TW202126658A - 吡咯并雜芳基衍生物或其偶聯物、其製備方法及其應用 - Google Patents

Abstract

本披露涉及吡咯并雜芳基衍生物或其偶聯物、其製備方法及其應用。具體而言，本披露提供了一種通式(D)所示的化合物或其配體-藥物偶聯物，其製備方法以及該配體-藥物偶聯物及其的醫藥組成物通過在製備治療癌症和病毒感染疾病的藥物中的用途，其中通式(D)中的各取代基與說明書中的定義相同。

Description

吡咯并雜芳基衍生物或其偶聯物、其製備方法及其應用

本披露涉及一類全新結構吡咯并雜芳基衍生物或其偶聯物。具體地說，本披露涉及一種吡咯并雜芳基衍生物以及含有該結構的抗體-藥物偶聯物，及其製備方法，和包含該偶聯物的醫藥組成物以及該偶聯物或醫藥組成物的用途。

抗體藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)把單株抗體或者抗體片段藉由穩定的化學接頭化合物與具有生物活性的藥物相連，充分利用了抗體對正常細胞和腫瘤細胞表面抗原結合的特異性和藥物的高效性，同時又避免了前者療效偏低和後者毒副作用過大等缺陷。這也就意味著，與以往傳統的化療藥物相比，抗體藥物偶聯物能精准地結合腫瘤細胞並降低將對正常細胞的影響(Mullard A，(2013)Nature Reviews Drug Discovery，12：329-332；DiJoseph JF，Armellino DC，(2004)Blood，103：1807-1814)。

TLR(Toll-like receptors)是模式識別受體(pattern recognition receptors，PRR)中的一種，識別與宿主不同的病原體分子，在天然免疫(innate immune response)中發揮關鍵作用，也是連接固有免疫和適應性免疫的橋樑。近年來研究發現，TLR不僅在抗病毒、細菌感染中發揮重要作用，並具有很強的抗腫瘤作用。

TLR主要表達在免疫細胞上，另在上皮、內皮細胞及腫瘤細胞上也有表達。免疫細胞上的TLR被激活後，藉由細胞質內一些接頭蛋白分子(如MyD88、TIRAP、TRIF等)傳遞信息，這些接頭分子會引起一系列信號分子的級聯反應進而活化轉錄因子NF-kB和IRFs，導致炎性相關因子(如IL-2、IL-12、TNF-a等)的釋放，使下游多種免疫細胞進一步激活，包括NK細胞，T細胞和DC細胞等，從而殺死腫瘤細胞或是病原體。

基於TLR在腫瘤免疫中的重要作用，針對這個家族開發抗腫瘤藥物方興未艾。目前已有三個TLR的激動劑被批准用於腫瘤治療，分別是咪喹莫特(Imiquimod)(TLR 7激動劑)用於基底細胞癌；卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin，BCG，TLR2/4激動劑)用於非肌層浸潤性膀胱癌；以及單磷醯脂A(monophosphoryl lipid A(MPLA)，TLR2/4激動劑)作為HPV疫苗佐劑治療宮頸癌。然而全身性給藥最大的問題是系統毒性，可以看到獲批的藥物兩個是局部給藥，一個是免疫佐劑。可以嘗試藉由聯合用藥或靶向用藥的方式提供TLR的療效和靶向性。

本披露提供了一種TLR7激動劑，通式(D)所示的化合物，以及其配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自 烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R³選自胺基、雜環基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)R^6a-OH、-R^b-NHC(O)R^6a-OH-、R^b-R^W-、胺基雜環基、雜環基胺基和環烷基胺基，其中該胺基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、R^w、-C(O)R⁶和-NHC(O)R⁶中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R⁶選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，該烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

R^w的結構如下：

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

在本披露的另一些實施方案中，本披露提供了一種通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R³選自胺基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)- R^6a-OH、-R^b-R^W和如式

所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或 氮原子；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自键、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

R^w的結構如下：

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

在本披露的另一些實施方案中，本披露提供了一種TLR7激動劑，具有一種通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R³選自胺基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)- R^6a-OH、-R^b-R^W和如式

所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或 氮原子；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

R^w的結構如下：

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³為胺基，其中所述的胺基任選被選自烷基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³為雜環基，較佳為含N雜環基，更佳為含2個N原子的單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；該雜環基任選被選自烷基、鹵素和羥基、-C(O)R⁶和-NHC(O)R⁶中的一個或多個取代基所取代；R⁶為烷基，該烷基任選被選自羥基、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³選自胺基雜環基、雜環基胺基和環烷基胺基，其中該雜環基或環烷基為單環雜環基或單環環烷基。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³選自：

、

和-R^b-NH₂；

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一 個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

該R^b選自鍵、伸烷基、伸雜環基和伸環烷基，該伸烷基、伸雜環基和伸環烷基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該伸雜環基和伸環烷基較佳為單環伸雜環基或單環伸環烷基；

G³為碳原子或氮原子；且

該環B為含N雜環基，該雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基和雙環橋雜環基。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³選自含N雜環基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)R^6a-OH或-R^b-NHC(O)R^6a-OH-，其中該含N雜環基結構如下：

R^a，R^b，R^6a，如通式D中所定義；G³為碳原子或氮原子，優選氮原子。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R³選自：

、如式

所示的含N雜環基環B和-R^b-NH₂；

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一 個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

該R^b選自鍵、伸烷基、伸雜環基和伸環烷基，該伸烷基、伸雜環基和伸環烷基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該伸雜環基和伸環烷基較佳為單環伸雜環基或單環伸環烷基；

G³為碳原子或氮原子；且

該環B選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基和雙環橋雜環基。

在本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中R³選自：

本披露的另一方面，提供了一種具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該通式(D-)所示結構如下：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)-C(O)-、-C(O)-N(R⁵)-、-N(R⁵)-S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自 烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

通式(-D)中虛線

表示藉由R^3a基團上的氧原子或氮原子，與接頭單元 或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接；

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

本披露的另一方面，提供了一種配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該配體-藥物偶聯物具有通式(D-)所示的結構：

該通式(D-)為通式化合物(D)在配體-藥物偶聯物中的藥物部分；

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基、-R^b-NH-、-R^b-C(O)R^6a-O-、-R^b-NHC(O)R^6a-O-和-R^b-R^W-；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

R^w的結構如下：

通式(-D)中虛線

表示氫原子；或藉由R^3a基團上的氧原子或氮原子， 與接頭單元或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接；

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

本披露的另一方面，提供了一種具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該通式(D-)所示結構如下：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N原子或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)-C(O)-、-C(O)-N(R⁵)-、-N(R⁵)-S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

通式(-D)中虛線

表示藉由R^3a基團上的氧原子或氮原子，與接頭單元 或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接；

n為0、1、2、3或4；且

m為0、1或2。

本披露的另一方面，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

環A、G₁、G₂、R、R¹、R²、L¹、L²、n如通式(D-)中所定義；

y為1至10的整數或小數；

Pc為配體；且

L為接頭單元。

本披露的另一方面，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A、G₁、G₂、R、R¹、R²、L¹、L²、n通式(D-)中所定義；

y是一個均值，範圍為1至10，可以為整數，也可以為小數；

Pc為配體；

L為接頭單元；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中y為是均值，範圍是0至12，0至10，較佳1至8，更佳2至8，最佳為3至8，3至7，3-6，4-8，4-7，5-8或5-7。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中Pc為抗體，較佳單株抗體。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a為伸雜環基，該伸雜環基為含N雜環基，較佳為含2個N原子的單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；其中N原子與接頭單元或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a選自：

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G³為碳原子或氮原子；

該R^c為伸雜環基，該伸雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a選自：

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G³為碳原子或氮原子；

該環C為伸雜環基，該伸雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a選自：

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該環A為芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶基或噻吩基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該環A選自：

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該G₁為N原子。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中G₂為-O-。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L¹為伸烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L²為伸烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R選自氫原子、烷基和氰基，較佳氰基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R¹為烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R²相同或不同，且各自獨立地為氫原子、烷基、烷氧基和鹵素。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，或者該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^b為伸雜環基或伸環烷基，較佳為單環伸雜環基或單環伸環烷基。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元-L-為-X-L^a-L^b-L^c-L^d-，

X為-CH₂(CH₂)_rCH₂-S-或化學鍵；r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3，最佳1；

L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基 -N)-W-或-C(O)-W-C(O)-、

、

、

和

，其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或1至8個原 子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-或- C(O)-W-C(O)-

、

、

和

，其中 W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、 胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-，其中W選自C_1-8伸烷基或-C_1-8伸烷基-環烷基-，其中該C_1-8伸烷基和環烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺 基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^a較佳自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₅-C(O)-和-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH₂-環己基-C(O)-。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞 胺-3-基-N)-W-、

、

、

和

，其 中W選自C_1-8伸烷基或-C_1-8伸烷基-伸環烷基-，其中該C_1-8伸烷基和伸環烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^a較佳自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₅-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₂-C(O)-和-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH₂-環己基-C(O)-。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中L^a選自以下結構式：

和

，W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8伸烷基-環烷基-。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中L^b為化學鍵或以下結構式：

；該結構式的N端與L^a相連接，有兩個C端作為兩個連接臂， 與L^c相連接。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8烷基-C_3-6環烷基-，較佳C₅伸烷基或-CH₂-環己基-。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中該L^c的肽殘基為由一個或多個選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的肽殘基；較佳為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；更較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中接頭單元L^d選自-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-和化學鍵；

較佳的，L^d選自以下結構式：

R⁸-R¹²，t如接頭單元-L-中所定義，t選自1至6的任一整數。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中接頭單元-L-為-L^a-，選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W- C(O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-，其中W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8伸烷基-環烷基-。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元-L-為-X-L^a-L^b-L^c-L^d-，

X為-CH₂(CH₂)_rCH₂-S-或化學鍵；r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3；最佳1；

L^a為

、

、

、

、

或

，W選自C_1-8伸烷基或-C_1-8伸烷基-環烷基-；

L^b為化學鍵；

L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^d選自以下結構式：

、

和化學鍵；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中該接頭單元-L-，其X端與配體相連，L^d端與通式(D)所示化合物相連。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

L^a為

、

、

、

、

、

或

，s¹為2至8的整數，W選自C_1-8伸 烷基和-C_1-8伸烷基-伸環烷基-；

L^b為化學鍵；

L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^d選自以下結構式：

、

和化學鍵；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

L^a為

，s¹為2至8的整數；

L^b為化學鍵；

L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^d選自以下結構式：

、

和化學鍵；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其中該接頭單元-L-，其L^a端與配體相連，L^d端與通式(D)所示化合物相連。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-Lu1-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

X、W、L^b、L^c、L^d如接頭單元L中所定義；

環A、G₁、G₂、R¹、R²、R^3a、L¹、L²、n如通式(D-)中所定義；

Pc、y如通式(Pc-L-D)中所定義。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-Lu’-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

L^a選自

、

、

、

、

和

；其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基 -或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基；

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1、2、3或4；

m為0、1或2；

Pc為配體；且

y為1至10的整數或小數。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其為通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

W、L^b、L^c、L^d如接頭單元-L^a-L^b-L^c-L^d-中所定義；

環A、G₁、G₂、R¹、R²、R^3a、L¹、L²、n如通式(D-)中所定義；

Pc、y如通式(Pc-L-D)中所定義。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其為通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

W、L^b、L^c、L^d如接頭單元-L^a-L^b-L^c-L^d-中所定義；

環A、G₁、G₂、R¹、R²、R^3a、L¹、L²、n如通式(D-)中所定義；

Pc、y如通式(Pc-L-D)中所定義；

W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基；

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1、2、3或4；

m為0、1或2；

Pc為配體；且

y為1至10的整數或小數。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-Lu-D)或(Pc-Lu-DA)或(Pc-Lu-DB)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、 羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基；

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1、2、3或4；

m為0、1或2；

Pc為配體；且

y為1至10的整數或小數。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，其為通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中

環A為雜芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶或噻吩；

G₂為-O-；

R¹為烷基；

R²選自烷基、烷氧基和鹵素；

L¹為伸烷基；

L²為伸烷基；

R³選自-NH(R^a)、含N雜環基和-R^b-NH₂；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自氫原子、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基和胺基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1或2；

W選自C_1-8伸烷基或-C_1-8烷基-C_3-6環烷基-

L^b為化學鍵；

L^c為四肽殘基或二肽殘基；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^d選自以下結構式：

Pc為抗體，y為1-10的整數或小數。

本披露的另一些實施方案中，該具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物，包括連接單元-L-，該連接單元-L-包括，但不限於：

其中a端與配體Pc相連，b端與藥物端R^3a相連，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。

本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物包括，但不限於：

其中Pc為配體，y為1至10的整數或小數，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。

本披露的另一些實施方案中，提供一種配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽的混合物，其選自以下組合：

組合D-6，其包含：

組合D-7，其包含：

組合D-8，其包含：

組合D-9，其包含：

組合D-18，其包含：

組合D-21，其包含：

組合D-22，其包含：

組合D-23，其包含：

其中Pc為配體，y為1至10的整數或小數，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。

在本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中所述Pc為抗體。

在本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該抗體選自抗TLR7抗體、抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗B7-H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB抗體、抗整合素(Integrin)抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗SLC44A4抗體或抗間皮素(Mesothelin)抗體。

在本披露的另一些實施方案中，該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該抗體選自曲妥珠單抗(Trastuzumab)、帕妥珠單抗 (Pertuzumab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)、恩妥珠單抗(Enoblituzumab)、米貝珠單抗(Emibetuzumab)、依托珠單抗(Inotuzumab)、匹妥珠單抗(Pinatuzumab)、本妥昔單抗(Brentuximab)、吉妥珠單抗(Gemtuzumab)、貝伐珠單抗(Bivatuzumab)、洛妥珠單抗(Lorvotuzumab)、cBR96和格馬圖單抗(Glematumamab)。

本披露通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物包括，但不限於以下結構式：

其中y如前所定義，y選自1-10之間的整數或小數；更佳為1至8，2至8，可以為整數，也可以為小數；最佳為3至8，可以為整數，也可以為小數。其中r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3，最佳1。

在本披露的一些實施方案中，提供一種配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽的混合物，其選自以下組合：

組合FADC-6，其包含：

組合FADC-7，其包含：

組合FADC-8，其包含：

組合FADC-9，其包含：

組合FADC-18，其包含：

組合FADC-21，其包含：

組合FADC-22，其包含：

組合FADC-23，其包含：

組合FADC-28，其包含：

組合FADC-29，其包含：

組合FADC-31，其包含：

組合FADC-32，其包含：

其中y為1至10的整數或小數，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。

本披露的另一方面，提供了一種通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D₁)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A為雜芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶基或噻吩基；

G₂為-O-；

R¹為烷基；

R²選自烷基、烷氧基或鹵素；

L¹為伸烷基；

L²為伸烷基；

R³選自-NH(R^a)、含N雜環基、-R^b-NH₂和-R^b-C(O)R^6a-OH、-R^b-NHC(O)R^6a-OH；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基、雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自氫原子、伸烷基、伸環烷基、伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1或2。

本披露的另一方面，提供了通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D1)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A為雜芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶基或噻吩基；

G₂為-O-；

R¹為烷基；

R²選自烷基、烷氧基和鹵素；

L¹為伸烷基；

L²為伸烷基；

R³選自-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)-R^6a-OH 和如式

所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或氮原子；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自氫原子、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥 基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

n為0、1或2。

本披露該通式(D)所示的化合物包括，但不限於：

本披露的另一些實施方案中，提供了一種通式(Lu’-D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中：

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L^a選自

、

、

、

、

和

；其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或 1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基。

本披露的另一些實施方案中，提供了一種通式(Lu-D)所示的化合物或其可藥用的鹽：

其可用於製備通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物的中間體；

其中

環A、G₁、G₂、R、R¹、R²、R^3a、L¹、L²、n如通式(D-)中所定義；

W、L^b、L^c、L^d如通式(Pc-Lu-D)中所定義；

本披露的另一些實施方案中，提供了一種通式(Lu’-D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Lu-D)所示的化合物或其可藥用的鹽：

其可用於製備通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物的中間體；

其中

環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

G₁為N或CR⁴；

G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，所述雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^3a為伸雜環基，該伸雜環基為含N雜環基，較佳為含2個N原子的單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；其中N原子與接頭單元或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^3a選自：

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G³為碳原子或氮原子；

該R^c為伸雜環基，該伸雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^3a選自：

該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G³為碳原子或氮原子；

該環C為伸雜環基，該伸雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^3a選自：

本披露的另一些實施方案中，該通式(D)所示的化合物，其中該環A為芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶基或噻吩基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中該環A選自：

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中該G₁為N。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中G₂為-O-。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中該L¹為伸烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中該L²為伸烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R選自氫原子、烷基和氰基，較佳氰基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R¹為烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R²相同或不同，且各自獨立地為氫原子、烷基、烷氧基或鹵素。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中R^b為伸雜環基或伸環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-或-C(O)-W-C(O)-，其中W選自C_1-8烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；較佳為化學鍵；

L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

R¹²為芳基或雜芳基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-，其中W選自C_1-8伸烷基或-C_1-8伸烷基-伸環烷基-，其中該C_1-8伸烷基和伸環烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

L^a較佳自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₅-C(O)--(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₂-C(O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH₂-環己基-C(O)-。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中W為C_1-8伸烷基或-C_1-8烷基-C_3-6環烷基-，較佳C₅伸烷基或-CH₂-環己基-。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中該L^c的肽殘基為由一個或多個選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的肽殘基；較佳為四肽殘基；更佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中L^d選自-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-和-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-；t為1至6的整數；

較佳的，L^d選自以下結構式：

R⁸-R¹²如前面所定義。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中接頭單元-L-為-L^a-，選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-和-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-，較佳為-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)-C(O)-或-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-CH₂-環己基-C(O)-。

本披露的另一些實施方案中，該通式(L_u-D)所示的化合物，其中接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

L^a為

，s¹為2至8的整數；

L^b為化學鍵；

L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

L^d選自以下結構式：

、

和化學鍵。

本披露該通式(Lu-D)所示的化合物包括，但不限於：

本披露的另一方面，提供了通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D-I)或(D-II)所示結構的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

其中該R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基；

該環B為含N伸雜環基，該伸雜環基較佳選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；

G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²、R^a和n如通式(D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備通式(D)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

通式(DA-1)化合物脫胺基保護反應，得到通式(D)化合物，

其中：

R³為-NH(R^a)；該R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如通式(D)中所定義。

本披露的另一些實施方案中，提供了一種製備通式(D)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

通式(DA-2)化合物脫胺基保護反應，得到通式(D)化合物，

其中：

R³為如式

所示的含N雜環基環B；該環B為含N伸雜環 基，該伸雜環基較佳選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；

G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如通式(D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備如通式(D-I)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

通式(DA-1)化合物進行脫胺基保護反應，得到通式(D-I)化合物，

其中：

該R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基；

G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如通式(D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備如通式(D-II)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

通式(DA-2)化合物進行脫胺基保護反應，得到通式(D-II)化合物，

其中：

環B為含N伸雜環基，該伸雜環基較佳選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基和雙環橋雜環基；

G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如通式(D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備通式(LuA1-D)所示的化合物的方法，該方法包括：

通式(L-A1)化合物和通式(D)化合物在鹼性條件下反應，得到通式(L_UA1-D)化合物，

其中：環A、R¹、R²、R³、G¹、G²、L¹、L²和n如通式(LuA1-D)中所定义。

本披露的另一方面，提供了一種製備通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物的方法，其包括如下步驟：

還原Pc後，與通式(Lu-D)化合物進行偶聯反應，得到通式(Pc-Lu-D)的配體-藥物偶聯物；還原劑較佳TCEP；

其中：

Pc為配體；

環A、W、R¹、R²、R^3a、G¹、G²、L¹、L²、L^b、L^C、L^d、y和n如通式(Pc-Lu-D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備如通式(Pc-Lu’-D)所示的配體-藥物偶聯物的方法，其包括如下步驟：

還原Pc後所得到Pc’，Pc’與通式(Lu’-D)化合物進行偶聯反應，得到通式(Pc-Lu’-D)的配體-藥物偶聯物；

其中：

L^a選自

、

、

、

、

Pc為配體；G₁、G₂、L¹、L^b、L^c、L^d、R^3a、環A、W、L²、R¹、R²、n和y如通式(Pc-Lu’-D)中所定義。

本披露的另一方面，提供了一種製備通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物的方法，其包括如下步驟：

Pc’為經還原Pc後所得，與通式(Lu-D)化合物進行偶聯反應，得到通式(Pc-Lu-D)配體-藥物偶聯物；還原劑較佳TCEP；

其中：

Pc為配體；

環A、W、L¹、L²、R¹、R²、R^3a、G¹、G²、L^b、L^C、L^d、y和n如通式(Pc-Lu-D)中所定義。

本披露的另一方面，進一步涉及一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽，以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

本披露的另一方面，進一步涉及一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如本披露該化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑；或其含有治療有效量的如本披露該 配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽或其組成物，以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。

本披露的另一方面，進一步涉及一種配體-藥物偶聯物，包含配體和連接至配體的藥物，其中該藥物選自本披露該化合物，較佳藥物藉由接頭連接至配體，較佳配體為單株抗體。

本披露的另一方面，進一步涉及一種配體-藥物偶聯物的製備方法，包含將本披露該化合物與配體連接的步驟，較佳藉由接頭連接，較佳配體為單株抗體。當接頭單元-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-時，L^a端與配體連接，L^d端與藥物連接。

本披露的另一方面，進一步涉及本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽，或其組成物、或其醫藥組成物，其用作藥物。

本披露的另一方面，進一步涉及本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽，或其組合成物、或其醫藥組成物在製備用於治療或預防腫瘤的藥物中的用途；較佳其中該腫瘤為與TLR7、HER2、HER3或EGFR表達相關的癌症。

本披露的另一方面，進一步涉及本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽，或醫藥組成物在製備治療和/或預防癌症的藥物的用途，該癌症較佳選自乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤、肺癌(例如，小細胞肺癌和非小細胞肺癌)、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、白血病(例如，急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病、急性早幼粒細胞白血病、慢性 髓細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病)、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌、前列腺癌或淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或復發性間變性大細胞淋巴瘤)。

