CN113082224A - 吡啶并嘧啶类衍生物偶联物、其制备方法及其在医药上的应用 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及吡啶并嘧啶类衍生物偶联物、其制备方法及其在医药上的应用。具体而言，本公开提供了一种具有通式为(Pc‑L‑D)所示结构的化合物或其配体‑药物偶联物，其制备方法以及该配体‑药物偶联物及含有其的药物组合物通过受体调节在制备治疗癌症的药物中的用途，其中通式(Pc‑L‑D)中的各取代基与说明书中的定义相同。
Description
技术领域
本公开涉及一类吡啶并嘧啶类衍生物偶联物，及其制备方法，和包含所述偶联物的药物组合物以及所述偶联物或药物组合物的用途。
背景技术
抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的药物相连，充分利用了抗体对正常细胞和肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和药物的高效性，同时又避免了前者疗效偏低和后者毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响(Mullard A，(2013)Nature Reviews Drug Discovery，12：329–332；DiJoseph JF，Armellino DC，(2004)Blood，103：1807-1814)。
TLR(Toll-like receptors)是模式识别受体(pattern recognition receptors，PRR)中的一种，识别与宿主不同的病原体分子，在天然免疫(innate immune response)中起关键作用，也是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。近年来研究发现，TLR不仅在抗病毒、细菌感染中起重要作用，并具有很强的抗肿瘤作用。
TLR主要表达在免疫细胞上，另在上皮、内皮细胞及肿瘤细胞上也有表达。免疫细胞上的TLR被激活后，通过细胞质内一些接头蛋白分子(如MyD88，TIRAP，TRIF等)传递信息，这些接头分子会引起一系列信号分子的级联反应进而活化转录因子NF-kB和IRFs，导致炎性相关因子(如IL-2，IL-12，TNF-a等)的释放，使下游多种免疫细胞进一步激活，包括NK细胞，T细胞和DC细胞等，从而杀死肿瘤细胞或是病原体。
基于TLR在肿瘤免疫中的重要作用，针对这个家族开发抗肿瘤药物方兴未艾。目前已有三个TLR的激动剂被批准用于肿瘤治疗，分别是Imiquimod(TLR 7 agonist)用于基底细胞癌；Bacillus Calmette-Guerin(BCG，TLR2/4agonist)用于非肌层浸润性膀胱癌；以及monophosphoryl lipid A(MPLA)：TLR2/4agonist)作为HPV疫苗佐剂治疗宫颈癌。然而全身性给药最大的问题是系统毒性，可以看到获批的药物两个是局部给药，一个是免疫佐剂。可以尝试通过联合用药或靶向用药的方式提供TLR的疗效和靶向性。
发明内容
本公开提供了一种具有通式(Pc-L-D)所示结构的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述通式(Pc-L-D)如下：
其中：
G1、G2和G3相同或不同，且各自独立地选自CH、CR5或N；
A选自亚烷基或共价键，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2和R3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R4选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
y为1至10，可以为整数，也可以为小数；
Pc为配体；L为接头单元。
本公开的另一些实施方案中，如前所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DI)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、G3、A和R1～R4如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DII)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、A和R1～R4如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DIII)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、A和R1、R2、R4如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R4为杂环基，其中所述的杂环基任选被一个或多个烷基取代；优选为4至6元的杂环基，其中所述的4至6元杂环基含有1至2个相同或不同选自N、O和S的杂原子，并且所述的4至6元的杂环基任选被一个或多个烷基取代。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R2为氢原子。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R4为含N杂环基，更优选为5至6元含N杂环基，最优选为吡咯烷基、哌嗪或哌啶；所述的含N杂环基任选被烷基所取代。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R4为含N杂环基，更优选为5至6元含N杂环基，最优选为吡咯烷基、哌嗪或哌啶；所述的含N杂环基任选被一个或多个烷基所取代。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DIV)所示的化合物：
其中：
W1为CH且W2为NR6；或者
W1为N且W2为CH2或NR6；
R6选自氢原子和烷基，优选烷基；
s为0或1；
Pc、L、y、G1、A和R1如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R1为亚烷基，所述的亚烷基任选被一个或多个烷基和羟基取代。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DV)所示的化合物：
其中：
W1为CH且W2为NR6；或者
W1为N且W2为CH2或NR6；
R6选自氢原子或烷基，优选烷基；
s为0或1；
Pc、L、y、R1、G1和A如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的A为-(CH2)n-或共价键；n为1至6的整数。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R1为亚烷基。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R1为亚烷基，所述的亚烷基任选被一个或多个烷基取代。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中y为均值，可以为小数或整数，优选为1至8，更优选为3至8。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中Pc为抗体，优选单克隆抗体。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-，
X为-CH2(CH2)rCH2-S-或化学键；r选自1，2，3，4和5，优选自1，2和3；
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和-C(O)-W-C(O)-，其中W选自C1-8亚烷基、-C1-8烷基-环烷基-和1至8个链原子的直链杂烷基，所述杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O和S，其中所述的C1-8亚烷基、环烷基和直链杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中氨基酸任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
Lc选自PAB、-NR7(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-、-C(O)NR7、-C(O)NR7(CH2)t-、-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-和化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R10选自烷基、环烷基烷基和环烷基；
R11选自氢原子、烷基和卤代烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自芳基和杂芳基。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-和-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W选自C1-8亚烷基和-C1-8烷基-环烷基-，其中所述的C1-8亚烷基和环烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；La优选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)5-C(O)-和-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)2-。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元La选自以下结构式：
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的Lb的肽残基为由一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸和天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为四肽残基、二肽残基或化学键；更优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元Lc选自-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-和化学键；
优选的，Lc选自以下结构式：
R7-R12，t如接头单元-L-中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中
La为
s1为2至8的整数，优选5；
Lb为四肽残基；优选地，Lb为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基；
Lc为-NH-CH2-。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中
La为
s1为2至8的整数，优选5；
Lb为二肽残基；优选地，Lb为缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基；
Lc为-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-，
其中PAB结构为
R7-R9，t如接头单元-L-中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中-L-选自：
其中a端与配体Pc相连，b端与药物相连。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
其中Pc和y如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述Pc为抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自抗TLR7抗体、TLR8抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin抗体或其抗原结合片段。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自Trastuzumab、Pertuzumab、Nimotuzumab、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab，或其抗原结合片段。
本公开的另一些实施方案中，如前任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
其中y如通式(Pc-L-D)中所定义。
本公开进一步提供一种通式(L-D)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，
其中：
G1、A和R1、R2、R4如通式(Pc-L-D)中所定义；
La、Lb、Lc如接头单元-L-中所定义。
本公开的另一些实施方案中，如前所述的通式(L-D)所示的化合物，其选自：
本公开进一步提供一种一种制备如通式(Pc-L-DI)所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
还原Pc后，与通式(L-DI)进行偶联反应，得到通式(Pc-L-DI)；
优选的，还原Pc后，与通式(L-DI)反应，得到通式(Pc-L-DI)；还原剂优选TCEP，特别地，优选还原抗体上的二硫键；
其中：
Pc为配体；
G1、G3、A和R1-R4如通式(Pc-L-D)中所定义；
接头单元-L-如前所定义。
本公开进一步提供一种制备如通式(Pc-L-DIII)所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
还原Pc后，与通式(L-D)进行偶联反应，得到通式(Pc-L-DIII)；
其中：
Pc为配体；
G1、A和R1、R2、R4如通式(Pc-L-D)中所定义；
接头单元-L-如前所定义。
本公开的另一方面，进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的如前任一项本公开所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本公开的另一方面，进一步涉及前任一项本公开所述的配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或其药物组合物，其用作药物。
本公开的另一方面，进一步涉及前任一项本公开所述的配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；优选其中所述的肿瘤为与TLR8表达相关的癌症。
本公开的另一方面，进一步涉及前任一项本公开所述的配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或药物组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物的用途，所述癌症优选选自乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、肺癌(例如，小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病(例如，急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌、前列腺癌或淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤)；更优选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。
