TW201219568A - Antibody targeting osteoclast-related protein Siglec-15 - Google Patents

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Yoshiharu Hiruma
Eisuke Tsuda
Tatsuji Matsuoka
Toshiaki Ohtsuka
Tohru Takahashi
Toshinori Agatsuma
Sandra Miller
Robert Macek
Kathrin-Ladetzki Baehs
Steffen Runz
Ulrike Schubert
Ingrid Schuster
Dirk Ponsel
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Description

201219568 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關於可用作為異常骨， 預防劑之物質。本發明也係關於—種$ 體及編碼此種抗體之多核苷酸。此外1 種治療及/或預防異6常骨質代謝之方法 【先前技術】 已知骨骼是一種動態器官，藉由i 骨骼連續重新塑型’因而改變其本身白 濃度。健康的骨路係在藉成骨細胞形月 胞再吸收骨質間維持平衡，骨頭重量維 當骨質形成與骨質再吸收間之平衡喪失 質代謝諸如骨質疏鬆症（内分泌學綜論， 頁，骨骼生物學原理，學術出版社，紐約 頁）。 至於調節骨質代謝之因子，曾經報 素及局部細胞激素，此等因子彼此協力 持骨骼（内分泌學綜論（1 992) 13，66-80 論，（1 996) 1 7 , 308_332 頁）。至於因老 的改變，廣泛已知骨質疏鬆症的發生， 蓋各項因素諸如性激素分泌的減少及激 骨骼局部之細胞激素表現變化、老化基 骨細胞或成骨細胞分化失敗或功能異常 骨路組織變化視為單純老化所引起的生 骨質疏鬆大致上分成由於雌激素分泌減 代謝之治療劑或 藥組成物諸如抗 本發明係關於一 複形成及再吸收 型；!I且維持血約 骨質及藉破骨細 持怪定。相反地， 時，出現異常骨 (1992) 13，66-80 ’ （1996)， 87-102 告多種系統性激 合作來形成且維 頁，内分泌學綜 化造成骨骼組織 但其發生機轉涵 素受體的異常、 因之表現、及破 ’如此，難以將 理現象。原發性 少所造成的停經
S -4 - 201219568 後骨質疏鬆及因老化造成的老年性骨質疏鬆，但骨質形 成及骨質再口及收調節機轉之基礎力究料展主要係詳盡 闡明其發生機轉及發展其治療劑。 破骨、.、田胞為衍生自血球生成性幹細胞的多核細胞， 藉由釋放氣陰離子及氫料至破骨細胞所㈣的骨路表 面上，破骨細胞酸化骨骼表面與破骨細胞間之間隙，也 分泌組織蛋白酶K (cathepsin K)，其為酸性蛋白酶或類 似物（美國生理學期刊，（1991) 26〇, C13 1 5 1 324)。如此 造成填酸鈣的分解、酸性蛋白酶的活化及骨基質蛋白酶 的分解，結果導致骨質再吸收。 已經發現破骨細胞前驅細胞係藉由使用在存在於骨 路表面的成骨細胞/基質細胞的細胞膜上之RANKL (NF-κΒ配體之受體活化因子）刺激而分化成為破骨細胞 (美國國家科學院會議事錄，（1998) 95，3597-3602頁， 細胞’（1998) 93，165- 1 76頁）。業已顯示RANKL為由 成骨細胞/基質細胞所產生的膜蛋白。其表現係藉骨質再 吸收因子調節，RANKL誘導破骨細胞前驅細胞分化成為 多核破骨細胞等（美國國家科學院會議事錄，（1998) 95， 3597-3602頁’骨骼及礦物質研究期刊（1998)23, S222)。 又’不含RANKL之基因剔除小鼠業已發現可發展出類 似骨質疏鬆疾病，因此證實RANKL為生理破骨細胞分 化-誘導因子（自然，（1999) 397，315-323頁）。 作為治療骨質代謝病或縮短治療期的藥物，使用雙 膦酸鹽類、活性維生素D3、抑鈣素（calcit〇nin)及其衍生 201219568 一、激素製劑諸如雌二醇、SERM(選擇性雌激素受體調 卽劑卜伊普利黃酮（㈣iavGne)、維uK2(米那堤崔綱 (menatetrenone))、ρτΗ (副甲狀腺激素）製劑、約製劑等。 但此專樂物並非經當性呈古、丈咅& *性具有滿意的療效，需要發展具有 更強力療效的藥劑。 免疫細胞的細胞膜上覆蓋各種聚糖之緊密被覆層， 諸如唾液酸，聚糖已經藉由各種聚糖結合性蛋白質辨 識。唾液酸結合類免疫球蛋白凝集素（leetin)(後文稱作為 「西格烈（siglec)」）屬於—種可辨識唾液酸化糠蛋白且與 其結合之一家族第I型膜蛋白。多種西格烈（siglec)係表 現在免疫細胞的細胞膜上且可識別同樣存在於免疫細胞 的細胞膜上之唾液酸及調節細胞交互作用及細胞功能， 破視為涉及免疫反應（自然綜論免疫學，（2〇〇7) 7期， 25 5-266頁）。但也有大量西格烈分子其生理功能尚未經 洋盡闡明。西格烈_丨5 (唾液酸結合類免疫球蛋白凝集素 1 5)為新進報告屬於西格烈類的分子（糖生物學，（2〇〇7) 17期，838-846頁）且係與稱作為r CD33抗原狀3」、「CD33 分子狀3」、「CD33狀3」或「CD33L3」之分子相同。此 種分子從魚至人類具有高度演化保留性，業已發現可在 人類脾臟及淋巴結的樹狀細胞及/或巨噬細胞強力表 現。再者’作為使用唾液酸探針進行結合測試結果，也 已發現人類西格烈-15結合至Neu5Aca2-6GalNAc，及小 鼠西格烈15除了結合至Neu5Aca2-6GalNAc外也結合至 Neu5Aca2-3Gaipi-4Glc (糖生物學，（2007) 17 期 ’ 838-846 頁）。直到晚近，皆未曾顯示西格烈· 1 5之生理角色，但
S -6- 201219568 曾經報告西格烈-1 5之表現隨著破骨細胞之分化及成熟 而增加’破骨細胞的分化藉RNA干擾減低西格烈_15之 表現而抑制（W02007/093042)。也報告西格烈_15基因特 別係於巨細胞腫瘤表現’也發現當單核細胞衍生細胞系 分化成為破骨細胞時西格烈-1 5基因之表現程度增高 (W02009/048072)。已經揭示可抑制破骨細胞分化之兔多 株及大鼠單株抗小鼠西格烈-1 5抗體（W02009/048072)。 也曾經揭示可抑制破骨細胞分化之抗西格烈_ 1 5巍合體 單株抗體（US20 10/0 104575)。但尚未曾揭示可投予人體 之人類抗體。 【發明内容】 [有待解決之本發明問題] 本發明之目的係提供抑制破骨細胞之分化、成熟及 其活性之物質’及用於異常骨質代謝之治療劑及/或預防 劑。 [解決問題之手段] 發明人進行研究詳盡闡明破骨細胞分化、成熟及活 化機轉來找出對異常骨質代謝具有治療及/或預防功效 之物質。結果發現西格烈-1 5基因的表現隨著破骨細胞之 分化及成熟而增加，也發現破骨細胞的分化受特異性結 合至西格烈-1 5之抗體所抑制，如此完成本發明。某些情 況下’本發明抗體比較該技術領域已知之抗體具有對破 骨細胞更高的作用強度。 換言之，本發明包括下列態樣。 201219568 依據本發明之第一態樣’提供一種抑制破骨細胞之 形成及/或破骨細胞之骨質再吸收的可結合西格烈 (Siglec)-1 5之分離抗體或其功能片段，該抗體包含（a)〜 重鏈，該重鏈包含CDRH1，該CDRH1包含與SEQ NO:71具至少80%序列相同度之一序列、包含與seqid NO : 72具至少80°/〇序列相同度之一序列之CDRH2、及 包含與SEQ ID NO: 35、45、55或65中之一者具至少 8 0%序列相同度之一序列之001013;及（13)—輕鏈，該輕 鏈包含CDRL1，該CDRL1包含與SEQ ID NO : 73具至 少80%序列相同度之一序列、包含與SEQ ID NO : 74具 至少80%序列相同度之一序列之0010^2、及包含與8£() ID NO : 40、50、60或70中之一者具至少80%序列相同 度之一序列之CDRL3。 依據本發明之第二態樣提供一種抑制破骨細胞之形 成及/或破骨細胞之骨質再吸收的可結合西格烈-1 5之分 離抗體或其功能片段’該抗體包含（a) —重鍵，該重鍵包 含CDRH1，該CDRH1包含與SEQ It) NO : 106具至少 8 0%序列相同度之一序列、包含與SEQ ID NO : 107具至 少8 0%序列相同度之一序列之CDRH2、及包含與SEQ ID NO : 55、35、45、65或80中之一者具至少80%序列相 同度之一序列之 CDRH3 ;及（b) —輕鏈，該輕鏈包含 CDRL1，該CDRL1包含與SEQIDNO: 73或83具至少 80%序列相同度之一序列、包含與SEQ ID NO : 108具至 少80%序列相同度之一序列之CDRL2、及包含與SEQ ID NO : 60、40、50、70、90、100 或 109 中之一者具至少 80%序列相同度之一序列之CDRL3。
S -8 - 201219568 較佳CDRH3包含與SEQ ID NO : 35具至少80%序 列相同度之一序列及CDRL3包含與SEQ ID NO : 40具 至少80%序列相同度之一序列。另外，CDRH3包含與SEQ ID NO : 45具至少80%序列相同度之一序列及CDRL3包 含與SEQ ID NO : 50具至少80%序列相同度之一序列。 另夕卜，CDRH3包含與SEQ ID NO : 55具至少80%序列相 同度之一序列及CDRL3包含與SEQ ID NO : 60具至少 80%序列相同度之一序列。另外，CDRH3包含與SEQID NO : 65具至少80%序列相同度之一序列及CDRL3包含 與SEQ ID NO : 70具至少80%序列相同度之一序列。另 外，001〇13包含與5£()101^0:80具至少80%序列相同 度之一序列及CDRL3包含與SEQ ID NO: 109具至少80% 序列相同度，較佳與SEQ ID NO : 90或100具至少80% 序列相同度之一序列。 方便地 ’ CDRH1 包含與 SEQ ID NO : 33、43、53、 6 3或7 8中之一者具至少8 0 %序列相同度之一序列。 較佳，CDRH2 包含與 SEQ ID NO : 34、44、54、64、 79、94或104中之一者具至少8〇%序列相同度之一序列。 優異地，CDRL1 包含與 SEQIDNO: 38、48、58、 68或88中之一者具至少80%序列相同度之一序列。 方便地，CDRL2 包含與 SEQ ID NO : 39、49、59、 69或89中之一者具至少80%序列相同度之一序列。 較佳地，CDRm、CDRH2、CDRH3、CDHL 卜 CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ IDNO: 33、34、35、 38、39及40具至少80%序列相同度之序列。 -9 - 201219568 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO : 43、44、45、 48、49及50具至少80%序列相同度之序列。 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO : 53、54、55、 58、59及60具至少80%序列相同度之序列。 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO : 63、64、65、 68、69及70具至少80%序列相同度之序列。 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO : 78、79、80、 88、89及90具至少80%序列相同度之序列。 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO : 93、94、95、 98、99及100具至少80%序列相同度之序列。 另外，CDRHl、CDRH2、CDRH3、CDRLl、CDRL2、 及CDRL3之序列分別包含與SEQ ID NO: 103、104、105、 88、89及90具至少80%序列相同度之序列。 特佳抗體或功能片段包含與前文列舉之序列具至少 90% 或 95%序列相同度之 CDRHl、CDRH2、CDRH3、 CDRLl、CDRL2、及/或 CDRL3。 較佳地，該抗體包含： 選自於由下列所組成之組群之一重鏈可變區 al)—胺基酸序列包含：SEQ ID NO : 32之胺基酸殘 基20至136、SEQ ID NO: 42之胺基酸殘基20至135、
S -10- 201219568 SEQ ID NO . 52 之胺基酸殘基 2〇 至 137、SEQ ID NO : 62之胺基酸殘基20至i36、SEQID N〇: 77之胺基酸殘 基20至138、SEQ ID NO: 92之胺基酸殘基2〇至138 或SEQ ID NO : 102之胺基酸殘基2〇至140 ; a2)與al)之胺基酸序列具至少90%序列相同度之一 胺基酸序列； a3)與al)之胺基酸序列具至少95%序列相同度之一 胺基酸序列；及 a4)包括於al)之胺基酸序列_ 一個或數個胺基酸殘 基之添加、刪除或取代之一胺基酸序列；及 選自於由下列所組成之組群之一輕鏈可變區 bl)—胺基酸序列包含：SEQ ID NO : 37之胺基酸殘 基20至129、SEQ ID NO : 47之胺基酸殘基20至129、 SEQ ID NO : 57 之胺基酸殘基 20 至 129、SEQ ID NO : 67之胺基酸殘基20至129、SEQ ID NO : 87之胺基酸殘 基20至134或SEQ ID NO: 97之胺基酸殘基20至133 ; b2)與bl)之胺基酸序列具至少90%序列相同度之一 胺基酸序列； b3)與bl)之胺基酸序列具至少95%序列相同度之一 胺基酸序列；及 b4)包括於bl)之胺基酸序列中一個或數個胺基酸殘 基之添加、刪除或取代之一胺基酸序列。 特佳重及輕鏈可變區與前文列舉之序列具至少9 9 % 序列相同度。 優異地，該抗體包含： 201219568 選自於由下列所組成之群組中之一重鏈 a1) —胺基酸序列包含 SEQIDNO: 32、42、52、62、 77、92或1〇2中之一者之序列； a2)與ai)之該胺基酸序列具至少9〇%序列相同度之 一胺基酸序列； a3)與al)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度之 一胺基酸序列；及 a4)包括於ai)之該胺基酸序列中之一或數個胺基酸 殘基的添加、刪除或取代之一胺基酸序列；及 選自於由下列所組成之群組中之一輕鍵 bl)—胺基酸序列包含 SEQ ID NO: 37、47、57、67、 87或97中之一者之序列； b2)與bl)之該胺基酸序列具至少90%序列相同度之 一胺基酸序列； b3)與bl)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度之 一胺基酸序列；及 b4)包括於bl)之該胺基酸序列中之一或數個胺基酸 殘基的添’加、刪除或取代之一胺基酸序列。 特佳重及輕鏈與前文列舉之序列距至少9 9 %序列相 同度》 方便地，該抗體包含由含SEQ ID NO : 32之一胺基 酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 37之一胺基 酸序列所組成之一輕鏈。 另外，該抗體包含由含SEQ ID NO : 42之一胺基酸 序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 47之一胺基酸 序列所組成之一輕鍵。
S -12- 201219568 另外，該抗體包含由含SEQ ID NO : 52之一胺基酸 序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 57之一胺基酸 序列所組成之一輕鏈。 另外，該抗體包含由含SEQ ID NO : 62之一胺基酸 序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 67之一胺基酸 序列所組成之·—輕鍵。 另外’該抗體包含由含SEQ ID NO : 77之一胺基酸 序列所組成之一重鏈及由含SEq ID No : 87之一胺基酸 序列所組成之一輕鍵。 另外，該抗體包含由含SEQ ID NO : 92之一胺基酸 序列所組成之一重鏈及由含SEq ID N〇 : 97之一胺基酸 序列所組成之一輕鏈。 另外’該抗體包含由含SEQ Π) NO : 1〇2之一胺基 酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO ·· 87之一胺基 酸序列所組成之一輕鏈。 方便地，本發明之抗體之功能片段係選自於由FA F(ab’）2, Fab’及Fv所組成之組群。 較佳地，該抗體為scFv〇 依據本發明之第三態樣提供依據本發明之第一或第 二態樣之一種分離抗體或其功能片 / 防異常骨質代謝。 …療及/或預 依據本發明之第四態樣，提供依據本發 第二態樣之分離抗體或其功能片段用於製造異〜—或 謝之治療或預防藥物之用途。 '吊月質代 201219568 依據本發明之第五態樣，提供一種患有異常骨質代 謝之病人之治療方法包含投予治療上有效量之依據本發 明之第一或第二態樣之分離抗體或其功能片段。 依據本發明之第六態樣’提供一種醫藥組成物包含 依據本發明之第一或第二態樣之抗體或其功能片段中之 至少一者。 方便地’該醫藥組成物為異常骨質代謝之治療及/或 預防劑。 依據本發明之第七態樣，提供一種治療及/或預防異 常骨質代謝之醫藥組成物，其特徵係包含依據本發明之 第一或第二態樣之抗體或抗體之功能片段中之至少一者 及選自於由雙膦酸鹽類、活性維生素D3、抑鈣素 (calcitonin)及其衍生物、激素製劑諸如雌二醇 (estradiol)、選擇性雌激素受體調節劑（SERM)、伊普利 黃酮（ipriflavone)、維生素K2[米那堤崔酮 (menatetrenone)]、鈣製劑、副甲狀腺激素（ρτΗ)製劑、 非類固醇抗發炎劑、可溶性TNF受體製劑、抗τΝρ>_α抗 體或該等抗體之功能片段、抗副甲狀腺激素相關蛋白質 (PTHrP)抗體或該等抗體之功能片段、江]受體拮抗劑、 抗I L - 6受體抗體或该等抗體之功沾y p 仇饈之功此片段、抗RANKL抗 體或該等抗體之功能片段、；5姑典*的1 , 及破骨細胞生成抑制因子 (0CIF)所組成之組群中之至少一個 較佳’該異常骨質代謝係選自 群：骨質疏鬆症、伴隨類風濕性關 變性高鈣血症、伴隨多發性骨髓瘤 成員。 於由下列所組成之組 節炎之骨質破壞、癌 或癌症轉移至骨頭的
S -14- 201219568 骨質破壞、巨細胞瘤、牙周 工關節之骨質溶解、慢性骨 吉特氏病（Paget，s disease)、 〇 病造成的牙齒脫落、環繞人 鶴炎之骨質破壞、骨頭之巴 腎性骨發育不全、及成骨不 優異地，該異常骨質代謝為骨質疏鬆症、伴隨類風 濕性關節炎之骨質破壞、或伴隨癌症轉移至骨頭的骨質 破壞。 方便地，該骨質疏鬆症為停經後骨質疏鬆症、老年 性骨質疏鬆症、使用治療劑諸如類固醇或免疫抑制劑造 成的續發性骨質疏鬆症、或伴隨類風濕性關節炎之骨質 疏鬆症。 依據本發明之第八態樣，提供一種多核苷酸其包含： a) 編碼依據本發明之第一或第二態樣之抗體或其功 能片段中之一者之一核苷酸序列；或 b) 一多核苷酸之一核苷酸序列，該核苷酸序列係於 苛刻條件下雜交至由與a)之該核苷酸序列互補之一核苷 酸序列所組成之一多核苷酸。 方便地，編碼 CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、 CDRL2及CDRL3之序列之該等核苷酸序列包含： a)分別為SEQ ID NO : 3 1之核苷酸148至162、SEQ ID NO: 31 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO: 31 之核 苷酸352至37 5、SEQ ID NO : 36之核苷酸I24至156、 SEQ ID NO : 36 之核苷酸 202 至 222、及 SEQ ID NO : 36之核苷酸319至348; 201219568 b) 分別為SEQ ID NO : 41之核苷酸 ID NO : 41 之核苷酸 205 至 255、SEQ 苷酸 352 至 372、SEQ ID NO: 46 之核 SEQ ID NO : 46 之核苷酸 202 至 222、 46之核苷酸319至348 ; c) 分別為SEQ ID NO : 51之核苷酸 ID NO : 51 之核苷酸 205 至 255、SEQ 苷酸 352 至 378、SEQ ID NO: 56 之核 SEQ ID NO : 56 之核苷酸 202 至 222、 56之核苷酸319至348 ; d) 分別為SEQ ID NO : 61之核苷酸 ID NO : 61 之核苷酸 205 至 255、SEQ 苷酸 352 至 375、SEQ ID NO : 66 之核 SEQ ID NO : 66 之核苷酸 202 至 222、 66之核苷酸319至348 ; e) 分別為SEQ ID NO : 76之核苷酸 ID NO : 76 之核苷酸 205 至 25 5、SEQ 苷酸 352 至 381、SEQ ID NO: 86 之核 SEQ ID NO: 86 之核苷酸 211 至 231、 86之核苷酸328至363 ; f) 分別為SEQ ID NO : 91之核苷酸 ID NO: 91 之核苷酸 205 至 255、SEQ 苷酸 352 至 381、SEQ ID NO: 96 之核 SEQ ID NO: 96 之核苷酸 211 至 231、 96之核苷酸328至360 ;或 148 至 162、SEQ ID NO : 41 之核 苷酸1 24至1 56、 及 SEQ ID NO : 148 至 162、SEQ ID NO : 51 之核 苷酸124至156、 及 SEQ ID NO : 148 至 162、SEQ ID NO : 61 之核 苦酸124至156、 及 SEQ ID NO : 148 至 162、SEQ ID NO : 76 之核 普酸124至165、 及 SEQ ID NO : 148 至 162、SEQ ID NO : 91 之核 苦酸124至165、 及 SEQ ID NO :
S -16- 201219568 g)分別為SEQ ID NO: 101之核苷酸148至162、SEQ ID NO: 101 之核苷酸 205 至 261、SEQ ID NO: 101 之 核苷酸358至387、SEQ ID NO :86之核苷酸124至165、 SEQ ID NO : 86 之核苷酸 211 至 231、及 SEQ ID NO : 86之核苷酸328至363。 較佳地，該多核苷酸包含： 選自於由下列所組成之組群中之編碼一重鏈可變區 之一核苷酸序列 al)—核苷酸序列包含：SEQIDNO: 31之核苷酸58 至 408、SEQIDNO:41 之核苷酸 58 至 405、SEQIDNO: 51之核苷酸58至411、SEQ ID NO : 61之核苷酸58至 408、SEQ ID NO : 76 之核苷酸 58 至 414、SEQ ID NO : 91之核苷酸58至414、或SEQ ID NO : 101之核苦酸58 至 420 ; a2) —多核苷酸之一核苷酸序列，該核苷酸序列係於 苛刻條件下雜交至由與a 1)之該核苷酸序列互補之一核 苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 狂3)包括於al)之該核苷酸序列中之一或數個核苷酸 的添加、刪除或取代之一核苷酸序列；及 選自於由下列所組成之組群中之編碼一輕鏈可變區 之一核苷酸序列 bl)—核苷酸序列包含：SEQ ID NO : 36之核普酸58 至 3 87、SEQ ID NO : 46 之核苷酸 58 至 387、SEQ ID NO : 56之核苷酸58至387、SEQ ID NO : 66之核苷酸58至 387、SEQIDNO:86 之核苷酸 58 至 402、或 SEQIDNO: 96之核苷酸58至399 ; 201219568 b 2)—多核苷酸之一核苷酸序列’該核苷酸序列係於 苛刻條件下雜交至由與b 1)之該核苷酸序列互補之/核 苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 b 3 )包括於b 1)之該核苷酸序列中之一或數個核苷酸 的添加、刪除或取代之一核苷酸序列。 優異地，該多核苷酸包含： 選自於由下列所組成之組群中之編碼一重鏈之一核 苷酸序列 al)包含 SEQ ID NO: 31、41、51、61、76、91 或 101中之一者之序列之一核苷酸序列； a2)—多核苷酸之一核苷酸序列，該核苷酸序列係於 苛刻條件下雜交至由與a 1)之該核苷酸序列互補之一核 苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 a3)包括於al)之該核苷酸序列中之一或數個核苷酸 的添加、刪除或取代之一核苷酸序列；及 選自於由下列所組成之組群中之編碼一輕鏈之一核 苷酸序列 bl)包含 SEQ ID NO : 36、46、56、66、86 或 96 中 之—者之序列之一核苷酸序列； b 2)—多核苷酸之一核苷酸序列’該核苦酸序列係於 苛刻條件下雜交至由與b 1)之該核苷酸序列互補之一核 苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 b 3)包括於b 1)之該核苷酸序列中之一或數個核苷酸 的添加、刪除或取代之一核苷酸序列。
S -18- 201219568 依據本發明之第九態樣，提供一種載體包含依據本 發明之第八態樣之至少一個多核普酸。 依據本發明之第十態樣，提供一種轉形細胞包含依 據本發明之第八態樣之至少一個多核苷酸。 依據本發明之第十一態樣，提供一種轉形細胞包含 依據本發明之第九態樣之至少一個載體。 依據本發明之第十二態樣，提供一種製造依據本發 明之第一或第二態樣之抗體之方法，包含下列步驟：培 養依據本發明之第十或第十一態樣之轉形細胞，收集培 養材料及從該等培養材料中純化該等抗體。 於本說明書中，二序列間之百分比「相同度」係使 用内設參數利用BLASTP演算法版本2.2.2測定（Altschul， Stephen F., Thomas L. Madden, Alejandro A. Schaffer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller,及 David J. Lipman (1997)，「間隙 BLAST 及 PSI-BLAST :新一代蛋 白質資料庫搜尋程式」，核酸研究25:33 89-3402)。特別， BLAST 演算法可於網際網路使用 URL www.ncbi.nlm.nih.gov/blast.存取。 [發明優點] 依據本發明可獲得一種用於異常骨質代謝之治療及 /或預防劑，其作用機轉係用來抑制破骨細胞之分化及成 熟及其活性。 【實施方式】 如此處使用「基因」一詞不只包括DNA，同時也包 括 mRNA、cDNA 及 cRNA。 -19- 201219568 如此處使用「多核苦酸 使用，也包括DNA、RNA、 如此處使用「多肽」及 使用。 〜詞係以核酸之相同 采針、寡核普酸及引子 蛋白質」等詞係無區 如此處使用「RNA分量」 —詞係指含有 RNA之
如此處使用「細胞」 及培養細胞。 士。此處使用「西格烈—詞係以西格烈_15 質的相同意義使用》 如此處使用「破骨細胞形成」一詞係以「破f 分化」或「破骨細胞成熟」之相同意義使用。 如此處使用「抗體之功能片段」—詞係指具有 結合活性之抗體之部分片段且包括Fab、F(ab，）2、 等。該術語也涵蓋Fab’ ’ Fab，為經由於還原性條科 理F(ab，）2所得抗體可變區之一價片段。但該術語迅 於此等分子’只要該片段具有抗原結合親和力即可 復’此等功能片段不只包括經由使用適當酶處理拍 白質之全長分子所得之一片段’同時也包括使用缝 性抗體基因於適當宿主細胞所產生之蛋白質。 已知抗體之重鍵或輕鏈具有三個互補性決 (CDR)。互補性決定區也稱做超可變域，此等區於重 鍵可變區之一次結構為高度可變，此等超可變域倍 個發散部分存在於抗體之重鏈或輕鏈之多狀。於本 書中’以從重鏈多肽之胺基端（N-端）排序，重鏈之 °δ也包括於動物個體的
意義 〇 別地 一分 細胞 蛋白 細胞 抗原 scF v 下處 非限 。又 體蛋 傳改 定區 或輕 呈三 說明 CDR 201219568 定名為CDRHl、CDRH2及CDRH3。輕鏈之CDR以從輕 鏈多肽之胺基端排序定名為CDRL1、CDRL2及CDRL3。 此等6個CDR於抗體之第二級結構内部緊密靠近及決定 結合至抗原之特異性。 如此處使用「雜交係於苛刻條件下進行」一詞係才丨 雜父係於可執行識別之下列條件下進行：經由於市售雜 交溶液諸如快速雜交（ExpressHyb)之雜交溶液[克隆科技 公司（Clontech，Inc.)製造]内於68〇c進行雜交；或使用具 有DNA制動於其上之過濾器於〇 7 M至丨〇 M氣化鈉存 在下於68°C進行雜交，接著使用〇.1至2XSSC溶液（lx SSC溶液係由15〇 mM氣化鈉及15 mM檸檬酸鈉組成） 於68 C進行洗滌，或雜·交係於其相當條件下進行。 之抗體使用時「可結合」一詞 當關聯有關西格烈 表不抗體偏好於生理你Α β , 埋條件下可結合西格烈-1 5。於若干實
施例中，此乃與「牲里认 ,_ M 特異性」的同義詞。如此於若干實施 例中’該抗體比較复它知β “匕相關多肽具有針對西格烈_ i 5更高 的親和力’例如 倍、104 倍、1〇5 1.西格烈-1 5 .5 倍、2 倍、5 倍、10 倍、1〇〇 倍、1〇3 ^、1〇6倍更高的親和力。 當西格烈-1 5欲用补* + 用1乍為免疫原時，西格烈-1 5可從人 類、非人哺乳類（諸如 天一鼠、大鼠、小鼠、兔、豬、、綿 羊、牛或猴）或雞之單 平孩細胞及骨髓細胞純化及使用，或 刖述細胞之細胞膜Α 、。丨刀可經製備及使用。此外，西格烈 -1 5可經由其試管人 α _ σ成或於宿主細胞經由遺傳工程製 造獲付。此種遺傳工
枉中，更明確言之，西格烈-1 5 cDNA 201219568 整合入可表現西格烈_丨5 cDNA之載體，及西格烈-1 5係 於含有酶、酶基質、及轉錄及轉譯所需能量之溶液内合 成；或其它原核或真核宿主細胞被轉形來表現西格烈 -15’因而可獲得蛋白質。 人類西格烈-1 5 cDNA之核苷酸序列已經於基因存 庫（GenBank)註冊具有存取號碼NM_213602。小鼠西格烈 -1 5 cDNA之核苷酸序列已經於基因存庫註冊具有存取 说碼 XM_884636。 2 ·抗西格烈-1 5抗體 抗體之一般結構為該技術領域所已知及此處只簡短 摘述°免疫球蛋白單體包含由雙硫鍵所連結的二重鏈及 二輕鍵°各個重鏈係與其透過雙硫鍵而直接結合的輕鏈 中之一者成對。各重鏈包含一恆定區（其改變係取決於抗 體之同型基因）及一可變區。可變區包含三個超可變區 (或互補性決定區）分別標示為CDRH卜CDRH2及CDRH3 及其係支撐於框架區内部。各個輕鏈包含一恆定區及一 可變區，以重鏈可變區之類似方式，該可變區包含由框 架區所支撐之三個超可變區（標示為CDRL1、cdrl2及 CDRL3)。 各對重鏈及輕鏈之超可變區彼此協力合作來產生 結合標靶抗原之一抗原結合位置。一對重鏈及輕鏈之 合特異性係藉重鏈及輕鏈之CDR1、CDR2及CDR3序 界定。如此-旦決$ CDR序列集合（亦即重鍵及輕鍵 CDR1、CDR2及⑽3序列）其產生特定結合特異性， 原則上該C D R序列隼合可#、, 』粟〇 了插入鏈接任何抗體恆定區的 201219568 何其它抗體框架區内部之適當位置來提供具有相同抗原 結合特異性之一種不同抗體。 於較佳實施例中，提供抗體M〇r〇928 1、 MOR09892、MOR09898、MOR1〇11〇、M〇R12574、 Μ Ο R 1 3 1 5 4及Μ Ο R1 3 1 5 6 ’其胺基酸序列細節係列舉於表 4至7及表1 0至1 2。但本發明並非囿限於此等較佳實施 例。 以一般術語說明，於本發明之抗西格烈_15抗體中， 重鏈及輕鏈之CDR1及CDR2序列符合SEQ ID Ν〇 : 71 至7 4列舉之同位序列。另外，於本發明之抗西格烈_丄5 抗體中，重鏈之CDR1及CDR2序列符合SEQ ID N〇 : 106至107列舉之同位序列；輕鏈之CDR2序列可符合 SEQ ID NO: 1〇8及輕鏈之CDR1序列可符合SEQ ID NO : 73 或 83。 輕鏈之CDR3序列符合SEQ ID NO : 1〇9列舉之同 位序列。特佳該抗體具有輕鏈之CDR3序列符合SEQ ID NO : 109列舉之同位序列及重鏈之CDR3序列具有SEq IDNO: 80 之序歹 ij。 得自本發明之若干較佳抗體（M〇R〇928 1、 MOR09892、MOR〇9898 及 MOR10110)之特定 CDR1、 CDR2及CDR3序列係列舉於表8。得自本發明之其它抗 體（MOR12574、MOR13154 及 MOR13 156)之特定 CDR1、 CDR2及CDR3序列係列舉於表13()如此提供包含cdr1 至3具有得自此等較佳抗體之序列之抗體。但因本發明 之較佳抗體序列間具有高度序列相同性，於本發明之範 -23- 201219568 圍内也提供具有得自不同較佳抗體之CDR序列之抗體。 例如可提供抗體包含具有得自MOR0928 1之CDR1序 列、得自 MOR09892 之 CDR2 及得自 MOR09898 之 CDR3 之一重鏈及具有得自 MORl〇li〇之CDR1序列、得自 MOR09281 之 CDR2 及得自 MOR09892 之 CDR3 之一輕 鏈0 也須瞭解於本發明之若干實施例中，C D R1至3之胺 基酸序列係與表8及表1 3所提供之該等序列不同而同時 仍然保有至少8 0 % (或於若干實施例中至少9 0 %或9 5 %) 序列相同度。於若干實施例中’在一個抗體之一個CDR 位置的胺基酸序列係與在另一個抗體相同CDR的相對應 位置之胺基酸殘基調換。例如，可提供抗體包含一重鏈， 其中CDR1序列包含胺基酸序列NYAMS (SEQ ID NO : 75)’亦即MOR09281重键之CDR1序列具有於位置3之 胺基酸取代以得自MOR09892重鏈之CDR1位置3之胺 基酸。於其它實施例中’於CDR3之一或多個胺基酸殘 基係以另一個胺基酸取代。取代可以是「保留性」，保留 性表示係屬在同一個胺基酸家族内部的取代。天然胺基 酸可劃分成下列四個家族，該等家族内部將進行保留性 取代。 1) 具驗性支鏈之胺基酸：離胺酸、精胺酸、組胺酸。 2) 具酸性支鏈之胺基酸：天冬酸、麵胺酸 3) 具不帶電極性支鏈之胺基酸：天冬醯胺、麵醯胺、 絲胺酸、蘇胺酸、赂胺酸。
S -24- 201219568 4)具非極性支鏈之胺基酸：甘胺酸、丙胺酸、纈胺 酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯基丙胺酸、甲硫胺 酸、色胺酸、半胱胺酸。 又有其它實施例中，一或多個胺基酸殘基添加至抗 體之一或多個CDR或從其中刪除。此等添加或刪除係出 現在CDR之N端或C端或出現在cdr内部位置。 藉胺基酸的添加、刪除或取代改變抗體之Cdr之胺 基酸序列，可獲得各種效果諸如對標靶抗原之結合親和 力增高或凝集減少。 須瞭解包含此等已改變CDR序列之本發明抗體仍然 結合西格烈-1 5及抑制破骨細胞的形成及/或破骨細胞之 骨質再吸收。此點可藉此處實例5及6所揭示之結合檢 定分析及生物活性檢定分析測試。 抗體之恆定區也可從針對抗體MOR09281、 MOR09892、MOR09898、MOR10110、MOR12574、 MOR13154及MOR13156特別揭示之該等抗體恆定區變 更。例如’抗體可設有任何同型基因之FC區：IgA、IgD、 IgE、IgG 或 IgM。 較佳抗體為人類抗體。 抗體、其製造及使用為眾所周知且係揭示於例如 Harlow，E.及Lane，D.，抗體：實驗室手冊，冷泉港實驗 室出版社，冷泉港，紐約，1999。 抗體可使用該技術領域已知之標準方法產生。抗體 實例包括（但非限於）抗體之單株、單鏈、及功能性片段。 -25- 201219568 抗體之「功能性片段」包括可結合標乾抗原之抗體 的任何片段，如此包括Fab片段、F(ab，）2片段、Fab，片 段及Fv片段。 抗體可於某個範圍之宿主製造，例如山羊、兔、大 鼠、小鼠、人類、及其它。藉由注射標靶抗原（於本發明 為西格烈· 1 5)或具有免疫原性質之片段或其募肽而宿主 被免疫接種。依據宿主種屬而定，可使用多種佐劑來提 问免疫反應。此專佐劑包括但非限於佛氏（F r e u n d ’ s)、礦 物凝膠諸如氫氧化紹、及界面活性物質諸如溶卵峨脂、 普隆尼克（pluronic)多元醇類、多陰離子類、胜肽類、油 乳液類、鎖孔蜞血藍質（keyhole limpet hemocyanin)、及 二硕基齡。用於人類之佐劑中以BCG (Bacille Calmette-Guerin，卡介苗）及小棒桿菌 為特別有用。 針對西格烈-1 5之單.株抗體可經由培養中藉連續細 胞系提供抗體分子製造的任一種技術製備。此等技術包 括但非限於融合瘤技術、人類B細胞融合瘤技術、及 EBV-融合瘤技術（K〇ehler等人，1 975，自然，256 : 495-497; Kosbor 等人，1983，今日免疫學 4:72; Cote 等人 ’ 1 983’ PNAS USA, 80:2026-2030; Cole 等人，1 985， 單株抗體及癌症治療’ A1 a n r · l i s s I n c.，紐約，7 7 - 9 6頁）。 另外，可使用單鏈抗體之製造技術。單鏈抗體（scFv) 包含以鏈接子胜肽（典型長度約5至25胺基酸）連結之一 重鏈可變區及一輕鏈可變區。scFv可使用重組技術合 成’例如經由於宿主有機體諸如大腸桿菌（五表現編 碼scFv之載體。
