TW202011984A - IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及其用途 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於新型IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及其用途。該等IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白可投與至患者以治療癌症。在某些情況下，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與檢查點阻斷抗體諸如PD-1抗體組合投與。
Description
無
[0001] 癌症免疫療法中兩種非常有前途之方法包括基於細胞因子之治療及免疫檢查點蛋白諸如PD-1之阻斷。
[0002] 細胞因子諸如IL-2及IL-15在幫助B細胞、T細胞及NK細胞之增殖及分化中起作用。兩種細胞因子經由與一種三聚體複合物結合而發揮其細胞信號傳導功能，該三聚體複合物由以下組成：兩種共有受體，亦即共同γ鏈(γc；CD132)及IL-2受體β鏈(IL-2Rβ；CD122)，以及每種細胞因子特有之α鏈受體：IL-2受體α (IL-2Rα；CD25)或IL-15受體α (IL-15Rα；CD215)。兩種細胞因子皆視為腫瘤學中潛在有價值之治療劑，並且IL-2已批准用於患有轉移性腎細胞癌及惡性黑素瘤之患者。目前，儘管正在進行一些臨床試驗，但尚未批准使用重組IL-15。然而，作為潛在藥物，兩種細胞因子皆具有非常快之清除，半衰期以分鐘計。當以高劑量投與以克服快速清除時，IL-2免疫療法與全身毒性相關。近來之臨床試驗中亦已報導IL-15免疫療法之此種全身毒性(Guo等, J Immunol, 2015, 195(5):2353-64)。
[0003] 免疫檢查點蛋白諸如PD-1在T細胞活化後上調，以藉由在結合免疫檢查點配位體諸如PD-L1時耗盡活化之T細胞來阻止自體免疫。然而，免疫檢查點蛋白亦於腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)中上調，且免疫檢查點配位體在腫瘤細胞上過度表現，從而有助於腫瘤細胞之免疫逃逸。藉由用藥物諸如Opdivo® (納武單抗(nivolumab))及Keytruda® (派姆單抗(pembrolizumab))阻斷免疫檢查點相互作用對TIL之脫抑制已證明在癌症治療中非常有效。儘管諸如納武單抗及派姆單抗之檢查點阻斷療法有希望，但許多患者仍未能對單獨檢查點阻斷實現充分應答。
[0004] 因此，在腫瘤學治療中對於利用細胞因子之治療策略仍存在未滿足之需求，該等細胞因子不需要高劑量且靶向腫瘤以避免全身毒性。此外，需要鑒定額外治療方式以與檢查點阻斷疊加，這可增加患者應答率。本發明藉由提供降低效能之IL-15/Rα-Fc融合蛋白來解決此等需求及注意事項，該等融合蛋白具有增強之藥物動力學及藥效學，並且其與檢查點阻斷抗體協同組合。
[0005] 本發明係關於投與新型IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與檢查點阻斷抗體之組合。在一些實施方案中，該檢查點阻斷抗體選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
[0006] 在一些態樣中，本文提供一種治療有需要之患者中之癌症的方法，其包括投與：
治療有效量之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，其包含：
a)第一單體，該第一單體自N端至C端包含：
i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域；
ii)第一結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及
b)第二單體，該第二單體自N端至C端包含：
i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者；
ii)第二結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域；
其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號；及
治療有效量之檢查點阻斷抗體，其選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
[0007] 在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代N4D/N65D。
[0008] 在一些實施方案中，該IL-15Rα sushi結構域包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。
[0009] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有S364K/E357Q : L368D/K370S取代。在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域具有S364K/E357Q取代且該第二變異體Fc結構域具有L368D/K370S取代。
[0010] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含M428L/N434S取代。
[0011] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含E233P/L234V/L235A/G236del/S267K取代。
[0012] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及該檢查點阻斷抗體係同時或依序投與。
[0013] 在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗(pidilizumab)。
[0014] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306或XENP24045之胺基酸序列。
[0015] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0016] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0017] 在一些實施方案中，該癌症為轉移性癌症。在一些實施方案中，該癌症選自由以下組成之群：乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑素瘤癌、膀胱癌、腎癌、腎臟癌、肝癌、頭頸部癌、結直腸癌、黑素瘤、胰腺癌、胃癌、食道癌、間皮瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。
[0018] 在一些實施方案中，本文概述之癌症治療方法導致患者之血管滲漏程度最低。
[0019] 在一些實施方案中，該血管滲漏程度範圍為投藥後患者中之血清白蛋白減少20%或20%以下。
[0020] 在一些態樣中，本文提供一種治療患者中之癌症之方法，該方法包括投與包含IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及檢查點阻斷抗體之組合療法至該患者，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含：
a)第一單體，其自N端至C端包含：
i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域；
ii)第一結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及
b)第二單體，其自N端至C端包含：
i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者；
ii)第二結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域；
其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號；且該檢查點阻斷抗體選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
[0021] 在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代N4D/N65D。
[0022] 在一些實施方案中，該IL-15Rα sushi結構域包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。
[0023] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有S364K/E357Q : L368D/K370S取代。在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域具有S364K/E357Q取代且該第二變異體Fc結構域具有L368D/K370S取代。
[0024] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含M428L/N434S取代。
[0025] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含E233P/L234V/L235A/G236del/S267K取代。
[0026] 在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。
[0027] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)或XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列。
[0028] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0029] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0030] 在一些實施方案中，該癌症為轉移性癌症。在一些實施方案中，該癌症選自由以下組成之群：乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑素瘤癌、膀胱癌、腎癌、腎臟癌、肝癌、頭頸部癌、結直腸癌、黑素瘤、胰腺癌、胃癌、食道癌、間皮瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。
[0031] 在一些實施方案中，本文所述之癌症治療方法導致患者中之血管滲漏程度最低。
[0032] 在一些實施方案中，該血管滲漏程度範圍為投藥後患者中之血清白蛋白減少20%或20%以下。
[0033] 在一些態樣中，本文提供一種誘導患者中之T細胞擴增之方法，其包括投與：
治療有效量之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，其包含：
a)第一單體，其自N端至C端包含：
i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域；
ii)第一結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及
b)第二單體，其自N端至C端包含：
i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者；
ii)第二結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域；其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號；及
治療有效量之檢查點阻斷抗體，其選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
[0034] 在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代N4D/N65D。
[0035] 在一些實施方案中，該IL-15Rα sushi結構域包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。
[0036] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有S364K/E357Q : L368D/K370S取代。在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域具有S364K/E357Q取代且該第二變異體Fc結構域具有L368D/K370S取代。
[0037] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含M428L/N434S取代。
[0038] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含E233P/L234V/L235A/G236del/S267K取代。
[0039] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及該檢查點阻斷抗體係同時或依序投與。
[0040] 在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)或XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列。
[0041] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0042] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0043] 在一些實施方案中，該患者患有癌症。在一些實施方案中，該癌症為轉移性癌症。在一些實施方案中，該癌症選自由以下組成之群：乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑素瘤癌、膀胱癌、腎癌、腎臟癌、肝癌、頭頸部癌、結直腸癌、黑素瘤、胰腺癌、胃癌、食道癌、間皮瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。
[0044] 在一些實施方案中，該T細胞擴增為T細胞增加至少2倍。在一些實施方案中，該T細胞擴增範圍為T細胞增加2倍至15倍。
[0045] 在一些實施方案中，該方法不增加誘發低白蛋白血症之可能性。
[0046] 在一些實施方案中，該等T細胞包含腫瘤浸潤淋巴細胞。
[0047] 在一些態樣中，本發明提供一種組合療法，其包含IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及檢查點阻斷抗體，該檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含：
a)第一單體，其自N端至C端包含：
i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域；
ii)第一結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及
b)第二單體，其自N端至C端包含：
i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者；
ii)第二結構域連接子；及
iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域；
其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號。
[0048] 在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/N65D。在一些實施方案中，該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代N4D/N65D。
[0049] 在一些實施方案中，該IL-15Rα sushi結構域包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。
[0050] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有S364K/E357Q : L368D/K370S取代。在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域具有S364K/E357Q取代且該第二變異體Fc結構域具有L368D/K370S取代。
[0051] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含M428L/N434S取代。
[0052] 在一些實施方案中，該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含E233P/L234V/L235A/G236del/S267K取代。
[0053] 在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。
[0054] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)或XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列。
[0055] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。
[0056] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。
[0057] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
[0058] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。
[0059] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。
[0060] 在一些實施方案中，該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
優先權主張
[00277] 本申請案主張2018年4月18日申請之美國臨時申請案第62/659,563號，2018年6月12日申請之美國臨時申請案第62/684,143號，2018年8月29日申請之美國臨時申請案第62/724,396號及2018年11月7日申請之美國臨時申請案第62/756,800號之優先權，該等文獻之揭示內容以引用之方式全部併入本文中。
I. 定義
[00278] 為了更完全地理解本申請案，下面闡述一些定義。該等定義意在涵蓋語法等效形式。
[00279] 在本文中「消除(ablation)」意指減少或去除結合及/或活性。因此，例如，「消除FcγR結合」意指Fc區胺基酸變異體與不含特異性變異體之Fc區相比具有小於50%起始結合，其中小於70-80-90-95-98%之結合損失為較佳的，且通常在Biacore檢定中結合低於可偵測結合水平。在消除FcγR結合中特別有用者為圖5中所示之彼等變異體。然而，除非另有說明，否則本發明之Fc單體保持與FcRn結合。
[00280] 如本文所用之「ADCC」或「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」意指其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上結合之抗體且隨後引起靶細胞裂解之細胞介導反應。ADCC與FcγRIIIa之結合相關；與FcγRIIIa之結合增加導致ADCC活性增加。如本文所討論，本發明之許多實施方案完全消除ADCC活性。
[00281] 如本文所用之「ADCP」或抗體依賴性細胞介導之吞噬作用意指其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上結合之抗體且隨後引起靶細胞之吞噬作用之細胞介導反應。
[00282] 本文中之「修飾」意指多肽序列中之胺基酸取代、插入及/或缺失或對與蛋白質化學連接之部分的改變。舉例而言，修飾可為與蛋白質連接之改變的碳水化合物或PEG結構。「胺基酸修飾」在本文中意指多肽序列中之胺基酸取代、插入及/或缺失。為清楚起見，除非另有說明，否則胺基酸修飾始終係對於由DNA編碼之胺基酸，例如於DNA及RNA中具有密碼子之20種胺基酸。
[00283] 本文中「胺基酸取代」或「取代」意指用不同胺基酸替代親本多肽序列中特定位置之胺基酸。特定言之，在一些實施方案中，取代係對於在特定位置非天然存在之胺基酸，其非天然存在於生物體內或任何生物體中。舉例而言，取代E272Y或272Y係指變異體多肽，在該情況下為Fc變異體，其中第272位之麩胺酸由酪胺酸替代。為清楚起見，已經工程化以改變核酸編碼序列但未改變起始胺基酸之蛋白質(例如，將CGG (編碼精胺酸)交換為CGA (仍編碼精胺酸)以增加宿主生物體表現量)並非「胺基酸取代」；亦即，儘管產生編碼相同蛋白之新基因，但若該蛋白在其起始特定位置處具有相同之胺基酸，則其並非胺基酸取代。取代可包括天然存在之胺基酸，且在某些情況下可包括合成胺基酸。實例包括美國專利第6,586,207號；WO 98/48032；WO 03/073238；US2004-0214988A1；WO 05/35727A2；WO 05/74524A2；J. W. Chin等, (2002), Journal of the American Chemical Society 124:9026-9027；J. W. Chin及P. G. Schultz, (2002), ChemBioChem 11:1135-1137；J. W. Chin等, (2002), PICAS United States of America 99:11020-11024；以及L. Wang及P. G. Schultz, (2002), Chem. 1-10，均以引用之方式全部併入。
[00284] 如本文所用之「胺基酸插入」或「插入」意指在親本多肽序列之特定位置添加胺基酸殘基或序列。舉例而言，-233E表示在第233位之後且第234位之前插入麩胺酸。另外，-233ADE或A233ADE表示在第233位之後且第234位之前插入AlaAspGlu。
[00285] 如本文所用之「胺基酸缺失」或「缺失」意指在親本多肽序列中之特定位置去除胺基酸殘基或序列。舉例而言，E233、E233#、E233()或E233del表示在第233位缺失麩胺酸。另外，EDA233-或EDA233#表示在第233位開始缺失序列GluAspAla。
[00286] 如本文所用之「變異體蛋白質」、「蛋白質變異體」或「變異體」意指由於至少一個胺基酸修飾而不同於親本蛋白質之蛋白質。蛋白質變異體可指蛋白質本身，包含蛋白質之組合物，編碼其之胺基酸序列，或編碼其之DNA或核酸序列。較佳地，蛋白質變異體與親本蛋白質相比具有至少一個胺基酸修飾，例如，與親本相比，約1至約70個胺基酸修飾，且較佳約1至約5個胺基酸修飾。修飾可為添加、刪除或取代。如下所述，在一些實施方案中，親本多肽(例如Fc親本多肽)為人類野生型序列，諸如來自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4之Fc區，但具有變異體之人類序列亦可用作「親本多肽」，例如可包括IgG1/2雜合體。本文中之蛋白質變異體序列較佳與親本蛋白質序列具有至少約80%同一性，且最佳至少約90%同一性，更佳至少約95-98-99%同一性。
[00287] 因此，如本文所用之「抗體變異體」或「變異體抗體」意指由於至少一個胺基酸修飾而不同於親本抗體之抗體，如本文所用之術語「IgG變異體」或「變異體IgG」意指由於至少一個胺基酸修飾而不同於親本IgG (此外，在許多情況下，不同於人類IgG序列)之抗體，且如本文所用之「免疫球蛋白變異體」或「變異體免疫球蛋白」意指由於至少一個胺基酸修飾而不同於親本免疫球蛋白序列之免疫球蛋白序列。如本文所用之「Fc變異體」或「變異體Fc」意指在Fc結構域中包含胺基酸修飾之蛋白質。修飾可為添加、缺失或取代。本發明之Fc變異體根據構成其之胺基酸修飾來定義。因此，例如，N434S或434S為相對於親本Fc多肽在第434位具有絲胺酸殘基取代之Fc變異體，其中編號係根據EU索引。同樣地，M428L/N434S限定相對於親本Fc多肽具有取代M428L及N434S之Fc變異體。WT胺基酸之身份可能未指定，在此情況下，前述變異體被稱為428L/434S。應注意，提供取代之順序為任意的，亦即，例如，428L/434S為與434S/428L相同之Fc變異體，等等。對於本發明中討論之關於抗體或其衍生物及片段之所有位置，除非另有說明，否則胺基酸位置編號係根據EU索引。EU索引或如Kabat或EU編號方案中之EU索引係指EU抗體之編號(Edelman等, 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85，以引用之方式全部併入本文中)。修飾可為添加、缺失或取代。取代可包括天然存在之胺基酸，且在某些情況下，可包括合成胺基酸。
[00288] 如本文所用，「蛋白質」意指至少兩個共價連接之胺基酸，其包括蛋白質、多肽、寡肽及肽。肽基可包含天然存在之胺基酸及肽鍵，或合成肽模擬物結構，亦即「類似物」，諸如擬肽(參見Simon等, PNAS USA 89(20):9367 (1992)，以引用之方式全部併入)。胺基酸可為天然存在或合成(例如並非由DNA編碼之胺基酸)；如熟習此項技術者所理解。舉例而言，同型苯丙胺酸、瓜胺酸、鳥胺酸及正白胺酸被視為用於本發明目的之合成胺基酸，且可利用D-及L- (R或S)組態之胺基酸。本發明之變異體可包含修飾，其包括使用利用例如Schultz及其同事開發之技術併入之合成胺基酸，包括但不限於由以下所述之方法：Cropp及Shultz, 2004, Trends Genet. 20(12):625-30；Anderson等, 2004, Proc Natl Acad Sci USA 101 (2):7566-71；Zhang等, 2003, 303(5656):371-3；及Chin等, 2003, Science 301(5635):964-7，全部以引用之方式併入。另外，多肽可包括一個或一個以上側鏈或末端之合成衍生，糖基化，聚乙二醇化，環狀排列，環化，與其他分子之連接子，與蛋白質或蛋白質結構域之融合，以及添加肽標籤或標記。其中生物功能分子包含兩種或兩種以上之蛋白質，每種蛋白質可被稱為「單體」或「亞基」或「結構域」；並且生物功能分子可被稱為「複合物」。
[00289] 如本文所用之「殘基」意指蛋白質中之位置及其相關胺基酸身份。舉例而言，天冬醯胺297 (亦稱為Asn297或N297)為人類抗體IgG1中第297位之殘基。
[00290] 如本文所用之「IgG亞類修飾」或「同種型修飾」意指將一種IgG同種型之一個胺基酸轉化為另一種比對IgG同種型之相應胺基酸的胺基酸修飾。舉例而言，因為IgG1包含酪胺酸且IgG2包含在EU第296位之苯丙胺酸，所以IgG2中之F296Y取代被視為IgG亞類修飾。
[00291] 如本文所用之「非天然存在之修飾」意指並非同種型之胺基酸修飾。舉例而言，因為IgG均不包含第434位之絲胺酸，所以IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 (或其雜合體)中之取代434S視為非天然存在之修飾。
[00292] 如本文所用之「胺基酸」及「胺基酸身份」意指由DNA及RNA編碼之20種天然存在胺基酸中之一者。
[00293] 如本文所用之「效應功能」意指由抗體Fc區與Fc受體或配位體之相互作用產生之生物化學事件。效應功能包括但不限於ADCC、ADCP及CDC。
[00294] 如本文所用之「IgG Fc配位體」或「Fc配位體」意指來自任何生物體之分子，較佳為多肽，其與IgG抗體之Fc區結合以形成Fc/Fc配位體複合物。Fc配位體包括但不限於FcγRI、FcγRII、FcγRIII、FcRn、C1q、C3、甘露聚糖結合凝集素、甘露糖受體、葡萄球菌蛋白A、鏈球菌蛋白G及病毒FcγR。Fc配位體亦包括Fc受體同源物(FcRH)，其為與FcγR同源之Fc受體家族(Davis等, 2002, Immunological Reviews 190:123-136，以引用之方式全部併入)。Fc配位體可包括未發現之結合Fc之分子。特定IgG Fc配位體為FcRn及Fcγ受體。
[00295] 如本文所用之「Fcγ受體」、「FcγR」或「FcgammaR」意指結合IgG抗體Fc區且由FcγR基因編碼之蛋白質家族之任何成員。在人類中，該家族包括但不限於FcγRI (CD64)，包括同功異型物FcγRIa、FcγRIb及FcγRIc；FcγRII (CD32)，包括同功異型物FcγRIIa (包括同種異型物H131及R131)、FcγRIIb (包括FcγRIIb-1及FcγRIIb-2)，及FcγRIIc；及FcγRIII (CD16)，包括同功異型物FcγRIIIa (包括同種異型物V158及F158)及FcγRIIIb (包括同種異型物FcγRIIb-NA1及FcγRIIb-NA2) (Jefferis等, 2002, Immunol Lett 82:57-65，以引用之方式全部併入)，以及任何未發現之人類FcγR或FcγR同功異型物或同種異型物。FcγR可以來自任何生物體，包括但不限於人類、小鼠、大鼠、兔及猴。小鼠FcγR包括但不限於FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32)、FcγRIII (CD16)及FcγRIII-2 (CD16-2)，以及任何未發現之小鼠FcγR或FcγR同功異型物或同種異型物。
[00296] 如本文所用之「FcRn」或「新生兒Fc受體」意指結合IgG抗體Fc區且至少部分由FcRn基因編碼之蛋白質。FcRn可以來自任何生物體，包括但不限於人類、小鼠、大鼠、兔及猴。如此項技術中所知，功能性FcRn蛋白包含兩個多肽，通常稱為重鏈及輕鏈。輕鏈為β-2-微球蛋白(β2-微球蛋白)，且重鏈由FcRn基因編碼。除非本文另有說明，否則FcRn或FcRn蛋白係指具有β2-微球蛋白之FcRn重鏈的複合物。多種Fc變異體可用於增加與FcRn之結合，並且在某些情況下，可增加血清半衰期。一般而言，除非另有說明，否則本發明之Fc單體保持與FcRn結合(並且如下所述，可包括胺基酸變異體以增加與FcRn之結合)。
[00297] 如本文所用之「親本多肽」意指隨後修飾以產生變異體之起始多肽。親本多肽可為天然存在之多肽，或天然存在之多肽之變異體或工程化形式。親本多肽可以指多肽本身，包含親本多肽之組合物，或編碼其之胺基酸序列。因此，如本文所用之「親本免疫球蛋白」意指經修飾以產生變異體之未修飾的免疫球蛋白多肽，且如本文所用之「親本抗體」意指經修飾以產生變異體抗體之未修飾的抗體。應注意，「親本抗體」包括如下概述之已知的商業化重組產生抗體。
[00298] 如本文所用之「Fc」或「Fc區」或「Fc結構域」意指包含抗體之恒定區之多肽，在某些情況下，不包括第一恒定區免疫球蛋白結構域(例如CH1)或其一部分的全部或一部分，並且在某些情況下，進一步排除鉸鏈之全部或一部分。因此，Fc可以指IgA、IgD及IgG之最後兩個恒定區免疫球蛋白結構域(例如，CH2及CH3)，IgE及IgM之最後三個恒定區免疫球蛋白結構域，以及視情況，此等結構域之柔性鉸鏈N端之全部或一部分。對於IgA及IgM，Fc可包括J鏈。對於IgG，Fc結構域包含免疫球蛋白結構域CH2及CH3 (Cγ2及Cγ3)以及CH1 (Cγ1)與CH2 (Cγ2)之間的下鉸鏈區。儘管Fc區之邊界可改變，但人類IgG重鏈Fc區通常定義為包括殘基E216、C226或A231至其羧基端，其中編號係根據如Kabat中之EU索引。在如下文更全面描述之一些實施方案中，對Fc區進行胺基酸修飾，例如以改變與一種或一種以上FcγR或與FcRn之結合。
[00299] 如熟習此項技術者所理解，重鏈恒定區結構域之確切編號及安置在不同編號系統中可以不同。根據EU及Kabat之重鏈恒定區編號之有用比較如下，參見Edelman等, 1969, Proc Natl Acad Sci USA 63:78-85；及Kabat等, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，其以引用之方式全部併入。表 1 
[00300] 如本文所用之「融合蛋白」意指至少兩種蛋白質之共價接合。融合蛋白可包含人工序列，例如如本文所述之結構域連接子。「Fc融合蛋白」或「免疫黏附素」在本文中意指包含Fc區之蛋白質，通常與一種或一種以上不同蛋白質諸如本文所述之IL-15及/或IL-15R連接(視情況經由如本文所述之結構域連接子)。在某些情況下，兩個Fc融合蛋白可以形成同二聚體Fc融合蛋白或異二聚體Fc融合蛋白，後者為較佳。在某些情況下，異二聚體Fc融合蛋白之一種單體僅包含Fc結構域(例如，空Fc結構域)，且另一種單體為Fc融合體，其包含變異體Fc結構域及蛋白質結構域，諸如受體、配位體或其他結合搭配物。
[00301] 如本文所用之「位置」意指蛋白質序列中之位置。位置可以按順序編號，或根據公認形式(例如用於抗體編號之EU索引)編號。
[00302] 在本文中本發明之異二聚體蛋白之單體上下文中的「鏈型」意指，與「匹配」之兩條DNA鏈相似，將異二聚化變異體併入每個單體中以保持、產生及/或增強「匹配」形成異二聚體之能力。舉例而言，若某些pI變異體經工程化為單體A (例如，使pI更高)，則亦可以利用之「電荷對」之空間變異體不會干擾pI變異體，例如將使pI更高之電荷變異體置於相同「鏈」或「單體」上以保持兩種功能。類似地，對於下文更全面概述之一組成對出現之「偏態」變異體，熟習此項技術者將考慮pI以決定將哪一條鏈或單體併入一組對中，使得亦使用偏態之pI使pI分離最大化。
[00303] 「野生型或WT」在本文中意指在自然界中存在之胺基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因變異。WT蛋白具有未經有意修飾之胺基酸序列或核苷酸序列。
[00304] 本發明之異二聚體蛋白通常為分離的或重組的。當用於描述本文揭示之各種多肽時，「分離的」意指已自其表現之細胞或細胞培養物中鑒定且分離及/或回收之多肽。通常，藉由至少一個純化步驟製備分離多肽。「分離蛋白質」係指實質上不含來自細胞培養物諸如宿主細胞蛋白之其他蛋白質的蛋白質。「重組」意指使用重組核酸技術在外源宿主細胞中產生之蛋白質。
[00305] 關於蛋白質序列之「胺基酸序列同一性百分比(%)」定義為在比對序列且引入缺口(必要時)以實現最大序列同一性百分比並且不考慮任何保守取代作為序列同一性之一部分後，候選序列中之胺基酸殘基與特定(親本)序列中之胺基酸殘基相同的百分比。用於確定胺基酸序列同一性百分比之比對可以此項技術範圍內之各種方式實現，例如，使用公眾可用之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign (DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定用於量測比對之適當參數，包括在所比較之序列全長上實現最大比對所需之任何演算法。一種特定程式為在美國公開案第20160244525號之第[0279]至[0280]段中概述之ALIGN-2程式，其以引用之方式併入本文中。
[00306] 本發明之胺基酸序列(「本發明序列」)與親本胺基酸序列之間的同一性程度計算為兩個序列比對中之精確匹配數除以「本發明序列」之長度或親本序列之長度，以最短者為准。結果以同一性百分比表示。
[00307] 在一些實施方案中，兩種或兩種以上之胺基酸序列為至少50%、60%、70%、80%或90%同一性。在一些實施方案中，兩種或兩種以上之胺基酸序列為至少95%、97%、98%、99%或甚至100%同一性。
[00308] 「抗原結合結構域」或「ABD」在本文中意指抗原結合分子之一部分，其賦予抗原決定子以其結合特異性。
[00309] 如本文所用，術語「抗原結合分子」在其最廣泛意義上指任何特異性結合抗原決定子之分子。抗原結合分子可為蛋白質、碳水化合物、脂質或其他化合物。抗原結合分子之實例為免疫球蛋白及其衍生物或片段，例如Fab及scFv。抗原結合分子之其他實例為受體及配位體。
[00310] 「特異性結合」或「特異性結合於」或對特定抗原或抗原決定基具「特異性」意指與非特異性相互作用可量測地不同的結合。例如，可以藉由測定與對照分子結合相比之分子結合來量測特異性結合，該對照分子通常為不具有結合活性之類似結構之分子。舉例而言，特異性結合可藉由與類似於靶標之對照分子競爭來確定。
[00311] 特異性結合之強度或親和力可以用相互作用之解離常數(KD
)表示，其中較小KD
表示較大親和力且較大KD
表示較低親和力。結合特性可藉由此項技術中熟知之方法確定，諸如生物層干涉量測法及基於表面電漿共振之方法。一種此方法需要量測抗原結合位點/抗原或受體/配位體複合物之結合及解離速率，其中速率取決於複合物搭配物之濃度，相互作用之親和力及同樣影響兩個方向之速率的幾何參數。因此，可確定結合速率(ka)及解離速率(kd)，且kd/ka比率等於解離常數KD
(參見例如Nature 361:186-187 (1993)及Davies等 (1990) Annual Rev Biochem 59:439-473)。
[00312] 特定分子或抗原決定基之特異性結合可以表現為，例如抗原結合分子對於抗原或抗原決定基之KD
為至少約10-4
M、至少約10-5
M、至少約10-6
M、至少約10-7
M、至少約10-8
M、至少約10-9
M、或者至少約10-10
M、至少約10-11
M、至少約10-12
M或10-12
M以上。通常，相對於抗原或抗原決定基，特異性結合抗原之抗原結合分子之KD
為對照分子之20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或10,000倍以上。
[00313] 此外，特定分子或抗原決定基之特異性結合可以表現為，例如相對於對照，抗原結合分子對於抗原或抗原決定基之ka或結合速率對於抗原決定基為至少20倍、50倍、100倍、500倍、1000倍、5,000倍、10,000倍或10,000倍以上。
[00314] 「抗原決定基」在本文中意指與特定抗原結合結構域相互作用之決定子，例如抗體分子之可變區，稱為互補位(paratope)。抗原決定基為分子諸如胺基酸或糖側鏈之分組，且通常具有特定結構特徵以及特定電荷特徵。單個分子可具有一個以上之抗原決定基。抗原決定基可包含直接參與結合之胺基酸殘基(亦稱為抗原決定基之免疫顯性成份)及其他不直接參與結合之胺基酸殘基，諸如由特異性抗原結合肽有效阻斷之胺基酸殘基；換言之，胺基酸殘基位於特異性抗原結合肽之足跡內。抗原決定基可為構形的或線性的。構形抗原決定基由線性多肽鏈之不同區段之空間並置胺基酸產生。線性抗原決定基為由多肽鏈中之相鄰胺基酸殘基所產生者。構形抗原決定基與非構形抗原決定基之區別在於，在變性溶劑之存在下，與前者而非後者之結合喪失。抗原決定基通常於獨特空間構形中包括至少3個且更通常至少5或8-10個胺基酸。識別相同抗原決定基之抗原結合分子可於簡單免疫檢定中證實，該免疫檢定顯示一個抗原結合分子阻斷另一抗原結合分子與靶抗原結合之能力，例如「分級(binning)」。如下所述，本發明不僅包括本文列舉之抗原結合分子及抗原結合結構域，而且亦包括與列舉之抗原結合分子或抗原結合結構域結合之抗原決定基競爭結合。
[00315] 「融合」或「共價連接」在本文中意指組份(例如，IL-15及Fc結構域)藉由肽鍵直接連接或經由本文概述之結構域連接子連接。
[00316] 如本文所用，術語「單鏈」係指包含藉由肽鍵線性連接之胺基酸單體之分子。
[00317] 在進一步描述本發明之前，應理解本發明不限於所描述之特定實施方案，因此當然可以改變。亦應理解，本文使用之術語僅用於描述特定實施方案，而非限制性，因為本發明之範疇僅受隨附申請專利範圍之限制。
II. 抗體
[00318] 如下文所討論，通常使用術語「抗體」。可用於本發明之抗體可呈現如本文所述之許多形式，包括本文描述且在附圖中描繪之傳統抗體以及抗體衍生物、片段及模擬物。
[00319] 傳統抗體結構單元通常包含四聚體。每個四聚體通常由兩對相同多肽鏈組成，各對具有一條「輕」鏈(通常具有約25 kDa之分子量)及一條「重」鏈(通常具有約50-70 kDa之分子量)。人類輕鏈分類為κ及λ輕鏈。本發明係針對通常基於IgG類之雙特異性抗體，其具有若干亞類，包括但不限於IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。一般而言，IgG1、IgG2及IgG4比IgG3更頻繁使用。應當注意，IgG1具有不同的同種異型物，其在356 (D或E)及358 (L或M)處具有多態性。本文描繪之序列使用356E/358M同種異型物，但本文包括其他同種異型物。亦即，包括本文包括之IgG1 Fc結構域之任何序列可具有356D/358L，替代356E/358M同種異型物。
[00320] 此外，本文中之許多抗體在位置220處具有至少一個由絲胺酸替代之半胱胺酸；通常此為在本文描繪之大部分序列中之「scFv單體」側，但其亦可在「Fab單體」側，或兩者，以減少二硫鍵形成。本文序列中特定包括此等半胱胺酸中之一者或兩者被替代(C220S)。
[00321] 因此，如本文所用之「同種型」意指由其恒定區之化學及抗原特徵限定之免疫球蛋白的任何亞類。應理解，治療性抗體亦可包含同種型及/或亞類之雜合體。舉例而言，如以引用之方式併入之美國公開案2009/0163699中所示，本發明使用人類IgG1/G2雜合體。
[00322] 高變區通常涵蓋以下胺基酸殘基：在輕鏈可變區中，大約胺基酸殘基24-34 (LCDR1；「L」表示輕鏈)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)；及在重鏈可變區中，大約31-35B (HCDR1；「H」表示重鏈)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；Kabat等, SEQUENCES OF PROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 第5版, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)；及/或形成高變環之彼等殘基(例如輕鏈可變區中之殘基26-32 (LCDR1)、50-52 (LCDR2)及91-96 (LCDR3)以及重鏈可變區中之26-32 (HCDR1)、53-55 (HCDR2)及96-101 (HCDR3)；Chothia及Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917)。下文描述本發明之特定CDR。
[00323] 如熟習此項技術者所理解，CDR之確切編號及安置在不同編號系統中可能不同。然而，應理解，可變重鏈及/或可變輕鏈序列之揭示內容包括相關(固有)CDR之揭示內容。因此，各可變重鏈區之揭示內容為vhCDR (例如vhCDR1、vhCDR2及vhCDR3)之揭示內容，且各可變輕鏈區之揭示內容為vlCDR (例如vlCDR1、vlCDR2及vlCDR3)之揭示內容。CDR編號之有用比較如下，參見Lafranc等, Dev. Comp. Immunol. 27(1):55-77 (2003)：表 2 
[00324] 在整個本說明書中，當提及可變結構域中之殘基時，通常使用Kabat編號系統(大約，輕鏈可變區之殘基1-107及重鏈可變區之殘基1-113)以及Fc區之EU編號系統(例如，Kabat等, 同上(1991))。
[00325] 重鏈之另一種Ig結構域為鉸鏈區。「鉸鏈」或「鉸鏈區」或「抗體鉸鏈區」或「鉸鏈結構域」在本文中意指在抗體之第一恒定結構域與第二恒定結構域之間包含胺基酸之柔性多肽。在結構上，IgG CH1結構域終止於EU位置215，且IgG CH2結構域始於殘基EU位置231。因此對於IgG，抗體鉸鏈在本文中定義為包括位置216 (IgG1中之E216)至230 (IgG1中之p230)，其中編號係根據Kabat中之EU索引。在某些情況下，使用「鉸鏈片段」，其在鉸鏈結構域之N端及C端中之任一者或兩者上含有較少胺基酸。如本文所述，pI變異體亦可在鉸鏈區中形成。
[00326] 輕鏈通常包含兩個結構域，亦即輕鏈可變結構域(含有輕鏈CDR且與重鏈可變結構域一起形成Fv區)及輕鏈恒定區(通常稱為CL或Cκ)。
[00327] 下文概述之用於額外取代之另一個相關區域為Fc區。
[00328] 本發明提供大量不同之CDR組。在該情況下，「完全CDR組」包含三個可變輕鏈CDR及三個可變重鏈CDR，例如，vlCDR1、vlCDR2、vlCDR3、vhCDR1、vhCDR2及vhCDR3。此等可分別為較大的可變輕鏈結構域或可變重鏈結構域之一部分。此外，如本文中更全面概述，當使用重鏈及輕鏈時(例如當使用Fab時)，可變重鏈結構域及可變輕鏈結構域可在獨立多肽鏈上，或者在scFv序列之情況下在單個多肽鏈上。
[00329] CDR有助於抗原結合之形成，或者更具體言之，抗體之抗原決定基結合位點之形成。「抗原決定基」係指與抗體分子之可變區中之特定抗原結合位點相互作用的決定子，稱為互補位。抗原決定基為諸如胺基酸或糖側鏈之分子的分組，且通常具有特定結構特徵以及特定電荷特徵。單一抗原可具有一個以上之抗原決定基。
[00330] 抗原決定基可包含直接參與結合之胺基酸殘基(亦稱為抗原決定基之免疫顯性成份)及不直接參與結合之其他胺基酸殘基，諸如由特異性抗原結合肽有效阻斷之胺基酸殘基；換言之，胺基酸殘基位於特異性抗原結合肽之足跡內。
[00331] 抗原決定基可為構形的或線性的。構形抗原決定基由線性多肽鏈之不同區段之空間並置胺基酸產生。線性抗原決定基為由多肽鏈中之相鄰胺基酸殘基所產生者。構形抗原決定基與非構形抗原決定基之區別可能在於，在變性溶劑之存在下，與前者而非後者之結合喪失。
[00332] 抗原決定基通常於獨特空間構形中包括至少3個且更通常至少5或8-10個胺基酸。識別相同抗原決定基之抗體可於簡單免疫檢定中證實，該免疫檢定顯示一種抗體阻斷另一抗體與靶抗原結合之能力，例如「分級」。如下所述，本發明不僅包括本文列舉之抗原結合結構域及抗體，而且亦包括與列舉之抗原結合結構域結合之抗原決定基競爭結合。
[00333] 因此，本發明提供了不同的抗體結構域。如本文所述及此項技術中已知，本發明之異二聚體抗體在重鏈及輕鏈內包含不同結構域，其亦可以重疊。此等結構域包括但不限於Fc結構域、CH1結構域、CH2結構域、CH3結構域、鉸鏈結構域、重鏈恒定結構域(CH1-鉸鏈-Fc結構域或CH1-鉸鏈-CH2-CH3)、重鏈可變結構域、輕鏈可變結構域、輕鏈恒定結構域、Fab結構域及scFv結構域。
[00334] 因此，「Fc結構域」包括-CH2-CH3結構域及視情況鉸鏈結構域(-H-CH2-CH3)。在本文之實施方案中，當scFv連接至Fc結構域時，scFv構築體之C端連接至Fc結構域之鉸鏈的全部或一部分；例如，它通常連接至作為鉸鏈開端之序列EPKS。重鏈包含重鏈可變結構域及恒定結構域，其包括CH1-視情況選用之鉸鏈-包含CH2-CH3之Fc結構域。輕鏈包含輕鏈可變結構域及輕鏈恒定結構域。scFv包含重鏈可變結構域、scFv連接子及輕鏈可變結構域。在本文概述之大多數構築體及序列中，可變重鏈之C端連接至scFv連接子之N端，其C端連接至可變輕鏈之N端(N-vh-連接子-vl-C)，但可以切換(N-vl-連接子-vh-C)。
[00335] 本發明之一些實施方案包含至少一個scFv結構域，其儘管非天然存在，但通常包括藉由scFv連接子連接在一起的重鏈可變結構域及輕鏈可變結構域。如本文所概述，雖然scFv結構域通常自N端至C端定向為vh-scFv連接子-vl，但對於任何scFv結構域(或使用來自Fab之vh及vl序列構築者)，此可以顛倒為vl-scFv連接子-vh，取決於形式在一端或兩端具有視情況選用之連接子。
[00336] 如本文所示，存在許多合適之連接子(用作結構域連接子或scFv連接子)，其可用於共價連接所述結構域，包括藉由重組技術產生之傳統肽鍵。在一些實施方案中，連接子肽可主要包括以下胺基酸殘基：Gly、Ser、Ala或Thr。連接子肽應具有足以連接兩個分子之長度，使得它們相對於彼此呈現適當構形，從而使其保持所需活性。在一個實施方案中，連接子之長度為約1至50個胺基酸，較佳長度為約1至30個胺基酸。在一個實施方案中，可使用長度為1至20個胺基酸之連接子，在一些實施方案中可使用約5至約10個胺基酸。有用之連接子包括甘胺酸-絲胺酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n及(GGGS)n，其中n為至少1 (且通常為3至4)之整數，甘胺酸-丙胺酸聚合物，丙胺酸-絲胺酸聚合物及其他柔性連接子。或者，各種非蛋白質聚合物，包括但不限於聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚氧化烯，或聚乙二醇與聚丙二醇之共聚物，可用作連接子。
[00337] 其他連接子序列可包括任何長度之CL/CH1結構域之任何序列，但不包括CL/CH1結構域之所有殘基；例如CL/CH1結構域之前5-12個胺基酸殘基。連接子可源自免疫球蛋白輕鏈，例如Cκ或Cλ。連接子可源自任何同種型之免疫球蛋白重鏈，包括例如Cγ1、Cγ2、Cγ3、Cγ4、Cα1、Cα2、Cδ、Cε及Cμ。連接子序列亦可源自其他蛋白質，諸如Ig樣蛋白質(例如TCR、FcR、KIR)，鉸鏈區衍生序列，以及來自其他蛋白質之其他天然序列。
[00338] 在一些實施方案中，連接子為「結構域連接子」，用於將如本文所概述之任何兩個結構域連接在一起。舉例而言，可存在將Fab之CH1結構域之C端連接至scFv之N端的結構域連接子，其中另一個視情況選用之結構域連接子將scFv之C端連接至CH2結構域(儘管在許多實施方案中，鉸鏈用作該結構域連接子)。雖然可以使用任何合適之連接子，但許多實施方案利用甘胺酸-絲胺酸聚合物作為結構域連接子，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n及(GGGS)n，其中n為至少1 (且通常3至4至5)之整數，以及允許具有足夠長度及柔性之兩個結構域之重組連接以允許每個結構域保持其生物學功能之任何肽序列。在某些情況下，且注意到如下所述之「鏈型」，可以使用在scFv連接子之一些實施方案中使用的帶電結構域連接子。
[00339] 在一些實施方案中，連接子為scFv連接子，用於共價連接如本文所討論之vh及vl結構域。在許多情況下，scFv連接子為帶電scFv連接子。
[00340] 因此，本發明進一步提供帶電scFv連接子，以便促進第一單體與第二單體之間的pI分離。亦即，藉由併入帶正電荷或負電荷之scFv連接子(或者在不同單體上使用scFv之骨架的情況下為兩者)，這允許包含帶電連接子之單體改變pI而對Fc結構域不作出進一步變化。此等帶電連接子可以取代至任何含有標準連接子之scFv中。同樣，如熟習此項技術者所理解，根據pI之所需變化，將帶電scFv連接子用於適當之「鏈」或單體上。舉例而言，如本文所討論，為製備三重F形式異二聚體抗體，計算每個所需抗原結合結構域之Fv區的原始pI，並選擇一個以製備scFv，且取決於pI，選擇正或負連接子。
[00341] 帶電結構域連接子亦可用於增加本發明單體之pI分離，因此本文包括之彼等可用於本文中利用連接子之任何實施方案中。
[00342] 特定言之，一些形式之抗體，通常稱為「異二聚體抗體」，意指該蛋白具有至少兩個自組裝成異二聚體Fc結構域之相關Fc序列及至少兩個Fv區，無論為Fab或scFv。
III. 嵌合及人源化抗體
[00343] 在某些實施方案中，本發明之檢查點阻斷抗體包含來自特定生殖系重鏈免疫球蛋白基因之重鏈可變區及/或來自特定生殖系輕鏈免疫球蛋白基因之輕鏈可變區。舉例而言，此等抗體可包含以下或由以下組成：包含作為特定生殖系序列之「產物」或「源自」特定生殖系序列之重鏈或輕鏈可變區的人類抗體。藉由比較人類抗體之胺基酸序列與人類生殖系免疫球蛋白之胺基酸序列且選擇序列最接近於人類抗體序列(亦即最大同一性%)之人類生殖系免疫球蛋白序列(使用本文概述之方法)，因而可鑒定作為人類生殖系免疫球蛋白序列之「產物」或「源自」人類生殖系免疫球蛋白序列之人類抗體。作為人類生殖系免疫球蛋白序列之「產物」或「源自」人類生殖系免疫球蛋白序列之人類抗體可含有由於例如天然存在之體細胞突變或有意引入定點突變而與生殖系序列相比之胺基酸差異。然而，人源化抗體通常在胺基酸序列方面與由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少90%相同，且與其他物種之生殖系免疫球蛋白胺基酸序列(例如，鼠類生殖系序列)相比含有將抗體鑒定為源自人類序列之胺基酸殘基。在某些情況下，人源化抗體在胺基酸序列方面可與由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列至少95%、96%、97%、98%或99%，或甚至至少96%、97%、98%或99%相同。通常，源自特定人類生殖系序列之人源化抗體將顯示與由人類生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列相比不超過10-20個胺基酸差異(在引入本文中任何偏態
、pI及消除變異體之前；亦即，在引入本發明之變異體之前，變異體之數目通常較低)。在某些情況下，人源化抗體可顯示與由生殖系免疫球蛋白基因編碼之胺基酸序列相比不超過5個、或甚至不超過4、3、2或1個胺基酸差異(此外，在引入本文中任何偏態
、pI及消除變異體之前；亦即，在引入本發明之變異體之前，變異體之數目通常較低)。
[00344] 在一個實施方案中，如此項技術中已知，親本抗體已經親和力成熟。基於結構之方法可用於人源化及親和力成熟，例如如USSN 11/004,590中所述。基於選擇之方法可用於使抗體可變區人源化及/或親和力成熟，包括但不限於以下所述之方法：Wu等, 1999, J. Mol. Biol. 294:151-162；Baca等, 1997, J. Biol. Chem. 272(16):10678-10684；Rosok等, 1996, J. Biol. Chem. 271(37): 22611-22618；Rader等, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 8910-8915；Krauss等, 2003, Protein Engineering 16(10):753-759，皆以引用之方式全部併入。其他人源化方法可涉及僅部分CDR之移植，包括但不限於以下所述之方法：USSN 09/810,510；Tan等, 2002, J. Immunol. 169:1119-1125；De Pascalis等, 2002, J. Immunol. 169:3076-3084，皆以引用之方式全部併入。
IV. 異二聚體Fc融合蛋白
[00345] 本發明係關於異二聚體Fc融合蛋白，其包括不同取向之IL-15及IL-15受體α (IL-15Rα)蛋白結構域。Fc結構域可源自IgG Fc結構域，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc結構域，其中IgG1 Fc結構域特別用於本發明。
[00346] 每條鏈之羧基端部分限定主要負責效應功能之恒定區。Kabat等集合重鏈及輕鏈之可變區之眾多一級序列。根據序列之保守程度，他們將個別一級序列分為CDR及構架且製成其清單(參見SEQUENCES OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, 第5版, NIH出版, No. 91-3242, E.A. Kabat等，以引用之方式全部併入)。在整個本說明書中，當提及可變結構域中之殘基(大約，輕鏈可變區之殘基1-107及重鏈可變區之殘基1-113)時，通常使用Kabat編號系統，以及Fc區之EU編號系統(例如，Kabat等, 同上(1991))。
[00347] 在免疫球蛋白之IgG亞類中，重鏈中存在若干免疫球蛋白結構域。「免疫球蛋白(Ig)結構域」在本文中意指具有不同三級結構之免疫球蛋白區域。在本發明中關注重鏈結構域，包括重鏈恒定(CH)結構域及鉸鏈結構域。在IgG抗體之情況下，IgG同種型各自具有三個CH區。因此，在IgG情形下之「CH」結構域如下：「CH1」係指根據如Kabat中之EU索引之第118-215位。「鉸鏈」係指根據如Kabat中之EU索引之第216-230位。「CH2」係指根據如Kabat中之EU索引之第231-340位，且「CH3」係指根據如Kabat中之EU索引之第341-447位。如表1中所示，重鏈結構域之確切編號及安置在不同的編號系統中可能不同。如本文所示且下文所述，pI變異體可在下文討論之一個或一個以上CH區以及鉸鏈區中。
[00348] 重鏈之另一種Ig結構域為鉸鏈區。「鉸鏈」或「鉸鏈區」或「抗體鉸鏈區」或「免疫球蛋白鉸鏈區」在本文中意指包含在抗體之第一重鏈恒定結構域與第二重鏈恒定結構域之間之胺基酸的柔性多肽。在結構上，IgG CH1結構域終止於EU位置215，且IgG CH2結構域始於殘基EU位置237。因此對於IgG，抗體鉸鏈在本文中定義為包括位置216 (IgG1中之E216)至230 (IgG1中之P230)，其中編號係根據如Kabat中之EU索引。在一些實施方案中，例如在Fc區之情形下，包括鉸鏈，通常係指位置216-230。如本文所述，pI變異體亦可在鉸鏈區中形成。
[00349] 因此，本發明提供不同的抗體結構域。如本文所述且此項技術中已知，本發明之異二聚體蛋白包含不同結構域，其亦可重疊。此等結構域包括但不限於Fc結構域、CH1結構域、CH2結構域、CH3結構域、鉸鏈結構域及重鏈恒定結構域(CH1-鉸鏈-Fc結構域或CH1-鉸鏈-CH2-CH3)。
[00350] 因此，「Fc結構域」包括-CH2-CH3結構域及視情況鉸鏈結構域。在一些實施方案中，Fc結構域亦包括CH1結構域之一部分。在一些實施方案中，當蛋白質片段例如IL-15或IL-15Rα連接至Fc結構域時，IL-15或IL-15Rα構築體之C端連接至Fc結構域之鉸鏈之全部或一部分；例如，其通常連接至作為鉸鏈開端之序列EPKSC。在本文其他實施方案中，當蛋白質片段，例如IL-15或IL-15Rα連接至Fc結構域時，蛋白質片段之N端連接至CH3結構域之C端。
[00351] 在本文概述之Fc結構域蛋白之一些構築體及序列中，IL-15或IL-15Rα蛋白質片段之C端連接至結構域連接子之N端，該結構域連接子之C端連接至恒定Fc結構域之N端(N-IL-15或IL-15Rα蛋白質片段-連接子-Fc結構域-C)，但可以切換(N-Fc結構域-連接子-IL-15或IL-15Rα蛋白質片段-C)。在本文概述之其他構築體及序列中，第一蛋白質片段之C端視情況經由結構域連接子連接至第二蛋白質片段之N端，第二蛋白質片段之C端視情況經由結構域連接子連接至恒定Fc結構域之N端。在本文概述之其他構築體及序列中，提供不與第一蛋白質片段或第二蛋白質片段連接之恒定Fc結構域。異二聚體Fc融合蛋白可含有兩種或兩種以上之本文所述之示例性單體Fc結構域蛋白。在另一構築體中，第一蛋白質片段之N端視情況經由結構域連接子連接至第二蛋白質片段之C端，第二蛋白質片段之N端視情況經由結構域連接子連接至恒定Fc結構域之C端。
