JP2013502913A - 親和性成熟ヒト化抗ceaモノクローナル抗体 - Google Patents
親和性成熟ヒト化抗ceaモノクローナル抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013502913A JP2013502913A JP2012526072A JP2012526072A JP2013502913A JP 2013502913 A JP2013502913 A JP 2013502913A JP 2012526072 A JP2012526072 A JP 2012526072A JP 2012526072 A JP2012526072 A JP 2012526072A JP 2013502913 A JP2013502913 A JP 2013502913A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- abm
- sequence
- antibody
- cea
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3007—Carcino-embryonic Antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
- C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
癌胎児性抗原(CEA、CEACAM−5又はCD66eとしても知られている)は約180kDaの分子量を有する糖タンパク質である。CEAは免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)アンカーを介して細胞膜にリンクされている7つのドメインを含む(Thompson J.A., J Clin Lab Anal. 5:344-366, 1991)。7つのドメインは、単一のN末端Ig可変ドメイン及びIg定常領域に相同な6つのドメイン(A1-B1-A2-B2-A3-B3)を含む(Hefta L J,ら、 Cancer Res. 52:5647-5655, 1992)。
オリゴ糖成分は、物理的安定性、プロテアーゼ攻撃に対する抵抗性、免疫系との相互作用、薬物動態学、及び特異的生物学的活性を含む、治療用糖タンパク質の効力に関連する特性に有意に影響を与える。このような特性は、オリゴ糖の存在又は非存在に依存するのみならず、オリゴ糖の特異的構造にもまた依存する可能性がある。オリゴ糖構造と糖タンパク質機能との間のある程度の一般化がなされ得る。例えば、特定のオリゴ糖構造は、特異的炭水化物結合タンパク質との相互作用を通して血流からの糖タンパク質の急速なクリアランスを媒介するが、他の構造は、抗体によって結合され得、そして望ましくない免疫反応を誘発し得るJenkinsら、 Nature Biotechnol. 14:975-81, 1996)。
定義
本明細書において用いられる用語は、下記に別に定義されていなければ、一般的に当該技術分野で用いられている。
1)このアッセイは、抗体の抗原結合領域によって認識される標的抗原を発現することが知られている標的細胞を使用する;
2)このアッセイは、エフェクター細胞として、ランダムに選択された健常ドナーの血液から単離されたヒト末梢血単球細胞(PBMC)を使用する;
3)このアッセイは以下のプロトコールに従って使用される。
i)PBMCを、標準的な密度遠心分離手順を使用して単離し、RPMI細胞培養培地中、5×106細胞/mlで懸濁する;
ii)標的細胞を、標準的な培養方法によって増殖させ、90%よりも高い生存度を有する指数増殖期から収集し、RPMI細胞培養培地中で洗浄し、100マイクロキュリーの51Crで標識し、細胞培養培地で2回洗浄し、そして105細胞/mlの密度で細胞培養培地中に再懸濁する;
iii)100マイクロリットルの上記の最終的な標的細胞懸濁物を、96ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに移す;
iv)抗体を、細胞培養培地中で4000ng/mlから0.04ng/mlまで段階希釈し、得られる抗体溶液の50マイクロリットルを96ウェルマイクロタイタープレート中の標的細胞に加えて、上記の全体の濃度範囲を網羅する種々な抗体濃度を3通りで試験する;
v)最大放出(MR)コントロールのために、標識された標的細胞を含む、プレート中の3つのさらなるウェルは、抗体溶液(上記の要点iv)の代わりに、50マイクロリットルの2%(V/V)非イオン性界面活性剤(Nonidet,Sigma,St.Louis)の水溶液を受容する;
vi)自発性放出(SR)コントロールのために、標識された標的細胞を含む、プレート中の3つのさらなるウェルに、抗体溶液(上記の要点iv)の代わりに、50マイクロリットルのRPMI細胞培養培地を受容する;
vii)次いで、96ウェルマイクロタイタープレートを、50×gで1分間遠心分離し、そして1時間4℃でインキュベートする;
viii)50マイクロリットルのPBMC懸濁液(上記の要点i)を各ウェルに加えて25:1のエフェクター:標的細胞比を生じ、そしてプレートをインキュベーター中、5% CO2大気、37℃下に4時間配置する;
ix)各ウェルからの無細胞上清を収集し、実験的に放出された放射能をガンマカウンターを使用して定量する;
x)特異的溶解のパーセンテージを、計算式(ER−MR)/(MR−SR)×100に従って各抗体について計算し、ここで、ERは抗体濃度について定量された平均放射能(上記の要点ixを参照のこと)であり、MRはMRコントロール(上記の要点vを参照のこと)についての定量された平均放射能(上記の要点ixを参照のこと)であり、そしてSRはSRコントロール(上記の要点viを参照のこと)についての定量された平均放射能(上記の要点ixを参照のこと)である;
4)「ADCCの増加」は、上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの増加、及び/又は上記の試験された抗体濃度範囲内で観察される特異的溶解の最大パーセンテージの半分を達成するために必要とされる抗体の濃度の減少のいずれかとして定義される。ADCCの増加は、上記のアッセイを用いて測定される、当業者に公知である同じ標準的な産生、精製、製剤、及び保存の方法を使用して、同じ型の宿主細胞によって産生される、同じ型の抗体によって媒介されるADCCに比例するが、これは、GnTIIIを過剰発現するように操作された宿主細胞によって産生されなかった。
CEAは、長い間診断目的のために癌マーカーとして使用されている。それは同一の細胞型の非腫瘍組織に比べて多くの腫瘍組織内において異常に発現される(例えば、細胞内で異なるパターンで過剰発現されるか及び/又は分布している)。しかしながら、CEAは、一般的に腫瘍細胞表面から切断され、使用可能な抗CEA抗体のほとんどはまた、可溶性CEAに結合されているので、CEAに対する非抱合型抗体は一般に、治療目的のために使用されてはいない。たとえば、現在パイロット試験にある抗CEA抗体は放射抱合体として投与される (Wongら、2004; Lierschら、 2007)。
IgG1ヌクレオチド配列(配列番号121)
ACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGCAGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGATGAGCTGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTAAATGA
IgG1アミノ酸配列(配列番号122)
TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
一態様において、本発明は、抗原結合分子及びマウスPR1A3抗体と同じ結合特異性(例えば、膜結合CEAの同じエピトープに結合する)を有し、及び相当するか又は改良された生物学的活性(例えば、膜結合CEAに対する改善された親和性及び/又は強化されたADCC)を有するポリペプチドに関する。一実施態様では、抗原結合分子は、下記の表2に記載のCDRの一つ又は複数を含む。より具体的な実施態様では、抗原結合分子は、下記表2の3つの重鎖CDRを含む。別の具体的な実施態様では、抗原結合分子は、下記表2の3つの軽鎖CDRを含む。別の特定の実施態様において、本発明は、(a)配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号11、及び配列番号12からなる群から選択される重鎖CDR1配列:(b)配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、及び配列番号24からなる群から選択される重鎖CDR2配列:(c)配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、及び配列番号35からなる群から選択される重鎖CDR3配列:を含む膜結合ヒトCEAに対して特異的な抗原結合分子に向けられている。別の具体的な実施態様において、本発明は、(a)配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44及び配列番号45からなる群から選択される軽鎖CDR1配列:(b)配列番号46、及び配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、及び配列番号55からなる群から選択される軽鎖CDR配列:及び(c)配列番号56の軽鎖CDR3:を含む膜結合ヒトCEAに対して特異的な抗原結合分子に向けられている。特定の実施態様では、抗原結合分子は可溶性ヒトCEAに対して実質的な交差反応性を有していない。別の実施態様では、抗原結合分子は、ヒト重鎖及び/又は軽鎖の定常領域を含む。例えば、一実施態様では、抗原結合分子は、Fc領域を含む。より具体的な実施態様では、抗原結合分子は糖鎖を操作されたFc領域を含む。本発明はまた、膜結合ヒトCEAに特異的な本発明の抗原結合分子のいずれか一をコードするポリヌクレオチドに向けられている。
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEX1X2MX3WVRQAPGQGLEWMGX4INTKX5GEAX6YX7EEFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDX8X9X10YX11X12X13X14DYWGQGTTVTVSS
ここで、X1はY又はF;X2はS又はG;X3はN又はS;X4はW又はY;X5はN,T又はS;X6はT又はN;X7はV又はI;X8はF又はA;X9はY、A、V、F又はS;X10はD、H、W、E、又はY;X11はV、L又はF;X12はE、K又はQ;X13はA又はT;及びX14はM又はLである。
具体的な実施態様では、軽鎖可変領域は、以下の通りの配列番号11の配列を有するポリペプチドを含む:
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASX15X16X17X18X19X20VAWYQQKPGKAPKX21LIYX22ASX23X24X25X26GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK
ここで、X15はQ、A、K、又はH;X16はN、A、Y、I、K、T、又はF;X17はV、A、G、又はM;X18はG、S、T、又はL;X19はT、N、P、又はA;X20はN又はY;X21はP又はL;X22はS、L、又はW;X23はY、N、又はH;X24はR、L、P、又はH;X25はY、S、Q、K、E、F、又はP;及びX26はS、G、I、又はRである。
