TW201437209A - 雙環嘧啶化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供式I化合物：□其中X為一鍵或CH2；R係選自由以下組成之群：□R1及R2各自獨立地選自由CH及N組成之群；R3為H或CH3；R4為H或CH3；L係選自由以下組成之群：-O(CH2)3-、-C(O)NH(CH2)2-、-CH2C(O)NH(CH2)2-、-(CH2)3N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)2N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)3NH-、(CH2)2OCH2-、-(CH2)4-、-(CH2)2NHCH2-、-(CH2)3O-及-CH2O(CH2)2-；或其醫藥學上可接受之鹽。本發明化合物為自分泌運動因子抑制劑。

Description

雙環嘧啶化合物
本發明係關於雙環嘧啶化合物或其醫藥學上可接受之鹽及其治療用途。本發明化合物為自分泌運動因子(autotaxin)抑制劑。
自分泌運動因子為一種據報導為溶血磷脂酸(LPA)來源之酶，其經由其同源受體之一(LPA1)上調疼痛相關之蛋白質。LPA為影響許多生物及生物化學程序之細胞內脂質介體。自分泌運動因子介導之LPA生物合成之靶向抑制可提供一種新穎機制以預防神經損傷誘發之神經痛。需要抑制自分泌運動因子之化合物以對需要治療疼痛之患者提供潛在的治療選擇。
據報導，與骨關節炎(OA)相關之疼痛為引起OA患者之下肢殘疾的主要症狀。已診斷出超過兩千萬美國人患有OA，其為最常見之關節病。當前批准之OA疼痛治療可具侵襲性，長期使用可能會失效，且可能不適於治療所有患者。需要針對罹患與OA相關之疼痛之患者的其他治療選擇。抑制自分泌運動因子之化合物代表針對患有與OA相關之疼痛之患者的另一種可能治療選擇。
美國專利7,524,852('852)揭示經取代之雙環嘧啶衍生物作為消炎劑。
PCT/US2011/048477揭示吲哚化合物作為自分泌運動因子抑制劑。
需要提供自分泌運動因子抑制之新穎化合物。本發明提供作為自分泌運動因子抑制劑之新穎化合物。本發明提供抑制LPA產生之某 些新穎化合物。需要自分泌運動因子抑制劑化合物以提供對自分泌運動因子介導之病狀的治療，諸如疼痛及與OA相關之疼痛。
本發明提供式I化合物：
其中X為一鍵或CH2；R係選自由以下組成之群： R1及R2各自獨立地選自由CH及N組成之群；R3為H或CH3；R4為H或CH3；L係選自由以下組成之群：-O(CH2)3-、-C(O)NH(CH2)2-、-CH2C(O)NH(CH2)2-、-(CH2)3N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)2N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)3NH-、(CH2)2OCH2-、-(CH2)4-、-(CH2)2NHCH2-、-(CH2)3O-及-CH2O(CH2)2-；或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明亦提供一種治療患者之疼痛的方法，其包含向需要此種治療之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。本發明亦提供一種治療患者之與骨關節炎相關之疼痛的方法，其包含向需要此種治療之患者投與有效量之式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽。
本發明提供一種式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於療法中，尤其用於治療疼痛或用於治療與OA相關之疼痛。此外，本發明提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造 用以治療疼痛之藥物。本發明亦提供式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造用以治療與OA相關之疼痛之藥物。
本發明另外提供一種醫藥組合物，其包含式I化合物或其醫藥學上可接受之鹽以及一或多種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑。本發明亦涵蓋合成式I化合物之新穎中間物及製程。
術語「醫藥學上可接受之鹽」係指認為對臨床及/或獸醫學使用而言可接受的本發明化合物之鹽。醫藥學上可接受之鹽及製備其之常用方法在此項技術中為熟知的。參見例如P.Stahl等人，Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection and Use,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M.Berge等人，「Pharmaceutical Salts」,Journal of Pharmaceutical Sciences，第66卷，第1期，1977年1月。
如本文所用之術語「治療(treat/treatment)」係指限制、減緩、停止或逆轉現有症狀、病狀或病症之進展或嚴重性。症狀、病狀或病症可依「急性」或「慢性」事件呈現。在急性事件中，在症狀、病狀或病症發作時投與化合物，且當事件消失時中止。在與症狀或事件相關之病症或病狀之過程中治療慢性事件，其中慢性治療並不視症狀或事件之特定表現而定。本發明涵蓋急性治療與慢性治療。
本發明化合物抑制自分泌運動因子，且可適用於治療伴有自分泌運動因子增加之疾病或病狀。本發明化合物抑制LPA產生，且可適用於治療伴有LPA增加之疾病或病狀。與其他LPA脂質介體相比，本發明化合物可抑制自分泌運動因子介導之LPA生物合成。本發明化合物可適用於治療伴有LPA1結合增加之疾病或病狀。
如本文所用之「患者」係指需要治療之動物，較佳並非排他地為哺乳動物。一較佳實施例為哺乳動物患者，其較佳為人類。另一較佳實施例為伴侶動物患者，諸如狗、貓或家禽。
如本文所用之術語「有效量」係指本發明化合物或其醫藥學上 可接受之鹽當以單次或多次劑量投與患者時向處於診斷或治療下之患者提供所需作用之量或劑量。應瞭解，實際上投與之活性劑之量將由醫師根據相關情況來確定，包括所治療之病狀、所選投藥途徑、所投與之實際活性劑、個別患者之年齡、重量及反應，及患者症狀之嚴重性及其他相關情況。
本發明化合物較佳調配為藉由使化合物具生物可用性之任何途徑投與的醫藥組合物。最佳地，該等組合物用於經口投與。該等醫藥組合物及製備其之製程在此項技術中為熟知的。參見例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy(D.B.Troy編，第21版，Lippincott,Williams & Wilkins,2006)。
技術人員將瞭解，結構包含所有互變異構形式。為避 免疑義，該結構包含易於藉由互變異構而相互轉代之異構體。該結構 包含例如互變異構體及
式I化合物尤其適用於本發明之治療方法，但某些基團、取代基及組態對於式I化合物而言較佳。以下段落描述該等較佳基團、取代基及組態。應瞭解，此等優選項可適用於本發明之治療方法及新化合物。
較佳地，R為
較佳地，R1為CH。
較佳地，R2為N。
較佳地，當R1為CH且R2為N時，L為(CH2)2OCH2或O(CH2)3。
較佳地，當R為時，R3及R4各自為H。
較佳地，R3及R4中僅一者為CH3。
較佳地，X為一鍵。
較佳地，X為CH2。
尤其較佳地，X為一鍵，且L為-(CH2)3NH-。較佳地，X為一鍵， R為，R1為CH，且L為-(CH2)2OCH2-或(CH2)2OCH2及其鹽。
尤其較佳地，X為一鍵，且L為-(CH2)2OCH2-。另外較佳地，X為一 鍵，且L為-CH2O-，且R為。較佳地，X為CH2，R為 ，R1為CH，R2為N，L為-(CH2)2OCH2-或(CH2)2OCH2及其 鹽。
尤其較佳地，X為CH2，且L為-(CH2)2OCH2-，且R為
較佳化合物為：H-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-咪唑-1-基)乙醯胺、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酯、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(1H-咪唑-1-基)戊-1-酮、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-咪唑-1-基)丙酯、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基]乙酮及其醫藥學上可接受之鹽。
較佳化合物為：1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮、1-[2-(2,3-二氫-1H- 茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊-1-酮、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基甲氧基)丙-1-酮、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基}乙酮、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺、N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]乙醯胺、N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]乙醯胺、N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙醯胺、N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-1H-1,2,3-三唑-4-甲醯胺及其醫藥學上可接受之鹽。
較佳化合物為：1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-5-(1H-四唑-5-基)戊-1-酮、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基}乙酮、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺、2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-咪唑-5-基)丙酯、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(1H-1,2,3-三唑-5-基氧基)丁-1-酮、1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6- 基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮；及其醫藥學上可接受之鹽。
尤其較佳化合物為：1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮；及1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮；及其醫藥學上可接受之鹽。
製備及實例
以下製備及實例進一步說明本發明，且代表本發明化合物之典型合成。應瞭解，製備及實例以說明而非限制之方式闡述，且一般技術者可進行多種修改。在下文所呈現之流程中，除非另有指示，否則所有取代基均如先前所定義。為清楚起見，在以下流程中尚未指定某些立體化學中心且已除去某些取代基，且不欲以任何方式限制流程之教示。此外，個別異構體、對映異構體或非對映異構體可由一般技術者在合成式I化合物中之任何適宜點處藉由諸如選擇性結晶技術或對掌性層析之方法來分離或解析(參見例如J.Jacques等人，「Enantiomers,Racemates,and Resolutions」,John Wiley and Sons,Inc.,1981及E.L.Eliel與S.H.Wilen「Stereochemistry of Organic Compounds」,Wiley-Interscience,1994)。試劑及起始物質一般可由一般技術者獲得。其他物質可藉由有機及雜環化學之標準技術(其類似於已知結構上類似之化合物的合成)及由以下製備及實例所述之程序(包括任何新穎程序)來製備。
除非相反地指出，否則本文所說明之化合物係使用ACDLABS或Symyx Draw 3.2命名及編號。
一般而言，式I化合物(其中X為一鍵或CH2)可自式II化合物製備。更特定言之，在流程A中，在碳化二亞胺、1-羥基苯并三唑及諸 如三乙胺之鹼存在下使式II化合物(其中X為一鍵或CH2)與式VII化合物偶合，得到式I化合物(其中X為一鍵或CH2)。適合溶劑包括二氯甲烷。
或者，在流程A中，式I化合物(其中X為一鍵或CH2)可自式IV化合物製備。更特定言之，在硫酸銅(II)存在下於諸如二甲基甲醯胺/水之溶劑中使式IV化合物(其中X為一鍵或CH2)與諸如疊氮基三甲基矽烷之疊氮化物來源反應，得到式I化合物(其中X為一鍵或CH2)。式IV化合物(其中X為一鍵或CH2)可藉由在諸如四氫呋喃之溶劑中使式III化合物與3-丁炔-1-醇及諸如氫化鈉之鹼反應來製備。式III化合物(其中X為一鍵或CH2)可藉由在諸如二氯甲烷之溶劑中使式II化合物與2-氯乙醯氯及諸如三乙胺之鹼反應來製備。
如流程B中所示，式II化合物(其中X為一鍵或CH2)可自式V化合物(其中Pg為胺保護基)製備。更特定言之，在諸如四氫呋喃之溶劑中使式V化合物(其中X為一鍵或CH2；且Pg為第三丁氧基羰基)與諸如鹽酸之酸反應，得到式II化合物(其中X為一鍵或CH2)。
流程B
在流程C中，式V化合物(其中X為CH2；且Pg為第三丁氧基羰基)可自式VI化合物製備。更特定言之，使N-第三丁氧基羰基-4-哌啶酮依序與(CH3)2NCH(OCH3)2在諸如二甲基甲醯胺之溶劑中反應，隨後與式VI化合物、諸如碳酸鉀之鹼在諸如乙醇之共溶劑中反應，得到式V化合物(其中X為CH2，且Pg為第三丁氧基羰基)。式VI化合物可藉由在諸如乙腈之溶劑中使2,3-二氫-1H-茚-2-胺鹽酸鹽及1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽與諸如二異丙基乙胺之鹼反應來製備。
在流程D中，式V化合物(其中X為一鍵，且Pg為諸如第三丁氧基羰基之胺保護基)可藉由在諸如N-乙基-N-異丙基丙-2-胺存在下於如1-甲基吡咯啶-2-酮之溶劑中使2-氯-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯與2,3-二氫-1H-茚-2-胺反應來製備。
一般而言，式VII化合物可自3-丁炔-1-醇藉由採用多個合成步驟來製備。更特定言之，在流程E中，在諸如二氯甲烷之溶劑中使式VIII化合物(其中Pg1為諸如第三丁基之羧酸保護基)與諸如三氟乙酸之酸反應，得到式VII化合物。式VIII化合物可藉由在碘化銅(I)存在下於諸如二甲基甲醯胺/甲醇之溶劑中使式IX化合物(其中Pg1為第三丁基)與諸如疊氮基三甲基矽烷之疊氮化物來源反應來製備。式IX化合物(其中Pg1為第三丁基)可藉由使3-丁炔-1-醇與YCH2C(O)OPg1(其中Y為諸如鹵素溴之適合離去基，且Pg1為第三丁基)反應來製備。該反應宜在諸如硫酸四丁基銨之相轉移催化劑及諸如氫氧化鈉水溶液之鹼存在下於諸如二氯甲烷之溶劑中進行。
或者，在流程E中，式VII化合物可藉由在諸如氯化鈀(II)之過渡金屬催化劑存在下於諸如異丙醇/水之溶劑中使式X化合物與氫氣反應來製備。式X化合物可藉由使式XI化合物與YCH2C(O)OPg1(其中Y為諸如鹵素溴之適合離去基，且Pg1為第三丁基)反應來製備。該反應宜在諸如氯化四丁基銨之相轉移催化劑及諸如氫氧化鈉水溶液之鹼存在下於諸如二氯甲烷之溶劑中進行。用諸如鹽酸之酸處理所得第三丁酯中間物，得到式X化合物。式XI化合物可藉由在諸如四氫呋喃之溶劑中使式XII化合物與氯化異丙基鎂及苯甲基疊氮化物反應來製備。式XII化合物可藉由在諸如對甲苯磺酸之有機酸存在下使3-丁炔-1-醇與二氫哌喃反應來製備。該反應通常在諸如二氯甲烷之溶劑中進行。
製備1 合成1-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)胍鹽酸鹽.
