TW201208701A

TW201208701A - Anti-EPHA2 antibodies and uses thereof

Info

Publication number: TW201208701A
Application number: TW100124384A
Authority: TW
Inventors: Takeshi Takizawa; Tatsuji Matsuoka; Jun Hasegawa
Original assignee: Daiichi Sankyo Co Ltd
Priority date: 2010-07-12
Filing date: 2011-07-11
Publication date: 2012-03-01
Also published as: WO2012008397A1

Description

201208701 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於一種抗EPHA2抗體及含有該抗體之醫藥組成物等。【先前技術】 EPHA2係分子量130kDa之具有1次穿透膜構造的受體型酪胺酸激酶（參照例如非專利文獻1)。EPHA2的N 末端側之細胞外區域，存在配體結合域與2處第III型黏 • 連蛋白域（fibronectin type III domain)、C末端側之細胞内區域存在赂胺酸激酶域與山姆結構（sterile-a-motif ; S A Μ)域。作為ΕΡΗΑ2的配體，已知有GPII^(anchor)型細胞膜蛋白質Ephrin-Al〜A5(參照例如非專利文獻2)。由於配體與EPHA2結合而酪胺酸激酶域被活化，存在於 ΕΡΗA2之細胞内區域的酪胺酸殘基被鱗酸化，而訊息被傳達至細胞内。又’與配體結合之ΕΡΗΑ2藉由胞飲作用 φ 被帶進細胞内’最終於蛋白酶體被分解已業經報告（參照例如非專利文獻3)。 ΕΡΗΑ2臨床上於多數的癌’特別於乳癌、食道癌、前列腺癌、胃癌、非小細胞肺癌、大腸癌、多形神經膠胚細胞瘤（multiform glioblastoma)之高表現已業經報告（參照例如非專利文獻4、5、6、7、8、9、1 〇、11)。又，業經報告：食道癌中’於EPHA2表現陽性的患者，局部淋巴結轉移的頻率或淋巴結轉移的數量係有意義的高、且癌的分化度係有意義的低；又，於EpHA2表現陽性的 201208701 心者5年生存率係有意義的低（參照例如非專利文獻5) ’於非小細胞肺癌，無病生存期未滿5年的患者，相較於多於5年的Φ、去，cdua 〜者EpHA2的表現係有意義的高；於復發、特別於引起移棘$ H您& & ^ 轉至細的患者，ΕρΗΑ2的表現係有意義的咼（參照例如非專利女勒0、. 丄β F寻才J文獻9)，於大腸癌，ΕΡΗΑ2表現陽性的患者，容易引扭胖結也约5丨起肝轉移、淋巴管浸潤、淋巴結轉移，臨床分期高的电、去φ Η Η π门π心有肀εΡΗΑ2表現陽性的患者多（參照例如非專利文獻1 0)。又，業經報告··藉由將EPHA2基因導入細胞，非癌細胞將獲得非貼附性（anchorage_independent)增殖能力或於細胞外基質之管狀形態形成能力、活體内（in vivo) 的腫瘤增殖能力等癌性狀（參照例如非專利文獻4)、癌細胞之對於細胞外基質的浸潤性將有所亢進（參照例如非專利文獻12、13)。反之，若以siRNA抑制EPHA2的表現，則癌細胞的浸潤性或非貼附性增殖、活體内的腫瘤增殖將受到抑制（參照例如非專利文獻i 3、i 4);及藉由使用配體之Ephrin-Al與人類IgG的Fc區域之融合蛋白處將EPHA2予以活化，而引發藉由胞飲作用之EpHA2 的分解，癌細胞的浸潤性或非貼附性增殖 '管狀形態形成能力將受到抑制（參照例如非專利文獻4、1 1、1 2)已業經報告。另一方面’業經報告：EPHA2非僅於癌細胞，亦表現於腫瘤内或周邊血管（參照例如非專利文獻1 5)。業經報告：於小鼠，EPHA2訊號參與由於Ephrin _A1所誘導之血管新生、尤其表現於血管内皮細胞的EPHA2為血管 201208701 内皮細胞之管腔形成或生存所必要（參照例如非專利文獻16)，而EPHA2的細胞外區域與人類igG的Fc區域之融合蛋白質抑制活體内的血管新生、顯示抗腫瘤效果（參照例如非專利文獻1 7)亦已業經報告。

關於EPHA2 ’業經報告：一種激動劑（ag〇nist)抗 EPHA2單株抗體，其係如配體般，具有誘導EpHA2酪胺酸殘基磷酸化之活性與誘導EPHA2分解之活性，而抑制乳癌細胞株之非貼附性增殖或於細胞外基質之管狀形態形成（參,¾例如非專利文獻1 4)。又，.相較於非癌細胞，與露出於癌細胞之EPHA2上的抗原決定位置（epit〇pe)結合，並具有誘導ΕΡΗ A2酷·胺酸殘基鱗酸化之活性與誘導 ΕΡΗΑ2分解之活性的激動劑抗ΕΡΗΑ2單株抗體於活體内顯示抗腫瘤效果已業經報告（參照例如非專利文獻23 、專利文獻1)。另一方面，業經報告：Kiewlish等人之抗EPHA2單株抗體雖具有EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化誘導活性與ΕΡΗA2之分解誘導活性’但於活體内未顯示抗腫瘤效果（參照例如非專利文獻24)。又，專利文獻2中記載有將癌細胞免疫於小鼠而取得之抗 ΕΡΗΑ2 單株抗體 LUCA19、SG5、LUCA40、SPL1 ’且關於此等抗體：LUCA19與SG5對於ΕΡΗΑ2酪胺酸殘基之磷酸化不具影響；LUCA40於活體外（in vitro)抑制癌細胞之增殖；LUCA19、SG5、及LUCA40於經毒素 (皂草素；saporin)標記之抗小鼠抗體存在下，被内化 (internalize)於癌細胞内。又，關於LUCA40與SPL1，於活體内顯示抗腫瘤效果雖已業經報告，但關於是否具有激動劑活性仍屬不明。 201208701 另一方面，與EPHA2之細胞外區域結合’並具有抗腫瘤活性之單株抗體及其人化抗體已業經報告（專利文獻4)。 [先行技術文獻] [專利文獻] [專利文獻1]國際公開第WO03/094859號小冊； [專利文獻2]國際公開第WO2006/084226號小冊； [專利文獻3]國際公開小冊W02003/05788 1 ; [專利文獻4]國際公開W02009/028639。 [非專利文獻] [非專利文獻 l]Molecular and cellular Biology、1990 年、第 10 卷、p.6316-6324 ; [非專利文獻 2]Annual Review of Neuroscience、1998 年、第 21 卷、ρ·309-345 ; [非專利文獻 3]Molecular Cancer Research、2002 年、第 1 卷、p.79-87 ; [非專利文獻 4]Cancer Research、2001 年、第 61 卷、 P-2301-2306 ； [非專利文獻 5]International Journal of Cancer、2003 年、第 103 卷、p.657-663 ; [非專利文獻 6]The Prostate、1 999 年、第 41 卷、p_275-280 ; [非專利文獻 7] American Journal of Pathology、 2003 年、第 163 卷、p.2271-2276 ; [非專利文獻 8]Cancer Science、2005 年、第 96 卷、P.42- 201208701 [非專利文獻 9]Clinical Cancer Research、2003 年、第 9 卷、p_613-618 ; [非專利文獻 10]OncologyReports、2004 年、第 11 卷、 P-605-61 1 ； [非專利文獻 ll]Molecular Cancer Research、2005 年、第 3 卷、p.54 1 -55 1 ; [非專利文獻 12]Biochemical and Biophysical Resarch Communications、2004 年、第 320 卷、p.1096-1 102 ； φ [非專利文獻 13]Oncogene、2004 年、第 23 卷、ρ.1448-1456 ； [非專利文獻 14]Cancer Research、2002 年、第 62 卷、 P-2840-2847 ； [非專利文獻 15]〇ncogene、2000 年、第 19 卷、P.6043-6052 ； [非專利文獻 16]Journal of Cell Science、2004 年、第 1 17 卷、p.2037-2049 ;

[非專利文獻 17]Oncogene、2002 年、第 21 卷、p.7011-7026 ； [非專利文獻 18]The New England Journal of Medicine ' 2007 年、第 357 卷、p_39-51 ; [非專利文獻 19]Oncogene、2007 年、第 26 卷、p.3661-3678 ； [非專利文獻 20]Oncogene、2007 年、第 26 卷、P.3603-3613 ； [非專利文獻 21]Nature Medicine、2000 年、第 6 卷、 p.443-446 ； 201208701 [非專利文獻 22]Blood、2004 年、第 103 卷、p.2738-2743 9 [非專利文獻 23]Cancer Research、2003 年、第 63 卷、 P.7907-7912 ; [非專利文獻 24]Neoplasia、2006 年、第 8 卷、p.18-30 [非專利文獻 25]Journal of Pharmaceutical Sciences、2 008 年、第 97 卷、ρ·1414-1426 ; [非專利文獻 26]Presta L，et al: Thromb Haemost 85: 379-389 、 2001 ° 【發明内容】 [發明所欲解決之課題] 本發明之一課題係提供一種針對ΕρΗA2之抗體。本發明之另一課題係提供一種對於癌症具有治療效果之含有s玄抗ΕΡΗΑ2抗體的醫藥組成物等。本發明之另一課題係提供一種該抗體的製造方法。本發明之另一課題係提供一種使用該抗體之抑制腫瘤增殖的方法等。 [解決課題之手段] 本發明人等為解決上述課題戮力進行檢討，並於製造將國際公開小冊W0 2009/028639所記載之抗ΕρΗΑ2 單株抗體之源自於SH3W的重鍵及源自力的輕鏈予以組合的人化抗體(本說明書中稱作「可交換抗體 (swapped，dy)」。)時發現：在維持抑_^^ 之活性的同時，相較於源自於SH3 h 1 AA 的人化抗體及源自於剛Μ的人化抗體，結合至抗^ ，且ADCC活性亦有所提升而完成本發明。 201208701 即，本發明係包含： (1) 一種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成，且專一性識別包含序列表之序列編號4所示之胺基酸序列而成之多胜（polypeptide);前述重鏈係包含··包含序列表之序列編號1 8所示之胺基酸序列而成之CDRH1、包含序列表之序列編號20所示之胺基酸序列而成之CDRH2、及包含序列表之序列編號22所示之胺基酸序列而成之CDRH3所成；前述輕鏈係包含：包含 φ 序列表之序列編號48所示之胺基酸序列而成之CDRL1 、包含序列表之序列編號50所示之胺基酸序列而成之 CDRL2、及包含序歹ij表之序列編號52所示之胺基酸序列而成之CDRL3所成； (2) 如（1)所記載之抗體或該抗體之機能性片段，其係專一性識別包含序列表之序列編號4之胺基酸編號439 至5 3 4所示之胺基酸序列而成之多胜； (3) 如（1)或（2)所記載之抗體或該抗體之機能性片段 φ ，其係包含重鏈及輕鏈所成，且對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426至540所示之胺基酸序列而成之多胜的Kd値為1.5nM以下；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號1 8所示之胺基酸序列而成之CDRH 1 、包含序列表之序列編號2〇所示之胺基酸序列而成之 CDRH2、及包含序列表之序列編號22所示之胺基酸序列而成之CDRH3所成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號48所示之胺基酸序列而成之CDRL1、包含序列表之序列編號50所示之胺基酸序列而成之CDRL2、及 201208701 包含序列表之序列編號52所示之胺基酸序列而成之 CDRL3所成； (4) 如（3)所記載之抗體或該抗體之機能性片段，其得、對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號 426至540所示之胺基酸序列而成之多胜的Kd値為 1 .OnM以下； (5) 如（3)所記載之抗體或該抗體之機能性片段 ’其係對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號 426至540所示之胺基酸序列而成之多胜的^値為 φ 0.5nM以下； (6) 如（1)至（5)中任一項記載之抗體或該抗體之機能性片段，其係將藉由EPHA2配體所誘導之EPHA2赂胺酸殘基的磷酸化予以抑制； (7) 如（1)至（6)中任一項記載之抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號54、56所示之胺基酸序列、或於該胺基酸序列中之1個或數個胺基酸係已缺失、取代、φ 附加之胺基酸序列之任一胺基酸序列而成之重鏈可變區 ;前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號66、68所示之胺基酸序列、或於該胺基酸序列中之1個或數個胺基酸係已缺失、取代、附加之胺基酸序列之任—胺基酸序列而成之輕鏈可變區； (8) 如（1)至（7)中任一項之抗體或該抗體之機能性片段’其係包含重鍵及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號53、55所示之胺基酸序列、或於該胺 -10- 201208701 基酸序列中之1個或數個胺基酸係已缺失、取之胺基酸序列之任一胺基酸序列；前述輕鍵係含序列表之序列編號65 ' 67所示之胺基酸序列基酸序列中之1個或數個胺基酸係已缺失、取之胺基酸序列之任一胺基酸序列； (9) 一種抗體或該抗體之機能性片段，其係及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之 5 3所示之胺基酸序列而成；前述輕鍵係包含. Φ 表之序列編號65所示之胺基酸序列而成； (1 0 ) —種抗體或該抗體之機能性片段，其鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表號5 3所示之胺基酸序列而成；前述輕鏈係包含列表之序列編號6 7所示之胺基酸序列而成； (1 1) 一種抗體或該抗體之機能性片段，其鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表號5 5所示之胺基酸序列而成；前述輕鏈係包含 % 列表之序列編號65所示之胺基酸序列而成； (1 2) —種抗體或該抗體之機能性片段，其鏈及輕键所成；前述重鏈係包含：包含序列表號5 5所示之胺基酸序列而成；前述輕鏈係包令列表之序列編號67所示之胺基酸序列而成； (13)如（1)至（12)中任一項記載之抗體或該能性片段，其係具有以下a)至d)所示之性質： a) 不具EPHA2赂胺酸殘基之鱗酸化能力； b) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活七代、附加包含：包或於該胺代、附加包含重鏈序列編號包含序列係包含重之序列編 :包含序係包含重之序列編 ••包含序係包含重之序列編 -:包含序抗體之機 201208701 C)對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性； d)於活體内具有抗腫瘤活性； (1 4)如（1)至（1 2)中任一項記載之抗體或該抗體之機月b性片ί又，其係具有以下a)〜e)所示之性質： a) 不具EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力； b) 不顯示EPHA2蛋白質量之減少作用； c) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活性； d) 對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性； e) 於活體内具有抗腫瘤活性； (1 5)如（1)至（1 4)中任一項記載之抗體’其係IgG抗體； (16)如（1)至（14)中任一項記載之抗體或該抗體之機能性片段’其係選自於Fab、F(ab，）2、Fv、scFv、雙鏈抗體（diabody)、線狀抗體及多元專一性 (multi-specificity)抗體之任一者； (1 7) —種醫藥組成物’其特徵為含有至少任一種選自於如（1)至（1 6)之抗體或該抗體之機能性片段； (1 8) —種癌治療用醫藥組成物，其特徵為含有至少任一種選自於如（1)至（16)之抗體或該抗體之機能性； (1 9) 一種醫藥組成物，其係用於治療乳癌、食道癌、前列腺癌、胃癌、非小細胞肺癌、大腸癌、及/或多形神經膠胚細胞瘤’其特徵為含有至少任一種選自於如（1) 〜（1 6)之抗體或該抗體之機能性片段。 (2 0) —種補乳動物所具有之腫瘤之增殖之抑制方法，其係藉由投予選自於如（1)至（1 8)之任一種； -12- 201208701 (21) 如（19)記載之腫瘤之增殖之抑制方法，其中腫瘤係表現EPHA2之腫瘤； (22) —種多核苷酸，其係編碼選自於如（1)至（16)中任一項記載之抗體或該抗體之機能性片段； .(23)—種宿主細胞，其係藉由如（22)記載之多核苷酸而轉形（transformation); (24) —種抗體或該抗體之機能性片段之製造方法，其特徵為包含：將如（23)記載之宿主細胞予以培養，並 ® 自培養液將該抗體或該抗體之機能性片段予以回收之步驟而成。 [發明效果] 藉由本發明，成功取得一種抗EPHA2人化可交換抗體及該抗體之機能性片段。並且發現該抗體具有優異之抗腫瘤活性。進一步，提供一種醫藥組成物，其係含有該抗體作為有效成分；再進一步，提供一種癌治療用醫藥組成物 % ，其係包含該抗體。【實施方式】 [發明之實施形態] 1.定義本說明書中’ 「癌」與「腫瘤」係作為相同意義使用。本說明書中’ 「基因」之用語，不僅DNA，亦包含：其mRNA、cDNA及其cRNA。因此，本發明中之「EPHA2 基因」係包含：EPHA2之DNA、mRNA、cDNA及cRNA。 •13- 201208701 本說明書’ 「多核苷酸」之用語，係作為與核峻相同意義使用，並亦包含：DNA、RNA、探針、寡核替酸、及引子。本說明書中，「多胜」與「蛋白質」使用上未予以區別。本說明書中，「細胞」亦包含：動物個體内之細胞、培養細胞。

本說明書中，「細胞之癌化」係指：細胞喪失對於接觸抑制現象之感受性、或顯不非貼附性增殖等，而細胞顯示異常增殖’且如此顯示異常增殖之細胞稱為「痒細胞」。本說明書中，具有與EPHA2所具有之細胞之癌化活性及/或細胞增殖活性等相同功能之蛋白質亦稱為 EPHA2。

本說明書中之「可交換抗體（swapped antibody)」係指.於複數種類的机體之間交換重鍵及/或輕鏈之抗體，除了重鏈及/或輕鏈之全長已交換者外，亦包含僅可變區、僅恆定區已交換者、僅互補決定區已交換者。即，例如：於抗體之全長序列中，抗體A之重鏈為AH、輕鏈為AL、抗體B之重鏈為BH、輕鏈為bl時，重鏈/輕鏈之組合為AH/BL、BH /AL之抗體係可交換抗體。又，作為其他例子’當抗體A之重鍵可變區的CDR為CDRH1A

、CDRH2A、及CDRH3A、輕鏈可變區的CDR為CDRL1A 、CDRL2A、及CDRL3A，抗體B之重鍵可變區的CDR 為CDRH1B、CDRH2B、及CDRH3B、輕鍵可變區的CDR ⑧ -14- 201208701 為 CDRL1B、CDRL2B ' 及 CDRL3B 時，CDR 之組合為 :重鏈係 CDRH1A、CDRH2A、及 CDRH3A，且輕鏈係 CDRL1B、CDRL2B、及 CDRL3B 之抗體，以及 CDR 之組合為：重鏈係CDRH1B、CDRH2B、及CDRH3B，且輕鏈係CDRL1A、CDRL2A、及CDRL3A之抗體為可交換抗體。本說明書中，只要無特別記載，「抗EPHA2抗體」亦包含抗EPHA2可交換抗體、「抗EPHA2人化抗體」亦包含抗EPHA2人化可交換抗體」。

本說明書中之「抗體之機能性片段」，意指具有與抗原結合活性之抗體的部分片段，而包含Fab、F(ab’）2 、scFV等。又，將F(ab’）2於還原條件下處理後之抗體可變區的一價片段之F ab ’亦包含於抗體之機能性片段。但只要具有與抗原之結合能力，並不限定於此等分子。又，此等機能性片段，不僅係將抗體蛋白質之全長分子以適當的酵素予以處理者，亦包含使用經基因工程改變之抗體基因並於適當的宿主細胞中所產生之蛋白質。本說明書中之「酪胺酸殘基之磷酸化」.，係指胜肽之胺基酸序列中所含有之酪胺酸殘基被磷酸化，而酪胺酸殘基是否被磷酸化，例如：調查胜肽與抗磷酸化酪胺酸抗體（例如：抗-磷醯酪胺酸，組 4G10 HRP-共軛株 (Anti-Phosphotyrosine ， recombinant 4G10 HRp-conjugate)(Millipore(Upsate)公司製 #16-184)之結合性，當與該抗體結合時，可判定酪胺酸殘基被磷酸化。本說明書中之「EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力」，係指將EPHA2之胺基酸序列中之酪胺酸殘基予以磷酸化的 -15- 201208701 能力，而抗體是否具有EpHA2之酪胺酸殘基之磷酸化能力，例如：可將抗體與EPHA2予以培養後，根據是否具有EPHA2與抗磷酸化酪胺酸抗體之結合性而予以判定。本說明書中之「EPHA2蛋白質之表現量減少」，係指EPHA2蛋白質的量減少，而抗體是否具有使EPHA2 蛋白質的量減少之作用’例如：可將抗體與EPHA2予以培養後，藉由將EPHA2的量予以定量而調查。本說明書中之「EPHA2配體」，係表示可成為EPHA2 配體之物質，且作為其具體例可列舉：GPI錨型細胞膜蛋白質之 Ephrin-Al 〜A5(Annual Review 〇f

Neuroscience、1998 年、第 21 卷、p.309-345)。本說明書中，「細胞傷害」係指造成細胞某種形態之病理變化’且不限於直接性外傷，而係指dNA斷裂或鹼基二量體之形成 '染色體斷裂 '細胞分裂裝置之損傷、各種酵素活性之降低等所有細胞構造或機能上之損傷。本說明書中之「細胞毒殺（cyt〇t〇xic)活性」係指引起上述細胞傷害。本說明書中t ADCC得、與抗體依賴性細胞毒殺 (Aimb〇dy-dependent cellular cyt〇t〇xicity)相同意義係指Fey受體保有細胞經由Fcy受體附著於結合在標的細胞之表面抗原之抗體的Fc部分、並毒殺標的細胞庳 ;ADCC活性亦稱作抗體依賴性細胞毒殺活性，係指：

迷反應之活性。ADCC活性雖可根據該業者通常所L 仁叮猎由例如：本說明書中之實施例 8所記載的方法予以測定。頁她例 -16- 201208701 本說明書中之「CDC」係與補體依賴性細胞毒殺 (C〇mPlement_dependent cyt〇t〇cixicity)相同意義而活性係指引起補體依賴性細胞毒殺的活性^ CDC活性可根據該業者通常所進行之方法予以測定。本說明書中，「於活體内具有抗腫瘤活性」，意指具有抑制或減少具有腫瘤之動物個體之腫瘤增殖的活性。抗EPHA2抗體是否「於活體内具有抗腫瘤活性」雖可根據該業者通常所進行之方法加以調查，但亦可根據例如以下的方法加以調查。即，針對經皮下移植腫瘤細胞（例如：MDA-MB-23 1細胞）的裸小鼠（例如： BALB/cAJcl-nu/nu ;自曰本克雷亞（clear司取得）於腹腔内適當投予作為試驗物質之抗EPA2抗體，並與未投予抗EPA2抗體之對照組，比較腫瘤體積之歷時性變化 ’而於抗EPA2抗體投予組與對照組相較，腫瘤體積係有意義地小時’可將試驗物質之該抗EPA2抗體判定為「於活體内具有抗腫瘤活性」。已知抗體分子的重鏈及輕鏈上分別具有3處互補決定區（CDR : Complementary determing region)。本說明書中’關於抗體之互補決定區，係將重鏈的互補決定區表記為CDRH1、CDRH2、及CDRH3、將輕鏈的互補決定區表記為 CDRL1、CDRL2、及 CDRL3。本說明書中之「抗原決定位置」，係指於動物、較佳為哺乳動物、進一步較佳為小鼠或人類的體内中之具有抗原性及/或免疫原性之EPHA2的部分胜肽。為具有抗原性之EPHA2的部分胜肽之抗原決定位置、雖可根據 -17- 201208701 免疫測定法等該業者所熟知之方法予以決定，但可根據例如以下的方法加以進行。製作EPHA2之各種部分構造。於製作部分構造時’可使用習知之募胜肽合成技術。可藉由例如：使用該業者所周知之基因重組技術，製作自EPHA2的C末端或N末端，以適當之長度依序予以截短之一連串多胜後’檢討抗體對於此等之反應性，而於決定粗略之識別部位後、進一步合成短胜肽並檢討與此等胜肽的反應性，而決定抗原決定位置。本說明書中之變異抗體，係指抗體的胺基酸序列中之1個或數個胺基酸已取代、缺失、附加的抗體。作為本說明書中之抗體性質的一例，可列舉：生物性、化學性、及物理性質，而作為進一步具體例，可列舉：生物活性、對於抗原•抗原決定位置之結合性、製造、流通、保存時之安定性、熱安定性等。本發明中之「於嚴格條件下予以雜交」係指：藉由於市售之雜交溶液 ExpressHyb Hybridization Solution( 克隆科技公司製）中、並於68 °C下予以雜交，或使用固定有DNA的濾紙並於〇. 7-1 · 0Μ氣化納（NaCU存在下、於 68°C下進行雜交後，使用0.1-2倍濃度的SSC溶液（1倍濃度SSC係包含：1 50mM氣化鈉、1 5mM檸檬酸鈉而成 )’並於6 8 °C下洗淨，而可予以鑑定之條件或與其同等之條件下予以雜交。 2.關於 EPHA2 (1)EPHA2 基因 201208701 EPHA2基因之核苷酸序列及胺基酸序列，係於 GenBank中登錄為EPH receptor A2(登錄編號分別為 NM_00443 1、NP_〇〇4422)。又，EPHA2 基因的開放讀架 (Open Reading Frame ; ORF)之核苷酸序列係記載於序列表之序列編號1、其胺基酸序列係記載於序列表之序列編號2。再者’包含於EPHA2之胺基酸序列中之1個或數個胺基酸已取代、缺失、附加之胺基酸序列而成，且具有 ^與此等酵素相同生物活性之蛋白質亦包含於EPHA2。 (2)EPHA2基因之癌部專一性表現 EPHA2基因於諸多的癌、尤其於乳癌、食道癌、前列腺癌、胃癌、非小細胞肺癌、大腸癌、多形神經膠胚細胞瘤中之高表現已業經報告。又’抑制ΕΡΗA2表現量及/或活性之物質，係具有抑制ΕΡΗΑ2所導致之細胞癌化及/或癌細胞之增殖的活性。 _ (3)ΕΡΗΑ2之調製作為抗ΕΡΗΑ2抗體之抗原的ΕΡΗΑ2，可列舉ΕΡΗΑ2 的全長多胜或其部分多胜，進一步具體而言，可列舉： ΕΡΗΑ2之全長多胜，或較佳為：ΕΡηα2之細胞外區域多胜（包含序列表之序列編號4之胺基酸編號}〜5 4 〇所示之胺基酸序列而成）、進一步較佳為：包含序列表之序列編唬4之胺基酸編號426至540所示之胺基酸序列的多胜、再進一步較佳為：包含序列表之序列編號4之胺基 .酸編號439至534所示之胺基酸序列的多胜；或於此等 -19- 201208701 加入任意之知基酸序列或載體（cwrier)的衍生物。又，可列舉.包含上述各多胜之至少6個連續部分之胺基酸序列而成的多胜；或於此等加入任意之胺基酸序列或載體 (carrier)的衍生物。再者’成為抗原之EPHA2全長多胜或其部分多胜’ 可藉由·藉由基因操作使EPHA2基因或其部分多胜的基因於宿主細胞產生而得。 EPHA2可自人類的腫瘤組織或腫瘤細胞直接予以純化使用’又，EPHA2全長多胜或其部分多胜可藉由於活體内合成、或藉由基因操作於宿主細胞產生而得。於基因操作中，具體而言，可將EPHA2或其部分多胜嵌入可表現之載體（vect〇r)後，於含有轉染 (trransfection)與翻譯（translation)所必要之酵素、基質、及能量物質的溶液中合成；或藉由：藉由將其他原核生物、或真核生物之宿主細胞予以轉形而表現EPHA2或其部分多胜，而得到該蛋白質。 EPHA2之其部分多胜的cDNA，可藉由例如：將表現EPHA2的cdNA庫作為模板，並使用將編碼EPHA2 cDNA或其部分多胜之DNA予以專一性增幅的引子進行反轉錄酶-聚合酶鏈反應（以下稱作「PCR」）（參照Saiki, R. K·，et al. Science(1988)239，p.487-489)之所謂 pcr 法而取得。作為多胜之活體外（in vitro)合成，雖可列舉例如：羅氏醫療診斷設備（roche-diagnostics)公司製造的快速翻譯系統（Rapid Translation System ; RTS)，但不限定於此。 -20- 201208701 3 ·抗EPHA2抗體 (1)抗EPHA2單株抗體之取得為抗EPHA2抗體之SH348-1可取得自融合瘤 SH348-1。又，為抗EPHA2抗體之SH357- 1可取得自融合瘤SH357-1。融合瘤SH348-1及融合瘤SH357-1係於 2007年6月8日寄存於日本國獨立行政法人產業技術總合研究所專利生物寄存中心（住址：日本國茨城縣筑波市東1-1-1中央第6)，融合瘤SH348-1係以SH348-1的名 • 稱被授與受託編號FERM BP-10836、融合瘤SH357-1係以SH357-1的名稱被授與受託編號FERM BP-10837。又’ SH348- 1之重鏈的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號5、胺基酸序列係記載於序列編號6。3Η348-1 之輕鏈的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號7、胺基酸序列係記載於序列編號8。SH348- 1之重鏈可變區的核苦酸序列係記載於序列表之序列編號9、胺基酸序列係記載於序列編號1〇。SH348-1之重鏈恆定區的核苦酸 Φ序列係記載於序列表之序列編號丨丨、胺基酸序列係記載於序列編號12。SH348-1之輕鏈可變區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號1 3、胺基酸序列係記載於序列編號1 4。SH348-1之輕鏈恆定區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號i 5、胺基酸序列係記載於序列編號^ 6 。SH348-1之CDRH1的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號1 7、胺基酸序列係記載於序列編號u、CDRH2 之核苷酸序列係記載於序列編號1 9、胺基酸序列係記載於序列編號20、CDRH3之核苷酸序列係記載於序列編號 -21 - 201208701 2卜胺基酸序列係記載於序列編號22。SH348- 1之CDRLl 的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號23、胺基酸序列係記載於序列編號24、CDRL2之核苷酸序列係記載於序列編號2 5、胺基酸序列係記載於序列編號2 6、c D R L 3 之核苷酸序列係記載於序列編號27、胺基酸序列係記載於序列編號2 8。又，SH3 57-1之重鏈的核苷酸序列係記載於序列法之序列編號2 9、胺基酸序列係記載於序列編號3 〇。 SH3 57-1之輕鏈的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號3 1、胺基酸序列係記載於序列編號3 2。s H 3 5 7 _ 1之重鏈可變區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號33、胺基酸序列係記載於序列編號34 ^ SH3 57- 1之重鏈怪定區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號35、胺基酸序列係記載於序列表之序列編號36 ^ SH357 1之輕鏈可變區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號37、胺基酸序列係記載於序列編號3^ 之輕鏈恆定區的核苷酸序列係記載於序列表之序列編號39、胺基酸序列係記載於序列編號404^57」之CDRm的核普酸序列係記載於序列表之序列編？虎41、胺基酸序列係記載於序列編號42、CDRH2之核苦酸序列係記載於序列編號G 、胺基酸序列係記載於序列編號44、cdrh3之核皆酸序列係記載於序列編號45、胺基酸序列係記載的核^序^記㈣Mr 序列編號47、胺基酸序列係記載於序列編號48、CD· 之核苦酸序列係記載於序列編號49、胺基酸序列係記載 -22- 201208701 於序列編號50、CDRL3之核苷酸序列係記載於序列編號 5 1、胺基酸序列係記載於序列編號5 2。 (2)抗EPHA2人化可交換抗體之取得作為抗EPHA2人化可交換抗體的例子，可列舉具有 :源自於SH348-1之人化重鏈及源自於SH357-1之人化輕鏈的人化抗體。

作為抗EPHA2人化可交換抗體，且係上述可交換抗體’可列舉：重鏈及輕鏈經人化的抗體，而作為人化抗體’可列舉一種抗體，其係僅將互補決定區（CDr ; c〇mplementarity determing regi〇n)嵌入源自於人類之抗體（參照 Nature( 1986)32 1，p.522-525)，根據 CDR 移植法 ’除了 CDR序列之外，一部分骨架（framew〇rk)的胺基酸殘基亦移植於人類抗體的抗體（參照WO90/0786 1號、US 6972323號公報）。作為抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片段的具體例，可列舉一種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈，且專一性識別包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426至540所示之胺基酸序列的胜肽’前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號1 8所示之胺基酸序列而成之CDRIH、包含序列表之序列編號20 所示之胺基酸序列而成之CDRH2、及包含序列表之序列編號22所示之胺基酸序列而成之CDRH3所成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號4 8所示之胺基酸序列而成之CDRL1、包含序列表之序列編號5〇所示之胺基酸序列而成之CDRL2、及包含序列表之序列編號52所示之胺基酸序列而成之CDRL3所成。 -23- 201208701 作為抗 FPH Δ ? i /. 人化可交換抗體或該抗體之機能性 Π“具體例，可列舉至少任一種選自於：一種抗 ” &包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號s 4 _ ^ 〇 j就54所不之胺基酸序列而成之重鏈可前述輕鏈係包含：包含序列編號66所示之胺基酸歹J而成之輕鏈可變區；—種抗體，其係包含重鍵及輕鏈所成，則述重鏈係包含：包含序列表之序列編號54所不之胺基酸序列而成之重鏈可變區；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號68所示之胺基酸序列而成之輕鏈可變區，一種抗體，其係包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含，包含序列表之序列編號5 6所示之胺基酸序列而成之重鏈可變區；前述輕鏈係包含：包含序列編號 /6所示之胺基酸序列而成之輕鏈可變區；一種抗體，其人匕3重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號56所示之胺基酸序列而成之重鏈可變區；前述輕鏈係包含：包含序列編號6 8所示之胺基酸序列而成之輕鏈可變區；一種抗體，其係包含重鏈及序列編號6 5 φ 所示之輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號5 3所示之胺基酸序列而成；一種抗體，其係包含：序列表之序列編號5 3所示之重鏈及序列編號6 7所示之每鏈所成；一種抗體，其係包含：序列表之序列編號5 5 所示之重鏈及序列編號65所示之輕鏈所成；一種抗體，其係包含：序列表之序列編號55所示之重鏈及序列編號 6 7所示之輕鏈所成；及該等抗體之機能性片段《又，包含於上述抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性 ⑧ -24-

201208701 片段的胺基酸序列中之1個或數個胺基酸、附加之胺基酸序列而成者，亦包含於本發人化可交換抗體或該抗體之機能性片段。本發明之抗EPHA2人化可交換抗體能性片段係特定識別EPHA2、較佳為：專一之細胞外區域、進一步較佳為：專一性識之序列編號4之胺基酸編號426至540所列的多胜、再進一步較佳為：專一性識別 φ 序列編號4之胺基酸編號4 3 9至5 3 4所示的多胜。本發明之抗ΕΡΗA2人化可交換抗體能性片段係對於包含序列編號4之胺基酸: 所示之胺基酸序列的多胜’作為Kd値為較佳為1 ·0nM以下、進一步較佳為〇.5nM (3)抗體之製造可根據基因重組技術，藉由編碼各個換抗體之重鏈及輕鏈的cDNA、較佳為包含體’將真核細胞予以轉形，並藉由將產生單株抗體之轉形細胞予以培養，而自培養此抗體。其中’作為宿主可使用例如真核細胞細胞、淋巴球或骨髓瘤等之哺乳動物細胞一旦將抗體基因予以分離後，並導入製作抗體時，可使用適當的宿主與表現載使用真核細胞作為宿主時，可使用動細胞、真核微生物。已缺失、取代明之抗EPHA2 或該抗體之機性識別EPHA2 別包含序列表示之胺基酸序包含序列表之之胺基酸序列或該抗體之機备號426至540 1 ·5ηΜ以下、以下。上述人化可交該cDNA的載基因重組人類上清液中得到 ’較佳為CHO 〇適當的宿主而體的組合。物細胞、植物 •25- 201208701 作為動物細胞，可列舉：（1)哺乳類細胞，例如：為狼子細胞之 COS 細胞（Gluzman，Y. Cell( 1 98 1 )23, p.1 75- 1 82 ; ATCC CRL-1650)、小鼠纖維母細胞 NIH3T3(ATCC No. CRL- 1 658)或中國倉鼠卵巢細胞（CH0 細胞；ATCC CCL-61)之二氫葉酸還原酶缺失株（Urlaub， G. and Chasin, L. A. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A(1980) 77, p.4126-4220)。又’作為此等宿主，亦可使用有所改變之宿主，其係得以表現糖鏈構造有所改變，而抗體的 ADCC活性（抗體依賴性細胞毒殺活性）或C D C活性有所提高的抗體。作為如此宿主，可列舉一種CHO細胞，其係導入有編碼抗體分子的基因，前述抗體分子係產生鍵結於抗體的 F c區之N -配糖體鍵結複合型糖鏈中，於糖鏈還原末端的 N -乙醯葡萄糖胺’未鍵結有海藻糖（fuc〇se)的糖鏈的比例為20%以上之抗體組成物（參照w〇 02/3 1 140號）使用原核細胞時，可列舉例如：大腸菌、枯草菌。可藉由將作為目的之抗體基因藉由轉形導入於此等細胞，並將經轉形之細胞於活体外培養而得到抗體。作為抗體的同型（isotype)並無限制，雖可列舉例如 • IgG(IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(IgAl、IgA2) 、IgD或IgE等，但較佳者可列舉：IgG或igM。又於本發明中：除了上述抗體，亦可為該抗體之機能性片段。作為抗體之機能性片段的例子’係包含：Fab 、F(ab’）2、SCFV等。又，F(ab’）2在經還原條件下處理之抗體可變區的單價片段Fab，亦包含於抗體之機能性片段 -26- 201208701 。但只要具有與抗原結合能力，並不限定於此等分子。又，於此等機能性片段中：不僅係將抗體蛋白質的全長分子以適當之酵素處理者，亦包含使用經基因工程改變之抗體基因，並於適當之宿主細胞中所產生的蛋白質。作為抗體之一例之單鏈抗體（亦記載作SCFV)，係藉由將抗體的重鏈V區與輕键V區，以多胜的鏈結器 (linker)予以連結而得到（Pluckthun,(單株抗體藥理學 )The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, 鲁 1 1 3(Rosenburg 及 Moore 編、Springer Verlag，New York， p.269-3 1 5(1994), Nature Biotechnol〇gy(2005)) 23, p.l126-1136)。製作單鏈抗體的方法於該技術領域係為習知（參照例如：美國專利第4,946,778號、美國專利第5,26〇,2〇3 號、美國專利第5,091，513號、美國專利第5,455,〇3〇號等）。於此scFV中’重鏈V區與輕鏈v區係經由不成為共軛的鏈結器，較佳者為多胜鏈結器而連結（Hust〇n，】 S- et al.5 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.( 1 988), 85, P.5879-5883)。scFV中之重鏈V區及輕鏈v區亦可源自於同一抗體，亦可源自於個別抗體。作為連結v區的胜肽鏈結器，可使用例如：包含12 〜1 9殘基而成之任意單鏈胜肽。、·扁碼scFV的DNA ’可藉由：於編碼前述抗體的重鏈或重鏈V區之DNA，及編碼輕鏈或輕鏈v區之Dna 中’將編碼此等序列中之全部或所欲之胺基酸序列的 DNA部分作為模板，並使用定義其兩端之引子對，藉由 -27- 201208701 、^巾曰，其次，進一步將編碼胜肽鏈結器部分的DNA及定義其兩端得以與個別重鏈、輕鏈相連結之引子對予以組合增幅而得到。八又’-旦製作編碼scFV #職，料根據常法得到含有該等之表現載體、及藉由該表現載體而轉形之宿可藉由使用該宿主，並根據常法而得到。此等抗體片段可與前述相同地取得並表現基因，並藉由宿主產生。進步，作為抗體的例子，亦可為對於至少2種不同抗原具有特異性之多元特異性抗體。通常如此分子雖係結合2個抗原者（即，雙重特異性抗體（bispecific antibody)) ’本發明中之「多元特異性抗體」係包含對於其以上（例如3種）之抗原具有特異性的抗體。本發明之抗體，多元特異性抗體係包含全長而成之抗體、或如此抗體之片段（例如：F(ab，）2雙重特異性抗體）亦可。雙重特異性抗體亦可結合2種抗體的重鏈與輕鏈（HL對）而製作；亦可藉由將產生不同單株抗體的融合瘤予以融合’製作產生雙重特異性抗體之融合細胞而製作（Millstein et al·，Nature( 1 983)305, p.53 7-539)。作為抗體的例子，亦可為多株抗體，其係胺基酸序列不同之複數種類的抗EPHA2抗體的混合物。作為多株抗體之一例’可列舉CDR不同之複數種類的抗體的混合物。作為如此多株抗體，可使用將產生不同抗體的細胞的混合物予以培養，並自該培養物予以純化的抗體（參照 WO 2004/061 104 號）。 -28- 201208701 作為抗體之修飾物，亦可使用與聚乙二醇（PEG)等之各種分子結合的抗體。作為抗體的例子，進一步亦可為此等抗體與其他藥劑形成共扼（Immunoconjugate)者。作為如此抗體的例子 ’可列舉：該抗體係與放射性物質或具有藥理作用之化合物的結合物（Nature Biotechnology(2005)23， ρ·1137-1146)。所得到的抗體可純化至均一為止。抗體的分離、純 Φ 化只要係使用於一般蛋白質所使用之分離、純化方法即 "SJ* 〇雖只要適當選擇例如：層析管柱、濾芯（filter)、超過濾、鹽析、透析、調製用聚丙烯醯胺凝膠電泳、等電聚焦電泳等並予以組合，即可分離、純化抗體（蛋白質純化與鑑定實驗指南：實驗室課程手冊（Strategies for Protein Purification and Characterization · A Laboratory Course Manual), Daniel R. Marshak et al. eds., Cold • Spring Harbor Laboratory Press(1996);抗體：實驗手冊 (Antibodies: A Laboratory Manual). Ed Harlow and David Lane, Cold Spring Harbor Laboratory Press(1 988))，但並不限定於此等。作為層析法，可列舉：親和性層析法、離子交換層析法、疏水性層析法、凝膠過滤、逆相層析法、吸附層析法等。此等層析法，可使用HPLC或FPLC等之液相層析儀而進行。 -29- 201208701 作為用於親和性層析法之管柱，可列舉：、蛋白G柱。作為使用例如蛋白A柱之管柱，可列舉： POR*OS、Sepharose F. F.(Pharmacia)等。又，亦可使用固定有抗原之載體（carrier) 於抗原之結合性而純化抗體。 4 ·抗EPHA2人化可交換抗體之性質本發明之抗EPHA2人化可交換抗體或安能性片段係具有至少以下（1)〜（5)之任一種性 (1) 專一性結合於包含序列表之序列編號：編號426〜5 34所示之胺基酸序列而成的多胜少任一種選自於下述a)〜e)之性質。 a) 不具EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力 b) 不顯示EPHA2蛋白質量之減少作用。 c) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活<| d) 對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性 e) 於活體内具有抗腫瘤活性。 (2) 專一性結合於包含序列表之序列編號！編號4 2 6〜5 3 4所示之胺基酸序列而成的多胜少任2種以上選自於下述a)〜e)之性質。 a) 不具EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力 b) 不顯示EPHA2蛋白質量之減少作用。 c) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活，丨 d) 對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性 e) 於活體内具有抗腫瘤活性》蛋白A柱 Hyper D、並利用對《抗體之機質。《之胺基酸 ’並具有至 5之胺基酸 ’並具有至 -30- 201208701 (3)專一性結合於包含序列表之序列編號8之胺基酸編號426〜5 34所示之胺基酸序列而成的多胜，並具有下述a)〜e)的性質。 a) 不具EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力。 b) 不顯示EPHA2蛋白質量之減少作用。 c) 對於表現Ε Ρ Η A 2之細胞具有A D C C活性。 d) 對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性。 e) 於活體内具有抗腫瘤活性。

其中，抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片段所導致之EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力，可根據例如：WO 2009/028639 之（實施例 3)3)-1-1 〜3)-1-2 所記載的方法予以測定。即，於適當條件下培養MDA-MB-23 1 細胞，並將抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體、作為 EPHA2的可溶性配體之重組小鼠 Ephrin-Al/Fc嵌合體 (Recombinant Mouse Ephrin-Al/Fc Chimera i 以下簡稱作「Ephrin -Al/Fc」；研發系統（R&D Systems)公司製： φ #602-Al-200)以RPMI1640稀釋為適當濃度的溶液，添加於已將培養基棄置之MDA-MB-23 1細胞中，並於3 7°C、 5%C02的條件下培養指定之時間。為將EPHA2予以免疫沈澱，首先，於每1樣本之 25μ1 蛋白 G磁珠（Protein G magnetic beads)懸浮液（新英格蘭生物實驗室（NEW ENGLAND Bio-Labs)公司製）中添加抗-Eck /EPHA2 D7 株（anti-Eck /EPHA2, clone D7 ，以下簡稱作「抗 EPHA2 抗體（D7)」：Millipore(Upsate) 公司製#05-480)，並於4°C下翻轉混合2小時。 201208701 其後，添加胎牛血清（FBS)並使最終濃度為1〇%，並進一步於4°C下翻轉混合30分鐘。以含有！ mM苯曱基磺醯氟（PMSF)之1倍細胞溶解缓衝液（lxCeU Lysis Buffer)將磁珠洗淨3次後，添加2〇〇pg上述所調製之細胞溶解液上清液’並於4。(：下翻轉混合一晚。翌日，以含有1 mM PMSF之1倍細胞溶解緩衝液將磁珠洗淨3次後’於磁珠_添加S D S -樣本緩衝液（5 6 · 3 m IV[三經甲基胺基曱烧鹽酸鹽（Tris-HCl)pH6_8、1.8%(w/v)SDS、9%甘油、0.72M 2-巯基乙醇、〇.〇45mg/ml溴苯酚藍）並於98°C下加熱5分鐘，並以SDS-PAGE將解離自磁珠的蛋白質予以分離。自分離後之凝膠將蛋白質轉印至聚二氟乙烯 (polyvinylidene difluoride)膜（以下簡稱作「pvdF 膜」；孔洞大小0.45 μιη : Millipore公司製）。將轉印後的pvDF 膜於阻斷液（將1包Block Ace粉末（大日本住友製藥（雪印乳業）公司製）溶解於1 〇〇ml超純水後，添加Tween 20 、疊氮化鈉並分別使最終濃度為〇. 1 %(v/v)、〇〇2%(w/v)) 中震盪而進行阻斷。首先，為檢測經免疫沈澱之EPHA2 ’將阻斷後的PVDF膜浸潰於以阻斷液稀釋為〇.25pg/ml 之EPHA2抗體溶液，並於室溫震盪1小時，將Pvdf膜於 TBST(50mMTris-HClpH8.0、138mM 氣化鈉、2.7mM 氣化 If (KC1)、0· 1 %(v/v)Tween 20)中 1 〇分鐘洗淨 3 次後，浸潰於以TBST稀釋3000倍的HRP連結抗小鼠Ig全綿羊抗體（Anti-Mouse Ig，HRP-Linked Whole Ab Sheep)( 奇異健康生物科技（GE Healthcare Bio-Sciences)公司製） ⑧ -32- 201208701 溶液並於室溫下震盪30分鐘。進一步將PVDF膜於TBST 中10分鐘洗淨3次後，使用ECL Plus(奇異健康生物科技公司製）以化學發光用膜檢測訊號。其次’為自此PVDF膜上去除抗體，將PVDF膜浸潰於去除（Strip)液（5〇mM Tris-HCl pH6.8、2%(w/v) SDS 、lOOmM 2-巯基乙醇）並於55^下震盪30分鐘後，浸潰於 Quench 液（含有 1 %(v/v)過氧化氫（H202)、0 _ 1 %(w/v) 疊氮化鈉（NaNO的TB ST)並於室溫下進行20分鐘震盪處 φ 理，進一步於TBST中10分鐘洗淨3次。為檢測EPHA2 酪胺酸殘基之磷酸化狀態，將此PVDF膜於不含疊氮化鈉之阻斷液（將1包Block Ace粉末（大日本住友製藥（雪印乳業）公司製）溶解於100ml超純水後，添加Tween 20 並使最終濃度為0.1 %(v/v))中震盪阻斷後，浸潰於以不含疊氮化鈉之阻斷液稀釋10000倍的抗-磷醯酪胺酸，組 4G10 HRP-共輛株（Anti-Phosphotyrosine，recombinant 4G10 HRP-conjugate)(於圖式中簡稱作「4G10抗體」；

Millipore(Upsate)公司製#16-184)溶液，並於室溫下搖晃 φ 1小時。將PVDF膜於TBST中10分鐘洗淨3次後，進一步於水中5分鐘洗淨3次，並使用ECL Plus以化學發光用膜檢測訊號。又，EPHA2蛋白質量之減少作用，可根據例如·· WO 2009/028639之實施例3之3)-1-3所記載的方法予以測定。即，可將細胞溶解液上清液以SDS-PAGE分離後，將凝膠中的蛋白質轉印於PVDF膜，藉由以抗EPHA2抗體進行西方氏轉潰法（Western blotting)，藉由將EPHA2 蛋白質的量予以定量而測定蛋白質的減少量。 -33- 201208701 又’ ADCC活性雖可以通常所進行之方法予以測定，但可根據例如：本說明書之實施例8所記載之方法予以測定。又’ CDC活性雖可以該業者通常所進行之方法予以測定。又’可根據例如：w〇2〇〇9/〇28639之實施例3之 3)-3所記載的方法進行。即，將懸浮於含有1〇% FBS之 RPMI1 640(添加有抗生素）的 mdA-MB-23 1、A549、PC -3 細胞’以各5000細胞/孔接種於96孔微量盤，並於37〇C 、5%CO 2的條件下培養一晚。翌日，使補體添加後的最終濃度為25pg/ml，添加以含有1〇% FBS之RPMI1 640( 添加有抗生素）稀釋之SH348- 1、SH3 57- 1、同型對照抗體（mIgG2a) ’並於4。(：下靜置1小時。於此添加以 RPMI1640稀釋成30%的兔補體（CEDARLAND公司製 #CL 305 1 )並使最終濃度為5%，並於37°C、5% CO 2的條件下培養1小時’進一步於室溫下靜置3 0分鐘。為測定細胞生存率’添加與培養液等量的CellTiter-Glo發光細胞存活率檢測液（CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay ； Promega公司製），並於室溫下攪拌i 〇分鐘後’以微量盤計數器測量發光量。細胞生存率係以下式算出。細胞生存率（％) = (a - b) / (c - b) X 1 0 0 a :樣本孔的發光量 b :背景（細胞、抗體未添加孔）發光量的平均値（n = 8) 。接種細胞時，取代細胞懸浮液而添加等量的含有1 〇 % FBS之RPMI 1640(添加有抗生素）；添加抗體時，添加與 -34- 201208701 抗體稀釋液等量的含有10%FBS之RpMI164〇(添加有生素）。除此之外’係進行與樣本孔相同的操作。 C :未添加抗體孔的發光量之平均値（n = 3)。抗體加時，添加與抗體稀釋液等量的含有10% fbs RPMI1640(添加有抗生素）。除此之外，，係進行與樣本相同的操作。又，於活體内中之抗腫瘤活性，可藉由例如：針具有腫瘤的實驗動物投予抗EPHA2人化可交換抗體砝抗體之機能性片段，並測定腫瘤體積的變化而確認可藉由例如：本說明書之實施例1〇所記載的方法予二定。 5.含有抗EPHA2人化可交換抗體之醫藥抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片，係有用於作為醫藥、尤其作為以治療癌症為目的之藥組成物、或作為如此疾病之免疫學診斷用抗體。抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片 ’作為醫藥’雖只要係表現EPHA2的癌症均成為治療對象，但作為癌症的種類，雖可較佳列舉例如：乳癌食道癌、如列腺癌、胃癌、非小細胞肺癌、大腸声、多形神經膠胚細胞瘤，但不限定於此等。本發明亦提供一種醫藥組成物，其係包含：對於療有效的量之抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之能性片段與藥學上可接受之稀釋劑、載體、可溶化劑乳化劑、保存劑、及/或輔助劑。抗添之孔對或〇測段醫段的 N 及治機 -35- 201208701 本發明之醫藥組成物中物質，較佳者為：於投予量或用於可接受之製劑的藥組成物者為非毒性者較佳。X ,度，對於被投予醫本發明之醫藥組成物係可包、黏度、透明度、彥員色、等張性、益用;;將阳、浸透厂堅解率、緩釋率、吸收率、及浸透率；改分安定性、溶或保持之製劑用的物.質。乂改隻、或維持、作為製劑用的物質雖可列舉。甘胺酸、丙胺酸、穀胺酸、天冬=’:旦不限於此等酸或離胺酸等之胺基酸類，·抗菌劑；打琯、·且月:酸：精胺或亞硫酸氫鈉等之浐爵几壞血酸、硫酸納液、碳酸氫鹽、知檬酸、硼酸緩衝等之㈣f烷鹽酸鹽(Μ··)溶液專之緩衝劑；甘露醇或甘胺酸等 a* ^ρπτλ λ ^ 具充劑；乙二胺四乙酉夂（EDTA)等之螯合劑；咖啡因 _七工《乙稀。比0各°定、β-環糊精或羥丙基-β_環糊精等之錯

Mr ^ ^ ^ ^ 匍刼糖、甘露糖或糊精权^劑；單糖類、雙糖類或葡萄糖、甘露糖或糊精等之其他碳水化合物；著色劑、香味劑、稀釋劑、乳化劑或聚乙烯吡咯啶等之親水聚合物；低分子量多胜、鹽形成對離子、羥基氣苯胺、苯甲酸、水楊酸、乙汞硫柳酸鈉、苯乙醇、對羥苯甲酸曱酯、對羥苯曱酸丙酯、克羅西希定（chlorhexidine)、山裂酸或過氧化氫等之防腐劑’甘油、丙二醇或聚乙二醇等之溶·劑；甘露糖醇或山梨糖醇等之糖醇；懸浮劑、PEG、山梨糖醇酐酯、聚山梨糖醇酯20或聚山梨糖醇酯8〇等聚山梨糖醇酯 (polysorbate) > 特里通（triton)、胺基丁三醇 ⑧ -36- 201208701 (tromethamine)、卵填脂或膽固醇等之界面活性劑；嚴糖或山梨糖醇等之安定化增強劑；氯化鈉、氯化鉀或甘露糖醇、山梨糖醇等之彈性增強劑；運輸劑；稀釋劑，·賦形劑；及/或藥學上之輔助劑。此·#製劑用之物質的添加量，係相對於抗ηA2人化可交換抗體或其機能性片段的重量0·0 1〜丨00倍、特別較佳為添加〇. 1〜1 〇倍。再者，本發明亦包含一種醫藥組成物，其係含有：使抗ΕΡΗΑ2人化可交換抗體含有於脂質體中之免疫脂質體（immun〇liposome)或抗ΕΡΗΑ2抗體與脂質體結合之抗體（美國專利第6214388號）。製劑十之較佳醫藥組成物的組成可由該業者因應適用疾病、適用投予途徑等而加以適當決定。醫藥組成物中之賦形+ ^ 叫〜劑或載體亦可為液體亦可為固適當之賦形劑或載體為注射用的水或生理食鹽水、人工：脊髓液或通常用於非經口投予之其他物質亦可。食鹽水用於載體。食-水或血清白蛋白的生理緩衝亦可使用例如：ρΗ7㈣5的τ出緩衝、：pH4〇_5 5的乙酸緩衝液、ρΗ5.0_8.0的檸檬酸糖醇或其他化合物C衝液、或該等中含有山梨之純醫f組成物，作為所選擇之組成、所必要、田之给劑’而製備為冷凍乾燥品或液體。 -37- 201208701 包含抗EPHA2 A化可交換抗體或該抗體之機能性片段之醫藥組成物亦可成形作為冷;東乾燥品，前述冷束乾餘品係使用如蔗糖之適當賦形劑。醫藥組成物亦可調製成非經口投予用，亦可調製成藉由經口之消化道吸收用。

製劑之組成及濃度係可根據投予方法而決定，且包含於本發明之醫藥組成物的& EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片段之對於EPHA2的親和性，即，才目對於針對EPHA2的解離係數㈤値），親和性愈高（K" 低）’則對於人類投予量少即可發揮藥效之故亦可根摘此”。果’决疋本發明之醫藥組成物之對於人的投予量。投予量’於針對人類投予醫藥組成物之際，通常只要於1 180天之間將01〜1〇〇mg/kg投予i次即可。作為醫藥組成物之形態，可列舉：包含點滴之注射 ^塞蜊、經鼻劑、舌下劑、經皮吸收劑等。

