TW202108631A - 一種抗ｃｄ４７抗原結合蛋白及其應用 - Google Patents

一種抗ｃｄ４７抗原結合蛋白及其應用 Download PDF

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TW202108631A
TW202108631A TW109128448A TW109128448A TW202108631A TW 202108631 A TW202108631 A TW 202108631A TW 109128448 A TW109128448 A TW 109128448A TW 109128448 A TW109128448 A TW 109128448A TW 202108631 A TW202108631 A TW 202108631A
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Ｆ 格羅斯維爾德
Ｄ 德拉貝克
Ｍ（Ｒ） 范哈佩恩
Ｒ 揚森
王路凡
劉斌
戎一平
何云
周偉
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大陸商和鉑醫藥（上海）有限責任公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
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    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants

Abstract

本申請涉及一種分離的抗原結合蛋白。所述抗原結合蛋白能夠特異性結合腫瘤細胞表面的CD47，抑制CD47與SIRPα的結合，能夠結合人紅細胞，不引起凝血反應，能夠引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬，抑制腫瘤生長和/或腫瘤細胞增殖。本申請還提供了所述抗原結合蛋白在預防和治療腫瘤中的應用。

Description

一種抗CD47抗原結合蛋白及其應用
本申請涉及生物醫藥領域，具體的涉及一種抗CD47抗原結合蛋白及其應用。
CD47也稱為整聯素相關蛋白(IAP)、卵巢癌抗原OA3、Rh相關抗原和MER6，是一種廣泛表達於細胞表面的跨膜蛋白，屬於免疫球蛋白超家族。CD47可以與整聯蛋白、血小板反應素(TSP-1)以及信號調節蛋白α(SIRPα)相互作用。CD47最初被鑒定為人卵巢癌上的腫瘤抗原，隨後大量研究證實，CD47還在大部分人類癌症(例如，淋巴瘤、白血病、乳腺癌、結腸癌、肺癌、胃癌、成膠質細胞瘤、神經膠質瘤、卵巢癌、宮頸癌、膀胱癌、前列腺癌或黑色素瘤)的腫瘤細胞上高表達，與SIRPα結合後，能傳遞抑制性信號逃避巨噬細胞的吞噬(參見Oldenborg PA.CD47：A Cell Surface Glycoprotein Which Regulates Multiple Functions of Hematopoietic Cells in Health and Disease.ISRN Hematol.2013；2013：614619.doi：10.1155/2013/614619)。因此，阻斷CD47-SIPRα相互作用二點藥劑，可以恢復CD47+靶細胞的吞噬攝取並降低巨噬細胞活化的閾值。
近年來，針對CD47與SIRPα信號通路介導的腫瘤逃逸機制的藥物研發成為腫瘤免疫治療的新的熱門。目前，臨床上正在研究的CD47抗體有Forty Seven的Hu5F9-G4、Celgene的CC-90002、Surface Oncology的SRF-231等。然而，這些抗體還存在親和力較低、引起血細胞凝集反應等缺點(參見專利US9045541)。因此，急需研發更加安全有效的靶向CD47的新型療法。
本申請提供了一種抗CD47抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：1)能夠結合源自人和猴的CD47；2)能夠特異性結合Jurkat細胞和Raji細胞表面的CD47；3)能夠抑制CD47與SIRPα的結合；4)能夠阻斷Jurkat細胞表面的CD47與SIRPa的結合；5)能夠結合人紅細胞；6)不引起凝血反應；7)能夠引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬；8)能夠抑制腫瘤生長和/或腫瘤細胞增殖。本申請還提供了該抗原結合蛋白在預防和治療腫瘤中的應用。
一方面，本申請提供了一種分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈可變區VL和抗體重鏈可變區VH，該VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，該VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中該VL包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列，該VH包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：
1)能夠以3x10-9M或更高的KD值結合源自人和猴的CD47，其中該KD值藉由Biacore測定；
2)在FACS測定中，能夠特異性結合Jurkat細胞和Raji細胞表面的CD47；
3)在ELISA測定中，能夠抑制CD47與SIRPα的結合；
4)能夠結合人血紅細胞；
5)在紅細胞凝血測定中，不引起凝血反應；
6)能夠引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬；
7)能夠抑制腫瘤生長和/或腫瘤細胞增殖。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包括抗體或其抗原結合片段。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該抗原結合片段包括Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該抗體為全人源抗體。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中LCDR1包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR1包含SEQ ID NO：113、114和115中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR2包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR2包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR3包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該LCDR3包含SEQ ID NO：67-74、116-121中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR1包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR1包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR2包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR2包含SEQ ID NO：136-138中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR3包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該HCDR3包含SEQ ID NO：55和58-63中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該VL包括框架區L-FR1，L-FR2，L-FR3，和L-FR4。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR1的C末端與該LCDR1的N末端直接或間接相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：149所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR1包含SEQ ID NO：156、157和158中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：150所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR2包含SEQ ID NO：191-194中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：151所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR3包含SEQ ID NO：155、162-166中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR4的N末端與該LCDR3的C末端直接或間接相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：152所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該L-FR4包含SEQ ID NO：159、160和161中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該VL包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其包括抗體輕鏈恆定區，且該抗體輕鏈恆定區包括人Igκ恆定區。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該抗體輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈LC，且該LC包含SEQ ID NO：197所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈LC，且該LC包含SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該VH包括框架區H-FR1，H-FR2，H-FR3，和H-FR4。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR1的C末端與該HCDR1的N末端直接或間接相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：145所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR1包含SEQ ID NO：167-170中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：146所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR2包含SEQ ID NO：184、187-190中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：147所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR3包含SEQ ID NO：171-182中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR4的N末端與該HCDR3的C末端直接或間接相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：148所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該H-FR4包含SEQ ID NO：183、185和186中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該VH包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其包括抗體重鏈恆定區，且該抗體重鏈恆定區包括人IgG恆定區。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白，其包括抗體重鏈恆定區，且該抗體重鏈恆定區包括人IgG4恆定區。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白中該抗體重鏈恆定區包含SEQ ID NO：195中任一項中所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈HC，且該HC包含SEQ ID NO：198所示的胺基酸序列。
在某些實施方式中，該分離的抗原結合蛋白包含抗體重鏈HC，且該HC包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112中任一項中所示的胺基酸序列。
另一方面，本申請提供了分離的一種或多種核酸分子，其編碼本申請該的分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本申請提供了一種載體，其包含本申請該的核酸分子。
另一方面，本申請提供了一種細胞，其包含本申請該的核酸分子或本申請該的載體。
另一方面，本申請提供了一種製備本申請該的分離的抗原結合蛋白的方法，該方法包括在使得本申請該的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養本申請該的細胞。
另一方面，本申請提供了一種醫藥組成物，其包含本申請該的分離的抗原結合蛋白、本申請該的核酸分子、本申請該的載體和/或本申請該的細胞，以及視需要地藥學上可接受的載體。
另一方面，本申請提供了一種本申請該的分離的抗原結合蛋白、本申請該的核酸分子、本申請該的載體、本申請該的細胞和/或本申請該的醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
在某些實施方式中，該的用途，其中該腫瘤包括實體瘤和/或血液腫瘤。
另一方面，本申請提供了一種抑制CD47與SIRPα結合的方法，該方法包括施用本申請該的分離的抗原結合蛋白。
另一方面，本申請提供了一種預防、緩解和/或治療腫瘤的方法，該方法包括向有需要的受試者施用本申請該的分離的抗原結合蛋白。
本領域技術人員能夠從下文的詳細描述中容易地洞察到本申請的其它方面和優勢。下文的詳細描述中僅顯示和描述了本申請的示例性實施方式。如本領域技術人員將認識到的，本申請的內容使得本領域技術人員能夠對所公開的具體實施方式進行改動而不脫離本申請所涉及發明的精神和範圍。相應地，本申請的圖式和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。
本申請所涉及的發明的具體特徵如所附申請專利範圍所顯示。藉由參考下文中詳細描述的示例性實施方式和圖式能夠更好地理解本申請所涉及發明的特點和優勢。對圖式簡要說明如下：
圖1A和圖1B顯示的是本申請所述抗原結合蛋白與Jurkat細胞的結合活性(FACS檢測)；
圖1C顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000806、PR000807和PR000808與Raji細胞的結合活性；
圖2顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811與食蟹猴PBMC細胞的結合活性(FACS檢測)；
圖3A顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811與猴CD47蛋白的結合活性；
圖3B和圖3C顯示的是本申請所述抗原結合蛋白分別與人和猴CD47蛋白的結合活性(ELISA檢測)；
圖4A和圖4B顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811抑制人CD47與SIRPα結合的活性(ELISA檢測)；
圖5A和圖5B顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811阻斷Jurkat細胞表面的CD47與SIRPα結合的活性(ELISA檢測)；
圖6A和圖6B顯示的是本申請所述抗原結合蛋白不引起人紅細胞凝集反應；
圖7顯示的是本申請所述抗原結合蛋白與紅細胞的結合能力(FACS檢測)；
圖8A和圖8B顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000796、PR000802、PR000803、PR000804、PR000805、PR000806、PR000807、PR000808和PR000811引起巨噬細胞對Jurkat細胞吞噬作用的能力；
圖9顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR000806、PR000807和PR000808引起巨噬細胞對OVCAR3細胞吞噬作用的能力；
圖10顯示的是本申請所述抗原結合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281引起巨噬細胞對人紅細胞吞噬作用的能力；
圖11A和圖11B顯示的是不同濃度的本申請所述抗原結合蛋白PR000806和PR000808在NCG-Raji小鼠模型上的體內抗腫瘤活性，分別為腫瘤體積變化(A)和小鼠體重變化(B)；
圖12A和圖12B顯示的是不同濃度的本申請所述抗原結合蛋白PR000806和PR000808在B-hSIRPa/hCD47-MC38-hCD47小鼠模型上的體內抗腫瘤活性，分別為腫瘤體積變化(A)和小鼠體重變化(B)；
圖13顯示的是使用本申請所述抗原結合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治療前後小鼠體重變化趨勢；
圖14顯示的是使用本申請所述抗原結合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治療前7天小鼠模型血常規檢測結果；
圖15顯示的是使用本申請所述抗原結合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治療後第1天小鼠模型血常規檢測結果；
圖16顯示的是使用本申請所述抗原結合蛋白PR001265、PR001275、PR001276、PR000806、PR000808和PR001281治療後第7天小鼠模型血常規檢測結果；
圖17顯示的是本申請所述抗原結合蛋白對於CD47的結合特異性檢測結果。
以下由特定的具體實施例說明本申請發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所公開的內容容易地瞭解本申請發明的其他優點及效果。
在本申請中，術語“抗原結合蛋白”通常是指包含結合抗原的部分的蛋白質，以及視需要地允許結合抗原的部分採用促進抗原結合蛋白與抗原結合的構象的支架或骨架部分。可典型地包含抗體輕鏈可變區(VL)、抗體重鏈可變區(VH)或上述兩者。VH和VL區可進一步被區分為稱為互補決定區(CDR)的高變區，它們散佈在稱為框架區(FR)的更保守的區域中。每個VH和VL可由三個CDR和四個FR區構成，它們從胺基端至羧基端可按以下順序排列：FR-1、CDR1、FR-2、CDR2、FR-3、CDR3和FR-4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合結構域。抗原結合蛋白的實例包括但不限於抗體、抗原結合片段(Fab，Fab’，F(ab)2，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb)、免疫綴合物、多 特異性抗體(例如雙特異性抗體)、抗體片段、抗體衍生物、抗體類似物或融合蛋白等，只要它們顯示出所需的抗原結合活性即可。
在本申請中，術語“可變”通常是指這樣的事實，即抗體的可變結構域的序列的某些部分變化強烈，它形成各種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性。然而，變異性並非均勻地分佈在抗體的整個可變區中。它集中在輕鏈和重鏈可變區中的三個區段，被稱為互補決定區(CDR)或高變區(HVR)。可變域中更高度保守的部分被稱為框架(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變結構域各自包含四個FR區，大部分採用β-折疊構型，藉由三個CDRs連接，形成環連接，並且在一些情況下形成β-折疊結構的一部分。每條鏈中的CDRs藉由FR區緊密靠近在一起，並與來自另一條鏈的CDR一起形成抗體的抗原結合位點，恆定區不直接參與抗體與抗原的結合，但是它們表現出不同的效應功能，例如參與抗體的依賴於抗體的細胞毒性。在本領域中，可以藉由多種方法來定義抗體的CDR，例如基於序列可變性的Kabat定義規則(參見，Kabat等人，免疫學的蛋白質序列，第五版，美國國立衛生研究院，貝塞斯達，馬里蘭州(1991))和基於結構環區域位置的Chothia定義規則(參見，A1-Lazikani等人，JMol Biol 273：927-48,1997)。在本申請中，還使用包含了Kabat定義和Chothia定義的Combined定義規則確定可變結構域序列和全長抗體序列中的胺基酸殘基。
Figure 109128448-A0101-12-0013-347
其中，Laa-Lbb可以指從抗體輕鏈的N端開始，第aa位元(Chothia編碼規則)至第bb位元(Chothia編碼規則)的胺基酸序列；Haa-Hbb可以指從抗體重鏈的N端開始，第aa位元(Chothia編碼規則)至第bb位元(Chothia編碼規則)的胺基酸序列。例如，L24-L34可以指從抗體輕鏈N端開始，按照Chothia編碼規則的從第24位元至第34位的胺基酸序列；H26-H32可以指從抗體重鏈N端開始，按照Chothia編碼規則的從第26位元至第32位的胺基酸序列。
在本申請中，術語“分離的抗原結合蛋白”通常是指已經從其產生環境(例如，天然的或重組的)的組分中識別，分離和/或回收的抗原結合蛋白。其產生環境的污染組分通常是干擾其研究、診斷或治療用途的物質，可以包括酶、激素和其他蛋白質或非蛋白質溶質。分離的抗原結合蛋白或抗體通常將藉由至少一個純化步驟來製備。
在本申請中，術語“單株抗體”通常是指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體，即集群中的個別抗體是相同的，除了可能存在的少量的自然突變。單株抗體通常針對單個抗原位點具有高度特異性。而且，與常 規多株抗體製劑(通常具有針對不同決定簇的不同抗體)不同，各單株抗體是針對抗原上的單個決定簇。除了它們的特異性之外，單株抗體的優點在於它們可以藉由融合瘤培養合成，不受其他免疫球蛋白污染。修飾語“單株”表示從基本上同質的抗體群體獲得的抗體的特徵，並且不被解釋為需要藉由任何特定方法產生抗體。例如，根據本發明使用的單株抗體可以在融合瘤細胞中製備，或者可以藉由重組DNA方法製備。
在本申請中，術語“全人源抗體”通常是指將人類編碼抗體的基因全部轉移至基因工程改造的抗體基因缺失動物中，使動物表達的抗體。抗體所有部分(包括抗體的可變區和恆定區)均由人類來源的基因所編碼。全人源抗體可以大大減少異源抗體對人體造成的免疫副反應。本領域獲得全人源抗體的方法可以有噬菌體展示技術、轉基因小鼠技術、核糖體展示技術和RNA-多肽技術等。
在本申請中，術語“特定抗CD47抗體”通常是指可以與本申請的抗體競爭結合CD47的抗體。本申請的抗原結合蛋白可包括與特定抗CD47抗體具有相同胺基酸序列的那些抗體。
在本申請中，術語“特異性結合”通常是指抗體藉由其抗原結合域與表位結合，並且該結合需要抗原結合域和表位之間的一些互補性。根據該定義，當抗體相比於其將結合隨機的，不相關的表位而言更容易藉由其抗原結合域與表位結合時，抗體被稱為“特異性結合”該抗原。“表位”是指抗原上與抗原結合蛋白(如抗體)結合的特定的原子基團(例如，糖側鏈、磷醯基、磺醯基)或胺基酸。
在本申請中，術語“CD47”通常是指白細胞表面抗原CD47，可以為完整的CD47蛋白，也可以為保留CD47的至少部分活性的任何形式的CD47及其變體。所述CD47可包括人CD47及其片段或猴CD47及其片段。例如，人CD47可包含參見UniProtKB資料庫中登錄號No.Q08722所示的胺基酸序列。所述的猴可以為食蟹猴。例如，食蟹猴CD47可包含UniProtKB資料庫中登錄號為No.A0A2K5X4I2的胺基酸序列。在本申請中，術語“人CD47胞外區”和“hCD47.ECD”可互換地使用，通常是指CD47胞外N端的V型免疫球蛋白的結構域，也是CD47配體結合區域。例如，人CD47胞外區可包含UniProtKB中登錄號為No.Q08722所示胺基酸序列的第19位至第141位序列。
在本申請中，術語“SIRPα”通常是指信號調節蛋白α，也稱為BIT、MFR、MYD1、PTPNS1、SHPS1或SIRP，是CD47的免疫球蛋白樣細胞表面受體，可以為完整的SIRPα蛋白，也可以為保留SIRPα的至少部分活性的任何形式的SIRPα及其變體。在某些情形中，所述SIRPα可以為人SIRPα，其可包含UniProtKB資料庫中登錄號為P78324所示的胺基酸序列。
在本申請中，術語“Jurkat細胞”通常是指人白血病T淋巴細胞。所述Jurkat細胞來源於一個14歲的男孩的外周血。
在本申請中，術語“Raji細胞”通常是指人Burkitt's淋巴瘤細胞。所述Raji細胞源自一位11歲黑人男孩的左上頜骨的Burkitt淋巴瘤。
在本申請中，術語“OVCAR 3細胞”和“OVCAR-3細胞”可互換地使用，通常是指人卵巢腺癌細胞。所述OVCAR 3細胞源自患有進行性卵巢腺癌病人的惡性腹水。
在本申請中，術語“凝血反應”、“凝集作用”可互換地使用，通常是指當與不同試劑一起孵育時，血紅細胞凝集或結塊時發生的同型相互作用。所述凝集作用可以是指對照抗體存在時，紅細胞的凝集使血液圓斑邊緣模糊的現象。據報導，現有的CD47抗體在一定濃度下會引起RBC的凝集，如本申請實施例7中的現有抗體Tab1(FortySeven，Hu5F9-G)。因此，凝血作用會限制CD47抗體的治療效果。術語“不引起凝血反應”通常是指不產生血紅細胞凝集或結塊。
在本申請中，術語“Tab1”通常是指FortySeven公司的抗CD47抗體Hu5F9-G。
