JP2023521885A - ディールス－アルダーコンジュゲーション方法 - Google Patents

ディールス－アルダーコンジュゲーション方法 Download PDF

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Abstract

本明細書に記載されているものは、例えば、治療部分および／または造影剤部分の標的特異的送達に有用であるタンパク質－ペイロードコンジュゲートおよびそれらの組成物である。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼおよびディールス－アルダー技法の組合せを利用する、タンパク質－ペイロード構築物（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）を生成するための特異的かつ効率的な方法が提供される。グルタミニル修飾抗体、ディールス－アルダー付加体、および反応性ペイロードを含む抗体－薬物コンジュゲートおよび組成物が提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、あらゆる目的のためにその全体を参照によって本明細書に組み入れる、２０２０年４月１６日出願の米国仮出願第６３／０１０，９０３号についての米国特許法第１１９条（ｅ）に基づく利益を主張する。
開示の分野
本開示は、タンパク質－ペイロードコンジュゲート（例えば、抗体－薬物コンジュゲート）、医薬組成物、およびそれを用いる疾患を処置する方法に関する。また、トランスグルタミナーゼとディールス－アルダー技法の組合せを利用して、タンパク質－ペイロード構築物を生成するための特異的かつ効率的な方法も提供される。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体と反応性ペイロードの特異的かつ効率的な反応のための方法が提供される。
配列表
配列表の公式なコピーはＥＦＳ－Ｗｅｂを介し、ＡＳＣＩＩフォーマットの配列表のハードコピーとして、ファイル名２５０２９８－０００１３０＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、サイズ約１７３キロバイトで、本明細書と同時に提出される。ＡＳＣＩＩフォーマット文書の本ハードコピーに含まれる配列表は、本明細書の一部であり、その全体を参照によって本明細書に組み入れる。
抗体コンジュゲートなどのタンパク質コンジュゲートは、結合剤の選択的結合を利用して、対象の組織内の標的にペイロードを送達する。ペイロードとは、標的で働き始めることができる治療部分である場合もあり、例えば診断または治療のいずれかの目的で体内の構造または体液のコントラストを高めることができる造影剤部分の場合もある。
リンカーおよびペイロードを抗体にコンジュゲートするためのいくつかの技法が利用可能である。多くのコンジュゲートが、抗体のシステイン残基またはリジン残基への非選択的共有結合のリンケージによって製造される。こういった非選択的技法によって、異なる部位におけるコンジュゲーションを備えるとともに抗体あたり異なる数のコンジュゲーションを備える生成物の異種混合物をもたらすことが可能である。したがって、当技術分野では、部位選択的抗体コンジュゲーションを提供する方法および技法に対するニーズがある。
単剤療法および併用療法での使用向けの、種々の抗原に結合して、がん、感染、炎症性疾患、および免疫系障害などの疾患の処置が改善されていることを可能とすることができる、さらなる安全かつ有効なターゲティング作用剤に対するニーズが、当技術分野にある。ある特定の実施形態では、本開示は上記ニーズを満たすとともにその他の利益を提供する。
前記の議論は、単に、当技術が直面する課題の性質をより良好に理解するために示すものであって、いかなる場合においても、先行技術に対する承認として解釈すべきものではなく、また、本明細書のいずれかの参考文献の引用がかかる参考文献が本願に対して「先行技術」を構成することを承認するものと解釈すべきものではない。
種々の非限定的な態様および実施形態について下に記載する。
一態様では、本開示は、
式（Ｉ）：
Figure 2023521885000001
 （式中：ＢＡは結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；Ｚはディールス－アルダー付加体であり；Ｌはリンカーであり；Ｄは、治療部分および／または造影剤部分であり；ｎは１から３までの整数であり；ここで、ｎが２または３である場合、Ｚ、ＬおよびＤは同一でも異なっていてもよく；ｄは１から６までの整数である）による構造を有する化合物を提供する。
一実施形態では、Ｄはメイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分である。
一実施形態では、Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である。
一態様では、本開示は、式（Ｉ）：
Figure 2023521885000002
 （式中：ＢＡは結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；Ｚはディールス－アルダー付加体であり；Ｌはリンカーであり；Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；ｎは１から３までの整数であり；ここで、ｎが２または３である場合、Ｚ、ＬおよびＤは同一でも異なっていてもよく；ｄは１から６までの整数である）による構造を有する化合物を提供する。
一実施形態では、化合物は、式（１Ａ）：
Figure 2023521885000003
 によるものである。
一実施形態では、化合物は、式（１Ｂ）：
Figure 2023521885000004
 によるものである。
一実施形態では、ｎは１または２である。一実施形態では、ｎが２である場合、２つの部分Ｄは同じである。一実施形態では、ｎが２である場合、２つの部分Ｄは異なる。一実施形態では、ｎが２である場合、２つのディールス－アルダー付加体Ｚは同一である。一実施形態では、ｎが２である場合、２つのディールス－アルダー付加体Ｚは異なる。
一態様では、本開示は、
式（ＩＩ）：
Figure 2023521885000005
 （式中：ＢＡは結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；ＱはＣＨＲ、（ＣＨＲ）２、またはＯブリッジであり；Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基（例えば、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、もしくは－ＮＨＣ１～３アルキル）であり；Ｌはリンカーであり；Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；ｎは１から３までの整数であり；ｄは１から６までの整数である）による構造を有する化合物を提供する。
一実施形態では、化合物は、式（ＩＩＡ）：
Figure 2023521885000006
 によるものである。
一実施形態では、化合物は、式（ＩＩＢ）：
Figure 2023521885000007
 によるものである。
一実施形態では、２つの部分Ｄは同じである。一実施形態では、２つの部分Ｄは異なる。
一実施形態では、化合物は式（ＩＩＩＡ）：
Figure 2023521885000008
 によるものである。
一実施形態では、化合物は式（ＩＩＩＢ）：
Figure 2023521885000009
 によるものである。
一実施形態では、化合物は式（ＩＩＩＣ）：
Figure 2023521885000010
 によるものである。
上記のいずれかの１つの実施形態では、Ｒは出現する毎にＨである。
別の実施形態では、少なくとも１つのＲはＨではない。一実施形態では、少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである。一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣ１～３アルキルである。一実施形態では、少なくとも１つのＲは、－ＮＨ－Ｃ１～３アルキルである。一実施形態では、少なくとも１つのＲはメチルである。一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣＨ３である。
一態様では、本開示は、式（ＩＶ）：
Figure 2023521885000011
 （式中：ＢＡは結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；Ｌはリンカーであり；Ｄはメイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；ｄは１から６までの整数である）による構造を有する化合物を提供する。
上記式のいずれか１つの化合物の実施形態では、ＢＡは、抗体またはそれの抗原結合断片である。さらなる実施形態では、ＢＡはモノクローナルヒト化抗体である。さらなる実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片である。
上記式のいずれか１つの化合物の実施形態では、Ｇｌｎは、出現する毎に独立して、Ｑ２９５またはＮ２９７Ｑである。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、ｄは２、４、または６である。ある特定の実施形態では、ｄは２である。ある特定の実施形態では、ｄは４である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｄは、アウリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、メイタンシノイド、アンサマイシン抗生物質、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である。
前述の化合物のいずれか１つによる化合物、Ｄは造影剤部分であり、造影剤は、色素（例えば、蛍光色素）、キレート剤、放射性核種、またはオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、Ｄは蛍光色素を含む。
一実施形態では、Ｄは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８からなる群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ蛍光色素である。特定の一実施形態では、ＤはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－（ＣＨ２）ｕ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、
Figure 2023521885000012
 （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から２０までの整数である）のうちの１つもしくはそれ以上またはそれらの組合せを含む。一実施形態では、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である。さらなる実施形態では、ＳＰは－（ＣＨ２）ｕ－である（式中、下付き文字ｕは１から５までの整数である）。
一実施形態では、ＳＰは、
Figure 2023521885000013
 （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）
である。
一実施形態では、ＳＰは、
Figure 2023521885000014
 である。
上記のいずれかの一実施形態では、２つの部分Ｄは同じである。上記のいずれかの一実施形態では、２つの部分Ｄは異なる。
前述の式のいずれか１つによる化合物、ここで、Ｚは、式２ａ：
Figure 2023521885000015
 （式中：Ｒ’は独立してＨ、Ｃ１～３アルキルであるか、または２つのＲ’が一緒になって、ＣＨＲ、（ＣＨＲ）２、またはＯブリッジを構成し、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、または－ＯＣ１～３アルキルまたは－ＮＨ－Ｃ１～３アルキルである）による部分である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｚは、式２ａ：
Figure 2023521885000016
 （式中：Ｒ’は独立してＨ、Ｃ１～３アルキルであるか、または２つのＲ’が一緒になって、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯブリッジを構成している）による部分である。
さらなる実施形態では、Ｚは、式２ａ－１～２ａ－３：
Figure 2023521885000017
 のいずれか１つによる部分である。さらなる実施形態では、Ｚは、式２ａ－１：
Figure 2023521885000018
 による部分である。
一実施形態では、少なくとも１つのＲはＨではない。一実施形態では、Ｚは、式２ａ－４～２ａ－６：
Figure 2023521885000019
 （式中、少なくとも１つのＲはＨではない）のいずれか１つによる部分である。一実施形態では、Ｚは、式２ａ－７～２ａ－１２：
Figure 2023521885000020
 のいずれか１つによる部分である。
一実施形態では、部分Ｚは、出現する毎に独立して、２ａ－１～２ａ－１２から選択される。
化合物が２つの部分Ｚを含む一実施形態では、一方の部分Ｚは２ａ－７であり、他方の部分Ｚは２ａ－１１である。化合物が２つの部分Ｚを含む一実施形態では、一方の部分Ｚは２ａ－７であり、他方の部分Ｚは２ａ－１２である。
一実施形態では、断片－ＳＰ－Ｚ－は、
Figure 2023521885000021
 （式中、２つの部分Ｚは同じである）から選択される。
一実施形態では、断片－ＳＰ－Ｚ－は、
Figure 2023521885000022
 （式中、２つの部分Ｚは異なる）から選択される。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｌは、１個またはそれ以上のアミノ酸を含む。さらなる実施形態では、Ｌは、１つまたはそれ以上の：－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－）ｍ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、
Figure 2023521885000023
 （式中、下付き文字ｍおよびｎは、出現する毎に独立して、０から２０までの整数である）をさらに含む。一実施形態では、１個またはそれ以上のアミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、バリン、フェニルアラニン、プロリン、またはシトルリンである。さらなる実施形態では、１個またはそれ以上のアミノ酸は、バリン－シトルリン（－ＶＣ－）またはバリン－アラニン（－ＶＡ－）である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｌは：
Figure 2023521885000024
 （式中：ｌ、ｍおよびｎは出現する毎に独立して、０から２０までの整数であり；ｐは０から４までの整数である）である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、Ｌは：
Figure 2023521885000025
 （式中：ｎは１から６までの整数であり；ｍは２から１０までの整数であり；ｐは１から３までの整数であり；アミノ酸は出現する毎に独立してバリン、シトルリンまたはアラニンである）である。
前述の化合物のいずれか１つの実施形態では、治療部分および／または造影剤部分のＤは、第三級アミノ基を介してリンカーＬにつながっている。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000026
 は、式（Ｉ－ＤＡ）：
Figure 2023521885000027
 （式中、
Figure 2023521885000028
 は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、治療部分および／または造影部分のＤはアミノ基を介してつながっている）によるものである。さらなる実施形態では、Ｄは、本明細書に記載の、メイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000029
 は、式（Ｉ－Ａ１）：
Figure 2023521885000030
 （式中：
Figure 2023521885000031
 は、スペーサーまたは結合剤への結合である）によるものである。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000032
 は、式（Ｉ－Ａ１１）：
Figure 2023521885000033
 （式中：
Figure 2023521885000034
 は、スペーサーまたは結合剤への結合である）によるものである。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000035
 は、式（Ｉ－ＤＢ）：
Figure 2023521885000036
 （式中、
Figure 2023521885000037
 は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、部分Ｄはアミノ基を介してつながっている）によるものである。式Ｉ－Ｂの化合物の実施形態では、Ｄは、本明細書に記載の、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）またはそれのアナログもしくは誘導体である。式Ｉ－Ｂの化合物の実施形態では、Ｄは、本明細書に記載の、ＰＢＤ－１：
Figure 2023521885000038
 またはそれのアナログもしくは誘導体である。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000039
 は、式（Ｉ－Ｂ１）：
Figure 2023521885000040
 （式中：
Figure 2023521885000041
 は、スペーサーまたは結合剤への結合である）によるものである。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000042
 は、式（Ｉ－ＤＣ）：
Figure 2023521885000043
 （式中、
Figure 2023521885000044
 は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、部分Ｄはアミノ基を介してつながっている）によるものである。さらなる実施形態では、Ｄはリファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000045
 は、式（Ｉ－Ｃ１）：
Figure 2023521885000046
 、式(I-C1)
（式中：
Figure 2023521885000047
 は、スペーサーまたは結合剤への結合である）によるものである。
式Ｉの化合物の実施形態では、断片
Figure 2023521885000048
 は、式（Ｉ－Ｃ２）：
Figure 2023521885000049
 （式中：
Figure 2023521885000050
 は、スペーサーまたは結合剤への結合である）によるものである。
式（ＩＩ）による前述の化合物のいずれかの実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であり；Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である。
前述の化合物のいずれかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ－Ａ１’）～（Ｉ－Ａ１０’）：
Figure 2023521885000051
Figure 2023521885000052
Figure 2023521885000053
 （式中：ｄは１から６までの整数である）のいずれか１つによる構造を有する。
前述の化合物のいずれかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ－Ａ１１’）：
Figure 2023521885000054
 （式中：ｄは１から６までの整数である）による構造を有する。
前述の化合物のいずれかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ－Ｂ）：
Figure 2023521885000055
 （式中：ｄは１から６までの整数である）による構造を有する。
前述の化合物のいずれかの実施形態では、化合物は、式（Ｉ－Ｃ）
Figure 2023521885000056
 （式中：ｄは１から６までの整数である）による構造を有する。
一態様では、本開示は、前述の化合物のいずれか１つによる化合物の集団を含む組成物であって、約０．５～約８．０の薬物－抗体比（ＤＡＲ）を有する、組成物を提供する。さらなる実施形態では、組成物は約１．０～約２．５のＤＡＲを有する化合物の集団を含む。さらなる実施形態では、組成物は約２のＤＡＲを有する化合物の集団を含む。さらなる実施形態では、組成物は約３．０～約４．５のＤＡＲを有する化合物の集団を含む。さらなる実施形態では、組成物は約４のＤＡＲを有する化合物の集団を含む。
本開示の一態様では、前述の実施形態のいずれか１つによる化合物を生成する方法が提供され、方法は：
ａ．）式（Ｖ－ｘ）：
Figure 2023521885000057
 （式中：
ＢＡは結合剤であり；
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｘはジエンを含む部分であり；
Ｉは１から６までの整数であり；
ｎは１から３までの整数であり；
ここで、ｎが２または３である場合、Ｚ、ＬおよびＤは同一でも異なっていてもよい）
による構造を有する化合物ｉ）を、
式（ＶＩ－ｙ）：
Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
（式中：
Ｙはジエノフィルを含む部分であり；
Ｌはリンカーであり；
Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分である）
による化合物ｉｉ）と接触させる工程と；
ｂ．）生成された化合物を単離する工程と
を含む。
一実施形態では、ｎは１または２である。一実施形態では、ｎは１である、すなわち、化合物は、構造
Figure 2023521885000058
 を有する。一実施形態では、ｎは２である、すなわち、化合物は、構造
Figure 2023521885000059
 を有する。
一実施形態では、上記方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ２：
Figure 2023521885000060
 （式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｘはジエンを含む部分であり、ここで、２つのＸ部分は同じである）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（Ｖ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
一実施形態では、上記方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ２：
Figure 2023521885000061
 （式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｘはジエンを含む部分であり、ここで、２つのＸ部分は異なる）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（Ｖ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
一実施形態では、Ｘは、出現する毎に独立して、
Figure 2023521885000062
 （式中、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基（例えば、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、または－ＮＨＣ１～３アルキル）である）から選択される。
上記方法の一実施形態では、Ｒは出現する毎にＨである。
上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＨではない。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲは、－ＮＨＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはメチルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣＨ３である。
一実施形態では、Ｘは
Figure 2023521885000063
 であり、Ｙは
Figure 2023521885000064
 である。
別の態様では、本開示は：
ａ．）式（Ｖ－ｘ）：
Figure 2023521885000065
 （式中：
ＢＡは結合剤であり；
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｘはジエンを含む部分であり；
Ｉは１から６までの整数である）
による構造を有する化合物ｉ）を、
式（ＶＩ－ｙ）：
Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
（式中：
Ｙはジエノフィルを含む部分であり；
Ｌはリンカーであり；
Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイドである、治療部分であるか、またはＤは造影剤部分、もしくはそれのアナログもしくは誘導体である）
による化合物ｉｉ）と接触させて、式（Ｖ－ｘ’ｚ）：
Figure 2023521885000066
 による構造を有する化合物を生成する工程と；
ｂ．）式（Ｖ－ｘ’ｚ）による化合物を
式（ＶＩ－ｙ）：
Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
による化合物と接触させる工程と；
ｃ．）式（１Ｂ）の生成された化合物を単離する工程と
を含む方法を提供する。
一実施形態では、２つのＸ部分は同じである。別の実施形態では、２つのＸ部分は異なる。
一実施形態では、工程ａ．）のＤ部分は、工程ｂ．）のＤ部分とは異なる。一実施形態では、工程ａ．）のＤ部分は、工程ｂ．）のＤ部分と同じである。
一実施形態では、工程ａ．）は約７．０～約７．６のｐＨで実行される。一実施形態では、工程ａ．）は、約７．２～約７．４のｐＨで実行される。一実施形態では、工程ａ．）は、約７．２のｐＨで実行される。
一実施形態では、工程ｂ．）は、約５．０～約６．０のｐＨで実行される。一実施形態では、工程ｂ．）は、約５．３～約５．７のｐＨで実行される。一実施形態では、工程ｂ．）は、約５．５のｐＨで実行される。
一実施形態では、方法は、工程ａ．）の後および工程ｂ．）の前に緩衝液交換工程をさらに含む。
一実施形態では、Ｘは、出現する毎に独立して、
Figure 2023521885000067
 （式中、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基（例えば、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、もしくは－ＮＨＣ１～３アルキル）である）から選択される。
上記方法の一実施形態では、Ｒは出現する毎にＨである。
上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＨではない。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲは、－ＮＨＣ１～３アルキルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはメチルである。上記方法の一実施形態では、少なくとも１つのＲはＯＣＨ３である。
一実施形態では、前述の方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式ＩＶ－ｘ１：
ＮＨ２－ＳＰ－Ｘ （ＩＶ－ｘ１）
（式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｘはジエンを含む部分である）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（ＩＶ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
前述の方法のさらなる実施形態では、Ｘは
Figure 2023521885000068
 であり、Ｙは
Figure 2023521885000069
 である。
本開示の一態様では、前述の実施形態のいずれか１つによる化合物を生成する方法が提供され、方法は：
ａ．）式（ＩＶ－ｙ）：
Figure 2023521885000070
 （式中：
ＢＡは結合剤であり；
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｙはジエノフィルを含む部分であり；
Ｉは１から６までの整数であり；
ｎは１から３までの整数である）
による構造を有する化合物ｉ）を、
式（ＶＩ－ｘ）：
Ｘ－Ｌ－Ｄ （Ｖ－ｘ）
（式中：
Ｘはジエンを含む部分であり；
Ｌはリンカーであり；
Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイドである治療部分であるか、またはＤは造影剤部分、もしくはそれのアナログもしくは誘導体である）
による化合物ｉｉ）と接触させる工程と；
ｂ．）生成された化合物を単離する工程と
を含む。
一実施形態では、前述の方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ１：
ＮＨ２－ＳＰ－Ｙ （Ｖ－ｙ１）
（式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｙはジエノフィルを含む部分である）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（Ｖ-ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
一実施形態では、前述の方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ２：
Figure 2023521885000071
 （式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｙはジエノフィルを含む部分であり、ここで、２つのＹ部分は同じである）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（Ｖ-ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
一実施形態では、前述の方法は：
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ２：
Figure 2023521885000072
 （式中：
ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
Ｙはジエノフィルを含む部分であり、ここで、２つのＹ部分は異なる）
による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
２．）生成された化合物を単離する工程と
を含む、式（Ｖ-ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む。
前述の方法のさらなる実施形態では、Ｘは
Figure 2023521885000073
 であり、Ｙ
Figure 2023521885000074
 はである。
前述の方法のいずれか１つの実施形態では、結合剤はアグリコシル化されている。
前述の方法のいずれか１つの実施形態では、結合剤は、工程１の前に脱グリコシル化される。
前述の方法の実施形態では、ＢＡはＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である。
前述の方法の実施形態では、Ｇｌｎは、出現する毎に独立して、Ｑ２９５またはＮ２９７Ｑである。
前述の方法の実施形態では、ｄは２または４である。さらなる実施形態では、ｄは２である。別の実施形態では、ｄは４である。
前述の方法の実施形態では、ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、－（（ＣＨ２）ｕ－Ｏ－）ｖ－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－（式中、下付き文字ｕおよびｖは、出現する毎に独立して１から２０までの整数である）のうちの１つもしくはそれ以上またはそれらの組合せである。さらなる実施形態では、ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－（ＣＨ２）ｕ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（式中、下付き文字ｕおよびｖは、独立して１から２０までの整数である）のうちの１つもしくはそれ以上、またはそれらの組合せである。さらなる実施形態では、ＳＰは－（ＣＨ２）ｕ－である（式中、下付き文字ｕは１から５までの整数である）。
一実施形態では、ＳＰは、
Figure 2023521885000075
 （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）である。
一実施形態では、ＳＰは、
Figure 2023521885000076
 （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）である。
一実施形態では、ＳＰは、
Figure 2023521885000077
 である。
一実施形態では、
Figure 2023521885000078
 は、
Figure 2023521885000079
 である。
前述の方法の実施形態では、Ｘは、下の式３または４：
Figure 2023521885000080
 （式中、ＲはＨまたはＣ１～３アルキルであり；ＱはＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯである）によるジエン部分である。さらなる実施形態では、Ｘは、下の式４ａ：
Figure 2023521885000081
 によるジエン部分である。
前述の方法の実施形態では、Ｙは、式５または６：
Figure 2023521885000082
 （式中、Ｒ’はＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；ＫはＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000083
 、またはＮＨ－Ｎである）によるジエノフィル部分である。さらなる実施形態では、Ｙは、式６ａ：
Figure 2023521885000084
 によるジエノフィル部分である。
前述の方法の実施形態では、Ｌは１個またはそれ以上のアミノ酸を含む。さらなる実施形態では、Ｌは、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２－Ｏ－）ｍ－、－Ｃ（Ｏ）－、
Figure 2023521885000085
 のうちの１つまたはそれ以上をさらに含む。特定の実施形態では、アミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、バリン、フェニルアラニン、プロリンまたはシトルリンである。
前述の方法の実施形態では、Ｌは、
Figure 2023521885000086
 を含み、
Ｄは、Ｌのメチレン部分に共有結合で連結し、第四級アンモニウム部分を形成する第三級アミンを含む。
前述の方法の実施形態では、Ｄは、アウリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、アンサマイシン抗生物質、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である。
前述の方法の実施形態では、Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である。
前述の方法の実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であり；Ｘは、下の式４ａ：
Figure 2023521885000087
 によるジエン部分であり；Ｙは、式６ａ：
Figure 2023521885000088
 によるジエノフィル部分であり；Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン；およびそれらのアナログまたは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である。
前述の方法の実施形態では、方法は：
ａ．）
１．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ１ａ：
Figure 2023521885000089
 による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させることであって、結合剤は、脱グリコシル化ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であることと；
２．）生成された化合物を単離することと
によって化合物を生成する工程；および
ｂ．）工程ａ．）の化合物を、下の式（ＶＩ－Ａ）、（ＶＩ－Ｂ）または（ＶＩ－Ｃ）：
Figure 2023521885000090
 （式中：
Ｄは、治療部分のアミノ基を介してつながれているモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である）
による化合物と接触させる工程：および
ｃ．）生成された化合物を単離する工程
を含む。
一態様では、本開示は、前述の方法のいずれか１つによって生成される化合物を提供する。
一態様では、本開示は、医薬組成物であって、提供された実施形態のいずれか１つによる化合物、または提供された実施形態のいずれか１つによる組成物、ならびに希釈剤、担体、および／または賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。一実施形態では、組成物は非経口製剤である。
一態様では、本開示は、それを必要とする対象における状態を処置する方法を提供し、方法は、提供された実施形態のいずれか１つによる化合物を含む組成物、提供された実施形態のいずれか１つによる組成物、または提供された実施形態のいずれか１つによる医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。前述の方法の一実施形態では、状態はがんである。前述の方法のさらなる実施形態では、状態はＨＥＲ２＋乳がんである。前述の方法の一実施形態では、ＢＡはＨＥＲ２抗体、またはそれの抗原結合断片である。前述の方法の一実施形態では、Ｄは細胞傷害剤である。
対象における状態を処置する前述の方法の一実施形態では、がんは：前立腺、膀胱、子宮頸部、肺、結腸、腎臓、乳房、膵臓、胃、子宮、および卵巣のうちの１つまたはそれ以上において発生する原発性および／または転移性腫瘍によって特徴付けられる。前述の方法の一実施形態では、がんは、前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、乳がん、膵臓がん、胃がん、子宮がん、または卵巣がんである。
対象における状態を処置する前述の方法の一実施形態では、Ｄは：ドラスタチン、アウリスタチン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピンおよびチューブリン相互作用剤から選択される。さらなる実施形態では、ＤはＭＭＡＥまたはＰＤＢである。
対象における状態を処置する前述の方法の一実施形態では、状態は感染である。さらなる実施形態では、ＢＡはＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片である。さらなる実施形態では、Ｄはリファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。さらなる実施形態では、状態は細菌感染である。さらなる実施形態では、状態はウイルス感染である。
対象における状態を処置する前述の方法の一実施形態では、状態は炎症状態である。さらなる実施形態では、ＢＡはＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である。さらなる実施形態では、状態は免疫系障害である。さらなる実施形態では、炎症状態は、がんに起因する高カルシウム血症、メニエール病、片頭痛、群発頭痛、重度のアフタ性潰瘍、喉頭炎、重度の結核、梅毒に対するヘルクスハイマー反応、非代償性心不全、アレルギー性鼻炎または鼻ポリープである。
本開示のこれらのおよびその他の態様は、添付の特許請求の範囲を含めて以下の発明を実施するための形態を読むことで、当業者であれば明らかとなるであろう。
本開示の詳細な実施形態について本明細書に開示するが、開示される実施形態は、様々な形態で具現化することができる開示を単に例示するものであることを理解されたい。加えて、本開示の様々な実施形態に関連して与えられる例それぞれは、限定的ではなく例示的であることが意図される。したがって、本明細書に開示の特定の構造および機能の詳細は、限定するものと解釈されるべきではなく、単に、本開示を様々に用いることを当業者に教示するための代表的な基礎と解釈されるべきである。本開示は、記載された特定の方法および実験条件に限定されるものではないことを理解されたい。これは、かかる方法および条件は多様であり得るからである。また、本明細書で使用される用語は単に特定の実施形態を記載する目的のものであり、限定を意図するものでないことも理解されたい。これは、本開示の範囲は添付の特許請求の範囲によってのみ限定されるからである。
定義
特に明記しない限り、本明細書で使用される技術的および科学的用語は全て、本開示が属する技術分野の当業者であれば一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の記載されている数値に関して使用される場合、当該の値は記載されている値から１％以下だけ異なり得ることを意味する。例えば、本明細書で使用される場合、「約１００」という表現は、９９および１０１ならびにその間の全ての値（例えば、９９．１、９９．２、９９．３、９９．４等）を含む。
本明細書に記載されるものと同様または等価の任意の方法および材料を本開示の実施または試験において使用することができるが、特定の方法および材料についてこれから記載する。本明細書で言及される特許、出願、および非特許刊行物は全て、参照によってそれらの全体を本明細書中に組み入れる。
範囲については、本明細書では、「約」もしくは「概」である一方の特定の値からおよび／または「約」もしくは「概」である別の特定の値までとして表現される。かかる範囲で表現される場合には、別の実施形態は一方の特定の値からおよび／またはその他の特定の値までを含む。
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」または「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」とは、少なくとも名前を挙げた化合物、要素、粒子、または方法の工程が、組成物または物品または方法に存在することを意味するが、他の化合物、材料、粒子、または方法の工程が名前を挙げたものと同一の機能を有しているとしても、他のかかる化合物、材料、粒子、または方法の工程の存在を排除するものではないことを意味する。
容態、障害または状態に関する「処置する」または「処置」という用語には、以下が含まれる：（１）容態、障害もしくは状態に罹患する可能性があるかもしくはそれらに罹患しやすい可能性があるがまだ容態、障害、もしくは状態の臨床的症状もしくは不顕性症状を経験していないかもしくはそれらを呈していない対象において発生する容態、障害、もしくは状態の少なくとも１つの臨床的症状もしくは不顕性症状の発症および／もしくは出現の可能性を予防すること、遅延させることもしくは低減させること；または、（２）上記容態、障害もしくは状態を阻害すること、すなわち、疾患の進行もしくはそれの再発、もしくはそれの少なくとも１つの臨床的症状もしくは不顕性症状を阻止すること、軽減させることもしくは遅延させること；または（３）疾患を緩和すること、すなわち、容態、障害もしくは状態、もしくはその臨床的症状もしくは不顕性症状のうちの少なくとも１つの退行を生じさせること。処置される対象にとっての利益とは、統計的に有意なものであるか、または患者にとってまたは医師にとって少なくとも知覚できるものである。
「対象」または「患者」または「個体」または「動物」とは、本明細書で使用される場合、ヒト、獣医動物（例えばネコ、イヌ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ等）および疾患の実験動物モデル（例えばマウス、ラット）を指す。一実施形態では、対象はヒトである。
本明細書で使用される場合、用量または量に適用される「有効な」という用語は、それを必要とする対象への投与に際して所望の活性をもたらすのに十分である化合物または医薬組成物のその分量を指す。有効成分の組合せが投与される場合、上記組合せの有効量は、個別に投与された場合では有効であると思われた各成分の量を含むことも含まないこともあることに留意されたい。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢および全身状態、処置を行う状態の重度、用いる特定の薬物または複数の薬物、投与様式等に応じて、対象毎に変動することになる。
「医薬的に許容される」という句は、本開示の組成物と併用で使用される場合、生理学的に忍容性であり、哺乳動物（例えばヒト）に投与した場合有害反応を通常には生じない、かかる組成物の分子実体およびその他の成分を指す。好ましくは本明細書で使用される場合、「医薬的に許容される」という用語は、連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認を受けたもの、または米国薬局方に、もしくは、哺乳動物での、より具体的にはヒトでの使用向けに一般的に認められた薬局方に列記されているもの、を意味する。
「医薬として許容される塩」という句は、本開示の組成物と併用で使用される場合、患者への投与に適切な任意の塩を指す。適切な塩は、それらに限定されないが、参照によって本明細書に組み入れる、Ｂｅｒｇｅら、「Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ」、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、１９７７、６６：１に開示のものが含まれる。塩の例としては、それらに限定されないが、酸由来の、塩基由来の、有機の、無機の、アミンの、およびアルカリ金属またはアルカリ土類金属の各塩が挙げられるが、これには、それらには限定されないが、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、以下のものの各塩：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐトルエンスルホン酸、サリチル酸等が含まれる。一部の例では、本明細書に記載のペイロード（例えば、本明細書に記載のリファマイシンアナログ）は、第三級アミンを含み、ここで、第三級アミンの窒素原子は、これをとおして当該ペイロードがリンカーまたはリンカー－スペーサーに結合している原子である。そのような場合では、ペイロードの第三級アミンへの結合は、リンカー－ペイロード分子に第四級アミンをもたらす。第四級アミン上の正電荷は、対イオン（例えば、クロロ、ブロモ、ヨード、または本明細書に記載のもののような他の任意の適切に電荷を帯びた部分）によってバランスを保つことができる。
「治療有効量」という句は、本明細書で使用される場合、それが投与される目的である所望の効果を生みだす量を指す。正確な量は処置の目的に依存することになるが、既知の技法（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９） Ｔｈｅ Ａｒｔ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）を使用して当業者であれば確認可能となるものである。
「最小阻止濃度」（「ＭＩＣ」）という用語は、一晩のインキュベーション後に微生物の視認可能な増殖を阻害する抗菌物質の最低濃度を指す。ＭＩＣを決定するアッセイが知られている。一方法は、下の実施例に記載のものである。
ある特定の基、部分、置換基および原子を波線で図示する。波線によって、結合または複数の結合を横切るまたはキャップすることができる。波線によって、基、部分、置換基または原子がそれをとおして結合している原子を指示する。例えば、
Figure 2023521885000091
 のように図示されるプロピル基で置換されているフェニル基は、以下の構造：
Figure 2023521885000092
 を有する。
ある特定の基、部分、置換基および原子を、別の基または部分、例えば環状部分への固定されていない結合接続で図示する。別の結合を横切る固定されていない結合が指示することは、上記の基、部分、置換基または原子は、そのことが化学的に可能な場合、他の基または部分、例えば環状部分の非特定の任意の原子につながることができることである。例えば、以下の構造の場合：
Figure 2023521885000093
 置換基ＳＰは、そのことが化学的に可能である場合、環上の任意の位置で当該環につながることができる。
「電子供与基」という用語は、本明細書で使用される場合、当技術分野のその通常の意味、すなわち、共鳴（メソメリズム）または誘起効果（もしくは誘起）を介してその電子密度の一部を共役π系に供与し、その結果、π系をより求核的とする、原子または官能基、という意味で与えられる。こういった電子効果の結果として、かかる基がつなげられている芳香環は、求電子置換反応に関与する傾向が高い。電子供与基の非限定的な例には、置換および非置換のアミン、ヒドロキシ－、アルコキシ、アルキル、ビニル、アリール、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキルチオ、アルキルホスフィノ、およびフルオロの各基が含まれる。
本明細書で使用される場合、「アルキル」という用語は、当技術分野でのその通常の意味で与えられ、これには、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を含めて、飽和脂肪族基が含まれる。ある特定の実施形態では、直鎖または分枝鎖のアルキルはその骨格に約１～２０個の炭素原子（例えば、直鎖ではＣ１～Ｃ２０、分枝鎖ではＣ２～Ｃ２０）、および代替的に約１～１０個の炭素原子、または約１～６個の炭素原子を有する。一部の実施形態では、シクロアルキル環は、その環構造に約３～１０個の炭素原子を有し、この場合かかる環は単環式または二環式であるが、および代替的にその環構造に約５、６、または７個の炭素を有する。一部の実施形態では、アルキル基は低級アルキル基であることもあり、この場合、低級アルキル基は１～４個の炭素原子（例えば、直鎖低級アルキルではＣ１～Ｃ４）を含む。
本明細書で使用される場合、「アルケニル」という用語は、１つまたはそれ以上の二重結合を有する、本明細書に定義のアルキル基を指す。
本明細書で使用される場合、「アルキニル」という用語は、１つまたはそれ以上の三重結合を有する、本明細書に定義のアルキル基を指す。
「ヘテロアルキル」という用語は、当技術分野でのその通常の意味で与えられ、１個またはそれ以上の炭素原子がヘテロ原子（例えばハロゲン、酸素、窒素、硫黄等）で置き換えられている、本明細書に記載のアルキル基を指す。ヘテロアルキル基の例としては、それらに限定されないが、アルコキシ、ポリ（エチレングリコール）－、アルキル置換アミノ、テトラヒドロフラニル、ピペリジニル、モルホリニル等が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「芳香族」とは、５から２０個までの環原子を有するとともに場合によって１から２０個までのヘテロ原子置換基を有する、単環式もしくは多環式の芳香族または複素芳香族の環を指す。一部の実施形態では、芳香族基は場合によって１から１０個までのヘテロ原子置換基を有することができる。一部の実施形態では、芳香族基は場合によって１から５個までのヘテロ原子置換基を有することができる。一部の実施形態では、芳香族基は、シクロペンタジエニル、フェニル、ナフチル、またはアントラセニルなどの単環式または多環式の芳香環である。一部の実施形態では、芳香族基は、５から１０個までの環原子を有する単環式または多環式の芳香環である。一部の実施形態では、芳香族基は、フェニルおよびシクロペンタジエニルなどの５から６個までの炭素原子を含有する単環式芳香環である。特定の一実施形態では、芳香族基はフェニル基である。
単独でまたは「アラルキル」、「アラルコキシ」もしくは「アリールオキシアルキル」におけるように大きな部分の一部として使用される「アリール」という用語は、計５～１４の環員を有する単環式または二環式の環系を指し、ここで、環系の少なくとも１つの環は芳香族であり、環系の各環は３～７個の環員を含有する。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と互換的に使用することができる。本開示のある特定の実施形態では、「アリール」とは、それらに限定されないが、フェニル、ビフェニル、ナフチル、ビナフチル、アントラシル等が含まれる芳香族環系を指し、この環系は１個またはそれ以上の置換基を有することができる。インダニル、フタルイミジル、ナフトイミジル、フェナントリジニル、またはテトラヒドロナフチル等などの１つまたはそれ以上の非芳香族環に芳香族環が縮合されている基も、これが本明細書で使用される場合、「アリール」という用語の範囲内に含まれる。
「ＭＳＲ１」、「ｈＭＳＲ１」等の表現は、本明細書で使用される場合、（ｉ）ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００２４３６．１に記載のアミノ酸配列、（ｉｉ）ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿６１９７２９．１に記載のアミノ酸配列、および／または（ｉｉｉ）ＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿６１９７３０．１に記載のアミノ酸配列を含む、ヒト単回通過三量体ＩＩ型膜貫通糖タンパク質パターン認識受容体を指し、これらはクラスＡマクロファージスカベンジャー受容体の種々のタイプおよびアイソフォームを表す。「ＭＳＲ１」という表現には、単量体と多量体との両方のＭＳＲ１分子が含まれる。本明細書で使用される場合、「単量体ヒトＭＳＲ１」という表現は、多量体化ドメインを含有も保有もしておらず、かつ別のＭＳＲ１分子との直接の物理的接続のない単一ＭＳＲ１分子として正常条件下で存在するＭＳＲ１タンパク質またはそれの部分を意味する。
「ＨＥＲ２」または「ヒト上皮成長因子受容体２」という表現は、ヒト上皮成長因子受容体ファミリーのメンバーを指す。このがん遺伝子の増幅または過剰発現は、ある特定の悪性のタイプの乳がんの発生および進行において重要な役割を果たすことが示されてきた。近年、このタンパク質は、乳がん患者の概３０％にとって重要なバイオマーカーおよび治療の標的となっている。ＨＥＲ２のアミノ酸配列は、配列番号４９として記載されている。本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド、およびタンパク質断片への全ての言及は、非ヒト種由来であると明示しない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、またはタンパク質断片のヒトバージョンを指すものとする。したがって、「ＨＥＲ２」という表現は、例えば「マウスＨＥＲ２」、「サルＨＥＲ２」等の非ヒト種に由来するものとして指定されない限り、ヒトＨＥＲ２を意味する。
「ＨＥＲ２を結合する抗体」または「抗ＨＥＲ２抗体」という句には、ＨＥＲ２を特異的に認識する抗体およびそれの抗原結合断片が含まれる。
本開示で使用される全てのアミノ酸の略語は、米国特許法施行規則第１．８２２条第（Ｂ）項（Ｊ）項に記載のように、米国特許商標庁によって承認されたものである。
「タンパク質」という用語は、アミド結合を介して共有結合で連結した約２０個を超えるアミノ酸を有する任意のアミノ酸ポリマーを意味する。本明細書で使用される場合、「タンパク質」には、生物学的治療用タンパク質、研究または治療法で使用される組換えタンパク質、トラップタンパク質およびその他のＦｃ融合タンパク質、キメラタンパク質、抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体、二重特異性抗体、抗体断片、ナノボディ、組換え抗体キメラ、ｓｃＦｖ融合タンパク質、サイトカイン、ケモカイン、ペプチドホルモン等が含まれる。タンパク質は、組換え細胞ベースの産生系、例えば、昆虫バキュロウイルス系、酵母系（例えば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属の種）、哺乳動物系（例えば、ＣＨＯ細胞、および、ＣＨＯ－Ｋ１細胞のようなＣＨＯ派生体）を使用して生成することができる。
