TW201900228A - 分離基材、細胞分離過濾器及血小板之製造方法 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種巨核細胞的排斥率高並且血小板的透過率高的分離基材以及使用了該分離基材之細胞分離過濾器及血小板之製造方法。本發明的分離基材由用於從包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液分離血小板之不織布構成，其中，分離基材的平均孔徑係2.0μm以上且15.0μm以下，分離基材的厚度係10μm以上且500μm以下。

Description

分離基材、細胞分離過濾器及血小板之製造方法
本發明涉及一種分離基材、細胞分離過濾器及血小板之製造方法。
血小板係在血栓的形成中發揮中心作用，且在生體內顯現止血功能之細胞，因此若出血時或使用抗癌劑時血小板減少，則嚴重的情況下有時導致死亡。 而且，對血小板的減少之唯一的確定之治療法係輸血血小板製劑。目前的血小板製劑取決於來自志願者的獻血，儘管保存有效期間為4天之極短的天數，隨著因少子化而能夠獻血的年齢層的人口減少及獻血需要高之高齢人的人口增加，預測醫療現場中的需要與供給的平衡難以保持。 因此，代替獻血之血小板來源的開發備受關注。
近年來，已報導了藉由將多能性乾細胞、造血祖細胞、間充質細胞等作為來源培養巨核細胞來在體外大量生產血小板之技術。 在該技術中，血小板藉由巨核細胞的細胞質被切割而產生，因此在血小板生產後的培養液中含有複數個巨核細胞。 因此，從抑制免疫原性之觀點考慮，需要分離巨核細胞及從巨核細胞生產之血小板之技術開發。
作為該種分離技術，例如在專利文獻1中記載了“一種血小板分離基材，其由用於從包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液分離血小板之多孔體構成，其中，多孔體的流入側的平均孔徑係10 μm以上且20 μm以下，從流入側朝向流出側，平均孔徑連續或階段性地較少，並且流出側的平均孔徑係3 μm以上且8 μm以下。”（[申請專利範圍1]）。 [先前技術文獻] [專利文獻]
[專利文獻1]日本特開2016-192960號公報
本發明人等對專利文獻1中所記載之血小板分離基材進行了研究，其結果可知巨核細胞的排斥率（除去率）高，但是明確了血小板的透過率（回收率）低而對巨核細胞與血小板的分離性能存在改善的空間。
因此，本發明的課題在於提供一種巨核細胞的排斥率高並且血小板的透過率高的分離基材以及使用了該分離基材之細胞分離過濾器及血小板之製造方法。
本發明人等為了實現上述課題而進行了深入研究的結果，發現如下從而完成了本發明，亦即，關於由不織布構成之分離基材，若平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下，厚度係10 μm以上且500 μm以下，則巨核細胞的排斥率高並且血小板的透過率變高。 亦即，發現了藉由以下的結構能夠實現上述課題。
[1]一種分離基材，其由用於從包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液分離血小板之不織布構成，其中 分離基材的平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下， 分離基材的厚度係10 μm以上且500 μm以下。 [2]如[1]所述之分離基材，其中分離基材的透氣性係2 cm3 /cm2 /s以上且40 cm3 /cm2 /s以下。 [3]如[1]或[2]所述之分離基材，其中構成不織布之纖維的平均纖維直徑係800 nm以上且1900 nm以下。 [4]如[1]至[3]中任一項所述之分離基材，其中分離基材的孔隙率係40%以上且90%以下。 [5]如[1]至[4]中任一項所述之分離基材，其中分離基材由選自包括纖維素樹脂、聚丙烯腈樹脂、聚碸樹脂、氟樹脂、聚醚碸樹脂、聚醯胺樹脂及聚烯烴樹脂之群組中之至少一種樹脂構成。 [6]如[1]至[5]中任一項所述之分離基材，其中分離基材由選自包括纖維素樹脂及聚烯烴樹脂之群組中之至少一種樹脂構成。 [7]如[6]所述之分離基材，其中纖維素樹脂係纖維素醯化物或纖維素。 [8]如[6]所述之分離基材，其中聚烯烴樹脂係聚丙烯。