在本申請中，術語“Tab2”通常是指Celgene公司的抗CD47抗體CC-90002。
在本申請中，術語“Tab3”通常是指Surface Oncology公司的抗CD47抗體SRF-231。
在本申請中，術語“KD”、“Kd”、“KD”可互換地使用，通常是指平衡解離常數，並指在滴定測量中，在平衡時、或者藉由將解離速率常數(koff)除以結合速率常數(kon)所獲得的值。可使用結合速率常數(kon)、解離速率常數(koff)和平衡解離常數(KD)表示抗原結合蛋白(例如抗體)對抗原的結合親和力。確定結合和解離速率常數的方法為本領域熟知。使用基於螢光的技術可提供高靈敏度以及在生理緩衝液中在平衡時檢查樣品的能力。可以使用其他實驗途徑和儀器例如BIAcore(生物分子相互作用分析)測定。
在本申請中，術語“核酸分子”通常是指從其天然環境中分離的或人工合成的任何長度的分離形式的核苷酸、去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸或其類似物。
在本申請中，術語“載體”通常是指能夠在合適的宿主中自我複製的核酸分子，其將插入的核酸分子轉移到宿主細胞中和/或宿主細胞之間。該載體可包括主要用於將DNA或RNA插入細胞中的載體、主要用於複製DNA或RNA的載體，以及主要用於DNA或RNA的轉錄和/或翻譯的表達的載體。該載體還包括具有多種上述功能的載體。該載體可以是當引入合適的宿主細胞時能夠轉錄並翻譯成多肽的多核苷酸。通常，藉由培養包含該載體的合適的宿主細胞，該載體可以產生期望的表達產物。
在本申請中，術語“細胞”通常是指可以或已經含有包括本申請所述的核酸分子的質粒或載體，或者能夠表達本申請所述的抗體或其抗原結合片段的個體細胞、細胞系或細胞培養物。所述細胞可以包括單個宿主細胞的子代。由於天然的、意外的或故意的突變，子代細胞與原始親本細胞在形態上或在基因組上可能不一定完全相同，但能夠表達本申請所述的抗體或其抗原結合片段即可。該細胞可以藉由使用本申請所述的載體體外轉染細胞而得到。所述細胞可以是原核細胞(例如大腸桿菌)，也可以是真核細胞(例如酵母細胞，例如COS細胞，中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，HeLa細胞，HEK293細胞，COS-1細胞，NS0細胞或骨髓瘤細胞)。在一些實施方案中，該細胞是哺乳動物細胞。例如，該哺乳動物細胞可以是CHO-K1細胞。在本申請中，術語“重組細胞”通常是指在其中引入了重組表達載體的細胞。該重組宿主細胞不僅包括某種特定的細胞，還包括這些細胞的後代。
在本申請中，術語“醫藥組成物”通常是指這樣的製劑，其以允許活性成分的生物學活性有效的形式存在，並且不包含對將施用該組成 物的物件具有不可接受的毒性的另外的成分。該組成物是無菌的。“無菌”組成物是滅菌的，或不含所有活的微生物及它們的孢子。
在本申請中，術語“腫瘤”通常是指哺乳動物中的機體(例如，細胞或其組成部分)在各種致瘤因數作用下，局部組織細胞增生所形成的贅生物。在本申請中，腫瘤可以包括淋巴瘤、白血病和卵巢癌。例如，腫瘤可以包括侵襲性非霍奇金淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、急性淋巴細胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，慢性淋巴細胞性白血病(CLL)，慢性骨髓性白血病(CML)，卵巢癌等。
在本申請中，術語“在……之間”通常是指某種胺基酸片段的C端與第一胺基酸片段的N端直接或間接連接，並且其N端與第二胺基酸片段的C端直接或間接連接。在輕鏈中，例如，該L-FR2的N末端與該LCDR1的C末端直接或間接相連，且該L-FR2的C末端與該LCDR2的N末端直接或間接相連。又例如，該L-FR3的N末端與該LCDR2的C末端直接或間接相連，且該L-FR3的C末端與該LCDR3的N末端直接或間接相連。在重鏈中，例如，該H-FR2的N末端與該HCDR1的C末端直接或間接相連，且該H-FR2的C末端與該HCDR2的N末端直接或間接相連。又例如，該H-FR3的N末端與該HCDR2的C末端直接或間接相連，且該H-FR3的C末端與該HCDR3的N末端直接或間接相連。在本申請中，“第一胺基酸片段”和“第二胺基酸片段”可以為相同或不同的任意一段胺基酸片段。
在本申請中，術語“包含”通常是指包括明確指定的特徵，但不排除其他要素。
在本申請中，術語“約”通常是指在指定數值以上或以下0.5%-10%的範圍內變動，例如在指定數值以上或以下0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、或10%的範圍內變動。
抗體、其抗體結合片段或變體
一方面，本申請提供一種抗原結合蛋白，其可包含輕鏈可變區VL中的至少一個CDR，所述VL可包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含LCDR1，且該LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列：
RASQSX1SSX2LX3(SEQ ID NO：139)；其中，X1=I或V；X2=W，Y或H；X3=A或N。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：113所示抗原結合蛋白的LCDR1相比，所述LCDR1可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2和/或X3處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：113所示抗原結合蛋白的LCDR1相比，所述LCDR1可至少包含在X1、X2或X3處的胺基酸取代，其中X1處的胺基酸可被取代為V；X2處的胺基酸可被取代為Y或H；X3處的胺基酸可被取代為N。
例如，該LCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：113-115。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含LCDR2，且所述LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列：
X1X2SX3X4X5X6(SEQ ID NO：140)；其中，X1=K，R，V或G；X2=A或S；X3=S，T，R或I；X4=L或R；X5=E，D，Q或A；X6=S或T。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：56所示抗原結合蛋白的LCDR2相比，該LCDR2可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：56所示抗原結合蛋白的LCDR2相比，該LCDR2可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5或X6處的胺基酸取代，其中X1處的胺基酸可被取代為R、V或G；X2處的胺基酸可被取代為S；X3處的胺基酸可被取代為R、I或T；X4處的胺基酸可被取代為R；X5處的胺基酸可被取代為D、Q或A；X6處的胺基酸可被取代為T。
例如，該LCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含LCDR3，且該LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列：
X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10T(SEQ ID NO：141)；其中，X1=Q或R；X2=Q，L或H；X3=Y或-；X4=N，I，Q或-；X5=S，Y，T或N；X6=Y，W，N或Q；X7=S，T或-；X8=T或-；X9=P或-；X10=Y，R或L。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：116所示抗原結合蛋白的LCDR3相比，該LCDR3可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：116所示抗原結合蛋白的LCDR3相比，該LCDR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10處的胺基酸取代，其中X1處的胺基酸可被取代為Q；X2處的胺基酸可被取代為L或H；X3處的胺基酸可被取代為無胺基酸；X4處的胺基酸可被取代為I、Q或無胺基酸；X5處的胺基酸可被取代為Y、T或N；X6處的胺基酸可被取代為Q、N或W；X7處的胺基酸可被取代為T或無胺基酸；X8處的無胺基酸可被取代增加為T；X9處的胺基酸可被取代為無胺基酸；X10處的胺基酸可被取代為R或L。
在本申請中，“-”表示與對照抗原結合蛋白的LCDR3相比，該位可以為無胺基酸取代。例如，與SEQ ID NO：116所示抗原結合蛋白的LCDR3(X9處胺基酸為P)相比，SEQ ID NO：74所示的抗原結合蛋白的LCDR3在X9處沒有胺基酸取代。
例如，該LCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：67-74、116-121。
本申請所述的抗原結合蛋白可包含抗體重鏈可變區VH中的至少一個CDR，該VH包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含HCDR1，且該HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列：
GX1SX2X3X4Y(SEQ ID NO：142)；其中，X1=G或D；X2=I，L或V；X3=S，N，D或Q；X4=N，S或T。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：40所示的抗原結合蛋白的HCDR1相比，該HCDR1可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3和/或X4處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：40所示的抗原結合蛋白的HCDR1相比，該HCDR1可至少包含在X1、X2、X3和/或X4處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為D；X2處的胺基酸可被取代為L或V；X3處的胺基酸可被取代為S、D或Q；X4處的胺基酸可被取代為S或T。
例如，該HCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含HCDR2，且該HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列：
YYSGX1(SEQ ID NO：143)；其中，X1=T，N或S。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：136所示的抗原結合蛋白的HCDR2相比，該HCDR2可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：136所示的抗體的HCDR2相比，該HCDR2可至少包含在X1處的胺基酸取代，其中，X2處的胺基酸可被取代為S或T。
例如，該HCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：136-138。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含HCDR3，且該HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列：
X1X2X3X4X5X6Y(SEQ ID NO：144)；其中，X1=K或G；X2=R或K；X3=G，A，T，W或L；X4=V，M，G，I或A；X5=L，Y，H，F或-；X6=D或S。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：60所示的抗原結合蛋白的HCDR3相比，該HCDR3可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：60所示的HCDR3相比，該HCDR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5和/或X6處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為G；X2處的胺基酸可被取代為K；X3處的胺基酸可被取代為A、T、L或W；X4處的胺基酸可被取代為M、G、A或I；X5處的胺基酸可被取代為Y、H、F或無胺基酸；X6處的胺基酸可被取代為S。
例如，該HCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：55、58-63。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含LCDR1-3。該LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列。
在某些情形中，本申請所述抗原結合蛋白的該LCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；該LCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127；該LCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：67-74、116-121。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：72所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含HCDR1-3。該HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列。
在某些情形中，本申請所述抗原結合蛋白的該HCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；該HCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：136-138；且該HCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：58-63和55。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和HCDR1-3。該LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列；該LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列；該LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列；該HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列；該HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列；且該HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列。
在某些情形中，本申請所述抗原結合蛋白的該LCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；該LCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127；該LCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：67-74、116-121；該HCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；該HCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：136-138；且該HCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：58-63和55。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：72所示的胺基酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO： 138所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述的抗原結合蛋白中LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列；LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列；LCDR3可包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列；其HCDR1可包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列；HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列；且HCDR3可包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列。
本申請所述的抗原結合蛋白還可包含框架區L-FR1，L-FR2，L-FR3和L-FR4。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含L-FR1，該L-FR1的C末端與該LCDR1的N末端直接或間接相連，且該L-FR1包含SEQ ID NO：149所示的胺基酸序列：
X1IX2MTQSPX3X4LSX5SX6GX7RX8TX9X10C(SEQ ID NO：149)；其中，X1=D或E；X2=Q或V；X3=S或A；X4=T或S；X5=A或V；X6=V或P；X7=D或E；X8=V或A；X9=I或L；X10=T或S。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：157所示的抗原結合蛋白的L-FR1相比，該L-FR1可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：157所示的抗原結合蛋白的L-FR1相比，該L-FR1可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9和/或X10處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為E；X2處 的胺基酸可被取代為V；X3處的胺基酸可被取代為A；X4處的胺基酸可被取代為S；X5處的胺基酸可被取代為V；X6處的胺基酸可被取代為P；X7處的胺基酸可被取代為E；X8處的胺基酸可被取代為A；X9處的胺基酸可被取代為L；X10處的胺基酸可被取代為S。
例如，該L-FR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：156-158。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含L-FR2，該L-FR2位於該LCDR1與該LCDR2之間，且該L-FR2包含SEQ ID NO：150所示的胺基酸序列：
WYQQKPGX1APX2LLIY(SEQ ID NO：150)；其中，X1=K，N或Q；X2=K或R。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：191所示的抗原結合蛋白的L-FR2相比，該L-FR2可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1和/或X2處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：191所示的抗原結合蛋白的L-FR2相比，該L-FR2可至少包含在至少包含在X1和/或X2處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為N或Q；X2處的胺基酸可被取代為R。
例如，該L-FR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：191-194。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含L-FR3，該L-FR3位於該LCDR2與該LCDR3之間，且該L-FR3包含SEQ ID NO：151所示的胺基酸序列：
X1X2PX3RFSGSGSGTX4FX5LTX6SSLQX7X8DFAX9YYC(SEQ ID NO：151)；其中，X1=G，D；X2=V或I；X3=S或V；X4=E或D；X5=T或S；X6=I或V；X7=P或S；X8=D或E；X9=T或I。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：166所示的抗原結合蛋白的L-FR3相比，該L-FR3可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8和/或X9處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：166所示的抗體的L-FR3相比，該L-FR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8和/或X9處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為D；X2處的胺基酸可被取代為I；X3處的胺基酸可被取代為V；X4處的胺基酸可被取代為D；X5處的胺基酸可被取代為S；X6處的胺基酸可被取代為V；X7處的胺基酸可被取代為S；X8處的胺基酸可被取代為E；X9處的胺基酸可被取代為I。
例如，該L-FR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：155、162-166。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含L-FR4，該L-FR4的N末端與該LCDR3的C末端相連，且該L-FR4包含SEQ ID NO：152所示的胺基酸序列：
FGX1GTKX2EIK(SEQ ID NO：152)；其中，X1=Q或G；X2=L或V。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：160所示的抗體的L-FR4相比，該L-FR4可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1和/或X2處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：160所示的L-FR4相比，該L-FR4可至少包含在至少包含在X1和/或X2處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為G；X2處的胺基酸可被取代為V。
例如，該L-FR4可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：159-161。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含輕鏈可變區VL，且該VL可包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列：
Figure 109128448-A0101-12-0031-349
Figure 109128448-A0101-12-0031-348
(SEQ ID NO：153)；其中，X1=D，E；X2=Q，V；X3=S或A；X4=T或S；X5=A或V；X6=V或P；X7=D或E；X8=V或A；X9=I或L；X10=T或S；X11=I或V；X12=W或Y或H；X13=A或N；X14=K，N或Q；X15=K或R；X16=K，R，V或G；X17=A或S；X18=S，T，R或I；X19=L或R；X20=E，D，Q或A；X21=S或T；X22=G或D；X23=V或I；X24=S或V；X25=E或D；X26=T或S；X27=I或V；X28=P或S；X29=D或E；X30=T或I；X31=Q或R；X32=Q，L或H；X33=Y或-； X34=N，I，Q或-；X35=S，T或N；X36=Y，W，N或Q；X37=S，T或-；X38=T或-；X39=P或-；X40=Y，R或L；X41=Q或G；X42=L或V。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：15所示的抗體的VL相比，該VL可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39、X40、X41和/或X42處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：15所示的VL相比，該VL可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39、X40、X41和/或X42處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為E；X2處的胺基酸可被取代為V；X3處的胺基酸可被取代為A；X4處的胺基酸可被取代為S；X5處的胺基酸可被取代為V；X6處的胺基酸可被取代為P；X7處的胺基酸可被取代為E；X8處的胺基酸可被取代為A；X9處的胺基酸可被取代為L；X10處的胺基酸可被取代為S；X11處的胺基酸可被取代為V；X12處的胺基酸可被取代為H或Y；X13處的胺基酸可被取代為N；X14處的胺基酸可被取代為Q或N；X15處的胺基酸可被取代為R；X16處的胺基酸可被取代為G、R或V；X17處的胺基酸可被取代為S；X18處的胺基酸可被取代為I、R或T；X19處的胺基酸可被取代為R；X20處的胺 基酸可被取代為A、Q或D；X21處的胺基酸可被取代為T；X22處的胺基酸可被取代為D；X23處的胺基酸可被取代為I；X24處的胺基酸可被取代為V；X25處的胺基酸可被取代為D；X26處的胺基酸可被取代為S；X27處的胺基酸可被取代為V；X28處的胺基酸可被取代為S；X29處的胺基酸可被取代為E；X30處的胺基酸可被取代為I；X31處的胺基酸可被取代為Q；X32處的胺基酸可被取代為L或H；X33處的胺基酸可被取代為無胺基酸；X34處的胺基酸可被取代為I或無胺基酸；X35處的胺基酸可被取代為Y、T或N；X36處的胺基酸可被取代為W或N；X37處的胺基酸可被取代為無胺基酸；X38處的胺基酸可被取代為T；X39處的胺基酸可被取代為無胺基酸；X40處的胺基酸可被取代為L或R；X41處的胺基酸可被取代為G；X42處的胺基酸可被取代為V。