本公开的另一方面，进一步涉及前任一项本公开所述的化合物或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或药物组合物在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途，所述病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗和/或预防肿瘤的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量或预防有效剂量的本公开所述的化合物或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物；优选其中所述的肿瘤为与TLR8表达相关的癌症。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗或预防癌症的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量或预防有效剂量的本公开所述的化合物或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物；所述癌症优选选自乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、黑色素瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、肺癌(例如小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病(例如，急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌或淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或复发性间变性大细胞淋巴瘤)；更优选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗由病毒引起的感染的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量或预防有效剂量的本公开所述的化合物或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或包含其的药物组合物；所述病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。
可将活性化合物(例如根据本公开所述的配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐)制成适合于通过任何适当途径给药的形式，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以受试者能够以单剂进行自我给药的方式。本发明活性化合物或组合物的单位剂量的方式可以是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液体制剂。
本发明治疗方法中所用活性化合物或组合物的施用剂量通常将随疾病的严重性、受试者的体重和活性化合物的功效而改变。不过，作为一般性指导，合适的单位剂量可以是0.1～1000mg。
本发明的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选自以下成分：填充剂、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或药学上可接受的润湿剂等，此类组合物还可以含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。
药物组合物还可以是用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒提供活性成分，通过加入水混合分散剂、湿润剂、悬浮剂或防腐剂中的一种或多种。也可加入其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这些组合物。
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入受试者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、受试者的年龄、受试者的体重、受试者的健康状况、受试者的行为、受试者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
发明的详细说明
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本公开所属领域普通技术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料实施或测试本公开，但本文描述了优选的方法和材料。描述和要求保护本公开时，依据以下定义使用下列术语。
当本公开中使用商品名时，旨在包括该商品名产品的制剂、该商品名产品的非专利药和活性药物部分。
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“配体”是能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配体的作用是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞结合的分子。在本公开实施方式中，配体表示为Pc，配体可通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键，优选为抗体或其抗原结合片段，所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体、全人抗体或鼠源抗体；优选为单克隆抗体。
术语“药物”是指细胞毒性药物或免疫调节剂。细胞毒性药物能在肿瘤细胞内具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正常细胞的凋亡，导致严重的副作用。该术语包括毒素，如细菌、真菌、植物或动物来源的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)，化疗药物，抗生素和核溶酶。免疫调节剂是免疫关卡分子的抑制剂。本公开的一此实施方案中，药物表示为D，属于免疫调节剂，特别是TLR8激动剂。
术语“接头单元、接头或连接片段”是指一端与配体连接而另一端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。
接头可以包含一种或多种接头构件。例示性的接头构件包括6-马来酰亚氨基己酰基(“MC”)、马来酰亚氨基丙酰基(“MP”)、缬氨酸-瓜氨酸(“val-cit”或“vc”)、丙氨酸-苯丙氨酸(“ala-phe”)、对氨基苄氧羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(“SPP”)、N-琥珀酰亚氨基4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1羧酸酯(“SMCC”，在本文中也称作“MCC”)和N-琥珀酰亚氨基(4-碘-乙酰基)氨基苯甲酸酯(“SIAB”)。接头可以包括拉伸单元、间隔单元、氨基酸单元和延伸单元，可以通过本领域已知方法合成，诸如US2005-0238649A1中所记载的。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感)接头、光不稳定接头、二甲基接头、或含二硫化物接头(Chari等，Cancer Research 52：127-131(1992)；美国专利No.5，208，020)。
术语“拉伸单元”指一端通过碳原子与配体共价连接而另一端通过硫原子与细胞毒性药物相连的化学结构片段。在本公开中，拉伸单元如通式(Y)所定义。拉伸单元通过还原胺化的方式与抗体中的氨基反应而连接，优选为抗体N端和/或赖氨酸残基上的ε-氨基。进一步的本公开的拉伸单元包括结构MC。
术语“间隔单元”是一种双功能化合结构片段，可用于偶联连接单元和细胞毒性药物最终形成配体-细胞毒性药物偶联物，这种偶联方式可以将细胞毒性药物选择性的连接到连接单元上。
术语“氨基酸单元”是指如果存在延伸单元的情况下，可以将以下结构式YR中的羰基与延伸单元相连，如果没有延伸单元的情况下，可以将YR直接连接在细胞毒性药物上的氨基酸，在本发明实施方式中，氨基酸单元表示为-Kk-：
-Kk-是二肽、三肽、四肽、五肽、六肽、七肽、八肽、九肽或十肽，-K-单元各自独立地具有以下结构式Ka或Kb，k是0-10之间的一个整数：
其中：
R23为-H或甲基；
R24为H、甲基、异丙基、异丁基、仲丁基、苄基、对羟基苄基、-CH2OH、-CH(OH)CH3、-CH2CH2SCH3、-CH2CONH2、-CH2COOH、-CH2CH2CONH2、-CH2CH2COOH、-(CH2)3NHC(＝NH)NH2、-(CH2)3NH2、-(CH2)3NHCOCH3、-(CH2)3NHCHO、-(CH2)4NHC(＝NH)NH2、-(CH2)4NH2、-(CH2)4NHCOCH3、-(CH2)4NHCHO、-(CH2)3NHCONH2、-(CH2)4NHCONH2、-CH2CH2CH(OH)CH2NH2、2-吡啶基甲基-、3-吡啶基甲基-、4-吡啶基甲基-、苯基、环己基，
R25为-芳基-、-烷基-芳基-、-环烷基-、-烷基-环烷基-、-环烷基-烷基-、-烷基-环烷基-烷基-、-杂环基-，-烷基-杂环基-、-杂环基-烷基-、-烷基-杂环基-烷基-、-芳基-、-烷基-芳基-、-芳基-烷基-、-烷基-芳基-烷基-、-杂芳基-、-烷基-杂芳基-、-杂芳基-烷基-、-烷基-杂芳基-烷基-。
在一个实施方案中，-Kk-为二肽，优选为-缬氨酸-瓜氨酸-、-苯丙氨酸-赖氨酸-或-N-甲基缬氨酸-瓜氨酸-，进一步优选为-缬氨酸-瓜氨酸-。
在另一个实施方案中，-Kk-为二肽，优选为
术语“氨基酸”是指分子结构中含有氨基和羧基、并且氨基和羧基都直接连接在-CH-结构上的有机化合物。通式是H2NCHRCOOH。根据氨基连结在羧酸中碳原子的位置，可分为α、β、γ、δ、ε……-氨基酸。在生物界中，构成天然蛋白质的氨基酸具有其特定的结构特点，即其氨基直接连接在α-碳原子上，即α-氨基酸，包括甘氨酸(Glycine)、丙氨酸(Alanine)、缬氨酸(Valine)、亮氨酸(Leucine)、异亮氨酸(Isoleucine)、苯丙氨酸(Phenylalanine)、色氨酸(Tryptophan)、酪氨酸(Tyrosine)、天冬氨酸(Aspartic acid)、组氨酸(Histidine)、天冬酰胺(Asparagine)、谷氨酸(Glutamic acid)、赖氨酸(Lysine)、谷氨酰胺(Glutamine)、甲硫氨酸(Methionine)、精氨酸(Arginine)、丝氨酸(Serine)、苏氨酸(Threonine)、半胱氨酸(Cysteine)、脯氨酸(Proline)等。
在本发明的一个实施方案中，氨基酸选自
术语“延伸单元”是指当氨基酸单元存在的情况下，可以将氨基酸单元与细胞毒性药物偶联，或当氨基酸单元不存在时，可通过与YR上羰基与细胞毒性药物偶联的化学结构。在本发明实施方式中，延伸单元表示为-Qq-，q选自0，1，2。
本公开中延伸单元为PAB，结构如4-亚氨基苄基氨甲酰基片段，其结构如式(VI)所示，连接在D上，
缩写
接头组件包括但不限于：
MC＝6-马来酰亚氨基己酰基，结构如下：
Val-Cit或“vc”＝缬氨酸-瓜氨酸(蛋白酶可切割接头中的例示二肽)，
瓜氨酸＝2-氨基-5-脲基戊酸，
PAB＝对氨基苄氧羰基(“自我牺牲”接头组件的例示)，
Me-Val-Cit＝N-甲基-缬氨酸-瓜氨酸(其中接头肽键已经修饰以防止其受到组织蛋白酶B的切割)，
MC(PEG)6-OH＝马来酰亚氨基己酰基-聚乙二醇(可附着于抗体半胱氨酸)，
SPP＝N-琥珀酰亚氨基4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯，
SPDP＝N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯，
SMCC＝琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯，
IT＝亚氨基硫烷。
术语“配体-药物偶联物”，指配体通过连接单元与具有生物活性的药物相连。
术语“平均药物载荷”或“载药量”是指式(I)分子中每个配体上加载的细胞毒性药物平均数量，也可以表示为药物量和抗体量的比值，药物载量的范围可以是每个配体(Pc)连接0-12个，优选1-10个。可用常规方法如UV/可见光光谱法，质谱，ELISA试验和HPLC特征鉴定偶联反应后每个ADC分子的药物品均数量。在本公开的实施方式中，载药量表示为y，也可称为DAR(Drug-antibody Ratio)值，示例性的可以为1，2，3，4，5，6，7，8，9，10的均值，范围为0-12，优选1-10，更优选1-8，或2-8，或2-7，或3-8，或3-7，或3-6，或4-7，或4-6，或4-5的均值。
本公开的一个实施方式中，细胞毒性药物通过连接单元偶联在抗体的巯基上。
可以用以下非限制性方法控制配体细胞毒性药物偶联物的载量，包括：
(1)控制连接试剂和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem，243，p3558(1968)中所述。
术语“抗体”指免疫球蛋白，是由两条重链和两条轻链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。根据免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排列顺序不同，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。本公开所述的抗体优选为针对靶细胞上细胞表面抗原的特异性抗体，非限制性实施例为以下抗体：抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体或抗Mesothelin抗体中一个或多个；优选为曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名Herceptin)、帕妥珠单抗(Pertuzumab，也被称作2C4，商品名Perjeta)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab，商品名泰欣生)、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab。
全长抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区(Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高变区(HVR)和4个序列相对保守的骨架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性，又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR)由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3；重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。
本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体，优选人源化抗体和全人源抗体。
术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能用鼠制备抗体。制备时用特定抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂交瘤。
术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗体分子。
术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-graftedantibody)，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体框架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回复突变，以保持活性。本公开的人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力成熟后的人源化抗体。进一步描述参与人源化可使用小鼠抗体的方法的文献包括，例如Queen等，Proc.，Natl.Acad.Sci.USA，88，2869，1991和Winter及其同事的方法[Jones等，Nature，321，522(1986)，Riechmann，等，Nature，332，323-327(1988)，Verhoeyen，等，Science，239，1534(1988)]。
