TW201347661A - 菌類培養方法 - Google Patents

Abstract

提供一種菌類培養方法，其係以固體培養基或液體培養基將擔子菌類從菌絲體育成至子實體，能以均一品質、效率良好地簡便培養擔子菌類。菌類培養方法係具備：以金屬、合成樹脂、天然樹脂及/或紙形成由網布、織布、不織布、多孔質薄片中選出之補強體(15)，附上擔子菌類菌絲體用培養基(14)後，於其表面側上塗佈或噴霧其培養液(17)來接種擔子菌類(20)之菌絲體，形成菌絲體育成培養薄片(1)後，育成前述菌絲體之菌絲體增殖步驟[I]；以及於在前述表面側所育成之前述菌絲體附上擔子菌類子實體用培養基(24)，形成子實體育成培養薄片(2)後，從前述菌絲體育成至子實體之子實體增殖步驟[II]。

Description

菌類培養方法

本發明係關於使用擔持有固體培養基或液體培養基之培養薄片，將擔子菌類從菌絲體至子實體於薄片上層狀培育之菌類培養方法。

牛樟芝、靈芝、冬蟲夏草、姬松茸等之各種菌類，被使用作為生藥醫藥品之藥效成分，或是化妝品或健康食品之有效成分。

天然之擔子菌類，附著於植物之原木等之基質作為營養源，從菌絲體長出子實層托為平滑或粗面之膜狀的子實體而育成。該等天然之擔子菌類中，需求特別大之台灣特有種牛樟芝，專以天然樹木之牛樟原木來增殖，生育極為緩慢，加上作為基質之牛樟的濫伐，採取困難是稀少之天然資源。

牛樟芝，其菌絲體中幾乎不含藥效成分，如非專利文獻1所揭示，其子實體中含有多種且高濃度之顯示肝機能改善機能或抗腫瘤作用等之藥理作用的如三萜般 之藥效成分。牛樟芝因從天然來的採取量少，以液體培養或固體培養之人工生產被研究著。但液體培養之培養速度比天然育成快幾分的程度，必須使用大量的培養液。即使使用大容量槽相對其規模之比例生產量少而生產效率低劣，不適合工業製造。另一方面，以往之固體培養，因並列多數之洋菜培養基容器，必須在無菌室培養十分麻煩，因為每個洋菜培養基容器之生育速度‧藥效成分含量的差距大，在容積被限制的無菌室僅能有限地並列洋菜培養基容器，所以不適合工業製造。

香菇等之食用菇，遠比牛樟芝容易栽培，能以培養基培養移植至原木來栽培菌類。專利文獻1中揭示為了固體培養香菇等之菌類而使用者，以合成纖維形成之整體具有編目狀的細孔、以加壓成形之具有上端部分厚、底部分薄之複數凹部的菌類培養用成形薄片。如此之菌類培養用成形薄片，因其係為了將菌類移植至原木來培養者，不能用於固體培養不用移植至原木的從菌絲體成為膜狀子實體之如牛樟芝等的擔子菌類。

[先前技術文獻]

[非專利文獻]

[非專利文獻1]循證補充替代醫學(Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine)，Volume 2011，ID 212641

[專利文獻]

[專利文獻1]日本專利第3139837號公報

本發明係為了解決前述問題所成者，目的為提供一種以固體培養基或液體培養基將擔子菌類從菌絲體育成至子實體，能以均一品質、效率良好地簡便培養擔子菌類之菌類培養方法，以及提供用於該培養方法之培養薄片。

為達成前述目的而成之申請專利範圍之請求項1所載之菌類培養方法，其特徵係具備：以金屬、合成樹脂、天然樹脂及/或紙形成由網布、織布、不織布、多孔質薄片中選出之補強體，附上擔子菌類菌絲體用培養基後，於其表面側塗佈或噴霧其培養液來接種擔子菌類之菌絲體，形成菌絲體育成固體培養薄片後，育成前述菌絲體之菌絲體增殖步驟；以及於在前述表面側所育成之前述菌絲體附上擔子菌類子實體用培養基，形成子實體育成培養薄片後，從前述菌絲體育成至子實體之子實體增殖步驟。