例如，該VL區可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29。
本申請該的抗原結合蛋白還可包含框架區H-FR1，H-FR2，H-FR3和H-FR4。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含H-FR1，該H-FR1的C末端與該HCDR1的N末端直接或間接相連，且該H-FR1包含SEQ ID NO：145所示的胺基酸序列：
QVQLQESGPGLX1X2PSETLSLTCX3VS(SEQ ID NO：145)；其中，X1=V或M；X2=K或Q；X3=T或S。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：169所示的抗原結合蛋白的H-FR1相比，該H-FR1可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2和/或X3處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：169所示的H-FR1相比，該H-FR1可至少包含在X1、X2和/或X3處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為M；X2處的胺基酸可被取代為Q；X3處的胺基酸可被取代為S。
例如，該H-FR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：167-170。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含H-FR2，該H-FR2位於該HCDR1與該HCDR2之間，且該H-FR2包含SEQ ID NO：146所示的胺基酸序列：
YWX1WX2RQX3PGX4GLEWIGX5I(SEQ ID NO：146)；其中，X1=S或T；X2=I或F；X3=P或A；X4=K或R；X5=Y或N。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：188所示的H-ER2相比，該H-FR2可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：包含在X1、X2、X3、X4和/或X5處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：188所示的H-FR2相比，該H-FR2可至少包含在X1、X2、X3、X4和/或X5處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為T；X2處的胺基酸可被取代為F；X3處的胺基酸可被取代為A；X3處的胺基酸可被取代為R；X3處的胺基酸可被取代為N。
例如，該H-FR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：184、187-190。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含H-FR3，該H-FR3位於該HCDR2與該HCDR3之間，且該H-FR3包含SEQ ID NO：147所示的胺基酸序列：
RVX1X2SX3DX4SKNQFSLX5LX6SVX7X8X9DTAX10YYCX11R(SEQ ID NO：147)；其中，X1=T或S；X2=I或M；X3=V或I；X4=T或I；X5=K或N；X6=S，T或N；X7=T或I；X8=A或S；X9=A或G；X10=V或M；X11=A或G。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：178所示的H-FR3相比，該H-FR3可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14和/或X15處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：178所示的H-FR3相比，該H-FR3可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14和/或X13處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為D；X2處的胺基酸可被取代為Q；X3處的胺基酸可被取代為P；X4處的胺基酸可被取代為T；X5處的胺基酸可被取代為S；X6處的胺基酸可被取代為M；X7處的胺基酸可被取代為I；X8處的胺基酸可被取代為I；X9處的胺基酸可被取代為K；X10處的胺基酸可被取代為S或N；X11處的胺基 酸可被取代為I；X12處的胺基酸可被取代為S；X13處的胺基酸可被取代為G；X14處的胺基酸可被取代為M；X15處的胺基酸可被取代為G。
例如，該H-FR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：171-182。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含H-FR4，該H-FR4的N末端與該HCDR3的C末端相連，且該H-FR4包含SEQ ID NO：148所示的胺基酸序列：
X1GQGX2LVTVSS(SEQ ID NO：148)；其中，X1=W或S；X2=T或I。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：186所示的H-FR4相比，該H-FR4可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1和/或X2處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：186所示的H-FR4相比，該H-FR4可至少包含在X1和/或X2處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為S；X2處的胺基酸可被取代為I。
例如，該H-FR4可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：183、185和186。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含重鏈可變區VH，且該VH包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列：
Figure 109128448-A0101-12-0036-350
Figure 109128448-A0101-12-0037-351
(SEQ ID NO：154)；其中，X1=V或M；X2=K或Q；X3=T或S；X4=G或D；X5=I，L或V；X6=S，N或D；X7=N，S或T；X8=S或T；X9=I或F；X10=P或A；X11=K或R；X12=Y或N；X13=T，S或N；X14=N或D；X15=N或Q；X16=P或S；X17=K或T；X18=T或S；X19=I或M；X20=V或I；X21=T或I；X22=K或N；X23=S，T或N；X24=T或I；X25=A或S；X26=A或G；X27=V或M；X28=A或G；X29=K或G；X30=R或K；X31=G，A，T，W或L；X32=V，M，G，I或A；X33=L，Y，H，F或-；X34=D或S；X35=W或S；X36=T或I。例如，該序列可以是根據Chothia定義規則確定的序列。
在本申請中，與SEQ ID NO：85所示的抗原結合蛋白的VH相比，該VH可至少包含在選自以下的胺基酸位置處的取代：在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35和/或X36處的胺基酸取代。
在本申請中，與SEQ ID NO：85所示的VH相比，該VH可至少包含在X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、X18、X19、X20、X21、X22、X23、X24、X25、X26、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35和/或X36處的胺基酸取代，其中，X1處的胺基酸可被取代為V；X2處的胺基酸可被取代為Q；X3處的胺基酸可被取代為S；X4處的胺基酸可被取代為D；X5處的胺基酸可被取代為L或V；X6處的胺基酸可被取代為S、Q或D；X7處的胺基酸可被取代為T；X8處的胺基酸可被取代為T；X9處的胺基酸可被取代為F；X10處 的胺基酸可被取代為A；X11處的胺基酸可被取代為R；X12處的胺基酸可被取代為N；X13處的胺基酸可被取代為T或S；X14處的胺基酸可被取代為D；X15處的胺基酸可被取代為Q；X16處的胺基酸可被取代為P；X17處的胺基酸可被取代為T；X18處的胺基酸可被取代為S；X19處的胺基酸可被取代為M；X20處的胺基酸可被取代為I；X21處的胺基酸可被取代為I；X22處的胺基酸可被取代為K；X23處的胺基酸可被取代為N或T；X24處的胺基酸可被取代為I；X25處的胺基酸可被取代為S；X26處的胺基酸可被取代為G；X27處的胺基酸可被取代為M；X28處的胺基酸可被取代為G；X29處的胺基酸可被取代為G；X30處的胺基酸可被取代為K；X31處的胺基酸可被取代為T、A、W或L；X32處的胺基酸可被取代為I、M、G或A；X33處的胺基酸可被取代為H、F、Y或無胺基酸；X34處的胺基酸可被取代為S；X35處的胺基酸可被取代為S；X36處的胺基酸可被取代為I。
例如，該VH可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111。
在本申請中，該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈可變區VL和重鏈可變區VH。該VL可包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列；該VH可包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列。
本申請所述抗原結合蛋白的該VL可包含下述任一項中所示的胺基酸序列SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29；該VH可包含下述任一項中所示的胺基酸序列SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：111所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：107所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：109所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：81、83、85、89、91、93、95和97任一項中所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：81所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：83所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：93所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：95所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：97任一項中所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列。
例如，該分離的抗原結合蛋白可包含VL和VH，其VL可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列。
在本申請中，該抗原結合蛋白包含輕鏈恆定區CL，且該抗體輕鏈恆定區可包括人Igκ恆定區。
例如，該CL區可包含下述所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：196。
在本申請中，該抗原結合蛋白包含輕鏈LC，且該LC可包含SEQ ID NO：197所示的胺基酸序列。
例如，該LC可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30。
在本申請中，該抗原結合蛋白包含重鏈恆定區CH，且該抗體重鏈恆定區可包括人IgG恆定區。在某些情形中，本申請該抗體重鏈恆定區可包括人IgG4恆定區。
例如，該CH區可包含下述所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：195。
在本申請中，該抗原結合蛋白包含輕鏈HC，且該抗體HC可包含SEQ ID NO：198所示的胺基酸序列。
例如，該HC可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112。
本申請所述抗原結合蛋白包含抗體輕鏈恆定區CL和重鏈恆定區CH。該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列；且該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。
本申請所述抗原結合蛋白包含抗體輕鏈LC和重鏈HC。該LC可包含SEQ ID NO：197所示的胺基酸序列，且該HC可包含SEQ ID NO：198所示的胺基酸序列。
例如，該LC可包含下述任一項中所示的胺基酸序列SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30，該HC可包含下述任一項中所示的胺基酸序列SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112。
本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：149所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：150所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：151所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：152所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：197所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：145所示的胺基酸序列， H-FR2可包含SEQ ID NO：146所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：147所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：148所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：198所示的胺基酸序列。
在某些情形中，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含如SEQ ID NO：113-115中任一項所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一項所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：67-74、116-121中任一項所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：156-158中任一項所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191-194中任一項所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：155、162-166中任一項所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：159-161中任一項所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一項所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196中所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30中任一項所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53中任一項所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136-138中任一項所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：55和58-63中任一項所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：167-170中任一項所示 的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：184、187-190中任一項所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：171-182中任一項所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：183、185和186中任一項所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一項所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195中任一項所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112中任一項所示的胺基酸序列。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：162所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：53所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：182所 示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：183所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：105所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：106所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001281相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：122所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：73所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：193所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：27所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：28所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：59所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：172所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：87所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：88所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000806相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：126所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：72所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：156所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：163所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：1所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：2所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：38所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：55所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：184所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：180所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：79所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：80所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000808相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：114所示的胺基酸序列，LCDR2可包含 SEQ ID NO：127所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：71所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：156所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：192所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：164所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：161所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：3所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：4所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：61所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：167所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：189所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：171所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：75所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：76所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000807相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：158所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：194所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：155所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：159所示的胺 基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：170所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：190所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：176所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：107所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：108所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001264相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：158所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：194所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：155所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：159所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該 