CN113521299A - 吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用 - Google Patents

吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本公开涉及吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用。具体而言，本公开提供了一种具有通式为(Pc‑L‑D)所示结构的配体‑药物偶联物，其制备方法以及该配体‑药物偶联物及含有其的药物组合物通过受体调节在制备治疗癌症的药物中的用途，其中通式(Pc‑L‑D)中的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用
技术领域
本公开涉及一类全新结构吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物。具体地说，本公开涉 及一种吡唑并嘧啶衍生物以及含有该结构的抗体-药物偶联物，及其制备方法，和 包含所述偶联物的药物组合物以及所述偶联物或药物组合物的用途。
背景技术
抗体药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的药物相连，充分利用了抗体对正常 细胞和肿瘤细胞表面抗原结合的特异性和药物的高效性，同时又避免了前者疗效 偏低和后者毒副作用过大等缺陷。这也就意味着，与以往传统的化疗药物相比， 抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响(Mullard A, (2013)Nature Reviews DrugDiscovery,12:329–332；DiJoseph JF,Armellino DC, (2004)Blood,103:1807-1814)。
TLR(Toll-like receptors)是模式识别受体(pattern recognition receptors，PRR) 中的一种，识别与宿主不同的病原体分子，在天然免疫(innate immune response)中起关键作用，也是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁。近年来研究发现，TLR 不仅在抗病毒、细菌感染中起重要作用，并具有很强的抗肿瘤作用。
TLR主要表达在免疫细胞上，另在上皮、内皮细胞及肿瘤细胞上也有表达。免 疫细胞上的TLR被激活后，通过细胞质内一些接头蛋白分子(如MyD88，TIRAP， TRIF等)传递信息，这些接头分子会引起一系列信号分子的级联反应进而活化转 录因子NF-kB和IRFs，导致炎性相关因子(如IL-2，IL-12，TNF-a等)的释放，使 下游多种免疫细胞进一步激活，包括NK细胞，T细胞和DC细胞等，从而杀死肿瘤 细胞或是病原体。
基于TLR在肿瘤免疫中的重要作用，针对这个家族开发抗肿瘤药物方兴未艾。 目前已有三个TLR的激动剂被批准用于肿瘤治疗，分别是Imiquimod(TLR 7 agonist)用于基底细胞癌；Bacillus Calmette-Guerin(BCG，TLR2/4agonist)用于非 肌层浸润性膀胱癌；以及monophosphoryl lipid A(MPLA):TLR2/4agonist)作为HPV 疫苗佐剂治疗宫颈癌。然而全身性给药最大的问题是系统毒性，可以看到获批的 药物两个是局部给药，一个是免疫佐剂。可以尝试通过联合用药或靶向用药的方 式提供TLR的疗效和靶向性。
发明内容
本公开提供了一种具有通式(Pc-L-D)所示结构的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003021755950000021
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立 地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中 所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧 基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳 基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、 羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取 代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一 个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure BDA0003021755950000022
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基 各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂 环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰 基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基； 所述的单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基任选被 选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一 个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
y为1至10的小数或整数；
Pc为配体；
L为接头单元；L与R3a上的氮原子连接。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3a为如下所示的包含1-2个N原子的3-10元亚杂环基：
Figure BDA0003021755950000031
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基；所述 的单环杂环基、双螺杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基任选被选自C1-6烷基、 C1-6烷氧基、卤素、卤代C1-6烷基、羟基、C1-6羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一 个或多个取代基所取代；
在所述配体-药物偶联物中，L与Rc上的氮原子共价连接。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中Rc选自亚哌嗪基、六氢吡咯并吡咯基、二氮杂螺基和二氮杂双环基。。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R4选自杂环基或C3-8环烷基；所述的环烷基优选为单环环烷基；所述的 杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环杂环基，更优选为包含1-2 个杂原子的3-6元单环杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子；R4任选被1-2 个C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R4选自环丙基，环戊基和四氢吡喃基，R4任选被1-2个C1-6的烷基所取 代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R5选自亚杂环基和C3-8亚环烷基；所述的C3-8亚环烷基优选为C3-8单环 亚环烷基；所述的亚杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环亚杂 环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环亚杂环基；所述杂原子选自N原子 或O原子；R5任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R5选自哌啶基或四氢吡咯基；R5任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3a选自：
Figure BDA0003021755950000041
如上所示的杂环基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基和氨基中的一个或多个 取代基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3a选自：
Figure BDA0003021755950000042
其中波浪线表示R3a与偶联物的药物部分L2相连接；虚线表示R3a与偶联物的 连接子部分L相连接。
如上所示的杂环基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基和氨基中的一个或多个 取代基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的环A选自苯基，吡啶基和噻吩基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的环A选自：
Figure BDA0003021755950000043
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中L1为C1-6亚烷基；L2为C1-6亚烷基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R1为C1-6烷基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基和卤素。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中y为1至8的小数或整数，优选为2至8的小数或整数，更优选为3至8 的小数或整数。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中Pc为抗体。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和 -C(O)-W-C(O)-，其中W选自亚烷基、亚烷基-亚环烷基或1至6个原子的直链亚 杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷 基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、 烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中所述的氨基酸任选被选 自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的 一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7-(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t -OC(O)-、-C(O)-NR7-、-C(O)-NR7-(CH2)t-、-NH-R12-(CH2)t和化学键，其中t为1 至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘 代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基；
Ld选自-O-R13-C(O)-或化学键；-R13-选自亚烷基或化学键，所述的亚烷基任选 被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基 中的一个或多个取代基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基 -N)-W-，其中W选自C1-6亚烷基或C1-6亚烷基-C3-6亚环烷基，其中所述的C1-6亚 烷基和C3-6亚环烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、 氯代C1-6烷基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基的一个或多个取代基所取 代；
优选的，-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)5-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基 -N)-(CH2)2-。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的-Lb-的肽残基为由一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖 氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸和天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选 为四肽残基、二肽残基或化学键；更优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四 肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-Lc-选自-NH-R12-(CH2)t或化学键；其中t为1至3的整数；
R12选自亚芳基或化学键；
优选的，Lc选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000061
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-Ld-选自-O-R13-C(O)-或化学键；R13选自亚烷基或化学键；所述 的亚烷基任选被选自C1-6烷基和C3-6环烷基中的一个或多个取代基所取代；
优选的，-Ld-选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000062
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自
Figure BDA0003021755950000063
或者
Figure BDA0003021755950000064
s1选自2至8的整数，s2选自2 至8的整数；
Lb选自四肽残基、二肽残基和化学键；优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨 酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基；
Lc-Ld选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000065
和化学键；
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-，所述-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀 酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W为自C1-6亚烷基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L’-D)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003021755950000071
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立 地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中 所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧 基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳 基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、 羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取 代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一 个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure BDA0003021755950000072
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基 各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂 环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰 基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基； 所述的Rc任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨 基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
y为1至10的小数或整数，优选为1至8的小数或整数；
Pc为配体；
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和 -C(O)-W-C(O)-，其中W选自亚烷基、亚烷基-亚环烷基或1至6个原子的直链亚 杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷 基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、 烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中氨基酸任选被选自卤素、 羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多 个取代基所取代；
Lc选自-NR7-(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t -OC(O)-、-C(O)-NR7-、-C(O)-NR7-(CH2)t-、-NH-R12-(CH2)t和化学键，其中t为1 至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘 代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中-L-选自：
Figure BDA0003021755950000081
Figure BDA0003021755950000091
其中a端与Pc相连，b端与药物部分R3a上的N原子相连。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000092
Figure BDA0003021755950000101
其中Pc为配体；
y为1至10的小数或整数，优选为1至8的小数或整数。
在本公开的另一些实施方案中，所述的配体-药物偶联物或其可药用盐或溶剂 合物，其中所述Pc为抗体选自抗TLR7抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗 体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、 抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗 CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33 抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗 Trop-2抗体，抗DLL3抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin 抗体；
优选的，所述的抗体选自Trastuzumab、Pertuzumab、Nimotuzumab、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab。
本公开通式(Pc-L-D)所示的配体-药物偶联物包括，但不限于以下结构式：
Figure BDA0003021755950000111
Figure BDA0003021755950000121
其中y如通式(Pc-L-D)中所定义，为1-10之间的整数或小数；优选为1至8的 整数或小数，更优选为2至8的整数或小数；最优选为3至8的整数或小数。
另一方面，本公开进一步提供了一种TLR7激动剂，具有通式(D)所示结构 的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立 地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中 所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧 基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳 基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、 羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取 代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一 个或多个取代基所取代；
R3选自氨基、
Figure BDA0003021755950000122
-NH(R4)、-R5-NH2、-R5-C(O)-R6-OH、 -R5-NHC(O)-R6-OH、氨基杂环基、杂环基氨基和环烷基氨基，其中所述的氨基任 选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、 环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；其中所述的G选自碳原子或氮原 子；所述的环B为包含1-2个N原子的3-10元杂环基，任选被选自烷基、卤素、 羟基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
R4选自烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基各自独立 地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝 基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂 环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰 基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R6为亚烷基，所述的亚烷基任选被选自烷基、羟基、卤素、氨基、杂环基和 环烷基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R3为氨基，其中所述的氨基任选被选自烷基、环烷基和 杂环基中的一个或多个取代基所取代；
优选的，所述的氨基任选被选自C1-6烷基、C3-8环烷基和杂环基中的一个或多 个取代基所取代；所述的杂环基为包含1-2个N原子的3-10元杂环基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R3选自氨基杂环基、杂环基氨基和C3-8环烷基氨基，其 中所述的杂环基或环烷基为单环杂环基或单环环烷基；所述的杂环基为包含1-2 个N原子的3-10元杂环基。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R3选自-NH(R4)、-R5-NH2或如下所示的杂环基：
Figure BDA0003021755950000131
所述的R4选自C1-6烷基、杂环基和C3-8环烷基；R4任选被1-2个C1-6的烷基 所取代；
所述的R5选自键、C1-6亚烷基、亚杂环基和C3-8亚环烷基，所述的C1-6亚烷 基、亚杂环基和C3-8亚环烷基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基、氨基和硝基中 的一个或多个取代基所取代；所述的亚杂环基和C3-8亚环烷基优选为单环亚杂环 基或单环亚环烷基；所述的亚杂环基为包含1-2个N原子的3-10元杂环基；
G选自碳原子或氮原子；
所述的环B为包含1-2个N原子的3-10元杂环基，所述的杂环基优选自单环 杂环基、双螺杂环基、双环稠杂环基和双环桥杂环基；所述的环B任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R3选自：
Figure BDA0003021755950000141
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中所述的环A选自苯基，吡啶基或噻吩基；
优选的，其中所述的环A选自：
Figure BDA0003021755950000142
