TW201518302A - 用於治療ｃ型肝炎之新穎化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供式I化合物(包含其鹽)以及使用該等化合物之組合物及方法。該等化合物具有抵抗C型肝炎病毒(HCV)之活性且可用於治療彼等感染HCV者。 □

Description

用於治療C型肝炎之新穎化合物 相關申請案的交叉參考
本申請案主張於2013年12月13日提出申請的美國臨時專利申請案61/915,729及於2013年3月13日提出申請的美國臨時專利申請案61/778,936之優先權，該等申請案之全文以引用方式併入本文中。
本發明概言之係關於式I新穎化合物(包含其鹽)，其具有抵抗C型肝炎病毒之活性(HCV)且可用於治療彼等感染HCV者。本發明亦係關於使用該等化合物之組合物及方法。
C型肝炎病毒(HCV)係主要的人類病原體，在世界範圍內感染估計一億七千萬人，約為感染1型人類免疫缺陷病毒數量的五倍。該等HCV感染個體之大部分患有嚴重的進行性肝臟疾病，包含硬化及肝細胞癌(Lauer,G.M.；Walker,B.D.N.Engl.J.Med. 2001,345,41-52)。
HCV係正鏈RNA病毒。基於對所推斷胺基酸序列之比對及5’-非轉譯區中之廣泛相似性，已將HCV歸類為黃病毒科(Flaviviridae)家族中之單獨屬。黃病毒科家族之所有成員具有含有正鏈RNA基因組之有包膜病毒粒子，該基因組經由翻譯單一、不間斷開放閱讀框來編碼所有已知的病毒特異性蛋白。
在整個HCV基因組之核苷酸及所編碼胺基酸序列內發現大量異質性。已表徵至少6個主要基因型，且已闡述50個以上的亞型。HCV之主要基因型在世界範圍內之分佈不同，且儘管對基因型對發病機制 及療法之可能效應進行了大量研究，但HCV之基因異質性之臨床重要性仍難以捉摸。
單鏈HCV RNA基因組之長度為約9500個核苷酸，且具有編碼約3000個胺基酸之單一大多蛋白之單一開放閱讀框(ORF)。在所感染細胞中，此多蛋白在多個位點處經細胞及病毒蛋白酶裂解以產生結構及非結構(NS)蛋白。在HCV之情形中，成熟非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A及NS5B)之產生係藉由兩種病毒蛋白酶來實現。人們認為第一種為金屬蛋白酶且在NS2-NS3接合處裂解；第二種係含於NS3之N端區域內之絲胺酸蛋白酶(亦稱為NS3蛋白酶)且介導NS3下游之所有後續裂解，兩者均在NS3-NS4A裂解位點處呈順式，且對於剩餘的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位點呈反式。NS4A蛋白似乎具有多種功能，用作NS3蛋白酶之輔因子且可能幫助NS3及其他病毒複製酶組份之膜定位。NS3蛋白與NS4A之複合物形成似乎為處理事件所必需，以提高所有位點處之蛋白水解效率。NS3蛋白亦展現核苷三磷酸酶及RNA解旋酶活性。NS5B(亦稱為HCV聚合酶)係參與HCV複製之RNA依賴性RNA聚合酶。HCV NS5B蛋白闡述於「Structural Analysis of the Hepatitis C Virus RNA Polymerase in Complex with Ribonucleotides」(Bressanelli；S.等人，Journal of Virology 2002,3482-3492；及Defrancesco及Rice，Clinics in Liver Disease 2003,7,211-242中。
當前，最有效之HCV療法採用α-干擾素與利巴韋林(ribavirin)之組合，此在40%之患者中產生持續功效(Poynard,T.等人Lancet 1998,352,1426-1432)。最新臨床結果展示，作為單一療法，聚乙二醇化α-干擾素優於未經修飾之α-干擾素(Zeuzem,S.等人N.Engl.J.Med. 2000,343,1666-1672)。然而，即使利用涉及聚乙二醇化α-干擾素與利巴韋林之組合之實驗治療方案，大部分患者之病毒載量並未持續降低。因 此，研發出治療HCV感染之有效治療法的需求很明確且重要。
HCV-796(一種HCV NS5B抑制劑)顯示降低患者中HCV RNA含量之能力。當使用該化合物作為單一藥劑進行治療時，在給藥期間病毒RNA含量瞬時降低且然後反彈，但當與呈干擾素及利巴韋林形式之標準護理組合時含量降低更穩健。由於在組合方案之延長給藥期間觀察到肝毒性，故暫停此化合物之研發。美國專利7,265,152及相應PCT專利申請案WO2004/041201闡述HCV-796類化合物。已揭示其他化合物，例如參見WO2009/101022。
本發明提供技術優點，例如，該等化合物在抵抗C型肝炎方面新穎且有效。此外，該等化合物提供例如關於其作用機制、黏合、抑制功效、靶選擇性、溶解度、安全性曲線或生物可用度中之一或多者之醫藥應用之優點。
本發明之一態樣係式I化合物
其中： R1係或，其中烷基、環烷基或Ar1部分可具有氫或氘原子； R2係氫、氟、甲氧基或CD3O； R3係氫；R4係第二丁基、三氟丙基、三氟乙氧基或三氟乙基胺基；R5係氟； Ar1係或；且X係CH或N；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係式I化合物，其中R1係 或 R2係氫、氟、甲氧基或CD3O；R3係氫；R4係第二丁基、三氟丙基、三氟乙氧基或三氟乙基胺基；R5係氟； Ar1係或；且X係CH或N；或其醫藥上可接受之鹽。
本發明另一態樣係式I化合物，其中：R1係(Ar1)烷基或(Ar1)環烷基；R2係氫、鹵基、烷基或烷氧基；R3係氫；R4係烷基、鹵烷基或鹵烷基胺基；R5係鹵基；且Ar1係經0-2個烷基取代基取代之噁二唑基； 或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係式I化合物，其中R1係(Ar1)烷基或(Ar1)環烷基。
另一發明係式I化合物，其中R1係或
另一發明係式I化合物，其中R1係
另一發明係式I化合物，其中R2係氫、鹵基、烷基或烷氧基。
另一發明係式I化合物，其中R2係氫、氟或甲氧基。
另一發明係式I化合物，其中R2係CD3O。
另一發明係式I化合物，其中R3係氫。
另一發明係式I化合物，其中R4係烷基、鹵烷基或鹵烷基胺基。
另一發明係式I化合物，其中R4係第二丁基、三氟丙基或三氟乙基胺基。
另一發明係式I化合物，其中R5係鹵基。
另一發明係式I化合物，其中R5係氟。
另一發明係式I化合物，其中Ar1係經0-2個烷基取代基取代之噁二唑基。
另一發明係式I化合物，其中Ar1係或
另一發明係式I化合物，其中Ar1係
本發明包含該等化合物之所有醫藥上可接受之鹽形式。醫藥上可接受之鹽係彼等抗衡離子並不顯著有助於化合物之生理活性或毒性且因此用作藥理學等效物者。該等鹽可根據採用市售試劑之常見有機技術製得。一些陰離子鹽形式包含乙酸鹽、醋硬脂酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物、樟腦磺酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、葡糖醛酸鹽、 氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、氫碘酸鹽、碘化物、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、硝酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及羥萘甲酸鹽。一些陽離子鹽形式包含銨鹽、鋁鹽、苄星青黴素(benzathine)鹽、鉍鹽、鈣鹽、膽鹼鹽、二乙胺鹽、二乙醇胺鹽、鋰鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、4-苯基環己胺鹽、六氫吡鹽、鉀鹽、鈉鹽、胺基丁三醇鹽及鋅鹽。
本發明之一些化合物具有不對稱碳原子。本發明包含所有立體異構體形式，包含鏡像異構體及非鏡像異構體以及立體異構體之混合物(例如外消旋物)。一些立體異構體可使用業內已知之方法製得。化合物與相關中間體之立體異構體混合物可根據業內通常已知之方法分離成個別同分異構體。在以下方案及表中之分子結構繪示中使用楔形或散列僅意欲指示相對立體化學，且不應理解為暗示絕對立體化學指配。
本發明意欲包含出現於本發明化合物中之原子之所有同位素。同位素包含彼等具有相同原子序數但具有不同質量數之原子。藉助一般實例且不加以限制，氫之同位素包含氘及氚。碳之同位素包含13C及14C。同位素標記之本發明化合物通常可藉由彼等熟習此項技術者已知之習用技術來製備，或可藉由與本文所闡述方法類似之製程使用適當同位素標記試劑替代原本採用之未標記試劑來製備。該等化合物可具有多種潛在用途，例如作為測定生物學活性之標準及試劑。在穩定同位素之情形下，該等化合物可具有有利地改良生物學、藥理學或藥物代謝動力學性質之潛能。
醫藥組合物及治療方法
該等化合物展示抵抗HCV NS5B之活性且可用於治療HCV及HCV感染。因此，本發明之另一態樣係包括化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑之組合物。
本發明之另一態樣係進一步包括具有抗HCV活性之化合物之組合物。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之化合物為干擾素或利巴韋林之組合物。在本發明之另一態樣中，干擾素係選自干擾素α2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A及類淋巴母細胞干擾素τ。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之化合物為環孢素之組合物。在本發明之另一態樣中，環孢素係環孢素A。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之化合物係選自由以下組成之群之組合物：介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助T細胞反應發生之化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特(Imiqimod)、利巴韋林、肌苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之化合物有效地抑制選自以下各項的靶之功能之組合物：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及用於治療HCV感染之核苷類似物。
本發明之另一態樣係包括化合物或其醫藥上可接受之鹽、醫藥上可接受之載劑、干擾素及利巴韋林之組合物。
本發明之另一態樣係抑制HCV複製子之功能之方法，其包括使HCV複製子與化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸。
本發明之另一態樣係抑制HCV NS5B蛋白之功能之方法，其包括使HCV NS5B蛋白與化合物或其醫藥上可接受之鹽接觸。
本發明之另一態樣係治療患者之HCV感染之方法，其包括向患者投與治療有效量之化合物或其醫藥上可接受之鹽。在另一實施例 中，該化合物有效地抑制HCV複製子之功能。在另一實施例中，該化合物有效地抑制HCV NS5B蛋白之功能。
本發明之另一態樣係治療患者之HCV感染之方法，其包括結合(在其之前、之後或同時)具有抗HCV活性之另一化合物向患者投與治療有效量之化合物或其醫藥上可接受之鹽。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之另一化合物為干擾素或利巴韋林之方法。
本發明之另一態樣係其中干擾素係選自以下各項之方法：干擾素α 2B、聚乙二醇化干擾素α、複合干擾素、干擾素α 2A、干擾素λ及類淋巴母細胞干擾素τ。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之另一化合物為環孢素之方法。
本發明之另一態樣係其中環孢素為環孢素A之方法。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之另一化合物係選自以下各項之方法：介白素2、介白素6、介白素12、增強1型輔助T細胞反應發生之化合物、干擾RNA、反義RNA、咪奎莫特、利巴韋林、肌苷5'-單磷酸去氫酶抑制劑、金剛烷胺及金剛烷乙胺。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之另一化合物有效地抑制選自由以下組成之群的靶之功能之方法：HCV金屬蛋白酶、HCV絲胺酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV進入、HCV組裝、HCV釋出、HCV NS5A蛋白、IMPDH及用於治療HCV感染之核苷類似物。
本發明之另一態樣係其中具有抗HCV活性之另一化合物有效地抑制HCV生命週期中除HCV NS5B蛋白外之靶的功能之方法。
「治療有效」意指如肝炎及HCV感染領域中之從業醫師所理解提供有意義的患者益處所需之藥劑之量。
「患者」意指感染HCV病毒且適用於如肝炎及HCV感染之領域中之從業醫師所理解之療法者。
「治療」、「療法」、「方案」、「HCV感染」及相關術語係如肝炎及HCV感染之領域中之從業醫師所理解來使用。
本發明化合物通常係以包括治療有效量之化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑之醫藥組合物形式給予，且可含有習用賦形劑。醫藥上可接受之載劑係彼等具有可接受之安全性曲線之習知載劑。組合物涵蓋所有常用固體及液體形式，包含例如膠囊、錠劑、菱形錠劑及粉末以及液體懸浮液、糖漿、酏劑及溶液。組合物係使用常用調配技術來製得，且習用賦形劑(例如黏合劑及潤濕劑)及媒劑(例如水及醇)通常用於組合物。例如，參見Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing公司，Easton,PA，第17版，1985。
固體組合物通常係以劑量單位形式來調配，且提供約1mg至1000mg活性成份/劑量之組合物較佳。劑量之一些實例為1mg、10mg、100mg、250mg、500mg及1000mg。通常，其他藥劑將存在於與臨床上所使用之該類藥劑類似之單位範圍內。通常，此範圍為0.25-1000mg/單位。
液體組合物通常在劑量單位範圍內。通常，液體組合物將在1-100mg/mL之單位劑量範圍內。劑量之一些實例為1mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL及100mg/mL。通常，其他藥劑將存在於與臨床上所使用之該類藥劑類似之單位範圍內。通常，此範圍為1-100mg/mL。
本發明涵蓋所有習用投與模式；口服及非經腸方法較佳。通常，給藥方案將與臨床上所使用之其他藥劑類似。通常，日劑量為1-100mg/kg體重/天。通常，口服需要的化合物較多，且非經腸需要的 較少。然而，特定給藥方案將由醫師利用合理醫學判斷來確定。
本發明亦涵蓋其中以組合療法給予該化合物之方法。亦即，可結合但與可用於治療肝炎及HCV感染之其他藥劑分開使用該化合物。在該等組合方法中，該化合物通常係結合其他藥劑以1-100mg/kg體重/天之日劑量來給予。其他藥劑通常係以治療使用量給予。然而，特定給藥方案將由醫師利用合理醫學判斷來確定。
適用於組合物及方法之化合物之一些實例列示於表1中。
合成方法
化合物可藉由業內已知之方法(包含下文所闡述之彼等)來製得。一些試劑及中間體為業內已知。其他試劑及中間體可藉由業內已知之方法使用市售材料製得。用於闡述化合物合成之變量(例如經編號之「R」取代基)僅欲說明如何製備，且不應與申請專利範圍或說明書其他部分中所使用之變量混淆。方案內所使用之縮寫通常遵循業內所使用之慣例。
方案中所使用之縮寫通常遵循業內所使用之慣例。說明書及實例中所使用之化學品縮寫定義如下：「NaHMDS」用於雙(三甲基矽基)醯胺鈉；「DMF」用於N,N-二甲基甲醯胺；「MeOH」用於甲醇；「NBS」用於N-溴琥珀醯亞胺；「Ar」用於芳基；「TFA」用於 三氟乙酸；「LAH」用於氫化鋰鋁；「DMSO」用於二甲基亞碸；「h」用於小時；「rt」或「RT」用於室溫或滯留時間(上下文將指示)；「min」用於分鐘；「EtOAc」用於乙酸乙酯；「THF」用於四氫呋喃；「EDTA」用於乙二胺四乙酸；「Et2O」用於二乙醚；「DMAP」用於4-二甲基胺基吡啶；「DCE」用於1,2-二氯乙烷；「ACN」用於乙腈；「DME」用於1,2-二甲氧基乙烷；「HOBt」用於1-羥基苯并三唑水合物；「DIEA」用於二異丙基乙胺；TEA用於三乙胺；DCM用於二氯甲烷
如本文所使用之縮寫定義如下：「1×」用於一次，「2×」用於兩次，「3×」用於三次，「℃」用於攝氏度，「eq」用於當量，「g」用於克，「mg」用於毫克，「L」用於公升，「mL」用於毫升，「μL」用於微升，「N」用於正常，「M」用於莫耳濃度，「mmol」用於毫莫耳，「min」用於分鐘，「h」用於小時，「atm」用於氣氛，「psi」用於磅/平方英吋，「conc.」用於濃縮物，「sat」或「sat’d」用於飽和，「MW」用於分子量，「mp」用於熔點，「ee」用於鏡像異構體過量，「MS」或「Mass Spec」用於質譜，「ESI」用於電噴霧離子化質譜，「HR」用於高解析度，「HRMS」用於高解析度質譜，「LCMS」用於液相層析質譜，「HPLC」用於高壓液相層析，「RP HPLC」用於逆相HPLC，「TLC」或「tlc」用於薄層層析，「NMR」用於核磁共振光譜法，「1H」用於質子，「δ」用於δ，「s」用於單峰，「d」用於雙重峰，「t」用於三重峰，「q」用於四重峰，「m」用於多重峰，「br」用於寬峰，「Hz」用於赫茲，且「α」、「β」、「R」、「S」、「E」及「Z」係熟習此項技術者所熟悉之立體化學符號。
製備本發明化合物之途徑顯示於方案1-13中。
方案1.
