맙 변이체는 하기 특성과 관련하여 펨브롤리주맙과 실질적으로 동일하다: PD-1에 대한 결합 친화도 및 PD-1에 대한 각각의 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 차단하는 능력.

환자 / 암 / 반응 정의. 본원에 사용된 "RECIST 1.1 반응 기준"은 반응이 측정되는 상황에 기초하여 적절하게 표적 병변 또는 비표적 병변에 대해 문헌 [Eisenhauer et al., E.A. et al., Eur. J. Cancer 45: 228-247 (2009)]에 제시된 정의를 의미한다.

본원에 기재된 조합 요법을 사용한 치료에 대한 특이적 항종양 반응을 지칭하는 경우에 "반응자 환자"는 환자가 항종양 반응을 나타내었음을 의미한다.

"지속 반응"은 치료제 또는 본원에 기재된 조합 요법을 사용한 치료의 중단 후에 지속된 치료 효과를 의미한다. 일부 경우에, 지속 반응은 치료 지속기간과 적어도 동일하거나 또는 치료 지속기간보다 적어도 1.5, 2.0, 2.5 또는 3배 더 긴 지속기간을 갖는다.

"조직 절편"은 조직 샘플의 단일 부분 또는 조각, 예를 들어 정상 조직 또는 종양의 샘플로부터 절단된 조직의 얇은 슬라이스를 지칭한다.

본원에 사용된 암을 "치료하다" 또는 "치료하는"은 암을 갖거나 또는 암으로 진단된 대상체에게 PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합 요법을 투여하여, 적어도 1종의 양성 치료 효과, 예컨대, 예를 들어 감소된 암 세포 수, 감소된 종양 크기, 감소된 말초 기관 내로의 암 세포 침윤 속도, 또는 감소된 종양 전이 또는 종양 성장 속도를 달성하는 것을 의미한다. 암에서의 양성 치료 효과는 다수의 방식으로 측정될 수 있다 (문헌 [W. A. Weber, J. Nucl. Med. 50:1S-10S (2009)] 참조). 예를 들어, 종양 성장 억제와 관련하여, NCI 표준에 따르면, T/C ≤42%가 항종양 활성의 최소 수준이다. T/C <10%는 높은 항종양 활성 수준으로 간주되며, T/C (%) = 치료군의 중앙 종양 부피/대조군의 중앙 종양 부피 x 100이다. 일부 경우에, 본원에 기재된 조합 요법에 대한 반응은 RECIST 1.1 기준 또는 irRC (2차원 또는 1차원)를 사용하여 평가되며, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 PD-1 길항제의 조합에 의해 달성된 치료는 PR, CR, OR, PFS, DFS 및 OS 중 임의의 것이다. "종양 진행까지의 시간"으로도 지칭되는 PFS는 치료 동안 및 치료 후에 암이 성장하지 않는 시간의 길이를 나타내고, 환자가 CR 또는 PR을 경험한 시간의 양, 뿐만 아니라 환자가 SD를 경험한 시간의 양을 포함한다. DFS는 치료 동안 및 치료 후에 환자가 질환이 없는 상태를 유지하는 기간을 지칭한다. OS는 나이브 또는 비치료 개체 또는 환자와 비교하여 기대 수명의 연장을 지칭한다. 일부 경우에, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염과 PD-1 길항제의 조합물에 대한 반응은 RECIST 1.1 반응 기준을 사용하여 평가되는 PR, CR, PFS, DFS, OR 및 OS 중 임의의 것이다. 암 환자를 치료하는데 효과적인 개시된 조합물에 대한 치료 요법은 환자의 질환 상태, 연령 및 체중 및 대상체에서 항암 반응을 도출하는 요법의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료 방법, 의약 및 개시된 용도는 모든 대상체에서 양성 치료 효과를 달성하는데 효과적이지 않을 수 있고, 이들은 관련 기술분야에 공지된 임의의 통계적 검정, 예컨대 스튜던트 t-검정, 카이2-검정, 만 및 휘트니에 따른 U-검정, 크루스칼-왈리스 검정 (H-검정), 존키어-테르프스트라-검정 및 윌콕슨-검정에 의해 결정된 바와 같이 통계적으로 유의한 수의 대상체에서 효과적이어야 한다.

용어 "치료 요법", "투여 프로토콜" 및 "투여 요법"은 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염과 PD-1 길항제의 조합물 중 각각의 치료제의 용량 및 투여 시기를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다.

암으로 진단되었거나 암에 걸린 것으로 의심되는 대상체에 적용될 때의 "종양"은 임의의 크기의 악성 또는 잠재적으로 악성인 신생물 또는 조직 덩어리를 지칭하고, 원발성 종양 및 속발성 신생물을 포함한다. 고형 종양은 통상적으로 낭 또는 액체 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 성장 또는 덩어리이다. 상이한 유형의 고형 종양은 이들을 형성하는 세포의 유형에 대해 명명된다. 고형 종양의 예는 육종, 암종 및 림프종이다.

"종양 부하"로도 지칭되는 "종양 부담"은 신체 전반에 걸쳐 분포된 종양 물질의 총량을 지칭한다. 종양 부담은 림프절 및 골수를 포함한, 신체 전반에 걸친 암 세포의 총 수 또는 종양(들)의 총 크기를 지칭한다. 종양 부담은 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해, 예컨대, 예를 들어 대상체로부터 제거시, 예를 들어 캘리퍼를 사용하여 또는 신체 내에 있는 동안 영상화 기술, 예를 들어 초음파, 골 스캔, 컴퓨터 단층촬영 (CT) 또는 자기 공명 영상화 (MRI) 스캔을 사용하여 종양(들)의 치수를 측정함으로써 결정될 수 있다.

용어 "종양 크기"는 종양의 길이 및 폭으로서 측정될 수 있는 종양의 총 크기를 지칭한다. 종양 크기는 관련 기술분야에 공지된 다양한 방법에 의해, 예컨대, 예를 들어 대상체로부터 제거시, 예를 들어 캘리퍼를 사용하여 또는 신체 내에 있는 동안 영상화 기술, 예를 들어 골 스캔, 초음파, CT 또는 MRI 스캔을 사용하여 종양(들)의 치수를 측정함으로써 결정될 수 있다.

"1차원 irRC"는 문헌 [Nishino M, Giobbie-Hurder A, Gargano M, Suda M, Ramaiya NH, Hodi FS. "Developing a Common Language for Tumor Response to Immunotherapy: Immune-related Response Criteria using Unidimensional measurements," Clin. Cancer Res. 2013, 19(14): 3936-3943)]에 기재된 기준의 세트를 지칭한다. 이들 기준은 각각의 병변의 최장 직경 (cm)을 이용한다.