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中所述的L1为C1-6亚烷基；L2为C1-6亚烷基；R1为C1-6烷 基；R2相同或不同，且各自独立地为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R4选自杂环基或C3-8环烷基；所述的环烷基优选为单环 环烷基；所述的杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环杂环基， 更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环杂环基；所述杂原子选自N原子或O原 子；R4任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R4选自环丙基，环戊基和四氢吡喃基，R4任选被1-2个 C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R5选自亚杂环基和C3-8亚环烷基；所述的C3-8亚环烷基 优选为C3-8单环亚环烷基；所述的亚杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元 单环或多环亚杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环亚杂环基；所述杂 原子选自N原子或O原子；R5任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中R5选自哌啶基或四氢吡咯基；R5任选被1-2个C1-6的烷 基所取代。
在本公开的另一些实施方案中，所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，其中所述的R6为C1-6亚烷基，所述的C1-6亚烷基任选被选自 C1-6烷基、羟基、卤素、氨基和C3-8环烷基中的一个或多个取代基所取代。
本公开所述的通式(D)所示的化合物包括，但不限于：
Figure BDA0003021755950000151
Figure BDA0003021755950000161
Figure BDA0003021755950000171
Figure BDA0003021755950000181
Figure BDA0003021755950000191
Figure BDA0003021755950000201
Figure BDA0003021755950000211
Figure BDA0003021755950000221
Figure BDA0003021755950000231
本公开的另一些实施方案中，提供了一种通式(Lu-D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0003021755950000232
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂 芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立 地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中 所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧 基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳 基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、 羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取 代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一 个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure BDA0003021755950000241
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基 各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、 氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂 环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰 基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
其中所述的G选自碳原子或氮原子；
所述的Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂 环基；所述的Rc任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰 基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
W选自亚烷基、-亚烷基-亚环烷基-或1至8个原子的直链亚杂烷基，所述直 链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷基、亚环烷基和 直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷 基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中所述的氨基酸任选被选 自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的 一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t -OC(O)-、-C(O)NR7、-C(O)NR7(CH2)t-或化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘 代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基；
Ld选自-O-R13-C(O)-或化学键；-R13-选自亚烷基或化学键，所述的亚烷基任选 被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基 中的一个或多个取代基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R3a为如 下所示的包含1-2个N原子的3-10元亚杂环基：
Figure BDA0003021755950000251
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基；所述 的单环杂环基、双螺杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基任选被选自C1-6烷基、 C1-6烷氧基、卤素、卤代C1-6烷基、羟基、C1-6羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一 个或多个取代基所取代；
在所述配体-药物偶联物中，L与Rc上的氮原子共价连接。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中Rc选自 亚哌嗪基、六氢吡咯并吡咯基、二氮杂螺基和二氮杂双环基。。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R4选自 杂环基或C3-8环烷基；所述的环烷基优选为单环环烷基；所述的杂环基优选为包 含1-2个杂原子的3至10元单环或多环杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6 元单环杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子；R4任选被1-2个C1-6的烷基所 取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R4选自 环丙基，环戊基和四氢吡喃基，R4任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R5选自 亚杂环基和C3-8亚环烷基；所述的C3-8亚环烷基优选为C3-8单环亚环烷基；所述的 亚杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环亚杂环基，更优选为包 含1-2个杂原子的3-6元单环亚杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子；R5任 选被1-2个C1-6的烷基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R5选自 哌啶基或四氢吡咯基；R5任选被1-2个C1-6的烷基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R3a选自：
Figure BDA0003021755950000261
如上所示的杂环基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基和氨基中的一个或多个 取代基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中所述的环 A选自苯基，吡啶基和噻吩基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中所述的环 A选自：
Figure BDA0003021755950000262
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中L1为C1-6亚烷基；L2为C1-6亚烷基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R1为C1-6烷基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中R2相同 或不同，且各自独立地为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中y为1 至8的小数或整数，优选为2至8的小数或整数，更优选为3至8的小数或整数。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中Pc为抗 体。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和 -C(O)-W-C(O)-，其中W选自亚烷基、亚烷基-亚环烷基或1至6个原子的直链亚 杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷 基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、 烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中所述的氨基酸任选被选 自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的 一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7-(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t -OC(O)-、-C(O)-NR7-、-C(O)-NR7-(CH2)t-、-NH-R12-(CH2)t或化学键，其中t为1 至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘 代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基；
Ld选自-O-R13-C(O)-或化学键；-R13-选自亚烷基或化学键，所述的亚烷基任选 被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基 中的一个或多个取代基所取代。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W选自 C1-6亚烷基或C1-6亚烷基-C3-6亚环烷基，其中所述的C1-6亚烷基和C3-6亚环烷基独 立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、氯代C1-6烷基、氘代 C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基的一个或多个取代基所取代；
优选的，-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)5-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基 -N)-(CH2)2-。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中所述的 -Lb-的肽残基为由一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、 丝氨酸、谷氨酸和天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为四肽残基、二 肽残基或化学键；更优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基或者缬氨 酸-瓜氨酸的二肽残基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -Lc-选自-NH-R12-(CH2)t或化学键；其中t为1至3的整数；
R12选自亚芳基或化学键；
优选的，Lc选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000271
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -Ld-选自-O-R13-C(O)-或化学键；R13选自亚烷基或化学键；所述的亚烷基任选被选 自C1-6烷基和C3-6环烷基中的一个或多个取代基所取代；
优选的，-Ld-选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000272
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自
Figure BDA0003021755950000281
或者
Figure BDA0003021755950000282
s1选自2至8的整数，s2选自2 至8的整数；
Lb选自四肽残基、二肽残基和化学键；优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨 酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基；
Lc-Ld选自以下结构式：
Figure BDA0003021755950000283
或化学键；
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
本公开的另一些实施方案中，所述的通式(Lu-D)所示的化合物，其中接头单元 -L-为-La-，所述-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-和-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-， 其中W为自C1-6亚烷基。
本公开所述的通式(Lu-D)所示的化合物包括，但不限于：
Figure BDA0003021755950000284
Figure BDA0003021755950000291
Figure BDA0003021755950000301
Figure BDA0003021755950000311
Figure BDA0003021755950000321
Figure BDA0003021755950000331
本公开的另一方面，提供了一种制备通式(Pc-Lu-D)所示的化合物的方法， 其包括如下步骤：
Figure BDA0003021755950000332
Pc’为经还原Pc后所得，与通式(Lu-D)进行偶联反应，得到通式(Pc-Lu-D)；
其中：
Pc为配体；
W、L1、L2、Lb、Lc、R1、R2、R3a、n和y如通式(Pc-Lu-D)中所定义。
本公开的另一方面，进一步涉及一种配体-药物偶联物，包含配体和连接至配 体的药物，其中所述药物选自本公开所述的化合物，优选药物通过接头连接至配 体，优选配体为抗体。
本公开的另一方面，进一步涉及一种配体-药物偶联物的制备方法，包含将本 公开所述的化合物与配体连接的步骤，优选通过接头连接，优选配体为抗体。当 接头单元-L-为-La-Lb-Lc-Ld-时，La端与配体连接，Ld端与药物连接。
本公开的另一方面，进一步涉及一种药物组合物，其含有治疗有效量的如本 公开所述的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或 其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本公开的另一方面，进一步涉及本公开所述的化合物或其偶联物或其药学 上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或其药物组合 物，其用作药物。
本公开的另一方面，进一步涉及本公开所述的化合物或其偶联物或其药学上 可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在 制备用于治疗或预防病毒感染或肿瘤的药物中的用途。
本公开的另一方面，进一步涉及本公开所述的化合物或其偶联物或其药学上 可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物，或其药 物组合物在制备用于治疗或预防肿瘤的药物中的用途；优选其中所述的肿瘤为与 TLR7、HER2、HER3或EGFR表达相关的癌症。
本公开的另一方面，进一步涉及本公开所述的化合物或其偶联物或其药学上 可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或药物组合物在制 备治疗和/或预防癌症的药物的用途，其中所述癌症优选选自黑色素瘤、非小细胞 肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、COPD、 溃疡性结肠炎、肝纤维化、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、 尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、神经胶质瘤、 神经母细胞瘤、肉瘤、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病、骨癌、皮肤 癌、甲状腺癌、胰腺癌和淋巴瘤；或者，在制备用于治疗由病毒引起的感染的药 物中的用途，所述病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病 毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克 出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、 SARS和流感病毒。
本公开的另一方面，进一步涉及本公开所述的化合物或其偶联物或其药学上 可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐，或药物组合物在制 备治疗和/或预防由病毒引起的感染的药物的用途，其中所述病毒选自：登革热病 毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山 谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡 病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗和/或预防病毒感染或肿瘤的方法，该方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的本公开所述的化合物或其 偶联物或其药学上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或 包含其的药物组合物。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗和/或预防肿瘤的方法，该方法 包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的本公开所述的化合物或其偶联物或其 药学上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或包含其的药 物组合物；优选其中所述的肿瘤为与TLR7、HER2、HER3或EGFR表达相关的 癌症。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗或预防癌症的方法，该方法包 括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的本公开所述的化合物或其偶联物或其药 学上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或溶剂合物或包 含其的药物组合物；其中所述癌症优选选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、 基底细胞癌、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、COPD、溃疡性结肠炎、肝 纤维化、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、 肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肉 瘤、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌和淋巴瘤。
本公开的另一方面，进一步涉及一种用于治疗由病毒引起的感染的方法，该 方法包括向需要其的受试者施用治疗有效剂量的本公开所述的化合物或其偶联物 或其药学上可接受的盐，或其配体-药物偶联物、或其药学上可接受的盐或包含其 的药物组合物；所述病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎 病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯 克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、 SARS和流感病毒。
可将活性化合物(例如根据本公开所述的化合物或其药学上可接受的盐、本 公开所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐)制成适合于通过任何适当途 径给药的形式，活性化合物优选是以单位剂量的方式，或者是以受试者能够以单 剂进行自我给药的方式。本公开所的活性化合物或组合物的单位剂量的方式可以 是片剂、胶囊、扁囊剂、瓶装药水、药粉、颗粒剂、锭剂、栓剂、再生药粉或液 体制剂。
本公开治疗方法中所用活性化合物或组合物的施用剂量通常将随疾病的严重性、受试者的体重和活性化合物的相对功效而改变。不过，作为一般性指导，合 适的单位剂量可以是0.1mg～1000mg。
本公开的药物组合物除活性化合物外，可含有一种或多种辅料，所述辅料选 自以下成分：填充剂、稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或赋形剂等。根据给药 方法的不同，组合物可含有0.1至99重量％的活性化合物。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭 剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。 可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含 有粘合剂、填充剂、润滑剂、崩解剂或药学上可接受的润湿剂等，此类组合物还 可以含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提 供悦目和可口的药用制剂。
水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。水混悬液 也可以含有一种或多种防腐剂例、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种 或多种甜味剂。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油中配制而成。油悬浮液可含有增稠 剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。
药物组合物还可以是用于制备水混悬液的可分散粉末和颗粒提供活性成分， 通过加入水混合分散剂、湿润剂、悬浮剂或防腐剂中的一种或多种。也可加入其 他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸保存这 些组合物。
本公开的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。
药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有 水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的 无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将 油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液 或微乳注入受试者的血流中。或者，最好按可保持本公开化合物恒定循环浓度的 方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种 装置的示例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。