在62℃下，將2,3-二氫-1H-茚-2-胺鹽酸鹽(197g；1.08當量；1.16莫耳)、1H-吡唑-1-甲脒鹽酸鹽(158g；1.00當量；1.08莫耳)及二異丙基乙胺(400g；2.87當量；3.09莫耳；539.74mL)於乙腈(2L)中之溶液攪拌2小時，在此期間白色固體沈澱。冷卻混合物至25℃，隨後過濾且用300mL乙腈及300mL甲基第三丁基醚洗滌。在25℃下於空氣中乾燥產物1小時，得到呈白色固體狀之標題化合物(200g，87%)：MS(m/z)：176(M+1)。
製備2 合成2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯.
在109℃下於N2下，將1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(224g；2.15當量；1.88莫耳；250.98mL)及N-第三丁氧基羰基-4-哌啶酮(250g；1.44當量；1.25莫耳)於二甲基甲醯胺(1.2L)中之溶液攪拌4小時。冷卻混合物至25℃，隨後添加乙醇(700mL；12.02莫耳；553.91g)。在25℃下向混合物中一次性添加1-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)胍鹽酸鹽(185g；1.00當量；873.90毫莫耳)及碳酸鉀(475g；3.44莫耳)，形成白色懸浮液。在80-90℃下攪拌混合物24小時，隨後冷卻至25℃，且將混合物傾倒至5L冰/水中，得到黃色懸浮液。用乙酸乙酯(3×3L)萃取，且用10%氯化鋰溶液(3L)、水(3L)及飽和氯化鈉溶液(3L)洗滌有機層。經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到約300ml紅色溶液。經矽膠栓塞(10cm高度，5cm直徑)過濾溶液，隨後濃縮至乾燥，得到呈紅色凝膠狀之標題化合物(320g，100%)：MS(m/z)：367(M+1)。
製備3 合成N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺.
向2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯(319g；1.00當量；870.48毫莫耳)於四氫呋喃(1.5L)中之溶液中逐份添加鹽酸(900mL；5M，於水中；5.17當量；4.50莫耳；1.08kg)。一旦添加完成，即在50℃下攪拌溶液1小時。冷卻混合物至25℃，隨後添加3L甲基第三丁基醚及1L水。使溶液在20℃下靜置16小時。分離各相，且用二氯甲烷(2L)萃取水相。棄去有機萃取物，且使用4M氫氧化鈉調節水相至pH 10。用乙酸乙酯(3×3L)萃取，且用 飽和氯化鈉(2L)洗滌經合併之有機萃取物。經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到紅色凝膠。在50℃下將該物質再溶解於乙酸乙酯(300mL)及石油醚(200mL)中，且使其經24小時沈澱。過濾且乾燥，得到標題化合物(85g，37%)。MS(m/z)：267(M+1)。
製備4 合成2-丁-3-炔氧基四氫哌喃.
在25℃下，將3-丁炔-1-醇(50g，1當量，713mmol)、單水合對甲苯磺酸(1.36g，0.01當量，7.13mmol)及二氫哌喃(71.7mL，1.10當量，785mmol)於二氯甲烷(500mL)中之溶液攪拌24小時。隨後緩慢添加飽和碳酸氫鈉溶液(500mL)，且用二氯甲烷(500mL)萃取混合物。經無水硫酸鈉乾燥有機萃取物，過濾且濃縮，得到粗產物，藉由真空蒸餾純化該粗產物，得到標題化合物(90g，82%)：沸點：65℃，1mm Hg。
製備5 合成2-(3-苯甲基三唑-4-基)乙醇.
在15℃下，向2-丁-3-炔氧基四氫哌喃(113.50g，736.00mmol)於四氫呋喃(1.4L)中之溶液中逐滴添加氯化異丙基鎂(368mL，736.00mmol)，同時維持內部溫度低於20℃。移除冰-水浴，使溫度升溫至25℃，且在彼溫度下保持20分鐘，確保氣體完全析出。加熱反應混合物至30-35℃，且向混合物中經2小時逐滴添加苯甲基疊氮化物(70g，525.71mmol)，同時確保反應混合物中之苯甲基疊氮化物濃度不會上 升至明顯程度(藉由諸如LCMS之方法)。攪拌4小時後，冷卻反應混合物至25℃，且經由逐滴添加飽和氯化銨水溶液(400mL)淬滅。攪拌16小時後，用甲基第三丁基醚(200mL)稀釋，分離各層，且將有機層與3M鹽酸(600mL)一起攪拌4小時。當藉由諸如LCMS之方法，達成大於98%之轉化率時，經由逐滴添加6M氫氧化鈉(約350mL)升高反應混合物之pH值至pH>10。用甲基第三丁基醚(3×300mL)及二氯甲烷(3×300mL)萃取所得混合物。在真空中濃縮經合併之有機層，且藉由矽膠管柱層析在用乙酸乙酯溶離下純化所得粗產物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(53g，50%)。MS(m/z)：204.1(M+1)。
製備6 合成[2-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)乙氧基]乙酸.
在0℃下，向2-(3-苯甲基三唑-4-基)乙醇(50g，246.01mmol)及氯化四正丁基銨(6.84g，24.60mmol)於二氯甲烷(400mL)中之混合物中饋入400mL 40% w/w氫氧化鈉(5.73mol)。添加溴-1,1-二甲基乙酸乙酯(62.38g，319.81mmol)，且攪拌16小時，同時使溫度上升至25℃。分離各層，且用二氯甲烷(2×100mL)萃取水相。在真空中濃縮經合併之有機層，得到75g呈黃色油狀之中間物2-(2-(3-苯甲基-3H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基)乙酸第三丁酯。用450mL甲苯及150mL 6M鹽酸稀釋油狀物，且在25℃下攪拌16小時。分離各層，且調節水層之pH值至約pH 2.0。在用水(2×200mL)沖洗下過濾所得白色固體，得到呈白色固體狀之標題化合物(58g，90%)。MS(m/z)：262.1(M+1)。
製備7 合成2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸.
向容納含[2-(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)乙氧基]乙酸(10.1g；1.00當量；38.66毫莫耳)及氯化鈀(II)(3g；16.92毫莫耳；3.00g)之異丙醇(300mL)及水(60mL)的燒瓶加壓1大氣壓氫氣(氣體)。使燒瓶在氫氣氛圍下維持3小時，隨後經CeliteTM過濾且濃縮。添加甲苯(2×50mL)且濃縮，得到標題化合物(7.96g，100%)。1H NMR(d6-DMSO)：2.86(t,J=7Hz,2 H),3.65(t,J=7Hz,2 H),3.98(s,2 H),7,77(s,1 H),13.4-13.6(br s,2 H)。
實例1 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮.
在25℃下，向2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸(2.7g，15.8mmol)、1-羥基苯并三唑(3.20g，23.7mmol)及(二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(5.44g，28.4mmol)於二氯甲烷(40mL)中之混合物中添加N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(4.2g，15.8mmol)。向反應混合物中添加三乙胺(4.40mL，31.6mmol)，且攪拌16小時。用水(2×50mL)洗滌且濃縮有機層。藉由矽膠管柱層析在用乙酸乙酯/甲醇溶離下純化，得到呈固體狀之標題化合物(4.0g，60%)。MS(m/z)：420(M+H)。
製備8 合成2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮.
在23℃下，向含N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(11.0g，41.3mmol)及三乙胺(7.48mL，53.7mmol)之二氯甲烷(200mL)中經五分鐘逐滴添加2-氯乙醯氯(3.61mL，5.13g，45.4mmol)。攪拌30分鐘，且將反應混合物傾倒至1：1 50%飽和碳酸氫鈉水溶液：二氯甲烷(75mL)中。使有機層與水層分離，且用二氯甲烷(2×25mL)進一步萃取水層。合併有機萃取物且經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。將殘餘物溶解於氯仿(10mL)中，且經由矽膠管柱層析(梯度溶離：含25%乙酸乙酯之己烷至100%乙酸乙酯)純化，得到標題化合物(9.75g，69%)。1H NMR(CDCl3,*=次要醯胺旋轉異構體)δ 2.77*(t,2H),2.84(dd,2H),2.87(t,2H),3.35(dd,2H),3.76(t,2H),3.85*(t,2H),4.12(s,2H),4.52*(s,2H),4.57(s,2H),4.72-4.82(m,1H),5.48-5.64(m,1H),7.12-7.21(m,4H),8.03-8.10(m,1H)。
製備9 合成2-(丁-3-炔-1-基氧基)-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮.
