TW201326171A - 烷基化哌□化合物 - Google Patents

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Abstract

本發明提供式I之烷基化哌□化合物，包括其立體異構體、互變異構體及醫藥可接受鹽，可用於抑制Btk激酶，及用於治療免疫疾病，如Btk激酶介導之發炎。本發明揭示使用式I之化合物於活體外、原位及活體內診斷及治療哺乳動物細胞中此等疾病或相關病理症狀之方法□

Description

烷基化哌 化合物
本發明基本上係關於用於治療由布魯頓(Bruton)酪胺酸激酶(Btk)介導之疾病，包括發炎、免疫疾病及癌症之化合物，及更具體言之，抑制Btk活性之化合物。本發明亦係關於使用該化合物於體外、原位及體內診斷或治療哺乳動物細胞或相關病理症狀之方法。
相關申請案之交互參照
本非臨時申請案係在37 CFR§1.53(b)下申請，在35 USC§119(e)下主張2011年11月3日申請之美國臨時申請案61/555,395之優先權，該案係以引用全文之方式併入本文。
蛋白質激酶，作為人類酶之最大家族，涵蓋遠超過500種蛋白質。布魯頓酪胺酸激酶(Btk)係酪胺酸激酶之Tec家族中之一員，且係早期B細胞發育及成熟B細胞活化、信號傳導及存活之調控劑。
B細胞經由B細胞受體(BCR)信號傳導，可以導致廣範圍生物輸出，此則基於B細胞之發育階段。BCR訊號之量值及持續時間需準確調控。異常BCR介導信號傳導可導致失調性B細胞活化及/或病原自體抗體之形成，導致多種自體免疫及/或炎症性病症。人類之Btk突變導致X-連鎖無丙種球蛋白血症(XLA)。此病症係與B細胞成熟受損、免疫球蛋白產生下降、T細胞非依賴性免疫反應折損及BCR刺激 時持續鈣徵象之顯著衰減有關。Btk在過敏性疾病及/或自體免疫疾病中起作用之證據已在Btk-缺陷小鼠模型中得以證實。例如，於全身性紅斑狼瘡(SLE)之標準鼠科臨床前模型中，已發現Btk缺陷導致疾病進展之顯著改善。此外，Btk缺陷小鼠亦可抵抗發展骨膠原誘導關節炎及較不易發展葡萄球菌誘導關節炎。大量證據支持B細胞及人類免疫系統於自體免疫及/或炎症性疾病之病理中之作用。開發以貧化B細胞之蛋白質治療(如利妥昔單抗(Rituxan))提供治療許多自體免疫及/或炎症性疾病之方法。由於Btk在B細胞活化中之作用，故Btk之抑制劑可用作B細胞介導病原活性(如自體抗體產生)之抑制劑。Btk亦表現於破骨細胞、肥大細胞及單核細胞中且已發現對於此等細胞之功能甚為重要。例如，小鼠中之Btk缺陷係與IgE介導肥大細胞活化受損(TNF-α及其他炎症性細胞因子釋放之顯著消減)有關，且人類中之Btk缺陷係與活化單核細胞之TNF-α產生之重大下降有關。
因此，Btk活性之抑制可用於治療過敏性疾病及/或自體免疫及/或炎症性疾病，如：SLE、類風濕性關節炎、多重血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎及哮喘(Di Paolo等人(2011)Nature Chem.Biol.7(1)：41-50；Liu等人(2011)Jour.of Pharm.And Exper.Ther.338(1)：154-163)。此外，已提出Btk在細胞凋亡中起作用；因此，Btk活性之抑制可用於癌症，及治療B細胞淋巴瘤、白血病及其他惡性血液病。此外，鑒於Btk在破骨 細胞功能中之作用，Btk活性之抑制可用於治療骨病，如骨質疏鬆。具體Btk抑制劑已公開，(Liu(2011)Drug Metab.and Disposition 39(10)：1840-1849；US 7884108；WO 2010/056875；US 7405295；US 7393848；WO 2006/053121；US 7947835；US 2008/0139557；US 7838523；US 2008/0125417；US 2011/0118233；PCT/US2011/050034「PYRIDINONES/PYRAZINONES,METHOD OF MAKING,AND METHOD OF USE THEREOF」,2011年8月31日申請；PCT/US2011/050013「PYRIDAZINONES,METHOD OF MAKING,AND METHOD OF USE THEREOF」,2011年8月31日申請；US Ser.No.13/102720「PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE」,2011年5月6日申請)。
本發明基本上係關於具有布魯頓酪胺酸激酶(Btk)調控活性之式I烷基化哌吡啶酮化合物。
式I化合物具有結構：
包括其立體異構體、互變異構體或醫藥可接受鹽。各種取代基定義於下文中。
本發明之一態樣係由式I化合物及醫藥可接受載劑、助流劑、稀釋劑或賦形劑組成之醫藥組合物。該醫藥組合物可進一步包含第二治療劑。
本發明之另一態樣係製造醫藥組合物之方法，該方法包含將式I化合物與醫藥可接受載劑組合。
本發明包括一種治療疾病或病症之方法，該方法包含將治療有效量之式I化合物投與罹患疾病或病症之病患，該疾病或病症選自免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能障礙及神經疾病，及由布魯頓酪胺酸激酶介導。
本發明包括一種治療由布魯頓酪胺酸激酶介導之病症之套組，其包含：a)包含式I化合物之第一醫藥組合物；及b)使用說明。
本發明包括一種式I化合物，其用作藥劑，及用於治療疾病或病症，該疾病或病症選自免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能障礙及神經疾病，及由布魯頓酪胺酸激酶介導。
本發明包括式I化合物之用途，其用於製造治療免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能障礙及神經疾病用之藥劑，及其中該藥劑介導布魯頓酪胺酸激酶。
本發明包括製造式I化合物之方法。
現在詳細參考本發明之實施例，其實例闡述於附圖結構及式中。雖然本發明將結合枚舉實施例描述，然而將瞭解其等非意欲將本發明限制於彼等實施例。相對地，本發明預期涵蓋所有替換、修改及等效內容，此等內容包含於由申請專利範圍所界定之本發明範圍內。熟習本項技術者將瞭解類似或等效於本文中所描述之許多方法及材料，其等可用於實施本發明。本發明不以任何方式限制於所描述之方法及材料。於所合併文獻、專利案及與本申請案不同或矛盾之類似材料之一或多種情況中，包括但不限於定義術語、術語用法、描述技術或類似者，以本申請案為準。除非另外說明，否則本文中所使用之所有技術及科學術語具有與本發明相關技藝之一般技術者通常理解相同的含義。雖然類似或等效於本文中所描述者之方法及材料可用於實施或測試本發明，然而下文將描述合適方法及材料。所有公開案、專利申請案、專利案及在本文中提及之其他參考文獻係以引用其等全文之方式併入本文。除非另外說明，否則用於本申請案中之命名法係基於IUPAC系統命名法。
定義
當說明取代基之數目時，術語「一或多個」係指一個取代基至最多可能取代基數目之範圍，即，由取代基置換一個氫至置換全部氫。術語「取代基」表示置換原分子上之氫原子之原子或原子基團。術語「經取代」表示指定基團帶有一或多個取代基。當任何基團可攜帶多個取代基及提 供各種不同可能取代基時，該等取代基係獨立選擇及不必相同。術語「未經取代」意指指定基團不帶有取代基。術語「視需要經取代」意指指定基團未經取代或經一或多個獨立地選自可能取代基之群之取代基取代。當說明取代基之數目時，術語「一或多個」係指一個取代基至最多可能取代基數目之範圍，即，由取代基置換一個氫至置換全部氫。
如本文中所使用之術語「烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1至C12)之飽和直鏈或支鏈單價烴基，其中烷基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。於另一實施例中，烷基具有一至八個碳原子(C1至C8)，或一至六個碳原子(C1至C6)。烷基實例包括，但不限於，甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，異丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，異丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，第二丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，第三丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基 (-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3)、1-庚基、1-辛基及類似者。
如本文中所使用之術語「伸烷基」係指具有一至十二個碳原子(C1至C12)之飽和直鏈或支鏈二價烴基，其中伸烷基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。於另一實施例中，伸烷基具有一至八個碳原子(C1至C8)或一至六個碳原子(C1至C6)。伸烷基之實例包括，但不限於，亞甲基(-CH2-)、伸乙基(-CH2CH2-)、伸丙基(-CH2CH2CH2-)及類似者。
術語「烯基」係指具有兩至八個碳原子(C2至C8)，具有至少一個不飽和位置，即，碳-碳sp2雙鍵之直鏈或支鏈單價烴基，其中烯基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代，及包括具有「順式」及「反式」定向，或「E」及「Z」定向之基團。實例包括，但不限於，乙烯基(-CH=CH2)、烯丙基(-CH2CH=CH2)及類似者。
術語「伸烯基」係指具有兩至八個碳原子(C2至C8)及至少一個不飽和位點，即碳-碳sp2雙鍵之直鏈或支鏈二價烃基，其中伸烯基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代，且包括具有「順式」及「反式」定向，或「E」及「Z」定向之基團。實例包括，但不限制於，伸乙 烯基(-CH=CH-)，烯丙基(-CH2CH=CH-)及類似者。
術語「炔基」係指具有兩至八個碳原子(C2至C8)及至少一個不飽和位點，即碳-碳sp三鍵之直鏈或支鏈單價烃基，其中炔基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。實例包括，但不限制於，乙炔基(-C≡CH)，丙炔基(炔丙基，-CH2C≡CH)，及類似者。
術語「伸炔基」係指具有兩至八個碳原子(C2至C8)及至少一個不飽和位點，即碳-碳sp三鍵之直鏈或支鏈二價烃基，其中伸炔基可視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。實例包括，但不限制於，伸乙炔基(-C≡C-)，伸丙炔基(伸炔丙基，-CH2C≡C-)，及類似者。
術語「碳環」、「碳環基」、「碳環」及「環烷基」係指就單環狀環而言，具有3至12個碳原子(C3至C12)之單價非芳族、飽和或部分不飽和環，或就雙環狀環而言，則具有7至12個碳原子。具有7至12個原子之雙環狀碳環可佈置成，例如，雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統，及具有9至10個環原子之雙環狀碳環可佈置成雙環[5,6]或[6,6]系統，或橋聯系統，如雙環[2.2.1]庚烷、雙環[2.2.2]辛烷及雙環[3.2.2]壬烷。螺旋部分亦包含於此定義之範圍內。單環狀碳環之實例包括，但不限制於，環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環己二烯基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基、環十一烷基、環十二烷基及類似者。碳環基係視需要獨立地 經下文所述之一或多個取代基取代。
「芳基」意指具有6至20個碳原子(C6至C20)，透過將一個氫原子自原芳族環系統之單個碳原子移除而衍生之單價芳族烃基。某些芳基在示例性結構中表示為「Ar」。芳基包括雙環狀基團，其包含稠合至飽和、部分不飽和或芳族碳環之芳族環。常見芳基包括，但不限制於，自苯衍生之基團(苯基)、經取代苯、萘、蒽、聯苯基、茚基、茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及類似者。芳基係視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。
「伸芳基」意指具有6至20個碳原子(C6至C20)，透過將兩個氫原子自原芳族環系統之兩個碳原子移除而衍生之二價芳族烃基。一些伸芳基在示例性結構中表示為「Ar」。伸芳基包括雙環狀基團，其包含稠合至飽和、部分不飽和環，或芳族碳環之芳族環。常見伸芳基包括，但不限制於，自苯衍生之基團(伸苯基)、經取代苯、萘、蒽、伸聯苯基、伸茚、伸茚滿基、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘基及類似者。伸芳基係視需要經下文所述之一或多個取代基取代。
術語「雜環」、「雜環基」及「雜環狀環」在本文中可交換且係指具有3至約20個環原子之飽和或部分不飽和(即環內具有一或多個雙及/或三鍵)碳環狀基團，其中至少一個環原子係選自氮、氧、磷及硫之雜原子，餘下環原子係C，其中一或多個環原子係視需要獨立地經下文所述之一或多個取代基取代。雜環可為具有3至7個環成員(2至6個 碳原子及1至4個選自N、O、P及S之雜原子)之單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子及1至6個選自N、O、P及S之雜原子)之雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。雜環描述於Paquette,Leo A.；「Principles of Modern Heterocyclic Chemistry」(W.A.Benjamin,New York,1968)，尤其Chapters 1,3,4,6,7及9；「The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs」(John Wiley & Sons,New York,1950 to present)，特定言之Volumes 13,14,16,19，及28；及J.Am.Chem.Soc.(1960)82：5566。「雜環基」亦包括雜環基與飽和、部分不飽和環，或芳族碳環狀或雜環狀環稠合之基團。雜環狀環之實例包括，但不限制於，嗎啉-4-基、哌啶-1-基、哌基、哌-4-基-2-酮、哌-4-基-3-酮、吡咯烷-1-基、硫代嗎啉-4-基、S-二側氧基硫代嗎啉-4-基、氮雜環辛-1-基、氮雜環丁-1-基、八氫吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮雜環庚烷-1-基、吡咯啶基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫哌喃基、二氫哌喃基、四氫硫代哌喃基、六氫吡啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、噻噸基、哌基、高哌基、氮雜環丁基、氧雜環丁烷基、硫雜環丁基、高哌啶基、氧雜環庚烷基、硫雜環庚烷基、氧氮呯基、二氮呯基、硫氮呯基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、吲哚啉基、2H-哌喃基、4H-哌喃基、二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環戊烷基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫雜環戊基、二氫哌喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑啶 基咪唑啉基、咪唑啶基、3-氮雜雙環[3.1.0]己基、3-氮雜雙環[4.1.0]庚基、氮雜雙環[2.2.2]己基、3H-吲哚基喹基及N-吡啶脲。螺旋部分亦包含於此定義之範圍內。其中2個環原子係經側氧基基(=O)部分取代之雜環基之實例為嘧啶酮基及1,1-二側氧基-硫代嗎啉基。本文中之雜環基係視需要獨立地經文中所述之一或多個取代基取代。
術語「雜芳基」係指呈5-、6-或7-員環之單價芳族基團，及包括具有5至20個原子之稠環系統(其中至少一者係芳族)，含有一或多個獨立地選自氮、氧及硫之雜原子。雜芳基之實例為吡啶基(包括，例如2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括，例如4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁二唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲哚基、酞基、噠基、三基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋呫基、苯并呋呫基、苯并硫苯基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹噁啉基、萘啶基及呋喃并吡啶基。雜芳基係視需要獨立地經文中所述之一或多個取代基取代。
雜環或雜芳基可在可行位置經碳(碳鍵聯)或氮(氮鍵聯)鍵結。以實例而非限制方式，碳鍵結雜環或雜芳基係鍵結於吡啶之2、3、4、5或6位，噠之3、4、5或6位，嘧啶之2、4、5或6位，吡之2、3、5或6位、呋喃、四氫呋 喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯之2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑之2、3、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑之3、4或5位，氮丙啶之2或3位，氮雜環丁烷之2、3或4位，喹啉之2、3、4、5、6、7或8位或異喹啉之1、3、4、5、6、7或8位。
以實例而非限制方式，氮鍵結雜環或雜芳基係鍵結於氮丙啶、氮雜環丁烷、吡咯、吡咯啶、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啉、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌、吲唑、吲哚啉、1H-吲唑之1位，異吲哚或異吲哚啉之2位，嗎啉之4位及咔唑或β-咔啉之9位。
術語「治療」係指治療性治療，其中目的係減慢(減輕)非所需生理變化或疾病，如風濕病或癌症之發展或蔓延。就本發明之目的而言，有利或所需臨床結果包括，但不限制於，減輕症狀、減小疾病範圍、穩定化(即，不惡化)疾病狀態、延遲或減慢疾病進展、改善或緩和疾病狀態，及緩解(部分或整體)，不論可偵測或不可偵測。「治療」亦可意指相較於若不接受治療之預期存活而言延長存活。需要治療之彼等人群包括罹患該病況或病症之人群。
用語「治療有效量」意指本發明化合物之量：(i)治療特定疾病、病況或病症，(ii)減弱、改善或消除特定疾病、病況或病症之一或多個症狀，或(iii)預防或延遲本文中所描述之特定疾病、病況或病症之一或多個症狀之發作。於癌症之情況中，治療有效量之藥物可減少癌細胞數量；減 小腫瘤尺寸；抑制(即，某程度上減慢及較佳終止)癌細胞滲入周圍器官；抑制(即，某程度上減慢及較佳終止)腫瘤轉移；抑制(某程度上)腫瘤生長；及/或某程度上緩解與癌症相關之症狀中之一或多者。在藥物防止生長及/或殺死現有癌細胞可達到之程度內，該藥物呈細胞生長抑制性及/或細胞毒性。就癌症療法而言，可例如藉由評價疾病進展時間(TTP)及/或確定反應率(RR)測量效能。
如本文中所使用之「炎症性疾病」係指過度或失調性炎症性反應導致過度炎症性症狀、宿主組織損壞或組織功能喪失之任何疾病、病症或症候群。「炎症性疾病」亦係指藉由白血球及/或嗜中性白血球向化性之流入所介導之病理狀態。
如本文中所使用之「發炎」係指由組織之受傷或破壞引起之局部保護反應，其用於破壞、稀釋或屏蔽(隱蔽)致傷劑及受傷組織。發炎尤其與白血球及/或嗜中性白血球向化性之流入有關。發炎可源自病原性微生物及病毒感染及源自非感染方式，如創傷或心肌梗塞或中風後之再灌注，對外來抗原之免疫反應及自體免疫反應。因此，可透過式I化合物治療而治好之炎症性疾病涵蓋與特異性防禦系統之反應，及與非特異性防禦系統之反應相關之病症。
「特異性防禦系統」係指對特異性抗原之存在起反應之免疫系統部分。源自特異性防禦系統之反應之發炎之實例包括對外來抗原之典型反應、自體免疫疾病、及由T細胞介導之延遲型過敏反應。特異性防禦系統之炎症性反應之 其他實例為慢性炎症性疾病、固體移植組織及器官(例如腎及骨髓)排斥及移植物抗宿主疾病(GVHD)。
如本文中所使用之術語「非特異性防禦系統」係指由無法進行免疫記憶之白血球(例如，粒性細胞及巨噬細胞)介導之炎症性疾病。至少部分源自非特異性防禦系統之反應之發炎之實例包括與諸如成人(急性)呼吸窘迫症候群(ARDS)或多器官損傷症候群之病況相關之發炎；再灌注損傷；急性腎小球腎炎；反應性關節炎；具有急性炎症性部分之皮膚病；急性膿性腦膜炎或其他中樞神經系統炎症性疾病，如中風；燙傷；炎症性腸病；粒性細胞輸血相關症候群；及細胞激素誘導毒性。
如本文中所使用之「自體免疫疾病」係指其中組織損傷係與針對軀體本身組成之體液或細胞介導反應有關之任何病症群。
如本文中所使用之「過敏性疾病」係指源自過敏反應之任何症狀、組織損壞或組織功能喪失。如本文中所使用之「關節病」係指由可歸因於各種不同病因之關節炎症性病變表徵之任何疾病。如本文中所使用之「皮膚炎」係指由可歸因於各種不同病因之皮膚發炎表徵之皮膚病中一大家族。如本文中所使用之「移植排斥」係指對抗移植組織(如器官或細胞(例如骨髓))之任何免疫反應，特徵在於所移植及周圍組織之功能喪失、疼痛、腫脹、白血球症及血小板減少症。本發明之治療方法包括治療與炎症性細胞活化相關之病症之方法。
「炎症性細胞活化」係指由刺激物(包括，但不限制於，細胞激素、抗原或自體抗體)誘導之增生性細胞反應、產生可溶性介體(包括但不限制於細胞激素、氧自由基、酶、類前列腺素或血管活性胺)，或新生或增加數量之介體(包括但不限制於主要組織相容性抗原或細胞黏著分子)在炎症性細胞(即，單核細胞、巨噬細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞、粒性細胞(即多形核白血球，如嗜中性白血球、嗜鹼性白血球及嗜曙紅細胞)、肥大細胞、樹突細胞、蘭格罕(Langerhans)細胞及內皮細胞)中之細胞表面表現。熟習本項技術者將瞭解在此等細胞中此等表現型中之一者或組合之活化可導致炎症性疾病之啟動、永續或惡化。
術語「NSAID」係「非類固醇消炎藥」之頭字語且係具有止痛、退熱(降低高體溫及解除疼痛而不損害意識)及在較高劑量時，具有消炎作用(降低發炎)之治療劑。術語「非類固醇」係用於將此等藥物自類固醇區分，類固醇(在其他作用之寬範圍中)具有類似碳廿酸壓制、消炎作用。就止痛而言，NSAID不常用，係因其等係非麻醉藥。NSAID包括阿斯匹靈(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)及奈普生(naproxen)。NSAID常用於治療存在疼痛及發炎之急性或慢性病況。NSAID基本上用於解除以下病況之症狀：類風濕性關節炎、骨關節炎、炎症性關節病(例如，僵直性脊椎炎、牛皮癬性關節炎、萊特氏(Reiter)症候群、急性痛風、痛經、轉移性骨痛、頭痛及偏頭痛、手術後疼痛、 由發炎及組織損傷引起之輕度至中度疼痛、發熱、腸阻塞及腎絞痛。大部分NSAID用作環氧合酶之非選擇性抑制劑，抑制環氧合酶-1(COX-1)及環氧合酶-2(COX-2)同工酶。環氧合酶催化自花生油酸(本身自細胞磷脂雙層，藉由磷脂酶A2衍生)形成前列腺素及血栓素。前列腺素用作(尤其)發炎過程中之信使分子。COX-2抑制劑包括塞利西普(celecoxib)、依託昔普(etoricoxib)、羅美西普(lumiracoxib)、帕瑞考普(parecoxib)、羅非考普(rofecoxib)及伐地考普(valdecoxib)。
術語「癌症」係指或描述常由失調性細胞生長表徵之哺乳動物之生理病況。「腫瘤」包含一或多種癌細胞。癌症之實例包括，但不限制於，惡性腫瘤、淋巴癌、細胞瘤、肉瘤及白血病或淋巴血液病。此類癌症之更特定實例包括鱗狀細胞癌(例如，上皮鱗狀細胞癌)、肺癌，包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌(「NSCLC」)、肺腺癌及肺腺鱗癌、腹膜癌、肝細胞癌、腸或胃癌，包括胃腸道癌、胰腺癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝腫瘤、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮內膜或子宮癌、唾腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌及頭頸癌。
「惡性血液病」(不列顛拼寫為「Haematological」血液病)係影響血液、骨髓及淋巴結之癌症類型。由於與免疫系統緊密連接，故影響三者中之一者之疾病通常亦影響另外兩者：雖然淋巴癌係淋巴結之疾病，然而其通常蔓延至 骨髓，影響血液。惡性血液病係惡性腫瘤(「癌症」)，且其等基本上係藉由血液學及/或腫瘤學專家治療。於某些中心，「血液學/腫瘤學」係內科醫學之單獨亞學科，而在其他中心，其等被視為不同部分(亦存在外科及放射腫瘤學家)。血液病並非均為惡性(癌性)；此等其他血液病況亦可由血液學家管理。惡性血液病可自兩大血液細胞譜系產生：髓系及淋巴系細胞株。髓系細胞株正常產生粒性細胞、紅血球、血小板、巨噬細胞及肥大細胞；淋巴系細胞株產生B、T、NK及血漿細胞。淋巴癌、淋巴細胞性白血病及骨髓瘤係來自淋巴系細胞株，而急性及慢性骨髓性白血病、骨髓發育不良症候群及骨髓增生病係源自髓性細胞。白血病包括急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、急性單球性白血病(AMOL)及小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)。淋巴瘤包括霍奇金氏(Hodgkins)淋巴瘤(四種所有亞型)及非霍奇金氏淋巴瘤(所有亞型)。
「化學治療劑」係可用於治療癌症之化學化合物，不論作用機轉。化學治療劑之類別包括，但不限制於：烷基化製劑、抗代謝物、紡錘體毒植物鹼、細胞毒性/抗腫瘤抗生素、拓撲異構酶抑制劑、抗體、光敏化劑及激酶抑制劑。化學治療劑包括用於「定向療法」及習知化學療法中之化合物。化學治療劑之實例包括：厄洛替尼(erlotinib)(TARCEVA®,Genentech/OSI Pharm.)、多西他賽(docetaxel)(TAXOTERE®,Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧 啶、5-氟尿嘧啶，CAS No.51-21-8)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®,Lilly)、PD-0325901(CAS No.391210-10-9，Pfizer)、順鉑(cisplatin)(順二胺二氯鉑(II)，CAS No.15663-27-1)、卡鉑(carboplatin)(CAS No.41575-94-4)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)(TAXOL®,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)、曲妥單抗(trastuzumab)(HERCEPTIN®,Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-側氧基-2,3,4,6,8-五氮雜雙環[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲醯胺，CAS No.85622-93-1,TEMODAR®,TEMODAL®,Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基乙胺，NOLVADEX®,ISTUBAL®,VALODEX®)及阿黴素(doxorubicin)(ADRIAMYCIN®)、Akti-1/2、HPPD及雷帕黴素(rapamycin)。
化學治療劑之更多實例包括：奧沙利鉑(oxaliplatin)(ELOXATIN®,Sanofi)、波替單抗(bortezomib)(VELCADE®,Millennium Pharm.)、索坦(sutent)(SUNITINIB®,SU11248,Pfizer)、來曲唑(letrozole)(FEMARA®,Novartis)、甲磺酸伊馬替尼(imatinib mesylate)(GLEEVEC®,Novartis)、XL-518(Mek抑制劑，Exelixis,WO 2007/044515)、ARRY-886(Mek抑制劑，AZD6244，Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-1126(PI3K抑制劑，Semafore Pharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制劑，Novartis)、XL-147(PI3K抑制劑，Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟維司群 (fulvestrant)(FASLODEX®,AstraZeneca)、爾可福鈣(leucovorin)(亞葉酸)、雷帕黴素(西羅莫司(sirolimus)，RAPAMUNE®,Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)(TYKERB®,GSK572016,Glaxo Smith Kline)、洛那法尼(lonafarnib)(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉菲尼(sorafenib)(NEXAVAR®,BAY43-9006，Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(IRESSA®,AstraZeneca)、伊力替康(irinotecan)(CAMPTOSAR® CPT-11,Pfizer)、替吡法尼(tipifarnib)(ZARNESTRATM,Johnson & Johnson)、ABRAXANETM(無氫化蓖麻油(Cremophor))、太平洋紫杉醇之白蛋白工程化奈米粒子調配物(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,I1)、凡德他尼(vandetanib)(rINN，ZD6474，ZACTIMA®,AstraZeneca)、苯丁酸氮芥(chloranmbucil)、AG1478、AG1571(SU 5271；Sugen)、特癌適(temsirolimus)(TORISEL®,Wyeth)、帕唑帕尼(pazopanib)(GlaxoSmithKline)、堪佛司非米德(canfosfamide)(TELCYTA®,Telik)、噻替(thiotepa)及環磷醯胺(cyclosphosphamide)(CYTOXAN®,NEOSAR®)；烷基磺酸酯，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶，如苯唑達帕、卡波醌(carboquone)、美托達帕(meturedopa)及尤裏達帕(uredopa)；次乙亞胺(ethylenimines)及甲基蜜胺(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三伸乙磷醯胺(triethylenephosphoramide)、 三伸乙硫代磷醯胺(triethylenethiophosphoramide)及三甲蜜胺(trimethylomelamine)；乙醯素(acetogenins)(尤其番荔枝內酯(bullatacin)及番荔枝內酯酮(bullatacinone))；喜樹鹼(camptothecin)(包括合成類似物拓撲替康(topotecan))；苔蘚抑素(bryostatin)；多烯酮類化合物(callystatin)；CC-1065(包括其合成類似物阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin))；克利特非辛(cryptophycin)(尤其是克利特非辛1及克利特非辛8)；多拉司他汀(dolastatin)；多卡米星(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴素(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；肉質網囊素(sarcodictyin)；海綿抑素(spongistatin)；氮芥(mustard)，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、氯磷醯胺(chorophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、異環磷醯胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥(mechlorethamine)氧化物鹽酸鹽、苯丙胺酸氮芥(melphalan)、新氮芥(novembichin)、膽甾醇對苯乙酸氮芥(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲(nitrosoureas)如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、環己亞硝脲(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、及雷諾氮芥(ranimnustine)；抗生素，如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)、卡奇黴素γ1I、卡奇黴素ΩI1(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33：183- 186)；蒽環類抗生素(dynemicin)、蒽環類抗生素A；雙膦酸酯(bisphosphonates)，如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波黴素(esperamicin)；及新制癌菌素(neocarzinostatin)發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、胺茴黴素(authramycin)、氮絲胺酸(azaserine)、博來黴素(bleomycins)、放線菌素C(cactinomycin)、卡雷比素(carabicin)、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycinis)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-二氮雜-5-側氧基-L-正亮胺酸、嗎啉-阿黴素(morpholino-doxorubicin)、氰嗎啉阿黴素(cyanomorpholino-doxorubicin)、2-吡咯啉-阿黴素及脫氧阿黴素(deoxydoxorubicin))、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)(如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加拉黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈黴亞硝基素(streptozocin)、7-去氮腺苷基(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，如甲胺喋呤(methotrexate)及5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)(5-FU)；葉 酸類似物，如二甲葉酸(denopterin)、甲胺喋呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫代烏嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物如環胞苷(ancitabine)、阿札胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄性激素如卡魯睾丸(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾丸激素(testolactone)；抗腎上腺藥，如胺盧米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛斯坦(trilostane)；葉酸補充液，如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內酯(aceglatone)；醛磷醯胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；胺基乙醯丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；百思布啶(bestrabucil)；比山群(bisantrene)；依達曲沙(edatraxate)；迪福胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依氟鳥胺酸(elfornithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃坡黴素(epothilone)；乙環氧啶(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲(hydroxyurea)；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼達明(lonidainine)；美登木素生物鹼(maytansinoids)如，美登素I(maytansine)及安絲菌素 (ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；美得眠(mopidanmol)；硝林(nitraerine)；噴托他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙肼(2-ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多糖錯合物(JHS Natural Products,Eugene,OR))；雷佐生(razoxane)；根黴素(rhizoxin)；西佐糖(sizofiran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鍵孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2」-三氯三乙胺；單端胞黴烯(trichothecenes)(尤其T-2毒素、疣孢黴素A(verracurin A)、桿孢黴素A(roridin A)及蛇形毒素(anguidine))；胺基甲酸酯(urethan)；長春地辛(vindesine)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛矛醇(mitolactol)；呱泊溴烷(pipobroman)；葛胞嘧啶(gacytosine)；阿拉伯糖苷(arabinoside(「Ara-C」))；環磷醯胺(cyclophosphamide)；噻替(thiotepa)；6-硫代烏嘌呤(6-thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲胺喋呤(methotrexate)；鉑類似物，如順鉑(cisplatin)及卡鉑(carboplatin)；長春鹼(vinblastine)；依託泊苷(etoposide(VP-16))；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長春新鹼(vincristine)；長春瑞濱(vinorelbine(NAVELBINE®))；諾安托(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依達曲沙 (edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；胺基蝶呤(aminopterin)；卡培他濱(capecitabine(XELODA®,Roche))；依班膦酸鹽(ibandronate)；CPT-11；拓撲異構酶(topoisomerase)抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(difluoromethylornithine(DMFO))；視黃醛(retinoids)如視黃酸(retinoic acid)；及以上任一者之醫藥可接受鹽、酸及衍生物。
「化學治療劑」之定義亦包括：(i)用於調控或抑制作用於腫瘤之激素之抗激素劑，如抗雌激素及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)，包括，例如，他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX®；檸檬酸他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、曲洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)、曲沃昔芬(trioxifene)、雷洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)及FARESTON®(檸檬酸托瑞米芬(toremifine citrate))；(ii)芳香酶(aromatase)抑制劑，其抑制芳香酶，該等酶調控腎上腺中之雌激素產生，如，例如，4(5)-咪唑、胺魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE®(乙酸甲地孕酮(megestrol acetate))、AROMASIN®(依西美坦(exemestane)；Pfizer)、福美坦(formestanie)、法屈唑(fadrozole)、RIVISOR®(伏羅唑(vorozole))、FEMARA®(來曲唑(letrozole)；Novartis)及ARIMIDEX®(阿他美坦(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激素，如氟利坦(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、亮丙瑞林(leuprolide)、及戈舍瑞 林(goserelin)；及曲沙他濱(troxacitabine(1,3-二氧雜環戊烷核苷酸胞嘧啶類似物))；(iv)蛋白激酶抑制劑，如MEK抑制劑(WO 2007/044515)；(v)脂質激酶抑制劑；(vi)反義寡核苷酸，特定言之，抑制在異常細胞增生中所牽涉之信號傳導路徑中之基因表現之彼等物，例如，PKC-α、Raf及H-Ras，如反義寡核苷酸(oblimersen)(GENASENSE®,Genta Inc.)；(vii)核酶，如VEGF表現抑制劑(例如，ANGIOZYME®)及HER2表現抑制劑；(viii)疫苗，如基因療法疫苗，例如，ALLOVECTIN®、LEUVECTIN®及VAXID®；PROLEUKIN® rIL-2；拓撲異構酶1抑制劑，如LURTOTECAN®；ABARELIX® rmRH；(ix)抗血管生成劑，如貝伐單抗(bevacizumab)(AVASTIN®,Genentech)；及以上任一者之醫藥可接受鹽、酸及衍生物。