"다중-RTK 억제제"는 하기 RTK: (i) VEGFR2, 및 (ii) FGFR1, 2, 3 및 4로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 FGFR 중 적어도 각각의 수용체 티로신 키나제 (RTK) 활성을 억제하는 소분자 화합물을 의미한다. 예시적인 다중-RTK 억제제는 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.

β-카테닌은 Wnt 신호 전달의 매개체로서 기능하고, 전사 인자 Tcf/Lef (T 세포 인자/림프구 증진 인자)에 결합하고, Wnt 신호 전달에 관여하는 다양한 유전자 (시클린 D1, c-Myc 등)의 발현을 촉진하고, 세포의 증식 및 분화를 제어한다 (He et al., 1998 Science 281: 1509-1512; Kolligs et al., Mol. Cell. Biol. 19: 5696-5706, 1999; Crawford et al., Oncogene 18: 2883-2891, 1999; Shtutman et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 11: 5522-5527, 1999; Tetsu and McCormick, 1999 Nature, 398: 422-426).

CBP (시클릭 AMP 반응 요소 결합 단백질 (CREB) 결합 단백질)는 CREB 결합 도메인 내의 β-카테닌과 직접 상호작용하고, Tcf/Lef의 전사 활성화를 촉진한다 (Ken-Ichi Takemaru and Randall T. Moon, 2000, J. Cell. Biol. 149(2): 249-254). CBP/β-카테닌 억제제는 CBP와 카테닌, 특히 β-카테닌 사이의 상호작용을 억제하는 한 특별히 제한되지 않으며, β-카테닌과 CBP의 결합이 억제되고, 그 결과 β-카테닌 복합체에 의한 유전자 발현이 억제되는 실시양태가 바람직하다.

CBP/β-카테닌의 억제는 그 자체로 공지된 결합 검정 (방사성결합 검정 등), 리포터 검정 방법 및 다른 시험관내 및 생체내 검정 등에 의해 측정될 수 있다. 억제는 WO 2009/148192에 기재된 리포터 검정 방법에 의해 Wnt 신호 전달의 유전자 발현을 측정함으로써 확인될 수 있다.

본 발명의 CBP/β-카테닌 억제제는 상기 정의된 바와 같은 한 특별히 제한되지 않는다. 이는 바람직하게는 CBP/β-카테닌 억제 활성을 갖는 α-나선 모방체 화합물이고, 그의 예는 WO 2003/031448, WO 2004/093828, WO 2005/116032, WO 2009/148192, WO 2010/044485, WO 2010/128685, WO 2012/115286 등에 기재된 바와 같은 α-나선 모방체 화합물, 그의 제약상 허용되는 염 등을 포함한다. 예시적인 CBP/β-카테닌 억제제는 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386)를 포함한다.

본원에 개시된 조합 요법에서 각각의 PD-1 길항제, 렌바티닙 및 E7386은 표준 제약 실시에 따라 단독으로 또는 치료제 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체, 부형제 및 희석제를 포함하는 의약 / 제제 (또한 본원에서 제약 조성물로 지칭됨)로 투여될 수 있다. 각각의 치료제는 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염, 항-PD-1 항체, 및/또는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제제화함으로써 제조될 수 있고, 동시에 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 또한, 제제는 소위 키트 제제를 제공하기 위해 단일 패키지에 배치될 수 있다.

렌바티닙 또는 제약상 허용되는 염은 참고문헌 17에 기재된 방법에 의해 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 염의 예는 무기 산과의 염, 유기 산과의 염, 무기 염기와의 염, 유기 염기와의 염 및 산성 또는 염기성 아미노산과의 염을 포함한다. 무기 산과의 염의 바람직한 예는 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등과의 염을 포함한다. 유기 산과의 염의 바람직한 예는 아세트산, 숙신산, 푸마르산, 말레산, 타르타르산, 시트르산, 락트산, 스테아르산, 벤조산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산 등과의 염을 포함한다. 무기 염기와의 염의 바람직한 예로는 알칼리 금속 염 예컨대 나트륨 염 및 칼륨 염; 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 염 및 마그네슘 염; 알루미늄 염; 및 암모늄 염을 포함한다. 유기 염기와의 염의 바람직한 예는 디에틸아민, 디에탄올아민, 메글루민, N,N-디벤질에틸렌디아민 등과의 염을 포함한다. 산성 아미노산과의 염의 바람직한 예는 아스파르트산, 글루탐산 등과의 염을 포함한다. 염기성 아미노산과의 염의 바람직한 예는 아르기닌, 리신, 오르니틴 등과의 염을 포함한다. 보다 바람직한 제약상 허용되는 염은 유기 산과의 염이고, 특히 바람직한 제약상 허용되는 염은 메탄술폰산과의 염이다.

본원에 개시된 조합 요법의 PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 동시에 (즉, 동일한 의약으로), 공동으로 (즉, 임의의 순서로 하나의 투여 직후에 다른 것이 투여되는 별개의 의약으로), 또는 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 순차적 투여는 조합 요법에서의 치료제가 상이한 투여 형태 (하나의 작용제는 정제 또는 캡슐이고, 또 다른 작용제는 멸균 액체임)이고/거나 상이한 투여 스케줄, 예를 들어 적어도 매일 투여되는 화학요법제 및 덜 빈번하게, 예컨대 매주 1회, 2주마다 1회 또는 3주마다 1회 투여되는 생물요법제로 투여되는 경우에 특히 유용하다.

일부 경우에, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 PD-1 길항제 및/또는 CBP/β-카테닌 억제제의 투여 전에 투여되는 한편, 다른 경우에, 다중-RTK 억제제는 PD-1 길항제 및/또는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 투여 후에 투여된다.

일부 경우에, 조합 요법에서의 치료제 중 적어도 1종은 작용제가 동일한 암을 치료하기 위한 단독요법으로서 사용되는 경우에 전형적으로 사용되는 동일한 투여 요법 (용량, 빈도 및 치료 지속기간)을 사용하여 투여된다. 다른 경우에, 환자는 치료제가 단독요법으로서 사용되는 경우보다 조합 요법에서 적어도 1종의 치료제의 보다 적은 총량, 예를 들어 보다 적은 용량, 덜 빈번한 용량 및/또는 보다 짧은 치료 지속기간을 받는다.

