CN106421088A - 中草药组合物用于制备治疗或抑制阿兹海默症药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种中草药组合物用于制备治疗或抑制脑部退化相关疾病药物的用途，该中草药组合物包括：一第一药材，其包含2-40重量份的人参及0.6-28重量份的当归；以及一第二药材，其包含0.6-28重量份的当归、2-40重量份的黄耆及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物。

Description

中草药组合物用于制备治疗或抑制阿兹海默症药物的应用

技术领域

本发明涉及一种中草药组合物用于制备治疗或抑制脑部退化相关疾病药物的用途，尤其涉及一种中草药组合物用于制备治疗或抑制亨丁顿舞蹈症、脑血管性失智症、阿兹海默症、或帕金森氏症等药物的用途。

背景技术

失智是一个重大的社会议题，随着人口老化、生活环境变迁等因素，其在台湾的比例逐年增加。根据目前研究，失智症有四种亚型，依出现的频率分别为阿兹海默症(Alzheimer's disease，AD)、脑血管性失智症(Vascular dementia，VaD)、路易氏体失智症(Dementia with Lewy Bodies，DLB)及额颞叶型失智症(Frontotemporal lobe degeneration，FTD)等。而在2010年世界卫生组织调查报告指出，阿兹海默症及其混合症几乎占了九成，意即在失智症患者中，绝大多数属于阿兹海默症，但确切的致病原因目前仍然未有明确定论。一般认为，脑血管疾病可能是导致失智症发病的共同重要原因，当脑血流量不足、养份(譬如氧、葡萄糖)供应短缺导致海马区神经细胞损伤等都会增加失智的风险。

另一种脑部神经退化相关疾病为亨丁顿舞蹈症，起因于第4对染色体异常，CAG重复序列过度扩张造成脑部退化。亨丁顿舞蹈症病发时会无法控制四肢，并伴随着智能减退，最后因吞咽、呼吸困难等原因而死亡。到目前为止，药物仅能减缓而不能中止脑部的退化，仍无有效的治疗方式可以停止或恢复亨丁顿舞蹈症。

由于脑部是非常精密的器官，而目前我们对于脑部退化相关疾病的成因还不是非常了解，相关的研究也还持续进行中。遗憾的是，现在用于抑制或治疗该类疾病的药物效果都很有限，仅能延缓症状恶化而无法根治，因此，开发出其他能够有效抑制、甚至是治疗脑部退化相关疾病的药物或方法是目前还须继续努力的目标。

发明内容

目前针对脑部退化相关疾病的治疗或抑制多以西药为主，然中草药也可作为脑部退化相关疾病的治疗或抑制的新选择，其原因之一在于中草药不仅具有好的疗效且副作用较少。

为实现上述目的，本发明提供一种中草药组合物用于制备治疗或抑制脑部退化相关疾病药物的用途，该中草药组合物具有保护神经细胞的功效，作为制备治疗或抑制脑部退化相关疾病药物有很大的潜力。

在本发明中，“治疗”表示：在人类或动物中，在处理异常身体状况(如：病征、异常或疾病)方面与治疗或疗法有关，达成某种所欲的疗效。更具体地，譬如抑制异常身体状况发展，其包含减缓疾病发展速度、暂停疾病发展速度、改善异常身体状况、消除或减缓与异常身体状况等。换言之，治疗可为失调(disorder)的一或多种症状的消除，或失调的完全根除。

“预防”在人类或动物中，在处理异常身体状况(如：病征、异常或疾病)方面与预防或防止有关，达到某种所欲的防止效果。更具体地，譬如防止疾病发生或不受疾病感染。预防包括不定期完全及整体阻止失调的所有症状、减缓疾病一或多种症状发作，或使个体不易发病。

上述的中草药组合物用于治疗或抑制脑部退化相关疾病的药物包括一中草药组合物，该中草药组合物中包括：一第一药材，其包含2-40重量份的人参及0.6-28重量份的当归；以及一第二药材，其包含0.6-28重量份的当归、2-40重量份的黄耆、以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物。

更具体地，该中草药组合物的该第一药材是20-40重量份的人参及0.8-20重量份的当归，而该第二药材是1-24重量份的当归、2-40重量份的黄耆、以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物，且其中，女贞子、旱莲草及地黄优选以0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2的重量比例混合以形成该混合物，且更佳为女贞子、旱莲草及地黄的比例为1：1：1。

