TW201642847A - 用於靜脈內投與反丁烯二酸酯以治療神經疾病之方法及組合物 - Google Patents

用於靜脈內投與反丁烯二酸酯以治療神經疾病之方法及組合物 Download PDF

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Abstract

本文揭示用於靜脈內投與反丁烯二酸酯以治療神經疾病，諸如中風、肌萎縮性側索硬化、亨廷頓氏病(Huntington's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、帕金森氏病(Parkinson’s disease)及多發性硬化之方法及組合物。

Description

用於靜脈內投與反丁烯二酸酯以治療神經疾病之方法及組合物 [相關申請之交叉引用]
本申請主張2015年3月20日申請之美國臨時專利申請第62/136,431號之權益，該臨時專利申請以引用的方式整體併入本文中。
本文揭示用於靜脈內投與反丁烯二酸酯以治療神經疾病，諸如中風、肌萎縮性側索硬化、亨廷頓氏病(Huntington's disease)、阿茲海默氏病(Alzheimer’s disease)、帕金森氏病(Parkinson’s disease)及多發性硬化之方法及組合物。
神經疾病一般影響中樞神經系統中之神經元，亦即腦及脊髓。需要用安全且有效之化合物治療此等疾病。
中風
中風為美國第四大死亡原因。中風可由血管中阻斷血流流向腦之血塊引起(缺血性中風)或由血管破裂且阻止血流流向腦引起(出血性中風)。第三種類型中風為暫時性缺血性發作，通俗稱為「輕微中風」，其係由暫時血液凝塊引起。缺血性中風佔人類中發生之中風大部分。
血流流向腦之破壞導致由缺乏葡萄糖及氧引起之患病區域中的細胞死亡。自中風之恢復常常為部分的，且倖存者罹患長期或永久性運動、感覺及認知損傷。經常，中風倖存者遭受永久性神經破壞及感覺運動損傷，估計15%-30%中風倖存者變成終身殘廢(Roger等人，Circulation 2012；125：22-e220)。
迄今為止，缺血性中風之直接醫藥管理限於在中風後之急性期，亦即自損傷開始之時間至損傷後近乎六小時投與之藥物。目前，尚無已知的藥物用於治療出血性中風。
除組織纖維蛋白溶酶原活化劑(tPA)及在中風急性期期間採用之其他手術方法以外，目前美國尚無療法批准用於治療中風。可進行之治療後，患者常常遺留下一定程度之功能異常。患者必須進行物理療法，以試圖恢復喪失之感覺運動功能，復原成功程度不同(Sun等人，2014,Ann.Transl.Med.,2(8)：80)。
目前研究用於治療中風之大部分藥物聚焦於減少急性細胞死亡、發炎及細胞凋亡，且因此必須在缺血性事件後數小時內傳遞(Prakash等人，2013 Pharmacology,92：324-334)。
肌萎縮性側索硬化(ALS)
肌萎縮性側索硬化(ALS)為成年發作型神經退化性疾病。ALS為致命的且具有短暫疾病過程，在大多數情況下在診斷約五年內死亡(Mitchell等人，2007,Lancet 369：2031-41)。疾病發作一般出現在40歲與70歲之間。根據ALS CARE資料庫，資料庫中之60% ALS患者為男性且資料庫中之93% ALS患者為白種人。
ALS之特徵為運動皮質、脊髓及腦幹中上運動神經元及下運動神經元逐漸退化。此導致無法控制及開始肌肉運動。死亡常常由呼吸衰竭引起，因為橫隔膜及肋間肌最終喪失能力。
並不充分瞭解ALS之病源學。已知疾病以以下兩種形式中之一者 存在：偶發性形式，其影響約90%患者；或家族性形式，其影響約10% ALS患者，其中後者與特定遺傳突變相關聯。迄今為止，ALS已與C9ORF72、超氧化物歧化酶1(SOD1)、TAR DNA結合蛋白43(TDP-43)及肉瘤融合(FUS)基因之突變相關聯(Baloh等人，2013,Neurol.Clin.31：4)。該疾病之偶發性及家族性形式展現類似臨床表現。
目前，尚無已知之ALS藥物，且已最低限度地成功試圖減緩疾病進展。
亨廷頓氏病
亨廷頓氏病為由遺傳突變引起之遺傳性神經退化性病症。患有該疾病之患者在編碼亨廷頓蛋白質之HTT基因中具有異常數目之CAG三核苷酸重複序列(Cabouche等人，2013,Frontiers in Neurology 4：127)及A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第16頁。
在美國10,000人中亨廷頓氏病影響約1人。目前，約30,000人患有亨廷頓氏病且其他200,000人處於出現該疾病之風險中(Shannon,Hersch及Lovecky,Huntington’s Disease,A Guide for Families,(2009)Huntington’s Disease Soc’y of America，在網站hdsa.org/images/content/1/4/14765.pdf)。疾病發作在約30或40歲開始。一些患者在20多歲時開始展現症狀(青少年型亨廷頓氏病)，此亦與該疾病更快進展相關聯。
目前，尚無治療可用來治癒亨廷頓氏病且預防疾病發作，但藥物治療可幫助運動及精神病症之症狀。治療選擇包括多巴胺耗盡劑(例如利血平(reserpine)、丁苯那嗪(tetrabenazine))及多巴胺受體拮抗劑(例如安定藥(neuroleptics))，但此等藥物具有高風險之副作用，尤其為長時間使用(Kori等人，2010,Global J.Pharmacology 4(1)：06- 12)。安定藥已展示加重疾病之其他特徵，諸如運動徐緩及僵硬，導致功能進一步下降(Kori等人，2010,Global J.Pharmacology 4(1)：06-12)。
一些研究已表明丙戊酸及氯硝西泮可有效治療舞蹈病，而其他研究之結果為更少結論性的(Kim等人，2014 J.Mov.Disord.7(1)：1-6)。丁苯那嗪為一種多巴胺耗盡劑，其經FDA批准來抑制與亨廷頓氏病相關聯之不自主急跳及翻騰動作。認為其比利血平治療舞蹈病更有效，且更可能引起血壓過低，但該藥物之一嚴重副作用為加重或觸發抑鬱症或其他精神病狀(Xenazine®藥物標籤，可得自網站accessdata.fda.gov/drugsatfda_docs/label/2008/021894lbl.pdf)。
阿茲海默氏病
阿茲海默氏病為神經退化之日益普遍形式，其佔超過65歲人中癡呆總病例之約50%-60%。阿茲海默氏病目前影響全世界估計一千五百萬人，且由於群體中年老者相對增加，其發病率很可能在未來二十年至三十年間增加。雖然進展速度可改變，但診斷後之平均壽命預期值為約七年。低於3%之個體在診斷後生存超過14年。錐體細胞死亡及與更高心理機能相關聯之腦區域中的神經元突觸喪失導致典型症狀，特徵為認知功能之總體及漸進損傷(Francis等人，1999,J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry 66：137-47)。阿茲海默氏病為世界上老年性癡呆及早老性癡呆之最常見形式，且在臨床上公認為無情漸進癡呆，呈現增加之記憶喪失、智力功能及言語干擾(Merritt,1979,A Textbook of Neurology，第6版，第484-489頁Lea及Febiger,Philadelphia)。疾病本身通常具有緩慢且隱伏之進展，同等地影響全世界男女。其以適度不當之行為、不嚴厲之敘述、煩躁不安、趨向於誇大、陶醉及工作時效能降低開始；進展至操作判斷力降低、理解力喪失、抑鬱及近事記憶喪失；以嚴重迷失方向及意識模糊、無法走路、全身僵硬及失禁結束 (Gilroy及Meyer,1979,Medical Neurology，第175-179頁MacMillan Publishing Co.)。
阿茲海默氏病之病因未知。基於家族發病率、血統分析、單合子及異卵雙生研究以及該疾病與唐氏症候群(Down's syndrome)之關聯，阿茲海默氏病之發展似乎存在遺傳因素(關於綜述參見Baraitser,1990,The Genetics of Neurological Disorders，第2版，第85-88頁)。諸如腦中升高濃度之鋁、組織中錳之其他因素亦可能在阿茲海默氏病之發展中起作用(Crapper等人，1976,Brain,99：67-80,Banta及Markesberg,1977,Neurology,27：213-216)。亦已表明存在微管相關蛋白質之τ複合物的mRNA編碼之轉錄剪接的缺陷(關於綜述參見Kosik,1990,Curr.Opinion Cell Biol.,2：101-104)及/或存在此等蛋白質之不當磷酸化(Grundke-Igbak等人，1986,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,83：4913-4917；Wolozin及Davies,1987,Ann.Neurol.22：521-526；Hyman等人，1988,Ann.Neurol.,23：371-379；Bancher等人，1989,Brain Res.,477：90-99)，亦可能在阿茲海默氏病之發展中起作用。另外，參與合成乙醯膽鹼之酶的減少已導致阿茲海默氏病視為膽鹼能系統衰竭(Danes及Moloney,1976,Lancet,ii：1403-14)。
目前阿茲海默氏病尚無已證實之療法，且尚無藥劑一致有效地預防疾病之進展。大部分治療劑聚焦於管理阿茲海默氏病之症狀。當前療法包括抗精神病藥以及安定劑及乙醯膽鹼酯酶抑制劑。由於此等藥物之副作用及不引人注意之給藥需求，高度需要能夠治療阿茲海默氏病及其症狀之新方法及化合物。
帕金森氏病
帕金森氏病為一種運動系統病症，由產生多巴胺之神經元喪失引起。帕金森氏病特徵可為四種主要症狀，包括顫振(例如手、臂、腿、頜及臉發抖)；僵硬(例如四肢及軀體僵硬；運動徐緩(例如運動緩 慢)；及姿勢不穩定(例如平衡及協調減弱)。當帕金森氏病進展時，患者可能難以行走、交談或完成其他簡單任務。帕金森氏病通常影響年齡超過50之人。在有些人中，帕金森氏病之早期症狀可為隱蔽的且逐漸出現。在其他人中，疾病可更快速地進展。隨著帕金森氏病進展且症狀之嚴重程度增加，諸如發抖或顫振之症狀可開始干擾日常活動。帕金森氏病症狀亦可包括行為症狀，諸如抑鬱症及其他情緒改變。另外，帕金森氏病患者可能經歷吞嚥、咀嚼及說話之困難。其他帕金森氏病症狀包括(但不限於)泌尿問題或便秘；皮膚問題；及睡眠破壞。參見What is Parkinson's Disease？,NINDS Parkinson's Disease Information Page,National Institute of Neurological Disorders and Stroke，在ninds.nih.gov。
目前尚無治療帕金森氏病之藥物，但當前療法減輕一種或多種症狀。當前療法可包括左旋多巴(levodopa)與甲基多巴肼(carbidopa)、抗膽鹼能藥、溴麥角環肽(bromocriptine)、普拉克索(pramipexole)及羅匹尼祿(ropinirole)組合。諸如金剛烷胺之抗病毒劑亦用以治療帕金森氏病。雖然左旋多巴可幫助減輕帕金森氏病患者中帕金森氏病之一些症狀，但並非所有症狀均同等地對該藥物起反應。諸如運動徐緩及僵硬之一些症狀反應更佳，而諸如顫振之其他症狀可僅僅減少極少。參見What is Parkinson's Disease？,NINDS Parkinson's Disease Information Page,National Institute of Neurological Disorders and Stroke，在ninds.nih.gov。
在一些情況下，對當前藥物療法不反應之帕金森氏病患者用手術治療。手術可涉及深度大腦刺激(DBS)。在DBS中，電極植入腦中且連接至稱為脈衝產生器之小電氣裝置，其可在外部程式化。DBS需要刺激裝置小心程式化以準確地工作。參見What is Parkinson's Disease？,NINDS Parkinson's Disease Information Page,National Institute of Neurological Disorders and Stroke，在ninds.nih.gov。
多發性硬化
多發性硬化(MS)為一種具有針對中樞神經系統(CNS)抗原之自體免疫活性的自體免疫疾病。該疾病特徵為部分CNS中發炎，導致神經元軸突周圍之髓磷脂鞘損失(脫髓鞘)、軸突損失及神經元、寡突神經膠質細胞及膠質細胞最終死亡。關於MS及當前療法之全面綜述，參見例如Alastair Compston等人之McAlpine’s Multiple Sclerosis，第4版，Churchill Livingstone Elsevier,2006。
世界上超過210萬人罹患MS，其中美國生活約400,000人(參見例如Hanson等人，Patient Prefer Adherence,2014,8：415-422)。其為青年人中CNS之最常見疾病之一。MS為慢性進展性失能疾病，其一般在青春期後某時攻擊其受害者，診斷一般在20歲與40歲之間進行，不過可能更早地發作。女性比男性更可能患該疾病，且在不同患者之間，MS本身在症狀及嚴重程度上高度變化(參見例如Ruggieri等人，Ther.Clin.Risk Manag.,2014,10：229-239)。該疾病不直接為遺傳性的，不過遺傳易感性在其發展中起作用。MS為一種具有錯雜臨床、病理學及免疫表型之複雜疾病。
MS存在四種主要臨床類型：1)復發緩解性MS(RR-MS)，特徵為完全恢復下或恢復後後遺症及殘留不足下界限清楚之復發；特徵為缺乏疾病進展的疾病復發之間的時期；2)繼發性漸進性MS(SP-MS)，特徵為初始復發緩解過程，接著進展，有或無偶然復發、微小症狀緩解及平臺期；3)原發性漸進性MS(PP-MS)，特徵為自發作疾病進展，允許有偶然平臺期及暫時性微小改善；及4)漸進性復發MS(PR-MS)，特徵為漸進性疾病發作，具有清楚急性復發，有或無完全恢復；特徵為持續進展的復發之間的時期。
臨床上，該疾病最常呈現為復發緩解性疾病，且在較低程度 上，呈現為神經失能之穩定進展。復發緩解性MS(RR-MS)以病灶或多灶神經病功能異常之復發性發作形式存在。發作可在多年中出現、緩解及復發，看上去隨機。症狀緩解常常為不完全的，且當一個接著一個發作時，接著逐步向下進展，永久性神經缺陷增加。RR-MS之常見過程特徵為大部分患者與疾病進展最終發作相關的重複復發。該疾病之隨後過程為不可預知的，不過大部分患有復發緩解性疾病之患者將最終發展繼發性進展性疾病。在復發緩解性階段，復發與臨床不活動期交替，且可能具有或可能無後遺症之標記，視發作之間神經缺陷之存在而定。在復發緩解階段期間復發之間的時期為臨床上穩定的。另一方面，患有漸進性MS之患者展現如上定義且自發作起或者急性發作期後缺乏穩定增加，但此名稱不排除新復發之進一步出現。
MS病理部分反映在白質中病灶性發炎脫髓鞘病變之形成，此為患有急性及復發疾病之患者中的標誌。在患有漸進性疾病之患者中，腦在更整體之意義上受影響，其中在正常外觀白質中具有擴散但分佈廣(主要軸突)的破壞，且亦在灰質中、尤其皮層中大量脫髓鞘。
已建議諸如以FUMADERM®存在的反丁烯二酸酯之鹽與反丁烯二酸二甲酯(DMF)組合用於治療MS(參見例如Schimrigk等人，Eur.J.Neurol.,2006,13(6)：604-610；Drugs R&D,2005,6(4)：229-30；美國專利第6,436,992號)。FUMADERM®含有反丁烯二酸二甲酯、反丁烯二酸氫乙酯之鈣鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鎂鹽及反丁烯二酸氫乙酯之鋅鹽(參見例如Schimrigk等人，Eur.J.Neurol.,2006,13(6)：604-610)。
雖然目前尚無治療MS的藥物，但治療選擇可用於患有該疾病之患者。當前可用治療通常聚焦於減緩疾病隨著時間推移之進展，提高生活品質，且降低MS症狀之數目及嚴重程度。對於患有復發MS之彼等患者，常見初步治療包括干擾素-β(IFN-β)及格拉默(glatiramer)乙酸鹽(參見例如Fox等人，N.Engl.J.Med.,2012,367(12)：1087-1097； 勘誤見：N.Engl.J.Med.,2012,367(17)：1673)。其他治療已包括那他珠單抗(natalizumab)。過去幾年，芬戈莫德(fingolimod)、特立氟胺(teriflunomide)及延遲釋放DMF發展為口服治療，預計其提高治療堅持率(參見例如Cree B.A.,Neurohospitalist,2014,4(2)：63-65)。
TECFIDERA®為口服使用之反丁烯二酸二甲酯延遲釋放膠囊，2013年由美國食品與藥物管理局(U.S.Food and Drug Administration)批准用於治療患有多發性硬化復發形式之個體。TECFIDERA®含有反丁烯二酸二甲酯(DMF)。
最後，在治療神經疾病，諸如中風、肌萎縮性側索硬化、亨廷頓氏病、阿茲海默氏病、帕金森氏病及多發性硬化之領域內需要發展新療法及更有效治療方案。
本文提供治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸 二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病為中風。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反 丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯 組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病或病症為肌萎縮性側索硬化。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病為亨廷頓氏病。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步 驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病為阿茲海默氏病。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸 二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步 驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病為帕金森氏病。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組 成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
在一個實施例中，疾病為多發性硬化。
在一個實施例中，多發性硬化為多發性硬化之漸進性形式。
在一個實施例中，多發性硬化之漸進性形式為原發性漸進性多發性硬化(PP-MS)或繼發性漸進性多發性硬化(SP-MS)。
在一個實施例中，多發性硬化為多發性硬化之復發形式。
在一個實施例中，多發性硬化之復發形式為復發緩解性多發性硬化(RR-MS)。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。
在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與每日進行。
在一個實施例中，該投與每週進行一次。
在一個實施例中，該投與每隔一週進行。
在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患 者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，醫藥組合物為無菌等張溶液。
本文提供包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約150mg/ml。
在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約150mg/ml。
在一個實施例中，醫藥組合物進一步包含一種或多種選自小分子穩定劑、聚合物穩定劑及緩衝劑之賦形劑。
在一個實施例中，小分子穩定劑為十二烷基硫酸鈉。
在一個實施例中，聚合物穩定劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
在一個實施例中，緩衝劑為磷酸鹽緩衝液。
在一個實施例中，組合物之pH值在約4至約7範圍內。
在一個實施例中，組合物之pH值為約5.0。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯具有約100nm至約250nm之平均粒度(D50)。
在一個實施例中，D50為約180nm。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，其中醫藥組合物進一步包含十二烷基硫酸鈉、HPMC及磷酸鹽緩衝液，其中醫藥組合物之pH值為約5.0且D50為約180nm。
本文提供包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約16mg/ml。
在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
在一個實施例中，環糊精為經取代β環糊精。
在一個實施例中，經取代β環糊精以約5%(w/v)至約40%(w/v)存在。
在一個實施例中，經取代β環糊精以約20%(w/v)存在。
在一個實施例中，經取代β環糊精為羥丙基β環糊精或磺基丁基醚β環糊精。
在一個實施例中，經取代β環糊精為磺基丁基醚β環糊精。
在一個實施例中，醫藥組合物包含一種或多種式XX之磺基丁基醚β環糊精：
其中R獨立地選自H或-CH2CH2CH2CH2SO3Na，其限制條件為除其中R為-CH2CH2CH2CH2SO3Na之6或7種情況外，R為H。
在一個實施例中，醫藥組合物包含CAPTISOL。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且其中水溶液包含20%(w/v)CAPTISOL，且DMF之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
在一個實施例中，醫藥組合物為奈米懸浮液。
在一個實施例中，醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
3.1 術語
為提供說明書及申請專利範圍之清楚及一致瞭解，提供以下定義：
如本文所用，術語「烷二基」係指具有例如1至6個碳原子之二價直鏈或分支鏈烷基鏈。烷二基之代表性實例包括(但不限於)-CH2-、-(CH2)2、-CH(CH3)-、-(CH2)3-、-CH2CH(CH3)-、-CH(CH3)CH2-、-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-、-(CH2)4-、-(CH2)2CH(CH3)-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH(CH3)(CH2)2-、-CH(C2H5)CH2-、-CH2CH(C2H5)-、-C(CH3)2CH2-、-CH2C(CH3)2-、-CH(CH3)CH(CH3)-、-CH(C3H7)-、-(CH2)5、-(CH2)3CH(CH3)、-(CH2)2CH(CH3)CH2-、-CH2CHCH3(CH2)2-、-CH2C(CH3)2CH2-、-(CH2)2C(CH3)2-、-(CH2)6-、-(CH2)4CH(CH3)-、-(CH2)3CH(CH3)CH2-、-CH2CHCH3(CH2)3-、-(CH2)3C(CH3)2-及-(CH2)2C(CH3)2CH2-。
如本文所用，術語「烯基」係指具有兩至六個碳及至少一個碳-碳雙鍵之單價直鏈或分支鏈烴。烯基之代表性實例包括(但不限於)-CH=CH2、-CH=CH-CH3、-CH2-CH=CH-CH3或-CH(CH3)-CH=CH-CH3。
如本文所用，術語「烷基」係指單價完全飽和分支鏈或未分支烴部分。在一個實施例中，烷基包含1至20個碳原子、1至16個碳原子、1至10個碳原子、1至6個碳原子或1至4個碳原子。烷基之代表性實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基、第三丁基、正戊基、異戊基、新戊基、正己基、3-甲基己基、2,2-二甲基戊基、2,3-二甲基戊基、正庚基、正辛基、正壬基或正癸基。
如本文所用，術語「炔基」係指具有兩至六個碳及至少一個碳碳三鍵之單價直鏈或分支鏈烴。炔基之代表性實例包括(但不限於)2-丙炔基、3-丁炔基、2-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基。
如本文所用，術語「芳基」係指環部分中具有例如5至14個碳原子之單環、雙環或三環芳族烴基。在一個實施例中，芳基係指具有6至10個碳原子之單環及雙環芳族烴基。芳基之代表性實例包括(但不限於)苯基、萘基、茀基及蒽基。
如本文所用，術語「芳基烷基」係指其中鍵結至碳原子，通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經芳基置換的非環狀烷基。芳基烷基之代表性實例包括(但不限於)苯甲基、2-苯基乙-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、萘并苯甲基或2-萘并苯基乙-1-基。在某些實施例中，芳基烷基為C7-30芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為C1-10且芳基部分為C6-20。在某些實施例中，芳基烷基為C6-18芳基烷基，例如芳基烷基之烷基部分為C1-8且芳基部分為C6-10。在某些實施例中，芳基烷基為C7-12芳基烷基。
如本文所用，術語「烷基鍵聯基團」係指C1、C2、C3、C4、C5或C6直鏈(直鏈)飽和脂族烴基及C3、C4、C5或C6分支鏈飽和脂族烴基。在一個實施例中，C1-6烷基鍵聯基團為C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基鍵聯基團。烷基鍵聯基團之代表性實例包括(但不限於)具有一個至六個碳原子之部分，諸如甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、丙基(-CH2CH2CH2-)、異丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、第二丁基(-CHCH3CH2CH2-)、異丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、第二戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。術語「經取代之烷基鍵聯基團」係指在烴主鏈之一個或多個碳上具有替換一個或多個氫原子之取代基的烷基鍵聯基團。此類取代基不改變其附接之碳原子的sp3-雜交且包括以下在 術語「經取代」之定義中列出之彼等取代基。
如本文所用，術語「碳環」係指具有指定數目之碳的任何穩定單環、雙環或三環之環，其中任一環可為飽和或不飽和。在一個實施例中，C3-14碳環意欲包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14個碳原子之單環、雙環、三環或螺環(單環或多環)之環。碳環之代表性實例包括(但不限於)環丙基、環丁基、環丁烯基、環戊基、環戊烯基、環己基、環庚烯基、環庚基、環庚烯基、金剛烷基、環辛基、環辛烯基、環辛二烯基、茀基、苯基、萘基、茚滿基、金剛烷基、四氫萘基、八氫并環戊二烯、八氫-1H-茚、雙環[2.2.2]辛烷、螺[3.4]辛烷、螺[4.5]癸烷、螺[4.5]癸-1,6-二烯及二螺[2.2.4.2]十二烷。在一個實施例中，鍵聯於非相鄰碳原子以形成三環之環的橋為C1或C2橋。當環橋連時，針對環敘述之取代基亦可存在於橋上。
如本文所用，術語「環烷基」係指飽和或部分不飽和環狀烷基。環烷基之代表性實例包括(但不限於)環丙烷、環丁烷、環戊烷或環己烷。在一個實施例中，環烷基為C3-15環烷基、C3-12環烷基或C3-8環烷基。
如本文所用，術語「環烷基烷基」係指其中鍵結至碳原子，通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經環烷基置換的非環狀烷基。在某些實施例中，環烷基烷基為C4-30環烷基烷基，且例如環烷基烷基之烷基部分為C1-10且環烷基部分為C3-20。在另一個實施例中，環烷基烷基為C3-20環烷基烷基，且例如環烷基烷基之烷基部分為C1-8且環烷基部分為C3-12。在一特定實施例中，環烷基烷基為C4-12環烷基烷基。
如本文所用，術語「氘富集係數」係指既定化合物樣品中同位素豐度與氘天然豐度之間的比率。
如本文所用，術語「氘併入百分比」係指既定化合物樣品中特定位置上具有氘之分子佔包括氘化及未氘化之分子總量的百分比。
如本文所用，術語「氘化甲基」及「氘化乙基」分別係指含有至少一個氘原子之甲基及乙基。氘化甲基之實例包括-CDH2、-CD2H及-CD3。氘化乙基之實例包括(但不限於)-CHDCH3、-CD2CH3、-CHDCDH2、-CH2CD3。
如本文所用，術語「鹵素」係指氟基、氯基、溴基或碘基。
如本文所用，單獨或作為另一取代基一部分之術語「雜烷基」係指一個或多個碳原子(及某些相關氫原子)獨立地經雜原子基團置換的烷基。雜原子基團之實例包括(但不限於)-O-、-S-、-O-O-、-S-S-、-O-S-,-NR’、=N-N=、-N=N-、-N=N-NR’-、-PR’-、-P(O)2-、-POR’-、-O-P(O)2-、-SO-、-SO2-及-Sn(R’)2-，其中各R’獨立地為氫、C1-6烷基、經取代之C1-6烷基、C6-12芳基、經取代之C6-12芳基、C7-18芳基烷基、經取代之C7-18芳基烷基、C3-7環烷基、經取代之C3-7環烷基、C3-7雜環烷基、經取代之C3-7雜環烷基、C1-6雜烷基、經取代之C1-6雜烷基、C6-12雜芳基、經取代之C6-12雜芳基、C7-18雜芳基烷基或經取代之C7-18雜芳基烷基。在一個實施例中，C1-6雜烷基意謂例如至少一個碳原子(及某些相關氫原子)經雜原子置換之C1-6烷基。在一個特定實施例中，C1-6雜烷基例如包括具有五個碳原子及一個雜原子之基團、具有四個碳原子及兩個雜原子之基團等等。在一個實施例中，各R’獨立地為氫或C1-3烷基。在另一個實施例中，雜原子基團為-O-、-S-、-NH-、-N(CH3)-或-SO2-。在一個特定實施例中，雜原子基團為-O-。
如本文所用，術語「雜芳基」係指例如具有1至10個獨立地選自N、O或S之雜原子的5-14員單環、雙環或三環環系統，其中N及S可視情況氧化成各種氧化態，且其中環系統中之至少一個環為芳族。在一個實施例中，雜芳基為單環且具有5或6個環成員。單環雜芳基之代表性實例包括(但不限於)吡啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、三唑基、噁二唑 基、噻二唑基及四唑基。在另一個實施例中，雜芳基為雙環且具有8至10個環成員。雙環雜芳基之代表性實例包括吲哚基、苯并呋喃基、喹啉基、異喹啉基、吲唑基、吲哚啉基、異吲哚基、吲哚嗪基、苯并咪唑基、喹啉基、5,6,7,8-四氫喹啉及6,7-二氫-5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶。
如本文所用，術語「雜芳基烷基」係指其中鍵結至碳原子，通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經雜芳基置換的非環狀烷基。在某些實施例中，雜芳基烷基為C7-12雜芳基烷基，且例如雜芳基烷基之烷基部分為C1-2且雜芳基部分為C6-10。
如本文所用，術語「雜環」係指含有至少一個環雜原子(例如N、O或S)之任何環結構(飽和或部分不飽和)。雜環之實例包括(但不限於)嗎啉、吡咯啶、四氫噻吩、哌啶、哌嗪及四氫呋喃。
如本文所用，術語「雜環烷基」係指其中一個或多個碳原子(及某些相關氫原子)獨立地經一個或多個雜原子置換的飽和或不飽和環狀烷基；或其中一個或多個碳原子(及某些相關氫原子)獨立地經一個或多個雜原子置換使得環系統不再含有至少一個芳環之母體芳環系統。替換碳原子之雜原子的代表性實例包括(但不限於)N、P、O、S及Si。雜環烷基之代表性實例包括(但不限於)環氧化物、氮丙啶、硫脲、咪唑啶、嗎啉、哌嗪、哌啶、吡唑啶、吡咯啶及奎寧環。在一個實施例中，雜環烷基為C5-10雜環烷基、C5-8雜環烷基。在一個特定實施例中，雜環烷基為C5-6雜環烷基。
如本文所用，術語「雜環烷基烷基」係指其中鍵結至碳原子，通常末端或sp3碳原子之一個氫原子經雜環烷基置換的非環狀烷基。在某些實施例中，雜環烷基烷基為C7-12雜環烷基烷基，且例如雜環烷基烷基之烷基部分為C1-2且雜環烷基部分為C6-10。
如本文所用，術語「同位素物」係指同位素富集之反丁烯二酸 酯。
如本文所用，術語「同位素富集」係指原子同位素組成不同於彼原子之天然同位素組成。在一個實施例中，「同位素富集」反丁烯二酸酯含有至少一個同位素組成不同於天然同位素組成之原子。
如本文所用，術語「同位素組成」係指既定原子存在之各同位素之量。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指由醫藥學上可接受之無毒酸或鹼，包括無機酸及鹼及有機酸及鹼製備的鹽。本文中提供的反丁烯二酸酯之適合醫藥學上可接受之鹼加成鹽包括(但不限於)由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉及鋅製成之金屬鹽或由離胺酸、N,N’-二苯甲基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、甲基葡胺(N-甲基葡糖胺)及普魯卡因製成之有機鹽。適合無毒酸包括(但不限於)無機及有機酸，諸如乙酸、海藻酸、鄰胺基苯甲酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烯磺酸、甲酸、反丁烯二酸、糠酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡糖醛酸、麩胺酸、乙醇酸、氫溴酸、鹽酸、羥乙基磺酸、乳酸、順丁烯二酸、蘋果酸、扁桃酸、甲烷磺酸、黏液酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、苯基乙酸、磷酸、丙酸、水楊酸、硬脂酸、琥珀酸、胺磺酸、硫酸、酒石酸及對甲苯磺酸。特定無毒酸包括鹽酸、氫溴酸、磷酸、硫酸及甲烷磺酸。其他為此項技術中所熟知，參見例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing,Easton PA(1990)或Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第19版，Mack Publishing,Easton PA(1995)。
如本文所用，術語「立體異構體」係指反丁烯二酸酯之一種立體異構體基本上不含彼反丁烯二酸酯之其他立體異構體。舉例而言，具有一個對掌性中心的「立體異構純」之反丁烯二酸酯將基本上不含反丁烯二酸酯之相反對映異構體。具有兩個對掌性中心的「立體異構 純」之反丁烯二酸酯將基本上不含反丁烯二酸酯之其他非對映異構體。典型「立體異構純」反丁烯二酸酯包含超過約80重量%反丁烯二酸酯之一種立體異構體及少於約20重量%反丁烯二酸酯之其他立體異構體、超過約90重量%反丁烯二酸酯之一種立體異構體及少於約10重量%反丁烯二酸酯之其他立體異構體、超過約95重量%反丁烯二酸酯之一種立體異構體及少於約5重量%反丁烯二酸酯之其他立體異構體，或超過約97重量%反丁烯二酸酯之一種立體異構體及少於約3重量%反丁烯二酸酯之其他立體異構體。反丁烯二酸酯可具有對掌性中心且可作為外消旋體、個別對映異構體或非對映異構體及其混合物存在。所有此類異構形式包括在本文揭示之實施例內，包括其混合物。本文揭示之實施例涵蓋此類反丁烯二酸酯之立體異構純形式的用途以及彼等形式之混合物的用途。舉例而言，包含相等或不相等量之特定反丁烯二酸酯之對映異構體的混合物可用於本文揭示之方法及組合物中。此等異構體可不對稱地合成，使用標準技術，諸如對掌性管柱或對掌性拆分試劑拆分。參見例如Jacques,J.等人，Enantiomers,Racemates and Resolutions(Wiley Interscience,New York,1981)；Wilen,S.H.等人，Tetrahedron 33：2725(1977)；Eliel,E.L.,Stereochemistry of Carbon Compounds(McGraw Hill,NY,1962)；及Wilen,S.H.,Tables of Resolving Agents and Optical Resolutions第268頁(E.L.Eliel編輯，Univ.of Notre Dame Press,Notre Dame,IN,1972)。
如本文所用，術語「經取代」係指其中一個或多個氫原子獨立地經相同或不同取代基置換之基團。在某些實施例中，各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、=O、-NO2、苯甲基、-C(O)NH2、-R"、-OR"、-C(O)R"、-COOR"、-S(O)2R"或-NR2"，其中各R"獨立地為氫或C1-6烷基。在某些實施例中，各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、-NO2、苯甲基、-R"、-OR"或-NR2"，其中各R"獨立地為 氫或C1-4烷基。在某些實施例中，各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、=O、-NO2、苯甲基、-C(O)NR2"、-R"、-OR"、-C(O)R"、-COOR"或-NR2"，其中各R"獨立地為氫或C1-4烷基。在某些實施例中，各取代基獨立地為-OH、C1-4烷基及-NH2。
基團中之碳原子數目在本文中藉由字首「Cx-xx」說明，其中x及xx為整數。舉例而言，「C1-4烷基」為具有1至4個碳原子之烷基，「C1-6烷基」為具有1至6個碳原子之烷基；且「C6-10芳基」為具有6至10個碳原子之芳基。
圖1展示來自PET成像(圖1A)及MR成像(圖1B)小鼠之矢狀、冠狀及橫斷面，以及經口投與0.5mg/kg之(11C)-DMF之小鼠的PET及MR成像之合併影像(圖1C)。
圖2展示來自PET成像(圖2A)及MR成像(圖2B)小鼠之矢狀、冠狀及橫斷面，以及經口投與200mg/kg之(11C)-DMF之小鼠的PET及MR成像之合併影像(圖2C)。
圖3展示來自PET成像(圖3A)及MR成像(圖3B)小鼠之矢狀、冠狀及橫斷面，以及靜脈內投與0.5mg/kg之(11C)-DMF之小鼠的PET及MR成像之合併影像(圖3C)。
圖4展示來自投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(靜脈內)之小鼠的PET成像的各種小鼠組織中之定量信號。
圖5展示來自投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像的各種小鼠組織中之定量信號。
圖6展示來自投與200mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像的各種小鼠組織中之定量信號。
圖7展示來自投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(靜脈內)之小鼠的PET成像的各種腦區域中之定量信號。
圖8展示來自投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像的各種腦區域中之定量信號。
圖9展示來自投與200mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像的各種腦區域中之定量信號。
圖10展示投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(靜脈內)之小鼠的PET成像結果的時程。灰度：0至12% %ID/g。
圖11展示投與0.5mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像結果的時程。灰度：0至12% %ID/g。
圖12展示投與200mg/kg濃度之(11C)-DMF(經口)之小鼠的PET成像結果的時程。灰度：0至12% %ID/g。
圖13展示以矢狀切面看，靜脈內投與0.5mg/kg濃度之(14C)DMF之小鼠在投與後10分鐘(圖13A及B)或60分鐘(圖13C及D)的結果。
圖14展示以矢狀切面看，經口投與0.5mg/kg濃度之(14C)DMF之小鼠在投與後10分鐘(圖14A及B)或60分鐘(圖14C及D)的結果。
圖15展示方塊及觸鬚線MMF暴露曲線圖。DMF給藥後10分鐘及2小時的血漿(圖15A)、空腸(圖15B)、前腦(圖15C)、小腦(圖15D)、腎(圖15E)及脾(圖15F)。黑條代表PO給藥(100mg/kg)且灰條代表IV給藥(30mg/kg)。圖15G展示各種組織中IV及PO給藥後組織與血漿比(組織[MMF]/血漿[MMF]×100)。對於方塊及觸鬚線曲線圖：方塊代表第一及第三四分位數值，中值為方塊內之水平線，且條代表最小值及最大值；n=5。統計比較用曼恩-惠特尼U檢驗(Mann-Whitney U Test)進行(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖16展示在DMF IV及PO投與後2小時及6小時的前腦轉錄變化。NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖16A)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖16B)；醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖16C)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖16D)；血紅素加氧酶1 (Hmox1)(圖16E)；硫氧還蛋白還原酶1(Txnrd1)(圖16F)。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=5)。孔口標記之條代表媒劑對照，黑條代表2小時時間點，且灰條代表6小時時間點。誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多重比較(Tukey’s multiple comparison)進行以評估相同給藥方案內接受媒劑或DMF之動物之間的差異(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖17展示在DMF IV及PO投與後2小時及6小時的小腦轉錄變化。NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖17A)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖17B)；醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖17C)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖17D)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖17E)；硫氧還蛋白還原酶1(Txnrd1)(圖17F)。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=5)。孔口標記之條代表媒劑對照，黑條代表2小時時間點，且灰條代表6小時時間點。誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多重比較進行以評估相同給藥方案內接受媒劑或DMF之動物之間的差異(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖18展示在DMF IV及PO投與後2小時及6小時的腎轉錄變化。NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖18A)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖18B)；醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖18C)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖18D)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖18E)；硫氧還蛋白還原酶1(Txnrd1)(圖18F)。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=5)。孔口標記之條代表媒劑對照，黑條代表2小時時間點，且灰條代表6小時時間點。誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多重比較進行以評估相同給藥方案內接受媒劑或DMF之動物之間的差異(*，p<0.05； **，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖19展示在DMF IV及PO投與後2小時及6小時的脾轉錄變化。NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖19A)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖19B)；醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖19C)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖19D)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖19E)；硫氧還蛋白還原酶1(Txnrd1)(圖19F)。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=5)。孔口標記之條代表媒劑對照，黑條代表2小時時間點，且灰條代表6小時時間點。誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多重比較進行以評估相同給藥方案內接受媒劑或DMF之動物之間的差異(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖20展示在DMF IV及PO投與後2小時及6小時的空腸轉錄變化。NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖20A)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖20B)；醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖20C)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖20D)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖20E)；硫氧還蛋白還原酶1(Txnrd1)(圖20F)。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=5)。孔口標記之條代表媒劑對照，黑條代表2小時時間點，且灰條代表6小時時間點。誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多重比較進行以評估相同給藥方案內接受媒劑或DMF之動物之間的差異(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001)。
圖21展示10分鐘之MMF暴露之分析(平均值±標準差，n=5，X軸)，比較PO(100mg/kg，黑色圓)及IV(30mg/kg，灰色正方形)投與之DMF，其針對在2或6小時藥效反應之標準化倍數變化(平均值±標準差，n=5，Y軸)繪圖。圖21A-C：前腦中2小時之Osgin1(圖21A)、6小時之Akr1b8(圖21B)及6小時之Hmox1(圖21C)的暴露-藥效關係。圖 21D-F：腎中6小時之Nqo1(圖21D)、2小時之Hmox1(圖21E)及6小時之Txnrd1(圖21F)的暴露-藥效關係。圖21G-I：脾中6小時之Nqo1(圖21G)、2小時之Osgin1(圖21H)及2小時之Akr1b8(圖21I)的暴露-藥效關係。
圖22展示在投與媒劑或DMF PO(100mg/kg，黑條)或IV(17.5mg/kg，空條，或30mg/kg，灰條)10分鐘後在血漿(圖22A)、腦(圖22B)、空腸(圖22C)及腎(圖22D)中量測之MMF含量。條代表平均值(n=4)，誤差條表示標準差。評估在給與DMF PO或IV 10分鐘後腦(圖22E)、腎(圖22F)及空腸(圖22G)中MMF組織穿透。條代表(組織[MMF]/血漿[MMF]×100)之平均值，誤差條表示標準差(n=4)。統計比較使用方差分析(ANOVA)用圖基多次比較檢驗進行，以評估投藥途徑之間及IV劑量水準之間的改變。*p<0.05；**，p<0.01；****，p<0.0001。
圖23展示相對於媒劑對照，藉由經口管飼法(PO，100mg/kg，黑條)或靜脈內輸注(IV，17.5mg/kg，空心條，或30mg/kg，灰條)投與DMF兩小時後，腦中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖23A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖23B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖23C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖23D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖23E))之轉錄產物含量的倍數變化。孔口標記之條代表媒劑對照含量。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=4)，誤差條指示標準差。使用史都登氏t檢驗對PO組進行統計比較。IV組用圖基多次對比檢驗使用ANOVA進行分析以評估媒劑、DMF 17.5mg/kg及DMF 30mg/kg組之間的差異。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
圖24展示相對於媒劑對照，藉由經口管飼法(PO，100mg/kg，黑 條)或靜脈內輸注(IV，17.5mg/kg，空心條，或30mg/kg，灰條)投與DMF兩小時後，腎中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖24A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖24B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖24C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖24D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖24E))之轉錄產物含量的倍數變化。孔口標記之條代表媒劑對照含量。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=4)，誤差條指示標準差。使用史都登氏t檢驗對PO組進行統計比較。靜脈內組用圖基多次對比檢驗使用ANOVA進行分析以評估媒劑、DMF 17.5mg/kg及DMF 30mg/kg組之間的差異。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
圖25展示相對於媒劑對照，藉由經口管飼法(PO，100mg/kg，黑條)或靜脈內輸注(IV，17.5mg/kg，空心條，或30mg/kg，灰條)投與DMF兩小時後，空腸中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖25A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖25B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖25C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖25D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖25E))之轉錄產物含量的倍數變化。孔口標記之條代表媒劑對照含量。條代表相對於媒劑對照，指示基因之倍數變化的平均測定值(n=4)，誤差條指示標準差。使用史都登氏t檢驗對PO組進行統計比較。IV組用圖基多次對比檢驗使用ANOVA進行分析以評估媒劑、DMF 17.5mg/kg及DMF 30mg/kg組之間的差異。*，p<0.05；**，p<0.01。