본원에 개시된 조합 요법에서의 각각의 소분자 치료제는 고체 제제, 예컨대 정제, 과립, 미세 과립, 분말 또는 캡슐의 형태로 또는 액체, 젤리, 시럽 등의 형태로 경구로 투여될 수 있다. 본원에 개시된 조합 요법에서의 각각의 소분자 치료제는 정맥내, 근육내, 복강내, 피하, 직장, 국소 및 경피 투여 경로를 포함한 비경구로 투여될 수 있다.

본원에 개시된 조합 요법은 종양을 제거하기 위한 수술 전 또는 후에 사용될 수 있고, 방사선 요법 전, 동안 또는 후에 사용될 수 있다.

일부 경우에, 본원에 개시된 조합 요법은 이전에 생물요법제 또는 화학요법제로 치료받지 않은, 즉 치료 경험이 없는 환자에게 투여된다. 다른 경우에, 조합 요법은 생물요법제 또는 화학요법제를 사용한 선행 요법 후에 지속 반응을 달성하는데 실패한, 즉 치료 경험이 있는 환자에게 투여된다.

본원에 개시된 조합 요법은 전형적으로 촉진에 의해 또는 관련 기술분야에 널리 공지된 영상화 기술, 예컨대 자기 공명 영상화 (MRI), 초음파 또는 컴퓨터 축 단층촬영 (CAT) 스캔에 의해 발견되기에 충분히 큰 종양을 치료하는데 사용된다.

본원에 개시된 조합 요법은 바람직하게는 PD-L1 발현에 대해 양성 판정을 받은 암을 갖는 인간 환자에게 투여된다. PD-L1 발현은 바람직하게, 환자로부터 제거된 종양 샘플의 FFPE 또는 동결된 조직 절편 상에서 IHC 검정에서 진단용 항-인간 PD-L1 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하여 검출된다. 전형적으로, 환자의 의사는 PD-1 길항제, E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염으로의 치료 개시 전에 환자로부터 제거된 종양 조직 샘플에서 PD-L1 발현을 결정하기 위한 진단 시험을 지시하지만, 의사는 치료의 개시 후 임의의 시점에, 예컨대 예를 들어 치료 주기의 완료 후에 제1 또는 후속 진단 시험을 지시할 수 있는 것으로 고려된다.

본원에 개시된 조합 요법을 위한 투여 요법 (본원에서 투약 요법으로도 지칭됨)을 선택하는 것은 대상체의 혈청 또는 조직 교체율, 증상의 수준, 대상체의 면역원성 및 치료될 개체에서의 표적 세포, 조직 또는 기관의 접근성을 포함한 여러 인자에 따라 달라진다. 바람직하게는, 투여 요법은 환자에게 전달되는 각 치료제의 양을 부작용의 허용되는 수준에 부합하면서 최대화시킨다. 따라서, 조합물 중 각각의 생물요법제 및 화학요법제의 용량 및 투여 빈도는 부분적으로 특정한 치료제, 치료될 암의 중증도 및 환자 특징에 따라 달라진다. 항체, 시토카인 및 소분자의 적절한 용량을 선택하는 것에 대한 지침이 이용가능하다. 예를 들어, 문헌 [Wawrzynczak (1996) Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med. 341: 1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med. 344: 783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342: 613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348: 24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343: 1594-1602; Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed.); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]을 참조한다. 적절한 투여 요법의 결정은, 예를 들어 치료에 영향을 미치는 것으로 관련 기술분야에 공지되거나 의심되거나 또는 치료에 영향을 미칠 것으로 예측되는 파라미터 또는 인자를 사용하여 임상의에 의해 이루어질 수 있고, 예를 들어 환자의 임상 병력 (예를 들어, 선행 요법), 치료될 암의 유형 및 병기, 및 조합 요법에서의 치료제 중 1종 이상에 대한 반응의 바이오마커에 좌우될 것이다.

본원에 개시된 조합 요법의 생물요법제 (즉, PD-1 길항제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염)는 연속 주입에 의해 또는 예를 들어 매일, 격일, 1주에 3회 또는 매주, 2주, 3주, 매월, 격월에 1회 등의 간격에서의 용량에 의해 투여될 수 있다. 총 매주 용량은 일반적으로 적어도 0.05 μg/kg, 0.2 μg/kg, 0.5 μg/kg, 1 μg/kg, 10 μg/kg, 100 μg/kg, 0.2 mg/kg, 1.0 mg/kg, 2.0 mg/kg, 10 mg/kg, 25 mg/kg, 50 mg/kg 체중 또는 그 초과이다. 예를 들어, 문헌 [Yang et al. (2003) New Engl. J. Med. 349: 427-434; Herold et al. (2002) New Engl. J. Med. 346: 1692-1698; Liu et al. (1999) J. Neurol. Neurosurg. Psych. 67: 451-456; Portielji et al. (2003) Cancer Immunol. Immunother. 52: 133-144]을 참조한다. 세미플리맙-rwlc (리브타요(LIBTAYO)®)는 또 다른 PD-1 길항제이다. 이는 정맥내로 투여될 수 있으며, 여기서 350 mg가 3주마다 1회 (Q3W) 30분에 걸쳐 투여된다.

렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용량은 환자의 증상의 정도, 연령, 성별 및 체중, 감수성의 차이, 경로, 투여 시간 및 투여 간격, 제약 제제의 유형 등에 따라 적절하게 선택될 수 있다. 전형적으로, 경구 투여가 성인 (60 kg 체중)에 대해 수행되는 경우에, 용량은 1일에 1 내지 600 mg, 바람직하게는 5 내지 400 mg, 보다 바람직하게는 5 내지 200 mg이다. 용량은 1회 투여될 수 있거나 또는 보다 적은 용량으로 분할되어 1일에 2 내지 3회 제공될 수 있다.

조합 요법에서 PD-1 길항제로서 항-인간 PD-1 mAb를 사용하는 일부 경우에, 투여 요법은 항-인간 PD-1 mAb를 치료 과정 전반에 걸쳐 약 14일 (± 2일) 또는 약 21일 (± 2일) 또는 약 30일 (± 2일)의 간격으로 1, 2, 3, 5 또는 10 mg/kg의 용량으로 투여하는 것을 포함할 것이다. 항-PD-1 항체의 투여량은 상기와 동일한 방식으로 적절하게 선택될 수 있다. 전형적으로, 정맥내 투여가 성인 (60 kg 체중)에 대해 수행되는 경우에, 용량은 6-주 주기로 3주마다 1회의 스케줄로 2 mg/kg일 수 있다 (총 2회 용량). 항체는 적절한 간격으로 1 내지 10 주기 동안 투여될 수 있다.

