JP2021500913A - Ｅｍｔ経路を遮断してがん幹細胞を克服するｉｌ８ - Google Patents

Abstract

腫瘍発現性又は内因性ＩＬ−８を標的化するためにＩＬ−８に対して高い親和性を有する、組換えＩＬ−８抗体、その断片又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の組成物、方法、及び使用が提示される。好ましくは、組換えＩＬ−８抗体又はｓｃＦｖ断片は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶＨセグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶＬセグメントを含む。組換えＩＬ−８抗体又はｓｃＦｖ断片は、腫瘍を有する患者に投与して、腫瘍の転移を減少させ、腫瘍微小環境における免疫抑制を減少させ、又はＴｈ２媒介免疫応答を減少させるための医薬組成物として製剤化され得る。

Description

本出願は、２０１７年１１月１日に提出された本発明者らの同時係属米国仮特許出願第６２／５８０，２３２号明細書の優先権を主張する。

本発明の技術分野は、腫瘍を有する患者を治療し、腫瘍の転移を減少させ、又は腫瘍微小環境における免疫抑制を減少させるための、インターロイキン−８（ＩＬ−８）に対する、組換えｓｃＦｖ又は抗体の組成物、方法、及び使用に関する。

背景説明には、本発明の理解に有用であってもよい情報が含まれる。本明細書で提供される情報のいずれかが先行技術であること、又は現在請求されている発明に関連していることを認めるものではなく、又は具体的に又は暗黙的に参照されるいかなる出版物も先行技術であることを認めるものではない。

本明細書における全ての出版物及び特許出願は、あたかも各個々の出版物又は特許出願が参照により援用されることが具体的且つ個別に示されたかのように、参照により援用される。援用された参照における用語の定義又は使用が、本明細書で提供されるその用語の定義と矛盾し又は相反する場合、本明細書で提供されるその用語の定義が適用され、参照におけるその用語の定義は適用されない。

好中球走化性因子としても知られるインターロイキン−８（ＩＬ−８）は、主にマクロファージと上皮細胞によって産生され、免疫細胞（例えば、好中球）を感染部位に動員することにより、免疫系において重要な役割を果たすことが知られている。近年、腫瘍由来ＩＬ−８と腫瘍の発生との関係、特に腫瘍転移と腫瘍微小環境における免疫抑制の機序を同定することに関心が高まっている。例えば、いくつかの研究では、腫瘍由来ＩＬ−８が転移性腫瘍細胞で高度に発現されて、腫瘍細胞の上皮間葉転換を誘導し、実際、腫瘍開始細胞（例えば、腫瘍幹細胞）を産生できることが発見された。その他の研究では、腫瘍由来ＩＬ−８が骨髄由来のサプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）を引き付け、ＭＤＳＣが腫瘍微小環境におけるＴ細胞媒介免疫応答を妨害することによって、腫瘍の周囲に免疫抑制微小環境を提供し得ることが示された。

腫瘍発生におけるＩＬ−８の効果を軽減するために、ＩＬ−８に対するヒト抗体又はヒト化抗体、ＩＬ−８に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド又はマイクロＲＮＡを提供することによって、腫瘍発現性又は内因性ＩＬ−８を中和する努力がなされてきた。例えば、Ｂａｒ−Ｅｌｉに付与された米国特許出願公開第２００３／００６８３１９号明細書は、完全にヒト化され単離されたモノクローナル又はポリクローナルＩＬ−８による、腫瘍の血管新生及び転移の阻害を開示する。別の例では、Ｐｅｔｒｚｋｏｗｓｋｉに付与された米国特許第５，８４９，９０３号明細書は、黒色腫又は肺がんの増殖を減少させるのに有効である、ＩＬ−８に対する２０塩基対長のアンチセンスオリゴヌクレオチドを教示する。しかし、アンチセンスオリゴヌクレオチド又はマイクロＲＮＡの効果は、腫瘍のタイプ、及びこのような組成物の送達方法次第で変動してもよい。また、単離されたヒト抗体又はヒト化抗体は、単離されたヒト抗体又はヒト化抗体が腫瘍微小環境における内因性メタロプロテアーゼによって切断される一部の腫瘍微小環境では、効果的でないこともある。

このように、腫瘍微小環境におけるＩＬ−８の発現又は活性を阻害するいくつかのアプローチが研究されているにもかかわらず、ＩＬ−８と親和性の高いアミノ酸配列を有する、組換えＩＬ−８抗体又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を使用して、ＩＬ−８を標的化することは、これまでほとんど研究されていなかった。したがって、がん治療の効果を促進するために、腫瘍微小環境において腫瘍発現性又は内因性ＩＬ−８を標的化するための、組換えＩＬ−８抗体又は一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の改善された組成物、方法、及び使用に対する必要性がなおもある。

本発明の主題は、ＩＬ−８に対して高い親和性を有して、腫瘍発現性又は内因性のＩＬ−８を標的化して腫瘍細胞のＥＭＴ（上皮間葉転換）を促進するＩＬ−８の効果を中和し、及び／又は腫瘍微小環境における免疫抑制を促進する、組換えＩＬ−８抗体、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は抗体のその他の部分（融合産物、特にＴｘＭ中の融合産物をはじめとする）の様々な組成物、方法、及び使用に関する。

したがって、主題の一態様は、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含む。ｓｃＦｖペプチドは、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含む。第１及び第２のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１〜１５、３１〜３２又は配列番号１６〜３０、３３〜３４から選択される。

本発明の主題の別の態様では、本発明者らは、がんを有する患者を治療するための医薬組成物を考察する。医薬組成物は、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含む、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。第１及び第２のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１〜１５、３１〜３２又は配列番号１６〜３０、３３〜３４から選択される。好ましくは、ｓｃＦｖペプチドは、薬理学的に許容可能な担体中に存在する。

本発明の主題のなおも別の態様は、組換え核酸を対象とする。組換え核酸は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈセグメントをコード化する第１の核酸セグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌセグメントをコード化する第２の核酸セグメントを含む。任意選択的に、第１及び第２のセグメントは、同一読み枠内に存在する。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、組換え単離抗体又はその断片を考察する。組換え単離抗体又はその断片は、それぞれ第１及び第２のアミノ酸配列を有する、Ｖ_Ｈドメイン及び／又はＶ_Ｌドメインを含む。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、組織におけるＩＬ−８効果を減少させる方法もまた考察する。この方法では、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又はＶ_Ｌセグメントを含む、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）が提供される。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。方法には、組織におけるＩＬ−８効果を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、組織をｓｃＦｖペプチドによって処置するステップが続く。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、腫瘍を有する患者を治療する方法を考察する。この方法では、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又はＶ_Ｌセグメントを有する、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物が提供される。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。医薬組成物は、腫瘍を治療するのに有効な用量及びスケジュールで患者に投与される。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、腫瘍を有する患者における免疫抑制を減少させる方法を考察する。この方法では、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又はＶ_Ｌセグメントを有する、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物が提供される。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。医薬組成物は、腫瘍微小環境における骨髄由来サプレッサー細胞の存在を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、患者に投与される。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、腫瘍を有する患者におけるＴｈ−２媒介免疫応答を減少させる方法を考察する。この方法では、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又はＶ_Ｌセグメントを有する、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物が提供される。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。医薬組成物は、患者のＴｈ−２媒介免疫応答を低下させるのに有効な用量及びスケジュールで患者に投与される。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、患者における腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させる方法を考察する。この方法では、第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又はＶ_Ｌセグメントを有する、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む医薬組成物が提供される。好ましくは、第１のアミノ酸配列は、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり、第２のアミノ酸配列は、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である。医薬組成物は、腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、患者に投与される。

本発明の主題のなおも別の態様では、本発明者らは、腫瘍を有する患者におけるＴｈ−２媒介免疫応答を減少させるための、上記のｓｃＦｖペプチドの使用を考察する。本発明者らはまた、患者における腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるための、上記のｓｃＦｖペプチドの使用も考察する。さらに、本発明者らは、腫瘍を有する患者における腫瘍の転移を減少させるための、上記のｓｃＦｖペプチドの使用をさらに考察する。

