TW201922772A - Il8阻斷上皮-間質轉換(emt)途徑與克服癌症幹細胞 - Google Patents

Il8阻斷上皮-間質轉換(emt)途徑與克服癌症幹細胞 Download PDF

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克文 尼艾茲
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克利福德 安德斯 奧爾森
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Abstract

本案提供對IL-8具有高親和力的重組IL-8抗體、其片段或單鏈可變片段(single chain variable fragment, scFv)之組合物、方法，以及用途，以將腫瘤表現的或內源性的IL-8作為標靶。較佳地，該重組IL-8抗體或多價單鏈可變片段(scFv)片段包含一包括選自SEQ ID NO. 1-15, 31-32的一第一胺基酸序列的VH區段，及/或一包括選自SEQ ID NO. 16-30, 33-34的一第二胺基酸序列的VL區段。該重組IL-8抗體或多價單鏈可變片段(scFv)片段可以被配製為藥物組合物，以施予一患有腫瘤的患者以減少該腫瘤的轉移、減少該腫瘤微環境中的免疫抑制或減少Th2調節的免疫反應。

Description

IL8阻斷上皮-間質轉換(EMT)途徑與克服癌症幹細胞
本發明之領域為針對介白素-8 (interleukin-8, IL-8)的重組多價單鏈可變片段(scFv)或抗體之組合物、方法，及用途，用於治療一患有一腫瘤的患者，以減少該腫瘤的轉移或減少在該腫瘤為環境中的免疫抑制。
背景描述包括可用於理解本發明的資訊。這並非承認本文提供的任何資訊為先前技術或與現行請求保護之發明相關，也非承認具體或暗示地引用之任何出版物為先前技術。
本文中的所有出版物及專利申請皆透過引用方式併入，其程度如同每個單獨的出版物或專利申請被具體且單獨地指出透過引用方式併入。如果併入之參考文獻中術語的定義或用法與本文提供之術語的定義不一致或相反，則適用本文之術語的定義，且該術語在該參考文獻中的定義不適用於此。
介白素-8 (Interleukin-8, IL-8)，也稱為嗜中性白血球趨化因子，主要由巨噬細胞及上皮細胞產生，並且已知透過向感染部位募集免疫細胞(例如，嗜中性白血球)而在免疫系統中具有關鍵作用。近來，人們越來越關注識別腫瘤產生的IL-8與腫瘤發展之間的關係，特別是腫瘤轉移與腫瘤微環境中免疫抑制的機制。例如，一些研究發現腫瘤產生的IL-8在轉移性腫瘤細胞中高度表現，且實際上能夠誘導該腫瘤細胞的上皮-間質轉變以產生腫瘤起始細胞(例如，腫瘤幹細胞)。其他研究顯示腫瘤產生的IL-8吸引骨髓來源的抑制細胞(Myeloid-Derived Suppressor Cells, MDSC)，其可透過在該腫瘤微環境中干擾T細胞調節的免疫反應而在該腫瘤周圍提供免疫抑制性的微環境。
為了減輕IL-8在腫瘤發展中的作用，已經有透過提供針對IL-8的人類或人源化抗體、針對IL-8的反義寡核苷酸或微RNA以致力於中和腫瘤表現的或內源的IL-8。例如，Bar-Eli的美國專利申請公開號2003/0068319揭露透過完全人源化且分離的單株或多株IL-8抑制腫瘤的血管生成及轉移。於另一實例中，Petrzkowski的美國專利號5,849,903教導了針對IL-8的20鹼基對長的反義寡核苷酸，其有效減少黑色素瘤或肺癌的生長。然而，反義寡核苷酸或微RNA的作用可以根據腫瘤的類型以及這些組合物的遞送方法而不同。而且，分離的人類或人源化抗體在某些腫瘤微環境中可能不是很有效的，其中分離的人類或人源化抗體在該腫瘤微環境中被內源性金屬蛋白酶切割。
是以，儘管已經有數種在腫瘤微環境中抑制IL-8的表現或活性的方法被研究，但是使用具有對IL-8高親和力的胺基酸序列的重組IL-8抗體或單鏈可變片段(scFv)以IL-8為標靶方面，仍尚未被大量開發。因此，仍然需要重組IL-8抗體或單鏈可變片段(scFv)的改良組合物、方法以及用途，以在腫瘤微環境中將腫瘤表現的或內源的IL-8作為標靶以促進癌症治療之效果。
本發明的主題涉及一種對IL-8具有高親和力的重組IL-8抗體、單鏈可變片段(scFv)，或一抗體的其他部分(包括融合產物，尤其是在一TxM中的產物)的各種組合物、方法，以及用途，以將腫瘤表現的或內源的IL-8作為標靶，並且中和IL-8在促進一腫瘤細胞的上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)及/或在腫瘤微環境中的免疫抑制的作用。
因此，本發明主題的一方面包括單鏈可變片段(scFv)胜肽。該單鏈可變片段(scFv)胜肽包含一包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一包括一第二胺基酸序列的VL 區段。該第一及第二胺基酸序列係分別選自SEQ ID NO. 1-15, 31-32或SEQ ID NO. 16-30, 33-34。
於本發明主題之另一方面，本案發明人思考一種用於治療一患有一癌症的患者之藥物組合物。該藥物組合物包括單鏈可變片段(scFv)，其包含一包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一包括一第二胺基酸序列的VL 區段。該第一及第二胺基酸序列係分別選自SEQ ID NO. 1-15, 31-32或SEQ ID NO. 16-30, 33-34。較佳地，該單鏈可變片段(scFv)胜肽存在於藥學上可接受的載體中。
本發明主題之又一方面涉及一重組核酸。該重組核酸包括編碼一VH 區段的一第一核酸區段，該VH 區段具有選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第一胺基酸序列，及/或編碼一VL 區段的一第二核酸區段，該VL 區段具有選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第二胺基酸序列。可選地，該第一及第二區段存在於同一閱讀框中。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考一種重組分離的抗體或其片段。該重組分離的抗體或其片段包括一分別具有第一及第二胺基酸序列的一VH 結構域及/或一VL 結構域。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30,33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。