請求項2所載之菌類培養方法，係如請求項1所載者，其中，前述擔子菌類菌絲體用培養基及前述擔子菌類子實體用培養基，係分別為液體培養基或固體培養基。

請求項3所載之菌類培養方法係，如請求項2所載者，其中，前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體擔 持前述液體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述液體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基，或是於前述補強體以裏面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基；或前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於前述擔子菌類菌絲體用培養基擔持前述液體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基或是於前述補強體以裏面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基；或前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於從前述擔子菌類菌絲體用培養基將前述菌絲體與前述補強體一同剝離之前述補強體以裏面側擔持固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基。

請求項4所載之菌類培養方法係，如請求項3所載者，其中，前述菌絲體增殖步驟中，於菌絲體用薄膜上之層狀的前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基上，搭載前述補強體並壓合成一體化後，噴霧前述擔子菌類之菌絲體的培養液，形成前述菌絲體育成培養薄片，前述子實體增殖步驟中，將前述補強體與於前述以表面側育成之前述菌絲體一同從前述擔子菌類菌絲體用培養 基及菌絲體用薄膜剝離後，於前述補強體以其裏面側壓合子實體用薄膜上之層狀的前述固體培養基所成之擔子菌類子實體用培養基，形成前述子實體育成培養薄片。

請求項5所載之菌類培養方法係，如請求項1~4中任一項所載者，其中，捲取前述菌絲體育成培養薄片成捲筒狀來育成前述菌絲體，及/或捲取前述子實體育成培養薄片成捲筒狀來育成前述子實體。

請求項6所載之菌類培養方法係，如請求項1~5中任一項所載者，其中，前述擔子菌類係無褶菌目之菌類。

請求項7所載之菌類培養方法係，如請求項6所載者，其中，前述傘菌綱之菌類，係雞油菌科、珊瑚菌科、枝瑚菌科、繡球菌科、猴頭菇科、多孔菌科、刺革菌科、粉孢革菌科、韌革菌科、牛排菌科、齒耳菌科、肉齒菌科、革菌科、地花菌科、皮殼菌科、靈芝科、或刺孢多孔菌科之菌類。

請求項8所載之菌類培養方法係，如請求項1~7中任一項所載者，其中，於前述菌絲體及/或前述子實體，施予選自物理刺激、電刺激、光學刺激、化學刺激及生物刺激之至少任一種處理。

請求項9所載之培養薄片，其特徵係以其表面育成擔子菌類之菌絲體的補強體擔持有從前述菌絲體育成至子實體之擔子菌類子實體用培養基，該補強體係以金屬、合成樹脂、天然樹脂及/或紙所形成之選自網布、織 布、不織布、多孔質薄片中之補強體。

請求項10所載之培養薄片係，如請求項9所載者，其中，前述補強體係，液體培養基或固體培養基所成之育成前述菌絲體之擔子菌類菌絲體用培養基為擔持於未擔持補強體或擔持後剝離，液體培養基或固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基為擔持於前述補強體。

請求項11所載之培養薄片係，如請求項9~10中任一項所載者，其中，於前述補強體附有藉由網目狀、格子狀、碎褶狀、凹凸波形狀及/或柵板狀之間隙而具有通氣性之間隔物。

依據使用本發明培養薄片的菌類培養方法，能在短時間以固體培養薄片將擔子菌類從菌絲體育成至子實體。藉由捲取固體培養薄片靜置於定溫，能以狹小的空間大量地培養。因為使用固體培養薄片，所以能以均一品質、效率良好地簡便培養。

