KR101531484B1

KR101531484B1 - 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101531484B1
Application number: KR1020130061416A
Authority: KR
Inventors: 장선일; 신준호; 박용균; 김현수; 강현주; 전인화; 목지예
Original assignee: 주식회사 아토큐앤에이
Priority date: 2013-05-30
Filing date: 2013-05-30
Publication date: 2015-06-26
Also published as: KR20140140715A

Abstract

본 발명은 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 대상의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법에 관한 것으로, 본 발명에 따른 고욤나무 잎 추출물은 피부 미백 효과가 탁월할 뿐만 아니라, 식물 추출물을 사용하기 때문에 안전하고, 고욤나무 잎 부위를 이용하므로 비교적 공급이 용이하여, 화장품 산업에 널리 활용될 수 있다.

Description

고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물{Cosmetic composition for whitening skin comprising extract of Diospyros lotus leaf as effective component}

본 발명은 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물 및 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 대상의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법에 관한 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌, 카로틴 및 헤모글로빈의 양에 따라 결정되는데, 이 중 멜라닌에 의한 영향이 가장 크며, 피부의 두께와 반사도 및 혈류량 등에 의해서도 영향을 받는다. 피부색을 결정하는 가장 중요한 요소인 멜라닌 색소는 인체에 정상적으로 존재하는 아미노산의 일종인 티로신(tyrosine)이 표피의 기저층에 존재하는 멜라닌 세포의 내부에 함유되어 있는 효소인 티로시나제(tyrosinase)에 의해 도파(dopa)로 전환되고, 계속되는 일련의 복잡한 산화과정을 통해 최종적으로 흑갈색의 중합체인 멜라닌이 생성되는 것이다.

티로시나제는 미생물, 식물 및 동물 등 거의 모든 생물 종에 분포되어 있으며, 활성 부위에 한 쌍의 구리 이온을 함유하고 있는 금속함유 단백질로, 티로시나제의 기능은 피부와 관련된 질병과 밀접한 관련성이 있어, 지금까지의 미백제에 관한 연구들은 주로 티로시나제의 활성 저해제를 개발하는데 치중되어 왔다. 동물에서는 멜라닌 합성의 이상에 따라 백반증과 색소침착과 같은 비정상적인 멜라닌 착색을 일으키며, 이는 더 심할 경우 피부암을 일으키기도 한다.

현재 알려져 있는 미백을 위한 방법들은 자외선 차단, 신호 억제, 유전자 발현 억제, 효소작용 억제, 색소 환원 및 각질층 제거 등이 있다. 미백 기능을 나타내는 대표적 단일 물질로는 알부틴, 코지산, 아스코르브산 및 히드로퀴논 등이 사용되고 있으며, 현재 자연 친화적인 미백제 개발을 위한 천연 물질의 탐색이 활발히 진행되고 있다.

고욤나무(Diospyros lotus L.)는 우리나라와 중국을 비롯한 아시아에서 자연적으로 자생하는 낙엽성 식물로, 전통의약분야에서는 성숙한 과일인 '고욤'은 진정, 진통, 수렴 및 변비치료에 사용되어 왔다. 고욤나무의 생화학적 성분은 지방산, 당, 플라보노이드 및 비휘발성 물질이 보고되었고, 최근에는 혈액의 항응고, 뇌세포 보호 작용, 항산화 및 항암 효과에 대해 보고된 바 있다.이러한 고욤나무의 생리활성 효과는 주로 고욤나무 과실 및 종자를 대상으로 하고 있으며, 고욤나무 잎에 대한 생리활성 효과에 대한 평가는 미비한 실정이다. 또한, 고욤나무의 과실은 감에 비해서 작을 뿐만 아니라 종자가 많고, 주로 늦가을에 채취가 가능하여 산업적으로 활용하기에 용이하지 않을 뿐만 아니라 대량으로 소재를 조달하는데 한계가 있다. 그러므로 고욤나무 잎의 생리활성을 규명하여 활용한다면, 고욤나무 과일과 종자의 활용에 대한 한계성을 극복하여 산업화를 이루는데 매우 용이할 것으로 사료된다.