本披露的另一方面，進一步涉及本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽，或醫藥組成物在製備用於治療由病毒引起的感染的藥物中的用途，該病毒選自：登革熱病毒、黃熱病毒、西尼羅病毒、日本腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒、昆津病毒、墨累山谷腦炎病毒、聖路易腦炎病毒、鄂木斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、濟卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。

本披露的另一方面，進一步涉及一種用於治療和/或預防腫瘤的方法，該方法包括向需要其的患者施用治療有效劑量的本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽或包含其的醫藥組成物；較佳其中該腫瘤為與TLR7、HER2、HER3或EGFR表達相關的癌症。

本披露的另一方面，進一步涉及一種用於治療或預防癌症的方法，該方法包括向需要其的患者施用治療有效劑量的本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽或包含其的醫藥組成物；所述癌症較佳選自乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤、肺癌(例如小細胞肺癌和非小細胞肺癌)、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、白血病(例如，急性淋巴細胞白血病、急性髓細胞白血病、急性早幼粒細胞白血病、慢性髓細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病)、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌或淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或復發性間變性大細胞淋巴瘤)。

本披露的另一方面，進一步涉及一種用於治療由病毒引起的感染的方法，該方法包括向需要其的患者施用治療有效劑量的本披露該化合物或其配體-藥物偶聯物、或其藥學上可接受的鹽或包含其的醫藥組成物；所述病毒選自：登革熱病毒、黃熱病毒、西尼羅病毒、日本腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒、昆津病毒、墨累山谷腦炎病毒、聖路易腦炎病毒、鄂木斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、濟卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。

可將活性化合物製成適合於藉由任何適當途徑給藥的形式，活性化合物較佳是以單位劑量的方式，或者是以患者可以以單劑自我給藥的方式。本發明化合物或組合物的單位劑量的表達方式可以是片劑、膠囊、扁囊劑、瓶裝藥水、藥粉、顆粒劑、錠劑、栓劑、再生藥粉或液體製劑。

本發明治療方法中所用化合物或組成物的劑量通常將隨疾病的嚴重性、患者的體重和化合物的相對功效而改變。不過，作為一般性指導，合適的單位劑量可以是0.1~1000mg。

本發明的醫藥組成物除活性化合物外，可含有一種或多種輔料，該輔料選自以下成分：填充劑(稀釋劑)、黏合劑、潤濕劑、崩解劑或賦形劑等。根據給藥方法的不同，組合物可含有0.1至99重量%的活性化合物。

含活性成分的醫藥組成物可以是適用於口服的形式，例如片劑、糖錠劑、錠劑、水或油混懸液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊，或糖漿劑或酏劑。可按照本領域任何已知製備藥用組合物的方法製備口服組合物，此類組合物可含有黏合劑、填充劑、潤滑劑、崩解劑或藥學上可接受的潤濕劑等，此類組合物還可以含有一種或多種選自以下的成分：甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑，以提供悅目和可口的藥用製劑。

水懸浮液含有活性物質和用於混合的適宜製備水懸浮液的賦形劑。水混懸液也可以含有一種或多種防腐劑例、一種或多種著色劑、一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑。

油混懸液可藉由使活性成分懸浮於植物油中配製而成。油懸浮液可含有增稠劑。可加入上述的甜味劑和矯味劑，以提供可口的製劑。

醫藥組成物還可以是用於製備水混懸液的可分散粉末和顆粒提供活性成分，藉由加入水混合分散劑、濕潤劑、懸浮劑或防腐劑中的一種或多種。也可加入其他賦形劑例如甜味劑、矯味劑和著色劑。藉由加入抗氧化劑例如抗壞血酸保存這些組合物。

本披露的醫藥組成物也可以是水包油乳劑的形式。

醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶劑有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本披露化合物變區定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種變區定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。這種裝置的實例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型靜脈注射泵。

醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在腸胃外可接受的無毒稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液。此外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。

可按用於直腸給藥的栓劑形式給予本披露化合物。可藉由將藥物與在普通溫度下為固體但在直腸中為液體，因而在直腸中會溶化而釋放藥物的適宜的無刺激性賦形劑混合來製備這些醫藥組成物。此類物質包括可可脂、甘油明膠、氫化植物油、各種分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。

如本領域技術人員所熟知的，藥物的給藥劑量依賴於多種因素，包括但並非限定於以下因素：所用具體化合物的活性、患者的年齡、患者的體重、患者的健康狀況、患者的行為、患者的飲食、給藥時間、給藥方式、排泄的速率、藥物的組合等；另外，最佳的治療方式如治療的模式、通式化合物(I)的日用量或可藥用的鹽的種類可以根據傳統的治療方案來驗證。

圖1A為ADC-7分子的質譜全圖。

圖1B為ADC-7分子的質譜圖輕鏈區放大區。

圖1C為ADC-7分子的質譜圖重鏈區放大區。

圖1D為ADC-7分子的質譜圖重鏈區放大區。

圖2A為ADC-9分子的質譜全圖。

圖2B為ADC-9分子的質譜圖輕鏈區放大區。

圖2C為ADC-9分子的質譜圖重鏈區放大區。

圖2D為ADC-9分子的質譜圖重鏈區放大區。

圖3為本披露的ADC在CT26腫瘤模型中的藥效。

圖4為本披露的ADC在N87腫瘤模型中的藥效。

術語定義

除非另有限定，本文所用的所有技術和科學術語均與本披露所屬領域普通技術人員的通常理解一致。雖然也可採用與本文所述相似或等同的任何方法和材料實施或測試本披露，但本文描述了較佳的方法和材料。描述和要求保護本披露時，依據以下定義使用下列術語。

當本披露中使用商品名時，申請人旨在包括該商品名產品的製劑、該商品名產品的非專利藥和活性藥物部分。

除非有相反陳述，在說明書和申請專利範圍中使用的術語具有下述含義。

術語“配體”是能識別和結合目標細胞相關的抗原或受體的大分子化合物。配體的作用是將藥物呈遞給與配體結合的目標細胞群，這些配體包括但不限於蛋白類激素、凝集素、生長因子、抗體或其他能與細胞結合的分子。在本披露實施方式中，配體表示為Pc，配體可藉由配體上的雜原子與連接單元形成連接鍵，較佳為抗體或其抗原結合片段，該抗體選自嵌合抗體、人源化抗體、全人抗體或鼠源抗體；較佳為單株抗體。

術語“藥物”是指細胞毒性藥物或免疫調節劑。細胞毒性藥物能在腫瘤細胞內具有較強破壞其正常生長的化學分子。細胞毒性藥物原則上在足夠高的濃度下都可以殺死腫瘤細胞，但是由於缺乏特異性，在殺傷腫瘤細胞的同時，也會導致正常細胞的凋亡，導致嚴重的副作用。該術語包括毒素，如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素， 放射性同位素(例如At²¹¹、I¹³¹、I¹²⁵、Y⁹⁰、Re¹⁸⁶、Re¹⁸⁸、Sm¹⁵³、Bi²¹²、P³²和Lu的放射性同位素)，毒性藥物，化療藥物，抗生素和核溶酶。免疫調節劑是免疫關卡分子的抑制劑。本披露的一此實施方案中，藥物表示為D，屬免疫調節劑，特別是TLR7激動劑。

術語“接頭單元(或連接片段)”是指指一端與配體連接而另一端與藥物相連的化學結構片段或鍵，也可以連接其他接頭後再與藥物相連。

接頭，包括延伸物、間隔物和胺基酸單元，可以藉由本領域已知方法合成，諸如US2005-0238649A1中所記載的。接頭可以是便於在細胞中釋放藥物的“可切割接頭”。例如，可使用酸不穩定接頭(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭、或含二硫化物接頭(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美國專利No.5，208，020)。本發明的部分接頭可在一定條件下形成開環結構，如CN108430515A中，實施例4所描述。

術語“配體-藥物偶聯物”，指配體藉由穩定的連接單元與具有生物活性的藥物相連。在本披露中“配體-藥物偶聯物”較佳為抗體-藥物偶聯物(antibody drug conjugate，ADC)，指把單株抗體或者抗體片段藉由穩定的連接單元與具有生物活性的毒性藥物相連。

本披露所用胺基酸三字母代碼和單字母代碼如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。

術語“抗體”包括全長抗體及其抗原結合片段。

術語“全長抗體”指免疫球蛋白，是由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈藉由鏈間二硫鍵連接而成的四肽鏈結構。免疫球蛋白重鏈變區定區的胺基酸組成和排列順序不同，故其抗原性也不同。據此，可將免疫球蛋白分為五類，或稱為免疫球蛋白的同種型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相應的重鏈分別為μ鏈、δ鏈、γ鏈、α鏈、和ε鏈。同一類Ig根據其鉸鏈區胺基酸組成和重鏈二硫鍵的數目和位置的差別，又可分為不同的伸類，如IgG可分為IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。輕鏈藉由變區定區的不同分為κ鏈或λ鏈。五類Ig中每類Ig都可以有κ鏈或λ鏈。本披露該抗體較佳為針對靶細胞上細胞表面抗原的特異性抗體，非限制性實施例為以下抗體：抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗B7-H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB抗體、抗整合素(Integrin)抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗SLC44A4抗體或抗間皮素(Mesothelin)抗體中一個或多個；較佳為曲妥珠單抗(Trastuzumab，商品名Herceptin)、帕妥珠單抗(Pertuzumab，也被稱作2C4，商品名Perjeta)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab，商品名泰欣生)、恩妥珠單抗(Enoblituzumab)、米貝珠單抗(Emibetuzumab)、依托珠單抗(Inotuzumab)、匹妥珠單抗(Pinatuzumab)、本妥昔單抗(Brentuximab)、吉妥珠單抗(Gemtuzumab)、 貝伐珠單抗(Bivatuzumab)、洛妥珠單抗(Lorvotuzumab)、cBR96和格瑪圖單抗(Glematumamab)。

抗體重鏈和輕鏈靠近N端的約110個胺基酸的序列變化很大，為可變區(Fv區)；靠近C端的其餘胺基酸序列相對穩定，為變區定區。可變區包括3個高變區(HVR)和4個序列相對保守的骨架區(FR)。3個高變區決定抗體的特異性，又稱為互補性決定區(CDR)。每條輕鏈可變區(LCVR)和重鏈可變區(HCVR)由3個CDR區4個FR區組成，從胺基端到羧基端依次排列的順序為：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。輕鏈的3個CDR區指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重鏈的3個CDR區指HCDR1、HCDR2和HCDR3。

本披露的抗體包括鼠源抗體、嵌合抗體、人源化抗體和全人源抗體，較佳人源化抗體和全人源抗體。

術語“鼠源抗體”在本披露中為根據本領域知識和技能用鼠製備抗體。製備時用特定抗原注射試驗對象，然後分離表達具有所需序列或功能特性的抗體的融合瘤。

術語“嵌合抗體(chimeric antibody)”，是將鼠源性抗體的可變區與人抗體的變區定區融合而成的抗體，可以減輕鼠源性抗體誘發的免疫應答反應。建立嵌合抗體，要先建立分泌鼠源性特異性單抗的融合瘤，然後從鼠融合瘤細胞中選殖可變區基因，再根據需要選殖人抗體的變區定區基因，將鼠可變區基因與人變區定區基因連接成嵌合基因後插入表達載體中，最後在真核系统或原核系统中表達嵌合抗體分子。

術語“人源化抗體(humanized antibody)”，也稱為CDR移植抗體(CDR-grafted antibody)，是指將鼠的CDR序列移植到人的抗體可變 區框架，即不同類型的人種系抗體框架序列中產生的抗體。可以克服嵌合抗體由於攜带大量鼠蛋白成分，從而誘導的異源性反應。此類構架序列可以从包括種系抗體基因序列的公共DNA術據庫或公開的参考文獻獲得。如人重鏈和輕鏈可變區基因的種系DNA序列可以在“VBase”人種系序列數數據庫(在因特往www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可獲得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。為避免免疫原性下降的同時，引起的活性下降，可對該人抗體可變區框架序列進行最少反向突變或回復突變，以保持活性。本披露的人源化抗體也包括進一步由噬菌體展示對CDR進行亲和力成熟後的人源化抗體。進一步描述参與人源化可使用小鼠抗體的方法的文獻包括，例如Queen等，Proc.，Natl.Acad.Sci.USA，88，2869，1991和Winter及其同事的方法[Jones等，Nature，321，522(1986)，Riechmann，等，Nature，332，323-327(1988)，Verhoeyen，等，Science，239，1534(1988)]。

術語“全人源抗體”、“全人抗體”或“完全人源抗體”，也稱“全人源單株抗體”，其抗體的可變區和變區定區都是人源的，去除免疫原性和毒副作用。單株抗體的發展經歷了四個階段，分别為：鼠源性單株抗體、嵌合性單株抗體、人源化單株抗體和全人源單株抗體。本披露為全人源單株抗體。全人抗體製備的相关技術主要有：人融合瘤技術、EBV轉化B淋巴細胞技術、噬菌體顯示技術(phage display)、轉基因小鼠抗體製備技術(transgenic mouse)和單個B細胞抗體製備技術等。

術語“抗原結合片段”是指抗體的保持特異性結合抗原的能力的一個或多個片段。已顯示可利用全長抗體的片段来進行抗體的抗原結合功能。“抗原結合片段”中包含的結合片段的實例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1結構域組成的單價片段；(ii)F(ab')₂片段，包含藉由鉸鏈 區上的二硫橋連連接的兩兩個Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1結構域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VH和VL結構域組成的Fv片段；(v)單結構域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)，其由VH結構域組成；和(vi)分離的互補决定區(CDR)或(vii)可任選地藉由合成的接頭連接的兩個或更多個分離的CDR的組合。此外，雖然Fv片段的兩個結構域VL和VH由分開的基因編碼，但可使用重組方法，藉由合成的接頭連接它们，從而使得其能够產生為其中VL和VH區配對形成單價分子的單個蛋白質鏈(稱為單链Fv(scFv)；參見，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85：5879-5883)。此類單連抗體也意欲包括在術語抗體的“抗原結合片段”中。使用本領域技術人員已知的常規技術獲得此類抗體片段，並且以與對於完整抗體的方式相同的方式就功用性篩選片段。可藉由重組DNA技術或藉由酶促或化學斷裂完整免疫球蛋白來產生抗原結合部分。抗體可以是不同同種型的抗體，例如，IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4伸型)、IgA1、IgA2、IgD、IgE或IgM抗體。

Fab是藉由用蛋白酶木瓜蛋白酶(切割H鏈的224位的胺基酸殘基)處理IgG抗體分子所獲得的片段中的具有約50,000的分子量並具有抗原結合活性的抗體片段，其中H鏈N端側的約一半和整個L鏈藉由二硫鍵結合在一起。

F(ab')2是藉由用酶胃蛋白酶消化IgG鉸鏈區中兩個二硫鍵的下方部分而獲得的分子量為約100,000並具有抗原結合活性並包含在鉸鏈位置相連的兩個Fab區的抗體片段。

Fab'是藉由切割上述F(ab')2的鉸鏈區的二硫鍵而獲得的分子量為約50，000並具有抗原結合活性的抗體片段。

此外，可以藉由將編碼抗體的Fab'片段的DNA插入到原核生物表達載體或真核生物表達載體中並將載體導入到原核生物或真核生物中以表達Fab'來生產所述Fab'。

術語“單鏈抗體”、“單鏈Fv”或“scFv”意指包含藉由接頭連接的抗體重鏈可變結構域(或區域；VH)和抗體輕鏈可變結構域(或區域；VL)的分子。此類scFv分子可具有一般結構：NH₂-VL-接頭-VH-COOH或NH₂-VH-接頭-VL-COOH。合適的現有技術接頭由重複的GGGGS胺基酸序列或其變體組成，例如使用1-4個重複的變體(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用於本披露的其他接頭由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8：725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immuno 1.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。

術語“CDR”是指抗體的可變結構域內主要促成抗原結合的6個高變區之一。該6個CDR的最常用的定義之一由Kabat E.A.等人，(1991)Sequences of proteins of immunological interest.NIH Publication91-3242)提供。

術語“抗體框架”，是指可變結構域VL或VH的一部分，其用作該可變結構域的抗原結合環(CDR)的支架。從本質上講，其是不具有CDR的可變結構域。

術語“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上免疫球蛋白或抗體特异性結合的部位。表位通常以獨特的空间构象包括至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個連續或非連續的胺基酸。參見，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。

術語“特異性結合”、“選擇性結合”、“選擇性地結合”和“特異性地結合”是指抗體對預先確定的抗原上的表位的結合。通常，抗體以大约小於10^-7M，例如大約小於10^-8M、10^-9M或10^-10M或更小的親和力(KD)結合。

術語“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是單鏈或雙鏈的，但較佳是雙鏈DNA。当將核酸與另一個核酸序列置於功能關係中時，核酸是“有效連接的”。例如，如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉錄，那摸啟動子或增強子有效地連接至所述序列。

術語“載體”是指能够運輸已與其連接的另一個核酸的核酸分子。在一個實施方案中，載體是“質粒”，其是指可將另外的DNA區段連接至其中的環狀雙鏈DNA環。在另一個實施方案中，載體是病毒載體，其中可將另外的DNA區段連接至病毒基因組中。本文中公開的載體能够在已引入它們的宿主細胞中自主複製(例如，具有細菌的複製起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)或可在引入宿主細胞後整合入宿主細胞的基因組，從而隨宿主基因組一起複製(例如，非附加型哺乳動物載體)。

現有技術中熟知生產和純化抗體和抗原結合片段的方法，如冷泉港的抗體實驗技術指南，5-8章和15章。抗原結合片段同樣可以用常規方法製備。發明該抗體或抗原結合片段用基因工程方法在非人源的CDR區加上一個或多個人源FR區。人FR種系序列可以藉由比對IMGT人類 抗體可變區種系基因數據庫和MOE軟件，從ImMunoGeneTics(IMGT)的網站http：//imgt.cines.fr得到，或者從免疫球蛋白雜誌，2001ISBN012441351上獲得。

術語“宿主細胞”是指已向其中引入了表達載體的細胞。宿主細胞可包括細菌、微生物、植物或動物細胞。易於轉化的細菌包括腸桿菌科(enterobacteriaceae)的成員，例如大腸桿菌(Escherichia coli)或沙門氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢桿菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；鏈球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。適當的微生物包括釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和畢赤酵母(Pichia pastoris)。適當的動物宿主細胞系包括CHO(中國倉鼠卵巢細胞系)和NS0細胞。

本披露工程化的抗體或抗原結合片段可用常規方法製備和純化。比如，編碼重鏈和輕鏈的cDNA序列，可以選殖並重組至GS表達載體。重組的免疫球蛋白表達載體可以穩定地轉染CHO細胞。作為一種更推薦的現有技術，哺乳動物類表達系統會導致抗體的糖基化，特別是在Fc區的高度保守N端位點。陽性的純株在生物反應器的無血清培養基中擴大培養以生產抗體。分泌了抗體的培養液可以用常規技術純化。比如，用含調整過的緩衝液的A或G Sepharose FF柱進行純化。洗去非特異性結合的組分。再用PH梯度法沖提結合的抗體，用SDS-PAGE檢測抗體片段，收集。抗體可用常規方法進行過濾濃縮。可溶的混合物和多聚體，也可以用常規方法去除，比如分子篩、離子交換。得到的產物需立即，如-70℃，或者凍乾。

術語“肽”是指介於胺基酸和蛋白質之間的化合物片段，由2個或2個以上胺基酸分子藉由肽鍵相互連接而成，是蛋白質的結構與功能片段，如激素、酶類等本質上都是肽。

術語“糖”是指由C、H、O三種元素組成的生物大分子，可分為單糖、二糖和多糖等。

術語“螢光探針”是指在紫外-可見-近紅外區有特徵螢光，並且其螢光性質(激發和發射波長、強度、壽命和偏振等)可隨所處環境的性質，如極性、折射率、黏度等改變而靈敏地改變的一類螢光性分子，其與核酸(DNA或RNA)、蛋白質或其他大分子結構非共價相互作用而使一種或幾種螢光性質發生改變，可用於研究大分子物質的性質和行為。

術語“毒性藥物”是指抑制或防止細胞的功能和/或引起細胞死亡或破壞的物質。包括毒素和其他能用於腫瘤治療的化合物。

術語“化療藥物”是可用於治療腫瘤的化學化合物。該定義還包括起調節、降低、阻斷或抑制可促進癌生長的激素效果作用的抗激素劑，且常常是系統或全身治療的形式。它們自身可以是激素。

術語“烷基”指飽和脂肪族烴基團，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳含有1至12個碳原子的烷基，更佳含有1至10個或1至8個碳原子的烷基，最佳含有1至6個碳原子的烷基。非限制性實例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1，1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1, 3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各種支鏈異構體等。更較佳的是含有1至6個碳原子的低級烷基，非限制性實施例包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第三丁基、第二丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基。

術語“雜烷基”指含有一個或多個選自N、O或S的雜原子的烷基，其中烷基如上所定義。

術語“伸烷基”指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，其為包含1至20個碳原子的直鏈或支鏈基團，較佳含有1至12個碳原子，更佳含有1至6個碳原子的伸烷基。伸烷基的非限制性實例包括但不限於伸甲基(-CH₂-)、1,1-伸乙基(-CH(CH₃)-)、1,2-伸乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-伸丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-伸丙基(-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-伸丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-伸丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)和1,5-伸丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。伸烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，該取代基較佳獨立地任選選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基和側氧基中的一個或多個取代基所取代。

術語“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的環烷基)，其中烷基或環烷基的定義如上所述。烷氧基的非限制性實例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、環丙氧基、環丁氧基、環戊氧基、環己氧基。烷氧基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，環烷基環包含3至20個碳原子，較佳包含3至12個碳原子，更佳包含3至10個碳原子，最佳包含3至8個碳原子。單環環烷基的非限制性實 例包括環丙基、環丁基、環戊基、環戊烯基、環己基、環己烯基、環己二烯基、環庚基、環庚三烯基、環辛基等；多環環烷基包括螺環、稠環和橋環的環烷基。