一態様において、本発明は、発現ベクター及び/又は本発明の1つ又は複数の単離されたポリヌクレオチドを含む宿主細胞に向けられている。例えば、宿主細胞又は発現ベクターは、上記「抗CEA抗原結合分子」及び「抗CEA ABMのポリペプチド及びポリヌクレオチド」なる表題の付いた節に記載されたABM及び/又は変異体ABMのポリペプチドをコードするポリヌクレオチド又はポリヌクレオチドの何れか一つ又は複数を含む。別の態様において、本発明は、特異的に膜結合ヒトCEAに結合するABMを産生する方法に向けられており、該方法は、前記一又は複数のポリヌクレオチドの発現を可能にする条件下の培地中で、本発明の一つ又は複数の単離されたポリヌクレオチド、又は本発明の一つ又は複数の単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養することを含み、前記一つ又は複数のポリヌクレオチドはABMの一部を形成する一又は複数のポリペプチドをコードし、前記ABMを回復し、前記ABM又はその一部が同じエピトープに結合し、又はマウスモノクローナル抗体PR1A3との結合に対して競合することが可能である。
一態様において、本発明は、マウスPR1A3抗体と同じエピトープを結合し、抗体依存性細胞傷害性を含めて、増加したエフェクター機能を有するABMのグリコフォーム(例えば、変異体ABM)を提供する。抗体のグリコシル化の操作は、以前に記載されている。例えば、米国特許第6602684号を参照、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。グリコシル化に関与する遺伝子の活性を改変した宿主細胞由来のABMの産生方法も詳細に本明細書中に記載される。(例えば、「発現ベクター及び宿主細胞」なる題名の次の節を参照)。本発明のABMSのADCCの増加はまた、親和性成熟又は親和性を向上させる他の方法で、膜結合CEAに対する抗原結合分子の親和性を増加させることによって達成される(Tangら、J. Immunol. 2007, 179:2815-2823を参照)。これらのアプローチの組み合わせも本発明に包含される。
一態様にて、本発明は、グリコシル化パターンの修飾を有する本発明のABMの生成のための宿主発現系を提供する。特に、本発明は、改善された治療的価値を有する本発明のABMの糖型の生成のための宿主細胞系を提供する。それゆえに、本発明は、グリコシルトランスフェラーゼ活性を有するポリペプチドを発現するように選択又は操作された宿主細胞発現系を提供する。一実施態様において、グリコシルトランスフェラーゼ活性はGnTIII活性である。一実施態様において、GnTIII活性を有するポリペプチドは、異種ゴルジ存在性ポリペプチドのゴルジ局在化ドメインを含む融合ポリペプチドである。詳細には、このような宿主細胞発現系は、構成的又は調節されるプロモーター系に作動可能に連結された、GnTIIIを有するポリペプチドをコードする組換え核酸分子を含むように操作され得る。
PR1A3抗体と抗原結合に対して競合する能力を有する変異体ABM(例えばヒト化、親和性成熟ABM)のコード配列を含み、かつ生物学的に活性な遺伝子産物を発現する宿主細胞は、少なくとも4つの一般的アプローチ:(a)DNA−DNA又はDNA−RNAのハイブリダイゼーション;(b)「マーカー」遺伝子機能の存在又は非存在;(c)宿主細胞中のそれぞれのmRNA転写物の発現によって測定されるような転写物のレベルを評価すること;及び(d)免疫アッセイによって、又はその生物学的活性によって測定されるような遺伝子産物の検出によって同定されてもよい。
本発明はまた、CEAを発現する細胞をインビボ又はインビトロで標的とするための方法に向けらている。CEAを発現する細胞を治療目的のために標的とすることができる(例えば、免疫系による破壊のためCEA発現細胞を標的とすることで疾患を治療するために)。一実施態様において、本発明は、被験体に、本発明のABMを含む組成物を投与することを含む、CEAを発現する細胞を標的とするための方法に向けられている。CEAを発現する細胞また、診断目的のために標的とされ得る(例えば、それらがCEAを正常又は異常に発現しているかどうかを決定することなど)。従って、本発明はまた、CEAの存在又はCEAを発現する細胞を検出するための方法に向けられている。本発明によればCEAの発現を検出する一つの方法は、ABM及びCEAとの複合体の形成を可能にする条件下で、テストする試料を必要に応じてコントロール試料と、本発明のABMと、接触させることを含む。複合体形成は、その後(例えば、ELISA又は当技術分野で公知の他の方法により)検出される。試験試料とともにコントロール試料を用い、試験試料及びコントロール試料を比較する場合、ABM−CEA複合体の形成における任意の統計的な有意差は、被験試料中のCEAの存在を示している。
一態様において、本発明は、本発明のABMSを含む薬学的組成物及び薬学的に許容される担体に向けられている。本発明は更に、癌などの疾患の治療法、及び癌などの疾患の治療のための医薬の製造における、そうした薬学的組成物の使用に向けられている。具体的には、本発明は、疾患の治療のための方法、より具体的には、癌の治療のための方法に向けられており、該方法は本発明の薬学的組成物の治療有効量を投与することを含む。
含む。投与されるべきアンタゴニストの治療的有効量は、そうした考慮に左右される。
実施例1
親和性成熟ライブラリの生成
H1/H2ライブラリー
HCDR1及びHCDR2領域における無作為化された親和性成熟ライブラリの生成のために、CDR1中の位置F32 G33、CDR2中の位置W50 N52 T52a K52b T54 E56 T58をコード化するトリプレットが無作為に選ばれた。最初の工程で、DNA断片(断片1)は、テンプレートとしてpMS22及び無作為化CDR1の位置を含むプライマーMS−43とEAB−679(図11及び表6)を用いて増幅された。同じテンプレートを使用して、プライマーMS−56及びMS−52は、断片1の3’末端との重複領域を有する第二断片(断片2)を増幅した。増幅条件は、最初の5分間94℃でのインキュベーション工程が含まれ、その後、断片1及び断片2のそれぞれにおいて、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び20秒間及び50秒間の72℃伸長工程を含む各サイクルが25サイクル続いた。最後に、最終の10分間72℃のインキュベーション工程が実施された。両断片はアガロースゲル上で精製された。プライマーMS−43とEAB−680を使用して、断片1と2による重複伸長PCRは、CDR2の無作為化位置を含み、無作為化された両方のCDRを持つ断片を生成した(断片3)。断片1及び2のアセンブリに対して、断片1及び断片2の等モル量が使用された。増幅条件は、最初の5分間94℃のインキュベーション工程を含み、その後プライマー無しで、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び40秒間72℃の伸長工程の各サイクルが5サイクル続いた。外側のプライマーを添加した後、さらに20サイクルが同じパラメータを用いて実施された。断片3の3 '領域と重なった第4断片(断片4)が、テンプレートとして再びpMS22、及びプライマーMS−55及びMS−52を用いたPCR増幅された。ゲル精製した後、最終的なオーバーラップ伸長PCRは、テンプレートとして断片3及び4、及びプライマーMS−43及びMS−52を使用して、CL及びVHの一部分を含む断片を生成した。このために、断片3及び断片4の等モル量を用いた。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後プライマー無しで、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び80秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが5サイクル続いた。外側のプライマーを添加した後、更に20サイクルが同じパラメータを用いて実施された。得られた断片は次いでゲル精製及びNcoI/NheI消化後にpMS22と連結された。
LCDR1及びLCDR2領域における無作為化された親和性成熟ライブラリの生成のために、CDR1中の位置Q27、N28、V29、G30 T31 N32、CDR2中の位置Y49 S50 Y53 R54 Y55 S56をコード化するトリプレットが無作為に選ばれた。最初の工程で、DNA断片(断片1)は、テンプレートとしてpMS22及び無作為化CDR1の位置を含むプライマーEAB−685及びEAB−681(図12及び表6)を用いて増幅された。同じテンプレートを使用して、プライマーEAB−686及びEAB−687は、断片1の3’末端との重複領域を有する第二断片(断片2)を増幅した。増幅条件は、最初の5分間94℃でのインキュベーション工程が含まれ、その後、断片1及び断片2のそれぞれにおいて、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び60秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが25サイクル続いた。最後に、最終の10分間72℃のインキュベーション工程が実施された。両断片はアガロースゲル上で精製された。プライマーEAB−685及びEAB−682を使用して、断片1と2による重複伸長PCRは、CDR2の無作為化位置を含み、無作為化された両方のCDRを持つ断片を生成した(断片3)。断片1及び2のアセンブリに対して、断片1及び断片2の等モル量が使用された。増幅条件は、最初の5分間94℃のインキュベーション工程を含み、その後プライマー無しで、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び60秒間72℃の伸長工程の各サイクルが5サイクル続いた。外側のプライマーを添加した後、さらに20サイクルが同じパラメータを用いて実施された。断片3の3 '領域と重なった第4断片(断片4)が、テンプレートとして再びpMS22、及びプライマーEAB−688及びEAB−687を用いたPCR増幅された。ゲル精製した後、最終的なオーバーラップ伸長PCRは、テンプレートとして断片3及び4、及びプライマーEAB−685及びEAB−687を使用して、VL及びCHの一部分を含む断片を生成した。このために、断片3及び断片4の等モル量を用いた。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後プライマー無しで、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び80秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが5サイクル続いた。外側のプライマーを添加した後、更に20サイクルが同じパラメータを用いて実施された。得られた断片は次いでゲル精製及びHindIII/SacI消化後にpMS22と連結された。
HCDR3領域内の無作為化された親和性成熟ライブラリーを生成するために、位置W95、D96、F97、Y98、D99、Y100、V100a、E100b、A100c、及びM100dをコードするトリプレットは、2つの異なるアプローチに無作為化された。:(1)セグメント全体(H3完全ライブラリー)の無作為化、又は(2)各位置の個々の無作為化は10個のサブライブラリ−を与えた。個別に無作為化された位置を持つクローンを含むサブライブラリ−は、細菌(H3プールライブラリ−)への形質転換の後にプールされた。HCDR3領域の無作為化のために、断片は、CLの3’末端でアニールされたプライマー及びHCDR3の無作為化配列(図13)を含むプライマーを用いてPCR増幅された。次いで重複伸長PCRが、断片1の3’末端と重なり、VHの終端及びCH1の5’領域を含む第二の断片を用いて行われた。集合断片はSacI/NheI消化後pMS22へ連結された。H3プールライブラリを生成するために、10個のDNA断片は、プライマーEAB−749と組み合わせてプライマーAC7−AC16の各々を用いて別個にPCR増幅された。L3完全ライブラリを生成するために、プライマーAC17及びEAB−749が使用された。プラスミドpMS22が、テンプレートとして使用された。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び36秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが25サイクル続き、その後最終の10分間72℃のインキュベーション工程が続いた。これによりアガロースゲル上で精製した約580bp長の断片を得た。重複伸長PCRのために、第二の断片はEAB−752と組み合わせて、EAB−750又はEAB−751の何れかのプライマーを用いて増幅された。プライマーEAB−750は、無作為化プライマーAC7−11と重複配列を有し、一方EAB−751は無作為化プライマーAC12−17と配列相同性を共有していた。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び12秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが25サイクル続き、その後最終の10分間72℃のインキュベーション工程が続いた。得られた断片はおよそ180bp長であった。両方の断片の集合に対して、断片1及びそれに対応する断片2の等モル量が使用された。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び60秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが5サイクル続いた。外側のプライマーEAB−749及びEAB−752を添加した後、更に20サイクルが同じパラメータを用いて実施された。最後に、最後の10分間72℃でのインキュベーション工程が実施された。ゲル精製断片は次いでSacI/NheI消化後にpMS22へ連結され、精製されたライゲーションが電気穿孔法によりTG1細菌に形質転換された。
