TWI708608B - 旅人樹萃取物用於提升SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本發明提供一種旅人樹萃取物用於提升SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途，能有效清除粒線體DNA的突變、使粒線體維持正常代謝、延長細胞壽命、提升NAD+的濃度、提升端粒酶活性與穩定性，以提升細胞抗老化能力、延長細胞壽命、以及全身性抗老化能力。其中該旅人樹萃取物，係旅人樹果實以水、醇、或醇水混合物之溶劑所萃取而得。
Description
本發明係關於一旅人樹萃取物之用途，尤其是一種旅人樹萃取物用於提升Pink基因、Parkin基因、Atg基因、SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途。
在生物學及醫學上，老化(aging)是指一個生物體之生理狀態隨時間而惡化的現象，老化會造成身體各部分組織或器官機能衰退或功能減弱，使得生物體的健康功能變差，最後導致生物體死亡，現代人生活壓力大，長期壓力的累積會加速身體機能老化，也衍生出許多慢性疾病。
另外，隨著保健意識的抬頭及醫療技術的進步，人均壽命增長，但老化所造成的機能退化依然伴隨年齡的增長而加劇，因此除了在疾病的治療及預防外，老化的預防也是高齡社會的重要課題之一。
然而，雖然目前已研究出許多與老化相關的基因以及相關的機制，例如被稱為長壽基因(longevity gene)的SIRT1基因，其所編譯的蛋白質為哺乳動物中重要的NAD+依賴性去乙醯化酶，參與人體中許多重要的生理和病理過程；另外端粒的長度也被證實與一個體的壽命具有相關性。然而目前仍然沒
有能有效應用於延緩老化的藥物或方法，大多只能建議從飲食上多攝取具抗氧化活性物質的食物，並維持適當運動與保持正常作息及心情愉悅。
綜合上面所述，為了能方便又有效達到延緩老化的功效，開發一種能有效提升抗老化基因表現、調控NAD+相關之基因表現、調控粒線體活性相關之基因表現，以及改善認知功能的感知與執行能力的組合物，著實有其必要性。
緣此，本發明之一目的在提供一種旅人樹萃取物用於製備提升PTEN促進激酶(PTEN-induced putative kinase,Pink)基因、帕金森氏症少年蛋白(Parkinson juvenile disease protein,Parkin)基因、自噬作用相關基因(Autophagy-related gene,Atg)基因、抗衰老酶(Sirtuin,SIRT)基因、粒線體核糖體蛋白5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因、泛素樣蛋白(Ubiquitin-like protein,Ubl)基因、端粒酶反轉錄酶(Telomerase reverse transcriptase,TERT)基因、端粒酶RNA模板(telomerase RNA component,TERC)基因、及/或端粒延伸解旋酶調節因子1(Regulator of telomere elongation helicase 1,RTEL1)基因表現量表現量之組合物的用途，其中該旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，該溶劑與該旅人樹之液固比為5-20：1-5，且該萃取步驟係在50℃-100℃進行0.5-3小時。
本發明之另一目的在提供一種旅人樹萃取物用於製備提升細胞粒線體活性之組合物的用途，其中該旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，該溶劑與該旅人樹之液固比為5-20：1-5，且該萃取步驟係在50℃-100℃進行0.5-3小時。
在本發明之一實施例中，其中該Atg基因包含選自於自噬作用相關基因1(Autophagy-related gene 1,Atg1)基因、自噬作用相關基因8
(Autophagy-related gene 8,Atg8)基因及其任意組合所組成的群組；該Pink基因係PTEN促進激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,Pink1)基因；該Parkin基因係帕金森氏症少年蛋白1(Parkinson juvenile disease protein 1,Parkin1)基因；該SIRT基因係抗衰老酶1(Sirtuin 1,SIRT1)基因；該Ubl基因係泛素樣蛋白5(Ubiquitin-like protein 5,Ubl-5)；且該旅人樹萃取物係維持粒線體正常代謝及提升粒線體NAD+濃度；又該旅人樹萃取物之濃度至少為0.5mg/mL。
在本發明之又一實施例中，其中該旅人樹萃取物係提升端粒酶活性與穩定性，且該旅人樹萃取物之濃度至少為0.5mg/mL。
在本發明之又一實施例中，其中該旅人樹萃取物係提升細胞抗老化能力及延長細胞壽命，該旅人樹萃取物之濃度至少為0.5mg/mL。