於本發明主題之又一方面，本案發明人還思考一種降低一組織中IL-8作用之方法。於該方法中，提供了一種具有包括一第一胺基酸序列的一VH 區段及/或一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，而且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。該方法繼續進行以有效降低該組織中的IL-8作用之一劑量及方案將該單鏈可變片段(scFv)胜肽處理該組織之步驟。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考一種治療一患有一腫瘤的患者之方法。在該方法中，提供一種包含一具有包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)之藥物組合物。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，而且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。以有效治療該腫瘤之一劑量及方案將該藥物組合物施予該患者。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考一種降低一患有一腫瘤的患者的免疫抑制之方法。於該方法中，提供一種包含一具有包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)之藥物組合物。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，而且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。以在一腫瘤微環境中有效減少骨髓來源的抑制細胞存在之一劑量及方案將該藥物組合物施予該患者。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考一種在一患有一腫瘤的患者體內減少Th-2調節的免疫反應之方法。於該方法中，提供一種包含一具有包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)之藥物組合物。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，而且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。以在該患者體內有效減少Th-2調節的免疫反應之一劑量及方案將該藥物組合物施予該患者。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考一種在一患者體內減少一腫瘤細胞的上皮-間質轉化之方法。於該方法中，提供一種包含一具有包括一第一胺基酸序列的VH 區段及/或一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)之藥物組合物。較佳地，該第一胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同，而且該第二胺基酸序列與選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的一第三胺基酸序列至少95%相同。以有效減少該腫瘤細胞的上皮-間質轉變之一劑量及方案將該藥物組合物施予該患者。
於本發明主題之又一方面，本案發明人思考如上所述之單鏈可變片段(scFv)胜肽用於在一患有一腫瘤的患者體內減少Th-2調節的免疫反應之用途。再者，本案發明人思考如上所述之單鏈可變片段(scFv)胜肽用於在一患者體內減少一腫瘤細胞的上皮-間質轉化之用途。此外，本案發明人還思考如上所述之單鏈可變片段(scFv)胜肽用於在一患有一腫瘤的患者體內減少該腫瘤轉移之用途。
從以下較佳具體實施例之詳細描述以及附圖中，本發明主題之各種目的、特徵、方面，以及優點將變得更加明顯。
本案發明人現在發現，可以透過減輕IL-8作用而顯著減少或甚至消除各種IL-8調節的作用，包括腫瘤發展，特別是通過上皮-間質轉化途徑的IL-8調節的腫瘤轉移。這種減輕作用可以透過使用一種重組IL-8抗體或其片段(例如，針對IL-8具有高親和力的針對IL-8的單鏈可變片段(scFv)片段)在腫瘤微環境中捕獲或以其他方式結合IL-8來實現。
為此，本案發明人發現可以產生各種重組抗體或其片段，例如針對IL-8具有高親和力的一單鏈可變片段(scFv)，使得重組抗體或其片段，或單鏈可變片段(scFv)片段可以在腫瘤微環境中捕獲腫瘤產生的或內源性IL-8。結合或捕獲來自腫瘤微環境的IL-8被認為降低了該IL-8對該腫瘤細胞引發該腫瘤細胞轉移的作用。此外，結合或捕獲IL-8可以經由累積骨髓來源的抑制細胞(MDSC)來減少在腫瘤微環境中由IL-8所增加的免疫抑制之作用。此外，結合或捕獲IL-8可以減少在腫瘤微環境中由IL-8所增加的Th2調節的免疫反應之作用，這可以有助於在該腫瘤微環境中募集骨髓來源的抑制細胞。雖然不希望受任何具體理論或假設之束縛，但預期與抗體或片段結合的IL-8將不再能夠發揮其生物訊息傳遞的功能，可能是由於空間效應的關係。此外，當調節在顆粒或其他表面上的結合以捕獲IL-8時，訊息傳遞所需的IL-8濃度可能降低，從而減少或消除IL-8的作用。因此，術語結合及捕獲在本文中可互換使用。
如本文所用，術語“腫瘤”係，並且可與一種或多種癌細胞、癌組織、惡性腫瘤細胞，或惡性腫瘤組織互換使用，指可以在一人體中的一個或複數個解剖位置中被放置或被發現。
如本文所用，術語“結合”係，並且可以與術語“識別”及/或“檢測”互換使用，指二個分子之間的相互作用具有高親和力且KD 等於或小於10-3 M、10-4 M、10-5 M、10-6 M，或等於或小於10-7 M。
如本文所用，術語“提供(動詞)”或“提供(動名詞)”係指並包括製造、生成、放置、使能使用，或準備使用之任何行為。