「化學治療劑」之定義亦包括治療性抗體，如阿來組單抗(alemtuzumab(Campath))、貝伐單抗(bevacizumab(AVASTIN®，Genentech)；西妥昔單抗(cetuximab(ERBITUX®，Imclone)；盤尼圖單抗(panitumumab(VECTIBIX®，Amgen)、利妥昔單抗(rituximab(RITUXAN®，Genentech/Biogen Idec))、皮妥珠單抗(pertuzumab(OMNITARGTM，2C4，Genentech))、曲妥單抗(trastuzumab(HERCEPTIN®，Genentech))、托西奠單抗(tositumomab(Bexxar，Corixia))、及抗體藥物共軛物、吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin(MYLOTARG®，Wyeth))。
當與本發明之Btk抑制劑組合時具有作為化學治療劑之 治療潛能之人源化單株抗體包括：阿來組單抗(alemtuzumab)、阿泊珠單抗(apolizumab)、阿塞珠單抗(aselizumab)、阿力珠單抗(atlizumab)、巴皮紐阻單抗(bapineuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、比伐單抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥珠單抗(cantuzumab mertansine)、西利珠單抗(cedelizumab)、塞妥珠單抗(certolizumab pegol)、西弗妥珠單抗(cidfusituzumab)、希德妥珠單抗(cidtuzumab)、達利珠單抗(daclizumab)、依庫珠單抗(eculizumab)、依法利株單抗(efalizumab)、依呱佐單抗(epratuzumab)、厄利珠單抗(erlizumab)、非維珠單抗(felvizumab)、芳妥珠單抗(fontolizumab)、吉妥單抗(gemtuzumab ozogamicin)、奧英妥珠單抗(inotuzumab ozogamicin)、依匹裏木馬(ipilimumab)、拉貝珠單抗(labetuzumab)、林妥珠單抗(lintuzumab)、馬茲替尼(matuzumab)、美泊利單抗(mepolizumab)、莫他維珠單抗(motavizumab)、莫妥維珠單抗(motovizumab)、那他珠單抗(natalizumab)、尼妥珠單抗(nimotuzumab)、諾維珠單抗(nolovizumab)、怒維珠單抗(numavizumab)、奧瑞珠單抗(ocrelizumab)、奧瑪珠單抗(omalizumab)、帕利珠單抗(palivizumab)、帕考珠單抗(pascolizumab)、帕氟妥珠單抗(pecfusituzumab)、帕妥珠單抗(pectuzumab)、皮妥珠單抗(pertuzumab)、培克珠單抗(pexelizumab)、拉利珠單抗(ralivizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、雷司單抗(reslivizumab)、雷利珠單抗(reslizumab)、雷維珠單抗 (resyvizumab)、羅維珠單抗(rovelizumab)、魯里珠單抗(ruplizumab)、西羅珠單抗(sibrotuzumab)、西利珠單抗(siplizumab)、松妥珠單抗(sontuzumab)、他珠單抗(tacatuzumab tetraxetan)、他多單抗(tadocizumab)、他利單抗(talizumab)、特非珠單抗(tefibazumab)、托珠單抗(tocilizumab)、托利珠單抗(toralizumab)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、西莫介白素單抗(tucotuzumab celmoleukin)、土庫單抗(tucusituzumab)、尤瑪單抗(umavizumab)、烏珠單抗(urtoxazumab)、及維西珠單抗(visilizumab)。
「代謝物」係指定化合物或其鹽經由軀體中之代謝而產生之產物。化合物之代謝物可利用本技藝中已知之常規技術識別及其等活性係利用諸如本文中所描述之測試確定。此類產物可來自例如所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、脫醯胺化、酯化、脫酯化、酶解及類似作用。因此，本發明包括本發明化合物之代謝物，包括透過使本發明之式I化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物之時間而產生之化合物。
術語「包裝插頁」係指專門包含於治療產品之商業包裝中之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、在使用此類治療產品時所涉及之禁忌症候及/或警示之資訊。
術語「對掌性」係指與鏡像搭配物呈非重疊性質之分子，而術語「非對掌性」係指可重疊在其鏡像搭配物上之 分子。
術語「立體異構體」係指具有相同化學結構，但原子或基團之空間排佈不同之化合物。
「非立體異構體」係指具有兩或更多個對掌性中心及其等分子為彼此非鏡像之立體異構體。非立體異構體具有不同物理性質，例如，熔點、沸點、頻譜性質及反應活性。非立體異構體之混合物可在高解析分析方案(如電泳及層析)下分離。
「鏡像異構體」係指彼此鏡像不可重疊之化合物之兩個立體異構體。
本文中所使用之立體結構定義及協議基本上遵從S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；及Eliel,E.及Wilen,S.,「Stereochemistry of Organic Compounds」,John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994。本發明之化合物可含有非對稱或對掌性中心，及因此存在不同立體異構形式。預期本發明化合物之所有立體異構形式，包括但不限制於，非立體異構體、鏡像異構體及阻轉異構體，及其等混合物，如消旋混合物，將構成本發明之一部分。許多有機化合物係以光學活性形式存在，即，其等具有旋轉平面偏振光之平面之能力。於描述光學活性化合物時，將詞頭D及L，或R及S用於表示分子圍繞其對掌性中心之絕對組態。詞頭d及l或(+)及(-)係用於指定該化合物之平面偏振光之旋轉符號，其中(-)或l意指化學物為左 旋。具有詞頭(+)或d之化合物為右旋。對於指定化學結構而言，此等立體異構體相同，但其等彼此成鏡像。特定立體異構體亦可稱為鏡像異構體，及此類異構體之混合物常稱為鏡像異構混合物。將鏡像異構體之50：50混合物稱為消旋混合物或消旋體，其等可在化學反應或過程無立體選擇或立體特異性時存在。術語「消旋混合物」及「消旋體」係指兩個鏡像異構物之等莫耳混合物，其不具光學活性。鏡像異構體可藉由對掌性分離方法，如超臨界流體層析(SFC)，而自消旋混合物分離。對分離之鏡像異構體中之對掌性中心之組態指定可為暫定且針對說明目的以表1結構描述，而立體結構確定待定，如藉由x-射線結晶數據。
術語「互變異構體」或「互變異構形式」係指具有不同能量之結構異構體，其等可經由低能障壁相互轉化。例如，質子互變異構體(亦稱為質子轉移互變異構體)包括經由質子遷移之相互轉化，如酮-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括藉由某些鍵結電子之再組織而發生之相互轉化。
術語「醫藥可接受鹽」表示生物或其他情況適宜之鹽。醫藥可接受鹽包括酸及鹼加成鹽。用語「醫藥可接受」指出物質或組合物應與構成調配物之其他成分及/或計劃藉此治療之哺乳動物在化學及/或毒性學上相容。
術語「醫藥可接受酸加成鹽」表示與以下酸形成之彼等醫藥可接受鹽：無機酸，如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、 碳酸、磷酸，及選自脂族、環脂族、芳族、芳脂族、雜環、羧酸及磺酸類有機酸之有機酸，如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、天冬胺酸、抗壞血酸、榖胺酸、鄰胺基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、杏仁酸、恩波酸、苯基乙酸、甲烷磺酸「甲磺酸」、乙烷磺酸、對甲苯磺酸及水楊酸。
術語「醫藥可接受鹼加成鹽」表示與有機或無機鹼形成之彼等醫藥可接受鹽。可接受無機鹼之實例包括鈉、鉀、銨、鈣、鎂、鐵、鋅、銅、錳及鋁鹽。自醫藥可接受無毒性有機鹼產生之鹽包括以下化合物之鹽：一級、二級及三級胺、經取代胺，包括天然經取代胺、環胺及鹼性離子交換樹脂，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙胺基乙醇、三甲胺、二環己胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸、咖啡因、普魯卡因(procaine)、海卓胺、膽鹼、甜菜鹼、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可鹼、嘌呤、哌、哌啶、N-乙基哌啶及聚胺樹脂。
「溶劑化物」係指一或多種溶劑分子與本發明化合物之締結或錯合物。形成溶劑化物之溶劑之實例包括，但不限制於，水、異丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸及乙醇胺。
術語「EC50」係半最大有效濃度，及表示在體內獲得特定作用之最大值之50%所需之特定化合物之血漿濃度。
術語「Ki」係抑制常數及表示特定抑制劑對受體之絕對 結合親和性。其係利用競爭結合試驗測量及等於當不存在競爭配體(例如，放射配體)，特定抑制劑佔據50%受體時之濃度。Ki值可以對數方式轉化為pKi值(-log Ki)，其中較高值表示指數較大效力。
術語「IC50」係半最大抑制濃度及表示在體外達成對生物過程之50%抑制所需之特定化合物濃度。IC50值可以對數方式轉化為pIC50值(-log IC50)，其中較高值表示指數較大效力。IC50值並非絕對值，而係視實驗條件而定，例如，所採用之濃度，且可利用Cheng-Prusoff等式轉化為絕對抑制常數(Ki)(Biochem.Pharmacol.(1973)22：3099)。可計算其他百分比抑制參數，如IC70、IC90等。
術語「本發明之化合物」及「式I化合物」包括式I化合物及其立體異構體、幾何異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物及醫藥可接受鹽及前藥。
本文中所指定之任何化學式或結構，包括式I化合物，亦意欲表示此等化合物之水合物、溶劑化物及多形體及其等混合物。
本文中所指定之任何化學式或結構，包括式I化合物，亦意欲表示該等化合物之未標記形式，及同位素標記形式。同位素標記化合物具有由本文中所指定之化學式描述之結構，但一或多個原子係藉由具有經選擇之原子量或質量數之原子置換。可併入本發明化合物中之同位素之實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟及氯之同位素，如，但不限制於2H(氘，D)、3H(氚)、11C、13C、14C、15N、18F、 31P、32P、35S、36Cl及125I。本發明之各種同位素標記化合物，例如，併入放射性同位素(如3H、13C及14C)之彼等物。此等同位素標記化合物可用於代謝研究、反應動力學研究、偵測或成像技術，如正子放射斷層攝影術(PET)或單光子放射電腦斷層攝影術(SPECT)，包含藥物或物質組織分佈試驗，或病患之放射活性治療。本發明之氘標記或取代治療性化合物可具有改良之與分佈、代謝及分泌(ADME)有關之DMPK(藥物代謝及藥物動力學)性質。較重同位素(如氘)之取代可提供特定治療優點，其等獲自較大代謝穩定性，例如，改良之體內半衰期或降低之劑量需求。18F標記化合物可用於PET或SPECT研究。本發明之同位素標記化合物及其前藥基本上可藉由執行方案或實例中所揭示之製程及以下透過以可利用同位素標記試劑取代非同位素標記試劑來描述之製備例製備。此外，較重同位素，尤其氘(即，2H或D)之取代可提供特定治療優點，其等獲自較大代謝穩定性，例如改良之體內半衰期或降低之劑量需求或治療指數之改良。將理解，在本文中，將氘視為式(I)化合物中之取代基。此較重同位素，具體言之，氘之濃度可藉由同位素富集因子定義。於本發明之化合物中，未專門指定為特定同位素之任何原子意指彼原子之任何穩定同位素。除非另外說明，否則當某一位置專門指定為「H」或「氫」時，該位置視為具有呈其天然豐度同位素組成之氫。因此，於本發明之化合物中，任何專門指定為氘(D)之原子意指氘。
烷基化哌化合物
本發明提供如式I之烷基化哌化合物，及其醫藥調配物，其等潛在地可用於治療受Btk激酶調控之疾病、病況及/或病症。
式I化合物之示例性實施例包括
或其立體異構體、互變異構體或醫藥可接受鹽，其中：R1、R2及R3獨立地選自H、F、Cl、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH及C1-C3烷基；R4選自H、F、Cl、CN、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-CH(CF3)OH、-CH2F、-CHF2、-CH2CHF2、-CF3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、環丙基、環丙基甲基、1-羥基環丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環丁-3-基、氧雜 環丁-3-基、及氮雜環丁-1-基；R5選自-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CN、及-CH2CH2OH；或兩個R5基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；或R5基團與R8基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；n為1、2、3或4 R6選自H、F、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、及-OH；R7選自結構：
其中波浪線指出連接位點；R8選自-CH3、-S(O)2CH3、環丙基、氮雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基、及嗎啉-4-基；X1係CR9或N，其中R9選自H、F、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、及-OCH2CH2OH；X2係CR10或N，其中R10選自H、-CH3、-CH2CH3、及-CH2CH2OH；及Y1及Y2獨立地選自CH及N，其中Y1及Y2不同時為N。
式I化合物之示例性實施例包括其中X係CR9，及R9係 H。
式I化合物之示例性實施例包括其中X係N。
式I化合物之示例性實施例包括其中R4係-CH2OH。
式I化合物之示例性實施例包括其中R2係F。
式I化合物之示例性實施例包括其中R1及R3係H。
式I化合物之示例性實施例包括其中R6係CH3。
本發明之式I化合物可含有非對稱或對掌性中心，及因此存在不同立體異構形式。預期本發明化合物之所有立體異構形式，包括但不限制於，非立體異構體、鏡像異構體及阻轉異構體，及其等混合物，如消旋混合物，將構成本發明之一部分。
此外，本發明涵蓋所有非立體異構體，包括順式-反式(幾何)及構象異構體。例如，若式I化合物併有雙鍵或稠環，則順式及反式形式，及其等混合物將涵蓋於本發明之範圍內。
於本文中所顯示之結構中，當未指出任何特定對掌性原子之立體結構時，則本發明之化合物涵蓋及包括所有立體異構體。當藉由表示特定組態之實心楔形或虛線指出立體結構時，則彼立體異構體係如此指出及定義。
本發明之化合物可以與醫藥可接受溶劑(如水、乙醇及類似者)之未溶劑化及溶劑化形式存在，及預期本發明涵蓋溶劑化及未溶劑化形式。
本發明之化合物亦可以不同互變異構形式存在，及所有此等形式涵蓋於本發明之範圍中。術語「互變異構體」或 「互變異構形式」係指具有不同能量之結構異構體，其等可經由低能障壁相互轉化。例如，質子互變異構體(亦稱為質子轉移互變異構體)包括經由質子遷移發生之相互轉化，如酮-烯醇及亞胺-烯胺異構化。價鍵互變異構體包括藉由某些鍵結電子之再組織而發生之相互轉化。
生物學評價
式I化合物作為酶活性(或其他生物活性)之抑制劑之相對效率可藉由確定各化合物抑制該活性至預定範圍時之濃度及隨後比較結果來確定。一般而言，較佳確定方式係在生物化學試驗中抑制活性之50%時之濃度，即，50%抑制濃度或「IC50」。IC50值之確定可利用本技藝已知之習知技術完成。一般而言，IC50可藉由測量在研究中指定酶在某一濃度範圍抑制劑存在下之活性而確定。隨後將酶活性之實驗獲得值相對所使用之抑制劑濃度繪圖。展示50%酶活性(相較於不存在任何抑制劑時之活性)之抑制劑濃度取作IC50值。類似地，其他抑制濃度可藉由對活性之恰當確定而定義。例如，於某些情況中，宜確立90%抑制濃度，即，IC90等。
藉由標準生物化學Btk激酶試驗測試式I化合物(實例901)。
可用於測試式I化合物之標準細胞Btk激酶試驗之基本程式係Ramos細胞Btk試驗(實例902)。
標準細胞B細胞增殖試驗可將自Balb/c小鼠之脾臟純化之B細胞用於測試式I化合物(實例903)。
標準T細胞增殖試驗可將自Balb/c小鼠之脾臟純化之T細胞用於測試式I化合物(實例904)。
使用自8至16週大Balb/c小鼠之脾臟純化之總小鼠脾細胞，對式I化合物之B細胞活性之抑制進行CD86抑制試驗(實例905)。
可對式I化合物進行B-ALL細胞存活試驗以測量在培養中存活B-ALL細胞之數量(實例906)。
可對式I化合物進行CD69全血試驗以確定化合物抑制透過使IgM與山羊F(ab')2抗人IgM表面交聯而激活之人類全血中之B淋巴細胞產生CD69的能力(實例907)。CD69係淋巴細胞遷移及細胞因子分泌所涉及之II類C型凝集素。CD69表現表示白血球激活之最早可利用指示中之一者且其快速誘導係透過轉錄激活發生(Vazquez等人(2009)Jour.of Immunology Published October 19,2009,doi：10.4049/jimmunol.0900839)。選擇性Btk抑制劑對抗原受體刺激之濃度依賴抑制誘導淋巴細胞激活標記物CD69之細胞表面表現(Honigberg等人(2010)Proc.Natl.Acad.Sci.107(29)：13075-13080)。因此，選擇性Btk抑制劑之CD69抑制可與特定B細胞異常之治療效力關聯。表1及2顯示關於示例性式I化合物之CD69 Hu Blood FACS IC70值。
示例性式I化合物之細胞毒性或細胞生長抑制活性可藉由以下方式測量：在細胞培養基中建立增生性哺乳動物腫瘤細胞株，添加式I化合物，培養細胞約6小時至約5天；及測量細胞存活率(實例908)。將細胞體外試驗用於測量存 活率，即增殖(IC50)、細胞毒性(EC50)及細胞凋亡誘導(卡斯蛋白酶激活)及可用於預測對抗惡性血液病及固體腫瘤之臨床效力。
式I化合物與化學治療劑之組合之體外潛力可藉由以下方式測量：實例908之細胞增殖試驗；由Promega Corp.,Madison,WI販售之CellTiter-Glo®發光細胞存活率試驗。此均質試驗方法係基於鞘翅類(Coleoptera)螢光素酶之重組表現(US 5583024；US 5674713；US 5700670)及基於ATP呈現(代謝活性細胞之指示)之定量化確定培養物中之活細胞數量(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160：81-88；US 6602677)。以96或384孔格式進行CellTiter-Glo®試驗，使其接受自動高通量篩選(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer Drugs 6：398-404)。均質試驗製程涉及將單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)直接添加至在血清補充培養基中培養之細胞。不需要細胞清洗、培養基移除及多個吸移步驟。系統在添加試劑及混合後之10分鐘內在384-孔格式中偵測低達15個細胞/孔。
均質「添加-混合-測量」格式導致細胞分解及產生與ATP呈現量成比例之螢光訊號。ATP之量與培養物中存在之細胞之數量成正比。CellTiter-Glo®試驗產生「輝光型」螢光訊號，其由螢光素酶反應產生，具有基本上大於五小時之半衰期，視所使用之細胞類型及培養基而定。活細胞以相對螢光單位(RLU)反映。基質甲蟲(Bettle)螢光素係藉由重組螢火蟲螢光素酶而氧化脫羧基化，同時ATP轉化成 AMP及產生光子。延長之半衰期消除對使用試劑注射器之需求且提供連續或分批模式加工多個培養皿之靈活性。此細胞增殖試驗可使用各種多孔格式，例如96或384孔格式。數據可藉由螢光光度計或CCD照相成像裝置記錄。螢光輸出以經時測量之相對光單位(RLU)出示。
示例性式I化合物及與化學治療劑組合對抗特定血液腫瘤細胞株之抗增殖效力係藉由CellTiter-Glo®試驗(實例908)測量。確立所測試化合物及組合之EC50值。
表1及2中之示例性式I化合物係依照本發明之方法製造、特徵化及測試對Btk之抑制，及具有以下結構及對應名稱(ChemDraw Ultra,Version 9.0.1，及ChemBioDraw,Version 11.0,CambridgeSoft Corp.,Cambridge MA)。當多於一個名稱與式I化合物或中間物關聯時，化學結構將界定該化合物。
式I化合物之投與
本發明之化合物可藉由適合待治療病況之任何路徑投與。合適路徑包括經口、經腸外(包括皮下、肌肉內、靜脈內、動脈內、真皮內、囊內及硬膜外)、經皮、經直腸、經鼻、經表皮(包括經口腔及舌下)、經陰道、經腹膜內、經肺內及經鼻內。就局部免疫抑制治療而言，化合物可藉由病灶內投與之方式投與，包括灌注或在其他情況中使移植物與抑制劑接觸，然後移植。將瞭解，較佳路徑可隨著例如受試者之情況而變化。當化合物係經口投與時，將其與醫藥可接受載劑或賦形劑一起調配成丸劑、膠囊、錠劑等。當化合物係經腸外投與時，可將其與醫藥可接受腸外媒劑一起及以下文將詳述之單位劑量可注射形式調配。
治療病患之劑量可在約10 mg至約1000 mg式I化合物之 範圍內。常見劑量可為約100 mg至約300 mg化合物。劑量可每日一次(QID)、每日兩次(BID)或更頻繁地投與，視藥物動力學及藥效性質而定，包括特定化合物之吸收、分佈、代謝及分泌。此外，毒性因素可影響劑量及投藥方案。當經口投與時，丸劑、膠囊或錠劑可每日或以更低頻率服用並持續指定時間。在多次療法循環內重複該方案。
使用式I化合物之治療方法
本發明之式I化合物可用於治療遭受由與Btk激酶有關之異常細胞生長、功能或行為所引起之疾病或病症之人類或動物病患，如免疫疾病、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌障礙或神經疾病，因此該等疾病或病症可藉由投與如上定義之本發明化合物之方法治療。罹患癌症的人類或動物病患亦可藉由投與如上定義之本發明化合物之方法治療。藉此可改良或改善病患之病況。
式I化合物可用於體外、原位及體內診斷或治療哺乳動物細胞、生物體或相關病理狀況，如全身性及局部發炎、免疫炎症性疾病，如類風濕性關節炎、免疫抑制、器官移植排斥、過敏、潰瘍性結腸炎、克隆氏病、皮膚炎、哮喘、全身性紅斑狼瘡、休格倫氏症候群、多發性硬化、硬皮病/系統性硬化、特發性血小板減少紫癜(ITP)、抗嗜中性粒細胞細胞質抗體(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬及用於基本關節保護作用。
本發明之方法亦包括治療諸如關節炎疾病之疾病，如類風濕性關節炎、單關節關節炎、骨關節炎、痛風性關節 炎、脊椎炎；貝切特氏(Behcet)病；敗血病、敗血性休克、內毒素性休克、革蘭氏陰性敗血病、革蘭氏陽性敗血病及毒素性休克症候群；敗血病、創傷或出血後二次多器官損傷症候群；眼科病，如過敏性結膜炎、春季結膜炎、葡萄膜炎及甲狀腺相關眼病；嗜伊紅細胞性肉芽腫；肺或呼吸疾病，如哮喘、慢性支氣管炎、過敏性鼻炎、ARDS、慢性肺炎症性疾病(例如，慢性阻塞性肺病)、矽肺病、肺結節病、胸膜炎、肺泡炎、血管炎、氣腫、肺炎、支氣管擴張及肺型氧中毒；心肌層、大腦或肢體再灌注損傷；纖維化，如囊腫性纖維化；疙瘩形成或疤痕組織形成；動脈粥樣硬化；自體免疫疾病，如全身性紅斑狼瘡(SLE)、自體免疫甲狀腺炎、多發性硬化、某些糖尿病形式及雷諾氏(Reynaud)症候群；及移植排斥疾病，如GVHD及同種異體移植排斥；慢性腎小球腎炎；炎症性腸病，如慢性炎症性腸病(CIBD)、克隆氏病、潰瘍性結腸炎及壞死性小腸結腸炎；炎症性皮膚病，如接觸性皮膚炎、特應性皮膚炎、牛皮癬或蕁麻疹；由於感染引起之發熱及肌痛；中央或周邊神經系統炎症性疾病，如腦膜炎、腦炎及由於小創傷引起之大腦或脊髓損傷；休格倫氏症候群；涉及白血球滲出之疾病；醇性肝炎；細菌性肺炎；抗原-抗體錯合物介導疾病；血容量減少性休克；I型糖尿病；急性及滯後性過敏；由白血球失調及轉移引起之疾病狀態；燙傷；粒性細胞輸血相關症候群；及細胞因子誘導中毒。
本發明之方法亦包括治療癌症，癌症選自乳房癌、卵巢 癌、子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、神經膠質母細胞瘤、神經胚細胞瘤、胃癌、皮膚癌、角質棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡癌、未分化癌、乳頭狀癌、精細胞瘤、黑色素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及膽道癌、腎癌、胰癌、骨髓疾病、淋巴瘤、毛細胞癌、頰腔癌、鼻咽癌、咽癌、脣癌、舌癌、口腔癌、小腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦及中樞神經系統癌、霍奇金氏癌、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝及肝內膽管癌、肝細胞癌、胃癌、膠質瘤/神經膠質母細胞瘤、子宮內膜癌、黑色素瘤、腎臟及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔及咽部癌、非霍奇金氏淋巴瘤、黑色素瘤及絨毛結腸腺瘤。
本發明之方法可用於治療正在或可能遭受再灌注損傷之個體，即由於組織或器官經歷缺血一段時間後接著再灌注時所導致之損傷。術語「缺血」係指由於動脈血液流入阻塞而引起之局部組織貧血。瞬時缺血接著再灌注特徵上導致嗜中性白血球激活及反式遷移通過受影響區域中之血管之內皮。激活之嗜中性白血球累積進而導致反應性氧代謝物產生，其等破壞相關組織或器官之組分。此「再灌注損傷」現象通常與諸如以下病況有關：如血管中風(包括全 身及局部缺血)、出血性休克、心肌缺血或梗塞、器官移植及腦血管痙攣。為了說明，再灌注損傷發生在心臟搭橋手術結束時或心跳驟停期間，此時心臟被阻止接收血液，開始再灌注。預期Btk活性之抑制可導致在此等情況中發生再灌注損傷之量下降。
醫藥調配物
為了將本發明之化合物用於哺乳動物(包括人類)之治療性治療，通常依照標準醫藥實踐將其調配成醫藥組合物。根據本發明之此態樣，提供一種醫藥組合物，其包含與醫藥可接受稀釋劑或載劑締結之本發明化合物。
常見調配物係藉由將本發明之化合物與載劑、稀釋劑或賦形劑混合製備。合適載劑、稀釋劑及賦形劑係為熟習本項技術者熟知且包括如下材料：碳水化合物、蠟、水可溶及/或可溶脹聚合物、親水或疏水性材料、明膠、油、溶劑、水及類似者。所使用之特定載劑、稀釋劑或賦形劑係視施用本發明化合物之方式及目的而定。溶劑基本上係基於由熟習本項技術者認為投與哺乳動物安全(GRAS)之溶劑選擇。一般而言，安全溶劑係無毒性水性溶劑，如水及在水中可溶或可混溶之其他無毒性溶劑。合適水性溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如，PEG 400，PEG 300)等，及其等混合物。調配物亦可包含一或多種緩衝劑、穩定劑、表面活性劑、潤濕劑、潤滑劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、助流劑、加工助劑、著色劑、甜味劑、芳香劑、調味劑及提供藥物(本發明化 合物或其醫藥組合物)宜人外觀或協助製造醫藥產品(即，藥劑)之其他已知添加劑。
調配物可利用習知溶解及混合製程製備。例如，在上述賦形劑中之一或多者存在下，將原料藥物(即，本發明之化合物或該化合物之穩定形式(例如，與環糊精衍生物或其他已知錯合劑之錯合物))溶於合適溶劑中。一般將本發明之化合物調配成醫藥劑型以提供該藥物易控劑量及使病患服從處方。
用於施用之醫藥組合物(或調配物)可以各種不同方式包裝，視投與該藥物之方法而定。基本上，分配用之物件包含一容器，其具有佈置在其中之呈恰當形式之醫藥調配物。合適容器係為熟習本項技術者已知，且包括諸如瓶(塑膠或玻璃)、藥囊、安瓿、塑膠袋、金屬筒及類似者之材料。該容器亦可包括防幹預組合體，以防止不慎接觸包裝內之內容物。此外，該容器具有佈置在其上之標籤，該標籤描述容器之內容物。該標籤亦可包括恰當警告。
本發明之化合物之醫藥調配物可經製備用於各種投與路徑及類型。例如，具有所需純度之式I化合物可視需要與醫藥可接受稀釋劑、載劑、賦形劑或穩定劑以凍乾調配物、研磨粉末或水溶液形式混合(Remington's Pharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)。調配可藉由在室溫、恰當pH及所需純度下，藉由生理可接受載劑(即，在所採用之劑量及濃度下對受試者無毒性之載劑)進行。調配物之pH主要係視化合物之特定用途及濃 度而定，但可在約3至約8之範圍內。在pH 5之乙酸鹽緩衝劑中調配係一合適實施例。
該化合物常規上可以固體組合物、凍乾調配物或水溶液形式保存。
本發明之醫藥組合物將依照符合良好醫學實踐之方式(即量、濃度、計劃、療程、媒劑及投與路徑)調配、定劑量及投與。就此而言需考量之因素包括待治療之特定病症、待治療之特定哺乳動物、個別病患之臨床狀況、病症之起因、遞送藥劑之位點、投與方法、投與計劃及主治醫師已知之其他因素。待投與之化合物之「治療有效量」將受此等考量約束，且係改善或治療過度增生性疾病所需之最小量。
作為一般命題，每劑經腸外投與之抑制劑之初始醫藥有效量係於約0.01至100 mg/kg之範圍內，即約0.1至20 mg mg/kg病患體重/日，所使用之化合物之常見初始範圍為0.3至15 mg/kg/日。
可接受稀釋劑、載劑、賦形劑及穩定劑在所採用之劑量及濃度下對受試者無毒性，且包括緩衝劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(如氯化十八烷基二甲基苄基銨；氯化己烷雙胺；氯化芐二甲烴銨、氯化芐乙氧銨；酚、丁基或苄基醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲苯酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，如血清白蛋白、明 膠或免疫球蛋白；親水聚合物，如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，如甘胺酸、榖胺醯胺、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單糖、二糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，如EDTA；糖類，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽抗衡離子，如鈉；金屬錯合物(例如，Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子性表面活性劑，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。活性醫藥成分亦可包埋在所製備之微膠囊中，例如，藉由凝聚技術或藉由界面聚合，例如，羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊，分別呈膠狀藥物遞送系統形式(例如，脂質體、白蛋白微球、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)或呈粗乳液形式。此等技術揭示在Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中。
可製備式I化合物之緩釋製劑。緩釋製劑之合適實例包括含有式I化合物之固體疏水聚合物之半滲透性基質，該等基質係呈成形物件形式，例如，膜或微膠囊。緩釋基質之實例包括聚酯、水凝膠(例如，聚(2-羥乙基-甲基丙烯酸酯)，或聚(乙烯醇))、聚丙交酯(US 3773919)、L-榖胺酸與γ-乙基-L-榖胺酸酯之共聚物、不可降解乙烯乙酸乙酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物，如LUPRON DEPOTTM(主要由乳酸-乙醇酸共聚物及乙酸亮丙瑞林組成之可注射微球)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。
調配物包括適合本文中所詳述之投與路徑之彼等物。調 配物宜以單位劑型形式存在及可藉由醫藥技藝中熟知之任何方法製備。技術及調配物基本上可參見Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。此等方法包括使活性成分與構成一或多種附屬成分之載劑締結之步驟。一般而言，調配物係藉由使活性成分與液體載劑或細分固體載劑或兩者均勻且緊密地締合，及隨後，若需要，使產物成形來製備。
適合經口投與之式I化合物之調配物可製成離散單元，如各含有預確定量之式I化合物之丸劑、膠囊、扁囊劑或錠劑。壓製錠劑可藉由在合適機器中壓縮呈自由流動形式(例如粉末或顆粒)之活性成分，視需要與黏結劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或分散劑混合來製備。模製錠劑可藉由在合適機器中模製經惰性液體稀釋劑潤濕之粉末狀活性成分之混合物製成。錠劑可視需要經塗覆或刻痕及視需要經調配以提供活性成分自錠劑之緩慢或受控釋放。錠劑、片劑、含錠、水性或油懸浮液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊(例如，明膠膠囊)、糖漿或酏劑可經製備用於經口服用。預期用於經口服用之式I化合物之調配物可依照製造醫藥組合物技藝已知之任何方法製備及此等組合物可含有一或多種劑，包括甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑，以提供美味製劑。含有活性成分與適用於製造錠劑之無毒性醫藥可接受賦形劑之混合物之錠劑均可接受。此等賦形劑可為，例如，惰性稀釋劑，如碳酸鈣或鈉、乳糖、磷酸鈣或鈉；造粒及崩解劑，如玉米 澱粉，或海藻酸；黏結劑，如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑可未經塗覆或藉由已知技術(包括微囊封)塗覆以延遲在胃腸道中之崩解及吸收及藉此提供在較長時間內之持續作用。例如，延時材料，如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，可單獨或與蠟一起使用。
就眼睛或其他外組織(例如口及皮膚)之治療而言，調配物較佳係以含有例如0.075至20重量%之量之活性成分之局部軟膏或乳霜之形式施用。當以軟膏調配時，活性成分可與石蠟或水可混溶軟膏基質連用。或者，可將活性成分與水包油乳霜基質調配成乳霜。若需要，乳霜基質之水相可包含多元醇，即，具有兩或更多個羥基之醇，如丙二醇、丁1,3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油及聚乙二醇(包括PEG 400)及其等混合物。局部調配物宜包含增強活性成分經由皮膚或其他受影響區域之吸收或滲透之化合物。此等真皮滲透增強劑之實例包括二甲亞碸及相關類似物。本發明乳液之油相可由已知成分，依已知方式構成。雖然該相可僅包含乳化劑，然而其宜包含至少一種乳化劑與脂肪或油或與脂肪及油兩者之混合物。較佳，包含親水性乳化劑及作為穩定劑之親脂性乳化劑。較佳亦包含油及脂肪兩者。一起地，乳化劑與或不與穩定劑構成所謂之乳化蠟，及該蠟與油及脂肪一起構成所謂之乳化軟膏基質，其形成乳霜調配物之油性分散相。適用於本發明調配物中之乳化劑及乳化穩定劑包括Tween® 60、Span® 80、鯨蠟硬脂 醇、苄基醇、十四烷醯基醇、單硬脂酸甘油酯及月桂基硫酸鈉。
式I化合物之水性懸浮液含有活性材料與適於製造水性懸浮液之賦形劑之混合物。此等賦形劑包括懸浮劑，如羧甲基纖維素鈉、交聯羧甲纖維素、聚維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃蓍膠及阿拉伯膠，及分散劑或潤濕劑，如天然磷脂(例如，卵磷脂)、環氧烷與脂肪酸之縮合產物(例如，聚氧伸乙基硬脂酸酯)、環氧乙烷與長鏈脂族醇之縮合產物(例如，十七伸乙基氧鯨蠟醇)、環氧乙烷與自脂肪酸及己糖醇酐衍生之部分酯之縮合產物(例如，聚環氧伸乙基山梨糖醇酐單油酸酯)。水性懸浮液亦可含有一或多種防腐劑，如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯；一或多種著色劑、一或多種調味劑及一或多種甜味劑，如蔗糖或糖精。
式I化合物之醫藥組合物可呈無菌可注射製劑之形式，如無菌可注射水性或油性懸浮液。此懸浮液可依照已知技藝，使用上文已描述之彼等合適分散劑或潤濕劑及懸浮劑調配。該無菌可注射製劑亦可為含於無毒性非經腸式可接受稀釋劑或溶劑中之無菌可注射溶液或懸浮液，如含於1,3-丁二醇中之溶液，或製成凍乾粉末。尤其可使用之可接受媒劑及溶劑係水、林格氏溶液及等滲氯化鈉溶液。此外，無菌不揮發性油宜用作溶劑或懸浮介質。就此目的而言，可採用任何無刺激性不揮發性油，包括合成性單酸或二酸甘油酯。此外，諸如油酸之脂肪酸亦可用於可注射液 之製備中。
與載劑材料組合以製造單劑型之活性成分之量將視待治療之宿主及特定投與模式而定。例如，預期對人類經口投與之時間釋放調配物可含有約1至1000 mg活性材料與恰當且合宜量之載劑材料化合物，載劑材料之量可在總組合物之約5至約95%(重量：重量比)內變化。該醫藥組合物可經製備以便提供容易量取之投與量。例如，預期用於經靜脈內輸注之水性溶液可含有約3至500 μg活性成分/毫升溶液，以便依約30 mL/小時之速率輸注合適體積。
適於經腸外投與之調配物包括水性及非水性無菌可注射溶液，其可含有抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及溶質，其等使調配物與預期受試者之血液等滲；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包含懸浮劑及增稠劑。
適於對眼睛局部投與之調配物亦包含滴眼液，其中活性成分溶於或懸浮於合適載劑中，尤其是針對該活性成分之水性溶劑。該活性成分較佳係以約0.5至20重量%，例如約0.5至10重量%，例如約1.5重量%之濃度存在於此等調配物中。
適於在口內局部投與之調配物包括含錠，其包含在調味基質(一般係蔗糖及阿拉伯膠或黃蓍膠)中之活性成分；片劑，其包含在惰性基質(如明膠及甘油或蔗糖及阿拉伯膠)中之活性成分；及漱口劑，其包含在合適液體載劑中之活性成分。
用於經直腸投與之調配物可利用包含例如可可油或水楊 酸鹽之合適基質製備成栓劑。
適於經肺內或經鼻投與之調配物具有例如在0.1至500微米範圍內之粒徑(包括如0.5、1、30微米、35微米等之增量微米之0.1至500微米範圍內之粒徑)，其藉由經鼻道快速吸入或經口吸入投與以到達肺泡囊。合適調配物包括活性成分之水性或油性溶液。適合氣溶膠或乾粉末投與之調配物可依照習知方法製備且可與諸如上文所述用於治療或預防下文所描述病症之化合物之治療劑一起遞送。
適於經陰道投與之調配物可製備成子宮托、衛生止血棉塞、乳霜、凝膠、糊膏、泡沫或噴霧調配物，其除活性成分外，含有本技藝已知合適之載劑。
調配物可包裝在單位劑量或多劑量容器中，例如密封安瓿及小瓶，且可保存在冷凍乾燥(凍乾)條件中，僅要求在使用前才添加注射用之無菌液體載劑，例如，水。臨時配製的注射溶液及懸浮液係自上述類別之無菌粉末、顆粒及錠劑製備。較佳單位劑量調配物係含有如上文所述之日劑量或單位日分劑量，或其恰當比例之活性成分之彼等物。
本發明進一步提供獸用組合物，其包含如上定義之至少一活性成分與獸用載劑。獸用載劑係可用於投與該組合物之目的之材料且可為固體、液體或氣體材料，其等在獸醫技藝中呈惰性或可接受且與該活性成分相容。此等獸用組合物可經腸外、經口或藉由任何其他所需路徑投與。
組合療法
式I化合物可單獨或與其他治療劑組合來治療本文中所 描述之疾病或病症，如發炎或過度增生性疾病(例如，癌症)。於特定實施例中，將式I化合物與具有消炎或抗過度增生性質或可用於治療發炎、免疫反應疾病或過度增生性疾病(例如癌症)之第二治療化合物組合在醫藥組合調配物，或投藥方案中作為組合療法。該第二治療劑可為NSAID消炎劑。該第二治療劑可為化學治療劑。醫藥組合調配物或投藥方案之第二化合物較佳具有與式I化合物互補之活性，以使其等不彼此負面影響。此等化合物適合以有效用於預期目的之量組合存在。於一實施例中，本發明之組合物包含式I化合物，或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥可接受鹽或前藥，與諸如NSAID之治療劑組合。
組合療法可依照同時或依序方案投與。當依序投與時，該組合可分兩或更多次投與。組合投與包括使用不同調配物或單一醫藥調配物共同投與，及依任意順序連續投與，其中較佳在一段時間內兩(或所有)活性劑同時發揮其等生物活性。
以上共同投與劑中任一者之合適劑量為現時所使用之彼等劑量且可因新穎藥劑與其他治療劑或治療之組合作用(協同作用)而下降。
組合療法可提供「協同作用」及證明為「協同」，即當一起使用活性成分時所達成之作用大於分別使用該等化合物所獲得之作用之總和。協同作用可當活性成分作以下行為時獲得：(1)共調配及以組合單位劑量調配物方式同時投 與或遞送；(2)交替或並行地以不同調配物遞送；或(3)採取一些其他方案。當以交替療法遞送時，協同作用可在依序投與或遞送化合物時獲得，例如，藉由不同注射器進行不同注射、不同丸劑或膠囊，或分開輸注。一般而言，在交替療法期間，有效劑量之各活性成分係依序，即，連續投與，而於組合療法中，有效劑量之兩或更多種活性成分係一起投與。
於療法之特定實施例中，式I化合物，或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥可接受鹽或前藥可與其他治療、內分泌或抗體藥劑(如本文中所描述者)組合，及與手術療法及放射療法組合。因此，根據本發明之組合療法包含投與至少一種式I化合物，或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥可接受鹽或前藥，及使用至少一種其他癌症治療方法。式I化合物及其他醫藥活性治療劑之量及投與之相對時間將經選擇以獲得所需之組合治療作用。