本明細書におけるタンパク質、ポリペプチド、およびタンパク質断片への全ての言及は、非ヒト種由来であると明示しない限り、それぞれのタンパク質、ポリペプチド、またはタンパク質断片のヒトバージョンを指すものとする。したがって、「ＭＳＲ１」という表現は、例えば「マウスＭＳＲ１」、「サルＭＳＲ１」等の非ヒト種に由来するものとして指定されない限り、ヒトＭＳＲ１を意味する。
抗体のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔら（「Ｋａｂａｔ」付番方式）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２７３：９２７～９４８頁（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番方式）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５頁（「Ｃｏｎｔａｃｔ」付番方式）；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００３、２７：５５～７７頁（「ＩＭＧＴ」付番方式）；ならびにＨｏｎｅｇｇｅおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２００１、３０９：６５７～７０頁（「ＡＨｏ」付番方式）によって記載のものを含めて、任意の既知の付番方式を使用して付番することができる。別途指定されない限り、本明細書で使用される付番方式は、Ｋａｂａｔ付番方式である。しかし、付番方式の選択は、配列の違いが存在しない場合、配列の違いを暗示することを意図するものではなく、当業者であれば、１つまたはそれ以上の抗体のアミノ酸配列を調べることによって、配列位置を容易に確認することができる。別途明記されない限り、「ＥＵ付番方式」は、抗体重鎖定常領域の残基に言及する場合に（例えば、Ｋａｂａｔら前掲に報告されているように）、一般に使用される。
「グルタミニル修飾抗体」という用語は、グルタミン側鎖から本開示の第一級アミン化合物への少なくとも１つの共有結合リンケージを備える抗体を指す。特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、グルタミン側鎖上のアミドリンケージをとおして連結されている。ある特定の実施形態では、グルタミンは内因性グルタミンである。他の実施形態では、グルタミンは、ポリペプチド工学によって（例えば、ポリペプチド上のアミノ酸の欠失、挿入、置換、または突然変異を介して）反応性となされた内因性グルタミンである。さらなる実施形態では、グルタミンはアシル供与体グルタミン含有タグ（例えば、グルタミン含有ペプチドタグ、ＱタグまたはＴＧａｓｅ認識タグ）で操作されたポリペプチドである。
「ＴＧａｓｅ認識タグ」という用語は、アミノ酸の配列であって、アクセプターグルタミン残基を含み、かつ、ポリペプチド配列中に組み込まれる（例えば、それに付加される）場合、適切な条件下で、ＴＧａｓｅによって認識され、そして当該アミノ酸の配列内のアミノ酸側鎖と反応パートナーとの間の反応をとおしてＴＧａｓｅによって架橋がもたらされる、上記アミノ酸の配列を指す。認識タグは、ＴＧａｓｅ認識タグを含むポリペプチド中に天然では存在しないペプチド配列であり得る。一部の実施形態では、ＴＧａｓｅ認識タグは少なくとも１個のＧｌｎを含む。一部の実施形態では、ＴＧａｓｅ認識タグは、アミノ酸配列ＸＸＱＸ（配列番号４６７）を含み、ここで、Ｘは任意のアミノ酸（例えば、従来型のアミノ酸Ｌｅｕ、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ｖａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｉｎ、Ｈｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、Ｔｈｒ、ＬｙｓもしくはＴｒｐまたは非従来型のアミノ酸）である。一部の実施形態では、アシル供与体グルタミン含有タグは、ＬＬＱＧＧ（配列番号４６８）、ＬＬＱＧ（配列番号４６９）、ＬＳＬＳＱＧ（配列番号４７０）、ＧＧＧＬＬＱＧＧ（配列番号４７１）、ＧＬＬＱＧ（配列番号４７２）、ＬＬＱ、ＧＳＰＬＡＱＳＨＧＧ（配列番号４７３）、ＧＬＬＱＧＧＧ（配列番号４７４）、ＧＬＬＱＧＧ（配列番号４７５）、ＧＬＬＱ（配列番号４７６）、ＬＬＱＬＬＱＧＡ（配列番号４７７）、ＬＬＱＧＡ（配列番号４７８）、ＬＬＱＹＱＧＡ（配列番号４７９）、ＬＬＱＧＳＧ（配列番号４８０）、ＬＬＱＹＱＧ（配列番号４８１）、ＬＬＱＬＬＱＧ（配列番号４８２）、ＳＬＬＱＧ（配列番号４８３）、ＬＬＱＬＱ（配列番号４８４）、ＬＬＱＬＬＱ（配列番号４８５）、およびＬＬＱＧＲ（配列番号４８６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。例えば、その内容全体を本明細書に組み入れる、ＷＯ２０１２０５９８８２を参照されたい。
一部の実施形態では、ＴＧａｓｅ認識タグは、それに限定されないが、抗体を含めて、様々なポリペプチドに導入することができるｍｙｃペプチドに由来する。例えば、その内容全体を本明細書に組み入れる、米国特許第１０，０３６，０１０号を参照されたい。一部の実施形態では、Ｍｙｃ－Ｔａｇ配列は、ＥＱＫＬＩＳＥＥＤＬ（Ｎ－Ｇｌｕ－Ｇｌｎ－Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｇｌｕ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｃ、配列番号４８７）である。
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、特定の抗原に特異的に結合するかまたはそれと特異的に相互作用する少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む任意の抗原結合分子または分子複合体を意味する。「抗体」という用語には、ジスルフィド結合によって相互に接続された、２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、ならびにそれの多量体（例えば、ＩｇＭ）を含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲまたはＶＨと略す）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲまたはＶＬと略す）および軽鎖定常領域を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ領域およびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が散在する、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変の領域にさらに細分することができる。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端へと、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。様々な実施形態では、抗体（またはそれの抗原結合部分）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または自然にもしくは人為的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つ以上のＣＤＲのサイドバイサイド解析に基づいて画定することができる。
使用方法
別の態様では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、とりわけ、かかる処置を必要とする疾患、障害または状態の処置、予防および／または軽快に有用である。
一実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、がんを処置するのに有用である。別の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、感染を処置するのに有用である。一実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、細菌感染を処置するのに有用である。別の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、ウイルス感染を処置するのに有用である。別の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、真菌感染を処置するのに有用である。別の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、炎症状態を処置するのに有用である。さらに別の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、免疫系障害を処置するのに有用である。
「抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、完全抗体分子の抗原結合断片も含む。抗体の「抗原結合部分」、抗体の「抗原結合断片」などという用語は、本明細書で使用される場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、任意の天然発生の酵素的に入手可能な、合成的にもしくは遺伝子操作されたポリペプチドまたは糖タンパク質を含む。抗体の抗原結合断片は、例えば、任意の好適な標準的な技術、例えば、タンパク質分解性消化、または抗体可変ドメイン、場合により定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を伴う組換え遺伝子工学技術を使用した完全抗体分子に由来していてもよい。そのようなＤＮＡは既知であり、および／または例えば商業的供給源、ＤＮＡライブラリー（例えば、ファージ－抗体ライブラリーを含む）からすぐに入手可能であり、もしくは合成することができる。ＤＮＡは、シーケンシングを行い、化学的に、または例えば１つもしくはそれ以上の可変および／もしくは定常ドメインを好適な配置に配列させるための、もしくはコドンを導入するか、システイン残基を生成するか、アミノ酸の改変、追加、もしくは削除を行うためなどの分子生物学的技術を使用することによって操作してもよい。
抗原結合断片の非限定的な例としては：（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小認識単位（例えば、単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、例えばＣＤＲ３ペプチド）、または制約されたＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドが挙げられる。他の遺伝子操作された分子、例えば、ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば、一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫学的医薬品（ＳＭＩＰ）、およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインも本明細書で使用される場合、「抗原結合断片」という表現に包含される。
抗体の抗原結合断片は、典型的には、少なくとも１つの可変ドメインを含むことになる。可変ドメインは、任意のサイズのものまたはアミノ酸組成物であってもよく、１つまたはそれ以上のフレームワーク配列内のフレームに近接しているかまたはその中に存在する少なくとも１つのＣＤＲを一般的に含むことになる。ＶＬドメインと関連するＶＨドメインを有する抗原結合断片において、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の好適な配置で互いに対して位置していてもよい。例えば、可変領域はダイマーであっても、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＬダイマーを含んでいてもよい。
あるいは、抗体の抗原結合断片はモノマーＶＨまたはＶＬドメインを含んでいてもよい。
ある特定の実施形態では、抗体の抗原結合断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合している少なくとも１つの可変ドメインを含んでいてもよい。本明細書の抗体の抗原結合断片内で認められる場合がある可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的な配置としては：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（Ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬが挙げられる。本明細書において挙げられる例示的な配置のいずれかを含む可変ドメインおよび定常ドメインの任意の配置において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接連結していても、完全または部分的ヒンジまたはリンカー領域によって連結していてもよい。ヒンジ領域は、少なくとも２個（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０個、またはそれ以上）のアミノ酸からなり、これらは、単一のポリペプチド分子において隣接する可変および／または定常ドメイン間に可動性のまたは半可動性の連結をもたらす。
さらに、本明細書の抗体の抗原結合断片は、互いに、および／または１つもしくはそれ以上のモノマーＶＨもしくはＶＬドメインと非共有結合した（例えば、ジスルフィド結合によって）本明細書において挙げられる可変ドメインおよび定常ドメイン配置のいずれかのホモダイマーまたはヘテロダイマー（または他のマルチマー）を含んでいてもよい。
完全抗体分子と同様に、抗原結合断片は、単一特異性または多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。各可変ドメインが同じ抗原上の個別の抗原または異なるエピトープに特異的に結合することができる場合、抗体の多重特異性抗原結合断片は、典型的には、少なくとも２つの異なる可変ドメインを含むことになる。本明細書において開示される例示的な二重特異性抗体フォーマットを含む任意の多重特異性抗体フォーマットは、当技術分野において利用可能な所定の技術を使用して本明細書の抗体の抗原結合断片の文脈における使用に適応させてもよい。
本明細書の抗体は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）または抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を介して機能することができる。「補体依存性細胞傷害」（ＣＤＣ）は、補体の存在下、本明細書の抗体によって抗原発現細胞を溶解することを指す。「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」（ＡＤＣＣ）は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が、標的細胞上の結合抗体を認識し、その結果標的細胞の溶解をもたらす細胞介在性反応を指す。ＣＤＣおよびＡＤＣＣは、当技術分野において周知の利用可能なアッセイを使用して測定することができる（例えば、米国特許第５，５００，３６２号および同第５，８２１，３３７号、およびＣｌｙｎｅｓら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９５：６５２～６５６頁を参照されたい）。抗体の定常領域は、補体を固定し、細胞依存性細胞傷害を介在する抗体の能力において重要である。したがって、抗体のアイソタイプは、細胞傷害を介在することが抗体にとって望ましいかどうかに基づいて選択してもよい。
ある特定の実施形態では、本明細書の抗体、例えば、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＭＳＲ１抗体は、ヒト抗体である。「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する抗体を含むことが意図される。本明細書のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲおよび特にＣＤＲ３において、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列によってコードされていないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏランダムもしくは部位特異的突然変異誘発によってまたはｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異によって導入された突然変異）を含む場合がある。しかし、「ヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、別の哺乳動物種、例えばマウスの生殖細胞系由来のＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列にグラフトされた抗体を含むことは意図されない。
抗体は、一部の実施形態では、組換えヒト抗体であってもよい。「組換えヒト抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、組換え手段、例えば宿主細胞にトランスフェクトされた組換え発現ベクターを使用して発現された抗体（以下でさらに記載される）によって調製、発現、生成、もしくは単離された全てのヒト抗体、組換え、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリーから単離された抗体（以下でさらに記載される）、ヒト免疫グロブリン遺伝子に関してトランスジェニックである動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒら（１９９２）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７～６２９５頁を参照されたい）、またはヒト免疫グロブリン遺伝子配列から他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う他の任意の手段によって調製、発現、生成もしくは単離された抗体を含むことが意図される。かかる組換えヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列由来の可変および定常領域を有する。しかし、ある特定の実施形態では、かかる組換えヒト抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に関するトランスジェニック動物が使用される場合、ｉｎ ｖｉｖｏ体細胞突然変異誘発）を受けており、したがって、組換え抗体のＶＨおよびＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系ＶＨおよびＶＬ配列に由来し、それらに関連するが、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト抗体生殖細胞系レパートリー内に自然に存在することはできない配列である。
ヒト抗体は、ヒンジ不均質性と関連する２種類の形態で存在することができる。一方の形態において、免疫グロブリン分子は、ダイマーが鎖間重鎖ジスルフィド結合によって一緒に保持されている概１５０～１６０ｋＤａの安定な４本の鎖構築物を含む。もう一方の形態では、ダイマーは、鎖間ジスルフィド結合を介して連結されておらず、共有結合した軽鎖および重鎖から構成される約７５～８０ｋＤａの分子（半抗体）が形成されている。これらの形態は、アフィニティー精製後でさえ分離するのが極めて困難であった。様々なインタクトＩｇＧアイソタイプにおける第２の形態の出現頻度は、これらに限定されないが、抗体のヒンジ領域アイソタイプと関連する構造の違いに起因する。ヒトＩｇＧ４ヒンジのヒンジ領域における単一のアミノ酸置換は、典型的には、ヒトＩｇＧ１ヒンジを使用して観察されるレベルまで第２の形態の出現を顕著に低下させることができる（Ａｎｇａｌら（１９９３）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ３０：１０５頁）。本明細書は、ヒンジ、ＣＨ２、またはＣＨ３領域における１つまたはそれ以上の突然変異を有する抗体を包含し、これは、例えば、産生において、所望の抗体形態の収率を改善するのに望ましい場合がある。
本明細書の抗体は、単離されたまたは精製された抗体であってもよい。「単離された抗体」または「精製された抗体」は、本明細書で使用される場合、その自然環境の少なくとも１つの構成成分から同定され、分離され、および／または回収された抗体を意味する。例えば、生物の少なくとも１つの構成成分から、または抗体が自然に存在するかもしくは自然に産生される組織もしくは細胞から分離または取り出された抗体は、本明細書に関しては「単離された抗体」である。例えば、反応または反応順序の少なくとも１つの構成成分から精製された抗体は、「精製された抗体」であるか、または抗体を精製した結果である。単離された抗体は、組換え細胞内のｉｎ ｓｉｔｕ抗体も含む。単離された抗体は、少なくとも１つの精製または単離工程が行われた抗体である。ある特定の実施形態によれば、単離された抗体または精製された抗体は、他の細胞材料および／または化学物質を実質的に含まないとすることができる。
本明細書において開示される抗体は、抗体が由来する対応する生殖細胞系配列と比較して、重鎖および軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に１つまたはそれ以上のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含んでいてもよい。かかる突然変異は、本明細書において開示されるアミノ酸配列と、例えば、公的な抗体配列データベースから入手可能な生殖細胞系配列とを比較することによって容易に確認することができる。本明細書は、本明細書において開示されるアミノ酸配列のいずれかに由来する抗体、およびそれの抗原結合断片を含み、１つまたはそれ以上のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたはそれ以上のアミノ酸は、抗体が由来する生殖細胞系配列の対応する残基に、または別のヒト生殖細胞系配列の対応する残基に、または対応する生殖細胞系残基の保守的なアミノ酸置換に突然変異する（かかる配列変化は本明細書において集合的に「生殖細胞系突然変異」と称される）。当業者であれば、本明細書において開示される重鎖および軽鎖可変領域配列を用いて出発すると、１つもしくはそれ以上の個々の生殖細胞系突然変異またはそれらの組合せを含む多くの抗体および抗原結合断片を容易に生成することができる。ある特定の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の全ては、抗体が由来する元の生殖細胞系配列において認められる残基に復帰突然変異する。他の実施形態では、ある特定の残基のみ、例えば、ＦＲ１の最初の８個のアミノ酸内にもしくはＦＲ４の最後の８個のアミノ酸内に認められる突然変異した残基のみ、またはＣＤＲ１、ＣＤＲ２もしくはＣＤＲ３内に認められる突然変異した残基のみが元の生殖細胞系配列に復帰突然変異する。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基のうちの１つまたはそれ以上は、異なる生殖細胞系配列（すなわち、抗体が本来由来する生殖細胞系配列と異なる生殖細胞系配列）の対応する残基に突然変異する。
さらに、本明細書の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内に２つ以上の生殖細胞系突然変異のいずれかの組合せを含んでいてもよく、例えば、ある特定の個々の残基は、特定の生殖細胞系配列の対応する残基に突然変異しており、同時に元の生殖細胞系配列とは異なるある特定の他の残基は維持されているかまたは異なる生殖細胞系配列の対応する残基に突然変異している。一度得られると、１つまたはそれ以上の生殖細胞系突然変異を含む抗体および抗原結合断片は、１つまたはそれ以上の所望の特性、例えば、結合特異性の改善、結合親和性の増加、アンタゴニストまたはアゴニストの生物学的特性の改善または強化（場合によっては）、免疫原性の低下、抗体－薬物コンジュゲートに関する薬物－対－抗体比（ＤＡＲ）の改善などに関して容易に試験することができる。この一般的な様式で得られた抗体および抗原結合断片は本明細書に包含される。
抗体のアミノ酸配列は、Ｋａｂａｔら、（「Ｋａｂａｔ」付番方式）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら、１９９７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３：９２７～９４８頁（「Ｃｈｏｔｈｉａ」付番方式）；ＭａｃＣａｌｌｕｍら、１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５頁（「Ｃｏｎｔａｃｔ」付番方式）；Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００３，２７：５５～７７頁（「ＩＭＧＴ」付番方式）；ならびにＨｏｎｅｇｇｅおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２００１，３０９：６５７～７０頁（「ＡＨｏ」付番方式）によって記載されているものを含む任意の既知の付番方式を使用して付番することができる。特に指定がない限り、本明細書で使用される付番方式は、Ｋａｂａｔ付番方式である。しかし、付番方式の選択は、存在しない配列における違いを示唆することを意図するわけではなく、当業者であれば、１つまたはそれ以上の抗体のアミノ酸配列を調査することによって配列位置を容易に確認することができる。特に記載がない限り、「ＥＵ付番方式」は、抗体重鎖定常領域における残基について言及する場合に一般的に使用される（例えば、Ｋａｂａｔら、上掲において報告されている）。
「アグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）抗体」という用語は、トランスグルタミネーション（ｔｒａｎｓｇｌｕｔａｍｉｎａｔｉｏｎ）反応に干渉することができるグリコシル化配列を含まない抗体、例えば１つまたはそれ以上の重鎖上のＮ２９７において糖基を有さない抗体を指す。特定の実施形態では、抗体重鎖はＮ２９７突然変異を有する。言い換えれば、抗体は、Ｋａｂａｔらによって開示されたＥＵ付番方式にしたがって２９７位にアスパラギン残基をもはや有さないように突然変異している。特定の実施形態では、抗体重鎖は、Ｎ２９７ＱまたはＮ２９７Ｄ突然変異を有する。かかる抗体は、グリコシル化配列を除去もしくは無効にするための部位特異的な突然変異誘発によって、または任意のグリコシル化干渉部位もしくはその他の干渉構造から離れた部位においてグルタミン残基を挿入するための部位特異的な突然変異誘発によって調製することができる。かかる抗体も、天然または人工供給源から単離することができる。
「脱グリコシル化抗体」という用語は、Ｎ２９７における糖基が除去され、その結果Ｑ２９５グルタミネーションを促進する抗体を指す。特定の実施形態では、抗体、例えばＮ２９７抗体を脱グリコシル化する追加の工程を包含するプロセスが本明細書において提供される。
「エピトープ」という用語は、パラトープとして既知の抗体分子の可変領域における特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、１つを超えるエピトープを有することができる。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合することができ、異なる生物学的効果を有することができる。エピトープは、立体構造であっても直鎖状であってもよい。立体構造のエピトープは、直鎖状ポリペプチド鎖の異なるセグメントから空間的に並置されたアミノ酸によって産生される。直鎖状エピトープは、ポリペプチド鎖において隣接するアミノ酸残基によって産生されたものである。ある特定の状況では、エピトープは、抗原上に、糖、ホスホリル基、またはスルホニル基の部分を含んでいてもよい。
「コンジュゲートタンパク質」または「コンジュゲート抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、１つまたはそれ以上の化学的部分に共有結合しているタンパク質または抗体を指す。化学的部分は、本開示のアミン化合物を含んでいてもよい。本開示とともに使用するのに好適なリンカー（Ｌ）およびペイロード（Ｄ）は、本明細書において詳細に説明される。特定の実施形態では、治療部分を含むコンジュゲート抗体は、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、抗体－ペイロードコンジュゲート、または抗体－リンカー－ペイロードコンジュゲートとも称される。
「薬物－対－抗体比」または（ＤＡＲ）という用語は、本開示の結合剤にコンジュゲートされた治療部分、例えば薬物の平均数である。
「リンカー抗体比」または（ＬＡＲ）という用語はまた、小文字のｌとして示され、一部の実施形態では、本開示の結合剤にコンジュゲートされた反応性第一級アミン化合物の平均数である。かかる結合剤、例えば抗体は、好適なジエンまたはジエノフィルを含む第一級アミン化合物とコンジュゲートすることができる。ジエンまたはジエノフィルで官能化された得られた結合剤は、その後、ディールス－アルダー反応を介して対応するジエン又はジエノフィルを含む治療薬と反応することができる。
「グルタミニル修飾抗体」という用語は、グルタミン側鎖から化学的部分へ少なくとも１つの共有結合を有する抗体を指す。化学的部分は、当業者によって好適とみなされる任意の部分、例えば、本開示のアミン化合物であってもよい。特定の実施形態では、化学的部分は、グルタミン側鎖上のアミド連結を通して連結されている。
「医薬的に許容される量」という句は、それを必要とする対象における少なくとも１つの健康問題の影響または症状を処置、減少、軽減、またはモジュレートするのに効果的なまたは十分な量を指す。例えば、抗体または抗体－薬物コンジュゲートの医薬的に許容される量は、本明細書において提供される抗体または抗体－薬物－コンジュゲートを使用して生物学的標的をモジュレートするのに有効な量である。好適な医薬的に許容される量としては、これらに限定されるものではないが、本明細書において提供される抗体または抗体－薬物－コンジュゲートの約０．００１％から最大約１０％、およびその間の任意の量、例えば、約０．０１％、約０．０２％、約０．０３％、約０．０４％、約０．０５％、約０．０６％、約０．０７％、約０．０８％、約０．０９％、約０．１％、約０．２％、約０．３％、約０．４％、約０．５％、約０．６％、約０．７％、約０．８％、約０．９％、約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約６％、約７％、約８％、約９％、または約１０％が含まれる。
「初期ｐＨ」という句は、構成成分または反応物が反応混合物に添加される前の、反応のための構成成分または反応物のｐＨを指す。例えば、緩衝溶液が反応混合物に添加される前の、緩衝溶液の初期ｐＨは７．７４である。
「反応ｐＨ」という句は、全ての反応構成成分または反応物が添加された後の、反応のｐＨを指す。
「医薬的に許容される」という用語は、動物において、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国連邦政府もしくは州政府の規制当局によって承認を受けたもの、または米国薬局方もしくは他の一般的に認められている薬局方に挙げられているものを意味する。
「実質的な同一性」または「実質的に同一の」という用語は、核酸またはそれの断片について言及する場合、別の核酸（またはそれの相補的ストランド）と、適切なヌクレオチド挿入または欠失で最適にアラインメントした場合、以下で論じられるように、配列同一性の任意の周知のアルゴリズム、例えばＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧａｐによって測定した場合、ヌクレオチド塩基の少なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％、９７％、９８％または９９％でヌクレオチド配列に同一性が存在することを示す。参照核酸分子と実質的に同一性を有する核酸分子は、ある特定の場合では、参照核酸分子によってコードされるポリペプチドと同じまたは実質的に類似のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることができる。
ポリペプチドに適用する場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似の」という用語は、２つのペプチド配列が、例えば、デフォルトのギャップ重みを使用したプログラムであるＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによって最適にアラインメントされた場合、少なくとも９５％の配列同一性、さらにより好ましくは少なくとも９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基位置は、保守的なアミノ酸置換によって異なる。「保守的なアミノ酸置換」は、アミノ酸残基が類似の化学的特性（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基によって置換されたものである。一般的に、保守的なアミノ酸置換は、タンパク質の機能特性を実質的に変化させないことになる。２つ以上のアミノ酸配列が保守的な置換によって互いに異なる場合、パーセント配列同一性または類似性の程度は、置換の保守的な性質を上方に調整して修正することができる。この調整を行うための手段は、当業者に周知である。例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４：３０７～３３１頁を参照されたい。類似の化学的特性を有する側鎖を有するアミノ酸基の例としては、（１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；（２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；（３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；（４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシン、およびトリプトファン；（５）塩基性側鎖：リジン、アルギニン、およびヒスチジン；（６）酸性側鎖：アスパルテートおよびグルタメート、ならびに（７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンが挙げられる。一部の実施形態では、保守的なアミノ酸置換基は：バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタメート－アスパルテート、およびアスパラギン－グルタミンである。
あるいは、保守的な置換えは、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３～１４４５頁で開示されているＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する任意の変化である。「中程度に保守的な」置換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において非負値を有する任意の変化である。
ポリペプチドに関する配列類似性は、配列同一性とも称され、典型的には、配列分析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質分析ソフトウェアは、保守的なアミノ酸置換を含む様々な置換、欠失および他の改変に割り当てられた類似性の尺度を使用して類似の配列を一致させる。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、プログラム、例えばＧａｐおよびＢｅｓｔｆｉｔを含み、これらは、密接に関連するポリペプチド、例えば生物の異なる種からの相同ポリペプチド間でまたは野生型タンパク質とそれのムテインの間で配列相同性または配列同一性を判定するためにデフォルトのパラメーターを用いて使用することができる。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列は、ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムであるデフォルトのまたは推奨されるパラメーターを使用したＦＡＳＴＡを使用して比較してもよい。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と探索する配列との間の最良のオーバーラップの領域のアラインメントおよびパーセント配列同一性を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００）上掲を参照されたい）。本明細書の配列を、異なる生物からの多数の配列を含むデータベースと比較する場合の別の特定のアルゴリズムは、デフォルトのパラメーターを使用したコンピュータープログラムＢＬＡＳＴ、特にＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮである。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３～４１０頁およびＡｌｔｓｃｈｕｌら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９～４０２頁を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「治療有効量」は、疾患もしくは障害の処置もしくは管理において患者に治療的利点を提供するのに、または疾患もしくは障害と関連する１つもしくはそれ以上の症状を遅延するかもしくは最小化するのに十分な量（化合物の量）を指す。
本開示の化合物
タンパク質－ペイロードコンジュゲート化合物
前述の目的および他の目的によれば、本開示は、タンパク質－ペイロードコンジュゲート化合物、例えば、タンパク質－薬物コンジュゲート化合物、それの前駆体および中間体、医薬組成物、ならびにかかる処置を必要とする対象におけるある特定の疾患を処置するための方法を提供する。本開示によれば、本明細書において提供されるタンパク質－ペイロードコンジュゲート化合物は、治療部分または造影剤部分に連結された第一級アミン化合物とコンジュゲートされたグルタミニル修飾結合剤を含み、リンカーは、本明細書に記載される置換シクロヘキセン誘導体であるディールス－アルダー付加体を含む。
「タンパク質－ペイロードコンジュゲート」という用語は、本明細書で使用される場合、本開示による結合剤（例えば、抗体またはそれの断片）を含む化合物を指し、ｉ）ディールス－アルダー付加体およびｉｉ）治療部分または造影剤部分を含む本開示の１つまたはそれ以上の化合物にコンジュゲートされた１つまたはそれ以上のグルタミン残基を有している。例示の非限定的な例としては、本明細書に記載される式（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）が挙げられる。
「タンパク質－薬物コンジュゲート」という用語は、本明細書で使用される場合、本開示による結合剤（例えば、抗体またはそれの断片）を含む化合物を指し、ｉ）ディールス－アルダー付加体、およびｉｉ）治療部分を含む本開示の１つまたはそれ以上の化合物にコンジュゲートされた１つまたはそれ以上のグルタミン残基を有している。例示の非限定的な例としては、本明細書に記載される式（ＩＡ）、（ＩＢ）および（ＩＣ）が挙げられる。タンパク質－薬物コンジュゲートの具体的な実施形態では、結合剤は、抗体（例えば、モノクローナル抗体）であり、「抗体薬物コンジュゲート」またはＡＤＣという用語が場合により使用される。
本開示によれば、式（Ａ）による構造で示される構成成分を含むタンパク質－ペイロードコンジュゲート化合物：
Figure 2023521885000094
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；Ｚは本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｄは、本明細書に記載される治療部分または造影剤部分であり、ｎは、１から４までの整数であり、ｄは１から１０までの整数である）が提供される。ある特定の実施形態では、式Ａのタンパク質－薬物コンジュゲート化合物は、当業者に既知の追加のリンカーおよびスペーサーも含んでいてもよい。
一般的に、ディールス－アルダー反応は、本明細書において「ディールスアルダー付加体」とも称されるシクロヘキセン誘導体を形成するための、共役ジエンと、通常、ジエノフィル（ｄｉｅｎｏｐｈｉｌｅ）と称される（ｄｉｅｎｅｏｐｈｉｌｅともつづられる）アルケンまたはアルキンとの間の化学的反応である。
理論に束縛されるものではないが、ディールス－アルダー反応は、共役ジエンとジエノフィル（アルケンまたはアルキン）との［４＋２］－環状付加と考えられ、これはジエンの４π－電子およびジエノフィルの２π－電子が関与する電子環状反応である。反応の駆動力は、π－結合よりもエネルギー的に安定である新規のσ－結合の形成と考えられている。ディールス－アルダー反応および得られる付加体の非限定的な例は、以下のスキームＩにおいて示される。
Figure 2023521885000095
本開示の「ディールス－アルダー付加体」、Ｚという用語は、任意の二価シクロヘキセン誘導体を包含し、置換シクロヘキセン誘導体を生成するために行われる合成工程とは無関係である。すなわち、ディールス－アルダー付加体という用語は、本明細書で使用される場合、ディールス－アルダー反応の文字通りの生成物に限定されるものではないが、ディールス－アルダー反応によって生成することができる（または生成することが期待されるであろう）構造を含む。
ある特定の実施形態では、ディールス－アルダー付加体Ｚは、式１または２による部分：
Figure 2023521885000096
 （式中、Ｒ’は、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキルであるか、または２つのＲ’が一緒になって、ＣＨＲ、（ＣＨＲ）２、またはＯブリッジを構成し；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；ＫはＮ、
Figure 2023521885000097
 、またはＮＨ－Ｎであり；Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基である）を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ）：
Figure 2023521885000098
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは、本明細書に記載される任意選択のスペーサーであり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｎは、１から４までの整数であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＩＡ）：
Figure 2023521885000099
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは、本明細書に記載される任意選択のスペーサーであり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）：
Figure 2023521885000100
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたは本明細書に記載されるスペーサーであり；Ｑは、ＣＨＲ、（ＣＨＲ）２、またはＯブリッジであり；Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基であり；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｎは、１から４までの整数であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＩＩ）：
Figure 2023521885000101
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは存在しないかまたは本明細書に記載されるスペーサーであり；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
結合剤
一実施形態では、本明細書に記載されるタンパク質－薬物コンジュゲート実施形態の有効性は、その結合パートナーに結合するための結合剤の選択性に依存する。本開示の一実施形態では、結合剤は、ある程度の特異性で所与の結合パートナーに結合することができる任意の分子である。一実施形態では、結合剤は哺乳動物内に存在し、相互作用が治療的使用をもたらすことができる。代替の実施形態では、結合剤はｉｎ ｖｉｔｒｏで存在し、相互作用が診断的使用をもたらすことができる。一部の態様では、結合剤は、細胞または細胞集団に結合することができる。
本開示の好適な結合剤としては、結合パートナーに結合するタンパク質が挙げられ、結合剤は１つまたはそれ以上のグルタミン残基を含む。好適な結合剤としては、これらに限定されるものではないが、抗体、リンホカイン、ホルモン、成長因子、ウイルス受容体、インターロイキン、またはその他の細胞結合もしくはペプチド結合分子もしくは物質が挙げられる。
一実施形態では、結合剤は抗体である。ある特定の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、およびＦ（ａｂ）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリボディなど）から選択される。本明細書における抗体は、それぞれはその全体が参照によって組み入れる米国特許第６，５９６，５４１号および米国特許出願公開第２０１２／００９６５７２号に記載されている方法を使用してヒト化されたものであってもよい。本開示のタンパク質－薬物コンジュゲート化合物のある特定の実施形態では、ＢＡはヒト化モノクローナル抗体である。例えば、ＢＡは、ＨＥＲ２またはＭＳＲ１に結合するモノクローナル抗体であってもよい。
本開示において、抗体は、当業者に好適とみなされた任意の抗体であってもよい。一部の実施形態では、抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖配列において少なくとも１つのグルタミン残基を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、１つまたはそれ以上のＧｌｎ２９５残基を含む。ある特定の実施形態では、抗体は２つの重鎖ポリペプチドを含み、それぞれが１つのＧｌｎ２９５残基を有する。さらなる実施形態では、抗体は、重鎖２９５以外の部位において１つまたはそれ以上のグルタミン残基を含む。かかる抗体は、天然原料から単離しても、１つまたはそれ以上のグルタミン残基を含むように遺伝子操作してもよい。グルタミン残基を抗体ポリペプチド鎖に操作するための技術は、当業者の技術の範囲内である。ある特定の実施形態では、抗体はアグリコシル化されている。
抗体は、当業者に既知の任意の形態であってもよい。ある特定の実施形態では、抗体は軽鎖を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖はカッパ軽鎖である。ある特定の実施形態では、軽鎖はラムダ軽鎖である。
ある特定の実施形態では、抗体は重鎖を含む。一部の態様では、重鎖はＩｇＡである。一部の態様では、重鎖はＩｇＤである。一部の態様では、重鎖はＩｇＥである。一部の態様では、重鎖はＩｇＧである。一部の態様では、重鎖はＩｇＭである。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ１である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ２である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ３である。一部の態様では、重鎖はＩｇＧ４である。一部の態様では、重鎖はＩｇＡ１である。一部の態様では、重鎖はＩｇＡ２である。
一部の実施形態では、抗体は抗体断片である。一部の態様では、抗体断片はＦｖ断片である。一部の態様では、抗体断片はＦａｂ断片である。一部の態様では、抗体断片はＦ（ａｂ’）２断片である。一部の態様では、抗体断片はＦａｂ’断片である。一部の態様では、抗体断片はｓｃＦｖ（ｓＦｖ）断片である。一部の態様では、抗体断片はｓｃＦｖ－Ｆｃ断片である。
一部の実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。一部の実施形態では、抗体はポリクローナル抗体である。
一部の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。一部の実施形態では、抗体はヒト化抗体である。一部の実施形態では、抗体はヒト抗体である。
抗体は、当業者に好適とみなされた任意の抗原に対して結合特異性を有していてもよい。ある特定の実施形態では、抗原は、膜貫通分子（例えば、受容体）または成長因子である。例示的な抗原としては、これらに限定されるものではないが、分子、例えばレニン；ヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモンを含む成長ホルモン；成長ホルモン放出因子；副甲状腺ホルモン；甲状腺刺激ホルモン；リポタンパク質；アルファ１－アンチトリプシン；インスリンＡ－鎖；インスリンＢ－鎖；プロインスリン；卵胞刺激ホルモン；カルシトニン；黄体形成ホルモン；グルカゴン；凝固因子、例えば、第ｖｍｃ因子、第ＩＸ因子、組織因子（ＴＦ）、およびフォンビルブランド因子；抗凝固因子、例えばＣタンパク質；心房性ナトリウム利尿因子；肺サーファクタント；プラスミノーゲン活性化因子、例えば、ウロキナーゼまたはヒト尿もしくは組織型プラスミノーゲン活性化因子（ｔ－ＰＡ）；ボンベシン；トロンビン；造血成長因子；腫瘍壊死因子－アルファおよび－ベータ；エンケファリナーゼ；ＲＡＮＴＥＳ（発現され、分泌されたＴ細胞の正常な活性化を調節する）；ヒトマクロファージ炎症性タンパク質（ＭｌＰ－Ｉ－アルファ）；血清アルブミン、例えばヒト血清アルブミン；ミューラー阻害物質；レラキシンＡ－鎖；レラキシンＢ－鎖；プロリラキシン；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；微生物タンパク質、例えばベータラクタマーゼ；ＤＮａｓｅ；１９Ｅ；細胞傷害Ｔ－リンパ球関連抗原（ＣＴＬＡ）、例えばＣＴＬＡ－４；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）；ホルモンまたは成長因子に対する受容体；タンパク質ＡまたはＤ；リウマチ因子；神経栄養因子、例えば骨由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン－３、－４、－５、もしくは－６（ＮＴ－３、ＮＴ４、ＮＴ－５、もしくはＮＴ－６）、または神経成長因子、例えばＮＧＦ－β；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）；線維芽細胞成長因子、例えば、ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ；線維芽細胞成長因子受容体２（ＦＧＦＲ２）、表皮成長因子（ＥＧＦ）；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えば、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－β２、ＴＧＦ－β３、ＴＧＦ－β４、またはＴＧＦ－β５を含むＴＧＦ－アルファおよびＴＧＦ－ベータ；インスリン様成長因子－ｌおよび－２（ＩＧＦ－ｌおよびＩＧＦ－２）；ｄｅｓ（Ｉ－３）－ＩＧＦ－ｌ（脳ＩＧＦ－ｌ）、インスリン様成長因子結合タンパク質、ＥｐＣＡＭ、ＧＤ３、ＦＬＴ３、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣＩ、ＭＵＣＩ６、ＳＴＥＡＰ、ＣＥＡ、ＴＥＮＢ２、ＥｐｈＡ受容体、ＥｐｈＢ受容体、葉酸受容体、ＦＯＬＲＩ、メソテリン、クリプト、アルファｖベータ６、インテグリン、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ、トランスフェリン受容体、ｌＲＴＡＩ、ｌＲＴＡ２、ｌＲＴＡ３、ｌＲＴＡ４、ｌＲＴＡ５；ＣＤタンパク質、例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤＩＩ、ＣＤＩ４、ＣＤＩ９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２５、ＣＤ２６、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５５、ＣＤ５６、ＣＤ５９、ＣＤ７０、ＣＤ７９、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ１０３、ＣＤ１０５、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１３８、ＣＤＩ５２、またはこれらの全体は参照により組み入れる米国特許出願公開第２００８／０１７１０４０号もしくは米国特許出願公開第２００８／０３０５０４４号で開示されている１つもしくはそれ以上の腫瘍関連抗原もしくは細胞表面受容体に結合する抗体、；エリスロポエチン；骨誘導因子；免疫毒素；骨形成タンパク質（ＢＭＰ）；インターフェロン、例えば、インターフェロン－アルファ、－ベータ、および－ガンマ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えば、Ｍ－ＣＳＦ、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＧ－ＣＳＦ；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ－１からＩＬ－１０；スーパーオキシドジスムターゼ；Ｔ細胞受容体；表面膜タンパク質；崩壊促進因子；ウイルス性抗原、例えば、ＨＩＶエンベロープの一部；輸送タンパク質；ホーミング受容体；アドレシン；調節タンパク質；インテグリン、例えば、ＣＤｌｌａ、ＣＤｌｌｂ、ＣＤｌｌｃ、ＣＤＩ８、ＩＣＡＭ、ＶＬＡ－４およびＶＣＡＭ；腫瘍関連抗原、例えば、ＡＦＰ、ＡＬＫ、Ｂ７Ｈ４、ＢＡＧＥタンパク質、β－カテニン、ｂｒｃ－ａｂｌ、ＢＲＣＡ１、ＢＯＲＩＳ、ＣＡ９（炭酸脱水酵素ＩＸ）、カスパーゼ－８、ＣＤ２０、ＣＤ４０、ＣＤ１２３、ＣＤＫ４、ＣＥＡ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ｃ－ｋｉｔ、ｃＭＥＴ、ＣＴＬＡ４、サイクリン－Ｂ１、ＣＹＰ１Ｂ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、エンドグリン、Ｅｐｃａｍ、ＥｐｈＡ２、ＥｒｂＢ２／Ｈｅｒ２、ＥｒｂＢ３／Ｈｅｒ３、ＥｒｂＢ４／Ｈｅｒ４、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、Ｆｒａ－１、ＦＯＬＲ１、ＧＡＧＥタンパク質（例えば、ＧＡＧＥ－１、－２）、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧｌｏｂｏＨ、ｇｌｙｐｉｃａｎ－３、ＧＭ３、ｇｐ１００、Ｈｅｒ２、ＨＬＡ／Ｂ－ｒａｆ、ＨＬＡ／ＥＢＮＡ１、ＨＬＡ／ｋ－ｒａｓ、ＨＬＡ／ＭＡＧＥ－Ａ３、ｈＴＥＲＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＬＧＲ５、ＬＭＰ２、ＭＡＧＥタンパク質（例えば、ＭＡＧＥ－１、－２、－３、－４、－６、および－１２）、ＭＡＲＴ－１、メソテリン、ＭＬ－ＩＡＰ、Ｍｕｃ１、Ｍｕｃ１６（ＣＡ－１２５）、ＭＵＭ１、ＮＡ１７、ＮＧＥＰ、ＮＹ－ＢＲ１、ＮＹ－ＢＲ６２、ＮＹ－ＢＲ８５、ＮＹ－ＥＳＯ１、ＯＸ４０、ｐ１５、ｐ５３、ＰＡＰ、ＰＡＸ３、ＰＡＸ５、ＰＣＴＡ－１、ＰＤＧＦＲ－α、ＰＤＧＦＲ－β、ＰＤＧＦ－Ａ、ＰＤＧＦ－Ｂ、ＰＤＧＦ－Ｃ、ＰＤＧＦ－Ｄ、ＰＬＡＣ１、ＰＲＬＲ、ＰＲＡＭＥ、ＰＳＣＡ、ＰＳＧＲ、ＰＳＭＡ（ＦＯＬＨ１）、ＲＡＧＥタンパク質、Ｒａｓ、ＲＧＳ５、Ｒｈｏ、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－３、ＳＴＥＡＰ１、ＳＴＥＡＰ２、ＳＴｎ、サバイビン、ＴＡＧ－７２、ＴＧＦ－β、ＴＭＰＲＳＳ２、Ｔｎ、ＴＮＦＲＳＦ１７、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、チロシナーゼ、およびｕｒｏｐｌａｋｉｎ－３、ならびに本明細書において挙げられるポリペプチドのいずれかの断片が挙げられる。