此外，该中草药组合物可更包括一赋形剂，其可为任何常见的赋形剂，譬如淀粉、玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素、蔗糖、木蜜醇、滑石粉或硬脂酸镁，或者是其他药学或食品上已知常用的赋形剂。当该中草药组合物包括一赋形剂时，可依需求形成颗粒、胶囊、丸剂、片剂等剂形方便喂食，甚至可提升药效。

本发明视需求也可以另外加入甜味剂、风味剂或色素等，本发明并不以此为限。

天麻能镇静大脑，具有镇痛、解痉、保护心肝功能，降血压、改善血循环、抗炎、增强免疫、抗衰老、提高耐缺氧、升皮温及兴奋肠道等功能。故在另一实施例中，本发明的中草药组合物可更包括1-10重量份的天麻。

本发明的用于治疗或抑制脑部退化相关疾病的药物可以口服方式施予一受体，或是制成针剂等以注射方式施予一受体等，本发明并不以此为限，然优选为口服方式。且前述的脑部退化相关疾病举例可为亨丁顿舞蹈症、脑血管性失智症、阿兹海默症、路易氏体失智症、额颞叶型失智症、或帕金森氏症，或其他已知脑部退化相关疾病的至少之一，以达到治疗或抑制脑部退化相关疾病的效果。

更具体地，该脑部退化相关疾病可为亨丁顿舞蹈症或阿兹海默症。

除此之外，为了使该中草药组合物达到优选的效果，其可由下述方法制备：(A)提供一第一药材与一第二药材，其中，该第一药材是20-40重量份的人参及0.8-20重量份的当归，而该第二药材是0.6-28重量份的当归、2-40重量份的黄耆，以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物；(B)分别萃取并过滤该第一药材及该第二药材，以分别获得一第一萃取液及一第二萃取液；(C)过滤该第二萃取液，以得到一第三萃取液；以及(D)混合该第一萃取液与该第三萃取液。

在上述方法中，步骤(B)可以醇类萃取方式萃取该第一药材，所使用的醇类的浓度为30-80vol％，更佳为30-70vol％，且该醇类可为乙醇。

在本发明的上述方法中，步骤(B)可通过已知方式进行过滤以分离药材中的大分子。举例来说，可为水抽醇沉、离心过滤、陶瓷膜过滤、酶法等，然而本发明并不仅限于此，只要能有效地将药材中大分子分离的过滤方法均可使用。

至于步骤(B)中第二药材的萃取方式可通过水萃取方式进行，譬如热水煎煮，另外可利用陶瓷膜进行过滤以获得第三萃取液。

本发明的用于治疗或抑制脑部退化相关疾病的药物中包括了由多种中药材以特定比例组成的中草药组合物，该中草药组合物可有效地促进微循环，增进脑部血流量，使得脑部的养分供给变得有效率。并且有抗发炎、消除自由基的效果，能够减轻脑部的氧化压力，进而保护神经细胞，达到治疗或抑制脑部退化相关疾病的效果。

附图说明

图1是本发明的中草药萃取物在SH-SY5Y神经瘤细胞中有效地延缓或预防谷氨酸引发的兴奋性毒杀作用所导致的神经细胞萎缩的实验结果；

图2是本发明的中草药萃取物对亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠的寿命、体重及滚轮跑步机测试结果；

图3是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中促进微循环的实验结果；

图4是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中使脑萎缩现象缓解的实验结果；

图5是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中减缓亨丁顿蛋白聚集的实验结果；

图6是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中增加BDNF表现量的实验结果；

图7是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中增加VEGF表现量的实验结果；

图8是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中减缓TNF-α表现量的实验结果；

图9是本发明的中草药萃取物在亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠中减缓细胞凋亡相关的指标蛋白表现量的实验结果；

图10是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中促进微循环的实验结果；

图11是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中增加VEGF表现量的实验结果；

图12是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中增加BDNF表现量的实验结果；

图13是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中降低GSK-3β表现的实验结果；

图14是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中降低磷酸化Tau蛋白(p-Tau)表现；

图15是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中降低神经纤维纠结(NTFs)形成的实验结果；

图16是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中降低胜肽聚集成类淀粉(Aβ)沉淀的实验结果；

图17是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中增加超氧化物歧化酶(SOD2)表现的实验结果；