軽鎖のCDR3領域内の無作為化された親和性成熟ライブラリーを生成するために、位置Y91、Y92、T93、Y94、及びL95aをコードするトリプレットは、セグメント全体(L3完全ライブラリー)又は各々の何れかで無作為化され、5個のサブライブラリ−を得た。個別に無作為化された位置を持つクローンを含むサブライブラリ−は、細菌(L3プールライブラリ−)への形質転換の後にプールされた。5個のサブライブラリ−の生成のために、5個のDNA断片が、プライマーMS43との組み合わせでプライマーAC1−AC5のそれぞれを用いてPCR増幅された。L3完全ライブラリ−を生成するために、AC6及びMS43のプライマーの組み合わせが使用された(図14)。プラスミドpMS22が、テンプレートとして使用された。増幅条件は最初の5分間94℃インキュベーション工程を含み、その後、1分間94℃の変性、1分間55℃のアニーリング、及び25秒間72℃の伸長工程を含む各サイクルが25サイクル続き、その後最終の10分間72℃のインキュベーション工程が続いた。VLドメインの位置1から104までを包含する得られた断片はアガロースゲル上で精製され、追加のPCR増幅のテンプレートとして使用された。全ての反応は上記と同じ条件を用いて無作為化プライマー及びMS43との重複配列を有するプライマーEAB−746で実施された。精製断片並びにpMS22はNcoI/XhoIで消化された。全5個のサブライブラリについて、0.5μgの挿入は、0.5μgのpAC16と連結された。L3完全ライブラリ−について、ライゲーションは9.8μgの挿入及び9.8μgのpMS22により実施された。精製されたライゲーションは電気穿孔法によってTG1細菌に形質転換された。
マウス及びヒト化PR1A3抗体の両方が膜結合CEAのみを認識するが、可溶性ヒトCEAを与えないので、PR1A3のエピトープを含む組換えキメラタンパク質はヒト化PR1A3のインビトロ親和性成熟のために生成された(配列番号7及び8)。このハイブリッドタンパク質の生成はSteward ら(1999)に記載の通り行われた。簡潔には、ヒトの胆汁糖タンパク質(BGP)のBドメインのDNA配列が、PR1A3のエピトープを含むヒトCEA−B3ドメインの配列に置き換えられた。その結果、配列は、BGPのN及びA1ドメイン、CEAのB3ドメイン及びBGPのA2ドメインを含むハイブリッドタンパク質をコードしている(N−A1−B3−A2、huNABA)。この融合産物は、次いでヒトIgG1のFc部分にリンクされるか(huNABA−Fc) (Stewardら、Cancer Immunol Immunother, 47:299-306, 1999)、又は正確なプロテアーゼ切断部位、aviタグ及び(His)6タグをコードする配列に融合するか(huNABA−avi−his) (配列番号158)の何れかであった。huNABA−Fcは、プロテインAカラムを用いて安定的にトランスフェクトしたCHO細胞株の培養上清から精製された。huNABA−avi−hisは、安定してEBV由来タンパク質EBNAを発現するHEK293細胞に一時的にトランスフェクトした。同時にビオチンリガーゼをコードする同時形質移入されたプラスミドは、インビトロでaviタグ固有のビオチン化を可能とした。タンパク質は、その後、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー(IMAC)、続いてゲル濾過により精製された。
QLTTESMPFNVAEGKEVLLLVHNLPQQLFGYSWYKGERVDGNRQIVGYAIGTQQATPGPANSGRETIYPNASLLIQNVTQNDTGFYTLQVIKSDLVNEEATGQFHVYPELPKPSISSNNSNPVEDKDAMAFTCEPETQDTTYLWWINNQSLPVSPRLQLSNGNRTLTLLSVTRNDTGPYECEIQNPVSANRSDPVTLNVTYGPDTPTISPPDSSYLSGANLNLSCHSASNPSPQYSWRINGIPQQHTQVLFIAKITPNNNGTYACFVSNLATGRNNSIVKSITVSALSPVVAKPQIKASKTTVTGDKDSVNLTCSTNDTGISIRWFFKNQSLPSSERMKLSQGNITLSINPVKREDAGTYWCEVFNPISKNQSDPIMLNVNYNALPQENLINVDLEVLFQGPGSGLNDIFEAQKIEWHEARAHHHHHH
親和性成熟ヒト化PR1A3 Fabの生成は、標準プロトコルを使用して、ファージディスプレイによって行われた (Silacci ら、Proteomics, 5(9):2340-2350, 2005)。親和性成熟ライブラリーによる選択は以下の手順に従って溶液中で実施された:[1].各親和性成熟ライブラリーのおよそ1012ファージミド粒子を100nMのビオチン化huNABA−avi−hisに1ミリリットルの総体積で0.5時間結合させ、[2].ビオチン化huNABA−avi−his及び特異的に結合したファージ粒子を、5.4×107のストレプトアビジン被覆磁気ビーズの3分間の添加により、捕獲し、[3].ビーズを5−10×1mlPBS/Tween20及び5−10×1mlPBSを用いて洗浄し、[4].1mlの100mMのTEA(トリエチルアミン)を10分間の添加によりファージ粒子を溶出し、及び500ulの1Mトリス/HCl pH7.4を加えることによる中和し、及び、[5].指数関数的に増殖する大腸菌TG1細菌を再感染させ、ヘルパーファージVCSM13により感染させ、続いて、その後の選択のラウンドで使用されるファージミド粒子をPEG/NaCl沈殿させる。選択は一定又は減少する抗原濃度(10−7Mから2x10−9M)のいずれかを使用して、3から5回のラウンドで行われた。ラウンド2において、抗原:ファージ複合体の捕捉が、ストレプトアビジンビーズの代わりにニュートラアビジンプレートを用いて行われた。特異的バインダーは、次のようにELISAにより同定した:ウエルあたり10nMのビオチン化huNABA−avi−hisの100μlはニュートラビジンプレート上に被覆された。Fabを含む細菌の上清が添加され、結合したFabは抗フラグ/HRP二次抗体を使用して、フラグ-タグを介して検出された。ELISA陽性クローンを96穴フォーマットに可溶性Fab断片として細菌に発現させ、BIACORE T100を使用して、SPR分析により、上清は動力学的スクリーニング実験にかけられた。最も高い親和性定数を持つFabを発現するクローンを同定し、対応するファージミドが配列決定された。
動力学パラメータの正確な分析のために、Fabを細菌培養から精製した。500mlの培養は播種され、OD600が0.9にて1mMのIPTGで誘導した。細菌は25℃で一晩インキュベートし、遠心分離によって回収した。再懸濁したペレットを25mlのPPB緩衝液(30mMトリス−HCl PH8、1mMのEDTA、20%ショ糖)で20分間のインキュベーションした後、細菌は再び遠心分離し、上清を回収した。このインキュベーション工程は、5mMのMgSO4溶液25mlで一回繰り返した。両方のインキュベーション工程の上清をプールし、ろ過し、IMACカラム(His gravitrap、GE Healthcare)にロードされた。その後、カラムを40体積で洗浄した。溶出した後に(500mMのNaCl、500mMのImidazole、20mMのNaH2PO4 、pH7.4) 、溶出液はPD10カラム(GE Healthcare)を使用して再バッファリングされた。精製されたFabの速度論的パラメータは、200nmから6.25nMの範囲にあった希釈列にてSPR分析により調べられた。
PR1A3抗体は、ヒトIgG1/kappa定常領域を持たせるようにキメラ化され、及びFcにおいて高度にフコシル化された糖を持たせるためにGylcoMab技術を用いて発現された。糖鎖を操作された抗体及び糖鎖は操作されてない抗体は、エフェクターとターゲットの比率が25:1で比較された。抗体依存性標的細胞死滅の最大量は、Fc領域の糖鎖操作により倍増した(図2)。細胞死滅の更なる増加はエフェクターとターゲットの比を増加させることにより達成された(図2)。
Claims (97)
- 1つ以上の相補性決定領域(CDR)を含む、ヒト化、親和性成熟抗原結合ドメインを含む抗原結合分子(ABM)であって、前記抗原結合ドメインは、膜結合ヒト癌胎児性抗原(CEA)に特異的に結合し、前記抗原結合ドメインはマウスモノクローナル抗体PR1A3と同じエピトープに結合するか、又はマウスモノクローナル抗体PR1A3と結合を競合することが可能である抗原結合分子。
- 前記ABMは、親和性成熟されていない親ABMより、CEAに対して少なくとも約2倍から約10倍高い親和性を有する、請求項1に記載のABM。
- 前記ABMは約1μMから約0.001nMよりも低いKD値でヒトCEAに結合する、請求項1又は請求項2に記載のABM。
- 前記親和性成熟抗原結合分子は約100nMより低いKD値で結合する、請求項3に記載のABM。
- 前記ABMは可溶性CEAに対して実質的に交差反応性を持たない、請求項1から4の何れか一項に記載のABM。
- 配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、及び配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、及び配列番号56、又はその組合わせからなる群から選択される、少なくとも一つの重鎖又は軽鎖CDRを含む、請求項1から5の何れか一項に記載のABM。
- 前記少なくとも一つのCDRは重鎖CDRである、請求項6に記載のABM。
- 前記抗原結合ドメインが、
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、及び配列番号12からなる群から選択される重鎖CDR1、及び
配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、及び配列番号24からなる群から選択される重鎖CDR2、及び
配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、及び配列番号35からなる群から選択される重鎖CDR3を含む、
重鎖可変領域を含む、請求項1から7の何れか一項に記載のABM。 - 前記抗原結合ドメインが、
配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、及び配列番号45、からなる群から選択される軽鎖CDR1、及び
配列番号46、及び配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、及び配列番号55からなる群から選択される軽鎖CDR2、及び
配列番号56の軽鎖CDR3を含む、
軽鎖可変領域を含む、請求項1から8の何れか一項に記載のABM。 - 前記重鎖可変領域が、
配列番号9、
配列番号15、及び
配列番号25、
を含み、及び