式I化合物之代謝物
如本文中所描述之式I之活體內代謝產物亦包含於本發明之範圍內。此等產物可來自例如所投與化合物之氧化、還原、水解、醯胺化、脫醯胺化、酯化、脫酯化、酶解及類似作用。因此，本發明包括式I化合物之代謝物，包括藉由使本發明之化合物與哺乳動物接觸足以產生其代謝產物之時間而產生之化合物。
代謝產物一般係藉由本發明化合物之放射標記(例如， 14C或3H)同位素，將其經腸外以可偵測劑量(例如，大於約0.5 mg/kg)投與至動物(如大鼠、小鼠、天竺鼠、猴)或人，使代謝進行充足時間(一般約30秒至30小時)，及將其轉化產物自尿液、血液或其他生物樣品單離來識別。此等產物可輕易單離，係因其等經標記(其他係藉由使用可結合存活於代謝物中之抗原決定部位之抗體單離)。代謝物結構係以習知方式確定，例如採用MS、LC/MS或NMR分析。一般而言，代謝物之分析係如熟習本項技術者熟知之習知藥物代謝研究般以相同方式進行。代謝產物，除非無法在體內發現，否則均可用於本發明化合物之治療投藥之診斷試驗中。
製造物件
於本發明之另一實施例中，提供含有可用於治療上述疾病及病症之材料之製造物件或「套組」。於一實施例中，該套組包含容器，該容器包含式I化合物或其立體異構體、互變異構體、溶劑化物、代謝物或醫藥可接受鹽或前藥。該套組可進一步包含覆蓋或關聯該容器之標籤或包裝插頁。術語「包裝插頁」係指專門包含於治療產品之商業包裝中之說明書，其含有關於適應症、用法、劑量、投與、禁忌及/或牽涉此等治療產品之使用之警告的資訊。合適容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器、泡殼包裝等。該容器可由各種不同材料形成，如玻璃或塑料。該容器可容置有效治療病況之式I化合物或其調配物且可具有無菌入孔口(例如，該容器可為靜脈內溶液包或具有可藉由皮 下注射針刺穿之塞子之小瓶)。於該組合物中之至少一活性劑係式I化合物。標籤或包裝插頁指示組合物係用於治療所選擇之病況，如癌症。此外，標籤或包裝插頁可指示待治療之病患係具有如下病症者：例如，過度增生性疾病、神經變性、心臟肥大、疼痛、偏頭痛或神經創傷疾病或事件。於一實施例中，標籤或包裝插頁指示包含式I化合物之組合物可用於治療由異常細胞生長導致之病症。標籤或包裝插頁亦可指示該組合物可用於治療其他病症。替代，或另外，該製造物件可進一步包含第二容器，其包含醫藥可接受緩衝劑，如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液及葡萄糖溶液。其可進一步包含就商業及使用者立場而言適宜之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
該套組可進一步包含關於投與式I化合物及(若存在)第二醫藥調配物之指示。例如，若該套組包含式I化合物之第一組合物及第二醫藥調配物，則該套組可進一步包含關於第一與第二醫藥組合物之同時、依序或分別投與有需求病患之指示。
於另一實施例中，該套組適於遞送式I化合物之固體經口形式，如錠劑或膠囊。此套組較佳包括多個單位劑型。此等套組可包括一卡片，具有該等劑量預期使用之順序。此套組之一個實例係「泡殼包裝(blister pack)」。泡殼包裝為包裝工業中熟知且廣泛用於包裝醫藥單位劑型。若需要，可提供記憶輔助，例如以數字、字母或其他標記形式 或日曆插頁，指定在治療計劃中可投與該等劑量之日期。
根據一個實施例，套組可包含(a)含有式I化合物之第一容器；及視需要(b)含有第二醫藥調配物之第二容器，其中該第二醫藥調配物包含具有抗過度增生活性之第二化合物。或者，或另外，該套組可進一步包含第三容器，其包含醫藥可接受緩衝劑，如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包括商業及使用者立場所需之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭及注射器。
於套組包含式I化合物及第二治療劑之某些其他實施例中，該套組可包含一個含有各別組合物之容器，如分隔瓶或分隔箔包裝，然而，該等各別組合物亦可含於單一無分隔容器內。一般而言，該套組包含關於投與各別組分之指示。當各別組分較佳以不同劑型投與(例如經口及非經腸)，以不同投藥間隔投與時，或當該組合之個別組分之滴定(titration)為處方醫師所需時，該套組形式特別有利。
式I化合物之製備
式I化合物可藉由若干合成路徑合成，該等合成路徑包括類似於化學技藝中熟知製程之製程，尤其是依照本文描述者，及用於其他雜環之彼等製程，描述於：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors Katritzky and Rees,Elsevier,1997，例如Volume 3；Liebigs Annalen der Chemie,(9)：1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41：1052-60,(1958)；Arzneimittel- Forschung,40(12)：1328-31,(1990)，各案係以引用之方式併入本文。起始材料基本上來自商業購買，如Aldrich Chemicals(Milwaukee,WI)，或使用熟習本項技術者熟知之方法輕易製備(例如，藉由於Louis F.Fieser及Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-23，Wiley,N.Y.(1967-2006 ed.)或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin中大體上描述的方法，包括增刊(亦經由Beilstein線上數據庫購置)。
可用於合成式I化合物及必需試劑及中間物之合成化學轉變及保護基方法(保護及去保護)係為本技藝已知且包括，例如，R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；T.W.Greene及P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,3rd Ed.,John Wiley and Sons(1999)；及L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)及其等後續版本中描述之彼等內容。
式I化合物可單獨製備或製備成包含至少2，例如5至1,000種化合物，或10至100種化合物之化合物庫。式I化合物庫可藉由組合「分割及混合」方法或藉由多平行合成，使用溶液相或固相化學，透過熟習本項技術者已知之製程製備。因此，根據本發明之另一態樣，提供包含至少2種化合物，或其等醫藥可接受鹽之化合物庫。
圖及實例提供用於製備式I化合物之示例性方法。熟習本項技術者將瞭解可將其他合成路徑用於合成式I化合 物。雖然在圖及實例中描述及論述了具體起始材料及試劑，然而可以其他起始材料及試劑輕易取代以提供各種不同衍生物及/或反應條件。此外，許多藉由所描述方法製備之示例性化合物可依據本發明，利用熟習本項技術者熟知之習知化學進一步改質。
於製備式I化合物時，需保護中間物之遠端官能基(例如，一級或二級胺)。對此保護之需求可視遠端官能基性質及製備方法之條件而變化。合適胺基保護基包括乙醯基、三氟乙醯基、第三丁氧基羰基(BOC)、芐氧基羰基(CBz)及9-茀基亞甲氧基羰基(Fmoc)。對此保護之需求係由熟習本項技術者輕易確定。關於保護基及其等使用之基本描述，參見T.W.Greene,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,New York,1991。
可用於製備式I化合物之實驗製程、中間物及試劑可參見2011年5月6日申請之US Ser.No.13/102720,「PYRIDONE AND AZA-PYRIDONE COMPOUNDS AND METHODS OF USE」，該案係以引用其全文之方式併入本文。
圖1至12描述式I化合物101至125之示例性實施例之合成，其等更全面地描述於實例101至112中，及可用於製備其他式I化合物。
基本製程
基本製程：鈴木(Suzuki)偶合
鈴木類偶合反應可用於形成碳-碳鍵以連接式I化合物與諸如A-3之中間物之環(Suzuki(1991)Pure Appl.Chem.63：419-422；Miyaura and Suzuki(1979)Chem.Reviews 95(7)：2457-2483；Suzuki(1999)J.Organometal.Chem.576：147-168)。鈴木偶合係芳基鹵化物(如B-2或B-4)與硼酸(如A-1或A-2)之鈀介導交叉偶合反應。例如，B-2可與 約1.5當量之4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼烷)組合，及溶於約3當量之1莫耳碳酸鈉水溶液及等體積乙腈中。添加一催化量或更多之低價鈀試劑，如雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)。於某些情況中，使用乙酸鈀代替碳酸鈉以調節水性層之pH。隨後在微波反應器(Biotage AB，Uppsala，Sweden)中，在壓力下將反應加熱至約140至150℃維持10至30分鐘。藉由乙酸乙酯或另一有機溶劑萃取內容物。蒸發有機層後，可在矽石或反相HPLC上純化硼酯A-1。取代基係如定義，或其保護形式或前驅物。類似地，溴化物中間物B-4可經硼羰基化以提供A-2。
B-2與A-2或A-1與B-4之鈴木偶合提供式I化合物或中間物A-3。將硼酯(或酸)(1.5 eq)A-1或A-2，及鈀觸媒(如雙(三苯基膦)氯化鈀(II))(0.05 eq)添加至鹵中間物(1 eq)B-2或B-4之乙腈溶液與1 M碳酸鈉水溶液(與乙腈等體積)之混合物。於微波下將反應混合物加熱至約150℃，維持約15分鐘。LC/MS指示反應何時完成。將水添加至該混合物，及過濾沉澱物及藉由HPLC純化以提供產物A-3。取代基係如定義，或其保護形式或前驅物。
在鈴木偶合步驟期間可使用各種不同鈀觸媒。可將各種低價Pd(II)及Pd(0)觸媒用於鈴木偶合反應中，包括PdCl2(PPh3)2、Pd(t-Bu)3、PdCl2 dppf CH2Cl2、Pd(PPh3)4、Pd(OAc)/PPh3、Cl2Pd[(Pet3)]2、Pd(DIPHOS)2、Cl2Pd(Bipy)、[PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2、Cl2Pd[P(o-tol)3]2、Pd2(dba)3/P(o-tol)3、Pd2(dba)/P(furyl)3、Cl2Pd[P(furyl)3]2、Cl2Pd(PMePh2)2、 Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2、Cl2Pd[P(C6F6)3]2、Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2、Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2及囊封觸媒Pd EnCatTM、Pd EnCatTM TPP30及Pd(II)EnCatTM BINAP30(US 2004/0254066)。
基本製程：布赫瓦爾德(Buchwald)反應
布赫瓦爾德反應可用於胺化6-溴中間物B-1(Wolf and Buchwald(2004)Org.Synth Coll.Vol.10：423；Paul et al(1994)Jour.Amer.Chem.Soc.116：5969-5970)。將恰當5-(哌-1-基)吡啶-2-胺，例如104b，或5-(哌-1-基)吡-2-胺(200莫耳%)、Cs2CO3(50莫耳%)、Pd2(dba)3(5莫耳%)及4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(Xantphos,CAS Reg.No.161265-03-8，10莫耳%)添加至3,5-二鹵-吡啶酮中間物B-1之DMF溶液中。在微波反應器(Biotage AB,Uppsala,Sweden)中，在壓力下將反應加熱至約110℃，維持約30分鐘。在真空下濃縮所獲得之溶液以提供B-2。可使用其他鈀觸媒及膦配體。
亦可在布赫瓦爾德條件下藉由環醯胺中間物(R7)，如3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮101e及芳基溴化物B-3製備N-芳基醯胺中間物B-4。
分離方法
於製備式I化合物之方法中，宜將反應產物彼此及/或自起始材料分離。各步驟或各系列步驟之所需產物係藉由本技藝中常見之技術分離及/或純化至所需均一度。一般而言，此等分離涉及多相萃取、自溶劑或溶劑混合物結晶、蒸餾、昇華或層析。層析可涉及任意種方法，包括，例如：反相及正相；尺寸排除；離子交換；高、中及低壓液相層析方法及裝置；小規模分析；模擬移動床(SMB)及製備型薄或厚層層析，及小規模薄層及急驟層析技術。
另一類分離方法涉及以經選擇以結合或在其他情況令所需產物、未反應起始材料、反應副產物或類似者可分離之試劑處理混合物。此等試劑包括吸附劑或吸收劑，如活性碳、分子篩、離子交換介質或類似者。或者，該等試劑可為鹼性材料情況下之酸、酸性材料情況下之鹼、結合試劑，如抗體、結合蛋白質；選擇性螯合劑，如冠醚；液/ 液離子萃取試劑(LIX)或類似者。恰當分離方法之選擇係視所涉及材料之屬性而定，如在蒸餾及昇華中之沸點及分子量、在層析時存在或不存在極性官能基、在多相萃取時材料在酸性及鹼性介質中之穩定性及類似者。
可基於物理化學差異，藉由熟習本項技術者熟知之方法(如層析及/或分步結晶)將非立體異構混合物分離為其等個別非立體異構體。可透過與恰當光活性化合物(例如，對掌性佐劑，如對掌性醇或莫舍氏(Mosher)醯基氯)反應將鏡像異構混合物轉化為非立體異構混合物，分離該等非立體異構體及將個別非立體異構體轉化(例如，水解)成對應純鏡像異構體來分離鏡像異構體。且本發明之某些化合物可為阻轉異構體(例如，經取代聯芳)及視為本發明之一部分。鏡像異構體亦可藉由使用對掌性HPLC管柱分離。
單種立體異構體，例如，實質上不含其立體異構體之鏡像異構體可藉由使用諸如形成非立體異構體之方法，將光活性離析劑用於離析消旋混合物而獲得(Eliel,E.and Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds,」John Wiley & Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113(3)：283-302)。本發明之對掌性化合物之消旋混合物可藉由任何合適方法分離及單離，包括：(1)與對掌性化合物形成離子性非立體異構鹽及藉由分步結晶或其他方法分離，(2)與對掌性衍生劑形成非立體異構化合物，分離該等非立體異構體，及轉化為純立體異構體，及(3)在對掌性條件下直接分離實質純或富集立體異 構體。參見：「Drug Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology,」Irving W.Wainer,Ed.,Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。
在方法(1)下，可藉由鏡像異構上純對掌性鹼(如馬錢子鹼、奎寧、麻黃鹼、番木鼈鹼、α-甲基-β-苯乙胺(苯異丙胺)及類似者)與攜帶酸官能基之非對稱化合物(如羧酸及磺酸)之反應形成非立體異構鹽。非立體異構鹽可藉由分步結晶或離子層析來誘導分離。就胺基化合物之光學異構體之分離而言，添加對掌性羧酸或磺酸(如樟腦磺酸、酒石酸、杏仁酸或乳酸)可導致非立體異構鹽之形成。
或者，透過方法(2)，使待離析之基質與對掌性化合物之一種鏡像異構體反應以形成非立體異構體對(E.and Wilen,S.「Stereochemistry of Organic Compounds」,John Wiley & Sons,Inc.,1994,p.322)。非立體異構化合物可藉由使非對稱化合物與鏡像異構上純對掌性衍生劑(如薄荷基衍生物)反應，接著分離該等非立體異構體及水解以產生純或富集鏡像異構體而形成。確定光學純度之方法涉及製造消旋混合物之對掌性酯，如薄荷基酯，例如在鹼存在下之(-)氯甲酸薄荷酯，或莫舍氏酯、α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基乙酸酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47：4165)，及分析關於兩種阻轉異構鏡像異構體或非立體異構體之存在之1H NMR頻譜。阻轉異構化合物之穩定非立體異構體可藉由正-及反-相層析，接著分離阻轉異構萘基-異喹啉之方法(WO 96/15111)來分離及單離。透過方法(3)，可藉由 層析，使用對掌性固定相分離兩種鏡像異構體之消旋混合物(「Chiral Liquid Chromatography」(1989)W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513：375-378)。可藉由用於區分具有非對稱碳原子(如旋光及圓二色性)之其他對掌性分子之方法區分經富集或純化之鏡像異構體。
實例
實例101a 2,6-二溴-4-氟苯甲醛101a
將1,3-二溴-5-氟-2-碘苯(50 g，132 mmol)之無水甲苯(300 ml)溶液冷卻至-35℃。在30分鐘內添加異丙基氯化鎂溶液(84 ml，171 mmol，2.0 M二乙醚)，同時維持內部溫度低於-25℃。參見圖1。獲得澄清棕色溶液。持續攪拌1.5小時。隨後在30分鐘內添加無水DMF(34 ml，436 mmol)。反應混合物之溫度升至-19℃。在1小時內使反應混合物加熱至10℃(室溫)及於此溫度下攪拌1.5小時。藉由飽和NH4Cl(100 ml)淬冷反應，過濾及減壓下蒸發。藉由矽膠柱層析(藉由石油醚/乙酸乙酯溶離：50：1至20：1)純化殘餘物以得到101a(20 g，產率54%)，呈黃色固體形式。
實例101b 2,6-二溴-4-氟苯基甲醇101b
將NaBN4(10 g，284 mmol)添加至2,6-二溴-4-氟苯甲醛101a(20 g，71 mmol)之乙醇(500 ml)溶液中。在室溫(10℃)下將混合物攪拌4小時。TLC顯示起始材料消失。藉由HCl溶液(150 ml，1 M)淬冷反應。減壓下蒸發大部分乙醇。藉由乙酸乙酯(3×500 ml)萃取殘餘物。合併有機層及藉由無水Na2SO4乾燥，在真空中蒸發。藉由矽膠柱層析(藉由石油醚/乙酸乙酯溶離：50：1至20：1)純化殘餘物以得到101b(15 g，產率75%)，呈白色固體形式。
實例101c 2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c
將101b(23.0 g，81.0 mmol)、三乙胺(25.0 g，247 mmol)於無水二氯甲烷(100 ml)之溶液裝入配備有磁力攪拌器及氮氣入口之500-ml單頸圓底燒瓶。添加乙酸酐(10.0 g，98.0 mmol)及在室溫下將此混合物攪拌16小時。然後，藉由二氯甲烷(100 ml)稀釋混合物及藉由飽和碳酸氫鈉水溶液(100 ml)清洗。分離層及藉由二氯甲烷(2×20 ml)萃取水 性層。合併有機萃餘液及藉由硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除乾燥劑。減壓下濃縮濾液，及藉由經急驟管柱層析(矽石，0%至50%乙酸乙酯/己烷)純化所獲得之殘餘物以得到101c，產率為87%(23.0 g)，呈白色固體形式。
實例101d 5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯112d
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之500-ml圓底燒瓶並裝入5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸(30.4 g，184 mmol)、DMF(1.00 g，13.6 mmol)及二氯甲烷(300 ml)。利用冰浴將溶液冷卻至0℃。逐滴添加草醯氯(28.0 g，221 mmol)，及在30分鐘內將反應混合物加熱至室溫及攪拌5小時。然後，濃縮所獲得之溶液以提供棕色固體。將此固體溶於無水甲醇(400 ml)中，及將溶液冷卻至0℃。將三乙胺(57 g，552 mmol)添加至反應混合物，及在室溫下再攪拌2小時。然後，在降壓下將反應混合物濃縮至乾。藉由二氯甲烷(300 ml)稀釋殘餘物及藉由水(200 ml)及飽和碳酸氫鈉水溶液(200 ml)清洗。藉由硫酸鈉乾燥有機層，過濾及在減壓下濃縮。藉由己烷(200 ml)滴定所獲得之殘餘物以得到101d，產率為58%(19.1 g)，呈白色固體形式：mp 72-74℃；1H NMR(300 MHz,DMSO-d6)δ 7.13(s,1H),6.23(s, 1H),3.93(t,2H,J=6.0 Hz),3.77(s,3H),2.75(t,2H,J=6.0 Hz),1.93(m,2H),1.80(m,2H)；(APCI+)m/z 180.1(M+H)
實例101e 3-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯101e
將5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯101d(6.70 g，37.4 mmol)、碘乙腈(12.5 g，74.9 mmol)、硫酸鐵(II)七水合物(5.20 g，18.7 mmol)及二甲亞碸(250 ml)裝入配備有加料漏斗、溫度計之500-ml三頸圓底燒瓶中。於1小時內，在室溫下，利用水浴，經由注射器唧筒將過氧化氫(35%，18.2 g，187 mmol)逐滴加入混合物中。將硫酸鐵(II)七水合物(2至3當量)逐份添加至反應混合物以維持溫度在25℃與35℃之間，直至反應混合物之顏色變為深紅色。若TLC顯示反應未完成，則以相同方式添加更多過氧化氫(2至3當量)及更多硫酸鐵(II)七水合物(1至2當量)直至反應完成。然後，使反應混合物在飽和碳酸氫鈉水溶液(200 ml)與乙酸乙酯(400 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(2×100 ml)萃取水性層。藉由飽和硫代硫酸鈉溶液(50 ml)清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及在減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到101e，產率為78%(6.40 g)，呈黃色油形式：1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 6.23(s, 1H),4.23(s,2H),3.94(t,2H,J=6.5 Hz),3.81(s,3H),2.74(t,2H,J=6.5 Hz),2.00(m,2H),1.83(m,2H)；(APCI+)m/z 219.3(M+H)
實例101f 3-(2-胺基乙基)-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯鹽酸鹽101f
藉由氧化鉑觸媒，在50 psi氫-乙醇及乙酸乙酯下，於鹽酸存在下使3-(氰基甲基)-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯101e在室溫下氫化過夜以得到101f(380 mg,1.74 mmol)，將其直接用於下一步驟。
實例101g 3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-1(2H)-酮101g
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入3-(2-胺基乙基)-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯鹽酸鹽101f(在上文製備，估計1.74 mmol，假定定量產出)、乙醇鈉(354 mg，5.22 mmol)及乙醇(20 ml)。在55℃下，將混合物攪拌5小時。然後，在減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(200 ml)與水(100 ml)之間分 配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(2×100 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到67%產率(220 mg)呈白色固體形式之101g：mp 195-197℃；1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 6.76(s,1H),5.89(s,1H),3.78(t,2H,J=6.5 Hz),3.35(m,2H),2.66(m,4H),1.87(m,2H),1.72(m,2H)；(APCI+)m/z 191.3(M+H)
實例101h 2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]-吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯101h
將1,4-二氧雜環己烷(60 ml)、101c(1.9 g，6.0 mmol)、101g(400 mg，2.0 mmol)及碳酸銫(1.3 g，4.0 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物30分鐘後，添加氧雜蒽膦(xantphos)(120 mg，0.2 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(180 mg，0.2 mmol)，及在100℃下將反應混合物加熱12小時。然後，將反應冷卻至室溫，在乙酸乙酯(40 ml)與水(40 ml)之間分配，及過濾。分離水性層及藉由乙酸乙酯(70 ml×3)萃取。藉由鹽水(30 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及在減壓下濃縮濾液。在急 驟管柱上純化殘餘物，使用2：1 PE/EA溶離，以得到101h(421 mg，46%)，呈黃色固體形式。MS：[M+H]+ 435。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 7.52-7.50(m,1H),7.20-7.23(m,1H),6.14(s,1H),5.10-5.20(m,2H),4.06-4.12(m,1H),3.92-3.97(m,1H),3.83-3.88(m,1H),3.75-3.79(m,1H),3.03-3.10(m,1H),2.94-2.99(m,1H),2.75-2.83(m,2H),2.00-2.05(m,5H),1.83-1.88(m,2H)
實例101i (S)-4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯101i
將101h(300 mg，0.70 mmol)、(S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(332 mg，0.70 mmol)、CH3COONa(114 mg，1.4 mmol)、K3PO4(368 mg，1.4 mmol)、PdCl2(dppf)(56 mg，0.07 mmol)、 CH3CN(25 ml)及H2O(1 ml)之混合物在100℃下加熱3小時。隨後蒸發及藉由矽膠柱純化殘餘物，利用二氯甲烷/甲醇(30：1)溶離，以得到101i(293 mg，產率41%)，呈棕色固體形式。MS：(M+H)+ 710。
實例101 (S)-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)啶啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-1(2H)-酮101
將LiOH(914 mg，38 mmol)添加至101i(270 mg，0.38 mmol)於丙-2-醇(8 ml)、四氫呋喃(8 ml)及水(1.5 ml)中之溶液。使混合物在30℃下攪拌2小時。蒸發及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到101(127 mg，產率50%)，呈白色固體形式。MS：(M+H)+ 669。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.58(t,J=2.5,1H),8.40(s,1H),7.85(d,J=3.0,1H),7.35-7.38(m,2H),7.22-7.25(m,2H),7.13-7.16(m,1H),6.01(s,1H),4.76(s,1H),4.57-4.54(m,2H),4.47(t,J=6.0,1H),4.42(t,J=6.5,1H),4.29(s,2H),3.98-4.04(m,1H),3.89-3.94(m,1H),3.78-3.83(m,2H),3.67(s,1H),3.58(s,3H),3.37-3.42(m,1H),3.00-3.10(m,2H),2.90-2.95(m,2H),2.71(t,J=6.0,2H),2.52-2.55(m,1H),2.28-2.35(m,2H),2.18(t,J=8.5,1H),1.89-1.94(m,2H),1.72-1.78(m,2H),0.93(t,J=6.5,3H)
實例102a (S)-[4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)-哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡 啶-3-基)-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基]甲基乙酸酯102a
依照針對101i所描述之製程及以(4-氟-2-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}-6-(四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯(250 mg)及5-溴-1-甲基-3-(3-甲基-5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮(218 mg)開始，得到呈黃色固體形式之102a(225 mg，62%)。LCMS：[M+H]+ 726。參見圖2。
實例102 (S)-5-[5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基]-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-(9),2(7),3-三烯-6-酮102
依照針對101所描述之製程，藉由氫氧化鋰水解102a(210 mg，0.29 mmol)，得到呈白色固體形式之102(117 mg，85%)。LCMS：[M+H]+ 684。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.61(d,J=2.5,1H),8.26(s1H),7.99(d,J=2.5,1H),7.83(s,1H),7.46(d,J=2.0,1H),7.29-7.32(m,2H), 7.11(dd,J=2.0,8.0,1H),6.82(d,J=9.0,1H),4.62-4.73(m,4H),4.31(d,J=6.5,2H),4.02(t,J=6.5,1H),3.71(s,3H),3.52-3.55(m,1H),3.45-3.49(m,1H),3.09(t,J=4.5,2H),2.99(t,J=4.5,2H),2.87(t,J=4.5,2H),2.56(dd,J=3.0,11.0,1H),2.46-2.49(m,2H),2.19-2.25(m,1H),1.96-2.01(m,4H),1.00(d,J=6.0,3H)
實例103a (E)-3-(2-氯-4,4-二甲基環戊-1-烯基)丙烯酸乙酯103a
以下兩個製程係改編自Organic Preparations and Procedures Int.,29(4),471-498。將2-氯-4,4-二甲基環戊-1-烯甲醛(38 g，240 mmol)於苯(240 ml)中之溶液裝入配備有磁力攪拌器及氮氣入口之500-ml單頸圓底燒瓶。參見圖3。將乙氧基羰基亞甲基三苯基磷烷(84 g，240 mmol)添加至該溶液。將混合物攪拌14小時。然後，蒸發溶劑及藉由己烷(2 l)磨碎殘餘物以自PPh3副產物提取出產物。藉由硫酸鈉乾燥有機層及在真空中濃縮。藉由柱層析，使用100%己烷-1：1己烷/乙酸乙酯梯度純化殘餘物以得到37%產率(20 g)之103a。
實例103b 5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環戊并[b]吡咯-2-甲酸乙酯103b
將103a(17 g，74 mmol)的DMSO(100 ml)溶液裝入配備有磁力攪拌器及氮氣入口之250-ml單頸圓底燒瓶中。將疊氮化鈉(9.6 g，150 mmol)加入該溶液中。隨後將混合物加熱至75℃及攪拌8小時。冷卻至rt後，添加H2O(100 ml)及CH2Cl2(200 ml)及分離有機層。藉由CH2Cl2(50 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及在真空中濃縮。藉由柱層析，使用100%己烷-1：1己烷/乙酸乙酯梯度純化殘餘物以得到37%產率(5.7 g)之103b。
實例103c 1-(氰基甲基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環戊并[b]吡咯-2-甲酸乙酯103c
將103b(6.2 g，30 mmol)的DMF(57 ml)裝入配備有磁力攪拌器及氮氣入口之250-ml單頸圓底燒瓶中。將NaH(80%礦物油分散液，1.26 g，42.1 mmol)添加至該溶液。在rt下將所獲得之混合物攪拌90分鐘。然後，添加溴乙腈(2.94 ml，42 mmol)。將混合物攪拌14小時。然後，添加水(100 ml)及乙酸乙酯(200 ml)及分離有機層。藉由乙酸乙酯(2×50 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及在真空中濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到95%產率(7 g)之103c。
實例103d 1-(2-胺基乙基)-5,5-二甲基-1,4,5,6-四氫環戊并[b]吡咯-2-甲酸乙酯鹽酸鹽103d
以氮氣清洗500-ml Parr反應瓶及裝入10%鈀覆碳(50%濕度，2.0 g乾重)、103c(4.5 g，18 mmol)、12%鹽酸(9.2 ml，37 mmol)、乙酸乙酯(80 ml)及乙醇(52 ml)。將瓶連接至Parr氫化器，排空，裝入氫氣至50 psi之壓力並振蕩6小時。然後，排空氫氣，及將氮氣裝入瓶中。添加矽藻土過濾劑(Celite® 521，10.0 g)，及使混合物經Celite 521墊過濾。藉由乙醇(2×50 ml)清洗濾餅，及在減壓下將合併之濾液濃縮至乾。將粗殘餘物103d帶入下一步驟而不進一步純化。
實例103e 4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-9-酮103e
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入粗103d(~18 mmol)、乙醇鈉(6.2 g，92 mmol)及乙醇(120 ml)。在55℃下將混合物攪拌過夜。然後，在減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(200 ml)與水(100 ml)之間分配。過濾溶液。藉由乙酸乙酯(15 ml)清洗固體以得到850 mg所需產物103e。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(2×100 ml)萃取水性層。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層及在減壓下濃縮至幾乎乾透。過濾溶液及藉由乙酸乙酯(15 ml)清洗固體(1.44 g)。在真空下乾燥合併之固體以得到61%產率(2.3 g)之103e。
實例103f 2-溴-4-氟-6-(9-側氧基-4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]-十二烷-2(6),7-二烯-10-基)苄基乙酸酯103f
使密封試管裝備有磁力攪拌器及裝入103e(740 mg，3.6 mmol)、2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c(2.4 g，7.2 mmol)及碳酸銫(2.6 g，7.9 mmol)於1,4-二氧雜環己烷(36 ml)中之溶液。將氮氣鼓入該溶液30分鐘後，添加氧雜蒽膦(250 mg,0.43 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(260 mg，0.29 mmol)，及將反應混合物加熱至100℃，維持16小時。然 後，添加H2O(50 ml)及乙酸乙酯(50 ml)。分離水性層及藉由乙酸乙酯(2×50 ml)萃取。藉由鹽水(100 ml)清洗合併之有機萃餘液及藉由硫酸鈉乾燥。藉由柱層析，使用100%己烷-100%乙酸乙酯之梯度溶離以純化所獲得之殘餘物，得到56%產率(910 mg)之103f。
實例103g 2-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧雜硼烷-2-基)-4-氟-6-(9-側氧基-4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]-十二烷-2(6),7-二烯-10-基)苄基乙酸酯103g
將化合物103f(450 mg，1.0 mmol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-雙(1,3,2-二氧雜硼烷)(635 mg，2.5 mmol)、乙酸鉀(393 mg，4.0 mmol)、雙[(二苯基膦基)-二茂鐵]二氯鈀(II)-CH2Cl2錯合物(Pd Cl2dppf：CH2Cl2(1：1)，66 mg，0.08 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(20 ml)混合及在100℃下加熱5小時。將反應混合物冷卻至室溫及經Celite 521墊過濾。藉由乙酸乙酯(2×25 ml)清洗濾餅，及在減壓下濃縮合併之濾液至乾以得到103g(定量產出)，呈黑色油形式，將其直接用於下一步驟。MS(ESI+)m/z 497.3(M+H)。
實例103h (2S)-(2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環-[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氯-6-[1-甲基-5-({5-[2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]苯基)-甲基乙酸酯103h
依照針對化合物101i所描述之製程，使(2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯(229 mg，0.46 mmol)與(S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮(200 mg，0.46 mmol)反應，得到呈黃色固體形式之103h(80 mg，24%)。MS：[M+H]+ 724。
實例103 (2S)-10-[5-氯-2-(羥甲基)-3-[1-甲基-5-({5-[2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-苯基]-4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-9-酮103
依照針對101所描述之製程，藉由氫氧化鋰水解中間物103h(80 mg，0.11 mmol)以得到呈黃色固體形式之103(40 mg，53%)。LCMS：[M+H]+ 682。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.56(dd,J=2.0,7.0,1H),7.95(t,J=3.0,1H),7.82(d,J=3.0,1H),7.47(t,J=3.0,1H),7.31(dd,J=3.0,9.0,1H),7.17-7.14(m,1H),6.95(dd,J=2.5,9.0,1H), 6.82-6.80(m,2H),4.71-4.61(m,4H),4.56-4.53(m,1H),4.41-4.37(m,1H),4.33-4.28(m,1H),4.23-4.15(m,3H),3.91-3.86(m,1H),3.70(s,3H),3.55-3.44(m,2H),3.08-3.06(m,2H),2.56-2.46(m,7H),2.21-2.16(m,1H),1.27(s,6H),0.98-0.97(m,3H)
實例104a (2R,5S)-2,5-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁基酯104a
依照針對化合物108a所描述之製程，使(2R,5S)-4-氯-2,5-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯(1.5 g，6.0 mmol)及5-溴-2-硝基吡啶(1212 mg，6.0 mol)反應以得到呈黃色固體形式之104a(1500 mg，75%)。LCMS：[M+H]+ 337。參見圖4。
實例104b (2R,5S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2,5-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯104b
依照針對化合物108b所描述之製程，使104a(1.5 g，4.46 mmol)反應，得到呈黃色固體形式之104b(1130 mg， 83%)。LCMS：[M+H]+ 307
實例104c (2R,5S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-2,5-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯104c
依照針對化合物108c所描述之製程，使(2R,5S)-2,5-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯(332 mg，1.08 mmol)與3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(294 mg，1.08 mmol)反應，得到呈黃色固體形式之104c(402 mg，75%)。LCMS：[M+H]+ 492
實例104d (2R,5S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-2,5-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯104d