药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可 按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注 射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混 悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本公开化合物。可通过将药物与在普通温 度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激 性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植 物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非 限定于以下因素：所用具体化合物的活性、受试者的年龄、受试者的体重、受试 者的健康状况、受试者的行为、受试者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速 率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用 量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
附图说明
图1：本公开的ADC或抗体与细胞MDAPCa的体外结合能力。
发明的详细说明
除非另有限定，本文所用的所有技术和科学术语均与本公开所属领域普通技 术人员的通常理解一致。虽然也可采用与本文所述相似或等同的任何方法和材料 实施或测试本公开，但本文描述了优选的方法和材料。描述和要求保护本公开时， 依据以下定义，使用下列术语。
当本公开中使用商品名时，旨在包括该商品名产品的制剂、该商品名产品的 药物和活性药物部分。
术语“配体”是能识别和结合目标细胞相关的抗原或受体的大分子化合物。配 体的作用是将药物呈递给与配体结合的目标细胞群，这些配体包括但不限于蛋白 类激素、凝集素、生长因子、抗体或其他能与细胞结合的分子。在本公开实施方 式中，配体表示为Pc，配体可通过配体上的杂原子与连接单元形成连接键，优选 为抗体。
术语“药物”是指细胞毒性药物或免疫调节剂。细胞毒性药物能在肿瘤细胞内 具有较强破坏其正常生长的化学分子。细胞毒性药物原则上在足够高的浓度下都 可以杀死肿瘤细胞，但是由于缺乏特异性，在杀伤肿瘤细胞的同时，也会导致正 常细胞的凋亡，导致严重的副作用。该术语包括如细菌、真菌、植物或动物来源 的小分子毒素或酶活性毒素，放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、 Sm153、Bi212、P32和Lu的放射性同位素)，化疗药物，抗生素和核溶酶。免疫调节 剂是免疫关卡分子的抑制剂。本公开的一些实施方案中，药物是TLR7激动剂。
术语“接头单元”、“接头”或“连接片段”是指指一端与配体连接而另一 端与药物相连的化学结构片段或键，也可以连接其他接头后再与药物相连。本公 开的优选方案表示为L和L1至L4，其中L1端与配体相连，L4端与结构单元Y相 连后与药物(D)相连。
接头，包括延伸物、间隔物和氨基酸单元，可以通过本领域已知方法合成， 诸如US2005-0238649A1中所记载的。接头可以是便于在细胞中释放药物的“可切 割接头”。例如，可使用酸不稳定接头(例如腙)、蛋白酶敏感(例如肽酶敏感) 接头、光不稳定接头、二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Research 52: 127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
术语“配体-药物偶联物”，指配体通过稳定的连接单元与具有生物活性的药 物相连。在本公开中“配体-药物偶联物”优选为抗体-药物偶联物(antibody drug conjugate，ADC)，指把单克隆抗体或者抗体片段通过稳定的连接单元与具有生物 活性的毒性药物相连。
本公开所用氨基酸三字母代码和单字母代码如J.biol.chem,243,p3558(1968)中所述。
术语“抗体”包括全长抗体及其抗原结合片段。
术语“全长抗体”指免疫球蛋白，是由两条相同的重链和两条相同的轻链通 过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白重链恒定区的氨基酸组成和排 列顺序不同，可将免疫球蛋白分为五类，或称为免疫球蛋白的同种型，即IgM、IgD、 IgG、IgA和IgE，其相应的重链分别为μ链、δ链、γ链、α链、和ε链。同一类 Ig根据其铰链区氨基酸组成和重链二硫键的数目和位置的差别，又可分为不同的 亚类，如IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。轻链通过恒定区的不同分为κ链 或λ链。五类Ig中每类Ig都可以有κ链或λ链。本公开所述的抗体优选为针对靶 细胞上细胞表面抗原的特异性抗体，非限制性实施例为以下抗体：抗HER2(ErbB2) 抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗 HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、 抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、 抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗 MUCl抗体、抗Lewis Y抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗 体、抗PSMA抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体或抗Mesothelin抗体中一个或多个；优选为曲妥珠单抗(Trastuzumab，商品名Herceptin)、帕妥珠单抗(Pertuzumab，也被称作2C4，商品名Perjeta)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab，商 品名泰欣生)、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、 Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab。
全长抗体重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，为可变区 (Fv区)；靠近C端的其余氨基酸序列相对稳定，为恒定区。可变区包括3个高 变区(HVR)和4个序列相对保守的框架区(FR)。3个高变区决定抗体的特异性， 又称为互补性决定区(CDR)。每条轻链可变区(LCVR)和重链可变区(HCVR) 由3个CDR区4个FR区组成，从氨基端到羧基端依次排列的顺序为：FR1，CDR1， FR2，CDR2，FR3，CDR3，FR4。轻链的3个CDR区指LCDR1、LCDR2、和LCDR3； 重链的3个CDR区指HCDR1、HCDR2和HCDR3。
本公开的抗体包括鼠源抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体，优选人 源化抗体和全人源抗体。
术语“鼠源抗体”在本公开中为根据本领域知识和技能用鼠制备抗体。制备 时用特定抗原注射试验对象，然后分离表达具有所需序列或功能特性的抗体的杂 交瘤。
术语“嵌合抗体(chimeric antibody)”，是将鼠源性抗体的可变区与人抗体 的恒定区融合而成的抗体，可以减轻鼠源性抗体诱发的免疫应答反应。建立嵌合 抗体，要先建立分泌鼠源性特异性单抗的杂交瘤，然后从鼠杂交瘤细胞中克隆可 变区基因，再根据需要克隆人抗体的恒定区基因，将鼠可变区基因与人恒定区基 因连接成嵌合基因后插入表达载体中，最后在真核系统或原核系统中表达嵌合抗 体分子。
术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体 (CDR-graftedantibody)，是指将鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即 不同类型的人种系抗体框架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量 鼠蛋白成分，从而诱导的异源性反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序 列的公共DNA数据库或公开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系 DNA序列可以在“VBase”人种系序列数据库(在因特网 www.mrccpe.com.ac.uk/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，1991 Sequences ofProteins of Immunological Interest，第5版中找到。为避免免疫原性下降的同 时，引起的活性下降，可对所述的人抗体可变区框架序列进行最少反向突变或回 复突变，以保持活性。人源化抗体也包括进一步由噬菌体展示对CDR进行亲和力 成熟后的人源化抗体。进一步描述参与人源化可使用小鼠抗体的方法的文献包 括，例如Queen等，Proc.，Natl.Acad.Sci.USA，88，2869，1991和Winter及其同 事的方法[Jones等，Nature，321，522(1986)，Riechmann，等，Nature，332， 323-327(1988)，Verhoeyen，等，Science，239，1534(1988)]。
术语“全人源抗体”、“全人抗体”或“完全人源抗体”，也称“全人源单 克隆抗体”，其抗体的可变区和恒定区都是人源的，去除免疫原性和毒副作用。 单克隆抗体的发展经历了四个阶段，分别为：鼠源性单克隆抗体、嵌合性单克隆 抗体、人源化单克隆抗体和全人源单克隆抗体。全人抗体制备的相关技术主要 有：人杂交瘤技术、EBV转化B淋巴细胞技术、噬菌体显示技术(phage display)、转基因小鼠抗体制备技术(transgenic mouse)和单个B细胞抗体制备 技术等。
术语“抗原结合片段”是指抗体的保持特异性结合抗原的能力的一个或多个 片段。可利用全长抗体的片段来进行抗体的抗原结合功能。“抗原结合片段”中 包含的结合片段的示例包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的 单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的 二价片段，(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体的单臂的VH 和VL结构域组成的Fv片段；(v)单结构域或dAb片段(Ward等 人,(1989)Nature341：544-546)，其由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)可任选地通过合成的接头连接的两个或更多个分离的CDR的组 合。此外，虽然Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用 重组方法，通过合成的接头连接它们，从而使得其能够产生为其中VL和VH区 配对形成单价分子的单个蛋白质链(称为单链Fv(scFv)；参见，例如，Bird等人 (1988)Science242:423-426；和Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci USA85:5879-5883)。此类单链抗体也意欲包括在术语抗体的“抗原结合片段” 中。使用本领域技术人员已知的常规技术获得此类抗体片段，并且以与对于完整抗体的方式相同的方式就功用性筛选片段。可通过重组DNA技术或通过酶促或 化学断裂完整免疫球蛋白来产生抗原结合部分。抗体可以是不同同种型的抗体， 例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或 IgM抗体。
通常，Fab是通过用蛋白酶木瓜蛋白酶(例如，切割H链的224位的氨基酸残基) 处理IgG抗体分子所获得的片段中的具有约50,000的分子量并具有抗原结合活性的 抗体片段，其中H链N端侧的约一半和整个L链通过二硫键结合在一起。
通常，F(ab')2是通过用酶胃蛋白酶消化IgG铰链区中二硫键的下方部分而获得的，分子量为约100,000，具有抗原结合活性，并包含在铰链位置相连的两个Fab 区的抗体片段。
通常，Fab'是通过切割上述F(ab')2的铰链区的二硫键而获得的，分子量为约 50,000并具有抗原结合活性的抗体片段。
此外，可以通过将编码Fab'片段的DNA插入到原核生物表达载体或真核生物表 达载体中并将载体导入到原核生物或真核生物中以表达Fab'来生产所述Fab'。
术语“单链抗体”、“单链Fv”或“scFv”意指包含通过接头连接的抗体重 链可变结构域(或VH)和抗体轻链可变结构域(或VL)的分子。此类scFv分子可 具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现 有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成，例如使用1-4个重复的 变体(Holliger等人(1993)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448)。可用于本 公开的其他接头由Alfthan等人(1995)，Protein Eng.8:725-731，Choi等人 (2001)，Eur.J.Immuno l.31:94-106，Hu等人(1996)，Cancer Res.56:3055-3061， Kipriyanov等人(1999)，J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001)，Cancer Immunol.描述。
术语“CDR”是指抗体的可变结构域内主要促成抗原结合的6个高变区之 一。所述6个CDR的最常用的定义之一由Kabat E.A.等人，(1991)Sequences of proteins ofimmunological interest.NIH Publication91-3242)提供。
术语“抗体框架区”，是指可变结构域VL或VH的一部分，其用作该可变 结构域的抗原结合环(CDR)的支架。从本质上讲，其是不具有CDR的可变结构 域。
术语“表位”或“抗原决定簇”是指抗原上被免疫球蛋白或抗体结合的部 位。表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12， 13，14或15个连续或非连续的氨基酸。参见，例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular B iology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。
术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结 合”是指抗体或抗原结合片段对预先确定的抗原上的表位的结合。通常，抗体或 抗原结合片段以大约小于10-7M，例如大约小于10-8M、10-9M或10-10M或更小的 亲和力(KD)结合。
术语“核酸分子”是指DNA分子或RNA分子。核酸分子可以是单链或双 链的，但优选是双链DNA。当将核酸与另一个核酸序列置于功能关系中时，核酸 是“有效连接的”。例如，如果启动子或增强子影响编码序列的转录，那么启动 子或增强子有效地连接至所述编码序列。
术语“表达载体”是指能够运输已与其连接的另一个核酸的核酸分子。在一 个实施方案中，表达载体是“质粒”，其是指可将另外的DNA区段连接至其中 的环状双链DNA环。在另一个实施方案中，载体是病毒载体，其中可将另外的 DNA区段连接至病毒基因组中。本文中公开的载体能够在已引入它们的宿主细 胞中自主复制(例如，具有细菌的复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)或 可在引入宿主细胞后整合入宿主细胞的基因组，从而随宿主基因组一起复制(例 如，非附加型哺乳动物载体)。
现有技术中熟知生产和纯化抗体和抗原结合片段的方法，如冷泉港的抗体实 验技术指南，5-8章和15章。抗原结合片段同样可以用常规方法制备。发明所述 的抗体或抗原结合片段用基因工程方法在非人源的CDR区加上一个或多个人源 FR区。人FR种系序列可以通过比对IMGT人类抗体可变区种系基因数据库和 MOE软件，从ImMunoGeneTics(IMGT)的网站http://imgt.cines.fr得到，或者从免 疫球蛋白杂志，2001ISBN012441351上获得。
术语“宿主细胞”是指已向其中引入了表达载体的细胞。宿主细胞可包括细 菌、微生物、植物或动物细胞。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)的 成员，例如大肠杆菌(Escherichia coli)或沙门氏菌(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌 科(Bacillaceae)例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)； 链球菌(Streptococcus)和流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)。适当的微生物包括 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤酵母(Pichia pastoris)。适当的动物宿主 细胞系包括CHO(中国仓鼠卵巢细胞系)和NS0细胞。
本公开工程化的抗体或抗原结合片段可用常规方法制备和纯化。比如，编码 重链和轻链的cDNA序列，可以克隆并重组至GS表达载体。重组的免疫球蛋白表 达载体可以稳定地转染CHO细胞。作为一种更推荐的现有技术，哺乳动物类表达 系统会导致抗体的糖基化，特别是在Fc区的高度保守N端位点。阳性的克隆在生 物反应器的无血清培养基中扩大培养以生产抗体。分泌了抗体的培养液可以用常 规技术纯化。比如，用含调整过的缓冲液的A或G Sepharose FF柱进行纯化。洗 去非特异性结合的组分。再用PH梯度法洗脱结合的抗体，用SDS-PAGE检测抗 体片段，收集。抗体可用常规方法进行过滤浓缩。可溶的混合物和多聚体，也可 以用常规方法去除，比如分子筛、离子交换。得到的产物需立即冷冻，如-70℃， 或者冻干。
术语“肽”是指介于氨基酸和蛋白质之间的化合物片段，由2个或2个以上 氨基酸分子通过肽键相互连接而成，是蛋白质的结构与功能片段，如激素、酶类 等本质上都是肽。
术语“毒性药物”是指抑制或防止细胞的功能和/或引起细胞死亡或破坏的物 质。包括毒素和其他能用于肿瘤治疗的化合物。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链 基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12个) 碳原子的烷基，更优选为含有1至6个碳原子的烷基。非限制性示例示例包括甲 基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二 甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁 基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基 丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、 4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5- 甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、 2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基 己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己 基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基 己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基 己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非 限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲 丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、 2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二 甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲 基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基和2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优 选独立地任选选自H原子、D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧 基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂 环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
术语“杂烷基”指含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的烷基，其中烷 基如上所定义。
术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相 同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20 个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、 9、10、11和12个)碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限 制性示例示例包括但不限于亚甲基(-CH2-)、1,1-亚乙基(-CH(CH3)-)、1,2-亚乙基 (-CH2CH2)-、1,1-亚丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-亚丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-亚丙 基(-CH2CH2CH2-)、1,4-亚丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。亚烷基可以是取代的或非 取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基 优选独立地任选选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂 环基氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环 基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基和氧代基中 的一个或多个取代基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基、环烷基的定 义如上所述。烷氧基的非限制性示例示例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧 基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非 取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自H原子、 D原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧 基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包 含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，优选包含3至8个碳原子(例 如3、4、5、6、7和8个)，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性 示例示例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二 烯基、环庚基、环庚三烯基和环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环 烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元，单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环 基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。 优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环与环之间 共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选 为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元 或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000431
