TW201838620A - 皮膚屏障增強劑、醫藥組成物、藥用化妝品及美容方法 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種可增強皮膚屏障機能之皮膚屏障增強劑。即，一種皮膚屏障增強劑，含有單醣及糖醇中之至少一者，且pH為4.0以上且7.0以下。

Description

皮膚屏障增強劑、醫藥組成物、藥用化妝品及美容方法

本發明關於一種皮膚屏障增強劑、醫藥組成物、藥用化妝品及美容方法。

背景技術 表皮具有防止體內水分蒸發並保持皮膚水分量之保濕機能與防止蟎、灰塵、花粉及微生物等侵入之皮膚屏障機能。 於可見於各種皮膚疾病、異位性皮膚炎、乾癬及接觸性皮膚炎等之炎症症狀中，明顯可見水分自皮膚消失。保濕機能低落及皮膚屏障機能低落係與水分消失有關。

已有報告指出，伴隨皮膚屏障機能低落，經由皮膚之過敏原及細菌等所引起之致敏作用增加而誘發過敏反應及皮膚炎症等。舉例來說，就高齡者而言，由於皮膚屏障機能低落及皮膚屏障機能無法充分回復，皮膚炎及褥瘡等症狀容易惡化。由於上述事由，現正期待開發出可促進皮膚屏障機能增強之皮膚屏障增強劑等藥劑。 鑒於以上狀況，專利文獻1揭示了葡萄糖可促進HMGB1產生，誘導HMGB1朝細胞外釋放，提升正常細胞之增殖及遷移進而促進組織修復。 先行技術文獻 專利文獻

[專利文獻1]日本特開2013-147480號公報

發明概要 發明欲解決之課題 然而，現正需求可進一步增強皮膚屏障機能之皮膚屏障增強劑。 於此，本發明之目的即在於提供可進一步增強皮膚屏障機能之皮膚屏障增強劑。 用以解決課題之手段

絲聚蛋白(Filaggrin)係一存在於形成表皮顆粒層之細胞內之蛋白質，其係對保持皮膚水分量及保濕機能有益的蛋白質。密連蛋白-1(Claudin-1)則是構成將表皮細胞彼此連結之緊密型連結(tight junction)的膜蛋白質。Claudin-1在身為防止過敏原、微生物等侵入細胞內之蛋白質的同時，也對防止體表水分蒸發之機能有所助益。 本案發明人等針對促進皮膚組織修復之皮膚屏障增強劑進行精心探究，結果發現，含有所具pH落在酸性區域之單醣及糖醇中至少一者之液體具有促進與皮膚屏障相關之蛋白質Filaggrin及Claudin-1產生的作用。本案發明人等認為，若此等與皮膚屏障相關之蛋白質之產生受到促進，則可增強皮膚屏障機能，進而完成了本發明。 亦即，本發明具下列[1]~[6]之態樣。 [1]一種皮膚屏障增強劑，含有單醣及糖醇中之至少一者，且pH在4.0以上且7.0以下。 [2]如[1]之皮膚屏障增強劑，其含有葡萄糖作為前述單醣。 [3]如[1]之皮膚屏障增強劑，其含有甘露糖醇作為前述糖醇。 [4]如[1]至[3]中任一項之皮膚屏障增強劑，其中前述pH在5.0以上且7.0以下。 [5]一種醫藥組成物，含有如[1]至[4]中任一項之皮膚屏障增強劑，且pH在4.0以上且7.0以下。 [6]一種藥用化妝品，含有如[1]至[4]中任一項之皮膚屏障增強劑，且pH在4.0以上且7.0以下。 [7]如[6]之藥用化妝品，其呈液狀、凝膠狀或片狀。 [8]一種美容方法，包含：將[6]或[7]之藥用化妝品塗佈於皮膚或黏膜之步驟。 發明效果

依據本發明，可提供一種可進一步增強皮膚屏障機能之皮膚屏障增強劑。

用以實施發明之形態 (皮膚屏障增強劑) 本發明之皮膚屏障增強劑含有單醣及糖醇中之至少一者，且pH在4.0以上且7.0以下。就皮膚屏障增強劑之形態而言，只要是可測定pH之形態即不特別受限。具體例可例示如液狀、凝膠狀、片狀、溶膠、乳霜及乳液等，但並不限於此等。

本發明之皮膚屏障增強劑含有單醣及糖醇中之至少一者。藉由含有單醣及糖醇中之至少一者，可促進細胞之Filaggrin及Claudin-1之產生，進而增強皮膚屏障機能。皮膚屏障增強劑係謀求增強或回復皮膚原本所具有之皮膚屏障機能，諸如保持皮膚水分量及予以保濕之機能以及防止微生物等侵入細胞內之機能等。