图18是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中降低TNF-α的实验结果。

图19是本发明的中草药萃取物在阿兹海默症3TgXAD转殖基因小鼠中增加其记忆力的实验结果。

具体实施方式

以下通过具体实施例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭示的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。此外，本发明也可以通过其他不同具体实施例加以施行或应用，在不偏离本发明的精神下进行各种修饰与改变。

制备例

提供一中草药组合物，其包括：一第一药材及一第二药材。其中，第一药材是2-40重量份的人参以及0.8-20重量份的当归；第二药材是1-24重量份的当归，2-40重量份的黄耆，以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物，其中女贞子、旱莲草及地黄的重量比例为0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2且更优选为女贞子、旱莲草及地黄的比例为1：1：1。

首先，将上述第一药材以60-70vol％的酒精萃取后，以离心过滤方式过滤第一药材无药性的固型物，得到一第一萃取液。而第二药材则以热水煎煮的水萃方式取得粗萃汤药后，再以离心过滤方式过滤无药性的固型物，得到一第二萃取液。接着将第二萃取液以陶瓷膜过滤方式处理，以得到一第三萃取液。

将第一萃取液以及第三萃取液混合后，形成本发明的中草药组合物。

实验例1-SH-SY5Y神经分化细胞模式

图1A是将SH-SY5Y神经瘤细胞以视黄酸(retinoic acid，RA)诱发为神经细胞(I)后，再加入谷氨酸引发兴奋性毒杀使细胞萎缩，随后，再加入本发明的中草药组合物(浓度30mM)可有效地减缓谷氨酸引发的细胞萎缩。

图1B是正常神经细胞、经本发明的中草药萃取物前处理12小时再加入谷氨酸的神经细胞、以及仅加入谷氨酸引发兴奋性毒杀的神经细胞的体积变化率与时间的关系图，显然预先以本发明的中草药组合物处理的神经细胞可有效地延缓谷氨酸引发的兴奋性毒杀作用所导致的神经细胞萎缩，达到预防的效果(p<0.01，每组N值为12)。

实验例2-亨丁顿舞蹈症疾病模式

本实验以亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠亨丁顿舞蹈症R6/2转殖基因小鼠(B6CBA-Tg(HD exon1)65Gpb/1J)(以下简称HD鼠)作为实验对象。这些HD鼠的神经学表现型(neurological phenotype)包括舞蹈病样状或无意识运动、震颤及癫痫，并随着年纪增加而恶化，同样也有肌肉萎缩及早逝等和人类亨丁顿舞蹈症类似的症状。除此之外，也能在这些HD鼠的神经元内包涵体(neuronal intranuclear inclusions)中找到亨丁顿蛋白(huntingin protein)。根据观察，HD鼠的亨丁顿症状始于8周岁时并于14周岁时开始死亡，因此，选择2个月大的HD鼠进行早期亨丁顿症状治疗、并选择3个月大的HD鼠进行晚期亨丁顿症状治疗。

具体来说，在2个月大的HD鼠的饮水中加入30mg/mL的中草药萃取物或其控制组(控制组中仅含萃取时使用的溶剂，其中不包括中草药萃取物)，小鼠喂食的剂量是依据个别的体重及水的喂食量计算，平均为30mL/日。同时，对3个月大的HD鼠腹腔注射中草药萃取物或其控制组(在生理食盐水中仅含萃取时使用的溶剂，其中不包括中草药萃取物)，注射的剂量是依据个别的体重计算，平均为10mL/kg。

图2A显示喂食中草药组合物的HD鼠(22只)比未喂食中草药组合物的HD鼠(20只)的寿命较长；由图2B显示喂食中草药组合物的HD鼠(22只)比未喂食中草药组合物的HD鼠(20只)的体重明显较重；图2C利用滚轮跑步试验检测3个月大HD鼠的运动能力，结果显示喂食中草药组合物的HD鼠(12只)比未喂食中草药组合物的HD鼠(12只)在滚轮上跑步的时间明显较久(p<0.01-0.05)。