本発明の主題の様々な目的、特徴、態様、及び利点は、添付の図面と共に、以下の好ましい実施形態の詳細な説明からより明らかになるであろう。

ｓｃＦｖペプチド（４３−１２）の１つと、ＩＬ−８又はＩＬ−８オルソログ又はパラログとの間の結合動態のグラフを示す。 ｓｃＦｖペプチド（４９−３１）の１つと、ＩＬ−８又はＩＬ−８オルソログ又はパラログとの間の結合動態のグラフを示す。 ＩＬ−８処置時（２Ａ、２Ｃ）、及びＩＬ−８とｓｃＦｖペプチドとの同時処置時（２Ｂ、２Ｄ）の好中球遊出のグラフを示す。 ＩＬ−８処置時（ＣＴＲＬ）、及びＩＬ−８とｓｃＦｖペプチドとの同時処置時（４３−２、４３−１２）の好中球遊出のグラフを示す。 特定のｐＨ条件下における、ｓｃＦｖペプチド（４３−１２）の１つとＩＬ−８との間の結合動態のグラフ（４Ａ）、及び特定のｐＨ条件下における、選択された親和性成熟変異型ｓｃＦｖペプチド（４３−１２ａ及び４３−１２ｂ）の結合動態のグラフを示す。

本発明者らは、今や、ＩＬ−８効果を軽減することによって、腫瘍発生、特に上皮間葉転換経路を通じたＩＬ−８媒介腫瘍転移をはじめとする、様々なＩＬ−８媒介効果が、著しく減少し又は抑止され得ることを発見した。このような軽減効果は、組換えＩＬ−８抗体又はその断片（例えば、ＩＬ−８に対して高い親和性を有する、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ断片）を使用して、腫瘍微小環境において、ＩＬ−８を捕捉し又はそうでなければ結合することによって達成され得る。

その目的で、本発明者らは、ＩＬ−８に対して高い親和性を有するｓｃＦｖなどの様々な組換え抗体又はその断片が、組換え抗体又はその断片、又はｓｃＦｖ断片が、腫瘍微小環境において腫瘍発生性又は内因性ＩＬ−８を捕捉し得るように、生成され得ることを発見した。腫瘍微小環境からのＩＬ−８の結合又は捕捉は、腫瘍細胞の転移を始動させる、腫瘍細胞へのＩＬ−８効果を減少させると考えられている。また、ＩＬ−８の結合又は捕捉は、骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）の蓄積を介して、腫瘍微小環境における免疫抑制を増加させるＩＬ−８効果を減少させ得る。さらに、ＩＬ−８の結合又は捕捉は、腫瘍微小環境におけるＴｈ２媒介免疫応答を増加させるＩＬ−８効果を減少させ得て、これは、腫瘍微小環境における骨髄由来サプレッサー細胞の動員に寄与し得る。特定の理論又は仮説に拘束されることは望まないが、抗体又は断片に結合したＩＬ−８は、おそらく立体効果のために、もはやその生物学的シグナル伝達機能を発揮できなくなることが考察される。さらに、結合が、ＩＬ−８を捕捉するように粒子又はその他の表面上で媒介される場合、ＩＬ−８効果が減少し又は抑止されるように、シグナル伝達に必要なＩＬ−８濃度が減少してもよい。したがって、結合及び捕捉という用語は、本明細書で同義的に使用される。

本明細書の用法では、「腫瘍」という用語は、人体内の１つ又は複数の解剖学的位置に配置され、又は発見され得る、１つ又は複数のがん細胞、がん組織、悪性腫瘍細胞、又は悪性腫瘍組織を指し、同義的に使用される。

本明細書の用法では、「結合する」という用語は、Ｋ_Ｄが、１０^−３Ｍ以下、１０^−４Ｍ、１０^−５Ｍ、１０^−６Ｍ、又は１０^−７Ｍ以下の高い親和性を有する２分子間の相互作用を「認識する」及び／又は「検出する」という用語を指し、同義的に使用され得る。

本明細書の用法では、「提供する（ｐｒｏｖｉｄｅ）」又は「提供する（ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ）」という用語は、製造、生成、配置、使用可能化、又は即時使用可能化の任意の行為を指し、これを含む。

本発明の主題の例示的且つ特に好ましい一態様では、本発明者らは、ＩＬ−８に結合する、Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントを有する、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを考察する。ｓｃＦｖのペプチド配列は、ＩＬ−８に対して望ましい結合親和性を提供する任意の適当な配列であり得ることが考察される一方で、本発明者らは、表１の配列番号１〜３４のペプチド配列の少なくとも１つ又は複数を使用して、ｓｃＦｖペプチドが生成され得ることを見出した。

代案としては及びそれに加えて、本発明者らはまた、表１に提示されるＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントのアミノ配列を使用して、組換え単離抗体又はその断片が生成され得ることも考察する。本明細書の用法では、「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子、及び免疫グロブリン分子の免疫学的活性部分、すなわち、抗原と免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。したがって、「抗体及びその断片」には、免疫グロブリン分子全体（例えば、完全サイズ、全ＩｇＧ_１など）、抗体分子全体の断片が含まれる。したがって、その断片としては、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２、ジスルフィド連結されたＦｖｓ（ｓｄＦｖｓ）、Ｆｖｓ、及びＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントのどちらかを含んでなる任意の断片が挙げられてもよいが、これに限定されるものではない。抗体が免疫グロブリンである場合、免疫グロブリンは、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）及び任意のクラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）の重鎖又は定常ドメインを含んで、異なるタイプの免疫グロブリンを構成し得ることが考察される。さらに、「抗体」としては、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体が挙げられ得るが、これに限定されるものではない。したがって、表１に示されるようなＶ_Ｈ及び／又はＶ_Ｌドメインは、当該技術分野で周知の方法を用いて、任意の既存の（典型的にはヒト又はヒト化）抗体又は抗体断片にグラフト化され得ることが理解されるべきである。

本発明者らは、表１に提示されるＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントのアミノ配列を使用して、担体タンパク質と共役させ、ＩＬ−８がハイブリッドタンパク質によって捕捉され得るように、その表面上にＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントを有するハイブリッドタンパク質を生成させ得ることをさらに考察する。Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントを安定に保有し、好ましくは腫瘍微小環境へのアクセスを提供し得る、担体タンパク質の任意の適切な形態が考察される。特に好ましい１つの担体タンパク質としては、１つ又は複数のＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントと共役される抗体部分（例えば、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ｚ）への親和性を有する、アルブミン、再折り畳みアルブミン、及びその他のタンパク質が挙げられる。

典型的には、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントは、アンカー分子と共役され、それによってＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントは、担体タンパク質と共役され得る。例えば、担体タンパク質がアルブミンである場合、アンカー分子は、アルブミンのＳｕｄｌｏｗ部位Ｉ及びＩＩ、又はアルブミンのその他の任意の疎水性領域の１つに適合する、任意の適切なサイズの疎水性ペプチド又は糖脂質であり得る。例えば、上記のＩＬ−８に対する組換え免疫グロブリンタンパク質は、そのＦｃドメインを介して担体タンパク質と共役され得る。その他の実施形態では、アンカー分子は、疎水性ペプチド（少なくとも１０アミノ酸、１５アミノ酸、２０アミノ酸、３０アミノ酸などの長さ）を含んでもよい。これらの実施形態では、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメント（例えば、ｓｃＦｖの形態としての）及び疎水性ペプチドの様々な構成が考察され得る。例えば、一価のｓｃＦｖドメインは疎水性ペプチドに直接連結され得て、又は多価のｓｃＦｖは疎水性ペプチドに直接連結され得る。代案としては、１つのｓｃＦｖドメインは複数の疎水性ペプチドに直接連結され得て、又は複数のｓｃＦｖドメインは複数の疎水性ペプチドに直接連結され得る。