例示的な抗原としては、これらに限定されるものではないが、ＢＣＭＡ、ＳＬＡＭＦ７、Ｂ７Ｈ４、ＧＰＮＭＢ、ＵＰＫ３Ａ、およびＬＧＲ５も挙げられる。例示的な抗原としては、これらに限定されるものではないがＭＵＣ１６、ＰＳＭＡ、ＳＴＥＡＰ２、およびＨＥＲ２も挙げられる。
一部の実施形態では、抗原としては、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）または前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）が挙げられる。一部の実施形態では、抗原としてはＭＵＣ１６が挙げられる。一部の実施形態では、抗原としてはＳＴＥＡＰ２が挙げられる。一部の実施形態では、抗原としてはＰＳＭＡが挙げられる。一部の実施形態では、抗原としてはＨＥＲ２が挙げられる。一部の実施形態では、抗原は、プロラクチン受容体（ＰＲＬＲ）または前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である。一部の実施形態では、抗原はＭＵＣ１６である。一部の実施形態では、抗原としてはＰＳＭＡが挙げられる。一部の実施形態では、抗原はＨＥＲ２である。一部の実施形態では、抗原はＳＴＥＡＰ２である。
結合剤としては、アンキリン反復タンパク質、インターフェロン、リンホカイン、例えば、ＩＬ－２またはＩＬ－３、ホルモン様インスリンおよびグルココルチコイド、成長因子、例えばＥＧＦ、トランスフェリン、フィブロネクチンＩＩＩ型等も挙げられる。
本明細書における一部の実施形態は、治療的または診断的使用に特異的な標的である。一実施形態では、結合剤は、特定のタイプの腫瘍上で、共有、過剰発現、または改変されるあるタイプの腫瘍または抗原に特異的な抗原を含む、腫瘍抗原として定義される抗原と相互作用し、結合するように調製される。例としては、肺がんに伴うアルファ－アクチニン－４、メラノーマに伴うＡＲＴＣ１、慢性骨髄性白血病に伴うＢＣＲ－ＡＢＬ融合タンパク質、メラノーマに伴うＢ－ＲＡＦ、ＣＬＰＰまたはＣｄｃ２７、扁平上皮細胞癌に伴うＣＡＳＰ－８、および腎細胞癌に伴うｈｓｐ７０－２、ならびに以下の共通の腫瘍特異的抗原、例えば：ＢＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ、ＧｎＴＶ、ＫＫ－ＬＣ－１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＮＡ８８－Ａ、ＴＲＰ２－ＩＮＴ２が挙げられる。一部の実施形態では、抗原は、ＰＲＬＲまたはＨＥＲ２である。一部の実施形態では、抗体はＳＴＥＡＰ２、ＭＵＣ１６、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲＶＩＩＩ、ＦＧＲ２、またはＰＲＬＲに結合する。
タンパク質－薬物コンジュゲートに好適な抗ＨＥＲ２抗体
一部の実施形態では、抗体は抗ＨＥＲ２抗体である。一部の実施形態では、抗体は、トラスツズマブ、ペルツズマブ（２Ｃ４）、またはマルゲツキシマブ（ＭＧＡＨ２２）である。一部の実施形態では、抗体はトラスツズマブである。ある特定の実施形態によれば、本開示によるタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは抗ＨＥＲ２抗体を含む。一部の実施形態では、抗体はＨＥＲ２に結合し、ＷＯ２０１９／２１２９６５Ａ１に記載されているものを含む。
タンパク質－薬物コンジュゲートに好適な抗ＭＳＲ１抗体
本開示によるタンパク質－薬物コンジュゲートは、抗ＭＳＲ１抗体、例えば、完全長（例えば、ＩｇＧ１もしくはＩｇＧ４抗体）、または抗原結合部分（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２もしくはｓｃＦｖ断片）を場合により含み、機能に影響を与えるように、例えば残基エフェクター機能を削除するように場合により改変されている（Ｒｅｄｄｙら，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：１９２５～１９３３頁）。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートの実施形態は、表１および表２で挙げられる抗ＭＳＲ１抗体を含んでいてもよい。表１は、例示的な抗ＭＳＲ１抗体の、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）、ならびに軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を示す。表２は、例示的な抗ＭＳＲ１抗体のＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２ ＨＣＤＲ３、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の核酸配列識別子を示す。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対になる表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む。ある特定の実施形態は、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかの中に含まれるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、抗体またはそれの抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートに関連する。一部の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、２／１０、２３／４２、５０／５８；９０／９８、および２８２／２９０からなる群から選択される。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートに好適な抗体またはそれの抗原結合断片としては、ＭＳＲ１に特異的に結合するものがあり、表１に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートに好適な抗体またはそれの抗原結合断片としては、ＭＳＲ１に特異的に結合するものがあり、表１に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む。
ＭＳＲ１に特異的に結合するさらなる好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対になる表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含む、ＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む。ある特定の実施形態は、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかの中に含まれるＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む、抗体またはそれの抗原結合断片に関連する。一部の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、８／１６、４０／４８、５６／６４；９６／１０４、および２８８／２９６からなる群から選択される。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートに好適な抗体またはそれの抗原結合断片としては、ＭＳＲ１に特異的に結合するものがあり、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかの中に含まれる６つの一連のＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む。ある特定の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、４－６－８－１２－１４－１６；３６－３８－４０－４４－４６－４８；５２－５４－５６－６０－６２－６４；９２－９４－９６－１００－１０２－１０４、および２８４－２８６－２８８－２９２－２９４－２９６からなる群から選択される。
関連する実施形態では、ＭＳＲ１に特異的に結合する好適な抗体またはそれの抗原結合断片は、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかによって定義されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれる６つの一連のＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む。例えば、本開示は、ＭＳＲ１に特異的に結合し、２／１０、２３／４２、５０／５８、９０／９８、および２８２／２９０からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれるＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットを含む好適な抗体またはそれの抗原結合断片を含む。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するための方法および技術は、当技術分野において周知であり、本明細書において開示される指定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを同定するために使用することができる。ＣＤＲの境界を同定するために使用することができる例示的な慣例としては、例えば、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、およびＡｂＭ定義が挙げられる。大まかに言えば、Ｋａｂａｔ定義は、配列変動に基づいており、Ｃｈｏｔｈｉａ定義は構造ループ領域の位置に基づいており、ＡｂＭ定義は、ＫａｂａｔのアプローチとＣｈｏｔｈｉａのアプローチとの間で妥協したものである。例えば、Ｋａｂａｔ，「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７～９４８頁（１９９７）；およびＭａｒｔｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：９２６８～９２７２頁（１９８９）を参照されたい。公的なデータベースも、抗体内のＣＤＲ配列を同定するために利用可能である。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートを調製するための抗ＭＳＲ１抗体またはそれの一部をコードする核酸分子も本明細書において提供される。例えば、表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子が本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ１核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ２核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
表１に挙げられるＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかをコードする核酸分子も本明細書において提供され；ある特定の実施形態では核酸分子は、表２に挙げられるＬＣＤＲ３核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。
ＨＣＶＲをコードする核酸分子も本明細書において提供され、ＨＣＶＲは、一連の３つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３）を含んでいてもよく、ここで、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかによって定義される。
ＬＣＶＲをコードする核酸分子も本明細書において提供され、ＬＣＶＲは、一連の３つのＣＤＲ（すなわち、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含んでいてもよく、ここで、ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列セットは、表１に挙げられる例示的な抗ＭＳＲ１抗体のいずれかによって定義される。
ＨＣＶＲとＬＣＶＲの両方をコードする核酸分子も本明細書において提供され、ＨＣＶＲは、表１に挙げられるＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含んでいてもよく、ＬＣＶＲは、表１に挙げられるＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかのアミノ酸配列を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、核酸分子は、表２に挙げられるＨＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列、および表２に挙げられるＬＣＶＲ核酸配列のいずれかから選択されるポリヌクレオチド配列、またはこれらと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するこれらの実質的に類似している配列を含んでいてもよい。本開示のこの態様によるある特定の実施形態では、核酸分子はＨＣＶＲおよびＬＣＶＲをコードし、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲは両方とも表１に挙げられる同じ抗ＭＳＲ１抗体、たとえばＨ１Ｈ２１２３４Ｎに由来する。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートを調製するための、ＨＥＲ２の重鎖もしくは軽鎖可変領域を含むポリペプチドまたは抗ＭＳＲ１抗体を発現することができる組換え発現ベクターも本明細書において提供される。例えば、実施形態は、本明細書に記載される核酸分子、すなわち、表１において示されるＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／またはＣＤＲ配列のいずれかをコードする核酸分子のいずれかを含む組換え発現ベクターを含む。かかるベクターが導入された宿主細胞、ならびに抗体または抗体断片を産生することを可能にする条件下で宿主細胞を培養し、そうして産生された抗体および抗体断片を回収することによって、本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートを調製するための抗体またはそれの一部を産生する方法も本開示の範囲内に含まれる。
本明細書に記載される抗体－薬物コンジュゲートに好適な抗ＭＳＲ１抗体としては、改変グリコシル化パターンを有するものが含まれる。一部の実施形態では、抗体は、不所望のグリコシル化部位を除去するために改変される。代替の実施形態では、抗体には、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）機能を高めるために、オリゴ糖鎖上に存在するフコース部分が欠如している（Ｓｈｉｅｌｄら（２００２）ＪＢＣ ２７７：２６７３３を参照されたい）。他の実施形態では、ガラクトシル化は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を改変するために改変される。
ある特定の実施形態によれば、本開示による抗体－薬物コンジュゲートは、例えば、中性ｐＨと比較して酸性ｐＨにおいて抗体がＦｃＲｎ受容体に結合することを強化するかまたは低減させる１つまたはそれ以上の突然変異を含むＦｃドメインを含む抗ＭＳＲ１抗体を含む。例えば、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における突然変異を含む抗ＭＳＲ１抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートであって、酸性環境において（例えば、ｐＨが約５．５から約６．０の範囲のエンドソームにおいて）突然変異がＦｃドメインのＦｃＲｎへの親和性を高める抗体－薬物コンジュゲートが本明細書において提供される。かかる突然変異は、動物に投与した場合、抗体の血清半減期の増加をもたらすことができる。かかるＦｃ改変の非限定的な例としては、例えば、２５０位（例えば、ＥもしくはＱ）；２５０位および４２８位（例えば、ＬもしくはＦ）；２５２位（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷもしくはＴ）、２５４位（例えば、ＳもしくはＴ）、および２５６位（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤもしくはＴ）における改変；または４２８位および／もしくは４３３位（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱもしくはＫ）および／もしくは４３４位（例えば、Ｈ／ＦもしくはＹ）における改変；または２５０位および／もしくは４２８位における改変；または３０７位もしくは３０８位（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）および４３４位における改変が含まれる。一実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）、および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）改変；２５２、２５４、および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅ）改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌ改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；ならびに３０７および／または３０８改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含んでいてもよい。
例えば、実施形態は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される突然変異の１つまたはそれ以上の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＭＳＲ１抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートを含む。前述のＦｃドメイン突然変異の全ての可能な組合せ、および本明細書において開示される抗体可変ドメイン内の他の突然変異が本開示の範囲内で検討される。
重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸および核酸配列
表１は、本明細書に記載される選択された抗ＭＳＲ１抗体の重鎖および軽鎖可変領域およびＣＤＲのアミノ酸配列識別子を示す。対応する核酸配列識別子は表２において示す。
Figure 2023521885000102
Figure 2023521885000103
抗体は、典型的には、表１および表２で示すように、以下の命名法にしたがって本明細書において言及される：Ｆｃ接頭語（例えば、「Ｈ１Ｈ」、「Ｈ２ａＭ」など）、続いて数字の識別子（例えば、「２１２２７」、「２１２２８」、「２１２３１」など）、続いて「Ｐ」、「Ｎ」、または「Ｐ２」接尾語。したがって、この命名法によれば、抗体は、本明細書において、例えば、「Ｈ１Ｈ２１２２７Ｎ」、「Ｈ２ａＭ２１２２８Ｎ」、「Ｈ１Ｈ２７７２９Ｐ」、「Ｈ１Ｈ２７７６０Ｐ２」などと称することができる。本明細書で使用される抗体記号の接頭語は、抗体の特定のＦｃ領域アイソタイプを示す。特に、「Ｈ１Ｈ」抗体は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃを有し（抗体記号の最初の「Ｈ」で示されるように全ての可変領域が完全なヒトである）、同時に「Ｈ２ａＭ」抗体は、マウスＩｇＧ２ａＦｃを有する。特定のＦｃアイソタイプを有する抗体は、異なるＦｃアイソタイプを有する抗体へ変換することができる（例えば、マウスＩｇＧ４Ｆｃを有する抗体は、ヒトＩｇＧ１などを有する抗体へ変換することができる）が、いずれにしても、表１および表２に示す数字の識別子によって示される可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は依然として同じままであることになり、結合特性は、Ｆｃドメインの性質にかかわらず同一であるかまたは実質的に類似していることが予想されることは当業者であれば理解するであろう。
抗体改変。本明細書に記載される抗ＭＳＲ１抗体（例えば、Ｈ１Ｈ２１２３４Ｎ）は、元のヒトＦｃγ部分、ならびに全ての３つの抗ＭＳＲ１抗体に関してＮ２９７Ｑ単一点突然変異を有する異形を用いて産生した。本明細書に記載される全ての他の抗体は、ヒトＦｃγ部分におけるＮ２９７Ｑ単一点突然変異を用いて作製した。
一部の実施形態では、タンパク質薬物コンジュゲートは、コンジュゲートを得るための既知の方法にしたがって産生され、式（Ｂ）：
Figure 2023521885000104
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造で示される構成成分を含む。ある特定の実施形態では、式Ｂのタンパク質－薬物コンジュゲート化合物は、当業者に既知の追加のリンカーおよびスペーサーも含んでいてもよい。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＢＩ）：
Figure 2023521885000105
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；ＳＰは、本明細書に記載される任意選択のスペーサーであり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＢＩＩ）：
Figure 2023521885000106
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；ＳＰは存在しないかまたは本明細書に記載されるスペーサーであり；Ｌは、本開示によるリンカーであり；Ｄは、本明細書に記載される治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
抗体または抗原結合断片の残基にコンジュゲートさせるための技術およびリンカーは、当技術分野において既知である。例示的なアミノ酸結合、例えば、リジン（例えば、ＵＳ５，２０８，０２０；ＵＳ２０１０／０１２９３１４；Ｈｏｌｌａｎｄｅｒら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２００８，１９：３５８～３６１頁；ＷＯ２００５／０８９８０８；ＵＳ５，７１４，５８６；ＵＳ２０１３／０１０１５４６；およびＵＳ２０１２／０５８５５９２を参照されたい）、システイン（例えば、ＵＳ２００７／０２５８９８７；ＷＯ２０１３／０５５９９３；ＷＯ２０１３／０５５９９０；ＷＯ２０１３／０５３８７３；ＷＯ２０１３／０５３８７２；ＷＯ２０１１／１３０５９８；ＵＳ２０１３／０１０１５４６；およびＵＳ７，７５０，１１６を参照されたい）、セレノシステイン（例えば、ＷＯ２００８／１２２０３９；およびＨｏｆｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，２００８，１０５：１２４５１～１２４５６頁を参照されたい）、ホルミルグリシン（例えば、Ｃａｒｒｉｃｏら，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００７，３：３２１～３２２頁；Ａｇａｒｗａｌら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，２０１３，１１０：４６～５１頁、およびＲａｂｕｋａら，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２０１２，１０：１０５２～１０６７頁を参照されたい）、非天然アミノ酸（例えば、ＷＯ２０１３／０６８８７４、およびＷＯ２０１２／１６６５５９を参照されたい）、ならびに酸性アミノ酸（例えば、ＷＯ２０１２／０５９８２を参照されたい）を、この態様の文脈において使用してもよい。リジンコンジュゲートは、ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）を通して開始することもできる。リンカーは、チオール間に炭素ブリッジを形成することによって、切断された鎖間ジスルフィド結合のシステイン残基を含むシステイン残基にもコンジュゲートすることができる（例えば、ＵＳ９，９５１，１４１、およびＵＳ９，９５０，０７６を参照されたい）。リンカーは、炭水化物への結合を介して抗原－結合タンパク質（例えば、ＵＳ２００８／０３０５４９７、ＷＯ２０１４／０６５６６１およびＲｙａｎら，Ｆｏｏｄ ＆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００１，１３：１２７～１３０頁を参照されたい）、ならびにジスルフィドリンカー（例えば、ＷＯ２０１３／０８５９２５、ＷＯ２０１０／０１０３２４、ＷＯ２０１１／０１８６１１、およびＳｈａｕｎａｋら，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００６，２：３１２～３１３頁を参照されたい）にもコンジュゲートすることができる。部位特異的コンジュゲート技術を、抗体または抗原結合タンパク質の特定の残基に直接コンジュゲートさせるために用いてもよい（例えば、Ｓｃｈｕｍａｃｈｅｒら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２０１６）３６（Ｓｕｐｐｌ １）：１００を参照されたい）。以下でさらに詳述する特定の実施形態では、部位特異的コンジュゲート技術としては、トランスグルタミナーゼを介したグルタミンコンジュゲートが含まれる（例えば、Ｓｃｈｉｂｌｉ，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒ Ｅｄ．２０１０，４９，９９９５頁を参照されたい）。
トランスグルタミナーゼ介在性部位特異的コンジュゲート
一部の実施形態では、タンパク質薬物コンジュゲートは、グルタミニル修飾タンパク質を提供するための既知の方法にしたがって産生される。第一級アミン化合物をコンジュゲートするための技術は、当技術分野において既知である。部位特異的コンジュゲート技術は、トランスグルタミナーゼを介したグルタミンコンジュゲートを使用してグルタミンに直接コンジュゲートするために本明細書において用いられる（例えば、Ｓｃｈｉｂｌｉ，Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒ Ｅｄ．２０１０，４９，９９９５頁を参照されたい）。
本開示の第一級アミン含有化合物は、トランスグルタミナーゼベースの化学酵素コンジュゲートを介して１つまたはそれ以上のグルタミン残基にコンジュゲートしてもよい（例えば、Ｄｅｎｎｌｅｒら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１４，２５，５６９～５７８頁、およびＷＯ２０１７／１４７５４２を参照されたい）。例えば、トランスグルタミナーゼの存在下、抗体の１つまたはそれ以上のグルタミン残基は、第一級アミンリンカー化合物と結合することができる。簡潔には、一部の実施形態では、グルタミン残基（例えば、Ｇｌｎ２９５、すなわちＱ２９５残基）を有する結合剤は、トランスグルタミナーゼ酵素の存在下、以下でより詳細に記載される第一級アミン化合物で処置されている。ある特定の実施形態では、結合剤はアグリコシル化されている。ある特定の実施形態では、結合剤は脱グリコシル化されている。
ある特定の実施形態では、結合剤は、少なくとも１つのポリペプチド鎖配列において少なくとも１つのグルタミン残基を含む。ある特定の実施形態では、結合剤は２つの重鎖ポリペプチドを含み、それぞれが１つのＧｌｎ２９５残基を有している。さらなる実施形態では、結合剤は、重鎖２９５以外の部位において１つまたはそれ以上のグルタミン残基を含む。一部の実施形態では、結合剤、例えば抗体は、抗体の機能または結合を機能させないようにすることなく、部位にグルタミン残基を挿入するための部位特異的な突然変異誘発によって調製することができる。例えば、本明細書に記載されるＡｓｎ２９７Ｇｌｎ（Ｎ２９７Ｑ）突然変異を有する抗体が本明細書において含まれる。一部の実施形態では、Ｇｌｎ２９５残基および／またはＮ２９７Ｑ突然変異を有する抗体は、トランスグルタミナーゼにアクセスすることができるそれらの可変領域において１つまたはそれ以上の追加の天然発生のグルタミン残基を含み、その結果、リンカーまたはリンカー－ペイロードにコンジュゲートすることができる。例示的な天然発生のグルタミン残基は、例えば軽鎖のＱ５５において認めることができる。そのような場合では、トランスグルタミナーゼを介してコンジュゲートされた結合剤、例えば抗体は、予想よりも高いＤＡＲ値（例えば、４を超えるＤＡＲ）を有することができる。いずれのかかる抗体も、天然または人工の供給源から単離することができる。
本開示のある特定の実施形態では、ＤＡＲは、１抗体当たり１、２、３、４、５、６、７、または８個の薬物分子である。一部の実施形態では、ＤＡＲは１から８である。一部の実施形態では、ＤＡＲは１から６である。ある特定の実施形態では、ＤＡＲは２から４である。一部の場合において、ＤＡＲは２から３である。ある特定の場合において、ＤＡＲは０．５から３．５である。一部の実施形態では、ＤＡＲは、約１、または約１．５、または約２、または約２．５、または約３、または約３．５である。
第一級アミン化合物
グルタミン残基を含む結合剤（例えば、抗体または抗原結合化合物）のトランスグルタミナーゼ介在性カップリングに有用である第一級アミン化合物は、当業者によって有用とみなされる任意の第一級アミンであってもよい。
反応性第一級アミン化合物
ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、トランスグルタミネーション後にさらに反応することができる反応性基を含む。これらの実施形態では、グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、本明細書において開示される反応性ペイロード化合物または反応性リンカー－ペイロード化合物とさらに反応して、タンパク質－ペイロードコンジュゲートを形成することができる。より具体的には、反応性ペイロード化合物または反応性リンカー－ペイロード化合物は、第一級アミン化合物の反応性基と反応することができる反応性基を含む。ある特定の実施形態では、本開示による反応性基は、ディールス－アルダー環状付加を受けることができる部分を含む。ある特定の実施形態では、反応性基はジエンである。ある特定の実施形態では、反応性基はジエノフィルである。本開示のある特定の実施形態では、反応性基は、結合剤およびトランスグルタミネーション反応条件に適合する。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物、ＮＨ２－ＳＰ－Ｗが提供される（式中、ＳＰは任意選択であり、スペーサーを含み；Ｗは、ジエンまたはジエノフィルを含む）。ある特定の実施形態では、Ｗは、本明細書に定義されるようなジエン（Ｘ）またはジエノフィル（Ｙ）を含む。
ジエン、Ｘ
本開示のある特定の実施形態は、以下の式３または４によるジエン部分Ｘ：
Figure 2023521885000107
 （式中、Ｒは、ＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯである）を含む。
本開示のある特定の実施形態は：
Figure 2023521885000108
 （式中、Ｒは、Ｈまたは電子供与基である）から選択される構造によるジエン部分Ｘを含む。
本開示のある特定の非限定的な実施形態は：
Figure 2023521885000109
 から選択される構造によるジエン部分Ｘを含む。
本開示のある特定の実施形態は：
Figure 2023521885000110
 （式中、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈまたは電子供与基である）から選択される構造によるジエン部分Ｘを含む。
本開示のある特定の実施形態は：
Figure 2023521885000111
 から選択される構造によるジエン部分Ｘを含む。
本開示のある特定の実施形態は：
Figure 2023521885000112
 から選択される構造によるジエン部分Ｘを含む。
本開示のある特定の実施形態は、以下の構造：
Figure 2023521885000113
 のうちの１つによるシクロペンタジエンまたはメチル置換シクロペンタジエンを含む。
本開示による実施形態では、反応性第一級アミン化合物ＮＨ２－ＳＰ－Ｘが提供される（式中、ＳＰは任意選択であり、スペーサーを含み；Ｘはジエンを含む部分である）。
本開示によるある特定の実施形態では、以下の構造：
Figure 2023521885000114
 （式中、Ｒは、ＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯである）による反応性第一級アミン化合物が提供される。
本開示によるある特定の実施形態では、以下の構造：
Figure 2023521885000115
 （式中、Ｒは、ＨまたはＣ１～３アルキルであり、Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯである）による反応性第一級アミン化合物が提供される。
本開示によるある特定の実施形態では、以下の構造：
Figure 2023521885000116
 による反応性第一級アミン化合物が提供される。
ある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物は以下の構造：
Figure 2023521885000117
 のうちの１つによるものであるか、またはこれらの混合物である。
ジエノフィル、Ｙ
本開示のある特定の実施形態は、以下の式５または６：
Figure 2023521885000118
 （式中：Ｒ’は、ＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000119
 、またはＮＨ－Ｎである）によるジエノフィル部分Ｙを含む。
本開示のある特定の非限定的な実施形態は、以下の構造：
Figure 2023521885000120
 のうちの１つによるジエノフィル部分Ｙを含む。
本開示のある特定の実施形態は、以下の構造：
Figure 2023521885000121
 （式中、Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000122
 、またはＮＨ－Ｎである）のうちの１つによるジエノフィル部分Ｙを含む。
本開示のある特定の実施形態は、以下の構造：
Figure 2023521885000123
 （式中：Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮである）のうちの１つによるジエノフィル部分Ｙを含む。
本開示のある特定の非限定的な実施形態は、以下の構造：
Figure 2023521885000124
 のうちの１つによるジエノフィル部分Ｙを含む。
ある特定の実施形態では、ジエノフィル部分は、式６ａ：
Figure 2023521885000125
 によるマレイミドを含む。
さらなる実施形態では、反応性第一級アミン化合物ＮＨ２－ＳＰ－Ｙが提供される（式中、ＳＰは任意選択であり、スペーサーを含み；Ｙは、ジエノフィルを含む部分である）。
ある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000126
 （式中：Ｒ’は、ＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000127
 、またはＮＨ－Ｎである）のうちの１つによるジエノフィルを含む。
ある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000128
 （式中、Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000129
 、またはＮＨ－Ｎである）のうちの１つによるジエノフィルを含む。
ある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000130
 のうちの１つによるジエノフィルを含む。
ある特定の実施形態では、反応性第一級アミン化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000131
 によるマレイミドを含む。
スペーサーＳＰ
本明細書に記載されるある特定の実施形態では、ＳＰは、場合により存在し、－（ＣＨ２）ｕ－、－（（ＣＨ２）ｕ－Ｏ－）ｖ－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－、およびこれらの組合せからなる群から選択されるスペーサーを含む（式中、下付き文字ｕおよびｖは、出現する毎に独立して、１から２０までの整数であり、スペーサー連結性は、順方向、例えばＨ２Ｎ－（（ＣＨ２）ｕ－Ｏ－）ｖ－Ｗに構成しても、逆方向、例えばＨ２Ｎ－（－Ｏ－（ＣＨ２）ｕ）ｖ－Ｗに構成してもよい。
ある特定の実施形態では、ＳＰは、ジエンもしくはジエノフィル、またはディールス－アルダー付加体に共有結合している１つの連結基を含む。かかるＳＰは「直鎖状」として既知である。
他の実施形態では、ＳＰは、２つのジエンもしくはジエノフィル、または２つのディールス－アルダー付加体に共有結合している２つの連結基を含む。他の実施形態では、ＳＰは、３つのジエンもしくはジエノフィル、または３つのディールス－アルダー付加体に共有結合している３つの連結基を含む。かかるＳＰは「分岐状」として既知である。
一実施形態では、ＳＰは、１つのジエンに共有結合している。一実施形態では、ＳＰは、１つのディールス－アルダー付加体に共有結合している。
一実施形態では、ＳＰは、２つのジエンに共有結合している。一実施形態では、ＳＰは、２つのディールス－アルダー付加体に共有結合している。この想定では、ＳＰは、互いに同じであるかまたは異なる２つのジエンまたはディールス－アルダー付加体に結合していてもよい。一実施形態では、ＳＰは、２つの異なるジエンに結合している。別の実施形態では、ＳＰは、２つの異なるディールス－アルダー付加体に結合している。
分岐状ＳＰの例としては、これらに限定されるものではないが、
Figure 2023521885000132
 が挙げられる（式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して、１から２０までの整数である）。
本開示のある特定の実施形態では、ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－（ＣＨ２）ｕ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、
Figure 2023521885000133
 から選択されるスペーサー、およびこれらの組合せを含む（式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗおよびｘは、独立して、１から２０までの整数である）。
本開示のある特定の実施形態では、ＳＰは－（ＣＨ２）２－である。
特定の実施形態では、ＳＰは、１から２０個のＰＥＧモノマーを有する二価ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基である。本明細書で使用される場合、「ＰＥＧ＃」は、末端酸素原子および末端炭素原子を介して結合している二価エチレングリコール部分を指し、ここで、＃は１から１００である。例えば、＃が１である場合、ＰＥＧ１は、－ＯＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－であり；＃が２である場合、ＰＥＧ２は、－ＯＣＨ２ＣＨ２－ＯＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－であり；＃が３である場合、ＰＥＧ３は、－ＯＣＨ２ＣＨ２－ＯＣＨ２ＣＨ２－ＯＣＨ２ＣＨ２－または－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－である。ある特定の実施形態では、ＳＰは、８個のＰＥＧモノマーを含むＰＥＧ８である。
ある特定の実施形態では、第一級アミン－スペーサー化合物は、以下の式のうちの１つによるものである：
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）ｕ－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｕ’－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ’－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）ｕ’－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）ｕ－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ’－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ’－Ｗ；および
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）ｕ－Ｗ；
（式中、ｕ、ｕ’、ｖおよびｖ’の各下付き文字は、独立して、１から１２から選択される整数であり、Ｗは、上記で定義されるジエン（Ｘ）またはジエノフィル（Ｙ）を含む）。
ある特定の実施形態では、第一級アミン－スペーサー化合物は以下から選択される：
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）（１～８）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（１～８）－（ＣＨ２）（０～２）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）（１～８）－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）（０～８）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（１～８）－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－（ＣＨ２）（０～２）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）（１～８）－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）（０～８）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（１～８）－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－（ＣＨ２）（０～２）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）（１～８）－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－（ＣＨ２）（０～２）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－（ＣＨ２）（０～８）－Ｗ；
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２）（０～８）－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－（ＣＨ２）（０～２）－Ｗ；および
Ｈ２Ｎ－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）（０～８）－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）（０～８）－Ｗ；
（式中、Ｗは、上記で定義されるジエン（Ｘ）またはジエノフィル（Ｙ）を含む）。
ある特定の実施形態では、アルキルまたはアルキレン（すなわち、－ＣＨ２－）基のいずれかは、例えば、Ｃ１～８アルキル、メチルホルミル、または－ＳＯ３Ｈで場合により置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、アルキル基は置換されていない。
グルタミニル修飾タンパク質
グルタミニル修飾タンパク質、例えば、本明細書に定義されるような１つまたはそれ以上の反応性第一級アミン化合物とコンジュゲートされた結合剤を含む抗体が本明細書において提供される。
ある特定の実施形態では、アグリコシル化抗体は、本開示による反応性第一級アミン化合物と接触させて、本明細書においてより詳細に論じられるグルタミニル修飾抗体を産生する。ある特定の実施形態では、脱グリコシル化抗体は、反応性第一級アミン化合物と反応させて、グルタミニル修飾抗体を産生する。この説明の目的で、脱グリコシル化抗体は、当業者によって好適とみなされる任意の供給源からまたは任意の技術によって得ても産生してもよい。ある特定の実施形態では、抗体は、以下の工程（１）にしたがって脱グリコシル化される。さらなる実施形態では、脱グリコシル化またはアグリコシル化抗体は、グリコシル化に十分干渉することがない少なくとも１つのグルタミン残基、または以下で記載するようなトランスグルタミナーゼとの反応に利用できる他の構造を含むことで十分である。
反応性第一級アミン化合物は、トランスグルタミナーゼの存在下でグルタミン残基と共有結合を形成することができ、本明細書に記載される反応性基Ｗを含む（ＸおよびＺを含む）ことができる任意の第一級アミンであってもよい。有用な第一級アミンは本明細書において一セクションに記載される。
ある特定の実施形態では、本開示によるグルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｗ）：
Figure 2023521885000134
 （式中：ＢＡは結合剤であり；ＳＰは、存在しないかまたはスペーサーであり；Ｗは、ジエンまたはジエノフィル部分を含み、ｌは１から１０までの整数である）による構造を有する。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｘ）：
Figure 2023521885000135
 （式中：ＢＡは結合剤であり；ＳＰは、存在しないかまたはスペーサーであり；Ｘは、ジエンを含む部分であり、ｌは１から１０までの整数である）による構造を有する。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｙ）：
Figure 2023521885000136
 （式中：ＢＡは結合剤であり；ＳＰは、存在しないかまたはスペーサーであり；Ｙは、ジエノフィルを含む部分であり、ｌは１から１０までの整数である）による構造を有する。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｘ１）：
Figure 2023521885000137
 （式中：ＢＡは結合剤であり；ｌは１から１０までの整数である）による構造を有する。ある特定の実施形態では、ＢＡはトラスツズマブである。ある特定の実施形態では、ＢＡは、抗ＭＳＲ１抗体、例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎである。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｘ２）：
Figure 2023521885000138
 （式中：ＢＡは結合剤であり、ｌおよびｎは、独立して、１から１０までの整数である）による構造を有する。ある特定の実施形態では、ＢＡはトラスツズマブである。ある特定の実施形態では、ＢＡは、抗ＭＳＲ１抗体、例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎである。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｘ３）：
Figure 2023521885000139
 （式中：ＢＡは結合剤であり、ｌおよびｎは、独立して、１から１０までの整数である）による構造を有する。ある特定の実施形態では、ＢＡはトラスツズマブである。ある特定の実施形態では、ＢＡは、抗ＭＳＲ１抗体、例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎである。
ある特定の実施形態では、本開示による反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、式（Ｖ－Ｘ４）：
Figure 2023521885000140
 （式中：ＢＡは結合剤であり、ｌおよびｎは、独立して、１から１０までの整数である）による構造を有する。ある特定の実施形態では、ＢＡはトラスツズマブである。ある特定の実施形態では、ＢＡは、抗ＭＳＲ１抗体、例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎである。
本開示のある特定の実施形態では、リンカー－抗体比またはＬＡＲ（例えば、上記のＶ－Ｗ、Ｖ－ＸおよびＶ－Ｙの式において、例えば、小文字の「ｌ」として略される）は、１抗体当たり１、２、３、４、５、６、７、または８個の薬物分子である。一部の実施形態では、ＬＡＲは１から８である。一部の実施形態では、ＬＡＲは１から６である。ある特定の実施形態では、ＬＡＲは２から４である。一部の場合では、ＬＡＲは２から３である。ある特定の場合では、ＬＡＲは０．５から３．５である。一部の実施形態では、ＬＡＲは、約１、または約１．５、または約２、または約２．５、または約３、または約３．５である。
本開示によるある特定の実施形態では、ｌは１から１０、１から９、１から８、１から７、１から６、１から５、１から４、１から３、１から２、２から１０、２から９、２から８、２から７、２から６、２から５、２から４、２から３、３から１０、３から９、３から８、３から７、３から６、３から５、３から４、４から１０、４から９、４から８、４から７、４から６、または４から５までの整数である。ある特定の実施形態では、ｌは、１から４、１から３、１から２、２から４、２から３、または３から４までの整数である。ある特定の実施形態では、ｌは２である。ある特定の実施形態では、ｄは３である。ある特定の実施形態では、ｌは４である。一部の実施形態では、ｌは４である。
ある特定の実施形態では、ＢＡは、２つまたは４つのグルタミン残基を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、ＢＡは、Ｑ２９５残基を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、ＢＡは、Ｎ２９７Ｑ突然変異を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、ＢＡは、Ｑ２９５およびＮ２９７Ｑを含んでいてもよい。かかる実施形態では、ＢＡがダイマーである場合があるため、ＢＡは、トランスグルタミナーゼおよび反応性第一級アミン化合物のために４つのグルタミン残基を有する。かかる実施形態では、ｌは、１から４である。ある特定の実施形態では、ｌは２である。ある特定の実施形態では、ｌは３である。ある特定の実施形態では、ｌは４である。
式（ＩＶ－Ｘ）の反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、例えば、反応性リンカー－ペイロード分子、例えば、Ｙ－Ｌ－Ｄとのディールス－アルダー環状付加反応を経て、タンパク質－薬物コンジュゲートを形成するのに有用である。
式（ＩＶ－Ｙ）の反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、例えば、反応性リンカー－ペイロード分子、例えば、Ｘ－Ｌ－Ｄとのディールス－アルダー環状付加反応を経て、タンパク質－薬物コンジュゲートを形成するのに有用である。
反応性リンカー－ペイロード化合物
一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、式Ｗ－Ｌ－Ｄによる化合物であり、反応性リンカー－ペイロード化合物は、二価のリンカーＬ、反応性基Ｗ、およびペイロードＤを含み、Ｗは、本明細書に記載されるグルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）の反応性基と反応することができる。論じられるように、反応性グルタミニル修飾タンパク質（例えば、ＢＡ－［Ｇｌｎ－ＮＨ－ＳＰ－Ｗ］ｌ）と反応性リンカー－ペイロード化合物（例えば、Ｗ－Ｌ－Ｄ）とを接触させて、本明細書に記載されるタンパク質－薬物コンジュゲート（例えば、ＢＡ－［Ｇｌｎ－ＮＨ－ＳＰ－Ｚ－Ｌ－Ｄ］ｄ）を形成する工程を含む方法が本開示に含まれる。
ある特定の実施形態では、本開示の反応性リンカー－ペイロード化合物は、本明細書におけるセクションで定義されるジエン（Ｘ）を含む。ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、本明細書におけるセクションで定義されるジエノフィル（Ｙ）を含む。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロードは、以下の構造：
Figure 2023521885000141
 （式中、ＲはＨまたは電子供与基であり；Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯであり；ここで、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）によるものである。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロードは、以下の構造：
Figure 2023521885000142
 （式中、Ｒは、ＨまたはＣ１～３アルキルであり、Ｑは、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯであり；ここで、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）によるものである。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000143
 （式中、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）のうちの１つによるものである。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000144
 （式中、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）のうちの１つによるものであるか、またはこれらの混合物である。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000145
 （式中、：Ｒ’は、ＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000146
 、またはＮＨ－Ｎであり；ここで、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）のうちの１つによるものである。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000147
 （式中、Ｋは、ＣＨ、Ｎ、
Figure 2023521885000148
 、またはＮＨ－Ｎであり；ここで、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような治療部分および／または造影剤部分である）のうちの１つによるものである。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000149
 （式中、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような部分である）のうちの１つによるものである。
ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物はマレイミド部分を含む。ある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000150
 （式中、Ｌは、本明細書に定義されるようなリンカーであり、Ｄは、本明細書に定義されるような部分である）によるものである。
リンカー
本明細書で使用される場合、「リンカー」または「リンカー単位」は、本明細書に記載される、反応性基、例えば、Ｗ、Ｘ、もしくはＹ、またはディールス－アルダー付加体Ｚを、１つまたはそれ以上の治療部分Ｄに共有結合させる任意の二価の部分－Ｌを指す。一般的に、本明細書に記載される抗体コンジュゲートおよび治療部分に好適なリンカーは、抗体の循環半減期を利用するのに十分に安定であり、同時に、コンジュゲートの抗原－介在性内在化後にそのペイロードを放出することができるものである。一般的に、リンカーは、本明細書に記載される任意のスペーサーも含んでいてもよい。