於本發明主題之一示例性及特別較佳之方面，本案發明人思考一種與IL-8結合的具有一VH 區段以及一VL 區段的單鏈可變片段(scFv)胜肽。雖然預期單鏈可變片段(scFv)的胜肽序列可為提供所需對IL-8結合親和力的任何合適的序列，但本案發明人發現可以使用表1中的至少一種或多種胜肽序列：SEQ ID：1-34產生多價單鏈可變片段(scFv)胜肽。
或者且另外地，本案發明人還思考在表 1 中呈現的VH 區段及/或VL 區段的胺基序列可用於產生一種重組、分離的抗體或其片段。如本文所用，術語“抗體”係指免疫球蛋白分子以及免疫球蛋白分子的免疫活性部分，亦即，含有免疫專一性結合一抗原的一抗原結合位點之分子。因此，“抗體及其片段”包括完整的免疫球蛋白分子(例如，全長、全IgG1 等)、該整個抗體分子的一片段。因此，其片段可包括，但不限於，單鏈可變片段(scFv)、Fab片段、Fa’'片段、F(ab’)2、雙硫鍵連接的可變片段 (sdFvs)、可變片段(Fvs)，以及包含VH 區段及/或VL 區段的任何片段。在該抗體為一免疫球蛋白的情況下，考慮該免疫球蛋白可以包括重鏈或恆定結構域的任何類型(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA以及IgY)以及任何類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)以構成不同類型的免疫球蛋白。另外，“抗體”可包括，但不限於，人類抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單株抗體、多株抗體。因此，應當理解的是，可以使用本領域熟知之方法將表1中所示之VH 及/或VL 結構域移植到任何現有的(通常為人類或人源化的)抗體或抗體片段中。
本案發明人進一步思考表1中呈現的VH 區段及/或VL 區段的胺基序列可與一載體蛋白偶聯以產生在其表面上具有該VH 區段及/或VL 區段的一雜合蛋白，使得IL -8可以被該雜合蛋白捕獲。考慮了可以穩定攜帶VH 區段及/或VL 區段且較佳提供進入腫瘤微環境的任何合適形式的載體蛋白。一種特別較佳的載體蛋白包括白蛋白、重折疊白蛋白，以及對與一個或複數個VH 區段及/或VL 區段偶聯的抗體部分(例如，蛋白A、蛋白G、蛋白Z)具有親和力的其他蛋白。
通常，VH 區段及/或VL 區段與一錨分子偶聯，透過該錨分子，VH 區段及/或VL 區段可與該載體蛋白偶聯。例如，當該載體蛋白為白蛋白時，該錨分子可以為任何合適大小的疏水胜肽或醣脂質，以適合該白蛋白的Sudlow位點I及II之一或該白蛋白的任何其它疏水區域。例如，如上所述之針對IL-8的重組免疫球蛋白可以經由其Fc結構域與該載體蛋白偶聯。於其他具體實施例中，該錨分子可包括一疏水胜肽(長度為至少10個胺基酸、15個胺基酸、20個胺基酸、30個胺基酸等)。在這些具體實施例中，可以考慮VH 區段及/或VL 區段(例如，以單鏈可變片段(scFv)之形式)以及疏水性胜肽的各種構型。例如，一單價單鏈可變片段(scFv)結構域可以直接連接一疏水胜肽，或者一多價單鏈可變片段(scFv)可以直接連接一疏水胜肽。或者，一個單鏈可變片段(scFv)結構域可以直接連接到複數個疏水性胜肽，或者複數個單鏈可變片段(scFv)結構域可以直接連接到複數個疏水性胜肽。
或者，或另外地，一個或複數個VH 區段及/或VL 區段可以與一中間分子偶聯，該中間分子具有一錨部分以結合該載體蛋白。於一較佳的具體實施例中，本案發明人思考該中間分子為VH 區段及/或VL 區段提供複數個結合位點，使複數個標靶識別結構域可以經由該載體蛋白上的一單個結合位點攜帶。合適的中間分子可包括不對該未經抗原刺激的組織提供任何顯著毒性的任何蛋白質、醣脂質、有機分子，或無機分子。例如，該合適的中間分子可包括一奈米顆粒(例如，量子點、金奈米顆粒、磁性奈米顆粒、奈米管、聚合物奈米顆粒、樹枝狀大分子等)，或一珠粒(例如，聚苯乙烯珠粒、乳膠珠粒、dynabead等)。較佳地，奈米顆粒及/或珠粒的尺寸小於1 μm，較佳小於100 nm。該奈米顆粒可以與一疏水尾部交聯或部分塗覆，該疏水尾部為該載體蛋白(例如，白蛋白)提供一錨。一個或複數個VH 區段及/或VL 區段也可以交聯或部分塗覆在該奈米顆粒上(例如，經由與該標靶識別結構域連接的額外尾部結構域進行交聯等)。
於另一實施例中，合適的中間分子可包括與一抗該載體蛋白的抗體偶聯的珠粒(例如，聚苯乙烯珠粒，乳膠珠粒，dynabeads等)。因此，在該載體蛋白為一白蛋白的情況下，該珠粒可以與α-白蛋白抗體偶聯(例如，交聯，塗覆等)，使得該珠粒可以一高親和力及專一性與該載體蛋白結合。一個或複數個VH 區段及/或VL 區段也可以交聯或部分塗覆在該珠粒上(例如，經由與該標靶識別結構域連接的額外尾部結構域進行交聯、硫醇調節的交聯等)。
於一些具體實施例中，單鏈可變片段(scFv)胜肽可以形成一種重組免疫球蛋白複合物，其包含或模擬一ALT-803 (IL-15超級激動劑複合物，參見例如，Blood 2015 126:1957)或TxM (標靶基於ALT-803的支架平台，參見例如，URL altorbioscience.com/our-science/il-15-protein-superagonist-and-scaffold- technology/)結構。較佳地，本案發明人考慮，在該免疫球蛋白複合物模擬TxM結構的情況下，該單鏈可變片段(scFv)胜肽可以直接(或間接經由一連接子)與一個或複數個介白素-15 (IL-15)結合基序偶聯，及/或一個或複數個 IL-15結合基序(例如，IL-15、IL-15N72D等)的配體。因此，在該重組免疫球蛋白複合物模擬TxM IgG1結構的情況下，該重組免疫球蛋白複合物可包括針對IL-8的1-4個單鏈可變片段(scFv)胜肽。
此外，模擬TxM結構的重組免疫球蛋白複合物具有一個或複數個與IL-15結合基序或其配體偶聯的單鏈可變片段(scFv)胜肽，還可包括針對一腫瘤專一性抗原或患者-及腫瘤專一性新表位的結合結構域(例如，針對該新表位的一單鏈可變片段(scFv)胜肽等)。例如，該重組免疫球蛋白複合物可包括兩個針對IL-8的單鏈可變片段(scFv)胜肽，其與二個IL-15結合動機偶聯，且二個針對該新表位的單鏈可變片段(scFv)胜肽與二個IL-15結合基序配體偶聯。較佳地，該新表位為患者專一性及腫瘤專一性的，其透過如美國專利申請公開號US 2012/0059670A1以及US 2012/0066001A1中公開的序列資料的組學分析來鑑定。