随后，图3A利用MoorLDI2高解析度激光多普勒血流成像仪检测3个月大HD鼠，在注射本发明的中草药组合物之前(箭头左边)以及之后(箭头右边)的血流循环情况，结果清楚观察到HD小鼠在注射本发明的中草药组合物后，其背部和腹部的皮下血液循环增加；图3B定量统计HD小鼠喂食本发明的中草药组合物以后的背部和腹部皮下血液循环，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物显著增加HD小鼠背腹部的皮下血液循环(p<0.01，HD小鼠喂药与没有喂药组各6只)。

图4A通过核磁共振影像(MRI)技术检视3个月大HD小鼠的脑部结构，结果发现HD小鼠有明显脑部萎缩的现象，且这种脑部萎缩现象是一种渐进式、发生在特定区域、并且随着年龄而逐渐严重，然而HD小鼠在口服本发明中草药组合物后，则可观察到其大脑、中脑及小脑的容量及重量都明显地大于未喂食本发明中草药的HD小鼠，此一结果显示HD小鼠在服用本发明中草药组合物后，脑萎缩现象得到缓解；图4B进一步定量HD鼠脑的体积及重量，结果显示当HD小鼠喂食本发明的中草药组合物后，其大脑、中脑及小脑的体积及重量都较未喂食者显著增加(p<0.05，HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)。

为了探讨本发明的中草药组合物是否有助于减缓突变的亨丁顿蛋白聚集，图5比较有无喂食本发明的中草药组合物对2个月大HD小鼠脑部亨丁顿蛋白(Huntingtin)聚集的表现(HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图5A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠大脑皮层、纹状体、海马回中突变的亨丁顿蛋白聚集程度，结果发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部亨丁顿蛋白聚集具有减缓的效果；图5B利用西方墨点法(蛋白质印迹法)分析脑组织中的亨丁顿蛋白的表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部亨丁顿蛋白聚集确实具有显著降低的效果(p<0.01-0.05)。

由于亨丁顿氏神经营养假说认为：当BDNF生成减少会使得纹状体中神经退化。因此图6比较有无喂食本发明的中草药组合物对2个月大HD小鼠脑部BDNF的表现(HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图6A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠大脑皮层、纹状体、海马回中BDNF的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部BDNF表现具有增加的效果；图6B利用西方墨点法分析脑组织中的BDNF表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部BDNF表现确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。

在脑中，VEGF对于神经保护效果及血管生成方面也扮演着重要的角色。因此图7比较有无喂食本发明的中草药组合物对2个月大HD小鼠脑部VFGF的表现(HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图7A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠大脑皮层、纹状体、海马回中VEGF的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部VEGF表现具有增加的效果；图7B利用西方墨点法分析脑组织中的VEGF表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部VEGF表现确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。

发炎与神经性退化性疾病的发病机制及病程进展有关，而TNF-α是细胞发炎的重要标记蛋白。因此图8比较有无喂食本发明的中草药组合物对2个月大HD小鼠脑部TNF-α的表现(HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图8A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠大脑皮层、纹状体、海马回中TNF-α的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部TNF-α表现具有减缓的效果；图8B利用西方墨点法分析脑组织中的TNF-α表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部TNF-α表现确实具有显著降低的效果(p<0.01)。

接着确认粒线体功能，图9利用粒腺体功能异常(细胞凋亡)相关的Caspase-3作为指标蛋白。本实验比较有无喂食本发明的中草药组合物对2个月大HD小鼠脑部Caspase-3的表现(HD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图9A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠大脑皮层、纹状体、海马回中Caspase-3的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部TNF-α表现具有减缓的效果；图9B利用西方墨点法分析脑组织中的TNF-α表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对HD小鼠脑部TNF-α表现确实具有显著降低的效果(p<0.01)。

经由上述实验例2的结果可确认，本发明的中草药组合物可调控减少脑部中突变的亨丁顿蛋白聚集，且可通过降低TNF-α表现来降低兴奋性神经退化性疾病(excitotoxic neurodegeneration)并缓解发炎以及降低粒腺体功能异常引发的细胞凋亡。另一方面，本发明的中草药组合物也可通过促进BDNF及VEGF在脑中的表现量达到保护脑的效果，是以作为亨丁顿舞蹈症的治疗或抑制药物上有很大的潜力。