[9]一種細胞分離過濾器，其具備： 容器，配置有第1通液口及第2通液口；及 過濾材料，填充於第1通液口及第2通液口之間，該細胞分離過濾器中， 過濾材料係[1]至[8]中任一項所述之分離基材。 [10]一種血小板之製造方法，其具有： 接觸步驟，使至少包含巨核細胞之培養液與[1]至[8]中任一項所述之分離基材接觸； 培養步驟，在接觸步驟之前及之後的至少一者中，培養巨核細胞而產生血小板；及 回收步驟，在接觸步驟及培養步驟之後，回收含有所產生之血小板之培養液。 [發明效果]
藉由本發明，能夠提供一種巨核細胞的排斥率高並且血小板的透過率高的分離基材以及使用了該分離基材之細胞分離過濾器及血小板之製造方法。
以下，對本發明進行了詳細的說明。 以下所記載之構成要件的說明係根據本發明的代表性的實施態樣而完成者，但是本發明並不限定於該種實施態樣。 另外，在本說明書中，用“~”來表示之數值範圍係指將記載於“~”前後之數值作為下限值及上限值而包括之範圍。
通常，分離基材係指在複數個內部具有較小的孔隙之結構體，例如可舉出由纖維結構體、多孔膜、滾珠填充管柱及該等積層體構成者。 其中，纖維結構體係指纏結纖維而成為一個結構者，例如可舉出織物（網狀物（mesh））、編物、辮子、不織布及將纖維填充到管柱中者等，其中，從寬的孔徑分佈、複雑的流路、製作容易性的方面考慮，尤其不織布為較佳。又，作為不織布的製法，例如可舉出乾式法、湿式法、紡黏法、熔噴法、靜電紡絲法、針刺法等，其中，從生產性及通用性的方面考慮，湿式法及熔噴法、靜電紡絲法為較佳。 多孔膜係指在整個塑膠體具有多個連通孔者，作為製法可舉出相分離法、發泡法、照射放射線或雷射光等之蝕刻法、成孔法、冷凍乾燥法、塑膠焼結法等，但是從寬的孔徑分佈、複雑的流路、製作容易性的方面考慮，尤其使用了相分離法之多孔膜為較佳。 滾珠填充管柱係指藉由在管柱內填充滾珠而在滾珠之間形成孔隙者。滾珠的粒徑期望為均勻者，藉由滾珠的粒徑將滾珠之間的孔隙設為孔徑而容易控制。
[分離基材] 本發明的分離基材係由用於從包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液分離血小板之不織布構成之分離基材。 又，本發明的分離基材的平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下。 又，本發明的分離基材的厚度係10 μm以上且500 μm以下。
其中，本說明書中，“平均孔徑”係指在使用了perm-porometer（Seika Corporation製 CFE-1200AEX）之細孔徑分佈測量試驗中，相對於在GALWICK（Porous Materials，Inc製）中完全潤濕之樣品的空氣壓以2 cc/min增大而進行了評價之值。 具體而言，相對於在GALWICK中完全潤濕之膜狀樣品，在膜的一側以2 cc/min規定量送入空氣，一邊測量其壓力，一邊測量向與膜的相反的一側透過之空氣的流量。 在該方法中，首先關於在GALWICK中潤濕之膜狀樣品，得到了壓力與透氣流量的資料（以下，亦稱為“濕曲線”。）。接著，對與未潤濕之乾燥狀態的膜狀樣品相同的資料（以下，亦稱為“乾曲線”。）進行了測量，並求出相當於乾曲線的流量的一半之曲線（半乾曲線）與濕曲線的交點的壓力。之後，將GALWICK的表面張力（γ）、與基材的接觸角（θ）及空氣壓（P）導入到下述式（I），能夠計算平均孔徑。 平均孔徑=4γcosθ/P……（I）