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻 的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但 没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元 (例如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环 稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷 基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000441
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的 全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电 子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据 组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或 四环，更优选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000442
所述环烷基环包括如上所述的环烷基(包括单环、螺环、稠环和桥环)稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制 性示例示例包括茚满基、四氢萘基和苯并环庚烷基等；优选苯基并环戊基或四氢 萘基。
环烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的 连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、 卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、 硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至 20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧、硫、S(O)或S(O)2的杂原子， 但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环 原子，其中1～4个(例如1、2、3和4个)是杂原子；更优选包含3至8个环原 子(例如3、4、5、6、7和8个)，其中1-3是杂原子(例如1、2和3个)；更优 选包含3至6个环原子，其中1-3个是杂原子；最优选包含5或6个环原子，其中 1-3个是杂原子。单环杂环基的非限制性示例示例包括吡咯烷基、四氢吡喃基、1,2.3.6-四氢吡啶基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基和高哌嗪基等。多环 杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂 环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧、硫、S(O)或S(O)2的杂原子，其余 环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子 系统。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根据环 与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环 基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、 5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000451
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻 的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一 个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧、硫、S(O) 或S(O)2的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例 如7、8、9或10元)。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂 环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环 基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000452
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多 环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子 系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧、硫、S(O)或S(O)2的杂原子，其余环 原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元(例如7、8、9或10元)。根 据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环 或四环，更优选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000461
所述杂环基环包括如上所述的杂环基(包括单环、螺杂环、稠杂环和桥杂环) 稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基， 其非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000462
等。
杂环基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的 连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、 卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、 硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
术语“亚杂环基”指杂环基上具有2个从母体杂环基的相同碳原子或两个不 同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基。所述的杂环基如上所定义。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(稠合 多环是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。所述芳 基环包括如上所述的芳基环稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结 构连接在一起的环为芳基环，其非限制性示例示例包括：
Figure BDA0003021755950000463
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连 接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、 卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、 硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
术语“亚芳基”含有两个共价键，可以是邻位、间位或对位构型的芳基，非 限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000464
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其 中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元(例如5、6、7、8、9或10 元)，更优选为5元或6元，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯 基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡唑基、三唑基和四唑基等。所述杂芳 基环包括如上述的杂芳基稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连 接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000471
杂芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的 连接点上被取代，所述取代基优选独立地任选选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、 卤代烷基、卤代烷氧基、环烷基氧基、杂环基氧基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、 硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基。
术语“亚杂芳基”含有两个共价键，可以是邻位、间位或对位构型的杂 芳基，非限制性实施例包括：
Figure BDA0003021755950000472
术语“氨基保护基”是为了使分子其它部位进行反应时氨基保持不变，用易 于脱去的基团对氨基进行保护。非限制性实施例包含(三甲基硅)乙氧基甲基、四氢 吡喃基、叔丁氧羰基、乙酰基、苄基、烯丙基和对甲氧苄基等。这些基团可任选 地被选自卤素、烷氧基或硝基中的1-3个取代基所取代。
术语“氨基杂环基”指杂环基被一个或多个氨基取代，优选被一个氨基取代， 其中杂环基如上所定义，其中“氨基”指-NH2。本公开的代表性实施例如下：
Figure BDA0003021755950000473
术语“杂环基氨基”指氨基被一个或多个杂环基取代，优选被一个杂环基取 代，其中氨基如上所定义，其中杂环基如上所定义。本公开的代表性实施例如下：
Figure BDA0003021755950000481
术语“环烷基氨基”指氨基被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取 代，其中氨基如上所定义，其中环烷基如上所定义。本公开的代表性实施例如下：
Figure BDA0003021755950000482
术语“环烷基氧基”指环烷基-O-，其中环烷基如上所定义。
术语“杂环基氧基”指杂环基-O-，其中杂环基如上所定义。
术语“烷硫基”指烷基-S-，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指烷氧基被一个或多个卤素取代，其中烷氧基如上所定 义。
术语“环烷基烷基”指烷基被一个或多个环烷基取代，优选被一个环烷基取 代，其中烷基如上所定义，其中环烷基如上所定义。
术语“卤代烷基”指烷基被一个或多个卤素取代，其中烷基如上所定义。
术语“氘代烷基”指烷基被一个或多个氘原子取代，其中烷基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“硝基”指-NO2。
术语“酰胺基”指-C(O)N(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该 说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基 团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂 环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为1～5个，更优选为1～3 个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。本领域技术人员能够在不付出过 多努力的情况下(通过实验或理论)确定可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的 氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
术语“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药 用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的 载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收 进而发挥生物活性。
术语“药学上可接受的盐”或“可药用盐”是指本公开化合物的盐，这类盐用 于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。可以在化合物 的最终分离和纯化过程中，或通过使合适的基团与合适的碱或酸反应来单独制备 盐。通常用于形成药学上可接受的盐的碱包括无机碱，例如氢氧化钠和氢氧化钾， 以及有机碱，例如氨。通常用于形成药学上可接受的盐的酸包括无机酸以及有机 酸。
针对药物或药理学活性剂而言，术语“治疗有效量”是指无毒的但能达到预 期效果的药物或药剂的足够用量。有效量的确定因人而异，取决于受体的年龄和 一般情况，也取决于具体的活性物质，个案中合适的有效量可以由本领域技术人 员根据常规试验确定。
本文所用的术语“药学上可接受的”是指这些化合物、材料、组合物和/或剂 型，在合理的医学判断范围内，适用于与受试者组织接触而没有过度毒性、刺激 性、过敏反应或其他问题或并发症，具有合理的获益/风险比，并且对预期的用途 是有效。
本文所使用的，单数形式的“一个”、“一种”和“该”包括复数引用，反之 亦然，除非上下文另外明确指出。
当将术语“约”应用于诸如pH、浓度、温度等的参数时，表明该参数可以变 化±10％，并且有时更优选地在±5％之内。如本领域技术人员将理解的，当参数 不是关键的时，通常仅出于说明目的给出数字，而不是限制。
本公开的化合物还可包含其同位素衍生物。术语“同位素衍生物”指结构不 同仅在于存在一种或多种同位素富集原子的化合物。例如，具有本公开的结构， 除了用“氘”或“氚”代替氢，或者用18F-氟标记(18F同位素)代替氟，或者用 11C-，13C-，或者14C-富集的碳(11C-，13C-，或者14C-碳标记；11C-，13C-，或者14C- 同位素)代替碳原子的化合物处于本公开的范围内。这样的化合物可用作例如生 物学测定中的分析工具或探针，或者可以用作疾病的体内诊断成像示踪剂，或者 作为药效学、药动学或受体研究的示踪剂。
术语“载药量”也称药物配体比例，即ADC中每个配体所偶联的药物的平均 数量。示例性地，本公开中为式(I)分子中每个配体上加载的细胞毒性药物平均 数量，也可以表示为药物量和抗体量的比值(Drug-to-Antibody Ratio，DAR)，药 物载量的范围可以是每个配体(Pc)连接0-12个，优选1-10个细胞毒性药物(D)。 在本公开的实施方式中，载药量表示为y，示例性的可以为1，2，3，4，5，6，7， 8，9，10的均值，范围为0-12，优选1-10，更优选1-8，或2-8，或2-7，或3-8， 或3-7，或3-6，或4-7，或4-6，或4-5的均值。可用常规方法如UV/可见光光谱 法，质谱，ELISA试验、CE-SDS法和HPLC特征鉴定偶联反应后ADC的载药量。
可以用以下非限制性方法控制抗体药物偶联物的载量，包括：
(1)控制连接试剂和单抗的摩尔比，
(2)控制反应时间和温度，
(3)选择不同的反应试剂。
常规的药物组合物的制备见中国药典。
术语“载体”用于本公开的药物，是指能改变药物进入人体的方式和在体内 的分布、控制药物的释放速度并将药物输送到靶向器官的体系。药物载体释放和 靶向系统能够减少药物降解及损失，降低副作用，提高生物利用度。如可作为载 体的高分子表面活性剂由于其独特的两亲性结构，可以进行自组装，形成各种形 式的聚集体，优选的示例示例如胶束、微乳液、凝胶、液晶和囊泡等。这些聚集 体具有包载药物分子的能力，同时又对膜有良好的渗透性，可以作为优良的药物 载体。
术语“赋形剂”是在药物制剂中除主药以外的附加物，也可称为辅料。如片 剂中的黏合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂；半固体制剂、软膏剂、霜剂中的基质 部分；液体制剂中的防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶 剂、渗透压调节剂和着色剂等，均可称为赋形剂。
术语“稀释剂”又称填充剂，其主要用途是增加片剂的重量和体积。稀释剂 的加入不仅保证一定的体积大小，而且减少主要成分的剂量偏差，改善药物的压 缩成型性等。当片剂的药物含有油性组分时，需加入吸收剂吸收油性物，使保持 “干燥”状态，以利于制成片剂。如淀粉、乳糖、钙的无机盐和微晶纤维素等。
本公开的合成方法
为了完成本公开的合成目的，本公开采用如下的合成技术方案：
方案一：
本公开(Pc-Lu-D)所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
Figure BDA0003021755950000501
Pc’为经还原Pc后所得，与通式(Lu-D)进行偶联反应，得到通式(Pc-Lu-D)；
其中：
Pc为配体，优选为抗体；W、L1、L2、Lb、Lc、R1、R2、R3a、n和y如通式(Pc-Lu-D) 中所定义；所述的还原剂优选为TCEP。
具体实施方式
以下结合实施例进一步描述本公开，但这些实施例并非限制本公开的范围。
本公开实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照原 料或商品制造厂商所建议的条件。未注明具体来源的试剂，为市场购买的常规试 剂。
一、抗体实施例
以下抗体按抗体常规方法进行制备：如可进行表达载体构建后，转染真核细 胞如HEK293细胞(Life Technologies Cat.No.11625019)，纯化表达。
以下为Trastuzumab的序列
轻链
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVNTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFL YSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIKRT VAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQES VTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO：1
重链
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYP TNGYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFY AMDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVT VSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNT KVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLN GKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO：2
二、化合物实施例
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ) 以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶 剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)、氘代氯仿(CDCl3)、氘代甲醇(CD3OD)，内标为四 甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用Agilent 1200/1290DAD-6110/6120Quadrupole MS液质联用仪(生产商：Agilent，MS型号：6110/6120Quadrupole MS)。
waters ACQuity UPLC-QD/SQD(生产商：waters，MS型号：waters ACQuity QdaDetector/waters SQ Detector)
THERMO Ultimate 3000-Q Exactive(生产商：THERMO，MS型号：THERMO QExactive)
高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。
手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。
高效液相制备使用Waters 2545-2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson GX-281制备型色谱仪。
手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。
CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法 (TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用 的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
激酶平均抑制率及IC50值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。
本公开的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购 买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化 学科技(Accela ChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或 HC2-SS型氢化仪。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂，纯 化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯 甲烷/甲醇体系，B：正己烷/乙酸乙酯体系，C：石油醚/乙酸乙酯体系，溶剂的体 积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性 或酸性试剂进行调节。
实施例1
5-丁氧基-3-(4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺甲酸盐1
Figure BDA0003021755950000531
第一步
2-丁氧基-6-氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)-5-硝基嘧啶-4-胺1b
将2-丁氧基-4,6-二氯-5-硝基嘧啶1a(17g,63.89mmol,参照专利 “WO2016/44183”中说明书第63页提供的方法合成)溶解于四氢呋喃(45mL)中， 加入双(4-甲氧基苄基)胺(16.4g,63.89mmol,供应商韶远)，加入三乙胺(9.7g,95.84 mmol)，室温搅拌4小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系C纯化 所得残余物得到标题产物1b(17g,产率：54％)。
MS m/z(ESI):487.3[M+1]
第二步
2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)丙二酸二甲酯1c
将1b(17g,34.91mmol)溶解在丙酮(550mL)中，依次加入丙二酸二甲酯(6.9g,52.37mmol,供应商韶远)，氢氧化钠(4.9g,122.19mmol)和水(11mL)，室温搅拌4 小时。加水(800mL)，用乙酸乙酯(700mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食 盐水洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液减压浓缩，得到粗品标题产物1c(22g)， 产品不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):583.4[M+1]
第三步
2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)乙酸甲酯1d
往二甲基亚砜(60mL)和水(6mL)的混合液中加入粗品1c(6.0g,10.3mmol)， 再加入氯化锂(655mg,15.45μmol)，氩气保护，加热至110℃，搅拌反应4小时。 反应液冷却至室温，加水(150mL)，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取，合并有机相，有 机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩， 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物得到标题产物1d(2.3g,产率： 43％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.04(d,4H),6.84(d,4H),4.47(s,4H),4.28(t,2H),3.91(s,2H),3.80(s,6H),3.71(s,3H),1.76-1.69(m,2H),1.47-1.41(m,2H),0.93(t,3H).
