TW201932489A - 針對tigit之抗體及其變異體 - Google Patents
針對tigit之抗體及其變異體 Download PDFInfo
- Publication number
- TW201932489A TW201932489A TW108101551A TW108101551A TW201932489A TW 201932489 A TW201932489 A TW 201932489A TW 108101551 A TW108101551 A TW 108101551A TW 108101551 A TW108101551 A TW 108101551A TW 201932489 A TW201932489 A TW 201932489A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- amino acid
- seq
- tigit
- antigen
- antibody
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本申請提供一種特異性識別TIGIT之抗體諸如單株抗體(mAb)或其抗原結合片段。亦提供醫藥組成物、或製備及使用該抗體或其抗原結合片段之方法。
Description
本申請案係關於能夠特異性結合TIGIT蛋白之抗體或其抗原結合片段以及此類藥劑之用途。在一些實施例中,本申請案係關於針對TIGIT之小鼠及人源化單株抗體以以及此等抗體之用途。該等抗體或其抗原結合片段可用作診斷劑且可用於治療與TIGIT之活性及/或表現相關聯之疾病。
免疫系統為一種宿主防禦系統,其包含細胞、組織、及器官之集合,該等細胞、組織、及器官在一起起作用以保護免遭「外來」侵入物或由突變所致的異常細胞之攻擊。侵入物主要為引起感染的有機體,諸如細菌、病毒、寄生蟲、及真菌。免疫系統偵測並破壞異常細胞的能力防止許多癌症發展並有助於對抗癌症。包含中樞免疫器官及外周免疫器官之免疫系統在一起呈一個單元起作用以對抗傳染病。抵禦數百萬結構不同的外敵的能力顯示免疫系統之複雜性。這種複雜性係藉由器官、組織、細胞、及分子之動態通訊網路來實現。這些器官、組織、細胞、及分子彼此協作並保持免疫系統平衡,以對抗外來侵入並同時維持自身耐受性。
免疫查核點蛋白在調控免疫反應以維持自身耐受性及對抗侵入者方面起重要作用。其為觸發或阻斷免疫反應的分子。刺激性免疫查核點蛋白促進免疫,而抑制性免疫查核點蛋白削弱免疫活性並防止自身免疫。T細胞上表現之抑制性免疫查核點蛋白諸如PD-1及CTLA-4充當抑制免疫反應的中斷物(brake)。阻斷抑制性免疫查核點蛋白活化T細胞。
人類腫瘤為遺傳及表觀遺傳改變之組合的結果。當腫瘤細胞形成時,其表面上的一些抗原可發生變化。此等所謂的新生抗原(neo-antigen)將經免疫系統偵測出並作為異物經消滅。異常細胞在其進展至晚期癌症階段之前經消除。然而,腫瘤細胞發展出多種躲避並抑制免疫系統的抗性機制。腫瘤所應用之常見機制為藉由過度表現抑制性免疫查核點調節劑來操縱免疫查核點路徑。癌症免疫療法利用宿主免疫系統來治療癌症。範圍從活化效應細胞至阻斷抑制因子的機制加強免疫系統並產生抗腫瘤活性。阻斷抑制性免疫查核點路徑的藥物已在各種實體腫瘤中證明有前景的臨床活性。
PD-1及CTLA-4為經廣泛研究的兩種抑制性免疫查核點蛋白。針對PD-1或CTLA-4之單株抗體已徹底改變了對晚期黑色素瘤患者之安排,並已成為成功用於許多其他癌症的癌症治療方法。此外,不僅PD-1或CTLA-4之阻斷已在癌症患者中證明了腫瘤衰退反應,而且其他抑制性免疫查核點蛋白諸如TIM-3、LAG-3、或VISTA之阻斷亦在許多臨床前研究中顯示出有效的抗腫瘤反應。此等結果強調鑒別出針對新抑制性免疫查核點蛋白的抗體對有效的癌症免疫療法的重要性。
具有Ig及ITIM域之T細胞免疫受體(TIGIT)為T細胞及天然殺手(NK)細胞上表現之免疫查核點蛋白。TIGIT含有免疫球蛋白(Ig)及免疫受體基於酪胺酸之抑制模體(ITIM)域,並作為抑制性免疫查核點蛋白起作用,以靶向適應性及先天性免疫系統。ITIM已表現於大量負調控免疫細胞活性的抑制性受體中。此等受體包括免疫球蛋白(Ig)超家族成員、唾液酸結合凝集素樣分子(Siglecs)、及C型凝集素受體。當含有ITIM之受體與其配體相互作用時,ITIM經Src家族酪胺酸激酶磷酸化。經磷酸化之ITIM為含有Src同源2域之磷酸酶包括SHIP-1、Shp1、及Shp2提供對接位點(docking site)。此等磷酸酶能夠使含有免疫受體基於酪胺酸之活化模體(ITAM)之受體去磷酸化並失活。通過此機
制,含有ITIM之受體抑制來自免疫系統中含有ITAM之受體之傳訊,並控制免疫系統之活化。TIGIT由活化細胞毒性T細胞及調控T細胞表現,且可充當「斷開(turn off)」免疫反應的關鍵的抑制性免疫查核點調節劑。
CD28及CTLA-4當與其配體B7-1或B7-2相互作用時具有相反的作用。B7-1或B7-2與CD28之結合對免疫系統具有刺激作用,且B7-1或B7-2與CTLA-4之結合具有抑制作用。CD226及TIGIT為與CD28及CTLA-4相似的一對。CD226及TIGIT之配體為CD112及CD155(亦稱為PVR)。活化CD226及去活化TIGIT競爭相同的配體,這可導致接通(switch on)或切斷(switch off)T細胞之微妙平衡。
癌症免疫療法為通過加強患者之免疫系統來對抗癌症的一種治療。阻斷任何抑制性免疫查核點調節劑將使免疫系統中之平衡朝向活化狀態傾斜。其為癌症免疫療法之工具之一。TIGIT為抑制性免疫查核點調節劑之一種有前景的新靶標。開發出特異性針對TIGIT的拮抗劑抗體將阻斷其對T細胞的抑制作用且增加對抗癌症的免疫性。
本申請案係關於針對TIGIT蛋白之靶向結合劑以及其製備及使用方法。
在一般態樣中,本申請案係關於一種經單離抗體或其抗原結合片段,其包含:(a)重鏈可變域(VH),其包含分別地:i.重鏈互補決定區CDR1(CDR1),其包含選自由SEQ ID NO:27-39組成之群的胺基酸序列;ii.重鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:40-52組成之群的胺基酸序列;及iii.重鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:53-65組成之群的胺基酸序列;及
(b)輕鏈可變域(VL),其包含分別地:i.輕鏈CDR1,其包含選自由SEQ ID NO:66-78組成之群的胺基酸序列;ii.輕鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:79-91組成之群的胺基酸序列;及iii.輕鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:92-104組成之群的胺基酸序列;其中該抗體或其抗原結合片段能夠特異性結合TIGIT,較佳地特異性結合人類TIGIT。
本發明提供一種小鼠單株抗體(70A11A8E6)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:27、40、及53之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:66、79、及92之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:1及14之胺基酸序列的70A11A8E6之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體70A11A8E6或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(11D8E12A4)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:28、41、及54之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:67、80、及93之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:2及15之胺
基酸序列的11D8E12A4之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體11D8E12A4或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(16F10H12C11)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:29、42、及55之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:68、81、及94之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:3及16之胺基酸序列的16F10H12C11之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體16F10H12C11或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(8F2D8E7)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:30、43、及56之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:69、82、及95之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:4及17之胺基酸序
列的8F2D8E7之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體8F2D8E7或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(48B5G4E12)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:31、44、及57之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:70、83、及96之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:5及18之胺基酸序列的48B5G4E12之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體48B5G4E12或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(139E2C2D2)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:32、45、及58之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:71、84、及97之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:6及19之胺
基酸序列的139E2C2D2之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體139E2C2D2或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(128E3G7F5)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:33、46、及59之胺基酸序列。其亦包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:72、85、及98之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:7及20之胺基酸序列的128E3G7F5之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體128E3G7F5或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(121C2F10B5)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:34、47、及60之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:73、86、及99之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:8及21之胺基酸序列的121C2F10B5之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列
具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體121C2F10B5或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(104G12E12G2)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:35、48、及61之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:74、87、及100之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:9及22之胺基酸序列的104G12E12G2之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體104G12E12G2或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(83G6H11C12)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:36、49、及62之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:75、88、及101之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:10及23之胺基酸序列的83G6H11C12之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序
列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體83G6H11C12或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(92E9D4B4)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:37、50、及63之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:76、89、及102之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:11及24之胺基酸序列的92E9D4B4之重鏈及輕鏈可變域。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體92E9D4B4或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(100C4E7D11)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:38、51、及64之胺基酸序列。特異性結合人類TIGIT的小鼠單株抗體或抗原結合片段亦可包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:77、90、及103之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:12及25之胺基酸序列的100C4E7D11之重鏈及輕鏈可變域。SEQ ID NO:105-108之人源
化VH序列具有SEQ ID No:38、51、及64之CDR,且SEQ ID NO:113-117之人源化VL序列具有SEQ ID NO:77、90、及103之CDR。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體100C4E7D11、由SEQ ID NO:12及105-108之VH序列之一與SEQ ID NO:25及113-117之VL序列之一之組合製成之抗體、或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本發明提供一種小鼠單株抗體(64G1E9B4)或抗原結合片段,其特異性結合人類TIGIT且包含重鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:39、52、及65之胺基酸序列。其亦包含輕鏈可變區CDR1、CDR2、及CDR3序列,該等序列分別包含SEQ ID NO:78、91、及104之胺基酸序列。在一個實施例中,本發明之抗人類TIGIT小鼠單株抗體包含有包含SEQ ID NO:13及26之胺基酸序列的64G1E9B4之重鏈及輕鏈可變域。在一個實施例中,抗體包含在SEQ ID NO:52之重鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代發生在位置7D處,且其中殘基7D經取代為G。在一個實施例中,抗體包含在SEQ ID NO:65之重鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代發生在位置8M處,且其中殘基8M經取代為F或L。在一個實施例中,抗體包含在SEQ ID NO:78之輕鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代發生在位置1K處,且其中殘基1K經取代為R。SEQ ID NO:109-112之人源化VH序列具有SEQ ID No:39、52、及65之CDR,且SEQ ID NO:118之人源化VL序列具有SEQ ID NO:78、91、及104之CDR。在一些實施例中,上文所述之CDR取代可發生在SEQ ID NO:109-112之VH序列之對應CDR中,且上文所述之CDR取代可發生在SEQ ID
NO:118之VL序列之對應CDR中。其包括與此等所揭示之序列具有至少80%、85%、90%、及95%序列一致性的序列。在另一實施例中,小鼠單株抗體64G1E9B4,由SEQ ID NO:13、109-112、或對應的CDR經上文所提及之CDR取代所取代的SEQ ID NO:109-112之VH序列之一與SEQ ID NO:26、118、或對應的CDR經上文所提及之CDR取代所取代的SEQ ID NO:118之VL序列之一之組合製成之抗體,或抗原結合片段包含以下功能特徵:(a)如藉由表面電漿子共振(BIAcore)所確定,以20nM或更小的KD結合至人類TIGIT;(b)與食蟹獼猴TIGIT具有交叉反應性;(c)阻斷人類TIGIT與其配體CD155之間的相互作用;(d)在報導子檢定中活化T細胞;(e)刺激Jurkat細胞中之IL-2產生。
本申請案之抗體或其抗原結合片段可為齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化的。其亦可具有雙特異性,進一步包含能夠特異性結合第二抗原諸如CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的第二抗體部分。較佳地,第二抗體部分為單域抗體(sdAb)。
進一步提供一種醫藥組成物,其包含本申請案之任一經單離抗TIGIT抗體或其抗原結合片段及醫藥學上可接受之載劑。
本申請案之另一態樣提供一種治療患有TIGIT相關疾病之個體的方法,其包含向該個體投與有效量的上文所述之任一醫藥組成物。在一些實施例中,TIGIT相關疾病為癌症。在一些實施例中,癌症為實體腫瘤,諸如結腸癌。在一些實施例中,該方法進一步包含向個體投與另外的癌症療法,諸如手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合。在一些實施例中,TIGIT相關疾病為病原性感染。在一些實施例中,醫藥組成物係全身投與,諸如靜脈內(i.v.)投與。在一些實施例中,醫藥組成物係局部投與,諸如腫瘤內投與。在一些實施例中,個體為人類。
本發明之其他態樣、特徵、及優點將自以下揭露顯而易知,包括【實施方式】及其較佳實施例以及隨附申請專利範圍。
圖1A-1C描繪對過度表現有人類TIGIT之CHO細胞藉由螢光激活細胞分選(FACS)進行之血清抗體效價測試。血清係自各經免疫小鼠收集以供效價測試(圖1A:小鼠8087號;圖1B:小鼠8100號;圖1C:小鼠8771號)。對過度表現有人類TIGIT之CHO細胞藉由FACS研究篩選測試血。具有高TIGIT結合信號之小鼠指示較高效價且經選擇用於細胞融合之前的最後加強。
圖2A-2M描繪對人類TIGIT進行之融合瘤次純系之上清液之結合(圖2A:8F2D8E7;圖2B:16F10H12C11;圖2C:11D8E12A4;圖2D:48B5G4E12;圖2E:70A11A8E6;圖2F:139E2C2D2;圖2G:104G12E12G2;圖2H:64G1E9B4;圖2I:83G6H11C12;圖2J:92E9D4B4;圖2K:100C4E7D11;圖2L:128E3G7F5;及圖2M:121C2F10B5)。對過度表現有人類TIGIT之CHO細胞藉由FACS研究篩選自融合瘤次純系收集之上清液。選擇具有高TIGIT結合信號之次純系用於純化。
圖3A-3C描繪小鼠抗人類TIGIT單株抗體與CHO-K1細胞中表現之人類或食蟹獼猴TIGIT之結合。與人類TIGIT之結合顯示於圖3A及圖3B中。與食蟹獼猴TIGIT之結合顯示於圖3C中。
圖4A-4B描繪小鼠抗人類TIGIT單株抗體與PVR重組蛋白之間對人類TIGIT之競爭結合。
圖5A-5B描繪小鼠抗人類TIGIT抗體對藉由PVR對T細胞中過度表現之TIGIT之結合所抑制之T細胞活化的中和作用。藉由螢光素酶報導子信號指示之T細胞活化顯示於圖5A中,且藉由IL-2分泌指示之T細胞活化顯示於圖5B中。
圖6A-6B描繪嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體與CHO-K1細胞中表現之人類或食蟹獼猴TIGIT之結合。與人類TIGIT之結合顯示於圖6A中,且與食蟹獼猴TIGIT之結合顯示於圖6B中。
圖7描繪嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體與PVR重組蛋白之間對人類TIGIT之競爭結合。
圖8描繪嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體對T細胞活化之中和作用。
圖9A-9B顯示在C57BL/6人類TIGIT KI小鼠中之MC38同基因模型中人源化抗人類TIGIT單株抗體之體內功效實驗結果。
本申請案主張2018年1月15日提交之國際專利申請案第PCT/CN2018/072607號之優先權權益,其內容以全文引用之方式併入本文。
本申請案含有序列表,其作為ASCII格式序列表經由EFS-Web以電子方式提交,文件名為「688096.0120序列表」,且創建日期為2018年1月12日,且大小為約61kb。經由EFS-Web提交之序列表為本說明書之一部分且以全文引用之方式併入本文。
本申請案提供抗人類TIGIT單株抗體及其應用。本揭露涉及小鼠抗人類TIGIT單株抗體純系70A11A8E6、11D8E12A4、16F10H12C11、8F2D8E7、48B5G4E12、139E2C2D2、128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4之所述重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之基因序列。其亦涉及在此等小鼠抗人類TIGIT單株抗體純系
之人源化或轉譯後修飾之後所述重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之基因序列。本揭露涉及產生抗人類TIGIT單株抗體之方法。
