TW202031280A - 植物發酵物及其製備方法與用於肝臟保健的用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種植物發酵物及其製備方法與用於肝臟保健的用途，本發明之植物發酵物能有效提升肝臟細胞抗氧化活性，以預防受氧化壓力的傷害，同時能有效提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、及MRPS5基因之表現量，以提升肝臟細胞的抗老化活性；其中，該植物發酵物係將由一葛根萃取物及一枳椇子萃取物所組成之混合物以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌依序進行三段式發酵而獲得。
Description
本發明係關於一種植物發酵物及其製備方法與用於製備肝臟保健之組合物的用途，尤其是一種植物發酵物用於提升肝臟細胞抗氧化活性、及提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、及MRPS5基因之表現量；其中，該植物發酵物係將由一葛根萃取物及一枳椇子萃取物所組成之混合物以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌依序進行三段式發酵而獲得。
在生物學及醫學上，老化(aging)是指一個生物體之生理狀態隨時間而惡化的現象，老化會造成身體各部分組織或器官機能衰退或功能減弱，使得生物體的健康功能變差，最後導致生物體死亡，現代人生活壓力大，長期壓力的累積會加速身體機能老化，也衍生出許多慢性疾病。
另外，隨著保健意識的抬頭及醫療技術的進步，人均壽命增長，但老化所造成的機能退化依然伴隨年齡的增長而加劇，因此除了在疾病的治療及預防外，老化的預防也是高齡社會的重要課題之一。
雖然目前已研究出許多與老化相關的基因以及相關的機制，但是目前仍然沒有能有效應用於延緩老化的藥物或方法，臨床上只能建議從飲食上多攝取具抗氧化活性物質的食物、及減少飲酒等不良飲食習慣，並維持適當運動與保持正常作息及心情愉悅。
肝臟是人體內最大的器官，兼具消化、解毒等多種生理功能，因此肝臟若老化會使全身的生理機能出現問題。然而，因為肝臟細胞的再生能力很強，且肝臟又為沉默的器官，很難自行察覺肝臟的不適或老化。
綜上所述，為了能方便又有效達到延緩老化的功效，特別係針對維持人體正常機能非常重要的肝臟於年輕有活力的狀態，開發一種能有效提升肝臟細胞中抗老化基因表現量、以及提升肝臟細胞抗氧化能力之綜合性肝臟保健的組合物，著實有其必要性。
緣此，本發明之一目的在提供一種植物發酵物，其中該植物發酵物係由一葛根及一枳椇子的混合物經由一溶劑萃取所得之萃取物，再經由一酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、一乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)、及一醋酸桿菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵而獲得。
本發明之又一目的在提供一種如前所述之植物發酵物用於製備一肝臟保健之組合物的用途；其中該植物發酵物之有效濃度為至少0.5%(v/v)。
本發明之另一目的在提供一種植物發酵物之製造方法，係包含：將一葛根萃取物、及一枳椇子萃取物所組成之混合物經由一酵母菌、一乳酸桿菌、及一醋酸桿菌依序進行三階段發酵而獲得。
在本發明之一實施例中，該葛根及該枳椇子的混合物係以水為溶劑在50-100℃下萃取0.5-3小時所獲得；且該葛根、該枳椇子、及水係以1-3：1：25-35(w/w)之比例混合。
在本發明之又一實施例中，該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該乳酸桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)；且該酵母菌係為BCRC20271之菌株；該乳酸桿菌係為BCRC910805之菌株；該醋酸桿菌係為BCRC11688之菌株。
在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係提升一肝臟細胞之抗氧化活性。
在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係提升一肝臟細胞之抗老化活性；且該植物發酵物係提升該肝臟細胞之粒線體活性、清除錯誤摺疊蛋白質之能力、及/或提升細胞中NAD+的濃度。