在23℃下，向含氫化鈉(60重量%，於礦物油中，1.58g，39.6mmol)之四氫呋喃(50mL)中逐滴添加3-丁炔-1-醇(7.93g，8.59mL，113.2mmol)，隨後在23℃下攪拌20分鐘。在23℃下將此溶液添加至含2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮(9.70g，28.3mmol)之四氫呋喃(150mL)中，且攪拌一 小時。將反應混合物傾倒至50%飽和碳酸氫鈉水溶液中。分離有機層，且用乙醚(×2)及乙酸乙酯(×2)進一步萃取水層。合併有機萃取物且用鹽水洗滌，隨後經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(梯度溶離：含20%乙酸乙酯之己烷至100%乙酸乙酯)純化所得粗產物，得到標題化合物(8.16g，77%)。MS(m/z)：377(M+1)。
實例1a 替代性合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮.
將2-(丁-3-炔-1-基氧基)-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮(8.15g，21.7mmol)及L-抗壞血酸鈉鹽(8.58g，43.3mmol)於二甲基甲醯胺(60mL)及水(60mL)中之溶液用氮氣充氣10分鐘，隨後抽真空且用氮氣回充3次。添加五水合硫酸銅(II)(1.08g，4.33mmol)且加熱至90℃，隨後逐滴添加疊氮基三甲基矽烷(23.1mL，20.0g，173mmol)且攪拌一小時。冷卻反應混合物至23℃，且傾倒至水(50mL)中。用乙酸乙酯(4×50mL)萃取此混合物。合併有機萃取物且用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由矽膠管柱層析(梯度溶離：含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化所得粗產物，得到標題化合物(3.60g，40%)。MS(m/z)：420(M+1)。
製備10 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯.
向2-氯-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯(220g，860.37mmol)及2,3-二氫-1H-茚-2-胺(137.7g，1.03mol)於1-甲基吡咯啶-2-酮(3.6L)中之15℃溶液中饋入450mL(2.58mol)N-乙基-N-異丙基丙-2-胺。加熱所得混合物至80℃，維持16小時，隨後冷卻至30℃，且在25℃下將所得混合物轉移至5L水中。過濾所得固體，且用水(2×300mL)沖洗濾餅。在15℃下使固體於乙酸乙酯(350mL)中再漿化45分鐘。在用15℃乙酸乙酯(2×250mL)沖洗下過濾漿液，且乾燥，得到呈灰白色固體狀之標題化合物(226g，75%)。1H NMR(d6-DMSO)1.45(s,9 H),2.87(dd,J=7.2,15.8Hz,2 H),3.24(dd,J=7.2,15.8Hz,2 H),4.36(d,10.4Hz,2 H),4.44(d,J=12.8Hz,2 H),4.60(m,1 H),7.14(m,2 H),7.20(m,2 H),7.55(d,J=6.8Hz,1 H),8.27(d,J=7.2Hz,1 H)。
製備11 合成N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物.
在17℃下，向2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸第三丁酯(226g，641.25mmol)於四氫呋喃(2.0L)中之溶液中饋入670mL 5M鹽酸(3.35mol)，在添加期間維持內部溫度低於26℃。加熱所得溶液至50℃，維持16小時，冷卻至25℃，且用500mL水及500mL第三丁基甲基醚稀釋。分離所得層，且用第三丁 基甲基醚(3×1L)萃取。濃縮水相縮減至約200mL之反應體積，且過濾所得漿液。用第三丁基甲基醚(2×200mL)沖洗濾餅且乾燥，得到呈淺棕色固體狀之標題產物(177g，80%)。MS(m/z)：253.2(M-2HCl-H2O+1)。
製備12 合成2-丁-3-炔氧基乙酸第三丁酯.
在0℃下攪拌丁-3-炔-1-醇(6.00g；85.60mmol)、硫酸四丁基銨(2.07g；8.54mmol)及氫氧化鈉(40%wt/wt；150mL)於二氯甲烷(150mL)中之混合物。逐滴添加溴乙酸第三丁酯(19.34mL；128.40mmol)，且在室溫下攪拌混合物2.5小時。用二氯甲烷(200mL)及水(100mL)稀釋反應混合物，分離各層，且用二氯甲烷(2×100mL)進一步萃取水層。用鹽水(100mL)洗滌經合併之有機層，經無水硫酸鈉乾燥，且濃縮，得到呈棕色油狀之粗標題化合物(11.93g)。藉由矽膠管柱層析在用己烷：乙酸乙酯(0%至10%混合物)溶離下純化油狀物，得到呈無色油狀之標題化合物(11.35g；72%)。1H NMR(CDCl3)δ 1.48(s,9H),2.00(m,1H),2.52(m,2H),3.67(m,2H),4.01(bs,2H)。
製備13 合成2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸第三丁酯.
在0℃下攪拌含2-丁-3-炔氧基乙酸第三丁酯(11.34g；61.55mmol)及碘化銅(I)(584mg；3.07mmol)之二甲基甲醯胺(56.70mL)與甲醇(11.34mL)之混合物。逐滴添加疊氮基(三甲基)矽烷(12.33mL；86.47mmol)，且在90℃下加熱混合物18小時。
在第二批次中，在0℃下攪拌含2-丁-3-炔氧基乙酸第三丁酯(4.38g；23.77mmol)及碘化銅(I)(226mg；1.19mmol)之二甲基甲醯胺(22mL)與甲醇(6mL)之混合物。逐滴添加疊氮基(三甲基)矽烷(4.8mL；33.66mmol)，且在90℃下加熱混合物18小時。
冷卻至室溫後，合併兩個批次之粗產物，且濃縮混合物，得到微綠色殘餘物。藉由在用二氯甲烷：乙酸乙酯(75%至100%混合物)溶離下經二氧化矽栓塞過濾來純化粗產物，得到呈無色油狀之標題化合物(14.15g，73%)。MS(m/z)：228.15(M+1)。
製備14 合成2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸2,2,2-三氟乙酸.
在室溫下，將2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸第三丁酯(14.15g；62.26mmol)及三氟乙酸(70.75mL，935.69mmol)於二氯甲烷(70.75mL)中之混合物攪拌2小時。在減壓下濃縮反應混合物，得到呈棕色固體狀之含有額外三氟乙酸之標題化合物(20.22g，>100%)。MS(m/z)：172.05(M+1)。
實例2 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮.
在0℃下攪拌2-[2-(1H-三唑-5-基)乙氧基]乙酸2,2,2-三氟乙酸(20.22g；70.90mmol)、N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(27.99g；81.54mmol)及三乙胺(98.83mL；709.03mmol)於二甲基甲醯胺(404.40mL)中之混合物。經30分鐘添加1-丙烷膦酸環酐(50%於DMF中之溶液；51.89mL；81.54mmol)，且在室溫下攪拌混合物18小時。
在減壓下濃縮反應混合物，得到殘餘物。添加水(200mL)，且用乙酸乙酯(4×250mL)及二氯甲烷(4×250mL)萃取混合物。用飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100mL)及鹽水(100mL)洗滌經合併之有機層，隨後經無水硫酸鈉乾燥。過濾混合物，且在減壓下濃縮溶液，得到紅色固體(25.70g)，在室溫下使其於乙酸乙酯/甲醇(9：1混合物；200mL)中漿化2小時。過濾所得固體，且用冷乙酸乙酯(50mL)洗滌，得到固體(約18.2g)，在回流下使其於乙酸乙酯(200mL)中再漿化1小時。在冷卻至室溫時，攪拌混合物1小時，且過濾所得淺粉色固體。
使淺粉色固體於水/甲醇(1：1混合物；200mL)中漿化，且在50℃下加熱混合物30分鐘。添加氫氧化銨溶液(32%；50mL)，且在50℃下繼續加熱混合物30分鐘。冷卻至室溫後，再添加氫氧化銨溶液(32%；50mL)，且在室溫下繼續攪拌1小時。過濾所得淺灰色固體，乾燥且使其於乙酸乙酯(200mL)中再漿化1小時，得到淺灰色固體，將其過濾，用乙酸乙酯(25mL)洗滌且乾燥，得到呈灰色固體狀之標題化合物(12.42g；43%)。MS(m/z)：406(M+1)。
製備15 合成2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮.
在23℃下，將N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(14.4g，41.9mmol)及三乙胺(14.3g，19.7mL，141.4mmol)於二氯甲烷(200mL)中之懸浮液攪拌10分鐘，隨後冷卻至-30℃。經兩分鐘添加2-氯乙醯氯(5.49g，3.86mL，48.6mmol)，且經10分鐘升溫至23℃。添加甲醇(5mL)，且在真空中移除溶劑。使粗反應混合物於甲醇(30mL)中漿化，添加50g矽膠，且在真空中移除溶劑。將所得殘餘物加載至加載管柱上，且經由矽膠管柱層析(梯度溶離：含50%乙酸乙酯之己烷至乙酸乙酯至含10%甲醇之乙酸乙酯)純化，得到標題化合物(11.5g，84%)。MS(m/z)：329(M+1)。
製備16 合成2-(丁-3-炔-1-基氧基)-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮.
在0℃下，向含氫化鈉(60重量%，於礦物油中，2.06g，51.4mmol)之四氫呋喃(86mL)中添加3-丁炔-1-醇(4.64g，5.03mL，64.3mmol)，隨後在23℃下攪拌15分鐘。在0℃下將此溶液添加至含2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮(8.45g，25.7mmol)之四氫呋喃(86mL)中，且攪拌五分鐘。將反應混合物傾倒至50%飽和碳酸氫鈉水溶液中。分離有機層，且用乙醚及乙酸乙酯(各2×50mL)進一步萃取水層。合併有機萃取物且用鹽水洗滌，隨後經無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。合併粗產物與來自第二反 應(採用2-氯-1-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮(3.0g，9.1mmol)在相同條件及化學計量下進行反應)之粗產物，且藉由矽膠管柱層析(梯度溶離：含25%乙酸乙酯之己烷至100%乙酸乙酯)純化，得到標題化合物(2.90g，23%)。MS(m/z)：363(M+1)。
實例2a 替代性合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮.
將二甲基甲醯胺(27mL)及水(27mL)添加至含有2-(丁-3-炔-1-基氧基)-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮(2.90g，8.00mmol)之燒瓶中。添加五水合硫酸銅(II)(400mg，1.60mmol)及L-抗壞血酸鈉鹽(3.17g，16.0mmol)。將燒瓶抽真空且用氮氣(×2)回充，隨後添加疊氮基三甲基矽烷(7.37g，8.53mL，64.0mmol)，且加熱反應物至90℃，維持70分鐘。冷卻反應混合物至23℃，且在真空中移除所有溶劑。使殘餘物懸浮於甲醇/二氯甲烷中，隨後添加矽膠，且在真空中移除溶劑。將此物質加載至加載管柱上，且經由矽膠管柱層析(梯度溶離：含0%至9%甲醇之乙酸乙酯)純化，得到標題化合物(980mg，30%)。MS(m/z)：406(M+1)。
製備17 合成6-亞胺基-6-甲氧基-己酸甲酯.