方案2.
方案3.
方案4.
方案5.
方案6.
方案7.
方案8.
方案9.
方案10.
方案11.
方案12.
方案13.
特定實施例之描述
5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-醇. 在45℃下將NIS(7.38g,32.8mmol)添加至市售5-溴-6-氯吡啶-2-醇(5.70g,27.3mmol)於MeOH(50ml)中之攪拌溶液中。在45℃下將反應物攪拌1h。將琥珀色溶液冷卻至室溫且然後在真空中濃縮。用25mL DCM稀釋所得黃色固體，研磨30min，然後藉由用最少量DCM過濾來收集，以獲得白色固體狀5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-醇(7.60g,22.7mmol,83%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LCMS：m/e 335(M+H)+ LCMS滯留時間：2.62min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=4min。流速=0.8mL/min。)。1H NMR(500MHz,MeOD)δ ppm 8.26(s,1H)。
乙酸5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-基酯. 將5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-醇(12.9g,38.6mmol)懸浮於乙酸酐(40mL,420mmol)中且加熱至110℃。在 此溫度下將混合物加熱1h。1h後反應混合物呈現為均質溶液。TLC(在LCMS中觀察到之M+H質量主要為des-OAc之M+H質量)指示完全反應。將溶液與甲苯(3×25mL)共沸濃縮以獲得黃褐色固體狀乙酸5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-基酯(14.5g,38.5mmol,100%產率)。該固體未經進一步純化即用於後續Sonogashira偶合中。所觀察到之LCMS揭露大部分水解產物(起始材料)，但存在期望質量。LCMS：m/e 377(M+H)+ LCMS滯留時間：2.71min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=3min。流速=0.8mL/min。)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 8.37(s,1H),2.38(s,3H)。
乙酸5-溴-6-氯-3-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-2-基酯. 將乙酸5-溴-6-氯-3-碘吡啶-2-基酯(14.5g,38.5mmol)溶解於THF(50mL)中且冷卻至0℃。將TEA(2.5mL)、碘化銅(I)(0.514g,2.70mmol)及雙三苯基膦二氯化鈀(0.270g,0.385mmol)添加至反應混合物中。將混合物脫氣且裝填N2(3×)。隨後，在0℃下經1h之時程逐滴添加1-乙炔基-4-氟苯(5.55g,46.2mmol)。然後將反應混合物緩慢升溫至室溫且持續攪拌18h。LCMS及TLC顯示反應不完全。再添加2.5mL TEA。在室溫下然後將混合物攪拌較長週末(80h)。此時LCMS及TLC顯示無剩餘起始材料。將反應混合物濃縮成乾燥固體。然後將此固體溶解於DCM(50mL)中且用飽和NH4Cl洗滌。用DCM(2×20mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮至>15g棕色固體。將此固體溶解於DCM中，吸附於矽藻土(Celite)上，且然後在矽膠上實施急驟層析，用15管柱體積之於己烷中之10%-100% DCM梯度溶析，以獲得黃褐色固體狀乙酸5-溴-6-氯-3-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-2-基酯(11.7g,31.7mmol,82%產率)。LCMS：m/e 369 (M+H)+ LCMS滯留時間：3.74min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=4min。流速=0.8mL/min。)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 8.13(s,1H),7.48(dd,J=8.7Hz,2H),7.09(dd,J=8.7Hz,2H),2.39(s,3H)。
5-溴-6-氯-3-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-2-醇. 將乙酸5-溴-6-氯-3-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-2-基酯(5.5g,15mmol)懸浮於MeOH(75ml)中，且添加K2CO3(4.12g,29.8mmol)。在室溫下將混合物攪拌1h。此時LCMS及TLC顯示無剩餘SM。用CO氣球對混合物充氣10分鐘，且未經分離即用於下一步驟羰基化偶合中。
5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲酯. 將來自先前步驟含有5-溴-6-氯-3-((4-氟苯基)乙炔基)吡啶-2-醇(4.87g,14.9mmol)之全部反應混合物傾倒至含有氯化鈀(II)(0.439g,2.48mmol)、乙酸鈉(2.45g,29.8mmol)、氯化銅(II)二水合物(7.63g,44.8mmol)之Parr氫化裝置(「罐」)中。對反應物裝填CO(350PSI)，且使反應物不含CO毯覆之時間最小化。在室溫下將反應物劇烈攪拌過夜。LCMS顯示期望產物及極少量不期望C-3 H加成物二者。將反應混合物濃縮至乾燥，且然後於75mL 1M HCl與EtOAc(75mL)之間分配。分離各層，且用EtOAc(3×75mL)萃取水層。用鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得5.04g比率為4：1之期望5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲酯對不期望5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶。將混合物繼續進行粗產物水解，然後可藉由酸鹼萃取或矽膠層析分離酸與C-3 H加成物。注意：期望產物對C-3 H加成物之比率介於2：1至9：1範圍內，此端視規模而定，且大規模反應獲得較為不利的結果。LCMS：m/e 386(M+H)+ LCMS滯留時間：3.97min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A =90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=4min。流速=0.8mL/min。)。
5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸. 將5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸甲酯(2.38g,6.19mmol)與5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶(0.265g,0.812mmol)之4：1無法分離之混合物溶解於MeOH(50mL)、THF(50mL)、1M NaOH(50mL)之1：1：1混合物中。在油浴中將全部混合物加熱至65℃之內部溫度。在此溫度下將此混合物攪拌1h。然後將溶液濃縮成水性混合物。用EtOAc及1M HCl(50mL)稀釋此混合物。分離各層，且用EtOAc(3×20mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得白色固體。將此固體吸附於SiO2上且在矽膠上實施急驟層析，用於含有1% AcOH之DCM溶液中之0-10% MeOH溶析，以獲得5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸(1.85g,4.99mmol,81%產率)。LCMS：m/e 371(M+H)+LCMS滯留時間：3.30min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=4min。流速=0.8mL/min。)。
1H NMR(500MHz,MeOD)δ ppm 8.66(s,1H),8.21(dd,J=9.2Hz,2H),7.27(dd,J=8.9Hz,2H)。
5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將HATU(1.69g,4.45mmol)添加至於密封管中之5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲酸(1.1g,3.0mmol)、甲胺鹽酸鹽(1.00g,14.8mmol)及DIEA(2.59mL,14.8mmol)於DMF(20mL)中之攪拌溶液中。將反應管密封且在室溫下攪拌2小時。LCMS及TLC指示完全轉化。然後用EtOAc(50mL)及1M HCl(50mL)稀釋溶液。分離 各層，且用EtOAc(2×20mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得黃褐色固體。將此固體吸附於SiO2上，且在矽膠上用40 CV之於DCM中之0-5% MeOH梯度(極緩慢梯度)溶析，以獲得白色鬆散固體狀5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(1.1g,2.7mmol,92%產率)。LCMS：m/e 385(M+H)+ LCMS滯留時間：3.04min。(管柱：Phenomenex-Luna 50×2.0mm 3u。溶劑A=90%水：10%甲醇：0.1% TFA。溶劑B=10%水：90%甲醇：0.1% TFA。B起始%=0。B最終%=100。梯度時間=4min。流速=0.8mL/min。)。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ ppm 8.50(s,1H),7.89(dd,J=9.0Hz,2H),7.23(dd,J=8.7Hz,2H),5.85(br s,1H),3.00(d,J=4.8Hz,3H)。
3-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯. 將5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(5.0g,13mmol)、(3-(第三丁氧基羰基)苯基)苯甲酸(2.75g,12.4mmol)、Pd(Ph3P)4(2.26g,1.96mmol)及碳酸銫(8.49g,26.1mmol)之混合物脫氣/裝填N2，且用水(22ml)/DMF(220ml)稀釋。然後將所得混合物脫氣，裝填N2，加熱至65℃之內部溫度，並在N2氣氛下攪拌16h。將反應混合物冷卻至室溫，然後用EtOAc及1M飽和HCl稀釋。分離各層，且用EtOAc(3×10mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。然後在SiO2上對所得固體實施急驟層析，用16 CV之於己烷中之0-100% EtOAc梯度溶析，以獲得污染有雙偶合產物3,3'-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5,6-二基)二苯甲酸二-第三丁基酯之微黃色固體狀3-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(5.2g,11mmol,83%產率)。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.18(s,1H),8.08-8.02(m,2H),7.95-7.89(m, 2H),7.63(dt,J=7.6,1.5Hz,1H),7.52(t,J=7.6Hz,1H),7.24-7.18(m,2H),6.03(d,J=4.3Hz,1H),2.99(d,J=4.9Hz,3H),1.62(s,9H)。
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯. 在室溫下將3-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(1.50g,3.12mmol)、3,3,3-三氟丙烷-1-三氟硼酸酯(1.59g,7.80mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(582mg,1.25mmol)、Pd(OAc)2(140mg,0.624mmol)、碳酸銫(3.05g,9.36mmol)合併，脫氣，用N2回填，然後懸浮於甲苯(100mL)及水(10mL)中，且然後在60℃下加熱。將反應物攪拌16h。用乙酸乙酯稀釋反應混合物並用飽和NaHCO3洗滌，然後用飽和NaCl(水溶液)洗滌。濃縮有機相且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(1.6g,2.95mmol,95%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：2.20min；m/z(MH+)：543。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.51-8.45(m,1H),8.09-8.03(m,2H),8.01-7.96(m,2H),7.93(t,J=1.5Hz,1H),7.72-7.70(m,1H),7.68-7.62(m,1H),7.44-7.38(m,2H),2.98(dd,J=9.2,6.4Hz,2H),2.85-2.71(m,5H),1.60-1.54(m,9H)。
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸. 在室溫下將TFA(2.24ml,29.0mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(315mg,0.581mmol)於二氯乙烷(5.81ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1h，且然後藉由與甲苯共沸濃縮至乾燥，以獲得預期產物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(189mg,0.389mmol,67%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：2.89min；m/z(MH+)：487。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，3min之梯度時間，1min之保持時間及4min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.16(br.s,1H),8.55-8.47(m,1H),8.10-8.02(m,3H),8.00-7.96(m,2H),7.74(d,J=7.8Hz,1H),7.69-7.62(m,1H),7.42(t,J=8.9Hz,2H),3.05-2.96(m,2H),2.85-2.70(m,5H)。
5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸第三丁基酯. 步驟1：5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸之製備：將5-硼-2-甲氧基苯甲酸(562mg,2.87mmol)、Pd(Ph3P)4(301mg,0.261mmol)及碳酸銫(1.27g,3.91mmol)之混合物脫氣，且用水(3.1ml)及DMF(31ml)稀釋。將混合物脫氣且在N2下加熱至65℃。在65℃下將反應物攪拌16h。用EtOAc稀釋混合物，且用1M HCl及飽和NaCl洗滌。經 Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮。將殘餘物與DCM一起研磨，以獲得白色固體狀預期產物5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(890mg,1.96mmol,75%產率)。LC-MS滯留時間：2.46min；m/z(MH+)：455。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，3min之梯度時間，1min之保持時間及4min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.82(br.s.,1H),8.58-8.50(m,1H),8.14(s,1H),8.10-8.02(m,2H),7.79(d,J=2.3Hz,1H),7.69(dd,J=8.5,2.5Hz,1H),7.47-7.38(m,2H),7.28(d,J=8.8Hz,1H),3.90(s,3H),2.83(d,J=4.8Hz,3H)。
步驟2：標題化合物5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸第三丁基酯之製備：在100℃下將1,1-二-第三丁氧基-N,N-二甲基甲胺(3.16mL,13.2mmol)逐滴添加至5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(1.0g,2.2mmol)於DMF(20mL)中之攪拌懸浮液中。在100℃下將混合物攪拌過夜。然後將混合物濃縮成油性殘餘物，且然後在矽膠上純化，用15 CV之於己烷中之0-100% EtOAc梯度溶析，以獲得淺棕色/黃色固體狀5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸第三丁基酯(450mg,0.88mmol,40%產率)。LC-MS滯留時間：1.93min；m/z(M-tBu)+：455。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層 析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.19(s,1H),7.98-7.92(m,2H),7.82(d,J=2.5Hz,1H),7.55(dd,J=8.6,2.4Hz,1H),7.26-7.21(m,2H),7.06(d,J=8.7Hz,1H),5.84(br s,1H),3.97(s,3H),3.03-2.95(m,3H),1.61(s,9H)。
5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸. 將5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸第三丁基酯(450mg,0.881mmol)、3,3,3-三氟丙烷-1-三氟硼酸酯(449mg,2.20mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(164mg,0.352mmol)、Pd(OAc)2(39.5mg,0.176mmol)、碳酸銫(861mg,2.64mmol)脫氣，且用N2回填，然後在室溫下溶解於甲苯(23ml)及水(2.3ml)中，然後在70℃下加熱。將反應物攪拌16h。用乙酸乙酯稀釋混合物，並用飽和NaHCO3水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。濃縮有機相且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸第三丁基酯，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：2.27min；m/z(MH+)：573。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時 間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。將所獲得固體溶解於7mL DCM中且3mL TFA用處理，並在室溫下將反應物攪拌1h。然後將反應物濃縮且與甲苯共沸並與DCM一起研磨，以獲得5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(335mg,0.649mmol,74%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.91min；m/z(MH+)：517。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 12.70(br.s,1H),8.51-8.42(m,1H),8.06(dd,J=9.0,5.5Hz,2H),7.92(s,1H),7.68(d,J=2.3Hz,1H),7.59(s,1H),7.41(t,J=9.0Hz,2H),7.27(d,J=8.5Hz,1H),3.90(s,3H),3.02(d,J=8.3Hz,2H),2.82(d,J=4.5Hz,3H),2.80-2.66(m,2H)。
5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸. 將5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(3.0g,7.8mmol)、5-硼-2-氟苯甲酸(1.58g,8.60mmol)、Pd(Ph3P)4(0.90g,0.78mmol)及碳酸銫(3.82g,11.7mmol)之混合物抽空且裝填N2(3×)，且然後用水(0.95ml)/DMF(9.5ml)稀釋。將混合物再抽空且裝填N2(3×)，且在N2氣氛下加熱至65℃。在65℃下將反應物攪拌16h。LCMS顯示具有預期M+H之峰。用EtOAc(30mL)稀釋混 合物，且用1M HCl及飽和NaCl水溶液洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮以獲得固體，將其與DCM一起研磨，以獲得預期產物5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸(2.4g,5.4mmol,69%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：2.64min；m/z(MH+)：443。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，2min之保持時間及4min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.46(br.s,1H),8.55(d,J=4.8Hz,1H),8.21(s,1H),8.10-8.04(m,2H),8.00(dd,J=7.0,2.5Hz,1H),7.82(ddd,J=8.5,4.5,2.5Hz,1H),7.52-7.39(m,3H),2.82(d,J=4.8Hz,3H)。
5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸第三丁基酯. 在100℃下將1,1-二-第三丁氧基-N,N-二甲基甲胺(6.50mL,27.1mmol)逐滴添加至5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸(2.0g,4.5mmol)於DMF(10mL)中之攪拌懸浮液中。在此溫度下將反應混合物攪拌過夜。最終，將反應濃縮成橙色殘餘物。在矽膠上對此半固體實施急驟層析且用15 CV之於己烷中之0-100% EtOAc溶析，以獲得黃色固體狀5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸第三丁基酯(1.5g,3.0mmol,67%產率)。LC-MS滯留時間：2.14min；m/z(MH+)：499。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之 Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.18(s,1H),8.01-7.87(m,3H),7.59(ddd,J=8.5,4.5,2.5Hz,1H),7.28-7.18(m,3H),5.96(d,J=4.3Hz,1H),2.99(d,J=4.9Hz,3H),1.62(s,9H)。
