TW201309685A - 新穎結晶□衍生物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]□-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺、其製備方法、其醫學用途及包含該呈結晶形式之化合物的藥物。

Description

新穎結晶 衍生物
本發明大體而言係關於結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。本發明大體而言亦係關於包含結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之醫藥組合物，以及使用該結晶形式治療阿茲海默氏病(Alzheimer's Disease)之方法，及獲得該結晶物質之方法。
阿茲海默氏病為一種破壞性神經退化性病症。其偶發性形式侵襲年長群體(>75歲時發病率急劇增加)，另外存在四五十歲時發病之各種家族性形式。就病理學而言，其特徵在於存在胞外老年斑(extracellular senile plaque)及於患者腦中之胞內神經原纖維纏結(intracellular neurofibrillar tangle)。老年斑之核心成分為4 kDa小型類澱粉肽。其係藉由蛋白水解加工大型跨膜蛋白類澱粉前驅蛋白(APP)而生成。β-分泌酶(BACE-1)裂解APP會釋放可溶性APP-β片段，而99個胺基酸長之C端仍繫留於膜。此C端片段隨後由γ-分泌酶(一種膜多酶複合物)以蛋白水解方式加工生成各種長度之類澱粉肽，主要為40及42個胺基酸長(Hardy J,Selkoe DJ(2002) Science;297(5580):353-356)。
若在病理性條件下此等肽以增加之速率生成，或若其自腦中之移除受到干擾，則增加之腦類澱粉肽濃度會導致形成寡聚物、原纖維且最終形成斑(Farris W等人,(2007) Am.J. Pathol.;171(1):241-251)。已展示，腦中類澱粉肽及斑之沈積為阿茲海默氏病發病機制之第一可測事件，且其觸發突觸、突觸性接觸及神經元之損失(Grimmer T等人,(2009) Neurobiology of Aging;30(12):1902-1909)。大量神經元損失引起腦萎縮之後為認知、記憶力、方向性及執行日常生活任務之能力減弱，亦即臨床上表現為癡呆(Okello A等人,(2009) Neurology;73(10):754-760)。
BACE-1，亦稱為Asp2或Memapsin 2，為一種高度表現於神經元中之跨膜天冬胺酸蛋白酶。其與其受質APP共定位於高基體(Golgi)及內吞區室中(Willem M,Lammich S,Haass C(2009) Semin.Cell Dev.Biol;20(2):175-182)。小鼠基因剔除研究已證明無類澱粉肽形成，而該等動物為健康且可生育的(Ohno M等人,(2007) Neurobiol.Dis.;26(1):134-145)。APP過度表現小鼠中BACE-1之遺傳切除已證明無斑形成及逆轉認知缺陷(Ohno M等人,(2004) Neuron;41(1):27-33)。偶發性阿茲海默氏病患者腦中之BACE-1含量升高(Hampel H,Shen Y(2009) Scand. J. Clin. Lab. Invest.;69(1):8-12)。
總之，此等研究結果表明抑制BACE-1可為治療阿茲海默氏病之有利治療策略。
本發明係關於具有BACE抑制活性之新穎結晶衍生物，亦即結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺、其製備方法、其醫學用途及包含該結晶衍生物之藥物。
就至少化學穩定性及調配容易性而言，結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺提供優於相應非結晶化合物的優勢。
因此，在本發明之第一態樣中，提供呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。
5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之化學結構為
為避免疑義，本發明提供呈游離形式之結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。術語「游離形式」係指未形成鹽之化合物本身。
在本發明之一個實施例中，提供呈實質上純形式之結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。
如本文所用，「實質上純」在提及結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺使用時意謂以該化合物之重量計，5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之純度大於90重量%，包括大於90、91、92、93、94、95、96、97、98及99重量%，且亦包括等於約100重量%。
反應雜質及/或加工雜質之存在可藉由此項技術中已知的分析技術測定，諸如層析法、核磁共振光譜法、質譜法或紅外光譜法。
在一更關注態樣中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有至少一個、兩個或三個折射角2θ值選自8.3°、9.0°、10.9°、12.9°、13.9°、15.4°、16.2°、17.1°、18.2°及24.5°之峰，更特定言之，其中該等值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有至少一個、兩個、三個或四個折射角2θ值選自8.3°、9.0°、10.9°、12.9°、13.9°、15.4°、16.2°、17.1°、18.2°及24.5°之峰，更特定言之，其中該等值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為8.3°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為9.0°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為10.9°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為12.9°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為13.9°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為15.4°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為16.2°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為17.1°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為18.2°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有一個折射角2θ值為24.5°之峰，更特定言之，其中該值加上或減去0.2° 2θ。
在一個實施例中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖與圖1中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同。詳情參見實例6。
術語「實質上相同」提及X射線繞射峰位置時意謂典型的峰位置，且考慮強度變化。舉例而言，熟習此項技術者應瞭解峰位置(2θ)應顯示一些裝置間變化，通常差不多0.2°。此外，熟習此項技術者應瞭解相對峰強度應顯示裝置間變化以及歸因於結晶度、較佳定向、所製備之樣品表面及熟習此項技術者已知之其他因素的變化，且應僅視為定性量度。
一般熟習此項技術者亦應瞭解，X射線繞射圖可在有量測誤差下獲得，量測誤差係視所採用量測條件而定。詳言之，通常已知X射線繞射圖之強度可視所採用量測條件而波動。進一步應瞭解，相對強度亦可視實驗條件而變化，且因此不應考慮強度之精確階數。另外，習知X射線繞射圖之繞射角之量測誤差通常為約5%或5%以下，且當與上述繞射角有關時，應考慮該量測誤差程度。因此，應瞭解，本發明之晶體形式不限於X射線繞射圖與本文所揭示之附圖中描繪的X射線繞射圖完全一致的晶體形式。X射線繞射圖與附圖中所揭示之X射線繞射圖實質上一致之任何晶體形式皆屬於本發明之範疇。一般熟習此項技術者均能夠確定X射線繞射圖之實質上一致性。
在本發明之另一態樣中，本發明係關於5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之結晶形式，其差示掃描熱量測定(DSC)溫譜圖與圖2中所示實質上相同。
呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺在下文中通常稱為「本發明之藥劑」或「本發明之化合物」，當活體外或活體內測試時展現有價值的藥理學性質，且因此可適用於藥物中、療法中或適用作研究用化學品，例如作為工具化合物。