S -26- 201219568 ,抗體也可經由於淋巴細胞族群藉活體内感應製造而 製造’或經由篩選高度特異性結合試劑之重組免疫球蛋 白存庫或族群而製邊@ , 衣1^ (Urlandl 4 人，1 989，PNAS USA， 86 ： 3833-3837 ； Winter π ^ ι winter，G，4 人，1991，自然，349 : 293-299)。 也可生成抗原結合片段，例如F(ab，）2片段可藉蛋白 酶消化抗體分子製造’ & Fab片段可藉還原F(ab，)2片段 之雙硫橋生成。另外，可組成Fab表現存庫來允許快速 且容易地識別具有期望特異性之單株Fab片段（Huse等 人，1989，科學，256 : 1275 -1281)。 可使用多個免疫檢定分析進行篩檢來識別具有期望 特異性之抗體。使用具有已確立特異性之多株抗體或單 株抗體之競爭性結合或免疫放射性計量檢定分析之多個 方案為該技術領域眾所周知。此等免疫檢定分析典型地 涉及測量西格烈-1 5、或其任何片段或寡肽及其特定抗體 間之複雜形成的測量。可使用利用對兩種非干擾性西格 烈-1 5抗原決定部位具特異性之單株抗體的二位置基於 單株之免疫檢定分析’但也可採用競爭性結合檢定分析 (Maddox 等人 ’ 1 983，J· Exp. Med.，158:1211-1216)。 3 ·含有抗西格烈-1 5抗體之藥物 於前項「2.抗西格烈-1 5抗體」所述的抗西格烈-1 5 抗體中和西格烈-1 5之生物活性。此種抗體中和西格烈 -1 5之生物活性於活體内抑制西格烈_丨5之生物活性（亦 即破骨細胞之分化及/或成熟），因此可用作為由破骨細 胞之異常分化及/或成熟所引起的異常骨質代謝之治療 -27- 201219568 劑及/或預防劑。異常骨質代謝可以是以淨骨質流失為特 徵之任一種病症（骨質缺乏或骨質溶解）^通常，抗西袼 烈· 1 5抗體之治療及/或預防功效係應用於需要抑制骨質 再吸收之病例。可藉抗西格烈-1 5抗體治療及/或預防之 異常骨質代謝之實例包括骨質疏鬆（停經後骨質疏鬆、老 年性骨質疏鬆、由於使用治療劑諸如類固醇或免疫抑制 劑之繼發性骨質疏鬆、或伴隨類風濕性關節炎之骨質疏 鬆）、伴隨類風濕性關節炎之骨質破壞、癌變性高辦灰 症、伴隨多發性骨髓瘤或癌症轉移至骨頭的骨質破壞、 巨細胞瘤、牙周病造成的牙齒脫落、環繞人工關節之骨 質溶解、慢性骨髓炎之骨質破壞 '骨頭之巴吉特氏病 (Paget’s disease)、腎性骨發育不全、及成骨不全。但異 常骨質代謝並非限於此等實例只要屬於伴隨有因破骨細 胞引發淨骨質流失之疾病即可。 抗西格烈·1 5抗體用於中和西格烈-1 5之生物活性之 試管内活性例如可藉抑制過度表現西格烈-15之細胞分 化成為破骨細胞之活性而測定。例如，抗西格烈_15抗體 係以各種不同濃度添加至RAW 264.7細胞或Raw 264細 胞（其為小鼠單核細胞衍生細胞系），可測定經由使用 RANKL或TNF-a刺激來抑制分化成破骨細胞之活性。於 私實彳】中抗西格烈-15抗體係以各種不同濃度添加至 月髓衍生-人培養細胞，可測m由使用RANKL、 或活=維生素D3刺激來抑制分化成破骨細胞之活性。於 卜貫例中&西格烈1 5抗體係以各種濃度添加至正常 人類破骨細胞前驅細胞(正常人類自然破骨細胞前驅細 -28- 201219568 胞，得自桑可純藥公司（Sank〇 Junyaku c〇，Ud )，型錄 號碼2T-110)’及可決定經由使用rnak]l或m_csf刺激 來抑制分化成破骨細胞之活性。此種針對破骨細胞分化 之抑制效果可使用破骨細胞之酒石酸鹽抗性酸性磷酸酶 (TRAP) 性之抑制作用作為指標測定。於額外實例中， 針對破骨細胞分化之抑制效果也可經由使用抑制TRAp_ 陽性多核破骨細胞之形成，亦即抑制破骨細胞之細胞融 合作為指標而測定。於額外實例.中，於使用股骨-及/或 脛骨-衍生細胞之蝕點檢定分析實驗（Takada等人，骨頭 及礦物質（1 992) 17，347-359)中，抑制由破骨細胞再吸 收骨質之試管内活性之測定方式係經由以各種濃度添加 抗西格烈-15抗體至股骨及/或脛骨衍生細胞，及觀察於 牙本質切片上的姓點的形成。至於測定抑制由破骨細胞 之骨質再吸收之S式％*内活性，也可使用以輛合至銪之人 類膠原蛋白塗覆的孔板。於實驗動物抗西格烈_ i 5抗體針 對異常骨質代謝之活體内治療或預防功效可藉將抗西格 烈-15抗體投予骨質疏鬆模型動物或過度表現西格烈_15 之基因轉殖動物及測量破骨細胞之變化加以證實。 中和西格烈-1 5之生物活性之前述抗體可用作為藥 物’特別係用作為治療或預防異常骨質代謝之醫藥组成 物’異㊉月質代谢諸如骨質疏鬆、伴隨類風濕性關節炎 之骨質破壞或伴隨癌症轉移至骨頭的骨質破壞；或用作 為此種疾病之免疫診斷之抗體》 於類風濕性關節炎（RA)之治療中，主要問題為伴隨 疾病發生之骨質流失。曾經報告於此種伴隨RA之骨質 -29- 201219568 流失中’破骨細胞扮演重要角色。被視為針對類風渴性 關節炎之骨質破壞中針對破骨細胞誘導(分化及成孰)活 化及起因為最重要的細胞激素乃RANKL及 (R〇_E.等人’骨30’ 34〇·346頁，·)。作為㈣以 之誘斜受體之〇CIF/OPG可抑制由RANKL誘導破骨細胞 之形成’但不會抑制由TNF_a誘導破骨細胞之形成。另 一方面，依據本發明之抗西格烈_丨5抗體有效抑制藉 RANKL及TNF-a二者誘導破骨細胞之形成。因此預期^ 發明之抗西格烈·15抗體比較RANKL阻斷劑 (OCIF/OPG、抗RANKL抗體等）可更強力抑制於類風濕 性關節炎等因TNF-a誘導之骨質流失及骨質破壞。 舉個實例，用於異常骨質代謝之治療或預防，抗西 格烈-1 5抗體係單獨投藥或連同至少另一種骨頭相關疾 病之治療劑一起投藥《舉另一個實例，抗西格烈_丨5抗體 可連同治療上有效量之異常骨質代謝之治療劑投藥。抗 西格烈-1 5抗體及治療劑可同時、分開、或循序投予。可 連同抗西格烈-1 5抗體投予之治療劑之實例包括但非限 於雙膦酸鹽類、活性維生素D3、抑弼素（c a 1 c i t ο n i η )及其 衍生物、激素製劑諸如滩二醇（estradiol)、選擇性雌激素 受體調節劑（SERM)、伊普利黃酮（ipriflavone)、維生素 K2[米那堤崔酮（menatetrenone)]、釣製劑、副甲狀腺激素 (PTH)製劑、非類固醇抗發炎劑、可溶性TNF受體製劑、 抗TNF-α抗體或該等抗體之功能片段、抗副曱狀腺激素 相關蛋白質（PTHrP)抗體或該等抗體之功能片段、IL-1 受體拮抗劑、抗IL-6受體抗體或該等抗體之功能片段、 -30- 201219568 抗RANKL抗體或該等抗體之功能片段、及破骨細胞生 成抑制因子（OCIF) »於另一個實例中，治療劑為本發明 之第二不同抗西格烈_丨5抗體。換言之，投予本發明之兩 種不同抗西格烈-1 5抗體。取決於異常骨質代謝狀態或期 望之治療及/或預防程度，可投予二或三或更多類型治療 劑，此等治療劑係經由全部一起包囊在同一個製劑内部 供應。治療劑及抗西格烈_丨5抗體可經由包囊在同一個製 劑内部全部一起供應。再者，此等治療劑可經由包封成 為用於治療及/或預防之套件組全部一起供應。再者，此 等治療劑及抗西格烈-1 5抗體可分開供應。於投予基因治 療之情況下’針對骨頭疾病之含蛋白質治療劑基因及抗 西格烈-1 5抗體基因可插入相同啟動基因區或不同啟動 基因區下游，且可導入相同載體或不同載體内。 經由軛合骨頭疾病用之治療劑至抗西格烈_丨5抗體 或其片段’可製造標靶藥物軛合物，例如說明於Mc. Garnet「標靶藥物軛合物：原理及進展」，進階藥物遞送 （2 00 1 ) 5 3 ’ 1 7 1 -2 1 6。為了達成此項目的，除了抗 體分子外，可施加任何抗體片段，只要其不會完全喪失 辨識破骨細胞之能力即可，及其實例包括片段諸如Fab、 F(ab’）2、及Fv。本發明中，抗體及片段可以相同方式使 用’由抗西格烈-1 5抗體或其片段與骨病治療劑所形成之 車厄合物可以是述於下列參考文獻之各種形式中之任一 者：M.C_ Garnet 「標靶藥物軛合物：原理及進展」，進 阳藥物遞送綜論 ’（2〇〇1) 53，171-216 ; G.T. Hermanson 「生物軛合物技術」學術出版社，加州（1996) ; Putnarn 201219568 及J.Kopecek「具抗癌活性之聚合物扼合物」聚合㈣ 學之.進展（1 995) 1 22, 55-1 23等。換言之，可舉例說明 一種扼合物形式其中抗西格烈_15抗體與骨病治療劑係 彼此以化學方式且直接地或透過間隔基諸如寡肽而彼此 扼合，及透過適當藥物載劑所形成之軛合物。藥物載劑 之實例包括微脂粒及水溶性聚合物。透過此種藥物載劑 所形成之輕合物之更特定實例包括一種軛合物形式其^ 抗體及骨病治療劑係摻混於微脂粒，及微脂粒與抗體彼 此軛合；以及一種軛合物形式其中骨病治療劑係以化學 方式且直接地或透過間隔基·諸如募肽耗合至水溶性聚合 物（具有約1000至100000分子量之化合物）及抗體係概 合至該水溶性聚合物。抗體（或其片段）軛合至骨病治療 劑或藥物載劑諸如微脂粒或水溶性聚合物之轭合作用可
It熟諸s玄技術領域人士已知方法進行，諸如述於GT Hermanson「生物輥合技術」學術出版社，加州（i 996);
Putnam及J. Kopecek「具抗癌活性之聚合物軛合物」聚 合物科學進階（1995) 122, 55-123之方法。骨病治療劑摻 混於微脂粒可藉熟諳該技術領域人士已知方法進行，諸 如述於D.D. Lasic 「微脂粒：由物理學至應用」愛塞維 爾科學出版公司（Elsevier Science Publishers B.V.)，阿姆 斯特丹（1993)等之方法。骨病治療劑軛合至水溶性聚合 物~T藉熟諸该技術領域人士已知方法進行’諸如述於D. Putnam及j. Kopecek 「具抗癌活性之聚合物輛合物」 聚合物科學進階（1995) 122，55-123之方法。抗體（或其 片段）與骨病治療劑（或其片段）間之軛合物可藉熟諳該技 -32- 201219568 術領域人士已知方法經由前述方法以外之遺傳工裎 造 ° 本發明也提供一種醫藥組成物含有治療上及/或 防上有效量之抗西格烈_15抗體及醫藥上可接受之稀 劑、載劑、增溶劑、乳化劑、保藏劑及/或佐劑。 本發明也提供一種醫藥組成物含有治療上及/或 防上有效量之抗西格烈_丨5抗體，治療上及/或預防上 效量之至少一種骨病治療劑，及醫藥上可接受之稀 劑、載劑、增溶劑、乳化劑、保藏劑及/或佐劑。骨病 療劑之實例包括但非限於雙膦酸鹽類、活性維生素D 抑飼素（calcitonin)及其衍生物、激素製劑諸如雌二 (estradiol)、選擇性雌激素受體調節劑（SERM)、伊普 黃酮（ipriflavone)、 維生素 K2[米那堤崔 (menatetrenone)]、鈣製劑、副甲狀腺激素（ρτΗ)製劑 非類固醇抗發炎劑、可溶性TNF受體製劑、抗TNF_a 體或該等抗體之功能片段、抗副曱狀腺激素相關蛋白 (PTHrP)抗體或該等抗體之功能片段、IL-1受體拮抗齊 抗IL-6受體抗體或該專抗體之功能片段、抗rankl 體或s亥專抗體之功能片段、及破骨細胞生成抑制因 (OCIF)。於另一實例中，該治療劑為本發明之第二不 抗西格烈-15抗體。換δ之’醫藥組成物包含兩種不同 發明之抗西格烈-1 5抗體。 欲用於可接受用在依據本發明之醫藥組成物之製 中的物質較佳為就劑量及濃度而言對欲投予該組成物 人類個體為無毒。 製 預 釋 預 有 釋 治 ! ' 醇 利 酮 抗 質 I ' 抗 子 同 本 劑 之 -33- 201219568 本發明之醫藥組成物可含有藥用物質，該物質可改 變或維持醫藥組成物或其組分之pH、滲透壓、黏度、透 明度、顏色、等張性、色澤、無菌條件、安定性、溶解 度、釋放率、吸收率、或通透性。藥用物質之實例包括 但非限於胺基酸類諸如甘胺酸、丙胺酸、麵醯胺、天冬 醯胺、精胺酸及離胺酸；抗微生物劑；抗氧化劑諸如抗 壞企自文硫&鈉及亞硫酸氫納；緩衝劑諸如鱗酸鹽、檸 檬酸鹽、蝴酸鹽緩衝劑、碳酸氫鹽及Tris_Hcl溶液；填 充劑諸如甘露糖醇及甘胺酸；螯合劑諸如伸乙基二胺四 乙酸（EDTA);錯合劑諸如咖啡因（caffeine) '聚乙烯基吡 咯啶β-%糊精及羥丙基_β_環糊精；增量劑諸如葡萄糖、 甘路糖及糊精，其它碳水化合物類諸如單醣類及雙醣 類；著色劑；矯味劑；稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物 諸如聚乙烯基吡咯啶Η呆藏劑諸如低分子量多肽、鹼基 生成性抗衡離子 '氣化苄烷鏽、苯甲酸鹽類、水揚酸、 硫柳汞(thimerosal)、#乙醇、對羥苯甲酸甲醋、對羥苯 甲I丙s曰、氯西定（chl〇rhexidine)'山梨酸、及過氧化氮； ’合齊1諸如甘油、丙二醇及聚乙二醇丨糖醇類諸如甘露糖 醇及山4糖醇，懸浮劑；界面活性劑諸如聚山梨糖聚糖 酯、波利索貝類（polys〇rbates)包括波利索貝2〇及波利索 、 崔頓（Triton)、車美沙明（tromethamine)、卵填脂 及膽固醇；安定性提升劑諸如薦糖及山梨糖醇；彈性提 升知！諸如氣化鈉、氣化卸及甘露糖醇及山梨糖醇；轉運 ^，稀釋劑’職形劑；及/或醫藥佐劑。此等物質用於醫 藥用途之添加量較佳為抗西格烈-15.抗體之〇.01至100
S -34- 201219568 倍’特佳為0.1至1 〇倍。熟諸該技術領域人士可依據# 應用之疾病、欲施用之投藥途徑等決定於製劑中醫藥组 成物之較佳配方。 醫藥組成物中之賦形劑或載劑可皇液體或固體形 式。適當賦形劑或載劑可以是可注射之水、生理食gg #、 人工腦脊髓液或其它常用於腸道外投藥的物質。再者， 中性生理食鹽水或含有血清白蛋白之生理食鹽水也可用 作為載劑。醫藥組成物可含有pH 7.0至8.5之Tris緩衝 劑或pH 4·0至5.5之乙酸鹽緩衝劑’其可以山梨糖醇或 其它化合物補充。本發明之醫藥組成物之實例包括含有 抗西格烈-1 5抗體之醫藥組成物及含有抗西格烈·丨5抗體 及至少一種骨病治療劑之醫藥組成物。本發明之醫藥組 成物係製備成凍乾產品形式或液體形式作為具有選定之 組成及要求之純度之藥劑。含有抗西格烈_ 1 5抗體之醫藥 組成物及含有抗西格烈_ 1 5抗體及至少一種異常骨質代 謝治療劑之醫藥組成物也可使用適當賦形劑諸如蔗糖形 成為；東乾產品。 本發明之醫藥組成物可製備供腸道外投藥或用於經 口服投藥之胃腸道吸收。製劑之組成及濃度可依據投藥 方法決定。至本發明之醫藥組成物中所含抗西格烈-i 5
於劑量，於 之程度，換言之，因西 之解離常數（Kd值）為較低，抗西格烈_丨5抗體可 里用於人類及呈現其藥物功效，因此用於人類 之醫藥纽成物之劑量可基於此項結果決定。至 於人類抗西格烈-1 5抗體投予人體之情況下，抗 -35- 201219568 體可以每1日至180日一次投予約o.i至100毫克/千克 劑量。 本發明之醫藥組成物之劑型實例包括注射劑、輸注 液、栓劑、經鼻製劑、舌下製劑及經皮吸收劑。 4.本發明之其它產物 也可提供一種多核苦酸其包含於如上項目「2.抗西 格烈-1 5抗體」所述之編碼抗西格烈_ 1 5抗體序列。編碼 較佳抗體（MOR0928 1、MOR09892、MOR09898、 MOR10110、MOR125 74、MOR13 154 及 MOR13156)之核 苷酸序列細節係提供於表4至7及表10至12。但須瞭 解本發明之多核苷酸並非限於表4至7及表10至12列 舉者。更明確言之’如上第2項之說明，本發明之抗西 格烈-1 5抗體包括該等抗體其包含得自不同較佳抗體之 CDR，也包括該等抗體其包含含有一或多個胺基酸添 加、刪除或取代之CDR。本發明之多核苷酸包括編碼此 等抗體之多核苷酸。此外，因核酸碼的簡併，除了表4 至7及表10至12列舉之該等核苷酸序列外，核苷酸序 列也編碼相同胺基酸序列。 也提供多核苷酸其包含多核苷酸之核苷酸序列，該 多核苷酸於苛刻條件下雜交至與編碼以上第二項列舉抗 體之一的核苦酸序列互補之一核普酸序列所組成的多核 苷酸。就此方面而言，「雜交係於苛刻條件下進行」一詞 係如前文定義。 —多核苷酸也包含其它核苷酸序列諸如引子及/或其 匕表現調節序列、編碼多線答酿外ρ 深甘®夂化尾之序列、最小非轉 #區、及柯哲克（Kozak)同位序列。 -3 6-
S 201219568 於若干實施例中，提供包含此種多核苷酸之載體。 載體實例包括質體、黏端質體及病毒載體，包括嗟菌體。 除了多核苷酸本身外，此等載體可包括序列諸如複製起 點、遺傳彳示δ己、抗生素抗樂性基因' c〇S位置、選殖位置 及標靶序列。於許多實施例中’栽體包含足夠元素來在 宿主細胞内複製’及表現於宿主細胞編碼抗西格烈_工5 抗體之多核苷酸序列。 如此於額外實施例中，提供轉形細胞，該轉形細胞 包含前述多核苷酸（例如結合於細胞的基因體内）或包含 前述載體。適當宿主細胞包括細菌細胞諸如大腸桿菌及 真核細胞諸如酵母細胞或人類細胞系。此等轉形細胞可 經由培養細胞’表現編碼抗體之核苷酸序列然後從培養 基純化抗體而用來合成本發明之西格烈_ 1 5抗體。 [實例] 後文中’將參考實例更特別說明本發明，但本發明 並非囿限於此。注意下列實例中有關基因操弄的個別操 作係依據「分子轉殖」（作者Sambrook，J.，Fritsch，E.F. 及Maniatis，T·’冷泉港實驗室出版社1989年出版）所述 方法進行；或於使用市售試劑或套件組之情況下依據所 附的貫驗流程書進行。 實例1 細胞培養及暫時性轉染 人類胚胎腎（ΗΕΚ)293自由型（293FreeStyle)細胞係 於自由型293培養基[英維仇貞公司（Invitrogen)]生長。 用於細胞汰選，HEK 293自由型細胞使用 293菲克廷 -37- 201219568 (293fectin)(英維仇貞公司）依據供應商的指示轉染質體 DNA，諸如質體pcDNA3.1 ( + )/人類西格烈_15 (編碼人類 西格烈-1 5 ’存取號碼Q6ZMC9)、質體pCDNA3 _ 1 ( + )/小 鼠西格烈-15 (編碼小鼠西格烈_ 15、存取號碼 NP_001094508)或pcDNA3.1( + )。又經細胞汰選培養兩曰 後收穫經轉染之HEK 293自由型細胞。 重組人類西格烈-1 5 - F c及小鼠西格烈_ 1 5 - F c製備 可溶性人類西格烈-15/phIgFc之表現載體係藉葛威 (Gateway)技術（英維仇貞公司）組成。編碼人類西格烈
-15(存取號碼Q6ZMC9’ 1-260)完之編碼胞外位置之DNA 片#又係藉PCR擴增來將一分錄純株（entry ci〇ne)組成為 PDNOR221 (英維仇貞公司）。其次，於此分錄純株與載 有編碼人類Fc序列之DNA的目的地載體間進行Lr反 應。所組成之質體内人類西格烈_15_Fc之DNA序列係藉 DNA序列分析證實。人類西格烈_l5_Fc係於載有可溶性 人類西格烈-1 5/phIgFc之表現載體的HEK 293自由型内 暫時性表現。1.5升表現可溶性人類西格烈_15_Fc之hek 293自由型細胞之培養溶液通過史特瑞維（Sterivex)_Gv 過濾器[米利波公司（Millip〇re)]過濾，然後濾液施加至海 崔普（HiTrap)蛋白質A管柱[阿默山生科公司（Amersham
Bl〇SCiences)]，該管柱事先使用杜氏（DUlbeCC〇，S) PBS (D_PBS，英維仇貞公司製造）平衡。人類西格烈-15-Fc以 Μ檸檬酸鈉緩衝液（pH 3〇)洗提及以i MTds中和。 每份2.5毫升人類西格烈_15_Fc分量施加至pD i〇脫鹽 b柱（阿默山生科公司），該管柱事先以含5 〇 精胺酸
S -38- 201219568 鹽酸鹽之磷酸鹽緩衝食鹽水（pH 7.0，A-pbs)平衡，接著 以A-PBS洗提，藉此獲得3.5毫升樣本，該樣本之溶劑 係以A-PBS置換。藉前述程序製備之樣本於_8(rc低溫保 存直到使用時。 針對可溶性小鼠西格烈-15/pHIgFc之表現載體係藉 葛威技術（英維仇貞公司）組成。編碼小鼠西格烈_15(存取 號碼，NP 001094508，1 -25 8)之胞外位置之DNA片段係 藉PCR擴增來將一分錄純株組成為pDNOR221(英維仇貞 公司）。其次於使分錄純株與載有編碼人類FC序列之 DNA的目的地載體間進行LR反應。於所組成的質體中 小鼠西格烈-15-Fc之DNA序列係藉DNA序列分析證 實。小鼠西格烈-15-Fc係於載有可溶性小鼠西格烈 -15/phIgFc之表現抗體的HEK 293自由型暫時性表現。 1·8升表現小鼠西格烈-15-Fc之HEK 293自由型細胞之 培養液通過Sterivex-GV過濾器（米利波公司）過濾，濾液 施加至HiTrap蛋白質A管柱（阿默山生科公司），該管柱 事先使用杜氏PBS (D-PBS，英維仇貞公司）平衡。小鼠 西格烈-15-Fc以0.1 Μ檸檬酸鈉緩衝液（pH 3.0)洗提及以 1 M Tris中和。收集的小鼠西格烈_15-Fc分量使用離心 膜離心機（Amicon Ultra-Ι 5)(米利波公司）濃縮。緩衝液係 與含0.01%吐恩（Tween)-20之歐族卡（Otsuka)感染用生 理食鹽水[大％製藥公司（Otsuka Pharmaceutical)]交換。 樣本於-8 0 °C低溫保存直到使用時。 -39- 201219568 得自HuCAL GOLD存庫之抗體生成 A. 噬菌體顯示存庫 為了生成抗人類西格烈-1 5之治療性抗體，使用摩佛 夕（MorphoSys) HuCAL GOLD噬菌體顯示存庫進行選 擇。HuCAL GOLD為基於HuCAL構想之Fab存庫 [Knappik 等人（J.Mol. Biol·，296, 57-86, 2000)]; Krebs 等 人，J· Immunol. Methods, 254, 67-84, 200 1; Rothe 等人， J. Mol. Biol·，376(4):1 1 82-200, 2008)，其中全部六個 CDR係經分集（diversified)，採用希迪普雷（CysDisplay) 技術用來將Fab片段鍵聯至噬菌體表面（WO 01/05950)。 B. 使用HuCAL GOLD汰選 MOR0901 2、MOR08656 及 k〇R08662 係如後述分 離。用於選擇，HuCAL GOLD抗體存庫接受全細胞汰選， 該全細胞汰選係使用以質體PcDNA3.1( + )/人類西格烈 -15或質體pcDNA3.1( + )/小鼠西格烈-15之HEK 293自由 型細胞，使用293 fectin (英維仇貞公司）進行，接著為 PH-洗提及於西格烈-15-陰性HEK 293自由型細胞上之 後吸附步驟用來清除不相關的抗體-噬菌體。最後，剩餘 抗體噬菌體用來感染大腸桿菌細胞，然後大腸桿菌細胞 接種於瓊脂孔板上及培養隔夜。次日從孔板上刮下細菌 菌落，拯救噬菌體及擴增。HuCAL GOLD抗體存庫於96 孔瑪希索（Maxi-sorp)孔板[南克公司（Nunc)’透明]上使用 藉山羊抗人類Fc抗體[傑克森免疫研究公司（Jackson 1«1111\111〇1^86訂(^)"|，型錄號碼109-00 5-098]所捕捉的重組 人類西格烈_丨5-Fc進行捕捉汰選。為了消除人類Fc及山 6 -40- 201219568 羊IgG結合因子，人類IgG (傑克森免疫研究公司，型錄 號瑪009-000-003)及山羊igG(傑克森免疫研究公司，型 錄號碼 005-000-003)添加至選擇溶液。使用 Tween-2 0/PBS及PBS洗滌後，洗提結合的噬菌體。對數 中期大腸桿菌細胞感染經洗提的噬菌體及接種在補充葡 萄糖及氣黴素（chloramphenicol)(LB-CG)上。培養隔夜 後，刮下菌落及維持於含15%甘油之LB-CG。 MOR0928 1係如後述分離。為了獲得具有改良親和 力之Fab，得自固相Fc捕捉及差異全細胞汰選之噬菌體 係針對LCDR3分集做選擇接著為額外選擇回合。來自全 部汰選策略的輸出係在重組人類西格烈_ 1 5_hFc之一火 ELISA中篩選。良性純株接受二次ELISA及FACS篩選。 選出的純株經密實化及純化。 C.HuCAL GOLD Fab抗體於大腸桿菌之微表現。 藉pMORPHx23一Fab編碼之Fab片段於大腸桿菌微 表現係在圓底96孔培養孔板[康寧公司（c〇rning)]進行。 大腸桿菌菌落接種於培養基。培養孔板經培養直到培養 基變成略微混濁。然後添加額外培養基。培養孔板進一 步培養隔夜。次曰，含有2.5毫克/毫升溶菌酶（羅氏公司 (Roche))之BEL緩衝液[蛋白酶抑制劑混合液（羅氏公 司’型錄號碼1 1873580001)；[添加至培養孔板的各孔，振 搖培養孔板。大腸桿菌分解後，添加脫脂乳/pBs [塔卡拉 生物公司（Takara Bio)]溶液，進一步振搖培養孔板。所 製備的大腸桿菌分解液（lysate)用於ELISA篩檢人類西 格烈-1 5結合因子。 -4 1- 201219568 D.西格烈-15結合因子之ELISA篩檢 96孔美希索微滴定量（microtiter)孔板（南克公司）之 各孔塗覆以1.25微克/毫升山羊抗人Fc抗體（傑克森免疫 研究公司，型錄號碼109-005-098)隔夜。次日，以PBS 洗滌後，微滴定量孔板使用脫脂乳/PBS封鎖。使用PBS 洗滌後’添加1微克/毫升重組人類西格烈-1 5-Fc至微滴 定量孔板。孔板以Tween-20/Tris緩衝食鹽水[塔卡拉生 物公司，（TBST)]洗三次隨後添加前述大腸桿菌分解液。 孔板溫和振搖接著以T B S T洗務。然後驗性峨酸酶扼合 抗人Fab (傑克森免疫研究公司，型錄號碼109-035-097) 以T B S T稀釋及添加至孔板。孔板溫和振搖接著以τ b S T 洗滌。結合係藉阿托佛斯（Attophos)酶基質組合（羅氏公 司）檢測及螢光（激光：440奈米；發光：550奈米）係使用 孔板讀取器[分子裝置公司（Molecular Devices)，史拜崔 麥（SpectraMax) M5]測量。 [實例2]
HuCAL IgG2之組成、表現及純化 A.保留於IgG2
為了表現全長IgG，重鏈（VH)及輕鏈（VL)之可變域 片段須從pMORPHx 9 Fab表現載體次選殖入人類IgG2 之適當pMORPH 2_h_Ig載體。限剪酶Mfe][及BlpI係用 來將VH域片段次選殖入pm〇rph 2_h_IgG2，EcoRV及 BsiWI係用來將VL域片段次選殖入pM〇RPH 2_h_IgK 及EcoRV及Hpal係用來將VL域片段次選殖入pMORPH 2一h_IgX2。於接合、轉形及DNA製備後，所得IgG表現 質體係藉限剪分析及排序來決定特徵。
S -42- 201219568 B.人類IgG2之暫時性表現及純化 真核HKB11細胞以等量IgG重鏈及輕鏈表現載體 (pMORPH 2)轉染。細胞培養上清液通常係從3曰至7曰 後轉染收穫。無菌過濾後，溶液接受標準蛋白質A親和 層析術[麥索雷蘇（MabSelectSURE)、奇異健康照護公司 (GEHealthcare)]。若未另行陳述，係對1χ杜氏pBS(pH 7·2 ’英維仇貞公司）或對檸檬酸鹽緩衝液（1〇〇 mM檸檬酸 鹽，150 mM NaCM ’ pH 5.0)進行緩衝液交換，樣本係經 無菌過濾（0·2微米孔洞大小）。蛋白質濃度係藉紫外光光 譜術測定。IgG純度係於SDS-PAGE於變性、還原及非 還原條件下分析，或使用愛吉蘭生物分析器（Agilent BioAnalyzer)分析及於原生狀態藉HP_seC分析。 [實例3]
篩檢及抗體特徵化 A.於西格烈-1 5-FC上捕捉ELISA 384孔瑪希索（MaxiSorp)微滴定量孔板之各孔塗覆 以山羊抗人 IgG [待諾法（Dianova)，型錄號碼 109-005-098，於PBS稀釋ι:ι,〇00]。次日，各孔經洗滌 然後於微滴定量孔板振搖器上使用MPBST封阻。各孔以 PBST洗務’隨後添加重組人或小鼠西格烈15_人融合 蛋白°培養後’添加經預封阻之BEL萃取物（其製備請參 考實例ic)或經純化之Fab/IgG。孔板於微滴定量孔板振 搖器上培養及然後以PBST洗膝。 為了檢測結合至經捕捉的Fab之抗原，孔板以pBST 洗滌及添加抗-Fab-AP (待諾法，型錄號碼109_055_097， 於 PBS 稀釋 1:5000)。 -43- 201219568 培養後’孔板以TBST洗務’添加阿托佛斯（阿托佛 斯酶基質套組，羅氏藥廠# 1 1681982001，於TBS稀釋丄. 10) ’及於提肯（TECAN)微滴定量孔板讀取器（發光：535 奈米；激光：4 3 0奈米）測量螢光。 B.FACS分析 HEK293T細胞使用沃辛（Versene)(英維仇貞公司 #1 5040066)脫離’經洗滌及再懸浮於FACS緩衝液 (PBS/3% FC.S)。非黏著性HEK293自由型細胞經洗滌及 再懸浮於FACS緩衝液。ιχ1〇5_ίχ1〇6細胞/孔移轉入％ 孔圓底孔板，於300x g歷經5分鐘時間製作成丸粒及再 懸浮於經稀釋之BEL萃取物（參考實例j c)或經純化之抗 體。細胞-抗體混合物於4。(：培養1小時。細胞經由於3〇〇χ g離心5分鐘及隨後懸浮於FACS緩衝液洗滌兩次（於本 計畫過程甲，洗滌步驟數目增加至5來防止抗體結合至 未經轉染細胞）。細胞再懸浮於檢測抗體溶液（於FACS 缓衝液稀# 1:1 00)。於4。。培養i小時候，細胞以facs 緩衝液洗兩次，再懸浮於FACS緩衝液及透過facs陣列 裝置分析。資料係透過F1〇wJ〇軟體分析。M〇R〇32〇7 (抗 溶菌酶）抗體係用作為陰性對照。人類抗體係使用山羊抗 人PE (傑克森免疫研究斤丨⑽-丨16 〇97)檢測。 [實例4] 候選抗體之親和力成熟 A.親和力成熟存庫之生成 為了提问經選疋抗體片段之親和力及生物活性，使 用三核芽酸導向之突變發生（Virnekas等人，1994)藉卡
S -44- 201219568 E突變發生作用平行最佳化CDR3L及CDRH2區，框架 區維持‘)·亙定。於針對親和力成熟之選殖之前，全部親代 Fab片段皆係從相對應的表現載體（pm〇rPh X9_FH)轉移 入希迪普雷載體 pMORPH 25_LHC via Xbal/EcoRI。於 CDRL3或CDRH2分集後，所得七個不同存庫之接合混 合物電泳入4毫升大腸桿菌細胞（英維仇貞公司，美國加 州卡爾斯貝）獲得每個存庫約1 〇7至1 〇 8獨立菌落。此種 存庫大小確保涵蓋理論分集。存庫之擴增係如前述進行 (Rauchenberger等人，2003)。用於品質管制，隨意揀選 早一純株及定序。 B·固相Fc捕捉汰選 如前述從親和力成熟存庫拯救的1χ1〇ι2噬菌體導引 至透過固相F C捕捉汰選進行選擇，說明如後。 適當數目之瑪希索孔板（F96瑪希索，南克公司 #442402)之各孔以330微升Fey片段特異性抗人IgG，（10 微克/毫升於PBS ;傑克森免疫研究公司，型錄號碼 109-005-098)塗覆隔夜。次日經塗覆之各孔以Pbs洗滌 及於微滴定量孔板振搖器上使用MPBST封阻。隨後，各 孔以PBS洗務及與330微升抗原溶液培養。噬菌體於室 溫於旋轉器上於含乳粉、吐恩2〇及〇 .丨毫克/毫升山羊γ 球蛋白（傑克森免疫研究公司，型錄號碼〇〇9_〇〇〇_〇〇2)之 PBS溶液内預先封阻兩小時。用於選擇過程’抗原溶液 從瑪希索孔板移出’各孔以PBS洗滌。經預封阻之噬菌 體添加至相對應孔内，孔板於微滴定量孔板振搖器上培 養。培養後’移出噬菌體溶液，各孔以PBST及PBS洗 -45- 201219568 數次。末次洗滌步驟之後至繼續洗提之前去除PBs。特 異性結合之噬菌體透過DTT於Tris/HCl，pH 8.0及於室 溫之1 0分鐘培養期洗提。洗提液用來感染對數期大腸桿 菌TGI F +培養。感染的大腸桿菌接種於補充氣黴素及葡 萄糖之LB瓊脂孔板上及培養。次日刮下細菌菌落及再 懸浮於YT培養基。 選擇回合應用於CDRL3成熟汰選，及CdrH2成熟 汰選。於各次選擇回合藉由降低抗原濃度及增加洗滌步 驟數目及洗務強度來提高汰選苛刻度。 C.差分全細胞汰選 差分全細胞成熟汰選大致上係如後述進行。 差分全細胞汰選（d w C P)係於重阻抗原上藉變更固 相FC捕捉汰選（參考實例4B)及於轉染細胞上藉變更全 細胞汰選設計，說明如後。 全細胞汰選（WCP)係使用以人類西格烈_15暫時性 轉染的HEK293自由型細胞進行。表現西格烈_15之細胞 經洗滌、再懸浮及預先封阻。從各個成熟存庫中拯救之 約1x10噬菌體經預先封阻。封阻後，1χ1〇6西格烈_15_ 表現細胞經丸粒化，再懸浮於經預先封阻之噬菌體溶液 及培養。於隨後之選擇回合中，細胞數目減至5χΐ〇5。非 特異性噬菌體藉洗滌步驟去除，藉此於汰選過程中洗滌 :刻度增高。用於洗滌’細胞係藉離心而丸粒化、再懸 浮及於旋轉器上培養。洗滌後’特異性結合的噬菌體從 細胞洗提。離心後，從細胞丸粒去除上清液，&沾以2 M Tns驗基（未經緩衝）中和。以經選定之嗟菌體感染大
S -46- 201219568 腸桿菌 TGI F +係如針對固相汰選（參考實例4B)所述進 行。選擇回合係如 F c捕捉汰選或如全細胞汰選所述進 行。 D.親代抗體 MOR09012、MOR08656 及 MOR08662 分別為 MOR09892、MOR09 898 或 MOR10110 之親代抗體。選擇 MOR0928 1作為進一步分析之候選者而未使用親和力成 熟步驟。 有關抗體之胺基酸序列、編碼抗體之核酸序列及其 結構式之資訊係摘述於表1至表7。 表 1-MOR08656 鏈 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 1 2 6 7 圖 14 15 16 17 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-411 20-137 58-384 20-128 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-378 118-126 319-345 107-115 表 2-MOR08662 鏈 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 11 12 16 17 圖 18 19 20 21 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-408 20-136 58-387 20-129 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-375 118-125 319-348 107-116 表 3-MOR09012 鏈 重 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SEQIDNO 21 22 26 27 圖 22 23 24 25 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-405 20-135 58-390 20-130 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-372 118-124 319-351 107-117 -47- 201219568 表 4-MOR0928 1 鍵 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SEQIDNO 31 32 36 37 圖 26 27 28 29 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-408 20-136 58-387 20-129 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-375 118-125 319-348 107-116 表 5-MOR09892 鍵 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SEQIDNO 41 42 46 47 圖 30 31 32 33 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-405 20-135 58-387 20-129 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-372 118-124 319-348 107-116 表 6-MOR09898 鍵 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 51 52 56 57 圖 34 35 36 37 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-411 20-137 58-387 20-129 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-378 118-126 319-348 107-116 表 7-MOR101 10 鍵 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 61 62 66 67 圖 38 39 40 41 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-408 20-136 58-387 20-129 CDR1* 148-162 50-54 124-156 42-52 CDR2* 205-255 69-85 202-222 68-74 CDR3* 352-375 118-125 319-348 107-116 *核苷酸或胺基酸殘基之範圍 抗體各自之互補性決定區（CDR)之胺基酸序列係列 舉於表8。
S -48- 201219568 表8 抗體 鏈 CDR 序列 SEQIDNO CDR1 NYWMT 3 重 CDR2 FISYSGSTTYYADSVKG 4 MOR08656 CDR3 EGTSSMFDV 5 CDR1 SGDALRSYYAS 8 輕 CDR2 DDNKRPS 9 CDR3 GSYDGTVHV 10 CDR1 NYAMN 13 重 CDR2 TISYIGSNTYYADSVKG 14 MOR08662 CDR3 GAGLGYDV 15 CDR1 SGDNLRSKYVY 18 輕 CDR2 DTNDRPS 19 CDR3 OTYDMTSQDV 20 抗體 鏈 CDR 序列 SEQ ID NO CDR1 SYAMH 23 重 CDR2 YISYSGSNTYYADSVKG 24 MOR09012 CDR3 GWGGFDY 25 CDR1 SGDNLPNRYVH 28 輕 CDR2 DDNNRPS 29 CDR3 QTYDMFSMSDV 30 CDR1 NYWMS 33 重 CDR2 LISYSGSTTYYADSVKG 34 MOR09281 CDR3 DTPIGMDF 35 CDR1 SGDNLGSYYAY 38 輕 CDR2 GDNDRPS 39 CDR3 SSYDIVQPYV 40 CDR1 SYAMH 43 重 CDR2 YISYSGSNTYYADSVKG 44 MOR09892 CDR3 GWGGFDY 45 CDR1 SGDNLPNRYVH 48 輕 CDR2 DDNNRPS 49 CDR3 QSRDLHYSPV 50 CDR1 NYWMT 53 重 CDR2 FISYSGSTTYYADSVKG 54 MOR09898 CDR3 EGTSSMFDV 55 CDR1 SGDALRSYYAS 58 輕 CDR2 DDNKRPS 59 CDR3 ASFTYMSDFV 60 CDR1 NYAMN 63 重 CDR2 YISYSSSNTYYADSVKG 64 MOR10110 CDR3 GAGLGYDV 65 CDR1 SGDNLRSKYVY 68 輕 CDR2 DTNDRPS 69 CDR3 OTYDMTSODV 70 抗體 MOR0928 1 、MOR09892、MOR09898 及 MOR10110之CDR1及CDR2之胺基酸序列符合後文陳述 之同位序列。 -49- 201219568 重鍵C D R1同位序列為 XiYX2MX3 (SEQ id . 其中 N 或 S’x^ %或 A，及 I 為 s、h、t$n。 重鍵CDR2同位序列為 X4ISYSX5SX6TYYADSVKG (SEQ ID NO : 72) 其中x4為L、Y或F，X5為s或G，及X6為T或N。 輕鏈C D R 1同位序列為 sgdx7lx8x9x10yx1iXi2 (seq id ； 73) 其中乂7為N或八，乂8為G、p或R，X9為s或N，X10 為Y、R或Κ，ΧΠ為A或V，及又12為γ、H或S。 輕鏈CDR2同位序列為 X 13X1 4NX] 5RPS (SEQ ID NO : 74) 其中Xi3為G或D，父14為τ或D，及}^5為n、D或K。 [實例5] 結合活性分析 Α.藉ELISA進行結合活性分析 〇. 1毫升1微克/毫升重組人類西格烈_丨5 _Fc、小鼠西 格烈-1 5 - F c或人類 F c (傑克森免疫研究公司， #009-000-00 8)添加至96孔免疫化器胺基孔板（南克公司） 之各孔，孔板於4°C維持隔夜。次日，使用 0.05%吐恩 -20/PBS (PBST)洗務後’孔板於室溫以5% BS A/PB S封 阻1·5小時。以PBST洗滌後，0_1毫升1微克/毫升抗西 格烈-15 抗體（MOR09281、MOR09892、MOR09898、 MOR10110、MOR09012、MOR08656、MOR08662)及人類 IgG (傑克森免疫研究公司，型錄號碼009-000-003作為
S -50- 201219568 陰性對照）添加至孔板’孔板於室溫維持1小時。以pB $ τ 洗滌後，〇_1毫升以PBST稀釋5,000倍之過氧化酶軛合 抗人Fab抗體（傑克森免疫研究公司，型錄號碼 1 1 2-03 5-097)添加至孔板，孔板於室溫維持1 5小時。以 PBST洗滌後，使用ELISA POD ABTS套件組（拿卡萊泰 克（\3〇&^丁6891^)，型錄號碼028 93-60)檢測結合。反應 時間為4分鐘。使用孔板讀取器（分子裝置公司，史拜崔 麥M5)測量450奈米及650奈米之吸光比。第1圖顯示 ELISA 結果。發現 MOR0928 卜 MOR09892、MOR09898、 MOR10U0、MOR09012、MOR08656 及 MOR〇8662 結合 至重組人類西格烈-15-Fc及小鼠西格烈_15_Fc二者但不 結合人類Fc。 [實例6] 生物檢定分析 A.小鼠破骨細胞形成檢定分析 A-1.小鼠骨髓非黏著性細胞之製備 股骨及脛骨係從5週至8週齡的雄ddy小鼠切除， 及去除軟組織。切掉股骨及脛骨兩端，使用23號注射針 頭之注射器注入D-PBS來推擠出骨髓細胞。於uoo rpm 於室溫進行離心5分鐘，去除上清液。於細胞丸粒添加 1毫升溶血緩衝液[紅血球溶解緩衝液，希格瑪公司 (Sigma Co·, Ltd.)製造]來懸浮之，所得懸浮液於室溫放 置5分鐘。含10%胎牛血清（FBS)之20毫升ΜΕΜ-α培養 基（英維仇貞公司製造）添加至其中，懸浮液於室溫於 1，000 rpm離心5分鐘，及去除上清液。於細胞丸粒添加 -51 - 201219568 含5奈克/毫升M-CSF (R&D系統公司製造）及10% fbs 之1 〇毫升ΜΕΜ-α培養基及懸浮之。然後所得懸浮液通 過細胞滯留器[4〇微米尼龍’ BD飛爾肯（BD Falcon)製造] 來去除凝集物。所得細胞移至75平方厘米T形瓶（針對 黏著性細胞的使用）及於二氧化碳培養器内培養隔夜。隔 夜培養後，未黏著於τ形瓶的細胞經回收及用作為小鼠 骨髓非黏著性細胞β Α-2.抗西格烈_15抗體用於得自小鼠骨髓非黏著性細胞 之破骨細胞分化效果（使用RANKL刺激） 實例1及4所產生之抗西格烈_丨5抗體之效果係經由 使用小鼠骨髓非黏著性細胞藉破骨細胞分化檢定分析評 估。於實例0Α-1藉前述方法所製備之小鼠骨髓非黏著性 細胞係於含1〇〇/❶FBS及1〇奈克/毫升m-CSF之α-ΜΕΜ 培養基製備成1 ·5X 1 05細胞/毫升，所得細胞製劑以2〇〇 微升數量播種於9 6孔孔板之各孔，細胞於二氧化碳培養 器培養2日。去除96孔孔板内之老舊培養基，及添加含 10% FBS，20奈克/毫升人類RANKL [RANKL，皮波泰公 司（卩6?1'(^6(：11，111(：.)製造]，及1〇奈克/毫升]^-〇5卩之1〇〇 Μ升ΜΕΜ-α培養基至各孔。於細胞培養基内’以3至 100奈克/毫升濃度添加各種抗西格烈_15抗體 (MOR0928 1、MOR090 12、MOR09892、MOR08656、 MOR09 89 8、MOR0 86 62、及 m〇R1〇11〇)，細胞於二氧化 碳培養器内額外培養3日。培養完成後，藉下述程序測 量所形成之破骨細胞之酒石酸鹽抗性酸性磷酸酶（TRAP) 活性。於96孔孔板各孔之培養基藉抽吸去除，含1 %崔