조합 요법에서 PD-1 길항제로서 항-인간 PD-1 mAb를 사용하는 다른 경우에, 투여 요법은 항-인간 PD-1 mAb를 약 0.005 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 용량으로 환자내 용량 증량으로 투여하는 것을 포함할 것이다. 용량 사이의 간격은, 예를 들어 제1 용량과 제2 용량 사이에 약 30일 (± 2일), 제2 용량과 제3 용량 사이에 약 14일 (± 2일)로 점진적으로 단축될 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여 간격은 제2 용량에 후속적인 용량의 경우 약 14일 (± 2일)일 것이다.

특정 경우에, 대상체는 본원에 기재된 임의의 PD-1 길항제를 포함하는 의약의 정맥내 (IV) 주입을 투여받을 수 있다.

조합 요법에서의 PD-1 길항제는 바람직하게는 일부 경우에 니볼루맙이며, 이는 1 mg/kg Q2W, 2 mg/kg Q2W, 3 mg/kg Q2W, 5 mg/kg Q2W, 10 mg Q2W, 1 mg/kg Q3W, 2 mg/kg Q3W, 3 mg/kg Q3W, 5 mg/kg Q3W 및 10 mg Q3W로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 정맥내로 투여된다. PD-1 길항제는 또한 350 mg Q3W의 용량으로 정맥내로 투여되는 세미플리맙-rwlc일 수 있다.

조합 요법에서의 PD-1 길항제는 바람직하게는 일부 경우에 펨브롤리주맙, 펨브롤리주맙 변이체 또는 펨브롤리주맙 바이오시밀러이며, 이는 1 mg/kg Q2W, 2 mg/kg Q2W, 3 mg/kg Q2W, 5 mg/kg Q2W, 10 mg Q2W, 1 mg/kg Q3W, 2 mg/kg Q3W, 3 mg/kg Q3W, 5 mg/kg Q3W, 10 mg Q3W 및 임의의 이들 용량의 균일-용량 등가물, 즉, 예컨대 200 mg Q3W 및 400 mg Q6W로 이루어진 군으로부터 선택된 용량으로 액체 의약으로 투여된다. 일부 경우에, 펨브롤리주맙은 10 mM 히스티딘 완충제 pH 5.5 내의 25 mg/ml 펨브롤리주맙, 7% (w/v) 수크로스, 0.02% (w/v) 폴리소르베이트 80을 포함하는 액체 의약으로서 제공된다.

일부 경우에, 펨브롤리주맙의 선택된 용량은 25 내지 40분 또는 약 30분의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다.

렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 (예를 들어, 렌바티닙 메실레이트) 및 CBP/β-카테닌 억제제 (예를 들어, E7386)와 조합된 펨브롤리주맙에 대한 최적 용량은 이들 작용제 중 하나 또는 둘 다의 용량 증량 또는 용량 감량에 의해 확인될 수 있다. 일부 경우에, 조합 요법은 펨브롤리주맙을 IV로 200 mg Q3W (또는 IV로 400 mg Q6W)로 투여하고, CBP/카테닌 억제제, 렌바티닙 메실레이트는 (a) 1일에 24 mg 경구로, (b) 1일에 20 mg 경구로 또는 (c) 1일에 14 mg 경구로 각각 렌바티닙으로서 투여하는 21일 치료 주기를 포함한다.

환자는 적어도 1개의 DLT가 관찰될 때까지 먼저 1일량의 CBP/β-카테닌 억제제, IV로 200 mg의 펨브롤리주맙 Q3W (또는 IV로 400 mg Q6W) 및 1일에 24 mg (렌바티닙으로서)의 렌바티닙 메실레이트로 경구로 치료될 수 있고, 이어서 렌바티닙 메실레이트의 투여량은 1일에 20 또는 14 mg (각각 렌바티닙으로서)으로 감소될 수 있는 한편, 펨브롤리주맙 용량은 200 mg의 펨브롤리주맙 Q3W (또는 IV로 400 mg Q6W)로 계속될 수 있고, CBP/β-카테닌 억제제는 동일한 1일 투여량으로 계속되거나 감소될 수 있다.

예시적인 투여 요법으로서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 21일 주기로 매일 대략 동일한 시간에 물과 함께 1일 1회, 음식물과 함께 또는 음식물 없이 경구로 투여될 수 있다. 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 4 mg 및 10 mg (각각 렌바티닙으로서) 캡슐로서 제공될 수 있다. 각 주기의 제1일 (D1)에, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 펨브롤리주맙 투여 및/또는 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염 투여의 완료 후 대략 1시간 내에 투여될 수 있다. 펨브롤리주맙은 단회-사용 바이알에서 멸균, 보존제-무함유, 백색 내지 회백색 동결건조된 분말로서 제공될 수 있다. 각각의 바이알은 정맥내 주입의 경우 재구성 및 희석될 수 있다. 재구성된 용액 2 mL 각각은 대략 50 mg의 펨브롤리주맙을 함유할 수 있다. 일부 경우에, 펨브롤리주맙은 정맥내 주입의 경우 희석을 필요로 하는 멸균, 보존제-무함유, 투명 내지 약간 유백색, 무색 내지 약간 황색 용액으로서 제공될 수 있다. 각각의 바이알은 4 mL의 용액 중 100 mg의 펨브롤리주맙을 함유할 수 있다. 각각의 1 mL의 용액은 25 mg의 펨브롤리주맙을 함유할 수 있다. 펨브롤리주맙은 30분 정맥내 주입, Q3W (예를 들어 25분 내지 40분)로서 200 mg의 용량으로 투여될 수 있다.

경구 고체 제제가 제조되는 경우에, 제약상 허용되는 비히클 및 필요에 따라 결합제, 붕해제, 윤활제, 착색제, 향미제 등이 주요 성분, 즉 화학식 (I)에 의해 나타내어진 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, CBP/β-카테닌 억제제 및/또는 항-PD-1 항체에 첨가되어, 그 후에 통상적인 방법에 따라 정제, 과립, 미세 과립, 분말, 캡슐 등을 제조할 수 있다. 비히클의 예는 락토스, 옥수수 전분, 백색 연질 당, 글루코스, 소르비톨, 결정질 셀룰로스 및 이산화규소를 포함한다. 결합제의 예는 폴리비닐 알콜, 에틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 아라비아 검, 히드록시프로필셀룰로스 및 히드록시프로필메틸셀룰로스를 포함한다. 윤활제의 예는 스테아르산마그네슘, 활석 및 실리카를 포함한다. 착색제의 예는 산화티타늄, 철 세스퀴옥시드, 황색 철 세스퀴옥시드, 코치닐, 카르민 및 리보플라빈을 포함한다. 향미제의 예는 코코아 분말, 아스코르브산, 타르타르산, 페퍼민트 오일, 보르네올 및 시나몬 분말을 포함한다. 이들 정제 및 과립은 필요에 따라 코팅될 수 있다.