舉例而言，本發明之藥劑為天冬胺酸蛋白酶抑制劑，且可用於治療或預防涉及該等酶之加工的病狀、疾病或病症。特定言之，本發明之藥劑抑制β-分泌酶，且因此抑制β-類澱粉之生成及形成寡聚物及原纖維之後續聚集。
本發明之藥劑對蛋白酶之抑制性質可在下文所述之測試中評估。
測試1：對人類BACE-1之抑制
在室溫下，與含各種濃度之測試化合物的10 mM至100 mM乙酸鹽緩衝液(pH 4.5，含0.1% CHAPS)一起培育0.1 nM至10 nM濃度之重組BACE-1(胞外域，表現於桿狀病毒中且使用標準方法純化)1小時。添加源自APP序列且含有適合螢光團-淬滅劑對之合成螢光-淬滅肽受質，最終濃度為1 μM至5 μM，且在微板光譜螢光計中在適合激發/發射波長下以1分鐘時間間隔記錄螢光增量5至30分鐘。由隨測試化合物濃度變化之BACE-1活性抑制百分比計算IC50值。
測試2：對人類BACE-2之抑制
在室溫下，與含各種濃度之測試化合物的10 mM至100 mM乙酸鹽緩衝液(pH 4.5，含0.1% CHAPS)一起培育0.1 nM至10 nM濃度之重組BACE-2(胞外域，表現於桿狀病毒中且使用標準方法純化)1小時。添加源自APP序列且含有適合螢光團-淬滅劑對之合成螢光-淬滅肽受質，最終濃度為1 μM至5 μM，且在微板光譜螢光計中在適合激發/發射波長下以1分鐘時間間隔記錄螢光增量5至30分鐘。由隨測試化合物濃度變化之BACE-2活性抑制百分比計算IC50值。
測試3：對人類組織蛋白酶D(cathepsin D)之抑制
在室溫下，與含各種濃度之測試化合物的適合pH值(在pH 3.0至5.0範圍內)之甲酸鈉或乙酸鈉緩衝液一起培育重組組織蛋白酶D(以前組織蛋白酶D形式表現於桿狀病毒中，使用標準方法純化且藉由在甲酸鈉緩衝液(pH 3.7)中培育來活化)1小時。添加合成肽受質Mca-Gly-Lys-Pro-Ile-Leu-Phe-Phe-Arg-Leu-Lys(DNP)-D-Arg-NH2，最終濃度為1 μM至5 μM，且在微板光譜螢光計中，在325 nm之激發波長及400 nm之發射波長下以1分鐘時間間隔記錄螢光增量5至30分鐘。由隨測試化合物濃度變化之組織蛋白酶D活性抑制百分比計算IC50值。
測試4：對類澱粉肽1-40之細胞釋放的抑制
用類澱粉前驅蛋白之人類基因轉染中國倉鼠卵巢細胞。將細胞以8000個細胞/孔之密度塗佈於96孔微量滴定板中且在含有10% FCS之DMEM細胞培養基中培養24小時。將各種濃度之測試化合物添加至細胞中，且在測試化合物存在下培養細胞24小時。收集上清液，且使用目前技術水平之免疫分析技術測定類澱粉肽1-40之濃度，例如夾心ELISA、均相時差式螢光(HTRF)免疫分析或電化學發光免疫分析。由隨測試化合物濃度變化之類澱粉肽釋放抑制百分比計算化合物效能。
在上述測試1及測試4中測試非晶形及結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。
實例化合物在測試1中顯示以下平均IC50值：
實例化合物在測試4中顯示以下平均IC50值：
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之載劑」包括任何溶劑、分散介質、塗料、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等滲劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料及其類似物及其組合，如熟習此項技術者所知(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版Mack Printing Company,1990,第1289-1329頁)。除非任何習知載劑與活性成分不相容，否則涵蓋其在治療或醫藥組合物中之用途。
術語「治療有效量」之本發明化合物係指本發明化合物之量將引發個體之生物學或醫學反應(例如降低或抑制酶或蛋白質活性)或改善症狀、減輕病狀、減緩或延緩疾病進展、或預防疾病等。在一個非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指本發明化合物之量在投與個體時有效(1)至少部分減輕、抑制、預防及/或改善(i)由BACE-1介導或(ii)與BACE-1活性相關或(iii)以BACE-1活性(正常或異常)為特徵之病狀或病症或疾病；或(2)降低或抑制BACE-1之活性。在另一非限制性實施例中，術語「治療有效量」係指本發明化合物之量在投與細胞、或組織、或非細胞生物材料、或培養基時，有效至少部分降低或抑制BACE-1之活性。如上述實施例關於BACE-1所說明之術語「治療有效量」之含義亦以相同方式適用於任何其他相關蛋白質/肽/酶，諸如BACE-2或組織蛋白酶D。
如本文所用，術語「個體」係指動物。動物通常為哺乳動物。個體亦指例如靈長類動物(例如人類，男性或女性)、奶牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、兔、大鼠、小鼠、魚、鳥及其類似物。在某些實施例中，個體為靈長類動物。在又其他實施例中，個體為人類。
如本文所用，術語「抑制(inhibit/inhibition/inhibiting)」係指減輕或抑制既定病狀、症狀、或病症、或疾病，或顯著降低生物活性或過程之基線活性。
如本文所用，在一個實施例中，術語「治療(treat/treating/treatment)」任何疾病或病症係指改善疾病或病症(亦即減緩或阻止或減慢疾病之進展或其至少一個臨床症狀)。在另一實施例中，「治療」係指減輕或改善至少一個身體參數，包括患者不可辨別之身體參數。在另一實施例中，「治療」係指在身體上(例如穩定可辨別之症狀)、生理上(例如穩定身體參數)或兩方面調節疾病或病症。
如本文所用，術語「預防」任何特定疾病或病症係指在該疾病或病症之任何症狀明顯之前向個體投與本發明化合物。
如本文所用，若個體將在生物學、醫學或生活品質方面自治療中獲益，則該個體「需要」該治療。
如本文所用，術語本發明之「藥劑」可與術語本發明之「化合物」互換使用且含義無差異。
除非本文中另作說明或與本文明顯抵觸，否則如本文所用，在本發明中(尤其在申請專利範圍中)所用之術語「一」、「該」及類似術語應解釋為包括單數與複數。使用本文所提供之任何及所有實例或例示性語言(例如「諸如」)僅意欲較佳地說明本發明，且不對所主張之本發明之範疇造成限制。
由於對蛋白酶之抑制性質，本發明藥劑可適用於例如治療或預防各種精神病學、精神病、神經或血管障礙狀況，例如治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之血管系統或神經系統病狀、疾病或病症，或基於BACE-2(β-位點APP裂解酶2)或組織蛋白酶D(其為胃蛋白酶型天冬胺醯蛋白酶及β-分泌酶之相近同源物)之抑制及BACE-2或組織蛋白酶D表現與腫瘤細胞之更高致瘤或轉移可能的相關性，作為抗癌藥物，例如用於抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程。該血管系統或神經系統之病狀、疾病或病症例示為且包括(但不限於)焦慮症，諸如有或無畏曠症之恐慌症、無恐慌症病史之畏曠症、動物或其他特定恐懼症，包括社交恐懼症、社交焦慮症、焦慮、強迫症、壓力症(包括創傷後壓力症或急性壓力症)、或一般焦慮症或物質誘導焦慮症；神經官能病；發作(seizures)；癲癇，尤其部分發作，演變為繼發全身性發作或全身性發作之簡單發作、複雜發作或部分發作[不存在(典型或非典型)肌陣攣發作、陣攣發作、強直發作、強直-陣攣發作或失張力(atonic)發作]；驚厥；偏頭痛；情感障礙，包括抑鬱症或躁鬱症，例如單次發作或復發性嚴重抑鬱症、嚴重抑鬱、低落性情感病症、心境惡劣、抑鬱症NOS、雙極I型或雙極II型躁狂症或循環情感性精神障礙；精神病症，包括精神分裂症或抑鬱；神經退化，例如由大腦局部缺血引起之神經退化；神經系統之急性、創傷性或慢性退化過程，諸如帕金森氏病(Parkinson's disease)、唐氏症候群(Down's syndrome)、癡呆(例如老年癡呆、路易體癡呆或額顳葉癡呆)、認知病症、認知障礙(例如輕度認知障礙)、記憶損傷、類澱粉神經病變、周邊神經病變、阿茲海默氏病、格斯特曼-施特勞斯-沙尼格症候群(Gerstmann-Straeussler-Scheinker syndrome)、尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)(例如C型尼曼-皮克病)、腦炎症、腦損傷、脊髓損傷或神經損傷(例如創傷性腦損傷(TBI))、神經創傷或腦創傷、血管類澱粉症、伴以類澱粉症之大腦出血、亨廷頓氏舞蹈病(Huntington's chorea)、肌萎縮性側索硬化、多發性硬化症或X脆折症候群；癢病；腦澱粉樣血管病；腦病，例如傳染性綿體腦病；中風；注意力病症，例如注意力不足過動症；妥瑞症候群(Tourette's syndrome)；言語病症，包括口吃；晝夜節律紊亂，例如在遭受時差或換班工作影響之個體中；疼痛；傷害感受；疥瘡；嘔吐，包括急性嘔吐、延遲性嘔吐或預想性嘔吐，諸如由化學療法或放射療法誘發之嘔吐、動暈症或術後噁心或嘔吐；進食障礙，包括神經性厭食症或神經性貪食症；經前症候群；肌肉痙攣或痙攣狀態，例如在截癱患者中；聽覺障礙，例如耳鳴或年齡相關聽力損傷；尿失禁；青光眼；包涵體肌炎；物質相關病症，包括物質濫用或物質依賴，包括物質(諸如酒精)戒斷症。本發明藥劑亦可適用於增強認知，例如在罹患癡呆病狀(諸如阿茲海默氏病)之個體中；作為麻醉或微小醫學介入(諸如內視鏡檢法，包括胃內視鏡檢法)之前的預用藥；或作為配體，例如放射性配體或正電子發射斷層攝影法(PET)配體。