S -52- 201219568 頓X-100之50微升50 mM檸檬酸鈉緩衝液（pH 6.1)添加 至各孔。然後’孔板於孔板振搖器上振搖5分鐘來溶解 細胞。於各孔内，添加50微升酶基質溶液（50 mM檸檬 酸鈉緩衝液（pH 6.1)含有5毫克/毫升磷酸對硝基苯酯及 0.46%酒石酸鈉）’孔板於室溫培養1〇分鐘。培養後，5〇 微升1N氫氧化鈉溶液添加至96孔孔板之各孔來停止酶 催化反應。停止酶催化反應後，測量各孔於4〇5奈米之 吸光比作為TRAP活性之指標。結果顯示於第2至8圖。 針對 MOR09012 (MOR09892 之親代抗體）、MOR08656 (MOR09898 之親代抗體）、及 MOR08662 (MOR10110 之 親代抗體）未觀察得T R A P活性之顯著抑制。另一方面， 針對 MOR09281、MOR09892、MOR09898 及 MOR10110 於1 3奈克/宅升或更高濃度以劑量-相依性方式觀察得 TRAP活性之顯著抑制。由前述結果，顯示抗西格烈-丄5 抗體（MOR09281、MOR09892、MOR09898 及 MOR10110) 對破骨細胞之形成（破骨細胞之分化及成熟）具有強力抑 制功效。此外也顯示產生抗體（分別為MOR09892、 MOR09898 及 MOR10110)之親代抗體（M〇R〇9〇12、 MOR08656及MOR08662)之親和力熟成對破骨細胞之形 成具有較南抑制活性。 B.使用人破骨細胞之溶骨檢定分析 B)添加人類抗人西格烈·丨5單株抗體對正常人類破 骨細胞前驅細胞之骨質再吸收活性之影響（使用經膠原 蛋白塗覆之孔板評估） -53- 201219568 已知破骨細胞釋放蛋白酶諸如組織蛋白酶κ及分解 第I型膠原蛋白，膠原蛋白為骨頭組織之組成分。溶骨 檢定分析套件組[隆哲公司（L〇nza，inc.)]製造，型錄號碼 PA-1 500)提供塗覆以銪軛合人類膠原蛋白之96孔孔板 (96孔溶骨細胞培養孔板），當破骨細胞於孔板培養時， 經由測量釋放於上清液之定量螢光膠原蛋白片段，可評 估試管内破骨細胞之骨質再吸收活性。 正常人類破骨細胞前驅細胞（正常人類自然破骨細 胞前驅細胞，購自桑可純藥公司，型錄號碼2τ_ιι〇)依據 附在細胞上的實驗流程書以1χ1〇4細胞/孔播種於％孔 溶骨細胞培養孔板。至於培養基，使用破骨細胞前驅細 胞之最低必需培養基（〇ΡΒΜ，購自桑可純藥公司，型錄 號碼ΡΤ-8201)，該培養基補充以〇腦補充集合(破骨細 胞辛格闊特（SingUQ — 套彳組，冑自桑可純藥公司，型 錄號碼PT-9501)含有胎牛血清（終濃度：1〇%)、人類 RANKL (終濃度：1〇或2〇太 兄ζυ不克/¾升）、人類M-CSF (終 濃度：3 3奈克/毫升）等。於戶斥 甚 义所付培養上清液，添加於實 例 1及 4製備之人類括Α 顆柷人西格烈-15單株抗體 (MOR0928 1、09012、09899 λ…， 92 、 08656 、 09898 、 08662 及 10110)來獲得 4、20、1〇〇、痞 次500奈克/毫升之終濃度， 細胞於二氧化碳培養器内拉農Λ α々< 門枵養4日或5日。收集整份1〇 微升培養上清液’含於溶骨格—八 月檢疋分析套件組之200微升 螢光基團釋放劑添加至其中，你田吐„切上 /、τ ’使用時間解析螢光螢光計 [雅佛（ALVO) MX，伯金愛珥 炎碼公司（Perkin Elmer Inc.)製 201219568 造，具有於340奈米之激光及於615奉半夕找 μ 不木之發光]測量螢 光強度（RFU) ’藉此測定於培養上清液釋放之自由萍榮光 膠原蛋白片段數量。結果顯示於第9至13圖。結^ ,藉 添加RANKL而增加之螢光膠原蛋白片段量係以濃度相 依性方式於4奈克/毫升至500奈克/毫升之範圍藉;西 格烈-15抗體減少。關鍵性發現為親和力改良之抗體 (M〇R09892、09898及10110)可以比較個別^代二體 (MOR09012、08656及08662)更低的濃度抑制骨質再吸 收活性。此等結果提示抗體結合親和力改良，結果也導 致生物活性改良。 [實例7] 額外抗體之製備及檢定分析 A.抗體之製備 MOR09268係以實例1(其中獲得MOR0928 1)之相同 方式製備，依據實例2轉換成IgG2。MOR09268為 MOR12574、MOR13 154 及 MOR13 156 之親代抗體。親和 力成熟來產生此三種抗體係依據實例4所述方案進行。 有關抗體之胺基酸序列、其編碼核酸序列及其結構 式之資訊係摘述於表9至1 2。 表 9-MOR09268 鏈 _ ί —----1-----η 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺〜 SE〇 ID NO 76 77 81 ^2 ' 圖 46 47 48 ί?—— 信號序列* 1-57 1-19 1-57 .… Μ9 '~~ 可變區* _ 58-414 20-138 58-399 CDR1* _ 148-162 50-54 124-1^ _ 42g~~^ CDR2* 205-255 69-85 211-231 TUrT— CDR3* — 352-381 118-127 3?Λ-360 -55- 201219568 表 10-MOR12574 鏈 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 76 77 86 87 圖 46 47 50 51 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-414 20-138 58-402 20-134 CDR1* 148-162 50-54 124-165 42-55 CDR2* 205-255 69-85 211-231 71-77 CDR3* 352-381 118-127 328-363 110-121 表 11-MOR13154 鏈 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 91 92 96 97 圖 52 53 54 55 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-414 20-138 58-399 20-133 CDR1* 148-162 50-54 124-165 42-55 CDR2* 205-255 69-85 211-231 71-77 CDR3* 352-381 118-127 328-360 110-120 表 12-MOR13156 鏈 輕 序列類型 核苷酸 胺基酸 核苷酸 胺基酸 SE〇 ID NO 101 102 86 87 圖 56 57 50 51 信號序列* 1-57 1-19 1-57 1-19 可變區* 58-420 20-140 58-402 20-134 CDR1* 148-162 50-54 124-165 42-55 CDR2* 205-261 69-87 211-231 71-77 CDR3* 358-387 120-129 328-363 110-121 *核苷酸或胺基酸殘基之範圍 n.b.抗體MOR0926 8及MOR125 74之重鏈為相同。 抗體MOR12574及MOR13156之輕鏈為相同。 抗體各自之互補性決定區（CDR)之胺基酸序列列舉 於表13。
S -56- 201219568 表13 抗體 鏈 CDR 序列 SEQ ID NO CDR1 TYAMH 78 重 CDR2 NIAYSGSVTYYADSVKG 79 MOR09268 CDR3 RGPGMGNMDI 80 CDR1 TGTSSDVGDYNYVS 83 輕 CDR2 YVTNRPS 84 CDR3 QSYDTGSFAMV 85 CDR1 TYAMH 78 重 CDR2 NIAYSGSVTYYADSVKG 79 MORI 2574 CDR3 RGPGMGNMDI 80 CDR1 TGTSSDVGDYNYVS 88 輕 CDR2 YVTNRPS 89 CDR3 QSYAPLPSSHIV 90 CDR1 TYAMH 93 重 CDR2 TIFGSSSSTYYADSVKG 94 MORI 3154 CDR3 RGPGMGNMDI 95 CDR1 TGTSSDVGDYNYVS 98 輕 CDR2 YVTNRPS 99 CDR3 QSYAGASFNLV 100 CDR1 TYAMH 103 重 CDR2 TIEIKEAGYATNYAAGVKG 104 MORI 3156 CDR3 RGPGMGNMDI 105 CDR1 TGTSSDVGDYNYVS 88 輕 CDR2 YVTNRPS 89 CDR3 OSYAPLPSSHIV 90 抗體 MOR0928 1 、MOR09892 、MOR09898 、 MOR10110、MOR09268、MOR12574、MOR13154 及 MOR13156之重鏈之CDR1及CDR2及輕鏈之CDR2之胺 基酸序列符合後文列舉之同位序列。 重鏈CDR1同位序列為 X16YX17MX,8 (SEQ ID NO ： 106) 其中又16為N、S或T，又17為W或A，及乂18為S、Η、 Τ或Ν。 重鏈CDR2同位序列為
X19IX20X21X22X23X24X25X26X27TX28YAX29X30VKG (SEQ ID NO ： 107) -57- 201219568 其中 Xi9 為 L、Y、f、n 或 τ，Χ20為 S、A、F 或 E， X21為Y、G或I ’ χ22為κ或無胺基酸，χ23為e或無胺 基酸，X24為S或a，χ25為s或G，χ26為s或γ，χ27 為T、N、V、S或Α’χ28為γ或ν，χ29為d或Α及 X30為S或G。 輕鍵CDR2同位序列為 X31X32X33X34RPS (SEQ ID NO ： 108) 其中X31為G、D或γ，χ32為τ、D或V，X33為N 或T ’及X34為N、D或κ。 抗體 MOR12574、MOR13154 及 MOR13156 全部具 有相同輕鏈CDR1序列： TGTSSDVGDYNYVS (SEQ ID NO ： 83) 抗體 MORI 2574、MORI 3 154 及 MORI 3 156 全部具 有相同輕鏈CDR2序列： YVTNRPS (SEQ ID NO ： 89) 抗體 MORI 2574、MORI 3 154 及 MORI 3 156 全部具 有相同輕鏈CDR3序列： RGPGMGNMDI (SEQ ID NO ： 80) 抗體 MOR12574、MOR13154 及 MOR13156 之輕鏈 之CDR3之胺基酸序列符合後文陳述之同位序列。 QSYAX35X36X37X38X39X40X41V (SEQ ID NO ： 109) 其中X35為P或G，X36為L或A ’ X37為S或P， X38為S或F，X39為S或N，X4Q為H或無胺基酸及χ41 為I或L。 -58- 201219568 B.使用人類破骨細胞之溶骨檢定分析 人類抗人西格烈-1 5單株抗體對正常人類破骨細胞 前驅細胞之骨質再吸收活性之影響（使用經膠原蛋白塗 覆之孔板評估） 正常人類破骨細胞前驅細胞（正常人類自然破骨細 胞前驅細胞’購自桑可純藥公司，型錄號碼2T-11 0)依據 附在細胞上的實驗流程書以1 X 1 〇4細胞/孔播種於96孔 溶骨細胞培養孔板（隆哲公司，型錄號碼PA-1 500)。至於 培養基，使用破骨細胞前驅細胞之最低必需培養基 (OPBM，購自桑可純藥公司，型錄號碼ρτ-8201)，該培 養基補充以OPGM補充集合（破骨細胞辛格闊特套件 組’購自桑可純藥公司，型錄號碼PT-9501)含有胎牛血 清（終濃度：10%)、人類RANKL (終濃度：1〇或20奈克 /毫升）、人類M-CSF(終濃度：33奈克/毫升）等。於所得 培養上清液，添加MORO 9 268獲得3或30微克/毫升之 終濃度，及細胞於二氧化碳培養器内培養6日。同理， 添加 MOR12574、MOR13154 或 MOR13156 至培養上清 液獲得4、20、100、或500奈克/毫升之終濃度，細胞於 二氧化碳培養器内培養5曰。收集整份1 〇微升培養上清 液’含於溶骨檢定分析套件組之200微升螢光基團釋放 劑添加至其中，使用時間解析螢光螢光計（雅佛MX，伯 金愛瑪公司製造，具有於340奈米之激光及於615奈米 之發光）測量螢光強度（RFU)。藉此測定於培養上清液釋 放之自由態螢光膠原蛋白片段數量。MOR09268、 MOR12574、MOR13154及MOR13156之結果分別顯示於 -59- 201219568 第42、43、44及45圖。如第42至45圖所示，藉添加 RANKL所增加的螢光膠原蛋白片段數目以濃度相依性 方式藉抗西格烈-1 5抗體減少。 [實例8] 使用卵巢切除大鼠評估抗西格烈_丨5單株抗體之生 物活性 A ·動物實驗方案 從12週齡雌F3 44大鼠[得自日本查爾斯河實驗室公 司（Charles River Laboratories Japan，Inc.)]去除兩側卵 巢’大鼠分成兩組：載媒劑投予組；抗西格烈_ 1 5單株抗 體投予組。再者，準備一組作為山姆（sham)操作組。於 抗體投予組t，實例2或7之抗西格烈-1 5單株抗體從操 作次曰開始每週三次以1毫克/千克劑量重複投予歷時4 週。於載媒劑投予組及山姆操作組中，含〇. 〇 1 %吐恩2 〇 之PBS經腹内投予作為載媒劑。投予開始後四周，於空 腹條件下收集尿液2 4小時，尿液樣本儲存於_ 8 〇它直到 測量時。尿液收集完成後’將大鼠安樂死，從各頭大氣 切除腰椎。 B.腰椎骨密度之測量 黏者於切除的腰椎之軟組織經去除，取出第4至第 6腰椎。取出的腰椎經由於乙醇内振搖脫去脂肪及脫水， 及然後風乾，使用骨密度計[DCS-600EX，阿洛卡公司 (Aloka C〇_，Ltd.)製造]測量。卵巢切除組觀察得腰推骨 Φ度比較山姆操作組顯著減低’但於抗體投予組，因即 巢切除術所造成的骨密度減低將顯著獲得抑制。 -60- 201219568 c.尿去氧》比唆喏淋排泄之測量 多種第I型膠原蛋白交聯 女 又聊之代谢產物鮮明地反映出 骨質代謝周轉率，特別為骨皙函卩双]/r ^ ^ ^ ~月買再吸收。尤其去氧吡啶喏 啉主要係位在骨質膠原蛋白，田 w曰’因此被視為作為骨質再吸 收的指標有高度可信度》 ' 低溫保存之尿液樣本經组、由 站她 八+、左解凍，藉離心操作沈澱不溶 性物質’因而獲得上清液。此種上清液的去氧…琳 含量係使用骨聯結（〇steGlinks)「DPD」[DS t藥生醫公 司（DspharmaBiomedicalcoud)]。再者藉使用肌 酸奸測試和光(wak0)(和光醇化學工業公司製造），也測 量上清液内之肌酸酐含量，求出已經針對肌酸針校正的 去氧…母數量，切除組的尿液去氧岭若琳排 泄量比較山姆組顯著增加’因此顯示即巢切除大鼠的破 骨細胞性骨質再吸收增加。另-方面，抗體投予組中， 由於卵巢切除導致去氧吡。定„若啉排泄的增加將受抑制。 由此結果，也證實於動物研究模型中特異性地結合至西 格烈-15之單株抗體抑制破骨細胞骨質再吸收，將強力顯 示由於對骨質再吸收的抑制功效，卵巢切除大鼠的腰椎 骨密度減低將獲得抑制。 [工業應用性] 本發明之抗西格烈-1 5抗體具有抑制破骨細胞分化 或骨質再吸收活性的能力，含有抗西格烈_15抗體之醫藥 組成物可作為異常骨質代謝病之治療或預防劑。 201219568 【圖式簡單說明】 第1圖為線圖顯示 ELISA檢定分析測量抗體 MOR09281、MOR09892、MOR09898、MOR10110、 MOR09012、MOR0865 6、MOR08 662 及人類 IgG (陰性對 照）結合至人類西格烈-1 5-Fc、小鼠西格烈-1 5-Fc及人類 Fc之結果。 第2圖為線圖顯示於抗體MOR0928 1存在下所形成 的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第3圖為線圖顯示於抗體MOR09012 (MOR09892之 親代抗體）存在下所形成的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第4圖為線圖顯示於抗體MOR09892存在下所形成 的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第5圖為線圖顯示於抗體MOR08656 (MOR09898之 親代抗體）存在下所形成的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第6圖為線圖顯示於抗體MOR08662 (MOR10110之 親代抗體）存在下所形成的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第7圖為線圖顯示於抗體MOR09898存在下所形成 的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第8圖為線圖顯示於抗體MOR10110存在下所形成 的小鼠破骨細胞之TRAP活性。 第9圖為線圖顯示當於抗體MOR09281存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 第10圖為線圖顯示當於抗體MOR08656(MOR09898 之親代抗體）存在下培養時藉人類破骨細胞前驅細胞分 解而從孔板上釋放膠原蛋白片段。
S -62- 201219568 第11圖為線圖顯示當於抗體M〇r〇9898存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 第12圖為線圖顯示當於抗體m〇R〇9〇12(MOR09892 之親代抗體）及MOR09892在下培養時藉人類破骨細胞 前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋白片段。 第13圖為線圖顯示當於抗體m〇r〇8662 (MOR10110 之親代抗體）及MOR1 〇 1丨〇在下培養時藉人類破骨細胞 前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋白片段。 第14圖為編碼抗體MOR08656之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 1)。 第15圖為抗體MOR08656之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 2)。 第16圖為編碼抗體MOR08656之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 6) 〇 第17圖為抗體MOR08656之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 7)。 第18圖為編碼抗體MOR08662之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : U)。 第 19 圖泛 闽為抗體MOR08662之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 12) 〇 第 2 0圖J4. 馬編螞抗體MOR08662之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 16)。 第 21 圖 & 閛為抗體MOR08662之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : ι7) 〇 -63- 201219568 第22圖為編碼抗體MOR09012之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 21) 0 第 23圖為抗體M〇R0 9012之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 22) ° 第24圖為編碼抗體MOR09012之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 26)。 第 25圖為抗體MOR09012之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 27)。 第26圖為編碼抗體MOR0928 1之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 31) 〇 第 27圖為抗體 MOR0928 1之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 32) 〇 第28圖為編碼抗體MOR0928 1之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 36)。 第29圖為抗體MOR0928 1之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 37)。 第30圖為編碼抗體MOR09892之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 41)。 第31圖為抗體MOR09892之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 42) 〇 第32圖為組rB ^ 崎編碼抗體MOR09892之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 46)。 第 3 3圖主1 馬抗體MOR09892之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 47)。 -64- 201219568 第34圖為編 $抗體MOR09898之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO ： 5 i)第35圖為 m NO : 52)心體M〇R09898之重鏈之胺基酸序列第36圖為編 (SEQ ID NO : 〇 第37圖為故 (SEQ ID NO ： 57)第38圖為續 (SEQ ID NO ： 6l)第39圖為抗(SEQ ID NO : 62)。 第40圖為編碼抗體MOR 10 110之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 66)。 嘴抗體MOR09898之輕鏈之DNA序列 MOR09898之輕鏈之胺基酸序列 $抗體MOR10110之重鏈之DNA序列 MOR10110之重鏈之胺基酸序列 第 41圖為抗體MOR10110之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 67)。 第42圖為線圖顯示當於抗體MOR09268存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 第43圖為線圖顯不當於抗體MOR12574存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 第44圖為線圖顯不當於抗體MOR13154存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 -65- 201219568 第45圖為線圖顯示當於抗體m〇R 13156存在下培養 時藉人類破骨細胞前驅細胞分解而從孔板上釋放膠原蛋 白片段。 第46圖為編碼抗體m〇R09268及MOR12574之重鏈 之 DNA 序列（SEQ ID NO : 76)。 第47圖為抗體MORO9268及MOR12574之重鏈之胺 基酸序列（SEQ ID NO : 77)。 第48圖為編碼抗體MOR09268之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 81) 〇 第 49圖為抗體MOR09268之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 82) 〇 第50圖為編碼抗體MOR12574及MOR13156之輕鏈 之 DNA 序列（SEQ ID NO : 86)。 第5 1圖為抗體MOR12574及MOR13 156之輕鏈之胺 基酸序列（SEQ ID NO : 87)。 第52圖為編碼抗體MOR13154之重鏈之DNA序列 (SEQ ID NO : 91)。 第 53圖為抗體MOR13154之重鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 92)。 第54圖為編碼抗體MOR13154之輕鏈之DNA序列 (SEQ ID NO ·· 96)。 第 55圖為抗體MOR13154之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 97) » 第56圖為編碼抗體MOR13156之輕鍵之DNA序列 (SEQ ID NO : 101) 〇 -66- 201219568 第57圖為抗體MORI 3 156之輕鏈之胺基酸序列 (SEQ ID NO : 102)。 【主要元件符號說明】 無0 -67- 201219568 序列表 cllO>第一三共股份有限公司 <12〇>破骨細胞相關蛋白質SIGLEC-15之標把抗體
<130> PN792963WO <X50> EP10251744.8 <151> 2010-10-05 <160> 109 <170> Patentln version 3·3 <210> 1 <211> 1389 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1) . . (1389) <220> <221> sig__peptide <222> (1)..Ϊ57) <220> <221> V 一region <222> (58)..(411) <220> <221> misc_feature <222> (1487..(162) <223> CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (2057..(255) <223> CDR2 <220> <22X> misc_feature <222> (352~..(378) <223> CDR3 <400> 1 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa
Val Leu Ser Gin val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 tet aat cat tgg atg act tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc
Ser Asn Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 ga9 tgg gtg age ttt ate tet tat tet ggt age act acc tat tat geg
Glu Trp val ser phe lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 48 96 144 192 240 201219568 gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc act tea cgt gat aat teg aaa aac 288 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Θ5 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gee gtg 336 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tat tat tgc geg cgt gag 99t act tet tet atg ttc gat gtt tgg ggc 384 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp Val Trp Gly 1X5 120 125 caa ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gcc age acc aag srge ccc age 432 Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 gtg ttc ccc ctg gcc ccc tgc age aga age acc age gag age aca gee 480 Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160 gcc ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc 9tg 528 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 age tgg aac age gga gcc ctg acc age ggc gtg cac acc ttc CCC gcc 576 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 gtg ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg 624 Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 ccc age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac 672 Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220 aag ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc 720 Lys Pro Ser Asn Thr Lye val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240 gtg gag tgc ccc ccc tgc cct gcc cct cct gtg gcc gga ccc tec gtg 768 Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255 ttc ctg ttc ccc CCC aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg acc 816 Phe Leu Phs Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 260 265 270 ccc gag gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag gac ccc gag 864 Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Oln 275 280 285 gtg cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gcc aag 912 Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300 acc aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tec 960 Thr Lys Pro Arg GlU Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 305 310 315 320 gtg ctg acc Sftg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag 1008 Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335 tgc aag gtg tcc aac aag ggc ctg cct gcc ccc ate gag aaa acc ate 1056 Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He 340 345 350 s -2- 1104 201219568 age aag aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac ace ctg ccc Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365 ccc age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt ctg Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380 gtg aag ggc ttc tac ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aac Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400 ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac age Gly Gin Pro Glu Asa Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415 gac ggc age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age egg Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430 tgg cag cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gee ctg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met Kis Glu Ala Leu 435 440 445 cac aac cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 1152 1200 1248 1296 1344 1389 <210> 2 c211> 463 <212> PRT <213>智人 <400> 2
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 S 10 15
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Giu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Asn Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Phe lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Ijeu Tyr Leu Gin Met Asn Ser lieu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val 100 105 1X0
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp val Trp Gly 115 120 125 3- 201219568
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Olu Pro Val Thr Val 165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190
Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val Val Thr Val 195 200 205
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 215 220
Lys Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285
Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 305 310 315 320
Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie 340 345 350
Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400
S -4- 201219568
Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met I#eu Asp Ser 405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyx ser Lys lieu Thr val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser val Met His Olu Ala Leu 435 440 445
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 3 <211> 5 <212：> PRT <213> 智人 <400> 3
Asn Tyr Trp Met Thr 1 5 > > > > 0 12 3 1111 2 2 2 2
7 X 智 <400> 4 1 Gly <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 5
Phe lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp Val 1 5 <210> 6 <211> 693 <2X2> DNA <2i3>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(693} <220> <221> sig^peptide <222> (1}..(57) 201219568 <220> <221> V一region <222> (58).. (384) <220> <22l> raise 一 feature <222> (1247. . (156) <223> CDR1 <220> <22X> misc 一 feature <222> (202T. . <222} <223> CDR2 <220> <22l> mi sc—feature <222> (319)~. . (345) <223> CDR3 s <400> 丨 s atg gec tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga 48 Met Ala Xrp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 15 tcc tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg cct tea gtg age gtt gca 96 Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30 cca ggt cag acc geg cgt ate teg tgt age ggc gat get ett cgt tet 144 Pro Gly Gin Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser 35 40 45 tat tat get tet tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt ett 192 Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro val Leu 50 55 60 gtg att tat gat gat aat aag cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ttt 240 Val lie Tyr Asp Asp Asn Lye Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 age gga tec aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act 288 Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc ggt tet cat gat ggt act 336 Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Tyr Asp Gly Thr 100 105 110 gtt cat gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc gtc eta ggt cag ccc 3B4 Val His Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr val Leu Gly Gin Pro 115 120 125 aag get gee ccc teg gtc ac匕 ctg ttc ccg ccc tec tet gag gag ett 432 Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 130 135 140 caa gec aac aag gee aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac ccg 480 Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 145 150 155 160 gga gee gtg aca gtg gee tgg aag gca gat age age ccc gtc aag geg 528 Gly Ala val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro val Lys Ala 165 170 175 gga gtg gag acc acc aca ccc tec aaa caa age aac aac aag tac geg 576 Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 180 185 190 -6- 201219568 gcc age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tee cac aga 624