한편, 한국등록특허 제749927에는 '고욤나무 열매 식초의 제조방법'이 개시되어 있고, [Planta Medica, 2010년, 제76권 p324]에는 '고욤나무 잎으로부터 새로운 플라보노이드 화합물 분리 연구'가 개시되어 있으나, 본 발명에서와 같이 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장료 조성물에 대해서는 개시된 바가 없다.

본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명에서는 공급이 용이한 고욤나무 잎 추출물의 활용과 산업화를 위하여, 고욤나무 잎 열수 추출물의 활성을 조사한 결과, 티로시나제 억제 활성과 멜라닌 생성 억제 효과를 확인하였다. 이를 통해 고욤나무 잎 열수 추출물이 안전한 천연 소재의 피부 미백용 화장료 조성물로 이용될 수 있는 점을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.

상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 대상의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따른 고욤나무 잎 추출물은 피부 미백 효과가 탁월할 뿐만 아니라, 식물 추출물을 사용하기 때문에 안전하고, 고욤나무 잎 부위를 이용하므로 비교적 공급이 용이하여, 화장품 산업에 널리 활용될 수 있다.

도 1은 본 발명의 고욤나무 잎 열수 추출물이 티로시나제 활성 억제에 미치는 영향을 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 고욤나무 잎 열수 추출물이 α-MSH로 활성화된 마우스 흑생종 B16 세포에서 멜라닌 합성에 미치는 영향을 평가한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명의 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 고욤나무 잎 추출물은 고욤나무 잎의 물, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 에틸 아세테이트 또는 이들의 혼합 용매의 추출물일 수 있고, 바람직하게는 물 추출물이며, 더욱 바람직하게는 고욤나무 잎 열수 추출물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현 예에 따른 조성물에서, 상기 고욤나무 잎 열수 추출물은 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 4~6분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 35~45℃의 건조기에서 10~14시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 80~120g을 증류수 800~1,200㎖에 넣고 3~7분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 제조할 수 있고, 바람직하게는 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 5분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 40℃의 건조기에서 12시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 100g을 증류수 1,000㎖에 넣고 5분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 제조할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 피부 미백용 화장료 조성물은 피부외용연고, 크림, 유연화장수, 영양화장수, 팩, 에센스, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 헤어 컨디셔너, 헤어 트리트먼트, 젤, 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 마사지 크림, 영양크림, 아이크림, 모이스처 크림, 핸드 크림, 파운데이션, 영양에센스, 선스크린, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디 로션 및 바디 클렌저로 이루어지는 군으로부터 선택된 제형을 가질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이들 각 제형의 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종의 기제와 첨가물을 함유할 수 있으며, 이들 성분의 종류와 양은 당업자에 의해 용이하게 선정될 수 있다.

본 발명의 조성물은 본 발명의 화합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 피부 미백 활성 성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 피부 미백 활성 성분으로는 코지산 및 이의 유도체, 알부틴, 아스코르브산 및 이의 유도체, 히드로퀴논 및 이의 유도체, 레조르시놀, 사이클로알카논, 메틸렌디옥시페닐 알칸올, 2,7-디니트로인다졸 또는 덩굴귤 추출물, 쌀 추출물, 감초 추출물과 같은 식물 추출물 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

상기와 같이 피부 미백용 화장료 조성물을 화장품으로 제형화할 경우, 활성 성분에 대한 담체로 작용하는 피부에 적용가능한 공지의 부형제를 포함할 수 있다. 화장품으로 제형화시에는 [International cosmetic ingredient dictionary, 6th ed., The cosmetic, Toiletry and Fragrance Association, Inc., Washington, 1995]에 개시되어 있는 내용을 참조할 수 있을 것이다. 상기 문헌들은 본 명세서의 일부로서 포함된다.