リンカーは、切断可能であっても切断不可能であってもよい。切断可能なリンカーとしては、内在化後に細胞内代謝によって切断される、例えば、加水分解、還元、または酵素反応を介して切断されるリンカーが含まれる。切断不可能なリンカーとしては、内在化後に抗体のリソソーム分解を介して、結合しているペイロードを放出するリンカーが含まれる。
一部の実施形態では、好適なリンカーとしては、これらに限定されるものではないが、酸に不安定なリンカー、加水分解に不安定なリンカー、酵素的に切断可能なリンカー、還元に不安定なリンカー、自己崩壊性（ｓｅｌｆ－ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）リンカー、および切断不可能なリンカーが含まれる。ある特定の実施形態では、リンカーは切断可能なリンカーである。他の実施形態によれば、リンカーは切断不可能なリンカーである。
好適なリンカーとしては、これらに限定されるものではないが、１つまたはそれ以上のアミノ酸、グルクロニド、スクシンイミド－チオエーテル、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）単位、ヒドラゾン、ｍａｌ－カプロイル単位、ジペプチド単位、バリン－シトルリン単位、バリン－アラニン単位およびパラ－アミノベンジル単位であるかまたはこれらを含むものも含まれる。当技術分野において既知のいずれのリンカー分子またはリンカー技術も、本開示のＡＤＣを生成または構築するために使用してもよい。本開示の文脈において使用してもよい例示的なリンカーとしては、例えば、ＭＣ（６－マレイミドカプロイル）、ＭＰ（マレイミドプロパノイル）、ｖａｌ－ｃｉｔ（バリン－シトルリン）、ｖａｌ－ａｌａ（バリン－アラニン）、ｖａｌ－ｇｌｙ（バリン－グリシン）、プロテアーゼ－切断可能リンカーにおけるジペプチド部位、ａｌａ－ｐｈｅ（アラニン－フェニルアラニン）、プロテアーゼ－切断可能リンカーにおけるジペプチド部位、ｐ－アミノベンジル、ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル、ＳＰＰ（Ｎ－スクシンイミジル４－（２－ピリジルチオ）ペンタノエート）、ＳＭＣＣ（Ｎ－スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１カルボキシレート）、ＳＩＡＢ（Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノ安息香酸）、およびバリアント、ならびにこれらの組合せを含むかまたはこれらからなるリンカーが含まれる。本開示の文脈において使用してもよいリンカーの追加の例は、例えば、ＵＳ７，７５４，６８１およびＤｕｃｒｙ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，２０１０，２１：５～１３頁、およびこれらに引用されている文献において提供され、これらの内容はそれら全体が参照によって本明細書に組み入れるものとする。
一部の実施形態では、リンカーは、１つまたはそれ以上のアミノ酸を含む。好適なアミノ酸としては、天然、非天然、標準的、非標準的、タンパク質原生、非タンパク質原生、およびＬ－またはＤ－アルファ－アミノ酸が含まれる。一部の実施形態では、リンカーは、アラニン、バリン、グリシン、ロイシン、イソロイシン、メチオニン、トリプトファン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、ヒスチジン、もしくはシトルリン、これらの誘導体、またはこれらの組合せを含む。
一部の実施形態では、リンカーは、ペプチドとも称される２つ以上のアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、リンカーは、バリン－シトルリン、シトルリン－バリン、リジン－フェニルアラニン、フェニルアラニン－リジン、バリン－アスパラギン、アスパラギン－バリン、トレオニン－アスパラギン、セリン－アスパラギン、アスパラギン－セリン、フェニルアラニン－アスパラギン、アスパラギン－フェニルアラニン、ロイシン－アスパラギン、アスパラギン－ロイシン、イソロイシン－アスパラギン、アスパラギン－イソロイシン、グリシン－アスパラギン、アスパラギン－グリシン、グルタミン酸－アスパラギン、アスパラギン－グルタミン酸、シトルリン－アスパラギン、アスパラギン－シトルリン、アラニン－アスパラギン、およびアスパラギン－アラニンからなる群から選択されるジペプチドとも称される２つのアミノ酸を含む。ある特定の実施形態では、ペプチドは、バリン－シトルリン；シトルリン－バリン；バリン－アラニン；アラニン－バリン；バリン－グリシン、またはグリシン－バリンである。一部の実施形態では、リンカーは、バリンおよびシトルリンを含む。一部の実施形態では、リンカーは、バリンおよびアラニンを含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、アミノ酸またはペプチドと、－ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－）ｍ－、－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－、
Figure 2023521885000151
 から選択される１つまたはそれ以上とを含む（式中、下付き文字ｎおよびｍは、独立して、１から２０までの整数である）。
さらなる実施形態では、リンカーは、アミノ酸またはペプチドと、－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－、－（ＣＨ２）ｎ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｍ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－（ＣＨ２）ｎ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｍ－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｎ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｎ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－およびこれらの組合せから選択される１つまたはそれ以上とを含む（式中、下付き文字ｎおよびｍは、独立して、１から２０までの整数である）。ある特定の実施形態では、下付き文字ｎおよびｍは、独立して、１から１０までの整数である。ある特定の実施形態では、下付き文字ｎおよびｍは、独立して、１から５までの整数である。
一部の実施形態では、リンカーは自己崩壊性官能基を含む。自己崩壊性官能基は、当業者に既知の任意のそのような基であってもよい。特定の実施形態では、自己崩壊性官能基は、
Figure 2023521885000152
 （ｐ－アミノベンジルもしくはＰＡＢ）、またはこれらの誘導体である。有用な誘導体としては、
Figure 2023521885000153
 （ｐ－アミノベンジルオキシカルボニルまたはＰＡＢＣ）が含まれる。当業者であれば、自己崩壊性官能基は、ペイロード（すなわち、治療部分または造影剤部分）からリンカーの残りの原子を放出する化学的反応を起こすことができることは認識するであろう。本明細書で使用される場合、「自己崩壊性リンカー」という用語は、２つの化学的部分を一緒に共有結合することができる化学的部分を指す。一部の実施形態では、リンカーは、第１の部分へのその結合が切断された場合、治療部分または造影剤部分から分離することになる。ある特定の実施形態では、自己崩壊性部分は、治療部分（例えば、薬物）とリンカーのジペプチド単位とを連結する。細胞内酵素によってペプチド配列が切断される際、自己崩壊性部分は、薬物部分からそれ自体を切断し、その結果、薬物部分は誘導体化されていない活性型になる。
ＰＡＢおよびＰＡＢＣリンカー単位は、電子カスケードスペーサーとも称される。ペプチド単位のカルボキシ末端とＰＡＢのパラ－アミノベンジルとを連結するアミド結合は、基質であってもよく、ある特定のプロテアーゼによって切断可能である。芳香族アミンは電子－供与性になり、脱離基の除去につながる電子カスケードを開始し、それが、二酸化炭素が脱離した後に遊離薬物を放出する（ｄｅ Ｇｒｏｏｔら（２００１）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６６（２６）：８８１５～８８３０頁）。ＰＡＢ／ＰＡＢＣに近接したペプチド結合が切断される、すなわち細胞内酵素によって切断される際、薬物が配位子から放出され、それによって、結合しているリンカーの残りの部分はない（ｄｅ Ｇｒｏｏｔら（２００２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ １（１１）：９０１～９１１頁；ｄｅ Ｇｒｏｏｔら（１９９９）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２（２５）：５２７７～５２８３頁）。
一部の実施形態では、アミノ酸またはペプチドを含むリンカーは、がんまたは腫瘍関連プロテアーゼを含む１つまたはそれ以上の酵素によって酵素的に切断されて、部分（－Ｄ）を開放してもよく、一実施形態では、これが、放出される際にｉｎ ｖｉｖｏでプロトン化されて、治療部分を提供する。ある特定の実施形態では、１つまたはそれ以上のアミノ酸またはペプチドは天然アミノ酸を含む。他の実施形態では、アミノ酸またはペプチドは非天然アミノ酸を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、
Figure 2023521885000154
 から選択される構造を含む。
ある特定の実施形態では、リンカーは、
Figure 2023521885000155
 から選択される構造を含む。
ある特定の実施形態では、部分Ｄは、リンカーＬへの結合点であるアミノ基を含む。かかる部分は、ＤＮとして示すことができる。ＤＮを含む本開示のある特定の実施形態では、アミノ基は、リンカーにおける自己崩壊性部分に連結されている。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造によるものである（式中、ＤＮとして示される部分は、リンカーへの結合点であるアミノ基を含む）：
Figure 2023521885000156
式（ＩＩＩ－Ａ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、メイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造によるものである（式中、ＤＮとして示される部分は、リンカーへの結合点であるアミノ基を含む）：
Figure 2023521885000157
式（ＩＩＩ－Ｂ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）またはそれのアナログもしくは誘導体である。一実施形態では、ＤＮはＰＢＤ－１である。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造によるものである（式中、ＤＮとして示される部分は、リンカーへの結合点であるアミノ基を含む：
Figure 2023521885000158
式（ＩＩＩ－Ｃ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、リファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるペイロードＤＮ（例えば、リファマイシンアナログ）は第三級アミンを含み、その第三級アミンにおける窒素原子は、ペイロードをリンカーに結合させる原子である。そのような場合では、ペイロードの第三級アミンへの結合は、リンカー－ペイロード分子において第四級アミンをもたらす。第四級アミン上の正荷電は、対イオン（例えば、クロロ、ブロモ、ヨード、またはその他の任意の好適に荷電された部分、例えば本明細書に記載されるもの）によってバランスをとることができる。
そのような例としては、反応性リンカー－ペイロード分子がリファマイシンアナログを含み、以下の式（ＩＩＩ－Ｃ１）によるものであり、
Figure 2023521885000159
 、本明細書においてｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇとも称される実施形態が挙げられる。
ある特定の実施形態では、ＰＡＢ部分が、治療部分および／または造影剤部分に対して内因的である第二級アミン窒素に連結して、式（ＩＩＩ－Ｃ１）に示す第四級アミンを形成する場合、リンカーはＰＡＢＱリンカーと称される。
本明細書に記載されるペイロードＤＮ（例えば、ＭＭＡＥ）を有する一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード分子は、以下の式（ＩＩＩ－Ａ１）によるものである：
Figure 2023521885000160
本明細書に記載されるペイロードＤＮ（例えば、ＰＢＤ－１）を有する一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード分子は、以下の式（ＩＩＩ－Ｂ１）によるものである：
Figure 2023521885000161
ある特定の実施形態では、本開示は、式（Ｉ－Ｎ）：
Figure 2023521885000162
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは、本明細書に記載される任意選択のスペーサーであり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｌは、本開示によるリンカーであり；ＤＮは、リンカーＬへの結合点であるアミノ基を含む治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
ある特定の実施形態では、本開示は、式（ＩＶ－Ｎ）：
Figure 2023521885000163
 （式中：ＢＡは、本明細書に記載される結合剤であり；Ｇｌｎはグルタミン残基であり；ＳＰは、本明細書に記載される任意選択のスペーサーであり；Ｚは、本明細書に記載されるディールス－アルダー付加体を含み；Ｌは、本開示によるリンカーであり；ＤＮは、リンカーＬへの結合点であるアミノ基を含む治療部分および／または造影剤部分であり、ｄは１から１０までの整数である）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲート化合物を提供する。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000164
 は、式（ＩＶ－ＮＡ）：
Figure 2023521885000165
 （式中、
Figure 2023521885000166
 は、任意選択のスペーサーまたは結合剤断片に結合している）によるものである。
式（ＩＶ－ＮＡ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、本明細書に記載されるメイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000167
 は、式（ＩＶ－ＮＡ１）：
Figure 2023521885000168
 によるものである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000169
 は、式（ＩＶ－ＮＢ）：
Figure 2023521885000170
 （式中、
Figure 2023521885000171
 は、任意選択のスペーサーまたは結合剤断片に結合している）によるものである。
式（ＩＶ－ＮＢ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、または本明細書に記載されるそれのアナログもしくは誘導体である。一実施形態では、ＤＮはＰＢＤ－１である。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000172
 は、式（ＩＶ－ＮＢ１）：
Figure 2023521885000173
 （式中、
Figure 2023521885000174
 は、任意選択のスペーサーまたは結合剤断片に結合している）によるものである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000175
 は、式（ＩＶ－ＮＣ）：
Figure 2023521885000176
 （式中、
Figure 2023521885000177
 は、任意選択のスペーサーまたは結合剤断片に結合している）によるものである。
式（ＩＶ－ＮＣ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、ＤＮは、リファマイシンまたは本明細書に記載されるそれのアナログもしくは誘導体である。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000178
 は、式（ＩＶ－ＮＣ１）：
Figure 2023521885000179
 （式中、
Figure 2023521885000180
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）によるものである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000181
 は、式（ＩＶ－ＮＣ２）：
Figure 2023521885000182
 （式中、
Figure 2023521885000183
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）によるものである。
治療部分－Ｄ
本開示の実施形態では、Ｄは、有用とみなされる任意の治療部分および／または造影剤部分であってもよい。一態様では、治療部分は、細胞成長の阻害、延滞、低下、および／または阻止をもたらす化合物である。治療部分は、壊死またはアポトーシスを介した細胞死ももたらす場合がある。
本明細書に記載されるコンジュゲート化合物において使用するための例示の治療部分としては：抗がんおよび抗真菌活性を有することが示されている極めて強力な抗有糸分裂剤であるドラスタチン、ならびにそれのペプチドアナログおよび誘導体であるアウリスタチンが挙げられる。例えば、米国特許第５，６６３，１４９号およびＰｅｔｔｉｔら，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１～２９６５頁（１９９８）を参照されたい。例示的なドラスタチンおよびアウリスタチンとしては、これらに限定されるものではないが、アウリスタチンＥ、アウリスタチンＥＢ（ＡＥＢ）、アウリスタチンＥＦＰ（ＡＥＦＰ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、モノメチルアウリスタチン－Ｄ（ＭＭＡＤ）、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、および５－ベンゾイル吉草酸－ＡＥエステル（ＡＥＶＢ）が挙げられる。ある特定の実施形態では、ドラスタチン誘導体またはアナログは、ＭＭＡＦである。
本明細書に記載されるコンジュゲート化合物において使用するための例示の治療部分としては：メイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ４など）、アウリスタチン（例えば、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＤ、ＭＭＡＦなど）、デュオカルマイシン（例えば、ＭＧＢＡ）、ドラスタチン、トキソイド、および他の化学療法的に有効な薬物が挙げられる。
一実施形態では、治療部分は、メイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。本明細書で使用するための例示的なメイタンシノイドは、Ｗｉｄｄｉｓｏｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００６，４９，４３９２～４４０８頁に記載されており、全ての目的のために参照によって本明細書に組み入れるものとする。
ある特定の実施形態では、治療部分は、ＤＭ１（チオール含有メイタンシノイド抗微小管剤）である。
提供されるタンパク質－薬物コンジュゲートの文脈において使用してもよい治療部分Ｄの他の特定の例としては、例えば、１－デヒドロテストステロン、２－ピロリノドキソルビシン、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アントラサイクリン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、ブレオマイシン、ブスルファン、カリケアマイシン、カルムスチンシスプラチン、コルヒチン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、シクロホスファミド、シタラビン、サイトカラシンＢ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デカルバジン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドキソルビシン、エメチン、エピルビシン、臭化エチジウム、エトポシド、グラミシジンＤ、グルココルチコイド、リドカイン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン、メルファラン、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、モルホリノ－ドキソルビシン、プロカイン、プロプラノロール、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアザピン、シビロマイシン、ストレプトゾトシン、タキソール、テノポシド、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、トリコテセン、チューブリシン、ビンクリスチン、および前述のいずれかの立体異性体、同配体、アナログまたは誘導体が挙げられる。
本開示のある特定の実施形態では、治療部分Ｄは細胞傷害剤を含む。細胞傷害剤としては、細胞の成長、生存、または増殖に対して有害である任意の薬剤が含まれ、これらに限定されないが、チューブリン相互作用剤およびＤＮＡ損傷剤がある。本開示のこの態様にしたがって抗ＨＥＲ２抗体または抗ＭＳＲ１抗体にコンジュゲートしてもよい好適な細胞傷害剤および化学療法剤の例としては、例えば、１－（２クロロエチル）－１，２－ジメタンスルホニルヒドラジド、１，８－ジヒドロキシ－ビシクロ［７．３．１］トリデカ－４，９－ジエン－２，６－ジイン－１３－オン、１－デヒドロテストステロン、５－フルオロウラシル、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、９－アミノカンプトセシン、アクチノマイシンＤ、アマニチン、アミノプテリン、アンギジン、アントラサイクリン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、アウリスタチン、ブレオマイシン、ブスルファン、酪酸、カリケアマイシン（例えば、カリケアマイシンｇ１）、カンプトセシン、カルミノマイシン、カルムスチン、セマドチン、シスプラチン、コルヒチン、コンブレタスタチン、シクロホスファミド、シタラビン、サイトカラシンＢ、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デカルバジン、ジアセトキシペンチルドキソルビシン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ジソラゾール、ドラスタチン（例えば、ドラスタチン１０）、ドキソルビシン、デュオカルマイシン、エキノマイシン、エレウテロビン、エメチン、エポチロン、エスペラマイシン、エストラムスチン、臭化エチジウム、エトポシド、フルオロウラシル、ゲルダナマイシン、グラミシジンＤ、グルココルチコイド、イリノテカン、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤、レプトマイシン、ロイロシン、リドカイン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メイタンシノイド、メクロレタミン、メルファラン、メルカトプリン、メトプテリン、メトトレキサート、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、Ｎ８－アセチルスペルミジン、ポドフィロトキシン、プロカイン、プロプラノロール、プテリジン、ピューロマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、リゾキシン、ストレプトゾトシン、タリソマイシン、タキソール、テノポシド、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、トマイマイシン、トポテカン、チューブリシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン、および前述のいずれかの誘導体がある。
ある特定の実施形態では、Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、またはそれらのアナログもしくは誘導体から選択される治療部分である。ある特定の実施形態では、Ｄは造影剤部分である。一部の実施形態では、造影剤部分は色素、キレート剤、放射性核種、またはオリゴヌクレオチドを含む。
一部の実施形態では、色素は蛍光色素である。一部の実施形態では、Ｄは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８からなる群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ蛍光色素であってもよい。一実施形態では、ＤはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である。
一部の実施形態では、Ｄは放射性核種を含む。一実施形態では、Ｄは、８９Ｚｒ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、１１Ｃ、１８Ｆ、６８Ｇａ、５２Ｍｎ、５５Ｃｏ、１５２Ｔｂ、９０Ｎｂ、６６Ｇａ、７２Ａｓ、または６９Ｇｅのうちの１つまたはそれ以上を含む。
ある特定の実施形態では、本開示は、抗ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片、ならびに治療部分および／または造影剤部分Ｄ（すなわち、「ペイロード」）（例えば、細胞傷害剤）、例えば、これらに限定されないが、ＤＭ１を含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を提供する。一部の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体または抗原結合断片および細胞傷害剤（例えば、これらに限定されないが、ＤＭ１）は、リンカー（「Ｌ」）を介して共有結合している。ある特定の実施形態では、ＡＤＣは抗ＨＥＲ２抗体を含み、それはトラスツズマブである。様々な実施形態では、ＡＤＣは、ＷＯ２０１９／２１２９６５Ａ１において示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片、ならびにメイタンシノイド、場合によりＤＭ１を含み、場合により、抗ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片およびメイタンシノイドはリンカー、例えばＳＭＣＣを介して共有結合している。
様々な実施形態では、ＡＤＣは、ＷＯ２０１９／２１２９６５Ａ１において示されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む、抗ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片を含む。
別の態様によれば、本開示は、抗ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブまたはそれの抗原結合断片、ならびに治療部分および／または造影剤部分（例えば、細胞傷害剤）を含む抗体－薬物コンジュゲートを提供する。一部の実施形態では、抗体または抗原結合断片および細胞傷害剤は、本明細書において論じられるリンカーを介して共有結合している。様々な実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体または抗原結合断片は、本明細書に記載される抗ＨＥＲ２抗体または断片のいずれかであってもよい。特定の実施形態では、抗ＨＥＲ２抗体はトラスツズマブを含む。
ある特定の実施形態によれば、抗ＨＥＲ２抗体、例えばトラスツズマブにコンジュゲートされる細胞傷害剤は、メイタンシノイド、例えばＤＭ１もしくはＤＭ４、トマイマイシン誘導体、またはドラスタチン誘導体である。ある特定の実施形態によれば、抗ＨＥＲ２抗体にコンジュゲートされる細胞傷害剤は、アウリスタチン、例えば、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、またはこれらの誘導体である。当技術分野において既知の他の細胞傷害剤は、本開示の範囲内で検討され、例えば、リシン、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）毒素、シュードモナス外毒素、リシン、ジフテリア毒素、ボツリヌス毒素、ブリオジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）、サポリン、ヤマゴボウ毒素（すなわち、フィトラッカトキシンおよびフィトラシゲニン（ｐｈｙｔｏｌａｃｃｉｇｅｎｉｎ））、ならびにＳａｐｒａら，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ＆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２０１３，１３８：４５２～４６９頁に記載されている他のもののようなタンパク質毒素を含む。
ある特定の実施形態では、細胞傷害剤はアウリスタチンである。好適なアウリスタチンとしては、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦおよびこれらの誘導体が含まれる。一実施形態では、アウリスタチンはＭＭＡＥである。一実施形態では、ＭＭＡＥまたはそれの誘導体は、以下の構造：
Figure 2023521885000184
 を有する。
ある特定の実施形態では、細胞傷害剤は、メイタンシノイド、例えばマイタンシンの誘導体である。好適なメイタンシノイドとしては、ＤＭ１、ＤＭ４、またはこれらの誘導体、立体異性体、もしくは同位体（ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅｓ）が含まれる。好適なメイタンシノイドとしては、これらに限定されるものではないが、ＷＯ２０１４／１４５０９０Ａ１、ＷＯ２０１５／０３１３９６Ａ１、ＵＳ２０１６／０３７５１４７Ａ１、およびＵＳ２０１７／０２０９５９１Ａ１で開示されているものも含まれ、それら全体が参照により本明細書に組み入れるものとする。
一部の実施形態では、メイタンシノイドは以下の構造：
Figure 2023521885000185
 （式中、Ａは、場合により置換されたアリーレンまたはヘテロアリーレンである）を有する。
一部の実施形態では、メイタンシノイドは以下の構造：
Figure 2023521885000186
 （式中、Ａは、場合により置換されたアリーレンまたはヘテロアリーレンである）を有する。
一部の実施形態では、メイタンシノイドは以下の構造：
Figure 2023521885000187
 （式中、ｎは、１～１２までの整数であり、Ｒ１はアルキルである）を有する。
一部の実施形態では、メイタンシノイドは以下の構造：
Figure 2023521885000188
 を有する。
ある特定の実施形態では、治療部分は、ＭＳＲ１またはＨＥＲ２を介したその送達を通して治療的利点を提供する小分子を含む。ある特定の実施形態では、Ｄは、ステロイド、ＬＸＲモジュレーター、またはリファマイシンアナログからなる群から選択される分子の残基である。一部の場合では、Ｄはステロイドである。一部の場合では、ＤはＬＸＲモジュレーターである。一部の場合では、ＤはＬＸＲアゴニストである。一部の実施形態では、ＤはＬＸＲ拮抗薬である。例示的なＬＸＲモジュレーターペイロードは、例えば、２０１７年５月１８日に出願された米国特許出願第６２／５０８，３２７号、米国特許第２０１８／０３３４４２６号として公開されたＢｉｓ－Ｏｃｔａｈｙｄｒｏｐｈｅｎａｎｔｈｒｅｎｅ Ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅｓ Ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓに記載されており、これらはその全体が参照により本明細書に組み入れるものとする。
一部の実施形態では、治療部分Ｄは、２０１８年１２月２１日に出願された米国特許出願公開第６２／７８３，５０６号、２０１９年５月８日に出願された同第６２／８４４，８６０号、および２０１９年１２月２０日に出願された同第１６／７２２，９５８号に記載されている任意のリファマイシンアナログを含むリファマイシンアナログであり、これらは、その全体が参照により本明細書に組み入れるものとする。一部の実施形態では、治療部分Ｄは、以下の構造：
Figure 2023521885000189
 を有するリファマイシンアナログまたは誘導体である。
一実施形態では、治療部分はチューブリシンである。マイコバクテリウム属の培養ブロスから最初に単離されたチューブリシンは、分裂細胞の細胞骨格を急速に崩壊させ、アポトーシスを誘導する極めて強力なチューブリン重合阻害剤のグループである。チューブリシンは、Ｎ－メチル－Ｄ－ピペコリン酸（Ｍｅｐ）、Ｌ－イソロイシン（Ｉｌｅ）、およびツブバリン（ｔｕｂｕｖａｌｉｎｅ）（Ｔｕｖ）から構成され、珍しいＮ，Ｏ－アセタールおよび第二級アルコールまたはアセトキシ基を含む。チューブリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｇ、およびＩは、Ｃ末端ツブチロシン（Ｔｕｔ）アルファ－アミノ酸を含み、同時にＤ、Ｅ、Ｆ、およびＨは、代わりにこの位置にチューブフェニルアラニン（Ｔｕｐ）を有する（Ｓｔｅｉｎｍｅｔｚ，Ｈ．ら（２００４），Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｃｒｙｓｔａｌ ａｎｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｔｕｂｕｌｙｓｉｎｓ－Ｐｏｗｅｒｆｕｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ Ｔｕｂｕｌｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｍｙｘｏｂａｃｔｅｒｉａ．Ａｎｇｅｗａｎｄｔｅ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｄｉｔｉｏｎ，４３：４８８８～４８９２頁）。
他の実施形態では、治療部分は、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）から選択される。ＰＢＤは、ＤＮＡの特異的配列を認識し、そこに結合する能力を有し；ある特定の実施形態では、配列はＰｕＧＰｕである。最初のＰＢＤ抗腫瘍抗生物質であるアントラマイシンは、１９６５年に発見されている（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８７，５７９３～５７９５頁（１９６５）；Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，８７，５７９１～５７９３頁（１９６５））。それ以来、多数の天然発生のＰＢＤが報告されており、１０種類を超える様々なアナログへの合成経路が開発されている（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３～４６５頁（１９９４）；Ａｎｔｏｎｏｗ，Ｄ．およびＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１１ １１ １（４），２８１５～２８６４頁）。ファミリーメンバーとしては、アビーマイシン（ａｂｂｅｙｍｙｃｉｎ）（Ｈｏｃｈｌｏｗｓｋｉら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４０，１４５～１４８頁（１９８７））、チカマイシン（Ｋｏｎｉｓｈｉら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３７，２００～２０６頁（１９８４）），ＤＣ－８１（特許第昭５８－１８０４８７号；Ｔｈｕｒｓｔｏｎら，Ｃｈｅｍ．Ｂｒｉｔ，２６，７６７～７７２頁（１９９０）；Ｂｏｓｅら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，４８，７５１～７５８頁（１９９２））、マゼトラマイシン（ｍａｚｅｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｋｕｍｉｎｏｔｏら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，３３，６６５～６６７頁（１９８０））、ネオトラマイシンＡおよびＢ（Ｔａｋｅｕｃｈｉら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，９３～９６頁（１９７６））、ポロトラマイシン（ｐｏｒｏｔｈｒａｍｙｃｉｎ）（Ｔｓｕｎａｋａｗａら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１３６６～１３７３頁（１９８８））、プロトラカルシン（ｐｒｏｔｈｒａｃａｒｃｉｎ）（Ｓｈｉｍｉｚｕら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２９，２４９２～２５０３頁（１９８２）；ＬａｎｇｌｅｙおよびＴｈｕｒｓｔｏｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５２，９１～９７頁（１９８７））、シバノマイシン（ｓｉｂａｎｏｍｉｃｉｎ）（ＤＣ－１０２）（Ｈａｒａら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，７０２～７０４頁（１９８８）；Ｉｔｏｈら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，４１，１２８１～１２８４頁（１９８８））、シビロマイシン（Ｌｅｂｅｒら，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ，１１０，２９９２～２９９３頁（１９８８））ならびにトママイシン（ｔｏｍａｍｙｃｉｎ）（（Ａｒｉｍａら，Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，２５，４３７～４４４頁（１９７２））が挙げられる。
一部の実施形態では、本開示によるＰＢＤは一般構造：
Figure 2023521885000190
 を有する。
ＰＢＤは、その芳香族Ａ環とピロロＣ環の両方において置換基の数、タイプ、および位置、ならびにＣ環の飽和度が異なる。Ｂ環では、Ｎ１０－Ｃ１ １位において、イミン（Ｎ＝Ｃ）、カルビノールアミン（ＮＨ－ＣＨ（ＯＨ））、またはカルビノールアミンメチルエーテル（ＮＨ－ＣＨ（ＯＭｅ））のいずれかが存在し、これは、ＤＮＡをアルキル化する原因となる求電子中心である。既知の天然産物の全ては、キラルＣ１ １ａ位において（Ｓ）配置を有し、これは、Ｃ環からＡ環に向かってみた場合、右回りのねじれを提供する。それによってＢ型ＤＮＡのマイナーグルーブと等らせん性（ｉｓｏｈｅｌｉｃｉｔｙ）の適切な３次元形状が与えられ、結合部位において十分な適合を引き起こす（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，３～１１頁（１９７５）；ＨｕｒｌｅｙおよびＮｅｅｄｈａｍ－ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９，２３０～２３７頁（１９８６））。マイナーグルーブにおいて付加体を形成するその能力は、ＤＮＡプロセシングに干渉することを、したがって抗腫瘍剤としてのその使用を有効にする。
特定の一実施形態では、治療部分Ｄは、式ＰＢＤ－１のＰＢＤ化合物：
Figure 2023521885000191
 、またはそれのアナログもしくは誘導体である。
ある特定の実施形態では、治療部分は、アウリスタチン、ＰＢＤ、またはアンサマイシン抗生物質、例えば、リファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。
ある特定の実施形態では、治療部分は、ＭＭＡＥ、ＰＢＤ－１、または抗生物質、例えば、リファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000192
 によるものである（式中、Ｄとして示される治療部分は、アミノ基を介してリンカーに結合している）。
式（Ｖ－Ａ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、メイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000193
 によるものである（式中、Ｄとして示される治療部分は、アミノ基を介してリンカーに結合している）。
式（Ｖ－Ｂ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）またはそれのアナログもしくは誘導体である。特定の実施形態では、ＤはＰＢＤ－１である。
本開示によるある特定の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード化合物は、以下の構造：
Figure 2023521885000194
 によるものである（式中、Ｄとして示される治療部分は、アミノ基を介してリンカーに結合している）。
式（Ｖ－Ｃ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、リファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である。
一部の実施形態では、本明細書に記載されるペイロードＤ（例えば、リファマイシンアナログ）は第三級アミンを含み、その第三級アミンにおける窒素原子は、ペイロードをリンカーに結合させる原子である。そのような場合では、ペイロードの第三級アミンへの結合は、リンカー－ペイロード分子において第四級アミンをもたらす。第四級アミン上の正荷電は、対イオン（例えば、クロロ、ブロモ、ヨード、またはその他の任意の好適に荷電された部分、例えば本明細書に記載されるもの）によってバランスをとることができる。そのような例としては、反応性リンカー－ペイロード分子が、以下の式（Ｖ－Ｃ１）によるものであり：
Figure 2023521885000195
 、本明細書においてｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇとも称される実施形態が挙げられる。
本明細書に記載されるペイロードＤ（例えば、ＭＭＡＥ）を有する一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード分子は、以下の式（Ｖ－Ａ１）によるものであり：
Figure 2023521885000196
 、本明細書においてｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥとも称される。
本明細書に記載されるペイロードＤを有する一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード分子は、以下の式（Ｖ－Ａ１１）：
Figure 2023521885000197
 によるものである。
本明細書に記載されるペイロードＤ（例えば、ＰＢＤ、例えば、ＰＢＤ－１）を有する一部の実施形態では、反応性リンカー－ペイロード分子は、以下の式（Ｖ－Ｂ１）によるものであり：
Figure 2023521885000198
 、本明細書においてｍｃ－ＶＡ－ＰＢＤとも称される。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000199
 は、式（Ｉ－ＤＡ）によるものである：
Figure 2023521885000200
 （式中、
Figure 2023521885000201
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
式（Ｉ－ＤＡ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、本明細書に記載されるメイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000202
 は、式（Ｉ－Ａ１）によるものである：
Figure 2023521885000203
 （式中、
Figure 2023521885000204
 はスペーサーまたは結合剤に結合している）。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000205
 は、式（Ｉ－Ａ１１）によるものである：
Figure 2023521885000206
 （式中、
Figure 2023521885000207
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000208
 は、式（Ｉ－ＤＢ）によるものである：
Figure 2023521885000209
 （式中、
Figure 2023521885000210
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
式（Ｉ－ＤＢ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）または本明細書に記載されるそれのアナログもしくは誘導体である。特定の一実施形態では、ＤはＰＢＤ－１である。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000211
 は、式（Ｉ－Ｂ１）：
Figure 2023521885000212
 によるものである。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000213
 は、式（Ｉ－ＤＣ）によるものである：
Figure 2023521885000214
 （式中、
Figure 2023521885000215
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
式（Ｉ－ＤＣ）の反応性リンカー－ペイロード化合物のさらなる実施形態では、Ｄは、リファマイシンまたは本明細書に記載されるそれのアナログもしくは誘導体である。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000216
 は、式（Ｉ－Ｃ１）によるものである：
Figure 2023521885000217
 （式中、
Figure 2023521885000218
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
一部の実施形態では、断片
Figure 2023521885000219
 は、式（Ｉ－Ｃ２）によるものである：
Figure 2023521885000220
 （式中、
Figure 2023521885000221
 は、スペーサーまたは結合剤に結合している）。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ－Ａ１’）から（Ｉ－Ａ１１’）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲートが提供される：
Figure 2023521885000222
Figure 2023521885000223
Figure 2023521885000224
 （式中、ｄは、１から６までの整数である）。ある特定の実施形態では、ＢＡは抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはヒト化モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片である。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ－Ｂ１’）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲートが提供される：
Figure 2023521885000225
 （式中、ｄは、１から４までの整数であり、ｄは、１から６までの整数である）。ある特定の実施形態では、ＢＡは抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはヒト化モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ２抗体またはその抗原結合断片である。
ある特定の実施形態では、式（Ｉ－Ｃ１’）による構造を有するタンパク質－薬物コンジュゲートが提供される：
Figure 2023521885000226
 （式中、ｄは、１から６までの整数である）。ある特定の実施形態では、ＢＡは抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡはヒト化モノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、ＢＡは、ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片である。ある特定の実施形態では、ＢＡはトラスツズマブである。
別の態様では、本明細書に開示のタンパク質－ペイロードコンジュゲートは、とりわけ、診断および／またはイメージング向けに使用される。一実施形態では、本開示によるタンパク質－ペイロードコンジュゲートは造影剤部分を含む。かかる抗体は、例えば、試料内、例えば処置された対象内の標的タンパク質の分布の可視化に使用することができる。
一部の実施形態では、本開示によるタンパク質－薬物コンジュゲートは、治療部分と造影剤部分の両方を含むことができる。一部の実施形態では、かかるコンジュゲートを同時に使用して、疾患を処置するとともに体内のタンパク質標的の位置を視覚化することができる。
非限定的な一実施形態では、かかる抗体は、式（Ｉ－Ａ１０’）：
Figure 2023521885000227
 （式中：ｄは１から６までの整数である）の構造を有する。
抗ＨＥＲ２抗体－薬物コンジュゲート
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、とりわけ、ＨＥＲ２の発現もしくは活性に関連するかもしくはそれらによって媒介される、または、改変ＬＤＬと競合することなくＨＥＲ２を結合すること、および／もしくはＨＥＲ２受容体の内在化を促進すること、および／もしくは細胞表面受容体の数を低下させることによって処置が可能である、任意の疾患または障害の処置、予防および／または軽快に有用である。
本開示のタンパク質－薬物コンジュゲート（およびそれを含む治療用組成物）は、とりわけ、免疫応答の刺激、活性化および／またはターゲティングが有益であると思われる任意の疾患または障害を処置するのに有用である。特に、本開示の抗ＨＥＲ２抗体タンパク質－薬物コンジュゲートは、ＨＥＲ２の発現もしくは活性またはＨＥＲ２＋細胞の増殖に関連するかまたはそれらによって媒介される任意の疾患または障害の処置、予防および／または軽快向けに使用することができる。本開示の治療方法が達成される作用メカニズムには、エフェクター細胞の存在下での、例えば、ＣＤＣ、アポトーシス、ＡＤＣＣ、食作用による、またはこれらメカニズムの２つ以上の組合せによる、ＨＥＲ２発現細胞の殺滅が含まれる。本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートを使用して阻害または殺滅することができるＨＥＲ２発現細胞として、例えば、乳腺腫瘍細胞が挙げられる。
本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートは、例えば、前立腺、膀胱、子宮頸部、肺、結腸、腎臓、乳房、膵臓、胃、子宮、および／または卵巣において発生する原発性および／または転移性腫瘍を処置するのに使用することができる。ある特定の実施形態では、本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートは、以下のがんのうちの１つまたはそれ以上を処置するのに使用される：前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、乳がん、膵臓がん、胃がん、子宮がん、および卵巣がん。本開示のある特定の実施形態によれば、抗ＨＥＲ２抗体または抗ＨＥＲ２は、ＩＨＣが２＋以上である乳がん細胞に罹患している患者を処置するのに有用である。本開示の他の関連実施形態によれば、本明細書に開示の抗ＨＥＲ２抗体を、ＩＨＣが２＋以上である乳がん細胞に罹患している患者に投与することを含む方法が提供される。腫瘍スキャニング等などの当技術分野で既知の解析／診断方法を、患者が去勢抵抗性である腫瘍を有するかどうかを確認するために、使用することができる。
ある特定の実施形態では、本開示には、対象における残存がんを処置するための方法も含まれる。「残存がん」という用語は、抗がん療法による処置の後の対象における１個またはそれ以上のがん細胞の存在または持続を意味する。
本開示のタンパク質－薬物コンジュゲート（およびそれを含む治療用組成物）は、とりわけ、免疫応答の刺激、活性化および／またはターゲティングが有益であると思われる任意の疾患または障害を処置するのに有用である。特に、本開示の抗ＨＥＲ２抗体を含むタンパク質－薬物コンジュゲートは、ＨＥＲ２の発現もしくは活性またはＨＥＲ２＋細胞の増殖に関連するかまたはそれらによって媒介される任意の疾患または障害の処置、予防および／または軽快向けに使用することができる。本開示の治療方法が達成される作用メカニズムには、エフェクター細胞の存在下での、例えば、ＣＤＣ、アポトーシス、ＡＤＣＣ、食作用による、またはこれらメカニズムの２つ以上の組合せによる、ＨＥＲ２発現細胞の殺滅が含まれる。本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートを使用して阻害または殺滅することができるＨＥＲ２発現細胞には、例えば、乳腺腫瘍細胞が含まれる。
ある特定の態様によれば、本開示は、ＨＥＲ２発現に関連する疾患または障害（例えば、乳がん）を処置する方法を提供し、方法は、本明細書の他の箇所に記載の抗ＨＥＲ２タンパク質－薬物コンジュゲートのうちの１つまたはそれ以上を、対象が乳がん（例えば、ＩＨＣ２＋乳がん）を有すると判定された後に、当該対象に投与することを含む。例えば、本開示には乳がんを処置する方法が含まれ、本方法には、抗ＨＥＲ２抗体または抗原結合分子を含むタンパク質－薬物コンジュゲートを、対象がホルモン療法（例えば、抗アンドロゲン療法）を受けて、１日後に、２日後に、３日後に、４日後に、５日後に、６日後に、１週間後に、２週間後に、３週間後に、または４週間後に、２ヶ月後に、４ヶ月後に、６ヶ月後に、８ヶ月後に、１年後に、またはそれを超えた後に、当該対象に投与することを含む。
ある特定の実施形態では、本開示にはまた、ＨＥＲ２発現細胞に関連するかまたはそれによって引き起こされる疾患または障害（例えば、がん）の処置向けの医薬の製造における本開示の抗ＨＥＲ２抗体の使用が含まれる。一態様では、本開示は、本明細書に開示のように、医薬で使用するための抗ＨＥＲ２抗体または抗原結合断片を含むタンパク質－薬物コンジュゲートに関する。一態様では、本開示は、医薬で使用するための、本明細書に開示の抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を含む化合物に関する。
抗ＭＳＲ１抗体－薬物コンジュゲート