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His Arg 195 200 205 age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag aca 672
Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 210 215 220 gtg gcc cct aca gaa tgt tea 693
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 7 <211> 231 <212> PRT <213>智人 <400> 7
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 15 X0 15
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30
Pro Gly Gin Thr Ala Arg He Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser 35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro val Leu 50 55 60
Val He Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Cys Gly Ser Tyr Asp Gly Thr 100 X05 110
Val His Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Ijeu Thr Val Leu Gly Gin Pro 115 120 125
Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu 130 135 X40
Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr Pro 145 150 155 160
Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala 165 170 175
Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr Ala 180 185 3.90 201219568
Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp hys Ser His Arg 195 200 205
Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr 210 215 220
Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 8 <211> 11 <212> PRT <213> 智人 c400> 8
Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 9
Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 10
Gly Ser Tyr Asp Gly Thr Val His Val X 5 <210> 11 <211> 1386 <212> DNA <2X3> 智人 <220> <221> CDS <222> (1).. (1386) <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(57) <220> <221> v 一region <222> (58).. E408) <220> <221> misc feature <222> (148T. . (162) <223> CDR1 s -8- 48201219568 <220> <22l> misc一feature <222> (205T. . (255) <223> CDR2 <220> <221> misc一feature <222> (3527. . (375) <223> CDR3 <400> 11 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg Met Lys His beu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp X 5 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 act aat tat get atg aat tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc Thr Asn Tyr Ala Met Asn Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age act ate tet tat att ggt age aat acc tat tat geg Glu Trp Val Ser Thr lie Ser Tyr He Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc act tea cgt gat aat teg aaa aac Asp Ser Val Lys Qly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 9Q 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gcc gtg Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 1X0 tat tat tgc geg cgt ggt get ggt ett ggt tat gat gtt tgg ggc caa Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Oly Leu Gly Tyr Asp Val Trp Oly Gin 115 120 125 ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gcc age acc aag ggc ccc age gtg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130· 135 140 ttc ccc ctg gcc ccc tgc age aga age acc age gag age aca gcc gcc Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 145 150 X55 160 ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg age Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 tgg aac age gga gcc ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc gcc gtg Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg ccc Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Vai Thr Val Pro 195 200 205 age age aac ttc ggc acc cag acc tac a.cc tgc aac gtg gac cac aag Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220 ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc gtg 96 144 192 240 28β 336 384 432 480 528 576 624 672 720 -9 - 768201219568
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val 225 230 235 240 gag tgc ccc ccc tgc cct gcc cct cct gtg gcc gga ccc tcc gtg ttc Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255 ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg acc ccc Leu Phe Pro Pro I#ys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr Pro 260 265 270 gag gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag gac ccc gag gtg Glu Val Thr Cys val Val Val Asp val Ser His Giu Asp Pro Glu Val 275 280 285 cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gcc aag acc Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300 aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tec gtg Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 305 310 Z15 320 ctg acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgc Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asia Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335 aa9 9tg tcc aac aag ggc ctg cct gcc ccc ate gag aaa acc ate age Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350 aag aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac acc ctg ccc ccc Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr lieu Pro Pro 355 360 365 age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tcc ctg acc tgt ctg gtg Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380 aag ggc ttc tac ccc age gac ate gcc gtg gag tgg gag age aac ggc Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400 cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac age gac Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 405 410 415 ggc age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age egg tgg Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430 cag cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gcc ctg cac Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 aac cac tac acc cag aag age ctg age ctg tcc ccc ggc aaa Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 816 864 912 960 1008 1056 1104 1152 1200 1248 1296 1344 1386 <210> 12 <211> 462 <2X2> PRT <213>智人 <400> 12 Met Lya His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp s -10- 201219568 1 5 10 15
Val Leu Ser Gin Val Gin I*eu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser lieu Arg hen Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Thr Asn Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Thr He Ser Tyr lie Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lya Asn 85 90 9B
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Gly Leu Gly Tyr Asp val Trp Gly Gin 1X5 120 125
Gly Thr Leu Val Thr val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 145 150 155 X60
Leu Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro val Thr val ser 165 170 175
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 1B0 185 190
Leu Gin Ser ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys val 225 230 235 240
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 245 250 255
Le-u Phe Pro Pro Lys Pro Lye Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro 260 265 270
Glu Val Thr Cys val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val -11- 201219568 275 280 285 Gin Phe Asn Trp 290 Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 295 300
Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 305 310 3X5 320 Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr He Ser 340 345 350
Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 3S0 365 Ser Arg Glu Glu 370 Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 375 380 Lys Gly Phe Tyr 385 Pro Ser Asp lie Ala val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 390 395 400
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Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 Asn His Tyr Thr 450 Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 455 460 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 13
Asn Tyr Ala Met Asn 1 5 <210> 14 <211> 17 <2X2> PRT <213>智人 <400> 14
Thr lie Ser Tyr lie Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 -12- s 201219568
Gly <210> IS <211> 8 <212> PRT 智人 c400> 15
Gly Ala Gly Leu Gly Tyr Asp Val 1 5
<210> 16 <211> 69S <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(696) <220> <221> sig_peptide <222> (1)..(57) <220> <221> V_region <222> (58)..(387) <220> <22l> . misc_feature <222> (124)". . (156) <223 > CDR1 <220> <221> misc^feature <222> (202?..Ϊ222) <223> CDR2 <22〇> <221> misc—feature <222> (319?..(348) <223> CDR3 <400> 16 atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga 48
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 15 10 15 tcc tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg cct tea gtg age gtt gca 96
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser val Ala 20 25 30 cca ggt cag acc geg cgt ate teg tgt age ggc gat aat ett cgt tet 144
Pro Gly Gin Thr Ala Arg He Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Ser 35 40 45 aag tat gtt tat tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt ett 192
Lys Tyr val Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 gtg att tat gat act aat gat cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ett 240 val lie Tyr Asp Thr Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe -13- 201219568 €5 70 7S 80 age gga tee aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc cag act tat gat atg act Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Asp Met Thr 100 105 110 tet cag gat gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc gtc eta ggt cag Ser Gin Asp val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 1X5 120 125 ccc aag get gee ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tee tet gag gag Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 X35 140 ett caa gee aac aag gee aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160 ccg gga gee gtg aca gtg gee tgg aag gca gat age age ccc gtc aag Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 170 175 geg gga gtg gag acc acc aca ccc tee aaa caa age aac aac aag tac Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190 geg gee age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tee cac Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205 aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr Hia Glu Gly Ser Thr val Glu Lys 210 215 220 aca gtg gee cct aca gaa tgt tea Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 28Θ 336 384 432 480 528 576 624 672 696 <210> 17 <2X1> 232 <212> PRT <213>智人 <400> 17 Met Ala Trp Ala Leu Leu X^eu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 15 10 15
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser val Ser Val Ala 20 25 30
Pro Gly Gin Thr Ala Arg He Ser Cys Ser Gly Asp Asn heu Arg Ser 35 40 45
Lys Tyr Val Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60
Val lie Tyr Asp Thr Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro GXu Arg Phe 65 70 75 80 s -14- 201219568
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Asp Met Thr 100 105 110
Ser Gin Asp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 1X5 120 125
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 135 140
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu val Cys I»eu lie Ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160
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Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205
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Ser Gly Asp Asn Leu Arg Ser Lys Tyr Val Tyr 1 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 19
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Gin Thr Tyr Asp Met Thr Ser Gin Asp Val 1 5 10 <210> 21 <211> 1383 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1).. (1383) <220> <22i> sig_peptide <222> ⑴…（57} <220> <221> V_region <222> (58) .. {405) <220> <22l> misc^feature <222> (14βΤ. . (162) <223> CDR1 <220> <22l> mi sc—f eatu re <222> (2057. . (255) <223> CDR2 <220> <22l> misc一feature <222> (3527.,(372) <223> CDR3 s <400> ： 21 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48 Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp X 5 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc 9gc ctg gtg caa 96 val Leu Ser Gin val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt 144 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 tct tct tat get atg cat tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc 192 Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age tat ate tct tat tct ggt age aat acc tat tat geg 240 Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 - gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg aaa aac 2Θ8 Asp Ser val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gcc gtg 336 Thr Leu Tyr Leu Gin Met Aen Ser Leu Arg Ala GlU Asp Thr Ala val 100 105 110 -16- 201219568 tat tat tgc gcg cgt ggt tgg ggt ggt ttt gat tat tgg ggc caa ggc 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 115 120 125 acc ctg gtg acg gtt age tea gee age acc aag ggc ccc age gtg ttc 432
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser val Phe 130 X35 140 ccc ctg gee ccc tgc age aaa age acc age gag age aca gee gee ctg 480
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160 ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg age tgg 528
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175 aac age gga gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc gee gtg ctg 576
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190 cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg ccc age €24
Gin Ser Ser Gly 3^eu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205 age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac aag ccc €72
Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn val Asp His Lys Pro 210 215 220 age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc gtg gag 720
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 225 230 235 240 tgc ccc ccc tgc cct gee cct cct gtg gee gga ccc tee gtg ttc ctg 768
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Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300 ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tee gtg ctg 960
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Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys GIm Tyr Lys Cys Lys 325 330 335 gtg tee aac aag ggc ctg cct gee ccc ate gag aaa acc ate age aag 1056
Val ser Asn Lys Gly I^eu Pro Ala £>ro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350 aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac acc ctg ccc ccc age xi〇4
Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365 C£F9 9^9 Sfaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt ctg gtg aag 1152
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380 -17- 201219568 ggc ttc tac ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aac ggc cag 1200
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 工le Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400 ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac age gac ggc 1248
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415 age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age egg tgg cag 1296
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430 cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gee ctg cac aac 1344
Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa 1383
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Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 IS
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp val. Ser Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 115 120 125
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 X40
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Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 2X5 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 225 230 235 240
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Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu val Gin 275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala hys Thr I*ys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser Val Leu 30S 310 315 320
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Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys Thr He Ser Lys 340 345 350
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Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 3S0 395 400
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Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430 -19- 201219568
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 23 <211^ <212> <213> 5 PRT 智人 <400> 23 Ser Ty 1 ίο Ala Met His 5 <210> <211> <212> 24 17 PRT <213> 智人 c400> 24
Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 25 <2X1> <212> <213> 7 PHT 智人 <400> 25
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Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac aag 672
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220 ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc gtg 720
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S -24- 864201219568
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285
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Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 * 335
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser l#ys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 420 425 430
Gin Gin Gly Αεη Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 0 12 3 X X X X 2 2 2 2 < < < < 智 <400> 33
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Leu lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 35 <2X1> 8