본 발명의 일 구현예에 따른 화장료 조성물에 있어서, 상기 피부 미백용 화장료 조성물은 상기 고욤나무 잎 추출물을 상기 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001 내지 10% 함유되어 있을 수 있고, 바람직하게는 0.005 내지 1% 함유되어 있을 수 있으나, 바람직한 미백 효과를 제공할 수 있는 유효량을 포함한다면 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은

(a) 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 4~6분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 35~45℃의 건조기에서 10~14시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 80~120g을 증류수 800~1,200㎖에 넣고 3~7분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 고욤나무 잎 열수 추출물을 제조하는 단계; 및

(b) 상기 제조한 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 대상의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법을 제공할 수 있고,

바람직하게는

(a) 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 5분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 40℃의 건조기에서 12시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 100g을 증류수 1,000㎖에 넣고 5분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 고욤나무 잎 열수 추출물을 제조하는 단계; 및

(b) 상기 제조한 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 대상의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법을 제공할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 구현예에 따른 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법에 있어서, 상기 대상은 인간을 포함하거나 또는 제외한 포유류일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 피부의 과다 색소 침착을 억제, 저해 또는 완화시킬 수 있는 화합물의 양을 의미한다. 본 발명의 피부 미백용 조성물에 포함되는 상기 화합물의 유효량은 피부 미백용 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 피부 미백용 조성물이 피부의 과다 색소 침착에 따른 피부과적 치료를 위한 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 상기 고욤나무 잎 열수 추출물을 포함할 수 있을 것이다. 화장품으로 제품화되는 경우에 있어서도 유효성분이 단기간 내에 피부에 머무르게 되는 메이크업 제거제, 세정제 등과 같은 워쉬-오프(wash-off) 타입의 화장품의 경우에는 비교적 높은 농도의 상기 화합물을 포함할 수 있을 것이다. 반면 유효성분이 장기간 동안 피부에 머무르게 되는 화장수, 유액, 크림, 에센스 등의 리브-온(leave-on) 타입의 화장품의 경우에는 워쉬-오프 타입의 화장품에 비해 낮은 농도의 상기 화합물을 포함해도 무방할 것이다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실험 방법

1. 고욤나무 잎 열수 추출

실험에 사용한 고욤나무 잎은 전라북도 진안군 부귀면 수항리 신기마을에서 2012년 6월 30일에 채취하였다. 당시 채취한 고욤나무 잎 표본(#2012-0630)은 전주대학교 대체의학대학 보건관리 연구실에 보관하고 있다. 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 5분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 40℃의 건조기에서 12시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 100g을 증류수 1,000㎖에 넣고 5분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 19.5g을 회수한 후 -20℃에서 보관하면서 실험에 사용하였다.

2. 미백 활성 검정

(1) 티로시나제( tyrosinase ) 활성 측정

티로시나제 활성 측정을 위한 버섯 티로시나제(Sigma, USA)는 2,500유닛/㎖가 되도록 50mM 인산 나트륨 버퍼(pH 6.8)에 녹여 -20℃에서 동결 보관 후 효소원으로 사용하였다. 시료 10㎕와 효소 10㎕를 완충액 160㎕에 첨가하여 25℃에서 5분간 방치하였다. 기질로 L-3,4-디히드록시페닐알라닌(L-3,4-dihydroxyphenylalanine) 20㎕를 첨가하여 10분간 반응시킨 후 475nm에서 흡광도를 측정하여 다음 식으로 계산하였다.