圖26展示對於DMF PO(100mg/kg，實心黑色圓)及IV(17.5mg/kg，空心灰色正方形或30mg/kg，空心灰色三角形)，10分鐘之平均組織MMF暴露(±標準差，x軸)的評估，其針對腦(圖26A、B)、腎(圖26C、D)及空腸(圖26E、F)之藥效轉錄改變繪圖。在2小時下量測 之平均倍數變化在Y軸±標準差上針對Osgin1(圖26A)、Akr1b8(圖26B、E)、Hmox1(圖26C、F)及Nqo1(圖26D)繪圖。Y=1之虛線代表在媒劑對照中觀測到之基本基因表現水準。
圖27展示在IV投與DMF(30mg/kg，黑條)或MMF(27mg/kg，灰條)10分鐘後在血漿(圖27A)、腦(圖27B)、腎(圖27C)、空腸(空腸27D)及脾(圖27E)中量測之MMF含量。條代表平均值(n=4)，誤差條表示標準差。圖27F展示在IV給藥DMF或MMF後10分鐘腦、腎、空腸及脾中MMF組織穿透之評估。條代表(組織[MMF]/血漿[MMF]×100)之平均值，n=4。誤差條表示標準差。使用t檢驗，針對個別組織，進行統計比較，比較DMF與MMF IV投與。*p<0.05。
圖28展示相對於媒劑對照，在IV投與DMF、MMF或媒劑(分別為30mg/kg，黑條，或27mg/kg，灰條，媒劑影線條)2或6小時後，腦中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖28A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖28B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖28C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖28D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖28E))之轉錄產物含量的倍數變化。條表示對於匹配時間點(n=4)，相對於媒劑對照(影線條)，指示基因之倍數變化的平均測定值，誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多比較檢驗進行以評估接受媒劑、DMF或MMF之動物之間的改變。2及6小時時間點分開分析。*，p<0.05；**，p<0.01。
圖29展示相對於媒劑對照，在IV投與DMF、MMF或媒劑(分別為30mg/kg，黑條，或27mg/kg，灰條，媒劑影線條)2或6小時後，腎中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖29A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖29B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖29C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖29D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖29E))之轉錄產物含量的倍數變化。條表示對於 匹配時間點(n=4)，相對於媒劑對照(影線條)，指示基因之倍數變化的平均測定值，誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多比較檢驗進行以評估接受媒劑、DMF或MMF之動物之間的改變。2及6小時時間點分開分析。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
圖30展示相對於媒劑對照，在IV投與DMF、MMF或媒劑(分別為30mg/kg，黑條，或27mg/kg，灰條，媒劑影線條)2或6小時後，空腸中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖30A)；麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖30B)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖30C)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖30D)；及氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖30E))之轉錄產物含量的倍數變化。條表示對於匹配時間點(n=4)，相對於媒劑對照(影線條)，指示基因之倍數變化的平均測定值，誤差條指示標準差。統計比較使用ANOVA用圖基多比較檢驗進行以評估接受媒劑、DMF或MMF之動物之間的改變。2及6小時時間點分開分析。*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001；****，p<0.0001。
圖31展示對於IV DMF(30mg/kg，實心黑色圓)及IV MMF(27mg/kg，灰色三角形)，10分鐘之組織MMF暴露(平均值±標準差，n=4，X軸)的評估，其針對腦(圖31A、B)、腎(圖31C、D、E)及空腸(圖31F、G、H)之藥效轉錄改變繪圖。在2小時下量測之平均倍數變化在Y軸±標準差上針對Osgin1(圖31A、E)、Akr1b8(圖31F)、Hmox1(圖31C)及Nqo1(圖31B、D、G)(n=4)繪圖。Y=1之虛線代表在媒劑對照中觀測到之基本基因表現水準。
圖32展示在IV給藥DMF(30mg/kg，黑條)、MMF(27mg/kg，灰條)或媒劑(20% Captisol，空心條)10分鐘、2小時及6小時(Hr)後血球計數之分析。白血球(圖32A)、嗜中性粒細胞(圖32B)、淋巴細胞(圖 32C)、單核細胞(圖32D)、嗜酸性球(圖32E)及嗜鹼性球(圖32F)。條表示平均細胞計數，誤差條指示標準差(n=4，各組)。
圖33展示在IV給藥DMF(30mg/kg，黑條)、MMF(27mg/kg，灰條)或媒劑(20% Captisol，空心條)10分鐘、2小時及6小時(Hr)後紅血球及血小板之分析。紅血球(圖33A)、血紅蛋白含量(圖33B)、血細胞比容(圖33C)、平均紅血球容積(圖33D)及血小板(圖33E)。條表示平均細胞計數及值，誤差條指示標準差(n=4，各組)。
圖34展示相對於媒劑對照，在最後一次(第五次)IV給藥DMF 30mg/kg或媒劑媒劑2小時後，各種組織中某些基因(醛酮還原酶家族1成員b8(Akr1b8)(圖34A)；血紅素加氧酶1(Hmox1)(圖34B)；NADP(H)去氫酶醌1(Nqo1)(圖34C)；氧化應激誘發之生長抑制劑1(Osgin1)(圖34D))；及麩胺酸鹽-半胱胺酸連接酶催化亞單位(Gclc)(圖34E)之轉錄產物含量的倍數變化。灰條表示對於匹配時間點(媒劑n=4，DMF n=5)，相對於媒劑對照(黑條)，DMF誘發之指示基因之倍數變化的平均測定值，誤差條指示標準差。史都登氏t檢驗用以比較各組織內媒劑與DMF。* p<0.05，** p<0.01，**** p<0.0001。
圖35展示最後一次(第五次)IV給藥DMF(30mg/kg，灰條)或媒劑(20% Captisol，黑條)10分鐘後血球計數之分析。條表示平均細胞計數，誤差條指示標準差(媒劑n=4，DMF n=5)。針對每一指示細胞類型，使用史都登氏t檢驗進行統計比較，比較媒劑與DMF。* p<0.05。
圖36展示經口投與之DMF(每日100mg/kg)對SOD1-G93A小鼠之旋轉棒效能的影響。
圖37展示對於媒劑及DMF組，經口投與之DMF(經口，每日100mg/kg)對SOD1-G93A小鼠中運動神經元症狀之發作(圖37A)及存活(圖37B)的影響。
圖38展示對於媒劑及DMF組，指示自重量增加至重量減輕之轉變的斷點分析。
圖39展示在丙二酸鹽誘發之紋狀體病變模型中，對於實驗1(圖39A)及實驗2(圖39B)，與媒劑比較，DMF(經口)之作用。
圖40展示投與阿樸嗎啡(1.0mg/kg，皮下)後DMF(經口)對大鼠中旋轉行為之作用。
圖41展示免疫螢光之病變大鼠腦切片染色的代表性影像(星形細胞，圖41A、B；神經元，圖41C、D)。媒劑(圖41A、C)及DMF(經口，100mg/kg)(圖41B、D)。
圖42展示血漿、腦及腦脊髓液(CSF)中最後一次經口給藥DMF(mg/kg)30min後丙二酸鹽模型中的MMF暴露。
圖43展示第1天(圖43A；t=3.829min(MMF)及t=7.196min(DMF))及第7天(圖43B；t=3.819min(MMF)；t=7.163min(DMF))之奈米懸浮液的HPLC。
圖44展示第1天(圖44A)及第7天(圖44B)之奈米懸浮液的粒度分佈。
本文提供治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥 學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，該方法基本上由該投與步驟組成。
在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯為投與患者進行該治療之唯一活性劑。
在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為至少一種反丁烯二酸酯。在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。在一個實施例中，醫藥組合物中之唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。在一個實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種反丁烯二酸酯組成。在一個實施例中，醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
本文揭示之各種態樣、實施例及選擇均可以任何及所有變化組合。所提供之組合物及方法為示例性的，且不欲限制所主張之實施例的範疇。
5.1 用於本文中提供之方法的反丁烯二酸酯
用於本文揭示之方法及組合物的活性劑(亦即藥物)為至少一種反丁烯二酸酯。此類反丁烯二酸酯可為反丁烯二酸二烷酯(例如反丁烯二酸二甲酯)、反丁烯二酸單烷酯(例如反丁烯二酸單甲酯)、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯(例如反丁烯二酸二甲酯與反丁烯二酸 單甲酯)之組合、反丁烯二酸單烷酯(例如反丁烯二酸單甲酯)之前藥、上述任一者之氘化形式或上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合。在一個實施例中，用於本說明書中描述之方法、組合物及產物中的反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為(i)反丁烯二酸單烷酯或其前藥，或(ii)反丁烯二酸二烷酯。在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯為反丁烯二酸單甲酯(「MMF」)。在另一個實施例中，反丁烯二酸二烷酯為反丁烯二酸二甲酯(「DMF」)。
5.1.1 反丁烯二酸單烷酯及反丁烯二酸二烷酯
詳言之，本文中提供反丁烯二酸單烷酯及反丁烯二酸二烷酯，或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其用於本文中提供之方法中。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為式(I)之反丁烯二酸單烷酯：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中R1為C1-6烷基。
在式(I)化合物之某些實施例中，R1為甲基(反丁烯二酸單甲酯，「MMF」)。
在一個實施例中，式(I)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第4,959,389號中所揭示來製備。
在另一個實施例中，反丁烯二酸酯為式(II)之反丁烯二酸二烷酯：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中各R2獨立地為C1-6烷基。
在式(II)化合物之某些實施例中，各R2為甲基(反丁烯二酸二甲酯，「DMF」)。
在一個實施例中，式(II)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第4,959,389號中所揭示來製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯及/或反丁烯二酸單甲酯。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
5.1.2 反丁烯二酸單烷酯之前藥
本文中進一步提供反丁烯二酸單烷酯之前藥或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其用於本文所提供之方法中。
詳言之，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(III)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，R3為C1-6烷基；R4及R5各獨立地為氫、C1-6烷基或經取代之C1-6烷基；R6及R7各獨立地為氫、C1-6烷基、經取代之C1-6烷基、C1-6雜烷基、經取代之C1-6雜烷基、C4-12環烷基烷基、經取代之C4-12環烷基烷基、C7-12芳基烷基或經取代之C7-12芳基烷基；或R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-10雜芳基、經取代之C5-10雜芳基、C5-10雜環烷基及經取代之C5-10雜環烷基；且其中各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、=O、-NO2、苯 甲基、-C(O)NR8 2、-R8、-OR8、-C(O)R8、-COOR8或-NR8 2，其中各R8獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，當R3為乙基時，則R6及R7各獨立地為氫、C1-6烷基或經取代之C1-6烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、-R8、-OR8或-NR8 2，其中各R8獨立地為氫或C1-4烷基。在某些實施例中，各取代基獨立地為-OH或-COOH。
在式(III)化合物之某些實施例中，各取代基獨立地為=O、C1-4烷基或-COOR8，其中R8為氫或C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為乙基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為C3-6烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基或第三丁基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基或第三丁基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5各為氫。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基或第三丁基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7各獨立地為氫或C1-6烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7各獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7各獨立地為氫、甲基或乙基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7各為氫；在某些實施例中，R6及R7各為甲基；且在某些實施例中，R6及R7各為乙基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6為氫；且R7為C1-4烷基、經取代之C1-4烷基，其中各取代基獨立地為=O、-OR8、-COOR8或-NR8 2，且其中各R8獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6為氫；且R7為C1-4烷基、苯甲基、2-甲氧基乙基、羧基甲基、羧基丙基、1,3,4-噻二唑基、甲氧基、-COOCH3、2-側氧基-1,3-噁唑啶基、2-(甲基乙氧基)乙基、2-乙氧基乙基、(第三丁基氧基羰基)甲基、(乙氧基羰基)甲基、(甲基乙基)氧基羰基甲基或乙氧基羰基甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-6雜環烷基、經取代之C5-6雜環烷基、C5-6雜芳基及經取代之C5-6雜芳基環。在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5雜環烷基、經取代之C5雜環烷基、C5雜芳基及經取代之C5雜芳基環。在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C6雜環烷基、經取代之C6雜環烷基、C6雜芳基及經取代之C6雜芳基環。在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：哌嗪、1,3-噁唑啶基、吡咯啶及嗎啉環。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成C5-10雜環烷基環。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中 另一者為C1-6烷基；R6為氫；R7為氫、C1-6烷基或苯甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為C1-6烷基；R6為氫；且R7為氫、C1-6烷基或苯甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-6烷基；且R6及R7各為C1-6烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-6烷基；且R6及R7各為C1-6烷基。在式(III)化合物之某些實施例中，R5為甲基；R4及R5各為氫；且R6及R7各為C1-6烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-4烷基；R6為氫；且R7為C1-4烷基或經取代之C1-4烷基，其中取代基為=O、-OR8、-COOR8或-NR8 2，其中各R8獨立地為氫或C1-4烷基。在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為甲基；R6為氫；且R7為C1-4烷基或經取代之C1-4烷基，其中取代基為=O、-OR8、-COOR8或-NR8 2，其中各R8獨立地為氫或C1-4烷基。在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5各為氫；R6為氫；且R7為C1-4烷基或經取代之C1-4烷基，其中取代基為=O、-OR11、-COOR11或-NR11 2，其中各R11獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7連同其附接之氮一起形成C5-10雜環烷基環。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-6烷基；且R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-6雜環烷基、經取代之C5-6雜環烷基、C5-6雜芳基及經取代之C5-6雜芳基環。在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲 基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為甲基；R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-6雜環烷基、經取代之C5-6雜環烷基、C5-6雜芳基及經取代之C5-6雜芳基環。在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5各為氫；且R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-6雜環烷基、經取代之C5-6雜環烷基、C5-6雜芳基及經取代之C5-6雜芳基環。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-6烷基；且R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：嗎啉、哌嗪及N上經取代之哌嗪。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3為甲基；R4及R5中一者為氫且R4及R5中另一者為氫或C1-6烷基；且R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：嗎啉、哌嗪及N上經取代之哌嗪。
在式(III)化合物之某些實施例中，R3不為甲基。
在式(III)化合物之某些實施例中，R4為氫，且在某些實施例中，R5為氫。
在式(III)化合物之某些實施例中，R6及R7獨立地為氫、C1-6烷基、經取代之C1-6烷基、C6-10芳基、經取代之C6-10芳基、C4-12環烷基烷基、經取代之C4-12環烷基烷基、C7-12芳基烷基、經取代之C7-12芳基烷基、C1-6雜烷基、經取代之C1-6雜烷基、C6-10雜芳基、經取代之C6-10雜芳基、C4-12雜環烷基烷基、經取代之C4-12雜環烷基烷基、C7-12雜芳基烷基、經取代之C7-12雜芳基烷基；或R6及R7連同其附接之氮一起形成選自以下之環：C5-10雜芳基、經取代之C5-10雜芳基、C5-10雜環烷基及經取代之C5-10雜環烷基。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為：(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N,N-二乙基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯[N-苯甲基胺基甲醯基]甲酯； (2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-嗎啉-4-基-2-側氧基乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-丁基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸[N-(2-甲氧基乙基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；2-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}乙酸；4-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}丁酸；(2E)丁-2烯-1,4-二酸甲酯(N-(1,3,4-噻二唑-2-基)胺基甲醯基)甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N,N-二甲基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-甲氧基-N-甲基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸雙-(2-甲氧基乙基胺基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸[N-(甲氧基羰基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；4-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}丁酸鈉鹽；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-側氧基-2-哌嗪基乙酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸甲酯2-側氧基-2-(2-側氧基(1,3-噁唑啶-3-基)乙酯；(2E)丁-2烯-1,4二酸{N-[2-(二甲基胺基)乙基]胺基甲醯基}甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-(4-甲基哌嗪基)-2-側氧基乙酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸甲酯{N-[(丙基胺基)羰基]胺基甲醯基}甲酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸2-(4-乙醯基哌嗪基)-2-側氧基乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸{N,N-雙[2-(甲基乙氧基)乙基]胺基甲醯基}甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-(4-苯甲基哌嗪基)-2-側氧基乙酯； (2E)丁-2-烯-1,4-二酸[N,N-雙(2-乙氧基乙基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸2-{(2S)-2-[(第三丁基)氧基羰基]吡咯啶基}-2-側氧基乙酯甲酯；1-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯基}(2S)吡咯啶-2-甲酸；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-{[(第三丁基)氧基羰基]甲基}-N-甲基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸{N-(乙氧基羰基)甲基]-N-甲基胺基甲醯基}甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯1-甲基-2-嗎啉-4-基-2-側氧基乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸[N,N-雙(2-甲氧基乙基)胺基甲醯基]乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N,N-二甲基胺基甲醯基)乙酯甲酯；2-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]-N-甲基乙醯胺基}乙酸；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-{[(第三丁基)氧基羰基]甲基}胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(2E)丁-甲基-N-{[(甲基乙基)氧基羰基]甲基}胺基甲醯基)甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸{N-[(乙氧基羰基)甲基]-N-苯甲基胺基甲醯基}甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸{N-[(乙氧基羰基)甲基]-N-苯甲基胺基甲醯基}乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸{N-[(乙氧基羰基)甲基]-N-甲基胺基甲醯基}乙酯甲酯； (2E)丁-2-烯-1,4-二酸(1S)-1-甲基-2-嗎啉-4-基-2-側氧基乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(1S)-1-[N,N-雙(2-甲氧基乙基)胺基甲醯基]乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(1R)-1-(N,N-二乙基胺基甲醯基)乙酯甲酯；或(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(1S)-1-(N,N-二乙基胺基甲醯基)乙酯甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為：(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N,N-二乙基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯[N-苯甲基胺基甲醯基]甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-嗎啉-4-基-2-側氧基乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-丁基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸[N-(2-甲氧基乙基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；2-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}乙酸；{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}丁酸；(2E)丁-2烯-1,4-二酸甲酯(N-(1,3,4-噻二唑-2-基)胺基甲醯基)甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N,N-二甲基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-甲氧基-N-甲基胺基甲醯基)甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸雙-(2-甲氧基乙基胺基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸[N-(甲氧基羰基)胺基甲醯基]甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-側氧基-2-哌嗪基乙酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸甲酯2-側氧基-2-(2-側氧基(1,3-噁唑啶-3-基)乙酯；(2E)丁-2烯-1,4-二酸{N-[2-(二甲基胺基)乙基]胺基甲醯基}甲酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(N-[(甲氧基羰基)乙基]胺基甲醯基)甲酯甲酯；或 2-{2-[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙醯胺基}丙酸；或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為： 。亦參見US 2014-0179778 A1。
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為：
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為：
在式(III)化合物之某些實施例中，化合物為：
段落[0405]及[0407]中所述之化合物使用Chemistry 4-D Draw Pro,7.01c版本(ChemInnovation Software,Inc.,San Diego,California)命名。
在一個實施例中，式化合物(III)可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,148,414 B2號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(IV)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R9為C1-6烷基；R10及R11各獨立地為氫、C1-6烷基或經取代之C1-6烷基；且 R12為C1-6烷基、經取代之C1-6烷基、C1-6烯基、經取代之C1-6烯基、C1-6雜烷基、經取代之C1-6雜烷基、C3-8環烷基、經取代之C3-8環烷基、C6-8芳基、經取代之C6-8芳基，或-OR13，其中R13為C1-6烷基、經取代之C1-6烷基、C3-10環烷基、經取代之C3-10環烷基、C6-10芳基或經取代之C6-10芳基；其中各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、=O、-NO2、苯甲基、-C(O)NR14 2、-R14、-OR14、-C(O)R14、-COOR14或-NR14 2，其中各R14獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，各取代基獨立地為鹵素、-OH、-CN、-CF3、-R14、-OR14或-NR14 2，其中各R14獨立地為氫或C1-4烷基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，各取代基獨立地為=O、C1-4烷基及-COOR14，其中R14為氫或C1-4烷基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R9為C1-6烷基；在某些實施例中，R9為C1-3烷基；且在某些實施例中，R9為甲基或乙基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R9為甲基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R9為乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基或第三丁基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R9為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或第三丁基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為C1-6烷基。在式(IV)化合物之某些實施例中，R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為C1-4烷基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為甲基、乙基、正丙基或異丙基。在式(IV)化合物之某些實施例中，R10及R11各為氫。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R12為C1-6烷基；R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為C1-6烷基；且R9為C1-6烷基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R12為-OR13。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R13為C1-4烷基、環己基或苯基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R12為甲基、乙基、正丙基或異丙基；R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為甲基、乙基、正丙基或異丙基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R12為經取代之C1-2烷基，其中各取代基獨立地為-COOH、-NHC(O)CH2NH2或-NH2。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R12為乙氧基、甲基乙氧基、異丙基、苯基、環己基、環己氧基、-CH(NH2)CH2COOH、-CH2CH(NH2)COOH、-CH(NHC(O)CH2NH2)-CH2COOH或-CH2CH(NHC(O)CH2NH2)-COOH。
在式(IV)化合物之某些實施例中，R9為甲基或乙基；R10及R11中一者為氫且R10及R11中另一者為氫、甲基、乙基、正丙基或異丙基；且R12為C1-3烷基、經取代之C1-2烷基，其中各取代基為-COOH、-NHC(O)CH2NH2、-NH2或-OR13，其中R13為C1-3烷基、環己基、苯基或環己基。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為：(2E)丁-2-烯-1,4-二酸乙氧基羰氧基乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯(甲基乙氧基羰氧基)乙酯；或(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(環己基氧基羰氧基)乙酯甲酯；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為： ；；或 ；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為：(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯(2-甲基丙醯氧基)乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯苯基羰氧基乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸環己基羰氧基丁酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙酯甲酯；或(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-甲基-1-苯基羰氧基丙酯；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為： ；；或 ；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為：(2E)丁-2-烯-1,4-二酸乙氧基羰氧基乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯(甲基乙氧基羰氧基)乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯(2-甲基丙醯氧基)乙酯； (2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯苯基羰氧基乙酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸環己基羰氧基丁酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸(環己基氧基羰氧基)乙酯甲酯；(2E)丁-2-烯-1,4-二酸甲酯2-甲基-1-苯基羰氧基丙酯；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為：3-({[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]甲基}氧基羰基)(3S)-3-胺基丙酸，2,2,2-三氟乙酸；3-({[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]甲基}氧基羰基)(2S)-2-胺基丙酸，2,2,2-三氟乙酸；3-({[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2-烯醯基氧基]甲基}氧基羰基)(3S)-3-(2-胺基乙醯胺基)丙酸，2,2,2-三氟乙酸；或3-{[(2E)-3-(甲氧基羰基)丙-2烯醯基氧基]乙氧基羰氧基}(2S)-2-胺基丙酸，氯化物；或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或；或或其立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。
在式(IV)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其立體異構體。
段落[0431]、[0433]、[0435]及[0436]中所述之化合物使用Chemistry 4-D Draw Pro,7.01c版本(ChemInnovation Software,Inc.,San Diego,California)命名。
在一個實施例中，式(IV)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,148,414 B2號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利申請公開案第2014/0057918號中所揭示之前藥，諸如式(V)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽，其中R15為C1-6烷基；且m為2至6之整數。
在式(V)化合物之某些實施例中，R15為甲基。
在式(V)化合物之某些實施例中，R15為乙基。
在式(V)化合物之某些實施例中，R15為C3-6烷基。
在式(V)化合物之某些實施例中，R15為甲基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基或第三丁基。
在式(V)化合物之某些實施例中，R15為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第二丁基、異丁基或第三丁基。
在式(V)化合物之某些實施例中，化合物為：反丁烯二酸(2-嗎啉基乙基)酯甲酯；反丁烯二酸(3-嗎啉基丙基)酯甲酯；反丁烯二酸(4-嗎啉基丁基)酯甲酯；反丁烯二酸(5-嗎啉基戊基)酯甲酯；或反丁烯二酸(6-嗎啉基己基)酯甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在式(V)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽。
段落[0448]中所述之化合物使用Chemistry 4-D Draw Pro,7.01c版本(ChemInnovation Software,Inc.,San Diego,California)命名。
在一個實施例中，式(V)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利申請公開案第2014/0057918號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VI)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中：R16為C1-10烷基、C5-14芳基、羥基、-O-C1-10烷基或-O-C5-14芳基；R17、R18及R19各獨立地為C1-10烷基、C5-14芳基、羥基、-O-C1-10烷基、-O-C5-14芳基，或 其中R20為C1-6烷基；各可視情況經取代；且n、p及q各獨立地為0-4；其限制條件為R17、R18及R19中至少一者為
在式(VI)化合物之某些實施例中，R20為視情況經取代之C1-6烷基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R20為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R20為甲基。
在式(VI)化合物之某些實施例中，R16為C1-10烷基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R16為視情況經取代之C1-6烷基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R16為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R16為視情況經取代之C5-15芳基。在式(VI)化合物之某些實施例中，R16為視情況經取代之C5-C10芳基。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VI’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中R16為C1-10烷基、C6-10芳基、羥基、-O-C1-10烷基或-O-C6-10芳基；R17、R18及R19各獨立地為C1-10烷基、C6-10芳基、羥基、-O-C1-10烷基、-O-C6-10芳基，或 其中R20為C1-6烷基；各可視情況經取代；且n、p及q各獨立地為0-4；其限制條件為R17、R18及R19中至少一者為
在式(VI’)化合物之某些實施例中，R20為甲基。
在式(VI)或式(VI’)化合物之某些實施例中，化合物為：二反丁烯二酸(二甲基矽烷二基)二甲酯；反丁烯二酸甲酯((三甲氧基矽烷基)甲基)酯；反丁烯二酸甲酯((三羥基矽烷基)甲基)酯；或三反丁烯二酸三甲酯(甲基矽烷三基)酯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在式(VI)或式(VI’)化合物之某些實施例中，化合物為：；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，式(VI)及式(VI’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2013/119677中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中：其中R21為C1-6烷基；且R22及R23各獨立地為C1-10烷基或C5-14芳基；各可視情況經取代。
在式(VII)化合物之某些實施例中，R21為視情況經取代之C1-6烷基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R21為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R21為甲基。
在式(VII)化合物之某些實施例中，R22及R23各獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R22及R23各獨立地為視情況經取代之C1-6烷基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R22及R23各獨立地為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R22及R23各獨立地為視情況經取代之C5-14芳基。在式(VII)化合物之某些實施例中，R22及R23各獨立地為視情況經 取代之C5-10芳基。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VII’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中R21為C1-6烷基；且R22及R23各獨立地為C1-10烷基或C6-10芳基。
在一個實施例中，式(VII)及式(VII’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2013/119677中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VIII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中：R24為C1-6烷基；R25、R26及R27各獨立地為羥基、C1-10烷基、C5-14芳基、-O-C1-10烷基或-O-C5-14芳基；各可視情況經取代；且s為1或2。
在式(VIII)化合物之某些實施例中，R24為視情況經取代之C1-C6烷基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R24為視情況經取代之甲 基、乙基或異丙基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R24為甲基。
在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各為羥基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各獨立地為視情況經取代之C1-10烷基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各獨立地為視情況經取代之C1-6烷基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各獨立地為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各獨立地為視情況經取代之C5-14芳基。在式(VIII)化合物之某些實施例中，R25、R26及R27各獨立地為視情況經取代之C5-10芳基。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(VIII’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中：R24為C1-6烷基；R25、R26及R27各獨立地為羥基、C1-10烷基、C6-10芳基、-O-C1-10烷基或-O-C6-10芳基；且s為1或2。
在一個實施例中，式(VIII)及式(VIII’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2013/119677中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(IX)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中各R28獨立地為C1-6烷基；且R29為C1-10烷基；各可視情況經取代。
在式(IX)化合物之某些實施例中，各R28獨立地為視情況經取代之C1-6烷基。在式(IX)化合物之某些實施例中，各R28獨立地為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。在式(IX)化合物之某些實施例中，各R28為甲基。
在式(IX)化合物之某些實施例中，R29為視情況經取代之C1-6烷基。在式(IX)化合物之某些實施例中，R29為視情況經取代之甲基、乙基或異丙基。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2013/119677中所揭示之前藥，諸如式(IX’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中 R28為C1-6烷基；且R29為C1-10烷基。
在一個實施例中，式(IX)及式(IX’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2013/119677中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利第8,669,281 B1號中所揭示之前藥，諸如式(X)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R30為未經取代之C1-6烷基；La為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；且R31及R32各獨立地為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；或者，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R30為甲基。在式(X)化合物之某些實施例中，R30為乙基。