第四步
4-(4-(氯甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1f
将4-(4-(羟基甲基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1e(5.4g,17.62mmol,参照专利“WO2003/91249”中说明书第22页提供的方法合成)加至甲苯(200mL)中，氩气 保护，搅拌下缓慢加入氯化亚砜(3.15g,26.44mmol)。加毕，反应液加热至40℃， 搅拌1小时。反应液冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，用乙酸乙酯 (20mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯 化，得到标题产物1f(3.4g，产率：59％)。
MS m/z(ESI):325.1[M+1]
第五步
4-(4-(2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)-3-甲氧基-3-氧代丙 基)苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯1g
将1d(1g,1.91mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(16mL)中，氩气保护，冷却至 0℃，缓慢加入氢化钠(137mg,3.43mmol,含量60％)，加完后0℃搅拌30分钟， 再加入1f(930mg,2.86mmol)，加完后先恢复至室温，加热至100℃，反应4小时。 反应液冷却至室温，加水(20mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，有机 相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩， 所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物1g(554mg，产 率：35％)。
MS m/z(ESI):813.3[M+1]
第六步
4-(4-(2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)乙基)苄基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯1h
将1g(554mg,0.68mmol)溶于四氢呋喃(30mL)和水(15mL)中，加入氢氧化锂(163mg,6.8mmol)。反应液加热至60℃，搅拌16小时。反应液冷却至室温，加入 乙酸乙酯(100mL)，分液收集有机相。有机相用饱和食盐水(30mL×3)洗涤，无水 硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂。滤液减压浓缩得到粗品标题产物1h(469mg)，产 品不经纯化直接进行下一步反应。
MS m/z(ESI):755.5[M+1]
第七步
4-(4-(2-(5-氨基-6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基嘧啶-4-基)乙基)苄基)哌嗪-1-羧 酸叔丁酯1i
将粗品1h(469mg,0.62mmol)加入到乙酸(22mL)中，氩气保护，加入锌粉(610 mg,9.33mmol)。反应液在室温下搅拌16小时。反应液经硅藻土过滤，滤饼用二 氯甲烷洗涤。合并滤液，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B 纯化，得到标题产物1i(198mg,产率：43％)。
MS m/z(ESI):725.1[M+1]
第八步
4-(4-((7-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯1j
将1i(198mg,0.27mmol)加入到乙酸(4mL)中，加入亚硝酸异戊酯(48mg,0.41mmol)。反应液在室温下搅拌2小时。加水(20mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取， 合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物 1j(150mg，产率：75％)。
MS m/z(ESI):736.8[M+1]
第九步
5-丁氧基-3-(4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺甲酸盐1
向25mL闷罐反应器中加入1j(100mg,0.14mmol)和三氟乙酸(10mL)。闷罐 反应器密封后加热至110℃，搅拌16小时。冷却至室温，反应液减压浓缩，所得 残余物溶于甲醇，用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：Inertsil ODS-3 10um 20*250nm；流动相:A-水(0.1％甲酸)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：20mL/min)，得 到标题产物1(4.47mg,甲酸盐,产率：8.4％)。
MS m/z(ESI):396.2[M+1]
实施例2
5-丁氧基-3-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺甲酸盐 2
Figure BDA0003021755950000561
第一步
4-(3-甲氧基-4-(甲氧基羰基)苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯2c
将4-(溴甲基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯2a(7.00g,27.02mmol，参照专利 “WO2004/108677”中说明书第199页Example 73提供的方法合成)，哌嗪-1-羧酸 叔丁酯2b(7.55g,40.53mmol)和碳酸钾(11.18g,81.05mmol)依次加入到N,N-二甲 基甲酰胺(50mL)中，氩气保护，室温下搅拌16小时。加水(100mL)，用乙酸乙酯 (250mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯 化，得到标题产物2c(4g，产率：40％)。
MS m/z(ESI):365.3[M+1]
第二步
4-(4-(羟基甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯2d
将氢化铝锂(1.25g,32.93mmol)加入到干燥四氢呋喃(40mL)中，氩气保护，冷 却至-65℃。再将2c(4g,10.98mmol)的四氢呋喃溶液(10mL)缓慢滴加至反应液中。 加毕，反应液升至0℃，氩气保护下继续搅拌1小时。向反应液中加入四氢呋喃(10 mL)，再缓慢滴加水(5mL)。加完搅拌至没有气泡冒出，再向反应体系中加入无水 硫酸钠，在室温下搅拌30分钟后过滤。滤液减压浓缩得到粗品标题产物2d(3.6g, 产率：97％)。
第三步
4-(4-(氯甲基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯2e
将2d(2g,5.94mmol)溶于二氯甲烷(22mL)中，氩气保护，冷却至0℃，依次 加入三乙胺(1.80g,17.83mmol)和甲基磺酰氯(4.09g,35.67mmol)。升至室温，氩 气保护下搅拌3小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)，用二氯甲烷 (40mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥， 过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯 化，得到标题产物2e(1.79g，产率：71％)。
MS m/z(ESI):355.3[M+1]
第四步
4-(4-(2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)-3-甲氧基-3-氧代丙 基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯2f
将1d(1.79g,3.41mmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，氩气保护，冷 却至0℃，加入氢化钠(410mg,10.25mmol,含量60％)。反应液在0℃并且氩气保 护下搅拌30分钟。再加入2e(1.82g,5.12mmol)。加热至100℃，氩气保护下搅拌 16小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(40mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。 合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物 2f(1.75g，产率：60％)。
MS m/z(ESI):843.3[M+1]
第五步
4-(4-(2-(6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)乙基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯2g
将2f(500mg,593.14μmol)溶于四氢呋喃(6mL)和水(3mL)中，加入一水合氢 氧化锂(24.89mg,593.14μmol)。反应液加热至60℃，继续搅拌16小时。冷却至室 温，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。合并有机相，有机相用饱和氯化 钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用 硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物2g(355mg，产率：76％)。
MS m/z(ESI):785.8[M+1]
第六步
4-(4-(2-(5-氨基-6-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基嘧啶-4-基)乙基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-羧酸叔丁酯2h
将2g(820mg,1.04mmol)溶解于冰乙酸(90mL)中，加入锌粉(1.02g,15.67 mmol)，氩气保护，室温搅拌2小时。所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A 纯化，得到标题产物2h(520mg,收率：65％)。
MS m/z(ESI):755.8[M+1]
第七步
4-(4-((7-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲 氧基苄基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯2i
将2h(820mg,1.04mmol)溶于冰乙酸(10mL)中，氩气保护，冷却至0℃，加 入亚硝酸异戊酯(121.03mg,1.03mmol，安耐吉)。升至室温，氩气保护下搅拌2小 时。反应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标 题产物2i(330mg,收率：62％)。
MS m/z(ESI):766.3[M+1]
第八步
5-丁氧基-3-(2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺甲酸盐2
室温下向25mL闷罐反应器中加入2i(70mg,91.39μmol)和三氟乙酸(7mL)。 闷罐反应器密封后加热至110℃，搅拌16小时。冷却至室温，反应液减压浓缩。 所得残余物溶于甲醇，用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：Inertsil ODS-3 10um 20*250nm；流动相:A-水(0.1％甲酸)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：20mL/min)， 得到标题产物2(5.07mg,甲酸盐,产率：12％)。
MS m/z(ESI):426.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.37(s,2H),7.49(s,2H),6.98(d,1H),6.89(s, 1H),6.73(d,1H),4.16(t,2H),4.03(s,2H),3.80(s,3H),3.42(s,2H),2.84(s,4H), 2.38(s,4H),1.70-1.55(m,2H),1.44-1.33(m,2H),0.91(t,3H).
实施例3
3-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 甲酸盐3
Figure BDA0003021755950000581
Figure BDA0003021755950000591
第一步
4-((4-((叔丁氧基羰基)氨基)哌啶-1-基)甲基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯3a
室温下将2a(5.0g,19.30mmol)，哌啶-4-氨基甲酸叔丁酯(5.39g,28.95mmol) 和碳酸钾(10.78g,57.89mmol)依次加入到N,N-二甲基甲酰胺(50mL)中，氩气保护， 加热至60℃，搅拌3小时。加水(100mL)，用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。合并有机 相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减 压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3a(4.6g， 产率：62％)。
MS m/z(ESI):379.1[M+1]
第二步
(1-(4-(羟基甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3b
氩气保护下将氢化铝锂(6.03g,158.54mmol)加入到干燥四氢呋喃(20mL)中， 冷却至-65℃。再将3a(2g,5.28mmol)的四氢呋喃溶液缓慢滴加至反应液中。升至 0℃，氩气保护下搅拌1小时。向反应液中加入四氢呋喃(6mL)，再缓慢滴加水(3 mL)。加完搅拌至没有气泡冒出，再加入无水硫酸镁，在室温下搅拌30分钟后过 滤。滤液减压浓缩，得到标题产物3b(1.82g,产率：98％)。
MS m/z(ESI):351.1[M+1]
第三步
(1-(4-(氯甲基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3c
将3b(650mg,1.85mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，氩气保护，冷却至0℃，加 入氯化亚砜(441.32mg,3.71mmol)。反应液升至室温，搅拌3小时。向反应液中加 入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)，用二氯甲烷(20mL×3)萃取。合并有机相，有机相 用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，得 到粗品标题产物3c(520mg，产率：76％)。
MS m/z(ESI):369.1[M+1]
第四步
2-丁氧基-6-氯-N,N-双(2,4-二甲氧基苄基)-5-硝基嘧啶-4-胺3d
将1a(2g,7.5mmol)溶解于四氢呋喃(15mL)中，依次加入双(2,4-二甲氧基苄基)胺(2.4g,7.5mmol)与三乙胺(1.1g,11.3mmol)，室温搅拌4小时。反应液减压浓缩， 所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3d(3.7g，产率： 90％)。
MS m/z(ESI):547.2[M+1]
第五步
2-(6-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)丙二酸二甲酯3e
将3d(3.3g,6.0mmol)溶解在丙酮(110mL)中，依次加入丙二酸二甲酯(1.2g,9.0mmol)，氢氧化钠(845mg,21.1mmol)和水(2.3mL)，室温搅拌4小时。加水(100 mL)，缓慢滴加乙酸调节pH至8左右。所得混合物用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。合 并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂， 滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物 3e(3.6g，产率：93％)。
MS m/z(ESI):643.0[M+1]
第六步
2-(6-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)乙酸甲酯3f
将3e(3.6g,5.6mmol)加至二甲基亚砜(50mL)和水(10mL)中，加入氯化钠(1.3 g,22.4mmol)，氩气保护，加热至150℃，搅拌1小时。向冷却后的反应液中加入 水(50mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取。合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗 涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色 谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题产物3f(2.5g，产率：76％)。
MS m/z(ESI):585.2[M+1]
第七步
2-(6-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)-3-(4-((4-((叔丁氧基羰 基)氨基)哌啶-1-基)甲基)-2-甲氧基苯基)丙酸甲酯3g
将3f(500mg,855.26μmol)溶解于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，氩气保护，冷 却至0℃，加入氢化钠(68mg,1.70mmol，含量purity)。反应液在0℃并且氩气保 护下搅拌30分钟。再加入3c(470mg,1.27mmol)。反应液加热至100℃，氩气保 护下搅拌16小时。向反应液中加入饱和氯化铵水溶液(8mL)，用乙酸乙酯(16mL×3) 萃取。合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤除去 干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到 标题产物3g(600mg，产率：76％)。
MS m/z(ESI):917.8[M+1]
第八步 (1-(4-(2-(6-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基-5-硝基嘧啶-4-基)乙基)-3-甲氧基 苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3h
将3g(400mg,436.18μmol)溶于四氢呋喃(8mL)和水(4mL)中，加入一水合氢 氧化锂(191.74mg,4.36mmol)。升温至60℃，搅拌16小时。加水(50mL)，用乙酸 乙酯(70mL×3)萃取。合并有机相，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干 燥，过滤除去干燥剂，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B 纯化，得到标题产物3h(285mg，产率：76％)。
MS m/z(ESI):859.3[M+1]
第九步 (1-(4-(2-(5-氨基-6-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-2-丁氧基嘧啶-4-基)乙基)-3-甲氧基 苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3i
将3h(410mg,477.29μmol)溶解于冰乙酸(20mL)中，加入锌粉(468.15mg,7.16mmol)，氩气保护，室温下搅拌1小时。反应液过滤，滤液减压浓缩，所得残余物 用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物3i(400mg，产率：99％)。
MS m/z(ESI):829.7[M+1]
第十步
(1-(4-((7-(双(2,4-二甲氧基苄基)氨基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲 基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯3j
将3h(400mg,482.49μmol)溶于冰乙酸(8mL)中，氩气保护，冷却至0℃，加 入亚硝酸异戊酯(84.78mg,723.73μmol)。反应液升至室温，继续搅拌2小时。反 应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题产物 3i(66mg，产率：16％)。
MS m/z(ESI):840.3[M+1]
第十一步
3-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 甲酸盐3
室温下向3i(66mg,78.57μmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三氟乙酸(1.5 mL)，氩气保护，加热至60℃，搅拌16小时。冷却至室温，反应液减压浓缩。 所得残余物溶于甲醇，用高效液相色谱法纯化(分离条件：色谱柱：Inertsil ODS-3 10um 20*250nm；流动相:A-水(0.1％甲酸)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：20mL/min) 分离，得到标题产物3(24mg,甲酸盐,产率：69％)。
MS m/z(ESI):440.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):8.06(s,3H),7.17-7.12(m,2H),6.94(s,1H), 4.55-4.05(m,6H),3.84(s,3H),3.43-3.40(m,2H),3.25(s,2H),2.99-2.97(m,2H), 2.09-2.02(m,2H),1.74-1.68(m,4H),1.44-1.38(m,2H),0.93(t,3H).