術語“伸環烷基”指環烷基上具有2個從母體環烷基的環原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。該環烷基如上所定義。

術語“雜環基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其包含3至20個環原子，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的環部分，其餘環原子為碳。較佳包含3至12個環原子，其中1~4個是雜原子；更佳環烷基環包含3至10個環原子。單環雜環基的非限制性實例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、硫代嗎啉基、高哌嗪基等。多環雜環基包括螺環、稠環和橋環的雜環基。

術語“螺雜環基”指5至20員的單環之間共用一個原子(稱螺原子)的多環雜環基團，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據環與環之間共用螺原子的數目將螺雜環基分為單螺雜環基、雙螺雜環基或多螺雜環基，較佳為單螺雜環基和雙螺雜環基。更佳為4員/4員、4員/5員、4員/6員、5員/5員或5員/6員單螺雜環基。螺雜環基的非限制性實例包括：

術語“稠雜環基”指5至20員，系統中的每個環與體系中的其他環共享毗鄰的一對原子的多環雜環基團，一個或多個環可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多環稠雜環基，較佳為雙環或三環，更佳為5員/5員或5員/6員雙環稠雜環基。稠雜環基的非限制性實例包括：

術語“橋雜環基”指5至14員，任意兩個環共用兩個不直接連接的原子的多環雜環基團，其可以含有一個或多個雙鍵，但沒有一個環具有完全共軛的π電子系統，其中一個或多個環原子為選自氮、氧或S(O)_m(其中m是整數0至2)的雜原子，其餘環原子為碳。較佳為6至14員，更佳為7至10員。根據組成環的數目可以分為雙環、三環、四環或多 環橋雜環基，較佳為雙環、三環或四環，更佳為雙環或三環。橋雜環基的非限制性實例包括：

該雜環基環可以稠合於芳基、雜芳基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜環基，其非限制性實例包括：

和

等。

雜環基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基。

術語“伸雜環基”指雜環基上具有2個從母體雜環基的相同或不同的環原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基。該雜環基如上所定義。

術語“芳基”指具有共軛的π電子體系的6至14員全碳單環或稠合多環(也就是共享毗鄰碳原子對的環)基團，較佳為6至10員，例如苯基和萘基，較佳苯基。該芳基環可以稠合於雜芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為芳基環，其非限制性實例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“雜芳基”指包含1至4個雜原子、5至14個環原子的雜芳族體系，其中雜原子選自氧、硫和氮。雜芳基較佳為5至10員，更佳為5員或6員，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。該雜芳基環可以稠合於芳基、雜環基或環烷基環上，其中與母體結構連接在一起的環為雜芳基環，其非限制性實例包括：

雜芳基可以是任選取代的或非取代的，當被取代時，取代基較佳為一個或多個以下基團，其獨立地選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基胺基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基。

術語“胺基保護基”是為了使分子其它部位進行反應時胺基保持不變，用易於脫去的基團對胺基進行保護。非限制性實施例包含9-芴甲氧羰基、第三丁氧羰基、乙醯基、苄基、烯丙基和對甲氧苄基等。這些基團可任選地被選自鹵素、烷氧基或硝基中的1-3個取代基所取代。該胺基保護基較佳為9-芴甲氧羰基。

術語“胺基雜環基”指雜環基被一個或多個胺基取代，較佳被一個胺基取代，其中雜環基如上所定義，其中“胺基”指-NH₂。本披露的代表性實施例如下：

術語“雜環基胺基”指胺基被一個或多個雜環基取代，較佳被一個雜環基取代，其中胺基如上所定義，其中雜環基如上所定義。本披露的代表性實施例如下：

術語“環烷基胺基”指胺基被一個或多個環烷基取代，較佳被一個環烷基取代，其中胺基如上所定義，其中環烷基如上所定義。本披露的代表性實施例如下：

術語“環烷基烷基”指烷基被一個或多個環烷基取代，較佳被一個環烷基取代，其中烷基如上所定義，其中環烷基如上所定義。

術語“鹵烷基”指烷基被一個或多個鹵素取代，其中烷基如上所定義。

術語“氘代烷基”指烷基被一個或多個氘原子取代，其中烷基如上所定義。

術語“羥基”指-OH基團。

術語“鹵素”指氟、氯、溴或碘。

術語“胺基”指-NH₂。

術語“硝基”指-NO₂。

術語“醯胺基”指-C(O)N(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。

術語“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(環烷基)，其中烷基、環烷基如上所定義。

化學式中簡稱“Me”為甲基。

本披露還包括各種氘化形式的式(I)化合物。與碳原子連接的各個可用的氫原子可獨立地被氘原子替換。本領域技術人員能夠參考相關文獻合成氘化形式的式(I)化合物。在製備氘代形式的式(I)化合物時可使用市售的氘代起始物質，或它們可使用常規技術採用氘代試劑合成，氘代試劑包括但不限於氘代硼烷、三氘代硼烷四氫呋喃溶液、氘代氫化鋰鋁、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。

“任選”或“任選地”意味著隨後所描述的事件或環境可以但不必發生，該說明包括該事件或環境發生或不發生地場合。例如，“任選被烷基取代的雜環基團”意味著烷基可以但不必須存在，該說明包括雜環基團被烷基取代的情形和雜環基團不被烷基取代的情形。

“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，較佳為最多5個，更佳為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(藉由實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的胺基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。

術語“醫藥組成物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學上/可藥用的鹽或前體藥物與其他化學組分的混合物，以及其他組分例如生理學/可藥用的載體和賦形劑。醫藥組成物的目的是促進對生物體的給藥，利於活性成分的吸收進而發揮生物活性。

術語“藥學上可接受的鹽”或“可藥用鹽”是指本披露配體-藥物偶聯物的鹽，或本披露中所述的化合物的鹽，這類鹽用於哺乳動物體內時具有安全性和有效性，且具有應有的生物活性，本披露抗體-抗體藥物偶聯化合物至少含有一個胺基，因此可以與酸形成鹽，可藥用鹽的非限制性實例包括：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、琥珀酸鹽、抗壞血酸鹽、草酸鹽、硝酸鹽、梨酸鹽、磷酸氫鹽、磷酸二氫鹽、水楊酸鹽、檸檬酸氫鹽、酒石酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽。

術語“載藥量”是指式(I)分子中每個配體上加載的細胞毒性藥物平均數量，也可以表示為藥物量和抗體量的比值，藥物載量的範圍可以是每個配體(Pc)連接0-12個，較佳1-10個細胞毒性藥物(D)。在本披露的實施方式中，載藥量表示為y，示例性的可以為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的均值，範圍為0-12，較佳1-10，更較佳1-8，或2-8，或2-7，或3-8，或3-7，或3-6，或4-7，或4-6，或4-5的均值。可用常規方法如UV/可見光光譜法、質譜、ELISA試驗、CE-SDS法和HPLC特徵鑒定偶聯反應後每個ADC分子的藥物品均數量。

本披露的一個實施方式中，細胞毒性藥物藉由連接單員偶聯在配體的N端胺基和/或賴胺酸殘基的ε-胺基上，一般地，偶聯反應中能與抗體偶聯的藥物分子數將小於理論上的最大值。

可以用以下非限制性方法控制配體細胞毒性藥物偶聯物的載量，包括：

(1)控制連接試劑和單抗的摩爾比，

(2)控制反應時間和溫度，

(3)選擇不同的反應試劑。

常規的醫藥組成物的製備見中國藥典。

術語“載體”用於本披露的藥物，是指能改變藥物進入人體的方式和在體內的分佈、控制藥物的釋放速度並將藥物輸送到靶向器官的體系。藥物載體釋放和靶向系統能夠減少藥物降解及損失，降低副作用，提高生物利用度。如可作為載體的高分子表面活性劑由於其獨特的兩親性結構，可以進行自組裝，形成各種形式的聚集體，較佳的實例如膠束、微乳 液、凝膠、液晶、囊泡等。這些聚集體具有包載藥物分子的能力，同時又對膜有良好的滲透性，可以作為優良的藥物載體。

術語“賦形劑”是在藥物製劑中除主藥以外的附加物，也可稱為輔料。如片劑中的黏合劑、填充劑、崩解劑、潤滑劑；半固體製劑軟膏劑、霜劑中的基質部分；液體製劑中的防腐劑、抗氧劑、矯味劑、芳香劑、助溶劑、乳化劑、增溶劑、滲透壓調節劑、著色劑等均可稱為賦形劑。

術語“稀釋劑”又稱填充劑，其主要用途是增加片劑的重量和體積。稀釋劑的加入不僅保證一定的體積大小，而且減少主要成分的劑量偏差，改善藥物的壓縮成型性等。當片劑的藥物含有油性組分時，需加入吸收劑吸收油性物，使保持“乾燥”狀態，以利於製成片劑。如澱粉、乳糖、鈣的無機鹽、微晶纖維素等。

醫藥組成物可以是無菌注射水溶液形式。可在使用的可接受的溶媒和溶劑中有水、林格氏液和等滲氯化鈉溶液。無菌注射製劑可以是其中活性成分溶於油相的無菌注射水包油微乳。例如將活性成分溶於大豆油和卵磷脂的混合物中。然後將油溶液加入水和甘油的混合物中處理形成微乳。可藉由局部大量注射，將注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本披露化合物變區定循環濃度的方式給予溶液和微乳。為保持這種變區定濃度，可使用連續靜脈內遞藥裝置。這種裝置的實例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型靜脈注射泵。

醫藥組成物可以是用於肌內和皮下給藥的無菌注射水或油混懸液的形式。可按已知技術，用上述那些適宜的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配製該混懸液。無菌注射製劑也可以是在無毒腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中製備的無菌注射溶液或混懸液，例如1，3-丁二醇中製備的溶液。此 外，可方便地用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。為此目的，可使用包括合成甘油單或二酯在內的任何調和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以製備注射劑。

本披露涉及一類可裂解的特定結構的連接臂和特定結構的活性物，及由連接臂、活性物與抗體組成的抗體藥物偶聯物(ADC)。此類ADC是經由間隔物將一種毒性物質連於抗體而形成的複合物。該抗體偶聯藥物(ADC)在體內經降解而釋放出活性分子，從而起到抗腫瘤的作用。

以下結合實施例進一步描述本披露，但這些實施例並非限制本披露的範圍。

本披露實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未注明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。

實施例

化合物的結構是藉由核磁共振(NMR)或/和質譜(MS)來確定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的單位給出。NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀，測定溶劑為氘代二甲基伸碸(DMSO-d ₆ )、氘代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)，內標為四甲基矽烷(TMS)。

MS的測定用Agilent 1200/1290 DAD-6110/6120 Quadrupole MS液質聯用儀(生產商：Agilent，MS型號：6110/6120Quadrupole MS)、waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生產商：waters，MS型號：waters ACQuity Qda Detector/waters SQ Detector)、THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生產商：THERMO，MS型號：THERMO Q Exactive)。

高效液相色譜法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高壓液相色譜儀。

手性HPLC分析測定使用Agilent 1260 DAD高效液相色譜儀。

高效液相製備使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281製備型色譜儀。

手性製備使用Shimadzu LC-20AP製備型色譜儀。

CombiFlash快速製備儀使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄層層析矽膠板使用煙臺黃海HSGF254或青島GF254矽膠板，薄層色譜法(TLC)使用的矽膠板採用的規格是0.15mm~0.2mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.4mm~0.5mm。

矽膠管柱色譜法一般使用煙臺黃海矽膠200~300目矽膠為載體。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的測定用NovoStar酶標儀(德國BMG公司)。

本發明的已知的起始原料可以採用或按照本領域已知的方法來合成，或可購買自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶遠化學科技(Accela ChemBio Inc)、達瑞化學品等公司。

實施例中無特殊說明，反應能夠均在氬氣氛或氮氣氛下進行。

氬氣氛或氮氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氬氣或氮氣氣球。

氫氣氛是指反應瓶連接一個約1L容積的氫氣氣球。

加壓氫化反應使用Parr 3916EKX型氫化儀和清藍QL-500型氫氣發生器或HC2-SS型氫化儀。

氫化反應通常抽真空，充入氫氣，重複操作3次。

微波反應使用CEM Discover-S 908860型微波反應器。

實施例中無特殊說明，溶液是指水溶液。

實施例中無特殊說明，反應的溫度為室溫，為20℃~30℃。

實施例中的反應進程的監測採用薄層色譜法(TLC)，反應所使用的展開劑，純化化合物採用的管柱層析的沖提劑的體系和薄層色譜法的展開劑體系包括：A：二氯甲烷/甲醇體系，B：正己烷/乙酸乙酯體系，溶劑的體積比根據化合物的極性不同而進行調節，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等鹼性或酸性試劑進行調節。

一、抗體實施例

以下抗體按抗體常規方法進行製備：如可進行載體構建後，轉染真核細胞如HEK293細胞(Life Technologies Cat.No.11625019)，純化表達。

(1)以下為曲妥珠單抗(Trastuzumab)的序列

輕鏈

SEQ ID NO.1

重鏈

SEQ ID NO.2

(2)以下為帕妥珠單抗(Pertuzumab)的序列

輕鏈：

SEQ ID NO.3

重鏈：

SEQ ID NO.4

(3)以下為抗B7H3抗體1F9DS的序列：

輕鏈

SEQ ID NO.5

重鏈

SEQ ID NO.6

二、化合物實施例

實施例1

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈1

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(4-(溴甲基)苄基)胺基甲酸酯1b

稱取(4-(溴甲基)苄基)胺基甲酸第三丁酯1a(5.16g，17.19mmol，供應商畢得)置於反應瓶中，依次加入乙腈(30mL)和4M的鹽酸的1,4-二噁烷溶液(20mL)，劇烈攪拌下室溫反應1小時。反應液減壓濃縮除去有機溶劑，再加入50mL正己烷，減壓濃縮。所得殘餘物溶於1,4-二噁烷(50ml)和水(10ml)，依次加入碳酸氫鈉(8.66g，103.14mmol)和氯甲酸-9-芴基甲酯(4.00g，15.46mmol)，室溫攪拌反應1小時。加水(100mL)，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合併有機相，有機相依次用水(50mL×2)和飽和氯化鈉溶液(50mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1b(6.12g，產率：84.3%)。

MS m/z(ESI)：422.0[M+1]

第二步

4-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯1c

將化合物1b(1.30g，3.08mmol)加入到乙腈(30mL)中，依次加入無水碳酸鉀(638mg，4.62mmol)和哌嗪-1-基甲酸第三丁酯(860mg，4.62mmol)，加畢室溫攪拌反應2小時。減壓濃縮除去有機溶劑，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1c(1.41g，產率：86.8%)。

MS m/z(ESI)：528.2[M+1]

第三步

4-(4-(胺基甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯1d

將化合物1c(1.41g，2.67mmol)溶於二氯甲烷(5mL)中，加入二乙胺(15mL)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1d(735mg，產率：90.1%)。

MS m/z(ESI)：306.2[M+1]

第四步

4-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯1e

將化合物1d(182mg，0.596mmol)加入到四氫呋喃(2mL)中，加入溴乙酸乙酯(105mg，0.626mmol)，加入三乙胺(121mg，1.192mmol)，室溫攪拌16小時。加水(10mL)，用二氯甲烷萃取(15mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物得到標題產物1e(158mg，產率：67.8%)。

MS m/z(ESI)：392.3[M+1]

第五步

4-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯1g

將化合物1e(158mg，0.40mmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)，加入2-丁氧基-4,6-二氯嘧啶-5-甲醛1f(111mg，0.45mmol，參照專利“CN108794486”中說明書第28頁的實施例1提供的方法合成)，加入三乙 胺(82mg，0.81mmol)，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物1g(220mg，產率：90.2%)。

MS m/z(ESI)：604.2[M+1]

第六步

4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸第三丁酯1h

將化合物1g(220mg，0.36mmol)溶於7M的胺的甲醇溶液(15mL)中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物1h(83mg，產率：42.3%)。

MS m/z(ESI)：538.0[M+1]

第七步

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈1

將化合物1h(65mg，0.12mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(3mL)，氬氣保護，加熱至85℃，攪拌反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去大部分三氯氧磷，所得殘餘物置於常溫水浴中，緩慢滴加無水甲醇(3mL)，加畢室溫攪拌3小時。減壓濃縮除去甲醇，殘餘物溶於二甲亞碸(3mL)，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提， 流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物1(15mg產率：29.6%)。

MS m/z(ESI)：420.0[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.35-7.26(m,5H),5.39(s,2H),4.37(t,2H),3.57(s,2H),3.13-3.07(m,3H),2.63-2.56(m,3H),1.93(s,3H),1.81-1.72(m,2H),1.55-1.46(m,2H),1.36-1.27(m,2H),0.98(t，3H)。

實施例2

4-胺基-7-(4-((4-胺基哌啶-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯[2,3-d]嘧啶-6-甲腈2

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)哌啶-1-基)甲基)苄基)胺基甲酸酯2b

將化合物1b(530mg，1.26mmol)加入到乙腈(10mL)中，依次加入無水碳酸鉀(260mg，1.88mmol)和哌啶-4基甲酸第三丁酯2a(377mg，1.88mmol，供應商韶遠)，加畢室溫攪拌反應2小時。減壓濃縮除去有機溶劑，加水(30mL)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物2b(560mg，產率：82.4%)。

MS m/z(ESI)：542.2[M+1]

第二步

(1-(4-(胺基甲基)苄基)哌啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯2c

將化合物2b(560mg，1.03mmol)溶於二氯甲烷(1mL)中，加入二乙胺(3mL)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物2c(250mg，產率：75.7%)。

MS m/z(ESI)：320.2[M+1]

第三步

(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)哌啶-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯2d

將化合物2c(250mg，0.78mmol)加入到四氫呋喃(3mL)中，加入溴乙酸乙酯(144mg，0.86mmol)，加入三乙胺(160mg，1.58mmol)，室溫攪拌16小時。加水(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物得到標題產物2d(188mg，產率：59.2%)。

MS m/z(ESI)：406.2[M+1]

第四步

N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-((4-((第三丁氧基羰基)胺基)哌啶-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯2e

將化合物2d(188mg，0.46mmol)溶於無水四氫呋喃(5mL)，加入化合物1f(127mg，0.51mmol)，加入三乙胺(94mg，0.93mmol)，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物2e(249mg，產率：86.9%)。

MS m/z(ESI)：618.2[M+1]

第五步

(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)哌啶-4-基)胺基甲酸第三丁酯2f

將化合物2e(249mg，0.40mmol)溶於7M的胺的甲醇溶液(20mL)中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物2f(77mg，產率：34.7%)。

MS m/z(ESI)：552.2[M+1]

第六步

4-胺基-7-(4-((4-胺基哌啶-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈2

將化合物2f(77mg，0.14mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(3mL)，氬氣保護，加熱至85℃，攪拌反應2小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮 除去大部分三氯氧磷，所得殘餘物置於常溫水浴中，緩慢滴加飽和碳酸鈉溶液(5mL)，用10%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液(15mL×3)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物2(10mg產率：16.5%)。

MS m/z(ESI)：434.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.34-7.25(m,5H),5.39(s,2H),4.37(t,2H),3.53(s,2H),3.08-2.98(m,1H),2.93(d,2H),2.14-2.06(m,2H),1.92(s,3H),1.81-1.72(m,2H)1.65-1.58(m,2H),1.53-1.48(m,2H),1.36-1.28(m,3H),0.98(t，3H)。

實施例3

(S)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈3

第一步

(S)-(1-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯3b

將化合物1b(400mg，0.947mmol)加入到8mL乙腈中，加入碳酸鉀(193mg，1.42mmol)，加入(S)-3-第三丁氧羰基胺基吡咯烷3a(264.6mg，1.42mmol，供應商Ark)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液倒入10mL水中，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用水(20mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物3b(342mg，產率：68.5%)。

MS m/z(ESI)：528.0[M+1]

第二步

(S)-(1-(4-(胺基甲基)苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯3c

將化合物3b(340mg，0.64mmol)加入到1.5mL二氯甲烷中，加入二乙胺(3mL)，加畢室溫攪拌6小時。將反應液旋乾，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物3c(150mg，產率：76.2%)。

MS m/z(ESI)：306[M+1]

第三步

(S)-(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯3d

將化合物3c(140mg，0.458mmol)加入到2mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(76.5mg，0.458mmol)，加入三乙胺(92.7mg，0.916mmol)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水(8mL)，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物3d(115mg，產率：64.0%)。

MS m/z(ESI)：392.1[M+1]

第四步

(S)-N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯3e

將化合物3d(111mg，0.283mmol)加入到2mL四氫呋喃中，加入1f(77.6mg，0.311mmol)，加入三乙胺(43mg，0.425mmol)，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物3e(147mg，產率：85.8%)。

MS m/z(ESI)：603.9[M+1]

第五步

(S)-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯3f

將化合物3e(147mg，0.243mmol)加入到14mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物3f(56mg，產率：42.8%)。

MS m/z(ESI)：538.2[M+1]

第六步

(S)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈3

將化合物3f(35mg，0.065mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(2mL)，反應液溫度升至85℃，攪拌反應3小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，向反應液中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用10%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液(15mL×3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物3(6.1mg產率：22.3%)。

MS m/z(ESI)：420.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.40-7.25(m,5H),5.39(s,2H),4.37(t,2H),3.56-3.73(m,2H),2.95-2.85(m,2H),2.67-2.59(m,2H),2.46-2.39(m,1H),2.34-2.24(m,2H),1.81-1.69(m,3H),1.56-1.45(m,2H),1.38-1.28(m,2H),0.98(t，3H)。

實施例4

(R)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈4

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(R)-(4-((3-((第三丁氧羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)苄基)胺基甲酸酯4b

將化合物1b(400mg，0.947mmol)加入到8mL乙腈中，加入碳酸鉀(193mg，1.42mmol)，加入(R)-3-第三丁氧羰基胺基吡咯烷4a(264.6mg，1.42mmol，供應商Ark)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液倒入10mL水中，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用水(20mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物4b(340mg，產率：68.0%)。

MS m/z(ESI)：528.2[M+1]

