TW201425339A

TW201425339A - 用於治療心臟衰竭之合成線狀愛帕琳（ａｐｅｌｉｎ）模擬物

Info

Publication number: TW201425339A
Application number: TW102142121A
Authority: TW
Inventors: Frederic Zecri; Kayo Yasoshima; Philipp Grosche; Jun Yuan; Hongjuan Zhao
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2012-11-20
Filing date: 2013-11-19
Publication date: 2014-07-01
Also published as: EP2922559A2; EP2922559B1; AR093559A1; ES2705323T3; US20150284446A1; US10005829B2; JP6444882B2; CN105007928B; WO2014081702A3; CN105007928A; UY35144A; WO2014081702A2; JP2016501851A; WO2014081702A4; JP2018172410A

Abstract

本發明提供一種式I'之合成多肽：X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13 I或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物，其中X1、X2、X3、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12及X13在本文中經定義。該等多肽或其生物共軛物為APJ受體之促效劑。本發明亦係關於一種製造本發明之多肽或生物共軛物之方法，及其治療性用途，諸如治療或預防急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群(Brugada syndrome)、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。本發明進一步提供一種藥理學活性劑與醫藥組合物之組合。

Description

用於治療心臟衰竭之合成線狀愛帕琳(APELIN)模擬物

本發明係關於包含經修飾肽及多肽序列之新穎組合物，其經設計以在投與該等組合物之個體中治療心血管疾病，且其展現比其野生型對應物大的降解抗性及等效或大的生物活性。本發明亦係關於製造該等組合物及使用該等組合物作為醫藥學活性劑來治療心血管疾病之方法。

西方世界中心臟衰竭之發病率在大於65歲之成人中為約1/100。最常見病理學為心肌收縮性及由此心輸出量(亦即隨時間推移，心臟之任一心室所排出之有效血液體積)方面存在慢性缺陷。患有慢性心臟衰竭之患者可具有急性失代償(亦即心臟不能維持足夠血液循環)事件，其中心肌收縮性進一步降低。僅在美國每年就有約50萬例因「急性失代償性心臟衰竭」(ADHF)而住院。

針對ADHF之現有療法包括利尿劑、血管擴張劑及收縮影響劑，其直接提高心肌收縮性。現有靜脈內收縮影響劑(多巴酚丁胺(dobutamine)、多巴胺(dopamine)、米利酮(milrinone)、左西孟旦(levosimendan))係用於急性情況，儘管其與不良事件(諸如心律不整及提高之長期死亡率)有關。此等傾向已阻止了其在慢性心臟衰竭中之應用。地高辛(Digoxin)為一種口服收縮影響劑，但受窄治療指數、提高之致心律不整可能性及在腎機能不全方面之禁忌限制。

提高心肌收縮性而無致心律不整或死亡傾向之用於心臟衰竭之療法對於ADHF而言為迫切需要的，且亦可解決慢性心臟衰竭中大量未滿足的醫學需要。

愛帕琳(Apelin)為先前孤兒G-蛋白偶聯受體(GPCR)APJ(亦稱為愛帕琳受體)、血管收縮素樣1型受體、血管收縮素II樣1型受體及其類似物之內源性配位體。愛帕琳/APJ路徑廣泛地表現於心血管系統中，且愛帕琳在臨床前模型中已顯示出重大有益之心血管效應。人類中之急性愛帕琳投藥造成周邊及冠狀血管舒張且提高心輸出量(Circulation.2010；121：1818-1827)。因此，APJ促效作用正出現作為針對患有心臟衰竭之患者之重要治療目標。愛帕琳受體APJ之活化被認為提高心肌收縮性且提供心臟保護，而無現有療法之傾向。然而，原生愛帕琳展現出極短活體內半衰期及作用持續時間。極短半衰期為遞送此類治療性內源性肽公認的主要困難，因為經由肽酶作用而達成之血清清除率及蛋白水解性降解較快。

目前用於解決此缺點之一種方式為向患者投與大劑量之所關注的治療性肽，使得即使降解了一些治療性肽，仍足以保持治療上有效。然而，此方法使患者不舒適。因為大部分治療性肽無法經口投與，所以治療性肽將必須藉由靜脈內注射連續輸注、頻繁輸注或藉由不便之皮下注射途徑頻繁投與。對於頻繁投藥之需求亦產生多種具有不可接受之較高治療預計成本的潛在肽療法。大量經降解肽之存在亦可生成不當的副作用。

投藥方面之不適及較高成本為大部分具有吸引人之生物活性特徵之治療性肽不能開發作為藥物候選物的兩個原因。

因此，一種延長肽之半衰期之方法為對治療性肽進行修飾，其方式為使得其降解減緩，同時仍維持生物活性。

因此，需要鑑別如下肽及多肽，其模擬愛帕琳之功能，但具有提高之半衰期且顯示出相比天然產生之愛帕琳等效或大的生物活性。此外，需要鑑別如下愛帕琳類似物肽及多肽，其展現提高之構形約束，亦即能夠達成且維持活性構形狀態，使得肽及多肽可與其受體及/或其他路徑標靶相互作用而無需其他摺疊或再定位。其他方法包括藉由使肽與阻止其經由腎臟消除之分子共軛來降低清除率。

因此，存在對具有提高之半衰期之經修飾治療性肽的需要，以便在活體內提供更長之作用持續時間，同時維持較低毒性且保持經修飾肽之治療優勢。

本發明係有關藉由修飾所關注的治療性肽或多肽(亦即APJ促效劑)來克服體內肽降解之問題。

本發明之目標為提供新穎肽及多肽或其生物共軛物，其適用作APJ促效劑，且其相比於野生型愛帕琳及其他已知愛帕琳類似物亦具有以下改良中之至少一者：提高之半衰期；投藥時及/或溶解時對降解之較大抗擾性；及提高之構形約束，全部同時展現與野生型愛帕琳相同或更大之生物活性。本發明之肽及多肽或其生物共軛物因此尤其適用於治療或預防心血管疾病，諸如心臟衰竭、與心臟衰竭相關之病症及病狀，及對APJ受體活性之活化起反應的病症及病狀。

在一個實施例中，本發明之肽及多肽或其生物共軛物尤其適用於治療或預防與心臟衰竭相關之病症或病狀，或對APJ受體活性之活化(或促效作用)起反應之病症。在另一實施例中，本發明之肽及多肽或其生物共軛物適用於治療急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群(Brugada syndrome)、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病 (包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

本發明係關於肽及多肽或其生物共軛物、醫藥組合物及其製造與使用方法，如本文所描述。本發明之肽及多肽之實例包括根據式I至IV中之任一者之肽及多肽或其醯胺、酯、鹽，及其生物共軛物，以及本文中具體列舉之任何肽或多肽及其生物共軛物，包括(但不限於)實驗性實例。

本發明因此提供一種式(I)之肽或多肽：X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13 I其中：X1為多肽之N端且為不存在的、Q、A或pE；X2為R或r；X3為P或4-PhP；X5為L、Cha、D-L、F、Y、Y(Bzl)、3,4-Cl2-F或Nal；X6為D-胺基酸、S或A；X7為D-胺基酸、L、H或Aib；且X6及X7中之至少一者為D-胺基酸或Aib；X8為K、k、Q或E；X9為G或D；X10為P或2-哌啶甲酸；X11為D-Nle、Nle、f或D-Nva；X12為不存在的、P或D-胺基酸；X13為C端且為不存在的、F或D-胺基酸；且X11、X12及X13中之至少一者為D-胺基酸；其中：Nle為L-正白胺酸；D-Nle為D-正白胺酸；Nal為L-(萘基)丙胺酸；D-Nva為D-正纈胺酸；Aib為α-胺基異丁酸；Cha為(S)-β-環己基丙胺酸；D-Tic為D-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸；pE為L-焦麩胺酸；3,4-Cl2-F為(S)-3,4-二氯苯丙胺酸；Y為L-酪胺酸；且Y(Bzl)為L-苯甲基-酪胺酸；或該多肽之醯胺、酯或鹽；或實質上等效於其之多肽。

如本文中進一步解釋，此項技術所公認之三個字母或一個字母之縮寫用於表示構成本發明之肽及多肽的胺基酸殘基。除在前接「D」時以外，該胺基酸為L-胺基酸。當一個字母之縮寫為大寫字母時，其係指L-胺基酸。當一個字母之縮寫為小寫字母時，其係指D-胺基酸。

式I或本文中所描述之其相關式(例如式I至IV)之上文所列舉之胺基酸殘基中的任一者均可以一種保守方式經取代，其限制條件為本發明之肽或多肽仍保持功能活性及結構特性(例如半衰期延長、受保護以避免降解、構形約束)。可容許之保守胺基酸取代之原理及實例在本文中得到進一步解釋。

本發明進一步提供一種生物共軛物或其多聚體，其包含：a. 式I至IV中之任一者之肽或多肽，b. 半衰期延長部分；其中該肽或多肽及該半衰期延長部分視情況經由連接子共價連接。

本發明之半衰期延長部分可共價附接、連接或共軛至肽或多肽類似物。半衰期延長部分可為例如聚合物，諸如聚乙二醇(PEG)、膽固醇基團、碳水化合物或寡醣；或結合至救助受體之任何天然或合成蛋白質、多肽或肽。半衰期延長部分較佳視情況經由連接子共價連接至血漿蛋白(白蛋白及免疫球蛋白)，伴隨有較長血清半衰期。舉例而言，半衰期延長部分為IgG恆定域或其片段(例如Fc區)、人類血清白蛋白(HSA)或白蛋白結合多肽。生物共軛物之半衰期延長部分段較佳為人類血清白蛋白。

半衰期延長部分以提高及/或不干擾本發明之生物共軛物之組成部分(例如式I'或本文中所描述之其相關式(式I至IV)之肽或多肽)的生物學功能的方式附接。半衰期延長部分可為蛋白質，諸如IgG恆定域或其片段(例如Fc區)、人類血清白蛋白(HSA)或白蛋白結合多肽。本文中所揭示之此類蛋白質亦可形成多聚體。

在一些實施例中，半衰期延長部分共價連接至式I至IV中之任一者之肽或多肽的N端。在其他實施例中，半衰期延長部分共價連接至本發明之式I至IV中之任一者之肽或多肽的C端。

本發明之多肽或其生物共軛物經由活化APJ受體而在治療以下疾病中具有效用：急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

在一較佳實施例中，本發明之多肽或其生物共軛物適用於治療急性失代償性心臟衰竭(ADHF)。

在另一實施例中，本發明係關於一種在需要治療之個體中治療對APJ受體之活化起反應之病症或疾病的方法，其包含：向個體投與有效量之根據式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯、鹽或生物共軛物，使得治療個體中對APJ受體之活化起反應之病症或疾病。

在又一實施例中，本發明係關於醫藥組合物，其包含根據式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物，及一或多種醫藥學上可接受之載劑。

在再一實施例中，本發明係關於包括以下之組合：根據式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯、鹽或生物共軛物，及一或多種治療學活性劑之醫藥組合。

在另一實施例中，本發明係關於一種在有需要之個體中活化APJ受體之方法，其包含：向個體投與治療有效量之根據式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯、鹽或生物共軛物。

為了解釋本說明書，除非另外說明，否則以下定義將適用且適當時，以單數形式使用之術語亦將包括複數形式，且反之亦然。

如本文中所使用，「對APJ受體之調變起反應之病症或疾病」、「對APJ之調變起反應之病症及病狀」、「對APJ受體活性之調變起反應之病症及病狀」、「對APJ受體活性之活化(或促效作用)起反應之病症」及類似術語包括急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

如本文中所使用，「APJ受體活性之活化」或「APJ受體之活化」係指APJ受體活性提高。APJ受體活性之活化亦稱為APJ受體之「促效作用」，例如藉由投與本發明之肽及多肽達成。

如本文中所使用，術語「多肽」及「肽」可互換使用，其係指連接在一起之兩個或兩個以上胺基酸。除了下文表1中所闡述之不常見或非天然胺基酸之縮寫以外，此項技術所公認之三個字母或一個字母之縮寫用於表示構成本發明之肽及多肽之胺基酸殘基。除在前接「D」時以外，該胺基酸為L-胺基酸。當一個字母之縮寫為大寫字母時，其係指L-胺基酸。當一個字母之縮寫為小寫字母時，其係指D-胺基酸。基團或字串或胺基酸縮寫用於表示肽。肽在左側以N端表示，且序列自N端至C端書寫。

本發明之肽含有非天然胺基酸(亦即自然界中不存在之化合物)，且或者可採用如此項技術中已知的其他胺基酸類似物。

某些非天然胺基酸可藉由描述於以下文獻中之技術引入：Deiters等人，J Am Chem Soc 125：11782-11783,2003；Wang及Schultz,Science 301：964-967,2003；Wang等人，Science 292：498-500,2001；Zhang等人，Science 303：371-373,2004或美國專利第7,083,970號。簡言之，此等表現系統中之一些涉及定點突變誘發，以將無意義密碼子(諸如琥珀TAG)引入編碼本發明之多肽之開放閱讀框架中。隨後將此類表現載體引入可利用對所引入之無意義密碼子具有特異性之tRNA的宿主中，且饋入所選擇之非天然胺基酸。有益於使部分與本發明之多肽共軛之目的之特定非天然胺基酸包括具有乙炔及疊氮基側鏈之彼等胺基酸。

本發明之肽中之一或多種天然或非天然胺基酸可例如藉由添加化學實體(諸如用於共軛、官能化或其他修飾等之碳水化合物基團、磷酸酯基團、法呢基、異法呢基、脂肪酸基團、連接子)而經修飾。該等修飾可以位點特異性或非位點特異性方式進行。在一較佳實施例中，肽之修飾產生更穩定的肽(例如展現出更大活體內半衰期之肽)。此等修飾可包括併入其他D-胺基酸等。該等修飾中無一者將實質上干擾肽之所需生物活性，但此等修飾可賦予肽所需特性，例如提高之生物活性。

相對於野生型蛋白質，該等修飾提高本發明之蛋白質之生物學特性，以及在一些情況下，充當例如標記及蛋白質半衰期延長劑之附接點，且以便將該等變異體附著至固體支撐物之表面。

在某些實施例中，此類修飾(例如位點特異性修飾)用於將共軛物(例如PEG基團)附接至本發明之多肽及/或肽，以便例如延伸半衰期或以其他方式改良該等多肽及/或肽之生物學特性。該等技術在本文中得到進一步描述。

在其他實施例中，此類修飾(例如位點特異性修飾)用於附接延長本發明之多肽之半衰期的其他聚合物及小分子及重組蛋白質序列。一種此類實施例包括將脂肪酸或特異性白蛋白結合化合物附接至多肽及/或肽。在其他實施例中，該等修飾在特定胺基酸類型處進行且可附接在多肽上之一或多個位點處。

在其他實施例中，此類修飾(例如位點特異性修飾)用作附接之方法，以便產生野生型及/或變異型多聚體，例如二聚體(均二聚體或雜二聚體)或三聚體或四聚體。此等多聚蛋白分子可另外具有諸如PEG、糖及/或PEG-膽固醇共軛物之基團，該等基團以胺基端或羧基端附接或融合至其他蛋白質(諸如Fc、人類血清白蛋白(HSA)等)。

在其他實施例中，此類位點特異性修飾用於產生蛋白質、多肽及/或肽，其中以位點特異性方式併入之吡咯離胺酸或吡咯離胺酸類似物或非天然產生之胺基酸(對乙醯基Phe、對疊氮基Phe)之位置允許此類蛋白質、多肽及/或肽之受控定向及附接至固體支撐物之表面上或附接有諸如PEG、糖及/或PEG-膽固醇共軛物之基團。

在其他實施例中，此類位點特異性修飾用於以位點特異性方式使蛋白質、多肽及/或肽交聯，從而形成雜寡聚體，包括(但不限於)雜二聚體及雜三聚體。在其他實施例中，此類位點特異性修飾用於以位點特異性方式使蛋白質、多肽及/或肽交聯，從而形成蛋白質-蛋白質共軛物、蛋白質-多肽共軛物、蛋白質-肽共軛物、多肽-多肽共軛物、多肽-肽共軛物或肽-肽共軛物。在其他實施例中，位點特異性修飾可包括分支點以允許超過一種類型之分子附接在蛋白質、多肽或肽之單一位點處。

在其他實施例中，本文中所例舉之修飾可以非位點特異性方式進行，且產生本發明之蛋白質-蛋白質共軛物、蛋白質-多肽共軛物、蛋白質-肽共軛物、多肽-多肽共軛物、多肽-肽共軛物或肽-肽共軛物。

在一些實施例中，本發明提供包含至少一種結合至抗體(諸如特異性結合如本文中所揭示之肽或多肽之抗體)之式I至IV中之任一者之肽或多肽的複合物。

一般熟習此項技術者將瞭解，各種胺基酸取代，例如保守胺基酸取代，可在本文中所描述之任何多肽之序列中進行，而不會必然地降低其活性。如本文中所使用，「通常用作其取代物之胺基酸」包括保守取代(亦即用具有相當化學特徵之胺基酸取代)。出於保守取代之目的，非極性(疏水性)胺基酸包括丙胺酸、白胺酸、異白胺酸、纈胺酸、甘胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸及甲硫胺酸。極性(親水性)、中性胺基酸包括絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪胺酸、天冬醯胺及麩醯胺酸。帶正電荷之(鹼性)胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸。帶負電荷之(酸性)胺基酸包括天冬胺酸及麩胺酸。胺基酸取代之實例包括用L-胺基酸取代其相應之D-胺基酸、用半胱胺酸取代高半胱胺酸或具有含硫醇之側鏈的其他非天然胺基酸、用離胺酸取代高離胺酸、二胺基丁酸、二胺基丙酸、鳥胺酸或具有含胺基之側鏈的其他非天然胺基酸或用丙胺酸取代正纈胺酸或其類似物。

如本文中所使用，術語「胺基酸」係指天然產生之胺基酸、以與天然產生之胺基酸類似之方式起作用的非天然胺基酸、胺基酸類似物及胺基酸模擬物，均呈其D及L立體異構體形式(若其結構允許此類立體異構形式)。胺基酸在本文中藉由其名稱、其通常所知的三個字母之符號或藉由IUPAC-IUB生物化學命名委員會(IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission)所建議之一個字母之符號提及。

術語「天然產生」係指在自然界中發現且未經人為操縱之材料。類似地，如本文中所使用，「非天然產生」、「非天然」及其類似術語係指自然界中未發現或已人為經結構修飾或合成的材料。當與胺基酸結合使用時，術語「天然產生」係指20種習知胺基酸(亦即丙胺酸(A或Ala)、半胱胺酸(C或Cys)、天冬胺酸(D或Asp)、麩胺酸(E或Glu)、苯丙胺酸(F或Phe)、甘胺酸(G或Gly)、組胺酸(H或His)、異白胺酸(I或Ile)、離胺酸(K或Lys)、白胺酸(L或Leu)、甲硫胺酸(M或Met)、天冬醯胺(N或Asn)、脯胺酸(P或Pro)、麩醯胺酸(Q或Gln)、精胺酸(R或Arg)、絲胺酸(S或Ser)、蘇胺酸(T或Thr)、纈胺酸(V或Val)、色胺酸(W或Trp)及酪胺酸(Y或Tyr))。