&包含抗EPHA2人化可交換抗體或該抗體之機能性片奴作為有效成分之醫藥組成物，亦可與化學療法劑同時或依序使用。即，亦可於投予化學療法劑後，投予包含杬ΕΡΗΑ2人化可交換抗體或該抗體之機能性片段作為有效成分之醫藥組成物；φ可於投予該醫藥組成物後投予化學療法劑；進一步’亦可同時投予該醫藥組成物與化學療法劑。例如：可使用之作用藥係包含：包含胸腺 h苷iiL 5成酶抑制劑之代謝括抗劑、核酸類似物、鉑細月毋f生劑、拓樸異構酶抑制劑、或抗微小管劑。得於本發明中使用之胸腺核苷酸合成酶抑制劑的例子包含： ⑧ -38- 201208701 5-FU、ΜΤΑ、及TDX。得以使用之代謝拮抗劑的例子為妥妙得適（Tomudex ; TDX)。得以使用之鉑細胞毒性劑的例子包含：二氯二胺鉑（cisplatin)及益樂鉑（oxaliplatin) 。除了上述所列舉之特定的作用藥之外，或取而代之而得於本發明中使用之化學療法劑係可含有：烷化劑；烷基磺酸鹽（alkyl sulfonate);氮丙碇（aziridine);伸乙亞胺 (ethyleneimine);甲基三聚氰胺（methylarneiamine);氮芥 (nitrogen mustard);亞硝基脲（nitrosureas);代謝拮抗劑，葉酸類似物’普林類似物；11密°定類似物；雄性激素；抗腎上腺物貝’葉酸補充劑，乙酿葡酿内醋（aceglatone) ;醛填醯胺糖苷（aldophosphamide glucoside);胺乙醯丙酸（aminolevulinic acid);安吖啶（amsacrine);阿莫司汀 (bestrabucil)’ 比生群（bisantrene);依達曲沙（edatrexate) :地佛法敏（defofamine);秋水仙胺（demecolcine);地吖醌（diaziquone);艾佛敏汀（eif0mithine);依利醋銨 (elliptiniumacetate);依托格魯（etogiucid);硝酸鎵；羥 Φ基尿素；香菇多糖（lentinan);氣尼達明（l〇nidamine);米托胍腙（mitoguazone);雙羥蒽醌（mitoxantrone)。作為化學療法劑’亦可使用拓樸異構酶抑制劑，用於特定實施形態的拓樸異構酶抑制劑為拓樸異構酶I抑制劑，例如 :喜樹鹼（camptothecin)。可用於本發明中之適切的拓樸異構酶I抑制劑為抗癌妥（irinotecan)(CPT-ii)或其活性代謝物之SN-38。CPT-1 1係藉由將被稱為開裂或開裂複合體之可逆性共價鍵結反應中間體予以安定化，專一性作用於細胞周期S期，亦得以誘導於02〜Μ期之細胞周 -39- i .· 201208701 期的停止。可用於本發明之特定的實施形態中之化學療法劑為氟°密°定，例如：5 - F U。使用特定的化學療法劑時，應理解為：亦可使用類似物’其係包含：保持特定作用藥之抗腫瘤活性之生物學活性的衍生物及其實質上之相同物。藉由投予本說明書所揭示之醫藥組成物得以抑制表現EPHA2之腫瘤的增殖。 [實施例] 以下，雖於實施例中進一步詳細說明本發明，但本發明不限定於此等。再者’於下述實施例中，關於基因操作之各操作只要未特別明示’係根據「分子選殖」（Sambrook，J.，Fritseh Ε· F·及Maniatis，T.著、冷泉港實驗室出版（c〇ld Spring Harbor Laboratory Press)、1 989年發行）所記載之方法及其他該業者所使用的實驗書所記載之方法而進行，或者 ’使用市售之試藥或套組時，係根據市售品之說明書而進行。實施例1、人化抗體之設計 a)SH348-l之人化抗體的設計 a)-i)SH348-l之可變區的分子模型建構（modeling) SH348-1之重鏈可變區係表示於序列表之序列編號 10。SH348- 1之輕鏈可變區係表示於序列表之序列編號 14 〇 SH348-1之可變區的分子模型建構，係根據作為相同性模型建構之一般性習知方法（Methods in -40- 201208701

Enzymology，203, 12 1 - 1 53,(1991))而實施。比較登錄於蛋白質資料銀行（Protein Data Bank)(Nuc. Acid Res 3 5 D301-D303(2007))之人類免疫球蛋白之可變區的i次元序列（可取得由X射線結晶構造所推導之三次元構造）與上文所決疋之S Η 3 4 8 - 1之可變區。作為結果，分別選擇 2JEL及1A4J作為相對於SH348- 1之輕鏈及重鏈之可變區’具有最高序列相同性的序列。骨架區之三次元構造係藉由將對應於SH348-1之輕鏈及重鏈的2JEL及1A4J •的座標予以組合，得到「骨架模型建構」而製作。SH348」的 CDR 係根據 Thornton et al.(J. Mol. Biol·，263, 800-815,(1996))的分類，CDRL!、CDRL2、CDRL3、CDRH, 及CDRH2係分別被分配於群組（ciuster)i6A、7A、9A、 10A、10A。CDRH3 係使用 H3 法則（FEBS letter 399, 1-8(1 996)) ’並歸類於e(9)D。其次，關於個別CDR之代表性立體構形係併入於骨架模型建構。最後’於能量方面’為得到具有SH348-1之可變區 φ之可旎性的分子模型，進行為去除不利之原子間接觸之月色里计算。上述順序係使用市售之蛋白質立體結構予測私式 Prime 及構形探索程式 MacroModel(Schrodinger， LLC)而進行。 a)-n)對於人化SH348- 1之胺基酸序列的設計人化SH348- 1抗體之建構係根據作為CDR移植 (Proc.Natl.Acad.Sci.USA 8+6 ’ 1〇〇29-1〇〇33( 1 989))之一般性習知方法而進行。接受者（accept〇r)抗體之選擇係根據骨架區内之胺基酸相同性。將SH348-1之骨架區的序列 • -41 - 201208701 與 IgBLAST(Nuc. Acid Res. 36，D25-D30(2007))之全部骨架予以比較，作為結果，L鏈係基於1 00626 1 A對於骨架區之96%的序列相同性而被選擇作為接受者。Η鏈係基於AAC 09074對於骨架區之86%的序列相同性而被選擇作為接受者。L鏈係關於1006261 A、Η鏈係關於AAC 09074之骨架區的胺基酸殘基，將其與關於SH348-1的胺基酸殘基予以排比（alignment)，並鑑定使用不同胺基酸的位置。此等殘基的位置使用以上所建構之SH348-1 之三次元模型予以分析，而可被移植於接受者上的贈與 φ 者（donner)殘基之選擇係根據 Queen et al.(Proc. Natl.

Acad. Sci· USA 86,10029-10033(1989))所給予的基準。藉由將所選擇之若干贈與者殘基植入接受者抗體，如以下之實施例所記載建構人化SH348-1序列。 b)SH348-l重鍵之人化 b)-i)hSH348-l-T4H 型重鏈：將伴隨將序列表之序列編號6所示之S Η 3 4 8 - 1重鏈之胺基酸編號2(異白胺酸）、9(脯胺酸）、1 1(白胺酸）、16( φ 穀胺酸）、17(酥胺酸）、20(異白胺酸）、38(離胺酸）、43( 離胺酸）、46(離胺酸）、69(丙胺酸）、73(榖胺酸）、76(丙胺酸）、80(苯丙胺酸）、83(異白胺酸）、84(天冬醯胺）、85( 天冬醯胺）、88(天冬醯胺）、93(酥胺酸）、95(苯丙胺酸）、1 14(酥胺酸）、1 15(白胺酸）分別取代為纈胺酸、丙胺酸、纈胺酸、丙胺酸、絲胺酸、纈胺酸、精胺酸、穀胺醯胺、穀胺酸、纈胺酸、天冬醯胺酸、纈胺酸、酪胺酸、白胺酸、絲胺酸、絲胺酸、丙胺酸、纈胺酸、酪胺酸、 -42- 201208701 白胺酸、纈胺酸所設計之人化s Η 3 4 8 -1重鏈命名為「 hSH348-l-T4H型重鏈」。將hSH348-1-T4H型重鏈之胺基酸序列示於序列表之序列編號53、將hSΗ348-1 -T4Η 型重鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號5 4。 b)-ii)hSH348-l-T5H 塑重鏈：將伴隨將序列表之序列編號6所示之SH348-1重鏈

的胺基酸編號2 (異白胺酸）、9 (脯胺酸）、1 1 (白胺酸）、1 6 ( 穀胺酸）、17(酥胺酸）、20(異白胺酸）、43(離胺酸）、76( 丙胺酸）、80(苯丙胺酸）、83(異白胺酸）、84(天冬醯胺）、85(天冬醯胺）、88(天冬醯胺）、93(酥胺酸）、1丨4(酥胺酸）、1 1 5 (白胺酸）分別取代為線胺酸、丙胺酸、绳胺酸、丙胺酸、絲胺酸、绳胺酸、穀胺醯胺、類胺酸、酿胺酸 .、白胺酸、絲胺酸、絲胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、纈胺酸所設計之人化 SH348-1 重鍵命名為「 hSH348-卜T5H型重鏈」。將hSH348-l_T5H型重鍵之胺基酸序列示於序列表之序列編號55、將型重鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號5 6。 c)SH348-l輕鏈之人化 c)-i)hSH348-l-TlL 型輕鏈：將W02009/028639(實施例10)、^丨弘^所記載之 hSH348-l-T1L型輕鏈的胺基酸序列示於序列表之序列編號57、將hsimma型重鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號5 8。 c)-ii)hSH348-l-T5L 型輕鏈： •43- 201208701 將伴隨將序列表之序列編號8所示之S Η 3 4 8 - 1輕鏈的胺基酸編號14(絲胺酸）、15(白胺酸）、1 7(天冬醯胺酸）、18(穀胺醯胺）、79(精胺酸）、88(白胺酸）、1〇5(甘胺酸）、1 0 9 (白胺酸）、114 (丙胺酸）分別取代為穌胺酸、脯胺酸、穀胺酸、脯胺酸、離胺酸、纈胺酸、縠胺醯胺、纈胺酸、酥胺酸所設計之人化 SH348- 1 輕鏈命名為「 hSH348-l-T5L型輕鍵」。將hSH348-l-T5L型輕鏈之胺基酸序列示於序列表之序列編號5 9、將h S Η 3 4 8 - 1 - T 5 L 型輕鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號60。 d)SH3 57-l之人化抗體的設計 d) -i)SH357-l之可變區的分子模型建構 SH357-1之重鏈可變區係記載於序列表之序列編號 34。SH3 57-1之輕鏈可變區係記載於序列表之序列編號 38 〇以與上述a)-i)相同方法’選擇2JEL及1A4J為分別對於SH3 57- 1之輕鏈及重鏈之可變區，具有最高序列相同性之序列，CDRLi、CDRL2、CDRL3、CDRH,及 CDRH2 係分別被分配於群組16A、7A、9A、10A、10A。CDRH3 係歸類於e(9)D。根據與a)_ii相同方法’ L鏈係選擇i00626 1A作為接受者、Η鏈係選擇AAC09074作為接受者，而決定人化SH357- 1之序列。其結果，如以下所示，取得關於輕鍵為1類型、關於重鏈為2類型之人化序列。 e) SH357-l重鏈之人化 -44- 201208701 e)-i)hSH357-l-T4H 型重鏈：將伴隨將序列表之序列編號30所示之SH3 57- 1重鏈的胺基酸編號2(異白胺酸）、9(脯胺酸）、1 1(白胺酸）、16( 榖胺酸）、17(酥胺酸）、20(異白胺酸）、38(離胺酸）、43( 灕胺酸）、46(離胺酸）、69(丙胺酸）、73(榖胺酸）、76(丙胺酸）、83(異白胺酸）、85(天冬醯胺）、88(天冬醯胺）、93( 絲胺酸）、9 5 (苯丙胺酸）、1 14 (穌胺酸）、11 5 (白胺酸）分別取代為纈胺酸·、丙胺酸、纈胺酸、丙胺酸、絲胺酸、纈

胺酸、精胺酸、縠胺醯胺、穀胺酸、纈胺酸、天冬醯胺酸、纈胺酸、白胺酸、絲胺酸、丙胺酸、纈胺酸、酪胺

酸、白胺酸、纈胺酸所設計之人化SH357-1重鏈命名為「hSH3 57-l-T4H型重鏈」。將hSH3 57-l-T4H型重鏈之胺基酸序列示於序列表之序列編號6卜將hSH357-l-T4H 型重鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號6 2。 e)-ii)hSH3 57-l-T5H 型重鏈：將伴隨將序列表之序列編號30所示之SH3 57- 1重鏈的胺基酸編號2(異白胺酸）、9(脯胺酸）、1 1(白胺酸）、16( 穀胺酸）、17(酥胺酸）、20(異白胺酸）、43(離胺酸）、76( 丙胺酸）、83(異白胺酸）、85(天冬醯胺）、88(天冬醯胺）、93(絲胺酸）、1 14(酥胺酸）、115(白胺酸）分別取代為纈胺酸、丙胺酸、纈胺酸、丙胺酸、絲胺酸、纈胺酸、榖胺醯胺、纈胺酸、白胺酸、絲胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、纈胺酸所設計之人化SH357- 1重鏈命名為「 hSH3 57-l-T5H型重鏈」。將hSH3 57-卜T5H型重鏈之胺基酸序列示於序列表之序列編號6 3、將h S Η 3 5 7 - 1 - T 5 Η 型重鏈之可變區的胺基酸序列示於序列編號64。 -45 - 201208701 f)SH357-l輕鏈之人化 f)-i)hSH357-l-TlL 型輕鏈：將W02009/028639(實施例10)、ίο·、〕」）所記載之 hSH357-l-TlL型輕鏈的胺基酸序列示於序列表之序列編號65、將hSH357-l-TlL型輕鏈之可變區的胺基酸序列不於序列編號6 6。 f)-ii)hSH357-l-T5L 型輕鏈：將伴隨將序列表之序列編號32所示之SH357-1輕鏈的胺基酸編號7(酥胺酸）、14(絲胺酸）、15(白胺酸）、17( 天冬醯胺酸）、18(縠胺醯胺）、88(白胺酸）、105(甘胺酸）、1〇9(白胺酸）、114(丙胺酸）分別取代為絲胺酸、酥胺酸捕fe酸、榖胺酸、脯胺酸、绳胺酸、穀胺醯胺、绳胺酸、穌胺酸所設計之人化SH3 57- 1輕鏈命名為「 hSH3 57-l-T5L型輕鏈」。將hSH3 57-l-T5L型輕鏈之胺基酸序列示於序列表之序列編號67、將hSH357-l-T5L 型％鍵之可變區的胺基酸序列示於序列編號68。實施例2、廣用表現載體PEF6KCL及pEFlFCCU之製作 ”人類輕鏈表現載體PEF6KCL之建構藉由將質體pEF6/V5-HisB(英傑（Invitrogen)公司）作為核板並使用下述引子進行PCR,取得自BGHpA之後馬上（序列位置21 74)迄至Smal(序列位置2958)為止的DNA 片段（包含：fl複製起始點（〇rigin 〇f replication)及sv 40 啟動子及起始點（pr〇m〇t〇r and 〇rigin)的Dna片段，以下作「片段A」。）。 -46 - 201208701 3 -ccacgcgccctgtagcggcgcattaagc-3’（引子 EFF1)(序列編號69) 5，一aaacccgggagctttttgcaaaagcctagg _3，( 弓| 子 EFsmaR)(序列編號70) 藉由重疊PCR(overlap RCR)將包含：所得到之片段 A與編碼人類κ鏈分泌訊號、人類κ鏈恆定區、及人類 polyA附加訊號之Dna序列的DNA片段（序列編號71 ; 以下作「片段B」。）予以結合。以限制酶ΚρηΙ及Smal ^將所得到之結合片段A與片段B之DNA片段予以消化 ’並連接於經限制酶 ΚρηΙ及 Smal消化之質體 pEF6/V5-HisB(英傑公司）’而建構人類輕鏈表現載體 pEF6KCL，其係於EF1啟動子之下流，具有訊號序列、選殖位置、人類κ鏈恒定區、及人類p〇iy a附加訊號序列。 2) pEFl/KCL 之建構將由上述方法所得到之pEF6KCL並以限制酶ΚρηΙ 及Smal所切出之DNA片段連接於經ΚρηΙ及Smal消化之pEFl/myc-HisB(英傑公司）而建構質體pefikcL。 3) 人類重鏈表現載體pEF1FCcu之建構將DNA片段（序列編號72)，其係包含：編碼人類IgG1 訊说序列及恆定區之胺基酸之DMA序列，以限制酶Nhel 及Pmel予以消化，並與經NheI及pmeI消化之質體 pEFIKCL連結’而建構人類重鏈表現載體pEF1FCCu，其係於EF 1啟動子下流具有訊號序列、選殖位置、人類重鏈怪定區、及人類poly A附加訊號序列。 -47- 201208701 實施例3、抗體表現載體之建構 1) hSH348-l-TlL、及 hSH3 5 7-l-TlL 型輕鏈表現載體之建構合成DNA，其係包含：編碼與序列表之序列編號73 所示之分泌訊號融合之hSH348-l-TlL型輕鏈可變區、及與序列編號7 4所示之分泌訊號融合之h S Η 3 5 7 -1 - T 1 L型輕鏈可變區的基因（英傑公司人工基因合成服務），並藉由將以限制酶Ndel及BsiWI所切出之DNA片段嵌入於將表現人化抗體輕鏈之廣用載體（PEF6KCL)以限制酶 Ndel及BsiWI予以切斷之位置，而建構hSH348-l-TlL 、h S Η 3 5 7 - 1 - T 1 L型輕鏈表現載體。將所得到之表現載體分別命名為 rpEF6KCL/hSH348-l-TlL」、「pEF6KCL/ hSH357-l-TlL」。 2) hSH348-l-TlH、hSH357-l-TlH 型重鏈表現載體之建構合成DNA，其係包含：編碼序列表之序列編號75 所示之hSH348-l-TlH型重鏈可變區、及序列編號76所示之hSH357-l-TlH型重鏈可變區的基因（英傑公司人工基因合成服務），並藉由將以限制酶BlpI所切出之DNA 片段，嵌入於將表現人化抗體 Η鏈之廣用載體 (pEFlFCCU)以限制酶 BlpI予以切斷之位置，而建構 hSH348-卜T1H、hSH357-l-TlH型重鏈表現載體。將所得到之表.現載體分別命名為「pEFlFCCU/hSH348-l-TlH」、「PEFlFCCU/hSH357-l-TlH」。 201208701 3)348-L4、及357-L4型輕鏈表現載體之建構合成DNA，其係包含：分別示於序列表之序列編號 7 8之胺基酸編號2 1〜1 3 7、及序列編號8 0之胺基酸編號 21〜137之編碼 hSH348-l-TlL型輕鏈可變區、及 hSH357-l-TlL 型輕鍵可變區的基因（基因工藝 (GENEART)公司；人工基因合成月艮務）’並藉由將以限制酶NedI及BsiWI所切出之DNA片段，嵌入於將表現人化抗體輕鏈之廣用載體（PEF6KCL)以限制酶NedI及 • BsiWI予以切斷之位置，而建構表現hSH348-l-TlL、及 hSH357-l-TlL型輕鏈之載體。其中，將hSH348-l-TlL 型輕鏈命名為「348-L4」、將hSH357-l-TlL型輕鏈命名為「357-L4」。又’將所得到之表現348-L4之載體命名為「PEF6KCL/3 4 8-L4」、表現357-L4之載體命名為「 pEF6KCL/3 57-L4」。348-L4之核苦酸序列係記載於序列表之序列編號8 1、胺基酸序列係記載於序列編號8 2。 357-L4之核苷酸序列係記載於序列編號83、胺基酸序列 φ 係記載於序列編號84。實施例4、人化抗體之調製 1)人化抗體之生產將1.2X109個之對數增殖期的Freestyle 293F細胞（英傑公司）接種於新鮮之1.2L的FreeStyle 293表現培養基（英傑公司）’並於37°C、8%C〇2培養箱内中，於90rpm 下震盪培養1小時。將3.6mg聚乙烯亞胺（P〇lyscience 公司#24765)溶解於20ml 〇pti_Pr〇 SFM培養基（英傑公司 )，其次，將使用PureLink HiPure質體套組（英傑公司） -49- 201208701 所調製之Η鏈表現載體（0.4mg)及L鏈表現載體（〇.8mg) 懸浮於20ml之Opti-Pro SFM培養基。於20ml聚乙烯亞胺/ Opti-Pro SFM混合液中，添加20ml表現載體/ Opti-Pro SFM混合液並予以緩慢攪拌，進一步放置5分鐘後，添加至Freestyle 293F細胞。將於37°C、8%C0 2 培養箱中7天並於90rpm下震動培養所得到之培養上清液以拋棄式膠囊渡忠（Disposable Capsule Filter)(亞德凡科技（Advantec)#CCS-045-ElH)予以過濾。將藉由 pEF6KCL/hSH348-卜 T1L 與 pEFlFCCU/ hSH3 48-卜T1H之組合所取得之SH348-1的人化抗體命名為「hSH348-l-Tl 」；pEF6KCL/hSH3 57- 1 -T1L 與 PEFlFCCU/hSH3 5 7-l-TlH 之組合所取得之 SH357- 1 的人化抗體命名為「hSH357-l-Tl」。 2)人化抗體之純化將上述1)所得到之培養上清液於重組蛋白質 A(rProtein A)親和性層析（4-6。{：下）與陶瓷氫氧磷灰石（室溫下）之2階段步驟中予以純化。重組蛋白質a親和性層析純化後與陶瓷氫氧磷灰石純化後之緩衝液取代步驟係於室溫下實施。首先，將1 1 00- 1 200ml培養上清液添加至經PBS予以平衡化之MabSelectSuRe(奇異健康生物科技公司製；HiTrap管柱：容積imlx2連結）。培養液完全裝入管柱後’以15-30ml PBS將管柱予以洗淨。其次以2M精胺酸鹽酸鹽溶液（ρΗ4·〇)予以沖提並收集含有^ 體的區段（fracUon^於除鹽管柱（奇異健康生物科1公^ 製；GiTrap除鹽管柱（desalting c〇lume):容積h2連 -50- 201208701 結）中進行將該區段取代為5raM磷酸鈉/50mM MES /2 0mM NaCl/pH6.5的緩衝液。進一步將該經取代之抗體溶液添加至經5mM NaPi/50m]VI MES)/20mM氣化納 /pH6.5的緩衝液予以平衡化之陶瓷氫氧磷灰石管柱（曰本伯樂（Bio-Rad)公司；生物級CHT2-1氫氧磷灰石管柱 ••容積2ml)。實施藉由氯化鈉之線性濃度梯度沖提並收集含有抗體的區段。於除鹽管柱（奇異健康生物科技公司製；GiTrap除鹽管柱：容積5mlx2連結）中進行將該區 ®段液體取代為CBS(10mM檸檬酸緩衝液/14〇mM氣化鈉、ρΗ6·0)。最後於離心超濾膜裝置VIVASpiN2〇(區段分子量30K ;莎多利斯（Sartorius)公司；4°C下）中加以濃縮 ’並將IgG濃度調製為1 .Omg/mi以上而作為純化樣本。實施例5、人化抗體之表現載體之建構 1) 348-L5、及357-L5型輕鏈表現載體之建構合成DNA，其係包含.編碼序列編號86之胺基酸編號21〜137所示之348-L5型輕鏈可變區、及序列編號 φ 88之胺基酸編號21〜137所示之357-L5型輕鏈可變區的基因（基因工藝公司；人工基因合成服務），並藉由將以限制酶Ndel及BsiWl所切出之DNA片段，嵌入於將表現人化抗體輕鏈之廣用載體（pEF6KCL)以限制酶]sidel 及BsiWl予以切斷之位置，而建構348_L5、及357_l5 型輕鏈表現載體。將所得到之表j兔載體分別命名為「 pEF6KCL/348-L5」、及「pEF6KCL/357-L5」。 2) 348-H4、348-H5、357-H4、及 357-H5 型重鏈表現載體之建構 -51 - 201208701 合成DNA，其係包含：編碼分別示於序列表之序列編號90之胺基酸編號20〜138所示之348-H4型重鏈可變區、序列編號92之胺基酸編號20〜138所示之348-H5 型重鏈可變區、序列編號94之胺基酸編號2 0〜1 3 8所示之3 57-H4型重鏈可變區、及序列編號96之胺基酸編號 20〜138之357-H5型重鏈可變區的基因（基因工藝公司 :人工基因合成服務），並藉由將以限制酶B1 p I所切出之DNA片段’嵌入於將表現人化抗體重鏈之廣用載體 (p E F 1 F C C U)以限制酶B1 p I予以切斷之位置，而建構 · 348-H4、348-H5、357-H4、及 357-H5 型重鏈表現載體。將所得到之表現載體分別命名為「PEF1FCCU/348-H4」、「pEFlFCCU/348-H5」、「pEF 1 FCCU/3 5 7-H4」、及「PEF1FCCU/3 57-H5」。各抗體之序列記載於第1圖、第2圖。實施例6、人化抗體之調製 1)人化抗體之生產根據與實施例4所記載之方法相同的方法取得抗體❶ φ 分別另夺藉由 pEFlFCCU/348-H4 與 pEF6KCL/348-L4 之組合所取得之 SH348- 1之人化抗體命名為「348-H4 -3 4 8-L4」、將藉由 pEFlFCCU/348-H4 與 pEF6KCL/348-L5 之組合所取得之 SH348-1之人化抗體命名為「348-H4-348-L5」、將藉由 pEFlFCCU/348-H5 與 pEF6KCL/348-L4 之組合所取得之SH348-1之人化抗體命名為「348-H5-348-L4」、將藉由 pEFlFCCU/348-H5 與 pEF6KCL/348-L5 之組合所取得之SH348-1之人化抗體命名為「348-H5- -52- 201208701

348-L5 j、將藉由 PEF1FCCU/357-H4 與 pEF6KCL/357-L4 之組合所取得之SH357- 1之人化抗體命名為「357-H4-357-L4」、將藉由 PEF1FCCU/357-H4 與 pEF6KCL/357-L5 之組合所取得之SH357- 1之人化抗體命名為「357-H4-357-L5」、將藉由 PEF1FCCU/3 5 7-H5 與 pEF6KCL/3 5 7-L4 之組合所取得之SH357- 1之人化抗體命名為「357-115-3 5 7-L.4 j、將藉由 PEF1FCCU/357-H5 與 pEF6KCL/357-L5 之組合所取得之SH357-1之人化抗體命名為「357-H5-357-L5」、將包含：藉由 PEF1FCCU/348-H4 與 PEF6KCL/ 3 5 7-L4之組合所取得之SH348·1之人化重鏈與沾357-1 之人化輕鏈而成之抗體命名為「348-H4-357_L4」、將包含：藉由 pEFlFCCU/348-H4 與 pEF6KCL/357-L5 之組合所取得之SH348-1之人化重鏈與SH357-1之人化輕鏈而成之抗體命名為「348-H4-357_L5」、將包含：藉由 pEFlFCCU/348-H5 與 pEF6KCL/357-L4 之組合所取得之 SH348-1之人化重鏈與SH357-1之人化輕鏈而成之抗體命名為「348-H 5-357-L4」、將包含：藉由 pEFlFCCU/ 348-H5與pEF6KCL/3 57-L5之組合所取得之SH348- 1之人化重鏈與SH357-1之人化輕鏈而成之抗體命名為「348 -H5-357-L5」、將包含：藉由 pEFlFCCU/3 57-H4 與 pEF6KCL/348-L4之組合所取得之SH348- 1之人化輕鏈與SH3 57-1之人化重鏈而成之抗體命名為「357-H4-348-L4」、將包含：藉由 pEFlFCCU/357-H4 與 pEF6KCL/348-L5之組合所取得之SH348-1之人化輕鏈與SH357-1之人化重鏈而成之抗體命名為「3 57-H4-348-L5」、將包含：藉由 PEF1FCCU/3 5 7-H5 與 pEF6KCL/3 4 8-L4 之組合所取 -53- 201208701 得之SH348- 1之人化輕鏈與之人化重鏈而成之 .抗體命名為「357-H5-348-L4」、將包含：藉由pEF1FCCU/ 357-H5與pEF6KCL/3 48-L5之組合所取得之SH348-1之人化輕鏈與SH3 57- 1之人化重鏈而成之抗體命名為「357 -H5-348-L5」。 2)人化抗體之純化將上述1)所得到之培養上清液於重組蛋白質A親和性層析（4-61下）與陶瓷氫氧磷灰石（室溫下）之2階段步驟中予以純化。重組蛋白質A親和性層析純化後與陶瓷氫氧磷灰石純化後之緩衝液取代步驟係於室溫下實施。首先，將1 1 00-1 200ml培養上清液添加至經pBS予以平衡化之MabSelectSuRe(奇異健康生物科技公司製； HiTrap管柱：容積lmix2連結）。培養液完全裝入管柱後，以15-30ml PBS將管柱予以洗淨。其次以2M精胺酸鹽酸鹽溶液（ρΗ4·〇)予以沖提並收集含有抗體的區段。於除鹽官柱（奇異健康生物科技公司製；GiTrap除鹽管柱 .谷積5mlx2連結）中進行將該區段取代為5rnM磷酸鈉 /50mM MES /20mM NaCl/PH6.5的緩衝液。進一步將該經籲取代之抗體溶液添加至經5mM磷酸鈉/5〇mM MES/20mM NaCl/pH6.5的緩衝液予以平衡化之陶瓷氫氧磷灰石管柱 (曰本伯樂公司，生物級CHT2-1氫氧磷灰石管柱：容積 2ml)。實施藉由氣化鈉之線性濃度梯度沖提並收集含有抗體的區段。於除鹽管柱（奇異健康生物科技公司製； GiTrap除鹽管柱：容積5mix2連結）中進行將該區段液體取代為CBS(10mM檸檬酸緩衝液/14〇π1μ氣化鈉、PH6.0)