<212> PRT -27- 201219568 <213> 智人 <400> 35 Asp Thr Pro lie Gly Met Asp Phe X 5 <210> 36 <211> 696 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(696) <220> <221> sigjpeptide <222> (1) ··(57) <220> <221> V—region <222> (58)..(387) <220> <221> misc一feature <222> (124孓…（156) <223> CDR1 <220> <221> misc_feature <222> (202^.， （222) <223> CDR2 <220> <221> misc一feature <222> (319T..<348) <223> CDR3 <400> 36 atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 15 10 15 tcc tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg cct tea gtg age gtt gca Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val ser Val Ala 20 25 30 cca ggt cag ate geg cgt ate teg tgt age ggc gat aat ett ggt tet Pro Gly Gin lie Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Gly Ser 35 40 45 tat tat get tat tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt ett Tyr Tyr Ala Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro GXy Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 gtg att cat ggt gat aat gat cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ttt Val lie Tyr Gly Asp Asn Asp Arg Pro Ser Gly He Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 age gga tec aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc tet tet tat gat att gtt Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp lie Val 48 96 144 192 240 288 s -28 336 384 201219568 100 105 110 cag cct tat gtg ttt ggc ggc ggc acg aag tta acc gtc eta ggt cag Gin Pro Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val I^eu Gly Gin 115 120 125 ccc aag get gee ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tee tet gag gag Pro t*ys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 135 140 ett caa gee aac aag gee aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160 ccg gga gee gtg aca gtg gee tgg aag gca gat age age ccc gtc aag Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 170 175 geg gga gtg gag acc acc aca ccc tee aaa caa age aac aac aag tac Ala Gly Val Qlu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190 geg gee age age tat ctg age ctg acg cct gag cag tgg aag tee cac Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser hen Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205 aga age tac age tgc cag gtc acg cat gaa ggg age acc gtg gag aag Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 215 220 aca gtg gee cct aca gaa tgt tea Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 432 480 528 576 624 672 $96 <210> 37 <211> 232 <212> PRT <213>智人 <400> 37
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly X 5 10 15
Ser Trp Ala Asp He Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30
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Tyr Tyr Ala Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60
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Tyr Ala Tyr 10
Tyr Val 10 -30- 201219568 <211> 1383 <212> DNA c213>智人 <220> <221> CDS <222> ⑴..（1383) <220> <221> sigjpeptide <222> (1)..(57) <220> <22X> v 一region <222> (58) . . (405) <220> <22l> misc 一 feature <222> (14θΤ. .(162) <223> CDR1 Λ Λ Λ Λ 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 νν νν misc^feature (2057-.(255) CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (352T. . (372) <223> CDR3 <400> 41 acg aaa cac ctg tgg ttc ttc czc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg Met Lys His Leu Trp Phe Phe 3^eu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 tet tet tat get atg cat tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age tat ate tet tat tet ggt age aat acc tat tat geg Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg aaa aac Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr 工le Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 65 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat acg gcc gtg Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tat tat tgc geg cgt ggt tgg ggt ggt ttt gat tat tgg ggc caa ggc Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 115 120 125 acc ctg gtg acg gtt age tea gcc age acc aag ggc ccc age gtg ttc Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser val Phe 130 135 140 48 96 144 192 240 288 336 384 -31- 432 201219568 ccc ctg gee ccc tgc age aga age acc age gag age aca gee gee ctg 480 Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160 ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg age tgg 528 Gly Cys Leu val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr val Ser Trp 165 170 175 aac age gga gee ctg acc age ggc gtg cac acc tee ccc gee gtg ctg 576 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 180 185 190 cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg ccc age 624 Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205 age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac aag ccc 672 Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 215 220 age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc gtg gag 720 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys val Glu 225 230 235 240 tgc ccc ccc tgc cct gee cct cct gtg gee gga ccc tee gtg ttc ctg 768 Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser val Phe Leu 245 250 255 ttc ccc ccc aag CCC aag gac acc ctg atg ate age egg acc ccc gag 816 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270 gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag gac ccc gag gtg cag 8β4 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro GlU val Gin 275 280 285 ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gee aag acc aag 912 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300 ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tee gtg ctg 960 Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser Val Leu 305 310 315 320 acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgc aag 1008 Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335 gtg tec aac aag ggc ctg cct gee ccc ate gag aaa acc ate age aag 1056 Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350 aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac acc ctg ccc ccc age χα〇4 Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365 egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt ctg gtg aag 1152 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu val Lys 370 375 3Θ0 ggc ttc tac ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aac ggc cag 1200 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400 ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac age gac ggc 1248 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415 -32- 1296 201219568 age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age egg tgg cag
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430 cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gee ctg cac aac
Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445 cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 42 <211> 461 <2X2> PRT <213>智人 <400> 42
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 XO 15
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Ser Ser Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 S5 60
Glu Trp Val Ser Tyr He Ser Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 X05 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Trp Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 1X5 120 125
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 130 135 140
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 145 150 155 160
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 165 170 175
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly val His Thr Phe Pro Ala val Leu 180 185 190 1344 1383 -33- 201219568
Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 195 200 205
Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro 210 2X5 220
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu 225 230 235 240
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro val Ala Gly Pro Ser val Phe Leu 245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu 260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin 275 260 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gin Phe Aen Ser Thr Phe Arg val val Ser Val Leu 305 310 315 320
Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 325 330 335
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys 340 345 350
Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 355 360 365
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin 385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly 405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 420 425 430
Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 435 440 445
His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 s -34- 201219568 <210> 43 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 43
Met His 5
Ser Tyr Ala 1 <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213>智人 <400> 44 Tyr lie Ser 1
Tyr Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5 10 15
Gly <210> 45 <211> 7 <2X2> PRT <213> 智人 <400> 45 Gly Trp Gly Gly Phe 1 5 <2X0> 46 <2X1> 696 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(696) <220> <221> sig_peptide <222> (1) - . (57) <220> <221> V_region <222> (?8)..{387} <220> c22X> miscofeature <222> (1247. (156) <223> cmi <220> <22X> misc—feature <222> (202Γ..(222) <223> CDR2 <220> <221> misc feature -35- 48201219568 <222> (319)..(348) <223> CDR3 <400> 46 atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly IS 10 is tee tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg cct tea gtg age gtt gca Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30 cca ggt cag acc geg cgt ate teg tgt age ggc gat aat ett cct aat Pro Gly Gin Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Pro Asn 35 40 45 cgt tat gtt cat tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt ett Arg Tyr Val His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 gtg att tat gat gat aat aat cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ttt Val lie Tyr Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 age gga tee aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc cag tet cgt gat ett cat Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Arg Asp Leu His 100 105 110 tat tet cct gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc gtc eta ggt cag Tyr Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 115 120 125 ccc aag get gcc ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tee tet gag gag Pro Lys Ala Ala Pro Ser val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 135 140 ett caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu val Cys Leu He ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160 ccg gga gcc gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat age age ccc gtc aag Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 170 175 9^g gga gtg gag acc acc aca ccc tee a£La caa age aac aac aag tac Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyx 180 165 190 geg gcc age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tee cac Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205 aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag Arg Ser Tyx Ser Cys Gin val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 215 220 96 144 192 240 288 336 384 432 480 52Θ 576 624 672 aca gtg gcc cct aca gaa tgt tea Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230
<210> 47 <211> 232 <212> PRT s -36- 696 201219568 <213>智人 <400> 47
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 IS
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30
Pro Gly Gin Thr Ala Arg lie Ser Cvs Ser Gly Asp Asn Leu Pro Asn 35 40 45
Arg Tyr Val His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 val lie Tyr Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser Gly He Pro Glu Arg Phe 65 7〇 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr He Ser Gly Thr 85 90 95
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Arg Asp Leu His 100 105 1X0
Tyr Ser Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 115 120 125
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Prc Ser Ser Glu Glu 130 135 140
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He Ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 170 175
Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser l»ys Gin Ser Asn Asn Lya Tyr 180 185 190
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205
Arg Ser Tyx Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 215 220
Thr val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 ^210> 48 <211> 11 <212> PRT <213>智人 -37- 201219568 <400> 48
Ser Gly Asp Asn beu Pro Asti Arg Tyr Val His 15 10 0 12 3 1 X 1 X 2 2 2 2 < < < < τ人PR智 <400> 49
Asp Asp Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 ssiRI Λ Λ > Λ 0 12 3 1X11 2 2 2 2 > ο ο 4
Gin Ser Arg Asp Leu His Tyr Ser Pro val 15 10 <210> 51 <211> 1389 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(1389) <220> <221> sigjpeptide <222> ⑴· ·（57) <220> <221> v region <222> (58)..(411) Λ Λ Λ Λ 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 misc_feature (148)". . (162) CDRl <220> <22l> misc^feature <222> (20ST. . (255) <223> CDR2 > > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 misc 一 feature (3527..(378) CDR3 <400> 51 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp X 5 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa 9g -38- 201219568
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Glv Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gee tee gga ttt acc ttt 144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 tet aat tat tgg atg act tgg gtg ege caa gee cct ggg aag ggt etc 192
Ser Asn Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age ttt ate tet tat tet ggt age act acc tat tat geg 240
Glu Trp Val Ser Phe lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala β5 70 75 80 gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg aaa aac 288
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gee gtg 336
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tat tat tgc geg cgt gag ggt act tet tet atg ttt gat gtt tgg ggc 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp Val Trp Gly 115 120 125 caa ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gee age acc aag ggc ccc age 432
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 gtg ttc ccc ctg gee ccc tgc age aga age acc age gag age aca gee 480
Val phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
145 150 155 ISO gee ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg 528
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 age tgg aac age gga gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc gee 576
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 gtg ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg 624
Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 ccc age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac 672
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 2X0 215 220 aag ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc 720
Lys Pro ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 22S 230 235 240 gtg gag tgc ccc ccc tgc cct gee cct cct gtg gee gga ccc tee gtg 768
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255 ttc ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg acc 816
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met He Ser Arg Thr 260 265 270 ccc gag gtg acc tgc gtg gfcg gtg gac gtg age cac gag gac ccc gag 864
Pro Glu val Thr Cys val Val Val Asp val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285 gtg cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gee aag 912 •39- 201219568
Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 290 295 300 acc aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tee 960
Thr Lys Pro Arq Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser 305 310 315 320 gtg ctg acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag 1008
Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly hys Glu Tyr Lys
325 330 33S tgc aag gtg tee aac aag ggc ctg cct gee ccc ate gag aaa acc ate 1056
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu hys Thr lie 340 345 350 age aag aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac acc ctg ccc 1104
Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr lieu Pro 355 360 365 ccc age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt ctg 1152
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380 gtg aag ggc ttc tac ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aac 1200
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 385 390 395 400 ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac age 1248
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Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 435 440 · 445 cac aac cac cac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa 1389
His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 52 <211> 463 <212> PRT <213> 智人 <400> 52
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Fhe 35 40 45
Ser Asn Tyr Trp Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp val Ser Phe He Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala -40- 201219568 65 70 . 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp Val Trp Gly 115 120 X25
Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr ser Glu Ser Thr Ala 145 150 155 160
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190
Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205
Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His 210 21S 220
Lys Pro Ser Asd Thr hys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys 225 230 235 240
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val 245 250 255
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr 260 265 270
Pro Glu Val Thr Cys val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 275 280 285
Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys 290 295 300
Thr hys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val val Ser 305 310 315 320
Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 325 330 335
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie -41 - 201219568 340 345 350
Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro 355 360 365
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu 370 375 380
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Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser 405 410 415
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 420 425 430
Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser val Met His Glu Ala Leu 435 440 445
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T人 5417PR智 > > > > 0 12 3 X 111 2 2 2 2 V V VV <2X0> 53 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 53 Asn Tyr Trp Met Thr 1 5 <400> 54 1 Gly <210> 55 <211> 9 <212> PRT <213> 智人 <400> 55
Phe lie Ser Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 5 10 15
Glu Gly Thr Ser Ser Met Phe Asp Val 1 5 -42- 201219568 6说人 6 9 g'; 5 \oD智 Λ Λ > Λ 0 12 3 1111 2 2 2 2 <220> <221> CDS <222> <1) .. (696) <220> <221> sigjpeptide <222> (1) .. (57) <220> <221〉 V—region <222> (58)..(387) <220> <22l> misc_feature <222> (124Γ..(156)
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Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 15 tcc tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg cct tea gtg age gtt gca 96
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser val Ala 20 25 30 cca ggt cag acc geg cgt ate teg tgt age ggc gat get ett cgt tet 144
Pro Gly Gin Thr Ala Arg He Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser 35 40 45 tat tat get tet tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt etc 192
Tyx Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu 50 55 60 gtg att tat gat gat aat aag cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ttt 240
Val lie Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly He Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 age gga tec aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act 288
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc get tet ttt act tat atg 336
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Thr Tyr Met 100 105 110 tet gat ttt gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc gtc eta ggt cag 384
Ser Asp Phe val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 115 120 125 ccc aag get gcc ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tec tet gag gag 432
Pro hys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu -43- 201219568 130 135 140 ctt caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac 480
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr hen Val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyx 145 150 155 160 ccg gga gcc gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat age age ccc gtc aag 528
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser pro Val Lys 165 170 175 geg gga gtg gag acc acc aca ccc tcc aaa caa age aac aac aag tac 576
Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190 geg gcc age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tec cac 624
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205 aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag 672
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr val Glu Lys 210 215 220 aca gtg gcc cct aca gaa tgt tea 696
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 57 <211> 232 <212> PRT <213> 智人 <400> 57
Met Ala Trp Ala Leu Leu lieu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 15
Ser Trp Ala Asp lie Glu Leu Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30
Pro Gly Gin Thr Ala Arg 工le Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser 35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro val Leu 50 55 60
Val lie Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Thr Tyr Met 100 105 110
Ser Asp Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys I»eu Thr val Leu Gly Gin 115 120 125
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 135 140 is -44- 201219568
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie Ser Asp phe Tyr 145 150 155 160
Pro Gly Ala Vai Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 170 175
Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Gla Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 215 220
Thr val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 58
<211> 11 <212> PRT <213>智人 <400> S8
Ser Gly Asp Ala Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser 1 5 <210> 59 <2X1> 7 <212> PRT <213> 智人 <400> 59 Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser X 5 <210> 60 <21X> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 60
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Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp X 5 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa 96
Val Leu Ser Gin val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt 144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 act aat tat get atg aat tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc 192
Thr Asn Tyr Ala Met Asn Trp val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age tat ate tet tat tet tet age aat acc tat tat geg 240
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Tyr Ser Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75, 80 gat age gtg aaa. ggc cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg aaa aac 288
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gcc gtg 336
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val loo 105 no tat tat tgc geg cgt ggt get ggt ett ggt tat gat gtt tgg ggc caa 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Gly Leu Gly Tyr Asp val Trp Gly Gin 115 120 125 ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gcc age acc aag ggc ccc age gtg 432
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 ttc ccc ctg gcc ccc tgc age aga age acc age gag age aca gcc gcc 480
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 145 150 155 160 ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc gtg age 528
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 -46 201219568 tgg aac age gga gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc gee gtg 576 Trp Abxi Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc gtg ccc 624 Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr val Pro 195 200 205 age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac cac aag 672 Ser Ser Asn Phe Qly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220 ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc tgc gtg 720 Pro Ser Asn Thr Lys val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val 225 230 235 240 gag tgc ccc ccc tgc cct gee cct cct gtg gee gga ccc tee gtg ttc 768 Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser val Phe 245 250 255 ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg acc ccc 816 Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Ij€U Met He Ser Arg Thr Pro 260 265 270 gag gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag gac ccc gag gtg 864 Glu val Thr Cys Val Val Val Asp val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285 cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gee aag acc 912 Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala Lys Thr 290 295 300 aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg tee gtg 960 Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 305 3X0 315 320 ctg acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac aag tgc 1008 Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335 aag gtg tee aac aag ggc ctg cct gee ccc ate gag aaa acc ate age 1056 Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu bys Thr He Ser 340 345 350 aag aca aag ggc cag ccc gaa CCC cag gtg tac acc ctg ccc ccc 1104 Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 3€5 age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt ctg gtg 1152 Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380 aag ggc etc tac ccc age gac ate gee gtg gag tgg gag age aac ggc 1200 Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400 cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc CCC atg ctg gac age gac 1248 Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met hen Asp Ser Asp 405 410 415 ggc age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age egg tgg Χ29β Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Uys Ser Arg Trp 420 425 430 cag cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gee ctg cac 1344 Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445 -47- 1386 1386201219568 aac cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 62 <211> 462 <212> PRT <213>智人 <400> 62
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15
Val Leu Ser Gin Val Gin lieu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Thr Asn Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Tyr lie Ser Tyr Ser Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ala Gly Leu Gly Tyr Asp Val Trp Gly Gin 1X5 X20 125
Gly Thr Leu Val Thr val Ser ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser val 130 135 140
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala 145 150 155 160
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175
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Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205
Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys 210 215 220 -48- 201219568
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lvs Cys Cys Val 225 230 235 240
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe 245 2S0 255
Leu Fhe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 工le Ser Arg Thr Pro 260 265 270
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 275 280 285
Gin Phe Asn Trp Tyr val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 290 29S 300
Lys Pro Arg Glu Gl*u Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val 305 310 315 320 t*eu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 325 330 335
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser 340 345 350
Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro 355 360 365
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys Leu Val 370 375 380
Lys Gly Phe Tyr Pro ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 385 390 395 400
Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp 405 410 415
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp hys Ser Arg Trp 420 425 430
Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 435 440 445
Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 63 <211> 5 <212> PRT <213>智人 <400> 63 49- 201219568
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Tyr lie Ser Tyr Ser Ser Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys <210> 65 <211> 8 <212> PRT <213> 智人 <400> 6S Gly Ala Gly Leu Gly Tyr Asp Val 1 5 <210> β6 <211> 696 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> il)..(69$) <220> <221> sig_peptide <222> (1) .. (57) <220> <221> v_region <222> (58) .. (387) <220> <22X> misc_feature <222> ¢1247..(156) <223> CDR1 <220> <22l> misc_feature <222> £2027..(222) <223> CDR2 <22〇> <221> misc_feature <222> (3197-.(348) <223> CDR3 <400> 66 1 5 Gly atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 15
S -50 48 201219568 tcc tgg get gat ate gaa ctg acc cag ccg ect tea gtg age gtt gca 96
Ser Trp Ala Asp He Glu bexx Thr Gin Pro Pro Ser Val Ser Val Ala 20 25 30 cca ggt cag acc geg cgt ate teg tgt age ggc gat aat ett cgt tet 144
Pro Gly Gin Thr Ala Arg lie Ser Cys Ser Gly Asp Asn Leu Arg Ser 35 40 45 aag tat gtt tat tgg tac cag cag aaa ccc ggg cag geg cca gtt ett 192
Lys Tyr Val Tyr Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro val Leu 50 55 60 gtg att tat gat act aat gat cgt ccc tea ggc ate ccg gaa ege ttt 240
Val Xle Tyr Asp Thr Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80 age gga tec aac age ggc aac acc geg acc ctg acc att age ggc act 288
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr hen Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95 cag geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc cag act tat gat atg act 336
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Asp Met Thr 100 10S 110 tet cag gac gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc gtc eta ggt cag 384
Ser Gin Asp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 115 120 125 ccc aag get gee ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc tec tet gag gag 432
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu 130 135 140 ett caa gee aac aag gee aca ctg gtg tgt etc ata agt gac ttc tac 480
Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr heu val Cys Leu lie Ser Asp Phe Tyr 145 150 155 160 ccg gga gee gtg aca gtg gee tgg aag gca gat age age ccc gtc aag 528
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys 165 X70 175 geg gga gtg gag acc acc aca ccc tec aaa caa age aac aac aag tac 576
Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190 geg gee age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag tgg aag tec cac 624
Ala Ala Ser Ser Tyr l#eu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205 aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age acc gtg gag aag €72
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 2X5 220 aca gtg gee cct aca gaa tgt tea 696
Thr val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 67 <211> 232 <212> PRT <213>智人 <400> 67
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Val tie Tyr Asp Thr Asn Asp Arg Pro Ser Gly lie Pro Glu Arg Phe 65 70 75 80
Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr lie Ser Gly Thr 85 90 95
Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Thr Tyr Asp Met Thr 100 105 110
Ser Gin Asp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gin 115 120 125
Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro ser Ser Glu Glu 130 135 140
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Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser Asn Asn Lys Tyr 180 185 190
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin Trp Lys Ser His 195 200 205
Arg Ser Tyr Ser Cys Gin val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys 210 215 220
Thr val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 <210> 68 <211> 11 <212> PRT c213:> 智人 <400> 68
Ser Gly Asp Asn Leu Arg Ser Lys Tyr Val Tyr 1 5 10 <210> 69 s -52- 201219568 <211> <212> <213> 7 PRT 智人 <400> 69
Asp Thr Asn Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> <211> <212> <213> 70 10 PRT 智人 <400> 70
Gin Thr Tyr Asp Met Thr Ser Gin Asp Val 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 71 5 PRT 智人 <220> <221> <222> <223> VARIANT ⑴··⑴ /replace="Asnu /replace^^Ser" <220> <221> <222> <223> VARIANT (3) . . (3) /replace=nTrp" /replace=nAla <220> <221> <222> <223> VARIANT (5> ♦,⑸ /replace=',Ser,t /replace=MHis" /replace=HThr" /replace= HAsn" <400> 71
Xaa Tyr Xaa Met Xaa 1 5 <210> <211> <212> c213> 72 17 PRT 智人 <220> <221> <222> VARIANT (1) . . (1) -53 201219568 <223> /replace^"Leu" / rep 1 ac e =，，Tyr *， /replace="Phen <220> <221> VARIANT <222> (6)..{6) <223 > /replace^" Serlf /replace^'Oly0 Λ Λ Λ Λ 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 ννν< VARIANT (8) . . {8) /replace="Thr" /replace»nAsn° <400> 72 Xaa lie Ser Tyr Ser Xaa Ser Xaa Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly <210> <21X> <212> <213> 73 11 PRT 智人
> > > > 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 V V V V VARIANT ⑷·.⑷ /replace= ”Asn，， /replaces"Ala” <220> <221> VARIANT <222> (S)..(6) <223> /replace»uGlyn / replace=11 Pro" /replace="Arg" <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace-"SerM /replace» "Asti*’ <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> /replace=MTyrn /replace=,,ArgM /replace=MLysn 54- 20121 9568 <220> <221> <222> <223> VARIANT (10) . . (10) /replace=wAlan /replace:"Valr Λ Λ Λ Λ 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < VARIANT (11)..(11) /replace-,!Tyr" /replace~nHisn /replace=''Sern <400> 73 Ser Gly Asp Xaa Leu Xaa 1 5
Xaa Xaa
Tyr Xaa Xaa 10 <210> 74 <211> 7 <212> PRT c213>智人 <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /repIace-^Gly" /repiace=MAsp" <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> /replace^"ThrH /replace-"Asp n <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223 > /replacex="Asn" /replace=,!Aspn /replace-uLys11 <400> 74 Xaa Xaa Asn Xaa Arg Pro 1 5
Ser <210> 75 <211> 5 <212> PRT <213> 人造 <220> <223> 互補性決定區 <400> 75 Asn Tyr Ala Met Ser -55- 201219568 1 5 <21〇> 76 <211> 1392 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (X)..(1Z$2) <220> <221> sig_peptide <222> {1),.(57) <220> <22X> V一region <222> (58).. (414) <220> <221> misc—feature <222> {14βΤ. . il62) <223> CDRX <220> <221> misc一feature <222> (205T. - (255) <223> CDR2 <220> <221> misc_feature <222> (3527..(381) <223> CDR3 <400> 76 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48
Met Lys His Leu Trp phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15 gtc ctg tcc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa 96
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt 144
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 act act tat get atg cat tgg gtg ege caa gcc cct ggg aag ggt etc 192
Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age aat ate get tat tet ggt age gtt acc tat tat geg 240
Glu Trp Val Ser Asn He Ala Tyr ser Gly ser Val Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 gat age gtg aaa ggc cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg aaa aac 288
Asp Ser val Lys Gly Arg Phe Thr He Sex- Arg Asp Asn ser Lys Asn 85 90 95 acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg gcc gtg 336
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tat tat tgc geg cgt cgt ggt cct ggt atg ggt aat atg gat att tgg 384
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp He Trp 115 120 125 -56- 201219568 ggc caa ggc acc ctg gtg acg gtt age tea gee age acc aag ggc ccc 432
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 age gtg ttc ccc ctg gee ccc tgc age aga age acc age gag age aca 480
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 145 150 155 160 gee gee ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc 528
Ala Ala Lieu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 16S 170 175 gtg age tgg aac age gga gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc 576
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 gee gtg ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc 624
Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 19S 200 205 gtg ccc age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac 672
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 210 215 220 cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc 720
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys 225 230 235 240 tgc gtg gag tgc ccc ccc ege cct gee cct cct gtg gee gga ccc tee 768
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 245 250 255 gtg ttc ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg 816
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 260 265 270 acc ccc gag gtg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag gac ccc 864
Thr Pro Glu val Thr Cys val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
275 280 28S gag gtg cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac aac gee 912
Glu val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu val His Asn Ala 290 295 300 aag acc aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg gtg gtg 960
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 305 310 315 320 tee gtg ctg acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa gaa tac 1008
Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 325 330 335 aag tgc aag gtg tee aac aag ggc ctg cct gee ccc ate gag aaa acc 1056
Lys Cys Lys val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 340 345 350 ate age aag aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac acc ctg 1104 lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 355 360 365 ccc ccc age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg acc tgt 1152
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 370 375 380 ctg gtg aag ggc ttc tac ccc age gac ate gee gtg ga_g tgg gag age 1200
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 385 390 395 400 -57- 201219568 aac ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg ctg gac 1248
Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 405 410 415 age gac ggc age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac aag age 1296
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430 egg tgg cag cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac gag gee 1344
Arg Trp Gin Gin Gly Asn val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 435 440 445 ctg cac aac cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc ggc aaa 1392
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <2X0> 77 <211> 464 <212> PRT <213>智人 <400> 77
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Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp Val Ser Asn He Ala Tyr Ser Gly Ser Val Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 * 95
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val 100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp lie Trp 115 120 125
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 115 -58 201219568 val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190
Ala val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Xhr Cys Asn val Asp 210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg hys Cys 225 230 235 240
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 245 250 255 val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp *Thr Leu Met lie Ser Arg 260 265 270
Thr Pro Glu val Thr Cys Val val Val Asp val Ser His Glu Asp Pro 275 280 285
Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 290 295 300
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 305 310 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 340 345 350 工le Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyx Thr Leu 355 360 365
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin val Ser Leu Thr Cys 370 375 380
Leu Val Lya Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 385 390 395 400
Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 405
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys lieu Thr val Asp Lys Ser 420 425 430
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 435 440 445 -59- 201219568
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 7B <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 78 Thr Tyr Ala Met His 1 5 <210> 79 <211> 17 <212> PRT <213> 智人 <400> 79 Asn lie Ala Tyr Ser 1 5 Gly <210> 80 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 <400> 80 Arg Gly Pro Gly Met 1 5 <21D> 81 <211> 708 <212> DNA <213> 智人 <220> <221> CDS <222> (1) . (708) <220> <221> sig_peptide <222> (1) ..(57) <220> <221> v_region <222> (58). -(399) <220> <22X> misc_ feature <222> (124j •.{165} <223> CDR1 <220> <221> misc_ feature <222> (2llJ .(231) 10 15 10 60- 201219568 <223> CDR2 <220> <22l> misc_feature <222> <32βΤ..(360) <223> CDR3 <400> 81 atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga 48
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Pro Gly Gin Ser He Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val 35 40 45 ggt gat tat aat tat gtg tet tgg tac cag cag cat ccc ggg aag geg 192
Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly X.ys Ala 50 55' 60 ccg aaa ett atg att tat tat gtt act aat cgt ccc tea ggc gtg age 240
Pro Lys Leu Met lie Tyr Tyr val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser 65 70 75 80 aac cgt ttt age gga tee aaa age ggc aac acc geg age ctg acc att 288
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Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin 195 200 205 tgg aag tee cac aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age 672
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Pro Gly Gin Ser He Thr lie Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val 35 40 45
Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu Met He Tyr Tyr Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser 65 70 75 80
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr lie 85 90 95
Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr 100 105 110
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Ser Ser Glu Glu Leu Gin Ala Asn l»ys Ala Thr Leu val Cys Leu lie 145 150 155 160
Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser 165 170 175
Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thxe Pro Ser Lys Gin Ser 180 185 190
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Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tvr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala 50 55 60
Pro Lys Leu Met lie Tyr Tyr Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly val ser 65 70 75 80
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He 85 90 95
Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr 100 105 110
Ala Pro Leu Pro Ser Ser His lie val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125
Thr Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro 130 135 140
Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu 145 150 155 160 lie Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr val Ala Trp Lys Ala Asp 165 170 175
Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin 180 185 190
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Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 48 96 s 144 -66- 201219568 35 40 45 act act tat get atg cat tgg gtg ege caa gee cct ggg aag ggt etc 192
Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age act ate ttt ggt tet tet age tet acc tat tat geg 240
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Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp lie Trp 115 120 125 ggc caa ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gee age acc aag ggc ccc 432
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 age gtg ttc ccc ctg gee ccc tgc age aga age acc age gag age aca 480
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr 145 150 155 160 gee gee ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc gtg acc 528
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 gee gtg ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg gtg acc 624
Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val val Thr 195 200 205 gtg ccc age age aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac gtg gac 672
Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp 210 215 220 cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg aag tgc 720
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Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser 245 250 255 gtg ttc ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate age egg 816
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Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
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Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 s -68 201219568
Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala val 100 、 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp lie Trp 115 120 12S
Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140
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Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val 305 3X0 315 320
Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 325 330 335
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu hys Thr 340 345 350 tie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr IjBVl 355 360 365 -69- 201219568
Pro Pro Ser Arg Olu Glu Met Thr hys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 370 375 380
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 385 390 395 400
Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp 405 410 415
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 420 425 430
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 435 440 445
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 450 455 460 <210> 93 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <400> 93
Thr Tyr Ala Met His 1 5 0X23 o 1111 o 2 2 2 2 4 VVVV < 9417PR智
Tyr Ala Asp Ser val Lys 15 ：hr lie Phe Gly Ser Ser Ser Ser Thr Tyi 5 10
Gly <210> <211> <212> <213> 95 10 PRT智人 95 1 c210> 96 <211> 708 <212> DNA <213> 智人 10
S -70- 201219568 <220> <221> CDS <222> (1).. (708) <220> <22l> sigjpeptide <222> (1)..(57) <220> <22l> V_region <222> (58),.(399) <220> < 2 21> miec_feature <222> {1247..(X6S) <223> CDR1 <220> <221> mi sc一feature <222> (21lT..(231) <223> CDR2 <220> <22l> misc_feature <222> (3287.-(360) <223> CDR3 <400> 96 atg gcc tgg get ctg ctg etc etc acc etc etc act cag ggc aca gga 48
Met Ala Trp Ala Leu Leu Leu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly X 5 10 15 tcc tgg get gat ate gca ctg acc cag cca get tea gtg age ggc tea 96
Ser Trp Ala Asp lie Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser 20 25 3〇 cca ggt cag age att acc ate teg tgt aeg ggt act age age gat gtt 144
Pro Gly Gin Ser lie Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val 35 40 45 ggt gat tat aat tat gtg tet tgg tac cag cag cat ccc ggg aag geg 192
Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala 50 55 60 ccg aaa ett atg att tat tat gtt act aat cgt ccc tea ggc gtg age 240
Pro Lys Leu Met lie Tyr Tyr Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser €5 70 75 80 aac cgt ttt age gga tec aaa age ggc aac acc geg age ctg acc att 288
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He 85 90 95 age ggc ctg caa geg gaa gac gaa geg gat tat tat tgc cag tet tat 336
Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr 100 105 110 get ggt get tet ttt aat ett gtg ttt ggc ggc ggc aeg aag tta acc 384
Ala Gly Ala Ser Phe Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 115 120 125 gtc eta ggt cag ccc aag get gcc ccc teg gtc act ctg ttc ccg ccc 432
Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 130 135 140 tec tet gag gag ett caa gcc aac aag gcc aca ctg gtg tgt etc ata 480
Ser Ser Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu He 145 150 155 160 -7 1- 528 201219568 528 agt gac ttc tac ccg gga gcc gtg aca gtg gcc tgg aag gca gat age Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser 165 170 175 age ccc gtc aag geg gga gtg gag acc acc aca ccc tee aaa caa age Ser Pro Val Lys Ala Gly val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser 180 185 190 aac aac aag tac geg gcc age age tat ctg age ctg aeg cct gag cag Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin 195 200 205 tgg aag tee cac aga age tac age tgc cag gtc aeg cat gaa ggg age Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser 210 215 220 acc gtg gag aag aca gtg gcc cct aca gaa tgt tea Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 235 576 624 672 708 <210> 97 <211> 236 <212> PRT <213>智人 <400> 97
Met Ala Trp Ala Leu Leu I^eu Leu Thr Leu Leu Thr Gin Gly Thr Gly 1 5 10 15
Ser Trp Ala Asp He Ala Leu Thr Gin Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser 20 25 30
Pro Gly Gin Ser He Thr He Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val 35 40 45
Gly Asp Tyr Asn 50
Tyr val Ser Trp Tyr Gin Gin His Pro Gly Lys Ala 55 60
Pro Lys Leu Met lie Tyr Tyr Val Thr Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser 65 70 75 80
Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr He 85 90 95
Ser Gly Leu Gin Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Ser Tyr 100 105 110
Ala Gly Ala Ser Phe Asn Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr 115 120 125
Val Leu Gly Gin Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro 130 135 · 140
Ser Ser Glu Glu Leu Gin Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu lie 145 150 155 160
S 72- 201219568
Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser 165 170 175
Ser Pro val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gin Ser 180 185 190
Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gin 195 200 205
Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gin Val Thr His Glu Gly Ser 2X0 215 220
Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 225 230 235 <210> 98 <211> 14 <212> PRT <213>智人 <400> 9β
Thr Gly Thr Ser 1
Ser Asp val Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ser 5 10 <210> 99 <21X> 7 <212> PRT <213>智人 <400> $9
Tyr val Thr Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 100 <211> XI <212> PRT <2U_>智人 <400> 100
Gin Ser Tyr Ala Gly Ala Ser Phe Asn Leu val 1 5 10 <210> 101 <211> 1398 <212> DNA <213>智人 <220> <221> CDS <222> (1)..(1398) <22〇> <221> sigjpeptide <222> (1).. (57) 201219568 <220> <221> V—region <222> (58)..(420) <220> <221> misc—feature <222> (14bT- - (162) <223> CDH1 <220> <221> tnisc—feature <222> (2057-.(261) <223> CDR2 <220> <22X> misc一 feature <222> (35bT- . (387) <223> CDR3 <400> 101 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 gtc ctg Ccc cag gtg caa ttg gtg gaa age ggc ggc ggc ctg gtg caa Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30 ccg ggc ggc age ctg cgt ctg age tgc geg gcc tcc gga ttt acc ttt Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 act act tat get atg cat tgg gtg ege caa gcc cat ggg aag ggt etc Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 gag tgg gtg age act att gag atfc aag gag get ggt tat get act aat Glu Trp val Ser Thr He Glu lie Lys Glu Ala Gly Tyr Ala Thr Asn 65 70 75 80 tat get get ggt gtt aag ggt cgt ttt acc att tea cgt gat aat teg Tyr Ala Ala Gly Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser 85 90 95 aaa aac acc ctg tat ctg caa atg aac age ctg cgt geg gaa gat aeg Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110 gcc gtg tat tat tgc geg cgt cgt ggt cct ggt atg ggt aat atg gat Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp 115 120 125 att tgg ggc caa ggc acc ctg gtg aeg gtt age tea gcc age acc aag lie Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140 ggc ccc age gtg ttc ccc ctg gcc ccc tgc age aga age acc age gag Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 145 150 155 160 age aca gcc gcc ctg ggc tgc ctg gtg aag gac tac ttc ccc gag ccc Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro X65 170 175 gtg acc gtg age tgg aac age gga gcc ctg acc age ggc gtg cac acc Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 180 185 190 48 96 144 192 240 288 336 384 432 480 528 -74 s 576 201219568 ttc ccc gcc gtg ctg cag age age ggc ctg tac age ctg age age gtg 624
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser val 195 200 205 gtg acc gtg ccc age aqc aac ttc ggc acc cag acc tac acc tgc aac 672
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220 gtg gac cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag acc gtg gag egg 720
Val Asp His X.ys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 225 230 235 240 aag tgc tgc gtg gag tgc ccc ccc tgc cct gcc cct cct gtg gcc gga 768
Lys Cys Cys val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 245 250 255 ccc tee gtg ttc ctg ttc ccc ccc aag ccc aag gac acc ctg atg ate 816
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr beu Met He 2β0 265 270 a9c C9ST acc ccc 9a9 9tg acc tgc gtg gtg gtg gac gtg age cac gag 664
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 280 285 gac ccc gag gtg cag ttt aat tgg tac gtg gac ggc gtg gag gtg cac 912
Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300 aac gcc aag acc aag ccc egg gag gaa cag ttc aac age acc ttc egg 960
Asn Ala X*ys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 315 320 gtg gtg tee gtg ctg acc gtg gtg cac cag gac tgg ctg aac ggc aaa ΐοοβ val Val Ser Val Deu Thr val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 gaa tac aag tgc aag gtg tec aac aag ggc ctg cct gcc ccc ate gag 1056
Glu Tyr Lys Cys Lys Vai Ser Asn Lys Gly Pro Ala Pro lie Glu 340 345 350 aaa acc ate age aag aca aag ggc cag ccc agg gaa ccc cag gtg tac 1104
Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 355 360 365 acc ctg ccc ccc age egg gag gaa atg acc aag aac cag gtg tee ctg 1152
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 370 375 380 acc tgt ctg gtg aag ggc ttc tac ccc age gac ate gcc gtg gag tgg 1200
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 385 390 395 400 gag age aac ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc ccc ccc atg 1248
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 405 410 415 ctg gac age gac ggc age ttc ttc ctg tac age aag ctg aca gtg gac 1296