依照針對化合物108d所描述之製程，酸水解104c(402 mg，0.82 mmol)以移除boc基團，得到呈黃色固體形式之 104d(300 mg，94%)。LCMS：[M+H]+ 392
實例104e 5-溴-3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)-吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮104e
依照針對化合物108e所描述之製程及以5-溴-3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-吡啶-2(H)-酮(300 mg，0.77 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之104e(320 mg，93%)。LCMS：[M+H]+ 448
實例104f 2,2,2-三氯-1-(4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-基)乙酮104f
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器、冷凝器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入4,5,6,7-四氫-1H-吲哚(3.00 g，24.8 mmol)、三氯乙醯氯(13.5 g，74.4 mmol)及1,2-二氯乙烷(50 ml)。在85℃下將溶液攪拌2小時。然後，減壓下濃 縮反應混合物以得到100%產率(6.50 g)之呈黑色半固體形式之104f：1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 11.94(s,1H),7.05(s,1H),2.62(t,2H,J=6.0 Hz),2.47(t,2H,J=6.0 Hz),1.80(m,2H),1.65(m,2H)；MS(ESI+)m/z 266.0(M+H)
實例104g 4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯104g
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入2,2,2-三氯-1-(4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-基)乙酮104f(6.50 g，24.8 mmol)、乙醇鈉(17.0 mg，0.25 mmol)及乙醇(40 ml)。在室溫下，將溶液攪拌1小時。然後，減壓下濃縮反應混合物。藉由柱層析純化殘餘物以得到100%產率(4.80 g)呈棕色固體形式之4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯104g：mp 70-72℃；1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 9.08(s,1H),6.75(s,1H),4.25(q,2H,J=7.2 Hz),2.65(t,2H,J=6.0 Hz),2.56(t,2H,J=6.0 Hz),1.85(m,4H),1.28(t,3H,J=7.2 Hz)；MS(ESI+)m/z 194.1(M+H)
實例104h 1-(氰基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯104h
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之125-ml單頸圓底燒瓶及裝入4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯104g(5.76 g，29.8 mmol)及DMF(50 ml)。利用冰浴，將溶液冷卻至0℃。添加氫化鈉NaH(60%礦物油分散液，1.43 g，35.8 mmol)。在室溫下，將所獲得之混合物攪拌1小時。然後，添加溴乙腈(1.43 g，35.8 mmol)。在室溫下，將混合物攪拌14小時。然後，減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(150 ml)與水(450 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(3×150 ml)萃取水性相。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到55%產率(3.80 g)呈黃色半固體形式之104h：1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.66(s,1H),5.29(s,2H),4.28(q,2H,J=7.2 Hz),2.62(t,2H,J=6.3 Hz),2.49(t,2H,J=6.3 Hz),1.92(m,2H),1.75(m,2H),1.33(t,3H,J=7.2 Hz)；MS(ESI+)m/z 233.1(M+H)
實例104i 1-(2-胺基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯104i
以氮氣清洗200-ml Parr反應瓶及裝入10%鈀覆碳(50%濕度，1.28 g乾重)、104h(3.00 g，12.9 mmol)、12%鹽酸(6.5 ml，25 mmol)、乙酸乙酯(60 ml)及乙醇(40 ml)。將該瓶連 接至Parr氫化器，排空，裝入氫氣至50 psi之壓力及振盪6小時。然後，排空氫氣，及將氮氣裝入瓶中。添加Celite 521(4.0 g)，及將混合物經Celite 521墊過濾。藉由乙醇(2×20 ml)清洗濾餅，及減壓下將合併之濾液濃縮至乾。使殘餘物在乙酸乙酯(150 ml)與10%碳酸鉀水溶液(100 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(3×75 ml)萃取水性層。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層及減壓下濃縮。藉由乙醇(5 ml)磨碎殘餘物以得到71%產率(1.71 g)呈白色固體形式之104i：mp 102-104℃；1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 6.61(s,1H),6.22(br,2H),4.15(m,4H),2.77(m,2H),2.59(t,2H,J=6.5 Hz),2.42(t,2H,J=6.5 Hz),1.70(m,2H),1.62(m,2H),1.23(t,3H,J=7.0 Hz)；MS(APCI+)m/z 237.2(M+H)
實例104j 3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮104j
以氮氣清洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入104i(1.80 g，7.63 mmol)、乙醇鈉(1.55 g，22.8 mmol)及乙醇(50 ml)。在55℃下將混合物攪拌5小時。然後，減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(200 ml)與水(100 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸 乙酯(2×100 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到42%產率(605 mg)之呈白色固體形式之104j：mp 207-209℃；1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 7.41(s,1H),6.36(s,1H),3.84(t,2H,J=6.0 Hz),3.42(m,2H),2.51(t,2H,J=6.0 Hz),2.42(t,2H,J=6.0 Hz),1.76(m,2H),1.65(m,2H)；(APCI+)m/z 191.3(M+H)
實例104k 2,6-二溴-4-氟苯甲醛104k
將異丙基氯化鎂(84 ml，171 mmol，2.0 M Et2O)之溶液在30分鐘內添加至冷卻至-35℃之1,3-二溴-5-氟-2-碘苯(50 g，132 mmol)之無水甲苯(300 ml)溶液，同時維持內部溫度低於-25℃。獲得澄清棕色溶液及在-25℃下繼續攪拌1.5小時。隨後在30分鐘內添加無水DMF(34 ml，436 mmol)。在1小時內將反應混合物加熱至10℃(室溫)及在此溫度下攪拌1.5小時。隨後藉由3.0 M HCl淬冷及接著添加乙酸乙酯。分離有機層及減壓下蒸發。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(50：1至20：1)溶離，以得到呈白色固體形式之104k(20 g，54%)。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 10.23(s,1H),7.48(d,J=7.5,2H)。
實例104l(2,6-二溴-4-氟苯基)甲醇104l
將NaBH4(10 g，284 mmol)添加至104k(20 g，71 mmol)之EtOH(500 ml)溶液。在室溫下(10℃)，將混合物攪拌4小時及TLC顯示起始材料已消失。藉由HCl水溶液(150 ml，1 M)淬冷反應及在真空中蒸發直至大部分EtOH蒸走。藉由 乙酸乙酯(500 ml×3)萃取殘餘物。合併有機層，藉由Na2SO4乾燥，及在真空中蒸發。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(50：1至20：1)溶離，以得到呈白色固體形式之104l(15 g，75%)。MS：[M-OH]+ 267。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 7.68(d,J=8.5,2H),5.23(s,1H),4.71(s,2H)
實例104m 2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯104m
在0℃下，將吡啶(8.4 g，107 mmol)及乙醯氯(8.3 g，107 mmol)添加至(2,6-二溴-4-氟苯基)甲醇(104l)(20 g，71 mmol)之CH2Cl2(500 ml)溶液。在室溫下，將混合物攪拌5小時。TLC顯示起始材料消失。在真空中蒸發反應及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(50：1至20：1)溶離，以得到呈白色固體形式之104m(20 g，87%)。MS：[M-Oac]+ 267。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.36(d,J=7.5,2H),5.38(s,2H),2.10(s,3H)
實例104n 2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯104n
將104j(3.8 g，20 mmol)、104m(20 g，60 mmol)、氧雜蒽膦(1.2 g，2 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(1.8 g，2 mmol)、Cs2CO3(16 g，50 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(120 ml)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶。排空該系統及隨後再填充N2。將回流冷凝器連接至該燒瓶，及在100℃下，將反應混合物加熱16小時。隨後，將混合物冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由經急驟管柱層 析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈白色固體形式之104n(5.2 g，60%)。MS：[M+H]+ 435。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 7.70(dd,J=3,1H),7.48(dd,J=3,1H),6.52(s,1H),5.01(m,2H),4.18(m,2H),4.02(m,1H),3.73(m,1H),2.60(m,2H),2.45(m,2H),1.98(s,3H),1.77(m,2H),1.68(m,2H)。
實例104o 4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫-吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯104o
將104n(3.8 g，8.65 mmol)、(PinB)2(11 g，43.25 mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.4 g，0.5 mmol)、KOAc(2.5 g，26 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(150 mL)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶。排空該系統及隨後再填充N2。將回流冷凝器連接至燒瓶及在100℃下，將反應混合物加熱15小時。隨後，將混合物冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由經急驟管柱層析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之104o(3.2 g，77%)。MS：[M+H]+ 483。
實例104p 2-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯104p
依照針對化合物108f所描述之製程，使104e(268 mg，0.60 mmol)與104o(289 mg，0.60 mmol)反應，得到呈黃色固體形式之104p(300 mg，85%)。LCMS：[M+H]+ 724
實例104 2-(3-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮104
依照實例101i中之製程，藉由氫氧化鋰水解104p之乙酸酯(288 mg，0.40 mmol)，得到呈白色固體形式之104(80 mg，25%)。LCMS：[M+H]+ 682。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.60(d,J=2.0,1H),8.02(d,J=2.5,1H),7.87(d,J=1.5,1H),7.49-7.48(m,1H),7.37(d,J=9.0,1H),7.16(d,J=9.0,1H),6.96(d,J=8.5,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J=9.0,1H),4.77-4.61(m,4H),4.54(d,J=11.5,1H),4.39-4.31(m,2H),4.19-4.15(m,3H),3.92-3.91(m,1H),3.77-3.74(m,1H),3.71(s,3H),3.18(s,1H),2.92-2.89(m,1H),2.73-2.70(m,2H),2.61-2.56(m,4H),2.48(s,1H),1.98- 1.79(m,5H),0.91-0.89(m,6H)
實例105a (S)-2-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯105a
將(S)-5-溴-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(203 mg，0.45 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(216 mg，0.45 mmol)、Pd(dppf)Cl2(18 mg，0.0225 mmol)、NaOAc(74 mg，0.90 mmol)、K3PO4(191 mg，0.90 mmol)及乙腈(3 ml)裝入配備有磁力攪拌器之密封試管。參見圖5。在三輪真空/氬氣沖洗偱環後，在100℃下將混合物加熱1小時。隨後過濾及在真空中蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用二氯甲烷/甲醇(25：1，體積比)溶離，以得到105a(220 mg，87%)，呈棕色固體形式。LCMS：[M+H]+ 724
實例105 (S)-2-(3-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮105
在30℃下，將105a(220 mg，0.30 mmol)及LiOH(72 mg，3.0 mmol)於iPrOH/THF(1：1，4 ml)及H2O(1 ml)中之混合物攪拌1小時。在真空中蒸發混合物及藉由EtOAc(10 ml×2)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之EtOAc萃餘液及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到105(54 mg，25%)，呈白色固體形式。LCMS：[M+H]+ 682。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.54(t,J=2.5,1H),7.91(s,1H),7.80(s,1H),7.47(d,J=1.5,1H),7.26-7.24(m,1H),7.18-7.15(m,1H),6.95(dd,J=2.5,9.0,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J=7.5,1H),4.72-4.61(m,4H),4.54(d,J=11.5,1H),4.33-4.30(m,2H),4.20-4.14(m,3H),3.92-3.90(m,1H),3.71(s,3H),3.53(t,J=5.5,1H),3.31(s,1H),3.12(s,2H),2.61-2.56(m,5H),2.44(s,2H),2.35(s,1H),1.91-1.89(m,2H),1.80-1.79(m,2H),1.67(s,1H),1.43-1.37(m,1H),0.82(t,J=5.5,3H)
實例106a (S)-4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯106a
將4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫啶并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(337 mg，0.7 mmol)、(S)-5-溴-1-甲基-3-(3-甲基-5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮(303 mg，0.7 mmol)、Pd(dppf)Cl2(33 mg，0.04 mmol)、K3PO4．3H2O(372 mg，1.4 mmol)及NaOAc(115 mg，1.4 mmol)於CH3CN(20 ml)中之混合物裝入密封試管。參見圖6。排空該系統及再填充N2。在110℃下將反應混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由經急驟管柱層析純化所獲得之殘餘物，使用30：1 DCM/MeOH溶離，以得到呈黃色固體形式之106a(258 mg，52%)。LCMS：[M+H]+ 710
實例106 (S)-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮106
在室溫下，將LiOH(70 mg，2.9 mmol)添加至106a(153 mg，0.22 mmol)之THF/iPA/H2O(6 ml/6 ml/2 ml)溶液，同時攪拌。將此混合物攪拌0.5小時。隨後，添加H2O(20 ml)及藉由EA(30 ml×3)萃取混合物。藉由Na2SO4乾燥合併之有機層及濃縮以得到黃色固體，藉由反相製備型HPLC進一步純化以得到呈白色固體形式之106(60 mg，42%產率)。LCMS：[M+H]+ 668。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.57(dd,J=2.0,7.0,1H),7.97(s,1H),7.85(s,1H),7.48(t,J=2.5,1H),7.33(d,J=7.0,1H),7.16(d,J=8.0,1H),6.96(dd,J=2.5,9.0,1H),6.87(s,1H),6.83(d,J=9.0,1H),4.69-4.72(m,4H),4.55(d,J=11.5,1H),4.29-4.38(m,2H),4.14-4.20(m,3H),3.90-3.93(m,1H),3.71(s,3H),3.57(s,1H),3.48(s,1H),3.09-3.14(m,2H),2.52-2.61(m,7H),2.23(s,1H),1.88-1.91(m,2H),1.79-1.81(m,2H),0.99(d,J=5.0,3H)
實例107a (S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯107a
依照針對化合物108a所描述之製程，使5-溴-2-硝基吡啶(1.5 g)及(S)-2-甲基哌-1-甲酸第三丁酯(2.3 g)反應，得到呈黃色固體形式之107a(1.5 g，40%)。MS：[M+H]+ 323。參見圖7。
實例107b (S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2-甲基-哌-1-甲酸第三丁酯107b
依照針對化合物108b所描述之製程，使107a(4.0 g)反應，得到呈黃色固體形式之107b(1.23 g，97%)。MS：[M+H]+ 293
實例107c (S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-2-甲基哌-1-甲酸第三丁酯107c
依照針對化合物108c所描述之製程，使3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(83 mg)與107b(90 mg)反應，得到呈黃色固體形式之107c(120 mg，81%)。MS：[M+H]+ 480
實例107d (S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(3-甲基哌-1-基)-吡啶-2-基-胺基)吡啶-2(1H)-酮107d
依照針對化合物108d所描述之製程，酸水解107c(120 mg)之boc基團，得到呈黃色固體形式之107d(100 mg，90%)。MS：[M+H]+ 380
實例107e (S)-5-溴-3-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮107e
依照針對化合物108e所描述之製程，使107d(100 mg)甲基化，得到呈黃色固體形式之107e(60 mg，59%)。MS：[M+H]+ 394
實例107f (S)-2-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸 酯107f
依照針對化合物108f所描述之製程，使4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(74 mg)與107e(60 mg)反應，得到呈黃色固體形式之107f(60 mg，59%)。LCMS：[M+H]+ 668
實例107 (S)-2-(3-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮107
依照實例108之製程，藉由氫氧化鋰水解107f(60 mg)，得到呈白色固體形式之107(20 mg，36%)。LCMS：[M+H]+ 626。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ：8.55(s,1H),7.90(d,J=2.5,1H),7.77(s,1H),7.46(d,J=2.5,1H),7.26(dd,J=3.0,9.5,1H),7.17(dd,J=3.0,9.5,1H),6.95(dd,J=3.0,9.0,1H),6.87(s,1H),6.81(d,J=9.0,1H),4.55(d,J=10.5,1H),4.31-4.36(m,2H),4.14-4.20(m,3H),3.90-3.92(m,1H),3.70(s,3H),3.38(d,J=11,1H),3.32(d,J=11.5,1H), 2.94(s,2H),2.56-2.61(m,5H),2.49(s,1H),2.38(s,4H),1.89-1.91(m,2H),1.79-1.80(m,2H),1.17(d,J=5.0,3H)
實例108a (R)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯108a
將甲基亞磺醯基甲烷(50 ml)、5-溴-2-硝基吡啶(2.2 g，11 mmol)、(R)-2-甲基哌-1-甲酸第三丁酯(2.2 g，11 mmol)及碳酸鉀(3.08 g，22 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。參見圖8。使該系統實施三輪真空/氮氣沖洗偱環及在65℃下加熱15小時。隨後冷卻至室溫，及在乙酸乙酯(100 ml)與水(20 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(50 ml×2)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由無水硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。經急驟管柱層析純化殘餘物，使用2：1(體積比)石油/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之108a(1.75 g，50%)。LCMS：[M+H]+ 323
實例108b (R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-2-甲基哌-1-甲酸第三丁酯108b
將10%鈀覆碳(100 mg)添加至108a(1.0 g，3.1 mmol)於甲醇(15 ml)中之混合物。在室溫下，在氮氣氛圍中將混合物攪拌過夜。在反應結束時，過濾及減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用DCM/MeOH(10：1，體積比)溶離，以得到呈棕色固體形式之108b(800 mg，88%)。LCMS：[M+H]+ 293
實例108c (R)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡 啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-2-甲基哌-1-甲酸第三丁酯108c
將1,4-二氧雜環己烷(15 ml)、108b(800 mg，2.7 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(720 mg，2.7 mmol)及碳酸銫(1.76 g，5.4 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之50-ml單頸圓底燒瓶中。將氮氣鼓入懸浮液3分鐘後，添加氧雜蒽膦(78 mg，0.14 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(128 mg，0.14 mmol)。對系統實施三次真空/氬氣吹掃循環，及在回流下加熱3小時。隨後冷卻至室溫及過濾。使濾液分配在乙酸乙酯(30 ml)與水(30 ml)之間。分離水性層及藉由乙酸乙酯(50 ml×2)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由無水硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。經急驟管柱層析純化殘餘物，使用10：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之108c(624 mg，47%)。LCMS：[M+H]+ 480
實例108d (R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(3-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮108d
在室溫下，將三氟乙酸(300 mg，2.6 mmol)逐滴添加至108c(624 mg，1.3 mmol)於二氯甲烷(8 ml)中之混合物。隨後將混合物攪拌過夜。添加2.0 N NaOH以將pH調節至大於10。隨後藉由乙酸乙酯(50 ml×2)萃取混合物。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥，及減壓下濃縮以得到呈棕色固體形式之108d(300 mg，61%)。LCMS：[M+H]+ 380
實例108e (R)-5-溴-3-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2- 基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮108e
在室溫下，將兩滴乙酸、30%甲醛溶液(0.5 ml)及三乙醯氧基硼氫化鈉(354 mg，1.6 mmol)添加至108d(300 mg，0.8 mmol)之甲醇(8 ml)溶液。隨後在室溫下，將混合物攪拌1小時。反應結束時，添加水(10 ml)及藉由乙酸乙酯(20 ml×2)萃取混合物。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層及在減壓下濃縮以得到呈棕色固體形式之108e(280 mg，90%)。LCMS：[M+H]+ 392
實例108f (R)-2-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯108f
將108e(280 mg，0.71 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(344 mg，0.71 mmol)、PdCl2(dppf)(58 mg，0.071 mmol)、1.0 M NaOAc(2.0當量)、1.0 M K3PO4(2.0當量)及二氧雜環己烷(5 ml)裝入配備有磁力攪拌器之密封試管。進行三輪真空/氬氣沖洗偱環後，在110℃下將混合物加熱2小時。隨後過濾及在真空中蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用二氯甲烷/甲醇(10：1，體積比)溶離，以得到108f(250 mg，58%)，呈白色固體形式。LCMS：[M+H]+ 668
實例108 (R)-2-(3-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥 甲基)-苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮108
在30℃下，將108f(250 mg，0.375 mmol)及LiOH．H2O(98 mg，2.0 mmol)於iPrOH/THF(1：1，3 ml)及H2O(1 ml)中之混合物攪拌2小時。在真空中蒸發混合物及藉由EtOAc(10 ml×2)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之EtOAc萃餘液及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到108(62 mg，26%)，呈白色固體形式。LCMS：[M+H]+ 626。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.53(s,1H),7.89(d,J=2.5,1H),7.76(s,1H),7.45(d,J=2,1H),7.26(s,1H),7.14-7.16(m,1H),6.92-6.94(m,1H),6.86(s,1H),6.79(d,J=9,1H),4.52-4.54(m,1H),4.30-4.32(m,2H),4.14-1.16(m,3H),3.90-3.91(m,1H),3.69(s,3H),3.34-3.35(m,2H),2.91-2.92(m,2H),2.60-2.38(m,10H),1.83-1.85(m,2H),1.78-1.79(m,2H),1.17(s,3H)
實例109a (R)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯109a
將1,4-二氧雜環己烷(60 ml)、5-溴-2-硝基吡啶(2.0 g，10.0 mmol)、(R)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯(2.0 g，10.0 mmol)及碳酸銫(6.5 g，20 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。參見圖9。將氮氣鼓 入所獲得之混合物30分鐘後，添加氧雜蒽膦(579 mg，1.0 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(915 mg，1.0 mmol)，及在100℃下，將反應混合物加熱15小時。然後，將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(100 ml)與水(100 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(150 ml×3)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。急驟層析柱純化殘餘物，使用30：1 DCM/MeOH溶離，以得到109a(1.6 g，44%)，呈黃色固體形式。MS：[M+H]+ 323。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.21(d,J=3.5,1H),8.18(d,J=9.0,1H),7.43-7.45(m,1H),4.33(s,1H),3,92-3.99(m,1H),3.80(d,J=12.5,2H),3.06-3.23(m,3H),1.43(s,9H),1.09(d,J=6.5,3H)。
實例109b (R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯109b
以氮氣沖洗500-ml燒瓶及裝入109a(1.5 g，4.6 mmol)、10%鈀覆碳(50%濕度，200 mg)及甲醇(70 ml)。排空，裝入氫氣，及在室溫下攪拌10小時。隨後排空氫氣及將氮氣裝入燒瓶中。經Celite墊過濾移除觸媒及在減壓下濃縮濾液以得到109b(1.1 g，81%)，呈棕色固體形式。MS：[M+H]+ 293
實例109c (R)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯109c
將1,4-二氧雜環己烷(50 ml)、109b(1.0 g，3.4 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.7 g，10.2 mmol)及碳酸銫(2.2 g，6.8 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物30分鐘後，添加氧雜蒽膦(198 mg，0.34 mmol)及三(二亞苄基丙酮)-二鈀(0)(313 mg，0.34 mmol)，及在100℃下將反應混合物加熱5小時。然後，將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(100 ml)與水(100 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(100 ml×3)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。急驟層析柱純化殘餘物，使用30：1 DCM/MeOH溶離，以得到呈黃色固體形式之109c(1.1 g，63%)。MS：[M+H]+ 478
實例109d (R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮109d
將HCl/二氧雜環己烷(4.0 M，4 ml)添加至109c(600 mg，1.26 mmol)於甲醇(20 ml)中之混合物。在室溫下將反應混合物攪拌4小時。隨後減壓下濃縮。藉由1.0 M NaOH水溶液鹼化殘餘物及藉由DCM萃取。藉由H2O清洗合併之有機層及減壓下濃縮以得到109d(450 mg，95%)，呈黃色固體形式。MS：[M+H]+ 378。
實例109e (R)-5-溴-3-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮109e
在室溫下將109d(500 mg，1.3 mmol)與30%甲醛(6.5 mmol)於甲醇/HOAc(30 ml/3 ml)中之混合物攪拌5分鐘，接著添加NaBH3CN(120 mg，1.9 mmol)。在室溫下將混合物攪拌4小時。冷卻至室溫及添加H2O(20 ml)。藉由DCM(50 ml)萃取混合物三次。減壓下濃縮合併之有機層及藉由柱層析純化殘餘物，使用30：1 DCM/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之109e(473 mg，83%)。MS：[M+H]+ 392。
實例109f (R)-2-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯109f
在100℃下，將109e(400 mg，1.0 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(490 mg，1.0 mmol)、PdCl2(dppf)(80 mg，0.1 mmol)、2.0 M Na2CO3(2.0當量)在DMF(4 ml)中之混合物加熱2小時。添加鹽水及藉由EA(50 ml)萃取混合物三次。減壓下濃縮合併之有機層。藉由經急驟管柱層析純化殘餘物，使用30：1 DCM/MeOH溶離，以得到呈棕色固體形式之109f(354 mg，52%)。LCMS：[M+H]+ 668
實例109 (R)-2-(3-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮109
依照針對化合物108所描述之製程，藉由氫氧化鋰水解109f(337 mg，0.5 mmol)，得到呈黃色固體形式之109(152 mg，48%)。LCMS：(M+H)+ 626。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.57(t,J=2.5,1H),8.39(s,1H),7.83(d,J=3.0,1H),7.31-7.36(m,3H),7.23(d,J=9.0,1H),7.17-7.20(m,1H),6.53(s,1H),4.86-4.88(m,1H),4.32(d,J=4.5,2H), 4.09-4.20(m,3H),3.87-3.91(m,1H),3.66(s,1H),3.59(s,3H),3.04-3.08(m,1H),2.90-2.94(m,1H),2.57-2.65(m,3H),2.47(t,J=5.5,2H),2.35-2.42(m,2H),2.19-2.21(m,1H),2.18(s,3H),1.79(t,J=6.0,2H),1.66-1.69(m,2H),0.91(d,J=6.0,3H)
實例110a (S)-5-溴-3-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮110a
依照針對化合物109e所描述之製程，藉由還原甲醯化使(S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮(377 mg，1 mmol)甲基化以得到呈白色固體形式之110a(294 mg，75%)。LCMS：[M+H]+ 393。參見圖10。
實例110b (S)-2-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯110b
依照針對化合物109f所描述之製程，藉由鈴木反應使110a(391 mg，1 mmol)與4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(482 mg，1 mmol)偶合以得到呈白色固體形式之110b(334 mg，50%)。LCMS：[M+H]+ 668
實例110 (S)-2-(3-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥 甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮110
依照實例109中之製程，水解110b之乙酸酯(667 mg，1.0 mmol)，得到呈白色固體形式之110(75 mg，12%)。LCMS：[M+H]+ 626。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.57(d,J=8,1H),7.96(s,1H),7.82(s,1H),7.47(d,J=1.5,1H),7.33(s,1H),7.15-7.16(m,1H),6.94-6.96(m,1H),6.86(s,1H),6.80(d,J=8.5,1H),4.52-4.54(m,1H),4.31-4.33(m,2H),4.18-4.19(m,3H),3.90-3.91(m,2H),3.70(s,3H),3.49-3.50(m,1H),3.06-3.07(m,2H),2.58-2.60(m,7H),2.34(s,3H),1.88-1.89(m,2H),1.78-1.79(m,2H),0.96(s,3H)
實例111a 2-甲基4-苄基哌-1,2-二甲酸1-第三丁酯111a
在N2下，將2-甲基哌-1,2-二甲酸1-第三丁酯(5 g，20.5 mmol)添加至配備有攪拌棒之乾100-ml單頸圓底燒瓶(圖1)。添加無水乙腈(60 ml)，接著添加BnBr(2.7 ml，22.5 mmol)及三乙胺(8.5 ml，61.5 mmol)。隨後將冷凝器安裝至燒瓶及在71℃下，將反應混合物加熱45分鐘。使反應混合物達到室溫及減壓下濃縮。隨後藉由二氯甲烷稀釋及藉由水及鹽水清洗。藉由Na2SO4乾燥有機層，過濾及減壓下濃縮。藉由急驟管柱(PE：EA=8：1)純化粗化合物以得到4.5 g(66%)111a。MS：[M+H]+：335