。最後於離心超濾膜裝置VIVASPIN20(區段分子量30K -54 - 201208701 ;莎多利斯公司；4°C下）中加以濃縮，並將IgG濃度調製為1.0mg/ml以上而作為純化樣本。實施例7、抗ΕΡίίΑ2抗體之Kd値的測定如下進行於實施例6所得到之抗EPHA2抗體與纖維第ΙΠ型黏連蛋白域之解離係數測定。調製組織胺'•第III型黏連蛋白域（426-540)(—種多胜’其係包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426至 540所示之胺基酸序列而成之多胜且於胺基酸末端附加 φ 有組胺酸標記）。使用Biacore T100(奇異健康生物科技（版））’並根據將抗體捕捉（c a p t u r e)至經固定化之抗人類 IgG(Fc)抗體、將抗原作為分析物予以測定之捕捉法 (capture method)而進行。根據胺基搞合（arnine coupling)

法’使抗人類IgG(Fc)抗體（人類抗體捕捉套組（Human antibody capture kit);奇異健康生物科技（股））共價鍵結〜10,000RU至感測晶片CM5(BIAcore公司）。亦同樣固定化至參考胞（reference cell)。使用 HBS-EP(10mM HEPES pH7.4、0,1 5M NaC卜 3mM EDTA、0.05% Surfactant 鲁P20)作為流動緩衝液。將抗人類IgG(Fc)抗體固定化至晶片上，並以流速10pL/分添加約20nM之抗體溶液60秒鐘後，以流速30μ1/分添加組織胺一第ΙΠ型黏連蛋白域 (426-540)之系列稀釋溶液（3.1 3-50ηΜ) 120秒鐘，接著監測1 80秒鐘之解離相。以流速1 〇μΐ/分添加作為再生溶液之3Μ氣化鎂30秒鐘。數據分析係使用分析軟體（BIAc〇re T100評價軟體2.0.1版）之1對1結合模式，並算出結合速率係數kon、解離速率係數koff及解離係數（Kd ; Kd = koff /kon) ° -55- 201208701 其結果得知：於將源自於SH348-1之人化重鏈與源自於 SH357- 1 之人化輕鏈予以組合之抗體，相較於 SH348-1之人化抗體或SH357-1之人化抗體，Kd値顯著降低且對於抗原之結合活性有所上升（表1)。相對於人化抗體 h348-l T1 之 Kd 値 8.29(nM)，348-H4-357-L4 為 0.37(nM)、348H4-357-L5 為 0.37(nM)、348-H5-3 57-L4 為 0.32(nM)、348-H5-357-L5 為 0·30(ηΜ)，結合活性顯著上升。 [表1]

No. Name kon [1 /Mb] koff [1/s] KD hM] 1 348-H4-348-L4 1.11 E-HD6 A.2QE<B 3.86 2 348-H4-348-L5 1.33E-HD6 4.0ΘΕ-06 3.C6 3 348-H4-357-L4 2.59E-+06 9.01 E-04 0.35 4 348-H4-357-L5 2.21 E-HD6 8.12E-04 0.37 5 348-H5-348-L4 1.63E-HD6 4.02E-0Q 2.47 6 348-H5-348-L5 1.71 E-KQ 3.78 E-OQ 2.21 7 348-H5-357- L4 2.58E-HD6 8.24 E-04 0.32 8 348-H5-357-L5 2.52 E<6 7.52 E-04 0.30 9 357-H4-348-L4 1.98 EK^ 1.39E-01 70.18 10 357-H4-348-L5 6.37E-KD6 4.62 E-01 72.50 11 357-H4-357-L4 2.51 E-+06 1.CGE-02 4.32 12 357-I-M-357-LJ5 2.47E-+06 9.71 E-CG 3.93 13 357-H5-348-L4 9.19Ε-+ΟΘ 5.51 E-01 60.01 14 357-H5-348-L5 8.24E-HD6 3.92E-01 47.57 15 357-H5-357-L4 3.27E-+05 1.18E-02 3.62 16 357-H5-357-L5 3.07E-+06 9.98E-<G 3.25 17 hSH348-1-T1 6.34 E<6 5.25 EHD6 8.29 -56- 201208701 實施例8、ADCC活性之測定將導入有E G F P基因之前列腺癌細胞株p C - 3作為標的細胞、將人類末梢血淋巴球（BIOPREDIC #PBL 003 ;以下作「人類PBL」）作為效應細胞（effect〇r cell)，並藉由測定釋放於培養上清液中之EGFP的螢光量，算出抗體依賴性細胞傷害活性（ADCC活性）。將懸浮於含有 10%超低IgG胎牛血清（Ultralow IgG FBS)(英傑公司 #16250-078)之不含酚紅的 RPMI1 640(英傑公司 Φ #1 1 835_〇30)培養基之表現EGFP的PC-3細胞以1 X 1〇4 個/孔接種於96孔微量盤，並於37。(：、5%CO 2的條件下培養一晚。去除培養基後，添加以新鮮培養基稀釋之人化抗EPHA2抗體或同型對照抗體之hIgGl(Alexis Biochemicals #ALX -804- 1 33)(最終濃度分別為〇·ΐ、i.o 、lOpg/ml)’進一步添加2χ1〇5個/孔的人類pbl，並於 37°C、5%CO 2的條件下培養一晚。將培養上清液予以回收並測定上清液中的螢光量（485/53 5nm)。ADCC活性所 ^ 導致之細胞溶解率係以下式算出。細胞溶解率（％) = (A-B)/(C-B)xl〇〇 A .樣本孔之培養上清液的營光量 B .未添加抗體、效應細胞孔之培養上清液的營光量之平均値。 C :以最終濃度1%的Triton-Xl〇〇溶解標的細胞孔之培養上清液的螢光量之平均値。第3圖係3樣本之平均値、誤差槓係顯示標準偏差。其結果顯示：於〇.kg/ml之抗體濃度，348_H4_357_l4 -57- 201208701 、348-H4-357-L5·、及 348-H5-357-L5 顯示高於 hSH3 57-l-Tl 及 357-H4-357-L4 之 ADCC 活性；於 O.lpg/ml 之抗體濃度的 348-H4-357-L4、348-H4-357-L5 、及348-H5-357-L5之ADCC活性，則與較其高於1〇倍濃度之 1· 〇gg/ml 的 hSH357-l-Tl 及 3 57-H4-357-L4 之 ADCC活性相同程度。實施例9 .抗原專一性結合

為驗證人化抗 EPHA2抗體之結合專一性，藉由 Cell-ELISA法檢討與人類EPHA2之自第439至534個之胺基酸序列（序列表之序列編號4之胺基酸編號439至 5 3 4所示之胺基酸序列）相同性高之蛋白質的結合性。相同性檢索係利用NCBI的BLAST而進行，並針對人類蛋白質檢索人類EPHA2之自第439至534個之胺基酸序列。使用命中之蛋白質中之上位2蛋白質（EPHA3同型 a(EPHA3 isoform a)(以下及圖式中作「EPHA3a」）及人類蛋白酪胺酸填脂酶、受體型、sigma同型4(以下及圖中作「PTPRS -4」））進行分析。由於此等蛋白質皆係N末端成為細胞外區域之穿透膜蛋白.質’為製作一種建構體（construct)，其係表現於N 末端附加FLAG-Tag之蛋白質，首先，將Gateway載體轉換系統（Vector Conversion System)(英傑公司 #1 1 828-029)之讀框（Reading Frame)B 嵌入於將 pFLAG-myc-CMV19(Sigma-Aldrich 公司 #E8658)以 Hind III與Bgl II予以切斷並經平滑化的位置，而製成「 pFLAG-G W」。其次，於經選殖編碼去除訊號序列（自開 ⑧ -58- 201208701 始密碼至第23個之胺基酸序列）之人類ΕΡηA2、去除訊號序列（自開始密碼至第2 0個之胺基酸序列）之人類 EPHA3a、或去除訊號序列（自開始密碼至第29個之胺基酸序列）之人類PTPRS-4之胺基酸序列的基因之入門載體（entry vector)與pFLAG-GW之間，使用LR選殖酶（英傑公司#11 79 1-0 19)進行重組反應，而製成表現載體「 pFLAG -EPHA2」、「pFLAG_EPHA3a」、「pFLAG-PTPRS-4

將使用 Lipofectamine 2000(英傑公司 #11668-019)而將 pFLAG-GW、pFLAG-EPHA2、pFLAG-EPHA3a、或 pFLAG-PTPRS-4予以轉染之293ανβ3細胞（使HEK29細胞安定表現黏合素aV及黏合素β3的細胞）接種於96孔盤，並於含有10% FBS之DMEM中，於37。(：、5%CO ：之條件下培養一晚。棄置培養基並添加以含有5%FBS之

PBS稀釋之人化抗EPHA2抗體（5pg/mL或50pg/mL)、作為人化抗體之陰性對照之hIgG(5pg/mL或50pg/mL)(傑 φ 克森免疫研究實驗室#109-035-098)、抗- FLAG M2單株抗體（0.02pg/mL 或 0.1pg/mL)(Sigma #F3165:及於圖式中係作「Anti-FLAG mAb」）、作為 Anti-FLAG mAb 之陰性對照之 mIgGl(0_02pg/mL 或 0.1pg/mL)(BD Bioscience #553447)，並於4°C下培養1小時。以含有5%FBS之PBS 將細胞洗淨後，為檢測人化抗EPHA2抗體及其陰性對照抗體，添加以含有5%FBS之PBS稀釋500倍之過氧化物酶AffiniPure山羊抗人類IgG Fey片段專一性（Peroxidase

AffiniPure Goat Anti-Human IgG FcyFragment Specific)( $ -59- 201208701

傑克森免疫研究實驗室#109-035-098);為檢測 Anti-FLAG mAb及其陰性對照抗體，添加稀釋5〇〇倍之山羊抗小鼠IgG過氧化物酶共軛物（G〇at anti_Mouse IgG

Peroxidase Conjugate)(Millip〇re#AP 181P)，並於 4°C 下培養1小時。以含有5%FBS之PBS將細胞洗淨後，藉由 OPD進行顯色反應’以1 M氣化氫將反應予以停止後，測定490nm的吸光度。第4圖係3樣本之平均値、誤差槓所示為標準偏差。使用Anti-FLAG mAb確認各蛋白質於細胞膜上之表現量時，確認了任一蛋白質於細胞膜上之相同程度的表現（第4圖A)。另一方面’相對於為人化抗EPHA2抗體之 hSH357-l-Tl、348-H4-357-L4、348-H4-357-L5、 348-H5-357-L5強力結合於表現人類EPHA2的細胞，對於表現人類EPHA3a及人類PTPRS -4的細胞，僅顯示與轉染為陰性對照之pFLAG-GW的細胞相同程度之結合性 (第4圖Β·Ε)。根據以上結果顯示：此等人化抗EPHA2 抗體係專一性識別並結合於人類ΕΡΗΑ2。實施例1 0、於活體内抗腫瘤活性之確認將人類乳癌細胞株MDA-MB-23 1細胞予以胰蛋白酶處理並自培養瓶予以剝離後，懸浮於含有1 0%FB S之 Leibovitz's L-1 5中後予以離心並去除上清液。將細胞以同培養基洗淨1次後，懸浮於BD Matrigel基質膜（BD Matrigel Basement Membrane Matrix)(BD 生物科學 #3 54234)，並以 5χ 106細胞/隻移植於6週齡的裸小鼠 (CAnN.Cg-Foxnl〔 nu〕/CrlCrlj [ Foxnlnu/ Foxnlnu): 201208701 曰本查理斯河（Charles River))的右腋窩部第2第3乳頭間皮下。將移植日作為第〇天並於第1 7天進行分組，於第17、24、31天以 O.Olmg/隻或 0.03mg/隻投予 hSH357-l-Tl 、348-H4-357-L4、348-H4-3 57-L5、或 348-H5-357-L5。賦形劑（Vehicle)組係投予與抗體等量之賦形劑。腫瘤體積係於第17、24、3 1、3 8天測定。第5 圖係每1組9隻之腫瘤體積的平均値、誤差槓所示為標準誤差。又’統計分析係使用第3 8天時間點之値，並藉 ^ 由 Dunnett’s多重比較試驗而進行（*:p<〇.〇5、**:p < 〇·〇1、*** : P < 0.001)。其結果：於 hSH357-l-Tl 、348-H4-357-L4、 34 8-H4-3 5 7-L5、348-H5-3 5 7-L5 之全部之人化抗 EPHA2 抗體，於0.0 3 mg/隻投予量確認有意義的抗腫瘤效果，而關於 hSH3 5 7-l-T 卜 348-H4-3 57-L5、348-H5-3 57-L5，於 0.0 1 m g/隻亦確認有意義的抗腫瘤效果（第5圖A - D)。 [產業上利用之可能性]

本發明之抗EPHA2抗體係具有抗腫瘤活性，而包含該抗EPHA2抗體之醫藥組成物得以成為抗癌劑。 [寄存編號] FERM BP- 1 0836 FERM BP- 1 0837 [序列表自由文字（free text)] 序列編號3 : EPHA2變異體序列序列編號53 : 348-H4 序列編號54 : 348-H4可變區 -61 - 201208701

序列編號55 : 348-H5 序列編號56 : 348-H5可變區序列編號57 : 348-L4 序列編號58 : 348-L4可變區序列編號59 : 348-L5 序列編號60 : 348-L5可變區序列編號6 1 : 35 7-H4 序列編號62 : 357-H4可變區序列編號63 : 357-H5 序列編號64 : 357-H5可變區序列編號65 : 35 7-L4 序列編號66 : 357-L4可變區序列編號67 : 357-L5 序列編號68 : 357-L5可變區序列編號69 :引子EFF1 序列編號70 :引子EfsmaR 序列編號7 1 :人類κ訊號序列+κ恆定區+polyA 序列編號72 :人類IgG訊號序列+ +恆定區序列編號73 :訊號序列+hSH348-l-TlL可變區序列編號74 :訊號序列+3 57-T1L可變區序列編號75 : hSH348-l-TlH可變區序列編號76 : h3 57-l-TlH可變區序列編號 77 : hSH348-TlL 序列編號 79 : hSH357-TlL 序列編號8 1 : 348-L4 -62- 201208701 序列編號83 : 357-L5 序列編號85 : 348-L5 序列編號87 : 357-L5 序列編號89 : 348-H4 序列編號91 : 348-H5 序列編號93 : 357-H4 序列編號95 : 357-H5 【圖式簡單說明】

第1-1圖： 1) 357-L4:表示357-L4之可變區之胺基酸序列的圖。 2) 35 7-L5 :表示357-L5之可變區之胺基酸序列的圖。 3) 3 5 7-H4 :表示357-H4之可變區之胺基酸序列的圖。 4) 357-H5:表示357-H5之可變區之胺基酸序.列的圖。 5) SH34 8- 1—CDRL1 :表示 SH348-1 之 CDRL 1 之胺基酸序列的圖。 6)SH348- 1_CDRL2 :表示 SH34 8-1 之 CDRL2 之胺基酸序列的圖。 • 7)SH348-1_CDRL3:表示 SH348-1 之 CDRL3 之胺基酸序列的圖。 8)SH348-1_CDRH1 ：表示 SH3 48 - 1 之 CDRH 1 之胺基酸序列的圖。 9)SH348-1_CDRH2 :表示 SH348- 1 之 CDRH2 之胺基酸序列的圖。第1-2圖： 10)SH348-1_CDRH3:表示 SH348-1 之 CDRH3 之胺基酸序列的圖。 -63- 201208701 1 1 )348-L4 ： 12) 348-L5 ： 13) 348-H4 ： 14) 348-H5 : 15) SH3 57-1 序列的圖。 16) SH357-1 序列的圖。 17) SH357-1 序列的圖® 18) SH357-1 酸序列的圖第1-3圖： 19) SH357-1 酸序列的圖 20) SH357-1 酸序列的圖第2-1圖： 1) 序列編號恆定區、及/ 列的圖。第2-2圖： 2) 序列編號區之胺基酸表示之可變區之胺基酸序.歹彳的圖。表示348 L5之可變區之胺基酸序列的圖。表示348-H4之可變區之胺基酸序列的圖。表示348-H5之可變區之胺基酸序列的圖。 _CDR_L1 .表 7F StI357 l 之 CDRL1 之胺基酸 _CDR_L2 .表不SI13571之CDRL2之胺基酸 _CDR-L3 :表示SH3 5 7- 1之CDRL3之胺基酸 -CDR-H1 .表示 SH357-1 之 CDRH1 之胺基 -CDR_H2 .表示 SH3 5 7-1 之 CDRH2 之胺基〇 -CDR-H3 ·表示 SH3 5 7- 1 之 CDRH3 之胺基 7 1 ·表不編號人類κ鏈分泌訊號、人類κ鏈、類polyA附加訊號之片段的核苷酸序 7 2 :表示包含編碼人類〗g 〇 1訊號序列及恆定之DNA序列的DNA片段的核苷酸序列的圖 -64 - 201208701 3)序列編號7 3 :表示包含編碼與分泌訊號融合之 hSH348-l-TlL型輕鏈可變區之基因的DNA的核苷酸序列的圖。第2-3圖： 4) 序列編號74 :表示包含編碼與分泌訊號融合乏 hSH357-l-TlL型輕鏈可變區之基因的DNA的核苷酸序列的圖。

5) 序列編號75:表示包含編碼hSH348-l-TlH犁重鏈可變區之基因的DNA的核苷酸序列的圖。 6) 序列編號76 :表示包含編碼hSH357-l-TlH塑重鏈可變區之基因的DNA的核苷酸序列的圖。第2-4圖： 7) 序列編號77 : hSH348-卜T1L :表示hSH348-卜T1L之核苷酸序列的圖。 8) 序列編號 78 : hSH348-卜T1L :表示 hSH348-；l-TlL 之胺基酸序列的圖。第2-5圖： • 9)序列編號 79 : hSH357-l-TlL:表示 hSH3 57-l-TlL 之核苷酸序列的圖。 10)序列編號 80 : hSH357-l-TlL :表示 hSH357-l-TlL 之胺基酸序列的圖。第2-6圖： 1 1)序列編號8 1 : 348-L4 :表示348-L4之核苷酸序列的圖。 12)序列編號82 : 348-L4 :表示348-L4之胺基酸序列的圖0 -65- 201208701 第2-7圖： 13) 序列編號83 : 357-L4 :表示357-L4之核苷酸序列的圖。 14) 序列編號84 : 357-L4 :表示357-L4之胺基酸序列的圖。第2-8圖： 15) 序列編號85 : 348-L5 :表示348-L5之核苷酸序列的圖。

16) 序列編號86 : 348-L5 :表示348-L5之胺基酸序列的圖。第2-9圖： 17) 序列編號87 : 357-L5 :表示357-L5之核苷酸序列的圖。 18) 序列編號88 : 357-L5 :表示357-L5之胺基酸序列的圖。第2-10圖： 19) 序列編號89 : 348-H4 :表示348-H4之核苷酸序列的圖。第2-1 1圖： 20) 序列編號90 : 348-H4 :表示348-H4之胺基酸序列的圖。第2-12圖： 2 1)序列編號9 1 : 348-H5 :表示348-H5之核苷酸序列的圖。 ⑧ -66 - 201208701 第2-13圖： 22) 序列編號92 : 348-H5 :表示348-H5之胺基酸序列的圖。第2-14圖： 23) 序列編號93 : 357-H4 :表示357-H4之核苷酸序列的圖。第2-15圖： 24) 序列編號94 :表示357-H4之胺基酸序列的圖。 Φ 第2-16圖： 25) 序列編號95 : 357-H5 :表示357-H5之核苷酸序列的圖。第2-17圖： 26) 序列編號96 : 357-H5 :表示357-H5之胺基酸序列的圖。第3圖：表示各抗體之ADCC活性之測定結果的圖；横軸係表示抗體濃度、縱軸係表示細胞溶解率；黑三角（▲) φ係對照抗體之hlgGl、黑圓點（·）係表示hSH357- 1 1H、黑四角（_)係表示357-H4-357-L4、白圓點（〇)係表示 348-H4-3 5 7-L4、白三角（△)係表示 348_H4_357_L5、白四角（□)係表示 348-H5-357-L5 。第4圖：係表示各抗體之抗原專一性結合的圖；A)係表示使用Anti-FLAG mAb所確認之各蛋白質之於細胞膜上的表現量的結果，顯示已確認任一蛋白質之於細胞膜上之相同程度的表現；B)係表示關於人化抗EPha2抗體之 hSH3 5 7-l-Tl之對於各蛋白質之結合結果；c)係表示關 -67- 201208701 於 348-H4-357-L4 ; D)係表示關於 348-H4-357- 表不關於348-H5-357-L5之結果，顯示相對於 ’各抗體對於表現人類Ερί1Α2之細胞之強力結表現人類EPHA3a及人類PTPRS-4之細胞，僅性對照之轉染pFLAG-GW細胞之相同程度的結第5圖：表示各抗體之於活體内抗腫瘤活性結 A)係表示關於 hSH357-l-Tl 、B)係表 348-H4-357-L4、C)係表示關於 348-H4-357-L5 示關於348-H5-357-L5之結果；横轴係表示人胞株MDA-MB-231細胞移植後之經過天數、縱腫瘤之體積。【主要元件符號說明】無0 乙5 、 E)係 B)〜E)中合，對於顯示與陰合性。果的圖；示關於、D)係表类員乳癌細軸係表示 -68- 201208701 序列表 <110〉第一三共株式會社 <120〉抗EPHA2抗體及其使用 <130> DSPCT-FP1128 <150> JP2010-158221 <151〉2010-07-12 <160> 96 <170〉Patent In 3.4 版 <210〉 1 •<211> 2931 <212〉 DMA <213〉人類 <220〉 <221> CDS <222〉⑴..（2931) <400〉 1 atg gag etc cag gca gee ego gee tgc ttc gee ctg ctg tgg ggc tgt 48

Met Glu Leu Gin Ala Ala Arg Ala Cys Phe Ala Leu Leu Trp Gly Cys 1 5 10 15 A geg ctg gee geg gee geg geg geg cag ggc aag gaa gtg gta ctg ctg 96

Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala 6ln Gly Lys Glu Val Val Leu Leu 20 25 30 gac ttt get gca get gga ggg gag etc ggc tgg etc aca cac ccg tat 144

Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly Glu Leu Gly Trp Leu Thr His Pro Tyr 35 40 45 ggc aaa ggg tgg gac ctg atg cag aac ate atg aat gac atg ccg ate 192 201208701

Gly Lys 6ly Trp Asp Leu Met Gin Asn lie Met Asn Asp Met Pro lie 50 55 60 tac atg tac tcc gtg tgc aac gtg atg tct ggc gac cag gac aac tgg 240

Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly Asp Gin Asp Asn Trp 65 70 75 80 etc ege acc aac tgg gtg tac ega gga gag get gag cgt ate ttc att 288

Leu Arg Thr Asn Trp Val Tyr Arg Gly Glu Ala Glu Arg lie Phe lie 85 90 95 gag etc aag ttt act gta cgt gac tgc aac age ttc cct ggt ggc gee 336

Glu Leu Lys Phe Thr Val Arg Asp Cys Asn Ser Phe Pro Gly Gly Ala 100 105 110 age tec tgc aag gag act ttc aac etc tac tat gee gag teg gac ctg 384

Ser Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu 115 120 125 gac tac ggc acc aac ttc cag aag ege ctg ttc acc aag att gac acc 432

Asp Tyr Gly Thr Asn Phe Gin Lys Arg Leu Phe Thr Lys lie Asp Thr 130 135 140 att geg ccc gat gag ate acc gtc age age gac ttc gag gca ege cac 480 lie AJa Pro Asp Glu lie Thr Val Ser Ser Asp Phe Glu Ala Arg His 145 150 155 160 gtg aag ctg aac gtg gag gag ege tec gtg ggg ccg etc acc ege aaa 528 201208701

Val Lys Leu Asn Val 6lu Glu Arg Ser Val Gly Pro Leu Thr Arg Lys 165 170 175 I乾 ttc tac ctg goc ttc cag gat ate ggt goc tgt gtg gcg c;tg etc

O/D

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gin Asp l|e 6jy A!a 〇ys va| Ala Leu Leu 180 185 190 tcc gtc cgt gtc tac tac aag aag tg〇〇〇〇 g3g 〇tg ctg cag ggc ctg 624

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Lys Cys Pro Glu Leu Leu Gin Gly Leu 195 200 205 gcc cac ttc cct gag aco ate gcc ggc tet gat gca cct tcc ctg gcc 672

Ala His Phe Pro Glu Thr lie Ala G|y Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ala 210 215 220 act gtg gcc ggc acc tgt gtg gac cat gcc gtg gtg cca ccg ggg ggt 720

Thr Val Ala Gly Thr Cys Val Asp His Ala Val Val Pro Pro Gly Gly 225 230 235 240 gaa gag ccc cgt atg cao tgt gca gtg gat ggc gag tgg ctg gtg ccc 768

Glu Glu Pro Arg Met His Cys Ala Val Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro 245 250 255 att ggg cag tgc ctg tgc cag gca ggc tac gag aag gtg gag gat gcc 816 lie Gly Gin Cys Leu Gys Gin Ala Gly Tyr Glu Lys Val Glu Asp Ala 260 265 270 tgc cag g〇c tgc teg cct gga ttt ttt aag ttt gag gca tet gag age 864 201208701

Cys Gin Ala Cys Ser Pro Gly Phe Phe Lys Phe Qlu Ala Ser Glu Ser 275 280 285 ccc tgc ttg gag tgc cct gag cac acg ctg cca tcc cct gag ggt g〇c Pro Cys Leu Glu Cys pr〇 Glu His Thr Leu Pro Ser Pro Glu Gly Ala 290 295 300 龍g tcc tgc gag tgt gag gaa ggG ttc ttc egg gca cct cag gac cca

Thr Ser Cys Glu Cys Glu Glu Gly Phe Phe Arg Ala Pro Gin Asp Pro 305 310 315 320 teg atg cct tgc

Ala Ser Met Pro Cys aca ega ccc ccc tcc gcc cca cac tac etc aca Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro His Tyr Leu Thr 325 330 335 f〇56gtg δδ〇 3tg gCC aag gag 〇tg CgC acg CCC cct cag

Ala Val Gly Met Gly Ala Lys Val Qlu Leu Arg Trp Thr Pro Pro Gin 340 345 350 f^4agc ggc cSc gag gac att gtc tac age gtc acc tgc gaa cag

Asp Ser Gly Gly Arg Glu Asp lie Val Tyr Ser Val Thr Cys Glu Gin 355 360 365 tgc 1152 tgg ccc gag tet ggg gaa tgc ggg ccg tgt gag gcc agt gtg ege

Cys Trp Pro Glu Ser Gly Glu Cys Gly Pro Cys Glu Ala Ser Val Arg 370 375 380 tac teg gag cct cct cac gga ctg acc ege acc agt gtg aca gtg age 1200 201208701

Tyr Ser Glu Pro Pro His Gly Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val Ser 385 390 395 400 gac ctg gag ccc cac atg aac tac acc ttc acc gtg gag gcc cgc aat 1248

Asp Leu Glu Pro His Met Asn Tyr Thr Phe Thr Val Glu Ala Arg Asn 405 410 415 ggc gtc tea ggc ctg gta acc age cgc age ttc cgt act gcc agt gtc 1296

Gly Val Ser Gly Leu Val Thr Ser Arg Ser Phe Arg Thr Ala Ser Val 420 425 430 age ate aac cag aca gag ccc ccc aag gtg agg ctg gag ggc cgc age 1344

Ser lie Asn Gin Thr Glu Pro Pro Lys Val Arg Leu Glu Gly Arg Ser 435 440 445 acc acc teg ett age gtc tee tgg age ate ccc ccg ccg cag cag age 1392

Thr Thr Ser Leu Ser Val Ser Trp Ser Ile Pro Pro Pro Gin Gin Ser 450 455 460 ega gtg tgg aag tac gag gtc act tac cgc aag aag gga gac tee aac 1440

Arg Val Trp Lys Tyr Glu Val Thr Tyr Arg Lys Lys Gly Asp Ser Asn 465 470 475 480 age tac aat gtg cgc cgc acc gag ggt ttc tee gtg acc ctg gac gac 1488

Ser Tyr Asn Val Arg Arg Thr Glu Gly Phe Ser Val Thr Leu Asp Asp 485 490 495 ctg gcc cca gac acc acc tac ctg gtc cag gtg cag gca ctg aeg cag 1536 201208701

Leu Ala Pro Asp Thr Thr Tyr Leu Val Gin Val Gin Ala Leu Thr Qln 500 505 510 gag ggc cag ggg gcc ggc age aag gtg cac gaa ttc cag aeg tee 1584 Tl , p

Glu Gly Gin 6ly Ala Gly Ser Lys Val His Glu Phe Gin Thr Leu Ser 515 520 525 ccg gag gga tet ggc aac ttg geg gtg att ggc ggc gtg get gtc ggt 1632

Pro Glu Gly Ser Gly Asn Leu Ala Val lie Gly Gly Val Ala Val Gly 530 535 540 gtg gtc ctg ett ctg gtg ctg gca gga gtt ggc ttc ttt ate cac ege 1680 .

