KR101429679B1 - 귀뚜라미 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 귀뚜라미 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 멜라닌의 생성 억제 및 세포외 분비 저해 활성을 갖는 귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 귀뚜라미 추출물은 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌의 생성을 억제하고 세포외 분비를 저해함으로써 우수한 피부미백 활성을 나타내므로, 이러한 목적을 갖는 기능성 화장품의 제조에 이용될 수 있다.

Description

귀뚜라미 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물 {Cosmetic compositions for skin whitening comprising cricket extracts}

본 발명은 귀뚜라미 추출물을 함유하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 멜라닌의 생성 억제 및 세포외 분비 저해 활성을 갖는 귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

우리나라는 빠르게 진행되고 있는 고령화와 라이프스타일의 변화로 아름다움에 대한 관심이 증가하고 있다. 또한, 소득수준의 향상과 함께 웰빙(well-being)에 대한 관심 증대로 기능성 제품을 선호하는 경향이 높아지고 있다. 기능성 화장품은 미용뿐만 아니라 일부 치료의 개념이 함축된 보다 적극적인 개념의 천연 화장품 개발이 주축을 이루며 연구 개발이 진행되고 있다. 지금까지 미용에 대한 인식은 외적인 아름다움에 국한되어 있었으나, 최근에는 이너뷰티(inner beauty), 즉 건강과 아름다움이 직결된다는 평범한 진리가 일반인들에게 재인식되기 시작하면서 건강미용시장 역시 주목을 받고 있다. 이에 따라 미용 산업은 기능성 화장품, 먹는 미용 식품, 다이어트 시장 등으로 그 범위가 확장되고 있으며, 식품 및 기존의 화장품 업체 또한 이너뷰티 시장에 뛰어들고 있다. 화장품 산업은 보다 기능적이고, 자연주의적인 제품을 선호하는 소비자의 요구에 부흥하여 전문적이고, 고도의 기술을 요하는 첨단 산업으로 점차 자리매김하고 있으며, 이에 따라 새로운 원료개발의 요구도 높아지고 있다.

동서고금을 막론하고 백옥 같은 얼굴은 오래전부터 미의 기준으로 간주되어왔으며, 피부 미용에 있어 미백은 많은 여성들이 가장 신경 쓰는 부분 중 하나이다. 또한 피부색은 우리가 보통 동안을 판단할 때 매우 중요한 요소이므로 깨끗하고 고운 피부는 모든 여성의 선망의 대상이다.

인체의 피부색은 일반적으로 멜라닌, 산화-환원 헤모글로빈, 카로틴, 멜라노이드에 의해 결정되며, 이 중에서 가장 큰 영향을 미치는 것은 멜라닌이다. 멜라닌은 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)내의 멜라노좀(melanosome)에서 만들어지는데, 피부가 자외선을 받게 되면 티로신(tyrosine)이 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소에 의해 산화되어 도파(DOPA, 3,4-dihydro xyphenylalanine)가 생성된다. 이것이 다시 산화되어 도파퀴논(dopaquinone)으로 전환되고, 도파퀴논은 비효소적인 산화반응을 거쳐 피부색소 침착 현상의 원인이 되는 멜라닌을 형성한다. 멜라닌은 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부 기관을 보호해주는 동시에, 피부 생체 내에 생겨난 자유 라디칼 등에 의한 피부 내 단백질과 유전자들의 손상을 보호해주는 유용한 역할을 하지만, 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 피부 노화나 기미, 주근깨 등과 같은 과색소침착증을 유발하며 피부암의 원인이 되기도 한다. 따라서 미용욕구 충족뿐만 아니라 피부 건강 유지 및 피부 질환 치료를 위해서 과도한 멜라닌의 생성을 억제해야 한다.

멜라닌의 합성을 억제하는 방법으로는 적절한 자외선 차단제를 함유한 화장료를 사용하여 자외선에 대한 노출을 방지 또는 감소시키거나, 멜라닌 합성 세포인 멜라노사이트의 세포활성을 저해시키는 방법, 티로시나아제의 활성을 억제하여 멜라닌 합성을 억제하는 방법 등이 있다. 하지만, 현재 티로시나아제 억제제로 개발되어 있는 알부틴(arbutin), 코직산(5-hydroxy-2-hydormethyl-v-pyrone), 하이드로퀴논(hydroquinone) 등의 물질들은 낮은 저해활성 및 물질 자체의 불안정성, 그리고 피부에 대한 독성을 나타내는 문제점을 안고 있다. 따라서 피부 독성이 없고 안정하며 멜라닌 생성억제 효과가 높은 천연의 저해물질이 필요한 실정이다.

최근에는 종래의 미백 물질들 외에 천연물에서 미백 활성 성분을 찾기 위한 연구가 활발하며, 합성품 대신 다양한 천연 원료의 개발이 요구되고 있다. 그러나 우리나라의 경우, 미용관련 산업 대부분의 원재료를 수입에 의존하고 있기 때문에 국내 소재의 천연물로부터 미용 기능성 소재를 확보한다면 미용 소재의 수입 의존도를 낮출 수 있으며 경쟁력 강화에도 도움이 될 것으로 예상된다.

한편, 곤충은 오래 전부터 양잠과 양봉 등으로 인간의 일상생활에 이용되어 왔으며, 최근에는 곤충의 가치가 지구상의 마지막 미개발 생물자원으로 재평가되면서 곤충산업의 분야의 성장이 가속화되고 있다. 또한 현대의 곤충산업은 첨단 기술과의 융복합화를 통해 여러 분야로 확대되어 그 활용 범위 또한 보다 다양화될 전망이다. 예로부터 우리 선조들은 곤충류를 각종 질병이나 건강유지를 위한 민간 약제로 이용하였는데, 조선시대 의학서인 허준의 ‘동의보감’을 보면 95종에 달하는 약용 곤충이 소개되어 있다. 최근 서양 의학에서도 기능성 신약 개발을 위하여 곤충에서 추출한 물질에 주목하고 연구개발을 활발하게 진행하고 있으며, 최근에는 파리의 유충 ‘구더기’가 욕창과 족부궤양 등의 상처치료에 효과를 나타낸다는 연구 결과가 발표되었다 (한국등록특허공보 10-0823298, 2008년04월17일 참조).

현대의 미용 산업에 있어서 곤충을 이용한 미용제품들은 곤충에서 유래한 효소를 이용한 것이 대부분이다. 그러나 이를 제품으로 개발할 경우 안정성 면에 있어서 효율이 떨어지며 대량생산이 어렵다는 단점을 가지고 있다. 반면 귀뚜라미의 경우 다른 곤충 소재들보다 배양이 용이하고 대량 생산이 가능하다는 이점을 가지고 있으며, 아직까지 귀뚜라미에 대한 피부 미백과 관련된 연구는 전무하다.

이에, 본 발명자들은 미용소재로서 연구개발이 전무하고 안전하며 질병예방 효능이 뛰어난 귀뚜라미에 주목하게 되었으며, 상기 귀뚜라미 추출물을 제조하여 피부 미백 효능을 검증하는 과정에서, 귀뚜라미 추출물이 세포독성을 나타내지 않으며 멜라닌 생성을 억제한다는 사실을 규명함으로써 본 발명을 완성하였다.

(특허문헌 1) KR1020030005516 A

따라서, 본 발명의 주된 목적은 멜라닌의 생성 억제 및 세포외 분비 저해 활성을 갖는 귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 곤충에서 분리한 유용성분을 이용한 천연 활성물질을 탐색하는 과정에서 미용소재 연구 개발이 전무하며 안전하고 질병예방 효능이 뛰어난 귀뚜라미 추출물에 주목하게 되었다. 상기 귀뚜라미 추출물이 멜라닌 생성을 억제하고 멜라닌의 세포외 분비를 효과적으로 저해하여 피부미백 효능이 있다는 사실을 규명함으로써, 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 추출물은 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌의 생성을 억제하거나 세포외 분비를 저해함으로써 피부미백 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 상기 귀뚜라미 추출물은 쥐의 멜라노마 세포와 인간 유래 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌 합성 및 세포외 분비를 억제하는 것을 확인하였다 (도 5, 6 참조)

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 추출물은 귀뚜라미 자체, 건조물 또는 건조분말을 물 또는 유기용매를 이용하여 통상적인 추출방법에 의해 수득할 수 있으며, 사용할 수 있는 유기용매로는 에탄올, 메탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 함수에탄올, 함수부틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 헥산 및 에틸아세테이트로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다. 또한 상기 추출방법은 통상적인 추출방법 예컨대, 열수추출, 유기용매 추출, 환류추출 등의 방법을 사용할 수 있으며, 구체적으로 귀뚜라미 건조물 또는 그 분쇄물을 상기 추출용매에 투입하고 필요에 따라 교반하면서 5-40℃에서 1-15일간 침적시키거나 40-100℃에서 4-20시간 동안 가열하여 추출하는 것이 적당하다. 추출에 사용되는 용매의 양은 추출원료의 통상 1 내지 20배량(중량비)인 것이 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 추출물이 첨가되는 양은 특별히 제한되지 않으나, 멜라닌 합성 저해 및 세포외 분비 억제를 통해 미백효과를 충분히 나타내기 위한 화장료의 유효성분으로서 통상적인 첨가량을 고려하면, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 10 중량%로 포함될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 스킨로션, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 영양로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양크림, 맛사지크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디클린져, 바디로션, 샴푸, 유액, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이새도우로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 제형을 가질 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 귀뚜라미 추출물은 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌의 생성을 억제하거나 세포외 분비를 저해함으로써 피부미백 능력을 효과적으로 나타낸다. 따라서 피부미백을 위한 기능성 화장료로서 유용하게 사용될 수 있다.

도 1 내지 4는 추출방법에 따른 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4의 세포독성 시험 결과를 각각 나타내는 그래프이다.
도 5는 귀뚜라미 추출물을 이용하여 멜라노마 세포의 멜라닌 합성 억제 효과를 측정한 결과이다.
도 6은 귀뚜라미 추출물을 이용하여 사람 유래 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌의 세포외 분비 저해 효과를 측정한 결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

제조예 . 귀뚜라미 추출물의 제조

본 발명에 사용한 귀뚜라미 추출물들은 하기 표 1과 같은 공정에 따라 동결건조한 후 분말화 하여 제조하였다. 사용된 귀뚜라미(Velarifictorus aspersus) 분말시료는 경북대학교 해충생태학 실험실로부터 입수한 귀뚜라미를 동결시켜 분쇄한 것을 사용하였다.

샘플	제조 방법
귀뚜라미 추출물 1	귀뚜라미 분말시료 300 g을 2차 증류수 500 mL을 사용하여 100℃에서 5시간동안 2회 반복 환류 추출 및 농축하여 31 g의 샘플을 준비
귀뚜라미 추출물 2	귀뚜라미 분말시료 300 g을 2차 증류수 500 mL을 사용하여 70℃에서 5시간동안 2회 반복 환류 추출 및 농축하여 17.36 g의 샘플을 준비
귀뚜라미 추출물 3	귀뚜라미 분말시료 300 g을 80% 에탄올 500 mL을 사용하여 80℃에서 5시간동안 2회 반복 환류 추출 및 농축하여 38.59 g의 샘플을 준비
귀뚜라미 추출물 4	귀뚜라미 분말시료 300 g을 50% 에탄올 500 mL을 사용하여 80℃에서 5시간동안 2회 반복 환류 추출 및 농축하여 24.25 g의 샘플을 준비

실험예 1. 귀뚜라미 추출물의 세포독성 검사

상기 귀뚜라미 추출물의 세포독성을 검사하기 위해 표피세포(JB6 P+ epidermal cell; Gene Regulation Section, Laboratory of Biochemical Physiology, National Cancer InstituteFrederick Cancer Research)를 이용하여 MTT assay를 수행하였다. JB6 P+ cell line은 발암촉진인자에 의해 종양으로 형질전환이 용이하도록 특화된 쥐의 피부세포주로, 세포독성을 검사하는데 주로 이용된다.

먼저, JB6 P+ epidermal cell을 96-웰 플레이트(well plate)에 씨딩(seeding)하고 5% FBS(fetal bovine serum, SIGMA, USA) 및 항생제가 첨가된 MEM(minimun essential medium; Cellgro, USA) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂의 조건 하에서 4시간 동안 배양하였다. MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분말 200 mg을 PBS 40 mL에 녹인 후 여과하여 5 mg/mL의 MTT 용액을 준비하였다.

4시간 후 25, 50, 100 μg/mL의 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4가 함유된 배지를 첨가하였고, 24시간 후 5 mg/mL의 MTT 용액을 배양한 세포가 들어있는 96-웰 플레이트에 20 μL씩 넣었다. 그리고 나서 37℃, 5% CO₂ 조건 하에서 2시간 동안 반응시킨 후 배지와 MTT 용액을 제거하고 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 200 μL씩 넣어 실온에서 30분간 혼합시켰다. 반응을 정지시킨 후 반응혼합물을 마이크로 플레이트 리터(microplate reader; Sunrise-Basic Tecan, Austria)를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하고 하기 식에 따라 세포생존율을 계산하였다.

상기 방법으로 총 4일간 배양하여 1일, 3일, 4일 동안 귀뚜라미 추출물의 세포독성을 검사하였다.

도 1 내지 4는 추출방법에 따른 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4의 세포독성을 측정한 결과이다.

도 1 내지 4에서 볼 수 있듯이, 추출방법 및 추출용매를 달리하여 제조된 추출물 모두에서 세포독성이 나타나지 않음을 확인하였다.

실험예 2. 귀뚜라미 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과

귀뚜라미 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과를 측정하기 위해서, 쥐의 B-16 멜라노마 세포(B-16 mouse melanoma cell, KCLB, KOREA)를 이용하여 멜라닌 함량 분석(Melanin content assay)을 수행하였다.

먼저 B-16 멜라노마 세포를 6-웰 플레이트에 씨딩(seeding)하고 10% FBS가 포함된 DMEM(Dulbemlo's modified Eagle's medium, GIBCO, USA) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO₂의 조건 하에서 24시간 동안 배양하였다.

24시간 후 200, 400 μg/mL의 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4와 200 μM의 알부틴이 함유된 phenol red free-DMEM 배지로 교체하였고, 1시간 후 α-MSH(melanocyte-stimulating hormone, Sigma, USA)를 최종 농도가 50 nM이 되도록 하여 세포 배양배지에 첨가하였다. 그리고 나서 동일한 조건 하에서 다시 4일간 배양하였다. 이때 시료와 α-MSH를 처리하지 않은 세포를 무처리 대조군, α-MSH만 처리한 세포를 양성 대조군, α-MSH와 알부틴을 처리한 세포를 음성 대조군으로 하였다.

세포가 웰의 바닥에 약 80% 이상 찰 때까지 배양한 후, 세포 외로 분비된 멜라닌의 양을 측정하기 위해 배지는 에펜드로프 튜브(effendrof tube)에 1 mL씩 옮겨 담고 차가운 PBS로 2번 세척하였다. 트립신(GIBCO, USA)을 처리하여 흡착된 세포들을 분리시킨 후 세포를 회수하였고 회수한 세포를 에펜드로프 튜브(effendrof tube)로 옮겨, 14000 rpm에서 10분간 원심분리 하였다. 이 때 침전된 펠릿을 사진으로 찍어 멜라닌 합성 정도를 비교하였다.

도 5는 귀뚜라미 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과를 나타낸 것으로, 튜브 1은 무처리 대조군, 튜브 2는 α-MSH 처리군, 튜브 3은 알부틴 200 μM 처리군, 튜브 4는 귀뚜라미 추출물 1의 200 μg/mL 처리군, 튜브 5는 귀뚜라미 추출물 1의 400 μg/mL 처리군, 튜브 6은 귀뚜라미 추출물 2의 200 μg/mL 처리군, 튜브 7은 귀뚜라미 추출물 2의 400 μg/mL 처리군, 튜브 8은 귀뚜라미 추출물 3의 200 μg/mL 처리군, 튜브 9는 귀뚜라미 추출물 3의 400 μg/mL 처리군, 튜브 10은 귀뚜라미 추출물 4의 200 μg/mL 처리군, 튜브 11은 귀뚜라미 추출물 4의 400 μg/mL 처리군이다.

도 5에서 볼 수 있듯이, 쥐의 B-16 멜라노마 세포에서 귀뚜라미 추출물 1과 2가 α-MSH로부터 유도된 멜라닌 합성을 농도 의존적으로 억제함을 확인할 수 있었고, 귀뚜라미 추출물 3 또한 400 μg/mL의 농도에서 멜라닌 합성을 효과적으로 억제함을 확인하였다. 귀뚜라미 추출물 4의 경우, 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3에 비해서는 효과가 적었으나 멜라닌 합성을 억제하는 것을 확인할 수 있었다. 또한 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4 모두 천연 미백 원료인 알부틴에 비해 멜라닌의 세포 외 분비를 억제함을 확인할 수 있었고, 특히 귀뚜라미 추출물 1은 무처리 대조군과 비슷한 정도의 멜라닌 분비 억제 효능을 나타내었다.

실험예 3. 귀뚜라미 추출물의 멜라닌 생성 저해 효과

귀뚜라미 추출물의 멜라닌 생성 저해 효과를 측정하기 위하여, 사람 유래 멜라닌 생성 세포를 이용하여 폰타나-마손 염색(Fontana-Masson staining)을 수행하였다.

귀뚜라미 추출물이 α-MSH에 의한 멜라닌 생성에 미치는 영향을 평가하기 위해, 사람 유래 멜라닌 생성 세포인 HEM-MP 세포(Cascade Biologics Inc., USA)를 24-웰 플레이트(well plate)에 씨딩(seeding)하고 사람 유래 멜라닌 생성 세포 성장 보충제(Human Melanocyte Growth Supplement; GIBCO) 5 mL이 첨가된 Medium 254 배지(GIBCO)를 사용하여 37℃, 5% CO₂의 조건 하에서 24시간 배양하였다.

24시간 후 배지를 제거하고 50 μg/ml의 귀뚜라미 추출물 1, 2, 3, 4와 200 μM의 알부틴을 함유한 배지로 교체하였고 1시간 후 α-MSH를 최종 농도가 100 nM이 되도록 하여 세포 배양배지에 첨가하였다. 그리고 나서 동일한 조건 하에서 세포가 웰의 바닥에 약 80% 이상 찰 때까지 배양하였다. 이때 시료와 α-MSH를 처리하지 않은 세포를 무처리 대조군, α-MSH만 처리한 세포를 양성 대조군, α-MSH와 알부틴을 처리한 세포를 음성 대조군으로 하였다.

총 4일간 배양하여 멜라닌 생성이 완료된 시점에 배양액을 제거하고 HEM-MP세포에 함유된 멜라닌을 염색하였다. 이를 위해 PBS로 1번 세척한 후, 무수 에탄올(absolute ethanol)을 500 μL 넣어 30분간 고정시킨 다음 무수 에탄올을 제거하고 암모니아성 은 용액(ammoiacal silver solution)을 넣었다. 이를 60℃에서 30분간 염색시킨 다음, 용액을 제거하고 증류수(D.W.)로 1번 세척하였다. 0.1% 염화금(gold chloride)과 5% 티오황산나트륨(sodium thiosulfate), 핵 고속 적색 염색(nuclear fast red stain) 용액을 이용하여 한 번씩 헹궈준 후 무수 에탄올을 이용하여 탈수하였다. 탈수과정을 거친 후 현미경용 슬라이드와 커버글라스, 봉입제로 표본을 제작하였고 현미경을 이용하여 사진을 찍었다.

도 6은 귀뚜라미 추출물의 멜라닌 생성 저해 효과를 나타낸 것으로, a는 무처리 대조군, b는 α-MSH 처리군, c는 α-MSH와 귀뚜라미 추출물 1의 50 μg/mL 처리군, d는 α-MSH와 귀뚜라미 추출물 2의 50 μg/mL 처리군, e는 α-MSH와 귀뚜라미 추출물 3의 50 μg/mL 처리군, f는 α-MSH와 귀뚜라미 추출물 4의 50 μg/mL 처리군, g는 α-MSH와 알부틴 200 μM 처리군이다.

도 6에서 볼 수 있듯이, 귀뚜라미 추출물 1, 2는 50 μg/mL의 농도에서 사람 유래 멜라닌 생성 세포의 멜라닌 생성을 저해함을 확인할 수 있었다. 귀뚜라미 추출물 3, 4의 경우 50 μg/mL에서 사람 유래 멜라닌 생성 세포의 성장 자체를 억제하기 때문에, 도 6의 실험에서는 멜라닌 생성이 억제 되었는지 여부를 현미경으로 관찰이 불가능 하였다.

제형예 1.

상기 제조예의 귀뚜라미 추출물 1을 함유한 화장료 중 화장수(스킨)의 제형예를 하기 표 2에 나타내었다.

번호	원 료	제형예 1
1	귀뚜라미 추출물 1	10.0
2	1,3-부틸렌 글라이콜	2.00
3	글리세린	3.00
4	올레일알콜	2.00
5	폴리솔베이트 20	1.00
6	에탄올	6.00
7	방부제	미량
8	조합향료	미량
9	정제수	잔량
	계	100.00

제형예 2.

상기 제조예의 귀뚜라미 추출물 1을 함유한 화장료 중 영양화장수(로션)의 제형예를 하기 표 3에 나타내었다.

번호	원 료	실시제형예 2
1	귀뚜라미 추출물 1	10.0
2	1,3-부틸렌글라이콜	4.00
3	글리세린	3.00
4	올레일알콜	0.05
5	폴리솔베이트 20	1.00
6	방부제	미량
7	조합향료	미량
8	정제수	잔량
	계	100.00

Claims (5)

1. 귀뚜라미 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 화장료 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 멜라닌 생성 세포에서 멜라닌의 생성을 억제하거나 세포외 분비를 저해함으로써 피부미백 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 함수에탄올, 함수부틸렌글리콜, 함수프로필렌글리콜, 헥산 및 에틸아세테이트로 구성된 군으로부터 선택된 용매를 이용하여 추출한 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 20 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
   
5. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스킨, 스킨로션, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 영양로션, 밀크로션, 모이스쳐로션, 영양크림, 맛사지크림, 모이스쳐크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디클린져, 바디로션, 샴푸, 유액, 파운데이션, 프레스파우더, 루스파우더, 아이새도우로 구성된 군으로부터 선택된 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.

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