2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸. 將5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸第三丁基酯(500mg,1.00mmol)、3,3,3-三氟丙烷-1-三氟硼酸酯(511mg,2.51mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(187mg,0.401mmol)、PdOAc2(45.0mg,0.200mmol)、碳酸銫(980mg,3.01mmol)脫氣，且用N2回填，然後在室溫下溶解於甲苯(23ml)及水(2.3ml)中，然後在70℃下加熱。將反應物攪拌16h。用乙酸乙酯稀釋混合物，並用飽和NaHCO3水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。濃縮有機相且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(469mg,0.837mmol)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：2.18min；m/z(MH+)：561。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/ 0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。將此材料溶解於8mL DCM中，且用3.5mL TFA處理，並將反應物攪拌1h。將反應濃縮且與甲苯共沸以獲得固體，將其與DCM一起研磨，以獲得2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(395mg,0.783mmol,78%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.90min；m/z(MH+)：505。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.42(br.s,1H),8.52-8.45(m,1H),8.06(dd,J=9.0,5.5Hz,2H),7.98(s,1H),7.93-7.88(m,1H),7.77-7.70(m,1H),7.52-7.37(m,3H),2.99(d,J=8.3Hz,2H),2.82(d,J=4.8Hz,3H),2.80-2.69(m,2H)。
2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽. 步驟1：N-(2-氰基丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下將2-甲基丙烷-2-亞磺醯氯(1.28g,9.12mmol)添加至2-胺基-2-甲基丙腈鹽酸鹽(1.0g,8.3mmol)於DCM(21ml)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(3.04ml,17.4mmol)中之攪拌溶液中。添加DMAP(10mg,0.083mmol)且將反應物攪拌1h。然後用二氯甲烷稀釋混合物，並用飽和NH4Cl水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮，以獲得預期產物N-(2-氰基丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.45g,7.71mmol,93%產 率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：2.15min；m/z(MH+)：189。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 1.76(s,3H),1.69(s,3H),1.24(s,9H)。
步驟2：2-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基-2-甲基丙醯亞胺之製備：在室溫下將碳酸鉀(2.94g,21.2mmol)添加至N-(2-氰基丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.0g,5.3mmol)及羥基胺鹽酸鹽(738mg,10.6mmol)於EtOH(18mL)中之攪拌溶液中。將反應物加熱至60℃且保持16h。然後將反應物濃縮，並用EtOAc稀釋所得殘餘物，且用水及飽和NaCl水溶液洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且藉由與甲苯共沸來濃縮，以獲得白色固體狀預期產物2-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基-2-甲基丙醯亞胺(1.0g,4.5mmol,85%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：0.35min；m/z(MH+)：222。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.14(s,1H),5.27(s,1H),5.25(s,2H),1.36(d,J=5.0 Hz,6H),1.12(s,9H)。
步驟3：N-(2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下用AcOH(7.5ml)處理於三乙氧基甲烷(7.5ml,45mmol)中之2-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基-2-甲基丙醯亞胺(1.0g,4.5mmol)。在室溫下將反應物攪拌16h。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥。在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度)上純化所得黃色油狀物，以獲得預期產物N-(2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(750mg,3.24mmol,72%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：0.987min；m/z(MH+)：232。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.51(s,1H),5.54(s,1H),1.65(s,3H),1.59(s,3H),1.08(s,9H)。
步驟4：標題化合物：2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽之製備：在室溫下將HCl(6mL,12mmol)(2.0M於Et2O中)添加至N-(2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(750mg,3.24mmol)於MeOH(6mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1h。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得白色固體狀預期產物2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(500mg,3.06mmol,94%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.78(s,1H),8.96(br.s.,3H),1.67(s,6H)。
2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-胺鹽酸鹽. 步驟1：(R)-N-[1-氰基-1-(2H3)甲基(2H3)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下在350mL寬口壓力容器中將三甲基矽烷甲腈(10ml,78mmol)與活化3A分子篩(cylinderial)(20g)一起添加至(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(9.5g,78mmol)、丙酮-d6(99.96%D)(6.3ml,78mmol)、乙醇鈦(IV)(35.6g,156mmol)於DCM(130ml)中之攪拌溶液中。將容器密封且在40℃下將混合物攪拌16h。將反應物轉移至500mL錐形燒瓶中，並在攪拌的同時用H2O(10mL)中止反應，且將矽藻土添加至混合物中。所形成之稠漿液在攪拌5min後變得較不黏。此漿液經由矽藻土/Na2SO4/矽藻土之三層墊過濾，用DCM洗滌。將濾液濃縮，吸附於矽藻土上，且在矽膠上純化(Biotage，EtOAc/己烷梯度，TLC(75% EtOAc/己烷)，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視產物)，以獲得預期產物(8.8g,45.0mmol,58%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.09min；m/z(MH+)：195。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 6.08(s,1H),1.13(s,9H)
步驟2：(Z)-N'-羥基-2-(2H3)甲基-2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}(2H3)丙醯亞胺之製備：在室溫下在500mL RB燒瓶中，將碳酸鉀(24.9g,180mmol)添加至(R)-N-[1-氰基-1-(2H3)甲基(2H3)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(8.8g,45mmol)及羥基胺鹽酸鹽(6.3g,90mmol)於 EtOH(150ml)中之攪拌溶液中。在60℃下在N2氣球下將反應物攪拌16h過夜。然後將反應物冷卻至室溫且經由矽藻土墊過濾，用EtOAc洗滌，以過濾掉大部分K2CO3。將濾液濃縮且溶解於EtOAc中。然後將矽藻土添加至混合物中且經由另一矽藻土墊過濾，用EtOAc洗滌，以過濾掉剩餘K2CO3。藉由與甲苯共沸2×來濃縮濾液，以獲得白色固體狀預期產物(6.1g,27mmol,60%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：0.98min；m/z(MH+)：228。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.14(br.s,1H),5.34-5.17(m,3H),1.12(s,9H)。
步驟3：(R)-2-甲基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-基]丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下用AcOH(40ml)處理於三乙氧基甲烷(40.2ml,241mmol)中之(Z)-N'-羥基-2-(2H3)甲基-2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}(2H3)丙醯亞胺(6.1g,27mmol)。在室溫下將反應物攪拌16h。藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥。將所得黃色油狀物吸收於矽藻土上且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度(使用70% EtOAc/己烷之TLC，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視)上純化，以獲得澄清油狀預期產物(5.1g,21mmol,80%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。
LC-MS滯留時間：1.13min；m/z(MH+)：238。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Waters Aquity BEH C18 2.1×50mm 1.7μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄 LC數據。溶析條件採用0.8mL/min之流速，98%溶劑A/2%溶劑B至98%溶劑A/2%溶劑B之梯度，1.5min之梯度時間，0.5min之保持時間及2min之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6). 9.52(s,1H),5.55(s,1H),1.08(s,9H)
步驟4：標題化合物：2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽之製備 在室溫下將HCl(42ml,84mmol)(2.0M於Et2O中)添加至(R)-2-甲基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-基]丙烷-2-亞磺醯胺(5.0g,21mmol)於MeOH(42ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1h。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得白色固體狀預期產物2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(2.9g,17mmol,80%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.79(s,1H),8.89(br.s.,3H)。
2-[( 2 H)-1,2,4-噁二唑-3-基]( 2 H 6 )丙-2-胺鹽酸鹽. 步驟1：(R)-2-甲基-N-{2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基](2H6)丙-2-基}丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下用[二乙氧基(2H)甲氧基]乙烷(0.103ml,0.616mmol)處理於AcOH(0.5ml)中之(z)-N'-羥基-2-(2H3)甲基-2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}(2H3)丙醯亞胺(140mg,0.616mmol)。將反應物攪拌40h。藉由與甲苯共沸2×將反應物濃縮至乾燥。在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度(在70% EtOAc/己烷中Rf為約0.2，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視)上純化所得油狀物，以獲得預期產物(64mg,0.27mmol,44%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。
LC-MS滯留時間：1.09min；m/z(MH+)：239。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 5.54(s,1H),1.08(s,9H)
步驟2：標題化合物：2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基](2H6)丙-2-胺鹽酸鹽之製備 在室溫下將HCl(0.5ml,1mmol)(2.0M於Et2O中)添加至(R)-2-甲基-N-{2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基](2H6)丙-2-基}丙烷-2-亞磺醯胺(60mg,0.25mmol)於MeOH(0.5ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1hr。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得白色固體狀預期產物(41mg,0.24mmol,95%產率)。
2-( 2 H 3 )甲氧基-5-(四甲基-1,3,2-二氧硼 -2-基)吡啶-3-甲酸( 2 H 3 )甲基酯. 步驟1：5-溴-2-氯吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯之製備：向5-溴-2-氯菸酸(7.26g,30.7mmol)於CD3OD(50mL)中之溶液添加1mL濃H2SO4。將混合物加熱至60℃。在60℃下保持48h後，將混合物濃縮且然後溶解於EtOAc及水中。分離各層且用EtOAc(2×30mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得約7.5克粗期望產物。在矽膠上對此材料實施急驟層析，用於己烷中之0-50% EtOAc梯度溶析，以獲得預期產物(7.0g,28mmol,90%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。
LC-MS滯留時間：1.44min；m/z(MH+)：253、255。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至 0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.58(d,J=2.5Hz,1H),8.30(d,J=2.5Hz,1H)。
步驟2：5-溴-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯之製備. 在25℃水浴中將鈉(3.4g,150mmol)溶解於甲醇-d4(30mL)中。隨後，在室溫下向d3-甲醇鈉溶液添加固體狀5-溴-2-氯吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(10g,40mmol)。在室溫下將混合物攪拌若干小時，以產生重白色沈澱。藉由添加飽和NH4Cl水溶液來中止混合物之反應，且然後濃縮成水性混合物。用EtOAc(35mL)及1M HCl(50mL)稀釋混合物。分離各層且用EtOAc(30mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得白色固體狀預期產物(7.6g,30mmol,76%產率)。LC-MS滯留時間：1.47min；m/z(MH+)：252、254。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
1H NMR(500MHz，氯仿-d)δ 8.34(d,J=2.5Hz,1H),8.25(d,J=2.5Hz,1H)。
步驟3：標題化合物：2-(2H3)甲氧基-5-(四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯之製備
在室溫下將5-溴-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(3.85g, 15.3mmol)、雙(戊醯)二硼(7.76g,30.5mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加成物(0.624g,0.764mmol)及乙酸鉀(3.75g,38.2mmol)合併，脫氣，用N2回填且溶解於二噁烷(153ml)中。在80℃下將反應物攪拌16h。LCMS顯示M+H為218之主峰，然而TLC表明為酸酯。將混合物濃縮且吸附於矽藻土上並在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得白色固體狀預期酸酯(4.46g,14.9mmol,98%產率)。NMR與酸酯結果一致。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.55(d,J=1.9Hz,1H),8.30(d,J=2.0Hz,1H),1.30(s,12H)。
LC-MS滯留時間：0.899min；m/z(所觀察到之酸M+H)：218。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基吡啶-3-甲酸. 步驟1：5-[6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯之製備：將5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(5.7g,15mmol)、2-(2H3)甲氧基-5-(四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(4.5g,15mmol)、PdCl2(dppf)(1.1g,1.5mmol)及碳酸銫(7.3g,22mmol)之乾燥混合物脫氣，且用DMF(180ml)/水(18ml)稀釋。將混合物脫氣且在N2下加熱至55℃。在55℃下將反應物攪拌6h。LCMS顯示預期M+H為476之 峰。將反應物濃縮至乾燥且吸收於矽藻土上並在矽膠(Biotage，EtOAc/DCM梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物(3.85g,8.09mmol,54%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.62min；m/z(MH+)：476。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Waters Aquity BEH C18 2.1×50mm 1.7μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用0.8mL/min之流速，98%溶劑A/2%溶劑B至98%溶劑A/2%溶劑B之梯度，1.5min之梯度時間，0.5min之保持時間及2min之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.59-8.50(m,2H),8.32-8.26(m,2H),8.06(dd,J=8.7,5.4Hz,2H),7.43(t,J=8.8Hz,2H),2.83(d,J=4.4Hz,3H)。
步驟2：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯之製備.在室溫下將5-[6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(3.45g,7.25mmol)、3,3,3-三氟丙烷-1-三氟硼酸酯(3.70g,18.1mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(1.35g,2.90mmol)、PdOAc2(0.326g,1.45mmol)及碳酸銫(7.09g,21.8mmol)合併，脫氣，且用N2回填，然後溶解於甲苯(250ml)及水(25ml)中，然後在80℃下加熱。在此溫度下將反應物攪拌16h過夜。LCMS顯示完全轉化成M+H為538之峰。將反應物濃縮至乾燥且吸收於矽藻土上並在矽膠(Biotage，EtOAc/DCM梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(2.99g,5.56mmol,77%產率)， 其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.69min；m/z(MH+)：538。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Waters Aquity BEH C18 2.1×50mm 1.7μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用0.8mL/min之流速，98%溶劑A/2%溶劑B至98%溶劑A/2%溶劑B之梯度，1.5min之梯度時間，0.5min之保持時間及2min之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.51-8.46(m,2H),8.21(d,J=2.4Hz,1H),8.07(dd,J=9.0,5.4Hz,2H),8.03(s,1H),7.42(t,J=8.9Hz,2H),3.06-2.98(m,2H),2.86-2.71(m,5H)。
步驟3：標題中間體：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸之製備. 將5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(2.9g,5.4mmol)溶解於THF(28mL)及MeOH(28mL)中。在室溫下添加1M NaOH水溶液(27mL,27mmol)。在60℃下將反應物攪拌1h。用EtOAc稀釋混合物，且用1M HCl及飽和NaCl洗滌。濃縮有機相且與甲苯共沸3×，以獲得5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2.8g,5.3mmol,98%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。
LC-MS滯留時間：1.59min；m/z(MH+)：521。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Waters Aquity BEH C18 2.1×50mm 1.7μm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用0.8mL/min之流速，98%溶劑A/2%溶劑B至98%溶劑A/2%溶劑B之梯度，1.5min之梯度時間，0.5min之保持時 間及2min之分析時間，其中溶劑A為10% MeOH/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90% MeOH/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 13.13(br.s,1H),8.53-8.46(m,1H),8.45(d,J=2.5Hz,1H),8.19(d,J=2.5Hz,1H),8.10-8.04(m,2H),8.02(s,1H),7.46-7.37(m,2H),3.07-2.99(m,2H),2.85-2.72(m,5H)。
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基吡啶-3-甲酸. 在室溫下將2-甲基丁-2-醇鈉(116mg,1.05mmol)、5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(氯]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(100mg,0.210mmol),2,2,2-三氟乙胺(104mg,1.05mmol)、氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)(17mg,0.021mmol)合併，脫氣，並溶解於二噁烷(4ml)中，且然後加熱至90℃並保持2hr。LCMS顯示M+H為522之主峰。將反應物濃縮並藉由製備型逆相HPLC在C18管柱上使用適當緩衝之H2O/CH3CN梯度純化，且濃縮，以獲得預期產物(40mg,0.077mmol,37%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。
LC-MS滯留時間：1.58min；m/z(所觀察到之酸M+H)：522。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 13.06(br.s,1H),8.36(d,J=2.5Hz,1H),8.35- 8.30(m,1H),8.12(d,J=2.5Hz,1H),7.98(dd,J=9.0,5.4Hz,2H),7.71(s,1H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.92-6.84(m,1H),4.21-4.09(m,2H),2.80(d,J=4.6Hz,3H)。
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基吡啶-3-甲酸. 步驟1：5-[6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基吡啶-3-甲酸甲酯之製備：將5-溴-6-氯-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(1.15g,2.99mmol)、市售2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼-2-基)菸酸甲基酯(1.05g,3.58mmol)、Pd(Ph3P)4(0.517g,0.448mmol)及碳酸銫(1.95g,5.97mmol)之混合物脫氣/裝填N2，且用水(.5ml)/DMF(5mL)稀釋。然後將所得混合物脫氣，裝填N2，且在65℃油浴中加熱並在N2氣氛下攪拌4h。LCMS顯示期望產物以及一些SM。藉由冷卻至室溫來停止反應，且用EtOAc及飽和1M HCl稀釋反應混合物。分離各層，且用EtOAc(3×10mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌合併之有機萃取物，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮。然後在矽膠上對所得固體實施急驟層析，用12 CV之於己烷中之0-100% EtOAc混合物溶析，且然後使8 CV保持在100% EtOAc下，以獲得黃褐色固體狀5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸甲基酯(630mg,1.31mmol,45%產率)。LC-MS滯留時間：1.69min；m/z(所觀察到之酸M+H)：470。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模 式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.43(d,J=2.5Hz,1H),8.29(d,J=2.5Hz,1H),8.22(s,1H),7.93(dd,J=8.9,5.1Hz,2H),7.26-7.20(m,2H),5.91(br.s.,1H),4.13(s,3H),3.94(s,3H),2.99(d,J=5.0Hz,3H)。
步驟2：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基吡啶-3-甲酸甲酯之製備. 在室溫下將5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸甲基酯(600mg,1.28mmol)、3,3,3-三氟丙烷-1-三氟硼酸酯(651mg,3.19mmol)、二環己基(2',6'-二異丙氧基-[1,1'-聯苯]-2-基)膦(238mg,0.511mmol)、PdOAc2(57.3mg,0.255mmol)、碳酸銫(1250mg,3.83mmol)脫氣，且用N2回填，然後溶解於甲苯(2mL)及水(0.2mL)中，然後在80℃下加熱。將反應物攪拌16h。LCMS指示具有預期M+H之主峰。用EtOAc稀釋反應混合物，且用1M HCl及飽和NaCl洗滌。經Na2SO4乾燥有機層，過濾且濃縮，以獲得黃色固體。在矽膠上對此固體實施急驟層析(Biotage)，用15 CV之於己烷中之0-100% EtOAc梯度溶析，以獲得白色固體狀5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸甲基酯(0.638g,1.20mmol,94%產率)。LC-MS滯留時間：2.12min；m/z(MH+)：532。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.51-8.46(m,2H),8.24-8.19(m, 1H),8.09-8.04(m,2H),8.04-8.01(m,1H),7.45-7.37(m,2H),4.01(s,3H),3.84(s,3H),3.05-3.00(m,2H),2.85-2.74(m,5H)。
步驟3：標題化合物：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基吡啶-3-甲酸之製備. 在60℃下將NaOH(2.97mL,2.97mmol)(1M水溶液)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸甲基酯(158mg,0.297mmol)於MeOH(3mL)/THF(3mL)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌1h。然後用EtOAc稀釋混合物且用1M HCl洗滌。藉由與甲苯共沸濃縮有機相，以獲得預期產物5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(157mg,0.303mmol)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.70min；m/z(MH+)：518。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 13.16(br.s.,1H),8.49(d,J=4.6Hz,1H),8.45(d,J=2.5Hz,1H),8.19(d,J=2.5Hz,1H),8.10-8.04(m,2H),8.02(s,1H),7.45-7.38(m,2H),4.00(s,3H),3.03(dd,J=9.0,6.6Hz,2H),2.85-2.81(m,3H),2.81-2.72(m,2H)。
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基吡啶-3-甲酸. 在100℃下將2-甲基丁-2-醇鈉(0.281g,2.55mmol)添加至5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯 基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸甲基酯(0.120g,0.255mmol)、2,2,2-三氟乙胺(0.253g,2.55mmol)、氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)(0.020g,0.026mmol)於二噁烷(2.55ml)中之攪拌溶液中。反應混合物立即變成深琥珀色。1h後LCMS顯示完全轉化成期望偶合產物，同時使第三丁基酯去保護。將反應混合物冷卻至室溫且濃縮成乾燥固體。然後將所得固體溶解於EtOAc中且用1M HCl稀釋。分離各層且用EtOAc(2×15mL)萃取水層。用水、鹽水洗滌各層，經Na2SO4乾燥，過濾且濃縮，以獲得黃色固體。然後將此固體與DCM(25mL)一起研磨3h。將固體過濾，以獲得黃色固體狀期望5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(110mg,0.21mmol,83%產率)。LC-MS滯留時間：1.68min；m/z(所觀察到之酸M+H)：519。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ 8.38(d,J=2.5Hz,1H),8.29(d,J=2.5Hz,1H),7.91(dd,J=8.2,6.1Hz,3H),7.69(s,1H),7.23-7.19(m,3H),4.18(d,J=9.3Hz,2H),4.07(s,3H),2.91(s,3H)。
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基吡啶-3-甲酸. 步驟1：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸2,2,2-三氟乙基酯之製備：在二噁烷(4.8ml) 及水(0.48ml)中合併5-[6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(2H3)甲基酯(125mg,0.263mmol)、二環己基({3,6-二甲氧基-2-[2,4,6-參(丙-2-基)苯基]苯基})磷烷[2-(2-胺基苯基)苯基]甲烷磺酸鈀(24mg,0.026mmol)、KOH(118mg,2.10mmol)。將反應物加熱至100℃並保持2h。然後用EtOAc稀釋反應物且用1M HCl洗滌。濃縮有機相且與甲苯共沸2×，以獲得預期醇產物。將粗材料溶解於DMF(2.3ml)中之Cs2CO3(148mg,0.454mmol)中，且在室溫下用三氟甲烷磺酸2,2,2-三氟乙基酯(393μl,2.72mmol)處理。將反應物攪拌16h過夜。然後將反應物濃縮且吸收於矽藻土上並在矽膠(Biotage，EtOAC/DCM梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物(78mg,0.130mmol)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：2.0min；m/z(M+H)：605。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟2：標題化合物：5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸之製備. 在室溫下將1M NaOH水溶液(1.3ml,1.3mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸2,2,2-三氟乙基酯(78mg,0.13mmol)於THF(0.65ml)及MeOH(0.65ml)中之攪拌溶液中。將反應物加熱至60℃並保持1h。LCMS顯示具有預期M+H之峰。用EtOAc稀釋混合 物，且用1M HCl及飽和NaCl洗滌。藉由與甲苯共沸濃縮有機相，以獲得5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(65mg,0.12mmol,96%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.69min；m/z(M+H)：523。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 13.08(br.s.,1H),8.59(d,J=2.5Hz,1H),8.37(d,J=2.5Hz,1H),8.24(s,1H),8.05-8.01(m,2H),7.41-7.37(m,2H),5.13(q,J=8.9Hz,2H),2.85(d,J=4.6Hz,3H)。
2-[( 2 H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-胺鹽酸鹽. 步驟1：2-甲基-N-{2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-基}丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下用[二乙氧基(2H)甲氧基]乙烷(0.106ml,0.633mmol)處理於AcOH(4ml)中之(Z)-2-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基-2-甲基丙醯亞胺(140mg,0.633mmol)。在室溫下將反應物攪拌16h。LCMS顯示具有預期M+H之主峰。藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥。在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度(在70% EtOAc/己烷中Rf為約0.2，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視)上純化所得油狀物，以獲得預期產物(27mg,0.12mmol,18%產率)，其與LCMS結果一致。
LC-MS滯留時間：1.47min；m/z(MH+)：233。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。 溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟2：標題化合物：2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-胺鹽酸鹽之製備 在室溫下將HCl(1.0mL,1.9mmol)(2M於Et2O中)添加至2-甲基-N-{2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-基}丙烷-2-亞磺醯胺(27mg,0.12mmol)於MeOH(1mL)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌2h且然後藉由與甲苯共沸來濃縮，以獲得預期產物(15mg,0.091mmol,78%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz，甲醇-d4)δ 1.77(s,6H)。
1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙-1-胺鹽酸鹽. 步驟1：(R)-N-[(1E/Z)-1-環丙基亞乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下在壓力容器中將(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(6.05g,49.9mmol)與乙醇鈦(IV)(22g,95mmol)依序添加至1-環丙基乙酮(4.71ml,47.6mmol)於THF(95ml)中之溶液中。在55℃下將混合物攪拌16h。用水稀釋反應物(形成沈澱)，然後用EtOAc稀釋。添加矽藻土且經由矽藻土墊過濾混合物。用H2O及飽和NaCl水溶液洗滌有機相。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮。將殘餘物吸收於矽藻土上，在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度)上純化，以獲得預期產物(5.89g,31.4mmol,66%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.56min；m/z(MH+)：188。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度 時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 2.28(s,3H),1.83-1.77(m,1H),1.09(s,9H),0.96-0.89(m,4H)。
步驟2：(R)-N-(1-氰基-1-環丙基乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備. 在室溫下將乙醇鈦(IV)(7.06g,31.0mmol)添加至(R)-N-(1-環丙基亞乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(5.8g,31mmol)及三甲基矽基氰化物(8.30ml,61.9mmol)於DCM(155ml)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌16h。用H2O中止反應物之反應且將矽藻土添加至混合物中，隨後經由矽藻土/Na2SO4/矽藻土之三層墊過濾，用DCM洗滌。將濾液濃縮，吸收於矽藻土上且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，TLC(75% EA/己烷)，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視)上純化，以獲得300mg、1.40mmol較快速溶析之非鏡像異構體(10：1)以及366mg、1.71mmol較緩慢溶析之非鏡像異構體(1：10)，該兩者皆與NMR結果一致。此外，回收2.7g、14mmol起始材料。第一溶析之非鏡像異構體：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 6.10(s,1H),1.59(s,3H),1.14(s,9H),0.71-0.56(m,3H),0.43-0.37(m,1H)，第二溶析之非鏡像異構體：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 6.07(s,1H),1.56(s,3H),1.14(s,9H),0.67-0.57(m,3H),0.50-0.45(m,1H)。
步驟3：(Z)-2-環丙基-N'-羥基-2-{[(R)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯基]胺基}丙醯亞胺之製備. 在室溫下將碳酸鉀(774mg,5.60mmol)添加至第一溶析之非鏡像異構體(R)-N-(1-氰基-1-環丙基乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(300mg,1.40mmol)及羥基胺鹽酸鹽(195mg,2.80mmol)於EtOH(4.7ml)中之攪拌溶液中。在50℃下將反應物攪拌16h過夜。將反應物冷卻至室溫且然後將矽藻土添加至反應混合物中，並經由矽藻 土墊過濾，用EtOAc洗滌。濃縮濾液，以獲得預期產物(321mg,1.30mmol,93%產率)，其與LCMS結果一致。
LC-MS滯留時間：1.09min；m/z M+H：248。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟4：(R)-N-[1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙基]-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備. 在室溫下用AcOH(2ml)處理於三乙氧基甲烷(2.0ml,12mmol)中之(Z)-2-環丙基-2-((R)-1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基丙醯亞胺(321mg,1.30mmol)。在室溫下將反應物攪拌16h。LCMS顯示具有預期M+H之主峰。藉由與甲苯共沸2×將反應物濃縮至乾燥。在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度(在70% EtOAc/己烷中Rf為約0.2，利用高錳酸鹽染色以便肉眼檢視)上純化所得黃色油狀物，以獲得預期產物(第一溶析之非鏡像異構體，120mg,0.466mmol,36%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.21min；m/z M+H：258。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.53(s,1H),5.29(s,1H),1.53-1.49(m,1H),1.47(s,3H),1.10(s,9H),0.49-0.40(m,4H)。
步驟5：1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙-1-胺鹽酸鹽.
在室溫下將HCl(1ml,2mmol)(2.0M於Et2O中)添加至(R)-N-(1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(120mg,0.466mmol)於MeOH(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1h。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得白色固體狀預期產物1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙胺鹽酸鹽(87mg,0.46mmol,98%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(500MHz，甲醇-d4)δ 9.38(s,1H),1.67(s,3H),1.44(s,1H),0.74-0.66(m,2H),0.62-0.56(m,1H),0.51-0.45(m,1H)。