流程F，步驟A. 使氯化氫(氣體)鼓泡通過5-氰基-戊酸甲酯(3.0mL；1.00當量；22.02毫莫耳)於甲醇(5mL)及乙醚(10mL)中之0℃溶液，持續1小時。使溶液升溫至室溫，隨後添加50mL乙醚，劇烈攪拌15分鐘，隨後過濾且收集所得沈澱物。用乙醚洗滌固體，得到6-亞胺基-6-甲氧基-己酸甲酯(3.82g；83%)：1H NMR(DMSO)δ 1.47-1.62(m,4H),2.31(t,2H),2.59(t,2H),3.56(s,3H),4.03(s,3H)。
製備18 合成5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸甲酯.
流程F，步驟B. 將甲醇(1mL)及三乙胺(0.36mL；1.0當量；2.58毫莫耳)添加至含有6-亞胺基-6-甲氧基-己酸甲酯(0.542g；1.00當量；2.58毫莫耳)之小瓶中，繼而添加甲醯肼(0.155g；1.0當量；2.58毫莫耳)於甲醇(3mL)中之溶液。在室溫下攪拌18小時，隨後加熱至70℃，維持3小時。濃縮混合物，隨後用乙酸乙酯(30mL)稀釋且過濾。濃縮濾液，得到呈無色油狀之5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸甲酯 (0.498g；105%)：MS(m/z)：184(M+1)。
製備18a 合成5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸.
流程F，步驟C. 將甲醇(3mL)、四氫呋喃(3mL)及水(2mL)添加至含有5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸甲酯(0.5g；1.0當量；2.73毫莫耳)之燒瓶中。一次性添加氫氧化鋰(0.261g；4.0當量；10.92毫莫耳)，且在室溫下攪拌90分鐘。冷卻溶液至0℃，且緩慢添加5N氯化氫(2.18mL；4.0當量；10.92毫莫耳)。濃縮混合物，隨後使殘餘物與甲苯(4×10mL)共沸。添加二氯甲烷(30mL)，繼而添加硫酸鎂。過濾，且用100mL含10%乙醇之二氯甲烷沖洗濾餅。濃縮得到呈醇加合物形式之5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸(1.6g；>100%)：MS(m/z)：170(M+1)。
實例3 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊-1-酮.
流程F，步驟D. 向含有5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊酸(0.40g；1.0當量；0.71毫莫耳)之溶液中添加N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.189g；1.0當量；0.71毫莫耳)，繼而添加二甲基甲醯胺(2mL)。在室溫下攪拌所得溶液直至均質。添加N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.017g；0.2當量；0.141毫莫耳)，且冷卻溶液至0℃。一次性添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.204g；1.5當量； 1.06毫莫耳)。使混合物升溫至室溫，且攪拌30分鐘。添加二氯甲烷(2mL)，加熱至40℃，且攪拌24小時。依序用250mL水及50mL乙酸乙酯稀釋。用乙酸乙酯(5×25mL)萃取混合物。用鹽水(10mL)洗滌經合併之有機萃取物。經硫酸鎂乾燥有機物，過濾，濃縮，且經由管柱層析(己烷至含12%甲醇之乙酸乙酯)純化，得到呈白色泡沫狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(4H-1,2,4-三唑-3-基)戊-1-酮(0.08g；27%產率)：MS(m/z)：418(M+1)。
製備19 合成5-咪唑-1-基戊酸甲酯.
流程G，步驟A. 向1H-咪唑(0.30g；1.0當量；4.41毫莫耳)及5-溴戊酸甲酯(1.03g；1.2當量；5.29毫莫耳)於二甲基甲醯胺(20mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.212g；1.2當量；5.29毫莫耳)。攪拌混合物18小時，隨後添加水(15mL)。用二氯甲烷萃取混合物且用鹽水(20mL)洗滌。經硫酸鈉乾燥有機相，過濾且濃縮，得到粗產物，藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化該粗產物，得到呈黃色油狀之5-咪唑-1-基戊酸甲酯(0.655g；82%)：MS(m/z)：183(M+1)。
製備20 合成5-咪唑-1-基戊酸.
流程G，步驟B. 將5-咪唑-1-基戊酸甲酯(0.60g；1.0當量；3.29毫莫耳)及氫氧化鋰(0.553g；4當量；13.17毫莫耳)於四氫呋喃(20mL)及水(15mL)中之溶液攪拌18小時。添加3mL 5N鹽酸，隨後濃縮混合物。藉由管柱層析(含0%至15%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈黃色油狀之5-咪唑-1-基戊酸(0.72g；19%)：MS(m/z)：169(M+1)。
實例4 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(1H-咪唑-1-基)戊-1-酮.
流程G，步驟C. 向N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.20g；1.0當量；0.75毫莫耳)、5-咪唑-1-基戊酸(0.152g；1.2當量；0.90毫莫耳)及1-羥基苯并三唑(0.203g；2.0當量；1.50毫莫耳)於二氯甲烷(20mL)及三乙胺(0.52mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.288g；2.0當量；1.50毫莫耳)。攪拌混合物18小時，隨後濃縮，添加水(10mL)，且用乙酸乙酯(3×20mL)萃取。經無水硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈無色油狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(1H-咪唑-1-基)戊-1-酮(0.14g；45%)：MS(m/z)：417 (M+1)。
製備21 合成1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]丙-2-烯-1-酮.
流程H，步驟A. 向N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.781g；1.0當量；2.93毫莫耳)於二氯甲烷(29mL)中之0℃溶液中依序逐滴添加三乙胺(0.82mL；2.0當量；5.86毫莫耳)、2-丙烯醯氯(0.24mL；1.0當量；2.93毫莫耳)。在環境溫度下攪拌溶液16小時，隨後用二氯甲烷稀釋，用鹽水洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且濃縮成橙色油狀物。藉由管柱層析純化粗產物，得到1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]丙-2-烯-1-酮(0.66g；70%)：MS(m/z)：321(M+1)。
製備22 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙-1-酮.
流程H，步驟B. 向1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]丙-2-烯-1-酮(0.5g；1.0當量；1.56毫莫耳)及2-丙炔-1-醇(5.0mL；55當量；85.86毫莫耳)之溶液中添加1,8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(0.035mL；0.15當量；0.23毫莫耳)。在環境溫度下攪拌反應物16小時，隨後加熱至50℃，維持36小時。將溶液濃縮成棕色油狀物，隨後藉由管柱層析(含20%至100%乙酸乙酯之二氯甲烷)純化粗產物，得到所需1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙-1-酮(0.28g；48%)：MS(m/z)：377(M+1)。
實例5 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基甲氧基)丙-1-酮.
流程H，步驟C. 向1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(丙-2-炔-1-基氧基)丙-1-酮(0.277g；1.0當量；0.74毫莫耳)於二甲基甲醯胺(4mL)及水(4mL)中之溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.037g；0.2當量；0.147毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.291g；2.0當量；1.47毫莫耳)。將系統抽真空兩次，且用氮氣回充。添加疊氮基三甲基矽烷(0.784mL；8.0當量；5.89毫莫耳)，且加熱異質混合物至90℃，維持1小時。用水(250mL)及乙酸乙酯(50mL)稀釋反應混合物，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用鹽水(30mL)洗滌 合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮成黃色/橙色油狀物。藉由管柱層析(乙酸乙酯至含10%甲醇之乙酸乙酯)純化粗產物，得到所需1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-(1H-1,2,3-三唑-4-基甲氧基)丙-1-酮(0.135g；44%)：MS(m/z)：420(M+1)。
製備23 合成5-(1H-咪唑-5-基)戊-4-炔酸苯甲酯.
流程I，步驟A. 向4-碘-1H-咪唑(0.388g；1.0當量；2.00毫莫耳)、戊-4-炔酸苯甲酯(0.376g；1.0當量；2.00毫莫耳)及三乙胺(0.84mL；3當量；6.0毫莫耳)於二甲基甲醯胺(8mL)中之經脫氧溶液中添加氯化雙(三苯膦)鈀(II)(0.14g；0.1當量；0.20毫莫耳)及碘化銅(I)(0.039mg；0.1當量；0.20毫莫耳)。加熱混合物至75℃，維持16小時，隨後用水(30mL)稀釋混合物且用乙酸乙酯萃取3次。用鹽水洗滌 經合併之有機萃取物，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮，得到粗產物。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈無色油狀之5-(1H-咪唑-5-基)戊-4-炔酸苯甲酯(0.35g；69%)：MS(m/z)：255(M+1)。
製備24 合成5-(5-苯甲氧基-5-側氧基-戊-1-炔基)咪唑-1-甲酸第三丁酯.
流程I，步驟B. 將5-(1H-咪唑-5-基)戊-4-炔酸苯甲酯(0.19g；1.00當量；0.747毫莫耳)、二碳酸二第三丁酯(0.210g；1.29當量；0.96毫莫耳)、三乙胺(0.21mL、2.0當量、1.49毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(9mg；0.1當量；0.074毫莫耳)於二氯甲烷(10mL)中之溶液攪拌2小時。濃縮溶液，且藉由管柱層析(含25%乙酸乙酯之己烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之5-(5-苯甲氧基-5-側氧基-戊-1-炔基)咪唑-1-甲酸第三丁酯(0.170g；64%)：MS(m/z)：299(M-t-Bu+1)。
製備25 合成5-(3-第三丁氧基羰基咪唑-4-基)戊酸.
流程I，步驟C. 在1大氣壓氫氣下，將5-(5-苯甲氧基-5-側氧基-戊-1-炔基)咪唑-1-甲酸第三丁酯(0.17g；1.0當量；0.48毫莫耳)及鈀(10%，於碳上；0.030g；0.014毫莫耳)於甲醇(13mL)中之60℃溶液劇烈攪拌16小時。過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之所需5-(3-第三丁氧 基羰基咪唑-4-基)戊酸(0.128g；99%)：MS(m/z)：213(M-t-Bu+1)。
製備26 合成5-[5-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-5-側氧基-戊基]咪唑-1-甲酸第三丁酯.
流程I，步驟D. 向5-(3-第三丁氧基羰基咪唑-4-基)戊酸(0.084g；1.0當量；0.31毫莫耳)、N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.064g；0.77當量；0.24毫莫耳)、1-羥基苯并三唑(0.065g；1.5當量；0.48毫莫耳)及三乙胺(0.20mL；4.5當量；1.44毫莫耳)於二氯甲烷(15mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.092g；1.5當量；0.48毫莫耳)。加熱混合物至40℃，維持16小時。濃縮混合物，隨後藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之5-[5-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-5-側氧基-戊基]咪唑-1-甲酸第三丁酯(0.040g；25%)：MS(m/z)：517(M+1)。
實例6 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(1H-咪唑-4-基)戊-1-酮.
流程I，步驟E. 向5-[5-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-5-側氧基-戊基]咪唑-1-甲酸第三丁酯(0.030g； 0.058毫莫耳)於二氯甲烷(8mL)中之溶液中添加三氟乙酸(1.5mL)。在室溫下攪拌反應物2小時。濃縮混合物且添加飽和碳酸氫鈉(10mL)及水(20mL)，隨後用二氯甲烷(3×20mL)萃取。用鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-5-(1H-咪唑-4-基)戊-1-酮(0.020g；83%)：MS(m/z)：417(M+1)。
實例7 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-咪唑-1-基)丙酯.