实施例4
3-(4-((4-氨基哌啶-1-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺4
Figure BDA0003021755950000621
将1e换成(1-(4-(羟基甲基)苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例5
(S)-3-(4-((3-氨基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 5
Figure BDA0003021755950000622
将1e换成(S)-(1-(4-(羟基甲基)苄基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例 1化合物的合成方法合成。
实施例6
(S)-3-(4-((3-氨基吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d] 嘧啶-7-胺6
Figure BDA0003021755950000631
将2b换成(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成方法 合成。
实施例7
(R)-3-(4-((3-氨基吡咯烷-1-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7- 胺7
Figure BDA0003021755950000632
将1e换成(R)-(1-(4-(羟基甲基)苄基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例 1化合物的合成方法合成。
实施例8
(R)-3-(4-((3-氨基吡咯烷-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d] 嘧啶-7-胺8
Figure BDA0003021755950000633
将2b换成(R)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成方法 合成。
实施例9
5-丁氧基-3-(4-((六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d] 嘧啶-7-胺9
Figure BDA0003021755950000641
将1e换成5-(4-(羟基甲基)苄基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例10
5-丁氧基-3-(4-((六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-1H-吡唑 并[4,3-d]嘧啶-7-胺10
Figure BDA0003021755950000642
将2b换成六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的 合成方法合成。
实施例11
3-(4-((2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7- 胺11
Figure BDA0003021755950000651
将1e换成7-(4-(羟基甲基)苄基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯，参考实 施例1化合物的合成方法合成。
实施例12
3-(4-((2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并 [4,3-d]嘧啶-7-胺12
Figure BDA0003021755950000652
将2b换成2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成 方法合成。
实施例13
3-(4-((2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7- 胺13
Figure BDA0003021755950000653
将1e换成2-(4-(羟基甲基)苄基)-2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯，参考实 施例1化合物的合成方法合成。
实施例14
3-(4-((2,7-二氮杂螺[3.5]壬-2-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并 [4,3-d]嘧啶-7-胺14
Figure BDA0003021755950000661
将2b换成2,7-二氮杂螺[3.5]壬烷-7-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成 方法合成。
实施例15
(R)-5-丁氧基-3-(4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 15
Figure BDA0003021755950000662
将1e换成(R)-4-(4-(羟基甲基)苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例16
(R)-5-丁氧基-3-(2-甲氧基-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d] 嘧啶-7-胺16
Figure BDA0003021755950000671
将2b换成(R)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成方法合 成。
实施例17
(S)-5-丁氧基-3-(4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 17
Figure BDA0003021755950000672
将1e换成(S)-4-(4-(羟基甲基)苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例18
(S)-5-丁氧基-3-(2-甲氧基-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧 啶-7-胺18
Figure BDA0003021755950000673
将2b换成(S)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成方法合 成。
实施例19
5-丁氧基-3-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶 -7-胺19
Figure BDA0003021755950000681
将1e换成(2R,6S)-4-(4-(羟基甲基)苄基)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实 施例1化合物的合成方法合成。
实施例20
5-丁氧基-3-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-1H-吡唑并 [4,3-d]嘧啶-7-胺20
Figure BDA0003021755950000682
将2b换成(2R,6S)-2,6-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例21
3-(4-((3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)甲基)苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧 啶-7-胺21
Figure BDA0003021755950000683
将1e换成3-(4-(羟基甲基)苄基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯，参 考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例22
3-(4-((3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基)甲基)-2-甲氧基苄基)-5-丁氧基-1H-吡唑并 [4,3-d]嘧啶-7-胺22
Figure BDA0003021755950000691
将2b换成3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-甲酸叔丁酯，参考实施例2化合物的 合成方法合成。
实施例23
5-丁氧基-3-(4-((环丙基氨基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺23
Figure BDA0003021755950000692
将1e换成环丙基(4-(羟基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的 合成方法合成。
实施例24
5-丁氧基-3-(4-((环丙基氨基)甲基)-2-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 24
Figure BDA0003021755950000693
将2b换成环丙胺，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例25
5-丁氧基-3-(4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7- 胺25
Figure BDA0003021755950000701
将1e换成(4-(羟基甲基)苄基)(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例26
5-丁氧基-3-(2-甲氧基-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺26
Figure BDA0003021755950000702
将2b换成四氢-2H-吡喃-4-胺，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例27
5-丁氧基-3-(4-((环戊基氨基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺27
Figure BDA0003021755950000703
将1e换成环戊基(4-(羟基甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的 合成方法合成。
实施例28
5-丁氧基-3-(4-((环戊基氨基)甲基)-2-甲氧基苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 28
Figure BDA0003021755950000711
将2b换成环戊胺，参考实施例2化合物的合成方法合成。
实施例29
5-丁氧基-3-(2-氟-4-(哌嗪-1-基甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺29
Figure BDA0003021755950000712
将1e换成4-(3-氟-4-(羟基甲基)苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合 物的合成方法合成。
实施例30
5-丁氧基-3-((5-(哌嗪-1-基甲基)噻吩-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺30
Figure BDA0003021755950000713
将1e换成4-((5-(羟基甲基)噻吩-2-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例31
5-丁氧基-3-(2-氟-4-((3-甲基哌嗪-1-基)甲基)苄基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺 31
Figure BDA0003021755950000721
将1e换成4-(3-氟-4-(羟基甲基)苄基)-2-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例32
5-丁氧基-3-((5-(哌嗪-1-基甲基)吡啶-2-基)甲基)-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-胺32
Figure BDA0003021755950000722
将1e换成4-((6-(羟基甲基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，参考实施例1化合物的合成方法合成。
实施例33
(R)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基)哌嗪-1- 基)-2-环丙基-2-羟基乙-1-酮33
Figure BDA0003021755950000723
实施例34
(S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基)哌嗪-1- 基)-2-环丙基-2-羟基乙-1-酮34
Figure BDA0003021755950000731
实施例35
(R)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-基)-2-环丙基-2-羟基乙-1-酮35
Figure BDA0003021755950000732
实施例36
(S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-基)-2-环丙基-2-羟基乙-1-酮36
Figure BDA0003021755950000733
实施例37
(S)-N-(1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌啶-4-基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺37
Figure BDA0003021755950000741
实施例38
(R)-N-(1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄 基)哌啶-4-基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺38
Figure BDA0003021755950000742
实施例39
(R)-N-((S)-1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基 苄基)吡咯烷-3-基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺39
Figure BDA0003021755950000743
实施例40
(S)-N-((S)-1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基 苄基)吡咯烷-3-基)-2-环丙基-2-羟基乙酰胺40
Figure BDA0003021755950000751
三、偶联物中间体的制备
实施例3-1
1-(3-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基)哌嗪-1- 基)-3-氧代丙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-1
Figure BDA0003021755950000752
实施例3-2
1-(3-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-基)-3-氧代丙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-2
Figure BDA0003021755950000761
实施例3-3
N-(1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基)哌 啶-4-基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺3-3
Figure BDA0003021755950000762
实施例3-4
(S)-N-(1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 吡咯烷-3-基)-3-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)丙酰胺3-4
Figure BDA0003021755950000763
实施例3-5
1-(2-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌嗪-1-基)乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-5
Figure BDA0003021755950000771
将化合物2(8mg，0.017mmol)加入到1mL四氢呋喃中，加入2-(2,5-二氧代 -2,5-二氢-1H-吡咯烷-1-基)乙醛3-5a(12mg，0.086mmol，采用专利申请 “WO2017/72662”第156页Example 5公开的方法制备而得)的1mL四氢呋喃溶 液，再加入醋酸硼氢化钠(18mg，0.085mmol)并滴入一滴醋酸，室温搅拌反应45 分钟。反应液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标 题产物3-5(3.4mg，产率：36.5％)。
MS m/z(ESI):549.1[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.25(br,1H),7.30-7.19(m,2H),7.02(s,2H), 6.92-6.85(m,1H),6.75-6.65(m,2H),5.35-5.30(m,1H),4.19-4.10(m,2H),4.08-4.99 (m,2H),3.79(s,3H),3.50-3.45(m,2H),2.45-2.35(m,3H),2.03-1.95(m,2H),1.91(s, 3H),1.67-1.58(m,2H),1.49-1.32(m,4H),0.91(t,3H),0.85-0.80(m,1H)
实施例3-6
1-(2-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基)哌嗪-1-基) 乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-6
Figure BDA0003021755950000772
将化合物2换成化合物1，参考实施例3-5化合物的合成方法合成。
实施例3-7
1-(2-((1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基苄基) 哌啶-4-基)氨基)乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-7
Figure BDA0003021755950000781
将化合物2换成化合物3，参考实施例3-5化合物的合成方法合成。
实施例3-8
(S)-1-(2-((1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲氧基 苄基)吡咯烷-3-基)氨基)乙基)-1H-吡咯-2,5-二酮3-8
Figure BDA0003021755950000782
将化合物2换成化合物6，参考实施例3-5化合物的合成方法合成。
实施例3-9
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨 基)-5-脲基戊酰氨基)苄基4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲 基)-3-甲氧基苄基)哌嗪-1-羧酸酯3-9
Figure BDA0003021755950000783
将2(3.5mg，7.42μmol)加入到1mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入 4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨 基)-5-脲基戊酰氨基)苄基(4-硝基苯基)碳酸酯3-9a(6mg，8.13μmol)，再加入0.2 mL吡啶，氩气置换三次，再加入1-羟基苯并三唑(3.5mg，23.0μmol)和N,N-二异 丙基乙胺(3.0mg，23.2μmol)，室温搅拌反应4.5小时。反应液进行高效液相色谱 法纯化(分离条件：色谱柱：XBridge Prep C18OBD 5um 19*250mm；流动相:A-水 (10mmol NH4OAc)：B-乙腈，梯度洗脱，流速：18mL/min)，收集其相应组分，减 压浓缩，得到标题产物3-9(5mg，产率：65.8％)。
MS m/z(ESI):1024.2[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.30(s,1H),10.00(s,1H),8.11(d,1H),7.83(d, 1H),7.58(d,3H),7.27(d,3H),7.02-6.95(m,3H),6.88(s,1H),6.79-6.68(m,1H),5.99 (t,1H),5.42(s,2H),4.98(s,2H),4.41-4.34(m,1H),4.24-4.12(m,3H),4.09-3.98(m, 2H),3.78(s,3H),3.06-2.91(m,2H),2.35-2.26(m,4H),2.19-2.09(m,2H),2.01-1.90 (m,3H),1.68-1.56(m,4H),1.52-1.31(m,8H),1.30-1.12(m,8H),0.96-0.77(m,9H).
实施例3-10
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨 基)-5-脲基戊酰氨基)苄基4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基) 苄基)哌嗪-1-羧酸酯3-10
Figure BDA0003021755950000791
将化合物2换成化合物1，参考实施例3-9化合物的合成方法合成。
实施例3-11
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨 基)-5-脲基戊酰氨基)苄基(1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲 基)-3-甲氧基苄基)哌啶-4-基)氨基甲酸酯3-11
Figure BDA0003021755950000792
将化合物2换成化合物3，参考实施例3-9化合物的合成方法合成。
实施例3-12