前記軽鎖可変領域が、
配列番号45、
配列番号55、及び
配列番号56
を含む、請求項9に記載のABM。 - 前記抗原結合ドメインが、
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTEX1X2MX3WVRQAPGQGLEWMGX4INTKX5GEAX6YX7EEFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARWDX8X9X10YX11X12X13X14DYWGQGTTVTVSS
の配列を含む重鎖可変領域を含み、
ここで、X1はY又はF;X2はS又はG;X3はN又はS;X4はW又はY;X5はN、T又はS;X6はT又はN;X7はV又はI;X8はF又はA;X9はY、A、V、F又はS;X10はD、H、W、E、又はY;X11はV、L又はF;X12はE、K又はQ;X13はA又はT;及びX14はM又はL
である、請求項1から5の何れか一項に記載のABM。 - 前記重鎖可変領域が配列番号107の配列を含む、請求項11に記載のABM。
- 前記抗原結合ドメインが、
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASX15X16X17X18X19X20VAWYQQKPGKAPKX21LIYX22ASX23X24X25X26GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCHQYYTYPLFTFGQGTKLEIK
の配列を含む軽鎖可変領域を含み、
ここで、X15はQ、A、K、又はH;X16はN、A、Y、I、K、T、又はF;X17はV、A、G、又はM;X18はG、S、T、又はL;X19はT、N、P、又はA;X20はN又はY;X21はP又はL;X22はS、L、又はW;X23はY、N、又はH;X24はR、L、P、又はH;X25はY、S、Q、K、E、F、又はP;及びX26はS、G、I、又はR
である、請求項1から5の何れか一項に記載のABM。 - 前記軽鎖可変領域が配列番号108の配列を含む、請求項13に記載のABM。
- 前記抗原結合ドメインが配列番号107の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号108の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1から14の何れか一項に記載のABM。
- 前記ABMがヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子に由来する少なくとも一つのフレームワーク領域を含む、請求項1−15の何れか一項に記載のABM。
- 前記ABMが配列番号102の重鎖フレームワーク領域FR1−3、及び配列番号106の軽鎖フレームワーク領域FR1−3を含む、請求項16に記載のABM。
- 一以上の相補性決定領域(CDR)を含む抗原結合ドメインを含む変異体抗原結合分子(ABM)であって、前記抗原結合ドメインは膜結合ヒト癌胎児性抗原(CEA)に特異的に結合し、前記変異体ABMは、親ABMと比べて変異体ABMの結合親和性の増加に寄与する少なくとも一つのCDRにおいて、少なくとも一つのアミノ酸置換を含み、親ABMはマウスPR1A3抗体の少なくとも一つのCDRを含み、前記変異体ABMはPR1A3抗体と同じエピトープに結合するか、又は膜結合CEAへの結合のためにPR1A3抗体と競合することが可能であり、前記変異体ABMは配列番号1から4の何れか一つの配列を含まない、変異体抗原結合分子。
- 前記変異体ABMは可溶性CEAに対して実質的な交差反応性を持たない、請求項18に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMは前記親ABMより少なくとも約2倍から約10倍強い、CEAに対する結合親和性を有する、請求項18又は請求項19に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMは、約1μMから約0.001nMより低いKDの結合親和性でヒトCEAに結合する、請求項18から20の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMは、約100nMより低いKDを持つ、請求項18から20の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記親ABMはマウスPR1A3抗体の6つのCDR全てを含み、及び前記変異体ABMは前記少なくとも2つのCDRにおいて一以上のアミノ酸置換を含む、請求項18から22の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMは、
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号8、配列番号10、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、及び配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、及び配列番号56、又はその組合わせからなる群から選択される少なくとも一つのCDRを含む、請求項18から23の何れか一項に記載の変異体ABM。 - 前記少なくとも一つのCDRは重鎖CDRである、請求項24に記載の変異体ABM。
- 前記の抗原結合ドメインが、
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、及び配列番号12、からなる群から選択される重鎖CDR1、及び
配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、及び配列番号24、からなる群から選択される重鎖CDR2、及び
配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、配列番号32、配列番号33、配列番号34、及び配列番号35からなる群から選択される重鎖CDR3
を含む重鎖可変領域を含む、請求項24又は請求項25に記載の変異体ABM。 - 前記抗原結合ドメインが配列番号107の配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項24から26の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記の抗原結合ドメインが、
配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、及び配列番号45からなる群から選択される軽鎖CDR1及び
配列番号46、及び配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、及び配列番号55からなる群から選択される軽鎖CDR2及び
配列番号56の軽鎖CDR3
を含む軽鎖可変領域を含む、請求項18から27の何れか一項に記載の変異体ABM。 - 前記抗原結合ドメインが配列番号108の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項28に記載の変異体ABM。
- 前記抗原結合ドメインが
配列番号9、
配列番号15、及び
配列番号25
を含み、及び
前記軽鎖可変領域が、
配列番号45、
配列番号55、及び
配列番号56
を含む、請求項24から29の何れか一項に記載の変異体ABM。 - 前記抗原結合ドメインが配列番号107の配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号108の配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項30に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMがヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子に由来する少なくとも一つのフレームワーク領域を含む、請求項18から24の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記変異体ABMが配列番号102の重鎖フレームワーク領域FR1−3、及び配列番号106に由来する軽鎖フレームワーク領域FR1−3を含む、請求項32に記載の変異体ABM。
- 前記ABM又は前記変異体ABMがFc領域を含む、請求項1から17の何れか一項に記載のABM、又は請求項18から33の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記Fc領域がヒトIgGのFc領域である、請求項34に記載のABM又は変異体ABM。
- Fc領域が糖鎖を操作されたFc領域である、請求項34又は請求項35に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記Fc領域中のN結合オリゴ糖の少なくとも約20%から約100%がフコシル化されてない、請求項36に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記Fc領域中のN結合オリゴ糖の少なくとも約20%から約100%が二分されている、請求項36に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記Fc領域中のN結合オリゴ糖の少なくとも約20%から約50%が二分され、フコシル化されてない、請求項36に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記ABM又は変異体ABMが少なくとも一つの増加したエフェクター機能を有する、請求項36から39の何れか一項に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記少なくとも一つの増加したエフェクター機能は、Fcレセプター結合親和性の増加、抗体依存性細胞傷害(ADCC)の増加、NK細胞への結合の増加、マクロファージへの結合の増加、単球への結合の増加、多形核細胞への結合の増加、直接的シグナル伝達誘導性アポトーシス、樹状細胞の成熟の増加、及びT細胞プライミングの増加からなる群から選択される、請求項40に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記増加したエフェクター機能はADCCの増加、又はNK細胞への結合の増加である、請求項41に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記ABM又は変異体ABMが、前記親抗原結合分子に比較して少なくとも約40%から約100%のADCCの増加を有する、請求項34から42の何れか一項に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが、全抗体、scFv断片、Fv断片、F(ab’)2断片、ミニボディ(minibodies)、ダイアボディ(diabodies)、トリアボディ(triabodies)、及びテトラボディ(tetrabodies)からなる群から選択される、請求項1から17の何れか一項に記載のABM、又は請求項18から33の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが、疾患の動物モデルにおいて最大生存時間を前記親ABMと比較して、少なくとも約10日から約120日増加させる、請求項1から17、又は34から44の何れか一項に記載のABM、又は請求項18から44の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 疾患の前記動物モデルが、LS174Tヒト大腸癌細胞を用いたマウス腫瘍異種移植片モデルである、請求項45に記載のABM又は変異体ABM。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが、インビトロ細胞毒性試験において、少なくとも約10%から約100%、ADCCを増加させる、請求項1から17又は34から46の何れか一項に記載のABM、又は請求項18から43の何れか一項に記載の変異体ABM。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが、マウスPR1A3抗体と比較して、与えられた濃度でADCCを誘導するときに、少なくとも約10倍から約1000倍強力である、請求項1から17、又は34から47の何れか一項に記載のABM、又は請求項18から43の何れか一項に記載の変異体ABM。
