TW201705971A - 中草藥萃取物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途 - Google Patents

中草藥萃取物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途 Download PDF

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Abstract

本發明提供一種中草藥組成物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途，該中草藥組成物包括：一第一藥材，其係包含2-40重量份之人參及0.6-28重量份之當歸；以及一第二藥材，其係包含0.6-28重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物。

Description

中草藥組成物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途
本發明係關於一種中草藥組成物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途，尤指一種中草藥組成物用於製備治療或抑制亨丁頓舞蹈症、腦血管性失智症、阿茲海默症、或帕金森氏症等藥物之用途。
失智是一個重大的社會議題，隨著人口老化、生活環境變遷等因素，其在台灣的比例逐年增加。根據目前研究，失智症有四種亞型，依出現的頻率分別為阿茲海默症(Alzheimer's disease, AD)、腦血管性失智症(Vascular dementia, VaD)、路易氏體失智症(Dementia with Lewy Bodies, DLB)及額顳葉型失智症(Frontotemporal lobe degeneration, FTD)等。而在2010年世界衛生組織調查報告指出，阿茲海默症及其混合症幾乎占了九成，意即在失智症患者中，絕大多數者屬於阿茲海默症，但確切的致病原因目前仍然未有明確定論。一般認為，腦血管疾病可能是導致失智症發病的共同重要原因，當腦血流量不足、養份(譬如氧、葡萄糖)供應短缺導致海馬區神經細胞損傷等都會增加失智的風險。
另一種腦部神經退化相關疾病為亨丁頓舞蹈症，起因於第4對染色體異常，CAG重複序列過度擴張造成腦部退化。亨丁頓舞蹈症病發時會無法控制四肢，並伴隨著智能減退，最後因吞嚥、呼吸困難等原因而死亡。到目前為止，藥物僅能減緩而不能中止腦部的退化，仍無有效的治療方式可以停止或恢復亨丁頓舞蹈症。
由於腦部是非常精密的器官，而目前我們對於腦部退化相關疾病的成因還不是非常了解，相關的研究也還持續進行中。遺憾的是，現在用於抑制或治療該類疾病的藥物效果都很有限，僅能延緩症狀惡化而無法根治，因此，開發出其他能夠有效抑制、甚至是治療腦部退化相關疾病的藥物或方法是目前還須繼續努力的目標。
目前針對腦部退化相關疾病的治療或抑制多以西藥為主，然中草藥也可做為腦部退化相關疾病的治療或抑制的新選擇，其原因之一在於中草藥不僅具有好的療效且副作用較少。
為達成上述目的，本發明提供一種中草藥組成物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途，該中草藥組成物具有保護神經細胞的功效，作為製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物有很大的潛力。
在本發明中，「治療」表示：在人類或動物中，於處理異常身體狀況(如：病徵、異常或疾病)方面與治療或療法有關，達成某種所欲的療效。更具體地，譬如抑制異常身體狀況發展，其包含減緩疾病發展速度、暫停疾病發展速度、改善異常身體狀況、消除或減緩與異常身體狀況等。換言之，治療可為失調(disorder)之一或多種症狀的消除、或失調之完全根除。
「預防」 在人類或動物中，於處理異常身體狀況(如：病徵、異常或疾病)方面與預防或防止有關，達到某種所欲之防止效果。更具體地，譬如防止疾病發生或不受疾病感染。預防包括不定期完全及整體阻止失調的所有症狀、減緩疾病一或多種症狀發作，或使個體不易發病。
上述之中草藥組成物用於治療或抑制腦部退化相關疾病之藥物包括一中草藥組成物，該中草藥組成物中包括：一第一藥材，其係包含2-40重量份之人參及0.6-28重量份之當歸；以及一第二藥材，其係包含0.6-28重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物。
更具體地，該中草藥組成物之該第一藥材係20-40重量份之人參及0.8-20重量份之當歸，而該第二藥材係1-24重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物，且其中，女貞子、旱蓮草及地黃較佳以0.8~1.2：0.8~1.2：0.8~1.2之重量比例混合以形成該混合物，且更佳為女貞子、旱蓮草及地黃之比例為1：1：1。
此外，該中草藥組成物可更包括一賦形劑，其可為任何常見的賦形劑，譬如澱粉、玉米澱粉、乳糖、微晶纖維素、羧甲基纖維素、蔗糖、木蜜醇、滑石粉、或硬脂酸鎂，或者是其他藥學或食品上習知常用的賦形劑。當該中草藥組成物包括一賦形劑時，可依需求形成顆粒、膠囊、丸劑、片劑等劑形方便餵食，甚至可提升藥效。
本發明視需求亦可另外加入甜味劑、風味劑、或是色素等，本發明並不以此為限。
天麻能鎮靜大腦，具有鎮痛、解痙、保護心肝功能，降血壓、改善血循環、抗炎、增強免疫、抗衰老、提高耐缺氧、升皮溫、以及興奮腸道等功能。故在另一實施例中，本發明之中草藥組成物可更包括1-10重量份之天麻。
