TW201121994A

TW201121994A - Antibodies to CEA

Info

Publication number: TW201121994A
Application number: TW099129130A
Authority: TW
Inventors: Thomas U Hofer; Ralf Hosse; Ekkehard Moessner; Pablo Umana
Original assignee: Roche Glycart Ag
Priority date: 2009-08-31
Filing date: 2010-08-30
Publication date: 2011-07-01
Also published as: IL218038A0; US9068008B2; PE20121552A1; CA2770174A1; WO2011023787A1; ZA201200954B; MX2012002461A; JP5744872B2; EP2473532A1; ECSP12011698A; CN102741293B; BR112012003983A2; CN102741293A; MA33536B1; AR078111A1; KR101528013B1; SG178567A1; AU2010288469A1; CO6491105A2; RU2012112340A

Description

201121994 六、發明說明：【發明所屬之技術領域】本發明係關於抗原結合分子（ABM)。在特定實施例中，本發明係關於對人類癌胚抗原（carcinoembyronic antigen/ CEA)具有特異性之重組單株抗體，包括嵌合抗體、靈長類化抗體或人類化抗體。另外，本發明係關於編碼此等 ABM之核酸分子、及包含此等核酸分子之載體及宿主細胞。本發明進一步係關於製備本發明之ABM的方法、及使用此等ABM治療疾病之方法。此外，本發明係關於具有經修飾糖基化而具有改良之治療特性的ABM，包括Fc受體結合增加及效應功能（諸如ADCC)增強之抗體。【先前技#f】癌胚抗原（CEA)及抗CEA抗體癌胚抗原（CEA，亦稱為CEACAM-5或CD66e)為分子量為約180 kD a之膽蛋白。CEA為免疫球蛋白超家族之成員，且含有經由糖基磷脂醯肌醇（GPI)錨連接至細胞膜的七個結構域（Thompson J.A·，J 5:344-366, 1991)。該七個結構域包括單一Ν端Ig可變域及六個與Ig恆定域同源之結構域（Al-Bl-A2-B2-A3-B3)(Hefta L J等人， Cancer Res. 52:5647-5655, 1992)= 人類CEA家族含有29種基因，其中表現18種：7種屬於 CEA子群且11種屬於妊娠特異性醣蛋白子群。認為若干 CEA子群成員具有細胞黏著特性。認為CEA在先天免疫性方面具有作用（Hammarstrdm S_, SewM Cawcer 5ζ·ο/· 149901.doc 201121994 9(2):67-81 (1999))。因為存在與CEA密切相關之蛋白質，所以產生對CEA具有特異性而對其他密切相關之蛋白質具有最小交叉反應性的抗CEA抗體可能具有挑戰性。 CEA長期以來鑑別為腫瘤相關抗原（Gold及Freedman, ·/ Exp Med., 727:439-462, 1965 i Berinstein N. L., J Clin 20:2197-2207，2002)。最初分類為僅在胎兒組織中表現之蛋白質的CEA現已在若干正常成年組織中鑑別出。此等組織主要起源於上皮，包括腸胃道細胞、呼吸道細胞及泌尿生殖道細胞，及結腸細胞、子宮頸細胞、汗腺細胞及前列腺細胞（Nap 等人，Twwowr 9(2-3):145-53, 1988 ; Nap等人，*52(8):2329-23339, 1992)。上皮起源之腫瘤以及其轉移含有CEA作為腫瘤相關抗原。儘管CEA本身之存在並不指示轉型為癌細胞，但CEA 之分佈有指示性。在正常組織中，CEΑ —般表現於細胞頂面上（Hammarstr6m S·，Semin Cancer Biol. P(2):67-81 (1999))，使得其不可為血流中之抗體接近。與正常組織相反，CEA傾向於表現於癌細胞之整個表面（Hammarstr0m S·，iSemz’w Cawcer P(2):67-81 (1999))。此表現模式改變使得CEA可被在癌細胞中結合之抗體接近。另外，癌細胞中CEA表現增加。此外，CEA表現增加會促進細胞間黏著增強，此可能會導致轉移（Marshall J_, 30(a增刊 8):30-6, 2003) ° CEA容易自細胞表面裂解且自腫瘤直接或經由淋巴管脫落至血流中。因為此特性，所以血清CEA含量已用作診斷 149901.doc 201121994 癌症及篩選癌症（尤其結腸直腸癌）復發之臨床標記 (Goldenberg D M., The International Journal of Biological

MarArm，7:183-188，1992 ; Chau I·等人，C7h 〇«co/.， : 1420-1429，2004，Flamini 等人，C//« 及以； ·· 72「23力6985-6988，2006)。此特性亦對使用CEA作為目標造成一個挑戰’因為血清CEA結合大多數現行抗CEA抗體，從而阻礙其到達細胞表面上之其目標且限制潛在臨床作用。已出於研究目的及治療目的針對CEA產生多種單株抗體作為診斷工具（例如 Nap 等人，（7<3«£^/-/?6151.，52(8):2329- 23339，1992 ; Sheahan等人，4所· */. C/z«. W.157- 164，1990 ; Sakurai 等人，《/· Surg. Oncol., 42:39-46, 1989 ； Goldenberg D M., The International Journal of Biological Markers, 7:183-188, 1992 ； Ledermann J A, Br. J. Cancer, 55:654, 1988 ； Ledermann J A, Br. J. Cancer, <55:69-73, 1993 ; Pedley R B等人，Sr.丄 Ca«cer，65:69-73, 1993 ; Boxer GM等人，Br. «/. Cawcer，<55:825-831, 1992)。

Chester等人已自欲用於放射免疫偵測及放射免疫療法之噬 % • 菌體呈現文庫分離出單鏈抗CEA抗體（美國專利第 ‘ 5,876,691號），且隨後將該抗體人類化（美國專利第 7,232,888號）。亦已自人類噬菌體呈現文庫分離出抗CEA 抗體（美國專利第5,872,215號）。藉由使NSl(P3/NSl/I-Ag-4_l)骨髓瘤細胞與來自用正常結腸直腸上皮免疫之小鼠之脾臟細胞融合來產生小鼠單株 149901.doc 201121994 抗體 PRlA3(Richman P. I.及 Bodmer W. F.，/«ί· ·/. Cawcer， 39:317-328，1987)。PR1 A3與分化充分及分化不足之結腸直腸癌均強烈反應且具有優於其他結腸直腸上皮反應性抗體之優勢，因為PR1A3之抗原似乎固定於腫瘤且不出現於自腫瘤流出之淋巴管或正常淋巴結中（Granowska M.等人 ’ ·/. #wc/. Med.，20:690-698，1989)。舉例而言， PR1A3與59/60的結腸直腸腫瘤反應（Richman Ρ· I.及 Bodmer W. F., Int. J. Cancer, 3P:317-328, 1987) « 而 CEA反應性抗體B72.3僅與75%的結腸直腸腫瘤反應（Mansi L.等人，Int J Rad Appi Instrum B·，16(2).127-35, 19S9)。 PR1 A3之抗原決定基定位顯示該抗體靶向CEA分子之Β3 域及 GPI錨（Durbin H.等人，proc. W". Scad. &ζ·. t/M, 91:4313-4317，1994)。因此，pria3抗體僅結合於膜結合型CEA ’而不結合於可見於癌症患者血流中之可溶性CEA 形式。因為此結合特性，所以PR1 A3抗體不可能被血清 CEA螯合；而是，其可靶向表現於癌細胞上之cea。 PR1A3所結合之抗原決定基為構形抗原決定基，而不是線性抗原決定基’認為此為促使PR1 A3與可溶性CEA之結合降低的原因（Stewart 專人，Ccmeer 47:299-06, 1999)〇先前已藉由將鼠類親本抗體之CDR移植至人類抗體RF-TS3'CL之重鍵構架區1-3(保留PR1A3之鼠類構架4)及REI抗體之輕鏈構架區將PR1A3抗體人類化。（Stewart等人’ Cancer Immunol Immunother, 47:299-06, 1999) 〇 PR1A3之 149901.doc 201121994 此人類化型式保留特異性且對於表面表現之CEA具有類似於鼠類抗體之親和力（Stewart等人，Cancer /zwwwwo/ //wwM«oi/zer，47:299-06, 1999;美國專利第 5,965,710號）。人類化PRlA3(hPRlA3)抗體顯示誘導對結腸直腸癌細胞株之靶向殺死。（Conaghhan P. J·等人，心./· Cancer， 98(7):1217-1225)。然而，hPRlA3對CEA之親和力相對較低0 放射性標記之抗CEA抗體已在臨床試驗中用於患有結腸直腸癌之患者。舉例而言，經標記之嵌合微型抗體 T84.66(cT84.66)在預備臨床研究中用於患有結腸直腸癌之患者。放射性標記之微型抗體能夠起向癌細胞。（w〇ng】 Y.等人，C/Z« Cawcer 10(15):5014-21, (2004))。在另一實例中，在輔助放射免疫療法中在患有結腸直腸癌之肝臟轉移的患者中對（1川；[_拉貝珠單抗一種放射性標記之人類化抗CEA抗體）進行測試，且發現其提供有希望之存活優勢。（Liersch τ等人，心”㈣ 14(9):2577-90,（2007)) 〇抗體糖基化寡醣組分可顯著影響與治療性_蛋白之功效有關之特性，包括物理穩定性、對蛋白酶攻擊之抗性、與免疫系統之相互制、㈣動力學及特定生物活性。此等特性可能 =僅取決於存在或不存在寡酿，而且亦可能取決於募瞻之特定結構。可獲得寡醣結構㈣U錢之間的一些通則。舉例而言，某些寡醣結構經由與特定碳水化合物結合 149901.doc 201121994 蛋白相互作用而介導醣蛋白自血流中快速清除，而其他寡醣結構可被抗體結合且觸發不當免疫反應。（Jenkins等人 ’ 5ioiec/mo/· 14:975-81，1996)。哺乳動物細胞由於能夠將蛋白質糖基化為最相容於人類應用之形式而成為用於產生治療性醣蛋白之較佳宿主。 (Cumming 等人，幻；厂 115-30，1991 ; Jenkins 等人，扪0j„〇/ 14:975_981，1996)。細菌極少使蛋白質糖基化，且類似於其他類型之常見宿主（諸如酵母、絲狀真菌、昆蟲及植物細胞），產生與自血流快速清除、不當免疫相互作用及在一些特定情況下較低生物活性相關之糖基化模式。在哺乳動物細胞中，在近二十年間最常用中國倉鼠卵巢（CHO)細胞。除提供適合糖基化模式外，此等細胞亦一貫產生遺傳上穩定且生產力較高的純系細胞株。其可在簡單生物反應器中使用無血清培養基培養至高密度，且允許開發安全且可再現之生物製程。其他常用動物細胞包括幼倉鼠腎（BHK)細胞、NS0_及SP2/〇_小鼠骨髓瘤細胞。最近，亦已測試利用轉殖基因動物之產生 (Jenkins等人，14:975-81，1996)。所有抗體在重鏈恆定區中之保守位置處均含有碳水化合物結構，各同型具有不同的N連接型碳水化合物結構陣列，該等結構可變地影響蛋白質組裝、分泌或功能活性。 (Wright A.及 Morrison S. L.，Γ⑽办細⑽；/· 75:26-32, 1997)。所連接之N連接型碳水化合物的結構視加工程度而顯著變化，且可包括高甘露糖、多分支鏈以及雙觸角複合 149901.doc 201121994 寡醋。（Wright, A.及Morrison，S_ L., 7Ve油 /5:26· ，7)通*，連接於特定糖基化位點之核心寡醣結構會被異質加工，致使甚至單株抗體亦會存在一群多種糖型。同樣，已顯示抗體糖基化在細胞株之間存在顯著差異且甚至既疋細胞株在不同培養條件下生長亦可見少量差異（Lifely，M· R,荨人，g/少⑶W〇/〇幻；5⑻：813_22, 1995)。一種使效能顯著增強但同時維持簡單製造過程且可能避免顯著不當副作用之方式為藉由工程改造其寡醣組分來增強單株抗體之細胞介導之天然效應功能，如Umafia，ρ·等人，iVaiwre 77:176-180 (1999)及美國專利第 6,602,684號中所描述，該等文獻之全部内容均以全文引用的方式併入本文中。癌症免疫療法中最常用之抗體1§(31型抗體為在各CH2域中之Asn297處具有保守N連接型糖基化位點的醣蛋白。兩個連接至Asn297之複合雙觸角募醣掩埋於CH2域之間’從而形成與多肽主鏈之廣泛接觸，且其存在對於抗體介導諸如抗體依賴性細胞毒性（ADCC)之效應功能為必需的（Lifely，M. R.等人，5:813-822 (1995) ; Jefferis， R.等人，及ev· /<53:59-76 (1998)，Wright, A.及 Morrison, S. L., ^oiec/mo/. ϋ26-32 (1997))。

Umafia等人先前展示β(1,4)-Ν-乙醯胺基葡萄糖基轉移酶 III(「GnTIII」）（一種催化形成對分寡醣之糖基轉移酶）在中國倉鼠卵巢（CHO)細胞中過度表現顯著增強由工程改造 149901.doc 201121994

CHO細胞產生之抗神經母細胞瘤嵌合單株抗體（chCE7)之活體外ADCC活性。（參看Umafia，P.等人，TVaiwre Aoiec/mo/. 77:176-180 (1999);及國際公開案第 WO 99/54342號，該等文獻之全部内容均以引用的方式併入本文中）。抗體chCH7屬於非共軛mAb之一大類，其具有高腫瘤親和力及特異性，但當在缺乏GnTIII酶之標準工業細胞株中產生時因效能過低而在臨床上不適用（Umana，P.等人，iVaiwre 5/7:176-180 (1999))。該研究首次顯示，可藉由工程改造產生抗體之細胞以表現GnTIII來顯著增強ADCC活性，此亦使得恆定區（Fc)相關對分寡醣（包括對分非岩藻糖基化寡醣）之比例增加超過天然存在之抗體中所見的量。對治療靈長類動物（包括（但不限於）人類）之癌症的靶向 CEA(尤其膜結合型CEA)之增強型治療方法仍存在需要。【發明内容】認識到具有PR1 A3抗體結合特異性且已經親和力成熟及/ 或糖基工程改造以增強Fc受體結合親和力及/或效應功能的抗原結合分子（ABM)具有極大治療潛能，本發明之發明者提供了此等ABM。在一個態樣中，本發明係關於能夠與 PR1A3抗體競爭抗原結合之變異ABM及/或親和力成熟 ABM。此等ABM之功效可藉由工程改造抗體Fc區之糖基化概況來進一步增強。在一態樣中，本發明亦係關於一種抗原結合分子 (ABM)，其包含含有一或多個互補決定區（CDR)之人類化 149901.doc 201121994 親和力成熟抗原結合域’其令該抗原結合域特異性結合膜結合型人類癌胚抗原（CEA)，且其中該抗原結合域與鼠類單株抗體PR1 A3結合相同抗原決定基，或能夠與鼠類單株抗體PR1A3競爭結合。本發明進一步係關於本發明之 ABM，該ABM具有經修飾之寡醣。在一實施例中，經修飾寡醣與未經修飾寡醣相比具有減少之岩藻糖基化。在其他實施例中’經修飾寡醣為混合或複合寡醣。在另一態樣中，本發明亦係關於與ABM相關之多肽、聚核苷酸、宿主細胞及表現載體》在另一態樣中’本發明係關於製備Abm 之方法。在另一態樣中’本發明係關於使用Abm，特定言之用於療與CEA異常表現有關之疾病（諸如癌症）的方法0 【實施方式】定義 >、t如下另作疋義，否則在本文中術語係如此項技術中一般所用來使用。如本文中所用，術語「戎及餘合分子」在其最廣泛意義上係指特異性結合抗原決定子之分子。抗原結合分子之非限制性實例為抗體或其保留抗原特異性結合之片段。更特疋5之，如本文中所用，.结合廣潜合多乂癀癤屈戎及兄4)之焱泰.结合分子為特異性結合於CEA，更特定言之特異料处人μ 〇、，、〜δ於細胞表面或膜結合型cea而不結合於自細胞表面裂解之可溶性CE Α的ΑΒΜ。「特異性結合」意謂結合對抗原具選擇性且可區別於不期望或非特異性相互作用。 149901.doc 201121994 如本文中所用，術語「戒邀」意欲包括完整抗體分子’ 包括單株、多株及多特異性（例如雙特異性）抗體，以及具有Fc區且保留結合特異性之抗體片段，及包括等效於免疫球蛋白之Fc區之區域且保留結合特異性的融合蛋白。亦涵蓋保留結合特異性之抗體片段，包括（但不限於）VH片段、 VL片段、Fab片段、F(ab’）2片段、scFv片段、Fv片段、微型抗體、雙功能抗體、三功能抗體及四功能抗體（例如參

Hudson^ Souriau, Nature Med. 9: 129-134 (2003)) 〇如本文中所用，術語「技及，结合域」係指包含特異性結合於抗原之部分或全部且與抗原之部分或全部互補的區域之抗原結合分子之部分》當抗原較大時，抗原結合分子可僅結合於抗原之特定部分’該部分稱為抗原決定基。抗原結合域可由例如一或多個抗體可變域提供。抗原結合域較佳包含抗體輕鍵可變區（VL)及抗體重鏈可變區（vh)。如本文中所用，在抗原結合分子（例如抗體）之情形中，術語「歲和力成濟」係指抗原結合分子例如藉由突變來源於參考抗原結合分子’與參考抗體結合於相同抗原，較佳結合於相同抗原決定基；且對抗原之親和力高於參考抗原結合分子對抗原之親和力。親和力成熟一般涉及修飾抗原結合分子之一或多個CDR中之一或多個胺基酸殘基。親和力成熟抗原結合分子通常與初始參考抗原結合分子結合於相同抗原決定基。如本文中所用，「潜合歲和力」一般以術語平衡締合常數或解離常數（分別為Ka或Kd)表述，其又為解離速率常數 149901.doc -12- 201121994 及締合速率常數（分別為1^及ka)之反比。因此，等效親和力可包含不同速率常數，只要速率常數之比率能保持相同。如本文中所用，術語「Fc显」係指IgG重鏈之c端區域。儘管IgG重鏈之Fc區的邊界可稍微變化，但人類IgG重鏈Fc區通常界定為自位置Cys226之胺基酸殘基延伸至缓基末端。如本文中所用’術語「事效於兑瘦琪蛋白之Fc昼的昼域」意欲包括免疫球蛋白之Fc區的天然存在之對偶基因變異體’以及具有產生取代、添加或缺失但並不實質上降低免疫球蛋白介導效應功能（諸如抗體依賴性細胞毒性）之能力之改變的變異體。舉例而言，一或多個胺基酸可自免疫球蛋白之Fc區的N端或C端缺失而不會造成生物功能之實質相失。此等變異體可根據此項技術中已知之總則來選擇以便對活性產生最小影響。（例如參看Bowie, J. U.等人， •Sczewce 247:1306-10 (1990)。如本文中所用，術語「鹿裙合垄/乂廯CM」係指結合於細胞之膜部分或細胞表面（尤其腫瘤細胞.表面）之人類癌胚抗原（CEA)。術語「膜結合型人類CEA」在某些情形中可指未結合於細胞膜，但已構築為保留PR1A3抗體所結合之抗原決定基的CEA。術語「可溶性CEA」係指未結合於細胞膜或細胞表面（例如腫瘤細胞表面）或自其裂解及/或通常不保留由PR 1 A3抗體結合之構形抗原決定基的人類癌胚抗原。可溶性CEA可例如見於患癌個體之血流或淋巴管中。 14990l.doc 201121994 如本文中所用’術語「鈐τ荔涅c凡4扃：r爻χ及應尨j意謂尤其當與膜結合型CEA相比時分子（例如抗原結合分子）不識別或特異性結合於可溶性CEA。舉例而言，抗原結合分子可結合少於約1 〇 %至少於約5 %之可溶性 CEA ’或可以選自由以下組成之群的量結合可溶性cea : 少於約 10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、 1%、0.5%、0.2%或0.1%，較佳少於約2%、1%或〇 5%可溶性CEA ’及最佳少於約0.2%或〇 1 %可溶性cea。如本文中所用，術語「淼合」及「兹合」當參考諸如 ABM之多肽使用時係指包含來源於兩種或兩種以上異源多肽（諸如不同物種之抗體的部分）之胺基酸序列的多肽。對於嵌合ABM，舉例而言，非抗原結合組分可來源於多種物種，包括諸如黑猩猩及人類之靈長類動物。嵌合ABM之恆定區一般實質上與天然人類抗體之恆定區一致；嵌合抗體之可變區一般包含來源於具有鼠類pR1A3可變區之胺基酸序列的重組抗CEA抗體之序列。人類化抗體尤其為融合或嵌合抗體之較佳形式。如本文所使用，術語「Λ廣允」用以指抗原結合分子部刀來源於非人類抗原結合分子（例如鼠類抗體），其保留或貫質上保留親本分子之抗原結合特性，但其在人類體内之免疫原&較低。其可由各種方法達成（在本文中稱作「乂廢允」）’該等方法包括（但*限於）：⑷將整個非人類可文域移植於人類怪定區上以產生嵌合抗體，⑻在保留或不保留關鍵構架殘基（例如對於保持良好抗原結合親和力或抗 149901.doc "14- 201121994 體功能重要之構架殘基）之情況下僅將非人類（例如供者抗原結合分子）CDR移植於人類（例如接受者抗原結合分子）構架及恆定區上，或（c)移植整個非人類可變域，但藉由置換表面殘基以類似人類之區段將其「遮蓋（cloak)」。此等方法揭示於以下文獻中：Jones等人，Morrison等人，/Voc. Natl. Acad. Sci., 81:6851-6855 (1984) ； Morrison^ Oi, Adv. Immunol44:65-92 (1988) ; Verhoeyen 等人，Science, 239:1534-1536 (1988) ； Padlan, Molec. Immun., 28:489-498 (1991) ; Padlan, Mo/ec. /mwwi, 31(3):169-217 (1994) ’ 該等文獻全部均以全文引用的方式併入本文中。在抗體之各重鏈及輕鏈可變域中一般存在3個互補決定區或CDR (CDR1、CDR2及CDR3)，該等CDR在抗體之各重鏈及輕鏈可變域中側接4個構架亞區（亦即FR1、FR2、FR3及FR4): FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。人類化抗體之討論可尤其見於美國專利第6,632,927號及公開之美國申請案第2003/0175269號中，該兩者均以全文引入的方式併入本文中。人類化亦可藉由將僅含有既定CDR之特異性決定胺基酸殘基之截短CDR移植於所選構架上來達成。「#鼻尨決定磅差」意謂直接涉及與抗原特異性相互作用及/或對於抗原特異性結合必要之殘基。一般而言，既定CDR中之僅約五分之一至三分之一殘基參與抗原結合。特定CDR中之特異性決定殘基可藉由例如根據Padlan等人，/. P〇) :133-139 (1995)(其内容以全文引用的方式併入本文中）中所述之方法自三維模型化計算原子間接觸並測定既定殘 149901.doc -15· 201121994 基位置處之序列變異性來鑑別。在一些情況下，人類免疫球蛋白之構架區（FR)殘基經相應非人類殘基置換。此外，人類化抗原結合分子可包含接受者抗體或供者抗體t未發現之殘基。進行此等修飾以進步改進抗原結合分子效能。一般而言，人類化抗原結合分子將包含至少一個及通常兩個可變域之實質上全部，其中至少一個、或實質上全部、或全部高變區對應於非人類免疫球蛋白之高變區，且全部或實質上全部FR為人類免疫球蛋白序列之FR。人類化抗原結合分子視情況亦至少包含免疫球蛋白恆定區（Fc)之一部分，通常包含人類免疫球蛋白值定區（Fc)之一部分。例如參看Jones等人，Nature 321:522-525 (1986) ; Reichmann等人，Nature 332:323-329 (1988);及 presta，curr· Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。類似地’如本文中所用，術語「產長廯允」用以指來源於非靈長類動物抗原結合分子（例如鼠類抗體）之抗原結合分子’其保留或實質上保留親本分子之抗原結合特性但在靈長類中之免疫原性較低。如本文中所用，術語「變鼻」（或癀似）聚核苷酸或多肽係指因藉由使用例如重組DNA技術產生之插入、缺失及取代而不同於明確引述之本發明聚核苷酸或多肽的聚核苷酸或多肽。特定言之，編碼此等相同或類似多肽之重組變異體可藉由使用遺傳密碼子之「冗餘」來合成或選擇。可引入各種密碼子取代（諸如產生各種限制位點之沉默改變）以 149901.doc -16- 201121994 最佳化於質體或病毒載體中之選殖或於特定原核或真核系統中之表現。聚核苷酸序列之突變可反映於多肽或添加至多肽中以修飾多肽任何部分之特性的其他狀之域中，以改變諸如配位體結合親和力、鏈間親和力或降解/週轉率之特徵。如本文中所用’術語「變厚麥犮cej犮及，结合分子」係指胺基酸序列因在親本抗體序列中添加、缺失及/或取代一或多個胺基酸殘基而不同於「親本」抗CEA抗原結合分子胺基酸序列之分子。在一特定實施例中，變異體在親本抗原結合分子之重鏈及/或輕鏈的一或多個高變區或CDR 中包含一或多個胺基酸取代。舉例而言，變異體可在親本抗原結合分子之一或多個高變區或CDR(亦即1、2、3、 4、5或6個高變區或CDR)中包含至少一個，例如約一個至約十個（亦即約1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個），及較佳約兩個至約五個取代。變異型抗CEA抗原結合分子亦可在重鍵或輕鍵之一或多個構架區中包含一或多個添加、缺失及/或取代。變異體通常將具有與親本抗原結合分子重鏈或輕鏈可變域序列具有至少約75%、80%、85%、90%、 95%、96°/。、97%、98%、99%或 100°/❶胺基酸序列一致性，通常至少約80%、90%、95%或99%胺基酸序列一致性之胺基酸序列。關於序列之一致性在本文中定義為在比對序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比後，候選序列中與親本抗體殘基一致之胺基酸殘基的百分比。抗體序列中之N端、C端或内部延伸、缺失或插入均不會視為 I49901.doc •17· 201121994 影響序列一致性或同源性。變異型抗原結合分子保留結人膜結合型人類CEA之能力，例如與親本抗原結合分子結人相同抗原決定基，且較佳具有優於親本抗原結合分子之= 性。例如變異體可具有較強結合親和力、增強之在活體外及活體内誘導抗體介導之細胞毒性之能力。為分析此等特性，一般應比較相同格式之變異型抗原結合分子與親本抗原結合分子；例如比較變異型抗原結合分子之Fab形式與親本抗原結合分子之Fab形式或變異型抗原結合分子之全長形式與親本抗原結合分子之全長形式。在本文中特別關注之變異型抗原結合分子為當與親本抗原結合分子比較時生物活性增強至少約2倍、3倍、4倍、5倍' 6倍、7倍、8 倍、9倍、10倍、U倍、12倍、13倍、14倍、15倍、μ 倍、16倍、17倍、18倍、19倍或2〇倍之變異型抗原結合分子。術语「巍莩」抗原結合分子係指用作製備變異體之起點或基礎的ABM。在一特定實施例中，親本抗原結合分子具有人類構架區且若存在則具有人類抗體恆定區。舉例而吕’親本抗體可為人類化抗體或人類抗體。胺基酸「屏托」可使得一個胺基酸經具有類似結構及/ 或化學特性之另一胺基酸置換，例如保守性胺基酸置換。「保子沒」胺基酸取代可基於所涉及殘基之極性、電荷、溶解度、疏水性、親水性及/或兩性性質之相似性來進行。舉例而言，非極性（疏水性）胺基酸包括丙胺酸、白胺酉文、異白胺酸、纈胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸及甲 149901.doc -18- 201121994 硫胺酸；極性中性胺基酸包括甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪胺酸、天冬醯胺及麩醯胺酸；帶正電（鹼性）胺基酸包括精胺酸、離胺酸及組胺酸；且帶負電（酸性）胺基酸包括天冬胺酸及麩胺酸。「插八」或「缺关」一般在約1至約20個胺基酸，更特定言之約1至約1〇個胺基酸且甚至更特定言之約2至約5個胺基酸之範圍内。非保守性取代將要求將此等類別之一的成員交換為另一類別。舉例而言，胺基酸取代亦可使得一個胺基酸經具有不同結構及/ 或化學特性之另一胺基酸置換’例如一組（例如極性）之胺基酸經不同組（例如鹼性）之另一胺基酸置換。允許之變化可藉由使用重組DNA技術在多肽分子中系統地進行胺基酸插入、缺失或取代並檢定所得重組變異體之活性來以實驗方式決定。如本文中所用，術語「革避_Fv」或「jcFv」係指包含 VH域及VL域呈單一多肽鍵形式之抗體片段。VH及VL域通常藉由連接子序列聯接。例如參看Pluckthun，The PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES,第 113卷，Rosenburg及Moore編.SρringeΓ·Verlag，NewYork，第 269-315頁（1994)。如本文中所用，術語「徵堃犮邀」係指含有恆定區，通常含有免疫球蛋白之CH3區，較佳含有IgG之CH3區，更佳含有IgGl之CH3區作為二聚化區之二價均二聚scFv衍生物。恆定區一般經由鉸鏈區及/或連接子區連接至scFv。微型抗體蛋白之實例可見於Hu等人（1996), Tie·?. 5 6: 149901.doc -19- 201121994 3055-61 t 。如本文中所用，術語「雙衫鹿犮邀」係指具有兩個抗原結合位點之小抗體片段，該等片段包含重鏈可變域（VH)連接至同一多肽鏈（VH-VL)中之輕鏈可變域（VL)。藉由使用過短而使同一鏈上之兩個域之間無法配對的連接子，迫使該等域與另一鏈之互補域配對且產生兩個抗原結合位點。雙功能抗體更充分描述於例如EP 404,097 ; WO 93/11161 ; 及 Hollinger 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)中。二於處虎禮係藉由形成三個seFv之三價三聚物從而產生三個結合位點而得到，且四衫處犮邀為四個％以之四價四聚體，從而產生四個結合位點。在此項技術中使用及/或接受之術語存在兩種或兩種以上疋義之情況下，除非相反地明確說明，否則如本文中所用之術語的定義意欲包括所有此等含義。特定實例為使用術語「互補決定區」（「CDR」）來描述重鍵與輕鍵多肽之可變區内均可發現之非毗連抗原結合位點（亦稱為抗原結合區）。CDR亦稱作「高變區」且在提及形成抗原結合區之可變區之部分時該術語在本文中可與術語r CDR」互換使用。此特定區域已由以下文獻描述：Kabat等人，U.S.

