KR101205763B1

KR101205763B1 - 혈류량 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101205763B1
Application number: KR1020050054529A
Authority: KR
Inventors: 류종성; 노석선; 이천구; 장민열
Original assignee: 주식회사 엘지생활건강
Priority date: 2005-06-23
Filing date: 2005-06-23
Publication date: 2012-11-28
Also published as: KR20060134653A

Abstract

본 발명은 혈류량 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 특히 구절초 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 피부 도포시 모세혈관의 확장을 통해 혈액 순환을 원활하게 하는 혈류량 개선 효과가 우수하면서도 피부에 자극이 없는 혈류량 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 혈류량 개선용 화장료 조성물은 혈류량 개선 효능 이외에 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 경로의 염증 유발 에이코사노이드(eicosanoid)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂)의 생성을 억제하는 등 항염증 효능이 또한 우수하다.

화장료 조성물, 구절초, 혈류량 개선, 항염증

Description

혈류량 개선용 화장료 조성물 {COSMETIC COMPOSITION FOR IMPROVEMENT OF BLOOD FLOW}

도 1은 본 발명의 일실시예에 따라 페리플럭스 시스템 5000 혈류량 측정기기를 이용하여 구절초 추출물의 인체에 대한 혈류량 개선 효능을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

도 2 는 본 발명의 일실시예에 따라 적외선 카메라를 이용하여 구절초 추출물의 인체에 대한 혈류량 개선 효능을 측정한 결과를 나타낸 사진이다.

도 3은 본 발명의 일실시예에 따라 구절초 추출물의 세포 수준에서의 프로스타글란딘 E₂ 생성 억제 효능을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명은 혈류량 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 특히 구절초 추출물을 유효성분으로 포함함으로써 피부 도포시 모세혈관의 확장을 통해 혈액 순환을 원활하게 하는 혈류량 개선 효과가 우수하면서도 피부에 자극이 없는 혈류량 개선용 화장료 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명에 따른 혈류량 개선용 화장료 조성 물은 혈류량 개선 효능 이외에 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 경로의 염증 유발 에이코사노이드(eicosanoid)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂)의 생성을 억제하는 등 항염증 효능이 또한 우수하다.

화장품은 외관상 피부를 아름답게 만들어 주어 미를 극대화하는데 그 목적이 있다. 미백, 주름개선, 피부보호 등 다양한 효능을 가진 원료들이 스크리닝 되어 화장품 제조 시에 첨가된다. 그 중에서도 피부 혈류량 개선은 피부의 원활한 혈류량 개선을 통해 칙칙하고 탄력 없는 피부를 싱싱하고 맑고 투명한 피부로 만들어 주어 외관상 돋보이는 건강한 피부를 만들어 준다.

그러나 혈류량 개선 효능을 가진 물질은 극히 제한적이거나 효능을 가진 물질도 많이 알려져 있지 않으며 현재 사용되는 소수의 물질도 화학적으로 합성하여 사용하고 있다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 부위로서, 과도한 자외선이나 오염 물질 등에 노출되면 홍반, 부종, 뾰루지, 따끔거림, 가려움 등의 피부 자극 및 염증 반응이 유발된다. 이러한 원인들에 의해 생성된 피부 트러블은 미관상 문제가 될 뿐만 아니라, 염증 반응 과정에서 생성되는 물질들이 부수적으로 피부의 색소 침착을 일으키고, 피부 탄력 섬유의 붕괴를 촉진시켜 피부 주름의 증가에까지 영향을 미치는 것으로 알려져 있다.

피부를 보호하고 미화 청결을 위해 사용되는 피부 외용 제품들에 있어서도 피부 보호 목적과는 상이한 성분들 - 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소, 기능성 원료 - 의 사용이 불가피하므로, 이들 성분들에 의해서도 피부에서는 여러 가지 부작용이 발생되고 있다. 특히 민감성 피부의 증가와 더불어, 미백, 주름 개선, 각질제거 등을 목적으로 하는 기능성 제품 내의 알파 하이드록시산(AHA), 레티놀, 알부틴 등의 성분들이 피부 트러블을 일으키는 주된 원인으로 작용하고 있으며, 또 이러한 부작용으로 인해 이들 물질의 최대 효능을 나타낼 수 있는 농도로 사용하는 데에는 많은 제한이 있었다.