1‧‧‧菌絲體育成固體培養

2‧‧‧子實體育成固體培養薄片

11‧‧‧菌絲體用薄膜

12‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基塗佈噴嘴

13‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基塗佈液

14‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基

15‧‧‧補強體

16‧‧‧菌絲體培養液噴霧噴嘴

17‧‧‧菌絲體培養液噴霧噴嘴

20‧‧‧擔子菌類

21‧‧‧子實體用薄膜

22‧‧‧擔子菌類子實體用培養基噴嘴

23‧‧‧擔子菌類子實體用培養基塗佈液

24‧‧‧擔子菌類子實體用培養基

25a‧25b‧‧‧脈衝電壓電極

26a‧26b‧‧‧脈衝電壓

[圖1]表示應用本發明之菌類培養方法的概要圖。

[圖2]表示應用本發明之其他菌類培養方法的概要圖。

以下，詳細說明本發明之實施形態，但本發明之範圍並不限定於此等形態。

一邊參照圖1一邊說明本發明之菌類培養方法。此菌類培養方法，係使用菌絲體育成固體培養薄片1及子實體育成固體培養薄片2，依照以下順序進行。

首先，進行菌絲體增殖步驟〔I〕。以金屬、合成樹脂、天然樹脂、紙形成能藉由網布、織布、不織布、多孔質薄片之凹凸或孔擔持培養基之補強體15，捲取放置。從非滲透性之樹脂製菌絲體用薄膜捲拉出菌絲體用薄膜11。以擔子菌類菌絲體用培養基塗佈噴嘴12塗佈或噴灑擔子菌類菌絲體用培養基塗佈液13至菌絲體用薄膜11表面側，形成成為固體培養基層之菌絲體育成洋菜培養基層之層狀的擔子菌類菌絲體用培養基14。拉出捲筒狀的補強體15，壓合附上擔子菌類菌絲體用培養基14，使補強體15與擔子菌類菌絲體用培養基14成為一體化。以補強體15之表面於擔子菌類菌絲體用培養基14上，從菌絲體培養液噴霧噴嘴16噴霧經液體培養之擔子菌類的菌絲體培養噴霧液17，接種擔子菌類20至擔子菌類菌絲體用培養基14。應需要，進一步在其上附上防止捲取時密接的網狀‧格子狀或柵板狀之間隔物(未圖示)。藉此，得到菌絲體育成固體培養薄片1。以薄片之間不密合的方式緩緩捲取菌絲體育成固體培養薄片1成捲筒狀後靜置。其間，育成擔子菌類20於擔子菌類菌絲體用培養基14， 往四面八方平面地增殖，形成擔子菌類20之菌絲體層。

接下來，進行子實體增殖步驟〔II〕。從菌絲體育成固體培養薄片1連同擔子菌類菌絲體用培養基14一起剝取菌絲體用薄膜11。如此一來，於補強體15上表面側殘存著擔子菌類20之菌絲體層。從非滲透性之樹脂製子實體用薄膜捲拉出子實體用薄膜21。以擔子菌類子實體用培養基噴嘴22塗佈或噴灑擔子菌類子實體用培養基塗佈液23至子實體用薄膜21表面，形成成為子實體育成洋菜培養基層之層狀的擔子菌類子實體用培養基24。補強體15以其裏面側壓合附上至子實體用薄膜21上之擔子菌類子實體用培養基24，使補強體15與擔子菌類子實體用培養基24成為一體化。擔子菌類20之菌絲體層接觸擔子菌類子實體用培養基24，成為可育成而增殖。藉此，得到子實體育成固體培養薄片2。以薄片之間不密合的方式緩緩捲取子實體育成固體培養薄片2成捲筒狀後靜置。其間，使擔子菌類20於擔子菌類子實體用培養基24從菌絲體成長育成至子實體，於薄片上往四面八方地增殖成層狀，形成擔子菌類20之子實體層。