在式(X)化合物之某些實施例中，La為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為經取代或未經取代之C1-3烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為經取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為二甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為甲基或二甲基取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X)化合物之某些實施例中，La為未經取代之C2烷基鍵聯基團。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之C1-6烷基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之C1-3烷基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之C1-2烷基。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31為C(O)ORa取代之C1-6烷基，其中Ra為氫或未經取代之C1-6烷基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為S(O)(O)Rb取代之C1-6烷基，其中Rb為未經取代之C1-6烷基。
在式(X)化合物之某些實施例中，R32為氫。在式(X)化合物之某些實施例中，R32為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(X)化合物之某些實施例中，R32為未經取代之C1-6烷基。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、 O及S之雜原子的雜環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之吡咯啶基、咪唑啶基、吡唑啶基、噁唑啶基、異噁唑啶基、三唑啶基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之哌啶基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成未經取代之哌啶基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成鹵素取代之哌啶基環。在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成4-鹵素取代之哌啶基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成未經取代之嗎啉基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成未經取代之吡咯啶基環。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31及R32連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基。
在式(X)化合物之某些實施例中，R31為經取代或未經取代之C6-10芳基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之C6-C10芳基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之苯基。在式(X)化合物之某些實施例中，R31為未經取代之苯甲基。
在一個實施例中，式(X)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,669,281 B1號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利第 8,669,281 B1號中所揭示之前藥，諸如式(X’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R33為未經取代之C1-6烷基；La’為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；且R34為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基。
在式(X’)化合物之某些實施例中，R33為甲基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R33為乙基。
在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團。在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為經取代或未經取代之C1-3烷基鍵聯基團。
在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為經取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為二甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X’)化合物之某些實施例 中，La’為甲基或二甲基取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X’)化合物之某些實施例中，La’為未經取代之C2烷基鍵聯基團。
在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為未經取代之C1-6烷基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為甲基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為未經取代之C1-3烷基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為未經取代之C1-2烷基。
在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為C(O)ORa’取代之C1-6烷基，其中Ra’為H或未經取代之C1-6烷基。在式(X’)化合物之某些實施例中，R34為S(O)(O)Rb’取代之C1-6烷基，其中Rb為未經取代之C1-6烷基。
在一個實施例中，式(X’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,669,281 B1號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利第8,669,281 B1號中所揭示之前藥，諸如式(X”)化合物：
或其互變異構體或立體異構體，其中A-為醫藥學上可接受之陰離子；R35為未經取代之C1-6烷基；La”為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子 的雜芳基；R36及R37各獨立地為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-C6炔基、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；或者，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環；且R38為經取代或未經取代之C1-6烷基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R35為甲基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R35為乙基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為經取代或未經取代之C1-6烷基鍵聯基團。在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為經取代或未經取代之C1-3烷基鍵聯基團。
在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為經取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為二甲基取代或未經取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為甲基或二甲基取代之C2烷基鍵聯基團。在式(X”)化合物之某些實施例中，La”為未經取代之C2烷基鍵聯基團。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之C1-6烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之C1-3烷基。在式 (X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之C1-2烷基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為C(O)ORa”取代之C1-6烷基，其中Ra”為氫或未經取代之C1-6烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為S(O)(O)Rb”取代之C1-6烷基，其中Rb”為未經取代之C1-6烷基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之吡咯啶基、咪唑啶基、吡唑啶基、噁唑啶基、異噁唑啶基、三唑啶基、四氫呋喃基、哌啶基、哌嗪基或嗎啉基環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之哌啶基環。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成未經取代之哌啶基環。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成鹵素取代之哌啶基環。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成4-鹵素取代之哌啶基環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成未經取代之嗎啉基環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成未經取代之吡咯啶基環。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36及R37連同其附接之氮原子一起形成經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為經取代或未經取代之C6-10芳基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之C6-10芳基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之苯基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R36為未經取代之苯甲基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R37為氫。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R37為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R37為未經取代之C1-6烷基。
在式(X”)化合物之某些實施例中，R38為未經取代之C1-6烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R38為未經取代之C1-3烷基。在式(X”)化合物之某些實施例中，R38為甲基。
在一個實施例中，式(X”)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,669,281 B1號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利第8,669,281 B1號中所揭示之前藥，諸如式(XI)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R39為未經取代之C1-6烷基；R40及R41各獨立地為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基、經取代或未經取代之C6-10芳基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或 經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；R42、R43、R44及R45各獨立地為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基或C(O)ORb；且Rb為H或經取代或未經取代之C1-C6烷基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R39為甲基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R39為乙基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之C1-6烷基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之C1-3烷基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之C1-2烷基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為C(O)ORb取代之C1-6烷基，其中Rb為氫或未經取代之C1-6烷基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為S(O)(O)Rb取代之C1-6烷基，其中Rb為未經取代之C1-6烷基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為經取代或未經取代之C6-10芳基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之C6-10芳基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之苯基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R40為未經取代之苯甲基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R41為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R41為經取代或未經取代之C1-6烷基。在式(XI)化合物之某些實施例中，R41為未經取代之C1-6烷基。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R42、R43、R44及R45各為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R42為經取代或未經取代之C1-6烷基且R43、R44及R45各為氫。在式(XI)化合物之某些實施例中，R42為未經取代之C1-6烷基且R43、R44及R45各為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R44為經取代或未經取代之C1-6烷基且R42、R43及R45各為氫。在式(XI)化合物之某些實施例中，R44為未經取代之C1-6烷基且R42、R43及R45各為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R42及R44各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R43及R45各為氫。在式(XI)化合物之某些實施例中，R42及R44各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R43及R45各為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R42及R43各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R44及R45各為氫。在式(XI)化合物之某些實施例中，R42及R43各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R44及R45各為氫。
在式(XI)化合物之某些實施例中，R44及R45各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R42及R43各為氫。在式(XI)化合物之某些實施例中，R44及R45各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R42及R43各為氫。
在一個實施例中，式(XI)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,669,281 B1號中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為美國專利第8,669,281 B1號中所揭示之前藥，諸如式(XII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R46為未經取代之C1-6烷基； 為、、或； X為N、O、S或SO2；Z為C或N；t為0、1、2或3； y為1或2；w為0、1、2或3；v為0、1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；R47、R48、R49及R50各獨立地為氫、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基或C(O)OR52；且R52為氫或經取代或未經取代之C1-6烷基；且各R51獨立地為氫、鹵素、經取代或未經取代之C1-6烷基、經取代或未經取代之C2-6烯基、經取代或未經取代之C2-6炔基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；或者，兩個附接於相同碳原子之R51連同其附接之碳原子一起形成羰基、經取代或未經取代之C3-10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基；或者，兩個附接於不同原子之R51連同其附接之原子一起形成經取代或未經取代之C3-C10碳環、經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜環或經取代或未經取代之包含一或兩個5或6員環及1-4個選自N、O及S之雜原子的雜芳基。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R46為甲基。在式(XII)化合物之某些實施例中，R46為乙基。
在式(XII)化合物之某些實施例中，為。
在式(XII)化合物之某些實施例中， 為。
在式(XII)化合物之某些實施例中，為。
在式(XII)化合物之某些實施例中，為。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R47為經取代或未經取代之C1-6烷基且R48、R49及R50各為氫。在式(XII)化合物之某些實施例中，R47為未經取代之C1-6烷基且R48、R49及R50各為氫。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R49為經取代或未經取代之C1-6烷基且R47、R48及R50各為氫。在式(XII)化合物之某些實施例中，R49為未經取代之C1-6烷基且R47、R48及R50各為氫。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R47及R49各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R48及R49各為氫。在式(XII)化合物之某些實施例中，R47及R49各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R48及R50各為氫。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R47及R48各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R49及R50各為氫。在式(XII)化合物之某些實施例中，R47及R48各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R49及R50各為氫。
在式(XII)化合物之某些實施例中，R49及R50各獨立地為經取代或未經取代之C1-6烷基且R47及R48各為氫。在式(XII)化合物之某些實施例中，R49及R50各獨立地為未經取代之C1-6烷基且R47及R48各為氫。
在一個實施例中，式(XII)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利第8,669,281 B1號中所揭示製備。
在式(X)、(X’)、(X”)、(XI)或(XII)化合物之某些實施例中，化 合物為：
在化合物(XII)之某些實施例中，化合物為
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中所揭示之前藥，諸如式(XIII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中L為具有1至6個碳原子之烷二基；A為SO、SO2或NR53，且R53為C1-6烷基或C3-6環烷基。
在式(XIII)化合物之某些實施例中，L為具有2、3或4個碳原子或具有2或4個碳原子或具有2個碳原子之烷二基。在式(XIII)化合物之某些實施例中，L為-CH2CH2-。在式(XIII)化合物之某些實施例中，A為SO或SO2。在式(XIII)化合物之某些實施例中，R53為甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、第三丁基、戊基、第二戊基或己基。在式(XIII)化合物之某些實施例中，R53為環丙基、環丁基、環戊基及環己基。在式(XIII)化合物之某些實施例中，R53為C1-4烷基、C3或C4或C5環烷基。在式(XIII)化合物之某些實施例中，R53為甲基或異丙基。
在一個實施例中，式(XIII)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中所揭示之前藥，諸如式(XIV)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，式(XIV)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中所揭示之前藥，諸如式(XV)化合物：
在一個實施例中，式(XV)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中 所揭示之前藥，諸如式(XVI)化合物：
或其立體異構體，其中R54及R55各獨立地為氫、C1-6烷基或C3-6環烷基；R56及R57各獨立地為氫或C1-6烷基；且c及d各獨立地為0至3之整數。
在式(XVI)化合物之某些實施例中，R54及R55各獨立地為氫、甲基或乙基。在式(XVI)化合物之某些實施例中，R54及R55各獨立地為氫或甲基。在式(XVI)化合物之某些實施例中，R54及R55均為氫；或R54為氫且R55為甲基。在式(XVI)化合物之某些實施例中，c及d各獨立地為0或1。在式(XVI)化合物之某些實施例中，c及d均為0。在式(XVI)化合物之某些實施例中，R56及R57各獨立地為C1-5烷基或C1-4烷基。在式(XVI)化合物之某些實施例中，R56及R57為第三丁基。在式(XVI)化合物之某些實施例中，R56及R57相同。
在一個實施例中，式(XVI)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中所揭示之前藥，諸如式(XVII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R58、R59、R61及R62各獨立地為氫、C1-6烷基或C3-6環烷基；R60為氫、C3-6環烷基或C1-6烷基，其中該C1-6烷基視情況經以下 中之一者或多者取代：胺基、NH-C(NH)NH2、羧醯胺、甲酸、羥基、咪唑、吲哚、巰基、甲基硫基、苯基、羥基苯基，且其中R61及R62中一者連同R60一起視情況屬於5或6員雜脂族環；且f及g各獨立地為0至3之整數，其限制條件為f與g不為0。
在式(XVII)化合物之某些實施例中，R61及R62各獨立地為氫或C1-2烷基。在式(XVII)化合物之某些實施例中，R61及R62為氫。在式(XVII)化合物之某些實施例中，R61為氫且R62為甲基。在式(XVII)化合物之某些實施例中，f及g中至少一者為0。在式(XVII)化合物之某些實施例中，g為0。
在式(XVII)化合物之某些實施例中，R60為經取代之C1-6烷基，其中取代基為以下中一者或多者：鹵素、硝基、腈、脲、苯基、醛、硫酸酯基、胺基、NH-C(NH)NH2、羧醯胺、甲酸、羥基、咪唑、吲哚、巰基、甲基硫基、苯基及羥基苯基。在特定實施例中，取代基為以下中一者或多者：胺基、NH-C(NH)NH2、羧醯胺、甲酸、羥基、咪唑、吲哚、巰基、甲基硫基、苯基及羥基苯基。在式(XVII)化合物之某些實施例中，R60為-CH2-C6H5。在式(XVII)化合物之某些實施例中，化合物為式XVII’化合物：
在一個實施例中，式(XVII)或(XVII’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在一個實施例中，反丁烯二酸單烷酯之前藥為WO2014/096425中所揭示之前藥，諸如式(XVIII)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中R63為氫、C1-6烷基、C3-6環烷基、C2-6烯基、鹵素、氰基、羥基、胺基、羧基、巰基、5或6員芳基或雜芳基，視情況經以下一者或多者取代：甲基、第三丁基、羥基、甲氧基、鹵素、硝基、腈、胺及羧醯胺。
在式(XVIII)化合物之某些實施例中，R63為氫、C1-2烷基、鹵素、氰基、胺基或羥基。在式(XVIII)化合物之某些實施例中，R63為氫、羥基或甲基。在式(XVIII)化合物之某些實施例中，R63為甲基。
在一個實施例中，式(XVIII)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如WO2014/096425中所揭示製備。
在式(XIII)、(XVI)、(XVII)或(XVIII)化合物之某些實施例中，化合物為：
5.1.3 氘化反丁烯二酸酯
在一個實施例中，氘化反丁烯二酸酯為美國專利申請公開案第US 2014-0179779 A1號中揭示之化合物，諸如式(XIX)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中R64及R67各獨立地為氫、氘、氘化甲基、氘化乙基、C1-6烷基、苯基、3-7員飽和或部分不飽和單環碳環、具有1-3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的3-7員飽和或部分不飽和單環雜環或具有1-3個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子的5-6員雜芳基環；且R65及R66各獨立地為氫或氘，其限制條件為式(XIX)化合物含有至少一個氘原子且R64及R67不同時為氫或氘。
詳言之，反丁烯二酸酯同位素體為美國專利申請公開案第US 2014-0179779 A1號中揭示之化合物，諸如式(XIX’)化合物：
或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體，其中R64及R67各獨立地為氫、氘、氘化甲基、氘化乙基或C1-6脂族基，且R65及R66各獨立地為氫或氘，其限制條件為式(XIX’)化合物含有至少一個氘原子且R64及R67不同時為氫或氘。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為氫或-CH3。在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為-CD3。在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為-CD2CD3。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R67為-CH2D、-CHD2或-CD3。在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R67為H、-CH3、-CH2D、-CHD2或-CD3。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為氫或-CH3且R67為-CH2D、-CHD2或-CD3。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為-CD3且R67為-CH2D、-CHD2或-CD3。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R65及R66中至少一者為氘。在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R65及R66均為氘。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R65及R66中至少一者為氘且R67為氫、-CH3、-CH2D、-CHD2或-CD3。在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R65及R66均為氘且R67為氫、-CH3、-CH2D、-CHD2或-CD3。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，R64為-CD2CD3且R67為H、-CH3、-CH2D、-CHD2或-CD3
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，化合物為反丁烯二酸(2H6)二甲酯、反丁烯二酸(2H3)甲酯、反丁烯二酸(2H3)二甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)二甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)乙酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)(2H3)甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)(2H6)二甲酯、(2-嗎啉基-2-側氧基乙基)反丁烯二酸(2,3-2H2)甲酯、(4-嗎啉基-1-丁基)反丁烯二酸(2,3-2H2)甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)2-(苯甲醯氧基)乙酯甲酯、反丁烯二酸2-(苯甲醯氧基)乙酯(2H3)甲酯、反丁烯二酸(2,3-2H2)(S)-2-((2-胺基-3-苯基丙醯基)氧基)乙酯甲酯或反丁烯二酸(S)-2-((2-胺基-3-苯基丙醯基)氧基)乙酯(2H3)甲酯；或其醫藥學上可接受之鹽或立體異構體。
在式(XIX)或式(XIX’)化合物之某些實施例中，化合物為： ；或 ；或其醫藥學上可接受之鹽或 立體異構體。
在一個實施例中，式(XIX)及(XIX’)化合物可使用本領域技術人員已知之方法，例如如美國專利申請公開案第US 2014-0179779 A1號中所揭示製備。
氘化反丁烯二酸酯適用作活性劑用於本文中提供的方法，例如治療神經疾病或治療與神經疾病相關之損傷。
在一個實施例中，當反丁烯二酸酯中特定位置稱為具有氘時，應瞭解該位置上氘之豐度實質上超過為0.015%之氘天然豐度。稱為具有氘之位置通常在該化合物中稱為氘之各原子具有至少3340(50.1%氘併入)之最小氘富集係數。
在其他實施例中，本文中提供之反丁烯二酸酯的每一指定氘原子之同位素富集係數為至少3500(各指定氘原子上52.5%氘併入)、至少4000(60%氘併入)、至少4500(67.5%氘併入)、至少5000(75%氘併入)、至少5500(82.5%氘併入)、至少6000(90%氘併入)、至少6333.3(95%氘併入)、至少6466.7(97%氘併入)、至少6600(99%氘併入)或至少6633.3(99.5%氘併入)。
5.1.4 鹽
在特定態樣中，在上文描述之反丁烯二酸酯的無毒醫藥學上可接受之鹽(其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式或上述任一者之互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合)包括在本文中描述之反丁烯二酸酯的範疇內。酸加成鹽藉由將反丁烯二酸酯之溶液與醫藥學上可接受之無毒酸的溶液混合來形成，諸如：鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異菸鹼酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫 鹽、抗壞血酸鹽、丁二酸鹽、順丁烯二酸鹽、龍膽酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、麩胺酸鹽、甲烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽及雙羥萘酸鹽。可接受之鹼鹽包括鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅及二乙醇胺鹽。
5.2 根據本文中提供之方法治療的神經疾病及損傷
本文提供治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
本文中提供治療神經疾病，例如與神經疾病相關之損傷的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。在一個實施例中，神經疾病為可藉由上調Nrf2/ARE路徑治療之疾病。在一個特定實施例中，神經疾病為中風。在一個特定實施例中，神經疾病為肌萎縮性側索硬化。在一個特定實施例中，神經疾病為亨廷頓氏病。在一個特定實施例中，神經疾病為阿茲海默氏病。在一個特定實施例中，神經疾病為帕金森氏病。在一個特定實施例中，神經疾病為多發性硬化。
在一個實施例中，神經疾病為涉及白質之疾病。在另一個實施例中，神經疾病為涉及脫髓鞘之疾病。在一個特定實施例中，神經疾病不為多發性硬化。
在特定實施例中，術語「治療(treating/treatment)」可包括疾病或病症之一種或多種症狀或損傷好轉、改善、治癒或減輕、維持其緩解或抑制其進展。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文 揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療疾病，例如與疾病相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療神經疾病。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在一個實施例中，活體內轉變產物為例如結合於第二化合物之反丁烯二酸酯，其中第二化合物為例如麩胱甘肽、半胱胺酸或蛋白質。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與神經疾病相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與神經疾病相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過1天、2天、5天、1週、2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與神經疾病相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與神經疾病相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估神經疾病之治療，例如與神經疾病相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由神經疾病減弱之功能，或消除與神經疾病相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與神經疾病相關之損傷進展或抑制其發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與神經疾病相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
5.2.1 中風
本文中提供治療中風，例如一種或多種與中風相關之損傷的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療中風，例如 與中風相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療中風。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與中風相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與中風相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過1天、2天、5天、1週、2週、1個月、1年或2年。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯在自中風發生起至少1小時、3小時、5小時、12小時、1天、2天、5天、1週、2週或1個月內投與患者。
在特定實施例中，與中風相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與中風相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1 個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估中風之治療，例如與中風相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由中風減弱之功能，或消除與中風相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與中風相關之損傷進展或抑制其發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與中風相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
在特定實施例中，本文中提供治療中風以使與中風相關之損傷好轉的方法，其中該損傷為感覺運動損傷、上肢痙攣、行走損傷、整個身體控制損傷、本體感受、反射損傷、敏捷度損傷、四肢麻痹、抗疲勞度損傷、手強度損傷、手工技巧損傷、精細手協調損失、反射亢進、肌肉無力、肌張力損傷、步態損傷、運動範圍損傷、言語損傷、共濟失調、虛弱或疲勞、顫振、四肢功能及活動性損傷、協調或平衡損傷、咀嚼或吞嚥損傷、視覺功能損傷、手功能損傷、面神經麻痹或上肢及下肢運動機能損傷。
以下揭示用於評估中風相關之損傷的方法論述於Compendium of Instructions for Outcome Measure,StrokEDGE Taskforce(2011),American Physical Therapy Association,Neurology Section。
5.2.1.1. 視覺功能損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為視覺功能損傷。在一特定實施例中，視覺功能損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之視覺功能損傷可藉由對比靈敏度測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.2. 面神經麻痹
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為面神經麻痹。在一特定實施例中，面神經麻痹可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.3. 本體感受
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為本體感受。在一特定實施例中，本體感受可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.4. 全身控制損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為全身控制損傷。在一特定實施例中，全身控制損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之全身控制損傷可藉由功能獨立性量測(FIMTM)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，與中風相關之全身控制損傷的好轉藉由執行FIMTM評估，FIMTM含有13個運動任務及5個認知任務，以7點次序量表在總體協助(或完全依賴)至完全獨立之範圍內評級。
5.2.1.5. 協調或平衡損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為協調或平衡損傷。在一特定實施例中，協調或平衡損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之平衡損傷可藉由伯格式平衡量表(Berg Balance Scale)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.6. 步態損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為步態損傷。在一特定實施例中，步態損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之步態損傷可經由定時10公尺步行測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，與中風相關之步態損傷的好轉藉由使個體在無幫助下行走10公尺(32.8呎)且量測患者行走中間6公尺(19.7呎)所花費之時間來評估。當患者到達2公尺時開始計時，且當患者腳趾到達8公尺時停止，以考慮到加速及減速。評分以每秒所走之公尺數來表示。10公尺行走計時提供步態速度之快照，認為其為精密量測患者步行能力的科學可靠且有效之測試。
5.2.1.7. 抗疲勞度損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為抗疲勞度損傷。在一特定實施例中，抗疲勞度損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之抗疲勞度損傷可藉由6分鐘行走測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施 例中，與中風相關之抗疲勞度損傷之好轉藉由比較在治療前後六分鐘內行走之距離來評估。
5.2.1.8. 共濟失調
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為共濟失調。在一特定實施例中，共濟失調可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之共濟失調可藉由手指至鼻測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在另一個實施例中，人類患者中與中風相關之共濟失調可藉由足跟至脛部測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.9. 行走損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為行走損傷。在一特定實施例中，行走損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之行走損傷可藉由定時25呎行走評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之行走損傷的好轉藉由量測患者完成25呎行走所花費之時間評估。定時25呎行走為一種熟知之用於評估行走損傷之方法。其由以下構成：將患者引導至清楚標記25呎路程之一端，及要求患者儘可能快但安全地行走25呎。時間由命令開始計算以至開始至患者到達25呎標記時。藉由使患者走回相同距離，立刻再次執行任務。測試評分為2次完整試驗之平均值。
5.2.1.10. 敏捷度損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為敏捷度損傷。在一特定實施例中，敏捷度損傷可使用本領域中 已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.11. 手功能損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為手功能損傷。在一特定實施例中，手功能損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之手功能損傷可藉由傑森-泰勒手功能測試(Jebsen-Taylor Hand Function test)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之手功能損傷的好轉藉由比較治療前後完成傑森-泰勒測試之七項任務每一者之時間來評估。
傑森-泰勒手功能測試為具有穩定手損傷之成年人中單側手功能之常用測試。測試量測個體開始完成以下任務每一項之時間量：(1)寫(拷貝)24字句子；(2)翻倒3”×5”卡片(類比翻頁)；(3)撿起小的常見目標(例如紙夾、瓶蓋及硬幣)；(4)使用茶匙及五種菜豆模擬吃東西；(5)堆疊方格；(6)撿起大的輕目標(例如空錫罐)；及(7)撿起大的重目標(重達1磅之滿錫罐)。首先測試非優勢手；然後測試優勢手。
5.2.1.12. 反射損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為反射損傷。在一特定實施例中，反射損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.13. 手強度損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為手強度損傷。在一特定實施例中，手強度損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之手強度損傷可藉由夾緊測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與 中風相關之手強度損傷之好轉藉由比較在治療前後使用測力計來評估。夾緊測試為鑑別手強度且偵測可能由治療過程引起之改變的一種簡單、有效且可靠的量度。每只手上之手強度使用測力計量測。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之手強度損傷可藉由捏夾測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之手強度損傷之好轉藉由比較治療前後捏夾強度來評估。捏夾測試為鑑別手強度且偵測可能由治療過程引起之改變的一種簡單、有效且可靠的量度。每只手上之手強度使用測力計量測。測試包含三個組分：指尖、鍵及手掌捏夾。捏夾強度使用捏夾計量測。
5.2.1.14. 反射亢進
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為反射亢進。在一特定實施例中，反射亢進可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.15. 手工技巧損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為手工技巧損傷。在一特定實施例中，手工技巧損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之手工技巧損傷可藉由箱子與木塊測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之手工技巧損傷的好轉藉由比較比較治療前後在一分鐘內一次一個，自隔板一邊移動至另一邊之木塊的數目來評估。箱子與木塊測試為手工技巧之標準測試。其量測個體在一分鐘內，可跨越盒子中間的隔板，自盒子一邊移動至另一邊的木塊數。命令個體每次僅僅移動一個木塊。
5.2.1.16. 精細手協調喪失
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之 損傷為精細手協調喪失。在一特定實施例中，精細手協調喪失可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.17. 肌張力損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為肌張力損傷。在一特定實施例中，肌張力損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.18. 關節活動範圍損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為關節活動範圍損傷。在一特定實施例中，關節活動範圍損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.19. 虛弱或疲勞
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為虛弱或疲勞。在一特定實施例中，虛弱或疲勞可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.20. 肌肉無力
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為肌肉無力。在一特定實施例中，肌肉無力可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之肌肉無力可藉由5次坐立測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之肌力的好轉藉由比較治療前後完成5次坐立測試所花費之時間來評估。5次坐立測試提供功能下肢肌力之量測。患者雙臂於胸前交叉且背靠著椅子坐下。命令患者儘可能快地立及坐五次，不接觸椅後背。
5.2.1.21. 上肢痙攣
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為上肢痙攣。在一特定實施例中，上肢痙攣可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之上肢痙攣可藉由殘疾評定量表評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之上肢痙攣可藉由經修改之阿什沃思量表(Ashworth Scale)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之上肢痙攣的好轉藉由比較治療前後，在四肢穿過其整套運動時檢查者察覺到之抗性或音調之量的主觀評級來評估。經修改之阿什沃思量表為通常用於量測痙攣之普遍方法。其量測在被動軟組織伸展期間之抗性。