流程J，步驟A. 向2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(0.22g；1.0當量；0.57毫莫耳)及1H-咪唑(0.082g；2.1當量；1.20毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.050g；2.2當量；1.25毫莫耳)，且攪拌18小時。用二氯甲烷及水稀釋反應物。分離各層，且用二氯甲烷(2×)進一步萃取水層。用硫酸 鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之所需2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-咪唑-1-基)丙酯(0.078g；33%)：MS(m/z)：419(M+1)。
製備27 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-氰基丙酯.
流程K，步驟A. 將2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(0.42g；1.0當量；1.09毫莫耳)及氰化鈉(0.085g；1.6當量；1.73毫莫耳)於二甲基甲醯胺(3mL)中之溶液加熱至100℃，維持2小時。冷卻混合物至環境溫度，用二氯甲烷(20mL)稀釋且用水(25mL)洗滌反應混合物。用二氯甲烷(2×20mL)萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到粗產物。合併 粗產物，且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化，得到呈淺棕色油狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-氰基丙酯且用於下一步驟。MS(m/z)：378(M+1)。
實例8 製備2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯.
流程K，步驟B. 將2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-氰基丙酯(0.24g；1.0當量；0.64毫莫耳)、疊氮基三甲基矽烷(0.85mL；10當量；6.38毫莫耳)及二丁基側氧基錫烷(0.040g；0.25當量；0.16毫莫耳)於甲苯(5mL)中之溶液加熱至100℃，維持24小時，隨後冷卻至環境溫度且濃縮。藉由逆相層析純化粗物質，得到不純產物。將不純產物溶解於50mL二氯甲烷中且用飽和碳酸氫鈉洗滌，且用二氯甲烷進一步萃取水層2次。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到呈黃色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯(0.110g；41%)：MS(m/z)：421(M+1)。
製備28 合成N-丁-3-炔基-N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯.
流程L，步驟A. 向2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮(0.42g；1.0當量；1.23毫莫耳)及三乙胺(0.205mL；1.2當量；1.47毫莫耳)於四氫呋喃(8mL)中之0℃溶液中快速添加丁-3-炔-1-胺(2.71g；8當量；9.80毫莫耳)。15分鐘後，加熱溶液至45℃，維持2小時，隨後濃縮混合物且將殘餘物再溶解於二氯甲烷(3mL)中。添加二碳酸二第三丁酯(0.802g；3當量；3.68毫莫耳)且在環境溫度下攪拌1小時。濃縮混合物，且藉由管柱層析(0%至100%乙酸乙酯/己烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之N-丁-3-炔基- N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.504g；87%)：MS(m/z)：476(M+1)。
製備29 合成{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯.
流程L，步驟B. 向N-丁-3-炔基-N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.252g；1.0當量；0.53毫莫耳)於二甲基甲醯胺(6mL)及水(3mL)(包括作為內標之甲苯(0.05mL))中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.026g；0.2當量；0.106毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.21g；2.0當量；1.06毫莫耳)。加熱反應容器至90℃，隨後緩慢添加疊氮基三甲基矽烷(0.565mL；8當量；4.24毫莫耳)。在90℃下攪拌4小時，隨後用水(100mL)及乙酸乙酯(50mL)稀釋反應混合物，且用3×50mL乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鎂乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化粗產物，得到呈無色泡沫狀之{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.174g；63%)：MS(m/z)：519(M+1)。
實例9 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基}乙酮.
流程L，步驟C. 向{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.165g；1.0當量；0.318毫莫耳)於二氯甲烷(2mL)及甲醇(1mL)中之0℃溶液中添加氯化氫(1M，於乙醚中；2.55mL；8當量；2.55毫莫耳)。在0℃下攪拌1小時後，濃縮混合物。將粗產物再溶解於10：1二氯甲烷：甲醇之混合物中，且用飽和碳酸氫鈉洗滌。再用10：1二氯甲烷：甲醇之混合物(4×)萃取水層。經硫酸鎂乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到呈棕色泡沫狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]胺基}乙酮(0.136g；102%)：MS(m/z)：419(M+1)。
製備30 合成2-(2-咪唑-1-基乙氧基)乙酸第三丁酯.
流程M，步驟A. 向1H-咪唑-1-乙醇(2.01g；1.0當量；17.93毫莫 耳)於四氫呋喃(90mL)中之0℃溶液中緩慢添加氫化鈉(0.79g；1.1當量；19.75毫莫耳)。攪拌1小時，隨後在0℃下逐滴添加乙酸溴-1,1-二甲基乙酯(4.03mL；1.49當量；26.76毫莫耳)。使溶液升溫至環境溫度，且攪拌3小時，隨後添加250mL飽和碳酸氫鈉水溶液。用二氯甲烷(3×150mL)萃取混合物。用鹽水(100mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到粗產物。藉由管柱層析(含0%至20%甲醇之二氯甲烷)純化此殘餘物，得到呈黏性黃棕色油狀之2-(2-咪唑-1-基乙氧基)乙酸第三丁酯(0.85g；21%)：MS(m/z)：227(M+1)。
實例10 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基]乙酮.
流程M，步驟B. 向2-(2-咪唑-1-基乙氧基)乙酸第三丁酯(0.375g；1.0當量；1.66毫莫耳)於二氯甲烷(10mL)中之溶液中逐滴添加三氟乙酸(2mL)。在室溫下攪拌4小時，隨後濃縮混合物。將剩餘殘餘物再溶解於二甲基甲醯胺(5mL)中，且依序添加二異丙基乙胺(1.45mL；5當量；8.31毫莫耳)、N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.44g；1.0當量；1.65毫莫耳)。添加六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基(0.69g；1.1當量；1.81毫莫耳)，且在室溫下攪拌16小時。將反應混合物傾倒至飽和碳酸氫鈉水溶液(200mL)中，且用二氯甲烷(2×200mL)萃取。用飽和碳酸氫鈉水溶液(100mL)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到粗產物。藉由管柱層析(含0%至20%甲醇之二氯甲烷)純化此殘餘物，得 到呈淺棕色固體狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-咪唑-1-基)乙氧基]乙酮(0.152g；22%)：MS(m/z)：419(M+1)。
製備31 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸戊-4-炔-1-基酯.
流程N，步驟A及B. 向4-戊炔-1-醇(0.50mL；5.39毫莫耳)於二氯甲烷(18mL)中之-78℃溶液中緩慢逐滴添加1,1'-羰基二咪唑(0.936g；5.66毫莫耳)。使反應物升溫至環境溫度，維持30分鐘，隨後將一半此溶液添加至N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺 (0.581g；1.05當量；2.18毫莫耳)、N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.258g；1.0當量；2.08毫莫耳)及三乙胺(0.58mL；2.0當量；4.15毫莫耳)之溶液中。使所得淡黃色溶液升溫至環境溫度且攪拌16小時，隨後升溫至40℃，再維持24小時。冷卻反應混合物至環境溫度且直接加載至矽膠管柱上。藉由管柱層析(含20%至100%乙酸乙酯之二氯甲烷)純化，得到2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸戊-4-炔-1-基酯(0.76g；88%)：MS(m/z)：377(M+1)。
實例11 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酯.
流程N，步驟C. 向2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸戊-4-炔-1-基酯(0.754g；1.0當量；1.80毫莫耳)於二甲基甲醯胺(15mL)及水(15mL)中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.090g；0.2當量；0.36毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.714g；2.0當量；3.61毫莫耳)。添加疊氮基三甲基矽烷(1.92mL；8當量；14.42毫莫耳)且加熱反應物至90℃，維持3小時。用水(250mL)及乙酸乙酯稀釋反應混合物。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取混合物。用水(3×)及鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮成褐色/橙色油狀物。藉由管柱層析(含0%至5%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙酯(0.26g；35%)：MS(m/z)：420(M+1)。
流程O
製備32 合成6-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-6-側氧基-己腈.
流程O，步驟A. 將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(1.33g；1.15當量；6.94毫莫耳)添加至裝有含N-(2,3-二氫-1h-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(1.96g；1.0當量；6.03毫莫耳)及5-溴戊酸(1.4g；1.25當量；7.50毫莫耳)之二氯甲烷(25mL)的燒瓶中。攪拌所得反應物2小時，隨後直接濃縮混合物。將殘餘物分配於水與二氯甲烷之間，且濃縮有機萃取物。藉由管柱層析(70%至90%乙酸乙酯/己烷)純化粗物質，得到中間物5-溴戊醯胺(0.66g)，將其溶解於二甲基甲醯胺(10mL)中。添加氰化鈉(0.128g；2.48mmol)且加熱所得混合物至100℃，維持3小時，隨後冷卻至環境溫度。將反應混合物分配於乙酸乙酯與水之間，且分離。用乙酸乙酯(2×100mL)萃取水層，且依序用1N鹽酸、鹽水洗滌經合併之有機萃取物。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到粗 產物。藉由管柱層析(含5%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到6-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-6-側氧基-己腈(0.0772g；4%)：MS(m/z)：362(M+1)。
實例12 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-5-(1H-四唑-5-基)戊-1-酮.
流程O，步驟B. 向6-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-6-側氧基-己腈(0.077g；1.0當量；0.213毫莫耳)於甲苯(6mL)中之經攪拌溶液中添加二丁基側氧基錫烷(0.071g；1.33當量；0.29毫莫耳)及疊氮基三甲基矽烷(1.6mL；56當量；12.01毫莫耳)。加熱所得溶液至105℃，維持16小時。冷卻反應混合物至環境溫度且濃縮。將殘餘物溶解於甲醇(5mL)中且將溶液加載至SCX管柱(用甲醇至含7N氨之甲醇溶離)上，得到粗產物，藉由逆相層析純化該粗產物，得到1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-5-(1H-四唑-5-基)戊-1-酮(0.0265g；31%)：MS(m/z)：405(M+1)。
實例13 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-咪唑-1-基)丙酯.
流程P，步驟A. 向2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(0.283g；1.0當量；0.76毫莫耳)及1H-咪唑(0.105g；2.0當量；1.54毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2.4mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.068g；2.25當量；1.70毫莫耳)。攪拌反應混合物16小時，隨後用二氯甲烷稀釋且用水洗滌。用二氯甲烷萃取水層兩次。濃縮經合併之有機萃取物，隨後藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈黃色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-咪唑-1-基)丙酯(0.0922g；30%)：MS(m/z)：405(M+1)。
製備33 合成N-丁-3-炔基-N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯.