术语“全人源抗体”、“完全人抗体”、“全人抗体”或“完全人源抗体”，也称“全人源单克隆抗体”，其抗体的可变区和恒定区都是人源的，去除免疫原性和毒副作用。全人抗体制备的相关技术主要有：人杂交瘤技术、EBV转化B淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phagedisplay)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备技术等。
术语“抗原结合片段”是指抗体的保持结合抗原的能力的一个或多个片段。已显示可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。“抗原结合片段”中包含的结合片段的实例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH和VL结构域组成的Fv片段；(v)单结构域或dAb片段(Ward等人，(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可任选地通过合成的接头连接的两个或更多个分离的CDR的组合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人(1988)Science242：423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.SciUSA85：5879-5883)。此类单链抗体也意欲包括在术语抗体的“抗原结合片段”中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
通常，Fab是通过用蛋白酶木瓜蛋白酶(例如，切割H链的224位的氨基酸残基)处理IgG抗体分子所获得的片段中的具有约50，000的分子量并具有抗原结合活性的抗体片段，其中H链N端侧的部分和L链通过二硫键结合在一起。
通常，F(ab')2是通过用酶胃蛋白酶消化IgG铰链区中两个二硫键的下方部分而获得的，分子量约为100，000，并具有抗原结合活性并包含在铰链位置相连的两个Fab区的抗体片段。
通常，Fab'是通过切割上述F(ab')2的铰链区的二硫键而获得的分子量为约50，000并具有抗原结合活性的抗体片段。
此外，可以通过将编码Fab'片段的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab'来生产所述Fab'。
术语“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重链可变结构域(或VH)和抗体轻链可变结构域(或VL)的分子。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-4个重复的变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：6444-6448)。可用于本公开的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8：725-731，Choi等人(2001)，Eur.J.Immuno l.31：94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56：3055-3061，Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293：41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
术语“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之一。通常，每个重链可变区中存在三个CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，每个轻链可变区中存在三个CDR(LCDR1、LCDR2、LCDR3)。可以使用各种公知方案中的任何一种来确定CDR的氨基酸序列边界。所述6个CDR的最常用的定义之一由Kabat E.A.等人，(1991)Sequences of proteinsof immunological interest.NIH Publication91-3242)提供。还包括“Chothia”编号规则、“ABM”编号规则、“contact”编号规则(参见Martin，ACR.Protein Sequence andStructure Analysis of Antibody Variable Domains[J].2001)和ImMunoGenTics(IMGT)编号规则(Lefranc M.P.，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)等。
术语“抗体框架”，是指可变结构域VL或VH的一部分，其用作该可变结构域的抗原结合环(CDR)的支架。从本质上讲，其是不具有CDR的可变结构域。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上被免疫球蛋白或抗体结合的部位。表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸。参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。
术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体以大约小于10-7M，例如大约小于10-8M、10-9M或10-10M或更小的亲和力(KD)结合。
术语“核酸分子”是指DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，但优选是双链DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动子或增强子有效地连接至所述编码序列。
术语“载体”是指能够运输已与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一个实施方案中，载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中的环状双链DNA环。在另一个实施方案中，载体是病毒载体，其中可将另外的DNA区段连接至病毒基因组中。本文中公开的载体能够在已引入它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)或可在引入宿主细胞后整合入宿主细胞的基因组，从而随宿主基因组一起复制(例如，非附加型哺乳动物载体)。
现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实验技术指南，5-8章和15章。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人源FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http：//imgt.cines.fr得到，Lefranc，G.，The Immunoglobulin FactsBook，AcademicPress，或者从免疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。
术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可包括细菌、微生物、植物或动物细胞。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的成员，例如大肠杆菌(Escherichia coli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。适当的微生物包括酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。适当的动物宿主细胞系包括CHO(中国仓鼠卵巢细胞系)和NS0细胞。
本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至表达载体。重组的免疫球蛋白表达载体可以稳定地转染宿主细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的N端位点。阳性的克隆在生物反应器的清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常规技术纯化。比如，用A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗去非特异性结合的组分。再用pH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃，或者冻干。
术语“肽”是指介于氨基酸和蛋白质之间的化合物片段，由2个或2个以上氨基酸分子通过肽键相互连接而成，是蛋白质的结构与功能片段。
术语“糖”是指由C、H、O三种元素组成的生物大分子，可分为单糖、二糖和多糖等。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子的烷基，更优选含有1至10个碳原子的烷基，最优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“杂烷基”指含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、1，1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1，2-亚乙基(-CH2CH2)-、1，1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1，2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1，3-亚丙基(-CH2CH2CH2-)、1，4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)和1，5-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中的一个或多个取代基所取代。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基或环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至10个碳原子，最优选包含3至8个(例如3、4、5、6、7和8个)碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个)环原子，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选环烷基环包含3至10个环原子；更优选包含3至8个环原子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1-3个(例如1、2和3个)是杂原子；更优选包含3至6个环原子，其中1-3个是杂原子；最优选包含5或6个环原子，其中1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合多环是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基，优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“杂芳基”指包含1至4个(例如1、2、3和4个)杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10元)，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含9-芴甲氧羰基、叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基等。这些基团可任选地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。所述氨基保护基优选为9-芴甲氧羰基。
术语“氨基杂环基”指杂环基被一个或多个氨基取代，优选被一个氨基取代，其中杂环基如上所定义，其中“氨基”指-NH2。本公开的代表性实施例如下：
术语“杂环基氨基”指氨基被一个或多个杂环基取代，优选被一个杂环基取代，其中氨基如上所定义，其中杂环基如上所定义。本公开的代表性实施例如下：
术语“环烷基氨基”指氨基被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取代，其中氨基如上所定义，其中环烷基如上所定义。本公开的代表性实施例如下：
术语“环烷基烷基”指烷基上的氢被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取代，其中烷基如上所定义，其中环烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基上的氢被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基上的氢被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“巯基”指-SH。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“酰胺基”指-C(O)N(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
化学式中简称“Me”为甲基。
本公开还包括各种氘化形式的式(I)化合物。与碳原子连接的各个可用的氢原子可独立地被氘原子替换。本领域技术人员能够参考相关文献合成氘化形式的式(I)化合物。在制备氘代形式的式(I)化合物时可使用市售的氘代起始物质，或它们可使用常规技术采用氘代试剂合成，氘代试剂包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氢呋喃溶液、氘代氢化锂铝、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本公开配体-药物偶联物的盐，或本公开中所述的化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性，本公开抗体-抗体药物偶联化合物至少含有一个氨基，因此可以与酸形成盐，可药用盐的非限制性实例包括：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、柠檬酸盐、乙酸盐、琥珀酸盐、抗坏血酸盐、草酸盐、硝酸盐、梨酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、水杨酸盐、柠檬酸氢盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。
常规的药物组合物的制备见中国药典。
术语“载体”用于本公开的药物，是指能改变药物进入人体的方式和在体内的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。药物载体释放和靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。如可作为载体的高分子表面活性剂由于其独特的两亲性结构，可以进行自组装，形成各种形式的聚集体，优选的实例如胶束、微乳液、凝胶、液晶、囊泡等。这些聚集体具有包载药物分子的能力，同时又对膜有良好的渗透性，可以作为优良的药物载体。
术语“赋形剂”是在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。如片剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂；半固体制剂软膏剂、霜剂中的基质部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂等均可称为赋形剂。
术语“稀释剂”又称填充剂，其主要用途是增加片剂的重量和体积。稀释剂的加入不仅保证一定的体积大小，而且减少主要成分的剂量偏差，改善药物的压缩成型性等。当片剂的药物含有油性组分时，需加入吸收剂吸收油性物，使保持“干燥”状态，以利于制成片剂。如淀粉、乳糖、钙的无机盐、微晶纤维素等。
本公开的合成方法
为了完成本公开的合成目的，本公开采用如下的合成技术方案：
本公开通式(Pc-L-DIII)所示的化合物制备方法例，该方法包括：
还原Pc后，与通式(L-DIII)反应，得到通式(Pc-L-DIII)；还原剂优选TCEP，特别地，优选还原抗体上的二硫键；
其中：Pc为配体；
G1、A和R1、R2、R4如通式(Pc-L-D)中所定义；
接头单元-L-如前所所定义。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。
本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试剂。
实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用Agilent 1200/1290DAD-6110/6120Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120Quadrupole MS)。
waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity QdaDetector/waters SQ Detector)THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO Q Exactive)
高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。
手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。
高效液相制备使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281制备型色谱仪。
手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(AccelaChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，C：石油醚/乙酸乙酯体系，，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。
中间体I1
2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1
第一步
2-((7-溴-2-氯吡啶[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1c
将7-溴-2,4-二氯吡啶并[3,2-d]嘧啶I1a(5.4g，19.36mmol，采用专利申请WO2014022728公开的方法制备而得)加入到120mL乙腈中，加入2-氨基-2-甲基已烷-1-醇I1b(3.8g，28.96mmol，采用专利申请WO2009129097公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(8.027g，58.08mmol)于45℃搅拌反应16小时，反应结束，过滤去不溶物，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物I1c(4.0g，产率：55.3％)。
MS m/z(ESI):373.1[M+1]。
第二步
2-((7-溴-2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1d
将化合物I1c(4.0g，10.71mmol)加入到25mL四氢呋喃中，加入2,4-二甲氧基苯甲胺(6.0g，35.861mmol)，加入N,N-二异丙基乙胺(4.15g，32.11mmol)，封管100℃搅拌16小时，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I1d(3.5g，产率：64.8％)。
MS m/z(ESI):504.1[M+1]
第三步
2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1e
将化合物I1d(130mg，0.237mmol)加入到5mL乙二醇二甲醚中，加入联硼酸频那醇酯(91mg，0.358mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(35mg，0.048mmol)，加入乙酸钾(70mg，0.713mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗品标题产物I1e(130mg，产率：99.2％)。
第四步
2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1g
将粗品化合物I1e(130mg，0.235mmol)加入到10mL 1,4-二氧六环和2mL水中，加入5-溴-2-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶I1f(68mg，0.282mmol，采用专利申请WO2007084451公开的方法制备而得)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氩气三次，反应液温度升至80℃反应2小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷(20mL)萃取，合并有机相，用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物I1g(60mg，产率：43.5％)。
MS m/z(ESI):586.0[M+1]。
第五步
2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I1
将化合物I1g(60mg，0.102mmol)加入到10mL三氟乙酸，室温反应2小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到产物I1(10mg，产率：22.4％)。
MS m/z(ESI):436.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,1H),8.64(s,1H),8.18-8.20(m,1H),7.83(s,1H),7.56-7.58(m,1H),7.24(s,1H),6.40(br,2H),5.16-5.20(m,1H),3.79(s,2H),3.70-3.73(m,1H),3.51-3.54(m,1H),2.54(s,4H),1.91-1.95(m,2H),1.71-1.75(m,4H),1.43(s,3H),1.23-1.27(m,4H),0.84-0.87(m,3H)。
中间体I2
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2
第一步
(R)-2-((7-溴-2-氯吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2c
将化合物I1a(400mg，1.434mmol)加入到10mL四氢呋喃中，加入(R)-2-氨基-2-甲基己烷-1-醇I2b(377mg，2.873mmol)，加入N,N-二异丙基乙胺(556mg，4.302mmol)，100℃封管搅拌反应16小时，反应结束，冷却到室温，过滤去不溶物，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物I2c(4.0g，产率：55.3％)。
MS m/z(ESI):373.1[M+1]。
第二步
(R)-2-((7-溴-2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2d
将化合物I2c(250mg，0.669mmol)加入到10mL四氢呋喃中，加入2，4-二甲氧基苯甲胺(560mg，3.349mmol)，加入N,N-二异丙基乙胺(259mg，2.004mmol)，封管100℃搅拌16小时，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷萃取(20mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I2d(295mg，产率：87.5％)。
MS m/z(ESI):504.1[M+1]
第三步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2e
将化合物I2d(295mg，0.54mmol)加入到5mL乙二醇二甲醚中，加入联硼酸频那醇酯(223mg，878.169umol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(43mg，0.059mmol)，加入乙酸钾(173mg，1.76mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩得到粗品标题产物I2e(322mg，产率：100％)。
第四步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2g
将粗品化合物I2e(322mg，0.584mmol)加入到10mL 1,4-二氧六环和2mL水中，加入化合物I1f(141mg，0.584mmol)，加入碳酸钾(242mg，1.75mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(43mg，0.059mmol)，置换氩气三次，反应液温度升至80℃反应2小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL水，用二氯甲烷(20mL)萃取，合并有机相，用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物I2g(100mg，产率：29.2％)。
MS m/z(ESI):586.0[M+1]
第五步
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I2
将化合物I2g(100mg，0.170mmol)加入到10mL三氟乙酸，室温反应2小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用水(50mL)，饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物I2(45mg产率：60.5％)。
MS m/z(ESI):436.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,1H),8.64(s,1H),8.18-8.20(m,1H),7.83(s,1H),7.56-7.58(m,1H),7.24(s,1H),6.40(br,2H),5.16-5.20(m,1H),3.79(s,2H),3.70-3.73(m,1H),3.51-3.54(m,1H),2.54(s,4H),1.91-1.95(m,2H),1.71-1.75(m,4H),1.43(s,3H),1.23-1.27(m,4H),0.84-0.87(m,3H)。
中间体I3
2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I3
第一步
2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(1'-甲基-1',2',3',6'-四氢-[2,4'-联吡啶]-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I3b
将化合物I1e(218mg，0.395mmol)加入到10mL 1,4-二氧六环和2mL水中，加入5-溴-1'-甲基-1',2',3',6'-四氢-2,4'-联吡啶I3a(100mg，0.395mmol，采用专利申请WO2010054279公开的方法制备而得)，加入1，1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(29mg，0.040mmol)，加入碳酸钾(164mg，1.187mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I3b(100mg，产率：43.2％)。
MS m/z(ESI):598.0[M+1]。
第二步
2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I3c
将化合物I3b(100mg，0.163mmol)加入到10mL甲醇中，加入钯碳(20mg)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氢气5次，室温反应20小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩得到粗品标题产物I3c(68mg，产率：67.8％)。
MS m/z(ESI):600.0[M+1]
第三步
2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I3
将粗品化合物I3c(60mg，0.100mmol)加入到5mL三氟乙酸，室温反应3小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物I3(15mg，产率：33.4％)。
MS m/z(ESI):450.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,1H),8.62(s,1H),8.11-8.13(d,1H),7.80(s,1H),7.42-7.44(m,1H),7.23(s,1H),6.38(br,2H),3.70-3.72(m,1H),3.50-3.53(m,1H),2.87-2.90(m,2H),2.68-3.72(m,1H),2.00(s,3H),1.83-1.93(m,9H),1.42(s,3H),1.23-1.27(m,4H),0.83-0.86(m,3H)。
中间体I4
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I4
第一步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(1'-甲基-1',2',3',6'-四氢-[2,4'-联吡啶]-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I4b
将化合物I2e(284mg，0.515mmol)加入到10mL 1,4-二氧六环和2mL水中，加入化合物I3a(130mg，0.515mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(38mg，0.052mmol)，加入碳酸钾(214mg，1.551mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物I4b(102mg，产率：33.1％)。
MS m/z(ESI)：598.0[M+1]。
第二步
(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I4c
将化合物I4b(100mg，0.163mmol)加入到10mL甲醇中，加入钯碳(20mg)，加入碳酸钾(49mg，0.355mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(18mg，0.025mmol)，置换氢气5次，室温反应20小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩得到粗品标题产物I4c(85mg，产率：84.7％)。
MS m/z(ESI):600.0[M+1]
第三步
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I4
将粗品化合物I4c(80mg，0.133mmol)加入到5mL三氟乙酸，室温反应2小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用薄层色谱法以洗脱剂体系B纯化得到产物I4(26mg，产率：43.3％)。
MS m/z(ESI):450.0[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.91(s,1H),8.62(s,1H),8.11-8.13(d,1H),7.80(s,1H),7.42-7.44(m,1H),7.23(s,1H),6.38(br,2H),3.70-3.72(m,1H),3.50-3.53(m,1H),2.87-2.90(m,2H),2.68-3.72(m,1H),2.00(s,3H),1.83-1.93(m,9H),1.42(s,3H),1.23-1.27(m,4H),0.83-0.86(m,3H)。
中间体I5
2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I5
第一步
2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I5b
将化合物I1e(200mg，0.363mmol)加入到10mL 1,4-二氧六环和2mL水中，加入1-((5-溴吡啶-2-基)甲基)-4-甲基哌嗪I5a(108mg，0.401mmol，采用专利申请WO20020026052公开的方法制备而得)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(27mg，0.037mmol)，加入碳酸钾(150mg，1.085mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物I5b(121mg，产率：54.2％)。
MS m/z(ESI)：615.1[M+1]
第二步
2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I5
将化合物I5b(85mg，0.138mmol)加入到5mL三氟乙酸，室温反应3小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化得到产物I5(23mg，产率：49.5％)。
MS m/z(ESI):465.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87-8.88(d,1H),8.60-8.61(m,1H),8.14-8.16(d,1H),7.79-7.80(s,1H),7.51-7.53(d,1H),7.20(s,1H),6.36(br,2H),5.12-5.15(t,1H),3.66(s,2H),3.68-3.70(m,1H),3.48-2.53(m,1H),2.32-3.42(m,8H),2.12(s,3H),1.90-1.92(m,2H),1.40(s,3H),1.22-1.23(m,4H),0.80-0.84(m,3H)。
中间体I6
(R)-2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I6
第一步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I6b
将化合物I2e(650mg，1.178mmol)加入到20mL 1,4-二氧六环和4mL水中，加入1-((5-溴吡啶-2-基)甲基)-4-甲基哌嗪I5a(318mg，1.170mmol)，加入1，1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(86mg，0.117mmol)，加入碳酸钾(489mg，3.538mmol)，置换氩气三次，升温到80℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水30mL，用二氯甲烷萃取(30mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(30mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物I6b(650mg，产率：89.70％)。
MS m/z(ESI):615.1[M+1]。
第二步
(R)-2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I6
将化合物I6b(650mg，0.138mmol)加入到5mL三氟乙酸，室温反应3小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到产物I6(320mg产率：65.14％)。
MS m/z(ESI):465.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87-8.88(d,1H),8.60-8.61(m,1H),8.14-8.16(d,1H),7.79-7.80(s,1H),7.51-7.53(d,1H),7.20(s,1H),6.36(br,2H),5.12-5.15(t,1H),3.66(s,2H),3.68-3.70(m,1H),3.48-2.53(m,1H),2.32-3.42(m,8H),2.12(s,3H),1.90-1.92(m,2H),1.40(s,3H),1.22-1.23(m,4H),0.80-0.84(m,3H)。
中间体I7
(R)-2-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I7
第一步
5-溴-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶I7c
将化合物5-溴-2-(溴甲基)嘧啶I7a(200mg，0.794mmol)加入到5mL乙腈，加入碳酸钾(220mg，1.592mmol)，0℃下加入1-甲基哌嗪I7b(120mg，1.198mmol)，升温到室温搅拌反应2小时。反应结束，过滤去不溶物，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I7c(200mg，产率：92.9％)。
MS m/z(ESI):273.1[M+1]
第二步
(R)-2-((2-((2，4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I7d
将化合物I2e(163mg，0.296mmol)加入到5mL 1,4-二氧六环和1mL水中，加入I7c(81mg，0.299mmol)，加入四三苯基磷钯(35mg，0.030mmol)，加入碳酸钾(82mg，0.593mmol)，置换氩气三次，升温到100℃搅拌反应2小时。反应液减压浓缩后，向体系中加入水20mL，用二氯甲烷萃取(10mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(20mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I7d(127mg，产率：69.8％)。
MS m/z(ESI):616.3[M+1]
第三步
(R)-2-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I7
将化合物I7d(127mg，0.206mmol)加入到3mL三氟乙酸，室温反应1小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入20mL饱和碳酸氢钠，用二氯甲烷(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到产物I7(34mg，产率：35.4％)。
MS m/z(ESI):466.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,2H),8.66(s,1H),7.92(s,1H),7.23(s,1H),6.40(br,2H),5.15(br,1H),3.73(s,2H),3.70(d,2H),3.50(d,2H),2.51(br,3H),2.29(br,3H),2.11(s,3H),1.90-1.88(m,2H),1.41(s,3H),1.28-1.20(m,4H),0.83(t,3H)
中间体I8
(R)-2((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I8
第一步
5-溴-2-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶I8c
将化合物5-溴-2-碘嘧啶I8a(4g，14.041mmol)加入到200mL 1,4-二氧六环和40mL水中，加入1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,2,3,6-四氢吡啶I8b(3.45g，15.463mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(1.05g，1.435mmol)，加入碳酸钾(3.89g，28.146mmol)，置换氩气三次，升温到45℃搅拌反应过夜。反应液减压浓缩后，向体系中加入水30mL，用二氯甲烷萃取(60mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(30mL)，饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物I8c(2.5g，产率：70.1％)。
MS m/z(ESI):255.9[M+1]
第二步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)嘧啶-5-基]吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基-2-甲基己烷-1-醇I8d
将化合物I2e(4.15g，7.5252mmol)加入到80mL 1,4-二氧六环和16mL水中，加入I8c(1.53g，6.021mmol)，加入1,1'-双二苯基膦二茂铁二氯化钯(551mg，0.753mmol)，加入碳酸钾(2.1g，15.195mmol)，置换氩气三次，升温到95℃搅拌反应45分钟。反应液减压浓缩后，向体系中加入水40mL，用二氯甲烷萃取(40mL×3)，合并有机相，有机相分别用水(40mL)，饱和氯化钠溶液(40mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I8d(3.5g，产率：77.7％)。
MS m/z(ESI):599.4[M+1]
第三步
(R)-2-((2-((2,4-二甲氧基苄基)氨基)-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基-2-甲基己烷-1-醇I8e
将化合物I8d(3.5g，5.846mmol)加入到50mL甲醇中，加入钯碳(1g)，置换氢气5次，室温反应48小时，过滤去钯碳，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题产物I8e(1.7g，产率：48.4％)。
MS m/z(ESI):601.4[M+1]
第四步
(R)-2((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己烷-1-醇I8
将粗品化合物I8e(1.7g，2.830mmol)加入到20mL三氟乙酸，室温反应1小时，反应液减压浓缩，向反应液中加入50mL饱和碳酸钠，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到产物I8(600mg，产率：47.1％)。
MS m/z(ESI):451.3[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.16(s,2H),8.64(s,1H),7.90(s,1H),7.22(s,1H),6.37(br,2H),5.14-5.12(m,1H),3.71-3.67(m,1H),3.51-3.47(m,1H),2.89-2.72(m,3H),2.17(s,3H),2.05-1.72(m,8H),1.40(s,3H),1.28-1.19(m,4H),0.83(t,3H)
实施例1
(R)-2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)1
第一步
(R)-2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-硝基苯基)碳酸酯1b
将I8(30mg，66.58umol)溶于无水二氯甲烷(1.5mL)，加入吡啶(53mg，0.67mmol)，冰水浴冷却至0-5℃。加入4-硝基苯基氯甲酸酯1a(94mg，0.47mmol，溶于0.5mL二氯甲烷中，供应商ark)。加毕，撤去冰水浴，升至室温搅拌24小时。向反应液中加入10mL水，用二氯甲烷(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(5mL×2)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，得到粗品标题产物1b，产品不经纯化直接用于下一步反应。
MS m/z(ESI):616.3[M+1]
第二步
(R)-2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基甲基(2-(甲基氨基)乙基)氨基甲酸酯1c
将粗品1b溶于无水二氯甲烷(2mL)，加入吡啶(53mg，0.67mmol)和N，N'-二甲基乙二胺(71mg，0.81mmol)。加毕，室温下搅拌24小时。反应液减压浓缩，所得残余物进行高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流动相：A-水(10mmol NH4OAc)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：18mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩得到标题产物1c(7.0mg，两步总产率：39.6％)。
MS m/z(ESI):565.3[M+1]
第三步
(R)-2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)1
将1c(7.0mg,12.40umol)和4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯1d(6.0mg，8.13umol，供应商Eos Biotech)溶于N，N'-二甲基甲酰胺(1.0mL)中，加入吡啶(0.2mL)，加入1-羟基苯并三唑(2.5mg，18.5umol)。加毕，室温搅拌16小时。反应液进行高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：XBridge Prep C18 OBD5um 19*250mm；流动相：A-水(10mmol NH4OAc)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：18mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩得到标题产物1(8.0mg，产率：83.2％)。
MS m/z(ESI):1163.6[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.01(s,2H),9.18(s,2H),8.66(s,1H),8.20-8.10(m,2H),7.93(s,1H),7.83(d,1H),7.57(d,2H),7.23(d,2H),7.15-7.04(m,2H),6.99(s,1H),6.46(s,2H),6.05-5.96(m,1H),5.42(s,2H),5.32(t,1H),5.00-4.87(m,2H),4.51-4.43(m,2H),4.43-4.34(m,1H),4.34-4.23(m,2H),4.23-4.15(m,1H),3.07-2.90(m,3H),2.90-2.65(m,7H),2.35-2.31(m,1H),2.25-2.06(m,5H),2.05-1.90(m,5H),1.90-1.75(m,5H),1.72-1.55(m,3H),1.52-1.38(m,6H),1.33-1.12(m,11H),0.90-0.76(m,6H).
实施例2
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺2
第一步
(9H-芴-9-基)甲基(R)-(2-((((2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基)氧基)甲基)氨基)-2-氧代乙基)氨基甲酸酯2b
将(2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)已酰氨基)甲基乙酸酯2a(20mg，0.054mmol，采用专利申请“WO2015155998中说明书第156页的Chem.43”公开的方法制备而得)加入到2mL四氢呋喃中，加入I8(24.4mg，0.054mmol)，氩气保护，加入氢化钠(2.8mg，0.065mmol，供应商Adamas)，加毕室温搅拌反应40分钟。反应液冰浴中冷却，加入水(5mL)，用乙酸乙酯萃取(8mL×3)，合并有机相，有机相用水(10mL)洗涤，饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化所得残余物，得到标题产物2b(17mg，产率：41.2％)。
MS m/z(ESI)：759.4[M+1]
第二步
(R)-2-氨基-N-(((2-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基)氧基)甲基)乙酰胺2c
将2b(16mg，0.021mmol)加入到1mL二氯甲烷中，加入二乙胺(1mL)，加毕室温搅拌30分钟。反应液减压浓缩，所得残余物用正己烷(10mL)打浆两次，过滤后将滤饼用油泵抽干，得到标题产物2c(11mg，产率：97.3％)。
MS m/z(ESI)：537.3[M+1]
第三步
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(2-(1-甲基哌啶-4-基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺2
将2c(10mg，0.018mmol)加入到1mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入(2S)-2-(2-{2-[6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基]乙酰氨基}乙酰胺基)-3-苯基丙酸2d(10.5mg，0.022mmol，采用专利申请“EP2907824中说明书第144页的实施例Formula 142”公开的方法制备而得)，加入4-(4,6-二甲氧基-1,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基氯化吗啉盐(7.7mg，0.027mmol)，室温搅拌2小时。反应液直接用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：XBridge Prep C18 OBD 5um 19*250mm；流动相：A-水(10mmol NH4OAc)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：18mL/min)，收集其相应组分，减压浓缩得到标题产物2(5.4mg产率：29.2％)。
MS m/z(ESI):991.5[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.25-9.14(m,2H),8.78-8.68(m,1H),8.38-8.26(m,1H),8.18-7.94(m,3H),7.45-7.29(m,2H),7.28-7.06(m,4H),6.98(s,1H),6.73-6.62(m,1H),5.36-5.27(m,1H),5.17-5.08(m,1H),4.76(s,2H),4.53-4.40(m,2H),4.14-3.97(m,2H),3.78-3.62(m,4H),3.59-3.46(m,3H),3.21-3.12(m,1H),3.05-2.93(m,2H),2.92-2.79(m,3H),2.75-2.64(m,3H),2.33(s,1H),2.22(s,2H),2.15-2.07(m,2H),2.06-1.78(m,6H),1.54-1.38(m,4H),1.35-1.15(m,7H),0.85(t,3H).
实施例3
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)3
将I8换成I2，参考实施例1化合物的合成方法合成得到。
实施例4
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺4
将I8换成I2，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例5
2-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)5
将I8换成I1，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例6
N-((7S)-16-((2-氨基-7-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺6
将I8换成I1，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例7
2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)7
将I8换成I3，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例8
(S)-N-(16-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺8
将I8换成I3，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例9
(R)-2-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)9
将I8换成I4，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例10
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(6-(1-甲基哌啶-4-基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺10
将I8换成I4，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例11
(R)-2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)11
将I8换成I6，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例12
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺12
将I8换成I6，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例13
2-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)13
将I8换成I5，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例14
(S)-N-(16-((2-氨基-7-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺14
将I8换成I5，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例15
(R)-2-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-2-甲基己基(4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨基)-5-脲基戊酰氨基)苄基)乙烷-1,2-二基双(甲基氨基甲酸酯)15
将I8换成I7，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例16
N-((7S,16R)-16-((2-氨基-7-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)吡啶并[3,2-d]嘧啶-4-基)氨基)-7-苄基-16-甲基-2,5,8,11-四氧代-14-氧杂-3,6,9,12-四氮杂二十烷基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺16
将I8换成I7，参考实施例2化合物的合成方法合成。
ADC药物载量分析
CE-SDS计算方法
试剂和仪器：
SDS-Mw Analysis Kit：Beckman生产，货号390953，该试剂盒中包含SDS-MW凝胶分离缓冲液、SDS-MW样品缓冲液(样品稀释液)、酸性清洗液(0.1mol/L盐酸溶液)、碱性清洗液(0.1mol氢氧化钠溶液)、内标物质(10kDa internal standard)。也可采用北京博思雅生化技术研究院生产的SDS试剂盒，货号BSYK018，该试剂盒中包含CE-SDS Gel Buffer、CE-SDSSampleBuffer(样品稀释液)。
烷基化溶液(0.25mo碘乙酰胺溶液)：称取约0.046g碘乙酰胺，加入lmL超纯水溶解混匀，可于2-8℃避光保存7天。
毛细管电泳仪：SCIEX公司PA800plus
毛细管：非涂层熔融石英毛细管(内径50μm)，切割至总长为30.2cm，高分辨率方法有效分离长度为20cm。
供试品溶液制备
用SDS样品缓冲液将供试品稀释至1mg/mL。样。取供试品溶液(1mg/mL)95μL，加入0.8mol/L碘乙酰胺水溶液5μL，涡旋混匀。取空白对照95μL，加入0.8mol/L碘乙酰胺水溶液5μL，涡旋混匀，从样品管中分别取出75μL至样品瓶中，立即进行分析。
测定法：
(1)毛细管的预处理：0.1mol/L氢氧化钠溶液在60psi压力下冲洗3分钟，然后用0.1mol/L盐酸溶液在60psi压力下冲洗2分钟，最后用纯水在70psi压力下冲洗1分钟。每次运行前应进行。
(2)毛细管的预填充：SDS凝胶分离缓冲液在50psi压力下冲洗15分钟。每次运行前应进行。
样品进样：10kV反相极性电动进样，还原样品进样20秒
分离：15kV下运行40分钟，反相极性。
样品室温度：18～25℃。
毛细管温度：18～25℃。
结果分析：
数据分析：基于抗体中打开的二硫键游离出的巯基都偶联上相应的Drugs，用Beckman软件对数据进行分析，以重链、非糖基化重链和轻链等校正峰面积分别占所有校正峰面积计算。根据公式：DAR＝[4*重链(H)峰面积+2*半抗(H-L)峰面积+4*双重链(H-H)峰面积+2*重重轻链(H-H-L)峰面积]/[重链(H)峰面积/2+半抗(H-L)峰面积/2+双重链(H-H)峰面积+重重轻链(H-H-L)峰面积+全抗峰面积]，最终计算出该ADC药的加权平均值
实施例17 ADC-1
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab(常规市售抗体，见WO2016/127790A1中曲妥珠单抗Trastuzumab所示，轻链为SEQID NO:5，重链为SEQID NO:6。)的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，1.16mL，78.38nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，19.6μL，196nmol)，置于水浴振荡器，于37℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物1(1.0mg，860nmol)溶解于60μL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液，含0.001M的EDTA)，得到标题产物ADC-1的PBS缓冲液(0.86mg/mL，13.0mL)，于4℃储存。
CE-SDS计算平均值：y＝3.47。
实施例18 ADC-2
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，1.27mL，85.8nmol)加入配置好的的三(2-羧乙基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，21.4μL，214nmol)，置于水浴振荡器，于37℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物2(1.0mg，1009nmol)溶解于60uL DMSO中，加入到上述反应液中，置于水浴振荡器，于25℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液，含0.001M的EDTA)，得到标题产物ADC-2的PBS缓冲液(1.03mg/mL，12.94mL)，于4℃储存。
CE-SDS计算平均值：y＝4.18。
实施例19 ADC-3
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例20 ADC-4
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例21 ADC-5
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例22 ADC-6
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例23 ADC-7
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例24 ADC-8
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例25 ADC-9
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例26 ADC-10
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例27 ADC-11
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例28 ADC-12
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例29 ADC-13
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例30 ADC-14
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
实施例31 ADC-15
参考实施例17化合物ADC-1的合成方法合成。
实施例32 ADC-16
参考实施例18化合物ADC-2的合成方法合成。
测试例：
生物学评价
测试例1、本发明化合物对人源TLR8和TLR7激动活性的测定
本发明化合物对HEK-BlueTMhTLR8稳转株细胞表达的hTLR8激活作用采用如下实验方法测定。
一、实验材料及仪器