菌絲體育成固體培養薄片1或子實體育成固體培養薄片2在捲取時藉由間隔物產生間隙而防止密接，維持濕度及通氣狀態。擔子菌類20之菌絲體層或子實體層，避開間隔物之網目狀、格子狀、或柵板狀間隙而增殖。

菌絲體增殖步驟〔I〕及子實體增殖步驟〔II 〕中，雖例示了任一皆使用固體培養基作為擔子菌類菌絲體用培養基及擔子菌類子實體用培養基之例，但任一方為液體培養基而另一方為固體培養基亦可，或任一皆為液體培養基亦可。例如，一邊參照圖2一邊說明其他菌類培養方法，其依照以下之順序進行。

首先，與前述同様地進行菌絲體增殖步驟〔I〕，調製菌絲體育成固體培養薄片1，捲取後靜置，使擔子菌類20育成且增殖，形成擔子菌類20之菌絲體層(參照圖1)。接著，如圖2所示，進行子實體增殖步驟〔II〕。於菌絲體育成固體培養薄片1之表面側的擔子菌類菌絲體用培養基14，以擔子菌類子實體用培養基噴嘴22噴灑擔子菌類子實體用培養基塗佈液23，形成成為子實體育成液體培養基層之擔子菌類子實體用培養基24。藉此，得到子實體育成固體培養薄片2。以薄片之間不密合的方式緩緩捲取子實體育成固體培養薄片2成捲筒狀後靜置。其間，使擔子菌類20於擔子菌類子實體用培養基24從菌絲體成長育成至子實體，平面地增殖，形成擔子菌類20之子實體層。

菌類培養方法為適合培養擔子菌類。擔子菌類為依據菇新版山溪領域書籍7(2006年6月10日，初版第1刷，山與溪谷社發行)之分類表示，以菌界-擔子菌亞門(Basidiomycotina)-真正擔子菌綱(Eubasidiomycetes)-帽菌亞綱(Hymenomycetidae)-無褶菌目(Aphyllophorales)為佳。無褶菌目可舉例如雞油菌科、珊瑚菌科、枝瑚菌科 、繡球菌科、猴頭菇科、多孔菌科、刺革菌科、粉孢革菌科、韌革菌科、牛排菌科、齒耳菌科、肉齒菌科、革菌科、地花菌科、皮殼菌科、靈芝科、刺孢多孔菌科之菌類。更具體而言，可舉例雞油菌(Cantharellus cibarius)、蟲形珊瑚菌(Clavaria vermicularis)、叢枝瑚菌(Ramaria botrytis)、繡球菌(Sparassis crispa)、珊瑚針菌(Hericium ramosun)、緣針菌(Creoloplus cirrbatus)、卷緣齒菌(Hydnum repandum)、長齒白齒耳菌(Mycoleptodonoides aitcbisonii)、舞茸(Grifola frondosa)、偏腫栓菌(Trametes gibbosa)、紅針菌(Phanerochaete chrysorbiza)、灰色齒脈菌(Lopharia cinerascens)、牛排菌(Fistulina hepatica)、褐孔飾孢革菌(Tomentella crinalis)、紫舞茸(Polyzellus multiplex)、波緣多孔菌(Albatrellus confluens)、藍孔地花菌(Albatrellus caeruleoporus)、青藍多孔菌(Albatrellus yasudai)、疊蓋肉齒菌(Sarcodon aspratus)、白黑擬牛肝多孔菌(Boletopsis leucomelas)、仙人茸(Albatrellus pascaprae)、豬苓(Polyporus umbellatus)、硫磺菌(Laetiporus sulphureus)、深紅密孔菌(Pycnoporus coccineus)、白薄孔菌(Antrodia albida)、異形薄孔菌(Antrodia beteromorpha)、牛樟芝(Antrodia camphorata)、香杉芝(Antrodia salmonea)、栗色擬層孔菌(Melanoporia castanea)、淡黃裂孔菌(Schizopora flavipora)、紫光靈芝(Ganoderma mastporum)、白樺茸(Inonotus oblicuus)、皮菌(Peniophora quercina)等。