일부 경우에, 환자는 적어도 24주, 예를 들어 8회의 3-주 주기 동안 조합 요법으로 치료된다. 일부 경우에, 조합 요법을 사용한 치료는 환자가 PD 또는 CR의 증거를 나타낼 때까지 계속된다.

일부 경우에, 환자가 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 또는 두경부의 편평 세포 암종으로 진단된 경우에, 환자는 본원에 개시된 조합 요법을 사용한 치료를 위해 선택되었다.

암에 대한 "치료 약물" 또는 "조합 요법"은 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, 항-PD-1 항체), 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 약물은 각각의 3종의 약물이 개별적이고 목적하는 투여에 적절한 방법, 예를 들어 경구, 경비, 점막, 직장, 질, 국소, 정맥내, 복강내, 피내, 피하 및 근육내 투여 등에 의해 개별적으로 또는 3종의 약물 중 2종의 조합으로 또는 함께 투여되도록 제제화될 수 있다.

면역 체크포인트 억제제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합물을 함유하는 암에 대한 조합 요법의 용량 및 그에 따른 치료 유효량의 투여 시기의 결정은 충분히 관련 기술분야의 통상의 기술자의 지식 내에 있다. 예를 들어, 초기 유효량은 세포 배양 또는 다른 시험관내 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양 검정에 의해 및/또는 동물 모델에서 결정된 순환 농도 또는 조직 농도, 예컨대 IC₅₀ 농도 등을 생성하도록 설정될 수 있다.

치료 하의 상태 및 치료 약물에 따라 투여 방법이 선택된다. 면역 체크포인트 억제제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 다양한 방법에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 성분 중 1종 이상은 하기 경로 중 임의의 것을 통해 대상체에게 투여될 수 있다: 피하, 정맥내, 복강내, 근육내 및 전신 투여, 및 일부 경우에, 특정한 기관 또는 종양 내로의 직접 주사 등. 면역 체크포인트 억제제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 본원에 기재된 바와 같이 단일 경로를 통해 또는 동시에 또는 순차적으로 동시 여러 경로를 통해 투여될 수 있다.

E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 특히 치료 적응증 및 처방 의사의 판단에 따라 1일에 1회, 1일에 2회, 1일에 수회 또는 추가로 1일에 복수회 투여될 수 있다.

치료 효과를 제공하는데 필요한 면역 체크포인트 억제제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 양은 특정한 목적에 대한 통상적인 절차에 따라 실험적으로 결정될 수 있다. 일반적으로, 세포는 치료 대상을 위해 투여될 때 약리학적 유효 용량으로 제공된다. "약리학적 유효량" 또는 "약리학적 유효 용량"은 특정한 장애 또는 질환 상태를 치료하기 위해, 목적하는 생리학적 효과를 생성하거나 또는 목적하는 결과, 예컨대 장애 또는 질환 등의 1종 이상의 증상 또는 적응증을 감소 또는 제거할 수 있는 데 충분한 양을 지칭한다.

조합 요법은 다른 암 치료, 예를 들어, 외과적 절제, 방사선 요법, 화학요법, 면역요법 및 지지 요법 (예를 들어, 진통제, 이뇨제, 항이뇨제, 항바이러스 약물, 항생제, 영양 보충제, 빈혈 치료, 혈액 응고 치료, 골 치료 및 정신병리학적 및 심리적 치료) 등과 추가로 조합될 수 있는 면역 체크포인트 억제제, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합일 수 있다.

하기 열거된 예시적인 구체적 치료 방법, 의약 및 용도를 포함한 본원에 개시된 이들 및 다른 측면은 본원에 함유된 교시로부터 명백할 것이다.

구체적인 치료 방법, 의약 및 용도

[1]. 개체에게 하기를 포함하는 조합 요법을 투여하는 것을 포함하는, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법:

(i) 프로그램화된 사멸 1 단백질 (PD-1)의 길항제;

(ii) 하기 구조를 갖는 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및

(iii) 하기 구조를 갖는 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염:

여기서 PD-1 길항제는 아테졸리주맙이 아니다.

[2]. [1]에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.

[3]. [1]에 있어서, 암이 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 유방암 및 비소세포 폐암 (NSCLC)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.

[4]. [1]에 있어서, 암이 RCC인 방법.

[5]. [1] 내지 [4] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 방법.

[6]. [1] 내지 [5] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체인 방법.

[7]. [1] 내지 [6] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 방법.

[8]. [1] 내지 [7] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙인 방법.

[9]. [1] 내지 [8] 중 어느 하나에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 매일 투여되고; 펨브롤리주맙이 3주마다 1회 투여되는 것인 방법.

[10]. [9]에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 24 mg, 20 mg, 18 mg, 12 mg 또는 8 mg의 1일 용량으로 투여되고; 펨브롤리주맙이 성인에 대해 200 mg 또는 소아에 대해 2 mg/kg (200 mg 이하)의 용량으로 3주마다 1회 투여되는 것인 방법.

[11]. [1] 내지 [10] 중 어느 하나에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 방법.

[12]. (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 (a) 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) 항-PD-1 항체와 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.

[13]. 항-PD-1 항체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 항-PD-1 항체는 (a) 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.

[14]. 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 (a) (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) 항-PD-1 항체와 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.

[15]. [12] 내지 [14] 중 어느 하나에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 제약 조성물.

[16]. [12] 내지 [15] 중 어느 하나에 있어서, 암이 고형 종양인 제약 조성물.

[17]. [12] 내지 [15] 중 어느 하나에 있어서, 암이 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.

[18]. [17]에 있어서, 암이 RCC인 제약 조성물.

[19]. [12] 내지 [18] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.

[20]. [12] 내지 [18] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체인 제약 조성물.

[21]. [12] 내지 [20] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 제약 조성물.

[22]. [12] 내지 [21] 중 어느 하나에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙인 제약 조성물.

[23]. [12] 내지 [22] 중 어느 하나에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 매일 투여되고; PD-1 길항제가 펨브롤리주맙이고, 3주마다 1회 투여되는 것인 제약 조성물.

[24]. [23]에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 24 mg, 20 mg, 18 mg, 12 mg 또는 8 mg의 1일 용량으로 투여되고; 펨브롤리주맙이 성인에 대해 200 mg 또는 소아에 대해 2 mg/kg (200 mg 이하)의 용량으로 3주마다 1회 투여되는 것인 제약 조성물.

[25]. [12] 내지 [24] 중 어느 하나에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 제약 조성물.