Val Val Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe lie His Arg 545 550 555 560 agg agg aag aac cag cgt gcc ege cag tee ccg gag gac gtt tac ttc 1728

Arg Arg Lys Asn Gin Arg Ala Arg Gin Ser Pro Glu Asp Val Tyr Phe 565 570 575 tee aag tea gaa caa ctg aag ccc ctg aag aca tac gtg gac ccc cac 1776 .

Ser Lys Ser Glu Gin Leu Lys Pro Leu Lys Thr Tyr Val Asp Pro His 580 585 590 aca tat gag gac ccc aac cag get gtg ttg aag ttc act acc gag ate 1824

Thr Tyr Glu Asp Pro Ash 6ln Ala Val Leu Lys Phe Thr Thr Glu lie 595 600 605 cat cca tee tgt gtc act egg cag aag gtg ate gga gca gga gag ttt 1872 201208701

His Pro Ser Cys Val Thr Arg Qln Lys Val Ile Gly Ala 6ly Glu Phe 610 615 620 ggg gag gtg tac aag ggc atg ctg aag aca tcc teg ggg aag aag gag 1920

Gly Glu Val Tyr Lys Gly Met Leu Lys Thr Ser Ser Gly Lys Lys Glu 625 630 635 640 gtg^ccg gtg gcc ate aag aeg ctg aaa gcc ggc tac aca gag aag cag Val Pro Val Ala He Lys Thr Leu Lys Ala Gly Tyr Thr Glu Lys Gin

645 650 655 ega gtg gac ttc etc ggc gag gee ggc ate atg ggc cag ttc age cac 2016

Arg Val Asp Phe Leu Gly 6lu Ala Gly lie Met Gly Gin Phe Ser His 660 665 670 cac aac ate ate ege eta gag ggc gtc ate tec aaa tac aag ccc atg 2064

His Asn lie lie Arg Leu Glu Gly Val lie Ser Lys Tyr Lys Pro Met 675 680 685 atg ate ate act gag tac atg gag aat ggg gcc ctg gac aag ttc ett 2112

Met lie lie Thr Glu Tyr Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp Lys Phe Leu 690 695 700 egg gag aag gat ggc gag ttc age gtg ctg cag ctg gtg ggc atg ctg 2160

Arg Glu Lys Asp Gly Glu Phe Ser Val Leu Sin Leu Val Gly Met Leu 705 710 715 720 egg ggc ate gca get ggc atg aag tac ctg gcc aac atg aac tat gtg 2208 201208701

Arg Gly Ile Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ala Asn Met Asn Tyr Val 725 730 735 cac cgt gac ctg get gcc age aac ate etc gtc aac age aac ctg gtc 2256

His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Me Leu Val Asn Ser Asn Leu Val 740 745 750 tgc aag gtg tet gac ttt ggc ctg tee ege gtg ctg gag gac gac ccc 2304

Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro 755 760 765 gag gcc acc tac acc acc agt ggc ggc aag ate ccc ate ege tgg acc 2352

Glu Ala Thr Tyr Thr Thr Ser Gly Gly Lys lie Pro lie Arg Trp Thr 770 775 780 gcc ccg gag gcc att tee tac egg aag ttc acc tet gcc age gac gtg 2400

Ala Pro Glu Ala lie Ser Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val 785 790 795 800 tgg age ttt ggc att gtc atg tgg gag gtg atg acc tat ggc gag egg 2448

Trp Ser Phe Gly lie Val Met Trp Qlu Val Met Thr Tyr Gly Glu Arg 805 810 815 ccc tac tgg gag ttg tee aac cac gag gtg atg aaa gcc ate aat gat 2496

Pro Tyr Trp Glu Leu Ser Asn His Glu Val Met Lys Ala Me Asn Asp 820 825 830 ggc ttc egg etc ccc aca ccc atg gac tgc ccc tee geo ate tac cag 2544 201208701

Gly Phe Arg Leu Fro Thr Pro Met Asp Cys Pro Ser Ala lie Tyr Gin 835 840 845 cto atg atg cag tgc tgg cag cag gag cgt gcc cgc cgc ccg aag ttc 2592

Leu Met Met Gin Cys Trp Gin 6ln Glu Arg Ala Arg Arg Pro Lys Phe 850 855 860 get gac ate gtc age ate ctg gac aag etc att cgt gee cct gac tee 2640

Ala Asp lie Val Ser lie Leu Asp Lys Leu lie Arg Ala Pro Asp Ser 865 870 875 880 etc aag acc ctg get gac ttt gac ccc ege gtg tet ate egg etc ccc 2688

Leti Lys Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val Ser lie Arg Leu Pro 885 890 895 age aeg age ggc teg gag ggg gtg ccc ttc ege aeg gtg tee gag tgg 2736

Ser Thr Ser Gly Ser 6lu Gly Val Pro Phe Arg Thr Val Ser Glu Trp 900 905 910 Λ ctg gag tee ate aag atg cag cag tat aeg gag cac ttc atg geg gee 2784 ,

Leu Glu Ser lie Lys Met Gin Gin Tyr Thr Glu His Phe Met Ala Ala 915 920 925 >tac act gee ate gag aag gtg gtg cag atg acc aac gac gac ate

Gly Tyr Thr Ala lie Glu Lys Val Val Gin Met Thr Asn Asp Asp He 930 935 940 aag agg att ggg gtg egg ctg ccc ggc cac cag aag ege ate gee tac 2880 201208701

Lys Arg lie Gly Val Arg Leu Pro Gly His 6In Lys Arg Me Ala Tyr 945 950 955 960 age ctg ctg gga etc aag gac cag gtg aac act gtg ggg ate ccc ate 2928

Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp Gin Val Asn Thr Val Gly lie Pro lie 965 970 975 tga 2931 <210> 2 <211> 976 <212〉 PRT <213〉人類 <400〉 2

Met Glu Leu Gin Ala Ala Arg Ala Cys Phe Ala Leu Leu Trp Gly Cys 15 10 15

Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gin Gly Lys Glu Val Val Leu Leu 20 25 30

Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly Glu Leu Gly Trp Leu Thr His Pro Tyr 35 40 45 6!y Lys Gly Trp Asp Leu Met Gin Asn lie Met Asn Asp Met Pro lie 50 55 60

Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly Asp Gin Asp Asn Trp 65 70 75 80

Leu Arg Thr Asn Trp Val Tyr Arg Gly Glu Ala Glu Arg Me Phe lie 85 90 95

Glu Leu Lys Phe Thr Val Arg Asp Cys Asn Ser Phe Pro Gly Gly Ala 100 105 110 -10- 201208701

Ser Ser Gys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu 115 120 125

Asp Tyr Gly Thr Asn Phe Gin Lys Arg Leu Phe Thr Lys lie Asp Thr 130 135 140 lie Ala Pro Asp Glu lie Thr Val Ser Ser Asp Phe 8lu Ala Arg His 145 150 155 160

Val Lys Leu Asn Val Glu Glu Arg Ser Val Gly Pro Leu Thr Arg Lys 165 . 170 175

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gin Asp lie Gly Ala Cys Val Ala Leu Leu 180 185 190

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Lys Cys Pro Giu Leu Leu Gin Gly Leu 195 200 205

Ala His Phe Pro Glu Thr He Ala Gly Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ala 210 215 220

Thr Val Ala Gly Thr Cys Val Asp His Ala Val Val Pro Pro Gly Gly 225 230 235 240

Glu Glu Pro Arg Met His Cys Ala Val Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro 245 250 255 lie Gly G!n Cys Leu Gys Gin Ala Gly Tyr Glu Lys Val Glu Asp Ala 260 265 270

Cys Gin Ala Cys Ser Pro Gly Phe Phe Lys Phe Glu Ala Ser Glu Ser 275 280 285

Pro Cys Leu Glu Cys Pro Glu His Thr Leu Pro Ser Pro Glu Gly Ala 290 295 300 -11 - 201208701

Thr Ser Cys Glu Cys 6lu Glu Gly Phe Phe Arg Ala Pro Gin Asp Pro 305 310 315 320

Ala Ser Met Pro Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro His Tyr Leu Thr 325 330 335

Ala Val Gly Met Gly Ala Lys Val Glu Leu Arg Trp Thr Pro Pro Gin 340 345 350

Asp Ser Gly Gly Arg Glu Asp lie Val Tyr Ser Val Thr Cys Glu Gin 355 360 365

Cys Trp Pro Glu Ser Gly Glu Cys Gly Pro Cys Glu Ala Ser Val Arg 370 375 380

Tyr Ser Glu Pro Pro His Gly Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val Ser 385 390 395 400

Asp Leu Glu Pro His Met Asn Tyr Thr Phe Thr Val Glu Ala Arg Asn 405 410 415

Gly Val Ser Gly Leu Val Thr Ser Arg Ser Phe Arg Thr Ala Ser Val 420 425 430

Ser lie Asn Gin Thr Glu Pro Pro Lys Val Arg Leu Glu Gly Arg Ser 435 440 445

Thr Thr Ser Leu Ser Val Ser Trp Ser lie Pro Pro Pro Gin Gin Ser 450 455 460

Arg Val Trp Lys Tyr Glu Val Thr Tyr Arg Lys Lys Gly Asp Ser Asn 465 470 475 480

Ser Tyr Asn Val Arg Arg Thr Giu Gly Phe Ser Val Thr Leu Asp Asp 485 490 495 201208701

Leu Ala Pro Asp Thr Thr Tyr Leu Val Gin Val Gin Ala Leu Thr Gin 500 505 510 GIu Gly Gin Gly Ala Gly Ser Lys Val His 6lu Phe Gin Thr Leu Ser 515 520 525

Pro GIu Gly Ser Gly Asn Leu Ala Val Me Gly Gly Val Ala Val Gly 530 535 540

Val Val Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe lie His Arg 545 550 555 560

Arg Arg Lys Asn 6In Arg Ala Arg Gin Ser Pro Slu Asp Val Tyr Phe 565 570 575

Ser Lys Ser GIu Gin Leu Lys Pro Leu Lys Thr Tyr Val Asp Pro His 580 585 590

Thr Tyr GIu Asp Pro Asn 6ln Ala Val Leu Lys Phe Thr Thr GIu lie 595 600 605

His Pro Ser Cys Val Thr Arg Gin Lys Val lie Gly Ala Gly GIu Phe 610 615 620 _ Gly GIu Val Tyr Lys Gly Met Leu Lys Thr Ser Ser Gly Lys Lys GIu φ 625 630 635 640

Val Pro Val Ala lie Lys Thr Leu Lys Ala Gly Tyr Thr GIu Lys Gin 645 650 655

Arg Val Asp Phe Leu 6iy GIu Ala Gly lie Met Gly Gin Phe Ser His 660 665 670

His Asn lie He Arg Leu GIu Gly.Val lie Ser Lys Tyr Lys Pro Met 675 680 685

Met lie lie Thr GIu Tyr Met GIu Asn Gly Ala Leu Asp Lys Phe Leu -13- 201208701 690 695 700

Arg Glu Lys Asp Gly Glu Phe Ser Val Leu Gin Leu VaI Gly Met Leu 705 710 715 720

Arg Gly lie Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ala Asn Met Asn Tyr Val 725 730 735

His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Val Asn Ser Asn Leu Val 740 745 750

Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro 755 760 765

Glu Ala Thr Tyr Thr Thr Ser Gly Gly Lys lie Pro He Arg Trp Thr 770 775 780

Ala Pro Glu Ala Ile Ser Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val 785 790 795 800

Trp Ser Phe Gly lie Val Met Trp Glu Val Met Thr Tyr Gly Glu Arg 805 810 8t5

Pro Tyr Trp Glu Leu Ser Asn His Glu Vai Met Lys Ala lie Asn Asp 820 825 830

Gly Phe Arg Leu Pro Thr Pro Met Asp Cys Pro Ser Ala lie Tyr Gin 835 840 845

Leu Met Met Gin Cys Trp Gin Gin Glu Arg Ala Arg Arg Pro Lys Phe 850 855 860

Ala Asp lie Val Ser lie Leu Asp Lys Leu lie Arg Ala Pro Asp Ser 865 870 875 880

Leu Lys Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val Ser lie Arg Leu Pro 885 890 895 -14- 201208701

Ser Thr Ser Gly Ser Glu Gly Val Pro Phe Arg Thr Val Ser Glu Trp 900 905 9t0

Leu Glu Ser lie Lys Met Gin Gin Tyr Thr Glu His Phe Met Ala Ala 915 920 925

Gly Tyr Thr Ala lie Glu Lys Val Val Gin Met Thr Asn Asp Asp lie 930 935 940

Lys Arg lie Gly Val Arg Leu Pro Gly His Gin Lys Arg lie Ala Tyr 945 950 955 960 隹 Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp 61n Val Asn Thr Val Gly lie Pro lie 965 970 975 <210〉 3 <211> 2961 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉EPHA2突變序列 <220>

<221> CDS <222〉（33).. (2960) <400〉 3 tcggggatcg gaccgagagc gagaagcgcg gc atg gag etc cag gca gcc ege 53

Met Glu Leu Gin Ala Ala Arg 5 gcc tgc ttc gcc ctg ctg tgg ggc tgt geg ctg gcc geg gcc geg geg 101

Ala Cys Phe Ala Leu Leu Trp Gly Cys Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala 10 15 20 -15 201208701 gcg cag ggc aag gaa gtg gta ctg ctg gac ttt get gca get gga ggg 149

Ala Gin Gly Lys Glu Val Val Leu Leu Asp Phe Ala Ala Ala Gly Gly 25 30 35 gag etc ggc tgg etc aca cac ccg tat ggc aaa ggg tgg gac ctg atg 197

Glu Leu Gly Trp Leu Thr His Pro Tyr Gly Lys Gly Trp Asp Leu Met 40 45 50 55 cag aac ate atg aat gac atg ccg ate tac atg tac tee gtg tgc aac 245

Gin Asn lie Met Asn Asp Met Pro lie Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn 60 65 70 gtg atg tet ggc gac cag gac aac tgg etc ege acc aaa tgg gtg tac 293

Val Met Ser Gly Asp Gin Asp Asn Trp Leu Arg Thr Asn Trp Val Tyr 75 80 85 ega gga gag get gag cgt ate ttc att gag etc aag ttt act gta cgt Arg Giy Glu Ala Glu Arg lie Phe lie Glu Leu Lys Phe Thr Val Arg 90 95 100 gac tgc aac age ttc cct ggt ggc gee age tee tgc aag gag act ttc 389

Asp Cys Asn Ser Phe Pro Gly Qly Ala Ser Ser Cys Lys Glu Thr Phe 105 110 Ί15 aac etc tac tat gee gag teg gac otg gac tac ggc ace aac ttc cag 437

Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu Asp Tyr Gly Thr Asn Phe Gin 120 125 130 135 ⑧ -16- 201208701 aag cgc ctg ttc acc aag att gac acc att gcg ccc gat gag ate acc 485

Lys Arg Leu Phe Thr Lys lie Asp Thr lie Ala Pro Asp Glu lie Thr 140 145 150 gtc age age gac ttc gag gca cgc cac gtg aag ctg aac gtg gag gag 533

Val Ser Ser Asp Phe Glu Ala Arg His Val Lys Leu Asn Val Glu Glu 155 160 165 cgc tcc gtg ggg ccg etc acc cgc aaa ggc ttc tac ctg gcc ttc cag 5引

Arg Ser Val 61y Pro Leu Thr Arg Lys Gly Phe Tyr Leu Ala Phe Gin 170 175 180 gat ate ggt gcc tgt gtg gca eta etc tcc gtc cgt gtc tac tac aag 629

Asp lie Gly Ala Cys Val Ala Leu Leu Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys 185 190 195 aag tgc ccc gag ctg ctg cag ggc ctg gcc cac ttc cct gag acc ate Lys Cys Pro Glu Leu Leu 6ln Gly Leu Ala His Phe Pro Glu Thr He 200 205 210 215 gcc ggc tet gat gca cct tcc ctg gcc act gtg gcc ggc acc tgt gtg Ala Gly Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ala Thr Val Ala Gly Thr Cys Val 220 225 230 gac cat gcc gtg gtg cca ccg ggg ggt gaa gag ccc cgt atg cac tgt Asp His Ala Val Val Pro Pro Gly Gly Glu Glu Pro Arg Met His Cys 235 240 245 -17- 201208701 gca gtg gat ggc gag tgg ctg gtg ccc att ggg cag tgc ctg tgc cag 821

Ala Val Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro lie Giy Gin Cys Leu Cys Gin 250 255 260 gca ggc tac gag aag gtg gag gat gcc tgc cag gcc tgc teg cct gga 869

Ala Gly Tyr Glu Lys Val Glu Asp Ala Cys Gin Ala Cys Ser Pro Qly 265 270 275

ttt ttt aag ttt gag gca tet gag age ccc tgc ttg gag tgc cct gag Phe-Phe Lys Phe Glu Ala Ser Glu Ser Pro Cys Leu Glu Cys Pro Glu 280 285 290 295 cac aeg ctg cca tcc cct gag ggt gcc acc tcc tgc gag tgt gag gaa 965

His Thr Leu Pro Ser Pro Glu Gly Ala Thr Ser Cys Glu Cys Qlu 6lu 300 305 310 ggc ttc ttc egg gca cct cag gac cca geg teg atg cct tgc aca ega 1013

Gly Phe Phe Arg Ala Pro Gin Asp Pro Ala Ser Met Pro Cys Thr Arg 315 320 325 cct tcc gcc cca cac tac etc aca gcc gtg ggc atg ggt gcc aag 1061

Pro Pro Ser Ala Pro His Tyr Leu Thr Ala Val Gly Met Gly Ala Lys 330 335 340 acS CC() cct cag ga〇 agG ggg ggG GgG gag gac

Val Glu Leu Arg Trp Thr Pro Pro Gin Asp Ser Gly Gly Arg Glu Asp .345 35〇 355 -18- 201208701 att gtc tac age gtc acc tgc gaa cag tgc tgg ccc gag tet ggg gaa 1157 lie Val Tyr Ser Val Thr Cys Glu Gin Cys Trp Pro Glu Ser Gly Glu 360 365 370 375 tgc^ggg ccg tgt gag gee agt gtg ege tac teg gag cct cct cac gga

Cys Gly Pro Cys Glu Ala Ser Val Arg Tyr Ser Glu Pro Pro His Gly 380 385 390 ctg acc ege acc agt gtg aca gtg age gac ctg gag ccc cac atg aac 1253

Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val Ser Asp Leu Glu Pro His Met Asn 395 400 405 tac acc ttc acc gtg gag gee ege aat ggc gtc tea ggc ctg gta acc 1301

Tyr Thr Phe Thr Val Glu Ala Arg Asn Gly Val Ser Gly Leu Val Thr 410 415 420 age ege age ttc cgt act gee agt gtc age ate aac cag aca gag ccc 1349

Ser Arg Ser Phe Arg Thr Ala Ser Val Ser lie Asn G!n Thr Glu Pro

425 430 435 ccc aag gtg agg ctg gag ggc ege age acc acc teg ett age gtc tee 1397

Pro Lys Val Arg Leu Glu Gly Arg Ser Thr Thr Ser Leu Ser Val Ser 440 445 450 455 tgg age ate ccc ccg ccg cag cag age ega gtg tgg aag tac gag gtc 1445

Trp Ser Me Pro Pro Pro Gin Qln Ser Arg Val Trp Lys Tyr Glu Val 460 465 470 -19- 201208701 act tac cgc aag aag gga gac tcc aac age tac aat gtg ege ege acc 1493

Thr Tyr Arg Lys Lys Gly Asp Ser Asn Ser Tyr Asn Val Arg Arg Thr 475 480 485 gag ggt ttc tec gtg acc ctg gac gac ctg gee cca gac acc acc tac 1541

Glu Gly Phe Ser Val Thr Leu Asp Asp Leu Ala Pro Asp Thr Thr Tyr 490 495 500 ctg gtc cag gtg cag gca ctg aeg cag gag ggc cag ggg gee ggc age 1589

Leu Val Gin Val Gin Ala Leu Thr Gin Glu Gly Gin Gly Ala Gly Ser 505 510 515 aag gtg cac gaa ttc cag aeg ctg tec ccg gag gga tet ggc aac ttg 1637 Λ·

Lys Val His Glu Phe Gin Thr Leu Ser Pro Glu Gly Ser Gly Asn Leu 520 525 530 535 geg gtg att ggc ggc gtg get gtc ggt gtg gtc ctg ett ctg gtg ctg 1685

Ala Val Ile Gly Gly Val Ala Val Gly Val Val Leu Leu Leu Val Leu 540 545 550 gca gga gtt ggc ttc ttt ate cac ege agg agg aag aac cag Ggt gee 1733

Ala 6iy Val Gly Phe Phe Ile His Arg Arg Arg Lys Asn Gin Arg Ala 555 560 565 ege cag tee ccg gag gac gtt tac ttc tec aag tea gaa caa ctg aag 1781

Arg Gin Ser Pro Glu Asp Val Tyr Phe Ser Lys Ser Glu Gin Leu Lys 570 575 580 -20- 201208701 ccc ctg aag aca tac gtg gac ccc cac aca tat gag gac ccc aac cag 1829

Pro Leu Lys Thr Tyr Val Asp Pro His Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Gin 585 590 595 ttg aag ttc act acc gag ate cat cca tee tgt gtc act egg Ala Val Leu Lys Phe Thr Thr Glu lie His Pro Ser Cys Val Thr Arg 600 605 610 615 cag aag gtg ate gga gca gga gag ttt ggg gag gtg tac aag ggc atg 1925

Gin Lys Val lie Gly Ala Gly Glu Phe Gly Glu Val Tyr Lys Gly Met 620 625 630 ctg^aag aca tee teg ggg aag aag gag gtg ccg gtg gee ate aag aeg Leu Lys Thr Ser Ser Gly Lys Lys Glu Val Pro Val Ala lie Lys Thr 635 640 645 g^aaa sec ggc tac aca gag aag cag ega gtg gac ttc etc ggc gag Leu Lys Ala Gly Tyr Thr Glu Lys Gin Arg Val Asp Phe Leu Gly Glu 650 655 660 gee ggc ate atg ggc cag ttc age cac cac aac ate ate ege eta gag 2069

Ala Gly Ile Met Gly 6ln Phe Ser His His Asn lie lie Arg Leu Glu 665 670 075 ggc^gtc ate tee aaa tac aag ccc atg atg ate ate act gag tac atg Gly Val Ife Ser Lys Tyr Lys Pro Met Met lie lie Thr Glu Tyr Met 680 685 690 695 -21 - 201208701 l^aat ggg gcc Gtg gac) aag ttc ctt egg gag aag gat ggc gag ttc

Glu Asn Gly Ala Leu Asp Lys Phe Leu Arg Glu Lys Asp Gly Glu Phe 700 705 710 ctg GaS ctg gtg ggc atg ctg egg ggo ate gca get ggc atg

Ser Val Leu 6ln Leu Val Gly Met Leu Arg Gly lie Ala Ala Gly Met 715 720 725

趨产c ctg 咖 aac atg aac tat gtg cac cgt gac ctg get gcc ege Lys Tyr Leu Ala Asn Met Asn Tyr Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg 730 735 740 atc ctc 幻^ aac age aac ctg gtc tgc aag gtg tet gac ttt ggc 2〇uy

Asn lie Leu Val Asn Ser Asn Leu Val Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly 745 750 755 ctg tcc ege gtg ctg gag gac gac ccc gag gcc acc tac acc acc agt 2357

Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro Glu Ala Thr Tyr Thr Thr Ser

760 765 770 775 ggc ggc aag ate ccc ate ege tgg acc gee ccg gag gcc att tec tac 2405

Gly Gly Lys lie Pro lie Arg Trp Thr Ala Pro Glu Ala lie Ser Tyr 780 785 790 egg aag ttc acc tet gcc age gac gtg tgg age ttt ggc att gtc atg 2453

Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly lie Val Met 795 800 805 ⑧ -22- 201208701 tgg gag gtg atg aco tat ggc gag egg ccc tac tgg gag ttg tee aac 2501

Trp Glu Val Met Thr Tyr Gly Glu Arg Pro Tyr Trp Glu Leu Ser Asn 810 815 820 cac gag gtg atg aaa gee ate aat gat ggc ttc egg etc ccc aca ccc 2549

His Glu Val Met Lys Ala Ile Asn Asp 6ly Phe Arg Leu Pro Thr Pro 825 830 835 atg gac tgc cco tee gee ate tac cag etc atg atg cag tgc tgg cag 2597

Met Asp Cys Pro Ser Ala Ile Tyr Gin Leu Met Met Gin Cys Trp Gin 840 845 850 855 cag gag cgt gee ege ege ccc aag ttc get gac ate gtc age ate ctg 2645 ,

Gin Glu Arg Ala Arg Arg Pro Lys Phe Ala Asp Me Val Ser lie Leu 860 865 870 gac aag etc att cgt gee cct gac tee etc aag acc ctg get gac ttt 2693

Asp Lys Leu lie Arg Ala Pro Asp Ser Leu Lys Thr Leu Ala Asp Phe 875 880 885 gac ccc ege gtg tet atG egg etc ccc age aeg age ggc teg gag ggg 2741 ·

Asp Pro Arg Val Ser Me Arg Leu Pro Ser Thr Ser Gly Ser Glu Gly 890 895 900 gtg ccc ttc ege aeg gtg tee gag tgg ctg gag tee ate aag atg cag 2789

Val Pro Phe Arg Thr Val Ser Glu Trp Leu Glu Ser lie Lys Met Gin 905 91〇 915 -23- 201208701 cag^tat acg gag cac ttc atg gcg gcc ggc tac act gcc ate gag aag 6ln Tyr Thr Glu His Phe Met Ala Ala 6ly Tyr Thr Ala Me Glu Lys 920 925 930 935 gtg gtg cag atg acc aac gac gac ate aag agg att ggg gtg egg ctg 2885

Val Val 61n Met Thr Asn Asp Asp lie Lys Arg lie Gly Val Arg Leu 940 945 950 ccc ggc cac cag aag ege ate gcc tac age ctg ctg gga etc aag gac 2933

Pro Gly His Gin Lys Arg Ile Ala Tyr Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp 955 960 965 cag gtg aac act gtg ggg ate ccc ate g 2961

Gin Val Asn Thr Val Gly lie Pro lie 970 975

<210〉 4 <211〉 976 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成建構想(synthetic construct) <400> 4

Met Glu Leu Gin Ala A!a Arg Ala Cys Phe Ala Leu Leu Trp Gly Cys 1 5 10 15

Ala Leu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gin Gly Lys Glu Val Val Leu Leu 20 25 30

Asp Phe Ala Ala Ala G!y Gly Glu Leu Gly Trp Leu Thr His Pro Tyr -24- 201208701 35 40 45

Gly Lys Gly Trp Asp Leu Met Gin Asn lie Met Asn Asp Met Pro lie 50 55 60

Tyr Met Tyr Ser Val Cys Asn Val Met Ser Gly Asp Gin Asp Asn Trp 65 70 75 80

Leu Arg Thr Asn Trp Val Tyr Arg Gly Glu Ala Glu Arg Ile Phe Ile 85 90 95

Glu Leu Lys Phe Thr Val Arg Asp Cys Asn Ser Phe Pro Gly Gly Ala 100 105 110

Ser Ser Cys Lys Glu Thr Phe Asn Leu Tyr Tyr Ala Glu Ser Asp Leu 115 120 125

Asp Tyr Gly Thr Asn Phe Gin Lys Arg Leu Phe Thr Lys lie Asp Thr 130 135 140 lie Ala Pro Asp Glu lie Thr Val Ser Ser Asp Phe Glu Ala Arg His 145 150 155 160

Val Lys Leu Asn Val Glu Glu Arg Ser Val Gly Pro Leu Thr Arg Lys 165 170 175

Gly Phe Tyr Leu Ala Phe 6ln Asp lie Gly Ala Cys Val Ala Leu Leu 180 185 190

Ser Val Arg Val Tyr Tyr Lys Lys Cys Pro Glu Leu Leu Gin Gly Leu 195 200 205

Ala His Phe Pro Glu Thr Me Ala Qly Ser Asp Ala Pro Ser Leu Ala 210 215 220

Thr Val Ala Gly Thr Cys Val Asp His Ala Val Val Pro Pro Gly Gly 225 230 235 240 -25- 201208701

Glu Glu Fro Arg Met His Cys Ala Val Asp Gly Glu Trp Leu Val Pro 245 250 255 lie Gly Gin Gys Leu Cys Gin Ala Gly Tyr Glu Lys Val Glu Asp Ala 260. 265 270

Cys Qln Ala Cys Ser Pro Gly Phe Phe Lys Phe Glu Ala Ser Glu Ser 275 280 285

Pro Cys Leu Glu Cys Pro Glu His Thr Leu Pro Ser Pro Glu Gly Ala 290 295 300

Thr Ser Cys Glu Cys Glu Glu Giy Phe Phe Arg Ala Pro Gin Asp Pro 305 310 315 320

Ala Ser Met Pro Cys Thr Arg Pro Pro Ser Ala Pro His Tyr Leu Thr 325 330 335

Ala Val Gly Met Gly Ala Lys Val Glu Leu Arg Trp Thr Pro Pro Gin 340 345 350

Asp Ser Gly Gly Arg Glu Asp lie Val Tyr Ser Val Thr Cys Glu Gin 355 360 365

Cys Trp Pro Glu Ser Gly Glu Cys Gly Pro Cys Glu Ala Ser Val Arg 370 375 380

Tyr Ser Glu Pro Pro His Gly Leu Thr Arg Thr Ser Val Thr Val Ser 385 390 ,395 400

Asp Leu Glu Pro His Met Asn Tyr Thr Phe Thr Val Glu Ala Arg Asn 405 410 415

Gly Val Ser Gly Leu Val Thr Ser Arg Ser Phe Arg Thr Ala Ser Val 420 425 430 -26- 201208701

Ser lie Asn Gin Thr Glu Pro Pro Lys Val Arg Leu 6lu Gly Arg Ser 435 440 445

Thr Thr Ser Leu Ser Val Ser Trp Ser lie Pro Pro Pro Gin Gin Ser 450 455 460

Arg Val Trp Lys Tyr Glu Val Thr Tyr Arg Lys Lys Gly Asp Ser Asn 465 470 475 480

Ser Tyr Asn Val Arg Arg Thr Glu Gly Phe Ser Val Thr Leu Asp Asp 485 490 495

Leu Ala Pro Asp Thr Thr Tyr Leu Val Gin Val Gin Ala Leu Thr Gin 500 505 510

Glu Gly 6ln Gly Ala Gly Ser Lys Val His Glu Phe Gin Thr Leu Ser 515 520 525

Pro Glu Gly Ser Gly Asn Leu Ala Val lie Gly Gly Val Ala Val Gly 530 535 540

Val Val Leu Leu Leu Val Leu Ala Gly Val Gly Phe Phe lie His Arg 545 550 555 560

Arg Arg Lys Asn Gin Arg Ala Arg Gin Ser Pro 6tu Asp Val Tyr Phe 565 570 575

Ser Lys Ser Glu 6ln Leu Lys Pro Leu Lys Thr Tyr Val Asp Pro His 580 585 590

Thr Tyr Glu Asp Pro Asn Gin Ala Val Leu Lys Phe Thr Thr Glu lie 595 600 605

His Pro Ser Cys Val Thr Arg Gin Lys Val lie Gly Ala Gly Glu Phe 610 615 620 -27- 201208701

Gly 6lu Val Tyr Lys 6ly Met Leu Lys Thr Ser Ser Gly Lys Lys Glu 625 630 635 640

Val Fro Val Ala lie Lys Thr Leu Lys Ala Gly Tyr Thr Glu Lys Gin 645 650 655

Arg Val Asp Phe Leu Gly Glu Ala Gly lie Met Gly Gin Phe Ser His 660 665 670

His Asn lie I le Arg Leu Glu Gly Val Me Ser Lys Tyr Lys Pro Met 675 680 685

Met lie lie Thr Glu Tyr Met Glu Asn Gly Ala Leu Asp Lys Phe Leu 690 695 700

Arg Glu Lys Asp Gly Glu Phe Ser Val Leu 6ln Leu Val Gly Met Leu 705 710 715 720

Arg Gly lie Ala Ala Gly Met Lys Tyr Leu Ala Asn Met Asn Tyr Val 725 730 735

His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn lie Leu Val Asn Ser Asn Leu Val 740 745 750

Cys Lys Val Ser Asp Phe Gly Leu Ser Arg Val Leu Glu Asp Asp Pro 755 760 765

Glu Ala Thr Tyr Thr Thr Ser Gly Gly Lys lie Pro lie Arg Trp Thr 770 775 780

Ala Pro Glu Ala lie Ser Tyr Arg Lys Phe Thr Ser Ala Ser Asp Val 785 790 795 800

Trp Ser Phe Gly lie Val Met Trp Glu Val Met Thr Tyr Gly Glu Arg 805 810 815

Pro Tyr Trp Glu Leu Ser Asn His Glu Val Met Lys Ala lie Asn Asp -28- 201208701 820 825 830

Gly Phe Arg Leu Pro Thr Pro Met Asp Gys Pro Ser Ala lie Tyr Gin 835 840 845

Leu Met Met Gin Cys Trp Gin Gin Glu Arg Ala Arg Arg Pro Lys Phe 850 855 860

Ala Asp lie Val Ser He Leu Asp Lys Leu lie Arg Ala Pro Asp Ser 865 870 875 880

Leu Lys Thr Leu Ala Asp Phe Asp Pro Arg Val Ser lie Arg Leu Pro

885 890 895

Ser Thr Ser Gly Ser Glu Gly Val Pro Phe Arg Thr Val Ser Glu Trp 900 905 910

Leu Glu Ser lie.Lys Met 6ln Gin Tyr Thr Glu His Phe Met Ala Ala 915 920 925

Gly Tyr Thr Ala lie Glu Lys Val Val Gin Met Thr Asn Asp Asp lie 930 935 940

Lys Arg lie Gly Val Arg Leu Pro Gly His Gin Lys Arg lie Ala Tyr 945 950 955 960

Ser Leu Leu Gly Leu Lys Asp Gin Val Asn Thr Val Gly Me Pro fie 965 970 975

<210〉 5 <211〉 1350 <212> DNA <213〉小鼠(Mus musculus) <220> <221> CDS <222〉⑴.，（1350) -29- 201208701 <400> 5 1 cag ate cag ttg gtg oag tet gga cct gag ctg aag aag cct gga gag 48

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 aca gtc aag ate tee tgc aag get tet ggg tat acc ttc aca cac tat 96

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30 tea atg cac tgg gtg aag cag get cca gga aag ggt tta aag tgg atg 144

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aac acc tac act gga gag cca aca tat get gat gac ttc 192

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60 aag gga egg ttt gee ttc tet ttg gaa aoc tet gee age act gee ttt Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80 ttg cag ate aac aac etc aaa aat gag gac aeg get aca tat ttc tgt 288

Leu Gin lie Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 gca acc tac tat agg tac gaa aga gac ttt gac tac tgg ggc caa ggc

Ha Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 1〇〇 105 110 -30- 201208701 act etc aca gtc tcc tea gcc aaa aca aca gcc cca teg gtc tat 384

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr 115 120 125 cca ctg gee cct gtg tgt gga gat aca act ggc tee teg gtg act eta 432

Pro Leu Ala Pro Val Cys 6ly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu 130 135 i4〇 gga tgc ctg gtc aag ggt tat ttc cct gag cca gtg acc ttg acc tgg 480 φ Gly Cys Leu Val Lys G!y Tyr Phe Pro Qlu Pro Val Thr Leu Thr Trp 145 150 155 160 aac tet gga tee ctg tee agt ggt gtg cac acc ttc cca get gtc ctg 528

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 cag tet gac etc tac acc etc age age tea gtg act gta acc teg age 576

Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser

180 185 190 acc tgg ccc age cag tee ate acc tgc aat gtg gee cac ccg gca age 624

Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser 195 200 205 age acc aag gta gac aag aaa att gag ccc aga ggg ccc aca ate aag

D/Z

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Glu Pro Arg Giy Pro Thr lie Lys 210 215 220 -31 - 201208701 tgt cct cca igc aaa tgc cca gca cct aac etc ttg ggt gga cca

Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 tcc gtc ttc ate ttc cct cca aag ate aag gat gta etc atg ate tee 768

Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser 245 250 255 ctg age ccc ata gtc aca tgt gtg gtg gtg gat gtg age gag gat gac 816

Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp 260 265 270 cca gat gtc cag ate age tgg ttt gtg aac aac gtg gaa gta cac aca 864

Pro Asp Val Gin lie Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr 275 280 285 get cag aca caa acc cat aga gag gat tac aac agt act etc egg gtg 912

Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val 290 295 300 φ gtc agt gee etc ccc ate cag cac cag gac tgg atg agt ggo aag gag 960

Val Ser Ala Leu Pro lie Gin His 6ln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu 305 310 315 320 ttc aaa tgc aag gtc aac aac aaa gac etc cca geg ccc ate gag aga 1008 .

Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg 325 330 335 -32- ⑧ 201208701 acc ate tea aaa ccc aaa ggg tea gta aga get cca cag gta tat gtc 1056 ,, , T 、，，

Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val 340 345 350 ttg cct cca cca gaa gaa gag atg act aag aaa cag gtc act ctg acc 1104

Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr 355 360 365

tgc atg gtc aca gac ttc atg cct gaa gac att tac gtg gag tgg acc 1152 TL 鲁 Gys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr 370 375 380 aac aac ggg aaa aca gag eta aac tac aag aac act gaa cca gtc ctg 1200 ,

Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu 385 390 395 400 gac tot gat ggt tet tac ttc atg tac age aag ctg aga gtg gaa aag 1248

Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys

405 410 415 aag aac tgg gtg gaa aga aat age tac tcc tgt tea gtg gto cac gag 1296 .,

Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu 420 425 430 ggt ctg cac aat cac cac aeg act aag age ttc tec egg act ccg ggt 1344

Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 435 440 445 -33- 201208701 aaa tga 1350

Lys <210> 6 <211> 449 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 6

Gin lie 6In Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80

Leu Gin Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Vai Thr Leu 201208701 130 135 140

Gly Cys Leu Vai Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser 180 185 190

Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie Thr Gys Asn Val Ala His Pro Ala Ser 195 200 205 '

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Glu Pro Arg Gly Pro Thr lie Lys 210 215 220

Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser 245 250 255

Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp 260 265 270

Pro Asp Val Gin lie Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Va! His Thr 275 280 285

Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Qlu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val 290 295 300

Val Ser Ala Leu Pro lie Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu 305 310 315 320

Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg 325 330 335 -35- 201208701

Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val 340 345 350

Leu Pro Pro Pro Glu Glu 6lu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr 355 360 365

Gys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr 370 375 380

Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys 405 410 415

Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu 420 425 430

Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 435 440 445

Lys <210〉 7 <211> 660 <212〉 DMA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222〉（1)..(660) <400> 7 gat gtt ttg atg acc caa agt cca etc tcc ctg cct gtc agt ett gga 48

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly -36- 201208701 5 10 15 gat caa gcc tcc ate tet tgc aga tet agt cag age att gta cat agt 96

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser 6ln Ser He Val His Ser 20 25 30 aat gga aac acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tet 144

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu 6lu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro 61y Gin Ser 35 40 45

cca aag etc ctg ate tac aaa gtt tec aac ega ttt tet ggg gtc cca 192

Pro Lys Leu Leu Me Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc aca etc agg ate 240

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg lie 65 70 75 80 age aga gtg gag get gag gat ctg gga gtt tat tac tgc ttt caa ggt 288 春 Ser Arg Val Glu Ala QIu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95 tea cat gtt ccg tac aeg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 cgg gai get gca cca act gta tec ate ttc cca cca tec agt gag 384

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Va! Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu -37- 201208701 115 120 125 cag tta aca tct gga ggt gcc tea gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc 432 4

Gin Leu Thr Ser Gly 6ly Ala Ser Val Val Gys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 tac ccc aaa gac ate aat gtc aag tgg aag att gat ggc agt gaa ega 480

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 caa aat ggc gtc ctg aac agt tgg act gat cag gac age aaa gac age 528

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 acc tac age atg age age acc etc aeg ttg acc aag gac gag tat gaa 576

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 180 185 190 ega cat aac age tat acc tgt gag gcc act cac aag aca tea act "tea 624

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 195 200 205 ccc att gtc aag age ttc aac agg aat gag tgt taa 660

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215

<210〉 8 <211〉 219 <212〉 PRT -38- 201208701 <213〉小鼠 <400> 8

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser- Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu 6ln Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Slu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Gys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135. 140

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu -39- 201208701 180 185 190

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 195 200 205

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 <210> 9 <211> 357 <212> DNA <213〉小鼠 <220〉 <221> CDS <222> (1)..(357) <400> 9 cag ate cag ttg gtg cag tet gga cct gag ctg aag aag cct gga gag 48

Gin lie 6ln Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 aca gtc aag ate tcc tgc aag get tet ggg tat acc ttc aca cac tat 96

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aao acc tac act gga gag cca aca tat get gat gac ttc 192

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 6〇 -40- 201208701 aag gga egg ttt gee ttc tet ttg gaa acc tet gee agc act gee ttt 240

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu 6!u Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 go ttg cag ate aac aac etc aaa aat gag gac aeg get aca tat ttc tet 288

Leu Gin lie Asn Asn Leu Lys Asn 6lu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95 gca acc tac tat agg tac gaa aga gac ttt gac tac tgg ggc caa ggc

Job Φ Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Qly 100 105 110 acc act etc aca gtc tee tea 357

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210〉 10 <211> 119 <212> PRT φ <213〉小鼠 <400〉 10

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly pr〇 Qlu Leu Lys Lys Pro Giy Glu 1 5 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 3〇

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pr〇 Qly Lys Gly Leu Lys Trp Met -41 - 201208701

Gly Trp He Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Phe 65 70 75 80

Leu Gin Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys 85 90 95

Aia Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 11 <211> 993 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220〉 <221> CDS <222〉（1)..(993) <400> 11 gcc aaa aca aca gcc cca teg gtc tat cca ctg gcc cct gtg tgt gga 48

Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 1 5 10 15 gat aca act ggc tcc teg gtg act eta gga tgc ctg gtc aag ggt tat 96

Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30 ttc cct gag cca gtg acc ttg acc tgg aac tet gga tcc ctg tcc agt 144

Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser -42- 201208701 35 40 45 ggt gtg cac acc tto cca get gtc ctg cag tet gac etc tac aco etc 192 6ly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu G!n Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60 age age tea gtg act gta acc teg age acc tgg ccc age cag tee ate 240

Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie 65 70 75 80

acc tgo aat gtg gee cac ccg gca age age acc aag gta gac aag aaa 288

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 att gag ccc aga ggg ccc aca ate aag ccc tgt cct cca tgc aaa tgc 336 I le Glu Pro Arg Gly Pro Thr He Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 100 105 110 cca gca cct aac etc ttg ggt gga cca tee gtc ttc ate ttc cct cca 384

Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Pile Pro Pro 115 120 125 aag ate aag gat gta etc atg ate tee ctg age ccc ata gtc aca tgt 432

Lys Me Lys Asp VaI Leu Met lie Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys 130 135 140 gtg gtg gtg gat gtg age gag gat gac cca gat gtc cag ate age tgg 480

Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val 6ln lie Ser Trp -43- 201208701 145 150 155 160 ttt gtg aac aac gtg gaa gta cac aca get cag aca caa acc cat aga 528

Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg 165 170 175 gag gat tac aac agt act etc ogg gtg gtc agt gee etc ccc ate cag 576

Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin 180 185 190

cac cag gac tgg atg agt ggc aag gag ttc aaa tgc aag gtc aac aac 624

His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 195 200 205 aaa gac etc cca geg ccc ate gag aga. acc ate tea aaa ccc aaa ggg 672

Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly 210 215 220

tea gta aga get cca cag gta tat gtc ttg cct cca cca gaa gaa gag Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 225 230 235 240 atg act aag aaa cag gtc act ctg acc tgc atg gtc aca gac ttc atg 768

Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 245 250 255 cct gaa gac att tac gtg gag tgg acc aac aac ggg aaa aca gag eta 816

Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Jhr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu ⑧ -44- 201208701 260 265 270 aac tac aag aac act gaa cca gtc ctg gac tct gat ggt tct tac ttc 864

Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 275 280 285 atg tac age aag ctg aga gtg gaa aag aag aac tgg gtg gaa aga aat 912

Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 290 295 300 age tac tcc tgt tea gtg gtc cac gag ggt ctg cac aat cac cac aeg 960

Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 305 310 315 320 act aag age ttc tcc egg act ccg ggt aaa tga 993

Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 330 325 OT鼠 23R、 13pl^ <210> •<211> <212〉 <213> <400> 12

Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 15 10 15

Asp Thr Thr 6ly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 35 40 45 •45 - 201208701

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60

Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie 65 70 75 80

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 lie Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 100 105 110

Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro 115 120 125

Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp 145 150 155 160

Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg 165 170 175

Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Me Gin 180 185 190

His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 195 200 205

Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly 210 215 220

Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 225 230 235 240 -46 - 201208701

Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr Gys Met Val Thr Asp Phe Met 245 250 255

Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 260 265 270

Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 275 280 285

Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 290 295 300

Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 305 310 315 320

Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 325 330 <210> 13 <211〉 336 <212〉DNA <213〉小鼠 <220〉

<221> CDS • <222> (1)..(336) <400〉 13 gat gtt ttg atg acc caa agt cca etc tcc ctg cct gtc agt ett gga 48

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15 gat caa gcc tcc ate tet tgc aga tet agt cag age att gta cat agt 96

Asp Gin Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Ile Val His Ser 20 25 30 -47- 201208701 aat gga aac acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tct 144

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45 cca aag etc ctg ate tac aaa gtt tee aac ega ttt tct ggg gtc cca 192

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 g.ac agg ttc agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc aca etc agg ate 240

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg He 65 70 75 80 age aga gtg gag get gag gat ctg gga gtt tat tac tgc ttt caa ggt 2§8

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr .Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95 tea cat gtt ccg tac aeg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336

Ser His Val Fro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 14

Asd Val Leu Met Thr 6ln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser He Val His Ser -48- 201208701 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly 6lri Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 15 <211> 324 <212> DNA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222〉（1)..(324) <400〉 15 egg get gat get gca cca act gta tcc ate ttc cca cca tcc agt gag 48

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu 1 5 10 15 cag tta aca tet gga ggt gcc tea gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc 96

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Vai Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 20 25 30 tac ccc aaa gac ate aat gtc aag tgg aag att gat ggc agt gaa ega -49- 201208701 144 fyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lle 八印 6ly Ser Glu Arg 35 40 45 caa aat ggc gtc ctg aac agt tgg act gat 〇邱 Sac agc aaa gac agc 192 6

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60 acc tac age atg age age acc etc aeg ttg acc aag gac gag tat gaa 240

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 65 70 75 80 ega cat aac age tat acc tgt gag gee act cac aag aca tea act tea 288

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 85 90 95 ccc att gtc aag age ttc aac agg aat gag tgt taa 324

Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Gys 100 105

<210〉 16 <211〉 107 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 16

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Me Phe Pro Pro Ser Ser Glu 15 10 15

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 20 25 30 ⑧ -50- 201208701

Tyr Pro Lys Asp Me Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg 35 40 45

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp 6ln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 6(u Tyr Glu 65 70 75 80

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 85 90 95

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105 <210> 17 <211> 15 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220> <221> CDS 〈222〉(1).. (15) <400> 17 cac tat tea atg cac 15

His Tyr Ser Met His 1 5 T鼠 8 R > 15P9^ <210> <211〉 <212> <213〉 <400> 18

His Tyr Ser Met His 201208701 <210> <211〉 <212> <213> 1951 <220〉 <221 > <222〉 c' CO V—/ D 1 <400〉 19 tgg ata aac acc tac act gga gag cca aca tat get gat gac ttc aag 48 Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 15 10 15 gga 51 Gly <210> 20 <211〉 17 <212〉 PRT <213〉小鼠 <400> 20 Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15

Gly <210〉 21 <211> 30 <212> DNA <213〉小鼠 52- 201208701 <220> <221> CDS <222〉⑴.，（30) <400> 21 tac tat agg tac gaa aga gac ttt gaG tac 30

Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr 1 5 10

<210〉 22 <211〉 10 <212〉 PRT <213〉小鼠 <400> 22

Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 <210〉 23 <211> 48 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222〉（1)..(48) 〈400〉 23 aga tct agt cag age att gta cat agt aat gga aac acc tat tta gaa 48

Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu 5 10

<210〉 24 <210 16 <212> PRT 〈213〉小鼠 <400〉 24 -53- 201208701

Arg Ser Ser Gin Ser Ile Val

His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu GIu 10 15 A 0 51N 、 22D ^ 鼠 <210> <211> <212〉 <213> <220>

<221> CDS <222〉（1)..(21) <400> 25 aaa gtt tee aac ega ttt tet 21

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210〉 26 <211> 7 <212> PRT <213〉小鼠 <400〉 26

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 0123 1— 1— if 1· 2222 <<<<

77N 、 22D s) D1 c( 1 Jr (27 <220> <221> <222> <400> 27 ttt caa ggt tea cat gtt ccg tac aeg 27

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr -54- 5 201208701 <210〉 28 <211> 9 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 28

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 ·

<210〉 29 <211〉 1350 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220〉 <221> CDS <222〉(1).. (1350) <400> 29 cag ate cag ttg gtg cag tet gga cct gag ctg aag aag cct gga gag 48

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15 aca gtc aag ate tcc tgc aag get tet ggg tat acc ttc ata gac tat 96

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe He Asp Tyr 20 25 30 tea atg cac tgg gtg aag cag get cca gga aag ggt tta aag tgg atg 144

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aac acc tac act gga gag cca aca tat tet gat gac ttc -55- 201208701 192

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60 aag gga egg ttt g〇〇 ttc tet ttg gaa acc tet gee age aot gee tat Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ttg cag ate age aac etc aaa aat gag gac aeg get tea tat ttc tgt 288

Leu Gin Me Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys 85 90 95 gca acc tac tat agg tac gaa aga gac ttt gac tac tgg ggc caa ggc 336

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110 acc act etc aca gtc tee tea gee aaa aca aca gee cca teg gtc tat 384

Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu 130 135 140 gga tgc ctg gtc aag ggt tat ttc cct gag cca gtg aoc ttg acc tgg 480

Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp 145 150 155 160 aac tet gga tee ctg tee agt ggt gtg cac acc ttc cca get gtc ctg -56- 201208701 528

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 cag tct gac etc tac acc etc age age tea gtg act gta acc teg age 570 6ln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser 180 185 190 acc tgg ccc age cag tee ate aco tgc aat gtg gee cac ccg gca age

Thr Trp Pro Ser Gin Ser He Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser φ 195 200 205 age acc aag gtg gac aag aaa att gag ccc aga ggg ccc aca ate aag 672

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Glu Pro Arg Gly Pro Thr lie Lys 210 215 220 ccc tgt cct cca tgc aaa tgc cca gca cct aac etc ttg ggt gga cca 720

Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

tec gtc ttc ato ttc cct cca aag ate aag gat gta etc atg ate tee 768

Ser Val phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser 245 250 255 雜 age ccc ata gtc aca tgt gtg gtg gtg gac gtg ago gag gat gac Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp 260 265 270 cca gat gtc cag ate age tgg ttt gtg aac aac gtg gaa gta cac aGa -57- 201208701

Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr 864

Pro Asp Val 6ln lie Ser Trp 275 280 285 get cag aca oaa acc cat aga gag gat tac aac agt act etc egg gtg §12

Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val 290 295 300 gtc agt gee etc cgg ate cag cac cag pc tgg atg agt ggc aag gag

Va? Ser Ala Leu Pro Me Gin His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu 305 310 315 320 ttc aaa tgc aag gtc aac aac aaa gac etc cca geg ccc ate gag aga 1008

Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg 325 330 335 acc ate tea aaa ccc aaa ggg tea gta aga get cca cag gta tat gtc 1056

Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr 355 360 365 tgc atg gtc aca gac ttc atg cct gaa gac att tac gtg gag tgg acc 1152

Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr 370 375 380 aac aac ggg aaa aca gag eta aac tac aag aac act gaa cca gtc ctg -58- 201208701 1200

Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr 6lu Pr〇 Va[ Leu 385 390 395 4〇〇 gao tct gat ggt tct tac ttc atg tao age aag ctg aga gtg gaa aag 1248

Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg VaS Glu Lys 405 410 415 aag aac tgg gtg gaa aga aat age tac tcc tgt tea gtg gto cac gae 1296

Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu # 420 425 430 ggt ctg cac aat cac cac aeg act aag age ttc tcc egg act ccg ggt 1344

Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly 435 440 445 aaa tga 1350

Lys

<210> 30 <211> 449 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 30

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr 20 25 30 -59- 201208701

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser 180 185 190

Thr Trp Pro Ser Gin Ser ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser 195 200 205

Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys lie Glu Pro Arg Gly Pro Thr lie Lys 210 215 220 -60- 201208701

Pro Cys Pro Pro Cys Lys Gys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser 245 250 255

Leu Ser Pro lie Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp 260 265 270

Pro Asp Val Gin He Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr 275 280 285

Ala Gin Thr Gin Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val 290 295 300

Val Ser Ala Leu Pro lie 6ln His Qln Asp Trp Met Ser Q[y Lys Glu 305 310 315 320

Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg 325 330 335

Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val 340 345 350

Leu Pro Pro Pro 6iu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr 355 360 365

Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr 370 375 380

Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys 405 410 415

Lys Asn Trp Val Qlu Arg Asn Ser Tyr Ser Gys Ser Val Val His Glu -61 - 201208701 420 425 430

Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Qly 435 440 445

Lys <210> 31 <211〉 660 <212> DNA <213〉小鼠

<220〉 <221> CDS <222〉（1)..(660) <400> 31 gat gtt ttg atg acc caa act cca etc tcc ctg cct gtc agt ett gga 48

Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 15 10 15 gat caa gcc tcc ate tet tgc aga tet agt cag age att gta cat agt 96

Asp Gin Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Ile Val His Ser 20 25 30 Φ agt gga ato acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tot 144 0

Ser Gly Ile Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin ^er 35 40 45 cca aag etc ctg ate tac aaa gtt tcc aac ega ttt tet ggg gtc cca 192

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 ⑧ -62- 201208701 gac agg ttc agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc aca etc aag ate 240

Asp Arg Phe Ser 6ly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80 age aga gtg gag ict ^ag gat ctg gga gtt tat tao tgc ttt caa ggt 288

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

tea cat gtt ccg tac acg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 egg get gat get gca cca act gta tee ate ttc cca cca tee agt gag 384

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 cag tta aca tet gga ggt gee tea gtc gtg tgc ttc ttg aac aac ttc 432

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 ccc aaa gac ato aat gtc aag tgg aag att gat ggo agt gaa ega 480

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys H© Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 aat ggc gtc ctg aac agt tgg act gat cag gac age aaa gac age 528

Gin Asn 6!y Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 -63- 201208701 acc tac age atg age age acc etc aeg ttg acc aag gac gag tat gaa 576

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp 61u Tyr Glu 180 185 190 ega cat aac age tat acc tgt gag gee act cac aag aca tea act tea 624

Pro lie VaI Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Gys 210 215 <210〉 32 <211> 219 <212> PRT <213〉小鼠 <400〉 32

Asp VaI Leu

Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 5 10 15

Asd Gin A丨a Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser G丨n Ser lie Val His Ser 20 25 30

Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Me 65 70 75 80 •64- 201208701

Ser Arg Va! Glu Ala Glu Asp Leu Giy Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Vat Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Qlu lie Lys 100 105 110

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 . 140

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 180 185 190

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 195 200 205

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 7 A鼠 35N 、 3 3 D twN >>>> o 123 1— 11 i_l 2222 <220> <221> CDS <222〉（1)..(357) <400〉 33 cag ate cag ttg gtg cag tet gga cct gag ctg aag aag cct gga gag -65- 201208701

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15 aca gtc aag ate tcc tgc aag get tet ggg tat acc ttc ata gao tat 96

Thr Val Lys lie Ser Gys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe He Asp Tyr 20 25 30 tea atg cac tgg gtg aag cag get cca gga aag ggt tta aag tgg atg 144 Λ

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Giy Leu Lys Trp Met 35 40 45 ggc tgg ata aac acc tac act gga gag cca aca tat tet gat gac ttc 192 6ly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60 gga egg ttt gcc ttc tet ttg gaa acc tet gee age act gee tat

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ttg cag ate age aac etc aaa aat gag gac aeg get tea tat ttc tgt Leu Gin lie Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys 85 90 95 |ca acc tac tat agg tac gaa aga gac ttt gac tac tgg ggc caa ggc 336

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110 sec act etc aca gtc tec tea -66 - 201208701 357

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 <210> 34 <211> 119 <212〉 PRT <213〉小鼠 <400> 34

Gin lie Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro 6lu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Ser Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115

<210> 35 <211> 993 <212> DNA -67- 201208701 <213〉小鼠〈220> <221> CDS <222> (1)..(993) <400〉 35 gcc aaa aca aca g〇c cca teg gtc tat cca ctg gcc cot gtg tgt gga 48

Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30 ttc cct gag cca gtg acc ttg acc tgg aac tet gga tec ctg tec agt 144

Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 35 40 45 ggt gtg cac acc ttc cca get gtc ctg cag tet gac etc tac acc etc 192 6ly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60 age age tea gtg act gta acc teg age acc tgg ccc age cag tec ate 240

Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie 65 70 75 80 acc tgc aat gtg gee cac ccg gca age age acc aag gtg gac aag aaa 288

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95 -68- 201208701 att gag ccc aga ggg ccc aca ate aag ccc tgt cct cca tgc aaa tgc 336 lie Glu Pro Arg Gly Fro Thr lie Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 100 105 110 cca gca cct aac etc ttg ggt gga cca tee gtc ttc ate ttc cct cca 384

Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro 115 120 125 aag ate aag gat gta etc atg ate tee ctg age ccc ata gtc aca tgt _ 432 鲁 Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser Leu Ser Pro lie Val Thr Cys 130 135 140 gtg gtg gtg gao gtg ago gag gat gac cca gat gtc cag ate age tgg 480

Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp 145 150 155 160 ttt gtg aac aac gtg gaa gta cao aca get cag aca caa acc cat aga 528 .

Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg

165 170 175 gag gat tac aac agt act etc egg gtg gtc agt gee etc ccc ate cag 576

Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin 180 185 190 cac cag gac tgg atg agt ggc aag gag ttc aaa tgc aag gtc aac aac 624

His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 195 · 200 205 -69- 201208701 aaa gao etc cca gcg ccg ate gag aga acc ate tea aaa ccc aaa ggg 672

Lys Asp Leu Pro Ala Pro He Glu Arg Thr Me Ser Lys Pro Lys Gly 210 215 220 tea gta aga get cca cag gta tat gtc ttg cct cca cca gaa gaa gag 720

Ser Val Arg Ala Pro Gin Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 225 230 235 240 atg act aag aaa cag gtc act ctg acc tgc atg gtc aca gac ttc atg 768

Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 245 250 255 cct gaa gac att tac gtg gag tgg acc aac aac ggg aaa aca gag eta 816 t

Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Qlu Leu 260 265 270 aac tac aag aac act gaa cca gtc ctg gac tet gat ggt tet tac ttc 864

Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn 290 295 300 age tac tee tgt tea gtg gtc cac gag ggt ctg cac aat cac cac aeg 960 .

Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 305 310 315 320 -70- 201208701 act aag age ttc tee ogg act ccg ggt aaa tga 993

Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 325 330 <210> 36 <211〉 330 <212> PRT <213〉小鼠 <400〉 36

Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly 15 10 15

Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Asp Leu Tyr Thr Leu 50 55 60

Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gin Ser lie • 65 70 75 80

Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys 85 90 95

He Glu Fro Arg Gly Pro Thr lie Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys 100 105 110

Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro 115 120 125

Lys lie Lys Asp Val Leu Met lie Ser Leu Ser Pro Me Val Thr Cys -71 - 201208701 130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gin lie Ser Trp 145 150 155 160

Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gin Thr Gin Thr His Arg 165 170 175

Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro lie Gin 180 185 190

His Gin Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn 195 200 205

Lys Asp Leu Pro Ala Pro lie Glu Arg Thr lie Ser Lys Pro Lys Gly 210 215 220

Ser Val Arg Ala.Pro Gin Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu 225 230 235 240

Met Thr Lys Lys Gin Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met 245 250 255

Pro Glu Asp lie Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu 260 265 270

Asri Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe 275 280 285

Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Va! Glu Arg Asn 290 295 300

Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr 305 310 315 320

Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 325 330 -72- 201208701 <210> 37 <211> 336 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220> <221 > CDS <222> (1).. (336) <400> 37 gat gtt ttg atg acc caa act cca etc tee ctg cct gtc agt ett gga 48

Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly

gat caa gee tee ate tet tgc aga tet agt cag age att gta cat agt 96

Asp 6ln Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30 agt gga ate acc tat tta gaa tgg tac ctg cag aaa cca ggc cag tet 144

Ser Gly lie Thr Tyr Leu 6lu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

cca aag etc ctg ate tac aaa gtt tee aac ega ttt tet ggg gtc cca 192

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60 gac agg ttc agt ggc agt gga tea ggg aca gat ttc aca etc aag ate 240

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80 age aga gtg gag get gag gat ctg gga gtt tat tac tgc ttt caa ggt -73- 201208701 288

Ser Arg Val Glu Ala 6lu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin 6ly 85 90 95 tea cat gtt ccg tac aeg ttc gga ggg ggg acc aag ctg gaa ata aaa 336

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Sly Gly Gly Thr Lys Leu Glu 1 ie Lys 100 105 110 <210> 38 <211> 112 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 38

Asp Val Leu Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly 1 5 10 15

Asp Gin Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser He Val His Ser 20 25 30

Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 74- 201208701 <210> 39 <211〉 324 <212> DNA <213〉小鼠 <220〉 <221> CDS <222> (1)..(324) <400> 39 egg get gat get gca cca act gta tee ate ttc cca cca tee agt gag 48

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 15 10 15

cag tta aca tet gga ggt gee tea gtc gtg tgc ttc ttg aao aac ttc 96

Gin Leu Thr Ser Gfy Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu. Asn Asn Phe 20 25 30 tac ccc aaa gac ate aat gtc aag tgg aag att gat ggc agt gaa ega 144

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lye lie Asp Gly Ser Glu Arg 35 40 45 caa aat ggc gto ctg aac agt tgg act gat cag gac age aaa gac age 192

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 65 70 75 80 ega cat aac age tat acc tgt gag gee act cac aag aca tea act tea 288 ·

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser -75- 201208701 85 90 95 ccc att gtc aag age ttc aac agg aat gag tgt taa 324

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105 <210〉 40 <211> 107 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 40

Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser lie Phe Pro Pro Ser Ser Glu 15 10 15

Gin Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 20 25 30

Tyr Pro Lys Asp lie Asn Val Lys Trp Lys lie Asp Gly Ser Glu Arg 35 40 45

Gin Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp 6ln Asp Ser Lys Asp Ser 50 55 60

Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 65 70 75 80

Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 85 90 95

Pro lie Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 100 105 <210〉 41 <211〉 15 76- 201208701 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222> (1)..(15) <400> 41 gac tat tea atg cac 15

Asp Tyr Ser Met His 1 5 # <210> 42 <211> 5 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 42

Asp Tyr Ser Met His <210> 43 <211> 51 <212〉DNA <213〉小鼠

<220> <221> CDS <222〉（1)..(51) <400> 43 tgg ata aac acc tac act gga gag cca aca tat tet gat gac ttc aag 48

Trp He Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15 I?3

Gly 77- 201208701 <210〉 44 <211> 17 <212〉 PRT <213〉小鼠 <400〉 44

Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe Lys 1 5 10 15

Gly

<210> 45 <211〉 30 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222〉（1)..(30) <400〉 45 tac tat agg tac gaaaga gac ttt gac tac 30

Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr

<210〉46 <211> 10 <212〉 PRT <213〉小鼠 <400> 46

Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr 1 5 10 ⑧ -78- 201208701 <210> 47 <211> 48 <212〉 DMA <213〉小鼠 <220> <221> CDS <222> (1)..(48) <400> 47 aga tct agt cag age att gta cat agt agt gga ate acc tat tta gaa 48

Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser Ser Gly Me Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15

<210〉 48 <211> 16 <212> PRT <213〉小鼠 <400> 48

Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu 1 5 10 15 <210> 49 <211> 21

• <212〉 DMA <213〉小鼠 <220

<221> CDS <222> (1)..(21) <400> 49 aaa gtt tcc aac ega ttt tct 21

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 201208701 T鼠 o R l· 5 7 p ^ <210> <211> <212〉 <213〉 <400〉 50

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser <210> 51 <211> 27 <212〉 DNA <213〉小鼠 <220〉 <221> CDS <222〉（1)..(27) <400> 51 ttt caa ggt tea cat gtt ccg tac aeg 27

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr 1 5 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213〉小鼠 <400〉 52

Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr <210> 53 <211> 449 〈212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220> <223> 348-H4 -80- 201208701 <400> 53

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser 6ly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala t 5 10 15

Ser Va! Lys Val Ser Gys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg 6ln Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly 6!u Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Giy 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 彳20 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 -81 - 201208701

Ser Ser Leu 6ly Thr Gin Thr Tyr lie Gys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Aia Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335

Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 -82- 201208701

Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gfy Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 φ Lys <210〉 54 <211〉 119 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉348-H4 可變區 <400> 54

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

10

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 6lu Trp Met 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 -83- 201208701

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala 85

Glu Asp 90

Thr Ala Val Tyr

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg 100

Asp Phe 105

Asp Tyr Trp Gly 110

Tyr Cys 95 Gin Gly

Thr Leu Val Thr Vai Ser Ser 115 " 序 549rt^ 54P Λ >>>> 0 12 3 <220〉 <223> 348-H5 <400> 55 Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly

Ala Glu 10

Val Lys Lys Pro

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala 20

Ser Gly 25

Tyr Thr Phe Thr 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala 35 40

Pro Gly

Gin Gly Leu Lys 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gfy 50 55

Glu Pro

Thr Tyr Ala Asp 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu 65 70

Glu Thr

Ser Val Ser Thr 75

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala 85

Glu Asp 90

Thr Ala Val Tyr

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg

Asp Phe

Asp Tyr Trp Gly

Gly Ala 15 His Tyr Trp Met Asp Phe Ala Tyr 80 Phe Cys 95 Gin Gly -84- 201208701 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Aia Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Gys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 6lu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 -85- 201208701

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335

Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 S8r Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Lys <210> 56 <211> 119 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉348-H5 可變區 -86- 201208701 <400> 56 6ln Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Qlu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr His Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 57 <211> 219 <212〉 PRT 〈213〉人工 <220〉 <223〉 348-L4 <400〉 57 201208701

Glu Pro Ala Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro 6ln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Me Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 6ln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu A!a Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 6ln 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser 6ln Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys -88- 201208701 210 215 <210> 58 <211> 114 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉348-L4 可變區 <400> 58

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 • 6lu Fro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 〜30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Qly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80 A Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Qly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr 列序 9T工 91R ^ 5 2Ρ / <210〉 <211> <212〉 <213〉 89- 201208701 <220> <223> 348-L5 <400〉 59

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15 6lu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Me Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 ⑧ -90- 201208701

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Gys 210 215

<210> 60 <211> 114 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉348-L5 可變區 <400> 60

Asp Val Leu Met Thr 6In Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly 6ln Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110 -91- 201208701

Arg Thr <210〉 61 <211> 449 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223> 357-H4 <400> 61

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr , 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu -92- 201208701 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 6lu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175

Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190

Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Me Gys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Giu Asp 260 265 270

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335 -93- 201208701

Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 6ln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 6In Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly 6ln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445

Lys <210〉 62 <211〉 119 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉357-H4 可變區 <400> 62

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Gfu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr -94- 201208701 20 25 30

Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 6ln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu 6In Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210〉 63 <211> 449 <212> PRT <213〉人工序列

<220〉 <223> 357-H5 <400> 63

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro 6iy Ala 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45 -95- 201208701

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 6In Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 .

Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Gys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220

Thr His Thr Gys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Me Ser 201208701 245 250 255

Arglhr ProGluVal Thr Cys Val Vai Val Asp Val Ser His Glu Asp

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 6ln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335

Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 6ln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350

Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380

Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415

Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 -97- 201208701

Lys <210〉 64 <211> 119 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220> <223〉35>H5 可變區 <400〉 64

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser 6ly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe lie Asp Tyr 20 25 30

Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser Asp Asp Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 201208701 <211> 219 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223> 357-L4 <400〉 65

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Me Val His Ser 20 25 30 春 Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu Me Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe 6ln Gly 85 90 95 A Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125

Gin Leu Lye Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 6ln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160 -99- 201208701

Ser 6ly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Gys 210 215

<210> 66 〈211〉 114 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉357-L4 可變區 <400〉 66

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro 6ln Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 . 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95 ⑧ -100- 201208701

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val 6lu lie Lys 100 105 110

Arg Thr <210〉 67 <211〉219 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉 357-L5 • <400> 67

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Vai Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Gys Arg Ser Ser Gin Ser lie Val His Ser 20 25 30

Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Giy Val Tyr Tyr Cys Phe Gin Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Giu lie Lys 100 105 110

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 -101 - 201208701

Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin 145 150 155 160

Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Qlu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser 195 200 205

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 68 <211> 114 <212> PRT <213〉人工序列 <220>

<223〉357-L5 可變區 <400〉 68

Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser He Val His Ser 20 25 30

Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro ⑧ -102- 201208701 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Qly Ser Gly Ser 61y Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe 6ln Gly 85 90 95

Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 110

Arg Thr

<210〉 69 <211> 28 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉引子 EFF1 <400> 69 ccacgcgccc tgtagcggcg cattaagc 28

<210> 70 <211〉 30 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉引子 EFsmaR <400〉 70 aaacccggga gctttttgca aaagcctagg 30 <210> 71 <211> 1704 <212> DNA <213〉人工序列 103- 201208701 <220> <223〉Human Kappa 訊號+Kappa 怪定區+poly A <400 71 ggtaccaccc aagctggcta ggtaagcttg ctagcgccac catggtgctg cagacccagg 60 tgttcatctc cctgctgctg tggatctccg gcgcatatgg cgatatcgtg atgattaaac 120 gtacggtggc cgccccctcc gtgttcatct tccccccctc cgacgagcag ctgaagtccg 180 gcaccgcctc cgtggtgtgc ctgctgaata aottctaccc cagagaggcc aaggtgcagt 240 ggaaggtgga caacgccctg cagtccggga actcccagga gagcgtgacc gagcaggaca 300 gcaaggacag cacctacagc ctgagcagca ccctgaccct gagcaaagcc gactacgaga 360 agcacaaggt gtacgcctgc gaggtgaccc accagggcct gagctccccc gtcaccaaga 420 gcttcaacag gggggagtgt taggggcccg tttaaacggg tggcatccct gtgacccctc 480 cccagtgcct ctcctggccc tggaagttgc cactccagtg cccaccagcc ttgtcctaat 540 aaaattaagt tgcatcattt tgtctgacta ggtgtccttc tataatatta tggggtggag 600 gggggtggta tggagcaagg ggcaagttgg gaagacaacc tgtagggcct gcggggtcta 660 ttgggaacca agctggagtg cagtggcaca atcttggctc actgcaatct ccgcctcctg 720 ggttcaagcg attctcctgc ctcagcctcc cgagttgttg ggattccagg catgcatgac 780 caggctcacc taatttttgt ttttttggta gagacggggt ttcaccatat tggccaggct 840 ggtctccaac tcctaatctc aggtgatcta cccaccttgg cctcccaaat tgctgggatt 900 201208701 acaggcgtga accactgctc cacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg 960 tggttacgcg oagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt 1020 tcttcccttc ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc 1080 tccctttagg gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg 1140 gtgatggttc acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg 1200 agtccacgtt ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct • 1260 cggtctattc ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg 1320 agctgattta acaaaaattt aacgcgaatt aattctgtgg aatgtgtgtc agttagggtg 1380 tggaaagtcc ccaggctccc cagcaggcag aagtatgcaa agcatgcatc tcaattagtc 1440 agcaaccagg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc agaagtatgc aaagcatgca 1500 tctcaattag tcagcaacca tagtcccgcc cctaactccg cccatcccgc ccctaactcc 1560

gcocagttcc gcccattctc cgccccatgg ctgactaatt ttttttattt atgcagaggc 1620 cgaggccgcc tctgcctctg agctattcoa gaagtagtga ggaggctttt ttggaggcot 1680 aggcttttgc aaaaagctcc cggg <210〉 72 <211> 1120 <212> DNA <213〉人工序列 -105- 201208701 <220〉 <223〉人類IgG訊號+恆定區 <400〉 72 tgctagcgcc accatgaaac acctgtggtt cttcctcctg ctggtggcag ctcccagatg 60 ggtgctgagc caggtgcaat tgtgcaggcg gttagctcag cctccaccaa gggcccaagc 120 gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc acctctggcg gcacagccgc cctgggctgc 180 ctggtcaagg actacttccc cgaacccgtg accgtgagct ggaactcagg cgccctgacc 240

agcggcgtgc acaccttccc cgctgtcctg cagtcctcag gactctactc cctcagcagc 300 gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac 360 aagcccagca acaccaaggt ggacaagaga gttgagccca aatcttgtga caaaactcac 420 acatgcccac cctgcccagc acctgaactc ctggggggac cctcagtctt cctcttcccc 480 ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg 540 gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg

cataatgcca agacaaagcc ccgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg ggtggtcagc 660 gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc 720 aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa aocatctcca aagccaaagg ccagccccgg 780 gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga tgaccaagaa ccaggtcagc 840 ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat 900 ⑧ -106- 201208701 ggccagcccg agaacaacta caagaccacc cctcccgtgc tggactccga cggctccttc 960 ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc agcagggcaa cgtcttctca 1020 tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacaccc agaagagcct ctccctgtct 1080 cccggcaaat gagatatcgg gcccgtttaa acgggtggca 1120

<210〉 73 <211> 442 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223〉訊號+hSH-348-l-TlL 可變區 <400> 73 aggtaagctt gctagcgcca ccatggtgct gcagacccag gtgttcatct ccctgctgct 60 gtggatctcc ggcgcatatg gcgacatagt gatgacccag agccccctga gcctgcccgt 120 gacccccggc gagcccgcct ccatcagctg ccggagcagc cagagcatcg tgcacagcaa 180 cggcaacacc tacctggagt ggtacctgca gaagcccggc cagagccccc agctgctgat 240 ctacaaggtg agcaaccggt tcagcggcgt gcccgaccgg ttcagcggca gcggcagcgg 300 caccgacttc accctgaaga tcagccgggt ggaggccgag gacgtgggcg tgtactactg 360 cttccagggc tcccacgtgc cctacacctt cggccagggc accaaggtgg agatcaagcg 420 tacggtggcc gccccctccg tg 442 <210> 74 <211〉 442 201208701 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉訊號+hSH357-l-TlL 可變區 <400> 74 aggtaagctt gctagcgcca ccatggtgct gcagacccag gtgttcatct ccctgctgct 60 gtggatotcc ggcgcatatg gcgacatagt gatgacccag agccccctga gcctgcccgt 120 gacccccggc gagcccgcca gcatcagctg ccggagcagc cagagcatcg tgcacagcag 180

cggcatcacc tacctggagt ggtacctgca gaagcccggc cagagccccc agctgctgat 240 ctacaaggtg agcaaccggt tcagcggcgt gcccgaccgg ttcagcggca gcggcagcgg 300 caccgacttc accctgaaga tcagccgggt ggaggccgag gacgtgggcg tgtactactg 360 cttccagggc agccacgtgc cctacacctt cggccagggc accaaggtgg agatcaagcg 420 tacggtggcc gccccctccg tg 442

<210〉 75 <211> 460 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220〉 <223〉hSH348-l-TlH 可變區 <400〉 75 gtaagcttgc tagcgcacca tgaagcacct gtggttcttc ctgctgctgg tggccgcccc 60 cagatgggtg ctgagccagg tgcagctggt gcagagcggc gccgaggtga agaagcccgg 120 cagcagcgtg aaggtgagct gcaaggccag cggctacacc ttcacccact acagcatgca ⑧ -108- 201208701 ctgggtgcgg caggcccccg gccagggcct ggagtggatg ggctggatca acacctacac 240 cggcgagccc acctacgccg acgacttcaa gggccgggtg accatcaccg ccgacacctc 300 cacctccacc gcctacctgg aactgagcag Qctgcggagc gaggacaccg ccgtgtacta 360 ctgcgccacc tactaccggt acgagcggga cttcgactac tggggccagc gcaccctggt 420 gaccgtgagc tcagcctcct ccaccaaggg cccctccgtg 460

<210> 76 <211〉 460 <212〉 DMA <213〉人工序列 <220〉 <223〉hSH357-l-TlH 可變區 <400> 76 gtaagcttgc tagcgcacca tgaagcacct gtggttcttc ctg.ctgctgg tggccgcccc 60 oagatgggtg ctgagccagg tgcagctggt gcagtooggc «tga agaagcocgg cgcctccgtg aaggtgtcct gtaaggcctc cggctacacc ttcatcgact actccatgca ctgggtgagg caggcccccg gccagggcct ggagtggatg ggctggatca acacctacac 240 cggcgagccc acctactccg acgacttcaa gggcagggtg accatcaccg ccgacacctc 300 caccagcacc gcctacctgg agctgtcctc cctgaggtcc gaggacaccg ccgtgtacta 360 ctgtgccacc tactacaggt acgagaggga cttcgactac tggggccagg gcaccctggt 420 gacggtgagc tcagcctcct ccaccaaggg cccctccgtg 460 201208701 <210> 77 <211> 717 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220>

<223> hSH348-T1L <220> <221> CDS <222〉(1).. (717) <400〉 77

atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tee ctg ctg ctg tgg ate tee 48

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser 15 10 15 ggc gca tat ggc gac ata gtg atg acc cag age ccc ctg age ctg ccc 96

Gly Ala Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 gtg acc ccc ggc gag ccc gcc tcc ate age tgc egg age age cag age 144

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 ate gtg cac age aac ggc aac acc tac ctg gag tgg tac ctg cag aag 1 yz lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 5〇 55 60 ccc ggc cag age ccc cag ctg ctg ate tac aag gtg age aac egg ttc Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 -110 201208701 age ggc gtS ccc gac egg ttc age ggc age ggc age ggc acc gac ttc 288

Ser Gly V2I Asp Arg Phe Ser 6ly Ser Qly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 acc ctg aag ate age egg gtg gag gee gag gac gtg ggc gtg tac tac 336

Thr Leu Lys He Ser Arg Vai Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 tgc ttc cag ggc tee cac gtg ccc tac acc ttc ggc 〇ag ggc acc aag 修 Cys Phe 6ln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 gtg gag ate aag cgt aeg gtg gee gee ccc tee gtg ttc ate ttc ccc 432

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140 ccc tee gac gag cag ctg aag tee ggc acc gee tee gtg gtg tgc ctg 480

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu φ 145 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gee aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 6ln Trp Lys Val Asp 165 170 175 aac gee ctg cag tee ggg aac tee cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser GHn Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 -111- 201208701 age aag gac age acc tac age ctg age age acc ctg ace ctg age aaa 624

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 gee gac tac gag aag cac aag gtg tac gee tgc gag gtg acc cac cag 672

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 ggc ctg age tee ccc gtc acc aag age ttc aac agg ggg gag tgt 717

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210〉 78 <211〉 239 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成建構體 <400> 78

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe Me Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 lie Val His Ser Asn Gly Αδη Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 201208701

Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140

Pro Ser Asp Glu 6ln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 列序 7A工 91N IV 7 lD / <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 -Il3- 201208701 <220>

<223> hSH357-T1L <220> <221> CDS <222> (1)..(717)

V <400> 79 atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tee ctg ctg ctg tgg ate tee

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15 ggc gca tat ggc gac ata gtg atg acc cag agc ccc ctg age ctg ccc φ

Gly Ala Tyr Gly Asp Me Val Met Thr 6ln Ser Pro Leu Ser Leu Pro gtg acc ccc ggc gag ccc gcc age ate age tgc egg age age cag age Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 3 每 40 45 ate gtg cac age age ggc ate acc tac otg gag tgg tac ctg cag aag 192

Ile Val. His Ser Ser Gly Ile Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 ccc ggc cag age ccc cag ctg ctg ate tac aag gtg age aac egg ttc 240

Pro Gly Gin Ser Pro 6ln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 age ggc gtg ccc gac egg ttc age ggc age ggc age ggc acc gac ttc 288

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe ⑧ -114- 201208701 85 90 95 acc ctg aag ate age egg gtg gag gee gag gac gtg ggc gtg tac tao 336

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr _ 105 110 tgc ttc cag ggc age cac gtg ccc tac acc ttc ggc cag ggc acc aag 384

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

gtg gag ate aag cgt aeg gtg gee gee ccc tee gtg ttc ate. ttc ccc Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140 ccc tee gac gag cag ctg aag tee ggc acc gee tee gtg gtg tgc ctg 480

Pro Ser Asp Glu 6ln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gee aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu'Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175 aac gee ctg cag tee ggg aac tee cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 age aag gac age acc tac age ctg age age acc ctg acc ctg age aaa 624

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys -115- 201208701 195 200 205 gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag 672

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 ggc ctg age tee ccc gtc aco aag age ttc aac agg ggg gag tgt 717

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe A$n Arg 6ly Glu Cys 225 230 235 <210> 80 <211> 239 <212> PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成建構體 <400> 80

Met Val Leu 6In Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp Me Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45

Me Val His Ser Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu 6ln Lys 50 55 60

Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe -116- 201208701 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Giy Val Tyr Tyr 100 105 110

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu 6ln Asp 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210〉 81 <211> 717 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223> 348-L4 <220> -117- 201208701 <221> CDS <222> (1)..(717) <400> 81 atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tee ctg ctg ctg tgg at〇 tee 48

Met Val Leu Gin Thr 6In Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp j[e §er 1 5 15 ggc gca tat ggc gac ate gtg atg acc cag ago ccc ctg ag〇〇tg cct 6ly Ala Tyr Gly Asp lie Val Met Thr 6ln Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 gtg aca cca ggc gag ccc gcc age ate age tgc aga tee age 〇ag age