對於上述適應症，適當劑量將視例如用作活性醫藥成分之化合物、宿主、投藥模式、病狀、疾病或病症之性質及嚴重程度、或所要效應而變化。然而，一般指示動物中令人滿意的結果在每公斤動物體重約0.1 mg至約100 mg、較佳約1 mg至約50 mg之日劑量下獲得。在較大哺乳動物(例如人類)中，指示之日劑量範圍為約0.5 mg至約2000 mg、較佳約2 mg至約200 mg之本發明藥劑，宜例如以多至一天四次之分次給藥投與或以持續釋放形式投與。
本發明藥劑可藉由任何習知途徑來投與，詳言之經腸投與，較佳經口投與，例如以錠劑或膠囊形式；或非經腸投與，例如以可注射溶液或懸浮液形式。
在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合物，其包含本發明藥劑作為活性醫藥成分，以及至少一種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑，以及視情況存在之其他輔助物質，諸如細胞色素P450酶之抑制劑、防止細胞色素P450降解活性醫藥成分之劑、改良或增強活性醫藥成分之藥物動力學之劑、改良或增強活性醫藥成分之生物可用性之劑等，例如葡萄柚汁、酮康唑(ketoconazole)或較佳利托那韋(ritonavir)。該組合物可以習知方式製造，例如藉由混合其組分。單位劑型含有例如約0.1 mg至約1000 mg、較佳約1 mg至約500 mg之本發明藥劑。
此外，本發明之醫藥組合物可以固體形式(包括但不限於膠囊、錠劑、丸劑、顆粒、粉末或栓劑)或液體形式(包括但不限於溶液、懸浮液或乳液)配製。該等醫藥組合物可經受習知醫藥操作(諸如滅菌)及/或可含有習知惰性稀釋劑、潤滑劑或緩衝劑以及佐劑(諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑及緩衝劑等)。
醫藥組合物通常為包含活性成分以及以下之錠劑或明膠膠囊：
a)　稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素及/或甘胺酸；
b)　潤滑劑，例如矽石、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂鹽或鈣鹽及/或聚乙二醇；對於錠劑，亦包含
c)　黏合劑，例如矽酸鎂鋁、澱粉糊、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉及/或聚乙烯吡咯啶酮；若需要，包含
d)　崩解劑，例如澱粉、瓊脂、褐藻酸或其鈉鹽、或起泡混合物；及/或
e)　吸收劑、著色劑、調味劑及甜味劑。
根據此項技術中已知之方法，錠劑可包覆膜或包覆腸衣。
適於經口投與之組合物包括有效量之本發明化合物，呈錠劑、口含錠、水性或油性懸浮液、可分散粉末或顆粒、乳液、硬或軟膠囊、或糖漿或酏劑。根據製造醫藥組合物之技術中已知之任何方法製備意欲經口使用之組合物，且該等組合物可含有一或多種選自由甜味劑、調味劑、著色劑及防腐劑組成之群之劑，以提供醫藥學上優美且可口之製劑。錠劑可含有活性成分與適用於製造錠劑之醫藥學上可接受之無毒賦形劑混合。此等賦形劑為例如惰性稀釋劑，諸如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；粒化及崩解劑，例如玉米澱粉或褐藻酸；黏合劑，例如澱粉、明膠或阿拉伯膠；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石。錠劑未包覆包衣或藉由已知技術包覆包衣以延遲在胃腸道中之崩解及吸收，且藉此提供較長時期之持續作用。舉例而言，可採用時間延遲物質，諸如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用於經口使用之調配物可以活性成分與惰性固體稀釋劑(例如碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合之硬明膠膠囊或以活性成分與水或油介質(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)混合之軟明膠膠囊提供。
某些可注射組合物為水性等滲溶液或懸浮液，且栓劑宜自脂肪乳液或懸浮液製備。該等組合物可經滅菌及/或含有佐劑，諸如防腐劑、穩定劑、濕潤劑或乳化劑、溶解促進劑、調節滲透壓之鹽及/或緩衝劑。另外，其亦可含有其他治療上有價值之物質。該等組合物分別根據習知混合、粒化或包覆包衣方法製備，且含有約0.1-75%，或含有約1-50%之活性成分。
適於經皮施用之組合物包括有效量之本發明化合物及適合載劑。適於經皮傳遞之載劑包括協助穿過宿主皮膚的可吸收之藥理學上可接受之溶劑。舉例而言，經皮裝置為繃帶形式，其包含底部件、含有化合物及視情況與載劑的貯器、視情況長期以受控及預定速率傳遞化合物至宿主皮膚之速率控制障壁、及使裝置固定於皮膚之構件。
適於局部施用(例如施用於皮膚及眼睛)之組合物包括水溶液、懸浮液、軟膏、乳霜、凝膠或可噴霧調配物(例如用於藉由氣霧劑或其類似物傳遞)。該等局部傳遞系統將尤其適於真皮施用，例如用於治療皮膚癌，例如在防曬霜、洗劑、噴霧及其類似物中用於預防性用途。因此其尤其適於局部使用，包括化妝品、此項技術中熟知的調配物。其可含有增溶劑、穩定劑、張力增強劑、緩衝劑及防腐劑。
如本文所用，局部施用亦可涉及吸入或鼻內施用。其宜以乾粉形式(以混合物(例如含乳糖之乾摻合物)形式單獨或以混合的組分粒子(例如含磷脂)形式)自乾粉吸入器中傳遞或以氣溶膠噴霧形式在使用或不使用適合推進劑情況下自加壓容器、泵、噴霧器、霧化器或氣霧器中傳遞。
本發明進一步提供包含本發明化合物作為活性成分的無水醫藥組合物及劑型，因為水可促使某些化合物降解。
本發明之無水醫藥組合物及劑型可藉由使用無水或含低水分之成分且在低水分或低濕度條件下製備。可製備無水醫藥組合物且以維持其無水性質之方式儲存。因此，無水組合物藉由使用已知防止曝露於水之材料包裝使得其可包括在適合的配方套組中。適合的包裝實例包括(但不限於)密封箔、塑膠、單位劑量容器(例如小瓶)、泡罩包裝及條帶包裝。
本發明進一步提供醫藥組合物及劑型，其包含一或多種降低作為活性成分之本發明化合物分解速率之劑。該等劑在本文中稱為「穩定劑」，包括(但不限於)抗氧化劑(諸如抗壞血酸)、pH緩衝劑或鹽緩衝劑等。
如上所述，在另一態樣中，本發明係關於本發明藥劑，其適用作藥物，例如用於治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之神經或血管病狀、疾病或病症，或用於抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程。在另一實施例中，本發明係關於本發明藥劑，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病症。在一個實施例中，本發明係關於本發明藥劑，其用於治療阿茲海默氏病或輕度認知障礙。
在另一態樣中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其作為藥物中之活性醫藥成分，該藥物例如用於治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之神經或血管病狀、疾病或病症，或用於抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程。在另一實施例中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其作為藥物中之活性醫藥成分，該藥物用於治療或預防由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病症。在一個實施例中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其作為藥物中之活性醫藥成分，該藥物用於治療或預防阿茲海默氏病或輕度認知障礙。
在另一態樣中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其用於製造用以治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之神經或血管病狀、疾病或病症或用以抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程的藥物。在另一實施例中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其用於製造用以治療或預防由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病症的藥物。在一個實施例中，本發明係關於本發明藥劑之用途，其用於製造用以治療或預防阿茲海默氏病或輕度認知障礙之藥物。