实验例3-阿兹海默症疾病模式

实验例3中探讨的是本发明的中草药组合物对于阿兹海默症的治疗及预防效果，在本实验例中，使用阿兹海默症3TgXAD基因转殖鼠(以下简称AD鼠，基因型human APPswe×human PS1M146V×human tauP301L，3×Tg-AD)进行实验，这种小鼠的寿命约18个月，通常在出生后第9个月发病。本发明中，选用出生10个月、已发病的AD鼠，并喂食前述制备例制造的中草药组合物两个月。

目前研究普遍认为，当脑部能源，譬如葡萄糖、氧气等不足的时候，恐加速失智恶化。首先，利用MoorLDI2高解析度激光多普勒血流成像仪检测有无喂食本发明的中草药组合物对12个月大AD小鼠的皮下循环血流，并和野生型同窝出生的小鼠作比较。结果清楚观察到AD小鼠在喂食本发明的中草药组合物后，背部的皮下血液循环增加；图10B定量统计AD小鼠喂食本发明的中草药组合物以后的背部皮下血液循环，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物显著增加AD小鼠背部的皮下血液循环(p<0.01，AD小鼠喂药与没有喂药组各6只)。

由于VEGF对于脑部的神经保护效果及血管生成方面扮演重要的角色，因此图11比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部VFGF的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图11A利用免疫组织化学染色技术检视小鼠海马回CA1区(CA1)与海马齿状回(DG)中VEGF的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部VEGF表现具有增加的效果；图11B利用西方墨点法分析脑组织中的VEGF表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部VEGF表现确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。

此外，图12比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部BDNF的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图12A利用免疫组织化学染色技术检视海马回CA1区与海马齿状回中BDNF的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部BDNF表现具有增加的效果；图12B利用西方墨点法分析脑组织中的BDNFF表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部BDNF表现确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。

由上述结果可知，当AD鼠喂食了本发明的中草药组合物后，其微循环血流量增加、微血管增生、通透性增加，进而使血液循环变好，能够更有效率地提供脑部所需要的养分而增进记忆力；此外，本发明的中草药组合物也可以通过促进BDNF及VEGF在脑中的表现量达到保护脑的效果，降低神经细胞损伤。

在阿兹海默症的Tau蛋白聚集路径中，糖原合成酶激酶-3(glycogensynthase kinase-3β，GSK-3β)是重要的Tau蛋白激酶之一，可催化Tau蛋白多个位点的磷酸化，而神经营养因子BDNF则可以抑制GSK-3β活性。因此图13比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部GSK-3β的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图13A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中GSK-3β的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部GSK-3β表现具有减缓的效果；图13B利用西方墨点法分析脑组织中的GSK-3β表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部GSK-3β表现确实具有显著降低的效果(p<0.01-0.05)。

由于GSK-3β可催化Tau蛋白多个位点的磷酸化，而喂食本发明中草药组合物显著降低GSK-3β活性，因此图14进一步比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部p-Tau的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图14A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中p-Tau的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部p-Tau表现具有减缓的效果；图14B利用西方墨点法分析脑组织中的p-Tau表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部p-Tau表现确实具有显著降低的效果(p<0.01-0.05)。

过去研究认为过度活化GSK-3将导致Tau蛋白的过度磷酸化，进而导致神经纤维化纠结，因此本实验进一步比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部神经纤维纠结(NTFs)的形成情况(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图15A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中NTFs的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部NTFs表现具有减缓的效果；图15B利用西方墨点法分析脑组织中的NTFs表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部NTFs表现确实具有显著降低的效果(p<0.01-0.05)。

阿兹海默症患者中观察到胜肽聚集成类淀粉(Aβ)沉积。因此图16比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部Aβ的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图16A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中Aβ的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部Aβ表现具有减缓的效果；图16B利用西方墨点法分析脑组织中的Aβ表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部Aβ表现确实具有显著降低的效果(p<0.01)。