HCDR1可包含SEQ ID NO：36所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：170所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：190所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：176所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：111所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：112所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001265相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：32所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO： 177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001266相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：178所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：91所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO： 92所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001267相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：81所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：82所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001268相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含 SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：178所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：83所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：84所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001269相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：121所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺 基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：181所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001270相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：120所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：17所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：18所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該 HCDR1可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：181所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001271相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：121所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：19所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：20所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO： 177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：89所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：90所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001272相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：69所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：25所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：26所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：179所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO： 100所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001273相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：68所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：23所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：24所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：179所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：100所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001274相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含 SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：174所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：97所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：98所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001275相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺 基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：175所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：93所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：94所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001276相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：119所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：165所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：11所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：12所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該 HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：168所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001277相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：120所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：165所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：13所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：14所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：168所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO： 177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：78所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001278相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：118所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：165所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：9所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：10所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：168所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO： 78所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001279相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：162所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：51所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：182所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：183所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：103所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：104所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR001280相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：115所示的胺基酸序列，LCDR2可包含 SEQ ID NO：31所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：70所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：158所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：194所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：155所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：159所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：29所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：30所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：34所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：58所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：170所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：190所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：176所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：109所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：110所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000796相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺 基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：40所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：136所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：181所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：186所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：85所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：86所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000802相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：57所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：67所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：21所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：22所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該 HCDR1可包含SEQ ID NO：47所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：62所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：179所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：99所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：100所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000803相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：116所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：166所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：15所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：16所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：45所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO： 173所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：95所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：96所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000804相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：117所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：165所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：7所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：8所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：42所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：138所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：60所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：168所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：177所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：185所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：77所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：78所示 的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000805相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
例如，本申請所述抗原結合蛋白可包含LCDR1-3和L-FR1-4。該LCDR1可包含SEQ ID NO：113所示的胺基酸序列，LCDR2可包含SEQ ID NO：56所示的胺基酸序列，LCDR3可包含SEQ ID NO：74所示的胺基酸序列，該L-FR1可包含SEQ ID NO：157所示的胺基酸序列，L-FR2可包含SEQ ID NO：191所示的胺基酸序列，L-FR3可包含SEQ ID NO：162所示的胺基酸序列，且L-FR4可包含SEQ ID NO：160所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VL和CL，且該VL可包含SEQ ID NO：5所示的胺基酸序列，該CL可包含SEQ ID NO：196所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含抗體輕鏈，該輕鏈可包含SEQ ID NO：6所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白還可包含HCDR1-3和H-FR1-4。其中該HCDR1可包含SEQ ID NO：49所示的胺基酸序列，HCDR2可包含SEQ ID NO：137所示的胺基酸序列，HCDR3可包含SEQ ID NO：63所示的胺基酸序列，該H-FR1可包含SEQ ID NO：169所示的胺基酸序列，H-FR2可包含SEQ ID NO：188所示的胺基酸序列，H-FR3可包含SEQ ID NO：182所示的胺基酸序列，且H-FR4可包含SEQ ID NO：183所示的胺基酸序列。該抗原結合蛋白可包含VH和CH，且該VH可包含SEQ ID NO：101所示的胺基酸序列，該CH可包含SEQ ID NO：195所示的胺基酸序列。且該抗原結合蛋白可包含抗體重鏈，該抗體重鏈可包含SEQ ID NO：102所示的胺基酸序列。例如，該抗原結合蛋白包含與PR000811相同的抗體輕鏈和抗體重鏈。
特定抗CD47抗體
本申請所述的分離的抗原結合蛋白，其可與特定抗CD47抗體競爭結合該CD47，其中該特定抗CD47抗體可包含輕鏈可變區和重鏈可變區，該特定抗CD47抗體的輕鏈可變區可包含LCDR1-3，該LCDR1-3的可包含依次為SEQ ID NO：139-141所示的胺基酸序列；該特定抗CD47抗體的重鏈可變區可包含HCDR1-3，該HCDR1-3可包含依次為SEQ ID NO：142-144所示的胺基酸序列。該特定抗CD47抗體的輕鏈可變區胺基酸序列可為SEQ ID NO：153，且該特定抗CD47抗體的重鏈可變區可為SEQ ID NO：154。
在本申請中，該特定抗CD47抗體的LCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：113、114和115；該LCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127；且該LCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：67-74、116-121。
在本申請中，該特定抗CD47抗體的HCDR1可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53；該HCDR2可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：136-138；且該HCDR3可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：58-63和55。
在本申請中，該特定抗CD47抗體的VL可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29。
在本申請中，該特定抗CD47抗體的VH可包含下述任一項中所示的胺基酸序列：SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111。
在本申請中涉及的蛋白質、多肽和/或胺基酸序列，還應理解為至少包含以下的範圍：與該該蛋白質或多肽具備相同或類似功能的變體或同源物。與該蛋白質或多肽具備相同或類似功能的變體可以稱為功能性變體。
在本申請中，該變體可以為，在該蛋白質和/或該多肽(例如，特異性結合CD47蛋白的抗體或其片段)的胺基酸序列中經過取代、缺失或添加一個或多個胺基酸的蛋白質或多肽。例如，該變體(例如，功能性變體)可包含已經藉由至少1個，例如1-30個、1-20個或1-10個，又例如1個、2個、3個、4個或5個胺基酸取代、缺失和/或插入而具有胺基酸改變的蛋白質或多肽。該變體(例如，功能性變體)可基本上保持改變(例如取代、缺失或添加)之前的該蛋白質或該多肽的生物學特性。例如，該變體(例如，功能性變體)可保持改變之前的該蛋白質或該多肽的至少60%、70%、80%、90%或100%的生物學活性(例如抗原結合能力)。例如，該取代可以為保守取代。
在本申請中，該抗原結合蛋白的胺基酸序列的一部分可以與來自特定物種的抗體中相應的胺基酸序列同源，或者屬於特定的類別。例如，抗體的可變區及恆定部分均可以來自一個動物物種(如人)的抗體的可變區及恆定區。在本申請中，該同源物可以為，與該蛋白質和/或該多肽(例如，特異性結合CD47蛋白的抗體或其片段)的胺基酸序列具有至少 約85%(例如，具有至少約85%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、約99%或更高的)序列同源性的蛋白質或多肽。