在另一態樣中，本發明係關於一種用於需要治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之神經或血管病狀、疾病或病症或抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程之個體之該治療、預防或抑制的方法，該方法包含向該個體投與有效量之本發明藥劑。在一個實施例中，本發明係關於一種調節個體之BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性之方法，其中該方法包含向該個體投與治療有效量之本發明藥劑。在另一實施例中，本發明係關於一種用於需要治療或預防由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病的個體之該治療或預防的方法，該方法包含向該個體投與有效量之本發明藥劑。在另一實施例中，本發明係關於一種用於需要治療或預防阿茲海默氏病或輕度認知障礙之個體之該治療或預防的方法，該方法包含向該個體投與有效量之本發明藥劑。
本發明藥劑可以單一活性醫藥成分形式或以與至少一種其他活性醫藥成分之組合的形式投與，該至少一種其他活性醫藥成分有效例如治療或預防β-類澱粉生成或聚集起作用之神經或血管病狀、疾病或病症或抑制與腫瘤細胞相關之轉移過程。該醫藥組合可呈單位劑型形式，該單位劑型包含預定量之各至少兩種活性組分以及至少一種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。或者，該醫藥組合可呈分開地包含至少兩種活性組分之包裝的形式，例如適於相伴或分開投與該至少兩種活性組分之包裝或施配器裝置，其中此等活性組分分開配置。在另一態樣中，本發明係關於該等醫藥組合。
因此，在另一態樣中，本發明係關於一種醫藥組合，其包含治療有效量之本發明藥劑及第二藥物，其係同時或相繼投與。
在一個實施例中，本發明提供一種包含本發明藥劑及至少一種其他治療劑的呈組合製劑形式之產品，其同時、分開或相繼用於療法中。在一個實施例中，該療法為治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀。
在一個實施例中，本發明提供一種醫藥組合物，其包含本發明藥劑及另一(其他)治療劑。如上所述，醫藥組合物可視情況包含醫藥學上可接受之賦形劑。
在一個實施例中，本發明提供一種套組，其包含兩種或兩種以上分開的醫藥組合物，其中至少一者含有本發明藥劑。在一個實施例中，該套組包含用於分開保存該等組合物之構件，諸如容器、分隔瓶或分隔箔封包。該套組之實例為通常用於包裝錠劑、膠囊及其類似物之泡罩包裝。本發明套組可用於投與不同的劑型(例如經口及非經腸劑型)，用於在不同給藥時間間隔投與分開的組合物或用於相對於彼此滴定分開的組合物。為有助於順應性，本發明套組通常包含投藥說明書。
在本發明之組合療法中，本發明藥劑及另一治療劑可由相同或不同製造商製造及/或調配。此外，本發明化合物及另一治療劑可一起用於組合療法中：(i)在對醫師發行組合產品之前(例如在套組包含本發明化合物及另一治療劑的情況下)；(ii)在投藥之前不久由醫師親自進行(或在醫師指導下進行)；(iii)由患者本人進行，例如，在相繼投與本發明化合物及另一治療劑期間。因此，本發明提供適用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀的本發明藥劑，其中該藥劑準備與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑之用途，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀，其中該藥物與本發明藥劑一起投與。
本發明亦提供本發明藥劑，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀之方法中，其中本發明藥劑準備與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀之方法中，其中該另一治療劑準備與本發明藥劑一起投與。本發明亦提供本發明藥劑，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀之方法中，其中本發明藥劑與另一治療劑一起投與。本發明亦提供另一治療劑，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀之方法中，其中該另一治療劑與本發明藥劑一起投與。
本發明亦提供本發明藥劑之用途，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀，其中患者先前(例如在24小時內)已用另一治療劑治療。本發明亦提供另一治療劑之用途，其用於治療由BACE-1、BACE-2或組織蛋白酶D活性介導之疾病或病狀，其中患者先前(例如在24小時內)已用本發明藥劑治療。
在一個實施例中，本發明係關於與另一治療劑組合之本發明化合物，其中該另一治療劑係選自：(a)　乙醯膽鹼酯酶抑制劑，諸如冬尼培唑(donepezil，AriceptTM)、雷斯替明(rivastigmine，ExelonTM)及加蘭他敏(galantamine，RazadyneTM)；(b)　麩胺酸拮抗劑，諸如美金剛(memantine，NamendaTM)；(c)　用於情緒消沉及煩躁之抗抑鬱藥物，諸如西它普蘭(citalopram，CelexaTM)、氟西汀(fluoxetine，ProzacTM)、帕羅西汀(paroxeine，PaxilTM)、舍曲林(sertraline，ZoloftTM)及曲唑酮(trazodone，DesyrelTM)；(d)　用於焦慮症、不安、口語干擾行為及反抗之抗焦慮劑，諸如勞拉西泮(lorazepam，AtivanTM)及奧沙西泮(oxazepam，SeraxTM)；(e)　用於幻覺、錯覺、攻擊行為、精神激動、不友善及不合作的抗精神病藥物，諸如阿立哌唑(aripiprazole，AbilifyTM)、氯氮平(clozapine，ClozarilTM)、氟哌啶醇(haloperidol，HaldolTM)、奧氮平(olanzapine，ZyprexaTM)、喹硫平(quetiapine，SeroquelTM)、利培酮(risperidone，RisperdalTM)及齊拉西酮(ziprasidone，GeodonTM)；(f)　情緒穩定劑，諸如卡馬西平(carbamazepine，TegretolTM)及雙丙戊酸(divalproex，DepakoteTM)；(g)　菸鹼α-7促效劑；(h)　mGluR5拮抗劑；(i)　H3促效劑；及(j)　類澱粉治療疫苗。
下列實例說明本發明。
實例 縮寫清單
DMAP　4-二甲胺基吡啶
DMF　二甲基甲醯胺
DMSO　二甲亞碸
EDC　1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽
EtOAc　乙酸乙酯
h　小時
nBuLi　正丁基鋰
NEt3　三乙胺
Pd2(dba)3　參(二亞苄基丙酮)二鈀(0)
TBME　第三丁基甲基醚
tBu3P　三第三丁基膦
TFA　三氟乙酸
THF　四氫呋喃
TLC　薄層層析
一般層析資訊 HPLC方法H1(Rt H1 )：
HPLC管柱尺寸：3.0×30 mm
HPLC管柱類型：Zorbax SB-C18，1.8 μm
HPLC溶離劑：A)水+0.05 Vol.-% TFA；B) ACN+0.05 Vol.-% TFA
HPLC梯度：在3.25分鐘內30-100% B，流速=0.7毫升/分鐘
LCMS方法H3(Rt H3 )：
HPLC管柱尺寸：3.0×30 mm
HPLC管柱類型：Zorbax SB-C18，1.8 μm
HPLC溶離劑：A)水+0.05 Vol.-% TFA；B)ACN+0.05 Vol.-% TFA
HPLC梯度：在3.25分鐘內10-100% B，流速=0.7毫升/分鐘
UPLC方法H5(Rt H5 )：
HPLC管柱尺寸：2.1×50 mm
HPLC管柱類型：Acquity UPLC HSS T3 C18，1.7 μm
HPLC溶離劑：A)水+0.1 Vol.-% TFA；B) ACN+0.1 Vol.-% TFA
HPLC梯度：在1.5分鐘內5-100% B，流速=1.0毫升/分鐘
實例1：製備呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺
a) 2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇
在氬氣下在-50℃以下，向二異丙胺(57.3 ml，402 mmol)於THF(500 ml)中之溶液中添加nBuLi於己烷中之1.6 M溶液(260 ml，416 mmol)。在-75℃下攪拌30分鐘後，添加4-溴-1-氟苯(31.1 ml，277 mmol)，同時保持溫度在-70℃以下。在-75℃下攪拌2小時後，在-65℃以下添加丙酮(41.2 ml，554 mmol)且在-75℃下攪拌反應混合物1小時，升溫至-50℃且傾倒於10% NH4Cl水溶液上。用TBME萃取混合物，用KHSO4水溶液、飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌有機相，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。自己烷中結晶粗產物，得到呈白色晶體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 3:1): Rf=0.45；UPLC RtH5=1.045 min；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.74(dd,1H),7.36(m,1H),6.93(dd,1H),2.04(d,1H),1.63(s,6H)。