第二步

(R)-(1-(4-(胺基甲基)苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯4c

將化合物4b(340mg，0.64mmol)加入到1mL二氯甲烷中，加入二乙胺(2mL)，加畢後升至室溫攪拌6小時。將反應液直接旋乾，所得殘餘物直接用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物4c(179mg，產率：90.9%)。

MS m/z(ESI)：306.1[M+1]

第三步

(R)-(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯4d

將化合物4c(179mg，0.586mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(97.8mg，0.586mmol)，加入三乙胺(118.6mg，1.172mmol)，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水8mL，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物4d(140mg，產率：61.0%)。

MS m/z(ESI)：392.0[M+1]

第四步

(R)-N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-((3-((第三丁氧基羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯4e

將化合物4d(140mg，0.357mmol)加入到2mL四氫呋喃中，加入1f(97.9mg，0.393mmol)，加入三乙胺(54.2mg，0.536mmol)室溫攪拌3.5小時，反應液直接減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物4e(150mg，產率：69.4%)。

MS m/z(ESI)：604.0[M+1]

第五步

(R)-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯4f

將化合物4e(150mg，0.248mmol)加入到14mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物4f(53mg，產率：39.7%)。

MS m/z(ESI)：538.4[M+1]

第六步

(R)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈4

將化合物4f(30mg，0.055mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(2mL)，反應液溫度升至85℃，攪拌反應3小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，向反應液中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用10%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液(15mL×3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物4(4.4mg產率：18.7%)。

MS m/z(ESI)：420.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.42(s,1H),7.31-7.29(d，2H)，7.19-7.17(d,2H),5.32(s,2H),4.26(t,2H),3.65-3.58(m,2H),2.70-2.64(m,2H),2.36-2.30(m,2H),2.05-1.95(m,2H),1.70-1.58(m,3H),1.45-1.36(m,2H),1.28-1.20(m,4H),0.93(t，3H)。

實施例5

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈5

第一步

5-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5b

將六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5a(181mg，0.85mmol，供應商：adamas)加入到8mL乙腈中，加入碳酸鉀(196mg，1.42mmol)，再加入化合物1b(300mg，0.71mmol)，加畢，室溫攪拌反應2.5小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物5b(319mg，產率：81.1%)。

MS m/z(ESI)：554.0[M+1]

第二步

5-(4-(胺基甲基)苄基)六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5c

將化合物5b(319mg，0.58mmol)加入到2mL二氯甲烷中，加入4mL二乙胺，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物5c(166mg，產率：86.9%)。

MS m/z(ESI)：332.1[M+1]

第三步

5-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)苄基)六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5d

將化合物5c(166mg，0.50mmol)加入到4mL四氫呋喃中，滴加溴乙酸乙酯(88mg，0.53mmol)，再滴入三乙胺(152mg，1.50mmol)，加畢，室溫攪拌反應23小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物中加入水20mL， 用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物5d(141mg，產率：67.4%)。

MS m/z(ESI)：418.0[M+1]

第四步

5-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)苄基)六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5e

將化合物1f(88mg，0.35mmol)加入到5mL四氫呋喃中，加入化合物5d(141mg，0.34mmol)，加入三乙胺(51mg，0.50mmol)，室溫攪拌2.5小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物5e(179mg，產率：84.1%)。

MS m/z(ESI)：630.2[M+1]

第五步

5-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)六氫吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸第三丁酯5f

將化合物5e(179mg，0.28mmol)加入到7M的胺的甲醇溶液(14mL)中，悶罐130℃攪拌反應16小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物5f(82mg，產率：51.2%)。

MS m/z(ESI)：564.2[M+1]

第六步

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(六氫吡咯并[3,4-c]吡咯烷-2(1H)-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈5

將化合物5f(82mg，0.12mmol)加入到5mL三氯氧磷中，升至85℃反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用二氯甲烷：甲醇(V：V=10：1)的混合溶劑(8mL×6)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓，所得殘餘物進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物5(14mg，產率：25.3%)。

MS m/z(ESI)：446.0[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.33-7.26(m,5H),5.38(s,2H),4.37(t,2H),3.59(s,2H),3.06-3.02(m,2H),2.93-2.89(m,2H),2.68(d,2H),2.41-2.37(m,2H),1.92(s,3H),1.78-1.74(m,2H),1.53-1.47(m,2H),1.33-1.29(m，2H)，0.98(t，3H)。

實施例6

7-(4-((2,7-二氮雜螺[3.5]壬-7-基)甲基)苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈6

將化合物1a換成2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-2-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例7

7-(4-((2,7-二氮雜螺[3.5]壬-2-基)甲基)苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈7

將化合物1a換成2,7-二氮雜螺[3.5]壬烷-7-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例8

(R)-4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈8

將化合物1a換成(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例9

(S)-4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈9

將化合物1a換成(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例10

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈10

將化合物1a換成(2R,6S)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例11

7-(4-((3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛-3-基)甲基)苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈11

將化合物1a換成3,8-二氮雜雙環[3.2.1]辛烷-8-甲酸第三丁酯，參考實施例1化合物的合成方法合成。

實施例12

4-胺基-2-丁氧基-7-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈12

第一 步

(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苯基)甲醇12b

將4-(胺基甲基)-3-甲氧基苯甲酸甲酯12a(600mg，3.07mmol，採用專利申請“US2010/16373，2010，A1”第14頁Preparation 86公開的方法製備而得)加入到15mL四氫呋喃中，氬氣置換三次，冰浴冷卻至0℃，慢慢滴加1M四氫鋰鋁的四氫呋喃溶液(3.7mL，3.69mmol)，加畢，冰浴反應1小時後自然升至室溫繼續攪拌反應1.5小時。冰浴下向反應液中依 次加入140mg水，420mg 15%氫氧化鈉溶液，420mg水，再加入無水硫酸鈉，室溫攪拌10分鐘，過濾，濾液減壓濃縮得到粗品產物12b(514mg，產率：100%)。產品不經純化直接進行下一步反應。

第二步

(9H-芴-9-基)甲基(4-(羥基甲基)-2-甲氧基苄基)胺基甲酸酯12c

將化合物12b(514mg，3.07mmol)加入到20mL 1,4-二噁烷中，加入4mL水，加入碳酸氫鈉(775mg，9.22mmol)，再加入氯甲酸-9-芴基甲酯(791mg，3.06mmol)，加畢，室溫反應2小時。加入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物12c(495mg，產率：41.3%)。

MS m/z(ESI)：390.3[M+1]

第三步

(9H-芴-9-基)甲基(4-(溴甲基)-2-甲氧基苄基)胺基甲酸酯12d

將化合物12c(495mg，3.07mmol)加入到20mL氫溴酸和4mL四氫呋喃中，加熱至85℃反應2小時。反應液減壓濃縮，冰浴下加入飽和碳酸鈉溶液調節pH大於7，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(60mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物12d(596mg，產率：100%)。

MS m/z(ESI)：452.2[M+1]

第四步

4-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯12f

將哌嗪-1-甲酸第三丁酯12e(200mg，1.07mmol，供應商：韶遠)加入到10mL乙腈中，加入碳酸鉀(244mg，1.77mmol)，再加入化合物12d(400mg，0.88mmol)，加畢，室溫攪拌反應1.2小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物12f(354mg，產率：71.8%)。

MS m/z(ESI)：558.3[M+1]

第五步

4-(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯12g

將化合物12f(354mg，0.63mmol)加入到2mL二氯甲烷中，加入4mL二乙胺，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物12g(202mg，產率：94.9%)。

MS m/z(ESI)：336.4[M+1]

第六步

4-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯12h

將化合物12g(202mg，0.60mmol)加入到8mL四氫呋喃中，滴加溴乙酸乙酯(105mg，0.63mmol)，再滴入三乙胺(183mg，1.81mmol)，加畢，室溫攪拌反應23小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物中加入水20 mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物12h(210mg，產率：82.7%)。

MS m/z(ESI)：422.4[M+1]

第七步

4-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯12i

將化合物1f(130mg，0.52mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入化合物12h(210mg，0.50mmol)，加入三乙胺(76mg，0.75mmol)室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物12i(236mg，產率：74.7%)。

MS m/z(ESI)：634.3[M+1]

第八步

4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸第三丁酯12j

將化合物12i(236mg，0.37mmol)加入到7M的胺的甲醇溶液(20mL)中，悶罐130℃攪拌反應22小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物12j(104mg，產率：49.2%)。

MS m/z(ESI)：568.3[M+1]

第九步

4-胺基-2-丁氧基-7-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈12

將化合物12j(104mg，0.18mmol)加入到4mL三氯氧磷中，升至85℃反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用二氯甲烷：甲醇(：V=10：1)的混合溶劑(8mL×6)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓，所得殘餘物進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物12(13mg，產率：15.8%)。

MS m/z(ESI)：450.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.60(br，2H)，7.40(s,1H),6.93(s,1H),6.74(dd，2H)，5.22(s,2H),4.20(t,2H),3.82(s,3H),3.55(s,2H),2.68-2.60(m,4H),2.33-2.25(m,4H),1.64-1.60(m,2H),1.49-1.41(m,1H),1.39-1.33(m,2H),0.91(t，3H)。

實施例13

(R)-4-胺基-2-丁氧基-7-(2-甲氧基-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈13

將化合物12e換成(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯，參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例14

(S)-4-胺基-2-丁氧基-7-(2-甲氧基-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈14

第一步

(S)-4-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14b

將(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14a(159mg，0.79mmol，供應商：韶遠)加入到6mL乙腈中，加入碳酸鉀(183mg，1.33mmol)，再加入化合物12d(300mg，0.66mmol)，加畢，室溫攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入30mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物14b(319mg，產率：84.1%)。

MS m/z(ESI)：572.3[M+1]

第二步

(S)-4-(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14c

將化合物14b(319mg，0.56mmol)加入到2mL二氯甲烷中，加入4mL二乙胺，室溫攪拌4小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物14c(159mg，產率：81.5%)。

MS m/z(ESI)：350.2[M+1]

第三步

(S)-4-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14d

將化合物14c(159mg，0.45mmol)加入到8mL四氫呋喃中，滴加溴乙酸乙酯(80mg，0.48mmol)的1mL四氫呋喃溶液，再滴入三乙胺(93mg，0.92mmol)，加畢，室溫攪拌反應18小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物14d(160mg，產率：80.7%)。

MS m/z(ESI)：436.3[M+1]

第四步

(S)-4-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14e

將化合物14d(160mg，0.37mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入化合物12h(92mg，0.37mmol)，加入三乙胺(56mg，0.55mmol)室溫攪拌1小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物14e(206mg，產率：86.5%)。

MS m/z(ESI)：648.2[M+1]

第五步

(S)-4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基羰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14f

將化合物14e(206mg，0.32mmol)加入到7M的胺的甲醇溶液(15mL)中，悶罐130℃攪拌反應21小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物14f(81mg，產率：43.8%)。

MS m/z(ESI)：582.2[M+1]

第六步

(S)-4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯14g

將化合物14f(82mg，0.14mmol)溶於無水四氫呋喃(3mL)中，氬氣保護，冰水浴冷卻至0℃，依次加入2，6-二甲基吡啶(45mg，0.42mmol)和三氟乙酸酐(88mg，0.42mmol)。加畢，0℃下攪拌1小時。撤去冰水浴，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(5mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機 相，有機相依次用5%的檸檬酸水溶液(10mL×2)和飽和氯化鈉溶液(10mL×2)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物得到標題產物14g(48mg，產率：60.4%)。

MS m/z(ESI)：564.3[M+1]

第七步

(S)-4-胺基-2-丁氧基-7-(2-甲氧基-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈14

往化合物14g(48mg，0.85mmol)中加入4M的氯化氫的1,4-二噁烷溶液(3mL)，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，加入2mL甲苯并減壓濃縮，重複兩次。往殘餘物中加入3mL正己烷打漿，靜置後傾倒出上層清液，保留固體；重複三次。再往殘餘物中加入3mL甲基第三丁基醚打漿，靜置後傾倒出上層清液，保留固體；重複三次。將固體殘餘物減壓濃縮，油泵拉乾得到標題產物14(45mg，鹽酸鹽，產率：98.5%)。

MS m/z(ESI)：464.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.40(s,1H),6.93(s,1H),6.77(d,1H),6.70(d,1H),5.22(s,2H),4.19(t,2H),3.82(s,3H),2.80-2.73(m,2H),2.70-2.56(m,6H),2.04-1.95(m,1H),1.90-1.82(m,1H),1.66-1.57(m,2H),1.56-1.50(m,1H),1.47-1.42(m,1H),1.40-1.32(m,2H),0.93-0.83(m,6H)。

實施例15

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(((3R，5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈15

將化合物12e換成(2R,6S)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯，參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例16

4-胺基-2-丁氧基-7-(2-氟-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈16

將化合物12a換成4-胺基甲基-3-氟苯甲酸甲酯，參考實施例12化合物的合成方法合成。

MS m/z(ESI)：438.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.70-7.50(br，2H)，7.42(s,1H),7.13(d,1H),7.09-6.90(m,2H),5.34(s,2H),4.22(t,2H),3.39(s,2H),2.65(t，4H)，2.34-2.31(m,4H),1.66-1.58(m,2H),1.41-1.33(m,2H),0.90(t，3H)

實施例17

4-胺基-2-丁氧基-7-(2-氟-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈17

將化合物12a換成4-胺基甲基-3-氟苯甲酸甲酯，化合物12e換成2-甲基哌嗪-1-甲酸第三丁酯參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例18

4-胺基-2-丁氧基-7-((5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈18

將化合物12a換成6-(胺基甲基)煙酸甲酯，參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例19

4-胺基-7-(4-((4-胺基哌啶-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈

將化合物12e換成化合物2a，參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例20

4-胺基-2-丁氧基-7-((5-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈20

將化合物12a換成5-胺基甲基噻吩-2-甲酸甲酯，參考實施例12化合物的合成方法合成。

實施例21

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((環丙胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈21

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(4-((環丙基胺基)甲基)苄基)胺基甲酸酯21b

將環丙胺21a(61mg，1.07mmol，供應商：韶遠)加入到10mL乙腈中，加入碳酸鉀(147mg，1.07mmol)，再加入化合物1b(300mg，0.71mmol)，加畢，室溫攪拌反應2.5小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入30mL水中，用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物21b(182mg，產率：64.3%)。

MS m/z(ESI)：399.2[M+1]

第二步

(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)(環丙基)胺基甲酸第三丁酯21c

將化合物21b(182mg，0.46mmol)加入到5mL二氯甲烷中，冰浴下加入三乙胺(93mg，0.92mmol)和二碳酸二第三丁酯(149mg，0.68mmol)，加畢，室溫攪拌反應1.5小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入20mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物21c(228mg，產率：100%)。

MS m/z(ESI)：516.0[M+18]

第三步

(4-(胺基甲基)苄基)(環丙基)胺基甲酸第三丁酯21d

將化合物21c(228mg，0.46mmol)加入到1mL二氯甲烷中，加入1.5mL二乙胺，升至30℃攪拌4小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物21d(108mg，產率：85.8%)。

第四步

(4-(((第三丁氧羰基)(環丙基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯21e

將化合物21d(105mg，0.38mmol)加入到4mL四氫呋喃中，滴加溴乙酸乙酯(67mg，0.40mmol)，再滴入三乙胺(115mg，1.14mmol)，加畢，室溫攪拌反應23小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用 矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物21e(86mg，產率：62.4%)。

MS m/z(ESI)：363.1[M+1]

第五步

N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-(((第三丁氧羰基)(環丙基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯21f

將化合物1f(55mg，0.22mmol)加入到4mL四氫呋喃中，加入化合物21e(76mg，0.21mmol)，加入三乙胺(32mg，0.32mmol)室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物21f(110mg，產率：91.2%)。

MS m/z(ESI)：574.9[M+1]

第六步

(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)(環丙基)胺基甲酸第三丁酯21g

將化合物21f(110mg，0.19mmol)加入到7M的胺的甲醇溶液(7mL)中，悶罐130℃攪拌反應16小時。反應液減壓濃縮，殘餘物中加入20mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法展開劑體系A純化，得到標題產物21g(24mg，產率：24.7%)。

MS m/z(ESI)：509.0[M+1]

第七步

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((環丙胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈21

將化合物21g(24mg，0.05mmol)加入到2mL三氯氧磷中，升至85℃反應1小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，所得殘餘物中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用二氯甲烷(8mL×3)萃取，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(15mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物21(8mg，產率：43.4%)。

MS m/z(ESI)：391.0[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.36-7.33(m，4H)，6.96(s,1H),5.38(s,2H),5.31(s,2H),4.56(br，1H)，4.38(t,2H),3.81(s,2H),2.22-2.14(m,1H),1.82-1.78(m,2H),1.54-1.51(m,2H),0.98(t,3H),0.45-0.40(m,4H)。

實施例22

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(((四氫-2H-吡喃-4-基)胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈22

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(4-(((四氫-2H-吡喃-4-基)胺基)甲基)苄基)胺基甲酸酯22b

將化合物1b(400mg，0.947mmol)加入到8mL乙腈中，加入碳酸鉀(193mg，1.42mmol)，加入4-胺基四氫吡喃22a(143.6mg，1.42mmol，供應商Ark)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液倒入10mL水中，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用水(20mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物22b(260mg，產率：62.2%)。

MS m/z(ESI)：443.2[M+1]

第二步

(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)(四氫-2H-吡喃-4-基)胺基甲酸第三丁酯22c

將化合物22b(260mg，0.587mmol)加入到6mL二氯甲烷中，加入三乙胺(118.6mg，1.172mmol)，加入二碳酸二第三丁酯(141mg，0.646 mmol)，加畢後室溫攪拌3小時。將反應液直接旋乾，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物22c(276mg，產率；86.7%)。

MS m/z(ESI)：560.0[M+18]

第三步

(4-(胺基甲基)苄基)(四氫-2H-吡喃-4-基)胺基甲酸第三丁酯22d

將化合物22c(272mg，0.501mmol)加入到2mL二氯甲烷中，加入二乙胺(1mL)，加畢後升至室溫攪拌6小時。將反應液直接旋乾，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物22d(124mg，產率：77.2%)。

MS m/z(ESI)：343.0[M+23]

第四步

(4-(((第三丁氧羰基)(四氫-2H-吡喃-4-基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯22e

將化合物22d(124mg，0.386mmol)加入到3mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(64mg，0.386mmol)，加入三乙胺(78.3mg，0.773mmol)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水8mL，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物22e(100mg，產率：63.6%)。

MS m/z(ESI)：407.0[M+1]

第五步

N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-(((第三丁氧羰基)(四氫-2H-吡喃-4-基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯22f

將化合物22e(100mg，0.245mmol)加入到2mL四氫呋喃中，加入化合物1f(67.4mg，0.270mmol)，加入三乙胺(37.3mg，0.368mmol)室溫攪拌3.5小時，反應液直接減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物22f(140mg，產率：91.9%)。

MS m/z(ESI)：619.0[M+1]

第六步

(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)(四氫-2H-吡喃-4-基)胺基甲酸第三丁酯22g

將化合物22f(140mg，0.226mmol)加入到14mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物22g(56mg，產率：43.2%)。

MS m/z(ESI)：553.4[M+1]

第七步

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-(((四氫-2H-吡喃-4-基)胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈22

將化合物22g(56mg，0.101mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(2mL)，反應液溫度升至85℃，攪拌反應3小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，向反應液中加入10mL飽和碳酸氫鈉溶液，用10%(v/v)的甲醇 的二氯甲烷溶液(15mL×3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉溶液(30mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物22(13mg產率：29.5%)。

MS m/z(ESI)：435.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.73-7.52(br，2H)，7.40(s，1H)，7.32-7.229(d,2H),7.16(d,2H),5.30(s,2H),4.26(t,2H),3.81-3.78(m,2H),3.69(s,2H),3.26-3.19(m,2H),1.91(s,1H),1.76-1.73(d,2H),1.70-1.60(m,2H),1.44-1.34(m,2H),1.28-1.18(m，3H)，0.92(t，3H)。

實施例23

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((環戊基胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈23

第一步

(9H-芴-9-基)甲基(4-((環戊基胺基)甲基)苄基)胺基甲酸酯23b

將環戊胺23a(157mg，1.84mmol，供應商adamas)溶於乙腈(20mL)中，依次加入無水碳酸鉀(294mg，2.13mmol)和化合物1b(600mg，1.42mmol)，加畢室溫攪拌反應2小時。減壓濃縮除去有機溶劑，加水(30ml)，用乙酸乙酯萃取(30mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物23b(400mg，產率：66.0%)。

MS m/z(ESI)：427.2[M+1]

第二步

(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)苄基)(環戊基)胺基甲酸第三丁酯23c

將化合物23b(400mg，0.94mmol)溶於二氯甲烷(20mL)，加入二碳酸二第三丁酯(307mg，1.41mmol)和三乙胺(190mg，1.88mmol)，室溫攪拌2小時。減壓濃縮，加水(10mL)，用乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除 去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物23c(377mg，產率：76.3%)。

MS m/z(ESI)：544.2[M+18]

第三步

(4-(胺基甲基)苄基)(環戊基)胺基甲酸第三丁酯23d

將化合物23c(377mg，0.72mmol)溶於二氯甲烷(1mL)中，加入二乙胺(3mL)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物23d(175mg，產率：80.3%)。

MS m/z(ESI)：305.2[M+1]

第四步

(4-(((第三丁氧基羰基)(環戊基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯23e

將化合物23d(175mg，0.57mmol)加入到四氫呋喃(3mL)中，加入溴乙酸乙酯(105mg，0.63mmol)，加入三乙胺(116mg，1.15mmol)，室溫攪拌16小時。加水(10mL)，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化所得殘餘物得到標題產物23e(196mg，產率：87.3%)。

第五步

N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-(((第三丁氧基羰基)(環戊基)胺基)甲基)苄基)甘胺酸乙酯23f

將化合物23e(196mg，0.50mmol)溶於無水四氫呋喃(5mL)，加入1f(138mg，0.55mmol)，加入三乙胺(101mg，1.00mmol)，室溫攪拌2 小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化，得到標題產物23f(246mg，產率：81.3%)。

MS m/z(ESI)：603.2[M+1]