於一些具體實施例中，該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段，可以使用SEQ ID No. 1-15, 31-32中的編碼一VH 區段的一序列產生。於其他具體實施例中，該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段，可以使用SEQ ID No. 16-30, 33-34中的編碼一VL 區段的一序列產生。於其他具體實施例中，該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段，可以使用SEQ ID No. 1-15, 31-32中的編碼一VH 區段的一序列以及SEQ ID No. 16-30, 33-34中的編碼一VL 區段的一序列來產生。於這些具體實施例中，較佳編碼該VH 區段的序列及編碼該VL 區段的序列是配對的序列(例如，單鏈可變片段(scFv) 49-31的SEQ ID NO. 1及16，單鏈可變片段(scFv) 49-22的SEQ ID NO. 2及17，單鏈可變片段(scFv) 49-7的SEQ ID NO. 3及18等)。然而，預期可以透過從SEQ ID No. 1-15, 31-32選擇一VH 區段以及從SEQ ID No. 16-30, 33-34選擇一VL 區段來產生任何VH 區段以及VL 區段對。
表 1
本案發明人還思考該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段，可以用編碼VH 區段及/或VL 區段的胺基酸序列產生，該些胺基酸序列分別與SEQ ID No. 1-15, 31-32中的任一個或SEQ ID No. 16-30, 33-34中的任一個至少85%相同，較佳至少90%相同，更佳至少95%。在這樣的具體實施例中，較佳為該單鏈可變片段(scFv)胜肽、重組抗體或其片段的結合親和力不低於一以SEQ ID No. 1-15, 31-32中的任一個產生或對SEQ ID No. 1-15, 31-32中的任一個產生的單鏈可變片段(scFv)胜肽、重組抗體或其片段的結合親和力的60%，較佳不低於70%，更佳不低於80%。實際上，且如以下進一步詳細討論的，本案發明人使用一選擇的單鏈可變片段(scFv)(43-12)並經由在VH 區及VH 的CDR區中的隨機誘變使該單鏈可變片段(scFv)進行親和力成熟。值得注意的是，在其他結合物之中，從親和力成熟過程中分離出二個單鏈可變片段(scFv)(43-12a及43-12b)，其具有改善的結合特徵。
最典型地，在單鏈可變片段(scFv)胜肽、重組抗體或其片段中的VH 區段及VL 區段經由一連接子或一間隔區偶聯，該連接子或間隔區通常為5-40個胺基酸之間，較佳為10-30個胺基酸之間，更佳為20-30個胺基酸之間。於一些具體實施例中，該連接子可以偶聯VH 區段的N端及VL 區段的C端。於其他具體實施例中，該連接子可以偶聯VL 區段的N端及VH 區段的C端。本案發明人思考以富含甘胺酸的序列(例如，(G4 S)n ，其中n介於1-5等)作為連接子可較佳地提供VH 區段及VL 區段之間的結構靈活性。還考慮該連接子包括一個或複數個絲胺酸或蘇胺酸殘基以增加該單鏈可變片段(scFv)胜肽、重組抗體或其片段的溶解度。存在許多本領域已知的連接子及製備單鏈可變片段(scFv)之方法，並且認為所有這些已知方法皆適用於本文。
此外，該單鏈可變片段(scFv)胜肽可包括複數個VH 區段及VL 區段以形成二價或多價單鏈可變片段(scFv)。於一些具體實施例中，該複數個VH 區段及/或VL 區段可具有相同的胺基序列(例如，具有三個VH 區段以及三個VL 區段的一多價單鏈可變片段(scFv)，且所有VH 區段具有49-31個VH (SEQ ID No. 1) 且所有VL 區段具有49-31 VL (SEQ ID No. 16)。於其他具體實施例中，VH 區段及/或VL 區段中的至少二個可以具有不同的胺基酸序列(例如，一具有三個VH 區段及三個VL 區段的多價單鏈可變片段(scFv)，且VH 區段的二個為49-31 VH (SEQ ID NO. 1)以及VH 區段的一個為49-22 VH (SEQ ID No. 2)，並且VL 區段的二個為49-31VL (SEQ ID No. 16)，以及VH 區段的一個為49-22 VL (SEQ ID No. 17))。
較佳地，該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段與IL-8 (72-mer與77-mer IL-8中的至少一種)的結合親和力(Kd)至少小於1×10-7 M，較佳小於1×10-8 M，更佳小於1×10-9 M，於25°C至37°C的溫度下測量，並在5.5-7.5的pH範圍內測量。本案發明人考慮到該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段與IL-8的結合親和力可能由於結構差異而不同，縱使使用相同的VH 區段及/或VL 區段胺基酸序列產生該單鏈可變片段(scFv)、重組抗體或其片段。例如，表2提供了幾種選殖株的單鏈可變片段(scFv)與重組抗體(IgG1)的不同親和力(以KD值測量)。選殖株49-31為使用編碼VH 區段(SEQ ID No. 1)與VL 區段(SEQ ID No. 16)的胺基酸序列產生的一單鏈可變片段(scFv)或一重組抗體(IgG1)，選殖株43-2為使用編碼VH 區段(SEQ ID No. 8)與VL 區段(SEQ ID No. 23)的胺基酸序列產生的一單鏈可變片段(scFv)或一重組抗體(IgG1)，且選殖株43-12為使用編碼VH 區段(SEQ ID No. 10)與VL 區段(SEQ ID No. 25)的胺基酸序列產生的一單鏈可變片段(scFv)或一重組抗體(IgG1)。透過表面等離子體共振測量確定初步KD 值，且顯示最高值及最低值以估計對IL-8的親和力之範圍。表 2 中Kd值的所有單位均為10-9 M。
表 2
表 3 提供了具有表1中所示序列的分子之進一步示例性的數據。於此，使用所示序列製備單鏈可變片段(scFv)與相應的人源化IgG1 ，並使用SPR以固定的IL-8作為晶片表面上的分析物測定KD。所有數值均表示為所示溫度下的奈米值。