b) 4-溴-1-氟-2-異丙烯基-苯
向2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇(119.7 g，498 mmol)於CH2Cl2(50 ml)中之溶液中添加對苯二酚(2.74 g，24.9 mmol)及250 ml 85% H3PO4。在50℃下攪拌所得反應混合物3.5小時。將混合物傾倒於冰-水上且用CH2Cl2萃取。用2N NaOH水溶液及水洗滌有機相，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將粗產物溶解於己烷中且經由矽膠犁過濾，在600毫巴下濃縮後獲得呈無色油狀之標題化合物：TLC(己烷): Rf=0.52；UPLC RtH5=1.416 min；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.43(dd,1H),7.37(m,1H),6.94(dd,1H),5.27(d,2H),2.13(s,3H)。
c) (S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-1,2-二醇
在0℃下，向K3Fe(CN)6(186 g，561 mmol)、K2CO3(78 g，561 mmol)、(DHQ)2-PHAL(1.311 g，1.674 mmol)及K2OsO2(OH)4(0.378 g，1 mmol)於t-BuOH-H2O 1:1(1600 ml)中之懸浮液中添加4-溴-1-氟-2-異丙烯基-苯(36 g，167 mmol)，且在0℃下攪拌反應混合物14小時。在0-5℃下小心地添加Na2S2O5(100 g)後，攪拌反應混合物1小時，隨後用EtOAc萃取。用5% NaS3O3溶液及鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，得到呈白色固體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.46；UPLC RtH5=0.767 min；ESIMS: 266,268[(M+NH4)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.71(dd,1H),7.27(m,1H),6.83(dd,1H),3.85(d,1H),3.62(d,1H),2.94(s,3H),2.01(s,1H),1.43(s,3H)。
d) (S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-甲基-環氧乙烷
在0-5℃下，在氬氣下，向(S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-1,2-二醇(37.35 g，150 mmol)於CH2Cl2(400 ml)中之溶液中添加NEt3(41.8 ml，300 mmol)且逐滴添加甲磺醯氯(12.8 ml，165 mmol)。在0-5℃下攪拌0.5小時後，將反應混合物添加至冷的1 N HCl中且用CH2Cl2萃取。用1 N HCl、H2O及飽和NaHCO3溶液洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。將粗甲磺酸酯溶解於TBME(500 ml)及200 ml 2 N NaOH水溶液中，且在25℃下攪拌2小時後，用TBME萃取混合物。用NaH2PO4溶液及鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，得到呈無色油狀之(S)-對映異構體：78% ee(Chiralpak AS-H 1218,己烷-EtOH 97:3,0.4 mL/min)；TLC(己烷-EtOAc 3:1): Rf=0.69；UPLC RtH5=1.186 min；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.46(dd,1H),7.30(m,1H),6.83(dd,1H),2.88(d,1H),2.72(d,1H),1.59(s,3H)。
e) (S)-1-疊氮基-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇
向(S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-甲基-環氧乙烷(51.85 g，224 mmol)於EtOH(800 ml)中之溶液中添加NaN3(36.8 g，531 mmol)、NH4Cl(60.6 g，1122 mmol)及18-冠-6(59.8 g，224 mmol)，且回流加熱反應混合物6小時。過濾反應混合物且濃縮至其一半體積。用EtOAc萃取殘餘油狀物。用飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，得到呈淡黃色油狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.70；UPLC RtH3=1.115 min；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.72(dd,1H),7.32(m,1H),6.85(dd,1H),3.73(d,1H),3.51(d,1H),2.44(s,1H),1.50(s,3H)。
f) (S)-1-胺基-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇
在0-5℃下，在氬氣下，經30分鐘之時間向LiAlH4(4.65 g，122 mmol)於THF(250 ml)中之懸浮液中添加(S)-1-疊氮基-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇(33.4 g，122 mmol)溶解於THF(150 ml)中之溶液。在0-5℃下攪拌1小時後，藉由小心地添加水(4.7 ml)、4 N NaOH(4.7 ml)及水(14.1 ml)淬滅反應，且在25℃下再攪拌3小時。用MgSO4乾燥白色懸浮液，過濾且濃縮。自TBME-己烷中再結晶凝固產物，得到呈米色晶體狀之標題化合物：98% ee(Chiralpak AD-H己烷-EtOH 75-25+0.05% NEt3)；TLC(CH2Cl2-MeOH 10:1) Rf=0.10；UPLC RtH5=0.558 min;ESIMS: 248,250[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.76(dd,1H),7.25(m,1H),6.82(dd,1H),4.16(br s,1H),3.19(d,1H),2.72(d,1H),1.44(s,3H),0.95(br s,2H)。
g) N-[(S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-羥基-丙基]-2-硝基-苯磺醯胺
在0-5℃下，經0.5小時之時間依次向(S)-1-胺基-2-(5-溴-2-氟-苯基)-丙-2-醇(34.7 g，140 mmol)於THF(400 ml)中之溶液中添加2-硝基-苯磺醯氯(34.9 g，154 mmol)及1 N NaOH水溶液。在20℃下攪拌反應混合物2小時。用TBME稀釋反應混合物且用水及NaH2PO4溶液及鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，自TBME-己烷中結晶後，得到呈米色晶體狀之標題化合物：TLC(甲苯-EtOAc 3:1): Rf=0.51；UPLC RtH5=1.118 min；ESIMS: 450,452[(M+NH4)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.98(m,1H),7.81(m,1H),7.65(m,2H),7.59(dd,1H),7.24(m,1H),6.79(dd,1H),5.60(t,1H),4.16(br s,1H),3.55(dd,1H),3.44(dd,1H),2.51(s,1H),1.51(s,3H)。
h) (R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-甲基-1-(2-硝基-苯磺醯基)-氮丙啶
在0-5℃下，向N-[(S)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-羥基-丙基]-2-硝基-苯磺醯胺(20.8 g，48 mmol)於CH2Cl2(400 ml)中之溶液中添加PPh3(19.2 g，72.4 mmol)及偶氮二甲酸二乙酯(11.6 ml，72.4 mmol)。在25℃下攪拌反應混合物24小時且濃縮。進行矽膠層析純化(己烷-EtOAc 20:1至2:1)後，獲得呈黃色晶體狀之標題化合物：TLC(甲苯-EtOAc 3:1): Rf=0.69；UPLC RtH5=1.308 min；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 8.31(m,1H),7.28(m,3H),7.60(dd,1H),7.42(m,1H),6.91(dd,1H),3.24(s,1H),2.81(s,1H),2.06(s,3H)。