本發明之用於治療或抑制腦部退化相關疾病之藥物可以口服方式施予一受體，或是製成針劑等以注射方式施予一受體等，本發明並不以此為限，然較佳為口服方式。且前述之腦部退化相關疾病舉例可為亨丁頓舞蹈症、腦血管性失智症、阿茲海默症、路易氏體失智症、額顳葉型失智症、或帕金森氏症，或其他習知腦部退化相關疾病之至少一者，以達到治療或抑制腦部退化相關疾病之效果。
更具體地，該腦部退化相關疾病可為亨丁頓舞蹈症或阿茲海默症。
除此之外，為了使該中草藥組成物達到較佳的效果，其可由下述方法製備：(A) 提供一第一藥材與一第二藥材，其中，該第一藥材係20-40重量份之人參及0.8-20重量份之當歸，而該第二藥材係0.6-28重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物；(B) 分別萃取並過濾該第一藥材及該第二藥材，以分別獲得一第一萃取液及一第二萃取液；(C) 過濾該第二萃取液，以得到一第三萃取液；以及(D)混合該第一萃取液與該第三萃取液。
於上述方法中，步驟(B)可以醇類萃取方式萃取該第一藥材，所使用之醇類之濃度係為30-80 vol%，更佳為30-70 vol%，且該醇類可為乙醇。
於本發明上述之方法中，步驟(B)可透過習知方式進行過濾以分離藥材中的大分子。舉例來說，可為水抽醇沉、離心過濾、陶瓷膜過濾、酵素法等，然而本發明並不僅限於此，只要能有效地將藥材中大分子分離的過濾方法均可使用。
至於步驟(B)中第二藥材之萃取方式可透過水萃方式進行，譬如熱水煎煮，另外可利用陶瓷膜進行過濾以獲得第三萃取液。
本發明之用於治療或抑制腦部退化相關疾病之藥物中包括了由多種中藥材以特定比例組成之中草藥組成物，該中草藥組成物可有效地促進微循環，增進腦部血流量，使得腦部的養分供給變得有效率。並且有抗發炎、消除自由基的效果，能夠減輕腦部的氧化壓力，進而保護神經細胞，達到治療或抑制腦部退化相關疾病之效果。
以下係藉由具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容輕易地了解本發明之其他優點與功效。此外，本發明亦可藉由其他不同具體實施例加以施行或應用，在不悖離本發明之精神下進行各種修飾與變更。
製備例
提供一中草藥組成物，其包括：一第一藥材、及一第二藥。其中，第一藥材係2-40重量份之人參以及0.8-20重量份之當歸；第二藥材係1-24重量份之當歸，2-40重量份之黃耆，以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物，其中女貞子、旱蓮草及地黃之重量比例為0.8~1.2：0.8~1.2：0.8~1.2且更佳為女貞子、旱蓮草及地黃之比例為1：1：1。
首先，將上述第一藥材以60-70 vol%之酒精萃取後，以離心過濾方式過濾第一藥材無藥性之固型物，得到一第一萃取液。而第二藥材則以熱水煎煮之水萃方式取得粗萃湯藥後，再以離心過濾方式過濾無藥性之固型物，得到一第二萃取液。接著將第二萃取液以陶瓷膜過濾方式處理，以得到一第三萃取液。
將第一萃取液以及第三萃取液混合後，形成本發明之中草藥組成物。
實驗例1-SH-SY5Y神經分化細胞模式
圖1A係將SH-SY5Y神經瘤細胞以視黃酸 (retinoic acid ; RA)誘發為神經細胞(I)後，再加入麩胺酸引發興奮性毒殺使細胞萎縮，隨後，再加入本發明之中草藥組成物 (濃度30 mM)可有效地減緩麩胺酸引發的細胞萎縮。
圖1B係正常神經細胞、經本發明之中草藥萃取物前處理12小時再加入麩胺酸的神經細胞、以及僅加入麩胺酸引發興奮性毒殺的神經細胞的體積變化率與時間的關係圖，顯然預先以本發明之中草藥組成物處理的神經細胞可有效地延緩麩胺酸引發的興奮性毒殺作用所導致的神經細胞萎縮，達到預防的效果(p ＜0.01，每組N值為12)。
實驗例2- 亨丁頓舞蹈症疾病模式
本實驗以亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠(B6CBA-Tg(HD exon1)65Gpb/1J) (以下簡稱HD鼠)作為實驗對象。該些HD鼠的神經學表現型(neurological phenotype)包括舞蹈病樣狀或無意識運動、震顫、以及癲癇，並隨著年紀增加而惡化，同樣也有肌肉萎縮及早逝等和人類亨丁頓舞蹈症類似的症狀。除此之外，也能在該些HD鼠的神經元內包涵體(neuronal intranuclear inclusions)中找到亨丁頓蛋白(huntingin protein)。根據觀察，HD鼠的亨丁頓症狀始於8周歲時並於14周歲時開始死亡，因此，選擇2個月大的HD鼠進行早期亨丁頓症狀治療、並選擇3個月大的HD鼠進行晚期亨丁頓症狀治療。
具體來說，在2個月大的HD鼠的飲水中加入30 mg/mL的中草藥萃取物或其控制組(控制組中僅含萃取時使用的溶劑，其中不包括中草藥萃取物)，小鼠餵食的劑量是依據個別的體重及水的餵食量計算，平均為30 mL/日。同時，對3個月大的HD鼠腹腔注射中草藥萃取物或其控制組(於生理食鹽水中僅含萃取時使用的溶劑，其中不包括中草藥萃取物)，注射的劑量是依據個別的體重計算，平均為10 mL/kg。
圖2A顯示餵食中草藥組成物的HD鼠(22隻)比未餵食中草藥組成物的HD鼠(20隻)的壽命較長；由圖2B顯示餵食中草藥組成物的HD鼠(22隻)比未餵食中草藥組成物的HD鼠(20隻)的體重明顯較重；圖2C利用滾輪跑步試驗檢測3個月大HD鼠的運動能力，結果顯示餵食中草藥組成物的HD鼠(12隻)比未餵食中草藥組成物的HD鼠(12隻)在滾輪上跑步的時間明顯較久(p ＜0.01-0.05)。
隨後，圖3A利用MoorLDI2 高解析度雷射都卜勒血流成像儀檢測3個月大HD鼠，在注射本發明之中草藥組成物之前(箭頭左邊)以及之後(箭頭右邊)的血流循環情況，結果清楚觀察到HD小鼠在注射本發明之中草藥組成物後，其背部和腹部的皮下血液循環增加；圖3B定量統計HD小鼠餵食本發明之中草藥組成物以後的背部和腹部皮下血液循環，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物顯著增加HD小鼠背腹部的皮下血液循環 (p ＜0.01, HD小鼠餵藥與沒有餵藥組各6隻)。