第六步

(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基甲醯基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)(環戊基)胺基甲酸第三丁酯23g

將化合物23f(246mg，0.41mmol)溶於7M的胺的甲醇溶液(20mL)中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去有機溶劑，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物23g(87mg，產率：39.7%)。

MS m/z(ESI)：537.4[M+1]

第七步

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((環戊基胺基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈23

將化合物23g(87mg，0.16mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(3mL)，氬氣保護，加熱至85℃，攪拌反應2小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮除去大部分三氯氧磷，所得殘餘物置於常溫水浴中，緩慢滴加飽和碳酸鈉溶液(5mL)，用10%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液(15mL×3)萃取，合併有機相，用飽和氯化鈉溶液(5mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物23(34mg產率：50.1%)。

MS m/z(ESI)：419.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.62(br,3H),7.39(s,1H),7.28(d,2H),7.15(d,2H),5.29(s,2H),4.25(t,2H),3.61(s,2H),2.97-2.91(m,1H),1.87(s,1H),1.71-1.57(m,5H),1.45-1.37(m,3H),1.34-1.23(m,3H),0.91(t，3H)。

實施例24

(R)-4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(2-環丙基-2-羥基乙醯基)哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈24

將化合物1(7.7mg，18.35umol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(1mL)和乙醇(0.2mL)中，加入(R)-2-環丙基-2-羥基乙酸24a(7.0mg，60.29umol，採用文獻“Journal of the Chemical Society，Chemical Communications，1991，#5，p.326-327”公開的方法製備而得)，然後依次加入N-甲基嗎啉(10mg，98.87umol)，1-羥基苯并三唑(5mg，37.00umol)和1-乙基-(3- 二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(7mg，36.52umol)，室溫下攪拌反應1小時。加水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層層析法以沖提劑體系A純化，得到標題產物24(5.3mg，產率：55.8%)。

MS m/z(ESI)：518.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ 7.40-7.35(m,4H),6.99(s,1H),5.41(s,3H),4.39(t,2H),4.37-4.23(m,1H),3.68-3.45(m,6H),2.62-2.47(m,4H),2.23(t,1H),2.05-1.98(m,1H),1.83-1.77(m,2H),1.55-1.48(m,2H),0.99(t,3H),0.92-0.87(m,1H),0.53-0.42(m,4H)。

實施例25

(R)-N-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)哌啶-4-基)-2-環丙基-2-羥基乙醯胺25

將化合物2(5.0mg，11.53umol)溶於N，N-二甲基甲醯胺(1mL)和乙醇(0.2mL)中，加入化合物24a(4.0mg，34.45umol)，然後依次加入N- 甲基嗎啉(6mg，59.32umol)，1-羥基苯并三唑(4mg，29.60umol)和1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(5mg，26.08umol)，室溫下攪拌反應1小時。加水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層層析法以沖提劑體系A純化，得到標題產物25(3.0mg，產率：48.9%)。

MS m/z(ESI)：532.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 7.40-7.27(m，5H)，5.41(s,2H),5.36-5.33(m,1H),4.37(t,2H),3.73-3.70(m,1H),3.55(d,1H),3.06-2.98(m,2H),2.22-2.17(m,1H),2.06-2.02(m,1H),1.93-1.87(m,2H),1.80-1.73(m,2H),1.65-1.57(m,3H),1.53-1.46(m,2H),0.98(t,3H),0.96-0.85(m,5H),0.51-0.41(m,3H),0.38-0.35(m，1H)

實施例26 LD-1

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)(環丙基)胺基甲酸酯26

將 化合物21(6.6mg，0.017mmol)加入到1.1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加 入化合物26a(13.7mg，0.018mmol，供應商：Ark)，再加入0.22mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(2.3mg，0.017mmol)和N,N-二異丙基乙胺(6.6mg，0.051mmol)，室溫攪拌反應16小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物26(4mg，產率：23.9%)。

MS m/z(ESI)：989.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.91(s,1H),8.00(d,1H),7.72(d,1H),7.52(br，2H)，7.50(d,2H),7.34(s,1H),7.21(s,2H),7.12(s,3H),6.92(s,2H),5.90(t，1H)，5.33(s,2H),5.26(s,2H),4.95(s,2H),4.32(s,3H),4.19(t,2H),4.12(t,1H),2.95-2.86(m,3H),2.18-2.02(m,3H),1.96-1.83(m,3H),1.59-1.51(m,4H),1.42-1.31(m,8H),1.17-1.10(m,2H),0.85-0.74(m,9H),0.59-0.50(m,4H)。

實施例27 LD-2

-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸酯27

將12(5mg，0.011mmol)加入到1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入26a(10mg，0.014mmol)，再加入0.2mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(5mg，0.033mmol)和N,N-二異丙基乙胺(5mg，0.039mmol)，室溫攪拌反應4.5小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流動相：A-水(10mmol NH₄OAc)：B-乙腈，梯度沖提，流速：18mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物27(2.5mg，產率：21.4%)。

MS m/z(ESI)：1048.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.91(s,1H),8.07(d,1H),7.79(d,1H),7.62(br，2H)，7.57(d,2H),7.40(s,1H),7.27(d,2H),7.00(s,1H),6.95(s,1H),6.74(dd，2H)，5.96(t，1H)，5.40(s,1H),5.32(t,1H),5.22(s,2H),4.98(s,2H),4.30-4.37(m,1H),4.19(t,2H),3.82(s,2H),3.43(s,3H),3.30-3.28(m,4H),3.08-2.90(m,3H),2.35-2.25(m,4H),2.20-1.05(m,3H),2.03-1.90(m,3H),1.70-1.55(m,3H),1.50-1.42(m,4H),1.38-1.32(m,2H),1.30-1.25(m,8H),0.90-0.82(m，6H)。

實施例28 LD-3

N-((10S)-1-((1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基)-10-苄基-2-環丙基-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六烷-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺28

實施例29 LD-4

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈29

將化合物12(5.6mg，0.012mmol)加入到1mL四氫呋喃中，加入29a(15mg，0.11mmol，採用專利申請“WO2017/72662，2017，A1”第156頁Example 5公開的方法製備而得)的1mL四氫呋喃溶液，再加入醋酸硼氫化鈉(10mg，0.047mmol)並滴入一滴醋酸，室溫攪拌反應45分鐘。反應液減壓濃縮，所得殘餘物用薄層色譜法展開劑體系A純化，得到標題產物29(6mg，產率：84.1%)。

MS m/z(ESI)：573.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.60(br，2H)，7.40(s,1H),7.00(s,2H),6.92(s,1H),6.73(dd，2H)，5.21(s,2H),4.19(t,2H),3.81(s,3H),3.61-3.45(m,4H),2.40-2.28(m,8H),2.05-1.95(m,2H),1.65-1.55(m,2H),1.37-1.32(m,2H),0.90(t，3H)。

實施例30 LD-5

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(3-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈30

將化合物12(9.6mg，0.020mmol)和3-馬來醯亞胺基丙酸30a(6mg，0.036mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1mL)中，加入三乙胺(6mg，0.059mmol)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(8mg，0.029mmol)，室溫攪拌1小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物30(9.5mg，產率：80.1%)。

MS m/z(ESI)：601.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.61(br，2H)，7.40(s，1H)，7.01(s,2H),6.96(s,1H),6.79(d,1H),6.72(d,1H),5.23(s,2H),4.20(t,2H),3.83(s,3H),3.59(t,2H),3.44(s,2H),2.41-2.21(m,5H),2.09-1.90(m,2H),1.68-1.58(m,3H),1.48-1.30(m,4H),0.89(t，3H)。

實施例31

S-(1-(2-(4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二側氧吡咯烷-3-基)半胱胺酸31

實施例32 LD-6

N-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-4-基)-4-((2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)甲基)環己烷-1-甲醯胺32

實施例33 LD-7

(2S,3S,4S,5R,6S)-6-(4-(((4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羰基)氧基)甲基)-3-(3-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)丙氧基)苯氧基)-3,4,5-三羥基四氫-2H-吡喃-2-甲酸

實施例34、35

S-((R)-1-(2-(4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二側氧吡咯烷-3-基)-L-半胱胺酸

34

S-((S)-1-(2-(4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-基)乙基)-2,5-二側氧吡咯烷-3-基)-L-半胱胺酸35

將化合物29(5mg，0.008mmol)加入到0.8mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入L-半胱胺酸(1.6mg，0.013mmol)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液減壓濃縮，所得殘餘物溶於二甲亞碸(2mL)，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到兩個標題產物34和35(2.6mg，2.2mg)。

較短保留時間：

HPLC純度81%，保留時間2.025分鐘，分析方法(色譜管柱：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH₄OAc)，B-乙腈)

MS m/z(ESI)：694.9[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.87-9.85(s,1H),7,88-7.83(m,1H),7.65-7.63(br，2H)，7.40(s,1H),7.22-7.18(m,1H),6.93(s,1H),6.78-6.68(m,3H),5.77-5.74(m,1H),5.35-5.29(m,2H),5.22(s,2H),4.19(t,3H),3.83-3.80(m,5H),3.65-3.59(m,2H),2.70-2.65(m,2H),2.34-2.31(m,2H),2.03-1.96(m,4H),1.90(s,3H),1.66-1.58(m,2H),1.49-1.41(m,2H),0.89(t，3H)。

較長保留時間：

HPLC純度89%，保留時間2.034分鐘，分析方法(色譜管柱：：ACQUITY UPLC BEHC18 1.7um 2.1*50mm，流動相：A-水(5mmol NH₄OAc)，B-乙腈)

MS m/z(ESI)：694.9[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 7.87-7.83(m,1H),7.66-7.63(br，2H)，7.40(s,1H),7.22-7.18(m,1H),6.93(s,1H),6.78-6.68(m,3H),5.77-5.74(m,1H),5.35-5.29(m,2H),5.22(s,2H),4.19(t,3H),3.83-3.80(m,5H),3.65-3.59(m,2H),2.70-2.65(m,2H),2.34-2.31(m,2H),2.03-1.96(m,4H),1.90(s,3H),1.66-1.58(m,2H),1.49-1.41(m,2H),0.89(t，3H)。

實施例36

(R)-N-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)-2-環丙基-2-羥基乙醯胺36

將化合物19(8.0mg，0.016mmol)溶於二氯甲烷(2mL)和甲醇(0.2mL)中，加入化合物24a(6mg，0.052mmol)，然後依次加入三乙胺(5mg，0.049mmol)，1-羥基苯并三唑(6mg，0.044mmol)和1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(9mg，0.049mmol)，氬氣保護，室溫下攪拌反應1小時。反應液減壓濃縮，殘餘物溶於二甲亞碸(2mL)，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物36(5mg產率：55.6%)。

MS m/z(ESI)：562.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.65(br,3H),7.42(s,1H),6.94(s,1H),6.77(d,1H),6.71(d,1H),6.13-6.03(m,1H),5.35-5.30(m,1H),5.22(s,2H),4.20(t,2H),3.82(s,3H),2.76-2.65(m,3H),2.03-1.95(m,3H),1.66-1.59(m,3H),1.52-1.42(m,3H),1.39-1.32(m,2H),1.03-0.98(m,1H),0.92-0.81(m,4H),0.38-0.22(m,4H)。

實施例37

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((環丁基胺基)甲基)-2-氟苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈37

將化合物21a換成化合物環丁胺，參考實施例21化合物的合成方法合成。

MS m/z(ESI)：423.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.10-7.02(m,3H),7.01-6.98(m,1H),5.44(s,2H),4.33(t,2H),3.68(s,2H),3.30-3.20(m,1H),2.21-2.10(m,2H),1.79-1.60(m,5H),1.59-1.41(m,6H),0.96(t，3H)。

實施例38

(S)-N-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)-2-環丙基-2-羥基乙醯胺38

將化合物19(35mg，75.50umol)溶於二氯甲烷(5mL)和甲醇(0.5mL)中，加入(S)-2-環丙基-2-羥基乙酸38a(26mg，223.9umol，採用文獻 “Journal of the Chemical Society，1988，110，p.2959”公開的方法製備而得)，然後依次加入三乙胺(23mg，227.3umol)，1-羥基苯并三唑(30mg，222.0umol)和1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(43mg，224.3umol)，氬氣保護，室溫下攪拌反應1小時。反應液減壓濃縮，殘餘物溶於二甲亞碸(3mL)，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物38(25mg產率：59.0%)。

MS m/z(ESI)：562.0[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.58(br,3H),7.41(s,1H),6.95(s,1H),6.78(d,1H),6.71(d,1H),5.26(d,1H),5.23(s,2H),4.20(t,2H),3.83(s,3H),3.57-3.53(m,1H),3.49(t,2H),2.77-2.69(m,2H),2.05-1.91(m,3H),1.70-1.58(m,3H),1.55-1.42(m,3H),1.40-1.35(m,2H),1.04-0.96(m,1H),0.93-0.83(m,3H),0.39-0.23(m,4H)。

實施例39

(S)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈39

第一步

(S)-(1-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯39b

將化合物12d(500mg，1.10mmol)加入到10mL乙腈中，加入碳酸鉀(451mg，3.31mmol)，加入(S)-3-第三丁氧羰基胺基吡咯烷39a(205.8mg，1.10mmol，供應商韶遠)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液倒入10mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用水(20mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物39b(401mg，產率：65.0%)。

MS m/z(ESI)：558.0[M+1]

第二步

(S)-(1-(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯39c

將化合物39b(401mg，0.72mmol)加入到3mL二氯甲烷中，加入二乙胺(6mL)，加畢室溫攪拌6小時。將反應液旋乾，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物39c(195mg，產率：80.8%)。

MS m/z(ESI)：336.3[M+1]

第三步

(S)-(4-((3-((第三丁氧羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)甘胺酸乙酯

39d

將化合物39c(195mg，0.581mmol)加入到2mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(92.2mg，0.552mmol)，加入三乙胺(176mg，1.744mmol)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水(8mL)，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物39d(170mg，產率：69.3%)。

MS m/z(ESI)：422.3[M+1]

第四步

(S)-N-(2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)-N-(4-((3-((第三丁氧羰基)胺基)吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)甘胺酸乙酯39e

將化合物39d(340mg，0.806mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入1f(200.9mg，0.806mmol)，加入三乙胺(122mg，1.209mmol)，室溫攪拌3.5小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物39e(320mg，產率：62.5%)。

MS m/z(ESI)：634.1[M+1]

第五步

(S)-(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基羰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸第三丁酯39f

將化合物39e(320mg，0.504mmol)加入到16mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物39f(77mg，產率：26.8%)。

MS m/z(ESI)：568.2[M+1]

第六步

(S)-4-胺基-7-(4-((3-胺基吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈39

將化合物39f(77mg，0.135mmol)置於反應瓶中，加入三氯氧磷(5mL)，反應液溫度升至90℃，攪拌反應3小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮，用二甲亞碸溶解殘餘物，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物39(15mg產率：24.5%)。

MS m/z(ESI)：450.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ7.79-7.51(br，2H)，7.40(s,1H),6.95(s,1H),6.81-6.75(m,1H),6.71-6.66(m,1H),5.22(s,2H),4.19(t,2H),3.82(s,3H),3.56-3.45(m,2H),2.43-2.35(m,1H),2.19-2.10(m,1H),2.05-1.92(m,2H),1.66-1.55(m,2H),1.41-1.31(m,2H),1.23(s,3H),0.89(t，3H)。

實施例40

(R)-N-((S)-1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)-2-環丙基-2-羥基乙醯胺40

將化合物39(6mg，13.3umol)溶於二氯甲烷(1mL)和甲醇(0.1mL)中，加入化合物24a(7.7mg，66.7umol)，然後依次加入三乙胺(4mg，40umol)，1-羥基苯并三唑(1.3mg，40umol)和1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(7.67mg，40umol)，室溫下攪拌反應2小時。減壓濃縮，所得殘餘物用二甲亞碸溶解，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物40(5mg產率：68.4%)。

MS m/z(ESI)：546.3[M-1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.55-7.51(br，2H)，7.41(s,1H),7.28-7.15(m,1H),7.07-6.90(m,1H),6.81-6.64(m,2H),5.36-5.29(m,1H),5.24(s,2H),4.19(t,2H),3.85(s,3H),3.52-3.45(m,2H),2.35-2.26(m,1H),2.15-2.05(m,1H),2.03-1.95(m,2H),1.68-1.56(m,3H),1.50-1.44(m,1H),1.43-1.31(m,3H),1.04-0.94(m,2H),0.93-0.83(m,3H),0.42-0.18(m,4H)。

實施例41

7-(4-((4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈41

第一步

7-(4-(((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41b

將化合物12d(1g，3.21mmol)加入到30mL乙腈中，加入碳酸鉀(751.6mg，5.52mmol)，加入4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41a(469mg，2.21mmol，供應商畢得)，加畢室溫攪拌反應2小時。反應液倒入10mL水中，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合併有機相，有機相用水(20mL)洗滌，飽和氯化鈉溶液(20mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物41b(1.05g，產率：81.3%)。

MS m/z(ESI)：584.1[M+1]

第二步

7-(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41c

將化合物41b(1.05g，1.79mmol)加入到3mL二氯甲烷中，加入二乙胺(6mL)，加畢室溫攪拌6小時。將反應液旋乾，所得殘餘物用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系A純化，得到標題產物41c(440mg，產率：67.6%)。

MS m/z(ESI)：362.1[M+1]

第三步

7-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41d

將化合物41c(440mg，1.21mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(193.1mg，1.156mmol)，加入三乙胺(307.9mg，3.04mmol)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水(8mL)，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物41d(444mg，產率：81.4%)。

MS m/z(ESI)：448.2[M+1]

第四步

7-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41e

將化合物41d(444mg，0.992mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入化合物1f(247mg，0.992mmol)，加入三乙胺(200mg，1.984mmol)，室 溫攪拌3.5小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物41e(420mg，產率：64.1%)。

MS m/z(ESI)：661.0[M+1]

第五步

7-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基羰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-4-羧酸第三丁酯41f

將化合物41e(420mg，0.636mmol)加入到16mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物41f(190mg，產率：50.3%)。

MS m/z(ESI)：595.0[M+1]

第六步

7-(4-((4,7-二氮雜螺[2.5]辛-7-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈41

將化合物41f(190mg，0.32mmol)置於反應瓶中，加入四氫呋喃(3mL)，加入2，6-二甲基吡啶(102.8mg，0.96mmol)，氬氣保護下降溫至零度，加入三氟乙酸酐(201mg，0.96mmol)，零度攪拌反應40分鐘，升至室溫攪拌反應1.5小時。反應液減壓濃縮，加入10mL二氯甲烷溶解，加入8mL碳酸氫鈉飽和溶液，攪拌5分鐘，分液，有機相用5%的檸檬酸水溶液洗(8mL×2)，飽和食鹽水洗(8mL×2)，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到黃色油狀物，向該油狀物中加入4M的鹽酸二氧六環溶液(10mL)，攪拌1小時，濃縮後用二甲亞碸溶解殘餘物，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮得到標題產物41(64mg產率：42.0%)。

MS m/z(ESI)：476.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.40(s,1H),6.95(s,1H),6.81-6.65(m,3H),5.21(s,2H),4.20(t,2H),3.82(s,3H),3.46-3.38(m,2H),2.86-2.79(m,2H),2.23-2.15(m,2H),2.04-1.95(m,2H),1.66-1.56(m,2H),1.42-1.31(m,3H),0.89(t,3H),0.55-0.46(m,2H),0.43-0.36(m,2H)。

實施例42

7-(4-((4,7-二氮雜螺[2.5]辛-4-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈42

第一步

4-(4-(胺基甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸第三丁酯42b

將化合物12d(1g，3.21mmol)加入到30mL乙腈中，加入碳酸鉀(751.6mg，5.52mmol)，加入4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸第三丁酯42a(469mg，2.21mmol，供應商畢得)，加畢室溫攪拌反應24小時，再升至60℃反應22小時，反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物42b(410mg，產率：51.3%)。

MS m/z(ESI)：362.4[M+1]

第二步

4-(4-(((2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸第三丁酯42c

將化合物42b(410mg，1.13mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入溴乙酸乙酯(170mg，1.13mmol)，加入三乙胺(286.9mg，2.83mmol)，室溫攪拌3小時。反應液減壓濃縮後，向體系中加入水(8mL)，用二氯甲烷萃取(8mL×3)，合併有機相，有機相分別用水(10mL)，飽和氯化鈉溶液(10mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾除去乾燥劑，濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物得到標題產物42c(378mg，產率：74.4%)。

MS m/z(ESI)：448.3[M+1]

第三步

4-(4-(((2-丁氧基-6-氯-5-甲醯基嘧啶-4-基)(2-乙氧基-2-側氧乙基)胺基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸第三丁酯42d

將化合物42c(378mg，0.844mmol)加入到8mL四氫呋喃中，加入化合物1f(210mg，0.844mmol)，加入三乙胺(171mg，1.689mmol)，室 溫攪拌3.5小時。反應液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以沖提劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物42d(420mg，產率：75.3%)。

MS m/z(ESI)：660.1[M+1]

第四步

4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-胺基羰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸第三丁酯42e

將化合物42d(420mg，0.636mmol)加入到16mL 7M胺甲醇溶液中，悶罐130℃攪拌反應20小時。反應液冷卻至室溫，減壓濃縮後，所得殘餘物用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物42e(140mg，產率：37.1%)。

MS m/z(ESI)：594.2[M+1]

第五步

7-(4-((4,7-二氮雜螺[2.5]辛-4-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-4-胺基-2-丁氧基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈42

將化合物42e(140mg，0.236mmol)置於反應瓶中，加入四氫呋喃(3mL)，加入2，6-二甲基吡啶(75.8mg，0.707mmol)，氬氣保護下降溫至0℃，加入三氟乙酸酐(148.5mg，0.707mmol)，0℃攪拌反應40分鐘，升至室溫攪拌反應1.5小時。反應液減壓濃縮，加入10mL二氯甲烷溶解，加入8mL碳酸氫鈉飽和溶液，攪拌5分鐘，分液，有機相依次用5%的檸檬酸水溶液(8mL×2)和飽和食鹽水(8mL×2)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮，得到黃色油狀物，向該油狀物中加入4M的鹽酸二氧六環溶液(10mL)，攪拌1小時，減壓濃縮後用二甲亞碸溶解殘餘物，用高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相： A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，減壓濃縮得到標題產物42(20mg產率：17.8%)。