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 ate gtg cac age aac ggc aac acc tac ctg gaa tgg tat ctg cag aag lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Giu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 ccc ggc cag tee ccc cag ctg ctg ate tac aag gtg tee aac egg ttc 240

Pro Gly 6In Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 age ggc gtg ccc gac aga ttc age ggc age ggc tee ggc acc gac ttc 288

Ser Gly Vai Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 acc ctg aag ate age egg gtg gaa gee gag gac gtg ggc gtg tac tac 336

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr -118- 201208701 100 105 110 tgt ttt caa ggc age cac gtg gcc tac acc ttc ggc cag ggc acc aag 384

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 gtg gaa ate aag cgt aeg gtg gcc gee ccc tco gtg ttc ate ttc ccc 432

Val 6!u Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140

ccc tee gac gag cag ctg aag tee ggc acc gcc tee gtg gtg tgc ctg 480

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu H5 . 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val 6ln Trp Lys Val Asp 165 170 175 aac gcc ctg cag tee ggg aac tee cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 61n Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 age aag gac age acc tac age ctg age age acc ctg acc ctg age aaa 624

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 gee gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag 672

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Vai Thr His Gin -119- 201208701 210 215 220 ggc ctg age tee ccc gtc acc aag age ttc aac agg ggg gag tgt 717

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 6ly Glu Cys 225 230 235 <210> 82 <211〉 239 <212〉 PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉合成建構體 <400> 82

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe Me Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp He Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45

Me Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60

Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 201208701

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin G!y Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu 6(n Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 •<210> 83 <211> 717 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223> 357-L4 <220〉 <221> CDS <222〉（1)..(717) <400> 83 atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tcc ctg ctg ctg tgg ate tcc 48 -121 - 201208701

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 1 5 1〇 15 ggc gca tat ggc gac ate gtg atg acc cag age ecc ctg age ctg cct 96 6ly Ala Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 gtg aca cca ggc gag ccc gcc age ate age tgc aga tcc age cag age 144

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Me Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 ate gtg cac age age ggc ate acc tac ctg gaa tgg tat ctg cag aag 192 lie Val His Ser Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 ccc ggc cag tcc ccc cag ctg ctg ate tac aag gtg tcc aac egg ttc 240

Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu Me Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 age ggc gtg ccc gac aga ttc age ggc age ggc tcc ggc acc gac ttc 288

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 acc ctg aag ate age egg gtg gaa gcc gag gac gtg ggc gtg tac tac 336

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Gfu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 tgt ttt caa ggc age cac gtg ccc tac acc ttc ggc cag ggc acc aag 384 -122- 201208701

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 gtg gaa ate aag cgt aeg gtg gee gee ccc tee gtg ttc ate ttc ccc 432 4

Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 ho ccc tee gac gag cag ctg aag tee ggc acc gee tee gtg gtg tgc ctg 480

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gee aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175 aac gee ctg cag tee ggg aac tee cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Asn Ala Leu G(n Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 age aag gac age acc tac age ctg age age acc ctg acc ctg age aaa 624

Ala Asp Tyr Qlu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 ggc ctg age tee ccc gtc acc aag age ttc aac agg ggg gag tgt 717 -123- 201208701

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 84 <211> 239 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉 <223〉合成建構鱧 <400〉 84

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe Me Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 lie Val His Ser Ser Gly lie Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60

Pro Gly Gin Ser Pro Gin Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro -124- 201208701 130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser 6ln Glu Ser Val Thr Glu G!n Asp 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His 6ln 210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Vai Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210〉 85 <211> 717 <212〉 DNA <213〉人工序列

<220> <223〉 348-L5 <220〉 <221> CDS <222> (1)..(717) <400> 85 atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tcc ctg ctg ctg tgg ate too 48

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 1 5 10 15 ggc gca tat ggc gac gtg ctg atg acc cag age ccc ctg age ctg cct -125- 201208701 96

Gly Ala Tyr Gly Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 gtg aca cca ggc gag ccc gcc age ate age tgc aga tcc age cag age 144

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 ate gtg cac age aac ggc aac acc tac ctg gaa tgg tat ctg cag aag lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60 ® ccc ggc cag tcc ccc aag ctg ctg ate tac aag gtg tcc aac egg ttc 240

Pro Gly 6ln Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 age ggc gtg ccc gac aga ttc age ggc age ggc tcc ggc acc gac ttc 288

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

acc ctg aag ate age egg gtg gaa gcc gag gac gtg ggc gtg tac tac 336

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 tgt ttt caa ggc age cac gtg ccc tac acc ttc ggc cag ggc acc aag 384

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 gtg gaa ate aag cgt aeg gtg gee gcc ccc tcc gtg ttc ate ttc ccc ⑧ -126- 201208701

Val Qlu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140 ccc tcc gac gag cag ctg aag tcc ggc acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg fro Ser Asp 6lu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Va.l Val Cys Leu 145 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg 6lu Ala Lys Val 6ln Trp Ly$ Val Asp # 165 170 175 aac gcc ctg cag tcc ggg aac tcc cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

gcc gac tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gag gtg acc cac cag 672

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 ggc ctg age tcc ccc gtc acc aag age ttc aac agg ggg gag tgt Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Qlu Cys 225 230 235 -127- 201208701 <210> 86 <211> 239 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220〉〈223>合成建構體 <400> 86

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr 6ly Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 lie Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gin Lys 50 55 60

Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110

Gys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125

Val Giu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Gys Leu 145 150 155 160 ⑧ -128- 201208701

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu 6ln Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Gys Glu Val Thr His Gin 210 215 220

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210〉 87 <211〉 717 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223> 357-L5 <220> <221> CDS <222〉（1)..(717) <400〉 87 atg gtg ctg cag acc cag gtg ttc ate tcc ctg ctg ctg tgg ate tcc 48

Met Val Leu Gin Thr Gin Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 1 5 10 15 ggc gca tat ggc gac gtg ctg atg acc cag age ccc ctg age ctg cct 96

Gly Ala Tyr Gly Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30 129 201208701 gtg aca cca ggc gag ccc gcc age ate age tgc aga tee age cag age 144

Val Thr Pro Gly G|u Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser 35 40 45 ate gtg cac age age ggc ate acc tac ctg gaa tgg tat ctg cag aag 192

Ile Val His Ser Ser Gly Ile Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Qln Lys 50 55 60 ccc ggc cag tee ccc aag ctg ctg ate tac aag gtg tee aac egg ttc 240

Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80 age ggc gtg ccc gac aga ttc age ggc age ggc tee ggc acc gac ttc 288

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys 115 120 125 gtg gaa ate aag cgt aeg gtg gcc gee ccc tee gtg ttc ate ttc ccc* 432

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 ho -130- 201208701 ccc tcc gac gag cag ctg aag tcc gg〇 acc gcc tcc gtg gtg tgc ctg 480

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 ctg aat aac ttc tac ccc aga gag gcc aag gtg cag tgg aag gtg gac 528

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175 aac gcc ctg cag tcc ggg aac tcc cag gag age gtg acc gag cag gac 576

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp 180 185 190 age aag gac age acc tac age ctg age age aoc ctg acc ctg age aaa 624 TU , Λ

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 gcc gao tac gag aag cac aag gtg tac gcc tgc gas gtg aGC cac caS 672

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Gys Glu Val Thr His Gin 210 215 220 ggc ctg age tcc ccc gtc acc aag age ttc aac agi ggg gag 717

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Gys 225 230 235 <210> 88 <211> 239 <212〉 PRT <213〉人工序列 -131 - <220> 201208701 <223〉合成建構體 <400> 88

Met Val Leu Gin Thr 6ln Val Phe lie Ser Leu Leu Leu Trp lie Ser 15 10 15

Gly Ala Tyr Gly Asp Val Leu Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro 20 25 30

Pro Gly Gin Ser Pro Lys Leu Leu lie Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe 65 70 75 80

Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95

Thr Leu Lys lie Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110

Cys Phe Gin Gly Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly 6ln Gly Thr Lys 115 120 125

Val Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro 130 135 140

Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp 165 170 175

Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp -132- 201208701 180 185 190

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Gys 6lu Val Thr His Gin 210 215 220 以y Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Gys 230 235 <210> 89 •<211> 1404 <212> DNA <213〉人工序列 <220> <223> 348-H4 <220〉 <221> CDS 〈222> ⑴..（1404) <400〉 89 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp

gtg ctg age cag gtg cag ctg gtg cag tet ggc gcc gaa gtg aag aaa 96

Val Leu Ser Gin Vai Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 cct ggc gcc tcc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc age ggc tac acc ttc Ϊ44

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 -133- 201208701 acc cac tac age atg cac tgg gtg ege cag gee cca ggc cag gga ctg 1 OL·

Thr His Tyr Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 gg tgg atg ggc tgg ate aac acc tac acc ggc gag cgg acc tac gee 6lu Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala 65 70 75 80 gac gac ttc aag ggc aga ttc gtg ttc age ctg gac acc age gtg tee 288

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser 85 90 95 acc gee tac ctg cag ctg tee age ctg aag gee gag gac acc gee gtg 336

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tac tac tgc gee acc tac tac aga tac gag egg gac ttc gac tac tgg 384

Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 ggc cag ggc acc ctg gtg aca gtg age tea gee tee acc aag ggc cca 432

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 age gtc ttc ccc ctg gca ccc tee tee aag age acc tet ggc ggc aca Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 ⑧ -134- 201208701 loo ^cc Sgc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc gtg acc Ala Ala Leu Gly Gys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 gtg age tgg aac tea ggc gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc 576

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 get gtc ctg cag tee tea gga etc tao tee etc age age gtg gtg acc 624 鲁 Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 gtg ccc tee age age ttg ggo acc cag acc tac ate tgc aac gtg aat 672

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220 cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tet 720

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa etc ctg 768

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 ggg gga ccc tea gtc ttc etc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc etc 816

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 -135- 201208701 atg ate tee egg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age 864

Met lie Ser Arg Thr Pro 6lu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 912

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 gtg cat aat gee aag aca aag ccc egg gag gag cag tac aac age aeg 960

Val His Asn Aia Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 tac egg gtg gtc age gtc etc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 1008

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tee aac aaa gee etc cca gee ccc 1056

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 ate gag aaa acc ate tee aaa gee aaa ggc cag ccc egg gaa cca cag 1104

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365 gtg tac acc ctg ccc cca tee egg gag gag atg acc aag aac cag gtc 1152

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380 ⑧ -136- 201208701 3gC Ctg 3CC Ctg £tC 333 ttC t3t CCC 3gc gac 3t〇 RCC ETtff 1200

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 4〇〇 gag tgg gag 3gc aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc cct 1248

Glu Trp 6lu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 ccc gtg ctg gac tcc gac ggc tcc ttc ttc etc tac age aag etc acc 赢 1296 ^ Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 gtg gac aag age agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tea tgc tcc gtg 1344 ,

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 atg cat gag get ctg cac aac cac tac acc cag aag age etc tcc ctg 1392 liet His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu

450 455 460 tet ccc ggc aaa 1404

Ser Pro Gly Lys 465 <210> 90 <211〉 468 <212〉 PRT <213〉人工序列 -137- 201208701 <220> <223〉合成建構艎 <400〉 90

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser 6ly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr His Tyr Ser Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Giy Leu 50 55 60

Glu Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala 65 70 75 80

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Fro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 . 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Giu Pro Val Thr 165 170 175 ⑧ -138- 201208701

Val Ser Trp Asn Ser 6ly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val 6lu Pro Lys Ser 225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Gys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 6ly Val Glu 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 lie Glu Lys Thr Me Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val -139- 201208701 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 6ln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460

Ser Pro Gly Lys 465 <210> 91 <211> 1404 <212> DNA <213〉人工序列 <220〉 <223> 348-H5 <220> <221> CDS <222> (1)..(1404) <400> 91 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 gtg ctg age cag gtg cag ctg gtg cag tet ggc gcc gaa gtg aag aaa -140- 201208701 96

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Va! Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 cct ggc gcc tcc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc age ggc tac acc ttc 144

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 acc cac tac age atg cac tgg gtg aaa cag gcc cca ggc cag gga ctg 192

Thr His Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 aag tgg atg ggc tgg ate aac aco tac acc ggc gag ccc acc tac gcc 240

Lys Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala 65 70 75 80 gac gac ttc aag ggc aga ttc gcc ttc age ctg gaa acc age gtg tcc 288

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser 85 90 95 acc gcc tac ctg cag ctg tcc age ctg aag gcc gag gac acc gcc gtg 336

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tac ttt tgc gcc acc tac tac aga tac gag egg gac ttc gac tac tgg 384

Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 ggc cag ggc acc ctg gtg aca gtg age tea gcc tcc acc aag ggc cca -141 - 201208701 432

Gly Gin 6ly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 •age gtc ttc ccc otg gca ccc tcc tcc aag age acc tet ggc ggc aca 480

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 146 150 155 160 gec gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc cco gaa ccc gtg acc 52Q

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175 gtg age tgg aac tea ggc gcc ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc 576

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 get gtc ctg cag tcc tea gga etc tac tcc etc age age gtg gtg acc 624

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 gtg ccc tcc age age ttg ggc acc cag acc tac ate tgc aac gtg aat 672

Vai Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220 cac aag 〇〇〇 age aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag cco aaa tet His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 tgt gac aaa act cac aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa etc ctg -142- 201208701 768

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270 atg ate tee egg acc cct gag gtc aca tgc gtg gtg gtg gac gtg age 864

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 cac gaa gac cct gag gto aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag 912 ,

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 tac egg gtg gtc age gtc etc acc gtc ctg cac cag gac tgg ctg aat 1008

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 ate gag aaa acc ate tee aaa gee aaa ggc cag ccc egg gaa cca cag -143- 201208701 1104

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365 gtg tac acc ctg ccc cca tcc egg gag gag atg acc aag aac cag gtc 1152

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Qln Val 370 375 380 age ctg acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac ate gee gtH 1200 ε Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 400 gag tgg gag age aat ggc cag ccc gag aao aac tac aag acc acc cct 1248

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 ccc gtg ctg gac tec gac ggc tec ttc ttc etc tac age aag etc acc 1296

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 gtg gac aag age agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tea tgc tec gtg 1344

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 atg cat gag get ctg cac aac cac tac acc cag aag age etc tec ctg 1392

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 tet ccc ggc aaa -144- 201208701 1404

Ser Pro Gly Lys 465 <210> 92 <211> 468 <212> PRT 〈213〉人工序列 <220〉 <223〉合成建構體 <400> 92 Λ Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Thr His Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60

Lys Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala 65 70 75 80

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 -145- 201208701

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Qly Pro 130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Gys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270

Met He Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn -146- 201208701 325 330 335

Qly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 lie Glu Lys Thr He Ser Lys Ala Lys 6Iy Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460

Ser Pro Gly Lys 465 <210> 93 <211> 1404 <212〉 DNA <213〉人工序列 <220> <223> 357-H4 -147- <220> 201208701 <221> CDS 〈222〉（1)..(1404) <400> 93 atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get ccc aga tgg 48

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 15 10 15 gtg ctg age cag gtg cag ctg gtg cag tet ggc gee gaa gtg aag aaa 96

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 cct ggc gee tee gtg aag gtg tee tgc aag gee age ggc tac acc ttc 144

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Giy Tyr Thr Phe 35 40 45 ate gac tac age atg cac tgg gtg ege cag gee cca ggc cag gga ctg 192 lie Asp Tyr Ser Met His Trp Va! Arg Gin Ala Pro G!y Gin Gly Leu 50 55 60 gaa tgg atg ggo tgg ate aac acc tac acc ggc gag ccc acc tac age 240

Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser 65 70 75 80 gac gac ttc aag ggc aga ttc gtg ttc age ctg gac acc age gtg tee 288

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val -148- 201208701 100 105 110 tac tgc gcc acc tac tac aga tac gag egg gac ttc gac tac tgg 384

Tyr Tyr Gys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr T卬 115 彳20 125 ggc cag ggc acc ctg gtg aca gtg age tea gee tee acc aag ggc cca 432

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val.Ser Ser Ala Ser Thr Lys 6ly Pro 130 135 140 age gtc ttc ccc ctg gca ccc tee tee aag age acc tet ggc ggc aca 480

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 gee gee ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc gtg acc 528

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175

gtg age tgg aac tea ggc gee ctg acc age ggc gtg cac acc ttc ccc 576

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 get gtc ctg cag tee tea gga etc tac tee etc age age gtg gtg acc 624

Ala Val Leu 6ln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205 gtg ccc tee age age ttg ggc acc cag acc tac ate tgc aac gtg aat 672

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Vai Asn -149- 201208701 210 215 220 cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tet 720 , n

Gys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Gys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255

ggg gga ccc tea gtc ttc etc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc etc 816

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285

cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 gtg cat aat gee aag aca aag ccc egg gag gag cag tac aac age aeg 960

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 6ln Asp Trp Leu Asn ⑧ -150- 201208701 325 330 335 ggc aag gag tac aag tgc aag gtc tcc aac aaa gcc etc cca gee ccc 1056

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 ate gag aaa acc ate tec aaa gee aaa ggc cag ccc egg gaa cca cag 1104 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

gtg tac acc ctg ccc cca tec egg gag gag atg acc aag aac cag gtc 1152

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac ate gcc gtg

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 400 f宫f tSS gag age aat ggc cag ggg gag aac aac tac aag acc acc cct • 1248

Glu Trp Glu Ser Asn Gly 6ln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 gac tee gao ggc too ttc ttc etc tac age aag etc acc

Pro Vai Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 特|4§ac aaS age agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tea tgc tee gtg

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Gys Ser Val

S -151- 201208701 435 440 445 atg cat gag get ctg cac aac cac tac acc cag aag age etc tee ctg 1392

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 tet ccc ggc aaa 1404

Ser Pro 6ly Lys 465 <210〉 94 <211> 468 <212〉 PRT <213〉人工序列 <220> <223〉合成建構體 <400> 94

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Vaf Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 lie Asp Tyr Ser Met His Trp Va! Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60

Glu Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser 65 70 75 80 -152- 201208701

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 •Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr Me Cys Asn Val Asn 210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser -153- 201208701 275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 6ly Val Glu 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Qln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 .

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445

Met His Slu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460

Ser Pro Gly Lys 465 -154- 201208701 <210> 95 <211〉 1404 <212〉 DMA <213〉人工序列 <220> <223> 357-H5 <220〉 <221> CDS <222〉(1).. (1404) <400> 95

atg aaa cac ctg tgg ttc ttc etc ctg ctg gtg gca get coo aga tgg 48

Met Ly$ His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15 « gtg ctg age cag gtg cag ctg gtg cag tet ggc gcc gaa gtg aag aaa 96

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Qly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 cct ggc gcc tcc gtg aag gtg tcc tgc aag gcc age ggc tac acc ttc 144

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe

ate gac tac age atg cac tgg gtg aaa cag gcc cca ggc cag gga ctg 192 lie Asp Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60 aag tgg atg ggc tgg ate aac acc tac acc ggc gag ccc acc tac age 240

Lys Trp Met Gly Trp Me Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser 65 70 75 80 -155- 201208701 gac gac ttc aag ggc aga ttc gcc ttc age ctg gaa acc age gtg tee 288

Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Fhe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser 85 90 95 acc gcc tac ctg cag ctg tee age ctg aag gcc gag gac acc gee gtg 336

Thr Ala Tyr Leu Gin Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 tac ttt tgc gcc acc tac tac aga tac gag egg gac ttc gac tac tee 384

Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 ggc cag ggc acc ctg gtg aca gtg age tea gcc tee acc aag ggc cca 432

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140 age gtc ttc ccc ctg gca ccc tee tee aag age acc tet ggc ggc aca 480

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160 goc gee ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccc gtg acc 528

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190 201208701 get gtc ctg cag tee tea gga etc tac tee etc age age gtg gtg acc 624

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Va! Thr 195 200 205 gtg ccc tee age age ttg ggc acc cag acc tac ate tgc aac gtg aat 672

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 6ln Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220

cac aag ccc age aac acc aag gtg gac aag aga gtt gag ccc aaa tet 720

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser 225 230 235 240 tgt gac aaa act cao aca tgc cca ccc tgc cca gca cct gaa etc ctg 768

Gys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 ggg gga ccc tea gtc ttc etc ttc ccc cca aaa ccc aag gac acc etc 816

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285 cac gaa gac cct gag gtc aag ttc aac tgg tac gtg gac ggc gtg gag His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300 -157- 201208701 gtg cat aat gcc aag aca aag ccc egg gag gag cag tac aac age aeg Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320 tac gtg gtc age gtc etc acc gtG cac cag gac tgg ctg

Tyr^Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 325 330 335 ggc aag gag tac sag tsc 3ag gtc tee aac aaa gcc etc cca gcc ccc 1056

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 ate gag aaa acc ate tee aaa gcc aaa ggc cag ccc egg gaa cca cag 1104 lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly 6ln Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365 gtg tac acc ctg ccc cca tee egg gag gag atg acc aag aac cag gtc 1152

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380 acc tgc ctg gtc aaa ggc ttc tat ccc age gac ate gcc gtg Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Me Ala Val 385 390 395 400 gag age aat ggc cag ccc gag aac aac tac aag acc acc cct 1248

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415 -158- 201208701 ccc gtg ctg gaG tcc gac ggc tcc ttc ttc etc tac age aag etc acc 1296

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 gtg gac aag age agg tgg cag cag ggc aac gtc ttc tea tgc tcc gtg 1344

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin 6ln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445 atg cat gag get ctg cac aac cac tac acc cag aag age etc tcc ctg 1392 鲁 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460 tot ccc ggc aaa 1404

Ser Pro Gly Lys 465 <210〉96 <211〉 468 <212> PRT ^ <213〉人工序列 <220> <223〉合成建構體 <400> 96

Met Lys His Leu Trp Phe Phe Leu Leu Leu Val Ala Ala Pro Arg Trp 1 5 10 15

Val Leu Ser Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 -159- 201208701

Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe 35 40 45

Ile Asp Tyr Ser Met His Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu 50 55 60

Lys Trp Met Gly Trp lie Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ser 65 70 75 80

Asp Asp Fhe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Val Ser 85 90 95

Thr Ala Tyr Leu 6In Leu Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110

Tyr Phe Cys Ala Thr Tyr Tyr Arg Tyr Glu Arg Asp Phe Asp Tyr Trp 115 120 125

Qly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 180 185 190

Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie Cys Asn Val Asn 210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser -160- 201208701 225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 245 250 255 6ly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 260 265 270

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His 61n Asp Trp Leu Asn 325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 340 345 350 I le Glu Lys Thr Me Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val 370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 420 425 430 -161 - 201208701

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin 61y Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 450 455 460

Ser Pro Gly Lys 465

⑧ -162-

Claims

201208701 七、申請專利範圍： 1. 一種抗體或該抗體之機能性片段’其係包含重鏈及輕鏈所成，且專一性識別包含序列表之序列編號4所示之胺基酸序列而成之多胜；

前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號1 8所示之胺基酸序列而成之CDRH 1、包含序列表之序列編號 20所示之胺基酸序列而成之CD RH2、及包含序列表之序列編號22所示之胺基酸序列而成之CDRH3所成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號4 8所示之胺基酸序列而成之CDRL 1、包含序列表之序列編號 50所示之胺基酸序列而成CDRL2、及包含序列表之序列編號5 2所示之胺基酸序列而成之CDRL3所成。 2.如申請專利範圍第1項之抗體或該抗體之機能性片段，其係專一性識別包含序列表之序列編號4之胺基酸編號439至534所示之胺基酸序列而成之多胜。 3.如申請專利範圍第1或2項之抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成，且對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426至540所示之胺基酸序列而成之多胜的Kd値為1 ·5ηΜ以下；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號1 8所示之胺基酸序列而成之CDRH1 '包含序列表之序列編號 20所示之胺基酸序列而成之CDRH2、及包含序列表之序列編號22所示之胺基酸序列而成之CDRH3所成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號4 8所示之胺基酸序列而成之CDRL1、包含序列表之序列編號 201208701 50所示之胺基酸序列而成之CDRL2、及包含序列表之序列編號52所示之胺基酸序列而成之CDRL3所成。 4. 如申請專利範圍第3項之抗體或該抗體之機能性片段，其係對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426 至540所示之胺基酸序列而成之多胜的Kd値為1 .OnM 以下。 5. 如申請專利範圍第3項之抗體或該抗體之機能性片段 ’其係對於包含序列表之序列編號4之胺基酸編號426 至540所示之胺基酸序列而成之多胜的〖a値為〇 5nM 以下。 6 ·如申请專利範圍第1至5項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段，其係將藉由EpHA2配體所誘導之 EPHA2酪胺酸殘基的填酸化予以抑制。 7. 如申請專利範圍第i至6項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；則述重鏈係包含.包含序列表之序列編號5 4、56 所示之胺基酸序列、或於該胺基酸序列中之丨或數個胺基酸係已缺失、取代 '附加之胺基酸序列之任一胺基酸序列而成之重鏈可變區；則述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號6 6、6 8 所不之胺基酸序列、或於該胺基酸序列中之1或數個胺基酸係已缺失、取代 '附加之胺基酸序列之任一胺基酸序列而成之輕鏈可變區。 8. 如申請專利範圍第丨至7項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段’其係包含重鏈及輕鏈所成； 201208701 前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號5 3、5 5 所示之胺基酸序列、或於該胺基酸序列中之 1或數個胺基酸係已缺失、取代、附加之胺基酸序列之任一胺基酸序列；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號6 5、6 7 所示之胺基酸序列、或該胺基酸序列中之1或數個胺基酸係已缺失、取代、附加之胺基酸序列之任一胺基酸序列而成。

9. 一種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號5 3所示之胺基酸序列而成； •前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號6 5所示之胺基酸序列而成。 1 0 · —種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號5 3所示之胺基酸序列而成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號67所示之胺基酸序列而成。 1 1. 一種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；前述重鏈係包含：包含序列表之序列編號5 5所示之胺基酸序列而成；前述輕鏈係包含：包含序列表之序列編號6 5所示之胺基酸序列而成。 201208701 1 2. —種抗體或該抗體之機能性片段，其係包含重鏈及輕鏈所成；月'J述重鏈係包含：包含序列表之序列編號55所示之胺基酸序列而成；削述fe鏈係包含：包含序列表之序列編號67所示之胺基酸序列而成。 13·如申請專利範圍第！至12項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段，其係具有以下a)至d)所示之性質： a) 不具EPHA2酿胺酸殘基之碳酸化能力，·， b) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活性； c) 對於表現Ε Ρ Η A 2之細胞具有c D C活性； d) 於活體内具有抗腫瘤活性。 14.如申請專利範圍第1至12項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段，其係具有以下a)至e)所示之性質： a) 不具EPHA2酪胺酸殘基之磷酸化能力； b) 不顯示EPHA2蛋白質量之減少作用； c) 對於表現EPHA2之細胞具有ADCC活性； d) 對於表現EPHA2之細胞具有CDC活性； e) 於活體内具有抗腫瘤活性。 1 5 ·如申請專利範圍第1至14項中任一項之抗體，其係IgG 抗體。 16.如申請專利範圍第1至14項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段，其係選自於Fab、F(ab’）2、Fv、scpv 、雙鏈抗體（diabody)、線狀抗體及多元專一性抗體之任一者。 201208701 1 7. —種醫藥組成物，其特徵為含有至少任一種選自於如申請專利範圍第1至1 6項之抗體或該抗體之機能性片段。 1 8. —種癌症治療用醫藥組成物，其特徵為含有至少任一種選自於如申請專利範圍第1至1 6項之抗體或該抗體之機能性片段。

19. 一種醫藥組成物，其係用於治療乳癌、食道癌、前列腺癌、胃癌、非小細胞肺癌、大腸癌、及/或多形神經膠胚細胞瘤，其特徵為含有至少任一種選自於如申請專利範圍第1至1 6項之抗體或該抗體之機能性片段。 2 0. —種哺乳動物所具有之腫瘤之增殖之抑制方法，其係藉由投予選自於如申請專利範圍第1至1 8項之任一種 2 1.如申請專利範圍第20項之腫瘤之增殖之抑制方法，其中腫瘤係表現EPHA2之腫瘤。 22 · —種多核苷酸，其係編碼選自於如申請專利範圍第1 至1 6項中任一項之抗體或該抗體之機能性片段。 23. —種宿主細胞，其係藉由如申請專利範圍第22項之多核苦酸而轉形（transformation)。 24· —種抗體或該抗體之機能性片段之製造方法，其特徵為包含：將如申請專利範圍第23項之宿主細胞予以培養、並自培養液將該抗體或該抗體之機能性片段予以回收之步驟而成。