代案としては、又はそれに加えて、１つ又は複数のＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントは、担体タンパク質に結合するアンカー部分を有する中間分子と共役され得る。好ましい実施形態では、本発明者らは、複数の標的認識ドメインが、担体タンパク質上の単一結合部位を介して保有され得るように、中間分子が、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントに対する複数の結合部位を提供することを考察する。適切な中間分子は、ナイーブ組織にいかなる有意な毒性も提供しない、任意のタンパク質、糖脂質、有機分子、又は無機分子を含んでもよい。例えば、適切な中間分子は、ナノ粒子（例えば、量子ドット、金ナノ粒子、磁性ナノ粒子、ナノチューブ、高分子ナノ粒子、デンドリマーなど）、又はビーズ（例えば、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、ダイナビーズなど）を含んでもよい。好ましくは、ナノ粒子及び／又はビーズは、１μｍ未満、好ましくは１００ｎｍ未満の寸法を有する。ナノ粒子は、担体タンパク質（例えば、アルブミン）へのアンカーを提供する疎水性尾部に架橋され、又はそれで部分的に被覆されてもよい。１つ又は複数のＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントもまた、ナノ粒子上に架橋され又はそれを部分的に被覆し得る（例えば、架橋などのために標的認識ドメインに連結された追加の尾部ドメインを介して）。

別の例では、適切な中間分子は、担体タンパク質に対する抗体と共役されたビーズ（例えば、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、ダイナビーズなど）を含んでもよい。したがって、担体タンパク質がアルブミンである場合、ビーズが高い親和性及び特異性で担体タンパク質に結合し得るように、ビーズはα−アルブミン抗体と共役され得る（例えば、架橋、被覆など）。１つ又は複数のＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントもまた、ビーズ上に架橋され又はそれを部分的に被覆し得る（例えば、架橋、チオール媒介架橋などのために標的認識ドメインに連結された追加の尾部ドメインを介して）。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖペプチドは、ＡＬＴ−８０３（ＩＬ−１５スーパーアゴニスト複合体、例えば、Ｂｌｏｏｄ ２０１５ １２６：１９５７を参照されたい）又はＴｘＭ（標的化ＡＬＴ−８０３ベースのスキャフォールドプラットフォーム、例えば、ＵＲＬ、ａｌｔｏｒｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍ／ｏｕｒ−ｓｃｉｅｎｃｅ／ｉｌ−１５−ｐｒｏｔｅｉｎ−ｓｕｐｅｒａｇｏｎｉｓｔ−ａｎｄ−ｓｃａｆｆｏｌｄ−ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／を参照されたい）構造を含んでなり又はそれを模倣する、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体を形成し得る。好ましくは、本発明者らは、免疫グロブリンタンパク質複合体がＴｘＭ構造を模倣する場合、ｓｃＦｖペプチドは、１つ又は複数のインターロイキン−１５（ＩＬ−１５）結合モチーフと、及び／又はＩＬ−１５結合モチーフ（例えば、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５Ｎ７２Ｄなど）に対する１つ又は複数のリガンドと、直接（又はリンカーを介して間接的に）共役され得ることを考察する。したがって、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体がＴｘＭ ＩｇＧ１構造を模倣する場合、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体は、ＩＬ−８に対する１−４ ｓｃＦｖペプチドを含んでもよい。

さらに、ＩＬ−１５結合モチーフ又はそのリガンドと共役された１つ又は複数のｓｃＦｖペプチドを有するＴｘＭ構造を模倣する、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体は、腫瘍特異的抗原又は患者特異的及び腫瘍特異的ネオエピトープに対する結合ドメイン（例えば、ネオエピトープなどに対するｓｃＦｖペプチドなど）もまた含んでもよい。例えば、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体は、２つのＩＬ−１５結合モチーフと共役されたＩＬ−８に対する２つのｓｃＦｖペプチド、及び２つのＩＬ−１５結合モチーフリガンドと共役されたネオエピトープに対する２つのＳｃＦｖペプチドを含んでもよい。好ましくは、ネオエピトープは、患者特異的且つ腫瘍特異的であり、それは米国特許出願公開第２０１２／００５９６７０Ａ１号明細書及び米国特許出願公開第２０１２／００６６００１Ａ１号明細書で開示されるような配列データのオミクス解析によって同定される。

いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖ、組換え抗体又はその断片は、配列番号１〜１５、３１〜３２のＶ_Ｈセグメントをコード化する１つの配列を使用して生成され得る。その他の実施形態では、ｓｃＦｖ、組換え抗体又はその断片は、配列番号１６〜３０、３３〜３４のＶ_Ｌセグメントをコード化する１つの配列を使用して生成され得る。なおもその他の実施形態では、ｓｃＦｖ、組換え抗体又はその断片は、配列番号１〜１５、３１〜３２のＶ_Ｈセグメントをコード化する１つの配列、及び配列番号１６〜３０、３３〜３４のＶ_Ｌセグメントをコード化する１つの配列を使用して生成され得る。これらの実施形態では、Ｖ_Ｈセグメントをコード化する配列、及びＶ_Ｌセグメントをコード化する配列は、対の配列であることが好ましい（例えば、ｓｃＦｖ ４９−３１では配列番号１と１６、ｓｃＦｖ ４９−２２では配列番号２と１７、ｓｃＦｖ ４９−７では配列番号３と１８など）。しかし、任意の対のＶ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントは、１つのＶ_Ｈセグメントを配列番号１〜１５、３１〜３２から選択し、１つのＶ_Ｌセグメントを配列番号１６〜３０、３３〜３４から選択することによって、生成され得ることが考察される。

本発明者らはまた、ｓｃＦｖ、組換え抗体又はその断片が、それぞれ、配列番号１〜１５、３１〜３２のいずれか１つと、又は配列番号１６〜３０、３３〜３４のいずれか１つと、少なくとも８５％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一である、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントをコード化するアミノ酸配列を用いて生成され得ることも考察する。このような実施形態では、ｓｃＦｖペプチド、組換え抗体又はその断片の結合親和性は、配列番号１〜１５、３１〜３２のいずれか１つを使用して、又は配列番号１〜１５、３１〜３２のいずれか１つを使用して生成された、ｓｃＦｖペプチド、組換え抗体又はその断片の結合親和性の６０％以上、好ましくは７０％以上、より好ましくは８０％以上であることが好ましい。実際、そして以下でさらに詳細に考察されるように、本発明者らは、選択されたｓｃＦｖ（４３〜１２）を使用して、ＶＨ及びＶＬのＣＤＲ領域におけるランダム変異誘発を介して、ｓｃＦｖを親和性成熟に供した。特筆すべきことに、そしていくつかの結合剤の中でも特に、２つのｓｃＦｖ（４３−１２ａ及び４３−１２ｂ）が、改善された結合特性を有する親和性成熟過程から単離された。

最も典型的には、ｓｃＦｖペプチド、組換え抗体又はその断片中のＶ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントは、典型的には５〜４０アミノ酸、好ましくは１０〜３０アミノ酸、より好ましく２０〜３０アミノ酸である、リンカー又はスペーサーを介して共役される。いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｖ_ＨセグメントのＮ末端及びＶ_ＬセグメントのＣ末端に共役し得る。その他の実施形態では、リンカーは、Ｖ_ＬセグメントのＮ末端及びＶ_ＨセグメントのＣ末端に共役し得る。本発明者らは、Ｖ_ＨセグメントとＶ_Ｌセグメントとの間に構造的可撓性を提供するために、リンカーのためのグリシンに富む配列（例えば、（Ｇ_４Ｓ）_ｎ、式中、ｎは１〜５であるなど）が好ましいことを考察する。１つ又は複数のセリン又はスレオニン残基をリンカーに含めて、ｓｃＦｖペプチド、組換え抗体又はその断片の溶解度を高めることもまた考察される。当該技術分野で公知の多数のリンカー及びｓｃＦｖを作製する方法があり、このような既知の方法は、全て本明細書での使用に適すると見なされる。