本發明以水、醇類、或醇水混合物為溶劑所萃取得之旅人樹萃取物能有效提高細胞粒線體的活性、提升抗老基因群-Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、及Atg8基因的表現量、提升參與調節NAD+之基因群-SIRT1基因、MRPS5基因、及Ubl-5基因的表現量、提升參與端粒酶活性與保護之基因群-TERT基因、TERC基因及RTEL1的表現量，因此能有效清除粒線體DNA的突變、使粒線體維持正常代謝以達到回春效果、延長細胞壽命、提升NAD+的濃度、提升端粒酶活性與穩定性。因此，本發明之旅人樹萃取物可用於製備提升細胞抗老化能力、延長細胞壽命、以及全身性抗老化之組合物的用途，該組合物該組合物是一醫藥品、一食品或一保養品，可藉由口服、皮膚塗抹等方式給予一個體。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1係為本發明實施例之旅人樹萃取物於提升細胞中粒線體膜電位之長條圖。** p值<0.01。
圖2係為本發明實施例之旅人樹萃取物於提升Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、及Atg8基因之長條圖。*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001。
圖3係為本發明實施例之旅人樹萃取物於提升SIRT1基因之長條圖。*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001。
圖4係為本發明實施例之旅人樹萃取物於提升MRPS5基因、及Ubl-5基因之長條圖。*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001。
圖5係為本發明實施例之旅人樹萃取物於提升TERT基因、TERC基因、及RTEL1基因之長條圖。**p值<0.01；***p值<0.001。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個此之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。
旅人樹(Adansonia digitata)為木棉科(Bombacaceae)猢猻木屬(Adansonia)落葉大喬木，原產於熱帶非洲，台灣於1908年引進栽植，又稱猢猻木、猴樹、猢猻緬、猢猻麵、猴麵包樹、死老鼠樹。旅人樹主幹短、分枝多，幹基膨大且呈褐色；掌狀複葉，多集生枝端；花兩性，呈白色，直徑可達15公分且下垂，具有腐肉的氣味；果實長約15公分，具豐富鈣含量。旅人樹之葉與果實可食用，果實溶解在牛奶或水中，可作為提神飲料，且種子可榨為食用油。
如本文中所使用的，用語「旅人樹萃取物」意為旅人樹與溶劑以1-5：5-20(w/w)比例經一特定時間與溫度萃取而得。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。
依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。
依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內
注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。
依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普®974P(carbopol®974P)、微結晶纖維素(microcrystallinwcellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，保養品可進一步包含有一被廣泛地使用於保養品製造技術之可接受的佐劑(acceptable adjuvant)。例如，該可接受的佐劑可包含有
一或多種選自於下列的試劑：溶劑、膠凝劑、活性劑、防腐劑、抗氧化劑、遮蔽劑(screening agent)、螯合劑、界面活性劑、染色試劑(coloring agent)、增稠劑(thickening agent)、填料(filler)、香料以及氣味吸收劑。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，保養品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於護膚(skincare)或化妝(makeup)的形式，這包括，但不限於：水性溶液(aqueous solution)、水-醇溶液(aqueous-alcohol solution)或油性溶液(oily solution)、呈水包油型(oil-in-water type)、油包水型(water-in-oil type)或複合型之乳劑、凝膠、軟膏、乳霜、面膜(mask)、貼片、貼布(pack)、擦劑、粉末、氣溶膠、噴霧、乳液、乳漿、糊劑、泡沫、分散液、滴劑、慕斯(mousse)、防曬油(sunblock)、化妝水(tonic water)、粉底(foundation)、卸妝產品(makeup remover products)、肥皂(soap)以及其他身體清潔產品(body cleansing products)等。