如本文中所使用，術語「非天然胺基酸(non-natural amino acid/unnatural amino acid)」可互換地意欲表示使用來自任何生物體之未經修飾或經修飾基因(不論相同或不同)無法在任何生物體中以生物合成方式產生的胺基酸結構。該等術語係指天然產生之(野生型)愛帕琳蛋白質序列或本發明之序列中不存在之胺基酸殘基。此等物質包括(但不限於)不為20種天然產生之胺基酸、硒半胱胺酸、吡咯離胺酸(Pyl)或吡咯啉-羧基-離胺酸(Pcl，舉例而言，如PCT專利公開案WO2010/48582中所描述)中之一者的經修飾胺基酸及/或胺基酸類似物。此類非天然胺基酸殘基可藉由取代天然產生之胺基酸及/或藉由將非天然胺基酸插入天然產生之(野生型)愛帕琳蛋白質序列或本發明之序列中而引入。非天然胺基酸殘基亦可併入以使得將所需官能性賦予愛帕琳分子，例如連接官能部分(例如PEG)之能力。當與胺基酸結合使用時，符號「U」將意指「非天然胺基酸(non-natural amino acid/unnatural amino acid)」，如本文中所使用。

此外，應瞭解此類「非天然胺基酸」需要經修飾tRNA及經修飾tRNA合成酶(RS)以便併入蛋白質中。此等「經選擇之」正交tRNA/RS對藉由如Schultz等人開發之選擇方法或藉由隨機或靶向突變來產生。舉例而言，吡咯啉-羧基-離胺酸為一種「天然胺基酸」，因為其由自一種生物體轉移至宿主細胞中之基因以生物合成方式產生，且因為其藉由使用天然tRNA及tRNA合成酶基因而併入蛋白質中，而對胺基苯丙胺酸(參見Generation of a bacterium with a 21 amino acid genetic code,Mehl RA,Anderson JC,Santoro SW,Wang L,Martin AB,King DS,Horn DM,Schultz PG.J Am Chem Soc.2003年1月29日；125(4)：935-9)為一種「非天然胺基酸」，因為儘管其以生物合成方式產生，但其藉由「經選擇之」正交tRNA/tRNA合成酶對而併入蛋白質中。

經修飾之經編碼胺基酸包括(但不限於)羥基脯胺酸、γ-羧基麩胺酸、O-磷絲胺酸、氮雜環丁烷甲酸、2-胺基己二酸、3-胺基己二酸、β-丙胺酸、胺基丙酸、2-胺基丁酸、4-胺基丁酸、6-胺基己酸、2-胺基庚酸、2-胺基異丁酸、3-胺基異丁酸、2-胺基庚二酸、第三丁基甘胺酸、2,4-二胺基異丁酸、鎖鏈素、2,2'-二胺基庚二酸、2,3-二胺基丙酸、N-乙基甘胺酸、N-甲基甘胺酸、N-乙基天冬醯胺、高脯胺酸、羥基離胺酸、別羥基離胺酸、3-羥基脯胺酸、4-羥基脯胺酸、異鎖鏈素、別異白胺酸、N-甲基丙胺酸、N-甲基甘胺酸、N-甲基異白胺酸、N-甲基戊基甘胺酸、N-甲基纈胺酸、萘丙胺酸、正纈胺酸、正白胺酸、鳥胺酸、戊基甘胺酸、2-哌啶甲酸及硫代脯胺酸。術語「胺基酸」亦包括作為某些生物體中之代謝物但未經用於併入蛋白質中之遺傳密碼編碼之天然產生的胺基酸。此類胺基酸包括(但不限於)鳥胺酸、D-鳥胺酸及D-精胺酸。

如本文中所使用，術語「胺基酸類似物」係指具有與天然產生之胺基酸相同之基本化學結構的化合物，僅舉例而言，結合至氫、羧基、胺基及R基團之α碳。胺基酸類似物包括天然及非天然胺基酸，其以化學方式可逆或不可逆地封端，或其C端羧基、其N端胺基及/或其側鏈官能基經化學修飾。該等類似物包括(但不限於)甲硫胺酸亞碸、甲硫胺酸碸、S-(羧甲基)-半胱胺酸、S-(羧甲基)-半胱胺酸亞碸、S-(羧甲基)-半胱胺酸碸、天冬胺酸-(β-甲酯)、N-乙基甘胺酸、丙胺酸甲醯胺、高絲胺酸、正白胺酸及甲硫胺酸甲基鋶。

Nal係指1-萘丙胺酸及2-萘丙胺酸，較佳2-萘丙胺酸。

4-苯基脯胺酸係指順式及反式4-苯基脯胺酸，較佳反式4-苯基脯胺酸。

如本文中所使用，術語「醯胺」係指C端處之羧酸基團之醯胺衍生物(例如-C(O)NH₂、-C(O)NH-C_1-6烷基、-C(O)NH-C_1-2烷基苯基、-C(O)NH-NHBn、-C(O)-4苯氧基哌啶或-C(O)N(C_1-6烷基)₂)。

術語「醯胺」亦指N端處之胺基之衍生物(例如-NHC(O)C_1-16烷基、-NHC(O)(CH₂)_nPh(n為1至6之整數)、-NHC(O)(CH₂)₂CO₂H、4-Cl-Ph-(CH₂)₃C(O)NH-、C₁₁H₂₃C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-C(O)-NH-、C₁₃H₂₇C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-C(O)-NH-、C₁₅H₂₇C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-C(O)NH-、Ph-CH₂CH₂NHC(O)-NH-或 CH₃(OCH₂CH₂)_mC(O)NH-(m為1至12之整數)。

如本文中所使用，術語「酯」係指C端(例如-COOR)形式處之羧酸基團之酯衍生物，其中酯之R係指C_1-6烷基(諸如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基等)、C_3-8環烷基(諸如環戊基、環己基等)、C_6-10芳基(諸如苯基、α-萘基等)、C_6-10芳基-C_1-6烷基(例如苯基-C_1-2烷基，諸如苯甲基、苯乙基、二苯甲基等)及α-萘基-C_1-2烷基(諸如α-萘基甲基)及其類似基團。亦可提及特戊醯氧基甲基酯及其類似物，其通常用做供口服投藥的酯。當本發明之多肽在除C端之外的位置處具有其他羧基或羧酸酯基團時，此類基團經醯胺化或酯化之彼等多肽亦屬於本發明之多肽的類別。在該等狀況下，該等酯可例如為與上文所提及之C端酯相同種類之酯。

術語烷基係指完全飽和分支鏈或未分支(或直鏈或線性)烴部分，其包含1至20個碳原子。烷基較佳包含1至7個碳原子，且更佳1至4個碳原子。

術語芳基係指環部分中具有6至10個碳原子之單環或雙環芳族烴基團。芳基之代表性實例為苯基或萘基。

術語雜芳基包括單環或雙環雜芳基，其含有5至10個選自碳原子及1至5個雜原子之環成員，且各雜原子係獨立地選自O、N或S，其中S及N可經氧化成各種氧化態。對於雙環雜芳基系統而言，該系統為完全芳族(亦即所有環均為芳族)。

術語環烷基係指具有3至12個碳原子、較佳3至8個或3至7個碳原子之飽和或不飽和但非芳族單環、雙環或三環烴基。對於雙環及三環環烷基系統而言，所有環均為非芳族。

術語雜環基係指呈4員、5員、6員或7員單環之飽和或不飽和非芳族(部分不飽和)環，且含有至少一個選自O、S及N之雜原子，其中N及S亦可視情況經氧化成各種氧化態。在一個實施例中，雜環基部分表示含有5至7個環原子且視情況含有另一選自O、S或N之雜原子之飽和單環。

術語「APJ」(亦稱為「愛帕琳受體」、「類血管收縮素1型受體」、「類血管收縮素II 1型受體」及其類似術語)表示具有380個殘基、7個跨膜結構域之Gi偶聯受體，其基因定位於人類中之染色體11之長臂上(NCBI參考序列：NP_005152.1，且由NCBI參考序列：NM_005161編碼)。1993年使用簡併寡核苷酸引子自基因組人類DNA中第一次選殖出APJ(O'Dowd等人，Gene,136：355-60,1993)且APJ與血管收縮素II受體1型共享顯著同源性。然而，儘管有此同源性，但血管收縮素II不結合APJ。儘管多年來作為孤兒受體，但已分離出內源配位體且將其命名為愛帕琳(Tatemoto等人，Biochem Biophys Res Commun 251,471-6(1998))。

術語「愛帕琳」表示77個殘基之前蛋白(NCBI參考序列：NP_0059109.3，且由NCBI參考序列：NM_017413.3編碼)，其經加工成愛帕琳肽之生物學活性形式，諸如愛帕琳-36、愛帕琳-17、愛帕琳-16、愛帕琳-13、愛帕琳-12。全長成熟肽(稱為「愛帕琳-36」)包含36個胺基酸，但最有效之同功異型物為愛帕琳之13聚體(愛帕琳-13)之焦麩胺酸化形式，稱為「Pyr-1-愛帕琳-13或Pyr¹-愛帕琳-13」。不同愛帕琳形式描述於例如美國專利6,492,324B1中。

術語「共軛物」及「生物共軛物」可互換使用，且意欲指由於式I至IV中之任一者之多肽與半衰期延長部分之間視情況經由連接子共價附接而形成的實體。

術語半衰期延長部分可共價連接/附接至肽或多肽類似物。半衰期延長部分可為例如聚合物，諸如聚乙二醇(PEG)、膽固醇基團、碳水化合物或寡醣；或結合至救助受體之任何天然或合成蛋白質、多肽或肽。半衰期延長部分較佳視情況經由連接子共價連接至血漿蛋白 (白蛋白)，伴隨有較長血清半衰期。舉例而言，半衰期延長部分為人類血清白蛋白(HSA)或白蛋白結合多肽。

術語「提高之半衰期」或「提高血清半衰期」或「延長半衰期」意指經修飾之生物學活性分子(例如愛帕琳13)相對於其未經修飾形式(或該肽之裸形式)在循環半衰期方面的正變化。血清半衰期如下量測：在投與生物學活性分子之後的各個時間點獲取血液樣品，且測定各樣品中該分子之濃度。量測血清濃度隨時間之變化允許計算經修飾分子(例如經共軛分子)之血清半衰期。藉由比較經修飾分子(例如經共軛分子)與未經修飾分子(例如愛帕琳13)之血清半衰期，可確定血清半衰期或t1/2之相對提高。提高宜為至少約兩倍，但更小之提高亦可為適用的。

本發明之多肽：

本文中描述本發明之各種實施例。應瞭解，各實施例中指定之特徵可與其他指定特徵組合以提供其他實施例。

在實施例1中，本發明因此提供一種式(I)之肽或多肽：X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13 I

其中：X1為多肽之N端且為不存在的、Q、A或pE；X2為R或r；X3為P或4-PhP；X5為L、Cha、D-L、F、Y、Y(Bzl)、3,4-Cl2-F或Nal；X6為D-胺基酸、S或A；X7為D-胺基酸、L、H或Aib；且X6及X7中之至少一者為D-胺基酸或Aib；X8為K、k、Q或E； X9為G或D；X10為P或2-哌啶甲酸；X11為D-Nle、Nle、f或D-Nva；X12為不存在的、P或D-胺基酸；X13為C端且為不存在的、F或D-胺基酸；且X11、X12及X13中之至少一者為D-胺基酸；其中：Nle為L-正白胺酸；D-Nle為D-正白胺酸；Nal為L-(萘基)丙胺酸；D-Nva為D-正纈胺酸；Aib為α-胺基異丁酸；Cha為(S)-β-環己基丙胺酸；D-Tic為D-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸；pE為L-焦麩胺酸；3,4-Cl2-F為(S)-3,4-二氯苯丙胺酸；Y為L-酪胺酸；且Y(Bzl)為L-苯甲基-酪胺酸；或該多肽之醯胺、酯或鹽；或實質上等效於其之多肽。

在實施例1a中，本發明因此提供一種式(IA)之肽或多肽：X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-G-X10-X11-X12-X13 IA其中：X1為多肽之N端且為不存在的、Q、A或pE；X2為R或r；X3為P或4-PhP； X5為L、Cha、D-L、F、Y、Y(Bzl)、3,4-Cl2-F或2-Nal；X6為D-胺基酸或S；X7為D-胺基酸、L、H或Aib；且X6及X7中之至少一者為D-胺基酸或Aib；X8為K或k；X10為P或2-哌啶甲酸；X11為D-Nle或Nle；X12為不存在的、P或D-胺基酸；X13為C端且為不存在的、F或D-胺基酸；且X11、X12及X13中之至少一者為D-胺基酸；或該多肽之醯胺、酯或鹽；或實質上等效於其之多肽。

在實施例1b中，本發明係關於一種式(I)或(IA)之肽或多肽，其中X1為不存在的或pE，或該多肽之醯胺、酯或鹽；或實質上等效於其之多肽。

在實施例1、1A或1B之一個態樣中，本發明係關於式I或IA之肽或多肽，其中K或k之側鏈中之胺基視情況經由醯胺鍵連接至脂肪酸。在此實施例之另一態樣中，該脂肪酸係選自月桂醯基、肉豆蔻醯基或軟脂醯基，其中月桂醯基為C₁₁H₂₃C(O)-，肉豆蔻醯基為C₁₃H₂₇C(O)-且軟脂醯基為C₁₅H₃₁C(O)-。

在實施例1、1A或1B之一個態樣中，本發明係關於式I或IA之肽或多肽，其中K或k之側鏈中之胺基視情況經由醯胺鍵連接至親脂性基團，其中該親脂性基團係選自如前述之脂肪酸及月桂醯基(O2Oc)、肉豆蔻醯基(O2Oc)及軟脂醯基(O2Oc)，且其中月桂醯基(O2Oc)為C₁₁H₂₃C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂C(O)-；肉豆蔻醯基(O2Oc)為C₁₃H₂₇C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂C(O)-；軟脂醯基(O2Oc)為C₁₅H₃₁C(O)NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂C(O)-。側鏈脂肪酸之實例已描述於2012年1月27日申請之美國臨時申請案第61/591,557號(代理人案號PAT054961-US-PSP)中，該案以引用之方式併入本文中。

在實施例2中，本發明係關於根據實施例1、1A或1B之多肽，其中X6及X12為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例3中，本發明係關於根據實施例2之多肽，其中X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例4中，本發明係關於根據實施例3之多肽，其中X11為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例5中，本發明係關於根據實施例1、1A或1B之多肽，其中X6及X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例6中，本發明係關於根據實施例1、1A或1B之多肽，其中X7及X12為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例7中，本發明係關於根據實施例6之多肽，其中X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例8中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至7中之任一者之多肽，其具有下式II：X1-R-P-R-X5-a-X7-X8-G-P-X11-X12-X13 II；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例9中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至8中之任一者之多肽，其具有式III：X1-R-P-R-X5-X6-X7-K-G-P-X11-a-f III；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例10中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)、6、7及9中之任一者之多肽，其具有式IV： X1-R-P-R-X5-S-X7-K-G-P-X11-X12-X13 IV；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例11中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至9中之任一者之多肽，其中X6為選自a、D-Leu、k、s、d、nva、abu、f、h、v及D-Cys(tBu)之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。在此實施例之另一態樣中，X11為nle或f。

在實施例12中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至11中之任一者之多肽，其中X7為Aib或選自a、f及h之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。

在實施例13中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至12中之任一者之多肽，其中X12為不存在的或選自a、f、p、e、r、abu、nva及D-Leu之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。在此實施例之另一態樣中，X12為a。

在實施例14中，本發明係關於根據實施例1(1A或1B)至13中之任一者之多肽，其中X13為不存在的或為選自f、y、d及D-Tic之D-胺基酸，或其醯胺、酯或鹽。在此實施例之另一態樣中，X13為f。

在實施例15中，本發明係關於根據實施例14之多肽，其中X13為不存在的或f；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例16中，本發明係關於根據前述實施例中之任一者之多肽，其中X1為pE；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例16A中，本發明係關於根據前述實施例中之任一者之多肽，其中X1為不存在的、A或Q；或該多肽之醯胺、酯或鹽。在此實施例之一特性態樣中，該肽經由其A或Q之N端共價連接至半衰期延長部分。

在實施例17中，本發明係關於根據實施例1至16中之任一者之多肽，其中X5為L；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例18中，本發明係關於根據實施例1至17中之任一者之多肽，其中X8為K；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例19中，本發明係關於根據實施例1至18中之任一者之多肽，其中X11為Nle或nle；或該多肽之醯胺、酯或鹽。

在實施例20中，本發明係關於根據前述實施例中之任一者之多肽，其中C端為醯胺；或該多肽之鹽。

在實施例21中，本發明係關於根據實施例20之多肽，其中C端為式-C(O)-R2之醯胺且R2為-NH₂、-NH-(CH₂)₂-Ph或4-苯氧基哌啶；或該多肽之鹽。

在另一實施例中，本發明係關於根據式I、IA、II、III或IV中之任一者或前述任何其他種類及子類中之任一者(亦即根據實施例1至15及17至21中之任一者)的肽及多肽，或其醯胺、酯或鹽，其中X1為不存在的；或該多肽之醯胺、酯或鹽。在此實施例之一個態樣中，該肽之N端為醯胺。在此實施例之另一態樣中，本發明係關於根據式I、IA、II、III或IV中之任一者或前述任何其他種類及子類中之任一者的肽及多肽，或其醯胺、酯或鹽，其中X1為不存在的且N端為式-NHR之醯胺，且R為CH₃C(O)-、CH₃-(O-CH₂CH₂)_m-C(O)-、軟脂醯基(O2Oc)_p、肉豆蔻醯基(O2Oc)_p、月桂醯基(O2Oc)_p或Ph-CH₂CH₂NHC(O)-、苯甲醯基、苯甲醯甲基、丁二醯基、辛醯基、4-苯基丁醯基、4-Cl-Ph-(CH2)₃C(O)-或Ph-CH₂CH₂NHC(O)-；且其中p為整數1至4；m為整數1至12；月桂醯基(O2Oc)_p為C₁₁H₂₃C(O)[NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-C(O)]_p-；肉豆蔻醯基(O2Oc)_p為C₁₃H₂₇C(O)[NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂- C(O)]_p-；軟脂醯基(O2Oc)_p為C₁₅H₃₁C(O)[NH-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-O-CH₂-C(O)]_p-。在此實施例之一個特定態樣中，R為乙醯基、苯甲醯基、苯甲醯甲基、丁二醯基、辛醯基、4-苯基丁醯基、4-Cl-Ph-(CH2)3C(O)-或Ph-CH₂CH₂NHC(O)-。N端醯胺之實例已描述於2012年1月27日申請之美國臨時申請案第61/591,557號(代理人案號PAT054961-US-PSP)中，該案以引用之方式併入本文中。

在另一實施例中，本發明係關於根據式I、IA、II、III或IV中之任一者或前述任何其他種類及子類(亦即根據實施例1至21中之任一者)的肽或多肽，或其醯胺、酯或鹽，其中N端為式NHR1之醯胺，其中R1為CH₃C(O)-、CH₃-(O-CH₂CH₂)_m-C(O)-、軟脂醯基(O2Oc)、肉豆蔻醯基(O2Oc)、月桂醯基(O2Oc)或Ph-CH₂CH₂NHC(O)-；且其中m、月桂醯基(O2Oc)、肉豆蔻醯基(O2Oc)及軟脂醯基(O2Oc)在上文中定義。