又，本說明書中，“厚度”係指使用測微儀（Mitutoyo Corporation製）在10處測量分離基材的膜厚，將各測量值進行平均之值。
本發明的分離基材如上所述，平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下，厚度係10 μm以上且500 μm以下，因此巨核細胞的排斥率高、並且血小板的透過率變高。 發揮該種效果之理由的詳細雖不明確，但是本發明人等如以下那樣推測。 亦即，從後述之實施例與比較例的對比，認為藉由分離基材的平均孔徑係15.0 μm以下，能夠阻止巨核細胞的透過，藉由分離基材的平均孔徑係2.0 μm以上並且分離基材的厚度係10 μm以上且500 μm以下，能夠使血小板透過。
本發明的分離基材的平均孔徑係3.0~11.0 μm為較佳，4.0~9.0 μm為更佳。 又，本發明的分離基材的厚度係20~300 μm為較佳，20~190 μm為更佳。
本發明中，從巨核細胞與血小板的分離性能更加提高之理由，分離基材的透氣性係2 cm3 /cm2 /s以上且40 cm3 /cm2 /s以下為較佳，5 cm3 /cm2 /s以上且30 cm3 /cm2 /s以下為更佳。 其中，本說明書中，“透氣性”係指藉由JIS L 1913的“通常的不織布試驗方法”中所記載之弗雷澤形法測量之值。
又，本發明中，從巨核細胞與血小板的分離性能更加提高之理由，分離基材的孔隙率係40%以上且90%以下為較佳，大於50%且小於85%為更佳。 其中，本說明書中，“孔隙率”係指藉由下述式計算之值。 孔隙率（%）=[1-{m/ρ/（S×d）}]×100 m：片材重量（g） ρ：樹脂密度（g/cm3 ） S：片材面積（cm2 ） d：片材膜厚（cm）
本發明的分離基材的結構係如上所述的不織布。 作為不織布之製造方法，例如可舉出靜電紡絲法、複合熔體紡絲法、熔噴法、CVD（chemical vapor deposition，化學氣相沉積）法，其中，靜電紡絲法為較佳。 具體而言，例如能夠藉由日本特開2016-053232號公報的圖1中示出之納米纖維製造裝置110來製造不織布120。
本發明中，從能夠兼具充分的纖維強度及良好的分離性能之理由，構成不織布之纖維的平均纖維直徑係800 nm以上且1900 nm以下為較佳。 又，從使用分離基材時（例如，過濾中等）能夠防止纖維的剝離之理由，構成不織布之纖維的平均纖維長度係1 mm以上且1 m以下為較佳。 另外，平均纖維直徑及平均纖維長度能夠藉由調節製造不織布時的原料（例如，乙酸纖維素等）溶液的濃度來進行調整。
其中，平均纖維直徑係指如以下那樣進行測量之值。 關於由纖維構成之不織布的表面，觀察透過型電子顯微鏡（Transmission Electron Microscope：TEM）像或掃描型電子顯微鏡（Scanning Electron Microscope：SEM）像。 按照構成之纖維的大小，以選自1000~5000倍之倍率，藉由電子顯微鏡圖像進行觀察。其中，試樣、觀察條件或倍率以滿足下述條件之方式進行調整。 （1）觀察圖像內的任意部位引出一根直線X，相對於該直線X，20根以上的纖維交叉。 （2）在相同的圖像內引出與直線X垂直交叉之直線Y，相對於直線Y，20根以上的纖維交叉。 相對於如上述的電子顯微鏡觀察圖像，關於與直線X相交之纖維、與直線Y相交之纖維的各自，讀取至少20根（亦即，總計至少為40根）的寬度（纖維的短徑）。如此，觀察至少3組以上的該種如上述的電子顯微鏡圖像，讀取至少40根×3組（亦即，至少120根）的纖維直徑。 將如此讀取之纖維直徑進行平均而求出平均纖維直徑。