實例1
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(879mg,2.31mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(750mg,1.54mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.81ml,4.6mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(277mg,1.70mmol)於DMF(10ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。然後將反應混合物濃縮且在矽膠(Biotage，EtOAc/DCM梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲 得預期產物5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(711mg,1.17mmol,76%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.76min；m/z(MH+)：596。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.43(s,1H),8.77(s,1H),8.51(q,J=4.3Hz,1H),8.11-8.03(m,1H),7.98(s,1H),7.93(d,J=7.6Hz,1H),7.90(s,1H),7.70(m,1H),7.62(m,1H),7.41(t,J=8.8Hz,2H),3.04(m,2H),2.82(d,J=4.4Hz,3H),2.75(m,2H),1.71(s,6H)；13C NMR(126MHz,DMSO-d6)δ 173.9,166.4,165.7,162.4,163.0(d,J=247.5Hz),158.7,151.9,151.3,138.7,134.7,133.0,132.2,131.6,129.9(d,J=8.2Hz),128.4,127.1,127.4(q,J=275.0Hz),125.2,117.5,116.0(d,J=22.5Hz),112.6,51.1,31.4(q,J=27.5Hz),27.2,26.6,26.2；19F NMR(470MHz,DMSO-d6)δ 64.8,-109.9 HRMS(+ESI)(MH+)。C30H26F4N5O4之計算值：596.1915，觀測值為596.1901；IR(KBr粉末)3600-2800、1650-1638、1510cm-1。C30H25F4N5O4之分析型計算值(%)：C 60.50，H 4.23，N 11.76，觀測值：C 60.61，H 4.01，N 11.56。
利用Bend Research微型SD及Pro-C-epT微噴霧乾燥器使用HPMCAS-MG(琥珀酸乙酸羥基丙基甲基纖維素之中等顆粒級)以10%、15%及25%活性成份製備噴霧乾燥分散液(SDD)。使用 HPMCAS-HG及PVP VA64利用Bend Research微型SD微噴霧乾燥器以15%活性成份製備另外兩種SDD。SDD係用活性成份及共聚物製備。使用HPMCAS-MG及-HG之SDD係使用THF/水溶液(95：5)製備，且使用PVP VA64之SDD係使用丙酮製備。噴霧乾燥裝置之入口溫度通常為約60℃-100℃，而出口溫度為約30℃-60℃。
實例2
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)-4-氟苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(23mg,0.059mmol)添加至2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(20mg,0.040mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.021mL,0.12mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(10mg,0.059mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min。經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗反應混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：20%-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。經由製備型LC/MS利用以下條件進一步純化材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有20mM 乙酸銨之水；梯度：50%-90% B，30分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。經由製備型LC/MS利用以下條件進一步純化材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，40分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為7.7mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.04min；M+H：614。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.03min；M+H：614。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.45(s,1H),8.85(s,1H),8.55-8.48(m,1H),8.08-8.01(m,2H),7.93(s,1H),7.66-7.59(m,1H),7.57-7.51(m,1H),7.46-7.37(m,3H),3.04-2.96(m,2H),2.85-2.69(m,J=3.7Hz,5H),1.68(s,6H)。
實例3
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)-4-甲氧基苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺
在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(33mg,0.087mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(30mg,0.058mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.030mL,0.17mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(14mg,0.087mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min然後經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗反應混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：25-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。經由製備型LC/MS利用以下條件進一步純化材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有20mM乙酸銨之水；梯度：0-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為10.7mg，且其藉由LCMS估計之純度為97%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10 mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.12min；M+H：626。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.00min；M+H：626。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.46(s,1H),8.67(s,1H),8.53-8.46(m,1H),8.08-8.01(m,2H),7.88(s,1H),7.72(s,1H),7.62-7.57(m,1H),7.40(s,2H),7.35-7.29(m,1H),4.03(s,3H),3.04-2.96(m,2H),2.83-2.69(m,5H),1.72(s,6H)。
N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺. 步驟1：N-環亞丁基-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在22℃下將2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4.32g,35.7mmol)及乙醇鈦(IV)(16.3g,71.3mmol)依序添加至環丁酮(2.5g,35.7mmol)於THF(102ml)中之溶液中。在60℃下將混合物攪拌5h。將反應混合物傾倒至攪拌飽和氯化鈉水溶液(60mL)上方。將矽藻土添加至懸浮液中且經由矽藻土墊過濾，用乙酸乙酯(300mL)洗滌。用鹽水洗滌濾液且合併有機層並用無水硫酸鈉乾燥。過濾所乾燥溶液且濃縮濾液，產生油狀物，在矽膠(Biotage，25g管柱，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物N-環亞丁基-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4.6g,27mmol,74%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 3.59-3.22(m,2H),3.21-3.03(m,2H),2.12(t,J=8.2Hz,2H),1.24(s,9H)。
步驟2：N-(1-氰基環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下將乙醇鈦(IV)(3.03g,13.3mmol)添加至三甲基矽基氰化物(7.12mL,53.1mmol)及N-環亞丁基-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4.6g,27mmol) 於DCM(100mL)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌16h。再添加1.7mL TMS-CN，然後添加1.5g TiOEt4。在室溫下將反應物再攪拌16h。用EtOAc稀釋混合物且用飽和NaHCO3及飽和NaCl洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮，以獲得N-(1-氰基環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(4.5g,22mmol,85%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δ 2.82-2.67(m,2H),2.62-2.34(m,2H),2.26-2.02(m,2H),1.26(s,9H)。
步驟3：(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丁烷甲脒之製備：在室溫下將碳酸鉀(1.38g,9.98mmol)添加至羥基胺鹽酸鹽(347mg,4.99mmol)及N-(1-氰基環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(500mg,2.50mmol)於EtOH(8ml)中之攪拌溶液中。然後將反應物加熱至60℃並保持16h。然後濃縮混合物且用EtOAc稀釋所得殘餘物，並用H2O洗滌，然後用NaCl(水溶液)洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮，以獲得白色固體狀預期產物(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丁烷甲脒(305mg,1.31mmol,52%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：0.456min；m/z(MH+)：234。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.20(s,1H),5.60(s,1H),5.10(s,2H),2.35-2.30(m,1H),2.27-2.17(m,1H),2.10-2.03(m,1H),1.99(s,1H),1.80-1.75(m,1H),1.73-1.62(m,1H),1.13(s,9H)。
步驟4：標題化合物之製備：在室溫下將(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丁烷甲脒(300mg,1.29mmol)溶解於二噁烷(6ml)中，且用N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(2.6ml,19mmol)處理。然後將反應物加熱至70℃並保持4h。LCMS顯示起始材料已耗盡。在一個次峰中觀察到244之預期M+H。在高真空下濃縮反應物且藉由製備型逆相HPLC在C18管柱上使用NH4OAc緩衝之H2O/CH3CN梯度純化殘餘物，並濃縮，以獲得淺棕色油狀N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(45mg,0.19mmol,14%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.31min；m/z(MH+)：244。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
實例4
5-(3-((1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(45mg,0.19mmol)溶解於1mL MeOH中且用1mL HCl(2M於Et2O中)處理， 並在室溫下攪拌30min。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁胺鹽酸鹽(32mg,0.18mmol)。然後在室溫下在DMF(1mL)中合併14mg(0.077mmol)此材料與3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(25mg,0.051mmol)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.027mL,0.15mmol)。向此攪拌溶液添加2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(29mg,0.077mmol)。在室溫下將混合物攪拌30min。經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗反應混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為20.2mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.02min；M+H：608。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.06min；M+H：608。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),9.33(s,1H),8.55-8.46(m,1H),8.10-8.02(m,2H),7.98(s,3H),7.69-7.59(m,2H),7.46-7.37(m,2H),3.05-2.97(m,2H),2.85-2.71(m,5H), 2.67-2.56(m,4H),2.10-1.99(m,2H)。
實例5
5-(3-((1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺.在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(29mg,0.077mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(25mg,0.051mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.027mL,0.15mmol)及1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丁胺鹽酸鹽(14mg,0.077mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為4.0mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters Acquity UPLC BEH C18，2.1×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.75分鐘；流速：1.11mL/min。滯留時間：2.95min；M+H：609。注射2條件：管柱：Waters Acquity UPLC BEH C18，2.1×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有0.05% TFA之水；流動相B：95：5乙腈：含有0.1% TFA之水；溫度：50℃；梯度：0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.75分鐘；流速：1.11mL/min。滯留時間：3.02min；M+H：609。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.49(s,1H),9.31(s,1H),8.42-8.32(m,1H),8.01-7.90(m,4H),7.69(s,1H),7.66-7.55(m,2H),7.39-7.29(m,2H),6.65-6.59(m,1H),4.23-4.11(m,2H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),2.68-2.55(m,4H),2.10-2.00(m,2H)。
實例6
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((1-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)環丙基)胺甲醯基)苯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(23mg,0.062mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(20mg,0.041mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.022mL,0.12mmol)及1-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)環丙胺鹽酸鹽(18mg,0.10mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。然後，單獨將額外量之胺：1-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)環丙胺鹽酸鹽(18mg,0.10mmol)溶解於DMF：N-乙基-N-異丙基丙-2-胺之2mL 1：1混合物中，且然後濃縮。將所得殘餘物與額外3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯 甲酸(20mg,0.041mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.022mL,0.12mmol)及2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(23mg,0.062mmol)一起添加至初始反應混合物中，且在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：30%-70% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為2.3mg，且其藉由LCMS估計之純度為99%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：2.77min；M+H：609。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：3.81min；M+H：609。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.36(s,1H),8.42-8.33(m,1H),8.00-7.90(m,4H),7.70-7.56(m,3H),7.39-7.30(m,2H),6.65-6.58(m,1H),4.25-4.11(m,2H),2.83-2.75(m,3H),2.52(s,3H),1.48-1.42(m,2H),1.37-1.30(m,2H)。
實例7
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 將3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(40mg,0.082mmol)溶解於DMF(1ml)中，且用N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(43μl,0.25mmol)、2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-胺鹽酸鹽(17mg,0.098mmol)處理，然後用2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(47mg,0.12mmol)處理。將反應混合物攪拌1h，然後用MeOH(1mL)中止反應物之反應，且經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18，19×10mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有20mM乙酸銨之水；梯度：50%-90% B，40分鐘，然後在100% B下保持4分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為17.0mg，且其藉由LCMS估計之純度為96%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：2.95min；M+H：611。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動 相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：3.89min；M+H：611。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.99(s,1H),8.41-8.33(m,1H),8.01-7.88(m,4H),7.68(s,1H),7.65-7.57(m,2H),7.34(t,J=8.7Hz,2H),6.62(t,J=6.3Hz,1H),4.24-4.09(m,2H),2.79(d,J=4.6Hz,3H),2.31(s,3H),1.70(s,6H.
