TW201318647A - 蘭花萃取物之萃取方法及其應用 - Google Patents

Abstract

本發明提供一種蘭花萃取物之萃取方法，其萃取方法包括：以甲醇萃取蘭花而得到蘭花甲醇萃取物，加入乙酸乙酯及水萃取而得蘭花乙酸乙酯萃取物及蘭花水層萃取物，將蘭花水層萃取物加入正丁醇及水萃取而得蘭花正丁醇萃取物；其中蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物具有抑制酪胺酸酶的活性及抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效。

Description

蘭花萃取物之萃取方法及其應用

本發明提供一種蘭花萃取物之萃取方法，而該蘭花萃取物具有抑制酪胺酸酶及具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應的活性。

皮膚的顏色，主要是由表皮內之黑色素(Melanin)、真皮內之胡蘿蔔素以及真皮微血管中之血液所造成。黑色素細胞(Melanocytes)位於皮膚基底層細胞內，為單細胞的分泌器官，其細胞呈圓形，黑色素細胞由長而分支的管狀突，這些突起在表皮細胞中穿梭。黑色素於表皮的深層內形成，並向皮膚的表面移動，但黑色素細胞本體並不會跟著移動，而是由角質細胞負責轉移的工作，角質細胞將這些黑色素轉至皮膚的表面，以形成天然的保護屏障。

黑色素只由黑色素細胞製造，這些細胞散置於表皮的基底細胞之間，黑色素細胞可合成黑色素顆粒，分泌黑色素，使人體呈現不同膚色。黑色素顆粒由黑色素細胞合成後，經由兩種主要的途徑進行移轉，一是向上轉移至角質細胞，進入表皮層，最後隨著皮膚剝落，另一種為向下轉移到真皮內而被黑色素吞噬細胞所吞噬。

常曬太陽會促進黑色素細胞內酪胺酸酶活性，而增加黑色素產生，皮膚經由黑色素的合成路徑(Raper-Mason pathway)，產生自發性化學反應與酵素催化作用而形成黑色素，黑色素為一種高分子的複合體，當皮膚被紫外線照射時，黑色素細胞內的酪胺酸酶(tyrosinase)會被活化，加速催化細胞內酪胺酸(tyrosine)氧化為二羥基苯基丙胺酸(dihydroxyphenylalanine，簡稱DOPA)，而二羥基苯基丙胺酸(DOPA)再由酪胺酸酶催化為多巴醌(dopachrome)，黑色素的生合成路徑牽涉到藉由酪胺酸酶的酪胺酸催化羥基化為L-3,4-二羥基苯基丙胺酸(L-3,4-dihydroxyphenylalanine,L-DOPA)及L-DOPA轉變為多巴醌(dopachrome)；而多巴醌是經由氧化反應轉變為黑色素，透過一系列的氧化反應，由多巴醌形成真黑色素(eumelanin)。

酪胺酸酶(tyrosinase)為一種含銅離子的多酚氧化酶，由黑色素細胞合成，其活性會因為來源不同而有所不同，酪胺酸酶與酪胺酸(tyrosine)的活性鍵結位置有三處活性中心銅離子，現今研究有關抑制酪胺酸酶活性的機轉上，主要有兩種方式：

(1)　酪胺酸酶之去活化

此反應機轉主要是因為酵素分子結構上帶有銅離子，抑制物藉以利用類似銅螯合劑(copper-chelating agents)的方式來螯合銅離子或與銅離子相互競爭，藉以減少銅離子之結合力，進而降低酪胺酸酶之活性，以阻斷黑色素生成機制，此抑制類型最具代表的成分為麴酸(kojic acid)。

(2)　競爭性取代酪胺酸酶受質

此反應機轉為抑制物與酪胺酸或多巴等受質相互競爭和酪胺酸酶進行反應，導致與酪胺酸酶作用的受質減少，而減少黑色素形成，此競爭性取代受質類型最具代表的成分包括對苯二酚(hydroquinone)、熊果素(arbutin)。