又，平均纖維長度係指如以下那樣測量之值。 亦即，纖維的纖維長度能夠藉由分析測量上述之平均纖維直徑時所使用之電子顯微鏡觀察圖像而求出。 具體而言，相對於如上述的電子顯微鏡觀察圖像，關於與直線X相交之纖維、與直線Y相交之纖維的各自，讀取至少20根（亦即，總計至少為40根）的纖維長度。 如此，觀察至少3組以上的如上述的電子顯微鏡圖像，讀取至少40根×3組（亦即，至少120根）的纖維長度。 將如此讀取之纖維長度進行平均而求出平均纖維長度。
本發明的分離基材由樹脂材料構成為較佳。 作為樹脂材料，具體而言，例如可舉出纖維素醯化物、纖維素等纖維素樹脂；聚丙烯腈樹脂；聚碸樹脂；氟樹脂；聚醚碸樹脂；聚醯胺樹脂；聚丙烯等聚烯烴樹脂；等，在該等中，亦可以單獨使用一種，亦可以併用兩種以上。 該等中，由纖維素樹脂及聚烯烴樹脂的至少一者構成為較佳，由纖維素樹脂構成為更佳，由纖維素醯化物或纖維素構成為進一步較佳。又，作為聚烯烴樹脂，聚丙烯為較佳。
本發明中，由纖維素構成之分離基材亦能夠藉由使由纖維素醯化物構成之分離基材鹼化而得到。 其中，作為纖維素醯化物所具有之醯基，具體而言，例如可舉出乙醯基、丙醯基及丁醯基等。另外，經取代之醯基可以為僅一種（例如，僅為乙醯基），亦可以為兩種以上。
又，本發明中，從抑制在分離基材上的血小板的吸附而更加提高血小板的透過率之觀點考慮，在分離基材的表面實施親水化處理，亦可以將血小板低吸附材料化學性或物理性改質。 作為血小板低吸附材料，在側鏈具有親水性基之聚合物為較佳，例如可舉出2-甲基丙烯醯氧基乙基磷酸胆鹼、乙二醇、甲基丙烯酸甲酯、羥基乙基甲基丙烯酸酯、乙烯醇、N-乙烯-2-吡咯烷酮、磺基甜菜鹼單體的聚合物等。 作為親水性基，具體而言，例如可舉出羥基、醚基、硝基、亞胺基、羰基、磷酸基、甲氧基二乙二醇基、甲氧基三乙二醇基、乙氧基二乙二醇基、乙氧基三乙二醇基、胺基、二甲基胺基、二乙基胺基、羧基、磷醯基、磷酸胆鹼基、硫酸基或該等的鹽等。 又，作為血小板低吸附材料及其改質方法，能夠利用WO87/05812、日本特開平4-152952、日本特開平5-194243、WO2010/113632等中所記載的材料及方法。
[細胞懸濁液] 使用本發明的分離基材供於血小板的分離之細胞懸濁液係包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液。 其中，巨核細胞及血小板並無特別限定，例如可舉出從成體組織採取之巨核細胞及血小板；從具有多能性乾細胞、造血祖細胞及間充質細胞等分化能之細胞分化之巨核細胞及血小板；在通常的方法中在不具有巨核細胞上的分化能之細胞藉由使用直接重新編程技術製作之巨核細胞及血小板；組合該等之巨核細胞及血小板；等。
作為多能性乾細胞，例如可舉出胚性乾細胞[ES（embryonic stem）細胞]、核移植胚性乾細胞[nt（nuclear transfer）ES細胞]及人工多能性乾細胞[iPS（induced pluripotent stem）細胞]等，其中，人工多能性乾細胞（iPS細胞）為較佳。 作為造血祖細胞，例如可舉出來自於骨髄、來自於臍帯血、動員[G-CSF（Granulocyte-colony stimulating factor，顆粒性白血球群落刺激因子）]末梢血、來自於ES細胞的中肺葉系細胞及來自於末梢血的細胞等，但是並不限定於該等。作為該等造血祖細胞，例如可舉出分化抗原群（cluster of differentiation：CD）34陽性者（例如，CD34+細胞、CD133+細胞、SP細胞、CD34+CD38-細胞、c-kit+細胞或者CD3-、CD4-、CD8-及CD34+細胞者）（國際公開WO2004/110139）。 作為間充質細胞，例如可舉出間充質乾細胞、脂肪祖細胞、骨髄細胞、脂肪細胞及滑膜細胞等，其中，脂肪祖細胞為較佳。 在通常的方法中，作為不具有在巨核細胞上的分化能之細胞，例如可舉出纖維芽細胞等，但是並不限定於該等。
[細胞分離過濾器] 本發明的細胞分離過濾器具備：容器，配置有第1通液口及第2通液口；及過濾材料，填充於第1通液口及第2通液口之間，其中在過濾材料中使用了上述之本發明的分離基材。