擔子菌類菌絲體用培養基或擔子菌類子實體用培養基，可為如洋菜培養基之固體培養基，亦可為液體培養基。

固體培養基，例如，於培養基1L中含有：單獨或混合之聚海藻酸鹽、洋菜等之水凝膠形成聚合物3~20g，馬鈴薯抽出物3~5g，單獨之葡萄糖、右旋糖、果糖、蔗糖、纖維雙醣或海藻糖、或是該等之中任意之混合物的糖類10g~30g。應需要，亦可適宜地添加pH調整劑、成為氮源或礦物質源之無機鹽類、木屑、燕麥、燕麥或小麥、大麥、麴為首之動植物體或該等之抽出物、二次代謝物等。

液體培養基，例如，培養基1L中含有：酵母抽出物及麥芽抽出物各10~30g，單獨之右旋糖、右旋糖、果糖、蔗糖、纖維雙醣、海藻糖、或是該等之中任意之混合物的糖類10g~30g。應需要，亦可適宜地添加pH調整、成為氮源或礦物質源之無機鹽類、動植物抽出物或木屑、燕麥、燕麥、小麥、大麥、麴為首之動植物體或該等之抽出物、二次代謝物等。

子實體育成時，於子實體育成固體培養薄片2上，在其形成當時、或形成後至經過1個月的期間，亦可施以形成物理刺激、電刺激、光學刺激、生物刺激、化學刺激之至少任一之處理。作為物理刺激、電刺激、光學刺激，可舉例如以20~100mW、10奈秒~100毫秒、較佳為數十奈秒~數十毫秒之間隔之脈衝雷射的照射處理，以 20~90kV、較佳為30~70kV、100μA~1mA、100~500毫秒間隔之30~60秒鐘之藉由脈衝電漿發生裝置的電漿處理，及波長為500~800nm之光照射處理。物理刺激、電刺激、光學刺激之中，物理刺激或電刺激，可不直接向子實體育成固體培養薄片2之子實體施予。例如，如圖2所示，以脈衝電壓電極25a向子實體育成固體培養薄片2產生脈衝電壓26a，及/或亦可以脈衝電壓電極25b不向著子實體育成固體培養薄片2之上方而為了大氣殺菌產生脈衝電壓26b。作為一例，每分鐘1次持續照射50~90kV、較佳為70~90kV、100μA~1mA、100~500毫秒間隔之1~10秒鐘之藉由脈衝電漿發生裝置的電漿處理。作為生物刺激、化學刺激，可舉例如與乳酸菌、酵母、米麴菌之不阻礙子實體生育之異種菌類的熱處理物、或欲育成子實體之同種菌類之另一批生菌類或熱處理物共存，混入萜烯類或產生萜烯類之樟或牛樟之木屑的處理。藉由如形成物理刺激、電刺激、光學刺激、生物刺激、化學刺激之處理，可大幅提升子實體之生成量‧生成速度‧生成密度，例如，以脈衝電壓處理或脈衝雷射照射處理，生成量約增量20~50%。

補強體15為菌體培養用網布，可舉例如孔徑為50~1000微米，厚度為30~300微米，素材為金屬(例如：不鏽鋼)、合成樹脂(例如：尼龍、聚酯、聚乙烯、聚丙烯、氟纖維、聚二氯亞乙烯、聚乙烯醇、乙烯-乙酸乙烯共聚物、聚胺甲酸酯、聚纖維素等)之網布布料或多孔質 薄片、天然纖維(例如：絹、綿)之織布、紙、不織布。其寬度，例如200~1100mm。

菌絲體用薄膜11或子實體用薄膜21為支持用薄膜，以例如聚酯、聚丙烯、聚二氯亞乙烯之耐熱性的樹脂所形成。其厚度，例如10~200微米，其寬度，例如200~1100mm。