流程Q，步驟A. 將丁-3-炔-1-胺(1.24g；8當量；4.48毫莫耳)快速添加至容納含2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]乙酮(0.184g；1.0當量；0.56毫莫耳)及三乙胺(0.094mL；1.2當量；0.67毫莫耳)之四氫呋喃(5mL)的燒瓶中。在環境溫度下攪拌15分鐘，隨後加熱至55℃，維持1小時，且加熱至65℃，維持30分鐘。濃縮混合物，隨後將殘餘物溶解於二氯甲烷(10mL)中。添加二碳酸二第三丁酯(0.8g；6.5當量；3.67毫莫耳)且在室 溫下攪拌30分鐘。將溶液直接加載至矽膠管柱上且經由層析(0%至100%乙酸乙酯/己烷)純化，得到呈無色泡沫狀之N-丁-3-炔基-N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.204g；79%)：MS(m/z)：462(M+1)。
製備34 合成{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基乙基[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯.
流程Q，步驟B. 向N-丁-3-炔基-N-[2-[2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基-乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.204g；1.0當量；0.44毫莫耳)於二甲基甲醯胺(6mL)及水(3mL)(其包括作為內標之甲苯(0.05mL))中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.022g；0.2當量；0.088毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.175g；2.0當量；0.88毫莫耳)。加熱至90℃，隨後在90℃持續攪拌下逐滴添加疊氮基三甲基矽烷(0.47mL；8當量；3.54毫莫耳)。攪拌3小時，隨後用水(100mL)及乙酸乙酯(50mL)稀釋反應混合物。用乙酸乙酯(3×50mL)萃取且用鹽水洗滌經合併之有機萃取物。經硫酸鎂乾燥有機物，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化粗產物，得到呈微黃色泡沫狀之{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基乙基}[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.157g；70%)：MS(m/z)：505(M+1)。
實例14 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基}乙酮.
流程Q，步驟C. 向含有{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-側氧基乙基}[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基甲酸第三丁酯(0.15g；1.0當量；0.297毫莫耳)於二氯甲烷(1mL)中之0℃溶液中緩慢添加三氟乙酸(3mL)。攪拌2小時，隨後升溫至環境溫度且攪拌30分鐘。濃縮混合物且將殘餘物溶解於二氯甲烷(20mL)中。添加飽和碳酸氫鈉(20mL)、鹽水(20mL)及水(50mL)，且用二氯甲烷(6×20mL)萃取。經硫酸鎂乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到呈微黃色泡沫狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-{[2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙基]胺基}乙酮(0.093g；77%)：MS(m/z)：405(M+1)。
製備35 合成2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯.
流程R，步驟A. 向N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(1.0g；1.0當量；3.07毫莫耳)及三乙胺(2.2mL；5.1當量；15.78毫莫耳)於四氫呋喃(21mL)中之混合物中經1小時逐滴添加氯甲酸3-氯丙酯(0.55mL；1.48當量；4.54毫莫耳)於四氫呋喃(21mL)中之溶液。攪拌溶液18小時，隨後用二氯甲烷稀釋且用碳酸氫鈉溶液洗滌。用二氯甲烷(2×)進一步萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到呈棕色固體狀之2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(1.15g；100%)：MS(m/z)：373(M+1)。
製備36 合成2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氰基丙酯.
流程R，步驟B. 向含有2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(1.15g；1.0當量；3.08毫莫耳)於二甲基甲醯胺(10mL)中之溶液中添加氰化鈉(0.230g；1.5當量；4.69毫莫耳)。加熱反應混合物至100℃，維持3小時，隨後冷卻至環境溫度，用二氯甲烷、水及5%氯化鋰溶液稀釋。分離各層，且用二氯甲烷及乙酸乙酯進一步萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮，得到呈棕色固體狀之2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6- 啶-6-甲酸3-氰基丙酯(0.98g；87%)：MS(m/z)：364(M+1)。
實例15 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯.
流程R，步驟C. 向2-(茚滿-2-基胺基)-5,7-二氫吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-氰基丙酯(0.98g；1.0當量；2.70毫莫耳)於甲苯(20.4mL)中之溶液中添加疊氮基三甲基矽烷(3.5mL；9.7當量；26.27毫莫耳)及二丁基側氧基錫烷(0.163g；0.25當量；0.66毫莫耳)。加熱反應混合物至100℃，維持18小時。濃縮溶液，且依序藉由逆相層析、矽膠層析(含0%至15%甲醇之氯仿)純化，得到呈棕色固體狀之所需2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-四唑-5-基)丙酯(0.097g；9%)：MS(m/z)：407(M+1)。
製備37 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-(戊-4-炔-1-基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺.
流程S，步驟A. 向N-戊-4-炔基咪唑-1-甲醯胺(0.265g；1.0當量；1.50毫莫耳)之-78℃溶液中依序添加N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(0.418g；1.05當量；1.57毫莫耳)、N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.185g；1.0當量；1.50毫莫耳)及三乙胺(0.42mL；2.0當量；2.99毫莫耳)。使所得淡黃色溶液升溫至室溫且攪拌18小時。將反應混合物直接加載至二氧化矽前置管柱上且藉由管柱層析(含10%至50%丙酮之己烷)純化，得到呈白色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-(戊-4-炔-1-基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺(0.286g；51%)：MS(m/z)：376(M+1)。
實例16 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺.
流程S，步驟B. 向含有2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-(戊-4-炔-1-基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺(0.275g；1.0當量；0.73毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2.44mL)及水(2.44mL)中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.037g；0.2當量；0.15毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.29g；2.0當量；1.46毫莫耳)。添加疊氮基三甲基矽烷(0.78mL；8當量；5.86毫莫耳)且加熱至90℃，維持1小時。冷卻溶液至環境溫度，用30mL水稀釋反應混合物，且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用水及鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮成黃色油狀物。藉由管柱層析(含0%至80%丙酮之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈白色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲醯胺(0.132g；43%)：MS(m/z)：419(M+1)。
製備38 合成N-戊-4-炔基咪唑-1-甲醯胺.
流程T，步驟A. 向4-戊炔-1-胺(0.258mL；1.0當量；3.10毫莫耳)於二氯甲烷(10mL)中之-78℃溶液中緩慢逐份添加1,1'-羰基二咪唑(0.539mg 1.05當量；3.26毫莫耳)。使反應物升溫至環境溫度且攪拌72小時。將溶液直接用於後續化學過程：MS(m/z)：178(M+1)。
製備39 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-(戊-4-炔-1-基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺.
流程T，步驟B. 向N-戊-4-炔基咪唑-1-甲醯胺(0.275g；1.0當量；1.55毫莫耳)於二氯甲烷(5mL)中之-78℃溶液中依序添加N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(0.266g；0.5當量；0.78毫莫耳)、三乙胺(1.08mL；5當量；7.76毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.029g；0.15當量；0.23毫莫耳)。使淺棕色溶液升溫至環境溫度且攪拌24小時。將反應混合物直接加載至矽膠管柱上且藉由管柱層析(含0%至30%乙酸乙酯之己烷)純化，得到呈白色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-n-(戊-4-炔-1-基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺(0.293g；63%)：MS(m/z)：362(M+1)。
實例17 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺.
流程T，步驟C. 向2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-N-(戊-4-炔-1-基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺(0.354g；1.0當量；0.98毫莫耳)於二甲基甲醯胺(3.26mL)及水(3.26mL)中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.049g；0.2當量；0.20毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.388g；2.0當量；1.96毫莫耳)。添加疊氮基三甲基矽烷(1.04mL；8當量；7.84毫莫耳)且加熱混合物至90℃，維持1小時，冷卻至 環境溫度且攪拌16小時。濃縮溶液至乾燥，且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化所得橙色半固體，得到呈固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲醯胺(0.085g；21%)：MS(m/z)：405(M+1)。
製備40 合成1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-(戊-4-炔基胺基)乙酮.
流程U，步驟A. 向2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮(0.534g；1.0當量；1.56毫莫耳)於四氫呋喃(5.19mL)中之溶液中依序添加三乙胺(0.434mL；2.0當量；3.12毫莫耳)、4-戊炔-1-胺(0.194mL；1.50當量；2.34毫莫耳)。在 55℃下攪拌48小時。直接濃縮溶液，得到1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-(戊-4-炔基胺基)乙酮(0.606g；100%)：MS(m/z)：390(M+1)。
製備41 合成N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-(戊-4-炔-1-基)乙醯胺.
流程U，步驟B. 向1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]-2-(戊-4-炔基胺基)乙酮(0.606g；1.0當量；1.56毫莫耳)於二氯甲烷(5.2mL)中之溶液中依序添加乙酸酐(0.176mL；1.20當量；1.87毫莫耳)、三乙胺(0.325mL；1.5當量；2.33毫莫耳)。用水及二氯甲烷稀釋反應混合物。分離各層且用鹽水洗滌有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮成橙色/棕色油狀物。藉由管柱層析(含0%至2%甲醇之乙酸乙酯)純化粗產物，得到所需N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-(戊-4-炔-1-基)乙醯胺(0.138g；21%)：MS(m/z)：432(M+1)。
實例18 合成N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]乙醯胺.
流程U，步驟C. 向含有N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-(戊-4-炔-1-基)乙 醯胺(0.137g；1.0當量；0.32毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2.12mL)及水(1.06mL)中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.016g；0.2當量；0.063毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.126g；2.0當量；0.64毫莫耳)。添加疊氮基三甲基矽烷(0.34mL；8當量；2.54毫莫耳)且加熱所得溶液至90℃，維持1小時。將反應混合物濃縮成棕色糊狀物且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化粗產物，得到呈灰白色固體狀之N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-N-[3-(1H-1,2,3-三唑-4-基)丙基]乙醯胺(0.036g；25%)：MS(m/z)：475(M+1)。
製備42 合成2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯.
流程V，步驟A. 向N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(1.00g；1.0當量；3.75毫莫耳)及三乙胺(1.10mL；2.1當量；7.88毫莫耳)於四氫呋喃(25mL)中之混合物中經1小時添加氯甲酸3-氯丙酯 (0.55mL；1.2當量；4.51毫莫耳)於四氫呋喃(25mL)中之溶液。攪拌2小時，隨後用二氯甲烷及飽和碳酸氫鈉稀釋且分離各層。用二氯甲烷(2×)進一步萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮至乾燥，得到黃色油狀物。藉由管柱層析(含10%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(1.146g；79%)：MS(m/z)：387(M+1)。
實例19 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(5-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酯.
流程V，步驟B. 向4(5)-甲基咪唑(0.180g；1.6當量；2.19毫莫耳)於四氫呋喃(15mL)中之溶液中添加氫化鈉(0.121g；2.2當量；3.01毫莫耳)。冷卻反應混合物至0℃且攪拌15分鐘，隨後添加2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-甲酸3-氯丙酯(0.530g；1.0當量；1.37毫莫耳)。在環境溫度下攪拌反應物24小時。用二氯甲烷及水稀釋反應混合物，且分離各層。用二氯甲烷(2×)進一步萃取水層。經硫酸鈉乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮至乾燥，得到黃色液體。藉由管柱層析(含0%至5%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到兩種區位異構產物之混合物。使用對掌性層析載體(chiralcel OJ-H，含5%乙腈之甲醇與0.2%異丙胺)進一步純化，得到產物2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(5-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酯(0.055g；12%)。MS(m/z)：433(M+1)。
實例20 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)- 甲酸3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酯.