本申請案藉由將所揭示之純系之重鏈及輕鏈可變域與人類IgG1之恆定區融合來提供嵌合抗人類TIGIT單株抗體。本申請案提供小鼠抗人類TIGIT單株抗體純系之重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之人源化形式。人源化抗人類TIGIT單株抗體係藉由將所揭示之純系之人源化重鏈及輕鏈可變域與人類IgG1之恆定區融合來產生。
除非特別相反地指示,否則本發明之實踐將採用在此項技術內的病毒學、免疫學、微生物學、分子生物學、及重組DNA技術之習知方法,其中許多出於說明之目的在以下進行描述。此類技術在文獻中得到充分說明。參見例如Current Protocols in Molecular Biology或Current Protocols in Immunology,John Wiley & Sons,New York,N.Y.(2009);Ausubel等人,Short Protocols in Molecular Biology,第3版,Wiley & Sons,1995;Sambrook及Russell,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版,2001);Maniatis等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(1982);DNA Cloning:A Practical Approach,第I及II卷(D.Glover編);Oligonucleotide Synthesis(N.Gait編,1984);Nucleic Acid Hybridization(B.Hames及S.Higgins編,1985);Transcription and Translation(B.Hames及S.Higgins編,1984);Animal Cell Culture(R.Freshney編,1986);Perbal,A Practical Guide to Molecular Cloning(1984);及其他類似參考文獻。
必須注意的是,除非上下文另外明確規定,否則如本文及隨附申請專利範圍中所用,單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個指示物。
除非另外說明,否則在一系列要素之前的術語「至少」應理解為係指該系列中之每一要素。熟習此項技術者將使用不多於一種常規實驗便認識到或能夠確定本文所述之本發明之特定實施例的許多等效物。此類等效物意欲由本發明涵蓋。
除非上下文另外要求,否則在本說明書及隨附申請專利範圍通篇,詞語「包含(comprise)」及變異體(諸如「comprises」及「comprising」)應理解為意指包括所述整數或步驟或者整數或步驟之群,而不排除任何其他整數或步驟或者整數或步驟之群。當在本文中使用時,術語「包含」可替代為術語「含有」或「包括」,或者有時在本文中使用時可替代為術語「具有」。
當在本文中使用時,「由......組成」排除在申請專利範圍要素中未指定之任何要素、步驟、或成分。當在本文中使用時、「基本上由......組成」不排除對申請專利範圍之基本及新穎特徵不產生實質性影響的材料或步驟。每當在本文中在本申請案之態樣或實施例之上下文中使用時,任何前述術語「包含」、「含有」、「包括」、及「具有」可經術語「由......組成」或「基本上由......組成」置換以改變本揭露之範疇。
如本文所用,多個所述要素之間的連接術語「及/或」應理解為涵蓋個別及經組合選項兩者。例如,當兩個要素藉由「及/或」結合時,第一選項係指第一要素在無第二要素之情況下的適用性。第二選項係指第二要素在無第一要素之情況下的適用性。第三選項係指第一要素及第二要素一起的適用性。此等選項之任一者均理解為落在該含義內,且因此滿足如本文所用之術語「及/或」之要求。多於一個選項的同時適用性亦理解為落在該含義內,因此滿足術語「及/或」之要求。
除非以其他方式說明,否則本文所述之任何數值諸如濃度或濃度範圍均理解為在所有情況下皆受到術語「約(about)」之修飾。因此,數值通常包括
所述值之±10%。例如,1mg/mL之濃度包括0.9mg/mL至1.1mg/mL。同樣,1mg/mL至10mg/mL之濃度範圍包括0.9mg/mL至11mg/mL。除非上下文另外明確指出,否則如本文所用,數值範圍之使用明確地包括該範圍內的所有可能的子範圍、所有個別數值,包括此等範圍內之整數及該等值之分數。
術語「表位」意謂能夠特異性結合抗體之蛋白決定位。表位通常由分子之化學活性表面分組組成,諸如胺基酸或糖側鏈,且通常具有特定的三維結構特徵以及特定的電荷特徵。構象及非構象表位之區別在於:在變性溶劑之存在下,與前者之結合喪失而與後者之結合未喪失。
如本文所用,「治療(treatment)」或「治療(treating)」為用於獲得有利或所要結果(包括臨床結果)之方法。出於本發明之目的,有利或所要臨床結果包括但不限於以下中之一或多者:減輕由疾病引起之一或多種症狀;削弱疾病之程度;穩定疾病(例如,預防或延遲疾病之惡化);預防或延遲疾病之蔓延(例如,轉移);預防或延遲疾病之復發;延遲或減緩疾病之進展;改善疾病狀態;提供疾病之緩解(部分或全部);減少治療疾病所需之一或多種其他藥物之劑量;延遲疾病之進展;提高生活品質;及/或延長存活。「治療」亦涵蓋減少疾病之病理學後果。本發明之方法考慮此等治療態樣中之任一或多者。
本文所用之術語「有效量」係指足以治療指定病症、病狀、或疾病諸如改善、緩和、減輕、及/或延遲其症狀中之一或多者的藥劑或藥劑組合之量。關於癌症,有效量包含足以引起腫瘤縮小及/或降低腫瘤生長速率(諸如抑制腫瘤生長)或預防或延遲其他不需要的細胞增殖之量。在一些實施例中,有效量為足以延遲發展之量。在一些實施例中,有效量為足以預防或延遲復發之量。有效量可以一或多次投與之形式投與。有效量之藥物或組成物可:(i)減少癌細胞之數量;(ii)減小腫瘤大小;(iii)在一定程度上抑制、延緩、減緩並較佳阻止癌細胞浸潤到外周器官中;(iv)抑制(即,在某種程度上減緩並且較佳地停止)腫瘤轉移;
(v)抑制腫瘤生長;(vi)預防或延遲腫瘤之發生及/或復發;及/或(vii)在一定程度上緩解與癌症相關之一或多種症狀。
術語「抗體」、「抗體部分」、或「抗體構築體」係以其最廣泛的意義使用且涵蓋各種抗體結構,包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如,雙特異性抗體)、全長抗體、及其抗原結合片段,只要其展現所要抗原結合活性即可。
基本的4鏈抗體單元為由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈組成之異四聚醣蛋白。IgM抗體由5個基本的異四聚體單元連同稱為J鏈之額外多肽組成且含有10個抗原結合位點,而IgA抗體包含2-5個基本的4鏈單元,該等單元可聚合以與J鏈組合之形式形成多價裝配物。在IgG之情況下,4鏈單元一般為約150,000道耳頓。各L鏈藉由一個共價二硫鍵連接H鏈,而兩條H鏈藉由一或多個二硫鍵(其取決於H鏈同型)彼此連接。各H鏈及L鏈亦具有規則隔開的鏈內二硫橋。各H鏈在N末端具有可變域(VH),接著對於α及γ鏈之各者而言為三個恆定域(CH),且對於μ及ε同型而言為四個CH域。各L鏈在N末端具有可變域(VL),接著在其另一端為恆定域。VL與VH對齊,且CL與重鏈之第一恆定域(CH1)對齊。據信具體胺基酸殘基形成輕鏈可變域與重鏈可變域之間的界面。將VH及VL配對在一起形成單一抗原結合位點。不同類別抗體之結構及性質參見例如Basic and Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Sties,Abba I.Terr及TristraM G.Parsolw(編),Appleton & Lange,Norwalk,Conn.,1994,第71頁及第6章。來自任何脊椎動物物種之L鏈均可基於其恆定域之胺基酸序列歸為兩種截然不同類型(稱為κ及λ)之一。取決於其重鏈恆定域(CH)之胺基酸序列,免疫球蛋白可歸於不同類別或同型。有五類免疫球蛋白:IgA、IgD、IgE、IgG、及IgM,其分別具有稱為α、δ、ε、γ、及μ之重鏈。基於CH序列及功能之相對較小的差
異,γ及α類經進一步分成亞類,例如,人類表現以下亞類:IgG1、IgG2A、IgG2B、IgG3、IgG4、IgA1、及IgA2。
術語「僅重鏈抗體」或「HCAb」係指包含重鏈但缺少一般存在於在4-鏈抗體中之輕鏈的功能性抗體。已知駱駝科動物(例如駱駝、美洲駝、或羊駝)產生HCAb。
術語「單域抗體」或「sdAb」係指具有三個互補決定區(CDR)之單一抗原結合多肽。單獨sdAb能夠在不與對應的含CDR之多肽配對之情況下結合抗原。在一些情況下,單域抗體由駱駝科HCAb經工程改造,且其重鏈可變域在本文中稱為「VHH」(重鏈抗體之重鏈可變域)。一些VHH亦可稱為奈米抗體。駱駝科sdAb係已知最小的抗原結合抗體片段之一(參見,例如,Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-8(1993);Greenberg等人,Nature 374:168-73(1995);Hassanzadeh-Ghassabeh等人,Nanomedicine(Lond),8:1013-26(2013))。基本的VH自N末端至C末端具有以下結構:FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4,其中FR1至FR4分別指代框架區1至4,且其中CDR1至CDR3係指互補決定區1至3。
「經單離」抗體為已經自其產生環境(例如天然或重組)之組分鑒別、分離、及/或回收之抗體。較佳地,經單離多肽不與自其產生環境的所有其他組分締合。其產生環境之污染物組分(諸如由重組轉染細胞所致的污染物組分)為通常干擾抗體的研究、診斷性或治療性用途的物質,且可包括酶、激素、及其他蛋白質或非蛋白質溶質。在較佳實施例中,多肽經純化至:(1)如藉由例如勞里法(Lowry method)所確定之大於95重量%抗體,並且在一些實施例中大於99重量%;(2)足以藉由使用轉杯式測序儀(spinning cup sequenator)獲得N末端或內部胺基酸序列之至少15個殘基的程度;或(3)藉由使用考馬斯藍(Coomassie Blue)或較佳銀染色,在非還原或還原條件下進行之SDS-PAGE至均質。經單離抗體
包括重組細胞內的原位抗體,因為抗體的天然環境的至少一種組分將不存在。然而通常,經單離多肽、抗體、或構築體藉由至少一個純化步驟製備。
抗體之「可變區」或「可變域」係指抗體之重鏈或輕鏈之胺基末端域。重鏈及輕鏈可變域可分別稱為「VH」及「VL」。此等域通常為抗體之最易變部分(相對於相同類別的其他抗體)且含有抗原結合位點。來自駱駝科物種之僅重鏈抗體具有單一重鏈可變區,其被稱為「VHH」。因此VHH為一種特殊類型的VH。
術語「可變」係指可變域之某些區段之序列於抗體之間廣泛不同。V域介導抗原結合且界定具體抗體對其具體抗原之特異性。然而,可變性未在可變域之整個跨度內均勻地分佈。而是,其集中於輕鏈及重鏈可變域中之稱為互補決定區(CDR)或超變區(HVR)的三個區段中。可變域之更高度保守部分稱為框架區(FR)。天然重鏈及輕鏈可變域各自包含四個FR區,其主要採用β-折疊組態,由三個CDR連接,該等CDR形成連接β-折疊結構之環且在一些情況下形成β-折疊結構之一部分。各鏈中之CDR藉由FR區緊密地保持在一起,且與來自另一鏈之CDR一起有助於抗體之抗原結合位點之形成(參見Kabat等人,Sequences of Immunological Interest,第五版,National Institute of Health,Bethesda,Md.(1991))。恆定域不直接參與抗體與抗原之結合,但表現出各種效應功能,諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性。
如本文所用之術語「單株抗體」係指從實質上均質的抗體群體獲得之抗體,即構成該群體的個別抗體是相同的,除了可以微量存在的可能天然存在的突變及/或翻譯後修飾(例如,異構化,脫醯胺)之外。單株抗體具有高特異性,係針對單一抗原位點。與通常包括針對不同決定位(表位)之不同抗體的多株抗體制劑形成對比,各單株抗體針對抗原上之單一決定位。除了特異性,單株抗體之優勢在於,其藉由融合瘤培養來合成,不受其他免疫球蛋白污染。修飾
語「單株」指示抗體之特性為獲自實質上均質的抗體群體,且不應理解為需要藉由任何具體方法來產生抗體。例如,欲根據本申請使用之單株抗體可藉由多種技術製成,包括例如融合瘤方法(例如,Kohler及Milstein.,Nature,256:495-97(1975);Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995);Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,第2版1988);Hammerling等人,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981));重組DNA方法(參見例如,美國專利第4,816,567號);噬菌體呈現技術(參見例如,Clackson等人,Nature,352:624-628(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004));及用於在具有部分或全部編碼人類免疫球蛋白序列之人類免疫球蛋白基因座或基因的動物中產生人類或人樣抗體的技術(參見例如,WO 1998/24893;WO 1996/34096;WO 1996/33735;WO 1991/10741;Jakobovits等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 90:2551(1993);Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993);Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993);美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、及第5,661,016號;Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992);Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994);Morrison,Nature 368:812-813(1994);Fishwild等人,Nature Biotechnol.14:845-851(1996);Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996);及Lonberg及Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
術語「全長抗體」、「完整抗體」、或「全抗體」可互換地用於指代以實質上完整形式的抗體,與抗體片段不同。特定言之,全長4鏈抗體包括具有重鏈及輕鏈(包括Fc區)的抗體。全長僅重鏈抗體包括重鏈(諸如VHH)及Fc
區。恆定域可為天然序列恆定域(例如,人類天然序列恆定域)或其胺基酸序列變異體。在一些情況下,完整抗體可具有一或多種效應功能。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分,較佳地完整抗體之抗原結合區及/或可變區。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2以及Fv片段;雙功能抗體(diabody);線性抗體(參見美國專利第5,641,870號,實例2;Zapata等人,Protein Eng.8(10):1057-1062[1995]));單鏈抗體分子;單域抗體(諸如VHH)及由抗體片段形成的多特異性抗體。抗體之木瓜酶消化產生兩個相同的抗原結合片段(稱為「Fab」片段)及殘餘「Fc」片段(名稱反映易於結晶之能力)。Fab片段由整條L鏈連同H鏈之可變區結構域(VH)及一條重鏈之第一恆定域(CH1)組成。各Fab片段關於抗原結合為單價的,即,其具有單一抗原結合位點。抗體之木瓜酶處理產生單一大型F(ab')2片段,該片段大體上對應於兩個具有不同抗原結合活性的經二硫化物連接Fab片段且仍能夠交聯抗原。Fab'片段因在CH1域之羧基末端處具有少量額外殘基(包括來自抗體鉸鏈區之一或多個半胱胺酸)而與Fab片段不同。Fab'-SH為本文中恆定域之半胱胺酸殘基攜帶自由硫醇基的Fab'的名稱。F(ab')2抗體片段最初呈其之間具有鉸鏈半胱胺酸的Fab'片段對產生。抗體片段之其他化學偶聯亦為已知的。
Fc片段包含藉由二硫化物保持在一起的兩條H鏈之羧基末端部分。抗體之效應功能係藉由Fc區中之序列來確定,該區亦由存在於某些細胞型上的Fc受體(FcR)識別。
術語「恆定域」係指免疫球蛋白分子之以下部分,其相對於該免疫球蛋白之含有抗原結合位點的其他部分(可變域)具有較保守胺基酸序列。恆定域含有重鏈之CH1、CH2、及CH3域(統稱為CH)及輕鏈之CHL(或CL)域。
任何哺乳動物物種之抗體(免疫球蛋白)之「輕鏈」均可基於其恆定域之胺基酸序列而歸為兩種明顯不同類型(稱為卡帕(「κ」)及拉姆達(「λ」))之一。
「Fv」為含有完全抗原識別及結合位點的最小抗體片段。此片段由以緊密、非共價締合之形式的一個重鏈可變區結構域及一個輕鏈可變區結構域的二聚體組成。這兩個域之折疊產生六個高變環(自H鏈及L鏈各自產生3個環),該等高變環有助於胺基酸殘基之抗原結合且賦予抗體抗原結合特異性。然而,即使單一可變域(或僅包含三個特異於抗原之CDR的半個Fv)具有識別並結合抗原的能力,但是與整個結合位點相比,親和力較低。
「單鏈Fv」(亦縮寫為「sFv」或「scFv」)為包含連接至單一多肽鏈中之VH及VL抗體域的抗體片段。通常,sFv多肽還包含VH與VL域之間的多肽連接子,該連接子能夠使sFv形成用於抗原結合的所需結構。關於sFv之評述,參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore編,Springer-Verlag,New York,第269-315頁(1994)。
本文所述之抗體之「功能片段」構成完整抗體之一部分,通常包括完整抗體之抗原結合或可變區或保留或具有經修飾之FcR結合能力的抗體之Fc區。抗體片段之實例包括線性抗體、單鏈抗體分子、及由抗體片段形成之多特異性抗體。
術語「雙功能抗體」係指以下小型抗體片段,其藉由在VH與VL域之間以短連接子(約5-10個殘基)構築sFv片段(參見前一段落)來製備,使得達成V域之鏈內而非鏈間配對,從而得到二價片段,即具有兩個抗原結合位點之片段。雙特異性雙功能抗體為兩個「交叉」sFv片段之異二聚體,其中兩種抗體之VH及VL域存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更詳細地描述於例如EP 404,097;WO 93/11161;Hollinger等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)中。
本文中之單株抗體特定地包括「嵌合」抗體(免疫球蛋白),其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源於特定物種或屬特定抗體類別或亞類之抗體中的相應序列一致或同源,而該(等)鏈之剩餘部分與源於另一物種或屬另一抗體類別或亞類
之抗體中的相應序列一致或同源,以及該等抗體之片段,只要其展現所需生物活性即可(美國專利第4,816,567號;Morrison等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。「人源化抗體」用作「嵌合抗體」之亞組。
非人類(例如,美洲駝或駱駝科)抗體之「人源化」形式為含有來源於非人類免疫球蛋白之最小序列的抗體。在一些實施例中,人源化抗體為以下人類免疫球蛋白(受者抗體),其中來自受者CDR(下文經定義)的殘基經具有所需特異性、親和力、及/或能力的來自諸如小鼠、大鼠、兔、駱駝、美洲駝、羊駝、或非人類靈長類動物的非人類物種(供體抗體)CDR之殘基置換。在一些情況下,人類免疫球蛋白之框架區(「FR」)殘基經對應的非人類殘基置換。此外,人源化抗體可包含不存在於受者抗體或供體抗體中之殘基。可進行此等修飾以進一步改良抗體性能,諸如結合親和力。一般而言,人源化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域之實質上全部,其中全部或實質上全部高變環對應於非人類免疫球蛋白序列之彼等,且全部或實質上全部FR區為人類免疫球蛋白序列之彼等,但是FR區可包括一或多處個別FR殘基取代,該一或多處取代改良抗體性能,諸如結合親和力、異構化、免疫原性等。FR中此等胺基酸取代之數目通常在H鏈中不多於6,且在L鏈中不多於3。人源化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分,通常為人類免疫球蛋白之恆定區。進一步細節參見例如Jones等人,Nature 321:522-525(1986);Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988);及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。亦參見例如Vaswani及Hamilton,Ann.Allergy,Asthma & Immunol.1:105-115(1998);Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995);Hurle及Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994);及美國專利第6,982,321號及第7,087,409號。
「人類抗體」為具有對應於人類所產生之抗體之胺基酸序列的胺基酸序列及/或已使用如本文所揭示之製備人類抗體之任一技術製成的抗體。此人
類抗體定義特定地排除包含非人類抗原結合殘基之人源化抗體。人類抗體可使用此項技術中已知之各種技術產生,包括噬菌體顯示文庫。Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,第77頁(1985);Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)中所述之方法亦可用於製備人類單株抗體。亦參見van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。人類抗體可藉由向基因轉殖動物投與抗原來製備,該基因轉殖動物已經修飾以回應於抗原攻擊而產生此類抗體,但其內源基因座已失能,例如經免疫基因轉殖鼠(xenomice)(XENOMOUSETM技術參見例如美國專利第6,075,181號及第6,150,584號)。關於經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體,亦參見例如Li等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。
術語「高變區」、「HVR」、或「HV」當在本文中使用時係指抗體可變域之在序列方面高度可變及/或形成結構確定環的各區。通常,單域抗體包含三個HVR(或CDR):HVR1(或CDR1)、HVR2(或CDR2)、及HVR3(或CDR3)。在三個HVR中,HVR3(或CDR3)顯示最大多樣性,且據信其在賦予抗體良好特異性方面發揮獨特作用。參見例如Hamers-Casterman等人,Nature 363:446-448(1993);Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
術語「互補決定區」或「CDR」用於指代如藉由Kabat系統所定義之高變區。參見Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)。
使用許多HVR描述且涵蓋在本文中。Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最常用(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。Chothia替代地提及結構環之位置(Chothia及Lesk,J.Mol.Biol.