[26]. 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 [12] 내지 [25] 중 어느 하나의 제약 조성물의 용도.

[27]. [12] 내지 [25] 중 어느 하나에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.

일반적 방법. 분자 생물학의 표준 방법은 문헌 [Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2^nd Edition, 2001 3^rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)]에 기재되어 있다. 표준 방법은 또한 문헌 [Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols. 1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, which describes cloning in bacterial cells and DNA mutagenesis (Vol. 1), cloning in mammalian cells and yeast (Vol. 2), glycoconjugates and protein expression (Vol. 3), and bioinformatics (Vol. 4)]에 나타나 있다.

면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리 및 결정화를 비롯한 단백질 정제 방법이 기재되어 있다 (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학적 분석, 화학적 변형, 번역후 변형, 융합 단백질의 생산, 단백질의 글리코실화가 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391] 참조). 폴리클로날 및 모노클로날 항체의 생산, 정제 및 단편화가 기재되어 있다 (Coligan, et al. (2001) Current Protcols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, supra). 리간드/수용체 상호작용을 특징화하기 위한 표준 기술이 이용가능하다 (예를 들어, 문헌 [Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York] 참조).

모노클로날, 폴리클로날 및 인간화 항체가 제조될 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, pp. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol. 224:487-499; 미국 특허 번호 6,329,511] 참조).

항체 인간화에 대한 대안은 파지 상에 나타난 인간 항체 라이브러리 또는 트랜스제닉 마우스에서의 인간 항체 라이브러리를 사용하는 것이다 (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol. 14: 309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1: 837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15: 146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21: 371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol. 17: 397-399).

항원의 정제는 항체의 생성에 필요하지 않다. 동물은 관심 항원을 보유하는 세포로 면역화될 수 있다. 이어서, 비장세포는 면역화된 동물로부터 단리될 수 있고, 비장세포는 골수종 세포주와 융합되어 하이브리도마를 생산할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Meyaard et al. (1997) Immunity 7: 283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13: 233-242; Preston et al., supra; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164] 참조).

항체는, 예를 들어 소형 약물 분자, 효소, 리포솜, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)에 접합될 수 있다. 항체는 치료, 진단, 키트 또는 다른 목적에 유용하고, 예를 들어 염료, 방사성동위원소, 효소 또는 금속, 예를 들어 콜로이드성 금에 커플링된 항체를 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146: 169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol. 162: 2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol. 168: 883-889] 참조).

형광 활성화 세포 분류 (FACS)를 비롯한 유동 세포측정법이 이용가능하다 (예를 들어, 문헌 [Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ] 참조). 예를 들어 진단 시약으로서 사용하기 위한, 핵산 프라이머 및 프로브를 비롯한 핵산, 폴리펩티드 및 항체를 변형시키는데 적합한 형광 시약이 이용가능하다 (Molecular Probesy (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

면역계의 조직학의 표준 방법이 기재되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY] 참조).

예를 들어, 항원 단편, 리더 서열, 단백질 폴딩, 기능적 도메인, 글리코실화 부위 및 서열 정렬을 결정하기 위한 소프트웨어 패키지 및 데이터베이스가 이용가능하다 (예를 들어, 진뱅크, 벡터 NTI(Vector NTI)® 스위트 (Suite) (인포맥스, 인크.(Informax, Inc.), 메릴랜드주 베데스다); GCG 위스콘신 패키지 (액셀리스, 인크.(Accelrys, Inc.), 캘리포니아주 샌디에고); 데시퍼(DeCypher)® (타임로직 코포레이션(TimeLogic Corp.), 네바다주 크리스탈 베이); 문헌 [Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16: 741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68: 177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133: 17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14: 4683-4690] 참조).

표 3은 서열 목록 내의 서열의 간단한 설명을 제공한다.

표 3

실시예

실시예 1:

E7386, 렌바티닙 및 항-PD-1 항체의 삼중 조합에 의한 항종양 효과

10% 소 태아 혈청 (FBS) 및 페니실린/스트렙토마이신 (각각 100 유닛/mL)을 함유하는 이글 최소 필수 배지 (E-MEM)를 사용하여 마우스 신세포 암종 세포주 RAG (ATCC 번호: CCL-142)를 배양하였다. 대수 성장 세포를 플라스크로부터 트립신-EDTA를 사용하여 수집하였다. 세포의 현탁액을 원심분리하여 상청액을 제거하였다. 다음으로, 행크 평형 염 용액 (HBSS)을 사용하여 2.5 x 10⁷개 세포/mL의 농도를 갖는 세포 현탁액을 제조하였다. 세포 현탁액을 각각의 7주령 마우스 (BALB/cAnNCrlCrlj, 암컷, 찰스 리버 래보러토리즈 재팬 인크.(Charles River Laboratories Japan Inc.))의 신체의 우측 측면 상에 0.1 mL의 용량으로 피하로 이식하였다. 이식 8일 후에, 전자 디지털 캘리퍼 (디지매틱 (TM) 캘리퍼; 미투토요 코포레이션(Mitutoyo Corporation))를 사용하여 관심 종양의 짧은 직경 및 긴 직경을 측정하였다. 하기 식을 사용하여 종양 부피 TV 및 RTV를 계산하였다.

EQ. 1: 종양 부피 TV (mm³) = 긴 직경 (mm) x 짧은 직경 (mm) x 짧은 직경 (mm) / 2.

EQ. 2: 상대 종양 부피 RTV= 제n일의 TV / 제1일의 TV.

투여 제1일의 종양 부피에 기초하여, 종양 부피의 평균 값이 거의 동일하도록 분류를 수행하였다. 렌바티닙의 1 mg/ml 용액을 3 mM HCl을 사용하여 제조하고, 28일 동안 1일 1회 0.2 mL/20 g 마우스 체중의 용량으로 경구로 투여하였다. PBS로 희석된, 1.0 mg/mL의 항-마우스-PD-1 항체 (클론: RMP1-14, 바이오엑스셀, 카탈로그#: BE0146)를 함유하는 투여 샘플 0.2 mL을 총 8회 (200 g/마우스의 투여량으로) 1주 2회 복강내로 투여하였다 (제1일, 제4일, 제8일, 제11일, 제15일, 제18일, 제22일 및 제25일, 군 분류한 날이 제1일로 설정됨). E7386의 2.5 mg/ml 용액을 0.1 M HCl을 사용하여 제조하고, 28일 동안 1일 1회 0.2 mL/20 g 마우스 체중의 용량으로 경구로 투여하였다. 대조군에는 아무것도 투여하지 않았다. 8마리의 마우스를 포함하는 각각의 군을 사용하여 실험을 수행하였다. 1주 2회 (제1일, 제4일, 제8일, 제11일, 제15일, 제18일, 제22일, 제25일 및 제29일), 각각의 종양 부피 (TV)를 대조군, 렌바티닙 투여 군, 항-마우스-PD-1 항체 투여 군, 렌바티닙 + 항-마우스-PD-1 항체 투여 군, E7386 + 렌바티닙 투여 군 및 삼중 조합물 군에 대해 결정하였다. 종양 부피를 대수적으로 변환시킴으로써 수득된 값을 사용하여 반복 측정된 던넷 다중 비교에 의해 통계적 분석을 수행하였다. E7386은 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드이다.