さらに、ｓｃＦｖペプチドは、複数のＶ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントを含み、二価又は多価のｓｃＦｖを形成し得る。いくつかの実施形態では、複数のＶ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントは、同一アミノ配列を有してもよい（例えば、３つのＶ_Ｈセグメントと３つのＶ_Ｌセグメントとを有する多価のｓｃＦｖであって、全てのＶ_Ｈセグメントが４９−３１ Ｖ_Ｈ（配列番号１）を有し、全てのＶ_Ｌセグメントが４９−３１ Ｖ_Ｌ（配列番号１６）を有する。その他の実施形態では、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントの少なくとも２つが、異なるアミノ酸配列を有してもよい（例えば、３つのＶ_Ｈセグメントと３つのＶ_Ｌセグメントとを有する多価のｓｃＦｖであって、Ｖ_Ｈセグメントの２つが４９−３１ Ｖ_Ｈ（配列番号１）であり、Ｖ_Ｈセグメントの１つが４９−２２ Ｖ_Ｈ（配列番号２）であり、Ｖ_Ｌセグメントの２つが４９−３１ Ｖ_Ｌ（配列番号１６）であり、Ｖ_Ｈセグメントの１つが４９−２２ Ｖ_Ｌ（配列番号１７）である。

好ましくは、ＩＬ−８（７２量体及び７７量体ＩＬ−８の少なくとも１つ）に対するｓｃＦｖ、組換え抗体又はその断片の結合親和性（Ｋｄ）は、２５℃〜３７℃の温度での測定、及び５．５〜７．５のｐＨ範囲での測定で、少なくとも１×１０^−７Ｍ未満、好ましくは１×１０^−８Ｍ未満、より好ましくは１×１０^−９Ｍ未満である。本発明者らは、Ｖ_Ｈセグメント及び／又はＶ_Ｌセグメントの同一アミノ酸配列を使用して、ｓｃＦｖ、組換え抗体、又はその断片が生成されても、構造の違いのために、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、組換え抗体、又はその断片の結合親和性が異なってもよいことを考察する。例えば、表２は、いくつかのクローンのｓｃＦｖ及び組換え抗体（ＩｇＧ１）の異なる親和性（ＫＤ値で測定された）を提供する。クローン４９−３１は、Ｖ_Ｈセグメント（配列番号１）及びＶ_Ｌセグメント（配列番号１６）をコード化するアミノ酸配列を使用して生成されたｓｃＦｖ又は組換え抗体（ＩｇＧ１）であり、クローン４３−２は、Ｖ_Ｈセグメント（配列番号８）及びＶ_Ｌセグメント（配列番号２３）をコード化するアミノ酸配列を使用して生成されたｓｃＦｖ又は組換え抗体（ＩｇＧ１）であり、クローン４３−１２は、Ｖ_Ｈセグメント（配列番号１０）及びＶ_Ｌセグメント（配列番号２５）をコード化するアミノ酸配列を使用して生成されたｓｃＦｖ又は組換え抗体（ＩｇＧ１）である。Ｋ_Ｄの予備値は表面プラズモン共鳴測定によって測定され、最高値及び最低値はＩＬ−８に対する親和性の範囲を推定するために示される。表２のＫｄ値の単位は全て、１０^−９Ｍである。

表３は、表１に示されるような配列を有する分子のさらなる例示的なデータを提供する。ここで、示されるような配列を使用して、ｓｃＦｖ及び対応するヒト化ＩｇＧ_１が調製され、チップ表面上の分析物として固定化ＩＬ−８を用いるＳＰＲによってＫＤが判定される。全ての値は、表示されるような温度でのナノＭ値として表される。

ｓｃＦｖペプチド（又は抗体又はその断片のＶ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメント）が、単一の組換え核酸によってコード化され得ることもさらに考察される。この実施形態では、組換え核酸は、Ｖ_Ｈセグメントをコード化する第１の核酸セグメント（配列要素）と、Ｖ_Ｌセグメントをコード化する第２の核酸セグメントとの少なくとも２つの核酸セグメントを含む。第１の核酸セグメントが、配列番号１〜１５、３１〜３２のアミノ酸配列の少なくとも１つをコード化するように選択され、第２の核酸セグメントが、配列番号１６〜３０、３３〜３４のアミノ酸配列の少なくとも１つをコード化するように選択されることが好ましい。しかし、それぞれＶ_Ｈ及びＶ_Ｌセグメントをコード化する第１及び第２の核酸セグメントが、配列番号１〜１５、３１〜３２のいずれか１つと、又は配列番号１６〜３０、３３〜３４のいずれか１つと、少なくとも８５％同一、好ましくは少なくとも９０％同一、より好ましくは少なくとも９５％同一であることもまた考察される。最も好ましくは、２つの核酸セグメントは、２つの核酸セグメントが、２つのペプチドセグメントを有する単一のタンパク質に翻訳され得るように、同一読み枠内にある。

さらに、組換え核酸は、リンカーペプチド（好ましくはＧに富む又はそうでなければ可撓性のリンカーペプチド）をコード化する、第１の核酸セグメントと第２の核酸セグメントとの間の第３の核酸セグメントを含んでもよく、これは、典型的には５〜４０アミノ酸、好ましくは１０〜３０アミノ酸、より好ましくは２０〜３０アミノ酸である。この実施形態では、３つの核酸セグメントは、３つの核酸セグメントが、３つのペプチドセグメントを有する単一のタンパク質に翻訳され得るように、同一読み取り枠内にあることが特に好ましい。

いくつかの実施形態では、組換え核酸は、第１及び第２の核酸セグメントの複数のセットを含んでもよく、各セットは、各第１及び第２の核酸セグメントの１つを含む。これらの実施形態では、組換え核酸は、好ましくは、第１の核酸セグメントと第２の核酸セグメントの各セットの間に位置するコネクタペプチドをコード化する、第４の核酸セグメントを含む。したがって、１つの例示的な組換え核酸は、［第１のセット］−コネクタペプチドをコード化する第４の核酸−［第２のセット］−コネクタペプチドをコード化する第４の核酸−［第３のセット］を含んでもよく、各第１、第２、及び第３のセットは、［Ｖ_Ｈセグメントをコード化する第１の核酸−リンカーをコード化する第３の核酸−Ｖ_Ｌセグメントをコード化する第２の核酸］を含み、第１の核酸及び第２の核酸の位置は、互いに交互に配置され得る。コネクタペプチドの配列は、１つのペプチド中のセット数によって変動してもよい。好ましくは、コネクタペプチドは、５〜５０アミノ酸、好ましくは１０〜４０アミノ酸、より好ましくは２０〜３０アミノ酸であってもよい。発明者らはまた、Ｖ_ＨとＶ_Ｌセグメントセット間のコネクタペプチドに可撓性を提供するのに、グリシンに富む配列（例えば、Ｇ_４Ｓなど）が好ましいとも考察する。

本発明者らは、腫瘍を有する患者に投与してＩＬ−８の内因性効果を減少させ又は阻害し得るように、ｓｃＦｖペプチド、抗体又はその断片が、医薬組成物として製剤化され得ることをさらに考察する。したがって、ｓｃＦｖペプチド、抗体又はその断片は、任意の薬学的に許容可能な担体中に（例えば、無菌注射用組成物として）、治療製剤のための投与単位当たり、少なくとも１ｍｌ、好ましくは少なくとも５ｍｌ、より好ましくは少なくとも２０ｍｌの量で配合され得ることが考察される。しかし、代替製剤もまた本明細書での使用に適すると見なされ、全ての既知の投与経路及び投与様式が本明細書で考察される。本明細書の用法では、「投与する」という用語は、本明細書で考察される化合物及び組成物の直接投与及び間接投与の双方を指し、直接投与は、典型的には医療従事者（例えば、医師、看護師など）によって実施される一方で、間接投与は、典型的には、化合物及び組成物を直接投与のために医療専門家に提供するか、又は利用可能にするステップを含む。

いくつかの実施形態では、医薬製剤は、皮下注射、真皮下注射、又は静脈内注射をはじめとする、全身注射を介して投与される。全身注射が効率的でないこともあるその他の実施形態では（例えば、脳腫瘍などの場合）、腫瘍内注射を介して製剤を投与することが考察される。