表 3
進一步預期該單鏈可變片段(scFv)胜肽(或抗體或其片段的VH 區段及VL 區段)可由單一重組核酸編碼。在該具體實施例中，該重組核酸包括至少二個核酸區段：編碼一VH 區段的一第一核酸區段(序列元件)以及編碼一VL 區段的一第二核酸區段。較佳為選擇該第一核酸區段以編碼SEQ ID No. 1-15, 31-32的胺基酸序列中的至少一個，以及選擇該第二核酸區段以編碼SEQ ID No. 16-30, 33-34的胺基酸序列中的至少一個。然而，還考慮該第一及第二核酸區段分別編碼與SEQ ID No. 1-15, 31-32中的任一個或SEQ ID No. 16-30, 33-34中的任一個至少85%相同，較佳至少90%相同，更佳至少95%相同的VH 及VL 區段。最佳地，該二個核酸區段在相同的閱讀框中，使得二個核酸區段可以轉譯為具有二個胜肽區段的單個蛋白質。
另外，該重組核酸可包括編碼一連接子胜肽的介於該第一及第二核酸區段之間的一第三核酸區段(較佳為富含G或其他柔性連接子胜肽)，其通常為5-40個胺基酸，較佳10-30個胺基酸，更較佳20-30個胺基酸。在該具體實施例中，特別較佳為該三個核酸區段在相同的閱讀框中，使得三個核酸區段可以轉譯為具有三個胜肽區段的單個蛋白質。
在某些具體實施例中，該重組核酸可包括複數組第一及第二核酸區段，其中每組包括每個第一及第二核酸區段中的一個。於這些具體實施例中，該重組核酸較佳包括編碼位於每組該第一及第二核酸區段之間的一連接器胜肽的一第四核酸區段。因此，一種示例性重組核酸可包括[第一組]-編碼一連接器胜肽的第四核酸-[第二組]- 編碼一連接器胜肽的第四核酸-[第三組]，其中第一組、第二組，以及第三組中的每一組包括[編碼VH 區段的一第一核酸-編碼一連接子的一第三核酸-編碼VL 區段的一第二核酸]，其中該第一及第二核酸的位置可以彼此交替。該連接器胜肽的序列可以根據在一單個胜肽中的組數而變化。較佳地，該連接器胜肽可以為5-50個胺基酸，較佳為10-40個胺基酸，更佳為20-30個胺基酸。本案發明人還考慮較佳富含甘胺酸的序列(例如，G4 S等)以提供VH 及VL 區段組之間的連接器胜肽的柔性。
本案發明人進一步設想該單鏈可變片段(scFv)胜肽、抗體或其片段可以配製為一藥物組合物，使其可以被施予患有一腫瘤的患者以減少或抑制IL-8的內源性作用。因此，預期該單鏈可變片段(scFv)胜肽、抗體或其片段可以以每劑量單位至少1 ml，較佳至少5 ml，更佳至少20 ml的量配製在任何藥學上可接受之載體(例如，作為無菌可注射組合物)中作為一治療製劑。然而，替代製劑也被認為適用於本文，且本文考慮了所有已知的給藥途徑及方式。如本文所用，術語“施用”係指直接及間接施用本文考慮之化合物及組合物，其中直接施用通常由醫療保健專業人員(例如，醫生、護士等)進行，間接給藥通常包括提供或製備可供醫療保健專業人員直接給藥的化合物及組合物之步驟。
於某些具體實施例中，該藥物製劑經由全身注射給藥，包括皮下、表皮下注射，或靜脈內注射。於其他具體實施例中，在全身注射可能非有效的情況下(例如，對於腦腫瘤等)，預期經由腫瘤內注射施用該製劑。
包括單鏈可變片段(scFv)胜肽、其抗體或其片段的藥物組合物的一種示例性方法及用途，其包括上述VH 及VL 區段，以減少在一標靶組織中IL-8調節的作用。如本文所用，IL-8調節的作用係指透過在該組織中或該組織的微環境中IL-8的存在而直接或間接誘導的任何生物學結果。因此，IL-8作用可以源自藉由在該組織中的一腫瘤細胞及/或一非腫瘤細胞(例如，免疫活性細胞，如淋巴細胞等)或該組織的外部(例如，該腫瘤附近的一健康組織等)釋放(或分泌)的IL-8，且存在於該腫瘤微環境中的任何給定時間。
在特別考慮的具體實施例中，本案發明人考慮IL-8調節的作用，尤其是在一患者的腫瘤微環境中，包括，但不限於，引發一細胞的遷移、引發該腫瘤的上皮-間質轉化、引發該腫瘤的轉移、在該腫瘤微環境中增加免疫抑制、刺激MDSC發展，以及在該腫瘤微環境中引發Th2偏向的免疫反應。因此，且不希望受特定理論束縛，本案發明人思考透過捕獲游離IL-8 (未結合於IL-8受體的IL-8)所減少來自該腫瘤微環境中IL-8的量會減少IL-8的作用或甚至逆轉IL-8對腫瘤細胞的影響：減少該腫瘤的上皮-間質轉化、減少或預防該腫瘤轉移，減少Th2偏向的免疫反應或重新平衡Th1-及Th2-調節的免疫反應，以及減少或預防在該腫瘤微環境中的免疫抑制。特別是，相對於相應的健康組織，在特定類型的癌症(例如，胰臟癌、三陰性乳腺癌、神經膠質母細胞瘤等)中顯示IL-8表現(或積聚)的過度或異常增加，預期結合或捕獲IL-8可以更有效地改變這些類型的癌症的預後。
關於對一患者施用該藥物組合物的劑量及時間表，預期該劑量及/或時間表可根據胜肽的類型而變化(例如，單鏈可變片段(scFv)、抗體、抗體片段、任何二種這些類型的組合、所有類型的組合等)、疾病(例如，腫瘤類型、大小、位置)的類型及預後、該患者的健康狀況(例如，包括年齡、性別等)。雖然是可以變化的，但可以選擇及調節該劑量及方案，使得該製劑不會對該宿主正常細胞產生任何顯著的毒性作用，但在少於3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，足以降低腫瘤微環境中IL-8的作用至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。