圖4A透過核磁共振影像(MRI)技術檢視3個月大HD小鼠的腦部結構，結果發現HD小鼠有明顯腦部萎縮的現象，且這種腦部萎縮現象是一種漸進式、發生在特定區域、並且隨著年齡而逐漸嚴重，然而HD小鼠在口服本發明中草藥組成物後，則可觀察到其大腦、中腦及小腦的容量及重量都明顯地大於未餵食本發明中草藥的HD小鼠，此一結果顯示HD小鼠在服用本發明中草藥組成物後，腦萎縮現象得到緩解；圖4B進一步定量HD鼠腦的體積及重量，結果顯示當HD小鼠餵食本發明之中草藥組成物後，其大腦、中腦及小腦的體積及重量都較未餵食者顯著增加(p ＜0.05, HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)。
為了探討本發明之中草藥組成物是否有助於減緩突變的亨丁頓蛋白聚集，圖5比較有無餵食本發明之中草藥組成物對2個月大HD小鼠腦部亨丁頓蛋白(Huntingtin)聚集的表現(HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖5A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠大腦皮層、紋狀體、海馬迴中突變的亨丁頓蛋白聚集程度，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部亨丁頓蛋白聚集具有減緩的效果；圖5B利用西方墨點法分析腦組織中的亨丁頓蛋白的表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部亨丁頓蛋白聚集確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01-0.05)。
由於亨丁頓氏神經營養假說認為：當BDNF生成減少會使得紋狀體中神經退化。因此圖6比較有無餵食本發明之中草藥組成物對2個月大HD小鼠腦部BDNF的表現(HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖6A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠大腦皮層、紋狀體、海馬迴中BDNF的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部BDNF表現具有增加的效果；圖6B利用西方墨點法分析腦組織中的BDNF表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部BDNF表現確實具有顯著增加的效果(p ＜0.01-0.05)。
在腦中，VEGF對於神經保護效果及血管生成方面也扮演著重要的角色。因此圖7比較有無餵食本發明之中草藥組成物對2個月大HD小鼠腦部VFGF的表現(HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖7A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠大腦皮層、紋狀體、海馬迴中VEGF的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部VEGF表現具有增加的效果；圖7B利用西方墨點法分析腦組織中的VEGF表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部VEGF表現確實具有顯著增加的效果(p ＜0.01-0.05)。
發炎與神經性退化性疾病之發病機制及病程進展有關，而TNF-α是細胞發炎的重要標記蛋白。因此圖8比較有無餵食本發明之中草藥組成物對2個月大HD小鼠腦部TNF-α的表現(HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖8A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠大腦皮層、紋狀體、海馬迴中TNF-α的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部TNF-α表現具有減緩的效果；圖8B利用西方墨點法分析腦組織中的TNF-α表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部TNF-α表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01)。
接著確認粒線體功能，圖9利用粒腺體功能異常(細胞凋亡)相關的Caspase-3作為指標蛋白。本實驗比較有無餵食本發明之中草藥組成物對2個月大HD小鼠腦部Caspase-3的表現(HD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖9A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠大腦皮層、紋狀體、海馬迴中Caspase-3的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部TNF-α表現具有減緩的效果；圖9B利用西方墨點法分析腦組織中的TNF-α表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對HD小鼠腦部TNF-α表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01)。