抑制一氧化氮自由基(NO)的生成為評估抗發炎活性的主要方法之一，其分析原理為利用LPS(lipopolysaccharide)刺激老鼠巨噬細胞RAW264.7，模擬發炎反應時由誘導型一氧化氮生成酵素(inducible nitric oxide synthase,iNOS)，iNOS會產生大量自由基。並利用山肉桂精油及其成分進行清除NO自由基的能力來評估成分是否有抗發炎活性。

蘭科(學名：Orchidaceae)植物俗稱蘭花，亦叫胡姬花，是開花植物中最大、最具多樣性的科，蘭科植物都是多年生草本，花因與昆蟲的授粉模式而特化出唇瓣，花器構造複雜，有些品種的花朵大型而美麗，而且具有不同的顏色和形狀，因此常被作為花卉栽培觀賞；在臺灣，蘭花已成主要的花卉作物，但因花卉的保存期有其一定的限制，因此如何提高蘭花附加價值成為蘭花產業上最重要的課題之一；然而，目前並無任何文獻提出蘭花萃取物具有優異的酪胺酸酶抑制活性及抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應，因此仍需要以嚴謹而縝密的科學性數據來證明，蘭花萃取物的功效驗證。

目前衛生署公告可使用的美白成分中包括麴酸(kojic acid)、熊果素(arbutin)、鞣花酸(ellagic acid)及洋甘菊抽取物(chamomile ET)等，如何尋找除了上述的美白有效成分以外的天然物萃取成分，就成為了主要追尋的目標，而本案發明人經多年研究，發現蘭花萃取物具有抑制酪胺酸酶的活性及具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應，蘭花萃取物在美白的應用上提供另一個更佳的選擇。

是以，本案發明人鑑於上述，以及的可能性，乃亟思加以改良創新，並經多年苦心孤詣潛心研究後，終於成功研發完成本件蘭花萃取物之萃取方法及其應用。

本說明書中所述之所有技術性及科學術語，除非另外有所定義，皆為該所屬領域具有通常技藝者可共同瞭解的意義。

本發明之主要目的在於提供一種蘭花萃取物之萃取方法，而該蘭花萃取物具有抑制酪胺酸酶及具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應的活性。

本發明提供一種蘭花萃取物的萃取方法，其萃取步驟包括：

步驟一：以水或甲醇萃取蘭花而得到蘭花水萃取物或蘭花甲醇萃取物；

步驟二：將步驟一所得之蘭花甲醇萃取物加入乙酸乙酯及水萃取而得蘭花乙酸乙酯萃取物及蘭花水層萃取物；及

步驟三：將步驟三所得之蘭花水層萃取物加入正丁醇及水萃取而得蘭花正丁醇萃取物。

根據此萃取方法，其中蘭花甲醇萃取物、乙酸乙酯及水係以體積濃度百分比1：1：1方式混合；蘭花水層萃取物、正丁醇及水係以體積濃度百分比1：1：1方式混合；而其中蘭花水萃取物、蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物具有抑制酪胺酸酶的活性及抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效。

本發明提供一種包含蘭花萃取物的醫藥組合物或化粧保養品組合物，其包含以上述蘭花萃取方法所得之蘭花萃取物及醫藥學上可接受之賦形劑。

根據此包含蘭花萃取物的醫藥組合物或化粧保養品組合物，其中該蘭花萃取物係為蘭花水萃取物、蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物；而且該醫藥組合物具有抑制酪胺酸酶的活性及抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效；而醫藥學上可接受之賦形劑為稀釋劑、填充劑、結合劑、崩解劑或潤滑劑。

本發明醫藥組合物或化粧保養品組合物可全身性投藥，即以錠劑、膠囊、糖漿、粉末、顆粒、乳液、乳膏等的形式口服投藥，或局部投藥，或穿皮投藥。

本發明係以下面的實施例予以示範闡明，但本發明不受下述實施例所限制。

實施例一、蘭花的萃取方法 1.　有機溶劑萃取物樣品之製備：

將1公斤不同品系的蘭花分別為CC23(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC18(朵麗蝶蘭屬蘭花)、CC26(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC16(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC11(蝴蝶蘭屬蘭花)乾燥蘭花樣品粉碎後以200 mL甲醇重複萃取5次，得到465.2 g的粗萃物(crude extract；CE)與乙酸乙酯(ethyl acetate；EA)、一次水以1:1:1的方式混合均勻，利用分液漏斗分離萃取，靜置一段時間後取乙酸乙酯層即為蘭花乙酸乙酯萃取(EA)，其水層再與正丁醇(1-butanol；BuOH)混合均勻，靜置一段時間後分別取水層與正丁醇取部份進行細胞實驗(如表一)。