進行菌類培養方法時，應需要，亦可進行殺菌、為了促進擔子菌類發芽之如脈衝電壓處理、脈衝雷射照射處理、電漿處理、光照射處理的前處理。

間隔物可為網目狀、格子狀，例如藉由以1~3cm間隔打褶之碎褶狀、以0.1~3cm間隔向四方之正弦波狀‧錐狀‧鐘狀‧圓錐台狀之具有連續凹凸之凹凸波形狀、及/或柵板狀之間隙而具有通氣性。此凹凸為，使菌絲體育成固體培養薄片1彼此或子實體育成固體培養薄片2彼此線接觸‧點接觸而具有通氣性者。

菌絲體育成固體培養薄片1或子實體育成固體培養薄片2，可攤開用，亦可彎曲或捲取用，裁切成適當大小使用亦可。若將連續長尺寸之薄片捲取成捲筒狀使用，有助於提升狹小空間之生產性。

[實施例]

在此例示藉由使用應用本發明之培養薄片的菌類培養方法來培養牛樟芝之例。而，除特別註明商品名‧廠商之試藥以外，使用市面販售之試藥特級。

(調製例)

(1)培養基之調製

在馬鈴薯200g剝皮後切成1cm方塊，於1L沸騰水中煮20分鐘，以紗布過濾之物以及葡萄糖20g中加入離子交換水使全量成為1L，以121℃、20分鐘之高壓滅菌處理，調製馬鈴薯右旋糖培養基(以下稱作PDB培養基)。此時以磷酸緩衝液將pH調製至5~7。

再者，在馬鈴薯200g剝皮後切成1cm方塊，於1L沸騰水中煮20分鐘，以紗布過濾之物以及葡萄糖20g中加入洋菜(日水製藥股份公司製)15~20g攪拌，加入離子交換水使全量成為1L後移至燒瓶，以121℃、15分鐘之高壓滅菌處理，調製洋菜培養基(以下稱為PDA培養基)。此時，以磷酸緩衝液將pH調製至5~7。

而，得到之培養基於無菌抽風櫃內操作，若為(i)固體培養之情形，加入15~20mL PDA培養基至直徑9cm之培養皿中後冷卻。若為(ii)液體培養之情形，使加入PDB培養基之燒瓶冷卻至常溫後進行接種及培養。培養全部於培養箱內以25℃之定溫進行。

(2)牛樟芝之野生種的固體繼代培養

藉由煤氣燈之火焰消毒後以鑷子將牛樟芝野生種的內側組織剝下2mm×3mm之片，接種至PDA培養基。10日後，從成為直徑約2.5cm菌落之菌絲體切出邊長5mm之 方塊片，接種至新的PDA培養基。之後，約每21日實施繼代培養，供至本發明之菌類培養方法。

而且，繼代培養中，從第1世代至第10世代為止，未發現其育成速度有變化。使用DNA分析儀對於第2世代菌絲體進行DNA分析之結果，鹼基序列顯示96%(266/276)之相同性，此菌絲體被鑑定為牛樟芝。

(3)固體培養基之最佳化

(3-1)培養基的選定

PDA培養基中，各別調製於被測試料中分別添加0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、及3.0%糖類之葡萄糖與代替其之右旋糖、果糖、或蔗糖作為碳源，培養經繼代培養之牛樟芝株30日後，測量菌絲體菌落之直徑。各個菌落直徑為：包含葡萄糖與右旋糖或果糖之培養基，在1.0%以上之情形略同為50mmΦ之程度，包含蔗糖之培養基與濃度非相關地在25mmΦ之程度。因此，葡萄糖、右旋糖、果糖，尤其是便宜的葡萄糖，適合牛樟芝菌絲體的培養。而混合有樟腦500ppm者成為60mmΦ，適合此等之生育促進。

(3-2)子實體育成之培養基的選定

培養基1L中，由酵母抽出物、麥芽抽出物各10g、右旋糖20g、洋菜15g、燕麥破碎物100g所成之培養基上，接種經繼代培養之牛樟芝株後培養3個月之後，以顯 微鏡觀察菌體一部份，能確認有表示形成子實體之連鉤(clamp)及胞子的存在。又，將得到之菌體乾燥後，以甲醇萃取後進行高效液相層析法(HPLC)分析，亦測出子實體含有成分即麥角脂醇類。藉此瞭解了，PDA培養基適合菌絲體育成、上述培養基適合子實體育成。

(4)液體培養基之最佳化

(4-1)檢討液體培養可能性

300mL之錐形瓶中，加入PDB培養基200mL，滅菌後，添加5個5mmΦ之擔持有牛樟芝的PDA培養基，在保持25℃之恆溫室中以每分鐘150迴轉振盪下，液體培養7日，得到菌絲體。

(實施例1：於平面狀固體培養薄片之培養)

25×30cm大小之托盤內，敷上20×25cm厚100微米的菌絲體用薄膜11之聚對酞酸乙二酯(PET)薄膜。之後以大約成為15×20cm之方式，流下約150g之預先以121℃、30分鐘高壓滅菌處理冷卻至60℃以下之擔子菌類菌絲體用培養基14之PDA培養基後，敷上15×20cm的補強體15之PET網布，調製培養基。將此培養基冷卻至室溫。於此培養基上均勻塗覆預先以PDB培養基液體培養之以均質機均質化之牛樟芝培養液，得到菌絲體育成固體培養薄片1。此托盤在無菌下以25℃培養30日。

得到之菌絲體附著網布連同擔子菌類20一起移植至 上述實施例3之(3-2)所載的培養基上，得到子實體育成固體培養薄片2，將此培養60日。此時藉由脈衝電漿發生裝置施行30kV、400μA、100毫秒間隔之30秒鐘的電漿處理，自培養開始每24小時一日1次共施行2日，得到之網布上的培養物在顯微鏡下，觀察到胞子及連鉤，又，將得到之菌體乾燥後，以甲醇萃取後進行HPLC分析，測出了子實體含有成分即麥角脂醇類。藉此確認了有生成子實體。

(實施例2：以捲筒狀固體培養薄片之培養)

實施例1中，除PET薄膜、PET網布成為寬300mm的捲筒狀PET薄膜，各步驟中一邊於層間夾有直徑1~2mm之多孔質氯化乙烯樹脂做的1cm方塊之網目狀間隔物一邊捲取以外，與實施例1同樣地製做菌絲體育成固體培養薄片1、子實體育成固體培養薄片2。藉由脈衝電漿發生裝置施行30kV、400μA、100毫秒間隔之30秒鐘的電漿處理，自培養開始每24小時一日1次共施行2日，60日後，網布上之培養物在顯微鏡下觀察到胞子及連鉤，又，將得到之菌體乾燥後，以甲醇萃取後進行HPLC分析，測出了子實體含有成分即麥角脂醇類。藉此確認了有生成子實體。

[產業上利用可能性]

使用本發明固體培養薄片之菌類培養方法能 用於人工培養長出育成平滑或粗面之膜狀之子實體的擔子菌類，或作為生藥用於醫藥品、或用作為健康食品之有效成分。

1‧‧‧菌絲體育成固體培養薄片

2‧‧‧子實體育成固體培養薄片

11‧‧‧菌絲體用薄膜

12‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基塗佈噴嘴

13‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基塗佈液

14‧‧‧擔子菌類菌絲體用培養基

15‧‧‧補強體

16‧‧‧菌絲體培養液噴霧噴嘴

17‧‧‧菌絲體培養液噴霧噴嘴

20‧‧‧擔子菌類

21‧‧‧子實體用薄膜

22‧‧‧擔子菌類子實體用培養基噴嘴

23‧‧‧擔子菌類子實體用培養基塗佈液

24‧‧‧擔子菌類子實體用培養基

Claims (11)