i) (R)-2-[(R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺醯胺基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙酸乙酯
在氬氣下，向NaH(2.53 g，60%於礦物油中，63 mmol)於DMF(160 ml)中之懸浮液中逐滴添加(R)-3,3,3-三氟-2-羥基-2-甲基-丙酸乙酯(11.99 g，63 mmol)，且在20℃下攪拌0.5小時後，添加(R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-甲基-1-(2-硝基-苯磺醯基)-氮丙啶(21.85 g，52.6 mmol)。使反應物保持在25℃下16小時。將混合物添加至冷的2 N HCl水溶液中且用TBME萃取產物。用飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。使殘餘固體自TBME-己烷中再結晶，得到呈黃色晶體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.59；UPLC RtH5=1.444 min；ESIMS: 618,620[(M+NH4)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.83(dd,1H),7.61(m,3H),7.48(dd,1H),7.27(m,1H),6.73(s,1H),6.60(dd,1H),4.33(m,2H),3.84(s,2H),1.84(s,3H),1.57(s,3H),1.33(t,3H)。
j) (R)-2-[(R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺醯胺基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙醯胺
在50℃下，攪拌(R)-2-[(R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺醯胺基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙酸乙酯(26.6 g，44.2 mmol)於7N NH3之MeOH溶液(75 ml)中之溶液16小時。減壓移除溶劑且使殘餘固體自Et2O中再結晶，得到呈黃色晶體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.35；UPLC RtH5=1.184 min；ESIMS: 589,591[(M+NH4)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.85(d,1H),7.64(m,3H),7.44(d,1H),7.41(dd,1H),7.26(m,1H),6.68(br s,1H),6.57(dd,1H),6.19(s,1H),5.54(br s,1H),4.24(d,1H),3.93(d,1H),1.79(s,3H),1.67(s,3H)。
k) N-[(R)-1-(5-溴-2-氟-苯基)-2-((R)-1-氰基-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺醯胺
在氬氣下之向(R)-2-[(R)-2-(5-溴-2-氟-苯基)-2-(2-硝基-苯磺醯胺基)-丙氧基]-3,3,3-三氟-2-甲基-丙醯胺(20.83 g，35.6 mmol)於CH2Cl2(300 ml)中之溶液中添加NEt3(12.5 ml，89 mmol)，且在0-5℃下添加三氟乙酸酐(6.15 ml，42.7 mmol)。在25℃下攪拌4小時後，將反應混合物添加至冷的NaHCO3溶液中且用CH2Cl2萃取產物。用冷的0.1 N HCl水溶液、水及飽和NaHCO3溶液洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，得到呈黃色油狀之標題化合物，其按原樣用於下一步驟：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.73；UPLC RtH5=1.364 min；ESIMS: 571,573[(M+NH4)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.89(d,1H),7.62(ddd,1H),7.57(ddd,1H),7.52(m,2H),7.29(m,1H),6.58(dd,1H),6.19(s,1H),4.17(s,2H),1.81(s,3H),1.72(s,3H)。
l) (2R,5R)-5-(5-溴-2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基胺
向N-[(R)-1-(5-溴-2-氟-苯基)-2-((R)-1-氰基-2,2,2-三氟-1-甲基-乙氧基)-1-甲基-乙基]-2-硝基-苯磺醯胺(6.54 g，11.8 mmol)及N-乙醯基-半胱胺酸(2.4 g，26.0 mmol)於MeOH(80 ml)中之溶液中添加K2CO3(3.62 g，26.0 mmol)，且在80℃下加熱反應混合物16小時。移除溶劑後，將殘餘物溶解於水中且用EtOAc萃取。用飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，進行矽膠層析純化(含有0.03% NEt3之己烷-EtOAc 10:1至1:2)後，得到呈黃色油狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.58；UPLC RtH5=0.843 min；ESIMS: 369,371[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.66(dd,1H),7.35(m,1H),6.91(dd,1H),3.97(m,2H),1.53(s,3H),1.49(s,3H)。
m)(2R,5R)-5-(2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基胺
在50℃下，經10% Pd-C使(2R,5R)-5-(5-溴-2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基胺(1.66 g，4.5 mmol)及乙酸鈉(0.369 g，4.5 mmol)於MeOH(50 ml)中之溶液氫化6小時。經矽藻土濾除催化劑且濃縮濾液。將殘餘物溶解於飽和NaHCO3溶液中且用EtOAc萃取。用鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，得到呈無色油狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.19；UPLC RtH5=0.777 min；ESIMS: 291[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 7.41(dt,1H),7.26(m,1H),7.11(t,1H),7.05(dd,1H),4.11(dd,1H),3.94(dd,1H),1.54(s,3H),1.49(s,3H)。
n) (2R,5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基胺
在冰-水冷卻下，向(2R,5R)-5-(2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基胺(1.035 g，3.57 mmol)於H2SO4(6 ml)中之溶液中分數份添加KNO3(0.379 g，3.74 mmol)。在25℃下攪拌反應混合物2小時，用水稀釋且在冷卻下用K2CO3鹼化。用EtOAc萃取產物。用飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌合併之萃取物，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。經由矽膠層析(含有0.05% NEt3之己烷-EtOAc 4:1至1:1)純化，得到呈淡黃色油狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.50；UPLC RtH5=0.749 min；ESIMS: 336[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 8.48(dd,1H),8.14(m,1H),7.15(dd,1H),4.20(br s,2H),4.04(dd,1H),3.91(dd,1H),1.54(s,3H),1.49(s,3H)。