在本發明之又一實施例中，該植物發酵物係提升一肝臟細胞中含TCP1的折疊蛋白(Chaperonin containing TCP1,CCT)基因、PTEN促進激酶(PTEN-induced putative kinase 1,Pink1)基因、及粒線體核糖體蛋白5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因的表現量；且該CCT基因係為TCP1的折疊蛋白7(Chaperonin containing TCP1 7,CCT7)基因、TCP1的折疊蛋白8(Chaperonin containing TCP1 8,CCT8)基因、或其組合物。
在本發明之另一實施例中，該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該乳酸桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)；且該酵母菌、該乳酸桿菌、及該醋酸桿菌之發酵時間比為1-5：1-5：3-10。
本發明將葛根及枳椇子混合物之萃取物以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌進行三段式發酵所得之植物發酵物，能直接且有效提升肝臟細胞之抗氧化活性，能提升肝臟細胞清除活性氧化物的能力以預防受氧化壓力的傷害；本發明之植物發酵物亦能有效提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、及MRPS5基因之表現量，以提升肝臟細胞之粒線體活性、清除錯誤摺疊蛋白質之能力、及提升細胞中NAD+的濃度，而能夠提升肝臟細胞的抗老化活性，使肝臟細胞的生理狀況更為年輕且延長壽命。中醫五行經絡是氣血運行的通道，如經絡通則百病消，而本發明之植物發酵物能夠清除自由基、排毒，達到提升精氣神的功效，又能提升回春相關基因的表現量，而能提升肝臟抵禦力及回春的保健功效，以調理肝臟經絡。因此，本發明之植物發酵物可用於製備肝
臟保健之組合物的用途，且該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服、塗抹等方式給予一個體。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1係為本發明之一實施例的植物發酵物降低含活性氧化物之肝臟細胞比例的長條圖。***p值<0.001。
圖2係為本發明之一實施例的植物發酵物提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因之表現量的長條圖。**p值<0.01。
圖3係為本發明之一實施例的植物發酵物提升肝臟細胞中MRPS5基因之表現量的長條圖。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個此之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。
葛根為葛藤(Pueraria lobata)之乾燥根，葛藤為豆科(Fabaceae)葛藤屬(Pueraria)多年生落葉性纏繞性大型藤本植物，又稱乾葛、葛麻藤、山肉豆、野葛、雞齊、黃斤等名。葛藤的根為塊根且外型粗厚，長時可達1公尺，厚則可達15公分，可供食用或藥用。
枳椇子(Hovenia dulcis Thunb.)為鼠李科(Rhamnaceae)枳椇屬(Hovenia)落葉性喬木植物，又稱拐棗、雞距、樹密、龍爪、金鉤梨、雞爪子、蠻子梨、甜半夜、杞久仔等名。原產於中國中南部、西南部及日本，台灣則於1960年代引進栽植於溪頭及瑞里等地。枳椇子的果梗具甜味，可供食用，俗稱拐棗或蠻字梨；其葉及種子則可供藥用，具有止渴、解酒、止吐之功效；其根皮或莖皮則具有活血舒筋之功效；其果實則能健胃、補血。
如本文中所使用的，用語「植物發酵物」意為葛根及枳椇子與溶劑以1-5：1：25-50(w/w)比例經一特定時間與溫度萃取而得之萃取物，再以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌依序進行一三段式發酵而獲得，其中該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該乳酸桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)。
本文所述之「有效濃度」係表示能有效提升肝臟細胞抗氧化活性、及/或有效提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、MRPS5基因表現量所需本發明之植物發酵物的濃度。有效濃度依所作用的對象而可能不同，但可藉由例如劑量遞增試驗(dose escalation)以實驗決定其有效濃度。
依據本發明，有關微生物發酵反應的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。
依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種但不限於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液