Dept, of Health and Human Services，「Sequences of Proteins of Immunological Interest」（1983)及 Chothia 等人，乂 Mo/. 5/〇/· 196:901-917 (1987)，該等文獻係以引用的方式併入本文中，其中當互相比較時該等定義包括胺基酸殘基之重疊或子集。然而，應用任一定義來指抗體或其 149901.doc -20· 201121994 變異體之CDR意欲在本文界定及使用之術語的範疇内。下文在表I中以比較形式闡述涵蓋如各上文引用之參考文獻所定義之CDR的適當胺基酸殘基。涵蓋特定CDR之確切殘基數目將視CDR之序列及大小而變化。熟習此項技術者通常可根據抗體之可變區胺基酸序列決定何等殘基構成特定 CDR。表1.CDR定義1 CDR Kabat Chothia AbM2 VH CDR1 31-35 26-32 26-35 VhCDR2 50-65 52-58 50-58 Vh CDR3 95-102 95-102 95-102 VL CDR1 24-34 26-32 24-34 VlCDR2 50-56 50-52 50-56 VL CDR3 89-97 91-96 89-97 1表1中所有CDR定義之編號均根據Kabat等人所述之編號慣例（參看下文）。 2如表1中所用具有小寫字母「b」之「AbM」係指如由 Oxford Molecular之「AbM」抗體模型化軟體定義之 CDR。

Kabat等人亦定義適用於任何抗體之可變域序列編號系統。一般技術者可在不依賴除序列本身以外之任何實驗資料情況下對任何可變域序列明確指定此「Kabat編號」系統。如本文中所用，「Kabat編號」係指Kabat等人，U.S. Dept, of Health and Human Services,「Sequence of Proteins 149901.doc -21 - 201121994 of Immunological Interest」（1983)所述之編號系統。除非另有規定，否則提及ABM中特定胺基酸殘基位置之編號係根據Kabat編说系統。序列表之序列（亦即seq id NO: 1至 8丑卩10 1^0:216)並不根據1^531編號系統來編號。然而，一般技術者熟習如何將序列表中之序列轉換為〖讣“編號。核酸或聚核苷酸具有與本發明之參考核苦酸序列至少例如95%「一致」之核苷酸序列意謂除該聚核苷酸序列每 100個參考核苷酸序列之核苷酸可包括至多5點突變外，該聚核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致。換言之，為獲得具有與參考核普酸序列至少95%—致之核苷酸序列的聚核苷酸，參考序列中至多5%的核苷酸可缺失或經另一核苷酸取代，或一定數目之核苷酸（參考序列中總核苷酸之至多5%)可插入參考序列中。實際上，可按慣例使用已知電腦程式來判定任何特定核酸分子或多肽是否與本發明之核苷酸序列或多肽序列至少 80%、85%、90%、95%、96%、97。/。、98。/。或 99%—致。可使用基於Brutlag等人，Comp.却价0似·. ¢:237.245 (1990)之演算法的FASTDB電腦程式來決定一種用於測定查詢序列（本發明之序列）與標的序列之間最佳總體匹配的方法（亦稱作全局序列比對）。在序列比對中，查詢序列與標的序列均為DNA序列。RNA序列可藉由將u轉化為τ來比較。該全局序列比對之結果呈一致性百分比之形式。 DNA序列之FAS丁dB比對中用以計算一致性百分比之較佳 149901.doc -22· 201121994 減為：矩陣=單„，k•元組=4,錯配罰分十聯接罰分 3〇隨機化組長度=〇，截止分=1 ’間隙罰分=5，間隙尺寸罰刀0.05 ’視窗尺寸=或標的核苦酸序列之長度（其較短者）。 ^ ^ 若標的序列因5’或3,缺失（而非因為内部缺失）而短於查⑨ 序列’則必須對該等結果進行手動校正。此係因為 FASTDB程式當計算一致性百分比時並未考慮標的序列之 5及3截h對於相對於查詢序财5,或y端截短之標的序列，-致性百分比可藉由計算查詢序列中位於標的序列之 5,及3·的未匹配/對準之驗基數來校正為查詢序列總驗基之百分比。藉由FASTDB序列比對之結果來判定核芽酸是否匹配/對準。接著將此百分比自一致性百分比中減去，由上述FASTDB程式使用指定參數來計算以得到最終一致性百分比得分。此經校正之得分為出於本發明之目的所用者。出於手動調整—致性百分比得分之㈣，僅計算如由 FASTDB比對所顯示位於標的序列之5,及3,驗基外側的未與查詢序列匹配/對準之鹼基。舉例而言，將90個鹼基之標的序列與1〇〇個鹼基之查詢序列比對以測定一致性百分比。在標的序列之5，端存在缺失且因此FASTDB比對未展示5·端前〗〇個驗基之匹配/對準。10個不配對鹼基佔序列之1〇%(5，及3,端中未匹配之鹼基數/查询序列中鹼基之總數），因此將藉由FASTDB程式什算之一致性百分比得分減去1〇%a若其餘9〇個鹼基完全匹配，則最終一致性百分比將為9〇%。在另一實例中，將 149901.doc -23· 201121994 90個鹼基之標的序列與1〇〇個鹼基之查詢序列相比較。此時，該等缺失為内部缺失，從而在標的序列之5，或3，不存在不與查詢序列匹配/對準之鹼基。在此情況下，並不手動杈正FASTDB計算之一致性百分比。再次，僅手動校正標的序列5’及3'中未與查詢序列匹配/對準之鹼基。出於本發明之目的，不進行其他手動校正。多肽具有與本發明查詢胺基酸序列至少例如95%「一致」之胺基酸序列意謂除標的多肽序列中每1〇〇個查詢胺基酸序列之胺基酸可包括至多5個胺基酸變化外，標的多肽之胺基酸序列與查詢序列一致。換言之，為獲得具有與查詢胺基酸序列至少95%—致之胺基酸序列的多肽，標的序列中至多5%之胺基酸殘基可經插入、缺失或經另一胺基酸取代。參考序列之此等改變可存在於參考胺基酸序列之胺基端或羧基端位置或彼等末端位置之間的任何位置，個別地穿插於參考序列中之殘基中或參考序列内之一或多個此連群組中。實際上，可按慣例使用已知電腦程式來判定任何特定多肽是否與參考多肽至少80%、85%、90%、95%、96%、 97。/。、98。/〇或99% —致。可使用基於Brutlag等人，。讲户办;別om·. 6:237-245 (1990)之演算法的FASTDB電腦程式來決定一種用於測定查詢序列（本發明之序列）與標的序列之間最佳總體匹配的方法（亦稱作全局序列比對）。在序列比對中’查詢序列及標的序列均為核苷酸序列或均為胺美酸序列。該全局序列比對之結果呈一致性百分比之形式。 149901.doc • 24· 201121994 FASTDB胺基酸比對中所用之較佳參數為：矩陣=PAM 〇， k組=2，錯配罰分=1，冑接罰分=2〇，隨機化組長度〇截止分=1，視窗尺寸=序列長度，間隙罰分=5，間隙尺寸罰刀-0.05，視窗尺寸=5〇〇或標的胺基酸序列之 (其中較短者）。 ^ 右軚的序列因N端或C端缺失（而非因為内部缺失）而短於查詢序列’則必須對該等結果進行手動校正。此係因為 FASTDB私式當計算全局__致性百分比時並未考慮列之二端及C端❹豆。對於相對於查料列心端及;端截短之標的序列致性百分比可藉由計算查詢序列十位於標的序列之N端及C端的未與相應標的殘基匹配/對準之殘基數來校正為查詢序列總鹼基之百分比。藉由FASTDB序列比對之結果來判定殘基是否匹配/對準。接著將此百分比自一致性百分比中減去，由上述FASTDB程式使用指定參數來计算以得到最終一致性百分比得分。此最終一致性百分比得分為出於本發明之目的所用者。出於手動調整一致ί±百刀比得分之目的，僅考慮標的序列的N端及c端中未與查詢序列匹配/對準之殘基。亦即，僅位於標的序列之最遠Ν端及c端殘基外側的查詢殘基位置。舉例而5，將90個胺基酸殘基之標的序列與i 〇〇個殘基之查詢序列比對以測定一致性百分比。在標的序列之N端存在缺失且因此FASTDB比對未展示N端前1〇個殘基之匹配/比對。10個不配對殘基佔序列之1〇%(N端及C端中未匹配之殘基數/查詢序列中殘基之總數），因此將藉由 149901.doc •25· 201121994 FASTDB程式計算之一致性百分比得分減去10%。若其餘 90個殘基完全匹配，則最終一致性百分比將為90%。在另一實例中，將90個殘基之標的序列與100個殘基之查詢序列相比較。此時，該等缺失為内部缺失，因此在標的序列之N端或C端不存在不與查詢序列匹配/對準之殘基。在此情況下，並不手動校正FASTDB計算之一致性百分比。再次，僅手動校正如FASTDB比對中所顯示位於標的序列之 N端及C端外側且未與查詢序列匹配/對準之殘基位置。出於本發明之目的，不進行其他手動校正。聚核苷酸及/或多肽之一致性百分比亦可使用可經由國家生物技術信息中心（National Center for Biotechnology Information，NCBI)獲得之BLAST程式（預設參數在程式中指定）來測定。如本文中所用，與本發明核酸序列「在羞#療# 7"# 爻」的核酸係指在以下特定條件下雜交之聚核苷酸：例如在 42°C 下在包含 50% 曱醯胺、5xSSC(750 mM NaCl、75 mM檸檬酸納）、50 mM填酸納（pH 7.6)、5 χ丹哈特氏溶液 (Denhardt's solution)、1 0%硫酸葡聚糖及 20 pg/ml 變性質切鮭魚精子DNA之溶液中保溫隔夜，接著於0.1 xSSC中在約65°C下洗滌過濾器。如本文中所用，術語「姜有<^77//活炫之多腐」係指能催化N-乙醯胺基葡萄糖（GlcNAc)殘基以β-1-4鍵聯添加至N 連接型寡醣之三甘露糖基核心之β-連接型甘露糖的多肽。其包括如在特定生物學檢定中所量測，以或不以劑量依賴 149901.doc -26· 201121994 性方式，顯示與β(1，4)-Ν-乙醯胺基葡萄糖轉移酶in(亦稱為β-1，4-甘露糖基-醣蛋白4-β-Ν-乙醯胺基葡萄糖基-轉移酶 (EC 2.4.1.144)，根據生物化學及分子生物學國際聯合會之名詞委員會（Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology/NC-IUBMB)) 之活性類似但未必相同之酶活性的融合多肽。在確實存在劑量依賴性之情況下，其不必與GnTIII之劑量依賴性相同，而是與GnTIII相比時實質上類似於既定活性之劑量依賴性（亦即’相對於GnTIII ’候選多狀將顯示較高活性或活性不低於約1/25，且較佳活性不低於約1/1〇，且最佳活性不低於約1/3)。如本文中所用，術語「苈差邀定位域fGo/W domain)」係指負責將多肽錨定於高基複合體内之位置之高基體駐留多肽（Golgi resident polypeptide)的胺基酸序列。定位域一般包含酶之胺基端「尾」。如本文中所用，術語「政應矽邀」係指可歸因於抗體之 Fc區（原生序列Fc區或胺基酸序列變異型Fc區）的生物活性。抗體效應功能之實例包括（但不限於）Fc受體結合親和力、抗體依賴性細胞毒性（ADCC)、抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP)、細胞激素分泌、免疫複合物介導之抗原呈現細胞抗原攝取、細胞表面受體下調等。如本文中所用，認為術語「工衮改道」，尤其具有字首「潜之術語「工衮政造」以及術語「潜差允工哀政邊」包括對天然存在或重組多肽或其片段之糖基化 149901.doc -27- 201121994 模式的任何操作。糖基化工程改造包括細胞之糖基化機構之代謝工程改造，包括寡醣合成路徑之遺傳操作以達成使細胞中表現之醣蛋白的糖基化改變。此外，糖基化工程改造包括突變及細胞環境對糖基化之影響。在一實施例中，糖基化工程改造為改變糖基轉移酶活性。在一特定實施例中，工程改造使得胺基葡萄糖基轉移酶活性及/或岩藻糖基轉移酶活性改變。如本文中所用，術語「凉主細應」涵蓋任何種類之可經工程改造以產生本發明之多肽及抗原結合分子的細胞系統。在一貫施例中，宿主細胞經工程改造以允許產生具有修飾糖型之抗原結合分子。在一較佳實施例中，抗原結合分子為抗體、抗體片段或融合蛋白。在某些實施例中，宿主細胞已被進一步操作以表現增加含量之一或多種具有 GnTIII活性之多肽。宿主細胞包括培養細胞，例如哺乳動物培養細胞’諸如CHO細胞、BHK細胞、NS0細胞、SP2/0 細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63小鼠骨髓瘤細胞、PER細胞' PER.C6細胞或融合瘤細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及植物細胞（僅舉幾個實例），以及轉殖基因動物、轉殖基因植物或栽培植物或動物組織内所含之細胞。如本文中所用’術語「分箏之細龙毒尨」包括抗體依賴性細胞毒性（ADCC)及由含有人類Fc區之可溶性Fc融合蛋白介導之細胞毒性。其為由「人類免疫效應細胞」導致「目標細胞」溶解之免疫機制。如本文中所用’術語「乂癀龙瘦效肩細虑」係指一群表 149901.doc -28- 201121994 面上顯示Fc受體之白血球，經由該等Fe受體其結合於抗原結合分子之Fc區或Fc融合蛋白之Fc區且執行效應功能。此群體可包括（但不限於）末梢血液單核細胞（PBMC)及/或自然殺傷（NK)細胞。如本文中所用，術語「芬襟知應」係指包含Fc區之抗原結合分子（例如包含Fc區之抗體或其片段）或！^融合蛋白所特異性結合之細胞。抗原結合分子或Fc融合蛋白經由位於 Fc區N端之蛋白質部分結合於目標細胞。如本文中所用，術語「屢發之Fc分葶之細游#尨」定義為在既定時間内，在既定濃度之抗原結合分子或Fc融合蛋白下，在包圍目標細胞之培養基中，藉由上文定義之以介導之細胞毒性的機制溶解之「目標細胞」數增加，及/或在包圍目標細胞之培養基中達成在既定時間内藉由Fc介導之細胞毒性之機制溶解既定數目之「目標細胞」所需之抗原結合分子或Fc融合蛋白的濃度降低。Fc介導之細胞毒性增強係相對於由相同類型宿主細胞使用相同標準製備1 化、調配及儲存方法（為熟習此項技術者所已知）所產生，而非由藉由本文令所述之方法經工程改造以改變糖基化模式（例如以表現糖基轉移酶GnTm或其他糖基轉移酶）之宿主細胞產生的相同抗原結合分子或Fc融合蛋白所介導之細胞毒性。 ^ 「抗體依賴性細胞毒性(A d c c)增強之抗原結合分意術語在本文中定義時)如由一般技術者已知之二何“方法所測定，具有增強之adcc的抗原結合分子。 149901.doc -29- 201121994 如下為一種公認活體外ADCC檢定： 1) 該檢定使用已知表現由抗體之抗原結合區識別之目標抗原的目標細胞； 2) 該檢定使用自隨機選擇之健康供者之血液分離的人類末梢血液單核細胞（PBMC)作為效應細胞； 3) 該檢定根據以下方案來進行： i) PBMC使用標準密度離心程序分離且以5xi〇6個細胞/毫升懸浮於RPMI細胞培養基中； ii) 該等目標細胞藉由標準組織培養法培養，在活力高於 90%之指數生長期收集，於RPMI細胞培養基中洗滌，以 100微居里（micro-Curie)之51Cr標記，以細胞培養基洗滌兩次，且以105個細胞/毫升之密度再懸浮於細胞培養基中； iii) 將1 00微升上述最終目標細胞懸浮液轉移至96孔微量滴定盤之各孔中； iv) 將該抗體在細胞培養基中自4〇〇〇 ng/ml連續稀釋至 0.04 ng/ml且將50微升所得抗體溶液添加至96孔微量滴定盤中之目標細胞中，一式三份測試涵蓋上述整個濃度範圍之各種抗體濃度； v) 對於最大釋放（MR)對照，使含有經標記目標細胞之培養盤中的3個額外孔接收50微升2%(V/V)非離子型清潔劑水溶液（Nonidet，Sigma，St. Louis)以替代抗體溶液（上述要點 iv); vi) 對於自發性釋放（SR)對照，使含有經標記目標細胞之培養盤中的3個額外孔接收50微升RPMI細胞培養基以替代 149901.doc •30· 201121994 抗體溶液（上述要點iv); νπ)接著將96孔微量滴定盤在5〇xg下離心i分鐘且在4。〇下培育1小時；：· Viii)將50微升pBMC懸浮液（上述要點i}添加至各孔十以 -得到25:1之效應物：目標細胞比率且將培養盤在5% c〇2氛圍37°C下之培育箱中置放4小時； ix)自各孔收集無細胞上清液且使用γ計數儀定量實驗釋放之放射性（ER); Χ)對於各抗體濃度根據式（ER-MR)/(MR-SR)xl〇〇計算特異性溶解百分比，其中ER為對該抗體濃度定量之平均放射性（參看上述要點ix)，肘汉為對河尺對照（參看上述要點v)定量之平均放射性（參看上述要點1?(),且3尺為對SR對照（參看上述要點vi)定量之平均放射性（參見上述要點ίχ); 4)「增強之ADCC」定義為在以上所測試抗體濃度範圍内觀察到之特異性溶解的最大百分比增加，及/或達成在以上所測試抗體濃度範圍内觀察到之特異性溶解的最大百刀比之一半所需要的抗體濃度降低。ADCC增強係相對於藉由上述檢定所量測，由相同類型宿主細胞使用熟習此項技術者已知之相同標準製儀、純化、調配及儲存方法產生的相同杬體”導’而非由經工程改造以過度表現之宿主細胞產生的ADCC。抗CEA抗原結合分子㈣長期以來已用作用於診斷目的之癌症標記。與相同細胞類型之非腫瘤組織相比，其在許多腫瘤組織中異常表 149901.doc -31 - 201121994 現（例如過度表現及/或以不同模式分佈於細胞中）。然而，因為CEA—般自腫瘤細胞表面裂解且大多數可用抗CEA抗體亦結合可溶性CEA，所以CEA之非共輛抗體一般不用於治療目的。舉例而言，當前預備試驗中所用之抗CEA抗體係以放射性共軛物形式投與（Wong等人，2004 ; Liersch等人，2007)。若干機制涉及抗CEA抗體之治療功效，包括抗體依賴性細胞毒性（ADCC)及補體依賴性細胞毒性（CDC)。CEA表現增加促進細胞間黏著增強，此可引起癌細胞轉移（Marshall J·，Semz’w 3 0(3)增刊 8 :3 0-3 6)。因此，抗CEA抗原結合分子亦可在抑制CEA介導之細胞黏著及癌細胞轉移中起作用。在一態樣中，本發明係關於一種抗原結合分子（例如抗體或其片段），其包含鼠類PR1 A3抗體之一或多個（例如一、二、三、四、五或六個）CDR，其中與PR1A3之相應 CDR相比至少一個CDR具有至少一個胺基酸殘基之取代，且其中與親本PR1 A3抗原結合分子相比，抗原結合分子對 CEA，較佳對膜結合型CEA具有改良之親和力。此一或多個CDR可為截短CDR，並且對於既定CDR，當該術語在本文中定義時將至少含有特異性決定殘基（SDR)。在一實施例中，抗原結合分子包含至少一個（例如一、二、三、四、五或六個）下文表2中所述之CDR，其包含將保留特異性結合之CDR的殘基。在另一實施例中，抗原結合分子包含至少一個（例如一、二、三、四、五或六個）下文表2中所 149901.doc -32- 201121994 述之CDR或其變異體或截短形式，其至少含有該CDR之特異性決定殘基，且包含來源於異源多肽之序列。在一特定實施例中，當抗原結合分子包含PR1 A3之重鏈CDR1變異體時，HCDR1具有麩胺酸來取代Kabat位置31之纈胺酸。在一實施例中，抗原結合分子包含表2之三個重鏈CDR(例如HCDR1、HCDR2及HCDR3)及/或三個輕鏈CDR(例如 LCDR1、LCDR2及LCDR3)，或其至少含有該三個CDR各自之特異性決定殘基之變異體或截短形式。在一更特定實施例中，抗原結合分子包含表2之三個重鏈CDR(例如 HCDR1、HCDR2 及 HCDR3)及三個輕鏈 CDR(例如 LCDR1、 LCDR2及LCDR3)。在另一實施例中，抗原結合分子包含抗體輕鏈及/或重鏈之可變區，較佳包含重鏈與輕鏈可變區。在一更特定實施例中，重鏈及/或輕鏈可變區係選自表4之重鏈及/或輕鏈可變區或其組合，其中重鏈及輕鏈可變區不為 SEQ ID NO: 99與 SEQ ID NO: 103 或 SEQ ID NO: 100與SEQ ID NO: 104之組合。在一實施例中，抗原結合分子為嵌合抗體，更特定言之為人類化抗體。在另一實施例中，抗原結合分子包含Fc區。在另一實施例中，抗原結合分子為親和力成熟分子。在另一實施例中，抗原結合分子與PR1A3相比ADCC活性增強。在一實施例中，抗原結合分子之ADCC增強係由於抗原結合分子對膜結合型CEA 之親和力增強，例如藉由親和力成熟或其他改良親和力之方法而增強（參看 Tang 等人，《/· 2007, 179:2815- 2823，其全部内容係以引用的方式併入本文中）。在另一 149901.doc •33· 201121994 實施例中，抗原結合分子包含經糖基工程改造之F c區。在另一態樣中，本發明亦係關於製備此等抗原結合分子之方法及其治療疾病之用途，該疾病尤其為表現CEA，尤其與相同細胞類型之正常組織相比CEA異常表現（例如過度表現或在細胞中以不同模式表現）之細胞增殖病症。此等病症包括（但不限於）結腸直腸癌、NSCLC(非小細胞肺癌）、胃癌、胰腺癌及乳癌。CEA表現量可藉由此項技術中已知之方法及本文中所述之方法（例如經由免疫組織化學檢定、免疫螢光檢定、免疫酶法檢定、ELISA、流動式細胞量測術、放射免疫檢定、西方墨點法（Western blot)、配位體結合、激酶活性等）來測定。在另一態樣中，本發明亦係關於一種經分離聚核苷酸，其包含編碼包含鼠類P R1A 3抗體之一或多個（例如·一、二、三、四、五或六個）互補決定區，或其至少含有該等互補決定區之特異性決定殘基之變異體或截短形式的多肽之序列。此專經分離聚核4酸通常編碼一或多種形成抗原吉合分子之融合多肽。在一實施例中，聚核苷酸包含編碼一或多個（例如一、二、三、四、五或六個）下文表2中所述之 CDR的序列，其包含將保留特異性結合之CDR殘基。在一貫施例中，聚核苷酸包含編碼表2之至少三個重鏈CDR(例如HCDR1、HCDR2及HCDR3)及/或三個輕鏈CDR(例如 LCDR1、LCDR2及LCDR3)或其至少含有該三個互補決定區各自之特異性決定殘基（SDR)之變異體或截短形式的序列。在一更特定實施例中，聚核苷酸編碼包含表2之三個 149901.doc •34· 201121994 重鏈CDR(例如HCDRl、HCDR2及HCDR3)及三個輕鏈 CDR(例如LCDR1、LCDR2及LCDR3)之多肽。在另一實方包例中，聚核苷酸編碼包含抗體輕鏈及/或重鏈之可變區的多肽。編碼重鏈及輕鏈可變區多肽之聚核苷酸可於一或多個表現載體中表現。在一更特定實施例中，編碼重鍵及/ 或輕鏈可變區之聚核苷酸係選自表5中提供之聚核苷酸之群或其組合’其中重鏈及輕鏈可變區不由SEq ID NO: 11 與 SEQ ID NO: 115 或 SEQ ID NO: 112與 SEQ ID NO: 116之組合編碼。在一實施例中，由聚核苷酸編碼之重鏈及輕鏈可變區多肽組合以形成嵌合抗體，更特定言之形成人類化抗體。在一特定實施例中’當聚核苷酸包含編碼pR1A3之重鏈CDR1或其變異體之序列時，該聚核苷酸編碼取代 Kabat位置31之纈胺酸的麩胺酸。在另一實施例中，聚核苷酸包含編碼Fc區之序列。本發明進一步係關於由此等聚核苷酸編碼之多肽。在一實施例中，由上述聚核苷酸編碼之多肽包含Fc區*在一更特定實施例中，由聚核苷酸編碼之多肽經糖基工程改造以在Fc區中具有改變之糖基化模式。在一特定實施例中，與親本1>111 A3抗體相比，由聚核苷酸編碼之多肽對膜結合型CEA之親和力增強。在另一實施例中，由聚核苷酸編碼之多肽的ADCc活性增強。在一貫施例中，由聚核苷酸編碼之多肽的ADCC增強係由於多肽對膜結合型CEA之親和力增強，例如藉由親和力成熟或其他改良親和力之方法而增強。在另一態樣中，本發明亦係關於由聚核苷酸編碼之多肽（例如抗原結合分子）治療疾 149901.doc -35- 201121994 病之用途，該疾病尤其為表現CEA，尤其與相同細胞類型之正常組織相比CEA異常表現（例如過度表現或在細胞中以不同模式表現）之細胞增殖病症。此等病症包括（但不限於）結腸直腸癌、NSCLC(非小細胞肺癌）、胃癌 '膜腺癌及乳癌。CEA表現量可藉由此項技術中已知之方法及本文中所述之方法（例如經由免疫組織化學檢定、免疫螢光檢定、免疫酶法檢定、ELISA、流動式細胞量測術、放射免疫檢定、西方墨點法、配位體結合、激酶活性等）來測定。在一特定實施例中’本發明係關於對膜結合型Cea具有特異性之包含重鏈可變區之人類化抗原結合分子或其部分或片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 1〇1、1〇7或188-206中任一者之序列。在另一實施例中，本發明係關於對膜結合型CEA具有特異性之包含輕鏈可變區之人類化抗原結合分子或其部分或片段，該輕鏈可變區包含SEq ID N〇: 105、108或2〇7-216中任一者之序列。在一特定實施例中，對膜結合型CEA具有特異性之人類化抗原結合分子或其部分或片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 101、107或188-206中任一者之序列，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 105、1〇8或2〇7_216中任一者之序列。在一實施例中，人類化抗原結合分子進一步包含人類重鏈恆定區及/或人類輕鏈恆定區。此等值定區描述於本文中且在此項技術中已知。在一更特定實施例中，人類化抗原結合分子包含F c區’更特定言包含已糖基工程 149901.doc -36 - 201121994 改造之F c區。在此項技術中已知將非人類抗體人類化之方法。舉例而吕’本發明之人類化ABM可根據Winter之美國專利第： 5,225,539號、Queen等人之美國專利第6，180,370號或Adair - 等人之美國專利第6,632,927號的方法製備，該等專利各自之全部内容係以引用的方式併入本文中。人類化抗體較佳具有一或多個胺基酸殘基自非人類來源引入其中。經常將此等非人類胺基酸殘基稱作「輸入」殘基，其通常取自「輸入」可變域。人類化可基本上按照Winter及合作者 (Jones 等人，321:522-525 (1986) ; Riechmann 等人 ’ iVaiwre，332:323-327 (1988) ; Verhoeyen 等人， •Science，239:1534-1536 (1988))之方法，藉由以高變區序列取代人類抗體之相應序列來進行。因此，此等「人類化」抗體為嵌合抗體（美國專利第4,816,567號），其中實質上完整人類可變域之一部分已經來自非人類物種之相應序列取代。人類化抗體通常為人類抗體，其中一些高變區殘基及可能一些FR殘基經來自非人類（例如齧齒動物）抗體中類似位點之殘基取代。標的人類化抗CEA抗體將視情況包含人類免疫球蛋白之恆定區。 ' 用於製備人類化抗體之輕鏈及重鏈人類可變域之選擇對於降低抗原性極為重要。根據所謂「最佳適配（best_fit)」方法’針對已知人類可變域序列之完整文庫來篩選供者 (例如齧齒動物）抗體之可變域序列。接著接受最接近於供者（例如齧齒動物）序列之人類序列作為人類化抗體之人類 I49901.doc 07- 201121994 構架區（FR)(Sims 等人《/. Immunol., 151:2296 (1993); Chothia等人，J. Mo/·出〇/., 196:901 (1987))。選擇人類構架序列之另一方法為將完整供者（例如齧齒動物）構架之各個別亞區（亦即FR1、FR2、FR3及FR4)或個別亞區（例如 FR1及FR2)之一些組合的序列與對應於該構架亞區（例如由 Kabat編號所確定）之已知人類可變區序列的文庫進行比較，並選擇最接近於齧齒動物序列之各亞區或組合之人類序列（Leung，美國專利申請公開案第2003/0040606A1號， 2003年2月27日公開）。另一方法使用來源於具有特定輕鏈或重鏈子群之所有人類抗體之共同序列的特定構架區 (Carter^ A * Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)； Presta等人，《/ 151:2623 (1993))。在一實施例中，人類構架區係選自人類生殖系序列集合。此等人類生殖系序列集合可見於諸如IMGT或VBase之資料庫中。構架區可經個別選擇（例如針對人類化抗CEA ABM之重鏈及/或輕鏈可變區之受者所選擇之FR1-3可由不同生殖系基因編碼）或作為相同生殖系基因之部分加以選擇。在一更特定實施例中，重鏈FR1-3係由IGHV7_4_1*02人類免疫球蛋白生殖系基因序列（寄存編號又62110，8£(^1〇1^〇:114)編碼。在另一特定實施例中，輕鏈FR1-3係由IMGT_hVK_l_ 39人類免疫球蛋白生殖系基因序列（寄存編號X593 1 5， SEQ ID NO: 11 8)編碼。在另一特定實施例中，重鏈FR4係由JH6生殖系基因序列（參看GenBank寄存編號M63030)編碼。在另一特定貪施例中，輕鏈FR4係由JK2生殖系基因 149901.doc -38 · 201121994 序列（參看Genbank寄存編號X61 584)編碼。一般需要抗原結合分子（諸如抗體及其片段）經人類化且保留對抗原之高親和力及其他有利生物特性。因此，在一實施例中，藉由使用親本及人類化序列之三維模型分析親本序列及各種概念性人類化產物來製備人類化抗體。三維免疫球蛋白模型通常可獲得且為熟習此項技術者所熟知。可獲得說明且顯示所選候選免疫球蛋白序列之可能三維構形結構的電腦程式。對此等顯示之分析有助於闡明殘基對候選免疫球蛋白序列之功能的可能作用，例如分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式，可自接受者及輸入序列選擇FR殘基且組合，以便達成所需抗體特徵’諸如對目標抗原之親和力增強。一般而言，高變區殘基直接且最實質上參與影響抗原結合。在一態樣中，本發明係關於具有所需特性及特徵之人類化、親和力成熟及/或變異型抗CEA抗原結合分子，該等所需特性及特徵包括（但不限於）對CEA抗原（尤其對膜結合型 CEA)之結合親和力強，同時對可溶性CEA實質上無交叉反應性；料’較佳以劑量依職方式誘導表現㈣之細胞