在另一實施例中，本發明係關於根據式I、IA、II、III或IV中之任一者或前述任何其他種類及子類中之任一者(亦即根據實施例1至8及10至21中之任一者)的肽及多肽，其中X13為不存在的；或其醯胺、酯或鹽。在此實施例之一個特定態樣中，C端為醯胺。在此實施例之另一態樣中，本發明係關於根據式I、IA、II、III或IV中之任一者或前述任何其他種類及子類中之任一者的肽及多肽，或其醯胺、酯或鹽，其中C端為式-C(O)R2之醯胺，且R2為-NH₂、-NH-Me、-NH-NHBn、4-苯氧基哌啶-1-基或-NH-(CH₂)₂-Ph。在此實施例之一較佳態樣中，本發明係關於根據式I至IV中之任一者或前述任何其他種類及子類中之任一者的肽及多肽，或其醯胺、酯或鹽，其中C端為式-C(O)R2之醯胺，且R2為-NH₂、-NH-(CH₂)₂-Ph或4-苯氧基哌啶-1-基。

在一個實施例中，本發明係關於實施例1至21中之任一者之肽或多肽，其中胺基酸X1至X13中之三者不同於存在於Pyr-1-愛帕琳-13中之相應胺基酸。在另一實施例中，本發明係關於實施例1至21中之任一者之肽或多肽，其中胺基酸X1至X13中之四者不同於存在於Pyr-1-愛帕琳-13中之相應胺基酸。

在另一實施例中，X1、X2、X3、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12及X13胺基酸為下文實例部分中之X1、X2、X3、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12及X13胺基酸所定義之彼等胺基酸。

在另一實施例中，根據本發明之個體多肽為下文實例部分中所列舉之彼等胺基酸或其醫藥學上可接受之鹽。

除非另外規定，否則術語「本發明之多肽」係指式(I)及其子式(式IA、II、III或IV)之多肽；或其醯胺、酯或鹽。

除非另外規定，否則術語「本發明之多肽」、「本發明之肽」、「愛帕琳肽促效劑」及其類似術語係指式I及其子式(式IA、II、III或IV)之肽及多肽；或其醯胺、酯或鹽。本發明之肽及多肽展現出與本文中所描述之已知愛帕琳肽及多肽(包括(但不限於)野生型愛帕琳、愛帕琳-13及pyr-1-愛帕琳-13)相比實質上等效或改良之活性及/或血漿穩定性。

本發明之肽及多肽亦涵蓋與根據式I、IA、II、III或IV中之任一者之肽及多肽或其醯胺、酯或鹽以及本文中所特定列舉之任何肽或多肽(包括(但不限於)實驗性實例)至少約95%一致的肽及多肽。

如本文中所使用，片語「同源胺基酸序列」或其變體係指在胺基酸層面上以至少指定之百分比的同源性為特徵之序列，且可與「序列一致性」互換使用。同源胺基酸序列包括含有保守胺基酸取代且多肽具有相同結合及/或活性之彼等胺基酸序列。在一些實施例中，若胺基酸序列與比較物序列具有至少60%或大於60%、至多99%之一致性，則其為同源的。在一些實施例中，若胺基酸序列與比較物序列共享一或多個、至多60個胺基酸取代、添加或缺失，則其為同源的。在一些實施例中，同源胺基酸序列具有不大於5個或不大於3個保守胺基酸取代。

同源性亦可在多肽層面上。本發明之肽或多肽或其部分及不同胺基酸序列之程度或百分比一致性係計算為兩個序列在對準方面之精確匹配的數目除以「本發明序列」或「外來序列」之長度(取其最短者)。結果以百分比一致性表示。

包含與特定實例中所描述之胺基酸序列具有約80至99.9%、較佳90至99.9%之同源性的胺基酸序列且具有優於愛帕琳-13或pyr-1-愛帕琳-13之血漿穩定性的多肽屬於本發明之多肽之種類。在一個實施例中，血漿穩定性改良為至少2倍。在一個實施例中，本發明之多肽具有至少30分鐘之血漿穩定性。在另一實施例中，本發明之多肽具有至少60分鐘或至少80分鐘、較佳至少100分鐘且更佳至少150分鐘之血漿穩定性。

術語「實質上等效」意指受體結合活性、信號轉導活性及其類似活性之性質為等效的。因此，可允許各等級(諸如多肽之受體結合活性之強度及分子量)之間甚至存在差異。

如本文中所描述之多肽，或藉由取代、缺失、添加或插入一或多個胺基酸而達成之其實質上等效物可經提及為就上述意義而言含有胺基酸序列實質上等效物的多肽。如本文中所描述之多肽，或藉由用天然或非天然胺基酸取代1至5個、較佳1至3個且更佳1或2個胺基酸而達成之其實質上等效物可經提及為就上述意義而言含有胺基酸序列實質上等效物的多肽。其他修飾及改變可包括用D-胺基酸置換L-胺基酸，或其他變化，包括(但不限於)磷酸化、羧化、烷化及其類似變化，只要維持式I、IA、II、III或IV之肽或多肽之APJ促效活性且血漿穩定性經改良超過愛帕琳-13之焦麩胺酸化形式。舉例而言，在式I、IA、II、III或IV之線性肽及多肽之位置2(X2)、位置6(X6)、位置7(X7)、位置8(X8)、位置11(X11)、位置12(X12)及位置13(X13)處關於多肽的活性及穩定性可充分耐受D-胺基酸。

在實施例22中，本發明進一步係關於一種生物共軛物或其多聚體，其包含：a. 根據前述實施例中之任一者之式I、IA、II、III或IV之肽或多肽、其醯胺、鹽或酯；b. 半衰期延長部分；其中該肽或多肽與該半衰期延長部分視情況經由連接子共價連接。

在實施例22A中，半衰期延長部分視情況經由連接子部分共價連接至式I、IA、II、III或IV之肽的N端。

在實施例22B中，半衰期延長部分視情況經由連接子部分共價連接至式I、IA、II、III或IV之肽的C端。

在實施例22C中，半衰期延長部分視情況經由連接子部分共價連接至式I、IA、II、III或IV之肽的側鏈，例如半衰期附接至K、Orn、Dab、Dap、hK或4-胺基-lsn之側鏈中之胺基。半衰期延長部分較佳視情況經由連接子部分附接至式I、IA、II、III或IV之肽的N端。

在實施例23中，本發明係關於根據實施例22之生物共軛物或其多聚體，其中半衰期延長部分為人類血清白蛋白。

在實施例24中，本發明係關於根據實施例23之生物共軛物，其中人類血清白蛋白經由以下各式之連接子以化學方式連接至式I至IV中之任一者之多肽的N端：

其中x為1至20，R為直鏈或分支鏈伸烷基、環烷基、芳基或雜芳基或其組合，R'為直鏈或分支鏈伸烷基、芳基或環烷基或其組合。

在實施例25中，本發明係關於根據實施例22或23之生物共軛物，其中人類血清白蛋白經由以下各式之連接子以化學方式連接至式I至IV中之任一者之多肽的C端：

半衰期延長部分

半衰期延長部分包括白蛋白，白蛋白係指血漿中的最豐富蛋白質，其單體形式中之分子量大致在65與67千道爾頓之間，視起源物種而定。術語「白蛋白」可與「血清白蛋白」互換使用，且不意欲界定與本發明之經修飾肽形成共軛物之白蛋白之來源。因此，如本文中所使用，術語「白蛋白」可指自天然來源(諸如血液或漿液)純化之白蛋白，或其可指以化學方式合成或重組產生之白蛋白。本發明之經修飾肽或多肽視情況經由連接子優先繫栓至白蛋白之表面上之半胱胺酸-34的游離硫醇基團。

半衰期延長部分包括「原生Fc」，其係指包含由於完整抗體之消化而產生或藉由其他方法產生之非抗原結合片段之序列的分子或序列，不論呈單體抑或多聚體形式；且可含有鉸鏈區。原生Fc之原始免疫球蛋白來源較佳為人類起源且可為任何免疫球蛋白，但IgG1及IgG2為較佳的。原生Fc分子由可藉由共價(亦即，雙硫鍵)及非共價締合連接成二聚體或多聚體形式之單體多肽構成。原生Fc分子之單體子單元之間的分子間雙硫鍵之數目在1至4之範圍內，視種類(例如IgG、IgA 及IgE)或子類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgA1及IgGA2)而定。原生Fc之一個實例為由於IgG之番木瓜蛋白酶消化而產生之經雙硫鍵鍵結的二聚體(參見Ellison等人，1982,Nucleic Acids Res.10：4071-9)。如本文中所使用，術語「原生Fc」為單體、二聚體及多聚體形式之總稱。

半衰期延長部分包括「Fc變異體」，其係指自原生Fc修飾但仍包含用於救助受體FcRn(新生兒Fc受體)之結合位點的分子或序列。國際公開案第WO 97/34631號及第WO 96/32478號描述例示性Fc變異體以及與救助受體之相互作用，且藉此以引用之方式併入。因此，術語「Fc變異體」可包含自非人類原生Fc人類化之分子或序列。此外，原生Fc包含因提供本發明之生物共軛物不需要之結構特徵或生物活性而可移除之區域。因此，術語「Fc變異體」包含缺乏一或多個原生Fc位點或殘基或其中一或多個Fc位點或殘基已經修飾之分子或序列，其影響或涉及：(1)雙硫鍵形成，(2)與所選宿主細胞之不相容性，(3)在所選宿主細胞中表現時之N端異質性，(4)糖基化作用，(5)與補體之相互作用，(6)結合至除救助受體外之Fc受體，或(7)抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。Fc變異體更詳細描述於下文。

半衰期延長部分係指「Fc結構域」，其涵蓋原生Fc及如上文所定義之Fc變異體及序列。如同Fc變異體及原生Fc分子一般，術語「Fc結構域」包括呈單體或多聚體形式之分子，不論其由完整抗體消化抑或由其他方法產生。在本發明之一些實施例中，Fc結構域可經由例如Fc結構域與肽序列之間的共價鍵共軛至式I'或式I至IV中之任一者的多肽。此類Fc蛋白質可經由Fc結構域之締合而形成多聚體，且此等Fc蛋白質及其多聚體均為本發明之一態樣。

半衰期延長部分包括「經修飾Fc片段」，其將意指包含經修飾序列之抗體之Fc片段。Fc片段為包含CH2、CH3及鉸鏈區一部分之抗體的一部分。經修飾Fc片段可衍生自例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

如應用於Fc結構域或包含Fc結構域之分子之術語「多聚體」係指具有兩個或兩個以上共價締合之多肽鏈的分子。

連接子

任何連接子基團均為視情況選用的。當存在時，其化學結構並不關鍵，因為其主要充當間隔基。

連接子為含有兩個反應性基團/官能基之化學部分，其中一個基團可與多肽反應且另一個可與半衰期延長部分反應。連接子之兩個反應性基團經由連接基團連接，該連接基團之結構並不關鍵，只要其不干擾連接子偶合至肽及半衰期延長部分。

連接子可由藉由肽鍵連接在一起之胺基酸構成。在本發明之一些實施例中，連接子由1至20個藉由肽鍵連接之胺基酸構成，其中該等胺基酸係選自20種天然產生之胺基酸。在各種實施例中，該1至20個胺基酸係選自胺基酸甘胺酸、絲胺酸、丙胺酸、脯胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、半胱胺酸及離胺酸。在一些實施例中，連接子由大部分非位阻胺基酸(諸如甘胺酸及丙胺酸)構成。在一些實施例中，連接子為聚甘胺酸、聚丙胺酸、甘胺酸與丙胺酸之組合(諸如聚(Gly-Ala))，或甘胺酸與絲胺酸之組合(諸如聚(Gly-Ser))。在其他實施例中，連接子包含1至20個選自非天然胺基酸之胺基酸。儘管3至15個胺基酸殘基之連接子對於與半衰期延長部分共軛而言為較佳的，但本發明涵蓋具有任何長度或組成之連接子。較佳胺基酸連接子為下式之O2Oc：或其重複單元。

本文所述之連接子為例示性的，且本發明涵蓋更長且包括其他殘基之連接子。本發明亦涵蓋非肽連接子。

連接子之連接部分可包含一或多個烷基、烷氧基、烯基、環烷基、芳基、雜芳基及雜環基或其組合。舉例而言，可使用烷基連接子，諸如-NH-(CH₂)z-C(O)-或-S-(CH₂)z-C(O)-或-O-(CH₂)z-C(O)-，其中z為2至20。此等烷基連接子可進一步經任何非位阻性基團取代，該等非位阻性基團包括(但不限於)低碳烷基(例如C1-C6)、低碳醯基、鹵素(例如Cl、Br)、CN、NH₂或苯基。

連接子亦可為聚合性質的。連接子可包括生物穩定或可生物降解之聚合物鏈或單元。具有重複鍵聯之聚合物在生理學狀況下可具有變化的穩定性程度，視鍵不穩定性而定。聚合物可含有諸如聚碳酸酯(-O-C(O)-O-)、聚酯(-C(O)-O-)、聚胺基甲酸酯(-NH-C(O)-O-)、聚醯胺(-C(O)-NH-)之鍵。此等鍵僅由舉例方式提供，且不意欲限制本發明之聚合物鏈或連接子中可採用之鍵的類型。合適之聚合物包括例如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯基吡咯啶酮、聚乙烯醇、聚胺基酸、二乙烯醚順丁烯二酸酐、N-(2-羥丙基)-甲基丙烯醯胺、聚葡萄糖、聚葡萄糖衍生物、聚丙二醇、聚氧乙基化多元醇、肝素、肝素片段、聚醣、纖維素及纖維素衍生物、澱粉及澱粉衍生物、聚伸烷二醇及其衍生物、聚伸烷二醇與其衍生物之共聚物、聚乙烯基乙醚及其類似物與混合物。一種聚合物連接子為例如PEG。一種例示性非肽連接子為聚乙二醇連接子：

其中該連接子具有100至5000kD(例如100至500kD)之分子量。

連接部分較佳含有一或多個胺基酸部分，例如(O2Oc)單元或C_1-4伸烷基-C(O)-、C_1-4伸烷基、-NH-C_2-6伸烷基-NH-或-NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-二胺基單元或其組合，且連接部分連接2個反應性基團或官能基。

反應性基團或官能基較佳為順丁烯二醯亞胺、硫醇或吡啶-2-基二硫基。

製備肽或多肽及用於附接至半衰期延長部分之肽-連接子構築體：

本發明之肽及多肽可藉由用於肽合成之本身已知程序產生。用於肽合成之方法可為固相合成及液相合成中之任一者。因此，所關注之肽及多肽可如下產生：將能夠構成蛋白質之部分肽或胺基酸與其殘餘部分縮合，且當產物具有保護基時，使保護基脫離，此時可製造所需肽。用於縮合及脫除保護基之已知方法包括以下文獻(1)至(5)中所描述之程序。

(1) M. Bodanszky及M. A. Ondetti, Peptide Synthesis, Interscience Publishers, New York, 1966， (2) Schroeder及Luebke, The Peptide, Academic Press, New York, 1965， (3) Nobuo Izumiya等人，Fundamentals and Experiments in Peptide Synthesis, Maruzen, 1975， (4) Haruaki Yajima及Shumpei Sakakibara, Biochemical Experiment Series 1, Protein Chemistry IV, 205, 1977，及 (5) Haruaki Yajima (編)，Development of Drugs-Continued, 14, Peptide Synthesis, Hirokawa Shoten。

在反應之後，肽可藉由習知純化技術(諸如溶劑萃取、管柱層析法、液相層析法及再結晶)之組合純化及分離。若如上文經分離之肽為游離化合物，則可藉由已知方法將其轉化為適合之鹽。相反地，若經分離產物為鹽，則可藉由已知方法將其轉化為游離肽。

多肽之醯胺可藉由使用適合於醯胺化之用於肽合成之樹脂獲得。該樹脂包括氯甲基樹脂、羥甲基樹脂、二苯甲基胺樹脂、胺基甲基樹脂、4-苯甲氧基苯甲基醇樹脂、4-甲基二苯甲基胺樹脂、PAM樹脂、4-羥甲基甲基苯基乙醯胺基甲基樹脂、聚丙烯醯胺樹脂、4-(2',4'-二甲氧基苯基-羥甲基)苯氧基樹脂、4-(2',4'-二甲氧基苯基-Fmoc-胺甲基)苯氧基樹脂、2-氯三苯甲基氯樹脂等。使用此類樹脂，藉由本身已知的各種縮合技術根據目標肽之序列使側鏈之α-胺基及官能基已經適合保護之胺基酸在樹脂上縮合。在反應系列結束時，將肽或經保護之肽自樹脂上移除，且將保護基移除，且必要時，形成雙硫鍵以獲得目標多肽。

關於上文提及之經保護胺基酸的縮合，可使用用於肽合成之多種活化試劑，諸如HATU、HCTU或例如碳化二亞胺。碳化二亞胺包括DCC、N,N'-二異丙基碳化二亞胺及N-乙基-N'-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺。為了使用此類試劑進行活化，可使用外消旋抑制劑添加劑，例如HOBt或Oxyma Pure。經保護胺基酸可連同活化試劑及外消旋抑制劑一起直接添加至樹脂中，或經預活化為對稱酸酐、HOBt酯或HOOBt酯，隨後添加至樹脂中。用於活化經保護胺基酸或使用樹脂進行縮合的溶劑可適當地選自已知適用於肽縮合反應之彼等溶劑。舉例而言，可提及N,N-二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯啶酮、氯仿、三氟乙醇、二甲亞碸、DMF、吡啶、二噁烷、二氯甲烷、四氫呋喃、乙腈、乙酸乙酯或其適合之混合物。

反應溫度可選自迄今已知適用於肽鍵形成之範圍且通常選自約-20℃至50℃之範圍。經活化胺基酸衍生物通常以1.5至4倍過量之比例使用。若藉由利用茚三酮反應之測試發現縮合不充分，則可重複縮合反應以在不移除保護基之情況下達成充分縮合。若重複縮合仍無法得到充分程度之縮合，則可用乙酸酐或乙醯咪唑使未反應之胺基乙醯化。

用於起始物質胺基酸之胺基之保護基包括Z、Boc、第三戊氧基羰基、異冰片氧基羰基、4-甲氧基苯甲氧基羰基、Cl-Z、Br-Z、金剛烷氧基羰基、三氟乙醯基、苯二甲醯基、甲醯基、2-硝基苯基次磺醯基、二苯基膦基硫醯基或Fmoc。可使用之羧基保護基包括(但不限於)上文所提及之C_1-6烷基、C_3-8環烷基及C_6-10芳基-C_1-2烷基以及2-金剛烷基、4-硝基苯甲基、4-甲氧基苯甲基、4-氯苯甲基、苯甲醯甲基、苯甲氧基羰基肼基、第三丁氧基羰基肼基及三苯甲基肼基。

絲胺酸及蘇胺酸之羥基可藉由酯化或醚化來保護。適合於該酯化之基團包括碳衍生基團，諸如低碳烷醯基(例如乙醯基等)、芳醯基(例如苯甲醯基等)、苯甲氧基羰基及乙氧羰基。適合於該醚化之基團包括苯甲基、四氫哌喃基及第三丁基。用於酪胺酸之酚羥基之保護基包括Bzl、Cl₂-Bzl、2-硝基苯甲基、Br-Z及第三丁基。