在本申請中，該同源性通常是指兩個或多個序列之間的相似性、類似或關聯。可以藉由以下方式計算“序列同源性百分比”：將兩條待比對的序列在比較窗中進行比較，確定兩條序列中存在相同核酸鹼基(例如，A、T、C、G)或相同胺基酸殘基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的數目以得到匹配位置的數目，將匹配位置的數目除以比較窗中的總位置數(即，窗大小)，並且將結果乘以100，以產生序列同源性百分比。為了確定序列同源性百分數而進行的比對，可以按本領域已知的多種方式實現，例如，使用可公開獲得的電腦軟體如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。本領域技術人員可以確定用於比對序列的適宜參數，包括為實現正在比較的全長序列範圍內或目標序列區域內最大比對所需要的任何演算法。該同源性也可以藉由以下的方法測定：FASTA和BLAST。對FASTA演算法的描述可以參見W．R．Pearson和D．J．Lipman的“用於生物學序列比較的改進的工具”，美國國家科學院院刊(Proc．Natl．Acad．Sci．)，85：2444-2448，1988；和D．J．Lipman和W．R．Pearson的“快速靈敏的蛋白質相似性搜索”，Science，227：1435-1441，1989。對BLAST演算法的描述可參見S．Altschul、W．Gish、W．Miller、E．W．Myers和D．Lipman的“一種基本的局部對比(alignment)搜索工具”，分子生物學雜誌，215：403-410，1990。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白能結合源自人和猴的CD47。該猴可以指食蟹猴。抗CD47抗體對CD47的結合親和性可藉由本領域已知的任何方法測定。在某些情形中，結合親和性可藉由競爭性ELISA、RIA或表面等離子共振如BIAcore來測定。在某些具體的情形中，結合親和性藉由表面等離子共振測定。例如，結合親和性和解離速率可藉由BIAcore測定。在某些情形中，該分離的抗原結合蛋白與CD47結合的KD可以為3x10-9M或以下。在一些具體的情形中，該分離的抗原結合蛋白與CD47結合的KD可以為3x10-9M、2x10-9M、1x10-9M、1x10-10M、1x10-11M或以下。在某些情形中，KD可以為約1pM至約500pM。在另一些情形中，KD可以為約500pM至約1nM。在另一些情形中，KD可以為約1nM至約10nM。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可以特異性結合CD47。本申請所述CD47可以是腫瘤細胞表面的CD47。該腫瘤細胞可以是Jurkat細胞或Raji細胞。在某些情形中，該抗原結合蛋白與Jurkat細胞上的CD47結合的EC50值可以為約10pM至約10nM。在另一些情形中，該EC50值可以為約100pM至約100nM。在另一些情形中，EC50值可以為約1pM至約1nM。在另一些情形中，該EC50值可以為約0.1nM至約1nM，例如，在FACS測量中。例如，在FACS測定中，該抗原結合蛋白與Jurkat細胞上的CD47結合的EC50值可以為約10pM至約10nM，如，約10pM至約1nM、至約1nM至約10nM。在本申請中，該抗原結合蛋白不結合或不特異性結合非CD47的抗原，例如，不結合或不特異性結合SIPRα、 CD147、PD-1、PD-L1、CTLA-4、CD80、CD86、CD28H、B7H3、B7H4和ICOS。
該抗原結合蛋白還能與食蟹猴細胞表面的CD47結合，如，可以是食蟹猴外周血單個核細胞(PBMC)。在某些情形中，該結合可藉由FACS檢測，得到的EC50值可以是約0.02nM至約0.2nM。在某些情形中FACS測得的EC50可以是約0.01nM至約0.3nM、約0.01nM至約0.5nM或約0.01nM至約1.0nM。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可以抑制CD47與SIRPα的結合。在本申請中，該CD47可以為人CD47胞外區。本申請所述人CD47胞外區可包含UniProt中登錄號為Q08722所示胺基酸序列中第19位至第141位的序列。例如，藉由ELISA測量的，該分離的抗原結合蛋白抑制人CD47與SIRPα結合的IC50值可以是約0.5nM至約5.0nM。在某些情形中，該阻斷結合的IC50值可以是約1.0nM至約3.0nM。在另一些情形中，可以是約1.5nM至約2.5nM。例如，藉由ELISA測量的，該分離的抗原結合蛋白抑制人CD47與SIRPα結合的抑制率可大於90%(例如，大於95%、大於96%、大於97%、大於98%、大於99%或更高)。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可以阻斷腫瘤細胞表面的CD47與SIRPα結合。本申請所述的腫瘤細胞可以為Jurkat細胞。本申請所述CD47抗原結合蛋白能夠藉由阻斷SIRPα與人CD47的結合。例如，該分離的抗原結合蛋白阻斷Jurkat細胞表面的CD47與SIRPα結合的IC50值可以是約0.01nM至約5.0nM，約0.02nM至約3.0nM或約0.03nM 至約2.0nM.在某些情形中，該IC50值可以是約0.1nM至約1.0nM，例如藉由FACS測量的。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可以不引起凝血反應。在某些情形下，與現有CD47抗體存在時的凝集水準相比，本申請的CD47抗原結合蛋白存在時的凝集水準下降了至少5%、至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%或至少99%，說明本申請的CD47抗原結合蛋白不引起凝血反應。例如，在濃度介於約0.65nM至約665nM之間時，該抗原結合蛋白不引起凝血反應。
在本申請中，該分離的抗原結合蛋白可以引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬。本申請所述的腫瘤細胞可以包括Jurkat和OVCAR 3腫瘤細胞。例如，用CFSE標記Jurkat細胞，用流式細胞儀進行測量，該分離的抗原結合蛋白可引起巨噬細胞對Jurkat的吞噬作用，吞噬指數可以為CFSE+CD14+細胞占總CD14+細胞的百分比，且該吞噬指數可以至少大於30%(例如，至少大於40%、至少大於50%、至少大於60%、至少大於70%、至少大於80%、至少大於90%或以上)。該分離的抗原結合蛋白可引起巨噬細胞對OVCAR3的吞噬作用的EC50值可以是約0.1nM至約5.0nM(例如，約0.2nM至約3.0nM、約0.2nM至約2.0nM或約0.5nM至約1.5nM)。在某些情形中，例如，用CD14-APC標記巨噬細胞，用流式細胞儀進行測量，可以是約0.5nM至約1.5nM。
本申請檢測了該分離的抗原結合蛋白引起巨噬細胞對人紅細胞的吞噬能力。例如，用FACS所測量的，該分離的抗原結合蛋白可引起巨噬細胞對人紅細胞的吞噬作用的吞噬指數可低於35%(例如，可低於30%、低於25%、低於20%、低於15%、低於10%、低於5%或更低)。 本申請所述分離的抗原結合蛋白引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬作用強於對紅細胞的吞噬作用。本申請所述的抗原結合蛋白能夠抑制腫瘤生長和/或腫瘤細胞增殖。在某些情形中，該抗原結合蛋白可以減緩腫瘤體積增長，消除腫瘤增長，或可以減緩體重減輕趨勢。該效果可藉由建立小鼠腫瘤模型檢測，例如，Raji小鼠模型或MC38小鼠模型。其中該腫瘤包括實體瘤和/或血液腫瘤。實體瘤可包括卵巢癌等，血液瘤可包括白血病、淋巴瘤。白血病可包括急性淋巴細胞性白血病(ALL)，急性骨髓性白血病(AML)，慢性淋巴細胞性白血病(CLL)，慢性骨髓性白血病(CML)等。淋巴瘤可包括霍奇金淋巴瘤，無痛性和侵襲性非霍奇金淋巴瘤，伯基特淋巴瘤等。
核酸、載體、細胞和製備方法
在另一個方面，本申請還提供了分離的一種或多種核酸分子，該一種或多種核酸分子可編碼本申請所述的抗體、其抗原結合片段。例如，該一種或多種核酸分子中的每一個核酸分子可以編碼完整的該抗體、其抗原結合片段，也可以編碼其中的一部分(例如，HCDR1-3、LCDR1-3、VL、VH、輕鏈或重鏈中的一種或多種)。
本申請所述的核酸分子可以為分離的。例如，其可以是藉由以下方法產生或合成的：(i)在體外擴增的，例如藉由聚合酶鏈式反應(PCR)擴增產生的，(ii)藉由選殖重組產生的，(iii)純化的，例如藉由酶切和凝膠電泳分級分離，或者(iv)合成的，例如藉由化學合成。在某些實施方式中，該分離的核酸是藉由重組DNA技術製備的核酸分子。
在本申請中，可以藉由本領域已知的多種方法來製備編碼該抗體、其抗原結合片段的核酸，這些方法包括但不限於，採用限制性片段操作或採用合成性寡核苷酸的重疊延伸PCR，具體操作可參見Sambrook 等人，Molecular Cloning，A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1989；和Ausube等人Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing and Wiley-Interscience，New York N.Y.，1993。
在另一個方面，本申請提供了一種或多種載體，其包含本申請所述的一種或多種核酸分子。每種載體中可包含一種或多種該核酸分子。此外，該載體中還可包含其他基因，例如允許在適當的宿主細胞中和在適當的條件下選擇該載體的標記基因。此外，該載體還可包含允許編碼區在適當宿主中正確表達的表達控制元件。這樣的控制元件為本領域技術人員所熟知的，例如，可包括啟動子、核糖體結合位點、增強子和調節基因轉錄或mRNA翻譯的其他控制元件等。在某些實施方式中，該表達控制序列為可調控的元件。該表達控制序列的具體結構可根據物種或細胞類型的功能而變化，但通常包含分別參與轉錄和翻譯起始的5’非轉錄序列和5’及3’非翻譯序列，例如TATA盒、加帽序列、CAAT序列等。例如，5’非轉錄表達控制序列可包含啟動子區，啟動子區可包含用於轉錄控制功能性連接核酸的啟動子序列。該表達控制序列還可包括增強子序列或上游活化子序列。在本申請中，適當的啟動子可包括，例如用於SP6、T3和T7聚合酶的啟動子、人U6RNA啟動子、CMV啟動子及其人工雜合啟動子(如CMV)，其中啟動子的某部分可與其他細胞蛋白(如人GAPDH，甘油醛-3-磷酸脫氫酶)基因啟動子的某部分融合，其可包含或不包含另外的內含子。本申請所述的一種或多種核酸分子可以與該表達控制元件可操作地連接。
該載體可以包括，例如質粒、黏粒、病毒、噬菌體或者在例如遺傳工程中通常使用的其他載體。例如，該載體為表達載體。
在另一方面，本申請提供了宿主細胞，該宿主細胞可包含本申請所述的一種或多種核酸分子和/或本申請所述的一種或多種載體。在某些實施方式中，每種或每個宿主細胞可包含一個或一種本申請所述的核酸分子或載體。在某些實施方式中，每種或每個宿主細胞可包含多個(例如，2個或以上)或多種(例如，2種或以上)本申請所述的核酸分子或載體。例如，可將本申請所述的載體引入該宿主細胞中，例如原核細胞(例如，細菌細胞)、CHO細胞、NS/0細胞、HEK293T細胞或HEK293A細胞，或者其他真核細胞，如來自植物的細胞、真菌或酵母細胞等。可藉由本領域已知的方法將本申請所述的載體引入該宿主細胞中，例如電穿孔、lipofectine轉染、lipofectamin轉染等。例如，該宿主細胞可以為COS、CHO、NSO、sf9、sf21、DH5a、BL21(DE3)或TG1。
在另一個方面，本申請提供了製備本申請所述的抗體、其抗原結合片段的方法。該方法可包括，在使得該抗體、其抗原結合片段表達的條件下，培養本申請所述的宿主細胞。例如，可藉由使用適當的培養基、適當的溫度和培養時間等，這些方法是本領域普通技術人員所瞭解的。
在某些情形中，該方法還可包括收穫(例如分離和/或純化)，本申請所述的抗體、其抗原結合片段的步驟。例如，可以採用蛋白G-瓊脂糖或蛋白A-瓊脂糖進行親和層析，還可藉由凝膠電泳和/或高效液相色譜等來純化和分離本申請所述的抗體、其抗原結合片段。
醫藥組成物、應用
在另一個方面，本申請提供了一種醫藥組成物，其可包含本申請所述的抗原結合片段或變體，所述的核酸分子，所述的載體，所述的宿主細胞，以及視需要地藥學上可接受的載體。
該藥學上可接受的載體通常是指可用於製備醫藥組成物或製劑的載體，通常安全、無毒，且既不是生物學上也非其它方面不合需要的。所使用的載體通常是適合施用於人體或其他哺乳動物的載體。在製備組成物時，活性成分通常與載體混合，由載體稀釋或封閉。當載體用作稀釋劑時，其可以是固體，半固體或液體材料，其充當抗體活性成分的媒介物或介質。該藥學上可接受的載體可以包括緩衝劑、抗氧化劑、防腐劑、低分子量多肽、蛋白質、親水聚合物、胺基酸、糖、螯合劑、反離子、金屬複合物和/或非離子表面活性劑等。
該醫藥組成物可包括本申請所述抗原結合蛋白，還可包括一種或多種聯用的活性化合物。活性化合物可以為不與該抗原結合蛋白產生不良影響的化合物，或者，可以為增強其功能的試劑，例如細胞毒劑、細胞因數、化療製劑或生長抑制劑。該聯用的化合物可以以有效用於所需目的用量聯合存在。
在本申請中，該醫藥組成物可被配製用於口服給藥，靜脈內給藥，肌肉內給藥，在腫瘤部位的原位給藥，吸入，直腸給藥，陰道給藥，經皮給藥或藉由皮下儲存庫給藥。用於經皮給藥或藉由皮下儲存庫的溶液或懸液可包括以下組分：無菌稀釋劑如注射用水、鹽水溶液、非揮發油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗菌劑如苯甲醇或對羥基苯甲酸甲酯；抗氧化劑如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑如乙二胺四乙酸(EDTA)；緩衝劑如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；和調節張力的物質如氯化鈉或右旋糖。pH可用酸或鹼調節，例如鹽酸或氫氧化鈉。
該醫藥組成物可以用於抑制腫瘤生長。例如，本申請的醫藥組成物可以抑制或延緩疾病的發展或進展，可以減小腫瘤大小(甚至基本消除腫瘤)，和/或可以減輕和/或穩定疾病狀態。例如，可藉由腫瘤小鼠體重增長減緩程度和腫瘤細胞螢光信號強度表示。
本申請所述的醫藥組成物可以包含預防和/或治療有效量的該抗體、其抗原結合片段。該預防和/或治療有效量是能夠預防和/或治療(至少部分治療)患有或具有發展風險的受試者中的疾病或病症和/或其任何併發症而所需的劑量。
另一方面，本申請提供了該抗體、其抗原結合片段在製備預防或治療疾病或病症的藥物中的用途。
另一方面，本申請提供的該抗體、其抗原結合片段，可用於預防或治療疾病或病症。該預防或治療疾病或病症可以指抑制或延緩疾病或病症的發展或進展。例如，可以用於抑制腫瘤的發展或進展。例如，可以抑制腫瘤增長或腫瘤細胞增殖。
另一方面，本申請提供了用於預防或治療腫瘤的該抗體或其抗原結合片段。
另一方面，本申請提供了一種抑制CD47與SIRPα結合的方法，其包括施用本申請所述的抗體、其抗原結合片段、所述的核酸分子、所述的載體、所述的宿主細胞和/或所述的醫藥組成物。例如，該方法可以為體外或離體方法。例如，該方法可以為ELISA或FACS。
另一方面，本申請提供了預防或治療腫瘤的方法，其包括向有需要的受試者施用本申請所述的抗體或其抗原結合片段、所述的分子核 酸、所述的載體、所述的宿主細胞和/或所述的醫藥組成物。在本申請中，該腫瘤包括實體瘤和/或血液腫瘤。例如，該腫瘤包含淋巴瘤、白血病、卵巢癌。
聯合用藥
本申請的抗原結合蛋白、藥物組合物和方法可以與其它治療劑和/或形式組合施用。改組合施用通常是指，在向受試者施用的過程中兩種(或更多種)不同的療法被遞送至改受試者，使得對改受試者的治療效果在某個時間點重疊。在某些情形中，當第二療法的遞送開始時，第一療法的遞送仍在發生，使得在施用方面存在重疊。這在本文中有時被稱為“同時”或“並行遞送”。在其它情形中，一個療法的遞送在其它療法的遞送開始之前結束。在某些情形中，由於組合施用，治療更有效，兩種處理的效果可以部分疊加、完全疊加或大於疊加。
在本申請中，改的抗原結合蛋白、藥物組合物或製劑可以與一種或多種另外的療法如手術、放射治療或另一治療性製劑的施用組合。在一個實施方案中，另外的療法可以包括化學療法，例如，細胞毒性劑。在一個實施方案中，另外的療法可以包括靶向治療，例如酪胺酸激酶抑制劑、蛋白酶體抑制劑或蛋白酶抑制劑。在一個實施方案中，另外的療法可以包括：抗炎化合物、抗血管生成化合物、抗纖維化化合物或抗增殖化合物，例如類固醇、生物免疫調節劑、單株抗體、抗體片段、適配子、siRNA、反義分子、融合蛋白、細胞因子、細胞因子受體、支氣管擴張劑、他汀類藥物、抗炎劑(例如甲氨蝶呤)或NSAID。在另一實施方案中，另外的療 法可以包括不同類別的組合療法。可以同時或順序地施用本申請改的抗原結合蛋白、藥物組合物或製劑和另外的療法。
本申請還涉及如下實施方案：
另一方面，本申請還提供了如下實施方案：
1.分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈可變區VL和抗體重鏈可變區VH，該VL包含LCDR1、LCDR2和LCDR3中的任意一個，該VH包含HCDR1、HCDR2和HCDR3中的任意一個，其中該VL包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列，該VH包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列。
2.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR1包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列，其中LCDR1較佳包含SEQ ID NO：113、114和115中任一項中所示的胺基酸序列。
3.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR2包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列，其中LCDR2較佳包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一項中所示的胺基酸序列。
4.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR3包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列，其中LCDR3較佳包含SEQ ID NO：67-74、116-121中任一項中所示的胺基酸序列。
5.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR1包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列，其中HCDR1較佳包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53中任一項中所示的胺基酸序列。
6.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR2包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列，其中HCDR2較佳包含SEQ ID NO：136-138中任一項中所示的胺基酸序列。
7.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR3包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列，其中HCDR3較佳包含SEQ ID NO：55和58-63中任一項中所示的胺基酸序列。
8.如實施方案1中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VL包含SEQ ID NO：1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27和29中任一項中所示的胺基酸序列。
9.如實施方案1中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VH包含SEQ ID NO：75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109和111中任一項中所示的胺基酸序列。
10.如實施方案1中所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體輕鏈LC，且該LC包含SEQ ID NO：197所示的胺基酸序列，其中該LC較佳包含SEQ ID NO：2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28和30中任一項中所示的胺基酸序列。
11.如實施方案1中所述的分離的抗原結合蛋白，其包含抗體重鏈HC，且該HC包含SEQ ID NO：198所示的胺基酸序列，其中該HC較佳包含SEQ ID NO：76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110和112中任一項中所示的胺基酸序列。
12.如實施方案1所述的分離的抗原結合蛋白，其具有下述性質中的一種或多種：
1)能夠特異性結合源自人和猴的CD47，較佳KD
Figure 109128448-A0101-12-0081-64
3x10-9M；
2)能夠抑制CD47與SIRPα的結合；
3)能夠結合人血紅細胞；
4)在紅細胞凝血測定中，不引起凝血反應；
5)能夠引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬；和
6)能夠抑制腫瘤生長和/或腫瘤細胞增殖。
13.一種或多種分離的核酸分子，其編碼實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
14.載體，其包含如實施方案13所述的核酸分子。
15.細胞，其包含如實施方案13所述的核酸分子或如實施方案14所述的載體。
16.製備實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白的方法，該方法包括在使得實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養如實施方案15所述的細胞。
17.醫藥組成物，其包含實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案13所述的核酸分子、實施方案14所述的載體和/或實施方案15所述的細胞，以及視需要地藥學上可接受的佐劑。
18.實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、實施方案13所述的核酸分子、實施方案14所述的載體、實施方案15所述的細胞和/或實施方案17所述的醫藥組成物在製備藥物中的用途，該藥物用於預防、緩解和/或治療腫瘤。
19.抑制CD47與SIRPα結合的方法，該方法包括施用實施方案1-12中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
不欲被任何理論所限，下文中的實施例僅僅是為了闡釋本申請的融合蛋白、製備方法和用途等，而不用於限制本申請發明的範圍。
實施例
下面顯示的實施例意在說明本發明的具體實施方案，並且不意在以任何方式限制本說明書或申請專利範圍的範圍。實施例不包括對傳統方法的詳細描述，如那些用於構建載體和質粒的方法，將編碼蛋白的基因插入到這樣的載體和質粒的方法或將質粒引入宿主細胞的方法．這樣的方法對於本領域中具有普通技術的人員是眾所周知的，並且在許多出版物中都有所描述，包括Sambrook，J.，Fritsch，E．F．and Maniais，T．(1989)MolecuLar Cloning：A Laboratory Manual，2nd edition，Cold spring Harbor Laboratory Press。
實施例1 小鼠免疫和抗體分子的獲得
可以利用CD47抗原對實驗動物進行免疫以獲得針對CD47特異性結合的抗體分子，該實驗動物可以是小鼠、大鼠、兔、羊、駱駝等。通常，其得到的抗體分子是非人源的。在獲得非人源抗體後，需要對這些分子利用抗體工程技術進行人源化改造，以降低免疫原性並提高成藥性。然而，抗體的人源化過程有其技術複雜性，經過人源化改造的分子往往會降低對抗原的親和力。另一方面，轉基因技術的進步使得可以培育出基因工程化小鼠，其攜帶人免疫球蛋白免疫庫並使其內源的鼠的免疫庫缺失。這種轉基因小鼠產生的抗體具有全人源的序列，因而無需再進一步做人源 化改造，大大提高了治療性抗體開發的效率。Harbour H2L2小鼠(Harbour Antibodies BV)是一種攜帶人免疫球蛋白免疫庫的轉基因小鼠，其產生的抗體具有完整的人的抗體可變結構域和大鼠恆定結構域。
1.1 用CD47抗原免疫小鼠
用可溶的重組人CD47-Fc融合蛋白對Harbour H2L2小鼠進行多輪免疫。抗原蛋白與免疫佐劑混合成免疫原試劑，然後藉由皮下經腹股溝注射或藉由腹腔注射。在每一輪免疫中，每隻小鼠接受的總注射劑量是100微升。在首輪免疫中，每隻小鼠接受用50μg抗原蛋白(人CD47-Fc)與完全弗氏佐劑(Sigma#F5881)以體積比1：1混合配製的免疫原試劑的免疫。在隨後的每輪增強免疫中，每隻小鼠接受用25μg抗原蛋白與Sigma Adjuvant System佐劑(Sigma#S6322)混合配製的免疫原試劑的免疫。每輪增強免疫的間隔時間至少為兩週，通常不超過五輪增強免疫。免疫時間為第0、14、28、42、56、70天；並且在第49、77天，檢測小鼠血清抗體滴度。在進行細胞融合前3天，以每隻小鼠25μg抗原蛋白的劑量進行最後一次增強免疫。
1.2 獲得融合瘤單株抗體和抗體序列
當檢測小鼠血清中CD47特異的抗體滴度達到一定的水準後，將小鼠的脾細胞取出並與骨髓瘤細胞系融合得到融合瘤細胞；對融合瘤細胞經過多輪篩選和選殖之後，分離出21個表達抗-CD47單株抗體分子的融合瘤。分離的融合瘤細胞及其表達的單株抗體都使用對應的株號來表示：11B8、15D1、18C4、32F1、35A11、39A8、40D7、73F1、74B6、75F6、78B6、80B6、81E5、83G1、84G2、85G2、86D7、87E9、87H6、 88G3、89E3。分離的融合瘤表達具有完整的人可變結構域和大鼠恆定結構域的重鏈和輕鏈的抗體分子。對上述單株抗體進行進一步的鑒定，根據其對人CD47的結合能力、食蟹猴CD47的結合能力、抑制CD47與SIRPα結合能力等參數，選出若干個融合瘤純株進行測序。利用常規的融合瘤測序手段獲得編碼抗體分子可變結構域的核苷酸序列以及對應的胺基酸序列。在本實施例中，從免疫的Harbour H2L2小鼠得到的抗CD47單株抗體分子可變結構域的序列是人源抗體序列。抗體可變結構域的CDR序列可以藉由Kabat或者Chothia或者其他CDR定義規則進行分析。在本實施例中，還使用了一種結合了Kabat定義和Chothia定義的稱為Combined定義規則進行分析。
1.3 製備全人重組抗體
在得到編碼抗體分子的輕、重鏈可變結構域序列以後，可以採用常規的重組DNA技術，將輕、重鏈可變結構域序列和相應的人的抗體輕、重鏈恆定結構域序列進行融合表達，得到重組抗體分子。在本實施例中，抗體重鏈可變結構域序列(VH)藉由基因合成並組到編碼人IgG4抗體重鏈恆定結構域序列的哺乳動物細胞表達質粒載體中，以編碼產生IgG4抗體的全長重鏈，並且在該IgG4重鏈恆定區引入S228P突變(根據EU編號，第228位絲胺酸取代成脯胺酸)以增加IgG4抗體的穩定性。抗體輕鏈可變結構域序列(VL)藉由基因合成並組到編碼人抗體Igκ輕鏈恆定結構域序列的哺乳動物細胞表達質粒載體中，以編碼產生抗體的全長輕鏈。在本實施例中，由於從免疫的Harbour H2L2小鼠得到的抗CD47單株抗體 分子可變結構域的序列是人源抗體序列，因而本實施例也得到全人源的抗CD47重組IgG4抗體。