實例111b：(4-苄基-1-甲基哌-2-基)甲醇111b
將化合物111a(1 g，2.99 mmol)溶於100 ml無水四氫呋喃中及在0℃下，小心添加氫化鋰鋁(342 mg，8.98 mmol)及將混合物攪拌30分鐘。隨後，回流3小時及將反應混合物逐份傾倒至冰上。隨後過濾及在真空中蒸發濾液。添加100 ml鹽水後，藉由二氯甲烷萃取(100 ml×3)。藉由Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾及濃縮以得到呈黃色油形式之111b(0.6 g，產率91%)
實例111c 4-苄基-2-(氟甲基)-1-甲基哌 111c
在N2下，將111b(9 g，40.9 mmol)之二氯甲烷溶液逐滴添加至N,N'-二甲基胺基三氟化硫(10.8 ml，81.8 mmol)於二氯甲烷中之冰冷溶液。在0℃下將黃色溶液攪拌1小時及加熱至室溫並攪拌15小時。藉由NaHCO3稀釋反應，及分離有機層及藉由Na2SO4乾燥。矽膠(DCM：MeOH=50：1)純化粗產物以得到呈黃色油形式之111c(3 g，產率33%)。MS：[M+H]+：223
實例111d 2-(氟甲基)-1-甲基哌 111d
將111c(3 g，13.5 mmol)及MeOH(80 ml)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶，及將Pd/C(10%)(300 mg)添加至所獲得之混合物。在氫氣(H2)下將反應混合物攪拌15小時。反應完成後，過濾及濃縮以得到呈黃色油形式之111d(1.6 g，產率90%)。
實例111e 2-(氟甲基)-1-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌 111e
將111d(1.6 g，12.1 mmol)、5-溴-2-硝基吡啶(3.7 g，18.2 mmol)及碳酸銫(9.9 g，30.2 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之溶液30分鐘後，添加氮雜蒽膦(700 mg，0.12 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(550 mg，0.06 mmol)，及在回流下將反應混合物加熱15小時。然後，將反應冷卻至室溫，過濾及濃縮以得到黑色固體作為粗產物。隨後矽膠(DCM：MeOH=100：1)純化以得到呈黃色固體形式之111e(2.6 g，產率76%)。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 8.20 (dd,J=12.5 Hz,2H),7.51(dd,J=9.0 Hz,1H),4.74-4.54(m,2H),4.03-3.92(m,2H),3.20(m,1H),3.09-2.99(m,2H),2.50(m,2H),2.46(s,3H)
實例111f 5-(3-(氟甲基)-4-甲基哌-1-基)吡啶-2-胺111f
將111e(2.6 g，10.2 mmol)及MeOH(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶，及將Pd/C(10%)(260 mg)添加至所獲得之混合物。在H2下將反應混合物攪拌15小時。反應完成後，過濾及濃縮以得到111f，將其用於下一步驟而不純化。
實例111g 5-溴-3-(5-(3-(氟甲基)-4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮111g
將1,4-二氧雜環己烷(60 ml)、111e(粗製，14.1 mmol)，3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(4.5 g，16.9 mmol)及碳酸銫 (11.5 g，35.2 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之溶液30分鐘後，添加氮雜蒽膦(820 mg，1.41 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(645 mg，0.7 mmol)，及在回流下將反應混合物加熱15小時。然後，將反應冷卻至室溫，過濾及濃縮以得到黑色固體作為粗產物。隨後矽膠(DCM：MeOH=100：1至50：1)純化以得到呈黃色固體形式之111g(3.1 g，產率50%)。
實例111h 4-氟-2-(5-(5-(3-(氟甲基)-4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯111h
將111g(1 g，2.4 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯(1.3 g，2.68 mmol)、PdCl2(dppf)(190 mg，0.24 mmol)、K3PO4(1 g，4.8 mmol) 及NaOAc(390 mg，4.8 mmol)於MeCN(15 ml)及H2O(1.5 ml)中之混合物在110℃下加熱3小時。在真空中蒸發溶劑。矽膠管柱(DCM：MeOH=50：1)純化殘餘物以得到111h(0.8 g，產率45%)。
實例111 2-(5-氟-3-(5-(5-(3-(氟甲基)-4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮111
將111h(750 mg，1.09 mmol)及LiOH水合物(2.3 g，55 mmol)於iPrOH(10 ml)、THF(10 ml)及H2O(10 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。在真空中蒸發混合物，及藉由DCM(3×30 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之萃餘液。矽膠管柱(DCM：MeOH=50：1)純化殘餘物以得到呈黃色固體形式之111(700 mg，93%)。MS：[M+H]+644。1H NMR(500 MHz,MeOD)δ 8.54(d,J=2.0 Hz,1H),7.93(d,J=1.5 Hz,1H),7.41(m,1H),7.33(d,J=2.0 Hz,1H),7.21(d,J=9.0 Hz,2H),7.02(d,J=9.0 Hz,1H),6.72(s,1H),4.67-4.46(m,4H),4.19(s,3H),4.02(m,1H),3.70(s,3H),3.51(d,J=11.5 Hz,1H),3.42(d,J=11. Hz,1H),3.36(s,1H),2.96(d,J=11.5 Hz,1H),2.85(m,1H),2.73-2.50(m,7H),2.48(s,3H),1.88(m,2H),1.78(m,2H)
實例112a N,N-二溴苯磺醯胺112a
將苯磺醯胺(115 g，731.4 mmol)、KOH(82.8 g，1.48 mol)及水(500 ml)置於1000-ml三頸燒瓶中(圖12)。隨後在劇烈攪拌下逐滴添加溴(230 g，1.48 mol)。過濾所生成之沉澱物，藉由水清洗及過濾以得到呈黃色粉末形式之112a(207 g，90%)
實例112b (S)-2-溴-3-(N-((R)-2-溴-3-乙氧基-3-氧丙基)苯基-磺醯胺基)丙酸乙酯112b
將丙烯酸乙酯(331.2 g，3.29 mmol)添加至112a(207 g，658.26 mmol)之DCM(500 ml)溶液。將混合物攪拌至回流及打開汞弧燈以保證反應在汞孤光中進行4小時。隨後藉由矽膠管柱純化反應混合物，使用PE：EA=15：1至10：1溶離，以得到呈白色固體形式之112b(20 g，6%)。MS：[M+H]+：538
實例112c (2R,6S)-1-苄基-4-(苯磺醯基)哌-2,6-二甲酸二乙酯112c
將BnNH2(12.48 g，116.5 mmol)添加至112b(20 g，38.8 mmol)之甲苯(100 ml)溶液。將反應混合物在90℃下攪拌3小時。隨後藉由矽膠管柱純化混合物，使用PE：EA=50：1至10：1溶離，以得到呈白色晶體形式之112c(10.7 g，60%)MS：[M+H]+：461
實例112d：(1-苄基-4-(苯磺醯基)哌-2,6-二基)二甲醇112d
在冷卻下將1 M LiAIH4之THF(70 ml；70 mmol)溶液逐滴添加及攪拌至112c(10.7 g；23.2 mmol)之THF(275 ml)溶液。使反應混合物回流20分鐘，傾倒至飽和Na2CO3溶液及藉由TBME萃取三次。藉由Na2SO4乾燥合併之有機相及蒸發至乾以得到無色固體，藉由TBME清洗以得到呈白色晶體形式之112d(7 g，80%)。MS：[M+H]+：377
實例112e 9-苄基-3-(苯磺醯基)-7-氧雜-3,9-二氮雜雙環 [3.3.1]壬烷112e
在室溫下，將SOCl2(1.34 ml；18.5 mmol)之甲苯(14 ml)溶液快速地逐滴滴加至112e(7.0 g，18.57 mmol)之DMF(276 ml)溶液。於油浴(170℃)中，將反應混合物回流下加熱5小時。蒸發反應混合物，溶於飽和Na2CO3溶液中及藉由EtOAc萃取三次。藉由Na2SO4乾燥合併之有機相，過濾及蒸發至乾及藉由矽膠管柱純化，使用PE：EA=10：1至5：1溶離，以得到呈無色晶體形式之112e(3.0 g，45%)。MS：[M+H]+：413
實例112f 3-(苯磺醯基)-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷112f
將Pd/C(0.5 g)之MeOH(30 ml)溶液添加至112e(3.0 g，8.37 mmol)之EtOH(100 ml)溶液。在氫氣氛圍下，於50℃下使反應混合物氫化過夜。隨後，濾出觸媒，藉由乙醇清洗，及蒸發出溶劑以得到呈無色固體形式之112f(2.0 g，90%)MS：[M+H]+：268
實例112g 9-甲基-3-(苯磺醯基)-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷112g
在室溫下，將HCHO(1.4 ml，16 mmol)及5滴AcOH添加至112f(2.0 g，7.5 mmol)之MeCN(60 ml)溶液。隨後添加NaCNBH3(1 g，16 mmol)及將混合物攪拌2小時。將其傾倒至水上及藉由EA(100×3)萃取。藉由Na2SO4乾燥有機層，過濾，蒸發及藉由矽膠管柱純化，使用PE：EA=5：1至1：1溶離，以得到呈無色油形式之112g(1.5 g，72%)MS：[M+H]+：283
實例112h 9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷鹽酸鹽112h
將LiAlH4(0.42 g，10.8 mmol)添加至112g(1.5 g，5.3 mmol)於甲苯(15 ml)與THF(15 ml)之混合物中之溶液。將反應混合物在110℃下加熱過夜。隨後將其傾倒至HCl(2 mol/l)中。使有機層分配及蒸發水層至乾及溶於甲醇中。 過濾所獲得之懸浮液及蒸發濾液以得到呈無色油形式之112h(800 mg，43%)。MS：[M+H]+：143
實例112i 9-甲基-3-(6-硝基吡啶-3-基)-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷112i
將Cs2CO3(5 g)及t-BuNH4I(cat.)添加至112h(800 mg，5.6 mmol)及5-溴-2-硝基吡啶(1.37 g，6.86 mmol)於DMSO(50 ml)中之溶液。將反應混合物在120℃下攪拌過夜。隨後將其冷卻至室溫，及藉由EtOAc(300 ml)萃取。藉由水(3×100 ml)及鹽水(150 ml)清洗有機層，藉由Na2SO4乾燥、過濾及濃縮以獲得粗產物，藉由矽膠管柱純化，使用DCM：MeOH=100：1至50：1溶離，以得到呈黃色固體形式之112i(850 mg，72%)。MS：[M+H]+：265
實例112j 5-(9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷-3-基)吡啶-2-胺112j
在室溫下，將Pd/C(50 mg)之MeOH(20 ml)溶液添加至 112i(800 mg，3.0 mmol)之THF(80 ml)溶液。在氫氣壓力氛圍下使反應混合物氫化及在室溫下攪拌過夜。過濾混合物及蒸發濾液以得到呈無色油形式之112j(680 mg，90%)。MS：[M+H]+：235
實例112k 5-溴-1-甲基-3-(5-(9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]-壬烷-3-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮112k
將氮雜蒽膦(58 mg，0.1 mmol)、Cs2CO3(2.1 g，6.4 mmol)及Pd2(dba)3(110 mg，0.1 mmol)添加至112j(500 mg，2.1 mmol)及3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(852 mg，3.2 mmol)於二氧雜環己烷(100 ml)中之溶液。在105℃下將反應混合物攪拌過夜。將混合物冷卻至RT，過濾，濃縮及藉由矽膠管柱純化粗產物，使用MeOH：DCM=0至1：5溶離，以得到112k(500 mg，46.4%)。MS：[M+H]+：421
實例112l 4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷-3-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯112l
將112l(500 mg，1.2 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基乙酸酯(636 mg，1.32 mmol)、PdCl2(dppf)(95 mg，0.12 mmol)、K3PO4(500 mg，2.4 mmol)及NaOAc(195 mg，2.4 mmol)於MeCN(8 ml)及H2O(0.8 ml)中之混合物在110℃下加熱3小時。在真空中蒸發溶劑。矽膠管柱純化殘餘物，使用DCM：MeOH=50：1溶離，以得到112l(340 mg，產率41%)。MS：[M+H]+：696
實例112 2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬烷-3-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮112
將112l(340 mg，0.489 mmol)及LiOH水合物(445 mg，24.45 mmol)於i-PrOH(4 ml)、THF(4 ml)及H2O(4 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。在真空中蒸發混合物，及藉由製備型HPLC純化殘餘物以得到呈淺黃色固體形式之112(105 mg，32.85%)。MS：[M+H]+ 654。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.46(d,J=2.5 Hz,1H),7.87(d,J=3.0 Hz,1H), 7.69(s,1H),7.42(d,J=2.0 Hz,1H),7.23-7.14(m,2H),6.94(d,J=2.5 Hz,1H),6.84(m,2H),4.52(d,J=11.5 Hz,1H),4.31(m,2H),4.12(m,5H),3.89(m,3H),3.69(s,3H),3.43(m,4H),2.84(s,2H),5.62-2.54(m,7H),1.88(m,2H),1.78(m,2H)
實例113a (3S)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯113a
依照實例104中所描述之製程及以(3S)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯(10.0 g，50 mmol)及5-溴-2-硝基吡啶(10.5 g，50 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之113a(8.05 g，50%)。參見圖13。MS-ESI：[M+H]+ 323
實例113b (3S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯113b
依照實例104中所描述之製程及以113a(5.8 g，18 mmol)開始，得到呈棕色固體形式之113b(4.9 g，93%)。參見圖13。MS-ESI：[M+H]+ 293
實例113c (3S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯113c
依照實例104所描述之製程及以113b(4.0 g，13.7 mmol)及3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(5.5 g，20.6 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之113c(5.4 g，83%)。參見圖13。MS-ESI：[M+H]+ 478
實例113d (3S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮113d
依照實例104中所描述之製程及以113c(3.1 g，6.5 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之113d(2.3 g，94%)。參見圖13。MS-ESI：[M+H]+ 378。
實例113e (S)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮113e
將113d(40.0 g，106 mmol)、氧雜環丁-3-酮(11.4 g，159 mmol)、NaBH3CN(10.0 g，159 mmol)及氯化鋅(21.3 g，159 mmol)於甲醇(700 ml)中之混合物在50℃下攪拌5小時。將該混合物添加至水(100 ml)中及減壓下濃縮。藉由二氯甲烷(3×200 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用40：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到113e(35 g，73%)。參見圖13。MS：[M+H]+ 434。
實例113f (3S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮113f
將113e(1.0 g，1.0 eq.，2.3 mmol)、Pin2B2(1.46 g，2.50 eq.，5.75 mmol)、Pd2(dba)3(105 mg，0.05 eq.，0.125 mmol)、X-Phos(93 mg，0.1 eq.，0.23 mmol)、乙酸鉀(676 mg，3.0 eq.，6.9 mmol)及二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在90℃下將混合物加熱4小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由3：1石油醚/乙酸乙酯(80 ml)清洗所獲得之殘餘物以得到呈黃色固體形 式之113f(1.0 g，90%)。參見圖13。MS：[M+H]+ 482。
實例113g 4-[5-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]-4-氧丁酸113g
將氧戊烷-2,5-二酮(100 g，999.27 mmol，2.00當量)於1,2-二氯乙烷(690 ml)及AlCl3(400.5 g，3.00 mol，6.00當量)中之溶液置於3000-ml 4頸圓底燒瓶中，接著在攪拌下，於室溫下，在20分鐘內逐滴添加1H-吡咯-2-甲酸乙酯(69 g，495.86 mmol，1.00當量)之1,2-二氯乙烷(660 ml)溶液(圖14)。在室溫下將所獲得之溶液攪拌3小時及藉由添加3 kg水/冰淬冷。過濾收集固體，藉由1×1000 ml水清洗及在真空烘箱中乾燥以得到105 g(89%)呈白色固體形式之113g。
實例113h 4-[5-(乙氧基羰基)-1H-吡咯-3-基]丁酸113h
將113g(105 g，438.92 mmol，1.00當量)之CF3COOH(1000 ml)溶液置於2000-ml 4-頸圓底燒瓶中，接著在攪拌下，於室溫下，在30分鐘內逐滴添加三乙基矽烷(204 g，1.75 mmol，4.00當量)(圖14)。在室溫下將所獲得之溶液攪拌8小時，在真空下濃縮及藉由500 ml水及500 ml乙酸乙酯稀釋。藉由飽和碳酸氫鈉水溶液將溶液之pH值調節至7。藉由3×500 ml乙酸乙酯萃取所獲得之溶液。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層及在真空下濃縮以得到30 g(30%)呈淺棕色固體形式之113h。
實例113i 7-側氧基-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113i
將113h(30 g，133.19 mmol，1.00當量)於CF3COOH(500 ml)及三氟乙醯基2,2,2-三氟乙酸酯(42 g，199.97 mmol，1.50當量)中之溶液置於1000-ml圓底燒瓶中。參見圖14。在室溫下將所獲得之溶液攪拌60分鐘，在真空下濃縮，藉由500 ml水及500 ml EA稀釋，及藉由3×500 ml乙酸乙酯萃取。藉由1×500 ml飽和碳酸鉀水溶液及1×500 ml鹽水清洗合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥及在真空下濃縮以得到24 g(87%)呈淺棕色固體形式之113i。
實例113j 6,6-二氟-7-側氧基-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113j
將113i(24 g，115.82 mmol，1.00當量)之四氫呋喃(200 ml)溶液置於以惰性氮氣氛圍沖洗及維持之2000-ml 4-頸圓底燒瓶中，接著在-78℃下，於30分鐘內，在攪拌下逐滴添加LiHMDS(406 ml，3.50當量)(圖14)。在-78℃下，於30分鐘內，在攪拌下將N-(苯磺醯基)-S-苯基氟烷磺醯胺(109.5 g，346.24 mmol，3.00當量)之四氫呋喃(500 ml)溶液逐滴添加至此混合物。在室溫下將所獲得之溶液攪拌過夜，藉由添加200 ml飽和NH4Cl水溶液淬冷及藉由3×200 ml乙酸乙酯萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層及在真空下濃縮。矽膠管柱純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(30：1)溶離，以得到9.5 g(34%)呈黃色固體形式之113j。
實例113k 6,6-二氟-7-羥基-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113k
將113j(18 g，74.01 mmol，1.00當量)之乙醇(100 ml)溶 液置於250-ml 3-頸圓底燒瓶中，接著在0℃下分數批添加NaBH4(2.8 g，74.02 mmol，1.00當量)(圖14)。在5℃下將所獲得之溶液攪拌10分鐘，藉由添加50 ml飽和NH4Cl水溶液淬冷，在真空下濃縮及藉由3×50 ml乙酸乙酯萃取。藉由1×100 ml水及1×100 ml鹽水清洗合併之有機層，藉由無水硫酸鈉乾燥及在真空下濃縮以得到18 g(99%)呈白色固體形式之113k。
實例113l 6,6-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113l
將113k(18 g，73.40 mmol，1.00當量)於二氯甲烷(200 ml)及CF3COOH(41.9 g，367.48 mmol，5.00當量)中之溶液置於500-ml 3-頸圓底燒瓶中，接著在0℃於20分鐘內在攪拌下逐滴添加三乙基矽烷(25.6 g，220.16 mmol，3.00當量)(圖14)。所獲得之溶液在室溫攪拌4小時，以飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH至7，及以1×200 ml二氯甲烷萃取。合併之有機層以1×100 ml水及1×100 ml鹽水洗，經無水硫酸鈉乾燥及在真空下濃縮。粗產物藉由急驟製備型HPLC純化得到10 g(59%)呈白色固體之113l。
實例113m 1-(氰基甲基)-6,6-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113m
將113l(5.0 g，21.81 mmol，1.00當量)於N,N-二甲基甲醯胺(50 ml)中之溶液置於250-ml 3-頸圓底燒瓶中，接著在0℃於10分鐘內分數批添加氫化鈉(1.3 g，54.17 mmol，1.40當量，60%)(圖14)。在20℃於10分鐘內在攪拌下將2-溴乙腈(3.7 g，30.85 mmol，1.40當量)逐滴添加至其中。 所獲得之溶液在室溫攪拌7小時，以100 ml水稀釋，及以3×50 ml乙酸乙酯萃取。合併之有機層以1×100 ml水及1×100 ml鹽水洗，經無水硫酸鈉乾燥及在真空下濃縮。殘餘物在矽膠管柱上純化，用乙酸乙酯/石油醚(1：20)溶離，得到3.3 g(56%)呈淺黃色油之113m。
實例113n 1-(2-胺基乙基)-6,6-二氟-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯113n
將113m(3.3 g，12.30 mmol，1.00當量)於乙醇(30 ml)及NiCl2．6H2O(3.2 g，13.45 mmol，1.10當量)中之溶液置於100-ml圓底燒瓶中，接著在0℃分數批添加NaBH4(1.4 g，37.01 mmol，3.00當量)(圖14)。所獲得之溶液在室溫攪拌24小時。濾出固體，及在真空下濃縮濾液。所獲得之溶液以30 ml乙酸乙酯稀釋及以1×30 ml鹽酸(2 N)洗。溶液以飽和碳酸氫鈉水溶液調節至pH=9及以2×30 ml乙酸乙酯萃取。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥及在真空下濃縮，得到0.7 g(21%)呈淺黃色油之113n。
實例113o 7,7-二氟-1H,2H,3H,4H,5H,6H,7H,8H,9H-吡并[1,2-a]吲哚-1-酮113o
將113n(10 g，36.73 mmol，1.00當量)於甲苯(100 ml)及乙酸(1.1 g，18.32 mmol，0.50當量)中之溶液置於250-ml圓底燒瓶中。參見圖14。將所獲得之溶液加熱至回流，維持2小時，冷卻及在真空下濃縮。於100 ml無水醚中磨碎殘餘物。藉由自乙醇再結晶純化粗產物以得到4.43 g(53%)呈白色固體形式之113o。MS-ESI：[M+H]+ 227。1H NMR (300 MHz,DMSO)δ 2.10-2.24(2H,m),2.59-2.64(2H,m),3.17-3.27(2H,m),3.43-3.48(2H,m),3.88-3.92(2H,m),6.44(1H,s),7.56(1H,s)。
實例113p 3-溴-6-(7,7-二氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-氟苄基乙酸酯113p
將1,4-二氧雜環己烷(40 ml)、113o(890 mg，3.94 mmol)、2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c(3847 mg，11.8 mmol)、Pd2(dba)3(180 mg，0.197 mmol)、氮雜蒽膦(227 mg，0.394 mmol)及碳酸銫(2.57 g，7.88 mmol)裝入配備有回流冷凝器之100-ml圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在100℃下將混合物加熱16小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈白色固體形式之113p(1100 mg，62%)。MS-ESI：[M+H]+ 471.1。
實例113q (S)-2-(7,7-二氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苄基乙酸酯113q
將113p(47 mg，0.10 mmol)、113f(47 mg，0.10 mmol)、Pd(dppf)Cl2(4 mg，0.005 mmol)、乙酸鈉(16 mg，0.2 mmol)、K3PO4(43 mg，0.2 mmol)、乙腈(2 ml)及水(0.2 ml)裝入密封試管。進行三輪真空/氬氣沖洗偱環後，在100℃下將混合物加熱1小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用25：1二氯甲烷/甲醇 溶離，以得到呈棕色固體形式之113q(37 mg，50%)。MS：[M+H]+ 746.3。
實例113 (S)-7,7-二氟-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮113
將113q(37 mg，0.05 mmol)及氫氧化鋰(12 mg，0.5 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物。將水(10 ml)添加至殘餘物及藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取所獲得之混合物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之113(20 mg，57%)。MS：[M+H]+ 704.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.57-8.54(m,1H),7.95(d,J=3.0 Hz,1H),7.82(d,J=3.5 Hz,1H),7.45-7.41(m,1H),7.32(d,J=8.5 Hz,1H),7.19-7.16(m,1H),6.99-6.95(m,1H),6.88(d,J=6.5 Hz,1H),6.82(d,J=8.5 Hz,1H),5.97(d,J=11.5 Hz,1H),4.71-4.64(m,4H),4.54(d,J=12.0 Hz,1H),4.35-4.18(m,5H),3.99-3.95(m,1H),3.71(s,3H),3.53(t,J=6.0 Hz,1H),3.47-3.45(m,1H),3.17(t,J=12.0 Hz,1H),3.08(t,J=5.0 Hz,2H),2.90(t,J=8.5 Hz,1H),2.79(t,J=6.0 Hz,1H),2.66-2.63(m,1H),2.56(d,J=11.0 Hz,1H),2.49-2.47(m,2H),2.30-2.20(m,2H),0.99(d,J=6.0 Hz,3H)。
實例114a (S)-3-乙基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸 第三丁酯114a
將1,4-二氧雜環己烷(50 ml)、5-溴-2-硝基吡啶(2.02 g，10 mmol)、(S)-3-乙基哌-1-甲酸第三丁酯(2.14 g，10.0 mmol)、Pd2(dba)3(458 mg，0.50 mmol)、氧雜蒽膦(576 mg，1.0 mmol)及碳酸銫(6.52 g，20 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之250-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在100℃下將混合物加熱過夜。然後，將反應冷卻至室溫。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之114a(700 mg，22%)。MS：[M+H]+ 336。
實例114b (S)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-乙基哌-1-甲酸第三丁酯114b
以氮氣沖洗100-ml單頸圓底燒瓶及裝入114a(0.7 g，2.08 mmol)、10%鈀覆碳(50%濕度，208 mg)，及甲醇(40 ml)。排空混合物，裝入氫氣，及在室溫下攪拌6小時。隨後排空氫氣及將氮氣裝入燒瓶中。藉由Celite墊過濾移除觸媒及減壓下濃縮濾液以得到114b(568 mg，89%)。MS：[M+H]+ 306。
實例114c (S)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡 啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-乙基哌-1-甲酸第三丁酯114c
將1,4-二氧雜環己烷(50 ml)、114b(568 mg，1.86 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(498 mg，1.86 mmol)、Pd2(dba)3(85 mg，0.093 mmol)、氧雜蒽膦(107 mg，0.186 mmol)及碳酸銫(1.198 g，3.72 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在100℃下將混合物加熱6小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用100：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之114c(502 mg，55%)。MS：[M+H]+ 492。
實例114d (S)-5-溴-3-(5-(2-乙基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-甲基吡啶-2(1H)-酮114d
將114c(502 mg，1.02 mmol)、二氯甲烷(2 ml)及4.0 M HCl/二氧雜環己烷(4 ml)之混合物在室溫下攪拌5小時。隨後在減壓下濃縮以得到呈黃色固體形式之粗114d(263 mg，66%)，將其用於下一步驟而不進一步純化。MS：[M+H]+ 392。
實例114e (S)-5-溴-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮114e
將114d(263 mg，0.67 mmol)、氧雜環丁-3-酮(96 mg，1.34 mmol)、NaBH3CN(104 mg，1.68 mmol)及氯化鋅(227 mg，1.68 mmol)於甲醇(10 ml)中之混合物在50℃下攪拌5小時。隨後將水(10 ml)添加至反應。在減壓下濃縮所獲得之混合物。藉由二氯甲烷萃取殘餘物三次。於減壓下濃縮合併之有機層，及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用50：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到114e(203 mg，68%)。MS：[M+H]+ 448。
實例114f (S)-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮114f
將114e(3219 mg，7.20 mmol)、Pin2B2(9072 mg，36.0 mmol)、Pd2(dba)3(329 mg，0.36 mmol)、X-phos(302 mg，0.72 mmol)、乙酸鉀(2117 mg，21.6 mmol)及二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在60℃下將混合物加熱16小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由8：1石油醚/乙酸乙酯(80 ml)清洗所獲得之殘餘物以得到呈黃色固體形式之114f(3.0 g，84%)。MS：[M+H]+ 496.4。
實例114g (2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-6-[5-({5-[(2S)-2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-4-氟苯基)甲基乙酸酯114g
將114f(180 mg，0.40 mmol)、(2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯103g(198 mg，0.40 mmol)、Pd(dppf)Cl2(29 mg，0.04 mmol)、K3PO4(170 mg，0.8 mmol)、乙酸鈉(66 mg，0.8 mmol)、乙腈(5 ml)及水(1.0 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在回流下將混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之114g(115 mg，39%)。MS：[M+H]+ 738.4。
實例114 2-(3-{5-[5-((S)-2-乙基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-5-氟-2-羥甲基-苯基)-7,7-二甲基-3,4,7,8-四氫-2H,6H-環戊并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡-1-酮114
將114g(115 mg，0.16 mmol)及氫氧化鋰(38 mg，1.6 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物及藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之乙酸乙酯萃餘液及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之114(45 mg，40%)。MS：[M+H]+ 696.4。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.55-8.54(m,1H),7.91(s,1H),7.80(d,J=1.5 Hz,1H),7.47(s,1H),7.26(d,J=3.0 Hz,1H),7.17(d,J=9.0 Hz,1H),6.95(dd,J=2.5,8.5 Hz,1H),6.83-6.81 (m,2H),4.71(t,J=6.5 Hz,2H),4.67(t,J=6.0 Hz,1H),4.62(t,J=6.0 Hz,1H),4.57-4.55(m,1H),4.41-4.38(m,1H),4.32-4.30(m,1H),4.24-4.14(m,3H),3.92-3.87(m,1H),3.71(s,3H),3.56-3.50(m,1H),3.33-3.29(m,1H),3.13-3.11(m,2H),2.58-2.56(m,3H),2.52(s,2H),2.44-2.43(m,2H),2.38-2.32(m,1H),1.66-1.64(m,1H),1.42-1.37(m,1H),1.28(s,6H),0.82(t,J=7.0 Hz,3H)。
實例115a (R)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯115a
將1,4-二氧雜環己烷(60 ml)、5-溴-2-硝基吡啶(2.0 g，10.0 mmol)、(R)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯(2.0 g，10.0 mmol)及碳酸銫(6.5 g，20 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之250-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物10分鐘後，添加三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(915 mg，1.0 mmol)及氧雜蒽膦(579 mg，1.0 mmol)。使系統進行三輪真空/氬氣沖洗及在100℃下加熱15小時。然後將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(100 ml)與水(100 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(3×50 ml)萃取。藉由鹽水(100 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除乾燥劑及在減壓下濃縮濾液。藉由矽 膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之115a(1.6 g，44%)。MS-ESI：[M+H]+ 323。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.21(d,J=3.5 Hz,1H),8.18(d,J=9.0 Hz,1H),7.45-7.43(m,1H),4.34-4.33(m,1H),3.92-3.99(m,1H),3.80(d,J=12.5 Hz,2H),3.06-3.23(m,3H),1.43(s,9H),1.09(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例115b (R)-4-(6-胺基吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯115b
以氮氣沖洗250-ml燒瓶及裝入115a(1.5 g，4.6 mmol)、10%鈀覆碳(50%濕度，200 mg)及甲醇(70 ml)。排空，裝入氫氣，及在室溫下攪拌10小時。隨後排空氫氣及將氮氣裝入燒瓶中。藉由Celite墊過濾移除觸媒及減壓下濃縮濾液以得到呈棕色固體形式之115b(1.1 g，81%)。MS-ESI：[M+H]+ 293。
實例115c (R)-4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3-甲基哌-1-甲酸第三丁酯115c