ある特定の実施形態では、本明細書に開示のタンパク質－薬物コンジュゲート、例えばＡＤＣは、とりわけ、ＭＳＲ１の発現もしくは活性に関連するかもしくはそれらによって媒介される、または、改変ＬＤＬと競合することなくＭＳＲ１を結合すること、および／もしくはＭＳＲ１受容体の内在化を促進することおよび／もしくは細胞表面受容体の数を低下させることによって、処置が可能である、任意の疾患または障害の処置、予防および／または軽快に有用である。例えば、本明細書に開示の抗体およびＡＤＣは、ＭＳＲ１を発現する細胞および／またはＭＳＲ１媒介シグナル伝達に応答する細胞、例えばマクロファージを標的とすることによって、アテローム性動脈硬化症、増殖性疾患、神経変性障害、および炎症の処置、減弱または軽快に有用である。一部の実施形態では、ペイロードがステロイドである場合、疾患、障害または状態とは、それらに限定されないが、喘息、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、アレルギー性皮膚炎、薬物過敏反応、アナフィラキシー性鼻炎、通年性または季節性アレルギー性鼻炎、および血清病を含めて、アレルギー状態であり；それらに限定されないが、掻痒、脂漏性皮膚炎、神経皮膚炎、湿疹、水疱性ヘルペス状皮膚炎、剥脱性紅皮症、菌状息肉腫、天疱瘡、および重症多形紅斑（スティーブンス・ジョンソン症候群）を含めて、皮膚疾患および状態であり；それらに限定されないが、原発性または続発性の副腎皮質不全、先天性副腎過形成、がんに関連する高カルシウム血症、および非化膿性甲状腺炎を含めて、内分泌障害であり；消化器疾患であり；それらに限定されないが、後天性（自己免疫）溶血性貧血、先天性（赤芽球）再生不良性貧血（ダイアモンド・ブラックファン貧血）、成人特発性血小板減少性紫斑病、赤芽球癆、および続発性血小板減少症を含めて、血液障害であり；旋毛虫症であり；くも膜下ブロックまたは切迫ブロックを伴う結核性髄膜炎であり；それらに限定されないが、白血病およびリンパ腫を含めて、腫瘍性疾患であり；それらに限定されないが、多発性硬化症の急性増悪、原発性または転移性脳腫瘍に関連する脳浮腫、開頭術、または頭部損傷を含めて、神経系障害であり；それらに限定されないが、交感性眼炎、側頭動脈炎、ぶどう膜炎、眼球乾燥症、および局所コルチコステロイドに不応性の眼の炎症状態を含めて、眼科疾患であり；それらに限定されないが、特発性ネフローゼ症候群におけるタンパク尿の利尿もしくは寛解を誘発するためであること、または狼瘡エリテマトーデスに起因するタンパク尿の利尿もしくは寛解を誘発するためであることを含めて、腎疾患であり；それらに限定されないが、ベリリウム症、適切な抗結核化学療法と同時に使用される場合の劇症または播種状肺結核、特発性好酸球性肺炎、症候性サルコイドーシスを含めて、呼吸器疾患であり；ならびにそれらに限定されないが、急性痛風性関節炎、急性リウマチ性心臓炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、若年性関節リウマチを始めとする関節リウマチにおける短期投与のための（患者に急性エピソードまたは増悪を乗り切らせるための）、ならびに皮膚筋炎、多発性筋炎、口内炎、および全身性エリテマトーデスにおける使用のための、補助療法として使用することを含めて、リウマチ障害である。ある特定の実施形態では、関節炎を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、自己免疫疾患、アレルギー、関節炎、喘息、呼吸障害、血液障害、がん、膠原病、結合組織障害、皮膚疾患、眼疾患、内分泌異常、免疫疾患、炎症性疾患、腸障害、胃腸疾患、神経学的障害、臓器移植状態、リウマチ様障害、皮膚障害、腫脹状態、創傷治癒状態、およびそれらの組合せから選択される疾患、障害または状態を処置するための方法であり、方法は、本明細書に記載のステロイドペイロードまたはそれのコンジュゲートを投与することを含む。
一部の実施形態では、自己免疫障害は、多発性硬化症、自己免疫性肝炎、帯状疱疹、全身性エリテマトーデス（すなわち、狼瘡）、重症筋無力症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、およびサルコイドーシスから選択される。一部の実施形態では、呼吸障害は、喘息、慢性呼吸器疾患、慢性閉塞性肺疾患、気管支炎症、および急性気管支炎から選択される。一部の実施形態では、がんは、白血病、リンパ芽球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ芽球性白血病から選択される。一部の実施形態では、膠原病は、全身性エリテマトーデスである。一部の実施形態では、眼疾患は、角膜炎である。一部の実施形態では、内分泌異常は、アジソン病、副腎不全、副腎皮質機能不全、副腎皮質過形成および先天性副腎過形成から選択される。一部の実施形態では、炎症性疾患は、白内障手術後の炎症、関節炎症、免疫性炎症、腱炎症、滑液包炎、上顆炎、クローン病、炎症性腸疾患、脂肪性肺臓炎、甲状腺炎、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（蕁麻疹（ｈｉｖｅｓ））、心膜炎、ネフローゼ症候群、およびぶどう膜炎から選択される。一部の実施形態では、腸障害は、膠原性大腸炎、ｓｅ癌から選択される。一部の実施形態では、リウマチ様障害は、関節リウマチ、リウマチ性多発筋痛症、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、および全身性エリテマトーデスから選択される。一部の実施形態では、皮膚障害は、乾癬、湿疹、およびポイズン・アイビーから選択される。一部の実施形態では、神経学的障害は慢性炎症性脱髄性多発根ニューロパチーである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、それらに限定されないが、ショック、脳浮腫、および移植片対宿主病を含めて、急性炎症事象を処置するために患者に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、それらに限定されないが、血液学的悪性腫瘍、例えば、白血病、リンパ腫、および骨髄腫に関連するものを含めて、リンパ溶解効果を処置するために投与される。
一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、それを必要とする対象における炎症を軽減するための方法であり、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のステロイドまたはそれのコンジュゲートの治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、それを必要とする対象における免疫系を調節するための方法であり、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のステロイドまたはそれのコンジュゲートの治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、それを必要とする対象におけるコルチゾールレベルを調節するための方法であり、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のステロイドまたはそれのコンジュゲートの治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、それを必要とする対象におけるリンパ球遊走を減少させる方法であり、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のステロイドまたはそれのコンジュゲートの治療有効量を投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書に記載されているものは、がんによる高カルシウム血症、メニエール病、片頭痛、群発頭痛、重度のアフタ性潰瘍、喉頭炎、重度結核、梅毒に対するヘルクスハイマー反応、非代償性心不全、アレルギー性鼻炎、または鼻ポリープを処置する方法であり、方法は、それを必要とする対象に、本明細書に記載のステロイドペイロードまたはそれのコンジュゲートを投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書に開示の化合物は、炎症性腸疾患、クローン病、または潰瘍性大腸炎を処置するために使用することができる。一部の実施形態では、疾患、障害または状態は、それらに限定されないが、喘息、皮膚感染、および眼感染を含めて、慢性炎症性状態である。一部の実施形態では、本明細書に記載の化合物は、臓器移植を受けている患者の免疫抑制に使用される。
一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、それらに限定されないが、統合失調症、薬物中毒、心的外傷後ストレス障害（ＰＴＳＤ）、および気分障害、薬物乱用、ストレス、ならびに不安症などの精神障害を含めて、ＧＲシグナル伝達に関連する神経障害を処置するために患者に投与される。
一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、それらに限定されないが、眼の炎症（例えば、結膜炎、角膜炎、ぶどう膜炎）、黄斑浮腫、および黄斑変性症を含めて、視覚系障害を処置するために患者に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、心血管障害を処置するために患者に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、グルコースおよび／または肝臓代謝障害を処置するために患者に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、筋骨格系障害を処置するために患者に投与される。一部の実施形態では、本明細書に記載のステロイドペイロードおよびそれのコンジュゲートは、湿疹および乾癬などの皮膚炎症状態を処置するために患者に投与される。
本明細書に記載のタンパク質コンジュゲートは、そのステロイドペイロードの特定の細胞または臓器系への標的化送達を目的とする手段を提供し、それによって、遊離の非コンジュゲートステロイドペイロードの投与から生じる副作用を軽減させるかまたは予防する。軽減されるまたは予防されるかかる潜在的な副作用の例としては、参照によってその全体を本明細書に組み入れるＤｅｃａｄｒｏｎ（登録商標）（デキサメタゾン）の認可された薬物ラベルに掲載されているものが挙げられる。一部の実施形態では、軽減されるまたは予防される副作用は以下から選択される：血圧の上昇；ナトリウム貯留；水／体液貯留（浮腫、血管性浮腫、肺浮腫）；カリウム排泄の増加；可逆的な視床下部－下垂体副腎（ＨＰＡ）軸抑制；処置の離脱後の潜在的なコルチコステロイド欠乏；感染への易罹患性；全身性真菌感染の増悪；小児および成人患者の水痘の重度の悪化；小児および成人患者の麻疹の重度の悪化；後嚢下白内障；視神経への潜在的損傷を伴う緑内障；細菌、真菌に起因する続発性眼感染の確立の促進、または誘発性続発性副腎皮質機能不全；活動性または潜伏性消化性潰瘍、憩室炎、新鮮な腸吻合および非特異性潰瘍性大腸炎が存在する場合の穿孔のリスクの増加；胃腸の穿孔後の腹膜刺激；骨形成の減少；骨吸収の増加；骨芽細胞機能の阻害；小児患者の骨成長の阻害；あらゆる年齢での骨粗鬆症の発症；急性ミオパチー（おそらく眼および呼吸器の筋肉を伴って、潜在的に四肢不全麻痺をもたらす）；クレアチニンキナーゼの上昇；多幸感、不眠、気分変動、人格変化、および重度の鬱病から、明らかな精神病的発現までにわたる精神錯乱；既存の情緒不安定または精神病の傾向の悪化；眼内圧亢進；徐脈；心停止；心不整脈；心臓肥大；循環虚脱；鬱血性心不全；脂肪塞栓症；高血圧；早産児の肥大型心筋症；亜急性心筋梗塞後の心破裂；失神；頻脈；血栓塞栓症；血栓性静脈炎；血管炎；座瘡；アレルギー性皮膚炎；鮫肌；斑状出血および点状出血；紅斑；創傷治癒障害；多汗；発疹；皮膚線条；皮膚試験に対する反応の抑制；薄く脆い皮膚；頭毛が薄くなること；蕁麻疹の；炭水化物およびグルコースへの耐性の減少；クッシング様状態の発生；高血糖症；糖尿；男性型多毛症；無性毛型多毛症；糖尿病におけるインスリンまたは経口血糖降下剤の要求量増加（インスリン抵抗性）；潜伏性糖尿病の徴候；月経不順；続発性の副腎皮質および下垂体の不応性（特に、ストレスの場合に；外傷；手術；または病気におけるような）；小児患者における成長抑制；感受性患者における鬱血性心不全；体液貯留；低カリウム血症性アルカローシス；カリウム喪失；ナトリウム貯留；腹部膨満；血清肝酵素レベルの上昇（通常、中断時に可逆的）；肝肥大；食欲増加；吐き気；膵炎；穿孔および出血の可能性がある消化性潰瘍；小腸および大腸の穿孔（特に、炎症性腸疾患の患者における）；潰瘍性食道炎；タンパク質異化に起因する負の窒素バランス；大腿骨頭および上腕骨頭の無菌壊死；筋肉量低下；筋力低下；骨粗鬆症；長骨の病的骨折；ステロイドミオパチー；腱断裂；脊椎圧迫骨折；痙攣；鬱病；情緒不安定；多幸感；頭痛；通常、処置の中断後の乳頭浮腫を伴う頭蓋内圧上昇（偽脳腫瘍）；不眠；気分変動；神経炎；ニューロパチー；感覚異常；人格変化；精神障害；回転性目眩；眼球突出；緑内障；眼内圧上昇；後嚢下白内障；異常な脂肪蓄積；感染に対する抵抗性の低下；吃逆；精子の運動性および数の上昇または低下；倦怠感；満月状顔貌；および体重増加；ならびに薬物間相互作用に関連するそういった副作用。一部の実施形態では、軽減されるまたは予防される副作用とは、薬物間相互作用に関連するものである。一部の実施形態では、軽減されるまたは予防される副作用は、以下のものとのコルチコステロイドの使用による薬物間相互作用に関連する：アミノグルテチミド、これにはコルチコステロイドによる副腎抑制の減弱が含まれる；アムホテリシンＢ注射とカリウム除去剤、これには低カリウム血症、心臓肥大、および鬱血性心不全の発症が含まれる；抗生物質、これにはコルチコステロイドクリアランスの顕著な低下が含まれる；抗コリンエステラーゼ剤、これには重症筋無力症の患者で重度の衰弱をもたらすことが含まれる；経口抗凝固薬、これにはワルファリンへの応答の阻害が含まれる；抗糖尿病剤、これには血糖値の上昇が含まれる；抗結核薬、これにはイソニアジドの血清濃度の低下が含まれる；コレスチラミン、これにはコルチコステロイドのクリアランスの増加が含まれる；シクロスポリン、これにはシクロスポリンとコルチコステロイドの両方の活性および痙攣の発生率の上昇が含まれる；デキサメタゾン抑制試験（ＤＳＴ）干渉、これにはインドメタシンで処置されている患者における偽陰性結果が含まれる；ジギタリスグリコシド、これには低カリウム血症に起因する不整脈のリスク増加が含まれる；エフェドリン、これには血液レベルの低下および生理的活性の縮小をもたらすコルチコステロイドの代謝クリアランスの増大が含まれる；経口避妊薬を始めとしたエストロゲン、これにはある特定のコルチコステロイドの肝臓代謝の低下およびそれらの効果の付随する上昇が含まれる；肝臓酵素誘導剤、阻害剤、および基質（シトクロムＰ４５０ ３Ａ４（ＣＹＰ ３Ａ４）酵素活性を誘導する薬物、例えば、バルビツレート、フェニトイン、カルバマゼピン、リファンピン）、これにはコルチコステロイドの代謝の増強が含まれる；ＣＹＰ ３Ａ４を阻害する薬物（例えば、ケトコナゾール、マクロライド抗生物質、例えば、エリスロマイシン）、これにはコルチコステロイドの血漿濃度上昇の可能性が含まれる；ＣＹＰ ３Ａ４によって代謝される薬物（例えば、インジナビル、エリスロマイシン）、これにはそれらのクリアランスが上昇しその結果、血漿濃度の低下をもたらすことが含まれる；ケトコナゾール、これには、ある特定のコルチコステロイドの最大６０％だけの代謝低下、その結果、コルチコステロイド副作用のリスクの増加をもたらすこと、およびコルチコステロイド離脱中に副腎不全を引き起こす可能性のある副腎コルチコステロイド合成の阻害が含まれる；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤＳ）、これには胃腸の副作用のリスクの増加およびサリチレートのクリアランスの上昇が含まれる；フェニトイン、これにはフェニトインレベルの上昇または低下、発作制御の変化が含まれる；皮膚試験、これには皮膚試験に対する反応の抑制が含まれる；サリドマイド、これには中毒性表皮壊死症が含まれる；ならびに、ワクチン、これには、抗体応答の阻害または生弱毒生ワクチンに含有される何らかの生物体の複製の増強に起因するトキソイドおよび生ワクチンまたは不活化ワクチンへの応答の減少が含まれる。
したがって、グルココルチコイド受容体に関連する疾患、障害または状態を処置するための方法が本明細書で提供され、方法は、上に記載の式のいずれかのコンジュゲートを、該疾患、障害または状態を有する患者に投与することを含み、ここで、該コンジュゲートの遊離のステロイドペイロードの投与に関連する副作用が軽減される。さらに、上に記載の式のいずれかの化合物を細胞に送達する方法が本明細書で提供され、方法は、該細胞を、上に記載の式のいずれかのタンパク質コンジュゲート化合物と接触させることを含み、ここで、タンパク質コンジュゲートは該細胞の表面抗原を結合する抗体またはそれの抗原結合断片を含む。
一部の例では、ペイロードがＬＸＲモジュレーターである場合、本明細書に記載されているものは、疾患、障害または状態を処置する方法であり、方法は、該障害を有する患者に、化合物および／もしくはＡＤＣ（例えば、上に記載の式のいずれかのＡＤＣ）またはそれらの医薬組成物の治療有効量を投与することを含む。
一部の例では、本明細書に記載されているものは、疾患、障害または状態を予防する方法であり、方法は、該障害を有する患者に、化合物および／もしくはＡＤＣ（例えば、上に記載の式のいずれかのＡＤＣ）またはそれらの医薬組成物の予防有効量を投与することを含む。
増殖性障害とは、当業者に既知の任意の増殖性障害とし得る。ある特定の実施形態では、増殖性障害には、限定されないが、腫瘍学的障害が含まれ、この場合、腫瘍学的障害とは、当業者に既知の任意のがん障害とし得る。ある特定の実施形態では、メラノーマを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、転移性メラノーマを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、肺がんを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、ＥＧＦＲ－チロシンキナーゼ阻害剤抵抗性肺がんを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、口腔がんを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、口腔扁平上皮細胞癌を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、前立腺がんを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、乳がんを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。
代謝性疾患とは、当業者に既知の任意の代謝性疾患とし得る。ある特定の実施形態では、代謝性疾患とは、脂質異常症である。脂質異常症とは、当業者に既知の任意の脂質異常症とし得る。ある特定の実施形態では、脂質異常症は、高脂血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高リポタンパク血症、ＨＤＬ欠損症、ＡｐｏＡ－Ｉ欠損症、ならびに心血管疾患、例えば、冠動脈疾患（これには、例えば、狭心症、心筋梗塞、および突然心臓死の処置および予防が含まれる）；アテローム性動脈硬化症（これには、例えば、アテローム性動脈硬化症の処置および予防が含まれる）；ならびに再狭窄（これには、例えば、バルーン血管形成術などの医療処置の結果として生じるアテローム性プラークを予防することまたは処置することが含まれる）からなる群から選択される。ある特定の実施形態では、糖尿病を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。
心血管疾患とは、当業者に既知の任意の心血管疾患とし得る。ある特定の実施形態では、アテローム性動脈硬化症を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、異常なマクロファージプロセシングから誘導されるアテローム性動脈硬化症を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、マクロファージが酸化低密度リポタンパク質（ｏｘＬＤＬ）をプロセシングすることができないｏｘＬＤＬの形成から誘導されるアテローム性動脈硬化症を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、虚血性心疾患を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、卒中を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、高血圧性心疾患を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、大動脈瘤を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、心内膜炎を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、末梢動脈疾患を処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。ある特定の実施形態では、この段落で提供の疾患のいずれかの組合せを処置するまたは予防する方法が本明細書で提供される。
一部の例では、本明細書に記載されているものは、核内受容体の機能を調節するための方法である。非限定的な例として、機能は、炎症性メディエーター（例えば、サイトカイン、ケモカイン）の発現／分泌、コレステロール調節、コレステロール摂取、コレステロール流出、コレステロール酸化、遊走、走化性、アポトーシスおよび壊死、炎症活性、脂質調節、アポトーシス、遊走、走化性、遺伝子転写、ならびにタンパク質発現から選択することができる。
一部の例では、本明細書に記載されているものは、疾患、障害または状態を予防する方法であり、方法は、該障害を有する患者に、上に記載の式のいずれかの化合物および／もしくはＡＤＣ、またはそれらの医薬組成物の治療有効量を投与することを含む。
黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）は、マクロファージおよびその他の細胞型による食作用を切り抜けて生存することができる通性細胞内細菌である（Ｈｏｒｎ，Ｊ．、ら、Ｉｎｓｉｄｅ ｊｏｂ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｈｏｓｔ－ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．Ｉｎｔ Ｊ Ｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、２０１８．３０８（６）：６０７～６２４頁；Ｊｕｂｒａｉｌ、Ｊ．、ら、Ｉｎａｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｕｓｔａｉｎ ｉｎｔｒａｐｈａｇｏｌｙｓｏｓｏｍａｌ ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ｉｎ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｃｅｌｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、２０１６．１８（１）：８０～９６頁）。生体内イメージングによって、マクロファージは、黄色ブドウ球菌が複製し、次いで、感染過程で他の臓器に播種する、貯留槽としての役割を果たすことができることが実証された（Ｓｕｒｅｗａａｒｄ，Ｂ．Ｇ．、ら、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１６．２１３（７）：１１４１～５１頁）。ほとんどの抗生物質は、マクロファージを含めて細胞をあまりうまくは透過せず、このことが指示するところは、細胞内黄色ブドウ球菌貯留槽が標準治療の抗生物質による処置を回避することができることである（Ｌｅｈａｒ，Ｓ．Ｍ．、ら、Ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ．Ｎａｔｕｒｅ，２０１５．５２７（７５７８）：３２３～８頁）。しかし、バンコマイシンのリポソーム製剤は、マクロファージへの抗生物質の透過を増大させ、標準治療のバンコマイシンよりもいっそう効果的に黄色ブドウ球菌の臓器負荷を減少させた（Ｓｕｒｅｗａａｒｄ，Ｂ．Ｇ．、ら、Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ ｉｎ ｖｉｖｏ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ，２０１６．２１３（７）：１１４１～５１頁）。まとめると、これらのデータが指示するところは、マクロファージへの抗生物質の送達が細胞内黄色ブドウ球菌貯留槽を消失させる効果的な方法とし得ることである。
米国において、抗生物質耐性黄色ブドウ球菌は、依然として公衆衛生の問題であり、おおよそ４０％の菌血症は、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）によって引き起こされる。ＦＤＡによって承認された治療選択肢は、ＭＲＳＡ菌血症についてはほとんど存在せず、バンコマイシンが依然として最適な抗生物質である。適当な抗生物質処置にもかかわらず、黄色ブドウ球菌菌血症による死亡率はおよそ１８％であり、その結果、処置法を改善することができる組合せへと調査を向けさせている。
リファマイシンクラスの抗生物質は、細菌ＲＮＡポリメラーゼ（ＲＮＡＰ）を阻害し、黄色ブドウ球菌に対する強力な活性を有する。しかし、このクラスの抗生物質による単剤療法は、処置中に耐性集団の選択にいたるおそれがある。それゆえ、リファマイシン抗生物質を第一選択抗生物質との組合せで使用して、一般に装具または外部デバイスが関与する感染において転帰を改善することができる。
リファマイシンアナログを含む本明細書に記載のＡＤＣは、対象における細菌増殖および／または細菌感染を予防するまたは処置するのに有用である。一部の場合では、細菌は、グラム陽性細菌である（グラム陽性細菌が細菌感染の原因である）。一部の場合では、細菌は、ペニシリン耐性細菌である（ペニシリン耐性細菌が細菌感染の原因である）。一部の場合では、細菌は、黄色ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）細菌である（ＭＲＳＡ細菌が細菌感染の原因である）。一部の場合では、細菌は、メチシリン感受性黄色ブドウ球菌（ＭＳＳＡ）細菌である（ＭＳＳＡ細菌が細菌感染の原因である）。一部の場合では、細菌は、バンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ＶＲＳＡ）細菌である（ＶＲＳＡ細菌が細菌感染の原因である）。一部の場合では、細菌は、多剤耐性結核菌（Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）である（多剤耐性結核菌細菌が細菌感染の原因である）。さらなる場合では、細菌は、例えば、アジスロマイシンに耐性のあるクラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）である（例えば、アジスロマイシンに耐性のあるクラミジア・トラコマチスが細菌感染の原因である）。より多くの場合では、細菌は、例えば、メトロニダゾール、バンコマイシン、および／またはフィダキソマイシンに耐性のあるクロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）である（例えば、メトロニダゾール、バンコマイシン、および／またはフィダキソマイシンに耐性のあるクロストリジウム・ディフィシルが細菌感染の原因である）。
対象における、蜂巣炎、菌血症、皮膚壊死症、眼瞼感染、眼感染、新生児結膜炎、骨髄炎、膿痂疹、腫れ物、熱傷様皮膚症候群、食中毒、肺炎、外科感染、尿路感染、熱傷後感染、髄膜炎、心内膜炎、敗血症、毒素性ショック症候群、化膿性関節炎、乳腺炎、人工関節に関連する感染、カテーテルに関連する感染、またはインプラントに関連する感染を予防するまたは処置する方法が本明細書で提供され、方法は、対象に、リファマイシンアナログを含む抗体－薬物コンジュゲートの有効治療量を投与することを含む。また対象における細胞内細菌感染を予防するまたは処置する方法が本明細書で提供され、方法は、対象に、リファマイシンアナログを含む抗体－薬物コンジュゲートの有効治療量を投与することを含む。
一部の場合では、対象における細菌感染、および／もしくはブドウ球菌感染、例えば、黄色ブドウ球菌感染に関連する疾患もしくは障害もしくは状態の処置および／もしくは予防にとって有用である、ならびに／またはかかる疾患、障害もしくは状態に関連する少なくとも１つの症状を軽快させることにとって有用である、抗ＭＳＲ１抗体、抗ＭＳＲ１抗体の抗原結合部分、または抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片を含むＡＤＣを、それを必要とする対象に投与することを含む治療方法が、本明細書で提供される。かかる疾患、障害または状態は、蜂巣炎、菌血症、皮膚壊死症、眼瞼感染、眼感染、新生児結膜炎、骨髄炎、膿痂疹、腫れ物、熱傷様皮膚症候群、食中毒、肺炎、外科感染、尿路感染、熱傷後感染、髄膜炎、心内膜炎、敗血症、毒素性ショック症候群、または化膿性関節炎とし得る。一部の場合では、対象は人工関節を有しており、本明細書に開示の抗体を、人工関節の周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の場合では、対象はカテーテルを有しており、本明細書に開示の抗体を、カテーテルおよび／またはカテーテルの周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の場合では、対象は移植された異物を有しており、本明細書に開示の抗体を、異物および／または異物の周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の場合では、対象は乳腺炎を有しており、本明細書に開示の抗体は乳腺炎を処置するのに有用である。
一部の場合では、リファマイシンアナログおよび／またはそれの抗ＭＳＲ１ ＡＤＣは、１つまたはそれ以上のさらなる抗生物質（例えば、ＭＲＳＡ感染に使用することができる抗生物質）、例えば、バンコマイシン、トリメトプリム－スルファメトキサゾール、テトラサイクリン、ドキシサイクリン／ミノサイクリン、クリンダマイシン、セファロスポリン（例えば、セファレキシン）、ナフシリン、フィダキソマイシン、リネゾリド等、および／またはその他の任意の適切な抗生物質との組合せで投与される。一部の場合では、リファマイシンアナログを含む本明細書に記載のＡＤＣは、組合せで投与される。
また、細菌の増殖を予防するおよび／または阻害する方法が本明細書で提供され、方法は、抗ＭＳＲ１抗体またはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含む抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の有効量を投与することを含む。
それを必要とする対象へ、抗ＭＳＲ１抗体またはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣの有効量を投与することを含む治療方法も本明細書で提供される。治療方法は、抗ＭＳＲ１抗体またはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣを含む医薬組成物の治療有効量を対象に投与することを含む。処置される障害とは、ＭＳＲ１を標的とすることによっておよび／または抗生物質薬の投与によって、改善され、軽快し、抑制され、または予防される任意の疾患または状態である。一部の実施形態では、疾患または状態は、増殖性疾患、代謝性疾患、炎症、神経変性疾患、またはグルココルチコイド受容体シグナル伝達に関連する疾患、障害、もしくは状態である。かかる実施形態の一部では、非コンジュゲートリファマイシンアナログの投与に関連する副作用は低減される。本明細書に記載の任意の疾患、障害または状態の処置のための、抗ＭＳＲ１抗体、抗ＭＳＲ１抗体の抗原結合部分、または、本明細書に記載の、抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片、例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎを含むＡＤＣ、の使用が本明細書で提供される。
ブドウ球菌感染、例えば、黄色ブドウ球菌感染に関連する疾患もしくは障害もしくは状態を処置する、減弱させる、もしくは軽快させるための治療方法、および／または、かかる疾患、障害もしくは状態に関連する少なくとも１つの症状を軽快させるための治療方法であって、リファマイシンアナログまたは抗ＭＳＲ１抗体（例えばＨ１Ｈ２１２３４Ｎ）もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣの、それを必要とする対象への投与を含む治療方法も本明細書で提供される。かかる疾患、障害または状態は、蜂巣炎、菌血症、皮膚壊死症、眼瞼感染、眼感染、新生児結膜炎、骨髄炎、膿痂疹、腫れ物、熱傷様皮膚症候群、食中毒、肺炎、外科感染、尿路感染、熱傷後感染、髄膜炎、心内膜炎、敗血症、毒素性ショック症候群、または化膿性関節炎とし得る。一部の実施形態では、対象は人工関節を有しており、本明細書に開示の、リファマイシンアナログまたは抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣを、人工関節の周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の実施形態では、対象はカテーテルを有しており、本明細書に開示の、リファマイシンアナログまたは抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣを、カテーテルおよび／またはカテーテルの周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の実施形態では、対象は移植された異物を有しており、本明細書に開示の、リファマイシンアナログまたは抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣを、異物および／または異物の周囲の組織の黄色ブドウ球菌感染を処置するおよび／または予防するために使用する。一部の実施形態では、対象は乳腺炎を有しており、本明細書に開示の抗体は乳腺炎を処置するのに有用である。治療方法は、リファマイシンアナログまたは抗ＭＳＲ１抗体もしくはそれのＭＳＲ１抗原結合断片とリファマイシンアナログとを含むＡＤＣを含む医薬組成物の治療有効量をそれを必要とする対象に投与することを含む。
別の態様では、本開示は、本開示の実施形態のいずれかのリファマイシンアナログ化合物にリンカーを介してまたはリンカー－スペーサーをとおして、コンジュゲートされている、抗体またはそれの抗原結合断片を含む抗体－薬物コンジュゲートを提供する。
一実施形態では、抗体またはそれの抗原結合断片は、マクロファージスカベンジャー受容体１（ＭＳＲ１）を結合する。
一実施形態では、抗体またはそれの抗原結合断片は：
（ｉ）配列番号４、３６、５２、９２、および２８４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１ドメイン；
（ｉｉ）配列番号６、３８、５４、９４、および２８６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２ドメイン；
（ｉｉｉ）配列番号８、４０、５６、９６、および２８８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３ドメイン；
（ｉｖ）配列番号１２、４４、６０、１００、および２９２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１ドメイン；
（ｖ）配列番号１４、４６、６２、１０２、および２９４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２ドメイン；ならびに
（ｖｉ）配列番号１６、４８、６４、１０４、および２９６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３ドメイン、
を含むことができる。
医薬組成物および投与方法
本明細書に開示のタンパク質または抗体コンジュゲートを含む治療用組成物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法も提供される。治療用組成物は、本明細書に記載のコンジュゲートのいずれか、および医薬的に許容される担体または希釈剤を含むことができる。
本明細書のタンパク質－薬物コンジュゲートは、とりわけ、それらのコグネート抗原の発現もしくは活性に関連するかもしくはそれらによって媒介される、または、それらのコグネート抗原と受容体もしくはリガンドとの間の相互作用を遮断すること、もしくはそうでなければ抗原の活性および／もしくはシグナル伝達を阻害すること、および／もしくは受容体内在化を促進すること、および／もしくは細胞表面受容体の数を低下させることによって処置が可能である、任意の疾患または障害の処置、予防および／または軽快に有用である。例えば、本明細書のタンパク質－薬物コンジュゲートは、それらのコグネート抗原を発現するおよび／または抗原媒介性シグナル伝達に応答する腫瘍の処置に、有用であるとし得る。本明細書で提供される抗体およびコンジュゲートを、脳および髄膜、口腔咽頭部、肺および気管支樹、胃腸管、雄性および雌性生殖器系、筋肉、骨、皮膚および付属器、結合組織、脾臓、免疫系、造血性細胞および骨髄、肝臓および尿路ならびに眼などの特殊な感覚器官に発生する原発性および／または転移性腫瘍を処置するのに、使用することもできる。ある特定の実施形態では、本明細書のタンパク質－薬物コンジュゲートを以下のがんのうちの１つまたはそれ以上を処置するのに使用する：腎細胞癌、膵癌、頭頸部がん、前立腺がん、悪性神経膠腫、骨肉腫、結腸直腸がん、胃がん（例えば、ＭＥＴ増幅による胃がん）、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、卵巣がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、滑膜肉腫、甲状腺がん、乳がんまたはメラノーマ。
本明細書に記載の処置方法の文脈において、タンパク質－薬物コンジュゲートは、単剤療法として（すなわち、唯一の治療部分として）、または１種もしくはそれ以上のさらなる治療部分との組合せで（その例は、本明細書の他の箇所に記載されている）投与することができる。
本発明で提供されるタンパク質－薬物コンジュゲートを含む医薬（すなわち治療用）組成物が本明細書で提供される。本明細書の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤、および改善された輸送、送達、耐容性等をもたらすその他の薬剤と共に製剤化される。数多くの適当な製剤が、全ての製薬化学者に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａに見いだすことができる。これらの製剤として、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆ．）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲルならびにカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」 ＰＤＡ（１９９８） Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８～３１１頁も参照されたい。
患者に投与されるタンパク質－薬物コンジュゲートの用量は、患者の年齢およびサイズ、標的疾患、病態、投与経路等に応じて異なることができる。ある特定の実施形態では、用量は、体重または体表面積にしたがって算出される。成人患者では、本明細書の抗体を、通常には約０．０１～約２０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは約０．０２～約７ｍｇ／ｋｇ体重、約０．０３～約５ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．０５～約３ｍｇ／ｋｇ体重の単回用量で静脈内投与することが効果的であるとし得る。状態の重度に応じて、処置の頻度および期間を調整することができる。抗体を投与するための有効投薬量およびスケジュールについては経験的に決定することができる；例えば、患者の経過を定期的な評価によってモニタリングすることができ、それに応じて用量を調整することができる。さらに、投薬量の種間スケーリングは、当技術分野においてよく知られている方法を使用して実施することができる（例えば、Ｍｏｒｄｅｎｔｉら、１９９１、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｒｅｓ．８：１３５１頁）。
種々の送達系が既知であり、それらを本明細書の医薬組成物を投与するのに使用することができる、例えば、リポソーム中のカプセル化、微粒子、マイクロカプセル、突然変異型ウイルスを発現することのできる組換え細胞、受容体媒介性エンドサイトーシスである（例えば、Ｗｕら、１９８７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９～４４３２頁を参照されたい）。導入方法には、それらに限定されないが、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、静脈内経路、皮下経路、鼻腔内経路、硬膜外経路および経口経路が含まれる。組成物は、いずれかの簡便な経路によって、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または内粘膜皮膚（例えば、口腔粘膜、直腸および腸管粘膜等）をとおした吸収によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤と共に投与することができる。投与は、全身性であっても局所性であってもよい。
本明細書の医薬組成物は、標準的な針およびシリンジによって皮下にまたは静脈内に送達することができる。加えて、皮下送達に関して、ペン型送達装置は、本明細書の医薬組成物の送達において容易に適用される。かかるペン型送達装置は、再使用可能であっても使い捨てであってもよい。再使用可能なペン型送達装置は、一般に、医薬組成物を含有する交換可能なカートリッジを利用する。カートリッジ内の医薬組成物が全て投与され、カートリッジが空となったら、空のカートリッジは容易に廃棄することができ、医薬組成物を含有する新しいカートリッジと交換することができる。次いで、ペン型送達装置を再使用することができる。使い捨てペン型送達装置では、交換可能なカートリッジはない。むしろ、使い捨てペン型送達装置は、装置内のリザーバーに医薬組成物が保持されているという予め充填された状態で届く。リザーバーから医薬組成物が空になったら、装置全体が廃棄される。
多数の再使用可能なペン型および自動注入送達装置が、本明細書の医薬組成物の皮下送達において適用される。例として、それらに限定されないが、ＡＵＴＯＰＥＮ（商標）（Ｏｗｅｎ Ｍｕｍｆｏｒｄ、Ｉｎｃ．、Ｗｏｏｄｓｔｏｃｋ、英国）、ＤＩＳＥＴＲＯＮＩＣ（商標）ｐｅｎ（Ｄｉｓｅｔｒｏｎｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｂｅｒｇｄｏｒｆ、スイス）、ＨＵＭＡＬＯＧ ＭＩＸ ７５／２５（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＯＧ（商標）ｐｅｎ、ＨＵＭＡＬＩＮ ７０／３０（商標）ｐｅｎ（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄ．）、ＮＯＶＯＰＥＮ（商標）Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、デンマーク）、ＮＯＶＯＰＥＮ ＪＵＮＩＯＲ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、デンマーク）、ＢＤ（商標）ｐｅｎ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ、Ｎ．Ｊ．）、ＯＰＴＩＰＥＮ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＰＲＯ（商標）、ＯＰＴＩＰＥＮ ＳＴＡＲＬＥＴ（商標）、ならびにＯＰＴＩＣＬＩＫ（商標）（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ、Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ、ドイツ）が挙げられるが、ほんの一部のものである。本明細書の医薬組成物の皮下送達において適用される使い捨てペン型送達装置の例として、それらに限定されないが、ＳＯ－ＬＯＳＴＡＲ（商標）ｐｅｎ（ｓａｎｏｆｉ－ａｖｅｎｔｉｓ）、ＦＬＥＸＰＥＮ（商標）（Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、およびＫＷＩＫＰＥＮ（商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、ＳＵＲＥＣＬＩＣＫ（商標）Ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ（Ａｍｇｅｎ、Ｔｈｏｕｓａｎｄ Ｏａｋｓ、Ｃａｌｉｆ．）、ＰＥＮＬＥＴ（商標）（Ｈａｓｅｌｍｅｉｅｒ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、ドイツ）、ＥＰＩＰＥＮ（Ｄｅｙ、Ｌ．Ｐ．）、およびＨＵＭＩＲＡ（商標）Ｐｅｎ（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、Ｉｌｌ．）が挙げられるが、ほんの一部のものである。
ある特定の状況では、医薬組成物は、放出制御系において送達することができる。一実施形態では、ポンプを使用することができる（Ｌａｎｇｅｒ、上掲；Ｓｅｆｔｏｎ、１９８７、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１頁を参照されたい）。別の実施形態では、ポリマー材料を使用することができる；Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａを参照されたい。さらに別の実施形態では、放出制御系は、組成物の標的に近接して置くことができ、したがって、全身性用量の一部分のみを必要とする（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ、１９８４、Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ、上掲、第２巻、１１５～１３８頁にて、を参照されたい）。他の放出制御系については、Ｌａｎｇｅｒ、１９９０、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７～１５３３頁による総説で論じられている。
注射用調製物には、静脈内、皮下、皮内および筋肉内の各注射、点滴注入等向けの剤形が含まれる。これらの注射用調製物は、公に知られた方法によって製造することができる。例えば、注射用調製物は、例えば、注射向けに従来から使用されている無菌水性媒体または油性媒体に、本明細書に記載の抗体またはその塩を溶解、懸濁または乳化させることによって製造することができる。注射用の水性媒体として、例えば、生理食塩水、グルコースを含有する等張性溶液およびその他の補助的薬剤等があるが、これらは、適当な可溶化剤と、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）、非イオン性界面活性剤［例えば、ポリソルベート８０、水素化ヒマシ油のＨＣＯ－５０（ポリオキシエチレン（５０ｍｏｌ）付加体）］等と、組み合わせて使用することができる。油性媒体として、例えば、ゴマ油、ダイズ油等が用いられるが、これらは、可溶化剤と、例えば、安息香酸ベンジル、ベンジルアルコール等と、組み合わせて使用することができる。このように製造された注射液は好ましくは、適当なアンプルに充填される。
効果的には、本明細書に記載の経口または非経口用途向けの医薬組成物は、活性成分の用量を適合させるのに適した単位用量の剤形へと製造される。単位用量のかかる剤形として、例えば、錠剤、丸薬、カプセル剤、注射剤（アンプル剤）、坐剤等が挙げられる。含有される先述の抗体の量は一般に、単位用量の剤形当たり約５～約５００ｍｇである；特に注射の形態では、ある特定の実施形態では、先述の抗体は、他の剤形の場合では約５～約１００ｍｇでおよび約１０～約２５０ｍｇで含有される。
「化学療法剤」とは、作用のメカニズムにかかわらず、がんの処置において有用である化学化合物である。化学療法剤のクラスには、それらに限定されないが：アルキル化剤、代謝拮抗剤、紡糸体毒植物アルカロイド、細胞傷害性／抗腫瘍抗生物剤、トポイソメラーゼ阻害剤、抗体、光感受性物質およびキナーゼ阻害剤が含まれる。化学療法剤には、「標的治療」および従来型化学療法において使用される化合物が含まれる。
化学療法剤の例として、以下が挙げられる：エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍ．）、ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、５－ＦＵ（フルオロウラシル、５－フルオロウラシル、ＣＡＳ Ｎｏ．５１－２１－８）、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）、Ｌｉｌｌｙ）、ＰＤ－０３２５９０１（ＣＡＳ Ｎｏ．３９１２１０－１０－９、Ｐｆｉｚｅｒ）、シスプラチン（ｃｉｓ－ジアミン，ジクロロ白金（ＩＩ）、ＣＡＳ Ｎｏ．１５６６３－２７－１）、カルボプラチン（ＣＡＳ Ｎｏ．４１５７５－９４－４）、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、テモゾロミド（４－メチル－５－オキソ－２，３，４，６，８－ペンタアザビシクロ［４．３．０］ノナ－２，７，９－トリエン－９－カルボキサミド、ＣＡＳ Ｎｏ．８５６２２－９３－１、ＴＥＭＯＤＡＲ（登録商標）、ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標）、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）、タモキシフェン（（Ｚ）－２－［４－（１，２－ジフェニルブタ－１－エニル）フェノキシ］－Ｎ，Ｎ－ジメチルエタンアミン、ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、ＩＳＴＵＢＡＬ（登録商標）、ＶＡＬＯＤＥＸ（登録商標））、ならびに、ドキソルビシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、Ａｋｔｉ－１／２、ＨＰＰＤおよびラパマイシン。
化学療法剤のより多くの例として、以下が挙げられる：オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、ｓｕｔｅｎｔ（ＳＵＮＩＴＩＮＩＢ（登録商標）、ＳＵ１１２４８、Ｐｆｉｚｅｒ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシレート（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ－５１８（Ｍｅｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ、ＷＯ２００７／０４４５１５）、ＡＲＲＹ－８８６（Ｍｅｋ阻害剤、ＡＺＤ６２４４、Ａｒｒａｙ ＢｉｏＰｈａｒｍａ、Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）、ＳＦ－１１２６（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｓｅｍａｆｏｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＢＥＺ－２３５（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＬ－１４７（ＰＩ３Ｋ阻害剤、Ｅｘｅｌｉｘｉｓ）、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ロイコボリン（フォリン酸）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（ＳＡＲＡＳＡＲ（商標）、ＳＣＨ６６３３６、Ｓｃｈｅｒｉｎｇ Ｐｌｏｕｇｈ）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、ＢＡＹ４３－９００６、Ｂａｙｅｒ Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イリノテカン（ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、ＣＰＴ－１１、Ｐｆｉｚｅｒ）、チピファルニブ（ＺＡＲＮＥＳＴＲＡ（商標）、Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ非含有）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，ＩＩ）、バンデタニブ（ｒＩＮＮ、ＺＤ６４７４、ＺＡＣＴＩＭＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、クロラムブシル、ＡＧ１４７８、ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｓｕｇｅｎ）、テムシロリムス（ＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、パゾパニブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、カンホスファミド（ＴＥＬＣＹＴＡ（登録商標）、Ｔｅｌｉｋ）、チオテパおよびシクロホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）、ＮＥＯＳＡＲ（登録商標））；アルキルスルホネート類、例えば、ブスルファン、インプロスルファンおよびピポスルファン；アジリジン類、例えば、ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパおよびウレドーパ；エチレンイミン類およびメチルメラミン類、これにはアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびトリメチロメラミンがある；アセトゲニン類（とりわけ、ブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（合成アナログのトポテカンを含めて）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（その合成アナログのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシンを含めて）；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログのＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含めて）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード類、例えば、クロラムブシル、クロルナファジン、クロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベンビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロソウレア類、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチンおよびラニムヌスチン；抗生物質類、例えば、エンジイン抗生物質類（例えば、カリケアミシン、カリケアミシンガンマｌｌ、カリケアミシンオメガｌｌ（Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．（１９９４）３３：１８３～１８６頁））；ジネミシン、ジネミシンＡ；ビスホスホネート類、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；ならびに、ネオカルチノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン類、アクチノマイシン、アウトラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン類、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシニス、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、ネモルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン類、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン類、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質類、例えば、メトトレキセートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸アナログ類、例えば、デノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート；プリンアナログ類、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジンアナログ類、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン類、例えば、カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤類、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補充剤類、例えば、フロリン酸；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビスアントレン；エダトラキセート；デホファミン；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン；メイタンシノイド、例えばメイタンシンおよびアンサミトシン類；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（とりわけ、Ｔ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡおよびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金アナログ類、例えば、シスプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標）、Ｒｏｃｈｅ）；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド類、例えばレチノイン酸；ならびに上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸および誘導体。
また、「化学療法剤」の定義に同様に含まれるものは以下である：（ｉ）腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン剤類、例えば、抗エストロゲン剤および選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）、これには、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）、クエン酸タモキシフェンを含めて）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストンおよびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフェン）がある；（ｉｉ）副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤類、例えば、以下のようなもの、４（５）－イミダゾール類、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタニー、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；（ｉｉｉ）抗アンドロゲン剤類、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリドおよびゴセレリン；ならびに、トロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤類、例えば、ＭＥＫ阻害剤（ＷＯ２００７／０４４５１５）；（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤類；（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド類、特に、異常な細胞増殖に関係するシグナル伝達経路における遺伝子の、例えば、ＰＫＣ－アルファ、ＲａｆおよびＨ－Ｒａｓの発現を阻害するアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばオブリメルセン（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標）、Ｇｅｎｔａ Ｉｎｃ．）；（ｖｉｉ）リボザイム類、例えば、ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤；（ｖｉｉｉ）遺伝子治療ワクチンなどのワクチン類、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）およびＶＡＸＩＤ（登録商標）；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ－２；トポイソメラーゼ１阻害剤、例えばＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；（ｉｘ）抗血管新生剤類、例えばベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；ならびに、上記のいずれかの医薬的に許容される塩、酸および誘導体。
また、「化学療法剤」の定義に同様に含まれるものは以下の治療抗体である：例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｅ）、オファツムマブ（ＡＲＺＥＲＲＡ（登録商標）、ＧＳＫ）、ペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（商標）、ＯＭＮＩＴＡＲＧ（商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、および、抗体薬物コンジュゲートのゲムツズマブ オゾガミシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）。また、「化学療法剤」の定義に同様に含まれるものは、がんの病理学において特に重要である特定の分子または分子のクラスを調整する活性剤である。目的の特定の分子の例は、ｖＥＧＦおよびＥＧＦＲ（ＨＥＲ１、ＨＥＲ２、および／またはＨＥＲ３）である。目的の分子のクラスの例は、抗ＰＤＬ－１またはＣＴＬＡ４免疫モジュレーターなどの免疫チェックポイントモジュレーターである。かかる適切な活性剤の例には、抗体、核酸（例えば、リボザイム、ｓｉＲＮＡ）、および小分子が含まれる。一部の実施形態では、活性剤は、特定の分子の発現および／または活性を阻害する。一部の実施形態では、活性剤は、特定の分子の発現および／または活性を活性化する。
本開示のコンジュゲートとの組合せで化学療法剤としての治療可能性を備えるヒト化モノクローナル抗体として、以下が挙げられる：アレムツズマブ、アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネウズマブ、ベバシズマブ、ビバツズマブ メルタンシン、カンツズマブ メルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブ ペゴール、シドフシツズマブ、シドツズマブ、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマズ、ゲムツズマブ オゾガミシン、イノツズマブ オゾガミシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ、ヌマビズマブ、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ、ペクツズマブ、ペルツズマブ、ペキセリズマブ、ラリビズマブ、ラニビズマブ、レスリビズマブ、レスリズマブ、レシビズマブ、ロベリズマブ、ルピリズマブ、シブロツズマブ、シプリズマブ、ソンツズマブ、タカツズマブ テトラキセタン、タドシズマブ、タリズマブ、テフィバズマブ、トシリズマブ、トラリズマブ、トラスツズマブ、ツコツズマブ セルモロイキン、ツクシツズマブ、ウマビズマブ、ウルトキサズマブおよびビシリズマブ。
本開示による、および本開示による使用のための医薬組成物は、有効成分、すなわち本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートに加えて、医薬的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤または当業者であればよく知られているその他の材料を含むことができる。かかる材料は無毒であることが求められるとともに、有効成分の効能を妨げてはならない。担体またはその他の材料の正確な特質は、投与経路に左右されることになるが、この経路は経口であってもよく、例えば、皮膚、皮下、または静脈内の注射によるものであってもよい。
別の態様では、ＭＳＲ１を特異的に結合する組換えヒト抗体またはそれの断片を含む抗体－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物が本明細書で提供され、これは、リファマイシンアナログおよび医薬的に許容される担体をさらに含む。関連する態様では、実施形態は、抗ＭＳＲ１抗体を含み、リファマイシンアナログをさらに含む抗体－薬物コンジュゲートと、第２の治療部分との組合せである組成物に関する。一実施形態では、第２の治療部分は、抗ＭＳＲ１抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートと効果的に組み合わされている任意の作用剤である。一実施形態では、第２の治療部分は、第２の薬物または治療部分にコンジュゲートされた抗ＭＳＲ１抗体を含む抗体－薬物コンジュゲートである。例示的な併用療法、合剤、および抗ＭＳＲ１抗体を含むＡＤＣが、本明細書の他の箇所に開示されている。
ある特定の実施形態では、本開示は、本開示のタンパク質－薬物コンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。本開示の医薬組成物は、適切な担体、賦形剤、および改善された輸送、送達、耐容性等をもたらす他の活性剤と共に製剤化される。数多くの適当な製剤が、全ての製薬化学者に既知の処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡに見いだすことができる。これらの製剤として、例えば、粉末、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、油、脂質、脂質（カチオン性またはアニオン性）含有小胞（例えば、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（商標）、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）、ＤＮＡコンジュゲート、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（種々の分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲルならびにカーボワックスを含有する半固体混合物が挙げられる。Ｐｏｗｅｌｌら「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ」 ＰＤＡ（１９９８） Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８～３１１頁も参照されたい。
ある特定の実施形態では、本開示には、それを必要とする対象に、ＨＥＲ２を特異的に結合する抗ＨＥＲ２抗体またはそれの抗原結合断片を含む治療用組成物を投与することを含む方法が含まれる。治療用組成物は、本明細書に開示の抗体または抗原結合分子のいずれか、および医薬的に許容される担体または希釈剤を含むことができる。「それを必要とする対象」という表現は、がんの１つもしくはそれ以上の症状もしくは徴候を呈すヒトもしくは非ヒト動物（例えば、腫瘍を発現するか、もしくは下で本明細書に記述のがんのいずれかに罹患している対象）、またはそうでない場合、ＨＥＲ２活性の阻害もしくは減少、もしくはＨＥＲ２＋細胞（例えば、乳がん細胞）の枯渇から恩恵を受けるであろうヒトもしくは非ヒト動物を意味する。
別の態様では、本開示は、ＨＥＲ２を特異的に結合する組換えヒト抗体またはそれの断片および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。関連する態様では、本開示は、抗ＨＥＲ２抗体と第２の治療部分との組合せである組成物を特徴とする。一実施形態では、第２の治療部分は、抗ＨＥＲ２抗体と効果的に組み合わされている任意の活性剤である。本開示の抗ＨＥＲ２抗体を含むさらなる併用療法および合剤は、本明細書の他の場所に開示されている。
別の態様では、本開示は、本開示の抗ＨＥＲ２抗体を使用して、ＨＥＲ２を発現する腫瘍細胞をターゲティング／殺滅するための治療方法を提供し、この場合、治療方法は、本開示の抗ＨＥＲ２抗体を含む医薬的組成物の治療有効量を、それを必要とする対象へ投与することを含む。一部の例では、抗ＨＥＲ２抗体（またはそれの抗原結合断片）は、乳がんを処置するために使用することができ、または、それらに限定されないが、ＡＤＣＣを増大させるための改変Ｆｃドメイン（例えば、Ｓｈｉｅｌｄら（２００２） ＪＢＣ ２７７：２６７３３頁を参照されたい）、放射免疫療法、抗体－薬物コンジュゲート、または腫瘍切除の効率を向上させるためのその他の方法を始めとする、方法によって、より細胞傷害性なものとになるように改変することができる。
本開示の化合物の作製方法
第一級アミン化合物をコンジュゲートする技法は、当技術分野で知られている。本明細書では部位特異的コンジュゲーション技法を用いて、トランスグルタミナーゼを介したグルタミンコンジュゲーションを使用してグルタミンへのコンジュゲーションを誘導する（例えば、Ｓｃｈｉｂｌｉ、Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍｉｅ Ｉｎｔｅｒ Ｅｄ．２０１０、４９、９９９５頁を参照されたい）。また、その主題を明示的に本明細書に組み入れる、ＷＯ２０１７１４７５４２も参照されたい。本明細書に記載の、グルタミニル修飾タンパク質およびタンパク質－薬物コンジュゲート（例えばＡＤＣ）を作製する方法、ならびに提供される方法で有用な組成物、ならびに方法によって生成される組成物が本明細書で提供される。コンジュゲートされたタンパク質は、それを必要とする対象におけるがんの処置を含めて、アッセイ、診断、および治療において有用である。
ある特定の実施形態では、方法は、反応性アミン化合物が本開示による反応性リンカー－ペイロード化合物である、下の少なくとも工程（２）を含む。
方法は、抗体のグルタミン残基におけるトランスグルタミナーゼ反応を含む。抗体は、当業者にとって既知の任意の抗体とし得る。有用な抗体は、本明細書の一セクションに記載されている。
当業者であれば、抗体が少なくとも１個のグルタミン残基を含む必要があることをわかるであろう。ある特定の実施形態では、抗体は、ＥＵ番号付けシステムで２９５と付番された１つまたはそれ以上の重鎖位置にグルタミン残基を含む。本開示では、この位置は、グルタミン２９５とまたはＧｌｎ２９５とまたはＱ２９５と呼ばれる。当業者であれば、これが多くの抗体の野生型配列中の保存されたグルタミン残基であることをわかるであろう。他の有用な実施態様では、上記抗体を操作して、グルタミン残基を含めることができる。グルタミン残基を含むように抗体配列を改変する技法は、当業者の能力の範囲内である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、抗体は、各重鎖に１個で、２個のグルタミン残基を含む。特定の実施形態では、抗体は、各重鎖に１個のＱ２９５残基を含む。さらなる実施形態では、抗体は、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、またはそれ超のグルタミン残基を含む。これらのグルタミン残基は、重鎖に、軽鎖に、または重鎖と軽鎖の両方に存在し得る。これらのグルタミン残基は、野生型残基であっても操作された残基であってもよい。抗体は、標準技法にしたがって製造することができる。
当業者であれば、抗体は、多くの場合で重鎖配列の残基Ｑ２９５近傍、残基Ｎ２９７でグリコシル化されていることを、わかるであろう。残基Ｎ２９７におけるグリコシル化は、残基Ｑ２９５にてトランスグルタミナーゼを妨害することができるとともに（Ｄｅｎｎｌｅｒら、上掲）、薬物の抗体に対する比（ＤＡＲ）に影響を及ぼすことができる。したがって、効果的な実施形態では、抗体はグリコシル化されていない。ある特定の実施形態では、抗体は脱グリコシル化またはアグリコシル化されている。
脱グリコシル化工程では、当業者にとって明らかな任意の技法によって抗体を脱グリコシル化することができる。特定の実施形態では、脱グリコシル化抗体は、抗体から１つまたはそれ以上のオリゴ糖を除去することによって製造される。脱グリコシル化は、当業者にとって明らかな任意の技法によって行うことができる。ある特定の実施形態では、抗体は化学的に脱グリコシル化される。ある特定の実施形態では、抗体は酵素的に脱グリコシル化される。ある特定の実施形態では、抗体は、ポリペプチドをグリコシル化しない系での発現によって脱グリコシル化することができる。有用な発現系には、例えば、原核発現系が含まれる。
ある特定の実施形態では、以下の工程を含む方法が本明細書で提供される：
（１）抗体を脱グリコシル化すること。
抗体は、当業者が適切とする任意の技法によって脱グリコシル化することができる。ある特定の実施形態では、抗体を、抗体とオリゴ糖との間の結合を切断することができる試薬と接触させる。試薬は、当業者にとって既知の任意の試薬とし得る。特定の実施形態では、試薬は、アスパラギン側鎖とＮ連結型オリゴ糖との間の結合を切断できる酵素である。ある特定の実施形態では、試薬は、ＰＮＧａｓｅ Ｆ、またはペプチド－Ｎ４－（Ｎ－アセチル－ベータ－グルコサミニル）アスパラギンアミダーゼ、またはＥＣ３．５．１．５２である。ＰＮＧａｓｅ Ｆなどの試薬は、商業的供給源から入手できる。ある特定の実施形態では、試薬はＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ Ｍｉｘ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ）である。試薬は、グリコシル化抗体の量および反応容量に適した量で使用される。ある特定の実施形態では、試薬約０．４単位を、グリコシル化抗体約１μｇ当たりに使用する。
ある特定の実施形態では、脱グリコシル化抗体を、反応混合物から単離する。脱グリコシル化抗体は、当業者が適切とする任意の技法によって単離することができる。特定の実施形態では、脱グリコシル化抗体は、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、濾過、遠心限外濾過、または適切と思われる他の任意の技法によって単離することができる。
次いで、妨害性のグリコシル化を有さない抗体を第一級アミン化合物と反応させる。ある特定の実施形態では、アグリコシル化抗体を第一級アミン化合物と反応させて、グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）を生成する。ある特定の実施形態では、脱グリコシル化抗体を第一級アミン化合物と反応させて、グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）を生成する。この説明の目的のために、脱グリコシル化抗体は、任意の供給源から、または当業者が適切とする任意の技法によって得ることまたは生成することができる。ある特定の実施形態では、抗体は、上の工程（１）にしたがって脱グリコシル化される。さらなる実施形態では、脱グリコシル化抗体またはアグリコシル化抗体が、妨害性のグリコシル化を十分に含まない少なくとも１個のグルタミン残基を、または、下に記載のように、トランスグルタミナーゼとの反応に利用可能である他の構造を、含むことで十分である。
第一級アミンは、トランスグルタミナーゼの存在下でグルタミン残基と共有結合を形成することができる任意の第一級アミンとし得る。有用な第一級アミンは、本明細書の一セクションに記載されている。
別の実施形態では：
（２）トランスグルタミナーゼの存在下、約７．０～約８．０の間の反応ｐＨで、第一級アミンが抗体のポリペプチド鎖中のグルタミン側鎖へと共有結合でカップリングするのに適した条件下で、抗体を十分な量の第一級アミン化合物で処理する工程を含む、グルタミニル修飾抗体を生成するための方法が提供される。本明細書で論議のように、抗体は、脱グリコシル化されている場合があり、アグリコシル化されている場合があり、そうでなければ、妨害性のグリコシル化を含まない場合がある。
別の実施形態では：
（ｉ）脱グリコシル化抗体またはアグリコシル化抗体を溶媒に添加する工程と；
（ｉｉ）第一級アミン化合物少なくとも５モル当量を添加する工程と；
（ｉｉｉ）反応ｐＨが約６．５～約８．５の間であるようなｐＨでトランスグルタミナーゼを添加する工程と；
（ｉｖ）最終反応混合物を混合する工程と
を含む、グルタミニル修飾抗体を生成するための方法が提供される。
別の実施形態では、工程（ｉｖ）は、最終反応混合物を少なくとも４時間混合することを含む。ある特定の実施形態では、工程（ｉｖ）は、最終反応混合物を攪拌することを含む。他の実施形態では、工程（ｉｖ）は、反応混合物を振盪することを含む。
トランスグルタミナーゼは、当業者が適切とする任意のトランスグルタミナーゼとし得る。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、第一級アミン化合物上の遊離アミノ基とグルタミン残基の側鎖上のアシル基との間にイソペプチド結合の形成を触媒する酵素である。トランスグルタミナーゼはまた、タンパク質－グルタミン－Ｙ－グルタミルトランスフェラーゼとしても知られている。特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、ＥＣ２．３．２．１３として分類される。トランスグルタミナーゼは、適切とされる任意の供給源に由来してもよい。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは微生物トランスグルタミナーゼである。有用なトランスグルタミナーゼは、ストレプトマイセス・モバラエンセ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｏｂａｒａｅｎｓｅ）、ストレプトマイセス・シンナモネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ）、ストレプトマイセス・グリセオカルネウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｏ－ｃａｒｎｅｕｍ）、ストレプトマイセス・ラベンジュラエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌａｖｅｎｄｕｌａｅ）、および枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）から単離されている。哺乳動物のトランスグルタミナーゼを含めて、非微生物トランスグルタミナーゼも使用できる。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、任意の技法によって生成されてもよく、当業者が適切とする任意の供給源から得られてもよい。特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは商業的供給源から得られる。
工程（２）では、反応は通常、溶媒中で実行される。ある特定の実施形態では、溶媒は、緩衝溶液または緩衝水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、有機溶媒、リン酸塩、ＨＥＰＥＳおよびＭＯＰＳで緩衝化された水などの、水溶液からなる群から選択される。例えば、一実施形態では、溶媒はＢｕｐＨリン酸緩衝生理食塩水である。
工程（２）の反応では、抗体は、当業者にとっては適切とされる任意の濃度とし得る。ある特定の実施形態では、抗体は、０．１から５ｍｇ／ｍｌまでの濃度で存在する。ある特定の実施形態では、抗体は、約０．１ｍｇ／ｍｌ、約０．２ｍｇ／ｍｌ、約０．３ｍｇ／ｍｌ、約０．４ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ、約０．６ｍｇ／ｍｌ、約０．７ｍｇ／ｍｌ、約０．８ｍｇ／ｍｌ、約０．９ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ、約１．１ｍｇ／ｍｌ、約１．２ｍｇ／ｍｌ、約１．３ｍｇ／ｍｌ、約１．４ｍｇ／ｍｌ、約１．５ｍｇ／ｍｌ、約１．６ｍｇ／ｍｌ、約１．７ｍｇ／ｍｌ、約１．８ｍｇ／ｍｌ、約１．９ｍｇ／ｍｌ、約２．０ｍｇ／ｍｌ、約２．５ｍｇ／ｍｌ、約３．０ｍｇ／ｍｌ、約３．５ｍｇ／ｍｌ、約４．０ｍｇ／ｍｌ、約４．５ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
第一級アミン化合物の濃度は、当業者が適切とする任意の濃度とし得る。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物の濃度によって反応の効率が決定される（すなわち、有用なＤＡＲがもたらされる）。第一級アミン化合物の濃度によって、高分子量副生成物が少量であることおよび高ＤＡＲが可能となる。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約３４モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約５０モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約７５モル当量の濃度である。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約８５モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約１００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約１２５モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約１５０モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約１７５モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して少なくとも約２００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約３００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約４００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約５００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約６００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して少なくとも約７００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約８００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約９００モル当量の濃度にある。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、抗体の濃度に対して、少なくとも約１０００モル当量の濃度にある。当業者であれば、上記範囲が第一級アミン化合物の溶解度における上限を有することをわかるであろう。ある特定の実施形態では、上記濃度のいずれもが、約５００モル当量未満であるかまたは約１０００モル当量未満である。
トランスグルタミナーゼのＵ／脱グリコシル化抗体１ｍｇの程度は、当業者が適切とする任意の量とし得る。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、約０．５～約３０Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、約０．５～約６Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、約１～約３０Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、少なくとも約１．７５Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、約２．２Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、少なくとも約２．５Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、少なくとも約３．５Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは少なくとも約５Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、少なくとも約１０Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、少なくとも約２５Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。ある特定の実施形態では、トランスグルタミナーゼは、スケールアップの目的で約１２Ｕ／脱グリコシル化抗体１ｍｇである。
工程（２）の反応は、当業者が適切とする任意の温度で実行される。特定の実施形態では、反応は、約２０℃から約４０℃まで、約２５℃から約４０℃まで、または約２５℃から約３７℃までの任意の温度で行われる。特定の実施形態では、反応は室温にてである。特定の実施形態では、反応は、約２５℃、約３０℃、約３５℃、または約３７℃にてである。
工程（２）の反応は、当業者が適切とする任意の量で行うことができ、反応のサイズに左右される。特定の実施形態では、反応容量は、約１０μＬから約１０ｍＬまで、約１０μＬから約５ｍＬまで、約１０μＬから約２．５ｍＬまで、約１０μＬから約１．０ｍＬまで、約１０μＬから約０．５ｍＬまで、約１０μＬから約２５０μＬまで、または約１０μＬから約１００μＬまでである。
工程（２）の反応は、グルタミニル修飾抗体の形成にとって適切とされる任意の時間の間、進むことができる。ある特定の実施形態では、反応は約１～約４８時間の間進む。特定の実施形態では、反応は、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１５時間、約２０時間、約２５時間、約３０時間、約４０時間、または約４８時間の間、進む。ある特定の実施形態では、反応は、少なくとも４時間、少なくとも１８時間、または少なくとも２４時間の間進む。反応の進行は、サイズ排除クロマトグラフィー、質量分析法、ＭＡＬＤＩ、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ウェスタンブロッティング等の、標準技法によってモニタリングすることができる。
ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、反応混合物から単離または精製する。グルタミニル修飾抗体は、当業者が適切とする任意の技法によって単離または精製することができる。特定の実施形態では、グルタミニル修飾タンパク質（例えば、抗体）は、クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、または適切と思われる他の任意の技法によって単離することができる。例えば、一実施形態では、グルタミニル修飾抗体は、アフィニティークロマトグラフィーによって精製される。さらなる例として、一実施形態では、グルタミニル修飾抗体は、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製される。さらなる例として、一実施形態では、グルタミニル修飾抗体は、アフィニティークロマトグラフィーおよびプロテインＡクロマトグラフィーによって精製される。
ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、高分子量の副生成物がほとんどまたは全くもたらされない。高分子量副生成物とは、トランスグルタミナーゼおよび／または最終反応のｐＨによって左右される反応において共有結合した２つ以上の重鎖群を含む、高分子量種であると思われる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、外観検査、染色、および／またはその他の検出方法を介したＳＤＳ－ＰＡＧＥゲルの検査に基づいて、検出可能な副生成物を含まない組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、所望のグルタミニル修飾抗体に対して１０％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して５％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して４％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して３％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して２％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して１％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（２）の反応によって、グルタミニル修飾抗体に対して１％未満の架橋抗体を含む組成物がもたらされる。相対量は、質量基準またはモル基準で算出することができる。
ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、トランスグルタミネーション後にさらなる反応が可能な反応基（本明細書では反応性アミンリンカー、例えば、Ｈ２Ｎ－ＳＰ－Ｗと呼ぶ）を含む。これらの実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、反応性ペイロード化合物（例えば、Ｗ－Ｄ）または反応性リンカー－ペイロード化合物（Ｗ－Ｌ－Ｄ）と反応させて、抗体－ペイロードコンジュゲートを形成することができる。反応性ペイロード化合物、反応性リンカー化合物、または反応性リンカー－ペイロード化合物は、第一級アミン化合物の反応基と反応することができる反応基を含む。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物はジエンを含み、反応性ペイロード化合物または反応性リンカー－ペイロード化合物は、ジエンと反応してディールス－アルダー付加体を形成するジエノフィルを含む。ある特定の実施形態では、第一級アミン化合物は、ジエンとディールス－アルダー付加体を形成することができるジエノフィルを含み、反応性ペイロード化合物または反応性リンカー－ペイロード化合物は、ジエンを含む。
有用な反応性ペイロード化合物および反応性リンカー－ペイロード化合物の例は、上のセクションに記載されている。
したがって、以下の工程を含む方法が本明細書で提供される：
（３）グルタミニル修飾抗体を反応性リンカー－ペイロード化合物と反応させてまたはそれで処理して、抗体－ペイロードコンジュゲートを形成すること。
反応は、当業者が適切とする条件下で進むことができる。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とリンカーペイロード化合物との間に結合を形成するのに適した条件下で、反応性リンカーペイロード化合物と接触させるまたはそれで処理する。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とリンカーペイロード化合物との間にディールス－アルダー付加体を形成するのに適した条件下で、反応性リンカー－ペイロード化合物と接触させるまたはそれで処理する。適切な反応条件は当業者であればよく知られている。例示的な反応を、下の実施例に提供する。
加えて、以下の工程を含む方法が本明細書で提供される：
（３）グルタミニル修飾抗体を反応性ペイロード化合物と反応させてまたはそれで処理して、抗体－ペイロードコンジュゲートを形成すること。
反応は、当業者が適切とする条件下で進むことができる。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とペイロードとの間に結合を形成するのに適した条件下で、反応性ペイロード化合物と接触させるまたはそれで処理する。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とリンカーペイロード化合物との間にディールス－アルダー付加体を形成するのに適した条件下で、反応性リンカーペイロード化合物と接触させるまたはそれで処理する。適切な反応条件は当業者であればよく知られている。例示的な反応を、下の実施例に提供する。
ある特定の実施形態では、以下の工程を含む方法が本明細書で提供される：
（３ａ）グルタミニル修飾抗体を反応性リンカー化合物と反応させてまたはそれで処理して、抗体－リンカーコンジュゲートを形成すること；および
（３ｂ））抗体－リンカーコンジュゲートを反応性ペイロード化合物と反応させてまたはそれで処理して、抗体－ペイロードコンジュゲートを形成すること。
反応は、当業者が適切とする条件下で進むことができる。ある特定の実施形態では、グルタミニル修飾抗体を、グルタミニル修飾抗体とリンカーとの間に結合を形成するのに適した条件下で、反応性リンカー化合物と接触させるまたはそれで処理する。ある特定の実施形態では、抗体－リンカーコンジュゲートを、抗体－リンカーコンジュゲートとペイロードとの間に結合を形成するのに適した条件下で、反応性ペイロード化合物と接触させるまたはそれで処理する。ある特定の実施形態では、反応性リンカー化合物は、第１の反応性基であって、本明細書に記載の第一級アミン化合物の反応性基と反応する第１の反応性基と、第２の反応基であって、反応性ペイロード化合物または反応性リンカー－ペイロード化合物と反応することができ、かつ、（１）工程（３ａ）の反応条件下で不活性であるか、または（２）工程（３ａ）の反応条件下では不活性であるように保護基で保護されているか、いずれかである第２の反応基と、を含む。前記保護された第２の反応基は、脱保護され、工程（３ｂ）に供せられる。適切な反応条件および保護基は、当業者であればよく知られている。例示的な反応を、下の実施例に提供する。
ある特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートを、反応混合物から単離または精製する。抗体－薬物コンジュゲートは、当業者が適切とする任意の技法によって単離または精製することができる。特定の実施形態では、抗体－薬物コンジュゲートは、サイズ排除クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、濾過、または適切と思われる他の任意の技法によって単離することができる。
ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応のよって、副生成物がほとんどまたは全くもたらされない。副生成物とは、トランスグルタミナーゼおよび／または最終反応のｐＨによって左右される反応において互いに共有結合した２つ以上の重鎖ポリペプチドを含む高分子量種であると思われる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して１０％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して５％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して４％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して３％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して２％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。ある特定の実施形態では、工程（３）、（３ａ）、または（３ｂ）の反応によって、抗体－ペイロードコンジュゲートに対して１％未満の副生成物を含む組成物がもたらされる。相対量は、質量基準またはモル基準で算出することができる。
グルタミニル修飾抗体が２つ以上の反応単位を含む一部の実施形態では、例えば、ＳＰが分枝状である場合、工程３を２回以上繰り返して、同じまたは異なる反応性ペイロードまたはリンカー－ペイロードで抗体を機能化することができる。
かかる実施形態では、工程３を、同じまたは異なる条件、例えば、同じまたは異なるｐＨで、２回以上行うことができる。
ＳＰが分枝状であるとともに２つのジエンを含む非限定的な一実施形態では、工程３を２回行うことができ、１回目は工程３を第１のｐＨで行い、２回目は工程３を第２のｐＨで行う。一実施形態では、第１のｐＨは、約６．７～約８．５、または約７．０～約７．６、または約７．２～約７．４、または約７．２である。一実施形態では、第２のｐＨは、約４．５～約６．３、または約５．０～約６．０、または約５．５である。
以下の例は、本明細書の特定の態様を例示する。例は、実施形態およびその様々な態様の特定の理解および実践を提供するにすぎないため、限定と解釈するべきではない。
本明細書で使用される場合、本明細書におけるプロセスおよび実施例において使用される記号および慣例は、逆であるとの別段指定のない限り、現代の科学文献、例えば、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙまたはｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙにおいて使用されるものと一致する。特に、限定するものではないが、以下の略語が実施例および本明細書全体にわたって使用される：
Figure 2023521885000228
本明細書で使用される場合、これらのプロセス、スキーム、および例において使用される記号および慣例は、特定の略語が具体的に定義されているかどうかにかかわらず、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙまたはｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙにおいて使用されるものと一致する。
一般的な方法
使用される全ての溶媒は、Ｓｉｇｍａ ＡｌｄｒｉｃｈまたはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃのいずれかから購入し、さらに精製することなく使用した。１Ｈ－ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｏｖａ ３００ＭＨｚおよび５００ＭＨｚ ＮＭＲ機器で記録した。化学シフト（δ）は、分析のために使用されるＮＭＲ溶媒に関してはｐｐｍで報告され、ｓ－シングレット、ｄ－ダブレット、ｔ－トリプレット、ｑ－カルテット、ｄｄ－ダブレットのダブレット、ｄｔ－トリプレットのダブレット、ｄｑ－カルテットのダブレット、およびｍ－マルチプレットとして報告される。カップリング定数（Ｊ）はヘルツ（Ｈｚ）で報告される。クロマトグラフィー純度は、エレクトロスプレーイオン源およびトリプル－四重極イオントラップアナライザーを備え、Ｍｅｒｃｋ Ｃｈｒｏｍｏｌｉｔｈ ＲＰ－１８ｅ分析ＨＰＬＣカラム（モノリシック、５０×２ｍｍ）、および以下の分析ＨＰＬＣ方法：注入容積５μＬ；流速１ｍＬ／分；０．０５％ＡｃＯＨを含む水中の５→９５％アセトニトリル、５分間（方法Ａ）；もしくは０．１％ＴＦＡ（方法Ｂ）、５分間；もしくは：０．１％ＴＦＡを含む水中の１→３０％アセトニトリル、５分間（方法Ｃ）；Ａｇｉｌｅｎｔダイオードアレイ検出器、波長＝２５４、２２０もしくは１９５ｎｍ；室温を使用したＡｇｉｌｅｎｔ １２００シリーズもしくは１１００シリーズＬＣ／ＭＳシステムで；またはＫｉｎｅｔｅｘ １．７□ｍ Ｃ１８ １００Å カラム（５０×２．１ｍｍ）および以下の分析ＵＰＬＣ方法（方法Ｄ）；注入容積５μＬ；流速０．６ｍＬ／分；水（０．０２％ＨＣＯＯＨを含む）中の１０→９０％アセトニトリル（０．０２％ＨＣＯＯＨを含む）、２．５分；フルダイオードアレイ検出器；室温を使用したＷａｔｅｒｓ ＵＰＬＣ／ＭＳ－５ＳＱＤシステムで判定した。適切なコンジュゲートは、Ｂｒｕｋｅｒ ｕｌｔｒａＦｌｅＸｔｒｅｍｅ ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ質量分析計を使用して分析した。全ての出発材料および溶媒は市販のものを購入し、特に明記しない限りさらに精製することなく使用した。
２－（シクロペンタ－１，３－ジエン－１－イル）エタン－１－アミンおよび２－（シクロペンタ－１，４－ジエン－１－イル）エタン－１－アミン（３）の合成
Figure 2023521885000229
 Ａｒ下、０℃で５分間冷却したＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２－ブロモエチルアミン臭化水素酸（１）（１．０１ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）の溶液に、シクロペンタジエニリドナトリウム（２）（ＴＨＦ中の２．４Ｍ溶液５．０ｍｌ）を５分にわたって滴加した。反応混合物を撹拌し、同時に２２℃に加温した。２４時間後、反応混合物を分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ、次いで、食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０→２０％［ＭｅＯＨ中の１％ＮＨ４ＯＨ］）で精製して、３ ３１１ｍｇを得た（収率７４％）。LC/MS: retention time 0.214 min. (ESI) calculated for C7H12N: [M+H]+ 110; found 110. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 6.44-6.08 (m、3H)、3.48 (s、2H)、2.98 (t、J = 1.5 Hz、1H)、2.89 (dt、J = 10.3、6.8 Hz、3H)、2.57-2.50 (m、2H).
２－（ペンタメチルシクロペンタ－１，３－ジエン－１－イル）エタン－１－アミン（６）および６－アミノ－Ｎ－（２－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）ヘキサンアミドオキサレート（９）の合成
ディールスアルダーリンカー６および９を、以下で記載するように化合物１から合成した。
Figure 2023521885000230
工程１：Ａｒ下、０℃で５分間冷却した無水ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の２－ブロモエチルアミン臭化水素酸１（７５０ｍｇ、３．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタジエニリドナトリウム５（ＴＨＦ中の０．５Ｍ溶液１７．６ｍｌ）を５分にわたって滴加した。反応混合物を撹拌し、同時に、２２℃に加温した。２０時間後、反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ、次いで、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０→５０％［ＭｅＯＨ中の０．１Ｎ ＮＨ３］）で精製して、薄い黄褐色半固形物として化合物６ ６１５ｍｇを得た（３．４４ｍｍｏｌ、収率９４％）。LC/MS (Method B): retention time 1.94 min. (ESI) calculated for C12H22N: [M+H]+ 180; found 180. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 2.05 (t、J = 7.5 Hz、2H)、1.75 (s、6H)、1.70 (s、6H)、1.60 (t、J = 7.5 Hz、2H)、1.23 (bs、2H)、0.87 (s、3H).
工程２：Ａｒ下、ＴＨＦ（４．０ｍＬ）中の化合物６（１１８ｍｇ、０．６５８ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｆｍｏｃ－６－カプロン酸ＮＨＳエステル（３２６ｍｇ、０．７２４ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０→１００％ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物７ ２０８ｍｇを得た（０．４０４ｍｍｏｌ、収率６１％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間４．３８分。（ＥＳＩ）Ｃ３３Ｈ４３Ｎ２Ｏ３：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５１５；実測値５１５。
工程３：Ａｒ下、ＤＣＭ（２．０ｍＬ）中の化合物７（２０８ｍｇ、０．４０４ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＢＵ（１２１ｍＬ、０．８０９ｍｍｏｌ）を添加した。２０分後、反応物を濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０→１００％［ＭｅＯＨ中の０．１Ｍ ＮＨ３］）で精製して、化合物８ ９８．９ｍｇを得た（０．３３９ｍｍｏｌ、収率８４％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）：保持時間１．０２分。（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ３３Ｎ２Ｏ：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値２９３；実測値２９３。
工程４：ＥｔＯＡｃ（１ｍＬ）中の化合物８（９８．９ｍｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＥｔＯＡｃ中の飽和シュウ酸（約２０滴）を添加した。形成された沈殿物を濾過し、ＥｔＯＡｃ ５ｍＬで洗浄し、次いで高真空下で乾燥して、化合物９ ７０．８ｍｇを黄褐色固形物として得た（０．１８５ｍｍｏｌ、収率４７％）。LC/MS (Method B): retention time 0.21 min. (ESI) calculated for free base C18H33N2O: [M+H]+ 293; found 293. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ2.89 (t、J = 7.6 Hz、2H)、2.46-2.43 (m、2H)、2.13 (t、J = 7.4 Hz、2H)、1.77 (s、6H)、1.73 (s、6H)、1.66-1.58 (m、6H)、1.37 (quintet、J = 7.7 Hz、2H)、0.88 (s、3H).
４－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）ブタン－１－アミン（１０）の合成
Figure 2023521885000231
 化合物１０を、実施例２における工程１にしたがって４－ブロモブチルアミン臭化水素酸を使用して合成して、化合物１０ １５７．０ｍｇを黄褐色固形物として得た（０．７５７ｍｍｏｌ、収率５８％）。LC/MS (Method A): retention time 1.60 min. (ESI) calculated for C14H26N: [M+H]+ 208; found 208. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 2.57 (t、J = 7.0 Hz、2H)、1.75 (s、6H)、1.66 (s、6H)、1.45 (bs、2H)、1.37 (t、J = 8.2 Hz、2H)、1.29 (quintet、J = 7.3 Hz、2H)、0.85 (s、3H)、0.62-0.55 (m、2H).
２－（２－（２－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミンアセテート（１３）の合成
Figure 2023521885000232
工程１．Ｂｏｃ－アミノ－ＰＥＧ２－臭化物１１（３２ｍｇ、０．１０３ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（１．０ｍＬ）中に溶解し、Ａｒでパージし、次いで１，４－ジオキサン（０．２６ｍＬ、１．０２９ｍｍｏｌ）中の４Ｍ ＨＣｌで処理した。１日後、反応物を真空中で濃縮し、次いで、高真空で３時間乾燥して、粗製化合物１２を薄黄色油状物として得た。
工程２．Ａｒ下、０℃で５分間冷却した無水ＴＨＦ（１．０ｍＬ）中の粗製１２（０．１０３ｍｍｏｌ）の溶液に、１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタジエニリドナトリウム５（０．６ｍｌ、０．３０９ｍｍｏｌ、ＴＨＦ中の０．５Ｍ溶液）を５分にわたって滴加した。反応混合物を撹拌し、同時に、室温に加温した。２０時間後、反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ、次いで、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０→５０％［ＭｅＯＨ中の０．１Ｎ ＮＨ３］）で精製し、純粋な分画を真空中で濃縮した。次いで、遊離アミンをＡｃＯＨ １ｅｑで処理し、真空中で濃縮し、高真空で乾燥して、化合物１３ １５ｍｇを金色油状物として得た（０．０４５８ｍｍｏｌ、収率４５％）。LC/MS (Method A): retention time 1.90 min. (ESI) calculated for free base C16H30NO2: [M+H]+ 268.2; found 268.3. 1H NMR (500 MHz; CD3OD) δ3.51 - 3.72 (m、6 H) 3.42 - 3.47 (m、2 H) 3.06 - 3.15 (m、2 H) 2.75 - 2.81 (m、2 H) 1.74 - 1.81 (m、9 H) 1.63 - 1.74 (m、7 H) 0.85 - 0.91 (m、3 H).
（２－（２－（３－オキソ－３－（（２－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）プロポキシ）エトキシ）エチル）－ｌ５－アザネイルアセテート（１６）
Figure 2023521885000233
工程１：ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の酸１４（４９ｍｇ、０．１２２８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（０．１ｍＬ）中のアミン６（２０ｍｇ、０．１１１６ｍｍｏｌ）の溶液およびＥＤＣ（４３ｍｇ、０．２２３２ｍｍｏｌ）を室温で添加した。１８時間撹拌後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（３０ｇ）を使用したクロマトグラフィーで直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（０％から１００％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物１５ ３５ｍｇを黄白色固形物として得た（０．０６２４ｍｍｏｌ、収率５６％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．５７分。（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ４５Ｎ２Ｏ５：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５６１．３；実測値５６１．３。
工程２：化合物１５（２０．０ｍｇ、０．０３５７ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（０．７ｍＬ）中に溶解し、次いでＤＭＦ（０．１ｍＬ、０．０５２５ｍｍｏｌ）中の５％ピペリジンを添加した。２時間後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、混合物を逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（３０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（０％から１００％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物１６ １０．０ｍｇを金色油状物として得た（０．０２５１ｍｍｏｌ、収率７０％）。LC/MS (Method A): retention time 1.69 min. (ESI) calculated for free base C19H35N2O3: [M+H]+ 339.3; found 339.3. 1H NMR (500 MHz; CD3OD) δ 3.69 (t、J = 6.35 Hz、2 H) 3.59 - 3.63 (m、5 H) 3.55 - 3.58 (m、2 H) 2.88 (t、J = 5.13 Hz、2 H) 2.41 - 2.49 (m、2 H) 2.36 (t、J = 6.11 Hz、2 H) 1.89 (s、1 H) 1.77 (s、6 H) 1.68 - 1.75 (m、7 H) 1.58 - 1.68 (m、2 H) 0.88 (s、3 H).