MS m/z(ESI)：476.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.40(s,1H),6.90(s,1H),6.78-6.67(m,3H),5.21(s,2H),4.20(t,2H),3.80(s,3H),3.76(s,2H),2.79-2.73(m,2H),2.64-2.59(m,2H),2.04-1.96(m,2H),1.66-1.56(m,2H),1.42-1.31(m,3H),0.89(t,3H),0.61-0.56(m,2H),0.48-0.43(m，2H)

實施例43 LD-8

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基(S)-4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸酯43

將化合物14(15mg，0.030mmol)加入到1.5mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入化合物26a(26mg，0.035mmol)，再加入0.3mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(13mg，0.085mmol)和N,N-二異丙基乙胺(11mg，0.085mmol)，室溫攪拌反應16小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物43(5mg，產率：15.7%)。

MS m/z(ESI)：1062.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 10.00(s,1H),8.10(d,1H),7.81(d,1H),7.58(d,2H),7.40(s,1H),7.27(d,2H),7.00(d,2H),6.78(d,1H),6.72(d,1H),6.01-5.94(m,1H),5.42(s,2H),5.22(s,2H),5.03-4.93(m,2H),4.40-4.33(m,1H),4.23-4.16(m,3H),4.13-4.06(m,1H),3.82(s,3H),3.73(d,2H),2.33(s,1H),2.22-2.05(m,4H),2.03-1.87(m,5H),1.73-1.55(m,5H),1.53-1.31(m,9H),1.30-1.12(m,9H),0.92-0.77(m,9H)。

實施例44 LD-9

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基)哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈44

將化合物12(12mg，0.027mmol)和6-馬來醯亞胺基己酸44a(11mg，0.052mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1mL)中，加入N,N-二異丙基乙胺(10mg，0.077mmol)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(14mg，0.051mmol)，室溫攪拌1小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm； 流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物44(4mg，產率：23.3%)。

MS m/z(ESI)：643.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.64(br，2H)，7.40(s,1H),7.00(s,2H),6.96(s,1H),6.79(d,1H),6.72(d,1H),5.23(s,2H),4.20(t,2H),3.83(s,3H),2.35-2.19(m,7H),1.68-1.57(m,3H),1.51-1.41(m,5H),1.40-1.30(m,3H),1.30-1.11(m,6H),0.89(t，3H)。

實施例45 LD-10

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(2-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈45

將化合物1(15mg，0.036mmol)加入到1mL四氫呋喃中，加入化合物29a(15mg，0.11mmol)的1mL四氫呋喃溶液，再加入醋酸硼氫化鈉(23mg，0.11mmol)並滴入一滴醋酸，室溫攪拌反應3小時。反應液直接用薄層色譜法以展開劑體系A純化，得到標題產物45(17mg，產率：87.6%)。

MS m/z(ESI)：543.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.60(br，2H)，7.40(s,1H),7.24(d,2H),7.16(d,2H),7.01(s,2H),5.30(s,2H),4.25(t,2H),3.49(t,2H),2.45-2.15(m,9H),2.05-1.95(m,2H),1.70-1.60(m,2H),1.45-1.35(m,3H),0.91(t，3H)。

實施例46 LD-11

4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(3-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)丙醯基)哌嗪-1-基)甲基)苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈46

將化合物1(10mg，0.024mmol)和30a(6mg，0.036mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(2mL)中，加入三乙胺(7mg，0.069mmol)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(10mg，0.036mmol)，室溫攪拌1小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物46(6mg，產率：44.1%)。

MS m/z(ESI)：571.2[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.62(br，2H)，7.40(s,1H),7.27(d,2H),7.18(d,2H),7.00(s,2H),5.31(s,2H),4.25(t,2H),3.58(t,2H),3.44(s,2H),2.35-2.22(m,5H),2.02-1.95(m,2H),1.71-1.61(m,3H),1.50-1.32(m,4H),0.91(t，3H)。

實施例47 LD-12

N-((2R，10S)-1-((1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基)-10-苄基-2-環丙基-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺47

第一步

(R)-2-環丙基-2-羥基乙酸苄酯47b

(S)-2-環丙基-2-羥基乙酸苄酯47c

將2-環丙基-2-羥基乙酸47a(7.4g，63.7mmol，採用專利申請“WO2013106717”公開的方法製備而得)溶於200mL乙腈中，依次加入碳酸鉀(35g，253.6mmol)，溴化苄(9.3g，54.4mmol)和四丁基碘化銨(500mg，1.36mmol)。將反應液室溫攪拌16小時，藉由矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯(10ml)淋洗，合併濾液減壓濃縮，用矽膠管柱色譜法以展開劑體系B純化所得殘餘物4.1g，進一步手性拆分純化(分離條件：色譜管柱：CHIRALPAK AY-3(AY30CD-TJ004)，0.46cm I.D.×15cm L；流動相：Hexane/EtOH=85/15(V/V)，流速：1mL/min)，得到標題產物47b(1.1g)和47c(1.2g)。

47b：HPLC純度99.8%，保留時間5.019分鐘，分析方法(色譜管柱：CHIRALPAK AY-3(AY30CD-TJ004)，0.46cm I.D.×15cm L，流動相：Hexane/EtOH=85/15(V/V))

47c：HPLC純度100%，保留時間6.624分鐘，分析方法(色譜管柱：CHIRALPAK AY-3(AY30CD-TJ004)，0.46cm I.D.×15cm L，流動相：Hexane/EtOH=85/15(V/V))

第二步

(R)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸苄酯47e

將2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)胺基)乙醯胺基)甲基乙酸酯47d(3.1g，8.41mmol，採用專利申請“CN105829346A”公開的方法製備而得)溶於四氫呋喃(55mL)中，加入化合物47b(2.0g，9.70mmol)，冰水浴冷卻至0~5℃，加入第三丁醇鉀(1.89g，16.84mmol)，冰水浴下攪拌10分鐘。加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，靜置分層，水相用氯仿(30mL×5)萃取，合併有機相。有機相減壓濃縮，所得殘餘物溶於1,4-二噁烷(32mL)和水(8mL)，加入碳酸鈉(1.78g，16.79mmol)和氯甲酸-9-芴基甲酯(2.18g，8.42mmol)，室溫攪拌2小時。反應液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL×2)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用管柱層析法以展開劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物47e(1.3g，產率：30.0%)。

MS m/z(ESI)：515.2[M+1]

第三步

(R)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸47f

將化合物47e(1.29g，2.51mmol)溶於乙酸乙酯(15mL)中，加入鈀碳(260mg，含量10%，乾型)，氫氣置換三次，室溫攪拌反應5小時。反應液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯(20mL)和甲醇(20mL)淋洗，濾液濃縮，得到粗品標題產物47f(980mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI)：425.1[M+1]

第四步

2,4-二甲氧基苄基(R)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3,6-二側氧-2,9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸酯47g

將粗品47f(980mg，2.31mmol)溶於二氯甲烷(15mL)中，加入2,4-二甲氧基苄醇(777mg，4.62mmol)，1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(664mg，3.46mmol)和4-二甲胺基吡啶(28mg，0.23mmol)，室溫攪拌一小時。減壓濃縮除去有機溶劑，加入20mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL×2)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用管柱層析以展開劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物47g(810mg，產率：61.1%)。

MS m/z(ESI)：575.0[M+1]

第五步

2,4-二甲氧基苄基(R)-2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)-2-環丙基乙酸酯47h

將化合物47g(1.01g，1.76mmol)溶於10mL二氯甲烷中，加入5mL二乙胺，室溫攪拌2小時。反應液減壓濃縮，加入10mL甲苯減壓濃縮，重複兩次；加入10mL正己烷打漿，傾倒出上層正己烷，重複三次， 減壓濃縮得到粗品標題產物47h(619mg)，產品不經純化直接用於下一步反應。

第六步

2,4-二甲氧基苄基(2R，10S)-10-苄基-2-環丙基-23-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十三酸酯47j

將粗品47h(619mg，1.76mmol)溶於10mL N,N-二甲基甲醯胺，加入(S)-2(-2-(-2-(6-(2,5-二側氧-1H-吡咯-1-基)已醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)-3-苯基丙酸47i(831mg，1.76mmol，採用專利申請“EP2907824”第144頁Formula 142公開的方法製備而得)，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(584mg，2.11mmol)，室溫攪拌1小時。加入60mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL×2)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用管柱層析法以展開劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物47j(1.0g，產率：70.5%)。

MS m/z(ESI)：824.2[M+18]

第七步

(2R,10S)-10-苄基-2-環丙基-23-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十三酸47k

將化合物47j(50mg，62.0μmol)加入反應瓶，加入0.12mL氯仿助溶，加入2mL 1%(v/v)的三氟乙酸的二氯甲烷溶液，冰水浴降溫至0-5℃，加入三乙基矽烷(29.1mg，250.2μmol)，冰浴攪拌反應40分鐘。冰浴下加入5mL二氯甲烷稀釋，冰浴下減壓濃縮，殘餘物用10mL正己烷打漿，傾倒出上層正己烷，重複三次，然後加入10mL甲基第三丁基醚，自然升 至室溫打漿，重複多次至濾液PH值接近7，過濾，收集濾餅，油泵抽乾，得到粗品產物47k(41mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI)：655.2[M-1]

第八步

N-((2R,10S)-1-((1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基)-10-苄基-2-環丙基-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺47

將化合物19(9mg，20.00umol)溶於1mL 9%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液中，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0-5℃，加入三乙胺(6mg，59.40umol)。將粗品47k(24mg，36.55μmol)溶於冰浴預冷的2mL 9%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液中，然後滴加入上述反應液中，再加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(8mg，30.00μmol)。升至室溫，攪拌反應35分鐘。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物47(4mg，產率：18.1%)。

MS m/z(ESI)：1102.3[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 8.58(t,1H),8.31(t,1H),8.13(d,1H),8.07(t,1H),8.01(t,1H),7.69-7.52(m,3H),7.41(s,1H),7.31-7.21(m,4H),7.20-7.14(m,1H),6.99(s,2H),6.94(s,1H),6.78-6.66(m,2H),5.23(s,2H),4.63-4.56(m,1H),4.53-4.45(m,1H),4.43-4.38(m,1H),4.20(t,2H),3.82(s,3H),3.79-3.52(m,8H),3.10-3.02(m,2H),2.85-2.65(m,6H),2.10(t,2H),2.05-1.90(m,4H),1.75-1.58(m,4H),1.55- 1.41(m,4H),1.40-1.32(m,2H),1.21-1.13(m,2H),1.05-0.93(m,1H),0.89(t,3H),0.43-0.30(m,4H)。

實施例48 LD-13

N-((2S,10S)-1-((1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基)-10-苄基-2-環丙基-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺48

第 一步

(S)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3，6-二側氧-2，9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸苄酯48a

將化合物47c(252mg，1.22mmol)加入反應瓶，加入4mL二氯甲烷，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0-5℃，加入第三丁醇鋰(98mg，1.22mmol)，冰水浴下攪拌反應15分鐘，變澄清，加入47d(300mg，814.3μmol)，冰水浴下攪拌2.5小時。加水(10mL)，分液，水相用二氯甲烷(8mL×2)萃取，合併有機相後用水(10mL×1)洗，飽和食鹽水(10mL×2)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得粗品。用矽膠管柱色譜法以展開劑體系B純化所得殘餘物，得到標題產物48a(282mg，產率：67.2%)。

第二步

(S)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3，6-二側氧-2，9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸48b

將化合物48a(280mg，0.554mmol)溶於8mL乙酸乙酯中，加入鈀碳(84mg，含量10%，乾型)，氫氣置換三次，室溫攪拌反應3小時。反應液用矽藻土過濾，濾餅用乙酸乙酯淋洗，濾液濃縮，得到粗品標題產物48b(230mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。

第三步

2,4-二甲氧基苄基(S)-10-環丙基-1-(9H-芴-9-基)-3，6-二側氧-2，9-二氧雜-4,7-二氮雜十一-11-酸酯48c

將粗品48b(230mg，541.8μmol)溶於7mL二氯甲烷中，依次加入2,4-二甲氧基苯甲醇(136.7mg，812.7μmol)，1-乙基-(3-二甲基胺基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(155mg，808.5umol)和4-二甲胺基吡啶(6.6mg，53.5umol)，室溫攪拌16小時。反應液用10mL二氯甲烷稀釋後，用水(10mL×1)洗，飽和食鹽水(10mL×2)洗，無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮得粗品。用薄層層析以展開劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物48c(159mg，產率：51.0%)

第四步

2,4-二甲氧基苄基(S)-2-((2-胺基乙醯胺基)甲氧基)-2-環丙基乙酸酯48d

將化合物48c(920mg，1.60mmol)溶於4mL二氯甲烷中，加入8mL二乙胺，室溫攪拌1.5小時。反應液減壓濃縮，加入10mL甲苯減壓濃縮，重複兩次；加入10mL正己烷打漿，傾倒出上層正己烷，重複三次，減壓濃縮得到粗品標題產物48d(564mg)，產品不經純化直接用於下一步反應。

第五步

2,4-二甲氧基苄基(2S,10S)-10-苄基-2-環丙基-23-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十三酸酯48e

將粗品48d(564mg，1.60mmol)溶於8mL N,N-二甲基甲醯胺，加入(S)-2(-2-(-2-(6-(2,5-二側氧-1H-吡咯-1-基)已醯胺基)乙醯胺基)乙醯胺基)-3-苯基丙酸47i(756mg，1.60mmol)，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(532mg，1.92mmol)，室溫攪拌1小時。加入60mL水，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合併有機相。有機相用飽和氯化鈉溶液(30mL×2)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮。用管柱層析法以展開劑體系A純化所得殘餘物，得到標題產物48e(756mg，產率：58.5%)。

MS m/z(ESI)：824.2[M+18]

第六步

(2S,10S)-10-苄基-2-環丙基-23-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)-6,9,12,15,18-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14,17-五氮雜二十三酸48f

將化合物48e(50mg，62.0μmol)加入反應瓶，加入0.12mL氯仿助溶，加入2mL 1%(v/v)的三氟乙酸的二氯甲烷溶液，冰水浴降溫至0-5℃，加入三乙基矽烷(29.1mg，250.2μmol)，冰浴攪拌反應40分鐘。冰浴下加入5mL二氯甲烷稀釋，冰浴下減壓濃縮，殘餘物用10mL正己烷打漿，傾倒出上層正己烷，重複三次，然後加入10mL甲基第三丁基醚，自然升至室溫打漿，重複多次至濾液PH值接近7，過濾，收集濾餅，油泵抽乾，得到粗品產物48f(41mg)，產品不經純化直接進行下一步反應。

MS m/z(ESI)：655.2[M-1]

第七步

N-((2S,10S)-1-((1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基)-10-苄基-2-環丙基-1,6,9,12,15-五側氧-3-氧雜-5,8,11,14-四氮雜十六-16-基)-6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺48

將化合物19(20mg，43.14umol)溶於2mL 9%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液中，氬氣置換三次，冰水浴降溫至0-5℃，加入三乙胺(7mg，69.30umol)。將粗品48f(56mg，85.28μmol)溶於冰浴預冷的2mL 9%(v/v)的甲醇的二氯甲烷溶液中，然後滴加入上述反應液中，再加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(20mg，72.28μmol)。升至室溫，攪拌反應35分鐘。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物48(10mg，產率：21.0%)。

MS m/z(ESI)：1102.4[M+1]

¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.30-7.15(m,6H),7.01(s,1H),6.89(d,1H),6.82(d,1H),6.76(s,2H),5.35(s,2H),4.68(d,1H),4.59(d,1H),4.52-4.45(m,1H),4.31(t,2H),3.91-3.78(m,7H),3.76-3.68(m,2H),3.56-3.44(m,6H),3.22-3.12(m,1H),3.03-2.95(m,3H),2.26(t,2H),2.19(t,2H),1.89-1.80(m,2H),1.75-1.69(m,2H),1.68-1.52(m,4H),1.51-1.41(m,2H),1.36-1.26(m,4H),1.12-1.04(m,1H),0.95(t,3H),0.51-0.40(m,4H)。

實施例49 LD-14

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基(1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)胺基甲酸酯49

將化合物19(12.5mg，0.027mmol)加入到1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入化合物26a(26mg，0.035mmol)，再加入0.2mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(12mg，0.089mmol)和N,N-二異丙基乙胺(11mg，0.085mmol)，室溫攪拌反應4.5小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm； 流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物49(8mg，產率：27.9%)。

MS m/z(ESI)：1062.8[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.98(s,1H),8.08(d,1H),7.80(d,1H),7.57(d,2H),7.40(s,1H),7.26(d,2H),7.24-7.16(m,1H),7.00(s,2H),6.93(s,1H),6.76(d,1H),6.71(d,1H),6.00-5.94(m,1H),5.41(s,2H),5.22(s,2H),4.91(s,2H),4.41-4.33(m,1H),4.23-4.14(m,3H),3.82(s,3H),3.27-3.17(m,2H),3.08-2.87(m,3H),2.77-2.65(m,2H),2.35-2.28(m,1H),2.25-2.05(m,3H),2.04-1.83(m,4H),1.77-1.53(m,6H),1.52-1.30(m,9H),1.29-1.08(m,5H),0.95-0.75(m,8H)。

實施例50 LD-15

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基7-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷 -4-羧酸酯50

將化合物41(8mg，0.017mmol)加入到1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入化合物26a(13mg，0.017mmol)，再加入0.2mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(8.1mg，0.053mmol)和N,N-二異丙基乙胺 (6.9mg，0.053mmol)，室溫攪拌反應4.5小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物50(5mg，產率：26.3%)。

MS m/z(ESI)：1074.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.99(s,1H),8.07(d,1H),7.80(d,1H),7.58(d,2H),7.40(s,1H),7.27(d,2H),7.00(s,2H),6.95(s,1H),6.80-6.69(m,3H),5.99-5.94(m,1H),5.41(s,2H),5.21(s,2H),4.99(s,2H),4.41-4.33(m,1H),4.19(t,3H),3.82(s,2H),3.05-2.91(m,3H),2.68-2.65(m,2H),2.42-2.35(m,2H),2.20-2.08(m,4H),2.03-1.90(m,3H),1.71-1.56(m,6H),1.52-1.42(m,5H),1.39-1.31(m,4H),1.20-1.14(m,2H),0.91-0.79(m，11H)，0.68(s，2H)。

實施例51 LD-16

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基4-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)-4,7-二氮雜螺[2.5]辛烷-7-羧酸酯51

將化合物42(8mg，0.017mmol)加入到1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入化合物26a(13mg，0.017mmol，供應商：Ark)，再加入0.2mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(8.1mg，0.053mmol)和N,N-二異丙基乙胺(6.9mg，0.053mmol)，室溫攪拌反應4.5小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物51(5mg，產率：26.3%)。

MS m/z(ESI)：1074.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.99(s,1H),8.08(d,1H),7.80(d,1H),7.58(d,2H),7.39(s,1H),7.27(d,2H),7.00(s,2H),6.91(s,1H),6.79-6.68(m,3H),5.99-5.94(m,1H),5.41(s,2H),5.21(s,2H),5.00(s，2H)，4.41-4.33(m,1H),4.19(t,3H),3.80(s,3H),3.78(s,1H),3.05-2.91(m,3H),2.65-2.62(m,3H),2.22-2.06(m,3H),2.02-1.91(m,2H),1.72-1.56(m,5H),1.52-1.42(m,5H),1.40-1.31(m,4H),1.21-1.15(m,2H),0.91-0.79(m,9H),0.58(s,2H),0.50(s，2H)。

實施例52 LD-17

(S)-4-胺基-2-丁氧基-7-(4-((4-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯基)-3-甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲腈52

將化合物14(10mg，0.022mmol)和44a(7mg，0.033mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺(1mL)中，加入N,N-二異丙基乙胺(8mg，0.062mmol)和4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化嗎啉鹽(12mg，0.043mmol)，室溫攪拌1小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物52(4mg，產率：28.2%)。

MS m/z(ESI)：657.1[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 7.67(br，2H)，7.41(s,1H),7.01(s,3H),6.80(d,1H),6.73(d,1H),5.23(s,2H),4.20(t,2H),3.83(s,3H),2.21-1.75(m,7H),1.68-1.58(m,3H),1.55-1.32(m,8H),1.31-1.08(m,8H),0.89(t，3H)。

實施例53 LD-18

4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二側氧-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)己醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苄基((S)-1-(4-((4-胺基-2-丁氧基-6-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)胺基甲酸酯53

將化合物39(6mg，0.013mmol)加入到1mL N,N-二甲基甲醯胺中，加入26a(9.8mg，0.013mmol)，再加入0.2mL吡啶，氬氣置換三次，再加入1-羥基苯并三唑(4.1mg，0.027mmol)和N,N-二異丙基乙胺(3.5mg，0.027mmol)，室溫攪拌反應4.5小時。反應液進行高效液相色譜法純化(分離條件：色譜管柱：Sharpsil-T Prep C18 5um 30*150mm；流動相：A-水(10mmol NH₃HCO₃)：B-乙腈，梯度沖提，流速：30mL/min)，收集其相應組分，減壓濃縮，得到標題產物53(5mg，產率：35.7%)。

MS m/z(ESI)：1048.5[M+1]

¹H NMR(400MHz,DMSO-d ₆ )δ 9.94(s,1H),8.03(d,1H),7.76(d,1H),7.51(d,2H),7.34(s,1H),7.19(d,2H),6.94(s,2H),6.74-6.60(m,3H),5.95-5.91(m,1H),5.36(s,2H),5.28-5.23(m,1H),5.16(s,2H),4.85(s,2H),4.34-4.27(m,1H),4.13(t,3H),3.91-3.84(m,2H),3.75(s, 2H),2.98-2.85(m,3H),2.65-2.58(m,3H),2.28-2.24(m,1H),2.22-2.16(m,2H),1.96-1.86(m,3H),1.59-1.49(m,5H),1.45-1.36(m,5H),1.34-1.24(m,4H),1.13-1.06(m,2H),0.85-0.72(m，10H)。