上記のＶ_Ｈ及びＶ_Ｌセグメントを含む、ｓｃＦｖペプチド、抗体又はその断片を含む、医薬組成物の１つの例示的な方法及び使用は、標的組織におけるＩＬ−８媒介効果を減少させることである。本明細書の用法では、ＩＬ−８媒介効果は、組織における又は組織の微小環境におけるＩＬ−８の存在によって、直接的又は間接的に誘導される任意の生物学的帰結を指す。したがって、ＩＬ−８効果は、組織中（例えば、リンパ球などの免疫コンピテント細胞など）又は組織外（例えば、腫瘍の近傍の健常組織など）の腫瘍細胞及び／又は非腫瘍細胞によって放出され（又は分泌され）て腫瘍微小環境に任意の時点で存在する、ＩＬ−８に起因してもよい。

特に考察される実施形態では、本発明者らは、特に患者の腫瘍微小環境において、細胞の遊出を始動させること、腫瘍の上皮間葉転換を始動させること、腫瘍の転移を始動させること、腫瘍微小環境における免疫抑制を高めること、ＭＤＳＣ発生を刺激すること、及び腫瘍微小環境におけるＴｈ２に偏った免疫応答を始動させることをはじめとするが、これらに限定されない、ＩＬ−８媒介効果を考察する。したがって、特定の理論に縛られることは望まないが、本発明者らは、遊離ＩＬ−８（ＩＬ−８受容体に結合していないＩＬ−８）を捕捉することによって腫瘍微小環境からＩＬ−８の量を減少させることが、ＩＬ−８効果を減少させる、又は腫瘍細胞に対するＩＬ−８の効果を逆転すらさせること：腫瘍の上皮間葉転換を減少させて腫瘍の転移を減少させ又は予防すること、Ｔｈ２に偏った免疫応答を減少させ又はＴｈ１及びＴｈ２媒介免疫応答を再均衡化すること、腫瘍微小環境における免疫抑制を減少させ又は予防することを考察する。特に、ＩＬ−８発現（又は蓄積）の過剰な又は異常な増加が、特定のタイプのがん（例えば、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫など）において、対応する健常組織と比較して示される場合、ＩＬ−８の結合又は捕捉は、これらのタイプのがんの予後をより効果的に変えてもよいことが予期される。

患者への医薬組成物の投与の用量及びスケジュールに関して、用量及び／又はスケジュールは、ペプチドのタイプ（例えば、ｓｃＦｖ、抗体、抗体断片、これらの任意の２つの組み合わせ、全ての組み合わせなど）、疾患のタイプ及び予後（例えば、腫瘍のタイプ、サイズ、位置）、患者の健康状態（例えば、年齢、性別などをはじめとする）次第で変動してもよいことが考察される。変動してもよいものの、用量及びスケジュールは、製剤が、宿主の正常細胞にいかなる有意な毒性効果ももたらさないが、なおも腫瘍微小環境におけるＩＬ−８の効果が、３時間以内、６時間以内、１２時間以内、２４時間以内、７２時間以内、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％減少するのに十分であるように選択及び調整されてもよい。

いくつかの実施形態では、ＩＬ−８の効果と、ＩＬ−８効果の減少は、組織中の遊離ＩＬ−８（７２量体又は７７量体のどちらか）の量によって測定され得る。これらの実施形態では、投与条件は、典型的には、７２量体又は７７量体遊離ＩＬ−８の少なくとも１つの量又は濃度が、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％減少するように調節される。その他の実施形態では、ＩＬ−８の効果と、ＩＬ−８効果の減少は、生物学的活性の生体外又は生体内測定を介して測定され得る。例えば、腫瘍の細胞遊走又は転移を減少させるための用量及び処置スケジュールは、ＩＬ−８による生体外細胞遊走アッセイによって判定され得る。本例では、投与条件は、典型的には、医薬組成物（又は薬学的に許容可能な担体なしのｓｃＦｖ、抗体又はその断片）による処置後、１時間、３時間、６時間、１２時間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％、元の位置から遊走する細胞数を減少させ、又は遊走細胞の遊走距離を減少させるように調節される。その他の例として、骨髄由来サプレッサー細胞による免疫抑制を減少させるための用量及び治療スケジュールは、腫瘍中の骨髄由来サプレッサー細胞の蓄積又は存在を測定することによって判定され得る。したがって、本例では、投与条件は、典型的には、骨髄由来サプレッサー細胞の数（全腫瘍組織の、又は腫瘍組織１ｃｍ^２当たりの）が、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％減少するように調節される。

なおもその他の実施形態では、ＩＬ−８の効果と、ＩＬ−８効果の減少は、局所サイトカイン分子の量又は濃度の測定を介して測定され得る。例えば、Ｔｈ−２媒介免疫応答を減少させるための用量及び処置スケジュールは、腫瘍微小環境におけるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１９、及びＩＬ−１３の少なくとも１つの量又は濃度を測定することによって判定され得る。したがって、この例では、投与条件は、典型的には、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１９、及びＩＬ−１３の少なくとも１つの量又は濃度が、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％減少するように調節される。

なおもその他の実施形態では、ＩＬ−８の効果と、ＩＬ−８効果の減少は、１つ又は複数の細胞のマーカーの生体外又は生体内発現レベルの測定を介して測定され得る。例えば、腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるための用量及び処置スケジュールは、腫瘍細胞におけるＥ−カドヘリン上皮マーカー及びＮ−カドヘリン間葉系マーカーの発現を測定することによって判定され得る。したがって、投与条件は、典型的には、Ｎ−カドヘリン間葉系マーカーの発現レベルが、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％減少する、又はＥ−カドヘリン上皮マーカーの発現レベルが（ＩＬ−８のみの治療と比較して）、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％増加するように調節される。腫瘍細胞におけるＮ−カドヘリンとＥ−カドヘリンの発現の間の比率もまた、ＩＬ−８の効果と、ＩＬ−８効果の減少の指標になり得ることもまた考察される。この例では、投与条件は、典型的には、Ｅ−カドヘリン：Ｎ−カドヘリン発現レベルの間の比率が、医薬組成物の投与後、３時間、６時間、１２時間、２４時間、７２時間、又は１週間以内に、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、最も好ましくは少なくとも５０％増加するように調節される。

異なる観点から見ると、生体内におけるＩＬ−８媒介効果の減少はまた、生理学的現象によっても観察され得る。例えば、ＩＬ−８濃度の減少は、腫瘍細胞のＥＭＴ（上皮間葉転換）の減少又は撤廃、及び関連するシグナル伝達経路の減少を介して観察され得る。同様に、患者での、特に腫瘍微小環境でのＩＬ−８濃度の減少は、適切な幹細胞マーカーによって容易に観察されるように、腫瘍細胞の幹細胞性を減少させる。ＩＬ−８減少のなおも別の生理学的効果において、ＭＤＳＣの発生は典型的には減少し、腫瘍内のＴ細胞におけるＴｈ２に偏った免疫応答も同様に減少する（したがってＴｈ１／Ｔｈ２のバランスをＴｈ１型の応答にシフトさせる。）

さらに、本発明者らは、特定のタイプのがんにおける腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるための、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片の効果が、１つ又は複数のがん薬物療法の同時投与によって増強され得ることを考察する。がん薬物療法としては、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（例えば、^１３１Ｉ−ｃｈＴＮＴ−３など）、アベルマブ（ＰＤ−Ｌ１とその受容体の間の相互作用を妨げるヒトモノクローナルＩｇＧ_１抗体）、ブラキュリ標的化ワクチン（例えば、ＥＴＢＸ−０５１（Ａｄ５［Ｅ１−、Ｅ２ｂ−］−ブラキュリ））、Ｈｅｒ２標的化ワクチン（例えば、ＥＴＢＸ−０２１など）、ＭＵＣ−１標的化ワクチン（例えば、ＥＴＢＸ−０６１（Ａｄ５［Ｅ１−、Ｅ２ｂ−］−ＭＵＣ１））、及び酵母ワクチン（例えば、ＧＩ−４０００（ＧＩ−４０１４、ＧＩ−４０１５、ＧＩ−４０１６、ＧＩ−４０２０）、ＧＩ−６２０７、ＧＩ−６３０１）が挙げられるが、これに限定されるものではない。これらのがん薬物療法の詳細は、その全体が参照として本明細書に援用される、国際公開ＰＣＴ／ＵＳ１７／４０２９７号に記載される。