- ADCCがインビトロの細胞毒性試験により測定される、請求項48に記載のABM又は変異体ABM。
- 膜結合CEAに特異的に結合する抗原結合ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記抗原結合ドメインは、
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、及び 配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、及び配列番号56、又はその組合わせ
を含む群から選択される一以上のCDR配列を含む、ポリペプチド。
- 第一配列及び第二配列を含む単離されたポリペプチドであって、前記第一配列は、
配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号5、配列番号6、配列番号7、配列番号8、配列番号9、配列番号10、配列番号12、配列番号13、配列番号14、配列番号15、配列番号16、配列番号17、配列番号18、配列番号19、配列番号20、配列番号21、配列番号22、配列番号23、配列番号24、配列番号25、配列番号26、配列番号27、配列番号28、配列番号29、配列番号30、配列番号31、and 配列番号32、配列番号33、配列番号34、及び配列番号35からなる群から選択される一以上のCDR配列を含み、及び
前記第二配列は
配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、及び配列番号56からなる群から選択される一以上のCDR配列を含み、及び
前記ポリペプチドは膜結合CEAに特異的に結合する、ポリペプチド。 - 配列番号101、105、107、108、及び188−216からなる群から選択される配列に少なくとも約80%から約100%同一である配列を含む単離されたポリペプチドであって、前記ポリペプチドが膜結合CEAに特異的に結合するポリペプチド。
- 膜結合CEAに特異的なヒト化抗原結合分子が請求項45から52の何れか一項に記載のポリペプチドを含む。
- 前記ヒト化抗原結合分子が可溶性CEAに対して実質的に交差反応性を持たない、請求項53に記載のヒト化抗原結合分子。
- 膜結合CEAに特異的に結合する抗体であって、前記抗体が配列番号107の重鎖可変領域及び配列番号108の軽鎖可変領域を含み、前記抗体がマウスPR1A3抗体と比較して増加したADCCを有する、抗体。
- 前記抗体が糖鎖を操作されたFc領域を含む、請求項55に記載の抗体。
- 前記抗体が可溶性CEAに対して実質的に交差反応性を持たない、請求項55又は56に記載の抗体。
- 前記抗体がマウスPR1A3抗体と比較して、疾患の動物モデルにおける最大生存時間を少なくとも約10日から120日増加させる、請求項55から57に記載の抗体。
- 前記抗体がインビトロ細胞毒性試験において、ADCCを少なくとも約10%から約100%増加させる、請求項55から58に記載の抗体。
- 請求項45から52の何れか一項に記載のポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド。
- 第一の単離されたポリヌクレオチド配列及び第二の単離されたポリヌクレオチド配列を含む組成物であって、前記第一の単離されたポリヌクレオチド配列が配列番号113、119、及び159−177からなる群から選択される配列と少なくとも約80%から約100%同一であり、前記第二の単離されたポリヌクレオチド配列が配列番号117、120、及び178−18からなる群から選択される配列と少なくとも約80%から約100%同一であり、前記ポリヌクレオチドが膜結合CEAに特異的に結合するポリペプチドをコードする、組成物。
- 前記第一の単離されたポリヌクレオチドが配列番号119であり、及び前記第二の単離されたポリヌクレオチドが配列番号120である、請求項61に記載の組成物。
- 前記第一の単離されたポリヌクレオチドが配列番号107のポリペプチドをコードし、及び前記第二の単離されたポリヌクレオチドが配列番号108のポリペプチドをコードする、請求項61に記載の組成物。
- 膜結合CEAに特異的なポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチドが配列番号57−77からなる群から選択される一以上の重鎖CDRをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドが配列番号119と少なくとも約80%から約100%同一である配列を含む、請求項64に記載の単離されたポリヌクレオチド。
- 膜結合CEAに特異的なポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、前記ポリヌクレオチドは配列番号78−98からなる群から選択される一以上の軽鎖CDRをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドが配列番号120と少なくとも約80%から約100%同一である配列を含む、請求項66に記載の単離されたポリヌクレオチド。
- 請求項60から67の何れか一項に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
- 前記ベクターがクローニングベクター又は発現ベクタ−である、請求項68に記載のベクター。
- 前記ベクターがファージディスプレイライブラリ−の作成に適しているベクタ−である、請求項68に記載のベクター。
- 請求項68から70の何れか一項に記載のベクターを含む宿主細胞。
- 第一の単離されたポリヌクレオチド及び第二の単離されたポリヌクレオチドを含む宿主細胞であって、前記第一の単離されたポリヌクレオチドが配列番号113、119、及び159−177からなる群から選択される配列を含み、前記第二の単離されたポリヌクレオチドが配列番号8、及び配列番号117、120、及び178−187からなる群から選択される配列を含む、宿主細胞。
- 膜結合ヒトCEAに特異的に結合するABMを産生する方法であって、前記方法が、
(a)前記ポリヌクレオチドの発現を可能にする条件下で、培地中で請求項71又は請求項72の宿主細胞を培養し、前記ポリヌクレオチドが前記ABMの一部を形成するポリペプチドをコードし、
(b)前記ABMを回復する
ことを含み、
前記ABM又はその一部分がマウスモノクローナル抗体PR1A3と同じエピトープに結合するか、又はマウスモノクローナル抗体PR1A3と結合を競合することが可能である、方法。 - 請求項1から17又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、及び薬学的に許容される担体を含む組成物。
- 腫瘍細胞の細胞溶解を誘導する方法であって、前記方法が前記腫瘍細胞を、請求項1から17又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物に接触させることを含む、方法。
- 前記腫瘍細胞が、大腸癌細胞、NSCLC(非小細胞肺癌)、胃癌細胞、膵臓癌細胞及び乳癌細胞からなる群から選択される、請求項75に記載の方法。
- 前記細胞溶解が前記ABM、変異体ABMの抗体依存性細胞傷害により誘導される、請求項75に記載の方法。
- 前記方法が、前記被検体に診断薬の有効量を投与することを含み、前記診断薬が請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、及び前記診断薬及びCEAの複合体の検出を可能にする標識を含む方法。
- 前記標識が造影剤である、請求項78に記載の方法。
- 異常にCEAを発現する癌を有する被検体を治療する方法であって、前記方法が前記被検体に、請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物の治療に有効量を投与することを含む、方法。
- 異常にCEAを発現する癌を有する被検体において生存時間を増加させる方法であって、前記方法が前記被検体に、請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物の治療に有効量を投与することを含む、方法。
- 前記癌が、大腸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、胃癌、膵臓癌及び乳癌からなる群から選択される、請求項80又は81に記載の方法。
- 異常にCEAを発現する腫瘍の退縮を被検体において誘導する方法であって、前記方法が前記被検体に、請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物の治療に有効量を投与することを含む、方法。
- 前記腫瘍が、大腸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、胃癌、膵臓癌及び乳癌からなる群から選択される癌である、請求項83に記載の方法。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが化学療法又は放射線療法と併用して投与される、請求項80から84の何れか一項に記載の方法。
- 前記ABM又は前記変異体ABMが化学療法剤と併用して投与される、請求項80から85の何れか一項に記載の方法。
- 前記被検体がヒトである、請求項78から86の何れか一項に記載の方法。
- 異常にCEAを発現する腫瘍細胞のCEA媒介性細胞接着を阻害する方法であって、前記方法が前記腫瘍細胞を、請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物の有効量と接触させることを含む、方法。
- 請求項1から17、又は34から49の何れか一項に記載のABM、請求項18から49の何れか一項に記載の変異体ABM、又は請求項55から59の何れか一項に記載の抗体、又は請求項74に記載の組成物の、異常にCEAを発現する癌を有する被検体の治療のための医薬の製造における使用。
- 前記癌が、大腸癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、胃癌、膵臓癌及び乳癌からなる群から選択される、請求項89に記載の使用。
- 前記ポリヌクレオチドが、
a)配列番号57、配列番号58、配列番号59、配列番号61からなる群から選択される配列、及び
b)配列番号62、配列番号63、配列番号64、配列番号65、配列番号66からなる群から選択される配列、及び
c)配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75、配列番号76、配列番号77からなる群から選択される配列
を含む、請求項64に記載の単離されたポリヌクレオチド。 - 前記ポリヌクレオチドが
配列番号58、
配列番号64、及び
配列番号67
を含む、請求項91に記載の単離されたポリヌクレオチド。 - 前記ポリヌクレオチドが配列番号119の配列を含む、請求項91に記載の単離されたポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドが
a)配列番号78、配列番号79、配列番号80、配列番号81、配列番号82、配列番号83、配列番号84、配列番号85、配列番号86、配列番号87からなる群から選択される配列、及び
b)配列番号88、配列番号89、配列番号90、配列番号91、配列番号92、配列番号93、配列番号94、配列番号95、配列番号96、配列番号97からなる群から選択される配列、及び
c)配列番号98の配列
を含む、請求項66に記載の単離されたポリヌクレオチド。 - 前記ポリヌクレオチドが
配列番号87、
配列番号97、及び
配列番号98
を含む、請求項94に記載の単離されたポリヌクレオチド。 - 前記ポリヌクレオチドが配列番号120の配列を含む、請求項94に記載のポリヌクレオチド。