實施例二、蘭花萃取物對於酪胺酸酶活性抑制的影響 1.　材料與方法： (1)處理組(蘭花萃取物)：

探討不同萃取物對抑制酪胺酸酶形成L-Dopachrome的能力，並以麴酸作為對照組。取20 μL的蘭花萃取物，加入60 μL 25 mM(pH6.8)的磷酸緩衝溶液及20 μL的酪胺酸酶於96孔盤中混合，並靜置室溫中10分鐘後，再加入100 μL 3.8 mM L-Dopa水溶液，於490 nm測吸光值(B)。

(2)空白組：

步驟與處理組相同，但以等體積萃取液所使用的溶劑取代萃取液(A)。

2.　結果：

本實驗使用之蘭花萃取物分別以熱水(Hot water)、水(H₂O)、95%乙醇(EtOH)、正丁醇(BuOH)及乙酸乙酯(EA)萃取。圖一A的結果顯示不同濃度不同溶劑抽取之蘭花萃取物或麴酸(Kojic acid)對酪胺酸酶活性抑制率之比較，熱水萃取液在濃度100 mg/mL下，僅具有28.6%的酪胺酸酶活性抑制率；水萃取的蘭花萃取物，只在濃度100 mg/mL下，有49.2%的酪胺酸酶活性抑制率，而濃度在10 mg/mL與50 mg/mL對酪胺酸酶活性則不具抑制率；95%乙醇萃取的蘭花萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下，對酪胺酸酶活性抑制率分別為28.6、59.8及75.7%；1-丁醇萃取的蘭花萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下，對酪胺酸酶活性抑制率分別為24.8、60.6及78%；乙酸乙酯所萃取的蘭花萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下之酪胺酸酶活性抑制率分別為46、85.5及100%，顯示以95%乙醇、1-丁醇及乙酸乙酯所萃取的蘭花萃取物對酪胺酸酶活性皆具有較佳抑制率，尤其在濃度為100 mg/mL下。以麴酸作為對照組，麴酸於濃度0.028、0.114 mg/mL(200、800 μM)下對酪胺酸酶活性抑制率分別為34.3、72.5%。由圖中之結果可知當萃取物濃度越高則對酪胺酸酶活性的抑制率增加，其中又以乙酸乙酯所萃取的效果較為顯著。另外，圖一B使用不同品系的蘭花分別為CC23、CC18、CC26、CC16、CC11皆以95%乙醇萃取。圖一B的結果顯示不同品系以乙醇抽取之蘭花萃取物或麴酸(Kojic acid)對酪胺酸酶活性抑制率的比較，CC23萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下，對酪胺酸酶活性抑制率分別為7.6、38.3及55.9%；CC18萃取物只在濃度50、100 mg/mL下，才具有21.5、54.9%的酪胺酸酶活性抑制率，而濃度在10 mg/mL對酪胺酸酶活性則不具抑制率；CC26萃取物只在濃度50、100 mg/mL下，才具有13.2、54.8%的酪胺酸酶活性抑制率，而濃度在10 mg/mL對酪胺酸酶活性則不具抑制率；CC16萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下，對酪胺酸酶活性抑制率分別為3.3、35.3及70.6%；CC11萃取物於濃度10、50、100 mg/mL下之酪胺酸酶活性抑制率分別為8.4、43.1及72.8%，顯示以95%乙醇所萃取的CC16與CC11萃取物對酪胺酸酶活性皆具有較佳抑制率，尤其在濃度為100 mg/mL下。以麴酸作為對照組，麴酸於濃度0.114 mg/mL(800 μM)下對酪胺酸酶活性抑制率為73.6%。由圖中之結果可知不同品系的蘭花對於抑制酪胺酸酶活性有不同影響，當萃取物濃度越高則對酪胺酸酶活性的抑制率亦增加，其中又以CC16與CC11萃取物的效果較為顯著。