1. 一種菌類培養方法，其係具備：以金屬、合成樹脂、天然樹脂及/或紙形成由網布、織布、不織布、多孔質薄片中選出之補強體，附上擔子菌類菌絲體用培養基後，於其表面側塗佈或噴霧其培養液來接種擔子菌類之菌絲體，形成菌絲體育成固體培養薄片後，育成前述菌絲體之菌絲體增殖步驟；以及於在前述表面側所育成之前述菌絲體附上擔子菌類子實體用培養基，形成子實體育成培養薄片後，從前述菌絲體育成至子實體之子實體增殖步驟。
2. 如請求項1之菌類培養方法，其中，前述擔子菌類菌絲體用培養基及前述擔子菌類子實體用培養基，係分別為液體培養基或固體培養基。
3. 如請求項2之菌類培養方法，其中，前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體擔持前述液體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述液體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基，或是於前述補強體以裏面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基；或前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於前述擔子菌類菌絲體用培養基擔持前述液體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基或是於前述補強體以裏面側擔持前述固體培養基所成 之前述擔子菌類子實體用培養基；或前述菌絲體增殖步驟中，於前述補強體以前述表面側擔持前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基，前述子實體增殖步驟中，於從前述擔子菌類菌絲體用培養基將前述菌絲體與前述補強體一同剝離之前述補強體以裏面側擔持固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基。
4. 如請求項3之菌類培養方法，其中，前述菌絲體增殖步驟中，於菌絲體用薄膜上之層狀的前述固體培養基所成之前述擔子菌類菌絲體用培養基上，搭載前述補強體並壓合成一體化後，噴霧前述擔子菌類之菌絲體的培養液，形成前述菌絲體育成培養薄片，前述子實體增殖步驟中，將前述補強體與於前述以表面側育成之前述菌絲體一同從前述擔子菌類菌絲體用培養基及菌絲體用薄膜剝離後，於前述補強體以其裏面側壓合子實體用薄膜上之層狀的前述固體培養基所成之擔子菌類子實體用培養基，形成前述子實體育成培養薄片。
5. 如請求項1~4中任一項之菌類培養方法，其中，捲取前述菌絲體育成培養薄片成捲筒狀來育成前述菌絲體，及/或捲取前述子實體育成培養薄片成捲筒狀來育成前述子實體。
6. 如請求項1~5中任一項之菌類培養方法，其中，前述擔子菌類係無褶菌目之菌類。
7. 如請求項6之菌類培養方法，其中，前述傘菌綱之 菌類，係雞油菌科、珊瑚菌科、枝瑚菌科、繡球菌科、猴頭菇科、多孔菌科、刺革菌科、粉孢革菌科、韌革菌科、牛排菌科、齒耳菌科、肉齒菌科、革菌科、地花菌科、皮殼菌科、靈芝科、或刺孢多孔菌科之菌類。
8. 如請求項1~7中任一項之菌類培養方法，其中，於前述菌絲體及/或前述子實體，施予選自物理刺激、電刺激、光學刺激、化學刺激及生物刺激之至少任一種處理。
9. 一種培養薄片，其特徵係以其表面育成擔子菌類之菌絲體之補強體擔持有從前述菌絲體育成至子實體之擔子菌類子實體用培養基，該補強體係以金屬、合成樹脂、天然樹脂及/或紙所形成之選自網布、織布、不織布、多孔質薄片中之補強體。
10. 如請求項9之培養薄片，其中，前述補強體係，液體培養基或固體培養基所成之育成前述菌絲體之擔子菌類菌絲體用培養基為擔持於未擔持補強體或擔持後剝離，液體培養基或固體培養基所成之前述擔子菌類子實體用培養基為擔持於前述補強體。
11. 如請求項9~10中任一項之培養薄片，其中，於前述補強體附有藉由網目狀、格子狀、碎褶狀、凹凸波形狀及/或柵板狀之間隙而具有通氣性之間隔物。