- 明細書に記載された発明。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US23850509P | 2009-08-31 | 2009-08-31 | |
US61/238,505 | 2009-08-31 | ||
PCT/EP2010/062527 WO2011023787A1 (en) | 2009-08-31 | 2010-08-27 | Affinity-matured humanized anti cea monoclonal antibodies |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013502913A true JP2013502913A (ja) | 2013-01-31 |
JP2013502913A5 JP2013502913A5 (ja) | 2013-04-18 |
JP5744872B2 JP5744872B2 (ja) | 2015-07-08 |
Family
ID=42985489
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012526072A Expired - Fee Related JP5744872B2 (ja) | 2009-08-31 | 2010-08-27 | 親和性成熟ヒト化抗ceaモノクローナル抗体 |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9068008B2 (ja) |
EP (1) | EP2473532B1 (ja) |
JP (1) | JP5744872B2 (ja) |
KR (1) | KR101528013B1 (ja) |
CN (1) | CN102741293B (ja) |
AR (1) | AR078111A1 (ja) |
AU (1) | AU2010288469A1 (ja) |
BR (1) | BR112012003983A2 (ja) |
CA (1) | CA2770174A1 (ja) |
CL (1) | CL2012000551A1 (ja) |
CO (1) | CO6491105A2 (ja) |
CR (1) | CR20120087A (ja) |
EC (1) | ECSP12011698A (ja) |
HK (1) | HK1176951A1 (ja) |
IL (1) | IL218038A0 (ja) |
MA (1) | MA33536B1 (ja) |
MX (1) | MX339608B (ja) |
PE (1) | PE20121552A1 (ja) |
RU (1) | RU2570554C2 (ja) |
SG (1) | SG178567A1 (ja) |
TW (1) | TW201121994A (ja) |
WO (1) | WO2011023787A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201200954B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014509200A (ja) * | 2011-03-02 | 2014-04-17 | ロシュ グリクアート アーゲー | Cea抗体 |
Families Citing this family (36)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5992710A (ja) * | 1982-11-16 | 1984-05-29 | 関西電力株式会社 | 直接水冷線路の立坑部の布設方法 |
MXPA04001072A (es) | 2001-08-03 | 2005-02-17 | Glycart Biotechnology Ag | Variantes de glicosilacion de anticuerpos que tienen citotoxicidad celulares dependiente de anticuerpos incrementada. |
EP2673294B1 (en) | 2011-02-10 | 2016-04-27 | Roche Glycart AG | Mutant interleukin-2 polypeptides |
US20120258073A1 (en) | 2011-02-10 | 2012-10-11 | Christian Gerdes | Immunotherapy |
EA201892619A1 (ru) * | 2011-04-29 | 2019-04-30 | Роше Гликарт Аг | Иммуноконъюгаты, содержащие мутантные полипептиды интерлейкина-2 |
PL2748202T3 (pl) | 2011-08-23 | 2018-12-31 | Roche Glycart Ag | Dwuswoiste cząsteczki wiążące antygen |
LT2748201T (lt) | 2011-08-23 | 2018-02-26 | Roche Glycart Ag | Dvigubai specifinė t ląsteles aktyvinantį antigeną surišanti molekulė |
CN107586340B (zh) | 2011-08-23 | 2022-01-21 | 罗切格利卡特公司 | 对t细胞活化性抗原和肿瘤抗原特异性的双特异性抗体及使用方法 |
WO2013054320A1 (en) * | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Tel Hashomer Medical Research Infrastructure And Services Ltd. | Antibodies to carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule (ceacam) |
GB201213858D0 (en) | 2012-08-03 | 2012-09-19 | Mab Design Ltd | Method |
EP2882777B1 (en) | 2012-08-07 | 2018-10-10 | Roche Glycart AG | Composition comprising two antibodies engineered to have reduced and increased effector function |
EP2904016B1 (en) | 2012-10-08 | 2018-11-14 | Roche Glycart AG | Fc-free antibodies comprising two fab-fragments and methods of use |
WO2014131711A1 (en) | 2013-02-26 | 2014-09-04 | Roche Glycart Ag | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
CN104936986B (zh) | 2013-02-26 | 2019-08-09 | 罗切格利卡特公司 | 双特异性t细胞活化性抗原结合分子 |
EP3444278A1 (en) | 2013-02-26 | 2019-02-20 | Roche Glycart AG | Bispecific t cell activating antigen binding molecules |
US11427647B2 (en) | 2014-04-27 | 2022-08-30 | Famewave Ltd. | Polynucleotides encoding humanized antibodies against CEACAM1 |
PL3137502T3 (pl) | 2014-04-27 | 2021-03-08 | Famewave Ltd. | Humanizowane przeciwciała przeciwko CEACAM1 |
DK3177643T3 (da) | 2014-08-04 | 2019-07-15 | Hoffmann La Roche | Bispecifikke T-celle-aktiverende antigenbindende molekyler |
EP4141032B1 (en) | 2014-11-20 | 2024-05-29 | F. Hoffmann-La Roche AG | Combination therapy of t cell activating bispecific antigen binding molecules and pd-1 axis binding antagonists |
AR106188A1 (es) | 2015-10-01 | 2017-12-20 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos anti-cd19 humano humanizados y métodos de utilización |
MA43025A (fr) | 2015-10-02 | 2021-05-26 | Hoffmann La Roche | Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène activant les lymphocytes t anti-ceaxcd3 |
BR112018003984A2 (pt) | 2015-12-09 | 2018-09-25 | Hoffmann La Roche | anticorpos |
PL3400246T3 (pl) | 2016-01-08 | 2021-03-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Sposoby leczenia nowotworów z dodatnim markerem cea z wykorzystaniem antagonistów wiążących oś pd-1 oraz przeciwciał dwuswoistych anty-cea/anty-cd3 |
DK3433280T3 (da) | 2016-03-22 | 2023-06-19 | Hoffmann La Roche | Protease-aktiverede T-celle-bispecifikke molekyler |
CN107663240B (zh) * | 2016-07-29 | 2021-01-12 | 中国人民解放军第四军医大学 | 高度糖基化cea特异性结合的单链抗体及其在检测和治疗上的应用 |
WO2018060301A1 (en) | 2016-09-30 | 2018-04-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Bispecific antibodies against cd3 |
CA3089287A1 (en) | 2018-02-08 | 2019-08-15 | Genentech, Inc. | Bispecific antigen-binding molecules and methods of use |
TW202115124A (zh) | 2019-06-26 | 2021-04-16 | 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 | 結合至cea之新穎抗原結合分子 |
EP3992211A4 (en) * | 2019-06-26 | 2023-01-04 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | ANTI-CEA ANTIBODIES AND ITS USE |
CN110713539B (zh) * | 2019-09-23 | 2021-04-16 | 华道(上海)生物医药有限公司 | 一种抗癌胚抗原的抗体及其制备方法和用途 |
CN110862456B (zh) * | 2019-09-23 | 2021-04-09 | 华道(上海)生物医药有限公司 | 一种抗癌胚抗原的抗体及其制备方法和用途 |