三、ADC製備實施例

ADC的DAR值測定

一、反相色譜串聯質譜分析(MS)DAR值計算方法

製備還原的ADC供試品：將ADC供試品用水稀釋至1mg/mL，加入1mol/mL的二巰基乙醇(DTT)，使其終濃度為50mmol/mL，37℃水浴孵育30min進行還原反應。

液相色譜條件：色譜管柱為PLRP-S(50mm×2.1mm，5μm，Agilent)，流動相A為含0.1%甲酸的水溶液，流動相B為含0.1%甲酸的乙腈溶液；梯度為0.0~3.0min，維持27% B相，3.0~25.0min，27%~49% B相，25.0~26.0min，49%~95% B相，26.0~31.0min，維持95% B相，31.0~31.5min，95%~27% B相，31.5~450min，維持27%B相；管柱溫為70℃；液相上樣量為15μL，即15μg。

質譜條件：乾燥氣溫度為325℃，乾燥氣流速為7L/min，霧化氣壓力為35psi，鞘氣溫度為200℃，鞘氣流速為4.5L/min；毛細管電壓為3500V，噴嘴電壓為500V，碎裂電壓為175V；一級質譜質量數範圍為m/z 500~m/z 5 000。

數據分析：用安捷倫MassHunter工作站bioconfirm軟件對數據進行分析。其中在質譜解卷積譜圖分析中，藉由對峰進行積分，計算輕鏈峰的峰面積百分比，且峰面積百分比總和為100；計算重鏈峰的峰面積百分比， 且總和為100，根據公式：DAR=2×(Σ重鏈加權峰面積+Σ輕鏈加權峰面積)/100，最終計算出該ADC藥的加權平均值。

二、毛細管電泳法分析(CE-SDS)DAR值計算方法

試劑和儀器：

SDS-Mw Analysis Kit：Beckman生產，貨號390953。

烷基化溶液(0.25mo碘乙醯胺溶液)：稱取約0.046g碘乙醯胺，加入1ml超純水溶解混勻，可於2-8℃避光保存7天。

毛細管電泳儀：SCIEX公司PA800plus

毛細管：非塗層熔融石英毛細管(內徑50μm)，切割至總長為30.2cm，高分辨率方法有效分離長度為20cm。

供試品溶液製備：用SDS樣品緩衝液將供試品稀釋至1mg/ml。樣。取供試品溶液(1mg/ml)95μl，加入0.8mol/L碘乙醯胺水溶液5μl，渦旋混勻。取空白對照95μl，加入0.8mol/L碘乙醯胺水溶液5μl，渦旋混勻，從樣品管中分別取出75μl至樣品瓶中，立即進行分析。

測定法：

(1)毛細管的預處理：0.1mol/L氫氧化鈉溶液在60psi壓力下沖洗3分鐘，然後用0.1mol/L鹽酸溶液在60psi壓力下沖洗2分鐘，最後用純水在70psi壓力下沖洗1分鐘。每次運行前應進行。

(2)毛細管的預填充：SDS凝膠分離緩衝液在50psi壓力下沖洗15分鐘。每次運行前應進行。

樣品進樣：10kV反相極性電動進樣，還原樣品進樣20秒

分離：15kV下運行40分鐘，反相極性。

樣品室溫度：18~25℃。

毛細管溫度：18~25℃。

數據分析：

基於抗體中打開的二硫鍵游離出的巰基都偶聯上相應的Drugs，用Beckman軟件對數據進行分析，以重鏈、非糖基化重鏈和輕鏈等校正峰面積分別占所有校正峰面積計算。根據公式：DAR=[4 *重鏈(H)峰面積+2 *半抗(H-L)峰面積+4 *雙重鏈(H-H)峰面積+2 *重重輕鏈(H-H-L)峰面積]/[重鏈(H)峰面積/2+半抗(H-L)峰面積/2+雙重鏈(H-H)峰面積+重重輕鏈(H-H-L)峰面積+全抗峰面積]，最終計算出該ADC藥的加權平均值。

實施例3-1 ADC-1

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.75mL，118.23nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，29.6μl，296nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物26(1.20mg，1213nmol)溶解於90μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將 反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-1的示例性產物ADC-1的PBS緩衝液(1.20mg/mL，12.0mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=3.66。

實施例3-2 ADC-2

參考實施例3-1製備ADC-2。

實施例3-3 ADC-3

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.54mL，104.05nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，26.0μl，260nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物27(1.09mg，1040nmol)溶解於100μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M 的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-3的示例性產物ADC-3的PBS緩衝液(1.23mg/mL，12.58mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算載藥量的平均值：y=3.55。

實施例3-4 ADC-4

參考實施例3-1製備ADC-4。

實施例3-5 ADC-5

參考實施例3-1製備ADC-5。

實施例3-6 ADC-6

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.73mL，184.3nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，46.1μl，460.7nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物45(1mg，1843nmol)溶解於70μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-6A、FADC-6B和FADC-6C的混合物)的示例性產物ADC-6的PBS緩衝液(2.18mg/mL，13.35mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-6的載藥量平均值：y=3.58。

實施例3-7 ADC-7

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，3.36mL，227.03nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，56.7μl，567nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物29(1.3mg，2270.1nmol)溶解於100μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-7A、FADC-7B和FADC-7C的混合物)的示例性產物ADC-7的PBS緩衝液(2.23mg/mL，17.13mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-7的載藥量平均值：y=3.84。

質譜圖見圖1A-圖1D。

實施例3-8 ADC-8

37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.59mL，175.2nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，43.8uL，438.1nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物46(1mg，1752nmol)溶解於70μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-8A、FADC-8B和FADC-8C的混合物)的示例性產物ADC-8的PBS緩衝液(2.24mg/mL，12.95mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-8的載藥量平均值：y=3.57。

實施例3-9 ADC-9

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.46mL，166.5nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，41.6μl，416.2nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物30(1mg，1665nmol)溶解於70μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(FADC-9A、 FADC-9B和FADC-9C的混合偶聯物)的示例性產物ADC-9的PBS緩衝液(2.12mg/mL，13.36mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-9的載藥量平均值：y=3.58。

質譜圖見圖2A-圖2D。

實施例3-10 ADC-10

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.69mL，181.4nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，45.4μl，453.6nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物47(2mg，1814nmol)溶解於130μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-10的示例性產物ADC-10的PBS緩衝液(2.34mg/mL，12.6mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=4.03。

實施例3-11 ADC-11

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.88mL，127nmol)加入配置 好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，67.3μl，673.2nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物47(2.1mg，1905nmol)溶解於100μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-10的示例性產物ADC-11的PBS緩衝液(1.76mg/mL，13.2mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=7.59。

實施例3-12 ADC-12

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.79mL，121nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，64.1μl，641.1nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物48(2mg，1814nmol)溶解於90μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的 PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-12的示例性產物ADC-12的PBS緩衝液(2.1mg/mL，11.15mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=7.63。

實施例3-13 ADC-13

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.39mL，94.1nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，23.5μl，235.4nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物49(1mg，941nmol)溶解於50μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-13的示例性產物ADC-13的PBS緩衝液(1.16mg/mL，12mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=4.05。

實施例3-14 ADC-14

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.86mL，125.5nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，66.5μl，665.3nmol)， 置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物49(2mg，1883nmol)溶解於90μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-13的示例性產物ADC-14的PBS緩衝液(2mg/mL，12.3mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=7.61。

實施例3-15 ADC-15

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.69mL，114.5nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，28.6μl，286.2nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物53(1.2mg，1145nmol)溶解於50μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-15的示例性產物ADC-15的PBS緩衝液(1.45mg/mL，11mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=4.12。

實施例3-16 ADC-16

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，0.85mL，57.2nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，30.3μl，303.4nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物53(0.9mg，859nmol)溶解於40μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-15的示例性產物ADC-16的PBS緩衝液(1.06mg/mL，9.2mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=7.62。

實施例3-17 ADC-17

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.67mL，113nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，28.2μl，282.4nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物43(1.2mg，1130nmol)溶解於60μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-17的示例性產物ADC-17的PBS緩衝液(1.68mg/mL，10.2mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=4.23。

實施例3-18 ADC-18

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.53mL，171.1nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，42.8μl，427.8nmol)， 置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物44(1.1mg，1711nmol)溶解於60μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-18A、FADC-18B和FADC-18C的混合物)的示例性產物ADC-18的PBS緩衝液(2.46mg/mL，12.17mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-18的載藥量平均值：y=3.76。

實施例3-19 ADC-19

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.65mL，111.7nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，27.9μl，279.3nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物50(1.2mg，1117nmol)溶解於50μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-19的示例性產物ADC-19的PBS緩衝液(1.77mg/mL，10.9mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=3.76。

實施例3-20 ADC-20

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.38mL，93.1nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，23.3μl，232.7nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物51(1mg，931nmol)溶解於50μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物FADC-20的示例性產物ADC-20的PBS緩衝液(1.35mg/mL，9.64mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算的載藥量平均值：y=3.66。

實施例3-21 ADC-21

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.80mL，121.8nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，30.5μl，304.5nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物52(0.8mg，1218nmol)溶解於50μl DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-21A、FADC-21B和FADC-21C的混合物)的示例性產物ADC-21的PBS緩衝液(1.82mg/mL，11.17mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-21的載藥量平均值：y=3.75。

實施例3-22 ADC-22

偶聯物ADC-22為偶聯物FADC-22A、FADC-22B和FADC-22C的混合物。

參考實施例3-18製備實施例3-23。

實施例3-23 ADC-23

偶聯物ADC-23為偶聯物FADC-23A、FADC-23B和FADC-23C的混合物。

參考實施例3-18製備實施例3-23。

實施例3-24 ADC-24

實施例3-25 ADC-25

實施例3-26 ADC-26

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，4.38mL，296.0nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，44.4μL，444.0nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物29(1.25mg，2183nmol)溶解於200μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-7A、FADC-7B和FADC-7C的混合物)的示例性產物ADC-26的PBS緩衝液(3.08mg/mL，14.6mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-26的載藥量平均值：y=2.11。

實施例3-27 ADC-27

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.60mL，108.1nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，57.4μL，574.0nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物29(0.93mg，1624nmol)溶解於80μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-7A、FADC-7B和FADC-7C的混合物)的示例性產物ADC-27的PBS緩衝液(1.54mg/mL，14.4mL)，於4℃儲存。

CE-SDS計算ADC-27的載藥量平均值：y=7.60。

實施例3-28 ADC-28

在37℃條件下，向抗體Pertuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.6mL，175.7nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，48.6μL，476.0nmol)， 置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物29(1.0mg，1746.2nmol)溶解於120μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-28A、FADC-28B和FADC-28C的混合物)的示例性產物ADC-28的PBS緩衝液(2.01mg/mL，14.5mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-28的載藥量平均值：y=4.54。

實施例3-29 ADC-29

在37℃條件下，向抗體Pertuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，2.9mL，195.9nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，52.9uL，529.0nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物30(1.2mg，2000.0nmol)溶解於150μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-29A、FADC-29B和FADC-29C的混合物)的示例性產物ADC-29的PBS緩衝液(2.18mg/mL，14.5mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-29的載藥量平均值：y=4.62。

實施例3-30 ADC-30(參照物)

在37℃條件下，向抗體Trastuzumab的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，1.58mL，106.8nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，56.7μL，567.0nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將專利WO2018198091第232頁的化合物C-5(0.9mg，1607nmol)溶解於50μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-30A、FADC-30B和FADC-30C的混合 物)的示例性產物ADC-30的PBS緩衝液(1.74mg/mL，12.0mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-30的載藥量平均值：y=7.40。

實施例3-31 ADC-31

在37℃條件下，向抗體1F9DS(抗B7H3抗體，)的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，3.2mL，216.2nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，54.1μL，541.0nmol)，置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物29(1.20mg，2095nmol)溶解於150μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M 的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-31A、FADC-31B和FADC-31C的混合物)的示例性產物ADC-31的PBS緩衝液(2.59mg/mL，14mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-31的載藥量平均值：y=3.23

實施例3-32 ADC-32

在37℃條件下，向抗體1F9DS(B7H3)的PBS緩衝水溶液(pH=6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液；10.0mg/mL，3.1mL，209.5nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，52.3μL，523.0nmol)， 置於水浴振盪器，於37℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用水浴降溫至25℃。

將化合物30(1.3mg，2164.0nmol)溶解於150μL DMSO中，加入到上述反應液中，置於水浴振盪器，於25℃下振盪反應3小時，停止反應。將反應液用Sephadex G25凝膠管柱脫鹽純化(沖提相：pH為6.5的0.05M的PBS緩衝水溶液，含0.001M的EDTA)，得到偶聯物混合物(偶聯物FADC-32A、FADC-32B和FADC-32C的混合物)的示例性產物ADC-32的PBS緩衝液(2.66mg/mL，14mL)，於4℃儲存。

MS計算ADC-32的載藥量平均值：y=3.78。

測試例：

生物學評價

測試例1、本發明化合物對人源TLR7激動活性的測定

本發明化合物對HEK-Blue^TM hTLR7穩轉株細胞表達的hTLR7蛋白激活作用採用如下實驗方法測定：

一、實驗材料及儀器

1. DMEM(Gibco，10564-029)，

2.胎牛血清(GIBCO，10099)，

3.青鏈黴素(Gibco，15140-122)，

4.台盼藍溶液(Sigma，T8154-100ML)，

5. Flexstation 3多功能酶標儀(Molecμlar Devices)，

6. HEK-Blue^TM HTLR7細胞系(InvivoGen，hkb-hTLR7)，

7. HEK-Blue檢測試劑(InvivoGen，hb-det3)。

二、實驗步驟

配置HEK-Blue檢測培養基，取HEK-Blue檢測乾粉一袋，加入50ml去內毒素水溶解，再放入37℃培養箱，10分鐘後無菌過濾。化合物先配製成20mM的原液；再用純DMSO稀釋至最高濃度為6×10⁶nM，經3倍梯度稀釋，共10個點。

用培養基先把上述配製好的化合物稀釋20倍，然後每孔加入20μl稀釋後的化合物。取HEK-Blue^TM hTLR7細胞，先去掉上清，再加入2-5ml預熱的PBS，放入培養箱1-2分鐘，輕輕吹打細胞，台盼藍染色計數。用HEK-Blue檢測培養基重懸細胞調整濃度為2.2×10⁵個細胞/ml，加180μl細胞至上述已加入20μl藥物的96孔細胞培養板中，37℃，培養6-16h。

酶標儀讀數，波長為620nm。可獲得相應的OD值，經Graphpad Prism計算得到藥物的EC₅₀值。

本發明化合物對人源TLR7激活作用可藉由以上的試驗進行測定，測得的EC₅₀值見表1。

結論：本發明化合物對人源TLR7具有明顯的激活作用。

測試例2、本發明中化合物刺激外周血單個核細胞(PBMC)分泌IFN-α能力的測定

本發明中化合物刺激PBMC分泌IFN-α能力採用如下實驗方法測定：

一、實驗材料及儀器

1. RPMI 1640(Invitrogen，11875)，

2. FBS(Gibco，10099-141)，

3.青鏈黴素(Gibco，15140-122)，

4. Ficoll-Paque PREMIUM(GE，17-5442-02)，

5.台盼藍溶液(Sigma，T8154-100ML)，

6. SepMateTM-50(Stemcell，15460)，

7. Bright-Line^TM血細胞計數儀(Sigma，Z359629-1EA)，

8.人源IFN-α試劑盒(cisbio，6FHIFPEB)，

9. PHERAStar多功能酶標儀(BMG，PHERAStar)。

二、實驗步驟

化合物用純DMSO稀釋，最高濃度為5mM，4倍梯度稀釋，共9個點。然後取4μl化合物，加入到196μl含10%FBS的RMPI 1640培養基中，混勻。每孔取50μl至新的96孔細胞培養板。

所有試劑平衡到室溫，取250ml培養瓶，將60ml血液和PBS+2% FBS加入其中，輕輕吹打混勻稀釋。取50ml PBMC分離管SepMateTM-50，加入15ml淋巴細胞分離液Ficoll-Paque PREMIUM，然後加入30ml稀釋後血液。1200g離心10分鐘，室溫。取上清，然後300g，離心8分鐘。用含10%FBS的RMPI 1640培養基重懸並計數，調整PBMC數量至3.33×10⁶個細胞/ml，取150μl至已加入化合物的細胞培養板中，37℃，5.0% CO₂的培養箱中培養24h。

將細胞培養板放入離心機中，1200rpm，室溫離心10分鐘。每孔取出150μl上清。先平衡人源IFN-α試劑盒中的試劑至常溫，在避光條件下根據試劑盒說明書配製抗-IFN-α-Eu³⁺-穴狀結合物(Anti-IFN-α-Eu³⁺-Cryptate conjugate)和抗-IFN-α-d2-結合物(Anti-IFN-α-d2-conjugate)，兩者均以1：40的比例與結合緩衝液(conjugate Buffer)混勻。然後每孔加入16μl的離心取得的上清液。再每孔加入2μl剛配好的抗-IFN-α-Eu³⁺-穴狀結合物和抗-IFN-α-d2-結合物，震盪混勻，室溫避光孵育3h。

在PHERAStar上用HTRF模式讀數。我們將刺激產生最低檢測限至少3倍以上細胞因子水平的最低藥物濃度，定義為該化合物在該細胞因子刺激實驗上的最低有效濃度MEC(Minimal Effective Concentration)值。

本發明化合物刺激PBMC分泌IFN-α的能力藉由以上的試驗進行測定，測得的MEC值見表2。

結論：從刺激PBMC分泌IFN-α的活性的數據上看，本發明化合物具有起效濃度較低的優勢。

測試例3、本披露中Her2-TLR7-ADC在腫瘤細胞存在的情況下刺激外周血單個核細胞(PBMC)分泌IFN-α能力的測定

本披露中Her2-TLR7-ADC在腫瘤細胞存在的情況下刺激PBMC分泌IFN-α能力採用如下實驗方法測定：

一、實驗材料及儀器

1. RPMI 1640培養基(Invitrogen，11875)，

2. FBS(Gibco，10099-141)，

3. Ficoll-Paque PREMIUM(GE，17-5442-02)，

4.台盼藍溶液(Sigma，T8154-100ML)，

5. SepMateTM-50(Stemcell，15460)，

6. Bright-Line^TM血細胞計數儀(Sigma，Z359629-1EA)，

7. Human IFN-α試劑盒(cisbio，62HIFNAPEG)，

8. PHERAStar多功能酶標儀(BMG，PHERAStar).

二、實驗步驟

Her2-TLR7-ADC用無菌PBS稀釋，最高濃度為5μM，4倍梯度稀釋，共9個點。每孔取20μl至新的96孔細胞培養板。

所有試劑平衡到室溫，取250ml培養瓶，將60ml血液和PBS+2% FBS加入其中，輕輕吹打混勻稀釋。取50ml PBMC分離管SepMateTM-50，加入15ml淋巴細胞分離液Ficoll-Paque PREMIUM，然後加入30ml稀釋後血液。1200g離心10分鐘，室溫。取上清，然後300g，離心8分鐘。用含10%FBS的RMPI 1640培養基重懸並計數。調整PBMC數量至1.38×10⁶個細胞/ml，取90μl至已加入化合物的細胞培養板。同時將SK-BR-3胰酶消化離心後，用1640培養基重懸後調整細胞密度為2.76×10⁵個細胞/ml，取90μl至已加入化合物的細胞培養板。最後每孔總體積是200μl。37℃，5.0% CO₂的培養箱中培養24小時。

將細胞培養板放入離心機中，1200rpm，室溫離心10分鐘。每孔取出150μl上清。先平衡Human IFN-α試劑盒中的試劑至常溫，在避光條件下根 據試劑盒說明書稀釋抗-IFN-α-Eu³⁺-穴狀結合物和抗-IFN-α-d2-結合物，兩者分別以1：20的比例與結合緩衝液稀釋，然後將稀釋好的抗-IFN-α-Eu³⁺-穴狀結合物和抗-IFN-α-d2-結合物按照1：1混勻。每孔加入16μl的樣品上清液和標準品。再加入4μl的預先混勻的結合物/d2溶液，每孔最後體積是20μl。室溫避光孵育3小時。

在PHERAStar上用HTRF模式讀數。我們將刺激產生最低檢測限至少3倍以上細胞因子水平的最低藥物濃度，定義為該化合物在該細胞因子刺激實驗上的最低有效濃度MEC值。

本披露ADC偶聯物刺激PBMC分泌IFN-α的能力藉由以上的試驗進行測定，測得的MEC值見表3。

結論：從刺激PBMC分泌IFN-α的活性的數據上看，本披露ADC具有起效濃度較低的優勢。

測試例4、本披露中Her2-TLR7-ADC在Balb/c同源小鼠腫瘤模型中的藥效評價

本披露中Her2-TLR7-ADC在Balb/c同源小鼠腫瘤模型中的藥效評價採用如下方法檢測：

一、實驗動物和飼養條件

Balb/c雌性小鼠，20g左右，購自維通利華實驗動物有限公司(生產許可證編號：SCXK(京)2016-0006，動物合格證編號：110011201102223(4))，5隻/籠飼養於SPF級環境，溫度20-25℃；濕度40-60%，自由進食進水。墊料籠具每週更換或視情況而定。

二、實驗藥品、試劑和儀器

所有藥物均用6.7mM PBS稀釋成0.5mg/ml，然後分裝1ml每管。

改良型1640培養基：生產廠家，hyclone，批號H03122。

0.25%Trpsin-EDTA：生產廠家，invitrogen，批號1807031。

FBS：生產廠家，賽默飛世爾，批號1767839。

三、實驗設計和實驗方法

CT26細胞(中科院細胞庫，TCM37)培養於含10%胎牛血清的1640培養基中，在含5% CO₂的37℃的細胞培養箱中連續培養。待細胞長至對數生長期(匯合率在80%-90%)時，用0.25%胰酶消化，收集細胞，並用無血清的1640洗滌細胞一次，最後用無血清的1640或PBS重懸，細胞計數，調整細胞濃度為1×10⁷細胞/ml用於接種。