將1,4-二氧雜環己烷(40 ml)、115b(1.0 g，3.4 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(2.7 g，10.2 mmol)及碳酸銫(2.2 g，6.8 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物10分鐘後，添加氧雜蒽膦(198 mg，0.34 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(313 mg，0.34 mmol)。對反應混合物進行三輪真空/氬氣沖洗及在100℃下加熱5小時。然後將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(50 ml)與水(50 ml)之間 分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(3×30 ml)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及在減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之115c(1.1 g，63%)。MS-ESI：[M+H]+ 478。
實例115d (R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮115d
將HCl/二氧雜環己烷(4 M，4 ml)添加至115c(600 mg，1.26 mmol)於甲醇(20 ml)中之混合物。在室溫下將反應混合物攪拌4小時。隨後減壓下濃縮。藉由1 M NaOH水溶液鹼化殘餘物及藉由二氯甲烷(3×30 ml)萃取。藉由鹽水清洗合併之有機層及減壓下濃縮以得到呈黃色固體形式之115d(450 mg，95%)。MS-ESI：[M+H]+ 378。
實例115e (R)-5-溴-3-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮115e
將115d(500 mg，1.3 mmol)及30%甲醛(650 mg，6.5 mmol)於甲醇/乙酸(30 ml/3 ml)中之混合物在室溫下攪拌5分鐘，接著添加NaBH3CN(120 mg，1.9 mmol)。在室溫下將混合物攪拌4小時。添加水(20 ml)及減壓下濃縮所獲得之混合物。藉由二氯甲烷(3×30 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之115e(473 mg，92%)。MS-ESI：[M+H]+ 392。
實例115f (R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁 -3-基)哌口井-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮115f
將115e(40.0 g，106 mmol)、氧雜環丁-3-酮(11.4 g，159 mmol)、NaBH3CN(10.0 g，159 mmol)及氯化鋅(21.3 g，159 mmol)於甲醇(700 ml)中之混合物在50℃下攪拌5小時。將水(50 ml)添加至混合物及減壓下濃縮。藉由二氯甲烷(3×200 ml)萃取殘餘物及減壓下濃縮合併之有機層。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用40：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到115f(35 g，73%)。MS：[M+H]+ 434。
實例115g 2,2,2-三氯-1-(4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-基)乙酮115g
以氮氣沖洗配備有磁力攪拌器、冷凝器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入4,5,6,7-四氫-1H-吲哚(3.00 g，24.8 mmol)、三氯乙醯氯(13.5 g，74.4 mmol)及1,2-二氯乙烷(50 ml)。將溶液在85℃下攪拌2小時。然後，減壓下濃縮反應混合物以得到100%產率(6.50 g)呈黑色半固體形式之115g：1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 11.94(s,1H),7.05(s,1H),2.62(t,2H,J=6.0 Hz),2.47(t,2H,J=6.0 Hz),1.80(m,2H),1.65(m,2H)；MS(ESI+)m/z 266.0(M+H)。
實例115h 4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯115h
以氮氣沖洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入115g(6.50 g，24.8 mmol)、乙醇鈉(17.0 mg，0.25 mmol)及乙醇(40 ml)。將溶液在室溫下攪拌1小時。然後，減壓下濃縮反應混合物。藉由柱層析純化殘餘物以得到100%產率(4.80 g)呈棕色固體形式之115h：mp 70-72℃；1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 9.08(s,1H),6.75(s,1H),4.25(q,2H,J=7.2 Hz),2.65(t,2H,J=6.0 Hz),2.56(t,2H,J=6.0 Hz),1.85(m,4H),1.28(t,3H,J=7.2 Hz)；MS(ESI+)m/z 194.1(M+H)
實例115i 1-(氰基甲基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯115i
以氮氣沖洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之125-ml單頸圓底燒瓶及裝入115h(5.76 g，29.8 mmol)及DMF(50 ml)。利用冰浴將溶液冷卻至0℃。添加NaH(60%礦物油分散液，1.43 g，35.8 mmol)。將所獲得之混合物在室溫下攪拌1小時。然後，添加溴乙腈(1.43 g，35.8 mmol)。將混合物在室溫下攪拌14小時。然後，減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(150 ml)與水(450 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(3×150 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得到55%產率(3.80 g)呈黃色半固體形式之115i：1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.66(s,1H),5.29(s,2H),4.28(q,2H,J=7.2 Hz),2.62(t,2H,J=6.3 Hz),2.49(t,2H,J=6.3 Hz),1.92(m,2H),1.75(m,2H),1.33(t,3H,J=7.2 Hz)；MS(ESI+)m/z 233.1(M+H)
實例115j 1-(2-胺基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯115j
以氮氣沖洗200-ml Parr反應瓶及裝入10%鈀覆碳(50%濕度，1.28 g乾重)、115i(3.00 g，12.9 mmol)、12%鹽酸(6.5 ml，25 mmol)、乙酸乙酯(60 ml)及乙醇(40 ml)。將瓶連接至Parr氫化器，排空，裝入氫氣至50 psi之壓力並振盪6小時。然後，排空氫氣，及將氮氣裝入瓶中。添加Celite 521(4.0 g)，及藉由Celite 521墊過濾混合物。藉由乙醇(2×20 ml)清洗濾餅，及在減壓下將合併濾液濃縮至乾。使殘餘物在乙酸乙酯(150 ml)與10%碳酸鉀水溶液(100 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(3×75 ml)萃取水性層。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機層及在減壓下濃縮。藉由乙醇(5 ml)磨碎殘餘物以得到71%產率(1.71 g)呈白色固體形式之115j：102-104℃；1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 6.61(s,1H),6.22(br,2H),4.15(m,4H),2.77(m,2H),2.59(t,2H,J=6.5 Hz),2.42(t,2H,J=6.5 Hz),1.70(m,2H),1.62(m,2H),1.23(t,3H,J=7.0 Hz)；MS(APCI+)m/z 237.2(M+H)
實例115k 3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮115k
以氮氣沖洗配備有磁力攪拌器及氮氣入口之100-ml單頸圓底燒瓶及裝入1-(2-胺基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯115j(1.80 g，7.63 mmol)、乙醇鈉(1.55 g，22.8 mmol)及乙醇(50 ml)。將混合物在55℃下攪拌5小時。然後，在減壓下濃縮反應混合物及使殘餘物在乙酸乙酯(200 ml)與水(100 ml)之間分配。分離有機層，及藉由乙酸乙酯(2×100 ml)萃取水性層。藉由鹽水清洗合併之有機層，藉由硫酸鈉乾燥及減壓下濃縮。藉由柱層析純化殘餘物以得 到42%產率(605 mg)呈白色固體形式之115k：mp 207-209℃；1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 7.41(s,1H),6.36(s,1H),3.84(t,2H,J=6.0 Hz),3.42(m,2H),2.51(t,2H,J=6.0 Hz),2.42(t,2H,J=6.0 Hz),1.76(m,2H),1.65(m,2H)；(APCI+)m/z 191.3(M+H)
實例151l 2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯115l
將115k(3.8 g，20 mmol)、2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c(20.0 g，61 mmol)、氧雜蒽膦(1.16 g，2.0 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(1.83 g，2.0 mmol)、Cs2CO3(16.3 g，50 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(120 ml)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶。排空系統及隨後再填充N2。將回流冷凝器連接至燒瓶及在100℃下將反應混合物加熱16小時。將混合物冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈白色固體形式之115l(5.2 g，60%)。MS：[M+H]+ 435。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 7.71-7.69(m,1H),7.49-7.47(m,1H),6.52(s,1H),5.01(m,2H),4.18(m,2H),4.02(m,1H),3.73(m,1H),2.60(m,2H),2.45(m,2H),1.98(s,3H),1.77(m,2H),1.68(m,2H)。
實例115m 4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯115m
將115l(3.8 g，8.8 mmol)、(PinB)2(10.9 g，43 mmol)、 Pd(dppf)Cl2(0.37 g，0.50 mmol)、乙酸鉀(2.55 g，26 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(150 ml)裝入配備有磁力攪拌器之250-ml單頸圓底燒瓶。將系統排空及隨後再填充N2。將回流冷凝器連接至燒瓶及將反應混合物在100℃下加熱15小時。將混合物冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之115m(3.2 g，75%)。MS：[M+H]+ 483
實例115n (R)-4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯115n
依照實例102中之製程及以115e(220 mg，0.50 mmol，1.0 eq.)、115m(482 mg，1.0 mmol，2.0 eq.)開始，得到呈黃色固體形式之115n(195 mg，55%)。MS：[M+H]+ 710.4
實例115 (R)-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲 哚-1(2H)-酮115
依照實例102中之製程及以115n(190 mg，0.27 mmol)開始，得到呈白色固體形式之115(47 mg，26%)。MS：[M+H]+668.4。1H NMR(500 MHz,DMSO-d6)δ 8.58(s,1H),8.42(s,1H),7.84(d,J=3.0 Hz,1H),7.36-7.32(m,3H),7.25-7.18(m,2H),6.52(s,1H),4.88(s,1H),4.56-4.42(m,4H),4.31-4.30(m,2H),4.18-4.13(m,3H),3.89-3.88(m,1H),3.68-3.67(m,1H),3.58(s,3H),3.39-3.38(m,1H),3.08-3.07(m,1H),2.94-2.93(m,1H),2.51-2.45(m,5H),2.33-2.32(m,2H),2.19-2.18(m,1H),1.79-1.69(m,4H),0.93-0.92(m,3H)。
實例116a {2-[5-({5-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟苯基}甲基乙酸酯116a
將5-溴-3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌 -1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮104e(134 mg，0.30 mmol)、1-甲基-3-(5-(4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮103g(298 mg，0.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2(22 mg，0.03 mmol)、K3PO4(127 mg，0.6 mmol)、乙酸鈉(49 mg，0.6 mmol)、乙腈(5 ml)及水(1.0 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在回流下將混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之116a(150 mg，68%)。MS：[M+H]+ 738.3
實例116 2-(3-{5-[5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-5-氟-2-羥甲基-苯基)-7,7-二甲基-3,4,7,8-四氫-2H,6H-環戊并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡-1-酮116
將116a(150 mg，0.20 mmol)及氫氧化鋰(48 mg，2.0 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物。藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取所獲得之殘餘物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之116(57 mg，41%)。MS：[M+H]+ 696.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.60(dd,J=2.0,6.5 Hz,1H),8.02(d,J=2.5 Hz,1H),7.88(s,1H),7.50-7.49(m,1H),7.37(d,J=8.5 Hz,1H),7.16(d,J=9.0 Hz,1H),6.96(dd,J=2.5,9.0 Hz,1H),6.83-6.81(m,2H),4.77-4.74(m,2H),4.66-4.62(m,2H),4.57-4.55(m,1H),4.33-4.31(m,1H),4.23-4.14(m,3H),3.92-3.89(m,1H),3.78-3.76(m,1H),3.71(s,3H),3.22-3.20(m,1H),2.93-2.91(m,1H),2.75-2.73(m,2H),2.58(s,2H),2.52(s,3H),1.97-1.90(m,2H),1.28(s,6H),0.91(d,J=5.5 Hz,6H)。
實例117a N-第三丁基-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺117a
將4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲酸(500 g，2.75 mol，1.0當量)及亞硫醯氯(655 g，5.5 mol，2.0當量)之混合物在回流下煮沸3小時。藉由減壓下蒸餾移除過量亞硫醯氯。將殘餘物溶於二氯甲烷(1.0 L)中及攪拌下添加第三丁胺(402 g，5.5 mol，2.0當量)之二氯甲烷(500 ml)溶液同時維持混合物之溫度低於10℃。將所獲得之溶液在25℃下攪拌16小時。減壓下移除大部分溶劑。將殘餘物在冰浴中冷卻及攪拌下緩慢地導入2 M KOH溶液以將pH調節至11。過濾懸浮液及收集固體，水洗三次，及在真空中乾燥以得到呈白色固體形式之117a(580 g，80%，經兩步驟)。MS：[M+H]+ 238。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.02(s,1H),5.77(s,1H),2.65(t,J=6.0 Hz,1H),2.47(t,J=6.0 Hz,1H), 1.74-1.70(m,4H),1.35(s,9H)。
實例117b N-第三丁基-3-(二氮烯基甲基)-4,5,6,7-四氫苯并[b]噻吩-2-甲醯胺117b
在-78℃下，於氬氣中將n-BuLi(672 ml，2.5 M THF，1.68 mol，4.0當量)緩慢地添加至117a(100 g，0.42 mol，1.0當量)之THF(500 ml)溶液。將混合物攪拌2小時。將DMF(306 g，4.2 mol，10.0當量)添加至混合物，同時維持溫度在-78℃。再過2.0小時後，在-78℃下藉由甲醇(500 ml)淬冷反應。在室溫下攪拌0.50小時。添加80%水合肼水溶液(131 g，2.1 mol)及使混合物在65℃下回流過夜。減壓下移除有機溶劑。過濾殘餘物及水洗所收集之黃色固體。在真空中乾燥固體以得到粗117b，將其用於下一步驟而不進一步純化。MS：[M+H]+ 280。
實例117c 8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-(9),2(7),3-三烯-6-酮117c
使117b(40 g，144 mmol)於H2SO4(30%水溶液，3 L)中之混合物在105℃下回流24小時。隨後過濾及藉由二氯甲烷(3×1 L)萃取濾液。藉由Na2SO4乾燥合併的萃餘液及在減壓下蒸發。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用100：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈白色固體形式之117c(9.0 g，31%)。MS：[M+H]+ 207.1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.15(s,1H),2.96-2.94(m,2H),2.86-2.84(m,2H),1.96-1.94(m,4H)。
實例117d (2-溴-4-氟-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基)甲基乙酸酯117d
將117c(1.0 g，4.85 mmol)、2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c(4.8 g，14.6 mmol)、碘化銅(I)(553 mg，2.9 mmol)、N1,N2-二甲基乙烷-1,2-二胺(512 mg，5.82 mmol)、Cs2CO3(3.2 g，9.7 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器之100-ml單頸圓底燒瓶。排空系統及隨後再填充N2。將回流冷凝器連接至燒瓶，及在100℃下將反應混合物加熱16小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之117d(437 mg，20%)。MS：[M+H]+ 451。
實例117e (4-氟-2-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯117e
依照實例104中之製程及以117d(400 mg，0.88 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之117e(353 mg，80%)。MS：[M+H]+ 499
實例117f {4-氟-2-[1-甲基-5-({5-[(2R)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基吡啶-3-基]-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基}甲基乙酸酯117f
依照實例102中之製程及以(R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮115f(217 mg，0.50 mmol)及117e(249 mg，0.50 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之117f(174 mg，48%)。MS：[M+H]+ 726。
實例117 3-(5-氟-2-羥甲基-3-{1-甲基-5-[5-((R)-2-甲基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-苯基)-6,7,8,9-四氫-3H-苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]噠-4-酮117
依照實例102中之製程及以117f(72 mg，0.10 mmol)開始，得到呈黃色固體形式之117(35 mg，51%)。LCMS：[M+H]+ 684。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.56(d,J=2.0 Hz,1H),8.48(s,1H),8.43(s,1H),7.85(d,J=2.5 Hz,1H),7.37-7.32(m,4H),7.24(d,J=9.0 Hz,1H),4.60(t,J=5.5 Hz,1H),4.57-4.53(m,2H),4.47-4.41(m,2H),4.28-4.27(d,J=4.0 Hz,2H),3.68-3.66(m,1H),3.58(s,3H),3.40-3.38(m,1H),3.10-3.07(m,1H),2.93-2.91(m,3H),2.84-2.82(m,2H),2.54-2.52(m,1H),2.32-2.30(m,2H), 2.19-2.18(m,1H),1.89-1.84(m,4H),0.93(t,J=6.5 Hz,2H)。
實例118a {2-[5-({5-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-4-氟-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基}甲基乙酸酯118a
將5-溴-3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮104e(179 mg，0.40 mmol)、(4-氟-2-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯117d(200 mg，0.40 mmol)、Pd(dppf)Cl2(29 mg，0.04 mmol)、K3PO4(170 mg，0.8 mmol)、乙酸鈉(66 mg，0.8 mmol)、乙腈(5 ml)、水(1.0 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在回流下將混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減 壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之118a(100 mg，34%)。MS：[M+H]+ 740.3。
實例118 3-(3-{5-[5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-5-氟-2-羥甲基-苯基)-6,7,8,9-四氫-3H-苯并[4,5]噻吩并[2,3-b]噠-4-酮118
將118a(100 mg，0.135 mmol)及氫氧化鋰(33 mg，1.35 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物。藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取所獲得之殘餘物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之118(36 mg，38%)。[M+H]+ 698.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.64(d,J=2.0 Hz,1H),8.27(s,1H),8.05(d,J=2.0 Hz,1H),7.88(s,1H),7.48(d,J=2,5 Hz,1H),7.37(d,J=5.5 Hz,1H),7.30(dd,J=2.5,9.0 Hz,1H),7.11(dd,J=2.5,8.5 Hz,1H),6.82(d,J=9.0 Hz,1H),4.79-4.73(m,2H),4.67-4.61(m,2H),4.31(s,2H),3.77(t,J=7.0 Hz,1H),3.72(s,3H),3.21-3.19(m,1H),2.99-2.98(m,2H),2.94-2.91(m,1H),2.88-2.86(m,2H),2.78-2.71(m,2H),2.51-2.49(m,1H),1.99-1.96(m,6H),0.92-0.90(m,6H)。
實例119a 2-溴-4-氟-6-(10-氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯119a
實例119a 10-溴-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-吡并[1,2-a]吲哚-1-酮119a
將1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-吡并[1,2-a]吲哚-1-酮104j(9.5 g，49.94 mmol，1.00當量)之N,N-二甲基甲醯胺(100 ml)溶液置於250-ml 3-頸圓底燒瓶中，接著在0℃下分數批添加N-溴琥珀醯胺(9.8 g，55.06 mmol，1.10當量)。將所獲得之溶液在室溫下攪拌2小時及藉由500 ml水稀釋。過濾沉澱物及在真空烘箱中乾燥以得到9.5 g(71%)呈淺棕色固體形式之119a。
實例119b 10-氟-1H,2H,3H,4H,6H,7H,8H,9H-吡并[1,2-a]吲哚-1-酮119b
將119a(40 g，148.62 mmol，1.00當量)之四氫呋喃(200 ml)溶液置於藉由惰性氮氣氛圍沖洗及維持之2-L 4-頸圓底燒瓶中，接著在-78℃下，攪拌下逐滴添加n-BuLi(2.4 M)(218 ml，3.50當量)。在-40℃下將所獲得之溶液攪拌3小時。在-78℃下，攪拌下將N-氟苯磺醯亞胺(98.7 g，313.33 mmol，2.10當量)之四氫呋喃(200 ml)溶液逐滴添加至此燒瓶。在室溫下將所獲得之溶液攪拌3小時。藉由添 加200 ml水淬冷及藉由3×500 ml乙酸乙酯萃取。藉由無水硫酸鈉乾燥合併之有機層及在真空下濃縮。藉由製備型HPLC純化粗產物(30 g)，使用以下條件：移動相，A：0.05%三氟乙酸/水；B：CH3CN；梯度：10% B-25% B，以得到5.05 g(16%)呈白色固體形式之119b。MS：[M+H]+ 209。1H NMR(300 MHz,CDCl3)δ 6.16(br,1H),3.90-3.86(m,2H),3.65-3.62(m,2H),2.53-2.47(m,4H),1.88-1.80(m,2H),1.77-1.72(m,2H)。
實例119c 2-溴-4-氟-6-(10-氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯119c
將1,4-二氧雜環己烷(60 ml)、2,6-二溴-4-氟苄基乙酸酯101c(2.34 g，7.2 mmol)、119b(500 mg，2.4 mmol)及碳酸銫(1.6 g，4.8 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物30分鐘後，添加氧雜蒽膦(140 mg，0.24 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(220 mg，0.24 mmol)及在100℃下將反應混合物加熱12小時。然後，將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(40 ml)與水(40 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(3×70 ml)萃取。藉由鹽水(30 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱純化殘餘物，使用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之119c(632 mg，58%)。MS：[M+H]+ 453.2。
實例119d (S)-4-氟-2-(10-氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫 吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苄基乙酸酯119d
將119c(150 mg，1.0 eq.，0.33 mmol)、(S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮113f(160 mg，1.0 eq.，0.33 mmol)、K3PO4(210 mg，3.0 eq.，0.99 mmol)、PdCl2(dppf)(27.0 mg，0.10 eq.，0.033 mmol)、THF(20 ml)及水(0.1 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之50-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在回流下將混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用40：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之119d(90 mg，37%)。MS：[M+H]+ 728.3。
實例119 (S)-10-氟-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮119
將119d(90 mg，1.0 eq.，0.12 mmol)、氫氧化鋰(9.0 mg，3.0 eq.，0.37 mmol)、異丙醇(3 ml)、THF(3 ml)及水(2 ml)裝入配備有磁力攪拌器之50-ml單頸圓底燒瓶。將混合物在室溫下攪拌1小時。隨後過濾及濃縮。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到119(42 mg，49%)。MS：[M+H]+ 686.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.54(dd, J=2.0 Hz,9.0,1H),7.94-7.93(m,1H),7.81(d,J=4.0 Hz,1H),7.45-7.44(m,1H),7.31(dd,J=3.0,9.0 Hz,1H),7.15-7.14(m,1H),6.94(dd,J=2.0,9.0 Hz,1H),6.81(d,J=8.5 Hz,1H),4.71-4.61(m,4H),4.53(d,J=9.5 Hz,1H),4.32-4.31(m,2H),4.15-4.08(m,3H),3.89-3.86(m,1H),3.69(s,3H),3.55-3.43(m,2H),3.07(m,2H),2.57-2.46(m,7H),2.20-2.16(m,1H),1.88-1.76(m,4H),0.98-096(m,3H)。
實例120a {2-[5-({5-[(2S)-2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-4-氟-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基}甲基乙酸酯120a
將(S)-5-溴-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮114e(179 mg，0.40 mmol)、(4-氟-2-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯117e(200 mg，0.40 mmol)、Pd(dppf)Cl2(29 mg，0.04 mmol)、K3PO4(170 mg，0.8 mmol)、乙酸鈉(66 mg，0.8 mmol)、乙腈(5 ml)及水(1.0 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗後，在回流下將混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之120a(120 mg，41%)。MS：[M+H]+ 740.3
實例120 3-(3-{5-[5-((S)-2-乙基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-5-氟-2-羥甲基-苯基)-6,7,8,9-四氫-3H-苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]噠-4-酮120
將120a(120 mg，0.16 mmol)及氫氧化鋰(38 mg，1.6 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物。藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取所獲得之殘餘物。減壓下濃縮合併之有機層及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之120(73 mg，65%)。MS：[M+H]+ 698.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.58(d,J=1.5 Hz,1H),8.26(s,1H),7.94(d,J=2.5 Hz,1H),7.80(s,1H),7.45(d,J=2.5 Hz,1H),7.30(d,J=9.0 Hz,1H),7.27(d,J=9.0 Hz,1H),7.11(dd,J=2.5,8.0 Hz,1H),6.82(d,J=9.0 Hz,1H),4.72-4.62(m,4H),4.31(s,2H),4.01(bs,1H),3.71(s,3H),3.53(t,J=6.0 Hz,1H),3.34-3.32(m,1H),3.13(t,J=6.0 Hz,2H),2.99(t,J=5.0 Hz,2H),2.87(t,J=5.0 Hz,2H),2.60-2.56 (m,1H),2.46-2.44(m,2H),2.36-2.34(m,1H),2.01-1.96(m,4H),1.71-1.68(m,1H),1.44-1.36(m,1H),0.83(t,J=7.5 Hz,3H)。
實例121a 4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯121a
將疊氮化鈉(9.75 g，150 mmol)添加至3-(2-氯環己-1-烯基)丙烯酸乙酯(21.4 g，100 mmol)之DMSO(100 ml)混合物。將反應混合物在105℃下加熱4小時。冷卻至室溫，然後將混合物傾倒至冰水中。藉由過濾收集所生成之沉澱物以得到121a(18.0 g，93.3%)。MS-ESI：[M+H]+ 194。
實例121b 1-(2,2-二乙氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸乙酯121b
在0℃下將121a(5.80 g，30.1 mmol)緩慢添加至NaH(1.44 g，60.2 mmol)之N,N-二甲基甲醯胺(DMF)(30 ml)懸浮液。將所獲得之混合物在室溫下攪拌0.5小時，接著添加2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(11.9 g，60.2 mmol)。在70℃下將反應加熱30小時及藉由水(100 ml)淬冷。隨後藉由乙酸乙酯(3×100 ml)萃取混合物。減壓下濃縮合併之有機相及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用40：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到121b(4.7 g，51%)。MS-ESI：[M-乙醇+H]+ 264。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 6.65(s,1H),4.59(t,J=5.0 Hz,1H),4.17-4.16(m,4H),3.59-3.57(m,2H),3.27-3.26(m,2H),2.61(t,J=6.0 Hz,2H),2.51(t,J=6.0 Hz,2H),1.73-1.71(m,2H),1.63-1.61(m,2H),1.25(t,J=7.0 Hz,3H),1.02(t,J=7.0 Hz,6H)。
實例121c 1-(2,2-二乙氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲酸121c
將氫氧化鈉(3.0 g，75.0 mmol)添加至121b(4.7 g，15.2 mmol)於乙醇(20 ml)、四氫呋喃(20 ml)及水(30 ml)之混合溶劑中之混合物。在75℃下將反應加熱兩天及減壓下濃縮。將殘餘物懸浮於水中及藉由稀檸檬酸水溶液中和。藉由乙酸乙酯(3×100 ml)萃取混合物及減壓下濃縮合併之有機相以得到121c(3.32 g，78%)。MS-ESI：[M-乙醇+H]+ 236。
實例121d 1-(2,2-二乙氧基乙基)-4,5,6,7-四氫-1H-吲哚-2-甲醯胺121d
將六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(HATU)(5.7 g，15.0 mmol)、三乙胺(1.5 g，15.0 mmol)及DMAP(128 mg，1.0 mmol)添加至121c(2.8 g，10.0 mmol)於N,N-二甲基甲醯胺(30 ml)中之混合物。在室溫下將反應混合物攪拌過夜。添加飽和氫氧化銨(30 ml)及將所獲得之混合物再攪拌2小時。隨後藉由水(100 ml)稀釋及藉由乙酸乙酯(3×100 ml)萃取。減壓下濃縮合併之有機相及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(6：1至3：1)溶離，以得到121d(2.7 g，96%)。MS-ESI：[M-乙醇 +H]+ 235。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 7.35(bs,1H),6.70(bs,1H),6.60(s,1H),4.60(t,J=5.5 Hz,1H),4.18(d,J=4.0 Hz,2H),3.57-3.56(m,2H),3.25(m,2H),2.57(t,J=6.0 Hz,2H),2.40(t,J=6.0 Hz,2H),1.71(t,J=5.0 Hz,2H),1.64(t,J=5.0 Hz,2H),1.01(t,J=7.0 Hz,6H)。
實例121e 6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮121e
將121d(2.7 g，9.6 mmol)與乙酸(10 ml)之混合物在110℃下加熱2小時。將混合物冷卻至室溫及藉由碳酸鈉水溶液中和及藉由乙酸乙酯(3×30 ml)萃取。減壓下濃縮合併之有機相以得到呈黃色固體形式之121e(1.6 g，88%)。MS-ESI：[M+H]+ 189.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 10.28(s,1H),7.02(d,J=5.5 Hz,1H),6.63(s,1H),6.52(pt,J=5.5 Hz,1H),2.66(t,J=6.0 Hz,2H),2.57(t,J=6.0 Hz,2H),1.83-1.82(m,2H),1.73-1.72(m,2H)。
實例121f 2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苯甲醛121f
將121e(500 mg，2.66 mmol)、2,6-二溴-4-氟苯甲醛(1.50 g，5.32 mmol)及乙酸鉀(521 mg，5.32 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氬氣鼓入懸浮液30分鐘，然後添加4,7-二甲氧基-1,10-啡啉(638.4 mg，2.66 mmol)及碘化亞銅(506 mg，2.66 mmol)。對系統進行三輪真空/氬氣沖洗及隨後在100℃下加熱16小時。隨後冷卻至室溫及過濾。藉由二氯甲烷(2×100 ml)清 洗固體。減壓下濃縮合併的濾液及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用石油醚/乙酸乙酯(10：1至3：1)溶離，以得到呈黃色固體形式之121f(510 mg，49%)。MS：[M+H]+ 389。