o) [(2R,5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基]-胺基甲酸第三丁酯
向(2R,5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基胺(1.14 g，3.4 mmol)於ACN(20 ml)中之溶液中添加Boc2O(0.891 g，4.08 mmol)及NEt3(0.72 ml，5.1 mmol)，且在25℃下攪拌混合物16小時。蒸發反應混合物且藉由矽膠層析(己烷-EtOAc 20:1至7:3)純化殘餘油狀物，自Et2O-己烷中結晶後，得到呈米色晶體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 3:1): Rf=0.37；UPLC RtH5=1.355 min；ESIMS: 436[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 11.04(br s,1H),8.24(m,2H),7.30(dd,1H),4.41(dd,1H),4.11(dd,1H),1.68(s,3H),1.51(s,9H),1.49(s,3H)。
p) [(2R,5R)-5-(5-胺基-2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基]-胺基甲酸第三丁酯
在50℃下，經5% Pd-C使[(2R,5R)-5-(2-氟-5-硝基-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基]-胺基甲酸第三丁酯(0.98 g，2.25 mmol)於異丙醇-THF 2:1(24 ml)中之溶液氫化4小時。經矽藻土濾除催化劑且濃縮濾液，自TBME-己烷中結晶後，得到呈米色晶體狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.42；UPLC RtH5=0.955 min；ESIMS: 406[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 6.82(dd,1H),6.52(m,2H),4.30(dd,1H),3.97(dd,1H),3.06(br s,2H),1.58(s,3H),1.48(s,3H),1.46(s,9H)。
q) ((2R,5R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-胺基]-2-氟-苯基}-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-胺基甲酸第三丁酯
向[(2R,5R)-5-(5-胺基-2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基]-胺基甲酸第三丁酯(82 mg，0.20 mmol)於DMF(2 ml)中之溶液中添加5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸(42 mg，0.26 mmol)、EDC.HCl(51 mg，0.26 mmol)、HOAt(31 mg，0.22 mmol)及DIPEA(0.09 ml，0.52 mmol)，且使反應混合物保持在25℃下16小時。濃縮混合物，將殘餘物溶解於EtOAc中且用飽和NaHCO3溶液及鹽水洗滌，經MgSO4乾燥，過濾且藉由矽膠層析(己烷-EtOAc 20:1至1:1)純化，得到呈淡黃色泡沫狀之標題化合物：TLC(己烷-EtOAc 1:1): Rf=0.81；UPLC RtH5=1.437 min；ESIMS: 550[(M+H)+]；1H NMR(360 MHz,CDCl3): δ 10.96(br s,1H),9.95(br s,1H),8.63(s,2H),7.88(m,1H),7.71(m,1H),7.54(dd,1H),7.08(dd,1H),4.34(d,1H),4.02(d,1H),2.77(s,3H),1.63(s,3H),1.47(m,12H)。
r)　結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺
向((2R,5R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-胺基]-2-氟-苯基}-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-胺基甲酸第三丁酯於CH2Cl2(0.3 ml)中之溶液中添加TFA(0.6 ml)，且使反應混合物保持在25℃下2小時。將反應物添加至冷的10% K2CO3水溶液中且用EtOAc萃取產物。用鹽水洗滌合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，接著藉由CombiFlash(120 g矽膠，己烷-(CH2Cl2/MeOH 10:1)梯度10:1至0:10)純化，得到呈無色泡沫狀之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺。將非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺(2.6 g，5.6 mmol)溶解於EtOH(15 mL)中，且在升溫至40℃後，用H2O(約6-7 mL)使溶液飽和。在25℃下持續結晶16小時，隨後收集晶體，用冷的EtOH-H2O洗滌且在高真空下，在25℃下乾燥16小時，得到呈白色針狀之標題化合物：mp 101-102℃ UPLC RtH5=0.957 min；ESIMS: 450[(M+H)+]；1H NMR(600 MHz,DMSO-d6): δ 10.73(br s,1H),8.98(s,1H),8.41(s,1H),7.80(dd,1H),7.73(m,1H),7.16(dd,1H),6.08(s,2H),3.92(d,1H),3.80(d,1H),2.54(s,3H),1.47(s,3H),1.42(s,3H)。
製備5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
上文步驟q)中所用之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸可如下製備：
a) 5-溴-3-甲基-吡啶-2-甲酸第三丁酯
向10.20 g(47.2 mmol)5-溴-3-甲基-吡啶-2-甲酸及20.61 g(94 mmol)二碳酸二第三丁酯於100 ml THF中之溶液中添加0.577 g DMAP。即刻開始析出CO2且在室溫下攪拌混合物2小時。添加TBME及飽和NaHCO3水溶液。分離各層且用飽和NaHCO3水溶液及鹽水洗滌有機層，並用MgSO4.H2O乾燥。矽膠層析(己烷/EtOAc 1-7%)得到呈黃色液體狀之標題化合物。
HPLC: RtH3=3.018 min；ESIMS[M+H]+=272,274(1 Br)；1H-NMR(360 MHz,CDCl3): δ 8.59(s,1H),7.77(s,1H),2.52(s,3H),1.65(s,9H)。
b) 5-溴-3-甲基-吡啶-2-甲酸第三丁酯
在氮氣氛圍下，使6.0 g(22.05 mmol)5-溴-3-甲基-吡啶-2-甲酸第三丁酯、1.813 g(15.43 mmol)Zn(CN)2、0.144 g鋅粉(2.205 mmol)及0.571 g(0.551 mmol)Pd2(dba)3.CHCl3之混合物懸浮於10 ml DMF中。添加tBu3P(0.321 ml，1.323 mmol)且在60℃下攪拌混合物5小時。冷卻後，用TBME稀釋混合物，經矽藻土過濾且用鹽水洗滌三次。藉由矽膠管柱層析(己烷/EtOAc 5-15%)純化粗產物，得到呈灰白色固體狀之標題化合物。TLC(己烷/EtOAc 3:1): Rf=0.31；HPLC: RtH3=2.431 min；ESIMS[M+Na]+=241；1H-NMR (360 MHz,CDCl3): δ 8.78(s,1H),7.88(s,1H),2.56(s,3H),1.67(s,9H)；Ft-IR: 2231 cm-1(CN)。
c) 5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸
向8.50 g(38.9 mmol)5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸第三丁酯於51 ml(389 mmol)1,3-二甲氧苯中之溶液中添加85 ml TFA且攪拌6.5小時。用甲苯稀釋反應混合物且蒸發。將殘餘物溶解於甲苯中且蒸發(2次)。使產物自TBME/己烷中結晶，得到呈白色粉末狀之標題化合物。HPLC: RtH1=2.314 min；ESIMS[M+Na]+=163；1H-NMR(360 MHz,CDCl3): δ 8.77(s,1H),8.07(s,1H),2.87(s,3H)。