상기와 같은 이유로 염증의 생성을 줄일 수 있는 방법에 관한 연구가 활발히 진행되고 있고, 지금까지의 연구 결과로는, 신경세포에서 분비되는 물질 P(Substance P) 등의 신경 펩타이드 자극에 의해 활성화되는 브라디키닌과 같은 키닌(kinins) 또는 시클로옥시게나아제 경로에 의해 형성된 다양한 사이토카인이나 프로스타글란딘 E₂ 등이 부종 형성에 관여하여 염증과 통증의 원인이 된다는 것이 알려져 있다. 물질P 를 비롯한 신경 펩타이드 길항제, 브라디키닌 길항제, 시클로옥시게나아제 억제제 등이 제시되어 왔으나, 지금까지 알려진 항염제는 피부에 대한 안전성 면에서나 제품 함유 시 안정성 면에서 대부분 문제점을 안고 있어서 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

상기와 같은 종래기술의 문제점을 해결하고자, 본 발명은 피부 도포시 모세혈관의 확장을 통해 혈액 순환을 원활하게 하는 혈류량 개선 효과가 우수하면서도, 동시에 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 경로의 염증 유발 에이코사노이드 (eicosanoid)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂)의 생성을 억제하는 등의 항염증 효능이 우수한 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 다른 목적은 피부에 자극이 없이 안전한 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 구절초 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류량 개선용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명에 따르면, 본 발명에 따른 혈류량 개선용 화장료 조성물은, 혈류량 개선 작용 이외에 항염증 효능을 추가로 갖는다.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명자들은 피부 혈류량을 개선시키면서도, 시클로옥시게나아제 경로의 프로스타글란딘 E₂의 생성을 저해하여 염증 생성을 억제할 수 있는 천연 한약재에 대하여 연구하던 중, 구절초 추출물이 피부 도포시 혈류량 개선효능이 탁월하면서도, 프로스타글란딘 E₂의 생성을 억제하는 효능이 우수함을 확인하고, 이를 토대로 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 혈류량 개선용 화장료 조성물은 구절초 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 사용되는 상기 구절초(학명: Chrysanthemum zawadskii HERBICH)는 가을에 피는 대표적인 자생화로 5 월 단오에는 줄기가 5 마디가 되고, 9 월 9 일(음력)이 되면 9 마디가 된다 하여 구절초(九節草)라 불린다. 또한 구절초는 줄기 끝에 한 송이 꽃이 피는데 흰 꽃이 신선보다 더 돋보인다 하여 선모초(仙母草)라 불린다.

상기 구절초는 바닷가를 제외한 전국에 자생하며 특히 높고 깊은 산에서 군락을 형성하여 자란다. 구절초는 종(種)으로는 단일종(單一種)이지만 품종은 몇 가지가 있다. 산구절초는 높이 10～60 ㎝, 꽃 직경 3～6 ㎝이며, 바위 구절초는 중북부 지방의 깊은 산에서 자라는 한국 특산 식물로 높이 20 ㎝, 꽃 직경 2～4 ㎝이다. 포천 구절초는 한탄강 지역에 자생하며 꽃색이 분홍색이 돈다. 우리 자생식물 중 원예가치가 높은 꽃 중 하나인 구절초는 국화과의 여러해살이 풀로 땅 속의 뿌리가 옆으로 길게 뻗어가면서 번식하며 번식력도 대단히 강하다. 그래서 가을에 외래식물인 코스모스에 경쟁할 만한 우리 꽃이다. 한방에서 구절초는 부인병, 보온에 특효가 있다. 특히, 월경장애에 효과가 있어 약재시장에 가면 구절초가 쌓여 있을 정도이다. 꽃은 술을 담그거나 말려서 베게 속에 넣으면 두통이나 탈모에 효과가 있고 머리칼이 희게 되는 것을 방지하며, 어린 싹은 나물로 무쳐먹고 잎은 떡을 찔 때 넣으면 향기를 내준다.

본 발명에서 제공하는 구절초 추출물은 상기 구절초를 통상의 추출 방법에 의하여 추출할 수 있으며, 추출용매의 종류 및 함량 등도 목적에 따라 임의 선정하여 사용할 수 있다.

일례로, 상기 구절초 추출물은 정제한 구절초를 건조 분쇄하여 분말화한 후, 약 10 배량의 추출용매로 5 일간 냉침하여 추출한 추출원액을 여과, 농축, 및 동결건조하는 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 이때 사용될 수 있는 추출용매로는 정제수, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 그리세롤, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트, 벤젠, 핵산, 디에틸에테르, 및 디클로로메탄으로 이루어진 군으로부터 1 종 이상 선택되는 용매를 혼합하여 추출하거나, 1 종의 용매를 사용하여 추출한 후, 여기에 1 종 또는 2 종 이상의 용매를 사용하여 용매분획할 수 있다.

상기와 같은 구절초 추출물은 화장료 조성물에 0.0001 내지 30 중량%로 포함되는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 0.001 내지 20 중량%로 포함되는 것이다. 그 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 본 발명에서 목적하는 효과인 혈류량 개선, 프로스타글란딘 생성 억제, 특히 프로스타글란딘 E₂의 생성 억제 효과를 얻기 어려우며, 안전성 측면에서도 좋지 않다는 문제점이 있으며, 30 중량%를 초과할 경우에는 제형 안정성에 문제가 생길 수 있다.

본 발명의 구절초 추출물을 유효성분으로 함유하는 혈류량 개선용 화장료 조성물은 필요에 따라 당업계에서 사용되는 통상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있음은 물론이다. 이때, 상기 첨가제는 인체에 무해하며 조성물의 안정성을 유지할 수 있어야 한다.

또한 본 발명의 혈류량 개선용 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 구체적으로, 상기 화장료 조성 물은 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 젤, 로션, 연고, 패취, 또는 분무제 등의 제형으로 제조할 수 있다.

상기와 같은 본 발명에 따른 혈류량 개선용 화장료 조성물은 피부 도포시 모세혈관의 확장을 통해 혈액 순환을 원활하게 하는 혈류량 개선 효과가 우수하면서도, 동시에 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 경로의 염증 유발 에이코사노이드(eicosanoid)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂)의 생성을 억제하는 등 항염 효능이 우수할 뿐만 아니라, 피부에 자극이 없이 안전하다.

따라서, 본 발명에 따른 조성물을 각종 제형으로 제형화할 경우, 혈류량 개선 작용 이외에, 이들 제형화를 위해 첨가되는 각종 부형제 혹은 첨가제, 예컨대 계면활성제, 방부제, 향료, 자외선 차단제, 색소 및 각종 기능성 원료 등의 사용으로 인해 유발되는 피부 트러블, 특히 피부 염증을 동시에 억제할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1

구절초를 한약분쇄기를 이용하여 100～200 메쉬(mesh) 크기로 분쇄한 후, 분쇄물 무게의 5 배 용량의 에탄올이나 10 배 용량의 1,3-부틸렌글리콜을 가하여 5 일 동안 냉침하여 추출하였다. 그 다음, 상기 추출물을 와트만 여과지(Whatman filter paper No.4)를 이용하여 고형분을 제거한 후, 회전식 증발농축기(rotary evaporator)를 이용하여 감압농축하여 구절초 추출물을 제조하였다.