經由上述實驗例2之結果可確認，本發明之中草藥組成物可調控減少腦部中突變的亨丁頓蛋白聚集，且可透過降低TNF-α表現來降低興奮性神經退化性疾病(excitotoxic neurodegeneration)並緩解發炎以及降低粒腺體功能異常引發之細胞凋亡。另一方面，本發明之中草藥組成物亦可藉由促進BDNF及VEGF在腦中的表現量達到保護腦的效果，是以作為亨丁頓舞蹈症的治療或抑制藥物上有很大的潛力。
實驗例3- 阿茲海默症疾病模式
實驗例3中探討的是本發明之中草藥組成物對於阿茲海默症的治療及預防效果，於本實驗例中，使用阿茲海默症3TgXAD基因轉殖鼠(以下簡稱AD鼠，基因型 human APPswe × human PS1M146V × human tauP301L; 3×Tg-AD)進行實驗，該種小鼠的壽命約18個月，通常在出生後第9個月發病。本發明中，選用出生10個月、已發病的AD鼠，並餵食前述製備例製造之中草藥組成物兩個月。
目前研究普遍認為，當腦部能源，譬如葡萄糖、氧氣等不足的時候，恐加速失智惡化。首先，利用MoorLDI2 高解析度雷射都卜勒血流成像儀檢測有無餵食本發明之中草藥組成物對12個月大AD小鼠的皮下循環血流，並和野生型同窩出生的小鼠作比較。結果清楚觀察到AD小鼠在餵食本發明之中草藥組成物後，背部的皮下血液循環增加；圖10B定量統計AD小鼠餵食本發明之中草藥組成物以後的背部皮下血液循環，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物顯著增加AD小鼠背部的皮下血液循環(p ＜0.01, AD小鼠餵藥與沒有餵藥組各6隻)。
由於VEGF對於腦部的神經保護效果及血管生成方面扮演重要的角色，因此圖11比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部VFGF的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖11A利用免疫組織化學染色技術檢視小鼠海馬迴CA1區(CA1)與海馬齒狀回(DG)中VEGF的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部VEGF表現具有增加的效果；圖11B利用西方墨點法分析腦組織中的VEGF表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部VEGF表現確實具有顯著增加的效果(p ＜0.01-0.05)。
此外，圖12比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部BDNF的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖12A利用免疫組織化學染色技術檢視海馬迴CA1區與海馬齒狀回中BDNF的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部BDNF表現具有增加的效果；圖12B利用西方墨點法分析腦組織中的BDNF表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部BDNF表現確實具有顯著增加的效果(p＜0.01-0.05)。
由上述結果可知，當AD鼠餵食了本發明之中草藥組成物後，其微循環血流量增加、微血管增生、通透性增加，進而使血液循環變好，能夠更有效率地提供腦部所需要的養分而增進記憶力；此外，本發明之中草藥組成物亦可藉由促進BDNF及VEGF在腦中的表現量達到保護腦的效果，降低神經細胞損傷。
在阿茲海默症的Tau蛋白聚集路徑中，肝醣合成酶3β(glycogen synthase kinase-3β, GSK-3β)是重要的tau蛋白激酶之一，可催化Tau蛋白多個位點的磷酸化，而神經營養因子BDNF則可以抑制GSK-3β活性。因此圖13比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部GSK-3β的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖13A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中GSK-3β的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部GSK-3β表現具有減緩的效果；圖13B利用西方墨點法分析腦組織中的GSK-3β表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部GSK-3β表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01-0.05)。
由於GSK-3β可催化Tau蛋白多個位點的磷酸化，而餵食本發明中草藥組成物顯著降低GSK-3β活性，因此圖14進一步比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部p-Tau的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖14A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中p-Tau的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部p-Tau表現具有減緩的效果；圖14B利用西方墨點法分析腦組織中的p-Tau表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部p-Tau表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01-0.05)。