Balb/c小鼠接種CT26細胞懸液(3×10⁶個)100μl於Balb/c小鼠右肋部皮下。挑選腫瘤細胞長至體積約160mm³大小後分成3組，分別給藥，每組8隻，當天給藥為第0天。按照下表藥物給藥方式進行單次尾靜脈注射給藥，之後每週測2次瘤體積，稱量體重，記錄數據。分組及給藥情況見表4。

抑瘤率計算方法：

腫瘤體積(TV)計算公式：TV=1/2×L_長×L_短 ²

相對腫瘤增殖率T/C(%)=(T-T0)/(C-C0)×100

抑瘤率TGI(%)=1-T/C(%)

其中T、C為實驗結束時治療組和對照組的腫瘤體積；T0、C0為實驗開始時的腫瘤體積。

四、實驗結果

瘤體積結果見表5和圖3，顯示5mpk的ADC-27和ADC-30具有明顯抑瘤藥效，給藥後第15天抑瘤率分別為90.7%和68.6%。

五、實驗結論

ADC-27對表達HER2的CT26腫瘤顯示出良好的抑瘤效果，並且明顯優於陽性對照ADC-30。

測試例5、本披露中Her2-TLR7-ADC在SCID-beige小鼠異源移植瘤模型中藥效評價

本披露中Her2-TLR7-ADC在SCID-beige小鼠異源移植瘤模型中的藥效評價採用如下方法檢測：

一、實驗動物和飼養條件

SCID-beige雌性小鼠，20g左右，購自維通利華實驗動物有限公司，5隻/籠飼養於屏障環境內，溫度20-25℃；濕度40-60%，自由進食進水。

二、實驗藥品、試劑和儀器

所有藥物均用PBS溶液稀釋成0.3mg/ml，然後分裝1ml每管。

RPMI 1640培養基：購買自Hyclone，貨號為：#SH30809.01；

胰酶：購買自Gibco，貨號為：25200-072；

FBS：購買自Gibco，貨號為：10091-148；

青鏈黴素混合液：購買自Gibco，貨號為：15140-122；

胎牛血清：購買自Hyclone，貨號為：SH30256.01；

Matrigel：購買自Corning，貨號為：356237。

三、實驗設計和實驗方法

N87細胞(人胃癌細胞，ATCC，CRL-5822)培養於含10%胎牛血清，1%青鏈黴素混合液的RPMI 1640培養基中，在含5% CO₂的37℃的細胞培養箱中連續培養。待細胞長至對數生長期(匯合率在80%-90%)時，用 0.25%胰酶消化，收集細胞，並用無血清的RPMI 1640洗滌細胞一次，最後用無血清的RPMI 1640重懸。

調整N87細胞，按2.5×10⁶個/隻/0.1ml(含50% matrigel)接種於SCID-beige小鼠右肋部皮下。挑選腫瘤細胞長至體積約200mm³大小後分成4組，每組9-10隻，當天給藥為第0天。按照下表藥物給藥方式給藥，之後每週測2次瘤體積，稱量體重，記錄數據。分組及給藥情況見表6。

抑瘤率計算方法：

腫瘤體積(TV)計算公式：TV=1/2×L_長×L_短 ²

相對腫瘤增殖率T/C(%)=(T-T0)/(C-C0)×100

抑瘤率TGI(%)=1-T/C(%)

其中T、C為實驗結束時治療組和對照組的腫瘤體積；T0、C0為實驗開始時的腫瘤體積。

四、實驗結果

單次給藥後，腫瘤即出現縮退，從第一次測量(第5天)至實驗終點(第34天)，抑瘤率均大於100%。見表7和圖4。

五、實驗結論：

單次尾靜脈注射ADC-7和ADC-9，對表達HER2的人胃癌細胞(N87)移植瘤顯示出非常顯著的抑瘤效果，明顯優於Herceptin單抗。

<110> 江蘇恆瑞醫藥股份有限公司(JIANGSU HENGRUI MEDICINE CO.,LTD.) 上海恆瑞醫藥有限公司(SHANGHAS HENGRUI PHARMACEUTICAL CO.,LTD.)

<120> 吡咯并雜芳基衍生物或其偶聯物、其製備方法及其應用

<160> 6

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 曲妥珠單抗(Trastuzumab)輕鏈

<400> 1

<210> 2

<211> 450

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 曲妥珠單抗(Trastuzumab)重鏈

<400> 2

<210> 3

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 帕妥珠單抗(Pertuzumab)輕鏈

<400> 3

<210> 4

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 帕妥珠單抗(Pertuzumab)重鏈

<400> 4

<210> 5

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 抗B7H3抗體1F9DS輕鏈

<400> 5

<210> 6

<211> 449

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<221> 鏈

<223> 抗B7H3抗體1F9DS重鏈

<400> 6

Claims (54)

1. 一種通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，

   

   其中：

   環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   G₁為N原子或CR⁴；

   G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

   R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

   R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自 烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R³選自胺基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)-R^6a-OH、-R^b-R^W和如式

   

   所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或氮原子；R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

   R^w的結構如下：

   

   n為0、1、2、3或4；且

   m為0、1或2。
2. 一種通式(D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，

   

   其中：

   環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   G₁為N原子或CR⁴；

   G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

   R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

   R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R³選自胺基、-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)-R^6a-OH、-R^b-R^W和如式

   

   所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或氮原子；

   R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、 羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

   R^w的結構如下：

   

   n為0、1、2、3或4；且

   m為0、1或2。
3. 如請求項1或2所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R³選自：

   

   、如式

   

   所示的含N雜環基環B和-R^b-NH₂；

   該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

   該R^b選自鍵、伸烷基、伸雜環基和伸環烷基，該伸烷基、伸雜環基和伸環烷基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該伸雜環基和伸環烷基較佳為單環伸雜環基或單環伸環烷基；

   G³為碳原子或氮原子；且

   該環B選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基和雙環橋雜環基。
4. 如請求項1或2所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R³選自：

   
5. 一種具有通式(D-)所示結構的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中所述通式(D-)所示結構如下：

   

   其中：

   環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   G₁為N原子或CR⁴；

   G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)-C(O)-、-C(O)-N(R⁵)-、-N(R⁵)-S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

   R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

   R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

   R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   通式(-D)中虛線

   

   表示藉由R^3a基團上的氧原子或氮原子，與接頭單員或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接；

   n為0、1、2、3或4；且

   m為0、1或2。
6. 如請求項5所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中：

   環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   G₁為N原子或CR⁴；

   G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)-C(O)-、-C(O)-N(R⁵)-、-N(R⁵)-S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

   R選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基；

   R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

   R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

   R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

   R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   通式(-D)中虛線

   

   表示藉由R^3a基團上的氧原子或氮原子，與接頭單員或與結合靶細胞所表達抗原的抗體共價連接；

   n為0、1、2、3或4；且

   m為0、1或2。
7. 如請求項5所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

   

   其中：

   環A、G₁、G₂、R、R¹、R²、R^3a、L¹、L²、n如權利要求5中所定義

   y為1至10的整數或小數；

   Pc為配體；且

   L為接頭單員。
8. 如請求項7所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-L-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

   

   其中：

   環A、G₁、G₂、R、R¹、R²、L¹、L²、n如權利要求7中所定義；

   y為1至10的整數或小數；

   Pc為配體；L為接頭單員；

   R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

   R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

   R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代。
9. 如請求項5至8中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a為伸雜環基，該伸雜環基為含N雜環基，較佳為含2個N原子的單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基；其中N原子與接頭單員L共價連接。
10. 如請求項5至8中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a選自：

    

    該R^a選自烷基、雜環基和環烷基，該烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；該雜環基或環烷基較佳為單環雜環基或單環環烷基；

    G³為碳原子或氮原子；

    環C為伸雜環基，該伸雜環基較佳自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基或雙環橋雜環基。
11. 如請求項5至10中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^3a選自：

    
12. 如請求項7至11中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中y為1至8，較佳為2至8，更佳為3至8的整數或小數。
13. 如請求項7至12中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中Pc為抗體。
14. 如請求項1至4中任一項該化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者權利要求5至13中任一項該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該環A為芳基或雜芳基，較佳苯基、吡啶基或噻吩基。
15. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至14中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該環A選自：

    
16. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至15中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該G₁為N原子。
17. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至16中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中G₂為-O-。
18. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至17中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L¹為伸烷基。
19. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至18中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L²為伸烷基。
20. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至19中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R選自氫原子、烷基和氰基，較佳氰基。
21. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至20中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R¹為烷基。
22. 如請求項1至4中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至21中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、烷基、烷氧基和鹵素。
23. 如請求項1至4中任一项該化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至22中任一项該配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^a為雜環基或環烷基，較佳為單環雜環基或單環環烷基。
24. 如請求項1至4中任一项所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，或者如請求項5至23中任一项所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中R^b為伸雜環基或伸環烷基，較佳為單環伸雜環基或單環伸環烷基。
25. 如請求項7至24中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單員-L-為-X-L^a-L^b-L^c-L^d-，

    X為-CH₂(CH₂)_r CH₂-S-或化學鍵；r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3；

    L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-、- C(O)-W-C(O)-、

    

    、

    

    、

    

    和

    

    ，其 中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，所述雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基。
26. 如請求項7至25中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單員-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

    L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-、- C(O)-W-C(O)-、

    

    、

    

    、

    

    和

    

    ，其 中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基。
27. 如請求項25或26所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中L^a選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3- 基-N)-W-、

    

    、

    

    、

    

    和

    

    ，其中W 選自C_1-8伸烷基或-C_1-8呀烷基-伸環烷基-，其中該C_1-8伸烷基和伸環烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；L^a較佳選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₅-C(O)-、-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₂-C(O)-和-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-(CH₂)₂-；

    或者L^a選自以下結構式：

    

    

    ，W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8伸烷基-伸環烷基-；較佳地，W選 自-(CH₂)₂-和-(CH₂)₅-。
28. 如請求項25至27中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中該L^c的肽殘基為由一個或多個選自苯丙胺酸、甘胺酸、纈胺酸、賴胺酸、瓜胺酸、絲胺酸、谷胺酸、天冬胺酸中的胺基酸形成的肽殘基；較佳為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；更較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基。
29. 如請求項25至28中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中L^d選自-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂₎t-OC(O)-和化學鍵；t為1至6的整數；

    較佳的，L^d選自以下結構式：

    

    R⁸-R¹¹如如請求項25中所定義。
30. 如請求項25或26所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單員-L-為-L^a-，選自-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-C(O)-和-(琥珀醯亞胺-3-基-N)-W-，其中W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8伸烷基-伸環烷基-。
31. 如請求項25至29中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單員-L-為-X-L^a-L^b-L^c-L^d-，

    X為-CH₂(CH₂)_r CH₂-S-或化學鍵；r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3；

    L^a為

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    或

    

    ，W選自C_1-8伸烷基和-C_1-8伸烷基-伸環烷基-；

    L^b為化學鍵；

    L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

    L^d選自以下結構式：

    

    、

    

    和化學鍵；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基。
32. 如請求項25至29中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其中接頭單員-L-為-L^a-L^b-L^c-L^d-，

    L^a為

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    或

    

    ，s¹為2至8的整數，W選自C_1-8伸 烷基和-C_1-8伸烷基-伸環烷基-；

    L^b為化學鍵；

    L^c為四肽殘基、二肽殘基或化學鍵；較佳為甘胺酸-甘胺酸-苯丙胺酸-甘胺酸的四肽殘基或者纈胺酸-瓜胺酸的二肽殘基；

    L^d選自以下結構式：

    

    、

    

    和化學鍵；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基。
33. 如請求項5至32中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-Lu’-D)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

    

    其中：

    L^a選自

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    和

    

    ；其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基 -或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基；

    環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    G₁為N或CR⁴；

    G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

    R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自 烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

    R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    n為0、1、2、3或4；

    m為0、1或2；

    Pc為配體；且

    y為1至10的整數或小數。
34. 如請求項5至33中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Pc-Lu-D)或(Pc-Lu-DA)或(Pc-Lu-DB)所示的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

    

    

    

    其中：

    其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-伸環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，該雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S的雜原子，其中該C_1-8伸烷基、伸環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、 羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基；

    環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    G₁為N或CR⁴；

    G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

    R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

    R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    n為0、1、2、3或4；

    m為0、1或2；

    Pc為配體；且

    y為1至10的整數或小數。
35. 如請求項5所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其還包括連接單員-L-，該-L-選自：

    

    

    

    其中a端與配體Pc相連，b端與藥物端R^3a相連，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。
36. 如請求項5至35中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下結構式：

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    其中Pc為配體，y為1至10的整數或小數，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。
37. 如請求項5至36中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其可藥用鹽或其組合物，其中所述Pc為抗體。
38. 如請求項37所述的配體-藥物偶聯物或其可藥用鹽或其組合物，其中該抗體選自抗TLR7抗體、抗HER2(ErbB2)抗體、抗EGFR抗體、抗B7-H3抗體、抗c-Met抗體、抗HER3(ErbB3)抗體、抗HER4(ErbB4)抗體、抗CD20抗體、抗CD22抗體、抗CD30抗體、抗CD33抗體、抗CD44抗體、抗CD56抗體、抗CD70抗體、抗CD73抗體、抗CD105抗體、抗CEA抗體、抗A33抗體、抗Cripto抗體、抗EphA2抗體、抗G250抗體、抗MUC1抗體、抗Lewis Y抗體、抗VEGFR抗體、抗GPNMB 抗體、抗整合素(Integrin)抗體、抗PSMA抗體、抗Tenascin-C抗體、抗SLC44A4抗體和抗間皮素(Mesothelin)抗體；

    較佳的，該抗體選自曲妥珠單抗(Trastuzumab)、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、尼妥珠單抗(Nimotuzumab)、恩妥珠單抗(Enoblituzumab)、米貝珠單抗(Emibetuzumab)、依托珠單抗(Inotuzumab)、匹妥珠單抗(Pinatuzumab)、本妥昔單抗(Brentuximab)、吉妥珠單抗(Gemtuzumab)、貝伐珠單抗(Bivatuzumab)、洛妥珠單抗(Lorvotuzumab)、cBR96和格瑪圖單抗(Glematumamab)。
39. 如請求項5至38中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其選自以下結構式：

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    

    其中y為1至10的整數或小數，r為1、2、3、4或5，較佳1、2或3。
40. 如請求項1所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(D1)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

    

    其中：

    環A為雜芳基或雜芳基，較佳苯基，吡啶基或噻吩基；

    G₂為-O-；

    R¹為烷基；

    R²選自烷基、烷氧基和鹵素；

    L¹為伸烷基；

    L²為伸烷基；

    R³選自-NH(R^a)、-R^b-NH₂、-R^b-C(O)-R^6a-OH、-R^b-NH-C(O)-R^6a-OH 和如式

    

    所示的含N雜環基環B；G³為碳原子或氮原子；

    R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^b選自氫原子、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^6a為伸烷基，該伸烷基任選被選自羥基、鹵素、胺基、雜環基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    n為0、1或2。
41. 一種化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其選自：

    

    

    
42. 一種通式(Lu’-D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，

    

    其中：

    環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    G₁為N或CR⁴；

    G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

    R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-，其中該伸雜環基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基和硝基中的一個或多個取代基所取代；

    R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    L^a選自

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    和

    

    ；其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或 1至8個原子的直鏈雜伸烷基，所述雜烷基包含1至3個選自N、O和S雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步 被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基。
43. 如請求項42所述的通式(Lu’-D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其為通式(Lu-D)所示的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽：

    

    其中：

    環A選自環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    G₁為N或CR⁴；

    G₂選自-O-、-S-、-C(O)-、-NR⁵-、-C(O)-OR⁵、-S(O)_m-、-N(R⁵)C(O)-、-C(O)N(R⁵)-、-N(R⁵)S(O)_m-、-S(O)_mN(R⁵)-和共價鍵；

    R¹選自烷基、烷氧基、鹵烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、烯基、炔基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自氘原子、烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R²相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基，其中該烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    L¹為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    L²為伸烷基，其中該伸烷基任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基中的一個或多個取代基所取代；

    R⁴選自氫原子、鹵素、烷基、烷氧基、鹵烷基、鹵烷氧基、氰基、胺基、硝基、羥基、羥烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R⁵選自氫原子、烷基、鹵烷基、環烷基、雜環基、芳基和雜芳基；

    R^3a選自-N(R^a)-、伸雜環基和-R^b-NH-；

    R^a選自氫原子、烷基、環烷基和雜環基，其中該烷基、環烷基和雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    R^b選自鍵、伸烷基、伸環烷基和伸雜環基，其中該伸烷基、伸環烷基和伸雜環基各自獨立地任選被選自烷基、烷氧基、鹵素、鹵烷基、羥基、羥烷基、氰基、胺基、硝基、環烷基和雜環基中的一個或多個取代基所取代；

    其中W選自C_1-8伸烷基、-C_1-8伸烷基-環烷基-或1至8個原子的直鏈雜伸烷基，所述雜伸烷基包含1至3個選自N、O和S雜原子，其中該C_1-8伸烷基、環烷基和直鏈雜伸烷基各自獨立地任選進一步被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基的一個或多個取代基所取代；

    L^b選自-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂CH₂C(O)-、-NR⁷(CH₂CH₂O)p¹CH₂C(O)-、-S(CH₂)p¹C(O)-和化學鍵，其中p¹為1至20的整數；L^b較佳為化學鍵；

    L^c為由2至7個胺基酸構成的肽殘基或化學鍵，其中胺基酸任選被選自鹵素、羥基、氰基、胺基、烷基、氯烷基、氘代烷基、烷氧基和環烷基中的一個或多個取代基所取代；

    L^d選自-NR⁷(CR⁸R⁹)t-、-NH-C(R⁸R⁹)-O-C(R¹⁰R¹¹)-C(O)-、-NH-R¹²-(CH₂)t-OC(O)-、-C(O)NR⁷、-C(O)NR⁷(CH₂)t-和化學鍵，其中t為1至6的整數；

    R⁷選自氫原子、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R⁸或R⁹相同或不同，且各自獨立地選自氫原子、鹵素、烷基、鹵烷基、氘代烷基和羥烷基；

    R¹⁰選自烷基、環烷基烷基和環烷基；

    R¹¹選自氫原子、烷基和鹵烷基；

    或者，R¹⁰和R¹¹與其相連接的碳原子一起形成C_3-6環烷基；

    R¹²為芳基或雜芳基。
44. 一種化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，其選自：

    

    

    

    

    
45. 一種製備通式(D-I)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

    

    通式(DA-1)進行脫胺基保護反應，得到通式(D-I)，

    其中：

    該R^a為雜環基或環烷基，該雜環基或環烷基優選為單環雜環基或單環環烷基；

    G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如如請求項1中所定義。
46. 一種製備通式(D-II)所示的化合物的方法，其包括如下步驟：

    

    通式(DA-2)進行脫胺基保護反應，得到通式(D-II)，

    其中：

    環B為含N伸雜環基，該伸雜環基較佳選自單環雜環基、雙螺雜環基、雙環稠雜環基和雙環橋雜環基；

    G¹、G²、L¹、L²、R¹、R²和n如如請求項1中所定義。
47. 一種製備通式(Pc-Lu’-D)所示的配體-藥物偶聯物的方法，其包括如下步驟：

    

    還原Pc後所得到Pc’，Pc’與通式(Lu’-D)的化合物進行偶聯反應，得到通式(Pc-Lu’-D)的配體-藥物偶聯物；

    其中：

    L^a選自

    

    、

    

    、

    

    、

    

    、

    

    Pc為配體；G₁、G₂、L¹、L^b、L^c、L^d、R^3a、環A、W、L²、R¹、R²、n和y如如請求項33中所定義。
48. 一種製備通式(Pc-Lu-D)所示的配體-藥物偶聯物的方法，其包括如下步驟：

    

    還原Pc後所得到Pc’，Pc’與通式(Lu-D)進行偶聯反應，得到通式(Pc-Lu-D)配體-藥物偶聯物；

    其中：

    Pc為配體；G₁、G₂、L¹、L^b、L^c、L^d、R^3a、環A、W、L²、R¹、R²、n和y如如請求項34中所定義。
49. 一種配體-藥物偶聯物，包含配體和連接至配體的藥物，其中該藥物為如請求項1至4、40、41中任一項所述的化合物，較佳藥物藉由接頭連接至配體。
50. 如請求項49所述的配體-藥物偶聯物，其中該配體為單株抗體。
51. 一種醫藥組成物，其含有治療有效量的如請求項1至4、40、41任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑；或者，其含有治療有效量的如請求項5至39中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其可藥用鹽，以及藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
52. 一種如請求項1至4、40、41任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽；或者，如請求項5至39中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其可藥用鹽；或如請求項51所述的醫藥組成物在製備用於治療或預防病毒感染或腫瘤的藥物中的用途。
53. 如請求項52所述的用途，其中該腫瘤為與TLR7、HER2、HER3、B7H3或EGFR表達相關的癌症。
54. 一種如請求項1至4、40、41中任一項所述的化合物或其偶聯物或其藥學上可接受的鹽或者，如請求項5至39中任一項所述的配體-藥物偶聯物或其可藥用鹽，或如請求項51所述的醫藥組成物在製備治療和/或預防癌症的藥物中的用途，其中所述癌症較佳選自黑色素瘤、非小細胞肺癌、肝細胞癌、基底細胞癌、腎細胞癌、骨髓瘤、變應性鼻炎、哮喘、COPD、潰瘍性結腸炎、肝纖維化、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、子宮癌、前列腺癌、腎癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、 食道癌、神經膠質瘤、神經母細胞瘤、肉瘤、肺癌、結腸癌、直腸癌、結直腸癌、白血病、骨癌、皮膚癌、甲狀腺癌、胰腺癌和淋巴瘤；

    或者，在製備用於治療由病毒引起的感染的藥物中的用途，該病毒選自：登革熱病毒、黃熱病毒、西尼羅病毒、日本腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒、昆津病毒、墨累山谷腦炎病毒、聖路易腦炎病毒、鄂木斯克出血熱病毒、牛病毒性腹瀉病毒、濟卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。

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