在活體外及活體外發生細胞溶解之能力；活體外抑制CEA 介導之細胞黏著之能力；抑制腫瘤組織生長及/或誘導腫瘤組織消退之能力（例如如在腫瘤模型（例如異種移植小鼠）中所顯示）。本文所述在某些實施例争，本發明之抗原結合分子例如因對包含嶋3抗體之—或多個咖的親本抗體進行 I49901.doc -39- 201121994 親和力成熟而具有增強之結合親和力。本發明抗原結合分子之親和力可藉由此項技術中已知及如本文所述之方法來測定。在一特定實施例中，本發明之人類化或變異型抗 CEA抗原結合分子以不大於約1 μΜ至約0.001 nM，更特定言之不大於約800 nM至約1 nM，且甚至更特定言之不大於約550 nM至約10 nM之單價親和力常數（KD)值結合於人類 CEA，較佳膜結合型CEA。在一特定實施例中，變異型抗 CEA抗原結合分子為以不大於約100 nM至約10 nM之單價親和力常數（KD)值結合於膜結合型CEA之親和力成熟抗體或其片段。在一實施例中，本發明之抗原結合分子通常結合與小鼠抗體PR1A3所識別相同之抗原決定基，或能夠與PR1A抗體競爭結合於膜結合型CEA。為篩選結合於由相關抗體結合之人類CEA上之抗原決定基的抗體（例如阻斷PR1A3抗體結合於人類CEA之抗體），可進行常規交叉阻斷檢定，諸如 ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory，Harlow 及 Lane 編（1988)中所述之交叉阻斷檢定。或者，可如例如Champe等人，乂5/〇/.匚/^«2· 2 70:13 88-1394 (1995)所述進行抗原決定基定位以判定抗體是否結合相關抗原決定基。在一實施例中，對人類CEA具有特異性之變異型抗原結合分子係自包含單株抗體PR1 A3之至少一個CDR的親本抗 CEA抗原結合分子製備，其中親本抗CEA抗體與PR1A3抗體結合相同抗原決定基且能夠與PR1A3競爭抗原結合。在 149901.doc -40- 201121994 一實施例中，親本抗原結合分子包含PR1A3抗體之至少一個、兩個或通常三個重鏈CDR ;在另一實施例中，親本抗原結合分子包含PR1A3抗體之至少一個、兩個或通常三個輕鏈CDR ;在另一實施例中，親本抗原結合分子包含 PR1A3抗體之三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR。較佳地，當抗原結合分子包含PR1A3之HCDR1時，該HCDR1包含麩胺酸取代Kabat位置31之纈胺酸。變異型ABM通常對CEA具有高於親本之親和力。在一實施例中，變異型ABM包含Fc 區。在一實施例中，變異型ABM係經糖基工程改造。在一實施例中，變異型ABM與親本ABM相比具有增強之ADCC 活性。在一特定實施例中，ADCC增強係由親和力增強引起，而親和力增強例如藉由對親本ABM進行親和力成熟以產生變異型ABM來達成。在一更特定的實施例中，與該親本抗原結合分子相比，ADCC增強至少約40%至約100°/〇。在另一特定的實施例中，以活體外細胞毒性檢定測量，變異型ABM使ADCC增強至少約10%至約100%。在更特定的實施例中，變異型ABM在既定濃度下誘導ADCC效能為該鼠類PR1 A3抗體至少約10倍至約1000倍。在另一特定實施例中，ADCC活性增強為Fc區糖基工程改造之結果。在另一特定實施例中，ADCC活性增強為親和力增強與糖基工程改造之組合的結果。在一實施例中，本發明之變異型抗原結合分子在至少一個CDR中包含一或多個胺基酸取代。胺基酸取代之數目可在一至十（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10)，較佳二 149901.doc -41 - 201121994 至五（例如2、3、4或5)之範圍内。在一實施例中，至少一個重鏈CDR包含一或多個胺基酸取代。在另一實施例中，至少一個輕鏈CDR包含一或多個胺基酸取代。在另—實施例中’至少一個重鍵CDR包含一或多個取代’且至少一個輕鏈CDR包含一或多個取代。較佳地，當抗原結合分子包含PR1A3之HCDR1時’該HCDR1包含麩胺酸取代Kabat位置3 1之賴胺酸。抗原結合分子生物特性之實質修飾可藉由選擇對維持以下方面之作用顯著不同的取代來完成：（勾取代區域中多肽主鍵之結構，例如呈摺疊片或螺旋構形，⑻目標位點處分子之電何或疏水性，或（c)側鏈體積。包含胺基酸取代之變異型抗原結合分子與親本抗原結合分子相比可具有改良之生物活性，例如改良之抗原結合親和力及增強之ADCC。胺基S夂取代可藉由此項技術中已知之各種技術引入，該等技術包括(但不限於)例如定點突變誘發及/或藉由噬菌體呈現對親本抗原結合分子進行親和力成熟。為鑑別供修飾之候選位點，例如高變區殘基，可進行丙胺酸掃描突變誘發以找出顯著有助於抗原結合之殘基。或者或另外，宜分析抗原·抗體複合物之晶體結構以鑑別抗體，、人類CEA之間的接觸點。此等接觸殘基及相鄰殘基為根據此項技術中已知及/或本文所述之方法進行取代之候選殘基。產生此等變異體後，可藉由此項技術中已知及/ 或本文所述之方法篩選該組變異體，且可在-或多個相關檢定中選擇具有優越特性之抗體供進—步開發。 149901.doc •42· 201121994 可使用噬菌體呈現來自含有隨機胺基酸突變之親本抗原結合分子產生高變區序列譜。舉例而言，使若干高變區位點（例如6-7個位點）突變以在各位點產生所有可能之胺基取代。或者，可對重鏈及/或輕鏈可變區進行隨機突變誘發。突變可藉由此項技術中已知之技術產生，該等技術包括（但不限於）在PCR擴增期間使用突變誘發引子、控制循 %數及使用誘發突變之核答酸類似物8_側氧基_dGTp及 dPTP。使由此產生之抗體變異體以單價方式自絲狀噬菌體粒子以與封裝於各粒子内之M1 3之基因m產物的融合體形式呈現。接著如本文所揭示針對生物活性（例如結合親和力）篩選噬菌體呈現之變異體且將具有一或多種改良活性之候選物用於進一步開發。製備噬菌體呈現文庫之方法可見於 Huse 等人，Sczewce，246:1275-1281 (1989);户广0<: #如7 Jcad Sc!··, 88:4363-4366 (1991)中，該等文獻各自之全部内容均以引用的方式併入本文中。鑑別親和力成熟抗原結合分子之替代方法可見於例如Baiint等人之美國專利第7,432,063號，其全部内容係以引用的方式併入本文中。在某些實施例中，本發明之抗原結合分子包含以區，較佳包含人類Fc區。Fc區之序列及結構在此項技術中已知且已表徵。在一特定實施例中’人類恆定區為IgG，如SEq ID NO 121及122中所述，及下文所述： igGl核苷酸序列（SEQ ID NO: 121) H9901.doc -43- 201121994

ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGC

ACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTCrGGCTGCCTGGTCAAGGACTA

CTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGA

CCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGAC

TCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGG

GCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAAC

ACCAAGGTGGACAAGAAAGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAAC

TCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGAC

CGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGA

TCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGC

CACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGT

GGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTAC

AACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAG

GACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAA

AGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAG

GGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGG

GATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAA

AGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATG

GGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGAC

TCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAG

AGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCA

TGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTC

TCCGGGTAAATGA

IgGl 胺基酸序列（SEQIDNO: 122)

TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK

KAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC

VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVL

TVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLP

PSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD

SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSP

GK 然而，本發明亦涵蓋人類Fc區之變異體及同功異型物。舉例而言，適用於本發明之變異型Fc區可根據Presta之美國專利第6,737,056號（？〇區變異體因一或多個胺基酸修飾而具有改變之效應功能）；或美國專利申請案第60/439,498 號；第 60/456,041 號；第 60/514,549 號；或 WO 2004/063351 (變異型Fc區因胺基酸修飾而具有增強之結合親和力）；或美國專利申請案第10/672,280號或WO 2004/099249(Fc變異體因胺基酸修飾而具有改變之與FcyR之結合）中教示之方 • 44 - 149901.doc 201121994 法來產生，該等文獻各自之内容係以全文引用的方式併入本文中。在一特定實施例中，抗CEA ABM及變異型ABM 包含已進行糖基工程改造以改變ABM之效應功能活性（例如降低岩藻糖基化、改良Fc受體結合親和力、增強ADCC 等）的Fc區。可使用之糖基工程改造方法在下文中詳細描述且在此項技術中已知。在一實施例中，本發明之抗原結合分子共輛至另一部分，諸如放射性標記或毒素。此等共軛抗原結合分子可藉由此項技術中熟知之眾多方法產生。在下文標題為「抗 CEA抗原結合分子共輛物」之章節中詳細描述本發明之抗 CEAABM共軛物。抗CEA ABM之多肽及聚核苷酸在一態樣中，本發明係關於與鼠類PR1 A3抗體具有相同結合特異性（例如結合於膜結合型CEA之相同抗原決定基），且具有相當或改良之生物活性（例如對膜結合型CEA 之親和力改良及/或ADCC增強）之抗原結合分子及多肽。在一實施例中，抗原結合分子包含一或多個下表2中所述之CDR。在一更特定實施例中，抗原結合分子包含3個下表2中之重鏈CDR。在另一特定實施例中，抗原結合分子包含3個下表2中之輕鏈CDR。在另一特定實施例中，本發明係關於對膜結合型人類CE A具有特異性之抗原結合分子，其包含：（a)選自由以下組成之群的重鏈CDR1序列： SEQ ID NO: 1 ' SEQ ID NO: 2 ' SEQ ID NO: 3 > SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、 149901.doc •45 - 201121994 SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11 及 SEQ ID NO: 12 ; (b)選自由以下組成之群的重鏈CDR2序列：SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、 SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24 ;及（c)選自由以下組成之群的重鏈CDR3序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、 SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34 及 SEQ ID NO: 35。在另一特定實施例中，本發明係關於對膜結合型人類CEA具有特異性之抗原結合分子，其包含：（a)選自由以下組成之群的輕鏈 CDR1序列：SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44及 SEQ ID NO: 45 ; (b)選自由以下組成之群的輕鏈CDR序歹丨J : SEQ ID NO: 46及 SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、 SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54及 SEQ ID NO: 55 ;及（c)SEQ ID NO: 56之輕鏈CDR3。在一特定實施例中，抗原結合分子對可溶性人類CEA不具有實質交叉反應性。在另一實施例中，抗原結合分子包含人類重鏈及/ 或輕鏈恆定區。舉例而言，在一實施例中，抗原結合分子包含Fc區。在一更特定實施例中，抗原結合分子包含已進 149901.doc -46· 201121994 行糖基工程改造之Fc區。本發明亦係關於編碼對膜結合型人類CEA具有特異性之任一本發明抗原結合分子之聚核苷酸。在一態樣中，本發明係關於對膜結合型人類CEA具有特異性之抗原結合分子，其包含重鏈可變區及/或輕鏈可變區。在一實施例中，重鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 101 之序列的多肽。在另一實施例中，重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 101之序列具有至少約80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98%或99%—致性之多肽。在一實施例中，輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 105之序列的多肽。在另一實施例中，重鏈可變區包含與SEQ ID NO: 105之序列具有至少約 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或 99% — 致性之多肽。在一實施例中，對膜結合型人類CEA具有特異性之抗原結合分子包含重鏈可變區及輕鏈可變區。在一特定實施例中，重鏈可變區包含具有如下SEQ ID NO·· 4之序列的多肽：

QVQLVQSCtSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEX,X2MNWVRQAPGQG lewmgx3intkx4gexax5yveefkgrfvfsldtsvstaylqisslka

EDTAVYYCAR\TOX6X7X8YX9X10XnXl2DYWGQGTTVTVSS 其中X1為Y或F ; X2為S或G; X3為N或S ; X4為W或Y; X5為Ν、Τ或S ; X6為Τ或Ν ; X7為V或I ; X8為F或A ; X9為 Y、A、V、F或 S ; X10為 D、H、W、E或 Y; X11為 V、L或 F; X12為Ε、Κ或Q; X13為Α或Τ;且ΧΜ為Μ或L »

在一特定實施例中，輕鏈可變區包含具有如下SEQ ID 14990】.doc •47- 201121994 NO: 11之序列的多肽： diqmtqspsslsasvgdrvtitckasx15x,6x17x18x19x20vawyqqkp gkapkx21liyx22asx23x24x25x26gvpsrfsgsgsgtdftltisslqped

FATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK 其中 X15為Q、A、K或Η; X16為N、A、Y、I、K、T或 F; X17為V、A、G或 Μ; X18為G、S、Τ或 L; X19為Τ、Ν、 Ρ 或 A ; X2G 為 Ν 或 Υ ; X21 為 Ρ 或 L ; X22 為 S、L 或 W ; X23 為丫、>1或11;又24為11、1^、？或11;又25為¥、8、（）、1<：、£、？或Ρ ;且X26為S、G、I或R。在另一特定實施例中，重鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 107之序列的多肽。在另一特定實施例中，重鏈可變區包含具有與SEQ ID NO: 107之序列至少約80%、85%、90%、 95%、96%、97%、98%或99%—致之序列的多肽。在另一特定實施例中，抗原輕鏈可變區包含具有SEQ ID NO: 108 之序列的多肽。在另一特定實施例中，輕鏈可變區包含與 SEQ ID NO: 108之序列至少約 80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98%或99%—致之序列。在一實施例中，抗原結合分子包含與選自由SEQ ID NO: 101、107及188至206 組成之群的序列至少約80°/。、85%、90%、95%、96%、 97%、98%、99%或100% —致之重鍵多狀，及與選自由 SEQ ID NO: 105、108及207至216組成之群的序列至少約 80〇/〇、85%、90〇/〇、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 一致之輕鏈多肽。包含重鏈及/或輕鏈可變區之抗原結合分子對CEA，尤其對膜結合型CEA具有特異性。在一實施 149901.doc -48- 201121994 例中，包含重鏈及/或輕鏈可變區之抗原結合分子對可溶性CEA不具有實質交叉反應性。在另一實施例中，重鏈進一步包含Fc區。在一特定實施例中，如在下文所詳細描述，Fc區已經糖基工程改造以使N-連接型寡醣之岩藻糖基化減少。在一態樣中，本發明亦係關於包含一或多個表2中所述之CDR的經分離多肽。在一實施例中，經分離多肽包含：選自由以下組成之群的重鏈CDR1序列：SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、 SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11 及 SEQ ID NO: 12 ; (b)選自由以下組成之群的重鏈CDR2序歹: SEQ ID NO: 13、 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24 ;及（c)選自由以下組成之群的重鏈 CDR3序列：SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO· 33、 SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 35。在一實施例中，經分離多肽包含與SEQ ID NO: 107之序列至少約80%、85%、 90%、95% ' 96%、97%、98% ' 99%或 100%—致之序歹，J 〇在另一實施例中，本發明係關於一種多肽，其包含：（a)選自由以下組成之群的輕鏈CDR1序列：SEQ ID NO: 36、 149901.doc -49- 201121994 SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44及 SEQ ID NO: 45 ; (b)選自由以下組成之群的輕鏈CDR序列：SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、 SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54 及 SEQ ID NO: 55 及（c)SEQ ID NO: 56 之輕鏈 CDR3。在一實施例中，經分離多肽包含與SEQ ID NO: 108 之序歹丨J 至少約 80%、85% ' 90%、95%、96%、97%、 98%、99%或100% —致之序列。在另一態樣中，本發明亦係關於編碼任一此等多狀及包含任一此等多狀之抗原結合分子的聚核苷酸。包含該多肽之抗原結合分子對CEA，尤其對膜結合型CEA具有特異性。在一實施例中，抗原結合分子對可溶性人類CEA不具有實質交叉反應性。在一實施例中，多肽進一步包含人類重鏈及/或輕鏈恆定區。在另一實施例中，多肽包含Fc區，更特定言之包含經糖基工程改造之Fc區。在一特定實施例中，如在本文所詳細描述， Fc區已經糖基工程改造以使N-連接型募醣之岩藻糖基化減少〇在另一態樣中，本發明進一步係關於編碼對膜結合型人類CEA具有特異性之抗原結合分子的經分離聚核苷酸。在一實施例中，經分離聚核苷酸包含一或多個下表3中所示之CDR序列，或其組合，其中聚核苷酸編碼多肽，該多肽作為抗原結合分子之部分特異性結合CEA，尤其特異性結 149901.doc •50- 201121994 合膜結合型CEA。在一實施例中，經分離聚核苷酸包含與一或多個表5中所示之可變區序列至少約80%、85%、 90%、95%、96%、97%、98%、99%或 100%—致之序列。在一個實施例中，本發明係關於一種組合物，其包含第一經分離之聚核苷酸及第二經分離之聚核苷酸，該第一經分離之聚核苷酸包含與選自由SEQ ID NO: 113、119及159-177組成之群的序列至少約80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98% ' 99%或100%—致之序列，該第二經分離之聚核苷酸包含與選自由SEQ ID NO: 117、120及178-187組成之群的序列至少約80%、85%、90%、95%、 96%、97%、98%、99%或100%—致之序列。在一個實施例中，聚核苷酸編碼包含可變區及恆定區（例如IgG恆定區或其片段，尤其包含Fc區之IgG恒定區）之重鏈。在一個實施例中，聚核苷酸編碼包含可變區及恆定區（例如κ或λ恆定區）之輕鏈。在一個實施例中，此等經分離之聚核苷酸所編碼的抗原結合分子對可溶性人類CEA不具有實質交叉反應性。在另一實施例中，本發明亦涵蓋一種經分離之聚核苷酸，其包含編碼具有保守性胺基酸取代之序列與選自由 SEQ ID NO: 101、105、107、108及 188-216組成之群的序列至少約 80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或100% —致之多肽的序列，其中包含該多肽之抗原結合分子（例如包含與選自由SEQ ID NO: 101、107及188-206組成之群的序列至少約80%、85%、90%、95%、96%、 149901.doc -51 - 201121994 97%、98%、99%或100% —致之多肽及與選自由SEQ ID NO: 105、110及207-216組成之群的序列至少約80%、 85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100%—致之多肽的抗原結合分子）特異性結合於CEA，尤其特異性結合於膜結合型CEA。在一個實施例中，多肽進一步包含人類恆定區。在一個特定實施例中，多肽包含人類Fc區。在一個更特定實施例中，Fc區為經糖基工程改造之IgG Fc 區。在一個實施例中，本發明係關於一種聚核苷酸，其包含：（a)選自由SEQ ID NO: 57-59及61組成之群的編碼重鏈 CDR1之序列，（b)選自由SEQ ID NO: 62-66組成之群的重鏈CDR2序列，及（c)選自由SEQ ID NO: 67-77組成之群的重鏈CDR3序列。在另一實施例中，本發明係關於一種聚核苷酸，其包含··（a)選自由SEQ ID NO: 78-88組成之群的輕鏈CDR1序列，（b)選自由SEQ ID NO: 89-97組成之群的輕鏈CDR2序列，及（c)SEQ ID NO: 98之輕鏈CDR3序列。表2 CDR 胺基酸序列 SEQ ID NO Kabat EFGMN 1 EYGMN 2 EYSMN 3 EFGMS 5 重鏈CDR1 Chothia GYTFTEF 6 GYTFTEY 7 AbM GYTFTEFGMN 8 GYTFTEYGMN 9 GYTFTEYSMN 10 GYTFTEFGMS 12 149901.doc •52· 201121994 CDR 胺基酸序列 SEQ ID NO Kabat WINTKTGEATYVEEFKG 13 WINTKTGEATYIEEFKG 14 WINTKSGEATYVEEFKG 15 YINTKNGEANYVEEFKG 16 WINTKNGEATYIEEFKG 17 重鏈CDR2 Chothia NTKTGEAT 18 NTKSGEAT 19 NTKNGEAN 20 AbM WINTKTGEAT 21 WINTKSGEAT 22 YINTKNGEAN 23 WINTKNGEAT 24 WDFYDYVEAMDY 25 WDFYHYVEAMDY 26 WDFVDYYEAMDY 27 WDFYWYVEAMDY 28 Kabat WDAFEYVKALDY 29 重鏈CDR3 Chothia WDFFEYFKTMDY 30 及AbM WDFFYYVQTMDY 31 WDFSYYYEAMDY 32 WDFAHYFQTMDY 33 WDFAYYFQTMDY 34 WDFAYYLEAMDY 35 KASQNVGTNVA 36 KASANVGNNVA 37 KASKNVGTNVA 38 KASAAVGTYVA 39 輕鏈CDR1 KASQYASTNVA 40 KASHNVGTNVA 41 KASQIMGPNVA 42 KASQIVGTNVA 43 KASQKVLTNVA 44 KASQTVSANVA 45 149901.doc -53- 201121994 SASYRYS 46 YLASNLSG 47 YLASYPQI 48 YSASYRKR 49 輕鏈CDR2 YWASYRYS 50 YSASHRYS 51 YLASYHES 52 YSASHRPS 53 YLASYRYS 54 YLASYRYR 55 輕鏈CDR3 HQYYTYPLFT 56 表3 CDR 核苷酸序列 SEQ ID NO GGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAAC 57 重鏈CDR1 GGATACACCTTCACTGAGTATGGTATGAAC 58 GGATACACCTTCACTGAGTATTCTATGAAC 59 GGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAGC 61 TGGATAAACACCAAAACTGGAGAGGCAACATATGT TGAAGAGTTTAAGGGA 62 TGGATAAACACCAAAACTGGAGAGGCAACATATAT TGAAGAGTTTAAGGGA 63 重鏈CDR2 TGGATAAACACCAAAAGTGGAGAGGCAACATATG TTGAAGAGTTTAAGGGA 64 TATATAAACACCAAAAATGGAGAGGCAAACTATG TTGAAGAGTTTAAGGGA 65 TGGATAAACACCAAAAATGGAGAGGCAACATATA TTGAAGAGTTTAAGGGA 66 重鏈CDR3 TGGGACTTCTATGATTACGTGGAGGCTATGGACTA C 67 TGGGACTTCTATCATTACGTGGAGGCTATGGACTA C 68 TGGGACTTCGTGGATTACGTGGAGGCTATGGACTA C 69 TGGGACTTCTATTGGTACGTGGAGGCTATGGACTA C 70 149901.doc -54- 201121994 CDR 核苷酸序列 SEQ ID NO TGGGACGCCTTTGAGTACGTGAAGGCGCTGGACT AC 71 TGGGATTTCTTTGAGTATTTTAAGACTATGGACTA C 72 TGGGACTTTTTTTATTACGTGCAGACTATGGACTA C 73 TGGGATTTTTCTTATTACGTTGAGGCGATGGACTA C 74 TGGGACTTTGCTCATTACTTTCAGACTATGGACTA C 75 TGGGACTTCGCTTATTACTTTCAGACTATGGACTA C 76 TGGGATTTCGCGTATTACCTTGAGGCTATGGACTA C 77 AAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTTGCC 78 AAGGCCAGTGCCAATGTGGGTAATAATGTTGCC 79 AAGGCCAGTAAGAATGTGGGGACTAATGTTGCG 80 AAGGCCAGTGCGGCTGTGGGTACGTATGTTGCG 81 輕鏈CDR1 AAGGCCAGTCAGATAGCGAGTACTAATGTTGCC 82 AAGGCCAGTCACAATGTGGGTACCAACGTTGCG 83 AAGGCCAGTCAGATTATGGGTCCTAATGTTGCG 84 AAGGCCAGTCAAATTGTGGGTACTAATGTTGCG 85 AAGGCCAGTCAGAAGGTGCTTACTAATGTTGCG 86 AAGGCCAGTCAGACTGTGAGTGCTAATGTTGCG 87 TATTCGGCATCCTACCGCTACAGT 88 TATTTGGCCTCCAACCTCTCCGGT 89 TACCTGGCATCCTACCCCCAGATT 90 TATTCGGCATCCTACCGCAAAAGG 91 輕鏈CDR2 TATTGGGCATCCTACCGCTATAGT 92 TATTCGGCATCCCACCGGTACAGT 93 TATTTGGCATCCTACCACGAAAGT 94 TATTCGGCATCCCACCGTCCCAGT 95 TATTTGGCATCCTACCGCTACAGT 96 TATTTGGCATCCTACCGCTACAGA 97 輕鏈CDR3 CACCAATATTACACCTATCCTCTATTCACG 98 149901.doc -55- 201121994 表4 構築體肽序列 SEQ ID NO PR1A3 VH QVKLQQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTEFGMNW VKQAPGKGLKWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFAFS LETSATTAYLQINNLKNEDTAKYFCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 99 pEM1496 huPRl A3 VH QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKADDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 100 CH7A QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 101 IGHV7-4-l*02 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMN WVRQAPGQGLEWMGWINTNTGNPTYAQGFTGRFV FSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCAR 102 PR1A3 VL DIVMTQSQRFMSTSVGDRVSVTCKASQNVGTNVAW YQQKPGQSPKALIYSASYRYSGVPDRFTGSGSGTDFT LTISNVQSEDLAEYFCHQYYTYPLFTFGSGTKLEMKR T 103 pEM1495 huPRlA3 VL DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWY QQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTF TISSLQPEDIATYYCHQYYTYPLFSFGQGTKVEIKR 104 CL1A DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWY QQKPGKAPKLLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK 105 IMGT hVK 1_ 39 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQ QKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTI SSLQPEDFATYYCQQSYSTP 106 CH7 rF9 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKSGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 107 CLA1 rHll DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQTVSANVAWY QQKPGKAPKLLIYLASYRYRGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 108 149901.doc -56- 201121994 構築體肽序列 SEQ ID NO PMS22 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 188 1C8 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYHYVE AMDYWGQGTTVTVSS 189 3Ε1 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFVDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 190 2D7 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYWYVE AMDYWGQGTTVTVSS 191 親和力成熟重鏈 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFAHYFQ TMDYWGQGTTVTVSS 192 親和力成熟重鏈 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFAYYFQ TMDYWGQGTTVTVSS 193 親和力成熟重鏈 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFAYYLE AMDYWGQGTTITYSS 194 Η3 全(5) 19 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMS WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDAFEYVK ALDYWGQGTTVTVSS 195 Η3 全(5) 8 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFFEYFK TMDYWGQGTTVTVSS 196 149901.doc ·57· 201121994 構築逋肽序列 SEQ ID NO Η3全(5) 28 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFFYYVQ TMDYWGQGTTVTVSS 197 Η3全(5) 27 QVQLYQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFSYYVE AMDYWGQGTTVTVSS 198 Η4Ε9重鏈 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGEATYIEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 199 Pacl4(B9) QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKSGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 200 Pad 5 (F9) QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKSGEATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 201 H1/H2 (5) 2 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYSMN WVRQAPGQGLEWMGYINTKNGEANYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 202 H1/H2 (5) 11 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYGMN WVRQAPGQGLEWMGWINTKNGEATYIEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 203 Hl/H2(5) 13 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMN WVRQAPGQGLEWMGYINTKNGEANYVEEFKGRFVF SLDASVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 204 H1/H2 (5) 14 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEYGMN WVRQAPGQGLEWMGYINTKNGEANYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDFYDYVE AMDYWGQGTTVTVSS 205 149901.doc ·58· 201121994 構築體肽序列 SEQ ID NO 出全(5)19 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEFGMS WVRQAPGQGLEWMGWINTKTGHATYVEEFKGRFVF SLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDAFEYVK ALDYWGQGTTVTVSS 206 pAC21 (3A1) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASANVGNNVAWY QQKPGKAPKLLIYLASNRSGGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 207 pAC19(2C6) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASKNVGTNVAWY QQKPGKAPKPLIYLASYPQIGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 208 pAC18(2Fl) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASAAVGTYVAWY QQKPGKAPKLLIYSASYRKRGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 209 PAC23 (2F11) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIASTNVAWYQ QKPGKAPKLLIYWASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 210 H4E9輕鏈 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQNVGTNVAWY QQKPGKAPKPLIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGIXLEIKRT 211 L2D2 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASHNVGTNVAWY QQKPGKAPKLLIYSASHRYSGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 212 pAC6 (Cl) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIMGPNVAWYQ QKPGKAPKLLIYLASYHESGVPSRFSGSGSGTDFTLT ISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 213 pAC7(E10) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQIVGTNVAWY QQKPGKAPKLLIYSASHRPSGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 214 pAC12 (H7) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQKVLTNVAWY QQKPGKAPKLLIYLASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 215 pAC13(Hll) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQTVSANVAWY QQKPGKAPKLLIYLASYRYRGVPSRFSGSGSGTDFTL TISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIKRT 216 149901.doc -59- 201121994 表5 構築體核苷酸序列 SEQ ID NO PR1A3 VH CAGGTGAAGCTGCAGCAGTCAGGACCTGAGTTGA AGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAA GGCTTCTGGATATACCTTCACAGAATTCGGAATGA ACTGGGTGAAGCAGGCTCCTGGAAAGGGTTTAAA GTGGATGGGCTGGATAAACACCAAAACTGGAGAG GCAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGC CTTCTCTTTGGAGACCTCTGCCACCACTGCCTATTT GCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACACGGCT AAATATTTCTGTGCTCGATGGGATTTCTATGACTAT GTTGAAGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCA CCGTGACCGTCTCCTCA 111 pEM1496 CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTGGAATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGGC AACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGACGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 112 CH7A CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 113 IGHV7-4- 1*02 CAGGTGCAGCTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTAGCTATGCTATGAAT TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATCAACACCAACACTGGGAACCC AACGTATGCCCAGGGCTTCACAGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAGGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGA 114 149901.doc -60- 201121994 PRl A3 VL GATATCGTGATGACCCAGTCTCAAAGATTCATGTCC ACATCAGTAGGAGACAGGGTCAGCGTCACCTGCA AGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTTGCCTGG TATCAACAGAAACCAGGACAATCCCCTAAAGCACT GATTTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGAGTCC CTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAATGTACAGTCTGAAGA CTTGGCGGAGTATTTCTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTCGGCTCGGGGACAAAGTTGG AAATGAAACGTACG 115 pEM1495 GACATCCAGATGACTCAGAGCCCAAGCAGCCTGA GCGCCAGCGTGGGTGACAGAGTGACCATCACCTG TAAGGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTTGCCT GGTACCAGCAGAAGCCAGGTAAGGCTCCAAAGCT GCTGATCTACTCGGCATCCTACCGGTACAGTGGTG TGCCAAGCAGATTCAGCGGTAGCGGTAGGGGTACC GACTTCACCTTCACCATCAGCAGCCTCCAGCCAGA GGACATCGCCACCTACTACTGCCACCAATATTACAC CTATCCTCTATTCAGCTTCGGCCAAGGGACCAAGG TGGAAATCAAACGT 116 CL1A GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTCGGCATCCTACCGCTACAGTGGAGTCCC ATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATT TCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTAT CCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCGA GATCAAG 117 IMGT hVK _1_39 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCG GGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCT GATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAGTA CCCCT 118 CH7 rF9 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTATGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAACACGAAATCTGGAGAGGC AACCTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCAGCTAGC 119 149901.doc -61 - 201121994 CLAl Rhll GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGACTGTGAGTGCTAATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTACTTGGCATCCTACCGCTACAGAGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 120 PMS22 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 159 1C8 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATCATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 160 3E1 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCGTGGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 161 149901.doc 62- 201121994 2D7 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATTGGTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 162 親和力成熟重鍵 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTTGCTCATTACT TTCAGACTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 163 親和力成熟重鏈 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCGCTTATTACT TTCAGACTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 164 親和力成熟重鏈 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGATTTCGCGTATTACC TTGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GATCACCGTCTCCTCA 165 *49901.doc •63- 201121994 H3 全(5) 19 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAG CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCTG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACGCCTTTGAGTAC GTGAAGGCGCTGGACTACTGGGGCCAAGGGACCA CGGTCACCGTCTCCTCA 166 H3 全(5) 8 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGATTTCTTTGAGTATT TTAAGACTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 167 H3^(5) 28 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTTTTTTATTACG TGCAGACTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 168 H3^(5) 27 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAA CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGATTTTTCTTATTACG TTGAGGCGATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC AGTCACCGTCTCCTCA 169 149901.doc 64- 201121994 Η4Ε9重鏈 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAATACCAAAACTGGAGAGGC AACTTATATTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCTT CTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTGC AGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCGT GTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACGT GGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 170 pAC14(B9) CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAACACCAAAAGTGGAGAGGC AACCTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 171 pAC15(F9) CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTATGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAACACGAAATCTGGAGAGGC AACCTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 172 H1/H2 (5) 2 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTATTCTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATACATAAACACCAAAAATGGAGAGGC AAACTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 173 149901.doc -65· 201121994 H1/H2 (5) 11 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTATGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATGGATAAACACCAAAAATGGAGAGGC AACCTATATTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCT TCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACG TGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCAC GGTCACCGTCTCCTCA 174 H1/H2 (5) 13 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATATATAAACACCAAAAATGGAGAGGCA AACTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCTT CTCCTTGGACGCCTCTGTCAGCACGGCATATCTGC AGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCGT GTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACGT GGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 175 H1/H2 (5) 14 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTATGGTATGAAC TGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGT GGATGGGATATATAAACACCAAAAATGGAGAGGCA AACTATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTCTT CTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTGC AGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCCGT GTATTACTGTGCGAGATGGGACTTCTATGATTACGT GGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGGGACCACG GTCACCGTCTCCTCA 176 H3 全(5) 19 CAGGTGCAATTGGTGCAATCTGGGTCTGAGTTGAA GAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAG GCTTCTGGATACACCTTCACTGAGTTTGGAATGAG CTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAG TGGATGGGATGGATAAACACCAAAACTGGAGAGG CAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGGTTTGTC TTCTCCTTGGACACCTCTGTCAGCACGGCATATCTG CAGATCAGCAGCCTAAAGGCTGAAGACACTGCTG TGTATTACTGTGCGAGATGGGACGCCTTTGAGTAC GTGAAGGCGCTGGACTACTGGGGCCAAGGGACCA CGGTCACCGTCTCCTCA 177 149901.doc -66- 201121994 pAC21 (3A1) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTGCCAATGTGGGTAATAATGTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTTGGCCTCCAACCGCTCCGGTGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 178 pAC19 (2C6) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTAAGAATGTGGGGACTAATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCCCCT GATCTACCTGGCATCCTACCCCCAGATTGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCCCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 179 pAC18 (2F1) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTGCGGCTGTGGGTACGTATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTCGGCATCCTACCGCAAAAGGGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 180 pAC23 (2F11) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGATAGCGAGTACTAATGTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTGGGCATCCTACCGCTATAGTGGAGTCCC ATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATT TCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTAT CCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCGA GATCAAGCGTACG 181 H4E9輕鏈 GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGAATGTGGGTACTAATGTTGCCTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCCCCT GATCTATTCGGCATCCTACCGCTACAGTGGAGTCCC ATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATT TCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTAT CCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCGA GATCAAGCGTACG 182 149901.doc -67- 201121994 L2D2 GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCACAATGTGGGTACCAACGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTCGGCATCCCACCGGTACAGTGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 183 pAC6 (Cl) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGATTATGGGTCCTAATGTTGCGTGGTA TCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCTG ATCTATTTGGCATCCTACCACGAAAGTGGAGTCCCA TCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAG ATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAA GATTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACC TATCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTC GAGATCAAGCGTACG 184 pAC7(E10) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAAATTGTGGGTACTAATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTCGGCATCCCACCGTCCCAGTGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 185 pAC12 (H7) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGAAGGTGCTTACTAATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTATTTGGCATCCTACCGCTACAGTGGAGTCCC ATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATT TCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGAT TTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTAT CCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCGA GATCAAGCGTACG 186 pAC13 (Hll) GATATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCT GCATCTGTGGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCAA GGCCAGTCAGACTGTGAGTGCTAATGTTGCGTGGT ATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCACCTAAGCTCCT GATCTACTTGGCATCCTACCGCTACAGAGGAGTCC CATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGAT TTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGA TTTCGCAACTTACTACTGTCACCAATATTACACCTA TCCTCTATTCACGTTTGGCCAGGGCACCAAGCTCG AGATCAAGCGTACG 187 149901.doc -68 · 201121994 表現載體及宿主細胞在一態樣中，本發明係關於表現載體及/或宿主細胞，其包含一或多種本發明之經分離聚核苷酸。舉例而言，該宿主細胞或表現載體包含任一或多種聚核苷酸或編碼上文在標題為「抗CEA抗原結合分子」及「抗CEAABM之多肽及聚核苷酸」之章節中所述之多肽、ABM及/或變異型 ABM的聚核苷酸。在另一態樣中，本發明係關於一種製備特異性結合膜結合型人類CEA之ABM的方法，該方法包含：在培養基中將包含一或多種本發明之經分離聚核苷酸或包含一或多種本發明之經分離聚核苷酸之表現載體的宿主細胞在允許該一或多種聚核皆酸表現之條件下培養，其中該一或多種聚核苷酸編碼一或多種形成ABM之部分的多肽；及回收該ABM，其中該ABM或其部分與鼠類單株抗體PR1 A3結合相同抗原決定基，或能夠與鼠類單株抗體 PR1A3競爭結合。任何類型之培養細胞株一般均可用於表現本發明之 ABM。在一較佳實施例中，CHO細胞、BHK細胞、NS0細胞、SP2/0細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63小鼠骨髓瘤細胞、PER細胞、PERX6細胞或融合瘤細胞、其他哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞或植物細胞可用作背景細胞株以產生本發明之經工程改造宿主細胞。在一特定實施例中，宿主細胞或表現載體包含一或多種編碼ABM之聚核苷酸，該ABM為具有鼠類PR1A3抗體之結合特異性的變異型抗體或其片段；例如，ABM與PR1 A3結 149901.doc -69- 201121994 合相同抗原決定基或能夠與PRl A3抗體競爭結合於抗原。在一較佳實施例中’抗體為親和力成熟抗體。親和力成熟抗體一般相比於該親和力成熟抗體所來源之參考抗體具有改良之結合親和力。在另一較佳實施例中，抗體具有所需治療特性’包括（但不限於）：對CEA抗原，尤其對膜結合型CEΑ具有強結合親和力，同時對可溶性CEA實質上無交叉反應性；誘導，較佳以劑量依賴性方式誘導表現CEA之細胞在活體外及活體外發生細胞溶解之能力；活體外抑制 CEA介導之細胞黏著之能力；在小鼠（例如異種移植小鼠）之腫瘤模型中抑制腫瘤組織生長及/或誘導腫瘤組織消退之能力。在另一較佳實施例中，變異型抗體或其片段包含人類F c。在一實施例中，一種或若干種編碼本發明之ABM的聚核苷酸可在組成性啟動子或者調節表現系統之控制下表現。適合調節表現系統包括（但不限於）四環素調節表現系統、蛻皮激素誘導性表現系統、丨ac切換型（lac switch)表現系統、糖皮質激素誘導性表現系統、溫度誘導性啟動子系統，及金屬硫蛋白金屬誘導性表現系統。若編碼本發明之 ABM的若干不同核酸包含於宿主細胞系統内，則其中一些可在組成性啟動子之控制下表現，而其他在調節啟動子之控制下表現°帛大表現量視為對細胞生長速率不具顯著不良影響之最&可能穩定多肽表現量，且將使用常規實驗來測定。藉由此項技術中—般已知之方法载表現量，該等方法包括西方墨點分析，其使用對ABM具有特異性之抗體 149901.doc 201121994 或對與ABM融合之肽標籤具有特異性之抗體；及北方墨點分析（Northern blot analysis)。在另一替代方案中，聚核苷酸可可操作地連接至報導基因；本文揭示之ABM的表現量可藉由量測與報導基因表現量相關之信號來測定。報導基因可與編碼該ABM的核酸一起轉錄為單一mRNA分子；其各別編碼序列可由内部核糖體進入位點（IRES)或由非帽依賴型轉譯強化子（CITE)連接。報導基因可與至少一個編碼本文揭示之ABM的核酸轉譯到一起使得形成單一多肽鏈》編碼本發明ABM之核酸可在單一啟動子控制下可操作地連接至報導基因，以使得編碼ABM之核酸及報導基因轉錄成一個RN A分子，該RN A分子替代性拼接成兩個個別信使 RNA(mRNA)分子；所得mRNA之一轉譯成該報導蛋白，而另一者轉譯成ABM。可使用熟習此項技術者熟知之方法來構築含有與鼠類 PR1A3抗體結合相同抗原決定基之ABM之編碼序列以及適當轉錄/轉譯控制信號的表現載體。此等方法包括活體外重組DNA技術、合成技術及活體内重組/遺傳重組。參看例如以下文獻中所述之技術：Maniatis等人， MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory, N.Y. (1989);及 Ausubel 等人， CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, N.Y (1989)。可利用多種宿主表現載體系統來表現本發明ABM之編碼 149901.doc 71 201121994 序列。較佳使用哺乳動物細胞作為以含有相關蛋白質之編碼序列及融合多肽之編碼序列的重組質體DNA或黏質體 DNA表現載體轉染之宿主細胞系統。最佳使用CHO細胞、 BHK細胞、NS0細胞、SP2/0細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63 小鼠骨髓瘤細胞、PER細胞、PER.C6細胞或融合瘤細胞、其他哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞或植物細胞作為宿主細胞系統。表現系統及選擇方法之一些實例描述於以下參考文獻及其中引用之參考文獻中：Borth等人，厂 71(4):266-73 (2000-2001) ; Werner 等人， Ar zne imi tt elf or s chung/Drug Res. 48(8):870-80 (1998) ; Andersen 及 Krummen， Cwrr. 13:117-123 (2002) ; Chadd 及 Chamow, Curr. Op. 12:188-194 (2001);及 Giddings，Cwrr. (9/7. Biotechnol. 12: 450-454 (2001)。在替代性實施例中，可使用其他真核宿主細胞系統，包括以含有本發明ABM之編碼序列之重組酵母表現载體轉型的酵母細胞，諸如美國專利申請案第60/344,169號及WO 03/056914(在非人類真核宿主細胞中製備擬似人類醣蛋白之方法）（該等文獻各自之内容係以全文引用的方式併入本文中）中教示之表現系統；以含有與鼠類PR1 A3抗體結合相同抗原決定基或能夠與PR1A3競爭抗原結合之ABM之編碼序列的重組病毒表現載體（例如桿狀病毒）感染之昆蟲細胞系統；以重組病毒表現載體（例如花椰菜嵌紋病毒CaMV ; 菸草嵌紋病毒TMV)感染或以含有本發明ABM之編碼序列 149901.doc -72- 201121994 之重組質體表現載體（例如Ti質體）轉型的植物細胞系統，其包括（但不限於）以下各案中教示之表現系統：美國專利第6,81 5,184號（自遺傳工程改造之浮萍表現及分泌生物活性多肽之方法）；W0 2〇〇4/〇57〇〇2(藉由引入糖基轉移酶基因在苔蘚植物細胞中產生糖基化蛋白質）及w〇 2〇〇4/ 024927(在台蘚原生質體中產生細胞外異源非植物蛋白之方法）；及美國專利申請案第6〇/365,769號、第6〇/368,〇47 號’及WO 2003/078614(包含功能性哺乳動物GnTIII酶之轉殖基因植物中之醣蛋白加工）（該等文獻各自之内容係以全文引用的方式併入本文中）；或以重組病毒表現載體（例如腺病毒、痘瘡病毒）感染之動物細胞系統，包括經工程改造以含有多個複本之編碼與鼠類？111八3抗體結合相同抗原決定基之嵌合ABM的DNA並且在雙裰染色體（d〇uble· minute chr〇mosome)中穩定擴增之細胞株（CH〇/dhfr)或不穩定擴增之細胞株（例如鼠類細胞株）。在一實施例中，包含該（等）編碼本發明ABM之聚核苷酸的載體為多順反子載體。又，在一實施例中，上文討論之ABM為抗體或其片段。在一較佳實施例中，ABM為親和力成熟抗體。穩定表現一般優於短暫表現，因為其通常達成更可再現之結果並且亦更適用於大規模製造；然而，判定短暫表現是否更適於特定情形亦在熟習此項技術者之技能範圍内。宿主細胞可用受適當表現控制元件（例如啟動子、強化子、序列、轉錄終止子、聚腺苷酸化位點等）控制之各別編碼核酸及可選擇標記轉型，而非使用含有病毒複製起點 149901.doc •73· 201121994 之表現載體轉型。在引入外源DNA後，可使經工程改造之細胞在增濃培養基中生長1-2天，接著將其轉至選擇性培養基中。重組質體中之可選擇標記賦予對選擇之抗性且允許選擇質體已穩定整合至其染色體中且生長形成生長點 (focus)之細胞，該等生長點又可選殖並擴增成細胞株。可使用許多選擇系統，包括（但不限於）疱疹單純型病毒胸苷激酶基因（Wigler等人，Ce// Π:223 (1977))、次黃嘌吟-鳥°票吟填酸核糖基轉移酶基因（Szybalska及Szybalski, Proc. Λ/αί/. Jcai/· Scz·. 45:2026 (1962))，及腺嗓呤填酸核糖基轉移酶基因（Lowy等人，CW/ 22:817 (1980))，該等基因可分別用於tk_細胞、hgprt_細胞或aprt_細胞。亦可使用抗代謝物抗性作為選擇以下之基礎：賦予對甲胺喋呤 (methotrexate)之抗性的 dhfr基因（Wigler等人，JVai/· /cat/. 77:3567 (1989); 0，Hare等人，iVoc. iVai/· Jcai Sci. USA 75:1527 (1981));賦予對黴酚酸（mycophenolic acid)之抗性的 gpt基因（Mulligan及 Berg, _Proc. iVai厂 «Scz·· 7&2072 (1981));賦予對胺基糖苷G-418之抗性的 neo 基因（Colberre-Garapin 等人，·/· Mol. Biol. 150:1 (1981));及賦予對潮黴素（hygromycin)之抗性的hygro基因 (Santerre等人，30:147 (1984))。最近，已描述其他可選擇基因，亦即允許細胞利用吲哚替代色胺酸之trpB ; 允許細胞利用組胺醇替代泣胺酸之hisD(Hartman及 Mulligan, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 55:8047 (1988)) ；醯胺酸合成酶系統；及賦予對鳥胺酸去羧酶抑制劑2-(二氟 149901.doc -74- 201121994 甲基）-DL-鳥胺酸（DFMO)之抗性的ODC(鳥胺酸去羧酶）（McConlogue, Current Communications in Molecular 价o/og少，Cold Spring Harbor Laboratory編（1987))。本發明進一步係關於一種修飾由宿主細胞產生之本發明 ABM之糖基化概況的方法’其包含在該宿主細胞中表現編碼本發明ABM之核酸’及編碼具有糖基轉移酶活性之多狀的核酸，或包含此等核酸之載體。具有糖基轉移酶活性之基因包括β(1，4)-Ν-乙醯胺基葡萄糖基轉移酶ni(GnTII)、α-甘露糖苷酶II(Manll)、β(1,4)-半乳糖基轉移酶（GalT)、 β(1，2)-Ν-乙酿胺基葡萄糖基轉移酶i(GnTI)及β(ΐ，2)-Ν-乙醯胺基葡萄糖基轉移酶II(GnTII)。在一實施例中，使具有糖基轉移酶活性之基因的組合（例如GnTIII與Mann)表現於宿主細胞中。同樣地，該方法亦涵蓋在糖基轉移酶基因已被破壞或以其他方式去活化之宿主細胞（例如編碼α1_6核心石藻糖基轉移酶之基因的活性已被剔除之宿主細胞）中表現一或多種編碼ΑΒΜ之聚核苷酸。在另一實施例中，本發明之ΑΒΜ可在進一步表現編碼具有6111111活性以修飾糖基化模式之多狀之聚核苷酸的宿主細胞中產生。在一特定實施例中，具有GnTIII活性之多肽為包含高基體駐留多肽之间基體疋位域的融合多肽。在另一較佳實施例中，本發明 ABM在表現編碼具有GnTm活性之多肽之聚核苷酸的宿主細胞中之表現產生Fc受體結合親和力增強且效應功能增強之ABM 〇因此’在—實施例中，本發明係關於一種宿主細胞，其包含（a)包含編碼具有GnTm活性之多肽之序列的經 149901.doc •75- 201121994 分離核酸，及（b)編碼本發明之ABM(諸如結合人類（：£八之嵌&抗體靈長類化抗體或人類化抗體）的經分離聚核苷酸。在一較佳實施例中，具有GnTm活性之多肽為包含 GnTIII之催化域的融合多肽且高基體定位域為甘露糖苦酶 II之定位域。產生此等融合多肽且將其用於製備效應功能增強之抗體的方法揭示於美國臨時專利申請案第 60/495，142號及美國專利中請公開案第2〇〇4/〇24i8i7號中，該等文獻之全部内容係以引用的方式明確併入本文中。在特疋實施例中，由宿主細胞產生之經修飾ABM具有IgG恒定區或其包含Fc區之片段。在另一特定實施例中’ ABM為人類化抗體或其包含Fc區之片段。由於伯主細胞之修飾（例如藉由表現糖基轉移酶基因），因此由本發明之宿主細胞產生之糖基化改變的ABM通常顯示Fc受體結合親和力增強及/或效應功能增強。&受體結合親和力增強較佳為對FcY活化受體（諸如FcYRnia受體）之結合增強。效應功能增強較佳為一或多種以下增強：抗體依賴細胞毋·性增強、抗體依賴性細胞吞嗟作用（ADcp)增強、細胞激素分泌增強、抗原呈現細胞之免疫複合物介導之抗原攝取增強、Fc介導之細胞毒性增強 '對nk細胞之結合增強、對巨噬細胞之結合增強、對多形核細胞（PMN) 之結合增強、對單核細胞之結合增強、目標結合抗體之交聯增強、誘導細胞凋亡之直接信號傳導增強 '樹突狀細胞成熟增加及T細胞激活增強。效應功能（包括抗體依賴性細胞毒性）增強之ABM的產生及 149901.doc -76- 201121994 使用在一態樣中’本發明提供糖型ABM(例如變異型ABM)，其與鼠類PR1 A3抗體結合相同抗原決定基且效應功能（包括抗體依賴性細胞毒性）增強。先前已描述抗體之糖基化工程改造。例如參看美國專利第6,6〇2,684號，其以全文引用的方式併入本文中。本文亦詳細描述自糖基化中所涉及基因之活性改變的宿主細胞製備Abm之方法（例如參看標題為表現載體及宿主細胞」之前述章節）。本發明ABΜ之 ADCC增強亦藉由增強抗原結合分子對膜結合型CEA之親和力’例如藉由親和力成熟或改良親和力之其他方法來達成（參看 Tang等人，j. 2007，179:2815-2823)。本發明亦涵蓋此等方法之組合。非共輛單株抗體（mAb)治療一些類型癌症之臨床試驗最近已產生令人鼓舞之結果。Dillman，C⑽cer价oAer. ά

Radiophare. 12'223-25 (\99Ί) ·，専 &，Immunology 7&127 (1997)。嵌合非共軛IgG1已批准用於低級或遽泡性B細胞非霍奇金淋巴瘤（non_H〇dgkin，s lyinph()ma) β

Dillman, Cancer Biother. & Radiopharm. 72:223-25 (1997),而另一非共軛mAb，亦即靶向實體乳房腫瘤之人類化IgGl亦已在ΙΠ期臨床試驗中顯示有希望結果。De〇等人，/mm⑽TWay /5:127 (1997)。此兩種 mAb 之抗原在其各別腫瘤細胞中高度表現且該等抗體介導腫瘤在活體外及活體内被效應細胞有效破壞。相反，許多具有良好腫瘤特異性之其他非共輛mAb不能觸發效應功能達到足以在 149901.doc •77· 201121994 臨床上適用之效能。Frost等人’ Cancer S0:317-33 (1997)，Surfus等人，/. /mwiwnoi/zer /P:184_91 (1996)。對於一些此等較弱mAb，目前正測試輔助細胞激素療法。添加細胞激素可藉由增強循環淋巴細胞之活性及增加循環淋巴細胞之數目來刺激抗體依賴性細胞毒性（ADCC) ^ Frost 等人，Cancer 仰:317-33 (1997) ; Surfus 等人，乂 π:184-91 (1996)。ADCC，亦即對目標細胞之溶解攻擊係在白血球受體結合於抗體之恆定區（Fc)後觸發。Oeo專 k，Immunology Today 18.Λ2Ί {\991)。增強非共軛IgGl之ADCC活性的不同但互補之方法為對抗體之Fc區進行工程改造。蛋白質工程改造研究已顯示 FcYR與IgG CH2域之較低鉸鏈區相互作用。Lund等人，乂 ;57:4963·69 (1996)。然而，FcyR結合亦需要存在共價連接於CH2區中保守Asn 297處之寡醣。Lund等人，/·/所㈣《〇/· 757:4963-69 (1996); Wright及 Morrison， 5沁以以· /5:26-31 (1997)，表明任一寡醣與多肽均直接有助於相互作用位點或寡醣為保持活性CH2多肽構形所需。因此可利用對券餹結構進行修飾作為增強相互作用之親和力的手段。