(인체에 대한 피부 혈류량 개선 효과)

1. 페리플럭스 시스템 5000 혈류량 측정기기를 이용한 in vivo 혈류량 평가

상기 제조한 구절초를 이용하여 건강한 성인 남녀 50 명을 대상으로 피부의 혈류량 촉진 효능을 알아보기 위하여 하기와 같이 전팔 부위에 구절초 추출물 사용 전,후의 혈류량을 페리플럭스 시스템5000(PeriFlux System 5000, 스웨덴 페리메드 AB(Perimed AB, Sweden)사 혈류량 측정기기를 이용하여 측정하였다. 본 기기는 모세혈관을 흐르는 적혈구가 레이저 빛을 파장으로 전환시키고 전환된 파장을 회복섬유(returning fiber)가 잡아서 전기적 신호로 다시 전환시켜 이 전기적 신호를 수치로 표현하여 혈류량을 나타내 준다. 즉, 혈류량이 많을수록 수치는 높아지고 혈류량이 적을수록 수치는 낮아진다. 혈류량을 나타내는 수치는 기기자체에서 제공하는 LDPF unit로 표현하였다.

피시험자는 항온,항습이 유지되는 실험실에 20～30 분 정도 적응을 시킨 후, 시험부위인 전팔(forearm) 부위에 상기 구절초 추출물을 도포하기 전 혈류량을 측정하였다. 그 다음, 상기 구절초 추출물에 증류수를 혼합하여 각각 1 %(v/v), 5 %(v/v)의 농도로 준비한 후, 도포하고 10 분 정도 기다린 후에 다시 혈류량을 측정하였다. 이때, 대조군은 구절초 추출물의 용매인 증류수를 사용하였다. 혈류량 개선 정도는 구절초 추출물 도포 전,후의 혈류량 측정값의 비율을 백분율로 표시하여 계산하였으며, 그 결과를 도 1 및 하기 표 1에 나타내었다.

구분	혈류량 측정값 평균 (LDPM unit)		개선율 (%)
구분	도포 전	도포 후	개선율 (%)
1%의 구절초 추출물	7.4 ± 3.2	8.3 ± 2.7	12.7
5%의 구절초 추출물	7.3 ± 2.9	10.2 ± 2.5	22.6
대조군	8.6 ± 3.6	8.4 ± 5.9	-
[주] 1. 개선율 (%) = {(도포 전 혈류량 평균값 - 도포 후 혈류량 평균값) / 도포 후 혈류량 평균값} × 100

상기 표 1 및 도 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 혈류량 개선용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 1 %의 농도에서 12.7 %의 혈류량 개선을 나타냈으며, 5 %의 농도에서는 22. 6 %의 혈류량 개선 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

2. 적외선 카메라를 이용한 in vivo 온도변화 측정

피부 온도의 증가는 피부 혈류량 증가로 인해 발생하는 현상 중 하나로, 상기 구절초 추출물의 인체에 대한 피부 혈류량 개선 효능을 알아보기 위하여 항온,항습이 유지되는 실험실에 건강한 성인 남녀 50 명을 20～30 분 동안 적응시킨 후 시험부위인 전팔 부위에 5 % 농도의 구절초 추출물과 대조군으로 증류수를 각각 도포한 후, 썰모 트레이서 6T62(Thermo Tracer 6T62, San-ei, 일본 산에이사 제조) 적외선 카메라를 이용하여 온도 변화를 관찰하고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

실험결과 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 온도가 증가하였으나, 대조군은 도포 한 부위에서는 온도 변화가 관찰되지 않음을 확인할 수 있었다. 이로부터, 구절초 추출물에 의해 피부 혈류량이 증가한다는 것을 알 수 있었다.

(프로스타글란딘 E₂ 생성 억제 효과)

구절초의 프로스타글란딘 E₂ 생성 억제 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 방법으로 실험하였다(참고문헌 : Jeffrey, K. H., Anglea, S. W., Zoe, S., and Rhia C. M. Intracellular Measurement of Prostaglandin E2: Effect of Anti-inflammatory Drugs on Cyclooxygenase Activity and Prostanoid Expression, Analytical Biochemistry, 1999, 271, 18-28).

먼저, 사람의 표피 조직에서 분리한 섬유 아세포를 수 차례 계대 배양한 후, 96-웰 플레이트에 1×10⁵ 개씩 넣고 37 ℃, 5 %(v/v)의 CO₂ 배양기에서 24 시간 동안 배양하였다. 그 다음, FBS(fetal bovine serum)가 포함되지 않은 배지로 교체하여 2 시간 동안 배양한 후, 상기 구절초 추출물에 증류수를 혼합하여 하기 표 1에 기재된 농도로 준비하여 처리한 다음, 37 ℃, 5 %(v/v)의 CO₂ 배양기에서 2 시간 동안 배양하였다.