（Ｓ）－６－アミノ－Ｎ－（２－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）－２－（３－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）プロパンアミド）ヘキサンアミドオキサレート（２３）の合成
Figure 2023521885000234
工程１．Ａｒ下、ドライアイス／アセトン浴槽中で－７８℃に冷却したＴＨＦ（７．８ｍＬ）中の１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペントジエニリリドナトリウム５（ＴＨＦ中の０．５Ｍ溶液９．４１ｍＬ、４．７０ｍｍｏｌ）の溶液に、３－ブロモ－エチルプロピオネート１７（０．５０ｍＬ、３．９２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を－７８℃で撹拌した。１．５時間後、冷却した浴槽を取り除き、反応混合物をさらに４５分間撹拌した。次いで、反応混合物をＨ２Ｏ（２８０ｍＬ）およびＳｉＯ２（２８０ｍｇ）を添加することによってクエンチした。５分後、混合物をＳｉＯ２の小さなパッドに通して濾過し、濾過物をＤＣＭ（２０ｍＬ）で洗浄した。次いで、濾液を濃縮し、ＥｔＯＨ（３．０ｍＬ）中に溶解し、氷／Ｈ２Ｏ浴槽中で０℃に冷却した。ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断した場合、次いでＨ２Ｏ（３．０ｍＬ）中のＮａＯＨ（３２９ｍｇ、８．２３ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を０℃で１９時間撹拌した。次いで、混合物を１Ｎ ＨＣｌ（ａｑ）（１０ｍＬ）中に注ぎ入れ、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して、粗製酸１８を得た。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．０７分。（ＥＳＩ）Ｃ１３Ｈ２１Ｎ：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値２０９；実測値２０９。
工程２．粗製酸１８（３．９２ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（５．６ｍＬ）中に溶解し、次いで、ＮＨＳ－ＯＨ（６３２ｍｇ、５．４９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９０２ｍｇ、４．７０ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（５．６ｍＬ）を添加した。１５時間後、追加のＮＨＳ－ＯＨ（３００ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）を添加し、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断されるまで、混合物を撹拌した。混合物を、ＳｉＯ２のパッドに通して濾過し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、濾液を濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０→５０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、１９ ８９３ｍｇをオフホワイト色固形物として得た（２．９３ｍｍｏｌ、収率７５％、２工程）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．３８分。（ＥＳＩ）Ｃ１７Ｈ２４ＮＯ４：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値３０６；実測値３０６。
工程３．ＤＭＡ（０．５０ｍＬ）中に溶解したＦｍｏｃ－Ｎｅ－リジン２０（４９．４ｍｇ、０．１３４ｍｍｏｌ）およびＮＨＳエステル１９（４５．０ｍｇ、０．１４７ｍｍｏｌ）に、ジイソプロピルエチルアミン（３６ｍＬ、０．２０１ｍｍｏｌ）を添加した。１５時間後、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断し、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（３０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、２０％の未知の不純物で汚染された化合物２１ ２３．９ｍｇを白色固形物として得た（０．０４２８ｍｍｏｌ、収率３２％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．５３分。（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ４３Ｎ２Ｏ５：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５５９；実測値５５９。
工程４：酸２１（２６．５ｍｇ、０．０４７４ｍｍｏｌ）およびアミン６（８．５ｍｇ、０．０４７４ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１．０ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＥＤＣ（１３．６ｍｇ、０．０７０９ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（９．６ｍｇ、０．０７１０ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。１時間後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、カラムクロマトグラフィー（１２ｇ）（ヘキサン中の０→１００％ＥｔＯＡｃ）で直接精製して、化合物２２ １６．２ｍｇを白色固形物として得た（０．０２２５ｍｍｏｌ、収率４７％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間４．４４分。（ＥＳＩ）Ｃ４６Ｈ６２Ｎ３Ｏ４：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値７２０；実測値７２０。
工程５．化合物２２（１６．２ｍｇ、０．０２２５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（０．５ｍＬ）中に溶解し、次いでＤＢＵ（３．４ｍＬ、０．０２２５ｍｍｏｌ）を添加した。１０分後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、反応混合物を真空中で濃縮した。得られた残留物を、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解し、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（１５．５ｇ）で精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から８０％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、２３のアセテートをオフホワイト色固形物として得た（７．４ｍｇ、０．０１４９ｍｍｏｌ）。材料を、１：１ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ中に溶解し、シュウ酸二水和物（２．２ｍｇ、０．０１７４ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を凍結乾燥して、オキサレート２３ ７．２ｍｇを黄褐色固形物として得た（０．０１２２ｍｍｏｌ、収率５４％）。LC/MS (Method A): retention time 2.52 min. (ESI) calculated for free base C31H52N3O2: [M+H]+ 498; found 498. 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 7.65-7.61 (m、3H)、7.56-7.53 (m、1H)、4.02-3.98 (m、1H)、2.74-2.70 (m、2H)、2.25-2.22 (m、2H)、1.82-1.77 (m、2H)、1.72 (s、12H)、1.66 (d、J = 13.8 Hz、12H)、1.58-1.53 (m、2H)、1.53-1.44 (m、4H)、1.37-1.32 (m、2H)、1.27-1.14 (m、2H)、1.08-1.05 (m、1H)、0.97-0.89 (m、1H)、0.84 (s、3H)、0.81 (s、3H).
（Ｓ）－６－アミノ－Ｎ－（２－（フラン－３－イル）エチル）－２－（３－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）プロパンアミド）ヘキサナミジルアセテート（２７）の合成
Figure 2023521885000235
工程１：Ａｒ下、ＤＣＭ（２．６ｍＬ）中のＢｏｃＮＨＬｙｓ（Ｆｍｏｃ）ＯＨ ２４（２００ｍｇ、０．４２７ｍｍｏｌ）および２－（フラン－３－イル）エタン－１－アミン（４３ｍｇ、０．３８８ｍｍｏｌ）に、ＥＤＣ（１１２ｍｇ、０．５８２ｍｍｏｌ）を添加した。１６時間後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、カラムクロマトグラフィー（４０ｇ）（ヘキサン中の１０→１００％ＥｔＯＡｃ）で直接精製して、化合物２５ １４２．７ｍｇを白色固形物として得た（０．２５４ｍｍｏｌ、収率６６％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．１９分。（ＥＳＩ）Ｃ３２Ｈ４０Ｎ３Ｏ６：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５６２；実測値５６２。
工程２：化合物２５（２１．４ｍｇ、０．０３８１ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ中の１５％ＴＦＡ（１．０ｍＬ）で処理した。３０分後、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断し、真空中で濃縮し、１：１ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）から凍結乾燥してＴＦＡを除去した。次いで、粗製アミンをＤＣＭ（１．０ｍＬ）中に溶解し、ＤＩＥＡ（２０ｍＬ、０．１１４ｍｍｏｌ）を添加した。ｐＨが塩基性であることを確認したら、ＮＨＳエステル１９（１４．０ｍｇ、０．０４５７ｍｍｏｌ）を添加した。５時間後、追加のＮＨＳエステル１９（１８．０ｍｇ、０．０５８９ｍｍｏｌ）を添加した。さらに１６時間後、次いで、反応混合物をカラムクロマトグラフィー（１２ｇ）（ヘキサン中の１０→１００％ＥｔＯＡｃ）で直接精製して、化合物２６ １８．４ｍｇを白色固形物として得た（０．０２８２ｍｍｏｌ、収率７４％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．７４分。（ＥＳＩ）Ｃ４０Ｈ５０Ｎ３Ｏ５：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値６５２；実測値６５２。
工程３：化合物２６（２８．０ｍｇ、０．４３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．０ｍＬ）中に溶解し、次いで、ＤＢＵ（１２．８ｍＬ、０．０８５９ｍｍｏｌ）を添加した。５分後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、混合物を逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（１５．５ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から１００％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物２７ １０．４ｍｇを透明色フィルム状物として得た（０．２１２ｍｍｏｌ、収率４９％）。LC/MS (Method A): retention time 2.65 min. (ESI) calculated for free base C25H40N3O3: [M+H]+ 430; found 430. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.41 (t、J = 1.5 Hz、1H)、7.32 (s、1H)、6.34 (s、1H)、4.20 (dd、J = 8.5、5.8 Hz、1H)、3.42-3.33 (m、4H)、2.85-2.81 (m、2H)、2.61 (t、J = 7.0 Hz、2H)、1.90 (s、3H)、1.77 (s、6H)、1.73-1.68 (m、10H)、1.62-1.50 (m、6H)、1.37-1.28 (m、2H)、0.91 (s、3H).
（Ｓ）－６－アミノ－Ｎ－（２－（２－（２－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エトキシ）エトキシ）エチル）－２－（３－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）プロパンアミド）ヘキサンアミドアセテート（２９）
Figure 2023521885000236
工程１：酸２１（５０ｍｇ、０．０８９６ｍｍｏｌ）およびアミン６（２６．３ｍｇ、０．０９８５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．６ｍＬ）中に溶解した。次いで、ＥＤＣ（３２．６ｍｇ、０．０１７０ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（１０．９ｍｇ、０．０８０６ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。３時間後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）を使用したクロマトグラフィーで直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（０％から１００％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物２８ ５５ｍｇを白色固形物として得た（０．０６８１ｍｍｏｌ、収率７６％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間４．５５分。（ＥＳＩ）Ｃ５０Ｈ７０Ｎ３Ｏ６：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値８０８．５；実測値８０８．５。
工程２：化合物２８（５５．０ｍｇ、０．０６８１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．４ｍＬ）中に溶解し、次いで、ＤＭＦ（０．８ｍＬ、０．４０８７ｍｍｏｌ）中の５％ピペリジンを添加した。３０分後、反応は、ＬＣ／ＭＳによって完了したと判断し、混合物を逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（０％から１００％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物２９ ２４．０ｍｇを白色固形物として得た（０．０３７２ｍｍｏｌ、収率５５％）。LC/MS (Method A): retention time 2.59 min. (ESI) calculated for free base C35H60N3O4: [M+H]+ 586.5; found 586.4. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 4.23 (dd、J = 8.5、5.6 Hz、1 H) 3.45 - 3.55 (m、4 H) 3.37 - 3.43 (m、2 H) 3.33 - 3.36 (m、2 H) 2.73 - 2.86 (m、3 H) 1.90 (s、2 H) 1.73 - 1.80 (m、15 H) 1.66 - 1.73 (m、15 H) 1.47 - 1.63 (m、6 H) 1.29 - 1.44 (m、2 H) 0.90 (d、J = 2.93 Hz、6 H).
３－（シクロペンタ－１，３－ジエン－１－イル）プロパン－１－アミニウムオキサレートおよび３－（シクロペンタ－１，４－ジエン－１－イル）プロパン－１－アミニウムオキサレート（３０）の合成
Figure 2023521885000237
 化合物３０を、実施例１に従って３－ブロモプロピルアミン臭化水素酸を使用して合成した。オキサレート塩を、実施例２の工程４に従って形成して、化合物３０ １５０．７ｍｇを黄褐色固形物として得た（０．７０７ｍｍｏｌ、収率３１％）。LC/MS (Method A): retention time 0.24 min. (ESI) calculated for free base C8H14N: [M+H]+ 124; found 124. 1H-NMR (500 MHz; DMSO-d6): δ 7.86-7.53 (bs、2H)、6.45 (s、1H)、6.41 (dt、J = 2.5、1.2 Hz、0.5H)、6.28-6.27 (m、0.5H)、6.19 (s、0.5H)、6.06 (s、0.5H)、2.94 (s、1H)、2.89 (s、1H)、2.80-2.76 (m、2H)、2.45-2.42 (m、1H)、2.39-2.36 (m、1H)、1.79-1.73 (m、2H).
４－（シクロペンタ－１，３－ジエン－１－イル）ブタン－１－アミニウムオキサレートおよび４－（シクロペンタ－１，４－ジエン－１－イル）ブタン－１－アミニウムオキサレート（３１）の合成
Figure 2023521885000238
 化合物３１を、実施例１に従って４－ブロモブチルアミン臭化水素酸を使用して合成した。オキサレート塩を、実施例２の工程４に従って形成して、化合物３１ ２０．１ｍｇを黄褐色固形物として得た（０．０８８４ｍｍｏｌ、収率６．２％）。LC/MS (Method C): retention time 2.68 min. (ESI) calculated for free base C9H16N: [M+H]+ 138; found 138. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.54-6.04 (m、3H)、3.00-2.75 (m、4H)、2.50-2.47 (m、1H)、2.45-2.42 (m、1H)、1.89-1.77 (m、1H)、1.69-1.64 (m、4H)、1.21 (d、J = 6.9 Hz、1H).
２－（２－（２－（２－（シクロペンタ－１，４－ジエン－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウムアセテートおよび２－（２－（２－（２－（シクロペンタ－１，３－ジエン－１－イル）エトキシ）エトキシ）エトキシ）エタン－１－アミニウムアセテート（３４）の合成
Figure 2023521885000239
工程１．Ｂｏｃ－アミノ－ＰＥＧ３－臭化物３２（１５７ｍｇ、０．４４１ｍｍｏｌ）をＡｃＯＨ（２．０ｍＬ）中に溶解し、次いで、Ａｒでパージし、酢酸（１．０ｍＬ）中の３３％ＨＢｒで処理した。１時間後、反応物を真空中で濃縮し、次いで、高真空で１時間乾燥した。得られた残留物を無水Ｅｔ２Ｏで摩砕し（２×）、次いでＣＨＣｌ３と共沸し、高真空下で乾燥して、粗製化合物３３ １４２ｍｇを金色油状物として得た（０．４２１ｍｍｏｌ、収率９５％）。
工程２．粗製物３３を無水ＤＭＥ（３．０ｍＬ）中に懸濁し、溶解が完了するまで超音波処理をした。次いで、溶液をＡｒ下、０℃に冷却し、シクロペンタジエニリドナトリウム２（ＴＨＦ中の２．４Ｍ溶液０．５０ｍＬ、１．２０ｍｍｏｌ）で処理した。１時間後、反応を１０％ＨＯＡｃ（ａｑ）（１．０ｍＬ）でクエンチし、濃縮し、得られた残留物をＭｅＣＮ（１．５ｍＬ）で希釈し、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から５０％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、不純な化合物３３を得た。第２の逆相精製を、Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）、溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から３５％）を含む）で行った。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物３４ ２４ｍｇを金色油状物として得た（０．０７９６ｍｍｏｌ、収率１９％）。LC/MS (Method A): retention time 0.74 min. (ESI) calculated for free base C13H24NO3: [M+H]+ 242; found 242. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ6.50-6.12 (m、3H)、3.91-3.86 (m、1H)、3.71-3.63 (m、12H)、3.24-3.20 (m、1H)、3.02-2.96 (m、4H)、2.76-2.73 (m、1H)、2.71-2.68 (m、1H).
６－オキソ－６－（（２－（２，３，４，５－テトラメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）ヘキサン－１－アミニウムアセテート、６－オキソ－６－（（２－（１，２，３，４－テトラメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）ヘキサン－１－アミニウムアセテート（マイナー構成成分）、および６－オキソ－６－（（２－（１，２，３，５－テトラメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）ヘキサン－１－アミニウムアセテート（マイナー構成成分）（３８）の合成
ディールスアルダーリンカー３６および３８を以下で記載するように化合物３５から合成した。
Figure 2023521885000240
工程１．無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の２，３，４，５－テトラメチルシクロペンタジエン３５（１．００ｇ、８．１８ｍｍｏｌ）に、ｎＢｕＬｉ（ヘキサン中の１．６Ｍ溶液６．６ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた懸濁液を室内温度で２時間撹拌した。個別の容器中で、ブロモエチルアミン臭化水素酸１（４１９ｍｇ、２．０５ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（２．０ｍＬ）中に懸濁し、Ａｒ下、氷／Ｈ２Ｏ浴槽中で０℃に冷却した。次いで、３５のあらかじめ形成したリチウム塩を、冷却混合物に５分にわたって添加した。追加の無水ＴＨＦ（２×５ｍｌ）を使用して、残りのリチウム塩全てを反応混合物に移した。反応混合物を撹拌し、同時に、２２℃に加温した。２０時間後、反応混合物をＨ２Ｏでクエンチし、分液漏斗に移し、ＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＨ２Ｏ、次いで、食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０→７０％［ＭｅＯＨ中の０．１Ｎ ＮＨ３］）で精製して、化合物３６ １０１ｍｇを薄黄褐色半固形物として得た（０．６１１ｍｍｏｌ、収率３０％）。LC/MS (Method B): retention time 2.05 min. (ESI) calculated for C11H20N: [M+H]+ 166; found 166. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 5.78 (s、0.8H)、5.75 (s、0.2H)、5.29 (t、J = 0.7 Hz、0.1H)、2.64 (bs、0.2H)、2.34-2.29 (m、1H)、2.12-2.08 (m、2H)、1.87-1.82 (m、3H)、1.79 (s、3H)、1.77 (d、J = 0.7 Hz、3H)、1.75 (dd、J = 6.3、0.6 Hz、2H)、1.68 (s、3H)、1.66 (s、1H)、1.64-1.60 (m、2H)、0.96 (d、J = 0.9 Hz、1H)、0.90 (s、3H).
工程２．化合物３７を、実施例２における工程２に従ってＤＭＡ中で合成して、化合物３７ ９５．４ｍｇをオフホワイト色固形物として得た（０．１９１ｍｍｏｌ、収率８５％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．７３分。（ＥＳＩ）Ｃ３２Ｈ４１Ｎ２Ｏ３：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５０１；実測値５０１。
工程３．化合物３８を、実施例２における工程３に従って合成した。ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断したら、反応物を濃縮し、得られた残留物をＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）で希釈し、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から７０％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物３８ ２０．５ｍｇを黄色フィルム状物として得た（０．０６０６ｍｍｏｌ、収率６２％）。LC/MS (Method B): retention time 2.32 min. (ESI) calculated for the free amine C17H31N2O: [M+H]+ 279; found 279. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 5.81 (d、J = 1.6 Hz、0.8H)、5.74 (d、J = 1.2 Hz、0.2H)、2.87 (t、J = 7.6 Hz、3H)、2.77 (ddd、J = 13.3、10.7、5.4 Hz、0.2H)、2.72-2.66 (m、0.2H)、2.51-2.48 (m、2H)、2.14 (td、J = 7.4、2.8 Hz、2H)、1.89 (s、3H)、1.85-1.84 (m、0.8H)、1.81 (d、J = 7.7 Hz、3H)、1.77 (dd、J = 7.4、1.0 Hz、4H)、1.72-1.69 (m、4H)、1.66-1.57 (m、8H)、1.40-1.35 (m、2H)、1.01-1.00 (m、0.2H)、0.97 (s、0.7H)、0.91 (s、3H).
（Ｓ）－６－（（６－（（２－（シクロヘキサ－１，５－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）アミノ）－６－オキソ－５－（３－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）プロパンアミド）ヘキサン－１－アミニウムアセテート（メジャー）および（Ｓ）－６－（（６－（（２－（シクロヘキサ－１，３－ジエン－１－イル）エチル）アミノ）－６－オキソヘキシル）アミノ）－６－オキソ－５－（３－（１，２，３，４，５－ペンタメチルシクロペンタ－２，４－ジエン－１－イル）プロパンアミド）ヘキサン－１－アミニウムアセテート（マイナー）（４６）の合成
ディールスアルダーリンカー４２、４４、および４６を以下で記載するように化合物３９から合成した。
Figure 2023521885000241
工程１．ＬＤＡ（７．２ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ、２．０Ｍ溶液）を、Ａｒ下、－７８℃の無水ＴＨＦの１０ｍＬへ添加し、続いて、無水ＴＨＦ１０ｍＬ中のシクロヘキサノン３９（１．２６ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を－７８℃で３０分間撹拌し、次いで、無水ＴＨＦ１０ｍＬ中のＰｈＮ（Ｔｆ）２（５．１ｇ、１４．４ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。１５分後、冷却した浴槽を取り除き、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。得られた混合物を１０％ＮＨ４Ｃｌ溶液でクエンチし、エーテル（５０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空中で濃縮して、暗茶色油状物を得た。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から５％ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物４０ １．５７ｇを無色油状物として得た（６．８８ｍｍｏｌ、収率５３％）。ＬＣ（方法Ａ）：保持時間３．０３分。ＭＳ（ＦＩＤ）Ｃ７Ｈ７Ｆ３Ｏ３Ｓ［Ｍ］に関する計算値２２８；実測値２２８。
工程２．化合物４１を、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．２０１３，１５，３９６６～３９６９頁に報告されている既知の手順に従って調製した。シクロヘキサ－１，５－ジエン－１－イルトリフルオロメタンスルホネート４０（４１０ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（８２ｍｇ、０．００９ｍｍｏｌ）、ＸＰｈｏｓ（１０３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、Ｃｓ２ＣＯ３（１．４ｇ、４．３２ｍｍｏｌ）、およびニトロメタン（２０ｍＬ）の溶液を、湯浴中、６５℃で加熱して、Ｉｓｃｏカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から２％ＥｔＯＡｃ）で精製後、化合物４１（１３４ｍｇ、４９％）を透明色油状物として得た。ＬＣ（方法Ａ）：保持時間２．９分。ＭＳ（ＦＩＤ）Ｃ８Ｈ１１ＮＯ２［Ｍ］に関する計算値１５３；実測値１５３。
工程３．ＡｃＯＨ（２．５ｍＬ）中の化合物４１（５０ｍｇ、０．３２６ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｚｎ末（２１３ｍｍｏｌ、３．２６ｍｍｏｌ）を室温で添加した。２時間後、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断した。得られた混合物をセライトに通して濾過し、濃縮して、酢酸塩で汚染された粗製化合物４２ ６０ｍｇを得、これを次の工程でさらに精製することなく使用した。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間０．１８分および０．２５分。（ＥＳＩ）遊離塩基Ｃ８Ｈ１４Ｎ［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値１２４．１；実測値１２４．２。
工程４．化合物４３を、実施例２における工程２に従ってＤＭＡ中で合成して、化合物４３ ３５．２ｍｇをオフホワイト色固形物として得た（０．０７６８ｍｍｏｌ、収率２８％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．３３分。（ＥＳＩ）Ｃ２９Ｈ３５Ｎ２Ｏ３：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値４５９；実測値４５９。
工程５．化合物４４を、実施例２における工程３に従って合成した。ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断したら、反応物を濃縮し、得られた残留物をＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）で希釈し、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（１５．５ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（０％から７０％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、不純な化合物４４を得た。第２の逆相精製をＥＺ Ｐｒｅｐ（Ｇｅｍｉｎｉ、３０×１５０ｍｍ）で行った。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（５％から７０％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物４４ ７．３ｍｇを透明色フィルム状物として得た（０．０３０９ｍｍｏｌ、収率４０％）。LC/MS (Method B): retention time 1.82 min. (ESI) calculated for free base C14H25N2O: [M+H]+ 237; found 237. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 6.11-6.09 (m、0.1H)、5.85 (s、2H)、5.81-5.78 (m、0.2H)、5.55 (s、1H)、5.49 (s、0.2H)、3.23 (t、J = 7.3 Hz、2H)、2.85 (t、J = 7.5 Hz、2H)、2.66 (s、0.1H)、2.58-2.54 (m、0.2H)、2.24-2.18 (m、4H)、2.13-2.05 (m、3H)、1.90 (s、1H)、1.75-1.69 (m、0.4H)、1.68-1.59 (m、4H)、1.42-1.36 (m、2H).
工程６．ＤＭＡ（１．１ｍＬ）の化合物４４（９．９ｍｇ、０．０４２１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡ（０．４０ｍＬ）中の、化合物２１（３５．３ｍｇ、０．０６３１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（３２．０ｍｇ、０．０８４２ｍｍｏｌ）、およびＮＭＭ（１４μＬ、０．１２６ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。２時間後、反応をＡｃＯＨでクエンチし、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（５０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（３０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物４５ １９．８ｍｇを白色固形物として得た（０．０２５５ｍｍｏｌ、収率６１％）。ＵＰＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：保持時間２．２９分。（ＥＳＩ）Ｃ４８Ｈ６５Ｎ４Ｏ５：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値７７８；実測値７７８。
工程７．ＤＭＡ（０．８５ｍＬ）中の化合物４５（１９．８ｍｇ、０．０２５５ｍｍｏｌ）の溶液に、ＤＭＡ（３０μＬ）中のＤＢＵ（４．１ｍｇ、０．０２６８ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。２５分後、反応をＡｃＯＨでクエンチし、逆相Ｃ１８Ａｑ Ｉｓｃｏカラム（３０ｇ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（３０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物４６ ５．７ｍｇを白色固形物として得た（０．０１０３ｍｍｏｌ、収率４０％）。LC/MS (Method B): retention time 2.16 min. (ESI) calculated for free base C33H55N4O3: [M+H]+ 555; found 555. 1H-NMR (300 MHz; CDCl3): δ 7.52 (d、J = 3.8 Hz、1H)、6.35 (d、J = 7.5 Hz、1H)、6.09 (d、J = 9.6 Hz、0.2H)、5.83 (q、J = 10.0 Hz、3H)、5.52 (s、1H)、5.31 (d、J = 7.0 Hz、3H)、4.84 (d、J = 26.1 Hz、0.5H)、4.36 (q、J = 7.1 Hz、1H)、3.48 (s、1H)、3.29 (q、J = 6.4 Hz、2H)、3.18 (dt、J = 13.6、6.8 Hz、2H)、2.86 (t、J = 6.8 Hz、2H)、2.51 (s、0.2H)、2.18 (dd、J = 16.8、7.2 Hz、3H)、2.11 (s、3H)、1.94 (s、3H)、1.75-1.59 (m、20H)、1.54-1.25 (m、10H)、0.88 (s、3H).
（Ｓ）－６－（（２－（フラン－３－イル）エチル）アミノ）－５－（３－（フラン－３－イル）プロパンアミド）－６－オキソヘキサン－１－アミニウムアセテート（４８）の合成
Figure 2023521885000242
工程１：化合物４７を、ＤＭＦ（１．０ｍＬ）中の、粗製脱保護アミン２５（２７ｍｇ、０．０５８４ｍｍｏｌ）、３－（フラン－３－イル）プロパン酸（９．８ｍｇ、０．０７０ｍｍｏｌ）、およびＥＤＣＩ（２０ｍｇ、０．１０５ｍｍｏｌ）、ならびにＴＥＡ（１６ｍＬ、０．１１７ｍｍｏｌ）を使用して、実施例７における工程２に従って合成した。１５時間後、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断した。次いで、粗製反応混合物をＥＺ Ｐｒｅｐ（Ｇｅｍｉｎｉ、３０×１５０ｍｍ）で直接精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物４７ １３．５ｍｇを白色固形物として得た（０．０２３１ｍｍｏｌ、収率４０％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．２分。（ＥＳＩ）Ｃ３４Ｈ３８Ｎ３Ｏ６：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値５８４．３；実測値５８４．３。
工程２．化合物４７（１０ｍｇ、０．０１７１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１．２ｍＬ）中に溶解し、ＤＭＦ中の５％ピペリジン（２００ｍＬ）を室温で滴加した。１６時間後、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判断した。混合物を濃縮して、全ての揮発性物質を除去し、ＤＭＳＯ０．５ｍＬ中に溶解した。粗製残留物をＥＺ Ｐｒｅｐ（Ｇｅｍｉｎｉ、３０×１５０ｍｍ）で精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物４８ ６．１ｍｇを白色固形物として得た（０．０１４５ｍｍｏｌ、収率８５％）。LC/MS (Method A): retention time 1.4 min. (ESI) calculated for free base C19H28N3O4: [M+H]+ 362.2; found 362.2. 1H-NMR (500 MHz; CD3OD): δ 7.41 (dt、J = 5.6、1.7 Hz、2H)、7.33 (dd、J = 1.5、0.8 Hz、1H)、7.30 (dd、J = 1.5、0.9 Hz、1H)、6.35 (ddd、J = 4.4、1.7、0.8 Hz、2H)、4.26 (dd、J = 8.8、5.5 Hz、1H)、3.40-3.34 (m、3H)、2.85-2.79 (m、2H)、2.74 (td、J = 7.2、4.5 Hz、2H)、2.62 (t、J = 7.1 Hz、2H)、2.51-2.48 (m、2H)、1.90 (s、2H)、1.78-1.71 (m、1H)、1.60-1.54 (m、3H)、1.32-1.22 (m、2H).
５－（３－メトキシフラン－２－イル）ペンタン－１－アミニウムアセテート（５３）の合成
Figure 2023521885000243
工程１：文献（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１８，２９，２０４６～２４１４頁）において報告されているように化合物４９を調製した。ＬＡＨ（１．１ｍＬ、ＴＨＦ中の１．０Ｍ溶液１．５ｅｑ．）によって化合物４９（１５０ｍｇ、０．７０６ｍｍｏｌ）を還元し、続いて、酒石酸塩ナトリウムカリウム水溶液（０．５ｍＬ）で処理して、対応するアルコール５０を得た（１３６ｍｇ、定量的収率）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間１．９分。（ＥＳＩ）Ｃ１０Ｈ１７Ｏ３：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値１８５．１；実測値１８５．１。
工程２：Ａｒ下、氷／Ｈ２Ｏ浴槽中の、無水ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中の化合物５０（１３０ｍｇ、０．７０５ｍｍｏｌ）にＴＥＡ（１５０μＬ、１．５ｅｑ．）を添加し、続いて、メタンスルホニル塩化物（７１μＬ、１．３ｅｑ．）を滴加した。得られた混合物を０℃で３０分間、次いで室温で２時間撹拌した。反応を、Ｈ２Ｏを添加することによってクエンチし、ＤＣＭ（３×）で抽出した。合わせた有機物を食塩水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥して、粗製化合物５１ １４３ｍｇを得（０．５４５ｍｍｏｌ、収率７８％）、これをさらに精製することなく次の工程で使用した。ＵＰＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：保持時間１．４分。（ＥＳＩ）Ｃ１１Ｈ１９Ｏ５Ｓ：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値２６３．１；実測値２６２．９。
工程３：ＫＩ（９ｍｇ、０．１ｅｑ．）の存在下、ＤＭＦ（１ｍＬ）中の、化合物５１（１４３ｍｇ、０．５４５ｍｍｏｌ）およびＫ－フタルイミド（１１０ｍｇ、０．５９９ｍｍｏｌ）の混合物を、ＬＣ／ＭＳによって反応が完了したと判定されるまで室温で３日間撹拌し、次いで、揮発性物質を真空中で濃縮した。得られた残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から６０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物５２ ６４ｍｇを得た（０．２０４ｍｍｏｌ、収率３８％）。ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）：保持時間３．１分。（ＥＳＩ）Ｃ１８Ｈ２０ＮＯ４：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値３１４．１；実測値３１４．１。
工程４：化合物５２（３０ｍｇ、０．０９５７ｍｍｏｌ）を、ＥｔＯＨ（０．５ｍＬ）中に溶解し、ＮＨ２－ＮＨ２・Ｈ２Ｏ（１０μＬ、０．１４３ｍｍｏｌ、１．５ｅｑｕｉｖ）を室内温度で添加した。１６時間後、反応物を、４０℃にわずかに加熱して、反応を完了させた。粗製混合物を真空中で濃縮し、得られた残留物を、ＤＭＳＯ（１ｍＬ）中に溶解し、ＥＺ Ｐｒｅｐ（Ｇｅｍｉｎｉ、３０×１５０ｍｍ）で精製した。溶出液：Ｈ２Ｏ中のＣＨ３ＣＮ、それぞれ０．０５％ＡｃＯＨ（１０％から９５％）を含む。生成物を含む分画を合わせ、凍結乾燥して、化合物５３ ８．５ｍｇを得た（０．０４６４ｍｍｏｌ、収率４８％）。UPLC/MS (Method D): retention time 0.83 min. (ESI) calculated for free base C10H18NO2: [M+H]+ 184.1; found 183.9. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ 7.10 (t、J = 2.4 Hz、1H)、6.26 (d、J = 0.8 Hz、1H)、3.71 (s、3H)、3.15 (bs、2H)、2.72-2.70 (m、2H)、2.60-2.57 (m、2H)、2.00 (s、3H)、1.64-1.58 (m、2H)、1.51-1.48 (m、2H)、1.36-1.32 (m、2H).
３－（３－メトキシフラン－２－イル）プロパン－１－アミニウムアセテート（５７）の合成
Figure 2023521885000244
工程１：Ａｒ下、氷浴槽中の、無水ＴＨＦ（３ｍＬ）中のＮａＨ（９５．４ｍｇ、２．３９ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）の懸濁液に、ジエチル（シアノメチル）ホスホネート（２９５μＬ、１．８２ｍｍｏｌ、１．１５ｅｑ．）を滴加した。得られた混合物を３０分間撹拌し、次いで、この冷却溶液に、ＴＨＦ（１ｍＬ）中の化合物５４（２００ｍｇ、１．５９ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。５分後、氷浴を取り除いた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応をＨ２Ｏでクエンチし、ＥｔＯＡｃで抽出した。粗製残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から９０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物５４ ２２０ｍｇをオフホワイト色固形物として得た（１．４８ｍｍｏｌ、収率９３％）。ＵＰＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：保持時間１．０９分および１．１９分。（Ｚ／Ｅ＝１：９）。（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ８ＮＯ２：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値１５０．１；実測値１４９．９。
工程２：化合物５５（１１０ｍｇ、０．７３７ｍｍｏｌ）を、Ｈ２加圧下、ＴＨＦ／ＭｅＯＨ（４ｍＬ、１：１、ｖ／ｖ）の混合物中のウィルキンソン触媒ＲｄＣｌ（ＰＰｈ３）３（６８ｍｇ、０．１ｅｑ．）で処理した。４８時間後、反応を完了させて、選択的に還元された粗製生成物５６を得た。粗製残留物をカラムクロマトグラフィー（ヘキサン中の０から９０％ＥｔＯＡｃ）で精製して、化合物５６ ４４ｍｇを得た（０．２９１ｍｍｏｌ、収率４０％）。ＵＰＬＣ／ＭＳ（方法Ｄ）：保持時間１．０１分。（ＥＳＩ）Ｃ８Ｈ１０ＮＯ２：［Ｍ＋Ｈ］＋に関する計算値１５２．１；実測値１５１．９。
工程３：化合物５６（８．５ｍｇ、０．０５６２ｍｍｏｌ）を、氷浴中のＬＡＨ（８４μＬ、０．０８４３ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ）で処理した。２時間後、冷却混合物をＨ２Ｏ（０．５ｍＬ）および１．０Ｍ ＮａＯＨ溶液（０．５ｍＬ）で慎重にクエンチした。所望の生成物を、Ｅｔ２Ｏで抽出し、真空中で濃縮して、化合物５６ ２．５ｍｇを得た（０．０１６１ｍｍｏｌ、収率２９％）。UPLC/MS (Method D): retention time 0.53 min. (ESI) calculated for C8H14NO2: [M+H]+ 156.1; found 155.9. 1H-NMR (500 MHz; CDCl3): δ7.12 (s、1H)、6.27 (s、1H)、3.73 (s、3H)、2.75 (bs、2H)、2.66 (t、J = 7.3 Hz、2H)、2.06-2.05 (m、2H)、1.81-1.78 (m、2H).