5.2.1.22. 顫振
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為顫振。在一特定實施例中，顫振可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.23. 四肢功能及活動性之損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為四肢功能及活動性損傷。在一特定實施例中，四肢功能及活動性損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之四肢功能及活動性損傷可藉由沃爾夫(Wolf)功能運動測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之四肢功能及活動性損傷的好轉藉由在治療前後執行沃爾夫功能活動性測試來評估。沃爾夫運動機能測試經由定時及功能任務定量上肢運動能力。其由17項物品或任務 組成。任務按照複雜性次序排列其自關節連累近端至遠端進展。評估任務之執行時間及運動與功能品質。雖然各項任務定時，過度執行時間通常截短至120秒。執行時間評估之大略分數為在所有任務期間記錄之中值時間。
5.2.1.24. 四肢麻痹
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為四肢麻痹。在一特定實施例中，四肢麻痹可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.25. 言語損傷(例如構音不良、運用不能或發聲困難)
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為言語損傷。在一特定實施例中，言語損傷為構音不良、運用不能或發聲困難。在某些實施例中，言語損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.26. 咀嚼或吞嚥損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為咀嚼或吞嚥損傷。在一特定實施例中，咀嚼或吞嚥損傷為吞嚥困難。在一特定實施例中，咀嚼或吞嚥損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之咀嚼或吞嚥損傷可藉由使用對比物質之X射線，諸如鋇X射線評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之咀嚼或吞嚥損傷之好轉藉由在治療前後執行鋇X射線來評估。鋇X射線為此項技術中熟知之方法。患者吞嚥鋇液，鋇液塗佈食管，允許醫師看到食管形狀之變化且評估肌肉活動。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之吞嚥損傷可藉由動力學吞嚥研究評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例 中，與中風相關之咀嚼或吞嚥損傷之好轉藉由在治療前後動力學吞嚥研究來評估。動力學吞嚥研究為此項技術中公認之方法。患者吞嚥不同稠度之鋇塗佈之食物。此項測試提供此等食物穿過口腔及沿著咽喉行進時之影像。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之吞嚥損傷可藉由食道肌肉測試(測壓法)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一個實施例中，與中風相關之咀嚼或吞嚥損傷之好轉藉由在治療前後執行食道肌肉測試來評估。測壓法為此項技術中已知之方法。將小管插入患者食管中且連接至壓力記錄器以在患者吞嚥時量測食管之肌肉收縮。
5.2.1.27. 上肢及下肢運動機能損傷
在一個實施例中，與中風相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為上肢及下肢運動機能損傷。在一特定實施例中，上肢及下肢運動機能損傷可使用本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與中風相關之上肢及下肢運動機能損傷可藉由傅格-梅爾評估(Fugl-Meyer Assessment)評估來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
5.2.1.28. 量測感覺運動損傷之各種其他測試
在其他實施例中，本文中描述或本領域中已知的與中風相關之損傷，包括運動機能之損傷可使用(不限於)以下評估：2分鐘行走測試、六點步測試、下肢功能之肌力測試、下肢肌力測試(LEMMT)、阿什沃思評分、9孔釘測試、精細手指運動、上肢功能之快速交替指頭或感覺功能之功能系統評分。在特定實施例中，2分鐘行走測試可用於量測行走，LEMMT可用於量測下肢肌力，及/或經修改之阿什沃思量測可用於量測痙攣。GAITRiteTM技術(例如26呎GAITRiteTM)可用於量測步態，例如步長及速度。NeuroCom SMART Balance Mastel®可 用於量測步態及平衡參數，諸如步長。Step Watch®加速計可用於量測步態。其他已知之上肢功能評估包括(不限於)效能量表-自我報告量測、手持計力法及上肢指數(UEI)。可用於量測運動機能之其他評估測試包括(但不限於)：柯拉協調測試(Kela Coordination Test)、姿勢穩定性測試、肩拖測試、膝伸肌之最大等長收縮力、肌肉抗疲勞度測試、被動伸直腿舉起、TEMP A(老年人之上肢效能測試)、臂、肩及手之無能(DASH)調查表及手動能力量度-36(MAM-36)。此類評估可在根據本文揭示之方法投與反丁烯二酸酯至患者前後執行。
5.2.2 肌萎縮性側索硬化
本文中提供治療肌萎縮性側索硬化(「ALS」)或葛雷克氏症(Lou Gehrig's Disease)，例如與ALS相關之一種或多種損傷之方法，其包括靜脈內向有需要之患者投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療ALS，例如與ALS相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療ALS。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與ALS相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可 藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與ALS相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與ALS相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與ALS相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估ALS之治療，例如與ALS相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由ALS減弱之功能，或消除與ALS相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與ALS相關之損傷的進展或抑制與ALS相關之損傷發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與ALS相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者 中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
在特定實施例中，本文中提供治療ALS以使與ALS相關之損傷好轉的方法，其中該損傷為感覺運動損傷、上肢痙攣、行走損傷、整個身體控制損傷、本體感受、反射損傷、敏捷度損傷、四肢麻痹、抗疲勞度損傷、手強度損傷、手工技巧損傷、精細手協調損失、反射亢進、肌肉虛弱、肌張力損傷、步態損傷、運動範圍損傷、言語損傷、共濟失調、虛弱或疲勞、顫振、四肢功能或活動性損傷、協調或平衡損傷、咀嚼或吞嚥損傷、視覺功能損傷、手功能損傷、面神經麻痹或上肢或下肢運動機能損傷。
5.2.2.1. 下運動神經元功能損傷
在一個實施例中，與ALS相關且根據本文中描述之方法治療的損傷為下運動神經元功能損傷，諸如肌肉無力、肌肉廢棄及束化或肌顫搐。
5.2.2.2. 上運動神經元功能損傷
在另一個實施例中，與ALS相關且根據此處描述之方法治療的損傷為上運動神經元功能損傷，諸如下肢、臉或頜痙攣；嚴重行走損傷；任何受影響肢沉重、疲勞、僵硬或缺乏協調；諸如活潑或反射亢進之反射損傷。
5.2.2.3. 延髓ALS損傷
在另一個實施例中，與ALS相關且根據本文中描述之方法治療的損傷由腦幹中運動神經元退化(延髓ALS)引起，諸如高聲及清楚說話的能力損傷(構音不良)或完全不能發聲。其他延髓ALS損傷包括鼻發聲品質；由於發聲肌肉損傷而難以將詞語發音；及控制呼吸減少(Wijesekera等人，2009,Orphanet J Rare Dis.(2)4：3)。
在另一個實施例中，與ALS相關且根據本文中描述之方法治療的損傷為難以咀嚼及吞嚥(吞嚥困難)或在最低程度挑釁下突發笑聲或叫喊。
5.2.2.4. 脊椎ALS損傷
在另一個實施例中，當脊髓中之運動神經元受影響時引起與ALS相關且根據本文中描述之方法治療的損傷(脊椎ALS)。此類損傷可為當行走或奔跑時不靈活及絆倒(或最終不能行走或站立)；難以提起對象；手工技巧損傷；及不能執行日常生活之活動(Wijesekera等人，2009,Orphanet J Rare Dis.(2)4：3)。
5.2.2.5. 與ALS相關之損傷的測試
與ALS相關且根據本文中描述之方法治療的症狀及損傷可使用一種或多種下述或本領域中已知之以下方法評估。
TUFTS定量神經肌肉檢查(TQNE)
在一特定實施例中，人類患者中與ALS相關之肌力與功能損傷可藉由TUFTS定量神經肌肉檢查(TQNE)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
TQNE為量測ALS中強度與功能之標準化測試。該測試涉及使用應變式張力計量測臂中8個肌群之最大自動等長收縮(MVIC)。此量測為ALS中臨床試驗之標準(Ross等人，1996年5月，Neurology；46(5)：1442-4)。
ALS功能評級量表(ALSFRS)
在一特定實施例中，人類患者中與ALS相關之肌力與功能損傷可藉由ALS功能評級量表(ALSFRS)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。ALSFRS為用於確定患者各種功能活動之能力之評估的按序評級量表(Cedarbaum等人1999,J.Neurological Sciences 169：13-21)。
最大肺活量(FVC)
在一特定實施例中，人類患者中與ALS相關之呼吸損傷可藉由量測最大肺活量(FVC)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。
FVC為可進入肺中或自肺中出來之空氣總量的量度，該空氣總量藉由命令患者呼氣至肺活量計中來量測。FVC容易執行且為呼吸狀態之有意義指示物(Czaplinski等人，2006,Journal of Neurology,Neurosurgery,and Psychiatry 77.3：390-392)。
其他評估方法
在其他實施例中，本文中描述或本領域中已知的與ALS相關之損傷，包括運動機能之損傷可使用(不限於)以下評估：定時25呎行走測試、6分鐘步行測試、2分鐘行走測試、六點步測試、下肢功能之肌力測試、下肢肌力測試(LEMMT)、阿什沃思評分、經修改之阿什沃思量表、9孔釘測試、精細手指運動、上肢功能之快速交替指頭或感覺功能之功能系統評分。詳言之，定時25呎行走、6分鐘步行測試及/或2分鐘行走測試可用於量測行走，LEMMT可用於量測下肢肌力，及/或經修改之阿什沃思量表可用於量測痙攣。GAITRiteTM技術(例如26呎GAITRiteTM)可用於量測步態，例如步長及速度。NeuroCom SMART Balance Mastel®可用於量測步態及平衡參數，諸如步長。Step Watch®加速計可用於量測步態。其他已知之上肢功能評估包括(不限於)效能量表-自我報告量測、手持計力法及上肢指數(UEI)。可用於量測運動機能之其他評估測試包括(但不限於)：伯格式平衡測試(Berg Balance Test)、柯拉協調測試、姿勢穩定性測試、肩拖測試、膝伸肌之最大等長收縮力、肌肉抗疲勞度測試、被動伸直腿舉起、TEMP-A(老年人之上肢效能測試)、臂、肩及手之無能(DASH)調查表、定時上及走測試及手動能力量度-36(MAM-36)。此類評估可在根 據本文揭示之方法投與反丁烯二酸酯至患者前後執行。
5.2.3 亨廷頓氏病
本文中提供治療亨廷頓氏病，例如一種或多種與亨廷頓氏病相關之損傷的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療亨廷頓氏病，例如與亨廷頓氏病相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療亨廷頓氏病。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與亨廷頓氏病相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與亨廷頓氏病相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與亨廷頓氏病相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進 一步包括在投與步驟前及/或後評估與亨廷頓氏病相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估亨廷頓氏病之治療，例如與亨廷頓氏病相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由亨廷頓氏病減弱之功能，或消除與亨廷頓氏病相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與亨廷頓氏病相關之損傷進展或抑制其發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與亨廷頓氏病相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
在一個實施例中，亨廷頓氏病之嚴重程度或一種或多種與亨廷頓氏病相關之損傷的嚴重程度使用統一亨廷頓氏病評級量表(UHDRS)評估。UHDRS為藉由亨廷頓研究組(「HSG」)研發之一種方法，其提 供亨廷頓氏病之臨床特徵及過程之評估。UHDRS已用作控制臨床試驗中主要結果量度。UHDRS之組分為：
1. 運動評估
2. 認知評估
3. 行為評估
4. 獨立性量表
5. 功能評估
6. 總功能能力(TFC)
參見亨廷頓研究組(Kieburtz K，原著者)。統一亨廷頓氏病評級量表：Reliability and Consistency.Mov.Dis.1996；11：136-142。UHDRS之運動部分為以下運動疾病雜誌出版物之增刊：第11卷第1-33期，統一亨廷頓氏病評級量表：Reliability and Consistency.Mov.Dis.1996；11：136-142,Supplemental Tape。
在特定實施例中，本文中提供治療亨廷頓氏病以使與亨廷頓氏病相關之損傷好轉的方法，其中該損傷為運動損傷、認知損傷或精神損傷，或以下中描述之損傷：A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s disease Society of America(2011)。
5.2.3.1. 運動損傷
在一個實施例中，與亨廷頓氏病相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為運動損傷。在一個特定實施例中，運動損傷為出現不自主運動(舞蹈病)及/或自主運動損傷，其可引起以下一者或多者：手工技巧、手協調減少、語言不清、吞嚥困難、平衡問題及倒下。
在一個實施例中，運動損傷為以下中描述之損傷：A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s disease Society of America(2011)，第39- 50頁。
在一個實施例中，運動損傷為張力障礙，其特徵在於例如經常與纏繞品質相關之重複異常模式之肌肉收縮。在特定實施例中，張力障礙可包括例如以下一者或多者：張力障礙臂在行走時提升、軀體傾斜、夜間磨牙以及腳在行走時內收。
在一個實施例中，運動損傷為運動徐緩，此意味自動或自主運動減緩。在一個實施例中，運動徐緩可包括例如以下一者或多者：喪失臉的表達性、缺少臂搖擺、手指輕拍困難及快速交替運動及步態緩慢。
在一個實施例中，損傷運動為痙攣(模仿正常行為片段之突然、短暫、間歇的運動、手勢或發聲)、肌陣攣(突然、短暫、像震動之不自主運動)、顫振(靜止、作姿勢或自主運動下存在之有節奏之擺動)或僵硬(肌張力增加及被動關節活動範圍減少)。
在一個實施例中，運動損傷為喪失自主運動控制，諸如掃視眼運動開始及速度緩慢、手指及手工技巧困難、手指輕拍緩慢及手快速交替運動。
在一個實施例中，運動損傷為運動不持續，亦即不能維持自主運動收縮，如例如「擠奶女工之夾緊」或在駕駛時氣體踏板上壓力不均勻所證明。在一個特定實施例中，運動不持續可藉由評估持續最大眼瞼閉合或舌伸出來分析。
在一個實施例中，運動損傷為步態損傷。在一個特定實施例中，步態更慢且更寬。
在一個實施例中，運動損傷為構音不良(發聲模糊或緩慢)。在另一個實施例中，運動損傷為吞嚥困難(吞嚥有困難)。在另一個實施例中，運動損傷為膀胱及腸失禁。在某些實施例中，運動損傷由癲癇發作引起。
在一特定實施例中，行走損傷可使用下述或本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。
在一個實施例中，舞蹈病之嚴重程度使用統一亨廷頓氏病評級量表(UHDRS)評估。A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第40-41頁。UHDRS包括用於評估運動病症之子量表。舞蹈病以七個身體區域中之一者評級。總舞蹈病評分為各身體區域評分之和，且可在0-28範圍內。
5.2.3.2. 認知損傷
一個實施例中，與亨廷頓氏病相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為認知損傷。在一個特定實施例中，認知損傷為心理作用之速度及靈活性降低及認知喪失累積。
在一個實施例中，認知損傷為以下中描述之損傷：A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第51-62頁。
在一個實施例中，認知損傷為記憶損傷。由於例如處理速率較慢且組織資訊之能力減弱，患者難以學習新資訊且收回預先學習之資訊。
在一個實施例中，認知損傷為察覺資訊能力損傷。在某些實施例中，此損傷特徵為以下損傷中一者或多者：情緒識別(例如精確鑑別面部表情所傳遞之情緒的能力)、時間知覺(例如難以估計時間)、氣味鑑別(例如能夠偵測氣味，但鑑別氣味之能力減弱)、空間知覺(例如身體與牆壁拐角或桌子之關係的判斷減弱，導致意外或倒下)及無意識(例如自己動作及感覺，不能認識到自己的無能及行為)的損傷。
在一個實施例中，認知損傷為執行效率損傷。執行過程在亨廷頓氏病中普遍且顯著受影響。執行功能涉及調節腦中原始認知過程之基本能力。在某些實施例中，此等基本能力包括(但不限於)認知處理速度、注意力(例如同時做兩件事之能力)、計畫及組織(例如排序及優先化)、開始(例如起始或開始活動、會話或行為之能力)、固執(例如患者可堅持特定想法或動作)、脈衝控制(例如患者可經歷脈衝控制困難及問題行為，諸如煩躁不安、突發脾氣、不經過思考即行事及不當性行為)及影響認知之其他調節過程。
在一個實施例中，認知損傷為交流損傷，諸如清楚說話(發音)、開始會話(起始)及組織(例如什麼資訊進入且什麼資訊出去)。
在一特定實施例中，認知損傷可使用下述或本領域中已知之一種或多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。
在一個實施例中，認知損傷使用統一亨廷頓氏病評級量表(UHDRS)評估。A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第61-62頁。為量測認知，UHDRS使用三個任務：
1)符號數位模態測試：該項測試需要患者在90秒內儘可能快地匹配多的符號及數字。
2)斯特鲁色詞測試(Stroop Color Word test)：該項測試需要患者說出盒子顏色、閱讀詞語且說出詞語中墨水顏色。允許每個任務45秒且評分為準確朗讀之物品數目。
3)口述流暢測試：該項測試需要患者在60秒內大聲說許多詞語，自指定字母開始。
5.2.3.3. 精神損傷
在一個實施例中，與亨廷頓氏病相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為精神損傷。在一個特定實施例中，精神損傷為抑鬱症、狂躁、強迫症、精神病、額葉功能低下或執行障礙症候群。在一特定實施例中，額葉功能低下或執行障礙症候群特徵為以下一者或多者：冷漠、煩躁不安、衝動及強迫。症候群可對患者婚姻、社會及經濟安寧形成嚴重後果。
在一個實施例中，精神損傷為以下中描述之損傷：A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第63-82頁。
在一個實施例中，精神損傷為嚴重抑鬱症、狂躁、強迫症、妄想症或精神病症。在另一個實施例中，精神損傷為器質性人格症候群(例如行為及人格改變，其可包括冷漠、煩躁不安、抑制解除、固執、滑稽、強迫性及判斷減弱)，又名額葉症候群或執行障礙症候群。在又一個實施例中，精神病損傷為精神錯亂、激動或性功能障礙。
5.2.4 阿茲海默氏病
本文中提供治療阿茲海默氏病，例如一種或多種與阿茲海默氏病相關之損傷的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療阿茲海默氏病，例如與阿茲海默氏病相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯 二酸酯更有效治療阿茲海默氏病。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與阿茲海默氏病相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與阿茲海默氏病相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與阿茲海默氏病相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與阿茲海默氏病相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估阿茲海默氏病之治療，例如與阿茲海默氏病相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由阿茲海默氏病減弱之功能，或消除與阿茲海默氏病相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效 抑制與阿茲海默氏病相關之損傷進展或抑制其發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與阿茲海默氏病相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
在特定實施例中，本文中提供治療阿茲海默氏病以使與阿茲海默氏病相關之損傷好轉的方法。損傷可為認知損傷、功能能力損傷、行為變化、整個身體健康損傷、生活品質降低或下述或本領域中已知或在下述評估與阿茲海默氏病相關之損傷的方法中分析之與阿茲海默氏病相關之任何損傷。
5.2.4.1. 與阿茲海默氏病相關之損傷
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關且根據本文中描述之方法治療之損傷為認知損傷、功能能力損傷、行為變化、整個身體健康損傷或生活品質降低。在一些實施例中，認知損傷為記憶損傷或思維損傷。在一些實施例中，記憶損傷可為立即回憶、短時記憶或長期記憶中之記憶問題。在一些實施例中，思維損傷可為表達或理解語言、經由感覺鑑別熟悉物件損傷；協調、步態或肌肉功能差；或執行功能(例如計畫、排序或判斷)差。
在一特定實施例中，損傷可使用下述或本領域中已知之一種或 多種方法評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。Alzheimer’s Disease Fact Sheet,NIH出版編號11-6423,2011年7月及Understanding Alzheimer’s Disease：What you need to know,NIH出版編號11-5441,2011年6月。
在一個實施例中，以下中之一者或多者評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷：認知評估(諸如阿茲海默氏病評定量表、認知分部(ADAS-cog)、祝福資訊-記憶-集中測試(BIMC)、祝福取向記憶集中儀器、短暫精神狀態測試(STMS)、臨床癡呆評級量表(CDR)、微精神狀態檢查(MMSE))、功能評估(諸如功能活動調查表(FAQ)、日常生活儀器活動(IADL)、身體自我維持量表(PSMS)及漸進性退化量表(PDS))及整體評估(諸如改變之臨床整體印象(CGIC)、臨床基於會談之印象(CIBI)及整體退化量表(GDS))及基於照護者之評估(諸如阿茲海默氏病中行為病理學評級量表(BEHAVE-AD)及神經精神病調查表(NPI))。Robert P等人，Review of Alzheimer's disease scales：is there a need for a new multi-domain scale for therapy evaluation in medical practice？,Alzheimers Res.Ther.2010年8月26日；2(4)：24,Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50,及Boustani M等人，Screening for Dementia,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003。
在一個實施例中，藉由ADAS-Cog子量表測試評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。ADAS-Cog子量表可用於區別具有正常思考過程之人與思維減弱之人。其亦可評估個體中思考能力之下降程度。ADAS-Cog子量表可確定個體之思考過程遞增好轉或下降。ADAS-Cog子量表含有十一個區域，包括回憶單詞、說出物件及手指、遵循命令、結構(繪圖能力)練習、構思(思維過程)練 習、取向、字識別、回憶測試方向、口語、理解及治療前後發現詞語困難。在詞語回憶部分，給與個體三次自展示給其之一列十個單詞回憶儘可能多地單詞的機會。在說出物件及手指中，幾個實物展示給個體，諸如花、鉛筆及梳子，且個體被要求說出它們。接著個體被要求陳述手上每一手指之名稱，諸如小手指、拇指等。在遵循命令中，個體被要求遵循一系列有時多步但簡單之命令，諸如「握拳」及「將鉛筆放在卡片上」。在結構(繪畫能力)練習中，該項任務涉及給人展示四種不同形狀，逐步更困難，諸如重疊矩形，且要求他們每個人繪出。在構思(思維過程)練習中，測試執行人要求個體假裝個體已寫信給自己，將其摺疊，將其放在信封中，密封信封，在信封上寫地址且示範放郵票之位置。在取向中，個體之取向藉由詢問個體其姓與名為什麼、週幾、日期、月、年、季節、日時及位置量測。在單詞識別中，個體被要求閱讀且設法回憶一列十二個字。向個體呈現彼等單詞以及幾個其他單詞且詢問是否各單詞為其早先看到之單詞。在回憶測試命令中，評估個體在無提示或在極少數提示下記住命令的能力。在口語中，整個測試評估個體使用語言表達自己的意思的能力。在理解中，藉由測試執行人評估在測試過程中個體理解單詞及語言之能力。在發現單詞困難中，整個測試中，測試執行人評估個體在整個自發會話中發現單詞之能力。Doraiswamy PM等人，Memory,language,and praxis in Alzheimer's disease：norms for outpatient clinical trial populations,Psychopharmacol.Bull.1997；33(1)：123-8；What is the Alzheimer’s Disease Assessment Scale-Cognitive Subscale，在alzheimers.about.com。
在一個實施例中，藉由祝福資訊-記憶-集中測試(BIMC)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。祝福資訊記憶集中(BIMC)儀器主要評估取向、記憶及集中(計數正向及反向且 以顛倒次序說出年月)。計數誤差且可總計零至28。製造超過10個誤差表明認知損傷。Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50。
在一個實施例中，藉由祝福取向記憶集中儀器評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。祝福取向記憶集中儀器為BIMC之縮短型式，具有評估對時間之取向、回憶短的短語、反向計數及以顛倒次序敘述月份之六個問題。計算誤差之加權分數。如同BIMC一樣，製造超過10個誤差表明認知損傷。Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50。
在一個實施例中，藉由精神狀態短測試(STMS)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。精神狀態短測試(STMS)評估取向、注意力、回憶、計算、概括、時鐘繪圖及複製。STMS具有38之總評分。29或更低之評分表明認知功能減弱。Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50,Barclay L,Short Test of Mental Status Helpful in Diagnosing Dementia,Medscape Medical News,2003,medscape.com,Kokmen E等人，A Short Test of Mental Status：Description and Preliminary Results,Mayo Clin Proc,1987年4月；62(4)：281-8，及Tang-Wai DF等人，Comparison of the short test of mental status and the mini-mental state examination in mild cognitive impairment,Arch.Neurol.,2003年12月；60(12)：1777-81。
在一個實施例中，藉由臨床癡呆評級量表(CDR)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。CDR為用於表徵可應用於阿茲海默氏病及相關癡呆之認知及功能效能之六個領域的5 點量表：記憶、取向、判斷與問題解決、社會事務、住宅與嗜好及個人護理。進行各評級之必要資訊經由患者之半結構性採訪及可靠通知者或間接來源(例如家族成員)獲得。CDR表提供引導臨床醫師基於會談資料及臨床判斷進行適當評級之描述性錨。除各領域之評級之外，可經由使用演算法計算總CDR評分。此評分可用於表徵及追蹤患者損傷/癡呆程度：
0=正常
0.5=極輕癡呆
1=輕度癡呆
2=中度癡呆
3=嚴重癡呆
Berg L.Clinical Dementia Rating(CDR).Psychopharmacol.Bull.1988；24：637-639。
在一個實施例中，藉由簡易精神狀態檢查(MMSE)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。北美最常用之精神狀態檢查為簡易精神狀態檢查(MMSE)。MMSE量測認知功能之許多區域，包括記憶、對地方及時間之取向、說出、閱讀、複製(視覺空間取向)、書寫及遵循三步命令之能力。其可在5至10分鐘內執行且自0至30點評分。少於24點之評分表示認知損傷，不過測試可針對教育水準進行調整。在高度教育之個體中MMSE可更特定但更不敏感(亦即更多假陰性但更少假陽性)。Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50及Folstein等人，「Mini-Mental State」a Practical Method for Grading the Cognitive State of Patients for the Clinician.Journal of Psychiatric Research,12(3)；189-198。
在一個實施例中，藉由功能活動調查表查(FAQ)評估(在投與反丁 烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。功能活動調查表(FAQ)量測可由癡呆減弱之功能活動(例如購物、烹飪、付帳單之能力)。FAQ藉由知曉且觀測患者之家族成員或朋友回答。「通知者」被要求對患者在10項活動中之效能評級為依賴性、需要幫助或有困難但獨立做事之某人。評分在0至30範圍內，截止值為9(亦即，三項或更多項活動中依賴性)，表示損傷。此資訊可適用於臨床背景，但患者之認知功能仍然需要進行評估。Adelman及Daly,Initial evaluation of the patient with suspected dementia,Am.Fam.Physician.2005年5月1日；71(9)：1745-50。
在一個實施例中，藉由日常生活之儀器活動(IADL)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。日常生活之Lawton儀器活動(IADL)量表評估一個人執行人們在起床、穿衣、整理後所進行之活動的能力。此等活動包括(但不限於)烹飪、開車、使用電話或電腦、購物、掌握財政及管理藥物。量測八個領域，IADL可在10至15分鐘內執行。量表可提供功能下降之預警或發出需要進一步評估之信號。Wiener JM等人，Measuring the activities of daily living：comparisons across national surveys,J.Gerontol.1990年11月；45(6)：S229-37及Robert P等人，Review of Alzheimer's disease scales：is there a need for a new multi-domain scale for therapy evaluation in medical practice？,Alzheimers Res.Ther.2010年8月26日；2(4)：24。
在一個實施例中，藉由身體自動維持量表(PSMS)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。身體自動維持量表經研發以估計目前社區或機構中之年老者的勞動能力喪失以用於計畫及評估治療。量表中之項目特別以可觀察到之行為作為目標。首先PSMS格式為基於ADL之六個項目，接著為 基於IADL量表之八個項目。用於反應之5點量表在完全的獨立至完全依賴範圍內。推薦用於測試之年齡為60及超過60。存在儀器評級型式及自我執行型式。身體自動維持量表(PSMS)。原始觀測者評級型式；Psychopharmacol Bull.1988；24(4)：793-4；身體自動維持量表(PSMS)。自我評級型式。併入Philadelphia Geriatric Center.Multilevel Assessment Instrument(MAI).Psychopharmacol.Bull.1988；24(4)：795-7。
在一個實施例中，藉由漸進性退化量表(PDS)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。漸進性退化量表(PDS)含有27個生活品質因子且為自我執行之量表，用於護理者在11個區域中檢驗患者實現基本ADL及IADL之能力。各項目使用100mm雙極視覺類比量表評分，接著在0至100範圍內之總評分來源於各項目之平均值。DeJong R等人，Measurement of quality-of-life changes in patients with Alzheimer's disease.Clin Ther.1989；11：545-54。
在一個實施例中，藉由臨床整體印象(CGI)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。臨床整體印象評級量表為精神病患者之治療研究中症狀嚴重程度、治療反應及治療功效的常用量度。臨床整體印象嚴重程度量表(CGI-S)為7點量表，其需要臨床醫師在評估時，相對於臨床醫師過去關於具有相同診斷之患者的經驗對患者疾病之嚴重程度進行評級。考慮到全部臨床經驗，在評級時依據精神病嚴重程度評估患者：1，正常，無病；2，邊界精神疾病；3，輕度疾病；4，中度疾病；5，顯著疾病；6，嚴重疾病；或7，極度疾病。臨床整體印象-好轉量表(CGI-I)為7點量表，其需要臨床醫師評估患者疾病相對於介入開始時之基線狀況已經好轉或惡化多少，且評級為：1，好轉非常多；2，好轉許多；3，最低限度好轉；4，無變化；5，最低限度惡化；6，變壞許多；或7，變壞非常多。臨床整 體印象-功效指數為4點×4點評級量表，其評估治療之治療作用為：1，未改變只更壞；2，最低限度；3，中度；4，按副作用標記為無、不顯著干擾患者功能、顯著干擾患者功能及超過治療作用。Robert P等人，Review of Alzheimer's disease scales：is there a need for a new multi-domain scale for therapy evaluation in medical practice？,Alzheimers Res.Ther.2010年8月26日；2(4)：24。
在一個實施例中，藉由臨床基於會談之印象(CIBI)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。CIBI為半結構性採訪，部分基於改變儀器之ADCS整體印象。其鑑別四種主要類別用於評估：整體、精神/認知狀況、行為及日常生活之活動。此四種類別每一者再分成如下文表1中所示之領域。
各領域藉由使用探查手段評估。對於所有領域，提供一些提議探查手段。鼓勵面談者根據需要選擇其他探查手段，增強會談之廣泛性。Clinician Interview Based Impression of Severity,morethanmedication.com.au及Knopman DS,Knapp MJ,Gracon SI,Davis CS：The Clinician Interview-Based Impression(CIBI)：A clinician's global change rating scale in Alzheimer's disease,Neurology 1994,44：2315-2321。
在一個實施例中，藉由整體退化量表(GDS)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。整體退化量表(GDS)為護理者提供關於罹患諸如阿茲海默氏病之原發性退化性癡呆者的認知功能之階段的概述。其分為7個不同階段。階段1-3為癡呆前階段。階段4-7為癡呆階段。階段5開始，個體不再能在無幫助下生存。在GDS內，將各階段編號(1-7)，給與短名(亦即健忘、早期精神混亂等)，接著簡單列出彼階段之特徵。護理者可藉由觀測到個體之行為特徵且將該等特徵與GDS比較來大概瞭解個體處於疾病過程哪一段。The Global Deterioration Scale for Assessment of Primary Degenerative Dementia,www.fhca.org及Reisberg,B.等人，The global deterioration scale for assessment of primary degenerative dementia.American Journal of Psychiatry,1982,139：1136-1139。
在一個實施例中，藉由阿茲海默氏病中行為病理學評級量表(BEHAVE-AD)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。BEHAVE-AD為一種用於評估阿茲海默氏病患者之神經病學測試儀器，其提供非認知症狀之整體評級。其可用於校驗臨床藥物之功效。Robert P等人，Review of Alzheimer's disease scales：is there a need for a new multi-domain scale for therapy evaluation in medical practice？,Alzheimers Res.Ther.2010年8月26日；2(4)：24,Auer等人，The Empirical Behavioral Pathology in Alzheimer's Disease(E-BEHAVE-AD)Rating Scale,Int.Psychogeriatr.1996年夏；8(2)：247-66，及Reisberg等人，Behavioral pathology in Alzheimer's disease(BEHAVE-AD)rating scale,Int.Psychogeriatr.,1996；8增刊3：301-8；論述351-4。
在一個實施例中，藉由神經精神病調查表(NPI)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。神經精神病調查表 (NPI)評估癡呆患者中存在之10種行為障礙：錯覺、幻覺、煩躁不安、焦慮、激動/攻擊、陶醉、抑制解除、易怒/不穩定、冷漠及異常運動活動。NPI使用篩選策略將投與時間最小化、僅僅檢驗及評分對篩選問題具有陽性反應之彼等行為領域。確定各行為之頻率與嚴重程度。NPI上各項目依1至4點頻率量表及1至3點嚴重程度量表評分。接著嚴重程度評分乘以頻率評分，得到在10至120點範圍內之總評分。NPI資訊自熟悉患者行為之護理者處獲得。Cummings JL等人，The Neuropsychiatric Inventory：comprehensive assessment of psychopathology in dementia,Neurology.1994年12月；44(12)：2308-14及Eoustani M等人，Screening for Dementia,Appendix C.Detailed Description of Standard Scales Used,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003。
在一個實施例中，藉由阿茲海默氏病功能改變評估量表(ADFACS)評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。ADFACS為基於基本ADL及IADL之16項功能評估儀器。經過訓練之臨床醫師或研究助手直接自患者與護理者獲得資訊。基本ADL項目每一者依0(無損傷)至4(嚴重損傷)之量表評分且各IADL項目依在0(無損傷)至3(嚴重損傷)範圍內之量表評分。16項目量表之總分數在0至54範圍內。Boustani M等人，Screening for Dementia,Appendix C.Detailed Description of Standard Scales Used,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003。
在一個實施例中，藉由高-比-斯量表(Gottfries-Brane-Steen Scale，GBS)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。高-比-斯(GBS)量表為藉由臨床醫師，基於患者與護理者之半結構性採訪，評級癡呆症狀的27項目全面量表。GBS評估4個領域：智力損傷(取向、記憶、集中[12個項目])、自顧運動機能(6個項 目)、情緒反應(3個項目)及行為症狀(6個項目)。0至6之7點評分系統用於此量表之27個項目每一者，總評分範圍為0至162點，其中評分增加表示臨床惡化。BoustaniM等人，Screening for Dementia,Appendix C.Detailed Description of Standard Scales Used,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003,Gottfries CG等人，A new rating scale for dementia syndromes,Arch Gerontol Geriatr 1982,1：311-330，及Bråne G等人，The Gottfries-Bråne-Steen scale：validity,reliability and application in anti-dementia drug trials,Dement.Geriatr.Cogn.Disord.2001,12：1-14。
在一個實施例中，藉由癡呆中日常生活惡化之會談量表(IDDD)評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。此量表評估在社區中生活之患者的基本ADL(16個項目)及IADL(17個項目)中的功能喪失。護理者評估依7點量表在各項目中患者損傷之嚴重程度，其中1至2點表示表示無損傷或輕微損傷，3至4點表示輕度損傷，5至6點表示中度損傷，且7點表示嚴重損傷。總評分在33至231點範圍內。Boustani M等人，Screening for Dementia,Appendix C.Detailed Description of Standard Scales Used,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003,Katz S等人，Studies of illness in the aged.The Index of ADL：a standardized measure of biological and psychosocial function,JAMA 1963,185：914-919,Lawton MP及Brody EM：Assessment of older people：self-maintaining and instrumental activities of daily living,Gerontologist 1969,9：179-186，及Robert P等人，Review of Alzheimer's disease scales：is there a need for a new multi-domain scale for therapy evaluation in medical practice？,Alzheimers Res.Ther.2010年8月26日；2(4)：24。
在一個實施例中，藉由癡呆中資源利用問卷量表(RUD)評估(在 投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)與阿茲海默氏病相關之損傷。RUD量表藉由護理者及關於社會服務之使用、住院治療之頻率及持續時間、與保健專業人員之非預定接觸、護理者與患者使用相伴藥物、護理者護理患者及錯過工作所花費之時間量及患者對研究藥物之使用的編譯資料完成。Boustani M等人，Screening for Dementia,Appendix C.Detailed Description of Standard Scales Used,Systematic Evidence Reviews，第20期，2003。
在一個實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之功能能力損傷可使用功能評估來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之功能能力損傷可使用功能評估問卷(FAQ)來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之功能能力損傷可藉由儀器日常生活活動(IADL)測試來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之功能能力損傷可藉由身體自動維持量表(PSMS)測試來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之功能能力損傷可藉由漸進惡化量表(PDS)測試來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用認知評估來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之認知損傷可藉由阿茲海默氏病評定量表認知分部(ADAS-cog)來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之認知損傷可藉由祝福資訊-記憶-集中測試(BIMC)來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之認知損傷可藉由臨床癡呆評級量表(CDR)測試來評估(在投與反丁烯二酸 酯前及/或後)。在一些實施例中，人類患者中與阿茲海默氏病相關之認知損傷可藉由簡易精神狀態檢查(MMSE)測試來評估(在投與反丁烯二酸酯前及/或後)。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用阿茲海默氏病評估量表-認知(ADAS-Cog)子量表評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。阿茲海默氏病評估量表-認知(ADAS-Cog)子量表幫助評估思考過程且區分正常思考過程與減弱之思考過程。其尤其適用於確定思考過程之衰退程度且可基於回答及評分，幫助評估人處於癡呆哪個階段。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷的好轉藉由ADAS-Cog子量表評估。ADAS-Cog子量表評估十一個區域內之個體之認知能力及記憶，包括回憶單詞、說出物件及手指、遵循命令、結構(繪圖能力)練習、構思(思維過程)練習、取向、字識別、回憶測試方向、口語、理解及治療前後發現詞語困難。ADAS-Cog子量表之每個部分的點加起來，得到總評分。在思想上功能愈異常，評分愈大。Doraiswamy PM等人，Memory,language,and praxis in Alzheimer's disease：norms for outpatient clinical trial populations,Psychopharmacol.Bull.1997；33(1)：123-8；What is the Alzheimer’s Disease Assessment Scale-Cognitive Subscale，在alzheimers.about.com。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用認知能力篩選測試(CASI)評估或分析(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷的好轉藉由CASI評估。CASI提供關於注意力、集中、取向、短時記憶、長期記憶、語言能力、視覺構造、列清單之流暢性、概括及判斷的定量評 估。Teng EL等人，The Cognitive Abilities Screening Instrument (CASI)：a practical test for cross-cultural epidemiological studies of dementia,Int.Psychogeriatr.1994；6：45-58。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用簡易精神狀態檢查(MMSE)評估(在投與反丁烯二酸前及/或後)。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷的好轉藉由MMSE評估。MMSE為可用於系統且徹底評估精神狀態之工具。MMSE有效地作為將具有認知損傷之患者與無認知損傷之患者分開的篩選儀器。另外，當重複使用時，儀器能夠量測可得益於介入之認知狀態變化。MMSE為測試認知功能五個區域之11個問題量度：取向、定位、注意力及計算、回憶及語言。總評分在0至30範圍內，其中評分愈高表明認知狀態愈佳。在一些實施例中，評分23或更低表明認知損傷。Folstein等人，「Mini-Mental State」a Practical Method for Grading the Cognitive State of Patients for the Clinician.Journal of Psychiatric Research,12(3)；189-198。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用電腦化記憶組測試(CMBT)評估(在投與反丁烯二酸前及/或後)。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷的好轉藉由CMBT評估。電腦化記憶組測試(CMBT)包括幾個認知測試，諸如臉識別、第一次及最後一次姓名全部獲取及姓名-臉關聯延遲回憶子量表。其為記憶評估臨床組之電腦化型式，其模擬日常生活之關鍵認知任務。Sanches de OliveiraR等人，Use of computerized tests to assess the cognitive impact of interventions in the elderly,Dement Neuropsychol,2014年6月；8(2)：107-111及Seltzer B等人Efficacy of donepezil in early-stage Alzheimer disease：a randomized placebo-controlled trial,Arch Neurol.2004年12月；61(12)：1852-6。