피하 (s.c.) RAG 이식 모델에서, E7386, 렌바티닙 및 항-마우스-PD-1 항체의 삼중 조합물은 이중 조합물 (즉, 렌바티닙 + 항 PD-1 항체 조합물 또는 렌바티닙 + E7386 조합물) 또는 단독요법으로서 단독으로 투여되는 경우의 각각의 작용제보다 유의하게 더 높은 항종양 효과를 나타냈다. 예를 들어, 제29일에, 삼중 조합물 군은 대조군 및 E7386 군과 비교하여 200배 넘게 더 적은 종양 부피를 가졌다. 삼중 조합물은 렌바티닙 군 및 항 PD-1 항체 군에 비해 각각 30배 넘게 및 120배 넘게 더 적은 종양 부피를 가졌다. 또한, 삼중 조합물 군은 렌바티닙 + 항 PD-1 항체 조합물 군 및 E7386 + 렌바티닙 조합물 군과 비교하여 각각 9배 넘게 더 적은 및 17배 넘게 더 적은 종양 부피를 가졌다.

CR 비율의 측면에서, 삼중 조합 군 (렌바티닙, 펨브롤리주맙 및 E7386)에서 관찰된 비율은 다른 치료군에서 관찰된 비율보다 우수하였다 (CR 비율: 대조군, 렌바티닙 군, 항-PD-1 항체 군, E7386 군, 렌바티닙 + 항 PD-1 항체 군, E7386 + 렌바티닙 군 및 삼중 조합 군에서 각각 8마리 마우스 중 0, 0, 2, 1, 4, 1, 및 7마리).

종양 부피의 매일 변화는 표 4에 제시된다. 또한, 각각의 군의 투여 동안 종양 부피 변화의 시간 경과 및 제29일의 상대 종양 부피를 각각 도 8 및 도 9에 제시한다.

표 4

실시예 2:

E7386, 렌바티닙 및 항-PD-1 항체의 삼중 조합에 의한 항종양 효과

다양한 배양 배지를 사용하여 마우스 세포주를 배양하였다 (도 10a-10c, 칼럼 A 참조). 대수 성장 세포를 플라스크로부터 트립신-EDTA를 사용하여 수집하였다. 세포의 현탁액을 원심분리하여 상청액을 제거하였다. 다음으로, 행크 평형 염 용액 (HBSS)을 사용하여 특정 세포 농도를 갖는 세포 현탁액을 제조하였다 (도 10a-10c, 칼럼 B 참조). 세포 현탁액을 각각의 7주령 면역 적격 마우스의 신체의 우측 측면 상에 0.1 mL의 용량으로 피하로 이식하였다 (도 10a-10c, 칼럼 C 참조).

이식 수일 후 (도 10a-10c, 칼럼 D 참조), 전자 디지털 캘리퍼 (디지매틱(Digimatic) (TM) 캘리퍼; 미투토요 코포레이션)를 사용하여 동물에서 종양의 짧은 직경 및 긴 직경을 측정하였다. 하기 식을 사용하여 종양 부피 TV 및 RTV를 계산하였다.

EQ. 1: 종양 부피 TV (mm³) = 긴 직경 (mm) x 짧은 직경 (mm) x 짧은 직경 (mm) / 2.

EQ. 2: 상대 종양 부피 RTV= 제n일의 TV / 제1일의 TV.

투여 제1일의 종양 부피에 기초하여, 종양 부피의 평균 값이 거의 동일하도록 분류를 수행하였다. 렌바티닙의 1 mg/ml 용액을 3 mM HCl을 사용하여 제조하고, 28일 동안 1일 1회 0.2 mL/20 g 마우스 체중의 용량으로 경구로 투여하였다. PBS로 희석된, 1.0 mg/mL의 항-마우스-PD-1 항체 (클론: RMP1-14, 바이오엑스셀, 카탈로그#: BE0146)를 함유하는 투여 샘플 0.2 mL을 3 또는 4주 동안 1주 2회 복강내로 투여하였다 (200 g/마우스의 투여량으로) (도 10a-10c, 칼럼 E 참조). E7386의 2.5 mg/ml 용액을 0.1 M HCl을 사용하여 제조하고, 3 또는 4주 동안 1일 1회 0.2 mL/20 g 마우스 체중의 용량으로 경구로 투여하였다 (도 10a-10c, 칼럼 E 참조). 대조군에는 아무것도 투여하지 않았다. 8마리의 마우스를 포함하는 각각의 군을 사용하여 실험을 수행하였다. 3 또는 4주 동안 1주 2회 (도 10a-10c, 칼럼 E 참조), 각각의 종양 부피 (TV)를 대조군, 렌바티닙 투여 군, 항-마우스-PD-1 항체 투여 군, 렌바티닙 + 항-마우스-PD-1 항체 투여 군, E7386 + 렌바티닙 투여 군 및 삼중 조합 요법 군에 대해 결정하였다. 종양 부피를 대수적으로 변환시킴으로써 수득된 값을 사용하여 반복 측정된 던넷 다중 비교에 의해 통계적 분석을 수행하였다. E7386은 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드이다.

도 11 및 도 12a-12g에 제시된 바와 같이, E7386, 렌바티닙 및 항-마우스-PD-1 항체의 삼중 조합 요법은 이중 조합 (즉, 렌바티닙 + 항 PD-1 항체 조합 또는 렌바티닙 + E7386 조합) 또는 단독요법으로서 단독으로 투여되는 경우의 각각의 작용제보다 더 높은 항종양 효과를 나타냈다.

시간 t에서의 상대 종양 부피 (RTV)를 하기 식에 따라 계산하였다:

EQ. 3: RTV= TV_t/TV_초기 x 100%.