皮膚屏障增強劑中之單醣及糖醇中之至少少一者之含量宜為1~5000mM，較宜為6~3000mM，更宜為6~1000mM，尤宜為6~165mM。單醣及糖醇中至少一者之含量若在前述下限值以上，則Filaggrin及Claudin-1之產生因皮膚屏障增強劑而受到促進，容易增強或回復皮膚屏障機能。單醣及糖醇中至少一者之含量若在前述上限值以下，單醣及糖醇中至少一者會均勻分散在皮膚屏障增強劑中，可充分促進Filaggrin及Claudin-1之產生，而容易地充分增強或回復皮膚屏障機能。

＜單醣＞ 單醣可例示如葡萄糖、果糖、甘露糖、阿拉伯糖、古洛瑭、木糖、來蘇糖、赤藻糖、蘇糖、半乳糖及山梨糖等單醣，但並不限於此等。於此等之中，皮膚屏障增強劑尤宜含有葡萄糖來作為單醣。

＜糖醇＞ 糖醇可例示如甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇及乳糖醇等，但並不限於此等。於此等之中，皮膚屏障增強劑尤宜含有甘露糖醇來作為糖醇。

＜皮膚屏障增強劑之pH＞ 本發明之皮膚屏障增強劑之pH為4.0以上且7.0以下，更宜5.0以上且7.0以下。pH若在前述下限值以上，則皮膚屏障增強劑所致之皮膚組織及細胞損害可獲減輕，且Filaggrin之mRNA及Claudin-1之mRNA的轉錄及表現受促進，而容易增強或回復皮膚屏障機能。pH若在前述上限值以下，則可充分促進Filaggrin及Claudin-1之產生，進而充分增強或回復皮膚屏障機能。 另，本說明書中，pH係指利用pH計測器(堀場製作所製「F-53」)於25℃下測得之值。

皮膚屏障增強劑之pH可藉緩衝液來調節。 緩衝液只要是可使皮膚屏障增強劑之pH維持在4.0以上且7.0以下之物即不特別受限。緩衝液可例示如磷酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、檸檬酸-磷酸緩衝液、順丁烯二酸緩衝液、蘋果酸緩衝液、琥珀酸緩衝液、偏磷酸緩衝液、山梨酸緩衝液、碳酸緩衝液、參羥甲基胺基甲烷-HCl緩衝液(參鹽酸緩衝液)、MES緩衝液(2-啉基乙磺酸緩衝液)、TES緩衝液(N-參(羥甲基)甲基-2-胺基乙磺酸緩衝液)、乙酸緩衝液、MOPS緩衝液(3-啉基丙磺酸緩衝液)、HEPES緩衝液(4-(2-羥乙基)-1-哌乙磺酸緩衝液)等緩衝液；甘胺酸-鹽酸緩衝液、甘胺酸-NaOH緩衝液、甘胺醯甘胺酸-NaOH緩衝液及甘胺醯甘胺酸-KOH緩衝液等胺基酸系緩衝液；參-硼酸緩衝液、硼酸-NaOH緩衝液、硼酸緩衝液等硼酸系緩衝液；以及咪唑緩衝液等，但不限於此等。於此等之中，以磷酸緩衝液、檸檬酸緩衝液、蘋果酸緩衝液、琥珀酸緩衝液及偏磷酸緩衝液為佳。緩衝液之pH調整可使用鹽酸及乙酸等酸性物質或氫氧化鈉、氨等鹼性物質來適當調整。 另，亦可不將上述緩衝液添加至皮膚屏障增強劑，而將磷酸、乙酸、胺基酸等酸性物質添加至皮膚屏障增強劑中藉此將皮膚屏障增強劑之pH調整為4.0以上且7.0以下。

以緩衝液調節皮膚屏障增強劑之pH時，皮膚屏障增強劑中之緩衝液濃度宜為6~165mM。若緩衝液濃度在前述下限值以上，將變得容易調整皮膚屏障增強劑之pH。若緩衝液濃度在前述上限值以下，則可藉皮膚屏障增強劑來充分促進Filaggrin及Claudin-1產生，而可容易地充分增強或回復皮膚屏障機能。

＜任意成分＞ 皮膚屏障增強劑可在不抑制本發明效果之範圍內視需要含有單醣及糖醇中至少一者以外的任意成分。 任意成分可例示如賦形劑、增黏劑、載體、香料及色素等。此等任意成分可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。關於任意成分，於後述之「(醫藥品組成物)」之項目中作具體說明。