實施例三、蘭花萃取物之抗發炎活性分析 1.　細胞株與培養基

將小鼠RAW 264.7的巨噬細胞(macrophage)置於DMEM含10%胎牛血清(fetal bovine albumin,FCS)，100 U/ml penicillin，100 U/ml streptomycin的培養基中，於10 cm²的培養皿(petri dish)中培養，並置於37℃、含5% CO₂的恆溫培養箱中培養。當細胞長滿時，將其培養基抽乾並以PBS沖洗後輕敲培養皿，使細胞脫離培養皿底部再以新鮮的培養基進行繼代培養或分盤以供進行實驗。

2. Nitrite測定

將小鼠RAW 264.7的巨噬細胞(macropharge)種於24孔盤(well)中，使其細胞密度為1×10⁶/mL，分別加入不同濃度的蘭花萃取物和LPS(100 ng/mL)處理24小時後，根據Griess reaction原理進行nitrite的定量。取100 L的上層液加入100 L Griess reagent(包括1% sulphanilamide in 5% phosphoric acid和0.1% naphthylethylenediamine dihydrochloride in water)混合均勻後以enzyme-linked immunosorbent assay plate reader(ELISA reader)於波長550nm下測其吸光值。

3.　蛋白質電泳與西方墨點法

試劑配置：

(1)Gold lysis buffer(蛋白質萃取液)

Glycerol　10%(v/v)

Triton X-100　1%(v/v)

EDTA　5 mM

EGTA　1 mM

NaF　10 mM

NaCl　137 mM

Tris(pH 7.9)　20 mM

Sodium orthoranadate　1 mM

β-glycerl phosphate　100 μM

Sodium pyrophosphate(Na₂P₂O₇)　1 mM

取上述配好之Gold lysis buffer 50 ml加入一錠市售Protease inhibitor cocktail tablets即為萃取蛋白質用之Gold lysis buffer。

(2)Tris-glycin electrophoresis buffer(1X SDS-PAGE running buffer)

Tris-base　25 mM

Glycine　250 mM

SDS　0.1%

(3)Transfer buffer(for Western blotting)

Tris-base　60 g

Glycine　288 g

溶於4L二次水，即為5倍Transfer buffer stock solution。取5倍的Transfer buffer stock solution 1L，加入1L Methanol再加入3L的二次水，即為Transfer buffer working solution。

(4)Sample loading buffer(5X)

SDS　12%

Glycerol　35%

Bromophenol blue　0.02%

Tris-HCl(pH 6.8)　350 mM

2-mercaptoethanol　30%

(5)Blocking solution(for Western blotting)

Sodium azide　0.1%

Tris base　20 mM

Tween 20　0.2%

NaCl　125 mM

BSA　1%

(6) TPBS

1倍PBS含0.2% Tween 20。

(7)一次抗體稀釋液

將一次抗體以Block solution稀釋約1,000倍。

(8)二次抗體稀釋液

將二次抗體以TPBS稀釋約5,000倍。

4.　細胞總蛋白質之萃取：

將細胞株依1×106/ml之密度種入5cm培養皿中，過夜培養。依實驗設計分別處理不同濃度蘭花萃取液與LPS培養24小時後，取出後用無菌的15mL離心管收集培養液以3,000 rpm離心5分鐘，收集沉澱的細胞。以PBS清洗一次，再以3,000 rpm離心5分鐘，離心後依細胞沉澱量加入所需之gold lysis buffer以進行萃取，於冰上放置1小時(每5分鐘取出震盪一次)，於4℃下以12,000 rpm離心30分鐘後，取出上清液即為蛋白質。

5.　蛋白質濃度測定：

取0.4 μl蛋白質萃取液加入0.2 ml Bio-Rad protein assay dye reagent，暗處反應15分鐘後，以分光光譜儀測定595 nm處的吸光值。BSA solution(2 mg/ml)作為濃度標準液，換算樣本內的蛋白濃度。

6.　蛋白質電泳分析：

(1)電泳膠片製作

a.分離膠(Resolving gels)(15ml)

b.堆積膠(Stacking gels)(5ml)