IgG分子在其Fc區中攜帶兩種N-連接型募醣，各重鏈上一種。如同任何醣蛋白，抗體係以糖型群體形式產生，其共用同一多肽主鍵’但具有不同寡醣連接至糖基化位點。通常見於血清IgG之Fc區的寡醣為複合雙觸角類型 (Wormald等人，36:130-38 (1997))，其具有 I49901.doc .78· 201121994 低含量末端唾液酸及對分N-乙醯胺基葡萄糖（GlcNAc)，及不同程度之末端半乳糖基化及核心岩藻糖基化。一些研究表明FcYR結合所需之最小碳水化合物結構處於寡醣核心内 ° Lund等人，*/· /ww757:4963-69 (1 996) 〇製造非共軛治療性mAb之工業及學術界所用之小鼠或倉鼠來源細胞株通常將所需寡醣決定子連接至Fc位點。然而，此等細胞株中表現之IgG缺少對分GlcNAc，該對分 GlcNAc以低量見於血清 IgG 中。Lifely 等人，G/_ycc^z’o/og_y 13-22 (1995)。相反，最近觀察到大鼠骨髓瘤產生之人類化IgGl(CAMPATH-lH)在其一些糖型中攜帶對分 GlcNAc。Lifely 等人，375:813-22 (1995)。大鼠細胞來源之抗體達到與標準細胞株中產生之CAMPATH-1H抗體類似之最大活體外ADCC活性，但抗體濃度顯著較低。 CAMPATH抗原通常以高含量存在於淋巴瘤細胞上，且此嵌合mAb在無對分GlcNAc存在下具有高ADCC活性。 Lifely 等人，少 3/&813-22 (1995)。在 N-連接型糖基化路徑中，對分GlcNAc由GnTIII添加。Schachter, Biochem. Cell Biol. <5^:163-81 (1986) ° 先前研究使用預先經工程改造以便可以外部調節方式表現不同含量之所選殖GnTIII酶基因的單一抗體產生CHO細胞株（Umaila，專尺，Nature Biotechnol. 17，ΛΊ (1999))。此方法首次在糖基轉移酶（例如GnTIII)表現與經修飾抗體之ADCC活性之間建立嚴密相關性。因此，本發 149901.doc -79- 201121994 明涵蓋一種與鼠類PRl A3抗體結合相同抗原決定基之變異型ABM(例如親和力成熟ABM)，其包含Fc區或等效於因改變產生ABM之宿主細胞中糖基轉移酶基因之表現量而具有改變之糖基化之Fc區的區域。在一特定實施例中，基因表現量之變化為GnTIII活性增強。GnTIII活性增強使得在 ABM之Fc區中對分寡醣之百分比增加，以及岩藻糖殘基之百分比降低。此抗體或其片段具有增強之Fc受體結合親和力及增強之效應功能。本發明亦係關於一種產生具有經修飾寡醣之本發明ABM 的方法，其包含（a)在允許產生本發明ABM之條件下培養經工程改造以表現至少一種編碼具有糖基轉移酶活性之多肽之核酸的宿主細胞，其中該具有糖基轉移酶活性之多肽係以足以修飾該宿主細胞產生之該ABM之Fc區中寡醣的量表現；及（b)分離該ABM。在一實施例中，具有糖基轉移酶活性之多肽為GnTIII。在另一實施例中，存在兩種具有糖基轉移酶活性之多肽。在一特定實施例中，兩種具有糖基轉移酶活性之肽為GnTIII及Manll。在另一實施例中，具有糖基轉移酶活性之多肽為包含GnTIII之催化域的融合多肽。在一更特定實施例中，融合多肽進一步包含高基體駐留多肽之高基體定位域。高基體定位域較佳為甘露糖苷酶II或GnTI之定位域。或者，高基體定位域係選自由以下組成之群：甘露糖苷酶I之定位域、GnTII之定位域及α 1-6 核心岩藻糖基轉移酶之定位域。由本發明方法產生之ABM 具有增強之Fc受體結合親和力及/或增強之效應功能。效 14990】.doc •80- 201121994 應功能增強一般為一或多種以下：Fc介導之細胞毒性增強 (包括抗體依賴性細胞毒性增強）、抗體依賴性細胞吞噬作用（ADCP)增強、細胞激素分泌增強、抗原呈現細胞之免疫複合物介導之抗原攝取增強、對NK細胞之結合增強、對巨嗤細胞之結合增強、對單核細胞之結合增強、對多形核細胞之結合增強、誘導細胞凋亡之直接信號傳導增強、目標結合抗體之交聯增強、樹突狀細胞成熟增強及T細胞激活增強。Fc受體結合親和力增強較佳為對Fc活化受體 (諸如FcyRIIIa)之結合增強。在一尤其較佳實施例中， ABM為人類化抗體或其片段。在一實施例中，ABM之Fc區中對分N-連接型比為總寡醣之至少約10%至約1〇〇%，特定言之至少約 50°/。’更特定言之至少約6〇%、至少約7〇%、至少約或至少約90-95%。在又一實施例中，藉由本發明方法產生的抗原結合分子因藉由本發明方法修飾其寡醣而在Fc區中具有增加比例之非岩藻糖基化寡醣。在一實施例中，非岩藻糖基化募醣之百分比為至少約2〇%至約1〇〇%，特定言之至少約50%、至少約6〇%至約7〇%，且更特定言之至少約 75%。非岩藻糖基化募醣可為混合或複合類型。在另一特定的實施例中，由本發明方法所產生的抗原結合分子由於藉由本發明方法對其寡醣之修飾結果產生Fc區中對分寡膽之比例增加。在—實施例中，對分寡醣百分比為至少約游0至約1GG%’特定言之是至少約50%，至少約6〇%至約 7〇%’且更特定言之是至少約75%。在一尤其較佳實施例 149901.doc -81· 201121994 中由本發明之宿主細胞及方法產生之ABM在Fc區中具有增加比例之對分非岩藻糖基化募醣。對分非岩藻糖基化募醣可為混合或複合寡醣。特定言之，本發明之方法可用以產生如下抗原結合分子：其中抗原結合分子之Fc區中之寡醣的至少約10%至約10〇%，特定言之至少約15%，更特定言之至少約20%至約50%，更特定言之至少約20%至約 25% ’且更特定言之至少約30%至約35%為對分非岩藻糖基化养畴。本發明之ABM亦可包含如下Fc區：其中ABM 之Fc區中之寡醣的至少約丨〇%至約1 〇〇%，特定言之至少約 15%，更特定言之至少約2〇%至約25%，且更特定言之至少約30%至約35%為對分混合非岩藻糖基化寡醣。在另一實施例中，本發明係關於一種藉由本發明方法製備之抗原結合分子（例如變異型ABM)，其能夠與PR1 A3抗體競爭膜結合型人類CEA，經工程改造以具有增強之效應功能及/或增強之Fc受體結合親和力。效應功能增強可包括（但不限於）一或多種以下：Fc介導之細胞毒性增強（包括抗體依賴性細胞毒性增強）、抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)增強、細胞激素分泌增強、抗原呈現細胞之免疫複合物介導之抗原攝取增強、對NK細胞之結合增強、對巨噬細胞之結合增強、對單核細胞之結合增強、對多形核細胞之結合增強、誘導細胞凋亡之直接信號傳導增強、目標結合抗體之交聯增強、樹突狀細胞成熟增強及T細胞激活增強。在一較佳實施例中，Fc受體結合親和力增強為對 Fc活化受體（最佳為FcyRIIIa)之結合增強。在一實施例 149901.doc -82- 201121994 中，抗原結合分子為抗體、含有Fc區之抗體片段，或包括等效於免疫球蛋白之Fc區之區域的融合蛋白。在一尤其較佳實施例中，抗原結合分子為人類化親和力成熟抗體。本發明進一步提供產生及使用宿主細胞系統以製備本發明ABM之糖型的方法，該等本發明ABM之糖型具有增強之F c受體結合親和力，較佳對F c活化受體具有增強之結合，及/或具有增強之效應功能，包括抗體依賴性細胞毒性增強。可用於本發明ABM之糖基工程改造方法已更詳細描述於美國專利第6,602,684號、美國專利申請公開案第 20(M/0241 8 I7 A1號、美國專利申請公開案第2003/0175884 A1號、美國臨時專利申請案第60/441,307號及WO 2004/065 540中，該等文獻各自之全部内容係以全文引用的方式併入本文中。或者可根據以下文獻中揭示之技術對本發明之ABM進行糖基工程改造以在Fc區中具有減少之岩藻糖殘基：美國專利申請公開案第2003/0157108號 (Genentech)，或 EP 1 176 195 Al、WO 03/084570、WO 03/0851 19及美國專利申請公開案第2003/0115614號、第 2004/093621號、第 2004/110282號、第 2004/110704號、第 2004/132140號（Kyowa)。此等文獻各自之内容係以全文引用的方式併入本文中。本發明之經糖基工程改造之ABM亦可在產生經修飾醣蛋白的表現系統中製備，該等表現系統諸如為以下文獻中教示者：美國專利申請公開案第 60/344,169 號及 WO 03/056914(GlycoFi，Inc.)或 WO 2004/ 57002 及 WO 2004/024927(Greenovation)，該等文獻各自之 149901.doc -83 - 201121994 内谷係以全文引用的方式併入本文中。產生用於製備糖基化模式改變之蛋白質的細胞株在一態樣中，本發明提供用於產生具有經修飾糖基化模式之本發明ABM的宿主細胞表現系統。詳言之，本發明提供用於產生治療價值獲改良之本發明ABM之糖型的宿主細胞系統。因此’本發明提供經選擇或經工程改造以表現具有糖基轉移酶活性之多肽的宿主細胞表現系統。在一特定實施例中，糖基轉移酶活性為GnTm活性。在一實施例中，具有GnTIII活性之多肽為包含異源高基體駐留多肽之高基體定位域的融合多肽。特定言之，此等宿主細胞表現系統可經工程改造以包含編碼具有GnTIII之多肽的重組核酸分子可操作地連接於組成性或調節啟動子系統。在一特定實施例中’本發明提供一種已經工程改造以表現至少一種編碼融合多肽之核酸的宿主細胞，該融合多肽具有GnTIII活性且包含異源高基體駐留多肽之高基體定位域。在一態樣中’宿主細胞係以包含至少一種編碼融合多肽之基因的核酸分子工程改造，該融合多肽具有GnTIII活性且包含異源高基體駐留多肽之高基體定位域。一般而言，任何類型之培養細胞株（包括上文討論之細胞株）均可用作對本發明之宿主細胞株進行工程改造之背景。在一較佳實施例中’使用CHO細胞、BHK細胞、NS0 細胞、SP2/0細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63小鼠骨髓瘤細胞、PER細胞、PER.C6細胞或融合瘤細胞、其他哺乳動物細胞、酵母細胞、昆蟲細胞或植物細胞作為背景細胞株來 149901.doc -84- 201121994 產生本發明之經工程改造之宿主細胞。預』本發明涵蓋表現具有糖基轉移酶活性（例如⑴ 活性）之多狀的任何姆工招对、生+ ^二 Π A工私改以之佰主細胞，該多肽包括已3如本文所定義之異源高基體駐留多肽之高基體定位域的融合多肽。或右干種編碼具有糖基轉移酶活性（例如GnTin活性）夕肽的核酸可在組成性啟動子或者調節表現系統之控制下表現。此等系統在此項技術中熟知且包括上文討論之系統若編碼具有糖基轉移酶活性（例如GnTm活性）且包含異源高基體駐留多肽之高基體^位域的融合多肽之若干不同核酸包含於宿主細胞系統内，則其中__些可在組成性啟動子控制下表現，而其他在調節啟動子控制下表現。具有糖基轉移酶活性（例如GnTI„活性）之融合多肽的表現量可藉由此項技術中一般已知之方法測定，該等方法包括西方墨點分析、北方墨點分析、報導基因表現分析或量測糖基轉移酶活性，例如GnTIII活性。或者，可採用結合於 GnTm之生物合成產物的凝集素，例如E4-PHA凝集素。或者’可使用功能檢定’其量測由用編碼具有糖基轉移酶活性（例如GnTIII活性）之多肽之核酸工程改造的細胞產生之抗體介導的增強之Fc受體結合或增強之效應功能。鑑別表現具有經修飾糖基化模式之蛋白質的轉染子或轉型體含有能夠與PR1 A3抗體競爭抗原結合之變異型ABM(例如人類化親和力成熟ABM)之編碼序列且表現生物活性基因產物的宿主細胞可藉由至少四種通用方法鑑別； 149901.doc •85- 201121994 (a)DNA-DNA或DNA-RNA雜交；⑻存在或不存在「標記」基因功能；（c)評估轉錄量，如藉由宿主細胞中各^ mRNA轉錄物之表現來量測；及(d)偵測基因產物，如藉由免疫檢定或藉由其生物活性來量測。在第一種方法中，能夠與！)!^^抗體競爭之變異型的編碼序列及/或具有糖基轉移酶（例如GnTIII)活性之多肽的編碼序列之存在可藉*DNA_DNA4DNA_rna雜交，使用包含分別與各別編碼序列同源之核苷酸序列或其部分戋衍生物之探針來偵測。在第二種方法中’重組表現載體/宿主系統可基於存在或不存在某些「標記」基因功能（例如胸苷激酶活性、對抗生素之抗性、對甲胺嗓吟之抗性、轉型表型、桿狀病毒中之包涵體形成等)進行鑑別及選擇。舉例而言，若將本發明ABM之編碼序列或其片段，及/或具有糖基轉移酶（例如GnTin)活性之多肽之編碼序列插人載體之標記基因序列内’則可藉由不存在標記基因功能來鐘別含有各別編碼序列之重組體。或者，可將標記基因在用以控制編碼序列表現之相同或不同啟動子的控制下與編碼序列以串聯方式置放‘ °己回應於誘導或選擇之表現指示本發明ABM之編碼序列及/或具有糖基轉移酶（例如GnTm)活性之多肽之編碼序列的表現。法_可藉由雜交檢定來評估本發.明ABM之編碼區或其片&及/或具有糖基轉移酶（例如〜了即活性之多狀之編碼序列的轉錄活性。舉例而言，RNA可藉由北方 149901.doc •86· 201121994 墨點法，使用與本發明ABM之編碼序列或其片段及/或具有糖基轉移酶（例如GnTIII)活性之多肽之編碼序列或其特定部分同源的探針分離及分析。或者，可萃取及檢定宿主細胞之總核酸以供與此等探針雜交。在第四種方法中，可以免疫學方式，例如藉由西方墨點法、免疫檢定（諸如放射性免疫沈澱、酶聯免疫檢定及其類似檢定）來評估蛋白質產物之表現。然而，表現系統之成功的最終測試涉及偵測生物活性基因產物。使用抗原結合分子之抗CEA的治療應用及方法本發明亦係關於一種活體内或活體外靶向表現cea之細胞的方法。可靶向表現CEA之細胞用於治療目的(例如藉由乾向CEA表現細月包以便由免疫系統破壞來治療病症）。在一實施例中，本發明係關於一種靶向個體體内表現cea 之細胞的方法，其包含投與個體包含本發明刪之組合物。亦可靶向表現CEA之細胞用於診斷目的(例如以判：其是否正常或異常表現叫因此，本發明亦係關於活體内或活體外偵測CEA或表現CEA之細胞之存在的方法。本發明之-種偵測CEA表現之方法包含在允許abm與心之間形成複合物之情況下使待測試樣本視情況與對昭樣本一起接觸本發明之腦。接著偵測複合物之形成（例如藉由EUSA或此項技術中已知之其他方法）。當使用對昭樣本與測試樣本時’當比較測試樣本與對照樣本時abm_CEa 複合物之形成中任何統計學上顯著中存在㈣。冑之差異均表明測試樣本 149901.doc -87- 201121994 在一態樣中’本發明之ABM可用以活體内或活體外乾向表現CEA之細胞。可靶向表現CEA之細胞以用於診斷目的或治療目的。在一態樣中，本發明之ABM可用以偵測樣本中CEA之存在。與相同細胞類型之非腫瘤組織相比，CEa 在許多人類腫瘤中異常表現（例如過度表現）。因此，本發明之ABM尤其適用於預防腫瘤形成、根除腫瘤及抑制腫瘤生長或轉移。本發明之ABM亦用以阻滯細胞週期、引起目標細胞（例如腫瘤細胞）發生細胞凋亡及抑制目標細胞之血管生成及/或分化。本發明之ABM可用以治療表現CEA之任何腫瘤。可用本發明之ABM治療之特定惡性疾病包括 (但不限於）結腸直腸癌、非小細胞肺癌、胃癌、騰腺癌及乳癌。本文揭示之抗CEA ABM可單獨使用以抑制腫瘤生長或殺死腫瘤細胞。舉例而言，抗CEA ABM可結合於癌細胞之膜或細胞表面上之CEA，且引發例如ADCC或其他效應物介導之癌細胞殺死。抗CEAABM可經人類化，特定言之經親和力成熟，更特定言之經糖基工程改造及親和力成熟。 ABM或者可單獨使用以尤其藉由實體干擾cEa抗原與另一化合物之結合來阻斷該CEA抗原之活性。舉例而言，抗原結合分子可用以阻斷CEA介導之細胞黏著。本發明之抗CEA ABM可以醫藥學上可接受之劑型投與哺乳動物（較佳人類）’該劑型諸如為下文討論之劑型，包括可用團式靜脈注射或藉由連續輸注一段時間、藉由肌肉内、腹膜内、腦脊髓内、皮下、關節内、滑膜内、勒内、 149901.doc • 88 - 201121994 丄局邛或吸入途徑投與人類之劑型。ΛΒΜ亦宜藉由腫瘤内腫瘤^、病灶内或病灶旁途徑投與，以發揮局部以及全身性治療效果。預期腹膜内途徑尤其適用於例如治療結腸直腸腫瘤。 ' 對於治療疾病，ΑΒΜ之適當劑量將視待治療疾病之類聖疾病嚴重度及病程、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應及主治醫師之判斷而$。ΑΒΜ宜一次性或歷經一系列治療投與患者。本發明提供一種選擇性殺死表現CEA之腫瘤細胞之方法。此方法包含使本發明之抗原結合分子或共軛物（例如免疫毒素）與該等腫瘤細胞反應。此等腫瘤細胞可來自人類癌瘤’包括結腸直腸癌、非小細胞肺癌（NSCLC)、胃癌、胰腺癌及乳癌。在一個實施例中，本發明提供一種抑制腫瘤細胞之Cea 介導之細胞黏著之方法。此方法包含使該腫瘤細胞與本發明之抗原結合分子或共軛物接觸。此等腫瘤細胞可來自人類細胞，包括結腸直腸癌細胞、非小細胞肺癌細胞 (NSCLC)、胃癌細胞、胰腺癌細胞及乳癌細胞。另外’本發明提供一種活體内治療癌瘤（例如人類癌瘤）之方法。此方法包含投與個體醫藥學上有效量之含有至少一種本發明之抗原結合分子或免疫共軛物（例如免疫毒素）的組合物。在另一態樣中，本發明係關於一種治療特徵在於CEA過度表現之癌症（包括（但不限於）結腸直腸癌細胞、 149901.doc •89- 201121994 NSCLC(非小細胞肺癌）、胃癌細胞、騰腺癌細胞及乳癌細胞）之方法，其係投與治療有效量之本文揭示之人類化及親和力成熟抗原結合分子或變異型抗原結合分子。在另一實施例中，本發明係關於一種使用本文揭示之人類化及親和力成熟抗原結合分子或變異型抗原結合分子誘導個體腫瘤組織消退之方法。腫瘤組織之非限制性實例包括結腸直腸腫瘤、非小細胞肺腫瘤、胃腫瘤、胰腺腫瘤及乳房腫瘤。在一個特定實施例中，腫瘤組織為結腸直腸腫瘤。根據本發明之實踐，個體可為人類、馬、豬、牛、鼠類、犬、貓及禽類個體《其他溫血動物亦包括於本發明中。本發明進一步提供抑制腫瘤細胞生長、治療個體之腫瘤及治療個體之增殖類型疾病之方法。此等方法包含投與個體有效量之本發明組合物。在另一態樣中’本發明係關於本文揭示之人類化及親和力成熟抗原結合分子或變異型抗原結合分子之用途，其係用於製造用於治療CEA異常表現相關疾病的藥物。在一個特定實施例中，該疾病為過度表現Cea之癌症，其包括 (但不限於）結腸直腸腫瘤、非小細胞肺腫瘤、胃腫瘤、騰腺腫瘤及乳房腫瘤。在一個特定實施例中，腫瘤為結腸直腸腫瘤。組合物、調配物、劑量及投藥途徑在一態樣中，本發明係關於包含本發明之ABM及醫藥學 149901.doc -90- 201121994 上y接又之載劑的醫藥組合物。本發明進一步係關於此等诀藥汲口 4勿纟治療疾病(諸如癌，症)之方法或在冑造用於治療疾病(諸如癌症)之藥物中的用途。特定言之，本發明係關於種/«療疾病’且更特定言之冶療癌症之方法，該方法包含投與治療有效量之本發明n 组合物。在匕、樣中’本發明涵蓋治療人類癌瘤（例如結腸直腸癌瘤)之省藥组合物、組合及方法。舉例而言’本發明包括適用於治療人類癌瘤之醫藥組合物，其包含醫藥學上有效量之本發明抗體及醫藥學上可接受之載劑。可使用S知投藥模式投與本發明之ABM組合物，該等習知投藥模式包括(但不限於)靜脈内、腹膜内、經口、淋巴 s内扠與或直接投與至腫瘤中。靜脈内投與較佳。在本發明之一態樣中，藉由混合具有所需純度之抗體與可選醬藥予上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑 (Remmgton's Pharmaceutical Sciences，第“版，〇s〇i，a

Ed· (1980))來製備呈凍乾調配物或水溶液形式的含有本發月之ABΜ的/α療性調配物以供儲存。可接受之載劑、賦形劑或穩定劑在所用劑量及濃度下對接受者無毒。欲用於活體内投與之調配物必須無菌。此可藉由無菌過遽膜過遽輕易地實現。本發明醫藥組合物的最有效投藥模式及給藥方案視疾病嚴重度及病程、患者之健康狀況及對治療之反應及治療醫師之判斷而定。因此，應針對個別患者滴定組合物之劑量。然而’本發明之組合物的有效劑量一般將在約〇〇 1至 149901.doc -91 · 201121994 約2000 mg/kg之範圍内。本文所述之分子可呈多種劑型，包括（但不限於）液體溶液或懸浮液、錠劑、丸劑、散劑、栓劑、聚合微囊或微脂粒、脂質體及可注射或可輸注溶液。較佳形式視投藥模式及治療應用而定。包含本發明之ABM的組合物將以與良好醫學實踐一致之方式來調配、給藥及投與。此情形中之考慮因素包括所治療之特定疾病或病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、疾病或病症之病因、藥劑傳遞部位、投藥方法、投藥時程安排及醫務人員已知之其他因素。待投與之括抗劑的治療有效量將取決於此等考慮因素。下文實例更詳細地說明本發明。提供以下製備及實例以使熟習此項技術者能夠更清楚地瞭解及實踐本發明。然而，本發明之範疇並不限於所例示之實施例，該等實施例意欲僅作為本發明之單個態樣的說明，且功能上等效之方法係在本發明之範疇内。實際上，據前述描述及隨附圖式’除本文所述以外的本發明之各種修改將變得對熟習此項技術者顯而易知。此等修改意欲屬於隨附申請專利範圍之範_内。實例除非另有規定，否則在以下實例中提及特定胺基酸殘基位置之編號係根據Kabat編號系統。實例1 產生親和力成熟文庫 149901.doc -92· 201121994 H1/H2文庫為產生HCDR1及HCDR2區隨機化之親和力成熟文庫，將編碼CDR1之位置F32 G33及CDR2之位置W50 N52 T52a K52b T54 E56 T58的二聯體隨機化。在第一步驟中，使用 pMS22作為模板且使用含有隨機化cdRI位置之引子MS-43 及EAB-679來擴增DNA片段（片段1)(圖η及表6)。使用相同模板，引子MS-56及MS-52擴增與片段1之31端具有重疊區域之第二片段（片段2)。擴增條件包括初始5分鐘94°C保溫步驟’接著為25個循環，各循環由1分鐘94°c變性、1分鐘 55°C黏接，及片段1及片段2分別20秒及50秒之72°C延伸步驟組成。結束時進行最終10分鐘72〇C保溫步驟。兩個片段均在瓊脂糖凝膠上純化。使用引子MS-43及EAB-680(含有 CDR2之隨機化位置），片段1及2之重疊延長？(：11產生兩個 CDR均經隨機化之片段（片段3)。為組裝片段，使用等莫耳量之片段1與片段2。擴增條件包括初始5分鐘94。匸保溫步驟，接著為5個無引子之循環，各循環由i分鐘94ι變性、1分鐘55°C黏接及40秒72。(：延伸步驟組成。在添加外部引子之後，使用相同參數再進行2〇個循環。再次使用 pMS22作為模板且使用引子MS_55&MS_52wpCR擴增與片段3之3’區重疊之第四片段（片段4)。在凝膠純化後，使用片段3及4作為模板且使用引子肘143及馗3_52進行最終重疊延長PCR產生含有CL以及VH之部分的片段。為此，使用等莫耳量之片段3及片段4。擴增條件包括初始5分鐘 I49901.doc •93- 201121994 94°C保溫步驟，接著為5個無引子之循環，各循環由1分鐘 94t變性、1分鐘55°C黏接及80秒72°C延伸步驟組成。在添加外部引子之後，使用相同參數再進行20個循環。接著對所得片段進行凝膠純化且在Ncol/Nhel消化之後與pMS22 連接。表6

引子 SEQ ID NO: H1/H2文庫引子核苷酸序列 MS-43 123 CCAGCCGGCCATGGCCGATATCCAGATGACCCAGTCTCCATC MS-52 124 GAAGACCGATGGGCCTTTGGTGCTAG MS-55 125 GCAACATATGTTGAAGAGTTTAAGGGACGG MS-56 126 ATGAACTGGGTGCGACAGGCCCCTG EAB- 679 127 CzAGGGGCCTGTCGCACCCAGTTCATMNNAWACTCAGTGAA GGTGTATCCAGAAGCC EAB- 680 128 CCGTCCCTTAAACTCTTCAACATAGGTTGCCTCTCCAGTTTT GGTGTTTATCCATCCCATCCACTCAAGCCCTTGTCCAGG 引子EAB-679及EAB-680之隨機化：加下劃線：60%原始鹼基及40%隨機化為N L1/L2文庫為產生LCDR1區及LCDR2區隨機化之親和力成熟文庫，將編碼 CDR1 之位置 Q27、N28、V29、G30 T31 N32 及 CDR2之位置Y49 S50 Y53 R54 Y55 S56的三聯體隨機化。在第一步驟中，使用PMS22作為模板且使用含有隨機化 CDR1位置之引子EAB-685及EAB-681來擴增DNA片段（片段1)(圖12及表6)。使用相同模板，引子EAB-686及EAB-687 擴增與片段1之3·端具有重疊區域之第二片段（片段2)。擴 149901.doc -94- 201121994 增條件包括初始5分鐘94°C保溫步驟，接著為25個循環，各循環由1分鐘94 C變性、1分鐘551黏接，及片段1及月段2分別60秒之72°C延伸步驟組成。結束時進行最終1〇分鐘72 C保溫步驟。兩個片段均在瓊脂糖凝膠上純化。使用引子EAB-685及EAB-682(含有CDR2之隨機化位置），片段i 及2之重疊延長PCR產生兩個CDR均經隨機化之片段（片段 3)。為組裝片段1及2,使用等莫耳量之片段丨與片段2。擴增條件包括初始5分鐘94°C保溫步驟，接著為5個無引子之循環，各循環由1分鐘94t變性、1分鐘55t黏接及60秒 72°C延伸步驟組成。在添加外部引子之後，使用相同參數再進行20個循環。再次使用pMS22作為模板且使用引子 EAB-688及EAB-687以PCR擴增與片段3之3,區重疊之第四片段（片段4)。在凝膠純化後，使用片段3及4作為模板且使用引子EAB-685及EAB-687進行最終重疊延長pCR產生含有VL以及CL之部分的片段。為此，使用等莫耳量之片段3 及片段4。擴增條件包括初始5分鐘94〇c保溫步驟接著為 5個無引子之循環，各循環由！分鐘94。〇變性、】分鐘“π 黏接及80秒72°C延伸步驟組成。在添加外部引子之後使用相同參數再進行20個循環。接著使此片段在Hindin/saci 消化之後與pMS22連接。 149901.doc -95- 201121994 表7