本發明係一種單醣及糖醇中至少一者之用途，其係供皮膚屏障增強劑之用，該用途包含於pH4.0以上且7.0以下投予單醣及糖醇中之至少一者。 亦即，本發明係一種單醣及糖醇中至少一者與任意成分之pH調整劑之組合的用途，其係供製造皮膚屏障增強劑之用，該用途包含於pH4.0以上且7.0以下投予單醣及糖醇中之至少一者。

(醫藥組成物) 本發明之醫藥組成物含有本發明之皮膚屏障增強劑，pH為4.0以上且7.0以下。 醫藥組成物中單醣及糖醇中至少一者之含量可考量醫藥組成物(皮膚屏障增強劑)之用途、用法等來決定。舉例來說，若為使用醫藥組成物之經皮吸收劑，以100~5000mM為宜，1000~3000mM更佳。若為使用醫藥組成物之注射劑，以1~1000mM為宜，6~165mM更佳。單醣及糖醇中至少一者之含量若在前述下限值以上，則Filaggrin及Claudin-1之產生因醫藥組成物而受到促進，皮膚屏障機能容易增強或回復。單醣及糖醇中至少一者之含量若在前述上限值以下，單醣及糖醇中至少一者會均勻分散於醫藥組成物中，而可充分促進Filaggrin及Claudin-1產生，使得皮膚屏障機能充分增強或回復。

醫藥組成物之pH為4.0以上且7.0以下，且宜為5.0以上且7.0以下。pH若在前述下限值以上，可使編碼Filaggrin之mRNA及編碼Claudin-1之mRNA的表現受到促進，而使皮膚屏障機能容易增強或回復。pH若在前述上限值以下，不易因投予醫藥組成物而引起皮膚組織受損，可充分促進Filaggrin及Claudin-1產生，使得皮膚屏障機能充分增強或回復。

醫藥組成物之用途可例示如：異位性皮膚炎、氣喘、類風溼性關節炎及膠原病等自體免疫疾病之治療藥；腎病症候群、潰瘍性大腸炎、肝炎、胰炎、甲狀腺炎、感冒、口內炎、牙齦炎及牙周炎等臟器炎症等疾病之抗炎症藥；燒燙傷、受傷、褥瘡、痤瘡、汗疹及凍瘡等創傷之創傷治療藥等；以及，著色性乾皮症及魚鱗癬等遺傳性疾病之治療藥等。此等之中，若將本發明之醫藥組成物應用在抗炎症藥及創傷治療藥上，本發明之效果尤其顯著。

醫藥組成物之劑形只要是可測定pH之形態即不特別受限。劑形之具體例可例示如液劑、乳劑、懸濁劑及糖漿劑等經口製劑；軟膏、洗劑(lotion)、乳霜、貼劑及氣溶膠劑等經皮吸收劑；注射劑、點眼劑及栓劑等非經口劑。於此等之中，本發明之效果特別是在軟膏等經皮吸收劑上表現尤為顯著。另，注射劑從安定性之觀點來看，亦可在液劑填充至小瓶等後以冷凍乾燥處理來去除水分。在水分已去除時，也可在使用當前，使冷凍乾燥物分散於生理食鹽水等中而調製成液劑。

醫藥組成物之用法可因應諸如疾病種類等來適當決定。舉例來說，疾病為異位性皮膚炎、切傷、擦傷等皮膚創傷等時，可例示如將經皮吸收劑之醫藥組成物直接塗佈於患部之方法等。 疾病位於口腔內或胃腸時，可例示如將醫藥組成物製成經口製劑來進行經口投藥之方法及將醫藥組成物製成注射劑來注入患部組織之方法等。亦可在上消化道內視鏡下以醫藥組成物洗淨患部並塗佈醫藥組成物至患部，藉此促進黏膜再生。藉此，可形成健全之黏膜而逐漸增加自然治癒，防止黏膜侵襲。更進一步來說，可將醫藥組成物塗佈於胃黏膜來促進胃黏膜再生，而增強或回復上皮組織之屏障機能。 疾病為花粉症等鼻、眼黏膜部位之疾病時，可例示如將醫藥組成物塗佈於患部之方法。若將醫藥組成物塗佈於鼻、眼黏膜部位，則鼻、眼黏膜部位受到修復且在黏膜層上形成強固之屏障。因此，即使過敏原多量附著於鼻、眼黏膜部位，仍可壓制過敏反應，進而消除發生鼻塞或分泌多量鼻涕或淚水等現象。 疾病為感冒等因病毒、細菌感染所致之上呼吸道黏膜炎症(感冒)時，可例示如將醫藥組成物點入鼻腔或吸入之方法。藉此，可抑制上呼吸道黏膜之炎症，修復上呼吸道黏膜並使其再生，進而可抑制感染進行並促進自然免疫反應之活性化。 另，醫藥組成物之投藥量可視患者或受試者之年齡、體重、疾病種類、程度及投藥方法等來適當決定。