(2)電泳操作

將電泳片裝置在電泳槽中，並填滿電泳緩衝液。取50 μg的蛋白質，加入5倍SDS protein loading buffer，以100℃加熱10分鐘後，於室溫下冷卻，將蛋白質樣本注入各個孔槽(well)中，進行電泳分析。先固定電壓在50V，直到蛋白質樣本進行到Stacking gel與Resolving gel的界面時，再將電壓調整到100V進行蛋白電泳分離。電泳分析結束後，進行轉印，以免疫墨點法(Immunoblotting)觀察其蛋白質表現量之變化。

轉印(transfer)：

取適當大小PVDF membrane(PVDF membrane先以methanol浸泡5分鐘後，再以蒸餾水清洗浸泡5分鐘)，操作時依序將3M paper、PVDF membrane、SDS-PAGE gel、3M paper由下往上重疊排放，再以玻棒輕壓以趕除氣泡，然後將其放入轉印槽中，整個裝置放入4℃冰箱中，以400 mA電流轉印過夜(800 mA電流轉印4小時)；待轉印完成後取下PVDF membrane，進行免疫墨點法。

7.　免疫墨點法(Immunoblotting)：

轉印好蛋白質的PVDF membrane先置於blocking solution中，於室溫下均勻振盪1小時(目的：競爭掉非特異性的蛋白質結合反應)。將一次抗體稀釋液(稀釋1000倍)加入PVDF membrane中，使其均勻的覆蓋於PVDF membrane上，於4℃冰箱中均勻振盪過夜。此時蛋白質己與一次抗體結合，再以適量的TPBS清洗3次，每次10分鐘。依不同的一次抗體，加入特異作用的二次抗體稀釋液(稀釋5000倍)，於室溫下反應1小時。反應之後，以適量的TPBS清洗3次，每次10分鐘。由於所使用的二次抗體上連結的是Horse-radish peroxidase，故使用enhanced-chemiluminescence(ECL)的酵素系統來偵測訊息的強弱。將ECL溶液(ECL1：ECL2=1：1)混合，並將PVDF正面浸潤於混合好之ECL溶液，反應1分鐘(視各種抗體而定)，再以保鮮膜完整包裹，使用FUJIFILM Bio Max light film壓片、洗片；由此法可觀測到某一特定蛋白質含量的變化。

8.　結果：

nitrite的半衰期相當短暫，但其會在幾秒內轉變成穩定的nitrite或nitrate。依據Griess reaction原理，將老鼠巨噬細胞RAW264.7處理不同濃度的蘭花萃取物和LPS後，培養24小時，收集細胞的上層液利用波長550 nm偵測其吸光值，再藉由標準曲線換算求得nitrite的濃度。結果如圖二A所示，在負控制組中(未處理蘭花萃取物和LPS)偵測所得的nitrite量非常低，而正控制組(單獨處理100 ng/ml的LPS)在24小時後所測得的nitrite則約為負控制組的35-45倍，顯示單獨處理LPS的確造成nitrite的大量產生。而RAW264.7細胞分別處理0、2.5、5、10、20和40 g/mL的蘭花萃取物和LPS(100 ng/ml)24小時後發現乙酸乙酯(ethyl acetate；EA)萃取物明顯抑制nitrite的產生；圖二B為不同品系的蘭花分別為CC23(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC18(朵麗蝶蘭屬蘭花)、CC26(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC16(蝴蝶蘭屬蘭花)、CC11(蝴蝶蘭屬蘭花)之抑制nitrite結果。

在正常的生理條件下，nitrite與PGE2並不會大量產生，但當巨噬細胞受到細菌或微生物侵入後，會受到脂多醣(Lipopolysaccharide)或細胞激素的刺激而誘導正常生理功能並不表現，與發炎息息相關iNOS及COX-2蛋白質的表現，進而引發一連串的發炎反應。結果由圖三顯示，蘭花萃取物能抑制LPS誘發巨噬細胞RAW264.7產生nitrite，因此接下來我們的實驗以西方墨點法來分蘭花萃取物在LPS誘發巨噬細胞RAW264.7所產生之iNOS及COX-2蛋白質的表現影響。