抗体および脱グリコシル化
以下の例では、トラスツズマブとしても知られる、Ｃａｒｔｅｒ ら，ＰＮＡＳ １９９２ ８９ ４２８５からのｈｕｍＡｂ４Ｄ５－８由来の可変領域を有する抗ＨＥＲ２抗体と、腫瘍学または感染性疾患とは関連しない免疫学的抗原由来の非結合アイソタイプコントロールとの２つの抗体を、ＰＮＧａｓｅＦ（ＮＥＢ Ｐ０７０４Ｌ）の４００Ｕ／ｍｇ ｍＡｂを使用して、ＰＢＳ、ｐＨ７．４中、３７℃で一晩脱グリコシル化した。反応混合物に、スピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ、３０ｋＤａカットオフ）を使用して、ＰＢＳ、ｐＨ７．４に緩衝液交換を行った。これによって、２９５Ｑ残基がトランスグルタミナーゼ酵素にアクセスして、抗体は最大ローディング２までコンジュゲートすることが可能になる。
この部位においてＦｃのＮ連結グリコシル化を除去するＮ２９７Ｑ突然変異を含む抗ＭＳＲ１抗体Ｈ１Ｈ２１２３４Ｎも、以下の実施例において使用した。突然変異によって、抗体が、重鎖の２９５Ｑおよび２９７Ｑにおいて最大ローディング４でコンジュゲートすることが可能になる。同じＮ２９７Ｑ突然変異を含む非結合抗体を非結合アイソタイプコントロールとして使用した。
化合物３リンカーの細菌性トランスグルタミナーゼコンジュゲート
ｍＡｂ－３中間体－グルタミニル修飾ｍＡｂ
Figure 2023521885000245
 脱グリコシル化対照、ＨＥＲ２、およびＭＳＲ１抗体を、ＰＢＳ、ｐＨ７．４中、１ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートした。リンカー３を抗体に対して５０～１５０倍のモル過剰で添加し、酵素反応を、抗体１ｍｇあたり細菌性トランスグルタミナーゼ（Ｚｅｄｉｒａ、Ｔ１００１）１２単位を添加することによって開始し、３７℃で４～１６時間インキュベートした。過剰なリンカー３を、スピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ、３０ｋＤａカットオフ）またはＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーによって除去した。コンジュゲートをＥＳＩ－ＭＳによって分析して、リンカー抗体比（ＬＡＲ）を、質量分析計のＸｅｖｏ Ｇ２－Ｓ ＱＴへ接続されたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣを使用して判定した。クロマトグラフィー分離をＣ４カラム（２．１×５０ｍｍ ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ ＢＥＨタンパク質Ｃ４、１．７μｍ、３００Ａ）、１０分の勾配（分：移動相Ｂの百分率；０：１０％、１：１０％、５：９０％、７：９０％、７．２：１０％、１０：１０％）で達成した。移動相Ａは、水中の０．１％ギ酸であり、移動相Ｂは、アセトニトリル中の０．１％ギ酸であった。流速を０．３ｍＬ／分で設定した。検出器ＴＯＦスキャンをｍ／ｚ５００～４５００で設定し、主要なパラメーターは記載するとおりである（キャピラリー電圧３．０ｋＶ；サンプリングコーン８０Ｖ；原料オフセット１００Ｖ；原料温度１５０℃；脱溶媒温度４５０℃；コーンガス０Ｌ／時間；脱溶媒ガス８００Ｌ／時間）。スペクトルを、ＭａｓｓＬｙｎｘソフトウェア内のＭａｘＥｎｔ関数を用いてデコンボリューションした。得られた分子イオンは、強度に従って重み付けした場合、表３に挙げられるローディングに対応した。サイズ排除ＨＰＬＣによって、全てのコンジュゲートが＞９５％モノマーであったことが確立された。
ｐＨ＝７．２でのグルタミニル修飾ｍＡｂとのディールスアルダーコンジュゲート：方法Ａ
ｍＡｂ－３中間体を、ＰＢＳ、ｐＨ７．２～７．４および１０％ＤＭＳＯ中、３～５ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートした。リンカー－ペイロードｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ、Ｄｏｒｏｎｉｎａ，Ｓ．Ｏ．ら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ ２１ ７７８；ｍｃ－ＶＡ－ＰＢＤ、Ｊｅｆｆｒｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１３ ２４ １２５６；ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ、およびｍａｌ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ、Ｌｅｈａｒ，Ｓ．Ｍ．ら，Ｎａｔｕｒｅ ２０１５ ５２７ ３２３～３２８頁（それぞれを以下に示す）を、抗体に対して３．５～１０倍のモル過剰で添加し、室温で４５～１２０分間インキュベートした。コンジュゲートを、プロテインＡクロマトグラフィー（ＰｉｅｒｃｅプロテインＡカラム、ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、製品番号２０３５６）またはＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。薬物の抗体に対する比をＬＣ－ＭＳによって判定した（実施例１７に記載されている方法に従った）。得られた分子イオンは、強度に従って重み付けした場合、表３に挙げられるローディングに対応した。サイズ排除ＨＰＬＣによって、全てのコンジュゲートが＞９５％モノマーであったことが確立された。
Figure 2023521885000246
ｐＨ＝５．５でのグルタミニル修飾ｍＡｂとのディールスアルダーコンジュゲート：方法Ｂ
ＴｈｅｍＡｂ－３中間体を、５０ｍＭヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．５中、４ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートした。１０％ＤＭＳＯをｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥに関して使用した。リンカー－ペイロードｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥまたはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）６４７ Ｃ２マレイミド（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、抗体に対して１０～２０倍のモル過剰で添加し、室温で２４～４０時間インキュベートした。コンジュゲートを、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬカラムを使用したサイズ排除クロマトグラフィーで精製した。薬物の抗体に対する比を、ＬＣ－ＭＳによって判定した（実施例２に記載されている方法に従った）。得られた分子イオンは、強度にしたがって重み付けした場合、表３に挙げられるローディングに対応した。サイズ排除ＨＰＬＣによって、全てのコンジュゲートが＞９５％モノマーであったことが確立された。
化合物４リンカーのリジンコンジュゲート
ｍＡｂ－４中間体－ランダムに改変されたｍＡｂ
Figure 2023521885000247
 対照およびＨＥＲ２抗体を、５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ８．０中、５ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートした。リンカー４（Ｓｔ．Ａｍａｎｔ，Ａ．Ｈ．ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１８ ２９ ２４０６）を、抗体に対して２～３倍のモル過剰で添加し、室温で２時間インキュベートした。反応混合物に、スピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ、３０ｋＤａカットオフ）を使用して、ＰＢＳ、ｐＨ７．４に緩衝液交換を行った。コンジュゲートをＥＳＩ－ＭＳによって分析して、リンカー抗体比（ＬＡＲ）を、実施例１７に記載されている方法を使用して判定した。得られた分子イオンは、強度にしたがって重み付けした場合、表３に挙げられるローディングに対応した。
ランダムなｍＡｂ中間体とのディールス－アルダーコンジュゲート
ｍＡｂ－４中間体を、ＰＢＳ、ｐＨ７．４および１０％ＤＭＳＯ中、３～５ｍｇ／ｍＬでコンジュゲートした。上記で示したペイロード（ｍｃ－ＶＡ－ＰＢＤ）を、抗体に対して４倍のモル過剰で添加し、室温で２時間インキュベートした。過剰なリンカー－ペイロードを、活性炭で処理することによって取り除き、続いてＳｅｐｈａｄｅｘ ＰＤ１０カラム（ＧＥ ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、製品番号１７０８５１０１）を使用して脱塩した。コンジュゲートをＥＳＩ－ＭＳによって分析して、実施例２に記載されている方法を使用して薬物抗体比（ＤＡＲ）を判定した。得られた分子イオンは、強度に従って重み付けした場合、表３に挙げられるローディングに対応する。サイズ排除ＨＰＬＣによって、全てのコンジュゲートが＞９５％モノマーであったことが確立された。
表３に、各コンジュゲートに関するローディング（ＬＡＲおよびＤＡＲ）を挙げる。トランスグルタミナーゼコンジュゲート３は、理論的値２にアプローチするＬＡＲを生成した。抗体－３ジエン中間体と、ディールス－アルダーマレイミドパートナーｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ、ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ、または鎖間ジスルフィド凝集の傾向があるｍｃ－ＶＡ－ＰＢＤ（Ｊｅｆｆｒｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１３ ２４ １２５６）とを反応させると、類似の値のＤＡＲを生成した。リジンコンジュゲートジエン４は、１．２および１．８のＬＡＲを生成したが、同じマレイミドとのディールス－アルダー反応によって、相対的ＤＡＲが低いコンジュゲートが得られた。これらの結果は、トランスグルタミナーゼおよびディールス－アルダーコンジュゲートを組み合わせることによって、様々なマレイミドリンカー－ペイロードに適合し、全体的な効率を改善し、低レベルの凝集を有する抗体上にそれらを部位選択的に配置できることを示す。
Figure 2023521885000248
段階的ディールス－アルダーコンジュゲート
ある特定の実施形態では、方法Ａおよび方法Ｂは、２つのジエンを有する同じ抗体－リンカー－ペイロード中間体に対して連続して行ってもよい。この戦略を使用して、同じペイロードまたは２つの異なるペイロード部分を有する抗体－ペイロードコンジュゲートを生成してもよい。例えば、化合物２７リンカーを有する抗体を、実施例１８の方法Ａを介してｍｃ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥにコンジュゲートし、その後、実施例１９の方法Ｂを介してＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（商標）６４７にさらにコンジュゲートした。緩衝液交換工程は、ＰＢＳ、ｐＨ＝７．２、続いて、方法Ｂに関するｐＨを変更するために５０ｍＭヒスチジン、ｐＨ＝５．５緩衝液で余分なペイロードを除去するために、スピンフィルター（Ａｍｉｃｏｎ、３０ｋＤａカットオフ）によって方法ＡとＢとの間で行った。
Figure 2023521885000249
Ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害アッセイ
この実施例では、様々な抗体－薬物コンジュゲートおよびネイキッドペイロードの、ｉｎ ｖｉｔｒｏで抗原発現腫瘍細胞を殺傷する能力を評価した。
ＳＫＢＲ３（Ｈｅｒ２＋）細胞を、完全成長培地中に１ウェルあたり８０００細胞で９６ウェルプレートに播種し、一晩成長させた。細胞生存率曲線に関しては、連続希釈したコンジュゲートまたはネイキッドペイロードを、１００ｎＭから５ｐＭの範囲の最終濃度で細胞に添加し、３日間インキュベートした。ＮＣＩＨ９２９およびＮＣＩＨ１９７５（Ｈｅｒ２－）細胞を、類似の条件を使用して陰性対照として行った。生存率を測定するために、細胞を、最後の２時間でＣＣＫ８（Ｄｏｊｉｎｄｏ）とインキュベートし、４５０ｎｍ（ＯＤ４５０）における吸光度をＶｉｃｔｏｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で判定した。ジギトニン（４０ｎＭ）処置細胞から判定されたバックグラウンドＯＤ４５０レベルを、全てのウェルから差し引き、生存率を、未処置対照の百分率として示した。ＩＣ５０値を、１０点の応答曲線にわたる４パラメーターロジスティック方程式から判定した（ＧｒａｐｈＰａｄプリズム）。ＨＥＲ２－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥＡＤＣおよびアイソタイプＣｎｔｌ－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥＡＤＣに関するＩＣ５０は、それぞれ０．０９６および＞１００ｎＭであった。鎖間ジスルフィドコンジュゲートは、トランスグルタミナーゼ部位特異的ディールス－アルダーコンジュゲートと類似のＩＣ５０値を有していた。これは、ディールス－アルダーコンジュゲートが、抗体薬物コンジュゲートの機能に影響を与えないことを示す。ＩＣ５０値は、ペイロード等価物に対して補正されており、他のトランスグルタミナーゼ部位特異的ディールスアルダーコンジュゲートの細胞生存率の結果は表５に示す。比較に関しては、ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＣ－ＭＭＡＥ鎖間ジスルフィドコンジュゲート分子を、Ｄｏｒｏｎｉｎａ，Ｓ．Ｏ．ら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２００３ ２１ ７７８に従って生成した。ｍｃ－ＶＡ－ＰＢＤをコンジュゲートするための全ての試みは、Ｊｅｆｆｒｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．２０１３ ２４ １２５６の結果に従っても成功はせず、ディールス－アルダーカップリング方法論と組み合わせた部位特異的トランスグルタミナーゼ反応の有用性がさらに実証された。
Figure 2023521885000250
Figure 2023521885000251
細胞内黄色ブドウ球菌の抗体－薬物コンジュゲート殺傷アッセイ
本開示によるリファマイシンアナログを、実施例１において同定された抗ＭＳＲ１抗体、または同じく実施例１において同定されたアイソタイプコントロール抗体のいずれかにコンジュゲートして、細胞内黄色ブドウ球菌を減少させるＡＤＣの能力を試験した。
ＴＨＰ－１単球細胞株を、培地（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中で成長させ、次いで、２４ウェルプレート中、１ｅ５細胞／ウェルの密度で播種し、３日間でマクロファージに分化させてから、２００ｎＭ ＰＭＡを使用して感染させた。実験前に、ＴＨＰ－１を、加温した媒体（ＦＢＳ不含ＲＭＰＩ）で洗浄して、ペニシリン／ストレプトマイシンを除去した。一晩培養した黄色ブドウ球菌ＮＲＳ３８４をＲＰＭＩ中で成長させ、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中に１ｅ７ｃｆｕ／ｍＬで再懸濁した。ＴＨＰ－１に、ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ中の黄色ブドウ球菌懸濁液を１ｅ６ｃｆｕ／ウェルで感染させ、感染多重度は１０：１（黄色ブドウ球菌：マクロファージ）であった。プレートを３００×ｇで５分間回転させて、細菌を同時に付着させ、次いで３７℃で２時間インキュベートした。遊離浮遊細菌を、加温した媒体（ＦＢＳ不含ＲＭＰＩ）で２回洗浄することによって除去し、残りの細胞外黄色ブドウ球菌は、５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含む媒体（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ）を添加することによって殺傷した。１時間後、媒体を吸引し、表示されているｍＡｂおよびＡＤＣを、５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含む培地（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ）中の感染したマクロファージに希釈系列で３回添加して、黄色ブドウ球菌が細胞外成長するのを防止した。希釈系列１０ｕｇ／ｍＬで開始し、ＭＳＲ１ＡＤＣ：ＭＳＲ１－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（鎖間ＣＹＳ）、ＭＳＲ１－ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ（鎖間ＣＹＳ）、ＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（ＴＧ－ＤＡ）に関しては、１：３の希釈で５点（１０、３．３、１．１、０．３７、および０．１２ｕｇ／ｍＬの最終濃度）で行った。ＭＳＲ１ｍＡｂ、アイソタイプコントロールｍＡｂ、およびアイソタイプコントロールＡＤＣ：アイソタイプＣｎｔｌ－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（鎖間ＣＹＳ）、アイソタイプＣｎｔｌ－ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ（鎖間ＣＹＳ）、およびアイソタイプＣｎｔｌ－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（ＴＧ－ＤＡ）は最高濃度のみで試験した。未処置のウェルも、感染に対するベースラインとして含まれていた。２４時間後、プレートを、ＦＢＳ不含の加温ＲＰＭＩで２回洗浄し、次いで、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００ ５０μＬを添加してＴＨＰ－１を溶解し；溶解後、ＰＢＳ ４５０μＬを各ウェルに添加した。黄色ブドウ球菌の生存は、ＰＢＳで連続希釈し、トリプチケース大豆寒天プレート上に平板培養することによってコロニー形成単位で計数した。結果を表６に要約する。
Figure 2023521885000252
表６で示すように、１０、３．３および１．１μｇ／ｍＬの濃度におけるＭＳＲ１ ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－ＲｉｆａｌｏｇｕｅＡＤＣ、ＭＳＲ１ ３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（鎖間ＣＹＳおよびＴＧ－ＤＡ）およびＭＳＲ１－ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ（鎖間ＣＹＳ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで感染したマクロファージから細胞内黄色ブドウ球菌を根絶する能力を実証し、低濃度では活性が用量依存的に低下した。１０μｇ／ｍＬの非コンジュゲート抗体で処置したマクロファージ（アイソタイプコントロールｍＡｂ、抗ＭＳＲ１ｍＡｂ）およびアイソタイプコントロールＡＤＣ（鎖間ＣＹＳおよびＴＧ－ＤＡ）は、細胞内黄色ブドウ球菌を未処置対照と同様のレベルで保有していた。これらのデータは、ＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（鎖間ＣＹＳおよびＴＧ－ＤＡ）を、マクロファージリザーバー内に存在する病原体を有効に殺傷するために使用できることを実証する。
細胞内黄色ブドウ球菌抗体－薬物コンジュゲート殺傷アッセイ
本開示のリファマイシンアナログを、同様に実施例１において使用されたこの部位においてＦｃのＮ連結グリコシル化を除去するＮ２９７Ｑ突然変異を含む抗ＭＳＲ１抗体Ｈ１Ｈ２１２３４Ｎもコンジュゲートして、細胞内黄色ブドウ球菌を減少させるためのＡＤＣの能力を試験した。突然変異によって、重鎖の２９５Ｑおよび２９７Ｑにおいて抗体が最大ローディング４でコンジュゲートされた。同じＮ２９７Ｑ突然変異を含む非結合抗体を非結合アイソタイプコントロール抗体として使用し、これも実施例１において使用した。
ＴＨＰ－１単球細胞株を、培地（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ＋１％ペニシリン／ストレプトマイシン）中で成長させ、次いで、４８ウェルプレート中、１ｅ５細胞／ウェルの密度で播種し、３日間でマクロファージに分化させてから、２００ｎＭ ＰＭＡを使用して感染させた。実験前に、ＴＨＰ－１を、加温した媒体（ＦＢＳ不含ＲＭＰＩ）で洗浄して、ペニシリン／ストレプトマイシンを除去した。一晩培養した黄色ブドウ球菌ＮＲＳ３８４をＲＰＭＩ中で成長させ、ＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中に１ｅ７ｃｆｕ／ｍＬで再懸濁した。ＴＨＰ－１に、ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ中の黄色ブドウ球菌懸濁液を１ｅ６ｃｆｕ／ウェルで感染させ、感染多重度は１０：１（黄色ブドウ球菌：マクロファージ）であった。プレートを３００×ｇで５分間回転させて、細菌を同時に付着させ、次いで３７℃で２時間インキュベートした。遊離浮遊細菌を、加温した媒体（ＦＢＳ不含ＲＭＰＩ）で２回洗浄することによって除去し、残りの細胞外黄色ブドウ球菌は、５０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含む媒体（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ）を添加することによって殺傷した。１時間後、媒体を吸引し、表示されているｍＡｂおよびｎｃＡＤＣを、５０μｇ／ｍＬゲンタマイシンを含む培地（ＲＭＰＩ＋１０％ＦＢＳ）中の感染したマクロファージに希釈系列で少なくとも２回添加して、黄色ブドウ球菌が細胞外成長するのを防止した。希釈系列は３０μｇ／ｍＬで開始し、ＭＳＲ１ＡＤＣ（ＴＧ－ＤＡ）：ＭＳＲ１－３－ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－ＲｉｆａｎａｌｏｇおよびＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅに関しては１：３の希釈で６点（３０、１０、３．３、１．１、０．３７、および０．１２μｇ／ｍＬの最終濃度）で行った。対照ＡＤＣ（本開示のトランスグルタミナーゼ－ディールスアルダー（「ＴＧ－ＤＡ」）法によって調製した）：アイソタイプＣｎｔｌ－３－ｍｃ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ、アイソタイプＣｎｔｒｌ－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅおよび非コンジュゲート抗体は、最高濃度のみで試験した。未処置のウェルも、感染に対するベースラインとして含まれていた。２４時間後、プレートを、ＦＢＳ不含の加温ＲＰＭＩで２回洗浄し、次いで、ＰＢＳ中の０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００ ５０μＬを添加してＴＨＰ－１を溶解し；溶解後、ＰＢＳ ２００μＬを各ウェルに添加した。黄色ブドウ球菌の生存は、ＰＢＳで連続希釈し、トリプチケース大豆寒天プレート上に平板培養することによってコロニー形成単位で計数した。結果を表７に要約する。
Figure 2023521885000253
表７で示すように、ＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（ＴＧ－ＤＡ）およびＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ（ＴＧ－ＤＡ）は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで感染したマクロファージから細胞内黄色ブドウ球菌を減少させる能力を実証し、低濃度では活性が用量依存的に低下し、最高濃度では細菌負荷が３～４ｌｏｇ減少した。３０μｇ／ｍＬの対照ｍＡｂで処置したマクロファージは、未処置対照と同様のレベルで細胞内黄色ブドウ球菌を保有し、３０μｇ／ｍＬのＡＤＣアイソタイプＣｎｔｌ－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（ＴＧ－ＤＡ）およびアイソタイプＣｎｔｌ－３－ｍａｌ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇは、未処置対照と比較して約１ｌｏｇで細胞内黄色ブドウ球菌を減少させた。これらのデータは、抗ＭＳＲ１ＡＤＣ、ＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｌｏｇｕｅ（ＴＧ－ＤＡ）およびＭＳＲ１－３－ｍｃ－ＰＥＧ８－ＶＣ－ＰＡＢＱ－Ｒｉｆａｎａｌｏｇ（ＴＧ－ＤＡ）を、マクロファージリザーバー内に存在する病原体を有効に殺傷するために使用できることを実証する。
本開示の範囲および趣旨から逸脱することなく上述の発明の主題に様々な変更を行うことができるため、上記の説明中に含まれるかまたは添付の特許請求の範囲内で定義される全ての発明の主題は、本開示の説明および例示として解釈されることが意図される。本開示の多くの改変および変形形態は、上記の教示を考慮すると可能である。したがって、本説明は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入る全てのそのような代替、改変、および変形を包含することが意図される。
本明細書において挙げられる全ての特許、出願、刊行物、試験法、文献、および他の試料は、本明細書に物理的に存在するかのうようにその全体が参照により本明細書に組み入れるものとする。

Claims (159)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 2023521885000254
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    Ｇｌｎはグルタミン残基であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｚはディールス－アルダー付加体であり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；
    ｎは１から３までの整数であり；
    ここで、ｎが２または３である場合、Ｚ、ＬおよびＤは同一でも異なっていてもよく；
    ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する化合物。
  2. 式（ＩＡ）：
    Figure 2023521885000255
     による請求項１に記載の化合物。
  3. 式（ＩＢ）：
    Figure 2023521885000256
     による請求項１に記載の化合物。
  4. ｎは１または２である、請求項１に記載の化合物。
  5. ２つの部分Ｄは同じである、請求項３に記載の化合物。
  6. ２つの部分Ｄは異なる、請求項３に記載の化合物。
  7. ２つのディールス－アルダー付加体Ｚは同一である、請求項３に記載の化合物。
  8. ２つのディールス－アルダー付加体Ｚは異なる、請求項３に記載の化合物。
  9. 式（ＩＩ）：
    Figure 2023521885000257
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    Ｇｌｎはグルタミン残基であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    ＱはＣＨＲ、（ＣＨＲ）２、またはＯブリッジであり；
    Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、または－ＮＨＣ１～３アルキルであり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；
    ｎは１から３までの整数であり；
    ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する化合物。
  10. 式（ＩＩＡ）：
    Figure 2023521885000258
     による請求項９に記載の化合物。
  11. 式（ＩＩＢ）：
    Figure 2023521885000259
     による請求項９に記載の化合物。
  12. ２つの部分Ｄは同じである、請求項１１に記載の化合物。
  13. ２つの部分Ｄは異なる、請求項１１に記載の化合物。
  14. 式（ＩＩＩＡ）：
    Figure 2023521885000260
     による請求項９に記載の化合物。
  15. 式（ＩＩＩＢ）：
    Figure 2023521885000261
     による請求項９に記載の化合物。
  16. 式（ＩＩＩＣ）：
    Figure 2023521885000262
     による請求項９に記載の化合物。
  17. Ｒは出現する毎にＨである、請求項９～１６のいずれか１項に記載の化合物。
  18. 少なくとも１つのＲはＨではない、請求項９～１６のいずれか１項に記載の化合物。
  19. 少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである、請求項１８または１９に記載の化合物。
  20. 少なくとも１つのＲはメチルである、請求項１８に記載の化合物。
  21. 式（ＩＶ）：
    Figure 2023521885000263
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    Ｇｌｎはグルタミン残基であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分であり；
    ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する化合物。
  22. ＢＡは抗体またはそれの抗原結合断片である、請求項１～２１のいずれか１項に記載の化合物。
  23. ＢＡはモノクローナルヒト化抗体である、請求項２２に記載の化合物。
  24. ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片である、請求項２２または２３に記載の化合物。
  25. Ｇｌｎは、出現する毎に独立してＱ２９５またはＮ２９７Ｑである、請求項１～２４のいずれか１項に記載の化合物。
  26. ｄは２、４、または６である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の化合物。
  27. ｄは２である、請求項２６に記載の化合物。
  28. ｄは４である、請求項２６に記載の化合物。
  29. Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である、請求項１～２８のいずれか１項に記載の化合物。
  30. Ｄは、アウリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、アンサマイシン抗生物質、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である、請求項１～２９のいずれか１項に記載の化合物。
  31. Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である、請求項１～３０のいずれか１項に記載の化合物。
  32. Ｄは造影剤部分であり、造影剤は、色素、キレート剤、放射性核種、またはオリゴヌクレオチドを含む、請求項１～３１のいずれか１項に記載の化合物。
  33. Ｄは、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、およびＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８からなる群から選択されるＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ蛍光色素である、請求項３２に記載の化合物。
  34. ＤはＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である、請求項３２に記載の化合物。
  35. ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、－（（ＣＨ２）ｕ－Ｏ－）ｖ－、－ＮＨ－、または－Ｃ（Ｏ）－（式中、下付き文字ｕおよびｖは、出現する毎に独立して１から２０までの整数である）のうちの１つまたはそれ以上およびそれらの組合せである、
    請求項１～３４のいずれか１項に記載の化合物。
  36. ＳＰは：
    －（ＣＨ２）ｕ－、Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－（ＣＨ２）ｕ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、
    Figure 2023521885000264
    （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から２０までの整数である）のうちの１つもしくはそれ以上、またはそれらの組合せである、
    請求項３５に記載の化合物。
  37. ＳＰは－（ＣＨ２）ｕ－である（式中、下付き文字ｕは１から５までの整数である）、請求項３５または３６に記載の化合物。
  38. ＳＰは、
    Figure 2023521885000265
     （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）である、
    請求項３５または３６に記載の化合物。
  39. ＳＰは、
    Figure 2023521885000266
     である、
    請求項３５もしくは３６または３８のいずれか１項に記載の化合物。
  40. ２つの部分Ｄは同じである、請求項３５もしくは３６または３８もしくは３９のいずれか１項に記載の化合物。
  41. ２つの部分Ｄは異なる、請求項３５もしくは３６または３８もしくは３９のいずれか１項に記載の化合物。
  42. Ｚは、式２ａ：
    Figure 2023521885000267
     （式中：
    Ｒ’は独立してＨ、Ｃ１～３アルキルであるか、または２つのＲ’が一緒になって、ＣＨＲ、ＣＨＲ－ＣＨＲ、もしくはＯブリッジを構成し、
    Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、または－ＯＣ１～３アルキルである）
    による部分である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の化合物。
  43. Ｚは、式２ａ’：
    Figure 2023521885000268
     （式中：
    Ｒ’は独立してＨ、Ｃ１～３アルキルであるか、または２つのＲ’が一緒になって、ＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、もしくはＯブリッジを構成している）、
    による部分である、請求項１～４２のいずれか１項に記載の化合物。
  44. Ｚは、式２ａ－１～２ａ－３：
    Figure 2023521885000269
     のいずれか１つによる部分である、請求項４２に記載の化合物。
  45. Ｚは、式２ａ－１：
    Figure 2023521885000270
     による部分である、請求項３８に記載の化合物。
  46. 少なくとも１つのＲはＨではない、請求項４２に記載の化合物。
  47. Ｚは、式２ａ－４～２ａ－６：
    Figure 2023521885000271
     （式中、少なくとも１つのＲはＨではない）
    のいずれか１つによる部分である、請求項４６に記載の化合物。
  48. Ｚは、式２ａ－７～２ａ－１２：
    Figure 2023521885000272
     のいずれか１つによる部分である、請求項４６に記載の化合物。
  49. 部分Ｚは、出現する毎に独立して、２ａ－１～２ａ－１２から選択される、請求項８に記載の化合物。
  50. 一方の部分Ｚは２ａ－７であり、他方の部分Ｚは２ａ－１１である、請求項４９に記載の化合物。
  51. 一方の部分Ｚは２ａ－７であり、他方の部分Ｚは２ａ－１２である、請求項４９に記載の化合物。
  52. 断片－ＳＰ－Ｚ－は、
    Figure 2023521885000273
     （式中、２つの部分Ｚは同じである）
    から選択される、請求項３８に記載の化合物。
  53. 断片－ＳＰ－Ｚ－は、
    Figure 2023521885000274
     （式中、２つの部分Ｚは異なる）
    から選択される、請求項３８に記載の化合物。
  54. Ｌは１個またはそれ以上のアミノ酸を含む、請求項１～５３のいずれか１項に記載の化合物。
  55. Ｌは、１つまたはそれ以上の：
    －ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－）ｍ－、－Ｃ（Ｏ）－、
    Figure 2023521885000275
     （式中、下付き文字ｍおよびｎは、出現する毎に独立して、０から２０までの整数である）
    をさらに含む、請求項４６に記載の化合物。
  56. １個またはそれ以上のアミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、バリン、フェニルアラニン、プロリン、またはシトルリンである、請求項４６または５５に記載の化合物。
  57. １個またはそれ以上のアミノ酸は、バリン－シトルリン（－ＶＣ－）またはバリン－アラニン（－ＶＡ－）である、請求項４６または５５に記載の化合物。
  58. Ｌは：
    Figure 2023521885000276
     （式中：ｌ、ｍおよびｎは出現する毎に独立して、０から２０までの整数であり；ｐは０から４までの整数である）
    である、請求項５６または５７に記載の化合物。
  59. Ｌは：
    Figure 2023521885000277
     （式中：ｎは１から６までの整数であり；ｍは２から１０までの整数であり；ｐは１から３までの整数であり、アミノ酸は出現する毎に独立してバリン、シトルリンまたはアラニンである）
    である、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の化合物。
  60. 部分Ｄは第三級アミノ基を介してリンカーＬにつながっている、請求項５６～５９のいずれか１項に記載の化合物。
  61. 断片：
    Figure 2023521885000278
     は、式（Ｉ－ＤＡ）：
    Figure 2023521885000279
     （式中、
    Figure 2023521885000280
     は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、部分Ｄはアミノ基を介してつながっている）
    による、請求項１に記載の化合物。
  62. Ｄは、本明細書に記載のメイタンシノイドまたはメイタンシノイドアナログである、請求項６１に記載の化合物。
  63. 断片
    Figure 2023521885000281
     は、式（Ｉ－ＤＡ１）：
    Figure 2023521885000282
     による、請求項１に記載の化合物。
  64. 断片
    Figure 2023521885000283
     は、式（Ｉ－ＤＢ）：
    Figure 2023521885000284
     （式中、
    Figure 2023521885000285
     は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、部分Ｄはアミノ基を介してつながっている）
    による、請求項１に記載の化合物。
  65. Ｄはピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）またはそれのアナログもしくは誘導体である、請求項６４に記載の化合物。
  66. ＤはＰＢＤ－１：
    Figure 2023521885000286
     またはそれのアナログもしくは誘導体である、請求項６４に記載の化合物。
  67. 断片
    Figure 2023521885000287
     は、式（Ｉ－ＤＢ１）：
    Figure 2023521885000288
     （式中：
    Figure 2023521885000289
     は、スペーサーまたは結合剤への結合である）
    による、請求項１に記載の化合物。
  68. 断片
    Figure 2023521885000290
     は、式（Ｉ－ＤＣ）：
    Figure 2023521885000291
     （式中、
    Figure 2023521885000292
     は、スペーサーまたは結合剤への結合であり、部分Ｄはアミノ基を介してつながっている）
    による、請求項１に記載の化合物。
  69. Ｄはリファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である、請求項６８に記載の化合物。
  70. 断片
    Figure 2023521885000293
     は、式（Ｉ－ＤＣ１）：
    Figure 2023521885000294
     （式中：
    Figure 2023521885000295
     は、スペーサーまたは結合剤への結合である）
    による、請求項１に記載の化合物。
  71. 断片
    Figure 2023521885000296
     は、式（Ｉ－ＤＣ２）：
    Figure 2023521885000297
     （式中：
    Figure 2023521885000298
     は、スペーサーまたは結合剤への結合である）
    による、請求項１に記載の化合物。
  72. 式（ＩＩ）：
    Figure 2023521885000299
     （式中：
    ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であり；
    Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である）
    による、請求項１～７１のいずれか１項に記載の化合物。
  73. 式（Ｉ－Ａ１’）～（Ｉ－Ａ１０’）：
    Figure 2023521885000300
    Figure 2023521885000301
    Figure 2023521885000302
     （式中：ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する、請求項７２に記載の化合物。
  74. 式（Ｉ－Ｂ１’）：
    Figure 2023521885000303
     （式中：ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する、請求項７２に記載の化合物。
  75. 式（Ｉ－Ｃ１’）：
    Figure 2023521885000304
     （式中：ｄは１から６までの整数である）
    による構造を有する、請求項７２に記載の化合物。
  76. 請求項１～７５のいずれか１項に記載の化合物の集団を含む組成物であって、
    約０．５～約８．０の薬物－抗体比（ＤＡＲ）を有する組成物。
  77. 約１．０～約２．５のＤＡＲを有する、請求項７６に記載の組成物。
  78. 約２のＤＡＲを有する、請求項７７に記載の組成物。
  79. 約３．０～約４．５のＤＡＲを有する、請求項７６に記載の組成物。
  80. 約４のＤＡＲを有する、請求項７９に記載の組成物。
  81. 請求項１～７５のいずれか１項に記載の化合物を生成する方法であって、
    ａ．）式（Ｖ－ｘ）：
    Figure 2023521885000305
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｘはジエンを含む部分であり；
    Ｉは１から６までの整数であり；
    ｎは１または２である）
    による構造を有する化合物ｉ）を、
    式（ＶＩ－ｙ）：
    Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
    （式中：
    Ｙはジエノフィルを含む部分であり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分である）
    による化合物ｉｉ）と接触させる工程と；
    ｂ．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む方法。
  82. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ１：
    ＮＨ２－ＳＰ－Ｘ （Ｖ－ｘ１）
    （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｘはジエンを含む部分である）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項８１に記載の方法。
  83. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ２：
    Figure 2023521885000306
     （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｘはジエンを含む部分であり、ここで、２つのＸ部分は同じである）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項８１に記載の方法。
  84. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ２：
    Figure 2023521885000307
     （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｘはジエンを含む部分であり、ここで、２つのＸ部分は異なる）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｘ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項８１に記載の方法。
  85. Ｘは、出現する毎に独立して、
    Figure 2023521885000308
     （式中、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、または－ＮＨＣ１～３アルキルである）
    から選択される、
    請求項８１～８４のいずれか１項に記載の方法。
  86. Ｒは出現する毎にＨである、請求項８５に記載の方法。
  87. 少なくとも１つのＲはＨではない、請求項８５に記載の方法。
  88. 少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである、請求項８５に記載の方法。
  89. 少なくとも１つのＲはメチルである、請求項８５に記載の方法。
  90. Ｘは
    Figure 2023521885000309
     であり、Ｙは
    Figure 2023521885000310
     である、
    請求項８１または８２に記載の方法。
  91. 請求項３に記載の式（１Ｂ）の化合物を生成する方法であって、
    ａ．）式（Ｖ－ｘ）：
    Figure 2023521885000311
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｘはジエンを含む部分であり；
    Ｉは１から６までの整数である）
    による構造を有する化合物ｉ）を、
    式（ＶＩ－ｙ）：
    Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
    （式中：
    Ｙはジエノフィルを含む部分であり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分である）
    による化合物ｉｉ）と接触させて、式（Ｖ－ｘ’ｚ）：
    Figure 2023521885000312
     による構造を有する化合物を生成する工程と；
    ｂ．）式（Ｖ－ｘ’ｚ）による化合物を
    式（ＶＩ－ｙ）：
    Ｙ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｙ）
    による化合物と接触させる工程と；
    ｃ．）式（１Ｂ）の生成された化合物を単離する工程と
    を含む方法。
  92. ２つのＸ部分は同じである、請求項９１に記載の方法。
  93. ２つのＸ部分は異なる、請求項９１に記載の方法。
  94. 工程ａ．）のＤ部分は、工程ｂ．）のＤ部分とは異なる、請求項９１に記載の方法。
  95. 工程ａ．）のＤ部分は、工程ｂ．）のＤ部分と同じである、請求項９１に記載の方法。
  96. 工程ａ．）は約７．０～約７．６のｐＨで実行される、請求項９１～９５のいずれか１項に記載の方法
  97. 工程ａ．）は約７．２～約７．４のｐＨで実行される、請求項９６に記載の方法。
  98. 工程ａ．）は約７．２のｐＨで実行される、請求項９６に記載の方法。
  99. 工程ｂ．）は約５．０～約６．０のｐＨで実行される、請求項９１～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 工程ｂ．）は約５．３～約５．７のｐＨで実行される、請求項９９に記載の方法。
  101. 工程ｂ．）は約５．５のｐＨで実行される、請求項９９に記載の方法。
  102. 工程ａ．）の後および工程ｂ．）の前に緩衝液交換工程をさらに含む、請求項９１～１０１のいずれか１項に記載の方法。
  103. Ｘは、出現する毎に独立して、
    Figure 2023521885000313
     （式中、Ｒは、出現する毎に独立して、Ｈ、Ｃ１～３アルキル、－ＯＣ１～３アルキル、または－ＮＨＣ１～３アルキルである）
    から選択される、請求項９１～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  104. Ｒは出現する毎にＨである、請求項１０３に記載の方法。
  105. 少なくとも１つのＲはＨではない、請求項１０３に記載の方法。
  106. 少なくとも１つのＲはＣ１～３アルキルである、請求項１０３に記載の方法。
  107. 少なくとも１つのＲはメチルである、請求項１０３に記載の方法。
  108. 請求項１～７５のいずれか１項に記載の化合物を生成する方法であって、
    ａ．）式（Ｖ－ｙ）：
    Figure 2023521885000314
     （式中：
    ＢＡは結合剤であり；
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｙはジエノフィル部分であり；
    Ｉは１から６までの数であり；
    ｎは１または２である）
    による構造を有する化合物ｉ）を、
    式（ＶＩ－ｘ）：
    Ｘ－Ｌ－Ｄ （ＶＩ－ｘ）
    （式中：
    Ｘはジエン部分であり；
    Ｌはリンカーであり；
    Ｄは、メイタンシノイド、チューブリシン、アウリスタチン、ドラスタチン、カンプトテシン、ピロロベンゾジアゼピン、抗生物質、抗ウイルス剤、抗炎症剤、免疫調節剤、抗真菌剤、ステロイド、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分である）
    による化合物ｉｉ）と接触させる工程と；
    ｂ．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む方法。
  109. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ１：
    ＮＨ２－ＳＰ－Ｙ （Ｖ－ｙ１）
    （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｙはジエノフィルを含む部分である）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項９１に記載の方法。
  110. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ２：
    Figure 2023521885000315
     （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｙはジエノフィルを含む部分であり、ここで、２つのＹ部分は同じである）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項９１に記載の方法。
  111. １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｙ２：
    Figure 2023521885000316
     （Ｖ－ｙ２）
    （式中：
    ＳＰは存在しないかまたはスペーサーであり；
    Ｙはジエノフィルを含む部分であり、ここで、２つのＹ部分は異なる）
    による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させる工程と；
    ２．）生成された化合物を単離する工程と
    を含む、式（Ｖ－ｙ）による構造を有する化合物を製造することを含む、
    請求項９１に記載の方法。
  112. Ｘは
    Figure 2023521885000317
     であり、Ｙは
    Figure 2023521885000318
     である、
    請求項９１または請求項１０９に記載の方法。
  113. 結合剤はアグリコシル化されている、請求項８２～１１２のいずれか１項に記載の方法。
  114. 接触工程の前に結合剤は脱グリコシル化される、請求項８２～１１３のいずれか１項に記載の方法。
  115. ＢＡはＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である、請求項８１～１１４のいずれか１項に記載の方法。
  116. Ｇｌｎは、出現する毎に独立して、Ｑ２９５またはＮ２９７Ｑである、請求項８１～１１５のいずれか１項に記載の方法。
  117. ｄは２または４である、請求項８１～１１６のいずれか１項に記載の方法。
  118. ｄは２である、請求項１１７に記載の方法。
  119. ｄは４である、請求項１１７に記載の方法。
  120. ＳＰは、－（ＣＨ２）ｕ－、－（（ＣＨ２）ｕ－Ｏ－）ｖ－、－ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）－のうちの１つもしくはそれ以上またはそれらの組合せである（式中、下付き文字ｕおよびｖは、出現する毎に独立して１から２０までの整数である）、
    請求項８１または１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
  121. ＳＰは、
    －（ＣＨ２）ｕ－、Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－（ＣＨ２）ｕ－（Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－、－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－、－（ＣＨ２）ｕ－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－、－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－（ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ）ｖ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－、－ＮＨ－（ＣＨ２）ｕ－Ｃ（Ｏ）－ＮＨ－
    のうちの１つもしくはそれ以上、またはそれらの組合せである（式中、下付き文字ｕおよびｖは、独立して１から２０までの整数である）、
    請求項８１または１０２～１２０のいずれか１項に記載の方法。
  122. ＳＰは－（ＣＨ２）ｕ－である（式中、下付き文字ｕは１から５までの整数である）、請求項１２１に記載の方法。
  123. ＳＰは
    Figure 2023521885000319
     （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）
    である、請求項９１～１０７のいずれか１項に記載の方法。
  124. ＳＰは
    Figure 2023521885000320
     （式中、下付き文字ｕ、ｖ、ｗ、およびｘは、独立して１から１２までの整数である）
    である、請求項１２３に記載の方法。
  125. ＳＰは
    Figure 2023521885000321
     である、請求項１２３に記載の方法。
  126. Figure 2023521885000322
     は、
    Figure 2023521885000323
     である、請求項９１～１０７または１２３～１２５のいずれか１項に記載の方法。
  127. Ｘは、下の式３または４：
    Figure 2023521885000324
     （式中、ＲはＨまたはＣ１～３アルキルであり；ＱはＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２、またはＯである）
    によるジエン部分である、請求項８１～１２２のいずれか１項に記載の方法。
  128. Ｘは、下の式４ａ：
    Figure 2023521885000325
     によるジエン部分である、請求項１２３に記載の方法。
  129. Ｙは、下の式５または６：
    Figure 2023521885000326
     （式中：Ｒ’はＨまたはＣ１～３アルキルであり；Ｊは、出現する毎に独立して、ＣＨまたはＮであり；ＫはＣＨ、Ｎ、
    Figure 2023521885000327
     、またはＮＨ－Ｎである）
    によるジエノフィル部分である、請求項８１～１２８のいずれか１項に記載の方法。
  130. Ｙは、式６ａ：
    Figure 2023521885000328
     によるジエノフィル部分である、請求項１２９に記載の方法。
  131. Ｌは１個またはそれ以上のアミノ酸を含む、請求項８１～１３０のいずれか１項に記載の方法。
  132. Ｌは、
    －ＮＨ－、－Ｓ－、－Ｏ－、－（ＣＨ２）ｎ－、－（ＣＨ２－Ｏ－）ｍ－、－Ｃ（Ｏ）－、
    Figure 2023521885000329
     のうちの１つまたはそれ以上をさらに含む、請求項１３１に記載の方法。
  133. １個またはそれ以上のアミノ酸は、グリシン、セリン、アラニン、バリン、フェニルアラニン、プロリンまたはシトルリンである、請求項１３１に記載の方法。
  134. Ｌは
    Figure 2023521885000330
     を含み、
    Ｄは、Ｌのメチレン部分に共有結合で連結し、第四級アンモニウム部分を形成する第三級アミンを含む、
    請求項１３１～１３３のいずれか１項に記載の方法。
  135. Ｄは、アウリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、アンサマイシン抗生物質、またはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分である、請求項８１～１３４のいずれか１項に記載の方法。
  136. Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である、請求項８１～１３４のいずれか１項に記載の方法。
  137. ＢＡは、ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であり；
    Ｘは、下の式４ａ：
    Figure 2023521885000331
     によるジエン部分であり；
    Ｙは、式６ａ：
    Figure 2023521885000332
     によるジエノフィル部分であり；
    Ｄは、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ＰＢＤ－１、リファマイシン；およびそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である、
    請求項８１～１３５のいずれか１項に記載の方法。
  138. 請求項８１～９０のいずれか１項に記載の方法であって、
    ａ．）
    １．）少なくとも１個のアクセプターグルタミン残基を有する結合剤ｉ）と、式Ｖ－ｘ１ａ：
    Figure 2023521885000333
     による化合物ｉｉ）とをトランスグルタミナーゼ（ＴＧａｓｅ）の存在下で接触させることであって、結合剤は、脱グリコシル化ＨＥＲ－２抗体、それの抗原結合断片、ＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片であることと；
    ２．）生成された化合物を単離することと
    によって化合物を生成する工程；および
    ｂ．）工程ａ．）の化合物を、下の式（Ｖ－Ａ）、（Ｖ－Ｂ）または（Ｖ－Ｃ）：
    Figure 2023521885000334
     （式中：
    Ｄは、治療部分のアミノ基を介してつながれているモノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、リファマイシン、もしくはそれらのアナログもしくは誘導体である治療部分であるか、またはＤは造影剤部分Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７である）
    による化合物と接触させる工程：および
    ｃ．）生成された化合物を単離する工程
    を含む方法。
  139. 化合物であって、
    請求項８１～１３７のいずれか１項に記載の方法によって生成される化合物。
  140. 医薬組成物であって、
    請求項１～７５もしくは１３９のいずれか１項に記載の化合物、または請求項７６～８０のいずれか１項に記載の組成物、ならびに
    希釈剤、
    担体、および／または
    賦形剤
    を含む医薬組成物。
  141. 非経口製剤である、請求項１４０に記載の医薬組成物。
  142. それを必要とする対象における状態を処置する方法であって、
    請求項１～７５もしくは１３９のいずれか１項に記載の化合物を含む組成物、
    請求項７６～８０のいずれか１項に記載の組成物、または
    請求項１４０もしくは１４１に記載の医薬組成物
    の治療有効量を対象に投与することを含む方法。
  143. 状態はがんである、請求項１４２に記載の方法。
  144. 状態はＨＥＲ２＋乳がんである、請求項１４３に記載の方法。
  145. ＢＡはＨＥＲ２抗体、またはそれの抗原結合断片である、請求項１４２～１４４のいずれか１項に記載の方法。
  146. Ｄは細胞傷害剤である、請求項１４２～１４５のいずれか１項に記載の方法。
  147. がんは：前立腺、膀胱、子宮頸部、肺、結腸、腎臓、乳房、膵臓、胃、子宮、および卵巣のうちの１つまたはそれ以上において発生する原発性および／または転移性腫瘍によって特徴付けられる、請求項１４２～１４６のいずれか１項に記載の方法。
  148. がんは、前立腺がん、膀胱がん、子宮頸がん、肺がん、結腸がん、腎臓がん、乳がん、膵臓がん、胃がん、子宮がん、または卵巣がんである、請求項１４２～１４７のいずれか１項に記載の方法。
  149. Ｄは：ドラスタチン、アウリスタチン、メイタンシノイド、ピロロベンゾジアゼピンおよびチューブリン相互作用剤から選択される、請求項１４２～１４７のいずれか１項に記載の方法。
  150. ＤはＭＭＡＥまたはＰＤＢである、請求項１４９に記載の方法。
  151. 状態は感染である、請求項１４２に記載の方法。
  152. ＢＡはＭＳＲ１抗体、またはそれの抗原結合断片である、請求項１５１に記載の方法。
  153. Ｄはリファマイシンまたはそれのアナログもしくは誘導体である、請求項１５１または１５２に記載の方法。
  154. 状態は細菌感染である、請求項１５１～１５３のいずれか１項に記載の方法。
  155. 状態はウイルス感染である、請求項１５１～１５３のいずれか１項に記載の方法。
  156. 状態は炎症状態である、請求項１４２に記載の方法。
  157. ＢＡはＭＳＲ１抗体またはそれの抗原結合断片である、請求項１５６に記載の方法。
  158. 状態は免疫系障害である、請求項１５６または１５５に記載の方法。
  159. 炎症状態は：がんに起因する高カルシウム血症、メニエール病、片頭痛、群発頭痛、重度のアフタ性潰瘍、喉頭炎、重度の結核、梅毒に対するヘルクスハイマー反応、非代償性心不全、アレルギー性鼻炎または鼻ポリープである、請求項１５６～１５８のいずれか１項に記載の方法。
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