그 다음, 프로스타글란딘 E₂ 자극원으로 칼슘 이오노포어 A23187(Calcium ionophore A23187)과 아라키돈산을 50 ㎛의 농도로 5 분간 처리한 후, 도데실트리메틸암모늄 브로마이드(dodecyltrimethylammonium bromide)를 최종 농도 0.25 %(w/v)로 10 분간 처리하여 세포를 용혈시켰다. 이 상층액을 goat-anti mouse Ig 로 코팅된 플레이트에 50 ㎕ 씩 취하여 넣어주고, 이때 프로스타글란딘 E₂ standard도 각각 농도를 변화시켜가며(20, 40, 80, 160, 240, 320, 480, 640 pg / 50 ㎕) 50 ㎕ 씩 넣어주었다.

여기에, 프로스타글란딘 E₂ 항체와 프로스타글란딘 E₂ 접합체를 각각 50 ㎕ 씩 넣어 플레이트 쉐이커로 2 시간 동안 상온에서 반응시킨 후, 배지 및 버퍼를 제거하고 4 회 수세하였다. 그 다음, 효소기질인 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(tetramethylbenzidine(TMB))/과산화수소(hydrogen peroxide)를 150 ㎕씩 넣어 쉐이커에서 30 분간 반응시킨 후, 반응 정지를 위하여 1M의 황산을 첨가하고 ELISA reader 450 nm에서 흡광도를 측정하여 정량하여 측정하고, 그 결과를 도 3 및 하기 표 2에 나타내었다. 이때, 하기 표 2의 억제율은 아라키돈산을 처리하지 않은 피부 섬유아세포와 아라키돈산을 처리한 섬유아세포의 프로스타글란딘 E₂ 생성량의 차이를 기준으로 계산하였으며, 상기 억제율은 5 회 반복하여 평균값을 기재하였다.

구분	농도 (%)	프로스타글란딘 E₂ (pg/10⁵ cells)	억제율 (%)
음성대조군	-	24.2 ± 4.4	-
양성대조군 (아라키돈산)	-	383.2 ± 10.1	-
구절초 추출물	0.01	262.6 ± 13.2	31.5
	0.1	201.9 ± 17.6	47.3
	1	110.4 ± 15.1	71.2

상기 표 2 및 도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 프로스타글란딘 E₂ 생성을 최고 71.2 %까지 매우 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었으며, 이로부터 구절초 추출물이 시클로옥시게나아제-2 효소의 유도작용 또는 활성을 저해하여 염증 반응을 억제하는 것임을 알 수 있었다.

(in vivo 항염 효과)

구절초의 동물 실험에서의 항염 효능을 알아보기 위하여, 하기와 같이 in vivo 평가법을 이용하여 실험하였다(mouse ear swelling test, MEST)(참고문헌 : A. Crummey, G. P. Harper, E. A. Boyle and F. R. Mangan. Inhibition of arachidonic acid-induced ear edema as a model for assessing topical anti-inflammatory compound. Agents and Actions 1987, 20, 69-76).

먼저, 무모 마우스(hairless mouse) 21 마리를 각 7 마리씩 3 개 군으로 나누어 0.5 %(v/v)의 구절초 추출물을 포함하는 에탄올을 시료로서 처리하는 시험군 1, 1.0 %(v/v)의 구절초 추출물을 포함하는 에탄올을 시료로서 처리하는 시험군 2, 구절초를 포함하지 아니하는 에탄올을 시료로서 처리하는 대조군으로 분류하였다.