醫藥組成物可在不妨礙本發明效果之範圍內視需要含有本發明之皮膚屏障增強劑以外之任意成分(以下亦載為「醫藥品任意成分」)。 醫藥品任意成分可例示如藥理學上可接受之鹽、賦形劑、增黏劑、載體、香料及色素等。此等醫藥品任意成分可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。

藥理學上可接受之鹽可例示如慣用之無毒性之鹽，即酸加成鹽及與各種鹼之鹽。具體例可例示如：鹽酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽等無機酸鹽；乙酸鹽、檸檬酸鹽、反丁烯二酸鹽、酒石酸鹽等有機酸鹽；甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等磺酸鹽、丙胺酸鹽、白胺酸鹽、麩胺酸鹽等胺基酸鹽；鹼金屬鹽(例如鈉鹽、鉀鹽等)及鹼土族金屬鹽(例如鎂鹽、鈣鹽等)等無機鹼鹽；三乙胺鹽、吡啶鹽、甲吡啶鹽、乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、二環己基胺鹽、N,N’-二苄基伸乙基二胺鹽等有機胺鹽等。此等鹽可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。這是因為若含有此種鹽，結晶化較為容易之故。

賦形劑可因應醫藥組成物之劑形來適當選擇。具體例可例示如：蒸餾水、離子交換水、純水等水、甲醇、乙醇等碳數1~6之低級醇、以及甘油等液體賦形劑；乳糖、澱粉、糊精、白糖等固體賦形劑等。此等賦形劑可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。

增黏劑可因應醫藥組成物之劑形來適當選擇。具體例可例示如明膠、黃原膠及鹿角菜膠等。此等增黏劑可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。

本發明係一種單醣及糖醇中至少一種之用途，其係供治療皮膚疾病之醫藥組成物之用，該醫藥組成物之pH為4.0以上且7.0以下，該用途包含：將單醣及糖醇中至少一者進行投藥。 亦即，本發明係一種單醣及糖醇中至少一者與任意成分之pH調整劑之組合的用途，其係供製造治療皮膚疾病之醫藥組成物，該組合之pH為4.0以上且7.0以下，該用途包含：將單醣及糖醇中至少一者進行投藥。 本發明之醫藥組成物可用於皮膚屏障機能之增強方法。皮膚屏障機能之增強方法包含：將有效成分量以上之單醣及糖醇中至少一者以pH4.0以上且7.0以下進行投藥。

(藥用化妝品) 本發明之藥用化妝品含有本發明之皮膚屏障增強劑，pH為4.0以上且7.0以下。本發明之藥用化妝品可舉例如洗劑、乳霜、乳液、粉底等，且目的為預防皮膚疾病及皮膚保溼。另，藥用化妝品被分類為日本國藥事法所制定之含藥化妝品(quasi drug)。

藥用化妝品中之皮膚屏障增強劑含量可考量藥用化妝品用途及投予形態等來決定。舉例來說，藥用化妝品中之單醣及糖醇中至少一者之濃度宜設成1~1000mM，更宜設成6~165mM之量。單醣及糖醇中至少一者之濃度若在前述範囲內，可促進Filaggrin及Claudin-1產生而充分增強或回復皮膚屏障機能，更為促進皮膚組織之修復。

藥用化妝品之pH宜為4.0以上且7.0以下，且宜為5.0以上7.0以下。pH若在前述下限值以上，Filaggrin之mRNA及Claudin-1之mRNA的表現受到促進，容易增強或回復皮膚屏障機能。pH若在前述上限值以下，則不易因投予醫藥組成物引起皮膚組織受損，可充分促進Filaggrin及Claudin-1產生而易使皮膚屏障機能充分增強或回復。

藥用化妝品之形態只要是可測定pH之形態即不特別受限。具體例可例示如呈液狀、凝膠狀及片狀等之藥用化妝品。 藥用化妝品之使用方法可因應諸如美容目的等來適當決定。藥用化妝品目的為皮膚美容及保濕時，可例示如將液體狀、乳液狀、凝膠狀及片狀之藥用化妝品直接塗佈於皮膚之方法等。 目的為口腔內部之美容時，可例示如：將液狀及凝膠狀等藥用化妝品作經口塗佈之方法；及，將液狀之藥用化妝品製成注射劑來注入之方法等。