1.DMEM(Gibco，10564-029)；
2.胎牛血清(GIBCO，10099)；
3.台盼蓝溶液(Sigma，T8154-100ML)；
4.Flexstation 3多功能酶标仪(Molecμlar Devices)；
5.HEK-BlueTMhTLR8细胞系(InvivoGen，hkb-hTLR8)，或HEK-BlueTMhTLR7细胞系(InvivoGen，hkb-hTLR7)；
6.HEK-Blue检测试剂(InvivoGen，hb-det3)；
7.磷酸盐缓冲液(PBS)pH7.4(上海源培生物科技股份有限公司，B320)。
二、实验步骤
a.对人源TLR8激动活性的测定
配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50mL去内毒素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6×106nM，然后3倍梯度稀释，共10个点；用培养基先将上述配制好的化合物稀释20倍，然后每孔加入20μL稀释后的化合物。
取HEK-BlueTM hTLR8细胞，先去掉上清，再加入2-5mL预热的PBS，放入培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬细胞，调整浓度为2.2×105个细胞/mL，加180μl细胞至上述已加入20μl化合物的96孔细胞培养板中，37℃，培养16小时。
酶标仪读数，波长为620nm。可获得相应的OD值，经Graphpad Prism计算得到化合物的EC50值。
b.对人源TLR7激动活性的测定
配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50mL去内毒素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6×106nM，经3倍梯度稀释，共10个点。用培养基先将上述配制好的化合物稀释20倍，然后每孔加入20μl稀释后的化合物。
取HEK-BlueTM hTLR7细胞，先去掉上清，再加入2-5mL预热的PBS，放入培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬细胞，调整浓度为2.2×105个细胞/mL，加180μl细胞至上述已加入20μL化合物的96孔细胞培养板中，37℃，培养16小时。
酶标仪读数，波长为620nm。可获得相应的OD值，经Graphpad Prism计算得到化合物的EC50值。
本发明化合物对人源TLR8和TLR7激活作用可通过以上的试验进行测定，测得的EC50值见表1。
表1本发明化合物对人源TLR8和TLR7的EC50值
“--”，表示没有测试。
结论：本发明化合物对人源TLR8具有较好的激活作用，对人源TLR7没有激活作用，说明本发明化合物对TLR8具有选择性。
测试例2、本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性的抑制作用
本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4咪达唑仑代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定。
一、实验材料及仪器
1.磷酸缓冲液(PBS)；(上海源培生物科技股份有限公司，B320，下同)
2.NADPH(Sigma N-1630)；
3.人肝微粒体(Corning Gentest)；
4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)；
5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)；
6.CYP探针底物(15μM的咪达唑仑，SIGMA UC429)和阳性对照抑制剂(酮康唑，SIGMA K1003)。
二、实验步骤
配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/mL的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的酮康唑工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至15μM浓度的咪达唑仑工作液。
分别取2.5mg/mL的微粒体溶液、15μM的咪达唑仑工作液、MgCl2溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后取20μl NADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μL含内标(100ng/mL喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟，然后3700rpm离心10分钟。取80μL的上清液，转移至LC-MS/MS分析。
数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC50值见表2。
表2本发明化合物对CYP3A4咪达唑仑代谢位点的IC50值
| 实施例编号 | IC<sub>50</sub>(μM) |
| 2 | 27 |
| 4 | >30 |
| 5 | >30 |
| 6 | >30 |
| 8 | >30 |
结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4的咪达唑仑代谢位点没有抑制作用，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP3A4代谢咪达唑仑代谢位点的代谢性药物相互作用。
测试例3、本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性的抑制作用
本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6酶活性采用如下实验方法测定。
一、实验材料及仪器
1.磷酸缓冲液(PBS)；
2.NADPH(Sigma N-1630)；
3.人肝微粒体(Corning Gentest)；
4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)；
5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)；
6.CYP探针底物(20μM的右美沙芬，SIGMA Q0750)和阳性对照抑制剂(奎尼丁，SIGMA D9684)。
二、实验步骤
配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/mL的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的奎尼丁工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至20μM浓度的右美沙芬工作液。
分别取2.5mg/mL的微粒体溶液、20μM的右美沙芬工作液、MgCl2溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μL，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的奎尼丁代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟，5分钟之后取20μLNADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μL含内标(100ng/mL喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟。3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。
数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP2D6酶抑制作用的IC50值见表3。
表3本发明化合物对CYP2D6酶抑制作用的IC50值
| 实施例编号 | IC<sub>50</sub>(μM) |
| 2 | >30 |
| 4 | >30 |
| 5 | >30 |
| 6 | >30 |
| 8 | >30 |
结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP2D6的酶活性抑制作用弱，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP2D6发生代谢性药物相互作用。
测试例4、本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4睾酮代谢位点的酶活性的抑制作用
本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4睾酮代谢位点的酶活性采用如下实验方法测定。
一、实验材料及仪器
1.磷酸缓冲液(PBS)；
2.NADPH(Sigma N-1630)；
3.人肝微粒体(Corning Gentest)；
4.ABI QTrap 4000液质两用仪(AB Sciex)，
5.Inertsil C8-3柱，4.6×50mm，5μm(美国迪马公司)，
6.CYP探针底物(睾酮/100μM，SIGMA K1003)和阳性对照抑制剂(酮康唑，Dr.Ehrenstorfer GmbH，C17322500)。
二、实验步骤
配置100mM的PBS缓冲液，用该缓冲液配制2.5mg/mL的人肝微粒体溶液和5mM的NADPH溶液，用PBS梯度稀释5X浓度的化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS梯度稀释5X浓度的酮康唑工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM)。用PBS稀释至50μM浓度的右美沙芬工作液。
分别取2.5mg/mL的微粒体溶液、50μM的睾酮工作液、MgCl2溶液和化合物工作液(150、50、15、5、1.5、0.15、0.015、0μM，每个浓度设置不同的反应体系)各20μl，混合均匀。阳性对照组用相同浓度的酮康唑代替化合物。同时将5mM的NADPH溶液一起在37℃预孵育5分钟。5分钟之后取20μL NADPH加入到各个孔中，启动反应，孵育30分钟。所有孵育样品设双样本。30分钟后向所有样本中加入250μL含内标(100ng/mL喜树碱)的乙腈，混匀，800rpm摇10分钟。3700rpm离心10分钟。取80μl的上清液，转移至LC-MS/MS分析。
数值经Graphpad Prism计算得到化合物对CYP3A4睾酮代谢位点的IC50值见表4。
表4本发明化合物对CYP3A4睾酮代谢位点的IC50值
| 实施例编号 | IC<sub>50</sub>(μM) |
| 4 | 16 |
| 5 | 8.3 |
| 6 | >30 |
| 8 | >30 |
结论：本发明化合物对人肝微粒体CYP3A4的睾酮代谢位点没有抑制作用，表现出更好的安全性，提示不会发生基于CYP3A4的睾酮代谢位点的代谢性药物相互作用。
测试例5、本发明化合物刺激外周血单个核细胞(PBMC)分泌IL12和IFNγ能力的测定
本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ能力采用如下实验方法测定。
一、实验材料及仪器
1.RMPI 1640(Invitrogen，11875)；
2.FBS(Gibco，10099-141)；
3.Ficoll-Paque PREMIUM(GE，17-5442-02)；
4.台盼蓝溶液(Sigma，T8154-100ML)；
5.SepMateTM-50(Stemcell，15460)；
6.Bright-LineTM血细胞计数仪(Sigma，Z359629-1EA)；
7.Human IL-12ELISA试剂盒(欣博盛，EHC152.96)；
8.Human IFNγ试剂盒(cisbio，62HIFNGPEG)；
9.PHERAStar多功能酶标仪(BMG，PHERAStar)。
二、实验步骤
化合物用纯DMSO稀释，最高浓度为5mM，4倍梯度稀释，共9个点。然后取4μl化合物，加入到196μL含10％FBS的RMPI 1640培养基中，混匀。取50μl至96孔细胞培养板。
所有试剂平衡到室温，取mL250mL培养瓶，将60mL健康人血液和等体积的PBS(含2％FBS)加入其中，轻轻吹打混匀稀释。取50mL PBMC分离管SepMateTM-50，加入15mL淋巴细胞分离液Ficoll-Paque PREMIUM，然后加入30mL上述稀释后血液。室温以1200g离心10分钟。取上清，然后以300g离心8分钟。用含10％FBS的RMPI 1640培养基重悬并计数，调整PBMC数量至3.33×106个细胞/mL，取150μL至上述已加入化合物的细胞培养板中，37℃，5.0％CO2的培养箱中培养24小时。将细胞培养板放入离心机中，1200rpm，室温离心10分钟，每孔取出150μL上清。
平衡Human IL-12ELISA检测试剂盒的试剂至常温，根据试剂盒说明书，标准品的最高浓度为2000pg/mL，二倍梯度稀释共8个点。待测样本稀释20倍。然后100μL/孔加入预包被好的板子内。37℃孵育90分钟，洗板；加入抗生素化抗体100μL/孔，37℃孵育60分钟，洗板；加入HRP结合酶100μL/孔，37℃孵育30分钟，洗板；加入TMB，室温孵育5分钟。最后加入终止液终止反应，酶标仪读取450nm处的吸光值。
平衡Human IFNγ检测试剂盒的试剂至常温，在避光条件下根据试剂盒说明书，配制标准品及检测抗体。每孔加入16μL的离心获得的上清液，再每孔加入4ul现配的混合检测抗体，震荡混匀，室温避光孵育过夜，使用PHERAStar多功能酶标仪程序读数
将能刺激PBMC产生比未加化合物组平均值高3倍SD(未加化合物组的SD)所对应化合物浓度，定义为该化合物的最低有效浓度(MEC，Minimal Effective Concentration)值。
本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的能力通过以上的试验进行测定，测得的MEC值见表5。
表5本发明化合物刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的MEC
| 实施例编号 | IL12 MEC(nM) | IFNγMEC(nM) |
| 2 | 23 | 24 |
| 3 | 15 | 27 |
| 4 | 31 | 33 |
| 6 | 41 | -- |
| 8 | 5 | -- |
| 9 | 24 | 94 |
“--”，表示没有测试。
结论：从刺激PBMC分泌IL12和IFNγ的活性的数据上看，本发明化合物具有起效浓度较低的优势。
测试例6Patchliner检测化合物对hERG钾离子通道的抑制作用
1、实验目的
应用全自动膜片钳在转染hERG钾通道的稳定细胞株上测试本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用。
2、实验方法
2.1实验材料与仪器
2.1.1实验材料：
| 试剂名称 | 供货公司 | 货号 |
| FBS | GIBCO | 10099 |
| 丙酮酸钠溶液 | sigma | S8636-100ML |
| MEM非必需氨基酸溶液(100×) | sigma | M7145-100ML |