實驗結果由圖三A及B顯示，在細胞分別處理20和40 g/mL不同溶劑萃取的蘭花萃取物、不同品種的蘭花萃取物與LPS反應24小時候，不同溶劑萃取的蘭花萃取物以乙酸乙酯(ethyl acetate；EA)萃取物明顯抑制iNOS的蛋白質表現。另外在圖三B實驗結果得知CC16及CC11的萃取物在40 g/mL皆略微抑制iNOS的蛋白質表現。以Pterostilben與Resveratrol這已知的抗發炎天然物作為對照組，Pterostilbene於濃度20 g/mL下對iNOS的蛋白質表現有明顯抑制。由圖中之結果可知不同萃取溶劑與品系的蘭花對於抑制發炎相關蛋白質的表現有不同影響。

上列詳細說明係針對本發明之一可行實施例之具體說明，惟該實施例並非用以限制本發明之專利範圍，凡未脫離本發明技藝精神所為之等效實施或變更，均應包含於本案之專利範圍中。

綜上所述，本案所提供之蘭花萃取物之萃取方法及應用，具有上述多項抑制酪胺酸酶的活性及具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效，應已充分符合新穎性及進步性之法定發明專利要件，爰依法提出申請，懇請　貴局核准本件發明專利申請案，以勵發明，至感德便。

圖一、蘭花萃取物之酪胺酸酶活性抑制的影響。(A)不同溶劑的蘭花粗萃物(B)不同品種的蘭花。

圖二、蘭花萃取物對於LPS誘發巨噬細胞RAW264.7產生nitrite的影響(A)不同溶劑的蘭花粗萃物(B)不同品種的蘭花層分出的粗萃物。

圖三、蘭花萃取物抑制LPS誘發巨噬細胞RAW264.7所產生之iNOS及COX-2蛋白質的表現。在巨噬細胞RAW 264.7中分別加入不同濃度(A)不同溶劑的蘭花粗萃物(B)不同品種的蘭花和LPS(100 ng/mL)處理24小時後，利用西方墨點法分析。

Claims (10)

1. 一種蘭花萃取物，其係由下列步驟所製備而得：：步驟一：以水或甲醇萃取蘭花而得到蘭花水萃取物或蘭花甲醇萃取物；步驟二：將步驟一所得之蘭花甲醇萃取物加入乙酸乙酯及水萃取而得蘭花乙酸乙酯萃取物及蘭花水層萃取物；及步驟三：將步驟三所得之蘭花水層萃取物加入正丁醇及水萃取而得蘭花正丁醇萃取物。
2. 如申請專利範圍第1項所述之蘭花萃取物，其中蘭花甲醇萃取物、乙酸乙酯及水係以體積濃度百分比1：1：1方式混合。
3. 如申請專利範圍第1項所述之蘭花萃取物，其中蘭花水層萃取物、正丁醇及水係以體積濃度百分比1：1：1方式混合。
4. 如申請專利範圍第1項所述之蘭花萃取物，其中蘭花水萃取物、蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物具有抑制酪胺酸酶的活性。
5. 如申請專利範圍第1項所述之蘭花萃取物，其中蘭花水萃取物、蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效。
6. 一種包含蘭花萃取物的醫藥組合物或化粧保養品組合物，其包含以申請專利範圍第1項所得之蘭花萃取物及醫藥學上可接受之賦形劑。
7. 如申請專利範圍第6項所述之組合物，其中該蘭花萃取物係為蘭花水萃取物、蘭花甲醇萃取物、蘭花乙酸乙酯萃取物、或蘭花正丁醇萃取物。
8. 如申請專利範圍第6項所述之組合物，其中該包含蘭花萃取物的醫藥組合物或化粧保養品組合物具有抑制酪胺酸酶的活性。
9. 如申請專利範圍第6項所述之組合物，其中該包含蘭花萃取物的醫藥組合物或化粧保養品組合物具有抑制以LPS(lipopolysaccharide)誘導而引發的發炎反應功效。
10. 如申請專利範圍第6項所述之組合物，其中該賦形劑為稀釋劑、填充劑、結合劑、崩解劑或潤滑劑。