본 발명자들은 최상의 평균 반응 (BestAvg반응)을 t ≥ 8일에 대한 (RTV-100%)의 평균의 최소 값으로서 정의하였다 (식 4). 이 메트릭은 반응의 속도, 강도 및 내구성의 조합을 단일 값으로 포착한다. 반응에 대한 기준 (mRECIST)을 RECIST 기준으로부터 적합화하고, 하기와 같이 정의하였다 (이 순서로 적용됨): mCR, BestAvg반응 < -95%; mPR, BestAvg반응 < -50%; mSD, BestAvg반응 < 30%; mPD, 달리 분류되지 않음.

참고문헌

본원에 인용된 모든 참고문헌은 각각의 개별 공개, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, 진뱅크 서열 또는 GeneID 엔트리), 특허 출원, 또는 특허가 참조로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 지시된 것과 동일한 정도로 참조로 포함된다. 참조로 포함된다는 상기 언급은 각각의 및 모든 개별 공개, 데이터베이스 엔트리 (예를 들어, 진뱅크 서열 또는 GeneID 엔트리), 특허 출원, 또는 특허에 대해 관련되도록 37 C.F.R. §1.57(b)(1)에 따라 본 출원인이 의도한 것이고, 그 각각은 상기 인용이 참조로 포함된다는 전용 언급에 바로 인접하지 않더라도 37 C.F.R. §1.57(b)(2)에 따라 명백하게 확인된다. 본 명세서 내에, 존재하는 경우, 참조로 포함된다는 전용 진술의 포함은, 참조로 포함된다는 이러한 일반적인 설명을 어떠한 방식으로든지 약화시키지 않는다. 본원에서 참고문헌의 인용은 참고문헌이 관련 선행 기술임을 인정하거나 이들 공개 또는 문헌의 내용 또는 일자에 관한 임의의 인정을 구성하는 것으로 의도되지 않는다.

SEQUENCE LISTING <110> MSD International GmbH Merck Sharp & Dohme Corp. Eisai R&D Management Co., Ltd. <120> COMBINATION OF A PD-1 ANTAGONIST, A VEGFR/FGFR/RET TYROSINE KINASE INHIBITOR AND A CBP/BETA-CATENIN INHIBITOR FOR TREATING CANCER <130> 213597-0005-00-WO <150> US 62/927,334 <151> 2019-10-29 <150> US 62/927,576 <151> 2019-10-29 <160> 25 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 1 Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Phe Ser Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 2 Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Light Chain CDR <400> 3 Gln His Ser Trp Glu Leu Pro Leu Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 4 Ser Tyr Tyr Leu Tyr 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody Heavy Chain CDR <400> 5 Gly Val Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe 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Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro 210 215 220 Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val 225 230 235 240 Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr 245 250 255 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu 260 265 270 Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285 Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile 325 330 335 Ser Lys 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Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu -15 -10 -5 Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr -1 1 5 10 Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu 15 20 25 30 Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile 35 40 45 Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser 50 55 60 Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn 65 70 75 Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr 80 85 90 Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val 95 100 105 110 Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val 115 120 125 Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr 130 135 140 Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser 145 150 155 Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn 160 165 170 Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr 175 180 185 190 Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu 195 200 205 Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His 210 215 220 Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr 225 230 235 Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys 240 245 250 Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu 255 260 265 270 Glu Thr

Claims (29)

1. 개체에게 하기를 포함하는 조합 요법을 투여하는 것을 포함하는, 인간 대상체에서 암을 치료하는 방법:
   (i) 프로그램화된 사멸 1 단백질 (PD-1)의 길항제;
   (ii) 하기 구조를 갖는 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및
   

   

   
   (iii) 하기 구조를 갖는 (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염:
   

   

   
   여기서 PD-1 길항제는 아테졸리주맙이 아니다.
2. 제1항에 있어서, 암이 고형 종양인 방법.
3. 제1항에 있어서, 암이 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
4. 제1항에 있어서, 암이 RCC인 방법.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 방법.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체인 방법.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 방법.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙인 방법.
9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 매일 투여되고; 펨브롤리주맙이 3주마다 1회 투여되는 것인 방법.
10. 제9항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 24 mg, 20 mg, 18 mg, 12 mg 또는 8 mg의 1일 용량으로 투여되고; 펨브롤리주맙이 성인 대상체에 대해 200 mg 또는 소아 대상체에 대해 2 mg/kg (200 mg 이하)의 용량으로 3주마다 1회 투여되는 것인 방법.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 방법.
12. (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염은 (a) 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) 항-PD-1 항체와 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.
13. 항-PD-1 항체를 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 항-PD-1 항체는 (a) 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.
14. 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 암을 치료하기 위한 제약 조성물이며, 여기서 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염은 (a) (6S,9aS)-N-벤질-8-({6-[3-(4-에틸피페라진-1-일)아제티딘-1-일]피리딘-2-일}메틸)-6-(2-플루오로-4-히드록시벤질)-4,7-디옥소-2-(프로프-2-엔-1-일)헥사히드로-2H-피라지노[2,1-c][1,2,4]트리아진-1(6H)-카르복스아미드 (E7386) 또는 그의 제약상 허용되는 염; 및 (b) 항-PD-1 항체와 조합되어 투여되는 것인 제약 조성물.
15. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 제약 조성물.
16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 고형 종양인 제약 조성물.
17. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 신세포 암종 (RCC), 결장직장암 (CRC), 간세포성 암종 (HCC), 흑색종, 방광암, 요로상피암, 유방암, 비소세포 폐암 (NSCLC), 자궁내막암 및 두경부의 편평 세포 암종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 제약 조성물.
18. 제17항에 있어서, 암이 RCC인 제약 조성물.
19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 모노클로날 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 제약 조성물.
20. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 항-PD-1 항체인 제약 조성물.
21. 제12항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙인 제약 조성물.
22. 제12항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, PD-1 길항제가 펨브롤리주맙인 제약 조성물.
23. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 매일 투여되고; PD-1 길항제가 펨브롤리주맙이고, 3주마다 1회 투여되는 것인 제약 조성물.
24. 제23항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 24 mg, 20 mg, 18 mg, 12 mg 또는 8 mg의 1일 용량으로 투여되고; 펨브롤리주맙이 성인 대상체에 대해 200 mg 또는 소아 대상체에 대해 2 mg/kg (200 mg 이하)의 용량으로 3주마다 1회 투여되는 것인 제약 조성물.
25. 제12항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 렌바티닙 메실레이트이고; E7386 또는 그의 제약상 허용되는 염이 E7386인 제약 조성물.
26. 암의 치료를 위한 의약의 제조를 위한 제12항 내지 제25항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 용도.
27. 제12항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 방법, 키트 또는 용도.
29. 제12항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 렌바티닙 또는 그의 제약상 허용되는 염이 매일 투여되고; PD-1 길항제가 펨브롤리주맙이고, 6주마다 1회 투여되는 것인 제약 조성물.

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