(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。
依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。
依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。
依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。
本發明提供一種植物發酵物及其製備方法與其用於護肝保健的用途，本發明之植物發酵物是將葛根及枳椇子與溶劑以1-5：1：25-50(w/w)比例經一特定時間與溫度萃取而得之萃取物，再以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌依序進行一三段式發酵而獲得，其中該酵母菌為BCRC20271之菌株、該乳酸桿菌
為BCRC910805之菌株、該醋酸桿菌為BCRC11688之菌株。本發明之植物發酵物可有效提升肝臟細胞的抗氧化活性、提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、MRPS5基因之表現量。
同時，本發明用於護肝保健之組合物，亦可包含一有效量之植物發酵物及一醫藥上可接受之載體，該組合物係一醫藥品、或一食品。
以下將詳細說明本發明植物發酵物之詳細製備方法、該植物發酵物提升肝臟細胞抗氧化活性之功效的測試、以及該植物發酵物提升肝臟細胞中抗老化基因表現量之功效的測試，以證實本發明之植物發酵物可有效提升肝臟細胞的抗氧化活性、提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、MRPS5基因之表現量。
在本發明一實施例中，將葛根的根及枳椇子的果實混合後，與水以1-5：1：25-50之比例均勻混合，並於50-100℃下同時滅菌萃取0.5-3小時後，將該萃取溶液冷卻至室溫供後續三段式發酵使用，以下列三種菌依序進行發酵：酵母菌、乳酸桿菌、醋酸桿菌，此三種菌之發酵順序無法前後對調，且其發酵時間比為1-5：1-5：3-10。在本發明一較佳實施例中，首先於該萃取溶液中植入0.01-0.5%(w/w)之酵母菌(Saccharomyces cerevisiae，購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC20271)，於25-35℃下進行前發酵1-5天，實際時間視發酵狀態而異。接著直接植入0.01-0.25%(w/w)之乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum TCI028，購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC910805)，於25-35℃下進行後發酵1-3天，實際時間視發酵狀態而異。接著再直接植入1-20%(w/w)之醋酸桿菌(Acetobacter aceti，購買於生物資源保存與研究中心，台灣，編號為BCRC11688)，於25-35℃下進行深層發酵5-15天，實際時間視發酵狀態而異，最後在不移除此三種菌之情況下，使用設定的糖度範圍2-4°、pH<4、酒精>5%等規格，如檢驗符合該規格，則判定發酵完成並得
到發酵液。接著，將該發酵液於45-70℃進行減壓濃縮，並以200-400mesh網篩過濾，再添加40-70%異麥芽寡糖調整規格後，於95-105℃下加熱90分鐘進行滅菌，即得到本發明之植物發酵物。
本發明之一實施例使用人類肝癌細胞(Human hpatocellular carcinoma,HepG2)以Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate(DCFH-DA，購自Sigma，美國，編號SI-D6883-50MG，5mg/mL保存於DMSO中)進行本發明之植物發酵物提升肝臟細胞抗氧化活性之功效測試。該HepG2細胞係購自美國典型培養物保藏中心(美國)，編號ATCC® HB-8065TM，且該細胞係培養於含有10%之胎牛血清(Fetal Bovine Serum，購自Gibco，美國)以及90%之DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium，購自Gibco，美國)之細胞培養液中，其中加入1%之青黴素-鏈黴素。
DCFH-DA是一種穩定的非極性化合物，可自由通透細胞膜，當DCFH-DA進入細胞後，會被細胞內的脂質酶水解，形成具有極性的DCFH，停留在細胞內無法出來，並會細胞內的活性氧化物(Reactive oxygen species,ROS)與DCFH產生氧化還原反應形成Dichloro-fluorescin(DCF)，以450-490nm波長激發後，會產生的綠色螢光可以被於510-550nm波長被偵測出，因此偵測經DCFH-DA處理之細胞的螢光強度，能反映細胞內活性氧物質之含量。