於某些具體實施例中，IL-8的作用以及IL-8作用的降低可以透過在組織中游離IL-8 (72聚體或77聚體)的量來測量。於這些具體實施例中，通常調整給藥條件以使72-mer或77-mer的游離IL-8中的至少一種的量或濃度，在施用該藥物組合物後少於3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，降低至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。於其他具體實施例中，IL-8的作用及IL-8作用的降低可以經由生物活性的體外或體內測量來量測。例如，用於減少一腫瘤細胞的細胞遷移或轉移的劑量及治療方案可以透過IL-8的體外細胞遷移測定來確定。於該實施例中，通常調整給藥條件以在以該藥物組合物(或單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段，不含藥學上可接受的載體)處理後1小時、3小時、6小時、12小時內，減少從原始位置遷移的細胞數或減少遷移細胞遷移的距離至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。針對其他實施例，可以透過測量在該腫瘤中骨髓來源的抑制細胞的累積或存在來確定用於減少骨髓來源的抑制細胞的免疫抑制的劑量及治療方案。因此，於該實施例中，通常調整給藥條件以在施用該藥物組合物後3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，減少骨髓來源的抑制細胞(在整個腫瘤組織或每cm2 腫瘤組織中)的數量至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。
於其他具體實施例中，IL-8的作用以及IL-8作用的降低可以透過測量局部細胞激素分子的量或濃度來測量。例如，減少Th-2調節的免疫反應的劑量及治療方案可以透過測量在腫瘤微環境中的IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-19，以及IL-13中至少一種的量或濃度來確定。因此，於該實施例中，通常調整給藥條件以在施用該藥物組合物後3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，減少IL-4、IL-5、IL-6、IL-9、IL-19，以及IL-13中至少一種的量或濃度至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。
於其他具體實施例中，IL-8的作用及IL-8作用的降低可以透過測量一種或多種細胞標記物的體外或體內表現量來測量。例如，減少腫瘤細胞的上皮-間質轉化的劑量及治療方案可以透過測量腫瘤細胞中E-鈣黏蛋白上皮標記物以及N-鈣黏蛋白間質標記物的表現來確定。因此，通常調整給藥條件以在施用該藥物組合物後3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，減少N-鈣黏蛋白間質標記物的表現量至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%，或在施用該藥物組合物後3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，增加E-鈣黏蛋白上皮標記物的表現量(僅與IL-8處理組相比) 至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。還預期在腫瘤細胞中N-鈣黏蛋白及E-鈣黏蛋白表現之間的比率也可以作為IL-8的作用及IL-8作用的降低的指標。在該實施例中，通常調整給藥條件以在施用該藥物組合物後3小時、6小時、12小時、24小時、72小時，或一週內，增加E-鈣黏蛋白：N-鈣黏蛋白表現量的比率至少20%，較佳至少30%，更佳至少40%，最佳至少50%。
從不同的角度來看，IL-8調節的體內作用的減少也可以透過生理現象觀察到。例如，經由減少或消除腫瘤細胞的上皮-間質轉換(EMT)以及減少相關的訊息傳遞途徑，可以觀察到降低的IL-8濃度。類似地，降低患者體類特別是一腫瘤微環境中的IL-8濃度將降低腫瘤細胞的幹性，這可以透過適當的幹細胞標記物而容易被觀察到。在IL-8還原的其他生理作用中，MDSC的發展通常減少，以及腫瘤內T細胞中的Th2偏向免疫反應(從而將Th1/Th2平衡轉向Th1型反應)。
另外，本案發明人思考透過共同施用一種或多種癌症藥物可以增強單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段對IL-8的作用以減少特定類型癌症中腫瘤細胞的上皮-間質轉化。該癌症藥物包括，但不限於，氟維司群(Fulvestrant)、阿羅黴素(Aldoxorubicin)、多西紫杉醇、腫瘤壞死治療劑(例如，131 I-chTNT-3等)、阿維魯單抗(Avelumab) (阻斷PD-L1與其受體之間相互作用的人類單株IgG1 抗體)、Brachyury標靶疫苗(例如，ETBX-051 (Ad5 [E1-, E2b-]-Brachyury))、Her2標靶疫苗(例如，ETBX-021等)，MUC-1標靶疫苗(例如 ，ETBX-061 (Ad5[E1-, E2b-]- MUC1))，以及酵母疫苗(例如，GI-4000 (GI-4014、GI-4015、GI-4016、GI-4020)、GI-6207、GI-6301)。這些癌症藥物的細節描述於PCT專利申請號PCT/US17/40297中，其以引用的方式整體併入本文。
於一些具體實施例中，本案發明人考慮可以透過共同施用一種或多種檢查點抑制劑來增強單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段對IL-8的作用。關於干擾或下調檢查點抑制的蛋白質，考慮結合檢查點受體的任何合適的胜肽配體。最典型地，結合將抑制或至少減少經由該受體的訊息傳遞，並且特別考慮的受體包括CTLA-4 (特別是對於CD8+ 細胞)、PD-1 (尤其對於CD4+ 細胞)、TIM1受體、2B4，以及CD160。例如，合適的胜肽結合劑可包括抗體片段，尤其是單鏈可變片段(scFv)，以及專一性結合該受體的小分子胜肽配體(例如，經由RNA展示或噬菌體淘選分離)。再次地，應當理解的是，該胜肽分子的表現將較佳地被協調，使得新表位或多表位與一種或多種胜肽配體同時表現。因此，通常預期胜肽配體由單個轉錄物(其可以包括或不包括編碼該多表位的序列部分)產生，例如，使用一內部核醣體進入位點或2A序列，或來自複數個轉錄物。
於其他具體實施例中，本案發明人考慮可以共同施用一種或多種免疫刺激細胞激素以調節單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段對IL-8的作用。例如，可以基於所需的免疫反應或CD4+ T細胞/未經抗原刺激的Th細胞極化的方向來選擇免疫刺激的細胞激素。例如，在需要來自未經抗原刺激的CD4+ T細胞的Treg細胞極化的具體實施例中，可以選擇免疫刺激的細胞激素以包括IL-2及TGF-β。在需要來自未經抗原刺激的CD4+ T細胞的Th17細胞極化的另一具體實施例中，可以選擇免疫刺激的細胞激素以包括IL-6及TGF-β。同樣地，Th1細胞極化的免疫刺激的細胞激素可包括IL-12及IFN-γ，而Th2細胞極化的免疫刺激的細胞激素可包括IL-4。另外，Tfh細胞(濾泡輔助T細胞)極化的免疫刺激的細胞激素可包括IL-6及IL-12，且CD4+細胞毒性T細胞極化的免疫刺激的細胞激素可包括IL-2。