依據本發明，保養品亦可與一或多種選自於下列之已知活性的外用劑(external use agents)一起合併使用：美白劑(whitening agents)[諸如維生素A酸(tretinoin)、兒茶素(catechin)、麴酸、熊果苷以及維生素C]、保濕劑、抗發炎劑(anti-inflammatory agents)、殺菌劑(bactericides)、紫外線吸收劑(ultraviolet absorbers)、植物萃取物(plant extracts)[諸如蘆薈萃取物(aloe extract)]、皮膚營養劑(skin nutrients)、麻醉劑(anesthetics)、抗痘劑(anti-acne agents)、止癢劑(antipruritics)、止痛劑(analgesics)、抗皮膚炎劑(antidermatitis agents)、抗過角化劑(antihyperkeratolytic agents)、抗乾皮膚劑(anti-dry skin agents)、抗汗劑(antipsoriatic agents)、抗老化劑(antiaging agents)、抗皺劑(antiwrinkle agents)、抗皮脂溢出劑(antiseborrheic agents)、傷口治療劑(wound-healing agents)、皮質類固醇(corticosteroids)以及激素(hormones)。有關這些外用劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。
依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。
本發明提供一種旅人樹萃取物用於提升Pink基因、Parkin基因、Atg基因、SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途，本發明之旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，其可用於提升細胞抗老化能力、延長細胞壽命、以及全身性抗老化。
同時，本發明用於製被提升Pink基因、Parkin基因、Atg基因、SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物，亦可包含一有效量之旅人樹萃取物及一醫藥上可接受之載體，該組合物係一醫藥品、一食品或一保養品。
以下將詳細說明本發明旅人樹萃取物之詳細萃取方法，與該旅人樹萃取物於調控人體週邊血液白血球細胞中粒線體膜電位之測試、調控人體週邊血液白血球細胞中CCT2基因、CCT5基因、CCT6A基因、CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、Atg8基因、SIRT1基因、FOXO基因、NADSYN基因、MRPS5基因、Ubl-5基因、TERT基因、TERC基因、及RTEL1基因表現量之測試，以證實該旅人樹萃取物對於提高細胞粒線體的活性、提升抗老基因群、提升參與調節NAD+之基因群、提升參與端粒酶活性與保護之基因群之效果，以及證實本發明之旅人樹萃取物具有提升細胞抗老化能力、延長細胞壽命、以及全身性抗老化的功效。
在本發明一實施例中，將旅人樹果實粉與水、醇、或醇水混合物之萃取溶劑以1-5：5-20之液固比混合，萃取溶劑較佳為水，均質後在溶劑中以50-100℃進行萃取0.5-3小時。萃取後冷卻至室溫，將該粗萃取物經由400 mesh之濾網過濾以獲得濾液。最後，將該濾液於45-70℃進行減壓濃縮，得到本發明之旅人樹萃取物。
本實施例以EDTA-Vacutainer收集9mL健康之人體周邊血液，將血液轉移到15mL離心管中，以lower decline rate模式300g離心15分鐘後，移除血漿並將膚色血球層(Buffy coat layer)轉移至新的15mL離心管中，以磷酸鹽緩衝溶液(Phosphate buffered saline,PBS)調節細胞溶液使總體積達6mL並混合均勻，再以3：6的比例混合Ficoll(購自GE Healthcare，瑞典，編號Cat.17-1440-03)及細胞溶液，並小心地將其放入離心機中以lower ascent and decline模式400g離心40分鐘後，移除血漿並以10mL之PBS清洗周邊血液單核細胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)，接著以400g離心10分鐘並移除PBS，計數細胞並記錄，接著加入1mg/mL之本發明之旅人樹萃取物於細胞中作用24小時後，使用BDTM MitoScreen試劑組，以1：250比例混合的JC1染色溶液與JC1染色緩衝溶液將細胞染色，再以1mL之JC-1 assay buffer沖洗細胞二次後，以流式細胞儀(BD Accuri C6 Plus Flowcytometry)偵測周邊血液單核細胞中粒線體的膜電位，其中本實施例之旅人樹萃取物係以水進行萃取。