阿兹海默症患者中观察到Aβ沉积，而Aβ沉积会增加脑部氧化压力，升高自由基浓度，而在自由基产生的途径中，SOD是重要的讯息传递因子：SOD抑制自由基ROS产生，故在接下来的实验中以SOD2作为标记物。图17比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部SOD2的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图17A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中SOD2的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部SOD2表现具有加强的效果；图17B利用西方墨点法分析脑组织中的SOD2表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部SOD2表现确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。换言的，本发明的中草药组合物可提升抗氧化酶(SOD)的活性，抑制活性氧化物质并降低脑组织的氧化压力。

发炎与神经性退化性疾病的发病机制及病程进展有关，而TNF-α是细胞发炎的重要标记蛋白。因此图18比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠脑部TNF-α的表现(AD小鼠喂食组与没有喂食组各6只)，并和野生型同窝出生的小鼠作比较(野生型对照组6只)。图18A利用免疫组织化学染色技术检视AD小鼠海马回CA1区与海马齿状回中TNF-α的表现，结果发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部TNF-α表现具有减缓的效果；图18B利用西方墨点法分析脑组织中的TNF-α表现量，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠脑部TNF-α表现确实具有显著降低的效果(p<0.01-0.05)。

最后，为了测试小鼠的记忆力而进行了Morris水迷宫测试。最后，为了测试小鼠的记忆力而进行了Morris水迷宫测试，水迷宫主要测试老鼠是否能学习或记忆，以及其学习或记忆的能力的程度。图19A利用Morris水迷宫测试比较有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠的空间记忆学习表现，并和野生型同窝出生的小鼠作比较，结果发现喂食本发明的中草药组合物的AD小鼠的空间记忆学习表现明显增加；图19B统计分析有无喂食本发明的中草药组合物对9个月大AD小鼠平台停留时间的差异，结果显示发现喂食本发明的中草药组合物对AD小鼠的平台停留时间确实具有显著增加的效果(p<0.01-0.05)。本结果发现喂食本发明的中草药组合物的AD小鼠的记忆力与野生型正常鼠几乎相同。

综合前述实验显示，本发明的中草药组合物可增进脑部血流量、促进微循环而有效地改善氧份的供给，并具有抗发炎、消除自由基等效果，故可减轻脑部的氧化压力。此外，喂食本发明的中草药组合物还能够保护神经细胞并修补损伤的神经元、减轻内质网压力、减少粒腺体功能异常并且抑止神经细胞凋亡，从而减缓或预防失智症。

Claims (10)

1.一种中草药组合物用于制备治疗或抑制阿兹海默症药物的应用，该中草药组合物包括：

一第一药材，其包含2-40重量份的人参及0.6-28重量份的当归；以及

一第二药材，其包含0.6-28重量份的当归、2-40重量份的黄耆、以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物。

2.如权利要求1所述的用途，其中，该中草药组合物的该第一药材是20-40重量份的人参及0.8-20重量份的当归，而该第二药材是1-24重量份的当归、2-40重量份的黄耆、以及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物。

3.如权利要求1所述的用途，其中，女贞子、旱莲草及地黄是以0.8～1.2：0.8～1.2：0.8～1.2的重量比例形成该混合物。

4.如权利要求1所述的用途，其中，该中草药组合物更包括一赋形剂，其选自由淀粉、玉米淀粉、乳糖、微晶纤维素、梭甲基纤维素、蔗糖、木蜜醇、滑石粉及硬脂酸镁所组成的组。

5.如权利要求1所述的用途，其中，该中草药组合物更包括天麻。

6.如权利要求1所述的用途，其中，该药物是以口服方式施予一受体。

7.如权利要求1所述的用途，其中，该中草药组合物由下述方法制备：

提供一第一药材与一第二药材，其中，该第一药材是20-40重量份的人参及0.8-20重量份的当归，而该第二药材是0.6-28重量份的当归、2-40重量份的黄耆及20-96重量份的女贞子、旱莲草及地黄的混合物；

分别萃取并过滤该第一药材及该第二药材，以分别获得一第一萃取液及一第二萃取液；

过滤该第二萃取液，以得到一第三萃取液；以及

混合该第一萃取液与该第三萃取液。

8.如权利要求7所述的用途，其中，步骤（B）是以醇类萃取方式萃取该第一药材，并以水萃方式萃取该第二药材。

9.如权利要求8所述的用途，其中，该醇类是乙醇。

10.如权利要求7所述的用途，其中，该醇类的浓度为30-80vol%。