實例8
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)環丙基)胺甲醯基)苯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 將3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(40mg,0.082mmol)溶解於DMF(1ml)中，且用N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(43μl,0.25mmol)、1-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)環丙胺鹽酸鹽(17mg,0.098mmol)處理，然後用2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(47mg,0.12mmol)處理。將反應物攪拌1h。然後用MeOH(1mL)中止反應物之反應，且經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18，19×10mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯 度：20%-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為15.4mg，且其藉由LCMS估計之純度為98%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：2.87min；M+H：609。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：3.84min；M+H：609。在氘化DMSO中獲取質子NMR。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.54(s,1H),8.42-8.32(m,1H),7.98-7.92(m,4H),7.69-7.61(m,3H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.61(t,J=6.3Hz,1H),4.21-4.14(m,2H),2.79(d,J=4.6Hz,3H),2.26(s,3H),1.67-1.63(m,2H),1.52-1.47(m,2H)。
實例9
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 步驟1：2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-胺鹽酸鹽之製備：在室溫下將 CDI(886mg,5.47mmol)逐份添加至2-((第三丁氧基羰基)胺基)-2-甲基丙酸(1.01g,4.97mmol)於DMF(2.0ml)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌5h，產生漿液。添加(Z)-N'-羥基乙脒(442mg,5.96mmol)，且在觀察到少量氣體逸出後反應物再次變成溶液。將此混合物在室溫下攪拌1h，然後在100℃下攪拌16h。濃縮反應物，且然後用Et2O稀釋，且並H2O洗滌。濃縮有機相，溶解於Et2O中，且用於Et2O中之過量2M HCl處理。將所得混合物攪拌30min，且然後藉由與甲苯共沸2×來濃縮。將所得固體與Et2O一起研磨，以獲得2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-胺鹽酸鹽(545mg,3.07mmol,62%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.26(br s,3H),2.40(s,3H),1.71(s,6H)。
步驟2：標題化合物之製備：將3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(30mg,0.062mmol)溶解於DMF(1ml)中，且用N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(32μl,0.19mmol)、2-(3-甲基-1,2,4-噁二唑-5-基)丙-2-胺鹽酸鹽(13mg,0.074mmol)處理，然後用2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(35mg,0.093mmol)處理。將反應物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18，19×10mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為18.1mg，且其藉由LCMS估計之純度為98%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5 乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.02min；M+H：610。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.06min；M+H：610。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.03(s,1H),8.56-8.46(m,1H),8.09-7.99(m,2H),7.98-7.86(m,3H),7.68-7.58(m,2H),7.41(t,J=8.7Hz,2H),3.04-2.95(m,2H),2.84-2.69(m,5H),1.70(s,6H)。
實例10
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((2-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.043mL,0.25mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(15mg,0.031mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(18mg,0.046mmol)及1,2,4-噁二唑-3-甲胺α,α,5-三甲基鹽酸鹽(5.5mg,0.031mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。LCMS顯示完全反應。用MeOH稀釋溶液，過濾且經由製備型LC/MS利用以下條件來純化： 管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18，19×10mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：20%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為2.4mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。在氘化DMSO中獲取質子NMR。LC-MS滯留時間：1.86min；m/z(MH+)：610。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.68(br s,1H),8.50(br s,1H),8.05(br s,2H),8.00-7.86(m,3H),7.61(d,J=11.0Hz,2H),7.41(t,J=8.4Hz,2H),3.03-2.97(m,2H),3.22.81(s,3H),2.79-2.71(m,2H),2.53(s,3H),1.67(s,6H)。
實例11
2-(4-氟苯基)-N-甲基-5-(3-((2-(5-甲基-1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.043mL,0.25mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(15mg,0.031mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(18mg,0.046mmol)及1,2,4-噁二唑-3-甲胺α,α,5-三甲基鹽酸鹽(5.5mg,0.031mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。LCMS顯示完全反應。用MeOH稀釋溶液，過濾且經由製備型LC/MS利用以下條件來純化：管柱：Waters XBridge C18，19×100mm，5μm粒子；保護管柱：Waters XBridge C18，19×10mm，5μm粒子；流動相A：水；流動相B：乙腈；緩衝液：20mM乙酸銨；梯度：20%-95% B，10.9分鐘，然後在95% B下保持4.0分鐘；流速：25mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為2.3mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm， 1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。在氘化DMSO中獲取質子NMR。LC-MS滯留時間：1.81min；m/z(MH+)：611。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.64(br s,1H),8.38(d,J=4.3Hz,1H),8.00-7.84(m,4H),7.68(s,1H),7.63-7.55(m,2H),7.34(t,J=8.7Hz,2H),6.63(br s,1H),4.18(m,2H),3.32(m,3H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),2.53(s,3H),1.67(s,6H)。
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯. 在室溫下將2-甲基丁-2-醇鈉(229mg,2.08mmol)、3-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(200mg,0.416mmol)、2,2,2-三氟乙胺(206mg,2.08mmol)、氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)(33mg,0.042mmol)合併，脫氣，且溶解於二噁烷(8.3ml)中，且然後加熱至80℃。30min時之LCMS顯示M+H與預期產物相匹配之主峰。用EtOAc稀釋混合物，且用1M HCl水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。濃縮有機相並與DCM一起研磨，以獲得預期產物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯 (130mg,0.239mmol,58%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：2.13min；m/z(MH+)：544。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸. 在室溫下將TFA(921μl,11.9mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(130mg,0.239mmol)於DCM(2.4ml)中之攪拌溶液中。將反應物攪拌2h，然後藉由與甲苯共沸至乾燥來濃縮。將所得固體與DCM一起研磨，以獲得預期產物3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(97mg,0.20mmol,83%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.73min；m/z(MH+)：488。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.07(br.s,1H),8.37-8.30(m,J=4.5Hz,1H),8.05-7.94(m,4H), 7.70-7.66(m,3H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.67(s,1H),4.23-4.10(m,J=3.0Hz,2H),2.80(d,J=4.8Hz,3H)。
5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸. 在室溫下將2-甲基丁-2-醇鈉(333mg,3.02mmol)、5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(275mg,0.605mmol)、2,2,2-三氟乙胺(299mg,3.02mmol)、氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)(48mg,0.060mmol)合併，脫氣，並溶解於二噁烷(12ml)中，且然後加熱至90℃。將反應物攪拌1h。然後用EtOAc稀釋混合物，並用1M HCl水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。濃縮有機相，藉由製備型逆相HPLC在C18管柱上使用適當緩衝之H2O/CH3CN梯度純化所得殘餘物，且濃縮，以獲得預期產物5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(41mg,0.079mmol,13%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.87min；m/z(MH+)：518。在220nm之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸. 在室溫下將2-甲基丁-2-醇鈉(311mg,2.82mmol)、5-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-氟苯甲酸(250mg,0.565mmol)、2,2,2-三氟乙胺(280mg, 2.82mmol)、氯[2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-異丙基-1,1'-聯苯][2-(2-胺基乙基)苯基]鈀(II)(45mg,0.056mmol)合併，脫氣，並溶解於二噁烷(12ml)中，且然後加熱至90℃並保持1h。然後用EtOAc稀釋混合物，且用1M HCl水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮。將所得固體與DCM一起研磨，以獲得250mg粗材料，藉由製備型逆相HPLC在C18管柱上使用適當緩衝之H2O/CH3CN梯度純化該粗材料，且濃縮，以獲得預期產物2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(100mg,0.198mmol,35%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.74min；m/z(MH+)：506。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 13.34(br.s,1H),8.38-8.29(m,1H),7.98(dd,J=8.8,5.5Hz,2H),7.89(dd,J=7.0,2.3Hz,1H),7.70-7.62(m,2H),7.51-7.43(m,1H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.72(s,1H),4.23-4.10(m,2H),2.80(d,J=4.8Hz,3H)。
實例12
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺.在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(117mg,0.308mmol)添加至3-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(100mg,0.205mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.11mL,0.62mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(50mg,0.31mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。然後藉由製備型逆相HPLC在C18管柱上使用適當緩衝之H2O/CH3CN梯度純化反應混合物，且濃縮，以獲得預期產物5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺(61mg,0.10mmol,49%產率))，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.73min；m/z(MH+)：597。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.43(s,1H),8.70(s,1H),8.40-8.32(m,1H),8.01- 7.94(m,2H),7.93(s,1H),7.90-7.85(m,1H),7.69(s,1H),7.64-7.57(m,2H),7.38-7.31(m,2H),6.63(t,J=6.4Hz,1H),4.26-4.12(m,2H),2.80(d,J=4.8Hz,3H),1.70(s,6H)。
實例13
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)-4-氟苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺.在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(20mg,0.053mmol)添加至2-氟-5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(18mg,0.036mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.019mL,0.11mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(7.6mg,0.046mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min。經由製備型LC/MS利用以下條件來製備粗反應混合物：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：30%-70% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為15.9mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B 下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：2.92min；M+H：615。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：3.91min；M+H：615。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.47(s,1H),8.73(s,1H),8.41-8.34(m,1H),8.00-7.92(m,2H),7.68(s,1H),7.64-7.54(m,2H),7.44(t,J=9.2Hz,1H),7.35(t,J=9.0Hz,2H),6.70(t,J=6.4Hz,1H),4.24-4.13(m,2H),2.80(d,J=4.6Hz,3H),1.69(s,6H)。
實例14
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)-4-甲氧基苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(22mg,0.058mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基苯甲酸(20mg,0.039mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.020mL,0.12mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(10mg,0.058mmol)於DMF(1mL)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min。然後經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗反應混合物：管 柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：20%-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為9.5mg，且其藉由LCMS估計之純度為97%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.02min；M+H：627。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：3.85min；M+H：627。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.47(s,1H),8.65(s,1H),8.39-8.31(m,1H),7.97(dd,J=8.9,5.5Hz,2H),7.79-7.73(m,1H),7.60(s,1H),7.54(dd,J=8.5,2.1Hz,1H),7.37-7.28(m,3H),6.58-6.53(m,1H),4.22-4.08(m,2H),4.01(s,3H),2.79(d,J=4.6Hz,3H),1.73(s,6H)。