為進行本發明之發酵三階段步驟提高植物發酵物提升肝臟細胞抗氧化活性之功效測試，首先將1×105個HepG2細胞培養於含有2mL上述細胞培養液之6孔培養盤中，於37℃培養24小時後，在不干擾貼附之細胞的情況下更換新的細胞培養液，接著將細胞分成以下五組：(1)空白控制組、(2)正控制組、(3)加入1%(v/v)本發明之植物發酵物之實驗組、(4)加入1%(v/v)枳椇子水萃取物之比較組、及(5)加入1%(v/v)葛根水萃取物之比較組，各組分別於37℃下反
應1小時，接著於各組中分別加入5μg/mL之DCFH-DA於37℃作用15分鐘，以標記細胞中ROS，再將第(2)-(5)組以0.5mM之H2O2(購自Sigma，美國，原液濃度為35%)於37℃下處理細胞1小時，且未加入H2O2作用之組別為空白控制組，接著在不干擾貼附之細胞的情況下移除培養液，並以1mL之1倍磷酸鹽緩衝生理鹽水(1x phosphate buffered saline,1xPBS)清洗細胞兩次，再加入200μL胰蛋白酶在黑暗中反應5分鐘，使細胞由培養盤上脫落，加入適當的培養液終止反應，並將細胞連同培養液於黑暗中收集至15mL離心管，以300g離心5分鐘後移除上清液，再以1mL之1xPBS沖洗細胞一次後，於300g離心5分鐘後除上清液，接著在黑暗中以1mL之1xPBS重新懸浮細胞，並使用流式細胞儀檢(BD AccuriTM C6 Plus，購自美國)測細胞於激發波長450-490nm、放射波長510-550nm的螢光數值，計算含有螢光訊號之細胞數。再利用Excel軟體進行student t-test以決定相較於該第(2)組，該第(1)、(3)-(5)是否在統計上具有顯著差異(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。
本發明之植物發酵物提升肝臟細胞抗氧化活性的實驗結果如圖1所示。未經H2O2處理過之空白控制組中，僅有約0.67%之HepG2細胞含有活性氧化物；而僅經H2O2處理過之正控制組中，約有61.97%之HepG2細胞含有活性氧化物，此結果顯示經H2O2處理確實能使HepG2細胞產生活性氧化物。而經本發明之植物發酵物預處裡之實驗組中，僅有約11.87%之HepG2細胞含有活性氧化物，與正控制組相比可顯著的降低50.1%之HepG2細胞產生活性氧化物；而經葛根水萃取物或枳椇子水萃取物預處理之比較組，分別仍有約41.57%及28.43%之HepG2細胞含有活性氧化物，與正控制組相比僅分別可顯著的降低約20.4%及33.54%之HepG2細胞產生活性氧化物。此結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物三階段發酵步驟後，可更有效減少肝臟細胞受H2O2刺激所誘發產生之活性氧化物，能有效提升肝臟細胞之抗氧化活性，預防肝臟細胞受氧化壓力的傷害。
本發明之一實施例為進行本發明之發酵三階段步驟提高植物發酵物調控肝臟細胞中抗老化基因表現量之功效測試。首先，將1×105個HepG2細胞培養於含有2mL上述細胞培養液之6孔培養盤中，於37℃培養24-48小時，接著將細胞分成以下四組：(1)僅加入細胞培養液之控制組、(2)加入0.5%(v/v)本發明之植物發酵物之實驗組、(3)加入0.5%(v/v)枳椇子水萃取物之比較組、及(4)加入0.5%(v/v)葛根水萃取物之比較組，並將該些組別之細胞分別於37℃下作用24小時後，測試各組HepG2細胞中目標基因的表現量。首先，將HepG2細胞以細胞裂解液(RB buffer，購自Geanaid公司，臺灣，Cat No.RBD300)回收細胞後，使用RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司，臺灣，Cat No.RBD300)分別收集該四組細胞內之RNA，接著利用SuperScript® III反轉錄酶(購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051)以2000ng之萃取RNA為模板，並以表1之組合引子及反轉錄酶進行反轉錄作用，以產生該些基因之mRNA所相應之cDNA產物，接著利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司，美國)，以及KAPA SYBR FAST(購自Sigma公司，美國，編號38220000000)將該四組反轉錄後產物分別以表1之組合引子進行定量即時聚合酶連鎖反應(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)試驗，條件為95℃反應1秒，60℃反應20秒，總共40個循環。