本案發明人進一步考慮了針對IL-8的單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段可以與活化或修飾的免疫細胞共同處理(或共同施用)給癌症患者，該免疫細胞可以透過降低腫瘤細胞或骨髓來源的抑制細胞在腫瘤微環境中的免疫抑制作用，以提供針對IL-8的單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段更好進入腫瘤微環境，進而可以最大化單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段對IL-8的作用。例如，活化或修飾的免疫細胞可包括表現一嵌合蛋白或T細胞受體複合物的未經抗原刺激的NKT細胞或遺傳修飾的NKT細胞，以誘導NKT細胞免疫反應，及/或改變該腫瘤的微環境(例如，透過抑制骨髓來源的抑制細胞的活性)。較佳地，遺傳修飾的NKT細胞的嵌合蛋白或T細胞受體結合一腫瘤(新)表位、一腫瘤相關抗原，或呈現於該腫瘤細胞上的一自身脂質。對於其他實施例，經修飾的免疫細胞可包括經遺傳修飾以表現CD40L及Fas-L中的至少一種的NKT細胞，較佳在其細胞表面上。遺傳修飾及/或未經抗原刺激的、活化的NKT細胞以減少在癌症微環境中的免疫抑制的細節描述於國際專利申請號PCT/US18/53506 (及其相應公開的美國國家階段申請)，其全部內容併入本文。同樣地，活化或修飾的免疫細胞可包括表現一嵌合蛋白或T細胞受體複合物的未經抗原刺激的T細胞或遺傳修飾的T細胞，以誘導T細胞免疫反應，及/或改變該腫瘤的微環境(例如，透過抑制骨髓來源的抑制細胞的活性)。較佳地，遺傳修飾的NKT細胞的嵌合蛋白或T細胞受體結合一腫瘤(新)表位、一腫瘤相關抗原，或一呈現於該腫瘤細胞上的一自身脂質。
對於另一實施例，活化或修飾的免疫細胞可包括表現殺傷活化受體(killer activating receptor, KAR)的遺傳修飾的NK細胞，其以可溶性NK細胞受體配體(例如，NKG2D、Nkp-30、Nkp-44、Nkp-46等)作為標靶，透過作為該NK細胞受體的誘餌配體來阻止有效的NK細胞活性。具有KAR的遺傳修飾的NK細胞的細節描述於美國專利申請號62/569503，其全部內容併入本文。
於一些具體實施例中，一種或多種上述癌症藥物、免疫刺激細胞激素、檢查點抑制劑，及/或未經抗原刺激的或遺傳修飾的NK細胞或NKT細胞可以與針對IL-8的單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段一起配製於相同的藥物組合物中。於其他具體實施例中，該癌症藥物可以配製為單獨的藥物組合物，其可以與單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段的藥物組合物一起提供，或在對該患者施用單鏈可變片段(scFv)、抗體或其片段的藥物組合物之前施用。
因此，應當理解的是，本文提供的IL-8結合分子可以形成治療方案，其包括施用本文提供的IL-8結合分子。例如，預期一癌症患者(例如，胰臟癌、三陰性乳腺癌、神經膠質母細胞瘤)的治療可以協調的方式進行，其中施用一第一藥物(例如，氟維司群)以將上皮-間質轉換(EMT)逆轉為間質至上皮細胞轉換(mesenchymal to epithelial transition, MET)，而且其中施用一第二藥物(例如，阿羅黴素)以專一地將缺氧腫瘤微環境作為標靶。這種治療方案被認為減少了免疫抑制環境並增加了腫瘤細胞中的細胞壓力，導致腫瘤細胞對免疫系統的免疫原性增加。此外，治療還可以包括以抗體為標靶的腫瘤壞死，其將“標記”壞死的腫瘤細胞，從而增加對NK細胞及/或細胞毒性T細胞攻擊的易感性。如上所述，共同施用本文提供的IL-8結合分子以進一步抑制IL-8調節的免疫抑制作用。此外，在如上所述減少免疫抑制條件時，然後該患者可以接受免疫療法，通常使用表現brachyury、腫瘤或癌症相關抗原，及/或患者-及腫瘤-專一性新抗原中的一種或多種的重組疫苗。因此，癌症治療將包括以下至少二種(或至少三種，或至少四種)：一腫瘤壞死標靶藥物、一將缺氧腫瘤微環境作為標靶的藥物、一將上皮-間質轉換(EMT)逆轉為間質至上皮細胞轉換(MET)的藥物、一疫苗組成分(重組病毒、酵母，及/或細菌)，以及本文提供的IL-8結合分子。
實施例
本案發明人使用編碼VH 區段的SEQ ID No. 10 (43-12 VH )以及編碼VL 區段的SEQ ID No. 25 (43-12 VL )的核酸序列產生單鏈可變片段(scFv)分子(43-12)，並確定其對IL-8 (72-mer及77-mer)的結合親和力，以及與IL-8的其他異種同源物或同種同源物的交叉反應性。如圖 1A 所示，該43-12單鏈可變片段(scFv)分子對72-mer及77-mer的IL-8皆表現出強親和力(具有385 pM及440 pM的KD值)，而且如果有的話，與同種同源物(hCXCL1、hCXCL2、hCXCL7)或異種同源物(mCXCL1)的交叉反應性非常小。
本案發明人還使用編碼VH 區段的SEQ ID No. 1 (49-31 VH )以及編碼VL 區段的SEQ ID No. 16 (49-31 VL )的核酸序列產生單鏈可變片段(scFv)分子(49-31)，並確定其對IL-8 (72-mer及77-mer)的結合親和力，以及與IL-8的其他異種同源物或同種同源物的交叉反應性。如圖 1B 所示，該49-31單鏈可變片段(scFv)分子對72-mer及77-mer的IL-8表現出強親和力(具有147 pM及120 pM的KD值)，而且如果有的話，與同種同源物(hCXCL1、hCXCL2、hCXCL7)或異種同源物(mCXCL1)的交叉反應性非常小。
接下來，本案發明人測試以這樣的方式產生的單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12, 49-31等，所有的分子也顯示於表3中)以確定它們對IL-8的中和作用。於一組示例性實驗中，從血液中分離出原代人類嗜中性白血球以評估單鏈可變片段(scFv)分子(此處：43-2, 43-12, 49-31)中和IL-8調節的嗜中性白血球趨化性的能力。在一個3 mM孔徑的transwell盤中，如左圖所示，將1 nM重組人類IL-8與一滴定的抗體一起作用，並將50,000個鈣黃綠素-AM標記的嗜中性白血球加入頂室中作用1.5及3小時。透過測定底室中的總螢光以及僅針對空白培養基孔的總螢光以減去背景來評估嗜中性白血球的遷移。圖 2 ，分區 A-D 所示為僅在處理IL-8 (圖2A，圖2C)以及IL-8與單鏈可變片段(scFv)分子 (43-2, 43-12, 49-31)之一1.5小時(圖 2B )或3小時(圖 2D )時，體外嗜中性白血球遷移的圖。如圖2B以及2D所示，所有單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12, 49-31)均可在小於1 μM的濃度下，在1.5小時及3小時內將嗜中性白血球的遷移減少30-70%，這表示所有單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12, 49-31)透過在血清(或培養基)中捕獲游離IL-8以有效減輕IL-8的作用。
圖 3 所示為單獨處理IL-8 (對照組)以及IL-8與1 nM濃度的單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12)之一時，嗜中性白血球遷移的圖。二種單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12)均可完全逆轉IL-8的作用，使得以單鏈可變片段(scFv)分子(43-2, 43-12)處理的嗜中性白血球遷移量與單獨的培養基相似或幾乎相同，而相較於單獨使用培養基，單獨使用IL-8處理可使嗜中性白血球遷移增加近三倍。
於另一組實驗中，本案發明人使用一種先前鑑定的IL-8結合物(於此：43-12，表1中的序列)的親和力成熟(於此：VH 及VL 鏈中CDR區的隨機誘變以及mRNA展示選擇)，以及使用二種不同的pH條件，pH7.4及pH6.0，對選擇的突變體形式進行SPR分析。從圖4A-C的結果可以看出(圖 4A 描述了親本單鏈可變片段(scFv) 43-12的結果)，兩種衍生突變體形式都比親本單鏈可變片段(scFv)具有改善的結合。具體而言，圖 4B 顯示43-12a的示例性結果(表1中顯示的序列)，且圖 4C 顯示43-12b的示例性結果(表1中顯示的序列)。
對於本領域技術人員顯而易見的是，在不脫離本文的發明構思的情況下，除了已經描述的那些之外的更多修改是可能的。因此，除了所附申請專利範圍之外，本發明之主題不受限制。此外，在解釋說明書及申請專利範圍時，所有術語應以與上下文一致的最廣泛的方式解釋。特別是，術語“包括”以及“包含”應被解釋為以非排他的方式指示元件、組件或步驟，指示所引用的元件、組件或步驟可以存在，或者被利用，或與未明確引用的其他元件、組件或步驟組合。如本文之描述以及以下申請專利範圍中所使用的，“一”、“一個”，以及“該”的含義包括複數指示，除非上下文另有明確說明。此外，如在本文之描述中所使用的，除非上下文另有明確規定，否則“在...中”的含義包括“在...中”以及“在...上”。當說明書申請專利範圍涉及選自由A、B、C...以及N所組成之群組中的至少一種時，該內文應解釋為只需要該群組中的一個元件，而非A加N，或B加N等。
圖 1A 所示為單鏈可變片段(scFv)胜肽(43-12)之一與IL-8或IL-8異種同源物或同種同源物之間的結合動力學圖。
圖 1B 所示為單鏈可變片段(scFv)胜肽(49-31)之一與IL-8或IL-8異種同源物或同種同源物之間的結合動力學圖。
圖 2A-D 所示為以IL-8處理(2A，2C)以及以單鏈可變片段(scFv)胜肽與IL-8共處理(2B，2D)時嗜中性白血球遷移的圖。
圖 3 所示為以IL-8處理(對照組)以及以單鏈可變片段(scFv)胜肽與IL-8共同處理(43-2, 43-12)時嗜中性白血球遷移的圖。
圖 4A-C 所示為單鏈可變片段(scFv)胜肽(43-12)之一與IL-8之間在特定pH條件下(4A)的結合動力學圖，以及選擇的親和力成熟變體單鏈可變片段(scFv)胜肽(43-12a以及43-12b)在特定pH條件下的結合動力學。

Claims (10)

  1. 一種單鏈可變片段(single chain variable fragment, scFv)胜肽，包含： 一包括一選自由SEQ ID NO. 1-15, 31-32所組成之群組的第一胺基酸序列的VH 區段，及/或一包括一選自由SEQ ID NO. 16-30, 33-34所組成之群組的第二胺基酸序列的VL 區段。
  2. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中該VH 區段以及VL 區段由一連接子胜肽偶聯。
  3. 如申請專利範圍第1項之胜肽，進一步包含至少二對該VH 區段以及VL 區段，其中該至少二對連接形成一多價單鏈可變片段(scFv)。
  4. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中該胜肽與一具有IL-15活性的蛋白質或與一具有IL-15受體α活性的蛋白質偶聯。
  5. 如申請專利範圍第1項之胜肽，其中該單鏈可變片段(scFv)胜肽係移植至一人類或人源化抗體中。
  6. 一種藥物組合物，包含一治療有效量之如申請專利範圍第1-5項中任一項之單鏈可變片段(scFv)胜肽。
  7. 如申請專利範圍第1-5項中任一項之單鏈可變片段(scFv)用於在一患有一腫瘤的患者中減少免疫抑制之用途。
  8. 如申請專利範圍第1-5項中任一項之單鏈可變片段(scFv)用於在一患有一腫瘤的患者中減少Th-2調節的免疫反應之用途。
  9. 如申請專利範圍第1-5項中任一項之單鏈可變片段(scFv)用於在一患者中減少一腫瘤細胞的上皮-間質轉化之用途。
  10. 如申請專利範圍第1-5項中任一項之單鏈可變片段(scFv)用於在一患有一腫瘤的患者中減少該腫瘤轉移之用途。
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