本發明之旅人樹萃取物提升細胞中粒線體膜電位之結果如圖1所示，其中粒線體膜電位越高表示粒線體活性越高，粒線體為細胞能量製造的中心，其活性與細胞機能息息相關，研究已知粒線體活性提高能與改善細胞老化的現象。而周邊血液單核細胞經本發明之旅人樹萃取物處理後，粒線體膜電位
顯著高於控制組，此結果顯示本發明之旅人樹萃取物能有效提高細胞粒線體的活性，能有效提升細胞抗老化的功能。
本實施例以人體週邊血液白血球細胞(PBMC)進行本發明之旅人樹萃取物於提升全身性回春基因之功效測試。將1.5x105個人體週邊血液白血球細胞培養於含有2mL之X-VIVOTM 10細胞培養的六孔培養盤中，以2mL液於6孔培養盤中進行培養，並分成以下三組，其中本實施例之旅人樹萃取物係以水進行萃取：(1)加入1mg/mL本發明之旅人樹萃取物的實驗組、(2)加入0.5mg/mL本發明之旅人樹萃取物的實驗組，以及(3)僅含培養液之控制組各處理24小時後，將周邊血液單核細胞以細胞裂解液(購自Geanaid公司，臺灣)回收細胞後，使用RNA萃取試劑套組(購自Geneaid公司，台灣)分別收集三組血管內皮細胞內之RNA，接著利用SuperScript® III反轉錄酶(購自Invitrogene公司，美國，編號18080-051)以2000ng之萃取RNA為模板以引子黏合進行反轉錄作用產生相應之cDNA，接著利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system(Thermo Fisher Scientific公司，美國)，以及KAPA SYBR FAST(購自Sigma公司，美國，編號38220000000)將兩組反轉錄後產物分別以表一之組合引子進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應(quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction)試驗，用以定量CCT2基因、CCT5基因、CCT6A基因、CCT7基因、CCT8基因、Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、Atg8基因、SIRT1基因、FOXO基因、NADSYN基因、MRPS5基因、及Ubl-5基因之mRNA表現量，並以方程式2-△△ct推導目標基因的mRNA相對量，其中定量數值係取由閾值循環數(Ct)，△Ct=Ct實驗組之目標基因/控制組之目標基因-Ct GAPDH (甘油醛-3-磷酸脫氫酶，Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)，△△Ct=△Ct實驗組之目標基因-△Ct控制組之目標基因。表現改變之倍數利用Excel軟體之STDEV公式計算標準差，並在Excel軟體中以單尾Student t-test分析是否具有統計上顯著差異(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。
CCT基因為折疊蛋白(Chaperonin)的一種，主要功能為矯正錯誤摺疊的蛋白質，並將無法成功修復之蛋白質送進蛋白質水解酶複合體(Proteasome)中進行水解，先前研究已指若此蛋白質調控之重複使用系統發生故障，會導致錯誤摺疊的蛋白質會聚集在細胞中，並造成細胞功能衰退及加速細胞的老化與死亡，因此被認為與個體之老化調節相關。
Pink1基因為一種位在粒線體的絲胺酸/蘇胺酸蛋白激酶(Serine/threonine protein kinase)，其功能為保護線粒體在細胞壓力期間發生故障，已知該基因之突變與帕金森氏症有關，而先前研究更指出該基因的過量表現能夠增加小鼠的壽命，因此也被認為與個體之老化調節有關。Parkin基因為一種存在於泛素-蛋白酶體系(Ubiquitin-proteasome system)中之酵素，並作為蛋白質分解的調節劑，已知該基因之突變與帕金森氏症有關，且先前研究亦指出增加該基因的表現量能夠延緩細胞的老化作用，因此被認為與細胞的老化作用相關。Atg基因則為自噬作用相關基因，會參與細胞中廢物降解和循環的自噬作用，先前研究指出該基因的過量表現，能夠延長小鼠的壽命，因此被認為與細胞的老化作用相關。
SIRT1基因為哺乳動物中重要的NAD+依賴性去乙醯化酶，先前研究指出SIRT1基因的表現量下降，會導致粒線體的生物合成功能降低，並導致
產生老化之相關疾病，因此該基因已被公認為長壽基因，與老化作用的關係密不可分。FOXO基因為一種轉錄因子，先前研究已指出該基因為細胞老化和決定壽命長短的重要因素。且先前研究已指出和年老的小鼠相比，年輕的小鼠體內含有較多的NAD+；且增加年老小鼠體內的NAD+濃度，能使其生理狀況更為年輕，因此NAD+被認為與延緩個體老化相關，而已知SIRT1基因、FOXO3基因、NADSYN基因、MRPS5基因、及Ubl-5基因與調節NAD+具有相關性。
本發明之旅人樹萃取物提升Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、及Atg8基因表現量之結果如圖2所示。人體週邊血液白血球細胞經0.5mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，Pink1基因表現量較控制組顯著的高約2.2倍、Parkin基因則顯著的較高約8倍、Atg1基因顯著的較高1.9倍、及Atg8基因則顯著的較高2.2倍；而經1mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，Pink1基因表現量較控制組高約2倍、Parkin基因則顯著的較高約7.8倍、Atg1基因顯著的較高6倍、及Atg8基因則顯著的較高2.4倍。此結果顯示本發明之旅人樹萃取物能有效提升Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、及Atg8基因的表現量，其中90%的人都有粒線體DNA的突變，當累積超過閾就會造成疾病及老化，因此本發明之旅人樹萃取物能夠使粒線體回春且維持正常機能的運作，具有預防細胞老化的功效。
本發明之旅人樹萃取物提升SIRT1基因表現量之結果如圖3所示。人體週邊血液白血球細胞經0.5mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，SIRT1基因表現量較控制組高約2倍；而經1mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，SIRT1基因表現量較控制組高約2.5倍。此結果顯示本發明之旅人樹萃取物能有效提升長壽基因-SIRT1基因的表現量，而能有效延長細胞壽命，具有抗細胞老化的功效。
本發明之旅人樹萃取物提升MRPS5基因、及Ubl-5基因表現量之結果如圖4所示。人體週邊血液白血球細胞經0.5mg/mL本發明之旅人樹萃取物
處理後，MRPS5基因表現量較控制組高約4倍、Ubl-5基因表現量較控制組顯著的高約6倍；而經1mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，MRPS5基因表現量較控制組顯著的高約20倍、Ubl-5基因表現量較控制組顯著的高約10倍。此結果顯示本發明之旅人樹萃取物能有效提升MRPS5基因、及Ubl-5基因的表現量，而能有效提升NAD+的濃度，並調節粒線體的正常代謝，以提升細胞抗老化及延長細胞壽命。
本實施例以人類周邊血液單核細胞(PBMC)進行本發明之旅人樹萃取物於提升端粒酶基因之功效測試。該人體週邊血液白血球細胞係購自美國典型培養物保藏中心(美國)，編號ATCC®PCS-800-011TM。該細胞係培養於X-VIVOTM10(購自Lonza，美國，編號04-380Q)細胞培養液。
將人體週邊血液白血球細胞分成以下三組，其中本實施例之旅人樹萃取物係以水進行萃取：(1)加入1mg/mL之本發明之旅人樹萃取物的實驗組、(2)加入0.5mg/mL之本發明之旅人樹萃取物的實驗組，以及(3)僅含培養液之控制組於37℃下培養24小時，並以實施例3之方法及表二之組合引子分析經本發明之旅人樹萃取物處理過之人體週邊血液白血球細胞中TERT基因、TERC基因、及RTEL1基因之表現情形。
端粒係為生物染色體末端的DNA重複序列，主要作用是保持染色體的完整性和控制細胞分裂週期，其中DNA每複製一次，端粒就會縮短一些，一旦端粒長度歸零，細胞則會走向凋亡，因此端粒的長度與細胞的年齡具有相關性，其中已知TERT基因、TERC基因及RTEL1基因與調節端粒的長短相關。TERT、TERC為端粒酶生成的重要基因，端粒酶透過加入重複序列TTAGGG來維持端粒末端的長度；而RTEL1為DNA解旋酶，在DNA複製期間維持端粒的穩定並保護端粒。
本發明之旅人樹萃取物提升TERT基因、TERC基因及RTEL1表現量之結果如圖5所示。人體週邊血液白血球細胞經0.5mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，TERT基因表現量較控制組顯著的高約3.1倍、TERC基因則顯著的較高約8倍、及RTEL1基因則顯著的較高5.2倍；而經1mg/mL本發明之旅人樹萃取物處理後，TERT基因表現量較控制組顯著的高約3.8倍、TERC基因則顯著的較高約11倍、及RTEL1基因則顯著的較高6.1倍。此結果顯示本發明之旅人樹萃取物能有效提升TERT基因、TERC基因及RTEL1的表現量，能有效提升端粒酶活性與穩定性。
綜上所述，本發明以水、醇類、或醇水混合物為溶劑所萃取得之旅人樹萃取物能有效提高細胞粒線體的活性、提升抗老基因群-Pink1基因、Parkin基因、Atg1基因、及Atg8基因的表現量、提升參與調節NAD+之基因群-SIRT1基因、MRPS5基因、及Ubl-5基因的表現量、提升參與端粒酶活性與保護之基因群-TERT基因、TERC基因及RTEL1的表現量，因此能有效清除粒線體DNA的突變、使粒線體維持正常代謝以達到回春效果、延長細胞壽命、提升
NAD+的濃度、提升端粒酶活性與穩定性。因此，本發明之旅人樹萃取物可用於製備提升細胞抗老化能力、延長細胞壽命、以及全身性抗老化之組合物的用途，該組合物該組合物是一醫藥品、一食品或一保養品，可藉由口服、皮膚塗抹等方式給予一個體。
<110> 大江生醫股份有限公司
<120> 旅人樹萃取物用於提升Pink1基因、Parkin基因、Atg基因、SIRT1基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1表現量之組合物的用途
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Claims (7)
- 一種旅人樹萃取物用於製備提升細胞抗老化能力及延長細胞壽命之組合物的用途，其中該旅人樹萃取物係提升人體周邊血液單核細胞中複數個與粒線體調節NAD+相關之基因的表現量以提升抗老化活性，該複數個與粒線體調節NAD+相關之基因包含抗衰老酶(Sirtuin,SIRT)基因、粒線體核糖體蛋白5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)基因、及/或泛素樣蛋白(Ubiquitin-like protein,Ubl)基因；且該旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，該溶劑與該旅人樹之液固比為5-20：1-5，且該萃取步驟係在50℃-100℃進行0.5-3小時。
- 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中該SIRT基因係抗衰老酶1(Sirtuin 1,SIRT1)基因；該Ubl基因係泛素樣蛋白5(Ubiquitin-like protein 5,Ubl-5)。
- 一種旅人樹萃取物用於製備提升細胞抗老化能力及延長細胞壽命之組合物的用途，其中該旅人樹萃取物係提升人體周邊血液單核細胞中複數個與調節端粒酶活性相關之基因的表現量以提升抗老化活性，該複數個與調節端粒酶活性相關之基因包含端粒酶反轉錄酶(Telomerase reverse transcriptase,TERT)基因、端粒酶RNA模板(telomerase RNA component,TERC)基因、及/或端粒延伸解旋酶調節因子1(Regulator of telomere elongation helicase 1,RTEL1)基因；且該旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，該溶劑與該旅人樹之液固比為5-20：1-5，且該萃取步驟係在50℃-100℃進行0.5-3小時。
- 一種旅人樹萃取物用於製備提升細胞抗老化能力及延長細胞壽命之組合物的用途，其中該旅人樹萃取物係提升人體周邊血液單核細胞粒線體 活性以提升抗老化活性，其中該旅人樹萃取物係以一溶劑萃取一旅人樹果實所獲得，該溶劑為水、醇、或醇水混合物，該溶劑與該旅人樹之液固比為5-20：1-5，且該萃取步驟係在50℃-100℃進行0.5-3小時。
- 如申請專利範圍第1項、第3項、或第4項中任一項所述之用途，其中該旅人樹萃取物之濃度為0.5-1.0mg/mL。
- 如申請專利範圍第1項、第3項、或第4項中任一項所述之用途，其中該組合物是一醫藥品。
- 如申請專利範圍第1項、第3項、或第4項中任一項所述之用途，其中該組合物進一步包含一醫藥上可接受之載體。
Priority Applications (2)
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| TW107137397A TWI708608B (zh) | 2018-10-23 | 2018-10-23 | 旅人樹萃取物用於提升SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途 |
| CN201910187824.7A CN111084794A (zh) | 2018-10-23 | 2019-03-14 | 旅人树萃取物用于制备提升基因表现量的组合物的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| TW107137397A TWI708608B (zh) | 2018-10-23 | 2018-10-23 | 旅人樹萃取物用於提升SIRT基因、MRPS5基因、Ubl基因、TERT基因、TERC基因及RTEL1基因表現量之組合物的用途 |
Publications (2)
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