MX2022016069A (es) | 2020-06-19 | 2023-02-02 | Hoffmann La Roche | Anticuerpos que se unen a cd3 y cd19. |
AU2021329375A1 (en) | 2020-08-20 | 2023-04-20 | A2 Biotherapeutics, Inc. | Compositions and methods for treating ceacam positive cancers |
JP2023538114A (ja) | 2020-08-20 | 2023-09-06 | エー2 バイオセラピューティクス, インコーポレイテッド | メソテリン陽性がんを治療するための組成物及び方法 |
WO2023147426A2 (en) * | 2022-01-27 | 2023-08-03 | Janssen Biotech, Inc. | Enhanced protein compositions |
WO2023180489A1 (en) | 2022-03-23 | 2023-09-28 | Synaffix B.V. | Antibody-conjugates for targeting of tumours expressing carcinoembyronic antigen |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995006067A1 (en) * | 1993-08-21 | 1995-03-02 | Imperial Cancer Research Technology Limited | Monoclonal antibodies for use in diagnosis and treatment of colorectal cancer |
US6602684B1 (en) * | 1998-04-20 | 2003-08-05 | Glycart Biotechnology Ag | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
Family Cites Families (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5859205A (en) | 1989-12-21 | 1999-01-12 | Celltech Limited | Humanised antibodies |
WO1993011161A1 (en) | 1991-11-25 | 1993-06-10 | Enzon, Inc. | Multivalent antigen-binding proteins |
US5872215A (en) | 1991-12-02 | 1999-02-16 | Medical Research Council | Specific binding members, materials and methods |
BR9207126A (pt) * | 1992-05-07 | 1995-08-29 | Sterling Winthrop Inc | Imunorreagente radioativo de marcação,composição formadora de imagem,composição terapêutica,processo para a formação de imagem diagnóstica em um sítio em um paciente e para tratar sítios de doença em um paciente,e,composição de matéria |
GB9324807D0 (en) | 1993-12-03 | 1994-01-19 | Cancer Res Campaign Tech | Tumour antibody |
US6001358A (en) | 1995-11-07 | 1999-12-14 | Idec Pharmaceuticals Corporation | Humanized antibodies to human gp39, compositions containing thereof |
US6417337B1 (en) | 1996-10-31 | 2002-07-09 | The Dow Chemical Company | High affinity humanized anti-CEA monoclonal antibodies |
US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
EP2275540B1 (en) | 1999-04-09 | 2016-03-23 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Method for controlling the activity of immunologically functional molecule |
CN101676400A (zh) | 2000-07-31 | 2010-03-24 | 比洛克西治疗公司 | 在浮萍中表达生物活性多肽 |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US6815175B2 (en) * | 2001-03-16 | 2004-11-09 | Cornell Research Foundation, Inc. | Anti-amyloid peptide antibody based diagnosis and treatment of a neurological disease or disorder |
US7321026B2 (en) | 2001-06-27 | 2008-01-22 | Skytech Technology Limited | Framework-patched immunoglobulins |
MXPA04001072A (es) | 2001-08-03 | 2005-02-17 | Glycart Biotechnology Ag | Variantes de glicosilacion de anticuerpos que tienen citotoxicidad celulares dependiente de anticuerpos incrementada. |
BR0213761A (pt) | 2001-10-25 | 2005-04-12 | Genentech Inc | Composições, preparação farmacêutica, artigo industrializado, método de tratamento de mamìferos, célula hospedeira, método para a produção de uma glicoproteìna e uso da composição |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
JP4820055B2 (ja) | 2001-12-27 | 2011-11-24 | グライコフィ, インコーポレイテッド | 哺乳動物型糖質構造を操作するための方法 |
US7432063B2 (en) | 2002-02-14 | 2008-10-07 | Kalobios Pharmaceuticals, Inc. | Methods for affinity maturation |
US20040132101A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-07-08 | Xencor | Optimized Fc variants and methods for their generation |
US20070148171A1 (en) * | 2002-09-27 | 2007-06-28 | Xencor, Inc. | Optimized anti-CD30 antibodies |
EP1485492B1 (en) | 2002-03-19 | 2011-12-21 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Gntiii (udp-n-acetylglucosamine:beta-d mannoside beta(1,4)-n-acetylglucosaminyltransferase iii) expression in plants |
AU2003236019A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-20 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Drug containing antibody composition appropriate for patient suffering from Fc Gamma RIIIa polymorphism |
WO2003085107A1 (fr) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cellules à génome modifié |
ATE503829T1 (de) | 2002-04-09 | 2011-04-15 | Kyowa Hakko Kirin Co Ltd | Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins |
WO2003085119A1 (fr) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Procede d'amelioration de l'activite d'une composition d'anticorps de liaison avec le recepteur fc$g(g) iiia |
CA2481837A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Production process for antibody composition |
US7232888B2 (en) | 2002-07-01 | 2007-06-19 | Massachusetts Institute Of Technology | Antibodies against tumor surface antigens |
KR101115797B1 (ko) * | 2002-08-01 | 2012-07-27 | 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 | 알파 태아 단백질 Immu31 항체 및 융합단백질, 및이들의 이용 방법 |
WO2004024927A1 (en) | 2002-09-12 | 2004-03-25 | Greenovation Biotech Gmbh | Protein production method |
JP4559358B2 (ja) | 2002-12-20 | 2010-10-06 | グリーンオベーション バイオテク ゲーエムベーハー | コケ細胞における異種グリコシル化タンパク質の産生 |
US7355008B2 (en) | 2003-01-09 | 2008-04-08 | Macrogenics, Inc. | Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same |
ATE475708T1 (de) | 2003-01-22 | 2010-08-15 | Glycart Biotechnology Ag | Fusionskonstrukte und deren verwendung zur produktion von antikörpern mit erhöhter fc rezeptor bindungsaffinität und effektorfunktion |