細胞分離過濾器中所使用之容器的形態、大小、材質並無特別限定。 作為容器的形態，例如可以為球、容器、盒狀、袋狀、管狀、管柱狀等、任意的形態。 作為容器的型（類型），亦能夠使用橫向類型及管柱狀類型中的任一個類型。
[血小板之製造方法] 本發明的血小板之製造方法具有： 接觸步驟，使至少包含巨核細胞之培養液與上述之本發明的分離基材接觸； 培養步驟，在接觸步驟之前和/或之後，培養巨核細胞而產生血小板；及 回收步驟，在接觸步驟及培養步驟之後，回收包含所產生之血小板之培養液。 其中，接觸步驟中的接觸機構能夠依據培養液的量及巨核細胞的濃度等來適當選擇，但是例如可舉出在填充有本發明的分離基材之塔或管柱等供給細胞懸濁液之方法等。 又，培養步驟中的產生血小板之方法，例如可舉出藉由流體加載剪切應力之方法，具體而言可舉出攪拌包含巨核細胞之培養液之方法等。另外，培養步驟中培養之巨核細胞可以為在接觸步驟之後具有培養步驟之情況下藉由本發明的分離基材補充之巨核細胞。又，認為接觸步驟之後具有培養步驟之情況下如後述之實施例那樣使包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液與分離基材接觸時在初期階段補充之巨核細胞，藉由基於之後接觸之細胞懸濁液（亦即流體）之負荷，亦產生血小板。 又，作為回收步驟中的回收方法，例如可舉出在填充有本發明的分離基材之塔或管柱狀等使包含所產生之血小板之培養液通液之方法等。 [實施例]
以下，根據實施例對本發明進行進一步詳細的說明。以下的實施例中所示之材料、使用量、比例、處理內容、處理步驟等只要不脫離本發明的宗旨，則能夠適當變更。然而，本發明的範圍並非係被以下所示之實施例限定地解釋者。
[實施例1] ＜乙酸纖維素的合成＞ 向纖維素（原料：棉絨纖維）混合乙酸、乙酸酐及硫酸，一邊將反應溫度保持為40℃以下，一邊進行乙醯基化。設為原料之纖維素消失而結束乙醯基化之後，進而在40℃以下繼續加熱，調整為所期望的聚合性。 接著，添加乙酸水溶液使殘留之酸酐進行水解之後，在60℃以下進行加熱，藉此進行部分水解，調整為所期望的取代度。 藉由過量的乙酸鎂對殘留之硫酸進行了中和。由乙酸水溶液進行再沉澱，進而反覆進行在水中的清洗，藉此合成了取代度2.91的乙酸纖維素。
＜乙酸丙酸纖維素的合成＞ 將乙酸變更為乙酸與丙酸的混合溶劑，將乙酸酐變更為乙酸酐與丙酸酐的混合物，除此以外，以與乙酸纖維素的合成相同的方法進行，從而合成了乙醯基取代度1.3%、丙醯基取代度48%的乙酸丙酸纖維素。
＜不織布的製作＞ 將所合成之乙酸纖維素溶解於二氯甲烷87%及甲醇13%的混合溶劑中，製備了3.5 g/100cm3 的乙酸纖維素溶液，並設置於納米纖維製造裝置的複數個中的任一噴嘴的一部分。 將由相同的方式製備之乙酸丙酸纖維素溶液設置於剩餘的噴嘴中，從而製作了以單位量10 g/m2 由20×30 cm的乙酸纖維素纖維及乙酸丙酸纖維素構成之不織布。 接著，對已製作之不織布在200℃下施加5分鐘加熱處理，從而製作了分離基材。
＜巨核細胞及血小板＞ 培養基：向RPMI1640（Life Technologies公司）450 ml添加牛血清（Life Technologies公司）50 ml而使用。 巨核細胞：將MEG-01（ATCC公司）用作巨核細胞。將其與培養基混合，藉此製備了巨核細胞液（6×105 cells/ml）。 血小板懸濁液：將從鼠末梢血單離者用作血小板。具體而言，在裝入有檸檬酸-葡萄糖溶液（ACD）（sigma-aldrich公司）之15 ml離心分離用錐形管狀（Falcon公司）回收了從鼠採血之全血10 ml。在300×g、室溫下進行7分鐘離心，回收了離心後的Plasma層及Bufffy coat層。相同地對回收液進行離心分離，僅回收了Plasma層之後，在1800×g、室溫下進行5分鐘離心，回收上清液，藉此得到了血小板。將其與培養基進行混合，藉此製備了血小板懸濁液（6×107 cells/ml）。 等量混合巨核細胞液及血小板懸濁液，藉此製備了細胞懸濁液。
＜細胞分離試驗＞ 使用過濾模組（ADVANTEC公司，KS-47）的供給側的其中一者的流通口與包含細胞懸濁液之50 ml注射器（TERUMO CORPORATION）管連接之過濾模組進行了膜分離處理。將注射器設置於注射器泵（HARVARD APPARATUS公司、PHD ULTRA 4400）運行注射器泵，以3 ml/min.的流量，細胞懸濁液30 ml以相對於設置於過濾模組內之分離基材直行之固定端方式供給。回收了從過濾模組的透過側的排出口排出之濾液。
＜回收細胞數的計數＞ 向從過濾模組的透過側採取之濾液100 μl添加加入了核染色劑亦即Hoechst33342（DOJINDO LABORATORIES製）之Dulbecco的磷酸緩衝食鹽水（Dulbecco’s Phosphate-Buffered Saline：DPBS）[Thermo Fisher Scientific公司製]10 μl，在遮光環境下反應了15分鐘。加入300 μl的DPBS，使用BD Trucount tubes（Becton， Dickinson and Company製），藉由流式細胞術（FACS Aria）進行了測量。 從前方散射光（Forward scatter：FSC）及側方散射光（Side scatter：SSC）柵極確定了巨核細胞成分及血小板成分。將血小板成分中的核染色陰性細胞作為血小板，將巨核細胞成分中的核染色陽性細胞作為巨核細胞，藉此計算了回收液中的血小板數及巨核細胞數。 將從以下式得到之血小板透過率及巨核細胞排斥率示於表1中。 血小板透過率（%）=（濾液中的血小板數/元液中的血小板數）×100 巨核細胞排斥率（%）=100-（濾液中的巨核細胞數/元液中的巨核細胞數）×100
＜評價（分離的判定）＞ 作為分離的總合判定，由以下基準進行了評價。將結果示於下述表1中。 A：血小板透過率係80%以上並且巨核細胞排斥率95%以上 B：血小板透過率係80%以上並且巨核細胞排斥率90%以上 或、血小板透過率係70%以上並且巨核細胞排斥率95%以上 C：血小板透過率小於70%或巨核細胞排斥率小於90%
[實施例2~5及比較例1] 調節導入到納米纖維製造裝置之乙酸纖維素及乙酸丙酸纖維素溶液的濃度，製作了不織布，除此以外，以與實施例1相同的方法，製作了分離基材，並進行了評價。將結果示於表1中。
[實施例6~7及比較例2~3] 變更由納米纖維製造裝置製作不織布時的單位量，除此以外，以與實施例1相同的方法，製作了分離基材，並進行了評價。將結果示於表1中。
[實施例8~9及比較例4] 在實施例8~9中使用聚丙烯製不織布（3M公司製），在比較例4中使用聚丙烯製不織布（Merck Millipore製），以與實施例1相同的方法，進行了評價。將結果示於下述表1中。
[實施例10] 使用溶解於二氯甲烷87%及甲醇13%的混合溶劑之纖維素溶液，製作了不織布，除此以外，以與實施例1相同的方法，製作了分離基材，並進行了評價。將結果示於表1中。
[實施例11及比較例5] 使用溶解於N，N-二甲基甲醯胺（DMF）之聚丙烯腈溶液，製作了不織布，除此以外，以與實施例1相同的方法，製作了分離基材，並進行了評價。將結果示於表1中。
[比較例6~8] 在比較例6中使用對苯二甲酸聚乙烯酯製不織布（TEIJIN LIMITED. 製），在比較例7中使用SUS316製的棉布網，在比較例8中使用乙酸纖維素製多孔膜（ADVANTEC製），除此以外，以與實施例1相同的方法進行了評價。將結果示於下述表1中。
[比較例9] 比較例9中，引用先行例亦即專利文獻1（日本特開2016-192960號公報）的實施例3的資料，使用了將該資料部分改變者。