いくつかの実施形態では、本発明者らは、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片の効果が、１つ又は複数のチェックポイント阻害剤の同時投与によって増強され得ることを考察する。チェックポイント阻害を妨げ又は下方制御するタンパク質に関して、チェックポイント受容体に結合する、任意の適切なペプチドリガンドが考察されることが考察される。最も典型的には、結合は、受容体を介したシグナル伝達を阻害し又は少なくとも減少させ、特に、ＣＴＬＡ−４（特にＣＤ８^＋細胞の場合）、ＰＤ−１（特にＣＤ４^＋細胞の場合）、ＴＩＭ１受容体、２Ｂ４、及びＣＤ１６０をはじめとする受容体が考察される。例えば、適切なペプチド結合剤は、受容体に特異的に結合する抗体断片、特にｓｃＦｖだけでなく、（例えば、ＲＮＡディスプレイ又はファージパニングを介して単離された）小分子ペプチドリガンドもまた含み得る。ペプチド分子の発現は、ネオエピトープ又はポリトープが、ペプチドリガンドの１つ又は複数と同時に発現されるように、好ましくは協調されることがここでも理解されるべきである。したがって、典型的には、ペプチドリガンドが、例えば、内部リボソーム進入部位又は２Ａ配列を使用して、単一の転写物（ポリトープをコード化する配列部分を含んでも含まなくてもよい）から、又は複数の転写物から生成されることが考察される。

その他の実施形態では、本発明者らは、１つ又は複数の免疫刺激性サイトカインを同時投与して、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片の効果が調節され得ることを考察する。例えば、免疫刺激性サイトカインは、所望の免疫応答又はＣＤ４＋ Ｔ細胞／ナイーブＴｈ細胞分極の方向に基づいて選択され得る。例えば、ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＴｒｅｇ細胞の分極が所望される一実施形態では、免疫刺激性サイトカインはＩＬ−２及びＴＧＦ−βを含むように選択されてもよい。ナイーブＣＤ４＋ Ｔ細胞からのＴｈ１７細胞の分極が所望される別の実施形態では、免疫刺激性サイトカインはＩＬ−６及びＴＧＦ−βを含むように選択されてもよい。同様に、Ｔｈ１細胞分極のための免疫刺激性サイトカインはＩＬ−１２及びＩＦＮ−γを含んでもよく、Ｔｈ２細胞分極のための免疫刺激性サイトカインはＩＬ−４を含んでもよい。さらに、Ｔｆｈ細胞（濾胞性ヘルパーＴ細胞）分極のための免疫刺激性サイトカインはＩＬ−６及びＩＬ−１２を含んでもよく、ＣＤ４＋細胞毒性Ｔ細胞分極のための免疫刺激性サイトカインはＩＬ−２を含んでもよい。

本発明者らは、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片の効果が最大化され得るように、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片と、腫瘍微小環境における腫瘍細胞又は骨髄由来サプレッサー細胞による免疫抑制効果を減少させることによって、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片に腫瘍微小環境へのより良いアクセスを提供し得る、活性化又は改変された免疫細胞とが、がん患者に同時治療（又は同時投与）され得ることをさらに考察する。例えば、活性化又は改変された免疫細胞は、キメラタンパク質又はＴ細胞受容体複合体を発現してＮＫＴ細胞免疫応答を誘導し、及び／又は腫瘍の微小環境を変化させる、ナイーブＮＫＴ細胞又は遺伝子改変ＮＫＴ細胞を含んでもよい（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞の活性を抑制することによって）。好ましくは、遺伝子改変ＮＫＴ細胞のキメラタンパク質又はＴ細胞受容体は、腫瘍（ネオ）エピトープ、腫瘍関連抗原、又は腫瘍細胞上に提示される自己脂質に結合する。別の例として、改変された免疫細胞は、好ましくはそれらの細胞表面上で、ＣＤ４０ＬとＦａｓ−Ｌの少なくとも１つを発現するように遺伝子改変された、ＮＫＴ細胞を含んでもよい。がん微小環境における免疫抑制を減少させるための、遺伝子改変ＮＫＴ細胞及び／又はナイーブＮＫＴ細胞、活性化ＮＫＴ細胞の詳細は、その全体が本明細書に援用される、国際公開ＰＣＴ／ＵＳ１８／５３５０６号（及びその対応する米国国内段階出願公開）に記載される。同様に、活性化又は改変された免疫細胞は、キメラタンパク質又はＴ細胞受容体複合体を発現してＴ細胞免疫応答を誘導し、及び／又は腫瘍の微小環境を変化させる、ナイーブＴ細胞又は遺伝子改変Ｔ細胞を含んでもよい（例えば、骨髄由来サプレッサー細胞の活性を抑制することによって）。好ましくは、遺伝子改変ＮＫＴ細胞のキメラタンパク質又はＴ細胞受容体は、腫瘍（ネオ）エピトープ、腫瘍関連抗原、又は腫瘍細胞上に提示される自己脂質に結合する。

さらに別の例として、活性化又は改変された免疫細胞は、可溶性ＮＫ細胞受容体リガンド（例えば、ＮＫＧ２Ｄ、Ｎｋｐ−３０、Ｎｋｐ−４４、Ｎｋｐ−４６など）を標的化するキラー活性化受容体（ＫＡＲ）を発現する遺伝子改変ＮＫ細胞を含んでもよく、これは、ＮＫ細胞受容体に対するデコイリガンドとして作用することにより、有効なＮＫ細胞活性を妨げる。ＫＡＲを有する遺伝子改変ＮＫ細胞の詳細は、その全体が本明細書に援用される、米国仮特許出願第６２／５６９５０３号明細書に記載される。

いくつかの実施形態では、上記の１つ又は複数のがん薬物療法、免疫刺激性サイトカイン、チェックポイント阻害剤、及び／又はナイーブ又は遺伝子改変ＮＫ細胞又はＮＫＴ細胞は、ＩＬ−８に対するｓｃＦｖ、抗体又はその断片と同じ医薬組成物に製剤化され得る。その他の実施形態では、がん薬物療法は、ｓｃＦｖ、抗体又はその断片の医薬組成物と共に提供され得る別個の医薬組成物に、又はｓｃＦｖ、抗体又はその断片の医薬組成物が患者に投与される前に投与され得る別個の医薬組成物に、配合され得る。

したがって、本明細書に提示されるＩＬ−８結合分子は、本明細書に提示されるＩＬ−８結合分子の投与を含む治療レジメンを形成してもよいことが理解されるべきである。例えば、がん患者（例えば、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫）の治療は、第１の薬物（例えば、フルベストラント）を投与してＥＭＴからＭＥＴ（間葉系から上皮系への転換）を逆転させ、第２の薬物（例えば、アルドキソルビシン）を投与して低酸素性腫瘍微小環境を特異的に標的化するような、調整された様式で実施されてもよいことが考察される。このような治療レジメンは、免疫抑制環境を減少させ、腫瘍細胞の細胞ストレスを増加させ、その結果、免疫系に対する腫瘍細胞の免疫原性の増加をもたらすと考えられている。さらに、治療は、壊死性腫瘍細胞を「標識」する腫瘍壊死標的化抗体もまた含んでもよく、したがって、ＮＫ細胞及び／又は細胞毒性Ｔ細胞による攻撃に対する易罹患性を増加させてもよい。本明細書に提示されるＩＬ−８結合分子は同時投与されて、上述のようなＩＬ−８媒介免疫抑制効果をさらに抑制する。さらに、上述のような免疫抑制状態の低下に際して、患者は、次に、典型的には、ブラキュリ、腫瘍又はがん関連抗原、及び／又は患者特異的及び腫瘍特異的新生抗原の１つ又は複数を発現する、組換えワクチンを使用した免疫療法を受けてもよい。したがって、がん治療には、腫瘍壊死標的薬、低酸素性腫瘍微小環境を標的化する薬物、ＥＭＴのＭＥＴ転換を逆転させる薬物、ワクチン構成成分（組換えウイルス、酵母、及び／又は細菌）、及び本明細書に提示されるようなＩＬ−８結合分子の少なくとも２つ（又は少なくとも３つ、又は少なくとも４つ）が含まれる。