將編碼抗體重鏈的質粒和編碼抗體輕鏈的質粒同時轉染哺乳動物宿主細胞(如人胚腎細胞HEK293)，利用常規的重組蛋白表達和純化技術，可以得到具有輕重鏈正確配對組裝的純化的CD47重組抗體。具體說來，將HEK293細胞在FreeStyleTM F17 Expression Medium培養基(Thermo #A1383504)中擴培。暫態轉染開始之前，調節細胞濃度至6~8 x 105細胞/ml，於37℃8% CO2搖床中培養24小時，細胞濃度在1.2 X 106細胞/ml。準備30ml培養的細胞。將上述編碼抗體重鏈的質粒和編碼抗體輕鏈的質粒以2：3的比例混合共計30μg質粒溶解於1.5ml Opti-MEM減血清培養基(Thermo,31985088)，並用0.22μm濾膜過濾除菌。再取1.5ml Opti-MEM溶入1mg/ml PEI(Polysciences,Inc # 23966-2)120μl，靜置5分鐘。把PEI緩慢加入質粒中，室溫孵育10分鐘，邊搖晃培養瓶邊緩慢滴入質粒PEI混合溶液，於37℃8% CO2搖床中培養5天。5天後觀測細胞活率。收集培養物，以3300g轉速離心10分鐘後取上清；然後將上清高速離心去除雜質。用PBS(pH7.4)平衡含有MabSelect TM(GE Healthcare Life Science# 71-5020-91 AE)的重力管柱(Bio-Rad #7311550)，2-5倍管柱體積沖洗。將上清樣品過柱；用5-10倍管柱體積的PBS沖洗管柱，再用pH3.5的0.1M甘胺酸洗脫目的蛋白，後用pH 8.0的Tris-HCl調節至中性，最後用超濾管(Millipore,UFC901024)濃縮換液至PBS緩衝液，得到純化的CD47抗體溶液。最後用NanoDrop(Thermo ScientificTM NanoDropTM One)測定濃度，分裝、存儲備用。
1.4 抗CD47全人重組抗體的序列表2列出了本實施例中CD47抗體的輕、重鏈可變結構域胺基酸序列，輕鏈全長胺基酸序列，重鏈(人IgG4)全長胺基酸序列和根據Chothia定義規則定義的CDR的胺基酸序列。
實施例2 抗體的序列分析和表達純化
抗體的重鏈可變結構域序列來源於染色體上重鏈基因群的胚系基因V、D、J基因片段的基因重排和體細胞高頻突變等事件；輕鏈可變結構域序列來源於輕鏈基因群的胚系基因V、J基因片段的基因重排和體細胞高頻突變等事件。基因重排和體細胞高頻突變是增加抗體多樣性的主要因素。來源於相同胚系V基因片段的抗體也可能產生不同的序列，但總體上相似性較高。利用一些演算法，例如IMGT/DomainGapAlign(http：//imgt.org/3Dstructure-DB/cgi/DomainGapAlign.cgi)或者NCBI/IgBLAST(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)可以從抗體的可變結構域序列推測出其發生基因重排時可能的胚系基因片段。將實施例1和2中的抗體序列進行分析，其重鏈可變結構域(VH)和輕鏈可變結構域(VL)的胚系基因V基因片段列於表3 CD47抗體序列的胚系基因分析和轉譯後修飾位點(PTM)分析。
蛋白質或多肽胺基酸鏈在細胞中翻譯合成後有時會引入化學修飾，稱為翻譯後修飾(PTM)。對於抗體而言，一些PTM的位點是非常保守的，例如，在人的IgG1抗體的恆定結構域的第297位元(EU編號)的保守的胺基酸天冬醯胺Asn通常會發生糖基化修飾形成糖鏈，而該糖鏈結構對於抗體結構和相關的效應子功能是至關重要的。但是，如果在抗體的可變結構域尤其是抗原結合區域(如CDR)中存在PTM，那麼這些PTM 的存在有可能會對抗原的結合有較大的影響，也可能對抗體的物理化學性質帶來變化。例如，糖基化、脫醯胺、異構化、氧化等都可能增加抗體分子的不穩定性或異質性，從而增加抗體開發的難度和風險。因而避免一些潛在的PTM對於治療性抗體的開發是非常重要的。隨著經驗的積累，人們發現一些PTM是和胺基酸序列的組成尤其是相鄰胺基酸組成的“模式”是高度相關的，這樣使得可以從蛋白質的一級胺基酸序列預測出潛在的PTM。例如，N-x-S/T(第一位是天冬醯胺，第二位是非脯胺酸以外的任意胺基酸，第三位是絲胺酸或者蘇胺酸)的序列模式預測出N-連接糖基化位點。引起PTM的胺基酸序列模式有可能來源於胚系基因序列，例如人胚系基因片段IGHV3-33天然地在FR3區域存在糖基化模式NST；也可能來源於體細胞高頻突變。
列出了實施例1的抗體的可變結構域VH和VL的預測的PTM。具體說來，NSS或NLT可能是糖基化位點，NS或NT或NN可能是脫醯胺位點。
可以藉由胺基酸突變來破壞PTM的胺基酸序列模式，從而降低或者去除特定PTM的形成。根據抗體序列和PTM序列模式的不同，有不同的突變設計方法。一種方法是將“熱點”胺基酸(如NS模式中的N或S)替換成物理化學性質相似的胺基酸(如把N突變為Q)。如果PTM序列模式來源於體細胞高頻突變，而並不存在於胚系基因序列中，那麼另一種方法可以是把該序列模式替換成對應的胚系基因序列。實際操作中，對同一個PTM序列模式可能採用多種突變設計方法。
表4列出了對六個來自實施例1的具有潛在PTM位點的抗體的序列進行胺基酸突變得到的新的抗體分子(稱為PTM變體)。表5列出了本實施例中這些PTM變體的輕、重鏈可變結構域胺基酸序列，輕鏈全 長胺基酸序列，重鏈(人IgG4)全長胺基酸序列，和根據Chothia定義規則定義的CDR的胺基酸序列。所有設計出來的PTM變體按照實施例1.3中描述的方法得到純化的重組抗體，並在後續的功能實驗中進一步驗證。
Figure 109128448-A0101-12-0088-352
Figure 109128448-A0101-12-0089-353
Figure 109128448-A0101-12-0090-354
Figure 109128448-A0101-12-0091-355
實施例3 抗原結合蛋白能夠與人和猴細胞表面的CD47結合
3.1 能夠與Jurkat以及Raji靶細胞表面的CD47結合
分別將Jurkat細胞(ATCC# TIB-152)和Raji細胞(ATCC# CCL-86)擴增培養，加入96孔板(Corning#3799)，每孔1×105個，再加入100μl不同濃度的實施例1或2得到的CD47抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、Tab3)，同型hIgG4SP作為對照。混勻後4℃下孵育1小時。1% BSA(Amresco# 0332-100G)洗滌3次，加入100μl的4μg/mL山羊抗人IgG(H+L)-Alexa 488，4℃下孵育1小時。洗滌3次後進行流式細胞上機測試(BD Biosciences#Canto II cytometer)。根據測定結果計算半數最大結合效應濃度(EC50)，並以EC50值和最大MFI值作為相對結合活性評價依據。在本申請中，Tab1、Tab2和Tab3均來自現有技術，分別是Forty Seven的Hu5F9-G4、Celgene的CC-90002、Surface Oncology的SRF-231。
結果如圖1及下
6-7所示。實施例1或2得到的CD47抗體均能結合Jurkat細胞，結合活性與Tab1、Tab2沒有顯著差別(圖1A-1B)，且比Tab3的結合能力好。
PR000806、PR000807、PR000808和Tab1、Tab2均能與Jurkat(圖1B)和Raji(圖1C)細胞表面的CD47結合，結合活性沒有顯著性區別，且比Tab3與Jurkat和Raji的親和能力強。
Figure 109128448-A0101-12-0093-356
Figure 109128448-A0101-12-0094-357
Figure 109128448-A0101-12-0094-358
3.2 能夠與食蟹猴PBMC細胞表面的CD47結合
採用3.1的方法檢測CD47抗體與食蟹猴PBMC的結合能力，結果如圖2及表8所示。實施例1得到的PTM突變前的CD47抗體均能與食蟹猴PBMC細胞表面的CD47結合，且EC50值小於Tab2。
Figure 109128448-A0101-12-0095-359
實施例4 抗原結合蛋白能夠與人和食蟹猴CD47蛋白結合
分別將人CD47(Sino Biological#12283-HCCH)和猴CD47(Acro Biosystems #CD7-C52H1)用PBS稀釋為0.25μg/ml，加至96孔板(Corning#9018)中，每孔100μl，4℃下孵育過夜。棄去液體後用PBST洗板3次，加入2% BSA封閉，室溫條件下孵育1小時。棄去封閉液，並用PBST緩衝液(pH7.4，含0.05%吐溫-20)洗板5次，將實施例1或2得到的CD47抗體和三種現有技術中的CD47抗體：Tab1(Forty Seven，Hu5F9-G4)、Tab2(Celgene，CC-90002)、Tab3(Surface Oncology，SRF-231)自66.7nM濃度起，依次進行5倍濃度稀釋，共10個濃度梯度， 加入100μl/孔，37℃孵育1小時，同型hIgG4SP(Crown Bio#C0045-4)為對照。清洗3次後，加入稀釋4000倍的羊抗人HRP二抗(Invitrogen#A18805)，37℃孵育1小時。清洗後添加100μl/孔TMB(Beyotime#P0209)，室溫避光放置5分鐘；每孔加入100μl/孔終止液(BBI life sciences#E661006-0200)終止反應，置酶標儀(PerkinElemer#Enspire)中測定450nm吸光度(OD450)值。根據測定結果計算半數最大結合效應濃度(EC50)，並以EC50值和最大OD值作為相對結合活性評價依據。
結果如圖3及下表9-10所示。圖3A和表9顯示，實施例1得到的PTM突變前的CD47抗體均能與源自食蟹猴的CD47蛋白結合。圖3B-3C和表10顯示PR00806、PR000807、PR000808與人(圖3B)和猴(圖3C)CD47結合的活性。PR00806、PR000807、PR000808、Tab1、Tab2、Tab3均能與人CD47蛋白結合，結合活性沒有顯著差別，且PR00806、PR000807、PR000808的EC50低於0.03nM，結合能力優於Tab3。PR00806、PR000807、PR000808、Tab1、Tab2均能與猴CD47蛋白結合，結合活性沒有顯著差別，但Tab3與猴CD47蛋白的結合能力較弱。
Figure 109128448-A0101-12-0097-360
Figure 109128448-A0101-12-0097-361
實施例5 抗原結合蛋白能夠抑制人CD47蛋白與SIRPα結合
將人CD47-ECD-hFc(Sino Biological # 12283-H02H)用PBS稀釋成1μg/ml加入到96孔板(Corning#9018)中，每孔100μl，4℃包被過夜。洗滌3次後用100μl的2% BSA室溫下封閉1小時。將實施例1或2得到的CD47抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、Tab3)用PBST稀釋成不同濃度梯度，與1μg/ml組胺酸標記的SIRPα蛋白(Sino Biological # 11612-H08H)混合後，加入孔板，同型hIgG4作為對照，室溫下孵育1小時。洗滌3次後每孔加入100μl組胺酸標記的HRP抗體(Biolegend# 652504)，室溫下反應1小時。洗滌3次後加入100μl TMB顯色液，室溫下避光顯色5分鐘。加入終止液終止反應，用酶標儀(PerkinElemer#Enspire)測定450nm吸光度(OD450)值。以IC50值、最小OD值、最大抑制率作為相對抑制活性評價依據。
結果圖4及下表11-12所示。圖4A和表11顯示，實施例1得到的CD47抗體均能抑制人CD47與SIRPα結合。圖4B和表12顯示PR00806、PR000807、PR000808均能抑制人CD47與SIRPα結合，抑制率均大於97%，且抑制活性與Tab1、Tab2、Tab3沒有顯著差別。
Figure 109128448-A0101-12-0099-362
Figure 109128448-A0101-12-0099-363
實施例6 原結合蛋白能夠阻斷Jurkat細胞上的CD47與SIRPα結合
將CD47高表達的人Jurkat細胞擴增培養後，以每孔1×105個加入96孔板。將實施例1或2得到的CD47抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、Tab3)用PBS稀釋成不同濃度梯度，與1μg/ml組胺酸標記的SIRPα蛋白混合後，加入每孔，同型hIgG4SP作為對照，4℃下孵育1小時。1%BSA洗滌2次，加入二抗Biotin-conjugated anti-His Tag antibody(GenScript # A00613)100μl體積，4℃下孵育1小時。離心之後1% BSA洗滌2次，加入三抗PE-Conjugated streptavidin(共軛鏈黴抗生物素蛋白)(Affymetrix #DC)100μl體積，洗滌3次後進行流式細胞上機測試。以IC50值、最小MFI值、最大抑制率作為相對阻斷活性評價依據。
結果如圖5及下表13-14所示。圖5A和表13顯示實施例1得到的CD47抗體均能阻斷Jurkat細胞表面的CD47與SIRPα結合。圖5B和表14顯示PR00806、PR000807、PR000808均能阻斷Jurkat細胞表面的CD47與SIRPα結合，且其阻斷活性與Tab1、Tab2沒有顯著差別，IC50均小於0.7nM，而Tab3阻斷能力較弱。
Figure 109128448-A0101-12-0101-364
Figure 109128448-A0101-12-0102-365
實施例7 抗原結合蛋白不引起紅細胞的凝集反應
分析實施例1或2得到的CD47抗體是否引起紅細胞凝集反應。將人紅細胞用PBS稀釋至4%後加入96孔板(Corning#3799)，再加入從200nM開始2倍稀釋待測抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、Tab3)，同型hIgG4SP作為對照，在37℃下孵育1小時。藉由與無抗體的孔內紅點邊緣的清晰程度對比來評價抗體對人紅細胞凝集的作用效果。
圖6A-6B顯示，與不加抗體的孔相比，除PR00796，其他抗原結合蛋白不引起凝集反應，紅點邊緣清晰；而Tab1引起凝集反應，紅點模糊，呈彌散狀。
實施例8 抗原結合蛋白與紅細胞結合能力檢測
檢測實施例1或2得到的CD47抗體與紅細胞結合的活性。將人紅細胞在PBS中稀釋，加入96孔板(Corning#3799)，每孔1×105個，再加入100μl不同濃度的抗CD47抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、 Tab3)，同型hIgG4SP作為對照，混勻後4℃下孵育1小時。1% BSA(Amresco# 0332-100G)洗滌3次，加入100μl的4μg/mL山羊抗人IgG(H+L)-Alexa 488，4℃下孵育1小時，洗滌3次後進行流式細胞上機測試(BD Biosciences#Canto II cytometer)。以EC50值、最大MFI值作為相對結合活性評價依據。
抗原結合蛋白與紅細胞結合的能力如圖7和下表15-16顯示。
Figure 109128448-A0101-12-0103-366
Figure 109128448-A0101-12-0104-367
比較抗原結合蛋白與Jurkat細胞結合(實施例3)和紅細胞(RBC)結合的能力，計算抗原結合蛋白與腫瘤細胞和紅細胞結合的EC50和最大MFI的比值，結果見下表16。從結果看出，與對照抗體相比，實施例1或2所得抗原結合蛋白與Jurkat結合的能力大於與紅細胞結合的能力。
Figure 109128448-A0101-12-0104-368
Figure 109128448-A0101-12-0105-369
實施例9 抗原結合蛋白能夠引起巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬作用
9.1 引起巨噬細胞對Jurkat細胞的吞噬作用
從人外周血單核細胞(PBMC)中分離得到CD14+的單核細胞(Miltenyi Biotec# 130-050-201)，加入100ng/ml M-CSF(R&D Systems# 216-MC/CF)培養7天使其分化為巨噬細胞，用胰酶消化，接種於96孔板上，每孔5×104個，同時以1：1的比例加入用0.25μM羧基螢光素琥珀醯亞胺酯(CFSE)(Life-technology# C34570)-標記的Jurkat細胞，再加入稀釋好的抗CD47的抗體和對照抗體(Tab1、Tab2、Tab3)，混勻後37℃下孵育2小時。用1% BSA洗去未被吞噬的Jurkat細胞，加入直標抗體CD14-APC(BD Pharmingen# 561708)。流式細胞儀(ACEA# Novocyte)進行測量，以吞噬指數作為吞噬作用的評價依據，吞噬指數為CFSE+CD14+細胞占總CD14+細胞的百分比。
結果如圖8和下表17-19所示。圖8A和表17顯示的是實施例1得到的PTM突變前的CD47抗體均能引起巨噬細胞對Jurkat細胞的吞噬作用，且引起吞噬作用的能力優於Tab2。圖8B和表18顯示的是PR000806、PR000807、PR000808均能引起巨噬細胞對Jurkat細胞的吞噬作用，且引起吞噬作用的能力優於Tab2和Tab3。表19顯示的是實施例1或2得到的CD47抗體在不同濃度引起巨噬細胞對Jurkat細胞的吞噬作用。
Figure 109128448-A0101-12-0107-370
Figure 109128448-A0101-12-0107-371
Figure 109128448-A0101-12-0108-372
9.2 引起巨噬細胞對OVCAR 3細胞的吞噬作用
按實施例9.1的方法檢測巨噬細胞對OVCAR 3(ATCC#HTB-161)細胞的吞噬作用，流式細胞儀測定EC50和吞噬指數。
結果如圖9和下表20所示，PR00806、PR000807、PR000808均能引起巨噬細胞對OVCAR3細胞的吞噬作用，且無顯著差別；EC50值和最大吞噬指數顯示，PR00806、PR000807、PR000808引起吞噬作用的能力比Tab3更強。
Figure 109128448-A0101-12-0109-373
實施例10 抗原結合蛋白引起巨噬細胞對人紅細胞吞噬作用的能力檢測
採用實施例9的方法檢測實施例1或2所得的抗原結合蛋白引起巨噬細胞對人紅細胞的吞噬作用，流式細胞儀測定EC50和吞噬指數。
結果如圖10和下表21-22所示。圖10和表21顯示的是PTM移除後的CD47抗體引起巨噬細胞對人紅細胞吞噬作用的能力。表22顯示的是實施例1或2得到的CD47抗體在不同濃度引起巨噬細胞對hRBC吞噬作用的能力檢測。結果顯示，本申請的抗原結合蛋白(如，CD47抗體)能夠有效引起巨噬細胞對hRBC吞噬，且效果與對照抗體相近或高於對照抗體。
Figure 109128448-A0101-12-0110-374
Figure 109128448-A0101-12-0111-375
Figure 109128448-A0101-12-0112-376
實施例11 抗原結合蛋白的體內抗腫瘤活性
11.1 抗原結合蛋白在NCG-Raji小鼠模型上的體內抗腫瘤活性
在NCG-Raji小鼠模型中評價抗原結合蛋白的抗腫瘤活性。將Raji細胞1×107個/0.1mL接種於NCG小鼠尾靜脈。細胞接種後第三天，將小鼠隨機分成10組，每組8隻小鼠，開始給藥。分別以0.3mg/kg、1mg/kg和3mg/kg劑量經腹腔注射各待測抗體，10μl/g，每3天給藥1次，連續給藥6次，同型hIgG4為對照。記錄小鼠體重和腫瘤體積。
表23顯示的是與同型IgG4相比，注射各抗體的腫瘤抑制率(TGI)，腫瘤抑制率與劑量有關。圖11A-11B顯示的是注射PR000806、PR000808和Tab1後小鼠體內腫瘤體積和體重變化趨勢。注射PR000806、PR000808的組小鼠腫瘤體積增長減緩。結果顯示，PR000806和PR000808具能在體內抑制腫瘤生長，PR000808在3mg/kg和1mg/kg劑量下比Tab1效果更好。
Figure 109128448-A0101-12-0113-377
11.2 抗原結合蛋白在B-hSIRPa/hCD47-MC38-hCD47小鼠模型上的體內抗腫瘤活性
在B-hSIRPa/hCD47-MC38-hCD47小鼠模型中評價抗原結合蛋白的抗腫瘤活性。將穩定表達人CD47蛋白的MC38細胞1×106個/0.1mL接種於B-hSIRPA/hCD47小鼠的右側皮下。細胞接種後，當平均腫瘤體積達到大約80-120mm3時，將小鼠隨機分成7組，每組8隻小鼠，開始給藥。分別以5mg/kg和10mg/kg劑量經腹腔注射各待測抗體，10μl/g，每3天給藥1次，連續給藥6次，同型hIgG4為對照。記錄小鼠體重和腫瘤體積。
圖12A-12B顯示的是注射PR000806、PR001265和Tab1後小鼠體內腫瘤體積和體重變化趨勢。注射PR000806、PR001265組的小 鼠腫瘤體積增長減緩。結果顯示，PR000806和PR001265能夠在體內抑制腫瘤生長，高劑量時PR000806和PR001265腫瘤抑制效果比Tab1更好。
實施例12 抗原結合蛋白的毒性檢測
將B-hSIRPA/hCD47純合小鼠按體重隨機分組，每組4隻，共8組，分組後第8天以10mpk的劑量腹腔注射給藥一次，第一次給藥為治療第0天，共給藥1次(第0天)。給藥和觀察期間每天測量1次小鼠體重，並記錄測量值。另外，分別於給藥前7天(正常值)、治療後1天、7天取血，進行血常規分析。小鼠體重變化和血常規分析結果如圖13-15所示。
給藥11天後結束實驗，實驗結束時，動物安樂死，小鼠拍照。
圖13顯示的是治療前後小鼠的體重變化。除同型hIgG4，其他抗原結合蛋白或抗體治療後小鼠體重均減輕，其中，Tab1、PR000806、PR000808和PR001281治療後小鼠體重減輕程度較其它三個分子大，與體外抗體分子與抗原在紅細胞上的結合能力結果一致，但是在治療後大約7天，小鼠體重開始恢復至正常水準。
圖14-16顯示的是治療前7天和治療後小鼠模型第1天、第7天血常規檢測結果。從圖像中可以看出，給藥後第一天，樣品組較對照組hIgG4SP血常規中的一些參數發生一定的變化，但是在給藥後7天之後，隨著機體代償功能的作用發揮，指標均恢復正常。
最後，從體重和血常規的資料來看，靶向CD47的抗體分子PR000806、PR000808和PR001281、PR001265、PR001275和PR001276均未顯示出不可恢復的血液毒性。
實施例13 抗原結合蛋白能夠與CD47結合的親和力測試(Biacore)
13.1 Protein A的偶聯
以1x HBS-EP+(GE Healthcare#BR-1006-69)為運行緩衝液，流速10ul/min，在CM5的4個通道上偶聯Protein A(Thermo Fisher #21181)：1)設置注入時間800s，將50mM NHS和200mM EDC以1：1體積比混合後注入4個通道；2)用pH4.5的醋酸鈉將Protein A稀釋至20μg/ml，注入800s；3)注入1M乙醇胺800s，以封閉晶片表面剩餘的活性羧基。封閉後繼續用1x HBS-EP+緩衝液平衡儀器兩小時，Protein A最終偶聯量約為2000RU。
13.2 動力學測試
設置多迴圈動力學模式，每個迴圈包括抗體的捕獲、分析物的結合以及晶片的再生。將抗體均稀釋至1μg/ml，以10μl/min的流速注入2、3、4通道40s，由預先偶聯的Protein A捕獲各抗體，捕獲量約為200RU。分別將人CD47(Sino biological#12283-HCCH)和食蟹猴CD47(Acro Biosystems#CD7-C52H1)依次按照0nM、1.25nM、2.5nM、5nM、10nM、20nM、40nM的濃度梯度注入四個通道，流速為30ul/min，設置注入時間180s，解離時間900s。最後以同樣流速注入甘胺酸(10mM，pH1.5)30s，以再生晶片。
13.3 資料分析
用Biacore T200分析軟體2.0對實驗結果進行分析，1通道作為參比通道扣除，分析模型選用1：1動力學擬合模型。
結果如下表24所示。實驗結果表明，5個抗體均與人CD47和食蟹猴CD47有較好結合，其中PR000806與兩種抗原的親和力相較於其他抗體略強。
表24 抗原結合蛋白與食蟹猴和人CD47結合的結合親和力
Figure 109128448-A0101-12-0116-378
實施例14 抗原結合蛋白以高度特異性結合CD47
分別將組胺酸標記的人CD47(Sino Biological#12283-HCCH)、SIPRα(Sino Biological#11612-H08H)、CD147(Sino Biological#10186-H08H)、PD-1(Novoprotein#CD91)、PD-L1(Novoprotein#C315)、CTLA-4(Sino Biological#11159-H08H)、CD80(Sino Biological#10698-H08H)、CD86(Sino Biological#10699-H08H)、CD28H(AcroBiosystem#CDH-H52H3)、B7H3(Sino Biological#11188-H08H)、B7H4(Sino Biological#10738-H08H)和ICOS(AcroBiosystem#ICS-H52H6)用PBS稀釋為1μg/ml，加至96孔板(Corning#9018)中，每孔100μl，4℃下孵育過夜。棄去液體後用PBST洗板3次，加入2% BSA封閉，室溫條件下孵育1小時。棄去封閉液，並用PBST緩衝液(pH7.4，含0.05%吐溫-20)洗板5次，將實施例1或2得到的CD47抗體PR001265、PR001275、PR001276以及Tab1(Forty Seven，Hu5F9-G4)稀釋至10nM和100nM，加入100μl/孔，37℃孵育1小時，同型hIgG4SP(Crown Bio#C0045-4)為對照。清洗3次後，加入 稀釋4000倍的羊抗人HRP二抗(Invitrogen#A18805)，37℃孵育1小時。清洗後添加100μl/孔TMB(Beyotime#P0209)，室溫避光放置5分鐘；每孔加入100μl/孔終止液(BBI life sciences#E661006-0200)終止反應，置酶標儀(PerkinElemer#Enspire)中測定450nm吸光度值和570nm吸光度值。計算OD450/570的比值(圖17)。
結果顯示，本申請的抗原結合蛋白以高度特異性結合CD47，不會結合非CD47的抗原SIPRα、CD147、PD-1、PD-L1、CTLA-4、CD80、CD86、CD28H、B7H3、B7H4和ICOS。
前述詳細說明是以解釋和舉例的方式提供的，並非要限制所附申請專利的範圍。目前本申請所列舉的實施方式的多種變化對本領域普通技術人員來說是顯而易見的，且保留在所附的申請專利範圍和其等同方案的範圍內。
<110> 和鉑醫藥(上海)有限責任公司(Harbour BioMed(Shanghai)Co.,Ltd.)
<120> 一種抗CD47抗原結合蛋白及其應用
<130> 0113-PA-003TW
<160> 198
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808輕鏈可變區
<400> 1
Figure 109128448-A0101-12-0118-379
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808輕鏈
<400> 2
Figure 109128448-A0101-12-0119-380
Figure 109128448-A0101-12-0120-381
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807輕鏈可變區
<400> 3
Figure 109128448-A0101-12-0120-382
<210> 4
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807輕鏈
<400> 4
Figure 109128448-A0101-12-0121-383
Figure 109128448-A0101-12-0122-384
<210> 5
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811}PR001280}PR001281輕鏈可變區
<400> 5
Figure 109128448-A0101-12-0122-385
<210> 6
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811}PR001280}PR001281輕鏈
<400> 6
Figure 109128448-A0101-12-0123-386
<210> 7
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805輕鏈可變區
<400> 7
Figure 109128448-A0101-12-0124-387
<210> 8
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805輕鏈
<400> 8
Figure 109128448-A0101-12-0124-388
Figure 109128448-A0101-12-0125-389
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 9
Figure 109128448-A0101-12-0126-390
<210> 10
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001279輕鏈
<400> 10
Figure 109128448-A0101-12-0126-391
Figure 109128448-A0101-12-0127-392
<210> 11
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001277輕鏈可變區
<400> 11
Figure 109128448-A0101-12-0128-393
<210> 12
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001277輕鏈
<400> 12
Figure 109128448-A0101-12-0128-394
Figure 109128448-A0101-12-0129-395
<210> 13
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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Figure 109128448-A0101-12-0130-396
<210> 14
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001278輕鏈
<400> 14
Figure 109128448-A0101-12-0130-397
Figure 109128448-A0101-12-0131-398
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Figure 109128448-A0101-12-0131-399
Figure 109128448-A0101-12-0132-400
<210> 16
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802}PR000804}PR001266}PR001267}PR001268}PR001269}PR001275}PR001276輕鏈
<400> 16
Figure 109128448-A0101-12-0132-401
Figure 109128448-A0101-12-0133-402
<210> 17
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001271輕鏈可變區
<400> 17
Figure 109128448-A0101-12-0133-403
Figure 109128448-A0101-12-0134-404
<210> 18
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001271輕鏈
<400> 18
Figure 109128448-A0101-12-0134-405
Figure 109128448-A0101-12-0135-406
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001270}PR001272輕鏈可變區
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Figure 109128448-A0101-12-0135-407
Figure 109128448-A0101-12-0136-64
<210> 20
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001270}PR001272輕鏈
<400> 20
Figure 109128448-A0101-12-0136-65
Figure 109128448-A0101-12-0137-66
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803輕鏈可變區
<400> 21
Figure 109128448-A0101-12-0137-68
Figure 109128448-A0101-12-0138-69
<210> 22
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803輕鏈
<400> 22
Figure 109128448-A0101-12-0138-70
Figure 109128448-A0101-12-0139-71
<210> 23
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001274輕鏈可變區
<400> 23
Figure 109128448-A0101-12-0139-72
Figure 109128448-A0101-12-0140-73
<210> 24
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001274輕鏈
<400> 24
Figure 109128448-A0101-12-0140-74
Figure 109128448-A0101-12-0141-75
<210> 25
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001273輕鏈可變區
<400> 25
Figure 109128448-A0101-12-0141-76
Figure 109128448-A0101-12-0142-77
<210> 26
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001273輕鏈
<400> 26
Figure 109128448-A0101-12-0142-78
Figure 109128448-A0101-12-0143-79
<210> 27
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806輕鏈可變區
<400> 27
Figure 109128448-A0101-12-0143-80
<210> 28
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806輕鏈
<400> 28
Figure 109128448-A0101-12-0144-81
Figure 109128448-A0101-12-0145-82
<210> 29
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796}PR001264}PR001265輕鏈可變區
<400> 29
Figure 109128448-A0101-12-0145-83
<210> 30
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796}PR001264}PR001265輕鏈
<400> 30
Figure 109128448-A0101-12-0146-84
Figure 109128448-A0101-12-0147-85
<210> 31
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796}PR001264}PR001265的LCDR2(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 31
Figure 109128448-A0101-12-0147-86
<210> 32
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001264的HCDR1(Chothia)
<400> 32
Figure 109128448-A0101-12-0147-87
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001264的HCDR1(Combined)
<400> 33
Figure 109128448-A0101-12-0147-88
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796的HCDR1(Chothia)
<400> 34
Figure 109128448-A0101-12-0148-89
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796的HCDR1(Combined)
<400> 35
Figure 109128448-A0101-12-0148-90
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001265的HCDR1(Chothia)
<400> 36
Figure 109128448-A0101-12-0148-91
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001265的HCDR1(Combined)
<400> 37
Figure 109128448-A0101-12-0148-92
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的HCDR1(Chothia)
<400> 38
Figure 109128448-A0101-12-0149-93
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的HCDR1(Combined)
<400> 39
Figure 109128448-A0101-12-0149-94
<210> 40
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001268,PR001269,PR001270, PR001271的HCDR(Chothia)
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Figure 109128448-A0101-12-0149-95
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001268, PR001269,PR001270,PR001271的HCDR(Combined)
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Figure 109128448-A0101-12-0150-96
<210> 42
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR000806,PR000807,PR001266,PR001267,PR001272,PR001277,PR001278,PR001279的HCDR(Chothia)
<400> 42
Figure 109128448-A0101-12-0150-97
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR000806,PR001266,PR001267,PR001272,PR001277,PR001278,PR001279的HCDR1(Combined)
<400> 43
Figure 109128448-A0101-12-0150-98
<210> 44
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的HCDR1(Combined)
<400> 44
Figure 109128448-A0101-12-0150-99
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804,PR001275,PR001276的HCDR1(Chothia)
<400> 45
Figure 109128448-A0101-12-0151-100
<210> 46
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804,PR001275,PR001276的HCDR1(Combined)
<400> 46
Figure 109128448-A0101-12-0151-101
<210> 47
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的HCDR1(Chothia)
<400> 47
Figure 109128448-A0101-12-0151-102
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的HCDR1(Combined)
<400> 48
Figure 109128448-A0101-12-0151-103
<210> 49
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 49
<400> 49
Figure 109128448-A0101-12-0152-104
<210> 50
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811的HCDR1(Combined)
<400> 50
Figure 109128448-A0101-12-0152-105
<210> 51
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001280的HCDR1(Chothia)
<400> 51
Figure 109128448-A0101-12-0152-106
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001280的HCDR1(Combined)
<400> 52
Figure 109128448-A0101-12-0153-107
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001281的HCDR1(Chothia)
<400> 53
Figure 109128448-A0101-12-0153-108
<210> 54
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001281的HCDR1(Combined)
<400> 54
Figure 109128448-A0101-12-0153-109
<210> 55
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的HCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 55
Figure 109128448-A0101-12-0153-110
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000804,PR000805,PR000811,PR001266,PR001267,PR001268,PR001269,PR001270,PR001271,PR001272,PR001275,PR001276, PR001277,PR001278,PR001279,PR001280,PR001281的LCDR2(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 56
Figure 109128448-A0101-12-0154-111
<210> 57
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的LCDR2(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 57
Figure 109128448-A0101-12-0154-112
<210> 58
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的HCDR3(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 58
Figure 109128448-A0101-12-0154-113
<210> 59
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的HCDR3(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 59
Figure 109128448-A0101-12-0154-114
<210> 60
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000804,PR000805,PR001266,PR001267,PR001268,PR001269,PR001270,PR001271,PR001272,PR001275,PR001276,PR001277,PR001278,PR001279的HCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 60
Figure 109128448-A0101-12-0155-115
<210> 61
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的HCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 61
Figure 109128448-A0101-12-0155-116
<210> 62
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的HCDR3(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 62
Figure 109128448-A0101-12-0155-117
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811,PR001280,PR001281的HCDR3(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 63
Figure 109128448-A0101-12-0155-118
<210> 64
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 64
Figure 109128448-A0101-12-0156-119
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000805,PR000806,PR000808,PR000811,PR001266,PR001267,PR001268,PR001269,PR001270,PR001271,PR001272,PR001277,PR001278,PR001279,PR001280,PR001281的HCDR1(Kabat)
<400> 65
Figure 109128448-A0101-12-0156-120
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的HCDR1(Kabat)
<400> 66
Figure 109128448-A0101-12-0156-121
<210> 67
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 67
Figure 109128448-A0101-12-0157-122
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001274的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 68
Figure 109128448-A0101-12-0157-123
<210> 69
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001273的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 69
Figure 109128448-A0101-12-0157-124
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的LCDR3(Chothia,Kabat,Combined)
<400> 70
Figure 109128448-A0101-12-0157-125
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 71
Figure 109128448-A0101-12-0158-126
<210> 72
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 72
Figure 109128448-A0101-12-0158-127
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 73
Figure 109128448-A0101-12-0158-128
<210> 74
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811,PR001280,PR001281的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 74
Figure 109128448-A0101-12-0158-129
<210> 75
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的重鏈可變區
<400> 75
Figure 109128448-A0101-12-0159-130
<210> 76
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的重鏈
<400> 76
Figure 109128448-A0101-12-0159-131
Figure 109128448-A0101-12-0160-132
Figure 109128448-A0101-12-0161-133
<210> 77
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR001277,PR001278,PR001279的重鏈可變區
<400> 77
Figure 109128448-A0101-12-0162-134
<210> 78
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR001277,PR001278,PR001279的重鏈
<400> 78
Figure 109128448-A0101-12-0162-135
Figure 109128448-A0101-12-0163-136
Figure 109128448-A0101-12-0164-137
<210> 79
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的重鏈可變區
<400> 79
Figure 109128448-A0101-12-0165-138
<210> 80
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的重鏈
<400> 80
Figure 109128448-A0101-12-0165-139
Figure 109128448-A0101-12-0166-140
Figure 109128448-A0101-12-0167-141
<210> 81
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001268的重鏈可變區
<400> 81
Figure 109128448-A0101-12-0168-142
<210> 82
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001268的重鏈
<400> 82
Figure 109128448-A0101-12-0168-143
Figure 109128448-A0101-12-0169-144
Figure 109128448-A0101-12-0170-145
Figure 109128448-A0101-12-0171-146
<210> 83
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001269的重鏈可變區
<400> 83
Figure 109128448-A0101-12-0171-147
<210> 84
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001269的重鏈
<400> 84
Figure 109128448-A0101-12-0172-148
Figure 109128448-A0101-12-0173-149
Figure 109128448-A0101-12-0174-150
<210> 85
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001270,PR001271的重鏈可變區
<400> 85
Figure 109128448-A0101-12-0174-151
<210> 86
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001270,PR001271的重鏈
<400> 86
Figure 109128448-A0101-12-0175-152
Figure 109128448-A0101-12-0176-153
Figure 109128448-A0101-12-0177-154
<210> 87
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的重鏈可變區
<400> 87
Figure 109128448-A0101-12-0177-155
<210> 88
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的重鏈
<400> 88
Figure 109128448-A0101-12-0178-156
Figure 109128448-A0101-12-0179-157
Figure 109128448-A0101-12-0180-158
<210> 89
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001266,PR001272的重鏈可變區
<400> 89
Figure 109128448-A0101-12-0180-159
<210> 90
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001266,PR001272的重鏈
<400> 90
Figure 109128448-A0101-12-0181-160
Figure 109128448-A0101-12-0182-161
Figure 109128448-A0101-12-0183-162
<210> 91
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001267的重鏈可變區
<400> 91
Figure 109128448-A0101-12-0183-163
<210> 92
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001267的重鏈
<400> 92
Figure 109128448-A0101-12-0184-164
Figure 109128448-A0101-12-0185-165
Figure 109128448-A0101-12-0186-166
<210> 93
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001276的重鏈可變區
<400> 93
Figure 109128448-A0101-12-0186-167
<210> 94
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001276的重鏈
<400> 94
Figure 109128448-A0101-12-0187-168
Figure 109128448-A0101-12-0188-169
Figure 109128448-A0101-12-0189-170
<210> 95
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804的重鏈可變區
<400> 95
Figure 109128448-A0101-12-0189-171
Figure 109128448-A0101-12-0190-172
<210> 96
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804的重鏈
<400> 96
Figure 109128448-A0101-12-0190-173
Figure 109128448-A0101-12-0191-174
Figure 109128448-A0101-12-0192-175
<210> 97
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001275的重鏈可變區
<400> 97
Figure 109128448-A0101-12-0192-176
Figure 109128448-A0101-12-0193-177
<210> 98
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001275的重鏈
<400> 98
Figure 109128448-A0101-12-0193-178
Figure 109128448-A0101-12-0194-179
Figure 109128448-A0101-12-0195-180
<210> 99
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的重鏈可變區
<400> 99
Figure 109128448-A0101-12-0195-181
Figure 109128448-A0101-12-0196-182
<210> 100
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的重鏈
<400> 100
Figure 109128448-A0101-12-0196-183
Figure 109128448-A0101-12-0197-184
Figure 109128448-A0101-12-0198-185
<210> 101
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811的重鏈可變區
<400> 101
Figure 109128448-A0101-12-0198-186
Figure 109128448-A0101-12-0199-187
<210> 102
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811的重鏈
<400> 102
Figure 109128448-A0101-12-0199-188
Figure 109128448-A0101-12-0200-189
Figure 109128448-A0101-12-0201-190
<210> 103
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001280的重鏈可變區
<400> 103
Figure 109128448-A0101-12-0201-191
Figure 109128448-A0101-12-0202-192
<210> 104
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001280的重鏈
<400> 104
Figure 109128448-A0101-12-0202-193
Figure 109128448-A0101-12-0203-194
Figure 109128448-A0101-12-0204-195
<210> 105
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001281的重鏈可變區
<400> 105
Figure 109128448-A0101-12-0204-196
Figure 109128448-A0101-12-0205-198
<210> 106
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001281的重鏈
<400> 106
Figure 109128448-A0101-12-0205-199
Figure 109128448-A0101-12-0206-200
Figure 109128448-A0101-12-0207-201
<210> 107
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001264的重鏈可變區
<400> 107
Figure 109128448-A0101-12-0207-202
Figure 109128448-A0101-12-0208-203
<210> 108
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001264的重鏈
<400> 108
Figure 109128448-A0101-12-0208-204
Figure 109128448-A0101-12-0209-205
Figure 109128448-A0101-12-0210-206
<210> 109
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796的重鏈可變區
<400> 109
Figure 109128448-A0101-12-0210-207
Figure 109128448-A0101-12-0211-208
<210> 110
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796的重鏈
<400> 110
Figure 109128448-A0101-12-0211-209
Figure 109128448-A0101-12-0212-210
Figure 109128448-A0101-12-0213-211
<210> 111
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001265的重鏈可變區
<400> 111
Figure 109128448-A0101-12-0213-212
Figure 109128448-A0101-12-0214-213
<210> 112
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001265的重鏈
<400> 112
Figure 109128448-A0101-12-0214-214
Figure 109128448-A0101-12-0215-215
Figure 109128448-A0101-12-0216-216
<210> 113
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802-806,PR000811,PR001266-1281的LCDR1(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 113
Figure 109128448-A0101-12-0216-217
<210> 114
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807,PR000808的LCDR1(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 114
Figure 109128448-A0101-12-0217-218
<210> 115
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的LCDR1(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 115
Figure 109128448-A0101-12-0217-219
<210> 116
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000804,PR001266-1269,PR001275-1276的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 116
Figure 109128448-A0101-12-0217-220
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 117
Figure 109128448-A0101-12-0217-221
<210> 118
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001279的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 118
Figure 109128448-A0101-12-0218-222
<210> 119
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001277的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 119
Figure 109128448-A0101-12-0218-223
<210> 120
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001271,PR001278的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 120
Figure 109128448-A0101-12-0218-224
<210> 121
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001270,PR001272的LCDR3(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 121
Figure 109128448-A0101-12-0218-225
<210> 122
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的LCDR2(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 122
Figure 109128448-A0101-12-0219-226
<210> 123
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804,PR001275,PR001276的HCDR1(Kabat)
<400> 123
Figure 109128448-A0101-12-0219-227
<210> 124
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274的HCDR1(Kabat)
<400> 124
Figure 109128448-A0101-12-0219-228
<210> 125
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的HCDR1(Kabat)
<400> 125
Figure 109128448-A0101-12-0219-229
<210> 126
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的LCDR2(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 126
Figure 109128448-A0101-12-0220-230
<210> 127
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的LCDR2(Kabat,Chothia,Combined)
<400> 127
Figure 109128448-A0101-12-0220-231
<210> 128
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001266,PR001268,PR001272的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 128
Figure 109128448-A0101-12-0220-232
<210> 129
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001267,PR001269,PR001270,PR001271的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 129
Figure 109128448-A0101-12-0221-233
<210> 130
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR000811,PR001273,PR001274,PR001280,PR001281的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 130
Figure 109128448-A0101-12-0221-234
<210> 131
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 131
Figure 109128448-A0101-12-0221-235
<210> 132
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR0007963,PR000805,PR000806,PR001264,PR001265,PR001277,PR001278,PR001279的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 132
Figure 109128448-A0101-12-0221-236
<210> 133
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001276的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 133
Figure 109128448-A0101-12-0222-237
<210> 134
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000804的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 134
Figure 109128448-A0101-12-0222-238
<210> 135
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001275的HCDR2(Kabat,Combined)
<400> 135
Figure 109128448-A0101-12-0222-239
<210> 136
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001266,PR001267}PR001268,PR001269,PR001270和PR001271的HCDR2(Chothia)
<400> 136
Figure 109128448-A0101-12-0222-240
<210> 137
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803}PR000811}PR001273}PR001274和PR001281的HCDR2(Chothia)
<400> 137
Figure 109128448-A0101-12-0223-241
<210> 138
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796}PR000804-808}1264}1265}1275-1279的HCDR2(Chothia)