藥用化妝品可在不妨礙本發明效果之範圍內視需要含有本發明之屏障增強劑以外之任意成分(以下也記為「化妝品任意成分」)。 化妝品任意成分可例示如：流動石蠟、純地蠟、地蠟、羊毛脂、凡士林、鯨蠟醇(cetanol)、鯊烯、荷荷芭油、硬脂酸、棕櫚酸、月桂醇、硬脂醇、鯨蠟醇(cetyl alcohol)、蜜蠟、甲基聚矽氧烷、二甲基環聚矽氧烷等油劑；丙醇、乙二醇、丙二醇、玻尿酸、膠原蛋白、聚乙二醇、羥基硬脂酸膽甾酯、甘油、山梨糖醇等保濕劑；各種界面活性劑；乳化劑；賦形劑：增黏劑；pH調整劑；抗氧化劑；色素；香料；紫外線吸收劑等。此等化妝品任意成分可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。

本發明係一種單醣及糖醇中至少一者之用途，其係供皮膚保溼或美容之藥用化妝品之用者，該用途包含以pH為4.0以上且7.0以下投予單醣及糖醇中至少一者。 亦即，本發明係一種單醣及糖醇中至少一者與任意成分之pH調整劑之組合的用途，其係用以製造皮膚保溼或美容之藥用化妝品者，該用途包含以pH為4.0以上且7.0以下：投予單醣及糖醇中至少一者。

(美容方法) 本發明之美容方法包含：將上述本發明之藥用化妝品塗佈於皮膚或黏膜之第1步驟。藥用化妝品之塗佈量可因應患者或受試者之年齡、體重、皮膚狀態及塗佈方法等來適當決定。

本發明之美容方法宜包含在第1步驟後使皮膚或黏膜之pH回到大於7.0之鹼性區域的第2步驟。進行第1步驟後至進行第2步驟之時間以15~30分鐘左右為宜。第1步驟與第2步驟間之間隔若為15~30分鐘左右，容易回到皮膚或黏膜原本pH之鹼性區域。使pH回到鹼性區域之方法可例示如：以流水等沖洗之方法；擦拭藥用化妝品並將之去除之方法；及，將含有中和劑之乳霜等從藥用化妝品上塗佈於皮膚或黏膜之方法等。此等方法可單獨使用1種，亦可組合2種以上使用。 本發明之美容方法以重覆進行上述第1步驟與第2步驟為宜。

本發明之美容方法包含：在pH4.0以上且7.0以下投予有效成分量以上之單醣及糖醇中至少一者。投予單醣及糖醇中至少一者時，也可於患者或受試者之皮膚或黏膜上塗佈單醣及糖醇中至少一者。

(作用效果) 如上述說明，由於本發明之皮膚屏障增強劑含有單醣及糖醇中任一者且pH為4.0以上且7.0以下，而可促進細胞產生Filaggrin及Claudin-1，並促進Filaggrin之mRNA及Claudin-1之mRNA的轉錄及表現。因此，可藉皮膚屏障增強劑充分增強或回復皮膚屏障機能。

以上已就本發明實施形態予以詳述，但本發明不限於該些特定之實施形態。 實施例

以下顯示實施例俾詳細說明本發明，但本發明不受以下記載所侷限。

(實施例1~7、比較例1~7) 於HuMedia-KG2培養基(KURABO INDUSTRIES LTD.製)中添加D-葡萄糖(產品編號：G5767，SIGMA公司製)或D-甘露糖醇(產品編號：M9647，SIGMA公司製)與用以調整培養基pH之鹽酸(HCl)(產品編號：080-0106，和光純藥社製)至表1之濃度，而調製出表1所示pH經調整之含皮膚屏障增強劑的培養基(以下亦記為「試驗用培養基」)。此外，pH係使用pH計測器(堀場製作所製「F-53」)於25℃下測得之值。 使用實施例1~7及比較例1~4、7之試驗用培養基，進行以下所載Filaggrin蛋白質表現量分析、以及Filaggrin蛋白質之mRNA及Claudin-1蛋白質之mRNA的各表現量分析，並將結果示於圖1~4。

＜Filaggrin蛋白質表現量之分析1＞ 使用HuMedia-KG2培養基(pH7.6，KURABO INDUSTRIES LTD.製)，將正常人類皮膚角化細胞(源自單一捐贈者之初代培養正常皮膚角化細胞，Takara Bio Inc.製)以1,000,000cells/well之細胞密度播種至6孔(6well)微量盤，並於37℃下培養24小時(前培養)。於前培養後，吸引去除培養液，再將培養基取代為實施例1~6及比較例1~4之試驗培養基，於37℃下培養30分鐘(正式培養)。正式培養後，吸引去除培養上清液，將培養基取代為pH7.6之HuMedia-KG2培養基，於37℃下培養3小時(後培養)。後培養後去除培養基，從培養之細胞抽提蛋白質。以SDS-PAGE使所抽提之蛋白質展開。之後，將抽提之蛋白質轉印到硝化纖維素膜，再以使用源自小鼠之Filaggrin抗體的西方墨點法(western blot)來分析培養細胞內之Filaggrin蛋白質表現量。此外，分析同一樣本之β-肌動蛋白(β-actin)之蛋白質表現量來作為內生性對照組。以感光密度計(Densitometer)測定所檢測出之各蛋白質之帶(band)濃度，分析出Filaggrin蛋白質及β-actin蛋白質之表現量。令前述同一樣本之β-actin蛋白質表現量為1，以Filaggrin蛋白質表現量之相對值(相對表現量)來評估Filaggrin蛋白質表現量。茲將結果示於圖1。

＜Filaggrin之mRNA、Claudin-1之mRNA表現量分析＞ 除了將試驗培養基變更為實施例2、4、6及比較例2、4之試驗培養基之外，利用與「＜Filaggrin蛋白質表現量之分析1＞」相同手法進行前培養、正式培養及後培養。後培養後除去培養基，從培養之細胞抽提Total RNA。使用RT-PCR法，從所抽提之RNA放大Filaggrin及Claudin-1之mRNA，並分析各mRNA之表現量。令比較例2之各mRNA表現量為1，並以實施例2、4、6及比較例4之各mRNA表現量之相對值(相對表現量)來評估Filaggrin之mRNA及Claudin-1之mRNA表現量。茲將結果示於圖2、3。

＜Filaggrin蛋白質表現量之分析2＞ 除了使用實施例7及比較例7之試驗用培養基之外，利用與「＜Filaggrin蛋白質表現量之分析1＞」相同手法進行實施例7及比較例7之Filaggrin蛋白質表現量之分析。另，令比較例7之Filaggrin蛋白質表現量為1，以實施例7之Filaggrin蛋白質表現量相對於比較例7之Filaggrin蛋白質表現量的相對值(相對表現量)來評估實施例7之Filaggrin蛋白質表現量。茲將結果示於圖4。

[表1]

如表1及圖1所示，應用本發明之實施例1~6中Filagglin蛋白質之表現量增加。尤其是在含有110mM之D-葡萄糖之實施例2、4、6中，Filagglin蛋白質之表現量顯著增加。

如表1及圖2、3所示，應用本發明之實施例2、4、6中，Filagglin及Claudin-1之各mRNA表現量增加。另，即使是在含有110mM之D-葡萄糖且pH為3.0之比較例4中，也可見Filagglin及Claudin-1之各mRNA增加。

如表1及圖4所示，應用本發明之實施例7之Filagglin蛋白質表現量較比較例7增加4.3倍。

從實施例1~6及比較例1~4之結果得知，藉由令試驗培養基之葡萄糖濃度為6mM或110mM且將pH調整至4.0以上且7.0以下，可促進培養細胞產生Filagglin蛋白質。 從實施例1~6及比較例2、4之結果得知，藉由令試驗培養基之葡萄糖濃度為110mM且將pH調整至3.0以上且7.0以下，可促進培養細胞內之Filagglin及Claudin-1之各mRNA的表現。 從比較例3、4之結果得知，令葡萄糖濃度為110mM且將pH調整至3.0雖可促進Filagglin蛋白質之mRNA表現，但未檢測出Filagglin蛋白質。

從實施例7及比較例7之結果得知，藉由令試驗培養基之甘露糖醇濃度為110mM且將pH調整至5.7，可促進培養細胞產生Filagglin蛋白質。 由上述結果得知，可藉由應用本發明來促進Filagglin及Claudin-1表現，進而增強皮膚屏障機能。

＜細胞損害試驗＞ 與「＜Filaggrin蛋白質表現量之分析1＞」之項目相同地培養正常人類皮膚角化細胞。並以LDH法分析所培養之細胞的損害程度。將各例之以試驗培養基培養之細胞以Triton X 100處理，令經處理之細胞的損害程度為100%，評估此時各例培養所得細胞之損害率。