引子 SEQ ID NO: L1/L2文庫引子核苷酸序列 EAB-685 129 CAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTGCATGCAAATTC TATTTCAAGG EAB-686 130 GTTGCGTGGTATCAGCAGAAACCAGGG EAB-687 131 GCTCTTTGTGACGGGCGAGCTCAGGCCCTGATGG EAB-688 132 GGAGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGG EAB-681 133 CCTGGTTTCTGCTGATACCACGCAACATTAGTACCCACAT TCTGACTGGCCTTGCAAGTGATGGTGACTC EAB-682 134 CTGCCACTGAACCTTGATGGGACTCCACTGTAGCGGTAG GATGCCGAATAGATCAGGAGCTTAGGTGCTTTCCCTGG 引子EAB-681及EAB-682之隨機化：加下劃線：60%原始鹼基及40°/❶隨機化為N H3文庫為產生在HCDR3區中隨機化之親和力成熟文庫，編碼位置 W95、D96、F97、Y98、D99、Y100、Vl〇〇a、ElOOb、 A100c及Ml00d之三聯體以兩種不同方法隨機化：（1)對整個區段進行隨機化（H3完全文庫），或（2)對各位置進行個別隨機化，產生十個子文庫。在轉型至細菌中之後彙集含有具有個別隨機化位置之純系的子文庫（H3彙集文庫）。為將 HCDR3區隨機化，使用在CL之3’端中黏接之引子及具有隨機化HCDR3序列之引子對片段進行PCR擴增（圖13)。接著用與片段1之3'端重疊且包含VH之末端及CH1之5'區之第二片段進行重疊延伸PCR。接著在<^(：Ι/α/7^ι消化後，將組裝之片段連接至pMS22中。為產生Η3彙集文庫，使用引子 AC7-AC16中每一者與引子EAB-749組合對十個DNA片段 149901.doc •96- 201121994 分別進行PCR擴增。為產生㈣全文庫，使用引子卯及 =-749。使用諸州⑵料模板1增條件包括初始5 。刀:里94。保溫步驟，接著為25個循環，各循環由1分鐘94 f < 、1分鐘55=黏接’及36秒72°C延伸步驟組成，接 #為最、’·，1 0为鐘72 C保溫步驟。此產生約58〇 bp長之片段’將其在瓊脂糖凝膠上純化。為進行重疊延伸pcR，使用引子EAB-750或EAB_75 !與则_752組合來對第二片段進行擴增。儘管引子EAB_75()具有與隨機化引子船七重疊之序列，但EAB-751與隨機化引子AC12_17享有序列同源性。擴增條件包括初始5分鐘94t保溫步驟接著為乃個循環，各循環由丨分鐘94t變性、i分鐘55它黏接及U 秒72 C延伸步驟組成，接著為最終1〇分鐘抓保溫步驟。所得片段長約180 bp。為組裝兩個片段，使用等莫耳量之片·^又1及相應片段2。擴增條件包括初始5分鐘94。〇保溫步驟，接著為5個無引子循環，各循環由}分鐘94。〇變性、ι 分鐘55。(：黏接，及延伸步驟組成。在添加外部引子EAB-749及EAB-752之後，使用相同參數進行2〇個額外循環。結束時，進行最終10分鐘72t保溫步驟。接著在 &ci/iv/；ei消化後，將經凝膠純化之片段連接至卩1^§22中，且藉由電穿孔將經純化之連接物轉型至TG丨細菌中。 149901.doc •97· 201121994 表8

引子 SEQ ID NO: H3文庫-引子核苷酸序列 AC7 135 CCAGTAGTCCATAGCCTCCACGTAATCATAGAAGTCMNNTCT CGCACAGTAATACACGGCAGTG AC8 136 CCAGTAGTCCATAGCCTCCACGTAATCATAGAAMNNCCATCT CGCACAGTAATACACGGCAGTG AC9 137 CCAGTAGTCCATAGCCTCCACGTAATCATAMNNGTCCCATCT CGCACAGTAATACACGGCAGTG AC10 138 CCAGTAGTCCATAGCCTCCACGTAATCMNNGAAGTCCCATCT CGCACAGTAATACACGGCAGTG AC11 139 CCAGTAGTCCATAGCCTCCACGTAMNNATAGAAGTCCCATCT CGCACAGTAATACACGGCAGTG AC12 140 CGTGGTCCCTTGGCCCCAGTAGTCCATAGCCTCCACMNNATC ATAGAAGTCCCATCTCGCACAG AC13 141 CGTGGTCCCTTGGCCCCAGTAGTCCATAGCCTCMNNGTAATC ATAGAAGTCCCATCTCGCACAG AC14 142 CGTGGTCCCTTGGCCCCAGTAGTCCATAGCMNNCACGTAATC ATAGAAGTCCCATCTCGCACAG AC15 143 CGTGGTCCCTTGGCCCCAGTAGTCCATMNNCTCCACGTAATC ATAGAAGTCCCATCTCGCACAG AC16 144 CGTGGTCCCTTGGCCCCAGTAGTCMNNAGCCTCCACGTAATC ATAGAAGTCCCATCTCGCACAG AC17 145 r.GTGGTCr.rTTGGCCCCAGTAGTCCAT^GCCTCCACGTA^TC ^TA(7AAGTCCCATCTCGCACAGTAATACACGGCAG ΕΑΒ- 749 146 CCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTC ΕΑΒ- 750 147 CGTGGAGGCTATGGACTACTGGGGCCAAGG ΕΑΒ- 751 148 GACTACTGGGGCCAAGGGACCACGGTCAC ΕΑΒ- 752 149 GGTCAGGGCGCCTGAGTTCCACG 引子AC17之隨機化：在#遨.· 60。/❶原始鹼基及40%隨機化為Μ 加下劃線：60%原始鹼基及40°/。隨機化為Ν 149901.doc -98- 201121994 L3文庫為產生在輕鏈之CDR3區中隨機化之親和力成熟文庫，編碼位置Y91、Y92、T93、Y94及L95a之三聯體在整個區段（L3完全文庫）中隨機化或個別地隨機化產生五個子文庫。在轉型至細菌中之後彙集含有具有個別隨機化位置之純系的子文庫（L3彙集文庫）。為產生五個子文庫，使用各引子AC1-AC5與引子MS43組合以PCR擴增五個DNA片段。為產生L3完全文庫，使用引子組合AC6與MS43(圖14)。使用質體pMS22作為模板。擴增條件包括初始5分鐘94°C保溫步驟，接著為25個循環，各循環由1分鐘94°C變性、1分鐘55°C黏接，及25秒72°C延伸步驟組成，接著為最終10分鐘72°C保溫步驟。在瓊脂糖凝膠上純化涵蓋位置VL域之位置1-104的所得片段且將其用作另一 PCR擴增之模板。使用與上述相同之條件用具有與隨機化引子重疊之序列的引子EAB-746及MS43進行所有反應。經純化片段以及pMS22 用Ncol/Xhol消化。對於所有五個子文庫，均使0.5 pg插入物與0.5 pg pAC16連接。對於L3完全文庫，用9.8 gg插入物及9.8 pg pMS22進行連接。藉由電穿孔將經純化連接物轉型至TG1細菌中。 149901.doc -99- 201121994 表9

引子 SEQ ID NO: L3文庫-引子核苷酸序列 AC1 150 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAATAGAGGATAGGTGTAM NNTTGGTGACAGTAGTAAGTTGC AC2 151 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAATAGAGGATAGGTMNNAT ATTGGTGACAGTAGTAAGTTGC AC3 152 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAATAGAGGATAMNNGTAAT ATTGGTGACAGTAGTAAGTTGC AC4 153 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAATAGAGGMNNGGTGTAA TATTGGTGACAGTAGTAAGTTGC AC5 154 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAAMNNAGGATAGGTGTAA TATTGGTGACAGTAGTAAGTTGC AC6 155 GGTGCCCTGGCCAAACGTGAATAGAGGATAGGTGTAA TATTGGTGACAGTAGTAAGTTGC EAB-746 156 CGCTTGATCTCGAGCTTGGTGCCCTGGCCAAACGTG MS-43 123 CCAGCCGGCCATGGCCGATATCCAGATGACCCAGTCTC CATC 引子AC6之隨機化：在夯邀：60%原始鹼基及40%隨機化為Μ 加下劃線：60%原始鹼基及40%隨機化為Ν 產生抗原因為鼠類PR1 A3抗體與人類化PR1 A3抗體均僅識別膜結合型可溶性人類CEA而非脫落之可溶性人類CEA，所以產生含有PR1A3之抗原決定基的重組嵌合蛋白質用於活體外親和力成熟人類化PR1A3(SEQ ID NO: 7及8)。產生此雜交蛋白係如Steward等人，1999中所述來進行。簡言之，將人類膽汁醣蛋白（BGP)之B域的DNA序列用含有PR1A3之抗原決定基的人類CEA-B3域之序列置換。因此，該序列編 14990I.doc -100- 201121994 碼包含BGP之N及A1域、CEA之B3域及BGP之A2域的雜交蛋白（Ν·Α1-Β3_Α2，huNABA)。接著使此融合產物連接至人類 IgGl 之 Fc 部分（huNABA-Fc)(Steward 等人，Cancer Immunol Immunother, 47:299-306, 1 999)或融合至編碼精確蛋白酶裂解位點、avi標籤及（His)6標籤之序列〇1^八8八-avi-his)(SEQ ID NO·· 158)。使用蛋白質A管柱自穩定轉染之CHO細胞株的上清液純化huNABA-Fc。將huNABA-avi-his短暫轉染至穩定表現EBV來源蛋白質 EBNA之 HEK 293 細胞中。編碼生物素連接酶之同時共轉染之質體允許活體内avi標籤特異性生物素標記。接著藉由固定金屬親和層析法（IMAC)，接著進行凝膠過濾來純化蛋白質。 SEQ ID NO: 158(huNABA-avi-his)pETR6592

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QSLPSSERMKLSQGNITLSINPVKREDAGTYWCEVFNPISKNQSDPIM

LNVNYNALPQENLINVDLEVLFQGPGSGLNDIFEAQKIEWHEARAH

HHHHH 人類化PR1A3之親和力成熟使用標準方案藉由噬菌體呈現來產生親和力成熟人類化 PR1A3 Fab(Silacci等人，Proieomiej，5(9):2340-2350, 2005)。根據以下程序在溶液中用所有親和力成熟文庫進行選擇： 1.在1 ml之總體積中使各親和力成熟文庫之約1012個噬菌粒粒子結合於100 nM生物素標記之huNABA-avi-his持續 149901.doc -101 - 201121994 0.5小時，2.藉由添加5.4χ107個塗佈抗生蛋白鏈菌素之磁性珠粒來捕捉生物素標記之huNABA-avi-his及特異性結合之噬菌體粒子持續10分鐘，3.使用5-10x1 ml PBS/Tween20 及5-l〇xl ml PBS洗滌珠粒，4.藉由添加1 ml 100 mM TEA (三乙胺）溶離噬菌體粒子10分鐘且藉由添加500 μΐ 1M 丁1^/11(：1(?117.4)進行中和，及5.再感染指數生長之大腸桿菌（E. coli)TGl細菌，以輔助噬菌體VCSM13感染且隨後進行噬菌粒子之PEG/NaCl沈澱以用於後續各輪選擇中。使用恆定抗原濃度或遞降抗原濃度（1〇_7 Μ至2χ10·9 M)歷經3-5 輪進行選擇。在第2輪中，使用申性鏈親和素（neutravidin) 板替代抗生蛋白鏈菌素珠粒捕捉柝原：噬菌體複合物。如下藉由ELISA鑑別特定結合劑：以每孔100 μΐ 10 nM生物素標記之huNABA-avi-his塗佈於中性鏈親和素板上。添加含Fab之細菌上清液且使用抗Flag/HRP二次抗體，經由其 Flag標籤來偵測Fab結合。在96孔格式中ELISA陽性純系經細菌以可溶性Fab片段之形式表現且藉由SPR分析，使用 BIACORE T100對上清液進行動力學篩選實驗。鑑別表現具有最高親和力常數之Fab的純系且將相應噬菌粒定序。純化Fab及量測動力學參數為精確分析動力學參數，自細菌培養物純化Fab。接種 5 00 ml培養物且在OD600 0.9時以1 mM IPTG誘導。在25°C 下培育細菌隔夜且藉由離心進行收集。再懸浮之集結塊在 25 ml PPB 緩衝液（30 mM Tris-HCl(pH 8)、1 mM EDTA、 20%蔗糖）中培育20分鐘後，再次離心細菌且收集上清液。 149901.doc -102- 201121994 以25 ml 5 mM MgS04溶液重複此培育步驟一次。彙集兩個培育步驟之上清液，過濾且加載於IMAC管柱（His gravitrap，GE Healthcare)上。隨後，以40容積洗蘇管柱。在溶離（500 mM NaCl、500 mM咪唑、20 mM NaH2P04(pH 7.4))後，使用PD10管柱（GE Healthcare)再緩衝溶離液。接著藉由以200 nM至6.25 nM範圍内的稀釋列（dilution row) 進行SPR分析來研究經純化Fab之動力學參數。實例2 PR1A3抗體係經嵌合以具有人類IgGl/κ怪定區，且使用 GylcoMab技術來表現以在Fc中具有較高含量之去岩藻糖基化糖。在25 :1之效應物與目標比率下比較經糖基工程改造抗體與非糖基工程改造抗體。藉由糖基工程改造Fc區使抗體依賴性目標細胞殺死之最大量加倍（圖2)。藉由增加效應物與目標之比率進一步增加細胞殺死率（圖2)。使用與人類生殖系序列一致之構架使PR1 A3人類化。 IMGT序列IGHV7-4-l*02(寄存編號X62110)為VH人類化之受者且IMGT_hVK_l_39(寄存編號X593 15)為VL人類化之受者。包含重鏈可變區構築體CH7A及輕鏈可變區構築體 CL1A之人類化PR1 A3抗體顯示令人滿意之對人類結腸癌細胞之結合，如藉由流動式細胞量測術所量測（圖3 )。使用如在本文實例1中詳細描述之標準方案利用噬菌體呈現進行PR1 A3之親和力成熟。用於親和力成熟之親本人類化PR1 A3抗體包含重鏈可變區構築體CH7 A及輕鏈可變區構築體CL1A。下表3-6展示用於親和力成熟之文庫。對 149901.doc -103- 201121994 於L1 /L2文庫，CDR内之位置纈胺酸29、丙胺酸50或絲胺酸51保持恆定β對於H1/H2文庫，CDR内之位置異白胺酸 51、甘胺酸55或丙胺酸57保持恆定（圖4及圖5)。使親和力成熟重鏈可變區構築體CH7A rF9及親和力成熟輕鏈可變區構築體CL1A rH11分別與親本輕鏈可變區構築體及重鏈可變區構築體配對’及彼此配對。將所有抗體均轉化為人類IgGl/κ且藉由流動式細胞量測術量測對CEA陽性細胞株MKN45之結合。包含一個親和力成熟重鏈或輕鏈可變區或兩個親和力成熟重鍵或輕鍵可變區之抗體與人類化親本抗體相比顯示改良之結合特徵（圖6)。圖6、丨〇及i 5 展示若干實例，其中成熟輕鏈及重鏈獨立地有助於親和力增強。在圖6及圖15中’親本抗體CH7A CL1A具有最低信號強度，以及最高EC50值。在流動式細胞儀量測中，成熟輕鍵之EC50值向較低數值偏移，而成熟重鏈（圖6中之Γρ9 及圖15中之rB9)使總螢光信號強度偏移。圖1〇展示藉由 Biacore方法量測之重鏈及輕鏈的個別貢獻。此兩條鏈之組合甚至進一步增強親和力。親和力成熟重鏈及輕鏈CDR之結合親和力藉由Biacorw^j 定且列於下表10中》 149901.doc -104- 201121994 表ίο SEQID NO CDR-H3 (隨機化殘基加有下劃線所選殘基以粗體顯示）親和力 (由Biacore測定）構築體 25 WDFYDYVF. A1UDY 3681 nM PMS22 26 WDFYHYVEAMDY 586 nM 1C8 27 WDFVDYVEAMDY 1893 nM 3E1 28 WDFYWYVEAMDY 746 nM 2D7 33 WDFAHYFQTMD 59 nM 親和力成熟CDRH- 3 34 WDFAYYFQTMD 44 nM 親和力成熟CDRH-3 35 WDFAYYLEAMD 69 nM 親和力成熟CDRH-3 29 WDAFEYVKALDY 26 nM H3 全(5) 19 30 WDFFEYFKTMDY 51 nM H3全⑺8 31 WDFFYYVQTMDY 81 nM H3 全(5) 28 33 WDFSYYVEAMDY 132 nM H3全⑺27 CDR-H1 及 CDR-H2 隨機化殘基加有下劃線所選殘基以粗體顯示 1及13 EFGMN 及 WINTKTGEATYVEEFKG 3681 nM pMS22 1及14 EFGMN 及 WINTKTGEATYIEEFKG 402 nM H4E9 1及15 EFGMN 及 WINTKSGEATYVEEFKG pAC14 (B9) 2及15 EYGMN 及 WINTKSGEATYVEEFKG pAC15(F9) 3及16 EYSMN 及 YINTKNGEANYVEEFKG H1/H2 (5) 2 2及17 EYGMN 及 WINTKNGEATYIEEFKG Hl/H2(5) 11 149901.doc -105- 201121994 1及16 EFGMN 及 YINTKNGEANYVEEFKG Hl/H2(5) 13 2及16 EYGMN 及 YINTKNGEANYVEEFKG H1/H2 (5) 14 5及13 EFGMS 及 WINTKTGEATYVEEFKG 26 nM H3 全(5) 19 CDR-L1 及 CDR-L2 隨機化殘基加有下劃線所選殘基以粗體顯示 36 及 46 ONVGTN 及 YSASYRYS 3681 nM pMS22 37 及 47 ANVGNN 及 YLASNLSG 250 nM pAC21 (3A1) 38 及 48 KNVGTN 及 YLASYPQI 700 nM pAC19 (2C6) 39 及 49 AAVGTY 及 YSASYRKR 220 nM pAC18 (2F1) 40 及 50 QYASTN 及 YWASYRYS 290 nM pAC23(2Fll) 36及— QNVGTN 及 PLI-YSASYRYS 402 nM H4E9 41 及 51 HNVGTN 及 YSASHRYS 2255 nM L2D2 42 及 52 QIMGPN 及 YLASYHES pAC6 (Cl) 43 及 53 QIVGTN 及 YSASHRPS pAC7 (E10) 44 及 54 QKVLTN 及 YLASYRYS pAC12 (H7) 45 及 55 QTVSAN 及 YLASYRYR pAC13(Hll) CDR-L3 隨機化殘基加有下劃線所選殘基以粗體顯示 56 HQYYTYPLFT pMS22 下表11概括各種親和力成熟抗體序列之親和力常數。列出親本抗體PR1 A3以及成熟與非成熟序列之若干輕鏈與重鏈組合。所有值均藉由Biacore技術藉由量測以固定NABA-avi-his試劑（SEQ ID NO 158)作為抗原之Biacore晶片上呈 Fab格式之各種可溶性抗體構築體的締合速率常數（kQn)及 149901.doc -106- 201121994 解離速率常數汴。„)來獲得。親和力常數以KD標記。表11 :親和力成熟純系之動力學分析

純系名稱鍵單價親和力二價親和力 PR1A3 wt/wt k〇n · 6.74χ10 1/Ms，· 2.48xl0*2 1/s ； KD3681x10_9M k〇n : 2.82χ105 1/Ms ; k〇ff : 5.52ΧΚΓ4 1/s ; KD : 2x10—9M 1C8 hc/wt k〇n ： 12.9xl03 1/Ms ； k〇ff ： 0.76x1 O'2 1/s ； KD 586x10'9M k〇n : 4.67xl05 1/Ms ; k〇ff : 3.24XKT4 1/s ; KD : 0.693xl0·9 M H4E9 hc/wt k〇n ： 5.22xl03 1/Ms ; k〇ff : 0.21xl〇·2 1/s ； KD402x10'9M k〇n : 2·92χ105 1/Ms ; k〇ff : 2.04xl0·3 1/s ； KD ： 0.7χ1〇·9Μ H3 全(5) 19 hc/wt k〇n : 54.2x103 1/Ms ； k〇ff ： 0.13xl0'21/s ； KD24x10'9M k〇n : 9·02χ105 1/Ms ; k〇ff : 1.75X1。·4 1/s ； KD ： 0.19x10'9M H3 全(5) 8 hc/wt k〇n ： 27.3xl03 1/Ms ； k〇ff ： 0.14xl0_2 1/s ; KD51xl0—9M N/D 3A1 wt/ lc k〇n : 46.8><103 1/Ms ; k〇ff : U7xl0'2 1/s ； KD25〇x10'9M k〇n : 2.42xl05 1/Ms ; k〇ff : 3.64ΧΚΓ4 1/s ; KD : 1.5X10—9 M 2F1 wt/ lc k〇n ： 95.7><103 1/Ms ; k〇ff : 2·07χ10_2 1/s ; KD 22〇χ10·9 M k〇n ： 4.23x10s 1/Ms ； k〇ff ： 4.10^10^4 1/s ; KD : 0.952xl0·9 M 5L1A10 hc/wt k〇n : 15_6xl03 1/Ms ; k〇ff : 0.09xl0'2 1/s ； KD59x10*9M N/D 5HFF12 hc/wt k〇n ： 20.8xl03 1/Ms ； k〇ff ： 0.09xl〇·2 1/s ； KD44x10_9M N/D M4F1 hc/wt k〇n ·· 25.7xl03 1/Ms ； k〇ff ： 0_17xl0·2 1/s ; KD69x10_9M N/D H4E9 X 2F1 hc/lc k〇n : 36.4x103 1/Ms ； k〇ff ： 0.35xl0'21/s ； KD96x10'9M k〇n ： 4.23x10s 1/Ms ； k〇ff ： 1.9^10-4 1/s ; KD : 0.452xl0·9 M H4E9 X 3A1 hc/lc N/D k〇n : 2.46xl05 1/Ms ; k〇ff : 1.36X10*4 1/s ; KD : 0·55χ10·9Μ 1C8x2F1 hc/lc k〇n ： 68.1 xlO3 1/Ms ； k〇ff ： 0.87xl0'2 1/s ； KD 128χ1〇·9Μ k〇n ： 9.68xl05 1/Ms ； k〇ff ： 6.36^10-4 1/s ； KD ： 0.66x10'9M 1C8x3A1 hc/lc N/D k〇n ： 2.89x10s 1/Ms ； k〇ff ： 2.57x1ο·4 1/s ； KD ： 0.888x10_9M H3 全（5) 19 x2Fl hc/lc k〇n ： 206χ103 1/Ms ； k〇ff ： 0.25xl〇·2 1/s ； KD ： 12.2x10*9M k〇n ： 1.76^106 1/Ms ； k〇ff ： 2.84^104 1/s ； KD ： 0.16x10'9M H3 全(5) 8 X 2F1 hc/lc N/D k〇n ： 9.93xl05 ； 1/Ms ； k〇ff ： 2.71X1Q·4 1/s ； KD ： 0.28^10-9 M 149901.doc -107· 201121994 【圖式簡單說明】圖1展示CEA(CEACAM-5、CD66e)抗原之示意圖。當抗原結合於細胞膜時，PR1A3抗體特異性結合於該抗原之B3 域。圖2展示以人類PBMC作為效應物時糖基工程改造之嵌合 PR1A3抗體的增強之ADCC活性。圖3展示包含重鏈可變區構築體CH7A及輕鏈可變區構築體CL1A之人類化PR1A3抗體的抗原結合活性。圖4展示用於產生供對人類化PR1 A3抗體輕鏈進行親和力成熟之抗體文庫的隨機化位點。以X標記之位置經隨機化。圖5展示用於產生供對人類化PR1 A3抗體重鏈進行親和力成熟之抗體文庫的隨機化位點。以X標記之位置經隨機化。圖6展示包含重鏈可變區構築體CH7ArF9及輕鏈可變區構築體CLlArHll之來源於人類化PR1A3抗體的親和力成熟抗CEA抗體之結合活性。圖7展示脾内投與LSI 74T人類結腸直腸癌細胞以具有正位腫瘤模型之SCID/bg小鼠中功效研究之結果。在以25毫克/公斤體重之劑量注射抗體，接著再進行兩次每週注射後七天開始抗體療法。「CH7A」表示包含如本文所述之 PR1A3之CDR的人類化抗體。「SM3E」係指先前產生之抗 CEA抗體。「GA201」表示用作陽性對照之人類化抗EGF抗體。「PBS」係指用作陰性對照之磷酸鹽緩衝生理食鹽水。 I49901.doc -108- 201121994 根據由瑞士管理當局（Swiss regulatory authority)定義之终止準則來量測存活率。圖8展示靜脈内注射A549肺癌細胞之SCID/bg小鼠中功效研究之結果，其中腫瘤移植於該等動物之肺中。在以25 毫克/公斤體重之劑量注射抗體，接著再進行兩次每週注射後七天開始抗體療法。「CH7A」、「SM3E」及「GA201」係如上文關於圖7所闡述。名稱「CH7ArF9 CL1A rHll」表示具有親和力成熟重鏈及輕鏈之CH7A抗體變異體。名稱「ge」指示抗體已經糖基工程改造以在Fc區中具有減少數目之岩藻糖基化寡醣。「媒劑」係指陰性對照。A549肺癌細胞對於EGFR表現為強陽性且對於CEA表現為弱陽性。圖9展示脾内投與在動物肝臟中產生腫瘤轉移之MKN45 胃癌細胞之SCID/bg小鼠中功效研究之結果。名稱「CH7ArF9 CL1A rHl」、「SM3E」、「ge」及「PBS」係如上文關於圖7及圖8所闡述。圖10展示親和力成熟純系之動力學分析：（a)展示具有以下之抗CEA Fab的感測器圖譜：親和力成熟重鏈CH7A H4E9(SEQ ID NO: 199)連同未成熟輕鏈CL1A(SEQ ID NO: 105);親和力成熟輕鏈CL1A pAC18(SEQ ID NO: 209)與未成熟重鏈CH7A組合；及其組合，CH7A H4E9& CL1A pAC18(SEQ ID NO: 199及209)。（b)親和力成熟純系之動力學分析的概述。圖11展示人類化CH7A抗CEA抗體重鏈之CDR1及CDR2 149901.doc • 109- 201121994 隨機化之示意性概覽。圖12展示人類化CL1A抗CEA抗體輕鏈之CDR1及CDR2隨機化之示意性概覽。圖13展示人類化CH7A抗CEA抗體重鏈之CDR3隨機化之示意性概覽。圖14展示人類化CL1A抗CEA抗體輕鏈之CDR3隨機化之示意性概覽。圖15展示抗CEA抗體對MKN45目標細胞上膜結合型CEA 的結合親和力。如與對照抗體（CH7A、CL1A)相比，已轉化為IgG之具有親和力成熟輕鏈（圖A，CH7A、CLlArH7或 CH7A、CLlArHll)或親和力成熟重鏈及輕鏈（圖B，CH7A rB9、CL1A rHll G2(l))之人類化抗CEA抗體顯示獲改良之結合。圖16展示與對照抗體（CH7A、CL1A G2(R2))相比，利用親和力成熟抗體（CH7ArB9、CL1A rHllG2(l)、CH7Arf9、 CL1A rHllG2(l)，及 CH7A、CL1A rHll G2(l))測試抗體依賴性細胞毒性（ADCC)之檢定的結果。 149901.doc •110· 201121994 序列表 <11〇>瑞士商羅齊克雷雅公司 <120>CEA 抗體 <130 26372 <140〉099129130 <141> 20100830 <150> US 61/238,505 <151> 2009-08-31 <160> 216 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDRIKabat <400> 1

Glu Phe Gly Met Asn <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDRIKabat <400> 2

Glu Tyr Gly Met Asn

<210〉 3 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR1 Kabat <400> 3 Glu Tyr Ser Met Asn 1 5 <210> 4 <211> 121 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223〉重鏈可變區 <220> <221> MISC FEATURE <222> (32)7.(32) <223> Xaa = Tyr 或 Phe <220> <221> M I SC FEATURE <222> (33)7.(33) <223> Xaa = Ser 或 Gly <220> <221> MISCLFEATURE 14990〗·序列表.doc 201121994 <222> (35)..(35) <223> Xaa =人sn或 Ser <220> <221> MISC.FEATURE <222> (50)..(50) <223> Xaa = Tip 或Tyr <220> <221> MISC FEATURE <222> (55)..(55) <223> Xaa = ihr、Ser或Asn <220> <221> MISC FEATURE <222> (59)..(59) <223> icaa = fhr或Asn <220> <22l> MISC FEATURE <222> (61)..(61) <223> Xaa = Val 或 Met <220> <221> MISC.FEATTJRE <222> (101)..(101) <223> Xaa = Pile 或Ala <220> <221> MISC FEATURE <222> (102)..(102) <223> Xaa = Val、Phe、Ser、Tyi^Ala <220> <22l> MISC.FEATURE <222> (103)..(103) <223> = Asp、His、Tip、Glu或Tyr <220> <221> MISC.FEATURE <222> (105T..(105) <223> j(aa = Val、Phe 或Leu <220> <221> MISC一FEATURE <222> (106)..(106) <223> Xaa = Glu、Lys 或Gin <220> <221> MISC FEATURE <222> (107)..(107) <223> Xaa = Ala 或Thr <220〉 <221> MISC FEATURE <222> (108)..(108) <223> Xaa = Met或Leu <400> 4

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Xaa 20 25 30

Xaa Met Xaa Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Xaa lie Asn Thr Lys Xaa Gly Glu Ala Xaa Tyr Xaa Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Va. Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr •2· 149901-序列表.doc 201121994

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDRIKabat <400> 5 Glu Phe Gly Met Ser <210〉 6 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 Chothia <400> 6 Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 Chothia <400> 7 Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDRIAbM <400> 8 Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe Gly Met Asn 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列