用以定量CCT2基因、CCT5基因、CCT6A基因、CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、Parkin1基因、Atg1基因、Atg8基因、SIRT1基因、FOXO3基因、PARP1基因、PARP2基因、NADSYN基因、MRPS5基因、UBL-5基因、SOD3基因、TERT基因、TERC基因、及RTEL1基因之mRNA的表現量，其中定量數值係取由閾值循環數(Ct)，而目標基因的mRNA相對量係推導自方程式2-△△Ct，其中△CT=CT比較組或實驗組目標基因/控制組目標基因-CTGAPDH(甘油醛-3-磷酸脫氫酶，Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)；△△CT=CT比較組或實驗組目標基因-CT控制組目標基因；各組中各基因的fold change則為2-△△Ct。接著，
再利用Excel軟體決定變異係數與是否在統計上具有顯著差異(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。
CCT基因為折疊蛋白(Chaperonin)的一種，主要功能為矯正錯誤摺疊的蛋白質，並將無法成功修復之蛋白質送進蛋白質水解酶複合體(Proteasome)中進行水解，先前研究已指若此蛋白質調控之重複使用系統發生故障，會導致錯誤摺疊的蛋白質會聚集在細胞中，並造成細胞功能衰退及加速細胞的老化與死亡，因此被認為與個體之老化調節相關。Pink1基因為一種位在粒線體的絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶(Serine/threonine protein kinase)，其功能為保護
線粒體在細胞壓力期間發生故障，已知該基因之突變與帕金森氏症有關，而先前研究更指出該基因的過量表現能夠增加小鼠的壽命，因此也被認為與個體之老化調節有關。Parkin基因為一種存在於泛素-蛋白酶體系(Ubiquitin-proteasome system)中之酵素，並作為蛋白質分解的調節劑，已知該基因之突變與帕金森氏症有關，且先前研究亦指出增加該基因的表現量能夠延緩細胞的老化作用，因此被認為與細胞的老化作用相關。Atg基因則為自噬作用相關基因，會參與細胞中廢物降解、及循環的自噬作用，先前研究指出該基因的過量表現，能夠延長小鼠的壽命，因此被認為與細胞的老化作用相關。端粒係為生物染色體末端的DNA重複序列，主要作用是保持染色體的完整性和控制細胞分裂週期，其中DNA每複製一次，端粒就會縮短一些，一旦端粒消耗殆盡，細胞則會走向凋亡，因此端粒的長度與細胞的年齡具相關，其中又已知TERT基因、TERC基因及RTEL1基因與調節端粒的長短相關。先前研究已指出和年老的小鼠相比，年輕的小鼠體內含有較多的NAD+；且增加年老小鼠體內的NAD+濃度，能使其生理狀況更為年輕，因此NAD+被認為與延緩個體老化相關，研究結果已知SIRT1基因、FOXO3基因、NADSYN基因、UBL-5基因、SOD3基因、及MRPS5基因與調節NAD+相關。
本發明之植物發酵物提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、及Pink1基因之表現量的實驗結果如圖2所示。經本發明之植物發酵物作用後，相較於控制組，能分別顯著提升HepG2細胞中CCT7基因、CCT8基因、及Pink1基因之表現量達1.31倍、1.2倍、及1.32倍，其餘基因之表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；經葛根水萃取物或枳椇子水萃取物作用後，CCT7基因、CCT8基因、及Pink1基因之表現量皆分別相似或低於控制組。此結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物三階段發酵步驟後，能有效提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、及Pink1基因之表現量，能有效提升肝臟細胞之粒
線體活性及清除錯誤摺疊蛋白質之能力，以提升肝臟細胞的抗老化活性，使肝臟細胞的生理狀況更為年輕。
本發明之植物發酵物提升MRPS5基因之表現量的實驗結果如圖3所示。經本發明之植物發酵物作用後，相較於控制組，能提升HepG2細胞中MRPS5基因之表現量，其餘與調節NAD+相關之基因的表現量則與控制組相似或差異不大(數據未顯示)；而經葛根水萃取物或枳椇子水萃取物作用後，則反而會降低MRPS5基因之表現量。此結果顯示本發明之植物發酵物在經過本發明之微生物三階段發酵步驟後，能有效提升MRPS5基因之表現量，能有效提升肝臟細胞中NAD+的濃度，以提升肝臟細胞的抗老化活性，使肝臟細胞的壽命延長