用於組胺酸之咪唑之保護基包括Tos、4-甲氧基-2,3,6-三乙基苯磺醯基、DNP、苯甲氧基甲基、Bum、Boc、Trt及Fmoc。

起始胺基酸之經活化羧基包括相應酸酐、疊氮化物及活性酯，例如與諸如五氯苯酚、2,4,5-三氯苯酚、2,4-二硝基苯酚、氰基甲基醇、對硝基苯酚、HONB、N-羥基丁二醯亞胺、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺、HOBt等醇形成的酯。起始胺基酸之經活化胺基包括相應磷醯胺。

用於消除保護基之方法包括在催化劑(諸如鈀黑或鈀/碳)存在下使用氫氣之催化還原，使用無水氟化氫、甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、三氟乙酸或該等酸之混合物之酸處理，使用二異丙基乙胺、三乙胺、哌啶、哌嗪之鹼處理，使用液氨中之鈉金屬之還原。藉由上文所提及之酸處理達成之消除反應通常在-20℃至40℃之溫度下進行，且可有利地在添加陽離子受體(諸如苯甲醚、苯酚、苯甲基硫醚、間甲酚、對甲酚、二甲硫、1,4-丁二硫醇、1,2-乙二硫醇)之情況下進行。用於保護組胺酸之咪唑基團之2,4-二硝基苯基可藉由用硫酚處理來消除，而用於保護色胺酸之吲哚基團之甲醯基可藉由用稀氫氧化鈉溶液或稀氨水進行鹼處理以及上文所提及之在1,2-乙二硫醇、1,4-丁二硫醇存在下之酸處理來消除。

用於保護不應參與起始物質之反應的官能基之方法、可使用之保護基、移除保護基之方法及活化欲參與反應之官能基的方法均可自已知基團及方法判斷性地選擇。

用於獲得多肽之醯胺形式之另一方法包含：首先使C端胺基酸之-羧基醯胺化，隨後將肽鏈向N側延長直至所需鏈長，及隨後選擇性地使C端肽之α-胺基及欲形成目標多肽之其餘部分之胺基酸或肽之α-羧基脫除保護基，及使α-胺基及側鏈官能基已在混合溶劑(諸如上文所提及者)中經上文所提及之適合之保護基保護的兩個片段縮合。此縮合反應之參數可與上文所描述相同。藉由上述方法自藉由縮合獲得之經保護肽移除所有保護基，由此得到所需粗肽。此粗肽可藉由已知純化程序純化，且主要部分經凍乾以得到目標醯胺化多肽。為獲得該多肽之酯，使C端胺基酸之α-羧基與所需醇縮合，得到胺基酸酯，且隨後進行用於產生醯胺之上述程序。

經修飾之治療性肽或多肽及/或肽-連接子構築體包括可與半衰期延長部分上之可獲得之反應性官能基反應以形成共價鍵的反應性基團。反應性基團為能夠形成共價鍵之化學基團。反應性基團可通常為羧基、磷醯基、醯基、酯或混合酸酐、順丁烯二醯亞胺、醯亞胺酯、吡啶-2-基-二硫基，由此能夠在半衰期延長部分之目標位點處或在如下文所揭示之經化學修飾之Fc結構域處與如胺基、羥基、羧基或硫醇基之官能基形成共價鍵。用於連接至白蛋白之尤其受關注之反應性基團包括含有順丁烯二醯亞胺基之基團及含有吡啶-2-基-二硫基之基團。

官能基為半衰期延長部分上能夠與經修飾之肽或多肽上之反應性基團反應以形成共價鍵的基團。官能基包括用於與酯反應性實體鍵結之羥基；用於與順丁烯二醯亞胺、含有順丁烯二醯亞胺基之基團或吡啶-2-基-二硫基、醯亞胺酯及硫酯基反應之硫醇基；及用於鍵結至羧酸、磷醯基、醯基之胺基。

流程1至3描述肽-連接子構築體之合成，其中該肽為根據式I至IV中任一者之肽。

流程1描述附接至式I至IV之多肽之N端之含有順丁烯二醯亞胺的連接子之合成。

根據良好確立之醯胺偶合化學方法將肽之N端與一或多個O2Oc胺基酸單元(x為1至20，較佳1至10且更佳3至6)偶合以生成(1A)。使(1A)之末端胺基官能基與經活化之酸(1B)反應，其中R為直鏈或分支鏈伸烷基、芳基、雜芳基、環烷基或其組合，以便生成肽-含有順丁烯二醯亞胺之連接子構築體(1C)。經活化之酸(1B)可購得或容易根據一般熟習此項技術者已知的技術自其相應羧酸獲得。R較佳為直鏈伸烷基，且更佳R為-CH₂-CH₂-。或者，對於側鏈中含有胺基官能基之肽(例如含有離胺酸之肽)，在偶合反應之前需要諸如Alloc之正交保護基，接著進行額外脫除保護基步驟以便獲得(1C)。

流程2A及2B描述附接至根據式I至IV中之任一者之多肽之N端的含有吡啶-2-基-二硫基的連接子之合成。

肽-連接子構築體(1A)如流程1中所描述加以製備，且進一步與式(2A)之經活化之酸反應(其中R'為直鏈或分支鏈伸烷基)，以生成肽-含有吡啶-2-基-二硫基之連接子構築體(2B)。經活化之酸(2A)可購得或容易根據一般熟習此項技術者已知的技術自其相應羧酸獲得。R'較佳為-CH₂-CH₂-。或者，肽-連接子構築體(2C)可使用HO₂C-R'-SH或其經保護形式(例如三苯甲基或Acm基團，需要額外脫除保護基步驟)來製備，且進一步與(2D)反應以生成肽-含有吡啶-2-基-二硫基之連接子構築體(2B)。

使用二胺基單元(諸如-NH-CH₂CH₂-NH-或-NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-)以與流程1、2A及2B中所描述類似之方式將類似反應性基團附接至肽之C端。此類肽-連接子構築體之非限制性實例為：

或者，可根據流程3A、3B及3C將順丁烯二醯亞胺或吡啶-2-基-二硫基反應性基團附接至根據式I至IV中之任一者之多肽：

使用標準醯胺偶合條件將肽之C端處之羧酸基團與一或多個O2Oc胺基酸單元偶合以生成(3A)。末端羧酸官能基與(3B)或(3C)之胺基反應，其中R及R'如上文所定義，以便生成經活化之肽-連接子構築體(3D)或(3E)。另外，當肽含有羧基官能基側鏈(例如Glu或Asp)時，需要正交保護基(例如O-烯丙基)及額外脫除保護基步驟。

肽-連接子構築體3F可使用半胱胺2-氯三苯甲基樹脂獲得，且隨後與3G或3H反應以分別生成肽-連接子構築體3I或3E。

肽-連接子構築體(3J)可獲自二胺樹脂且進一步與(1B)或(2A)反應以分別生成式(3K)或(3L)之肽-連接子構築體。

流程1至3C描述肽-連接子構築體，該等構築體更特定言之用於製備具有白蛋白之生物共軛物。順丁烯二醯亞胺反應性基團及吡啶-2-基-二硫基反應性基團與白蛋白之半胱胺酸34之-SH官能基反應。

生物共軛物

在本發明之一個實施例中，將根據式I至IV中之任一者之肽或多肽共軛(以化學方式/共價附接)至白蛋白之半胱胺酸34之硫醇官能基。在此實施例之一個實施例中，白蛋白-肽係指白蛋白共軛(以化學方式連接)至肽之N端之生物共軛物。在又一實施例中，白蛋白-肽係指白蛋白共軛(以化學方式連接)至肽之C端之生物共軛物。

已發現共價連接至白蛋白之肽展現出實質上比未共軛之對應物大的活體內半衰期。

共軛物之製備：

流程4及5說明用於使APJ促效劑肽或根據式I至IV中之任一者之肽與半衰期延長部分(諸如Fc結構域或白蛋白)共軛之化學反應。

流程4說明式4A之肽-連接子與白蛋白之半胱胺酸34之共軛。

其中L表示肽與順丁烯二醯亞胺官能基之間的連接部分。在一特定實施例中，L為如流程1、3A、3B或3C中所揭示之連接部分。

流程5說明式5A之肽-連接子構築體與白蛋白之半胱胺酸34之共軛。

其中L表示肽與-S-S-吡啶官能基之間的連接部分。在一特定實施例中，L為如流程2、3A、3B或3C中所揭示之連接部分。

用於製造如流程1至5中所描述之共軛物及肽-連接子構築體之方法亦已描述且例示於共申請申請案(代理人案號：PAT055781-US-PSP)中，該案藉此以引用之方式併入。

醫藥組合物

本發明之多肽或生物共軛物或其醯胺、酯或鹽可以多種方式中之任一種投與，該等方式包括皮下、肌肉內、靜脈內、腹膜內、吸入、鼻內、經口等。本發明之尤佳實施例採用連續靜脈內投與本發明之多肽或生物共軛物，或其醯胺、酯或鹽。本發明之多肽可以推注形式或以歷經一段時間之連續輸注形式投與。可使用可植入式泵。在本發明之某些實施例中，間歇或連續多肽投與持續一天至數天(例如2至3天或更多天)，或持續更長時段，例如數週、數月或數年。在一些實施例中，規定間歇或連續多肽或生物共軛物投與持續至少約3天。在其他實施例中，規定間歇或連續多肽投與持續至少約一週。在其他實施例中，規定間歇或連續多肽或生物共軛物投與持續至少約兩週。可能需要在投與期間或在多個劑量之投與之間將平均血漿多肽濃度維持在特定臨限值以上。所需濃度可例如基於個體之生理狀況、疾病嚴重性等確定。該(等)所需值可藉由進行標準臨床試驗來鑑別。或者，肽及其共軛物可經由FcRn機制經口遞送(Nat Rev Immunol.7(9),715-25,2007；Nat Commun.3；3：610,2012,Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 304：G262-G270,2013)。

在另一態樣中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明之多肽或生物共軛物或其醯胺、酯或鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑。該醫藥組合物可針對特定投與途徑經調配，諸如經口投與、非經腸投與及直腸投與等。此外，本發明之醫藥組合物可以固體形式(包括(但不限於)膠囊、錠劑、丸劑、顆粒劑、散劑或栓劑)或以液體形式(包括(但不限於)溶液、懸浮液或乳液)製備。醫藥組合物可經受習知醫藥操作(諸如滅菌)及/或可含有習知惰性稀釋劑、潤滑劑或緩衝劑，以及佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑及緩衝劑等。

適合於可注射使用之醫藥組合物典型地包括無菌水溶液(其中可溶於水)或分散液及用於臨時製備無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑。

就靜脈內投藥而言，適合之載劑包括生理食鹽水、抑菌水、十六醇聚氧乙烯醚(Cremophor)ELTM(BASF,Parsippany,N.J)或磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)。在所有情況下，該組合物均應為無菌的且應為流體至存在容易注射能力之程度。較佳醫藥調配物在製造及儲存條件下為穩定的，且必須經防腐處理以抵抗諸如細菌及真菌之微生物的污染行為。一般而言，相關載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇及液態聚乙二醇及其類似物)及其適合之混合物之溶劑或分散介質。適當流動性可例如藉由使用諸如卵磷脂之塗層、藉由在分散液之情況下維持所需粒度及藉由使用界面活性劑來維持。防止微生物之行為可藉由各種抗細菌及抗真菌劑達成，例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸、硫柳汞及其類似物。在許多情況下，組合物中將較佳包括等張劑，例如糖、多元醇(諸如甘露糖醇、山梨糖醇)、氯化鈉。可注射組合物之延長吸收可藉由將延遲吸收之試劑(例如單硬脂酸鋁及明膠)納入組合物中而達成。

某些可注射組合物為水性等張溶液或懸浮液，且栓劑宜自脂肪乳液或懸浮液製備。該等組合物可經滅菌及/或含有佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、溶解促進劑、用於調節滲透壓之鹽及/或緩衝劑。另外，其亦可含有其他治療學上有價值之物質。該等組合物分別根據習知混合、粒化或塗佈方法製備，且含有約0.1%至75%活性成分，或含有約1%至50%活性成分。

無菌可注射溶液可如下製備：將適當溶劑中之所需量之活性化合物視需要與上文所列舉之成分之一或其組合合併，接著進行過濾滅菌。通常，分散液藉由將活性化合物併入含有鹼性分散介質及來自上文所列舉之彼等成分之所需其他成分的無菌媒劑中來製備。在用於製備無菌可注射溶液之無菌散劑之情況下，較佳製備方法為真空乾燥及冷凍乾燥，其得到活性成分加上來自其先前經無菌過濾溶液之任何其他所需成分的散劑。

經口組合物通常包括惰性稀釋劑或食用載劑。出於經口治療性投藥之目的，活性化合物可以併有賦形劑且以錠劑、糖衣錠或膠囊(例如明膠膠囊)形式使用。經口組合物亦可使用流體載劑來製備以用作漱口劑。可包括醫藥學上可相容之黏合劑及/或佐劑材料作為組合物之一部分。錠劑、丸劑、膠囊、糖衣錠及其類似劑型可含有以下成分或具有類似性質之化合物中的任一者：黏合劑，諸如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑，諸如澱粉或乳糖；崩解劑，諸如褐藻酸、澱粉羥基乙酸鈉或玉米澱粉；潤滑劑，諸如硬脂酸鎂或Sterotes；滑動劑，諸如膠狀二氧化矽；甜味劑，諸如蔗糖或糖精；或調味劑，諸如胡椒薄荷、水楊酸甲酯或橙調味劑。用於經口遞送之調配物宜併有改良胃腸道內之穩定性及/或增強吸收之試劑。

對於藉由吸入投藥而言，本發明治療劑較佳以氣溶膠噴霧形式自加壓容器或含有適合之推進劑(例如氣體，諸如二氧化碳)之分配器或噴霧器遞送。應注意，肺提供用於治療劑之全身遞送之大表面積。

該等試劑可囊封於例如聚合微粒(諸如美國公開案20040096403中所描述者)中，或與此項技術中已知的多種其他藥物遞送媒劑結合。在本發明之其他實施例中，該等試劑與如例如美國公開案20040062718中所描述之帶電脂質結合來遞送。應注意，後一系統已用於投與治療性多肽、胰島素，證明此系統用於投與肽試劑之效用。

全身投與亦可藉由經黏膜或經皮方式進行。

用於經皮施用之適合組合物包括有效量之本發明多肽及適合之載劑。適合於經皮遞送之載劑包括可吸收之藥理學上可接受之溶劑以幫助穿過宿主皮膚。舉例而言，經皮裝置呈繃帶形式，其包含襯底部件、含有該化合物及視情況選用之載劑的貯器、視情況選用之在延長時期內以受控且預定速率向宿主皮膚遞送該化合物的速率控制障壁及使該裝置緊固至皮膚之構件。

用於局部施用(例如至皮膚及眼睛)之適合組合物包括水溶液、懸浮液、軟膏、乳霜、凝膠或例如藉由氣溶膠或其類似物遞送之可噴射調配物。該等局部遞送系統尤其將適於皮膚施用。因此，其尤其適用於此項技術中熟知的局部(包括化妝)調配物。該等調配物可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑及防腐劑。

如本文中所使用，局部施用亦可關於吸入或鼻內施用。其可以來自乾粉吸入器之乾粉形式(單獨、作為混合物(例如與乳糖之乾式摻合物)或混合組分粒子(例如與磷脂))，或以來自使用或不使用適合推進劑之加壓容器、泵、噴灑器、霧化器或噴霧器的氣溶膠噴霧呈遞形式便利地遞送。

本發明進一步提供醫藥組合物及劑型，其包含一或多種使作為活性成分之本發明化合物將降解之速率減小的試劑。本文中稱為「穩定劑」之該等試劑包括(但不限於)諸如抗壞血酸之抗氧化劑、pH緩衝劑或鹽緩衝劑等。

如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指保留本發明多肽之生物有效性及特性且典型地為生物學上或其他方面所需的鹽。在許多情況下，本發明之多肽由於存在胺基及/或羧基或其類似基團而能夠形成酸式鹽及/或鹼式鹽。

醫藥學上可接受之酸加成鹽可由無機酸及有機酸形成，例如乙酸鹽、天冬胺酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、溴化物/氫溴化物、碳酸氫鹽/碳酸鹽、硫酸氫鹽/硫酸鹽、樟腦磺酸鹽、氯化物/鹽酸鹽、氯茶鹼鹽、檸檬酸鹽、乙烷二磺酸鹽、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、馬尿酸鹽、氫碘化物/碘化物、羥乙基磺酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、甲基硫酸鹽、萘甲酸鹽、萘磺酸鹽、菸鹼酸鹽、硝酸鹽、十八酸鹽、油酸鹽、乙二酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥萘酸鹽、磷酸鹽/磷酸氫鹽/磷酸二氫鹽、聚半乳糖醛酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、丁二酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、甲苯磺酸鹽及三氟乙酸鹽。

可衍生成鹽之無機酸包括例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸及其類似酸。可衍生成鹽之有機酸包括例如乙酸、丙酸、乙醇酸、乙二酸、順丁烯二酸、丙二酸、丁二酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、杏仁酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、甲苯磺酸、磺基水楊酸及其類似酸。可用無機及有機鹼形成醫藥學上可接受之鹼加成鹽。

可衍生成鹽之無機鹼包括例如銨鹽及來自週期表之第I行至第XII行之金屬。在某些實施例中，鹽係衍生自鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、銀、鋅及銅；尤其適合之鹽包括銨鹽、鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽及鎂鹽。

可衍生成鹽之有機鹼包括例如一級、二級及三級胺；經取代胺，包括天然產生之經取代胺；環胺；鹼性離子交換樹脂；及其類似物。某些有機胺包括異丙胺、苄星青黴素G(benzathine)、膽酸鹽、二乙醇胺、二乙胺、離胺酸、葡甲胺、哌嗪及緩血酸胺。

本發明之醫藥學上可接受之鹽可藉由習知化學方法自母體化合物(鹼性或酸性部分)合成。通常，該等鹽可藉由使此等化合物之游離酸形式與化學計量之量的適當鹼(諸如Na、Ca、Mg或K之氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽或其類似物)反應或藉由使此等化合物之游離鹼形式與化學計量之量的適當酸反應來製備。該等反應典型地在水中或在有機溶劑中或在二者之混合物中進行。通常，若可實行，則需要使用非水性介質，如醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。其他適合之鹽之清單可見於例如以下文獻中：「Remington's Pharmaceutical Sciences」，第20版，Mack Publishing Company,Easton,Pa.,(1985)；及「Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,and Use」,Stahl及Wermuth(Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2002)。

如本文中所使用，術語「醫藥學上可接受之載劑」包括任何及所有溶劑、分散介質、塗料、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等張劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料及其類似物及其組合，如熟習此項技術者將已知(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版.Mack Printing Company,1990，第1289-1329頁)。除非任何習知載劑均與活性成分不相容，否則涵蓋其在治療或醫藥組合物中之用途。

本發明之方法：

肽之愛帕琳家族為G蛋白偶聯APJ受體之唯一已知的天然配位體家族。愛帕琳基因編碼77個胺基酸之多肽，其經加工成愛帕琳肽之生物學活性形式，諸如愛帕琳-36、愛帕琳-17、愛帕琳-16、愛帕琳-13、愛帕琳-12及愛帕琳-13之經焦麩胺酸鹽修飾形式(Pyr¹-愛帕琳-13)。此等愛帕琳肽中之任一者在結合至APJ受體時均經由Gi及Gq蛋白轉導信號。在心肌細胞中，Gi或Gq偶聯導致細胞內pH、PLC活化及IP3產生之變化，該等變化使肌絲鈣敏感度增強且最終導致提高之心肌收縮性。Gi偶聯抑制活化之Gs、腺苷醯環化酶及cAMP產生，且提高pAkt含量，產生心臟保護。在血管內皮細胞中，經由Gi、pAKT達成之APJ活化導致提高之氧化氮(NO)產生，其使平滑肌鬆弛度提高，導致整體血管擴張。

若心肌收縮性進一步降低且症狀惡化，則患有慢性穩定性心臟衰竭之患者具有偶發性急性失代償事件。此等惡化稱為急性失代償性心臟衰竭(ADHF)。針對ADHF之現有療法包括利尿劑、血管擴張劑及收縮影響劑，其直接提高心肌收縮性。現有靜脈內收縮影響劑(多巴酚丁胺、多巴胺、米利酮、左西孟旦)因其不良事件(諸如心律不整及提高之長期死亡率)而為吾人所熟知。本發明之合成愛帕琳多肽類似物或其生物共軛物提供一種用於ADHF之療法，其提高心肌收縮性而無致心律不整或死亡傾向，且解決慢性心臟衰竭中大量未滿足的醫學需要。

實際上，人類中之急性愛帕琳治療(5分鐘)產生冠狀血管舒張及改良之心輸出量。然而，原生愛帕琳展現出極短t_½(數秒)及活體內作用持續時間(幾分鐘)。本發明之強力合成愛帕琳肽促效劑相比於原生愛帕琳具有較長之半衰期。

心肌細胞中之APJ受體之活化a)經由Gi/Gq、PLC及Ca2+改良心肌收縮性，且b)經由Gi、pAkt活化提供心臟保護，而無增加之cAMP(如在其他收縮影響劑之情況下所見)。此外，內皮細胞中之APJ促效作用導致動脈血管擴張，其藉由卸除左心室之工作而進一步有益於心臟衰竭。總體而言，該等合成愛帕琳多肽類似物可改良整體心臟功能，減少心律不整發生，且提供生存益處。

最近，已有許多臨床前研究出版物聚焦於愛帕琳在糖尿病及胰島素抗性中之潛在涉及。愛帕琳已顯示1)藉由改良肌肉、脂肪及心臟中之葡萄糖吸收而降低血糖含量，2)保護胰腺β細胞免於ER應激及隨後細胞凋亡，3)降低β細胞中之胰島素分泌，及4)調節脂肪組織中兒茶酚胺誘導之脂肪分解。此等方法中已牽涉到pAKT路徑之活化。

根據式I至IV中之任一者之多肽或其醫藥學上可接受之鹽，或其呈游離形式或呈醫藥學上可接受之鹽形式之生物共軛物展現有價值之藥理學特性，例如APJ受體促效特性，例如如活體外及活體內測試(如隨後部分中提供)中所指示，且因此適用於療法。

本發明之多肽或其醫藥學上可接受之鹽或其生物共軛物可適用於治療選自如下疾病之適應症：急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

因此，作為另一實施例，本發明提供式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於治療與APJ受體活性相關之疾病。在另一實施例中，療法係選自對APJ受體之促效作用起反應之疾病。在另一實施例中，該疾病係選自前文提及之清單，適合地為急性失代償性心臟衰竭。在此實施例之又一子組中，本發明提供式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於製造用於治療與APJ受體活性相關之疾病之藥劑。

因此，作為另一實施例，本發明提供式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於療法。在另一實施例中，療法係選自可藉由APJ受體之活化(促效作用)治療之疾病。

在另一實施例中，本發明提供一種治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病的方法，其包含投與治療上可接受之量之式I至IV中之任一者的多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物。在另一實施例中，該疾病係選自前文提及之清單，適合地為急性失代償性心臟衰竭。

在此實施例之又一子組中，本發明提供一種治療與APJ受體活性相關之疾病的方法，其包含投與治療上可接受之量之式I至IV中之任一者的多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物。

治療上欲採用之本發明之醫藥組合物或組合的有效量將取決於例如治療環境及目標。熟習此項技術者將瞭解，用於治療之適當劑量濃度將因此部分地取決於所遞送之分子、使用融合蛋白質變異體所針對之適應症、投藥途徑及患者之體型(體重、體表或器官大小)及狀況(年齡及一般健康狀況)而改變。相應地，臨床醫師可測定劑量之效價且改變投藥途徑以獲得最佳治療效果。典型劑量可在約0.1μg/kg至高達約100mg/kg或大於100mg/kg範圍內變化，取決於上文所提及之因素。在其他實施例中，劑量可在0.1μg/kg至高達約100mg/kg範圍內或在1μg/kg至高達約100mg/kg範圍內變化。

給藥頻率將取決於所使用之調配物中之雙重功能蛋白質的藥物動力學參數。典型地，臨床醫師將投與組合物直至達到會達成所要效應之劑量。因此，組合物可以單次劑量、隨時間以兩次或兩次以上劑量(其可含有或可不含相同量之所需分子)或經由植入裝置或導管以連續輸注形式來投與。適當劑量之進一步精化由一般熟習此項技術者按常規進行且在其常規進行之工作範圍內。適當劑量可經由使用適當劑量-反應資料來確定。

在另一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指當將本發明之多肽或其生物共軛物投與細胞、組織或非細胞生物材料或培養基時對至少部分活化APJ受體有效之量。如一般熟習此項技術者將瞭解，有效之特定試劑之絕對量可視諸如所需生物學終點、欲遞送之試劑、目標組織等因素而變化。一般熟習此項技術者應理解，「治療有效量」可以單次劑量投與或可藉由投與多次劑量而達成。舉例而言，在用於治療心臟衰竭之試劑的情況下，有效量可為足以引起患者之臨床改良之量，該臨床改良例如提高之運動耐量/能力、提高之血壓、減少之體液滯留及/或關於心臟功能(例如射血分數、運動能力(達至力竭之時間))之定量測試的改良結果等。

如本文中所使用，術語「個體」係指動物。動物典型地為哺乳動物。個體亦係指例如靈長類動物(例如人類)、牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥及其類似動物。在某些實施例中，個體為靈長類動物。在其他實施例中，個體為人類。

如本文中所使用，術語「抑制(inhibit/inhibition/inhibiting)」係指減輕或遏止既定病狀、症狀或病症或疾病，或顯著減小生物活性或過程之基線活性。

如本文中所使用，術語「治療(treat/treating/treatment)」任何疾病或病症在一實施例中係指改善該疾病或病症(亦即減緩或阻止或降低該疾病或至少一種其臨床症狀之進展)。在另一實施例中，「治療」係指緩解或改善至少一種身體參數，包括患者無法辨識之彼等參數。在又一實施例中，「治療」係指在身體上(例如使可辨識之症狀穩定化)、在生理上(例如使身體參數穩定化)或在這兩方面調節該疾病或病症。在又一實施例中，「治療」係指預防或延遲該疾病或病症的發作或發展或進展。

如本文中所使用，術語「預防(prevent/preventing/prevention)」係指預防個體中之病症之一或多種症狀的復發、發作或發展，該預防由於投與療法(例如治療劑)或投與療法之組合(例如治療劑之組合)而產生。

如本文中所使用，若個體在生物學、醫學或生活品質上將受益於治療，則該個體「需要」該治療。

除非本文中另外指示或與上下文明顯抵觸，否則如本文中所使用，本發明之上下文中(尤其在申請專利範圍之上下文中)所用之術語「一(a/an)」、「該(the)」及類似術語欲解釋為涵蓋單數及複數。

除非本文中另外指示或另外與上下文明顯抵觸，否則本文所描述之所有方法均可以任何適合順序進行。使用本文所提供之任何及所有實例或例示性語言(例如「諸如」)僅意欲較好地說明本發明，且不對另外所主張之本發明範疇施加限制。

本發明之多肽之活性可藉由下文描述之以下活體外方法評估。

hAPJ鈣通量分析：

將Chem-5 APJ穩定細胞(Millipore # HTS068C)以每孔10,000個細胞接種於384孔格式中之25μl生長培養基中，隨後在37℃組織培養恆溫箱中生長24小時。在分析前一小時，添加每孔25μl FLIPR Calcium 4染料(Molecular Devices R8142)及2.5mM丙磺舒(probenecid)，且在37℃組織培養恆溫箱中培育細胞一小時。將肽溶解於HBSS、HEPES及0.1% BSA緩衝液中，且自50μM至5pM進行10倍連續稀釋，一式三份。使用FLIPR Tetra將肽添加至具有染料之細胞中(1：5，針對在10μM至1pM範圍內之最終肽濃度)。細胞內之FLIPR染料在結合至鈣後發射螢光，而來自細胞外部之螢光經遮蔽。在FLIPR Tetra上使用470至495激發波長及515至575發射波長量測螢光。在肽添加之前10秒時開始進行讀數，總共持續3分鐘。針對各肽濃度計算最大-最小值且繪圖，且使用GraphPad稜鏡軟體針對由肽達成之鈣通量刺激計算曲線反曲點處之EC₅₀值。

血漿穩定性分析：

材料：

工作溶液：在Milli-Q水中製備1mg/mL測試物品

萃取溶液：具有0.1%甲酸及400ng/mL格列本脲(Glyburide)之甲醇：乙腈：水(1：1：1)。

血漿：雄性斯普雷格-道利大鼠(Sprague-Dawley rat)血漿(具有肝素鈉)，購自Bioreclamation LLC(Liverpool,NY)。

全血：雄性斯普雷格道利全血(具有肝素鈉)，購自Bioreclamation LLC(Liverpool,NY)。

肺組織勻漿：雄性大鼠斯普雷格道利肺購自Bioreclamation LLC(Liverpool,NY)。添加5倍體積之1X PBS後，使用寶創(polytron)均質機對肺進行均質化。在4℃下以9000rpm使組織勻漿離心10分鐘。再以3000rpm使上清液離心30分鐘，得到透明上清液。使用市售套組(Pierce,Thermo Scientific)測定蛋白質濃度。

樣品製備程序：(肽)

在以下生物基質中之一者中製備測試物品：肝素化大鼠血漿、肝素化大鼠全血或肺組織勻漿。藉由添加5μL 1mg/mL工作溶液至995μL大鼠血漿或全血中而以5000ng/mL製備血漿及全血樣品。肺組織勻漿樣品如下製備：用磷酸鹽緩衝生理食鹽水(PBS)將肺組織勻漿稀釋至1mg/ml蛋白質濃度，接著添加5μL工作溶液至995μL經稀釋之肺組織勻漿中。在水浴恆溫箱中於37℃下伴隨輕微震盪(65至75rpm)培育樣品。在時間0分鐘、5分鐘、15分鐘、30分鐘、60分鐘、120及240分鐘時，將培育樣品之25μL等分試樣轉移至96孔培養板中，且立即使用150μL萃取溶液沈澱蛋白質。在完成培育實驗之後，在4℃下以4000rpm使樣品培養板離心10分鐘。隨後，使用吸液裝置(Tecan Temo)將上清液轉移至另一培養板，且向所有樣品中添加50μL水。使培養板渦旋，隨後進行LC-MS分析。

樣品製備程序(共軛物)

藉由添加5μL 1mg/mL工作溶液至495μL大鼠血漿中而以50,000ng/mL製備測試物品。在水浴恆溫箱中於37℃下伴隨輕微震盪(65至75rpm)培育樣品。在時間0小時、0.5小時、1小時、2小時、4小時、6及24小時時，將培育樣品之50μL等分試樣轉移至96孔培養板中，且向各樣品中添加100μL 40mM TCEP(參(2-羧乙基)膦)。在37℃下培育反應混合物1小時。在完成反應之後，使用300μL乙腈進行蛋白質沈澱。在4℃下以4000rpm使樣品培養板離心10分鐘。隨後，使用吸液裝置(Tecan Temo)將125μL上清液轉移至另一培養板，且向所有樣品中添加50μL水。使培養板渦旋，隨後進行LC-MS分析。

穩定性樣品之LC-MS分析

HPLC：具有自動取樣器之Agilent 1290 HPLC

管柱：MAC-MOD ACE C18，3μm，30mm×2.1mm i.d.

移動相A：乙腈中之0.1%甲酸

移動相B：水中之0.1%甲酸

梯度程式：

質譜儀：Agilent Q-TOF 6530

資料獲取模式：以100至1000m/z之質量範圍進行全掃描

資料獲取及分析軟體：MassHunter

資料分析：

穩定性分析：穩定性半衰期(t_½)值藉由將各時間點處之峰面積轉化為相對於起始(t=0)峰面積之百分比剩餘來測定。

百分比剩餘=100×(樣品峰面積)÷(t=0峰面積)

計算百分比剩餘值之自然對數且針對樣品時間繪圖(Microsoft Excel)。藉由線性回歸確定此直線之斜率k(Microsoft Excel)。

隨後藉由公式t ½=0.693÷k計算穩定性半衰期。

基於代替活性之血漿穩定性分析：

遵循上述鈣通量方案，具有以下變化。亦用5%大鼠血漿(Bioreclamation # RATPLNAHP-M，經肝素鈉處理)培育肽。在37℃組織培養恆溫箱中培育後，在時間點t₀及t₂₄小時時獲取讀數。以分鐘為單位之肽血漿半衰期藉由計算以下來估算：1)LN((t₀時之EC₅₀)/(t_24小時時之EC₅₀))，2)計算以上值的斜率，及 3)t_1/2=0.693/(斜率^2)。

使用測試分析(如上文所描述)，本發明之多肽展現根據下文提供的表2及3之功效及穩定性。

本發明之多肽或其生物共軛物可具有類似於愛帕琳-13或pyr-1-愛帕琳-13之APJ受體效能。在一個實施例中，本發明之多肽或其生物共軛物具有小於100nM之EC₅₀。在另一實施例中，本發明之多肽或其生物共軛物具有小於50nM、較佳小於25nM且更佳小於15nM之EC₅₀。在又一實施例中，本發明之多肽具有小於10nM之EC₅₀。

本發明之多肽或其生物共軛物可具有優於愛帕琳-13或pyr-1-愛帕琳-13之血漿穩定性。在一個實施例中，血漿穩定性改良為至少2倍。在一個實施例中，本發明之多肽或其生物共軛物具有至少30分鐘之血漿穩定性。在另一實施例中，本發明之多肽或其生物共軛物具有至少60分鐘或至少80分鐘、較佳至少100分鐘且更佳至少150分鐘之血漿穩定性。

本發明之多肽或其生物共軛物可與一或多種其他治療劑同時、或在一或多種其他治療劑之前或之後投與。本發明之多肽可藉由相同或不同投藥途徑分開投與，或與其他試劑在同一醫藥組合物中共同投與。

在一個實施例中，本發明提供一種產品，其包含式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物及至少一種作為同時、分開或依序用於療法中之組合製劑的其他治療劑。在一個實施例中，療法為治療對APJ受體之活化起反應的疾病或病狀。

以組合製劑形式提供之產品包括包含以下的組合物：式I至IV中之任一者之多肽，或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物，及共同在同一醫藥組合物中之其他治療劑；或式I至IV中之任一者之多肽，或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物，及呈分開形式(例如呈套組形式)之其他治療劑。

在一個實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含式I至IV中之任一者之多肽，或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物，及其他治療劑。視情況，該醫藥組合物可包含如上文所描述之醫藥學上可接受之賦形劑。

在一個實施例中，本發明提供一種套組，其包含兩種或兩種以上各別醫藥組合物，其中至少一者含有式I至IV中之任一者之多肽，或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物。在一個實施例中，該套組包含用於分開地保留該等組合物之構件，諸如容器、分隔瓶或分隔箔製包。該套組之一實例為泡殼包裝，如典型地用於封裝錠劑、膠囊及其類似物。

本發明之套組可用於例如經口及非經腸投與不同劑型，以不同劑量間隔投與各別組合物，或針對彼此滴定各別組合物。為了幫助順應性，本發明之套組典型地包含投藥指導。

在本發明之組合療法中，本發明之化合物及另一治療劑可由相同或不同製造商製造及/或調配。此外，可使本發明之化合物與另一治療劑集合成組合療法：(i)在向醫師發放組合產品之前(例如在包含本發明之化合物及另一治療劑之套組之情況下)集合；(ii)在投藥前不久由醫師親自(或在醫師指導下)集合；(iii)在患者自身中集合，例如在依序投與本發明之多肽及另一治療劑期間。

因此，本發明提供式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀，其中該藥劑經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑之用途，其係用於治療對愛帕琳受體之促效作用起反應之疾病或病狀，其中該藥劑與式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物一起投與。

本發明亦提供式I至IV中之任一者之多肽，或其醫藥學上可接受之鹽或其生物共軛物，用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀的方法中，其中該式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物經製備用於與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑，用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀的方法中，其中該另一治療劑經製備用於與式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物一起投與。本發明亦提供式I至IV中之任一者之多肽，或其醯胺、酯或鹽，用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀的方法中，其中該式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑，用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀的方法中，其中該另一治療劑與式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物一起投與。

本發明亦提供式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀，其中患者先前(例如在24小時內)已經另一治療劑治療。本發明亦提供另一治療劑之用途，其係用於治療對APJ受體之促效作用起反應之疾病或病狀，其中患者先前(例如在24小時內)已經式I至IV中之任一者之多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物治療。

在一個實施例中，該另一治療劑係選自收縮影響劑、β腎上腺素激導性受體阻斷劑、HMG-Co-A還原酶抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、鈣離子通道阻斷劑(CCB)、內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、肥胖減輕劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制劑(ASI)、CETP抑制劑、抗凝血劑、鬆弛素、BNP(奈西立肽(nesiritide))及/或NEP抑制劑。

術語與第二試劑或治療「組合」包括共投與本發明之多肽(例如根據式I至IV中之任一者之多肽或其生物共軛物或本文中另外描述之多肽、生物共軛物)與第二試劑或治療；首先投與本發明之化合物，接著投與第二試劑或治療；及首先投與第二試劑或治療，接著投與本發明之化合物。

術語「第二試劑」包括此項技術中已知可治療、預防或減少本文中所描述之疾病或病症的症狀之任何試劑，該疾病或病症為例如對APJ受體之活化起反應之病症或疾病，諸如急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

第二試劑之實例包括收縮影響劑、β腎上腺素激導性受體阻斷劑、HMG-Co-A還原酶抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、鈣離子通道阻斷劑(CCB)、內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、肥胖減輕劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制劑(ASI)、CETP抑制劑、抗凝血劑、鬆弛素、BNP(奈西立肽)及/或NEP抑制劑。

如本文中所使用之收縮影響劑包括例如多巴酚丁胺、異丙基腎上腺素、米利酮、胺利酮(amirinone)、左西孟旦、腎上腺素、去甲腎上腺素、異丙基腎上腺素及地高辛。

如本文中所使用之β腎上腺素激導性受體阻斷劑包括例如醋丁洛爾(acebutolol)、阿替洛爾(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、比索洛爾(bisoprolol)、卡替洛爾(carteolol)、美托洛爾(metoprolol)、納多洛爾(nadolol)、普萘洛爾(propranolol)、索他洛爾(sotalol)及噻嗎洛爾(timolol)。

如本文中所使用之抗凝血劑包括達肝素(Dalteparin)、達那肝素 (Danaparoid)、依諾肝素(Enoxaparin)、肝素、亭紮肝素(Tinzaparin)、華法林(Warfarin)。

術語「HMG-Co-A還原酶抑制劑」(亦稱為β-羥基-β-甲基戊二醯基-輔酶A還原酶抑制劑)包括可用於降低血液中包括膽固醇在內的脂質含量之活性劑。實例包括阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、康百汀(compactin)、達伐他汀(dalvastatin)、二氫康百汀(dihydrocompactin)、氟哚他汀(fluindostatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、洛伐他汀(lovastatin)、匹伐他汀(pitavastatin)、美伐他汀(mevastatin)、普伐他汀(pravastatin)、羅素他汀(rosuvastatin)、利伐他汀(rivastatin)、辛伐他汀(simvastatin)及維洛他汀(velostatin)或其醫藥學上可接受之鹽。

術語「ACE抑制劑」(亦稱為血管收縮素轉化酶抑制劑)包括中斷血管收縮素I酶促降解為血管收縮素II之分子。該等化合物可用於調節血壓及用於治療充血性心臟衰竭。實例包括阿拉普利(alacepril)、貝那普利(benazepril)、貝那普拉(benazeprilat)、卡托普利(captopril)、西羅普利(ceronapril)、西拉普利(cilazapril)、地拉普利(delapril)、依那普利(enalapril)、依那普拉(enaprilat)、福辛普利(fosinopril)、咪達普利(imidapril)、賴諾普利(lisinopril)、莫西普利(moexipril)、莫福普利(moveltopril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quinapril)、雷米普利(ramipril)、螺普利(spirapril)、替莫普利(temocapril)及群多普利(trandolapril)或其醫藥學上可接受之鹽。

術語「內皮素拮抗劑」包括波生坦(bosentan)(參見EP 526708 A)、替唑生坦(tezosentan)(參見WO 96/19459)或其醫藥學上可接受之鹽。

術語「腎素抑制劑」包括地特吉侖(ditekiren)(化學名稱：[1S-[1R*,2R*,4R*(1R*,2R*)]]-1-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-L-脯胺醯基-L- 苯丙胺醯基-N-[2-羥基-5-甲基-1-(2-甲基丙基)-4-[[[2-甲基-1-[[(2-吡啶基甲基)胺基]羰基]丁基]胺基]羰基]己基]-N-α-甲基-L-組胺醯胺)；特拉吉侖(terlakiren)(化學名稱：[R-(R*,S*)]-N-(4-嗎啉基羰基)-L-苯丙胺醯基-N-[1-(環己基甲基)-2-羥基-3-(1-甲基乙氧基)-3-側氧基丙基]-S-甲基-L-半胱胺醯胺)；阿利吉侖(Aliskiren)(化學名稱：(2S,4S,5S,7S)-5-胺基-N-(2-胺甲醯基-2,2-二甲基乙基)-4-羥基-7-{[4-甲氧基-3-(3-甲氧基丙氧基))苯基]甲基}-8-甲基-2-(丙-2-基)壬醯胺)及占吉侖(zankiren)(化學名稱：[1S-[1R*[R*(R*)],2S*,3R*]]-N-[1-(環己基甲基)-2,3-二羥基-5-甲基己基]-α-[[2-[[(4-甲基-1-哌嗪基)磺醯基]甲基]-1-側氧基-3-苯基丙基]-胺基]-4-噻唑丙醯胺)，或其鹽酸鹽，或如由Speedel開發之SPP630、SPP635及SPP800，或式(A)及(B)之RO 66-1132及RO 66-1168：或其醫藥學上可接受之鹽。

若未特定定義，則術語「阿利吉侖」應理解為游離鹼及其鹽，尤其為其醫藥學上可接受之鹽，最佳為其半反丁烯二酸鹽。

術語「鈣離子通道阻斷劑(CCB)」包括二氫吡啶(DHP)及非DHP(例如地爾硫卓(diltiazem)類型及維拉帕米(verapamil)類型CCB)。實例包括胺氯地平(amlodipine)、苄普地爾(Bepridil)、地爾硫卓、非洛地平(felodipine)、里奧斯汀(ryosidine)、伊拉地平(isradipine)、拉西地平(lacidipine)、尼卡地平(nicardipine)、硝苯地平(nifedipine)、尼古地平(niguldipine)、尼魯地平(niludipine)、尼莫地平(nimodipine)、尼索地平(nisoldipine)、尼群地平(nitrendipine)、維拉帕米(Verapamil)及尼伐地平(nivaldipine)，且較佳為選自由以下組成之群的非DHP代表：氟桂利嗪(flunarizine)、普尼拉明(prenylamine)、地爾硫卓、芬地林(fendiline)、加洛帕米(gallopamil)、米貝地爾(mibefradil)、阿尼帕米(anipamil)、替阿帕米(tiapamil)及維拉帕米(verapamil)，或其醫藥學上可接受之鹽。CCB可用作抗高血壓藥、抗心絞痛藥或抗心律不整藥。

術語「利尿劑」包括噻嗪衍生物(例如氯噻嗪(chlorothiazide)、氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)、甲氯噻嗪(methylclothiazide)及氯噻酮(chlorothalidon))。

術語「ApoA-I模擬物」包括D4F肽(例如式D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F)。

血管收縮素II受體拮抗劑或其醫藥學上可接受之鹽應理解為結合於血管收縮素II受體之AT₁受體亞型但不導致受體活化的活性成分。由於AT₁受體之抑制，此等拮抗劑可例如用作抗高血壓劑或用於治療充血性心臟衰竭。

該類AT₁受體拮抗劑包含具有不同結構特徵之化合物，基本上較佳為非肽化合物。舉例而言，可提及選自由以下組成之群的化合物：纈沙坦(valsartan)、洛沙坦(losartan)、坎地沙坦(candesartan)、依普羅沙坦(eprosartan)、伊貝沙坦(irbesartan)、沙普立沙坦(saprisartan)、他索沙坦(tasosartan)、替米沙坦(telmisartan)、下式之名稱為E-1477之化合物下式之名稱為SC-52458之化合物及下式之名稱為ZD-8731之化合物或在各情況下其醫藥學上可接受之鹽。

較佳AT₁受體拮抗劑為坎地沙坦、依普羅沙坦、伊貝沙坦、洛沙坦、替米沙坦、纈沙坦。已銷售之彼等試劑亦較佳，最佳為纈沙坦或其醫藥學上可接受之鹽。

術語「抗糖尿病劑」包括胰島素分泌增強劑，其促進自胰腺β-細胞分泌胰島素。實例包括雙胍衍生物(例如二甲雙胍(metformin))、磺醯脲(SU)(例如甲苯磺丁脲、氯磺丙脲、甲磺氮草脲、乙醯苯磺醯環己脲、4-氯-N-[(1-吡咯啶基胺基)羰基]-苯磺醯胺(格列吡脲(glycopyramide))、格列本脲(glibenclamide)(優降糖(glyburide))、格列齊特(gliclazide)、1-丁基-3-間胺苯磺醯基脲、胺磺丁脲 (carbutamide)、格列波脲(glibonuride)、格列吡嗪(glipizide)、格列喹酮(gliquidone)、格列派特(glisoxepid)、格列丁噻唑(glybuthiazole)、格列丁唑(glibuzole)、格列己脲(glyhexamide)、格列嘧啶(glymidine)、格列平脲(glypinamide)、苯磺丁脲(phenbutamide)及甲苯環醯胺(tolylcyclamide))，或其醫藥學上可接受之鹽。其他實例包括下式之苯丙胺酸衍生物(例如那格列奈(nateglinide)[N-(反-4-異丙基環己基羰基)-D-苯丙胺酸](參見EP 196222及EP 526171) 瑞格列奈(repaglinide)[(S)-2-乙氧基-4-{2-[[3-甲基-1-[2-(1-哌啶基)苯基]丁基]胺基]-2-側氧基乙基}苯甲酸](參見EP 589874、EP 147850 A2(尤其第61頁之實例11)及EP 207331 A1)；二水合(2S)-2-苯甲基-3-(順-六氫-2-異吲哚啉基羰基)-丙酸鈣(例如米格列奈(mitiglinide)(參見EP 507534))；及格列美脲(glimepiride)(參見EP 31058)。

可與本發明之肽及多肽組合使用之第二試劑的其他實例包括DPP-IV抑制劑、GLP-1及GLP-1促效劑。

DPP-IV負責使GLP-1不活化。更特定言之，DPP-IV產生GLP-1受體拮抗劑且由此縮短對GLP-1之生理反應。GLP-1為胰腺胰島素分泌之主要刺激劑，且對葡萄糖處置具有直接有益效應。

DPP-IV(二肽基肽酶IV)抑制劑可為肽或較佳為非肽。DPP-IV抑制劑在各情況下一般地及特定地揭示於例如WO 98/19998、DE 196 16 486 A1、WO 00/34241及WO 95/15309中，在各情況下尤其揭示於化合物技術方案以及實施例之最終產物中，最終產物、醫藥製劑及申請專利範圍之主題由此以引用此等公開案之方式併入本申請案中。較佳為分別特定地揭示於WO 98/19998之實例3及WO 00/34241之實例1中之彼等化合物。

GLP-1(升糖素樣肽-1)為一種促胰島素蛋白質，其描述於例如W.E.Schmidt等人，Diabetologia,28,1985,704-707中及US 5,705,483中。

術語「GLP-1促效劑」包括GLP-1(7-36)NH₂之變異體及類似物，其尤其揭示於US 5,120,712、US 5,118666、US 5,512,549、WO 91/11457及C.Orskov等人，J.Biol.Chem.264(1989)12826中。其他實例包括GLP-1(7-37)，在該化合物中，在GLP-1(7-36)NH₂分子及其變異體及類似物(包括GLN⁹-GLP-1(7-37)、D-GLN⁹-GLP-1(7-37)、乙醯基LYS⁹-GLP-1(7-37)、LYS¹⁸-GLP-1(7-37)及尤其GLP-1(7-37)OH、VAL⁸-GLP-1(7-37)、GLY⁸-GLP-1(7-37)、THR⁸-GLP-1(7-37)、MET⁸-GLP-1(7-37)及4-咪唑丙醯基-GLP-1)的第37個位置處，Arg³⁶之羧基端醯胺官能基經G1置換。亦尤其青睞於GLP促效劑類似物腸促胰島素類似物(exendin)-4，由Greig等人描述於Diabetologia 1999,42,45-50中。

胰島素敏感度增強劑亦包括在定義「抗糖尿病劑」中，其恢復削弱之胰島素受體功能，以減小胰島素抗性且因此增強胰島素敏感度。實例包括降血糖噻唑啶二酮衍生物(例如格列酮(glitazone)、(S)-((3,4-二氫-2-(苯基-甲基)-2H-1-苯并哌喃-6-基)甲基-噻唑啶-2,4-二酮(恩格列酮(englitazone))、5-{[4-(3-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-1-側氧基丙基)-苯基]-甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(達格列酮(darglitazone))、5-{[4-(1-甲基-環己基)甲氧基)-苯基]甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(環格列酮(ciglitazone))、5-{[4-(2-(1-吲哚基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(DRF2189)、5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-乙氧基)]苯甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(BM-13.1246)、5-(2-萘基磺醯基)-噻唑啶-2,4-二酮(AY-31637)、雙{4-[(2,4-二側氧基-5-噻唑啶基)甲基]苯基}甲烷(YM268)、 5-{4-[2-(5-甲基-2-苯基-4-噁唑基)-2-羥基乙氧基]苯甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(AD-5075)、5-[4-(1-苯基-1-環丙烷羰基胺基)-苯甲基]-噻唑啶-2,4-二酮(DN-108)、5-{[4-(2-(2,3-二氫吲哚-1-基)乙氧基)苯基]甲基}-噻唑啶-2,4-二酮、5-[3-(4-氯-苯基])-2-丙炔基]-5-苯基磺醯基)噻唑啶-2,4-二酮、5-[3-(4-氯苯基])-2-丙炔基]-5-(4-氟苯基-磺醯基)噻唑啶-2,4-二酮、5-{[4-(2-(甲基-2-吡啶基-胺基)-乙氧基)苯基]甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(羅格列酮(rosiglitazone))、5-{[4-(2-(5-乙基-2-吡啶基)乙氧基)苯基]-甲基}噻唑啶-2,4-二酮(匹格列酮(pioglitazone))、5-{[4-((3,4-二氫-6-羥基-2,5,7,8-四甲基-2H-1-苯并哌喃-2-基)甲氧基)-苯基]-甲基}-噻唑啶-2,4-二酮(曲格列酮(troglitazone))、5-[6-(2-氟-苯甲氧基)萘-2-基甲基]-噻唑啶-2,4-二酮(MCC555)、5-{[2-(2-萘基)-苯并噁唑-5-基]-甲基}噻唑啶-2,4-二酮(T-174)及5-(2,4-二側氧基噻唑啶-5-基甲基)-2-甲氧基-N-(4-三氟甲基-苯甲基)苯甲醯胺(KRP297))。

其他抗糖尿病劑包括胰島素信號傳導路徑調節劑，如蛋白酪胺酸磷酸酶(PTPase)之抑制劑、抗糖尿病非小分子模擬化合物及麩醯胺酸-果糖-6-磷酸醯胺基轉移酶(GFAT)之抑制劑；影響失調性肝臟葡萄糖產生之化合物，如葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)之抑制劑、果糖-1,6-雙磷酸酶(F-1,6-Bpase)之抑制劑、肝糖磷酸化酶(GP)之抑制劑、升糖素受體拮抗劑及磷酸烯醇丙酮酸羧基激酶(PEPCK)之抑制劑；丙酮酸去氫酶激酶(PDHK)抑制劑；胃排空之抑制劑；胰島素；GSK-3之抑制劑；類視黃素X受體(RXR)促效劑；β-3 AR之促效劑；解偶蛋白(UCP)之促效劑；非格列酮類型PPARγ促效劑；雙重PPARα/PPARγ促效劑；含有抗糖尿病釩之化合物；腸促胰島素激素，如升糖素樣肽-1(GLP-1)及GLP-1促效劑；β-細胞咪唑啉受體拮抗劑；米格列醇(miglitol)；α₂-腎上腺素激導性拮抗劑；及其醫藥學上可接受之鹽。

在一個實施例中，本發明提供一種組合，特定言之一種醫藥組合，其包含治療有效量之根據式I至IV中之任一者之定義的多肽，或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物，及一或多種選自β-腎上腺素激導性受體阻斷劑之治療活性劑，諸如醋丁洛爾、阿替洛爾、倍他洛爾、比索洛爾、美托洛爾、納多洛爾、普萘洛爾、索他洛爾及噻嗎洛爾；血管收縮素II受體拮抗劑，諸如AT1阻斷劑；抗糖尿病劑，諸如DPPIV抑制劑(例如維格列汀(vildagliptin))及GLP1肽促效劑。

術語「肥胖減輕劑」包括脂肪酶抑制劑(例如羅氏鮮(orlistat))及食慾遏止劑(例如諾美婷(sibutramine)及苯丁胺)。

醛固酮合成酶抑制劑或其醫藥學上可接受之鹽應理解為具有抑制醛固酮產生之特性的活性成分。醛固酮合成酶(CYP11B2)為催化腎上腺皮質中醛固酮產生之最後步驟(亦即11-去氧皮質固酮轉化成醛固酮)之粒線體細胞色素P450酶。已知用所謂的醛固酮合成酶抑制劑抑制醛固酮產生為治療低鉀血症、高血壓、充血性心臟衰竭、心房纖維顫動或腎衰竭之成功變體。該醛固酮合成酶抑制活性容易由熟習此項技術者根據標準分析(例如US 2007/0049616)測定。

該類醛固酮合成酶抑制劑包含類固醇及非類固醇醛固酮合成酶抑制劑，後者最佳。

青睞於市售醛固酮合成酶抑制劑或衛生當局已核可之彼等醛固酮合成酶抑制劑。

該類醛固酮合成酶抑制劑包含具有不同結構特徵之化合物。非類固醇醛固酮合成酶抑制劑之一實例為下式之法屈唑之氫氯化物的(+)-對映異構體(美國專利4617307及4889861) 或適當時為其醫藥學上可接受之鹽。

適用於該組合之醛固酮合成酶抑制劑為一般地及特定地揭示於例如US2007/0049616中的化合物及類似物，尤其揭示於化合物技術方案以及實施例之最終產物中，最終產物、醫藥製劑及申請專利範圍之主題由此以引用此公開案之方式併入本申請案中。適用於本發明之較佳醛固酮合成酶抑制劑包括(但不限於)4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-3-甲基苯甲腈；5-(2-氯-4-氰基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸(4-甲氧基苯甲基)甲基醯胺；4'-氟-6-(6,7,8,9-四氫-5H-咪唑并[1,5-a]氮呯-5-基)聯苯-3-甲腈；5-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸丁酯；4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-2-甲氧基苯甲腈；5-(2-氯-4-氰基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸4-氟苯甲基酯；5-(4-氰基-2-三氟甲氧基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸甲酯；5-(4-氰基-2-甲氧基苯基)-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-甲酸2-異丙氧基乙酯；4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-2-甲基苯甲腈；4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-3-氟苯甲腈；4-(6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)-2-甲氧基苯甲腈；3-氟-4-(7-亞甲基-6,7-二氫-5H-吡咯并[1,2-c]咪唑-5-基)苯甲腈；順-3-氟-4-[7-(4-氟-苯甲基)-5,6,7,8-四氫-咪唑并[1,5-a]吡啶-5-基]苯甲腈；4'-氟-6-(9-甲基-6,7,8,9-四氫-5H-咪唑并[1,5-a]氮呯-5-基)聯苯-3-甲腈；4'-氟-6-(9-甲基-6,7,8,9-四氫-5H-咪唑并[1,5-a]氮呯-5-基)聯苯-3-甲腈，或在各情況下，其(R)或(S)對映異構體；或適當時為其醫藥學上可接受之鹽。

術語醛固酮合成酶抑制劑亦包括WO2008/076860、WO2008/076336、WO2008/076862、WO2008/027284、WO2004/046145、WO2004/014914、WO2001/076574中揭示之化合物及類似物。

此外，醛固酮合成酶抑制劑亦包括美國專利申請案US2007/0225232、US2007/0208035、US2008/0318978、US2008/0076794、US2009/0012068、US20090048241及PCT申請案WO2006/005726、WO2006/128853、WO2006128851、WO2006/128852、WO2007065942、WO2007/116099、WO2007/116908、WO2008/119744及歐洲專利申請案EP 1886695中揭示之化合物及類似物。適用於本發明之較佳醛固酮合成酶抑制劑包括(但不限於)如由Speedel開發之8-(4-氟苯基)-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)-2-氟苯甲腈；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)-2,6-二氟苯甲腈；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)-2-甲氧基苯甲腈；3-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)苯甲腈；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)苯二甲腈；4-(8-(4-氰基苯基)-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)苯甲腈；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)苯甲腈；4-(5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪-8-基)萘-1-甲腈；8-[4-(1H-四唑-5-基)苯基]-5,6-二氫-8H-咪唑并[5,1-c][1,4]噁嗪，或在各情況下，其(R)或(S)對映異構體；或適當時為其醫藥學上可接受之鹽。

適用於該組合中之醛固酮合成酶抑制劑為一般地及特定地揭示於例如WO 2009/156462及WO 2010/130796中的化合物及類似物，尤其揭示於化合物申請專利範圍以及實施例之最終產物中。適合於本發明中之組合之較佳醛固酮合成酶抑制劑包括3-(6-氟-3-甲基-2-吡啶-3-基-1H-吲哚-1-基甲基)-苯甲腈鹽酸鹽、1-(4-甲烷磺醯基-苯甲基)-3-甲基-2-吡啶-3-基-1H-吲哚、2-(5-苯甲氧基-吡啶-3-基)-6-氯-1-甲基-1H-吲哚、5-(3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-菸鹼酸乙酯、N-[5-(6-氯-3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-乙烷磺醯胺、吡咯啶-1-磺酸5-(6-氯-3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基酯、N-甲基-N-[5- (1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-甲烷磺醯胺、6-氯-1-甲基-2-{5-[(2-吡咯啶-1-基-乙基胺基)-甲基]-吡啶-3-基}-1H-吲哚-3-甲腈、6-氯-2-[5-(4-甲烷磺醯基-哌嗪-1-基甲基)-吡啶-3-基]-1-甲基-1H-吲哚-3-甲腈、6-氯-1-甲基-2-{5-[(1-甲基-哌啶-4-基胺基)-甲基]-吡啶-3-基}-1H-吲哚-3-甲腈、嗎啉-4-甲酸[5-(6-氯-3-氰基-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-醯胺、N-[5-(6-氯-1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-乙烷磺醯胺、C,C,C-三氟-N-[5-(1-甲基-1H-吲哚-2-基)-吡啶-3-基甲基]-甲烷磺醯胺、N-[5-(3-氯-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-4-三氟甲基-苯磺醯胺、N-[5-(3-氯-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-1-苯基-甲烷磺醯胺、N-(5-(3-氯-4-氰基苯基)吡啶-3-基)丁烷-1-磺醯胺、N-(1-(5-(4-氰基-3-甲氧基苯基)吡啶-3-基)乙基)乙烷磺醯胺、N-((5-(3-氯-4-氰基苯基)吡啶-3-基)(環丙基)甲基)乙烷磺醯胺、N-(環丙基(5-(1H-吲哚-5-基)吡啶-3-基)甲基)乙烷磺醯胺、N-(環丙基(5-萘-1-基-吡啶-3-基)甲基)乙烷磺醯胺、乙烷磺酸[5-(6-氯-1-甲基-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-2-基-吡啶-3-基甲基]-醯胺及乙烷磺酸{[5-(3-氯-4-氰基-苯基)-吡啶-3-基]-環丙基-甲基}-乙基-醯胺。

術語「內皮素受體阻斷劑」包括波生坦及安立生坦(ambrisentan)。

術語「CETP抑制劑」係指抑制膽固醇酯轉移蛋白(CETP)介導之各種膽固醇酯及三酸甘油酯自HDL輸送至LDL及VLDL的化合物。該CETP抑制活性容易由熟習此項技術者根據標準分析(例如美國專利第6,140,343號)來測定。實例包括揭示於美國專利第6,140,343號及美國專利第6,197,786號中之化合物(例如[2R,4S]4-[(3,5-雙-三氟甲基-苯甲基)-甲氧基羰基-胺基]-2-乙基-6-三氟甲基-3,4-二氫-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(托塞曲匹(torcetrapib))；揭示於美國專利第6,723,752號中之化合物(例如(2R)-3-{[3-(4-氯-3-乙基-苯氧基)-苯基]-[[3-(1,1,2,2-四氟-乙氧基)-苯基]-甲基]-胺基}-1,1,1-三氟-2-丙醇)；揭示於美國專利申請案第10/807,838號中之化合物；揭示於美國專利第5,512,548號中之多肽衍生物；分別揭示於J.Antibiot.,49(8)：815-816(1996)及Bioorg.Med.Chem.Lett.；6：1951-1954(1996)中之玫瑰菌素衍生物及膽固醇酯之含磷酸酯的類似物。此外，CETP抑制劑亦包括揭示於WO2000/017165、WO2005/095409、WO2005/097806、WO 2007/128568、WO2008/009435、WO 2009/059943及WO2009/071509中之彼等化合物。

術語「NEP抑制劑」係指抑制中性內肽酶(NEP)EC 3.4.24.11之化合物。實例包括坎沙曲(Candoxatril)、坎沙曲拉(Candoxatrilat)、右卡多曲(Dexecadotril)、依卡曲爾(Ecadotril)、消旋卡多曲(Racecadotril)、山帕曲拉(Sampatrilat)、法西多曲(Fasidotril)、奧馬曲拉(Omapatrilat)、傑莫曲拉(Gemopatrilat)、達魯曲(Daglutril)、SCH-42495、SCH-32615、UK-447841、AVE-0848、PL-37及(2R,4S)-5-聯苯-4-基-4-(3-羧基-丙醯胺基)-2-甲基-戊酸乙酯或其醫藥學上可接受之鹽。NEP抑制劑亦包括如揭示於美國專利第US 5,155,100號中之經膦醯基/聯芳基取代之二肽衍生物。NEP抑制劑亦包括如揭示於PCT申請案第WO 2003/104200號中之N-巰基醯基苯丙胺酸衍生物。NEP抑制劑亦包括如揭示於PCT申請案第WO 2008/133896號、第WO 2009/035543號或第WO 2009/134741號中之雙重作用抗高血壓劑。其他實例包括揭示於美國申請案第12/788,794號、第12/788,766號及第12/947,029號中之化合物。NEP抑制劑亦包括揭示於WO 2010/136474、WO 2010/136493、WO 2011/061271及美國臨時申請案第61/414171號及第61/414163號中之化合物。

在一個實施例中，本發明提供一種活化個體中之APJ受體的方法，其中該方法包含向該個體投與治療有效量之根據式I至IV中之任一者之定義的多肽，或其醯胺、酯或鹽，或其生物共軛物。

在一個實施例中，本發明提供一種治療個體中對APJ受體之活化起反應的病症或疾病之方法，其中該方法包含向該個體投與治療有效量之根據式I至IV中之任一者之定義的多肽，或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物。

在一個實施例中，本發明提供一種治療個體中對APJ受體之活化(促效作用)起反應的病症或疾病之方法，其中該病症或該疾病係選自急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。

在一個實施例中，本發明提供一種根據式I至IV中之任一者之定義的多肽或其生物共軛物，其用作藥劑。

在一個實施例中，本發明提供根據式I至IV中之任一者之定義的多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於製造用於治療對APJ受體之活化起反應的病症或疾病之藥劑。在另一實施例中，本發明提供根據式I至IV中之任一者之定義的多肽或其醯胺、酯或鹽或其生物共軛物的用途，其係用於製造用於治療對APJ受體之活化起反應的病症或疾病之藥劑，其中該病症或疾病尤其係選自急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷) 及子癇先兆。

本發明之例證：肽及多肽合成

該等肽藉由標準固相Fmoc化學方法合成。該等肽在Prelude^TM肽合成器(Protein Technologies,Inc.,Tucson,USA)及Liberty微波肽合成器(CEM Corporation,North Carolina,USA)上經組裝。C端上具有游離羧酸之肽由2-氯三苯甲基氯-PS-樹脂(ABCR,Karlsruhe,Germany或AnaSpec,Inc.,California,USA)合成。C端上具有未經取代之羧醯胺之肽由經Fmoc保護之Rink-Amide-AM-PS樹脂(Merck,Darmstadt,Germany)合成。C端上具有N上經單取代之羧醯胺之肽由負載有胺之BAL-AM-PS樹脂(EMC Microcollections,Tübingen,Germany)合成。

該等肽藉由製備型逆相HPLC純化。使用以下管柱：

˙Waters SunFire Prep C18 OBD管柱，5μm，30×100mm，部件編號186002572(一根管柱或串聯之兩根管柱)

˙Waters SunFire Prep C18 OBD管柱，5μm，30×150mm，部件編號186002797

˙Waters Atlantis Prep OBD T3管柱，5μm，30×150mm，部件編號186003703

˙Waters XBridge Prep C8 OBD管柱，5μm，30×150mm，部件編號186003083

˙Machery-Nagel Nucleosil® 100-5 C18，5μm，250×40mm，部件編號715340.400

移動相由溶離劑A(H₂O中之0.1% TFA)及溶離劑B(ACN)組成。梯度基於分離問題之特定需求來設計。純產物自ACN/H₂O凍乾。

藉由使用λ=214nm處之UV偵測的分析型HPLC及使用電噴霧電離的UPLC-MS對產物進行分析。

例示於表4中之肽使用下文描述之通用程序合成。未經取代之N或C端分別由斜體H-或-OH指示。

分析方法 1a)HPLC-分析方法A

˙管柱：具有ProntoSil 120-3-C18-H(3μm)之Bischoff UHC-640(53×4.0mm)；部件編號：0604F185PS030

˙溶離劑A：水中之0.07% TFA/溶離劑B：ACN中之0.1% TFA

˙流速：1.5ml/min

˙溫度：40℃

˙梯度：

1b)HPLC-分析方法B

˙溶離劑A：水中之0.1% TFA/溶離劑B：ACN中之0.4% TFA/溶離劑C：MeOH

˙流速：1.5ml/min

˙溫度：25℃

˙梯度：

1c)HPLC-分析方法C

˙管柱：XBridge BEH300 C18(100×4.6mm)，3μm；部件編號：186003612

˙溶離劑A：水中之0.1% TFA/溶離劑B：ACN中之0.1% TFA

˙流速：1.0ml/min

˙溫度：40℃

˙梯度：

2)UPLC-MS-分析方法D

˙Waters Acquity UPLC® BEH C18，1.7μm，2.1×50mm；部件編號：186002350

˙溶離劑A：水中之0.1% FA；溶離劑B：ACN中之0.1% FA

˙流速：0.7ml/min

˙溫度：40℃

˙梯度：

3)UPLC-HRMS-分析方法E

˙Waters Acquity UPLC® BEH C18，1.7μm，2.1×50mm；部件編號：186002350

˙溶離劑A：0.1% FA；溶離劑B：ACN中之0.1% FA

˙流速：1.0ml/min

˙溫度：50℃

˙梯度：在4.4分鐘中2%至98%

4)HPLC-分析方法F

˙管柱：YMC-Gel ODS-A-C18

˙溶離劑A：水中之0.1% v/v TFA/溶離劑B：ACN/溶離劑A，9/1 v/v

˙具有以下梯度之溶離

5)UPLC-MS-分析方法G

˙Waters Acquity UPLC® BEH C18，1.7μm，2.1×50mm；部件編號：186002350

˙溶離劑A：水中之0.05% FA+3.75mM乙酸銨；溶離劑B：ACN中之0.04% FA

˙流速：1.0ml/min

˙溫度：50℃

˙梯度：在1.7分鐘中2%至44%

6)UPLC-HRMS-分析方法H

˙Waters Acquity UPLC® BEH C18，1.7μm，2.1×50mm；部件編號：186002350

˙流速：1.0ml/min

˙溫度：50℃

˙梯度：在4.4分鐘中2%至98%

4)UPLC-MS-分析方法I

˙Waters Acquity UPLC® BEH300 SEC保護管柱，4.6×30mm；部件編號：186005793

˙溶離劑A：水中之0.1% FA；溶離劑B：ACN中之0.04% FA

˙流速：1.0ml/min

˙梯度：50% B，持續6分鐘

5)UPLC-MS-分析方法J

˙Waters Acquity UPLC® ProSwift RP-3，1.7μm，4.6×50mm；部件編號：064298

˙溶離劑A：水中之0.1% FA；溶離劑B：ACN中之0.08% FA

˙流速：2.0ml/min(在2min中3%至80% B)-流速1.8mL/min

˙溫度：40℃

˙梯度：在3分鐘中2%至98%

關於實例1至63之肽之分析資料概述於表5中，且使用上文描述之分析方法產生。

通用合成程序 1)將第一胺基酸負載至2-氯三苯甲基氯樹脂上且移除Fmoc

用DCM充分洗滌2-氯三苯甲基氯樹脂(1當量，1.0至1.6mmol/g)。將所需胺基酸(就1.6mmol/g負載量而言，典型地相對於樹脂為0.5至2當量)溶解於DCM(每公克樹脂約10mL)及DIPEA(就1.6mmol/g負載量而言，相對於樹脂為4當量)中。將溶液添加至樹脂中，且在室溫下震盪懸浮液19小時。使樹脂排水，且隨後依序用DCM/MeOH/DIPEA(17：2：1)、DCM、DMA、DCM充分洗滌。

對於Fmoc移除及負載量之測定而言，將樹脂反覆地與哌啶/DMA(1：4)或4-甲基哌啶/DMA(1：4)(12×每公克初始樹脂10mL)一起震盪，且用DMA(2×每公克初始樹脂10mL)洗滌。用MeOH將組合溶液稀釋至每公克初始樹脂250mL之體積 V 。用MeOH將此溶液之2mL等分試樣(V _a)進一步稀釋至250mL(V _t)。針對參考物MeOH在299.8nm下量測UV吸收，得到吸收A。依序用DMA、DCM、DMA、DCM充分洗滌樹脂，且在40℃下於高真空中乾燥，得到 m g樹脂。

根據下式計算樹脂之負載量：負載量[mol/g]=(A×V _t×V)/(d×ε×V _a×m)

(其中d：光析槽之寬度；ε=7800L mol^-1cm^-1)

2)固相肽合成 2a)Prelude^TM合成器上之合成循環A

用DMA洗滌樹脂。藉由重複用4-甲基哌啶/DMA(1：4)處理來移除Fmoc。用DMA洗滌樹脂。如下進行偶合：添加Fmoc-胺基酸(3當量；NMP中之0.2M溶液)、HCTU(3當量；NMP中之0.3M溶液)及DIPEA(3.3當量；NMP中之0.66M溶液)，接著在室溫下將懸浮液與氮氣混合，持續典型地15分鐘至4小時，視特定需求而定。在用DMA洗滌之後，典型地重複偶合步驟1至3次，視特定需求而定。在用DMA洗滌之後，藉由添加Ac₂O/吡啶/DMA(1：1：8)之混合物且隨後在室溫下混合該懸浮液來進行封端。用DMA洗滌樹脂。

2b)Prelude^TM合成器上之合成循環B

用DMA洗滌樹脂。藉由重複用哌啶/DMA(1：4)處理來移除Fmoc。用DMA洗滌樹脂。如下進行偶合：添加Fmoc-胺基酸(3當量；NMP中之0.3M溶液)、HCTU(3當量；NMP中之0.3M溶液)及DIPEA(4.5當量；NMP中之0.9M溶液)，接著在室溫下將懸浮液與氮氣混合，持續典型地15分鐘至4小時，視特定需求而定。在用DMA洗滌之後，典型地重複偶合步驟1至3次，視特定需求而定。在用DMA洗滌之後，藉由添加Ac₂O/吡啶/DMA(1：1：8)之混合物且隨後在室溫下混合該懸浮液來進行封端。用DMA洗滌樹脂。

2c)Liberty^TM合成器上之合成循環C

用DMF及DCM洗滌樹脂。藉由用20%哌啶/DMF處理來移除Fmoc(典型地每0.1mmol使用7ml，兩次)。用DMF及DCM洗滌樹脂。如下進行偶合：添加Fmoc-胺基酸(5當量；DMF中之0.2M溶液)、HCTU(5當量；DMF中之0.5M溶液)及DIPEA(10當量；NMP中之2M溶液)，接著在75℃或50℃下將懸浮液與氮氣混合，使用微波功率0至20瓦持續典型地5至50分鐘，視特定需求而定。在用DMF洗滌之後，可能重複偶合步驟一次，視特定需求而定。用DMF洗滌樹脂。

3)在有或無同時移除保護基之情況下自樹脂裂解 3a)裂解方法A

在室溫下將樹脂(0.1mmol)與95%水性TFA/EDT/TIS(95：2.5：2.5)(2mL)一起震盪，持續典型地1.5至2小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮溶液(2mL)。在室溫下震盪懸浮液，持續典型地0.75至1小時，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(2mL)，且在室溫下震盪懸浮液，持續典型地0.75至1小時。過濾出裂解溶液。用95%水性TFA(1mL)沖洗樹脂一次。將組合之裂解及洗滌溶液緩慢地傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(10mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。

3b)裂解方法B

在室溫下將樹脂(0.1mmol)與95%水性TFA/TIS(97.5：2.5)(2mL)一起震盪，持續1.5小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮溶液(2mL)。在室溫下震盪懸浮液45分鐘，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(2mL)，且在室溫下震盪懸浮液45分鐘。過濾出裂解溶液。用95%水性TFA(1mL)沖洗樹脂一次。將組合之裂解及洗滌溶液緩慢地傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(10mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。

3c)裂解方法C

將HFIP/DCM(10：90)(2mL)添加至樹脂(0.1mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液10分鐘。將裂解溶液過濾至iPrOH(0.8mL)中。重複此步驟3次，直接使裂解溶液與第一含iPrOH之裂解溶液組合。在高真空中將組合之裂解溶液濃縮至乾燥。殘餘物自tBuOH/H₂O(4：1)凍乾。

3d)裂解方法D

在室溫下將樹脂(0.1mmol)與95%水性TFA/TIS/DTT(95：2.5：2.5)(3mL)一起震盪，持續3小時。過濾出裂解溶液。用95%水性TFA(1mL)沖洗樹脂一次。將組合之裂解及洗滌溶液緩慢地傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(10至15mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。乙醚(10mL)添加至殘餘物中，將懸浮液渦旋3分鐘且離心，且傾出上清液。重複洗滌過程兩次。在高真空中乾燥固體。

下文中描述代表性實例之合成。

實例1 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-Pip-nle-a-f-OH

˙製備中間體1a

(負載具有Fmoc-f-OH之2-氯三苯甲基氯樹脂，移除Fmoc且測定樹脂之負載量)

類似於上述通用程序，使2-氯三苯甲基氯樹脂(3.0g，4.80mmol)與Fmoc-f-OH(1.86g，4.80mmol)於DCM(30mL)中之溶液及DIPEA(3.35mL，19.2mmol)反應，得到中間體1a(3.53g，負載量=0.96mmol/g)。

˙製備中間體1b

(組裝線性肽)

在Prelude^TM肽合成器上使中間體1a(0.100mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備實例1

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

將95%水性TFA/EDT/TIS(95：2.5：2.5)之混合物(2mL)添加至中間體1b(0.1mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液1.5小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮裂解溶液(2mL)。在室溫下震盪懸浮液45分鐘，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(2mL)，且在室溫下震盪懸浮液45分鐘。過濾出裂解溶液，且用95%水性TFA(1mL)洗滌樹脂。將組合之裂解及洗滌溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(10mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例1(86.5mg，0.044mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法A：t_R=3.43min)及UPLC-MS(分析方法D；經量測：[M+3H]³⁺=496.7；經計算：[M+3H]³⁺=496.6)分析純產物。

實例29 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-nle-a-f-OH

˙製備中間體29a

類似於上述通用程序，使2-氯三苯甲基氯樹脂(2g，3.20mmol)與Fmoc-f-OH(992mg，2.56mmol)於DCM(20mL)中之溶液及DIPEA(2.236mL，12.80mmol)反應，得到中間體29a(2.36g，負載量=0.82mmol/g)。

˙製備中間體29b

(組裝線性肽)

在Prelude^TM肽合成器上使中間體29a(0.600mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備實例29

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

˙將95%水性TFA/EDT/TIS(95：2.5：2.5)之混合物(10mL)添加至中間體29b(0.6mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液2小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮裂解溶液(10mL)。在室溫下震盪懸浮液1小時，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(10mL)，且在室溫下震盪懸浮液1小時。過濾出裂解溶液。將組合之裂解溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(200mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(100mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例29(538.7mg，0.279mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法A：t_R=3.35min)及UPLC-MS(分析方法D；經量測：[M+3H]³⁺=491.8；經計算：[M+3H]³⁺=491.9)分析純產物。

實例32 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-nle-NH(苯乙基)

˙製備中間體32a

(組裝線性肽)

在Prelude^TM肽合成器上使苯乙基胺-BAL-PS樹脂(167mg，0.100mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備實例32

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

將95%水性TFA/EDT/TIS(95：2.5：2.5)之混合物(2mL)添加至中間體32a(0.1mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液1.5小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮裂解溶液(2mL)。在室溫下震盪懸浮液1.5小時，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(2mL)，且在室溫下震盪懸浮液2小時。過濾出裂解溶液，且用95%水性TFA(1mL)洗滌樹脂。將組合之裂解溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(5mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例32(37.0mg，0.020mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法B：t_R=5.47min)及UPLC-MS(分析方法D；經量測：[M+3H]³⁺=453.6；經計算：[M+3H]³⁺=453.6)分析純產物。

實例33 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-nle-a-f-NH ₂

˙製備中間體33a

(組裝線性肽)

在Prelude^TM肽合成器上使經Fmoc保護之Rink-Amide-AM-PS樹脂(217mg，0.100mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備實例33

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

將95%水性TFA/TIS(97.5：2.5)之混合物(2mL)添加至中間體33a(0.1mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液1.5小時。過濾出裂解溶液，且添加新鮮裂解溶液(2mL)。在室溫下震盪懸浮液45分鐘，隨後過濾出裂解溶液。添加新鮮溶液(2mL)，且在室溫下震盪懸浮液45分鐘。過濾出裂解溶液，且用95%水性TFA(1mL)洗滌樹脂。將組合之裂解溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(10mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例33(108.9mg，0.055mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法A：t_R=3.17min)及UPLC-MS(分析方法D；經量測：[M+3H]³⁺=491.6；經計算：[M+3H]³⁺=491.6)分析純產物。

實例43 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-nle-(4-苯氧基哌啶-1-基)

˙製備中間體43a

(負載具有Fmoc-nle-OH之2-氯三苯甲基氯樹脂，移除Fmoc且測定樹脂之負載量)

類似於上述通用程序，使2-氯三苯甲基氯樹脂(300mg，0.48mmol)與Fmoc-Nle-OH(136mg，0.384mmol)於DCM(3mL)中之溶液及DIPEA(0.335mL，1.92mmol)反應，得到中間體43a(329mg，負載量=0.99mmol/g)。

˙製備中間體43b

(組裝線性肽)

在Prelude^TM肽合成器上使中間體43a(0.100mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備中間體43c

(自樹脂用HFIP裂解)

將HFIP/DCM(10：90)(2mL)添加中間體43b(0.100mmol)中，且在室溫下攪拌懸浮液10分鐘。將裂解溶液過濾至iPrOH(0.8mL)中。重複此步驟3次，直接使裂解溶液與第一含iPrOH之裂解溶液組合。在高真空中將組合之裂解溶液濃縮至乾燥。殘餘物自tBuOH/H₂O(4：1)凍乾，得到中間體43c。

˙製備中間體43d

(使4-苯氧基哌啶偶合)

在室溫下攪拌中間體43c與HATU(49.4mg，0.130mmol)、HOAt(17.7mg，0.130mmol)及2,6-二甲基吡啶(0.233mL，2.000mmol)於NMP(5mL)中之之混合物，持續5分鐘。添加4-苯氧基哌啶(35.0mg，0.197mmol)，且在室溫下持續攪拌45分鐘。在真空中將反應混合物濃縮至乾燥，得到中間體43d。

˙製備實例43

(移除保護基及純化)

將中間體43d溶解於95%水性TFA/EDT/TIS(95：2.5：2.5)(5mL) 中，且在室溫下攪拌溶液2小時。將裂解溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)(35mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。用冷庚烷/乙醚(1：1)(5mL)洗滌殘餘物，將懸浮液離心且傾出上清液。在高真空中乾燥殘餘物。藉由製備型HPLC分離產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例43(19.3mg，0.010mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法A：t_R=3.93min)及UPLC-MS(分析方法D；經量測：[M+3H]³⁺=472.6；經計算：[M+3H]³⁺=472.3)分析純產物。

實例57 合成pE-R-P-R-L-a-H-K-G-P-f-a-f-OH

˙製備中間體57a

類似於上述通用程序，使2-氯三苯甲基氯樹脂(5.0g，8.01mmol)與Fmoc-f-OH(3.10g，8.01mmol)於DCM(50mL)中之溶液及DIPEA(5.59mL，32.0mmol)反應，得到中間體57a(5.87g，負載量=0.897mmol/g)。

˙製備中間體57b

(組裝線性肽)

在Liberty^TM微波肽合成器上使中間體57a(0.100mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備實例57

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

將95%水性TFA/EDT/DTT(95：2.5：2.5)之混合物(3mL)添加至中間體57b(0.1mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液3小時。過濾出裂解溶液，且用95%水性TFA(1mL)洗滌樹脂。將組合之裂解及洗滌溶液傾入冷庚烷/乙醚(1：1)之混合物(11mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。乙醚(10mL)添加至殘餘物中，將懸浮液渦旋3分鐘且離心，且傾出上清液。重複洗滌過程兩次。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到實例57(59mg，0.030mmol)。

藉由分析型HPLC(分析方法C：t_R=7.16min)及UPLC-MS(分析方法E；經量測：[M+3H]³⁺=503.3；經計算：[M+3H]³⁺=503.6)分析純產物。

將此經粗分離之TFA鹽溶解於水(15mL水/mmol多肽)中，且使用呈氫氧化物形式之強鹼類型離子交換樹脂[離子交換劑III，強鹼，(^-OH形式，0.9mmol/ml)，Merck-Darmstadt,Germany，目錄編號：1.04767.0500，(25當量)]將其轉化成乙酸鹽，且經由凍乾來分離純乙酸鹽產物。

基於乙酸含量(離子層析)及水含量之分析評估鹽化學計量，且確定其在1：3與1：4(多肽：乙酸鹽)之間範圍內。

其他實例類似地合成：

˙實例2至28類似於實例1合成。

˙實例30及31類似於實例29合成。

˙實例34至42類似於實例33合成。

˙實例44至56及58至63類似於實例57合成。

實例64：白蛋白-TPA-O2Oc-O2Oc-O2Oc-O2Oc-Q-R-P-R-L-a-H-K-G-P-f-a-f-OH，其中TPA：3-巰基丙酸 步驟1：合成中間體64c(PPA-O2Oc-O2Oc-O2Oc-O2Oc-Q-R-P-R-L-a-H-K-G-P-f-a-f-OH)

˙製備中間體64a

(組裝線性肽)

在Liberty^TM微波肽合成器上使H-f-O-PS(1.0mmol)經歷固相肽合成。如下進行偶合：

˙製備中間體64b

(自樹脂裂解，同時移除保護基，隨後純化)

將由25mL TFA/TIPS/水(95：2.5：2.5)中之3.09g DTT及3mL苯甲基硫醚製成的溶液添加至中間體64a(1.0mmol)中，且在室溫下震盪懸浮液3小時。過濾出裂解溶液，且用95%水性TFA(5mL)洗滌樹脂。將組合之裂解及洗滌溶液傾入冷乙醚(80mL)上，得到沈澱物。將懸浮液離心，且傾出上清液。乙醚(80mL)添加殘餘物中。使懸浮液渦旋3分鐘，離心，且傾出上清液。重複洗滌過程3次。在高真空中乾燥固體。藉由製備型HPLC純化粗產物，且自ACN/H₂O凍乾，得到呈白色粉末狀之中間體64b(235mg，84μmol)。

藉由UPLC-MS(分析方法G；經量測：[M+2H]²⁺=1097.5；經計算：[M+2H]²⁺=1097.8)分析純產物。

製備中間體64c：PPA-O2Oc-O2Oc-O2Oc-O2Oc-Q-R-P-R-L-a-H-K-G-P-f-a-f-OH，其中PPA：3-(2-吡啶基二硫基)丙酸

在25℃下使中間體64b(76mg，29μmol)、2,2'-二硫基二吡啶(19mg，86μmol)於ACN(1mL)中之混合物震盪1小時。用MeOH稀釋反應混合物且過濾。藉由製備型HPLC純化溶液，且自ACN/H₂O凍乾，得到呈白色粉末狀之中間體64c(28mg，10μmol)。

藉由UPLC-MS(分析方法G；經量測：[M+2]²⁺=1152.5；經計算：[M+2]²⁺=1152.3)分析純產物。

步驟2：白蛋白去封端

˙用TCEP去封端

向15mL管中白蛋白(500mg，Aldrich，凍乾粉末，來自人類血清)於10mL PBS 1×緩衝液中之溶液中添加TCEP鹽酸鹽溶液(生物級純化水中之1.074mg)一次。在室溫下震盪所得溶液1小時，隨後使其脫鹽且用兩個Amicon Ultra-4離心過濾器(30K MWCO)洗滌。使過濾器在4K g下旋轉40分鐘，且棄去濾液。向各過濾器中添加3mL生物級純化水以用於各洗滌(在14K g下旋轉10分鐘)，且重複洗滌過程3次。將去封端之HSA溶解於水(總共約20mL)中。將溶液轉移至50mL Falcon管中且凍乾，得到結晶粉末(500mg)。

藉由UPLC-MS(分析方法I；經量測：66439.0；所預期：66437)分析純產物。

˙測定去封端之HSA中游離硫醇基團之數目

向2mL管中此去封端之HSA(2mg)於400μL PBS(pH 7.4)中之溶液中添加6-順丁烯二醯亞胺基己酸(13μg)於水中之溶液。在室溫下震盪所得溶液2小時。UPLC-MS(分析方法J)顯示，僅有單加合物形成，經量測：66649.0；所預期：66648。

˙用DTT去封端

向15mL管中白蛋白(400mg，Aldrich，凍乾粉末，來自人類血清)於5mL PBS 1×緩衝液中之溶液中添加DTT(0.232μl，生物級純化水中2mg/mL)溶液一次。在室溫下震盪所得溶液2小時，隨後使其脫鹽且用二十個Amicon Ultra-0.5離心過濾器(10K MWCO)洗滌。使過濾器在14K g下旋轉10分鐘，且棄去濾液。向各過濾器之頂部添加生物級純化水以用於各洗滌(在14K g下旋轉10分鐘)，且重複洗滌過程6次。將去封端之HSA溶解於水(總共約20mL)中。將溶液轉移至50mL Falcon管中且凍乾，得到結晶粉末(376mg)。

藉由UPLC-MS(分析方法J；經量測：66438.5；所預期：66437)分析純產物。

˙測定去封端之HSA中游離硫醇基團之數目

向2mL管中此去封端之HSA(3mg)於400μL PBS(pH 7.4)中之溶液中添加3-順丁烯二醯亞胺基丙酸(25μg)於水中之溶液。在室溫下震盪所得溶液隔夜。UPLC-MS(分析方法J)顯示僅有單加合物形成，經量測：66608.0；所預期：66606。

˙用半胱胺酸去封端

向2mL管中白蛋白(120mg，Aldrich，凍乾粉末，來自人類血清)於1mL 50mM PBS緩衝液(pH 8.0)中之溶液中添加半胱胺酸(10.94mg)一次。在室溫下震盪所得溶液1小時，隨後使其脫鹽且用兩個Amicon Ultra-0.5離心過濾器(10K MWCO)洗滌。使過濾器在14K g下旋轉10分鐘，且棄去濾液。向各過濾器之頂部添加生物級純化水以用於各洗滌(在14K g下旋轉10分鐘)，且重複洗滌過程5次。將去封端之HSA溶解於水(總共4mL)中。將溶液轉移至15mL Falcon管中且凍乾，得到結晶粉末(108mg)。

藉由UPLC-MS(分析方法J；經量測：66439；所預期：66437)分析純產物。

˙測定去封端之HSA中游離硫醇基團之數目

向2mL管中此去封端之HSA(3mg)於500μL PBS(pH 7.4)中之溶液中添加3-順丁烯二醯亞胺基丙酸(15μg)於水中之溶液。在室溫下震盪所得溶液1小時。UPLC-MS(分析方法J)顯示僅有單加合物形成，經量測：66608.0；所預期：66606。

步驟3：白蛋白-TPA-O2Oc-O2Oc-O2Oc-O2Oc-Q-R-P-R-L-a-H-K-G-P-f-a-f-OH

用中間體64c(7.8mg於水中)溶液處理去封端之HSA(100mg)於PBS緩衝液(6mL)中之溶液。在室溫下震盪所得溶液1小時，隨後使其脫鹽且用4個Amicon Ultra-0.5離心過濾器(10K MWCO)洗滌。使過濾器在13K g下旋轉10分鐘且棄去濾液。向各過濾器之頂部添加生物級純化水以用於各洗滌(在13K g下旋轉10分鐘)且重複洗滌過程6次。將共軛物溶解於水(總共4mL)中。將溶液轉移至15mL Falcon管中且凍乾，得到結晶粉末(90.5mg)。

藉由UPLC-MS(分析方法I；經量測：68630；所預期：68629)分析純產物。

已發現上述實例中之多肽針對APJ受體效能具有在約0.01nM至約1100nM範圍內之EC₅₀值。已發現下文實例中之多肽具有高於2分鐘、高於5分鐘、高於10分鐘、高於20分鐘、高於50分鐘及高於60分鐘之血漿穩定性。

可見本發明之多肽或其生物共軛物適用作APJ受體之促效劑，且因此適用於治療對APJ受體之活化起反應的疾病及病狀，諸如本文中所揭示之疾病。

此外，已顯示此等肽之半衰期藉由形成包含根據式I至IV中之任一者的肽或多肽及半衰期延長部分(諸如人類血清白蛋白)之生物共軛物而進一步延長。

已如此描述本發明之例示性實施例，一般熟習此項技術者應注意，本文內之揭示內容僅為例示性的，且在本發明之範疇內可進行各種其他替代方案、修改及變更。因此，本發明不限於如本文中所說明之特定實施例。

Claims

一種具有下式之多肽，X1-X2-X3-R-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13 I其中：X1為該多肽之N端且為不存在的或pE；X2為R或r；X3為P或4-PhP；X5為L、Cha、D-L、F、Y、Y(Bzl)、3,4-Cl2-F或Nal；X6為D-胺基酸、S或A；X7為D-胺基酸、L、H或Aib；且X6及X7中之至少一者為D-胺基酸或Aib；X8為K、k、Q或E；X9為G或D；X10為P或2-哌啶甲酸；X11為D-Nle、Nle、f或D-Nva；X12為不存在的、P或D-胺基酸；X13為C端且為不存在的、F或D-胺基酸；且X11、X12及X13中之至少一者為D-胺基酸；其中：Nle為L-正白胺酸；D-Nle為D-正白胺酸；Nal為L-(萘基)丙胺酸；D-Nva為D-正纈胺酸；Aib為α-胺基異丁酸； Cha為(S)-β-環己基丙胺酸；D-Tic為D-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸；pE為L-焦麩胺酸；3,4-Cl2-F為(S)-3,4-二氯苯丙胺酸；Y為L-酪胺酸；且Y(Bzl)為L-苯甲基-酪胺酸；或該多肽之醯胺、酯或鹽；或實質上等效於其之多肽。
如請求項1之多肽，其中X6及X12為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項2之多肽，其中X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項3之多肽，其中X11為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1之多肽，其中X6及X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1之多肽，其中X7及X12為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項6之多肽，其中X13為D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其具有下式：X1-R-P-R-X5-a-X7-X8-G-P-X11-X12-X13 II；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其具有式III：X1-R-P-R-X5-X6-X7-K-G-P-X11-a-f III；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1、6及7中任一項之多肽，其具有式IV： X1-R-P-R-X5-S-X7-K-G-P-X11-X12-X13 IV；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X6為選自a、D-Leu、k、s、d、nva、abu、f、h、v及D-Cys(tBu)之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X7為Aib或選自a、f及h之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X12為不存在的或選自a、f、p、e、r、abu、nva及D-Leu之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X13為不存在的或為選自f、y、d及D-Tic之D-胺基酸；或其醯胺、酯或鹽。
如請求項14之多肽，其中X13為不存在的或f；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X1為pE；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X5為L；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X8為K；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中X11為Nle或nle；或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中該C端為醯胺；或該多肽之鹽。
如請求項20之多肽，其中該C端為式-C(O)-R2之醯胺，且R2為- NH₂、-NH-(CH₂)₂-Ph或4-苯氧基哌啶；或該多肽之鹽。
如請求項1之多肽，其係選自：或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項22之多肽，其係選自：或該多肽之醯胺、酯或鹽。
如請求項1至7中任一項之多肽，其中該多肽具有至少100分鐘之血漿穩定性及小於10nM之IC50。
一種如請求項1至24中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽之用途，其係用於製造用於治療或預防對該APJ受體之促效作用起反應之疾病或病症的藥劑。
如請求項25之用途，其中該疾病或病症係選自急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群(Brugada syndrome)、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)及子癇先兆。
如請求項1至7中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽，其係用作藥劑。
如請求項1至7中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽，其係用於治療或預防對該APJ受體之促效作用起反應之疾病或病症。
如請求項1至7中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽，其係用於治療急性失代償性心臟衰竭(ADHF)、慢性心臟衰竭、肺高血壓、心房纖維顫動、布魯加達症候群、室性心動過速、動脈粥樣硬化、高血壓、再狹窄、缺血性心血管疾病、心肌症、心臟纖維化、心律不整、水滯留、糖尿病(包括妊娠性糖尿病)、肥胖症、周邊動脈疾病、腦血管事故、短暫性缺血性發作、創傷性腦損傷、肌肉萎縮性側索硬化、燒傷(包括曬傷)或子癇先兆。
一種組合，其包含治療有效量之如請求項1至24中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽，及一或多種治療學活性助劑。
如請求項30之組合，其中該助劑係選自收縮影響劑、β腎上腺素激導性受體阻斷劑、HMG-Co-A還原酶抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、鈣離子通道阻斷劑(CCB)、內皮素拮抗劑、腎素抑制劑、利尿劑、ApoA-I模擬物、抗糖尿病劑、肥胖減輕劑、醛固酮受體阻斷劑、內皮素受體阻斷劑、醛固酮合成酶抑制劑(ASI)、CETP抑制劑、抗凝血劑、鬆弛素、BNP(奈西立肽(nesiritide))及/或NEP抑制劑。
一種醫藥組合物，其包含治療有效量之如請求項1至24中任一項之多肽或其醯胺、酯或鹽，及一或多種醫藥學上可接受之載劑。