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430 aag age egg tgg cag cag ggc aac gtg ttc age tgc age gtg atg cac 1344
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445 gag gcc ctg cac aac cac tac acc cag aag age ctg age ctg tee ccc 1392
Glu Ala I»eu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460 -75- 201219568 ggc aaa 1398
Gly Lys 465 > > > > > 0 12 3 o 1111 o 2 2 2 2 4 2 6T、 0 6 R,; 1 404智 1
Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 a〇 15
Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin 20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45
Thr Thr Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60
Glu Trp val Ser Thr lie Glu lie Lys Glu Ala Gly Tyr Ala Thr Asn 65 70 75 80
Tyr Ala Ala Gly Val Lys Gly Arg Phe Thr He Ser Arg Asp Asn Ser 85 90 95
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr 100 105 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Gly Pro Gly Met Qly Asn Met Asp X15 120 125 lie Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu 145 150 15S 160
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val Kis Thr 160 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn 210 215 220 s -76- 201219568
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg 225 230 235 240
Lys cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly 245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie 260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 280 285
Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg 305 310 315 320
Val val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu 340 345 350
Lys Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg GXu Pro Gin Val 355 360 355
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 385 390
Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp 395 400
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met 405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser val Met His 435 440 445
Glu Ala Leu His Asn Eis Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460
Gly Lys 465 3 T 0 R V 1 5 p智 Λ Λ Λ Λ 0 12 3 11X1 2 2 2 2 -77- 201219568 <400> 103 Thr Tyr 1 Ala. <210> 104 <211> 19 <212 > PRT <2i3> 智人 <400> 104 Thr lie 1 Glu Val Lys Gly Met His 5 lie Lys Glu Ala Gly Tyr Ala Thr Asn Tyr Ala Ala Gly 5 10 15 <210> 105 <211> 10 <212> PRT <213> 智人 c400> 105
Arg Gly Pro Gly Met Gly Asn Met Asp He 1 5 10 <210> 106 <211> 5 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> VARIANT <222> (1) . . (1) <223> /replace-Asn /replace=nSern /replace=，，Thrn <220> <221〉 VARIANT <222> (3)..(3) <223> /replace®"Trp" /replace=”Ala” <220> <221> VARIANT <222> (5)..(5) c223> /repla.ce= "Ser" /replace=丨1His"
/replace」，ThrM /replace-nAsnn <400> 106
S -78- 201219568
Xaa Tyr xaa Met Xaa 1 5 <210> 107 <211> 19 <212> PRT <23_3>智人 <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> /replace=t,Leun/replace=nTyrf,/replace=nPhe,'/replace='tAsn,,/replace' nThr° <220> <221> VARIANT <222> (3!…⑶ <223> /replace^SerVreplace^AlaVreplace^PheVreplace^Glu，， <220> <221> VARIANT <222> ⑷，.（4) <223> / replaced Tyr tf/replace== ttGlyn/replace»w 工 len Λ Λ Λ Λ 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 VARIANT (5) . . (5) /replace= "Lys,f /replace=absent <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace»1丨Glu"/replace*absent <220> <221> VARIANT <222> (7)..(7) <223> /replace=flSer,,/^eplace=,'Ala,t <22〇> <221> VARIANT <222> {8) .. (8)
<223> / replace- n Ser11 / replace^ " Gly M <220> <221> VARIANT <222> (9)..(9) <223> /replace="Ser"/replace=”Tyr" <220> <221> VARIANT <222> (10)..(X0) <223> /replace-MThrn/replace* nAsnw/replacetel'Val"/feplace=MSerM/3：eplace= "Ala" <220> <221> VARIANT <222> (12)..(12) <223> /replace='，Tyrn/replace=nAsn" <220> <221> VARIANT <222> (15)..(15) <223> /replace=rnAspn/replace=nAsnn <220> 79- 201219568
<221> VARIANT <222> (IS)..(16) <223 > /replacWSerVreplace^Gly” <400> 107
Xaa He Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Ala Xaa Xaa is 10 15
Val Lys Gly <210> 108 <211> 7 <212> PRT <213> 智人 c220> <221> VARIANT <222> (1Ϊ . . (1) <223> /replacewGly'*/replace= "Asp V r ep 1 ac e =n Ty r" <220> <221> VARIANT <222> (2) . . (2) <223> /replace^^Thr"/replace® ^Asp"/replace= fiValn <220> <221> <222> VAHIANT (3) . . (3) <223> /replace="Asn"/replace= "Thrn <220> <221> VARIANT <222> (4) . . (4) <223> /replace="Asn"/replace^"Asp"/replace^"Lys" <400> 108
Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Pro Ser 1 5 <210> 109 <211> 12 <212> PRT <213> 智人 0 12 3 2 2 2 2 2 2 2 2 < < < < VARIANT (5) . . (5) /replace =" Pro"/^eplace-,,Gly,! <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> /replace-nLeun/replace-nAla" <220> <221> VAR 工 ANT <222> (7)..(7) <223> /replace=nSern/replacesMPro" <220> s -80- 201219568 <221> VARIANT <222> (8) . . (8) <223> /replace=n Ser n/replace= M Phe" <220> <221> <222> <223> VARIANT (9) · · (9) /replace=nSer"/^eplace="Asnn <220> <221> VARIANT <222> <10)..(10) <223> /replace= "His '* / replace=absent <220> <221> <222> <223> VARIANT (11)·· Ϊ11) /replace=tlIle,l/replace="Leun <400> 109
Gin Ser Tyr Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val 15 10

Claims (1)

  1. 201219568 七、申請專利範圍： 1 · 一種抑制破骨細胞之形成及/或破骨細胞之骨質再吸收 的可結合Siglec-15之分離抗體或其功能片段，該抗體 包含（a)—重鏈，該重鏈包含CDRH1，該CDRH1包含 與SEQ ID NO : 106具至少80%序列相同度之一序列、 包含與SEQ ID NO : 107具至少80%序列相同度之一序 列之 CDRH2、及包含與 SEQ ID NO : 55、35、45、65 或 80中之一者具至少 80%序列相同度之一序列之 CDRH3 ;及（b)—輕鏈，該輕鏈包含CDRL卜該CDRL1 包含與SEQ ID NO : 73或83具至少80%序列相同度之 一序列、包含與SEQ ID NO : 108具至少80%序列相同 度之一序列之CDRL2、及包含與SEQ ID NO : 60、40、 50、70、90、100或109中之一者具至少80%序列相同 度之一序列之CDRL3。 2 ·如申請專利範圍第1項之分離抗體或其功能片段’其 中該 CDRH1 包含與 SEQ ID NO : 33、43、53、63 或 78中之一者具至少80%序列相同度之一序列。 3 ·如申請專利範圍第1或2項之分離抗體或其功能片 段，其中該 CDRH2 包含與 SEQ ID NO : 34、44、54 ' 64、79、94或104中之一者具至少80%序列相同度之 一序列。 4.如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段，其中該CDRL1包含與SEQIDNO: 38、48、 5 8、68或88中之一者具至少80%序列相同度之一序列。 201219568 5 ·如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段，其中該CDRL2包含與SEQ ID NO : 39、49、 5 9、69或89中之一者具至少80%序列相同度之一序列。 6. 如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段，其中於該抗體中之CDRH1、CDRH2、CDRH3、 CDRL1、CDRL2及CDRL3之序列包含： a) 分另|J 為 SEQ ID NO : 33、34、35、38、39 及 40 或與其具至少80%、90%或95 %序列相同度之序列； b) 分別為 SEQ ID NO : 43、44、45、48、49 及 50 或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列； c) 分別為 SEQ ID NO : 53、54、55、58、59 及 60 或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列； d) 分別為 SEQ ID NO : 63、64、65、68 ' 69 及 70 或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列； e) 分別為 SEQ ID NO : 78、79、80、88、89 及 90 或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列； Ό分別為 SEQ ID NO : 93、94、95、98、99 及 1〇〇 或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列；或 g)分別為 SEQ ID NO : 103、104、105、88、89 及 90或與其具至少80%、90%或95%序列相同度之序列。 7. 如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段’其中該抗體包含： 選自於由下列所組成之群組中之一重鏈可變區 al)—胺基酸序列包含：SEQ ID NO : 32之胺基酸 殘基20至136、SEQ ID NO: 42之胺基酸殘基20至 -2- 201219568 135、SEQ ID NO : 52 之胺基酸殘基 20 至 137、SEQ ID NO: 62之胺基酸殘基20至136、SEQ ID NO: 77之胺 基酸殘基20至138、SEQ ID NO : 92之胺基酸殘基20 至138、SEQ ID NO: 102之胺基酸殘基20至140; a2)與al)之該胺基酸序列具至少90%序列相同度 之一胺基酸序列； a3)與al)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度 之一胺基酸序列；及 a4)包括於a 1)之該胺基酸序列中之一或數個胺基 酸殘基的添加、刪除或取代之一胺基酸序列；及 選自於由下列所組成之群組中之一輕鏈可變區 bl)—胺基酸序列包含：SEQ ID NO : 37之胺基酸 殘基20至129、SEQ ID NO: 47之胺基酸殘基20至 129、SEQ ID NO: 57 之胺基酸殘基 20 至 129、SEQ ID NO : 67之胺基酸殘基20至129、SEQ ID NO : 87之胺 基酸殘基20至134、或SEQ ID NO: 97之胺基酸殘基 20 至 133 ; b2)與bl)之該胺基酸序列具至少90%序列相同度 之一胺基酸序列； b3)與bl)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度 之一胺基酸序列；及 b4)包括於bl)之該胺基酸序列中之一或數個胺基 酸殘基的添加、刪除或取代之一胺基酸序列。 8.如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段，其中該抗體包含： -3- 201219568 選自於由下列所組成之群組中之一重鏈 a1) —胺基酸序列包含SEQ ID NO: 32、42、52、 62、77、92或102中之一者之序列； a2)與ai)之該胺基酸序列具至少90%序列相同度 之一胺基酸序列； a3)與al)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度 之一胺基酸序列；及 a4)包括於al)之該胺基酸序列中之一或數個胺基 酸殘基的添加、刪除或取代之一胺基酸序列；及 選自於由下列所組成之群組中之一輕鏈 bl)—胺基酸序列包含SEQ ID NO : 37、47、57、 67、87或97中之一者之序列； b2)與bl)之該胺基酸序列具至少90%序列相同度 之一胺基酸序列； b3)與bl)之該胺基酸序列具至少95%序列相同度 之一胺基酸序列；及 ^ b4)包括於bl)之該胺基酸序列中之一或數個胺基 酸殘基的添加、刪除或取代之一胺基酸序列。 9.如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其功 能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 32之一胺 基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 37之一 胺基酸序列所組成之一輕鏈。 1 0.如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 42之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 47之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 -4 - 201219568 11. 如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 52之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 57之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 12. 如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 62之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 67之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 1 3.如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 77之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 87之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 14.如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 92之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 97之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 1 5 ·如申請專利範圍第1至8項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其中該抗體包含由含SEQ ID NO : 102之一 胺基酸序列所組成之一重鏈及由含SEQ ID NO : 87之 一胺基酸序列所組成之一輕鏈。 1 6.如前述申請專利範圍各項中任一項之抗體之功能片 段，其係選自於由Fab、F(ab’）2、Fab’及Fv所組成之 組群。 17.如申請專利範圍第1至7項中任一項之抗體，其係為 scFv ° 201219568 18·如前述申請專利範圍各項中任一項之分離抗體或其 功能片段，其係用於治療及/或預防異常骨質代謝。八 19. 一種用於異常骨質代謝之治療或預防用藥物之製造 之用途，其係利用如申請專利範圍第丨至丨7項中任& 項之分離抗體或其功能片段。 2 0. —種患有異常骨質代謝之病人之治療方法，包含投予 治療上有效量之如申請專利範圍第i至17項中任:項 之分離抗體或其功能片段。 21. —種醫藥組成物，包含如申請專利範圍第1至17項 中任一項之抗體或其功能片段中之至少—者。 2 2.如申晴專利範圍第21項之醫藥組成物，其係為異常 骨質代謝之治療及/或預防劑。 2 3 . —種治療及/或預防異常骨質代謝之醫藥組成物，其特 徵係包含如申請專利範圍第1至1 7項中任一項之抗體 或抗體之功能片段中之至少一者及選自於由雙膦酸鹽 類、活性維生素D3、抑辦素（calcitonin)及其衍生物、 激素製劑諸如雌二醇（estradiol)、選擇性雌激素受體調 節劑（SERM)、伊普利黃嗣（ipriflavone)、維生素K2[米 那堤崔_ (menatetrenone)]、約製劑、副曱狀腺激素 (PTH)製劑、非類固醇抗發炎劑、可溶性TNF受體製 劑、抗TNF-α抗體或該等抗體之功能片段、抗副曱狀 腺激素相關蛋白質（PTHrP)抗體或該等抗體之功能片 段、IL-1受體拮抗劑、抗IL-6受體抗體或該等抗體之 功能片段、抗RANKL抗體或該等抗體之功能片段、及 破骨細胞生成抑制因子（OCIF)所組成之組群中之至少 一個成員。 -6 - 201219568 2 4 ·如申請專利範圍當，。 轭圍第18項之抗體或功能片段、如申請 專利範圍第19¾T ^ 、 項之用途、如申請專利範圍第20項之 方法或如申請專利範圍第22或23項之醫藥組成物， 5中該異常月質代謝係選自於由下列所組成之組群： 骨f疏鬆症、伴隨類風濕性關節炎之骨質破壞、癌變 !生间辦=症、伴隨多發性骨髓瘤或癌症轉移至骨頭的 月質破壞、巨細胞瘤、牙周病造成的牙齒脫落、環繞 人工關節之骨皙.、六初 士 質岭解、慢性骨髓炎之骨質破壞、骨頭 之巴口特氏病（paget，s disease)、腎性骨發育不全及 成骨不全。 25.如申請專利範圍第 方法或醫藥組成物， 症、伴隨類風濕性關 移至骨頭的骨質破壞 24項之抗體、功能片段、用途、 其中該異常骨質代謝為骨質疏鬆 節炎之骨質破壞、或伴隨癌症轉 26.如申5月專利範圍第25項之抗體、功能片段、用途、 方法或醫藥組成物，其中該骨質疏鬆症為停經後骨質 疏鬆症、老年性骨質疏齡症、使用治療劑諸如 或免疫抑制劑造成的續發性骨質疏鬆症、或伴隨類風 濕性關節炎之骨質疏鬆症。 員風 27_一種多核苷酸’其係包含： a)編碼如申請專利範圍第1至17項中任一項之 體中之-者或其功能片段之一核皆酸序列；《 ^ ^ b)一多核苷酸之一核苷酸序列，該核苷酸序列係於 可刻條件下雜交至由與a)之該核苷酸序列互補之一、 苷酸序列所組成之一多核苷酸。 % 201219568 28.如申請專利範圍第27項之多核苷酸，其中編碼 CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2 及 CDRL3 之序列之該等核苷酸序列包含： a) 分別為SEQ ID NO : 31之核苷酸148至162、 SEQ ID NO : 31 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 31 之核苷酸352至375、SEQ ID NO: 36之核苷酸124 至 156、SEQ ID NO: 36 之核苷酸 202 至 222、及 SEQ IDNO: 36之核苷酸319至348; b) 分別為SEQ ID NO : 41之核苷酸148至162、 SEQ ID NO : 41 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 41 之核苷酸352至372、SEQ ID NO : 46之核苷酸124 至 156、SEQ ID NO: 46 之核苷酸 202 至 222、及 SEQ IDNO: 46之核苷酸319至348; c) 分別為SEQ ID NO : 51之核苷酸148至162、 SEQ ID NO : 51 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 51 之核苷酸352至378、SEQ ID NO: 56之核苷酸124 至 156、SEQ ID NO: 56 之核苷酸 202 至 222、及 SEQ ID NO: 56之核苷酸319至348; d) 分別為SEQ ID NO : 61之核苷酸148至162、 SEQ ID NO : 61 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 61 之核苷酸352至375、SEQ ID NO : 66之核苷酸124 至 156、SEQ ID NO ·· 66 之核苷酸 202 至 222、及 SEQ IDNO: 66之核苷酸319至348; e) 分別為SE.Q ID NO : 76之核苷酸148至162、 SEQ ID NO : 76 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 76 S -8- 201219568 之核苷酸352至381、SEQ ID NO: 86之核苷酸124 至 165、SEQ ID NO: 86 之核苷酸 211 至 231、及 SEQ ID NO: 86之核苷酸328至363; f) 分別為SEQ ID NO: 91之核苷酸148至162、SEQ ID NO : 91 之核苷酸 205 至 255、SEQ ID NO : 91 之核 苷酸352至381、SEQIDNO:96之核苷酸124至165、 SEQ ID NO : 96 之核苷酸 211 至 231、及 SEQ ID NO : 96之核苷酸328至360 ;或 g) 分別為SEQ ID NO : 101之核苷酸148至162 ' SEQ ID NO : 101 之核苷酸 205 至 261、SEQ ID NO : 101之核苷酸358至387、SEQ ID NO: 86之核苷酸124 至 165、SEQ ID NO : 86 之核苷酸 211 至 231、及 SEQ ID NO: 86之核苷酸328至363。 29.如申請專利範圍第27項之多核苷酸，其中該多核苷 酸包含： 選自於由下列所組成之組群中之編碼一重鏈可變 區之一核苷酸序列 al)—核苷酸序列包含：SEQ ID NO : 3 1之核苷酸 58 至 408、SEQ ID NO: 41 之核苷酸 58 至 405、SEQ ID NO : 5 1之核苷酸58至411、SEQ ID NO : 61之核苷酸 58 至 408、SEQ ID NO: 76 之核苷酸 58 至 414、SEQ ID NO : 91之核苷酸58至414、或SEQ ID NO ·· 101之核 苷酸58至420 ; a2) —多核苷酸之一核苷酸序列’該核苷酸序列係 於苛刻條件下雜交至由與a 1)之該核苷酸序列互補之 一核苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 -9 - 201219568 a3)包括於al)之該核苷酸序列中之一或數個核苷 酸的添加、刪除或取代之一核苷酸序列；及 選自於由下列所組成之組群中之編碼一輕鏈可變 區之—核苷酸序列 bl)—核苷酸序列包含：SEQIDN〇: 36之核苷酸 58 至 387、SEQIDNO:46 之核苷酸 58 至 387、SEQid NO: 56之核苷酸58至387、SEQIDNO: 66之核苷酸 58 至 387、SEQ ID NO: 86 之核苷酸 58 至 402、或 SEQ ID NO : 96之核苷酸58至399 ; b 2) —多核苷酸之一核苷酸序列’該核普酸序列係 於苛刻條件下雜交至由與b 1)之該核苷酸序列互補之 —核苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 b3)包括於bl)之該核苷酸序列中之一或數個核苷 酸的添加、刪除或取代之一核苷酸序列。 30.如申請專利範圍第29項之多核苷酸，其中該多核苷 酸包含： 選自於由下列所組成之組群中之編碼一重鍵之一 核苷酸序列 al)包含 SEQIDN0 : 31、41、51、61、76、91 或 1 0 1中之一者之序列之一核苷酸序列； a 2) —多核普酸之一核普酸序列，該核皆酸序列係 於苛刻條件下雜交至由與a 1)之該核苷酸序列互補之 核音酸序列所組成之·-多核音酸，及 a3)包括於al)之該核苷酸序列中之一或數個核苷 酸的添加、刪除或取代之一核苷酸序列；及 -10- 201219568 選自於由下列所組成之組群中之編碼一輕鏈之一 核苷酸序列 bl)包含 SEQ ID NO : 36、46、56、66、86 或 96 中之一者之序列之一核苷酸序列； b2) —多核苷酸之一核苷酸序列，該核苷酸序列係 於苛刻條件下雜交至由與b 1)之該核苷酸序列互補之 一核苷酸序列所組成之一多核苷酸；及 b3)包括於bl)之該核苷酸序列中之一或數個核苷 酸的添加、刪除或取代之一核苷酸序列。 3 1. —種載體，包含如申請專利範圍第27至30項中任一 項之至少一個多核苷酸。 32.—種轉形細胞，包含如申請專利範圍第27至30項中 任一項之至少一個多核普酸。 3 3 . —種轉形細胞，包含如申請專利範圍第31項之至少 一個載體。 34.—種製造如申請專利範圍第1至17項之抗體之方 法，包含下列步驟：培養如申請專利範圍第32或33 項之轉形細胞，收集培養材料，及從該等培養材料中 純化該等抗體。
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Families Citing this family (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7989160B2 (en) 2006-02-13 2011-08-02 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in the process of bone remodeling
US8168181B2 (en) * 2006-02-13 2012-05-01 Alethia Biotherapeutics, Inc. Methods of impairing osteoclast differentiation using antibodies that bind siglec-15
WO2009048072A1 (ja) 2007-10-11 2009-04-16 Daiichi Sankyo Company, Limited 破骨細胞関連蛋白質Ｓｉｇｌｅｃ－１５を標的とした抗体
CA2868959A1 (en) 2012-03-30 2013-10-03 Daiichi Sankyo Company, Limited Cdr-modified anti-siglec-15 antibody
CN104507969A (zh) 2012-07-19 2015-04-08 阿莱斯亚生物疗法股份有限公司 抗siglec-15抗体
US10479832B2 (en) 2014-03-31 2019-11-19 Universiteit Gent Method of treating bone disease
CN106999576B (zh) * 2014-09-08 2021-09-03 国立癌症研究中心 癌细胞特异性抗体、抗癌剂、及癌症的检查方法
CA3002095A1 (en) * 2015-11-10 2017-05-18 Yale University Compositions and methods for treating autoimmune diseases and cancers
US11390675B2 (en) 2016-09-21 2022-07-19 Nextcure, Inc. Antibodies for Siglec-15 and methods of use thereof
US11421032B2 (en) * 2017-05-22 2022-08-23 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions and methods for inhibition of MICA/B shedding
WO2019004487A1 (ja) 2017-06-30 2019-01-03 国立大学法人北海道大学 成長障害を生じない小児骨粗鬆症治療薬
CN114829392B (zh) * 2019-12-13 2024-02-06 博奥信生物技术（南京）有限公司 结合rankl的抗体及其用途
CA3173201A1 (en) * 2020-03-27 2021-09-30 Mingjiu Chen Antibodies binding siglec15 and uses thereof
CN112159475B (zh) * 2020-10-10 2021-04-30 南京凯地生物科技有限公司 Siglec-15单克隆抗体及其应用
CN112961217B (zh) * 2021-03-19 2022-11-08 江苏元本生物科技有限公司 一种靶向Siglec-15的噬菌体多肽
WO2023278336A1 (en) * 2021-06-27 2023-01-05 Yale University Unc5b function blocking antibodies
CN113577283A (zh) * 2021-07-19 2021-11-02 河北医科大学第三医院 Siglec-15抑制剂在制备防治骨巨细胞瘤药物中的应用

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL117175A (en) 1995-02-20 2005-11-20 Sankyo Co Osteoclastogenesis inhibitory factor protein
DE19653646A1 (de) 1996-12-20 1998-06-25 Hoechst Ag Substituierte Purinderivate, Verfahren zu deren Herstellung, sie enthaltende Mittel und deren Verwendung
CA2781623A1 (en) 1997-04-15 1998-10-22 Daiichi Sankyo Company, Limited Novel protein binding to osteoclastogenesis inhibitory factor and process for producing the same
ES2327382T3 (es) 1999-07-20 2009-10-29 Morphosys Ag Metodos para presentar (poli)peptidos/proteinas en particulas de bacteriofagos a traves de enlaces disulfuro.
US7608704B2 (en) 2000-11-08 2009-10-27 Incyte Corporation Secreted proteins
US20040082508A1 (en) 2000-11-08 2004-04-29 Henry Yue Secreted proteins
CA2439129A1 (en) 2001-02-15 2002-08-22 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Novel cellular adhesion molecule of activated leukocyte
CN1212334C (zh) * 2001-02-28 2005-07-27 第二军医大学免疫学研究所 人唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素，其编码序列及用途
CA2451051C (en) * 2001-06-19 2012-11-27 Sorge Kelm Siglec inhibitors
US7364736B2 (en) 2001-06-26 2008-04-29 Amgen Inc. Antibodies to OPGL
US20050107588A1 (en) 2001-11-13 2005-05-19 Duggan Brendan M. Receptors and membrane-associated proteins
US7193069B2 (en) 2002-03-22 2007-03-20 Research Association For Biotechnology Full-length cDNA
EP2314316A1 (en) 2002-04-05 2011-04-27 Amgen, Inc Human anti-OPGL neutralizing antibodies as selective OPGL pathway inhibitors
RS54056B1 (en) * 2004-02-06 2015-10-30 Morphosys Ag ANTI-CD38 HUMAN ANTIBODIES AND THEIR USES
TWI359026B (en) 2004-02-12 2012-03-01 Sankyo Co Pharmaceutical composition for the osteoclast rela
US7405037B2 (en) 2004-05-07 2008-07-29 Lonza Walkersville, Inc. Methods and tools for detecting collagen degradation
CN101035807A (zh) * 2004-06-09 2007-09-12 泰勒公司 Siglec－6相关疾病的诊断和治疗
JP4604184B2 (ja) 2005-07-12 2010-12-22 独立行政法人産業技術総合研究所 新規糖鎖認識蛋白質及びその遺伝子
US8168181B2 (en) 2006-02-13 2012-05-01 Alethia Biotherapeutics, Inc. Methods of impairing osteoclast differentiation using antibodies that bind siglec-15
US7989160B2 (en) 2006-02-13 2011-08-02 Alethia Biotherapeutics Inc. Polynucleotides and polypeptide sequences involved in the process of bone remodeling
WO2009048072A1 (ja) 2007-10-11 2009-04-16 Daiichi Sankyo Company, Limited 破骨細胞関連蛋白質Ｓｉｇｌｅｃ－１５を標的とした抗体
WO2010065293A1 (en) * 2008-12-03 2010-06-10 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals Inc. Antibodies for guanylyl cyclase receptors
EP2377932B1 (en) 2009-04-09 2020-11-18 Daiichi Sankyo Company, Limited ANTI-Siglec-15 ANTIBODY

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