在一個實施例中，與阿茲海默氏病相關之認知損傷可使用多套臨床癡呆評級量表總和(CDR-SOB)子評估(在投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前及/或後)。O’Bryant SE等人，Staging Dementia Using Clinical Dementia Rating Scale Sum of Boxes Scores,Arch.Neurol.,65(8)：1091-1095。
5.2.5 帕金森氏病
本文中提供治療帕金森氏病，例如一種或多種與帕金森氏病相關之損傷的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療帕金森氏病，例如與帕金森氏病相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療帕金森氏病。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與帕金森氏病相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與帕金森氏病相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與帕金森氏病相關之損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與帕金森氏病相關之損傷，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度。
在一個特定實施例中，根據本文中描述之方法，在至少2週、1個月、1年、2年之治療時期期間一個或多個時間點評估帕金森氏病之治療，例如與帕金森氏病相關之損傷的好轉。
在另一特定實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效恢復或重獲或改善由帕金森氏病減弱之功能，或消除與帕金森氏病相關之損傷。
在某些實施例中，藉由投與一定量反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與帕金森氏病相關之損傷進展或抑制其發展。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之方法，諸如下述方法評估，與未經治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與帕金森氏病相關之損傷好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。此等方法可包括分配給患者或一組患者執行特定任務之能力以數值的客觀及主觀量度。在一些實施例中，根據本文中提供之方法治療引起與對照值比較統計上顯著的與神經疾病相關之損傷的好轉。在一個實施例中，對照值可為在治療開始前執行特定任務之所評估患者或一組患者中損傷之基線值。在一個實施例中，對照值可為給與安慰劑之患者執行特定任務所評估的值。在某些實施例中，與神經疾病相 關之損傷好轉之統計顯著性藉由本領域中已知之方法確定。
在特定實施例中，本文中提供治療帕金森氏病以使與帕金森氏病相關之損傷好轉的方法，其中該損傷為靜止顫振、運動徐緩、僵硬、姿勢不穩定、步態僵硬、寫字過小、桿樣表述、不需要之加速、彎腰姿勢、有探身過去之傾向、張力障礙、精細運動靈巧性及運動協調減弱、整體運動協調減弱、運動缺乏(手臂搖擺減少、靜坐不能、講話問題(諸如嗓音模糊或由缺乏肌肉控制所引起之語言不清)、吞嚥困難、性別功能異常、抽筋、流口水、嗅覺損失、便秘、REM行為失常(失眠)、情緒病症、立位低血壓(起立時低血壓)、睡眠障礙、便秘、膀胱問題、性問題、過度唾液、重量減輕或增加、視力或牙齒問題、疲勞或能量損失、抑鬱症、恐懼或焦慮、皮膚問題、認知問題諸如記憶困難、思想緩慢、意識模糊、癡呆或本領域中已知或下文所述與帕金森氏病相關之任何其他損傷。
5.2.5.1. 與帕金森氏病相關之損傷
本文揭示之方法提供患有帕金森氏病之患者之治療。詳言之，方法提供治療患有帕金森氏病之患者中一種或多種與帕金森氏病相關之損傷。帕金森氏病損傷包括運動症狀及非運動症狀。帕金森氏病運動症狀可分成原發性運動症狀及繼發性運動症狀。在一些實施例中，本文揭示之方法提供與帕金森氏病相關之原發性運動症狀的治療。在特定實施例中，原發性運動症狀可為靜止顫振、運動徐緩、僵硬或姿勢不穩定。在一些實施例中，本文揭示之方法提供與帕金森氏病相關之繼發性運動症狀的治療。在特定實施例中，繼發性運動症狀可為步態僵硬、寫字過小、桿樣表述或不需要之加速。在一些實施例中，繼發性運動症狀為彎腰姿勢、有探身過去之傾向、張力障礙、精細運動靈巧性及運動協調減弱、整體運動協調減弱、運動缺乏(手臂搖擺減少、靜坐不能、講話問題(諸如嗓音模糊或由缺乏肌肉控制所引起之 語言不清)、吞嚥困難、性功能異常、抽筋或流口水。在一些實施例中，本文揭示之方法提供與帕金森氏病相關之非運動症狀的治療。在一些實施例中，非運動為嗅覺喪失、便秘、REM行為病症(睡眠病症)、情緒病症、立位低血壓(起立時低血壓)、睡眠障礙、便秘、膀胱問題、性問題、過度唾液、重量減輕或增加、視力或牙齒問題、疲勞或能量損失、抑鬱症、恐懼或焦慮、皮膚問題、認知問題諸如記憶困難、思想緩慢、意識模糊或癡呆。在一些實施例中，與帕金森氏病相關之損傷為非運動損傷、顫振、運動徐緩(運動緩慢)僵硬、姿勢不穩定、平衡減弱、步態障礙(諸如步態僵硬)、講話損傷、吞嚥損傷、嗓音病症或行走快速打亂。與帕金森氏病相關之損傷可為下述或本領域中已知之任一者。
在一些實施例中，損傷可使用以下任一者評估：用於威爾遜氏病(Wilson's Disease)之整體評估量表、整體張力障礙量表、經修改之運動徐緩評級量表、非運動症狀量表(NMSS)+(包括NMSQ)、生活品質基本顫振問卷、精神性運動障礙之評級量表、急速運動障礙評級量表、基於急速視訊之痙攣評級量表、UFMG西登哈姆氏舞蹈病評級量表(USCRS)、統一運動障礙評級量表(UDysRS)、統一張力障礙評級量表(UDRS)、統一多系統萎縮症評級量表(UMSARS)、統一帕金森氏病評級量表(MDS-UPDRS)、3D步態分析、計時起走測試(TUG)、定時25呎行走測試(T25FW)及/或步態僵硬問卷(FOGQ)。Naismith SL及Lewis SJ,「DASH」symptoms in patients with Parkinson's disease：red flags for early cognitive decline,J Clin Neurosci.2011年3月；18(3)：352-5,MorrisM等人，Three-dimensional gait biomechanics in Parkinson's disease：evidence for a centrally mediated amplitude regulation disorder,Mov Disord.2005年1月；20(1)：40-50,Bonnet AM等人，Nonmotor Symptoms in Parkinson’s Disease in 2012：Relevant Clinical Aspects,Parkinsons Dis.2012；2012：198316,Martinez-Martin P等人，Assessing the non-motor symptoms of Parkinson's disease：MDS-UPDRS and NMS Scale,Eur J Neurol.2013年4月22日，及MDS Rating Scales,movementdisorders.org。
在一些實施例中，損傷使用UPDRS評估。當前UPDRS包括四個子量表。子量表1覆蓋精神作用、行為及情緒。子量表2對日常生活活動評級。子量表3為PD運動表現形式之臨床評級。子量表4覆蓋療法併發症。子量表1、2及4之資料自患者及護理者得出，而子量表3之資料基於檢查。UPDRS子量表2及3存在訓練帶，且回顧此等可提高量度可靠性。然而，除檢查者技能外，其他子量表之可靠性視患者報告而定，但存在日常生活活動組分子量表2的訓練帶。總UPDRS評分及UPDRS子量表評分並非間隔量表，此意謂關於此等量表之值之間無定量、相等的距離。舉例而言，評分4超過2，但不一定指示嚴重程度之兩倍。各評級部分為等級次序量度，而非準確時間間隔改變。Perlmutter JS,Assessment of Parkinson disease manifestation,Curr Protoc Neurosci.2009年10月；第10章，Goetz CG,LeWitt PA,Weidenman M.Standardized training tools for the UPDRS activities of daily living scale：Newly available teaching program.Mov.Disord.2003；18：1455-1458,Louis ED,Lynch T,Marder K,Fahn S.Reliability of patient completion of the historical section of the Unified Parkinson’s Disease Rating Scale.Mov.Disord.1996；11：185-192,Goetz CG,Stebbins GT.Assuring interrater reliability for the UPDRS motor section：Utility of the UPDRS teaching tape.Mov.Disord.2004；19：1453-1456，及Goetz CG,Stebbins GT,Chmura TA,Fahn S,Klawans HL,Marsden CD.Teaching tape for the motor section of the unified Parkinson’s disease rating scale.Mov.Disord.1995；10：263-266。
在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的運動損傷或一般活動性損傷為行走損傷。行走損傷包括(但不限於)行走速度損傷、行走不必要之加速、大步時間可變性損傷及雙肢支撐可變性損傷。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的一般活動性損傷或行走損傷使用以下評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)：用於威爾遜氏病之整體評估量表、整體張力障礙量表、經修改之運動徐緩評級量表、非運動症狀量表(NMSS)+(包括NMSQ)、生活品質基本顫振問卷、精神性運動障礙之評級量表、急速運動障礙評級量表、基於急速視訊之痙攣評級量表、UFMG西登哈姆氏舞蹈病評級量表(USCRS)、統一運動障礙評級量表(UDysRS)、統一張力障礙評級量表(UDRS)、統一多系統萎縮症評級量表(UMSARS)、統一帕金森氏病評級量表(MDS-UPDRS)、3D步態分析、計時起走測試(TUG)、定時25呎行走測試(T25FW)及/或步態僵硬問卷(FOGQ)。
在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的運動損傷或一般活動性損傷為步態損傷。在某些實施例中，根據本文中描述之方法治療的損傷為PD患者中步態異常或行走步態異常。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的步態損傷使用以下評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)：用於威爾遜氏病之整體評估量表、整體張力障礙量表、經修改之運動徐緩評級量表、非運動症狀量表(NMSS)+(包括NMSQ)、生活品質基本顫振問卷、精神性運動障礙之評級量表、急速運動障礙評級量表、基於急速視訊之痙攣評級量表、UFMG西登哈姆氏舞蹈病評級量表(USCRS)、統一運動障礙評級量表(UDysRS)、統一張力障礙評級量表(UDRS)、統一多系統萎縮症評級量表(UMSARS)、統一帕金森氏病評級量表(MDS-UPDRS)、3D步態分析、計時起走測試(TUG)、定時25呎行走測試(T25FW)及/或步態僵硬問卷(FOGQ)。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之運動損傷為運動障礙、張力障礙及/或運動不穩定。一般而言，運動不穩定為與長期使用藥物，諸如左旋多巴相關之運動症狀的控制振盪或變化。在一個實施例中，根據本文中描述之方法治療之運動損傷為運動障礙及/或張力障礙。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的步態損傷(例如運動障礙、張力障礙或不穩定)使用以下評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)：用於威爾遜氏病之整體評估量表、整體張力障礙量表、經修改之運動徐緩評級量表、非運動症狀量表(NMSS)+(包括NMSQ)、生活品質基本顫振問卷、精神性運動障礙之評級量表、急速運動障礙評級量表、基於急速視訊之痙攣評級量表、UFMG西登哈姆氏舞蹈病評級量表(USCRS)、統一運動障礙評級量表(UDysRS)、統一張力障礙評級量表(UDRS)、統一多系統萎縮症評級量表(UMSARS)、統一帕金森氏病評級量表(MDS-UPDRS)、3D步態分析、計時起走測試(TUG)、定時25呎行走測試(T25FW)及/或步態僵硬問卷(FOGQ)。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之運動損傷為視力損傷(例如眼睛問題或視力困難)。在一些實施例中，視力相關之帕金森氏病的損傷包括(但不限於)複視、眼瞼不自主閉合、視覺-空間定向退化、幻覺及幻景、青光眼、眼睛過度流淚、疲倦眼睛及彩色視覺及對比靈敏度。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的視力損傷(例如眼睛問題或視力困難)使用PD視力問卷評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)。PD視力問卷包含三個部分：視覺及視覺空間症狀、視覺介導之日常生活活動的效能及運動症狀。Amick MM等人，Web-Based Assessment of Visual and Visuospatial Symptoms in Parkinson’s Disease,Parkin.sons Dis.2012；2012：564812。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之運動損傷為多動腿症候 群。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的運動損傷(例如多動症候群)使用以下評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)：IRLS評級量表(IRLS)、臨床整體印象(CGI)量表、患者整體印象(PGI)、睡眠問卷形式A、RLS之生活品質(QoL)、增加嚴重程度評級量表(ASRS)、視覺類比量表(VAS)及醫學結果研究睡眠量表(MOS)。IRLS由10個問題之RLS評估組成，格式為0至4，0為「從不」或「無」，且4為「非常嚴重」或「非常頻繁」。RLS之嚴重程度評級為：1-10輕度；11-20中度；21-30嚴重；及31-40非常嚴重。CGI具有3個部分：(1)疾病嚴重程度；(2)整體改善(CGII)或改變(CGIC)及(3)功效指數。大部分(若非全部)研究證實依據CGI-I(或-C)量表具有研究者評級之「改善許多」(2)或「改善很多」(1)之評分的患者比例(定義為依據此7點總整體改善量表之「反應」、1=改善很多及7=惡化很多之非疾病特異性結果量度)。Aurora RN等人，The Treatment of Restless Legs Syndrome and Periodic Limb Movement Disorder in Adults-An Update for 2012：Practice Parameters with an Evidence-Based Systematic Review and Meta-Analyses：an American Academyof Sleep Medicine Clinical Practice Guideline,Sleep,2012年8月1日；35(8)：1039-62。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之運動損傷為僵硬，例如步態僵硬。僵硬為暫時性、不自主地無法開始或持續運動，僅持續幾秒，或有時，幾分鐘。其突然發生，尤其在行走時，如同腳變成黏住地面且亦可影響講話、書寫或睜開及閉合眼睛。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的運動損傷(例如僵硬)使用統一帕金森氏病評級量表(MDS-UPDRS)、3D步態分析、定時25呎行走測試(T25FW)及/或步態僵硬問卷(FOGQ)評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之運動損傷為增加之倒下。患有帕金森氏之某些人發現其步態變得減弱，其可能步行緩慢，拖曳或遭遇僵硬。所有此等可損害平衡且倒下變得常見，隨著病狀進展而漸增。倒下通常在發作第一症狀後5至10年之間開始。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的運動損傷(例如倒下)使用平衡評估，包括Tinetti、伯格式平衡量表(BBS)、計時起走(TUG)、功能步態評估(FGA)及/或平衡評價系統測試(BESTest)評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)。Duncan RP等人，Accuracy of fall prediction in Parkinson disease：six-month and 12-month prospective analyses,Parkinsons Dis,2012；2012：237673。
在一些實施例中，與帕金森氏病相關之損傷為認知損傷。在一些實施例中，根據本文中描述之方法治療的認知損傷使用帕金森氏病-認知之結果的量表(SCOPA-COG)、簡易精神狀態檢查(MMSE)及/或劍橋認知檢查(CAMCOG)評估(投與反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽前或後)。SCOPA-COG由10個項目組成，最大評分為43，其中評分愈高，效能愈佳。Marinus J等人，Assessment of cognition in Parkinson's disease,Neurology.2003年11月11日；61(9)：1222-8。
5.2.6 多發性硬化
本文中提供治療多發性硬化的方法，其包括向有需要之患者靜脈內投與至少一種本文揭示之反丁烯二酸酯。在一特定實施例中，多發性硬化為多發性硬化之漸進形式。在一特定實施例中，多發性硬化之漸進形式為原發性漸進性多發性硬化(PP-MS)。在另一特定實施例中，多發性硬化之漸進形式為繼發性漸進性多發性硬化(SP-MS)。在另一特定實施例中，多發性硬化為多發性硬化之復發形式。在一特定實施例中，多發性硬化之復發形式為復發緩解性多發性硬化(RR-MS)。
在一個態樣中，向有需要之患者靜脈內投與治療有效量之本文揭示之反丁烯二酸酯。在另一特定實施例中，患者靜脈內投與反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物，量及時間足以治療多發性硬化，例如與多發性硬化相關之損傷。
在一個特定實施例中，患者為人類。
在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效治療多發性硬化。在某些實施例中，靜脈內投與反丁烯二酸酯比經口投與反丁烯二酸酯更有效地使反丁烯二酸酯或其體內轉變產物(例如分別為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯)到達腦；亦即，在靜脈內投與後，相對於經口投與，腦中量更大。在特定實施例中，反丁烯二酸酯經口與靜脈內投與。在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法的治療為患者中與多發性硬化相關之損傷好轉、減少其持續時間、維持其好轉或抑制其進展。此可藉由在至少或超過2週、1個月、1年或2年之時期內此項技術中已知且可用於評估與多發性硬化相關之損傷的一種或多種方法中讀數改良來證明。
在某些實施例中，至少一種反丁烯二酸酯重複投與患者，歷時至少或超過1週、2週、1個月、1年或2年。
在特定實施例中，與多發性硬化相關之損傷或多發性硬化之嚴重程度藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在其他特定實施例中，本文中描述之方法進一步包括在投與步驟前及/或後評估與多發性硬化相關之損傷或多發性硬化之嚴重程度，其中該損傷藉由本領域中已知之一種或多種方法評估。在一個實施例中，本文中描述之方法進一步包括在重複投與本文中描述之反丁烯二酸酯後評估該損傷之程度或嚴重程度。
在某些實施例中，藉由投與一定量的反丁烯二酸酯治療患者有效抑制與一種或多種與多發性硬化相關之損傷進展或抑制其發展。
在特定實施例中，本文中提供治療多發性硬化以達到以下終點中之一者或多者的方法：(a)個體中降低之復發頻率；(b)個體中降低之復發機率；(c)個體中降低之按年率計復發率；(d)降低個體中殘疾進展風險；(e)降低的個體中新或新擴大T2病變之數目；(f)降低的個體中新未增強T1過高強度病變之數目；或(g)個體中降低之Gd+病變數目；其中改變(a)-(g)係相對於接受安慰劑或未經治療之個體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯以治療有效量投與患者。在一個特定實施例中，如藉由本領域中已知之任何方法所評估，與未經治療或安慰劑治療之患者比較，投與治療有效量之反丁烯二酸酯使患者中與多發性硬化相關之終點好轉至少約5%、10%、20%、30%、40%或50%。
5.3 患者群體
本文提供治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。在一個實施例中，患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。在一個實施例中，患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
如本文所用，術語「患者」及「個體」可互換使用。如本文中描述之反丁烯二酸酯投與有需要之個體、患有神經疾病之個體。在一個特定實施例中，該個體已經開業醫生診斷為患有神經疾病。
在一個特定實施例中，人類患者為成年人。在一個實施例中，人類患者為18至55歲。在一個特定實施例中，人類患者為女性。在又一個特定實施例中，人類患者為男性。
在一個實施例中，患者未懷孕。在另一個實施例中，患者非餵奶母親。在一個實施例中，若患者懷孕，則本文中提供之方法進一步包括鼓勵患者進行妊娠登記之步驟，其監測在懷孕期間暴露於反丁烯二酸酯之女性中懷孕結果。
在一個實施例中，患者對在本文中描述之方法中投與的反丁烯二酸酯，諸如反丁烯二酸二甲酯無超敏反應。在另一個實施例中，患者對反丁烯二酸酯，諸如反丁烯二酸二甲酯無超敏反應，或對反丁烯二酸酯具有已知之超敏反應。在某些實施例中，本文中提供之方法進一步包括在靜脈內投與反丁烯二酸酯之步驟後，監測患者對該反丁烯二酸酯之過敏反應的發展之步驟。在特定實施例中，過敏反應為例如出現麻疹、血管神經性水腫及/或呼吸困難。
在一個實施例中，患者不同時用一種或多種反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)及任何免疫抑制或抗贅生性藥物治療。在某些實施例中，患者不同時用一個反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。在某些實施例中，患者不同時用本文中描述之反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險之任何藥物治療。
在一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前患者從未用反丁烯二酸酯，例如反丁烯二酸二甲酯處理。在另一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前1、2、3、4、6、8、10或12 個月或1、2、3、5、10、20、30、40或50年，患者尚未用反丁烯二酸酯，例如反丁烯二酸二甲酯治療。
在一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前患者從未用任何免疫抑制或抗贅生性藥物治療。在另一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前1、2、3、4、6、8、10或12個月或1、2、3、5、10、20、30、40、50年，患者尚未用任何免疫抑制或抗贅生性藥物治療。在另一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前患者從未用任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。在又一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前1、2、3、4、6、8、10或12個月或1、2、3、5、10、20、30、40或50年，患者尚未用任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。在另一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前患者從未用攜帶引起PML之已知風險之任何藥物治療。在又一個實施例中，在根據本文揭示之方法開始療法之前1、2、3、4、6、8、10或12個月或1、2、3、5、10、20、30、40或50年，患者尚未用攜帶引起PML之已知風險之任何藥物治療。
在一個實施例中，免疫抑制或抗贅生性藥物選自以下中之一者或多者：苯丁酸氮芥(chlorambucil)、美法侖(melphalan)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、噻替派(thiotepa)、異磷醯胺(ifodfamide)、氮烯唑胺(dacarbazine)、丙卡巴肼(procarbazine)、替莫唑胺(temozolomide)、六甲三聚氰胺(hexamethylmelamine)、阿黴素(doxorubicine)、道諾黴素(daunarubicine)、艾達黴素(idarubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊立替康(irinotecan)、甲胺喋呤(methotrexate)、依託泊苷(etoposide)、長春新鹼(vincristine)、長春花鹼(vinblastine)、長春瑞濱(vinorelbine)、阿糖胞苷(cytarabine)、白消安(busulfan)、胺萘菲特(amonifide)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、拓撲替康 (topotecan)、二氯甲二乙胺(mustargen)、博來黴素(bleomycin)、洛莫司汀(lomustine)、司莫司汀(semustine)、絲裂黴素C(mitomycin C)、突變黴素(mutamycin)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、甲胺喋呤(methotrexate)、三甲曲沙(trimetrexate)、雷替曲塞(raltitrexid)、氟去氧尿苷(flurorodeoxyuridine)、卡培他濱(capecitabine)、呋氟尿嘧啶(ftorafur)、5-乙炔基尿嘧啶、6-硫鳥嘌呤(6-thioguanine)、克拉屈濱(cladribine)、噴司他汀(pentostatin)、替尼泊苷(teniposide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、洛索蒽醌(losoxantrone)、放線菌素D(actinomycin D)、長春地辛(vindesine)、多西紫杉醇(docetaxel)、胺磷汀(amifostine)、干擾素α(interferon alpha)、他莫昔芬(tamoxefen)、甲羥孕酮(edroxyprogesterone)、甲地孕酮(megestrol)、雷諾昔芬(raloxifene)、來曲唑(letrozole)、阿那曲唑(anastrzole)、氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、視黃酸(retinoic acids)、三氧化二砷、利妥昔單抗(rituximab)、CAMP ATH-1、米羅他(mylotarg)、黴酚酸(mycophenolic acid)、塔可莫司(tacrolimus)、糖皮質激素(glucocorticoids)、柳氮磺胺吡啶(sulfasalazine)、格拉默、反丁烯二酸酯、拉喹莫德(laquinimod)、FTY-720、干擾素τ(interferon tau)、達珠單抗(daclizumab)、英利西單抗(infliximab)、IL1O、抗-IL2受體抗體、抗-IL-12抗體、抗-IL6受體抗體、CDP-571、阿達木單抗(adalimumab)、依那西普(entaneracept)、來氟米特(Ieflunomide)、抗干擾素γ抗體、阿巴西普(abatacept)、氟達拉濱(fludarabine)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、硫唑嘌呤(azathioprine)、環孢素(cyclosporine)、靜脈內免疫球蛋白、5-ASA(馬沙拉嗪(mesalamine))及β-干擾素。
在一個實施例中，免疫抑制或免疫調節藥物選自以下中之一者或多者：鈣神經素(calcinerurin)抑制劑、皮質類固醇、細胞抑制劑、 亞硝基脲、蛋白質合成抑制劑、放線菌素D、蒽環黴素、光神黴素、多株抗體(諸如atgum及即複寧(thymoglobulin))、單株抗體(諸如莫羅單抗-CD3(muromonab-CD3))及巴利昔單抗(basiliximab)、環孢菌素、西羅莫司、雷帕黴素、γ-干擾素、類鴉片、TNF結合蛋白、TNF-α結合蛋白、依那西普、黴酚酸酯(mycophenolate)、芬戈莫德及多球殼菌素。
在一個實施例中，根據本文中描述之方法治療的患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
在一個實施例中，患者之生命中或自從診斷患有神經疾病以來，未進行免疫抑制或免疫調節療法。
在一個實施例中，根據本文中描述之方法治療的患者不患有多發性硬化。
5.3.1 中風
在一個實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有中風之患者之步驟。
5.3.2 肌萎縮性側索硬化(「ALS」)
在一個實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有ALS之患者之步驟。
在一個實施例中，患者經診斷患有家族性ALS。在另一個實施例中，該患者經診斷患有偶發性ALS。
5.3.3 亨廷頓氏病
在一個實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有亨廷頓氏病之患者之步驟。
在一個實施例中，患者經診斷患有幼年發作型亨廷頓氏病。兒童期發作之亨廷頓氏病具有有些不同之特徵。舞蹈病為少得多之顯著特徵，且可為完全缺乏。最初症狀通常包括注意力不足、行為病症、 學業不及格、張力障礙、運動徐緩及有時顫振。在成年人中很少發現之癲癇發作可在此幼年形式中發現。幼年發作型HD往往遵循更快速過程，存活期少於15年。A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第10頁。
在一個實施例中，患者患有早期、中期或晚期亨廷頓氏病。
在早期亨廷頓氏病中，患者基本上具有功能且可繼續做事，例如工作、開車、處理財產及獨立生活。損傷可包括(但不限於)以下中之一者或多者：微小不自主運動、微細協調喪失、難以思考複雜問題、有些抑鬱、易怒及抑制解除。
在中期亨廷頓氏病，患者喪失做事之能力，例如以下中之一者或多者：工作、開車、管理其自身財政及做其自己之家務事，但將能夠做例如以下中之一者或多者：在幫助下吃、穿及注意個人衛生。在一個實施例中，舞蹈病可為顯著的，且患者具有增加的例如有意運動任務之困難。患者可具有例如以下中一者或多者之問題：吞嚥、平衡、倒下及重量減輕。在特定實施例中，對於患者而言，解決問題變得更困難，因為個體無法排序、組織或按優先次序列出資訊。
在晚期亨廷頓氏病中，患者在所有日常生活活動中均需要幫助。在一個實施例中，患者在晚期亨廷頓氏病中常常無法說話且臥床不起，但可保留一些理解能力。在某些實施例中，舞蹈病可為嚴重的。在一些實施例中，晚期損傷為例如以下中之一者或多者：僵硬、張力障礙及運動徐緩。在另一個實施例中，精神病症狀可存在於晚期亨廷頓氏病，但由於患者可經歷溝通困難而將更難以認識到且治療。A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第7頁。
在一個實施例中，患者具有11-13(階段I)、7-10(階段II)、3-6(階段III)、1-2(階段IV)或0(階段V)之總功能能力評級量表總分。A Physician’s Guide to the Management of Huntington’s Disease,Lovecky及Trapata(編輯)，第3版，Huntington’s Disease Society of America(2011)，第8頁；Shoulson等人，Assessment of functional capacity in neurodegenerative movement disorders：Huntington’s disease as a prototype，於Munsat(編輯)：Quantification of Neurological Deficit.Boston：Butterworth,1989，第271-283頁；The Huntington Study Group.Unified Huntington’s Disease Rating Scale：reliability and consistency,Mov.Disord.11，第136-142頁(1996)。
在一個實施例中，已確定患者在編碼亨廷頓蛋白質之基因中具有超過40個CAG重複序列。在另一個實施例中，已確定患者具有36-39個CAG重複序列。在某些實施例中，使用本領域中已知之任何方法，諸如遺傳測試法確定CAG重複序列之數目。
在一個實施例中，患者無亨廷頓氏病之家族史。在另一個實施例中，患者不知道亨廷頓氏病之家族史。
5.3.4 阿茲海默氏病
在特定實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有阿茲海默氏病之患者之步驟。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有阿茲海默氏病。在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者已在與阿茲海默氏病診斷一致之症狀發作後執行神經成像(電腦斷層掃描攝影術[CT]或MRI)。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者具有輕度至中度嚴重程度之癡呆，定義為16-26之簡易精神狀態檢查(MMSE)，包括篩選時。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者在篩選之前已穩定給與管理機構批准之阿茲海默氏病藥物至少3個月。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者已接受對精神起作用之藥物(例如不同於單胺氧化酶抑制劑(MAOI)之抗抑鬱劑及大部分三環類藥物、抗精神病藥、抗焦慮劑、抗驚厥劑、情緒穩定劑等)。在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者已穩定給與對精神起作用之藥物至少6週。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段1阿茲海默氏病。階段1中之患者通常無損傷(例如正常功能)。人未經歷任何記憶問題。在一些實施例中，與醫學專業人員之會談未展示癡呆症狀之任何證據。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段2阿茲海默氏病。階段2中之患者具有極輕度認知衰退(可為正常年齡相關之改變或阿茲海默氏病之最早徵象)。人可能覺得好象其正具有記憶喪失，例如忘記熟字或日常物件之位置。但在體檢期間或藉由朋友、家庭成員或同事無法偵測到癡呆症狀。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段3阿茲海默氏病。階段3中之患者具有輕度認知衰退(早期阿茲海默氏病可在一些但非所有具有此等症狀之個體中診斷)。朋友、家庭成員或同事開始注意到困難。在詳細醫學會談期間，醫生也許能偵測到記憶或專心問題。常見階段3困難包括：說出正確詞語或姓名有顯著問題、當介紹新人時記住姓名困難、在社會或工作環境下顯著更難以執行任務、忘記剛剛閱讀之材料、喪失或放錯有用物體及計畫或組織困難增加。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段4 阿茲海默氏病。階段4之患者通常具有中度認知衰退(輕度或早期阿茲海默氏病)。此時，仔細之醫學會談將能偵測若干區域之明確症狀：近來事件健忘、減弱之執行挑戰性心算的能力-例如自100間隔7反向計數；執行複雜任務困難更大，諸如為客人計畫晚餐、付款或管理財政；忘記自己個人史且變得喜怒無常或孤獨，特別是在社交上或精神上挑戰之情況。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段5阿茲海默氏病。階段5之患者通常具有中等嚴重認知衰退(中度或中期阿茲海默氏病)。記憶及思考之缺口顯著，且個體開始需要幫助日常活動。在此階段，患有阿茲海默氏症者可能無法回憶其自己地址或電話號碼或其畢業之中學或大學，對其身份或日期變得不清楚、對不太有挑戰之心算有困難；諸如藉由減去自40間隔4或自20間隔2反向計數；需要幫助為季節或時機選擇適當衣服；仍然記住關於本身及其家庭之顯著細節；且仍然無需幫助吃飯或如廁。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段6阿茲海默氏病。階段6之患者通常具有嚴重認知衰退(中等嚴重或中期阿茲海默氏病)。記憶繼續惡化，可能發生人格改變，且個人需要大範圍說明做日常活動。在此階段，個體可能喪失近來經歷以及其周圍環境之意識，記住其自己姓名但對其個人史有困難、區別熟悉與不熟悉之臉但記住配偶或護理者之姓名有困難、適當需要幫助穿衣，且可在無監督下犯錯，諸如將睡衣放在白天衣服上或鞋穿在錯誤之腳上；經歷睡眠模式之重大改變，例如日間睡眠且晚上不安寧、需要幫助處理如廁細節(例如沖洗廁所、適當擦或處理棉紙)、控制其膀胱或腸日益困難、經歷主要人格及行為變化，包括懷疑及錯覺(諸如相信其護理者為冒名頂替者)或強迫性、重複行為，如絞手或撕碎棉紙，其往 往徘徊或走失。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
在一個實施例中，根據本文中提供之方法治療的患者患有階段7阿茲海默氏病。階段7之患者通常具有非常嚴重認知衰退(嚴重或晚期阿茲海默氏病)。在此疾病之最終階段，個體喪失對其環境作出反應、繼續進行會談及最終控制移動之能力。其仍然可說話或短語。在此階段，個人需要幫助做大部分其日常個人護理，包括吃飯或如廁。其亦可喪失微笑、無支撐下坐及支撐其頭之能力。其反射變得異常，肌肉生長僵硬，且吞嚥減弱。參見alz.org之Alzheimer’s Association。
5.3.5 帕金森氏病
在特定實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有帕金森氏病、尤其特發性帕金森氏病之患者之步驟。
Hoehn及Yahr量表為通常用於在廣義上描述帕金森氏症狀如何進展及殘疾相對程度之系統。其最初於1967中雜誌Neurology中由Melvin Yahr及Margaret Hoehn公開，且包括階段1至5。自那時起，已添加階段0且階段1.5及2.5已提出且廣泛使用。
階段0-無病徵
階段1-僅僅一側症狀(單側)
階段1.5-單側以及涉及頸及脊柱之症狀
階段2-雙側(雙邊)症狀，但無平衡損傷
階段2.5-輕度雙邊症狀，當給與『牽引』測試時恢復(醫生站在該人後面且要求其在向後牽引時維持其平衡)
階段3-平衡損傷。輕度至中度疾病。物理非依賴性
階段4-嚴重殘疾，但仍然能夠在無幫助下行走或站立
階段5-除非說明，否則需要輪椅或臥床不起
在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及 Yahr量表之階段1。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段1.5。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段2。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段2.5。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段3。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段4。在一個實施例中，根據本文揭示之方法治療之患者處於Hoehn及Yahr量表之階段5。
5.3.6 多發性硬化
在一個實施例中，本文中提供之方法進一步包括在投與步驟之前選擇、鑑別或診斷患有多發性硬化之患者之步驟。在一些實施例中，多發性硬化形式為復發緩解型、繼發漸進性、原發漸進性或漸進-復發性多發性硬化。在一個實施例中，多發性硬化患者為患有MS復發形式之患者。在一特定實施例中，患者患有復發緩解性MS(RR-MS)。在另一個實施例中，多發性硬化患者為患有MS漸進形式之患者。在一特定實施例中，患者患有繼發性-漸進性MS(SP-MS)。在另一特定實施例中，患者患有原發性-漸進性MS(SP-MS)。在又一個特定實施例中，患者患有繼發性-復發性MS(PR-MS)。
5.4 給藥方案
本發明提供用於本文中描述之治療方法的給藥方案。
本文提供治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。在一個實施例中，在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
在一個實施例中，該投與每日進行。在一個實施例中，該投與每週進行一次。在一個實施例中，該投與每隔一週進行。在一個實施例中，該投與每月進行一次。
在一個實施例中，在至少兩週之時間段內重複靜脈內投與之步驟。在一個實施例中，在至少一個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。在一個實施例中，在至少六個月之時間段內重複靜脈內投與之步驟。在一個實施例中，在至少一年之時間段內重複靜脈內投與之步驟。
在一個實施例中，該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向患者經口投與反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
反丁烯二酸酯可以界定頻率及劑量投與有需要之個體。本文中描述之反丁烯二酸酯及醫藥組合物之量可靜脈內一天投與一次，或每天2、3、4、5或6劑分開投與。在一個特定實施例中，該反丁烯二酸酯每日、每隔一日、每隔兩日、每隔三日、每隔四日、每隔六日或每隔七日以數劑靜脈內投與。在另一特定實施例中，該反丁烯二酸酯每隔一週、每隔兩週、每隔三週或每隔四週靜脈內投與。在另一特定實施例中，該反丁烯二酸酯每月、每隔一月、每隔兩月、每隔三月、每隔四月或每隔五月靜脈內投與。在特定實施例中，該投與呈相等劑 量。在另一特定實施例中，該投與非相等劑量(例如個體以在隨後治療期間增加之特定劑量治療)。在一個實施例中，反丁烯二酸酯僅僅在治療期期間投與一次。
在某些實施例中，在至少一週之時期內重複用本文中描述的反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物治療個體。在另一特定實施例中，在至少一個月之時期內重複該治療。在另一特定實施例中，在至少兩個月之時期內重複該治療。在另一特定實施例中，在至少六個月之時期內重複該治療。在另一特定實施例中，在至少一年之時期內重複該治療。
在一特定態樣中，本文中描述的至少一種反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物經由多個投與途徑，包括靜脈內投與來投與有需要之個體，或至少一種反丁烯二酸酯可與其他藥劑(亦即藥物)組合投與(參見部分5.6)。
用於產生單一劑型之反丁烯二酸酯之量將視特定投與模式而改變。然而，應瞭解，任何特定個體之特定劑量及治療方案將視多種因素而定，包括採用之特定化合物之活性、年齡、體重、整體健康狀態、性別、飲食、投與時間、排泄率、藥物組合及治療醫師之判斷及治療之特定疾病之嚴重程度。活性反丁烯二酸酯之量亦可視反丁烯二酸酯共同投與之治療性或預防性藥劑(若存在)而定。
在一個特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個特定實施例中，本文中描述之反丁烯二酸酯或組合物在給藥方案過程內以恆定速率靜脈內投與。在另一特定實施例中，反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物在給藥方案之過程中以不同速率靜脈內投與(例如初始劑量以固定速率，其在隨後劑量期間增加或減少)。在另一個實施例中，本文中描述的反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物以每小時每公斤體重約10至40mL速率或以每小時 每公斤體重約20至30mL速率投與。
在特定實施例中，本文中描述之反丁烯二酸酯或組合物以1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL、7mL、8mL、9mL或10mL之總體積靜脈內投與患者。在另一特定實施例中，該等反丁烯二酸酯或組合物以10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL或100mL之總體積靜脈內投與患者。在又一個特定實施例中，反丁烯二酸酯或包含反丁烯二酸酯之組合物以100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL或1000mL之總體積靜脈內輸送至患者。
在一些實施例中，反丁烯二酸酯以在約1mg至約1000mg、約10mg至約750mg或約48mg至約240mg範圍內之量靜脈內投與。在一個特定實施例中，該等反丁烯二酸酯或組合物以少於480mg或約160mg或更少之量靜脈內投與。在一個特定實施例中，該等反丁烯二酸酯或組合物以每週一次約1,120mg或更少、兩週一次2,240mg或更少或一月一次4,800mg或更少之量靜脈內投與。
如本領域的技術人員所認識到，投與之本文中描述的化合物及醫藥組合物之量亦將視投藥途徑、賦形劑使用及與其他治療性治療之共同使用，包括使用其他治療劑(亦即藥物)之可能性而改變。
在一些實施例中，反丁烯二酸酯每日靜脈內投與(例如以1.11mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔一天靜脈內投與(例如以2.22mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯一週三次靜脈內投與(例如以2.59mmol或 更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每週兩次靜脈內投與(例如以3.89mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每週一次靜脈內投與(例如以7.77mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔一週一次靜脈內投與(例如以15.54mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔兩週一次靜脈內投與(例如以23.31mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔三週一次靜脈內投與(例如以31.08mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯一月一次靜脈內投與(例如以33.30mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯隔月一次靜脈內投與(例如以66.61mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250 mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔兩月一次靜脈內投與(例如以99.91mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸酯每隔三月一次靜脈內投與(例如以133.21mmol或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸酯(例如每天5.00mmol、每天4.16mmol、每天3.33mmol、每天250mmol、每天1.67mmol或每天0.833mmol)組合。
在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每日靜脈內投與(例如以160mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔一天靜脈內投與(例如以320mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯一週三次靜脈內投與(例如以374毫克或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每週兩次靜脈內投與(例如以560mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每週一次靜脈內投與(例如以1,120mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔一週一次靜脈內投與(例如以2,240mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240 mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔兩週一次靜脈內投與(例如以3,360mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔三週一次靜脈內投與(例如以4,480mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯一月一次靜脈內投與(例如以4,800mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯隔月一次靜脈內投與(例如以9,600mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔兩月一次靜脈內投與(例如以14,400mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。在一些實施例中，反丁烯二酸二甲酯每隔三月一次靜脈內投與(例如以19,200mg或更少之劑量)，與每日經口給與之反丁烯二酸二甲酯(例如每天720mg、每天480mg、每天360mg、每天240mg或每天120mg)組合。
與經口投與相同量之相同反丁烯二酸酯相比，靜脈內投與本文中描述的反丁烯二酸酯或其醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體可提供個體循環系統中較高含量之該等反丁烯二酸酯。因此，預計靜脈內投與本文中描述的反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)比實現相同臨床作用之經口投與的投與劑量低。在一特定實施例中，靜脈內投與本文中描述的反丁烯二酸酯投與之劑量比實現適用臨床或 藥效作用之反丁烯二酸酯經口投與低至少兩倍、至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少40倍、至少50倍、至少100倍、至少200倍、至少300倍、至少400倍或至少500倍。在特定實施例中，藉由患者血液或血漿中反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯或反丁烯二酸單甲酯)之濃度確定臨床或藥效作用。在另一個實施例中，藉由患者一個或多個組織(例如腦)中反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯或反丁烯二酸單甲酯)之濃度或量確定臨床或藥效作用。在又一個實施例中，如本文中描述(參見部分5.2)，該臨床或藥效作用為治療神經疾病，例如與神經疾病相關之損傷。
5.5 醫藥組合物
如本文中描述的至少一種反丁烯二酸酯可調配成用於靜脈內投與有需要之個體的醫藥學上可接受之組合物。熟知用於靜脈內投與之適合調配物。在一較佳實施例中，該等反丁烯二酸酯於溶液中調配以供靜脈內投與，亦稱IV投與或IV滴注。
在一個特定實施例中，醫藥組合物基本上由至少一種如本文中描述的反丁烯二酸酯組成。在另一特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。在另一特定實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸單甲酯或其前藥。在另一個實施例中，醫藥組合物中之唯一藥物為反丁烯二酸二甲酯及藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。在另一特定實施例中，藉由離體降解產生之該其他化合物為反丁烯二酸單甲酯。
本文中描述的至少一種反丁烯二酸酯調配於適於靜脈內投與之組合物中。適於靜脈內調配之組合物為此項技術中已知且包括溶液(例如水溶液)。在特定實施例中，本文中描述的靜脈內組合物包含體積膨脹溶液，包括(但不限於)生理鹽水、乳酸化林格氏溶液(lactated Ringer’s solution)、哈特曼溶液(Hartmann’s Solution)、葡萄糖、羥乙 基澱粉、琥珀明膠及其類似物。在另一特定實施例中，本文中描述的組合物含有一種或多種緩衝劑，包括(但不限於)碳酸氫鈉、磷酸鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸、硼酸、索倫森磷酸鹽緩衝液(Sorenson’s phosphate buffer)及該等緩衝劑之所有醫藥學上可接受之鹽。在一個特定實施例中，該組合物包含於無菌溶液中調配之本文中描述之反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)。在某些實施例中，該溶液與血液等張。在另一特定實施例中，該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯、反丁烯二酸單甲酯或其前藥，或上述任一者之氘化形式。
適於靜脈內投與之醫藥組合物亦描述於以下部分5.5.1及5.5.2中。
本文中描述的醫藥組合物可以醫藥學上可接受之任何靜脈內輸送形式投與有需要之個體。在一特定實施例中，該組合物(例如溶液)經由注射器輸送。在另一特定實施例中，該組合物(例如溶液)經由輸注袋輸送。在另一特定實施例中，該組合物(例如溶液)使用皮下注射器針頭、周圍套管、中樞靜脈導管、周圍插入管線、挖隧道線或可植入埠輸送。
在一個實施例中，醫藥組合物含有與FUMADERM®中彼等反丁烯二酸酯不同的反丁烯二酸酯。FUMADERM®包含反丁烯二酸二甲酯、反丁烯二酸氫乙酯之鈣鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鎂鹽及反丁烯二酸氫乙酯之鋅鹽的組合。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含反丁烯二酸酯；其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥或上述任一者之氘化形式或上述任一者之互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸酯之鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含反丁烯二酸酯；其中反丁 烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥或上述任一者之氘化形式或上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸氫乙酯之鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含反丁烯二酸酯；其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥或上述任一者之氘化形式或上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸氫乙酯之鈣鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鎂鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鋅鹽及反丁烯二酸氫乙酯之銅鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含反丁烯二酸酯；其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥或上述任一者之氘化形式或上述任一者之互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含反丁烯二酸酯；其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合或上述任一基之氘化形式或上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體或上述任一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸氫乙酯之鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，醫藥組合物包含至少一種反丁烯二酸酯；其中反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合或上述任一者之氘化形式或上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體或上述任 一者之組合；其限制條件為反丁烯二酸氫乙酯之鈣鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鎂鹽、反丁烯二酸氫乙酯之鋅鹽及反丁烯二酸氫乙酯之銅鹽不存在於醫藥組合物中。
在一特定實施例中，本文中描述的至少一種反丁烯二酸酯呈單一療法投與；因此，其不與一種或多種活性藥劑(亦即藥物)組合投與。在一個特定實施例中，至少一種本文中描述的反丁烯二酸酯不與任一種或多種或所有以下活性藥劑組合投與：血管緊張素轉變酶抑制劑(例如WO2013/022882A1中揭示之抑制劑)；胺基-金剛烷衍生之NMDA受體拮抗劑(例如美金剛、金剛烷乙胺及金剛烷胺(參見例如US2008/0089861)；多發性硬化藥物、過氧物酶體增殖體活化受體(PPAR)γ促效劑(例如US2013/0158077A1中揭示之促效劑)；格拉默乙酸鹽或相關共聚物(例如如WO2011/100589A1中揭示)；干擾素-β(參見例如WO2011/100589A1)；降低或消除面紅之藥物，諸如前列腺素調節劑、食用纖維、包含肥大細胞活化及發炎生化物質分泌之抑制劑的組合物、礦質鹽或如例如WO2007/042035A1中所描述之藥物；胍那苄或胍那苄衍生物(例如WO2014/138298A1中揭示之胍那苄或胍那苄衍生物)；S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶(SAMDC)抑制劑、多元胺類似物或多元胺生物合成抑制劑(參見例如WO2014/110154A1中揭示之藥物)；VLA4結合抗體(例如EP2783701A2中揭示之抗體)；及血管生成素-2(ANG-2)抑制劑(例如EP2307456B1中揭示之抑制劑)。
5.5.1 奈米懸浮液
本文提供包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。在一個實施例中，至 少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約150mg/ml。在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約150mg/ml。
在一個實施例中，醫藥組合物進一步包含一種或多種選自小分子穩定劑、聚合物穩定劑及緩衝劑之賦形劑。
在一個實施例中，小分子穩定劑為十二烷基硫酸鈉。在一個實施例中，聚合物穩定劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。在一個實施例中，緩衝劑為磷酸鹽緩衝液。
在一個實施例中，組合物之pH值在約4至約7範圍內。在一個實施例中，組合物之pH值為約5.0。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯具有約100nm至約250nm之平均粒度(D50)。在一個實施例中，D50為約180nm。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，其中醫藥組合物進一步包含十二烷基硫酸鈉、HPMC及磷酸鹽緩衝液，其中醫藥組合物之pH值為約5.0且D50為約180nm。
提供於此部分中之醫藥組合物可用於本文中提供之任何方法中。
5.5.2 包含環糊精之調配物
本文提供包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或 立體異構體，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。在一個實施例中，至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約16mg/ml。在一個實施例中，反丁烯二酸二甲酯之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
在一個實施例中，環糊精為經取代β環糊精。
在一個實施例中，經取代β環糊精以約5%(w/v)至約40%(w/v)存在。在一個實施例中，經取代β環糊精以約20%(w/v)存在。
在一個實施例中，經取代β環糊精為羥丙基β環糊精或磺基丁基醚β環糊精。在一個實施例中，經取代β環糊精為磺基丁基醚β環糊精。
在一個實施例中，醫藥組合物包含一種或多種式XX之磺基丁基醚β環糊精：
其中R獨立地選自H或-CH2CH2CH2CH2SO3Na，其限制條件為除 其中R為-CH2CH2CH2CH2SO3Na之6或7種情況外，R為H。在一個實施例中，醫藥組合物包含CAPTISOL。
在一個實施例中，反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且其中水溶液包含20%(w/v)CAPTISOL，且DMF之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
提供於此部分中之醫藥組合物可用於本文中提供之任何方法中。
5.6 組合治療
在特定實施例中，至少一種本文中描述的反丁烯二酸酯與一種或多種指示用於治療患者患有之神經疾病的其他化合物組合投與。其他化合物可與至少一種反丁烯二酸酯處於相同或分開之組合物，且可靜脈內或藉由不同投藥途徑(例如口服)輸送。在一特定實施例中，該一種或多種其他化合物連續、在本文中描述的反丁烯二酸酯之前、之後或同時投與。在本文中描述之反丁烯二酸酯(例如反丁烯二酸二甲酯)靜脈內與經口投與之一特定實施例中，可使用本領域中已知之用於口服反丁烯二酸酯之組合物及給藥方案(參見例如TECFIDERA® Prescribing Information,2013年3月；WO 2008/097596；WO 2010/126605)。
6. 實例
6.1 實例1：放射性標記之反丁烯二酸二甲酯的靜脈內及經口投與
此實例描述放射性標記之DMF經口及靜脈內投與小鼠及如藉由成像評估之所得組織分佈。
6.1.1 製備( 11C)反丁烯二酸二甲酯之方法
下文中提供一種用於製備(11C)反丁烯二酸二甲酯之示例性方法。
反丁烯二酸及氯化鐵(II)溶於亞硫醯氯且回流24小時。分餾用以純化反丁烯二醯基二氯。未反應之亞硫醯氯在74℃下蒸出且佔反應混合物之45%。任何揮發性副產物在80℃與150℃之間蒸出。產物反丁烯二醯基二氯在158℃下蒸出，且呈刺激性黃色液體狀收集。反丁烯二醯基二氯佔反應混合物之約45%-50%。未反應之反丁烯二酸及氯化鐵(II)保持在反應容器中。反丁烯二醯基二氯用氬氣沖洗且儲存在-20℃下。發現當儲存在惰性氛圍下時反丁烯二醯基二氯穩定且反應多達7天。
11C-二氧化碳陷於氫化鋁鋰(10μmol)中以形成11C-甲醇，使反丁烯二醯基二氯(1mg)與11C-甲醇在室溫下反應5-10分鐘。反應混合物用10μL水及100μL甲醇淬滅以產生11C-反丁烯二酸二甲酯(產量5-10%，衰變校正)。反應混合物用100μL水淬滅以產生11C-反丁烯二酸單甲酯(產量1-3%，衰變校正)。放射性標記之產物使用水稀釋至50mL，且通過C-18 Sep-pak(藉由用10mL乙醇及10mL水清洗預處理)。Sep-pak用10mL水清洗。放射性標記之產物用0.1-0.5mL乙醇溶離，且添加至無菌生理鹽水(0.9%)中，得到10%乙醇於無菌生理鹽水(0.9%)中之最終調配物。對於經口給與，400mg/kg非放射性藥物溶於0.2mL 0.8%美多秀中。例如如上所述合成之放射性標記之藥物添加至混合物中，且經由經口管飼法給與。
6.1.2 ( 14 C)反丁烯二酸二甲酯
用於實例1中之[2,3-14C]DMF自ViTrax Co.,Placentia,CA,USA(批號155-038-000，比活性54mCi/mmol)獲得。
6.1.3 與經口投與比較靜脈內投與反丁烯二酸二甲酯之結果
為確定藉由活體內不同途徑投與之DMF的定位及保留，經口或者經由尾靜脈注射向小鼠投與同位素標記之DMF。為追蹤投與後DMF定位，正電子發射斷層攝影法(PET)使用microPET Focus 220TM (Siemens)，及磁共振成像(MR)使用BioSpin 7T(Bruker)，將動物成像。使用inviCRO軟體分析自PET實驗獲得之影像。
經口(PO)以0.5mg/kg(N=2)或200mg/kg(N=3)，或靜脈內(IV)以0.5mg/kg(N=3)向未處理雄性CD1小鼠投與同位素標記(11C)之反丁烯二酸二甲酯(DMF)(參見部分6.1.1)且藉由正離子發射斷層攝影法(PET)或者磁共振(MR)成像。所有動物在影像獲取期間均麻醉。在投與(11C)DMF之後各時間點，直至90分鐘，使處理之小鼠成像。用PO(11C)DMF以0.5mg/kg或200mg/kg處理之小鼠顯示主要在消化道及腎中之正信號(分別為圖1及2)。相反地，IV投與(11C)DMF之動物顯示遍及身體各組織，包括腦及心臟之正信號(圖3)。此等發現指示與經口投與之DMF相比，靜脈內輸送之DMF定位於活體內各種組織，即使經口輸送之組合物為高得多之濃度(亦即0.5mg/kg IV投與對比200mg/kg PO投與)。所顯示之信號可來源於(11C)DMF或其任何活體內轉變產物。
來自三組處理動物之成像資料根據組織類型，使用inviCRO影像分析軟體定量。腦、心臟、肝、腎、肩胛肌肉及全身之相關區域(ROI)藉由固定體積之橢圓體與該等區域擬合來定義。肩胛肌肉ROI為手繪且不代表所有小鼠肌肉，而僅僅由其相應ROI之小區域構成。在0.5mg/kg IV處理動物中，與以0.5mg/kg(圖5)或200mg/kg(11C)DMF(圖6)處理的PO處理之動物相比，信號在大部分組織中更高(圖4)。
顯著地，IV處理之動物之腦中信號(圖7)比低或高濃度下PO處理之動物之腦中大得多(圖8及9)。為定量調查來自腦各區域之信號，藉由將專用14區小鼠腦圖與各動物之腦區擬合來獲得髓質、小腦、中腦、橋腦、皮層、海馬、丘腦、下丘腦、紋狀體、蒼白球、鼻子、胼胝體、白質及心室之ROI。實際上，當來自腦之此等特定區域的信號定量時，在PO處理之動物的任何區域中幾乎未偵測到信號(圖8及9)。 然而，IV處理之動物顯示整個觀測期內腦所有區域中高水準信號(圖7)。此等結果展示IV投與DMF意外地使得腦中DMF之濃度比經口投與DMF時濃度高。
為證實針對腦中IV DMF定位所觀測到之作用，將用(11C)DMF處理之小鼠與用(14C)DMF處理之小鼠相比(參見部分6.1.2)。如圖10中所示，早在投與後30秒，來自用0.5mg/kg IV(11C)DMF處理之動物的信號定位於許多組織中，包括腦。用0.5mg/kg PO(11C)DMF(圖11)或者200mg/kg PO(11C)DMF(圖12)處理之動物顯示整個處理過程中信號幾乎只在消化道中。類似地，當以矢狀切面察看時，用0.5mg/kg IV(14C)DMF(圖13)處理之動物在投與後10分鐘(圖13A、B)及60分鐘(圖13C、D)時顯示腎及腦中信號，而用0.5mg/kg PO(14C)DMF(圖14)處理之動物在(14C)DMF投與後10分鐘(圖14A及B)及60分鐘(圖14C及D)，腦中具有較少信號。此等結果指示與經口投與之(14C)DMF比較，靜脈內投與之(14C)DMF意外地快速累積於腦及其他組織中，經口投與導致(14C)DMF基本上不存在於處理動物之腦中。
檢查處理小鼠中(11C)DMF定位於腦之特定區域指示特定區域發射比其他區域高的信號(圖7)。顯著地，已知與神經疾病有關之許多區域在用(11C)DMF靜脈內處理後發射強信號；例如與嗅區相比，在用(11C)DMF靜脈內處理後，紋狀體(亨廷頓氏病、中風)、皮層及海馬(阿茲海默氏病、中風)、黑質及腦幹(帕金森氏病、中風)、大腦皮層(中風)及脊髓(ALS、中風)及小腦(中風)均發射強信號(圖7)。因為以0.5mg/kg或者200mg/kg經口投與(11C)DMF大都顯示腦中顯著較低水準之信號，此等結果指示意外地，靜脈內投與DMF可特別地定位至某些與特定神經疾病相關之神經結構。
6.2 實例2：經口及靜脈內投與之反丁烯二酸二甲酯之藥物動力學及藥效學的表徵
此實例比較大鼠及小鼠中原型Nrf2反應基因對DMF經口及靜脈內投與之藥效反應。
6.2.1 DMF經口及靜脈內投與史泊格多利(Sprague Dawley)大鼠
縮寫清單
引言
實例1中描述之小鼠PET及QWBA研究證明IV投與11C或14C標記之DMF使得放射性快速且選擇性分配至CNS中，而PO給藥產生主要限於胃腸道(GI)之更多外周分佈。此等成像資料能夠表徵放射性之解剖學位置，但所成像者之分子身份未知且可為DMF本身、MMF或許多不同DMF結合物或代謝物。
為確定在DMF IV傳遞後觀測到之成像結果是否與有意義之生物作用(例如Nrf2活化)相關，評估連續5日每日給與(IV或PO)一次之史泊格-多利大鼠中血漿、CNS(前腦及小腦)及周圍組織(空腸、腎及脾)中藥物動力學及轉錄藥效作用。藉由qRT-PCR分析組織以評估已預先表徵對DMF/MMF處理作出反應之6種假定Nrf2標靶基因的轉錄變化。 Scannevin RH,Chollate S,Jung MY,Shackett M,Patel H,Bista P,Zeng W,RyanS,Yamamoto M,Lukashev M,Rhodes KJ.Fumarates promote cytoprotection of central nervous system cells against oxidative stress via the nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2 pathway.J Pharmacal Exp Ther.2012年4月；341(1)：274-84。進行此研究以補充下文進一步描述之在野生型小鼠中進行之研究(參見部分6.2.2)，且使將來藥物動力學、藥效及功效研究能夠利用IV給藥模式。
概述
實例1中描述之活體內正電子發射斷層攝影法(PET)及定量整體放射自顯影法(QWBA)研究已證明反丁烯二酸二甲酯(DMF)之靜脈內(IV)傳遞使得來源於DMF之放射性選擇性分配至中樞神經系統(CNS)中，而經口(PO，經口投與)使得分佈主要定位至胃腸道。為評估在IV給藥下差異生物分佈之生物作用，比較史泊格多利大鼠中經由IV輸注對比PO投與之DMF，評估腦及外周中藥物動力學及藥效學。
當給藥後10分鐘評估時，IV投與DMF(30mg/kg)使得主要DMF代謝物反丁烯二酸單甲酯(MMF)廣泛分佈在測試組織(前腦、小腦、腎、脾、空腸)中。在PO投與之DMF 100mg/kg)下觀測到MMF類似廣泛分佈在相同組織中。有趣地，與PO給藥相比，儘管IV投與之劑量較低，但MMF在腦中之絕對水準顯著更高。此使得與PO給藥相比，IV下腦與血漿比率顯著更高。其他組織未展現此優先分佈。
在所有測試之組織中，在給藥後2小時及6小時，如藉由定量即 時聚合酶鏈反應(qRT-PCR)評估，基因表現顯著調節。對於個別測試基因，反應之時間態樣(2小時對比6小時)存在差別，以及反應在組織之間存在差異。
在評估暴露(在10分鐘量測)與藥效反應(2小時或6小時)之間的關係時，有證據證明在所有測試組織中正相關。因此，以30mg/kg IV投與DMF使得與100mg/kg PO DMF相比，外周暴露及外周中藥效反應降低。在腦中，相反：與DMF PO相比，DMF IV具有更高絕對MMF暴露及轉錄藥效反應。
材料與方法
所有涉及動物之程序均根據如美國國家衛生研究院(U.S.National Institutes of Health)採用之實驗動物照護與使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)中建立的標準執行。所有動物方案均經Biogen Idec Inc.實驗動物照護與使用委員會批准；Biogen由國際實驗動物照護評估與授權協會(Association for Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International)授權。8-12週齡雄性史泊格-多利大鼠購自Wilmington(MA)之Charles River Lab，且在：實驗持續時間期間隨意給與標準水及食物。大鼠在研究開始前在Biogen Idec動物園中適應至少5天。
化合物調配及動物程序
靜脈內調配及傳遞：
對於所有IV給藥，利用10mL/kg之體積。
媒劑：H2O中20%(w/v)Captisol溶液。1L媒劑藉由添加200g Captisol至800mL去離子H2O(dH2O)來制得。
DMF(30.0mg/kg)：來源；目錄號112JS4184；06-Dec-2013。DMF以3.0mg/mL溶解於媒劑中。物質首先在攪拌盤上攪拌至媒劑溶液中，接著在室溫水浴中進行超音波處理5分鐘。
經口調配及傳遞：
對於所有PO給藥，利用10mL/kg之體積。
媒劑：H2O中0.8% E4M等級羥丙基甲基纖維素(HPMC；媒劑)。8g HPMC粉末添加至dH2O以產生1L媒劑溶液。特定言之，500mL熱dH2O(85-90℃)添加至8g HPMC中且用平坦金屬均質器攪拌，直至實現澄清無色溶液。使溶液冷卻至室溫，接著將剩餘體積之dH2O添加至1L之最終體積。再一次，用平坦金屬均質器攪拌溶液，直至均質。
DMF(100mg/kg)：來源；Cilag批號112JS4184；2013年12月6日。DMF以10mg/mL懸浮在0.8% HPMC中，用攪拌棒攪動，接著在室溫水浴中超音波處理5分鐘。懸浮液在4℃下攪拌實驗之整個時期。
實驗設計、給藥方案及組織收集
為評估及比較DMF IV及PO給藥之作用，如下所述，經由IV尾靜脈輸注(n=15)或藉由經口管飼法(n=15)將DMF投與大鼠，一天一次，連續5日。
組：A、E及I：PO DMF 100mg/kg(總共n=15，5只/組)
組B、F及J：IV DMF 30mg/kg(總共n=15，5只/組)
組C及G：PO媒劑，0.8% HPMC(總共n=10，5只/組)
組D及H：IV媒劑，僅20% Captisol(總共n=10，5只/組)
實驗時間線第5天：
在研究第5天，評估3個時間點：給藥後10分鐘、2小時及6小時，如時間線中展示。在每個時間點，將來自各組之5只動物處死。在2小時及6小時時間點，來自各動物之組E、F、I及J的組織樣品分開，其中一半組織經加工用於MMF暴露，且一半經加工用於qRT-PCR。注意媒劑組(C、D、G及H)未加工用於MMF量測且僅僅用於qRT-PCR。
評估MMF暴露：
在10分鐘、2小時及6小時，自動物組(組A、B、E、F、I、J)收集血漿及組織(前腦、小腦、空腸、腎及脾)以量測樣品中MMF濃度。使用非GLP但有效LC/MS/MS分析定量MMF。使用非參數曼恩-惠特尼U檢驗進行統計比較。
評估轉錄藥效改變：
給藥後2小時及6小時，分別處死來自組C、D、E及F以及G、H、I及J之動物組，且收集組織(前腦、小腦、空腸、腎及脾)用於藉由qRT-PCR針對原型Nrf2反應基因之表現進行RNA分析。
血漿及組織中MMF定量
如預先提及，處死史泊格-多利大鼠，且在給藥後10分鐘、2小時及6小時收集終末血漿及組織樣品，且血漿、腦、小腦、空腸及腎中MMF暴露如下測定。解剖後組織在乾冰上速凍。在快要血液收集 時，將4μL 250mg/mL氟化鈉(NaF)於水中之儲備混合物添加至肝素鋰管中收集之各100μL血液中。儲備NaF混合物在使用當天製備且在攪拌盤上經由連續攪拌保持為均質懸浮液。全血添加至管中，接著將樣品倒置若干次且儲存在濕冰(2℃至8℃)上。所有樣品在收集30分鐘內在4℃下以1500 x g(4200RPM)離心15分鐘。接著血漿轉移至預冷卻管中，在乾冰上立即冷凍且維持冰凍(-80℃)直至分析。
血漿或組織勻漿樣品之等分試樣(50μL)藉由用含有反丁烯二酸甲基乙酯或者作為內標之-4C13-MMF之乙腈進行蛋白質沈澱來提取。對於組織樣品，將均化溶液(具有12.5mg/mL NaF之『空白』血漿)之等分試樣添加至組織樣品中。在蛋白質沈澱之前組織樣品在Fast Prep組織均質器上在6.5m/s下均質化60秒。血漿、前腦、小腦、空腸、脾及腎樣品中MMF之濃度使用合格LC-MS/MS分析在相應基質中測定。使用具有渦輪離子噴霧介面(AB Sciex,Foster City,CA)及Analyst軟體(1.6.1版)之API 5500三重四極質譜儀實現資料收集及整合。MMF相對於其內標之峰值面積比用以使用二次回歸，在1/x2加權下構築標準曲線。所有四個分析之定量下限(LLOQ)為10ng/mL。藉由標準及品質控制樣品之精確性及準確性監測分析之效能。
RNA提取及qRT-PCT
組織RNA提取：
為製備RNA，將冰凍組織放於2mL具有1.5mL QIAzol溶解試劑(QIAgen)及3.2mm不銹鋼珠粒(BioSpec Products,Bartlesville,OK)之無RNA酶之96孔區塊中。在微型球粒攪拌器(Biospec Products)中破壞組織達45秒四個週期。RNA在氯仿中萃取且水相與等體積之70%乙醇混合。萃取之RNA施用於RNeasy 96盤且根據製造商方案(RNeasy 96通用組織方案，QIAgen，Hilden Germany)，藉由旋轉法來純化。
qRT-PCR：
根據製造商方案(Life Technologies,Carlsbad,CA)使樣品逆轉錄成cDNA，且藉由即時聚合酶鏈反應(qPCR)分析。使用大鼠靶基因引子及6-FAMTM染料標記之TaqMan® MGBTM探針(Life Technologies)。含有100ng cDNA、900nM各引子及250nM TaqMan探針之反應物在QuantStudio 12k-撓曲系統(Life Technologies)上在95℃下循環一次，歷時10分鐘，接著95℃下10秒及60℃下1分鐘，循環40次。所有樣品均一式三份量測，其中Gapdh為標準化基因。來自Life Technologies之Taqman引子/探針組包括：Akr1b8(Rn00756513_m1)；Gclc(Rn00689046_m1)；Hmox1(Rn01536933_m1)；Nqo1(Rn00566528_m1)；Txnrd1(Rn01503798_m1)；Osgin1(Rn00593303_m1)及Gapdh(Rn01775763_g1)。使用比較CT法進行最終分析以計算倍數變化且在每個時間點，樣品相對於媒劑對照標準化。在所有圖中，描繪平均倍數變化(±標準差)。使用ANOVA與圖基多重比較檢驗進行統計比較，以評估在既定投藥途徑內在2小時或6小時媒劑與DMF處理之大鼠之間的差異。
結果
血漿及組織暴露
如圖15中所示，給藥後10分鐘，在藉由PO(100mg/kg；20860±8777ng/mL，156.8±66μM)或IV(30mg/kg；12880±4456ng/mL，96.8±33.5μM)投與DMF之動物中血漿中MMF暴露穩固。IV給藥後平均血漿MMF含量比用PO給藥實現之平均血漿MMF含量低38%，但此差異不顯著(圖15A)。在2小時，在接受DMF PO(2248±997ng/mL，16.9±7.5μM)及IV(7.8±2.7ng/mL，0.1±0.0μM)之動物中血漿MMF含量實質上下降，且此時，PO給藥後之含量顯著高於IV給藥之動物中的含量。在6小時時間點，DMF PO給藥後血漿中MMF含量在5只動物中之3只中可偵測(30±31ng/mL，0.2±0.2μM)；其餘2只大鼠中 含量低於定量含量。在6小時時間點，在來自DMF IV投與之大鼠的血漿樣品中MMF不可偵測。
前腦中(圖15C)，給藥後10分鐘，與PO給藥之MMF含量(862±391ng/mL,6.5±2.9μM)相比，IV給藥之動物中MMF含量顯著更高(1984±564ng/mL，14.9±4.2μM)。在小腦中觀測到類似結果(圖15D)，其中與DMF PO給藥(1206±644ng/mL，9.1±4.8μM)相比，DMF IV實現顯著更高之MMF含量(2740±1195ng/mL，20.6±9.0μM)。然而，至2小時，來自IV給藥之動物的腦MMF含量低於定量含量，而PO給藥之動物仍具有可量測之MMF含量(前腦：211±103ng/mL，1.6±0.8μM；小腦：243±118ng/mL，1.8±0.9μM)。所有暴露在文中均提供為平均值±標準差(n=5)。給藥後六小時，在前腦或小腦中MMF不可偵測。
在空腸、腎及脾中，在10分鐘，中值MMF含量存在數值差異，然而，當比較PO及IV DMF給藥途徑時此等差異不顯著(圖15B、E、F)。DMF PO給藥後兩小時，MMF含量顯著減少，但在腎、空腸及脾中可偵測。然而，IV DMF給藥後2小時，在任何組織中MMF均不可偵測。IV或PO DMF給藥後六小時，在任何組織中MMF不可偵測。
在比較組織與血漿MMF暴露之比率時，在PO及IV給藥之間以及組織之間觀測到差異。在前腦及小腦中，與IV給藥之大鼠相比，在PO給藥之大鼠中觀測到顯著更低之MMF穿透(圖15G，分別為p<0.005及p<0.0001)。在腎中，相對於PO給藥，IV給藥後中值比率數值上更高，但此差異不顯著。空腸、腎及脾中組織穿透比率無顯著差異；然而，應注意此等樣品展現相當大之可變性(空腸比率資料未示)。
CNS及外周組織中藥效作用
2小時及6小時時間點評估Nrf2依賴性轉錄改變揭露與用DMF IV(30mg/kg)處理之動物相比，用DMF PO(100mg/kg)處理之動物之間 的定性反應的差異。此外，在2個給藥組內，收集組織之間存在差異。前腦中，給藥後2小時及6小時，IV DMF給藥引起Nqo1、Osgin1、Akr1b8及Hmox1顯著調節(圖16)。DMF PO給藥僅僅調節兩種基因：2小時及6小時Osgin1及僅僅2小時之Akr1b8。小腦中轉錄反應類似於前腦(圖17)。IV DMF給藥後，給藥後2小時及6小時，觀測到Nqo1、Osgin1、Akr1b8及Hmox1顯著調節。小腦中Gclc及Txnrd1之轉錄反應亦顯著增加，但僅僅在後者6小時時間點。DMF PO給藥顯著調節小腦組織中3種基因：2小時及6小時之Osgin1、2小時之Akr1b8及6小時時間點之Hmox1。
在腎中，DMF IV給藥引起Nqo1及Txnrd1在2小時及6小時顯著調節，且Hmox1僅僅在2小時顯著調節(圖18)。DMF PO給藥後，在2小時及6小時時間點，相對於媒劑對照，Nqo1、Hmox1及Txnrd1存在顯著變化。Osgin1僅在2小時時間點顯著調節。
脾中轉錄變化類似於在腎中觀測到之變化，其中在DMF PO給藥後2小時及6小時Nqo1、Osgin1、Akr1b8、Gclc及Txnrd1均顯著增加(圖19)。DMF IV給藥後，注意到在2小時與6小時時間點脾中顯著轉錄增加，且僅僅在2小時時間點觀測到Akr1b8及Txnrd1顯著變化。亦在DMF IV給藥後6小時發現Nqo1顯著變化。在任一給藥模式後未觀測到脾中Hmox1表現變化。
空腸中表現水準變化定性類似於其他外周組織。DMF IV給藥後，觀測到在6小時Nqo1及Hmox1顯著增加，且在2小時Osgin1表現顯著增加(圖20)。DMF PO給藥引起在給藥後2小時與6小時Osgin1、Akr1b8及Txnrd1顯著增加。PO DMF給藥後，僅僅在6小時時間點，Nqo1表現增加，而在2小時時間點，觀測到Gclc及Hmox1顯著增加。
暴露-藥效反應關係
為評估暴露與藥效反應之間的可能關係，若干組織中之絕對 MMF暴露針對基因表現倍數變化繪圖。此方法具有固有限制；由於MMF半衰期短且形成藥效反應需要時間，所以無法在同一動物中量測此兩種特性。對於此分析，在給藥後2小時或6小時，在10分鐘之單點暴露針對在另一組動物中量測之藥效反應比較。
對於大部分評估組織(前腦、腎及脾)，MMF暴露與藥效反應存在明確的正相關(圖21A-I)。因此，在大鼠腦中，在DMF IV給藥引起更高暴露下，與DMF PO給藥後在動物中所見相比，存在更大量值轉錄反應。在外周，觀測到相反情況：DMF PO給與之動物與DMF IV給與之大鼠比較具有更高的暴露及轉錄改變。一種例外係在脾中及對Nqo1表現之作用(圖21G)，其中PO給藥後更高之MMF暴露不引起更大轉錄反應。最終，由於空腸中量測之高度變化之暴露(圖15B)，故針對暴露：反應關係，不評估此等資料。
結論
若干神經退化性疾病具有發炎及氧化應激作為中樞病理學成因。在臨床前及臨床研究中經口DMF已展示活化Nrf2路徑，且此可至少部分介導治療MS中之治療作用(Linker RA,Lee DH,Ryan S,van Dam AM,Conrad R,Bista P,Zeng W,Hronowsky X,Buko A,Chollate S,Ellrichmann G,Brück W,Dawson K,Goelz S,Wiese S,Scannevin RH,Lukashev M,Gold R.Fumaric acid esters exert neuroprotective effects in neuroinflammation via activation of the Nrf2 antioxidant pathway.Brain.2011年3月；134(第3部分)：678-92；Scannevin RH,Chollate S,Jung MY,Shackett M,Patel H,Bista P,Zeng W,Ryan S,Yamamoto M,Lukashev M,Rhodes KJ.Fumarates promote cytoprotection of central nervous system cells against oxidative stress via the nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2 pathway.J Pharmacol Exp Ther.2012年4月；341(1)：274-84；L.Amaravadi,S.Gopal,R.Gold, R.J.Fox,A.Mikulskis,M.Lukashev,J.Kong,M.Stephan,K.T.Dawson.Effects of BG-12 on a marker of Nrf2 pathway activation：pharmacodynamic results from the phase 3 DEFINE and CONFIRM studies.週四，2012年10月11日，15：30-17：00.ECTRIMS 2012,Lyon France)。臨床前證據表明增加MMF暴露(外周及CNS中)在神經退化性模型中功效更高；然而，由於經口投與當前調配物下劑量限制之耐受性，人類給藥無法實質上增加超過當前水準。因此，若存在一種機制選擇性地增加相對CNS暴露，同時維持與現有外周暴露相關聯之型態，則此可經由增加CNS細胞對毒性氧化及發炎應激之抗性而增強在神經退化性疾病中之功效。
實例1中所呈現之大鼠成像資料證明IV投與之DMF引起DMF或DMF活體內轉變產物選擇性分配至CNS中，同時經口傳遞產生更侷限於胃腸道之分佈。上文描述之研究的結果證實DMF IV投與引起生物學上活性MMF更大程度相對分配至腦中，此可與在相對於PO給藥，較低總DMF劑量實現之CNS中藥效反應增加相當，且因此血漿及外周暴露水準較低。
亦研究DMF IV給藥之初步安全性，且經由尾靜脈注射每日一次給藥重複5天後，尾中無治療相關之組織病理學發現(資料未示)。
6.2.2 DMF經口及靜脈內投與C57BL/6小鼠
縮寫清單
引言
實例1之小鼠中PET及QWBA研究展示靜脈內(IV)投與11C或14C標記之DMF使得放射性快速且選擇性分配至CNS中，而PO給藥產生主要限於胃腸道(GI)之更多外周分佈。此等成像資料能夠表徵放射性之解剖學位置，但放射性核素之分子身份未知且可為DMF、MMF或其他反丁烯二酸酯結合物或代謝物。為確定在DMF IV傳遞後觀測到之成像結果是否與有意義之生物作用(例如Nrf2活化)相關，在血漿、CNS及外周組織中評估藥物動力學及轉錄藥效作用。
CNS中過度氧化應激已確定為若干神經退化性病症中之病理學因素，且中和此毒性應激之治療策略可用於眾多種疾病中。若IV傳遞之DMF可增強CNS中Nrf2相關之轉錄反應及隨後促存活路徑超過在經口投與下可實現情形，則IV投藥途徑可提供CNS相關疾病中增強之有益作用。
概述
實例1中呈現之活體內正電子發射斷層攝影法(PET)及定量整體放射自顯影法(QWBA)研究證明反丁烯二酸二甲酯(DMF)之靜脈內(IV)傳遞使得來源於DMF之放射性選擇性分配至中樞神經系統(CNS)中，而經口(PO，經口投與)使得分佈主要定位胃腸道內。為評估在IV給藥 下差異生物分佈之可能生物作用，比較小鼠中IV對比PO投與之DMF，評估血漿、腦及外周組織中藥物動力學及藥效特性。
PO與IV投藥途徑均引起血漿、腦及外周組織中穩固的反丁烯二酸單甲酯(MMF，DMF之生物活性主要代謝物)暴露。相對於IV投與之DMF(17.5或30mg/kg)，DMF PO投與之劑量愈高(100mg/kg)，MMF之血漿及組織濃度顯著愈高。兩種IV劑量之集中比較揭露血漿、腎、空腸及脾中暴露劑量反應，而非腦中。比較組織穿透，與PO相比，IV給藥下MMF之腦與血漿比率顯著增強，此與來自成像研究之發現一致。
在DMF投與之PO與IV途徑後在腦及外周組織中觀測到顯著的藥效轉錄作用。儘管與PO DMF給藥相比，IV後腦中絕對MMF含量較低，但轉錄反應具有類似量值，表明腦中藥效反應不簡單與MMF含量相關聯。在外周組織中MMF暴露與轉錄反應之間存在正相關。
在比較IV DMF投與與IV MMF投與之作用時，IV DMF後，與IV MMF投與相比，MMF腦與血漿比率顯著更高，且此外僅僅IV DMF給藥使得腦中藥效反應顯著增加。DMF與MMF使得外周組織中產生顯著轉錄藥效變化。
亦評估藥效改變之持久性，且每日一次IV DMF給藥連續5日後的反應類似於單劑後觀測到之反應。亦在連續給藥5日後在尾部中進行試點組織病理學，且未鑑別到坦白病理(資料未呈現)。
在單劑及每日一次重複5次IV劑量後評估血細胞型態，以評估循環細胞群體之變化。在單劑後觀測到對若干參數之顯著影響，但單獨媒劑作用類似於接受DMF之組。每日一次5劑IV DMF後，淋巴細胞及單核細胞下降，顯著不同於接受媒劑之小鼠。
總之，經由IV輸注投與時DMF在腦中產生顯著藥效作用。此等轉錄變化類似於PO給藥後誘發之作用；然而，PO給藥之總含量高3.3 倍，此引起諸如腎及空腸之外周組織中相對暴露及藥效作用更高。若假定DMF/MMF之最大安全全身暴露類似於目前用於多發性硬化(MS)之暴露，若藉由IV輸注實現類似全身暴露，則腦中暴露及轉錄作用可能增強，此可賦予神經退化性疾病之額外益處。
材料與方法
所有涉及動物之程序均根據如美國國家衛生研究院採用之實驗動物照護與使用指南中建立的標準執行。所有動物方案均經Biogen Idec Inc.實驗動物照護與使用委員會批准，Biogen由國際實驗動物照護評估與授權協會授權。11-13週齡雌性C57BL/6小鼠購自Jackson Laboratories(Bar Harbor,ME)，且在實驗持續時間期間隨意給與標準水及食物。所有小鼠在研究開始前在Biogen Idec動物園適應至少一週。
化合物調配及動物程序
靜脈內調配及傳遞：
媒劑：20% Captisol®：每1L媒劑由200公克(g)Captisol在去離子水(dH2O)中制得。給藥體積為10mL/kg至尾靜脈中。
DMF(17.5mg/kg及30mg/kg)：DMF(Cilag批號I12JS4184；06-Dec-2013)經由攪拌棒攪拌以1.75mg/mL或3mg/mL溶解，接著在室溫水浴中超音波處理5-10分鐘。在室溫下溶液用攪拌棒攪拌實驗整個時間。給藥體積為10mL/kg至尾靜脈中。
MMF(27.08mg/kg)：MMF(Sigma 651419)經由用攪拌棒攪拌以2.708mg/mL溶解，接著在室溫下在水浴中超音波處理5分鐘。在室溫下溶液用攪拌棒攪拌實驗整個時間。MMF劑量經調整以補償與DMF比較較低之分子量，從而確保兩組之間傳遞同等「反丁烯二酸酯」。給藥體積為10mL/kg至尾靜脈中。
經口調配及傳遞：
媒劑：0.8% E4M等級羥丙基甲基纖維素(HPMC)：8g HPMC粉末添加至每公升dH2O中。最初，500mL熱dH2O(85-90℃)添加至8g HPMC中且用平坦金屬均質器攪拌，直至實現澄清無色溶液。使溶液冷卻至室溫，接著添加dH2O(室溫)，直至實現1L最終體積。再一次，用平坦金屬均質器攪拌溶液，直至均質。給藥體積為10mL/kg。
DMF(100mg/kg)：DMF(Cilag批號I12JS4184；2013年12月6日)經由用攪拌棒攪拌以10mg/mL懸浮在0.8% HPMC中，接著在室溫水浴中超音波處理5-10分鐘。在4℃下懸浮液用攪拌棒攪拌實驗整個時間。劑量體積為10mL/kg。
血漿及組織中MMF定量
血漿或組織勻漿樣品之等分試樣(25μL)藉由用含有作為內標之4C13-MMF之乙腈進行蛋白質沈澱來提取。對於組織樣品，將均化溶液(具有12.5mg/mL NaF之血漿)之等分試樣添加至組織樣品中。在蛋白質沈澱之前組織樣品在Fast Prep組織均質器上在6.5m/s下均質化60秒。血漿、腦、空腸及腎樣品中MMF之濃度使用合格LC-MS/MS分析在相應基質中測定。使用具有渦輪離子噴霧介面(AB Sciex,Foster City,CA)及Analyst軟體(1.6.1版)之API 5500三重四極質譜儀實現資料集合及整合。MMF相對於其內標之峰值面積比用以使用二次回歸，在1/x2加權下構築標準曲線。分別地，三種組織分析之定量下限(LLOQ)為1ng/mL，且血漿分析之定量下限為10ng/mL。藉由標準及品質控制樣品之精確性及準確性監測分析之效能。
RNA提取及定量PCR
組織RNA提取：
為製備RNA，將冰凍組織放於2mL具有1.5mL QIAzol溶解試劑(QIAgen)及3.2mm不銹鋼珠粒(BioSpec Products,Bartlesville,OK)之無RNA酶之96孔區塊中。在微型球粒攪拌器(Biospec Products)中破壞 組織達45秒四個週期。RNA用氯仿萃取且水相與等體積之70%乙醇混合。萃取之RNA施用於RNeasy 96盤且根據製造商方案(RNeasy 96通用組織方案，QIAgen，Hilden Germany)，藉由旋轉法來純化。
定量即時聚合酶鏈反應(qRT-PCR)：
根據製造商方案使用大容量cDNA反轉錄套組(Life Technologies,Carlsbad,CA)使樣品逆轉錄成cDNA，且藉由qRT-PCR分析。使用小鼠靶基因引子及6-FAMTM染料標記之TaqMan® MGBTM探針(Life Technologies)。含有100ng cDNA、900nM各引子及250nM TaqMan探針之反應物在QuantStudio 12k-撓曲系統(Life Technologies)上在95℃下循環一次，歷時10分鐘，接著95℃下10秒及60℃下1分鐘，循環40次。所有樣品均一式三份量測，其中Gapdh為標準化基因。來自Life Technologies之Taqman引子/探針組包括：Akr1b8(Mm00484314_ml)；Gapdh(Mm03302249_g1)；Gclc(Mm00802655_m1)；Hmox1(Mm00516005_m1)；Nqo1(Mm01253561_m1)；及Osgin1(Mm00660947_m1)。使用比較CT法來計算倍數變化且樣品相對於時間匹配之媒劑對照標準化。
全血細胞計數(CBC)
在給藥後指示時間點，將全血樣品(250μL)收集在EDTA管中，且維持在4℃下，直至在Charles River Laboratories進行CBC差異分析(在自收集時間起之24-36小時內分析)。
DMF IV多劑量可耐受性之尾組織病理學
在研究終止時自DMF及媒劑組收集小鼠尾，用於研究潛在注射部位反應。組織樣品保存在10%中性緩衝福馬林(NBF)中，接著轉移至Translational Pathology Laboratory以加工成石蠟塊、製備載玻片及蘇木素伊紅染色。藉由Biogen Idec Comparative Pathology部門進行染色載玻片之組織病理學評估(本文中未提供資料)。
結果
靜脈內投與DMF後藥物動力學及藥效學(研究1)
為評估DMF IV投與之作用，DMF在20% Captisol中調配且經由尾靜脈注射輸注至小鼠，且與接受DMF PO投與之小鼠比較。在給藥後10分鐘及2小時評估MMF暴露水準，而在給藥後2小時分析藥效轉錄反應。基於先前研究，選擇PO劑量，證明100mg/kg為多個小鼠模型中之有效劑量，且在假定DMF在媒劑中之溶解度下基於最大可能劑量，選擇IV組之高劑量(30mg/kg)。選擇DMF IV(17.5mg/kg)作為較低IV劑量。
組1：IV媒劑 (總共n=8，4只/時間點)
組2：IV DMF 17.5mg/kg (總共n=8，4只/時間點)
組3：IV DMF 30mg/kg (總共n=8，4只/時間點)
組4：PO媒劑 (總共n=8，4只/時間點)
組5：PO DMF 100mg/kg(總共n=8，4只/時間點)
在10分鐘時間點，將來自各組之4只動物處死，其中收集血漿及組織(腦、空腸及腎)以確定MMF暴露。給藥後兩小時，處死其餘4只動物，且收集血漿及組織。將來自2小時時間點之組織樣品分開，其中各樣品一半用於MMF暴露分析，且一半用於RNA提取及qRT-PCR，以評估Nrf2標靶基因之表現。
在給藥後10分鐘，量測DMF 100mg/kg PO投與(64725±16147ng/mL；498±124μM)後血漿中MMF之穩固暴露，而DMF以17.5mg/kg(6910±1459ng/mL；53±11μM)或30mg/kg(14275±1994ng/mL；110±15μM)IV給藥後MMF之血漿含量顯著較低(圖22A)。在腦、腎及空腸中，與DMF IV(17.5)相比，PO給藥下MMF含量亦顯著更高(圖22B、C、D)。在腦及空腸而非腎中，與DMF IV(30mg/kg)相比，DMF PO組中MMF含量亦顯著更高。在DMF IV組之間血漿或任何組織中無顯著差異。在2小時，來自已接受IV DMF之小鼠之血漿中未偵測到MMF，且接受PO DMF之小鼠中血漿MMF含量顯著減少(307±431ng/ml；2±3μM)。在2小時任何組織中未偵測到MMF。
在血漿、空腸及腎中，與IV 30mg/kg組相比，IV 17.5組中MMF含量平均低於43%，然而，如上所示，基於包括血漿組的預先指定之ANOVA多重比較分析，此等差異不顯著。一種僅僅直接比較兩個IV劑量組(t檢驗)之替代事後分析揭露此等差異為顯著的(p<0.05)，此與兩種劑量之差異一致且指示在IV給藥後此等組織中存在暴露劑量-反應。然而，在兩個DMF IV劑量組之間腦中MMF含量不存在顯著差異，差別在彼此10%內。此可指示MMF運輸至腦存在可飽和機制，但重要的是注意到此分析僅僅在單一時間點量測單一DMF代謝物MMF，且其他DMF衍生之反丁烯二酸酯物質可以在IV劑量之間變化的濃度下存在且可能具有不同的藥物動力學。
在比較組織與血漿MMF暴露之比率時，在PO及IV給藥之間、IV劑量之間以及組織之間觀測到差異。腦中，觀測到在17.5mg/kg IV給藥下穿透比PO給藥顯著更高(分別為18.7±7.4對比5.9±1.5；p<0.01)(圖22E)。然而，30mg/kg IV劑量之比率(8.1±1.9)未顯著不同於PO劑量。腎中，與PO(16.3±8.5)相比，兩種IV劑量之比率更高(17.5mg/kg，32.0±4.3及30mg/kg，42.7±11.4)，且更高IV劑量，顯著不 同(p<0.05)(圖22F)。空腸中劑量組之間組織穿透比率無顯著差異(圖222G)。
評估2小時時間點之藥效變化揭露DMF PO對比IV投藥途徑之間以及組織之間的反應差異。腦中PO給藥後，發現3種基因相對於媒劑對照顯著調節：Akr1b8(1.2±0.1)、Nqo1(1.1±0.1)及Osgin1(3.6±0.8)(圖23A-E，下文表7)。以17.5mg/kg IV給藥後，觀測到Akr1b8(1.4±0.1)、Gclc(1.1±0.1)、Nqo1(1.2±0.1)及Osgin1(3.1±0.6)顯著調節，且以30mg/kg IV給藥後觀測到Akr1b8(1.3±0.1)、Hmox1(1.3±0.1)、Nqo1(1.2±0.1)及Osgin1(5.0±0.7)顯著調節。觀測到2種基因之劑量-反應，其中對於Hmox1及Osgin1，在DMF IV 17.5對比30mg/kg給藥之間觀測到顯著差異(p<0.01)(圖23C、E)。
在腎中，在DMF PO給藥後，相對於媒劑對照，Gclc(1.7±0.4)、Hmox1(7.1±1.8)、Nqo1(1.8±0.3)及Osgin1(3.8±0.9)顯著增加(圖25A-E，下文表7)。IV給藥後誘發之腎變化適度，DMF 30mg/kg給藥後僅僅Akr1b8(1.6±0.2)及Gclc(1.4±0.3)顯著增加，且DMF 17.5mg/kg下Nqo1(1.6±0.4)及Osgin1(1.9±0.4)表現顯著增加。
在空腸中，在PO給藥後，(5.7±2.8)、Hmox1(2.9±0.6)及Nqo1(2.1±0.4)相對於媒劑對照均顯著增加(圖25A-E，下文表7)。DMF 30mg/kg IV給藥後，Nqo1(1.3±0.2)相較於媒劑以及相較於DMF IV 17.5mg/kg顯著增加。空腸中DMF 17.5mg/kg IV給藥下未觀測到基因表現顯著變化。
在比較MMF暴露於DMF投與之PO途徑與IV途徑之藥效反應時，觀測到一些趨勢。應注意由於DMF/MMF之快速藥物動力學需要短時間點(<2小時)，且觀測轉錄產物含量調節需要更長時間點(2小時)，所以此等暴露藥效關係在相同動物中未量測。因此，利用來自一組動物之10分鐘之平均暴露，與另一組中2小時之轉錄倍數變化比較，計 算比率。腦中，Osgin1及Akr1b8無明確的暴露-反應關係(圖26A、B)。儘管相對於DMF PO給藥，IV給藥後腦MMF暴露顯著較低，但觀測到類似量值藥效反應。另外，儘管DMF IV 17.5與30mg/kg之間的腦MMF暴露類似，但轉錄反應存在差異，其中與17.5mg/kg相比，30mg/kg下Osgin1具有顯著更高之倍數變化。此等資料可指示除MMF之外，其他生物活性DMF衍生反丁烯二酸酯物質存在於腦中，但在MMF特異性LC/MS/MS分析中未量測。或者，可能存在更複雜之劑量反應關係，其在單一時間點暴露分析中未捕捉到，其可能與跨越血腦障壁輸送及不同反丁烯二酸酯物質之代謝相關。
腎及空腸中之Hmox1反應及空腸中之Akr1b8展現暴露依賴性轉錄反應(圖27C、E、F)。然而，腎中Nqo1反應類似，儘管暴露顯著差異，此可能表明已藉由較低IV劑量實現的此基因之最大誘發平臺期(圖26D)。
靜脈內投與DMF及MMF後藥物動力學及藥效學(研究2)
為證實及擴大自上述研究1之發現，進行第二研究以評估IV投與後DMF(30mg/kg)之暴露及藥效特性。作為比較物，MMF(27.08mg/kg，與30mg/kg DMF同等的「反丁烯二酸酯」)亦包括在此研究內。在給藥後10分鐘及2小時評估MMF暴露水準，而在給藥後2小時及6小時分析轉錄藥效反應。在給藥後10分鐘、2小時及6小時進行具有差異圖之全血細胞計數(CBC)。
組1：IV媒劑 (總共n=12，4只/時間點)
組2：IV DMF 30mg/kg (總共n=12，4只/時間點)
組3：IV MMF 27.08mg/kg (總共n=12，4只/時間點)
給藥後十分鐘，將來自各組之4只動物處死，且收集血漿及組織(腦、腎、空腸及脾)以定量MMF暴露水準，以及收集全血以進行CBC。給藥後兩小時，處死各組之另外4只動物，且收集血漿、全血及組織。將來自2小時時間點之組織樣品分開，其中各樣品一半用於MMF暴露分析，且一半用於RNA提取/qRT-PCR，以評估Nrf2標靶基因之表現。給藥後六小時，處死各組之最後4只動物，且收集全血及組織。
給藥後10分鐘，DMF IV投與後血漿MMF暴露(11768±2261ng/mL，90.5±17.4μM)與MMF IV給藥後MMF血漿含量不顯著不同(13050±6850ng/mL；100.4±52.7μM)(圖27A)。在腎、空腸及脾中，IV DMF與MMF投與之間MMF含量無顯著差異(圖27C、D、E)。與經由IV給藥接受DMF之動物相比，接受MMF之動物中腦MMF含量存在31%差異，但此差異不顯著(圖27B)。在2小時，在藉由IV投與接受DMF或MMF之小鼠的血漿或任何組織中未偵測到MMF。
在比較組織與血漿MMF暴露之比率時，觀測到與MMF給藥(7.2±3)比較，IV DMF給藥(13.1±1.8)的腦穿透顯著更高(p<0.05)(圖 27F)。腎、空腸或脾中DMF與MMF投與之間的組織穿透比無顯著差異。
評估2小時及6小時時間點之藥效變化揭露IV DMF與MMF投與之間反應的差異。腦中，DMF給藥後2小時，發現僅僅Osgin1顯著調節(2.7±0.9)(圖28E)。在給藥後6小時，相對於媒劑對照，在接受DMF IV之動物中，Hmox1(1.2±0.1)、Nqo1(1.6±0.2)及Osgin1(1.5±0.2)顯著增加(圖28C、D、E，下文表7)。此處不重複預先鑑別的IV 30mg/kg投與之DMF(圖23A)下Akr1b8表現之顯著增加(圖28A)，但偵測小量值之顯著變化(研究1中<1.5倍)視對照與處理組之個別資料組中的變化性而定。相對於媒劑對照，MMF IV投與後無任何基因之轉錄顯著增加。在6小時時間點，與MMF IV投與相比，DMF使得基因Hmox1、Nqo1及Osgin1均顯著增加(圖28C、D、E，下文表7)。
腎中，IV投與之MMF給藥後2小時，相對於媒劑對照，Gclc(1.9±0.7)、Nqo1(1.6±0.4)及Osgin1(2.4±0.8)之轉錄產物含量均顯著增加(圖29B、D、E，下文表1)。在2小時時間點，未觀測到DMF投與顯著變化。MMF經由IV輸注給藥後六小時，相對於媒劑對照，Akr1b8(1.5±0.1)、Gclc(2.3±0.6)、Nqo1(2.3±0.3)及Osgin1(1.4±0.0)顯著增加(圖29A、B、D、E，下文表1)。腎中，DMF IV投與後六小時，相對於媒劑對照，Akr1b8(1.3±0.1)、Nqo1(2.5±0.1)及Osgin1(1.4±0.1)顯著增加(圖29A、D、E，下文表1)。
IV給藥後兩小時，空腸中，相對於媒劑對照，針對MMF及DMF，分別觀測到Akr1b8(2.4±0.7、2.0±0.3)、Nqo1(1.5±0.2、1.5±0.3)及Osgin1(1.6±0.1、1.3±0.1)之表現顯著增加(圖30A、D、E，下文表1)。此等變化中比較MMF與DMF，僅僅Osgin1變化顯著(p<0.05)。MMF經由IV投與給藥後六小時，相對於媒劑對照，Gclc(1.5±0.1)、Nqo1(1.7±0.1)及Osgin1(1.2±0.1)顯著增加(圖30B、D、E， 下文表1)。經由IV輸注投與DMF後六小時，相對於媒劑對照，Akr1b8(3.8±1.5)、Gclc(1.3±0.1)及Nqo1(1.9±0.3)顯著增加(圖30A、B、D，下文表1)。在比較DMF對比MMF IV投與後的表現水準時，給藥後2小時，Gclc、Hmox1及Osgin1存在顯著差異。給藥後6小時接受DMF及MMF在動物之間僅僅Gclc存在顯著差異。
在比較IV DMF對比MMF投與之暴露與藥效反應時，應再次注意由於短化合物藥物動力學與形成藥效轉錄反應所需之更長時間之間的時間分離，所以此等「PK/PD」關係並非取自相同動物。利用10分鐘之平均暴露及2或6小時之轉錄倍數變化，計算比率。腦中，比較DMF及MMF IV投與時，2小時之Osgin1及6小時之Nqo1存在明確的暴露-反應關係(圖31A、B)。在兩種情況下，相對於MMF IV，DMF IV產生更高MMF暴露，以及更高標準化之轉錄倍數變化。腎中，相對於DMF IV，MMF IV給藥引起6小時Hmox1及2小時Osgin1更高暴露，以及更大標準化倍數變化(圖31C、E)。腎中6小時Nqo1及空腸中6小時Nqo1及2小時Osgin1，相對於DMF IV給藥，儘管MMF IV給藥後MMF暴露更高，但觀測到類似的轉錄反應(圖31D、G、H)，且在6小時Akr1b8情況下，MMF IV投與具有較低標準化倍數變化(圖31F)。
表1為相對於時間匹配之媒劑對照，指示組織中指示基因之倍數變化的概述表。數值指示平均倍數變化±標準差(n=4)。與媒劑顯著的變化以粗體指示，用灰色突出顯示(單向ANOVA與圖基多比較檢驗)。
作為研究2一部分的靜脈內投與DMF或MMF後血液參數之預備分析
為確定經由靜脈內輸注投與DMF 30mg/kg或MMF 27.08mg/kg後對血細胞群體是否存在任何有害作用，將在給藥後10分鐘、2小時及6小時收集的來自4只小鼠/組的全血送至Charles River Laboratories進行具有差異的全血細胞計數(CBC)。雖然僅僅自4只動物/組很難得出任何重要結論，但似乎在2小時時間點白血球普遍減少(圖32A)。嗜中性 粒細胞、淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性球及嗜鹼性球之細胞數此減少不特別與DMF或MMF處理一致，因為在媒劑對照組中亦觀測到類似減少(圖32B-F)。此表明不與DMF或MMF投與相關非媒劑相關現象。在6小時時間點一些細胞群體似乎恢復一些(淋巴細胞、單核細胞及嗜酸性球)，而其他與10分鐘時間點相比顯著更低(嗜中性粒細胞及嗜鹼性球)。對紅血球、血紅蛋白、血細胞比容、平均紅血球容積或血小板無作用(圖33A-E)。由於此預備研究中樣品之總變化性及複製數目低，所以血細胞部分之統計分析未完成。
多劑靜脈內DMF投與與WBC計數(研究3)
為確定DMF多劑IV投與之作用及耐受性，進行研究3以評估每日一次IV 5劑後DMF(30mg/kg)之藥效特性且研究在尾部注射部位附近組織病理學說改變之出現。具有差異圖之CBC在最後一次給藥後10分鐘經由面靜脈抽血進行，且在最後一次給藥後2小時，在來自相同動物之組織中分析藥效Nrf2轉錄反應。亦在預備毒物學研究中在尾巴區域上進行組織病理學。
組1：IV媒劑 (n=4)
組2：IV DMF 30mg/kg (n=5)
來自此多劑研究之藥效資料與單次劑量反應一致，其中腦中轉錄反應顯然增加。腦中，最後一次給藥後2小時，IV DMF 30mg/kg給 藥後Osgin1(相對於媒劑對照2.5±0.6標準化倍數變化)及Hmox1(1.7±0.2)增加(圖34B、D)。空腸中，看到Akr1b8(3.3±0.75)增加(圖34A)。在DMF多天IV給藥後分析的組織中其他轉錄產物一般未受影響(圖34A-E)。
收集小鼠尾部之切片以用於組織分析。連續5天一天一次IV投與DMF 30mg/kg產生的變化類似於媒劑對照小鼠中所觀測到，由以下組成：嗜中性粒細胞及嗜酸性球之最低限度至輕度血管週混合發炎浸潤物；急性失血；及偶然血栓形成(資料未呈現)。媒劑對照與DMF處理小鼠之類似變化與程序及/或媒劑相關反應一致。
為確定在DMF 30mg/kg或媒劑多劑IV投與後對血細胞群體是否存在任何有害作用，在最後一次(第五次)給藥後10分鐘收集全血，且送至Charles River Laboratories進行具有差異的全血細胞計數(CBC)。雖然僅僅自4-5只動物/組很難得出任何重要結論，但似乎在DMF處理下在最後一次給藥後2小時白血球普遍減少(圖35)。特定言之，觀測到在DMF處理下淋巴細胞(38%)及單核細胞(60%)顯著下降。與以上討論之研究2一致，在此研究中對紅血球、血紅蛋白、血細胞比容、平均紅血球容積或血小板無作用。
結論
若干神經退化性疾病具有發炎及氧化應激作為中樞病理學成因。在臨床前及臨床研究中經口DMF已展示活化Nrf2路徑，且此可至少部分介導治療MS中之治療作用(Linker RA,Lee DH,Ryan S,van Dam AM,Conrad R,Bista P,Zeng W,Hronowsky X,Buko A,Chollate S,Ellrichmann G,Brück W,Dawson K,Goelz S,Wiese S,Scannevin RH,Lukashev M,Gold R.Fumaric acid esters exert neuroprotective effects in neuroinflammation via activation of the Nrf2 antioxidant pathway.Brain.2011年3月；134(第3部分)：678-92；Scannevin RH, Chollate S,Jung MY,Shackett M,Patel H,Bista P,Zeng W,Ryan S,Yamamoto M,Lukashev M,Rhodes KJ.Fumarates promote cytoprotection of central nervous system cells against oxidative stress via the nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2 pathway.J Pharmacol.Exp.Ther.2012年4月；341(1)：274-84；L.Amaravadi,S.Gopal,R.Gold,R.J.Fox,A.Mikulskis,M.Lukashev,J.Kong,M.Stephan,K.T.Dawson.Effects of BG-12 on a marker of Nrf2 pathway activation：pharmacodynamic results from the phase 3 DEFINE and CONFIRM studies.11,2012年10月11日週四，15：30-17：00.ECTRIMS 2012,Lyon France)。臨床前證據表明增加MMF暴露(外周及CNS中)在神經退化性模型中功效更高；然而，由於經口投與當前調配物下劑量限制之耐受性，人類給藥無法實質上增加超過當前水準。因此，若存在一種機制選擇性地增加相對CNS暴露，同時維持與現有外周暴露相關聯之型態，則此可經由增加CNS細胞對毒性氧化及發炎應激之抗性而增強在神經退化性疾病中之功效。
實例1中所呈現之成像資料證明IV投與之DMF引起DMF或DMF衍生化合物選擇性分配至CNS中，同時經口傳遞產生更侷限於胃腸道之分佈。此報告中描述之研究的結果證實與PO DMF給藥比較，DMF IV投與引起生物學上活性MMF更大程度分配至腦中，總體上引起在較低總DMF劑量下實現之CNS藥效反應，及對應血漿暴露。所有基因及劑量之暴露-反應關係有些不清楚，且針對表徵所有DMF衍生代謝物之生物分佈、藥物動力學及身份的可能未來研究可提供更多對此等關係之瞭解。
結果概述
研究1：單次給與DMF PO(100mg/kg)或IV(17.5或30mg/kg)
●10min之血漿暴露與全部投與劑量成相對線性關係。
●DMF PO給藥後，與DMF IV給藥相比，血漿、腦、腎及空腸中血漿及組織中MMF含量顯著更高。兩個IV給藥之事後分析揭露血漿、腎及空腸中顯著暴露劑量反應。DMF IV投與下MMF腦暴露無劑量反應，因為17.5及30mg/kg劑量引起類似MMF暴露。
●比較血漿與腦比率；DMF IV(17.5mg/kg)產生之比率為100mg/kg PO產生之比率的約雙倍。DMF IV(30mg/kg)之腦穿透比類似於PO。腎中DMF IV(17.5mg/kg)比率未不同於PO，但DMF IV(30mg/kg)顯著高於PO。空腸中任何組織穿透比率無差異。
●腦中，2小時，DMF IV誘發Akr1b8、Gclc、Hmox1、Nqo1及Osgin1之mRNA顯著變化。17.5與30mg/kg DMF之間存在Osgin1及Hmox1誘發之劑量-反應，但Akr1b8、Gclc及Nqo1無。PO給藥誘發Akr1b8、Nqo1及Osgin1表現顯著變化。
●腎中，2小時，IV投與之DMF在30mg/kg下誘發Akr1b8及Gclc顯著變化，且在17.5mg/kg下誘發Nqo1及Osgin1顯著變化。DMF PO誘發Gclc、Hmox1、Nqo1及Osgin1表現顯著變化。
●空腸中，2小時，PO投與之DMF誘發Akr1b8、Hmox1及Nqo1顯著變化。IV投與之DMF在30mg/kg下誘發Akr1b8及Nqo1顯著變化。未觀測到IV投與之DMF在17.5mg/kg下顯著的基因調節。
●腦中不存在明顯的暴露：藥效學關係；絕對組織MMF暴露愈高，並不對應於PD反應愈高。外周組織中，PO給藥下暴露愈高，PD誘發愈大。
研究2：單次給與DMF IV(30mg/kg)或MMF IV(27.08mg/kg)
●所有組織中10分鐘時MMF之絕對暴露在DMF IV愈MMF IV組之間類似。然而，與MMF IV相比，DMF IV之腦穿透比率顯著更高。在腎、空腸或脾中，未觀測到DMF IV與MMF IV相比更高的組織穿透比率。
●腦中，給藥後2小時，DMF IV誘發Osgin1顯著增加，且給藥後6小時，Nqo1、Hmox1及Osgin1顯著增加。MMF IV未誘發任何顯著反應。在6小時時間點，對Hmox1、Nqo1及Osgin1之反應在DMF與MMF IV投與之間顯著不同。
●腎中，經由IV輸注投與之DMF及MMF引起Akr1b8(6小時)、Nqo1(6小時)及Osgin1(6小時)類似顯著增加。IV投與之MMF誘發Gclc(2及6小時)及Nqo1(2小時)及Osgin1(2小時)額外顯著增加。
●空腸中，經由IV輸注投與之DMF及MMF引起Akr1b8(6小時)、Gclc(6小時)、Nqo1(2小時及6小時)及Osgin1(2小時)顯著增加。經由IV輸注投與之MMF引起6小時Osgin1額外顯著增加。
●腎及空腸中不存在DMF IV或MMF IV之明顯暴露：藥效學關係。腦中存在暴露：藥效學關係之一些證明，因為與MMF IV比較，DMF IV引起更高MMF腦暴露，且具有相應更大的藥效作用。
●血細胞型態之預備分析揭露包括媒劑之所有三組中處理之實質作用。媒劑組中DMF或MMF無一致差別。
研究3：連續5天每日一次給與DMF IV(30mg/kg)
●連續5天每日一次DMF IV給藥後，觀測到腦中給藥後2小時Hmox1、Osgin1及Gclc含量顯著增加，類似於單劑後之反應。亦在及空腸中觀測到Akr1b8、Nqo1及Osgin1含量顯著增加。
●在第5天最後一劑後尾巴之預備組織病理學分析未揭露任何處理相關之發現(本文中資料未呈現)。
●第五次DMF IV劑量後十分鐘，相對於媒劑對照，淋巴細胞及單核細胞數顯著降低，而其他細胞群體未改變。
6.3 實例3：神經疾病之動物模型
如以上實例1及2中所示，與DMF經口投與時相比，當靜脈內投與時DMF意外地更多累積在腦中而非外周組織中，且更大量在腦中。 基於此等資料，可預測靜脈內投與之DMF與經口投與之DMF相對比，關於對中樞神經系統之作用，將具有更有效的活體內作用，此為諸如中風、肌萎縮性側索硬化、亨廷頓氏病、阿茲海默氏病及帕金森氏病之神經疾病的療法所需。因此，可預期當DMF投與神經疾病之動物模型中時，靜脈內投與之DMF將展示與經口投與之DMF比較，在相同劑量下藥效作用更顯著，或靜脈內投與之DMF將展示與較高劑量下經口投與之DMF比較，較低劑量下類似的藥效作用。
6.3.1 評估神經疾病中DMF之治療功效的動物模型
6.3.1.1 中風
此研究之主要目標為評估靜脈內輸送之反丁烯二酸二甲酯(DMF)對缺血性及出血中風之小鼠及/或大鼠模型的影響。在誘發中風之前動物將用IV DMF或安慰劑進行預處理。此外，亦評估中風後IV DMF對比安慰劑之處理。Ding Y,Chen M,Wang M,Li Y,Wen A.Posttreatment with 11-Keto-β-Boswellic Acid Ameliorates Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury：Nrf2/HO-1 Pathway as a Potential Mechanism.Mol.Neurobiol.2014年10月28日[印刷前電子版]；Ashabi G,Khalaj L,Khodagholi F,Goudarzv及M,Sarkaki A.Pre-treatment with metformin activates Nrf2 antioxidant pathways and inhibits inflammatory responses through induction of AMPK after transient global cerebral ischemia.Metab.Brain.Dis.2014年11月21日[印刷前電子版]；及Zhao X,Sun G,Ting SM,Song S,Zhang J,Edwards NJ,Aronowski J.Cleaning up after ICH：the role of Nrf2 in modulating microglia function and hematoma clearance.J.Neurochem.2014年10月18日[印刷前電子版]。
大部分缺血性中風發生在大腦中動脈(MCA)區域中，且許多動物中風模型集中在此動脈。大腦中動脈閉塞(MCAO)之管腔內單絲模型 涉及手術細絲插入頸外動脈且正向擰至頸內動脈(ICA)，直至尖端咬合MCA起點，引起血流停止及隨後MCA區域中腦梗塞。MCAO技術將用於模擬永久或暫態閉塞。對於暫態MCAO，在一定時間間隔(30min、1h或2h)後移除縫線，實現再灌注。對於永久MCAO，細絲留在原地(24h)。為評估腦梗死程度，切除之腦切片將用氯化2,3,5-三苯基四唑鎓鹽(TTC)。TTC染色之影像分析將用於定量確定藥物作用。將評估梗塞前與梗塞後藥物處理用於治療作用。Chiang T1,Messing RO,Chou WH.Mouse model of middle cerebral artery occlusion.J.Vis.Exp.2011年2月13日；(48).pii：2761。
6.3.1.2. 肌萎縮性側索硬化
此研究之主要目標為評估靜脈內輸送之反丁烯二酸二甲酯(DMF)對肌萎縮性側索硬化(ALS)之小鼠模型的影響。ALS為特徵在於上及下運動神經元損失之晚期發作型神經退化性疾病。SOD1突變引起ALS之基因遺傳形式(Rosen,D.R.,Siddique,T.,Patterson,D.,Figlewicz,D.A.,Sapp,P.,Hentati,A.,Donaldson,D.,Goto,J.,O'Regan,J.P.,Deng,H.X.等人(1993).Mutations in Cu/Zn superoxide dismutase gene are associated with familial amyotrophic lateral sclerosis.Nature 362,59-62.)。小鼠中SOD1-G93A之表現導致類似於人類疾病之疾病表型，包括運動神經元損失、麻痹及過早死亡(Gurney,M.E.,Pu,H.,Chiu,A.Y.,Dal Canto,M.C.,Polchow,C.Y.,Alexander,D.D.,Caliendo,J.,Hentati,A.,Kwon,Y.W.,Deng,H.X.等人，(1994).Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu,Zn superoxide dismutase mutation.Science 264,1772-1775)。目前，僅僅一種藥物批准用於治療ALS，且其僅僅為患者提供少量的存活益處。
動物
雌性SOD1-G93A小鼠將購自Jackson Laboratories。所有小鼠將為 轉殖基因陽性。每個給藥組將使用十六隻小鼠。給藥將自第50-55天開始。
轉殖基因證實及組分佈
各SOD1-G93A小鼠將攜帶變化數目之轉殖基因複本。複本數目將影響疾病發作及進展，複本數目將藉由定量PCR監測。組將針對複本數目進行平衡。另外，同窩出生者將分佈在各組。
給藥
小鼠將每日經口或者靜脈內給與媒劑或DMF一次。
監測運動疾病發作
SOD1-G93A之疾病發作及進展將藉由三種方法監測。所有方法將以盲法方式進行。體重將每日記錄。將每日檢查小鼠之疾病發作，如腿顫振或在尾提升後後肢彎曲減少所定義。亦在第12、14及16週依據加速旋轉棒檢驗評估小鼠。對於此檢驗，小鼠將首先適應以2rpm旋轉300秒之棒，一天一次，歷時兩天。對於實際測試，小鼠將置於90秒內自2rpm加速至40rpm之棒上。到達全速後，測試又持續30秒。小鼠將每天測試三次且記錄最長時間。無法在棒上保持20秒之小鼠將剔除，不進行進一步測試。
終點定義
當小鼠未能在15秒內自兩邊向右時，將確定小鼠已到達實施人道安樂死之終點標準。
統計分析
對於旋轉棒及體重，將藉由雙向ANOVA比較數值。將藉由斷點分析進一步評估體重。斷點分析藉由完成一系列線性回歸擬合來鑑別曲線之拐點。在最低殘差下上升及下降斜率之曲線擬合的交叉點定義為斷點。對於各小鼠，將確定斷點。接著藉由史都登氏T檢驗(Student’s T-test)比較兩組。將使用Mantel-Cox對數等級檢驗法測試 發作及存活差異。將完成併入同窩出生者狀態之Cox比例危險檢驗的進一步檢驗。
預計靜脈內投與之DMF比經口投與之DMF更有效。
6.3.1.3. 亨廷頓氏病
A. 亨廷頓氏病轉殖基因小鼠模型中神經保護作用
N171-82Q品系之轉殖基因HD小鼠及非轉殖基因同窩出生者將用經口投與之DMF、靜脈內投與之DMF或10週齡之媒劑處理。將投與30mg DMF/kg之IV劑量，且將投與100mg DMF/kg之口服劑量。小鼠將置於旋轉棒(「旋轉棒」)上。小鼠自旋轉棒掉下之時間長度將記錄為運動協調之量度。小鼠行進之總距離亦將記錄為總運動力之量度。預計靜脈內投與DMF之N171-82Q轉殖基因HD小鼠比投與媒劑或經口投與DMF之小鼠保持在旋轉棒上更長時間段，且行進更遠。
B. 亨廷頓氏病之丙二酸鹽模型
參與能量產生路徑之一系列可逆及不可逆酶抑制劑已用於產生諸如帕金森氏病及亨廷頓氏病之神經退化性疾病之動物模型。詳言之，琥珀酸去氫酶(一種影響細胞能量體內平衡之酶)之抑制劑已用於產生亨廷頓氏病之模型。Kumar P,Kalonia H,Kumar A.Huntington's disease：pathogenesis to animal models.Pharmacol.Rep.2010年1月-2月；62(1)：1-14。
在丁哌卡因(2mg/kg)、美索比妥(Brevital)(50mg/kg，腹膜內)及異氟烷麻醉下將大鼠麻醉，且置於立體定位框中且準備進行紋狀體內注射。在以下對應於立體定位座標之左紋狀體中單一部位注射丙二酸鹽之單一注射：AP：離前囟點+7.0mm；側面：離中線2.8mm；DV：離前囟點顱骨表面-5.5mm。
丙二酸鹽(於生理鹽水中)將以2.0μl中2.0μmol之劑量在4分鐘內使用注射泵注射。注射針在輸注後將留在原地又1.0分鐘，且將緩慢抽 出以使輸注物沿針道回流最少。大鼠將在加熱板上保持溫熱直至自麻醉醒來。(Green及Greenamyre.Characterization of the excitotoxic potential of the reversible succinate dehydrogenase inhibitor malonate.J.Neurochemistry(1995),64(1)：430-4436)。
在立體定位注射丙二酸鹽前24小時所有雄性史泊格-多利大鼠將給與DMF，大鼠此後將每日經口或靜脈內給與，直至研究結束，總共6(實驗1)或7(實驗2)劑DMF。最後一次給藥後三十分鐘，所有動物將藉由CO2處死，且其腦將快速移除且儲存在含20%蔗糖之PBS中至少1小時，接著轉移至含30%蔗糖之PBS中隔夜。第二天，所有腦將埋入OCT中且儲存在-80℃下。處理組將如下給藥：媒劑，經口30mg/kg，經口100mg/kg，靜脈內15mg/kg，及靜脈內30mg/kg。
立體定位丙二酸鹽注射後四天，阿樸嗎啡(1.0mg/kg)將藉由皮下注射給與，且以15分鐘時間間隔確定同側轉動行為，歷時60min。
病變大小之細胞色素氧化酶組織化學及分析
培養基將由500ml 0.1M磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中200mg細胞色素C及200mg 3,3’-二胺基聯苯胺鹽酸鹽(DAB)組成。將載玻片在37℃下培育90分鐘且用PBS洗滌兩次(2-5分鐘)，接著移除至4%中性緩衝三聚甲醛，歷時20分鐘。將切片用PBS清洗兩次(2-5分鐘)，接著用蒸餾水清洗兩次(2-5分鐘)，脫水，在二甲苯中清除且蓋上蓋玻片。使用Open-Lab影像分析系統將各切片上病變面積定量。整個紋狀體上取切片且每只大鼠將分析總共二十個25μm切片。面積量測求和且乘以交叉距離(200μm)以確定每個個體之病變體積。
免疫螢光顯微術
對於藉由免疫螢光分析之組織，將動物麻醉且用4%三聚甲醛經心灌注。將移除腦且在4℃下後固定隔夜。接著將組織轉移至含30%蔗糖之PBS中。將連續25-μM冰凍切片插入冠狀平面，且空氣乾燥至 明膠塗佈之玻璃載玻片上。所有組織切片均在PBS中洗滌且在室溫下用5%正常山羊血清於0.1% Triton X-100/PBS中之溶液阻斷45分鐘。接著切片與神經元之單株抗-NeuN(1：500；Millipore,Temecula,CA,USA)及星形細胞之多株抗神經膠質纖絲酸性蛋白(GFAP)(1：600)一起於阻斷溶液中在4℃下培育隔夜。二級抗體在室溫下培育1小時。用Openlab及Spectrum軟體獲取所有免疫螢光影像。
統計分析
病變體積之資料將藉由單向方差分析(ANOVA)，接著圖基檢驗分析，以評估處理組與媒劑組之間的差異。
MMF暴露之藥物動力學分析
組織樣品均質化：
將研究及空白腦樣品轉移至組織管(TT1)(購自Covaris,Inc)中且附接於矽酸硼玻璃管且置於乾冰上，至少15分鐘。使用Cryoprep系統(Covaris Inc.)粉碎樣品且轉移至玻璃管，接著均質化。對於每1份(亦即100mg)組織，將具有15mg/mL NaF之2份(亦即200uL)水添加至各玻璃管中。組織在4℃下使用Covaris E210均質化，每個樣品約3分鐘。Covaris設置如下：工作循環20%，強度10及循環/破裂1000。均質化後，將1份(亦即100uL)乙腈添加至各玻璃管中，此將等於預先添加之水體積。均漿將再用E210均質化，每個樣品30秒。在同一天提取前均質化組織將儲存在冰上(均質化稀釋因數=4)。剩餘樣品將儲存在-80℃下。
樣品製備：
研究血漿樣品將保存在冰上。該樣品暴露於室溫之總時間每次提取少於4.5小時。根據預定規劃，將50μL樣品等分試樣(研究樣品、空白對照、校準用標準或QC樣品)手動轉移至96孔盤中。50：50乙腈：水之5uL等分試樣添加至空白及僅僅研究樣品之孔中。將200μL內標 外加溶液添加至各管中，雙白除外，其中將添加200μL 100%乙腈。接著盤渦流約60秒，且在3000rpm下離心10分鐘。將150μL體積之上清液轉移至新96孔注射盤中，且上清液在氮氣下蒸乾。乾提取物將在150uL含10%乙腈、0.1%甲酸之水中復原。盤渦流2分鐘，且負載至自動取樣器上進行注射以藉由LC-MS/MS確定MMF濃度。
LC-MS/MS分析：
具有Leap CTC PAL冷凍自動取樣器及Waters Atlantis dC18管柱(50×2.1mm，3μm)之Agilent 1200二元泵用於分析樣品。在分析期間使用之流動相為：流動相A：含0.1%甲酸之水；流動相B：含0.1%甲酸之乙腈。流速為400-500μL/min且注射體積為約30μL。偵測器為Applied Biosystems/MDS Sciex API 4000三重四極質譜儀。儀器將裝備有負離子模式之TIS源且分析物以MRM模式監測。Q1及Q3分別以單位/低解析度操作，且MMF及MEF(內標)之MS/MS轉變品質為128.8->70.9及142.8->70.9。未知樣品之濃度將針對標準計算。
在亨廷頓氏病動物模型中預計靜脈內投與之DMF比經口投與之DMF更有效。
6.3.1.4. 阿茲海默氏病
表現Swedish AD突變基因、hAPPK670N、M671L之雜合轉殖基因小鼠(Tg2576；Hsiao,Learning & Memory 2001,8,301-308)將用作阿茲海默氏病之動物模型。將動物安放在標準條件下，具有12：12光/暗循環，且食物及水隨意取用。在9月齡開始，小鼠分成三組。頭兩組動物將經口或靜脈內接受DMF六週。剩餘對照組將靜脈內接受媒劑六週。
在所有實驗組中，經2週，使用相同次序進行行為測試：(1)空間顛倒學習、(2)運動力、(3)恐懼狀況及(4)撞擊敏感度。
空間學習模式及顛倒學習之獲取將在DMF投與開始5天期間使用 如Bardgett等人，Brain Res Bull 2003,60,131-142中所描述之水T迷宮試驗。在第1-3期間使小鼠習慣水T迷宮，且任務獲取在第4天開始。在第4天，在迷宮一個選擇臂中訓練小鼠尋找逃脫平臺，直至連續追蹤進行6至8次正確選擇。顛倒學習階段將在第5天進行。在顛倒學習階段期間，在與在第4天逃脫平臺位置相反的選擇臂中訓練小鼠尋找逃脫平臺。使用與任務獲取期間相同的效能標準及試驗內時間間隔。
將評估大步行運動以確定空間顛倒學習模式的結果不受步行能力影響。兩天休息期後，在第8天在裝備有對運動敏感之偵測器之網格的腔室中評估水平步行運動，排除垂直及精細運動肌運動。在一小時時間期間將量測水平維度上伴隨偵測器同時阻斷及未阻斷的運動數目。
將使用在第9天開始之恐懼狀況模式測試前後關係及提示記憶之動物能力。測試將在腔室中進行，該腔室含有一塊浸透發出氣味之溶液，諸如薄荷浸出物的脫脂棉，脫脂棉置於格形地面下方。在第9天執行5分鐘、3個試驗80db、2800Hz音調足底電擊次序以訓練動物。在第10天，藉由將各小鼠送回腔室而不暴露於音調及足底電擊，且記錄每10秒冰凍行為之存在或缺乏達8分鐘，來測試背景記憶。冰凍將定義為無運動，諸如步行、用鼻吸氣或刻板，不同於呼吸。
在第11天，將測試動物對交替背景及對聽覺提示之反應。椰子提取物置於杯中且呈現80dB音調，但不輸送足底電擊，接著在試驗開始頭兩分鐘期間確定對交替背景之反應的冷淡存在或缺少。接著試驗剩餘8分鐘，連續呈現音調，且確定對音調之反應冷淡的存在或缺少。
在第12天，將測試動物以評估其對條件刺激，亦即足底電擊之敏感性。
在行為測試之最後一天後，將動物麻醉且移除腦，後固定隔 夜，且經由海馬切開切片。將切片染色以使β-澱粉狀蛋白斑成像。
將使用適當統計法分析資料。預計用靜脈內投與之DMF處理之動物與安慰劑動物或經口投與DMF之動物比較，學習及記憶功能改善。
6.3.1.5. 帕金森氏病
為評估靜脈內(IV)投與之DMF的作用，DMF將調配於Captisol®中且經由尾部靜脈輸注注射至大鼠或小鼠中，且與藉由經口管飼法(PO)接受DMF之大鼠或小鼠比較。將測試DMF之兩個IV劑量，17.5及30mg/kg，以及與經由PO投與之DMF(100mg/kg)一起之僅僅媒劑對照或媒劑(HPMC)。
組1：IV媒劑
組2：IV DMF 17.5mg/kg
組3：IV DMF 30mg/kg
組4：PO僅僅媒劑
組5：PO DMF 100mg/kg
A. MPTP誘發之神經毒性
MPTP或1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶為一種在人類與實驗動物中產生帕金森氏症候群之神經毒素。MPTP神經毒性之機制之研究展示其涉及藉由單胺氧化酶對單胺氧化酶MPTP抑制劑之活性形成的主要代謝物MPP+之產生阻斷小鼠與靈長類動物中MPTP之神經毒性。MPP+之毒害神經作用對多巴胺能神經元之特異性似乎歸因於突觸多巴胺轉運體對MPP+之吸收。此轉運體之阻斷劑預防MPP+神經毒性。已證明MPP+為粒線體複合物I活性之相對特異性抑制劑，在魚藤酮(retenone)結合位點結合於複合物I及減弱氧化磷酸化。活體內研究已展示MPTP可耗盡小鼠中紋狀體ATP濃度。已證明紋狀體內投與大鼠之MPP+顯著耗盡ATP以及增加注射部位限於紋狀體的乳酸鹽濃度。 增強ATP產生之化合物可在小鼠中防止MPTP毒性。Tieu K1,Perier C,Caspersen C,Teismann P,Wu DC,Yan SD,Naini A,Vila M,Jackson-Lewis V,Ramasamy R,Przedborski S.D-beta-hydroxybutyrate rescues mitochondrial respiration and mitigates features of Parkinson disease.J.Clin.Invest.2003年9月；112(6)：892-901。
DMF將經口或靜脈內投與動物，諸如小鼠或大鼠，歷時3週，接著用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)處理。MPTP將以適當劑量、給藥時間間隔及投與模式投與，歷時1週，接著處死。對照組將接受單獨生理鹽水或者MPTP鹽酸鹽。處死後將兩個紋狀體迅速解剖且置於冷卻0.1M高氯酸中。組織將隨後進行超音波處理且使用螢光計分析來分析等分試樣之蛋白含量。亦定量多巴胺、3,4-二羥基苯基乙酸(DOPAC)及高香草酸(HVA)。多巴胺及代謝物之濃度將表示為nmol/mg蛋白質。
防止MPTP、HVA及/或多巴胺耗盡誘發DOPAC耗盡的化合物為神經保護性的，因此可用於治療帕金森氏病。
B. 氟哌丁苯誘發之運動減少
化合物逆轉多巴胺拮抗劑(諸如氟哌丁苯)在齧齒動物中行為鎮靜作用之能力視為一種有效篩選具有潛在抗帕金森氏症作用之藥物的方法(Mandhane等人，Eur.J.Pharmacol.1997,328,135-141)。因此，本發明之化合物阻斷氟哌丁苯誘發之小鼠中自主活動不足的能力可用於評估活體內與潛在抗帕金森氏症功效。
用於實驗之小鼠將圈養在受控環境中且在實驗使用前使其適應新環境。在測試前一個半小時(1.5)，小鼠將投與0.2mg/kg氟哌丁苯，此為基線自主活動降低至少50%之劑量。在測試之前5-60min，DMF將經口或經由靜脈內投與。接著動物將個別置於乾淨明亮的聚碳酸酯籠中，該籠具有平坦穿孔蓋。水平自主活動藉由將籠置於含有聯接於 電腦以將光束中斷列表之3×6陣列之光電池的框架內來確定。使小鼠不受干擾以探索1h，且在此時間段內進行光束中斷數目用作自主活動之指示物。來自靜脈內投與DMF之小鼠的資料將與未接受DMF之對照動物及經口接受DMF之對照動物的資料比較，且評估統計上顯著差異。
預計靜脈內投與之DMF改善自主活動超過經口投與之DMF。
C. 6-羥基多巴胺動物模型
帕金森氏病中所見之神經化學不足可藉由局部注射多巴胺能神經毒素6-羥基多巴胺(6-OHDA)至含有黑質紋狀體神經元之細胞體或者纖維腦的區域中來再現。藉由僅僅在腦一側上單側使黑質紋狀體路徑病變，觀測到運動抑制之行為不對稱。雖然單側病變之動物仍然可動且能夠自我維持，但病變側上剩餘多巴胺敏感性神經元變得對刺激超敏。此藉由觀測到在全身性投與多巴胺促效劑，諸如阿樸嗎啡後，動物展示在與病變側對側之方向上明顯旋轉所證明。在6-OHDA病變大鼠中化合物誘發對側旋轉之能力已展示為預測藥物治療帕金森氏病功效之靈敏模型。
雄性史泊格-多利大鼠將圈養在受控環境中且在實驗使用前使其適應新環境。在手術之前十五分鐘，將給與動物去甲腎上腺素能吸收抑制劑地昔帕明(25mg/kg)之腹膜內注射以防止對非多巴胺神經元之破壞。接著動物置於麻醉腔室且使用氧氣與異氟烷之混合物麻醉。一旦無意識，將動物轉移至立體定位框架，其中麻醉將經由面罩維持。頭部頂部將剃削且使用碘溶液殺菌。乾燥後，沿著頭皮中線做出2cm長切口，且皮膚屈摺且夾回以暴露顱骨。接著在注射部位上方穿過顱骨鑽小孔。為使黑質紋狀體路徑病變，注射套管將緩慢降低至右前腦內側束上方前後-3.2mm、離前囟點內側-1.5mm及硬膜以下7.2mm深度的位置。降低套管後兩分鐘，6-OHDA以0.5μL/min速率經4min 輸注，以提供8μg之最終劑量。套管將再留在原地5min以促進在緩慢抽出前擴散。接著縫合皮膚，自立體定位框架移除動物，且回至其畜舍。使大鼠自手術恢復兩週，接著進行行為測試。
使用具有封閉在透明樹脂玻璃蓋之不銹鋼碗狀物(45cm直徑×15cm高)之轉子流速計系統量測旋轉行為，該蓋在碗狀物邊緣周圍且延伸至29cm之高度。為評估旋轉，將大鼠置於附接於與位於碗狀物上方之光學轉子流速計連接的彈簧繫繩的布護套中，光學轉子流速計評估向左或向右之運動為部分(45°)或者完全(360°)旋轉。
為減少投與測試化合物期間之應激，最初使大鼠習慣設備15分鐘，連續四天。測試當天，將經口或者靜脈內給與大鼠DMF。在即將測試時，向動物皮下注射臨限值下劑量之阿樸嗎啡，接著置於裝置中且記錄旋轉數目1小時。在一小時測試期期間完全對側旋轉的總數將用作抗帕金森氏症藥物功效之指數。
預計靜脈內投與之DMF比經口投與之DMF更有效。
6.3.2 肌萎縮性側索硬化及亨廷頓氏病之動物模型中反丁烯二酸二甲酯之功效
以下實驗展示神經疾病之動物模型中在經口投與後DMF之功效。
6.3.2.1. 肌萎縮性側索硬化
概述
此研究之主要目標為評估經口投與之反丁烯二酸二甲酯(DMF)對肌萎縮性側索硬化(ALS)之小鼠模型的功效。DMF已展示活化Nrf2抗氧化反應路徑。Nrf2路徑之遺傳活化已展示在ALS小鼠模型中疾病進展緩慢。
ALS之一種遺傳原因為超氧化物歧化酶(SOD1)基因突變。表現特定突變體SOD1-G93A之小鼠出現年齡依賴性運動神經元喪失，其引 起癱瘓及過早發病。SOD1-G93A小鼠為ALS廣泛使用之模型。
SOD1-G93A小鼠藉由經口管飼法給與媒劑或者每天100mg/kg DMF，在約第50天開始。在第85、100及115天運動效能藉由旋轉棒評估。藉由臨床觀察及體重監測健康狀態。在三個時間點任一者，旋轉棒效能在給與媒劑與DMF之組之間無顯著不同。體重少量受DMF影響。雖然峰值體重日期無變化，但斷點分析展示重量增加與重量減輕之間的拐點顯著變化。DMF對此等小鼠中疾病發作或存活率無顯著影響。
材料與方法
動物
三十二個雌性SOD1-G93A小鼠購自Jackson Laboratories(品系2726)。所有小鼠將為轉殖基因陽性。每個給藥組將使用十六隻小鼠。給藥在第50-55天開始。所有程序均根據NIH實驗動物照護與使用指南(NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals)進行，且經Biogen Idec研究所動物照護與使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)(IACUC協議編號0408-2011)批准。
轉殖基因證實及組分佈
各SOD1-G93A小鼠攜帶變化數目之轉殖基因複本。複本數目將影響疾病發作及進展，複本數目將藉由定量PCR監測。組將針對複本數目進行平衡。另外，同窩出生者分佈在各組。
測試物品及給藥
反丁烯二酸二甲酯以10mg/ml懸浮在0.8%羥丙基甲基纖維素(HPMC)中。小鼠將每日給與媒劑或DMF一次。給藥體積為10ml/kg，藉由經口管飼法引入。
監測運動疾病發作
SOD1-G93A之疾病發作及進展將藉由三種方法監測。所有方法 均以盲法方式進行。體重將每日記錄。亦每日檢查小鼠之疾病發作，如腿顫振或在尾提升後後肢彎曲減少所定義。亦在第12、14及16週依據加速旋轉棒測試評估小鼠。對於此測試，小鼠將首先適應以2rpm旋轉300秒之棒，一天一次，歷時兩天。對於實際測試，小鼠置於90秒內自2rpm加速至40rpm之棒上。到達全速後，測試又持續30秒。小鼠每天測試三次且記錄最長時間。無法在棒上保持20秒之小鼠剔除，不進行進一步測試。
終點定義
當小鼠未能在15秒內自兩邊向右時，確定小鼠已到達實施人道安樂死之終點標準。
統計分析
對於旋轉棒及體重，將藉由雙向ANOVA比較數值。將藉由斷點分析進一步評估體重。斷點分析藉由完成一系列線性回歸擬合來鑑別曲線之拐點。在最低殘差下上升及下降斜率之曲線擬合的交叉點定義為斷點。對於各小鼠，確定斷點。接著藉由史都登氏T檢驗(Student’s T-test)比較兩組。將使用Mantel-Cox對數等級檢驗法測試發作及存活差異。完成併入同窩出生者狀態之Cox比例危險檢驗的進一步檢驗。
結果
用DMF(經口，每日100mg/kg)處理SOD1-G93A小鼠不改變旋轉棒效能。媒劑與DMF組之效能在第14週及第16週之間減少，與疾病發作一致(圖36)。如藉由肢傾斜評估，DMF(經口，每日100mg/kg)不顯著改變發作(圖37A)。DMF(經口，每日100mg/kg)不延長SOD1-G93A小鼠之存活(圖37B)。考慮同窩出生者，Cox比例危害分析未揭露任何化合物作用，不過發現同窩出生者匹配為存活之重要因素(P<0.001)。斷點分析指示重量增加至重量減輕之轉變顯著延遲(p<0.05)(圖38)。體重喪失反映肌塊喪失。
最後，在SOD1-G93A小鼠中在測試劑量及頻率下DMF無法改善運動效能或延長存活。DMF確實延遲體重喪失，但益處很小。如以上所討論，預計在此動物模型中靜脈內投與之DMF比經口投與之DMF更有效。
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6.3.2.2. 亨廷頓氏病
概述
當前研究之主要目標為評估反丁烯二酸二甲酯(DMF)對作為亨廷頓氏病動物模型之大鼠中丙二酸鹽誘發之紋狀體病變的可能神經保護作用。DMF已展示活化Nrf2抗氧化反應路徑且為BG-12(一種當前研究用於治療多發性硬化之口服調配物)中之活性成分。
進行兩個分開實驗且在此處報告。第一實驗研究兩種劑量DMF(30mg/kg及100mg/kg)對藉由紋狀體內投與丙二酸鹽所產生之紋狀體病變大小的神經保護作用。進行第二實驗以闡述DMF對紋狀體病變大小之神經保護作用的劑量-反應函數且探索在丙二酸鹽誘發之紋狀體病變動物中功能恢復。此第二實驗包括四個處理組：媒劑50mg/kg、75mg/kg及100mg/kg DMF，經由經口管飼法，每日給與一次。
在異氟烷麻醉下在左紋狀體中單次立體定位注射丙二酸鹽前24小時所有雄性史泊格-多利大鼠接受其第一劑DMF，此後大鼠每日給與，直至研究結束，總共4(實驗1)或5(實驗2)劑DMF。注射丙二酸鹽後三天及最後一次劑量後30min，處死所有動物，且移除其腦且儲存在20%蔗糖中至少1小時，接著轉移至30%蔗糖中隔夜，第二天，所有腦埋入OCT中且儲存在-80℃下。藉由針對細胞色素C氧化酶之組織化學方法，確定紋狀體病變體積。第二實驗中，亦藉由用一定劑量阿樸嗎啡激發動物來誘發旋轉行為，量測功能恢復。最後一次DMF劑量後30分鐘且注射丙二酸鹽四天後，處死動物。
給與75或者100mg/kg DMF之動物分別顯著降低丙二酸鹽誘發之病變體積44%及61%。另外，亦在用100mg/kg DMF處理之動物中見到旋轉行為顯著減少41%。如丙二酸鹽誘發病變之動物中神經元特異性免疫染色所證明，在用DMF處理之動物中亦存在神經元之顯著保護。此等發現表明DMF之活體內神經保護，因為此化合物能夠減小大鼠紋狀體中丙二酸鹽誘發之病變的大小，且維持神經元及行為功能。
材料與方法
動物：
使用在實驗開始時重275-300公克之四十五隻成年雄性史泊格-多利大鼠(Charles River,Wilmington,MA)。21只大鼠用於實驗編號1(每組7只大鼠，三種處理)，且56只大鼠用於實驗編號2(每組14只大鼠，四種處理)。所有程序均根據NIH實驗動物照護與使用指南進行，且經Biogen Idec研究所動物照護與使用委員會(IACUC協議編號0349-2010)批准。
齧齒動物中丙二酸鹽誘發之紋狀體病變：
在丁哌卡因(2mg/kg)、美索比妥(50mg/kg，腹膜內)及異氟烷麻醉下將大鼠麻醉，且置於立體定位框中且準備進行紋狀體內注射。在以下對應於立體定位座標之左紋狀體中單一部位注射丙二酸鹽之單一注射：AP：離前囟點+7.0mm；側面：離中線2.8mm；DV：離前囟點顱骨表面-5.5mm。丙二酸鹽(於生理鹽水中)將以2.0μl中2.0μmol之劑量在4分鐘內使用注射泵注射。注射針在輸注後將留在原地又1.0min，且將緩慢抽出以使輸注物沿針道回流最少。大鼠將在加熱板上保持溫熱直至自麻醉醒來(Green及Greenamyre,1995)。
在立體定位注射丙二酸鹽前24小時所有雄性史泊格-多利大鼠接受DMF，大鼠此後接受每日經口或靜脈內給與，直至研究結束，總共6(實驗1)或7(實驗2)劑DMF。注射丙二酸鹽後三天(實驗1)或四天(實 驗2)及最後一次劑量後30min，藉由CO2處死所有動物，且快速移除其腦且儲存在含20%蔗糖之PBS中至少1小時，接著轉移至含30%蔗糖之PBS中隔夜。第二天，所有腦將埋入OCT中且儲存在-80℃下。第一實驗包括三個處理組：媒劑，30mg/kg及100mg/kg，且第二實驗包括四個處理組：媒劑，50mg/kg、75mg/kg及100mg/kg。
藉由阿樸嗎啡誘發之旋轉行為：
立體定位丙二酸鹽注射後四天，阿樸嗎啡(1.0mg/kg)將藉由皮下注射給與，且以15min時間間隔確定同側轉動行為，歷時60min。
病變大小之細胞色素氧化酶組織化學及分析：
培養基將由500ml 0.1M磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中200mg細胞色素C及200mg 3,3’-二胺基聯苯胺鹽酸鹽(DAB)組成。將載玻片在37℃下培育90分鐘且用PBS洗滌兩次(2-5分鐘)，接著移除至4%中性緩衝三聚甲醛，歷時20分鐘。將切片用PBS清洗兩次(2-5分鐘)，接著用蒸餾水清洗兩次(2-5分鐘)，脫水，在二甲苯中清除且蓋上蓋玻片。
使用Open-Lab影像分析系統將各切片上病變面積定量。整個紋狀體上取切片且每只大鼠將分析總共二十個25μm切片。將面積量測求和且乘以交叉距離(200μm)以確定每個個體之病變體積。
免疫螢光顯微術
對於藉由免疫螢光分析之組織，將動物麻醉且用4%三聚甲醛經心灌注。移除腦，且在4℃下後固定隔夜。接著將組織轉移至含30%蔗糖之PBS中。將連續25-μM冰凍切片插入冠狀平面，且空氣乾燥至明膠塗佈之玻璃載玻片上。所有組織切片均在PBS中洗滌且在室溫下用5%正常山羊血清於0.1% Triton X-100/PBS中之溶液阻斷45分鐘。接著切片與神經元之單株抗-NeuN(1：500；Millipore,Temecula,CA,USA)及星形細胞之多株抗神經膠質纖絲酸性蛋白(GFAP)(1：600)一起於阻斷溶液中在4℃下培育隔夜。二級抗體在室溫下培育1小時。所有 免疫螢光影像均用Openlab及Spectrum軟體獲得。
測試物品、對照及組織學化學供應品：
DMF(實驗編號1：貨號16293-33；實驗編號2：貨號16275-15)及調配媒劑(0.8%羥丙甲纖維素)。丙二酸二鈉單水合物(Sigma-Aldrich，貨號108k5314)。阿樸嗎啡(Sigma-Aldrich，批號096k1414，M.W.=312.8)。除丙二酸鹽外，所有測試物品經調配以在1.0ml kg體重下注射。對於組織學，3,3’-二胺基聯苯(DAB)(Sigma-Aldrich，貨號S88505,M.W.=214.27)、來自牛心臟之細胞色素C(Sigma-Aldrich，貨號070m700lv，M.W.=12,327個鹼基)。
統計分析：
病變體積之資料將藉由單向方差分析(ANOVA)，接著圖基檢驗分析，以評估處理組與媒劑組之間的差異。
MMF暴露之藥物動力學分析
組織樣品均質化
將研究及空白腦樣品轉移至組織管(TT1)(購自Covaris,Inc)中且附接於矽酸硼玻璃管且置於乾冰上，至少15分鐘。使用Cryoprep系統(Covaris Inc.)粉碎樣品且轉移至玻璃管，接著均質化。對於每1份(亦即100mg)組織，將具有15mg/mL NaF之2份(亦即200μL)水添加至各玻璃管中。組織在4℃下使用Covaris E210均質化，每個樣品約3分鐘。Covaris設置如下：工作循環20%，強度10及循環/破裂1000。均質化後，將1份(亦即100uL)乙腈添加至各玻璃管中，此將等於預先添加之水體積。均漿將再用E210均質化，每個樣品30秒。在同一天提取前均質化組織將儲存在冰上(均質化稀釋因數=4)。剩餘樣品儲存在-80℃下。
樣品製備
研究血漿樣品在冰上。該樣品暴露於室溫之總時間每次提取少 於4.5小時。根據預定規劃，將50μL樣品等分試樣(研究樣品、空白對照、校準用標準或QC樣品)手動轉移至96孔盤中。50：50乙腈：水之5μL等分試樣添加至空白及僅僅研究樣品之孔中。將200μL內標外加溶液添加至各管中，雙白除外，其中將添加200μL 100%乙腈。接著盤渦流約60秒，且在3000rpm下離心10分鐘。將150μL體積之上清液轉移至新96孔注射盤中，且上清液在氮氣下蒸乾。乾提取物將在150μL含10%乙腈、0.1%甲酸之水中復原。盤渦流2分鐘，且負載至自動取樣器上進行注射以藉由LC-MS/MS確定BIO-022817濃度。
LC-MS/MS分析
使用之HPLC系統由具有Leap CTC PAL冷凍自動取樣器之Agilent 1200二元泵組成。使用Waters Atlantis dC18管柱(50×2.1mm，3μm)。在分析期間使用之流動相為：流動相A：含0.1%甲酸之水；流動相B：含0.1%甲酸之乙腈。流速為400-500μL/min，且注射體積為約30μL。偵測器為Applied Biosystems/MDS Sciex API 4000三重四極質譜儀。儀器將裝備有負離子模式之TIS源且分析物以MRM模式監測。Q1及Q3分別以單位/低解析度操作，且BIO-022817及MEF(內標)之MS/MS轉變品質為128.8->70.9及142.8->70.9。未知樣品之濃度將針對標準計算。
結果
實驗1展示用100mg/kg DMF處理將丙二酸鹽誘發之病變體積降低55%(圖39A)。圖39A中之值表示對照平均%且誤差條表示SEM。每組n=7。實驗2展示用75或100mg/kg DMF處理將丙二酸鹽誘發之病變體積分別降低44%及61%(圖39B)。圖39B中之值表示對照平均%且誤差條表示SEM。
實驗2展示用100mg/kg DMF處理引起阿樸嗎啡誘發之旋轉行為相對於媒劑處理組顯著下降41%(圖40)。圖40中之棒條表示60分鐘時 期內平均旋轉且誤差條表示SEM。
圖41展示用於免疫螢光之病變大鼠腦切片染色之代表性成像。在注射區域近端，與用100mg/kg DMF處理之動物(圖41B、D)相比，投與媒劑之動物中存活神經元數目增加(圖41A、C)。星形細胞似乎在媒劑與DMF處理動物中靠近病變邊界處均存活。影像放大10x。
最後一次DMF劑量之後30分鐘，所有動物均收集血漿、腦脊髓液(CSF)及腦組織(小腦)以確定各隔室中反丁烯二酸單甲酯(MMF，DMF之主要代謝物)之含量(圖42)。各組中所有動物之平均值以ng/ml MMF呈現。誤差條指示標準誤差。組具有14或15只動物，如先前指示。圖42展示與腦以及CSF相比，血漿中所有DMF投與劑量下MMF之濃度均顯著更高。
最後，兩個實驗指示用100mg/kg DMF處理將丙二酸鹽誘發之病變體積顯著降低至少55%。第二研究中增加動物數目揭露在75mg/kg DMF處理下病變體積顯著減少44%。此外，在用100mg/kg DMF處理之動物中旋轉行為顯著減少41%，表明在處理下行為/運動功能維持。用100mg/kg DMF處理之丙二酸鹽病變動物證明顯著神經保護，因為使用神經元特異性抗體(NeuN)用於免疫螢光顯微術揭露在丙二酸鹽注射部位近端的區域中神經元保存。給與DMF之動物的血漿、CSF及腦MMF濃度具有劑量依賴性增加，表明化合物到達目標組織，亦即腦。