<400> 138
Figure 109128448-A0101-12-0223-242
<210> 139
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR1的通式
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> X=W,Y或H
<220>
<221> X
<222> (11)..(11)
<223> X=A或N
<400> 139
Figure 109128448-A0101-12-0223-243
<210> 140
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR2的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=K,R,V或G
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X2=A或S
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X3=S,T,R或I
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X4=L或R
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=E,D,Q或A
<220>
<221> X
<222> (7)..(7)
<223> X=S或T
<400> 140
Figure 109128448-A0101-12-0224-244
<210> 141
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> LCDR3的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=Q或R
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=Q,L或H
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Y或-
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=N,I,Q或-
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=S,Y,T或N
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=Y,W,N或Q
<220>
<221> X
<222> (7)..(7)
<223> X=S,T或-
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> X=T或-
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> X=P或-
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> X=Y,R或L
<400> 141
Figure 109128448-A0101-12-0225-245
Figure 109128448-A0101-12-0226-246
<210> 142
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR1的通式
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=I,L或V
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=S,N,D或Q
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=N,S或
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=N,S或T
<400> 142
Figure 109128448-A0101-12-0226-247
<210> 143
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR2的通式
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=T,N或S
<400> 143
Figure 109128448-A0101-12-0227-248
<210> 144
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> HCDR3的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=K或G
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=R或K
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=G,A,T,W或L
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=V,M,G,I或A
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=L,Y,H,F或-
<220>
<221> X
<222> (6)..(6)
<223> X=D或S
<400> 144
Figure 109128448-A0101-12-0227-249
<210> 145
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> H-FR1的通式
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=K或Q
<220>
<221> X
<222> (23)..(23)
<223> X=T或S
<400> 145
Figure 109128448-A0101-12-0228-250
<210> 146
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> H-FR2的通式
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=S或T
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=I或F
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> X=P或A
<220>
<221> X
<222> (11)..(11)
<223> X=K或R
<220>
<221> X
<222> (18)..(18)
<223> X=Y或N
<400> 146
Figure 109128448-A0101-12-0229-251
<210> 147
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> H-FR3的通式
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=N或D
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=N或Q
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> X=K或T
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=I或M
<220>
<221> X
<222> (15)..(15)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (17)..(17)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (25)..(25)
<223> X=K或N
<220>
<221> X
<222> (27)..(27)
<223> X=S,T或N
<220>
<221> X
<222> (30)..(30)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (31)..(31)
<223> X=A或S
<220>
<221> X
<222> (32)..(32)
<223> X=A或G
<220>
<221> X
<222> (36)..(36)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (40)..(40)
<223> X=A或G
<400> 147
Figure 109128448-A0101-12-0231-252
<210> 148
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> H-FR4的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=W或S
<220>
<221> X
<222> (5)..(5)
<223> X=T或I
<400> 148
Figure 109128448-A0101-12-0231-253
<210> 149
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-FR1的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Q或V
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> X=S或A
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=A或V
<220>
<221> X
<222> (15)..(15)
<223> X=V或P
<220>
<221> X
<222> (17)..(17)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (19)..(19)
<223> X=V或A
<220>
<221> X
<222> (21)..(21)
<223> X=I或L
<220>
<221> X
<222> (22)..(22)
<223> X=T或S
<400> 149
Figure 109128448-A0101-12-0232-254
<210> 150
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-FR2的通式
<220>
<221> X
<222> (8)..(8)
<223> X=K,N或Q
<220>
<221> X
<222> (11)..(11)
<223> X=K或R
<400> 150
Figure 109128448-A0101-12-0233-255
<210> 151
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-FR3的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (2)..(2)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (4)..(4)
<223> X=S或V
<220>
<221> X
<222> (14)..(14)
<223> X=E或D
<220>
<221> X
<222> (16)..(16)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (19)..(19)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (24)..(24)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (25)..(25)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (29)..(29)
<223> X=T或I
<400> 151
Figure 109128448-A0101-12-0234-256
<210> 152
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> L-FR4的通式
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Q或G
<220>
<221> X
<222> (7)..(7)
<223> X=L或V
<400> 152
Figure 109128448-A0101-12-0235-257
<210> 153
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 輕鏈可變區的通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Q或V
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> X=S或A
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=A或V
<220>
<221> X
<222> (15)..(15)
<223> X=V或P
<220>
<221> X
<222> (17)..(17)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (19)..(19)
<223> X=V或A
<220>
<221> X
<222> (21)..(21)
<223> X=I或L
<220>
<221> X
<222> (22)..(22)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (29)..(29)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (32)..(32)
<223> X=W,Y或H
<220>
<221> X
<222> (34)..(34)
<223> X=A或N；
<220>
<221> X
<222> (42)..(42)
<223> X=K,N或Q
<220>
<221> X
<222> (45)..(45)
<223> X=K或R
<220>
<221> X
<222> (50)..(50)
<223> X=K,R,V或G
<220>
<221> X
<222> (51)..(51)
<223> X=A或S
<220>
<221> X
<222> (53)..(53)
<223> X=S,T,R或I
<220>
<221> X
<222> (54)..(54)
<223> X=L或R
<220>
<221> X
<222> (55)..(55)
<223> X=E,D,Q或A
<220>
<221> X
<222> (56)..(56)
<223> X21=S或T
<220>
<221> X
<222> (57)..(57)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (58)..(58)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (60)..(60)
<223> X=S或V
<220>
<221> X
<222> (70)..(70)
<223> X=E或D
<220>
<221> X
<222> (72)..(72)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (75)..(75)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (80)..(80)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (81)..(81)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (85)..(85)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (89)..(89)
<223> X=Q或R
<220>
<221> X
<222> (90)..(90)
<223> X=Q,L或H
<220>
<221> X
<222> (91)..(91)
<223> X=Y或-
<220>
<221> X
<222> (92)..(92)
<223> X=N,I,Q或-
<220>
<221> X
<222> (93)..(93)
<223> X=S,T或N
<220>
<221> X
<222> (94)..(94)
<223> X=Y,W,N或Q
<220>
<221> X
<222> (95)..(95)
<223> X=S,T或-
<220>
<221> X
<222> (96)..(96)
<223> X=T或-
<220>
<221> X
<222> (97)..(97)
<223> X=P或-
<220>
<221> X
<222> (98)..(98)
<223> X=Y,R或L
<220>
<221> X
<222> (102)..(102)
<223> X=Q或G
<220>
<221> X
<222> (106)..(106)
<223> X=L或V
<400> 153
Figure 109128448-A0101-12-0239-258
<210> 154
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重鏈可變區的通式
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=K或Q
<220>
<221> X
<222> (23)..(23)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (27)..(27)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (29)..(29)
<223> X=I,L或V
<220>
<221> X
<222> (30)..(30)
<223> X=S,N,D或Q
<220>
<221> X
<222> (31)..(31)
<223> X=N,S或T
<220>
<221> X
<222> (35)..(35)
<223> X=S或T
<220>
<221> X
<222> (37)..(37)
<223> X=I或F
<220>
<221> X
<222> (40)..(40)
<223> X=P或A
<220>
<221> X
<222> (43)..(43)
<223> X=K或R
<220>
<221> X
<222> (50)..(50)
<223> X=Y或N
<220>
<221> X
<222> (56)..(56)
<223> X=T,N或S
<220>
<221> X
<222> (58)..(58)
<223> X=N或D
<220>
<221> X
<222> (60)..(60)
<223> X=N或Q
<220>
<221> X
<222> (61)..(61)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (64)..(64)
<223> X=K或T
<220>
<221> X
<222> (68)..(68)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (69)..(69)
<223> X=I或M
<220>
<221> X
<222> (71)..(71)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (73)..(73)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (81)..(81)
<223> X=K或N
<220>
<221> X
<222> (83)..(83)
<223> X=S,T或N
<220>
<221> X
<222> (86)..(86)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (87)..(87)
<223> X=A或S
<220>
<221> X
<222> (88)..(88)
<223> X=A或G
<220>
<221> X
<222> (92)..(92)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (96)..(96)
<223> X=A或G
<220>
<221> X
<222> (98)..(98)
<223> X=K或G
<220>
<221> X
<222> (99)..(99)
<223> X=R或K
<220>
<221> X
<222> (100)..(100)
<223> X=G,A,T,W或L
<220>
<221> X
<222> (101)..(101)
<223> X=V,M,G,I或A
<220>
<221> X
<222> (102)..(102)
<223> X=L,Y,H,F或-
<220>
<221> X
<222> (103)..(103)
<223> X=D或S
<220>
<221> X
<222> (105)..(105)
<223> X=W或S
<220>
<221> X
<222> (109)..(109)
<223> X=T或I
<400> 154
Figure 109128448-A0101-12-0243-259
<210> 155
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796}PR001264}1265的L-FR3(Combined)
<400> 155
Figure 109128448-A0101-12-0244-260
<210> 156
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807}PR000808的L-FR1
<400> 156
Figure 109128448-A0101-12-0244-261
<210> 157
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802-806,811和1266-1281的L-FR1(Combined)
<400> 157
Figure 109128448-A0101-12-0244-262
<210> 158
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,1264和1265的L-FR1
<400> 158
Figure 109128448-A0101-12-0245-263
<210> 159
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,1264和1265的L-FR4
<400> 159
Figure 109128448-A0101-12-0245-264
<210> 160
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802-806,808,811和1266-1281的L-FR4
<400> 160
Figure 109128448-A0101-12-0245-265
<210> 161
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的L-FR4(Combined)
<400> 161
Figure 109128448-A0101-12-0245-346
<210> 162
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811,1280和1281的L-FR3
<400> 162
Figure 109128448-A0101-12-0246-267
<210> 163
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的L-FR3
<400> 163
Figure 109128448-A0101-12-0246-268
<210> 164
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的L-FR3(Combined)
<400> 164
Figure 109128448-A0101-12-0246-269
<210> 165
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR001277,PR001278,PR001279的L-FR1
<400> 165
Figure 109128448-A0101-12-0247-270
<210> 166
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000803,PR000804,PR000806,PR001266,PR001267,PR001268,PR001269,PR001270,PR001271,PR001272,PR001275,PR001276,PR001273,PR001274的L-FR3
<400> 166
Figure 109128448-A0101-12-0247-271
<210> 167
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的H-FR1
<400> 167
Figure 109128448-A0101-12-0247-272
<210> 168
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR001277,PR001278,PR001279的H-FR1
<400> 168
Figure 109128448-A0101-12-0248-273
<210> 169
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR000803,PR000804,PR000806,PR000808,PR000811,PR001266-1276,PR001280,PR001281的H-FR1
<400> 169
Figure 109128448-A0101-12-0248-274
<210> 170
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的H-FR1
<400> 170
Figure 109128448-A0101-12-0248-275
<210> 171
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的H-FR3
<400> 171
Figure 109128448-A0101-12-0249-276
<210> 172
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的H-FR3
<400> 172
Figure 109128448-A0101-12-0249-277
<210> 173
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806 H-FR3
<400> 173
Figure 109128448-A0101-12-0250-278
<210> 174
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001275 H-FR3
<400> 174
Figure 109128448-A0101-12-0250-279
<210> 175
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001276 H-FR3
<400> 175
Figure 109128448-A0101-12-0250-280
Figure 109128448-A0101-12-0251-281
<210> 176
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265 H-FR3
<400> 176
Figure 109128448-A0101-12-0251-282
<210> 177
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000805,PR001266,PR001268,PR001272,PR001277-1279的H-FR3
<400> 177
Figure 109128448-A0101-12-0251-283
<210> 178
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR001269,PR001267 H-FR3
<400> 178
Figure 109128448-A0101-12-0252-284
<210> 179
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR001273,PR001274 H-FR3
<400> 179
Figure 109128448-A0101-12-0252-285
<210> 180
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808 H-FR3
<400> 180
Figure 109128448-A0101-12-0252-286
Figure 109128448-A0101-12-0253-287
<210> 181
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802,PR001270-1271的H-FR3
<400> 181
Figure 109128448-A0101-12-0253-288
<210> 182
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811,PR001280-1281的H-FR3
<400> 182
Figure 109128448-A0101-12-0253-289
<210> 183
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000811,PR001280-1281的H-FR4
<400> 183
Figure 109128448-A0101-12-0254-290
<210> 184
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000808的H-FR2
<400> 184
Figure 109128448-A0101-12-0254-291
<210> 185
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000803,PR000804,PR000805,PR001275,PR001276,PR001273,PR001274,PR001277,PR001278,PR001279的H-FR4
<400> 185
Figure 109128448-A0101-12-0254-292
<210> 186
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR000802,PR000806-808,PR0001264-1272的H-FR4
<400> 186
Figure 109128448-A0101-12-0254-293
<210> 187
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的H-FR2
<400> 187
Figure 109128448-A0101-12-0255-294
<210> 188
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802-805,PR000811,PR001266-1281的H-FR2
<400> 188
Figure 109128448-A0101-12-0255-295
<210> 189
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的H-FR2
<400> 189
Figure 109128448-A0101-12-0255-296
<210> 190
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的H-FR2
<400> 190
Figure 109128448-A0101-12-0256-297
<210> 191
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000802-805,PR000808,PR000811,PR001266-1281的L-FR2
<400> 191
Figure 109128448-A0101-12-0256-298
<210> 192
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000807的L-FR2
<400> 192
Figure 109128448-A0101-12-0256-299
<210> 193
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000806的L-FR2
<400> 193
Figure 109128448-A0101-12-0257-300
<210> 194
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> PR000796,PR001264,PR001265的L-FR2
<400> 194
Figure 109128448-A0101-12-0257-301
<210> 195
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> IgG4恆定區
<400> 195
Figure 109128448-A0101-12-0257-302
Figure 109128448-A0101-12-0258-303
Figure 109128448-A0101-12-0259-304
<210> 196
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人Ig κ恆定區
<400> 196
Figure 109128448-A0101-12-0259-305
<210> 197
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 輕鏈通式
<220>
<221> X
<222> (1)..(1)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (3)..(3)
<223> X=Q或V
<220>
<221> X
<222> (9)..(9)
<223> X=S或A
<220>
<221> X
<222> (10)..(10)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=A或V
<220>
<221> X
<222> (15)..(15)
<223> X=V或P
<220>
<221> X
<222> (17)..(17)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (19)..(19)
<223> X=V或A
<220>
<221> X
<222> (21)..(21)
<223> X=I或L
<220>
<221> X
<222> (22)..(22)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (29)..(29)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (32)..(32)
<223> X=W,Y或H
<220>
<221> X
<222> (34)..(34)
<223> X=A或N；
<220>
<221> X
<222> (42)..(42)
<223> X=K,N或Q
<220>
<221> X
<222> (45)..(45)
<223> X=K或R
<220>
<221> X
<222> (50)..(50)
<223> X=K,R,V或G
<220>
<221> X
<222> (51)..(51)
<223> X=A或S
<220>
<221> X
<222> (53)..(53)
<223> X=S,T,R或I
<220>
<221> X
<222> (54)..(54)
<223> X=L或R
<220>
<221> X
<222> (55)..(55)
<223> X=E,D,Q或A
<220>
<221> X
<222> (56)..(56)
<223> X21=S或T
<220>
<221> X
<222> (57)..(57)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (58)..(58)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (60)..(60)
<223> X=S或V
<220>
<221> X
<222> (70)..(70)
<223> X=E或D
<220>
<221> X
<222> (72)..(72)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (75)..(75)
<223> X=I或V
<220>
<221> X
<222> (80)..(80)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (81)..(81)
<223> X=D或E
<220>
<221> X
<222> (85)..(85)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (89)..(89)
<223> X=Q或R
<220>
<221> X
<222> (90)..(90)
<223> X=Q,L或H
<220>
<221> X
<222> (91)..(91)
<223> X=Y或-
<220>
<221> X
<222> (92)..(92)
<223> X=N,I,Q或-
<220>
<221> X
<222> (93)..(93)
<223> X=S,T或N
<220>
<221> X
<222> (94)..(94)
<223> X=Y,W,N或Q
<220>
<221> X
<222> (95)..(95)
<223> X=S,T或-
<220>
<221> X
<222> (96)..(96)
<223> X=T或-
<220>
<221> X
<222> (97)..(97)
<223> X=P或-
<220>
<221> X
<222> (98)..(98)
<223> X=Y,R或L
<220>
<221> X
<222> (102)..(102)
<223> X=Q或G
<220>
<221> X
<222> (106)..(106)
<223> X=L或V
<400> 197
Figure 109128448-A0101-12-0263-306
Figure 109128448-A0101-12-0264-307
<210> 198
<211> 442
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 重鏈通式
<220>
<221> X
<222> (12)..(12)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (13)..(13)
<223> X=K或Q
<220>
<221> X
<222> (23)..(23)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (27)..(27)
<223> X=G或D
<220>
<221> X
<222> (29)..(29)
<223> X=I,L或V
<220>
<221> X
<222> (30)..(30)
<223> X=S,N,D或Q
<220>
<221> X
<222> (31)..(31)
<223> X=N,S或T
<220>
<221> X
<222> (35)..(35)
<223> X=S或T
<220>
<221> X
<222> (37)..(37)
<223> X=I或F
<220>
<221> X
<222> (40)..(40)
<223> X=P或A
<220>
<221> X
<222> (43)..(43)
<223> X=K或R
<220>
<221> X
<222> (50)..(50)
<223> X=Y或N
<220>
<221> X
<222> (56)..(56)
<223> X=T,N或S
<220>
<221> X
<222> (58)..(58)
<223> X=N或D
<220>
<221> X
<222> (60)..(60)
<223> X=N或Q
<220>
<221> X
<222> (61)..(61)
<223> X=P或S
<220>
<221> X
<222> (64)..(64)
<223> X=K或T
<220>
<221> X
<222> (68)..(68)
<223> X=T或S
<220>
<221> X
<222> (69)..(69)
<223> X=I或M
<220>
<221> X
<222> (71)..(71)
<223> X=V或I
<220>
<221> X
<222> (73)..(73)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (81)..(81)
<223> X=K或N
<220>
<221> X
<222> (83)..(83)
<223> X=S,T或N
<220>
<221> X
<222> (86)..(86)
<223> X=T或I
<220>
<221> X
<222> (87)..(87)
<223> X=A或S
<220>
<221> X
<222> (88)..(88)
<223> X=A或G
<220>
<221> X
<222> (92)..(92)
<223> X=V或M
<220>
<221> X
<222> (96)..(96)
<223> X=A或G
<220>
<221> X
<222> (98)..(98)
<223> X=K或G
<220>
<221> X
<222> (99)..(99)
<223> X=R或K
<220>
<221> X
<222> (100)..(100)
<223> X=G,A,T,W或L
<220>
<221> X
<222> (101)..(101)
<223> X=V,M,G,I或A
<220>
<221> X
<222> (102)..(102)
<223> X=L,Y,H,F或-
<220>
<221> X
<222> (103)..(103)
<223> X=D或S
<220>
<221> X
<222> (105)..(105)
<223> X=W或S
<220>
<221> X
<222> (109)..(109)
<223> X=T或I
<400> 198
Figure 109128448-A0101-12-0268-308
Figure 109128448-A0101-12-0269-309
Figure 109128448-A0101-12-0270-310

Claims (16)

  1. 一種分離的抗原結合蛋白，其包含抗體重鏈可變區VH中的至少一個CDR，所述VH包含SEQ ID NO：154所示的胺基酸序列，且其包含抗體輕鏈可變區中的至少一個CDR，其中所述VL包含SEQ ID NO：153所示的胺基酸序列。
  2. 如請求項1所述的分離的抗原結合蛋白，其包括抗體或其抗原結合片段。
  3. 如請求項1或2所述的分離的抗原結合蛋白，其中所述抗原結合片段包括Fab，Fab’，Fv片段，F(ab’)2，scFv，di-scFv和/或dAb。
  4. 如請求項2或3所述的分離的抗原結合蛋白，其中該抗體選自下組：單株抗體、嵌合抗體、人源化抗體和全人源抗體。
  5. 如請求項1至4中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VH包含HCDR1，HCDR2和HCDR3，其中該HCDR3包含SEQ ID NO：144所示的胺基酸序列，其中該HCDR3較佳包含SEQ ID NO：55和58-63中任一項中所示的胺基酸序列。
  6. 如請求項5所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR2包含SEQ ID NO：143所示的胺基酸序列，其中該HCDR2較佳包含SEQ ID NO：136-138中任一項中所示的胺基酸序列。
  7. 如請求項5或6所述的分離的抗原結合蛋白，其中該HCDR1包含SEQ ID NO：142所示的胺基酸序列，其中該HCDR1較佳包含SEQ ID NO：32、34、36、38、40、42、45、47、49、51和53中任一項中所示的胺基酸序列。
  8. 如請求項1至7中任一項所述的分離的抗原結合蛋白，其中該VL包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，其中該LCDR3包含SEQ ID NO：141所示的胺基酸序列，其中該LCDR3較佳包含SEQ ID NO：67-74、116-121中任一項中所示的胺基酸序列。
  9. 如請求項8所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR2包含SEQ ID NO：140所示的胺基酸序列，其中該LCDR2較佳包含SEQ ID NO：31、56、57、122、126和127中任一項中所示的胺基酸序列。
  10. 如請求項8或9所述的分離的抗原結合蛋白，其中該LCDR1包含SEQ ID NO：139所示的胺基酸序列，其中該LCDR1較佳包含SEQ ID NO：113、114和115中任一項中所示的胺基酸序列。
  11. 一種分離的核酸分子，其編碼請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
  12. 一種載體，其包含如請求項11所述的核酸分子。
  13. 一種細胞，其包含如請求項11所述的核酸分子或如請求項12項所述的載體。
  14. 一種製備請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白的方法，該方法包括在使得請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白表達的條件下，培養如請求項13所述的細胞。
  15. 一種醫藥組成物，其包含請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白、請求項11所述的核酸分子、請求項12所述的載體和/或請求項13所述的細胞，以及視需要地藥學上可接受的載體。
  16. 一種抑制CD47與SIRPα結合的方法，該方法包括施用請求項1至10中任一項所述的分離的抗原結合蛋白。
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