本発明者らは、Ｖ_Ｈセグメントをコード化する配列番号１０（４３−１２ Ｖ_Ｈ）、及びＶ_Ｌセグメントをコード化する配列番号２５（４３−１２ Ｖ_Ｌ）の核酸配列を使用して、ｓｃＦｖ分子（４３−１２）を作製し、ＩＬ−８（７２量体及び７７量体）に対する結合親和性、及びＩＬ−８の別のオルソログ又はパラログとの交差反応性を判定した。図１Ａに示されるように、４３−１２ ｓｃＦｖ分子は、ＩＬ−８の７２量体及び７７量体の双方に対する強力な親和性（３８５ｐＭ及び４４０ｐＭのＫＤ）を示し、存在する場合、パラログ（ｈＣＸＣＬ１、ｈＣＸＣＬ２、ｈＣＸＣＬ７）又はオルソログ（ｍＣＸＣＬ１）との非常にわずかな交差反応性しか示さない。

本発明者らは、Ｖ_Ｈセグメントをコード化する配列番号１（４９−３１ Ｖ_Ｈ）、及びＶ_Ｌセグメントをコード化する配列番号１６（４９−３１ Ｖ_Ｌ）の核酸配列を使用して、ｓｃＦｖ分子（４９−３１）を作製し、ＩＬ−８（７２量体及び７７量体）に対する結合親和性、及びＩＬ−８の別のオルソログ又はパラログとの交差反応性を判定した。図１Ｂに示されるように、４９−３１ ｓｃＦｖ分子は、ＩＬ−８の７２量体及び７７量体の双方に対する強力な親和性（１４７ｐＭ及び１２０ｐＭのＫＤ）を示し、存在する場合、パラログ（ｈＣＸＣＬ１、ｈＣＸＣＬ２、ｈＣＸＣＬ７）又はオルソログ（ｍＣＸＣＬ１）との非常にわずかな交差反応性しか示さない。

次に、本発明者らは、このように作製されたｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２、４９−３１など、全て表３にも示される）を試験して、それらのＩＬ−８中和効果を判定した。一組の例示的な実験において、初代ヒト好中球を血液から単離し、ｓｃＦｖ分子（ここでは４３−２、４３−１２、４９−３１）がＩＬ−８媒介好中球走化性を中和する能力を評価した。３ｍＭ孔径のトランスウェルプレート内で、左側パネルに示すような１ｎＭの組換えヒトＩＬ−８を抗体の用量設定と共にインキュベートし、５０，０００個のカルセイン−ＡＭ標識好中球を上部チャンバーに入れて、１．５時間及び３時間培養した。好中球の遊出は、下部チャンバー内の全蛍光をアッセイし、バックグラウンドをブランク培地のみのウェルから差し引いて評価した。図２、パネルＡ〜Ｄは、ＩＬ−８単独（図２Ａ、図２Ｃ）で、及びＩＬ−８とｓｃＦｖ分子の１つ（４３−２、４３−１２、４９−３１）とで、１．５時間（図２Ｂ）又は３時間（図２Ｄ）処置した際の生体外好中球遊走を表すグラフを示す。図２Ｂ及び２Ｄに示されるように、全てのｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２、４９−３１）は、１．５時間及び３時間の双方において、１ｕＭ未満の濃度で好中球の遊出を３０〜７０％減少させ得て、これは、全てのｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２、４９−３１）が、血清（又は培地）中の遊離ＩＬ−８を捕捉することによりＩＬ−８の効果を軽減するのに有効であることが示唆された。

図３は、ＩＬ−８単独（ＣＴＲＬ）で、及びＩＬ−８とｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２）の１つとで、１ｎＭ濃度で処置した際の好中球遊出を表示するグラフを示す。どちらのｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２）も、ｓｃＦｖ分子（４３−２、４３−１２）処置による好中球遊走のレベルが、培地単独と同様であり又はほぼ同一であるように、ＩＬ−８の効果を完全に逆転させ得た一方で、ＩＬ−８処置単独は、培地単独と比較して好中球遊走をほぼ３倍増加させ得た。

さらに別の一組の実験において、本発明者らは、以前に同定された１つのＩＬ−８結合剤（ここでは、４３−１２、表１の配列）の親和性成熟（ここでは、ＶＨ及びＶＬ鎖のＣＤＲ領域のランダム変異誘発及びｍＲＮＡ提示選択）を用いて、２つの異なるｐＨ条件、ｐＨ７．４及びｐＨ６．０を用いて、選択された変異体形態についてＳＰＲ分析を実施した。図４Ａ〜Ｃ（図４Ａは親ｓｃＦｖ ４３−１２についての結果を描写する）の結果から分かるように、どちらの誘導体変異体形態も、親ｓｃＦｖよりも改善された結合性を有した。具体的には、図４Ｂは４３−１２ａ（表１に示される配列）の例示的な結果を示し、図４Ｃは４３−１２ｂ（表１に示される配列）の例示的な結果を示す。

本明細書の発明的概念から逸脱することなく、既に記載されたもの以外のより多くの修正が可能であることは、当業者には明らかであろう。したがって、本発明の主題は、添付の特許請求の範囲を除き、制限されるものではない。さらに、本明細書と特許請求の範囲の双方の解釈において、全ての用語は、文脈に沿った可能な限り広範な様式で解釈されるべきである。特に、「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、非排他的様式で、要素、構成要素、又はステップを指し、参照される要素、構成要素、又はステップが存在しても、又は利用されても、あるいは明示的に参照されないその他の要素、構成要素、又はステップと組み合わされてもよいことを示唆するものと解釈されるべきである。本明細書の説明、及びそれに続く特許請求の範囲全体にわたる用法では、「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び「その（ｔｈｅ）」の意味は、文脈上例外が明記されていない限り複数への言及を含む。本明細書の説明で使用されるように、文脈上例外が明記されていない限り、「ｉｎ」の意味は、「ｉｎ」及び「ｏｎ」を含む。本明細書の請求項が、Ａ、Ｂ、Ｃ、．．．．及びＮからなる群から選択されるものの少なくとも１つを指す場合、本文は、Ａ＋Ｎ、又はＢ＋Ｎなどではなく、群からの１つの要素のみを必要とするものと解釈すべきである。

Claims (71)