196:901-917(1987))。AbM HVR表示Kabat HVR與Chothia結構環之間的折衷,且係藉由Oxford Molecular的AbM抗體建模軟體來使用。「接觸」HVR係基於可用複合物晶體結構之分析。來自此等HVR中之各者的殘基在以下表1中指出。
HVR可包含如下「延長HVR」:在VL中,24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)、及89-97或89-96(L3),以及在VH中,26-35(H1)、50-65或49-65(H2)、及93-102、94-102、或95-102(H3)。這些定義中之各者之可變域殘基係根據Kabat等人(出處同上)進行編號。
單域抗體(諸如VHH)之胺基酸殘基係根據Kabat等人給出之VH域之一般編號進行編號(「Sequence of proteins of immunological interest」,US Public Health Services,NIH Bethesda,Md.,Publication No.91),如在Riechmann及Muyldermans,J.Immunol.Methods 2000年6月23;240(1-2):185-195之文章中應用於來自駱駝科動物之VHH域。根據此編號,VHH之FR1包含在位置1-30處之胺基酸殘基,VHH之CDR1包含在位置31-35處之胺基酸殘基,VHH之FR2包含在位置36-49處之胺基酸,VHH之CDR2包含在位置50-65處之胺基酸殘基,VHH之FR3包含在位置66-94處之胺基酸殘基,VHH之CDR3包含在位置95-102處之胺基酸殘基,且VHH之FR4包含在位置103-113處之胺基酸殘基。在此態樣中,應該注意,如此項技術中針對VH域及VHH域所熟,各CDR中胺基酸殘
基之總數可有所不同,且可不對應於由Kabat編號所指示之胺基酸殘基之總數(即,根據Kabat編號之一或多個位置可能不在實際序列中被佔據,或者實際序列可能包含比Kabat編號允許之數量多的胺基酸殘基)。
表述「如Kabat中的可變域殘基編號」或「如Kabat中的胺基酸位置編號」及其變型係指用於Kabat等人(出處同上)中的抗體編譯之重鏈可變域或輕鏈可變域之編號系統。使用此編號系統,實際線性胺基酸序列可含有較少或額外的胺基酸,該等胺基酸對應於可變域之FR或HVR的縮短或對其進行的插入。例如,重鏈可變域可包括H2之殘基52之後的單一胺基酸插入(根據Kabat的殘基52a)及重鏈FR殘基82之後的插入殘基(例如,根據Kabat的殘基82a、82b、及82c等)。可藉由在抗體序列之同源區處與「標準」Kabat編號序列比對來確定給定抗體的殘基的Kabat編號。
除非本文另外指示,否則免疫球蛋白重鏈中殘基之編號係如Kabat等人(出處同上)之EU索引之編號。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。
「框架」或「FR」殘基為除了如本文所定義之HVR殘基以外的那些可變域殘基。
「人類共通框架」或「受體人類框架」為表示人類免疫球蛋白VL或VH框架序列之選擇中最常出現之胺基酸殘基的框架。通常,人類免疫球蛋白VL或VH序列選自可變域序列之亞群。通常,序列之亞群為如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中之亞群。實例包括對於VL,亞組可為如Kabat等人(出處同上)中之亞組κI、κII、κIII、或κIV。另外,對於VH,亞組可為如Kabat等人中之亞組I、亞組II、或亞組III。可替代地,人類共通框架可來源於上述者,其中具體殘基,諸如當人類框架殘基係基於其與供體框架之
同源性藉由將供體框架序列與各種人類框架序列之集合進行比對來選擇時。「來源於」人類免疫球蛋白框架或人類共通框架之受體人類框架可包含人類免疫球蛋白框架或人類共通框架之相同胺基酸序列,或其可含有預先存在的胺基酸序列變化。在一些實施例中,預先存在的胺基酸變化之數目為10個或更少、9個或更少、8個或更少、7個或更少、6個或更少、5個或更少、4個或更少、3個或更少、或2個或更少。
「親和力成熟」抗體係在其一或多個CDR中具有一或多個改變而導致抗體對抗原之親和力相較於不具有彼等改變之親本抗體改良的抗體。在一些實施例中,親和力成熟抗體對靶抗原具有奈莫耳或甚至皮莫耳親和力。親和力成熟抗體係藉由此項技術中已知的程序產生。例如,Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)描述藉由VH域及VL域改組之親和力成熟。CDR及/或框架殘基之隨機誘變描述於,例如:Barbas等人Proc Nat'l.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994);Schier等人Gene 169:147-155(1995);Yelton等人J.Immunol.155:1994-2004(1995);Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9(1995);及Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
如本文所用,術語「特異性結合」、「特異性識別」或「特異於」係指可量測且可再現的相互作用,諸如靶標與抗原結合蛋白(諸如mAb)之間的結合,該結合在包括生物分子之分子之異質群體之存在下確定靶標的存在。例如,特異性結合靶標(其可為表位)之抗原結合蛋白(諸如mAb)係與結合其他靶標相比,以較大親和力、親合力、更容易、及/或以較長持續時間結合該靶標之抗原結合蛋白(諸如mAb)。在一些實施例中,抗原結合蛋白(諸如mAb)與不相關靶標之結合程度小於抗原結合蛋白(諸如mAb)與靶標之結合的約10%,例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在一些實施例中,特異性結合靶標之抗原結合蛋白(諸如mAb)具有10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、
或10-12M之解離常數(KD)。在一些實施例中,抗原結合蛋白特異性結合在來自不同物種的蛋白中保守的蛋白上的表位。在一些實施例中,特異性結合可包括但不需要專一性結合。
術語「特異性」係指抗原結合蛋白(諸如mAb)針對抗原之具體表位的選擇性識別。例如,天然抗體具有單特異性。如本文所用之術語「多特異性」表示抗原結合蛋白具有多表位特異性(即,能夠特異性結合一種生物分子上之兩種、三種、或更多種不同表位或能夠特異性結合兩種、三種、或更多種不同生物分子上之表位)。如本文所用之「雙特異性」表示抗原結合蛋白具有兩種不同的抗原結合特異性。除非另外指示,否則所列出之雙特異性抗體所結合之抗原之順序係任意的。也就是說,例如,術語「抗TIGIT/PD-L1」、「抗PD-L1/TIGIT」、「TIGIT×PD-L1」、「PD-L1×TIGIT」、「PD-L1-TIGIT」、及「TIGIT-PD-L1」可互換地用於指代特異性結合TIGIT及PD-L1之雙特異性抗體。如本文所用之術語「單特異性」表示具有一或多個結合位點之抗原結合蛋白(諸如mAb),各結合位點結合相同抗原之相同表位。
如本文所用之術語「價」表示抗原結合蛋白中指定數目的結合位點之存在。例如天然抗體或全長抗體具有兩個結合位點且係二價的。因此,術語「三價」、「四價」、「五價」、及「六價」分別表示抗原結合蛋白中兩個結合位點、三個結合位點、四個結合位點、五個結合位點、及六個結合位點之存在。
「抗體效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區(天然序列Fc區或胺基酸序列變異體Fc區)的彼等生物活性,且隨抗體同型而有所不同。抗體效應功能之實例包括:C1q結合及補體依賴性細胞毒性;Fc受體結合;抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC);吞噬作用;細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調;及B細胞活化。「減少或最小化的」抗體效應功能意謂其自野生型或未修飾抗
體減少至少50%(可替代地60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%)。一般熟習此項技術者可容易確定及量測抗體效應功能之確定。在較佳實施例中,補體結合、補體依賴性細胞毒性、及抗體依賴性細胞毒性之抗體效應功能受到影響。在一些實施例中,效應功能通過恆定區中消除醣化的突變(例如「少效應子突變」)而經消除。在一個態樣中,少效應子突變包含CH2區中之N297A或DANA突變(D265A及/或N297A)。Shields等人,J.Biol.Chem.276(9):6591-6604(2001)。可替代地,導致減少或消除效應功能的額外突變包括:K322A及L234A/L235A(LALA)。可替代地,效應功能可通過生產技術來減少或消除,諸如在不醣化的宿主細胞(例如,大腸桿菌(E.coli.))中之表現或以導致醣化模式改變成在促進效應功能時無效或不太有效的方式(例如Shinkawa等人,J.Biol.Chem.278(5):3466-3473(2003))。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或ADCC係指一種細胞毒性形式,其中結合至某些細胞毒性細胞(例如,自然殺手(NK)細胞、嗜中性球、及巨噬細胞)上存在之Fc受體(FcR)上的分泌Ig使得此等細胞毒性效應細胞能夠與攜帶抗原之靶細胞特異性結合並隨後以細胞毒素殺手靶細胞。抗體「武裝(arm)」細胞毒性細胞且為藉由此機制殺手靶細胞所需的。用於介導ADCC的初級細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII,而單核細胞表現FcγRI、FcγRII、及FcγRIII。造血細胞上之Fc表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)之第464頁之表3中。為了評估所關注之分子之ADCC活性,可執行體外ADCC檢定,諸如美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中所述者。用於此類檢定之有用效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。可替代地或另外,所關注之分子之ADCC活性可例如在動物模型中進行體內評估,諸如Clynes等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中揭示之動物模型。
本文術語「Fc區」用於定義免疫球蛋白重鏈之C末端區,包括天然序列Fc區及變異體Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可有所不同,但人類IgG重鏈Fc區通常定義成從在位置Cys226處的胺基酸殘基或從Pro230伸長至其羧基末端。Fc區之C末端離胺酸(根據EU編號系統之殘基447)可例如在抗體之產生或純化期間,或藉由重組工程改造編碼抗體之重鏈的核酸來移除。據此,完整抗體之組成物可包含所有K447均移除之抗體群體、無K447殘基移除之抗體群體及具有帶有或不帶有K447殘基之抗體之混合物之抗體群體。用於本文所述之抗體中的合適的天然序列Fc區包括人類IgG1、IgG2(IgG2A、IgG2B)、IgG3、及IgG4。
「Fc受體」或「FcR」描述結合抗體Fc區之受體。較佳FcR為天然序列人類FcR。此外,較佳FcR為結合IgG抗體(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII、及FcγRIII亞類之受體(包括此等受質之等位基因變異體及替代剪接形式)的FcR,FcγRII受體包括FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」),其具有主要在其胞質域中不同的類似胺基酸序列。活化受體FcγRIIA在其胞質域中含有免疫受體基於酪胺酸之活化模體(ITAM)。抑制受體FcγRIIB在其胞質域中含有免疫受體基於酪胺酸之抑制模體(ITIM)。(參見M.Daëron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR評述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991);Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994);及deHaas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中。其他FcR(包括將來欲鑒別之FcR)在本文中藉由術語「FcR」來涵蓋。
術語「Fc受體」或「FcR」亦包括新生兒受體FcRn,其負責將母體IgG轉移至胎兒。Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994)。量測與FcRn結合之方法為已知的(參見例如Ghetie及Ward,Immunol.Today 18:(12):592-8(1997);Ghetie等人,Nature Biotechnology 15(7):
637-40(1997);Hinton等人,J.Biol.Chem.279(8):6213-6(2004);WO 2004/92219(Hinton等人))。可以例如在表現人類FcRn之基因轉殖小鼠或轉染人類細胞株中或者在投與具有變異體Fc區之多肽的靈長類動物中檢定體內與FcRn之結合及人類FcRn高親和力結合多肽之血清半衰期。WO 2004/42072(Presta)描述改良或減弱與FcR之結合的抗體變異體。亦參見例如Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指靶細胞在補體存在下之溶解。經典補體路徑之活化係藉由補體系統之第一組分(C1q)與結合其同源抗原的(適當亞類的)抗體之結合來起始。為了評估補體活化,可執行CDC測定,例如,如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所述。Fc區胺基酸序列改變及C1q結合能力增加或減小的抗體變異體描述於美國專利第6,194,551B1號及WO99/51642中。該等專利公開案之內容明確以引用之方式併入本文。亦參見Idusogie等人,J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
「結合親和力」通常係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總強度。除非另外指示,否則如本文所用,「結合親和力」係指反映結合對成員之間的1:1相互作用的固有結合親和力。結合親和力可以由KD、Koff、Kon或Ka表示。如本文所用,術語「Koff」意欲指代抗體(或抗原結合域)從抗體/抗原複合物中解離之解離速率常數,如從動力學選擇設置所確定,以s-1為單位表示。如本文所用,術語「Kon」意欲指代抗體(或抗原結合域)與抗原締合以形成抗體/抗原複合物之締合速率常數,以M-1s-1為單位表示。如本文所用,術語平衡解離常數「KD」係指特定抗體-抗原相互作用之解離常數,並且描述佔據存在於平衡之抗體分子溶液中之所有抗體結合域之一半所需之抗原濃度,並且等於Koff/Kon,以M為單位表示。KD之量測預先假定所有結合劑都在溶液中。在抗體與細胞壁連接之情況下,例如在酵母表現系
統中,相應平衡速率常數表示為EC50,此給出了KD之良好近似值。親和常數Ka係解離常數KD之倒數,以M-1為單位表示。
解離常數(KD)用作顯示抗體對抗原之親和力之指標。例如,藉由使用標記有多種標記物試劑之抗體的Scatchard方法,以及藉由使用BiacoreX(Amersham Biosciences製造)(其為直接出售的量測套組)或類似套組根據套組附帶之用戶手冊及實驗操作方法,有可能進行簡單的分析。可以使用此等方法導出之KD值以M(莫耳每升)為單位表示。特異性結合靶標之抗體或其抗原結合片段可具有例如10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、或10-12M之解離常數(KD)。
抗體或抗原結合域之結合特異性可藉由此項技術中已知之方法以實驗方式確定。此類方法包含但不限於西方墨點法、ELISA測試、RIA測試、ECL測試、IRMA測試、EIA測試、BIAcore測試、及肽掃描。
半數最大抑制濃度(IC50)係物質(諸如抗體)抑制特定生物或生物化學功能之有效性之量度。它表明需要多少特定藥物或其他物質(抑制劑,如抗體)來抑制特定之生物過程(例如,PD-L1與B7-1,或過程之組分,即酶、細胞、細胞受體或微生物之間之結合)達一半。該等值通常表示為莫耳濃度。對於促效劑藥物或其他物質(例如抗體),IC50與「EC50」相當。EC50亦表示在體內獲得最大作用之50%所需的血漿濃度。如本文所用,「IC50」用於指示在活體外中和50%之抗原生物活性(例如PD-L1生物活性)所需之抗體(例如抗PD-L1 mAb)之有效濃度。IC50或EC50可藉由生物檢定進行量測,諸如藉由FACS之配體結合抑制分析(競爭結合檢定)、基於細胞之細胞介素釋放檢定、或放大發光鄰近均相檢定(AlphaLISA)。
關於肽、多肽、或抗體序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」及「同源性」定義為,在比對序列並引入缺口(若需要)以達成最大序列一致性百分比之
後,候選序列中與特定肽或多肽序列中胺基酸殘基相同的胺基酸殘基之百分比,且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的所進行的比對可以此項技術中的各種方式達成,例如使用公眾可獲得之計算機軟體,諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN、或MEGALIGNTM(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定量測比對的適當參數,包括在所比較之序列之全長範圍內達成最大比對所需之任何演算法。
編碼本文所述之構築體、抗體、或其抗原結合片段之「經單離」核酸分子為經鑒別且與至少一種在其產生環境中普遍與之締合的污染物核酸分子經單離核酸分子。較佳地,經單離核酸分子不與所有與產生環境相關的組分締合。編碼本文所述之多肽及抗體的經單離核酸分子係以其在自然界中存在的形式或情況以外的形式。因此經單離核酸分子區別於天然存在於細胞中編碼本文所述之多肽及抗體的核酸。經單離核酸包括普遍含有核酸分子的細胞中所含有之核酸分子,但核酸分子存在於染色體外或存在於與其天然染色體位置不同的染色體位置處。
如本文所用,術語「載體」係指一種核酸分子,其能夠傳播其所連接之另一種核酸分子。該術語包括呈自我複制核酸結構之載體以及併入其所引入的宿主細胞之基因體中的載體。某些載體能夠導引與其可操作地連接之核酸表現。此類載體在本文中稱為「表現載體」。
如本文所用之術語「轉染」、或「轉型」、或「轉導」係指將外源性核酸轉移或引入至宿主細胞中的過程。「轉染」、或「轉型」、或「轉導」細胞為已經轉染、轉型、或轉導有外源性核酸的細胞。細胞包括原代受試者細胞及其後代。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及「宿主細胞培養物」可互換使用且指代已引入外源性核酸之細胞,包括此類細胞之後代。宿主細胞包括
「轉型體」及「轉型細胞」,其包括原代轉型細胞及源於其之後代而不考慮繼代數目。後代可能在核酸含量方面未與親本細胞完全一致,但可含有突變。本文包括具有與針對原始轉型細胞所篩選或選擇相同的功能或生物活性之突變後代。
「輔助環境」係指個體已具有癌症病史且通常(但不必要)對療法有反應的臨床環境,療法包括但不限於手術(例如,手術切除)、放療、及化療。然而,此等個體因其癌症病史而被視為處於發展疾病之風險。「輔助環境」中之治療或投與係指隨後的治療方式。風險程度(例如,當輔助環境中之個體被視為「高風險」或「低風險」時)取決於若干因素,最常見為首次治療時的疾病程度。
「新輔助環境」係指在初步/確定性療法之前進行方法的臨床環境。
術語「醫藥組成物」之「醫藥調配物」係指以下制劑,其以允許活性成分之生物活性有效之形式,且不含有對投與調配物之受試者有不可接受毒性之額外組分。此類調配物係無菌的。「無菌」調配物係滅菌的或不含所有活的微生物及其孢子。
應理解,本文所述之本發明之實施例包括「由實施例組成」及/或「主要由實施例組成」。
本文中對「約」一值或參數的提及包括(且描述)關於該值或參數本身的變化。例如,關於「約X」之描述包括對「X」之描述。
如本文所用,提及「非」一值或參數通常意謂且描述「除」一值或參數之外。例如,該方法不用於治療X型癌症,意謂該方法用於治療除X之外類型的癌症。
本文使用之術語「約X-Y」具有與「約X至約Y」相同含義。
本文所述之經單離抗TIGIT構築體包含特異性識別TIGIT或與TIGIT結合的單株抗體(或「抗TIGIT mAb」)。在本發明之一些實施例中,經單離抗TIGIT構築體為全長IgG。
與較大的PVR-nectin分子家族類似,TIGIT蛋白含有細胞外IgV域、1型跨膜區、及含有ITIM與免疫球蛋白尾酪胺酸(ITT)樣模體之胞質尾。通過CD155的TIGIT之參與誘導通過Fyn及Lck的TIGIT之磷酸化及通過胞質連接子Grb2的SHIP1之補充。將SHIP1補充至TIGIT尾阻斷通過PI3K及MAPK路徑之信號轉導且導致NK細胞抑制。另外,在磷酸化時,TIGIT之ITT樣模體結合β-阻遏蛋白2(β-arrestin2)並補充SHIP1以限制NF-κB傳訊。人類TIGIT之示範性胺基酸序列揭示於Genbank登錄號NP_776160.2。
根據本發明之實施例,人類TIGIT序列之胺基酸序列與Genbank登錄號NP_776160.2之人類TIGIT至少90%一致,並且含有與其他物種(例如,鼠類)之TIGIT胺基酸序列相比,將胺基酸序列鑒定為人類的胺基酸殘基。在一些實施例中,人類TIGIT之胺基酸序列可以與Genbank登錄號NP_776160.2之人類TIGIT至少約95%、96%、97%、98%、或99%一致。在一些實施例中,人類TIGIT序列將顯示與Genbank登錄號NP_776160.2之人類TIGIT不多於10個胺基酸差異。在一些實施例中,人類TIGIT可以顯示與Genbank登錄號NP_776160.27之TIGIT不多於5、4、3、2、或1個胺基酸差異。可如本文所述確定一致性百分比。在一些實施例中,本文所述之抗TIGIT mAb特異性結合與Genbank登錄號NP_776160.2之TIGIT具有100%胺基酸序列一致性的TIGIT多肽。在一些實施例中,本申請之抗TIGIT mAb特異性結合包含SEQ ID NO:122之胺基酸序列的TIGIT多肽。
在一些實施例中,本申請之抗TIGIT mAb可與來自除人類之外之物種之TIGIT或在結構上與人類TIGIT相關之其他蛋白(例如,人類TIGIT同源物)交叉反應。在一些實施例中,本申請之抗TIGIT mAb完全特異於人類TIGIT,且不表現出物種或其他類型之交叉反應性。
抗體或抗原結合域之結合特異性可藉由此項技術中已知之方法以實驗方式確定。此類方法包含但不限於西方墨點法、ELISA測試、RIA測試、ECL測試、IRMA測試、EIA測試、BIAcore測試、及肽掃描。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-6M、約10-6M至約10-7M、約10-7M至約10-8M、約10-8M至約10-9M、約10-9M至約10-10M、約10-10M至約10-11M、約10-11M至約10-12M、約10-5M至約10-12M、約10-6M至約10-12M、約10-7M至約10-12M、約10-8M至約10-12M、約10-9M至約10-12M、約10-10M至約10-12M、約10-5M至約10-11M、約10-7M至約10-11M、約10-8M至約10-11M、約10-9M至約10-11M、約10-5M至約10-10M、約10-7M至約10-10M、約10-8M至約10-10M、約10-5M至約10-9M、約10-7M至約10-9M、約10-5M至約10-8M、或約10-6M至約10-8M。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之Kon為約102M-1s-1至約104M-1s-1、約104M-1s-1至約106M-1s-1、約106M-1s-1至約107M-1s-1、約102M-1s-1至約107M-1s-1、約103M-1s-1至約107M-1s-1、約104M-1s-1至約107M-1s-1、約105M-1s-1至約107M-1s-1、約103M-1s-1至約106M-1s-1、或約104M-1s-1至約106M-1s-1。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之Koff為約1s-1至約10-2s-1、約10-2s-1至約10-4s-1、約10-4s-1至約10-5s-1、約10-5s-1至約10-6s-1、
約1s-1至約10-6s-1、約10-2s-1至約10-6s-1、約10-3s-1至約10-6s-1、約10-4s-1至約10-6s-1、約10-2s-1至約10-5s-1、或約10-3s-1至約10-5s-1。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb之IC50在FACS研究中小於10nM,抗TIGIT mAb競爭性地阻斷人類TIGIT過度表現之CHO-K1細胞上CD155(亦稱為PVR;0.5μg)之結合。在一些實施例中,藉由FACS分析(競爭結合檢定)或基於細胞之細胞介素釋放檢定,在配體結合之抑制中,抗TIGIT mAb之IC50小於500nM。在一些實施例中,抗TIGIT mAb之IC50小於1nM、約1nM至約10nM、約10nM至約50nM、約50nM至約100nM、約100nM至約200nM、約200nM至約300nM、約300nM至約400nM、或約400nM至約500nM。
在一些實施例中,本文所提供之抗TIGIT抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體描述於例如美國專利第4,816,567號以及Morrison等人,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))中。在一個實例中,嵌合抗體包含非人類可變區(例如,來源於駱駝物種諸如美洲駝之可變區)及人類恆定區。在另一實例中,嵌合抗體為「類別轉換」抗體,其中類別或亞類已自親體抗體之類別或亞類改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在一些實施例中,嵌合抗體為人源化抗體。通常,非人抗體經人源化以降低對人類的免疫原性,同時保留親體非人類抗體的特異性及親和力。通常,人源化抗體包含一或多個可變域,其中HVR例如CDR(或其部分)來源於非人類抗體,且FR(或其部分)來源於人類抗體序列。人源化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中,人源化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如,HVR殘基所來源之抗體)之對應殘基取代以例如恢復或改良抗體特異性或親和力。
人源化抗體及其製備方法例如評述於Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中,且進一步例如描述於Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988);Queen等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989);美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號;Kashmiri等人,Methods 36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植);Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述「表面重塑」);Dall’Acqua等人,Methods 36:43-60(2005)(描述「FR改組」);及Osbourn等人,Methods 36:61-68(2005)及Klimka等人,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人源化之人類框架區包括但不限於:使用「最佳擬合」方法選擇之框架區(參見例如Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993));源於輕鏈或重鏈可變區之特定亞組之人類抗體的共通序列之框架區(參見例如Carter的,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,89:4285(1992);及Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993));人類成熟(體細胞突變)框架區或人類生殖系框架區(參見例如Almagro及Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008));及由篩檢FR文庫獲得之框架區(參見例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
在一些實施例中,mAb被修飾,例如人源化,而不降低該域對抗原之天然親和力,同時降低其對異源物種之免疫原性。例如,可以確定抗體重鏈及輕鏈可變域(VH及VL)之胺基酸殘基,並且例如在框架區中之一個或多個小鼠胺基酸被其在人類共通序列中發現之人類對應物置換,該多肽不失去其典型特徵,即人源化不會顯著影響所得多肽之抗原結合能力。小鼠單株抗體之人源化需要在兩條鏈(重鏈及輕鏈)中引入並誘變有限量的胺基酸且保存兩條鏈之組裝。
在一些實施例中,本文所提供之抗TIGIT抗體(尤其是mAb)為人類抗體。可使用此項技術中已知之各種技術來產生人類抗體。人類抗體一般描述於van Dijk及van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)以及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中。能夠產生完全人類單域抗體之基因轉殖小鼠或大鼠係此項技術已知的。參見例如US20090307787A1、美國專利第8,754,287號、US20150289489A1、US20100122358A1、及WO2004049794。
可以藉由向基因轉殖動物投與免疫原製備人類抗體,該基因轉殖動物經修飾以響應抗原性攻擊產生完整的人類抗體或具有人類可變區的完整抗體。此類動物通常含有人類免疫球蛋白基因座之全部或一部分,其置換內源性免疫球蛋白基因座,或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中。在此類轉殖基因小鼠中,內源性免疫球蛋白基因座一般已失活。自基因轉殖動物獲得人類抗體之方法之評述參見Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術的美國專利第6,075,181號及第6,150,584號;描述HUMAB®技術的美國專利第5,770,429號;描述K-M MOUSE®技術的美國專利第7,041,870號;及描述VELOCIMOUSE®技術的美國專利申請公開案第US 2007/0061900號。可以進一步修飾來自由此類動物產生的完整抗體的人可變區,例如通過與不同的人恆定區組合進行。
也可以藉由基於融合瘤的方法製備人類抗體。用於產生人類單株抗體的人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤(heteromyeloma)細胞株已有描述。(參見例如,Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63頁(Marcel Dekker公司,New York,1987);及Boerner等人,J.Immunol.,147:86(1991))。經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中。額外方法包括例如美國專利第7,189,826號(描述自融合
瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人類-人類融合瘤)中所描述之彼等方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術(Trioma technology))亦描述於Vollmers及Brandlein,Histology and Histopathology,20(3):927-937(2005),及Vollmers及Brandlein,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
還可以藉由分離選自人類來源的噬菌體展示文庫的Fv純系可變域序列來產生人類抗體。然後,可將此類可變域序列與所需人類恆定域組合。下文描述用於自抗體文庫選擇人類抗體之技術。
可藉由對組合文庫篩選具有所需的一或多種活性的抗體來單離本發明的抗體。例如,此項技術中已知多種用於生成噬菌體顯示文庫及篩選此類文庫中具有所要結合特徵之抗體之方法。此等方法例如評述於Hoogenboom等人,Methods in Molecular Biology 178:1-37(O'Brien等人編,Human Press,Totowa,NJ,2001),且進一步描述於例如McCafferty等人,Nature 348:552-554;Clackson等人,Nature 352:624-628(1991);Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks及Bradbury,Methods in Molecular Biology 248:161-175(Lo編,Human Press,Totowa,NJ,2003);Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004)。已描述用於構築單域抗體文庫之方法,例如參見美國專利第7371849號。
在某些噬菌體展示方法中,通過聚合酶鏈式反應(PCR)分別克隆VH和VL基因的組庫,並隨機重組在噬菌體文庫中,然後可以對其篩選抗原結合噬菌體,如Winter等人,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中描述。噬菌體通常展示作為單鏈Fv(scFv)片段或作為Fab片段的抗體片段。來自經免疫來源之
文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。可替代地,可選殖天然全庫(例如來自人類)以提供針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原之單抗體來源而無需任何免疫,如Griffiths等人,EMBO J,12:725-734(1993)所描述。最終,天然文庫亦可以合成方式藉由自幹細胞選殖未經重排之V基因區段,且使用含有隨機序列以編碼高度可變CDR3區及實現活體外重排之PCR引物來製得,如由Hoogenboom及Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如:美國專利第5,750,373號、以及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號、及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫經單離抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。
本文所述之抗TIGIT mAb之生物活性可以藉由量測其半數最大抑制濃度(IC50)來確定,其係抗體抑制特定生物或生物化學功能(諸如抑制TIGIT與其配體CD155(亦稱為PVR)之間的結合)之有效性之量度。例如,此處IC50可用於指示體外中和50% TIGIT生物活性所需之抗TIGIT mAb之有效濃度。對於促效劑藥物或其他物質(例如抗體),IC50與「EC50」相當。EC50亦表示在體內獲得最大作用之50%所需的血漿濃度。IC50或EC50可以藉由此項技術中已知的測定來量測,例如生物檢定,諸如藉由FACS分析(競爭結合檢定)配體結合之抑制,基於細胞之細胞介素釋放測定、或螢光素酶報導子檢定。
例如,可以使用流式細胞術研究配體結合之阻斷。表現人類TIGIT之CHO細胞可以從貼壁培養瓶中解離,並與用於測試的不同濃度之抗TIGIT mAb,及恆定濃度之經標記之TIGIT蛋白(例如生物素標記之TIGIT/Fc蛋白)混
合。可採用抗TIGIT抗體陽性對照,諸如阿特珠單抗。將混合物在室溫下平衡30分鐘,用FACS緩衝液(含有1% BSA之PBS)洗滌三次。然後,加入特異性識別恆定濃度之經標記CD155蛋白之抗體(如PE/Cy5鏈黴抗生物素蛋白二級抗體),並在室溫下溫育15分鐘。用FACS緩衝液洗滌細胞並藉由流動式細胞測量術分析。可使用Prism(GraphPad軟體,San Diego,CA),使用非線性迴歸分析資料以計算IC50。競爭測定之結果將證明抗TIGIT mAb抑制經標記之CD155與TIGIT之間相互作用之能力。
亦可藉由基於TIGIT的細胞介素釋放之阻斷測定來測試抗TIGIT mAb之生物活性。在樹突細胞中,CD155之TIGIT接合抑制IL-12p40產生並誘導IL10產生,因此產生致耐受性樹突細胞,該等致耐受性樹突細胞抑制T細胞增殖及由對應的T細胞的IFN-γ產生(Yu等人,2009)。TIGIT進一步作用於效應T細胞中以誘導1型或17型主導向IL-10主導免疫反應之轉移。TIGIT缺陷小鼠表現出IFN-γ+細胞以及IL-17+ CD-4+ T細胞之出現率增加,同時顯示在用抗原免疫之後IL-10產生幾乎完全喪失(Joller等人,2011)。因此,藉由抗TIGIT抗體的TIGIT路徑之阻斷可使用多種監測T細胞增殖、IFN-γ釋放、或IL10分泌的生物檢定進行研究。
在一些實施例中,本申請之抗TIGIT抗體(尤其是抗TIGIT mAb)阻斷或拮抗CD155配體所轉導之信號。在一些實施例中,抗TIGIT mAb可結合TIGIT上之表位,以便抑制TIGIT與CD155相互作用。在一些實施例中,在抗體組合位點與TIGIT配體結合位點之比例大於1:1且抗體濃度大於10-8M之條件下,抗TIGIT mAb可以將TIGIT與CD155之結合降低至少約5%、10%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、90%、95%、99%、或99.9%中之任一者。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其包含:重鏈可變域(VH),其具有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之重鏈CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中之任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:40-52中任一者之胺基酸序列之重鏈CDR2或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之重鏈CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體;及輕鏈可變域(VL),其具有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之輕鏈CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之輕鏈CDR2或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之輕鏈CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體。在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)。在一些實施例中,抗TIGIT抗體係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb包含有包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之VH CDR3及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之VL CDR3,且胺基酸取代位於VH及VL域之CDR1及/或CDR2。
因此,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其包含:重鏈可變域(VH),其具有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中之任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR2或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:53-65
中任一者之胺基酸序列之CDR3;及輕鏈可變域(VL),其具有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3。在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)或更小。在一些實施例中,抗TIGIT mAb係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其包含:重鏈可變域(VH),其具有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之CDR3;及輕鏈可變域(VL),其具有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3。在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)。在一些實施例中,抗TIGIT mAb係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,本申請之抗體或抗原結合片段包含表17及18中提供之CDR之序列。
CDR可以以各種成對組合組合以產生許多人源化抗TIGIT抗體。人源化取代對於熟習此項技術者來說係清楚的。例如,可以藉由比較天然存在之VH或VL之FR序列與一或多個密切相關之人類VH或VL之對應FR序列,然後使用此項技術已知(也如本文所述)之方法將一或多個此等潛在有用之人源化取代引入該VH或VL中來確定潛在有用之人源化取代。人源化重鏈及輕鏈經配
對。可以測試所得之人源化抗體之TIGIT結合親和力、穩定性、易於表現水準及/或其他所需性質。本文所述之抗TIGIT mAb可以為部分或完全人源化的。較佳地,所得人源化抗體(諸如人源化mAb)或其抗原結合片段在本文所述之KD、Kon、Koff之情況下結合TIGIT。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT人源化mAb或其抗原結合片段,其包含:包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列之VH域或其與SEQ ID NO:1-13中任一者具有至少約80%(諸如至少約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%中任一者)序列一致性之變異體;及包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其與SEQ ID NO:14-26中任一者具有至少約80%(諸如至少約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%)序列一致性之變異體。在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其包含:包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列之VH域或其在VH域中包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體;及包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其在VL域中包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體。在一些實施例中,抗TIGIT mAb或其抗原結合片段包含:具有SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列的VH域之變異體,其中該變異體在CDR中包含胺基酸取代,諸如VH之CDR1、及/或CDR2、及/或CDR;及具有SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列的VL域之變異體,其中該變異體在CDR中包含胺基酸取代,諸如VL中任一者之CDR1、及/或CDR2、及/或CDR3。在一些實施例中,抗TIGIT mAb或其抗原結合片段包含:具有SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列的VH域之變異體,其中該變異體在FR中包含胺基酸取代,諸如VH中任一者之FR1、及/或FR2、及/或FR3、及/或FR4;及具有SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列的VL域之變異體,其中該變異體在FR中
包含胺基酸取代,諸如SEQ ID NO:14-26中任一者之FR1、及/或FR2、及/或FR3、及/或FR4。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT抗體,諸如mAb(後文稱為「競爭性抗TIGIT抗體或競爭性抗TIGIT mAb」)或其抗原結合片段,其與本文所述之抗TIGIT mAb競爭地特異性結合TIGIT。在一些實施例中,可以使用ELISA測定來確定競爭性結合。例如,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其與包含分別以下之抗TIGIT mAb競爭地特異性結合TIGIT:SEQ ID NO:1-13中任一者之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:14-26中任一者之VL胺基酸序列。又例如,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其與包含以下之抗TIGIT mAb競爭地特異性結合TIGIT:重鏈可變域(VH),其具有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之CDR3;及輕鏈可變域(VL),其具有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3。又例如,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT mAb,其與表17及18中所述之任何抗TIGIT mAb競爭地特異性結合TIGIT。在一些實施例中,競爭性抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)或更小。在一些實施例中,競爭性抗TIGIT mAb係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
包含抗TIGIT mAb之抗TIGIT構築體可以為任何可能之形式。
在一些實施例中,包含抗TIGIT mAb之抗TIGIT構築體可以進一步包含另外之多肽序列,例如一或多個抗體部分。此類另外之多肽序列可以或可
以不改變或以其他方式影響抗TIGIT mAb之(生物學)性質,並且可以或可以不向本文所述之抗TIGIT mAb添加其他功能。在一些實施例中,另外之多肽序列賦予本申請之抗TIGIT mAb一或多種所需之性質或功能。在一些實施例中,抗TIGIT構築體為嵌合抗原受體(CAR),其包含有包含本文所述之一或多個抗TIGIT結合部分之細胞外抗原結合域。
在一些實施例中,另外之多肽序列可為特異性識別第二抗原之第二抗體部分(諸如sdAb、scFv)。在一些實施例中,第二抗原決定不為TIGIT。在一些實施例中,第二抗體部分特異性識別TIGIT上與本文所述之抗TIGIT mAb相同的表位。在一些實施例中,第二抗體部分特異性識別TIGIT上與本文所述之抗TIGIT mAb不同的表位。
在一些實施例中,額外之多肽序列可以增加分子之穩定性、溶解度或吸收,降低免疫原性或毒性,消除或減弱不期望之副作用,及/或與本文所述之抗TIGIT mAb本身相比,賦予本發明之抗TIGIT構築體其他有利性質及/或降低其不希望之性質。
在一些實施例中,抗TIGIT mAb為全長IgG。在一些實施例中,抗TIGIT mAb包含IgG之恆定區,諸如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4中任一者。在一些實施例中,恆定區為人類恆定區。在一些實施例中,恆定區為人類IgG1恆定區。
因此在一些實施例中,提供一種抗TIGIT全長IgG,其包含:重鏈,其中該可變區(VH)包含有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NOs:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:53-65
中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及輕鏈,其中該可變區(VL)包含有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2或其包含約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,提供一種抗TIGIT全長IgG,其包含:重鏈,其中該可變區(VH)包含有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NOs:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及輕鏈,其中該可變區(VL)包含有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,恆定區為人類IgG1恆定區。在一些實施例中,全長抗TIGIT IgG與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)或更小。在一些實施例中,全長抗TIGIT IgG係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,提供一種全長抗TIGIT mAb,其包含SEQ ID NO:1-13中任一者之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:14-26中任一者之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中,提供一種全長抗TIGIT IgG(後文稱為「競爭性抗TIGIT IgG」),其與本文所述之任一全長抗TIGIT IgG競爭地特異性結合TIGIT。可以使用ELISA檢定來確定競爭性結合。例如,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT IgG,其與包含以下之抗TIGIT IgG競爭地特異性結合TIGIT:SEQ ID NO:1-13中任一者之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:14-26中任一者之輕鏈胺基酸序列。又例如,在一些實施例中,提供一種抗TIGIT IgG,其與包含以下之抗TIGIT IgG競爭地特異性結合TIGIT:重鏈,其中可變區(VH)包含有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之CDR3;及輕鏈,其中可變區(VL)包含有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3。在一些實施例中,競爭性抗TIGIT IgG與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)或更小。在一些實施例中,競爭性抗TIGIT IgG係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,抗TIGIT構築體包含與一或多種其他抗體部分(例如特異性識別另一抗原之抗體部分)融合之本文所述之抗TIGIT mAb。該一或多種其他抗體部分可以為任何抗體或抗體片段形式,例如sdAb、全長抗體、Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、單鏈Fv(scFv)、scFv-scFv、微型抗體、或雙功能抗體。對於某些抗體片段之綜述,參見Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)。對於scFv
片段之綜述,參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg及Moore,(Springer-Verlag,New York),第269-315頁(1994);亦參見WO 93/16185;及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含救助受體結合表位殘基且具有延長之體內半衰期之Fab及F(ab)2片段的討論,參見美國專利第5,869,046號。對於多特異性抗體之綜述,參見Weidle等人,Cancer Genomics Proteomics,10(1):1-18,2013;Geering及Fussenegger,Trends Biotechnol.,33(2):65-79,2015;Stamova等人,Antibodies,1(2):172-198,2012。雙功能抗體為可為二價或雙特異性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097;WO 1993/01161;Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003);及Hollinger等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗體及四抗體亦描述於Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)中。抗體片段可藉由各種技術製成,包括但不限於蛋白分解消化完整抗體以及藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產生,如本文所述。在一些實施例中,該一或多種其他抗體部分係抗體模擬物,其係包含令人聯想到抗體之抗原結合域之小工程化蛋白質(Geering及Fussenegger,Trends Biotechnol.,33(2):65-79,2015)。此等分子衍生自現有人支架蛋白並包含單一多肽。可包含在本文所述之抗TIGIT構築體內之示例性抗體模擬物可以為,但不限於,設計之錨蛋白重複蛋白(DARPin;包含3-5個完全合成之錨蛋白重複序列,其側翼為N-及C末端Cap域),一種親和力多聚體(avimer;高親和力蛋白質,其包含多個A域,每個域對靶標具有低親和力),或Anticalin(基於脂質運載蛋白之支架,具有四個可接近之環,每個環之序列可以為隨機)。
用於製造多特異性抗體之技術包括但不限於具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表現(參見Milstein及Cuello,Nature 305:537(1983),WO 93/08829,及Traunecker等人,EMBO J.10:3655(1991)),及「孔中結(knob-in-hole)」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體
亦可藉由以下製得:工程改造針對製造抗體Fc-雜二聚分子之靜電轉向效應(WO 2009/089004A1);使二或更多種抗體或片段交聯(參見例如美國專利第4,676,980號,及Brennan等人,Science,229:81(1985));使用白胺酸拉鍊來生產雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992));使用用於製造雙特異性抗體片段的「雙功能抗體」技術(參見例如Hollinger等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993));及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人,J.Immunol.,152:5368(1994));及如例如Tutt等人,J.Immunol.147:60(1991)中所述製備三特異性抗體;以及產生包含串聯單域抗體之多肽(參見例如,美國專利申請第20110028695號;及Conrath等人,J.Biol.Chem.,2001;276(10):7346-50)。本文中亦包括具有三或更多個功能性抗原結合位點的經工程改造之抗體,包搭章魚抗體(Octopus antibodies)」(參見例如US2006/0025576A1)。
在一些實施例中,抗TIGIT構築體內之二或更多個抗體部分可視情況藉由肽連接子連接。抗TIGIT構築體中使用之肽連接子之長度、可撓性及/或其他性質可能對性質具有一些影響,該等性質包括但不限於對於一種或多種特定抗原或表位之親和力、特異性或親合力。例如,可以選擇較長之肽連接子以確保兩個相鄰之域不在空間上相互干擾。在一些實施例中,肽連接子包含撓性殘基(例如甘胺酸及絲胺酸),使得相鄰域相對於彼此自由移動。例如,甘胺酸-絲胺酸雙聯體可以為合適之肽連接子。
肽連接子可具有任何合適之長度。在一些實施例中,肽連接子為至少約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、50、75、100、或更多個胺基酸長度中之任一者。在一些實施例中,肽連接子為不多於約100、75、50、40、35、30、25、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、或更少個胺基酸長度中之
任一者。在一些實施例中,肽連接子之長度為約1個胺基酸至約10個胺基酸、約1個胺基酸至約20個胺基酸、約1個胺基酸至約30個胺基酸、約5個胺基酸至約15個胺基酸、約10個胺基酸至約25個胺基酸、約5個胺基酸至約30個胺基酸、約10個胺基酸至約30個胺基酸長、約30個胺基酸至約50個胺基酸、約50個胺基酸至約100個胺基酸、或約1個胺基酸至約100個胺基酸中之任一者。
肽連接子可具有天然存在之序列或非天然存在之序列。例如,衍生自僅重鏈抗體之鉸鏈區之序列可用作連接子。參見,例如,WO1996/34103。在一些實施例中,肽連接子為突變人類IgG1鉸鏈(EPKSSDKTHTSPPSP,SEQ ID NO:121)。在一些實施例中,肽連接子為撓性連接子。示例性柔性連接子包括甘胺酸聚合物(G)n,甘胺酸-絲胺酸聚合物(包括,例如,(GS)n、(GSGGS)n、(GGGS)n、及(GGGGS)n,其中n至少為1之整數),甘胺酸-丙胺酸聚合物,丙胺酸-絲胺酸聚合物,及在此項技術中已知之其他柔性連接子。在一些實施例中,肽連接子包含GGGGSGGGS(SEQ ID NO:119)之胺基酸序列。在一些實施例中,肽連接子包含SEQ ID NO:120(GGGGSGGGGSGGGGS)之胺基酸序列。
在一些實施例中,本申請之經單離抗體或抗原結合片段為雙特異性或多特異性抗體,其包含本文所述之融合至第二抗體部分的抗TIGIT IgG,其中該第二抗體部分特異性結合另一抗原,較佳另一抑制性免疫查核點分子。
在一實施例中,另一抗原為CTLA-4且該第二抗體部分包含特異性結合CTLA-4之抗體或抗原結合片段,諸如抗CTLA-4 mAb,較佳抗CTLA-4 sdAb。包含針對TIGIT及CTLA-4之雙特異性的經單離抗體或抗原結合部分可在後文稱為「抗TIGIT/CTLA-4抗體」、「抗TIGIT/CTLA-4構築體」、或「TIGIT×CTLA-4抗體」。
在一實施例中,另一抗原為PD-L1且該第二抗體部分包含特異性結合PD-L1之抗體或抗原結合片段,諸如抗PD-L1 mAb,較佳抗PD-L1 sdAb。包含針對TIGIT及PD-L1之雙特異性的經單離抗體或抗原結合部分可在後文稱為「抗TIGIT/PD-L1抗體」、「抗TIGIT/PD-L1構築體」、或「TIGIT×PD-L1抗體」。
在一實施例中,另一抗原為TIM-3且該第二抗體部分包含特異性結TIM-3之抗體或抗原結合片段,諸如抗TIM-3 mAb,較佳抗TIM3 sdAb。包含針對TIGIT及TIM-3之雙特異性的經單離抗體或抗原結合部分可在後文稱為「抗TIGIT/TIM-3抗體」、「抗TIGIT/TIM-3構築體」、或「TIGIT×TIM-3抗體」。
在一實施例中,另一抗原為LAG-3且該第二抗體部分包含特異性結合LAG-3之抗體或抗原結合片段,諸如抗LAG-3 mAb,較佳抗LAG-3 sdAb。具有針對TIGIT及LAG-3之雙特異性的經單離抗體或抗原結合部分可在後文稱為「抗TIGIT/LAG-3抗體」、「抗TIGIT/LAG-3構築體」、或「TIGIT×LAG-3抗體」。
與TIGIT類似,CTLA-4、PD-L1、TIM-3、及LAG-3係抑制性免疫查核點分子。
因此在一些實施例中,提供一種經單離抗TIGIT構築體,其包含特異性識別TIGIT之全長IgG及選自由抗CTLA-4 sdAb、抗PD-L1 sdAb、抗TIM-3 sdAb、及抗LAG-3 sdAb組成之群的sdAb,其中該抗PTIGIT IgG包含:重鏈,其中該可變區(VH)包含有包含SEQ ID NO:27-39中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NOs:40-52中任一者之胺基酸序列之CDR或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:53-65中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3
處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及輕鏈,其中該可變區(VL)包含有包含SEQ ID NO:66-78中任一者之胺基酸序列之CDR1或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,包含SEQ ID NO:79-91中任一者之胺基酸序列之CDR2或其包含約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,及包含SEQ ID NO:92-104中任一者之胺基酸序列之CDR3或其包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,sdAb之N末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之重鏈之至少一者之C末端。在一些實施例中,sdAb之C末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之重鏈之至少一者之N末端。在一些實施例中,sdAb之N末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之輕鏈之至少一者之C末端。在一些實施例中,sdAb之C末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之輕鏈之至少一者之N末端。在一些實施例中,特異性識別TIGIT之全長IgG及第二結合部分sdAb視情況藉由肽連接子連接。在一些實施例中,肽連接子包含SEQ ID NO:119-121之胺基酸序列。在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)或更小。在一些實施例中,抗TIGIT IgG係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT構築體,其包含特異性識別TIGIT之全長IgG及選自由抗CTLA-4 sdAb、抗PD-L1 sdAb、抗TIM-3 sdAb、及抗LAG-3 sdAb組成之群的sdAb,其中該全長IgG包含:包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列之VH域或其與SEQ ID NO:1-13中任一者具有至少約80%(諸如至少約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%中任一者)序列一致性之變異體,且其中該VH融合至免疫球蛋白
之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其與SEQ ID NO:14-26中任一者具有至少約80%(諸如至少約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、或99%中任一者)序列一致性之變異體,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,提供一種經單離抗TIGIT構築體,其包含特異性識別TIGIT之全長IgG及選自由抗CTLA-4 sdAb、抗PD-L1 sdAb、抗TIM-3 sdAb、及抗LAG-3 sdAb組成之群的sdAb,其中該全長IgG包含:包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列之VH域或其在VH域中包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其在VL域中包含多達約3處(諸如約1處、2處、或3處中任一者)胺基酸取代之變異體,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。
在一些實施例中,包含有包含SEQ ID NO:1-13之胺基酸序列之VH域或其變異體的抗TIGIT全長IgG在CDR諸如SEQ ID NO:1-13中任一者之CDR1、及/或CDR2、及/或CDR3中包含胺基酸取代,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);且包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其變異體在CDR諸如SEQ ID NO:14-26中任一者之CDR1、及/或CDR2、及/或CDR3中包含胺基酸取代,且其中該VH融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,包含有包含SEQ ID NO:1-13之胺基酸序列之VH域或其變異體的抗TIGIT全長IgG包含SEQ ID NO:1-13中任一者之CDR1、CDR2、及CDR3,且胺基酸取代處於FR中,諸如SEQ ID NO:1-13中任一者之FR1、及/或FR2、及/或FR3、及/或FR4,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);且包含SEQ ID NO:14-26中任
一者之胺基酸序列之VL域或其變異體包含SEQ ID NO:14-26中任一者之CDR1、CDR2、及CDR3,且胺基酸取代處於FR中,諸如SEQ ID NO:14-26中任一者之FR1、及/或FR2、及/或FR3、及/或FR4,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,包含有包含SEQ ID NO:1-13之胺基酸序列之VH域或其變異體的抗TIGIT全長IgG在CDR及FR中包含胺基酸取代,且其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);且包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域或其變異體在CDR及FR中包含胺基酸取代,且其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,提供一種經單離抗TIGIT構築體,其包含特異性識別TIGIT之全長IgG及選自由抗CTLA-4 sdAb、抗PD-L1 sdAb、抗TIM-3 sdAb、及抗LAG-3 sdAb組成之群的sdAb,其中該全長IgG包含:包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列之VH域,其融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區(鉸鏈、CH1、CH2、及CH3);及包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列之VL域,其融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。在一些實施例中,sdAb之N末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之重鏈之至少一者之C末端。在一些實施例中,sdAb之C末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之重鏈之至少一者之N末端。在一些實施例中,sdAb之N末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之輕鏈之至少一者之C末端。在一些實施例中,sdAb之C末端融合至特異性識別TIGIT之全長抗體之輕鏈之至少一者之N末端。在一些實施例中,特異性識別TIGIT之全長IgG及第二結合部分sdAb視情況藉由肽連接子連接。在一些實施例中,肽連接子包含SEQ ID NO:119-121之胺基酸序列。在一些實施例中,抗TIGIT mAb與TIGIT之間的結合之KD為約10-5M至約10-12M(諸如約10-7M至約10-12M或約10-8M至約10-12M)。在一些實施例中,抗TIGIT mAb係齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化。
在一些實施例中,亦提供一種包含特異性識別TIGIT之全長IgG的抗TIGIT構築體(後文稱為「競爭性抗TIGIT構築體」),其與本文所述之抗TIGIT/CTLA-4構築體、抗TIGIT/PD-L1構築體、抗TIGIT/TIM-3構築體、或抗TIGIT/LAG-3構築體競爭地特異性結合TIGIT。
在一些實施例中,涵蓋本文所提供之抗體之胺基酸序列變異體。例如,可能需要改善抗體的結合親和力及/或其他生物特性。抗體的胺基酸序列變異體可通過將適當修飾引入編碼抗體的核苷酸序列中或通過肽合成來製備。此類修飾包括例如抗體之胺基酸序列內殘基之缺失、及/或插入、及/或取代。可進行缺失、插入、及取代之任何組合以獲得最終構築體,其限制條件為最終構築體具有所需特徵,例如抗原結合。
在一些實施例中,提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代突變誘發之所關注位點包括HVR及FR。保守取代顯示於表2中之標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表2中標題「示範性取代」下,且如下文參考胺基酸側鏈類別進一步描述。胺基酸置換可引入目標抗體和經篩選所需活性(例如,保留的/改善的抗原結合性、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC)的產物中。
可基於共同側鏈性質將胺基酸分成以下類別:(1)疏水性:正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile;(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性:Asp、Glu;(4)鹼性:His、Lys、Arg;(5)影響鏈取向之殘基:Gly、Pro;(6)芳香性:Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將必然伴有將此等類別中之一者之成員換成另一個類別。
一種類型之取代型變異體關於取代親本抗體(例如人源化抗體或人類抗體)之一或多個高變區殘基。通常,所產生之經選擇用於進一步研究的變異體將相對於親本抗體具有某些生物特性之修飾(例如,改良)(例如,增加之親和力、減少之免疫原性)及/或將具有實質上經保持的親本抗體之某些生物特性。一個示例性置換變異體為親和力成熟抗體,其可例如使用基於噬菌體展示的親和力成熟技術(諸如本文描述述的那些技術)便利地產生。簡言之,一或多個HVR殘基發生突變且該等變異體抗體在噬菌體上顯示且針對特定生物活性(例如,結合親和力)進行篩選。
可在HVR中進行改變(例如置換)以例如改善抗體親和力。可在HVR「熱點」(即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經受突變的密碼子編碼的殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))及/或SDR(a-CDR)中進行這些改變,且測試所得變異體VH或VL的結合親和力。藉由構築且自二級文庫重新選擇之親和力成熟已描述於例如Hoogenboom等人.Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等人編,Human Press,Totowa,NJ,(2001))中。在親和力成熟之一些實施例中,藉由多種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之誘變)中之任一者將多樣性引入至所選用於成熟之可變基因中。然後產生二級文庫。然後篩選文庫以鑒別具有所需親和力的任何抗體變異體。引入多樣性的另一方法涉及HVR定向方法,其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描誘變或模型化來特異性地鑒別抗原結合中涉及的HVR殘基。通常尤其靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中,置換、插入或缺失可發生在一個或多個HVR內,只要這些改變基本上不降低抗體結合抗原的能力即可。例如,可在HVR中進行基本上不降低結合親和力的保守性改變(例如如本文所提供的保守性置換)。此類改變可處於HVR「熱點」或CDR以外。在上文所提供之變異體VHH序列的一些實施例中,各HVR未改變,或含有僅一種、兩種或三種胺基酸取代。
一種可用於鑒定抗體中可以作為誘變靶位的殘基或區域的方法稱作「丙胺酸掃描誘變」,如由Curningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述。在此方法中,靶標殘基(例如帶電殘基,諸如Arg、Asp、His、Lys、及Glu)中之一殘基或一組經鑒別且由中性或帶負電胺基酸(例如,丙胺酸或聚丙胺酸)置換以確定該抗體與抗原的相互作用是否受到影響。可在對初始置換顯示功能敏感性的胺基酸位置上引入進一步置換。可替代地或另外,抗原-抗體複合物
之晶體結構用來鑒別抗體與抗原之間的接觸點。此類接觸殘基和相鄰殘基可作為置換的候選物而被靶向或消除。可篩選變異體以確定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度介於一個殘基至含有一百或更多個殘基之多肽範圍內的胺基端及/或羧基端融合體,以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。該抗體分子之其他插入變異體包括該抗體的N端或C端融合至酶(例如,針對ADEPT)或增加該抗體之血清半衰期的多肽。
在一些實施例中,改變本文所提供之抗TIGIT構築體以增加或減小構築體醣化的程度。對抗體添加醣化位點或使抗體缺失醣化位點可通過改變胺基酸序列以使得產生或除去一個或多個醣化位點來便利地實現。
當抗TIGIT構築體包含Fc區時,可以改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含一般通過N-鍵連接到Fc區的CH2域的Asn297的分支二天線寡糖。參見例如Wright等人TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可包括各種碳水化合物,例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸,以及連接到二天線寡糖結構的「主幹」中的GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中,可對本發明的抗PD-L1抗體中的寡糖進行修飾以產生具有某些改善特性的抗體變異體。
在一些實施例中,提供具有缺乏(直接或間接)連接到Fc區上的岩藻糖的碳水化合物結構的抗體變異體。例如,此類抗體中的岩藻糖量可以是1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。海藻糖之量藉由如藉由MALDI-TOF質譜法所量測,計算相對於連接至Asn297之所有糖結構(例如,複合、雜合、及高甘露糖結構)的總和,在糖鏈內之Asn297處之海藻糖的平均量來測定,如例如WO2008/077546中所述。Asn297是指位於Fc區中大致位置297(Fc區殘基的Eu
編號)上的天冬醯胺殘基;然而,Asn297也可由於抗體中的微小序列變化而位於位置297的上游或下游約±3個胺基酸處,即在位置294與300之間。此類岩藻糖基化變異體可具有改善的ADCC功能。參見,例如,美國專利公開第US 2003/0157108號(Presta,L.);第US2004/0093621號(Kyowa Hakko Kogyo公司)。關於「脫海藻糖基化」或「缺乏海藻糖」抗體變異體之公開案之實例包括:US 2003/0157108;WO 2000/61739;WO 2001/29246;US 2003/0115614;US 2002/0164328;US 2004/0093621;US 2004/0132140;US 2004/0110704;US 2004/0110282;US 2004/0109865;WO 2003/085119;WO 2003/084570;WO 2005/035586;WO 2005/035778;WO2005/053742;WO2002/031140;Okazaki等人J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化作用之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986);美國專利申請案第US 2003/0157108 A1號,Presta,L;及WO 2004/056312 A1,Adams等人,尤其在實例11中)及基因剔除細胞株,諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87:614(2004);Kanda,Y.等人,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006);及WO2003/085107)。
抗TIGIT構築體變異體進一步具有平分寡醣,例如其中連接於抗體之Fc區上的雙觸角寡醣藉由GlcNAc平分。此類抗體變異體可具有降低的岩藻糖基化及/或改善的ADCC功能。此類抗體變異體的實例描述於例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等人);美國專利號6,602,684(Umana等人);及US 2005/0123546(Umana等人)。亦提供在連接至Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。此類抗體變異體可具有改善的CDC功能。此類抗體變異
體描述於例如WO 1997/30087(Patel等人);WO 1998/58964(Raju,S.);及WO 1999/22764(Raju,S.)中。
在一些實施例中,可以將一或多個胺基酸修飾引入本文所提供之抗TIGIT構築體之Fc區,從而產生Fc區變異體。Fc區變異體可以包含在一個或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如,取代)的人Fc區序列(例如,人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在一些實施例中,本申請涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗TIGIT構築體變異體,該等效應功能使其成為抗TIGIT構築體之體內半衰期較為重要但某些效應功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之應用所需要的候選物。可進行體外及/或體內細胞毒性檢定以確認CDC及/或ADCC活性的降低/減少。例如,可以進行Fc受體(FcR)結合檢定以確保抗體缺乏FcγR結合(因此有可能缺乏ADCC活性),但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC的初級細胞(NK細胞)僅表現FcγRIII,而單核細胞表現FcγRI、FcγRII、及FcγRIII。造血細胞上之FcR表現概述於Ravetch及Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464頁中之表3中。用於評估所關注分子之ADCC活性之體外檢定之非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號中(參見例如Hellstrom,I.等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))及Hellstrom,I等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985);第5,821,337號(參見Bruggemann,M.等人,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。可替代地,可採用非放射性檢定方法(參見例如用於流式細胞術的ACTITM非放射性細胞毒性檢定(Cell Technology公司Mountain View,CA);以及CytoTox 96®非放射性細胞毒性檢定(Promega,Madison,WI)。用於此類檢定之有用效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)和自然殺手(NK)細胞。可替代地或另外,所關注之分子之ADCC活性可例如在動物模型中進行體內評估,諸如Clynes
等人.Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中揭示之動物模型。還可進行C1q結合檢定以確認抗體不能結合C1q並且因此缺乏CDC活性。參見,例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c結合ELISA。為了評估補體活化,可進行CDC檢定(參見例如Gazzano-Santoro等人,J.Immunol.Methods 202:163(1996);Cragg,M.S.等人,Blood 101:1045-1052(2003);及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本領域中已知的方法來實施FcRn結合和體內清除/半衰期測定(參見例如Petkova,S.B.等人,Int'l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效應功能的抗體包括具有Fc區殘基238、265、269、270、297、327、及329中之一或多者之取代的那些(美國專利第6,737,056號)。此類Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297、及327中之二或更多處具有取代的Fc突變體,包括殘基265及297取代成丙胺酸的所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合經改良或削弱的某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號;WO 2004/056312和Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
在一些實施例中,抗TIGIT構築體變異體包含具有一或多個改良ADCC的胺基酸取代(例如在Fc區之位置298、333、及/或334(EU殘基編號)處之取代)的Fc區。
在一些實施例中,對Fc區做出改變,其導致改變的(即,改善的或降低的)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC),例如,如描述於美國專利第6,194,551號、WO 99/51642、及Idusogie等人J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
在一些實施例中,提供一種抗TIGIT構築體(例如,HCAb)變異體,其包含有包含一或多個胺基酸取代之變異體Fc區,該等取代增加半衰期及/或改
善與新生兒Fc受體(FcRn)之結合。具有延長的半衰期和改善的與新生兒Fc受體(FcRn)的結合的抗體描述於US2005/0014934A1(Hinton等人),新生兒Fc受體(FcRn)負責將母體IgG轉移至胎兒(Guyer等人,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等人,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗體包含其中具有改善Fc區與FcRn的結合的一個或多個置換的Fc區。此類Fc變異體包括在Fc區殘基238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424、或434中之一或多者處具有取代之Fc變異體,例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
還可見Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988);美國專利號5,648,260;美國專利號5,624,821;及WO 94/29351,其關注Fc區變異體的其它實例。
亦涵蓋包含本文所述之Fc變異體之抗TIGIT構築體(諸如融合至sdAb之全長IgG或抗TIGIT IgG)或其組合。
在一些實施例中,可能需要產生半胱胺酸工程改造抗TIGIT構築體,例如「巰基單抗(thioMAb)」,其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在具體實施例中,經取代殘基存在於抗體之可及位點處。通過用半胱胺酸置換那些殘基,反應性硫醇基由此定位在抗體的可及位點處且可用於使抗體綴合至其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)以產生如本文進一步所述的免疫綴合物。在一些實施例中,以下殘基中之任一者或多個可以被半胱胺酸取代:重鏈之A118(EU編號);及重鏈Fc區之S400(EU編號)。可如例如美國專利號7,521,541中所述來生成半胱胺酸改造抗TIGIT抗體。
在某些實施例中,可以進一步修飾本文中提供的抗TIGIT抗體以含有本領域已知的且易於獲得的額外非蛋白質部分。適於使抗體衍生化的部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性實例包括但不限於聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、右旋糖酐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三口惡烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、和右旋糖酐或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中的穩定性可具有製造優勢。該聚合物可具有任何分子量,並且可為分支或未分支的。連接到抗體上的聚合物數目可以變化,而且如果連接了超過一個聚合物,那麼它們可以是相同或不同的分子。通常,用於衍生化的聚合物的數量及/或類型可基於包括但不限於有待改善的抗體的具體特性或功能、抗體衍生物是否在限定條件下用於療法中等考慮因素來確定。
在一些實施例中,提供抗TIGIT抗體與可通過暴露於輻射而選擇性加熱的非蛋白質部分的綴合物。在一些實施例中,非蛋白質部分是碳納米管(Kam等人,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長,並且包括但不限於不損害普通細胞但會將非蛋白質部分加熱至殺死鄰近於抗體-非蛋白質部分的細胞的溫度的波長。
在一些實施例中,本文所提供之抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)可以進一步修飾以含有一或多種生物活性蛋白、多肽、或其片段。如本文所用之「生物活性(bioactive)」或「生物活性(biologically active)」係指在體內顯示生物活性以實現特定功能。例如,它可以指與特定生物分子(例如蛋白質,DNA等)之組合,然後促進或抑制此生
物分子之活性。在一些實施例中,生物活性蛋白質或其片段具有免疫刺激/免疫調節、膜轉運或酶活性。
在一些實施例中,可與在本文所述之抗TIGIT構築體融合之生物活性蛋白質或其片段係配體,例如與特定細胞受體相互作用之淋巴因子及細胞因子。淋巴因子係低分子量蛋白質,當抗原或凝集素刺激T細胞生長時,T細胞分泌此等蛋白質。淋巴因子之實例包括但不限於干擾素-α、干擾素-γ、細胞介素-1(IL-1)、細胞介素-2(IL-2)、細胞介素-3(IL-3)、腫瘤壞死因子(TNF)、集落刺激因子(例如CSF-1、G-CSF、或GM-CSF)、趨化因子、巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)、巨噬細胞活化因子(MAF)、NK細胞活化因子、T細胞置換因子、白血病抑制因子(LIF)、淋巴毒素、蝕骨細胞活化因子(OAF)、溶解性免疫反應抑制劑(soluble immune response suppressor;SIRS)、生長刺激因子、單核球生長因子等。可併入至本發明之抗TIGIT融合蛋白之細胞因子包括但不限於腫瘤壞死因子α(TNFα)、干擾素(IFN)、及神經生長因子(NGF)等。
本申請進一步提供醫藥組成物,其包含有如本文所述之包含特異性識別TIGIT之全長IgG之任一抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)及視情況醫藥學上可接受之載劑。醫藥組成物可藉由將本文所述之具有所要程度之純度的抗TIGIT構築體與視情況選用之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑、或穩定劑混合來製備(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.編(1980)),其為凍乾調配物或水溶液形式。
醫藥組成物較佳係穩定的,其中包含本文所述之抗TIGIT mAb之抗TIGIT構築體在儲存時基本上保持其物理及化學穩定性及完整性。用於量測蛋白
穩定性之各種分析技術係此項技術中可用的且評述於Peptide and Protein Drug Delivery,247-301,Vincent Lee編,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.,Pubs.(1991)以及Jones,A.Adv.Drug Delivery Rev.10:29-90(1993)。可在選定溫度下持續選定時期測量穩定性。為了快速篩選,可以將制劑在40℃下保持2週至1個月,此時量測穩定性。當制劑在2-8℃下儲存時,通常制劑應在30℃或40℃下穩定至少1個月,及/或在2-8℃下穩定至少2年。當制劑在30℃下儲存時,制劑通常應在30℃下穩定至少2年,及/或在40℃下穩定至少6個月。例如,儲存期間之聚集程度可用作蛋白質穩定性之指標。在一些實施例中,本文所述之抗TIGIT構築體之穩定製劑可包含少於約10%(較佳少於約5%)之作為制劑中聚集體存在之抗TIGIT構築體。
在所用劑量及濃度下,可接受之載劑、賦形劑或穩定劑對接受者無毒,包括緩衝劑,抗氧化劑,包括抗壞血酸,甲硫胺酸,維生素E,偏亞硫酸氫鈉;防腐劑,等滲劑(如氯化鈉),穩定劑,金屬配合物(如鋅-蛋白質配合物);螯合劑如EDTA及/或非離子表面活性劑。
可接受的載劑的實例包括緩衝劑,如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸;抗氧化劑,包括抗壞血酸和甲硫胺酸;防腐劑(如十八烷基二甲基苄基氯化銨、氯化六烴季銨(hexamethonium chloride)、氯化苯二甲羥銨(benzalKonium chloride)、氯化苄甲乙氧銨(benzethonium chloride)、苯酚、丁醇或苄醇、對羥苯甲酸烷酯(如對羥苯甲酸甲酯或丙酯)、兒茶酚、間苯二酚、環己醇、3-戊醇以及間-甲酚);低分子量(小於約10個殘基)多肽;蛋白質,如血清白蛋白、凝膠或免疫球蛋白;親水性聚合物,如聚乙烯基吡咯烷酮;胺基酸,如甘胺酸、穀醯胺酸、天冬醯胺酸、精胺酸或離胺酸;單糖、雙糖以及其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合劑,如EDTA;糖,如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇;成鹽相對離子,如鈉離子;金屬絡合物(例如Zn-蛋白質絡合物);及/或非離
子界面活性劑,如TWEENTM、聚乙二醇(PEG),及PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
緩衝劑用於將pH控制在優化治療效果之範圍內,特別係在穩定性取決於pH的情況下。緩衝劑較佳以約50mM至約250mM之濃度存在。適用於本申請案之緩衝劑包括有機酸及無機酸及其鹽。例如,檸檬酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、草酸鹽、乳酸鹽、乙酸鹽。另外,緩衝劑可包含組胺酸及三甲胺鹽,例如Tris。
添加防腐劑以阻止微生物生長,並且通常以0.2%-1.0%(w/v)之範圍存在。添加防腐劑可以例如促進多用途(多劑量)制劑之生產。適用於本申請案之防腐劑包括十八烷基二甲基苄基氯化銨;六甲基氯化銨;苯紮氯銨(例如氯化物、溴化物、碘化物),苄索氯銨;硫柳汞,苯酚,丁醇或苄醇;對羥基苯甲酸烷基酯如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯;鄰苯二酚;間苯二酚;環己醇,3-戊醇及間甲酚。
存在有時稱為「穩定劑」之張力劑以調節或維持組成物中液體之張力。當與大的帶電生物分子如蛋白質及抗體一起使用時,它們通常被稱為「穩定劑」,因為它們可以與胺基酸側鏈之帶電基團相互作用,從而減少分子間及分子內相互作用之可能性。考慮到其他成分之相對量,張力劑可以以0.1重量%至25重量%,較佳1重量%至5重量%之任何量存在。較佳之張力劑包括多元糖醇,較佳三元或更高級糖醇,例如甘油、赤蘚糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇。
另外之賦形劑包括可以作為以下一者或多者之試劑:(1)填充劑,(2)溶解度增強劑,(3)穩定劑及(4)防止變性或黏附到容器壁上之試劑。此等賦形劑包括:多元糖醇(上面列舉的);胺基酸如丙胺酸、甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸、離胺酸、鳥胺酸、白胺酸、2-苯丙胺酸、麩胺酸、蘇胺酸等;
有機糖或糖醇,例如蔗糖,乳糖,乳糖醇,海藻糖,水蘇糖,甘露糖,山梨糖,木糖,核糖,核糖醇,肌胺酸,肌醇,半乳糖,半乳糖醇,甘油,環醇(例如肌醇),聚乙二醇;含硫還原劑,如尿素,谷胱甘肽,硫辛酸,硫代乙醇酸鈉,硫代甘油,α-硫代甘油及硫代硫酸鈉;低分子量蛋白質,如人血清白蛋白,牛血清白蛋白,明膠或其他免疫球蛋白;親水性聚合物,如聚乙烯吡咯啶酮;單醣(例如,木糖,甘露糖,果糖,葡萄糖;二醣(例如乳糖,麥芽糖,蔗糖);三醣如棉子糖;及多醣例如糊精或葡聚糖。
存在非離子表面活性劑或清潔劑(也稱為「潤濕劑」)以幫助溶解治療劑以及保護治療性蛋白避免發生攪動誘導之聚集,從而也允許制劑暴露於剪切表面應力而不會引起活性治療蛋白質或抗體之變性。非離子表面活性劑之存在量為約0.05mg/ml至約1.0mg/ml,較佳約0.07mg/ml至約0.2mg/ml。
合適之非離子表面活性劑包括聚山梨醇酯(20、40、60、65、80等),聚氧乙烯醚(184、188等),PLURONIC®多元醇,TRITON®,聚氧乙烯脫水山梨糖醇單醚(TWEEN®-20,TWEEN®-80等),月桂醯甘油400,聚乙二醇40硬脂酸酯,聚氧乙烯氫化蓖麻油10、50及60,甘油單硬脂酸酯,蔗糖脂肪酸酯,甲基纖維素及羧甲基纖維素。可以使用之陰離子清潔劑包括十二烷基硫酸鈉、二辛基磺基琥珀酸鈉及二辛基磺酸鈉。陽離子清潔劑包括苯紮氯銨或苄索氯銨。
為了使醫藥組成物用於體內投與,其必須為無菌的。可藉由無菌過濾膜過濾使醫藥組成物無菌。通常將本文中之醫藥組成物放置於具有無菌進入孔的容器中,例如具有皮下注射針可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或小瓶。
投與途徑根據已知且已接受之方法,諸如藉由單次或多次推注或者以合適方式在長時間內輸注,例如藉由皮下、靜脈內、腹膜內、肌肉內、動脈內、病灶內、或關節內途徑進行注射或輸注,局部投與,吸入,或藉由持續釋
放或延長釋放方式。在一些實施例中,醫藥組成物係局部投與,諸如腫瘤內投與。
可製備持續釋放制劑。持續釋放制劑的合適實例包括含有拮抗劑的固體疏水性聚合物的半透性基質,半透性基質呈成形製品的形式,例如膜或微膠囊。持續釋放基質之實例包括聚酯,水凝膠(例如,聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯),或聚(乙烯醇)),聚交酯(美國專利第3,773,919號),L-麩胺酸及乙基-L-麩胺酸酯之共聚物,不可降解之乙烯-乙酸乙烯酯,可降解之乳酸-乙醇酸共聚物,如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林組成之可注射微球)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
本文中的醫藥組成物也可含有所治療的特定適應症所需要的一種以上活性化合物,優選為具有互補活性並且不會對彼此有不利影響的化合物。或者/另外,組成物可包含細胞毒劑、化學治療劑、細胞介素、免疫抑制劑、或生長抑制劑。此類分子合適地以對預期之目的有效之量以組合形式存在。
該等活性成分也可截留在例如通過凝聚技術或界面聚合作用製備的微膠囊(例如分別為羥甲基纖維素或明膠微膠囊和聚(甲基丙酸甲酯)微膠囊)中、膠狀藥物遞送系統(例如,脂質體、白蛋白微球、微乳液、納米粒子和納米膠囊)中或粗乳液中。此類技術公開在Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版。
在一些實施例中,醫藥組成物包含在一次性小瓶中,例如一次性密封小瓶。在一些實施例中,醫藥組成物包含在多用途小瓶中。在一些實施例中,醫藥組成物大量包含在容器中。在一些實施例中,醫藥組成物為冷凍保存的。
如本文所述之包含特異性識別TIGIT之mAb之抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT全長IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異
性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)及其組成物(諸如醫藥組成物)可用於多種應用,例如診斷、分子檢定及治療。
本發明之一個態樣提供一種治療有需要之個體中之TIGIT相關疾病或病狀之方法,其包含向個體投與有效量之包含本文所述之抗TIGIT構築體之醫藥組成物。在一些實施例中,TIGIT相關疾病為癌症。在一些實施例中,TIGIT相關疾病係病原性感染,例如病毒感染。
本申請部分涵蓋蛋白質構築體(諸如抗TIGIT全長IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體),編碼其之核酸分子及/或載體,包含編碼其之核酸分子及/或載體之宿主細胞,其可以單獨或以任何方式與另一種療法組合投與,並且在至少一些態樣,與醫藥學上可接受之載劑或賦形劑一起。在一些實施例中,在投與抗TIGIT構築體之前,它們可以與此項技術熟知之合適之藥物載劑及賦形劑組合。根據本揭露製備之組成物可用於治療或癌症或延遲癌症之惡化。
在一些實施例中,提供一種治療癌症之方法,其包含向個體投與有效量包含有包含特異性識別TIGIT之mAb之經單離抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT全長IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)之醫藥組成物。在一些實施例中,癌症為實體腫瘤(諸如結腸癌)。在一些實施例中,醫藥組成物全身投與(例如靜脈內)。在一些實施例中,醫藥組成物局部(例如腫瘤內)投與。在一些實施例中,該方法進一步包含向個體投與另外之癌症療法(例如手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合)。在一些實施例中,個體為人類。在一些實施例中,該治療癌症之方法具有一或多種以下生物活性:(1)殺死癌細胞(包括旁觀者殺死);(2)抑制癌細胞之增殖;(3)在腫瘤中誘導免疫應答;
(4)減小腫瘤大小;(5)緩解患有癌症之個體之一或多種症狀;(6)抑制腫瘤轉移;(7)延長生存期;(8)延長癌症進展時間;(9)預防、抑制癌症復發、或降低癌症復發之可能性。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之殺手癌細胞之方法可達成至少約40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或更大中任一者之腫瘤細胞死亡率。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之殺手癌細胞之方法可達成至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或更大中任一者之旁觀腫瘤細胞(未受溶瘤VV感染)死亡率。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之減小腫瘤大小之方法可減小至少約10%(包括例如至少約20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%、或100%中任一者)腫瘤大小。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之抑制腫瘤轉移之方法可抑制至少約10%(包括例如至少約20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%、或100%中任一者)轉移。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之延長個體(諸如人類)存活之方法可延長個體之存活至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、或24個月中任一者。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之延長癌症進展時間之方法可延長癌症進展時間至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12週中任一者。
本文描述之方法適用於治療多種癌症,包括實體癌症及液體癌症。該方法適用於所有階段之癌症,包括早期癌症、非轉移性癌症、原發性癌症、晚期癌症、局部晚期癌症、轉移性癌症、或緩解期癌症。本文描述之方法可以用作第一療法、第二療法、第三療法或與此項技術已知之其他類型之癌症療法之組合療法,例如化療,手術,激素療法,放射,基因療法,免疫療法(例如T細胞療法),骨髓移植,幹細胞移植,靶向療法,冷凍療法,超聲療法,光動力療法,射頻消融等,在輔助環境或新輔助環境中(即,該方法可以在初步/確定性治療之前進行)。在一些實施例中,該方法用於治療先前已經治療之個體。在一
些實施例中,癌症對於先前療法係難以治癒的。在一些實施例中,該方法用於治療先前未接受過治療之個體。
在一些實施例中,該方法合適於治療TIGIT表現、活性、及/或傳訊異常的癌症,該等包括(作為非限制性實例)黑素瘤、前列腺癌、肺癌、結腸癌、胃癌、卵巢癌、乳癌、及膠質母細胞瘤。
因此在一些實施例中,提供一種治療免疫療法應答性實體瘤(諸如癌或腺癌,諸如具有異常TIGIT表現、活性及/或信號傳導之癌症)之方法,其包含向個體投與有效量包含有包含特異性識別TIGIT之單株抗體之經單離抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT全長IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)之醫藥組成物。在一些實施例中,癌症為實體腫瘤(諸如結腸癌)。在一些實施例中,醫藥組成物全身投與(例如靜脈內)。在一些實施例中,醫藥組成物局部(例如腫瘤內)投與。在一些實施例中,該方法進一步包含向個體投與另外之癌症療法(例如手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合)。在一些實施例中,個體為人類。在一些實施例中,該治療癌症之方法具有一或多種以下生物活性:(1)殺死癌細胞(包括旁觀者殺死);(2)抑制癌細胞之增殖;(3)在腫瘤中誘導免疫應答;(4)減小腫瘤大小;(5)緩解患有癌症之個體之一或多種症狀;(6)抑制腫瘤轉移;(7)延長生存期;(8)延長癌症進展時間;(9)預防、抑制癌症復發、或降低癌症復發之可能性。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之殺手癌細胞之方法可達成至少約40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或更大中任一者之腫瘤細胞死亡率。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之殺手癌細胞之方法可達成至少約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、或更大中任一者之旁觀腫瘤細胞(未受溶瘤VV感染)死亡率。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之減小腫瘤大小之
方法可減小至少約10%(包括例如至少約20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%、或100%中任一者)腫瘤大小。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之抑制腫瘤轉移之方法可抑制至少約10%(包括例如至少約20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%、或100%中任一者)轉移。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之延長個體(諸如人類)存活之方法可延長個體之存活至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、或24個月中任一者。在一些實施例中,藉由本文所述之醫藥組成物介導之延長癌症進展時間之方法可延長癌症進展時間至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12週中任一者。
在一些實施例中,該方法適用於治療具有異常CD155或TIGIT表現、活性、及/或傳訊之癌症,作為非限制性實例,該等癌症包括血液癌症及/或實體腫瘤。可以使用本發明之抗體抑制其生長之一些癌症包括通常對免疫療法有反應之癌症。用於治療之其他癌症之非限制性實例包括黑素瘤(例如,轉移性惡性黑素瘤),腎癌(例如透明細胞癌),前列腺癌(例如激素難治性前列腺腺癌),乳腺癌,結腸癌及肺癌(例如非小細胞肺癌)。另外,本發明包括其生長可以使用本發明之抗體抑制的難治性或復發性惡性腫瘤。可以使用本發明之抗體治療之其他癌症之實例包括骨癌,胰腺癌,皮膚癌,頭頸癌,皮膚或眼內惡性黑素瘤,子宮癌,卵巢癌,直腸癌,肛門區域癌,胃癌,睾丸癌,子宮癌,輸卵管癌,子宮內膜癌,子宮頸癌,陰道癌,外陰癌,霍奇金病,非霍奇金淋巴瘤,食道癌,小腸癌,內分泌系統癌,甲狀腺癌,甲狀旁腺癌,腎上腺癌,軟組織肉瘤,尿道癌,陰莖癌,慢性或急性白血病包括急性髓性白血病,慢性粒細胞白血病,急性淋巴細胞白血病,慢性淋巴細胞白血病,兒童實體瘤,淋巴細胞性淋巴瘤,膀胱癌,腎或輸尿管癌,腎盂癌,中樞神經系統腫瘤(CNS),原發性CNS淋巴瘤,腫瘤血管生成,脊髓軸腫瘤,腦幹膠質瘤,垂體腺瘤,卡波西肉瘤,表皮
樣癌,鱗狀細胞癌,T-細胞淋巴瘤,環境誘發之癌症,包括由石棉誘導之癌症,以及該等癌症之組合。本申請還可用於治療轉移性癌症,尤其係表現TIGIT之轉移性癌症(Iwai等人(2005)Int.Immunol.17:133-144)。
因此,在一些實施例中,提供一種治療免疫療法應答性實體瘤(諸如癌或腺癌,諸如具有異常TIGIT表現、活性及/或信號傳導及/或異常CTLA-4、PD-L1、TIM-3、及LAG-3表現、活性及/或信號傳導之癌症)之方法,其包含向個體投與有效量包含有包含融合至CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3 sdAb特異性識別TIGIT之全長IgG之經單離抗TIGIT構築體的醫藥組成物。在一些實施例中,提供一種治療免疫療法應答性實體瘤(諸如癌或腺癌,諸如具有異常TIGIT表現、活性及/或信號傳導及/或異常CTLA-4、PD-L1、TIM-3、LAG-3表現、活性及/或信號傳導之癌症)之方法,其包含向個體投與有效量包含有包含融合至CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3 sdAb特異性識別TIGIT之全長IgG之經單離抗TIGIT構築體的醫藥組成物。
在一些實施例中,本文所述之方法適用於治療結腸直腸癌,例如腺癌,胃腸道類癌,胃腸道間質瘤,平滑肌肉瘤,黑素瘤或鱗狀細胞癌。
本公開的醫藥組成物的劑量和所需藥物濃度可根據設想的特定用途而變化。確定適當劑量或施用途徑完全在普通技術者之技術內。動物實驗為人類療法之有效劑量之確定提供可靠的指導。有效劑量之物種間類推可以遵循Mordenti,J.及Chappell,W.「The Use of Interspecies Scaling in Toxicokinetics,」Toxicokinetics and New Drug Development,Yacobi等人編,Pergamon Press,New York 1989,第42-46頁來進行。
當體內投與包含本文所述之抗TIGIT mAb之抗TIGIT構築體時,正常劑量可以從每天約10ng/kg至約100mg/kg哺乳動物體重或更多變化,較佳約1mg/kg/天至10mg/kg/天,例如約1-3mg/kg/天,約2-4mg/kg/天,約3-5mg/kg/
天,約4-6mg/kg/天,約5-7mg/kg/天,約6-8mg/kg/天,約6-6.5mg/kg/天,約6.5-7mg/kg/天,約7-9mg/kg/天,或約8-10mg/kg/天,此取決於給藥途徑。在本公開的範圍內的是,不同的制劑對於不同的治療和不同的病症是有效的,並且意圖治療特定器官或組織的施用可需要不同於對另一種器官或組織的遞送方式的遞送。此外,劑量可藉由一或多次單獨投與來投與,或藉由連續輸注來投與。對於若干天或更長時間內的重複施用,根據病狀,持續進行治療,直至實現所需的疾病症狀抑制為止。然而,其他劑量方案可以是有用的。此療法之進展易於藉由習知技術及檢定來監測。
在一些實施例中,醫藥組成物投與一次(例如推注)。在一些實施例中,醫藥組成物被投與多次(例如2、3、4、5、6或更多次中之任何一者)。如果係多次投與,則可以藉由相同或不同的路徑執行,並且可以在同一地點或其他地點進行。醫藥組成物可以每週投與兩次,每週投與3次,每週投與4次,每週投與5次,不中斷地每日投與,每週投與一次,不中斷地每週投與,每2週投與一次,每3週投與一次,每月投與一次,每2個月一次,每3個月一次,每4個月一次,每5個月一次,每6個月一次,每7個月一次,每8個月一次,每9個月一次,每10個月一次,每11個月一次,或每年一次。給藥間隔可以為24h至48h,2天至3天,3天至5天,5天至1週,1週至2週,2週至1個月,1個月至2個月,2個月至3個月,3個月至6個月,或6個月至一年中之任一者。間隔也可以為不規則的(例如在腫瘤進展後)。在一些實施例中,給藥方案沒有中斷。在一些實施例中,每4天投與組成物4次。藉由監測患者之疾病跡象並相應地調整治療,熟習醫學技術者可以容易地確定特定患者之最佳劑量及治療方案。
將本申請案之醫藥組成物(包括但不限於重構及液體制劑)給予需要用本文所述之抗TIGIT構築體治療之個體,較佳人,根據已知方法,例如靜脈內推注給藥,或在一段時間內連續輸注,藉由肌肉內、腹膜內、腦脊髓內、皮
下、靜脈內(iv)、關節內、滑膜內、鞘內、口服、局部或吸入途徑。重構調配物可藉由將經凍乾本文所述之抗TIGIT構築體溶解於試劑中使得蛋白分散於各處來製備。適用於本申請案之示範性醫藥學上可接受之(對人投與安全且無毒)稀釋劑包括但不限於無菌水、抑菌性注射用水(BWFI)、pH緩衝溶液(例如磷酸鹽緩衝鹽水)、無菌鹽水溶液、林格氏溶液或右旋糖溶液、或鹽及/或緩衝劑之水溶液。
在一些實施例中,醫藥組成物係藉由皮下(即在皮膚下)投與來向個體投與。出於這種目的,可以使用注射器來注射醫藥組成物。然而,可使用其他用於投與醫藥組成物之裝置,諸如注射裝置、注射筆、自動注射器裝置、無針裝置、及皮下貼片遞送系統。
在一些實施例中,醫藥組成物係向個體靜脈內投與。在一些實施例中,醫藥組成物係藉由輸注(諸如靜脈內輸注)來向個體投與。免疫療法之輸注技術為此項技術已知的(參見例如Rosenberg等人,New Eng.J.of Med.319:1676(1988))。
如本文所述之包含特異性識別TIGIT之mAb之抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT全長IgG、抗TIGIT/CTLA-4雙特異性抗體、抗TIGIT/PD-L1雙特異性抗體、抗TIGIT/TIM-3雙特異性抗體、或抗TIGIT/LAG-3雙特異性抗體)及其組成物(諸如醫藥組成物)亦可用於診斷或分子檢定。例如,該抗體或其抗原結合片段可用於檢測或定量生物樣品中之TIGIT,從而檢測或監測與TIGIT有關之疾病(諸如上文所述之疾病)之進展或治療。
本文所述之抗TIGIT構築體(諸如抗TIGIT單株抗體)可使用此項技術中已知或如本文所述之任何方法製備。
齧齒動物單株抗體可以使用此項技術已知之方法獲得,例如藉由對齧齒動物物種(例如小鼠或大鼠)進行免疫並從中獲得融合瘤,或藉由使用此項技
術中已知之分子生物學技術選殖Fab片段或單鏈Fc(scFv)文庫,並且隨後使用未選擇之文庫之單個純系藉由ELISA來選擇或藉由使用噬菌體展示。
為了重組產生單株抗體,將編碼單株抗體之核酸單離或合成並插入可複制之載體中以進一步選殖(擴增DNA)或用於表現。編碼單株抗體的DNA容易單離並且使用常規程序(例如,使用能夠特異性結合至編碼抗體的重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)來測序。有很多載體可供使用。載體之選擇部分取決於要使用之宿主細胞。通常,較佳之宿主細胞來源於原核或真核(通常係哺乳動物)。
本發明亦提供以下非限制性實施例:實施例1包含一種經單離抗體,較佳mAb,或其抗原結合片段,其包含:(a)重鏈可變域(VH),其包含分別地:i.重鏈互補決定區CDR1(CDR1),其包含選自由SEQ ID NO:27-39組成之群的胺基酸序列;ii.重鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:40-52組成之群的胺基酸序列;及iii.重鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:53-65組成之群的胺基酸序列;及(b)輕鏈可變域(VL),其包含分別地:i.輕鏈CDR1,其包含選自由SEQ ID NO:66-78組成之群的胺基酸序列;ii.輕鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:79-91組成之群的胺基酸序列;及iii.輕鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:92-104組成之群的胺基酸序列;其中該抗體或其抗原結合片段能夠特異性結合TIGIT,較佳地特異性結合人類TIGIT。
實施例2為如實施例1之經單離抗體或其抗原結合片段,其中:
(1)該VH包含分別具有SEQ ID NO:27、40、及53之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:66、79、及92之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(2)該VH包含分別具有SEQ ID NO:28、41、及54之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:67、80、及93之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(3)該VH包含分別具有SEQ ID NO:29、42、及55之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:68、81、及94之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(4)該VH包含分別具有SEQ ID NO:30、43、及56之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:69、82、及95之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(5)該VH包含分別具有SEQ ID NO:31、44、及57之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:70、83、及96之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(6)該VH包含分別具有SEQ ID NO:32、45、及58之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:71、84、及97之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(7)該VH包含分別具有SEQ ID NO:33、46、及59之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:72、85、及98之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(8)該VH包含分別具有SEQ ID NO:34、47、及60之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:73、86、及99之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;
(9)該VH包含分別具有SEQ ID NO:35、48、及61之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:74、87、及100之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(10)該VH包含分別具有SEQ ID NO:36、49、及62之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:75、88、及101之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(11)該VH包含分別具有SEQ ID NO:37、50、及63之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:76、89、及102之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(12)該VH包含分別具有SEQ ID NO:38、51、及64之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:77、90、及103之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;或(13)該VH包含分別具有SEQ ID NO:39、52、及65之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:78、91、及104之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
實施例3為如實施例2之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含分別具有SEQ ID NO:38、51、及64之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:77、90、及103之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
實施例4為如實施例2之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含分別具有SEQ ID NO:39、52、及65之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含具有SEQ ID NO:78、91、及104之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
實施例5為如實施例1-4中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中分別地,該VH包含SEQ ID NO:1-13中任一者之胺基酸序列,或其與SEQ ID NO:1-13中任一者具有至少約80%、至少約90%、或至少約95%序列一致性的變異體,且該VL包含SEQ ID NO:14-26中任一者之胺基酸序列,或其與SEQ ID NO:14-26中任一者具有至少約80%、至少約90%、或至少約95%序列一致性的變異體。
實施例6為如實施例5之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含選自由SEQ ID NO:1-13組成之群的胺基酸序列,或其在該VH中包含多達約3個胺基酸取代的變異體;且該VL包含選自由SEQ ID NO:14-26組成之群的胺基酸序列,或其在該VL中包含多達約3個胺基酸取代之變異體。
實施例7為如實施例5或6之經單離抗體或其抗原結合片段,其中:(1)該VH包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列;(2)該VH包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列;(3)該VH包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列;(4)該VH包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列;(5)該VH包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列;(6)該VH包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列;
(7)該VH包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列;(8)該VH包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列;(9)該VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列;(10)該VH包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列;(11)該VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列;(12)該VH包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列;或(13)該VH包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。
實施例8為如實施例7之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。
實施例9為如實施例7之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。
實施例10為如實施例1-9中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區。
實施例11為如實施例1-10中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。
實施例12為如實施例1-11中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段與該TIGIT之間的結合之KD為10-7M至約10-12M,較佳約10-8M至約10-12M,更佳約10-9M至約10-12M。
實施例13為如實施例1-12中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其為齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化的。
實施例14為如實施例13之經單離抗體或其抗原結合片段,其為人源化的。
實施例15為如實施例14之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含選自由SEQ ID NO:105-112組成之群的胺基酸序列,且該VL包含選自由SEQ ID NO:113-118組成之群的胺基酸序列。
實施例16為如實施例1-15中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其進一步包含第二抗體部分,其中該第二抗體部分能夠特異性結合第二抗原。
實施例17為如實施例16之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分為Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、單鏈Fv(scFv)、scFv-scFv、微型抗體、雙功能抗體、sdAb、或抗體模擬物。
實施例18為如實施例17之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分為sdAb。
實施例19為如實施例16-18中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合CTLA-4,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合CTLA-4的sdAb。
實施例20為如實施例16-18中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合PD-L1,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合PD-L1的sdAb。
實施例21為如實施例16-18中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合TIM-3,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合TIM-3的sdAb。
實施例22為如實施例16-18中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合LAG-3,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合LAG-3的sdAb。
實施例23為如實施例19-22中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT的全長IgG之重鏈或輕鏈之胺基末端視情況經由肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb之羧基末端。
實施例24為如實施例19-22中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT的全長IgG之重鏈或輕鏈之羧基末端視情況經由肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb之胺基末端。
實施例25為如實施例23或24之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT的該全長IgG經由具有SEQ ID NO:119-121之一之胺基酸序列的肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb。
實施例26為一種第二經單離抗體或其抗原結合片段,其能夠與如實施例1-25中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段競爭地特異性結合TIGIT。
實施例27為一種醫藥組成物,其包含如實施例1-25中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段、或如實施例26之第二經單離抗體或其抗原結合片段、及醫藥學上可接受之載劑。
實施例28為如實施例1-25中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,如實施例26之第二經單離抗體或其抗原結合片段、或如實施例27之醫藥組成物,其用於治療有需要之受試者之TIGIT相關疾病。
實施例29為如實施例28之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該TIGIT相關疾病為癌症。
實施例30為如實施例29之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該癌症為實體腫瘤。
實施例31為如實施例29之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該癌症為結腸癌。
實施例32為如實施例28至31中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其與另外的癌症療法組合。
實施例33為如實施例32之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該另外的癌症療法為手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合。
實施例34為如實施例28之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該TIGIT相關疾病為病原性感染。
實施例35為如用於實施例28-34中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於全身或局部投與。
實施例36為如實施例28-34中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於靜脈內投與。
實施例37為如實施例28-34中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於腫瘤內投與。
實施例38為如實施例28-37中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該受試者為人類。
實施例39為一種治療有需要之受試者之TIGIT相關疾病之方法,其包含向該受試者投與有效量如實施例27之醫藥組成物。
實施例40為如實施例39之方法,其中該TIGIT相關疾病為癌症。
實施例41為如實施例40之方法,其中該癌症為實體腫瘤。
實施例42為如實施例40或41之方法,其中該癌症為結腸癌。
實施例43為如實施例40-42中任一項之方法,其進一步包含向該個體投與另外的癌症療法。
實施例44為如實施例43之方法,其中該另外的癌症療法為手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合。
實施例45為如實施例39之方法,其中該TIGIT相關疾病為病原性感染。
實施例46為如實施例39-45中任一項之方法,其中該醫藥組成物係全身或局部投與。
實施例47為如實施例39-45中任一項之方法,其中該醫藥組成物係靜脈內投與。
實施例48為如實施例39-45中任一項之方法,其中該醫藥組成物係腫瘤內投與。
實施例49為如實施例39-48中任一項之方法,其中該個體為人類。
以下實例意欲僅示範本發明,且因此不應視為以任何方式限制本發明。以下實例及詳述係藉由說明方式且不藉由限制方式來提供。
在本揭露中,通過以下免疫方法獲得小鼠抗人類TIGIT單株抗體70A11A8E6、11D8E12A4、16F10H12C11、8F2D8E7、48B5G4E12、139E2C2D2、128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4。
對於動物免疫,免疫原為Fc標籤人類TIGIT蛋白之融合蛋白(Acro Bioscience:TIT-5254)。將50μg TIGIT Fc融合蛋白與200μl弗氏完全佐劑(Sigma-Aldrich)1:1混合以使雌性Balb/c小鼠免疫。然後,每兩週用25μg與弗氏不完全佐劑1:1混合之TIGITFc融合蛋白對小鼠進行腹膜內加強,多達3次。融合之前4天,選擇藉由螢光激活細胞分選(FACS,圖1A-1C)在流動式細胞測量術研究中具有高TIGIT結合信號的三隻小鼠(8087號、8100號、及8771號)以供用25μg TIGIT Fc融合蛋白(無佐劑)進行最後一次腹膜內加強。採用FACS結合測試評估融合瘤上清液中之抗體與CHO-K1細胞(GenScript)表面上所表現之TIGIT蛋白之結合能力。收集CHO-K1親代細胞及過度表現有人類TIGIT之CHO-K1兩者並用PBS洗滌三次。將2.5×105個細胞及100μl融合瘤上清液添加至96孔板之各孔中以在4℃下孵育1小時。然後使用PBS將板洗滌3次。添加100μl iFluor標記之山羊抗小鼠IgG並在4℃下孵育45min。最後,用PBS將細胞洗滌3次,且藉由FACS BD Calibur讀出信號。
對於融合瘤融合及篩選,將經單離脾製成均質單細胞懸浮液,且亦製得骨髓瘤細胞(SP 2/0細胞)之單細胞懸浮液。通過電融合方法融合8.9×107個脾細胞及4.1×107個SP 2/0細胞。將各融合瘤融合之融合細胞再懸浮於100ml含有胸腺核苷嘧啶、次黃嘌呤、及胺基蝶呤融合瘤選擇試劑之DMEM/10% FBS
培養基中。向96孔板之50個孔中各分配100μl細胞懸浮液。將96孔板在具有6% CO2濃度之37℃孵育箱中培養7天。然後,藉由ELISA結合、阻斷、及FACS結合測試融合瘤上清液,以藉由ELISA結合測試偵測抗人類TIGIT抗體之存在。
ELISA結合測試:應用間接ELISA以評估上清液中之抗體與人類TIGITFc融合蛋白之結合能力。將0.5μg/ml重組TIGITFc融合蛋白或人類IgG1在每孔100μl PBS溶液之情況下塗佈於ELISA板中,在4℃下隔夜。使用PBST(0.05% tween)洗滌板。使用含有1% BSA之PBST以每孔200μl之形式封閉板0.5小時。稍後拋棄封閉緩衝液,且以每孔100μl之形式添加融合瘤上清液以在室溫下孵育1小時。然後用PBST將板洗滌3次。以每孔100μl之形式添加山羊抗小鼠IgG(Fab特異性)HRP並在37℃下孵育半小時。然後用PBST將板洗滌5次,且將TMB緩衝液(GenScript)添加至孔中並在室溫下孵育15min。在每孔50μl下添加1M HCL(Sigma)終止緩衝液以終止反應,且在450nm下讀取各板。
選擇對人類TIGIT Fc融合蛋白及人類IgG1進行的上清液ELISA測試之讀數之間的OD值差高於500的融合瘤以供進一步融合瘤次選殖。次選殖係藉由限制稀釋(limited dilution)進行。對細胞進行計數並於含有胸腺核苷嘧啶、次黃嘌呤、及胺基喋呤融合瘤選擇試劑之DMEM/10% FBS培養基中連續稀釋至每毫升5-15個細胞之濃度。對於各融合瘤純系,在每孔1-3個細胞之濃度下將200μl融合瘤懸浮液轉移至96個孔中。在37℃、5% CO2下將各板孵育1周。然後將上清液用於FACS結合研究中,以評估抗人類TIGIT抗體之存在。藉由FACS研究證實70A11A8E6、11D8E12A4、16F10H12C11、8F2D8E7、48B5G4E12、139E2C2D2、128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4之融合瘤上清液特異性結合人類TIGIT(圖2A-2M)。
使用表現小鼠同型ELISA套組(Clonotyping System-HRP,SouthernBiotech;Birmingham,AL)鑒別單株抗體之同型。然後使用TRIzol(Ambion)提取3×106-5×106個融合瘤細胞之單純系之總RNA。使用同型特異性引物及通用引物(PrimeScriptTM第一股cDNA合成套組,Takara;Mountain View,CA)將RNA反轉錄成cDNA,然後應用RACEPCR(GenScript)擴增抗體重鏈及輕鏈之可變區,且將PCR產物次選殖至pMD18-T載體系統(Takara)中。使用載體特異性引物確認並測序插入區段。最後,獲得70A11A8E6、11D8E12A4、16F10H12C11、8F2D8E7、48B5G4E12、139E2C2D2、128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4之可變區DNA/蛋白序列。
合成上文純系之各者之重鏈或輕鏈可變區及恆定區之DNA片段並插入至pTT5表現載體中。使用所構築之質體轉染HEK293-6E細胞,且將HEK293-6E細胞於搖瓶中在37℃下培養10天。然後收集上清液以供純化。在純化之前,用0.2M NaOH處理管及蛋白A管柱以移除熱源。然後,用0.05M Tris及1.5M NaCl(pH 8.0)再平衡管柱。將之前收集之上清液與平衡緩衝液1:1混合並過濾以保持無菌。將經過濾之上清液用蛋白A管柱在室溫下孵育2小時,並用1X平衡緩衝液洗滌。用無菌0.1M檸檬酸鈉(pH 3.5)溶析IgG。用1/9體積1M Tris-HCl(pH 9.0)中和溶析溶液。將經中和之溶液改變成PBS(pH 7.4)緩衝液以移除其他緩衝液內容物,且在無菌條件下濃縮最終的樣品溶液。然後在1.43消光係數Ec(0.1%)之情況下通過OD280 nm確定濃度。藉由SDS-PAGE使用10%預製凝膠(GenScript)在BioRad電泳系統上測試經純化之抗體。用Estain 2.0(GenScript)將凝膠染色,且藉由與蛋白標準液(protein ladder)(GenScript)比較來評估純度及分子量。
使用表面電漿子共振(SPR)生物感測器BIACORE® T200(GE Healthcare;Little Chalfont,United Kingdom)確定小鼠抗人類TIGIT單株抗體與人類TIGIT之結合動力學。從50nM開始,在3倍連續稀釋之情況下,製備不同濃度的小鼠抗人類TIGIT單株抗體。通過Fc捕捉方法將各小鼠抗人類TIGIT單株抗體固定於感測器晶片上。將具有HIS標籤之人類TIGIT蛋白用作分析物。使用BIACORE® T200評估軟體獲得解離(k d )及締合(k a )速率常數。自k d 與k a 之比計算表觀平衡解離常數(K D )。如表3中所示,小鼠抗人類TIGIT單株抗體具有可比的與人類TIGIT蛋白之結合動力學(表3)。
使用基於螢光激活細胞分選(FACS)之檢定確定小鼠抗人類TIGIT單株抗體與CHO-K1細胞上過度表現之人類或食蟹獼猴TIGIT之結合親和力。製備小鼠抗人類TIGIT單株抗體(人類TIGIT從111μM開始,且食蟹獼猴TIGIT從55.6μM開始,以9種濃度進行3倍連續稀釋),作為FACS分析之一級抗體。
將表現人類TIGIT之CHO-K1細胞自貼壁式培養瓶解離並與不同濃度之小鼠抗人類TIGIT單株抗體混合(均於96孔板中)。將混合物在室溫下平衡30分鐘並用FACS緩衝液(含有1% BSA之PBS)洗滌三次。添加作為二級抗體之iFluor標記之山羊抗小鼠IgG並在室溫下孵育45min。最後,用PBS將細胞洗滌3次,且藉由FACS BD Calibur讀取信號。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並計算EC50值。如圖3A-3C及表4中所示,FACS研究說明,小鼠抗人類TIGIT單株抗體結合在CHO-K1細胞中過度表現之人類TIGIT,其中EC50值之範圍為0.3nM至16.3nM。
在所測試之小鼠抗人類TIGIT單株抗體中,僅139E2C2D2、128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4結合食蟹獼猴TIGIT。如圖3A-3C及表5中所示,FACS研究說明,一些小鼠抗人類TIGIT單株抗體結合在CHO-K1細胞中過度表現之食蟹獼猴TIGIT,其中EC50值之範圍為1nM至18.5nM。
使用FACS檢定評估小鼠抗人類TIGIT單株抗體與PVR重組蛋白之間於人類TIGIT上之競爭結合。為了評估小鼠抗人類TIGIT單株抗體與PVR之間於人類TIGIT上之競爭結合,製備小鼠抗人類TIGIT單株抗體樣品(從500nM開始,以10種濃度進行3倍連續稀釋)。將表現人類TIGIT之CHO細胞自貼壁式培養瓶解離並與不同濃度之各小鼠抗人類TIGIT單株抗體及5μg/ml具有生物素標記之人類TIGIT-Fc融合蛋白混合。將混合物在室溫下平衡30分鐘並用FACS緩衝液(含有1% BSA之PBS)洗滌三次。然後向混合物中添加PE/Cy5鏈親和素二級抗體並在室溫下孵育15分鐘。隨後,用FACS緩衝液洗滌細胞並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並計算IC50值(圖4A-4B及表6)。競爭FACS研究證明了小鼠抗人類TIGIT單株抗體阻斷人類TIGIT與人類PVR之間的結合的能力,其中除了16F10H12C11,IC50值之範圍為0.75nM至73.5nM。
在Octet RED96儀器(ForteBio;Menlo Park,CA)上進行對128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4之表位結合測試。所有量測均在30℃下進行。使用胺偶聯方法將一種感興趣之抗體固定至生物感測器上。將抗原蛋白TIGIT於PBST緩衝液(1x PBS,pH 7.4及0.05% Tween-20)中稀釋,用作分析物1。將抗原蛋白TIGIT(濃度與分析物1中之濃度相同)及第二抗體之混合物用作分析物2。首先,將經塗佈之生物感測器浸入分析物1中,然後在再生及平衡之後浸入分析物2中。比較分析物1及分析物2之感測圖。若分析物1之結合水準顯著高於分析物2之結合水準,則認為第二抗體能夠與經固定之抗體競爭結合靶蛋白TIGIT。若分析物1之結合水準顯著低於分析物2之結合水準,則認為第二抗體不能與經固定之抗體競爭結合靶蛋白TIGIT。重複實驗,直至所有抗體經分析。將128E3G7F5、121C2F10B5、104G12E12G2、83G6H11C12、92E9D4B4、100C4E7D11、及64G1E9B4映射至三個組(表7)。各組中小鼠抗人類TIGIT單株抗體在人類TIGIT上具有密切相關或相同的表位。
藉由穩定轉染T細胞受體(TCR)活化物來將CHO-K1細胞工程改造成人工樹突細胞(APC)。然後CHO-K1 APC過度表現有PVR。用NFAT可誘導Lucia報導子構築體穩定轉染Jurkat細胞株以產生Jurkat/NFAT報導子細胞株。然後Jurkat/NFAT報導子細胞株過度表現有人類TIGIT。將CHO-K1 APC/PVR細胞與Jurkat/NFAT報導子/TIGIT細胞共培養以評估小鼠抗人類TIGIT單株抗體之中和活性。將Jurkat/NFAT報導子/TIGIT細胞用連續稀釋的各小鼠抗人類TIGIT單株抗體預孵育30分鐘,之後添加CHO-K1 APC/PVR細胞。幾小時相互作用之後,自各孔收集20μl上清液以供IL-2量測,然後向系統中添加ONE-STEPTM螢光素酶試劑以用於量測NFAT活性。藉由螢光素酶信號強度或IL-2分泌評估Jurkat/NFAT報導子/TIGIT細胞之活化。兩種細胞之間PVR在TIGIT上之結合抑制Jurkat/NFAT報導子/TIGIT細胞活化。小鼠抗人類TIGIT單株抗體阻斷PVR與TIGIT之間的相互作用,然後中和PVR在TIGIT上之抑制。添加的中和抗體越多,活化的Jurkat/NFAT報導子/TIGIT細胞越多,螢光素酶信號越強或分泌的IL-2越多(圖5A-5B、表8、及表9)。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並根據經正規化之螢光素酶信號及IL-2分泌計算EC50值。
藉由將100C4E7D11或64G1E9B4之重鏈及輕鏈可變域與人類IgG1之恆定區融合製成嵌合抗人類TIGIT單株抗體(100C4E7D11嵌合或64G1E9B4嵌合)。
藉由將100C4E7D11之重鏈(SEQ ID NO:105)及輕鏈(SEQ ID NO:113)之人源化可變域與人類IgG1之恆定區融合來製成100C4E7D11之人源化抗人類TIGIT單株抗體(100C4E7D11VH1_VL1)。
藉由將64G1E9B4之重鏈(SEQ ID NO:109)及輕鏈(SEQ ID NO:118)之人源化可變域與人類IgG1之恆定區融合來製成64G1E9B4之人源化抗人類TIGIT單株抗體(64G1E9B4VH1_VL1.M1)。人源化64G1E9B4VH1_VL1.M1單株抗體包含在SEQ ID NO:78之輕鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代在位置1K處進行,且其中殘基1K經取代為R。
藉由將64G1E9B4之重鏈(SEQ ID NO:109)及輕鏈(SEQ ID NO:118)之人源化可變域與人類IgG1之恆定區融合來製成64G1E9B4之人源化抗人類TIGIT單株抗體(64G1E9B4VH1.M1_VL1.M1)。人源化64G1E9B4VH1.M1_VL1.M1單株抗體包含在SEQ ID NO:52之重鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代在位置7D處進行,且其中殘基7D經取代為G。其亦包含在SEQ ID NO:78之輕鏈CDR中的一個胺基酸取代,其中該取代在位置1K處進行,且其中殘基1K經取代為R。
使用表面電漿子共振(SPR)生物感測器BIACORE® T200(GE Healthcare)確定嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體與人類TIGIT之結合動力學。從50nM開始,在3倍連續稀釋之情況下,製備不同濃度的嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體。通過Fc捕捉方法將各嵌合抗人類TIGIT單株抗體或各人源化抗人類TIGIT單株抗體固定於感測器晶片上。將具有HIS標籤之人類TIGIT蛋白用作分析物。使用BIACORE® T200評估軟體獲得解離(k d )及締合(k a )速率常數。自k d 與k a 之比計算表觀解離常數(K D )。如表10中所示,嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體具有可比的與人類TIGIT蛋白之結合動力學(表10)。
使用基於螢光激活細胞分選(FACS)之檢定確定嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體與CHO-K1細胞上過度表現之人類或食蟹獼猴TIGIT之結合親和力。製備嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體(人類TIGIT從100μM開始,且食蟹獼猴TIGIT從55.6μM開始,以10種濃度進行3倍連續稀釋),作為FACS分析之一級抗體。將表現人類TIGIT之CHO-K1細胞自貼壁式培養瓶解離並與不同濃度之小鼠抗人類TIGIT單株抗體混合(均於96孔板中)。將混合物在室溫下平衡30分鐘並用FACS緩衝液(含有1% BSA之PBS)洗滌三次。添加作為二級抗體之iFluor標記之山羊抗小鼠IgG
並在室溫下孵育45min。最後,用PBS將細胞洗滌3次,且藉由FACS BD Calibur讀取信號。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並計算EC50值。如圖6A及表11中所示,FACS研究證明,嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體結合在CHO-K1細胞中過度表現之人類TIGIT,其中EC50值之範圍為0.4nM至1.2nM。
嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體亦結合食蟹獼猴TIGIT。如圖6B及表12中所示,FACS研究證明,嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體結合在CHO-K1細胞中過度表現之食蟹獼猴TIGIT,其中EC50值之範圍為0.9至2.9nM。
使用FACS檢定評估嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體與PVR重組蛋白之間於人類TIGIT上之競爭結合。為了評估嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體與PVR之間於人類
TIGIT上之競爭結合,製備嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體樣品(從300nM開始,以10種濃度進行3倍連續稀釋)。將表現人類TIGIT之CHO細胞自貼壁式培養瓶解離並與不同濃度之各嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT單株抗體及5μg/ml具有生物素標記之人類TIGIT-Fc融合蛋白混合。將混合物在室溫下平衡30分鐘並用FACS緩衝液(含有1% BSA之PBS)洗滌三次。然後向混合物中添加PE/Cy5鏈親和素二級抗體並在室溫下孵育15分鐘。隨後,用FACS緩衝液洗滌細胞並藉由流動式細胞測量術進行分析。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並計算IC50值(圖7及表13)。競爭FACS研究證明了小鼠抗人類TIGIT單株抗體阻斷人類TIGIT與人類PVR之間的結合的能力,其中IC50值之範圍為0.4nM至1.3nM。
藉由穩定轉染T細胞受體(TCR)活化物來將CHO-K1細胞工程改造成人工樹突細胞(APC)。然後CHO-K1 APC中過度表現PVR。Jurkat細胞株中過度表現人類TIGIT。將CHO-K1 APC/PVR細胞與Jurkat/TIGIT細胞共培養以評估嵌合抗人類TIGIT單株抗體及人源化抗人類TIGIT單株抗體之中和活性。將Jurkat/TIGIT細胞用連續稀釋的各嵌合抗人類TIGIT單株抗體或各人源化抗人類TIGIT單株抗體預孵育30分鐘,之後添加CHO-K1 APC/PVR細胞。幾小時相互
作用之後,自各孔收集20μl上清液以供IL-2量測。藉由IL-2分泌評估Jurkat/TIGIT細胞之活化。兩種細胞之間PVR在TIGIT上之結合抑制Jurkat/TIGIT細胞活化。嵌合抗人類TIGIT單株抗體或人源化抗人類TIGIT抗體阻斷PVR與TIGIT之間的相互作用,然後中和PVR在TIGIT上之抑制。添加的中和抗體越多,活化的Jurkat/TIGIT細胞越多,分泌的IL-2越多(圖8及表14)。使用PRISMTM(GraphPad軟體,San Diego,CA)使用非線性迴歸分析數據,並根據IL-2分泌計算EC50值。
藉由將MC38腫瘤細胞(鼠類結腸腺癌細胞株)植入C57BL/6人類TIGIT基因植入(KI)小鼠(Biocytogen;Worcester,MA)中來製備小鼠異種移植模型。培養MC38腫瘤細胞,懸浮於無鎂及鈣之HBSS-/-中,且將1×106個細胞皮下注射在6-8週齡雌性C57BL/6人類TIGIT KI小鼠之側腹。使用卡尺量測腫瘤體積且用公式(長度×寬度×寬度)/2進行計算。當平均腫瘤體積達到90-100mm3時,將小鼠隨機化以開始用人源化抗人類TIGIT單株抗體進行治療。經由i.p.(5mg/kg)每4天一次給藥人源化抗人類TIGIT單株抗體。在整個研究中量測體重。
如圖9A-9B中所示,與人類IgG對照相比,人源化抗人類TIGIT單株抗體100C4E7D11VH1_VL1、64G1E9B4VH1_VL1.M1、及64G1E9B4VH1.M1VL1.M1顯示較高的腫瘤抑制功效。各測試組之平均體重在研究之幾天期間未顯示任何顯著差異。
ID:SEQ ID NO
ID:SEQ ID NO
ID:SEQ ID NO;CDR:互補決定區
ID:SEQ ID NO;CDR:互補決定區
<110> 大陸商南京傳奇生物科技有限公司
<120> 針對TIGIT之抗體及其變異體
<130> 688096.0120
<140> TW 108101551
<141> 2019-01-15
<150> PCT/CN2018/072607
<151> 2018-01-15
<160> 122
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 1
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 2
<210> 3
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 3
<210> 4
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 4
<210> 5
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 5
<210> 6
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 6
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 7
<210> 8
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 8
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 9
<210> 10
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 10
<210> 11
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 11
<210> 12
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 12
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH
<400> 13
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 14
<210> 15
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 15
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 16
<210> 17
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 17
<210> 18
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 18
<210> 19
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 19
<210> 20
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 20
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 21
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 22
<210> 23
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 23
<210> 24
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 24
<210> 25
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 25
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL
<400> 26
<210> 27
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 27
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 28
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 29
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 30
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 31
<210> 32
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 32
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 33
<210> 34
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 34
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 35
<210> 36
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 36
<210> 37
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 37
<210> 38
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 38
<210> 39
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR1
<400> 39
<210> 40
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 40
<210> 41
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 41
<210> 42
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 42
<210> 43
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 43
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 44
<210> 45
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 45
<210> 46
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 46
<210> 47
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 47
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 48
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 49
<210> 50
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 50
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 51
<210> 52
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR2
<400> 52
<210> 53
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 53
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 54
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 55
<210> 56
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 56
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 57
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 58
<210> 59
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 59
<210> 60
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 60
<210> 61
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 61
<210> 62
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 62
<210> 63
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 63
<210> 64
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 64
<210> 65
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VH CDR3
<400> 65
<210> 66
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 66
<210> 67
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 67
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 68
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 69
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 70
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 71
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 72
<210> 73
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 73
<210> 74
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 74
<210> 75
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 75
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 76
<210> 77
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 77
<210> 78
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR1
<400> 78
<210> 79
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 79
<210> 80
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 80
<210> 81
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 81
<210> 82
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 82
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 83
<210> 84
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 84
<210> 85
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 85
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 86
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 87
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 88
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 89
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 90
<210> 91
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR2
<400> 91
<210> 92
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 92
<210> 93
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 93
<210> 94
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 94
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 95
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 96
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 97
<210> 98
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 98
<210> 99
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 99
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 100
<210> 101
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 101
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 102
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 103
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠VL CDR3
<400> 104
<210> 105
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 105
<210> 106
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 106
<210> 107
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 107
<210> 108
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 108
<210> 109
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 109
<210> 110
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 110
<210> 111
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 111
<210> 112
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VH
<400> 112
<210> 113
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 113
<210> 114
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 114
<210> 115
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 115
<210> 116
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 116
<210> 117
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 117
<210> 118
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人源化VL
<400> 118
<210> 119
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽連接子
<400> 119
<210> 120
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽連接子
<400> 120
<210> 121
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽連接子
<400> 121
<210> 122
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> TIGIT
<400> 122
Claims (38)
- 一種經單離抗體或其抗原結合片段,其包含:(a)重鏈可變域(VH),其包含分別地:i.重鏈互補決定區1(CDR1),其包含選自由SEQ ID NO:27-39組成之群的胺基酸序列;ii.重鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:40-52組成之群的胺基酸序列;及iii.重鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:53-65組成之群的胺基酸序列;及(b)輕鏈可變域(VL),其包含分別地:i.輕鏈CDR1,其包含選自由SEQ ID NO:66-78組成之群的胺基酸序列;ii.輕鏈CDR2,其包含選自由SEQ ID NO:79-91組成之群的胺基酸序列;及iii.輕鏈CDR3,其包含選自由SEQ ID NO:92-104組成之群的胺基酸序列;其中該抗體或其抗原結合片段能夠特異性結合TIGIT,較佳地特異性結合人類TIGIT。
- 如申請專利範圍第1項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中:(1)該VH包含分別具有SEQ ID NO:27、40、及53之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:66、79、及92之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(2)該VH包含分別具有SEQ ID NO:28、41、及54之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:67、80、及93之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3; (3)該VH包含分別具有SEQ ID NO:29、42、及55之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:68、81、及94之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(4)該VH包含分別具有SEQ ID NO:30、43、及56之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:69、82、及95之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(5)該VH包含分別具有SEQ ID NO:31、44、及57之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:70、83、及96之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(6)該VH包含分別具有SEQ ID NO:32、45、及58之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:71、84、及97之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(7)該VH包含分別具有SEQ ID NO:33、46、及59之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:72、85、及98之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(8)該VH包含分別具有SEQ ID NO:34、47、及60之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:73、86、及99之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(9)該VH包含分別具有SEQ ID NO:35、48、及61之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:74、87、及100之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(10)該VH包含分別具有SEQ ID NO:36、49、及62之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:75、88、及101之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3; (11)該VH包含分別具有SEQ ID NO:37、50、及63之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:76、89、及102之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;(12)該VH包含分別具有SEQ ID NO:38、51、及64之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:77、90、及103之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3;或(13)該VH包含分別具有SEQ ID NO:39、52、及65之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:78、91、及104之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
- 如申請專利範圍第2項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含分別具有SEQ ID NO:38、51、及64之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含分別具有SEQ ID NO:77、90、及103之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
- 如申請專利範圍第2項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含分別具有SEQ ID NO:39、52、及65之胺基酸序列的該等重鏈CDR1、CDR2、及CDR3序列,且該VL包含具有SEQ ID NO:78、91、及104之胺基酸序列的該等輕鏈CDR1、CDR2、及CDR3。
- 如申請專利範圍第1項至第4項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中分別地該VH包含與選自由SEQ ID NO:1-13組成之群的序列至少90%一致的胺基酸序列,且該VL包含與選自由SEQ ID NO:14-26組成之群的序列至少90%一致的胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第5項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含選自由SEQ ID NO:1-13組成之群的胺基酸序列,或其在該VH中包含 多達約3個胺基酸取代的變異體;且該VL包含選自由SEQ ID NO:14-26組成之群的胺基酸序列,或其在該VL中包含多達約3個胺基酸取代之變異體。
- 如申請專利範圍第5項或第6項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中:(1)該VH包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:14之胺基酸序列;(2)該VH包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:15之胺基酸序列;(3)該VH包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:16之胺基酸序列;(4)該VH包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:17之胺基酸序列;(5)該VH包含SEQ ID NO:5之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:18之胺基酸序列;(6)該VH包含SEQ ID NO:6之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:19之胺基酸序列;(7)該VH包含SEQ ID NO:7之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:20之胺基酸序列;(8)該VH包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:21之胺基酸序列;(9)該VH包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:22之胺基酸序列;(10)該VH包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:23之胺基酸序列; (11)該VH包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:24之胺基酸序列;(12)該VH包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列;或(13)該VH包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第7項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:25之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第7項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列,且該VL包含SEQ ID NO:26之胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第1項至第9項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH融合至免疫球蛋白之重鏈恆定區。
- 如申請專利範圍第1項至第10項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VL融合至免疫球蛋白之輕鏈恆定區(CL)。
- 如申請專利範圍第1項至第11項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段與該TIGIT之間的結合之KD為10-7M至約10-12M,較佳約10-8M至約10-12M,更佳約10-9M至約10-12M。
- 如申請專利範圍第1項至第12項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其為齧齒動物、嵌合、人類、部分人源化、或完全人源化的。
- 如申請專利範圍第13項之經單離抗體或其抗原結合片段,其為人源化的。
- 如申請專利範圍第14項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該VH包含選自由SEQ ID NO:105-112組成之群的胺基酸序列,且該VL包含選自由SEQ ID NO:113-118組成之群的胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第1項至第15項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其進一步包含第二抗體部分,其中該第二抗體部分能夠特異性結合第二抗原。
- 如申請專利範圍第16項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分為Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、單鏈Fv(scFv)、scFv-scFv、微型抗體、雙功能抗體、sdAb、或抗體模擬物。
- 如申請專利範圍第17項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分為sdAb。
- 如申請專利範圍第16項至第18項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合CTLA-4,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合CTLA-4之sdAb。
- 如申請專利範圍第16項至第18項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合PD-L1,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合PD-L1之sdAb。
- 如申請專利範圍第16項至第18項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合TIM-3,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合TIM-3之sdAb。
- 如申請專利範圍第16項至第18項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中該第二抗體部分能夠特異性結合LAG-3,較佳地,該第二抗體部分為能夠特異性結合LAG-3之sdAb。
- 如申請專利範圍第19項至第22項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT之全長IgG之重鏈或輕鏈之胺基末端視情況經由肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb之羧基末端。
- 如申請專利範圍第19項至第22項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT之全長IgG之重鏈或輕鏈之羧基末端視情況經由肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb之胺基末端。
- 如申請專利範圍第23項或第24項之經單離抗體或其抗原結合片段,其中能夠特異性識別TIGIT之該全長IgG經由具有SEQ ID NO:119-121之一之胺基酸序列的肽連接子融合至能夠特異性結合CTLA-4、PD-L1、TIM-3、或LAG-3的該sdAb。
- 一種第二經單離抗體或其抗原結合片段,其能夠與如申請專利範圍第1項至第25項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段競爭地特異性結合TIGIT。
- 一種醫藥組成物,其包含如申請專利範圍第1項至第25項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段、或如申請專利範圍第26項之第二經單離抗體或其抗原結合片段、及醫藥學上可接受之載劑。
- 如申請專利範圍第1項至第25項中任一項之經單離抗體或其抗原結合片段,如申請專利範圍第26項之第二經單離抗體或其抗原結合片段、或如申請專利範圍第27項之醫藥組成物,其用於治療有需要之受試者之TIGIT相關疾病。
- 如申請專利範圍第28項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該TIGIT相關疾病為癌症。
- 如申請專利範圍第29項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該癌症為實體腫瘤。
- 如申請專利範圍第29項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該癌症為結腸癌。
- 如申請專利範圍第28項至第31項中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其與另外的癌症療法組合。
- 如申請專利範圍第32項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該另外的癌症療法為手術、放射、化療、免疫療法、激素療法、或其組合。
- 如申請專利範圍第28項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該TIGIT相關疾病為病原性感染。
- 如申請專利範圍第28項至第34項中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於全身或局部投與。
- 如申請專利範圍第28項至第34項中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於靜脈內投與。
- 如申請專利範圍第28項至第34項中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該經單離抗體或抗原結合片段或醫藥組成物係用於腫瘤內投與。
- 如申請專利範圍第28項至第37項中任一項之供使用的經單離抗體或其抗原結合片段或醫藥組成物,其中該受試者為人類。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
??PCT/CN2018/072607 | 2018-01-15 | ||
CN2018072607 | 2018-01-15 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TW201932489A true TW201932489A (zh) | 2019-08-16 |
Family
ID=67219401
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TW108101551A TW201932489A (zh) | 2018-01-15 | 2019-01-15 | 針對tigit之抗體及其變異體 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11708410B2 (zh) |
EP (1) | EP3740508A4 (zh) |
JP (1) | JP7316284B2 (zh) |
KR (1) | KR20200109313A (zh) |
CN (1) | CN111601826B (zh) |
AU (1) | AU2019207296A1 (zh) |
CA (1) | CA3088332A1 (zh) |
IL (1) | IL275737A (zh) |
SG (1) | SG11202005595YA (zh) |
TW (1) | TW201932489A (zh) |
WO (1) | WO2019137548A1 (zh) |
Families Citing this family (23)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA3062061A1 (en) | 2017-05-01 | 2018-11-08 | Agenus Inc. | Anti-tigit antibodies and methods of use thereof |
EP3898677A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | OSE Immunotherapeutics | Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule |
WO2020165374A1 (en) | 2019-02-14 | 2020-08-20 | Ose Immunotherapeutics | Bifunctional molecule comprising il-15ra |
WO2021122866A1 (en) | 2019-12-17 | 2021-06-24 | Ose Immunotherapeutics | Bifunctional molecules comprising an il-7 variant |
CA3176497A1 (en) | 2020-05-07 | 2021-11-11 | Fatima MECHTA-GRIGORIOU | Antxr1 as a biomarker of immunosuppressive fibroblast populations and its use for predicting response to immunotherapy |
CN114507284B (zh) * | 2020-05-09 | 2023-05-26 | 华博生物医药技术(上海)有限公司 | 抗tigit的抗体、其制备方法和应用 |
AU2021293507A1 (en) | 2020-06-18 | 2023-02-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Treatment with anti-TIGIT antibodies and PD-1 axis binding antagonists |
TW202216778A (zh) | 2020-07-15 | 2022-05-01 | 美商安進公司 | Tigit及cd112r阻斷 |
CN114539405B (zh) * | 2020-11-23 | 2024-02-23 | 广东菲鹏制药股份有限公司 | 抗tigit抗体或其抗原结合片段 |
WO2022112198A1 (en) | 2020-11-24 | 2022-06-02 | Worldwide Innovative Network | Method to select the optimal immune checkpoint therapies |
WO2022148781A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Institut Curie | Combination of mcoln activators and immune checkpoint inhibitors |
WO2022214652A1 (en) | 2021-04-09 | 2022-10-13 | Ose Immunotherapeutics | Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains |
WO2022214653A1 (en) | 2021-04-09 | 2022-10-13 | Ose Immunotherapeutics | New scaffold for bifunctional molecules with improved properties |
AR125753A1 (es) | 2021-05-04 | 2023-08-09 | Agenus Inc | Anticuerpos anti-tigit, anticuerpos anti-cd96 y métodos de uso de estos |
CN115466327A (zh) * | 2021-06-10 | 2022-12-13 | 北京天广实生物技术股份有限公司 | 结合tigit的抗体及其用途 |
TW202320848A (zh) | 2021-07-28 | 2023-06-01 | 美商建南德克公司 | 治療癌症之方法及組成物 |
WO2023056403A1 (en) | 2021-09-30 | 2023-04-06 | Genentech, Inc. | Methods for treatment of hematologic cancers using anti-tigit antibodies, anti-cd38 antibodies, and pd-1 axis binding antagonists |
WO2023138639A1 (zh) * | 2022-01-24 | 2023-07-27 | 原启生物科技(上海)有限责任公司 | 靶向tigit的抗原结合蛋白及其用途 |
WO2023240058A2 (en) | 2022-06-07 | 2023-12-14 | Genentech, Inc. | Prognostic and therapeutic methods for cancer |
WO2024003360A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Institut Curie | Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma |
WO2024028386A1 (en) | 2022-08-02 | 2024-02-08 | Ose Immunotherapeutics | Multifunctional molecule directed against cd28 |
WO2024041639A1 (en) * | 2022-08-26 | 2024-02-29 | Nanjing Legend Biotech Co., Ltd. | Antibodies targeting tigit and uses thereof |
CN116444653B (zh) * | 2023-03-09 | 2024-03-15 | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) | 一株阻断性非洲猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备与应用 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103073644B (zh) * | 2012-12-31 | 2014-03-12 | 中国科学技术大学 | 特异性抗小鼠tigit的单克隆抗体及其制备方法、鉴定及应用 |
EP3169363A4 (en) | 2014-07-16 | 2018-02-21 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods of treating cancer using tigit inhibitors and anti-cancer agents |
MA40475A (fr) * | 2014-08-19 | 2017-06-28 | Fayadat Dilman Laurence | Anticorps anti-tigit |
KR102590385B1 (ko) | 2014-12-22 | 2023-10-18 | 시스트이뮨, 인코포레이티드 | 이중특이적 4가 항체 및 이의 제조 및 사용방법 |
UY36471A (es) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware | Anticuerpos contra el inmunorreceptor (tigit) de linfocitos t con dominios ig y motivos de inhibición del inmunorreceptor basados en tirosina (itim) |
TWI715587B (zh) * | 2015-05-28 | 2021-01-11 | 美商安可美德藥物股份有限公司 | Tigit結合劑和彼之用途 |
EP3337517A4 (en) * | 2015-08-20 | 2019-04-17 | Abbvie Stemcentrx LLC | ANTI-DLL3 ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES AND METHODS OF USE |
JP6764474B2 (ja) | 2015-09-25 | 2020-09-30 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 抗tigit抗体及び使用方法 |
RU2020124191A (ru) * | 2015-10-01 | 2020-08-27 | Потенза Терапевтикс, Инк. | Анти-tigit антиген-связывающие белки и способы их применения |
EP3565839A4 (en) * | 2017-01-05 | 2021-04-21 | Gensun Biopharma Inc. | CHECKPOINT REGULATOR ANTAGONISTS |
-
2019
- 2019-01-15 JP JP2020539000A patent/JP7316284B2/ja active Active
- 2019-01-15 CA CA3088332A patent/CA3088332A1/en active Pending
- 2019-01-15 WO PCT/CN2019/071711 patent/WO2019137548A1/en unknown
- 2019-01-15 TW TW108101551A patent/TW201932489A/zh unknown
- 2019-01-15 KR KR1020207020419A patent/KR20200109313A/ko active Search and Examination
- 2019-01-15 CN CN201980008439.XA patent/CN111601826B/zh active Active
- 2019-01-15 SG SG11202005595YA patent/SG11202005595YA/en unknown
- 2019-01-15 AU AU2019207296A patent/AU2019207296A1/en active Pending
- 2019-01-15 EP EP19738954.7A patent/EP3740508A4/en active Pending
- 2019-01-15 US US15/733,364 patent/US11708410B2/en active Active
-
2020
- 2020-06-29 IL IL275737A patent/IL275737A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
SG11202005595YA (en) | 2020-07-29 |
CA3088332A1 (en) | 2019-07-18 |
US11708410B2 (en) | 2023-07-25 |
AU2019207296A1 (en) | 2020-07-16 |
KR20200109313A (ko) | 2020-09-22 |
EP3740508A4 (en) | 2022-03-23 |
EP3740508A1 (en) | 2020-11-25 |
IL275737A (en) | 2020-08-31 |
WO2019137548A1 (en) | 2019-07-18 |
CN111601826B (zh) | 2023-12-15 |
JP2021510710A (ja) | 2021-04-30 |
CN111601826A (zh) | 2020-08-28 |
JP7316284B2 (ja) | 2023-07-27 |
US20210095028A1 (en) | 2021-04-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111601826B (zh) | 针对tigit的抗体及其变体 | |
JP7410024B2 (ja) | Pd-l1に対する単一ドメイン抗体とその多様体 | |
JP7383617B2 (ja) | Pd-l1に対する抗体及びそのバリアント | |
CN111699200B (zh) | 针对pd-1的单域抗体和其变体 | |
TW202003567A (zh) | 針對lag-3之單一結構域抗體及其用途 | |
JP2023509214A (ja) | 抗tigit抗体、それを含む多重特異性抗体及びその使用方法 | |
CN114008080B (zh) | 抗pd-l1/抗lag-3多抗原结合蛋白及其使用方法 | |
JP2023509215A (ja) | 抗tigit抗体、それを含む多重特異性抗体及びその使用方法。 | |
JP2023543031A (ja) | 抗cd93構築物およびその使用 | |
WO2023160376A1 (en) | Antibodies and variants thereof against human b7-h3 | |
CN116783215A (zh) | 抗cd93构建体及其用途 |