實例2：製備呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺的第一替代程序a) ((2R,5R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-胺基]-2-氟-苯基}-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-胺基甲酸第三丁酯
在0-5℃下，向[(2R,5R)-5-(5-胺基-2-氟-苯基)-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基]-胺基甲酸第三丁酯(實例1步驟p)(2.2 g，5.43 mmol)於DMF(20 ml)中之溶液中添加5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸(0.968 g，5.97 mmol)、EDC(1.095 g，7.05 mmol)、HOAt(1.182 g，8.68 mmol)，且在25℃下攪拌反應混合物16小時。將反應混合物添加至冷的NaHCO3飽和溶液中且用TBME萃取產物。用H2O及鹽水洗滌合併之TBME層，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮，自二異丙醚中結晶後，獲得呈無色晶體狀之標題化合物：UPLC RtH5=1.472 min；ESIMS: 550;[(M+H)+]；1H NMR(400 MHz,CDCl3): δ 11.11(s,1H),10.11(s,1H),8.79(br s,1H),8.01(s,1H),7.84(m,1H),7.68(dd,1H),7.21(dd,1H),4.49(d,1H),4.16(d,1H),1.76(s,3H),1.64(s,3H),1.62(s,9H)。
b) 5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺
向((2R,5R)-5-{5-[(5-氰基-3-甲基-吡啶-2-羰基)-胺基]-2-氟-苯基}-2,5-二甲基-2-三氟甲基-5,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-胺基甲酸第三丁酯(2.27 g，4.13 mmol)於CH2Cl2(25 ml)中之溶液中添加TFA(41.3 mmol，3.18 ml)，且在25℃下攪拌反應混合物2.5小時。將反應混合物添加至10%NaHCO3水溶液(pH>8)中且用EtOAc萃取游離鹼。用水及鹽水洗滌合併之有機層，經MgSO4乾燥，過濾且濃縮。藉由在50-60℃下將物質溶解於EtOH(15 ml)中使粗產物再結晶兩次，且用H2O(6-8 ml)飽和後，冷卻澄清溶液至環境溫度隔夜，過濾及乾燥後，得到呈白色晶體狀之純度>99%的標題化合物：UPLC RtH5=0.905 min；ESIMS: 450 [(M+H)+]；1H NMR(600 MHz,DMSO-d6): 10.72(s,1H),8.97(s,1H),8.39(s,1H),7.78(d,1H),7.71(m,1H),7.15(t,1H),6.08(br s,2H),3.91(d,1H),3.78(d,1H),2.52(s,3H),1.46(s,3H),1.41(s,3H)。
實例3：製備呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺的第二替代程序
在室溫下，將5.954 mg非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺分散於400 μL水中，且以2.4℃/h自16℃冷卻至5℃，在5℃下保持10小時，且隨後以5℃/min加熱至40℃，並以2.4℃/h冷卻回到5℃。藉由離心分離固體且在37℃/50毫巴下乾燥隔夜。
實例4：製備呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺的第三替代程序
在室溫下，將4.9 mg非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺調於400 μL乙醇/水20/80中形成漿料，持續24小時。接著分離固體且在37℃/50毫巴下乾燥隔夜。
實例5：製備呈結晶形式之5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺的第四替代程序
在室溫下，將4.9 mg非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺調於400 μL丙酮/水20/80中形成料漿，持續24小時。接著分離固體且在37℃/50毫巴下乾燥隔夜。
實例6：非晶形及結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之XRPD分析
藉由XRPD分析結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺，且表3中顯示十個最主要的特徵峰(亦參見圖1)。
X射線粉末繞射(XRPD)分析使用Brucker D8 Advance x射線繞射儀進行。在約30 kV及40 mA下，在以下條件下進行量測：
掃描速率(連續掃描)：0.3秒/步(步進時間等於107.1秒)
步長：0.017°(2θ)
索勒縫隙　2.5°
縫隙(自左至右)：V12(可變)，6 mm防散射狹縫
X射線繞射圖用CuKα輻射在2°與40°(2θ)之間記錄以鑑別完整圖。
實例7：結晶及非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之DSC分析
使用來自TA instruments之Q1000 DSC，藉由差示掃描熱量測定(DSC)分析結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺，且發現在約93.6℃下開始熔融，參見圖2。
亦藉由DSC分析非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺，參見圖3。
實例8：當暴露於高溫/潮濕下一週時，非晶形對結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4] -3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之化學穩定性
藉由將非晶形及結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺暴露於高溫及/或潮濕下一週來測試該非晶形物質對結晶物質之穩定性。在高溫及/或潮濕下儲存後，對塊體非晶形物質或結晶物質進行取樣且溶解於乙腈中，並在來自Waters之Aquity UPLC中使用以下條件分析純度：
分離管柱　Acquity UPLC BEH C18(2.1×50 mm)
移動相　A：水+0.1%TFA B：ACN+0.1%TFA
梯度　在10分鐘內10>60；在60下維持1分鐘；在　1分鐘內60>10
流帶　0.4 ml/min
管柱溫度　30℃
偵測　220 nm
該測試之結果顯示於下表4中。
圖1顯示當使用CuKα輻射量測時，結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之X射線粉末繞射圖。
圖2顯示結晶5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之DSC溫譜圖。
圖3顯示非晶形5-氰基-3-甲基-吡啶-2-甲酸[3-((3R,6R)-5-胺基-3,6-二甲基-6-三氟甲基-3,6-二氫-2H-[1,4]-3-基)-4-氟-苯基]-醯胺之DSC溫譜圖。
(無元件符號說明)

Claims (10)

  1. 一種下式化合物之結晶形式，
  2. 如請求項1之化合物之結晶形式，其係呈實質上純形式。
  3. 如請求項1或2之化合物之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖具有至少一個、兩個或三個折射角2θ值選自8.3°、9.0°、10.9°、12.9°、13.9°、15.4°、16.2°、17.1°、18.2°及24.5°之峰，其中該等值加或減0.2° 2θ。
  4. 如請求項1或2之化合物之結晶形式，當使用CuKα輻射量測時，其X射線粉末繞射圖與圖1中所示之X射線粉末繞射圖實質上相同。
  5. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至4中任一項之化合物之結晶形式作為活性醫藥成分以及至少一種醫藥學上可接受之載劑或稀釋劑。
  6. 如請求項5之醫藥組合物，其進一步包含另一或多種治療劑。
  7. 如請求項1至4中任一項之化合物之結晶形式，其用作藥物。
  8. 如請求項1至4中任一項之化合物之結晶形式，其用於治療阿茲海默氏病(Alzheimer's Disease)或輕度認知障礙。
  9. 一種如請求項1至4中任一項之化合物之結晶形式的用途，其用於製造用以治療或預防阿茲海默氏病或輕度認知障礙之藥物。
  10. 一種醫藥組合，其包含治療有效量之如請求項1至4中任一項之化合物之結晶形式及第二藥物，兩者同時或相繼投與。
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