過去研究認為過度活化GSK-3將導致tau蛋白的過度磷酸化，進而導致神經纖維化糾結，因此本實驗進一步比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部神經纖維糾結(NTFs)的形成情況(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖15A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中NTFs的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部NTFs表現具有減緩的效果；圖15B利用西方墨點法分析腦組織中的NTFs表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部NTFs表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01-0.05)。
阿茲海默症患者中觀察到胜肽聚集成類澱粉(Aβ)沉積。因此圖16比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部Aβ的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖16A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中Aβ的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部Aβ表現具有減緩的效果；圖16B利用西方墨點法分析腦組織中的Aβ表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部Aβ表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01)。
阿茲海默症患者中觀察到Aβ沉積，而Aβ沉積會增加腦部氧化壓力，升高自由基濃度，而在自由基產生的途徑中，SOD是重要的訊息傳遞因子：SOD抑制自由基ROS產生，故在接下來的實驗中以SOD2作為標記物。圖17比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部SOD2的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖17A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中SOD2的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部SOD2表現具有加強的效果；圖17B利用西方墨點法分析腦組織中的SOD2表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部SOD2表現確實具有顯著增加的效果(p ＜0.01-0.05)。換言之，本發明之中草藥組成物可提升抗氧化酶(SOD)的活性，抑制活性氧化物質並降低腦組織的氧化壓力。
發炎與神經性退化性疾病之發病機制及病程進展有關，而TNF-α是細胞發炎的重要標記蛋白。因此圖18比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠腦部TNF-α的表現(AD小鼠餵食組與沒有餵食組各6隻)，並和野生型同窩出生的小鼠作比較(野生型對照組6隻)。圖18A利用免疫組織化學染色技術檢視AD小鼠海馬迴CA1區與海馬齒狀回中TNF-α的表現，結果發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部TNF-α表現具有減緩的效果；圖18B利用西方墨點法分析腦組織中的TNF-α表現量，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠腦部TNF-α表現確實具有顯著降低的效果(p ＜0.01-0.05)。
最後，為了測試小鼠的記憶力而進行了Morris 水迷宮測試。最後，為了測試小鼠的記憶力而進行了Morris 水迷宮測試，水迷宮主要測試老鼠是否能學習或記憶，以及其學習或記憶的能力的程度。圖19A利用Morris 水迷宮測試比較有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠的空間記憶學習表現，並和野生型同窩出生的小鼠作比較，結果發現餵食本發明之中草藥組成物的AD小鼠的空間記憶學習表現明顯增加；圖19B統計分析有無餵食本發明之中草藥組成物對9個月大AD小鼠平台停留時間的差異，結果顯示發現餵食本發明之中草藥組成物對AD小鼠的平台停留時間確實具有顯著增加的效果(p ＜0.01-0.05)。本結果發現餵食本發明之中草藥組成物的AD小鼠的記憶力與野生型正常鼠幾乎相同。
綜合前述實驗顯示，本發明之中草藥組成物可增進腦部血流量、促進微循環而有效地改善氧份的供給，並具有抗發炎、消除自由基等效果，故可減輕腦部的氧化壓力。此外，餵食本發明之中草藥組成物還能夠保護神經細胞並修補損傷的神經元、減輕內質網壓力、減少粒腺體功能異常並且抑止神經細胞凋亡，從而減緩或預防失智症。
無。