實例121g 3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮121g
將5-溴-3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮104e(3.0 g，6.70 mmol)、Pin2B2(8442 mg，33.5 mmol)、Pd2(dba)3(311 mg，0.34 mmol)、X-phos(319 mg，0.67 mmol)、乙酸鉀(1970 mg，20.1 mmol)及二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在60℃下將混合物加熱16小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液。藉由8：1石油醚/乙酸乙酯(80 ml)清洗所獲得之殘餘物以得到呈黃色固體形式之121g(3 g，90%)。MS：[M+H]+ 496.4。
實例121h 2-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)-吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苯甲醛121h
將121f(194 mg，0.5 mmol)、121g(347.0 mg，0.7 mmol)、乙酸鉀(98.0 mg，1.0 mmol)、1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵-二氯鈀(II)(20.4 mg，0.025 mmol)、水(0.5 ml)及乙腈(20 ml)裝入50-ml圓底燒瓶。對系統進行3輪真空/氬氣沖洗及在100℃下，於氬氣氛圍中加熱3小時。反應混合物之LCMS分析顯示殘留少量起始材料。將反應混合物冷卻至室溫及過濾。藉由二氯甲烷(50 ml)及水(50 ml)稀釋濾液。分離水性層及藉由二氯甲烷(3×20 ml)萃取。藉由Na2SO4乾燥合併之有機層，過濾及減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析純化黑色殘餘物，使用二氯甲烷/甲醇(80/1至30/1)溶離，以得到呈黃色固體形式之121g(182 mg，54%)。MS：[M+H]+ 678。
實例121 2-(3-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮121
在室溫下將NaBH4(41.8 mg，1.1 mmol)添加至121h(150 mg，0.22 mmol)之甲醇(10 ml)溶液。將反應攪拌1小時後，LCMS指示反應完全。將混合物傾倒至水(30 ml)中及減壓下濃縮。藉由二氯甲烷(3×30 ml)萃取殘餘物。藉由鹽 水(30 ml)清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，過濾及減壓下濃縮。藉由製備型HPLC純化殘餘物固體以得到呈白色固體形式之121(60.3 mg，40%)。MS：[M+H]+ 680。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.63(d,J=2.0 Hz,1H),8.51(s,1H),7.90(d,J=3.0 Hz,1H),7.41(m,2H),7.31-7.23(m,4H),6.78(d,J=1.0 Hz,2H),4.80(m,1H),4.55-4.54(m,2H),4.49-4.4.48(m,2H),4.28-4.20(m,2H),3.69-3.64(m,1H),3.60(s,3H),3.29-3.27(m,2H),2.89-2.88(m,1H),2.75-2.67(m,4H),2.61(m,2H),1.93-1.86(m,3H),1.59(m,2H),0.85-0.81(m,6H)。
實例122a (S)-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮122a
將(S)-5-溴-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮114e(3219 mg，7.20 mg)、Pin2B2(9072 mg，36.0 mmol)、Pd2(dba)3(329 mg，0.36 mmol)、X-phos(302 mg，0.72 mmol)、乙酸鉀(2117 mg，21.6 mmol)及二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪 拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在60℃下將混合物加熱16小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由8：1石油醚/乙酸乙酯(80 ml)清洗所獲得之殘餘物以得到呈黃色固體形式之122a(3.0 g，84%)。
實例122b (S)-2-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-2(H)-基)苯甲醛122b
將2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苯甲醛121f(159 mg，0.41 mmol)、122a(213 mg，0.43 mmol)、PdCl2(dppf)(29 mg，0.04 mmol)、K3PO4(182 mg，0.86 mmol)、乙酸鈉(71 mg，0.86 mmol)、乙腈(15 ml)及水(1.5 ml)裝入圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在80℃下將混合物加熱3小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用1：20甲醇/二氯甲烷溶離，以得到呈紅色固體形式之122b(120 mg，43%)。MS：[M+H]+ 678.3
實例122 (S)-2-(3-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-6,7,8,9-四氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮122
將122b(100 mg，0.15 mmol)、NaBH4(22 mg，0.60 mmol)及甲醇(10 ml)之混合物在25℃下攪拌1小時。隨後藉 由水(5 ml)淬冷及減壓下濃縮。藉由二氯甲烷(2×10 ml)萃取殘餘物及減壓下濃縮合併之有機層。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到122(32 mg，31%)。MS：[M+H]+ 680.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.56(s,1 H),7.91(s,1 H),7.80(s,1 H),7.53(s,1 H),7.28-7.26(m,2 H),7.05(s,1 H),6.97-6.93(m,2 H),6.81(d,J=8.5 Hz,1 H),6.45(d,J=5.5 Hz,1 H),4.71-4.61(m,4 H),4.38(d,J=12.0 Hz,1 H),4.36(d,J=11.5 Hz,1 H),3.70(s,3 H),3.52(bs,1 H),3.31(d,J=5.5 Hz,1 H),3.13-3.10(m,2H),2.75-2.70(m,4H),2.56-2.43(m,4H),1.98-1.96(m,2H),1.85-1.84(m,2H),1.39-1.36(m,2H),0.82(t,J=7.0 Hz,3H)。
實例123a 2-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯123a
將2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯101h(120 mg，0.27 mmol)、(S)-3-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺 基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮122a(158.4 mg，0.32 mmol)、Pd(dppf)Cl2(24.5 mg，0.03 mmol)、K3PO4(114.5 mg，0.54 mmol)、乙酸鈉三水合物(73.4 mg，0.54 mmol)、水(0.5 ml)及乙腈(20 ml)裝入100-ml單頸圓底燒瓶。將系統排空及再填充N2。在100℃下將反應混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用25：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃棕色固體形式之123a(105 mg，53%)。MS：[M+H]+ 724.3。
實例123 (S)-2-(3-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-1(2H)-酮123
將123a(105 mg，0.15 mmol)及氫氧化鋰(36 mg，1.5 mmol)於異丙醇/THF(1：1，4 ml)及水(1 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物及藉由乙酸乙酯(2×10 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之乙酸乙酯萃餘液及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈淺粉色固體形式之123(40 mg，40%)。MS：[M+H]+ 682.3。1H NMR(500 M,CHCl3)δ 8.55(s,1H),7.93(s,1H),7.82(s,1H),7.51(s,1H),7.29(d,J=3.5 Hz,1H),7.15-7.12(m,1H),6.94(dd,J=3.5 Hz,10.5,1H),6.81(d,J=10.0 Hz,1H),6.30(s,1H),4.77-4.74(m,4H),4.72-4.70(m,1H),4.57-4.55(m,1H),4.29-4.24(m,1H),4.12-4.05(m,1H),3.90- 3.78(m,4H),3.70(s,3H),3.52-3.50(m,1H),3.32-3.30(m,1H),3.12-3.10(m,2H),3.04-2.83(m,2H),2.81(m,2H),2.57-2.50(m,1H),2.43-2.33(m,2H),2.05-2.00(m,2H),1.87-1.85(m,2H),1.49-1.35(m,2H),0.81(t,J=8.5 Hz,3H)。
實例124a (2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟-6-[1-甲基-5-({5-[(2R)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]苯基)甲基乙酸酯124a
將(R)-5-溴-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)吡啶-2(1H)-酮115f(152 mg，0.35 mmol)、(2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苯基)甲基乙酸酯103g(206 mg，0.415 mmol)、PdCl2(dppf)(28 mg，0.04 mmol)、K3PO4(l47 mg，0.69 mmol)、乙酸鈉(57 mg，0.69 mmol)、乙腈(20 ml)及水(2 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後 在100℃下將混合物加熱3小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。矽膠柱層析純化殘餘物，使用1：20甲醇/二氯甲烷溶離，以得到呈紅色固體形式之124a(70 mg，28%)。MS：[M+H]+ 724.2。
實例124 2-(5-氟-2-羥甲基-3-{1-甲基-5-[5-((R)-2-甲基-4-氧雜環丁-3-基-哌-1-基)-吡啶-2-基胺基]-6-側氧基-1,6-二氫-吡啶-3-基}-苯基)-7,7-二甲基-3,4,7,8-四氫-2H,6H-環戊并[4,5]吡咯并[1,2-a]吡-1-酮124
將124a(59 mg，0.080 mmol)、氫氧化鋰(19 mg，0.80 mmol)、THF(10 ml)、異丙醇(8 ml)及水(10 ml)之混合物在室溫下攪拌1.5小時。隨後減壓下濃縮及藉由二氯甲烷(2×10 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之二氯甲烷萃餘液。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到124(43 mg，79%)。MS：[M+H]+ 682.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.58-8.57(m,1H),8.41(s,1H),7.84(d,J=3.0 Hz,1H),7.37-7.31(m,3H),7.22(d,J=9.5 Hz,1H),7.19-7.16(m,1H),6.50(s,1H),4.87(d,J=2.0 Hz,1H),4.57-4.53(m,2H),4.46(t,J=6.0 Hz,1H),4.41(t,J=6.0 Hz,1H),4.31(d,J=3.0 Hz,2H),4.21-4.18(m,2H),4.15-4.10(m,1H),3.88-3.85(m,1H),3.67(d,J=2.0 Hz,1H),3.58(s,3H),3.41-3.37(m,2H),3.10-3.07(m,1H),2.95-2.91(m,1H),2.56(d,J=1.5 Hz,2H),2.41(s,2H),2.32-2.28(m,2H),2.17-2.15(m,1H),1.21(s,6H),0.91(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例125a 3,3-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸 第三丁酯125a
將5-溴-2-硝基吡啶(5.6 g，28.0 mmol)、3,3-二甲基-哌-1-甲酸第三丁酯(3.0 g，14.0 mmol)、碳酸銫(9.1 g，28 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之溶液30分鐘，然後添加Binap(870 mg，1.4 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(1.2 g，1.4 mmol)。對反應混合物進行三輪真空/氬氣沖洗及在120℃下攪拌24小時。然後，將反應冷卻至室溫，過濾及使濾液在乙酸乙酯(200 ml)與水(50 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯萃取(3×50 ml)。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到125a(1.27 g，27%)。LCMS：[M+H]+ 337.2。
實例125b 4-(6-胺基吡啶-3-基)-3,3-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯125b
以氮氣沖洗50-ml圓底燒瓶及裝入125a(1100 mg，3.2 mmol)、10%鈀覆碳(10%濕度，110 mg)及甲醇(20 ml)。隨後排空，以氫氣裝填，及在室溫下攪拌5小時。排空氫氣及將氮氣裝入燒瓶中。藉由Celite墊過濾移除觸媒及減壓下濃縮濾液以得到125b(950 mg，94%)。LCMS：[M+H]+ 307.3。
實例125c 4-(6-(5-溴-1-甲基-2-側氧基-1,2-二氫吡啶-3-基胺基)吡啶-3-基)-3,3-二甲基哌-1-甲酸第三丁酯125c
將125b(950 mg，3.1 mmol)、3,5-二溴-1-甲基吡啶-2(1H)-酮(1240 mg，4.6 mmol)、1,4-二氧雜環己烷(30 ml)及碳酸銫(2015 mg，6.2 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之溶液5分鐘，然後添加氧雜蒽膦(179 mg，0.31 mmol)及三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(283 mg，0.31 mmol)。對反應混合物進行三輪真空/氬氣沖洗及在回流下加熱10小時。然後將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在乙酸乙酯(50 ml)與水(10 ml)之間分配。分離水性層及藉由乙酸乙酯(3×20 ml)萃取。藉由鹽水(30 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用4：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到125c(1.21 g，79%)。LCMS：[M+H]+ 492.1。
實例125d 5-溴-3-(5-(2,2-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮125d
將3 M HCl之二乙醚(15 ml)溶液添加至125c(1.19 g，1.9 mmol)之二氯甲烷(20 ml)溶液。將反應混合物在室溫下攪拌4小時。隨後減壓下濃縮以得到125d(900 mg，95%)。LCMS：[M+H]+ 392.1。
實例125e 5-溴-3-(5-(2,2-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮125e
將125d(900 mg，2.3 mmol)、氧雜環丁-3-酮(497 mg，6.9 mmol)、NaBH3CN(435 mg，6.9 mmol)及氯化鋅(311 mg，2.3 mmol)於甲醇(30 ml)中之混合物在50℃下攪拌4小 時。隨後減壓下濃縮。將水(10 ml)添加至殘餘物及藉由CHCl3(3×50 ml)萃取混合物。減壓下濃縮合併之有機層。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用50：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到125e(800 mg，78%)。LCMS：[M+H]+ 448.1。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.65(d,J=2.0 Hz,1H),8.11(d,J=2.5 Hz,1H),7.85(s,1H),7.37-7.34(m,1H),6.96(d,J=2.5 Hz,1H),6.72(d,J=8.5 Hz,1H),4. 69-4.61(m,4H),3.60(s,3H),3.50-3.14(m,3H),2.43-2.17(m,4H),1.06(s,6H)。
實例125f 2-(5-(5-(2,2-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯125f
將125e(190 mg，1.0 eq.，0.42 mmol)、4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯115m(405 mg，2.0 eq.，0.84 mmol)、PdCl2(dppf)(33 mg，0.10 eq.，0.040 mmol)、K3PO4(178 mg，2.0 eq.，0.84 mmol)、 乙酸鈉(69 mg，2.0 eq.，0.84 mmol)、乙腈(20 ml)及水(0.1 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之50-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後將混合物在90℃下加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用50：1二氯甲烷/乙醇溶離，以得到呈黃色固體形式之125f(90 mg，29%)。MS：[M+H]+ 724.3。
實例125 2-(3-(5-(5-(2,2-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮125
將125f(85 mg，1 eq.，0.11 mmol)、氫氧化鋰(14 mg，5 eq.，0.55 mmol)、異丙醇(3 ml)、THF(3 ml)及水(2 ml)裝入配備有磁力攪拌器之50-ml單頸圓底燒瓶。在30℃下將混合物攪拌1小時。隨後過濾及減壓下濃縮殘餘物。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到125(43 mg，57%)。MS：[M+H]+ 682.4。1H NMR(500 MHz,DMSO)δ 8.62(d,J=2.0 Hz,1H),8.55(s,1H),7.94(d,J=2.5 Hz,1H),7.41-7.39(m,2H),7.33-7.31(m,1H),7.23-7.17(m,2H),6.52(s,1H),4.86(brs,1H),4.54(t,J=6.5 Hz,2H),4.42(t,J=6.0 Hz,2H),4.30(s,2H),4.17-4.11(m,3H),3.89-3.86(m,1H),3.58(m,3H),3.39-3.36(m,1H),3.08-2.98(m,2H),2.63-2.56(m,2H),2,46(t,J=6.0 Hz,2H),2.33-2.12(m,4H),1.80-1.67(m,4H),0.96(s,6H)。
實例126a 2-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯126a
將2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯101h(347 mg，0.80 mmol)、3-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮121g(792 mg，1.6 mmol)、Pd(dppf)Cl2(32.7 mg，0.040 mmol)、K3PO4(340.0 mg，1.6 mmol)、乙酸鈉三水合物(217.6 mg，1.6 mmol)、水(0.5 ml)及乙腈(50 ml)裝入100-ml單頸圓底燒瓶。將系統排空及再填充N2。在100℃下將反應混合物加熱2小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用25：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃棕色固體形式之126a(200 mg，34.6%)。MS：[M+H]+ 724.5。
實例126 2-[3-[5-[[5-[(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁 -3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-1-甲基-6-側氧基-3-吡啶基]-5-氟-2-(羥甲基)苯基]-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲哚-1-酮126
將126a(150 mg，0.20 mmol)及氫氧化鋰(72 mg，3.0 mmol)於異丙醇/THF(5：3，8.0 ml)及水(2.0 ml)中之混合物在30℃下攪拌1小時。減壓下蒸發混合物及藉由乙酸乙酯(2×20 ml)萃取殘餘物。減壓下濃縮合併之乙酸乙酯萃餘液及藉由製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之126(45 mg，33%)。MS：[M+H]+ 682.9。1H NMR(500 MHz,CHCl3)δ 8.60(dd,J=2,5 Hz,1H),8.03(s,1H),7.87(s,1H),7.54(s,1H),7.37-7.35(m,1H),7.14-7.12(m,1H),6.96-6.94(m,1H),6.82-6.80(m,1H),6.31(s,1H),4.77-4.71(m,2H),4.67-4.62(m,2H),4.58-4.55(m,1H),4.41-4.40(m,1H),4.29-4.25(m,1H),4.13-4.09(m,1H),3.91-3.80(m,3H),3.77-3.74(m,1H),3.70(s,3H),3.18(d,J=5.0 Hz,1H),3.06-3.01(m,1H),2.98-2.90(m,2H),2.83(m,2H),2.77-2.70(m,2H),2.47(m,1H),2.06-2.01(m,2H),1.97-1.93(m,1H),1.88-1.87(m,2H),0.91-0.89(m,6H)。
實例127a 2-(羥基(吡啶-2-基)甲基)丙烯酸甲酯127a
將氯仿(100 ml)、吡啶甲醛(10.7 g，0.10 mol)、丙烯酸甲酯(8.60 g，0.10 mol)及1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(0.560 g，5.00 mmol)裝入250-ml單頸圓底燒瓶。在室溫下將反應混合物攪拌48小時。然後，減壓下濃縮反應及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用3：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈深黃色油形式之127a(11.6 g，60%)。MS-ESI：(M+H)+ 194.2。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.54(d,J=5.0 Hz,1H),7.69-7.66(m,1H),7.42(d,J=8.0 Hz,1H),7.22-7.20(m,1H),6.36(s,1H),5.97(s,1H),5.62(s,1H),4.85(s,1H),3.74(s,3H)。
實例127b 吲哚-2-甲酸甲酯127b
將乙酸酐(80 ml)及127a(6.68 g，34.6 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之250-ml單頸圓底燒瓶。將反應混合物在回流下，於氮氣中加熱4小時。然後將反應冷卻至室溫，傾倒至冰(100 g)與飽和碳酸氫鈉水溶液(200 ml)之混合物上，及攪拌1小時。藉由飽和碳酸氫鈉水溶液中和所獲得之溶液及藉由二氯甲烷(3×200 ml)萃取。藉由硫酸鈉乾燥合併之有機萃餘液及減壓下濃縮。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用10：1石油醚/乙酸乙酯(10：1)溶離，以得到呈白色固體形式之127b(2.1 g，35%)。MS-ESI：(M+H)+ 176.2。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 7.86-7.84(m,1H),7.79(d,J=1.0 Hz,1H),7.36-7.34(m,1H),6.82(s, 1H),6.70-6.66(m,1H),6.55-6.51(m,1H),3.88(s,3H)。
實例127c 5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯127c
以氮氣沖洗250-ml圓底燒瓶及裝入127b(2.0 g，11.4 mmol)、10%鈀覆碳(50%濕度，200 mg)及甲醇(50 ml)。排空，以氫氣裝填，及在5 atm氫氣下，在室溫下攪拌8小時。隨後排空氫氣及將氮氣裝入燒瓶中。藉由CELITE®墊過濾移除觸媒及減壓下濃縮濾液以得到呈白色固體形式之127c(1.1 g，81%)。MS-ESI：[M+H]+ 180.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 7.25(d,J=2.0 Hz,1H),6.09(s,1H),3.93(t,J=6.0 Hz,2H),3.66(s,3H),2.67(t,J=6.0 Hz,2H),1.87-1.83(m,2H),1.75-1.70(m,2H)。
實例127d 3-甲醯基-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯127d
以氮氣沖洗配備有磁力攪拌器之100-ml圓底燒瓶及裝入無水二氯乙烷(20 ml)及無水DMF(0.70 ml，9.0 mmol)。將 氧氯化磷(0.70 ml，7.3 mmol)在2分鐘內添加至冷卻在0℃下之混合物，同時維持反應溫度在0與10℃之間。移除冷卻浴及在室溫下將反應攪拌1小時。添加5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯(127c)(1.0 g，5.6 mmol)之乙腈(10 ml)溶液及在室溫下將反應混合物攪拌3小時。然後，減壓下濃縮。藉由飽和NaHCO3(20 ml)水溶液溶解油狀殘餘物及藉由乙酸乙酯(3×50 ml)萃取。藉由水(50 ml)清洗合併之有機層，藉由Na2SO4乾燥，及減壓下蒸發。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用1：5乙酸乙酯/石油醚溶離，以得到呈白色固體形式之127d(703 mg，58%)。MS-ESI：(M+H)+ 208.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 10.14(s,1H),6.40(s,1H),4.27(t,J=6.0 Hz,2H),3.78(s,3H),2.78(t,J=6.0 Hz,2H),1.94-1.85(m,2H),1.78-1.69(m,2H)。
實例127e 6,7,8,9-四氫噠并[4,5-b]吲哚-1(2H)-酮127e
將3-甲醯基-5,6,7,8-四氫吲哚-2-甲酸甲酯(127d)(600 mg，2.9 mmol)及氫氧化肼(20 ml)裝入配備有回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。在100℃下將反應混合物加熱4小時。然後，將反應冷卻至室溫及過濾以得到呈黃色固體形式之127e(413 mg，75%)。MS-ESI：(M+H)+ 190.1。1H NMR (500 MHz,DMSO-d 6)δ 12.17(s,1H),8.24(s,1H),6.33(s,1H),4.16(t,J=6.0 Hz,2H),2.88(t,J=6.5 Hz,2H),2.00-1.96(m,2H),1.84-1.79(m,2H)。
實例127f 2-溴-4-氟-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫噠并[4,5-b]吲哚-2(1H)-基)苯甲醛127f
將127e(450 mg，2.4 mmol)、2,6-二溴-4-氟苯甲醛(2.0 g，7.2 mmol)、碳酸銫(1.6 g，4.8 mmol)及1,4-二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml單頸圓底燒瓶。將氮氣鼓入所獲得之混合物10分鐘，然後添加碘化銅(I)(450 mg，2.4 mmol)及4,7-二甲氧基-1,10-啡啉(571 mg，2.4 mmol)，及在90℃下將反應混合物加熱12小時。然後，將反應冷卻至室溫及過濾。使濾液在二氯甲烷(40 ml)與水(40 ml)之間分配。分離水性層及藉由二氯甲烷(3×30 ml)萃取。藉由鹽水(50 ml)清洗合併之有機層及藉由硫酸鈉乾燥。藉由過濾移除乾燥劑及減壓下濃縮濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用1：2乙酸乙酯/石油醚溶離，以得到呈棕色固體形式之127f(251 mg，31%)。MS-ESI：(M+H)+ 390.0。
實例127g 4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-6,7,8,9-四氫噠并[4,5-b]吲哚-2(1H)-基)苯甲醛127g
將127f(125.0 mg，0.32 mmol)、1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮113f(155.0 mg，0.32 mmol)、乙酸鈉(53.0 mg，0.64 mmol)、K3PO4(135.70 mg，0.64 mmol)、PdCl2(dppf)(50.0 mg，0.06 mmol)、乙腈(25 ml)及水(1 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml圓底燒瓶。對系統進行3輪真空/氬氣沖洗及在100℃下加熱3小時。隨後減壓下蒸發及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈棕色固體形式之127g化合物(108 mg，51%)。MS：[M+H]+ 665.4。
實例127 2-[5-氟-2-(羥甲基)-3-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]苯基]-6,7,8,9-四氫噠并[4,5-b]吲哚-1-酮127
將NaBH4(17.0 mg，0.45 mmol)添加至127g(100.0 mg，0.15 mmol)之甲醇(20 ml)溶液。將混合物在室溫下攪拌2小時。隨後藉由水(1 ml)淬冷及減壓下蒸發混合物。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈白色固體形式之127(56 mg，產率56%)。MS：[M+H]+ 667.4。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.58(d,J=2.0,1H),8.47(s,1H),8.40(s,1H),7.85(d,J=2.5,1H),7.39(d,J=2.0,1H),7.37- 7.34(m,1H),7.30-7.28(m,1H),7.25-7.22(m,2H),6.48(s,1H),4.57-4.53(m,2H),4.46(m,2H),4.41(m,1H),4.25(m,2H),4.20(s,2H),3.69-3.64(m,1H),3.58(s,3H),3.41-3.36(m,1H),3.10-3.07(m,1H),2.96-2.92(m,3H),2.54-2.50(m,1H),2.35-2.28(m,2H),2.18(m,1H),2.04-2.00(m,2H),1.87-1.82(m,2H),0.92(d,J=6.0,3H)。
實例128a 2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟苯甲醛128a
將4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-9-酮103e(1.0 g，4.90 mmol，1.0 eq.)、2-溴-6-氯-4-氟苯甲醛(2.76 g，9.8 mmol，2.0 eq.)、Pd2(dba)3(224 mg，0.24 mmol，0.050 eq.)、氧雜蒽膦(283 mg，0.49 mmol，0.10 eq.)、乙酸鉀(1.44 g，14.7 mmol，3.0 eq.)及1,4-二氧雜環己烷(50 ml)裝入配備有回流冷凝器之100-ml圓底燒瓶。排空系統及再填充N2。在80℃下將反應混合物加熱5小時。然後將反應冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及矽膠柱純化殘餘物，使用80：1二氯甲烷/甲醇溶離， 以得到呈黃色固體形式之128a(992 mg，50%)。MS：[M+H]+ 405.1。
實例128b 2-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟-6-[1-甲基-5-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]苯甲醛128b
將128a(303 mg，0.75 mmol)、1-甲基-3-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1,2-二氫吡啶-2-酮113f(385 mg，0.80 mmol)、Pd(dppf)Cl2(68.6 mg，0.075 mmol)、乙酸鉀(147 mg，1.50 mmol)、K3PO4(327 mg，1.50 mmol)、乙腈(15 ml)及水(6滴)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之50-ml圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在100℃下將混合物加熱2小時。然後將反應冷卻至室溫。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用15：1乙酸乙酯/甲醇溶離，以得到呈黑色固體形式之128b(382 mg，77%)。MS-ESI：[M+H]+ 680.3。
實例128 2-(7,7-二甲基-4-側氧基-1,2,6,8-四氫環戊并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡-3-基)-4-氟-6-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]苯甲酸128
將2-甲基-2-丁烯(9.0 ml，107 mmol)添加至128b(190 mg，0.28 mmol)、第三丁醇(7 ml)及二氯甲烷(0.5 ml)之混合物。在-10℃下逐滴添加NaClO2(53 mg，0.59 mmol)及 NaH2PO4．2水(135.7 mg，0.87 mmol)水溶液(2 ml)。在-10℃下將混合物攪拌1小時。隨後藉由水(20 ml)處理及藉由乙酸乙酯(4×50 ml)萃取。藉由MgSO4乾燥合併之有機萃餘液，過濾及減壓下蒸發。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈淺黃色固體形式之128(33 mg，17%)。MS-ESI：[M+H]+ 696.2。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 13.19-13.17(m,1H),8.60(s,1H),8.36(s,1H),7.86(d,J=2.5 Hz,1H),7.37-7.35(m,2H),7.24-.7.22(m,3H),6.46(s,1H),4.57-4.54(m,2H),4.48-4.47(m,1H),4.42-4.41(m,1H),4.10-4.09(m,2H),3.95-3.92(m,1H),3.68-3.67(m,1H),3.56(s,3H),3.42-3.39(m,2H),3.09-3.07(m,1H),2.96-2.94(m,1H),2.92(s,3H),2.41-2.40(m,2H),2.35-2.31(m,2H),2.20-2.17(m,1H),1.21-1.20(m,6H),0.93(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例129a 2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟苯甲酸129a
將2-甲基-2-丁烯(22 ml，262 mmol)添加至2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟苯甲醛128a(810 mg，2.0 mmol)、第三丁醇(50 ml)及二氯甲烷(3 ml)之混合物。在 0℃下逐滴添加NaClO2(1.8 g，20.0 mmol)及NaH2PO4二水合物(2.2 g，14.0 mmol)之水溶液(20 ml)。在0℃下將混合物攪拌1小時。隨後藉由水(30 ml)處理及藉由乙酸乙酯(4×90 ml)萃取。藉由MgSO4乾燥合併之有機萃餘液及減壓下濃縮以得到呈黃色固體形式之129a(930 mg，84%)。MS-ESI：[M+H]+ 421.1。
實例129b 2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-10-基}-4-氟-N-甲基苯甲醯胺129b
將DMF(8 ml)、129a(160 mg，0.38 mmol)、HATU(505 mg，1.33 mmol)、DMAP(46 mg，0.38 mmol)及三乙胺(1.0 ml)裝入配備有磁力攪拌器之25-ml單頸圓底燒瓶。在25℃下將混合物加熱0.5小時。隨後添加MeNH2．HCl(266 mg，3.8 mmol)及在25℃下將所獲得之混合物攪拌2.5小時。然後，將反應冷卻至室溫。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由製備型TLC純化殘餘物，使用1：20甲醇/二氯甲烷沖洗，以得到呈黑色固體形式之129b(116 mg，70%)。MS-ESI：[M+H]+ 434.0
實例129 2-(7,7-二甲基-4-側氧基-1,2,6,8-四氫環戊并[3,4]吡咯并[3,5-b]吡-3-基)-4-氟-N-甲基-6-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]苯甲醯胺129
將129b(116 mg，0.27 mmol)、1-甲基-3-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-5- (4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)-1,2-二氫吡啶-2-酮113f(260 mg，0.54 mmol)、Pd(dppf)Cl2(26 mg，0.030 mmol)、乙酸鉀(53 mg，0.54 mmol)、K3PO4(117 mg，0.54 mmol)、乙腈(5 ml)及水(0.50 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在回流下將混合物加熱2小時。然後，將反應冷卻至室溫。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到呈淺黃色固體形式之129(80 mg，42%)。MS-ESI：[M+H]+ 709.5。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6 )δ 8.69(d,J=2.0 Hz,1H),8.39(s,1H),8.11(d,J=4.5 Hz,1H),7.89(d,J=2.5 Hz,1H),7.38-7.36(m,1H),7.32-7.30(m,2H),7.28-7.26(m,1H),7.23-7.21(m,1H),6.47(s,1H),4.58-4.54(m,2H),4.48-4.46(m,1H),4.43-4.41(m,1H),4.05-3.91(m,4H),3.67-3.66(m,1H),3.57(s,3H),3.41-3.38(m,1H),3.10-3.08(m,1H),2.97-2.94(m,1H),2.55-2.54(m,3H),2.48-2.47(m,3H),2.40-2.39(m,2H),2.36-2.28(m,2H),2.22-2.19(m,1H),1.21-1.20(m,6H),0.93(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例130a 2-溴-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯甲醛130a