4-((S)-2-((S)-2-(6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰氨基)-3-甲基丁酰氨 基)-5-脲基戊酰氨基)苄基((S)-1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基) 甲基)-3-甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸酯3-12
Figure BDA0003021755950000801
将化合物2换成化合物6，参考实施例3-9化合物的合成方法合成。
实施例3-13
N-((2R,10S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-2-甲氧 基苄基)哌嗪-1-基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14-四氮杂十 六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-13
Figure BDA0003021755950000802
实施例3-14
N-((2S,10S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-2-甲氧 基苄基)哌嗪-1-基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14-四氮杂十 六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-14
Figure BDA0003021755950000803
实施例3-15
N-((2R,10S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基) 哌嗪-1-基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14-四氮杂十六-16- 基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-15
Figure BDA0003021755950000811
实施例3-16
N-((2S,10S)-1-(4-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)苄基) 哌嗪-1-基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14-四氮杂十六-16- 基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-16
Figure BDA0003021755950000812
实施例3-17
N-((2R,10S)-1-((1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲 氧基苄基)哌啶-4-基)氨基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14- 四氮杂十六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-17
Figure BDA0003021755950000813
实施例3-18
N-((2S,10S)-1-((1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3-甲 氧基苄基)哌啶-4-基)氨基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂-5,8,11,14- 四氮杂十六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-18
Figure BDA0003021755950000814
实施例3-19
N-((2R,10S)-1-(((R)-1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3- 甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)氨基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂 -5,8,11,14-四氮杂十六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-19
Figure BDA0003021755950000821
实施例3-20
N-((2S,10S)-1-(((R)-1-(4-((7-氨基-5-丁氧基-1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶-3-基)甲基)-3- 甲氧基苄基)吡咯烷-3-基)氨基)-10-苄基-2-环丙基-1,6,9,12,15-五氧代-3-氧杂 -5,8,11,14-四氮杂十六-16-基)-6-(2,5-二氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-基)己酰胺3-20
Figure BDA0003021755950000822
四、ADC的制备
以下ADC制备过程，通过抗体和药物比例等条件的调整，可以获得不同DAR 值(y)的抗体药物偶联物。
实施例4-1 ADC-1
Figure BDA0003021755950000823
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M 的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，1.59mL，107.4nmol)加入配置好的的三(2-羧乙 基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，26.9μL，268.5nmol)，置于水浴振荡器，于37℃ 下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物3-9(1.1mg，1074nmol)溶解于50uL DMSO中，加入到上述反应液 中，置于水浴振荡器，于25℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液，含0.001M 的EDTA)，得到通式TM-3-9的示例性产物ADC-1的PBS缓冲液(1.48mg/mL，11.1 mL)，于4℃储存。
CE-SDS计算平均值：y＝4.08。
实施例4-2 ADC-2
Figure BDA0003021755950000831
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M 的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，0.77mL，52.0nmol)加入配置好的的三(2-羧乙 基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，27.6μL，275.5nmol)，置于水浴振荡器，于37℃ 下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物3-9(0.8mg，781.1nmol)溶解于40μL DMSO中，加入到上述反应液 中，置于水浴振荡器，于25℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液，含0.001M 的EDTA)，得到通式TM-3-9的示例性产物ADC-2的PBS缓冲液(0.87mg/mL，9.4 mL)，于4℃储存。
CE-SDS计算平均值：y＝7.66。
实施例4-3 ADC-3
Figure BDA0003021755950000832
在37℃条件下，向抗体Trastuzumab的PBS缓冲水溶液(pH＝6.5的0.05M 的PBS缓冲水溶液；10.0mg/mL，2.7mL，182.4nmol)加入配置好的的三(2-羧乙 基)膦(TCEP)的水溶液(10mM，45.6μL，456nmol)，置于水浴振荡器，于37℃下 振荡反应3小时，停止反应。将反应液用水浴降温至25℃。
将化合物3-5(1.0mg，1822.6nmol)溶解于100μL DMSO中，加入到上述反应 液中，置于水浴振荡器，于25℃下振荡反应3小时，停止反应。将反应液用Sephadex G25凝胶柱脱盐纯化(洗脱相：pH为6.5的0.05M的PBS缓冲水溶液，含0.001M 的EDTA)，得到通式TM-3-5的示例性产物ADC-3的PBS缓冲液(2.26mg/mL，12.1 mL)，于4℃储存。
CE-SDS计算平均值：y＝4.59。
实施例4-4 ADC-4
Figure BDA0003021755950000841
将化合物3-9换成化合物3-2，参考实施例4-1ADC的合成方法合成，得到通 式TM-3-2的示例性产物ADC-4。
实施例4-5 ADC-5
Figure BDA0003021755950000842
将化合物3-9换成化合物3-17，参考实施例4-1ADC的合成方法合成，得到 通式TM-3-17的示例性产物ADC-5。
实施例4-6 ADC-6
Figure BDA0003021755950000843
将化合物3-9换成化合物3-18，参考实施例4-1ADC的合成方法合成；得到 通式TM-3-18的示例性产物ADC-6。
实施例4-7 ADC-7
Figure BDA0003021755950000851
将化合物3-9换成化合物3-11，参考实施例4-1ADC的合成方法合成；得到 通式TM-3-11的示例性产物ADC-7。
实施例4-8 ADC-8
Figure BDA0003021755950000852
将化合物3-9换成化合物3-3，参考实施例4-1ADC的合成方法合成；得到通 式TM-3-3的示例性产物ADC-8。
生物学评价
测试例1、本公开化合物对人源TLR7激动活性的测定
本公开化合物对HEK-BlueTM hTLR7稳转株细胞表达的hTLR7蛋白激活作用 采用如下实验方法测定：
一、实验材料及仪器
1.DMEM培养基(Gibco，10564-029),
2.胎牛血清(GIBCO,10099),
3.青链霉素(Gibco,15140-122),
4.台盼蓝溶液(Sigma,T8154-100ML),
5.Flexstation 3多功能酶标仪(Molecμlar Devices),
6.HEK-BlueTM hTLR7细胞系(InvivoGen,hkb-hTLR7),
7.HEK-Blue检测培养基(InvivoGen,hb-det3)。
二、实验步骤
配置HEK-Blue检测培养基，取HEK-Blue检测干粉一袋，加入50mL去内毒 素水溶解，再放入37℃培养箱，10分钟后无菌过滤。
化合物先配制成20mM的原液；再用纯DMSO稀释至最高浓度为6×106nM， 经3倍梯度稀释，共10个点。然后用DMEM培养基先把上述配制好的化合物稀 释20倍，最后每孔加入20μL稀释后的化合物。
取HEK-BlueTM hTLR7细胞，先去掉上清，再加入2-5mL预热的PBS，放入 培养箱1-2分钟，轻轻吹打细胞，台盼蓝染色计数。用HEK-Blue检测培养基重悬 细胞调整浓度为2.2×105个细胞/mL，加180μL细胞至上述已加入20μL药物的 96孔细胞培养板中，37℃，培养6-16小时。
酶标仪读数，波长为620nm。可获得相应的OD值，经Graphpad Prism计算 得到药物的EC50值。
本公开化合物对人源TLR7激活作用可通过以上的试验进行测定，测得的EC50值见表1。
表1本公开化合物对人源TLR7的EC50。
实施例编号 EC<sub>50</sub>(nM) E max(％)
1 105 138
2 93 127
结论：本公开化合物对人源TLR7具有明显的激活作用。
测试例2、本公开中化合物刺激外周血单个核细胞(PBMC)分泌IFN-α能力的 测定
本公开中化合物刺激PBMC分泌IFN-α能力采用如下实验方法测定：
一、实验材料及仪器
1.RPMI 1640培养基(Invitrogen,11875),
2.FBS(Gibco,10099-141),
3.青链霉素(Gibco,15140-122),
4.Ficoll-Paque PREMIUM(GE,17-5442-02),
5.台盼蓝溶液(Sigma,T8154-100ML),
6.SepMateTM-50(Stemcell,15460),
7.Bright-LineTM血细胞计数仪(Sigma,Z359629-1EA),
8.人源IFN-α试剂盒(cisbio,6FHIFPEB),
9.PHERAStar多功能酶标仪(BMG，PHERAStar)。
二、实验步骤
化合物用纯DMSO稀释，最高浓度为5mM，4倍梯度稀释，共9个点。然后 取4μL化合物，加入到196μL含10％FBS的RMPI 1640培养基中，混匀。每孔取 50μL至新的96孔细胞培养板。
所有试剂平衡到室温，将60mL血液和PBS+2％FBS加入培养瓶，混匀稀释。 取50mLPBMC分离管SepMateTM-50，加入15mL淋巴细胞分离液Ficoll-Paque PREMIUM，然后加入30mL稀释后血液。1200g离心10分钟，室温。取上清，然 后300g，离心8分钟。用含10％FBS的RMPI 1640培养基重悬并用血细胞计数仪 计数，调整PBMC数量至3.33×106个细胞/mL，取150μL至已加入化合物的细胞 培养板中，37℃，5.0％CO2的培养箱中培养24小时。
将细胞培养板放入离心机中，1200rpm，室温离心10分钟。每孔取出150μL 上清。先平衡人源IFN-α试剂盒中的试剂至常温，在避光条件下根据试剂盒说明 书配制抗-IFN-α-Eu3+-穴状结合物(Anti-IFN-α-Eu3+-Cryptate conjugate)和抗 -IFN-α-d2-结合物(Anti-IFN-α-d2-conjugate)，两者均以1：40的比例与结合缓冲 液(conjugate Buffer)混匀。然后每孔加入16μL的离心取得的上清液。再每孔加 入2μL刚配好的抗-IFN-α-Eu3+-穴状结合物和抗-IFN-α-d2-结合物，震荡混匀，室 温避光孵育3小时。
在PHERAStar上用HTRF模式读数。我们将刺激产生最低检测限至少3倍以 上细胞因子水平的最低药物浓度，定义为该化合物在该细胞因子刺激实验上的 MEC(MinimalEffective Concentration)值。
本公开化合物刺激PBMC分泌IFN-α的能力通过以上的试验进行测定，测得 的MEC值见表2。
表2本公开化合物刺激PBMC分泌IFN-α的MEC
实施例编号 MEC(nM) E max(％)
1 0.15 121
2 0.03 118
结论：从刺激PBMC分泌IFN-α的活性的数据上看，本公开化合物具有起效 浓度较低的优势。
测试例3、本公开中ADC在肿瘤细胞存在的情况下刺激外周血单个核细胞 (PBMC)分泌IFN-α能力的测定
本公开中ADC在肿瘤细胞存在的情况下刺激PBMC分泌IFN-α能力采用如 下实验方法测定：
一、实验材料及仪器
1.RPMI 1640培养基(Invitrogen,11875),
2.FBS(Gibco,10099-141),
3.Ficoll-Paque PREMIUM(GE,17-5442-02),
4.台盼蓝溶液(Sigma,T8154-100ML),
5.SepMateTM-50(Stemcell,15460),
6.Bright-LineTM血细胞计数仪(Sigma,Z359629-1EA),
7.Human IFN-α试剂盒(cisbio,62HIFNAPEG),
8.PHERAStar多功能酶标仪(BMG，PHERAStar).
二、实验步骤
ADC用无菌PBS稀释，最高浓度为5μM，4倍梯度稀释，共9个点。每孔取 20μL至新的96孔细胞培养板。
所有试剂平衡到室温，取250mL培养瓶，将60mL血液和PBS+2％FBS加入 其中，轻轻吹打混匀稀释。取50mL PBMC分离管SepMateTM-50，加入15mL淋 巴细胞分离液Ficoll-Paque PREMIUM，然后加入30mL稀释后血液。1200g离心 10分钟，室温。取上清，然后300g，离心8分钟。用含10％FBS的RMPI 1640 培养基重悬并计数。调整PBMC数量至1.38×106个细胞/mL，取90μL至已加入 化合物的细胞培养板。同时将SK-BR-3胰酶消化离心后，用1640培养基重悬后调 整细胞密度为2.76×105个细胞/mL，取90μL至已加入化合物的细胞培养板。最 后每孔总体积是200μL。37℃，5.0％CO2的培养箱中培养24小时。
将细胞培养板放入离心机中，1200rpm，室温离心10分钟。每孔取出150μL上 清。先平衡Human IFN-α试剂盒中的试剂至常温，在避光条件下根据试剂盒说明书 稀释Anti-IFN-α-Eu3+-Cryptate conjugate和Anti-IFN-α-d2-conjugate，两者分别以1： 20的比例与detection buffer稀释，然后将稀释好的Anti-IFN-α-Eu3+-Cryptate conjugate和Anti-IFN-α-d2-conjugate按照1:1混匀。每孔加入16μL的样品上清液和标 准品。再加入4μL的预先混匀的conjugate/d2溶液，每孔最后体积是20μL。室温避 光孵育3小时。
在PHERAStar上用HTRF模式读数。我们将刺激产生最低检测限至少3倍以 上细胞因子水平的最低药物浓度，定义为该化合物在该细胞因子刺激实验上的 MEC(MinimalEffective Concentration)值。
本公开ADC偶联物刺激PBMC分泌IFN-α的能力通过以上的试验进行测定， 测得的MEC值见表3。
表3本公开ADC刺激PBMC分泌IFN-α的MEC
实施例编号 MEC(nM)
ADC-1 0.9
ADC-3 3.6
结论：从刺激PBMC分泌IFN-α的活性的数据上看，本公开ADC具有起效浓 度较低的优势。
测试例4、本公开中ADC在SCID-beige小鼠异源移植瘤模型中药效评价
本公开中ADC在SCID-beige小鼠异源移植瘤模型中的药效评价采用如下方法 检测：
一、实验动物和饲养条件
SCID-beige雌性小鼠，20g左右，购自维通利华实验动物有限公司，5只/笼 饲养于屏障环境内，温度20-25℃；湿度40-60％，自由进食进水。
二、实验药品、试剂和仪器
所有药物均用PBS溶液稀释成0.3mg/mL，然后分装1mL每管。
RPMI 1640培养基：购买自Hyclone，货号为：#SH30809.01；
胰酶：购买自Gibco，货号为：25200-072；
FBS：购买自Gibco，货号为：10091-148；
双抗：购买自Gibco，货号为：15140-122；
胎牛血清：购买自Hyclone，货号为：SH30256.01；
Matrigel：购买自Corning，货号为：356237。
三、实验设计和实验方法
N87细胞培养于含10％胎牛血清，1％双抗的RPMI 1640培养基中，在含5％ CO2的37℃的细胞培养箱中连续培养。待细胞长至对数生长期(汇合率在 80％-90％)时，用0.25％胰酶消化，收集细胞，并用无血清的RPMI 1640洗涤细 胞一次，最后用无血清的RPMI1640重悬。
调整N87细胞，按2.5×106个/只/0.1mL(含50％matrigel)接种于SCID-beige 小鼠右肋部皮下，挑选肿瘤细胞长至体积约200mm3大小后分成3组，每组9只， 当天给药为第0天。静脉注射给药1次。之后每周测2次瘤体积，称量体重，记 录数据。分组及给药情况见表4。
表4.试验分组及给药
组别 药物 给药剂量 给药途径/频率
组1 空白对照-PBS - i.v.，单次
组2 Trastuzumab 3mg/kg i.v.，单次
组3 ADC-3 3mg/kg i.v.，单次
四、实验结果和结论
瘤体积结果显示3mpk的ADC-3具有明显抑瘤药效，单次给药后，肿瘤即出 现缩退，从第一次测量(第5天)至实验终点(第34天)，抑瘤率均大于100％。 具体结果见表5和图1。
表5.对荷瘤裸鼠N87移植瘤的疗效
Figure BDA0003021755950000891
实验结论：单次尾静脉注射ADC-3，对表达HER2的人胃癌细胞(N87)移植 瘤模型中显示出非常显著的抑瘤效果，明显优于Trastuzumab单抗。
序列表
<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司
上海恒瑞医药有限公司
<120> 吡唑并嘧啶衍生物或其偶联物、其制备方法及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> Trastuzumab LC
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 2
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> DOMAIN
<223> Trastuzumab HC
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450

Claims (44)

1.一种具有通式(Pc-L-D)所示结构的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003021755940000011
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure FDA0003021755940000012
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基；所述的单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
y为1至10的小数或整数；
Pc为配体；
L为接头单元；L与R3a上的氮原子连接。
2.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3a为如下所示的包含1-2个N原子的3-10元亚杂环基：
Figure FDA0003021755940000021
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基；所述的单环杂环基、双螺杂环基、双环稠杂环基或双环桥杂环基任选被选自C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤素、卤代C1-6烷基、羟基、C1-6羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
在所述配体-药物偶联物中，L与Rc上的氮原子共价连接。
3.根据权利要求1或2所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R4选自杂环基或C3-8环烷基；所述的环烷基优选为单环环烷基；所述的杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R5选自亚杂环基和C3-8亚环烷基；所述的C3-8亚环烷基优选为C3-8单环亚环烷基；所述的亚杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环亚杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环亚杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子。