圖5為圖表，顯示評價實施例1~6及比較例1~4之經試驗培養基培養之細胞之損害率結果。 如表1及圖5所示，應用本發明之實施例1~6之細胞損害率較pH為7.6之比較例1、2之細胞損害率更低。另一方面，pH為3.0之比較例3、4之細胞損害率較pH為7.6之比較例1、2之細胞損害率更高。

由以上結果得知，pH為3.0之比較例3、4可觀察到發生細胞損害。然而此種細胞損害可藉由在pH落在5.0以上之酸性區域的試驗培養基中應用本發明而顯著減輕，減輕至較以pH為7.6之比較例1、2之試驗培養基培養所得細胞之細胞損害更低的水準。 亦即，得知可藉由在pH為5.0以上之試驗培養基中應用本發明而使皮膚屏障機能回復並減輕細胞損害。

＜異位性皮膚炎小鼠模式之評價＞ 製作出已分別將葡萄糖濃度調整為20%且pH調整為6.0之磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)之水溶液，將其視為已應用本發明之皮膚屏障增強劑。 從Day0起至Day14為止，以每週2次之頻率，對馴化飼育後8週大之雌性NC/Nga小鼠的右耳殼部位施行蟎抗原之皮內投予。與此並行，從Day0起至Day28為止，塗佈投予本發明之皮膚屏障增強劑1天1次。作為Mock組，則是從Day0起至Day28為止，每天塗佈投予pH已調整成7.6之PBS，1天1次。 於Day28拍攝Mock組及塗佈了皮膚屏障增強劑之組的耳殼部位照片，從已於異氟醚(Isoflurane)麻醉下放血、安樂死之小鼠採取左、右耳殼部位，進行中性甲醛水溶液固定。石蠟包埋後製作組織切片。將該切片以蘇木精-伊紅(HE)溶液染色，同時使用源自小鼠之Filaggrin及Claudin-1抗體進行免疫染色。負對照組(Negative control)則使用將8週大雌性NC/Nga小鼠於無處置下直接飼育至Day28之小鼠耳殼切片。

圖6為照片，顯示以異位性皮膚炎小鼠模式進行評價之小鼠耳殼部位外觀。以肉眼觀察小鼠耳殼部位，結果，在經蟎抗原致敏之小鼠耳殼部位塗佈pH為7.6之PBS的群組(Mock組)係於Day15觀察到輕度潰瘍形成與出血，Day28觀察到高度出血與潰瘍形成。另一方面，塗佈本發明之皮膚屏障增強劑之群組雖在Day28觀察到些微皮膚腫脹，但Day15、Day28均完全未觀察到耳殼部位之潰瘍形成、出血。

圖7為照片，顯示利用異位性皮膚炎小鼠進行評價之小鼠耳殼部位切片組織的染色結果。如圖7之HE染色結果所示，Mock組觀察到真皮中炎症性細胞強烈浸潤。但塗佈了本發明皮膚屏障增強劑之群組則炎症性細胞浸潤減少，角質層與表皮形態也維持正常。如圖7之免疫染色結果所示，Mock組失去Claudin-1蛋白質之表現連續性，在此同時，其表現量亦低落。相對於此，塗佈了本發明皮膚屏障增強劑之群組則觀察到強烈連續之Claudin-1蛋白質染色像。同樣地，Mock組則觀察到Filaggrin蛋白質表現之低落與喪失連續性。相對於此，塗佈了本發明之皮膚屏障增強劑之群組則是Filaggrin蛋白質連續且大幅度地表現於顆粒層部分中。

＜參考試驗1＞ 使用HuMedia-KG2培養基(pH7.6、KURABO INDUSTRIES LTD.製)，以1,000,000cells/well之細胞密度將正常人類皮膚角化細胞播種於6孔(6well)微量盤中，於37℃下培養24小時(前培養)。前培養後，吸引去除培養液，將培養基取代為比較例2之試驗培養基並於37℃下進行正式培養。從將正式培養時間設為0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0小時之各培養液中去除培養基，從培養之細胞抽提Total RNA。使用RT-PCR法，從抽提自各培養液之RNA擴增Filaggrin及Claudin-1之mRNA，並針對正式培養時間相異之各培養液分析各mRNA之表現量。令正式培養時間為0小時之各mRNA表現量為1，以各培養時間之細胞的各mRNA表現量相對值(相對表現量)來評價Filaggrin及Claudin-1之各mRNA表現量。

圖8為圖表，顯示參考試驗1之各培養時間中比較例2之Filaggrin及Claudin-1之mRNA表現量的評價結果。於比較例2中，Claudin-1之mRNA之誘導表現尖峰係在開始誘導表現後0.5小時觀察到。Filaggrin之mRNA誘導表現尖峰則在開始誘導誘導後2.0小時觀察到。