1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙胺鹽酸鹽. 步驟1：N-(1-氰基環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在0℃下將2-甲基丙烷-2-亞磺醯氯(1.0ml,8.4mmol)添加至1-胺基環丙烷甲腈鹽酸鹽(1g,8mmol)於二氯甲烷(21ml)及N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(3.0ml,17mmol)中之攪拌溶液中。添加DMAP(10mg,0.084mmol)且在室溫下將反應物攪拌2h。用二氯甲烷稀釋混合物，且用飽和NH4Cl水溶液及飽和NaCl水溶液洗滌。經Na2SO4乾燥有機相，過濾且濃縮，以獲得黃色黏性固體狀 預期產物N-(1-氰基環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.5g,8.1mmol,95%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.40min；m/z(MH+)：187。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟2：(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丙烷甲脒之製備：在室溫下將碳酸鉀(4.45g,32.2mmol)及羥基胺鹽酸鹽(1.1g,16mmol)添加至N-(1-氰基環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(1.5g,8.1mmol)於EtOH(27ml)中之攪拌溶液中。將反應物加熱至60℃並保持2h。然後將反應物冷卻至室溫。添加矽藻土且經由矽藻土墊過濾混合物，用100mL EtOAc洗滌。濃縮濾液，以獲得預期產物(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丙烷甲脒(1.7g,7.8mmol,96%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.09min；m/z(MH+)：220。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟3：N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺之製備：在室溫下用AcOH(6ml)處理於三乙氧基甲烷(6.0ml,36 mmol)中之(Z)-1-(1,1-二甲基乙基亞磺醯胺基)-N'-羥基環丙烷甲脒(1.0g,4.6mmol)。在室溫下將反應物攪拌16h。藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥。在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度(在70% EtOAc/己烷中Rf為約2)上純化所得黃色油狀物，以獲得預期產物N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(340mg,1.5mmol,33%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：1.06min；m/z(MH+)：230。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 9.44(s,1H),6.36(s,1H),1.57-1.51(m,1H),1.45-1.32(m,3H),1.15(s,9H)。
步驟4：標題化合物：1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙胺鹽酸鹽之製備：在室溫下將HCl(3ml,6mmol)(2.0M於Et2O中)添加至N-(1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙基)-2-甲基丙烷-2-亞磺醯胺(340mg,1.5mmol)於MeOH(3ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將反應物攪拌1h。然後藉由與甲苯共沸3×將反應物濃縮至乾燥，以獲得白色固體狀預期產物1-(1,2,4-噁二唑-3-基)環丙胺鹽酸鹽(220mg,1.38mmol,93%產率)，其與NMR結果一致。1H NMR(400MHz,MeOH-d4)δ 9.29(s,1H),1.65-1.61(m,2H),1.61-1.58(m,2H)。
實例15及16
5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺且分離成純同分異構體. 步驟1：(E)-3-(6-(丁-2-烯-2-基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯之製備：將3-(6-氯-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(250mg,0.520mmol)、(Z)-丁-2-烯-2-基三氟硼酸鉀(100mg,0.617mmol)、6-(二環己基膦基)-2',6'-二甲氧基-[1,1'-聯苯]-3-磺酸鈉(107mg,0.208mmol)、二乙醯氧基鈀(23.3mg,0.104mmol)、碳酸銫(254mg,0.780mmol)乾式合併，用N2脫氣，且然後溶解於DMF(4.7ml)及水(0.47ml)中，並加熱至80℃且保持1h。然後藉由與甲苯共沸將反應物濃縮至乾燥，並將粗混合物吸附於矽藻土上，且在矽膠(Biotage，EtOAc/己烷梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，獲得預期產物(E)-3-(6-(丁-2-烯-2-基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(118mg,0.236mmol,45%產率)，其與LCMS及NMR結果一致。LC-MS滯留時間：2.22min；m/z(MH+)：501。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用 針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ 8.51-8.43(m,1H),8.10-8.04(m,2H),8.01(s,1H),7.96-7.93(m,1H),7.91-7.87(m,1H),7.68-7.64(m,1H),7.60-7.54(m,1H),7.45-7.37(m,2H),5.44-5.37(m,1H),2.83(d,J=4.5Hz,3H),1.87-1.82(m,3H),1.59-1.52(m,12H)。
步驟2：3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯之製備：在室溫下將Pd/C(50mg,0.047mmol,10%)添加至(E)-3-(6-(丁-2-烯-2-基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(118mg,0.236mmol)於EtOH(4.7ml)中之攪拌溶液中。將反應物置於Parr罐中且裝填50 PSI H2，並在室溫下將混合物攪拌16h。將矽藻土添加至反應混合物中，且經由矽藻土墊過濾漿液，用EtOAc洗滌。濃縮濾液，以獲得預期產物3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(118mg,0.235mmol,100%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：2.38min；m/z(MH+)：503。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，2min之保持時間及4min之分析時間，其中溶劑A為5% MeOH/95% H2O/10mM乙酸銨，且溶劑B為5% H2O/95% MeOH/10mM乙酸銨。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟3：3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸之製備：在室溫下將TFA(0.90ml,12mmol)添加至3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸第三丁基酯(118mg,0.235mmol)於DCM(2.3ml)中 之攪拌溶液中。將反應物攪拌2h，且然後藉由與甲苯共沸2×濃縮至乾燥。將所得固體與DCM一起研磨，以獲得3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(98mg,0.22mmol,93%產率)，其與LCMS結果一致。LC-MS滯留時間：1.84min；m/z(MH+)：447。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。
步驟4：標題化合物之製備在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(38mg,0.10mmol)添加至3-(6-(第二丁基)-2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)苯甲酸(30mg,0.067mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(35μl,0.20mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(13mg,0.081mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌30min。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：25%-95% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。然後經由製備型HPLC使用對掌性管柱來純化材料。第一溶析之同分異構體之產量為11.0mg，且其純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒 子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.08min；M+H：556。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.08min；M+H：556。在氘化DMSO中獲取質子NMR。
實例15
第一溶析之分離物NMR：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.43(s,1H),8.76(s,1H),8.49-8.44(m,1H),8.06(dd,J=9.0,5.3Hz,2H),7.95-7.88(m,2H),7.82(s,1H),7.62-7.57(m,1H),7.55-7.50(m,1H),7.40(t,J=8.9Hz,2H),2.91-2.87(m,1H),2.81(d,J=4.6Hz,3H),1.83-1.74(m,1H),1.70(s,6H),1.57-1.46(m,1H),1.19(d,J=6.7Hz,3H),0.65(t,J=7.3Hz,3H)。第二溶析之同分異構體之產量為10.8mg，且其純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。滯留時間：3.08min；M+H：556。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。滯留時間：4.08min； M+H：556。在氘化DMSO中獲取質子NMR。
實例16
第二溶析之分離物NMR：1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.43(s,1H),8.76(s,1H),8.50-8.44(m,1H),8.06(dd,J=8.4,5.6Hz,2H),7.96-7.89(m,2H),7.82(s,1H),7.62-7.57(m,1H),7.53(d,J=7.6Hz,1H),7.40(t,J=8.9Hz,2H),2.92-2.89(m,1H),2.81(d,J=4.6Hz,3H),1.83-1.75(m,1H),1.70(s,6H),1.53(dt,J=13.6,6.6Hz,1H),1.19(d,J=6.7Hz,3H),0.65(t,J=7.3Hz,3H)。
實例17
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(71.2mg,0.187mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(65mg,0.13mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(65μl,0.38mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(23.3mg,0.137mmol)於DMF(1.2ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。然後用EtOAc稀釋混合物，且用1M HCl及飽和NaCl洗滌。濃縮有機相且吸收於矽藻土上並在矽膠(Biotage，EtOAc/DCM梯度，在λ=254nm下收集流份)上純化，以獲得預期產物(68mg,0.11mmol,85%產率)，其與LCMS及NMR結果一致，且藉由HPLC獲 得足夠純度。LC-MS滯留時間：1.86min；m/z(MH+)：636。在220nM之檢測器波長下使用SPD-10AV UV-Vis檢測器在配備有Phenomenex-Luna 3u C18 2.0×30mm管柱之Shimadzu LC-10AS液相層析儀上記錄LC數據。溶析條件採用1mL/min之流速，100%溶劑A/0%溶劑B至0%溶劑A/100%溶劑B之梯度，2min之梯度時間，1min之保持時間及3min之分析時間，其中溶劑A為10%乙腈/90% H2O/0.1%三氟乙酸，且溶劑B為10% H2O/90%乙腈/0.1%三氟乙酸。使用針對LC之Micromass平臺以電噴霧模式測定MS數據。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),8.68(s,1H),8.51-8.45(m,1H),8.43(d,J=2.5Hz,1H),8.10(d,J=2.4Hz,1H),8.06(dd,J=9.1,5.4Hz,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.9Hz,2H),3.05-2.97(m,2H),2.84-2.72(m,5H)。其他HPLC方法：溶劑A=5% CH3CN/95% H2O/0.1% TFA，溶劑B=95% CH3CN/5% H2O/0.1% TFA，B起始%=10，B最終%=100，梯度時間=30min，終止時間=32min，流速=1ml/min。管柱：Waters Sunfire C-18，4.6×150mm，3.5mm，Rt=21.94min，純度=100%；管柱：Waters XBridge苯基管柱4.6×150mm，3.5mm，Rt=18.34min，純度=100%。
實例18
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)- 1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(13mg,0.035mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(12mg,0.023mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.012ml,0.069mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(4.3mg,0.025mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：35%-75% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為6.3mg，且其藉由LCMS估計之純度為99%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.74min，M+H=637。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.77min，M+H=637。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.49(s,1H),8.65(s,1H),8.40-8.27(m,2H),8.09(s,1H),8.03-7.92(m,2H),7.69(s,1H),7.41-7.28(m,2H),6.89-6.75(m,1H),4.22-4.08(m,2H),2.79(d,J=4.3Hz,3H)。
實例19
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-{2-[( 2 H)-1,2,4-噁二唑-3-基]( 2 H 6 )丙-2-基}吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.015ml,0.086mmol)及2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基](2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(5.4mg,0.032mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：25%-85% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為15.1mg，且其藉由LCMS估計之純度為99%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0%B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：1.97min，M+H：638。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B： 95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.75min，M+H=638。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.66(s,1H),8.37-8.32(m,2H),8.09(d,J=2.4Hz,1H),7.97(dd,J=8.5,5.5Hz,2H),7.69(s,1H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.86-6.77(m,1H),4.22-4.09(m,2H),2.79(d,J=4.6Hz,3H)。
實例20
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-{2-[( 2 H)-1,2,4-噁二唑-3-基]( 2 H 6 )丙-2-基}吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.015ml,0.086mmol)及2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基](2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(5.4mg,0.032mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：35%-75% B，30分鐘，然後在100% B下保持7分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。 產物之產量為11.9mg，且其藉由LCMS估計之純度為99%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.16min，M+H：637。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.98，M+H：=637。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.69(s,1H),8.52-8.46(m,1H),8.43(d,J=2.4Hz,1H),8.10(d,J=2.4Hz,1H),8.05(dd,J=8.9,5.5Hz,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.9Hz,2H),3.05-2.97(m,2H),2.85-2.71(m,5H)。
實例21
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶- 5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(15μl,0.086mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(5.4mg,0.032mmol)於DMF(0.5ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：35%-75% B，20分鐘，然後在100% B下保持7分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為6.5mg，且其藉由LCMS估計之純度為97%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.17min。M+H=638。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.03min。M+H=638。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.45(s,1H),8.65(s,1H),8.55-8.45(m,2H),8.26(s,1H),8.16(s,1H),8.02-7.93(m,2H),7.37(t,J=8.9Hz,2H),5.10(q,J=8.7Hz,2H),2.83(d,J=4.6Hz,3H)。
實例22
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(15μl,0.086mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(5.2mg,0.032mmol)於DMF(0.5ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：30%-100% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為7.9mg，且其藉由LCMS估計之純度為97%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.18min；M+H=632。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10 mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.04min；M+H=632。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),8.66(s,1H),8.55(s,1H),8.52-8.46(m,1H),8.27(s,1H),8.19(s,1H),8.05-7.98(m,2H),7.39(t,J=8.5Hz,2H),5.12(q,J=9.0Hz,2H),2.84(d,J=4.3Hz,3H),1.73(s,6H)。
實例23
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(18μl,0.108mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(7.0mg,0.013mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(7.7mg,0.020mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(3.3mg,0.020mmol)於DMF(1)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。LCMS顯示完全反應。將反應混合物過濾且然後經由製備型LC/MS利用以下條件來純化：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：25%-90% B，15分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心 蒸發來乾燥。產物之產量為3.1mg，且其藉由LCMS估計之純度為97%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.96min，M+H=630。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：4.08min，M+H=630。在氘化甲醇中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),8.70(s,1H),8.49(d,J=4.3Hz,1H),8.43(d,J=2.1Hz,1H),8.10(d,J=2.1 Hz,1H),8.06(dd,J=8.4,5.6Hz,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.7Hz,2H),3.01(t,J=7.8Hz,2H),2.81(d,J=4.3Hz,3H),2.80-2.69(m,2H),1.73(s,6H)。