5.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3a选自：
Figure FDA0003021755940000031
如上所示的杂环基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基和氨基中的一个或多个取代基所取代。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的环A选自苯基，吡啶基和噻吩基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的环A选自：
Figure FDA0003021755940000032
8.根据权利要求1至7中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中L1为C1-6亚烷基；L2为C1-6亚烷基。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R1为C1-6烷基。
10.根据权利要1至9中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基和卤素。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中y为1至8的小数或整数，优选为2至8的小数或整数，更优选为3至8的小数或整数。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中Pc为抗体。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和-C(O)-W-C(O)-，其中W选自亚烷基、亚烷基-亚环烷基或1至6个原子的直链亚杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中所述的氨基酸任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7-(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-、-C(O)-NR7-、-C(O)-NR7-(CH2)t-、-NH-R12-(CH2)t和化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基；
Ld选自-O-R13-C(O)-或化学键；-R13-选自亚烷基或化学键，所述的亚烷基任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代。
14.根据权利要求13所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W选自C1-6亚烷基或C1-6亚烷基-C3-6亚环烷基，其中所述的C1-6亚烷基和C3-6亚环烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、C1-6烷基、氯代C1-6烷基、氘代C1-6烷基、C1-6烷氧基和C3-6环烷基的一个或多个取代基所取代；
优选的，-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)5-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-(CH2)2-。
15.根据权利要求13至14中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的-Lb-的肽残基为由一个或多个选自苯丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、谷氨酸和天冬氨酸中的氨基酸形成的氨基酸残基；优选为四肽残基、二肽残基或化学键；更优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基。
16.根据权利要求13至15中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-Lc-选自-NH-R12-(CH2)t或化学键；其中t为1至3的整数；
R12选自亚芳基或化学键；
优选的，Lc选自以下结构式：
Figure FDA0003021755940000051
17.根据权利要求13至16中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-Ld-选自-O-R13-C(O)-或化学键；R13选自亚烷基或化学键；所述的亚烷基任选被选自C1-6烷基和C3-6环烷基中的一个或多个取代基所取代；
优选的，-Ld-选自以下结构式：
Figure FDA0003021755940000052
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
18.根据权利要求13至17中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-Lb-Lc-Ld-，
La选自
Figure FDA0003021755940000053
s1选自2至8的整数，s2选自2至8的整数；
Lb选自四肽残基、二肽残基和化学键；优选为甘氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸-甘氨酸的四肽残基或者缬氨酸-瓜氨酸的二肽残基；
Lc-Ld选自以下结构式：
Figure FDA0003021755940000054
和化学键；
R14为C3-6环烷基，优选为环丙基。
19.根据权利要求13所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中接头单元-L-为-La-，所述-La-选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-或-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-，其中W为自C1-6亚烷基。
20.根据权利要求1至13，18中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其为通式(Pc-L’-D)所示的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003021755940000061
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure FDA0003021755940000062
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
G选自碳原子或氮原子；
Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基；所述的Rc任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
y为1至10的小数或整数，优选为1至8的小数或整数；
Pc为配体；
La选自-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-C(O)-、-(琥珀酰亚胺-3-基-N)-W-和-C(O)-W-C(O)-，其中W选自亚烷基、亚烷基-亚环烷基或1至6个原子的直链亚杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中氨基酸任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7-(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-、-C(O)-NR7-、-C(O)-NR7-(CH2)t-、-NH-R12-(CH2)t和化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基。
21.根据权利要求1所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其中-L-选自：
Figure FDA0003021755940000071
Figure FDA0003021755940000081
其中a端与Pc相连，b端与R3a上的N原子相连。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
Figure FDA0003021755940000082
Figure FDA0003021755940000091
其中Pc为配体；
y为1至10的小数或整数，优选为1至8的小数或整数。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，其中所述Pc为抗体，选自抗TLR7抗体、抗HER2(ErbB2)抗体、抗EGFR抗体、抗B7-H3抗体、抗c-Met抗体、抗HER3(ErbB3)抗体、抗HER4(ErbB4)抗体、抗CD20抗体、抗CD22抗体、抗CD30抗体、抗CD33抗体、抗CD44抗体、抗CD56抗体、抗CD70抗体、抗CD73抗体、抗CD105抗体、抗CEA抗体、抗A33抗体、抗Cripto抗体、抗EphA2抗体、抗G250抗体、抗MUCl抗体、抗LewisY抗体、抗VEGFR抗体、抗GPNMB抗体、抗Integrin抗体、抗PSMA抗体、抗Trop-2抗体，抗DLL3抗体、抗Tenascin-C抗体、抗SLC44A4抗体和抗Mesothelin抗体；
优选的，所述的抗体选自Trastuzumab、Pertuzumab、Nimotuzumab、Enoblituzumab、Emibetuzumab、Inotuzumab、Pinatuzumab、Brentuximab、Gemtuzumab、Bivatuzumab、Lorvotuzumab、cBR96和Glematumamab。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的配体-药物偶联物或其药学上可接受的盐，其选自以下结构式：
Figure FDA0003021755940000101
Figure FDA0003021755940000111
其中y为1至10的整数或小数；优选为1至8的整数或小数。
25.一种具有通式(D)所示结构的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003021755940000112
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R3选自氨基、
Figure FDA0003021755940000121
-NH(R4)、-R5-NH2、-R5-C(O)-R6-OH、-R5-NHC(O)-R6-OH、氨基杂环基、杂环基氨基和环烷基氨基，其中所述的氨基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；其中所述的G选自碳原子或氮原子；所述的环B为包含1-2个N原子的3-10元杂环基，任选被选自烷基、卤素、羟基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
R4选自烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R6为亚烷基，所述的亚烷基任选被选自烷基、羟基、卤素、氨基、杂环基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4。
26.根据权利要求25所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3为氨基，其中所述的氨基任选被选自烷基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
优选的，所述的氨基任选被选自C1-6烷基、C3-8环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；所述的杂环基为包含1-2个N原子的3-10元杂环基。
27.根据权利要求25所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3选自氨基杂环基、杂环基氨基和C3-8环烷基氨基，其中所述的杂环基或环烷基为单环杂环基或单环环烷基；所述的杂环基为包含1-2个N原子的3-10元杂环基。
28.根据权利要求25所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3选自-NH(R4)、-R5-NH2或如下所示的杂环基：
Figure FDA0003021755940000122
所述的R4选自C1-6烷基、杂环基和C3-8环烷基；
所述的R5选自键、C1-6亚烷基、亚杂环基和C3-8亚环烷基，所述的C1-6亚烷基、亚杂环基和C3-8亚环烷基任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；所述的亚杂环基和C3-8亚环烷基优选为单环亚杂环基或单环亚环烷基；所述的亚杂环基为包含1-2个N原子的3-10元杂环基；
G选自碳原子或氮原子；
所述的环B为包含1-2个N原子的3-10元杂环基，所述的杂环基优选自单环杂环基、双螺杂环基、双环稠杂环基和双环桥杂环基；所述的环B任选被选自C1-6烷基、卤素、羟基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代。
29.根据权利要求25所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R3选自：
Figure FDA0003021755940000131
30.根据权利要求25至29中任一项所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，，其中所述的环A选自苯基，吡啶基或噻吩基；
优选的，其中所述的环A选自：
Figure FDA0003021755940000132
31.根据权利要求25至30中任一项所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的L1为C1-6亚烷基；L2为C1-6亚烷基；R1为C1-6烷基；R2相同或不同，且各自独立地为氢原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基或卤素。
32.根据权利要求25至31中任一项所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R4选自杂环基或C3-8环烷基；所述的环烷基优选为单环环烷基；所述的杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子。
33.根据权利要求25至32中任一项所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中R5选自亚杂环基和C3-8亚环烷基；所述的C3-8亚环烷基优选为C3-8单环亚环烷基；所述的亚杂环基优选为包含1-2个杂原子的3至10元单环或多环亚杂环基，更优选为包含1-2个杂原子的3-6元单环亚杂环基；所述杂原子选自N原子或O原子。
34.根据权利要求25至33中任一项所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其中所述的R6为C1-6亚烷基，所述的C1-6亚烷基任选被选自C1-6烷基、羟基、卤素、氨基和C3-8环烷基中的一个或多个取代基所取代。
35.根据权利要求25所述的通式(D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：
Figure FDA0003021755940000141
Figure FDA0003021755940000151
Figure FDA0003021755940000161
36.一种通式(Lu-D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003021755940000162
其中：
环A选自芳基和杂芳基；
R1选自烷基、烷氧基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自氘原子、烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R2相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
L1为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自卤素、烷基、烷氧基、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
L2为亚烷基，其中所述的亚烷基任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
R3a选自-N(R4)-、-R5-NH-和如
Figure FDA0003021755940000171
所示的亚杂环基；
R4选自氢原子、烷基、环烷基和杂环基，其中所述的烷基、环烷基和杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
R5选自亚烷基、亚环烷基和亚杂环基，其中所述的亚烷基、亚环烷基和亚杂环基各自独立地任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基、硝基、环烷基和杂环基中的一个或多个取代基所取代；
其中所述的G选自碳原子或氮原子；
所述的Rc选自单环亚杂环基、双螺亚杂环基、双环稠亚杂环基或双环桥亚杂环基；所述的Rc任选被选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、羟基、羟烷基、氰基、氨基和硝基中的一个或多个取代基所取代；
n为0、1、2、3或4；
W选自亚烷基、-亚烷基-亚环烷基-或1至8个原子的直链亚杂烷基，所述直链亚杂烷基包含1至3个杂原子选自N、O或S，其中所述的亚烷基、亚环烷基和直链亚杂烷基独立地任选进一步被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基的一个或多个取代基所取代；
Lb为由2至7个氨基酸构成的肽残基或化学键，其中所述的氨基酸任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代；
Lc选自-NR7(CR8R9)t-、-NH-C(R8R9)-O-C(R10R11)-C(O)-、-NH-R12-(CH2)t-OC(O)-、-C(O)NR7、-C(O)NR7(CH2)t-或化学键，其中t为1至6的整数；
R7选自氢原子、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R8或R9相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、氘代烷基和羟烷基；
R10选自氢原子、烷基或卤代烷基；
R11选自烷基或环烷基；
或者，R10和R11与其相连接的碳原子一起形成C3-6环烷基；
R12选自亚芳基或亚杂芳基；
Ld选自-O-R13-C(O)-或化学键；-R13-选自亚烷基或化学键，所述的亚烷基任选被选自卤素、羟基、氰基、氨基、烷基、氯代烷基、氘代烷基、烷氧基和环烷基中的一个或多个取代基所取代。
37.根据权利要求36所述的通式(Lu-D)所示的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，其选自：
Figure FDA0003021755940000181
Figure FDA0003021755940000191
Figure FDA0003021755940000201
38.一种制备如通式(Pc-Lu-D)所示的化合物的方法，其包括如下步骤：
Figure FDA0003021755940000211
Pc’为经还原Pc后所得，与通式(Lu-D)进行偶联反应，得到通式(Pc-Lu-D)；
其中：
Pc为配体；
W、L1、L2、Lb、Lc、Ld、R1、R2、R3a、n和y如权利要求36中所定义。
39.一种配体-药物偶联物，包含配体和连接至配体的药物，其中所述药物选自权利要求25至35任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，优选药物通过接头连接至配体。
40.根据权利要求39所述的配体-药物偶联物，其中所述配体为抗体。
41.一种药物组合物，其含有治疗有效量的根据权利要求25至35任一项所述的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂；或者，其含有治疗有效量的根据权利要求1至24中任意一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
42.根据权利要求25至35任一项所述的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐；或者，根据权利要求1至24中任意一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，或根据权利要求41所述的药物组合物在制备用于治疗或预防病毒感染或肿瘤的药物中的用途。
43.根据权利要求42所述的用途，其中所述的肿瘤为与TLR7、HER2、HER3、B7H3或EGFR相关的癌症。
44.根据权利要求25至35中任意一项所述的化合物或其偶联物或其药学上可接受的盐，或根据权利要求1至24中任意一项所述的配体-药物偶联物或其可药用盐，或根据权利要求41所述的药物组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途，其中所述癌症优选选自黑色素瘤、非小细胞肺癌、肝细胞癌、基底细胞癌、肾细胞癌、骨髓瘤、变应性鼻炎、哮喘、COPD、溃疡性结肠炎、肝纤维化、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、肾癌、尿道癌、膀胱癌、肝癌、胃癌、子宫内膜癌、唾液腺癌、食道癌、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、肉瘤、肺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、白血病、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、胰腺癌和淋巴瘤；或者，在制备用于治疗由病毒引起的感染的药物中的用途，所述病毒选自：登革热病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、昆津病毒、墨累山谷脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、牛病毒性腹泻病毒、济卡病毒、HIV、HBV、HCV、HPV、RSV、SARS和流感病毒。
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