WO2004101790A1 (en) * | 2003-05-14 | 2004-11-25 | Domantis Limited | A process for recovering polypeptides that unfold reversibly from a polypeptide repertoire |
MX347590B (es) * | 2011-03-02 | 2017-05-03 | Roche Glycart Ag | Anticuerpos del cea. |
-
2010
- 2010-08-27 RU RU2012112340/10A patent/RU2570554C2/ru active
- 2010-08-27 KR KR1020127008265A patent/KR101528013B1/ko active IP Right Grant
- 2010-08-27 SG SG2012013306A patent/SG178567A1/en unknown
- 2010-08-27 CN CN201080048622.1A patent/CN102741293B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-08-27 AU AU2010288469A patent/AU2010288469A1/en not_active Abandoned
- 2010-08-27 MX MX2012002461A patent/MX339608B/es active IP Right Grant
- 2010-08-27 WO PCT/EP2010/062527 patent/WO2011023787A1/en active Application Filing
- 2010-08-27 EP EP10745651.9A patent/EP2473532B1/en active Active
- 2010-08-27 PE PE2012000266A patent/PE20121552A1/es not_active Application Discontinuation
- 2010-08-27 JP JP2012526072A patent/JP5744872B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-08-27 CA CA2770174A patent/CA2770174A1/en not_active Abandoned
- 2010-08-27 BR BR112012003983-0A patent/BR112012003983A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2010-08-30 TW TW099129130A patent/TW201121994A/zh unknown
- 2010-08-30 AR ARP100103166A patent/AR078111A1/es not_active Application Discontinuation
- 2010-08-31 US US12/872,908 patent/US9068008B2/en active Active
-
2012
- 2012-01-30 CO CO12014021A patent/CO6491105A2/es not_active Application Discontinuation
- 2012-02-08 ZA ZA2012/00954A patent/ZA201200954B/en unknown
- 2012-02-09 IL IL218038A patent/IL218038A0/en unknown
- 2012-02-20 CR CR20120087A patent/CR20120087A/es unknown
- 2012-02-27 MA MA34650A patent/MA33536B1/fr unknown
- 2012-02-28 EC ECSP12011698 patent/ECSP12011698A/es unknown
- 2012-02-29 CL CL2012000551A patent/CL2012000551A1/es unknown
-
2013
- 2013-04-15 HK HK13104510.8A patent/HK1176951A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-05-26 US US14/721,795 patent/US20160075795A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1995006067A1 (en) * | 1993-08-21 | 1995-03-02 | Imperial Cancer Research Technology Limited | Monoclonal antibodies for use in diagnosis and treatment of colorectal cancer |
US6602684B1 (en) * | 1998-04-20 | 2003-08-05 | Glycart Biotechnology Ag | Glycosylation engineering of antibodies for improving antibody-dependent cellular cytotoxicity |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
JPN6008006994; Biotechnology, (1992), 10, [7], p.779-783 * |
JPN6008006999; Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (1994), 91, [9], p.3809-3813 * |
JPN6008007005; Gene, (1996), 169, [2], p.147-155 * |
JPN6008007011; J. Immunol., (1995), 155, [4], p.1994-2004 * |
JPN6008007019; J. Immunol., (1995), 154, [7], p.3310-3319 * |
JPN6008007084; J. Mol. Biol., (1992), 226, [3], p.889-896 * |
JPN6013062086; Proteomics. 2005, Vol.5, No.9, p.2340-2350 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2014509200A (ja) * | 2011-03-02 | 2014-04-17 | ロシュ グリクアート アーゲー | Cea抗体 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL218038A0 (en) | 2012-04-30 |
US9068008B2 (en) | 2015-06-30 |
PE20121552A1 (es) | 2012-11-26 |
CA2770174A1 (en) | 2011-03-03 |
WO2011023787A1 (en) | 2011-03-03 |
ZA201200954B (en) | 2014-07-30 |
MX2012002461A (es) | 2012-03-14 |
JP5744872B2 (ja) | 2015-07-08 |
EP2473532A1 (en) | 2012-07-11 |
ECSP12011698A (es) | 2012-03-30 |
CN102741293B (zh) | 2015-04-01 |
BR112012003983A2 (pt) | 2021-09-14 |
CN102741293A (zh) | 2012-10-17 |
MA33536B1 (fr) | 2012-08-01 |
AR078111A1 (es) | 2011-10-12 |
KR101528013B1 (ko) | 2015-06-16 |
SG178567A1 (en) | 2012-04-27 |
AU2010288469A1 (en) | 2012-03-01 |
CO6491105A2 (es) | 2012-07-31 |
RU2012112340A (ru) | 2013-10-10 |
EP2473532B1 (en) | 2017-06-21 |
MX339608B (es) | 2016-05-31 |
CL2012000551A1 (es) | 2012-10-12 |
RU2570554C2 (ru) | 2015-12-10 |
US20110104148A1 (en) | 2011-05-05 |
CR20120087A (es) | 2012-03-22 |
TW201121994A (en) | 2011-07-01 |
HK1176951A1 (en) | 2013-08-09 |
US20160075795A1 (en) | 2016-03-17 |
KR20120060874A (ko) | 2012-06-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5744872B2 (ja) | 親和性成熟ヒト化抗ceaモノクローナル抗体 | |
US20220002441A1 (en) | Anti-cea antibodies | |
AU2007282923B2 (en) | Antigen binding molecules that bind EGFR, vectors encoding same, and uses thereof | |
JP5336089B2 (ja) | Egfrを結合する抗原結合分子、それをコードするベクターおよびその使用 | |
US20060223096A1 (en) | Antigen binding molecules directed to MCSP and having increased Fc receptor binding affinity and effector function | |
CA2544865A1 (en) | Cd20 antibodies with increased fc receptor binding affinity and effector function |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130301 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131224 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140320 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140328 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20140417 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20140424 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140526 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20141028 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150227 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20150309 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150407 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150430 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5744872 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |