TW201629057A - 新穎化合物αｖβ整聯蛋白拮抗劑 - Google Patents

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Abstract

一種式(I)化合物， □其中R表示H或F，或其鹽。

Description

新穎化合物α v β 6 整聯蛋白拮抗劑
本發明係關於為αvβ6整聯蛋白拮抗劑之吡咯啶化合物、包含該等化合物之醫藥組合物及其於療法，尤其治療適用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之病況中之用途，化合物在製造用於治療適用αvβ6整聯蛋白之拮抗劑之病況之藥劑中之用途及治療或預防人類中適用αvβ6整聯蛋白之拮抗作用之病症之方法。
整聯蛋白超家族蛋白質為雜二聚細胞表面受體，包含α及β亞單位。已報導至少18個α及8個β亞單位，其已展示形成24種相異α/β雜二聚體。各鏈包含大細胞外域(就β亞單位而言之>640個胺基酸，就α亞單位而言之>940個胺基酸)，具有每條鏈約20個胺基酸之跨膜跨越區，及一般而言每條鏈30-50個胺基酸之短細胞質尾。已顯示不同整聯蛋白參與過多的細胞生物學，包括與細胞外基質之細胞黏附、細胞-細胞相互作用及對細胞遷移、增殖、分化及生存之效應(Barczyk等人，Cell and Tissue Research,2010,339,269)。
整聯蛋白受體經由短蛋白質-蛋白質結合界面與結合蛋白質相互作用。整聯蛋白家族可分組為在此類配位體中共用類似結合識別基元之亞家族。主要亞家族為RGD-整聯蛋白，其識別在蛋白質序列內含有RGD(精胺酸-甘胺酸-天冬胺酸)基元之配位體。此亞家族中存在8種整聯蛋白，即αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6、αvβ8、α11bβ3、α5β1、α8β1，其 中命名法表明αvβ1、αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8與發散β亞單位共用共同αv亞單位，且αvβ1、α5β1及α8β1與發散α亞單位共用共同β1亞單位。已顯示β1亞單位與11種不同α亞單位配對，其中僅以上列出之3種通常識別RGD肽基元(Humβhries等人，Journal of Cell Science,2006,119,3901)。
8種RGD結合整聯蛋白對於不同含RGD配位體具有不同結合親和力及特異性。配位體包括蛋白質，諸如纖維結合蛋白、玻璃連結蛋白、骨橋蛋白及轉型生長因子β1及β3(TGFβ1及TGFβ3)之潛在聯繫肽(LAP)。與TGFβ1及TGFβ3之LAP之整聯蛋白結合已在若干系統中顯示使得能夠活化TGFβ1及TGFβ3生物活性，及後續TGFβ驅動之生物學(Worthington等人，Trends in Biochemical Sciences,2011,36,47)。與RGD結合整聯蛋白之表現模式結合之此類配位體之多樣性產生疾病干預之多個機會。此類疾病包括纖維化疾病(Margadant等人，EMBO reports,2010,11,97)、發炎病症、癌症(Desgrosellier等人，Nature Reviews Cancer,2010,10,9)、再狹窄及具有血管生成組分之其他疾病(Weis等人，Cold Spring.Harb.Perspect.Med. 2011,1,a 006478)。
大量αv整聯蛋白拮抗劑(Goodman等人，Trends in Pharmacological Sciences,2012,33,405)已揭示於文獻中，包括抑制抗體、肽及小分子。就抗體而言，此等包括pan-αv拮抗劑英妥木單抗(Intetumumab)及阿吐珠單抗(Abituzumab)(Gras,Drugs of the Future,2015,40,97)、選擇性αvβ3拮抗劑埃達珠單抗(Etaracizumab)及選擇性αvβ6拮抗劑STX-100。西侖吉肽(Cilengitide)為抑制αvβ3及αvβ5兩者之環肽拮抗劑且SB-267268為抑制αvβ3及αvβ5兩者之化合物之實例(Wilkinson-Berka等人，Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.,2006,47,1600)。化合物充當區分αv整聯蛋白之組合之拮抗劑之創新使得能夠關於特異性疾病適應症調適而產生新穎藥劑。
肺纖維化表示若干間質性肺病，包括特發性間質性肺炎之末期，且特徵在於肺間質內之細胞外基質之過度沈積。在特發性間質性肺炎中，特發性肺纖維化(IPF)表示在診斷之後具有3至5年之典型存活期之最通常且最致命病況。IPF中之纖維化一般為進行性的，當前藥理學干預難治且由於功能性肺泡單元之閉塞而不可改變地導致呼吸衰竭。IPF在美國及歐洲影響大致500,000人。
存在支持上皮限制整聯蛋白αvβ6在TGFβ1之活化中之關鍵作用之活體外實驗、動物及IPF患者免疫組織化學資料。此整聯蛋白表現在正常上皮組織中較低且在受傷及發炎上皮，包括IPF中之活化上皮中顯著上調。因此，靶向此整聯蛋白降低干擾更寬TGFβ恆穩作用之理論可能性。已顯示藉由抗體阻斷部分抑制αvβ6整聯蛋白在不加重炎症的情況下預防肺纖維化(Horan GS等人Partial inhibition of integrin αvβ6 prevents pulmonary fibrosis without exacerbating inflammation.Am J Respir Crit Care Med 2008 177：56-65)。在肺纖維化之外，αvβ6亦考慮為其他器官，包括肝及腎之纖維化疾病之重要促進劑(綜述於Henderson NC等人Integrin-mediated regulation of TGFβ in Fibrosis,Biochimica et Biophysica Acta-Molecular Basis of Disease 2013 1832：891-896中)，表明αvβ6拮抗劑可在治療多個器官中之纖維化疾病中有效。
與若干RGD結合整聯蛋白可結合至TGFβ且使其活化之觀測結果一致，不同αv整聯蛋白最近已牽涉纖維化疾病(Henderson NC等人Targeting of αv integrin identifies a core molecular pathway that regulates fibrosis in several organs Nature Medicine 2013第19卷，第12期：1617-1627；Sarrazy V等人Integrins αvβ5 and αvβ3 promote latent TGF-β1 activation by human cardiac fibroblast contraction Cardiovasc Res 2014 102：407-417；Minagawa S等人Selective targeting of TGF-β activation to treat fibroinflammatory airway disease Sci Transl Med 2014第6卷，第241期：1-14；Reed NI等人The αvβ1 integrin plays a critical in vivo role in tissue fibrosis Sci Transl Med 2015第7卷，第288期：1-8)。因此，針對RGD結合整聯蛋白家族之特異性成員或在RGD結合整聯蛋白家族內具有特異性選擇性指紋之抑制劑可在治療多個器官中之纖維化疾病中有效。
一系列整聯蛋白拮抗劑針對αvβ3、αvβ5、αvβ6及αvβ8之SAR關係已經描述(Macdonald,SJF等人Structure activity relationships of αv integrin antagonists for pulmonary fibrosis by variation in aryl substituents.ACS MedChemLett 2014,5,1207-1212.2014年9月19日)。
期望提供亦可具有針對其他αv整聯蛋白，諸如αvβ1、αvβ5或αvβ8之活性之αvβ6拮抗劑。
在本發明之第一態樣中，提供一種式(I)化合物或其鹽，更特定言之，式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽：
其中R表示H或F。
式(I)化合物及其鹽具有αvβ6拮抗劑活性且咸信對於治療或預防某些病症具有潛在用途。術語αvβ6拮抗劑活性包括本文中之αvβ6抑制劑活性。
在本發明之第二態樣中，提供一種包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑之醫藥組合物。
在本發明之第三態樣中，提供一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，用於療法，特定言之治療適用αvβ6整聯蛋白受體拮抗劑之疾病或病況中。
在本發明之第四態樣中，提供一種治療或預防有需要之人類中適用αvβ6整聯蛋白受體拮抗劑之疾病或病況之方法，其包含向有需要之人類投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
在本發明之第五態樣中，提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽在製造用於治療適用αvβ6整聯蛋白受體拮抗劑之疾病或病況之藥劑中之用途。
圖1.化合物(XVIII)之X射線晶體結構。
圖2.化合物(XXIII)之X射線晶體結構。
在本發明之第一態樣中，提供一種式(I)化合物或其鹽：
其中R表示H或F。
一種式(I)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(IA)或其鹽：
在一個實施例中，式(IA)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸之醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，式(IA)化合物具有式(IA1)：
(R)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(I)化合物具有式(IA2)：
(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(I)化合物具有式(IA3)：
(S)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(I)化合物具有式(IA4)：
(R)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
另一式(I)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(IB)或其鹽：
在一個實施例中，式(IB)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸之醫藥學上可接受之鹽。
在一個實施例中，式(IB)化合物具有式(IB1)：
(R)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(IB)化合物具有式(IB2)：
(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(IB)化合物具有式(IB3)：
(S)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
在另一實施例中，式(IB)化合物具有式(IB4)：
(R)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
式(I)化合物具有鹼性胺基及羧酸基兩者且可因此形成內鹽(internal salt)，亦即兩性離子或內鹽(inner salt)。因此，在一個實施例中，式(I)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或兩性離子鹽形式之化合物IA1、IA2、IA3、IA4、IB1、IB2、IB3或IB4中之任一者。在另一實施例中，式(I)化合物為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或非兩性離子鹽形式之化合物IA1、IA2、IA3、IA4、IB1、IB2、IB3或IB4中之任一者。
應瞭解，本發明以母體化合物形式、以兩性離子形式(母體化合物藉由其羧酸基內部質子化且通常以兩性離子形式存在)及以其鹽， 例如其醫藥學上可接受之鹽形式涵蓋式(I)化合物。在一個實施例中，本發明係關於式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
關於適合之鹽之回顧，參見Berge等人，J.Pharm.Sci.,66：1-19,(1977)。適合之醫藥學上可接受之鹽列於P H Stahl及C G Wermuth編，Handbook of Pharmaceutical Salts；Properties,Selection and Use,Weinheim/Zurich：Wiley-VCH/VHCA,2002中。適合之醫藥學上可接受之鹽可包括與無機酸，諸如鹽酸、氫溴酸、正磷酸、硝酸、磷酸、或硫酸，或與有機酸，諸如甲烷磺酸、乙烷磺酸、對甲苯磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、反丁烯二酸、蘋果酸、丁二酸、水楊酸、順丁烯二酸、甘油磷酸、酒石酸、苯甲酸、麩胺酸、天冬胺酸、苯磺酸、萘磺酸(諸如2-萘磺酸)、己酸或乙醯水楊酸之酸加成鹽。尤其適合之酸為反丁烯二酸及順丁烯二酸。通常，醫藥學上可接受之鹽可藉由按需要使用所需酸或鹼容易地製備。所得鹽可自溶液沈澱且藉由過濾收集，或可藉由蒸發溶劑來回收。
其他非醫藥學上可接受之鹽，例如甲酸鹽、草酸鹽或三氟乙酸鹽可例如用於式(I)化合物之分離中，且包括於本發明之範疇內。
醫藥學上可接受之鹼加成鹽可由式(I)化合物與適合之有機鹼(例如三乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、膽鹼、精胺酸、離胺酸或組胺酸)之反應形成，該反應視情況於適合溶劑中，得到通常例如藉由結晶及過濾分離之鹼加成鹽。醫藥學上可接受之鹼鹽包括銨鹽；鹼金屬鹽，諸如鈉及鉀鹽；鹼土金屬鹽，諸如鈣及鎂鹽；及與有機鹼之鹽，包括一級、二級及三級胺，諸如異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環己基胺及N-甲基-D-還原葡糖胺之鹽。
本發明在其範疇內包括式(I)化合物之鹽之所有可能的化學計算量及非化學計算量形式。
式(I)化合物可呈結晶或非晶形式。此外，式(I)化合物之結晶形 式中之一些可以多晶型物之形式存在，其包括於本發明之範疇內。式(I)化合物之多晶型形式可使用多種習知分析技術表徵及區分，包括(但不限於)X射線粉末繞射(XRPD)圖案、紅外(IR)光譜、拉曼光譜(Raman spectra)、差示掃描熱量測定(DSC)、熱解重量分析(TGA)及固態核磁共振(SSNMR)。
式(I)化合物亦可使用噴霧乾燥分散(SDD)方法以聚合物基質，諸如羥丙基甲基纖維素乙酸酯丁二酸酯中之非晶形分子分散液形式製備以改良原料藥之穩定性及可溶性。
應瞭解，許多有機化合物可與溶劑形成複合物，該等有機化合物在該等溶劑中皮應或自其沈澱或結晶。此等複合物稱為「溶劑合物」。舉例而言，與水之複合物稱為「水合物」。具有高沸點及/或能夠形成氫鍵之溶劑，諸如水、二甲苯、N-甲基吡咯啶酮、甲醇及乙醇可用於形成溶劑合物。識別溶劑合物之方法包括(但不限於)NMR及微量分析。應瞭解，結晶形式可視情況經溶劑化以形成例如醫藥學上可接受之溶劑合物，諸如水合物，其可為含有可變量之水之化學計算量水合物以及化合物。溶劑合物包括化學計算量溶劑合物及非化學計算量溶劑合物。式(I)化合物可以溶劑化或非溶劑化形式存在。
本文所描述之化合物含有兩個不對稱中心以使得可形成光學異構體，例如非對映異構體及對映異構體。因此，本發明涵蓋式(I)化合物之異構體，無論以經分離以實質上不含另一異構體(亦即純)之個別異構體形式或以混合物形式。經分離以實質上不含另一異構體(亦即純)之個別異構體可經分離以使得存在小於10%，特定言之小於約1%，例如小於約0.1%之另一異構體。
熟習此項技術者應瞭解，某些非對映異構體可比其他非對映異構體具有較少活性且個別非對映異構體之活性可下降至選擇之限度以下。
異構體之分離可藉由熟習此項技術者已知之習知技術，例如藉由分步結晶、層析、HPLC或此等技術之組合實現。
式(I)化合物可以若干互變異構形式中之一者存在。應瞭解，本發明涵蓋式(I)化合物之所有互變異構體，無論呈個別互變異構體形式或其混合物形式。
自前述內容應瞭解，本發明之範疇內包括式(I)化合物及其鹽之溶劑合物、異構體及多晶型形式。
化合物製備
本發明化合物可藉由多種方法，包括標準化學方法製得。除非另外指明，否則任何先前定義之變數將繼續具有先前定義之含義。說明性一般合成方法陳述於下文中，且接著，本發明之特定化合物於工作實例中製備。
熟習此項技術者應瞭解，可以兩個幾何異構體形式存在之一些中間化合物之(E)或(Z)描述可含有其他幾何異構體作為次要組分。
結構式(I)之化合物可藉由包含結構式(II)之化合物之首先去保護，亦即酯基之裂解，接著視情況轉化為鹽之方法製備：
其中R2為C1-C6烷基，例如t-Bu、乙基或甲基。或者，R2為對掌性醇，例如(-)-薄荷醇[(1R,2S,5R)-2-異丙基-5-甲基環己醇]。
本發明之第六態樣提供式(II)化合物。
結構式(II)之化合物(其中R2為甲基、乙基、對掌性醇，諸如薄荷醇或t-Bu)之去保護可藉由在惰性溶劑，諸如二氯甲烷、2-甲基-四氫呋喃、四氫呋喃、1,4-二噁烷或環戊基甲基醚或水中使用例如鹽酸、 氫溴酸、硫酸或三氟乙酸進行酸水解實現。
或者，結構式(II)之化合物(其中R2為甲基、乙基或對掌性醇，諸如薄荷醇)之去保護可藉由在適合溶劑，例如水性溶劑，諸如水性甲醇中使用例如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀進行鹼水解實現。
在酯基之裂解之後，所得產物可藉由熟習此項技術者熟知之方法轉化為所要求之鹽。
在一個實施例中，兩性離子轉化為反丁烯二酸鹽藉由用反丁烯二酸之乙醇溶液處理兩性離子之乙醇溶液、加熱所得鹽溶液至40℃且使其冷卻至5℃以出現結晶實現。
在另一實施例中，兩性離子轉化為順丁烯二酸鹽藉由用順丁烯二酸之水溶液處理兩性離子之乙腈溶液、加熱所得溶液至40℃且使其冷卻至5℃以出現結晶實現。
結構式(II)之化合物可獲自結構式(III)之化合物：
其中R2如上文所定義，其藉由與結構式(IV)之酸化合物反應，其中R為H或F：
或者，可使用酸酯，諸如頻哪醇酯，其原位提供母體酸。結構式(IV)之化合物可商購自例如Enamine LLC,Princeton Corporate Plaza,7 Deer Park Drive Ste.17-3,Monmouth Jct.NJ(USA)08852,Manchester Organics或Fluorochem。結構式(III)與(IV)之化合物之間的反應可在存在適合之催化劑，諸如銠催化劑，例如(1,5-環辛二烯)氯化銠之二聚物[Rh(COD)Cl]2及添加劑，諸如膦配位體，例如雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘(BINAP)的情況下，較佳在存在鹼，諸如水性氫氧化 鉀的情況下，在高溫，諸如50-95℃下，及在水可混溶性溶劑，諸如1,4-二噁烷中進行。反應較佳在絕對厭氧條件下進行，其中反應混合物用諸如氮氣之惰性氣體吹掃，且在減壓下抽空，重複此抽空及用氮氣吹掃之方法三次。或者，反應可在微波瓶中進行且混合物在高溫下在微波反應器中加熱。此反應通常以1：1之比率產生異構體混合物。產生之異構體混合物可藉由層析、HPLC或藉由結晶分離。不對稱合成可藉由在存在基於銠化合物之催化劑的情況下包括對掌性配位體，例如(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘(「R-BINAP」)之一種對映異構體實現。結構式(III)之化合物中之雙鍵之幾何構型可為(E)異構體或(E)及(Z)異構體之混合物，較佳純(E)異構體。
式(III)化合物之一種對映異構體與式(IV)化合物之間的反應產生大致1：1比率之兩個非對映異構體，其可藉由結晶、層析或藉由HPLC分離。分離之較佳方法為對掌性支撐物，諸如Chiralpak或Chiralcel管柱上之對掌性HPLC。在存在約I0%添加劑，諸如(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯二萘[(R)-BINAP]的情況下，形成之非對映異構體之比率可實質上增加至例如大致80：20或更高，此提供更具生物活性之非對映異構體作為主要異構體。
或者，由熟習此項技術者選擇或藉由篩選大量組合選擇之化合物(III)與不同對掌性R2基團、配位體、酸(IV)、催化劑及溶劑之各種組合可獲得非對映異構體之較高比率。
非對映異構比率可藉由對掌性HPLC或藉由結晶另外增加至例如大於99：1。
結構式(V)之化合物可獲自結構式(III)之化合物：
其藉由與結構式(VI)之化合物反應：
其中R2如上文所定義，在存在有機鹼，諸如N,N-二異丙基乙胺(「DIPEA」)及適合之鈀基催化劑，例如PdCl2(dppf)-CH2CI2[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)的情況下，在諸如二氯甲烷之溶劑中與二氯甲烷複合。式(V)化合物可用作母體化合物，或在存在三級胺鹼的情況下原位產生自鹽，諸如二鹽酸鹽。
結構式(VI)之化合物可藉由本文所述之方法製備。以說明方式，結構式(VI)之化合物(其中R2為甲基，且雙鍵具有(E)幾何構型)可藉由在下文中顯示之方法，以含市售4-溴巴豆酸甲酯及乙酸鈉或乙酸鉀之乙腈為起始物，在例如50℃之高溫下製備：
結構式(V)之化合物可製備自結構式(VII)之化合物：
其藉由催化氫解，例如在惰性溶劑，諸如乙醇或乙酸乙酯中使用碳上沈積之鈀催化劑。
結構式(VII)之化合物可獲自結構式(VIII)之化合物：
其藉由在存在鹼，諸如碳酸鉀的情況下，於適合溶劑，諸如DMF中，且在諸如130℃之高溫下之二醯亞胺還原，產生自例如苯磺醯基醯肼。
結構式(VIII)之化合物以幾何異構體，例如(E)或(Z)形式存在且可以純異構體形式或混合物形式使用。結構式(VIII)之化合物可以結構式(IX)之已知市售(例如購自Wuxi App Tec,288 Fute Zhong Road, Waigaoquiao Free Trade,Shanghai 200131,China)化合物為起始物獲得：
其可例如藉由含三氧化硫之吡啶氧化為結構式(X)之對應醛：
此結構式(X)之化合物可接著與結構式(XI)之鎓內鹽(ylide)反應，其可在不分離式(X)化合物的情況下進行：
以藉此形成式(VIII)化合物，其以幾何異構體(E)及(Z)之混合物形式存在。熟習此項技術者應瞭解，存在自醛(X)形成式(VIII)化合物之其他方法。幾何異構體可藉由層析分離或以混合物形式用於下一步驟中。製備結構式(I)之化合物之此總體流程在下文中概述為流程(I)：
流程(I)：
結構式(XI)之鎓內鹽可以式(XII)化合物(購自Fluorochem)為起始物製得：
其藉由與第一鹽酸反應，接著用碳酸氫鈉中和，可接著轉化為結構式(XIII)之醛：
其可例如使用硼氫化鈉還原為結構式(XIV)之對應醇：
(關於製備式(XIV)之醇，亦參見US-A-20040092538中所揭示之途 徑)。其可接著經溴化(例如使用三溴化磷)以產生結構式(XV)之對應溴化合物：
其可藉由與三苯基膦在諸如乙腈之溶劑中反應轉化為三苯基溴化鏻(XVI)。
上文所提及之結構式(XI)之鎓內鹽化合物可藉由結構式(XVI)之化合物與鹼，諸如第三丁醇鉀溶液在惰性溶劑，諸如THF中之反應獲得。結構式(XI)之鎓內鹽可在不預先分離的情況下與結構式(X)之醛在相同容器中分離或較佳原位形成及反應。
製備結構式(XI)之鎓內鹽之總體流程在下文中概述為流程(II)：
流程(II)
式(IX)化合物之兩個市售對映異構體中之每一者提供式(I)化合物之非對映異構體，其比另一非對映異構體更強力。
應瞭解，在上文所述之任一途徑中，保護一或多個官能基可為有利的。保護基及用於其移除之方法之實例可見於T.W.Greene『Protective Groups in Organic Synthesis』(第3版，J.Wiley and Sons,1999)中。適合之胺保護基包括醯基(例如乙醯基)、胺基甲酸酯基(例如2',2',2'-三氯乙氧基羰基、苯甲氧羰基或第三丁氧羰基)及芳烷基(例 如苯甲基)，其可按需要藉由水解(例如使用酸，諸如含鹽酸之二噁烷或含三氟乙酸之二氯甲烷)或還原(例如苯甲基或苯甲氧羰基之氫解或使用含鋅之乙酸之2',2',2'-三氯乙氧基羰基之還原移除)移除。其他適合之胺保護基包括三氟乙醯基(-COCF3)，其可藉由鹼催化之水解移除。
應瞭解，在上文所述之途徑中之任一者中，將各種基團及部分引入至分子中之合成步驟之精確順序可變化。確保在方法之一個階段引入之基團或部分將不受後續轉化及反應影響，且因此選擇合成步驟之順序將在熟習此項技術者之技能內。
亦咸信某些式(III)、(V)至(VIII)、(X)、(XI)、(XV)及(XVI)之化合物為新穎的且因此形成本發明的另一態樣。
式(I)化合物之絕對組態可在自已知絕對組態之中間物之獨立對映選擇性合成之後獲得。或者，式(I)之對映異構純化合物可轉化為絕對組態已知之化合物。在任一情況下，光譜資料、旋光度及分析型HPLC管柱上之滯留時間之比較可用於證實絕對組態。可行之第三選項為經由X射線結晶學確定絕對組態。
使用方法
咸信式(I)化合物及其鹽具有αv整聯蛋白拮抗劑活性，特定言之αvβ6受體活性，且因此在治療適用αvβ6拮抗劑之疾病或病況中具有潛在效用。
本發明因此提供一種用於療法中之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽可用於治療適用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之疾病或病況。
本發明因此提供用於治療適用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之疾病或病況之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
亦提供式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽在製造用於治療適 用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之疾病或病況之藥劑中之用途。
亦提供一種治療有需要之個體中適用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之疾病或病況之方法，其包含投與治療有效量之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
適當地，有需要之個體為哺乳動物，尤其人類。
如本文所用，術語「有效量」意謂將引發例如研究人員或臨床醫師尋求之組織、系統、動物或人類之生物或醫學反應之藥物或藥劑的量。此外，術語「治療有效量」意謂相較於尚未接受此量的對應個體，造成疾病、病症或副作用之治療、治癒、預防或改善改良，或疾病或病症之進展速率降低之任何量。該術語之範疇內亦包括有效增強正常生理功能的量。
纖維化疾病涉及在修復或反應過程中在器官或組織中形成過量纖維結締組織。咸信αvβ6拮抗劑適用於治療多種此類疾病或病況，包括依賴αvβ6整聯蛋白功能及經由αv整聯蛋白活化轉型生長因子β者。疾病可包括(但不限於)肺纖維化(例如特發性肺纖維化、非特異性間質性肺炎(NSIP)、普通型間質性肺炎(UIP)、哈布二氏(Hermansky-Pudlak)症候群、進行性大塊纖維化(煤工肺塵病之併發症)、結締組織疾病相關肺纖維化、哮喘及COPD中之氣管纖維化、ARDS相關纖維化、急性肺損傷、輻射誘發纖維化、家族性肺纖維化、肺性高血壓)；腎纖維化(糖尿病性腎病、IgA腎病、狼瘡性腎炎、局灶節段性腎小球硬化(FSGS)、移植腎病、自體免疫腎病、藥物誘發腎病、高血壓相關腎病、腎源性系統纖維化)；肝纖維化(病毒誘發纖維化(例如C型或B型肝炎)、自體免疫肝炎、原發性膽汁性肝硬化、酒精性肝病、非酒精性脂肪肝病，包括非酒精性脂肪肝炎(NASH)，先天性肝纖維化、原發性硬化性膽管炎、藥物誘發肝炎、肝硬化)；皮膚纖維化(肥厚性瘢痕、硬皮病、瘢痕瘤、皮肌炎、嗜伊紅血球筋膜炎、杜普宜特 朗氏攣縮(Dupytrens contracture)、艾登二氏(Ehlers-Danlos)症候群、佩羅尼氏病(Peyronie's disease)、營養不良性大皰性表皮鬆解、口腔黏膜下纖維化)；眼纖維化(年齡相關之黃斑變性(AMD)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼症、青光眼)角膜結瘢、角膜損傷及角膜創傷癒合、小樑切除手術後濾過泡結瘢之預防；心臟纖維化(充血性心臟衰竭、動脈粥樣硬化、心肌梗塞、心內膜心肌纖維化、肥厚性心肌症(HCM))及其他各種纖維化病況(縱隔纖維化、骨髓纖維化、腹膜後纖維化、克羅恩病(Crohn's disease)、神經纖維瘤、子宮平滑肌瘤(類纖維瘤)、慢性器官移植排斥。額外抑制αvβ1、αvβ5或αvβ8整聯蛋白可能有額外效益。
另外，亦可治療與αvβ6整聯蛋白相關之癌前病變或癌症(此等可包括(但不限於)子宮內膜癌、基細胞癌、肝癌、結腸癌、子宮頸癌、口腔癌、胰臟癌、乳癌及卵巢癌、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、巨細胞腫瘤及癌症相關基質)。可由影響血管生成獲得利益之病況亦可受益(例如實體腫瘤)。
術語「適用αvβ6拮抗劑之疾病或病況」意欲包括任何或所有以上疾病病況。
在一個實施例中，適用αvβ6拮抗劑之疾病或病況為特發性肺纖維化。
在另一實施例中，適用αvβ6拮抗劑之疾病或病況選自角膜結瘢、角膜損傷及角膜創傷癒合。
組合物
儘管可能為了用於療法中，式(I)化合物以及其醫藥學上可接受之鹽可以化學原料投與，但通常將活性成分呈現為醫藥組合物。
本發明因此在另一態樣中提供一種包含式(I)化合物或醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑 之醫藥組合物。式(I)之化合物及醫藥學上可接受之鹽係如上文所述。載劑、稀釋劑或賦形劑必須為可接受的，其意為與組合物之其他成分相容且不對其接受者有害。
根據本發明之另一態樣，亦提供一種製備醫藥組合物之方法，其包括摻合式(I)之化合物或其醫藥學上可接受之鹽與一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。醫藥組合物可用於治療本文所述之任一病況。
另外提供一種用於治療適用αvβ6整聯蛋白拮抗劑之疾病或病況之醫藥組合物，其包含式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
另外提供一種醫藥組合物，其包含0.01至3000mg之式(I)化合物或其醫藥學上之鹽及0.1至2g之一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
由於式(I)化合物意欲用於醫藥組合物中，可輕易瞭解其較佳各以實質純形式，例如至少60%純，更適當地至少75%純且較佳至少85%純，尤其至少98%純(%以重量基礎之重量計)提供。
醫藥組合物可以每個單位劑量含有預定量之活性成分的單位劑型呈遞。較佳單位劑量組合物為含有每日劑量或次劑量或其適當分率之活性成分者。因此，此等單位劑量可一天投與超過一次。較佳單位劑量組合物為含有如上文所述之每日劑量或次劑量(一天投與超過一次)或其適當分率之活性成分者。
醫藥組合物可適於藉由任何適當途徑投與，例如藉由經口(包括頰內或舌下)、經直腸、吸入、鼻內、局部(包括頰內、舌下或經皮)、經陰道、經眼或非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內或皮內)途徑。此類組合物可藉由藥學技術中已知之任何方法製備，例如藉由使活性成分與載劑或賦形劑締合。
在一個實施例中，醫藥組合物適於經口投與。
適於經口投與之醫藥組合物可呈現為離散單元，諸如膠囊或錠劑；散劑或顆粒劑；水性或非水性液體中之溶液或懸浮液；可食用發泡體或乳油甜點；或水包油液體乳液或油包水液體乳液。
舉例而言，關於以錠劑或膠囊形式經口投與，活性藥物組分可與口服、無毒醫藥學上可接受之惰性載劑，諸如乙醇、甘油、水及其類似物組合。適合於併入錠劑或膠囊中之粉末可藉由將化合物減小為適合之細粒尺寸(例如藉由微米尺寸化)且與類似地製備之醫藥載劑，諸如可食用碳水化合物，如澱粉或甘露糖醇混合製備。調味劑、防腐劑、分散劑及染色劑亦可存在。
膠囊可藉由製備如上文所述之粉末混合物，且填充成形之明膠鞘製得。助流劑及潤滑劑，諸如膠態二氧化矽、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇可在填充操作之前添加至粉末混合物。亦可添加崩解劑或增溶劑，諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉以改良攝取膠囊時之藥劑可用性。
此外，當需要或必要時，適合之黏合劑、助流劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、崩解劑及著色劑亦可併入至混合物中。適合之黏合劑包括澱粉、明膠、天然糖(諸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味劑、天然及合成膠(諸如阿拉伯膠、黃蓍膠或海藻酸鈉)、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟及其類似物。
用於此等劑型之潤滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉及其類似物。
崩解劑包括(但不限於)澱粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤土、三仙膠及其類似物。錠劑例如藉由製備粉末混合物，粒化或摻雜，添加潤滑劑及崩解劑及按壓為錠劑而調配。粉末混合物藉由混合化合物(適當地搗碎)與如上文所述之稀釋劑或鹼，且視情況與黏合劑，諸如羧甲基纖維素、海藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯啶酮，溶液阻滯劑，諸如 石蠟，吸收促進劑，諸如四級鹽及/或吸收劑，諸如膨潤土、高嶺土或磷酸二鈣製備。粉末混合物可藉由用黏合劑，諸如糖漿、澱粉糊劑、阿卡迪亞膠漿(acadia mucilage)或纖維素或聚合材料之溶液潤濕且迫使通過篩網而粒化。作為粒化之替代方案，粉末混合物可穿過壓錠機且結果為不完美地形成之毛坯破碎成顆粒。顆粒可藉助於添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油經潤滑以防止黏著至成錠模。潤滑之混合物隨後壓縮為錠劑。本發明化合物亦可與自由流動惰性載劑組合且在不經過粒化或摻雜步驟的情況下直接壓縮為錠劑。可提供由蟲膠之密封塗層、糖或聚合材料之塗層及蠟之拋光塗層組成之透明或不透明保護塗層。染料可添加至此等塗層以區分不同單位劑量。
口服流體，諸如溶液、糖漿及酏劑可以單位劑型製備以使得給定量含有預定量之化合物。糖漿可藉由將化合物溶解於適當地調味之水溶液中製備，而酏劑係經由使用無毒酒精性媒劑製備。懸浮液可藉由分散化合物於無毒媒劑中調配。亦可添加增溶劑及乳化劑(諸如乙氧基化異硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐劑、風味添加劑(諸如薄荷油)或天然甜味劑或糖精或其他人工甜味劑及其類似物。
適當時，用於經口投與之劑量單位組合物可經微囊封。調配物亦可例如藉由將粒狀材料包覆或包埋於聚合物、蠟或其類似物中製備以延長或維持釋放。
本發明化合物亦可以脂質體傳遞系統，諸如單層小微脂粒、單層大微脂粒及多層微脂粒形式投與。脂質體可由多種磷脂，諸如膽固醇、硬脂胺或磷脂醯膽鹼形成。
適於經皮投與之醫藥組合物可以意圖與受者之表皮保持長時段之緊密接觸之離散貼片形式呈現。
適於局部投與之醫藥組合物可調配為軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、散劑、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣溶膠或油劑。
對於眼睛或其他外部組織，例如口腔及皮膚之處理，組合物較佳以局部軟膏或乳膏形式施用。當經調配為軟膏時，活性成分可與石蠟或水混溶性軟膏基質一起使用。或者，活性成分可藉由水包油乳膏基質或油包水基質調配為乳膏。本發明化合物可以局部滴眼劑形式投與。本發明化合物可經由結膜下、前房內或玻璃體內途徑投與，其將使長於每天之投與時間間隔成為必需。
適於局部投與至眼睛之醫藥調配物包括滴眼劑，其中活性成分溶解或懸浮於適合之載劑，尤其水性溶劑中。投與至眼睛之調配物將具有經眼相容pH及重量莫耳滲透濃度。一或多種經眼可接受pH調節劑及/或緩衝劑可包括於本發明之組合物中，包括酸，諸如乙酸、硼酸、檸檬酸、乳酸、磷酸及鹽酸；鹼，諸如氫氧化鈉、磷酸鈉、硼酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉及乳酸鈉；及緩衝液，諸如檸檬酸鹽/右旋糖、碳酸氫鈉及氯化銨。此類酸、鹼及緩衝液可以將組合物之pH維持於經眼可接受範圍內所需的量包括。一或多種經眼可接受鹽可以足以使組合物之重量莫耳滲透濃度進入經眼可接受範圍內之量包括於組合物中。此類鹽包括具有鈉、鉀或銨陽離子及氯化物、檸檬酸根、抗壞血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氫根、硫酸根、硫代硫酸根或亞硫酸氫根陰離子之彼等。
經眼傳遞裝置可經設計而以多個界定釋放速率及持續劑量動力學及滲透率控制釋放一或多種治療劑。控制釋放可經由併入生物可降解/生物可蝕性聚合物(例如聚(乙烯乙烯基)乙酸酯(EVA)、超水解PVA)、羥烷基纖維素(HPC)、甲基纖維素(MC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚己內酯、聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚酸酐之不同選項及特性之聚合基質、聚合物分子量、聚合物結晶性、共聚物比率、處理條件、表面修整、幾何構型、賦形劑添加及將增強藥物擴散、沖蝕、溶解及滲透之聚合塗層之設計獲得。
使用眼部裝置傳遞藥物之調配物可與一或多種適合於指定投與途徑之活性劑及佐劑組合。舉例而言，活性劑可與任何醫藥學上可接受之賦形劑、乳糖、蔗糖、澱粉粉末、烷酸之纖維素酯、硬脂酸、滑石、硬脂酸鎂、氧化鎂、磷酸及硫酸之鈉及鈣鹽、阿拉伯膠、明膠、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮及/或聚乙烯醇(經製錠或囊封以用於習知投與)摻和。或者，化合物可溶解於聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纖維素膠體溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黃蓍膠及/或各種緩衝液中。化合物亦可與生物可降解及非生物可降解聚合物兩者及具有時間延遲特性之載劑或稀釋劑之組合物混合。生物可降解組合物之代表性實例可包括白蛋白、明膠、澱粉、纖維素、葡聚糖、多醣、聚(D,L-交酯)、聚(D,L-交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羥基丁酸酯)、聚(烷基碳酸酯)及聚(原酸酯)及其混合物。非生物可降解聚合物之代表性實例可包括EVA共聚物、聚矽氧橡膠及聚(丙烯酸甲酯)及其混合物。
經眼傳遞之醫藥組合物亦包括原位可膠凝水性組合物。此類組合物包含以當與眼睛或淚液流體接觸時有效促進膠凝之濃度之膠凝劑。適合之膠凝劑包括(但不限於)熱固性聚合物。如本文所用之術語「原位可膠凝」不僅包括當與眼睛或淚液流體接觸時形成凝膠之低黏度液體，且亦包括當投與至眼睛時展現實質上增加之黏度或凝膠硬度之更黏滯液體，諸如半流體及搖變凝膠。參見例如Ludwig(2005)Adv.Drug Deliv.Rev.3；57：1595-639，出於其用於經眼藥物傳遞之聚合物實例之教示內容之目的而以引用的方式併入本文中。
適於在口中局部投與之醫藥組合物包括口含錠、片劑及漱口水。
適於經直腸投與之醫藥組合物可呈現為栓劑或灌腸劑。
用於經鼻或吸入投與之劑型可便利地調配為氣溶膠、溶液、懸 浮液凝膠或乾粉。
適於經陰道投與之醫藥組合物可呈現為子宮托、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、發泡體或噴霧調配物。
適於非經腸投與之醫藥組合物包括可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及使組合物與預期接受者血液等張之溶質的水性及非水性無菌注射溶液，及可包括懸浮劑及增稠劑之水性及非水性無菌懸浮液。可使組合物呈現於單位劑量或多劑量容器(例如密封安瓿及小瓶)中，且可在經冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在即將使用之前添加無菌液體載劑(例如水)用於注射。可自無菌散劑、顆粒劑及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。
適於皮下或肌肉內投與之醫藥組合物包括聚(乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)共聚物以形成含有活性醫藥成分之微粒以提供持續釋放。
治療有效量之本發明化合物將取決於多種因素，包括例如個體之年齡及體重、需要治療之精確病況及其嚴重程度、調配物之性質及投與途徑，且最後將由巡診醫師或獸醫酌情處理。在醫藥組合物中，用於經口或非經腸投與之各劑量單位較佳含有0.01至3000mg，更佳0.1至2000mg以兩性離子母體化合物計算之本發明化合物。
醫藥學上可接受之本發明化合物可以每天0.01mg至3000mg或每天0.5至1000mg以兩性離子計算之式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽之日劑量(對於成年患者)，例如經口或非經腸劑量投與。此量可以每天之單一劑量或更通常以每天之多個(諸如兩個、三個、四個、五個或六個)亞劑量給予以使得總日劑量相同。其鹽之有效量可測定為式(I)化合物本身之有效量之一定比例。
本發明化合物可單獨或與其他治療劑組合採用。本發明之組合療法因此包含投與至少一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及使用至少一種其他醫藥活性劑。較佳地，本發明之組合療法包含投與 至少一種式(I)化合物或其醫藥學上可接受之鹽，及至少一種其他醫藥活性劑。本發明之化合物及其他醫藥活性劑可以單一醫藥組合物在一起投與或分開投與，且當分開投與時，此可同時或按任何次序依序進行。將選擇本發明之化合物及其他醫藥活性劑之量及相對投與時序以達成所需組合治療效應。
因此，在另一態樣中，提供一種包含本發明化合物及至少一種其他醫藥活性劑之組合。
因此，在一態樣中，本發明之化合物及醫藥組合物可與一或多種其他治療劑組合使用或包括該一或多種其他治療劑，包括用於過敏性疾病、發炎疾病、自體免疫疾病之治療劑、抗纖維化治療劑及用於阻塞性氣管疾病之治療劑、用於糖尿病性眼部疾病之治療劑及用於角膜結瘢、角膜損傷及角膜創傷癒合之治療劑。
抗過敏治療劑包括抗原免疫治療劑(諸如蜂毒、花粉、牛乳、花生、CpG基元、膠原蛋白、之組分及片段，可以經口或舌下抗原形式投與之細胞外基質之其他組分)、抗組織胺(諸如西替利嗪(cetirizine)、氯雷他定(loratidine)、阿伐斯丁(acrivastine)、非索非尼定(fexofenidine)、氯苯那敏(chlorphenamine))及皮質類固醇(諸如丙酸氟替卡松(fluticasone propionate)、糠酸氟替卡松(fluticasone furoate)、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、布地奈德(budesonide)、環索奈德(ciclesonide)、糠酸莫米松(mometasone furoate)、曲安西龍(triamcinolone)、氟尼縮松(flunisolide)、潑尼龍(prednisolone)、氫化可體松(hydrocortisone))。
消炎治療劑包括NSAID(諸如阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen))、白三烯調節劑(諸如孟魯司特(montelukast)、紮魯司特(zafirlukast)、普魯司特(pranlukast))及其他消炎治療劑(諸如iNOS抑制劑、類胰蛋白酶抑制劑、IKK2抑制劑、p38 抑制劑(洛嗎莫德(losmapimod)、迪嗎莫德(dilmapimod))、彈性蛋白酶抑制劑、β2促效劑、DP1拮抗劑、DP2拮抗劑、pI3K δ抑制劑、ITK抑制劑、LP(溶血磷脂)抑制劑或FLAP(5-脂肪加氧酶活化蛋白)抑制劑(諸如3-(3-(第三丁硫基)-1-(4-(6-乙氧基吡啶-3-基)苯甲基)-5-((5-甲基吡啶-2-基)甲氧基)-1H-吲哚-2-基)-2,2-二甲基丙酸鈉)；腺苷a2a促效劑(諸如腺苷及瑞加德松(regadenoson))、趨化因子拮抗劑(諸如CCR3拮抗劑或CCR4拮抗劑)、介體釋放抑制劑。
用於自體免疫疾病之治療劑包括DMARDS(諸如甲胺喋呤、來氟米特(leflunomide)、硫唑嘌呤)、生物醫藥治療劑(諸如抗IgE、抗TNF、抗介白素(諸如抗IL-1、抗IL-6、抗IL-12、抗IL-17、抗IL-18))、受體治療劑(諸如依那西普(etanercept)及類似藥劑)；抗原非特異性免疫治療劑(諸如干擾素或其他細胞因子/趨化激素、細胞激素/趨化因子受體調節劑、細胞激素促效劑或拮抗劑、TLR促效劑及類似藥劑)。
其他抗纖維化治療劑包括TGFβ合成之抑制劑(諸如吡非尼酮(pirfenidone))、靶向血管內皮生長因子(VEGF)之酪胺酸激酶抑制劑、血小板衍生生長因子(PDGF)及纖維母細胞生長因子(FGF)受體激酶(諸如尼達尼布(Nintedanib)(BIBF-1120)及甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(Gleevec))、內皮素受體拮抗劑(諸如安立生坦(ambrisentan)或馬西替坦(macitentan))、抗氧化劑(諸如N-乙醯半胱胺酸(NAC)；廣譜抗生素(諸如可曲噁唑、四環素(鹽酸二甲胺四環素))、磷酸二酯酶5(PDE5)抑制劑(諸如西地那非(sildenafil))、抗αvβx抗體及藥物(諸如抗αvβ6單株抗體(諸如WO2003100033A2中所述之彼等)；英妥木單抗(intetumumab)；西侖吉肽(cilengitide))，可以組合形式使用。
用於阻塞性氣管疾病之療法包括支氣管擴張劑，諸如短效β2促效劑，諸如沙丁胺醇)、長效β2促效劑(諸如沙美特羅(salmeterol)、福 莫特羅(formoterol)及威蘭特羅(vilanterol))、短效蕈毒鹼拮抗劑(諸如異丙托溴銨)、長效蕈毒鹼拮抗劑(諸如噻托銨、蕪地溴銨(umeclidinium))。
在一些實施例中，治療亦可涉及本發明化合物與其他現有治療模式，例如治療糖尿病性眼部疾病之現有藥劑，諸如抗VEGF治療劑，例如Lucentis®、Avastin®及Aflibercept及類固醇，例如曲安西龍(triamcinolone)，及含有丙酮化氟新龍(fluocinolone acetonide)之類固醇植入物之組合。
在一些實施例中，治療亦可涉及本發明化合物與其他現有治療模式，例如治療角膜結瘢、角膜損傷或角膜創傷癒合之現有藥劑，諸如Gentel®、小牛血提取物、Levofloxacin®及Ofloxacin®之組合。
本發明之化合物及組合物可單獨或與癌症療法，包括化學療法、放射線療法、靶向藥劑、免疫療法及細胞或基因療法組合用於治療癌症。
熟習此項技術者將瞭解，適當時，其他治療劑成分可以鹽，例如鹼金屬或胺鹽或酸加成鹽，或前藥，或酯，例如低碳數烷基酯，或溶劑合物，例如水合物形式使用以使治療成分之活性及/或穩定性及/或物理特徵，諸如可溶性達到最佳。亦應瞭解，適當時，治療成分可以光學純形式使用。
上文提及之組合可方便地呈現以便以醫藥組合物形式使用，且由此包含如上文所定義之組合以及醫藥學上可接受之稀釋劑或載劑之醫藥組合物表示本發明之另一態樣。此類組合之個別化合物可在分開或組合之醫藥組合物中依序或同時投與。較佳地，個別化合物將在組合之醫藥組合物中同時投與。已知治療劑之適當劑量將為熟習此項技術者容易地理解。
應瞭解，當本發明化合物與一或多種其他治療活性劑組合投與 時，通常藉由吸入、靜脈內、經口、鼻內、眼局部或所得醫藥組合物可藉由相同途徑投與之其他途徑投與。或者，組合物之個別組分可藉由不同途徑投與。
本發明現將僅藉助於實例說明。
縮寫
以下清單提供如本文所用之某些縮寫之定義。應瞭解，清單並非窮舉的，但未在下文中定義之彼等縮寫之含義將為熟習此項技術者顯而易見。
Ac(乙醯基)
BCECF-AM(2',7'-雙-(2-羧乙基)-5-(及-6)-羧基螢光素乙醯氧基甲基酯)
BEH(乙烯橋接混合技術)
Bu(丁基)
CBZ(羧基苯甲基)
CHAPS(3-[(3-膽醯胺基丙基)二甲基銨基]-1-丙磺酸鹽)
Chiralcel OD-H(纖維素參(3,5-二甲基苯基胺基甲酸酯)，塗佈於5μm矽膠上)
Chiralpak AD-H(直鏈澱粉參(3,5-二甲基苯基胺基甲酸酯)，塗佈於5μm矽膠上)
Chiralpak ID(直鏈澱粉參(3-氯苯基胺基甲酸酯)，固定於5μm矽膠上)
Chiralpak AS(直鏈澱粉參((S)-α-甲基苯甲基胺基甲酸酯)，塗佈於5μm矽膠上)
CDI(碳基二咪唑)
CSH(帶電表面混合技術)
CV(管柱體積)
DCM(二氯甲烷)
DIPEA(二異丙基乙胺)
DMF(N,N-二甲基甲醯胺)
DMSO(二甲亞碸)
DSC(示差掃描比色測定)
Et(乙基)
EtOH(乙醇)
EtOAc(乙酸乙酯)
h(小時)
HCl(鹽酸)
HEPES(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸)
LCMS(液相層析質譜)
M(莫耳)
MDAP(質量導向自動製備型HPLC)
MDCK(Madin-Darby犬腎)
Me(甲基)
MeCN(乙腈)
MeI(甲基碘)
MeOH(甲醇)
min(分鐘)
MS(質譜)
PdCl2(dppf)-CH2Cl2[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯鈀(II)，與二氯甲烷複合
Ph(苯基)
iPr(異丙基)
(R)-BINAP(R)-(+)-2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯二萘
[Rh(COD)Cl]2((氯(1,5-環辛二烯)銠(I)二聚物)
SPE(固相萃取)
TBME(第三丁基甲基醚)
TEA(三乙胺)
TFA(三氟乙酸)
TGA(熱解重量分析)
TGA-IR(與紅外線接合之熱重分析儀)
THF(四氫呋喃)
TLC(薄層層析)
UPLC(超高效液相層析)
XRPD(X射線粉末繞射)
所有引用之鹽水係指氯化鈉之飽和水溶液。
實驗細節 分析型LCMS
分析型LCMS在以下系統A或B中之一者上進行。
所有系統之UV偵測為來自220nm至350nm之波長之平均信號且質譜使用交替掃描正負模式電噴霧電離在質譜儀上記錄。
如本文中所提及之LCMS系統A-C之實驗細節如下：
系統A
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC BEH C18管柱
流動速率：1mL/min.
溫度：40℃
溶劑：A：含10mM碳酸氫銨之水，用氨溶液調節至pH 10
B：乙腈
系統B
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC BEH C18管柱
流動速率：1mL/min
溫度：40℃
溶劑：A：甲酸於水中之0.1% v/v溶液
B：甲酸於乙腈中之0.1% v/v溶液
系統C
管柱：50mm×2.1mm ID，1.7μm Acquity UPLC CSH C18管柱
流動速率：1mL/min.
溫度：40℃
溶劑：A：含10mM碳酸氫銨之水，用氨溶液調節至pH 10
B：乙腈
中間物1：7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氫-1,8- 啶(化合物(XV)).
在0℃下在氮氣下向(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)甲醇(化合物(XIV))：參見US20040092538，第80頁，[0844])(820mg，4.99mmol)於無水乙腈(50mL)中之懸浮液中逐滴添加三溴化磷(0.565mL，5.99mmol)。在添加後，形成深橙色沈澱，其變為淡橙色。反應混合物在0℃下攪拌1h，到彼時反應完成。混合物在真空中濃縮且殘餘物分配於乙酸乙酯(250mL)與NaHCO3之飽和水溶液(250mL)之間。水相用乙酸乙酯(250mL)進一步萃取。合併之有機物溶液穿過疏水性玻璃料，接著在真空中濃縮，得到呈疏鬆乳油狀固體狀之標題化合物(1.05g，93%)：LCMS(系統C)RT=0.95min,ES+ve m/z 227，229(M+H)+。
中間物2：三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(XVI)).
7-(溴甲基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶(化合物(XV)，關於製備，參見中間物1)(1.00g，4.40mmol)於乙腈(98mL)中之溶液經三苯基膦(1.270g，4.84mmol)處理且溶液在室溫下在氮氣下攪拌隔夜。混合物在真空中濃縮以得到深乳油色固體，其隨後用二乙醚碾磨，得到呈淡乳油色固體狀之標題化合物(2.139g，99%)：LCMS(系統C)RT=1.23min,ES+ve m/z 409(M+H)+。
中間物3：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(E,Z)苯甲酯.(化合物(VIII)).
在氮氣下之3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(+-)-苯甲酯(化合物(IX)：購自Wuxi App Tec)(260mg，1.03mmol)於DCM(3mL)及DMSO(0.3mL)中之攪拌溶液用DIPEA(0.896mL，5.13mmol)處理。在冷卻至0-5℃(冰浴)之後，經約5min逐份添加吡啶三氧化硫(327mg，2.05mmol)以將醇化合物(IX)氧化為對應醛化合物(X)，其未經分離。移除冷卻浴且繼續攪拌0.5h。同時，在氮氣下之三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物(XVI)，關於製備，參見中間物2)(553mg，1.13mmol)於無水DCM(10mL)中之溶液經約5min用第三丁醇鉀(1M於THF中)(1.232mL，1.232mmol)逐滴處理，產生橙色溶液。繼續攪拌10min，且接著醛(式(X))溶液一次添加至鎓內鹽溶液且混合物在環境溫度下攪拌22h。反應混合物用DCM(20mL)稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(20mL)及鹽水(20mL)洗滌，乾燥(Na2SO4)，隨後在真空中蒸發。深褐色殘餘物藉由20g二氧化矽SPE濾筒上之層析純化且以經30min之0-100%乙酸乙酯-環己烷之梯度溶離以獲得呈兩種幾何異構體形式之標題化合物： 異構體1：稻草色膠狀物(123.4mg，31%)，LCMS(系統A)RT=1.28min,95%，ES+ve m/z 382(M+H)+及 異構體2：稻草色膠狀物(121.5mg，31%)，LCMS(系統A)RT=1.22min,91%，ES+ve m/z 382(M+H)+
總體產率=244.9mg，62.5%。
中間物3之組態隨後顯示為(R)且兩種幾何異構體為：3-氟-3-(2- (5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(R,E)-苯甲基酯及3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(R,Z)-苯甲酯。
中間物4：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(化合物(VII)).
3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(E,Z)-苯甲酯(化合物VIII，關於製備，參見中間物3)(1：1，E：Z)(244mg，0.640mmol)於DMF(2mL)中之溶液用苯磺醯基醯肼(購自Alfa Aesar)(275mg，1.60mmol)及碳酸鉀(354mg，2.56mmol)處理。反應混合物加熱至130℃後維持1h，隨後使其冷卻且分配於DCM與水之間。有機相用水洗滌且經由疏水性玻璃料乾燥。有機溶液在真空中蒸發且殘餘橙色油藉由二氧化矽濾筒(20g)上之層析純化，以經20min之0-50%[(3：1 EtOAc：EtOH)-EtOAc]之梯度溶離。適當溶離份經合併且在真空中蒸發，得到呈淡黃色膠狀物狀之標題化合物(150mg，61%)：LCMS(系統A)RT=1.24min,90%，ES+ve m/z 384(M+H)+。中間物4之絕對組態隨後根據推理顯示為(S)，因此化合物為3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-甲酸(S)-苯甲酯。中間物3中之(R)至中間物4中之(S)之改變係由於雙鍵之移除之優先級中之改變。
中間物5：7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8- 啶(化合物(V)).
3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(化合物(VII，關於製備，參見中間物4)(4.67g，12.2mmol)於含有10%鈀/碳(0.50g)之乙醇(70mL)中之攪拌溶液在氫氣氛圍下攪拌7h。LCMS顯示不完全去保護且再添加10%鈀/碳(0.25g)且混合物在氫氣氛圍下攪拌隔夜。反應混合物以暗灰色懸浮液形式存在，因此添加DCM以溶解材料，直至混合物變為黑色。催化劑藉由經由矽藻土墊過濾而移除且濾液及洗滌液在真空中蒸發。殘餘物自DCM蒸發以獲得呈橙色油狀之標題化合物(3.28g)：LCMS(系統A)RT=0.79min,90%，ES+ve m/z 250(M+H)+。中間物5之組態隨後根據推理確定為(S)且化合物之名稱為(S)-7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶。
中間物6[7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8- 啶，(化合物(V))甲烷磺酸鹽.
化合物(V)之此鹽可以如上文純化化合物(V)之方法製備及結晶。
2-丁醇(5mL)添加至7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶(化合物(V)，關於製備，參見中間物5)(1.0g，4.0mmol)中且加熱混合物直至實現完全溶解。添加甲烷磺酸(0.260mL，4.01mmol)至溫溶液且在攪拌下加熱混合物至80℃。隨後使溶液冷卻至環境溫度。無立即明顯之沈澱，因此溶液在冰箱(約4℃)中進一步冷卻。在3天之後，觀測到大量固體。固體藉由過濾分離且用冷2-丁醇洗滌，且 在真空中進一步乾燥以獲得呈淡黃色固體狀的標題化合物(600mg，43%)：LCMS(系統A)RT=0.80min,100%,ES+ve m/z 250(M+H)+；Chiralpak AD管柱(250mm×4.6mm)上之分析型對掌性HPLC RT=8.41min，99.6%及RT=12.03min，0.4%，用40% EtOH-庚烷(含有0.2%異丙胺)溶離，流動速率1mL/min，在235nm處偵測。中間物6之組態隨後根據推理確定為(S)且化合物之名稱為(S)-7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶甲烷磺酸鹽。
中間物7：4-乙醯氧基丁-2-烯酸(E)-甲酯(化合物(VI))
乙酸鈉(3.5g，42mmol)於MeCN(30mL)中之懸浮液用4-溴巴豆酸甲酯(購自Aldrich)(3.33mL，5g，28mmol)處理且混合物加熱至50℃後維持3天。混合物用醚稀釋，接著過濾。固體用醚洗滌且組合之濾液及洗滌液在減壓下蒸發。在蒸發之後，殘餘物分配於醚與水之間。有機相用碳酸氫鈉水溶液洗滌、經MgSO4乾燥且在減壓下蒸發，得到淡橙色油。NMR指示產物及起始物質之混合物，因此，添加乙酸鈉(3.44g，42mmol)至殘餘油，接著添加MeCN(10mL)，且經週末將混合物加熱至70℃。混合物在減壓下濃縮且殘餘物分配於醚與水之間。有機溶液用水、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)且過濾。濾液在減壓下蒸發，得到呈橙色油狀之標題化合物(3.55g，80%)：NMR δ(CDCl3)6.92(1H,dt,J 16,5Hz),6.01(1H,dt,J 16,2Hz),4.72(2H,dd,J 5,2Hz),3.73(3H,s),2.10(3H,s)。
中間物8：4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(E)-甲酯(化合物(III)
4-乙醯氧基丁-2-烯酸(E)-甲酯(化合物(VI)，關於製備參見中間物7)(127mg，0.802mmol)、7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶(化合物(V)，關於製備參見中間物5)(200mg，0.802mmol)及PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(65.7mg，0.080mmol)於DCM(2mL)中之混合物在環境溫度下攪拌2h。LCMS顯示約50%轉化率且添加DIPEA(0.279mL，1.60mmol)且在室溫下攪拌溶液2h。LCMS顯示幾乎完全轉化為產物。材料直接負載至管柱上且藉由層析(20g胺基丙基濾筒)純化，以經20min之含0-100% EtOAc之環己烷之梯度溶離。適當溶離份經合併及蒸發，得到標題化合物(101.4mg，36%產率)：LCMS(系統C)RT=1.08min,95%,ES+ve m/z 348(M+H)+。中間物8之組態確定為(S)且名稱根據推理確定為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-3-烯酸(S,E)-甲酯。
中間物9：4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸甲酯.異構體A及異構體B).
4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2- 烯酸(E)-甲酯(化合物(III)，關於製備，參見中間物8)(145mg，0.334mmol)、(R)-BINAP(31mg，0.05mmol)、[Rh(COD)Cl]2(10mg，0.020mmol)、(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(購自例如CombiBlocks、Manchester Organics或Fluorochem)(259mg，1.251mmol)及3.8M KOH(0.22mL，0.836mmol)在微波瓶中溶解於1,4-二噁烷(2mL)中且溶液在微波烘箱中加熱(100min，95℃)。反應混合物經由矽藻土過濾，用EtOAc(10mL)洗滌且濃縮。反應混合物懸浮於MeOH(300μL)中且藉由逆相層析法(C18，40g，含5-95% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨，20CV)純化。適當溶離份經合併且蒸發，得到呈膠狀之標題化合物(II)之非對映異構混合物(99mg，58%)。
混合物溶解於EtOH(2mL)及庚烷(1mL)中且非對映異構體藉由Chiralcel OD-H管柱(3cm×25cm)上之對掌性HPLC分離，用30% EtOH(含有0.2%異丙胺)-70%庚烷溶離(流動速率=30mL/min，在215nm處偵測)，得到化合物(II)之兩種非對映異構體。
異構體A(17mg，10%)：分析型對掌性HPLC RT=8.0min，>99.5%，在Chiralcel OD-H管柱(4.6mm id×25cm)上，用(30% EtOH(含有0.2%異丙胺)-庚烷溶離，流動速率=1.0mL/min，在215nm處偵測；LCMS(系統A)RT=1.21min,99%,ES+ve m/z 511(M+H)+；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.17(t,J=7.5Hz,1H),7.13(d,J=7.5Hz,1H),6.88-6.84(m,1H),6.76(d,J=7.5Hz,1H),6.38(d,J=7.5Hz,1H),3.87-3.81(m,4H),3.58(s,3H),3.42-3.36(m,2H),3.17-3.10(m,4H),2.90-2.49(m,12H),2.11-1.84(m,6H),1.38-1.28(m,2H)。
異構體B(77mg，45%)：分析型對掌性HPLC RT=17.2min，>99.5%，在Chiralcel OD-H管柱(4.6mm id×25cm)上，用(30% EtOH(含有0.2%異丙胺)-庚烷溶離，流動速率=1.0mL/min，在215nm處偵測；1H NMR(400MHz,CD3OD)δ 7.18(t,J=7.5Hz,1H),7.13-7.07 (m,1H),6.89-6.77(m,2H),6.74(d,J=7.5Hz,1H),6.36(d,J=7.5Hz,1H),3.87-3.75(m,4H),3.57(s,3H),3.40-3.34(m,2H),3.28-3.20(m,1H),3.16-3.07(m,4H),2.91-2.74(m,4H),2.74-2.44(m,9H),2.07-1.91(m,3H),1.91-1.80(m,2H)。
中間物9之兩種異構體之絕對組態隨後根據推理確定為就主要異構體(異構體B)而言，為4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(S)-甲酯，且就次要異構體(異構體A)而言，為4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(R)-甲酯。
中間物10：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(S,E,Z)-苯甲酯.(化合物(XXIII))
3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(R)-(-)-苯甲酯[(-)-化合物(IX)](購自Wuxi App Tec)(4.18g，16.50mmol)於二氯甲烷(60mL)及DMSO(5.86mL，83mmol)中之攪拌溶液在氮氣下用DIPEA(14.41mL，83mmol)處理。在冰浴中冷卻至0-5℃之後，經約5min分批添加吡啶三氧化硫(5.40g，33.9mmol)。溶液變為淡黃色且繼續攪拌約0.5h，得到黃色溶液。溶液用稀HCl(50mL)洗滌且乾燥(MgSO4)。接著添加三苯基((5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)甲基)溴化鏻(化合物XVI，關於製備，參見中間物2)(8.06g，16.47mmol)及少量DCM(約5mL)，隨後添加環己烷(3.81mL)，得到淡橙色溶液。第三丁醇鉀(19.80mL，19.80mmol)逐滴添加至此溶液，其產生乳油色懸浮液。在1h之 後，反應混合物用DCM(200mL)稀釋，用碳酸氫鈉飽和水溶液(200mL)及鹽水(200mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，隨後在真空中蒸發。暗橙色油固化隔夜且用二乙醚(約30mL)碾磨，隨後過濾，得到乳油色固體及黃色濾液。濾液在真空中蒸發，得到橙色油且將此施用至330g正相二氧化矽濾筒且以環己烷/乙酸乙酯梯度(0-100%乙酸乙酯，經50min)溶離。適當溶離份在真空中蒸發，得到呈稻草色膠狀物狀之標題化合物(3.953g，63%)：LCMS(系統C)RT=1.28min,50%及1.34min,46% ES+ve m/z 382(M+H)+。
中間物11：3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-甲酸(R)-苯甲酯
3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙烯基)吡咯啶-1-甲酸(S、E及Z)-苯甲酯(化合物XXIII，關於製備，參見中間物10)(3.814g，10.00mmol)於DMF(40mL)中之攪拌溶液在氮氣下用碳酸鉀(5.53g，40.0mmol)，接著用苯磺醯肼(4.38g，25.4mmol)處理，得到黃色液體。混合物在100℃下加熱1h，隨後使其冷卻至環境溫度，且經由矽藻土過濾。濾液在真空中蒸發，得到乳油色糊劑。此分配於水(100mL)與乙酸乙酯(100mL)之間且有機層另外用水(4×100mL)洗滌，乾燥(MgSO4)，且隨後在真空中蒸發，獲得黃色油(3.261g)。此經週末保留於高真空管線上(2.982g)。油溶解於最少DMSO(約3mL)中且施加至120g逆相濾筒且經12CV在10mM碳酸氫銨水溶液中以10-100%(含有0.1% NH3之乙腈)之梯度溶離。溶離份6-9在真空中部分蒸發以移除乙腈。其餘溶液用水(40mL)及DCM(60mL)稀釋，隨後分離。 水層另外用DCM(3×30mL)萃取且有機萃取物經合併，乾燥(MgSO4)，接著在真空中蒸發，得到呈淺黃色油狀之標題化合物(2.145g，56%)：LCMS(系統C)：RT=1.25min,ES+ve m/z 384(M+H)+。
中間物12：(R)-7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8- 啶
3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-甲酸(R)-苯甲酯(關於製備，參見中間物11)(2.334g，6.09mmol)於乙醇(50mL)中之溶液添加至10%鈀/碳(250mg，0.235mmol)且混合物在氫氣氛圍下攪拌3h，此時添加更多鈀/碳(107.2mg)。攪拌反應物隔夜。添加DCM(約30mL)且混合物在氮氣下經矽藻土過濾。在真空中蒸發濾液，得到呈黃色油狀之標題化合物(1.575g)：LCMS(系統C)RT=0.83min,ES+ve m/z 250(M+H)+。
中間物13：4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(R,E)-甲酯
4-乙醯氧基丁-2-烯酸(E)-甲酯(0.951g，6.01mmol)(化合物(IV)，關於製備參見中間物7)、(R)-7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶(關於製備參見中間物12)(1.520g，6.10mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.242g，0.331mmol)及乙酸鉀(2.083g，21.22mmol)溶解於DCM(25mL)中且反應混合物在氮下攪拌20h，得到橙色液體(2.188g)。反應混合物分配於DCM(50mL)與水(50mL)之 間且再用DCM(50mL)萃取一次。合併之有機相用鹽水(50mL)洗且經MgSO4乾燥。在真空中移除溶劑，且殘餘物溶解於DCM中且在胺基丙基濾筒(50g)上使用0-100%乙酸乙酯-環己烷之梯度經20min純化。適當溶離份合併且在真空中蒸發，得到呈黃色油狀之標題化合物(1.59g，75%)。LCMS(系統C)：RT=1.07min,ES+ve m/z 348(M+H)+。
中間物14. (R)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸甲酯及(S)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸甲酯
4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(R,E)-甲酯(關於製備參見中間物13)(429mg，0.988mmol)、[Rh(COD)Cl]2(29.7mg，0.060mmol)、(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(716mg，3.46mmol)及3.8M KOH(0.647mL，2.46mmol)溶解於1,4-二噁烷(2mL)中且溶液在微波反應器中加熱(大功率，100min，95℃)。反應混合物經由矽藻土過濾，用EtOAc(10mL)洗且濃縮。反應混合物懸浮於MeOH(300μL)中且藉由逆相層析法(C18，40g)純化，用30-85% MeCN(含有0.1%氨)於10mM碳酸氫銨水溶液中之梯度，30CV)溶離。適當溶離份合併且蒸發，得到呈非對映異構體混合物之產物(214mg，42%產率)。混合物藉由在Chiralcel OD-H管柱(30mm×25cm)上用含30% EtOH(含有0.2%異丙胺)之庚烷溶離、流動速率=30 mL/min、在215nm偵測之製備型對掌性HPLC分離，得到標題化合物之兩種非對映異構體：
異構體1 甲基(R)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(29mg，6%)LCMS(系統B)RT=0.54min,ES+ve m/z 511(M+H)+；分析型對掌性HPLC RT=7.5min，>99.5%，在Chiralcel OD-H管柱(4.6mm×25cm)上，用含有0.2%異丙胺之30%EtOH-庚烷溶離，流動速率1mL/min。
異構體2 甲基(S)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(138mg，27%)：LCMS(系統B)RT=0.57min,ES+ve m/z 511(M+H)+；分析型對掌性HPLCRT=13.9min，>99.5%，在Chiralcel OD-H管柱(4.6mm×25cm)上，用含有0.2%異丙胺之30%EtOH-庚烷溶離，流動速率1mL/min。
中間物15. 4-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)嗎啉
4-(4-氟苯基)嗎啉(Roiban,G-D.Eur.J.Org.Chem. 2014,2070-2076)(85g，469mmol)溶解於環己烷(1.2L)中且燒瓶用氬氣吹掃30min。向氬氣下之所得溶液中添加[Ir(COD)OMe]2(31.1g，46.9mmol)、4,4'-二-第三丁基-2,2'-聯吡啶(25.2g，94mmol)及4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼(60.0g，469mmol)且在70℃下攪拌18h。反應藉由TLC監測。(含10% EtOAc之己烷.Rf=0.2，用UV偵測)。乙酸乙酯(500mL)及鹽水(200mL)添加至反應混合物且分離有機相。用乙酸乙酯(2×300mL)萃取水相。用水、鹽水洗滌合併之有機相，乾燥 (Na2SO4)，過濾且在減壓下濃縮。殘餘液體(80g)負載至矽膠(100-200網格)管柱，用3% EtOAc-己烷溶離。適當溶離份經合併且在真空中蒸發。殘餘物(60g)用戊烷(100mL)碾磨，獲得55g產物，其進一步用冷戊烷碾磨，得到呈白色固體狀之標題化合物(50.3g，35%)：LCMSES+ve m/z 308(M+H)+。
中間物16. 4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(S)甲酯
燒瓶以含(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)酸(關於製備，參見中間物15)(216mg，0.958mmol)、4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(S,E)-甲酯(關於製備，參見中間物8)(111mg，0.319mmol)及KOH(水溶液)(0.252mL，0.958mmol)之1,4-二噁烷(3mL)填充。溶液使用氮氣脫氣。[Rh(COD)Cl]2(7.88mg，0.016mmol)及(R)-BINAP(23.87mg，0.038mmol)溶解於1,4-二噁烷(3mL)中且溶液經脫氣。兩種溶液經混合，脫氣，且在氮氣下在90℃下加熱1h。LCMS顯示最少轉化為產物，但仍保留大量之兩種起始物質。[Rh(COD)Cl]2(7.88mg，0.016mmol)及(R)-BINAP(23.87mg，0.038mmol)添加至溶液且溶液加熱至50℃後維持2h)。LCMS顯示進一步轉化為產物，但轉化率仍僅為約20%。添加其他量之(R)-BINAP(23.87mg，0.038mmol)、[Rh(COD)Cl]2(7.88mg，0.016mmol)、(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)酸(216mg，0.958mmol)及KOH(水溶液)(0.252mL，0.958mmol)。溶液在50℃下加熱2h)。LCMS顯示進一步轉化為所需產物且因此反應停止。反應混合物穿過矽藻土(10g)且用3CV之 MeOH洗滌。濾液在減壓下蒸發。殘餘物經由Biotage SNAP濾筒(30g)上之逆相層析純化，用40-85%乙腈-10mM碳酸氫銨水溶液溶離。收集適當溶離份且在真空下蒸發以產生標題化合物(116.9mg，69%)。LCMS(系統A)RT=1.23min,94%,ES+ve m/z 529(M+H)+；分析型對掌性HPLC RT=9.5min，>95%，用20% EtOH(含有0.2%異丙胺)-庚烷溶離，在Chiralcel OD-H(250mm×4.6mm)層析管柱上，流動速率1mL/min，在215nm處偵測。
製備實例 實例1：(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(S)-甲酯(關於製備，參見中間物9，異構體B)(77mg，0.15mmol)溶解於MeOH(1mL)中。LiOH(水溶液)(1M，0.452mL)添加至反應混合物中。在環境溫度下攪拌反應混合物18h。HCl(水溶液)(2M，0.226mL)添加至反應混合物，隨後其負載至經預調節SCX管柱上，用MeOH(2CV)，接著用含2M NH3之MeOH(2CV)溶離。氨溶離份經合併且蒸發。殘餘物使用逆相層析法(C18，含5-95% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨，15CV)純化。適當溶離份經收集且蒸發，得到呈膠狀之標題化合物(61mg，81%產率)：分析型對掌性HPLC RT=7.06min，>99.5%，在Chiralpak AS-H管柱(4.6mm id×25cm)上，用50% EtOH-庚烷溶離，流動速率=1.0mL/min，在215 nm處偵測；LCMS(系統A)RT=0.76min,98%,ES+ve m/z 497(M+H)+；1H NMR(CD3OD,600MHz)7.27-7.20(m,2H),6.89(s,1H),6.86(dd,J=8.3,2.0Hz,1H),6.78(d,J=7.7Hz,1H),6.45(d,J=7.3Hz,1H),3.88-3.80(m,4H),3.49-3.28(m,6H),3.25-3.18(m,2H),3.17-3.13(m,4H),3.03(d,J=8.1Hz,1H),2.82(dd,J=16.1,8.8Hz,1H),2.77-2.68(m,4H),2.67-2.56(m,1H),2.25(d,J=3.3Hz,1H),2.20-2.09(m,3H),1.90(五重峰，J=6.0Hz,2H)。
實例1之不對稱中心之絕對組態經確定且發現化合物具有結構式(IA2)(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸。
實例2：(S)-4-(R)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
(S)-4-(R)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸甲酯(關於製備，參見中間物14異構體2)(138mg，0.270mmol)於甲醇(1mL)中之溶液用LiOH水溶液(1M，0.811mL)處理且反應混合物在環境溫度下攪拌18h。2M HCl(0.405mL，0.811mmol)隨後添加至反應混合物，且施用至經預調節SCX濾筒。濾筒隨後用MeOH(2CV)，接著用含2M氨之甲醇(2CV)洗滌。氨溶離份經合併，蒸發且殘餘物使用逆相層析法(C18濾筒)純化，用含5-95% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨水溶液(15CV)溶離。適當溶離份經蒸發，得到呈膠狀之標題化合物(121mg，90%)。膠狀 物溶解於二乙醚(2mL)中，接著逐滴添加環己烷(約5mL)。出現固體且懸浮液在減壓下蒸發，得到標題化合物：LCMS(系統A)RT=0.77min,ES+ve m/z 497(M+H)+；1H NMR(DMSO-d 6,600MHz)7.12(t,J=7.5Hz,1H),7.02(d,J=7.5Hz,1H),6.82-6.81(m,1H),6.76-6.73(m,1H),6.69-6.67(m,1H),6.28(d,J=7.5Hz,1H),6.26-6.24(m,1H),3.74-3.69(m,4H),3.25-3.21(m,2H),3.15-3.09(m,1H),3.09-3.05(m,4H),2.87-2.65(m,4H),2.64-2.56(m,3H),2.56-2.45(m,4H+(藉由溶劑遮蔽))，2.40(dd,J=16,8.5Hz,1H),2.04-1.81(m,4H),1.74(五重峰，J=6.0Hz,2H)。
實例2之不對稱中心之絕對組態經確定且發現化合物具有結構式(IA3)(S)-4-(R)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸。
實例3：(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸順丁烯二酸鹽
MeCN(0.2mL)添加至(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(19.8mg)，接著添加順丁烯二酸(3M水溶液，0.0133mL)。溶液之溫度在40℃與5℃之間循環48h，在各循環之間保持一小時。結晶固體使用裝配有0.45m過濾器之離心過濾管分離，產生結晶順丁烯二酸鹽。
MeCN(3.5mL)添加至(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(349.6mg，0.70mmol)。向油性溶液中添加順丁烯二酸(3M水溶液，1.0當量)，其產生橙色溶液。添加晶種(關於製備，參見上文)。溶液在40℃下攪拌1h，冷卻至5℃後維持1h且在室溫下攪拌隔夜。結晶順丁烯二酸鹽藉由真空過濾分離且風乾15min。結晶順丁烯二酸鹽 之產率為(269.6mg，62%)：mp 184.5℃(熔化起始，DSC)。
替代性製備：向(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(1.146g，2.308mmol)中添加乙腈(11.5mL)。向此攪拌油性溶液中添加含3.0M順丁烯二酸之水(0.769mL，2.308mmol)，得到淡橙色溶液。溶液加熱至40℃且添加結晶順丁烯二酸鹽(關於製備，參見上文)之晶種。混合物在40℃下加熱1h且出現之白色固體經該1小時變為淡粉紅色。混合物在冰/水浴中冷卻1h。懸浮液在室溫下攪拌18h，接著藉由過濾來收集固體，用乙腈(2mL)洗滌，且在真空中乾燥，得到呈淡粉紅色固體狀之標題化合物(751mg，53%)。1H NMR(DMSO-d 6,600MHz)7.27(1H,d,CH),7.17(1H,t,CH),6.92(1H,br.s,NH),6.89(1H,t,CH),6.80(1H,dd,CH),6.75(1H,br.d,CH),6.44(1H,d,CH),6.04(2H,s,CH[順丁烯二酸鹽]),3.73(4H,br.t,2xCH2),3.31(2H,t,CH2),3.29-3.20(2H,CH+½ CH2),3.17-3.07(7H,br.t+m,2xCH2+3X1/2 CH2),3.04(1H,br.m,½ CH2),2.98(1H,br.m,½ CH2),2.75(1H,dd,½ CH2),2.68-2.59(4H,m,2xCH2),2.49(1H,dd,½ CH2),2.17-1.98(4H,m,2×CH2),1.78(2H,m,CH2)。
實例4：(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸反丁烯二酸鹽
MeCN(0.2mL)添加至(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(19.7mg)，接著添加反丁烯二酸(EtOH中之0.2M溶液，198.3μL)。溶液之溫度在40℃與5℃之間循環48h，在各循環之間保持一小時。在減壓下蒸發溶劑且添加MeCN(0.2mL)。產物之溫度在40℃與5℃之間循環隔夜(約16h)，在各循環之間保持一小時，其產生膠狀物。添加順丁烯二酸鹽之晶種(關於製備參見實例3)，膠狀物及懸浮 液在室溫下攪拌隔夜，其產生膠狀物及結晶固體之混合物。
EtOH(0.5mL)添加至(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(344.2mg，0.69mmol)。向油性溶液中添加反丁烯二酸(EtOH中之0.2M溶液，1.0當量)連同反丁烯二酸鹽之晶種(關於製備，參見上文)，其產生灰白色沈澱。懸浮液在40℃下攪拌1h，冷卻至5℃後維持1h且在室溫下攪拌隔夜。結晶反丁烯二酸鹽藉由真空過濾分離且風乾15min。結晶反丁烯二酸鹽之產率為(345.9mg，81%)：mp 171℃(熔化起始，DSC)。
替代性製備：向(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(1.24g，2.50mmol)中添加EtOH(1.8mL)。向此攪拌油性溶液種添加含0.2M反丁烯二酸之EtOH(12.48mL，2.5mmol)及結晶反丁烯二酸鹽之晶種(關於製備，參見上文)，得到淡橙色溶液及膠狀物。將此加熱至40℃後維持1h。白色固體經該1小時沈澱。懸浮液在冰/水浴中冷卻且攪拌1h。懸浮液隨後在室溫下攪拌18h。固體藉由過濾來收集，用乙醇(2mL)洗滌。固體在真空中乾燥，得到呈白色固體狀之標題化合物(1.34g，88%)：1H NMR(DMSO-d 6,600MHz)7.13(1H,t,CH),7.08(1H,d,CH),6.82(1H,t,CH),6.78(1H,br.s,NH),6.75ppm(1H,dd,CH),6.69(1H,br.d,CH),6.61(2H,s,CH[反丁烯二酸鹽])，6.31(1H,d,CH),3.72(4H,br.t,2×CH2),3.25(2H,br.t,CH2),3.13(1H,m,CH),3.08(4H,br.t,2×CH2),2.85-2.69(5H,m,CH2+3×1/2 CH2),2.61(2H,t,CH2),2.58-2.48(4H,m,CH2+2×1/2CH2),2.41(1H,dd,CH),2.03-1.85(4H,m,2×CH2),1.75(2H,m,CH2)。
實例5.(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1- 基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(S)甲酯(關於製備，參見中間物16)(116.9mg，0.221mmol)於THF中之溶液用LiOH水溶液(1M，1.1mL，1.1mmol)處理。溶液在25℃下攪拌5h。LCMS顯示完全轉化為產物。向溶液中添加2M HCl(0.663mL，1.327mmol)，接著溶液負載至預處理SCX管柱(10g)上，用含3CV 2M NH3之MeOH(3CV)溶離。適當溶離份經收集且減壓蒸發，得到呈粉紅色固體狀之標題化合物(114.3mg，100%)：LCMS(系統A)RT=0.77min,98%,ES+ve m/z 515(M+H)+；NMR(D2O,400MHz)7.37(d,J=7Hz,1H),7.06(t,J=9Hz,1H),6.99-6.92(m,2H),6.49(d,J=7Hz,1H),3.88-3.80(m,4H),3.67-3.39(m),3.36-3.20(m),3.10-3.03(m,4H),2.76-2.62(m,5H),2.51(dd,J=15,7Hz,1H),2.38-2.07(m,4H),1.85-1.77(m,2H)。
實例6.(S)-4-(S)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸檸檬酸鹽水合物
MeCN(0.2mL)添加至(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)(20.4mg)，接著添加檸檬酸(THF中之1M溶液，41.1μL)，其產生膠狀物。膠狀物殘餘物之溫度在40℃與5℃之間循環48h，在各循環之間保持一小時。在減壓下蒸發溶劑且添加MeCN(0.2mL)。所得產物之溫度在40℃與5℃之間循環隔夜(約16h)，在各循環之間保持一小時，其產生結晶檸檬酸鹽。
MeCN(6.0mL)添加至(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(關於製備，參見實例1)之樣品(349.5mg)。向油性溶液中以五個等分試樣添加檸檬酸(THF中之1M溶液，0.704mL)，其產生膠質材料。添加結晶檸檬酸鹽之晶種(關於製備，參見上文)。膠質懸浮液在40℃下攪拌一小時，冷卻至5℃後維持一小時且在室溫下攪拌隔夜，接著使懸浮液之溫度在40℃與5℃之間循環兩天。結晶檸檬酸鹽藉由真空過濾分離且風乾15min。結晶檸檬酸鹽之產率為(315.9mg，65%)：mp 121.4℃(熔化藉由DSC起始)。TGA資料顯示25℃與135℃之間的約2.7重量%損失。逸出氣體之TGA-IR分析顯示水之存在指示檸檬酸鹽為水合物(1當量水之理論重量%為2.6%)。
結晶甲磺酸鹽及二丁二酸鹽分別自丙酮-甲苯及乙腈類似地製備，且亦發現為水合的。
實例7.(R)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
在0℃下向微波瓶(0.5-2ml)中添加4-溴丁-2-烯酸(E)-甲酯(關於製備，參見中間物7)(113mg，0.634mmol)、(S)-7-(2-(3-氟吡咯啶-3-基)乙基)-1,2,3,4-四氫-1,8-啶(關於製備，參見中間物5)(166.4mg，0.667mmol)、DIPEA(0.233mL，1.33mmol)及二氯甲烷(1mL)。溶液在0℃下攪拌3h。LCMS顯示合理轉化為烷基化中間物。溶液隨後在氮氣下蒸發。向微波瓶中添加3.8M KOH(水溶液)(0.351mL，1.335mmol、[Rh(COD)Cl]2(15mg，0.030mmol)、(3-(N-嗎啉基)苯 基)酸(276mg，1.335mmol)及R-BINAP(50mg，0.080mmol)且該瓶置於微波中(5h，50℃，大功率)。LCMS顯示一些轉化且起始物質及酸均仍存在。瓶再次置於微波中(1h，70℃)。LCMS顯示進一步轉化為酯及酸之完全原脫硼基化作用。R-BINAP(50mg，0.080mmol)、[Rh(COD)Cl]2(15mg，0.030mmol)、(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(276mg，1.335mmol)及3.8M KOH(水溶液)(0.351mL，1.33mmol)添加至瓶中且瓶置於微波中(1h，85℃)。LCMS顯示一些轉化但為了提高產率，添加其他R-BINAP(50mg，0.080mmol)、[Rh(COD)Cl]2(15mg，0.030mmol)、(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(276mg，1.335mmol)及3.8M KOH(水溶液)(0.351mL，1.33mmol)且瓶再次置於微波中(1h，100℃)。LCMS顯示足夠轉化且混合物穿過矽藻土(10g，20mLMeOH)且濾液在真空下蒸發。樣品負載於MeOH：DMSO(1：1)中且使用經10CV之含50-95% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨)梯度在逆相(C18)管柱(30g)上純化。適當溶離份經合併且在真空中蒸發，得到所需中間物。向圓底燒瓶中添加3.8M KOH(3.34mL，12.69mmol)且溶液懸浮於四氫呋喃(2mL)中(攪拌隔夜，25℃)。LCMS顯示最少轉化為羧酸酯。添加1M LiOH(水溶液)(3.34mL，3.34mmol)且在25℃下攪拌反應物。2M HCl(水溶液)(8.34mL，16.68mmol)添加至反應混合物且其隨後負載至預潤濕SCX管柱(10g，用1CV MeOH，隨後用1CV MeCN預潤濕)上，接著用2CV MeCN，接著用含2CV NH3之MeOH洗滌。適當溶離份在減壓下蒸發。樣品溶解於10：10：1MeOH：DMSO：H2O(2.4mL)中且藉由MDAP純化(在XBridge C18管柱(通常100mm×30mm i.d.5μm填充直徑)上在環境溫度下進行，用乙腈-10mM碳酸氫銨水溶液(用氨溶液調節至pH 10)之梯度溶離)。在氮氣流下蒸發溶劑，得到呈非對映異構體之混合物形式之所需產物。混合物藉由在Daicel Chiralpak AS管柱(20mm×250mm)上、在15 mL/min之流動速率下用含50% EtOH之庚烷溶離、在215nm處偵測之製備型對掌性HPLC分離。自含有次要、稍後溶離異構體之溶離份蒸發溶劑，得到標題化合物(7mg，2%)。分析型對掌性HPLC RT=8.15min，在Daicel Chiralpak AS管柱(4.6mm×25cm)上，用含50% EtOH之庚烷溶離，流動速率=1.0mL/min，在215nm處偵測；LCMS(系統C)RT=0.76min,98.9%,ES+ve m/z 497(M+H)+。
實例8.(R)-4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(R,E)-甲酯(關於製備，參見中間物13)(110mg，0.253mmol)在氮氣下溶解於1,4-二噁烷(2mL)中。(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(157mg，0.760mmol)隨後添加至反應混合物中。[Rh(COD)Cl]2(13.4mg，0.027mmol)溶解於1,4-二噁烷(1mL)中且氮氣鼓泡通過2min。此暗紅色溶液添加至主要反應燒瓶。添加3.8M KOH(水溶液)(0.2mL，0.76mmol)，隨後反應混合物加熱至50℃後維持1h。LCMS顯示一些轉化為產物。反應混合物在50℃下攪拌1h。LCMS顯示不進一步轉化為產物。冷卻反應混合物且經由矽藻土過濾。用EtOH(10mL)洗滌管柱。溶液在減壓下蒸發，隨後懸浮於1M LiOH(水溶液)(1mL，1mmol)及1,4-二噁烷(1mL)中。攪拌反應混合物隔夜。LCMS顯示轉化為產物。反應混合物用2M HCl(水溶液)(0.5mL)酸化。粗混合物負載至SCX濾筒上且用含2M NH3之MeOH溶離。氨溶離份經蒸發且粗混合物懸浮於MeOH(1mL)中。材料藉由C18管柱(30g)上之逆相層析法純化，用含 5-70% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨，10CV)之梯度溶離。 適當溶離份經合併且蒸發。殘餘物藉由在Daicel Chiralpak AS管柱(20mm×25cm)上、在15mL/min之流動速率下用含50% EtOH之庚烷溶離且在215nm處偵測之對掌性HPLC純化。自含有稍後溶離異構體之溶離份蒸發溶劑，得到標題化合物(6mg，5%)。分析型對掌性HPLCRT=26.5min，在Daicel Chiralpak AS-H管柱(4.6mm×25cm)上，用含50% EtOH之庚烷溶離，流動速率=1.0mL/min，在215nm處偵測；LCMS(系統A)RT=0.81min,100%,ES+ve m/z 497(M+H)+。
實例9. 4-((R)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8- 啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸
4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)丁-2-烯酸(R,E)-甲酯(關於製備，參見中間物13)(145mg，0.417mmol)、[Rh(COD)Cl]2(10.29mg，0.021mmol)、R-BINAP(31.2mg，0.050mmol)、4-(4-氟-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環-2-基)苯基)嗎啉(關於製備，參見中間物15)(256mg，0.835mmol)及3.8M KOH(水溶液)(0.220mL，0.835mmol)溶解於1,4-二噁烷(2mL)中且溶液於微波中加熱(大功率，1h，100℃)。溶液經週末靜置且LCMS顯示不轉化為產物。藉由添加之R-BINAP(31.2mg，0.050mmol)、[Rh(COD)Cl]2(10.29mg，0.021mmol)及3.8M KOH(水溶液)(0.220mL，0.835mmol)重複該反應。LCMS顯示反應已充分進行且混合物穿過矽藻土(MeOH，3CV)且減壓蒸發。產物藉由C18(40g)管柱上之逆相層析法(負載於1：1 MeOH/DMSO中)純化，用含35-95% MeCN(含 有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨(10CV)溶離。適當溶離份在減壓下蒸發且產物隨後溶解於四氫呋喃(2mL)中且與1M LiOH(水溶液)(2.087mL，2.087mmol)反應(室溫，2h)。LCMS顯示反應已進行至完成。添加2M HCl(水溶液)(1.5mL，3mmol)且混合物負載至預潤濕SCX管柱(10g，用1CV MeOH，隨後用1CV MeCN預調節，樣品經負載，用2CV MeCN，隨後用2CV含2M NH3之MeOH洗滌)上。適當溶離份在減壓下蒸發。產物負載至逆相C18管柱(12g)上，用含15-55% MeCN(含有0.1%氨)之10mM碳酸氫銨(10CV)溶離。適當溶離份在減壓下蒸發，得到標題化合物(12mg，6%)。LCMS(系統A)RT=0.77min,98%,ES+ve m/z 515(M+H)+。
生物檢定 細胞黏附檢定
描述利用之試劑及方法[Ludbrook等人，Biochem.J. 2003,369,311及Macdonald等人ACS MedChemLett,2014,5,1207-1212，關於αvβ8檢定)，伴以以下澄清點。使用以下細胞株，配位體在括號中：K562-αvβ3(LAP-b1)、K562-αvβ5(玻璃連結蛋白)、K562-αvβ6(LAP-b1)、K562-αvβ8(LAP-b1)、A549-αvβ1(LAP-b1)。用於促進黏附之二價陽離子為2mM MgCl2。黏附藉由用螢光染料BCECF-AM(Life Technologies)之細胞標記定量，其中每毫升3×106個細胞之細胞懸浮液與0.33μL/mL之30mM BCECF-AM在37℃下一起培育10分鐘，隨後將50微升/孔分配至96孔檢定盤中。在檢定結束時，黏附之細胞使用50微升/孔之含0.5% Triton X-100之H2O裂解以釋放螢光。螢光強度使用Envision®盤讀取器(Perkin Elmer)偵測。關於檢定中之活性拮抗劑，資料擬合至4參數邏輯方程式以用於IC50測定。
細胞黏附檢定中之實例1之效能(pIC50)為：αvβ6 pIC50=8.0；αvβ3 pIC50=6.9；αvβ5 pIC50=7.1；αvβ8 pIC50=7.6；αvβ1 pIC50=7.0。
細胞黏附檢定中之實例2之效能(pIC50)為：αvβ6 pIC50=7.9；αvβ3 pIC50=6.2；αvβ5 pIC50=6.8；αvβ8 pIC50=7.6。
細胞黏附檢定中之實例3之效能(pIC50)為：αvβ6 pIC50=8.2；αvβ3 pIC50=6.9；αvβ8 pIC50=7.6；αvβ1 pIC50=7.1。
細胞黏附檢定中之實例4之效能(pIC50)為：αvβ6 pIC50=8.1；αvβ3 pIC50=6.8；αvβ8 pIC50=7.6；αvβ1 pIC50=7.0。
細胞黏附檢定中之實例5之效能(pIC50)為：αvβ6 pIC50=7.8；αvβ3 pIC50=6.1；αvβ5 pIC50=6.5；αvβ8 pIC50=7.6；αvβ1 pIC50=6.8。
細胞黏附檢定中之實例7之親和力(pIC50)為：αvβ6 pIC50=6.3；αvβ3 pIC50=5.5；αvβ5 pIC50=6.0；αvβ8 pIC50=5.9。
細胞黏附檢定中之實例8之親和力(pIC50)為：αvβ6 pIC50=6.5；αvβ3 pIC50<5.0。
細胞黏附檢定中之實例9之親和力(pIC50)為：αvβ6 pIC50=7.6；αvβ3 pIC50=5.1；αvβ5 pIC50=6.5；αvβ8 pIC50=7.1。
引用之數字為平均pIC50值。
MDCK細胞中之滲透率
在Madin-Darby犬腎y-多藥抗性1(MDCKII-MDR1)細胞中，在pH 7.4下，在存在強力P-醣蛋白抑制劑GF120918的情況下測定實例1、實例2及實例5(全部以兩性離子形式)之被動膜滲透率。各化合物在各測試場合以3M之濃度一式兩份地培育。在此檢定中，實例1之被動表觀滲透率(Papp)為68nm/s(n=2個測試場合)且實例2為20nm/s(n=1個測試場合)。對於實例5，Papp為90nm/s(±26nm/s；n=3個測試場合)。
觀測到儘管兩個非對映異構實例1及實例2在αvβ6細胞黏附檢定中具有類似活體外親和力(實例1 pIC50=8.0；實例2 pIC50=7.9)，其具有MDCK細胞中之不同滲透率(實例1 P=68nm/s且實例2 P=20nm/s)。預期此藉由實例1在藥物動力學研究中在活體內具有比實例2高之口服可 用性反映。
識別結構式(I)之化合物之絕對組態 識別3-氟吡咯啶不對稱中心之絕對組態。
目標分子(IA)之合成與結構式(IX)之中間物之各對映異構體分開地開始。此材料購自Wuxi App Tec，呈3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(+)-苯甲酯或3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(-)-苯甲酯形式，且每一者提供比次要非對映異構體更強力之(IA)之主要非對映異構體。3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸苯甲酯(IX)之對映異構體中之每一者之絕對組態為未知的，且進行流程3中概述之以下實驗以確定其組態。
1-(第三丁氧基羰基)-3-氟吡咯啶-3-甲酸(XVII)之外消旋混合物[Chemical Abstracts登記號1001754-59-1](購自Wuxi App Tec)藉由酸(XVII)與第一羰基二咪唑(CDI)，接著與(+)-(R)-α-甲基苯甲胺之反應轉化為N-α-甲苄基醯胺。此提供可藉由矽膠層析分離之醯胺之非對映異構混合物(P.K.Mykhailiuk等人Convenient synthesis of enantiopure(R)-and(S)-3-fluoro-3-aminomethylpyrrolidines,Tetrahedron 2014,70,3011-3017)。更極性異構體之組態由Mykhailiuk及吾等藉由X射線繞射研究獨立地確定且顯示為3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(S)第三丁酯[化合物(XVIII)](圖1)，且因此對於較少極性異構體，呈3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯[化合物(XIX)]形式。此外，此提供與藉由流程III中顯示之順序獲得之化合物比較之參考材料。儘管吾人關於極性異構體[化合物(XVIII)]之X射線資料與Mykhailiuk等人報導之X射線晶體結構一致，1H NMR光譜與吾人獲得之光譜不同。兩種非對映異構體[化合物(XVIII)及(XIX)]之光譜極類似；然而，關於吡咯啶C4質子存在小診斷性差異。吾人觀測其處於2.22ppm。Mykhailiuk報導其處於2.15ppm。
提供實例2之非對映異構體(IA)之結構式(IX)[3-氟-3-(羥基甲基) 吡咯啶-1-甲酸(-)-苯甲酯]之化合物之(-)-對映異構體經含10% Pd/C之乙醇氫化以移除CBZ保護基，且所得胺(XX)經二碳酸二第三丁酯保護，得到3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(-)-第三丁酯(XXI)。後者經含三氯化釕及高碘酸鈉之乙腈-水氧化。所得羧酸(XXII)隨後使用CDI及(+)-(R)-α-甲基苯甲胺轉化為如前所述之醯胺。將此醯胺與參考醯胺樣品(XVIII)及(XIX)相比且藉由NMR光譜法、旋光及對掌性HPLC發現與3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯(XIX)一致。(IX)之(-)-對映異構體為提供非對映異構體(IA3)及(IA4)之異構體且此等在吡咯啶不對稱中心處具有(R)-組態。(IX)之(+)-對映異構體提供(IA1)及(IA2)，其在吡咯啶不對稱中心處具有絕對組態(S)。
流程III.識別3-氟吡咯啶不對稱中心之絕對組態 識別苯甲基不對稱中心之絕對組態.
實例1之苯甲基不對稱中心之絕對組態藉由流程IV中顯示之降解實驗獲得。因此，實例1在室溫下用含碘代甲烷之DCM處理隔夜以使吡咯啶氮四級化，接著添加碳酸鉀，在微波反應器中加熱至120℃後 維持1h，得到(S)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIII)。將降解產物與使用經典Hayashi不對稱反應(T.Hayashi等人Tetrahedron Asymmetry,1999,10,4047-4056)，使用雙(降冰片二烯)四氟硼酸銠(I)作為催化劑且使用(R)-BINAP作為對掌性配位體，藉由添加(3-(N-嗎啉基)苯基)酸至呋喃-2(5H)-酮製備之真實(R)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIV)相比且顯示為降解產物之對映異構體，因此將其苯甲基中心處之實例1之組態確定為(S)。
流程IV. 試劑及條件：i)MeI，DCM，室溫，18h；ii)K2CO3，120℃，1h；iii)雙(降冰片二烯)四氟硼酸銠(I)及(R)-BINAP，KOH，1,4-二噁烷，100℃，1h。
此外，化合物XXIII之組態藉由X射線繞射研究獨立地確認且顯示為(S)(圖2)。
基於鑑別結構式(I)之化合物中之各不對稱中心之絕對組態之以上實驗，實例之絕對組態概述如下：實例1為結構式(IA2)(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸之化合物，實例2為結構式(IA3)(S)-4-(R)-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基) 吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸之化合物。
實驗 3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(S)-第三丁酯(化合物XVIII)及3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯(化合物XIX)
(±)-1-(第三丁氧基羰基)-3-氟吡咯啶-3-甲酸(化合物XVII)[Chemical Abstracts登記號1001754-59-1](購自Wuxi App Tec)(3.00g，12.9mmol)於THF(70mL)中之溶液在室溫下用固體CDI(2.5g，15.4mmol)處理，接著混合物加熱至80℃後維持1.5h。在此溫度下添加(R)-(+)-α-甲基苯甲胺(購自Fluka)(1.6g，13.2mmol)，接著再在80℃下加熱混合物1.5h。混合物用乙酸乙酯稀釋且用稀HCl、NaHCO3、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)，過濾且使其在室溫下緩慢蒸發。混合物最後在不結晶出固體時在減壓下濃縮。殘餘物藉由二氧化矽(2×100g)套筒上之層析純化，以經40min之0-25% EtOAc-環己烷溶離。首先溶離之化合物以白色發泡體(1.54g，36%)狀獲得：LCMS(系統A)RT=1.17min,ES+ve m/z 337(M+H)+；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.43-1.49(m,9H),1.54(d,J=7.0Hz,3H),2.08-2.19(m,1H),2.37-2.62(m,1H),3.43-3.56(m,1H),3.61-3.93(m,3H),5.14(五重峰，J=7.1Hz,1H),6.71-6.76(m,1H),7.27-7.39(m,5H)，含有約10%更極性非對映異構體；[α]D 20+61(c=1.27，於MeOH中)；分析型對掌性HPLCRT=7.58min，90%，及RT=9.53min，10%，在Chiralpak AD管柱(250mm×4.6mm)上，用10% EtOH-庚烷溶離，流動速率=1mL/min，在215nm處偵測。此樣品之50mg部分在二氧化矽濾筒(20g)上經進一步純化，以經20min之0-25% EtOAc-環己烷溶離。適當溶離份在減壓下蒸發，得到3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯(化合物XIX)之分析純樣品(30mg)LCMS(系統C)RT=1.16min, ES+ve m/z 337(M+H)+及354(M+NH4)+及ES-ve m/z 335(M-H)-；[α]D 20+63(c=0.933，於MeOH中)。
溶離自管柱之第二化合物(更極性非對映異構體)(1.2g，28%)結晶自醚，得到3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(S)-第三丁酯(化合物XVIII)mp=113-115℃；LCMS(系統C)RT=1.16min,ES+ve m/z 337(M+H)+；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.43-1.48(m,9H),1.54(d,J=7.0Hz,3H),2.14-2.26(m,1H),2.44-2.70(m,1H),3.46-3.55(m,1H),3.56-3.87(m,3H),5.14(五重峰，J=7.1Hz,1H),6.73(br s,1H),7.27-7.40(m,5H)；[α]D 20+73(c=0.876，於MeOH中)；分析型對掌性HPLC RT=9.50min，100%，在Chiralpak AD管柱(250mm×4.6mm)上，用10% EtOH-庚烷溶離，流動速率=1mL/min，在215nm處偵測。此非對映異構體之絕對組態自X射線繞射研究確定。
(R)-(-)-(3-氟吡咯啶-3-基)甲醇(化合物XX)
(-)-N-CBZ-3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶，化合物(IX)之(-)-異構體(購自Wuxi App Tec)(4.0g，15.8mmol)之溶液經10% Pd/C(400mg)在乙醇(150mL)中氫化隔夜。催化劑藉由經由矽藻土過濾移除且用乙醇洗滌。濾液及洗滌液在減壓下蒸發，得到呈黃色油狀之標題化合物(2.0g，106%，含有一些乙醇(根據NMR))，其固化為蠟質固體：LCMS(系統C)RT=0.22min,ES+ve m/z 120(M+H)+及ES-ve m/z 118(M-H)-。產物在吹除單元中在氮氣下在40℃下進一步乾燥。1H NMR(500MHz,CDCl3)3.82(dd,J=18.7,12.5Hz,1H),3.73(dd,J=22.0,12.2Hz,1H),3.22-3.15(m,1H),3.23-3.14(m,1H),2.99-2.92(m,1H),2.91(dd,J=29.1,13.2Hz,1H),2.66(br s,2H),2.10-1.98(m,1H),1.94-1.81(m,1H)；[α]D 20=-4(c=1.19，於EtOH中)。
3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(R)-(-)-第三丁酯(化合物XXI)
(R)-(3-氟吡咯啶-3-基)甲醇(化合物XX)(1.88g，15.8mmol)於 DCM(15mL)及二異丙基乙胺(4.13mL，23.7mmol)中之溶液用二碳酸二第三丁酯(3.79g，17mmol)處理且混合物在20℃下攪拌3h。混合物分配於2M HCl與DCM之間且分離於相分離器濾筒中。有機層在減壓下濃縮且殘餘物藉由二氧化矽濾筒(70g)上之層析純化，以經40min之0-50% EtOAc-環己烷之梯度溶離。溶離份藉由二氧化矽上之TLC(50% EtOAc-環己烷)檢查且用KMnO4溶液染色。適當溶離份經合併且減壓蒸發，得到呈無色油狀之標題化合物(2.73g，79%)：LCMS(系統C)RT=0.79min,ES+ve m/z 220(M+H)+及439(2M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ 1.42(s,9H),1.96-2.14(m,2H),3.32-3.41(m,2H),3.42-3.50(m,2H),3.54-3.61(m,1H),3.62-3.69(m,H),4.90(t,J=5.8Hz,1H)；[α]D 20=-28(c=3.51，於CHCl3中)。
3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯(化合物XIX)
3-氟-3-(羥基甲基)吡咯啶-1-甲酸(-)-第三丁酯(化合物XXI)(200mg，0.9mmol)於MeCN(1mL)及水(1mL)中之溶液用RuCl3(9.5mg，0.05mmol)及高碘酸鈉(976mg，4.5mmol)處理且混合物在20℃下攪拌16h。混合物用1M HCl(5mL)酸化且分配於DCM中。水相用DCM再提取兩次且各相分離於相分離濾筒中。有機溶液蒸發於吹除單元中，得到(R)-1-(第三丁氧基羰基)-3-氟吡咯啶-3-甲酸(化合物XXII)(125mg，59%)：MS ES-ve m/z 232(M-H)-。酸(125mg，0.54mmol)溶解於乙酸乙酯(10mL)中且用CDI(360mg，2.2mmol)處理且在室溫下攪拌混合物1h，接著在50℃下加熱0.5h。混合物在吹除單元中濃縮，殘餘物溶解於THF(6mL)中且用(R)-(+)-α-甲基苯甲膠(200mg，1.9mmol)處理且在20℃下攪拌1.5h。混合物用乙酸乙酯稀釋且用2M HCl溶液洗滌兩次，接著用鹽水洗滌。有機溶液經乾燥(MgSO4)且減壓蒸發，得到灰色固體(290mg)。殘餘物溶解於MeOH- DMSO(1：1；3mL)中且在環境溫度下藉由XSELECT CSH C18管柱(150mm×30mm i.d.5μm填充直徑)上之MDAP純化，以運行30min之30-85%(含10mM碳酸氫銨之水，用氨水溶液-乙腈調節至pH 10)之梯度溶離，在254nm處偵測，且以RT=17.4min，ES+ve m/z 337(M+H)+收集峰值。溶離份在吹除單元中在45℃下在氮氣下濃縮且殘餘懸浮液用EtOAc萃取。有機溶液用2M HCl洗滌兩次，接著用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)且減壓蒸發，得到黃色膠狀物(35mg)。膠狀物在環境溫度下藉由XBridge C18管柱(100mm×19mm i.d.5μm填充直徑)上之MDAP再純化，以(含10mM碳酸氫銨之水，用氨水溶液-乙腈調節至pH 10)之梯度溶離，運行25min，在254nm處偵測，收集第一溶離份(RT=10min)。在吹除單元中在氮氣下在45℃下移除溶劑，得到呈無色膠狀物狀之標題化合物(16mg，5%)：LCMS(系統C)RT=1.16min,ES+ve m/z 337(M+H)+,354(M+NH4)+；分析型對掌性HPLC RT=7.58min,97.7%，在Chiralpak AD管柱(250mm×4.6mm)上，用10% EtOH-庚烷溶離，流動速率=1mL/min，在215nm處偵測；[α]D 20+63(c=1.15，於MeOH中)。1H NMR光譜(500MHz，CDCl3)以及旋光及對掌性HPLC RT全部與3-氟-3-(((R)-1-苯乙基)胺甲醯基)吡咯啶-1-甲酸(R)-第三丁酯(化合物XIX)之彼等相符。
藉由降解為(+)-(S)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIII)確定實例1之苯甲基不對稱中心之絕對組態
室溫下之(S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸(實例1)(100mg，0.201mmol)於DCM(8mL)中之溶液用碘甲烷(0.195mL，3.13mmol)處理且攪拌18h。反應物在真空中濃縮(以移除過量碘甲烷)。殘餘物再溶解於DCM(5mL)中且添加碳酸鉀(122mg，0.884mmol)。反應物在微波反應器中加熱至120℃後維持1h。溶液經過濾且在真空中濃縮。殘餘油 藉由二氧化矽(10g)上之管柱層析來純化，用含0-100% TBME之環己烷之梯度溶離。相關溶離份在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(S)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIII)(32mg，64%)：LCMS(系統C)RT=0.82min,100%,ES+ve m/z 247(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)7.32-7.26(m,1H),6.89-6.84(m,1H),6.79-6.73(m,2H),4.67(dd,J=9,8Hz,1H),4.30(dd,J=9.06,7.5Hz,1H),3.92-3.85(m,4H),3.76(五重峰，J=8.31Hz,1H),3.21-3.17(m,4H),2.93(dd,J=17.5,8.7Hz,1H),2.93(dd,J=17.5,8.7Hz,1H),2.70(dd,J=17.5,8.7Hz,1H)；[α]D 22=+37.1(c=1.40，於CHCl3中)；對掌性HPLC RT=25.4min，在Chiralpak ID管柱(25cm×4.6mm)上，用20%異丙醇-庚烷溶離，流動速率1mL/min，在215nm處偵測。一部分化合物XXIII藉由緩慢結晶自氯仿再結晶以提供適合於X射線繞射研究之晶體。
合成真實(R)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIV)以與化合物(XXIII)比較.
雙(降冰片二烯)四氟硼酸銠(I)(購自Aldrich)(18.70mg，0.05mmol)及(3-(N-嗎啉基)苯基)酸(1035mg，5.00mmol)於1,4-二噁烷(10mL)中之溶液用呋喃-2(5H)-酮(0.142mL，2.0mmol)及KOH溶液(3.8M，1.053mL，4.00mmol)處理。所得溶液在微波反應器中加熱至100℃後維持1h。使反應物冷卻且在真空中濃縮，得到棕色油。殘餘物藉由層析(50g KPNH濾筒)純化，以經45min之含0-50% EtOAc之環己烷之梯度溶離。相關溶離份在真空中濃縮，得到呈白色固體狀之(R)-4-(3-(N-嗎啉基)苯基)二氫呋喃-2(3H)-酮(化合物XXIV)(132mg，27%)：LCMS(系統C)RT=0.82min,100%,ES+ve m/z 248(M+H)+；[α]D 22=-28.3(c=1.70，於CHCl3中)；對掌性HPLC RT=23.4min，94%，RT=25.4min 6%，在Chiralpak ID管柱(25cm×4.6mm)上，用 20%異丙醇-庚烷溶離，流動速率1mL/min，在215nm處偵測。

Claims (13)

  1. 一種式(I)化合物， 其中R表示H或F，或其鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其具有式(IA)： 其為4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)(morpholino)苯基)丁酸，或其鹽。
  3. 如請求項1或請求項2之化合物，其具有式(IA2)： (S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(3-(N-嗎啉基)苯基)丁酸，或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 如請求項1之化合物，其具有式(IB)： 4-(3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或其鹽。
  5. 如請求項1或請求項4之化合物，其具有式(IB2)： (S)-4-((S)-3-氟-3-(2-(5,6,7,8-四氫-1,8-啶-2-基)乙基)吡咯啶-1-基)-3-(2-氟-5-(N-嗎啉基)苯基)丁酸或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如請求項1、2及4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於療法。
  7. 如請求項1、2及4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療適用αvβ6受體拮抗劑之疾病或病況。
  8. 如請求項1、2及4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其用於治療特發性肺纖維化。
  9. 一種如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療或預防αvβ6受體之拮抗有益之病症之藥劑。
  10. 一種如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療或預防纖維化疾病之藥劑。
  11. 一種如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽之用途，其用於製造用於治療或預防特發性肺纖維化之藥劑。
  12. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
  13. 如請求項12之醫藥組合物，其呈適於經口投與之形式。
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