其中，各實施例中，使過濾膜如表1那樣不同。 具體而言，在實施例1~5及比較例1中，使用了由孔徑及透氣性不同之纖維素醯化物構成之不織布。 在實施例6~7及比較例2~3中，使用了由厚度不同之纖維素醯化物構成之不織布。 在實施例8~9及比較例4中，使用了由平均孔徑不同之聚丙烯構成之不織布。 在實施例10~11及比較例5~6中，使用了原材料不同之不織布。 在比較例7中，使用了網結構的分離基材，在比較例8中，使用了多孔性結構的分離基材。
[表1]
從表1中所示之結果，可知使用了由平均孔徑大於15 μm的不織布構成之分離基材之情況下，巨核細胞的排斥率變低（比較例1）。 又，可知使用了由平均孔徑小於2.0 μm的不織布構成之分離基材之情況下，血小板的透過率變低（比較例4~6）。 又，可知使用了由厚度大於500 μm的不織布構成之分離基材之情況下，血小板的透過率變低（比較例2、3及9）。 又，可知即使平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下、厚度係10 μm以上且500 μm以下，使用了非不織布的形態之分離基材之情況下，血小板的透過率及巨核細胞的排斥率中的任一者變低（比較例7及8）。
相對於此，可知使用了由平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下、厚度係10 μm以上且500 μm以下之不織布構成之分離基材之情況下，巨核細胞的排斥率高並且血小板的透過率變高（實施例1~11）。

Claims (10)

  1. 一種分離基材，其由用於從包含巨核細胞及血小板之細胞懸濁液分離血小板之不織布構成，其中， 該分離基材的平均孔徑係2.0 μm以上且15.0 μm以下， 該分離基材的厚度係10 μm以上且500 μm以下。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之分離基材，其中 該分離基材的透氣性係2 cm3 /cm2 /s以上且40 cm3 /cm2 /s以下。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之分離基材，其中 構成該不織布之纖維的平均纖維直徑係800 nm以上且1900 nm以下。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之分離基材，其中 該分離基材的孔隙率係40%以上且90%以下。
  5. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之分離基材，其中 該分離基材由選自包括纖維素樹脂、聚丙烯腈樹脂、聚碸樹脂、氟樹脂、聚醚碸樹脂、聚醯胺樹脂及聚烯烴樹脂之群組中之至少一種樹脂構成。
  6. 如申請專利範圍第1項或第2項所述之分離基材，其中 該分離基材由選自包括纖維素樹脂及聚烯烴樹脂之群組中之至少一種樹脂構成。
  7. 如申請專利範圍第6項所述之分離基材，其中 該纖維素樹脂係纖維素醯化物或纖維素。
  8. 如申請專利範圍第6項所述之分離基材，其中 該聚烯烴樹脂係聚丙烯。
  9. 一種細胞分離過濾器，其具備： 容器，配置有第1通液口及第2通液口；及 過濾材料，填充於該第1通液口及該第2通液口之間，其中 該過濾材料係申請專利範圍第1項至第8項中任一項所述之分離基材。
  10. 一種血小板之製造方法，其具有： 接觸步驟，使至少包含巨核細胞之培養液與申請專利範圍第1項至第8項中任一項所述之分離基材接觸； 培養步驟，在該接觸步驟之前及之後的至少一者中，培養巨核細胞而產生血小板；及 回收步驟，在該接觸步驟及該培養步驟之後，回收含有所產生之血小板之培養液。
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