| G418硫酸盐 | Enzo | ALX-380-013-G005 |
| MEM | Hyclone | SH30024.01B |
| hERG cDNA | Origene | - |
| G418.Sulfate | Enzo | ALX-380-013-G005 |
| pcDNA3.1(+) | invitrogen | V79020 |
| HEK293人胚肾细胞 | 中科院细胞库 | 货号GNHu18 |
2.1.2实验仪器：
2.2全自动膜片钳实验步骤
通过将已经构建了hERG基因的pCDNA3.1(+)转染HEK293细胞系，然后通过加入G418筛选出单克隆HEK293-hERG稳定细胞株。HEK293-hERG稳定细胞株按照1：4的密度在MEM/EBSS培养基(10％FBS，400μg/mL G418，1％MEM非必需氨基酸溶液(100×)，1％丙酮酸钠溶液)中进行传代培养，培养48-72小时之内进行全自动膜片钳实验。实验当天将细胞用0.25％胰酶(life technologies，12563-029)消化后，离心收集细胞，用细胞外液(140mMNaCl，4mM KCl，1mM MgCl2，2mM CaCl2，5mMD一水葡萄糖，10mM HEPES，pH7.4，298mOsmol)重悬细胞制成细胞悬液。将细胞悬液放置在Patchliner仪器的细胞库上，Patchliner仪器利用负压控制器将细胞加到芯片(NPC-16)上，负压将单个细胞吸引在芯片的小孔上。当形成全细胞模式后，仪器将按照设定的hERG电流电压程序得到hERG电流，然后仪器自动的由低浓度到高浓度，进行化合物灌流。通过HEAK EPC10膜片钳放大器(Nanion)和Pathlinersoftware以及Pathcontrol HTsoftware提供的数据分析软件，对化合物各浓度下的电流以及空白对照电流进行分析。
2.3测试结果
本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用通过以上的试验进行测定，测得的IC50值见表6。
表6本发明化合物对hERG钾电流的阻断作用的IC50
| 实施例编号 | IC<sub>50</sub>(μM) |
| 2 | 7 |
| 4 | 14 |
| 5 | 17 |
| 6 | 26 |
| 8 | >30 |
结论：本发明化合物对hERG的抑制作用弱，可降低由hERG通路引起的副作用。
Claims (34)
1.一种具有通式(Pc-L-D)所示结构的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述通式(Pc-L-D)如下：
其中：
G1、G2和G3相同或不同，且各自独立地选自CH、CR5或N；
A选自亚烷基或共价键，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2和R3相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
R4选自烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、氨基、氰基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
y为1至10，可以为整数，也可以为小数；
Pc为配体；L为接头单元。
2.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DI)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、G3、A和R1～R4如权利要求1中所定义。
3.根据权利要求1或2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DII)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、A和R1～R4如权利要求1中所定义。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DIII)所示的化合物：
其中：
Pc、L、y、G1、A和R1、R2、R4如权利要求1中所定义。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R4为杂环基，其中所述的杂环基任选被一个或多个烷基取代；优选地，R4为4至6元的杂环基，其中所述的4至6元杂环基含有1至2个相同或不同地选自N、O和S的杂原子，并且所述的4至6元的杂环基任选被一个或多个烷基取代。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R2为氢原子。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R4为含N杂环基，更优选为5至6元的含N杂环基，最优选为吡咯烷基、哌嗪或哌啶；所述的含N杂环基任选被一个或多个烷基所取代。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DIV)所示的化合物：
其中：
W1为CH，且W2为NR6；或者
W1为N，且W2为CH2或NR6；
R6选自氢原子和烷基，优选烷基；
s为0或1；
Pc、L、y、G1、A和R1如权利要求1中所定义。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R1为亚烷基。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L-DV)所示的化合物：
其中：
W1为CH且W2为NR6；或者
W1为N且W2为CH2或NR6；
R6选自氢原子和烷基，优选烷基；
s为0或1；
Pc、L、y、R1、G1和A如权利要求1中所定义。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的A为-(CH2)n-或共价键；n为1至6的整数。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R1为亚烷基，所述的亚烷基任选被一个或多个烷基取代。
13.根据权利要求权利要求1至12中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中y为1至8，优选为3至8。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中Pc为抗体，优选单克隆抗体。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-，
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和-C(O)-W-C(O)-，其中W选自C1-8亚烷基、-C1-8烷基-环烷基-和1至8个链原子的直链杂烷基，所述杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O和S，其中所述的C1-8亚烷基、环烷基和直链杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中氨基酸任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
Lc选自PAB、-NR7(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-、-C(O)NR7、-C(O)NR7(CH2)t-、-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-和化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R10选自烷基、环烷基烷基和环烷基；
R11选自氢原子、烷基和卤代烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自芳基和杂芳基。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-和-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W选自C1-8亚烷基和-C1-8烷基-环烷基-，其中所述的C1-8亚烷基和环烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；La优选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)5-C(O)-和-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)2-。
17.根据权利要求16所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元La选自以下结构式：
18.根据权利要求15所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的Lb的肽残基为由一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸和天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为四肽残基、二肽残基或化学键；更优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基。
19.根据权利要求15中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元Lc选自-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-和化学键；
优选的，Lc选自以下结构式：
R7-R12，t如权利要求15中所定义。
20.根据权利要求15所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中
La为
s1为2至8的整数，优选5；
Lb为四肽残基；优选地，Lb为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基；
Lc为-NH-CH2-。
21.根据权利要求15所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中
La为
s1为2至8的整数，优选5；
Lb为二肽残基；优选地，Lb为缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基；
Lc为-PAB-NR7-(CR8R9)t-NR7-C(O)-，
其中PAB结构为
R7-R9，t如权利要求15中所定义。
22.根据权利要求15所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中-L-选自：
其中a端与配体Pc相连，b端与药物相连。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
其中Pc和y如权利要求1中所定义。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，其中所述Pc为抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。
25.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自抗TLR7抗体、TLR8抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin抗体或其抗原结合片段。
26.根据权利要求25所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的抗体或其抗原结合片段选自Trastuzumab、Pertuzumab、Nimotuzumab、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab，或其抗原结合片段。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
其中y如权利要求1所定义。
28.一种通式(L-D)所示的化合物：
或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式，或其可药用的盐，
其中：
L、G1、A和R1、R2、R4如权利要求1中所定义。
29.根据权利要求28所述的通式(L-D)所示的化合物，其选自：
30.一种制备如通式(Pc-L-DI)所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
还原Pc后，与通式(L-DI)进行偶联反应，得到通式(Pc-L-DI)；
其中：
Pc为配体；
L、G1、G3、A和R1-R4如权利要求1中所定义。
31.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求1至27中任意一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
32.根据权利要求1至27中任意一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求31所述的药物组合物在制备用于治疗或预防病毒感染或肿瘤的药物中的用途；所述病毒优选乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、疱疹病毒和艾滋病毒。
33.根据权利要求32所述的用途，其中所述的肿瘤为与TLR8表达相关的癌症。
34.根据权利要求1至27中任意一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求31所述的药物组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途，其中所述癌症优选选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、COPD、溃疡性结肠炎、肝纤维化、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌和淋巴瘤；更优选自黑色素瘤、肺癌、肝癌、基底细胞癌、肾癌、骨髓瘤、胆道癌、脑癌、乳腺癌、宫颈癌、绒毛膜癌、结肠癌、直肠癌、头颈癌、腹膜肿瘤、输卵管癌、子宫内膜癌、食道癌、胃癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、口腔癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、皮肤癌和甲状腺癌。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| WO2023232142A1 (zh) * | 2022-06-02 | 2023-12-07 | 映恩生物制药（苏州）有限公司 | 一种药物化合物及其用途 |
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2021
- 2021-01-08 CN CN202110021964.4A patent/CN113082224A/zh active Pending
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