實質上如實例19中所述來製備。使用對掌性層析載體(chiralcel OJ-H，含5%乙腈之甲醇與0.2%異丙胺)進一步純化，得到產物2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-甲酸3-(4-甲基-1H-咪唑-1-基)丙酯(0.111g；25%)。MS(m/z)：433(M+1)。
製備43 合成3-(1H-咪唑-5-基)丙酸甲酯.
流程W，步驟A. 向3-(1H-咪唑-5-基)丙酸(2.0g；1.0當量；14.27毫莫耳)於甲醇(18mL)中之-78℃溶液中添加亞硫醯氯(0.75mL)。使反應混合物升溫至環境溫度且攪拌30分鐘。向反應混合物中添加飽和碳 酸氫鈉(10mL)且濃縮。使所得殘餘物懸浮於甲醇(10mL)中且過濾，隨後濃縮，得到呈白色固體狀之3-(1H-咪唑-5-基)丙酸甲酯(2.2g；100%)：MS(m/z)：155(M+1)。
製備44 合成3-(1H-咪唑-5-基)丙-1-醇.
流程W，步驟B. 向3-(1H-咪唑-4-基)丙酸甲酯(2.2g；1.0當量；8.52毫莫耳)於四氫呋喃(85mL)中之0℃溶液中經5分鐘逐滴添加氫化鋰鋁(1M，於四氫呋喃中；17mL；2.0當量；17.00毫莫耳)。使反應混合物升溫至環境溫度且攪拌16小時。依序添加水(0.65mL)、15%氫氧化鈉(0.65mL)及水(1.95mL)，隨後攪拌30分鐘。過濾所得固體且用丙酮沖洗。濃縮濾液，得到呈白色固體狀之3-(1H-咪唑-5-基)丙-1-醇(3.0g；61%)。為進一步純化產物，使一部分3-(1H-咪唑-4-基)丙-1-醇(1.5g)懸浮於水(50mL)中且在100℃下攪拌2小時。過濾產物混合物且濃縮濾液，得到呈灰白色固體狀之純3-(1H-咪唑-5-基)丙-1-醇(0.5g)：MS(m/z)：127(M+1)。
實例21 合成2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-咪唑-5-基)丙酯.
流程W，步驟C. 向3-(1H-咪唑-5-基)丙-1-醇(0.50g；1.0當量；2.62毫莫耳)於二甲基甲醯胺(8.5mL)中之溶液中添加1,1'-羰基二咪唑 (0.51g；1.2當量；3.15毫莫耳)且攪拌1小時。向前述溶液中緩慢添加N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(0.94g；1.10當量；2.89毫莫耳)。在環境溫度下攪拌16小時，隨後加熱至60℃，再維持16小時。將反應混合物分配於水與氯仿之間且分離各層。用氯仿(2×)進一步萃取水層。經硫酸鎂乾燥經合併之有機萃取物，過濾且濃縮成黏性液體。藉由管柱層析(含0%至20%甲醇之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈棕色固體狀之2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-甲酸3-(1H-咪唑-5-基)丙酯(0.041g；4%)：MS(m/z)：405(M+1)。
製備45 合成2-(丁-3-炔基胺基)-1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]乙酮.
流程X，步驟A. 向2-氯-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫 吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]乙酮(1.05g；1.0當量；3.06毫莫耳)於四氫呋喃(10.2mL)中之溶液中依序添加三乙胺(0.85mL；2.0當量；6.13毫莫耳)、1-胺基-3-丁炔(0.38mL；1.5當量；4.59毫莫耳)，且加熱至55℃，維持16小時，隨後濃縮且將2-(丁-3-炔基胺基)-1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]乙酮直接用於下一步驟：MS(m/z)：376(M+1)。
製備46 合成N-(丁-3-炔-1-基)-n-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}乙醯胺.
流程X，步驟B. 向2-(丁-3-炔基胺基)-1-[2-(茚滿-2-基胺基)-7,8-二氫-5H-吡啶并[4,3-d]嘧啶-6-基]乙酮(0.303g；1.0當量；0.48毫莫耳)於二氯甲烷(1.61mL)中之溶液中添加乙醯氯(0.041mL；1.2當量；0.58毫莫耳)及三乙胺(0.101mL；1.5當量；0.73毫莫耳)。5分鐘後，用水及二氯甲烷(各20mL)稀釋反應物且分離各層。用鹽水洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮成橙色/棕色油狀物。藉由管柱層析(含0%至80%丙酮之二氯甲烷)純化粗產物，得到N-(丁-3-炔-1-基)-n-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}乙醯胺(0.08g；38%)：MS(m/z)：418(M+1)。
實例22 合成N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]乙醯胺.
流程X，步驟C. 向含有N-(丁-3-炔-1-基)-N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}乙醯胺(0.075g；1.0當量；0.18毫莫耳)於二甲基甲醯胺(1.20mL)及水(0.6mL)中之經脫氧溶液中添加五水合硫酸銅(II)(0.009g；0.2當量；0.036毫莫耳)及L-抗壞血酸鈉鹽(0.071g；2.0當量；0.36毫莫耳)。添加疊氮基三甲基矽烷(0.19mL；8當量；1.44毫莫耳)且加熱至90℃，維持1.5小時。用水稀釋反應混合物且用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用水及鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮成黃色油狀物。藉由管柱層析(含0%至80%丙酮之二氯甲烷)純化粗產物，得到呈黃色泡沫狀之N-{2-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-側氧基乙基}-n-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙基]乙醯胺(0.025g；30%)：MS(m/z)：461(M+1)。
實例23 合成N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙醯胺.
流程Y，步驟A. 向2-(2H-三唑-4-基)乙醯胺(0.056g；1.1當量；0.42毫莫耳)、3-胺基-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]丙-1-酮(0.13g；1.0當量；0.39毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.0094g；0.2當量；0.077毫莫耳)於二氯甲烷(1.28mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.111g；1.5當量；0.58毫莫耳)。在環境溫度下攪拌反應混合物16小時。將溶液直接加載至矽膠管柱上且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化，得到呈白色固體狀之N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-1,2,3-三唑-5-基)乙醯胺(0.098g；57%)：MS(m/z)：447(M+1)。
實例24 製備N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-1H-1,2,3-三唑-4-甲醯胺.
流程Z，步驟A. 向2H-三唑-4-甲酸(0.048g；1.1當量；0.42毫莫耳)、3-胺基-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]丙-1-酮(0.13g；1.0當量；0.39毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.0094g；0.2當量；0.077毫莫耳)於二氯甲烷(1.28mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.111g；1.5當量；0.58毫莫耳)。在環境溫度下攪拌反應物16小時。將混合物直接加載至矽膠管柱上且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體狀之N-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-1H-1,2,3-三唑-4-甲醯胺(0.105g；63%)：MS(m/z)：433(M+1)。
製備47 合成{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}胺基甲酸第三丁酯.
流程AA，步驟A. 將1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(2.69g；1.5當量；14.06毫莫耳)添加至容納含3-(第三丁氧基羰基胺基)丙酸(1.8g；1.0當量；9.37毫莫耳)、N-茚滿-2-基-5,6,7,8-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-2-胺(2.50g；1.0當量；9.37毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.229g；0.2當量；1.87毫莫耳)之二氯甲烷(30mL)的燒瓶中。攪拌混合物2小時，隨後將溶液直接加載至矽膠管柱上且藉由管柱層析(含30%至100%乙酸乙酯之二氯甲烷)純化，得到呈無色泡沫狀之{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}胺基甲酸第三丁酯(3.42g；83%)：MS(m/z)：438(M+1)。
製備48 合成3-胺基-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]丙-1-酮.
流程AA，步驟B. 向{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}胺基甲酸第三丁酯(0.19g；1.0當量；0.44毫莫耳)於二氯甲烷(1mL)中之溶液中添加三氟乙酸(1mL)且攪拌16小時。濃縮混合物，隨後將殘餘物分配於二氯甲烷與1N氫氧化鈉之間。分離各層且用二氯甲烷進一步萃取水層。用鹽水洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到所需3-胺基-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)- 基]丙-1-酮(0.145g；98%)：MS(m/z)：338(M+1)。
實例25 合成H-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-咪唑-1-基)乙醯胺.
流程AA，步驟C. 向2-咪唑-1-基乙酸(0.060g；1.1當量；0.47毫莫耳)、3-胺基-1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]丙-1-酮(0.145g；1.0當量；0.43毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.0105g；0.2當量；0.086毫莫耳)於二氯甲烷(1.43mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.124g；1.5當量；0.65毫莫耳)。攪拌所得溶液16小時。將溶液直接加載至矽膠管柱上且藉由管柱層析(含0%至10%甲醇之二氯甲烷)純化，得到呈白色固體狀之H-{3-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-3-側氧基丙基}-2-(1H-咪唑-1-基)乙醯胺(0.094g；49%)：MS(m/z)：446(M+1)。
製備49 合成1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸乙酯.
流程BB，步驟A. 向苯甲基疊氮化物(4.5mL；1.0當量；35.90毫莫耳)於二甲亞碸(36mL)中之溶液中依序添加丙二酸二乙酯(7.16mL；1.3當量；46.67毫莫耳)、碳酸鉀(19.85g；4當量；143.60毫莫耳)，且在40℃下加熱所得溶液16小時。添加5N鹽酸直至pH=1，隨後過濾所得沈澱物。用水洗滌沈澱物且乾燥，得到呈白色固體狀之1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸酯(5.65g；64%)：MS(m/z)：248(M+1)。
製備50 合成1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸.
流程BB，步驟B. 將1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸酯(1.46g；1.0當量；5.90毫莫耳)及氫氧化鈉(1N；10.00mL；1.7當量；10.00毫莫耳)之90℃溶液攪拌9小時。添加1N鹽酸直至pH值為2，隨後過濾反應物且乾燥濾餅，得到1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(1.15g；89%)：MS(m/z)：220(M+1)。
製備51 合成1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-醇.
流程BB，步驟C. 將1-苯甲基-5-羥基-1H-1,2,3-三唑-4-甲酸(1.25g；1.0當量；5.70毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2mL)中之溶液置放於經預熱至125℃之反應塊中且加熱2分鐘。使反應物冷卻至室溫且將1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-醇立即用於下一步驟：MS(m/z)：176(M+1)。
製備52 合成4-[(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)氧基]丁酸甲酯.
流程BB，步驟D. 向1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-醇(1.0g；1.0當量；5.71毫莫耳)及碳酸鉀(1.59g；2.0當量；11.42毫莫耳)於二甲基甲醯胺(2mL)中之溶液中添加4-溴丁酸甲酯(1.48mL；2.0當量；11.42毫 莫耳)。在50℃下加熱反應物1小時，隨後冷卻至環境溫度且攪拌16小時。用乙酸乙酯及水稀釋反應物。分離各層且用乙酸乙酯進一步萃取水層。用水(3×)洗滌經合併之有機萃取物，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮。藉由管柱層析(含0%至50%乙酸乙酯之二氯甲烷)純化粗產物，得到4-[(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)氧基]丁酸甲酯(0.506g；32%)：MS(m/z)：276(M+1)。
製備53 合成4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸甲酯.