각 군의 마우스의 양쪽 귀를 시료 적용 전 에탄올로 깨끗이 세척한 후, 마이크로미터를 이용하여 마우스의 귀 두께의 평균치를 측정하였다. 시험군 1 및 시험군 2는 각각의 시료 20㎕를, 대조군은 에탄올 20 ㎕를 도포하고 1 시간이 경과한 후, 대조군을 제외한 각각의 마우스의 좌측 귀에는 에탄올을, 우측 귀에는 아라키돈산을 각각 2 ㎎/ear씩 도포하고, 도포 1 시간 후 마이크로미터를 이용하여 양쪽 귀의 두께를 3 회씩 반복 측정하여 아라키돈산에 의한 귀의 부종(edema) 정도를 측정하였다.

이때, 아라키돈산을 도포하지 아니한 마우스의 좌측 귀는 시험군 1 및 시험군 2자체의 염증 유발 여부를 알아보기 위한 대조군으로 이용하였으며, 시료의 도포 전과 비교하여 별다른 차이를 보이지 아니하였다.

시험군 1 및 시험군 2의 항염 효과는 구절초를 포함하지 아니하는 에탄올을 처리한 대조군을 기준으로 부종 억제 정도를 판정하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

이때, 억제율은 하기 수학식 1에 따라 측정하였다.

[수학식 1]

억제율 (%) = {(A-B) / A} × 100

A: 대조군 귀의 평균두께 변화 (아라키돈산 처리 후 두께 - 아라키돈산 처리 전 두께)

B: 시험군 귀의 평균두께 변화 (아라키돈산 처리 후 두께 - 아라키돈산 처리 전 두께)

구분	구절초 농도 (부피 %)	귀 두께 (㎛)			억제율 (%)
구분	구절초 농도 (부피 %)	아라키돈산 처리 전	아리키돈산 처리 후	두께변화	억제율 (%)
시험군 1	0.5	321	555	234	20.5
시험군 2	1.0	318	528	210	28.6
대조군	-	323	618	295

상기 표 3을 통하여, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 0.5 %의 농도에서 20.5 %, 1.0 %의 농도에서는 28.6 %의 염증 억제율을 보여 in vivo 상에서도 항염 효능이 우수함을 확인할 수 있었다.

(안전성)

1. 세포독성 평가

구절초 추출물의 1차 안전성을 검증하고자 구절초 추출물에 대하여 V79-4세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의 연속 세포주)를 배양하여 MTT 시험을 하는 방법(참고 문헌 : Mossman T. Rapid colorimetric assay for cellular growth & survival : application to proliferation & cytotoxicity assays. Journal of Immunological Methods, 1983, 65, 55~63)을 수행하여 세포독성을 시험하고, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다. 이때, 대조군으로 SLS(Sodium lauryl sulfate)를 사용하였다.

시료	IC₅₀ (%, w/v)
SLS	0.005
구절초 추출물	10
[주] IC₅₀(Inhibitory Concentration 50) - 50 %의 세포를 사멸시키는 농도

상기 표 4를 통하여, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물의 IC₅₀ 값은 10 %로 SLS에 비하여 2,000 배 이상 세포독성이 낮게 나타나 안전성이 우수함을 확인할 수 있었다.

2. 알러지 평가

구절초의 알러지 유발여부를 확인하기 위한 실험으로 LLNA(local lymph node assay) 실험법을 실시하였다(참고문헌 : OECD GUIDELINE FOR THE TESTING OF CHEMICALS ; DRAFT NEW GUIDELINE 429: Skin Sensitization ; Local Lymph Node Assay).

먼저, 구절초 추출물을 각각 20 중량%, 40 중량%, 60 중량% 용액으로 제조하여, 마우스(Balb/c)의 양쪽 귀에 25 ㎕씩 3 일간 발라준 후, 마우스로부터 이개임파절(Auricular lymph node)을 분리하였다. 상기 분리한 임파절을 분쇄하여 단일세포 상태로 만든 후, 방사성 동위원소 [³H]-메틸티미딘(methyl thymidine)을 첨가하여 24 시간 동안 배양한 다음, 세포 증식의 dpm 및 증폭도를 측정하고, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다. 이때, 대조군으로는 에탄올 60 중량% 용액을 사용하였다.

구분	농도 (%)	임파절세포 수 (세포/mL × 10⁷)	dpm¹ (평균)	S.I.² (증폭도)
에탄올	60	2.27	1895	운반매개물
구절초 추출물	20	2.29	1242	0.7
구절초 추출물	40	2.32	1839	1.0
구절초 추출물	60	3.2	1714	0.9
[주] 1. dpm(disintegraion per minute) - [³H]-메틸티미딘이 세포내로 삽입되는 양 2. S.I.(stimulation index) - 시료의 평균 dpm을 대조군의 평균 dpm으로 나눈 값

알러지 평가 결과는 대조군에 비한 시료군의 임파구 증폭 정도로 나타내며, 한 농도에서라도 시료의 증폭 정도(S.I.)가 3 이상이고, 농도 의존적으로 증가하는 경향을 보일 경우 알러젠으로 간주하게 되는데, 상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 증폭 정도가 3 이하로서 알러지 유발 가능성이 없는 것으로 나타났다.

3. 인체첩포 시험

구절초의 인체에 대한 안전성을 알아보기 위하여, 하기와 같이 인체 첩포 시험(Human patch test)을 통하여 인체에 대한 1차 자극시험을 실시하였다. 건강한 성인 남녀 50 명을 대상으로 CTFA 가이드라인(참고문헌 : The Cosmetic, Toility and Fragrance Association. Inc. Washington, D.C., 20036, 1991)에 따라 실시하였다.

먼저, 핀 챔버(Finn Chamber)에 5 % 농도(v/v)의 구절초 추출물, 0.05 % 농도(w/v)의 SLS시료, 및 증류수를 각각 15 ㎕를 적하시킨 후, 이를 시험부위인 피시험자의 등에 얹어 테이프로 고정시켰다. 이어서, 24 시간 동안 첩포한 후, 첩포를 제거하고 다시 4 시간이 경과한 다음 시험부위의 피부 반응을 하기의 기준에 따라 판정하고, 그 결과를 표 6에 나타내었다. 이때, 자극도는 하기 수학식 2에 따라 측정하였다.

판정기준
0	홍반이나 특이한 현상 없음
1	주위보다 약간 붉어짐
2	주위보다 현저히 붉어짐
3	주위보다 심하게 붉어지고 부풀어 오름

[수학식 2]

자극도 = {(0 × 명) + (1 × 명) + (2 × 명) + (3 × 명)} / 피시험자 수

시료	판정결과 (명)				자극도
시료	3	2	1	0	자극도
증류수	-	3	6	41	0.24
0.05% SLS	1	4	11	33	0.44
5% 구절초 추출물	-	-	3	47	0.06

상기 표 6를 통하여, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 인체 도포시 자극이 없는 안전한 원료임을 확인할 수 있었다.

이상의 실험결과로부터, 본 발명의 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물에 사용되는 구절초 추출물은 항염 효능 및 혈류량 개선 효능이 탁월하고, 독성 및 피부에 대한 안전성도 우수한 물질임을 알 수 있었으며, 화장료 조성물로서 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제 등의 제형으로 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 혈류량 개선 및 항염증용 화장료 조성물은 피부 도포시 모세혈관의 확장을 통해 혈액 순환을 원활하게 하는 혈류량 개선 효과가 우수하면서, 동시에 시클로옥시게나아제(cyclooxygenase) 경로의 염증 유발 에이코사노이드(eicosanoid)인 프로스타글란딘 E₂(prostaglandin E₂)의 생성을 억제하는 등 항염 효능이 우수할 뿐만 아니라, 피부에 자극이 없이 안전한 효과가 있다.

Claims

구절초 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 혈류량 개선용 조성물.
제1항에 있어서, 항염증 효능을 더 가짐을 특징으로 하는 혈류량 개선용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 구절초 추출물이 조성물에 0.0001 내지 30 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 혈류량 개선용 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서,

상기 조성물이 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 에센스, 팩, 젤, 로션, 연고, 패취, 및 분무제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 제형인 것을 특징으로 하는 혈류량 개선용 조성물.