實例24
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-{2-[( 2 H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-基}吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2- (4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.015ml,0.086mmol)及2-[(2H)-1,2,4-噁二唑-3-基]丙-2-胺鹽酸鹽(5.2mg,0.032mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為13.2mg，且其藉由LCMS估計之純度為99%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.17min；M+H=631。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.01min；M+H=631。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 8.70(s,1H),8.53-8.45(m,1H),8.43(s,1H),8.10(s,1H),8.07-8.01(m,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.7Hz,2H),3.05-2.96(m,2H),2.85-2.71(m,5H),1.73(s,6H)。
實例25
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(22mg,0.058mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(20mg,0.039mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.020ml,0.12mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(7.2mg,0.043mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：30%-70% B，15分鐘，然後在100% B下保持7分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為17.9mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.33min，M+H=633。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10 mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：4.34min，M+H=633。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),8.69(s,1H),8.53-8.45(m,1H),8.43(s,1H),8.13-8.02(m,3H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.1Hz,2H),4.10(s,3H),3.06-2.98(m,2H),2.86-2.71(m,5H)。
實例26
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)( 2 H 6 )丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(13mg,0.035mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(12mg,0.023mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.012ml,0.069mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-胺鹽酸鹽(4.3mg,0.025mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：35%-75% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之 產量為5.2mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.74min，M+H=634。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.78min，M+H=634。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.49(s,1H),8.65(s,1H),8.39-8.30(m,2H),8.09(s,1H),8.03-7.91(m,2H),7.69(s,1H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.87-6.76(m,1H),4.20-4.05(m,5H),2.79(d,J=4.3Hz,3H)。
實例27
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(32μl,0.18mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(12mg,0.023 mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(13mg,0.035mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(7.5mg,0.046mmol)於DMF(1)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：30%-70% B，20分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為8.5mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.90min，M-H=629。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.97min，M-H=629。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.49(s,1H),8.66(s,1H),8.34(br.s.,2H),8.09(s,1H),8.04-7.92(m,2H),7.69(s,1H),7.34(t,J=8.4Hz,2H),6.82(br.s.,1H),4.21-4.09(m,2H),2.79(d,J=4.0Hz,3H),1.74(s,6H)。
實例28
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(67μl,0.39mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(25mg,0.048mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(28mg,0.072mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(7.9mg,0.048mmol)於DMF(1)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。LCMS顯示完全反應。將溶液過濾且然後經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：20%-100% B，15分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為26.2mg，且其藉由LCMS估計之純度為96%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。Rt：3.14min，M+H=627。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙 酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0% B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。Rt：4.05min，M+H=627。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.48(s,1H),8.70(s,1H),8.49(d,J=4.6Hz,1H),8.43(d,J=2.4Hz,1H),8.10(d,J=2.4Hz,1H),8.08-8.02(m,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.9Hz,2H),4.10(s,3H),3.04-2.98(m,2H),2.81(d,J=4.6Hz,3H),2.80-2.74(m,2H),1.73(s,6H)。
實例29
5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-[(2,2,2-三氟乙基)胺基]呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(67μl,0.39mmol)添加至5-(2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-((2,2,2-三氟乙基)胺基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基)-2-甲氧基菸酸(25mg,0.048mmol)、2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(28mg,0.072mmol)及2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-胺鹽酸鹽(7.9mg,0.048mmol)於DMF(1)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。LCMS顯示完全反應。將溶液過濾且然後經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：Waters XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：含有20mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有20mM乙酸銨之水；梯度：25%-90% B，25分鐘，然後在100% B下保持5分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸 發來乾燥。產物之產量為7.6mg，且其藉由LCMS估計之純度為94%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min。Rt：2.95min，M+H=628。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：40℃；梯度：在0%B下保持0.5min，0-100% B，4分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min。Rt：3.86min，M+H=628。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.49(s,1H),8.66(s,1H),8.34(s,2H),8.09(s,1H),8.00-7.94(m,2H),7.69(s,1H),7.34(t,J=8.9Hz,2H),6.82(t,J=6.3Hz,1H),4.19-4.12(m,2H),4.10(s,3H),2.79(d,J=4.3Hz,3H),1.74(s,6H)。
實例30
N-[1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙基]-5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-( 2 H 3 )甲氧基吡啶-3-甲醯胺. 在室溫下將2-(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基)-1,1,3,3-四甲基異脲鎓六氟磷酸鹽(V)(16mg,0.043mmol)添加至5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5- 基]-2-(2H3)甲氧基吡啶-3-甲酸(15mg,0.029mmol)、N-乙基-N-異丙基丙-2-胺(0.015ml,0.086mmol)及1-環丙基-1-(1,2,4-噁二唑-3-基)乙胺鹽酸鹽(上文所製備)(6.0mg,0.032mmol)於DMF(1ml)中之攪拌溶液中。在室溫下將混合物攪拌1h。經由製備型LC/MS利用以下條件來純化粗材料：管柱：XBridge C18，19×200mm，5μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；梯度：40%-80% B，20分鐘，然後在100% B下保持7分鐘；流速：20mL/min。合併含有期望產物之流份且經由離心蒸發來乾燥。產物之產量為11.6mg，且其藉由LCMS估計之純度為100%。使用兩種分析型LC/MS注射來測定最終純度。注射1條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95乙腈：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5乙腈：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0% B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：1mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：2.27min，M+H=656。注射2條件：管柱：Waters BEH C18，2.0×50mm，1.7μm粒子；流動相A：5：95甲醇：含有10mM乙酸銨之水；流動相B：95：5甲醇：含有10mM乙酸銨之水；溫度：50℃；梯度：0%B，0-100% B，3分鐘，然後在100% B下保持0.5分鐘；流速：0.5mL/min；檢測：UV 220nm。Rt：3.09min，M+H=656。在氘化DMSO中獲取質子NMR。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ 9.47(s,1H),8.68(s,1H),8.52-8.47(m,1H),8.45(s,1H),8.15(s,1H),8.11-8.02(m,2H),7.98(s,1H),7.41(t,J=8.5Hz,2H),3.06-2.96(m,2H),2.84-2.72(m,5H),1.70(s,3H),1.64-1.54(m,1H),0.62-0.49(m,2H),0.48-0.43(m,1H),0.42-0.35(m,1H)。
生物學方法
HCV NS5B RdRp選殖、表現及純化. 將編碼HCV基因型1b(純 系1)、胺基酸316自半胱胺酸突變成天冬醯胺之基因型1b變體及基因型2a(JFH-1)之NS5B蛋白之cDNA選殖至pET21a表現載體中。使用18胺基酸C端截短來表現每一未經標記之蛋白質以增強溶解性。使用大腸桿菌勝任細胞系BL21(DE3)來表現蛋白質。使培養物在37℃下生長約4小時，直至該等培養物在600nm下之光學密度達到2.0為止。將培養物冷卻至20℃，並用1mM IPTG誘導。添加新鮮胺苄青黴素(ampicillin)直至最終濃度為50μg/mL，且使細胞在20℃下生長過夜。
將細胞沈澱物(3L)溶解以供純化，產生15-24mg經純化之NS5B。溶解緩衝液係由以下成份組成：20mM Tris-HCl(pH 7.4)、500mM NaCl、0.5% triton X-100、1mM DTT、1mM EDTA、20%甘油、0.5mg/mL溶菌酶、10mM MgCl2、15μg/mL去氧核糖核酸酶I及完全TM蛋白酶抑制劑錠劑(Roche)。在添加溶解緩衝液之後，使用組織均質器再懸浮經冷凍之細胞沈澱物。為降低樣品之黏度，使用附接至布蘭森音波處理器(Branson sonicatoror)之微尖錐在冰上對溶解物之等份試樣進行音波處理。在4℃下以100,000×g將經音波處理之裂解物離心30分鐘，且經由0.2μm過濾單元(Corning)過濾。
使用以下兩個依序層析步驟來純化蛋白質：肝素瓊脂糖CL-6B及polyU瓊脂糖凝膠4B。層析緩衝液與溶解緩衝液相同，但不含溶菌酶、去氧核糖核酸酶I、MgCl2或蛋白酶抑制劑，且根據向管柱上裝填蛋白質之需求來調整緩衝液之NaCl濃度。用NaCl梯度溶析每一管柱，該NaCl梯度之長度端視管柱類型自5-50個管柱體積變化。在最終層析步驟後，基於SDS-PAGE分析，所得酶純度>90%。將酶分成等份試樣，並將其儲存於-80℃下。
HCV NS5B RdRp酶分析. 以384孔格式使用珠粒上之固相均質分析來評價NS5B抑制劑(WangY-K、Rigat K、Roberts S及Gao M(2006)Anal Biochem,359：106-111)。藉由將引子與珠粒混合於1×緩衝液中 並在室溫下培育三小時來將生物素化之寡dT12引子捕獲於抗生蛋白鏈菌素偶合之成像珠粒(GE,RPNQ0261)上。在離心後移除未結合之引子。將結合引子之珠粒再懸浮於3×反應混合物(20mM Hepes緩衝液(pH 7.5)、dT引子偶合珠粒、聚A模板、3H-UTP及RNA酶抑制劑(Promega N2515))中。在DMSO中以1：3連續稀釋化合物，並將其等分至分析板中。將等體積(5μL)之水、3×反應混合物及於3×分析緩衝液(60mM Hepes緩衝液(pH 7.5)、7.5mM MgCl2、7.5mM KCl、3mM DTT、0.03mg/mL BSA、6%甘油)中之酶添加至分析板上經稀釋之化合物中。384孔分析中各組份之最終濃度：0.36nM模板、15nM引子、0.29μM 3H-UTP(0.3μCi)、1.6U/μL RNA酶抑制劑、7nM NS5B酶、0.01mg/mL BSA、1mM DTT及0.33μg/μL珠粒、20mM Hepes緩衝液(pH 7.5)、2.5mM MgCl2、2.5mM KCl及0.1% DMSO。
在30℃下使反應繼續進行24小時，並藉由添加50mM EDTA(5μL)來終止。在培育至少15分鐘後，在Amersham LEADseeker多模態成像系統上讀取各板。
使用十個不同的[I]來測定化合物之IC50值。使用四參數邏輯斯蒂公式(four-parameter logistic formula)y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))自抑制計算IC50值，其中A及B分別表示最小抑制%及最大抑制%，C係IC50，D係希爾斜率(hill slope)，且x代表化合物濃度。
細胞系. 用於評估化合物之細胞系係由組成性表現含有海腎螢光素酶報導基因之基因型1b(純系1)HCV複製子或用天冬醯胺置換胺基酸316處之半胱胺酸之基因型1b(純系1)HCV複製子或基因型2a(JFH-1)複製子之人類肝細胞源性細胞系(Huh-7)組成。將該等細胞維持在含有10% FBS、100U/mL青黴素(penicillin)/鏈黴素(streptomycin)及1.0mg/mL G418之達爾伯克氏改良伊格爾培養基(Dulbecco’s modified Eagle medium,DMEM)中。
HCV複製子螢光素酶分析. 為評估化合物功效，將經滴定之化合物轉移至經組織培養物處理之無菌384孔板中，並用於含4% FBS之DMEM中之HCV複製子細胞(50μL，以2.4×103個細胞/孔之密度)對該等板進行接種(最終DMSO濃度為0.5%)。在37℃下培育3天後，根據製造商之說明書使用EnduRen受質(Promega目錄編號E6485)來分析細胞之海腎螢光素酶活性。簡言之，將EnduRen受質稀釋於DMEM中且然後添加至該等板中至最終濃度為7.5μM。在37℃下將該等板培育至少1h，然後在Viewlux成像儀(PerkinElmer)上使用發光程式讀取。使用如上所述之四參數邏輯斯蒂公式來計算50%有效濃度(EC50)。
為評價化合物之細胞毒性，向含EnduRen之板中添加Cell Titer-Blue(Promega)，並在37℃下培育至少4h。使用Viewlux成像儀讀取每一孔之螢光信號。使用四參數邏輯斯蒂公式來計算所有CC50值。
化合物I之1b複製子及酶數據報告於表2中。
熟習此項技術者應明瞭，本發明並不受限於上述說明性實例，且其可在不背離其基本屬性下以其他特定形式來體現。因此，期望將所有態樣中之實例視為說明性的而非限制性的，以隨附申請專利範圍而非上述實例為準，且因此本發明意欲涵蓋屬於申請專利範圍之等效內容之含義及範圍內之所有變化。

Claims (8)

  1. 一種式I化合物 其中： R1係或，其中該等烷基、環烷基 或Ar1部分可具有氫或氘原子；R2係氫、氟、甲氧基或CD3O；R3係氫；R4係第二丁基、三氟丙基、三氟乙氧基或三氟乙基胺基；R5係氟； Ar1係或；且 X係CH或N；或其醫藥上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物，其中： R1係或 R2係氫、氟、甲氧基或CD3O；R3係氫；R4係第二丁基、三氟丙基、三氟乙氧基或三氟乙基胺基；R5係氟； Ar1係或；且 X係CH或N；或其醫藥上可接受之鹽。
  3. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之群 或其醫藥上可接受之鹽。
  4. 如請求項1之化合物，其選自由以下組成之群 或其醫藥上可接受之鹽。
  5. 如請求項1之化合物，其係5-(3-((2-(1,2,4-噁二唑-3-基)丙-2-基)胺甲醯基)苯基)-2-(4-氟苯基)-N-甲基-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽
  6. 如請求項1之化合物，其係5-[2-(4-氟苯基)-3-(甲基胺甲醯基)-6-(3,3,3-三氟丙基)呋喃并[2,3-b]吡啶-5-基]-2-(2H3)甲氧基-N-[2-(1,2,4-噁二唑-3-基)(2H6)丙-2-基]吡啶-3-甲醯胺或其醫藥上可接受之鹽
  7. 一種組合物，其包含如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽及醫藥上可接受之載劑。
  8. 一種如請求項1之化合物之用途，其用於製造用來治療C型肝炎感染之藥劑。
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