如以上所討論，預計在此動物模型中靜脈內投與之DMF比經口投與之DMF更有效。
參考文獻
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6.4 實例4：用於靜脈內投與DMF之調配物
6.4.1 DMF之奈米懸浮液
概述
DMF奈米懸浮液(150mg/ml，D50約180nm)藉由在pH 5.0磷酸鹽緩衝液中隔夜研磨DMF、羥丙基甲基纖維素(HPMC)及十二烷基硫酸鈉(SDS)之混合物來製備。使用高效液相層析(HPLC)、顯微術及粒度分佈(PSD)檢查奈米懸浮液在周圍溫度下之化學及物理穩定性。所得結果表明奈米懸浮液在周圍溫度下化學及物理穩定長達7天。奈米懸浮液適合於例如需要DMF>5mg/ml之IV調配物。
DMF奈米懸浮液之製備
奈米懸浮液如下製備：
將1.5g DMF、100mg HPMC E6(Dow Chemical，貨號VL31012N22)及20mg SDS(Fisher Scientific，貨號090217)添加至50ml Corning 430290離心管中。將5.0ml pH5.0磷酸鹽緩衝液(Fisher Scientific，貨號100498)添加至管中。此外，亦將ZrO2珠粒(約10ml)添加至管中。樣品在Fisher Scientific多管渦流器中在2500rpm下渦流60min且經由光學顯微影像檢查粒度。添加額外5.0ml pH5磷酸鹽緩衝液且樣品進一步研磨隔夜。歸因於研磨隔夜，樣品之溫度為約60℃。經由顯微影像及Mastersizer 2000確定粒度。
粒度
粒度分析藉由使用Malvern Mastersizer Hydro 2000S粒度分析器(Malvern Instruments,England)之雷射繞射技術進行。粒度使用分散在周圍溫度下用DMF預飽和4小時的0.2% Teepol 610S(Aldrich)水溶液中之化合物確定。
穩定性
懸浮液儲存在室溫下且在第1天及第7天取樣品。樣品之穩定性使用HPLC方法檢查化學穩定性，使用PSD及顯微影像(資料未提供)檢查物理穩定性。
化學穩定性：
DMF奈米懸浮液之化學穩定性展示於表9及圖43中。結果表明奈米懸浮液化學穩定長達7天。
a 等度HPLC方法用於DMF化學穩定性研究；管柱：Variane Lichrosorb RP18，250mm×4.6mm；流動相A：含0.1%磷酸之水(70%)；流動相B：甲醇(30%)；運行時間：10min；流速：1.0mL/min；注射體積：10μL；管柱溫度：35℃；偵測器波長：210 nm，具有4nm頻寬。
b 研磨隔夜後形成約3% MMF(DMF降解產物)。降解可歸因於研磨期間之溫度較高。
物理穩定性：
當樣品在周圍溫度下儲存長達7天時自PSD(圖44A(第1天)(150mg/ml，D50約180nm)及圖44B(第7天)(D50約175nm)及顯微影像(資料無提供)未觀測到奈米懸浮液之粒度變化。因此，奈米懸浮液物理穩定至少7天。
6.4.2 呈溶液之DMF調配物
概述
研究在周圍溫度下有或無各種賦形劑下DMF於水中之溶解度且概述於表10中：
發現DMF於環糊精媒劑中之溶解度(溶液4-8)隨環糊精百分比增加而增加。此外，發現DMF於水中之溶解度隨研究溫度而增加(在20℃下2.7mg/ml)。在37℃下DMF於水、模擬胃液(SGF)及模擬腸液(SIF)中之水溶性分別為2.84、2.95及3.11mg/ml。DMF之溶解度在pH4檸檬酸鹽緩衝液中3.32mg/ml至pH8硼酸鹽緩衝液中4.02mg/ml範圍內變化。
在水性介質中DMF之穩定性為pH依賴性的。在37℃下，發現在弱酸性條件下溶液中DMF穩定，其中最大穩定性在約pH 4。當在37℃下溶液pH值超過7時，DMF於溶液中之穩定性迅速減少。觀測到之DMF的主要降解產物為反丁烯二酸氫甲酯及反丁烯二酸。
當溶液儲存在周圍溫度下時20% Captisol溶液中DMF在0.2mg/ml下穩定長達2天且在4.0mg/ml下長達7天。包含20% Captisol之IV調配物適合於例如需要<4mg/ml DMF之IV調配物。生理鹽水及D5W調配物適用於例如需要<2mg/ml之IV調配物。在某些實施例中，新近製備此類生理鹽水及D5W調配物。
在水中之溶解度
使用懸浮平衡法，在20、35及50℃下確定DMF在水中之24小時平衡溶解度。在量測溫度下攪動約20mg DMF於1mL水中之懸浮液24小時。接著樣品在量測溫度下經由0.2μm過濾裝置過濾，且使用HPLC確定濾液濃度。藉由FT-Raman技術證實平衡固體為與起始物質相同之形式。發現DMF溶解度隨研究溫度而增加(表11)。
在37℃下在水性介質中之溶解度
在37℃下，藉由製備水、模擬胃液(SGF，無胃蛋白酶)、模擬腸液(SIF，無胰酶)或pH 2、4、6、8及10緩衝液中飽和溶液來確定DMF在水性介質中之溶解度。製劑在37℃下在Isotemp烘箱中旋轉24小時，接著經由0.2μm過濾器過濾且藉由HPLC確定溶液中DMF之量。在37℃下，DMF在水、SGF及SIF中之水溶性分別為2.84、2.95及3.11mg/ml。且DMF之溶解度在pH4檸檬酸鹽緩衝液中3.32mg/ml至pH8硼 酸鹽緩衝液中4.02mg/ml範圍內變化(表12)
水溶液中溶液穩定性
水中儲備DMF溶液以0.4mg/ml濃度製備。使用0.2mg/ml濃度溶液進行溶液穩定性研究，其藉由混合等體積儲備溶液及個別研究介質來實現。研究在水、SIF、SGF、pH 2、4、6及10之水性緩衝液中的溶液。儲存在37℃或周圍溫度下之樣品在預定時間點拉伸且藉由HPLC分析。
實驗結果表明在水性介質中DMF之穩定性為pH依賴性的。在37℃下，發現在弱酸性條件下溶液中DMF穩定，其中最大穩定性在約pH 4(表13)。當在37℃下溶液pH值超過7時，DMF於溶液中之穩定性迅速減少。在pH 10硼酸鹽緩衝溶液中，在初始濃度前降解之大半DMF能夠藉由HPLC確定。觀測到之DMF的主要降解產物為反丁烯二 酸氫甲酯及反丁烯二酸。
n/a=不可得
用於臨床前研究之DMF IV調配物研發
根據以下程式研發DMF IV調配物，其適合於目標濃度為約5mg/ml之臨床前研究：
1. 測試DMF在若干純溶劑(DMSO、乙醇、丙二醇及PEG 400)中之溶解度，其適合於IV給藥調配物(表14)。結果呈現於表15中。
2. 測試5mg/ml透明溶液是否可基於賦形劑在各種動物物種中之典型最大用量實現(表14)。舉例而言，2% DMSO(0.1ml/kg/5ml/kg×100%=2.0%)、10% PEG400(1ml/kg/5ml/kg×50%=10%)及20% Captisol(磺丁基醚環糊精)(5ml/kg/5ml/kg×20%=20%)可用於齧齒動物IV調配物，採用5ml/kg之劑量。
3. 因為PEG400提供DMF之最佳溶解度，所以測試DMF在具有不同賦形劑之10% PEG400中之溶解度。該等研究藉由製備PEG400儲備溶液且用不同媒劑稀釋該溶液來進行(表16)。結果表明甚至3.0mg/ml透明溶液無法藉由使用具有大部分賦形劑之10% PEG400實現，但20% Captisol及15% HPbCD可能為最佳選擇，因為兩者均在2.8mg/ml下產生透明溶液。
4. 測試DMF在15% HPbCD及20% Captisol中之溶解度。結果表明約5mg/ml DMF透明溶液可藉由使用20% Captisol實現(表17)。
S.Neervannan；Expert Opin.Drug Metab.Toxicol.2006 2(5)第715-731頁
DMF在HPbCD、Captisol、生理鹽水及D5W中之溶解度測試
測試DMF在5% HPbCD、40% HPbCD、5% Captisol及40% Captisol中之溶解度以研究環糊精百分比對DMF溶解度之作用。亦測試DMF在D5W(5%葡萄糖水溶液)及生理鹽水(0.9%NaCl溶液)中之溶解度實現低濃度DMF IV調配物之可能性。
在周圍溫度下藉由製備飽和溶液確定DMF在此等介質中之溶解度。製劑在周圍溫度下旋轉24小時，接著經由0.45μm過濾器過濾且藉由HPLC確定溶液中DMF之量。
DMF在20% Captisol中之穩定性及溶解度測試
基於以上討論之資訊，選擇20% Captisol用於進一步研究。
在室溫下藉由在20% Captisol中製備飽和溶液來確定DMF於20% Captisol中之溶解度。在50℃下加熱製劑5-10min，接著冷卻至室溫。此時形成沈澱且樣品經0.2μm過濾器過濾且藉由HPLC確定溶液 中DMF之量。
DMF在20% Captisol中之溶解度為4.11mg/ml。
研究0.2及4.0mg/ml DMF 20% Captisol溶液之穩定性。儲存在周圍溫度下之樣品在預定時間點(0、2及7天)拉伸且藉由HPLC分析。
結果表明當溶液儲存在周圍溫度下時DMF 20% Captisol溶液在0.2mg/ml下穩定長達2天且在4.0mg/ml下長達7天。
a 等度HPLC方法用於DMF化學穩定性研究；管柱：Variane Lichrosorb RP18，250mm×4.6mm；流動相A：含0.1%磷酸之水(70%)；流動相B：甲醇(30%)；運行時間：10min；流速：1.0mL/min；注射體積：10μL；管柱溫度：35℃；偵測器波長：210nm，具有4nm頻寬。
用於製備供靜脈內投與之DMF溶液之示例性方案
下文展示一種用於製備適於靜脈內投與之DMF溶液之示例性方案。
處理及使用條件
用於臨床前研發
警告：研究新藥-不用於人類。
受聯邦法限制於研究用途。
僅僅臨床前試用。僅僅由合格研究者使用。
處理：研究新藥。根據MSDS處理化合物。
預防：
○不冰凍
○在儲存期間樣品避免直射光
○樣品儲存在22℃±5℃
○推薦少於3.5mg/ml溶液，因為在周圍溫度下DMF在20% Captisol中之溶解度為4.1mg/ml。
DMF IV調配物(溶液)製劑
○向校準燒杯添加適當量之DMF以製備所需濃度之1公升溶液。
○添加媒劑至1L體積。
○添加磁性攪拌棒且在50℃下中速攪拌，直至實現溶液(約5-10min)。
○冷卻至周圍溫度
○用Nalgene快速流動過濾器(0.2μm aPES膜，Thermo Scientific)或同等過濾器過濾溶液
媒劑製劑
20%(w/w)Captisol媒劑：
○向校準燒杯添加200g Captisol
○添加800g去離子水
○在磁性攪拌盤上在500-600rpm下攪拌直至實現澄清無色溶液。
材料
○容器/蓋板：
○溶液儲存：Fisher Scientific Fisher牌琥珀色環境廣口瓶(02-912-005)(或同等物)
投與說明書
1.)調配物自儲存移出。
2.)參考關於適當測試物品濃度及給藥時程之方案。各動物應經由靜脈內輸注獲得適當劑量。
3.)任何殘餘調配物回至儲存。
以引用的方式併入
本文中引用之各種參考文獻，諸如專利、專利申請及公開案，其等之揭示內容以引用的方式整體併入本文中。

Claims (262)

  1. 一種治療有需要之人類患者之神經疾病的方法，其包括向該患者靜脈內投與包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯的醫藥組合物：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  2. 如請求項1之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  3. 如請求項2之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  4. 如請求項3之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  5. 如請求項4之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  6. 如請求項4之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  7. 如請求項3之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  9. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  10. 如請求項1及2中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  11. 如請求項10之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  12. 如請求項10之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  13. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  14. 如請求項10之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  15. 如請求項1至9中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  16. 如請求項15之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  17. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  18. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  19. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  20. 如請求項1至16中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  21. 如請求項17之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  22. 如請求項17之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  23. 如請求項17至20中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  24. 如請求項17至20中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  25. 如請求項1至7及9至24中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  26. 如請求項25之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  27. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  28. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗(natalizumab)治療。
  29. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
  30. 如請求項1至26中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  31. 如請求項1至30中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  32. 如請求項1之方法，其中該疾病為中風。
  33. 如請求項32之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  34. 如請求項33之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲 酯。
  35. 如請求項34之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  36. 如請求項35之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  37. 如請求項35之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  38. 如請求項34之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  39. 如請求項32至38中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  40. 如請求項32至38中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  41. 如請求項32及33中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  42. 如請求項41之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  43. 如請求項41之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  44. 如請求項32至38中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  45. 如請求項40之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  46. 如請求項32至40中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由 該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  47. 如請求項46之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  48. 如請求項32至47中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  49. 如請求項32至47中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  50. 如請求項32至47中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  51. 如請求項32至47中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  52. 如請求項48之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  53. 如請求項48之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  54. 如請求項48至51中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  55. 如請求項48至51中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  56. 如請求項32至38及40至55中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  57. 如請求項56之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  58. 如請求項32至57中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  59. 如請求項32至57中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  60. 如請求項32至57中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任 何藥物治療。
  61. 如請求項32至57中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  62. 如請求項32至61中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  63. 如請求項1之方法，其中該疾病或病症為肌萎縮性側索硬化。
  64. 如請求項63之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  65. 如請求項64之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  66. 如請求項65之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  67. 如請求項66之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  68. 如請求項66之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  69. 如請求項65之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  70. 如請求項63至69中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  71. 如請求項63至69中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  72. 如請求項63及64中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯 一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  73. 如請求項72之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  74. 如請求項72之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  75. 如請求項63至69中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  76. 如請求項72之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  77. 如請求項63至71中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  78. 如請求項77之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  79. 如請求項63至78中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  80. 如請求項63至78中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  81. 如請求項63至78中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  82. 如請求項63至78中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  83. 如請求項79之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  84. 如請求項79之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  85. 如請求項79至82中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  86. 如請求項79至82中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內 重複該靜脈內投與之步驟。
  87. 如請求項63至69及71至86中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  88. 如請求項87之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  89. 如請求項63至88中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  90. 如請求項63至88中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  91. 如請求項63至88中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
  92. 如請求項63至88中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  93. 如請求項63至92中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  94. 如請求項1之方法，其中該疾病為亨廷頓氏病。
  95. 如請求項94之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  96. 如請求項95之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  97. 如請求項96之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁 烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  98. 如請求項97之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  99. 如請求項97之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  100. 如請求項96之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  101. 如請求項94至100中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  102. 如請求項94至100中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  103. 如請求項94及95中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  104. 如請求項103之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  105. 如請求項103之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  106. 如請求項94至100中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  107. 如請求項103之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  108. 如請求項94至102中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  109. 如請求項108之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二 甲酯組成。
  110. 如請求項94至109中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  111. 如請求項94至109中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  112. 如請求項94至109中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  113. 如請求項94至109中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  114. 如請求項110之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  115. 如請求項110之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  116. 如請求項110至113中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  117. 如請求項110至113中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  118. 如請求項94至100及102至117中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  119. 如請求項118之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  120. 如請求項94至119中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  121. 如請求項94至119中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  122. 如請求項94至119中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
  123. 如請求項94至119中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之 引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  124. 如請求項94至123中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  125. 如請求項1之方法，其中該疾病為阿茲海默氏病。
  126. 如請求項125之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  127. 如請求項126之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  128. 如請求項127之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  129. 如請求項128之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  130. 如請求項128之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  131. 如請求項127之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  132. 如請求項125至131中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  133. 如請求項125至131中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  134. 如請求項125及126中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  135. 如請求項134之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為 反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  136. 如請求項134之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  137. 如請求項125至131中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  138. 如請求項134之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  139. 如請求項125至133中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  140. 如請求項139之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  141. 如請求項125至140中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  142. 如請求項125至140中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  143. 如請求項125至140中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  144. 如請求項125至140中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  145. 如請求項141之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  146. 如請求項141之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  147. 如請求項141至144中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  148. 如請求項141至144中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  149. 如請求項125至131及133至148中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  150. 如請求項149之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  151. 如請求項125至150中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  152. 如請求項125至150中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  153. 如請求項125至150中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
  154. 如請求項125至150中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  155. 如請求項125至154中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  156. 如請求項1之方法，其中該疾病為帕金森氏病。
  157. 如請求項156之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  158. 如請求項157之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  159. 如請求項158之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  160. 如請求項159之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  161. 如請求項159之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  162. 如請求項158之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  163. 如請求項156至162中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  164. 如請求項156至162中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  165. 如請求項156及157中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  166. 如請求項165之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  167. 如請求項165之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  168. 如請求項156至162中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  169. 如請求項165之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  170. 如請求項156至164中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  171. 如請求項170之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  172. 如請求項156至171中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  173. 如請求項156至171中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  174. 如請求項156至171中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  175. 如請求項156至171中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  176. 如請求項172之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  177. 如請求項172之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  178. 如請求項172至175中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  179. 如請求項172至175中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  180. 如請求項156至162及164至179中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  181. 如請求項180之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  182. 如請求項156至181中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  183. 如請求項156至181中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  184. 如請求項156至181中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的任何藥物治療。
  185. 如請求項156至181中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  186. 如請求項156至185中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  187. 如請求項1之方法，其中該疾病為多發性硬化。
  188. 如請求項187之方法，其中該多發性硬化為多發性硬化之漸進性形式。
  189. 如請求項188之方法，其中多發性硬化之該漸進性形式為原發性漸進性多發性硬化(PP-MS)或繼發性漸進性多發性硬化(SP-MS)。
  190. 如請求項187之方法，其中該多發性硬化為多發性硬化之復發性形式。
  191. 如請求項190之方法，其中多發性硬化之該復發形式為復發緩解性多發性硬化(RR-MS)。
  192. 如請求項187之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  193. 如請求項192之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  194. 如請求項193之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在1至1000毫克範圍內。
  195. 如請求項194之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在10至750毫克範圍內。
  196. 如請求項194之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與的反丁烯二酸二甲酯之量在48至240毫克範圍內。
  197. 如請求項193之方法，其中在該靜脈內投與之步驟中投與治療有效量之反丁烯二酸二甲酯，該量少於480毫克。
  198. 如請求項187至197中任一項之方法，其中該方法基本上由該投與步驟組成。
  199. 如請求項187至197中任一項之方法，其中該至少一種反丁烯二酸酯為投與該患者進行該治療之唯一活性劑。
  200. 如請求項187及192中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為該至少一種反丁烯二酸酯。
  201. 如請求項200之方法，其中該醫藥組合物中之該等唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及反丁烯二酸單甲酯。
  202. 如請求項200之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為一種選自該群之反丁烯二酸酯。
  203. 如請求項187至197中任一項之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯及在該投與之前藉由自該醫藥組合物中之反丁烯二酸二甲酯降解而產生的視情況存在之一種或多種化合物。
  204. 如請求項200之方法，其中該醫藥組合物中之該唯一活性劑為反丁烯二酸二甲酯。
  205. 如請求項187至199中任一項之方法，其中該醫藥組合物基本上由該至少一種反丁烯二酸酯組成。
  206. 如請求項205之方法，其中該醫藥組合物基本上由反丁烯二酸二甲酯組成。
  207. 如請求項187至206中任一項之方法，其中該投與每日進行。
  208. 如請求項187至206中任一項之方法，其中該投與每週進行一次。
  209. 如請求項187至206中任一項之方法，其中該投與每隔一週進行。
  210. 如請求項187至206中任一項之方法，其中該投與每月進行一次。
  211. 如請求項207之方法，其中在至少兩週之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  212. 如請求項207之方法，其中在至少一個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  213. 如請求項207至210中任一項之方法，其中在至少六個月之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  214. 如請求項207至210中任一項之方法，其中在至少一年之時間段內重複該靜脈內投與之步驟。
  215. 如請求項187至197及199至214中任一項之方法，其中該投與為治療方案之一部分，其中該向該患者靜脈內投與與向該患者經口投與該反丁烯二酸酯之一個或多個步驟交替。
  216. 如請求項215之方法，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且經口投與之反丁烯二酸二甲酯之量為每日480mg。
  217. 如請求項187至216中任一項之方法，其中該患者對該反丁烯二酸酯不具有已知之超敏反應。
  218. 如請求項187至216中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及任何免疫抑制或免疫調節藥物或那他珠單抗治療。
  219. 如請求項187至216中任一項之方法，其中該患者不同時用反丁烯二酸酯及攜帶引起漸進性多灶性白質腦病(PML)之已知風險的 任何藥物治療。
  220. 如請求項187至216中任一項之方法，其中該患者不患有經鑑別之引起受損免疫系統功能的全身性醫學病狀。
  221. 如請求項187至220中任一項之方法，其中該醫藥組合物為無菌等張溶液。
  222. 一種醫藥組合物，其包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  223. 如請求項222之醫藥組合物，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體。
  224. 如請求項223之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  225. 如請求項224之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約150mg/ml。
  226. 如請求項225之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸二甲酯之濃度為約150mg/ml。
  227. 如請求項222至226中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物進一步包含一種或多種選自小分子穩定劑、聚合物穩定劑及緩衝劑之賦形劑。
  228. 如請求項227之醫藥組合物，其中該小分子穩定劑為十二烷基硫 酸鈉。
  229. 如請求項227或228之醫藥組合物，其中該聚合物穩定劑為羥丙基甲基纖維素(HPMC)。
  230. 如請求項227至229中任一項之醫藥組合物，其中該緩衝劑為磷酸鹽緩衝液。
  231. 如請求項227至230中任一項之醫藥組合物，其中該組合物之pH值在約4至約7範圍內。
  232. 如請求項231之醫藥組合物，其中該組合物之pH值為約5.0。
  233. 如請求項222至232中任一項之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸酯具有約100nm至約250nm之平均粒度(D50)。
  234. 如請求項233之醫藥組合物，其中該D50為約180nm。
  235. 如請求項222之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，其中該醫藥組合物進一步包含十二烷基硫酸鈉、HPMC及磷酸鹽緩衝液，其中該醫藥組合物之pH值為約5.0且該D50為約180nm。
  236. 一種醫藥組合物，其包含至少一種選自由以下組成之群之反丁烯二酸酯：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、反丁烯二酸單烷酯之前藥、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或立體異構體，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  237. 如請求項236之醫藥組合物，其中該至少一種反丁烯二酸酯係選自由以下組成之群：反丁烯二酸二烷酯、反丁烯二酸單烷酯、反丁烯二酸二烷酯與反丁烯二酸單烷酯之組合、上述任一者之氘化形式及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、互變異構體或 立體異構體。
  238. 如請求項237之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯。
  239. 如請求項238之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸二甲酯之濃度為約1mg/ml至約16mg/ml。
  240. 如請求項239之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸二甲酯之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
  241. 如請求項236至240中任一項之醫藥組合物，其中該環糊精為經取代β環糊精。
  242. 如請求項241之醫藥組合物，其中該經取代β環糊精以約5%(w/v)至約40%(w/v)存在。
  243. 如請求項241之醫藥組合物，其中該經取代β環糊精以約20%(w/v)存在。
  244. 如請求項241至243中任一項之醫藥組合物，其中該經取代β環糊精為羥丙基β環糊精或磺基丁基醚β環糊精。
  245. 如請求項244之醫藥組合物，其中該經取代β環糊精為磺基丁基醚β環糊精。
  246. 如請求項245之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含一種或多種式XX之磺基丁基醚β環糊精： 其中R獨立地選自H或-CH2CH2CH2CH2SO3Na，其限制條件為除其中R為-CH2CH2CH2CH2SO3Na之6或7種情況外，R為H。
  247. 如請求項245之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含CAPTISOL。
  248. 如請求項236之醫藥組合物，其中該反丁烯二酸酯為反丁烯二酸二甲酯，且其中該水溶液包含20%(w/v)CAPTISOL，且該DMF之濃度為約2mg/ml至約4mg/ml。
  249. 如請求項1至30中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  250. 如請求項32至61中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  251. 如請求項63至92中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  252. 如請求項94至123中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  253. 如請求項125至154中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  254. 如請求項156至185中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米 懸浮液。
  255. 如請求項187至220中任一項之方法，其中該醫藥組合物為奈米懸浮液。
  256. 如請求項1至30中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  257. 如請求項32至61中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  258. 如請求項63至92中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  259. 如請求項94至123中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  260. 如請求項125至154中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  261. 如請求項156至185中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
  262. 如請求項187至220中任一項之方法，其中該醫藥組合物為水溶液，其中該水溶液包含環糊精，其中該環糊精為α環糊精或經取代β環糊精。
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