<220> <223> 重鏈CDRIAbM 149901-序列表.doc 201121994 <400> 9

Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDRIAbM <400> 10

Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr Ser Met Asn 1 5 10 <210> 11 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>輕鏈可變區 <220> <221> MISC一FEATURE <222> (27)..(27) <223> kaa = όΐη、Ala、Lys或His <220> <221> MISC.FEATURE <222> (28)..(28) <223> *aa = 乂sn、Ala、Tyr、He、Lys或Thr <220> <221> MISC.FEATURE <222> (29)..(29) <223> Xaa = Val、Ala'Gb^Met <220> <221> MISC.FEATURE <222> (30)..(30) <223> 父的=0iy、Ser、Thr或Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..(31) <223> 女aa = 、Asn、Pro或Ala <220> <221> MISC FEATURE <222> (32)..(32) <223> Xaa = Asn或Tyr <220> <221> MISC FEATURE <222> (46)..(46) <223> Xaa = Pro 或Leu <220> <221> MISC.FEATIJRE <222> (50)..(50) <223> Xaa = “r、Leu或Tip <220> <22l> MISC FEATURE <222> (53)..(53) <223> ^Caa = Tyr、Asn或His <220> <221> MI SC FEATURE <222> (54)..(54) <223> kaa = Aig、Leu、Pro或His -4- 149901·序列表.doc 201121994 <220> <221> MISC.FEATURE <222> (55)..(55) *aa = Tyr、Ser、Gin、Lys、Phe、Pro 或Glu <220> <221> MISC.FEATURE <222> (56)..(56) <223> ；^aa= Ser、Gly、De 或Arg <400> 11

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Va] Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Xaa Ala Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223> 重鏈CDRIAbM <400> 12

Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe Gly Met Ser 1 5 10 <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Kabat <400> 13

Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 149901-序列表.doc 201121994 <220> <223> 重鏈CDR2Kabat <400〉 14

Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr lie Glu Glu Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 15 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Kabat <400> 15

Trp He Asn Thr Lys Ser Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe Lys 15 10 15 G】y <210> 16 <211> 17 <212> PR丁 <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Kabat <400> 16

Tyi· lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn 丁yr Val Glu Glu Phe Lys 15 10 15

Gly <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Kabat <400> 17

Trp lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Thr Tyr He Glu Glu Phe Lys 15 10 15

Gly <210〉】8 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Chothia <400> 18

Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr 149901·序列表.doc 201121994 1 5 <210〉 19 <211> 8 <212> PRT <2]3>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Chothia <400> 19

Asn Thr Lys Ser Gly Glu Ala Thr <210> 20 <211> 8 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2Chothia <400> 20

Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2AbM <400> 21

Trp He Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr 10 <210> 22 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2AbM <400> 22

Trp He Asn Thr Lys Ser Gly Glu Ala Thr 10 <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2AbM <400> 23

Tyr lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn 1 5 10 <210〉 24 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 149901-序列表.doc 201121994 <220〉 <223> 重鏈CDR2AbM <400> 24

Trp lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Thr 1 5 10 <210〉 25 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 25

Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 26 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 26

Trp Asp Phe Tyr His Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <2丨3>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 27

Trp Asp Phe Val Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 10 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 28

Trp Asp Phe Tyr Trp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 29 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 29

Trp Asp Ala Phe Glu Tyr Val Lys Ala Leu Asp Tyr 1 5 10 14990卜序列表.doc 201121994 <210> 30 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 30

Trp Asp Phe Phe Glu Tyr Phe Lys Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 31 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 31

Trp Asp Phe Phe Tyr Tyr Val Gin Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 32 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 32

Trp AspPhe Ser Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210〉 33 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400〉 33

Trp Asp Phe Ala His Tyr Phe Gin Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 34 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220〉 <223> 重鏈CDR3 <400> 34

Trp Asp Phe Ala Tyr 丁yr Phe Gin Thr Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 35 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 149901-序列表.doc -9- 201121994 <400> 35

Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Leu Glu Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 36

Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 37

Lys Ala Ser Ala Asn Val Gly Asn Asn Val Ala 1 5 10 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 38

Lys Ala Ser Lys Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 39

Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr Val Ala 1 5 10 <210> 40 <211> 11 <212> PRT <2i3>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 40

Lys Ala Ser Gin Tyr Ala Ser Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 41 •10- 149901-序列表.doc 201121994 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 41

Lys Ala Ser His Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 42

Lys Ala Ser Gin lie Met Gly Pro Asn Val Ala 1 5 10 <210> 43 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 43

Lys Ala Ser Gin lie Val Gly Thr Asn Val Ala 10 <210> 44 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 44

Lys Ala Ser Gin Lys Val Leu Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 45

Lys Ala Ser Gin Thr Val Ser Ala Asn Val Ala 1 5 10 <210> 46 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 46 149901·序列表.doc - 11 - 201121994

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser <2)0> 47 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 47

Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Ser Gly <210> 48 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 48

Tyr Leu Ala Ser Tyr Pro Gin lie <210> 49 <211> 8 <212〉 PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 49

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 50

Tyr Trp Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser <210> 51 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 51

Tyr Ser Ala Ser His Arg 丁yr Ser <2I0> 52 <211> 8 <212> PRT 12- 149901-序列表.doc 201121994 <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 52

Tyr Leu Ala Ser Tyr His Glu Ser <210> 53 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 53

Tyr Ser Ala Ser His Arg Pro Ser <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 54

Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 55

Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR3 <400> 56

His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu Phe Thr 1 5 10 <210> 57 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 <400> 57 ggatacacct tcactgagtt tggaatgaac •13- 149901-序列表.doc 201121994 <210> <211> <212> <213> 58 30 DNA 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 <400> 58 ggatacacct tcactgagta tggtatgaac 30 <210> <211> <212> <213> 59 30 DNA 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 <400> 59 ggatacacct tcactgagta ttctatgaac 30 <210> <211> <212> <213> 60 0 DNA 人工序列 <220> <223> 空白 <400> 000 60 <210> <211> <212> <213> 61 30 DNA 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 <400> 61 ggatacacct tcactgagtt tggaatgagc 30 <210> <211> <212> <213> 62 51 DNA 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2 <400> 62 tggataaaca ccaaaactgg agaggcaaca tatgttgaag agtttaaggg a 51 <210> <211> <212> <213> 63 51 DNA 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2 <400> 63 tggataaaca ccaaaactgg agaggcaaca tatattgaag agtttaaggg a 51 <210> 64 <211> 51 <212> DNA <213> 人工序列 <220> 14- 149901-序列表.doc 201121994 <223> 重鏈CDR2 <400> 64 tggataaaca ccaaaagtgg agaggcaaca tatgttgaag agtttaaggg a <210> 65 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2 <400> 65 tatataaaca ccaaaaatgg agaggcaaac tatgttgaag agtttaaggg a <210> 66 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR2 <400> 66 tggataaaca ccaaaaatgg agaggcaaca tatattgaag agtttaaggg a <210> 67 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 67 tgggacttct atgattacgt ggaggctatg gactac <210> 68 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 68 tgggacttct atcattacgt ggaggctatg gactac <210> 69 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 69 tgggacttcg tggattacgt ggaggctatg gactac <210> 70 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <223> 重鏈CDR3 <400> 70 tgggacttct attggtacgt ggaggctatg gactac •15· 149901·序列表.doc 201121994 <210> 71 <211〉 36 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 71 tgggacgcct ttgagtacgt <210> 72 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 72 tgggatttct ttgagtattt <210> 73 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 73 tgggactttt tttattacgt <210> 74 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 74 igggattttt cttattacgt <210> 75 <211> 36 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 75 tgggactttg ctcattactt <210> 76 <211> 36 <212〉 DNA <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR3 <400> 76 tgggacttcg cttattactt <210> 77 <211> 36 <212> DNA <213> <220> 人工序列 gaaggcgctg gactac taagactatg gactac gcagactatg gactac tgaggcgatg gactac tcagactatg gactac tcagactatg gactac 36 36 36 36 36 36 149901-序列表.doc •16- 201121994 <223> 重鏈CDR3 <400> 77 tgggatttcg cgtattacct tgaggctatg gactac <210〉 78 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 78 aaggccagtc agaatgtggg tactaatgtt gcc <210> 79 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 79 aaggccagtg ccaatgtggg taataatgtt gcc <210> 80 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 80 aaggccagta agaatgtggg gactaatgtt gcg <210> 81 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 81 aaggccagtg cggctgtggg tacgtatgtt gcg <210> 82 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 82 aaggccagtc agatagcgag tactaatgtt gcc <210> 83 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 83 aaggccagtc acaatgtggg taccaacgtt gcg 149901·序列表.doc 33 201121994 <210> 84 <211> 33 <2】2> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 84 aaggccagtc agattatggg tcctaatgtt gcg <210> 85 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 85 aaggccagtc aaattgtggg tactaatgtt scg <210> 86 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400〉 86 aaggccagtc agaaggtgct tactaatgtt gcg <210> 87 <211> 33 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR1 <400> 87 aaggccagtc agactgtgag tgctaatgtt gcg <210> 88 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400〉 88 tattcggcat cctaccgcta cagt <210> 89 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 89 tatttggcct ccaacctctc cggt <210> 90 <211> 24 <212> DNA <213> 人工序列 <220> 149901·序列表.doc 33 33 33 24 18- 24 201121994 <223> 輕鏈CDR2 <400> 90 tacctggcat cctaccccca gatt <210> 91 <2Π> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 91 tattcggcat cctaccgcaa aagg <210> 92 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 92 tattgggcat cctaccgcta tagt <210> 93 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 93 tattcggcat cccaccggta cagt <210> 94 <211> 24 <212> DNA <2]3>人工序列 <220〉 <223> 輕鏈CDR2 <400> 94 tatttggcat cctaccacga aagt <210> 95 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 95 tattcggcat cccaccgtcc cagt <210> 96 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR2 <400> 96 tatttggcat cctaccgcta cagt M990卜序列表.doc 201121994 <210> 97 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220〉 <223> 輕鏈CDR2 <400> 97 tatttggcat cctaccgcta caga 24 <210> 98 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 輕鏈CDR3 <400> 98 caccaatatt acacctatcc tctattcacg 30 <210> 99 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> PRIA3 VH <400〉 99

Gin Val Lys Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15

Thr Val Lys lie Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Lys Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Thr Ala Lys Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 】20 <210> 100 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pEM1496 huPRlA3 VH <400> 100

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 •20- 149901-序列表.doc 201121994

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp He Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 101 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> CH7A <400> 101

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 102 <211> 98 <212> PRT <213>人工序列 <220> -21 · 149901-序列表.doe 5 201121994 <223> IGHV7-4-l*02 <400> 102

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Asn Thr Gly Asn Pro Thr Tyr Ala Gin Gly Phe 50 55 60

Thr Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg <210> 103 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> PR1A3 VL <400> 103

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Gin Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ser Pro Lys Ala Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Asn Val Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 104 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220>

<223> pEM1495 huPRlA3 VL •22· 149901·序列表.doc 201121994 <400> 104

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr He Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp He Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Ser Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 105 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> CL1A <400> 105

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 106 <211> 95 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> IMGTJiVK 丄 39 <400> 106 •23- 149901-序列表.doc 201121994

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser He Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu He 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 GIu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro 85 90 95 <210> 107 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> CH7 rF9 <400> 107

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser GIu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr GIu Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu GIu Trp Met 35 40 45 G.yTrpHeAsn^r Lys Ser C.y GIu A,a Thr Tyr Val GIu GIu Phe

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala GIu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val GIu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 108 <21I> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> OA1 rHIl <400> 108

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 -24- 149901-序列表.doc 201121994

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Thr Val Ser Ala Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr (jin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5〇 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Scr Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 109 <211> 0 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>空白 <40Cb 000 <210> 110 <211> 0 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223〉空白 <400> 110 000 <210> 111 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> PR1A3 VH <400> 111 caggtgaagc tgcagcagtc aggacctgag ttgaagaage ctggagagac agtcaagatc tcctgcaagg cttctggata taccttcaca gaattcggaa tgaactgggt gaageagget cctggaaagg gtttaaagtg gatgggctgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat gttgaagagt ttaagggacg gtttgccttc tctttggaga cctctgccac cactgcctat ttgeagatea acaacctcaa aaatgaggac acggctaaat atttctgtgc tcgatgggat ttctatgact atgttgaagc tatggactac tggggccaag ggaccaccgt gaccgtctcc tea <210> 112 <211> 362 <212> DNA <213>人工序列 <220> 25- 149901-序列表.doc 201121994 <223> pEM1496 <400> 112 caggtgcagc tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagttggaat gaactgggtg cgacaggccc 120 ctggacaagg gcttgagtgg atgggatgga taaacaccaa aactggagag gcaacatatg 180 ttgaagagtt taagggacgg tltgtcttct ccttggacac ctctgtcagc acggcatatc 240 tgcagatcag cagcctaaag gctgacgaca ctgccgtgta ttactgtgcg agatgggact 300 tctatgatta cgtggaggct atggactact ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct 360 ca 362 <210> 113 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> CH7A <400> 113 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 114 <211> 294 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> IGHV7-4-l*02 <400> 114 caggtgcagc tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact agetatgeta tgaattgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacacca acactgggaa cccaacgtat 180 gcccagggct tcacaggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaggac actgccgtgt attactgtgc gaga 294 <210> 115 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> PR1A3 VL <400> 115 gatatcgtga tgacccagtc tcaaagattc atgtccacat cagtaggaga cagggtcagc 60 gtcacctgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgttg cctggtatca acagaaacca 120 ggacaatccc ctaaagcact gatttacteg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat 180 cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcaa tgtacagtct 240 149901-序列表.doe -26- 201121994 gaagacttgg cggagtattt ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgttcggc 300 tcggggacaa agttggaaat gaaacgtacg 330 <210> Π6 <211> 327 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pEM1495 <400> 116 gacatccaga tgactcagag cccaagcagc ctgagcgcca gcgtgggtga cagagtgacc 60 atcacctgta aggccagtca gaatgtgggt actaatgttg cctggtacca gcagaagcca 120 ggtaaggctc caaagctgct gatctactcg gcatcctacc ggtacagtgg tgtgccaagc 180 agattcagcg gtagcggtag cggtaccgac ttcaccttca ccatcagcag cctccagcca 240 gaggacatcg ccacctacta ctgccaccaa tattacacct atcctctatt cagcttcggc 300 caagggacca aggtggaaat caaacgt 327 <210> 117 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> CL1A <400> 117 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctattcg gcatcctacc gctacagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caag 324 <210> 118 <211> 285 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> IMGT_hVK.lJ9 <400> 118 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccct 285 <210> 119 <211> 369 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> CH7 rF9 149901-序列表.d〇c 27- 201121994 <400> 119 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtatggta tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacga aatctggaga ggcaacctat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tcagctagc 369 <210> 120 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> CLA1 rHll <400> 120 ' gatatccaga tgacccagtc iccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gactgtgagt gctaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctacttg gcatcctacc gctacagagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 121 <211> 987 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> IgGl <400> 121 accaagggcc catcggtctt ccccctggca ccctcctcca agagcacctc tgggggcaca 60 gcggccctgg gctgcctggt caaggactac ttccccgaac cggtgacggt gtcgtggaac 120 tcaggcgccc tgaccagcgg cgtgcacacc ttcccggctg tcctacagtc ctcaggactc 180 tactccctca gcagcgtggt gaccgtgccc tccagcagct tgggcaccca gacctacatc 240 tgcaacgtga atcacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaaagcaga gcccaaatct 300 tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca 360 gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 420 acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 480 gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 540 taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 600 aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 660 aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 720 aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 780 gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 840 tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 900 gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 960 • 28 · 149901·序列表.doc 201121994 agcctctccc tgtctccggg taaatga 987 <210> 122 <211> 328 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> IgGl <400> 122

Thr Lys Gly Pro Scr Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 15 10 15

Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 20 25 30

Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 35 40 45

His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 50 55 60

Ser Val Val Thr Val Pro Ser Scr Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie 65 70 75 80

Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn T-hr Lys Val Asp Lys Lys Ala 85 90 95

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 100 105 110

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 115 120 125

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 130 135 140

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 145 150 155 160

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 165 170 175

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 180 185 190

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 195 200 205

Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 210 215 220

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 225 230 235 240

Lys Asn Gin Val Ser Leu Tlu Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 245 250 255 -29- 149901-序列表.doc 201121994

Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 260 265 270

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 275 280 285

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe 290 295 300

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 305 310 315 320

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 <210> 123 <211> 42 <212> ONA <213>人工序列 <220> <223> 引子MS«43 <400> 123 ccagccggcc atggccgata tccagatgac ccagtctcca tc 42 <210> 124 <211> 26 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子MS-52 <400> 124 gaagaccgat gggcctttgg tgctag 26 <2I0> 125 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子MS-55 <400> 125 gcaacatatg ttgaagagtt taagggacgg 30 <210> 126 <211> 25 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> MS-56 <400> 126 atgaactggfi tgcgacaggc ccctg 25 <210> 127 <211> 56 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子EAB>679 <220> 30- 149901·序列表.doc 201121994 <221> misc feature <222> (26)7.(26) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (27)7.(28) <223> n為a、c ' g或t <220> <221> misc feature <222> (30):.(30) <223> w為a或t <400> 127 caggggcctg tcgcacccag ttcatmnnaw actcagtgaa ggtgtatcca gaagcc <210> 128 <211> 81 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子 EAB~680 <400> 128 ccgtccctta aactcttcaa cataggttgc ctctccagtt ttggtgttta tccatcccat ccactcaagc ccttgtccag g <210> 129 <211> 50 <2]2> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子 ΕΑΒ·685 <400> 129 cagctatgac catgattacg ccaagcttgc atgcaaattc tatttcaagg <210> 130 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子ΕΑΒ·686 <400> 130 gttgcgtggt atcagcagaa accaggg <210> 131 <211> 34 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子ΕΑΒ·687 <400> 131 gctctttgtg acgggcgagc tcaggccctg atgg <210> 132 <211> 35 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子ΕΑΒ·688 <400> 132 ggagtcccat caaggttcag tggcagtgga tctgg -31 · 149901·序列表.doc 60 201121994 <210> 133 <211> 70 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子ΕΑΒ·681 <400> 133 70 cctggtttct gctgatacca cgcaacatta gtacccacat tctgactggc cttgcaagtg atggtgactc <210> 134 <21l> 77 <212> DNA <213>人工序列 <220> 60 77 <223> 引子EAB冶82 <400> 134 ctgccactga accttgatgg gactccactg tagcggtagg atgccgaata gatcaggagc ttaggtgctt tccctgg <210> 135 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC7 <220> <221> misc feature <222> (37)..(37) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (38)..(39) <223> n為a、c、g或t <400> 135 ccagtagtcc atagcctcca cgtaatcata gaagtcmnnt ctcgcacagt aatacacggc agtg <210> 136 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC8 <220> <221> misc feature <222> (34)..(34) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (35)7.(36) <223> n為a ' c、g或t <400> 136 60 64 ccagtagtcc atagcctcca cgtaatcata gaamnnccat ctcgcacagt aatacacggc agtg 60 32- 149901-序列表.doc 64 201121994 <210> 137 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC9 <220> <221> misc feature <222> (31)7.(31) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (32)7.(33) <223> n為a、c、g或t <400> 137 ccagtagtcc atagcctcca cgtaatcata mnngtcccat ctcgcacagt aatacacggc agtg <230> 138 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC10 <220> <221> misc feature <222> (28)..(28) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (29)..(30) <223> n為a、c、g或t <400> 138 60 64 ccagtagtcc atagcctcca cgtaatcmnn gaagtcccat ctcgcacagt aatacacggc agtg <210> 139 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子ACll <220> <221> misc feature <222> (25)7.(25) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (26)7.(27) <223> n為a、c、g或t <400> 139 60 64 ccagtagtcc atagcctcca cgtamnn'ata gaagtcccat ctcgcacagt aatacacggc agtg <210> 140 60 149901-序列表.doc 33- 64 201121994 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC12 <220> <221> misc feature <222> (37)..(37) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (38)7.(39) <223> n為a、c、g或t <400> 140 cgtggtccct tggccccagt agtccatagc ctccacmnna tcatagaagt cccatctcgc acag <210〉 141 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC13 <220> <221> misc feature <222> (34)7.(34) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (35)..(36) <223> n為a、c、g或t <400> 141 60 64 cgtggtccct tggccccagt agtccatagc ctcmnngtaa tcatagaagt cccatctcgc acag <210> 142 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子ACM <220> <221> misc feature <222> (31)..(31) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (32)..(33) <223> n為a、c、g或t <400> 142 60 64 cgtggtccct tggccccagt agtccatagc mnncacgtaa tcatagaagt cccatctcgc 60 acag <210> 143 <211> 64 <212> DNA <213> 人工序列 149901·序列表.doc 34- 64 201121994 <220> <223> 引子AC15 <220> <221> <222> <223> misc feature (28)..(28) m為a或c <220> <221> <222> <223> misc feature (29)7.(30) n為a、c、g或t <400> 143 cgtggtccct tggccccagt agtccatmnn ctccacgtaa tcatagaagt cccatctcgc 60 acag 64 <210> <211> <212> <213> 144 64 DNA 人工序列 <220> <223> 引子AC16 <220> <221> <222> <223> misc feature (25)..(25) m為a或c <220> <221> <222> <223> misc feature (26)..(27) n為a、c、g或t <400> 144 cgtggtccct tggccccagt agtcmnnagc ctccacgtaa tcatagaagt cccatctcgc 60 acag 64 <210> <211> <212> <213> 145 77 DNA 人工序列 <220> <223> 引子AC17 <400> 145 cgtggtccct tggccccagt agtccatagc ctccacgtaa tcatagaagt cccatctcgc 60 acagtaatac acggcag 77 <210> 146 <211> 25 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子EAB-749 <400> 146 ccatcagggc ctgagctcgc ccgtc 25 <210> 147 <211> 30 <212> DNA <213> 人工序列 <220> 35- 149901-序列表.doc 201121994 <223> 引子 EAB-750 <400> 147 cgtggaggct atggactact <210> 148 <211> 29 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子 EAB-751 <400> 148 gactactggg gccaagggac <210> 149 <211> 23 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子EAB-752 <400> 149 ggtcagggcg cctgagttcc <210> 150 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子ACl <220> <221> misc feature <222> (37)7.(37) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (38)7.(39) <223> π為a、c、g或t <400> 150 ggtgccctgg ccaaacgtga <210> 151 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC2 <220> <221> misc feature <222〉 (34)7.(34) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (35)..(36) <223> n為a、c、g或t <400> 151 ggtgccctgg ccaaacgtga <210> 152 <211> 60 ggggccaagg cacggtcac acg 30 29 23 atagaggata ggtgtamnnt tggtgacagt agtaagttgc atagaggata ggtmnnatat tggtgacagt agtaagttgc 60 60 149901-序列表.doc -36- 201121994 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC3 <220> <221> misc feature <222> (31)7.(31) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (32)7.(33) <223> n為a、c、g或t <400> 152 ggtgccctgg ccaaacgtga atagaggata mnngtaatat tggtgacagt agtaagttgc <210> 153 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC4 <220> <221> misc feature <222> (28)..(28) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (29)7.(30) <223> n為a、c、g或t <400> 153 ggtgccctgg ccaaacgtga atagaggmnn ggtgtaatat tggtgacagt agtaagttgc <210> 154 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC5 <220> <221> misc feature <222> (22)..(22) <223> m為a或c <220> <221> misc feature <222> (23)..(24) <223> n為a、c ' g或t <400> 154 \ ggtgccctgg ccaaacgtga amnnaggata ggtgtaatat tggtgacagt agtaagttgc <210> 155 <211> 60 <212> DNA <213> 人工序列 <220> <223> 引子AC6 <400> 155 ggtgccctgg ccaaacgtga atagaggata ggtgtaatat tggtgacagt agtaagttgc -37- M9901 ·序列表.doc 201121994 <210> 156 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子EAB-746 <400> 156 cgcttgatct cgagcttggt gccctggcca aacgtg <210> 157 <21l> 0 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>空白 <400> 157 000 <210> 158 <21l> 428 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pHTR6592 <400> 158

Gin Leu Thr Thr Glu Ser Met Pro Phe Asn Val Ala Glu Gly Lys Glu 15 10 15

Val Leu Leu Leu Val His Asn Leu Pro Gin Gin Leu Phe Gly Tyr Ser 20 25 30

Trp Tyr Lys Gly Glu Arg Val Asp Gly Asn Arg Gin lie Val Gly Tyr 35 40 45

Ala lie Gly Thr Gin Gin Ala Thr Pro Gly Pro Ala Asn Ser Gly Arg 50 55 60

Glu Thr lie Tyr Pro Asn Ala Ser Leu Leu lie Gin Asn Val Thr Gin 65 70 75 80

Asn Asp Thr Gly Phe Tyr Thr Leu Gin Val lie Lys Ser Asp Leu Val 85 90 95

Asn Glu Glu Ala Thr Gly Gin Phe His Val Tyr Pro Glu Leu Pro Lys 100 105 110

Pro Ser lie Ser Ser Asn Asn Ser Asn Pro Val Glu Asp Lys Asp Ala 115 120 125

Met Ala Phe Thr Cys Glu Pro Glu Thr Gin Asp Thr Thr Tyr Leu 丁rp 130 135 140

Trp lie Asn Asn Gin Ser Leu Pro Val Ser Pro Arg Leu Gin Leu Ser 145 150 155 160

Asn Gly Asn Arg Thr Leu Thr Leu Leu Ser Val Thr Arg Asn Asp Thr 165 170 175 •38· 149901-序列表.doc 201121994

Gly Pro Tyr Glu Cys Glu lie Gin Asn Pro Val Ser Ala Asn Arg Ser 180 185 190

Asp Pro Val Thr Leu Asn Val Thr Tyr Gly Pro Asp Thr Pro Thr lie 195 200 205

Ser Pro Pro Asp Ser Ser Tyr Leu Ser Gly Ala Asn Leu Asn Leu Ser 210 215 220

Cys His Ser Ala Ser Asn Pro Ser Pro Gin Tyr Ser Trp Arg lie Asn 225 230 235 240

Gly lie Pro Gin Gin His Thr Gin Val Leu Phe He Ala Lys He Thr 245 250 255

Pro Asn Asn Asn Gly Thr Tyr Ala Cys Phe Val Ser Asn Leu Ala Thr 260 265 270

Gly Arg Asn Asn Ser He Val Lys Ser lie Thr Val Ser Ala Leu Ser 275 280 285

Pro Val Val Ala Lys Pro Gin lie Lys Ala Ser Lys Thr Thr Val Thr 290 295 300

Gly Asp Lys Asp Ser Val Asn Leu Thr Cys Ser Thr Asn Asp Thr Gly 305 310 315 320 lie Ser lie Arg Trp Phe Phe Lys Asn Gin Ser Leu Pro Ser Ser Glu 325 330 335

Arg Met Lys Leu Ser Gin Gly Asn He Thr Leu Scr lie Asn Pro Val 340 345 350

Lys Arg Glu Asp Ala Gly Thr Tyr Trp Cys Glu Val Phe Asn Pro lie 355 360 365

Ser Lys Asn Gin Ser Asp Pro lie Met Leu Asn Val Asn Tyr Asn Ala 370 375 380

Leu Pro Gin Glu Asn Leu He Asn Val Asp Leu Glu Val Leu Phe Gin 385 390 395 400

Gly Pro Gly Ser Gly Leu Asn Asp lie Phe Glu Ala Gin Lys lie Glu 405 410 415

Trp His Glu Ala Are Ala His His His His His His <210> 159 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> PMS22 <400> 159 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat •39· 149901-序列表.doc 201121994 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 160 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 引子 1C8 <400> 160 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttctatcatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 161 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 3E1 <400> 161 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttcgtggatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 162 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> 2D7 <400> 162 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 24.0 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttctattggt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 149901-序列表.doc -40- 201121994 tea <210> 163 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 163 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac tttgctcatt actttcagac tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea <210> 164 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 164 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac ttegettatt actttcagac tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea <210> 165 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 165 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggat ttegegtatt accttgaggc tatggactac tggggccaag ggaccacgat caccgtctcc tea <210> 166 <211> 363 -41 - 149901-序列表.doc 201121994 <212> mA <213>人工序列 <220> <223>113全(5)19 <400> 166 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgctgtgt attactgtgc gagatgggac 300 gcctttgagt acgtgaaggc gctggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 167 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>113全(5)8 <400> 167 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggat 300 ttctttgagt attttaagac tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 168 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>113全(5)28 <400> 168 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 tttttttatt aegtgeagae tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 169 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>113全(5)27 149901·序列表.doc 42- 201121994 <400> 169 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggat 300 ttttcttatt acgttgaggc gatggactac tggggccaag ggaccacagt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 170 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <2M> H4E9重鏈 <400> 170 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggta tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaatacca aaactggaga ggcaacttat 180 attgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa jggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttetatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 171 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC14 (B9) <400> 171 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggta tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaagtggaga ggcaacctat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttetatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 172 <211> 363 <2I2> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC15 (F9) <400> 172 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtatggta tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacga aatctggaga ggcaacctat 180 149901-序列表.doc •43· 201121994 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccltggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea <210> 173 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 2 <400〉 173 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact eagtatteta tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatac ataaacacca aaaatggaga ggcaaactat gltgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea <210> 174 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 11 <400> 174 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtatggta tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaaatggaga ggcaacctat attgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc tea <210> 175 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 13 <400> 175 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggta tgaactgggt gcgacaggcc cctggacaag ggcttgagtg gatgggatat ataaacacca aaaatggaga ggcaaactat gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggacg cctctgtcag cacggcatat ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac ttctatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc -44- 149901-序列表.doc 201121994 tea 363 <210> 176 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 14 <400> 176 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtatggta tgaactgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatat ataaacacca aaaatggaga ggcaaactat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgccgtgt attactgtgc gagatgggac 300 ttetatgatt acgtggaggc tatggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 177 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> H3全(5) 19 <400> 177 caggtgcaat tggtgcaatc tgggtctgag ttgaagaage ctggggcctc agtgaaggtt 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcact gagtttggaa tgagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg ataaacacca aaactggaga ggcaacatat 180 gttgaagagt ttaagggacg gtttgtcttc tccttggaca cctctgtcag cacggcatat 240 ctgcagatca gcagcctaaa ggctgaagac actgctgtgt attactgtgc gagatgggac 300 gcctttgagt aegtgaagge gctggactac tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360 tea 363 <210> 178 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC21 (3A1) <400> 178 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtgc caatgtgggt aataatgttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctatttg gcctccaacc gctccggtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agetegagat caagcgtacg 330 <210> 179 <211> 330 <232> DNA <213>人工序列 149901-序列表.doc 45- 201121994 <220> <223〉 pAC19 (2C6) <400> 179 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtaa gaatgtgggg actaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac cUagcccct gatctacctg gcatcctacc cccagattgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcccctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 180 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC18 (2F1) <400〉 180 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtgc ggctgtgggt acgtatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctattcg gcatcctacc gcaaaagggg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 181 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC23 (2F11) <400> 181 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gatagcgagt actaatgttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctattgg gcatcctacc gctatagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 182 <2]1> 330 <2i2> DNA <213>人工序列 <220> <223> H4E9輕鏈 <400> 182 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gaatgtgggt actaatgttg cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagcccct gatctattcg gcatcctacc gctacagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 149901·序列表.doc • 46· 201121994 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 183 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> L2D2 <400> 183 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca caatgtgggt accaacgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctattcg gcatcccacc ggtacagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 184 <21]> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC6 (Cl) <40p> 184 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gattatgggt cctaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctatttg gcatcctacc acgaaagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 185 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC7 (E10) <400> 185 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca aattgtgggt actaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctattcg gcatcccacc gtcccagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 > > > > 012 3 ΟΛ ΛΖ 2 2 V\/ < < 186 330 DNA 人工序列 <220> 149901-序列表.doc 47- 201121994 <223> pAC12 (H7)' <400> 186 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gaaggtgctt actaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctatttg gcatcctacc gctacagtgg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 187 <211> 330 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223> pAC13 (Hll) <400> 187 gatatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atcacttgca aggccagtca gactgtgagt gctaatgttg cgtggtatca gcagaaacca 120 gggaaagcac ctaagctcct gatctacttg gcatcctacc gctacagagg agtcccatca 180 aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagatttcg caacttacta ctgtcaccaa tattacacct atcctctatt cacgtttggc 300 cagggcacca agctcgagat caagcgtacg 330 <210> 188 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> PMS22 <400> 188

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser GIu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe TTir Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Gly Glu Ala Τ.Γ Tyr Va. Glu Glu Phe

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 G.ndv^^Val ^ Va, Ser Ser -48- 149901·序列表.doc 201121994 <210> 189 <2Π> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 1C8 <400> 189

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 .