티로시나제 활성능(%) = (시료첨가군의 흡광도/무첨가군의 흡광도)×100

(2) 흑색종 세포의 배양 및 웨스턴 블랏을 통한 멜라닌 합성율 측정

마우스 유래 흑색종 세포(melanoma, B16, American Type Culture Collection)는 10% 열처리된 우태아혈청(fetal bovine serum)과 1% 페니실린/스트렙토마이신이 함유된 MEM 배지를 사용하여 배양하였다. 세포는 2×10⁵/㎖ 밀도로 24 웰 배양 플라스크에 접종하여 약 70% 성장이 도달되었을 때 추출물(100~200㎍/㎖)과 멜라닌 자극 호르몬으로 100nM α-MSH(α-melanin stimulating hormone)를 각각 처리하여 3일 동안 배양하였다. 배양을 마친 세포를 인산완충식염수로 2번 세척 후, 세포를 모아 차가운 라이시스 버퍼(lysis buffer, 20mM sodium phosphate(pH 6.8), Triton X-100, 1mM PMSF, 1mM EDTA)를 이용하여 세포를 용해시키고, 15,000×g에 15분 동안 원심분리를 하여 얻은 멜라닌 펠렛을 20% DMSO가 포함된 1N NaOH로 95℃에서 1시간 동안 녹였다. 녹인 시료를 분광광도계를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 합성 멜라닌(synthetic melanin)을 표준물질로 하여 0~50㎍/㎖ 농도 범위에서 얻은 표준 검량선으로부터 브래드포드법(Bradford assay)을 이용하여 멜라닌 단백질 함량을 정량하고, 50㎍을 10% SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)로 분리한 다음 트랜스퍼 용액(20% 메탄올, 25mM Tris, 192mM 글리신, pH 8.3)을 이용해 니트로셀룰로오스 막에 분리된 단백질을 트랜스퍼시켰다. 비특이반응을 제거하기 위해서 5% 비지방 탈지유가 함유된 TTBS(triton-tris buffered saline)로 4℃에서 2시간 이상 충분히 흔들면서 방치하였다. 그 후 TBS(tris buffered saline)로 3회 세척하고, 항-티로시나제(1:1,000)를 첨가하여 3시간 동안 실온에서 반응시킨 후 충분히 세척하고, 호스래디쉬퍼옥시다제가 부착된 염소 항-토끼 IgG(goat anti-rabbit IgG, 1:2,000)를 첨가하고 1시간 동안 실온에서 반응시켰다. 막은 TBS로 충분히 세척하고 통상적인 ECL(enhanced chemiluminescence) 방법으로 발색시켰다.

3. 통계처리

모든 실험값은 평균±표준오차로 표시하였으며, 통계분석은 분산분석(ANOVA)와 스튜던트 티 검정(Student's t-test)으로 처리하였으며, 유의성 한계는 <0.05 수준에서 던칸의 다중범위검정(Duncan's multiple range test)에 의한 사후분석을 수행하였다.

실시예 1. 고욤나무 잎 추출물이 티로시나제 활성 억제에 미치는 영향

본 발명의 고욤나무 잎 추출물이 멜라닌 생성과 관련된 티로시나제 활성 억제에 미치는 영향을 알아보기 위하여 비타민 C를 양성대조군으로 사용하였다. 그 결과, 고욤나무 잎 추출물은 농도가 증가할수록 양성대조군인 비타민 C와 유사한 티로시나제 활성 억제율을 나타냈다. 특히 고욤나무 잎 추출물 10mg/㎖의 농도에서 티로시나제 활성 억제율이 약 70%로, 그 효과가 매우 우수한 것을 확인할 수 있었다(도 1).

실시예 2. 고욤나무 잎 추출물이 흑색종 세포에서 멜라닌 합성 억제에 미치는 영향

멜라닌 자극 호르몬인 α-MSH(α-melanin stimulating hormone)로 활성화된 마우스 유래 흑색종 세포 B16에서 본 발명의 고욤나무 잎 추출물이 멜라닌 합성 억제에 미치는 영향을 알아본 결과는 도 2와 같다. 고욤나무 잎 추출물은 농도가 증가할수록 멜라닌 합성을 현저히 억제하는 효과가 있었다. 고욤나무 잎 추출물 100㎍/㎖과 200㎍/㎖의 농도에서는 멜라닌 합성이 유의하게 억제되는 효과를 보였고, 특히 고욤나무 잎 추출물 200㎍/㎖의 농도에서는 양성대조군인 비타민 C(50㎍/㎖)와 유사하게 멜라닌 합성을 억제하는 효과가 있었다.

Claims

채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 4~6분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 35~45℃의 건조기에서 10~14시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 80~120g에 대하여 증류수 800~1,200㎖의 비율로 넣고 3~7분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 제조된 고욤나무 잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
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(a) 채취한 고욤나무 잎을 물로 세척한 후 4~6분간 증기로 찐 후 실온에서 건조하고, 35~45℃의 건조기에서 10~14시간 동안 건조한 후, 건조한 고욤나무 잎 80~120g을 증류수 800~1,200㎖에 넣고 3~7분간 끓여 추출한 다음, 여과하고 동결건조기로 건조하여 고욤나무 잎 열수 추출물을 제조하는 단계; 및
(b) 상기 제조한 고욤나무 잎 열수 추출물의 유효량을 인간을 제외한 포유류의 피부에 처리하여 멜라닌 색소의 침착을 개선하는 방법.