綜上所述，本發明將葛根及枳椇子混合物之萃取物以酵母菌、乳酸桿菌、及醋酸桿菌進行三段式發酵所得之植物發酵物，能直接且有效提升肝臟細胞之抗氧化活性，能提升肝臟細胞清除活性氧化物的能力以預防受氧化壓力的傷害；本發明之植物發酵物亦能有效提升肝臟細胞中CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、及MRPS5基因之表現量，以提升肝臟細胞之粒線體活性、清除錯誤摺疊蛋白質之能力、及提升細胞中NAD+的濃度，而能夠提升肝臟細胞的抗老化活性，使肝臟細胞的生理狀況更為年輕且延長壽命。中醫五行經絡是氣血運行的通道，如經絡通則百病消，而本發明之植物發酵物能夠清除自由基、排毒，達到提升精氣神的功效，又能提升回春相關基因的表現量，而能提升肝臟抵禦力及回春的保健功效，以調理肝臟經絡。因此，本發明之植物發酵物可用於製備肝臟保健之組合物的用途，且該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服、塗抹等方式給予一個體。
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Claims (15)
- 一種植物發酵物，其中該植物發酵物係由一葛根及一枳椇子的混合物經由一溶劑萃取所得之萃取物，再經由一酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)、一乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)、及一醋酸桿菌(Acetobacter aceti)依序進行發酵而獲得。
- 如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物，其中該葛根及該枳椇子的混合物係以水為溶劑在50-100℃下萃取0.5-3小時所獲得。
- 如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物，其中該葛根、該枳椇子、及水係以1-3：1：25-35(w/w)之比例混合。
- 如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物，其中該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該乳酸桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)。
- 一種如申請專利範圍第1項所述之植物發酵物用於製備一肝臟保健之組合物的用途。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該植物發酵物係提升一肝臟細胞之抗氧化活性。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該植物發酵物係提升一肝臟細胞之抗老化活性。
- 如申請專利範圍第7項所述之用途，其中該植物發酵物係提升該肝臟細胞之粒線體活性、提升清除錯誤摺疊蛋白質之能力、及/或提升細胞中NAD+的濃度。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該植物發酵物係提升一肝臟細胞中含TCP1的折疊蛋白(Chaperonin containing TCP1,CCT)基因、PTEN促進激酶(PTEN-induced putative kinase 1,Pink1)基因、及粒線體核糖體蛋白5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因的表現量。
- 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中該CCT基因係為TCP1的折疊蛋白7(Chaperonin containing TCP1 7,CCT7)基因、TCP1的折疊蛋白8(Chaperonin containing TCP1 8,CCT8)基因、或其組合物。
- 如申請專利範圍第5項所述之用途，其中該植物發酵物之有效濃度為至少0.5%(v/v)。
- 一種植物發酵物之製造方法，係包含：將一葛根萃取物、及一枳椇子萃取物所組成之混合物經由一酵母菌、一乳酸桿菌、及一醋酸桿菌依序進行三階段發酵而獲得。
- 如申請專利範圍第12項所述之製造方法，其中該葛根、該枳椇子、及水係以1-3：1：25-35(w/w)比例混合。
- 如申請專利範圍第12項所述之製造方法，該酵母菌之添加量為0.01-0.5%(w/w)；該乳酸桿菌之添加量為0.01-0.25%(w/w)；該醋酸桿菌之添加量為1-20%(w/w)。
- 如申請專利範圍第12項所述之製造方法，其中該酵母菌、該乳酸桿菌、及該醋酸桿菌之發酵時間比為1-5：1-5：3-10。
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