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Va) Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg 丁rp Asp Phe Tyr His Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 190 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> 3E1 <400> 190

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 -49· 149901-序列表.doc 201121994

Ala Arg Trp Asp Phe Val Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 191 <211> 121 <212〉 PRT c213>人工序列 <220> <223> 2D7 <400> 191

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Trp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 192 <211> 121 <212> PRT <2Π>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 192

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys G.y Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr A.a Tyr -50- 149901-序列表.doc 201121994

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala GIu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Ala His Tyr Phe Gin Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 193 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 193

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Phe Gin Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 194 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>親和力成熟重鏈 <400> 194

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 •51 · 149901-序列表.doc 201121994

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe SO 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Ala Tyr Tyr Leu Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr lie Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 195 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>113全(5)19 <400> 195

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala I 5 JO 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Oly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 G^TrpI.eAsnThr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val G,u G.u Phe

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Ala Phe Glu Tyr Val Lys Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 196 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>>13全(5)8 <400> 196

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30 -52- 1499(H·序列表.doc 201121994

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Phe Glu Tyr Phe Lys Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Va] Ser Ser 115 120 <210> 197 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H3全(5) 28 <400> 197

Gin Val Gin Leu Val Gin Set Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Phe Tyr Tyr Val Gin Thr Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115. 120 <210> 198 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>113全(5)27 <400> 198 •53- 149901-序列表.doc 201121994

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Ser Tyr Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 199 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H4E9重鏈 <400> 199

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp He Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr lie Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 > > > Q 1 λ 3 2 2 2 < < v< 200 121

PRT 人工序列 • 54· 149901·序列表.doc 201121994 <m> <223> pAC14 (B9) <400> 200

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Ser Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 201 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC15 (F9) <400> 201

Gin.Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Ser Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50. 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 no

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 •55- 149901·序列表.doc 201121994 <210> 202 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 2 <400> 202

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 203 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 11 <400> 203

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Thr Tyr lie Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Vai Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 -56- 149卯1-序列表.doc 201121994

Ma Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Ί^γ Val Glu Ala Met Asp Tyr Ττρ Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 204 <211> 121 <212> PR丁 <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 13 <400> 204

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Ala Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 205 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H1/H2 (5) 14 <400> 205

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Tyr 20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr lie Asn Thr Lys Asn Gly Glu Ala Asn Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70- 75 80 -57- 149901-序列表.doc 201121994

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Phe Tyr Asp Tyr Val Glu Ala Met Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 206 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H3全(5)19 <400> 206

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Glu Phe 20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Trp lie Asn Thr Lys Thr Gly Glu Ala Thr Tyr Val Glu Glu Phe 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Leu Gin lie Ser Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Trp Asp Ala Phe Glu Tyr Val Lys Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110

Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 207 <211> 110 <2]2> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC21 (3A1) <400> 207

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Ala Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45 • 58 - 149901·序列表.doc 201121994

Tyr Leu Ala Ser Asn Arg Ser Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 208 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC19 (2C6) <400> 208

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 δ 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Lys Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu He 35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Tyr Pro Gin lie Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 209 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC18 (2F1) <400> 209

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Ala Ala Val Gly Thr Tyr 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Lys Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 -59- 149901-序列表.doc 201121994

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 210 <211> 110 <2i2> PRT <213>人工序列 <220〉 <223> pAQ3 (2F11) <400〉 210

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin lie Ala Ser Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys Arg Thr 100 .105 110 <210> 211 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> H4E9輕鏈 <400> 211

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 •60- 149901-序列表.doc 201121994

Ser Gly Ser G!y Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 212 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <22.3> L2D2 <400> 212

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser His Asn Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser His Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 213 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC6 (Cl) <400> 213

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin lie Met Gly Pro Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Tyr His Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 •61 - 149901-序列表.doc 201121994

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 214 <231> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC7 (E10) <400〉 214

Asp He Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser-Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin lie Val Gly Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ser Ala Ser His Arg Pro Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 215 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC12 (H7) <400> 215

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Lys Val Leu Thr Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 • 62· 149901·序列表.doc 201121994

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His Gin Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 <210〉 216 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223> pAC13 (Hll) <400> 216

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Lys Ala Ser Gin Thr Val Ser Ala Asn 20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Leu Ala Ser Tyr Arg Tyr Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys His G!n Tyr Tyr Thr Tyr Pro Leu 85 90 95

Phe Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 110 -63- 149901-序列表.doc

Claims

201121994 七、申請專利範圍： 1 _ 一種抗原結合分子（ABM) ’其包含一種包含一或多個互補決定區（CDR)之人類化親和力成熟抗原結合域，其中該抗原結合域特異性結合膜結合型人類癌胚抗原 (CEA)，且其中該抗原結合域與鼠類單株抗體PR1A3結 ' 合相同抗原決定基或能夠與該鼠類單株抗體PR1A3競爭結合。 2. 如請求項1之分子，其中該ABM對CEA之親和力大於該未親和力成熟之親本ABM至少約2倍至約10倍。 3. 如請求項1或請求項2之分子，其中該ABM以低於約1 μΜ 至約0.001 ηΜ之KD值結合於人類CEA。 4. 如請求項3之分子，其中該親和力成熟抗原結合分子以低於約100 ηΜ之KD值結合。 5. 如請求項1或請求項2之分子，其中該ABM對可溶性CEA 不具有實質交叉反應性。 6. 如請求項1或請求項2之分子，其包含至少一個選自由以下組成之群的重鏈或輕鏈CDR : SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、 SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 8、SEQ ID . NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO: 17、 SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 149901.doc 201121994 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、 SEQ ID NO: 31 及 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、 SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55及 SEQ ID NO: 56，或其組合。 7. 如請求項6之分子，其中該至少一個CDR為重鏈CDR。 8. 如請求項1或請求項2之分子，其中該抗原結合域包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含：選自由以下組成之群的重鏈CDR1 : SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、 SEQ ID NO: 10及 SEQ ID NO: 12，及選自由以下組成之群的重鏈CDR2 : SEQ ID NO: 13、 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及 SEQ ID NO: 24，及選自由以下組成之群的重鏈CDR3 : SEQ ID NO: 25、 SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ -2- 149901.doc 201121994 ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及 SEQ ID NO: 35 = 9. 如請求項1或請求項2之分子，其中該抗原結合域包含輕鏈可變區，該輕鏈可變區包含：選自由以下組成之群的輕鏈CDR1 : SEQ ID NO: 36、 SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44及 SEQ ID NO: 45，及選自由以下組成之群的輕鏈CDR2 : SEQ ID NO: 46及 SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO·· 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54及 SEQ ID NO: 55，及 SEQ ID NO: 56 之輕鏈 CDR3。 10. 如請求項9之分子，其中該重鏈可變區包含： SEQ ID NO: 9 ； SEQ ID NO: 15 ;及 SEQ ID NO: 25 ；其中該輕鏈可變區包含： SEQ ID NO: 45 ； SEQ ID NO: 55 ;及 SEQ ID NO: 56。 11. 如請求項1或請求項2之分子，其中該抗原結合域包含一種包含以下序列之重鏈可變區： 149901.doc 201121994 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEX^MX^RQAPGQ GLEWMGX4INTKX5GEAXfiYX7EEFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLK AEDTAVYYCARWDX8X?XI0YXnX12X13XwDYWGQGTTVTVSS 其中X1為Y或F ; X2為S或G ; X3為N或S ; X4為W或Y ; X5為N、T或S; X6為T或N; X7為V或I; X8為F或A; X9 為 Y、A、V、F或 S ; X1G為D、H、W、E或 Y;X"為 V、 L 或 F; X12為 E、K或 Q; X13 為 A或 T; X14為 M或 L。 12.如請求項11之分子，其中該重鏈可變區包含SEQ ID NO 107之序列。 13. 如請求項1或請求項2之分子，其中該抗原結合域包含一種包含以下序列之輕鍵可變區： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASX,5XI6X17Xl8X,9X20VAWYQQKP GKAPKX^LIYX^ASX^X^X^X^GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPED FATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK 其中 X15為Q、A、K或 η ; X16為N、A、Y、I、K、T或 F; X17為V、A、ο或 Μ; X18為G、S、Τ或 L·; X19為 Τ、 Ν、Ρ 或 A ; X2G 為 Ν 或 Υ ; X21 為 ρ 或 L ; X22 為 S、L 或 W ; X23 為 Y、N 或 H ; x24 為 R、L、p 或 Η ; X25 為 Y、S、Q、 K、E、F 或 P ; X26為 s、G、I 或 R。 14. 如請求項13之分子’其中該輕鏈可變區包含SEq id NO 108之序列》 15. 如請求項1或請求項2之分子，其中該抗原結合域包含一種包含SEQ ID NO: 1〇7序列的重鏈可變區，及一種包含 SEQ ID NO: 108序列的輕鏈可變區。 16. 如請求項1或請求項2之分子，其中該abm包含至少一個來源於人類生殖系免疫球蛋白基因之構架區。 149901.doc -4- 201121994 17. 如請求項16之分子，其中該ABM包含SEQ ID NO: 102之重鏈構架區FR1-3及SEQ ID NO: 1 06之輕鏈構架區FR1-3 ° 18. —種變異型抗原結合分子（ABM)，其包含一種包含一或多個互補決定區（CDR)之抗原結合域，其中該抗原結合域特異性結合膜結合型人類癌胚抗原（CEA)，其中該變異型ABM包含至少一個胺基酸取代在至少一個CDR中，其有助於該變異型ABM與親本ABM相比增強之結合親和力，其中該親本ABM包含該鼠類PR1A3抗體之至少一個 CDR，其中該變異型八8]^與該？111八3抗體結合相同抗原決定基或能夠與該PR1A3抗體競爭結合於膜結合型 CEA，且其中該變異型ABM不包含SEQ ID NO: 1-4中任一序列。 19. 如請求項18之分子，其中該變異型ABM對可溶性CEA不具有實質交叉反應性。 20. 如請求項18或請求項19之分子，其中該變異型ABM對 CEA之結合親和力大於該親本ABM至少約2倍至約10 倍。 21. 如請求項18或請求項19之分子，其中該變異型ABM以低於約1 μΜ至約0.001 nM之結合親和力KD結合人類CEA。 22. 如請求項18或請求項19之分子，其中該變異型ABM具有低於約100 nM之KD。 23. 如請求項18或請求項19之分子，其中該親本ABM包含該鼠類PR1A3抗體之所有六個CDR，且其中該變異型ABM 149901.doc 201121994 包含一或多個胺基酸取代在該至少兩個CDR中。 24. 如請求項18或請求項19之分子，其中該變異型ABM包含至少一個選自由以下組成之群的CDR : SEQ ID NO: 1、 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 8、 SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、 SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31 及 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、 SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、 SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55及 SEQ ID NO: 56，或其組合。 25. 如請求項24之分子，其中該至少一個CDR為重鏈CDR。 26. 如請求項18或請求項19之分子，其中該抗原結合域包含重鏈可變區，該重鏈可變區包含：選自由以下組成之群的重鏈CDR1 : SEQ ID NO: 1、 149901.doc -6- 201121994 SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、 SEQ ID NO: 10及 SEQ ID NO: 12，及選自由以下組成之群的重鏈CDR2 : SEQ ID NO: 13、 SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO·· 22、SEQ ID NO: 23及 SEQ ID NO: 24，及選自由以下組成之群的重鏈CDR3 : SEQ ID NO: 25、 SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及 SEQ ID NO: 35 ° 27. 如請求項18或請求項19之分子，其中該抗原結合域包含一種包含SEQ ID NO: 107序列的重鏈可變區。 28. 如請求項18或請求項19之分子，其中該抗原結合域包含輕鍵可變區，該輕鍵可變區包含：選自由以下組成之群的輕鏈CDR1 : SEQ ID NO: 36、 SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44及 SEQ ID NO: 45，及選自由以下組成之群的輕鏈CDR2 : SEQ ID NO: 46及 SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID 149901.doc 201121994 NO: 53、SEQ ID NO: 54及 SEQ ID NO: 55，及 SEQ ID NO: 56 之輕鏈 CDR3。 29.如請求項28之分子，其中該抗原結合域包含一種包含 SEQ ID NO: 108序列的輕鏈可變區。 3 0.如請求項18或請求項19之分子，其中該抗原結合域包含： SEQ ID NO: 9 ； SEQ ID NO: 15 ;及 SEQ ID NO: 25 ；其中該輕鏈可變區包含： SEQ ID NO: 45 ； SEQ ID NO: 55 ;及 SEQ ID NO: 56。 31. 如請求項30之分子，其中該抗原結合域包含一種包含 SEQ ID NO: 107序列的重鏈可變區，及一種包含SEQ ID NO: 108序列的輕鏈可變區。 32. 如請求項18或請求項19之分子，其中該變異型ABM包含至少一個來源於人類生殖系免疫球蛋白基因之構架區。 33_如請求項32之分子，其中該變異型ABM包含SEQ ID NO: 102之重鏈構架區FR1-3及來源於SEQ ID NO: 106之輕鏈構架區FR1-3。 34. 如請求項1、2、18及19中任一項之分子，其中該ABM或該變異型ABM包含Fc區。 35. 如請求項34之分子，其中該Fc區為人類IgG Fc區。 149901.doc 201121994 36. 如請求項34之分子，其中Fc區為經糖基工程改造之Fc 區。 37. 如請求項36之分子，其中該Fc區中N-連接型寡醣之至少約20%至約1〇〇%為非岩藻糖基化寡醣。 38·如請求項36之分子，其中該Fc區中N-連接型寡酿之至少約20%至約1〇〇%為對分寡瞻。 39. 如請求項36之分子，其中該Fc區中N-連接型寡醣之至少約20%至約50%為對分非岩藻糖基化寡醣。 40. 如請求項36之分子，其中該ABM或該變異型ABM具有至少一種增強之效應功能。 41. 如請求項40之分子’其中該至少一種增強之效應功能係選自由以下組成之群：Fc受體結合親和力增強、抗體介導之細胞毒性（ADCC)增強、對NK細胞之結合增強、對巨噬細胞之結合增強、對單核細胞之結合增強' 對多形核細胞之'結合增強、誘導細胞凋亡之直接信號傳導增強、樹突狀細胞成熟增加及T細胞激活（priming)增強。 42. 如請求項41之分子’其中該增強之效應功能為増強 ADCC或增強對NK細胞之結合。 43. 如請求項42之分子，其中該ABM或變異型ABM與該親本抗原結合分子相比ADCC增強至少約40%至約100%。 44. 如請求項1、2、18及19中任一項之分子，其中該ABM或該變異型ABM為選自由以下組成之群的抗體或其片段：完整抗體、scFv片段、Fv片段、F(ab，）2 片段、微型抗體、雙功能抗體（diabody)、三功能抗艘 149901.doc 201121994 (triabody)及四功能抗體（tetrabody)。 45. 如請求項1、2、18及19中任一項之分子，其中與該親本ABM相比，該ABM或該變異型ABM在疾病動物模型中使最大存活時間增加至少約10天至約120 天。 46. 如請求項45之分子，其中該疾病動物模型為使用LSI 74T 人類結腸直腸癌細胞之小鼠腫瘤異種移植模型。 47. 如請求項1、2、18及19中任一項之分子，其中在活體外細胞毒性檢定中，該ABM或該變異型 ABM使ADCC增強至少約10%至約100%。 48. 如請求項1、2、18及19之分子，其中該ABM或該變異型ABM在既定濃度下誘導ADCC 效能為該鼠類PR1A3抗體至少約10倍至約1000倍。 49. 如請求項48之分子，其中ADCC係由活體外細胞毒性檢定測量。 5 0. —種經分離之多肽，其包含特異性結合膜結合型CEA之抗原結合域，其中該抗原結合域包含一或多個選自由以下組成之群的CDR序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO: 14、 SEQ ID NO: 15、SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 149901.doc -10- 201121994 24、 SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、 SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、及 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34、SEQ ID NO: 35、SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、 SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、 SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55及 SEQ ID NO: 56，或其組合。 51. —種經分離之多肽，其包含第一序列及第二序列，其中該第一序列包含一或多個選自由以下組成之群的CDR序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NOM3、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 15、 SEQ ID NO: 16、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO: 18、SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO·· 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 25、 SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27、SEQ ID NO: 28、 SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31、及 SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34及 SEQ ID NO: 35 ;及 149901.doc -11 - 201121994 其中該第二序列包含一或多個選自由以下組成之群的 CDR序歹丨J : SEQ ID NO: 36、SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 38、SEQ ID NO: 39、SEQ ID NO: 40、SEQ ID NO: 41、SEQ ID NO: 42、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、 SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49、SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52、SEQ ID NO: 53、SEQ ID NO: 54、SEQ ID NO: 55及SEQ ID NO: 56 ;其中該多肽特異性結合膜結合型CEA。 52. —種經分離之多肽，其包含與選自由SEQ ID NO: 101、 105、107、108及188-216組成之群的序列至少約80%至約100%—致之序列，其中該多肽特異性結合於膜結合型 CEA。 53. —種對膜結合型CEA具有特異性之人類化抗原結合分子，其包含如請求項45至52中任一項之多肽。 54. 如請求項53之人類化抗原結合分子，其中該人類化抗原結合分子對可溶性CEA不具有實質交叉反應性。 5 5. —種特異性結合於膜結合型CEA之抗體，該抗體包含 SEQ ID NO: 107之重鏈可變區及SEQ ID NO: 108之輕鏈可變區，其中該抗體與鼠類PR1 A3抗體相比具有增強之 ADCC。 56.如請求項55之抗體，其中該抗體包含已經糖基工程改造之Fc區。 5 7.如請求項55或56之抗體，其中該抗體對可溶性CEA不具 149901.doc -12- 201121994 有實質交叉反應性。 58.如請求項55或56之抗體，其中與該鼠類pR1A3抗體相比’該抗體在疾病動物模型中使最大存活時間增加至少約1 〇天至約120天。 5 9.如請求項5 5或5 6之抗體’其中在活體外細胞毒性檢定中’該抗體使ADCC增強至少約10%至約1〇〇%。 60. —種經分離之聚核苷酸，其編碼如請求項45至52中任一項之多肽。 61 · —種組合物，其包含第一經分離之聚核苷酸序列及第二經分離之聚核苷酸序列，其中該第一經分離之聚核苷酸序列與選自由SEQ ID NO: 113、119及159-177組成之群的序列至少約80°/。至約100°/。一致，且其中該第二經分離之聚核苷酸序列與選自由SEQ ID NO: 117、120及178-187組成之群的序列至少約80%至約1 〇〇% 一致，其中該等聚核苷酸編碼特異性結合於膜結合型CEA之多肽。 62.如請求項61之組合物’其中該第一經分離之聚核苷酸為 SEQ ID NO: 119，且其中該第二經分離之聚核苷酸為 SEQ ID NO: 120。 63 ·如請求項6 1之組合物，其中該第一經分離之聚核苷酸編碼SEQ ID NO: 107之多肽，且其中該第二經之分離聚核苷酸編碼SEQ ID NO: 108之多肽。 64. —種經分離之聚核苷酸，其編碼對膜結合型ceA具有特異性之多肽，其中該聚核苷酸包含一或多個選自由SEQ ID NO: 57-77組成之群的重鏈CDR編碼序列。 149901.doc •13· 201121994 65 ·如凊求項64之經分離之聚核苷酸，纟中該聚核苷酸包含與SEQ ID NO: 119至少約80%至約1〇〇。/。一致之序列。 66. 種經分離之聚核苷酸，其編碼對膜結合型CEA具有特八丨生之夕肽，其中該聚核苷酸包含一或多個選自由SEq ID NO: 78-98組成之群的輕鏈CDR編碼序列。 67. 如請求項66之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含與SEQ ID NO: 120至少約80%至約1〇〇%一致之序列。 68. —種載體，其包含如請求項6〇至67中任一項之聚核苷酸。 69. 如請求項68之載體，其中該載體為選殖載體或表現載體。 70. 如請求項68之載體，其中該載體為適用於製備噬菌體呈現庫之載體。 71. —種宿主細胞’其包含如請求項68至7〇中任一項之載體。 72. —種宿主細胞，其包含第一經分離之聚核苷酸及第二經分離之聚核苷酸’其中該第一經分離之聚核苷酸包含選自由SEQ ID NO: 113、119及159-177組成之群的序列，且其中該第二經分離之聚核苷酸包含選自由SEQ ID NO: 8及SEQ ID NO: 117、120及178-187組成之群的序列。 73· —種產生特異性結合膜結合型人類CEA之ABM的方法，該方法包含： (a)如請求項71或請求項72之宿主細胞在培養基中在允許該聚核苷酸表現之條件下培養，其中該聚核苷酸編碼 149901.doc 201121994 形成該ABM之部分的多肽；及 (b)回收該ABM，其中該ABM或其部分與鼠類單株抗體州幻結合柄同抗原決定基，或能夠與該鼠類單株抗體pRiA3競爭結合〇 74. 75. 76. 77. 78. -種組合物’其包含如請求項ι17〇^49中任1 之ΑΒΜ，如請求項18至49中任—項之變異型麵，或如請求項55至59中任-項之抗體，及醫㈣上可接受劑。一種誘導腫瘤細胞發生細胞溶解之活體外方法該方法包含使該腫瘤細胞與如請求項1至17或34至49中任—項之ΑΒΜ、如請求項18至49中任—項之變異型αβμ、如社求項55至59中任一項之抗體，或如請求項74之組合物：觸。如請求項75之活體外方法，其中該腫瘤細胞係選自由以下組成之群：結腸直腸癌細胞、NSCLC(非小細胞肺癌）、胃癌細胞、胰腺癌細胞及乳癌細胞。如請求項75之活體外方法’其中該細胞溶解係由該 ABM、變異型ABM之抗體依賴性細胞毒性所誘導。 -種診斷個體疾病之活體外方法，該方法包含投與該個體有效量之診斷劑，其令該診斷劑包含如請求項'1 或34至49中任一項之ABM、如請求項18至49中任一變異型ABM，或如請求項55至59中任一項之抗體，=之許僧測該珍斷劑與CEA之複合物的標記。 149901.doc -15· 201121994 79.如請求項78之活體外方法，其中該標記為成像劑。 8〇· —種如請求項1至49中任一項之分子、如請求項“至” 中任一項之抗體或如請求項74之組合物的用途，其係用於製造用於增加患有異常表現CEA之癌症之個體之存活時間的藥物。 81. 如請求項80或81之用途，其中該癌症係選自由結腸直腸癌、非小細胞肺癌（NSCLC)、胃癌、胰腺癌及乳癌組成之群。 82. —種如請求項1至49中任一項之分子、如請求項55至59 中任一項之抗體或如請求項74之組合物的用途，其係用於製造在個體體内誘導異常表現CEA之腫瘤消退的藥物。 83. 如請求項82之用途，其中該腫瘤為選自由結腸直腸癌、非小細胞肺癌（NSCLC)、胃癌、胰腺癌及乳癌組成之群的癌症。 84·如請求項80至83中任一項之用途其中該ABM或該變異型ABM係與化學療法或放射療法組合投與。 85. 如請求項80至83中任一項之用途，其中該ABM或該變異型ABM或該組合物係與化學治療劑一起投與。 86. 如請求項80至83中任一項之用途，其中該個體為人類。 87. —種如請求項丄至的中任一項之分子、如請求項55至59 中任一項之抗體或如請求項74之組合物的用途，其係用於製造用於抑制異常表現CEA之腫瘤細胞之CEA介導之細胞黏著的藥物。 149901.doc 201121994 88_ —種如請求項1至17或34至49中任一項之ABM、如請求項18至49中任一項之變異型ABM、如請求項55至59中任一項之抗體、或如請求項74之組合物的用途，其係用於製造用於治療患有異常表現CEA之癌症之個體的藥物。 89. 如請求項88之用途，其中該癌症係選自由結腸直腸癌、非小細胞肺癌（NSCLC)、胃癌、胰腺癌及乳癌組成之群。 90. 如請求項64之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含： a) 選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 57、SEQ ID NO: 58、SEQ ID NO: 59、SEQ ID NO: 61 ;及 b) 選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 63、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66 ;及 c) 選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 67、SEQ ID NO: 68、SEQ ID NO: 69、SEQ ID NO: 70、SEQ ID NO: 71 ' SEQ ID NO: 72 ' SEQ ID NO: 73 ' SEQ ID NO: 74、SEQ ID NO: 75、SEQ ID NO: 76、SEQ ID NO: 77。 91. 如請求項90之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 58 ； SEQ ID NO: 64 ;及 SEQ ID NO: 67。 92. 如請求項90之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含 149901.doc -17- 201121994 SEQ ID NO: 119之序列。 93. 如請求項66之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含： a) 選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 78、SEQ ID NO: 79、SEQ ID NO: 80、SEQ ID NO: 81、SEQ ID NO: 82、SEQ ID NO: 83、SEQ ID NO: 84、SEQ ID NO: 85、SEQ ID NO: 86、SEQ ID NO: 87 ;及 b) 選自由以下組成之群的序列：SEQ ID NO: 88、SEQ ID NO: 89、SEQ ID NO: 90、SEQ ID NO: 91、SEQ ID NO: 92、SEQ ID NO: 93、SEQ ID NO: 94、SEQ ID NO: 95、SEQ ID NO: 96、SEQ ID NO: 97 ;及 c) SEQ ID NO: 98之序列。 94. 如請求項93之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含： SEQ ID NO: 87 ； SEQ ID NO: 97 ;及 SEQ ID NO: 98。 95. 如請求項93之經分離之聚核苷酸，其中該聚核苷酸包含 SEQ ID NO: 120之序列。 149901.doc 18-