＜參考試驗2＞ 除了培養基使用比較例5之試驗培養基並將正式培養之時間設為0、2.0、4.0、6.0、24.0小時之外，與「＜Filaggrin蛋白質表現量之分析1＞」項目同樣地評價各培養時間之Filaggrin蛋白質表現量。 圖9為圖表，顯示參考試驗2之Filaggrin蛋白質表現量之評價結果。從開始誘導表現後2小時觀察到Filaggrin蛋白質表現量增加。Filaggrin蛋白質表現量之增加係在開始誘導表現後24小時之間觀察到。

＜參考試驗3＞ 除了培養基使用比較例6之試驗培養基並使用源自小鼠之Claudin-1抗體之外，利用與「＜参考例2＞」項目相同之手法，評價各培養時間之Claudin-1蛋白質表現量。 圖10為圖表，顯示參考試驗3之Claudin-1蛋白質表現量之評價結果。從開始誘導表現後2小時觀察到Claudin-1蛋白質表現量之增加。Claudin-1蛋白質表現量之增加係在開始誘導表現後24小時之間觀察到。

以上各試驗等之結果顯示，透過含有6mM或110mM之葡萄糖或110mM之甘露糖醇且pH為4.0以上且7.0以下之皮膚屏障增強劑，皮膚屏障相關蛋白質之基因表現受到誘導。亦即顯示，本發明之皮膚屏障增強劑可透過促進皮膚屏障相關蛋白質之基因表現來促進屬皮膚屏障相關蛋白質之Filaggrin及Claudin-1產生，而可增強皮膚屏障機能。 亦如參考試驗2、3之結果所示，即使是pH為7.6之比較例2、5、6亦因含有55~165mM之葡萄糖而觀察到皮膚屏障相關蛋白質之表現量及生產量增加(圖8~圖10)。然而，本發明之皮膚屏障增強劑因pH為4.0以上且7.0以下，可進一步增強皮膚屏障相關蛋白質之表現(圖1、圖4)。因此，本發明之皮膚屏障增強劑可較習知之皮膚屏障增強劑更有效地增強皮膚屏障機能。故而，若將本發明之皮膚屏障增強劑應用於醫藥品等，可期待可更有效地修復皮膚組織等之顯著效果。 產業上之可利用性

本發明所得皮膚屏障增強劑、醫藥組成物及藥用化妝品可進一步增強皮膚屏障機能，而可利用於皮膚之保濕或美容以及增強皮膚屏障機能等。

圖1為圖表，顯示實施例1~6及比較例1~4之Filaggrin蛋白質表現量之評價結果。 圖2為圖表，顯示實施例2、4、6及比較例2、4之Filaggrin之mRNA表現量的評價結果。 圖3為圖表，顯示實施例2、4、6及比較例2、4之Claudin-1之mRNA表現量的評價結果。 圖4為圖表，顯示實施例7及比較例7之Filaggrin蛋白質表現量之評價結果。 圖5為圖表，顯示實施例1~6及比較例1~4之細胞傷害率之評價結果。 圖6為照片，顯示以異位性皮膚炎小鼠模式進行評價之小鼠耳殼部分外觀。 圖7為照片，顯示以異位性皮膚炎小鼠模式進行評價之小鼠耳殼部分之切片組織染色結果。 圖8為圖表，顯示參考試驗1之Filaggrin及Claudin-1之mRNA表現量之評價結果。 圖9為圖表，顯示參考試驗2之Filaggrin蛋白質表現量之評價結果。 圖10為圖表，顯示参考試驗3之Claudin-1蛋白質表現量之評價結果。

Claims (8)

1. 一種皮膚屏障增強劑，含有單醣及糖醇中之至少一者，且pH為4.0以上且7.0以下。
2. 如請求項1之皮膚屏障增強劑，其含有葡萄糖作為前述單醣。
3. 如請求項1之皮膚屏障增強劑，其含有甘露糖醇作為前述糖醇。
4. 如請求項1至3中任一項之皮膚屏障增強劑，其中前述pH為5.0以上且7.0以下。
5. 一種醫藥組成物，含有如請求項1至4中任一項之皮膚屏障增強劑，且pH為4.0以上且7.0以下。
6. 一種藥用化妝品，含有如請求項1至4中任一項之皮膚屏障增強劑，且pH為4.0以上且7.0以下。
7. 如請求項6之藥用化妝品，其呈液狀、凝膠狀或片狀。
8. 一種美容方法，包含一將如請求項6或7之藥用化妝品塗佈於皮膚或黏膜之步驟。