流程BB，步驟E. 向4-[(1-苯甲基-1H-1,2,3-三唑-5-基)氧基]丁酸甲酯(0.50g；1.0當量；1.82毫莫耳)及10%鈀/碳(0.05g；0.025當量；0.047毫莫耳)於乙醇(7mL)中之異質溶液中添加5滴濃鹽酸。抽真空且依序用氮氣(3×)、氫氣(3×)回充，且在50psi氫氣下劇烈攪拌反應混合物16小時。過濾內含物且濃縮濾液，得到4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸甲酯(0.335g；99%)。MS(m/z)：184(M-1)。
製備54 合成4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸.
流程BB，步驟F. 向4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸甲酯(0.215g；1.0當量；1.16毫莫耳)於乙醇(1mL)中之溶液中添加1N氫氧化鈉(2.32mL；2.0當量；2.32毫莫耳)，且加熱混合物至60℃，維持16小時。添 加1N鹽酸(2.32mL；2.0當量；2.32毫莫耳)且濃縮，得到4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸(0.20g；100%)。未經進一步純化即用於下一步驟：MS(m/z)：170(M-1)。
實例26 合成1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(1H-1,2,3-三唑-5-基氧基)丁-1-酮.
流程BB，步驟G. 向4-(2H-三唑-4-基氧基)丁酸(0.1g；1.0當量；0.58毫莫耳)及N-(2,3-二氫-1H-茚-2-基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-2-胺二鹽酸鹽水合物(0.201g；1.0當量；0.58毫莫耳)及N,N-二甲基-4-吡啶胺(0.014g；0.2當量；0.12毫莫耳)於二氯甲烷(5.8mL)中之溶液中添加1-(3-二甲基胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.168g；1.5當量；0.88毫莫耳)及二異丙基乙胺(0.41mL；4當量；2.34毫莫耳)。攪拌反應物2小時，隨後將反應混合物直接加載至矽膠管柱上。藉由管柱層析(10%(含2N氨之甲醇)/乙酸乙酯)純化，得到呈白色固體狀之1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(1H-1,2,3-三唑-5-基氧基)丁-1-酮(0.104g；44%)：MS(m/z)：406(M+1)。
如由膽鹼釋放所量測之自分泌運動因子之抑制
此分析之目的為使用膽鹼釋放分析法偵測自分泌運動因子抑制。
用100% DMSO連續稀釋測試化合物(含於100% DMSO中之10mM儲備液)，在半區96孔盤(Corning 3992)中產生10個濃度之100×抑制 劑。在圓底96孔盤(Fisher 12565502)中用分析緩衝液依1：33.33稀釋含在100% DMSO中之此等10個孔中之每一者，在含有3% DMSO之孔中產生3×濃度。分析緩衝液為50mM Tris(pH 8.0)、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2、0.01% TRITONTM X-100(Sigma T9284)及0.01%不含脂肪酸之牛血清白蛋白(Sigma A8806)。隨後各取20μl等分試樣之各3×測試化合物一式一份添加至黑色平底96孔盤(Corning 3991)中。隨後除了無酶對照孔以外，在每個孔中添加每孔20μl之3×重組人類自分泌運動因子(具有轉染至293E細胞中之C端His標籤且經由鎳螯合劑及尺寸排外層析純化的全長人類自分泌運動因子)。無酶對照孔中則每孔添加20μl之分析緩衝液。在各孔中添加20μl之含有膽鹼氧化酶(Sigma C5896)、辣根過氧化酶(Sigma P8125)、螢光試劑(amplex ultrared)(Invitrogen A36006)及自分泌運動因子基質溶血磷脂醯膽鹼(LPC)16：0(Avanti Polar Lipids 855675P)之3×混合液，同時避免暴露於光。孔中膽鹼氧化酶、辣根過氧化酶、螢光試劑(amplex ultrared)及LPC 16：0之最終濃度分別為0.4單位/毫升、4單位/毫升、40μM及30μM。隨後將盤用鋁箔密封件密封且在37℃下於Labline Imperial III培育箱中培育1小時。在此培育期間，LPC被自分泌運動因子裂解，產生溶血磷脂酸(LPA)16：0及膽鹼。所釋放之膽鹼被膽鹼氧化酶氧化，產生甜菜鹼及過氧化氫。過氧化氫與辣根過氧化物及螢光試劑(amplex ultrared)反應，形成螢光分子試鹵靈(resorufin)。用SpectraMax Gemini EM螢光計在530-590nm之激發發射波長下使用SoftMax Pro 4.8軟體量測盤上之試鹵靈。利用內部Lilly軟體OLO曲線擬合工具，使用4參數曲線擬合計算IC50。結果表示為算術平均值+/-標準差；n=x。本文中實例1至15之化合物基本上如上文所述進行測試，且展示自分泌運動因子之IC50低於約100nM。以下例示之化合物基本上如上文所述進行測試，且展示以下針對自分泌運動因子之活性：
表1中之數據說明使用活體外膽鹼釋放分析，表1之化合物抑制自分泌運動因子。
在人類血漿存在下LPA之減少
以下分析欲量測LPA之減少。此分析為當用於測試已鑑別為自分泌運動因子抑制劑之化合物時可用於鑑別選擇性自分泌運動因子介導之LPA抑制劑化合物的工具。咸信，經自分泌運動因子之LPA生物合成為LPA1介導之神經痛的LPA來源。Makoto Inoue等人，「Autotaxin,a synthetic enzyme of lysophosphatidic acid (LPA),mediates the induction of nerve-injured neuropathic pain」,Molecular Pain,2008,4：6。自分泌運動因子介導之LPA生物合成的靶向抑制係由此分析之結果支持。
將來自收集於肝素鈉(Lampire Biologicals)中之健康人類女性供體之血漿單位彙集，等分且儲存於-80℃下。在分析之日，使血漿之等分試樣解凍，且在4℃下於離心機中以3000RPM旋轉10分鐘以移除碎片。將90μl血漿等分試樣添加至96孔圓底聚丙烯盤之各孔中。將含有10×測試化合物的含10% DMSO之分析緩衝液(50mM Tris(pH 8.0)、5mM KCl、1mM CaCl2、1mM MgCl2)之10μL等分試樣添加至各孔中，不含測試化合物之對照孔除外。此產生一式一份10個1×濃度之測試化合物，最終濃度為含1% DMSO之90%血漿。將不含測試化合物的含10% DMSO之分析緩衝液之10μl等分試樣添加至0小時(n=8)及3小時無測試化合物對照(n=8)孔中。將500mM乙二胺四乙酸(EDTA)之10μl等分試樣添加至0小時無測試化合物對照孔中之每一者中以螯合內源性自分泌運動因子。將0小時無測試化合物對照孔之全 部內含物轉移至新的96孔圓底聚丙烯盤中且在-80℃下冷凍。隨後將含有血漿+/-測試化合物(減去0小時無抑制劑對照孔)之盤在37℃下於Robbins ScientificTM 400型雜交培育箱中培育3小時，同時以14,000RPM搖動。在此3小時培育期間，存在於血漿中之卵磷脂膽固醇醯基轉移酶使磷脂醯膽鹼裂解，產生較高血漿含量之自分泌運動因子基質溶血磷脂醯膽鹼(LPC)。含量增加之內源性LPC由內源性自分泌運動因子裂解，產生較高血漿濃度之內源性溶血磷脂酸(LPA)(Nakamura等人，Clinical Biochemistry 40(2007),274-277)。在3小時培育中LPA之此增加可由自分泌運動因子抑制劑抑制。在3小時培育之後，將10μl 500mM EDTA添加至所有剩餘孔(含測試化合物之孔及3小時無測試化合物對照孔)中，以螯合內源性自分泌運動因子。隨後將此等孔之全部內含物添加至先前已儲存於-80℃下(而不使0小時血漿解凍)的含有0小時無測試化合物對照血漿之盤中。隨後將盤用鋁箔密封件再覆蓋且置放回-80℃下，直至提取用於質譜分析。在提取之日，使盤在冰上解凍，且將各孔之25μl血漿轉移至2mL TrueTaperTM方形96深孔盤(Analytical Sales and Products #968820)中。將含有LPA內標(50ng/ml D5氘LPA 16：0及50ng/ml D5氘LPA 18：0)之提取緩衝液(50%甲醇、49.9%乙腈、0.1%乙酸)之400μl等分試樣添加至各孔中，且藉由質譜分析測定各樣品中之總LPA。根據下式計算LPA之減少百分比：100-(3小時血漿+測試化合物-0小時無測試化合物對照血漿)/(3小時無測試化合物對照血漿-0小時無測試化合物對照血漿)×100
使用4參數曲線擬合計算IC50值。結果表示為算術平均值+/-標準差；n=x。使用本發明化合物進行此分析之結果展示LPA減少，其為劑量依賴性的且為統計學上顯著的。
表2中之數據顯示在人類血漿存在下化合物使LPA減少。結果支持化合物抑制自分泌運動因子介導之LPA生物合成。

Claims (19)

  1. 一種式I化合物， 其中X為一鍵或CH2；R係選自由以下組成之群： R1及R2各自獨立地選自由CH及N組成之群；R3為H或CH3；R4為H或CH3；L係選自由以下組成之群：-O(CH2)3-、-C(O)NH(CH2)2-、-CH2C(O)NH(CH2)2-、-(CH2)3N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)2N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)3NH-、(CH2)2OCH2-、-(CH2)4-、-(CH2)2NHCH2-、-(CH2)3O-及-CH2O(CH2)2-；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如請求項1之化合物或鹽，其中R為
  3. 如請求項2之化合物或鹽，其中R1為CH。
  4. 如請求項2或3中任一項之化合物或鹽，其中R2為N。
  5. 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其中L係選自由以下組成之群：-(CH2)4-、-O(CH2)3-、-(CH2)2OCH2-、-(CH2)3O-及-CH2O(CH2)2-。
  6. 如請求項5之化合物或鹽，其中L為-(CH2)2OCH2-。
  7. 如請求項5之化合物或鹽，其中L為-O(CH2)3-。
  8. 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其中L係選自由以下組成之群：-(CH2)2N(C(O)CH3)CH2-、-(CH2)3N(C(O)CH3)CH2-及-CH2C(O)NH(CH2)2-。
  9. 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其中X為一鍵。
  10. 如請求項1至3中任一項之化合物或鹽，其中X為CH2。
  11. 如請求項1之化合物或鹽，其為1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-7,8-二氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-6(5H)-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮
  12. 如請求項1之化合物或鹽，其為1-[2-(2,3-二氫-1H-茚-2-基胺基)-5,7-二氫-6H-吡咯并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-[2-(1H-1,2,3-三唑-4-基)乙氧基]乙酮
  13. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，與一或多種醫藥學上可接受之載體、稀釋劑或賦形劑組合。
  14. 一種如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製造用以治療患者之疼痛之藥物。
  15. 一種如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽 的用途，其係用於製造用以治療患者之與骨關節炎相關疼痛之藥物。
  16. 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於療法中。
  17. 如請求項1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其係用於治療疼痛。
  18. 一種中間化合物，其具有下式：
  19. 一種中間化合物，其具有下式：
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