將1,4-二氧雜環己烷(20 ml)、8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-6-酮117c(618 mg，3.0 mmol)、2,6-二溴苯甲醛(1980 mg，7.5 mmol)、CuBr(215 mg，1.5 mmol)、肌胺酸(267 mg，3.0 mmol)及K2CO3(828 mg，6.0 mmol)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之25-ml單頸圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，在100℃下將混合物加熱16小時。然後將反應冷卻至室溫。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之130a(702 mg，60%)。MS：[M+H]+ 389.0。
實例130b 2-[1-甲基-5-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基吡啶-3-基]-6-{6-側氧基-8-硫雜-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯甲醛130b
將130a(160 mg，0.40 mmol)、(S)-1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基硼酸113f(160 mg，0.40 mmol)、Pd(dppf)Cl2(32 mg，0.040 mmol)、乙酸鈉(66 mg，0.80 mmol)、K3PO4(170 mg，0.80 mmol)及乙腈(6 ml)裝入配備有磁力攪拌器之密封試管。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在100℃下將混合物加熱2小時。隨後過濾及減壓下蒸發濾液。藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用30：1二氯甲烷/甲 醇溶離，以得到呈黃色固體形式之130b(123 mg，46%)。LCMS：[M+H]+ 664.3。
實例130 3-[2-(羥甲基)-3-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]苯基]-6,7,8,9-四氫苯并噻吩并[2,3-d]噠-4-酮130
在0℃下，將硼氫化鈉(20 mg，0.54 mmol)添加至130b(120 mg，0.18 mmol)之甲醇(5 ml)溶液。將反應攪拌30分鐘。隨後藉由水(1 ml)淬冷及減壓下濃縮。藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到130(70 mg，59%)。LCMS：[M+H]+ 666.3。1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ 8.62(d,J=2.0 Hz,1H),8.26(s,1H),7.98(s,1H),7.84(s,1H),7.56-7.54(m,2H),7.42(d,J=2.5 Hz,1H),7.37(dd,J=2.0,7.0 Hz,1H),7.31(d,J=8.0 Hz,1H),6.83(d,J=8.5 Hz,1H),4.72-4.66(m,4H),4.36(d,J=5.0 Hz,2H),4.05(t,J=5.5 Hz,1H),3.72(s,3H),3.55-3.54(m,1H),3.46-3.45(m,1H),3.08-3.06(m,2H),2.99(t,J=5.0 Hz,2H),2.87(t,J=5.0 Hz,2H),2.60-2.59(m,1H),2.49-2.48(m,2H),2.20-2.19(m,1H),2.02-1.96(m,4H),0.99(d,J=6.0 Hz,3H)。
實例131a 3,3-二甲基環戊酮131a
將甲基鋰之乙醚溶液(430 ml，860 mmol，2.0 M)在30分鐘內添加至冷卻至0℃之CuI(81.0 g，420 mmol)之無水乙醚(500 ml)懸浮液。參見圖15。在0℃下將混合物攪拌2小時。將3-甲基環戊-2-烯酮(33.6 g，350 mmol)在1小時內，於0℃下逐滴添加至以上混合物。在0℃下將所獲得之混合 物再攪拌2小時。隨後藉由飽和NH4Cl(300 ml)淬冷及過濾。藉由乙醚(2×200 ml)萃取濾液。藉由無水Mg2SO4乾燥合併之有機層及過濾。減壓下蒸發濾液以得到呈無色固體形式之131a(28 g，71%)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 2.31(t,J=8.0 Hz,2H),2.05(s,2H),1.79(t,J=8.0 Hz,2H),1.12(s,6H)。
實例131b 2-氯-4,4-二甲基環戊-1-烯甲醛131b
將POCl3(40.5 g，250 mmol)在10分鐘內添加至冷卻在0℃下之DMF(18.3 g，250 mmol)之二氯甲烷(300 ml)溶液。參見圖15。在20℃下將混合物攪拌1小時。將131a(28.0 g，250 mmol)在20分鐘內逐滴添加至以上混合物。在回流下將所獲得之混合物加熱20小時。將反應混合物冷卻至室溫及傾倒至乙酸鈉(60 g)之冰水(400 g)溶液中。藉由二氯甲烷(2×300 ml)萃取混合物。藉由水(2×200 ml)清洗合併之有機層，藉由無水Mg2SO4乾燥及過濾。減壓下蒸發濾液以得到呈無色油形式之131b(33.0 g，粗)。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 9.99(s,1H),2.62(d,J=2.0 Hz,2H),2.38(d,J=2.0 Hz,2H),1.15(s,6H)。
實例131c 5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-環戊并[b]噻吩-2-甲酸乙酯131c
將2-巰基乙酸乙酯(19.2 g，160 mmol)添加至131b(33.0 g，粗)於二氯甲烷(400 ml)及三乙胺(60 g，600 mmol)中之溶液。參見圖15。在回流下將反應混合物加熱6小時。隨後減壓下濃縮。將殘餘物溶於乙醇(400 ml)及三乙胺(60 g，600 mmol)中。在回流下將混合物加熱12小時。減壓下再次濃縮及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用40：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈黃色固體形式之131c(18.0 g，32%，分兩步驟)。MS-ESI：[M+H]+ 225.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 7.49(s,1H),4.32(q,J=7.0 Hz,2H),2.72(s,2H),2.56(s,2H),1.35(t,J=7.0 Hz,3H),1.22(s,6H)。
實例131d 5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-環戊并[b]噻吩-2-甲酸131d
將氫氧化鋰(6.82 g，284 mmol)添加至131c(16.0 g，71.0 mmol)於丙-2-醇(200 ml)、四氫呋喃(200 ml)及水中之溶液。參見圖15。在65℃下將反應混合物加熱5小時。減壓下移除有機溶劑。藉由鹽酸(12 M)將殘餘物之pH調節至1.0。藉由過濾收集沉澱物及在真空中乾燥以得到呈白色固體形式之131d(12.0 g，86%)。MS-ESI：[M+H]+ 196.9
實例131e N-第三丁基-5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-環戊并[b]噻吩-2-甲醯胺131e
將131d(12.0 g，61.0 mmol)之SOCl2(80 ml)懸浮液在65℃下加熱2小時。減壓下濃縮反應混合物。參見圖15。藉由二氯甲烷(20 ml)稀釋殘餘物，將其添加至2-甲基丙-2-胺(4.45 g，61.0 mmol)及三乙胺(18.0 g，180 mmol)於二氯甲烷(180 ml)中之溶液。將所獲得之混合物攪拌16小時及藉由二氯甲烷(200 ml)稀釋。藉由水(3×50 ml)清洗，藉由無水Mg2SO4乾燥，過濾及減壓下蒸發以得到呈黃色固體 形式之131e(15.0 g，97%)。MS-ESI：[M+H]+ 252.0
實例131f N-第三丁基-3-甲醯基-5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-環戊并[b]噻吩-2-甲醯胺131f
將正丁基鋰溶液(10.0 ml，25 mmol，2.5 M己烷)在五分鐘內添加至冷卻至-70℃之131e(1.5 g，6.0 mmol)之無水THF(60 ml)溶液。參見圖15。在-70℃下攪拌6小時。在五分鐘內添加DMF(1.3 g，18.0 mmol)及在室溫下將所獲得之混合物攪拌過夜。隨後藉由飽和NH4Cl(40 ml)淬冷及減壓下濃縮。藉由乙酸乙酯(2×30 ml)萃取殘餘物。藉由無水Mg2SO4乾燥合併之有機層及過濾。減壓下蒸發濾液以得到呈黃色固體形式之131f(1.34 g，80%)。MS-ESI：[M+H]+ 280.3
實例131g N-第三丁基-3-(腙甲基)-5,5-二甲基-5,6-二氫-4H-環戊并[b]噻吩-2-甲醯胺131g
在5分鐘內將131f(5.6 g，20.0 mmol)之無水THF(20 ml)溶液添加至85%肼水溶液(10 ml)於THF(180 ml)中之溶液。參見圖15。在20℃下攪拌3小時。減壓下濃縮反應混合物以得到呈黑色固體形式之131g(6.0 g，產率95%，純度：95%)。MS-ESI：[M+H]+ 294.0
實例131h 4,4-二甲基-7-硫雜-10,11-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-1(8),2(6),11-三烯-9-酮131h
在回流下將131g(3.8 g，13.0 mmol)之30% H2SO4(100 ml)溶液加熱16小時。參見圖15。將反應混合物冷卻至室溫及藉由二氯甲烷(3×200 ml)萃取。減壓下濃縮合併之有機層 及藉由矽膠柱層析純化殘餘物，使用100：1二氯甲烷/甲醇溶離，以得到呈黃色固體形式之131h(1.72 g，60%)。MS-ESI：[M+H]+ 221.0
實例131i 2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-7-硫雜-10,11-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-1(8),2(6),11-三烯-10-基}-4-氟苯甲醛131i
將131h(330 mg，1.5 mmol)、2,6-二溴-4-氟苯甲醛(1.26 g，4.5 mmol)、CuBr(113 mg，0.8 mmol)、肌胺酸(142 mg，1.6 mmol)、K2CO3(420 mg，3.0 mmol)及二氧雜環己烷(20 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之100-ml圓底燒瓶。參見圖15。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在95℃下將混合物加熱15小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由矽膠柱層析純化所獲得之殘餘物，使用5：1石油醚/乙酸乙酯溶離，以得到呈白色固體形式之131i(380 mg，60%)。MS-ESI：[M+H]+ 420.6
實例131j 2-{4,4-二甲基-9-側氧基-7-硫雜-10,11-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-1(8),2(6),11-三烯-10-基}-4-氟-6-[1-甲基-5-({5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]苯甲醛131j
將131i(421 mg，1.0 mmol)、(S)-1-甲基-3-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮113f(580 mg，1.2 mmol)、Pd(dppf)Cl2(59 mg，0.080 mmol)、K3PO4三水合物(360 mg，1.6 mmol)、水(6滴)及四氫呋喃(20 ml)裝入配備有磁力攪拌器及回流冷凝器之50-ml圓底燒瓶。進行三輪真空/氬氣沖洗，然後在回流下將混合物加熱6小時。隨後冷卻至室溫及過濾。減壓下濃縮濾液及藉由1：1石油醚/乙酸乙酯(20 ml)清洗殘餘物以得到呈白色固體形式之131j(556 mg，80%)。MS-ESI：[M+H]+ 696.3
實例131 3-[5-氟-2-(羥甲基)-3-[1-甲基-5-[[5-[(2S)-2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]-2-吡啶基]胺基]-6-側氧基-3-吡啶基]苯基]-7,7-二甲基-6,8-二氫環戊并[3,4]噻吩并[1,3-d]噠-4-酮131
在20℃下將硼氫化鈉(110 mg，3.0 mmol)添加至131j(520 mg，0.75 mmol)之甲醇(10 ml)溶液。將反應混合物攪拌30分鐘及藉由水(3 ml)淬冷。隨後減壓下濃縮及藉由反相製備型HPLC純化殘餘物以得到131(340 mg，65%)。MS-ESI：[M+H]+ 698.3。1H NMR(500 MHz,DMSO-d 6)δ 8.55(d,J=2.5 Hz,1H),8.46(s,1H),8.41(s,1H),7.85(d,J=2.5 Hz,1H),7.40-7.30(m,4H),7.23(d,J=9.0 Hz,1H),4.60(t,J=5.0 Hz,1H),4.57-4.53(m,2H),4.46(t,J=6.0 Hz,1H),4.41(t,J=6.0 Hz,1H),4.30-4.29(m,2H),3.68-3.65(m,1H),3.58(s,3H),3.40-3.38(m,1H),3.10-3.07(m,1H), 2.95-2.94(m,1H),2.91-2.89(m,2H),2.80-2.78(m,2H),2.54-2.52(m,1H),2.34-2.30(m,2H),2.20-2.16(m,1H),1.27(s,6H),0.93(d,J=6.5 Hz,3H)。
實例901 生物化學Btk試驗
以下係可用於測試式I化合物之標準生物化學Btk激酶試驗之大致步驟。製備master mix minus Btk酶，其含有1×細胞信號傳導激酶緩衝劑(25 mM Tris-HCl，pH 7.5，5 mM β-甘油磷酸酯，2 mM二硫蘇糖醇，0.1 mM Na3VO4，10 mM MgCl2)、0.5 μM原PTK生物素化肽基質2及0.01% BSA。製備master mix plus Btk酶，其含有1×細胞信號傳導激酶緩衝劑、0.5 μM PTK生物素化肽基質2、0.01% BSA及100 ng/孔(0.06 mU/孔)Btk酶。Btk酶係如下製備：將具有C-末端V5及6x His標籤之全長度人野生型Btk(寄存編號NM-000061)次選殖至pFastBac載體中用於製造攜帶此抗原決定部位標籤Btk之桿狀病毒。桿狀病毒之傳代係基於詳述在其公開協議「Bac-to-Bac Baculovirus Expression Systems」(Cat.Nos.10359-016及10608-016)中之Invitrogen說明進行。使用第3繼代病毒感染Sf9細胞以過表現重組Btk蛋白質。隨後利用Ni-NTA管柱將Btk蛋白質純化至均一。基於敏感Sypro-Ruby染色，最終蛋白質製劑之純度大於95%。製備200 μM之ATP水溶液及藉由1 N NaOH調節至pH 7.4。將1.25 μL量之化合物-5% DMSO溶液轉移至96-孔1/2面積Costar聚苯乙烯板。藉由11-點劑量-反應曲線(起始濃度為10 μM；1：2稀釋)單個測試化合物。將18.75 μL量之 master mix minus酶(作為負對照)及master mix plus酶轉移至96-孔1/2面積costar聚苯乙烯板之合適孔中。將5 μL之200 μM ATP添加至96-孔1/2面積Costar聚苯乙烯板中之彼混合物，最終ATP濃度為40 μM。使反應在室溫下培養1小時。藉由含有30 mM EDTA、20 nM SA-APC及1 nM PT66 Ab之Perkin Elmer1×偵測緩衝劑終止反應。利用時間解析螢光度，藉由Perkin Elmer Envision，使用激勵濾波器330 nm、發射濾波器665 nm及第2發射濾波器615 nm閱讀該板。隨後計算IC50值。或者，可使用Lanthascreen試驗，透過磷酸化肽產物之量化評價Btk活性。在肽產物上之螢光素與偵測抗體上之鋱之間發生之FRET(螢光共振能量轉移)將隨著Btk抑制劑之添加而下降，添加Btk抑制劑使肽之磷酸化下降。於25 μL之最終反應體積中，藉由50 mM Hepes pH 7.5、10 mM MgCl2、2 mM MnCl2、2 mM DTT、0.2 mM NaVO4、0.01% BSA及0.4 μM螢光素聚-GAT培養Btk(h)(0.1 ng/25 μl反應)。藉由添加ATP至25 μM(ATP之Km)來引發反應。在室溫下培養60分鐘後，藉由30分鐘內在室溫下添加最終濃度為2 nM之Tb-PY20偵測抗體-60 mM EDTA來終止反應。在Perkin Elmer Envision上，藉由340 nM在495 nm及520 nm下激勵及發射來確定偵測。示例性Btk抑制IC50值出示於表1、2及3中。
實例902 Ramos細胞Btk試驗
以下係可用於測試式I化合物之標準細胞Btk激酶試驗之另一大致步驟。在測試化合物存在下，將Ramos細胞以 0.5×107細胞/ml之密度在37℃下培養1小時。隨後透過與10 μg/ml抗人IgM F(ab)2在37℃下一起培養5分鐘來刺激細胞。將細胞粒化、溶解及對澄清溶胞產物進行蛋白質試驗。使各樣品之等量蛋白質接受SDS-PAGE及西方墨點法，使用抗磷Btk(Tyr223)抗體(Cell Signaling Technology #3531；Epitomics，cat.#2207-1)或抗磷Btk(Tyr551)抗體(BD Transduction Labs #558034)評估Btk自體磷酸化或使用抗Btk抗體(BD Transduction Labs #611116)控制在各溶胞產物中之Btk總量。
實例903 B-細胞增殖試驗
以下係可用於測試式I化合物之標準細胞B-細胞增殖試驗之大致步驟。使用B-細胞單離套組(Miltenyi Biotech,Cat# 130-090-862)自8至16週大Balb/c小鼠之脾臟純化B細胞。將測試化合物於0.25% DMSO中稀釋及藉由2.5×105經純化小鼠脾臟B-細胞培養30分鐘，然後添加10 μg/ml抗小鼠IgM抗體(Southern Biotechnology Associates Cat# 1022-01)，最終體積為100 μl。培養24小時後，添加1 μCi 3H-胸苷及將板再培養36小時，然後利用針對SPA[3H]胸苷攝取試驗系統(Amersham Biosciences # RPNQ 0130)之製造商協議收集。藉由microbeta計數儀(Wallace Triplex 1450，Perkin Elmer)數出基於SPA-粒的螢光度。
實例904 T細胞增殖試驗
以下係可用於測試式I化合物之標準T細胞增殖試驗之大致步驟。利用Pan T細胞單離套組(Miltenyi Biotech,Cat# 130-090-861)自8至16週大Balb/c小鼠之脾臟純化T細胞。將測試化合物於0.25% DMsO中稀釋及與2.5×105經純化小鼠脾臟T細胞以最終體積100 μl一起在各以10 μg/ml抗CD3(BD #553057)及抗CD28(BD #553294)抗體預塗覆之平坦透明底板中，在37℃下培養90分鐘。培養24小時後，添加1 μCi 3H-胸苷及將板再培養36小時，然後利用針對SPA[3H]胸苷攝取試驗系統(Amersham Biosciences # RPNQ 0130)之製造商協議收集。藉由microbeta計數儀(Wallace Triplex 1450，Perkin Elmer)數出基於SPA-粒的螢光度。
實例905 CD86抑制試驗
以下係可用於測試式I化合物之B細胞活性抑制標準試驗之大致步驟。藉由紅血細胞溶解自8至16週大Balb/c小鼠之脾臟純化總小鼠脾細胞(BD Pharmingen #555899)。將測試化合物稀釋至0.5% DMSO及與1.25×106脾細胞以最終體積200 μl一起在平坦透明底板(Falcon 353072)中，在37℃下培養60分鐘。隨後藉由添加15 μg/ml IgM(Jackson ImmunoResearch 115-006-020)刺激細胞，及在37℃，5% CO2下培養24小時。培養24小時後，將細胞轉移至錐狀底透明96-孔板及藉由在1200 x g下離心5分鐘粒化。藉由CD16/CD32(BD Pharmingen #553142)預封阻細胞，接著藉由CD19-FITC(BD Pharmingen #553785)、CD86-PE(BD Pharmingen #553692)及7AAD(BD Pharmingen #51-68981E)進行三重染色。在BD FACSCalibur上分類細胞及在CD19+/7AAD-群體上閘控。測量對於測試化合物濃度之在 閘控群體上之CD86表面表現水平。
實例906 B-ALL細胞存活試驗
以下係使用XTT讀數測量活細胞數量之標準B-ALL(急性淋巴母細胞白血病)細胞存活研究之步驟。此試驗可用於測試式I化合物抑制在培養物中之B-ALL細胞存活之能力。可使用之一種人類B細胞急性淋巴母細胞白血病株係SUP-B15，其係可獲自ATCC之人類前B細胞ALL株。
將SUP-B15前B-ALL細胞塗佈在多個96-孔微滴定板中，在100 μl Iscove培養基+20% FBS中，濃度為5×105細胞/ml。隨後與最終濃度為0.4%之DMSO一起添加測試化合物。將細胞在37℃下，藉由5% CO2培養至多3天。3天後，將細胞1：3地分配至含有測試化合物之新96-孔板中及再生長3天。各經過24小時後，將50 μl XTT溶液添加至複製96-孔板中之一者及依照製造商指引，在2、4及20小時時獲取吸光度讀數。隨後獲取在該試驗之線性範圍內(0.5至1.5)之僅藉由DMSO處理之細胞之OD讀數及比較僅藉由DMSO處理之細胞，測量在化合物處理孔中活細胞之百分比。
實例907 CD69全血試驗
自符合以下條件之健康志願者獲得人血：1週不服藥、非吸煙者。藉由靜脈穿刺將血液(約20 ml以測試8種化合物)收集至具有肝素鈉之Vacutainer®(Becton,Dickinson and Co.)試管中。
將式I化合物於DMSO中之10 mM溶液以1：10於100% DMSO中稀釋，隨後以三倍連續稀釋方式於100% DMSO中 稀釋以獲得十點劑量-反應曲線。將該等化合物以1：10進一步於PBS中稀釋及隨後將5.5 μl各化合物之樣液一式兩份地添加至2 ml 96-孔板；添加5.5 μl之10% DMSO-PBS溶液作為對照及無刺激物孔。將人類全血-HWB(100 μl)添加至各孔。混合後，將板在37℃、5% CO2、100%濕度下培養30分鐘。將山羊F(ab')2抗人IgM(10 μl之500 μg/ml溶液，50 μg/ml最終濃度)添加至各孔(除無刺激物孔外)，並混合及將板再培養20小時。在20小時培養結束時，使樣品與螢光標記抗體在37℃、5% CO2、100%濕度下一起培養30分鐘。包括誘導對照、未染色及單染色，以補償調節及初始電壓設定。隨後藉由PharM LyseTM(BD Biosciences Pharmingen)，依照製造商說明溶解樣品。隨後將樣品轉移至適合在LSRII機上之BD Biosciences HTS 96孔系統上作業之96孔板。所獲得之數據及平均螢光強度值係利用BD Biosciences DIVA軟體獲得。利用FACS分析軟體(Flow Jo)對結構進行初始分析。測試化合物之抑制濃度(IC50、IC70、IC90等)定義為使CD69細胞之陽性(亦係藉由抗IgM刺激之CD20陽性)百分比下降例如50%時之濃度(減去8個無刺激物背景之孔之平均值後，8個對照孔之平均值)。IC70值係藉由Prism version 5，使用非線性回歸曲線擬合計算並顯示於表1及2中。
實例908 體外細胞增殖試驗
式I化合物之效力係藉由採用以下協議之細胞增殖試驗 測量(Mendoza等人(2002)Cancer Res.62：5485-5488)。CellTiter-Glo®發光細胞存活率試驗，包括試劑及協議可自市面購置(Promega Corp.,Madison,WI,Technical Bulletin TB288)。該試驗評估化合物進入細胞及抑制細胞增殖之能力。試驗原理係基於藉由同質試驗中存在之ATP量化對所存在之活細胞之數量予以確定，在該同質試驗中Cell-Titer Glo試劑之添加導致細胞溶解及藉由螢光素酶反應產生光訊號。光訊號與存在之ATP量成比例。
將B細胞淋巴瘤細胞株(BJAB、SUDHL-4、TMD8、OCI-Ly10、OCI-Ly3、WSU-DLCL2)之板塗佈至384-孔板之正常生長培養基中，及將連續稀釋之BTK抑制劑或DMSO單獨添加至各孔。在培養96小時後藉由CellTiter-Glo®(Promega)評估細胞存活率。數據係以BTK抑制劑處理細胞相對DMSO處理對照細胞之相對細胞存活率之形式出示。數據點係在各劑量濃度下4次重複之平均數。誤差條表示平均數之SD。
步驟：第1天-接種細胞板(384孔黑色、透明底、微透明、TC板，具有獲自Falcon #353962之蓋)，收集細胞，在1000細胞/54 μl/孔下將細胞接種至384孔細胞板中以進行3天試驗。細胞培養基：RPMI或DMEM高葡萄糖，10%胎牛血清，2 mL L-榖胺醯胺，P/S。培養O/N，在37℃、5% CO2下。
第2天-將藥物添加至細胞，化合物稀釋，DMSO板(1：2連續，共9個點)，在96孔板之第2列中添加20 μl之10 mM 化合物。使用Precision對整個板實施連續1：2稀釋(10 μl+20 μl 100% DMSO)，以獲得共9個點。培養基板96-孔錐狀底聚丙烯板，獲自Nunc(cat.#249946)(1：50稀釋)，將147 μl培養基添加至所有孔。使用Rapidplate將DMSO板中各孔之3 μl DMSO+化合物轉移至培養基板上之各對應孔。
將藥物添加至細胞，細胞板(1：10稀釋)，將6 μl培養基+化合物直接添加至細胞(在細胞上已有54 μl培養基)。在37℃、5% CO2下，在不經常打開之培養器中培養3天。
第5天-板顯色，在室溫下融解Cell Titer Glo緩衝劑。將細胞板移出37℃及平衡至室溫。經過約30分鐘。將Cell Titer Glo緩衝劑添加至Cell Titer Glo基質(瓶對瓶)。將30 μl Cell Titer Glo試劑(Promega cat.#G7572)添加至各細胞孔。置於板振盪器上約30分鐘。藉由Analyst HT Plate閱讀器讀出發光度(半秒/孔)。
細胞存活率試驗及組合試驗：將細胞以1000至2000細胞/孔接種於384-孔板中維持16小時。在第二天，在96孔板中，使用DMSO進行九次連續1：2化合物稀釋。利用Rapidplate機器(Zymark Corp.,Hopkinton,MA)將化合物進一步稀釋至生長培養基中。隨後將稀釋之化合物一式四份地添加至384-孔板之孔中及在37℃及5% CO2下培養。4天後，使用Cell-Titer Glo(Promega)，依照製造商說明，藉由發光度測量活細胞之相對量及藉由Wallac Multilabel Reader(PerkinElmer,Foster City)讀取。利用Prism® 4.0軟體(GraphPad,San Diego)計算EC50值。在所有試驗中，式I 化合物及化學治療劑係同時或(前後)隔4小時分開地添加。
另一示例性體外細胞增殖試驗包括以下步驟：
1.將培養基中含有約104細胞之100 μl細胞培養物樣液置於384-孔不透明壁板之各孔中。
2.製備含有培養基且不含細胞之對照孔。
3.將化合物添加至實驗孔及培養3至5天。
4.將盤平衡至室溫，維持約30分鐘。
5.添加體積等於各孔中存在之細胞培養基之體積之CellTiter-Glo試劑。
6.在軌道振盪器上將內容物混合2分鐘以誘導細胞溶解。
7.在室溫下將板培養10分鐘以使光訊號穩定化。
8.記錄發光度及在圖中表示為RLU=相對發光單位。
雖然為清晰理解已藉由說明及實例之方式在某程度上詳細地描述本發明，然而該等描述及實例不應視為限制本發明之範圍。因此，可將所有合適修改及等效內容視為屬於由以下申請專利範圍所界定之本發明範圍內。在本文中引述之所有專利案及科學文獻之公開內容係明確地以引用其等全文之方式併入本文。
圖1顯示(S)-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡啶并[3,4-b]吲嗪-1(2H)-酮101之製備，以中間物2,6-二溴-4-氟苯甲 醛101a開始。
圖2顯示(S)-5-[5-氟-2-(羥甲基)-3(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基]-8-硫代-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-6-酮102之製備，以中間物(S)-[4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)-哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-{6-側氧基-8-硫代-4,5-二氮雜三環[7.4.0.02,7]十三烷-1(9),2(7),3-三烯-5-基}苯基]甲基乙酸酯102a開始。
圖3顯示(2S)-10-[5-氟-2-(羥甲基)-3-[1-甲基-5-({5-[2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基]吡啶-2-基}胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基]-苯基]-4,4-二甲基-1,10-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-2(6),7-二烯-9-酮103之製備，以中間物(E)-3-(2-氯-4,4-二甲基環戊-1-烯基)丙烯酸乙酯103a開始。
圖4a顯示2-(3-(5-(5-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮104之製備，以中間物(2R,5S)-2,5-二甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁酯104a開始。
圖4b顯示自3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮104j製備4-氟-2-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫-吡嗪并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼烷-2-基)苄基乙酸酯104o。
圖5顯示(S)-2-(3-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮105之製備，以中間物(S)-2-(5-(5-(2-乙基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-4-氟-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯105a開始。
圖6顯示(S)-2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮106之製備，以中間物(S)-4-氟-2-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-6-(1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)苄基乙酸酯106a開始。
圖7顯示(S)-2-(3-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮107之製備，以中間物(S)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁基酯107a開始。
圖8顯示(R)-2-(3-(5-(5-(3,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)-苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮108之製備，以中間物(R)-2-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁基酯108a開始。
圖9顯示(R)-2-(3-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮109之製備，以中間物(R)-3-甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁基酯109a開始。
圖10顯示(S)-2-(3-(5-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-5-氟-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮110之製備，以中間物(S)-5-溴-3-(5-(2,4-二甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基吡啶-2(1H)-酮110a開始。
圖11顯示2-(5-氟-3-(5-(5-(3-(氟甲基)-4-甲基哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-1-甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)-2-(羥甲基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮111之製備，以中間物4-苄基哌-1,2-二甲酸1-第三丁基2-甲基酯111a開始。
圖12顯示2-(5-氟-2-(羥甲基)-3-(1-甲基-5-(5-(9-甲基-7-氧雜-3,9-二氮雜-雙環[3.3.1]壬-3-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苯基)-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-1(2H)-酮112之製備，以中間物N,N-二溴苯磺醯胺112a開始。
圖13顯示(S)-2-(7,7-二氟-1-側氧基-3,4,6,7,8,9-六氫吡嗪并[1,2-a]吲哚-2(1H)-基)-4-氟-6-(1-甲基-5-(5-(2-甲基-4-(氧雜環丁-3-基)哌-1-基)吡啶-2-基胺基)-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-基)苄基乙酸酯113q之製備，以中間物(3S)-3- 甲基-4-(6-硝基吡啶-3-基)哌-1-甲酸第三丁基酯113a開始。
圖14顯示自中間物1H-吡咯-2-甲酸乙酯製備113o。
圖15顯示自中間物3-甲基環戊-2-烯酮製備2-溴-6-{4,4-二甲基-9-側氧基-7-硫代-10,11-二氮雜三環[6.4.0.02,6]十二烷-1(8),2(6),11-三烯-10-基}-4-氟苯甲醛131i。

Claims (20)

  1. 一種選自式I之化合物 或其立體異構體、互變異構體或醫藥可接受鹽，其中：R1、R2及R3獨立地選自H、F、Cl、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH及C1-C3烷基；R4選自H、F、Cl、CN、-CH2OH、-CH(CH3)OH、-C(CH3)2OH、-CH(CF3)OH、-CH2F、-CHF2、-CH2CHF2、-CF3、-C(O)NH2、-C(O)NHCH3、-C(O)N(CH3)2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHC(O)CH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH2CH2OH、環丙基、環丙基甲基、1-羥基環丙基、咪唑基、吡唑基、3-羥基-氧雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基、及氮雜環丁-1-基； R5選自-CH3、-CH2CH3、-CH2OH、-CH2F、-CHF2、-CF3、-CN、及-CH2CH2OH；或兩個R5基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；或R5基團與R8基團形成3-、4-、5-或6-員碳環或雜環；n為1、2、3或4；R6選自H、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、及-OH；R7選自結構： 其中波浪線指示連接位點；R8選自-CH3、-S(O)2CH3、環丙基、氮雜環丁-3-基、氧雜環丁-3-基、及嗎啉-4-基；X1係CR9或N，其中R9選自H、F、Cl、-CH3、-CH2CH3、-CH2CH2OH、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、及-OCH2CH2OH；X2係CR10或N，其中R10選自H、-CH3、-CH2CH3、及-CH2CH2OH；及Y1及Y2獨立地選自CH及N，其中Y1及Y2不同時為N。
  2. 如請求項1之化合物，其中X係CR9，及R9係H。
  3. 如請求項1之化合物，其中X係N。
  4. 如請求項1之化合物，其中R4係-CH2OH。
  5. 如請求項4之化合物，其中R2係F。
  6. 如請求項5之化合物，其中R1及R3係H。
  7. 如請求項1之化合物，其中R6係CH3。
  8. 如請求項1之化合物，其選自下表中之化合物：
  9. 如請求項1之化合物，其選自下表中之化合物：
  10. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至9中任一項之化合物及醫藥可接受之載劑、助流劑、稀釋劑或賦形劑。
  11. 如請求項10之醫藥組合物，其進一步包含治療劑。
  12. 一種製造醫藥組合物之方法，其包含將如請求項1至9中任一項之化合物與醫藥可接受之載劑組合。
  13. 一種如請求項10之醫藥組合物之用途，其係用於製造供治療選自免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能障礙及神經疾病，及由布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶介導之疾病或病症之藥劑。
  14. 如請求項13之用途，其中該疾病或病症係免疫疾病。
  15. 如請求項14之用途，其中該免疫疾病係類風濕性關節炎。
  16. 如請求項13之用途，其中該疾病或病症係全身及局部發炎、關節炎、與免疫抑制相關之發炎、器官移植排斥、過敏、潰瘍性結腸炎、克隆氏(Crohn's)病、皮膚炎、哮喘、全身性紅斑狼瘡、修格蘭氏(Sjögren's)症候群、多發性硬化、硬皮病/全身性硬化、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、抗嗜中性白血球細胞質抗體(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、牛皮癬。
  17. 如請求項13之用途，其中該疾病或病症係癌症，選自乳癌、卵巢癌、子宮頸癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、食道癌、喉癌、神經膠質母細胞瘤、神經胚細胞瘤、胃癌、皮膚癌、角質棘皮瘤、肺癌、表皮樣癌、大細胞癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、小細胞癌、肺腺癌、骨癌、結腸癌、腺瘤、胰癌、腺癌、甲狀腺癌、濾泡(follicular)癌、未分化癌、乳頭狀癌、精細胞瘤、黑色 素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌及膽道癌、腎癌、胰癌、骨髓疾病、淋巴瘤、毛細胞癌、頰腔癌、鼻咽癌、咽癌、脣癌、舌癌、口腔癌、小腸癌、結腸直腸癌、大腸癌、直腸癌、腦及中樞神經系統癌、霍奇金氏(Hodgkin's)癌、白血病、支氣管癌、甲狀腺癌、肝及肝內膽管癌、肝細胞癌、胃癌、膠質瘤/神經膠質母細胞瘤、子宮內膜癌、黑色素瘤、腎臟及腎盂癌、膀胱癌、子宮體癌、子宮頸癌、多發性骨髓瘤、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、淋巴細胞性白血病、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、骨髓性白血病、口腔及咽癌、非霍奇金氏淋巴瘤、黑色素瘤及結腸絨毛腺瘤。
  18. 如請求項13之用途，其中該藥劑係與另一治療劑組合使用，該另一治療劑選自抗發炎劑、免疫調節劑、化學治療劑、趨神經因子(neurotropic factor)、治療心血管疾病之藥劑、治療肝病之藥劑、抗病毒劑、治療血液病之藥劑、治療糖尿病之藥劑及治療免疫缺陷病之藥劑。
  19. 一種治療由布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶介導之病症之套組，其包含：a)如請求項10之醫藥組合物；及b)使用說明。
  20. 如請求項10之醫藥組合物，其用作治療選自免疫疾病、癌症、心血管疾病、病毒感染、發炎、代謝/內分泌功能障礙及神經疾病，及由布魯頓氏(Bruton's)酪胺酸激酶介導之疾病或病症之藥劑。
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