圖1係本發明之中草藥萃取物在SH-SY5Y神經瘤細胞中有效地延緩或預防麩胺酸引發的興奮性毒殺作用所導致的神經細胞萎縮之實驗結果； 圖2係本發明之中草藥萃取物對亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠之壽命、體重、及滾輪跑步機測試結果； 圖3係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中促進微循環之實驗結果； 圖4係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中使腦萎縮現象緩解之實驗結果； 圖5係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中減緩亨丁頓蛋白聚集之實驗結果； 圖6係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中增加BDNF表現量之實驗結果； 圖7係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中增加VEGF表現量之實驗結果； 圖8係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中減緩TNF-α表現量之實驗結果； 圖9係本發明之中草藥萃取物在亨丁頓舞蹈症R6/2轉殖基因小鼠中減緩細胞凋亡相關的指標蛋白表現量之實驗結果； 圖10係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中促進微循環之實驗結果； 圖11係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中增加VEGF表現量之實驗結果； 圖12係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中增加BDNF表現量之實驗結果； 圖13係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中降低GSK-3β表現之實驗結果； 圖14係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中降低磷酸化Tau蛋白(p-Tau)表現； 圖15係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中降低神經纖維糾結(NTFs)形成之實驗結果； 圖16係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中降低胜肽聚集成類澱粉(Aβ)沉澱之實驗結果； 圖17係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中增加超氧化物歧化酶(SOD2)表現之實驗結果； 圖18係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中降低TNF-α之實驗結果。 圖19係本發明之中草藥萃取物在阿茲海默症3TgXAD轉殖基因小鼠中增加其記憶力之實驗結果。

Claims (12)

  1. 一種中草藥組成物用於製備治療或抑制腦部退化相關疾病藥物之用途，該中草藥組成物包括： 一第一藥材，其係包含2-40重量份之人參及0.6-28重量份之當歸；以及 一第二藥材，其係包含0.6-28重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物。
  2. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該中草藥組成物之該第一藥材係20-40重量份之人參及0.8-20重量份之當歸，而該第二藥材係1-24重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物。
  3. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，女貞子、旱蓮草及地黃係以0.8~1.2：0.8~1.2：0.8~1.2之重量比例形成該混合物。
  4. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該中草藥組成物更包括一賦形劑，其係選自由：澱粉、玉米澱粉、乳糖、微晶纖維素、梭甲基纖維素、蔗糖、木蜜醇、滑石粉、及硬脂酸鎂所組成之群組。
  5. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該中草藥組成物更包括天麻。
  6. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該藥物係以口服方式施予一受體。
  7. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該腦部退化相關疾病係為亨丁頓舞蹈症、腦血管性失智症、阿茲海默症、路易氏體失智症、額顳葉型失智症、或帕金森氏症之至少一者。
  8. 如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該中草藥組成物係由下述方法製備： (A) 提供一第一藥材與一第二藥材，其中，該第一藥材係20-40重量份之人參及0.8-20重量份之當歸，而該第二藥材係0.6-28重量份之當歸、2-40重量份之黃耆、以及20-96重量份之女貞子、旱蓮草及地黃之混合物； (B) 分別萃取並過濾該第一藥材及該第二藥材，以分別獲得一第一萃取液及一第二萃取液； (C) 過濾該第二萃取液，以得到一第三萃取液；以及 (D)混合該第一萃取液與該第三萃取液。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中，步驟(B)係以醇類萃取方式萃取該第一藥材。
  10. 如申請專利範圍第9項所述之用途，其中，該醇類係乙醇。
  11. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中，該醇類之濃度係為30-80 vol%。
  12. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中，步驟(B)係以水萃方式萃取該第二藥材。
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