1. 配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメント
   を含んでなる、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチド。
2. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項１に記載のペプチド。
3. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項２に記載のペプチド。
4. 前記ペプチドが、薬理学的に許容可能な担体中に存在する、請求項１〜３のいずれか一項に記載のペプチド。
5. 前記ペプチドが、Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントの少なくとも２つの対をさらに含んでなり、前記少なくとも２つの対が連結されて多価のｓｃＦｖを形成する、請求項１〜４のいずれか一項に記載のペプチド。
6. 配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメント
   を含んでなる、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含んでなり、
   前記ペプチドが薬理学的に許容可能な担体中に存在する、がんを有する患者を治療するための医薬組成物。
7. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項６に記載の組成物。
8. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項７に記載の組成物。
9. 前記ペプチドが、前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントの少なくとも２つの対をさらに含んでなり、前記少なくとも２つの対が連結されて多価のｓｃＦｖを形成する、請求項６〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を有するＶ_Ｈセグメントをコード化する第１の核酸セグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を有するＶ_Ｌセグメントをコード化する第２の核酸セグメントを含んでなり、
    前記第１及び第２のセグメントが、任意選択的に同一読み枠中に存在する、組換え核酸。
11. リンカーペプチドをコード化する第３の核酸セグメントをさらに含んでなる、請求項１０に記載の組換え核酸。
12. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、前記リンカーペプチドと共役される、請求項１１に記載の組換え核酸。
13. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項１１〜１２のいずれか一項に記載の組換え核酸。
14. 前記組換え核酸が、前記第１及び第２の核酸セグメントの第１及び第２のセットを含んでなる、請求項１０〜１３のいずれか一項に記載の組換え核酸。
15. 前記第１及び第２のセットが、コネクタペプチドをコード化する第４の核酸セグメントと共役される、請求項１４に記載の組換え核酸。
16. それぞれ第１及び第２のアミノ酸配列を有する、Ｖ_Ｈドメイン及び／又はＶ_Ｌドメインを含んでなり、
    前記第１のアミノ酸配列が、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一であり；
    前記第２のアミノ酸配列が、配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第３のアミノ酸配列と少なくとも９５％同一である、組換え単離抗体又はその断片。
17. 前記抗体又はその断片が、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項１６に記載の抗体又はその断片。
18. 前記抗体又はその断片が、
    （ａ）免疫グロブリン分子全体；
    （ｂ）ｓｃＦｖ；
    （ｃ）モノクローナル抗体；
    （ｄ）ヒト抗体；
    （ｅ）ヒト化抗体；
    （ｆ）キメラ抗体；
    （ｇ）Ｆａｂ断片；
    （ｈ）Ｆａｂ’断片；
    （ｉ）Ｆ（ａｂ’）２；
    （ｊ）Ｆｖ；及び
    （ｋ）ジスルフィド連結されたＦｖ
    からなる群から選択される、請求項１６〜１７のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
19. （ｂ）ヒトＩｇＧ１定常ドメイン；
    （ｃ）ヒトＩｇＧ２定常ドメイン；
    （ｄ）ヒトＩｇＧ３定常ドメイン；
    （ｅ）ヒトＩｇＧ４定常ドメイン；及び
    （ｆ）ヒトＩｇＡ定常ドメイン
    からなる群から選択される、重鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含んでなる、請求項１６〜１８のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
20. 前記抗体又はその断片が、薬理学的に許容可能な担体中に存在する、請求項１６〜１９のいずれか一項に記載の抗体又はその断片。
21. 配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含んでなる、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを提供するステップと、
    組織におけるＩＬ−８効果を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、前記組織を前記ｓｃＦｖペプチドによって処置するステップと
    を含んでなる、組織におけるＩＬ−８効果を減少させる方法。
22. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項２１に記載の方法。
23. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項２２に記載の方法。
24. 前記医薬組成物が、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）の少なくとも１つをさらに含んでなる、請求項２１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記ｓｃＦｖが、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項２１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記ＩＬ−８効果が、前記組織から分泌される内因性ＩＬ−８から生じる、請求項２１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記ＩＬ−８効果が、前記組織に由来しない外因性ＩＬ−８から生じる、請求項２１〜２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記ＩＬ−８効果が、細胞の遊出を始動させるステップを含んでなる、請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記組織が腫瘍であり、前記ＩＬ−８効果が、前記腫瘍の微小環境中のＭＤＳＣ蓄積を始動させるステップを含んでなる、請求項２１〜２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記ＩＬ−８効果が、Ｔｈ２媒介免疫応答を減少させるステップを含んでなる、請求項２１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含む医薬組成物を提供するステップと、
    腫瘍を治療するのに有効な用量及びスケジュールで、前記医薬組成物を患者に投与するステップと
    を含んでなり、前記ｓｃＦｖが、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び／又は配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含んでなる、前記腫瘍を有する前記患者を治療する方法。
32. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項３１に記載の方法。
33. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項３２に記載の方法。
34. 前記医薬組成物が、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）の少なくとも１つをさらに含んでなる、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の方法。
35. 前記用量及び前記スケジュールが、前記患者における前記腫瘍の上皮間葉転換を少なくとも３０％妨げるのに有効である、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。
36. 前記腫瘍が、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫の少なくとも１つである、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の方法。
37. 前記ｓｃＦｖが、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
38. フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）、及びブラキュリの少なくとも１つを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
39. ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５超作動薬（ＡＬＴ８０３）、ＩＬ−２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される免疫刺激性サイトカインを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
40. チェックポイント阻害剤を前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項３１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
41. 一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含む医薬組成物を提供するステップと、
    前記医薬組成物を腫瘍微小環境における骨髄由来サプレッサー細胞の存在を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、患者に投与するステップと
    を含んでなり、前記ｓｃＦｖが、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含んでなる、腫瘍を有する前記患者において免疫抑制を減少させる方法。
42. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項４１に記載の方法。
43. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項４２に記載の方法。
44. 前記薬理学的組成物が、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、及び腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）の少なくとも１つをさらに含んでなる、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
45. 前記用量及び前記スケジュールが、前記腫瘍の微小環境における前記骨髄由来サプレッサー細胞の増殖を少なくとも３０％減少させるのに有効である、請求項４１〜４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記腫瘍が、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫の少なくとも１つである、請求項４１〜４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記用量及び前記スケジュールが、前記患者における前記腫瘍の上皮間葉転換を少なくとも３０％妨げるのに有効である、請求項４１〜４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記ｓｃＦｖが、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項４１〜４７のいずれか一項に記載の方法。
49. フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）、及びブラキュリの少なくとも１つを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項４１〜４８のいずれか一項に記載の方法。
50. ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５超作動薬（ＡＬＴ８０３）、ＩＬ−２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される免疫刺激性サイトカインを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項４１〜４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含む医薬組成物を提供するステップと、
    前記医薬組成物を患者のＴｈ２媒介免疫応答を低下させるのに有効な用量及びスケジュールで、前記患者に投与するステップと
    を含んでなり、前記ｓｃＦｖが、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含んでなる、腫瘍を有する前記患者におけるＴｈ２媒介免疫応答を減少させる方法。
52. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項５１に記載の方法。
53. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項５２に記載の方法。
54. 前記薬理学的組成物が、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、及び腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）の少なくとも１つをさらに含んでなる、請求項５１〜５３のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記用量及び前記スケジュールが、前記腫瘍の微小環境におけるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１９、及びＩＬ−１３の少なくとも１つの量を少なくとも３０％減少させるのに有効である、請求項５１〜５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記腫瘍が、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫の少なくとも１つである、請求項５１〜５５のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記ｓｃＦｖが、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項５１〜５６のいずれか一項に記載の方法。
58. フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）、及びブラキュリの少なくとも１つを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項５１〜５７のいずれか一項に記載の方法。
59. ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５超作動薬（ＡＬＴ８０３）、ＩＬ−２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される免疫刺激性サイトカインを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項５１〜５８のいずれか一項に記載の方法。
60. 一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）ペプチドを含む医薬組成物を提供するステップと、
    前記医薬組成物を腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるのに有効な用量及びスケジュールで、患者に投与するステップと
    を含んでなり、前記ｓｃＦｖが、配列番号１〜１５、３１〜３２からなる群から選択される第１のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｈセグメント、及び配列番号１６〜３０、３３〜３４からなる群から選択される第２のアミノ酸配列を含んでなるＶ_Ｌセグメントを含んでなる、前記患者における前記腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させる方法。
61. 前記Ｖ_Ｈセグメント及びＶ_Ｌセグメントが、リンカーペプチドと共役される、請求項６０に記載の方法。
62. 前記リンカーペプチドが、グリシンに富むペプチドである、請求項６１に記載の方法。
63. 前記薬理学的組成物が、フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）、及びブラキュリの少なくとも１つをさらに含んでなる、請求項６０〜６２のいずれか一項に記載の方法。
64. 前記腫瘍が、膵臓がん、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫の少なくとも１つである、請求項６０〜６３のいずれか一項に記載の方法。
65. 前記ｓｃＦｖが、１０^−７Ｍ未満のＩＬ−８への結合親和性を有する、請求項６０〜６４のいずれか一項に記載の方法。
66. フルベストラント、アルドキソルビシン、ドセタキセル、腫瘍壊死治療剤（ＴＮＴ）、及びブラキュリの少なくとも１つを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項６０〜６５のいずれか一項に記載の方法。
67. ＩＬ−２、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１５超作動薬（ＡＬＴ８０３）、ＩＬ−２１、ＩＰＳ１、及びＬＭＰ１からなる群から選択される免疫刺激性サイトカインを前記患者に同時投与するステップをさらに含んでなる、請求項６０〜６６のいずれか一項に記載の方法。
68. 腫瘍を有する患者における免疫抑制を減少させるための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の使用。
69. 腫瘍を有する患者におけるＴｈ２媒介免疫応答を減少させるための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の使用。
70. 患者における腫瘍細胞の上皮間葉転換を減少させるための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の使用。
71. 腫瘍を有する患者における前記腫瘍の転移を減少させるための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）の使用。

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