[00352] 在一些實施方案中，連接子為「結構域連接子」，用於將如本文所概述之任何兩個結構域連接在一起，其中一些描繪於圖87中。雖然可以使用任何合適之連接子，但許多實施方案利用甘胺酸-絲胺酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n及(GGGS)n，其中n為至少1 (且通常為0至1至2至3至4至5)之整數以及允許具有足夠長度及柔性之兩個結構域之重組連接以允許每個結構域保持其生物學功能的任何肽序列。在某些情況下，且注意到如下文所概述之「鏈型」，連接子為帶電結構域連接子。
[00353] 因此，在一些實施方案中，本發明提供異二聚體Fc融合蛋白，其依賴於使用兩種不同之重鏈變異體Fc序列，其將自組裝形成異二聚體Fc結構域融合多肽。
[00354] 在一個實施方案中，異二聚體Fc融合蛋白含有至少兩個恒定結構域，其可經工程化以產生異二聚體，諸如pI工程化。可以使用之其他Fc結構域包括含有已經pI工程化之本發明之CH1、CH2、CH3及鉸鏈結構域中之一者或一者以上的片段。特定言之，圖9A-9G及圖39A-39D中描繪之形式為異二聚體Fc融合蛋白，意味著蛋白質具有自組裝成異二聚體Fc結構域之兩個相關Fc序列及至少一個蛋白質片段(例如，1、2個或2個以上之蛋白質片段)。在某些情況下，第一蛋白質片段與第一Fc序列連接，且第二蛋白質片段與第二Fc序列連接。在其他情況下，第一蛋白質片段與第一Fc序列連接，且第一蛋白質片段非共價連接至未與Fc序列連接之第二蛋白質片段。在某些情況下，異二聚體Fc融合蛋白含有第一蛋白質片段，該第一蛋白質片段與第二蛋白質片段連接，該第二蛋白質片段與第一Fc序列連接，及不與第一或第二蛋白質片段連接之第二Fc序列。
[00355] 本發明係關於新型構築體，以提供允許與一個或一個以上結合搭配物、配位體或受體結合之異二聚體Fc融合蛋白。異二聚體Fc融合構築體係基於抗體重鏈之兩個Fc結構域之自組裝性質，例如，組裝成「二聚體」之兩個「單體」。異二聚體Fc融合體藉由改變如下面更全面地討論之每個單體之胺基酸序列來製備。因此，本發明一般關於異二聚體Fc融合蛋白之產生，其可以若干方式共同接合結合搭配物或配位體或受體，依賴於在每個鏈上不同之恒定區中的胺基酸變異體，以促進異二聚體形成及/或允許異二聚體相比於同二聚體容易純化。
[00356] 存在許多可用於產生本發明之異二聚體之機制。另外，如熟習此項技術者所理解，此等機制可以組合以確保高度異二聚化。因此，導致異二聚體產生之胺基酸變異體被稱為「異二聚化變異體」。如下文所討論，異二聚化變異體可包括空間變異體(例如下文所述之「球/孔(knobs and holes)」或「偏態」變異體及下文所述之「電荷對」變異體)以及「pI變異體」，其允許自異二聚體中純化同二聚體。如以引用之方式全部併入本文之WO2014/145806中一般描述且特定如下文關於「異二聚化變異體」之討論，異二聚化之有用機制包括「球/孔」(「KIH」；有時在本文中描述為「偏態」變異體) (參見WO2014/145806中之討論)，如WO2014/145806中所述之「靜電轉向」或「電荷對」，如WO2014/145806中所述之pI變異體，及如WO2014/145806及以下所述之一般額外Fc變異體。
[00357] 在本發明中，存在若干可以導致異二聚體蛋白及抗體易於純化之基本機制；一種依賴於使用pI變異體，使得每個單體及隨後每個二聚體物質具有不同的pI，從而允許A-A、A-B及B-B二聚體蛋白之等電純化。或者，某些形式也允許基於尺寸進行分離。如下面進一步概述，亦可相比於同二聚體「偏向」形成異二聚體。因此，空間異二聚化變異體與pI或電荷對變異體之組合在本發明中特別有用。
[00358] 一般而言，特別用於本發明之實施方案依賴於包括偏態變異體之變異體組，其與pI變異體相結合促進異二聚化形成優於同二聚體形成，這增加兩種單體及各二聚體物質之間的pI差異。
[00359] 另外，如下文更充分概述，取決於異二聚體Fc融合蛋白之形式，pI變異體可包含在單體之恒定及/或Fc結構域內，或可以使用結構域連接子。亦即，本發明亦提供在單體及/或帶電結構域連接子中之一者或兩者上之pI變異體。另外，替代功能之其他胺基酸工程亦可賦予pI變化，諸如Fc、FcRn及KO變異體。
[00360] 在利用pI作為分離機制以允許異二聚體蛋白純化之本發明中，可以將胺基酸變異體引入單體多肽中之一者或兩者；亦即，一種單體(在本文中簡稱為「單體A」)之pI可經工程化遠離單體B，或者單體A和B皆可以改變，其中單體A之pI增加且單體B之pI降低。如所討論，任一個或兩個單體之pI變化可以藉由以下進行：去除或添加帶電殘基(例如，中性胺基酸由帶正電或帶負電之胺基酸殘基替代，例如，麩醯胺酸變為麩胺酸)，將帶電殘基自正或負變為相反電荷(例如，天冬胺酸變為離胺酸)或將帶電殘基變為中性殘基(例如，電荷損失；離胺酸變為絲胺酸)。許多此等變異體在附圖中示出。
[00361] 因此，本發明之該實施方案提供在至少一個單體中產生足夠的pI變化，使得異二聚體可以與同二聚體分離。如熟習此項技術者所理解，且如下面進一步討論，此可以藉由使用「野生型」重鏈恒定區及已經工程化以增加或減少其pI之變異體區(wt A : B+或wt A : B-)，或藉由增加一個區域且減少另一區域(A+ : B-或A- : B+)來進行。
[00362] 因此，一般而言，本發明之一些實施方案之組份為恒定區中之胺基酸變異體，其旨在藉由將胺基酸取代(「pI變異體」或「pI取代」)併入一種或兩種單體中而改變二聚體蛋白之至少一種單體(若非兩種)之等電點(pI)。若兩種單體之pI差異小至0.1個pH單位，則可以實現異二聚體與兩種同二聚體之分離，其中0.2、0.3、0.4及0.5或0.5以上均可用於本發明。
[00363] 如熟習此項技術者所理解，為了獲得良好分離，包括在每個或兩個單體上之pI變異體之數目將部分取決於組份之起始pI。亦即，為了確定哪種單體工程化或哪個「方向」(例如，更正或更負)，計算Fc結構域之序列以及在某些情況下與Fc結構域連接之蛋白質結構域且自其作出決定。如此項技術中所知，不同的Fc結構域及/或蛋白質結構域將具有在本發明中利用之不同起始pI。一般而言，如本文所概述，pI經工程化以導致每個單體之總pI差為至少約0.1 log，其中0.2至0.5如本文所述較佳。
[00364] 此外，如熟習此項技術者所理解且本文所概述，在一些實施方案中，可以基於尺寸將異二聚體與同二聚體分離。如附圖所示，例如，若干形式允許基於尺寸分離異二聚體與同二聚體。
[00365] 在使用pI變異體來實現異二聚化之情況下，藉由使用Fc結構域之恒定區，提供設計及純化異二聚體Fc融合蛋白之更模組化方法。因此，在一些實施方案中，必須工程化異二聚化變異體(包括偏態及純化異二聚化變異體)。另外，在一些實施方案中，藉由引入來自不同IgG同種型之pI變異體，顯著降低由pI變異體產生之免疫原性的可能性，使得pI改變而未引入顯著的免疫原性。因此，欲解決之另一問題為闡明具有高人類序列含量之低pI恒定結構域，例如在任何特定位置最小化或避免非人類殘基。
[00366] 該pI工程化可能發生之附帶益處亦為血清半衰期延長及FcRn結合增加。亦即，如USSN 13/194,904 (以引用之方式全部併入)中所述，降低抗體恒定結構域之pI (包括在抗體及Fc融合體中存在者)可導致活體內更長的血清保留。此等用於增加血清半衰期之pI變異體亦有助於pI變化以進行純化。
[00367] 另外，應注意，異二聚化變異體之pI變異體為Fc融合蛋白之分析及品質控制過程提供額外益處，因為當存在同二聚體時消除、最小化及區分之能力很顯著。類似地，可靠地測試異二聚體Fc融合蛋白產生之再現性的能力為重要的。
A. 異二聚化變異體
[00368] 本發明提供異二聚體單體，包括呈多種形式之異二聚體Fc融合蛋白，其利用異二聚體變異體以允許異二聚體形成及/或自同二聚體中純化。異二聚體融合構築體係基於兩個Fc結構域之自組裝性質，例如組裝成「二聚體」之兩個「單體」。
[00369] 存在許多合適的成對之異二聚化偏態變異體組。此等變異體以「成對」之「組」形式出現。亦即，該對之一組併入第一單體中，且該對之另一組併入第二單體中。應注意，此等組不一定表現為「球/孔」變異體，一個單體上之殘基與另一單體上之殘基之間一一對應；亦即，此等成對之組形成兩個單體之間的界面，其促進異二聚體形成且阻止同二聚體形成，從而允許在生物條件下自發形成之異二聚體的百分比超過90%，而非預期50% (25%同二聚體A/A:50%異二聚體A/B:25%同二聚體B/B)。
B. 空間變異體
[00370] 在一些實施方案中，藉由添加空間變異體可促進異二聚體之形成。亦即，藉由改變每個重鏈中之胺基酸，不同重鏈更可能結合形成異二聚體結構，而非形成具有相同Fc胺基酸序列之同二聚體。合適之空間變異體包括於USSN 15/141,350之圖29中，其皆以引用之方式全部併入本文，以及在圖84中。
[00371] 一種機制在此項技術中通常稱為「球/孔」，係指產生空間影響以促進異二聚體形成且不利於同二聚體形成之胺基酸工程化，如USSN 61/596,846；Ridgway等, Protein Engineering 9(7):617 (1996)；Atwell等, J. Mol. Biol. 1997 270:26；美國專利第8,216,805號中所述，該等文獻均以引用之方式全部併入本文中。附圖鑒定多種依賴於「球/孔」之「單體A-單體B」對。另外，如Merchant等, Nature Biotech. 16:677 (1998)中所述，此等「球/孔」突變可與二硫鍵組合，以偏向異二聚化形成。
[00372] 用於產生異二聚體之另一機制有時稱為「靜電轉向」，如Gunasekaran等, J. Biol. Chem. 285(25):19637 (2010)中所述，其以引用之方式全部併入本文中。這有時在本文中稱為「電荷對」。在該實施方案中，靜電用於偏向形成異二聚化。如熟習此項技術者所理解，此等亦可對pI有影響，因此對純化亦有影響，因此在某些情況下亦可視為pI變異體。然而，由於產生此等以迫使異二聚化且不用作純化工具，因此其歸類為「空間變異體」。此等包括但不限於與D221R/P228R/K409R配對之D221E/P228E/L368E (例如，此等為單體對應組)及與C220R/E224R/P228R/K409R配對之C220E/P228E/368E。
[00373] 額外單體A及單體B變異體可與其他變異體視情況且獨立地以任何量組合，諸如本文概述之pI變異體或US 2012/0149876之圖37中所示之其他空間變異體，其均以引用之方式明確地併入本文中。
[00374] 在一些實施方案中，本文概述之空間變異體可以視情況且獨立地與任何pI變異體(或其他變異體，諸如Fc變異體、FcRn變異體等)合併至一個或兩個單體中，且可以獨立地且視情況包括或排除本發明之蛋白質。
[00375] 在圖3A-3E中可見合適偏態變異體之清單。在許多實施方案中特別有用的是成對之組，包括但不限於S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L；K370S : S364K/E357Q；及T366S/L368A/Y407V : T366W (視情況包括橋接二硫化物，T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C)。在命名方面，「S364K/E357Q : L368D/K370S」對意指一種單體具有雙變異體組S364K/E357Q且另一單體具有雙變異體組L368D/K370S；如上所述，此等對之「鏈型」取決於起始pI。
C. 異二聚體之pI (等電點)變異體
[00376] 一般而言，如熟習此項技術者所理解，存在兩大類pI變異體：增加蛋白質pI者(鹼性變化)及降低蛋白質pI者(酸性變化)。如本文所述，可以使用此等變異體之所有組合：一種單體可以是野生型，或不顯示與野生型顯著不同之pI的變異體，且另一單體可以更具鹼性或更具酸性。或者，各單體可以改變，一者變為更鹼性且一者變為更酸性。
[00377] pI變異體之較佳組合顯示於USSN 15/141,350之圖30中，其均以引用之方式全部併入本文中。如本文所概述且附圖中所示，此等變化相對於IgG1顯示，但所有同種型均可以這種方式改變，以及同種型雜合體。在重鏈恒定結構域來自IgG2-4之情況下，亦可使用R133E及R133Q。pI變異體描繪於圖4中。
[00378] 在一個實施方案中，若Fc單體之一包括CH1結構域，則pI變異體之較佳組合具有一個包含208D/295E/384D/418E/421D變異體之單體(當相對於人類IgG1時為N208D/Q295E/N384D/Q418E/N421D)。在某些情況下，第二單體包含帶正電之結構域連接子，包括(GKPGS)4
。在某些情況下，第一單體包括CH1結構域，包括位置208。因此，在不包括CH1結構域之構築體(例如對於不利用一個結構域上之CH1結構域之異二聚體Fc融合蛋白)中，較佳之負pI變異體Fc組包括295E/384D/418E/421D變異體(當相對於人類IgG1時為Q295E/N384D/Q418E/N421D)。
[00379] 在一些實施方案中，在Fc結構域之鉸鏈結構域中進行突變，包括位置216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229及230。因此，可以在位置216-230中之一者或一者以上中進行pI突變及特別是取代，其中1、2、3、4或5個突變可用於本發明。同樣，涵蓋單獨或與其他結構域中之其他pI變異體之所有可能組合。
[00380] 可用於降低鉸鏈結構域之pI之特定取代包括但不限於第221位之缺失，第222位之非天然纈胺酸或酥胺酸，第223位之缺失，第224位之非天然麩胺酸，第225位之缺失，第235位之缺失及第236位之缺失或非天然丙胺酸。在某些情況下，僅在鉸鏈結構域中進行pI取代，且在其他情況下，此等取代以任何組合添加至其他結構域中之其他pI變異體。
[00381] 在一些實施方案中，可在CH2區中進行突變，包括位置233、234、235、236、274、296、300、309、320、322、326、327、334及339。此外，可以進行此14個位置之所有可能組合；例如，pI抗體可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個CH2 pI取代。
[00382] 可用於降低CH2結構域之pI之特定取代包括但不限於第274位之非天然麩醯胺酸或麩胺酸，第296位之非天然苯丙胺酸，第300位之非天然苯丙胺酸，第309位之非天然纈胺酸，第320位之非天然麩胺酸，第322位之非天然麩胺酸，第326位之非天然麩胺酸，第327位之非天然甘胺酸，第334位之非天然麩胺酸，第339位之非天然酥胺酸，以及CH2及其他結構域中之所有可能組合。
[00383] 在該實施方案中，突變可以獨立地且視情況選自位置355、359、362、384、389、392、397、418、419、444及447。用於降低CH3結構域之pI之特定取代包括但不限於第355位之非天然麩醯胺酸或麩胺酸，第384位之非天然絲胺酸，第392位之非天然天冬醯胺酸或麩胺酸，第397位之非天然甲硫胺酸，第419位之非天然麩胺酸，第359位之非天然麩胺酸，第362位之非天然麩胺酸，第389位之非天然麩胺酸，第418位之非天然麩胺酸，第444位之非天然麩胺酸，以及第447位之缺失或非天然天冬胺酸。
D. 同種型變異體
[00384] 另外，本發明之許多實施方案依賴於將來自一個IgG同種型之特定位置之pI胺基酸「引入」另一者中，從而減少或消除將不需要之免疫原性引入變異體中之可能性。此等中之許多顯示於以引用之方式併入本文之美國公開申請案No. 2014/0370013之圖21中。亦即，出於多種原因，IgG1為治療抗體之常見同種型，包括高效應功能。然而，IgG1之重鏈恒定區具有比IgG2更高之pI (8.10對7.31)。藉由在特定位置將IgG2殘基引入IgG1骨架中，所得單體之pI降低(或增加)且另外表現出更長的血清半衰期。舉例而言，IgG1在第137位具有甘胺酸(pI 5.97)，且IgG2具有麩胺酸(pI 3.22)；引入麩胺酸將影響所得蛋白質之pI。如下所述，通常需要許多胺基酸取代來顯著影響變異體Fc融合蛋白之pI。然而，應注意如下文所討論，即使IgG2分子之變化亦允許血清半衰期增加。
[00385] 在其他實施方案中，進行非同種型之胺基酸改變，以減少所得蛋白質之總電荷狀態(例如，藉由將較高pI胺基酸改變為較低pI胺基酸)，或者允許結構容納穩定性等，如下面更進一步描述。
[00386] 另外，藉由pI工程化重及輕恒定結構域，可見異二聚體之各單體之顯著變化。如本文所討論，使兩種單體之pI相差至少0.5可以允許藉由離子交換色譜法或等電聚焦或對等電點敏感之其他方法進行分離。
E. 計算pI
[00387] 每個單體之pI可以取決於變異體重鏈恒定結構域之pI及包括變異體重鏈恒定結構域及融合搭配物之總單體之pI。因此，在一些實施方案中，使用美國公開申請案第2014/0370013號之圖19中的圖表，基於變異體重鏈恒定結構域計算pI之變化。如本文所討論，對何種單體進行工程化通常由各單體之固有pI決定。
F. 活體內結合中亦賦予更佳FcRn之pI變異體
[00388] 在pI變異體降低單體pI之情況下，它們可具有改善活體內血清保留之額外益處。
[00389] 儘管仍在研究中，但據信Fc區在活體內具有更長之半衰期，因為在內體中在pH 6下與FcRn之結合會隔離Fc (Ghetie及Ward, 1997 Immunol Today. 18(12): 592-598，以引用之方式全部併入)。然後，內體隔室將Fc再循環至細胞表面。一旦隔室向細胞外空間開放，則較高之pH (~7.4)誘導Fc釋放回血液中。在小鼠中，Dall' Acqua等顯示，在pH 6及pH 7.4下FcRn結合增加之Fc突變體實際上具有降低之血清濃度及與野生型Fc相同之半衰期(Dall' Acqua等, 2002, J. Immunol. 169:5171-5180，以引用之方式全部併入)。認為Fc在pH 7.4下對FcRn之親和力增加禁止Fc釋放回血液中。因此，將在活體內增加Fc半衰期之Fc突變理想地在較低pH下增加FcRn結合，同時仍允許在較高pH下釋放Fc。胺基酸組胺酸在6.0至7.4之pH範圍內改變其電荷狀態。因此，在Fc/FcRn複合物中之重要位置發現His殘基並不奇怪。
G. 用於額外功能性之額外Fc變異體
[00390] 除了pI胺基酸變異體之外，亦存在許多有用之Fc胺基酸修飾，其可以出於多種原因製備，包括但不限於改變與一種或一種以上FcγR之結合，改變與FcRn之結合等。
[00391] 因此，本發明之蛋白質可包括胺基酸修飾，包括本文概述之異二聚化變異體，其包括pI變異體及空間變異體。每組變異體可以獨立地且視情況包括在任何特定異二聚體蛋白中或自任何特定異二聚體蛋白中排除。
H. FcγR變異體
[00392] 因此，可以進行許多有用之Fc取代以改變與一種或一種以上FcγR之結合。導致結合增加以及結合減少之取代可為有用的。舉例而言，已知增加與FcγRIIIa之結合導致ADCC增加(抗體依賴性細胞介導之細胞毒性；細胞介導之反應，其中表現FcγR之非特異性細胞毒性細胞識別靶細胞上之結合抗體，隨後引起靶細胞裂解)。類似地，在某些情況下，與FcγRIIb (抑制性受體)之結合降低亦可為有益的。在本發明中使用之胺基酸取代包括USSN 11/124,620 (特別是圖41)、11/174,287、11/396,495、11/538,406中列出之彼等，該等文獻均以引用之方式全部地且特定地對於其中揭示之變異體明確併入本文中。可用之特定變異體包括但不限於236A、239D、239E、332E、332D、239D/332E、267D、267E、328F、267E/328F、236A/332E、239D/332E/330Y、239D、332E/330L、243A、243L、264A、264V及299T。
[00393] 另外，增加對FcγRIIc之親和力的胺基酸取代亦可包括於本文概述之Fc結構域變異體中。於例如USSN 11/124,620及14/578,305中描述之取代為有用的。
[00394] 另外，亦存在額外之Fc取代，其可用於增加與FcRn之結合及增加血清半衰期，如以引用之方式全部併入本文之USSN 12/341,769中具體揭示，包括但不限於434S、434A、428L、308F、259I、428L/434S、259I/308F、436I/428L、436I或V/434S、436V/428L及259I/308F/428L。
I. 消除變異體
[00395] 類似地，另一類功能變異體為「FcγR消除變異體」或「Fc敲除(FcKO或KO)」變異體。在此等實施方案中，對於一些治療應用，期望減少或去除Fc結構域與一個或一個以上或全部Fcγ受體(例如，FcγR1、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa等)之正常結合以避免額外作用機制。亦即，例如，在許多實施方案中，特別是在使用免疫調節蛋白時，希望消除FcγRIIIa結合以消除或顯著降低ADCC活性，使得Fc結構域之一包含一種或一種以上Fcγ受體消除變異體。此等消除變異體描繪於USSN 15/141,350之圖31中，其均以引用之方式全部併入本文中，且各自可以獨立地且視情況包括或排除，其中較佳之態樣利用選自由以下組成之群的消除變異體：G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del，根據EU索引。應注意，本文提及之消除變異體消除FcγR結合但通常不消除FcRn結合。消除FcγR結合之有用消除變異體(有時稱為「敲除」或「KO」變異體)描繪於圖5中。
J. 異二聚體與Fc變異體之組合
[00396] 如熟習此項技術者所理解，所有所述異二聚化變異體(包括偏態及/或pI變異體)可以視情況且獨立地以任何方式組合，只要它們保持其「鏈型」或「單體分區」即可。另外，所有此等變異體均可以組合成任何異二聚化形式。
[00397] 在pI變異體之情況下，儘管在附圖中示出可特定使用之實施方案，但可以遵循改變兩個單體之間的pI差異以促進純化之基本規則產生其他組合。
[00398] 另外，任何異二聚化變異體、偏態及pI亦可獨立地且視情況與如本文一般概述之Fc消除變異體、Fc變異體、FcRn變異體組合。
[00399] 另外，單體Fc結構域可包含一組胺基酸取代，其包括C220S/S267K/L368D/K370S或C220S/S267K/S364K/E357Q。
[00400] 另外，異二聚體Fc融合蛋白可包含偏態變異體(例如，如USSN 15/141,350之圖1A-1C中所示之一組胺基酸取代，其均以引用之方式全部併入本文中)，其中特別有用之偏態變異體選自由以下組成之群：S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L，K370S : S364K/E357Q，T366S/L368A/Y407V : T366W；及T366S/L368A/Y407V : T366W (視情況包括橋接二硫化物，T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C)，視情況消除變異體，視情況帶電結構域連接子；及視情況pI變異體。
[00401] 在一些實施方案中，Fc結構域包含一個或一個以上胺基酸取代，其選自由以下組成之群：236R、S239D、S239E、F243L、M252Y、V259I、S267D、S267E、S67K、S298A、V308F、L328F、L328R、330L、I332D、I332E、M428L、N434A、N434S、236R/L328R、S239D/I332E、236R/L328F、V259I/V308F、S267E/L328F、M428L/N43S、Y436I/M428L、N436V/M428L、V436I/N434S、Y436V/N434S、S239D/I332E/330L、M252Y/S54T/T256E、V259I/V308F/M428L、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236_及E233P/L234V/L235A/G236del/S267K，根據EU索引。
[00402] 在一個實施方案中，在本發明中使用之偏態及pI變異體之特定組合為T366S/L368A/Y407V : T366W (視情況包括橋接二硫化物，T366S/L368A/Y407V/Y349C : T366W/S354C)，其中一種單體包含Q295E/N384D/Q418E/N481D且另一單體包含帶正電之結構域連接子。如此項技術中所理解，「球/孔」變異體不會改變pI，因此可用於任一單體上。
[00403] 在某些實施方案中，Fc結構域包含包括M428L/N434S之胺基酸取代。在一些實施方案中，未靶向IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白之各Fc結構域包含包括M428L/N434S之胺基酸取代。
[00404] 含有本文所述之IL-15及IL-15Rα蛋白之異二聚體Fc融合蛋白之Fc結構域的有用實施方案提供於圖6A-6E中。
V. IL-15及IL-15Rα蛋白結構域
[00405] 本發明提供含有IL-15及IL-15Rα蛋白之異二聚體Fc融合蛋白。如附圖中所示，IL-15複合物可呈現若干形式。如上所述，IL-15蛋白本身之穩定性低於與IL-15Rα蛋白複合時之穩定性。如此項技術中已知，IL-15Rα蛋白含有「sushi結構域」，其為保留IL-15結合活性之受體的最短區域。因此，儘管可以製備包含整個IL-15Rα蛋白之異二聚體融合蛋白，但本文之較佳實施方案包括僅使用sushi結構域之複合物，其序列如附圖所示。
[00406] 因此，IL-15複合物通常包含IL-15蛋白及IL-15Rα之sushi結構域(除非另有說明，否則使用全長序列，「IL-15Rα」、「IL-15Rα(sushi)」及「sushi」在本文中可互換使用)。該複合物可以三種不同形式使用。如圖9A、9C、9D及9F所示，IL-15蛋白及IL-15Rα(sushi)並非共價連接，而是經由規則之配位體-配位體相互作用自組裝。如本文更全面描述，其可為與Fc結構域共價連接之IL-15結構域或sushi結構域(通常使用視情況選用之結構域連接子)。或者，它們可以使用如圖9B、9E及9G中一般所示之結構域連接子共價連接。圖9B描繪sushi結構域作為N端結構域，但這可以顛倒。最後，IL-15及sushi結構域各自可經工程化以含有半胱胺酸胺基酸，其形成二硫鍵以形成複合物，如圖39A-39D中通常所示，同樣，IL-15結構域或sushi結構域與Fc結構域共價連接(使用視情況選用之結構域連接子)。
[00407] 在一些實施方案中，人類IL-15蛋白具有NCBI參考序列No. NP_000576.1或SEQ ID NO:1中所示之胺基酸序列。在某些情況下，人類IL-15之編碼序列以NCBI參考序列No. NM_000585示出。本文概述之Fc融合異二聚體蛋白之例示性IL-15蛋白可具有SEQ ID NO:2 (成熟IL-15)之胺基酸序列或SEQ ID NO:1之胺基酸49-162。在一些實施方案中，IL-15蛋白與SEQ ID NO:2具有至少90%，例如，90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99%以上之序列同一性。在一些實施方案中，IL-15蛋白具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由C42S、L45C、Q48C、V49C、L52C、E53C、E87C及E89C組成之群的一個或一個以上胺基酸取代。Fc融合蛋白之IL-15蛋白可具有1、2、3、4、5、6、7、8或9個胺基酸取代。
[00408] 胺基酸取代可為IL-15:IL-2β及IL-15:共同γ鏈界面處之等排取代。在一些實施方案中，人類IL-15蛋白諸如人類成熟IL-15蛋白具有一個或一個以上胺基酸取代，其選自由以下組成之群：N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D、Q108E及其任何組合。在一些實施方案中，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代N4D/N65D。在某些情況下，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白與包括N4D/N65D取代之SEQ ID NO:2具有至少97%或98%序列同一性。在一些實施方案中，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/N65D。在某些情況下，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白與包括D30N/N65D取代之SEQ ID NO:2具有至少97%或98%序列同一性。在一些實施方案中，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。在某些情況下，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白與包括D30N/E64Q/N65D取代之SEQ ID NO:2具有至少96%或97%序列同一性。
[00409] 在一些實施方案中，Fc融合蛋白之人類IL-15蛋白諸如人類成熟IL-15蛋白與SEQ ID NO:2之胺基酸序列相同。在某些情況下，人類IL-15蛋白諸如人類成熟IL-15蛋白不具有胺基酸取代。
[00410] 在一些實施方案中，人類成熟IL-15變異體蛋白具有一個或一個以上胺基酸突變(例如，取代、插入及/或缺失)。在某些情況下，突變引入半胱胺酸殘基，其可與人類IL-15受體 α (IL-15Rα)蛋白形成二硫鍵。
[00411] 在一些實施方案中，人類IL-15受體α (IL-15Rα)蛋白具有以NCBI參考序列No. NP_002180.1或SEQ ID NO:3示出之胺基酸序列。在某些情況下，人類IL-15Rα之編碼序列以NCBI參考序列No. NM_002189.3示出。本文概述之Fc融合異二聚體蛋白之例示性IL-15Rα蛋白可包含SEQ ID NO:3之sushi結構域(例如，SEQ ID NO:3之胺基酸31-95)或換言之SEQ ID NO:4之胺基酸序列，或者由SEQ ID NO:3之sushi結構域(例如，SEQ ID NO:3之胺基酸31-95)或換言之SEQ ID NO:4之胺基酸序列組成。在一些實施方案中，IL-15Rα蛋白具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列及選自由D96、P97、A98、D96/P97、D96/C97、D96/P97/A98、D96/P97/C98及D96/C97/A98組成之群的胺基酸插入，其中該胺基酸位置係相對於全長人類IL-15Rα蛋白或SEQ ID NO:3。例如，胺基酸諸如D (例如Asp)、P (例如Pro)、A (例如Ala)、DP (例如Asp-Pro)、DC (例如Asp-Cys)、DPA (例如Asp-Pro-Ala)、DPC (例如Asp-Pro-Cys)或DCA (例如Asp-Cys-Ala)可以添加至SEQ ID NO:4之IL-15Rα蛋白之C端。在一些實施方案中，IL-15Rα蛋白具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列及選自由K34C、A37C、G38C、S40C及L42C組成之群的一個或一個以上胺基酸取代，其中該胺基酸位置係相對於SEQ ID NO:4。SEQ ID NO:4之IL-15Rα (sushi)蛋白可具有1、2、3、4、5、6、7、8個或8個以上之胺基酸突變(例如，取代、插入及/或缺失)。
[00412] SEQ ID NO:1為MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS。
[00413] SEQ ID NO:2為NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS。
[00414] SEQ ID NO:3為MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL。
[00415] SEQ ID NO:4為ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR。
[00416] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸變異體D30N之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及D30N取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少D30N取代。
[00417] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸變異體N1D之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及N1D取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少N1D取代。
[00418] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸變異體N4D之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及N4D取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少N4D取代。
[00419] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸變異體E64Q之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及E64Q取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少E64Q取代。
[00420] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸變異體N65D之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及N65D取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少N65D取代。
[00421] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸取代N1D/D30N之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及N1D/D30N取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少N1D/D30N取代。
[00422] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸取代N4D/D30N之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及N4D/D30N取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少N4D/D30N取代。
[00423] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸取代D30N/E64Q之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及D30N/E64Q取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少D30N/E64Q取代。
[00424] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸取代D30N/N65D之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及D30N/N65D取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少D30N/N65D取代。
[00425] 在一些實施方案中，本發明提供包含具有胺基酸取代D30N/E64Q/N65D之人類IL-15變異體之蛋白質。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及D30N/E64Q/N65D取代。在一些實施方案中，該蛋白質包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及至少D30N/E64Q/N65D取代。
VI. 結構域連接子
[00426] 在一些實施方案中，IL-15蛋白及IL-15Rα蛋白經由連接子連接在一起。視情況，該等蛋白質並非經由連接子連接。在其他實施方案中，IL-15蛋白及IL-15Rα蛋白係非共價連接。
[00427] 在一些實施方案中，IL-15蛋白經由連接子與Fc結構域連接。在某些實施方案中，IL-15蛋白直接與Fc結構域連接，諸如不存在連接子。在特定實施方案中，IL-15蛋白經由鉸鏈區或其片段與Fc結構域連接。在一些實施方案中，IL-15Rα蛋白經由連接子與Fc結構域連接。在其他實施方案中，IL-15Rα蛋白直接與Fc結構域連接，諸如不存在連接子。在特定實施方案中，IL-15Rα蛋白經由鉸鏈區或其片段與Fc結構域連接。在某些情況下，連接子不用於將IL-15蛋白或IL-15Rα蛋白與Fc結構域連接。
[00428] 在一些實施方案中，該連接子為「結構域連接子」，用於將如本文所概述之任何兩個結構域連接在一起。儘管可使用任何合適之連接子，但許多實施方案利用甘胺酸-絲胺酸聚合物，包括例如(GS)n、(GSGGS)n、(GGGGS)n及(GGGS)n，其中n為至少0 (且通常0至1至2至3至4至5)之整數，以及允許具有足夠長度及柔性之兩個結構域重組連接以允許每個結構域保留其生物學功能的任何肽序列。在某些情況下，有用之連接子包括(GGGGS)0
或(GGGGS)1
或(GGGGS)2
。有用之結構域連接子示於圖7中。在某些情況下，且注意到如下文所概述之「鏈型」，帶電結構域連接子可以如本文所討論且於圖7及本文中所示使用。
VII. 本發明之有用形式
[00429] 如圖9A-9G及圖39A-39D中所示，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白存在許多有用形式。通常，本發明之異二聚體融合蛋白具有兩種功能組份：IL-15/IL-15Rα(sushi)組份及Fc組份，兩者皆可採用如本文所概述之不同形式，且兩者皆可以任何組態與其他組份組合。
[00430] 第一Fc結構域及第二Fc結構域可具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：a) S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；b) S364K/E357Q : L368D/K370S；c) L368D/K370S : S364K；d) L368E/K370S : S364K；e) T411E/K360E/Q362E : D401K；f) L368D/K370S : S364K/E357L及g) K370S : S364K/E357Q，根據EU編號。在一些實施方案中，第一Fc結構域具有L368D/K370S取代且第二Fc結構域具有S364K/E357Q取代。在一些實施方案中，第一Fc結構域具有S364K/E357Q取代且第二Fc結構域具有L368D/K370S取代。
[00431] 在一些實施方案中，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其包含Q295E/N384D/Q418E/N421D，根據EU編號。
[00432] 視情況，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其由以下組成：G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del，根據EU編號。
[00433] 視情況，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有428L/434S變異體以延長半衰期。在某些情況下，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有M428L/N434S變異體以延長半衰期。在一些實施方案中，第一Fc結構域具有M428L/N434S取代且第二Fc結構域具有M428L/N434S取代。
A. IL-15/Rα-異Fc形式
[00434] 在該實施方案中，如圖9A中所示，異二聚體融合蛋白包含兩種單體(兩種Fc單體)。第一單體包含(自N端至C端) IL-15-視情況選用之結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。第二單體包含IL-15/Rα(sushi)結構域-視情況選用之結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。
[00435] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在某些情況下，L368D/K370S變異體在第一單體上且S354K/E357Q變異體在第二單體上。
[00436] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00437] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00438] 在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代的Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00439] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00440] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00441] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中， IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00442] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體。
[00443] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00444] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00445] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00446] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00447] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00448] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00449] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00450] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00451] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00452] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體。
[00453] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00454] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00455] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體、IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00456] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00457] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00458] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域，及包含圖6A中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00459] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案示於WO2018/071919中之圖48A (包括鏈1 (17693)及鏈2 (15908)之XENP22822)，圖94A (包括鏈1及鏈2之XENP23504)，圖104AO (包括鏈1及鏈2之XENP24045)，圖104AQ (包括鏈1及鏈2之XENP24306)，圖48A (包括鏈1及鏈2之XENP22821)，圖94A (包括鏈1及鏈2之XENP23343)，圖104AJ (包括鏈1及鏈2之XENP23557)，圖104AP (包括鏈1及鏈2之XENP24113)，圖104AP (包括鏈1及鏈2之XENP24051)，圖104AR (包括鏈1及鏈2之XENP24341)，圖104AP (包括鏈1及鏈2之XENP24052)，及圖104AP (包括鏈1及鏈2之XENP24301)，其均以引用之方式全部併入本文中。
[00460] 在IL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案示於圖10 (包括鏈1 (15902)及鏈2 (15908)之XENP22822)及(包括鏈1 (16479)及鏈2 (16481)之XENP21475)。
B. scIL-15-Rα-Fc
[00461] 在該實施方案中，如圖9B中所示，異二聚體融合蛋白包含兩種單體。第一單體包含(自N端至C端) IL-15/Rα(sushi)結構域連接子-IL-15-視情況選用之結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。第二單體包含「空」Fc，其包含鉸鏈-CH2-CH3之全部或部分。此係稱為「scIL-15/Rα-Fc」，其中「sc」代表(例如IL-15/Rα sushi複合物之)「單鏈」。
[00462] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00463] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00464] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S，及各Fc單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S，及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00465] 在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；及包含圖6B中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc單體。
[00466] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00467] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00468] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00469] 在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；及包含圖6B中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc單體。
[00470] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00471] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00472] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00473] 在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；及包含圖6B中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc單體。
[00474] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00475] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00476] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00477] 在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；及包含圖6B中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc單體。
[00478] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00479] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00480] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00481] 在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；及包含圖6B中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體。在一些實施方案中，scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體及IL-15Rα(sushi)結構域之單鏈；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之scIL-15/Rα-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc單體。
[00482] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案包括包含鏈1 (16478)及鏈2 (8924)之XENP21478且示於圖11中。該形式之其他實施方案包括XENP21993、XENP21994、XENP21995、XENP23174、XENP23175、XENP24477及XENP24480且示於WO2018071919中之圖104G、104H、104AG、104AU及104AV中並且胺基酸序列分別見於SEQ ID NO: 514-518、519-523、524-528、849-853、1063-1067及1078-1082。
C. ncIL-15/Rα-Fc
[00483] 在該實施方案中，如圖9C中所示，異二聚體融合蛋白包含三種單體。第一單體包含(自N端至C端) IL-15/Rα(sushi)-結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。第二單體包含「空」Fc，其包含鉸鏈-CH2-CH3之全部或部分。第三單體為IL-15。此係稱為「ncIL-15/Rα-Fc」，其中「nc」代表「非共價」。
[00484] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00485] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00486] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00487] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00488] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00489] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體。
[00490] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體，及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00491] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N4D變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00492] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00493] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體，及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00494] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N65D變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00495] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00496] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00497] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00498] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00499] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在ncIL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00500] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00501] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E。
[00502] 在nIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00503] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00504] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15 Q108E變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00505] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00506] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在ncIL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00507] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之空-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含含有人類成熟IL-15野生型變異體之單鏈；IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之空-Fc；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00508] 在ncIL-15/Rα-異Fc形式中，較佳實施方案示於WO2018071919中之圖104AS (包括鏈1及鏈2之XENP24349)及圖104AT (包括鏈1及鏈2之XENP24383)，其均以引用之方式全部併入本文中。
[00509] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案示於圖12A及圖12B中，諸如包括鏈1 (16484)及鏈2 (8793)及鏈3 (16481)之XENP21479；包括鏈1 (16478)及鏈2 (8924)及鏈3 ()之XENP22366；及包括鏈1 (16484)及鏈2 (8793)及鏈3 (15908)之XENP22366；及XENP24348。
D. 二價ncIL-15/Rα-Fc
[00510] 在該實施方案中，如圖9D中所示，同二聚體融合蛋白包含四種單體。第一單體及第二單體包含(自N端至C端) IL-15/Rα(sushi)-結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。第三單體及第四單體包含IL-15。此係稱為「二價ncIL-15/Rα-Fc」，其中「nc」代表「非共價」。
[00511] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00512] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00513] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00514] 在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體。
[00515] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00516] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00517] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00518] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00519] 在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體。
[00520] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00521] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00522] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00523] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00524] 在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體。
[00525] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體。
[00526] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00527] 在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 Q108E變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL- Q108E變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體。
[00528] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00529] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00530] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00531] 在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6C中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15野生型變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體。在一些實施方案中，二價ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-野生型變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之第一IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體；以及包含人類IL-15Rα(消除)結構域之第二IL-15Rα(sushi)-Fc單體及包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體。
[00532] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案示於WO2018071919中之圖104E (包括鏈1及鏈2之XENP21979)以及序列表中示為SEQ ID NO: 480-483，其均以引用之方式全部併入本文中。
[00533] 在二價ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案示於圖13中，諸如包括鏈1 (17023)及鏈2 (16484)之XENP21978。
E. 二價scIL-15/Rα-Fc
[00534] 在該實施方案中，如圖9e中所示，同二聚體融合蛋白包含兩種單體。第一單體及第二單體包含(自N端至C端) IL-15/Rα(sushi)-結構域連接子-IL-15-視情況選用之結構域連接子-CH2-CH3，其中該結構域連接子有時包含鉸鏈之全部或部分。此係稱為「二價scIL-15/Rα-Fc」，其中「sc」代表(例如IL-15/ Rα sushi複合物之)「單鏈」。
[00535] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00536] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00537] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。
[00538] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00539] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00540] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00541] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00542] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00543] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00544] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N65D變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00545] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00546] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00547] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00548] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00549] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00550] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00551] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。
[00552] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15 Q108E變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 Q108E變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 Q108E變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 Q108E變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 Q108E變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00553] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00554] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00555] 在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含兩種人類成熟IL-15野生型變異體，兩種IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6D中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體連接。在一些實施方案中，二價scIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含第一IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接；及第二IL-15/Rα(sushi)-Fc單體，其包含與人類IL-15Rα(sushi)結構域連接之人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，該人類IL-15Rα(sushi)結構域與包含胺基酸取代C220S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之Fc單體連接。
[00556] 在二價scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案示於圖14中。
F. Fc- ncIL-15/Rα
[00557] 在該實施方案中，如圖9F中所示，異二聚體融合蛋白包含三種單體。第一單體包含(自N端至C端) CH2-CH3-結構域連接子-IL-15/Rα(sushi)，其中該Fc包含鉸鏈之全部或部分。第二單體包含「空」Fc，其包含鉸鏈-CH2-CH3之全部或部分。第三單體為IL-15。此係稱為「ncIL-15/Rα-Fc」，其中「nc」代表「非共價」。
[00558] 在ncIL-15/Rα-Fc (或Fc-ncIL-15/Rα)形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00559] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00560] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在Fc-ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00561] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 D30N/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 D30N/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00562] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00563] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00564] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體；包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00565] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體。
[00566] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00567] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N4D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N4D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00568] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00569] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體，及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00570] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00571] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00572] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00573] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體, IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N4D/N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N4D/N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00574] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00575] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00576] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00577] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N1D/N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 N1D/N65D變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00578] 在ncIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00579] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體。
[00580] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 Q108E變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00581] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 Q108E變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15 Q108E變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00582] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00583] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00584] 在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15野生型變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白包含人類IL-15野生型變異體，包含人類IL-15Rα(sushi)結構域之Fc- IL-15/Rα(sushi)單體，其與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體之C端連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00585] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，包括XENP22638之較佳實施方案示於WO2018071919中之圖104T以及序列表中示為SEQ ID NO: 668-672，其均以引用之方式全部併入本文中。
[00586] 在Fc- ncIL-15/Rα形式中，較佳實施方案包括XENP22637作為鏈1 (17603)及鏈2 (8927)及鏈3 (16484)且示於圖15中。
G. Fc-scIL-15/Rα
[00587] 在該實施方案中，如圖9G中所示，異二聚體融合蛋白包含兩種單體。第一單體包含(自N端至C端) CH2-CH3-視情況選用之結構域連接子- IL-15/Rα(sushi)-結構域連接子-IL-15，其中該Fc包含鉸鏈之全部或部分。第二單體包含「空」Fc，其包含鉸鏈-CH2-CH3之全部或部分。此係稱為「Fc-scIL-15/Rα」或「scIL-15/Rα-Fc」，其中「sc」代表(例如IL-15/Rα sushi複合物之)「單鏈」。
[00588] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00589]
[00590] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。
[00591] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體。
[00592] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及在兩種單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及在兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00593] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至與人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體連接之人類IL-15Rα(sushi)結構域；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00594] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體。
[00595] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00596] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00597] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體。
[00598] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體，及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00599] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00600] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體。
[00601] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N4D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00602] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00603] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體。
[00604] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15 N1D/N65D變異體、偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及各Fc單體上之M428L/N434S變異體。
[00605] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 N1D/N65D變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00606] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E。
[00607] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15變異體Q108E及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00608] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15 Q108E變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 Q108E變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15 Q108E變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00609] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體。
[00610] 在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之428L/434S變異體。在Fc-scIL-15/Rα形式中，較佳實施方案利用IL-15野生型變異體及偏態變異體對S364K/E357Q : L368D/K370S及兩種單體上之M428L/N434S變異體。
[00611] 在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含人類成熟IL-15野生型變異體，IL-15Rα(sushi)結構域；及包含圖6E中所描繪之胺基酸取代之兩種Fc單體。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15野生型變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。在一些實施方案中，Fc-scIL-15/Rα融合蛋白包含Fc-IL-15/Rα(sushi)單體，其包含含有胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體L368D/K370S、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S之Fc單體，使得Fc結構域與連接至人類成熟IL-15野生型變異體之人類IL-15Rα(sushi)結構域連接；及空-Fc單體，其包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI變異體S364K/E357Q、等排pI取代P217R/P228R/N276K、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N343S。
[00612] 在scIL-15/Rα-Fc形式中，較佳實施方案示於圖16中。
VIII.本發明之特定實施方案
[00613] 本文提供包含不同形式之未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白及檢查點阻斷抗體之組合物。此外提供包括向受試者(例如人類受試者)投與未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白及檢查點阻斷抗體之方法。
[00614] 在一些實施方案中，本文所述組合物之檢查點阻斷抗體選自由抗PD-1抗體組成之群。在一些實施方案中，該抗PD-1抗體選自由納武單抗、派姆單抗或匹地單抗組成之群。
[00615] 在一些實施方案中，本文所述組合物之未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白以本文所述之形式組織，諸如IL-15/IL-15Rα-異Fc形式、scIL-15/Rα-Fc形式、ncIL-15/Rα-Fc形式、二價ncIL-15/Rα-Fc形式、二價scIL-15/Rα-Fc形式、Fc-ncIL-15/Rα形式或Fc-scIL-15/Rα形式。在一些實施方案中，未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白具有IL-15/IL-15Rα-異Fc形式。
[00616] 在一些實施方案中，該組合物之未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白具有IL-15/IL-15Rα-異Fc形式且包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域；包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。在一些實施方案中，IL-15/Rα-異Fc融合蛋白包含人類成熟IL-15 N65D變異體；人類IL-15Rα(sushi)結構域，包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體；及包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體。
[00617] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI0取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，組合物包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00618] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00619] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，組合物包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00620] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/E64Q/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00621] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI0取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，組合物包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00622] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00623] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00624] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 N4D/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00625] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI0取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含抗PD-1抗體及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00626] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含納武單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00627] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含派姆單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00628] 在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q及消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。在一些實施方案中，本文所述之組合物或方法包含匹地單抗及未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含：(a)第一單體，其(自N端至C端)包含人類成熟IL-15 D30N/N65D變異體，該變異體與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代L368D/K370S、等排pI取代Q295E/N384D/Q418E/N421D、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15-Fc單體連接；及(b)第二單體，其(自N端至C端)包含人類IL-15Rα(sushi)結構域，該結構域與包含胺基酸取代C220S、異二聚體pI取代S364K/E357Q、消除取代E233P/L234V/L235A/G236del/S267K及FcRn取代M428L/N434S之IL-15Rα(sushi)-Fc單體連接。
[00629] 在一些實施方案中，組合物包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24306 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，組合物包含納武單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合物包含派姆單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合物包含匹地單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合物包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24045 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，組合物包含納武單抗及XENP24045。在一些實施方案中，組合物包含派姆單抗及XENP24045。在一些實施方案中，組合物包含匹地單抗及XENP24045。
[00630] 在一些實施方案中，組合療法或治療包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24306 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，組合療法或治療包含納武單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合療法或治療包含派姆單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合療法或治療包含匹地單抗及XENP24306。在一些實施方案中，組合療法或治療包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24045 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，組合療法或治療包含納武單抗及XENP24045。在一些實施方案中，組合療法或治療包含派姆單抗及XENP24045。在一些實施方案中，組合療法或治療包含匹地單抗及XENP24045。在某些情況下，組合療法可用於治療癌症，誘導T細胞擴增，及/或導致受試者之血管滲漏最低。在一些實施方案中，將組合療法投與至受試者且在受試者中誘導T細胞擴增。在某些情況下，擴增之T細胞群體，例如，TIL群體大於當受試者單獨投與抗PD-1抗體或未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白時。在一些實施方案中，將組合療法投與至受試者且與僅投與抗PD-1抗體或未靶向之IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白相比導致最小程度之血管滲漏。
[00631] 在一些實施方案中，治療癌症之方法包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24306 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含納武單抗及XENP24306。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含派姆單抗及XENP24306。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含匹地單抗及XENP24306。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24045 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含納武單抗及XENP24045。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含派姆單抗及XENP24045。在一些實施方案中，治療癌症之方法包含匹地單抗及XENP24045。
[00632] 在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24306 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含納武單抗及XENP24306。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含派姆單抗及XENP24306。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含匹地單抗及XENP24306。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含選自由納武單抗、派姆單抗及匹地單抗組成之群之抗PD-1抗體及XENP24045 (如熟習此項技術者所理解，包括其序列識別符)。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含納武單抗及XENP24045。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含派姆單抗及XENP24045。在一些實施方案中，擴增受試者中之T細胞之方法包含匹地單抗及XENP24045。
[00633] 投與抗PD-1抗體及例示性IL-15/Rα-Fc融合變異體之治療誘導受試者中之T細胞(包括活化T細胞)之增殖。如實施例22中所示，抗PD-1抗體(例如，XENP16432)及IL-15/Rα-Fc融合變異體(例如，XENP24306)之組合與單獨抗PD-1抗體相比可以表現出淋巴細胞在活體內之擴增延長。在一些實施方案中，投與抗PD-1抗體及例示性IL-15/Rα-Fc融合變異體可誘導IFNγ產生。在某些情況下，藉由投與抗PD-1抗體及IL-15/Rα-Fc融合蛋白來增加IFNγ產生量。與單獨抗PD-1抗體或IL-15/Rα-Fc融合蛋白相比，在投與包含抗PD-1抗體及IL-15/Rα-Fc融合蛋白之治療後，IFNγ量較高。
[00634] 在一些實施方案中，投與抗PD-1抗體及例示性IL-15/Rα-Fc融合變異體可減小腫瘤尺寸。在某些情況下，與單獨抗PD-1抗體或IL-15/Rα-Fc融合蛋白相比，在投與包含抗PD-1抗體及IL-15/Rα-Fc融合蛋白之治療後，腫瘤尺寸較小。
[00635] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及本發明之異二聚體融合蛋白中之任一者。如熟習此項技術者所理解及下文更全面討論，本發明之異二聚體融合蛋白可呈現多種組態，如圖9A-9G及圖39A-39D中一般描繪。例示性融合蛋白之胺基酸序列提供於圖12A、12B、13、14、15、16、40A、40B、41A、41B、42、43、48A-48H、49A-49D、50A-50B、51、52、53、99A-99C、100、101及102中，如根據序列識別符所顯而易見的。
[00636] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及任何例示性「IL-15/Rα異Fc」及「dsIL-15/Rα異Fc」蛋白。本文概述之許多實施方案通常依賴於以下形式，其包含第一單體(第一融合蛋白)，該第一單體(第一融合蛋白)包含使用第一結構域連接子將IL-15蛋白結構域共價連接至第一Fc結構域之N端，及第二單體(第二融合蛋白)，該第二單體(第二融合蛋白)包含使用第二結構域連接子將IL-15Rα蛋白結構域共價連接至第二Fc結構域之N端。該形式(「IL-15/Rα異Fc」及「dsIL-15/Rα異Fc」)之例示性實施方案包括但不限於XENP20818、XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21475、XENP21476、XENP21477、XENP22013、XENP22815、XENP22816、XENP22817、XENP22818、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22829、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP22834、XENP22815、XENP22816、XENP22817、XENP22818、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP23343、XENP23554、XENP23555、XENP23557、XENP23559、XENP23561、XENP24018、XENP24019、XENP24020、XENP24051、XENP24052、XENP23504、XENP24306、XENP24306、XENP23343、XENO24113、XENP24341及XENP24301 (包括相應序列識別符)。
[00637] 在一些實施方案中，組合物或方法包含抗PD-1抗體及IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白，該融合蛋白具有以下「IL-15/Rα異Fc」及「dsIL-15/Rα異Fc」形式：XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22360、XENP22362、XENP22363、XENP22364、XENP22365、XENP22366、XENP22684、XENP22361、XENP22816、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22829、XENP22834、XENP23554、XENP23557、XENP23561、XENP24018、XENP24019、XENP24045、XENP24051、XENP24052、XENP23343、XENP23504、XENP24113、XENP24301、XENP24306、XENP24341、XENP23472、XENP23473、XENP22815、XENP22817、XENP22818、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP23555、XENP23559、XENP23560、XENP24017、XENP24020、XENP24043或XENP24048 (包括相應序列識別符)。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖41A、41B、48A、48B、48C、48D、48E、48F、48G、48H、53、90A、99B及99C中，如根據序列識別符所顯而易見的。
[00638] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及scIL-15/ Rα-Fc異二聚體融合蛋白，該scIL-15/ Rα-Fc異二聚體融合蛋白包含如下融合蛋白，其包含第一蛋白結構域，該第一蛋白結構域經由第一結構域連接子共價連接至第二蛋白結構域之N端，該第二蛋白結構域經由第二結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端，及第二Fc結構域(例如，空Fc結構域)。在某些情況下，第一蛋白結構域為IL-15Rα蛋白結構域且第二蛋白結構域為IL-15蛋白結構域。該形式(「scIL-15/ Rα-Fc」)之例示性實施方案包括但不限於XENP21478 (包括相應序列識別符)。
[00639] 在一些實施方案中，組合物或方法包含抗PD-1抗體及IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白，該融合蛋白具有以下「scIL-15/Rα-Fc」形式：XENP24013、XENP24014、XENP24016、XENP24015、XENP24050、XENP24475、XENP24476、XENP24478、XENP24479、XENP24481及XENP25938 (包括相應序列識別符)。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖49A、49B、49C、49D及100中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00640] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及ncIL-15/ Rα-Fc或dsIL-15/ Rα-Fc異二聚體融合蛋白，該融合蛋白包含經由結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端之第一蛋白結構域，第二Fc結構域(例如，空Fc結構域)，及非共價連接至第一蛋白結構域之第二蛋白結構域。在某些情況下，第一蛋白結構域為IL-15蛋白結構域且第二蛋白結構域為IL-15Rα蛋白結構域。該形式(「ncIL-15/ Rα-Fc」或「dsIL-15/ Rα-Fc」)之例示性實施方案包括但不限於XENP21479、XENP22357、XENP22354、XENP22355、XENP22356、XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22360、XENP22361、XENP22362、XENP22363、XENP22364、XENP22365、XENP22366、XENP22637、XENP24348、XENP24349及XENP24383 (包括相應序列識別符)。
[00641] 在一些實施方案中，具有「ncIL-15/Rα-Fc」形式之IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白為XENP21479、XENP22366、XENP24348、XENP24383、XENP24349、XENP24890及XENP25138 (包括相應序列識別符)。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖12A、12B、50A、50B及101中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00642] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及二價ncIL-15/ Rα-Fc或二價dsIL-15/ Rα-Fc融合蛋白，該融合蛋白包含第一融合蛋白，其包含經由第一結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端之第一蛋白結構域；第二融合蛋白，其包含經由第二結構域連接子共價連接至第二Fc結構域之N端之第二蛋白結構域，非共價連接至該第一融合蛋白之該第一蛋白結構域之第三蛋白結構域，及非共價連接至該第二融合蛋白之該第二蛋白結構域之第四蛋白結構域。在某些情況下，第一蛋白結構域及第二蛋白結構域為IL-15 Rα蛋白結構域，且第三蛋白結構域及第四蛋白結構域為IL-15蛋白結構域。該形式(「二價ncIL-15/ Rα-Fc」或「二價dsIL-15/ Rα-Fc」)之例示性實施方案包括但不限於XENP21978、XENP22634、XENP24342及XENP24346 (包括相應序列識別符)。
[00643] 在一些實施方案中，具有「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式之IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白為XENP21978、XENP24342、XENP24346及XENP24351 (包括相應序列識別符)。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖13、52及102中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00644] 另一種有用之形式(「二價scIL-15/ Rα-Fc」)在本文中概述於圖14中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00645] 在一些實施方案中，組合物或方法包括抗PD-1抗體及Fc-ncIL-15/Rα融合蛋白或Fc-dsIL-15/Rα融合蛋白，該融合蛋白包含第一融合蛋白，其包含使用結構域連接子共價連接至第一蛋白結構域之N端之第一Fc結構域，第二Fc結構域(例如，空Fc結構域)，及非共價連接至該第一蛋白結構域之第二蛋白結構域。該形式(「Fc-ncIL-15/Rα」或「Fc-dsIL-15/Rα」)之例示性實施方案包括但不限於XENP22637及XENP22639，以及圖15中所描繪之彼等，如根據序列識別符所顯而易見。在一些實施方案中，第一蛋白質及第二蛋白質係經由連接子連接(圖9G)。
[00646] 在一些實施方案中，具有「Fc-ncIL-15/Rα」形式之IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白為XENP22637及XENP22638。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖15中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00647] 在一些實施方案中，具有「Fc-scIL-15/Rα」形式之IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白示於圖16中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00648] 在一些實施方案中，具有「Fc-dsIL-15/Rα」形式之IL-15/Rα異二聚體Fc融合蛋白為XENP22639及XENP22640。該等形式之例示性胺基酸序列示於圖42中，如根據序列識別符所顯而易見。
[00649] 對於本文概述之任何異二聚體Fc融合蛋白，第一結構域連接子與第二結構域連接子可以相同或不同。另外，異二聚體蛋白之第一Fc結構域及第二Fc結構域可具有不同之胺基酸序列。
[00650] 本發明之Fc結構域包含IgG Fc結構域，例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc結構域，其中IgG1、IgG2及IgG4 Fc結構域特定用於一些實施方案中。在一些實施方案中，該第一Fc結構域及第二Fc結構域包含一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：L368D/K370S及S364K；L368D/K370S及S364K/E357L；L368D/K370S及S364K/E357Q；T411E/K360E/Q362E及D401K；L368E/K370S及S364K；K370S及S364K/E357Q；K370S及S364K/E357Q；S267K/L368D/K370S及S267K/S364K/E357Q，根據EU編號。在某些情況下，本文概述之任何異二聚體Fc融合形式之第一及/或第二Fc結構域可具有另一組胺基酸取代，其包含Q295E/N384D/Q418E/N421D，根據EU編號。在一些實施方案中，第一及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其由G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del組成，根據EU編號。
[00651] 其他異二聚化變異體可以獨立地且視情況包括附圖中概述之變異體及選自附圖中概述之變異體。該等組合物可進一步包含消除變異體、pI變異體、帶電變異體、同種型變異體等。
[00652] 本文提供組合物，其包含抗PD-1抗體及在IL-15/Rα界面處具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα-Fc異二聚體融合蛋白(參見例如實施例2)。該等IL-15/Rα-Fc融合蛋白可誘導或促進免疫細胞(包括NK細胞、CD8+
T細胞及CD4+
T細胞)之增殖。
[00653] 本文亦提供組合物，其包含抗PD-1抗體及經工程化以降低效能之IL-15/Rα-Fc融合蛋白(亦稱為「IL-15/Rα-Fc親和變異體」；參見例如實施例3)。在某些情況下，IL-15/Rα-Fc融合蛋白變異體顯示改進之藥物動力學，降低之效能及延長之(例如，增加之)半衰期。
[00654] 在一些實施方案中，包含抗PD-1抗體及經工程化以降低效能之IL-15/Rα-Fc融合變異體之組合物亦經工程化以具有Xtend (FcRn) Fc取代，使得各Fc單體包含胺基酸取代M428L/N434S。該等IL-15/Rα-Xtend Fc變異體之例示性實施方案描繪於圖99A-99C、100、101及102中(亦參見表6)。投與IL-15/Rα-Xtend Fc變異體可誘導受試者中之T細胞(包括活化T細胞)增殖。如實施例4D中所示，具有結構域連接子(例如XENP24113)之IL-15/Rα-Fc親和變異體相比於不具有連接子之相應IL-15/Rα-Fc親和變異體(僅鉸鏈；例如XENP24341)可展現淋巴細胞在活體內之擴增延長。IL-15/Rα-Fc親和變異體可提供延長之T細胞藥理學。
[00655] 本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可以優先結合T細胞及NK細胞，並且在某些情況下，在受試者之癌症環境中選擇性地靶向活化T細胞。值得注意的是，不具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc融合變異體(例如，IL-15/Rα-Fc親和變異體) (僅鉸鏈；例如XENP24341)相比於具有結構域連接子之相應IL-15/Rα-Fc親和變異體(例如XENP24113)表現出與各種淋巴細胞群之結合減少(參見圖117)。
[00656] 本文所述之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可增強活化T細胞之抗腫瘤作用(參見實施例5B及5C)。在一個實施方案中，本文所述之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可誘導CD8+
T細胞(例如，活化CD8+
T細胞)及CD4+
T細胞(例如，活化CD4+
T細胞)之增殖。在某些情況下，IL-15/Rα-Fc融合蛋白可誘導CD8+
T細胞之增殖，優於CD4+
T細胞之增殖。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可誘導CD8+
T細胞(例如，CD8+
T細胞之CD69+
/IFNγ+
分數及/或CD69+/
Ki-67+
分數)及CD4+
T細胞(例如，CD4+
T細胞之CD69+
/IFNγ+
分數及/或CD69+/
Ki-67+
分數)之增殖。本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可促進腫瘤細胞之殺傷，且可選擇性地擴增活化淋巴細胞(包括腫瘤浸潤淋巴細胞)。值得注意的是，IL-15/Rα-Fc融合蛋白可優先誘導CD8+
及CD4+
T細胞之增殖。
[00657] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可增強投與該等蛋白質之受試者中的抗腫瘤作用。如下述實施例(參見實施例5D)中所說明，用IL-15/Rα-Fc融合蛋白治療相比於不用該等IL-15/Rα-Fc融合蛋白治療顯著降低具有腫瘤之受試者中的腫瘤生長。
[00658] 在一些實施方案中，在存在及不存在本文所述之Xtend-Fc取代之情況下IL-15/Rα-Fc融合蛋白的效能降低可增強投與該等蛋白質之受試者中的藥效學及藥物動力學。如下述實施例(參見實施例6)中所說明，具有本發明之Xtend (FcRn)取代(例如，各Fc單體上之M428L/N434S變異體)之IL-15/Rα-Fc融合蛋白諸如XmAb24306及XENP23343相比於不具有Xtend取代之相應IL-15/Rα-Fc融合蛋白在受試者中展現較長的血清半衰期。在某些情況下，Xtend取代顯著改善暴露，如由增加之半衰期所示。
[00659] 下文(參見實施例7)顯示，效能降低之IL-15/Rα-Fc變異體如XENP22821相比於本文所述之野生型IL-15/Rα-Fc融合蛋白如XENP20818可以擴增淋巴細胞計數持續更長的持續時間。值得注意的是，XENP23343 (XENP22821之Xtend類似物)相比於XENP22821進一步增強淋巴細胞擴增之持續時間。
[00660] 如下述實施例(參見實施例8)中所說明，IL-15/Rα-Fc融合蛋白諸如但不限於XmAb24306 (亦稱為XENP24306)可克服Treg抑制抗CD3誘導效應T細胞增殖。
[00661] 如本文(參見實施例9)所述，IL-15/Rα-Fc融合蛋白諸如但不限於XENP24045可在一定範圍之劑量水平內促進白細胞擴增且加劇異種GVHD。值得注意的是，XENP24045與抗PD-1抗體諸如XENP13432之組合療法顯示協同效應(例如，協同作用)，特別是在低劑量下。
[00662] 在一些實施方案中，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白為XENP23557 (參見圖48E)。XENP23557包含鏈1 (人類_IL15_N4D/N65D_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_pI(-)_等排_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S (18786))及鏈2 (人類_IL15Ra(Sushi)_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q (15908))。
[00663] 在一些實施方案中，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白為XENP24045 (參見圖48E)。XENP24045包含鏈1 (人類_IL15_D30N/E64Q/N65D_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_pI(-)_等排_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S)及鏈2 (人類_IL15Rα(Sushi)_(GGGGS)1_ Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q)。
[00664] 在一些實施方案中，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白為XENP24113 (參見圖99B)。XENP24113包含鏈1 (人類_IL15_N4D/N65D_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_pI(-)_等排_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S/M428L/N434S)及鏈2 (人類_IL15Rα(Sushi)_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q/M428L/N434S)。
[00665] 在一些實施方案中，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白為XENP24306 (參見圖99C)。XENP24306包含鏈1 (人類_IL15_D30N/E64Q/N65D_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_pI(-)_等排_A_C220S/PVA_/S267K/L368D/K370S/M428L/N434S)及鏈2 (人類_IL15Rα(Sushi)_(GGGGS)1_Fc(216)_IgG1_C220S/PVA_/S267K/S364K/E357Q/M428L/N434S)。
[00666] 因此，在一個態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其包含a)包含第一蛋白結構域及第一Fc結構域之第一融合蛋白，其中使用第一結構域連接子將該第一蛋白結構域共價連接至該第一Fc結構域之N端；b)包含第二蛋白結構域及第二Fc結構域之第二融合蛋白，其中使用第二結構域連接子將該第二蛋白結構域共價連接至該Fc結構域之N端；其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域包含IL-15蛋白且該第二蛋白結構域包含IL-15Rα蛋白。在一些實施方案中，第一蛋白結構域直接地且不使用第一結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端，及/或第二蛋白結構域直接地且不使用第二結構域連接子共價連接至第二Fc結構域之N端。在一些實施方案中，本發明亦提供檢查點阻斷抗體，諸如抗PD-1抗體。
[00667] 在某些情況下，該異二聚體蛋白選自由以下組成之群：XENP20818、XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21475、XENP21476、XENP21477、XENP22013、XENP22815、XENP22816、XENP22817、XENP22818、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22829、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP22834、XENP23343、XENP23554、XENP23555、XENP23557、XENP23559、XENP24019及XENP24020 (包括相應序列識別符)。
[00668] 在另一態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其包含：a)包含第一蛋白結構域、第二蛋白結構域及第一Fc結構域之融合蛋白，其中使用第一結構域連接子將該第一蛋白結構域共價連接至該第二蛋白結構域之N端，且其中使用第二結構域連接子將該第二蛋白結構域共價連接至該第一Fc結構域之N端；b)第二Fc結構域；其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域包含IL-15Rα蛋白且該第二蛋白結構域包含IL-15蛋白。在某些情況下，亦提供檢查點阻斷抗體，諸如抗PD-1抗體。
[00669] 在一些實施方案中，該異二聚體蛋白可為XENP21478。
[00670] 在另一態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其包含：a)包含第一蛋白結構域及第一Fc結構域之融合蛋白，其中使用結構域連接子將該第一蛋白結構域共價連接至該第一Fc結構域之N端；b)第二Fc結構域；及c)非共價連接至該第一蛋白結構域之第二蛋白結構域；其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域包含IL-15Rα且該第二蛋白結構域包含IL-15蛋白。在某些情況下，亦提供檢查點阻斷抗體，諸如抗PD-1抗體。
[00671] 在一些實施方案中，該異二聚體蛋白可選自由以下組成之群：XENP21479、XENP22357、XENP22354、XENP22355、XENP22356、XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22360、XENP22361、XENP22362、XENP22363、XENP22364、XENP22365、XENP22366及XENP22637 (包括相應序列識別符)。
[00672] 在另一態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其包含：a)包含第一蛋白結構域及第一Fc結構域之第一融合蛋白，其中使用結構域連接子將該第一蛋白結構域共價連接至該第一Fc結構域之N端；b)第二融合蛋白，其包含含有第二蛋白結構域之第二重鏈及包含第二Fc結構域之第一第二重鏈，其中使用結構域連接子將該第二蛋白結構域共價連接至該第二Fc結構域之C端；c)非共價連接至該第一融合蛋白之該第一蛋白結構域之第三蛋白結構域；及d)非共價連接至該第二融合蛋白之該第二蛋白結構域之第四蛋白結構域，其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域及該第二蛋白結構域包含IL-15Rα蛋白，且其中該第三蛋白結構域及該第四蛋白結構域包含IL-15蛋白。在一些實施方案中，該異二聚體蛋白可為XENP21978或XENP22634。在某些情況下，亦提供檢查點阻斷抗體，諸如抗PD-1抗體。
[00673] 在另一態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其包含：a)包含第一Fc結構域及第一蛋白結構域之第一融合蛋白，其中使用結構域連接子將該第一Fc結構域共價連接至該第一蛋白結構域之N端；b)第二Fc結構域，及c)非共價連接至該第一融合蛋白之該第一蛋白結構域之第二蛋白結構域；其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域包含IL-15Rα蛋白且該第二蛋白結構域包含IL-15蛋白。在某些情況下，亦提供檢查點阻斷抗體，諸如抗PD-1抗體。
[00674] 在本發明之實施方案中之任一者中，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域可具有另一組胺基酸取代，其包含Q295E/N384D/Q418E/N421D，根據EU編號。在某些情況下，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其由以下組成：G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del，根據EU編號。
[00675] 在本發明之實施方案中之任一者中，IL-15蛋白具有選自由全長人類IL-15及截短人類IL-15組成之群的多肽序列，且IL-15Rα蛋白具有選自由全長人類IL-15Rα及人類IL-15Rα之sushi結構域組成之群的多肽序列。在某些情況下，IL-15蛋白及IL1-5Rα蛋白具有一組胺基酸取代或添加，其分別選自由以下組成之群：E87C : D96/P97/C98；E87C : D96/C97/A98；V49C : S40C；L52C : S40C；E89C : K34C；Q48C : G38C；E53C : L42C；C42S : A37C；及L45C : A37C。
[00676] 在另一態樣中，本發明提供檢查點阻斷抗體及異二聚體蛋白，該異二聚體蛋白選自由以下組成之群：XENP20818、XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21475、XENP21476、XENP21477、XENP21478、XENP21479、XENP21978、XENP22013、XENP22015、XENP22017、XENP22354、XENP22355、XENP22356、XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22360、XENP22361、XENP22362、XENP22363、XENP22364、XENP22365、XENP22366、XENP22637及XENP22639 (包括相應序列識別符)。在一些態樣中，本發明提供異二聚體蛋白，其選自由以下組成之群：XENP20818、XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21475、XENP21476、XENP21477、XENP22013、XENP22815、XENP22816、XENP22817、XENP22818、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22829、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP22834、XENP23343、XENP23554、XENP23555、XENP23557、XENP23559、XENP24019及XENP24020 (包括相應序列識別符)。除了製備該等蛋白質及用其治療患者的方法之外，亦提供核酸、表現載體及宿主細胞。
[00677] 在一些態樣中，本文提供治療有需要之患者中之癌症且最小化該患者中之血管滲漏程度的方法。該方法包括向該患者投與治療有效量之檢查點阻斷抗體例如抗PD-1抗體，及治療有效量之本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白或本文所述之醫藥組合物。
[00678] 在一些實施方案中，該方法亦包括投與治療有效量之檢查點阻斷抗體。在一些實施方案中，該檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。在一些實施方案中，抗PD-L1抗體為阿特珠單抗(atezolizumab)、阿維魯單抗(avelumab)或杜巴魯單抗(durbalumab)。
[00679] 在一些實施方案中，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體之後，患者中之血清白蛋白中的血管滲漏程度範圍為減少20%或20%以下，例如，減少20%、減少19%、減少18%、減少17%、減少16%、減少20%、減少20%、減少20%、減少20%、減少20%、減少15%、減少14%、減少13%、減少12%、減少11%、減少10%或減少10%以下。在某些情況下，在投藥後第1天至第15天出現血清白蛋白中之該種減少。在一些實施方案中，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體後第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天或第15天后出現(或可偵測到)減少。
[00680] 在一些實施方案中，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體後，患者展現淋巴細胞增加2倍至15倍，例如，增加2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍或15倍。在某些情況下，在投藥後第1天至第15天出現淋巴細胞之該種增加。在一些實施方案中，在投藥後第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天或第15天后出現(或可偵測到)淋巴細胞增加。
[00681] 在一些實施方案中，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體後，患者展現外周CD8+ T細胞增加2倍至13倍，例如，增加2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍或13倍。在某些情況下，在投藥後第1天至第15天出現外周CD8+ T細胞之該種增加。在一些實施方案中，在投藥後第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天或第15天后出現(或可偵測到)外周CD8+ T細胞增加。
[00682] 在一些態樣中，本文提供在有需要之患者中誘導T細胞擴增且未增加誘發低白蛋白血症之可能性的方法，其包括向該患者投與治療有效量之本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白或本文所述之醫藥組合物。在一些實施方案中，該方法亦包括投與治療有效量之檢查點阻斷抗體。在一些實施方案中，檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。
[00683] 在一些實施方案中，T細胞擴增為T細胞增加至少2倍，例如， 2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍、20倍、21倍或21倍以上。在一些實施方案中，T細胞擴增範圍為T細胞增加2倍至15倍，例如，增加2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍或15倍。在某些情況下，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合體及檢查點阻斷抗體例如抗PD-1抗體後第1天至第15天出現T細胞之該種擴增。在一些實施方案中，在投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合體及檢查點阻斷抗體例如抗PD-1抗體後第1天、第2天、第3天、第4天、第5天、第6天、第7天、第8天、第9天、第10天、第11天、第12天、第13天、第14天、第15天或第15天后出現(或可偵測到) T細胞擴增。
[00684] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與抗PD-1抗體組合與含IL-15或IL-15Rα之對照蛋白相比可增強淋巴細胞擴增，以及導致白蛋白下降減少(圖203中描繪之資料)。白蛋白下降減少指示IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體之優異治療指數。在一些實施方案中，IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與抗PD-1抗體組合促進外周CD8+
T細胞增加至少3倍(200%)。在一些實施方案中，IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與抗PD-1抗體組合介導或促進白蛋白下降程度不超過15%減少。在某些情況下，IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白與抗PD-1抗體組合引起或誘導白蛋白水平下降低於含IL-15或IL-15Ra之對照蛋白。在一些實施方案中，向本文所述之患者投與IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及抗PD-1抗體，其促進外周CD8+
T細胞增加至少11倍 (1000%)，同時維持白蛋白水平高於20%下降。
[00685] 本發明提供誘導患者中之T細胞擴增之方法，其藉由投與檢查點阻斷抗體及IL-15蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物，該改進包括向該患者投與抗PD-1抗體及IL-15變異體蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物，其中該IL-15變異體蛋白具有降低之親和力，使得患者具有低白蛋白血症之可能性降低。
[00686] 在本文所述方法之一些實施方案中，變異體IL-15具有一個或一個以上胺基酸取代，其選自由N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D及Q108E組成之群。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N1D取代或至少N1D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N4D取代或至少N4D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N1D取代或至少D8N取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有D30N取代或至少D30N取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有D61N取代或至少D61N取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有E64Q取代或至少E64Q取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N65D取代或至少N65D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有Q108E取代或至少Q108E取代。
[00687] 在本文所述方法之一些實施方案中，IL-15變異體蛋白具有選自由N4D、N65D、N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群的胺基酸取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N4D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N65D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有N4D/N65D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有D30N/N65D取代。在一些實施方案中，變異體IL-15具有D30N/E64Q/N65D取代。
[00688] 在本文所述方法之一些實施方案中，IL-15變異體蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物為本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白中之任一者。
[00689] 因此，在一個態樣中，本發明提供IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，其包含：(a)第一融合蛋白，其包含第一蛋白結構域及第一Fc結構域，其中使用第一結構域連接子將該第一蛋白結構域共價連接至該第一Fc結構域之N端；(b)第二融合蛋白，其包含第二蛋白結構域及第二Fc結構域，其中使用第二結構域連接子將該第二蛋白結構域共價連接至該Fc結構域之N端；其中該第一Fc結構域及該第二Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/LS364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411T/E360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號，且其中該第一蛋白結構域包含IL-15蛋白且該第二蛋白結構域包含IL-15Rα蛋白。在一些實施方案中，第一蛋白結構域直接地且不使用第一結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端及/或第二蛋白結構域直接地且不使用第二結構域連接子共價連接至第二Fc結構域之N端。
[00690] 在一些實施方案中，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其包含Q295E/N384D/Q418E/N421D，根據EU編號。在一些實施方案中，其中第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一組胺基酸取代，其由以下組成：G236R/L328R、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K、E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G、E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G及E233P/L234V/L235A/G236del，根據EU編號。在一些實施方案中，第一Fc結構域及/或第二Fc結構域具有另一胺基酸取代M428L/N434S，根據EU編號。
[00691] 在一些實施方案中，IL-15蛋白具有選自由全長人類IL-15蛋白及截短人類IL-15蛋白組成之群的多肽序列，且該IL-15Rα蛋白具有選自由全長人類IL-15Rα蛋白及人類IL-15Rα蛋白之sushi結構域組成之群的多肽序列。在某些實施方案中，IL-15蛋白具有一個或一個以上胺基酸取代，其選自由N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D及Q108E組成之群。在特定實施方案中，IL-15蛋白具有選自由N4D、N65D、N4D/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群的胺基酸取代。
[00692] 在一些實施方案中，IL-15蛋白及IL-15Rα蛋白具有一組胺基酸取代或添加，其分別選自由以下組成之群：E87C : D96/P97/C98；E87C : D96/C97/A98；V49C : S40C；L52C : S40C；E89C : K34C；Q48C : G38C；E53C : L42C；C42S : A37C；及L45C : A37C。
[00693] 在一些實施方案中，第一蛋白結構域直接地且不使用第一結構域連接子共價連接至第一Fc結構域之N端，及/或第二蛋白結構域直接地且不使用第二結構域連接子共價連接至第二Fc結構域之N端。
[00694] 在一些實施方案中，IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白選自由以下組成之群：XENP20818、XENP22013、XENP22014、XENP22015、XENP22017、XENP23343、XENP23504、XENP23557、XENP24045、XENP24113、XENP24301、XENP24306及XENP24341。
[00695] 除了製備該等蛋白質及用其治療患者的方法之外，亦提供核酸、表現載體及宿主細胞。
[00696] 在一個態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含本文所述之IL-15/IL-15Rα Fc融合異二聚體蛋白中之任一者及醫藥學上可接受之載劑。在另一態樣中，本發明提供醫藥組合物，其包含IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，該融合蛋白選自由以下組成之群：XENP20818、XENP22013、XENP22014、XENP22015、XENP22017、XENP23343、XENP23504、XENP23557、XENP24045、XENP24113、XENP24301、XENP24306及XENP24341；及醫藥學上可接受之載劑。
[00697] 在另一態樣中，本發明提供治療有需要之患者中之癌症的方法，其包括向該患者投與治療有效量之本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白中的任一者或其醫藥組合物。在一些實施方案中，該方法亦包括投與治療有效量之檢查點阻斷抗體。在某些實施方案中，該檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在某些情況下，抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。在某些情況下，抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、阿維魯單抗或杜巴魯單抗。
[00698] 其他IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白詳細描述於例如2016年10月14日申請之美國Ser. No. 62/408,655、2016年11月1日申請之美國Ser. No. 62/416,087、2017年1月6日申請之美國Ser. No. 62/443,465、2017年3月28日申請之美國Ser. No. 62/477,926、2017年10月16日申請之美國專利申請第15/785,401號及WO2018071919中，該等文獻以全文引用之方式明確併入本文中，特定參考其中之附圖、圖例及申請專利範圍。
[00699] 在一個態樣中，本發明提供治療有需要之患者中之癌症且最小化該患者中之血管滲漏程度的方法。在一些實施方案中，該方法包括向患者投與治療有效量之本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白或本文所述之醫藥組合物。
[00700] 在一些實施方案中，該方法亦包括投與治療有效量之檢查點阻斷抗體。在一些實施方案中，該檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。在一些實施方案中，該抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、阿維魯單抗或杜巴魯單抗。
[00701] 在一些實施方案中，在投藥後患者中之血清白蛋白中的血管滲漏程度範圍為減少20%或20%以下。
[00702] 在一些實施方案中，在投藥後患者展現淋巴細胞增加2倍至15倍。
[00703] 在一些實施方案中，在投藥後患者展現外周CD8+ T細胞增加2倍至13倍。
[00704] 在一個態樣中，本發明提供誘導有需要之患者中之T細胞擴增且不增加誘發低白蛋白血症之可能性的方法，其包括向該患者投與治療有效量之本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白或本文所述之醫藥組合物。
[00705] 在一些實施方案中，該方法亦包括投與治療有效量之檢查點阻斷抗體。
[00706] 在一些實施方案中，該檢查點阻斷抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。在一些實施方案中，該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。在一些實施方案中，該抗PD-L1抗體為阿特珠單抗、阿維魯單抗或杜巴魯單抗。
[00707] 在一些實施方案中，T細胞擴增為T細胞增加至少2倍。在一些實施方案中，T細胞擴增範圍為T細胞增加2倍至15倍。
[00708] 在一些態樣中，本發明提供誘導患者中之T細胞擴增之方法，其藉由投與IL-15蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物，該改進包括向該患者投與IL-15變異體蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物，其中IL-15變異體蛋白具有降低之親和力，使得患者患上低白蛋白血症之可能性降低。
[00709] 在本文所述方法之一些實施方案中，變異體IL-15具有一個或一個以上胺基酸取代，其選自由以下組成之群：N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D及Q108E。
[00710] 在本文所述方法之一些實施方案中，IL-15變異體蛋白具有選自由N4D、N65D、N4D/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群的胺基酸取代。
在本文所述方法之一些實施方案中，IL-15變異體蛋白與IL-15Rα蛋白之複合物為本文所述之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白中之任一者。
IX.本發明之核酸
[00711] 本發明進一步提供編碼本發明之異二聚體Fc融合蛋白之核酸組合物(或者，在單體Fc結構域蛋白之情況下，以及編碼其之核酸)。
[00712] 如熟習此項技術者所理解，核酸組合物將取決於異二聚體蛋白之形式。因此，例如，當該形式需要三種胺基酸序列時，可以將三種核酸序列併入到一個或一個以上表現載體中用於表現。類似地，對於某些形式，僅需要兩種核酸；同樣，它們可以置於一個或兩個表現載體中。
[00713] 如此項技術中已知，編碼本發明組份之核酸可以如此項技術中已知併入表現載體中，且取決於用於產生本發明之異二聚體Fc融合蛋白之宿主細胞。通常，核酸與任何數量之調節元件(啟動子、複製起點、選擇標記、核糖體結合位點、誘導物等)可操作地連接。表現載體可為染色體外或整合載體。
[00714] 隨後將本發明之核酸及/或表現載體轉化至此項技術中眾所周知之任何數目之不同類型的宿主細胞，包括哺乳動物、細菌、酵母、昆蟲及/或真菌細胞，其中哺乳動物細胞(例如，CHO細胞)用於許多實施方案。
[00715] 在一些實施方案中，編碼每個單體之核酸(視情況而定，取決於形式)各自包含在單個表現載體內，通常在不同或相同的啟動子控制下。在本發明中特別有用之實施方案中，該兩種或三種核酸中的每一者皆包含於不同表現載體上。
[00716] 本發明之異二聚體Fc融合蛋白係藉由如此項技術中眾所周知培養包含表現載體之宿主細胞來製備。一旦產生，即進行傳統之融合蛋白或抗體純化步驟，包括離子交換層析步驟。如本文所討論，使兩種單體之pI相差至少0.5可以藉由離子交換層析法或等電聚焦或對等電點敏感之其他方法進行分離。亦即，包括改變每個單體之等電點(pI)之pI取代使得每個單體具有不同之pI且異二聚體亦具有不同之pI，因此促進異二聚體之等電純化(例如，陰離子交換層析法、陽離子交換層析法)。該等取代亦有助於確定及監測純化後之任何污染同二聚體(例如，IEF凝膠、cIEF及分析IEX管柱)。
X.IL-15/IL-15Rα 異二聚體免疫調節 Fc 融合蛋白之生物學及生物化學功能
[00717] 通常，將本發明之異二聚體Fc融合蛋白投與至癌症患者，且以如本文所述之多種方法評估功效。因此，儘管可以進行標準之功效檢定，諸如癌症負荷、腫瘤大小、轉移之存在或程度之評估等，但亦可基於免疫狀態評估來評估免疫腫瘤學治療。這可以多種方式進行，包括活體外及活體內檢定。舉例而言，可以進行免疫狀態變化評估(例如，ipi治療後存在ICOS+ CD4+ T細胞)以及「老式」量測，諸如腫瘤負荷、大小、侵襲性、LN受累、轉移等。因此，可以評估以下中之任一者或全部：PVRIG對CD4+
T細胞活化或增殖、CD8+
T (CTL)細胞活化或增殖、CD8+
T細胞介導之細胞毒性活性及/或CTL介導之細胞耗竭、NK細胞活性及NK介導之細胞耗竭的抑制作用，PVRIG對Treg細胞分化及增殖以及Treg-或髓源抑制細胞(MDSC)介導之免疫抑制或免疫耐受的增強作用，及/或PVRIG對免疫細胞之促炎性細胞因子產生(例如，T或其他免疫細胞之IL-2、IFN-γ或TNF-α產生)的影響。
[00718] 在一些實施方案中，藉由使用例如CFSE稀釋法、免疫效應細胞之Ki67細胞內染色及3
H-胸苷併入方法評估免疫細胞增殖來進行治療評估。
[00719] 在一些實施方案中，藉由評估基因表現增加或活化相關標誌物(包括CD25、CD69、CD137、ICOS、PD1、GITR、OX40中之一者或一者以上)之蛋白質水平增加及藉由CD107A之表面表現量測之細胞脫粒來進行治療評估。
[00720] 一般而言，如此項技術中已知進行基因表現檢定。
[00721] 一般而言，亦如此項技術中已知類似地進行蛋白質表現量測。
[00722] 在一些實施方案中，藉由評估由靶細胞活力偵測量測之細胞毒性活性來進行治療評估，其經由估計眾多細胞參數，諸如酶活性(包括蛋白酶活性)、細胞膜通透性、細胞黏附、ATP產生、輔酶產生及核苷酸攝取活性。此等檢定之特定實例包括但不限於台盼藍或PI染色、51
Cr或35
S釋放方法、LDH活性、MTT及/或WST檢定、鈣黃綠素-AM檢定、基於發光之檢定等。
[00723] 在一些實施方案中，藉由評估由細胞因子產生量測之T細胞活性來進行治療評估，其中使用眾所周知之技術使用包括但不限於IFNγ、TNFα、GM-CSF、IL2、IL6、IL4、IL5、IL10、IL13之細胞因子在細胞內量測培養上清液。
[00724] 因此，可以使用評估以下中之一者或一者以上之檢定來進行治療評估：(i)免疫應答增加，(ii) αβ及/或γδ T細胞活化增加，(iii)細胞毒性T細胞活性增加，(iv) NK及/或NKT細胞活性增加，(v) αβ及/或γδ T細胞抑制減輕，(vi)促炎性細胞因子分泌增加，(vii) IL-2分泌增加，(viii)干擾素-γ產生增加，(ix) Th1應答增加，(x) Th2應答減少，(xi)減少或消除調節性T細胞(Treg)中之至少一者之細胞數目及/或活性。
A. 量測功效及效能之檢定
[00725] 在一些實施方案中，使用如此項技術中已知之混合淋巴細胞反應(MLR)檢定評估T細胞活化。活性增加表明免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00726] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測免疫應答之增加或減少，如例如藉由不同因子之磷酸化或去磷酸化或藉由量測其他轉譯後修飾來量測。IL-15經由STAT5之磷酸化介導IFNγ表現及分泌。因此，在一些實施方案中，信號傳導路徑檢定量測免疫應答之增加或減少，如由STAT5之磷酸化所示。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00727] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測αβ及/或γδ T細胞活化之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00728] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測細胞毒性T細胞活性之增加或減少，如例如藉由直接殺傷靶細胞如例如癌細胞或藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00729] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測NK及/或NKT細胞活性之增加或減少，如例如藉由直接殺傷靶細胞如例如癌細胞或藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物如例如CD107a等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00730] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測αβ及/或γδ T細胞抑制之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00731] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測促炎性細胞因子分泌之增加或減少，如例如藉由ELISA或藉由Luminex或藉由基於多重珠粒之方法或藉由細胞內染色及FACS分析或藉由Alispot等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00732] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測IL-2分泌之增加或減少，如例如藉由ELISA或藉由Luminex或藉由基於多重珠粒之方法或藉由細胞內染色及FACS分析或藉由Alispot等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00733] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測干擾素-γ產生之增加或減少，如例如藉由ELISA或藉由Luminex或藉由基於多重珠粒之方法或藉由細胞內染色及FACS分析或藉由Alispot等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00734] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測Th1應答之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00735] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測Th2應答之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00736] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測細胞數目及/或至少一種調節T細胞(Treg)活性之增加或減少，如例如藉由流式細胞術或藉由IHC所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00737] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測M2巨噬細胞數目之增加或減少，如例如藉由流式細胞術或藉由IHC所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00738] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測M2巨噬細胞促腫瘤發生活性之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物之表現變化所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00739] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測N2嗜中性白細胞增加之增加或減少，如例如藉由流式細胞術或藉由IHC所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00740] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測N2嗜中性白細胞促腫瘤發生活性之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物之表現變化所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00741] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測T細胞活化抑制之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00742] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測CTL活化抑制之增加或減少，如例如藉由直接殺傷靶細胞如例如癌細胞或藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00743] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測αβ及/或γδ T細胞耗竭之增加或減少，如例如藉由活化標誌物之表現變化所量測。應答降低指示免疫刺激活性。適當降低與下文概述之增加相同。
[00744] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測αβ及/或γδ T細胞應答之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00745] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測抗原特異性記憶應答刺激之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD45RA、CCR7等之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00746] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測癌細胞凋亡或裂解之增加或減少，如例如藉由細胞毒性檢定例如MTT、Cr釋放、Calcine AM或藉由基於流式細胞術之檢定如例如CFSE稀釋或碘化丙啶染色等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00747] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測對癌細胞之細胞毒性或細胞抑制作用刺激之增加或減少，如例如藉由細胞毒性檢定例如MTT、Cr釋放、Calcine AM或藉由基於流式細胞術之檢定如例如CFSE稀釋或碘化丙啶染色等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00748] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測直接殺傷癌細胞之增加或減少，如例如藉由細胞毒性檢定例如MTT、Cr釋放、Calcine AM或藉由基於流式細胞術之檢定如例如CFSE稀釋或碘化丙啶染色等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00749] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測Th17活性之增加或減少，如例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物之表現變化所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00750] 在一個實施方案中，信號傳導路徑檢定量測補體依賴性細胞毒性及/或抗體依賴性細胞介導細胞毒性誘導之增加或減少，如例如藉由細胞毒性檢定例如MTT、Cr釋放、Calcine AM或藉由基於流式細胞術之檢定如例如CFSE稀釋或碘化丙啶染色等所量測。活性增加指示免疫刺激活性。適當之活性增加概述如下。
[00751] 在一個實施方案中，例如藉由直接殺傷靶細胞如例如癌細胞或藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物如例如CD137、CD107a、PD1等之表現變化量測T細胞活化。對於T細胞，增殖、活化細胞表面標誌物(例如，CD25、CD69、CD137、PD1)、細胞毒性(殺傷靶細胞之能力)及細胞因子產生(例如，IL-2、IL-4、IL-6、IFNγ、TNF-a、IL-10、IL-17A)之增加將指示與增強之癌細胞殺傷一致之免疫調節。
[00752] 在一個實施方案中，例如藉由直接殺傷靶細胞如例如癌細胞或藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物如例如CD107a等之表現變化量測NK細胞活化。對於NK細胞，增殖、細胞毒性(殺傷靶細胞且增加CD107a、顆粒酶及穿孔素表現之能力)、細胞因子產生(例如，IFNγ及TNF)及細胞表面受體表現(例如CD25)的增加將指示與增強之癌細胞殺傷一致之免疫調節。
[00753] 在一個實施方案中，例如藉由細胞因子分泌或藉由增殖或藉由活化標誌物之表現變化量測γδ T細胞活化。
[00754] 在一個實施方案中，例如藉由細胞因子分泌或藉由活化標誌物之表現變化量測Th1細胞活化。
[00755] 活性或應答之適當增加(或減少，適當時如上所述)為相比於參考樣品或對照樣品(例如不含本發明之抗PVRIG抗體之測試樣品)中之信號增加10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或98%至99%。類似地，與參考或對照樣品相比，至少一倍、兩倍、三倍、四倍或五倍之增加顯示功效。
XI.檢查點阻斷抗體
[00756] 在一些實施方案中，本文所述之含有IL-15及IL-15Rα蛋白之異二聚體Fc融合蛋白與其他治療劑組合，該等其他治療劑包括檢查點阻斷抗體，諸如但不限於PD-1抑制劑、TIM3抑制劑、CTLA4抑制劑、PD-L1抑制劑、TIGIT抑制劑、LAG3抑制劑或其組合。
A. 抗PD1抗體
[00757] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可與檢查點阻斷抗體例如抗PD-1抗體組合投與至具有癌症之受試者。在某些情況下，該抗PD-1抗體包括XENP13432 (二價抗PD-1 mAb，基於具有消除效應功能之納武單抗；XENP13432之胺基酸序列描繪於圖160中)。
[00758] 例示性非限制性抗PD-1抗體分子揭示於2015年7月30日公開之名稱為「Antibody Molecules to PD-1 and Uses Thereof」之US 2015/0210769中，其以引用之方式全部併入。
[00759] 在一個實施方案中，抗PD-1抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變結構域(視情況包括恒定區)、至少一個或兩個輕鏈可變結構域(視情況包括恒定區)或兩者，其包含BAP049-純系-A、BAP049-純系-B、BAP049-純系-C、BAP049-純系-D或BAP049-純系-E之胺基酸序列；或如US 2015/0210769之表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與前述序列中之任一者實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。抗PD-1抗體分子視情況包含來自重鏈、輕鏈或兩者之前導序列，如US 2015/0210769之表4中所示；或實質上與其相同之序列。
[00760] 在另一實施方案中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文所述抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之三個互補判定區(CDR)，所述抗體例如為選自以下中之任一者之抗體：BAP049-hum01、BAP049-hum02、BAP049-hum03、BAP049-hum04、BAP049-hum05、BAP049-hum06、BAP049-hum07、BAP049-hum08、BAP049-hum09、BAP049-hum10、BAP049-hum11、BAP049-hum12、BAP049-hum13、BAP049-hum14、BAP049-hum15、BAP049-hum16、BAP049-純系-A、BAP049-純系-B、BAP049-純系-C、BAP049-純系-D或BAP049-純系-E；或如表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00761] 在另一實施方案中，抗PD-1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2015/0210769之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00762] 在另一實施方案中，抗PD-1抗體分子包括來自包含US 2015/0210769之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區的至少一個、兩個或三個CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。在某些實施方案中，抗PD-1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如，輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中之一個或一個以上取代。在一個實施方案中，抗PD-1抗體分子包括在輕鏈可變區之第102位之輕鏈CDR3中的取代，例如，在根據表1之輕鏈可變區之第102位，半胱胺酸取代為酪胺酸，或半胱胺酸取代為絲胺酸殘基(例如，對於未修飾之鼠類或嵌合序列為SEQ ID NO: 16或24；或對於修飾序列為SEQ ID NO: 34、42、46、54、58、62、66、70、74或78中之任一者)。
[00763] 在另一實施方案中，抗PD-1抗體分子包括來自包含US 2015/0210769之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00764] 在一個實施方案中，抗PD-1抗體分子包括：
[00765] (a)重鏈可變區(VH)，其包含SEQ ID NO: 4之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 5之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 33之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0210769之表1中；
[00766] (b) VH，其包含選自SEQ ID NO: 1之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 32之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0210769之表1中；
[00767] (c) VH，其包含SEQ ID NO: 224之VHCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 5之VHCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 13之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 14之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 33之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0210769之表1中；或
[00768] (d) VH，其包含SEQ ID NO: 224之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 32之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0210769之表1中。
[00769] 在另一實施方案中，抗PD-1抗體分子包含(i)重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 224之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 5之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列；及(ii)輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 13之VLCDR1胺基酸序列，SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 14之VLCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO: 32或SEQ ID NO: 33之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0210769之表1中。
[00770] 在其他實施方案中，PD-1抑制劑為選自納武單抗、派姆單抗或匹地單抗之抗PD-1抗體。
[00771] 在一些實施方案中，抗PD-1抗體為納武單抗。納武單抗之替代名稱包括MDX-1106、MDX-1106-04、ONO-4538或BMS-936558。在一些實施方案中，抗PD-1抗體為納武單抗(CAS登記號：946414-94-4)。納武單抗為特異性阻斷PD1之完全人類IgG4單株抗體。納武單抗(純系5C4)及特異性結合PD1之其他人類單株抗體揭示於US 8,008,449及WO2006/121168中。在一個實施方案中，PD-1抑制劑為納武單抗，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。在一些實施方案中，抗PD-1抗體為派姆單抗。派姆單抗(亦稱為蘭利珠單抗(lambrolizumab)、MK-3475、MK03475、SCH-900475或KEYTRUDA®
；Merck)為結合PD-1之人源化IgG4單株抗體。派姆單抗及其他人源化抗PD-1抗體揭示於Hamid, O.等, (2013)New England Journal of Medicine
369 (2): 134-44；US 8,354,509及WO2009/114335中。
[00772] 在一個實施方案中，PD-1抑制劑為揭示於例如US 8,354,509及WO 2009/114335中且具有本文揭示序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)之派姆單抗。
[00773] 在一些實施方案中，抗PD-1抗體為匹地單抗。匹地單抗(CT-011；Cure Tech)為結合PD1之人源化IgG1k單株抗體。匹地單抗及其他人源化抗PD-1單株抗體揭示於US 8,747,847及WO2009/101611中。
[00774] 其他抗PD1抗體包括AMP 514 (Amplimmune)，尤其例如於US 8,609,089、US 2010028330及/或US 20120114649中揭示之抗PD1抗體。
[00775] 在一些實施方案中，PD-1抑制劑為免疫黏附素(例如，包含與恒定區(例如，免疫球蛋白序列之Fc區)融合之PD-Ll或PD-L2之細胞外或PD-1結合部分的免疫黏附素)。在一些實施方案中，PD-1抑制劑為AMP-224 (B7-DCIg；Amplimmune；例如揭示於WO2010/027827及WO2011/066342中)，為阻斷PD-1與B7-H1之間之相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受體。
[00776] 在一些實施方案中，抗PD-1抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。存在若干抗PD-1抗體，包括但不限於兩種目前FDA批准之抗體派姆單抗及尼夫珠單抗(nivolizumab)，以及目前臨床試驗中之彼等，包括但不限於替雷利珠單抗(tislelizumab)、Sym021、REGN2810 (由Rengeneron開發)、JNJ-63723283(由J and J開發)、SHR-1210、匹地單抗、AMP-224、MEDIo680、PDR001及CT-001，以及Liu等, J. Hemat. & Oncol. (2017)10:136中概述之其他，其中之抗體以引用之方式明確併入。
[00777] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白可與PD-1抑制劑(例如，抗PD-1抗體)組合使用。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)與抗PD-1抗體組合投與。
B. 抗TIM3抗體
[00778] 例示性非限制性抗TIM-3抗體分子揭示於2015年8月6日公開之名稱為「Antibody Molecules to TIM-3 and Uses Thereof」之US 2015/0218274中，其以引用之方式全部併入。
[00779] 在一個實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變結構域(視情況包括恒定區)，至少一個或兩個輕鏈可變結構域(視情況包括恒定區)或兩者，其包含ABTIM3、ABTIM3-hum01、ABTIM3-hum02、ABTIM3-hum03、ABTIM3-hum04、ABTIM3-hum05、ABTIM3-hum06、ABTIM3-hum07、ABTIM3-hum08、ABTIM3-hum09、ABTIM3-hum10、ABTIM3-hum11、ABTIM3-hum12、ABTIM3-hum13、ABTIM3-hum14、ABTIM3-hum15、ABTIM3-hum16、ABTIM3-hum17、ABTIM3-hum18、ABTIM3-hum19、ABTIM3-hum20、ABTIM3-hum21、ABTIM3-hum22、ABTIM3-hum23之胺基酸序列；或如US 2015/0218274之表1-4中所述；或由表1-4中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。抗TIM-3抗體分子視情況包含來自如US 2015/0218274中所示之重鏈、輕鏈或兩者之前導序列；或與其實質上相同之序列。
[00780] 在另一實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文所述抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之互補判定區(CDR)，所述抗體為例如選自以下中之任一者之抗體：ABTIM3、ABTIM3-hum01、ABTIM3-hum02、ABTIM3-hum03、ABTIM3-hum04、ABTIM3-hum05、ABTIM3-hum06、ABTIM3-hum07、ABTIM3-hum08、ABTIM3-hum09、ABTIM3-hum10、ABTIM3-hum11、ABTIM3-hum12、ABTIM3-hum13、ABTIM3-hum14、ABTIM3-hum15、ABTIM3-hum16、ABTIM3-hum17、ABTIM3-hum18、ABTIM3-hum19、ABTIM3-hum20、ABTIM3-hum21、ABTIM3-hum22、ABTIM3-hum23；或如US 2015/0218274之表1-4中所述；或由表1-4中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00781] 在另一實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2015/0218274之表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00782] 在另一實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2015/0218274之表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。在某些實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如，輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中之一個或一個以上取代。
[00783] 在另一實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個來自包含US 2015/0218274之表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈及輕鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1-4中所示或由表1-4中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00784] 在一個實施方案中，抗TIM-3抗體分子包括：
(a)重鏈可變區(VH)，其包含選自SEQ ID NO: 9之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 10之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及輕鏈可變區(VL)，其包含SEQ ID NO: 12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 14之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中；
(b) VH，其包含選自SEQ ID NO: 3之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 4之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 7之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 8之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中；
(c) VH，其包含選自SEQ ID NO: 9之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 25之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 14之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中；
(d) VH，其包含選自SEQ ID NO: 3之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 24之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 7之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 8之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中；
(e) VH，其包含選自SEQ ID NO: 9之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 31之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 14之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中；或
(f) VH，其包含選自SEQ ID NO: 3之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 30之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 5之VHCDR3胺基酸序列；及VL，其包含SEQ ID NO: 6之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 7之VLCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO: 8之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0218274之表1-4中。
[00785] 例示性抗TIM-3抗體揭示於美國專利第8,552,156號、WO 2011/155607、EP 2581113及美國公開案第2014/044728號中，且包括Sym023 (Symphogen在臨床開發中)、TSR-22 (Tesaro在臨床開發中)、LY3321367 (Eli Lilly在臨床開發中)、BGTB-A425 (BeiGene在臨床開發中)、MBG453 (Novartis在臨床開發中)及INCAGN02390 (Incyte在臨床開發中)。
[00786] 在一些實施方案中，抗TIM-3抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。存在若干臨床開發中之TIM-3抗體，包括但不限於MBG453及TSR-022。
[00787] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白可與TIM-3抑制劑(例如，抗TIM3抗體)組合使用。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)與抗TIM3抗體組合投與。
C. 抗CTLA4抗體
[00788] 例示性抗CTLA4抗體包括曲美木單抗(tremelimumab) (IgG2單株抗體，可獲自Pfizer，以前稱為替西木單抗(ticilimumab)、CP-675,206)；及伊匹單抗(ipilimumab) (CTLA-4抗體，亦稱為MDX-010，CAS No. 477202-00-9)。其他例示性抗CTLA-4抗體揭示於例如美國專利第5,811,097號中。
[00789] 在一個實施方案中，抗CTLA4抗體為揭示於例如US 5,811,097、US 7,605,238、WO00/32231及WO97/20574中且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)的伊匹單抗。
[00790] 在一個實施方案中，抗CTLA4抗體為揭示於例如US 6,682,736及WO00/37504中且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)的曲美木單抗。
[00791] 在一些實施方案中，抗CTLA-4抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。因此，用於如本文概述之組合療法中之合適的抗CTLA-4抗體包括但不限於一種目前FDA批准之抗體伊匹單抗及開發中之若干種，包括CP-675,206及AGEN-1884。
[00792] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白可與CTLA-4抑制劑(例如，抗CTLA-4抗體)組合使用。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)與抗CTLA-4抗體組合投與。
D. 抗PD-L1抗體
[00793] 例示性非限制性抗PD-L1抗體分子揭示於2016年4月21日公開之名稱為「Antibody Molecules to PD-L1 and Uses Thereof」之US 2016/0108123中，其以引用之方式全部併入。
[00794] 在一個實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變結構域(視情況包括恒定區)、至少一個或兩個輕鏈可變結構域(視情況包括恒定區)或兩者，其包含BAP058-hum01、BAP058-hum02、BAP058-hum03、BAP058-hum04、BAP058-hum05、BAP058-hum06、BAP058-hum07、BAP058-hum08、BAP058-hum09、BAP058-hum10、BAP058-hum11、BAP058-hum12、BAP058-hum13、BAP058-hum14、BAP058-hum15、BAP058-hum16、BAP058-hum17、BAP058-純系-K、BAP058-純系-L、BAP058-純系-M、BAP058-純系-N或BAP058-純系-O中之任一者之胺基酸序列；或如US 2016/0108123之表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00795] 在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文所述抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之互補判定區(CDR)，所述抗體為例如選自以下中之任一者之抗體：BAP058-hum01、BAP058-hum02、BAP058-hum03、BAP058-hum04、BAP058-hum05、BAP058-hum06、BAP058-hum07、BAP058-hum08、BAP058-hum09、BAP058-hum10、BAP058-hum11、BAP058-hum12、BAP058-hum13、BAP058-hum14、BAP058-hum15、BAP058-hum16、BAP058-hum17、BAP058-純系-K、BAP058-純系-L、BAP058-純系-M、BAP058-純系-N或BAP058-純系-O；或如US 2016/0108123之表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00796] 在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2016/0108123之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00797] 在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2016/0108123之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。在某些實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如，輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中之一個或一個以上取代。
[00798] 在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個來自包含US 2016/0108123之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈及輕鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00799] 在一個實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括：
(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 195之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中；及
(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO: 9之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 10之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 11之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
[00800] 在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括：
(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 195之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 5之VHCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中；及
(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO: 12之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 13之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 14之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
[00801] 在一個實施方案中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO: 1之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO: 4之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施方案中，抗PD-L1抗體分子包含SEQ ID NO: 195之VHCDR1胺基酸序列，各自揭示於US 2016/0108123之表1中。
[00802] 在一些實施方案中，PD-L1抑制劑為抗體分子。在一些實施方案中，抗PD-Ll抑制劑選自YW243.55.S70、MPDL3280A、MEDI-4736、MSB-0010718C、MDX-1105、阿特珠單抗、杜巴魯單抗、阿維魯單抗或BMS936559。
[00803] 在一些實施方案中，抗PD-L1抗體為阿特珠單抗。阿特珠單抗(亦稱為MPDL3280A及Atezo®；Roche)為結合PD-L1之單株抗體。阿特珠單抗及其他人源化抗PD-L1抗體揭示於US 8,217,149中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00804] 在一些實施方案中，抗PD-L1抗體為阿維魯單抗。阿維魯單抗(亦稱為A09-246-2；Merck Serono)為結合PD-L1之單株抗體。阿維魯單抗及其他人源化抗PD-L1抗體揭示於US 9,324,298及WO2013/079174中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00805] 在一些實施方案中，抗PD-L1抗體為德瓦魯單抗(durvalumab)。德瓦魯單抗(亦稱為MEDI4736；AstraZeneca)為結合PD-L1之單株抗體。德瓦魯單抗及其他人源化抗PD-L1抗體揭示於US 8,779,108中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00806] 在一些實施方案中，抗PD-L1抗體為BMS-936559。BMS-936559 (亦稱為MDX-1105；BMS)為結合PD-L1之單株抗體。BMS-936559及其他人源化抗PD-L1抗體揭示於US 7,943,743及WO2007005874中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00807] 在一些實施方案中，抗PD-L1抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。存在若干抗PD-L1抗體，包括三種目前FDA批准之抗體，亦即阿特珠單抗、阿維魯單抗、德瓦魯單抗，以及目前臨床試驗中之彼等，包括但不限於LY33000054及CS1001，以及Liu等, J. Hemat. & Oncol. (2017)10:136中概述之其他抗體，其中之抗體以引用之方式明確併入。
[00808] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα異二聚體融合蛋白可與PD-L1或PD-L2抑制劑(例如，抗PD-L1抗體)組合使用。
E. 抗TIGIT抗體
[00809] 在一些實施方案中，抗TIGIT抗體為OMP-313M32。OMP-313M32 (OncoMed Pharmaceuticals)為結合TIGIT之單株抗體。OMP-313M32及其他人源化抗TIGIT抗體揭示於US20160376365及WO2016191643中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00810] 在一些實施方案中，抗TIGIT抗體為BMS-986207。BMS-986207 (亦稱為ONO-4686；Bristol-Myers Squibb)為結合TIGIT之單株抗體。BMS-986207及其他人源化抗TIGIT抗體揭示於US20160176963及WO2016106302中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00811] 在一些實施方案中，抗TIGIT抗體為MTIG7192。MTIG7192 (Genentech)為結合TIGIT之單株抗體。MTIG7192及其他人源化抗TIGIT抗體揭示於US2017088613、WO2017053748及WO2016011264中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00812] 在一些實施方案中，抗TIGIT抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。存在若干臨床開發中之TIGIT抗體，BMS-986207 (BMS在臨床開發中)、OMP-313M32 (OncoMed在臨床開發中)、MTIG7192A (Genentech在臨床開發中)及AB154 (Arcus Biosciences在臨床開發中)。
[00813] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白可與TIGIT抑制劑(例如，抗TIGIT抗體)組合使用。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)與抗TIGIT抗體組合投與。
[00814] 在一些實施方案中，抗TIGIT抗體可與XENP24306組合使用，包括但不限於BMS-986207 (BMS在臨床開發中)、OMP-313M32 (OncoMed在臨床開發中)、MTIG7192A (Genentech在臨床開發中)及AB154 (Arcus Biosciences在臨床開發中)。
F. 抗LAG3抗體
[00815] 例示性非限制性抗LAG-3抗體分子揭示於2015年9月17日公開之名稱為「Antibody Molecules to LAG-3 and Uses Thereof」之US 2015/0259420中，其以引用之方式全部併入。
[00816] 在一個實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個或兩個重鏈可變結構域(視情況包括恒定區)、至少一個或兩個輕鏈可變結構域(視情況包括恒定區)或兩者，其包含以下中之任一者之胺基酸序列：BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser) (例如，BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-純系-F、BAP050-純系-G、BAP050-純系-H、BAP050-純系-I或BAP050-純系-J；或如US 2015/0259420之表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00817] 在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自本文所述抗體之重鏈可變區及/或輕鏈可變區之三個互補判定區(CDR)，所述抗體例如為選自以下中之任一者之抗體：BAP050-hum01、BAP050-hum02、BAP050-hum03、BAP050-hum04、BAP050-hum05、BAP050-hum06、BAP050-hum07、BAP050-hum08、BAP050-hum09、BAP050-hum10、BAP050-hum11、BAP050-hum12、BAP050-hum13、BAP050-hum14、BAP050-hum15、BAP050-hum16、BAP050-hum17、BAP050-hum18、BAP050-hum19、BAP050-hum20、huBAP050(Ser) (例如，BAP050-hum01-Ser、BAP050-hum02-Ser、BAP050-hum03-Ser、BAP050-hum04-Ser、BAP050-hum05-Ser、BAP050-hum06-Ser、BAP050-hum07-Ser、BAP050-hum08-Ser、BAP050-hum09-Ser、BAP050-hum10-Ser、BAP050-hum11-Ser、BAP050-hum12-Ser、BAP050-hum13-Ser、BAP050-hum14-Ser、BAP050-hum15-Ser、BAP050-hum18-Ser、BAP050-hum19-Ser或BAP050-hum20-Ser)、BAP050-純系-F、BAP050-純系-G、BAP050-純系-H、BAP050-純系-I或BAP050-純系-J；或如US 2015/0259420之表1中所述，或由表1中之核苷酸序列編碼；或與任何前述序列實質上相同(例如，至少80%、85%、90%、92%、95%、97%、98%、99%或更高同一性)之序列。
[00818] 在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2015/0259420之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00819] 在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括至少一個、兩個或三個來自包含US 2015/0259420之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之輕鏈可變區的CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。在某些實施方案中，抗PD-L1抗體分子包括輕鏈CDR中之取代，例如，輕鏈之CDR1、CDR2及/或CDR3中之一個或一個以上取代。
[00820] 在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括來自包含US 2015/0259420之表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼之胺基酸序列之重鏈及輕鏈可變區的至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個CDR (或總體地全部CDR)。在一個實施方案中，相對於表1中所示或由表1中所示之核苷酸序列編碼的胺基酸序列，一個或一個以上CDR (或總體地全部CDR)具有一個、兩個、三個、四個、五個、六個或六個以上的變化，例如，胺基酸取代或缺失。
[00821] 在一個實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括：
(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 286之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 2之VHCDR2胺基酸序列；及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0259420之表1中；及
(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO: 10之VLCDR1胺基酸序列、SEQ ID NO: 11之VLCDR2胺基酸序列及SEQ ID NO: 12之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0259420之表1中。
[00822] 在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包括：
(i)重鏈可變區(VH)，其包括選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 286之VHCDR1胺基酸序列；SEQ ID NO: 5之VHCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO: 3之VHCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0259420之表1中；及
(ii)輕鏈可變區(VL)，其包括SEQ ID NO: 13之VLCDR1胺基酸序列，SEQ ID NO: 14之VLCDR2胺基酸序列，及SEQ ID NO: 15之VLCDR3胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0259420之表1中。
[00823] 在一個實施方案中，抗LAG-3抗體分子包含SEQ ID NO: 1之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包含SEQ ID NO: 4之VHCDR1胺基酸序列。在另一實施方案中，抗LAG-3抗體分子包含SEQ ID NO: 286之VHCDR1胺基酸序列，各自揭示於US 2015/0259420之表1中。
[00824] 在一些實施方案中，抗LAG-3抗體為BMS-986016。BMS-986016 (亦稱為BMS986016；Bristol-Myers Squibb)為結合LAG-3之單株抗體。BMS-986016及其他人源化抗LAG-3抗體揭示於US 2011/0150892、WO2010/019570及WO2014/008218中。
[00825] 在一些實施方案中，抗LAG3抗體為LAG525。LAG525 (亦稱為IMP701；Novartis)為結合LAG3之單株抗體。LAG525及其他人源化抗LAG3抗體揭示於US 9,244,059及WO2008132601中，且具有本文揭示之序列(或與其實質上相同或類似之序列，例如，與指定序列具有至少85%、90%、95%或更高同一性之序列)。
[00826] 其他例示性抗LAG3抗體揭示於例如US2011150892及US2018066054中。
[00827] 在一些實施方案中，抗LAG-3抗體可與本發明之IL-15/Rα Fc融合蛋白組合使用。存在若干臨床開發中之抗LAG-3抗體，包括REGN3767 (Regeneron)、TSR-033 (Tesaro)、BMS-986016 (BMS)及Sym022 (Symphogen)。
[00828] 在一些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白可與LAG3抑制劑(例如，抗LAG3抗體)組合使用。在某些實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)與抗LAG3抗體組合投與。
[00829] 在一些實施方案中，抗LAG-3抗體可與XENP24306組合使用，包括但不限於REGN3767 (Regeneron)、TSR-033 (Tesaro)、BMS-986016 (BMS)及Sym022 (Symphogen)。
XII.組合療法
[00830] 在一些態樣中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白與另一治療劑組合投與。如本文所用之「組合」投與意指在受試者罹患病症之過程中向受試者傳遞兩種(或兩種以上)不同治療，例如，在受試者經診斷患有該病症之後並且在該病症經治癒或消除或因其他原因停止治療之前傳遞兩種或兩種以上治療。在一些實施方案中，當第二治療開始傳遞時仍然發生一種治療之傳遞，因此在投藥方面存在重疊。此在本文中稱為「同時」或「並行傳遞」。在其他實施方案中，一種治療之傳遞在另一種治療之傳遞開始之前結束。在任一情況之一些實施方案中，由於組合投藥，治療更有效。舉例而言，第二治療更有效，例如，與不存在第一治療情況下投與第二治療相比，利用較少第二治療可見等效作用，或第二治療在更大程度上減輕症狀，或者在第一治療下可見類似情況。在一些實施方案中，傳遞使得症狀減少或與病症相關之其他參數大於在不存在另一治療之情況下傳遞之一種治療所觀測之參數。兩種治療之作用可為部分加和，完全加和，或大於加和。傳遞可以使得當傳遞第二治療時仍可偵測到所傳遞之第一治療之作用。
[00831] 本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)及至少一種額外治療劑可以同時地，以相同或獨立組合物，或依序地投與。對於依序投與，可首先投與本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)，其次投與額外藥劑，或者投藥次序可顛倒。
[00832] 本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)及/或其它治療劑、程序或方式可以在病症活躍期間或在緩解期或疾病較不活躍期間進行。IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)可在其他治療之前，與治療並行，在治療後或在病症緩解期間投與。
[00833] 當組合投與時，IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)及額外藥劑(例如，第二或第三藥劑)或全部可以比單獨使用之每種藥劑(例如作為單一療法)之量或劑量更低或相同的量或劑量投與。在一些實施方案中，IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)、額外藥劑(例如，第二或第三藥劑)或全部之投與量或劑量比單獨使用之每種藥劑(例如作為單一療法)之量或劑量低(例如，至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。在其他實施方案中，產生所需作用(例如癌症治療)之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)、額外藥劑(例如，第二或第三藥劑)或全部之量或劑量比實現相同治療作用所需之單獨使用之每種藥劑(例如作為單一療法)之量或劑量更低(例如，低至少20%、至少30%、至少40%或至少50%)。
[00834] 在其他態樣中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)可與化學療法，放射線，免疫抑制劑(諸如環孢菌素、硫唑嘌呤、甲胺喋呤、黴酚酸酯及FK506)，針對檢查點抑制劑之抗體，或其他免疫消除劑諸如CAMPATH，其他抗體療法，癌得星(cytoxan)，氟達拉濱(fludarabine)，環孢菌素，FK506，雷帕黴素，黴酚酸，類固醇，FR90165，細胞因子及照射組合用於治療方案。肽疫苗，諸如在Izumoto等, 2008 J Neurosurg 108:963-971中所述者。
[00835] 在某些情況下，本發明之化合物與其他治療劑組合，諸如其他抗癌劑、抗過敏劑、抗噁心劑(或止吐劑)、疼痛緩解劑、細胞保護劑及其組合。
[00836] 在一個實施方案中，本文所述之IL-15/Rα Fc融合蛋白(例如，XENP24113、XENP24306、XENP23557或XENP24045)可與化學治療劑組合使用。例示性化學治療劑包括蒽環類(例如，伊達比星、道諾黴素、多柔比星(例如，脂質體多柔比星))，蒽二酮衍生物(例如，米托蒽醌)，長春花生物鹼(例如，長春鹼、長春新鹼、長春地辛、長春瑞濱)，烷化劑(例如，環磷醯胺、達卡巴嗪、美法侖、異環磷醯胺、替莫唑胺)，免疫細胞抗體(例如，阿侖單抗、吉妥珠單抗、利妥昔單抗、奧法木單抗、托西莫單抗、本妥昔單抗)，抗代謝物(包括例如葉酸拮抗劑、阿糖胞苷、嘧啶類似物、嘌呤類似物及腺苷脫胺酶抑制劑(例如氟達拉濱))，mTOR抑制劑，TNFR糖皮質激素誘導之TNFR相關蛋白(GITR)促效劑，蛋白酶體抑制劑(例如，阿克拉黴素A、膠黏毒素或硼替佐米)，免疫調節劑諸如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如來那度胺)，激酶抑制劑諸如依魯替尼(例如億珂(Imbruvica))，皮質類固醇(例如，地塞米松、強的松)及CVP (環磷醯胺、長春新鹼及潑尼松之組合)，存在或不存在依託泊苷(例如VP-16)之CHOP (環磷醯胺、羥基道諾黴素、Oncovin®(長春新鹼)及潑尼松之組合)，環磷醯胺及噴司他丁之組合，苯丁酸氮芥及潑尼松之組合，氟達拉濱及環磷醯胺之組合，或另一藥劑諸如鹽酸氮芥(例如Mustargen)、多柔比星(阿黴素®)、甲胺喋呤、奧沙利鉑或阿糖胞苷(ara-C)。
[00837] 考慮用於組合療法之一般化學治療劑包括阿那曲唑(Arimidex®)、比卡魯胺(Casodex®)、硫酸博萊黴素(Blenoxane®)、白消安(Myleran®)、白消安注射液(Busulfex®)、卡培他濱(Xeloda®)、N4-戊氧羰基-5-去氧-5-氟胞苷、卡鉑(Paraplatin®)、卡莫司汀(BiCNU®)、苯丁酸氮芥(Leukeran®)、順鉑(Platinol®)、克拉屈濱(Leustatin®)、環磷醯胺(Cytoxan®或Neosar®)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿拉伯糖苷(Cytosar-U®)、阿糖胞苷脂質體注射液(DepoCyt®)、達卡巴嗪(DTIC-Dome®)、放線菌素(更生黴素D，Cosmegan)、鹽酸道諾黴素(Cerubidine®)、檸檬酸道諾黴素脂質體注射液(DaunoXome®)、地塞米松、多烯紫杉醇(Taxotere®)、鹽酸多柔比星(Adriamycin®，Rubex®)，依託泊苷(Vepesid®)、磷酸氟達拉濱(Fludara®)、5-氟尿嘧啶(Adrucil®、Efudex®)、氟他胺(Eulexin®)、替紮他濱、吉西他濱(二氟去氧胞苷)、羥基脲(Hydrea®)、伊達比星(Idamycin®)、異環磷醯胺(IFEX®)、伊立替康(Camptosar®)、L-天冬醯胺酶(ELSPAR®)、甲醯四氫葉酸鈣、美法侖(Alkeran®)、6-巰基嘌呤(Purinethol®)、甲胺喋呤(Folex®)、米托蒽醌(Novantrone®)、麥羅塔(mylotarg)、紫杉醇(Taxol®)、費尼克斯(Yttrium90/MX-DTPA)、噴司他丁、具有卡莫司汀植入物之聚苯丙生20 (Gliadel®)、檸檬酸他莫昔芬(Nolvadex®)、替尼泊苷(Vumon®)、6-硫鳥嘌呤、塞替派、替紮拉明(Tirazone®)、注射用鹽酸托泊替康(Hycamptin®)、長春鹼(Velban®)、長春新鹼(Oncovin®)及長春瑞濱(Navelbine®)。
XIII.治療
[00838] 一旦製成，本發明之組合物可用於眾多腫瘤學應用，其藉由治療癌症，通常藉由利用與本發明之異二聚體Fc融合蛋白結合而促進T細胞活化(例如，T細胞不再受抑制)。
[00839] 因此，本發明之異二聚體組合物可用於治療此等癌症，包括但不限於轉移性癌症。
A. 用於活體內投藥之異二聚體蛋白組合物
[00840] 根據本發明使用之抗體之調配物係藉由將具有所需純度之抗體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑混合而製備(如Remington's Pharmaceutical Sciences, 第16版, Osol, A.編[1980]中通常概述)，以凍乾調配物或水溶液形式儲存。可接受之載劑、緩衝劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒，且包括緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苄基氯化銨；六甲氯銨；苯紮氯銨、苄索氯銨；苯酚、丁醇或苄醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺酸、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；及/或非離子界面活性劑，諸如TWEEN™、PLURONICS™或聚乙二醇(PEG)。
B. 投藥方式
[00841] 根據已知方法，諸如團式靜脈內投藥或藉由經一段時間連續輸注，將本發明之異二聚體蛋白及化學治療劑投與至受試者。
C. 治療方式
[00842] 在本發明之方法中，療法用於提供關於疾病或病狀之陽性治療反應。「陽性治療反應」旨在改善疾病或病狀，及/或改善與疾病或病狀相關之症狀。舉例而言，陽性治療反應係指該疾病之以下改善中之一者或一者以上：(1)腫瘤細胞數目減少；(2)腫瘤細胞死亡增加；(3)抑制腫瘤細胞存活；(5)抑制(亦即，在一定程度上減緩，較佳停止)腫瘤生長；(6)患者存活率增加；及(7)與疾病或病狀相關之一種或一種以上症狀的一些緩解。
[00843] 任何給定疾病或病狀中之陽性治療反應可以藉由對該疾病或病狀具特異性之標準化反應準則來確定。可以使用諸如磁共振成像(MRI)掃描、x射線照相成像、電腦斷層(CT)掃描、骨骼掃描成像、內窺鏡檢查及腫瘤活檢取樣包括骨髓穿刺(BMA)及循環中腫瘤細胞計數之篩選技術來評估腫瘤反應之腫瘤形態學變化(例如，總體腫瘤負荷、腫瘤大小及其類似物)。
[00844] 除了此等陽性治療反應之外，接受治療之受試者可經歷疾病相關症狀改善之有益作用。
[00845] 根據本發明之治療包括「治療有效量」之所用藥物。「治療有效量」係指在必要劑量及時間段內有效實現所需治療結果的量。
[00846] 治療有效量可根據諸如以下因素而改變：疾病狀態，個體之年齡、性別及體重，以及藥物在個體中引發所需反應之能力。治療有效量亦為其中蛋白質或蛋白質部分之任何毒性或有害作用超過治療有益作用的量。
[00847] 用於腫瘤治療之「治療有效量」亦可藉由其穩定化疾病進展之能力來量測。可在預測人類腫瘤中之功效之動物模型系統中評估化合物抑制癌症之能力。
[00848] 或者，組合物之此種特性可藉由利用熟習此項技術者已知之活體外檢定研究化合物抑制細胞生長或誘導細胞凋亡之能力來評估。治療有效量之治療化合物可降低腫瘤大小，或以其他方式改善受試者之症狀。一般技術者將能夠基於諸如受試者體型、受試者症狀之嚴重程度及所選擇之特定組合物或投藥途徑等因素來確定此等量。
[00849] 調整給藥方案以提供最佳所需反應(例如，治療反應)。舉例而言，可以投與單次推注，可以隨時間投與幾個分開劑量，或者可以根據治療情況之緊急程度按比例減少或增加劑量。胃腸外組合物可以劑量單位形式配製，以便於投藥及給藥均勻性。如本文所用之劑量單位形式係指適合作為待治療受試者之單位劑量之物理離散單位；各單位含有預定量之活性化合物，其經計算可與所需醫藥載劑一起產生所需治療作用。
[00850] 本發明之劑量單位形式之說明書由以下決定且直接取決於：(a)活性化合物之獨特特徵及欲實現之特定治療作用，及(b)複合此種活性化合物用於治療個體敏感性之技術中固有的局限性。
[00851] 本發明中使用之異二聚體蛋白之有效劑量和給藥方案取決於待治療之疾病或病狀，且可由熟習此項技術者確定。
[00852] 本發明中使用之異二聚體蛋白之治療有效量的例示性非限制性範圍為約0.1-100 mg/kg。
[00853] 所有引用之參考文獻均以引用之方式明確地全部併入本文中。
[00854] 儘管出於說明目的已在上文描述本發明之特定實施方案，但熟習此項技術者將理解，在不悖離如所附申請專利範圍中描述之本發明的情況下，可進行細節之許多變化。
實施例
[00855] 下文提供實施例以說明本發明。此等實施例並不意味著將本發明限制於任何特定應用或操作理論。對於本發明中討論之所有恒定區位置，編號係根據如Kabat中之EU索引(Kabat等, 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第5版, United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda，以引用之方式全部併入)。熟習抗體技術者將理解，該慣例由免疫球蛋白序列之特定區域中的非順序編號組成，使得能夠對免疫球蛋白家族中之保守位置進行正規化參考。因此，如由EU索引定義之任何給定免疫球蛋白之位置不一定對應於其順序序列。
[00856] 一般及特定科學技術概述於美國公開案2015/0307629、2014/0288275及WO2014/145806中，所有該等文獻均以引用之方式明確地全部併入，特別是對於其中概述之技術。
XIV.实施例 1 ： IL-15/IL-15Rα(sushi) Fc 融合蛋白
[00857] 為了解決IL-15/IL-15Rα異二聚體之短半衰期，產生IL-15/IL-15Rα(sushi)複合物作為Fc融合體(此處稱為IL-15/Rα-Fc融合蛋白)，其目的在於促進複合物產生且促進FcRn介導之複合物再循環並延長半衰期。
A. 1A：工程化IL-15/Rα-Fc融合蛋白
[00858] 藉由標準基因合成構築編碼IL-15或IL-15Rα sushi結構域之質粒，接著次選殖至含有Fc融合搭配物(例如，如圖8A-8D中描繪之恒定區)之pTT5表現載體中。說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式之卡通示意圖描繪於圖9A-9G中。
[00859] IL-15Rα異二聚體Fc融合體或「IL-15/Rα-異Fc」形式包含重組融合至異二聚體Fc之一側的IL-15及重組融合至異二聚體Fc之另一側的IL-15Rα sushi結構域(圖9A)。IL-15及IL-15Rα可在其Fc區之相應C端及N端之間具有可變長度連接子(參見圖7)。該形式之說明性蛋白質包括XENP20818及XENP21475，其序列描繪於圖10中(亦參見表2)。該形式之額外蛋白質之序列包括XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21476、XENP21477，其分別描繪於WO2018071919中之圖104A-104D中，且分別為SEQ ID NO: 418-423、424-429、430-435、436-441、442-447、454-459及460-465，其以引用之方式併入本文中。表 2 
[00860] 單鏈IL-15/Rα-Fc融合體或「scIL-15/Rα-Fc」形式包含藉由可變長度連接子與IL-15融合之IL-15Rα sushi結構域(稱為「單鏈」IL-15/IL-15Rα複合物或「scIL-15/Rα」)，其隨後與異二聚體Fc區之N端融合，其中分子之另一側為「僅Fc」或「空-Fc」異二聚體Fc (圖9B)。說明性連接子之序列描繪於圖7中。該形式之說明性蛋白為XENP21478，其序列描繪於圖11中(亦參見表3)。包括XENP21993、XENP21994、XENP21995、XENP23174、XENP24477及XENP24480之該形式之額外蛋白質的序列分別描繪於WO2018071919中之圖104G、104H、104AG、104AU及104AV中，且分別為SEQ ID NO: 514-518、519-523、524-528、849-853、1063-1067及1078-1082，其以引用之方式併入本文中。表 3 
[00861] 非共價IL-15/Rα-Fc融合體或「ncIL-15/Rα-Fc」形式包含與異二聚體Fc區融合之IL-15Rα sushi結構域，而IL-15經分別轉染以便形成非共價IL-15/IL-15Rα複合物，其中分子之另一側為「僅Fc」或「空-Fc」異二聚體Fc (圖9C)。該形式之說明性蛋白質包括XENP21479、XENP22366及XENP24348，其序列描繪於圖12A-12B中。
[00862] 二價非共價IL-15/Rα-Fc融合體或「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式(圖9D)包含融合至同二聚體Fc區之N端之IL-15Rα(sushi)，而IL-15經分別轉染，以便形成非共價IL-15/Rα複合物。該形式之說明性蛋白質為XENP21978，其序列描繪於圖13中。包括XENP21979之該形式之額外蛋白質的序列描繪於WO2018071919中之圖104E中且為SEQ ID NO: 480-483，其以引用之方式併入本文中。
[00863] 二價單鏈IL-15/Rα-Fc融合體或「二價scIL-15/Rα-Fc」形式(圖9E)包含藉由可變長度連接子與IL-15Rα(sushi)融合之IL-15 (稱為「單鏈」IL-15/IL-15Rα(sushi)複合物或「scIL-15/Rα」)，隨後將其與同二聚體Fc區之N端融合。說明性連接子之序列描繪於圖7中。該形式之說明性蛋白質之序列描繪於圖14中。
[00864] Fc-非共價IL-15/Rα融合體或「Fc-ncIL-15/Rα」形式(圖9E)包含與異二聚體Fc區之C端融合之IL-15Rα(sushi)，而IL-15經分別轉染，以便形成非共價IL-15/Rα複合物，其中分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。該形式之說明性蛋白質為XENP22637，其序列描繪於圖15中。包括XENP22638之該形式之額外蛋白質的序列描繪於WO2018071919中之圖104T中且為SEQ ID NO: 668-672，其以引用之方式併入本文中。
[00865] Fc-單鏈IL-15/Rα融合體或「Fc-scIL-15/Rα」形式(圖9G)包含藉由可變長度連接子與IL-15Rα(sushi)融合之IL-15 (「scIL-15/Rα」)，其隨後與異二聚體Fc區之C端融合，其中分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。說明性連接子之序列描繪於圖7中。該形式之說明性蛋白質之序列描繪於圖16中。
[00866] 藉由在HEK293E細胞中暫態轉染產生蛋白質，且藉由包括蛋白A層析法(GE Healthcare)及陰離子交換層析法(HiTrapQ 5 mL管柱，50 mM Tris pH 8.5及含1 M NaCl之50 mM Tris pH 8.5之5-40%梯度)之兩步純化方法純化。
B. 1B：IL-15/Rα-Fc融合蛋白之純度及均質性之表徵
[00867] 以如上所述之若干形式產生之IL-15/Rα-Fc融合蛋白藉由尺寸排阻層析法(SEC)及毛細管等電聚焦(CEF)表徵其純度及均質性，如下文一般描述。
[00868] 使用SEC分析蛋白質以量測其大小(亦即流體動力學體積)且確定純化樣品之天然樣行為。該分析在Agilent 1200高效液相層析(HPLC)系統上進行。將樣品以1.0 mL/min注入Superdex™ 200 10/300 GL管柱(GE Healthcare Life Sciences)上，使用1×PBS pH 7.4作為移動相，在4℃下25分鐘，UV偵測波長為280 nM。使用Agilent OpenLab層析資料系統(CDS) ChemStation Edition AIC版本C.01.07進行分析。所選IL-15/Rα-Fc融合蛋白之層析圖示於圖17B、18B及19B中。
[00869] 使用LabChip GXII Touch HT (PerkinElmer, Waltham, Mass.)，使用利用製造商說明書進行之Protein Express Assay LabChip及Protein Express檢定試劑套組，經由CEF電泳分析蛋白質。樣品一式兩份進行，一份在還原條件(用二硫蘇糖醇)下進行且另一份在非還原條件下進行。所選IL-15/Rα-Fc融合蛋白之凝膠圖像顯示於圖17C、18C及19C中。
[00870] 對於每種融合蛋白，峰之對稱性及其他物種之相對低群體表明各種形式為穩健的。
C. 1C：IL-15/Rα-Fc融合蛋白之親和力及穩定性之表徵
[00871] 使用Octet (基於BioLayer Interferometry (BLI)之方法)進行IL-15/Rα-Fc融合蛋白之親和篩選。Octet之實驗步驟通常包括以下：固定化(將配位體或測試物捕獲至生物感應器上)；結合(將配位體或測試物塗覆之生物感應器浸入含有相應測試物或配位體之系列稀釋液之孔中)；及解離(將生物感應器返回至含有緩衝液之孔中)，以確定測試物之親和力。在該方法中亦包括僅包含緩衝液之參考孔以用於資料處理期間之背景校正。特定言之，抗人類Fc (AHC)生物感應器用於捕獲測試物，隨後浸入多種濃度之IL-2Rβ (R&D Systems, Minneapolis, Minn.)中以進行KD測定。親和力結果及相應感應圖描繪於圖17D、18D及19D中。三種構築體中之每一者均顯示出對IL-1Rβ之高親和力結合(3-8 nM)。
[00872] 使用差示掃描螢光法(DSF)評估IL-15/Rα-Fc融合蛋白之穩定性。使用Bio-Rad CFX Connect即時PCR偵測系統進行DSF實驗。將蛋白質與SYPRO橙螢光染料混合且在PBS中稀釋至0.2 mg/mL。SYPRO橙之最終濃度為10X。在25℃下初始溫育10分鐘後，使用1℃/min之加熱速率將蛋白質自25℃加熱至95℃。每30秒進行螢光量測。使用儀器軟體計算熔化溫度(Tm)。穩定性結果及相應熔融曲線描繪於圖17E、18E及19E中。每個構築體顯示出良好總體穩定性，Tm為~68℃。
D. 1D：細胞增殖檢定中IL-15/Rα-Fc融合蛋白之活性
[00873] 如上所述各種形式之IL-15/Rα-Fc融合蛋白在細胞增殖檢定中進行測試。用指定濃度之測試物處理人類PBMC。處理4天后，PBMC用抗CD8-FITC (RPA-T8)、抗CD4-PerCP/Cy5.5 (OKT4)、抗CD27-PE (M-T271)、抗CD56-BV421 (5.1H11)、抗CD16-BV421 (3G8)及抗CD45RA-BV605 (Hi100)染色以對以下細胞類型進行門控：CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及NK細胞(CD56+/CD16+)。Ki67為與細胞增殖嚴格相關之蛋白質，且使用抗Ki67-APC (Ki-67)及Foxp3/轉錄因子染色緩衝液組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.)進行細胞內Ki67之染色。使用FACS量測上述細胞類型上之Ki67百分比(描繪於圖20A-20C及圖21A-21C中)。
[00874] 各種IL-15/Rα-Fc融合蛋白誘導CD8+ T細胞及NK細胞之強烈增殖。值得注意的是，增殖活性之差異取決於IL-15-Fc側之連接子長度。特定言之，不具有連接子之構築體(僅鉸鏈)，包括XENP21471、XENP21474及XENP21475，顯示較弱之增殖活性。
E. 1E：SEB刺激之PBMC檢定中之IL-15/Rα-Fc融合蛋白的活性
[00875] 如上所述，IL-15/Rα異二聚體可以有效地活化T細胞。如上所述之各種形式之IL-15/Rα-Fc融合蛋白在SEB刺激之PBMC檢定中進行測試。葡萄球菌腸毒素B (SEB)為一種超抗原，其以類似於經由T細胞受體(TCR)活化實現之方式引起T細胞活化及增殖。用SEB刺激人類PBMC為用於檢定T細胞活化及增殖之共同方法。
[00876] 來自多個供體之人類PBMC用10 ng/mL SEB與20 µg/mL各種IL-15/Rα-Fc融合蛋白組合或對照(PBS，同種型對照及二價抗PD-1抗體)刺激72小時。處理後，收集上清液且檢定IL-2，其資料描繪於圖22中。資料清楚地表明，IL-15/Rα-Fc融合蛋白比PBS及同種型對照更加增強IL-2分泌。值得注意的是，許多IL-15/Rα-Fc融合蛋白具有與抗PD-1抗體相當或更佳之活性。
F. 1F：IL-15/Rα-Fc融合蛋白增強人類PBMC植入NSG小鼠中之植入及疾病活性
[00877] 在雌性NSG (NOD-SCID-γ)免疫缺陷小鼠中進行之移植物抗宿主病(GVHD)模型中評估IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP20818。當向NSG小鼠注射人類PBMC時，人類PBMC產生針對小鼠細胞之自體免疫應答。用IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理注射有人類PBMC之NSG小鼠可增強植入T細胞之增殖。
[00878] 在第0天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著給與XENP20818 (第1天1 mg/kg，其後每週一次)及重組IL-15 (Biolegend；第1天0.17 mg/kg，其後每週一次)。存活曲線示於圖23中。資料顯示，與接受重組IL-15之小鼠(至第14天全部存活)相比，接受IL-15/Rα-Fc融合蛋白之小鼠表現出快速發病及死亡(至第10天皆死亡)。這可能係由於IL-15/Rα-Fc融合蛋白之預期更長之半衰期。
[00879] 在另一實驗中，在第0天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠，接著給與XENP20818 (第1天1 mg/kg、0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.03 mg/kg，其後每週一次)或PBS。包括未植入PBMC之小鼠之對照組以研究XENP20818對野生型NSG小鼠之任何影響。在第7天收集血液以量測IFNγ，其資料描繪於圖24中，且用於量測CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及CD45+細胞計數，其資料描繪於圖25A-25C中。資料顯示XENP20818之明顯劑量反應。
XV.實施例 2 ：具有工程化二硫鍵之 IL-15/Rα-Fc 異二聚體融合蛋白
[00880] 為了進一步提高IL-15/Rα-Fc融合蛋白之穩定性且延長半衰期，將二硫鍵工程化至IL-15/Rα界面。
A. 2A：具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα異二聚體之工程化及表徵
[00881] 藉由研究IL-15/Rα複合物之晶體結構，以及藉由使用分子操作環境(MOE；Chemical Computing Group, Montreal, Quebec, Canada)軟體建模，預測在IL-15/Rα界面處之殘基可用半胱胺酸取代，以形成共價二硫鍵，如圖26中所描繪。
[00882] 藉由標準基因合成構築編碼IL-15或IL-15Rα(sushi)之質粒，接著次選殖至pTT5表現載體中。IL-15Rα(sushi)鏈包括C端聚組胺酸標籤。藉由標準誘變技術用半胱胺酸取代如上所述鑒定之殘基。另外，IL-15Rα中sushi結構域後至多三個胺基酸添加至IL-15Rα(sushi)之C端，作為工程半胱胺酸之骨架(其說明性序列描繪於圖27中)。用半胱胺酸工程化之說明性IL-15及IL-15Rα(sushi)變異體之序列分別描繪於圖28及29以及序列表中。
[00883] 具有及不具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα異二聚體之卡通示意圖描繪於圖30A-30C中。
[00884] 說明性ncIL-15/Rα異二聚體XENP21996之序列描繪於圖31中。說明性dsIL-15/Rα異二聚體XENP22004、XENP22005、XENP22006、XENP22008及XENP22494之序列描繪於圖32中。說明性scIL-15/Rα異二聚體XENP22049之序列描繪於圖33中。
[00885] 產生「野生型」IL-15/Rα異二聚體作為對照，其在C端具有額外殘基但不具有工程化半胱胺酸。包括XENP22001、XENP22002及XENP22003之該形式之額外蛋白質的序列分別描繪於WO2018/071919中之圖104H及104I中，且分別為SEQ ID NO: 531-532、533-534及535-536，其以引用之方式併入本文中。
[00886] 藉由在HEK293E細胞中暫態轉染產生蛋白質，且藉由Ni-NTA層析純化。
[00887] 在蛋白質純化後，如實施例1B中一般描述藉由毛細管等電聚焦(CEF)表徵其純度及均質性，其凝膠圖像描繪於圖34-35中。隨後如實施例1C中一般描述使用DSF篩選蛋白質之穩定性，其資料描繪於圖36-38中。最後，如實施例1C中一般描述藉由Octet篩選蛋白質與IL-2Rβ之結合，其資料描繪於圖38中。
[00888] 如藉由變性非還原CEF所示，正確形成許多二硫鍵，其中與不具有工程化二硫鍵之對照相比，可見共價複合物之較大分子量(圖34-35)。二硫鍵鍵合之IL-15/Rα異二聚體具有高達+13℃之熱穩定性(圖38)。與IL-2Rβ之結合不受包含工程化二硫鍵之影響(圖38)。偏愛之二硫鍵鍵合對為XENP22005、XENP22006、XENP22008及XENP22494，且如下所述構築為Fc融合蛋白。
B. 2B：具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα-Fc融合蛋白之表徵
[00889] 將具有上述突變之編碼IL-15或IL-15Rα sushi結構域之質粒次選殖至含有Fc融合搭配物(例如，如圖8A-8D中所描繪之恒定區)之pTT5表現載體中。具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα-Fc融合蛋白之卡通示意圖描繪於圖39A-39D中。
[00890] 二硫鍵鍵合之IL-15/Rα異二聚體Fc融合體或「dsIL-15/Rα-異Fc」(圖39A)與「IL-15/Rα-異Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。該形式之說明性蛋白質包括XENP22013、XENP22014、XENP22015及XENP22017，其序列描繪於圖40A-40B中。
[00891] 二硫鍵鍵合之IL-15/Rα Fc融合體或「dsIL-15/Rα-Fc」(圖39B)與「ncIL-15/Rα-Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。該形式之說明性蛋白質包括XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22684及XENP22361，其序列描繪於圖41A-41B中。包括XENP22360、XENP22362、XENP22363、XENP22364、XENP22365、XENP22366之該形式之額外蛋白質的序列分別描繪於WO2018071919中之圖104O、104P、104Q及104R中，且分別為SEQ ID NO: 612-616、622-626、627-631、632-636、637-641及642-646，其以引用之方式併入本文中。
[00892] 二價二硫鍵鍵合之IL-15/Rα-Fc或「二價dsIL-15/Rα-Fc」(圖39C)與「二價ncIL-15/Rα-Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。該形式之說明性蛋白質包括XENP22634、XENP22635及XENP22636，其序列描繪於圖42中。包括XENP22687之該形式之額外蛋白質的序列描繪於WO2018071919中之圖104V中且為SEQ ID NO: 685-688，其以引用之方式併入本文中。
[00893] Fc-二硫鍵鍵合之IL-15/Rα融合體或「Fc-dsIL-15/Rα」(圖39D)與「Fc-ncIL-15/Rα」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。該形式之說明性蛋白質包括XENP22639及XENP22640，其序列描繪於圖43中。
[00894] 產生在C端具有額外殘基但不具有工程化半胱胺酸之「野生型」IL-15/Rα-Fc融合蛋白作為對照。包括XENP21988、XENP21989、XENP21990、XENP21991、XENP21992、XENP22354及XENP22355之此等對照IL-15/Rα-Fc融合蛋白之序列描繪於WO2018071919中之圖104F、104G、104L及104M中且分別為SEQ ID NO: 484-489、490-495、496-501、502-507、508-513、582-586及587-591，其以引用之方式併入本文中。
[00895] 藉由在HEK293E細胞中暫態轉染產生蛋白質，且藉由包括蛋白A層析(GE Healthcare)及陰離子交換層析(HiTrapQ 5 mL管柱，50 mM Tris pH 8.5及含1 M NaCl之50 mM Tris pH 8.5之5-40%梯度)之兩步純化方法純化。
[00896] 在蛋白質純化後，如實施例1B中一般描述藉由毛細管等電聚焦(CEF)表徵其純度及均質性。如上所述，如由變性非還原CEF所示，正確地形成許多二硫鍵，其中與不具有工程化二硫鍵之對照相比，可見共價複合物之較大分子量(圖44)。
[00897] 隨後在細胞增殖檢定中測試蛋白質。將IL-15/Rα-Fc融合蛋白(具有或不具有工程化二硫鍵)或對照與PBMC一起溫育4天。溫育後，PBMC用抗CD4-PerCP/Cy5.5 (RPA-T4)、抗CD8-FITC (RPA-T8)、抗CD45RA-BV510 (HI100)、抗CD16-BV421 (3G8)、抗CD56-BV421 (HCD56)、抗CD27-PE (O323)及抗Ki67-APC (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之NK細胞、CD4+ T細胞及CD8+ T細胞之增殖描繪於圖45A-45C中。IL-15/Rα-Fc融合蛋白及IL-15對照各自誘導NK細胞、CD8+ T細胞及CD4+ T細胞之強烈增殖。
XVI.實施例 3 ：經工程化以降低效能且增加 PK 及半衰期之 IL-15/Rα-Fc 融合蛋白
[00898] 為了進一步改善PK且延長半衰期，推斷降低IL-15效能會降低抗原沈降，從而增加半衰期。
A. 3A：變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白之工程化及產生
[00899] 藉由研究IL-15:IL-2Rβ及IL-15:共同γ鏈界面之晶體結構，以及藉由使用MOE軟體建模，預測在此等界面處之殘基可經取代以降低效能。圖46描繪IL-15:受體複合物之結構模型，顯示工程化等排取代之預測殘基位置(為了降低免疫原性風險)。經工程化以降低效能之說明性IL-15變異體之序列描繪於圖47A-47C中。
[00900] 藉由標準基因合成構築編碼IL-15或IL-15Rα(sushi)之質粒，接著次選殖至含有Fc融合搭配物之pTT5表現載體中(例如，如圖8A-8D中所描繪之恒定區)。藉由標準誘變技術併入如上所述鑒定之取代。
[00901] 經工程化以降低效能之「IL-15/Rα-異Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的序列描繪於圖48A-48H中，包括XENP22815、XENP22817、XENP22818、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP23555、XENP23559、XENP23560、XENP24017、XENP24020、XENP24043及XENP24048之額外序列分別描繪於WO2018071919中之圖104Z、104AA、104AC、104AD、104AE、104AF、104AJ、104AK、104AM、104AN及104AO中且分別為SEQ ID NO: 729-734、741-746、747-752、777-782、783-788、789-794、795-800、801-806、807-812、819-824、825-830、831-836、837-842、887-892、899-904、905-910、937-942、955-960、961-966及979-984，其以引用之方式併入本文中。
[00902] 經工程化以降低效能之「scIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的序列描繪於圖49A-49D中，其中包括XENP24013、XENP24014及XENP24016之额外序列分別描繪於WO2018071919中之圖104AK及104AL中且分別為SEQ ID NO: 914-921、922-926及932-936，其以引用之方式併入本文中。
[00903] 經工程化以降低效能之「ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的序列描繪於圖50A-50B中。經工程化以降低效能之說明性ncIL-15/Rα異二聚體之序列描繪於圖51中，其中包括XENP22791、XENP22792、XENP22793、XENP22794、XENP22795、XENP22796、XENP22803、XENP22804、XENP22805、XENP22806、XENP22807、XENP22808、XENP22809、XENP22810、XENP22811、XENP22812、XENP22813及XENP22814之额外序列分別描繪於WO2018071919中之圖104V、104W、104X、104Y及104Z中且分別為SEQ ID NO: 689-690、691-692、693-694、695-696、697-698、699-700、705-706、707-708、709-710、711-712、713-714、715-716、717-718、719-720、721-722、723-724、725-726及727-728，其以引用之方式併入本文中。
[00904] 經工程化以降低效能之「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的序列描繪於圖52中。經工程化以降低效能之「dsIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的序列描繪於圖53中。
[00905] 藉由在HEK293E細胞中暫態轉染產生蛋白質，且藉由包括蛋白A層析(GE Healthcare)及陰離子交換層析(HiTrapQ 5 mL管柱，50 mM Tris pH 8.5及含1 M NaCl之50 mM Tris pH 8.5之5-40%梯度)之兩步純化方法純化。
B. 3B：經工程化以降低效能之變異體IL-15/Rα-異Fc及scIL-15/Rα-Fc融合蛋白之活體外活性
[00906] 在多種細胞增殖檢定中測試變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白。
[00907] 在第一細胞增殖檢定中，將IL-15/Rα-Fc融合蛋白(具有或不具有工程化取代)或對照與PBMC一起溫育4天。溫育後，PBMC用抗CD4-Evolve605 (SK-3)、抗CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)、抗CD16-eFluor450 (CB16)、抗CD56-eFluor450 (TULY56)、抗CD3-FITC (OKT3)及抗Ki67-APC (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之NK細胞、CD8+ T細胞及CD4+ T細胞之增殖描繪於圖54A-54C及圖55中。大多數IL-15/Rα-Fc融合蛋白誘導每個細胞群之增殖；然而，活性根據特定工程化取代而變化。
[00908] 在第二細胞增殖檢定中，IL-15/Rα-Fc融合蛋白(具有或不具有工程化取代)與PBMC一起溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (OKT3)、抗CD4-Evolve604 (SK-3)、抗CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8)、抗CD16-eFluor450 (CB16)、抗CD56-eFluor450 (TULY56)、抗CD27-PE (O323)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)及抗Ki67-APC (20Raj1)抗體染色以標記各種細胞群。圖56A-56C及圖57A-57C描繪藉由FACS對用XENP22821溫育後各種細胞群之選擇。首先基於側向散射(SSC)及前向散射(FSC)對淋巴細胞進行門控(圖56A)。隨後基於CD3表現對淋巴細胞進行門控(圖56B)。基於CD16表現對CD3表現陰性細胞進一步門控以鑒定NK細胞(CD16+) (圖56C)。基於CD4及CD8表現對CD3+ T細胞進行進一步門控以鑒定CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及γδ T細胞(CD3+CD4-CD8-) (圖57A)。關於CD45RA表現對CD4+及CD8+ T細胞進行門控，分別如圖57B-C中所示。最後，基於Ki67表現百分比確定各種細胞群之增殖，且資料顯示於圖59A-59D中。NK及CD8+ T細胞相比於CD4+ T細胞對IL-15/Rα-Fc融合蛋白更敏感，且如上所述，增殖活性根據特定工程化取代而改變。圖59D顯示各種IL-15/Rα-Fc融合蛋白相對於對照XENP20818之EC50變化倍數。圖58A及58B進一步描繪在用XENP22821溫育PBMC之前及之後，藉由對CD69及CD25 (T細胞活化標誌物)之表現進行門控，用IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後之淋巴細胞的活化。
[00909] 在第三實驗中，將其他變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白與人類PBMC在37℃下溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (OKT3)、抗CD4-SB600 (SK-3)、抗CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)、抗CD16-eFluor450 (CB16)、抗CD25-PE (M-A251)及抗Ki67-APC (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之CD8+ (CD45RA-) T細胞、CD4+ (CD45RA-) T細胞、γδ T細胞及NK細胞之增殖描繪於圖60A-60D中。
[00910] 在第四實驗中，人類PBMC與指定濃度之額外IL-15/Rα-Fc變異體一起溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (OKT3)、抗CD4 (SB600)、抗CD8-PerCP/Cy5.5 (RPA-T8)、抗CD16-eFluor450 (CB16)、抗CD25-PE (M-A251)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)及抗Ki67-APC (Ki67)染色且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。在處理後CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞上之Ki67百分比描繪於圖61A-61C中。
[00911] 在第五實驗中，變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白與人類PBMC在37℃下溫育3天。溫育後，細胞用抗CD3-PE (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8α-BV510 (SK1)、抗CD8β-APC (2ST8.5H7)、抗CD16-BV421 (3G8)、抗CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)、抗CD56-BV605 (NCAM16.2)及抗Ki67-PE/Cy7 (Ki-67)染色且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、γδ T細胞及NK細胞上之Ki67百分比描繪於圖62A-62E中。
[00912] 在第六實驗中，變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白與人類PBMC在37℃下溫育3天。溫育後，細胞用抗CD3-PE (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8α-BV510 (SK1)、抗CD8β-APC (SIDI8BEE)、抗CD16-BV421 (3G8)、抗CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251)、抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)、抗CD56-BV605 (NCAM16.2)及抗Ki67-PE/Cy7 (Ki-67)染色且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、γδ T細胞及NK細胞上之Ki67百分比描繪於圖63A-63E中。
C. 3C：在IL-15與IL-15Rα之間具有不同連接子長度之經工程化以降低效能之變異體cIL-15/Rα-Fc融合蛋白的活體外活性
[00913] 具有一些上述取代且進一步在IL-15與IL-15Rα之間具有不同長度連接子(如表4中所描繪)之IL-15/Rα-Fc融合蛋白與在指定濃度之人類PBMC在37℃下溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-PE (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8-APC (RPA-T8)、抗CD16-BV605 (3G8)、抗CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251)、抗CD45RA-APC/Fire750 (HI100)及抗Ki67-PE/Cy7 (Ki-67)染色且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、γδ T細胞及NK (CD16+)細胞上之Ki67百分比描繪於圖64A-D中。資料顯示ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP21479為CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK (CD16+)細胞及γδ T細胞增殖之最有效誘導劑。scIL-15/Rα-Fc融合蛋白中之每一者在誘導增殖方面不如XENP21479有效，但差異取決於連接子長度以及特定工程化取代。表 4 
D. 3D：其他形式之經工程化以降低效能之變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白的活體外活性
[00914] 不同形式之變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白(如表5中所描繪)與人類PBMC在37℃下在指定濃度下溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-PE (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8-APC (RPA-T8)、抗CD16-BV605 (3G8)、抗CD25-PerCP/Cy5.5 (M-A251)、抗CD45RA-APC/Fire750 (HI100)及抗Ki67-PE/Cy7 (Ki-67)染色且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、γδ T細胞及NK (CD16+)細胞上之Ki67百分比分別描繪於圖65A-65D中。如上所述，資料顯示ncIL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP21479為CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK (CD16+)細胞及γδ T細胞增殖之最有效誘導劑。值得注意的是，將Q108E取代引入ncIL-15/Rα-Fc形式(XENP24349)中相比於野生型(XENP21479)急劇降低其增殖活性。表 5 
E. 3E：藉由變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白之STAT5磷酸化
[00915] IL-15及IL-15Rα之反式呈遞(Transpresentation)驅動STAT5之磷酸化及隨後NK及T細胞(CD4+及CD8+)之增殖。因此，在與指定IL-15/Rα-Fc測試物溫育15分鐘後，分析CD8+及CD4+ T細胞之STAT5磷酸化。PBMC在室溫下用抗CD4-BV421 (RPA-T4)及抗CD8-A700 (SK1)染色30-45分鐘。洗滌細胞且與預冷(-20℃) 90%甲醇一起溫育20-60分鐘。用甲醇溫育後，再次洗滌細胞且用抗CD45RA-BV510 (HI100)、抗CD27-BV605 (L128)、抗CD25-PE (M A251)、抗pSTAT5-Alexa647 (pY687)及抗FoxP3-Alexa488 (259D)染色以標記各種細胞群及STAT5磷酸化。圖66A-66D描繪用XENP22821溫育後之各種細胞群之選擇。首先基於SSC及FSC對淋巴細胞進行門控(圖66A)。隨後基於CD4及CD8表現對淋巴細胞進行門控以鑒定CD4+及CD8+ T細胞(圖66B)。隨後基於CD45RA及CD27表現對CD4+及CD8+ T細胞進行進一步門控以鑒定圖66C-66D中分別描繪之其他亞群。最後，測定各種細胞群中之STAT5磷酸化，且資料顯示於圖67A-67C中。T細胞上之STAT5磷酸化以劑量依賴性方式誘導，且亦根據特定工程化取代而變化。圖67C顯示變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白相對於對照之STAT5磷酸化的EC50變化倍數。
[00916] 在另一實驗中，將來自B6小鼠之脾細胞與指定濃度之指定測試物一起溫育15分鐘。溫育後，脾細胞用抗CD44-BV605 (IM7)染色。洗滌細胞且與預冷(-20℃) 90%甲醇一起溫育20-60分鐘。甲醇溫育後，再次洗滌細胞且在室溫下用抗CD3-BV421 (145-2C11)、抗CD4-PE (GK1.5)、抗CD8-FITC (53-6.7)及抗pSTAT5-Alexa647 (pY694)染色30-45分鐘以標記各種細胞群及STAT5磷酸化。指示小鼠CD8+CD45RA-及CD4+CD45RA-上之STAT5磷酸化的Alexa647 MFI描繪於圖68A-68B中。
F. 3F：經工程化以降低效能之變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白之PK
[00917] 為了研究經工程化以降低效能之IL-15/Rα-Fc融合蛋白是否具有改善之半衰期及PK，在C57BL/6小鼠之PK研究中檢查此等變異體。在第0天，經由IV-TV向兩組小鼠(每組每種測試物5只小鼠)給與0.1 mg/kg指定測試物。在給藥後60分鐘收集血清，隨後對於第1組在第2、4及7天收集血清且對於第2組在第1、3及8天收集血清。在夾心ELISA中使用抗IL-15及抗IL-15Rα抗體測定IL-15/Rα-Fc融合蛋白之血清水平。結果描繪於圖69中。圖70描繪人類NK細胞效能與測試物半衰期之間的相關性。圖71描繪小鼠STAT5信號傳導效能與測試物半衰期之間的相關性。
[00918] 如所預測，效能降低之變異體顯示實質上更長之半衰期。值得注意的是，與野生型對照XENP20818之0.5天相比，半衰期提高至幾乎9天(參見XENP22821及XENP22822)。
G. 3G：效能降低之IL-15/Rα-Fc融合蛋白增強淋巴細胞擴增
[00919] 在C57BL/6 albino小鼠中之另一實驗中，向動物給與指定濃度之指定測試物(每組5只小鼠)。在第8天對小鼠放血且處死以評估脾臟中之測試物之血清濃度(圖146A-146D)及CD8+ T細胞計數(圖73)。
[00920] 資料顯示，效能降低之變異體諸如XENP22818及XENP22829促進更大之淋巴細胞擴增。然而，效能降低過多(諸如見於XENP22821)消除淋巴細胞擴增之增強。
H. 3H：變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白增強人類PBMC植入NSG小鼠中之植入及疾病活性
[00921] 如實施例1F中一般描述，在雌性NSG免疫缺陷小鼠中進行之GVHD模型中評估變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白。
[00922] 在第一研究中，在第0天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著在第1天給與指定濃度之IL-15/Rα-Fc融合蛋白。CD45+增殖與體重減輕相關(如圖74中所示)，且因此在第4天及第8天量測CD45+細胞，作為本研究中疾病活性之指標(圖75A-75B)。資料顯示，與對照(PBS)相比，IL-15/Rα-Fc融合蛋白中之每一者增強人類PBMC植入NSG小鼠中CD45+細胞之增殖。
[00923] 在另一研究中，在第0天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著在第1天給與指定濃度之IL-15/Rα-Fc融合蛋白。在第4、7及11天量測IFNγ水平以及人類NK細胞、CD45+淋巴細胞、CD8+ T細胞及CD4+ T細胞計數(圖76A-76C、77A-77C、78A-78B、79A-79B及80A-80B)。資料顯示變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白以劑量依賴性方式增強人類NK細胞及T細胞之IFNγ分泌及增殖。值得注意的是，觀測活性與各變異體之活體外效能相關。
[00924] 在另一研究中，在第-8天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著在第0天給與指定濃度之指定測試物。在第4天、第7天及第11天量測IFNγ水平以及人類NK細胞、CD45+
淋巴細胞、CD8+
T細胞及CD4+ T細胞計數。圖81描繪在第4天、第7天及第11天小鼠血清中之IFNγ水平。圖82A-82C分別描繪在第4天、第7天及第11天之CD8+
T細胞計數。圖83A-83C分別描繪在第4天、第7天及第11天之CD4+
T細胞計數。圖84A-84C分別描繪在第4天、第7天及第11天之CD45+細胞計數。在第4天、第7天和第11天亦量測小鼠體重，且在圖85A-85C中描繪為初始體重之百分比。
I. 3I：IL-15/Rα-Fc融合蛋白增殖食蟹猴淋巴細胞
[00925] 為便於臨床開發，評估IL-15/Rα-Fc融合蛋白之各種參數為有用的，諸如食蟹猴中之藥效學、藥物動力學及毒性。因此，研究IL-15/Rα-Fc融合蛋白是否能夠增殖食蟹猴淋巴細胞。將食蟹猴PBMC與指定測試物一起溫育，且評估各種淋巴細胞群上之Ki67表現，其資料描繪於圖86中。
J. 3J：IL-15/Rα-Fc融合蛋白在食蟹猴中具活性
[00926] 向食蟹猴投與單次靜脈內(i.v.)劑量之XENP20818 (n=3)、XENP22819 (n=1)、XENP22821 (n=3)、XENP22822 (n=3)、XENP22834 (n=3)及XENP23343 (n=3)。隨時間評估淋巴細胞計數(圖87A-87E、89A-89E、91A-91E、93A-93E、95A-95E及97A-97E)及增殖(圖88A-88E、90A-90E、92A-92E、94A-94E、96A-96E及98A-98E)。資料顯示CD56+
NK細胞(圖91A)、CD16+
NK細胞(圖91B)、γδ T細胞(圖91C)、CD8+
T細胞(CD45RA+) (圖91D)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖91E)及CD4+
T細胞(圖91F)之顯著變化，在用XENP22821處理後在第6天達到峰值，隨後恢復且正規化。最後，圖92A-92E顯示CD56+
NK細胞(圖92A)、CD16+
NK細胞(圖92B)、CD8+
T細胞(CD45RA+
) (圖92C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖92D)及CD4+
T細胞(圖92E)上之顯著Ki67表現，表明用XENP22821處理後之增殖活性。在用XENP20818、XENP22819、XENP22822及XENP23343處理後觀測到類似增殖活性，證實本發明之大多數IL-15/Rα-Fc融合蛋白在食蟹猴中具活性。
XVII.實施例 4 ：經工程化具有 Xtend Fc 之 IL-15/Rα-Fc 融合蛋白
[00927] 如上所述經工程化以降低效能之IL-15/Rα-Fc變異體經進一步工程化以具有Xtend Fc (下文稱為「IL-15/Rα-XtendFc」融合蛋白)，藉由將編碼IL-15及/或IL-15Rα(sushi)之質粒次選殖至含有具有M428L/N434S取代之Fc融合搭配物之pTT5表現載體中，以進一步延長半衰期(參見圖8A-8D，骨架11)。說明性IL-15/Rα-XtendFc之序列描繪於圖99A-99C、100、101及102中(亦參見表6)。表 6 
A. 4A：額外IL-15/Rα-Fc變異體之活體外活性
1. 4A(a)：人類淋巴細胞之增殖
[00928] 將人類PBMC與指定濃度之IL-15/Rα-XtendFc變異體一起溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (OKT3)、抗CD4-PE (RPA-T4)、抗CD8-eFluor450 (SK-1)、抗CD45RA-PE/Cy7 (HI100)、抗CD16-PerCP/Cy5.5 (3G8)、抗CD25-APC/Fire750 (M-A251)及抗Ki67-APC (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之處理後CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之增殖描繪於圖103A-103C中。
[00929] 在另一實驗中，人類PBMC用指定濃度之XENP20818及XENP24306處理。處理3天后，PBMC首先用抗CD3-PerCP/Cy5.5 (OKT3)、抗CD4-BV786 (RPA-T4)、抗CD8β-PE/Cy7 (SIDI8BEE)、抗CD16-BV421 (3G8)、抗CD56-BV605及抗CD45RA-APC/Cy7 (HI100)染色。再次洗滌細胞且使用eBioscience™ Foxp3/轉錄因子染色緩衝液組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.)用抗FoxP3-AF488 (259D)及抗Ki67-APC染色。如由Ki67表現所示之處理後CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、NK細胞及γδ T細胞之增殖描繪於圖104A-104D中。
2. 4A(b)：如由Ki67所示之食蟹猴淋巴細胞之增殖
[00930] 當選擇Xtend變異體用於研究食蟹猴中之活性時，研究其增殖食蟹猴T細胞之能力。將食蟹猴PBMC與指定濃度之所選測試物一起溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (SP34)、抗CD4-PE/Cy7 (OKT4)、抗CD8-APC (RPA-T8)、抗CD45RA-APC/Fire750 (HI100)、抗CD16-BV605 (3G8)、抗CD25-BV421 (M-A251)及抗Ki67-PerCP/Cy5.5 (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之處理後CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞之增殖描繪於圖105A-105C中。另外，與實施例1D中描繪之資料一致，不具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體(僅鉸鏈；亦即XENP24341)相比於具有連接子之相應IL-15/Rα-Fc親和變異體(例如，XENP24113)在增殖之食蟹猴淋巴細胞中顯示較小效能。在另一實驗中，將3只動物之食蟹猴PBMC與指定濃度之XENP20818及XMAb24306一起溫育4天。溫育後，PBMC用抗CD3-FITC (SP34)、抗CD4-PE/Cy7 (OKT4)、抗CD8α-PB (BW135)、抗CD8b-eF660 (SIDI8BEE)、抗CD45RA-APC/H7 (5H9)、抗CD16-BV605 (3G8)、抗CD56-PerCP/Cy5.5 (B159)及抗Ki67-PerCP/Cy5.5 (Ki-67)染色以標記各種細胞群且如實施例1D中一般描述藉由FACS分析。如由Ki67表現所示之處理後CD8+CD8α+CD45RA- T細胞之增殖描繪於圖106中。
B. 4B：IL-15/Rα-XtendFc變異體在GVHD模型中之活體內活性
[00931] 在第-7天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著在第0天給與指定測試物(0.3 mg/kg)。在第4天和第7天收集全血，且在第5-8或第11天將小鼠處死取其脾臟以使用FACS量測CD4+ T細胞、CD8+ T細胞及CD45+細胞計數。圖107A-107C分別描繪全血中第4天及第7天以及脾臟中第8天之CD4+ T細胞計數。圖108A-108C分別描繪全血中第4天及第7天以及脾臟中第8天之CD8+ T細胞計數。圖109A-109C分別描繪全血中第4天及第7天以及脾臟中第8天之CD4+ T細胞計數。亦在第-8、-2、1、5、8及11天量測小鼠之體重，如圖110A-110F中所描繪。每個點代表一隻雌性NSG小鼠。
C. 4C：變異體IL-15/Rα-XtendFc融合蛋白在食蟹猴PBMC中之活體外活性
[00932] 如實施例3I中一般描述進行變異體IL-15/Rα-XtendFc融合蛋白增殖食蟹猴之能力。特定言之，將食蟹猴PBMC與指定測試物一起溫育3天。溫育後，細胞用抗CD3 FITC (OKT3)、抗CD4-PE (RPA-T4)、抗CD8-Efluor450 (SK-1)、抗CD15 PerCP/Cy5.5 (3G8)、抗CD25-APC/Fire750 (M-A251)、抗CD45RA-PE/Cy7 (HI100)及抗Ki67-APC染色且藉由流式細胞術評估。描繪表現Ki67之各種淋巴細胞群之百分比的資料描繪於圖111A-111D中。
D. 4D：變異體IL-15/Rα-XtendFc融合蛋白在食蟹猴中之活體內活性
[00933] 向猴子(n=3)投與單次靜脈內(i.v.)劑量之指定測試物(第1天)且每日收集血液。隨時間評估血液中之CD8+ T細胞、CD4+ T細胞及NK細胞計數，分別如圖112A-112C中所描繪。每個點為3只食蟹猴之平均值。資料顯示各變異體在增殖免疫細胞中具活性，表明本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白可用作人類癌症之治療劑。另外，與實施例1D及4A中描繪之資料一致，與不具有連接子之相應IL-15/Rα-Fc親和變異體(僅鉸鏈；亦即XENP24341)相比，具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體(亦即XENP24113)顯示食蟹猴淋巴細胞之擴增延長。亦隨時間評估測試物之血清濃度，且確定半衰期描繪於圖113中。資料示出XENP24306顯示最大延長之T細胞藥理學。XENP24113亦顯示延長之T細胞藥理學。未來之研究將在較低劑量下評估XENP24113。
XVIII.實施例 5 ： IL-15/Rα-Fc 融合蛋白增強活化 T 細胞之抗腫瘤活性
A. 5A：IL-15/Rα-Fc融合蛋白優先結合活化T細胞
[00934] 在免疫腫瘤學之情形下，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白在癌症環境中選擇性靶向活化T細胞為重要的。為了研究這一點，使用利用新鮮及活化之PBMC進行之結合實驗。藉由用100 ng/mL板結合抗CD3 (OKT3)及1 µg/ml抗IL-2刺激新鮮PBMC持續2天來製備活化PBMC，其用作腫瘤環境中活化淋巴細胞之替代物。將新鮮及活化之PBMC與指定AF647標記之測試物在冰上溫育1小時。溫育後，PBMC用抗CD3-PE/Cy7 (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8-PerCP/Cy5.5 (SK1)、抗CD16-BV421 (3G8)及抗CD45RA-PE-HI100染色以鑒定各種細胞群。如由AF647 MFI所示，測試物與各種細胞群之結合描繪於圖114A-114F(對於具有Xtend且不具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體)、圖115A-115F (對於具有Xtend且具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體)及圖116A-116F (具有Xtend之額外形式之IL-15/Rα-Fc融合蛋白)。資料顯示，本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白優先與活化PBMC中之T細胞及NK細胞結合，表明其在免疫腫瘤學中之適用性。另外，與實施例1D、4A及4D中描繪之資料一致，相比於具有連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體(例如XENP24113)，不具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體(僅鉸鏈；例如XENP24341)表現出對各種淋巴細胞群之較少結合，如圖117中所描繪。
B. 5B：XmAb24306增強活化T細胞之抗腫瘤作用
[00935] 根據製造商之說明，使用EasySep™人類T細胞富集套組(STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)自人類PBMC (CMV+ HLA-A0201)純化T細胞。將純化T細胞與20:1 E:T比率之CFSE標記之親本MCF-7腫瘤細胞(在該實施例中稱為第1組)或CFSE標記之表現pp65之MCF-7腫瘤細胞(在該實施例中稱為第2組)及指定測試物一起溫育4天。在第3天，將Brefeldin A (BioLegend, San Diego, Calif.)及抗CD107a PerCP/Cy5.5 (LAMP-1)添加至細胞中。溫育後，將細胞與Zombie Aqua™可固定活力套組(BioLegend, San Diego, Calif.)在室溫下溫育30分鐘。洗滌細胞且用抗CD4-APC/eFluor780 (RPA-T4)、抗CD8b-PE/Cy7 (SIDI8BEE)、抗CD25-PE (M-A251)及抗CD69-BV605 (FN50)在冰上染色1小時。再次洗滌細胞，且使用eBioscience™ Foxp3/轉錄因子染色緩衝液組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.)用抗IFNγ-BV421 (4S.B3)及抗Ki67-APC染色。藉由流式細胞術分析細胞之各種細胞群。基於CFSE染色鑒定靶細胞，且基於Zombie染色鑒定死亡靶細胞。基於CD4及CD8表現對效應細胞(CFSE-)進行門控。
[00936] CD25及CD69為T細胞活化標誌物。圖118A及118B分別描繪兩組中CD8+ T細胞上之CD25表現(如由PE MFI所示)，且圖119A及119B分別描繪CD4 + T細胞上之CD25表現。圖120A及120B分別描繪兩組中CD8+ T細胞上之CD69表現(如由BV605 MFI所示)，且圖121A及121B分別描繪CD4+ T細胞上之CD69表現。
[00937] Ki67為一種與蛋白質增殖嚴格相關之蛋白質。圖122A-122B分別描繪兩組中CD8+ T細胞中之細胞內IFNγ表現(如由BV421 MFI所示)，且圖123A-123B分別描繪CD4+ T細胞中之細胞內IFNγ表現。圖124A-124C分別描繪第1組中CD8+ T細胞之Ki-67+/IFNγ-、Ki-67+/IFNγ+及Ki-67-/IFNγ+分數。圖125A-125C分別描繪第1組中CD4+ T細胞中之Ki-67+
/IFNγ-
、Ki-67+
/IFNγ+
及Ki-67-
/IFNγ+
分數。圖126A-126C分別描繪第2組中CD8+
T細胞之Ki-67+
/IFNγ-
、Ki-67+
/IFNγ+
及Ki-67-/IFNγ+分數。圖127A-127C分別描繪第2組中CD4+ T細胞之Ki-67+
/IFNγ-
、Ki-67+
/IFNγ+
及Ki-67-
/IFNγ+
分數。
[00938] CD107a與脫粒及細胞溶解活性的進一步指標有關。圖128A-128B分別描繪兩組中CD8+
T細胞上之CD107a表現(如由PerCP/Cy5.5 MFI所示)，且圖129A-129B分別描繪CD4+
T細胞上之CD107a表現。
[00939] 圖130A-130B分別描繪兩組之剩餘靶細胞(亦即親本MCF-7腫瘤細胞或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)之數目，且圖131A-131B描繪死亡靶細胞之數目。
[00940] 總之，資料顯示本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白不僅促進腫瘤細胞之殺傷，而且融合蛋白選擇性地擴增活化淋巴細胞，表明對腫瘤浸潤淋巴細胞之選擇性的可能性。值得注意的是，IL-15/Rα-Fc融合蛋白優先誘導CD8+及CD4+ T細胞之增殖，如Ki67+
IFNγ+
之各群體之百分比所示。
[00941] 在證實活化T細胞之優先增殖之類似實驗中，在不存在或存在抗HLA-A抗體(W6/32)之情況下將來自人類PBMC (CMV+ HLA-A0201)之純化T細胞與30:1 E:T比率之親本或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞溫育(以經由TCR減少/消除T細胞活化)。描繪Ki67+
/IFNγ+
之CD8+
T細胞百分比之資料示於圖132中。描繪剩餘靶細胞(例如，親本MCF-7腫瘤細胞或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)之數目之資料描繪於圖133中。用抗HLA-A抗體溫育且隨後T細胞活化之減少導致較低百分比之CD8+
Ki67+
IFNγ+
T細胞及較低效能之靶細胞殺傷，進一步說明活化淋巴細胞之選擇性擴增。
C. 5C：XENP24113增強活化T細胞之抗腫瘤作用
[00942] 根據製造商之說明，使用EasySep™人類T細胞富集套組(STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)自人類PBMC (CMV+ HLA-A0201)純化T細胞。將純化T細胞與20:1 E:T比率之CFSE標記之表現pp65之MCF-7腫瘤細胞以及指定測試物一起溫育4天。在第3天，將Brefeldin A (BioLegend, San Diego, Calif.)及抗CD107a-PerCP/Cy5.5 (LAMP-1)添加至細胞中。溫育後，將細胞與Zombie Aqua™可固定活力套組(BioLegend, San Diego, Calif.)在室溫下溫育30分鐘。洗滌細胞且用抗CD4-APC/eFluor780 (RPA-T4)、抗CD8b-PE/Cy7 (SIDI8BEE)、抗CD25-PE (M-A251)及抗CD69-BV605 (FN50)在冰上染色1小時。再次洗滌細胞且使用eBioscience™ Foxp3/轉錄因子染色緩衝液組(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.)用抗IFNγ-BV421 (4S.B3)及抗Ki67-APC染色。藉由流式細胞術分析細胞之各種細胞群。基於CFSE染色鑒定靶細胞，且基於Zombie染色鑒定死亡靶細胞。基於CD4及CD8表現對效應細胞(CFSE-)進行門控。
[00943] CD25及CD69為T細胞活化標誌物。圖134A-134B分別描繪CD8+
T細胞及CD4+
T細胞上之CD25表現(如由PE MFI所示)。圖135A-135B分別描繪CD8+
T細胞及CD4+ T細胞上之CD69表現(如由BV605 MFI所示)。
[00944] Ki67為一種與蛋白質增殖嚴格相關之蛋白質。圖136A-B分別描繪CD8+
T細胞及CD4+
T細胞中之Ki67表現(如由APC MFI所示)。圖137A-137B分別描繪CD8+ T細胞及CD4+
T細胞之Ki-67+
/IFNγ+
分數。圖138A-138B分別描繪CD8+ T細胞及CD4+ T細胞之CD69+
/IFNγ+
分數。圖139A-139B分別描繪CD8+
T細胞及CD4+
T細胞之CD69+
/Ki-67+
分數。圖140描繪剩餘靶細胞(例如，表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)之數目，且圖141描繪死亡靶細胞之數目。
[00945] 與實施例5B一致，如由Ki67表現所示，IL-15/Rα-Fc融合蛋白中之每一者相比於誘導CD4+
T細胞優先誘導CD8+
T細胞之增殖。值得注意的是，CD69+
KI67+
及CD69+
IFNγ+
分數之增加與pp65-MCF7靶殺傷相關。因此，在增殖活化T細胞方面相比於XmAb24306具有更大效能之XENP24113在靶殺傷中亦更有效。
D. 5D：IL-15/Rα-Fc增強小鼠中之抗腫瘤作用
[00946] 在實施例4B中描繪之研究中，包括XmAb24306之一些較低效能變異體不能增強GVHD。儘管Xtend取代(M428L/N434S)增強人類及食蟹猴中之PK，但取代實際上減少小鼠中之暴露。因此，對於實施例中描繪之研究，在小鼠中評估XENP24045 (XmAb24306之非Xtend類似物)之抗腫瘤作用。
[00947] 在第-14天在NOD SCID γ (NSG)小鼠(每組10只)之後腰窩中皮內植入3×106
個表現pp65之MCF-7細胞。在第0天，向小鼠腹膜內植入來自對T細胞pp65反應性篩選呈陽性之HLA匹配CMV+
供體之5×106
個人類PBMC (或PBS用於對照小鼠)。用指定測試物或PBS (對照小鼠)每週處理小鼠，持續4周(總共4劑)。藉由卡尺量測監測腫瘤體積，其資料顯示(第1次給藥後之天數)於圖142A-142B中。在第7、12、19及26天抽取血液，且藉由流式細胞術分析以計數各種淋巴細胞群，如圖143A-143D中所描繪。在該模型中，與僅PBMC相比，XENP24045顯著降低腫瘤生長。
XIX.實施例 6 ：具有及不具有 Xtend-Fc 之 IL-15/Rα-Fc 融合蛋白之效能降低增強食蟹猴中之藥效學及藥物動力學
[00948] 如實施例3J所描繪，許多效能降低之IL-15/Rα-Fc變異體以及XENP23343 (其為XENP22821之Xtend-類似物)在食蟹猴中具活性。
[00949] 測試物隨時間之血清濃度及半衰期描繪於圖144中。資料顯示效能與食蟹猴中之暴露呈負相關，其中非活性IL-15/Rα-Fc融合變異體XENP22834具有最長半衰期。這與小鼠中之資料一致，如實施例3F中所描繪。值得注意的是，增加之劑量對PK具有最小影響，如藉由1X及3X劑量之XENP22821之Cmax正規化血清濃度所示(描繪於圖145中)。另外，Xtend取代顯著改善暴露，如由XENP23343之半衰期所示。
[00950] 另外，如圖87A-87E、91A-91E及97A-97E中所描繪之用XENP20818、XENP22821及XENP23343處理後之食蟹猴中的淋巴細胞計數重新繪製為圖146A-146E中其平均變化倍數之覆蓋圖，以強調藥效學之改善。資料清楚地表明，與野生型IL-15/Rα-Fc融合體XENP20818相比，效能降低之IL-15/Rα-Fc變異體XENP22821使淋巴細胞計數之擴增持續時間更長。值得注意的是，XENP23343 (XENP22821之Xtend-類似物)相比於XENP22821進一步增強淋巴細胞擴增之持續時間。
[00951] 在另一研究中，向食蟹猴投與單次靜脈內(i.v.)劑量之0.3X劑量XENP22821 (n=3)或0.6X劑量XmAb24306，且隨時間評估各種參數。資料顯示XmAb24306在較低0.6X劑量下顯示相似之PK/PD (與3X劑量相比，如實施例4D中所描繪；來自兩個研究之淋巴細胞擴增之覆蓋圖描繪於圖147A-147B中)與有利耐受性。值得注意的是，儘管與XENP22821 (在0.3X劑量下)、XmAb24306 (在0.6X劑量下)相似之劑量與更有效XENP22821相比顯示優異PK/PD，其中外周Ki-67直至第10天呈陽性(圖149-151)及淋巴結Ki-67直至第15天呈陽性(研究結束；圖148)。另外，XmAb24306相比於擴增CD4+ T細胞優先擴增CD8+ T細胞，包括Treg (參見圖153-154)。圖155A-155C描繪來自該研究之CD8+ T細胞、CD4+ T細胞、CD16+ NK細胞計數之覆蓋圖(在用XmAb24306給藥後)且描繪於實施例3J中之研究(在用XENP20818、WT IL-15/Rα-Fc給藥後)進一步說明效能降低所賦予之增強藥效學。
XX.實施例 7 ：效能降低不影響 IL-15/Rα-Fc 融合蛋白之免疫機制
[00952] XmAb24306之效能降低需要更高之濃度以達到與更高效能IL-15/Rα-Fc融合蛋白諸如WT XENP20818相同水平之T細胞擴增。然而，擔憂效能降低及/或更大之濃度將改變與IL-15/Rα-Fc處理相關之免疫機制。因此，研究在用相應EC50之XENP20818 (WT IL-15/Rα-Fc融合體)及XmAb24306溫育後PBMC、分離CD8+ T細胞及分離NK細胞中免疫相關基因之概況。
[00953] 使用EasySep™人類CD8+ T細胞富集套組(STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)根據製造商之說明富集CD8 + T細胞。利用EasySep™人類CD56陽性選擇套組II (STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)根據製造商之說明富集NK細胞。將200萬個新鮮PBMC、CD8 + T細胞或NK細胞與XENP20818、XmAb24306、重組IL-15或重組IL-2一起溫育24或48小時。溫育後，使用RNeasy Plus Mini套組(Qiagen, Hilden, Germany)提取RNA。藉由nCounter® PanCancer Immune Profiling Panel (NanoString Technologies, Seattle, Wash.)檢定每個樣品100 ng RNA。用XENP20818及XmAb24306處理後之基因表現變化倍數針對各種條件作圖，如圖156A-156C及圖157A-157C中所描繪。資料顯示，在每種情況下，基因表現概況在XENP20818與XmAb24306之間良好相關，表明在較高濃度下給與效能降低之IL-15/Rα-異Fc融合體後免疫機制應該沒有變化。相比之下，用XmAb24306對比IL-15處理48小時後基因表現變化倍數之相關性描繪於圖158A中。推測較低相關性係由於重組IL-15亦與IL-15Rα受體細胞結合。進一步比較，用XmAb24306對比IL-2處理48小時後基因表現變化倍數之相關性描繪於圖158B中。推測較低之相關性係由於重組IL-2與不同受體(亦即IL-2Rα)之結合。
XXI.實施例 8
：IL-15/Rα-Fc 融合蛋白及 Treg
[00954] 除了增殖效應T細胞之外，IL-15亦可結合Treg上之受體且增強其增殖；然而，Treg抑制免疫反應且因此認為不利於腫瘤學治療。在實施例6中描繪之研究中，發現本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白相比於Treg選擇性地擴增CD8 + T細胞。此處亦研究本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白對效應T細胞之Treg抑制的影響。
[00955] 先前已報導雷帕黴素在活體外促進CD4+CD25+FOXP3+ Treg之增殖，且所得擴增之Treg抑制CD4+及CD8+ T細胞增殖(參見例如Battaglia等, (2006) Rapamycin promotes expansion of functional CD4+CD25+FOXP3+ regulatory T cells of both healthy subjects and type 1 diabetic patients. J Immunol. 177(12) 8338-8347；及Strauss等, (2007) Selective survival of naturally occurring human CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells cultured with rapamycin. J Immunol. 178(1) 320-329)。因此，使用EasySep™人類CD4+ T細胞富集套組(STEMCELL Technologies, Vancouver, Canada)藉由陰性選擇自人類PBMC富集CD4+ T細胞。使用Dynabeads™人類Treg擴增劑(Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass.)在RPMI1640 + 10%胎牛血清+ 0.1 µg/ml雷帕黴素+ 500 U/ml IL-2中擴增Treg持續1-4天。將Treg轉移至塗有0.5 µg/ml抗CD3 (OKT3, Biolegend, San Diego, Calif.)之T75燒瓶中，且用RPMI1640 + 10%胎牛血清+ 0.1 µg/ml雷帕黴素+ 100 U/ml IL-2 + 0.5 µg/ml抗CD28 mAb培養。在自PBMC初始富集CD4 + T細胞後至少8天進行實驗。
[00956] 將1×105
個CFSE標記之PBMC (自體)與板結合抗CD3上之Tag-it Violet標記之Treg (100 ng/ml；OKT3)之2倍稀釋物與10 µg/ml XmAb24306在37℃下共培養3天。藉由CFSE或Tag-it Violet稀釋量測CD8+及CD4+應答細胞之增殖，且使用Zombie Aqua™可固定活力套組(BioLegend, San Diego, Calif.)進行染色以排除死細胞，其資料描繪於圖159A-159B中。資料顯示XmAb24306克服了抗CD3誘導之效應T細胞增殖之Treg抑制。
XXII.實施例 9 ： IL-15/Rα-Fc 融合蛋白與檢查點阻斷抗體組合
[00957] 接著，研究本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白是否適合與檢查點阻斷疊加。與實施例5B一樣，使用XmAb24306的之Xtend類似物。所用檢查點阻斷抗體為XENP16432 (基於具有消除效應功能之納武單抗之二價抗PD-1 mAb；序列描繪於圖160中)。在第-1天經由IV-OSP將1000萬個人類PBMC植入NSG小鼠中，接著在第0、7、14及21天給與指定濃度之指定測試物。在第6天和第10天收集全血以使用FACS量測CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、CD45+細胞及NK細胞計數，以及每週兩次量測IFNγ之血清濃度及體重。第6天及第10天之細胞計數描繪於圖161A-161B、162A-162B、163A-163B及164A-164B中，第7天之血清IFNγ濃度描繪於圖165中，且直至第7、11、14及18天之體重變化描繪於圖166A-166D中。每個點代表一隻雌性NSG小鼠。資料顯示XENP24045在所有劑量水平下促進白細胞擴增且加劇異種GVHD。值得注意的是，XENP24045顯示出與PD-1阻斷(XENP16432)之強烈協同作用，特別是在較低之0.3 mg/kg XENP24045劑量下。
XXIII.實施例 10 ： WT IL-15/Rα-Fc 對各種淋巴細胞群增殖之影響
[00958] 用WT IL-15/Rα-Fc (XENP20818)溫育後表現Ki67之各種淋巴細胞群之百分比如本文所述實施例中其他地方一般性描述進行研究，其資料描繪於圖167中。
XXIV.實施例 11 ： XENP24306 顯示在刺激 CD8+
CD25+
T 細胞上之 STAT5 磷酸化方面之效能降低
[00959] 在與XENP24306、WT IL-15/Rα-Fc (XENP20818)及其他效能變異體一起溫育後，CD8+CD45RA+ T細胞上之STAT5磷酸化如實施例中其他地方一般性描述進行研究，其資料描繪於圖168及169中。
XXV.實施例 12 ：當調整劑量時效能降低顯示類似信號傳導動力學
[00960] 用EC50劑量之XENP20818或XENP24306刺激人類PBMC且每天檢定持續6天。在第3天后洗去測試物之細胞。描繪表現Ki67之CD8+
CD45RA-
T細胞百分比以及CD8+
CD45RA-
T細胞上之BCL-2及CD25表現的資料分別描繪於圖170、171及172中。資料顯示，當調整劑量時，效能降低顯示與WT相比類似之信號傳導動力學。
XXVI.實施例 13 ： XENP24045 優先誘導活化 T 細胞上之 STAT5 磷酸化
[00961] 如本文所述實施例中其他地方一般描述，研究在新鮮人類PBMC對比與XENP24045 (XENP24306之非Xtend類似物)及WT IL-15/Rα-Fc溫育後受刺激之人類PBMC中CD8+
T細胞上的STAT5磷酸化，其資料描繪於圖173中。資料顯示XENP20818與XENP24045皆優先在受刺激之PBMC中誘導CD8+
T細胞上之STAT5磷酸化，表明對活化T細胞之偏好。
XXVII.實施例 14 ： XENP24306 優先擴增活化 T 細胞
[00962] 將2×105
個CFSE標記之人類PBMC與指定劑量之XENP24306在指定劑量之板結合抗CD3 (OKT3)上溫育4天。藉由CFSE稀釋量測T細胞之增殖，且使用Zombie染料排除死細胞。描繪增殖CD8+
CD45RA-
T細胞百分比之資料描繪於圖174中，且顯示T細胞活化增加(藉由更大濃度之αCD3)使得XENP24306實現CD8+
T細胞之更大增殖。
XXVIII.實施例 15 ： XENP24045 及 XENP23557 在 huPBMC 植入 NSG 小鼠 (GVHD 模型 ) 中增強 T 細胞增殖及 IFNγ 產生，且與檢查點阻斷 組合
[00963] 在另一GVHD研究中，單獨或與抗PD-1 mAb組合研究XENP24045 (XENP24306之非Xtend類似物)及XENP23557 (XENP24113之非Xtend類似物)。在第-1天經由IV-OSP向NSG小鼠植入5×106
個人類PBMC，且在第0、7、14及21天給與指定濃度之指定測試物。圖175描繪第10天之血清IFNγ濃度，圖176描繪第17天之CD45+
細胞計數，且圖177描繪第25天之體重(作為初始體重之百分比)。
[00964] 資料顯示XENP24045及XENP23557增強T細胞增殖及IFNγ產生，以及增強GVHD。值得注意的是，資料顯示兩者之明顯劑量反應，因為T細胞增殖及IFNγ產生進一步增強，且GVHD進一步惡化，如由在0.3 mg/kg劑量下相比於0.1 mg/kg XENP24045以及在0.1 mg/kg劑量下相比於0.03 mg/kg XENP23557之體重變化所示。另外，資料顯示IL-15/Rα-Fc融合體與檢查點阻斷良好疊加，如由增強之T細胞增殖及IFNγ部分及增強之GVHD所示。
XXIX.實施例 16 ： XENP24045 在 huPBMC 植入 NSG 小鼠 (GVHD 模型 ) 中增強 T 細胞增殖及 IFNγ 產生，且與檢查點阻斷 組合
[00965] 在單獨或與抗PD-1 mAb組合研究XENP24045 (XENP24306之非Xtend類似物)之另一GVHD研究中，在第-1天經由IV-OSP向NSG小鼠植入10×106
個人類PBMC，且在第0、7、14及21天給與指定濃度之指定測試物。
[00966] 圖178描繪第7天之血清IFNγ濃度，圖179描繪第10天之各種淋巴細胞群計數，且圖180-181分別描繪第11天以及研究持續時期內之體重(作為初始體重之百分比)。與實施例15一致，資料顯示XENP24045增強T細胞增殖及IFNγ產生。另外，資料再次顯示XENP24045與檢查點阻斷良好疊加，如由增強之T細胞增殖及IFNγ部分及增強之GVHD所示。
XXX.實施例 17 ： IL-15-Fc 融合體增強小鼠腫瘤模型中 PD-1 阻斷之抗腫瘤活性
[00967] 在第-14天，用3×106
個pp65轉導之MCF-7細胞皮內接種NSG小鼠(每組10只)。隨後向小鼠腹膜內注射1.5×106
或5×106
個pp65反應性人類PBMC(或PBS用於對照)且在第0天用測試物(PBS、3.0 mg/kg XENP16432或0.5 mg/kg XENP24045與3 mg/kg XENP16432組合)處理，且在第7天、第14天及第21天用指定測試物進一步處理。在植入1.5×106
個huPBMC之小鼠中huPBMC植入後第21天之CD45+細胞計數描繪於圖182中。在植入1.5×106
個huPBMC之小鼠中huPBMC植入後第31天以及在研究持續時期內之腫瘤體積描繪於圖183和184中。在研究持續時期內植入5×106
個huPBMC之小鼠中的腫瘤體積描繪於圖185中。資料顯示IL-15-Fc融合體XENP24045在植入1.5×106
個huPBMC之小鼠中增強抗PD-1阻斷之抗腫瘤活性。值得注意的是，如圖185中所示，在植入5×106
個huPBMC之小鼠中，將XENP24045與XENP16432組合，與單獨用XENP16432處理相比，不增強抗腫瘤活性。這表明：a)將IL-15-Fc融合體與檢查點阻斷組合可以為具有低數目腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)之腫瘤的治療提供實質性益處；及b)在對單獨檢查點阻斷免疫療法具有次優應答之患者中，添加細胞因子免疫療法諸如本發明之IL-15-Fc融合體可增強抗腫瘤反應。
XXXI.實施例 18 ：研究食蟹猴中 IL-15-Fc 效能變異體之藥物動力學
[00968] 在研究具有Xtend之IL-15-Fc效能變異體之藥物動力學的另一研究中，向食蟹猴投與第一單次靜脈內(i.v.)劑量之不同濃度之XENP22853 (具有Xtend之WT IL-15/Rα-異Fc)、XENP24306 (具有Xtend之IL-15(D30N/E64Q/N65D)/Rα-異Fc)、XENP24113 (具有Xtend之IL-15(N4D/N65D)/Rα-異Fc)及XENP24294 (具有Xtend之scIL-15(N4D/N65D)/Rα-Fc)。
[00969] 圖189描繪第一次給藥後測試物隨時間之血清濃度。圖190描繪XENP22853及相應WT非Xtend XENP20818 (來自食蟹猴中之早期研究)隨時間之相對血清濃度。與實施例6描繪之資料一致，資料顯示單獨Xtend取代(如在XENP22853中)對IL-15-Fc融合體之藥物動力學提供一些改進。值得注意的是，除了Xtend取代之外併入效能變異體(如在XENP24306及XENP24113中)，極大地改善IL-15-Fc融合體之藥物動力學。出乎意料的是，與XENP24306相比，XENP24113顯示出實質較差之藥物動力學。類似地，與XENP24306相比，scIL-15/Rα-Fc融合體XENP24294 (其具有與XENP24113相同之IL-15(N4D/N65D)效能變異體)亦顯示實質較差之藥物動力學。儘管基於具有IL-15(N4D/N65D)變異體之IL-15-Fc融合體預期XENP24113 (及XENP24294)之藥物動力學降低，但證實比具有IL-15(D30N/E64Q/N65D)變異體之IL-15-Fc融合體具有更大的活體外效能(如實施例3B及圖61中所描繪)，藥物動力學之降低出乎意料地與效能增加不成比例。
[00970] 猴研究表明，效能降低之IL-15/Rα-異Fc融合體之半衰期為數天，其顯著長於IL-15之＜1小時半衰期。此外，觀測到藥效學及清除率之顯著負相關，其中降低效能之變異體由於更持久之暴露而允許更高、更耐受之劑量及增強之淋巴細胞增殖。基於此等觀測結果，假定受體介導之內化為影響各種IL-15之PK/PD關係之關鍵因素(如圖195中示意性描繪)。
[00971] 為了對此進一步研究，開發了一種基於機制之PK/PD模型來預測最佳藥物-受體親和力，其平衡效能與靶介導之清除率。一些結果顯示於圖194中。來自多項食蟹猴研究之PK資料(圖196)輸入此等模擬中，且允許多個額外參數以在PK資料之整體擬合中變化(浮動)。值得注意的是，模擬收斂於估計之KD
值，該等KD
值與實驗量測之結合EC50值線性相關(圖197)。利用估計之KD
值，生成模擬PK曲線、受體佔用率(RO)曲線及藥效學曲線(如圖198中所描繪)，使得能夠確定RO (RO-AUC)曲線下之預測面積以及最大受體佔用率(RO-Max)。繪製預測RO-AUC值相對於經實驗確定之PD-AUC (藥效學AUC：CD8+
T細胞隨時間之增加倍數的曲線下面積) (圖199A)、預測RO-AUC值相對於經實驗確定之PD-Max (峰值CD8+
T細胞增加(相對於基線之倍數)) (圖199B)、預測RO-AUC值相對於經實驗確定之ALB-min (白蛋白相對於基線水平之減少%的最低點) (圖199C)、預測RO-Max (最大受體佔用率)值相對於經實驗確定之PD-AUC (圖199D)、預測RO-Max相對於經實驗確定之PD-Max (圖199E)及預測RO-Max相對於經實驗確定之ALB-Min (圖199F)。值得注意的是，預測RO-AUC值與如圖199A中所描繪之經實驗確定之PD-AUC (藥效學AUC)以及如圖198B中所描繪之PD-Max充分相關，表明RO-AUC為最小化目標值。
[00972] 最後，對Xtend或非Xtend形式之IL-15/Ra-異Fc融合體進行對各種KD
值之模擬掃描(如圖200中所描繪)，揭示預測之最佳KD
為約200 nM，與XmAb24306之估計KD
值類似。
XXXII.實施例 19
：效能降低之 IL-15/Rα- 異 Fc 融合體與抗 PD-1 有效組合以擴增外周 T 細胞
[00973] 在實施例17中所述之小鼠腫瘤模型中，與單獨用抗PD-1 mAb處理相比，用XENP24045與抗PD-1 mAb之組合處理顯著增強抗腫瘤活性(在第21、27、38、41及43天，p ≤ 0.05；以及在第24、29、31、34及36天，p ≤ 0.01，根據非配对t檢驗)。進一步研究外周T細胞之擴增。描繪人類CD8+
T細胞擴增之資料(如在研究第7、14、21及28天之計數所示)顯示於圖201A及圖201B中。值得注意的是，在第14、21及28天，與單獨用抗PD-1 mAb治療相比，藉由用XENP24045與抗PD-1 mAb之組合處理顯著增強CD8+
T細胞計數。進一步如圖201B中所示，用XENP24045與抗PD-1 mAb之組合處理比單獨用抗PD-1 mAb處理遠遠更早地增強CD8+
T細胞活化(如由CD8 T細胞之CD25表現所示)。
XXXIII.實施例 20 ：效能降低之 IL-15/Rα- 異 Fc 融合體不僅增強藥效學， 而且 提高耐受性
[00974] 基於自各種食蟹猴研究收集之資料，發現工程化降低效能之IL-15/Rα-異Fc融合體相對於包含WT IL-15之IL-15/Rα-異Fc融合體可增強藥效學(圖202A-圖202C中重疊之資料，顯示藉由給與0.3X劑量XENP20818、0.3X劑量XmAb24306及0.6X劑量XmAb24306使CD8+
T細胞、CD16+
NK細胞及淋巴細胞擴增)，淋巴細胞增加高達1000%。血管滲漏症候群為與細胞因子諸如IL-2處理相關之標誌性毒副作用。血管滲漏之一種跡象為低白蛋白血症，亦即血清白蛋白濃度下降。因此，研究如上所述給藥之食蟹猴中之白蛋白下降，且顯著發現XmAb24306不僅與XENP20818相比增強淋巴細胞擴增，而且亦導致白蛋白下降之減少(資料描繪於圖203中)，表明XmAb24306之優異治療指數。舉例而言，儘管XmAb24306與XENP20818皆促進外周CD8+
T細胞增加至少3倍(200%) (當在相同水平下給藥時)，由XmAb24306介導之白蛋白減少程度不超過15%，而XENP20818導致白蛋白減少至少25%。此外，2倍高劑量(0.6X)之XmAb24306促進外周CD8+
T細胞增加至少11倍(1000%)，同時保持白蛋白水平降低20%以上。另外，在實施例18中所述之建模中，似乎預測之RO-Max值與經實驗確定之ALB-Min充分相關(參見圖199F)，表明RO-Max為優化以微調IL-15及其他細胞因子之耐受性的目標值。
XXXIV.實施例 21 ：進一步工程化在 IL-15:CD132 界 面 處 包含修飾之降低效能 之 IL-15 變異體
[00975] 如實施例3B及圖55所示，野生型scIL-15/Rα-Fc融合體XENP21478在誘導NK細胞及CD8+ T細胞之增殖方面不如野生型IL-15/Rα-異Fc XENP20818有效。因此，推斷適用於IL-15/Rα-異Fc融合體之效能降低IL-15變異體可能太弱且不適合用於其他IL-15融合體形式，諸如scIL-15/Rα-Fc融合體。因此，吾人關注到以諸如具有IL-15(N4D/N65D)變異體之Il-15/Rα-異Fc融合體之其它形式使用之IL-15(N4D/N65D)變異體相比於具有IL-15(D30N/E64Q/N65D)變異體之IL-15/Rα-異Fc融合體顯示更大之活體外效能。
[00976] 然而，如上所示，具有IL-15(N4D/N65D)變異體之IL-15-Fc融合體與具有IL-15(D30N/E64Q/N65D)變異體之IL-15-Fc融合體相比表現出較差之藥物動力學。注意到在IL-15界面處具有兩種取代之IL-15(N4D/N65D)負責結合CD122，而在IL-15:CD122界面處具有兩種取代(E64Q及N65D)及在IL-15界面處具有一種取代(D30N)之IL-15(D30N/E64Q/N65D)負責結合CD132。因此，推斷在IL-15:CD132界面處之修飾可能有助於XENP24306觀測到之優異藥物動力學。
[00977] 鑒於前述，產生併有D30N取代之IL-15效能變異體之另一文庫。此等說明性IL-15變異體之序列描繪於圖191中，以及產生包含此等變異體之說明性scIL-15/Rα-Fc融合體(其序列描繪於圖192中)且在細胞增殖檢定中研究。
[00978] 將人類PBMC與指定濃度之指定測試物一起溫育3天。溫育後，PBMC用抗CD3-PE (OKT3)、抗CD4-FITC (RPA-T4)、抗CD8-eF660 (SIDI8BEE)、抗CD16-BV421 (3G8)、抗CD45RA-APC/Fire750 (HI100)、抗CD56-BV605 (5.1H11)及抗Ki67-PE/Cy7 (Ki-67)染色且藉由流式細胞術分析。圖193A-圖193G描繪表現Ki67之各種淋巴細胞群之百分比，其指示增殖。
[00979] 如所預期，資料顯示，與包含相同IL-15變異體之IL-15/Rα-異Fc以及包含IL-15(N4D/N65D)變異體之scIL-15/Rα-Fc融合體相比，包含IL-15(D30N/E64Q/N65D)變異體之scIL-15/Rα-Fc融合體在各種淋巴細胞群之增殖中不具有活性或具有急劇降低之活性。然而，許多具有包含D30N取代之IL=15變異體之scIL-15/Rα-Fc融合體顯示與WT scIL-15/Rα-Fc XENP21993相似之活性。值得注意的是，吾人鑒定一種特定IL-15(D30N/N65D)變異體，其不僅包含IL-15:CD132界面修飾，而且亦具有與IL-15(N4D/N65D)變異體相似之效能(在scIL-15/Rα-Fc融合體之情形下)。
XXXV.實施例 22 ：額外研究
A. 22A：XENP24306增強人類PBMC植入NSG小鼠(GVHD模型)中之T細胞增殖及IFNγ產生，且與檢查點阻斷有效組合
[00980] 在GVHD研究中，單獨或與抗PD-1 mAb XENP16432組合研究各種濃度之XENP24306。在第-1天經由IV-OSP向NSG小鼠植入10×106
個人類PBMC，且在第0、7、14及21天給與指定濃度之指定測試物。在第3、7、14及21天抽取血液以研究淋巴細胞擴增(資料描繪於圖204-206中)及IFNγ濃度(資料描繪於圖209中)；且每週兩次評估體重作為GVHD之指標(資料描繪於圖207-208中)。
[00981] 資料顯示，至第10天，使用0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.01 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著增強GVHD，超過單獨使用3 mg/kg XENP16432處理(使用非配對t檢驗進行統計)。至第14天，使用0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著增強CD3+ T細胞擴增，超過單獨使用3 mg/kg XENP16432處理(使用非配對t檢驗對於對數轉換資料進行統計)。
B. 22B：XENP24306增強小鼠腫瘤模型中PD-1阻斷之抗腫瘤活性
[00982] 在小鼠腫瘤模型中，單獨或與抗PD-1 mAb XENP16432組合地研究各種濃度之XENP24306。在第-15天，用3×106
個pp65轉導之MCF-7皮內接種NSG小鼠。在第0天，隨後向小鼠腹膜內注射1.5×106
個人類PBMC，且在第0、7、14及21天用指定測試物進一步處理。在第7、14及21天抽取血液以研究淋巴細胞擴增(資料描繪於圖210-211中)及IFNγ濃度(資料描繪於圖214中)。藉由卡尺量測每週三次量測腫瘤體積(資料描繪於圖212及213A中)，且每週兩次評估體重作為GVHD之指標(資料描繪於圖213B中)。
[00983] 資料顯示，至第11天，與單獨使用XENP16432處理相比，使用1.0 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著降低腫瘤體積(使用非配對t檢驗對基線校正腫瘤量測進行統計)。至第7天，與單獨用XENP16432處理相比，用1.0 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著增強IFNγ分泌。至第14天，用單獨XENP24306或XENP24306與XENP16432組合處理之各組顯著增強淋巴細胞擴增，超過PBS處理。值得注意的是，至第14天，不考慮XENP24306濃度，用XENP24306與XENP16432之組合以及單獨更高濃度之XENP24306處理之各組，顯著增強淋巴細胞擴增，超過XENP16432處理。
[00984] 提供上述實施例以向一般技術者提供完全揭示內容以及如何製造及使用本發明之組合物、系統及方法之實施方案的描述，且並不意圖限制本發明人認為之其發明範疇。熟習此項技術者顯而易見之用於實施本發明之上述模式的修改旨在處於隨附申請專利範圍之範疇內。本說明書中提及之所有專利及出版物表示本發明所屬領域之技術人員的技能水準。該揭示內容中引用之所有參考文獻均以引用之方式併入，其程度如同每個參考文獻已單獨地以引用之方式全部併入一般。
[00985] 所有標題及部分名稱僅用於清楚及參考目的，而不應以任何方式視為限制。舉例而言，熟習此項技術者應理解根據本文所述發明之精神及範疇適當的來自不同標題及部分之各個態樣組合在一起之有用性。
[00986] 本文引用之所有參考文獻均以引用之方式且對於所有目的全部併入本文，其程度如同每個單獨之出版物或專利或專利申請案明確地且單獨地指出對於所有目的以引用之方式全部併入一般。
在不悖離本發明之精神和範疇之情況下，可對本申請案進行許多修改及變化，其對於熟習此項技術者為顯而易見的。本文描述之特定實施方案及實施例僅作為實例提供，且本申請案僅受隨附申請專利範圍之條款以及申請專利範圍所賦予之等效物之完全範疇的限制。
無
[0061] 圖1描繪IL-15與其受體IL-15Rα (CD215)、IL-15Rβ (CD122)及共同γ鏈(CD132)之複合物的結構。
[0062] 圖2A及圖2B描繪IL-15及其受體之序列。
[0063] 圖3A-圖3E描繪有效對之Fc異二聚化變異體組(包括偏態(skew)及pI變異體)。在圖3D及圖3E中，存在沒有相應「單體2」變異體之變異體；此等為可以單獨用於任一單體之pI變異體。
[0064] 圖4描繪等排變異體抗體恒定區及其相應取代之列表。pI_( )指示較低pI變異體，而pI_(+)指示較高pI變異體。此等可以視情況且獨立地與本發明之其他異二聚化變異體(以及如本文所述之其他變異體類型)組合。
[0065] 圖5描繪消除FcγR結合之有用消除變異體(有時稱為「敲除」或「KO」變異體)。通常，兩種單體上皆存在消除變異體，但在某些情況下其可能僅在一種單體上。
[0066] 圖6A-圖6E顯示本發明之「非細胞因子」組份之特別有用的實施方案。
[0067] 圖7描繪許多例示性可變長度連接子。在一些實施方案中，此等連接子可用於將IL-15及/或IL-15Rα(sushi)之C端連接至Fc區之N端。在一些實施方案中，此等連接子可用於融合IL-15與IL-15Rα(sushi)。
[0068] 圖8A-圖8D顯示基於人類IgG1之若干有用IL-15/Rα-Fc形式骨架之序列，無細胞因子序列(例如，Il-15及/或IL-15Rα(sushi))。骨架1係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架2係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K : L368D/K370S偏態變異體，具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架3係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K : L368E/K370S偏態變異體，具有L368E/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架4係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，D401K : K360E/Q362E/T411E偏態變異體，具有K360E/Q362E/T411E偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架5係基於人類IgG1 (356D/358L同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架6係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體，以及兩個鏈上之N297A變異體。骨架7與6相同，區別在於突變為N297S。骨架6及7之替代形式可以排除兩個鏈中之消除變異體E233P/L234V/L235A/G236del/S267K。骨架8係基於人類IgG4，且包括S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體，以及兩個鏈上之S228P (EU編號，其在Kabat中為S241P)變異體，其如此項技術中已知消除Fab臂交換。骨架9係基於人類IgG2，且包括S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，在具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體。骨架10係基於人類IgG2，且包括S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，在具有L368D/K370S偏態變異體之鏈上之Q295E/N384D/Q418E/N421D pI變異體以及兩個鏈上之S267K變異體。骨架11與骨架1相同，區別在於其包括M428L/N434S Xtend突變。骨架12係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個相同鏈上之C220S，兩個相同鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。骨架13係基於人類IgG1 (356E/358M同種異型物)，且包括兩個鏈上之C220S，S364K/E357Q : L368D/K370S偏態變異體，在具有S364K/E357Q偏態變異體之鏈上之P217R/P229R/N276K pI變異體及兩個鏈上之E233P/L234V/L235A/G236del/S267K消除變異體。
[0069] 如熟習此項技術者所理解及下文所概述，此等序列可與本文概述之任何IL-15及IL-15Rα(sushi)對一起使用，包括但不限於如圖9A-9G及圖39中示意性描繪之IL-15/Rα-異Fc、ncIL-15/Rα、scIL-15/Rα及dsIL-15/Rα。另外，任何IL-15及/或IL-15Rα(sushi)變異體均可以任何組合併入此等圖8A-8D骨架中。
[0070] 在此等骨架中之每一者中包括與所述序列具有90%、95%、98%及99%同一性(如本文所定義)及/或含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個額外胺基酸取代之序列(與圖中之「親本」相比，如熟習此項技術者所理解，其與親本人類IgG1 (或IgG2或IgG4，取決於骨架)相比已含有許多胺基酸修飾)。亦即，除該圖之骨架內所含的偏態、pI及消除變異體之外，所述骨架亦可含有額外胺基酸修飾(通常為胺基酸取代)。
[0071] 圖9A-圖9G描繪本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白之若干形式。IL-15Rα異二聚體Fc融合體或「IL-15/Rα-異Fc」(圖9A)包含與異二聚體Fc之一側重組融合之IL-15及與異二聚體Fc之另一側重組融合之IL-15Rα(sushi)。該IL-15及IL-15Rα(sushi)可具有在Fc區之C端與N端之間的可變長度Gly-Ser連接子。單鏈IL-15/Rα-Fc融合體或「scIL-15/Rα-Fc」(圖9B)包含藉由可變長度連接子與IL-15融合之IL-15Rα(sushi)(稱為「單鏈」IL-15/IL-15Rα(sushi)複合物或「scIL-15/Rα」)，其然後與異二聚體Fc區之N端融合，該分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。非共價IL-15/Rα-Fc或「ncIL-15/Rα-Fc」(圖9C)包含與異二聚體Fc區融合之IL-15Rα(sushi)，而IL-15獨立轉染以使得形成非共價IL-15/Rα複合物，該分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。二價非共價IL-15/Rα-Fc融合體或「二價ncIL-15/Rα-Fc」(圖9D)包含與同二聚體Fc區之N端融合之IL-15Rα(sushi)，而IL-15獨立轉染以使得形成非共價IL-15/Rα複合物。二價單鏈IL-15/Rα-Fc融合體或「二價scIL-15/Rα-Fc」(圖9E)包含藉由可變長度連接子與IL-15Rα(sushi)融合之IL-15(稱為「單鏈」IL-15/IL-15Rα(sushi)複合物或「scIL-15/Rα」)，其然後與同二聚體Fc區之N端融合。Fc-非共價IL-15/Rα融合體或「Fc-ncIL-15/Rα」(圖9F)包含與異二聚體Fc區之C端融合之IL-15Rα(sushi)，而IL-15獨立轉染以使得形成非共價IL-15/Rα複合物，該分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。Fc-單鏈IL-15/Rα融合體或「Fc-scIL-15/Rα」(圖9G)包含藉由可變長度連接子與IL-15Rα(sushi)融合之IL-15 (稱為「單鏈」IL-15/IL-15Rα(sushi)複合物或「scIL-15/Rα」)，其然後與異二聚體Fc區之C端融合，該分子之另一側為「僅Fc」或「空Fc」。
[0072] 圖10描繪「IL-15/Rα-異Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP20818及XENP21475之序列，其中額外序列XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21476、XENP21477分別列於WO2018071919中之圖104A-104D中，且分別為SEQ ID NO: 418-423、424-429、430-435、436-441、442-447、454-459及460-465。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0073] 圖11描繪「scIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP21478之序列，其中額外序列XENP21993、XENP21994、XENP21995、XENP23174、XENP23175、XENP24477及XENP24480分別列於WO2018071919中之圖104G、104H、104AG、104AU及104AV中，且分別為SEQ ID NO: 514-518、519-523、524-528、849-853、1063-1067及1078-1082。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0074] 圖12A-圖12B描繪「ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP21479、XENP22366及XENP24348之序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0075] 圖13描繪「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP21978之序列，其中額外序列XENP21979列於WO2018071919中之圖104E中且為SEQ ID NO: 480-483。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0076] 圖14描繪「二價scIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白之序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0077] 圖15描繪「Fc-ncIL-15/Rα」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22637之序列，其中額外序列XENP22638列於WO2018071919中之圖104T中且為SEQ ID NO: 668-672。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0078] 圖16描繪「Fc-scIL-15/Rα」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白之序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[0079] 圖17A-圖17E提供說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式XENP20818之資料。圖17A描繪XENP20818之IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式。圖17B描繪如藉由SEC所測定之XENP20818之純度及均質性。圖17C描繪如藉由CEF所測定之XENP20818之純度及均質性。圖17D描繪如藉由Octet所測定之XENP20818對IL-2Rβ之親和力。圖17E描繪如藉由DSF所測定之XENP20818之穩定性。
[0080] 圖18A-圖18E提供說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式XENP21478之資料。圖18A描繪XENP21478之IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式。圖18B描繪如藉由SEC所測定之XENP21478之純度及均質性。圖18C描繪如藉由CEF所測定之XENP21478之純度及均質性。圖18D描繪如藉由Octet所測定之XENP21478對IL-2Rβ之親和力。圖18E描繪如藉由DSF所測定之XENP21478之穩定性。
[0081] 圖19A-圖19E提供說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式XENP21479之資料。圖19A描繪XENP21479之IL-15/Rα-Fc融合蛋白形式。圖19B描繪如藉由SEC所測定之XENP21479之純度及均質性。圖19C描繪如藉由CEF所測定之XENP21479之純度及均質性。圖19D描繪如藉由Octet所測定之XENP21479對IL-2Rβ之親和力。圖19E描繪如藉由DSF所測定之XENP21479之穩定性。
[0082] 圖20A-圖20C描繪具有不同連接子長度之IL-15/Rα-異Fc形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白對NK (CD56+
/CD16+
)細胞(圖20A)、CD4+
T細胞(圖20B)及CD8+
T細胞(圖20C)增殖之誘導，其基於如藉由FACS所量測之Ki67表現。
[0083] 圖21A-圖21C描繪scIL-15/Rα-Fc形式(XENP21478)及ncIL-15/Rα-Fc形式(XENP21479)之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白對NK (CD56+
/CD16+
)細胞(圖21A)、CD4+
T細胞(圖21B)及CD8+
T細胞(圖21C)增殖之誘導，其基於如藉由FACS所量測之Ki67表現。
[0084] 圖22描繪在SEB刺激之PBMC檢定中，藉由說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白、同種型對照及二價抗PD-1抗體相比於PBS對照增強IL-2分泌。
[0085] 圖23描繪在用XENP20818及重組IL-15處理後PBMC植入NSG小鼠之存活曲線。
[0086] 圖24描繪在植入人類PBMC且用指定濃度之XENP20818處理後第7天NSG小鼠血清中之IFNγ濃度。
[0087] 圖25A-25C描繪在用指定濃度之XENP20818處理後7天人類PBMC植入NSG小鼠之全血中的CD4+
T細胞(圖25A)、CD8+
T細胞(圖25B)及CD45+
細胞(圖25C)計數。
[0088] 圖26描繪IL-15/Rα異二聚體之結構模型，其顯示工程化二硫鍵對之位置。
[0089] 圖27描繪經工程化在C端具有額外殘基以充當工程半胱胺酸殘基骨架之說明性IL-15Rα(sushi)變異體的序列。
[0090] 圖28描繪經工程化具有半胱胺酸以與經工程化具有半胱胺酸之IL-15Rα(sushi)變異體形成共價二硫鍵之說明性IL-15變異體的序列。
[0091] 圖29描繪經工程化具有半胱胺酸以與經工程化具有半胱胺酸之IL-15變異體形成共價二硫鍵之說明性IL-15Rα(sushi)變異體的序列。
[0092] 圖30A-圖30C描繪在IL-15與IL-15Rα(sushi)之間具有及不具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα異二聚體。非共價IL-15/Rα異二聚體或「ncIL-15/Rα異二聚體」(圖30A)包含獨立轉染且非共價連接之IL-15Rα(sushi)及IL-15。二硫鍵鍵合之IL-15/Rα異二聚體或「dsIL-15/Rα異二聚體」(圖30B)包含獨立轉染且由於工程化半胱胺酸而共價連接之IL-15Rα(sushi)及IL-15。單鏈IL-15/Rα異二聚體或「scIL-15/Rα異二聚體」(圖30C)包含藉由可變長度Gly-Ser連接子與IL-15融合之IL-15Rα(sushi)。
[0093] 圖31描繪說明性ncIL-15/Rα異二聚體XENP21996之序列。重要的是應注意，此等序列係在IL-15Rα(sushi)之C端使用聚組胺酸(Hisx6或HHHHHH (SEQ ID NO:XX)) C端標籤而產生。
[0094] 圖32描繪說明性dsIL-15/Rα異二聚體XENP22004、XENP22005、XENP22006、XENP22008及XENP22494之序列，額外序列XENP22007、XENP22009、XENP22010、XENP22011、XENP22012及XENP22493分別描繪於WO2018071919中之圖104J、104K及104I中且分別為SEQ ID NO: 543-544、545-546、547-548、551-552、553-554及647-648。重要的是應注意，此等序列係在IL-15Rα(sushi)之C端使用聚組胺酸(Hisx6或HHHHHH) C端標籤而產生。
[0095] 圖33描繪說明性scIL-15/Rα異二聚體XENP22049之序列。重要的是應注意，此等序列係在IL-15之C端使用聚組胺酸(Hisx6或HHHHHH) C端標籤而產生。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα及連接子之間的邊界。
[0096] 圖34描繪如藉由CEF所測定之具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα異二聚體的純度及均質性。
[0097] 圖35描繪如藉由CEF所測定之具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα異二聚體的純度及均質性。
[0098] 圖36描繪如由DSF熔融曲線所示具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα異二聚體的穩定性及熔融溫度。
[0099] 圖37描繪如由DSF熔融曲線所示具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα異二聚體的穩定性及熔融溫度。
[00100] 圖38描繪具有及不具有工程化二硫鍵之IL-15/Rα異二聚體之表現產率、分子量、如藉由MOE軟體計算之IL-15與IL-15Rα(sushi)之間的預測親和力變化、熔融溫度及對IL-2Rβ之親和力。在相關單體後之括弧中指示突變。
[00101] 圖39A-圖39D描繪具有工程化二硫鍵之本發明之IL-15/Rα-Fc融合蛋白的額外形式。二硫鍵鍵合之IL-15/Rα異二聚體Fc融合體或「dsIL-15/Rα-異Fc」(圖39A)與「IL-15/Rα-異Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。二硫鍵鍵合之IL-15/Rα Fc融合體或「dsIL-15/Rα-Fc」(圖39B)與「ncIL-15/Rα-Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。二價二硫鍵鍵合之IL-15/Rα-Fc或「二價dsIL-15/Rα-Fc」(圖39C)與「二價ncIL-15/Rα-Fc」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。Fc二硫鍵鍵合之IL-15/Rα融合體或「Fc-dsIL-15/Rα」(圖39D)與「Fc-ncIL-15/Rα」相同，但其中IL-15Rα(sushi)及IL-15由於工程化半胱胺酸而進一步共價連接。
[00102] 圖40A-圖40B描繪「dsIL-15/Rα-異Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22013、XENP22014、XENP22015及XENP22017之序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00103] 圖41A-圖41B描繪「dsIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22357、XENP22358、XENP22359、XENP22684及XENP22361的序列。額外序列XENP 22360、22362、22363、22364、22365、22366分別描繪於WO2018/071919中之圖104O、104P、104Q及104R中，且分別為SEQ ID NO:612-616、622-626、627-631、632-636、637-641及642-646，其以引用之方式全部併入本文中。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00104] 圖42描繪「二價dsIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22634、XENP22635及XENP22636的序列。额外序列XENP22687描繪於WO2018/071919中之圖104V中且為SEQ ID NO:685-688，其以引用之方式全部併入本文中。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00105] 圖43描繪「Fc-dsIL-15/Rα」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22639及XENP22640的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00106] 圖44描繪如藉由CEF所測定之具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白的純度及均質性。
[00107] 圖45A-圖45C描繪具有及不具有工程化二硫鍵之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白對NK (CD56+/CD16+)細胞(圖45A)、CD8+
T細胞(圖45B)及CD4+
T細胞(圖45C)增殖的誘導，其基於如藉由FACS所量測之Ki67表現。
[00108] 圖46描繪與IL-15Rα、IL-2Rβ及共用γ鏈複合之IL-15的結構。示出設計用於降低效能之取代位置。
[00109] 圖47A-圖47C描繪經工程化以降低效能之說明性IL-15變異體的序列。此等變異體IL-15序列中之每一者中包括與所述序列具有90%、95%、98%及99%同一性(如本文所定義)及/或含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個額外胺基酸取代之序列。在一個非限制性實例中，所述序列可含有額外胺基酸修飾，諸如對實施例2中所述之共價二硫鍵形成有貢獻者。
[00110] 圖48A-圖48H描繪經工程化以降低效能之「IL-15/Rα-異Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP22816、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22829、XENP22834、XENP23554、XENP23557、XENP23561、XENP24018、XENP24019、XENP24045、XENP24051及XENP24052的序列。额外序列XENP 22815、22817、22818、22823、22824、22825、22826、22827、22828、22830、22831、22832、22833、23555、23559、23560、24017、24020、24043及24048分別描繪於WO2018071919中之圖104Z、104AA、104AC、104AD、104AE、104AF、104AJ、104AK、104AM、104AN及104AO中，且分別為SEQ ID NO: 729-734、741-746、747-752、777-782、783-788、789-794、795-800、801-806、807-812、819-824、825-830、831-836、837-842、887-892、899-904、905-910、937-942、955-960、961-966及979-984。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00111] 圖49A-圖49D描繪經工程化以降低效能之「scIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP24015、XENP24050、XENP24475、XENP24476、XENP24478、XENP24479及XENP24481的序列。额外序列XENP 24013、24014、24016描繪於WO2018071919中之圖104AK及104AL中且為SEQ ID NO: 914-921、922-926及932-936。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00112] 圖50A-圖50B描繪經工程化以降低效能之「ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP24349、XENP24890及XENP25138的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00113] 圖51描繪經工程化以降低效能之說明性ncIL-15/Rα異二聚體XENP22801及XENP22802的序列。额外序列XENP 22791、22792、22793、22794、22795、22796、22803、22804、22805、22806、22807、22808、22809、22810、22811、22812、22813、22814分別描繪於WO2018071919中之圖104V、104W、104X、104Y及104Z中且分別為SEQ ID NO: 689-690、691-692、693-694、695-696、697-698、699-700、705-706、707-708、709-710、711-712、713-714、715-716、717-718、719-720、721-722、723-724、725-726及727-728。重要的是應注意，此等序列係在IL-15Rα(sushi)之C端使用聚組胺酸(Hisx6或HHHHHH) C端標籤而產生。
[00114] 圖52描繪經工程化以降低效能之「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP24342的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00115] 圖53描繪經工程化以降低效能之「dsIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP23472及XENP23473的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00116] 圖54A-圖54C描繪變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白對NK細胞(圖54A)、CD8+
(CD45RA-) T細胞(圖54B)及CD4+
(CD45RA-) T細胞(圖54C)增殖之誘導，其基於如藉由FACS所量測之Ki67表現。
[00117] 圖55描繪由變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白對NK及CD8+
T細胞增殖之誘導的EC50，以及相對於XENP20818之EC50減少倍數。
[00118] 圖56A-圖56C描繪用於圖59A-59D中所描繪之實驗之淋巴細胞及亞群的門控。圖56A顯示門控之淋巴細胞群。圖56B顯示CD3陰性及CD3陽性亞群。圖56C示出CD3陰性細胞之CD16陰性及CD16陽性亞群。
[00119] 圖57A-圖57C描繪用於圖59A-59D中所描繪之實驗之CD3+
淋巴細胞亞群之門控。圖57A顯示CD3+
T細胞之CD4+
、CD8+
及γδ T細胞亞群。圖57B顯示CD4+
T細胞之CD45RA(-)及CD45RA(+)亞群。圖57C顯示CD8+
T細胞之CD45RA(-)及CD45RA(+)亞群。
[00120] 圖58A-圖58B描繪在用XENP22821溫育人類PBMC之前(圖58A)及之後(圖58B)的CD69及CD25表現。
[00121] 圖59A-圖59D描繪用指定變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白溫育四天之人類PBMC中的細胞增殖。圖59A-C顯示增殖NK細胞(CD3-CD16+) (圖59A)、CD8+ T細胞(CD3+CD8+CD45RA-) (圖59B)及CD4+ T細胞(CD3+CD4+CD45RA-) (圖59C)之百分比。圖59D顯示各種IL-15/IL-15Rα Fc異二聚體相對於對照(XENP20818)之EC50變化倍數。
[00122] 圖60A-圖60D描繪用指定變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白溫育三天之人類PBMC中的細胞增殖。圖60A-C顯示增殖CD8+
(CD45RA-) T細胞(圖60A)、CD4+
(CD45RA-) T細胞(圖60B)、γδ T細胞(圖60C)及NK細胞(圖60D)之百分比。
[00123] 圖61A-圖61C描繪用額外IL-15/Rα變異體處理後之CD8+ T細胞(圖61A)、CD4+ T細胞(圖61B)及NK細胞(圖61C)上的Ki67表現百分比。
[00124] 圖62A-圖62E描繪用IL-15/Rα變異體處理後之(圖62A) CD8+ (CD45RA-) T細胞、(圖62B) CD4+ (CD45RA-) T細胞、(圖62C) γδ T細胞、(圖62D) NK (CD16+CD8α-)細胞及(圖62E) NK (CD56+CD8α-)細胞上的Ki67表現百分比。
[00125] 圖63A-圖63E描繪用IL-15/Rα變異體處理後之CD8+
(CD45RA-) T細胞(圖63A)、CD4+
(CD45RA-) T細胞(圖63B)、γδ T細胞(圖63C)、NK (CD16+CD8α-)細胞(圖63D)及NK (CD56+CD8α-)細胞(圖63E)上的Ki67表現百分比。
[00126] 圖64A-圖64D描繪用具有不同連接子長度之經工程化以降低效能之額外IL-15/Rα變異體處理後之(圖64A) CD8+ T細胞、(圖64B) CD4+ T細胞、(圖64C) γδ T細胞及(圖64D) NK (CD16+)細胞上的Ki67表現百分比。
[00127] 圖65A-圖65D描繪用額外IL-15/Rα變異體處理後之(圖65A) CD8+
T細胞、(圖65B) CD4+
T細胞、(圖65C) γδ T細胞及(圖65D) NK (CD16+)細胞上的Ki67表現百分比。
[00128] 圖66A-圖66D描繪用於圖67A-67C中所描繪之實驗之淋巴細胞及其亞群的門控。圖66A顯示淋巴細胞群之門控。圖66B顯示CD4+及CD8+ T細胞。圖66C顯示CD4+ T細胞之CD45RA及CD27表現亞群。圖66D顯示CD8+ T細胞之CD45RA及CD27表現亞群。
[00129] 圖67A-圖67C描繪用指定濃度之指定變異體IL-15/IL-15Rα-Fc融合蛋白將PBMC溫育4天后之CD8+
T細胞(CD45RA-CD27-) (圖67A)及CD4+
T細胞(CD45RA-CD27-) (圖67B)上的STAT5磷酸化。圖67C顯示各種IL-15/IL-15Rα Fc異二聚體相對於對照(XENP20818)的EC50變化倍數。
[00130] 圖68A-圖68B描繪用指定測試物溫育後之小鼠脾細胞中之CD8+
CD45RA-
T細胞(圖68A)及CD4+
CD45RA-
T細胞(圖68B)上的STAT5磷酸化。
[00131] 圖69描繪各種IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照在C57BL/6小鼠中在0.1 mg/kg單次劑量下的IV-TV給藥PK。
[00132] 圖70描繪半衰期相對於NK細胞效能之相關性。
[00133] 圖71描繪對於IL-15/Rα-Fc親和變異體之半衰期相對於小鼠STAT5信號傳導之相關性。
[00134] 圖72描繪在C57BL/6 albino小鼠給藥後8天之測試物血清濃度。
[00135] 圖73描繪在用指定測試物給藥後8天在C57BL/6 albino小鼠脾臟中之CD8+
T細胞計數。
[00136] 圖74顯示CD45+
細胞含量可預測疾病。
[00137] 圖75A-圖75B描繪在第4天(圖75A)及第8天(圖75B)如由CD45+
細胞計數所示之變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白植入的增強。
[00138] 圖76A-圖76C描繪在用指定變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照處理植入有人類PBMC之NSG小鼠後在第4天(圖76A)、第7天(圖76B)及第11天(圖76C)的IFNγ含量。
[00139] 圖77A-圖77C描繪在用指定變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照處理植入有人類PBMC之NSG小鼠後在第4天(圖77A)、第7天(圖77B)及第11天(圖77C)的CD45+
淋巴細胞計數。
[00140] 圖78A-圖78C描繪在用指定IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照處理植入有人類PBMC之NSG小鼠後在第4天(圖78A)、第7天(圖78B)及第11天(圖78C)的NK細胞(CD16+CD56+CD45RA+)計數。
[00141] 圖79A-圖79B描繪在用指定IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照處理植入有人類PBMC之NSG小鼠後在第7天(圖79A)及第11天(圖79B)的CD8+
T細胞(CD8+CD45RA+)計數。
[00142] 圖80A-圖80B描繪在用指定IL-15/Rα-Fc融合蛋白或對照處理植入有人類PBMC之NSG小鼠後在第7天(圖80A)及第11天(圖80B)的CD4+ T細胞(CD4+CD45RA+)計數。
[00143] 圖81描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之血清中第4天、第7天及第11天的IFNγ含量。
[00144] 圖82A-圖82C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中第4天(圖82A)、第7天(圖82B)及第11天(圖82C)的CD8+ T細胞計數。
[00145] 圖83A-圖83C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中第4天(圖83A)、第7天(圖83B)及第11天(圖83C)的CD4+ T細胞計數。
[00146] 圖84A-圖84C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中第4天(圖84A)、第7天(圖84B)及第11天(圖84C)的CD45+細胞計數。
[00147] 圖85A-圖85C描繪在用額外IL-15/Rα變異體處理後第4天(圖85A)、第7天(圖85B)及第11天(圖85C)之huPBMC植入小鼠的體重(作為初始體重之百分比)。每個點代表單個NSG小鼠。對體重降至初始體重70%以下之小鼠實施安樂死。死小鼠佔70%。
[00148] 圖86A-圖86B描繪在用指定測試物溫育後表現Ki67之食蟹猴CD8+
T細胞(圖86A)及食蟹猴NK細胞(圖86B)的百分比。
[00149] 圖87A-圖87E描繪在向食蟹猴給與XENP20818後之淋巴細胞計數。圖87A-E分別顯示CD56+ NK細胞(圖87A)、CD16+ NK細胞(圖87B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖87C)、CD8+ T細胞(圖87D)及CD4+ T細胞(圖87E)之絕對計數的變化倍數。
[00150] 圖88A-圖88E描繪在向食蟹猴給與XENP20818後之CD56+ NK細胞(圖88A)、CD16+ NK細胞(圖88B)、CD8+ T細胞(CD45RA+) (圖88C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖88D)及CD4+ T細胞(CD45RA-) (圖88E)的增殖。
[00151] 圖89A-圖89E描繪在向食蟹猴給與XENP22819後之淋巴細胞計數。圖89A-89E顯示CD56+ NK細胞(圖89A)、CD16+ NK細胞(圖89B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖89C)、CD8+ T細胞(圖89D)及CD4+ T細胞(圖89E)之絕對計數的變化倍數。
[00152] 圖90A-圖90E描繪在向食蟹猴給與XENP22819後之CD56+ NK細胞(圖90A)、CD16+ NK細胞(圖90B)、CD8+ T細胞(CD45RA+) (圖90C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖90D)及CD4+ T細胞(CD45RA-) (圖90E)的增殖。
[00153] 圖91A-圖91E描繪在向食蟹猴給與XENP22821後之淋巴細胞計數。圖91A-91E顯示CD56+ NK細胞(圖91A)、CD16+ NK細胞(圖91B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖91C)、CD8+ T細胞(圖91D)及CD4+ T細胞(圖91E)之絕對計數的變化倍數。
[00154] 圖92A-圖92E描繪在向食蟹猴給與XENP22821後之CD56+ NK細胞(圖92A)、CD16+ NK細胞(圖92B)、CD8+ T細胞(CD45RA+) (圖92C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖92D)及CD4+ T細胞(CD45RA-) (圖92E)的增殖。
[00155] 圖93A-圖93E描繪在向食蟹猴給與XENP22822後之淋巴細胞計數。圖93A-E分別顯示CD56+ NK細胞(圖93A)、CD16+ NK細胞(圖93B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖93C)、CD8+ T細胞(圖93D)及CD4+ T細胞(圖93E)之絕對計數的變化倍數。
[00156] 圖94A-圖94E描繪在向食蟹猴給與XENP22822後之CD56+ NK細胞(圖94A)、CD16+ NK細胞(圖94B)、CD8+
T細胞(CD45RA+) (圖94C)、CD8+
T細胞(CD45RA-) (圖94D)及CD4+
T細胞(CD45RA-) (圖94E)的增殖。
[00157] 圖95A-圖95E描繪在向食蟹猴給與XENP22834後之淋巴細胞計數。圖95A-E分別顯示CD56+ NK細胞(圖95A)、CD16+ NK細胞(圖95B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖95C)、CD8+ T細胞(圖95D)及CD4+ T細胞(圖95E)之絕對計數的變化倍數。
[00158] 圖96A-圖96E描繪在向食蟹猴給與XENP22834後之CD56+ NK細胞(圖96A)、CD16+ NK細胞(圖96B)、CD8+ T細胞(CD45RA+) (圖96C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖96D)及CD4+ T細胞(CD45RA-) (圖96E)的增殖。
[00159] 圖97A-圖97E描繪在向食蟹猴給與XENP23343後之淋巴細胞計數。圖97A-E分別顯示CD56+
NK細胞(圖97A)、CD16+
NK細胞(圖97B)、γδ T細胞(CD45RA+CD3+CD4-CD8-) (圖97C)、CD8+
T細胞(圖97D)及CD4+
T細胞(圖97E)之絕對計數的變化倍數。
[00160] 圖98A-圖98E描繪在向食蟹猴給與XENP23343後之CD56+ NK細胞(圖98A)、CD16+ NK細胞(圖98B)、CD8+ T細胞(CD45RA+) (圖98C)、CD8+ T細胞(CD45RA-) (圖98D)及CD4+ T細胞(CD45RA-) (圖98E)的增殖。
[00161] 圖99A-圖99C描繪具有M428L/N434S取代之「IL-15/Rα-異Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP23343、XENP23504、XENP24113、XENP24301、XENP24306及XENP24341的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00162] 圖100描繪具有M428L/N434S取代之「scIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP25938 (亦稱為XENP24294)的序列。
[00163] 圖101描繪具有M428L/N434S取代之「ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP24383的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00164] 圖102描繪具有M428L/N434S取代之「二價ncIL-15/Rα-Fc」形式之說明性IL-15/Rα-Fc融合蛋白XENP24346及XENP24351的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於圖7中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及Fc區之間的邊界。
[00165] 圖103A-圖103C描繪在用具有M428L/N434S Fc突變之IL-15/Rα變異體處理後人類CD8+
T細胞(圖103A)、人類CD4+
T細胞(圖103B)及人類NK細胞(圖103C)上之Ki67表現的百分比。
[00166] 圖104A-圖104D描繪在用XmAb24306 (亦稱為XENP24306)處理後人類CD8+
T細胞(圖104A)、人類CD4+
T細胞(圖104B)、人類NK細胞(圖104C)及人類γδ T細胞(圖104D)上之Ki67表現的百分比。
[00167] 圖105A-圖105C描繪在用WT IL-15/Rα-Fc及具有M428L/N434S Fc突變之效能降低IL-15/Rα變異體處理後食蟹猴CD8+
T細胞(圖105A)、食蟹猴CD4+
T細胞(圖105B)及食蟹猴NK細胞(圖105C)上之Ki67表現的百分比。
[00168] 圖106描繪在用XENP20818或XmAb24306處理後食蟹猴CD8α+
CD45RA-
T細胞上之Ki67表現的百分比。
[00169] 圖107A-圖107C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中第4天(圖107A)及第7天(圖107B)的CD4+ T細胞計數及脾臟中第8天(圖107C)的CD4+ T細胞計數。
[00170] 圖108A-圖108C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中(圖108A)第4天及(圖108B)第7天的CD8+
T細胞計數及脾臟中(圖108C)第8天的CD8+
T細胞計數。
[00171] 圖109A-圖109C描繪在用額外變異體IL-15/Rα-Fc融合蛋白處理後huPBMC植入小鼠之全血中第4天(圖109A)及第7天(圖109B)的CD8+ T細胞計數及脾臟中第8天(圖109C)的CD8+ T細胞計數。
[00172] 圖110A-圖110F描繪在用額外IL-15/Rα變異體處理後huPBMC植入小鼠在第-2天(圖110A)、第1天(圖110B)、第5天(圖110C)、第8天(圖110D)及第11天(圖110E)的體重(作為初始體重之百分比)。每個點代表單個NSG小鼠。圖110F描繪在用IL-15/Rα變異體處理後huPBMC植入小鼠中之體重時程。
[00173] 圖111A-圖111D描繪在用指定測試物溫育後表現Ki67之CD8+CD45RA- T細胞(圖111A)、CD4+CD45RA- T細胞(圖111B)、γδ T細胞(圖111C)及CD16+ NK細胞(圖111D)之百分比。
[00174] 圖112A-圖112D描繪用IL-15/Rα變異體處理後食蟹猴中之CD8+ T細胞(圖112A)、CD4+ T細胞(圖112B)、NK細胞(圖112C)及γδ T細胞(圖112D)計數。
[00175] 圖113A-113H描繪指定測試物在食蟹猴中之血清濃度隨時間的變化及半衰期。
[00176] 圖114A-圖114F描繪在新鮮及活化PBMC中AF647標記測試物(WT IL-15/Rα-Fc及具有Xtend且不具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體)與CD8+CD45RA- T細胞(圖114A)、CD8+CD45RA+ T細胞(圖114B)、CD4+CD45RA- T細胞(圖114C)、CD4+CD45RA+ T細胞(圖114D)、CD16+ NK細胞(圖114E)及γδ T細胞(圖114F)的結合。
[00177] 圖115A-圖115F描繪在新鮮及活化PBMC中AF647標記測試物(WT IL-15/Rα-Fc及具有Xtend且具有結構域連接子之IL-15/Rα-Fc親和變異體)與(圖115A) CD8+
CD45RA-
T細胞、(圖115B) CD8+
CD45RA+
T細胞、(圖115C) CD4+
CD45RA-
T細胞、(圖115D) CD4+
CD45RA+
T細胞、(圖115E) CD16+
NK細胞及(圖115F) γδ T細胞的結合。
[00178] 圖116A-圖116F描繪在新鮮及活化PBMC中AF647標記測試物(WT IL-15/Rα-Fc及具有Xtend變異體諸如FcRn變異體之其他形式之IL-15/Rα-Fc融合蛋白)與(圖116A) CD8+
CD45RA-
T細胞、(圖116B) CD8+
CD45RA+
T細胞、(圖116C) CD4+
CD45RA-
T細胞、(圖116D) CD4+
CD45RA+
T細胞、(圖116E) CD16+
NK細胞及(圖116F) γδ T細胞的結合。
[00179] 圖117描繪在活化PBMC中AF647標記測試物(包括XENP24341及XENP24113)與CD8+
CD45RA-
T細胞的結合。
[00180] 圖118A-圖118B描繪(圖118A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖118B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD8+
T細胞上的CD25表現。
[00181] 圖119A-圖119B描繪(圖119A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖119B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD4+
T細胞上的CD25表現。
[00182] 圖120A-圖120B描繪(圖120A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖120B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD8+
T細胞上的CD69表現。
[00183] 圖121A-圖121B描繪(圖121A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖121B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD4+
T細胞上的CD69表現。
[00184] 圖122A-圖122B描繪(圖122A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖122B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD8+
T細胞中的細胞內IFNγ表現。
[00185] 圖123A-圖123B描繪(圖123A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖123B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中之CD4+
T細胞中的細胞內IFNγ表現。
[00186] 圖124A-圖124C描繪第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD8+
T細胞之(圖124A) Ki-67+
/IFNγ-
、(圖124B) Ki-67+
/IFNγ+
及(圖124C) Ki-67-
/IFNγ+
分數的百分比。
[00187] 圖125A-圖125C描繪第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD4+
T細胞之(圖125A) Ki-67+
/IFNγ-
、(圖125B) Ki-67+
/IFNγ+
及(圖125C) Ki-67-
/IFNγ+
分數的百分比。
[00188] 圖126A-圖126C描繪第1組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD8+
T細胞之(圖126A) Ki-67+
/IFNγ-
、(圖126B) Ki-67+
/IFNγ+
及(圖126C) Ki-67-
/IFNγ+
分數的百分比。
[00189] 圖127A-圖127C描繪第1組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD4+
T細胞之(圖127A) Ki-67+
/IFNγ-
、(圖127B) Ki-67+
/IFNγ+
及(圖127C) Ki-67-
/IFNγ+
分數的百分比。
[00190] 圖128A-圖128B描繪(圖128A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖128B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD8+
T細胞上之CD107a表現。
[00191] 圖129A-圖129B描繪(圖129A)第1組(用親本MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)及(圖129B)第2組(用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育之純化T細胞)中CD4+
T細胞上之CD107a表現。
[00192] 圖130A-圖130B描繪在用純化T細胞及指定測試物溫育後之剩餘靶細胞[圖130A：親本MCF-7腫瘤細胞；圖130B：表現pp65之MCF-7腫瘤細胞]。
[00193] 圖131A-圖131B描繪在用純化T細胞及指定測試物溫育後之死細胞[圖131A：親本MCF-7腫瘤細胞；圖131B：表現pp65之MCF-7腫瘤細胞]的數目。
[00194] 圖132描繪在存在或不存在抗HLA-A抗體下用親本MCF-7腫瘤細胞或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞溫育純化T細胞後CD8+
T細胞之Ki-67+
/IFNγ+
分數的百分比。
[00195] 圖133描繪在存在或不存在抗HLA-A抗體下用親本MCF-7腫瘤細胞或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞溫育純化T細胞後之靶細胞(亦即親本MCF-7腫瘤細胞或表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)的數目。
[00196] 圖134A-圖134B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖134A) CD8+
T細胞及(圖134B) CD4+
T細胞上的CD25表現。
[00197] 圖135A-圖135B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖135A) CD8+
T細胞及(圖135B) CD4+
T細胞上的CD69表現。
[00198] 圖136A-圖136B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖136A) CD8+
T細胞及(圖136B) CD4+
T細胞上的Ki67表現。
[00199] 圖137A-圖137B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖137A) CD8+
T細胞及(圖137B) CD4+
T細胞之Ki-67+
/IFNγ+
分數的百分比。
[00200] 圖138A-圖138B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖138A) CD8+
T細胞及(圖138B) CD4+
T細胞之CD69+
/IFNγ+
分數的百分比。
[00201] 圖139A-圖139B描繪在用表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及指定測試物溫育純化T細胞後(圖139A) CD8+ T細胞及(圖139B) CD4+ T細胞之CD69+/Ki67+分數的百分比。
[00202] 圖140描繪在用純化T細胞及指定測試物溫育後之剩餘靶細胞(表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)。
[00203] 圖141描繪在用純化T細胞及指定測試物溫育後之死細胞 (表現pp65之MCF-7腫瘤細胞)的數目。
[00204] 圖142A-圖142B描繪在用XmAb24306之非Xtend類似物XENP24045處理後植入有表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及pp65反應性人類PBMC之小鼠中的平均腫瘤體積(圖142A)及腫瘤體積變化(圖142B)。
[00205] 圖143A-圖143D描繪在用XmAb24306之非Xtend類似物XENP24045處理後植入有表現pp65之MCF-7腫瘤細胞及pp65反應性人類PBMC之小鼠全血中的CD45+
細胞(圖143A)、CD4+
細胞(圖143B)、CD8+
細胞(圖143C)及NK細胞(圖143D)計數。
[00206] 圖144描繪各種濃度之各種測試物在食蟹猴中之血清濃度隨時間的變化及半衰期。
[00207] 圖145描繪1X及3X劑量之XENP22821在食蟹猴中的Cmax正規化血清濃度隨時間的變化。
[00208] 圖146A-圖146E描繪在給與指定測試物後食蟹猴中之CD8+
T細胞(圖146A)、CD4+
T細胞(圖146B)、CD16+
NK細胞(圖146C)、CD56+
NK細胞(圖146D)及γδ T細胞(圖146E)計數的平均變化倍數。
[00209] 圖147A-圖147B描繪在給與3X劑量或0.6X劑量之XENP24306後食蟹猴全血中之CD8+
T細胞(圖147A)及γδ T細胞(圖147B)隨時間的變化倍數。
[00210] 圖148描繪在給與0.3X劑量XENP22821及0.6X劑量XENP24306後表現Ki67之食蟹猴淋巴結中之CD8α+
CD45RA+
T細胞的百分比。
[00211] 圖149描繪在給與0.3X劑量XENP22821及0.6X劑量XENP24306後表現Ki67之食蟹猴全血中之CD8α+
CD45RA+
T細胞的百分比(左軸)及細胞計數變化倍數(右軸)。
[00212] 圖150描繪在給與0.3X劑量XENP22821後表現Ki67之食蟹猴PBMC中之各種淋巴細胞群的百分比。
[00213] 圖151描繪在給與0.6X劑量XmAb24306後表現Ki67之食蟹猴PBMC中之各種淋巴細胞群的百分比。
[00214] 圖152描繪在給與0.6X劑量XmAb24306後表現Ki67之食蟹猴全血中之CD8α+CD45RA+ T細胞百分比及XmAb24306之血清濃度隨時間變化的覆蓋圖。
[00215] 圖153描繪在給與0.6X劑量XmAb24306後食蟹猴全血中之CD8+
T細胞、CD4+
T細胞、CD56+
CD8α+
NK細胞及γδ T細胞隨時間的計數變化倍數。
[00216] 圖154描繪在給與0.6X劑量XmAb24306後食蟹猴全血中之CD8+
T細胞及Treg隨時間的計數變化倍數。
[00217] 圖155A-圖155C描繪在給與XENP20818或XmAb24306後食蟹猴全血中之CD8+
T細胞(圖155A)、CD4+
T細胞(圖155B)及CD16+
NK細胞(圖155C)計數隨時間變化的覆蓋圖。
[00218] 圖156A-圖156C描繪在用EC50
濃度之XENP20818或XmAb24306處理24小時後之(圖156A)全PBMC、(圖156B)純化NK細胞及(圖156C)純化CD8+
T細胞中的免疫相關基因表現相比於未處理物的變化倍數。
[00219] 圖157A-圖157C描繪在用EC50
濃度之XENP20818或XmAb24306處理48小時後之(圖157A)全PBMC、(圖157B)純化NK細胞及(圖157C)純化CD8+
T細胞中的基因表現相比於未處理物的變化倍數。
[00220] 圖158A-圖158B描繪在用EC50濃度之(圖158A) XmAb24306或IL-15及(圖158B) XmAb24306或IL-2處理48小時後之全PBMC中的基因表現相比於未處理物的變化倍數。
[00221] 圖159A-圖159B描繪在XmAb24306及各種濃度之雷帕黴素擴增Treg存在下(圖159A) CD8+及(圖159B) CD4+應答T細胞的增殖。
[00222] 圖160描繪具有消除變異體(E233P/L234V/L235A/G236del/S267K，「IgG1_PVA_/S267k」)之二價抗PD-1 mAb XENP16432的序列。CDR加有底線。如本文所述且對於本文中包含CDR之每個序列均是如此，CDR位置之確切鑒定可能略有不同，這取決於如表1中所示使用之編號，因此本文不僅包括加底線之CDR，而且包括使用其他編號系統在VH及VL結構域中包括之CDR。另外，各CDR在序列表中具有其自身SEQ ID NO:或序列識別符，且每個VH及VL結構域在序列表中具有其自身SEQ ID NO:或序列識別符。
[00223] 圖161A-圖161B描繪在指定測試物第一次給藥後(圖161A)第6天及(圖161B)第10天小鼠全血中之CD8+
T細胞。
[00224] 圖162A-圖162B描繪在指定測試物第一次給藥後(圖162A)第6天及(圖162B)第10天小鼠全血中之CD4+
T細胞。
[00225] 圖163A-圖163B描繪在指定測試物第一次給藥後(圖163A)第6天及(圖163B)第10天小鼠全血中之CD45+
T細胞。
[00226] 圖164A-圖164B描繪在指定測試物第一次給藥後(圖164A)第6天及(圖164B)第10天小鼠全血中之NK細胞。
[00227] 圖165描繪在指定測試物第一次給藥後第7天NSG小鼠血清中之IFNγ。
[00228] 圖166A-圖166D描繪在指定測試物第一次給藥後第7天(圖166A)、第11天(圖166B)、第14天(圖166C)及第18天(圖166D)之小鼠體重。
[00229] 圖167描繪在用XENP20818溫育後表現Ki67之指定淋巴細胞群之百分比。
[00230] 圖168描繪在用XENP20818、XENP22821、XENP24050及XENP24306溫育後CD8+
CD45RA+
T細胞上之STAT5磷酸化。
[00231] 圖169描繪在用XENP20818、XENP22819、XENP22821及XENP22834溫育後CD8+
CD45RA+
T細胞上之STAT5磷酸化。
[00232] 圖170描繪在用相應EC50之XENP20818或XENP24306溫育後表現Ki67之CD8+
CD45RA-
T細胞隨時間的百分比。
[00233] 圖171描繪在用相應EC50之XENP20818或XENP24306溫育後CD8+
CD45RA-
T細胞上之BCL2表現隨時間的變化。
[00234] 圖172描繪在用相應EC50之XENP20818或XENP24306溫育後CD8+
CD45RA-
T細胞上之CD25表現隨時間的變化。
[00235] 圖173描繪在用XENP24045或XENP20818溫育後新鮮人類PBMC相對於刺激人類PBMC中之CD8+
T細胞上的STAT5磷酸化。
[00236] 圖174描繪在用指定劑量之XENP24306及指定劑量之板結合抗CD3 (OKT3)溫育人類PBMC後的增殖CD8+
CD45RA-
百分比(如藉由CFSE稀釋所測定)。
[00237] 圖175描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第10天huPBMC植入NSG小鼠中之血清IFNγ濃度。
[00238] 圖176描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第17天huPBMC植入NSG小鼠中之血液中的CD45+
細胞計數。
[00239] 圖177描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第25天huPBMC植入NSG小鼠的體重(作為初始體重之百分比)。
[00240] 圖178描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第7天huPBMC植入NSG小鼠中之血清IFNγ濃度。
[00241] 圖179A、圖179B、圖179C及圖179D描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第10天huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+
細胞、B) CD3+
T細胞、C) CD4+
T細胞、D) CD8+
T細胞計數。
[00242] 圖180描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第11天huPBMC植入NSG小鼠的體重(作為初始體重之百分比)。
[00243] 圖181描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後huPBMC植入NSG小鼠之體重(作為初始體重之百分比)的時程。
[00244] 圖182描繪用XENP16432及/或XENP24045給藥之pp65-MCF7及huPBMC植入NSG小鼠中第21天之CD45+
細胞計數。
[00245] 圖183描繪用XENP16432及/或XENP24045給藥之pp65-MCF7及huPBMC植入NSG小鼠中第31天之腫瘤體積。
[00246] 圖184描繪用XENP16432及/或XENP24045給藥之pp65-MCF7及huPBMC (1.5×106
)植入NSG小鼠中之腫瘤體積隨時間的變化(huPBMC植入後)。
[00247] 圖185描繪用XENP16432及/或XENP24045給藥之pp65-MCF7及huPBMC (5×106
)植入NSG小鼠中之腫瘤體積隨時間的變化(huPBMC植入後)。
[00248] 圖186描繪包含野生型IL-15之scIL-15/Rα-Fc融合體XENP21993的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於附圖中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及恒定/Fc區之間的邊界。
[00249] 圖187描繪包含野生型IL-15及Xtend Fc (M428L/N434S)變異體之IL-15/Rα-異Fc融合體XENP22853的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於附圖中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及恒定/Fc區之間的邊界。
[00250] 圖188描繪包含IL-15(N4D/N65D)變異體及Xtend Fc (M428L/N434S)取代之scIL-15/Rα-Fc融合體XENP24294的序列。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於附圖中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及恒定/Fc區之間的邊界。
[00251] 圖189描繪在指定相對濃度之第一次給藥後食蟹猴中之指定測試物隨時間的血清濃度。
[00252] 圖190描繪XENP22853及相應WT非Xtend XENP20818隨時間之相對血清濃度。
[00253] 圖191描繪經工程化以降低效能且包含D30N取代之說明性IL-15變異體的序列。此等變異體IL-15序列中之每一者中包括與所述序列具有90%、95%、98%及99%同一性(如本文所定義)及/或含有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個額外胺基酸取代之序列。在一個非限制性實例中，所述序列可含有額外胺基酸修飾，諸如如實施例2中所述有助於形成共價二硫鍵者。
[00254] 圖192A-圖192C描繪具有包含D30N取代之IL-15變異體之說明性scIL-15/Rα-Fc融合體。IL-15及IL-15Rα(sushi)加有底線，連接子加有雙重底線(儘管如熟習此項技術者所理解，該等連接子可由其他連接子替代，其中一些描繪於附圖中)，且斜線(/)指示IL-15、IL-15Rα、連接子及恒定/Fc區之間的邊界。
[00255] 圖193A、圖193B、圖193C、圖193D、圖193E、圖193F及圖193G描繪在用指定測試物溫育後表現Ki67之A) CD4+CD45RA-、B) CD4+CD45RA+、C) CD8+CD45RA-、D) CD8+CD45RA+、E) CD16+ NK細胞、F) CD56+ NK細胞及G) γδ細胞的百分比。
[00256] 圖194A、圖194B、圖194C、圖194D及圖194E顯示機械PK/RO/TMDD模型描繪如實施例18中所討論之相對PD效應。值得注意的是，所預測之RO-AUC值與用實驗確定之PD-AUC (藥效學AUC)非常相關，表明RO-AUC為優化目標值，允許預測最佳Kd值。
[00257] 圖195顯示說明受體介導之內化為影響各種IL-15之PK/PD關係之關鍵因素之假設的示意圖。k增殖
表示增殖速率。k死亡 CTL
表示細胞死亡速率。Kd
表示解離常數。k消除
表示消除速率。k輸注
表示輸注至中樞血液中之速率。k合成
表示IL-15受體之合成速率。k降解
表示IL-15受體之降解速率。
[00258] 圖196描繪基於圖195中描繪之模型輸入模擬中之多種食蟹猴研究之PK資料覆蓋圖。
[00259] 圖197描繪基於圖1所描繪之模型之KD估計值與用實驗量測之結合EC50值線性相關。
[00260] 圖198描繪基於圖195中所描繪之模型之模擬PK曲線、受體佔用率(RO)曲線及藥效曲線。該模型表明，效能降低延長了暴露，且存在最大藥效(亦即T細胞擴增)之最佳KD。
[00261] 圖199A-圖199F描繪A) RO-AUC預測值與用實驗確定之PD-AUC (藥效學AUC)，B) RO-AUC預測值與用實驗確定之PD-Max (CD8+ T細胞計數峰值)，C) RO-AUC預測值與用實驗確定之ALB-min (最低血清白蛋白濃度)，D) RO-Max (最大受體佔用率)預測值與用實驗確定之PD-AUC，E) RO-Max預測值與用實驗確定之PD-Max以及F) RO-Max預測值與用實驗確定之ALB-Min之間的相關性。值得注意的是，RO-AUC預測值與用實驗確定之PD-AUC及PD-max非常相關，而RO-Max預測值與用實驗確定之ALB-Min非常相關。
[00262] 圖200描繪對於Xtend或非Xtend形式之IL-15/Rα-異Fc融合體之多種KD
值進行模擬掃描(基於圖195中描繪之模型)，揭示預測之最佳KD
為約200 nM，類似於XmAb24306之估計KD
值。
[00263] 圖201A及圖201B描繪用XENP16432及/或XENP24045給藥之pp65-MCF7及huPBMC植入NSG小鼠中的A)人類CD8+ T細胞計數及B)人類CD8+ T細胞上之CD25表現。***表示p ≤ 0.001，且**表示p ≤ 0.01，如藉由非配對t檢驗所確定。發現用XENP24045與抗PD-1 mAb之組合處理在後期顯著增強CD8+ T細胞擴增，且誘導CD8+ T細胞之早期活化。
[00264] 圖202A-圖202C描繪在用0.3X劑量XENP20818、0.3X劑量XmAb24306及0.6X劑量XmAb24306給藥後食蟹猴中之A) CD8+ T細胞、B) CD16+ NK細胞及C)淋巴細胞的擴增。資料顯示藉由降低效能之XmAb24306賦予增強之藥效學。
[00265] 圖203描繪在用0.3X劑量XENP20818、0.3X劑量XmAb24306及0.6X劑量XmAb24306給藥後食蟹猴中之血清白蛋白(作為血管滲漏之指標)的變化百分比。資料顯示藉由降低效能之XmAb24306賦予增強之耐受性(如白蛋白下降之減少所示)。
[00266] 圖204A-圖204F描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第7天huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+
細胞、B) CD3+
T細胞、C) CD4+
T細胞、D) CD8+
T細胞、E) CD16+
CD56+
NK細胞計數及F) CD4/CD8比率。
[00267] 圖205A-圖205F描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第14天huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+細胞、B) CD3+ T細胞、C) CD4+ T細胞、D) CD8+ T細胞、E) CD16+CD56+ NK細胞計數及F) CD4/CD8比率。資料顯示直至第14天，使用0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著增強CD3+ T細胞擴增，超過單獨使用3 mg/kg XENP16432處理(使用非配對t檢驗對於對數轉換資料進行統計)。
[00268] 圖206A-圖206F描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第21天huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+細胞、B) CD3+ T細胞、C) CD4+ T細胞、D) CD8+ T細胞、E) CD16+CD56+ NK細胞計數及F) CD4/CD8比率。
[00269] 圖207A-207I描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後A)第3天、B)第6天、C)第10天、D)第13天、E)第17天、F)第20天、G)第25天、H)第28天及I)第29天huPBMC植入NSG小鼠之體重變化(作為GVHD之指標)。資料顯示直至第10天，使用0.3 mg/kg、0.1 mg/kg或0.01 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理顯著增強GVHD，超過單獨使用3 mg/kg XENP16432處理(使用非配對t檢驗進行統計)。
[00270] 圖208描繪在用指定濃度之指定測試物給藥後huPBMC植入NSG小鼠隨時間之體重變化(作為GVHD之指標)。
[00271] 圖209A-圖209C描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後A)第7天、B)第14天及C)第21天huPBMC植入NSG小鼠中之血清IFNγ濃度。
[00272] 圖210A-圖201F描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第14天pp65-MCF-7及huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+細胞、B) CD3+ T細胞、C) CD4+ T細胞、D) CD8+ T細胞、E) CD16+CD56+ NK細胞計數及F) CD4/CD8比率。*表示p ＜ 0.05，非配對t檢驗，與PBS處理組相比之指定組；†表示p ＜ 0.04，非配对t檢驗，與XENP16432處理組相比之指定組。在統計分析之前對資料進行對數轉換。資料顯示直至第14天，用單獨XENP24306或用XENP24306與XENP16432組合處理之各組顯著增強淋巴細胞擴增，超過PBS處理。值得注意的是，直至第14天，用XENP24306與XENP16432之組合處理之各組，不管XENP24306濃度如何，以及單獨更高濃度之XENP24306，均顯著增強淋巴細胞擴增，超過XENP16432處理。
[00273] 圖211A-圖211F描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後第21天pp65-MCF-7及huPBMC植入NSG小鼠之血液中的A) CD45+細胞、B) CD3+ T細胞、C) CD4+ T細胞、D) CD8+ T細胞、E) CD16+CD56+ NK細胞計數及F) CD4/CD8比率。*表示p ＜ 0.05，非配对t檢驗，與PBS處理組相比之指定組；†表示p ＜ 0.04，非配对t檢驗，與XENP16432處理組相比之指定組。在統計分析之前對資料進行對數轉換。
[00274] 圖212A-圖212I描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後A)第4天、B)第6天、C)第8天、D)第11天、E)第13天、F)第15天、G)第19天、H)第22天及I)第25天pp65-MCF-7及huPBMC植入NSG小鼠中的腫瘤體積(基線校正)變化。資料顯示直至第11天，用1.0 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理相比於用單獨XENP16432處理顯著降低腫瘤體積(在基線校正之腫瘤量測中使用非配對t檢驗進行統計)。
[00275] 圖213A-圖213B描繪在用指定濃度之指定測試物給藥後pp65-MCF-7及huPBMC植入NSG小鼠隨時間之A)腫瘤體積變化及B)體重變化(作為GVHD之指標)。資料表明儘管C組、F組及G組中之所有小鼠均死亡，但這符合GVHD (如體重變化所示)。
[00276] 圖214A-圖214C描繪在用指定濃度之指定測試物第一次給藥後A)第7天、B)第14天及C)第21天pp65-MCF-7及huPBMC植入NSG小鼠中之血清IFNγ濃度。*表示p ＜ 0.05，非配对t檢驗，與PBS處理組相比之指定組；†表示p ＜ 0.04，非配对t檢驗，與XENP16432處理組相比之指定組。在統計分析之前對資料進行對數轉換。資料顯示直至第7天，用1.0 mg/kg、0.3 mg/kg或0.1 mg/kg XENP24306與3 mg/kg XENP16432之組合處理相比於用單獨XENP16432處理顯著增強IFNγ分泌。
無
Claims (26)
- 一種治療有需要之患者中之癌症的方法，其包括投與： 治療有效量之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，其包含： a)第一單體，其自N端至C端包含： i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域； ii)第一結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及 b)第二單體，其自N端至C端包含： i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者； ii)第二結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域； 其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號；及 治療有效量之檢查點阻斷抗體，其選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
- 一種誘導患者中之T細胞擴增之方法，其包括投與： 治療有效量之IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白，其包含： a)第一單體，其自N端至C端包含： i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域； ii)第一結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及 b)第二單體，其自N端至C端包含： i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者； ii)第二結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域； 其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號；及 治療有效量之檢查點阻斷抗體，其選自由以下組成之群：抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體。
- 如申請專利範圍第1項或第2項之方法，其中該變異體IL-15結構域包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及胺基酸取代D30N/E64Q/N65D。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該IL-15Rα sushi結構域包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有S364K/E357Q : L368D/K370S取代。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該第一變異體Fc結構域具有S364K/E357Q取代且該第二變異體Fc結構域具有L368D/K370S取代。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含M428L/N434S取代。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域各自包含E233P/L234V/L235A/G236del/S267K取代。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及該檢查點阻斷抗體係同時或依序投與。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該抗PD-1抗體為納武單抗、派姆單抗或匹地單抗。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306或XENP24045之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24306 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為納武單抗。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為派姆單抗。
- 如申請專利範圍第11項之方法，其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含XENP24045 (SEQ ID NO:XX)之胺基酸序列且該抗PD-1抗體為匹地單抗。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該癌症為轉移性癌症。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該癌症選自由以下組成之群：乳癌、肺癌、結腸癌、卵巢癌、黑素瘤癌、膀胱癌、腎癌、腎臟癌、肝癌、頭頸部癌、結直腸癌、黑素瘤、胰腺癌、胃癌、食道癌、間皮瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤及骨髓瘤。
- 如任何前述申請專利範圍之方法，其中該方法導致該患者中之血管滲漏程度最低。
- 如申請專利範圍第20項之方法，其中在投藥後該患者中之血清白蛋白中的血管滲漏程度範圍為減少20%或20%以下。
- 如申請專利範圍第2項至第21項中任一項之方法，其中該T細胞擴增為T細胞增加至少2倍。
- 如申請專利範圍第2項至第22項中任一項之方法，其中該T細胞擴增範圍為T細胞增加2倍至15倍。
- 如申請專利範圍第1項至第23項中任一項之方法，其中該方法不增加誘發低白蛋白血症之可能性。
- 如申請專利範圍第2項至第24項中任一項之方法，其中該等T細胞包含腫瘤浸潤淋巴細胞。
- 一種組合療法，其包含IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白及檢查點阻斷抗體，該抗體選自抗PD-1抗體、抗PD-L1抗體、抗TIM3抗體、抗TIGIT抗體、抗LAG3抗體及抗CTLA-4抗體， 其中該IL-15/IL-15Rα異二聚體Fc融合蛋白包含： a)第一單體，其自N端至C端包含： i) IL-15受體α (IL-15Rα) sushi結構域； ii)第一結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第一變異體Fc結構域；及 b)第二單體，其自N端至C端包含： i)變異體IL-15結構域，其包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列及選自由N4D/N65D、D30N/N65D及D30N/E64Q/N65D組成之群之胺基酸取代中的任一者； ii)第二結構域連接子；及 iii)包含CH2-CH3之第二變異體Fc結構域； 該第一變異體Fc結構域及第二變異體Fc結構域具有一組胺基酸取代，其選自由以下組成之群：S267K/L368D/K370S : S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q : L368D/K370S；L368D/K370S : S364K；L368E/K370S : S364K；T411E/K360E/Q362E : D401K；L368D/K370S : S364K/E357L及K370S : S364K/E357Q，根據EU編號。
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| US11618776B2 (en) | 2018-12-20 | 2023-04-04 | Xencor, Inc. | Targeted heterodimeric Fc fusion proteins containing IL-15/IL-15RA and NKG2D antigen binding domains |
| TW202128757A (zh) | 2019-10-11 | 2021-08-01 | 美商建南德克公司 | 具有改善之特性的 PD-1 標靶 IL-15/IL-15Rα FC 融合蛋白 |
| WO2021092719A1 (zh) * | 2019-11-11 | 2021-05-20 | 王盛典 | 一种靶向抗原特异性t细胞诱导其向记忆干性细胞分化的融合蛋白 |
| JP2023502712A (ja) * | 2019-11-21 | 2023-01-25 | インサーム（インスティテュ ナシオナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシェ メディカル） | 抗ｐｄ－１／ｉｌ－１５免疫サイトカインによる新しいｐｄ－１標的免疫療法 |
| KR20220114063A (ko) * | 2019-12-13 | 2022-08-17 | 큐진 인크. | 신규한 인터루킨-15 (ｉｌ-15) 융합 단백질 및 이의 용도 |
| US20230093155A1 (en) * | 2019-12-13 | 2023-03-23 | Cugene Inc | Cytokine-based bioactivatable drugs and methods of uses thereof |
| WO2021142476A1 (en) * | 2020-01-12 | 2021-07-15 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Single-chain polypeptides |
| KR20220132598A (ko) * | 2020-01-28 | 2022-09-30 | 제넨테크, 인크. | 암 치료를 위한 IL15/IL15R 알파 이종이량체 Fc-융합 단백질 |
| US20230226203A1 (en) * | 2020-06-18 | 2023-07-20 | Proviva Therapeutics (Hong Kong) Limited | Activatable procytokines |
| CN113321736B (zh) * | 2020-12-30 | 2024-01-09 | 苏州复融生物技术有限公司 | 一种长效化白介素15融合蛋白及其制备方法和应用 |
| AU2022217812A1 (en) * | 2021-02-05 | 2023-08-03 | Salubris Biotherapeutics, Inc. | Il-15 fusion proteins and methods of making and using same |
| AU2022296794A1 (en) * | 2021-06-23 | 2023-12-14 | Cytune Pharma | Interleukin-15 based immunocytokines |
| KR20240042442A (ko) * | 2021-07-28 | 2024-04-02 | 제넨테크, 인크. | 혈액암 치료를 위한 IL15/IL15R 알파 이종이량체 Fc-융합 단백질 |
| WO2023015198A1 (en) * | 2021-08-04 | 2023-02-09 | Genentech, Inc. | Il15/il15r alpha heterodimeric fc-fusion proteins for the expansion of nk cells in the treatment of solid tumours |
| WO2023160721A1 (en) * | 2022-02-28 | 2023-08-31 | Wuxi Biologics (Shanghai) Co., Ltd. | Heterodimeric polypeptide complexes comprising il-15 variants and uses thereof |
| WO2023239228A1 (ko) * | 2022-06-10 | 2023-12-14 | 메디맵바이오 주식회사 | 항-tigit 항체, 인터류킨-15, 및 인터류킨-15 수용체 알파 스시 도메인을 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도 |
| WO2024011179A1 (en) * | 2022-07-07 | 2024-01-11 | Genentech, Inc. | Combinations of il15/il15r alpha heterodimeric fc-fusion proteins and fcrh5xcd3 bispecific antibodies for the treatment of blood cancers |
| CN115806627A (zh) * | 2022-08-03 | 2023-03-17 | 深圳市先康达生命科学有限公司 | 一种自分泌IL-15与anti-LAG3结合的融合蛋白及其应用 |
| CN116554356B (zh) * | 2023-05-16 | 2024-01-23 | 武汉大学 | 一种hyperIL-15与sCD4及Fc的融合蛋白及其应用 |
Family Cites Families (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5595756A (en) * | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
| US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
| US5811097A (en) | 1995-07-25 | 1998-09-22 | The Regents Of The University Of California | Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling |
| EP0915987A2 (en) | 1997-04-21 | 1999-05-19 | Donlar Corporation | POLY-($g(a)-L-ASPARTIC ACID), POLY-($g(a)-L-GLUTAMIC ACID) AND COPOLYMERS OF L-ASP AND L-GLU, METHOD FOR THEIR PRODUCTION AND THEIR USE |
| PT1137436E (pt) | 1998-12-03 | 2008-09-15 | Univ California | Estimulação das células t contra auto-antigénios por meio de agentes bloqueadores de ctla-4 |
| EP2112166B1 (en) | 1998-12-23 | 2018-11-21 | Pfizer Inc. | Human monoclonal antibodies to ctla-4 |
| US6682736B1 (en) | 1998-12-23 | 2004-01-27 | Abgenix, Inc. | Human monoclonal antibodies to CTLA-4 |
| US7605238B2 (en) | 1999-08-24 | 2009-10-20 | Medarex, Inc. | Human CTLA-4 antibodies and their uses |
| US7449443B2 (en) | 2000-03-23 | 2008-11-11 | California Institute Of Technology | Method for stabilization of proteins using non-natural amino acids |
| US6586207B2 (en) | 2000-05-26 | 2003-07-01 | California Institute Of Technology | Overexpression of aminoacyl-tRNA synthetases for efficient production of engineered proteins containing amino acid analogues |
| US7139665B2 (en) | 2002-02-27 | 2006-11-21 | California Institute Of Technology | Computational method for designing enzymes for incorporation of non natural amino acids into proteins |
| MXPA05006828A (es) | 2002-12-23 | 2005-09-08 | Wyeth Corp | Anticuerpos contra pd-1, y sus usos. |
| EP1675620B1 (en) | 2003-10-09 | 2019-05-08 | Ambrx, Inc. | Polymer derivatives |
| JP4889505B2 (ja) | 2004-02-02 | 2012-03-07 | アンブレツクス・インコーポレイテツド | 被修飾されたヒト成長ホルモンポリペプチドおよびこれらの使用 |
| WO2005085282A1 (en) * | 2004-02-27 | 2005-09-15 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Il-15 binding site for il15-ralpha and specific il-15 mutants having agonists/antagonists activity |
| US8367805B2 (en) | 2004-11-12 | 2013-02-05 | Xencor, Inc. | Fc variants with altered binding to FcRn |
| SI2161336T1 (sl) | 2005-05-09 | 2013-11-29 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Humana monoklonska protitelesa za programirano smrt 1 (PD-1) in postopki za zdravljenje raka ob uporabi anti-PD-1 protiteles samih ali v kombinaciji z drugimi imunoterapevtiki |
| BRPI0613361A2 (pt) | 2005-07-01 | 2011-01-04 | Medarex Inc | anticorpo monoclonal humano isolado, composição, imunoconjugado, molécula biespecìfica, molécula de ácido nucleico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira, camundongo transgênico, método para modular uma resposta imune num indivìduo, método para inibir crescimento de células tumorais num indivìduo, método para tratar uma doença infecciosa num indivìduo, método para aumentar uma resposta imune a um antìgeno num indivìduo, método para tratar ou prevenir uma doença inflamatória num indivìduo e método para preparar o anticorpo anti-pd-l1 |
| EP1987839A1 (en) | 2007-04-30 | 2008-11-05 | I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale | Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease |
| US9244059B2 (en) | 2007-04-30 | 2016-01-26 | Immutep Parc Club Orsay | Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease |
| EP2535354B1 (en) | 2007-06-18 | 2017-01-11 | Merck Sharp & Dohme B.V. | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
| CN104548091A (zh) | 2008-02-11 | 2015-04-29 | 治疗科技公司 | 用于肿瘤治疗的单克隆抗体 |
| US8168757B2 (en) | 2008-03-12 | 2012-05-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | PD-1 binding proteins |
| AR072999A1 (es) | 2008-08-11 | 2010-10-06 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos |
| ES2545609T3 (es) | 2008-08-25 | 2015-09-14 | Amplimmune, Inc. | Composiciones de antagonistas de PD-1 y métodos de uso |
| US20110223188A1 (en) | 2008-08-25 | 2011-09-15 | Solomon Langermann | Targeted costimulatory polypeptides and methods of use to treat cancer |
| KR20210060670A (ko) | 2008-12-09 | 2021-05-26 | 제넨테크, 인크. | 항-ｐｄ-ｌ１ 항체 및 ｔ 세포 기능을 향상시키기 위한 그의 용도 |
| US20130017199A1 (en) | 2009-11-24 | 2013-01-17 | AMPLIMMUNE ,Inc. a corporation | Simultaneous inhibition of pd-l1/pd-l2 |
| BR122021025338B1 (pt) | 2009-11-24 | 2023-03-14 | Medimmune Limited | Anticorpo isolado ou fragmento de ligação do mesmo contra b7-h1, composição farmacêutica e seus usos |
| PL2581113T3 (pl) | 2010-06-11 | 2018-11-30 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Przeciwciało anty-tim-3 |
| EP2635607B1 (en) | 2010-11-05 | 2019-09-04 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain |
| HUE051954T2 (hu) | 2011-11-28 | 2021-03-29 | Merck Patent Gmbh | ANTI-PD-L1 ellenanyagok és alkalmazásaik |
| UY34887A (es) | 2012-07-02 | 2013-12-31 | Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware | Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos |
| AU2014205086B2 (en) | 2013-01-14 | 2019-04-18 | Xencor, Inc. | Novel heterodimeric proteins |
| EP2951203B1 (en) | 2013-03-15 | 2019-05-22 | Xencor, Inc. | Heterodimeric proteins |
| JP6329343B2 (ja) | 2013-06-13 | 2018-05-23 | 任天堂株式会社 | 画像処理システム、画像処理装置、画像処理プログラム、および画像処理方法 |
| EP4269441A3 (en) * | 2013-08-08 | 2024-01-24 | Cytune Pharma | Il-15 and il-15ralpha sushi domain based on modulokines |
| JP6484634B2 (ja) * | 2014-01-08 | 2019-03-13 | シャンハイ ヘンルイ ファーマスーティカル カンパニー リミテッドＳｈａｎｇｈａｉ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ． | Ｉｌ−１５ヘテロ二量体タンパク質及びその用途 |
| JOP20200094A1 (ar) | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
| JOP20200096A1 (ar) | 2014-01-31 | 2017-06-16 | Children’S Medical Center Corp | جزيئات جسم مضاد لـ tim-3 واستخداماتها |
| CR20160425A (es) | 2014-03-14 | 2017-05-26 | Novartis Ag | Moléculas de anticuerpos que se unen a lag-3 y usos de las mismas |
| AP2016009475A0 (en) | 2014-03-28 | 2016-09-30 | Xencor Inc | Bispecific antibodies that bind to cd38 and cd3 |
| EP3160498B1 (en) * | 2014-06-30 | 2021-10-06 | Altor BioScience Corporation | Il-15-based molecules and methods of use thereof |
| EA201790195A1 (ru) | 2014-07-16 | 2017-09-29 | Дженентек, Инк. | Способы лечения рака с применением ингибиторов tigit и противораковых агентов |
| ES2952717T3 (es) | 2014-10-14 | 2023-11-03 | Novartis Ag | Moléculas de anticuerpos contra PD-L1 y usos de las mismas |
| US10208120B2 (en) | 2014-11-05 | 2019-02-19 | Genentech, Inc. | Anti-FGFR2/3 antibodies and methods using same |
| US10259887B2 (en) * | 2014-11-26 | 2019-04-16 | Xencor, Inc. | Heterodimeric antibodies that bind CD3 and tumor antigens |
| JP6180663B2 (ja) | 2014-12-23 | 2017-08-16 | ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ | Ｔｉｇｉｔに対する抗体 |
| CR20170511A (es) * | 2015-05-08 | 2018-01-22 | Xencor Inc | Anticuerpos heterodiméricos que se unen a cd3 y a antígenos tumorales. |
| TWI715587B (zh) | 2015-05-28 | 2021-01-11 | 美商安可美德藥物股份有限公司 | Ｔｉｇｉｔ結合劑和彼之用途 |
| RU2732591C2 (ru) | 2015-09-25 | 2020-09-21 | Дженентек, Инк. | Анти-tigit антитела и способы применения |
| RU2767357C2 (ru) * | 2016-06-14 | 2022-03-17 | Ксенкор, Инк. | Биспецифические антитела-ингибиторы контрольных точек |
| WO2018071919A1 (en) * | 2016-10-14 | 2018-04-19 | Xencor, Inc. | IL15/IL15Rα HETERODIMERIC FC-FUSION PROTEINS |
-
2019
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