TW201021803A - ErbB-3 (HER3)-selective combination therapy - Google Patents

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201021803 六、發明說明： 【相關申請案之交互參照】 本申請案主張2008年11月7日申請之美國臨時專利申 請案第61/1 12,549號之優先權，該文獻以全文引用的方式 併入本文中。 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於下調HER3 (及視情況存在之EGFR及 HER2中之一或多者）於細胞中的表現及/或活性之方法，該 方法包含向細胞投予有效量之靶向細胞中之HER3 mRNA 的寡聚化合物（寡聚物）及有效量之蛋白酪胺酸激酶（ρτκ ) 抑制劑或其醫藥學上可接受之衍生物。本發明進一步係關 於治療疾病之方法’該方法包含向有需要患者投予有效量 之乾向細胞中之HER3 mRNA的寡聚物及有效量ρτκ抑制 劑或其醫藥學上可接受之衍生物。本發明進一步係關於一 種醫藥組成物’其在醫藥學上可接受之賦形劑中包含有效 量之粗向HER3 mRNA之募聚物及有效量之ρτκ抑制劑或 其醫藥學上可接受之衍生物。該等組成物適用於下調hER3 (及視情況存在之EGFr及HER2中之一或多者）之表現及 /或活性及治療各種諸如癌症之疾病。 本發明提供一種靶向HER3之鎖核酸（「LNA」）寡聚物 (諸如本文所述寡聚物中之一或多者）用於製備藥物之用 返’其中s亥藥物係與蛋白酪胺酸激酶抑制劑組合用於癌症 治療。本發明提供一種包含靶向HER3之LNA寡聚物（諸 如本文所述寡聚物中之一或多者）之藥物，其中該藥物係 201021803 « 與蛋白酪胺酸激酶抑制劑組合用於癌症治療。 【先前技術】 HER3為受體酪胺酸激酶之ErbB家族之成員，該ErbB 家族包括4種不同受體：ErbB-1 ( EGFR、HER1 )、ErbB-2 (neu、HER2 )、ErbB-3 ( HER3 )及 ErbB-4 ( HER4 ) ( Yarden 等人，Nat· Hev. Mol. Cell. Biol，2001，2(2): 127-137)。此家 族之受體蛋白由細胞外配位體結合結構域、單疏水性跨膜 結構域及含有細胞質酪胺酸激酶之結構域構成。EGF家族 ❹ 中至少有12個生長因子，其與ErbB受體中之一或多者結 合且實現受體均二聚作用或雜二聚作用。二聚作用觸發配 位體結合受體之内化及再循環（或其降解）以及尤其觸發 調節細胞存活、細胞凋亡及増殖活性之下游細胞内信號傳 導路徑。熟習此項技術者認為HER3 ( ErbB3 )缺乏路胺酸 激酶活性。 近來發現EGFR、HER2及HER3與腫瘤形成有關。近 來研究展示與人類正常組織對應物相比時Egfr在許多惡 ©性人類組織中過度表現。已在乳房、肺、印巢及腎臟之腫 瘤中發現編碼EGFR之基因的過度表現、擴增、缺失及結構 重排之發生率較尚。EGFR基因在多形性神經膠母細胞瘤腫 瘤中之擴增為一種已知最一致的遺傳學改變，egfr過度表 現亦見於許多非小細胞肺癌瘤中。已在人類乳腺癌瘤中谓 測到高含量之HER3 mRNA。 針對細胞蛋白質或其他大分子且導致細胞凋亡之習知 化學治療方式通常不會鑑別出快迷分裂腫瘤細胞與急速分 5 201021803 裂正常細胞。諸如骨髓細胞及胃腸道細胞之正常細胞死亡 會導致有毒副作用。此外，來自細胞毒性化學療法之腫瘤 反應不可預知。 近來，已探測若干蛋白酪胺酸激酶抑制劑作為蛋白酪 胺酸激酶表現失調之某些癌症之選擇性療法。然而，該等 療法之功效有限’此係因為許多癌症對蛋白路胺酸激酶抑 制劑療法無反應或對抑制劑之抗性隨時間顯現^ Arora等人， (2005) J. Pharmacol, and Exp. Therapies 315(3):971-971-979 〇 需要靶向腫瘤細胞之癌症療法，該等癌症療法與習知 化學療法相比更有效且毒性較小，且與當前可用之選擇性 療法相比具有較高反應率。 【發明内容】 在某些具體實例中’本發明係關於一種醫藥組成物， 其包含：（a)由10至50個連續單體組成之寡聚物，其中鄰 近單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯，其中該寡 聚物包含具有至少10個連續單體之第一區域；其中該第— 區域之至少一個單體為核苷類似物；其中該第一區域之序 列與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比 對目標區域之反向互補序列至少80% —致；（b )蛋白酪胺 酸激酶抑制劑；及（c )醫藥學上可接受之賦形劑。 在多個具體實例中’醫藥組成物包含由以SEQ ID NO: 1 80所示之序列組成之寡聚物及蛋白酪胺酸激酶抑制劑吉 非替尼（gefitinib )。 201021803 在其他具體實例中，醫藥組成物包含：（a)由10至5〇 個連續單體組成之寡聚物之結合物，其中鄰近單體藉由磷 酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯，其中該寡聚物包含具有 至少ίο個連續單體之第一區域；其中該第一區域之至少— 個單體為核苷類似物；其中該第一區域之序列與哺乳動物 HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之 反向互補序列至少80% —致；（b )蛋白路胺酸激酶抑制劑； 及（c)醫藥學上可接受之賦形劑。

本發明進一步係關於一種抑制哺乳動物細胞增殖之方 法，該方法包含使細胞與以下接觸··（ a)有效量之由1〇至 50個連續單體組成之募聚物，其中鄰近單體藉由磷酸酯基 或硫代磷酸酯基共價鍵聯，其中該寡聚物包含具有至少⑺ 個連續單體之苐一區域；其中該第一區域之至少—個單體 為核苦類似物；且其中該第—區域之序列與哺乳動物her3 基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向

互補序列至少80%—致；及⑴有效量之蛋白路胺酸激酶 抑制劑。 在多個具體實例中，抑制哺乳動物細胞增殖之方法包 含使細胞與有效量之由以SEQ ID NO: 180所示之序列組成 之券聚物及有效量之吉非替尼接觸。 始+ ”扎鄆物體内細 胞3殖之方法，該方法包含使哺乳動物組織與以下接觸：（a ) 有效量之由10至5〇個連續單體組成之募聚物，其中鄰近 單體藉由磷酸酯基或代磷酸酯基共價鍵 丹中該寡聚 7 201021803 物包含具有至少10個連續單體之第一區域；其中該第—區 域之至少一個單體為核苷類似物；且其中該第一區域之序 列與哺乳動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比 對目標區域之反向互補序列至少8〇%一致；及（b )有效量 之蛋白酪胺酸激酶抑制劑。 在某些具體實例中，抑制哺乳動物體内細胞增殖之方 法包含使哺乳動物組織與有效量之由以SEq ID NO: 180所 不之序列組成之募聚物及有效量之吉非替尼接觸。 在多個具體實例中，抑制哺乳動物體内細胞增殖之方 法包含使哺乳動物組織與以下接觸：（a)有效量之由1〇至 50個連續單體組成之寡聚物的結合物，其中鄰近單體藉由 磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯，其中該寡聚物包含具 有至少10個連續單體之第一區域；其中該第一區域之至少 一個單體為核苷類似物；且其中該第一區域之序列與哺乳 動物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比對目標區 域之反向互補序列至少80%一致；及有效量之蛋白酪 胺酸激酶。 本發明進一步涵蓋一種治療哺乳動物癌症之方法，該 方法包含向哺乳動物投予（a)有效量之由1〇至5〇個連續 單體組成之募聚物，其中鄰近單體藉由磷酸酯基或硫代磷 酸醋基共價鍵聯，其中該寡聚物包含具有至少1〇個連續單 體之第一區域；其中該第一區域之至少一個單體為核苷類 似物；且其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺 乳動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列 201021803 ，至少_一致；及U)有效量之蛋白路胺酸激酶抑制劑。 在某些具體實例中，治療哺乳動物癌症之方法包含向 嘴乳動物投予有效置之由以SEQ ID NO: 1 80所示之序列級 成之募聚物及有效量之吉非替尼。 在多個具體實例中，癌症係選自由肺癌、前列腺癌、 乳癌、卵巢癌、結腸癌、上皮癌及胃癌組成之群。 在其他具體實例中，本發明涵蓋治療哺乳動物癌症之 方法，該方法包含向哺乳動物投予：（a )有效量之由1〇至 5 0個連續單體組成之养聚物之結合物，其中鄰近單體醉由 磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯，其中該募聚物包含具 有至少10個連續單體之第一區域；其中該第一區域之至少 一個單體為核普類似物；其中該第一區域之序列與哺乳動 物HER3基因或哺乳動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域 之反向互補序列至少80%—致；及（b)有效量之蛋白路胺 酸激酶抑制劑。 本發明之一具體實例提供以下組合之用途： Φ ( a.)由10至50個連續單體組成之募聚物，其中鄰近 單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯， 其中該寡聚物包含具有至少10個連續單體之第一區 域，其與具有至少 1〇 個選自由 5'_GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC-3' ( SEQ ID NO: 169)及 5，-TsAsGscscstsgstscsascst山MeCsTsMeC-3，（ SEQ ID NO: 180)組成之群的化合物中存在之連續單體之區域的序列至 少80%—致， 9 201021803 其中大寫字母表示谷-D-氧基-LNA單體且小寫字母表示 DNA單體，下標「s」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有5_ 曱基胞嘧啶鹼基之氧基_LNA單體，且 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物， s亥寡聚物為反義抑制劑或heR3 ;及 (b.) EGFR ( HER1 )之蛋白酪胺酸激酶抑制劑，諸如 吉非替尼、埃羅替尼（erl〇tinib)、拉帕替尼（—Μ及 卡奈替尼（canertinib)及/或諸如VEGFR2及VEGFR3之 VEGFR家族成員之蛋白路胺酸激酶抑制劑，諸如索拉非尼 (sorafenib )， 其係用於治療哺乳動物癌症。 在具體實例之-變化中，第一區域之序列與具有至少 1〇 個 5 _Gs CsTsCsCsasgsascsastscsasMeCsTsMeC-3，（ SEQ ID NO: 169)或 5，-TsAsGscsCstsg山CsasCst山MeCsTsMec_3,( seq id n〇: 180)中存在之連續單體之區域的序列一致。在具體實例之 另ΜΓ 變化令，寡聚物為

5,-GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC-3' ( SEQ ID NO： 169R5，-TsAsGsCsCstsgstsCsasCststsMeCsTsMec_3,(SEQiDN〇: 180)，其為HER3之反義寡聚物抑制劑。本發明亦提供與此 等用途對應之冶療方法具體實例。該等方法具體實例包括 同時或大約同時向需要治療癌症之諸如人類患者之哺乳動 物投予寡聚物及PKI抑制劑。 【實施方式】 在某些具體實例中，本發明提供調節HER3 (及視情況 10 201021803 , 存在之EGFR及HER2中之一或多者）的表現及/或活性之 組成物及方法。詳言之，本發明提供一種醫藥組成物，其 在醫藥學上可接受之賦形劑中包含有效量之在細胞内條件 下與編碼HER3 (及視情況存在之EGFR及HER2中之—咬 多者）之核酸特異性雜交之募聚物及有效量之蛋白酪胺酸 激酶抑制劑或其醫藥學上可接受之衍生物。 在某些具體實例中，募聚物與蛋白酪胺酸激酶抑制劑 或其醫藥學上可接受之衍生物存在於同一組成物中。在多 ©個具體實例中’寡聚物所存在之組成物與包含蛋白酪胺酸 激酶抑制劑之組成物分離。在某些具體實例中，募聚物存 在之組成物與蛋白酪胺酸激酶抑制劑組成物分離，且封裝 兩種組成物以組合使用。 在某些具體實例中，本發明涵蓋治療或預防患者之諸 如癌症之病症的方法，該方法包含向有需要患者投予有效 量之本發明之醫藥組成物。 ^ 1·5·醫藥組成物 響 1.5.1.寡聚物 在第一態樣中，用於本發明之醫藥组成物及方法之寡 聚化合物（本文中稱為寡聚物）冑用於例如調節編碼哺乳 = HER3之核酸分子的功能。在某些具體實例中編碼哺 孔動物HER3之核酸分子包括具有SEQ m ν〇 η?所一、 =序列之核酸及其天然存在之對偶基因變異體。本：： 之暴聚物由共價鍵聯之單體構成。 術語「單體（_。菌）」包括天然存在於核酸中且不 201021803 含經修飾之糖或經修飾之核鹼基的核苷與去氧核苦（統稱 為「核苷（nucleoside)」），亦即核糖或去氧核糖與天然存在 之未經修飾核鹼基（鹼基）部分（亦即，嘌呤及嘧啶雜環 腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸嘧啶或尿嘧啶）共價鍵結之 化合物及「核苷類似物（nucleoside analog)」，其為確實天 然存在於核酸中或並非天然存在於核酸中之核苷，其中該 糖部分不為核糖或去氧核糖（諸如雙環糖或2,修飾糖，諸 如2’取代糖），或該鹼基部分經修飾（例如，％甲基胞嘧啶）， 或兩者皆有。 _ 「RNA單體（RNAmonomer)j為含有核糖及未經修飾 之核鹼基的核苷。 「DNA單體（DNAmon〇mer)j為含有去氧核糖及未經 修飾之核鹼基的核苷。 如下文所進一步描述，「鎖核酸單體（L〇cked Nucleic Acid m〇nomer)」、「鎖單體（1〇cked爪⑽⑽⑷」或「lna 單體（LNA m〇nomer)」為具有雙環糖之核苷類似物。

術語「相應核苷類似物（c〇rresp〇nding nucle〇side Q anal〇g)」及「相應核苷（c〇rresp〇nding nucle〇side)」指示 核苦類似物中之鹼基部分與核皆中之鹼基部分相同。舉例 而。’ s「核苷」含有與腺嘌呤鍵聯之2，·去氧核糖時，「相 應核苷類似物」含有例如與腺嘌呤鹼基部分鍵聯之經修飾 之糖。 用於本發明之組成物及方法的本文所述寡聚物之單體 、左由鍵聯基團偶合於一起。各單體適當地經由鍵聯基團與 12 201021803 , 3’相鄰單體鍵聯。 術語「鍵聯基團（linkage group )」及「核皆間鍵 (internucleoside linkage )」意謂能夠將兩個連續單體共價 偶合於-起之基團。特疋實例包括填酸醋基（在相鄰核普 单體之間形成填酸一 Sa )及硫代鱗酸醋基（在相鄰核苷單 體之間形成硫代磷酸酯鍵）。 合適的鍵聯基團包括WO 2007/031091中所列出之彼等 鍵聯基團，例如WO 2007/031091 (其以引用的方式併入本 ® 文中）之第34頁之第一段中列出之鍵聯基團。 在一些具體實例中，將鍵聯基團自其正常磷酸二酯修 飾為更能抵抗核酸酶攻擊者（諸如硫代磷酸酯或硼烷磷酸 酯），此兩者可由核糖核酸酶Η裂解，允許核糖核酸酶介導 之對目標基因表現之反義抑制。 在本發明之上下文中，術語「寡聚物（oligomer )」、「募 聚化合物（oligomeric compound )」及「募核苦酸 (oligonucleotide )」可互換使用，且係指兩個或兩個以上 ® 連續單體由例如填酸酯基（在核苷之間形成填酸二酯鍵） 或硫代磷酸酯基（在核苷之間形成硫代磷酸酯鍵）共價鍵 聯而形成之分子。寡聚物包含10-50個單體’諸如丨〇-3〇個 單體，或由10-50個單體，諸如10-30個單體組成。

在一些具體實例中，寡聚物包含如本文所提及之核苷 或核苷類似物或其混合物。如以下第6.1 ·2節所定義’「LNA 募聚物（LNA oligomer )」或「LNA养核音( LNA oligonucleotide )」係指含有一或多個LNA單體之募核苷酸。 13 201021803 視情況包括於寡聚物中之核苷類似物可類似地起相應 ’ 核苷的作用，或可具有特定改良功能。一些或所有單體= ， 核苷類似物之寡聚物通常優於天然形式，此係因為例如其 穿透細胞膜之能力增強、對細胞外及/或細胞内核酸酶之優 良抗性及對核酸目標之高親和力及特異性。LNa單體尤其 較佳。 在多個具體實例中’募聚物内存在之一或多種核苦類 似物為「沉默的（silent )」或在功能上與相應天然核皆「等 效（equivalent)」，亦即對寡聚物用於抑制目標基因表現之 〇 方式不具有功能性影響。然而，例如若此等「等效」核苦 類似物更易於製造或製造成本更低廉，或在儲存或製造條 件下更穩定’或可併有標籤或標記時，其為有用的。然而， 典型地’類似物將對寡聚物用於抑制表現之方式具有功能 性影響；例如，藉由對目標核酸之目標區域產生增加之結 合親和力及/或對細胞内核酸酶之抗性增加，及/或更易於輸 送至細胞中。 在多個具體實例中’本發明之寡聚物包含核苷單體及 © 至少一個核苷類似物單體，諸如LNA單體或其他核苦類似 物單體。 術語「至少一個（at least one )」包含大於或等於1之 整數’諸如 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19 ' 20等。在多個具體實例中，諸 如當提及本發明化合物之核酸或蛋白質目標時，術語「至 少一個」包括術§吾「至少兩個（at least two )」及「至少三 14 201021803 個utleastthree)」及「至少四個（atieastf〇ur)」。同樣 地:在一些具體實例中，術語「至少兩個」包含術語「至 少二個」及「至少四個」。 在—體實例中，寡聚物由i〇_5〇個連續單體，諸 1〇、U、12、13、14、l5、16、l7、l8、19、2〇、21、22、 23 24 25、26、27、28、29或30個連續單體組成。 φ ❹ ^些具體實例中，寡聚物由iq_25個單體或…” 早體或12-16個單體組成。 1Λ在多個具體實例中’募聚物包含10-25個連續單體， 10-24個遠續置神、。 平隨 ^續单體，12·25個或12_24個或⑽個連續單 體诸如12-18個連續置辨 ^ , 單體，諸如U、u : “ t個或12·16個連續 4 15、16個連續單體。 在多個具體實例中 !〇-18個，諸如121: 物包含1〇_22個連續單體或 14 12_18個或13·17個或12_16個，諸如& 4 15或16個連續單體。 在-些具體實例中，寡聚物包含⑼ 12-14個連續單體。 似及12 16個或 M U ^ 具體實例中，募聚物包含14^ 個或丨4·16個連續單體。 在多個具體實例中，募聚物包含…⑴丨 個連續單體。 以13或14 在多個具體眚& + 之寡聚物由至夕實 用於本發明之醫藥組成物及方法 法 夕22個連續單體，諸如至多20個連續單體， 啫如至多18個連續里舯以， ^ 早菔 躓单體，诸如15、16或17個連續單體组 成。在某些具體督如士 咬貝早篮、、且 D中’本發明之募聚物包含少於2〇個連 201021803 續單體。 在多個具體實例中，本發明之寡聚物不包含rna單體。 ^ 在多個具體實例中，募聚物為線性分子或當合成時為 線性。在該等具體實例中’寡聚物為單鏈分子，且典型地 不包含具有例如至少3、4或5個連續單體之短區域，其與 同一募聚物内之另一區域互補以使得該寡聚物形成内部雙 鍵體。在多個具體實例中’寡聚物實質上不為雙鏈，亦即 不為siRNA。 在一些具體實例中’寡聚物由一段連續單體組成，其 ❹ 序列係由本文所揭示之SEQ ID NO.識別（例如參見表i )。 在其他具體實例中，寡聚物包含第一區域，該區域由一段 連續單體組成；及一或多個其他區域，其由至少一個其他 單體組成。在一些具體實例中，該第一區域之序列係由本 文所揭示之SEQ ID NO.識別。 1·5·2·鎖核酸（LNA)單體 術語「LNA單體（LNA monomer )」係指含有雙環糖 (「LNA糖（LNA sugar)」）之核苷類似物。術語r LNA寡 ◎ 核普酸（LNA oligonucleotide )」及「LNA 寡聚物（LNA oligomer)」係指含有一或多個LNA單體之寡聚物。 在某些具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 养核苷酸化合物中所用之LNA具有通式丨之結構： 16 201021803

ω 其中 X 係選自-ο-、-S-、-n(rn*)_、-C(R6R6*)-; B係選自氫、視情況經取代之C,_4烷氧基、視情況經取 代之（^_4烷基、視情況經取代之cu4醯氧基、核鹼基、：DNA Ο 嵌入劑、光化學活性基團、熱化學活性基團、螯合基團、 報導基團及配位體； P表示與後一單體鍵聯之核苷間鍵或5'-末端基團之基 團位置，該核苷間鍵或5，-末端基團視情況包括取代基R5 或同樣可用之取代基R5 * ; P*表示與前一單體鍵聯之核苷間鍵或3’-末端基團； R4*及R2* —起表示由1-4個選自-C(RaRb)-、 -C(Ra) = C(Rb)-、-C(Ra)=N-、-0-、-Si(Ra)2-、-S-、-S02-、-N(Ra)- 眷 及>c=z之基團/原子組成之雙基， 其中Z係選自·〇·、-s_及_N(Ra)_，且Ra及Rb各獨立地 選自氫、視情況經取代之c^2烷基、視情況經取代之C2 i2 烯基、視情況經取代之c2_12炔基、羥基、烷氧基、C2 i2 烧氧基烷基、c^2烯氧基、羧基、Cl_12烷氧基羰基、Ci i2 烷基羰基、甲醯基、芳基、芳氧基-羰基、芳氧基、芳基羰 基、雜芳基、雜芳氧基-羰基、雜芳氧基、雜芳基羰基、胺 基、單（C"烷基）胺基及二（C Μ烷基）胺基、胺甲醯基、單6 17 201021803 院基）_胺基基及二（Ci_6烧基）-胺基-叛基、胺基-Cw烧基 « -胺基羰基、單（C!.6烷基）胺基-Cw烷基·胺基羰基及二（(^_6 烧基）胺基-Cw烧基·胺基幾基、C!_6烧基-艘基胺基、胺曱 醯胺基、C1 _6炫《醯基氧基、颯基（sulphono )、C u烧基績醯 基氧基、硝基、疊氮基、硫基、（^·6烷硫基、鹵素、DNA 嵌入劑、光化學活性基團、熱化學活性基團、螯合基團、 報導基團及配位體’其中芳基及雜芳基可視情況經取代且 其中兩個成對取代基Ra及Rb —起可表示視情況經取代之亞 曱基（=CH2)，且❹ 取代基 R1* ' R2、R3*、R5、R5*、R6 及 R6* (若存在） 各獨立地選自氫、視情況經取代之Ci i2烷基、視情況經取 代之C2.!2烯基、視情況經取代之c2_12炔基、經基、cN12 烷氧基、Cm烷氧基烷基、Cm烯氧基、羧基、Cii2烷氧 基羰基、CU12烧基羰基' 曱醢基、芳基、芳氧基_幾基、芳 氡基、芳基羰基、雜芳基、雜芳氧基_羰基、雜芳氧基、雜 芳基羰基、胺基、單（Ci·6烷基）胺基及二（Ci6烷基）胺基、 胺曱醢基、單（C1.6烷基）_胺基-羰基及二（c16烷基）_胺基_羰 ◎ 基、胺基-C,·6烷基-胺基羰基、單（Ci 6烷基）胺基_Ci 6烷基· 胺基羰基及二（C!·6烷基）胺基-c^6烷基-胺基羰基、Ci6烷基 -羰基胺基、胺甲醯胺基、C1-6烷醯基氧基、颯基、c16烷 基績醯基氧基、石肖基、4氮基、硫基、Ci6烧硫基、幽素、 ONA嵌入劑、光化學活性基團、熱化學活性基團、螯合基 團 '報導基團及配位體，其中芳基及雜芳基可視情況經取 代，且其中兩個成對取代基一起可表示側氧基（〇χ〇 )、硫 18 201021803 ㈣、亞胺基或視情況經取代之亞甲基，或一起可形成由 視情況雜有一或多個選自-〇、-S-及-(NRn)-之雜原子/基團 及/或藉由該或該等雜原子/基團封端之丨-5個碳原子伸烧基 鍵組成之螺雙基，其中RN係選自氣及C14烧基，且其中兩 個N鄰近（非成對）取代基可表示產生雙鍵之另-鍵結；且 R當存在且不涉及雙基時係選自氫及Cm烷基；及其鹼性 鹽及酸加成鹽； 在某些具體實例中’ R”係選自Η、-CH3、-CH2-CH3、 〇 -CH2-〇-CH3 及-CH=CH2。 在多個具體實例中，R4*及R2* 一起表示選自以下之雙 基.-C(RaRb)-〇- 、 -C(RaRb)-C(RcRd).〇-、 -C(R R )-C(RcRd)-C(ReRf).〇. 、 -C(RaRb)-O.C(RcRd)-、 -C(R Rb)-0-C(RcRd)-〇- 、 -C(RaRb)-C(RcRd)- 、 -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf).、-C(Ra)=C(Rb)-C(RcRd)-、 -C(RaRb)-N(Rc)- 、 -C(RaRb)-C(RcRd)-N(Re)- 、 -C(RaRb)-N(Rc)-〇-及-C(RaRb)-S-、-C(RaRb)-C(RcRd)-S-,其 _中Ra、Rb、RC、Rd、Re及Rf各獨立地選自氫、視情況經取 代之cK12烷基、視情況經取代之c212烯基、視情況經取代 之c2_12炔基、羥基、Cuu烷氧基、c2-12烷氧基烷基、c2_12 烯氧基、羧基、Cb! 2烷氧基羰基、Cb! 2烷基羰基、曱醯基、 芳基、芳氧基-羰基、芳氧基、芳基羰基、雜芳基、雜芳氧 基-羰基、雜芳氧基、雜芳基羰基、胺基、單（CI.6烷基）胺基 及二（Ci.6烷基）胺基、胺曱醯基、單（cN6烷基）-胺基-羰基及 二（C!-6烷基）·胺基-羰基、胺基烷基-胺基羰基、單（c,_6 19 4 201021803 烷基）胺基-Ci.6烷基-胺基羰基及二（<^_6烷基）胺基-Cm烷基 ••胺基羰基、6烷基·羰基胺基、胺曱醯胺基、Cl6烷醯基 氧基、颯基、（^_6烷基磺醯基氧基、硝基、疊氮基、硫基、

Ci-6烷硫基、鹵素、DNA嵌入劑、光化學活性基團、熱化 學活性基團、螯合基團、報導基團及配位體，其中芳基及 雜芳基可視情況經取代且其中兩個成對取代基Ra及Rb —起 可表示視情況經取代之亞甲基（=CH2 )， 在其他具體實例中，R4"11及R2 —起表示選自以下之雙 基.-CH2-O-、-CH2-S-、-CH2-NH-、-CH2-N(CH3)-、 -CH2-CH2-〇. 、 -CH2-CH(CH3)- 、 -ch2-ch2-s-、 -ch2-ch2-nh- 、 -ch2-ch2-ch2- 、 -CH2-CH2-CH2.〇-、 -ch2-ch2-ch(ch3)-、_CH=CH-CH2-、-CH2-〇-CH2-〇_、 -CH2-NH-〇. 、 -CH2-N(CH3)-0- 、 -ch2-〇-ch2- ' •CH(CH3)-〇-、-CH(CH2-〇-CH3)-0-。 對於所有對掌性中心而言，不對稱基團可見呈R或s 位向。 在多個具體實例中’用於募聚物之LNA單體包含至少 〇 —個對應於式（Π )或式（m )之LNA單體：

其中 Y 為-0-、-〇-CH2- ' -s-、-NH-或 N(RH) ; z 及 z* 係獨立地選自核苷間鍵、末端基團或保護基；B構成天然存 20 201021803 、义酸中或非天时在於核酸中之未經修都之驗基部分 或經修飾之鹼基部分，且RH係選自氫及c“4烷基。 用於本發明之多個具體實例中之lna單體式（以） • ( vm)所示：

泠-D-硫基-LNA (VI)

(VIII) 術語「硫基-LNA ( thio-LNA)」係指上文式（π )中之 Υ係選自S或-CH2-S-之LNA單體。硫基_Lna可為卜D或 a-L構型。 術語「胺基-LNA ( amino-LNA )」係指上文式（π )中 之 Υ 係選自-N(H)-、N(R)-、CH2_N(H)-及lna 單體，其中R係選自氫及C!·4烷基。胺基_LNa可為卜£)或 oi-L構型。 術語「氧基-LNA ( oxy-LNA )」係指上文式（η )中之 21 201021803

Y表示-0_或-CH2-〇-之LNA單體。氧基_LNA可為卜D或a、L 構型。 術語「ΕΝΑ」係指上文式（II)中之Y為<&_〇_之LNa 單體（其中使-CHyO-之氧原子連接至相對於鹼基B之2，位 上）。 在某些具體實例中，LNA單體係選自/3-D-氧基_LNA單 體' 〇i-L-氧基-LNA單體、/S-D-胺基_LNA單體及硫基 -LNA單體，詳言之/3-D-氧基_LNa單體。 在本發明之上下文中，術語「Cl_4烷基」意謂直鏈或分 ❹ 支鏈飽和烴鏈’其中該鏈具有！至4個碳原子，諸如曱基、 乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基及第 三丁基。 含有鎖核酸（LNA)之寡聚物表示新一代反義募聚物。 不同於先前募核苷酸，LNA寡聚物中之核苷LNA單體在糖 内具有所設計之02，-至C4，-鍵（參見上文式IV-VIII)。此舉 穩定或「鎖定」有利於RNA結合之3’-内（3'-endo)結構構 形中之核糖。因此，與習知DNA寡聚物相比，LNA寡聚物 © 具有特別高之RNA結合親和力。此外，LNA修飾實質上可 改良核酸酶抗性且使得寡核苷酸長度減小（例如參見Vester B 等人，LNA (locked nucleic acid): high-affinity targeting of complementary RNA and DNA. Biochemistry. 2004 年 10 月 26 日；43(42):13233-41 ; Lauritsen A 等人，

Methylphosphonate LNA: a locked nucleic acid with a methylphosphonate linkage. Bioorg Med Chem Lett. 2003 年 22 201021803 1 月 20 日；13(2): 253-6 )。 A單體及包含LNA單體之寡核苷酸可藉由此項技術已 ^之任何方法來獲得。在某些具體實例中，LNA單體及LNA 养核苷奴可藉由PCT公開案第〇7/〇31〇81號及其中所引 用之參考文獻中所揭示之程序來獲得。

Is·3·其他核苷類似物單體及鍵 人在夕個具體實例中，募聚物中存在之至少一個單體為 3有諸如選自5-甲基胞喊°定、異胞哺唆、假異胞。密咬、5-為尿♦定、5_丙炔基尿嘴。定、6_胺基嗓呤、胺基。票吟、肌 ★ 胺基示吟、2_氣-6-胺基嗓吟、黃嗓呤及次黃噪吟之 鹼基之經修飾鹼基及/或例如經修飾以提供取代基之糖 邻刀之經修飾糖，諸如2ι_〇_烷基_核糖、2，_胺基-去氧核糖、 2’-氟-去氧核糖及2，_〇·甲氧基乙基_核糖（2ιμ〇ε)，或如上 所述LNA糖，或阿拉伯糖（「ανα單體」）或2，_氟-阿拉伯 糖或d-阿糖-己糖醇糖（「ΗΝΑ單體」）之核苷類似物。 適用於本文所述寡聚物之核苷類似物之具體實例描述 ❹於例如 Freier & Altmann; Nucl. Acid Res.，1997, 25, 4429-4443 及 Uhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2)，293-213 中或描述於 w〇 2007/031091 中或參考 WO 2007/03 109卜該等文獻以全文引用的方式併入本文中。 在多個具體實例中’在寡聚物中併入增強親和力之核 苷類似物（亦即提高募聚物/目標區域雙鏈體之雙鏈體穩定 性（Tm )之核苷類似物）’諸如lna單體或含有2，-取代之 糖之單體，或併入經修飾鍵聯基團使核酸酶抗性增強。在 23 201021803 多個具體實例中，併入有該等增強親和力之核苷類似物使 募聚物尺寸得以減小且使得較短募聚物之序列特異性得以 增強。將認識到當提及特定寡聚物鹼基序列時，在某此具 體實例中，募聚物包含相應增強親和力之核苷類似物，諸 如相應LNA單體或其他相應核苷類似物。 包含核苷及/或核苷類似物單體之募核苷酸可藉由此項 技術中已知之任何方法來合成。在一些具體實例中，用於 本發明之方法及組成物之寡核苷酸可使用自動合成器 ❹ 利用標準胺基碟酸醋化學法藉由碘氧化來合成。心氮基乙基 二異丙基_胺基鱗酸龍可購自Applied Bi〇systems (心如

Clty，Calif·)。用於製造本發明之組成物及方法中所用之募 聚化合物之經修飾單體可藉由此項技術中已知之任何方 法，諸如 Jones R·及 Herdewijn p，⑸⑽ in = CleiC ACld Chemistry (J〇hn wney & 8箱公司出版，· 中所述之方法來獲得。 寡聚物之至少2個連續單體之間

在一些具體實例中 的鍵不為磷酸二酯鍵。 個具有經修飾 (其可為同一 在某些具體實例中，寡聚物包括至少一 f基之早體、至少—個具有經修飾糖之單體 單體）及至乂 —個非天然存在之單體間鍵。 • ·.間隙聚合物（Gapmer)設計 ，某些具體實例中，本發明之寡聚物為間隙 間隙聚合物」為包含能夠募集如下文所進一步指 之玄糖核酸酶（例如核糖核酸酶H)之-段連續單體（^ 24 201021803 • 具有至少6或7個DNA單體之區域，在本文中稱作區域b) 的募聚物，其中區域B在其5,端與3,端上由分別稱作區域a 及區域C之區域側接，區域A及區域c各包含核苷類似物， 該等核苷類似物為諸如増強親和力之核苷類似物，諸如K 個增強親和力之類似物’例如LNA核苷酸。 在某些具體實例中，區域A及區域C中存在之核苷類 似物包含如上所述經修飾糖部分，且募聚物或其區域中之 所有核苷類似物包含相同經修飾糖部分。在多個具體實例 ® 中，核苷類似物含有2，-M〇E糖，2，-氟-去氧核糖或LNA糖。 募聚物之核苷類似物可獨立地選自此等三種類型。在含有 核苷類似物之某些募聚物具體實例中，至少一個核苷類似 物含有2，-MOE-糠。在多個具體實例中，募聚物中之至少2、 3、4、5、6、7、8、9或1〇個核苷類似物含有2，_μ〇ε核 糖。在某些具體實例中’至少一個核苷類似物含有2,_氟_ 去氧核糖。在多個具體實例中，募聚物中之至少2、3、4、 ❹5、6、7、8、9或10個核苦類似物含有2，_敗_去氧核糖。 典型地，間隙聚合物自5,至3,包含區域A_B_C或視情 況存在之A-B-C-D或D-A-B-C，其中：區域a包含至少一 個核苷類似物，諸如至少一個LNA單體，諸如丨_6個核苷 類似物，諸如LNA單體；且區域B包含（當與目標^να =子（諸如mRNA目標）之互補目標區域形成雙鏈體時） 能夠募集核糖核酸酶之至少五個連續單體，諸如DNA單 體；且區域c由以下組成或包含以下：至少一個核苷類似 物，諸如至少一個LNA單體’諸如卜6個核苦類似物諸 25 201021803 如LNA單體；且區域D (若 諸如DNA單體。 包H、2或3個單體’ 在多個具體實例中，區域 枋让相V止， 田1 2 ' 3、4、5或0個 t皆類似物，諸如LNA單體，諸如9 ς加从十 ^ 7 c ^ τ 者如2-5個核苷類似物，諸 -個LNA單體，諸如…個核*類似 4個LNA單體組成；及/或區域。由……々 ： 核苷類似物，諸如LNA單體， 3 如w個LNA單體，諸二！：2-5個㈣類似物，諸 ❹ 或4個核苷類似物，諸如3戋 4個LNA單體組成。在 渚如3或 為LNA單體。 -具體實例中，所有核苦類似物 在某些具體實例中，區域B包 + 5'6'7'8'9>10' 或:個能夠募集核糖核酸酶之連續單體或“〇個或Μ 體實二8::夠_糖核酸酶之連續單體。在某些具 DNA。。 “ B包含至少一個DNA單體，諸如1-12個 ONA早體，或4_12個dna 腹或6-10個DNA單體， 诸如7-1〇個DNA單體、或8 y或W個DNA單體。

Q 在某些具體實例中，區域A由3十/ Λ τ Μ Α „ Λ、 田3或4個核苷類似物（諸 如LNA早體）組成，區域 組成，且區域。由3或4個"J'9或1〇個囊單體 知士、 個核苷類似物（諸如LNA單體） 組成。該等設計包括（A-B-C)3-l〇i ) ,n , iU_3、3-l〇-4、4-l〇-3、3-9-3、 3-9-4、4·9-3、3-8-3、34-4、4H ， Β-τ、社 . 3-7-3 ' 3-7-4 ' 4-7-3 5 且可進一步包括區域D，直

單體）。 '、〃、有1或2個單體（諸如DNA 在某些具體實例中，寡聚物 切田 10、U、12、13 或 14 26 201021803 個連續單體組成，其中該募聚物之區域具有模式（5,_3,) A-B-C或視情況存在之a-B-C-D或D-A-B-C，其中：區域a 由1、2或3個核苷類似物（諸如LNA單體）組成；區域B 由當與互補RNA分子（諸如mRNA目標）形成雙鏈體時能 夠募集核糖核酸酶之7、8或9個連續單體組成；且區域c 由1、2或3個核苷類似物（諸如LNA單體）組成。若存在’ 則區域D由單一 DNA單體組成。 參 在某些具體實例中，區域A由1個LNA單體組成。在 某些具體實例中，區域A由2個LNA單體組成。在某些具 體實例中，區域A由3個LNA單體組成。在某些具體實; 中，區域€由i個LNA單體組成。在某些具體實例中，區 域C由2個LNA單體組成。在某些具體實例中，區域c由 3個LNA單體組成。在某些具體實例中，區域b由7個核 苦單體組成。在某些具體實例中，區域B由8個核*單體 組成。在某些具體實例中，區域B由9個㈣單 在某些具體實例中，區域B包含Μ㈤舰單體，諸如2 3、4、5、6、7或8個譲單體。在某些 域^由嶋單體組成。在某些具體實例中，區域 >、一個呈osL構型之LNA單體，諸如2、3、4、5、6至 二或9個呈4構型之LNA單體。在某些具體、，:、 ^包含至少-個A氧基LNA單體。在某Μ ， 中，區域Β中之呈a-L構型之所有⑽ 、實例 _單體。在某些具體實例中，寡聚物之二二：基 在之單體的數目係選自由以τ ( °° 5中存 下（核苷類似物單體-區域Β, 27 201021803 普類似物單體）組成之群旧小“：“小 -1、 :9;:9一3 — ^10-2' 2-10-1 , 2-10-2, 1.10.3 ^ 3-10.! 0 ^ 具體實例中，本發明之募聚物之A-B-C區域中 之早體的數目係選自由以下組成之群：2_7_丨、1_12、2 了子〕 3 7 3 2·7·3: 3_7_2、3_7·4及4_7_3。在某些具體實例中， 及區域°各由兩個LNA單體組成，且區域B由8 〇 或9個㈣單體（在某些具體實例中為DNA單體）組成。 在多個具體實例中，其他間隙聚合物設計包括以下. 其中區域A及/或區域C由3、4、5或6個核皆類似物，諸 如含有2，-〇·甲氧基乙基-核糖（2,_)之單體或含有2,· I去氧核糖之單體組成’且區域B由8、9、i〇、U或Η 個核苦（諸如難單體）組成，其中區域A-B-C具有5-10_5 或4-12-4個單體。 在二具體實例中，間隙聚合物含有如本文所提供之 含硫鍵聯基園。在多個具體實例中，尤其在間隙區域（B) ◎ 中，間隙聚合物含有硫代磷酸酯鍵聯基團。 在某些具體實例中，硫代鱗酸酿鍵使側接區域（A及c ) 中之單體鍵聯在-起。在多個具體實例中，硫代填酸醋鍵 使區域A或區域C與區域D鍵聯，且使區域d内之單艘鍵 聯在一起。 、區域B及區域C包含除 如碟酸二酯鍵），例如當使 在多個具體實例中，區域A 硫代璘酸酿基外之鍵聯基團（諸 28 201021803 單體）保護區域A及區域C!内之 降解時尤其如此。 养聚物之相鄰單體藉助於硫代磷 用核苷類似物（例如LNA 鍵聯基團免於核酸内切酶 在多個具體實例中， 酸酯基彼此鍵聯。 認識到在具有硫代填酸酿主鏈、尤其在核皆類似物單 體之間或_類似物單體相鄰（典型地在區域A及,或區 域C中）具有硫代磷酸賴聯基團之募聚物中包括峨酸二

酯鍵（諸如一或兩個鍵）可修飾募聚物之生物可用性及/或 生物刀布’參見WO 2008/0533 14，其係以引用的方式併入 本文中。 在一些具體實例（諸如上文提及之具體實例）中，在 適當情況下且未特定說明時，所有剩餘鍵聯基團為磷酸二 酯基或硫代磷酸酯基或其混合物。 在一些具體實例中’所有核苷間鍵聯基團均為硫代磷 酸酯基。 當提及特定間隙聚合物寡核苷酸序列（諸如本文所提 ❿供之彼等間隙聚合物寡核苷酸序列）時，應瞭解，在多個 具體實例中’當鍵為硫代磷酸酯鍵時，可使用替代性鍵（諸 如本文中所揭示之鍵），例如可使用磷酸酯（磷酸二酯）鍵， 對於核苷類似物（諸如LNA單體）之間的鍵而言尤其如此。 其他間隙聚合物設計揭示於WO 2004/046160及WO 2007/1465 11A2中，該等文獻以引用的方式併入本文中。以 引用的方式併入本文中之美國臨時申請案60/977,409提及 「短聚物（shortmer )」間隙聚合物寡聚物。在一些具體實 29 201021803 例中’本文呈現之券聚物可為該等短聚物間隙聚合物。 1.5.5.寡聚物序列及特異性 用於本發明之組成物及方法中之寡聚物與編碼her3 及/或HER2及/或EGFR多肽之核酸雜交。 術語「核酸（nucleic acid )」及「聚核苦酸 (polynucleotide)」在本文中可互換使用，且定義為由兩個 或兩個以上如上文所述之單體共價鍵聯所形成之分子。包 括2個或2個以上單體時，「核酸」可為任何長度，且術語 統稱為「募聚物（寡聚物）」’其具有本文所述之長度。術 0 語「核酸」及「聚核苷酸」包括單鏈、雙鏈、部分雙鏈及 環狀分子。 在多個具體實例中，如本文所用之術語「目標核酸 (target nucleic acid)」係指編碼哺乳動物HER3多肽之核 酸（諸如DNA或RNA)(諸如具有以SEQ ID NO: 197所示 之序列的人類HER3 mRNA ’或具有GenBank寄存編號 NM_001005915 、NM_001982 及替代性拼接形式 NP_001973.2 及 NP_001005915_1 (人類）；NM—017218 (大 〇 鼠）；NM_010153(小鼠）；NM_01 103105 (牛）之哺乳動物 mRNA ;或具有 GenBank 寄存編號 ΧΜ_001491896 (馬）、 XM_001 169469 及 XM_509131 (黑猩猩）之預測 mRNA 序 列）。 在多個具體實例中，「目標核酸」亦包括編碼哺乳動物 HER2多肽之核酸（諸如具有 GenBank寄存編號 NM_001005862 及 NM_004448 (人類）；NM_017003 及 30 201021803 秦 NM_017218(大鼠）；NM_0010038 17(小鼠）；NM—001003217 (犬）；及NM—001048163 (貓）之哺乳動物mRNA)。 在多個具體實例中，「目標核酸」亦包括編碼哺乳動物 EGFR 多肽之核酸（諸如具有 GenBank 寄存編號 NM_201284、NM_201283、NM_201282 及 NM_005228 (人 類）；NM_007912 及 NM_207655 (小鼠）；NM_03 1507 (大 鼠）；及NM—214007 (豬）之哺乳動物mRNA)。 認識到上文所揭示之GenBank寄存編號係指cDNA序 〇 列而並非指mRNA序列本身。成熟mRNA之序列可自相應 cDNA序列用尿嘧啶鹼基（U)置換胸嘧啶鹼基（T)而直 接衍生。 在多個具體實例中，「目標核酸」亦包括編碼HER3 (及 視情況存在之HER2及EGFR中之一或多者）的核酸或其天 然存在之變異體，及由此衍生之RNA核酸，諸如前體mRNA 或成熟mRNA。本發明之募聚物典型地能夠與目標核酸雜 交。 ® 術語「其天然存在之變異體（naturally occurring variant thereof )」係指天然存在於指定分類學群組（諸如哺乳動物， 諸如小鼠、猴及人類）中之HER3 (或HER2或EGFR)多 肽或核酸序列之變異體。典型地，當提及聚核苷酸之「天 然存在之變異體」時，該術語亦涵蓋藉由染色體易位或複 製可見於染色體Chr 12: 54.76-54.7 8 Mb處之編碼HER3(或 HER2或EGFR )之基因組DNA及RNA (諸如自RNA衍生 之mRNA )之任何對偶基因變異體。當提及特異性多肽序列 31 201021803 ΐ例Γ:’該術語亦包括蛋白質之天然存在形式，其因此 j如4由共轉譯修飾或轉譯後修飾（諸如信號肽裂解、 蛋白水解裂解、糖基化等）來加工。 „在某些具體實例中，本文所述之募聚物藉由寡聚物之 早體與目標核酸之單體之間的沃森·克里克（wat細_crick) 驗基配對、霍氏氫鍵結（H(K)gsteen hydrogen bonding)或

反向霍氏氩鍵結與目標核酸之區域（「目標區域（target g10n)」）結合。该結合亦稱為「雜交（hybridization)」。 除非另外說明，否則結合係藉由互補鹼基（亦即腺嘌呤與 胸嘧啶（DNA)或尿嘧啶（RNA)，及鳥嘌呤與胞嘧啶）之 沃森-克里克配對進行，且由於寡聚物之序列與目標區域之 反向互補序列一致或部分一致，故募聚物與目標區域結 合，就本文中之目的而言，據稱寡聚物與目標區域「互補_ 或°卩分互補」，且养聚物序列與目標區域之序列的「互補 性」百分比為與目標區域序列之反向互補序列的「一致性 百分比。 除非文中另外明確說明，否則本文中「目標區域」將 〇 為具有使用下文所述之比對程式及參數與指定寡聚物（或 其區域）之序列之反向互補序列最佳比對的序列的目標核 酸之區域。 在測定用於本發明之組成物及方法之募聚物（或其區 域）與編碼哺乳動物HER3 (或HER2或EGFR )之核酸（諸 如本文中所揭示之核酸）之目標區域之間的r互補性 (complementarity)」程度時，該「互補性」（亦為「同源性 32 201021803 * (homology)」）程度係表示為寡聚物（或其區域）之序列 舆其所最佳比對之目標區域反向互補序列之間的一致性百 女比。該百分比係藉由計數所比對驗基中2個序列之間一 致的鹼基數目，除以寡聚物（或其區域）中連續單體之總 數且乘以100來計算。在該比較中，若存在間隙，則該等 間隙較佳僅為錯配而非間隙内之單體數目在本發明之募聚 物與目標區域之間不同的區域。 就本發明而言，可使用Clustalw演算法使用標準設定 ©測定胺基酸及聚核苦酸比對、序列一致性百分比及互補性 私度.參見 http://www.ebi ac uk/emb〇ss/aHgn/index， 方法：EMB0SS::水（局部广間隙開啟=10.0,間隙延伸= 〇·5,使用Blosum 62 (蛋白質）或對於核苦酸/核驗基序列 而言使用DNAfuIl。 如將瞭解，視上下文而定，「錯配（mismatch )」係指序 列之非一致性（例如，寡聚物之核鹼基序列與其所結合之 目標區域之反向互補序列之間；例如，兩個經比對之編 腿3之核酸㈣基序狀間），或序狀非互補性（例如， 募聚物與其所結合之目標區域之間）。 適當地’募聚物（或結合物，如下文所進一步描述） 能夠抑制（諸如藉由下調）HER3 (及視情況存在之咖2 及EGFR中之一或多者）基因之表現。 在多個具體實例中，用於本發明之組成物及方法之寡 聚物抑制騰3 (及視情況存在之臟2及EGFR中之—或 多者）mRNA表現，該抑制量與即將治療之前的表現量相比 33 201021803 為至少10%、至少20%且更佳與即將治療之前的表現量相 比為至少 30%、40%、50%、60%、70%、80%、9〇〇/〇或 95〇/〇。 在多個具體實例中，本發明之寡聚物抑制HER3 (及視情況 存在之HER2及EGFR中之-或多者）蛋白質表現，該抑制 量與即將治療之前的表現量相比為至少1〇%、至少2〇%， 更佳與即將治療之前的表現量相比為至少3〇%、4〇%、5〇%、 60%、70%、80%、90%或95%。在—些具體實例巾，當使 用InM本發明之寡聚物或結合物時可見該抑制作用。在多 個具體實例中，當使用25 nM室:Y私·+、& a ,, 田仗用z) nM暴聚物或結合物時可見該 M AM m . w 在多個具體實例中，抓财表現之抑制小於⑽％ (亦 即’小於表現之完全抑制），諸如小於98%抑制 ' 小於95% 抑制、小於90%抑制、小於8〇%抑制、諸如小於7〇%抑制： 在多個具體實射，蛋白f表現之抑制^、於⑽％ (亦即， 小於表現之完全抑制），諸如小於98%抑制、小於咖抑制、 小於90%抑制、小於嶋抑制、諸如小於鳩抑制。

Q 或者，可例如藉由北方I 、土广 北万墨點法（northern blotting)七 = RT_PCR量測mRNA之含量來測定對表現量之調節。· ，由"麗含量來量測時，在多個具體實例中，當使用二 ^副及約25副之適當劑量時，抑制量典型地為在不^ 在本發明化合物之情況下之量的1〇_2〇%之量。 存

亦可例如藉由諸％ SDS_PAC}E (we8— bl〇Uing)之方法’使用針對目標蛋白產生之八t 抗體，藉由量測蛋白質含量來測定對表現量之調節（2 34 201021803 抑制或增強）。 在一些具體實例中，本發明提供的募聚物抑制（例如 下調）由此衍生之HER3 mRNA及/或蛋白質之一或多種替 代性拼接同功異構物之表現。在—些具體實例中，本發明 提供抑制一或多種HER3之替代性拼接蛋白質同功異構物 (GenBank 寄存編號 NP—001973.2 及 ΝΡ—00 1005915.1 )之

表現及/或編碼HER3蛋白質同功異構物（GenBank寄存編 號nm_001982及NM_001005915 1 )之核酸之表現的募聚 物。在一些具體實例中，編碼HER3同功異構物i之mRNA 為目標核酸。在其他具體實例中，編碼HER3同功異構物2 之mRNA為目標核酸。在某些具體實例中，編碼ΗΕ^同 功異構物1及HER3同功異構物2之核酸均為目標核酸，例 如具有序列SEQ ID NO: 180之寡聚物。 在多個具體實例中，本發明提供具有與HER3核酸中之 目標區域之序列互補之鹼基序列的募聚物或其第一區域， 該等寡聚物下調HER3 mRNA及/或HER3蛋白質表現且下 調一或多種其他ErbB受體酪胺酸激酶家族成員（諸如her2

及/^eGFR)之恤财及/或蛋白質之表現。與兩個不°同 受體家族核酸（例如HER2及HER3 mR 〜从人 AJ>之目標區域有 效、，。口且下調兩目標之mRNA及/或蛋白 使埜一 貝农現的募聚物或 A 」ErbB受體家 鉍成員之目標區域結合且能夠有效下調所 AL. ^ ^ 男一個基因之募 聚物或其第一區域稱為具「三特異性夕 , , 夕個具f你丨

中，本發明之寡聚化合物可具多特異性體實W 即能夠與受體 35 201021803 酪胺酸激酶之ErbB家族之多個成員的目標核酸之目標區域 結合且下調其表現。應瞭解，如本文所用之術語「雙特異 性」及「三特異性」不以任何方式進行限定。舉例而言，「雙 特異性寡聚物」可能對第三目標核酸有一些影響作用，而 「三特異性寡聚物」可能對其三個目標核酸中之一者有極 弱且因此具有不太顯著之影響。 在多個具體實例中，雙特異性寡聚物或其第一區域能 夠與HER3核酸中之目標區域及HER2目標核酸中之目標區 域結合且有效下調HER3及HER2 mRNA及/或蛋白質之表 ® 現。在某些具體實例中，雙特異性寡聚物不會相同程度地 下調HER3 mRNA及/或蛋白質及HER2 mRNA及/或蛋白質 之表現。在其他具體實例中，本發明之雙特異性寡聚物或 其第一區域能夠與HER3目標核酸中之目標區域及EGFR目 標核酸中之目標區域結合且有效下調HER3 mRNA及/或蛋 白質及EGFR mRNA及/或蛋白質之表現。在多個具體實例 中，雙特異性寡聚物不會相同程度地下調HER3 mRNA及/

或蛋白質及EGFR mRNA及/或蛋白質之表現。在其他具體 ◎ 實例中，三特異性寡聚物或其第一區域能夠與HER3目標核 酸之目標區域及受體酪胺酸激酶目標核酸之兩個其他ErbB 家族中之目標區域結合，且有效下調HER3 mRNA及/或蛋 白質及受體酪胺酸激酶之ErbB家族之兩個其他成員之 mRNA及/或蛋白質之表現。在多個具體實例中，三特異性 募聚物或其第一區域能夠有效下調HER3 mRNA及/或蛋白 質之表現、HER2 mRNA及/或蛋白質之表現及EGFR mRNA 36 201021803 及/或蛋白質之表現。在多個具體實例中，三特異性募聚物 不會相同程度地下調HER3 mRNA及/或蛋白質、HER2 mRNA及/或蛋白質及egfR mRNA及/或蛋白質之表現。

用於本發明之醫藥組成物及方法中之募聚物典型地與 人類HER3及/或人類HER2及/或人類EGFR mRNA之目標 區域結合，且因而包含以下或由以下組成：具有與例如SEQ ID NO: 197、SEQ ID NOM98 及/或 SEQ ID NO: 199 之鹼基

序列互補或部分互補之鹼基序列之區域。在某些具體實例 中，用於本發明之醫藥組成物及方法中之募聚物之序列視

情況包含當與 SEQ ID NO: 197、SEQ ID NO: 198 或 SEQ ID 〇_ 199之最佳比對目標區域之序列相比時1、2、3、4或 4個以上鹼基錯配。 在一些具體實例中’用於本發明之醫藥組成物及方法 中之募聚物具有與選自由SEQ ID NO: 200-227、1-140及 8 233組成之群的序列一致之序列（參見下文表1)。在其 他具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之寡聚物具 有田與選自由 SEQ ID NO: 200-227、1-140 及 228-233 組成 群的序列相比時一個、兩個或三個驗基不同之序列。在 —八體實例中，寡聚物包含1 〇-16個連續單體。由1 6個 1續單體組成之寡聚物之序列的實例為SEq ED N〇: i、 5 17 18 、 19 、 34 、 49 、 50 、 51 、 52 、 53 、 54 、 55 、 56 、 8 59、 74、 75、 76、 91、 92、 1〇7、 122、 137、 138、 及140。較短序列可由此衍生，例如較短募聚物之序列 ° 5袤存在於選自具有SEQ ID NO: 200-227、卜140及 37 201021803 228-233之鹼基序列的寡聚物中之募聚物之區域中。在多個 具體實例中，較長寡聚物包括具有同樣存在於SEq ID no: 200-2：27、1-140及228-233中之至少i〇個連續單體之序列 的區域。與具有 SEQIDNO: 1、16、17、18' 19、34、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、58 ' 59、74、75、76、 91、92、107、122、137、138、139 及 140 之序列之寡聚物 互補之人類HER3 mRNA之目標區域示於圖1中（粗體及下 劃線，相應寡聚物SEQ ID NO如上指示）。 在多個具體實例中，寡聚物具有以SEQ ID NO: 141-168 © 所示之鹼基序列。在某些具體實例中’寡聚物為LNA寡聚 物’例如具有SEQ ID NO: 169-196及234之序列之寡聚物， 詳言之具有 SEQ ID NO: 169、170、173、174、180、181、 183、185、187、188、189、190、191、192 及 194 之驗基 序列的寡聚物。在多個具體實例中，寡聚物為LNA寡聚物， 諸如具有 SEQ ID NO: 169、170、172、174、175、176 及 179之鹼基序列的寡聚物。在一些具體實例中，寡聚物或其 區域由以下組成或包含以下：如SEQ ID NO: 169、180或 ® 2 3 4所示之鹼基序列。在一些具體實例中，本發明之結合物 包括具有如SEQ ID NO: 1 69、1 80或234所示之驗基序列之 募聚物。 在某些具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 寡聚物可適當地包含具有同樣存在於較短寡聚物中之特定 序列（諸如選自SEQ ID NO: 200-227之序列）之區域，該 較短寡聚物亦可用於本發明之組成物及方法中。在多個具 38 201021803 體實例中，區域包含10-16個單體。舉例而言’具有SEQ ID NO: 200-227之鹼基序列之寡聚物各包含之區域的序列同樣 存在於分別具有 SEQ ID NO: 1、16、17、18、19、34、49、 50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、74、75、76、 91、92、107、122、137、138、139 及 140 之序列的較短募 聚物中。在一些具體實例中，具有少於16個單體（諸如1〇、

11、12、13、14或15個單體）之募聚物具有之區域具有至 少8個、至少9個、至少10個、至少11個、至少12個， 至少13個、至少14或15個連續單體，其序列同樣存在於 具有 SEQ ID NO: 1、16、17、18、19、34、49、50、51、 52、53、54、55、56、57、58、59、74、75、76、91、92、 107、122、137、138、139或140之序列的募聚物中。因此， 在多個具體實例中，較短募聚物之序列衍生自較長寡聚物 之序列。在一些具體實例中，具有本文所揭示之SEQ ID N〇 之寡聚物的序列或其具有至少1〇個連續單體之序列同樣存 在於較長寡聚物中。典型地’用於本發明之醫藥組成物及 方法中之寡聚物包含具有同樣存在於SEQ m N〇: i、16、 17^18>19^34>49^50, 51，52^53, 54^55^56^57^ 58、59、74、75、76、91、92、1〇7、l22、i37、i38、i39 52、53、54 或MO中之序列之第—區域，且若寡聚物比同㈣在於_ ID NO·· 1、16、17、18、19、34、49、5〇、^、 137、138、139 或 14〇 中之第一 域具有的序列與側接目標核酸 55 、 56 、 57 、 58 、 59 、 74 75 、 76 、 91 、 92 、 107 、 122 、 區域長’則募聚物之側接區 之目標區域之序列互補。兩 39 201021803 個遠等寡聚物為SEQ ID NO: 1及SEQ ID NO: 54。 在多個具體實例中’募聚物包含以下或由以下組成： 與編碼哺乳動物HER3之目標核酸之目標區域充分互補（完 全互補）的單體之序列。 然而’在一些具體實例中，募聚物之序列與HER3目標 核酸之最佳比對目標區域相比包括1、2、3或4個（或4 個以上）錯配’且仍與目標區域充分結合以有效抑制HER3 rnRNA或蛋白質表現。錯配對沃森_克里克氫鍵結雙鏈體之 失穩的影響可例如由寡聚物之長度增加及/或寡聚物中存在 ❹ 之核苦類似物（諸如LNA單體）之數目增加來補償。 在多個具體實例中，寡聚物鹼基序列與例如編碼哺乳 動物HER3之目標核酸的最佳比對目標區域之鹼基序列相 比包含至多3個、諸如至多2個錯配。 在多個具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 寡聚物或其區域之鹼基序列與選自由SEQ ID NO 200-227 ' 1-140及22 8-233組成之群的序列至少8〇%一致， 諸如至少85%、至少90%、至少91%、至少92%'至少93%、 q 至少94% '至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、 至少99%、甚至1〇〇%—致。 在多個具體實例中，寡聚物或其第一區域之鹼基序歹j 與SEQ ID NO: 197、198及/或199中存在之目標區域之序 列至少80%互補，諸如至少85%、至少90%、至少91%、 至少92%、至少93%、至少94%、至少95〇/〇、至少96%、 至少97%、至少98%、至少99%、甚至100%互補。 40 201021803 * •在多個具體實例中’募聚物（或其第一區域）之序列 孫選自由 SEQ ID NO: 200-227、1-140 及 228_233 組成之 群’或係選自由 SEQ ID NO: 200-227、1_14〇 及 228_233 之 至少1〇個連續單體組成之群。在其他具體實例中，當與所 選序列或其區域最佳比對時，用於本發明之醫藥組成物及 方法中之寡聚物或其第一區域之序列视情況包含與具有 SEQ ID Ν0: 200-227、^^0及228·233之序列之寡聚物或 其至少10個連續單體之序列中的鹼基部分不同之丨、2或3 © 個驗基部分。 在某些具體實例中，單體區域由11、12、13、14、15、 16 、 17 、 18 、 19 、 20 、 21 、 22 、 23 、 24 、 25 、 26 、 27 、 28 或29個連續單體，諸如1〇至15、12至25、12至22，諸 如12至1 8個單體組成。在多個具體實例中，該區域適當 地與本發明募聚物具有相同長度。 在一些具體實例中，募聚物在5,端或3,端處包含其他 單體，諸如在募聚物之5,端及/或3端處獨立地包含丨、2、 3、4或5個其他單體，其與目標區域之序列不互補。在多 個具體實例中，本發明之募聚物包含與目標互補之區域， 其在5’及/或3'處由其他單體側接。在多個具體實例中，區 域之3'端由1、2或3個DNA或RNA單體側接。在固相合 成募聚物期間通常使用3，DNA單體。在多個可相同或不同 之具體實例中’寡聚物之5·端由1、2或3個DNa或RNA 單體側接。在某些具體實例中’其他5,或3,單體為核苦， 諸如DNA或RNA單體。在多個具體實例中，5，或單體可 41 201021803 表示如本文中間隙聚合物寡聚物之情形中所提及之區域D。 表1 ' 寡聚物序列 SEQ ED NO 序列（5’·3*) 長度 (鹼基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQ ID NO: 1 GCTCCAGACATCACTC 16 2S66- 2881 100% 87.5% SEQ ID NO: 2 GCTCCAGACATCACT 15 SEQ ID NO: 3 CTCCAGACATCACTC 15 SEQ ID MO: 4 GCTCCAGACATCAC 14 . SEQ ID NO: 5 CTCCAGACATCACT 14 SEQ ID NO: 6 TCCAGACATCACTC 1.4 SEQ ID NO: 7 GCTCCAGACATCA 13 SEQ ID NO: 8 CTCCAGACATCAC 13 SEQ ID NO: 9 TCCAGACATCACT 13 SEQ ID NO: 10 CCAGACATCACTC 13 SEQ ID NO: 11 GCTCCAGACATC 12 SEQ ID NO: 12 CTCCAGACATCA 12 SEQ ID NO: 13 TCCAGACATCAC 12 SEQJDNO: 14 CCAGACATCACT 12 SEQ ID NO: 15 CAGACATCACTC 12

42 201021803

1 ' ' - Γ· ----------------- 表1 寡聚物序列 SEQ ID NO 序列(5’-3') 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGPR 互補 HER2 SEQ ID NO: 16 CTCCAGACATCACTCT 16 2865- 2880 100°/〇 93.8% SEQ ID NO: 17 CAGACATCACTCTGGT 16 2862- 2877 100% 93.8% SEQ ID NO: 18 AGACATCACTCTGGTG 16 2861 -2876 100% 93.8% SEQ ID NO: 19 ATAGCTCCAGACATCA 16 2869- 2884 93.8% 87.5% SEQ ID NO: 20 ATAGCTCCAGACATC 15 SEQ ID NO: 21 TAGCTCCAGACATCA 15 SEQ ID NO: 22 ATAGCTCCAGACAT 14 SEQ ID NO: 23 TAGCTCCAGACATC 14 SEQ ID NO; 24 AGCTCCAGACATCA 14 SEQ ID NO: 25 ATAGCTCCAGACA 13 SEQ ID NO: 26 TAGCTCCAGACAT 13 SEQ ID NO: 27 AGCTCCAGACATC 13 SEQ ID NO: 28 GCTCCAGACATCA 13 SEQ ID NO: 29 ATAGCTCCAGAC 12 SEQ ID NO: 30 TAGCTCCAGACA 12 SEQ ID NO: 31 AGCTCCAGACAT 12 SEQ ID NO: 32 GCTCCAGACATC 12 SEQ ID NO: 33 CTCCAGACATCA 12 SEQ ID NO: 34 TCACACCATAGCTCCA 16 2876- 2891 87.5% ,93.8% 43 201021803 表！ 寡聚物序列 SEQ ID NO 序列(Y-3·) 長度 (鹼基） 目標位點 HEE3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQ ID NO: 35 TCACACCATAGCTCC 15 SEQ ID NO: 36 CACACCATAGCTCCA 15 SEQ ID NO: 37 TCACACCATAGCTC 14 SEQ ID NO; 38 CACACCATAGCTCC 14 SEQ ID NO: 39 ACACCATAGCTCCA 14 SEQ ID NO: 40 TCACACCATAGCT 13 SEQ ID NO: 41 CACACCATAGCTC 13 SEQ ID NO: 42 ACACCATAGCTCC 13 SEQ ID NO: 43 CACCATAGCTCCA 13 SEQ ID NO: 44 - TCACACCATAGC 12 SEQ ID NO: 45 CACACCATAGCT 12 SEQ ID NO: 46 ACACCATAGCTC 12 SEQ ID NO: 47 CACCATAGCTCC 12 SEQ ID NO: 48 ACCATAGCTCCA 12 SEQ ID NO: 49 CATCCAACACTTGACC 16 3025- 3040 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 50 ATCCAACACTTGACCA 16 3024- 3039 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 51 CAATCATCCAACACTT 16 3029- 3044 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 52 TCAATCATCCAACACT 16 3030- 3045 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 53 CATGTAGACATCAATT 16 3004- 3019 87.5% 93.8% 44 201021803

表1 募聚物序列 SEQ ID NO 序列(S.-3f) 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQ ID NO: 54 TAGCCTGTCACTTCTC 16 435-450 68.8% 75% SEQ ID NO: 55 AGATGGCAAACTTCCC 16 530-545 68.8% 68.8% SEQ ID NO: 56 CAAGGCTCACAGATCT 16 1146- 1161 75% 68.8% SEQ ID NO; 57 AAGTCCAGGTTGCCCA 16 1266- 1281 75% 75% SEQ ID NO: 58 CATTCAAGTTCTTCAT 16 1490- 1505 75% 68.8% SEQ ID NO: 59 CACTAATTTCCTTCAG 16 1529- 1544 81.3% 68.8% SEQ ID NO: 60 CACTAATTTCCTTCA 15 SEQ ID NO: 61 ACTAATTTCCTTCAG 15 SEQ ID NO: 62 CACTAATTTCCTTC 14 SEQ ID NO: 63 ACTAATTTCCTTCA 14 SEQ ID NO: 64 CTAATTTCCTTCAG 14 SEQ ID NO: 65 CACTAATTTCCTT 13 SEQ ID NO: 66 ACTAATTTCCTTC 13 SEQ ID NO: 67 CTAATTTCCTTCA 13 SEQ ID NO: 68 TAATTtCCTTCAG 13 SEQ ID NO; 69 CACTAATTTCCT 12 SEQ ID NO: 70 ACTAATTTCCTT 12 SEQ ID NO; 71 CTAATTTCCTTC 12 SEQ ID NO: 72 TAATTTCCTTCA 12 SEQ ID NO: 73 AATTTCCTTCAG 12 45 201021803 表1 寡聚物序列 SEQ ID NO 序列(y·3’） 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQ ID NO; 74 GCCCAGCACTAATTTC 16 1535- 1550 75% 68.8% SEQ ID NO: 75 CTTTGCCCTCTGCCAC 16 1673- 】688 75% 75% SEQ ID NO: 76 CACACACTTTGCCCTC 16 1679- 1694 68.8% 75% SEQ ID NO: 77 CACACACTTTGCCCT 15 SEQ ID NO: 7S ACACACTTTGCCCTC 15 SEQ ID NO: 79 CACACACTTTGCCC 14 SEQ ID NO; 80 ACACACTTTGCCCT 14 SEQ ID NO: SI CACACTTTGCCCTC 14 SEQ ID NO: 82 CACACACTTTGCC 13 SEQ ID NO; 83 ACACACTTTGCCC 13 SEQ ID NO: 84 CACACTTTGCCCT 13 SEQ ID NO: 85 ACACTTTGCCCTC 13 SEQ ID NO: 86 CACACACTTTGC 12 .SEQIDNO: B7 ACACACTTTGCC 12 SEQ ID NO: 88 CACACTTTGCCC 12 SEQ ID NO: 89 ACACTTTGCCCT 12 SEQ ID NO: 90 CACTTTGCCCTC 12 SEQ ID NO: 91 CAGTTCCAAAGACACC 16 2345- 2360 75% 68.8% SEQ ID NO: 92 TGGCAATTTGTACTCC 16 2636 -2651 75% 6S.S% SEQ ID NO: 93 TGGCAATTTGTACTC 15 SEQ ID NO; 94 GGCAATTTGTACTCC 15 SEQ ID NO: 95 TGGCAATTTGTACT 14 46 201021803

表1 寡聚物序列 SEQ Π) NO 序列(5’-3<) 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQIDNO:96 GGCAATTTGTACTC 14 SEQ ID NO: 97 GCAATTTGTACTCC 14 SEQ ID NO: 98 TGGCAATTTGTAC 13 SEQ ID NO: 99 GGCAATTTGTACT 13 SEQ ED NO: 100 GCAATTTGTACTC 13 SEQ ID NO: 101 CAATTTGTACTCC 13 SEQ ID NO: 102 TGGCAATTTGTA 12 SEQ ID NO: 103 GGCAATTTGTAC 12 SEQ ID NO: 104 GCAATTTGTACT 12 SEQ ID NO: 105 CAATTTGTACTC 12 SEQID'NO: 106 AATTTGTACTCC 12 SEQ ID NO: 107 GTGTGTGTATTTCCCA 16 2848- 2863 75% 68.8% SEQ ID NO: 108 GTGTGTGTATTTCCC 15 SEQ ID NO: 109 TGTGTGTATTTCCCA 15 SEQ ID NO; 110 GTGTGTGTATTTCC 14 SEQ ID NO: 111 TGTGTGTATTTCCC 14 SEQ ID NO: ί 12 GTGTGTATTTCCCA 14 SEQ ID NO: 113 GTGTGTGTATTTC 13 SEQ ID NO: 114 TGTdTGTATTTCC 13 SEQ ED NO: 115 GTGTGTATTTCCC 13 SEQ ID NO: 116 TGTGTATTTCCCA 13 SEQ ED MO: 117 GTGTGTGTATTT 12 SEQ ID NO: 118 TGTGTGTATTTC 12 47 201021803 表1 寡聚物序列 SEQIDNO 序列(S，-3’） 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQJDNO: 119 GTGTGTATTTCC 12 SEQ1D NO: 120 TGTGTATTTCCC 12 SEQIDNO: 121 GTGTATTTCCCA 12 SEQ ID NO: 122 CCCTCTGATGACTCTG 16 3474- 3489 60% 68.8% SEQIDNO: 123 . CCCTCTGATGACTCT 15 SEQ ID NO; 124 CCTCTGATGACTCTG 15 SEQ ID NO: 125 CCCTCTGATGACTC 14 SEQ ID NO: 126 CCTCTGATGACTCT 14 SEQIDNO: 127 CTCTGATGACTCTG 14 SEQ ]D NO: 128 CCCTCTGATGACT 13 SEQ ID NO: 129 CCTCTGATGACTC 13 SEQ ID NO: 130 CTCTGATGACTCT 13 SEQ ID NO: 131 TCTGATGACTCTG 13 SEQ ID NO: 132 CCCTCTGATGAC 12 SEQIDNO: 133 CCTCTGATGACT 12 SEQIDNO; 334 CTCTGATGACTC 12 SEQIDNO: 135 TCTGATGACTCT 12 SEQ ID NO: 136 CTGATGACTCTG 12 SEQ ID NO: 137 CATACTCCTCATCTTC 16 3770- 3785 81.3% 81.3% SEQ ID NO: 138 CCACCACAAAGTTATG 16 1067- 1082 81.3% 68.8% SEQ ID NO: 139 CATCACTCTGGTGTGT 16 2858- 2873 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 140 GACATCACTCTGGTGT 16 2860· 2875 93.8% 87.5% 48 201021803

表1 寡聚物序列 SEQ ID NO 序列(5·-3·) 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQIDNO: 141 GsCsT$cscsasgsascsastscsasCsTsC 16 SEQ ID NO: 142 ^s^'s^'scsas^sascsas^scsascs^'s^s^' 16 SEQ ID NO: 143 ^$AsGsascsastscsascsiscsts^sGsT 16 SEQ ID NO: 144 ^s^s^scsastscsascstscsts^s^s^'s^ 16 SEQ ID NO: 145 ^s^1s^s^scstscscsasSsascsagTsCsA 16 SEQ CD NO: 146 Ts^sAscsascscsastsasgscsts<"sCsA 16 SEQ ID NO: 147 CsAsTscscsasascsascststsssAs^s<" .16 SEQ ID NO: 148 ^s^s^scsasascsascs^s^as^s^s^ 16 SEQ ID NO: 149 CsAsAstscsastscscsasascsasCsTsT 16 SEQ ID NO; 150 ^sCsAsastscsastscscsasascs^sCsT 16 SEQ ID NO: 151 CsAsTs&sts 兹 sgsascsVscsasAsTsT 16 SEQ ID NO; 152 16 SEQ ID NO: 153 WWsWAVsVsCsCsC 16 SEQ ID NO: 154 CsAs〜SsgscstscsascsascsasTsCsT 16 SEQ ID NO: 155 ^s^s^stscscsas^^sVs^scs^s^s'^ 16 SEQ ID NO: 156 CsAsTstscsasasgststscststs^sAsT 16 SEQJDNO: 157 ^sAs(^sisasastststscscststs^sAsG 16 SEQ ID NO: 15S ^s^s^scsas^scsascstsasasts^'s^s^' 16 SEQ ID NO: 159 ^s^sTstsgscscscstscsts%cs^sAs^ 16 SEQ ID NO: 160 CSASCSaSCSaSCSWSgSCSCSCSTSC 16 49 201021803 表1 寡聚物序列 SEQ ID NO 序列(5'-3') 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQIDNO:161 CAGStstscScsasasWscACSC 16 SEQ ID NO: 162 TsG^GSWsxsxsWsascsTsCSC 16 SEQ ID NO: 163 16 SEQ ID NO: 164 16 SEQ ID NO; 165 ^*sAsTsascstscscstscsastscsTsTsC 16 SEQTD NO: 166 CsCAWsWsgsVsVsG . 16 SEQ TD NO: 167 ^sAs^scsascsiscstsgsgstsfisTs^s*i， 16 SEQ ID NO: I6S ^si^sCsasiscsascstscsts^s^-i*s^s^ 16 SEQ ID NO: 169 ^s^s^scscsas^ascsasiscsas^*s^'s^' 16 SEQ ID NO: 170 CsT，sCscsasgsascsastscsascsTsCsT 16 SEQ ID NO: 171 ^s^sCisascsastscsascsiscsis^s^s，^ 16 SEQ ID NO: 172 WsWsWsWsW^G 16 SEQ ID NO: 173 ^sTs^sgscstscscsas%ascsas^，sCs^ 16 SEQIDNO:174 16 SEQ ID NO: 175 cATscscsWsascsVsgsAscsc 16 SEQ ID NO: 176 WsWsWAWeACsA 16 SEQ ID NO; 177 ^sAs^stscsastscscsasascsas^$^s'^ 16 SEQ ID NO: 178 Ts<"sAsastscsastscscsasascsAs^sT 16 SEQ ID NO: 179 ^sAs^s^stsas^ascsastscsas^sTs^ 16 SEQ ID NO: 180 TsAsGscscstsgstscsascststs<-：s，^sC 16

50 201021803

表1 募聚物序列 SEQ IB NO 序列(5'-3〇 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQID NO: 181 As^sAstsgsgscsasasascststsCsCs^ 16 SEQ ID NO: 182 CSAsAS8sgscstscsascsascsasTsCsT 16 SEQ ID NO: 183 AsAs^stscscsas^^tsts^cs^s^'sA 16 SEQ ID NO': 184 Ws^WsV祕sW 16 SEQ ID NO: 185 ^sAsCstsasastststscscststs^sAsG 16 SEQ ID NO: 186 GSCsCscSWsascstsasastsTSTSC 16 SEQ ID NO: 187 CSTsTSWscscstscstsgscsCSASC 16 SEQID NO: 188 ^S^'S^'SaSCSa5CStStStS^CSCS^S^，S^ 16 SEQID NO: 189 ^siS<^ststscscsasasasgsascsAsCsC· 16 SEQ ID NO: 190 TsGsGscsasasVsWsascsTscsc 16 SEQ ID NO: 191 ^^'s^sts^sts^s^sastststscs^s^s^' 16 SEQ ID NO: 192 ^sCsCstscstsgsastsgsa$cstsCsTsG 16 SEQ ID NO: 193 CsAsTsascstscscstscsasVsTsTs^ 16 SEQ ID NO: 194 cscsVscsascsWsgsVATsG 16 SEQID NO: 195 Cs^sTscsascs^scs^s®sgsM^TsGsT 16 SEQID NO: 196 GsAsCsastscsascstscstsgsgsTsGsT 16 SEQ ID NO: 200 CATAGCTCCAGACATCACTCTGGT 24 SEQID NO: 201 ATAGCTCCAGACATCACTCTGGTG 24. SEQ ID NO: 202 GCTCCAGACATCACTCTGGTGTGT 24 SEQ ID NO: 203 CTCCAGACATCACTCTGGTGTGTG 24 SEQ ID NO: 204 CACCATAGCTCCAGACATCACTCT 24 51 201021803 表1 寡聚物序列 SEQIDNO 序列(5·-3·) 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 HER2 SEQ ID NO: 205 ACTGTCACACCATAGCTCCAGACA 24 SEQ ID NO： 206 CAATCATCCAACACTTGACCATCA 24 SEQ ID NO: 207 AATCATCCAACACTTGACCATCAC 24 SEQ ID NO: 208 TCATCAATCATCCAACAC1TGACC 24 SEQ ID NO: 209 CTCATCAATCATCCAACACTTGAC 24 SEQ ID NO: 210 TCACCATGTAGACATCAATTGTGC 24 SEQ ID NO: 211 GACATAGCCl'GTCACTTCTCGAAT 24 SEQ ID NO: 212 ACGAAfiATGGCAAACTTCCCATCG 24 SEQ ID NO: 213 CCCACAACGCTOACACATCTTGAG 24 SEQ ID NO: 214 CAOAAAGTTCCAGGTTGCCCAGGAT 24 SEQ ID NO: 215 GTCi ACATTC AAGTTCTTC ATG ATC 24 SEQ ID NO: 216 CCACrCACTAATTTCCTTCAGGGAT 24 SEQ ID NO: 217 ATACGCCCAGCACTAATTTCCrrC 24 SEQ ID NO: 218 CACACrTTGCCCTCTGCCACGCAG 24 SEQ ID NO: 219 GGGTCACACACTTTGCCCTCTGCC 24 SEQ ID NO: 220 TGCArAOTTCCAAAGACACCCCxAG 24 SEQIDNO: 221 CrCTTGGCAATTTGTACTCCCCAG 24 SEQ ID NO; 222 TrTGr.TGTGTCTATTTCCCAAAGT 24 SEQ ID NO: 223 ATGCCCCTCTGATGACTCTGATGC 24 SEQ ID NO; 224 TATTCATACrCCTCATCTTCATCT 24 SEQ ID NO: 225 TGATCCACCACAAAGTTATGGGGA 24 SEQ ID NO: 226 CAGACATCACTCTGGTGTGTGTAT 24 SEQ ID HO: 227 TfirACJACATCACTCTGGTGTGTGT 24

52 201021803 表1 募聚物序列 SEQIDNO 序列(5'-3·) 長度 (驗基） 目標位點 HER3 互補 EGFR 互補 mm SEQIDNO: 228 TAGCCTGTCACTTCT 15 - SEQIDNO.-229 AGCCTGTCACTTCTC 15 SEQIDNO: 230 TAGCCTGTCACTTC 14 SEQroNO: 231 AGCCTGTCACTTCT 14 SEQTDNO: 232 TAGCCTGTCACTT 13 SEQ ID NO: 233 TAGCCTGTCACT 12 SEQ ID NO: 234 P^S^S^SCSCStS^tSCSaS^S^S^' 13

對於間隙聚合物序列（SEQ ID NO: 141-196及234 )而 言，粗體大寫字母指示核苷含有LNA糖且小寫字母指示2，-去氧核苷。下標「s」指示鄰近核苷之間的硫代磷酸酯鍵。 LNA單體中之所有胞嘧啶鹼基均為5-甲基胞嘧啶。對於具 有24個核苷之募核苷酸（SEQ ID NO: 21 1-227 )而言，如 ❷ 表1所示之粗體及加下線字母指示已併入較長寡核苷酸中 之較短寡聚化合物之鹼基序列。 1.5.6.結合物

在本揭不案之上下文中’術語「結合物」指示由如本 文中所述之寡聚物與一或多個自身不為核酸或單體之部分 (「結合部分」）共價連接（「結合」）所形成的化合物。該等 結合部分之實例包括大分子化合物，諸如蛋白質、脂肪酸 鏈、糖殘基、聽蛋白、聚合物或其組合。典型地，蛋白質 可為目標蛋白質之抗體。典型聚合物可為聚乙二醇。WO 53 201021803 2007/031091提供合適部分及結合物，該文獻以引用的方式 < 併入本文中。 因此’在一些具體實例中，本發明之組成物及方法利 用結合物’其包含如本文所述之募聚物及至少—種與寡聚 物共價連接之不為核酸或單體之結合部分。因此，在寡聚 物係由如本文中所揭示具有特異性鹼基序列之連續單體組 成的某些具體實例中，結合物亦可包含至少一個與該寡聚 物共價連接之結合部分。 在多個具體實例中，結合物可增強募聚物之活性、細 胞分布或細胞攝取。該等部分包括（但不限於）：抗體；多 狀，脂質部分，諸如膽固醇部分、膽酸；硫醚，例如己基_s_ 二笨曱基硫醇、硫代膽固醇；脂族鏈，例如十二烷二酵或 十一烷基殘基；磷脂，例如二·十六烷基_外消旋_甘油或丨，2_ 一-鄰十六烷基-外消旋_甘油基_3_h_膦酸三乙銨；多元胺或 聚乙二醇鏈；金剛烷乙酸；棕櫊基部分；十八烷基胺或己 基胺基-羰基-氧基膽固醇部分。 在某些具體實例中，寡聚物與增加寡聚化合物之細胞 ◎ 攝取的部分結合。 在某些具體實例中，募聚物與活性藥物（例如阿司匹 林Uspinn )、布洛芬（ibupr〇fen )、磺胺藥（仙也心叫）、 抗糖尿病藥、抗菌劑或抗生素）結合。 在某些具體實例中， 在多個具體實例中 成：帶正電聚合物， 7 ’結合部分為固醇，諸如膽固醇。 中’結合部分包含以下或由以下組 諸如長度為例如1-50、 諸如2-20、諸 54 201021803 -如3-10個胺基酸殘基之帶正電肽，及/或聚烷醚（諸如聚乙 二醇（PEG)或聚丙二醇），參見w〇 2008/034123，其以引 用的方式併入本文中。帶正電聚合物（諸如聚烷醚）可適 當地經由連接子（諸如WO 2008/034123中所述之可釋放連 接子）與本發明之募聚物連接。 1.5.6.1.1.活化募聚物 如本文所用之術語「活化寡聚物（activated oligomer )」 係指與至少一個官能部分共價鍵聯（亦即官能化）的本發 ® 明之募聚物（諸如上述寡聚物），該至少一個官能部分使得 寡聚物與一或多個結合部分（亦即，自身不為核酸或單體 之部分）共價鍵聯形成本文中所述之結合物。官能部分典 型地將包含能夠經由（例如）3 ’ -經基或腺嘌呤驗基之環外 NH2基團與募聚物共價鍵結之化學基團、在一些具體實例中 具有親水性之間隔基及能夠與結合部分結合之末端基團 (例如，胺基、酼基或羥基）。在一些具體實例中，此末端 魯 基團未經保護，例如為NH2基團。在其他具體實例中，末 端基團例如由任何合適的保護基（諸如Theodora W. Greene 及 Peter G. M. Wuts 之「Protective Groups in Organic Synthesis」，第 3 版（John Wiley & Sons，1999)中所述之 保護基）保護。合適的羥基保護基之實例包括酯，諸如乙 酸酯；芳烧基’諸如苯甲基、二苯基甲基或三笨基曱基及 四氫哌喃基。合適的胺基保護基之實例包括苯曱基、α_甲基 苄基、二苯基曱基、三笨基曱基、苄氧基羰基、第三丁氧 羰基及醯基（諸如三氯乙醯基或三氟乙醯基）。 55 201021803 在一些具體實例中，官能部分自裂解。在其他具體實 例中，官能部分可生物降解。例如參見美國專利第7，斯，229 號’其以全文引用的方式併入本文中。 在-些具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 寡聚物在5,端處官能化以使得結合部分與募聚物之5，端共 價連接。在其他具體實例中，寡聚物可在3,端處經官能化。 在其他具體實例中，寡聚物可沿主鏈或在雜環鹼基部分上 官能化。在其他具體實例中，募聚物可在一個以上獨立地 選自5端、3 ’端、主鏈及驗基之位置上經官能化。 ❹ 在一些具體實例中，活化寡聚物藉由在合成期間併入 一或多個與官能部分共價連接之單體來合成。在其他具體 實例中’本發明之活化募聚物係以未經官能化之單體來合 成’且寡聚物係在合成完成後官能化。 在一些具體實例中’募聚物係經含有胺基烷基連接子 之位阻酯官能化’其中烷基部分具有式（Ch2)w，其中w為 在1至10範圍内之整數，諸如約6’其中烷基胺基之烷基 部分可為直鏈或分支鏈，且其中官能基係經由酯基 〇 (•o-c(o)-(ch2)wnh)與寡聚物連接。 在其他具體實例中’募聚物係經含有（CH2)W-毓基（SH) 連接子之位阻酯官能化，其中w為在1至1〇範圍内之整數， 諸如約6，其中烷基胺基之烷基部分可為直鏈或分支鏈，且 其中官能基經由酯基（-0-C(0)-(CH2)wSH)與募聚物連接。 在一些具體實例中，酼基活化之募核苷酸係與諸如聚乙二 醇之聚合物部分或肽（經由形成雙硫鍵）結合。 56 201021803

-與至少一個官能部分共價鍵聯之活化募聚物可藉由此 項技術中已知之任何方法，且詳言之藉由各以全文引用的 方式併入本文中之美國專利第7,595,304號、WO 2008/034122 及 WO 2008/034119 及 Zhao 等人（2007) J· Controlled Release 119:143-152 ;及 Zhao 等人（2005) Bioconjugate Chem· 16:758-766中所揭示之方法來合成。 在其他具體實例中’用於本發明之醫藥組成物及方法 中之寡聚物係藉由藉助於實質上如美國專利第4,962,029號 ® 及第4,9 14,2 1 0號中所述之官能化試劑（亦即胺基磷酸酯在 一端經由親水性間隔基鏈與包含經保護或未經保護之巯 基、胺基或羥基之另一端鍵聯之實質上線性試劑）向寡聚 物中引入疏基、胺基或經基來官能化。該等試劑主要與募 聚物之羥基反應。在一些具體實例中，該等活化寡聚物具 有與募聚物之51-羥基偶合之官能化試劑。在其他具體實例 中’活化寡聚物具有與3 ’ -經基偶合之官能化試劑。在其他 ©具體實例中，活化寡聚物具有與寡聚物主鏈上之羥基偶合 之官能化試劑。在其他具體實例中，寡聚物係由一種以上 如美國專利第4,962,029號及第4,914,210號中所述之官能 化試劑來官能化，該等文獻以全文引用的方式併入本文 中。合成該等官能化試劑及將其併入至單體或寡聚物中之 方法揭示於美國專利第4,962,029號及第4,914,210號中。 在一些具體實例中、固相結合之募聚物之5,端係經二 烯基胺基磷酸酯衍生物官能化，之後使脫去保護基之募聚 物經由狄爾斯-阿爾德（Diels-Alder )環加成反應與例如胺 57 201021803 基酸或肽結合。 在多個具體實例中，將含有2^糖修飾之單體（諸如經 2、胺基曱酸酯取代之糖或2’-(0·戊基-N-鄰笨二醯亞胺基）-去氧核糖）併入至寡聚物中有助於結合部分與寡聚物之糖 的共價連接。在其他具體實例中，使用諸如V-二甲氧基三 笨曱基-2'-0-(e-鄰苯二醯亞胺基胺基戊基）-2·-去氧腺苷 -3’--N，N-二異丙基-氰基乙氧基胺基磷酸酯之試劑來製備在 一或多個單體之2、位置處具有含胺基之連接子的募聚物。 例如參見 Manoharan 等人，Tetrahedron Letters，1991, 34， 〇 7171。 在其他具體實例中，寡聚物在核鹼基上（包括在N6嘌 呤胺基上，在鳥嘌呤之環外N2上或在胞喊η定之N4或5位 置上）具有含胺之官能部分。在一些具體實例中，可藉由 使用已在寡聚物合成中官能化之商業試劑來達成該官能 化。 一些官能部分可購得，例如異質雙官能及同質雙官能 鍵聯部分係獲自Pierce公司（Rockford, 111.)。其他市售鍵 ❹ 聯基團為5·-胺基修飾劑C6及3’-胺基修飾劑試劑，兩者均 獲自 Glen Research Corporation (Sterling，Va·)。5'-胺基修 飾劑 C6 亦以 Aminolink-2 獲自 ABI ( Applied Bi〇systems 公司，Foster City，Calif.)，且31-胺基修飾劑亦獲自cl〇ntech

Laboratories 公司（pai〇 Alto, Calif.)。 在一些具體實例中’本發明之組成物包含—種以上寡 聚物以靶向兩種或甚至所有三種目標核酸。在多個具體實 58 201021803 .例中，本發明係關於一種醫藥組成物，其包含靶向HER3 之寡聚物及靶向HER2且下調HER2表現之寡聚物。在可相 同或不同之其他具體實例中，本發明係關於一種醫藥組成 物，其包含靶向HER3之寡聚物及靶向EGFR且下調EGFR 表現之另一寡聚物。 在一些具體實例中，靶向HER2及/或EGFR mRNA之 寡聚物（或其結合物）與靶向HER3之募聚物具有相同設計 (例如間隙聚合物、頭聚合物、尾聚合物）。在多個具體實 〇 例中，靶向HER2及/或EGFR mRNA之募聚物（或其結合 物）具有與靶向HER3之募聚物不同之設計。 在一些具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 寡聚物與結合部分共價鍵聯以有助於寡聚物傳遞通過細胞 膜。有助於寡聚物傳遞通過細胞膜之結合部分之實例為親 脂性部分，諸如膽固醇。在多個具體實例中，用於本發明 之醫藥組成物中之寡聚物與形成脂質體之脂質調配物（諸 如 Lipforectamine 2000 或 Lipforectamine RNAiMAX，其兩 ® 者都均可購自Invitrogen ) —起調配。在一些具體實例中， 將寡聚物與一或多種脂質樣非天然存在之小分子（「類脂質 (lipidoid )」）之混合物一起調配。類脂質庫可藉由習知合成 化學法合成且可檢定類脂質之不同量及組合以研發使特定 大小之寡聚物藉由所選投藥途徑有效傳遞至目標組織之媒 劑。合適的類脂質庫及組成物可見於（例如）獲自 http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/abs/nbt 1 40 2.html 之 Akinc 等人（2008) Nature Biotechnol.中，該文獻以 59 201021803 引用的方式併入本文中。 1·6·蛋白路胺後激酶抑制劑 如本文可互換使用之術語「蛋白酪胺酸激酶抑制劑 (protein tyrosine kinase inhibitor)」、「ρτκ 抑制劑（ΡΤΚ inhibitor )」及「路胺酸激酶抑制劑（tyr〇sine kinase inhibitor)」係指與一或多個酪胺酸激酶結構域結合且抑制 3亥一或多個酪胺酸激酶結構域之活性的分子。蛋白酪胺酸 激酶抑制劑不為如本文所述靶向HER3之寡聚物。在一些具 體實例中，蛋白酪胺酸激酶抑制劑為單株抗體。在其他具 ◎ 體實例中’蛋白路胺酸激酶抑制劑為分子量小於〗〇〇〇 Da (諸如介於300 Da與700 Da之間）之小分子。 在某些具體貫例中，PTK抑制劑與一或多個EGFR家 族成員之酪胺酸激酶結合且抑制該等酪胺酸激酶。在多個 具體實例中，PTK抑制劑與一或多種蛋白質之酪胺酸激酶 結合且抑制該等酪胺酸激酶，該一或多種蛋白質與一或多 個EGFR家族成員（例如涉及由一或多個EGFR家族成員發 起之一或多種信號級聯之蛋白質）相互作用或藉由該一或 ◎ 多個EGFR家族成員調節。在一些具體實例中，酪胺酸激酶 為受體酪胺酸激酶，亦即為具有細胞外配位體結合結構域 且藉由結合一或多個配位體來活化之較大蛋白質之細胞内 結構域。在某些具體實例中，蛋白酪胺酸激酶為非受體酪 酸激酶。酪胺酸激酶在一或多個信號傳導路徑中藉由將 其他蛋白質磷酸化來調節其他蛋白質之活性。 在多個具體實例中，適用於本發明之組成物及方法之 60 201021803 參 蛋白絡胺酸激酶抑制劑包括選擇性結纟EGFR家族成員之 赂月女酸激酶結構域之小分子抑制劑。在某些具體實例中， 適用於本發明之組成物及方法之蛋白赂胺酸激酶抑制劑包 括與EGFR蛋白質家族之__個以上&貞之^㈣μ 域結合且抑制該等結構域之活性的小分子抑制劑。在‘他 具體實例中，適用於本發明之組成物及方法之蛋白赂胺酸 激酶抑制劑包括不僅與受體絡胺酸激酶之egfr家族 f生、口而且與蛋白質之其他家族（諸如及 /或Raf)之酪胺酸激酶結構域結合之ρτκ抑制劑。在某此 具體實例中，PTK抑制劑為可逆抑制劑，亦即其與蛋白_ 結合但非不可逆改變。在多個具體實例中，PTK抑制齊^ 不可逆抑制劑，亦即其藉由與ρτκ受體二聚體共價 抑制ΡΤΚ。 ★ 在多個具體實例中，本發明涵蓋醫藥組成物，並包含 蛋白路胺酸激酶抑制劑之醫藥學上可接受之衍生物。如本 文所用之醫樂學上可接受之衍生物（pharmaCeuticaIly acceptable derivative )」_詞包括ρτκ抑制劑之任何醫 上可接受之鹽、前藥、放射性標記形式、立體異構體對 映異構體、非對映異構體、其 合物、幾何異構體、互變I構體構形式、外消旋混 變異構體、溶劑合物（例如水合物）、 非晶形固體形式及結晶固體形式。在—具體實例中，醫藥 學上可接受之料物為Ρτκ抑制劑之醫藥學上可^ 鹽、放射性標記形式、立辦 異構體、其他立體異構：：異=對映異構體、非對映 ^ 卜肩旋屍合物、幾何異構體 61 201021803 及/或互變異構體。在另一具體實例中，醫藥學上可接受之 何生物為PTK抑制劑之醫藥學上可接受之鹽。 在某些具體實例中，用於本發明之組成物及方法中之 PTK抑制劑呈非鹽形式（例如呈自由酸或自由驗形式）。在 ^他具體5例中’用於本發明之組成物及方法中之PTK抑 制劑呈醫藥學上可接受之鹽形式。如本文所用之「醫藥學 上可接焚之鹽」係指保持所要生物活性且呈現可接受程度 之不當毒性作用之鹽。 赂胺酸激酶抑制劑之醫藥學上可接受之鹽形式可藉由 0 %知方法製備。若Ρτκ抑制劑含有酸基’則合適鹽可由使 化合物與合適驗反應得到相應鹼加成鹽來形成。該等鹼包 括（但不限於）鹼金屬氫氧化物，包括氫氧化鉀、氫氧化 納及氮氧化鐘；驗土金屬氫氧化物，諸如氫氧化鋇及氫氧 化妈’驗金屬醇鹽’例如乙醇鉀及丙醇鈉；及各種有機鹼， 諸如°底°定、一乙醇胺及Ν -甲基楚胺醯胺。 或者’ Ρ τ Κ抑制劑之酸加成鹽可由用以下物質處理該 等化合物來形成：醫藥學上可接受之有機酸及無機酸（例 ◎ 如氮函酸’諸如氫氣酸、氫溴酸或氫碘酸）、其他無機酸及 其相應鹽（諸如硫酸鹽、硝酸鹽或磷酸鹽及其類似鹽及烷 基％酸鹽及單芳基磺酸鹽（諸如乙磺酸鹽、甲苯磺酸酯及 笨續酸鹽））及其他有機酸及其相應鹽（諸如乙酸鹽、三氟 乙酸鹽、酒石酸鹽、順丁烯二酸鹽、丁二酸鹽、檸檬酸鹽、 苯甲酸鹽、水楊酸鹽 '抗壞血酸鹽及其類似鹽 > 因此，ΡΤΚ 抑制劑之醫藥學上可接受之酸加成鹽包括（但不限於）乙 62 201021803 酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、精胺酸鹽、天冬胺酸鹽、苯 甲酸鹽、苯績酸鹽（benzenesulfonate、besylate )、硫酸氣 鹽、亞硫酸氫鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸 鹽、辛酸鹽、氣化物、氣苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、環戊烷丙 酸鹽、二葡糖酸鹽、磷酸二氫鹽、二;5肖基苯甲酸鹽、十二 烧基硫酸鹽、乙續酸鹽、反丁婦二酸鹽、半乳糖二酸鹽（來 自黏液酸）、半乳糖醛酸鹽、葡糖庚酸鹽、葡糖酸鹽、麩胺 酸鹽、甘油磷酸鹽、半丁二酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己 〇 酸酯、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫峡酸鹽、2-羥基乙 磺酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、異丁酸鹽、乳酸鹽、乳 糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、 偏磷酸鹽、甲磺酸鹽、曱基苯甲酸鹽、單氫磷酸鹽、2-萘磺 酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、油酸鹽、雙羥萘酸鹽 (palmoate)、果膠酸鹽、過氧硫酸鹽、苯乙酸鹽、3-苯基丙 酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、鄰苯二曱酸鹽。

適用於本發明之方法及組成物之PTK抑制劑包括（但 ® 不限於）吉非替尼（ZD-1839，Iressa® )、埃羅替尼 (OSI-1774，Tarceva™)、卡奈替尼（CI-1033 )、凡德他尼 (vandetanib ) ( ZD6474，Zactima® )、替伏汀 AG-825 (替伏 汀 AG-825 ) ( CAS 149092-50-2)、拉帕替尼（GW-572016 )、 索拉非尼（BAY43-9006 )、AG-494 ( CAS 133550-35-3 )、 RG-13022 ( CAS 149286-90-8 )、RG-14620 ( CAS 136831-49-7 )、BIBW 2992 ( Tovok )、替伏汀 9 ( CAS 13 6831-49-7 )、替伏汀 23 ( CAS 1 18409-57-7)、替伏汀 25 63 201021803 (CAS 1 18409-5 8-8 )、替伏汀 46 ( CAS 122520-85-8 )、替伏 汀 47 ( CAS 122520-86-9)、替伏汀 53 ( CAS 122520-90-5 )、 紫鉚因（butein) ( l-(2,4-二羥苯基）-3-(3,4-二羥苯基）_2·丙 稀-1-酮2'，3,4,4’ -四經查耳酮；CAS 487-52-5)、薑黃素 ((E，E)-1，7-雙（4 -經基-3-甲氧基苯基）-i，6-庚二烯·3,5·二 酮；CAS 458-37-7 )、Ν4-(卜苯甲基-1Η-吲唑-5-基）-Ν6，Ν6-二曱基-吡啶并-[3,4-d]-嘧啶-4,6·二胺（202272-68-2 )， AG-1478、AG-879、環丙烷甲酸_(3·(6·(3·三氟甲基_苯基胺 基）-’啶-4-基胺基）苯基）_醯胺（CAS 879127-07-8 )、Ν8-(3- ® 氣-4-氟苯基）-Ν2-(1-曱基派啶-4-基）_嘧啶并[5,4_d]嘯啶 •2’8-—胺、2HC1 (CAS 196612-93-8)、4-(4-笨甲氧基苯胺 基）-6,7-二甲氧基喹唑啉（CAS 179248-61-4)、N-(4-((3-氣 -4-氟苯基）胺基）吡啶并[3,4_d]嘧啶-6_基）2_丁醢胺（cas 881001-19-0 )、EKB-569、HKI-272 及 HKI-357。 在一些具體實例中’ PTK抑制劑係選自吉非替尼 '埃 羅替尼、拉帕替尼 '卡奈替尼及索拉非尼。 在某些具體實例中，酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 ❹ ptk抑制劑可藉由此項技術中已知之任何方法獲得。 在一些具體實例中，PTK抑制劑可購自例如sigma_Aldrich<g) 及Cayman Chemica卜在多個具體實例中，ρτκ抑制劑由醫 生處方購自例如 AstraZeneca、R〇che、Glax〇SmithKiine 及

Bayer· Pharmaceuticals。在其他具體實例中，ρτκ抑制劑可 藉由此項技術中已知之方法合成，例如藉由Rewcastie，g.w 等人，（1996) J. Med. Chem· 39:918_928 中所述之方法。 64 201021803 在多個具體實例中，本發明之組成物包含一種以上酪 胺酸激酶抑制劑。在一些具體實例中，一種路胺酸激酶抑 制劑對特定受體酪胺酸激酶（例如吉非替尼）具選擇性， 且第二酪胺酸激酶抑制劑相對無選擇性（例如索拉非尼）。 在多個具體實例中，第二酪胺酸激酶抑制劑與一個以上 EGFR家族成員（例如拉帕替尼）之路胺酸激酶結構域結 合。在其他具體實例中，第二酪胺酸激酶抑制劑與不同家 ❹ ❹ 族（諸如VEGFR)中之PTK受體之㈣酸_結構域結合。 1.6.1.醫藥學上可接受之賦形劑及劑型 一在一些具體實例中，本發明之醫藥組成物包含至少— 種寡聚化合物、至少一種ρτκ抑制劑或其醫藥學上^ 二 =及合適量之醫藥學上可接受之賦形劑以提供適； ::、者之形式。如本文所用之術語「患者（patient) 二(：不限則人類或非人類動物，諸如伴侣匕 :牛，猴子、拂狒、黑ί1Μ、馬、羊、緒、雞、J、 實：中Γ小鼠、大鼠、兔子或天竺氣。在多個具趙 至；一種寡聚化合物及至少-種ρτκ抑制劑产 :物―::組成物中。在其他具雜實例中’至少-種::： 性成份處二獨LPTK抑制劑處於獨立醫藥組成物中。在活 起/ 成物中之該等具體實射，組成物可— 匕裝（共同包裝）以用於無向HER3之組合療法 崩解==可:稀!劑、懸浮劑、增溶劑、1合劑、 m 著色劑、潤滑劑及其類似賦形# _ 馱形劑可為液體，諸^ ϋ β 1 ❿齊丨。醫藥 諸如水或油（包括石油、動物、植物來 65 201021803

源或合成來源之油’諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻 油及其類似油）。醫藥賦形劑可為生理食鹽水、阿拉伯膠' 明膠'澱粉糊、滑石、角蛋白、膠狀二氧化石夕、尿素及其 類似賦形m卜’可使用助劑' 穩定劑、增_、潤滑 劑及著色劑n體實例中，當投予患者時醫藥學上可 接丈之賦形劑無菌。當靜脈内投予募聚物或Ρτκ抑制劑 時，水為尤其有用之賦形劑。亦可將生理食鹽水溶液及水 性右旋糖及甘油溶液用作液體賦形劑，尤其用於可注射溶 液。合適的醫藥賦形劑亦包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、 明膠、麥芽、水稻、麵粉'白堊、矽膠、硬脂酸鈉、單硬 脂酸甘油酿、滑石、氣化鈉'脫脂乳粉、甘油、丙二醇、 水、乙醇及其類似賦形劑》本發明之組成物（必要時）亦 可含有微小量之潤濕劑或乳化劑或pH緩衝劑。可用以調配 口服劑型之醫藥學上可接受之賦形劑之具體實例描述於

Handbook of Pharmaceutical Excipients, American Pharmaceutical Association ( 1986 )中。

本發明之醫藥組成物可呈溶液、懸浮液、乳液、錠劑、 藥丸、小球、膠囊、含有液體之膠囊、散劑、持續釋放調 配物、栓劑、乳液、霧劑 '喷霧 '懸浮液形式或適用之任 何其他形式。合適醫藥賦形劑之其他實例描述於

Remington's Pharmaceutical Sciences 1447-1676 (Alfonso R

Gennaro編，第19版，1995)中，該文獻以引用的方式併入 本文中。 在多個具體實例中，組成物根據常規程序調配為適合 66 201021803

:口服投^人類之組成物。經口傳遞之募聚物或小分子PTK "制劑可呈例如錠劑、膠囊、膠囊錠（geleap)、囊片、口 含劑、、水性或油性溶液、懸浮液、顆粒劑、散劑、乳液、 糖4或Ιέ劑形式。當將活性劑併人口服㈣丨中冑，該等鍵 劑可為壓I錠、研製錠劑（例如粉末狀錠劑或壓碎鍵劑>、 t錠齊J糖衣鍵劑、薄膜衣鍵劑、多重壓製旋或多層鍵 W製把固體口服劑型之技術及組成物描述於Marcei Dekker公司出版之心崎⑽㈣以吨心阳聊… (Ueberman'Lachman 及 Schwartz 編，第 2版）中。製造錠 劑（壓製鍵及模製錠）、膠囊（硬膠囊及軟膠囊）及藥丸之 技術及組成物亦描述於Remingt〇n,s pb似⑶ fences 1553_1593 (Arthur 〇s〇1 編第 i6 版，

Publishing，Easton，PA 1980)中。 液體口服劑型包括水性及非水性溶液、乳液、懸浮液 及由非發泡顆粒復原之溶液及/或懸浮液，視情況含有一或 夕種合適溶劑、防腐劑、乳化劑、懸浮劑、稀釋劑、甜味 劑、著色劑、調味劑及其類似物。製造液體口服劑型之技 術及組成物描述於Marcel Dekker公司出版之 Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, (Lieberman、Rieger 及 Banker 編）中。 當將本發明之組成物非經腸注射時，其可例如呈等張 無菌溶液形式。或者’當吸入組成物時，可將其調配為乾 燥霧劑或可調配為水溶液或部分水性之溶液。 經口投予之組成物可含有一或多種藥劑（例如甜味 67 201021803 劑諸如果糖、阿斯巴甜（aspartame)或糖精；調味劑， ❹ *月椒4荷冬青油或櫻桃；I色劑；及防腐劑）以得 ]醫某學上美味之製劑。此外，錠劑或藥丸形式之醫藥組 成物可經包覆包衣以延遲在胃腸道中之崩解及吸收，藉此 提供長時間的持續作用。滲透活性驅動化合物周圍之選擇 性滲透膜亦適用於經口投予組成物。在此等後者平台中， 驅動化合物吸入膠囊周圍環境之流體，該驅動化合物膨脹 以紅由孔取代藥劑或藥劑組成物。與立即釋放調配物之峰 值特徵（spiked profile)相反，此等傳遞平台可提供基本上 零級之傳遞特徵。亦可使用諸如單硬脂酸甘㈣或m 上甘油酯之時間延遲物質。口服組成物可包括標準賦形劑， 諸，甘露糖醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎖、糖精納、纖維素 及奴&L鎂。在一具體實例中，賦形劑為醫藥級的。 〇 在另—具體實例巾，可調配組成物用於靜脈内投予。 用於靜脈内投予之組成物典型包含無菌等張水性緩衝液。 必要時’組成物亦可包括增溶劑。用於靜脈内投予之紐成 物可視情況包括諸如苯佐卡目（benzocaine)或丙胺卡因 (pnlocaine)之局部麻醉劑以減輕注射部位之疼痛。通常， 將各成份分別補充或以單位劑型一起混合，例如呈於指干 活性劑之量的密閉容器（諸如安訊或藥囊）中之乾燥^ 乾燥散劑或無水濃縮物。在藉由輸注投予組成物之情況 下’可將其例如用含有無菌醫藥級水或生理食鹽水之輸液 并瓦分配。在藉由注射投予活性劑之情況下，可提供一安瓶 之無菌注射用水或生理食鹽水以在投予之前混合各成份。° 68 201021803 - 纟發明m成物可藉由控制釋放或持續釋放方法 或藉由熟習此項技術者已知之傳遞裝置投予。實例包括（;曰 不限於）美國專利第3,845,770號，·第3,916,899號；第 3,536,809 ^ % 3,598,123 % ; % 4,008,719 % ； % 5,674,533 號，第 5,〇59,595 號；第 5,591，767 號；第 5，12〇,548 號；第 ^〇73,543 遽；第 5,639,476 號；第 5,354’556 號及第 5,733,566 號中所述之實例，各文獻均以引用的方式併入本文中。可 使用a亥等劑型且使用例如經丙基甲基纖維素、其他聚合物 基質 '凝膠、參透膜、滲透系統、多層包衣、微粒、多顆 粒。、月夕旨質艘、微球體或其組合提供控制釋放或持續釋放之 或夕種$性成份’以得到變化比例之所要釋放特徵。可 易於選擇熟習此項技術者已知之合適的控制釋放或持續釋 放調配物（包括本文所述之彼等調配物）以與本發明之活 性成份一起使用。因此，本發明涵蓋適用於口服投予之單 一單位劑型’諸如（但不限於）適合於控制釋放或持續釋 @ 放之錠劑、膠囊、膠囊錠及囊片。 本文所述之醫藥組成物可口服、肺部、表面（例如表 皮、經皮、眼用及黏膜（包括陰道及直腸傳遞））或非經腸 (包括靜脈内、動脈内、皮下、腹膜内或肌肉内注射或輸注） 投予。在一具體實例中，將含有治療性募聚物之醫藥組成 物靜脈内（i.v.)、腹膜内（i.p.)或以快速注射方式投予。 在本發明之許多態樣中非經腸途徑較佳。適當調配物取決 於所選投藥途徑，亦即是否進行局部或全身治療。在將至 少一種募聚物及至少一種PTK抑制劑調配為獨立組成物之 69 201021803 多個具體實例中’ t藥組成物無需呈相同形式（例如 劑型、液體劑型'_且無需藉由相同途徑（例如經口' 非經腸、表面）或同時投予。舉例而言，本發明涵蓋醫 組成物，其中將寡聚物調配為用於口服投予之劑型，例如 錠劑、膠囊、口服糖漿及其類似劑型，且其中將ρτκ 劑調配為用於靜脈内投予或藉由吸入投予之劑型。 1 1·6·2·給藥方案 可每隔一定時間（「給藥時間間隔」或「m」）在3天 至兩週的範圍内投予乾向HER3(及視情況存在之刪2及❹ 响R中之-或多者）之LNA寡聚物。在—些具體實例中， 為 4、5、6、7、8、9、0、u、12wum@_ 例中，DI為約1週。在其他具體實例中，DI為6、7或8 天。至少兩次給藥適當地具有介於該兩次給藥之間的βι， 諸如3、4、5、6、7、8 ' 9或1〇次給藥’各自具有介於連 續給與LNA寡聚物之間的DI。各次給藥之間的以時期可

忐相同。纟一些具體實例中，m時期在3天至兩週之範圍 内。在其他具體實例中’ DI時期為4、5、6、7、8、9、1〇、 Q 1 1、12或13天。在其他具體實例中，DI時期為約i週。 在某些具體實例中，DI時期為6 ' 7或8天。 在一些具體實例中，乾向HER3(及視情況存在之HER2 及EG FR中之一或多者）之ln a寡聚物之各劑量在每公斤 體重約0.25 mg至約1〇 mg之範圍内，諸如約〇 5 mg/kg、 '、、勺 1 mg/kg、約 2 mg/kg、約 3 mg/kg、約 4 mg/kg、約 5 mg/kg、 約 6 mg/kg、約 7 mg/kg、約 8 mg/kg 或約 9 mg/kg。在一些 70 201021803 .具體實例中，靶向HER3 (及視情況存在之HER2及EGFR 中之一或多者）的LNA寡聚物之各劑量在約2 mg/kg至約 8 mg/kg，或約 4 mg/kg 至約 ό mg/kg，或約 4 mg/kg 至約 5 mg/kg之範圍内。在一些具體實例中’乾向her3 (及視情 況存在之HER2及EGFR中之一或多者）之LNA寡聚物之 各劑量為至少2 mg/kg，諸如2、3、4、5、6、7或8 mg/kg。 在多個具體實例中，各劑量為6 mg/kg。 典型藉由諸如皮下、肌肉内、靜脈内或腹膜内投予之 〇 非經腸投予方式投予LNA寡聚物。在某些具體實例中，投 予為靜脈内投予。 在一些具體實例中’在初始給藥方案之後重複LN a寡 聚物之給藥方案。在多個具體實例中，視需要重複給藥方 案以治療疾病或預防疾病惡化。 在某些具體實例中’經相對短時間間隔而非連續地投 予靶向HER3 (及視情況存在之HER2及EGFR中之一或多 者）的LNA募聚物。在多個具體實例中，短投予時間明顯 ® 改善患者之生活品質，此係因為其不需長時間住院。因此， 在多個具體實例中’不會藉由連續輸注來投予靶向HER3 (及視情況存在之HER2及EGFR中之一或多者）的LNa募 聚物。因此可將各劑量之LNA募聚物以小於12小時，諸如 小於約8小時、小於約4小時，諸如小於約3小時之時間 間隔投予患者。因此，可將各劑量之LNA寡聚物以約i小 時與約4小時範圍内，諸如約2小時至約3小時，或約2 小時之時間間隔投予患者。可將LNA寡聚物以至少3〇分 71 201021803 在里諸如至少1小時之時間間隔投予患者。該等投予可例 如靜脈内進行。 在一些具體實例中，可在投予一或多種醫藥學上有效 量之把向HER3 (及視情況存在之HER2及EGFR中之一或 夕者）的LNA募聚物之前、與之同時或在其隨後投予醫藥 學上有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑。典型地，投予一或 夕種有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑以使LNA募聚物與蛋 白路胺酸激酶對患者提供並行治療效益。 ❹ 1·6·3·套組 本發明亦提供一種套組，其包含第一組份及第二矣 份。在多個具體實例中，第一組份包含至少一種能夠抑伟 (例如下調）HER3表現之寡聚物或其結合物及/或醫藥組〆 物ρ且第一組份包含至少一種對一或多個egfr家族成員^ 有選擇性之小分子蛋白酪胺酸激酶抑

例中，該套組包含作為治療劑而非募核㈣或ρτκ抑^ ^第三組份，諸如化學治療劑（例如紫杉酚）。在一些具骨 實例中’將本發明之套組用於治療過度增生性病症（諸士 癌症）之方法中，該方法包含向有需要患者投予套組中4 有效量之第-組份及第二組份，個具體實例中，並今 或同時投予第一組份及第二組份。在其他具體實例中，令 序且以任何次序投予第一組份及第二組份。 在-些具體實例中，該套組包含以下：包含能夠抑讳 (例如下調）臟3表現之本發明募聚物或其結合物及/或！ 樂組成物之第-組份；及作為蛋白路胺酸激酶抑制 72 201021803 一 H及作為能夠抑制（例如下調）如本文所述之HER2 及EGFR中之—或多者表現之募聚物或其結合物及/或醫藥 組成物之第三組份。 、

本發明之一具體實例提供一種套組，其包括呈套組内 之獨立組成物形式之至少一種募聚化合物及至少-種PTK 抑制劑。舉例而言，本發明之一種套組具體實例包含根據 SEQIDN〇: 180之募聚化合物& ΡΤΚ抑制劑吉非替尼，各 自在套組内呈獨立組成物形式。 © 1.7.方法 在某些具體實例中，本發明涵蓋抑制騰3在細胞中的 表現及/或活性之方法，該方法包含使細胞與有效量之寡聚 化合物（或其結合物）及有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑 接觸以抑制（例如下調）HER3 (及視情況存在之刪2及 EGFR中之一或多者）於細胞中之表現及/或活性。在某些 具體實例中，抑制HER3 (及視情況存在之_2及E咖 巾之一或多者）灿财表現。在其他具體實例中，抑制腿3 » (及視情況存在之賊2及EGFR中之一或多者）蛋白質表 現。在其他具體實例中，抑制（例如下調）egfr家族成員 之路胺酸激酶之活性。在多個具體實例中，抑制（例如下 調）HER3(及視情況存在之HER2& EGFR中之—或多者） 内化至細胞中。在多個具體實例中，細胞為哺乳動物細夕胞， 諸如人類細胞。 在某些具體實例中，接觸在試管内發生。在其他具體 實例中，藉由向哺乳動物投予本發明之組成物實現活㈣ 73 201021803 接觸。在多個具體實例中，本發明提供一種抑制（例如下 調）HER3蛋白質及/或mRNA之表現，及/或HER3内化至 細胞中及HER2蛋白質及/或mRNA於細胞中之表現及/或 HER2酪胺酸激酶之活性，及/或HER2内化至細胞中之方 法。人類HER2 mRNA之序列以SEQ ID NO: 199展示。在 其他具體實例中，本發明提供一種抑制（例如下調）HER3 蛋白質及/或mRNA於細胞中的表現，及/或HER3内化至細 胞中及EGFR蛋白質及/或mRNA於細胞中的表現，及/或 EGFR酪胺酸激酶之活性，及/或EGFR内化至細胞中之方 ❹ 法。人類EGFR mRNA之序列以SEQ ID NO: 198展示。在 其他具體實例中，本發明提供一種抑制（例如下調）HER3、 HER2及EGFR mRNA及/或蛋白質於細胞中的表現，及/或 HER2及EGFR路胺酸激酶之活性，及/或HER3、HER2及 EGFR内化至細胞中之方法。 在某些具體實例中，本發明係關於一種治療患者疾病 之方法，該方法包含向有需要之患者投予包含有效量之至 少一種寡聚物或其結合物、有效量之至少一種小分子蛋白 ❹ 路胺酸激酶抑制劑及醫藥學上可接受之賦形劑之醫藥組成 物。如本文所用之術語「治療（）」係指 治療現有疾病（例如如下文所提及之疾病或病症）或預防 疾病’亦即預防（prophylaxis)。 在多個具體實例中’本發明係關於一種治療患者疾病 之方法，其中寡聚物（或其結合物）及蛋白路胺酸激酶抑 制劑處於不同醫藥組成物中。在某些具體實例中，兩種組 74 201021803 成物可並行或同時投予。在其他具體實例中，兩種組成物 可以任何夂序依序投予。在多個具體實例中，包含寡核苷 -(或八、’’α 口物）之組成物及包含蛋白絡胺酸激酶抑制劑 之組成物可以不同給藥進度及不同濃度、以不同劑型及藉 由不同投藥途徑投予。 投藥方法包括（但不限於）皮内、肌肉内、腹膜内、 非經腸、靜脈内、皮下、鼻内、硬膜外、口服、舌下、大 腦内、陰道内、經皮、直腸、吸入或表面、尤其耳、鼻、 β目艮或皮膚。投藥方法遵從相關技藝人士之判斷。 亦可例如藉由使用吸入器或噴霧器及用霧化劑調配或 、、一由在敗反化σ物或合成的肺部界面活性劑中灌注而肺部 投予。在某些具體實例中，寡聚& (或其結合物）及/或蛋 白酪胺酸激酶抑制劑可與傳統黏合劑及賦形劑（諸如甘油 二s旨）一起調配為栓劑。 虽藉由注射（例如連續輸注或快速注射）將募聚物（或 其、、Ό σ物）及/或蛋白酪胺酸激酶抑制劑合併以實現非經腸 投予時，用於非經腸投予之調配物可呈於油性或水性媒劑 中之懸夺液、溶液、乳液形式，且該等調配物可進一步包 含醫藥學上必要之添加劑’諸如—或多種穩定劑、懸浮劑、 分散劑及其類似物。募聚物（或其結合物）及/或蛋白㈣ 酸激酶抑制劑亦可呈可復原為可注射調配物之散劑形式。 在八他八體實例中，养聚物（或其結合物）及/或蛋白 酪胺酸激酶抑制劑可於小泡、詳言之脂質體中傳遞（參見 Langer’ Science 249:1527_1533 (199〇);及 等人 75 201021803

Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer 317-327 及 353-365 (1989))。 在其他具體實例中’寡聚化合物（或其結合物）及/或 蛋白酪胺酸激酶抑制劑可於控制釋放系統或持續釋放系統 中傳遞（例如參見 Goodson， 「Dental Applications」（第 115-138 頁）in Medical Applications of Controlled Release, 第 2 卷，Applications and Evaluation, R.S· Langer 及 D.L.

Wise 編，CRC Press (1984) ; Langer, Science 249:1527-1533 (1 990))。在多個具體實例中’控制釋放或持續釋放傳遞可 0 藉由泵（Langer，Science 249:1527-1533 (1990); Sefton, CRC Crit Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald 等人， Surgery 88:507 (1980);及 Saudek 等人，N. Engl· J. Med. 321:574 (1989))或藉助於聚合材料（參見Medical

Applications of Controlled Release (Langer 及 Wise 編， 1974) ； Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen 及 Ball 編，1984) ; Ranger 及 Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 o (1983) ; Levy 等人，Science 228:190 (1985) ; During 等人，

Ann. Neurol. 25:351 (1989);及 Howard 等人，J. Neurosurg. 71:105(1989))實現。 在某些具體實例中，本發明之組成物適用於抑制細胞 增殖。在多個具體實例中，抗增殖效應為與未經處理之細 胞樣品相比細胞增殖降低至少10%、降低至少20%、降低 至少30°/。、降低至少40%、降低至少50% '降低至少60%、 76 201021803 ❹ 降低至少、70〇/〇、降低至少8〇%或降低至少9〇%。在其他具 體實例中，抗增殖效應為與僅用募聚化合物或小分子蛋白 酪胺酸激酶抑制劑處理（「單一療法」）之細胞樣品相比細 胞増殖降低至少10%、降低至少2〇%、降低至少3〇%、降 低至少40%、降低至少50%、降低至少6〇%、降低至少观、 降低至少80%或降低至少9〇%。在多個具體實例中，細胞 為癌細胞。在一些具體實例中，癌細胞係選自乳癌細胞、 前列腺癌細胞、肺癌細胞及上皮癌細胞。 因此本發明之組成物適用於治療諸如癌症之過度增 生性疾病。在-些具體實例中，藉由本發明之乾向腿3 之組合療法治療之癌症係選自由以下組成之群：淋巴瘤及 白血病（例如非霍奇金氏淋巴瘤（__H〇dgk… lym_n〇、霍奇金氏淋巴瘤、急性^病、急性淋巴球性 白血病、急性髓細胞性白血病、慢性骨髓白血病、慢性淋 巴球性白血病、多發性骨髓瘤）、結腸癌、直腸癌、上皮癌、 胰：癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、腎細胞癌、肝細胞瘤、 膽管癌、絨膜癌、子宮頸癌、睾丸癌、肺癌、膀胱癌、黑 色素瘤、頭頸癌、腦癌、原發部位不明的轉移癌、贊瘤、 周圍神經系統之癌症、中樞神經系統之癌，症、纖維肉瘤、 黏液肉瘤、月旨肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原性肉瘤、脊索瘤、 血管肉瘤、内皮肉冑、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑 膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤（Ewing，s __)、平滑肌肉瘤、 橫紋肌肉冑、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、 皮脂腺癌、乳突癌、乳突腺癌、囊腺癌、趙質癌、支氣管 77 201021803 癌、精原細胞瘤、胚胎癌、威姆氏瘤（洲咖，她衝 細胞肺癌、上皮癌、神經膠瘤、星形細胞瘤、神經管母細 胞瘤、顧咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤' 聽神經瘤、募樹突神經膠細胞瘤、腦㈣膜瘤、神經母細 胞瘤及視網膜母細胞瘤、重鏈病、癌轉移或以不受控 常細胞生長為特徵之任何疾病或病症。

^在某些具體實例中，疾病為選自由肺癌、前列腺癌、 n @巢癌、結腸癌、上皮癌及胃癌組成之群的癌症。 在某些其他具體實例中，肺癌為非小細胞肺癌。 如以下實例所示，本發明之組合療法使得可治療對例 如吉非替尼或另一 PTK抑制劑之單一療法有抗性之癌症。 在多個具體實例中，本發明之疾病之治療可與一或多 種其他抗癌治療（諸如放射線療法、化學療法或免疫療法） 組合。 在某些具體實例中，疾病與HER3基因（及/或HER2 基因及/或EGFR基因）或蛋白質產物與HER3相關或與之 相互作用之基因的突變相關β在一些具體實例中，突變基 ❹ 因編碼在酪胺酸激酶結構域中具有突變之蛋白質。在多個 具體實例中，酪胺酸激酶結構域之突變處於小分子ρτκ抑 制劑之結合位點及/或ΑΤΡ結合位點。因此，在多個具體實 例中’目標mRNA為HER3 (及/或HER2及/或EGFR)序 列之突變形式；例如其包含一或多個單點突變，諸如與癌 症有關之SNP。 在某些具體實例中，疾病與HER3之突變形式之異常含 78 201021803 • 量相關。在某些具體實例中，疾病與HER3之野生型形式之 異常含量相關。本發明之-態樣係針對一種治療患有或易 患與HER3之異常含量有關之病況之患者的方法，該方法包 含向患者投予治療有效量之輕向HER3之寡聚物或其結合 物及有效量之小分子蛋白赂胺酸激酶抑制劑，該抑制^ EGFR家族成員及/或與-或多個EGFR家族成員相互作用 之蛋白質之酪胺酸激酶結構域結合。在—些具體實例中， 寡聚物包含-或多個LNA單元。在多個具體實例中’ ρτκ ® 抑制劑為吉非替尼。 在另-具體實例中，本發明係針對—種治療患有或易 患與HER2突變形式之異常含量或HER2野生型形式之異常 含量有關之病況之患者的方法，肖方法包含向哺乳動物投 予治療有效量之革巴向HER3(及視情況存在之舰2及egfr 中之一或多者）之募聚物或其結合物，及有效量之與—或 多個EGFR家族成員及/或與-或多個EGFR家族成員相互 作用之蛋白質之路胺酸激酶結構域結合之小分子赂胺酸激 酶抑制劑。在一些具體實例中，募聚物包含一或多個㈣ 單元。在多個具體實例中’ Ρτκ抑制劑為吉非替尼。 在其他具體實例中，本發明係針對一種治療患有或易 患與突變⑽叹之異常含量或野生型egfi^異常含量有關 之病況之患者的方法，㉟方法包含向患者投予治療有效量 之無向HER3 (及視情況存在之HER2及中之一或多 者）之募聚物或其結合物’及有效量之與egfr家族成員及 /或與EGFR家族成員相互作用之蛋白質之酿胺酸激酶結構 79 201021803 域結合之小分子酷胺酸激酶抑制劑^在一些具體實例中， 养聚物包含一或多個LNA單元。在多個具體實例中，ρτκ 抑制劑為吉非替尼。 在多個具體實例中，如本文所述，本發明涵蓋—種預 防或治療疾病之方法，該方法包含向需該治療之人類投予 ’口療有效量之調節HER3調節型寡聚物（及視情況存在之 HER2及EGFR中之一或多者）之寡聚物或其結合物及有效 量之與EGFR家族成員及/或與一或多個EGFR家族成員相 互作用之蛋白質之酪胺酸激酶結構域結合之酪胺酸激酶抑 ◎ 制劑。 對治療或預防疾病之有效之至少一種募聚物及至少一 種PTK抑制劑之量可藉由標準臨床技術來測定。通常劑量 範圍可基於認為在試管内及活體内動物模型中有效之Ec5〇 來估§十。待使用之精確劑量亦視例如投藥途徑及疾病之嚴 重性而定’且可根據相關技藝人士之判斷及/或各患者之情 /兄來決定。在其其他實例中，必定視接受治療之患者的體 重及身體狀況（例如肝功能及腎功能）、待治療之病痛 '症 ◎ 狀之嚴重性、給藥時間間隔之頻率、任何有害副作用之存 在及所用之特定寡核苷酸及PTK抑制劑而發生變化。

在多個具體實例中，募聚物之劑量為每公斤體重約〇_〇1 g 約lg，且可母天、每週、每月或每年給藥一次或一次 以上，或甚至每2年至丨〇給藥一次或藉由連續輸注數小時 至右干個月來給藥。在某些具體實例中，PTK抑制劑之劑 里為每天約50 mg至約5〇〇 mg。在多個具體實例中，PTK 80 201021803 • 抑制劑之劑量為每天約100 mg至約4〇〇 mg。在其他具體實 例申，PTK抑制劑之劑量為每天約15〇 mg至約3〇〇 。在 某些具體實例中，可基於所量測到之活性劑在體液或組織 中之滯留時間及濃度來估計給藥重複率。在成功治療之 後，患者可用靶向HER3之組合療法維持治療以預防疾病病 況復發。 1 · 8 ·實施例 實施例1 :靶向ErbB-3 (HER3)之組合療法減少癌細 〇胞增殖 實驗程序 1.細胞培養 在若干腫瘤細胞株中研究鹼基序列及設計如SEq ID NO: 180所示之募聚物（下文稱為Γ〇Ν18〇」）與吉非替尼 (一種EGFR抑制劑）之組合效應。將細胞培養於如下所述 培養基中且維持於37。(：、95%濕度及5% (：〇2下。常規每週 使細胞繼代2-3代。 ❹ 15PC-3 ( Santaris Pharma ):將人類前列腺癌細胞株 15PC-3 培養於 DMEM( ATCC ) +10%胎牛血清（fbS ) + 2 mM GlutamaxTMI+慶大黴素（gentamicin) (25 pg/ml)中。 A549 ( ATCC ) ’將人類肺癌細胞株A549培養於F12K 培養基（ATCC ) +10% FBS+2 mM Glutamax™ 1+青黴素 (Penicillin) ( 100 ιι/ml) /鏈黴素（Strept〇mycin) ( 1〇〇 Mg/ml)中。 DU 145 ( ATCC ):將人類前列腺癌細胞株Du丨45培養 81 201021803 於伊格氏最小基本培養基（Eagle's Minimum Essential Medium) (ATCC) +10% FBS + 2 mM Glutamax™ 1+青黴素 (100 u/ml) /鏈黴素（100 Mg/ml)中。 A43 1 ( ATCC ):將人類表皮樣癌細胞株A43 1培養於 DMEM( ATCC ) +10%胎牛血清（FBS ) +2 mM GlutamaxTM 1 + 青黴素（100 u/ml) /鏈黴素（100 pg/ ml )中。 SKBR-3 ( ATCC ):將人類乳癌細胞株SKBR3培養於改 良之 McCoy's 5A 培養基（ATCC ) +10% FBS + 2 mM GlutamaxTM 1+ 青黴素（100 u/ml ) /鏈黴素（100 gg/ml )中。 © Η1993 ( ATCC ):將人類肺癌細胞株HI993培養於 RPMI-1640 ( ATCC) +10% FBS + 2 mM Glutamax™ 1+青黴素 (100 u/ml) /鏈黴素（100 jitg/ml)中。 2.用ON180及吉非替尼組合治療 使用陽離子脂質體調配物 LipofectamineTM-2000 (Invitrogen™)作為轉染媒劑，用ON180或具有如SEQ ID NO: 236所示之擾碼鹼基序列之含有LNA之寡聚物（下文 稱為「ONCONT」）來處理細胞。將細胞接種於6孔板 ® (NUNC™)中且在5 0%-60%匯合時進行處理。使用無血清 之 OptiMEM® ( Gibco™ ) 及 5 μg/mL 之 LipofectamineTM-2000，如製造商所述由ON180轉染細胞。 ONCONT充當陰性對照物。將經處理細胞在37°C下培育4 小時且接著用 OptiMEM®洗滌，此後添加正常含血清培養 基。 用募核苷酸（ON 180或ONCONT)轉染之後24小時， 82 201021803 ·> • 用吉非替尼（Amfinecom公司）（一種市售EGFR抑制劑藥 物（最終濃度為1 μΜ至40 ))處理細胞48小時。接著 分別藉由 MTS使經處理之細胞經受增殖檢定及藉由 qRT-PCR經受ErbB3 mRNA定量（參見下文）。各實驗至少 進行兩次。 3. 細胞增殖檢定（MTS檢定） 遵循製造商之說明書藉由使用CellTiter 96® Aqueous One solution試劑（Promega，目錄號358B )進行增殖檢定。 G 簡言之，將MTS化合物添加至6孔板之培養物中，且在 37°C、95%濕度及5% C〇2下培育1-3小時，之後進行量測。 接著將具有MTS試劑之培養基轉移至96孔板中。使用 ELIS A 讀取器（Molecular Devices )以 650 nm 為參考在 490 nm下量測吸光度。由僅含有培養基之孔量測檢定之本底值 且自含有細胞之孔的彳§號中減去該本底值。49〇 nm下之吸 光度（OD490 nm )與培養物中之活細胞數目成比例。 4. 藉由qRT-PCR檢驗ErbB3 mRNA含量 ® 使用 Qiagen RNeasy Plus Mini 套組（目錄號 74134)自 如上所述之經處理細胞萃取總RNA。藉由使用QuantiTect Probe RT-PCR套組（目錄號：204443 ; Qiagen )根據製造商 之說明書，使用一步qRT-PCR研究細胞中之ErbB3 mRNA 含量。引子及探針之序列如下： 人類ErbB3 PCR引子/探針組： 探針：CATTGCCCAACCTCCGCGTG( SEQ ID NO: 250 ) 引子-1 : TGCAGTGGATTCGAGAAGTG ( SEQ ID NO: 83 201021803 251 ) 引子-2 : GGCAAACTTCCCATCGTAGA ( SEQ ID NO: 252 ) 人類GAPDH引子/探針組： 探針：ACTGGCGCTGCCAAGGCTGT( SEQ ID NO: 253 ) 弓I 子-1 : CCACCCAGAAGACTGTGGAT ( SEQ ID NO: 254 ) 引子-2 : TTCAGCTCAGGGATGACCTT ( SEQ ID NO: 255 ) ❹ 使用 120 ng 總 RNA 樣品經 Applied Biosystems 7500 Fast即時PCR系統進行qRT-PCR。GAPDH mRNA充當内部 對照物。 結果 A549細胞對吉非替尼具有抗性。僅40 μΜ之吉非替尼 不會影響此細胞株中之增殖（圖1 Α )。僅0Ν1 8〇可有效抑 制ErbB3 mRNA產生之表現（IC50<2 nM ;圖1C)及細胞生 長（IC50<5 nM)(圖 ΙΑ、1B)。用 2 nM ON180 與吉非替尼 〇 組合處理顯著增強吉非替尼對A549細胞之抗增殖效應。（圖 1 A、1B )。如圖1B中所示，與用40 μΜ吉非替尼單一療法 而處理之Α549細胞相比，40 μΜ吉非替尼及2 nM ΟΝ180 之組合將A549細胞之生長速率降低約50%。 H1993細胞對吉非替尼相對不敏感（IC5〇=40 nM)(圖 2A)。僅ON180可有效抑制ErbB3 mRNA之表現（圖2C) 及細胞生長（IC5〇 nM )(圖 2A、2B )。用 1 nM ON180 及 84 201021803 • 吉非替尼之組合處理增強吉非替尼對H丨993細胞之抗増殖 效應（圖2A、2B )。如圖2B所示，與用40 μΜ吉非替尼單 一療法進行處理相比，40μΜ吉非替尼及lnM〇N18()之組 合將Η1 993細胞之生長速率降低5〇%以上。 15PC3細胞對吉非替尼有抗性。2〇从Μ之吉非替尼不 會影響此細胞株中之增殖。（圖3Α )僅〇N1 8〇可有效抑制 ErbB3 mRNA (圖 3C )及細胞生長（IC5〇<2 nM )(圖 3 A、 3B)。與用20μΜ吉非替尼單一療法進行處理相比，用inM β ON180及20 /xM吉非替尼之組合處理15pc3細胞顯著增強 (亦即幾乎70%)吉非替尼對15PC3細胞之抗增殖效應（圖 3A、3B )。 DU145細胞對吉非替尼有抗性。4〇 之吉非替尼不 會影響此細胞株中之增殖。（圖4Α )僅〇N1 8〇可有效抑制

ErbB3 mRNA之表現（圖4C )及細胞生長（ic50<5 nM )(圖 4A、4B )。與用40 μΜ吉非替尼單一療法進行處理相比，用 1 ηΜ 〇Ν18〇及4〇 吉非替尼之組合處理DU145細胞顯 著增強（亦即約40% )吉非替尼對DU1 45細胞之抗增殖效 應（圖 4A、4B )。 SKBR3細胞對吉非替尼敏感。（圖5 A )使SKBR3細胞 僅暴露於ON180可有效抑制ErbB3 mRNA之表現（圖5C) 及細胞生長（IC50<5 nM )(圖5A、5B )。與用20 μΜ吉非 替尼單一療法進行處理相比，用1 nM ON 180及20 μΜ吉非 替尼之組合處理此等腫瘤細胞顯著增強（亦即5〇%以上） 吉非替尼對SKBR3細胞之抗增殖效應（圖5 A、5Β )。 85 201021803 A43 1細胞對吉非替尼敏感。（圖6A )使此等腫瘤細胞 僅暴露於ON180可有效抑制ErbB3 mRNA (圖6C)及細胞 生長（IC50< 1 nM)(圖6A、6B)。與用20 μΜ吉非替尼單 一療法進行處理相比’用1 ηΜ ΟΝ180及40 μΜ吉非替尼之 組合處理Α43 1細胞顯著增強（亦即約5〇% )吉非替尼對 Α43 1細胞之抗增殖效應（圖6Α、6Β )。 結論 寡聚化合物ΟΝ180有效抑制6種測試癌症細胞株 ❹ (A549、H1993、15PC3、DU145、A431 及 SKBR3)中之 ErbB3 mRNA之表現及細胞增殖。兩種細胞株（SKBR3及A43 j ) 對吉非替尼敏感，而四種細胞株（A549、H1993、15pc3及 DU145 )對PTK抑制劑不敏感或有抗性。然而，在所有6 種測試腫瘤細胞株中均觀測到用〇N1 8〇及吉非替尼之組合 處理對細胞增殖的作用。低濃度（1〜5nM)之〇別8〇處理 可增強抗性腫瘤細胞（A549 ' H1993、DU145及15PC3)對 吉非替尼之敏感性。 〇 本申請案中所引用之所有公開案、專利、專利申請 及其他文獻均以全文引用的方式併入本文中，為達所有 的該引用的程度就如同已個別地將每一個別公開案、專 案、專利中請案或其他文獻以全文引用的方式併入一般 儘管已說明且描述各種特定具體實{列，但應瞭解可在 不背離本發明之精神及範疇之情況下進行各種改變。 【圖式簡單說明】 圖 1A-圖1C :圖1A及圖1B展 不养聚化合物 序列及 86 201021803 , 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 A549肺癌細胞之抗增殖效應。圖1 C表明序列及設計如SEQ ID NO: 180所示之寡聚化合物抑制A549細胞中之HER3 mRNA表現。 圖2A-圖2C :圖2A及圖2B展示募聚化合物（序列及 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 Η1 993前列腺癌細胞之抗增殖效應。圖2C表明序列及設計 如SEQ ID NO: 180所示之寡聚化合物抑制Η1 993細胞中之 〇 HER3 mRNA 表現。 圖3A-圖3C :圖3A及圖3B展示募聚化合物（序列及 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 15PC3前歹ij腺癌細胞之抗增殖效應。圖3C表明序歹ij及設計 如SEQ ID NO: 180所示之募聚化合物抑制15PC3細胞中之 HER3 mRNA 表現。 圖4A-圖4C :圖4A及圖4B展示募聚化合物（序列及 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 ® DU 1 45前列腺癌細胞之抗增殖效應。圖4C表明序列及設計 如SEQ ID NO: 180所示之寡聚化合物抑制DU145細胞中之 HER3 mRNA 表現。 圖5A-圖5C :圖5A及圖5B展示寡聚化合物（序列及 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 SKBR3乳癌細胞之抗增殖效應。圖5C表明序列及設計如 SEQ ID NO: 180所示之寡聚化合物抑制SKBR3細胞中之 HER3 mRNA 表現。 87 201021803 圖6A-圖6C:圖6A及圖6B展示寡聚化合物（序列及 設計如SEQ ID NO: 180所示）及吉非替尼之組合治療對 A43 1人類上皮癌細胞之抗增殖效應。圖6C表明序列及設 計如SEQ ID NO: 180所示之寡聚化合物抑制A43 1細胞中 之HER3 mRNA表現。 【主要元件符號說明】

88 201021803 序列表 <110〉安龍製藥公司 三特瑞製藥公司 瘳松柏 張易賢 <120〉ERBB-3 (HER3)選擇性組合療法

<130> 213.1346-PCT <140> <141> <150〉61/112,549 <151〉 2008-11-07 <160> 255 ❹ <170〉Patentln 3. 5 版 <210〉1 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 1 16 gctccagaca tcactc <210> 2 <211〉 15 <212> DNA <213〉人造序列 ©<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 2 15 gctccagaca tcact <210> 3 <211〉 15 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 3 ctccagacat cactc 第1頁 15 201021803 <210〉 4 <211> 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 4 gctccagaca tcac <210> 5 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 5 ctccagacat cact <210> 6 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 6 tccagacatc actc <210〉 7 <211〉 13 <212> DNA 〈213>人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 7 gctccagaca tea <210〉 8 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 8 201021803 ctccagacat cac 13 <210> 9 〈211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 9 tccagacatc act 13 <210> 10 <211> 13 <212> DNA 〈213>人造序列 ® <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 10 ccagacatca etc 合成的寡核苷酸 13 <210〉 11 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 11 gctccagaca tc 合成的寡核苷酸 12 <210> 12 <211> 12 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 合成的寡核苷酸 <400> 12 ctccagacat ca <210> 13 <211〉 12 <212> DNA <213〉人造序列 第3頁 <220〉 12 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 13 tccagacatc ac <210> 14 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 14 ccagacatca ct <210> 15 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 15 cagacatcac tc <210> 16 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 16 ctccagacat cactct <210> 17 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 17 cagacatcac tctggt

<210> 18 <211> 16 <212> DNA 201021803 <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 18 agacatcact ctggtg 16 <210> 19 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 19 atagctccag acatca 16 Ο <210> 20 <211> 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 20 atagctccag acatc 15 <210> 21 <211〉 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 ®<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 21 tagctccaga catca 15 <210〉 22 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 22 atagctccag acat 14 第5頁 201021803 <210> 23 <211> 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 〈220〉 <223〉人造序列之敘述： <400> 23 tagctccaga catc 合成的寡核苷酸 <210> 24 <211> 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: <400> 24 agctccagac atca 合成的寡核苷酸 <210> 25 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述: <400> 25 atagctccag aca :合成的寡核苷酸 <210> 26 <211> 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: <400> 26 tagctccaga cat :合成的寡核苷酸 <210> 27 <211〉 13 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 :合成的寡核苷酸 <400> 27 13201021803 agctccagac ate <210> 28 <211〉 13 〈212〉 DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述 <400> 28 gctccagaca tea 合成的寡核苷酸 13 <210> 29 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 ❹ <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 29 atagctccag ac 合成的寡核苷酸 12 <210> 30 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 30 tagctccaga ca 合成的寡核苷酸 12 <210> 31 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 31 agctccagac at 合成的寡核苷酸 <210> 32 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 第7頁 <220〉 12 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 32 gctccagaca tc <210> 33 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 33 ctccagacat ca <210> 34 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 34 tcacaccata gctcca <210> 35 <211〉 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 35 tcacaccata gctcc <210> 36 <211> 15 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 36 cacaccatag ctcca

<210〉 37 <211〉 14 <212〉 DNA 201021803 <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 37 tcacaccata gctc 14 <210> 38 <211〉 14 <212> DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 38 cacaccatag ctcc 14 ❿ <210> 39 <211〉 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 39 acaccatagc tcca 14 <210〉 40 <211> 13 <212> DNA <213〉人造序列 ©<220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 40 tcacaccata get 13 <210> 41 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 41 cacaccatag etc 13 第9頁 201021803 <210> 42 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 42 acaccatagc tcc 13 <210> 43 <211> 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 Θ 13 <400> 43 caccatagct cca <210> 44 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 44 tcacaccata gc 12

<210> 45 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 45 cacaccatag ct 12 <210> 46 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 46 第10頁 201021803 acaccatagc tc 12 <210> 47 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <4O0> 47 caccatagct cc 合成的募核苷酸 12 <210> 48 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 ® <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 48 accatagctc ca 合成的寡核苷酸 12 <210> 49 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 49 catccaacac ttgacc 合成的寡核苷酸 ❹ <210> 50 <211> 16 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 50 atccaacact tgacca 合成的寡核苷酸 <210> 51 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 第11頁 <220> 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 51 caatcatcca acactt <210> 52 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 52 tcaatcatcc aacact <210> 53 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 53 catgtagaca tcaatt <210〉 54 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 54 tagcctgtca cttctc <210> 55 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 55 agatggcaaa cttccc

<210> 56 <211> 16 <212〉 DNA 16201021803 <213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉56 caaggctcac acatct <210> 57 <211〉 16 <212〉DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 57 aagtccaggt tgccca ❹ <210> 58 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 58 cattcaagtt cttcat 16 16 <210> 59 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 〇<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 59 cactaatttc cttcag 16 <210〉 60 <211> 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 60 cactaatttc cttca 第13頁 15 201021803 <210〉 61 <211〉 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 61 actaatttcc ttcag 15 <210> 62 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 14

<400> 62 cactaatttc cttc <210> 63 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 63 actaatttcc ttca 14 <210〉 64 <211> 14 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 64 ctaatttcct tcag 14 <210> 65 <211> 13 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 65

第14頁 201021803 cactaatttc ctt 13 <210> 66 <211> 13 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 66 actaatttcc ttc 13 <210> 67 <211> 13 <212> DNA <213〉人造序列 ❹ <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 67 ctaatttcct tea 13 <210> 68 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 68 taatttcctt cag 13 ® <210> 69 <211> 12 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 69 cactaatttc ct 12 <210> 70 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 第15頁 <220〉 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 70 actaatttcc tt <210〉 71 <211> 12 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 71 ctaatttcct tc <210> 72 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 72 taatttcctt ca <210〉 73 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 73 aatttccttc ag <210> 74 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 74 gcccagcact aatttc

<210> 75 <211〉 16 <212〉 DNA 16201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 75 ctttgccctc tgccac <210〉 76 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 76 cacacacttt gccctc ❹ <210〉 77 <211〉 15 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 77 cacacacttt gccct 16 15 <210> 78 <211> 15 <212> DNA <213〉人造序列 ©<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 78 acacactttg ccctc 15 <210> 79 〈211> 14 <212> DNA 〈213>人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 79 cacacacttt gccc 14 第17頁 201021803 <210〉 80 <211〉 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 80 acacactttg ccct <210〉 81 <211> 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 81 cacactttgc cctc <210> 82 <211> 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 82 cacacacttt gcc <210〉 83 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 83 acacactttg ccc <210> 84 <211〉 13 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 84 201021803 cacactttgc cct 13 <210> 85 <211> 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 85 acactttgcc etc 13 <210> 86 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 ❹ <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 86 cacacacttt gc 12 <210> 87 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 87 acacactttg cc 12 ® <210> 88 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 88 cacactttgc cc 12 <210> 89 <211〉 12 <212> DNA <213〉人造序列 第19頁 〈220> 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 89 acactttgcc ct <210> 90 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 90 cactttgccc tc <210> 91 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 91 cagttccaaa gacacc <210> 92 <211> 16 <212〉 DNA <213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 92 tggcaatttg tactcc <210> 93 <211〉 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 93 tggcaatttg tactc

<210> 94 <211〉 15 <212〉 DNA 15201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 94 ggcaatttgt actcc <210> 95 <211> 14 <212> DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 95 tggcaatttg tact G <210> 96 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 96 ggcaatttgt actc 14 14 <210〉 97 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 〇<220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 97 gcaatttgta ctcc 14 <210> 98 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 98 tggcaatttg tac 第21頁 13 201021803 <210> 99 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述： <400> 99 ggcaatttgt act 合成的募核苷酸 <210> 100 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述： <400> 100 gcaatttgta etc 合成的寡核苷酸 <210> 101 <211> 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: <400> 101 caatttgtac tee :合成的寡核苷酸 <210> 102 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 102 tggcaatttg ta :合成的寡核苷酸 <210> 103 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 :合成的寡核苷酸 <400> 103 12 201021803 ggcaatttgt ac 〈210〉 104 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 104 gcaatttgta ct 12 <210> 105 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 ❿ <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 12 12 <400> 105 caatttgtac tc <210> 106 <211〉 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 106 aatttgtact cc 〇 <210> 107 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 107 gtgtgtgtat ttccca <210> 108 <211〉 15 <212> DNA <213〉人造序列 第23頁 <220〉 16 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 108 gtgtgtgtat ttccc 15 <210> 109 <211> 15 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 109 tgtgtgtatt tccca 15 <210> 110 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 110 gtgtgtgtat ttcc 14 <210> 111 <211> 14 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 111 tgtgtgtatt tccc 14 <210〉 112 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 112 gtgtgtattt ccca 14

<210> 113 <211> 13 <212〉 DNA 第24頁 201021803 <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 :合成的寡核苷酸 <4〇0> 113 gtgtgtgtat ttc 13 <210> 114 <211> 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <4〇0> 114 tgtgtgtatt tcc 13 <210〉 115 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <400〉 115 gtgtgtattt ccc 13 <210> 116 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 _ <220〉 〈223>人造序列之敘述: 合成的寡核苷酸 <400> 116 tgtgtatttc cca 13 <210> 117 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: 合成的募核苷酸 <400> 117 gtgtgtgtat tt 12 第25頁 201021803 <210> 118 <211〉 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 118 tgtgtgtatt tc 12 <210> 119 <211> 12 <212〉 DNA <213>人造序列 <220> ❹ 12 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 119 gtgtgtattt cc <210> 120 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 120 tgtgtatttc cc 12

<210〉 121 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 121 gtgtatttcc ca 12 <210〉 122 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 122 第26頁 16 201021803 ccctctgatg actctg <210> 123 <211〉 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 123 ccctctgatg actct 15 <210> 124 <211> 15 <212〉 DNA <213〉人造序列 ❿ <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 124 cctctgatga ctctg 15 <210〉 125 <211> 14 <212〉 DNA <213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 125 ccctctgatg actc 14 ® <210> 126 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 126 cctctgatga ctct 14 <210> 127 <211> 14 <212> DNA <213〉人造序列 第27頁 <220〉 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 127 ctctgatgac tctg <210> 128 <211> 13 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 128 ccctctgatg act <210> 129 <211> 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 129 cctctgatga etc <210> 130 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 130 ctctgatgac tet <210> 131 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 131 tctgatgact ctg

<210> 132 <211> 12 <212> DNA 201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <4〇0> 132 ccctctgatg ac 12 <210> 133 <211〉 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <4〇0> 133 cctctgatga ct 12 <210> 134 <211〉 12 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <4〇0> 134 ctctgatgac tc 12 <210> 135 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 癰 <220〉 _ <223〉人造序列之敘述: :合成的寡核苷酸 <400〉 135 tctgatgact ct 12 <210〉 136 <211> 12 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述: 合成的寡核苷酸 <400> 136 ctgatgactc tg 12 第29頁 201021803 <210> 137 <211> 16 <212〉 DNA 〈213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 137 catactcctc atcttc 16 <210> 138 <211〉 16 <212〉 DNA <213>人造序列 <220> ❿ 16 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 138 ccaccacaaa gttatg <210> 139 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 139 catcactctg gtgtgt 16

<210> 140 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 140 gacatcactc tggtgt 16 <210> 141 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 141 第30頁 201021803 gctccagaca tcactc 16 <210〉 142 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <4〇0> 142 ctccagacat cactct 16 Ο <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 <220> <223> 143 16 DNA 人造序列 人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 143 cagacatcac tctggt 16 <210> 144 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 144 agacatcact ctggtg 合成的寡核苷酸 ❿ <210〉 145 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400> 145 atagctccag acatca 合成的寡核苷酸 <210> 146 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 第31頁 <220> 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 146 tcacaccata gctcca <210> 147 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 147 catccaacac ttgacc <210> 148 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 148 atccaacact tgacca <210> 149 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 149 caatcatcca acactt <210〉 150 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 150 tcaatcatcc aacact

<210> 151 <211〉 16 <212〉 DNA 16201021803 <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 151 catgtagaca tcaatt <210〉 152 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 152 tagcctgtca cttctc 16 <210> 153 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 153 agatggcaaa cttccc 16 <210〉 154 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 〇<220> <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 154 caaggctcac acatct 16 <210> 155 <211> 16 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400〉 155 aagtccaggt tgccca 第33頁 16 201021803 <210〉 156 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述： <400> 156 cattcaagtt cttcat 合成的寡核苷酸 <210〉 157 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述： <400> 157 cactaatttc cttcag 合成的寡核苷酸 <210> 158 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述: <400> 158 gcccagcact aatttc :合成的寡核苷酸 <210> 159 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 159 ctttgccctc tgccac :合成的寡核苷酸 <210> 160 <211〉 16 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 :合成的寡核苷酸 <400> 160 201021803 cacacacttt gccctc <210> 161 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 161 cagttccaaa gacacc 合成的寡核苷酸 <210> 162 <211〉 16 <212〉 DNA 〈213>人造序列 ❹ <220〉 <223〉人造序列之敘述 <400> 162 tggcaatttg tactcc 合成的寡核苷酸 <210> 163 <211〉 16 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述 <400〉 163 gtgtgtgtat ttccca 合成的募核苷酸 ® <210> 164 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述: <400> 164 ccctctgatg actctg 合成的募核苷酸 <210> 165 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 165 catactcctc atcttc <210> 166 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 166 ccaccacaaa gttatg <210> 167 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 167 catcactctg gtgtgt <210〉 168 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 168 gacatcactc tggtgt <210> 169 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 169 gctccagaca tcactc

<210> 170 <211> 16 <212〉 DNA .201021803 <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 170 ctccagacat cactct 16 <210> 171 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400> 171 cagacatcac tctggt 16 <210〉 172 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 172 agacatcact ctggtg 16 <210> 173 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 ®<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 173 atagctccag acatca 16 <210> 174 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 174 tcacaccata gctcca 16 第37頁 201021803 <210〉 175 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400〉 175 catccaacac ttgacc <210> 176 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 176 atccaacact tgacca <210> 177 <211〉 16 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 177 caatcatcca acactt <210> 178 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 178 tcaatcatcc aacact <210〉 179 <211〉 16 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 179 201021803 catgtagaca tcaatt 16 <210> 180 <211> 16 〈212〉 DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 180 tagcctgtca cttctc 16 <210〉 181 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 ® <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 181 agatggcaaa cttccc 16 <210> 182 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 16 <400> 182 caaggctcac acatct

<210> 183 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 183 aagtccaggt tgccca 16 <210> 184 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 第39頁 <220> 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 184 cattcaagtt cttcat <210> 185 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 185 cactaatttc cttcag <210> 186 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400〉 186 gcccagcact aatttc <210> 187 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 187 ctttgccctc tgccac <210> 188 <211> 16 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 188 cacacacttt gccctc

<210> 189 <211> 16 <212〉 DNA 16201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 189 cagttccaaa gacacc <210> 190 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <400〉 190 tggcaatttg tactcc 16 <210> 191 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 191 gtgtgtgtat ttccca 16 <210> 192 <211> 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 〇<220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 192 ccctctgatg actctg 16 <210> 193 <211> 16 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述··合成的募核苷酸 <400> 193 catactcctc atcttc 第41頁 16 201021803 <210> 194 <211〉 16 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> ^ <223〉人造序列之敘述··合成的寡核苷酸 <400〉 194 ccaccacaaa gttatg 16 <210〉 195 <211〉 16 <212〉 DNA <213>人造序列 <220>

<223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 195 catcactctg gtgtgt 16 <210> 196 <211> 16 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 196 gacatcactc tggtgt 16 <210> 197 <211> 5511 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 197

acacacacac acccctcccc tgccatccct ccccggactc cggctccggc tccgattgca 60 atttgcaacc tccgctgccg tcgccgcagc agccaccaat tcgccagcgg ttcaggtggc 120 tcttgcctcg atgtcctagc ctaggggccc ccgggccgga cttggctggg ctcccttcac 180 cctctgcgga gtcatgaggg cgaacgacgc tctgcaggtg ctgggcttgc ttttcagcct 240 ggcccggggc tccgaggtgg gcaactctca ggcagtgtgt cctgggactc tgaatggcct 300 gagtgtgacc ggcgatgctg agaaccaata ccagacactg tacaagctct acgagaggtg 360 tgaggtggtg atggggaacc ttgagattgt gctcacggga cacaatgccg acctctcctt 420 cctgcagtgg attcgagaag tgacaggcte tgtcctcgtg gccatgaatg aattctctac 480 第42頁 201021803 tctaccattg cccaacctcc gcgtggtgcg agggacccag gtctacgatg ggaagtttgc catcttcgtc atgttgaact ataacaccaa ctccagccac gctctgcgcc agctccgctt gactcagctc accgagattc tgtcaggggg tgtttatatt gagaagaacg ataagctttg tcacatggac acaattgact ggagggacat cgtgagggac cgagatgctg agatagtggt gaaggacaat ggcagaagct gtcccccctg tcatgaggtt tgcaaggggc gatgctgggg tcctggatca gaagactgcc agacattgac caagaccatc tgtgctcctc agtgtaatgg tcactgcttt gggcccaacc ccaaccagtg ctgccatgat gagtgtgccg ggggctgctc aggccctcag gacacagact gctttgcctg ccggcacttc aatgacagtg gagcctgtgt acctcgctgt ccacagcctc ttgtctacaa caagctaact ttccagctgg aacccaatcc ❿ ccacaccaag tatcagtatg gaggagtttg tgtagccagc tgtccccata actttgtggt ggatcaaaca tcctgtgtca gggcctgtcc tcctgacaag atggaagtag ataaaaatgg gctcaagatg tgtgagcctt gtgggggact atgtcccaaa gcctgtgagg gaacaggctc tgggagccgc ttccagactg tggactcgag caacattgat ggatttgtga actgcaccaa gatcctgggc aacctggact ttctgatcac cggcctcaat ggagacccct ggcacaagat ccctgccctg gacccagaga agctcaatgt cttccggaca gtacgggaga tcacaggtta cctgaacatc cagtcctggc cgccccacat gcacaacttc agtgtttttt ccaatttgac aaccattgga ggcagaagcc tctacaaccg gggcttctca ttgttgatca tgaagaactt gaatgtcaca tctctgggct tccgatccct gaaggaaatt agtgctgggc gtatctatat aagtgccaat aggcagctct gctaccacca ctctttgaac tggaccaagg tgcttcgggg

G ▼ gcciacggaa gagcgactag acatcaagca taatcggccg cgcagagact gcgiggcaga gggcaaagtg tgtgacccac tgtgctcctc tgggggatgc tggggcccag gccctggtca gtgcttgtcc tgtcgaaatt atagccgagg aggtgtctgt gtgacccact gcaactttct gaatggggag cctcgagaat ttgcccatga ggccgaatgc ttctcctgcc acccggaatg ccaacccatg gagggcactg ccacatgcaa tggctcgggc tctgatactt gtgctcaatg tgcccatttt cgagatgggc cccactgtgt gagcagctgc ccccatggag tcctaggtgc caagggccca atctacaagt acccagatgt tcagaatgaa tgtcggccct gccatgagaa ctgcacccag gggtgtaaag gaccagagct tcaagactgt ttaggacaaa cactggtgct gatcggcaaa acccatctga caatggcttt gacagtgata gcaggattgg tagtgatttt 第43頁 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 201021803 catgatgctg ggcggcactt ttctctactg gcgtgggcgc cggattcaga ataaaagggc 2220 tatgaggcga tacttggaac ggggtgagag catagagcct ctggacccca gtgagaaggc 2280 taacaaagtc ttggccagaa tcttcaaaga gacagagcta aggaagctta aagtgcttgg 2340 ctcgggtgtc tttggaactg tgcacaaagg agtgtggatc cctgagggtg aatcaatcaa 2400 gattccagtc tgcattaaag tcattgagga caagagtgga cggcagagtt ttcaagctgt 2460 gacagatcat atgctggcca ttggcagcct ggaccatgcc cacattgtaa ggctgctggg 2520 actatgccca gggtcatctc tgcagcttgt cactcaatat ttgcctctgg gttctctgct 2580 ggatcatgtg agacaacacc ggggggcact ggggccacag ctgctgctca actggggagt 2640 acaaattgcc aagggaatgt actaccttga ggaacatggt atggtgcata gaaacctggc 2700 tgcccgaaac gtgctactca agtcacccag tcaggttcag gtggcagatt ttggtgtggc 2760 tgacctgctg cctcctgatg ataagcagct gctatacagt gaggccaaga ctccaattaa 2820 gtggatggcc cttgagagta tccactttgg gaaatacaca caccagagtg atgtctggag 2880 ctatggtgtg acagtttggg agttgatgac cttcggggca gagccctatg cagggctacg 2940 attggctgaa gtaccagacc tgctagagaa gggggagcgg ttggcacagc cccagatctg 3000 cacaattgat gtctacatgg tgatggtcaa gtgttggatg attgatgaga acattcgccc 3060 aacctttaaa gaactagcca atgagttcac caggatggcc cgagacccac cacggtatct 3120 ggtcataaag agagagagtg ggcctggaat agcccctggg ccagagcccc atggtctgac 3180 aaacaagaag ctagaggaag tagagctgga gccagaacta gacctagacc tagacttgga 3240 agcagaggag gacaacctgg caaccaccac actgggctcc gccctcagcc taccagttgg 3300 aacacttaat cggccacgtg ggagccagag ccttttaagt ccatcatctg gatacatgcc 3360 catgaaccag ggtaatcttg gggagtcttg ccaggagtct gcagtttctg ggagcagtga 3420 acggtgcccc cgtccagtct ctctacaccc aatgccacgg ggatgcctgg catcagagtc 3480 atcagagggg catgtaacag gctctgaggc tgagctccag gagaaagtgt caatgtgtag 3540 gagccggagc aggagccgga gcccacggcc acgcggagat agcgcctacc attcccagcg 3600 ccacagtctg ctgactcctg ttaccccact ctccccaccc gggttagagg aagaggatgt 3660 caacggttat gtcatgccag atacacacct caaaggtact ccctcctccc gggaaggcac 3720 cctttcttca gtgggtctca gttctgtcct gggtactgaa gaagaagatg aagatgagga 3780 gtatgaatac atgaaccgga ggagaaggca cagtccacct catcccccta ggccaagttc 3840 ccttgaggag ctgggttatg agtacatgga tgtggggtca gacctcagtg cctctctggg 3900 第44頁 201021803

cagcacacag agatgaagac tgcagccatg ggggcctgga agaggctaca ggctaatgcc agctagtgcc cccttttccc acaaaattct aggttttcct ctggagatat ctaggctctt acctagcaga cttaaaatct ttaactatga catccttaaa catggtggct aggcaaggag aaaaaaaaaa gccagcactt tatggaaaca aaagagatga atgtgctctt ggcactgttt acctagacat catctttgtg gcaaattcac agttgcccac tatgaatata ggggcctgcc catcaggccc gactctgcct cagagaacgt tttagagggt cagtcccaga tatggtatgt tattttgtgt gaaggattac atgtgtgcct ggaaagtgta gtgaagaaag gccaggcatc acaattctgt catgcctgta tttgagacca aaaaaaaaaa tgggaggctg tagcaagaca aataaattaa attgtaaggt cttgtttttg ctcatctcag taaaccataa aaggatcccc tccaccctgt tgaatcggca cagcatctga cccatgtcca ttgataaccc aactcctgct accgtcttct caattccatt agccagctgt gctttcccag tctccatatc ttgtttccca attttggttt aggttaggag atactaaact gacatacata atctcagcac gcttagccaa actttagaac agatgggaag ctgtctctac gcagtagatc gccaagaaaa cactgaatca gaagtggtgg tccacatgtg aagatccact acccatcatg acgagatgga gcaagggtat ttatgcccgc tgattactgg ccctgtggca ccctattccc caatctttgg gcactttctt tcccattcct ccttcctctc tcagactgtc atgactctta tagatattga tcacctacat ttatctcatt tttgggaggc catagtaaga tgggtgcagt atcacttgag aggggaaaaa caggatgcaa actgatttaa agtctaaccc tgggggtagt ccgtaaatga tttagaagcc cccactgcag ggtggtcctg gaagagatga ctaaaaactc catagcaggc ctcagggagc tctctctccc aggcttttaa ctctttccca cagcttcttc aggctcttga aagaagagga accccctaga ttactatcat tatctcactt ttacacaaag tgaggcagaa cccccatctc ggctcatgcc cccagaatta aaaaaaagaa aatcctccca gttacagccc caacagccac cagaaggaaa tcttcactcc attctcatcc gcacaactcc ggggtgatta gagcttttca tacgtagctt ttttccccaa atttaatggc aggtcccagc acattttgac accccaggaa acaggcactc ctacttggaa aagggaggaa aagacagaag aattcagcac agtcctttat ggaagtcggg ggattacctg tttaaaaaaa tgtaatccca gagataagcc actgagcctt attcctgtgc ttgtttaagg atcctcctat aataactgga ttatccgagg a 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5511 <210> 198 第45頁 201021803 <211〉 5616 <212〉 DNA <213〉智人 <400> 198

ccccggcgca gcgcggccgc agcagcctcc gccccccgca cggtgtgagc gcccgacgcg 60 gccgaggcgg ccggagtccc gagctagccc cggcggccgc cgccgcccag accggacgac 120 aggccacctc gtcggcgtcc gcccgagtcc ccgcctcgcc gccaacgcca caaccaccgc 180 gcacggcccc ctgactccgt ccagtattga tcgggagagc cggagcgagc tcttcgggga 240 gcagcgatgc gaccctccgg gacggccggg gcagcgctcc tggcgctgci ggctgcgctc 300 tgcccggcga gtcgggctct ggaggaaaag aaagtttgcc aaggcacgag taacaagctc 360 acgcagttgg gcacttttga agatcatttt ctcagcctcc agaggatgtt caataactgt 420 gaggtggtcc ttgggaattt ggaaattacc tatgtgcaga ggaattatga tctttccttc 480 ttaaagacca tccaggaggt ggctggttat gtcctcattg ccctcaacac agtggagcga 540 attcctttgg aaaacctgca gatcatcaga ggaaatatgt actacgaaaa ttcctatgcc 600 ttagcagtct tatctaacta tgatgcaaat aaaaccggac tgaaggagct gcccatgaga 660 aatttacagg aaatcctgca tggcgccgtg cggttcagca acaaccctgc cctgtgcaac 720 gtggagagca tccagtggcg ggacatagtc agcagtgact ttctcagcaa catgtcgatg 780 gacttccaga accacctggg cagctgccaa aagtgtgatc caagctgtcc caatgggagc 840 tgctggggtg caggagagga gaactgccag aaactgacca aaatcatctg tgcccagcag 900 tgctccgggc gctgccgtgg caagtccccc agtgactgct gccacaacca gtgtgctgca 960 ggctgcacag gcccccggga gagcgactgc ctggtctgcc gcaaattccg agacgaagcc 1020 acgtgcaagg acacctgccc cccactcatg ctctacaacc ccaccacgta ccagatggat 1080 gtgaaccccg agggcaaata cagctttggt gccacctgcg tgaagaagtg tccccgtaat 1140 tatgtggtga cagatcacgg ctcgtgcgtc cgagcctgtg gggccgacag ctatgagatg 1200 gaggaagacg gcgtccgcaa gtgtaagaag tgcgaagggc cttgccgcaa agtgtgtaac 1260 ggaataggta ttggtgaatt taaagactca ctctccataa atgctacgaa tattaaacac 1320 ttcaaaaact gcacctccat cagtggcgat ctccacatcc tgccggtggc atttaggggt 1380 gactccttca cacatactcc tcctctggat ccacaggaac tggatattct gaaaaccgta 1440 aaggaaatca cagggttttt gctgattcag gcttggcctg aaaacaggac ggacctccat 1500 gcctttgaga acctagaaat catacgcggc aggaccaagc aacatggtca gttttctctt 1560 第46頁

201021803 gcagtcgtca gcctgaacat aacatccttg ggattacgct ccctcaagga gataagtgat ggagatgtga taatttcagg aaacaaaaat ttgtgctatg caaatacaat aaactggaaa aaactgittg ggacctccgg tcagaaaacc aaaattataa gcaacagagg tgaaaacagc tgcaaggcca caggccaggt ctgccatgcc ttgtgctccc ccgagggctg ctggggcccg gagcccaggg actgcgtctc ttgccggaat gtcagccgag gcagggaatg cgtggacaag tgcaaccttc tggagggtga gccaagggag tttgtggaga actctgagtg catacagtgc cacccagagt gcctgcctca ggccatgaac atcacctgca caggacgggg accagacaac tgtatccagt gtgcccacta cattgacggc ccccactgcg tcaagacctg cccggcagga gtcatgggag aaaacaacac cctggtctgg aagtacgcag acgccggcca tgtgtgccac ctgtgccatc caaactgcac ctacggatgc actgggccag gtcttgaagg ctgtccaacg aatgggccta agatcccgtc catcgccact gggatggtgg gggccctcct cttgctgctg gtggtggccc tggggatcgg cctcttcatg cgaaggcgcc acatcgttcg gaagcgcacg ctgcggaggc tgctgcagga gagggagctt gtggagcctc ttacacccag tggagaagct cccaaccaag ctctcttgag gatcttgaag gaaactgaat tcaaaaagat caaagtgctg ggctccggtg cgttcggcac ggtgtataag ggactctgga tcccagaagg tgagaaagtt aaaattcccg tcgctatcaa ggaattaaga gaagcaacat ctccgaaagc caacaaggaa atcctcgatg aagcctacgt gatggccagc gtggacaacc cccacgtgtg ccgcctgctg ggcatctgcc tcacctccac cgtgcagctc atcacgcagc tcatgccctt cggctgcctc ctggactatg tccgggaaca caaagacaat attggctccc agtacctgct caactggtgt gtgcagatcg caaagggcat gaactacttg gaggaccgtc gcttggtgca ccgcgacctg gcagccagga acgtactggt gaaaacaccg cagcatgtca agatcacaga ttttgggctg gccaaactgc tgggtgcgga agagaaagaa taccatgcag aaggaggcaa agtgcctatc aagtggatgg cattggaatc aattttacac agaatctata cccaccagag tgatgtctgg agctacgggg tgaccgtttg ggagttgatg acctttggat ccaagccata tgacggaatc cctgccagcg agatctcctc catcctggag aaaggagaac gcctccctca gccacccata tgtaccatcg atgtctacat gatcatggtc aagtgctgga tgatagacgc agatagtcgc ccaaagttcc gtgagttgat catcgaattc tccaaaatgg cccgagaccc ccagcgctac cttgtcattc agggggatga aagaatgcat ttgccaagtc ctacagactc caacttctac cgtgccctga tggatgaaga agacatggac gacgtggtgg atgccgacga gtacctcatc 第47頁 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 201021803

ccacagcagg gcttcttcag cagcccctcc acgtcacgga ctcccctcct gagctctctg 3360 agtgcaacca gcaacaattc caccgtggct tgcattgata gaaatgggct gcaaagctgt 3420 cccatcaagg aagacagctt cttgcagcga tacagctcag accccacagg cgccttgact 3480 gaggacagca tagacgacac cttcctccca gtgcctgaat acataaacca gtccgttccc 3540 aaaaggcccg ctggctctgt gcagaatcct gtctatcaca atcagcctct gaaccccgcg 3600 cccagcagag acccacacta ccaggacccc cacagcactg cagtgggcaa ccccgagtat 3660 ctcaacactg tccagcccac ctgtgtcaac agcacattcg acagccctgc ccactgggcc 3720 cagaaaggca gccaccaaat tagcctggac aaccctgact accagcagga cttctttccc 3780 aaggaagcca agccaaatgg catctttaag ggctccacag ctgaaaatgc agaataccta 3840 agggtcgcgc cacaaagcag tgaatttatt ggagcatgac cacggaggat agtatgagcc 3900 ctaaaaatcc agactctttc gatacccagg accaagccac agcaggtcct ccatcccaac 3960 agccatgccc gcattagctc ttagacccac agactggttt tgcaacgttt acaccgacta 4020 gccaggaagt acttccacct cgggcacatt ttgggaagtt gcattccttt gtcttcaaac 4080 tgtgaagcat ttacagaaac gcatccagca agaatattgt ccctttgagc agaaatttat 4140 ctttcaaaga ggtatatttg aaaaaaaaaa aaagtatatg tgaggatttt tattgattgg 4200 ggatcttgga gtttttcatt gtcgctattg atttttactt caatgggctc ttccaacaag 4260 gaagaagctt gctggtagca cttgctaccc tgagttcatc caggcccaac tgtgagcaag 4320 gagcacaagc cacaagtctt ccagaggatg cttgattcca gtggttctgc ttcaaggctt 4380 ccactgcaaa acactaaaga tccaagaagg ccttcatggc cccagcaggc cggatcggta 4440 ctgtatcaag tcatggcagg tacagtagga taagccactc tgtcccttcc tgggcaaaga 4500 agaaacggag gggatggaat tcttccttag acttactttt gtaaaaatgt ccccacggta 4560 cttactcccc actgatggac cagtggtttc cagtcatgag cgttagactg acttgtttgt 4620 cttccattcc attgttttga aactcagtat gctgcccctg tcttgctgtc atgaaatcag 4680 caagagagga tgacacatca aataataact cggattccag cccacattgg attcatcagc 4740 atttggacca atagcccaca gctgagaatg tggaatacct aaggatagca ccgcttttgt 4800 tctcgcaaaa acgtatctcc taatttgagg ctcagatgaa atgcatcagg tcctttgggg 4860 catagatcag aagactacaa aaatgaagct gctctgaaat ctcctttagc catcacccca 4920 accccccaaa attagtttgt gttacttatg gaagatagtt ttctcctttt acttcacttc 4980 第48頁

201021803 aaaagctttt tactcaaaga gtatatgttc cctccaggtc agctgccccc aaaccccctc cttacgcttt gtcacacaaa aagtgtctct gccttgagtc atctattcaa gcacttacag ctctggccac aacagggcat tttacaggtg cgaatgacag tagcattatg agtagtgtgg aattcaggta gtaaatatga aactagggtt tgaaattgat aatgctttca caacatttgc agatgtttta gaaggaaaaa agttccttcc taaaataatt tctctacaat tggaagattg gaagattcag ctagttagga gcccaccttt tttcctaatc tgtgtgtgcc ctgtaacctg actggttaac agcagtcctt tgtaaacagt gttttaaact ctcctagtca atatccaccc catccaattt atcaaggaag aaatggttca gaaaatattt tcagcctaca gttatgttca gtcacacaca catacaaaat gttccttttg cttttaaagt aatttttgac tcccagatca gtcagagccc ctacagcatt gttaagaaag tatttgattt ttgtctcaat gaaaataaaa ctatattcat ttccactcta aaaaaaaaaa aaaaaa <210> 199 <211> 4624 <212> DNA <213〉智人 <400> 199 ggaggaggtg gaggaggagg gctgcttgag gaagtataag aatgaagttg tgaagctgag attcccctcc attgggaccg gagaaaccag gggagccccc cgggcagccg cgcgcccctt cccacggggc cctttactgc gccgcgcgcc cggcccccac ccctcgcagc accccgcgcc ccgcgccctc ccagccgggt ccagccggag ccatggggcc ggagccgcag tgagcaccat ggagctggcg gccttgtgcc gctgggggct cctcctcgcc ctcttgcccc ccggagccgc w gagcacccaa gtgtgcaccg gcacagacat gaagctgcgg ctccctgcca gtcccgagac ccacctggac atgctccgcc acctctacca gggctgccag gtggtgcagg gaaacctgga actcacctac ctgcccacca atgccagcct gtccttcctg caggatatcc aggaggtgca gggctacgtg ctcatcgctc acaaccaagt gaggcaggtc ccactgcaga ggctgcggat tgtgcgaggc acccagctct ttgaggacaa ctatgccctg gccgtgctag acaatggaga cccgctgaac aataccaccc ctgtcacagg ggcctcccca ggaggcctgc gggagctgca gcttcgaagc ctcacagaga tcttgaaagg aggggtcttg atccagcgga acccccagct ctgctaccag gacacgattt tgtggaagga catcttccac aagaacaacc agctggctct cacactgata gacaccaacc gctctcgggc ctgccacccc tgttctccga tgtgtaaggg 第49頁 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5616 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 201021803 ctcccgctgc tggggagaga gttctgagga ttgtcagagc ctgacgcgca ctgtctgtgc 900 cggtggctgt gcccgctgca aggggccact gcccactgac tgctgccatg agcagtgtgc 960 tgccggctgc acgggcccca agcactctga ctgcctggcc tgcctccact tcaaccacag 1020 tggcatctgt gagctgcact gcccagccct ggtcacctac aacacagaca cgtttgagtc 1080 catgcccaat cccgagggcc ggtatacatt cggcgccagc tgtgtgactg cctgtcccta 1140 caactacctt tctacggacg tgggatcctg caccctcgtc tgccccctgc acaaccaaga 1200 ggtgacagca gaggatggaa cacagcggtg tgagaagtgc agcaagccct gtgcccgagt 1260 gtgctatggt ctgggcatgg agcacttgcg agaggtgagg gcagttacca gtgccaatat 1320 ccaggagttt gctggctgca agaagatctt tgggagcctg gcatttctgc cggagagctt 1380 tgatggggac ccagcctcca acactgcccc gctccagcca gagcagctcc aagtgtttga 1440 gactctggaa gagatcacag gttacctata catctcagca tggccggaca gcctgcctga 1500 cctcagcgtc ttccagaacc tgcaagtaat ccggggacga attctgcaca atggcgccta 1560 ctcgctgacc ctgcaagggc tgggcatcag ctggctgggg ctgcgctcac tgagggaact 1620 gggcagtgga ctggccctca tccaccataa cacccacctc tgcttcgtgc acacggtgcc 1680 ctgggaccag ctctttcgga acccgcacca agctctgctc cacactgcca accggccaga 1740 ggacgagtgt gtgggcgagg gcctggcctg ccaccagctg tgcgcccgag ggcactgctg 1800 gggtccaggg cccacccagt gtgtcaactg cagccagttc cttcggggcc aggagtgcgt 1860 ggaggaatgc cgagtactgc aggggctccc cagggagtat gtgaatgcca ggcactgttt 1920 gccgtgccac cctgagtgtc agccccagaa tggctcagtg acctgttttg gaccggaggc 1980 tgaccagtgt gtggcctgtg cccactataa ggaccctccc ttctgcgtgg cccgctgccc 2040 cagcggtgtg aaacctgacc tctcctacat gcccatctgg aagtttccag atgaggaggg 2100 cgcatgccag ccttgcccca tcaactgcac ccactcctgt gtggacctgg atgacaaggg 2160 ctgccccgcc gagcagagag ccagccctct gacgtccatc atctctgcgg tggttggcat 2220 tctgctggtc gtggtcttgg gggtggtctt tgggatcctc atcaagcgac ggcagcagaa 2280 gatccggaag tacacgatgc ggagactgct gcaggaaacg gagctggtgg agccgctgac 2340 acctagcgga gcgatgccca accaggcgca gatgcggatc ctgaaagaga cggagctgag 2400 gaaggtgaag gtgcttggat ctggcgcttt tggcacagtc tacaagggca tctggatccc 2460 tgatggggag aatgtgaaaa ttccagtggc catcaaagtg ttgagggaaa acacatcccc 2520 caaagccaac aaagaaatct tagacgaagc atacgtgatg gctggtgtgg gctccccata 2580 第50頁 201021803 ❹

tgtctcccgc gccctatggc cctgctgaac cgtacacagg tacagacttc gggcaaggtg ccagagtgat accttacgat gccccagccc tgactctgaa ggacccccag cagcaccttc ggagtatctg catggtccac agggctggag tggctccgat ccccacacat ctctgagact ccagccagat acctgctggt caaagacgtt aggagctgcc ttactgggac tacggcagag tccgcagaag agaggtggga aaggaacctt agaggaacag cttctgggca tgcctcttag tggtgtatgc gacttggccg gggctggctc cccatcaagt gtgtggagtt gggatcccag cccatctgca tgtcggccaa cgctttgtgg taccgctcac gtaccccagc cacaggcacc ccctctgaag gtatttgatg gaccccagcc gatggctacg gttcggcccc gccactctgg tttgcctttg cctcagcccc caggacccac aacccagagt ccctgatgtg gggccctccg ccttcctgct cactggggag tctgcctgac accatgtccg agattgccaa ctcggaacgt ggctgctgga ggatggcgct atggtgtgac cccgggagat ccattgatgt gattccggga tcatccagaa tgctggagga agggcttctt gcagctcatc aggaggcccc gtgacctggg ctctacagcg ttgcccccct agcccccttc aaaggcccaa ggggtgccgt accctcctcc cagagcgggg acctgggtct tcctcaggga accacttcca tgagttccca tctttgtgga atccacggtg ggaaaaccgc ggggatgagc gctggtcaag caitgacgag ggagtccatt tgtgtgggag ccctgacctg ctacatgatc gttggtgtct tgaggacttg cgatgacatg ctgtccagac taccaggagt caggtctcca aatgggggca gtacagtgag gacctgcagc gccccgagag gactctctcc ggagaacccc tgccttcagc ggctccaccc ggacgtgcca gcagggaagg ggggaacctg gatggctgga ttctgaggcc cagctggtga ggacgcctgg tacctggagg agtcccaacc acagagtacc ctccgccggc ctgatgactt ctggaaaagg atggtcaaat gaattctccc ggcccagcca ggggacctgg cctgccccgg ggcggtgggg ctggcaccct gccaaggggc gaccccacag ccccagcctg ggccctctgc ccagggaaga gagtacttga ccagccttcg agcaccttca gtgtgaacca cctgacttct ccatgccagg aggggtccag ctgcccaatg cacagcttat gctcccagga atgtgcggct atgtcaaaat atgcagatgg ggttcaccca ttggggccaa gggagcggct gttggatgat gcatggccag gtcccttgga tggatgctga gcgctggggg acctgacact ccgaaggggc tgcaaagcct tacccctgcc aatatgtgaa ctgctgcccg atggggtcgt caccccaggg acaacctcta aagggacacc gaaggccaag gctggcatca aacctgtcct cctcgttgga agactctagg 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 第51頁 201021803 gtccagtgga tgccacagcc cagcttggcc ctttccttcc agatcctggg tactgaaagc 4320 cttagggaag ctggcctgag aggggaagcg gccctaaggg agtgtctaag aacaaaagcg 4380 acccattcag agactgtccc tgaaacctag tactgccccc catgaggaag gaacagcaat 4440 ggtgtcagta tccaggcttt gtacagagtg cttttctgtt tagtttttac tttttttgtt 4500 ttgttttttt aaagatgaaa taaagaccca gggggagaat gggtgttgta tggggaggca 4560 agtgtggggg gtccttctcc acacccactt tgtccatttg caaatatatt ttggaaaaca 4620 gcta 4624 <210> 200 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 200 catagctcca gacatcactc tggt 24 <210> 201 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 201 atagctccag acatcactct ggtg 24 <210〉 202 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 202 gctccagaca tcactctggt gtgt 24 <210〉 203 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 第52頁 <220〉 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 203 ctccagacat cactctggtg tgtg 24 <210> 204 <211〉 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 204 caccatagct ccagacatca ctct 24

<210> 205 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 205 actgtcacac catagctcca gaca 24 <210> 206 <211> 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 〇<400> 206 caatcatcca acacttgacc atca 24 <210> 207 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 207 aatcatccaa cacttgacca tcac 24

<210> 208 <211〉 24 <212〉 DNA 第53頁 201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 208 tcatcaatca tccaacactt gacc 24 <210> 209 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 209 ctcatcaatc atccaacact tgac 24 ❹ <210> 210 <211> 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 210 tcaccatgta gacatcaatt gtgc 24 <210> 211 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列

24 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 211 gacatagcct gtcacttctc gaat <210> 212 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 212 acgaagatgg caaacttccc atcg 24 第54頁 201021803 <210> 213 • <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的募核苷酸 <4〇0> 213 cccacaaggc tcacacatct tgag 24 <210> 214 <211〉 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 ® <400> 214 cagaaagtcc aggttgccca ggat 24 <210〉 215 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 215 gtgacattca agttcttcat gate 24

<210> 216 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 216 ccagcactaa tttccttcag ggat 24 <210〉 217 <211〉 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 217 第55頁 201021803 atacgcccag cactaatttc cttc 24 <210> 218 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 218 cacactttgc cctctgccac gcag 24 <210> 219 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 24

24 ◎ <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 219 gggtcacaca ctttgccctc tgcc <210> 220 <211〉 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 220 tgcacagttc caaagacacc cgag <210> 221 <211> 24 <212> DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 221 cccttggcaa tttgtactcc ccag 24 <210> 222 <211〉 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 第56頁 <220> 201021803 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <4〇0> 222 tctggtgtgt gtatttccca aagt 24 <210> 223 <211> 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 223 atgcccctct gatgactctg atgc 24

<210> 224 <211〉 24 <212> DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 224 tattcatact cctcatcttc atct 24 <210> 225 <211> 24 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 〈223>人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 ®<400> 225 tgatccacca caaagttatg ggga 24 <210> 226 <211〉 24 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 226 cagacatcac tctggtgtgt gtat 24

<210> 227 <211〉 24 <212> DNA 第57頁 24201021803 <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 227 tccagacatc actctggtgt gtgt <210> 228 <211> 15 <212> DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 228 tagcctgtca cttct 15

<210> 229 <211〉 15 <212〉 DNA 〈213>人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 229 agcctgtcac ttctc 15 <210> 230 <211> 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 230 tagcctgtca cttc

14 <210> 231 <211〉 14 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400〉 231 agcctgtcac ttct 第58頁 14 201021803 <210> 232 <211〉 13 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 <400> 232 tagcctgtca ctt 13 <210> 233 <211> 12 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 © <4〇0> 233 tagcctgtca ct 12 <210〉 234 <211〉 13 <212> DNA <213〉人造序列 <220> <223〉人造序列之敘述：合成的寡核苷酸 13 <400〉 234 tagcctgtca ctt <210〉 235 <211〉 16 <212〉 DNA _ <213〉人造的 <220> <223〉LNA寡聚物 <220> <221〉misc_特徵 <222〉（1)..(15) <223〉硫代磷酸鍵聯 <220〉 <22Ϊ> misc_ 特徵 <222〉 （1)..(3) <223〉LNA核鹼基 <220> <221〉 <222> (13)..(15) 第59頁 16201021803 <223〉LNA核鹼基 <400> 235 cgtcagtatg cgaatc <210> <211〉 <212〉 <213>

勺 白 6八造 3 6 N tv 2 1 D <220> <223〉LNA寡聚物 <220〉 <22Ϊ> misc_ 特徵 <222〉 （1)..(15) <223〉硫代磷酸鍵聯 <220> <22Ϊ> 111丨5(：_特徵 〈222> (1)..(4) <223〉LNA核鹼基 <220> <22Ϊ> 111丨3(：_特徵 <222〉 （13)..(15) <223〉LNA核鹼基 <400> 236 cgcagattag aaacct ❹ 16 <210> 237 <211> 22 <212〉 DNA <213〉人造的 <220〉 〈223>探針序列 <400> 237 ccacacctgg tcatagcggt ga ◎ <210〉 <211〉 <212〉 <213> 的 8 A造 3 ο N fv 2 2 D / <220〉 <223〉探針序列 <400> 238 ctgtttaggc caagcagagg 第60頁 20 201021803 <210〉 239 <211> 20 <212> DNA <213〉人造的 <220〉 <223〉探針序列 <400〉 239 attctgaatc ctgcgtccac 20 <210> 240 <211〉 20 <212〉 DNA <213〉人造的 <220> 0 <223〉探針序列 <400> 240 cattgcccaa cctccgcgtg 20 <210> 241 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造的 <220> <223〉探針序列 <400〉 241 tgcagtggat tcgagaagtg 20 <210〉 ❿ <211〉 <212> <213> 2 A造 2420DN人 <220> <223〉探針序列 <400> 242 ggcaaacttc ccatcgtaga 20 <210〉 243 <211> 20 <212> DNA <213〉人造的 <220〉 〈223>探針序列 第61頁 201021803 <400> 243 actggcgctg ccaaggctgt <210> 244 <211> 20 <212〉 DNA <213〉人造的 <220〉 <223〉探針序列 <400> 244 ccacccagaa gactgtggat > > > > 0 12 3 11 f _ - t 11 2 2 2 2 < < < < 245 20 DNA 人造的 <220〉 <223〉探針序列 <400> 245 ttcagctcag ggatgacctt <210> <211> <212〉 <213> 2420DN人 的 Α造 <220> <223〉探針序列 <400> 246 agctgtggcg tgatggccgt > > > > 0 12 3 f - -«1A 1Χ 2 2 2 2 < < < < 247 20 DNA 人造的 <220〉 <223〉探針序列 <400> 247 aactttggca ttgtggaagg 201021803 <220〉 <223〉探針序列 <4〇0> 248 ggatgcaggg atgatgttct <210> 249 <211〉 16 <212> DNA <213〉人造的 <220〉 <223〉LNA寡聚物 ❹ <220〉 <221〉 <222〉 <223〉 11115(：_特徵 (0.7(15) 硫代磷酸鍵聯 > > > > 0 12 3 2 22 2 2 2 2 2 < < < < misc_特徵 ⑴：⑶ f/N人核^基 > > > > 0 12 3 2222 222 2 < < < < misc_特徵 (14)7.(16) <400> 249 tagcctttga cctctc <210〉 250 <211〉 20 <212〉 DNA <213〉人造序列 ® <220> <223〉人造序列之敘述：合成的探針 <400〉 250 cattgcccaa cctccgcgtg 16 20 <210> 251 <211〉 20 <212> DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的引子 <400> 251 tgcagtggat tcgagaagtg 第63頁 201021803 <210> 252 <211〉 20 <212〉 DNA <213>人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的引子 <400> 252 ggcaaacttc ccatcgtaga 20 <210〉 253 <211> 20 <212〉 DNA <213〉人造序列 <220〉

<223〉人造序列之敘述：合成的探針 <400> 253 actggcgctg ccaaggctgt 20 <210> 254 <211> 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220> 〈223>人造序列之敘述：合成的引子 <400〉 254 ccacccagaa gactgtggat 20

<210> 255 <211〉 20 <212> DNA <213〉人造序列 <220〉 <223〉人造序列之敘述：合成的引子 <400〉 255 ttcagctcag ggatgacctt 20 第64頁

Claims (2)

1. 201021803 七、申請專利範圍： 1 · 一種以下組合之用途： ^ (a.)由10至50個連續單體組成之募聚物，其中鄰近 單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯， 其中該寡聚物包含具有至少10個連續單體之第一區 域’其與具有至少10個選自由以下組成之群的化合物中存 在之連續單體之區域的序列至少8〇% —致：
2. 5 -Gs eCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC-3t( SEQ ID NO： ❹ 169); 及 5，-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' ( SEQ ID NO： 180)， 其中大寫字母表示心D_氧基_LNA單體且小寫字母表示 DNA單體，下標「S」表示硫代罐酸i旨鍵且MeC表示含有5-甲基胞嘧啶驗基之尽氧基_LNA單體，且 丨中該第一區域之至少一個單體為核苦類似物；及 (b. ) EGFR ( HER1 )之蛋白赂胺酸激酶抑制劑， 其係用於治療哺乳動物之癌症。 2·如申請專利範圍帛！項之用途，其中該egfr(heri) 之蛋白絡胺酸激酶抑制劑係選自由吉非替尼（㈣出仙）、 埃羅替尼“rl〇tinib)、拉帕替尼Ο — "及卡奈替尼 (canertinib)組成之群。 3’如申凊專利範圍第2項之用途’其中該阳叹（1 ) 之蛋白酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 1 201021803 4 ·如刖述申嗜直 片 叫專利軏圍中任一項之用途，其中該第一區 域之序列與且右 ’、有至V 10個SEQ ID NO: 169或180中存在之 連續单體之區域的序列一致。 5 :述申請專利範圍中任—項之用㉟，其中該寡 之第一區域由 至1 8個連續單體組成。 6.如前述申請專 之第-區域由u個員之用途，其中該寡聚物 巧由16個連續單體組成。 7·如别述申請專利範圍中任-項之用途，其中各核苷類 似物獨立地選自由 U各核苷類 基-核糖之單體、含有2:π :LNA單體 '含有2，-〇-院 去氧核糖之單Μ 3 __甲基-核糖之單體、含有2,-胺基 去乳核糖之早體及含有2,氟·去氧核糖之單體。 9 ·如申4專利範圍第8 LNA單體。 用途，其中該核苷類似物為 如申請專利範圍第i項至第 其中該募聚物係選自由以下組成之群· …途’ 5'-G Mer τ ^ 169 ❹ s s s sCsasgsascsastscsasMep T Mep ； LsTs C-3 ( SEQ ID NO： 〇 及 180 ，-TsAsGscsCstsgstsCsascststsMeCsTsMec_3f ^ SEQ id no 該寡聚物為 11·如申請專利範圍第1〇 5，-TsAsGscscstsgstscsascstst 項之用途，其中 S eCsXMep -3,, s c'3 ( SEQ id NO； 12 ·如前述申請專利範圍中任 項之用途，其中該哺 乳 2 180 201021803 動物為人類。 / 13.如刖述申請專利範圍中任-項之用it，其中該癌症 係選自由以下組成之群：肺癌、前列腺癌、乳癌、上皮癌 及表皮樣癌。 14. 如申請專利範圍第i項至第12項中任一項之用途， 其中該癌症係選自由以下組成之群：非霍奇金氏淋巴瘤 (non-Hodgkin’s lymph〇ma )、霍奇金氏淋巴瘤 '急性白血 病、急性淋巴球性白血病、急性髓細胞性白血病、慢性骨 Φ髓白血病、慢性淋巴球性白血病、多發性骨髓瘤、結腸癌、 直腸癌、上皮癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺癌、腎 細胞癌、肝細胞瘤、膽管癌、絨膜癌、子宮頸癌、睾丸癌、 肺癌、膀胱癌、黑色素瘤、頭頸癌、腦癌、原發部位不明 的轉移癌、贅瘤、周圍神經系統之癌症、中樞神經系統之 癌症、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原 性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋 巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤（Ewing，s ® tumour)、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細 胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳突腺癌、囊 腺癌、髓質癌、支氣管癌、精原細胞瘤、胚胎癌、威姆氏 瘤（Wilms’ tumour )、小細胞肺癌、上皮癌、神經膠瘤、星 形細胞瘤、神經管母細胞瘤、顱咽管瘤、室管媒瘤、松果 體瘤、血管母細胞瘤、聽神經瘤、寡樹突神經膠細胞瘤、 腦脊髓膜瘤、神經母細胞瘤及視網膜母細胞瘤。 15. —種醫藥組成物’其包含： 3 201021803 (a)由10至50個連續單體組成之寡聚物，其中鄰近 單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯， 其中該养聚物包含具有至少1〇個連續單體之第一區 域； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列炱 少80%—致； (b )蛋白酿胺酸激酶抑制劑；及 (c)醫藥學上可接受之賦形劑。 16. 如申請專利範圍第15項之組合物，其中該寡聚物之 第一區域之序列與具有至少1〇個SEQ ID NO: 1-140及 169-234中存在之連續單體之區域的序列至少%一致。 17. 如申請專利範圍第16項之組合物，其中該寡聚物之 第一區域之序列與具有至少1 〇個Seq id NO: 1、54、200 或2 11中存在之連續單體之區域的序列至少8 〇 % 一致。 18. 如申請專利範圍第16項之組合物，其中該寡聚物之 第一區域之序列與具有至少10個SEQ m Ν〇: 169或18〇 中存在之連續單體之區域的序列至少8〇%一致。 19. 如申請專利範圍第15項之組合物，其中該蛋白酪胺 酸激酶抑制劑係選自由以下組成之群：吉非替尼、埃羅替 尼、卡奈替尼、凡德他尼（vandetanib )、拉帕替尼 '索拉 非尼（sorafenib)、AG-494、RG-13022、RG-14620、BIBW 2992、替伏汀AG-825、替伏汀9、替伏汀23、替伏汀25、 201021803 替伏汀46、替伏江47、替伏汀53、紫鉚因（butein )、薑黃 素、AG-1478、AG-879、環丙烷甲酸_(3·(6_(3_三氟甲基苯 基胺基）-嘧啶-4-基胺基）·苯基）_醯胺、Ν8_(3氣_4_氟苯 基）-N2-(l -甲基哌啶-4-基）-嘧啶并[5,4_d]嘧啶_2,8_二胺、 2HC1 ( CAS 196612-93-8 )、4-(4-苯甲氧基苯胺基）_6,7_二甲 氧基喹唑啉、Ν-(4-((3·氣_4_氟苯基）胺基）吡啶并[3，4 d]嘧啶 -6-基）2-丁醯胺（CAS 881001-19-0 )、EKB-569、HKI-272 及 HKI-357。 ® 20.如申請專利範圍第19項之組合物，其中該蛋白酪胺 酸激酶抑制劑係選自由以下組成之群：吉非替尼、埃羅替 尼、拉帕替尼、卡奈替尼及索拉非尼。 21. 如申請專利範圍第15項之組合物，其中該第一區域 中之至少一個單體為選自由以下組成之群的核苷類似物： LNA單體、含有2，_〇_院基_核糖之單體、含有2，_〇_甲基. 核糖之單體、含有2，-胺基-去氧核糖之單體及含有2，氟_去 氧核糖之單體。 參 22. 如申請專利範圍第21項之組合物，其中該第—區域 中之至少一個單體為LNA單體。 23. 一種醫藥組成物，其包含： (a )由以下序列組成之寡聚物： 5，-TSAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC>3- ( SEQ ID N〇. 180) ’ ‘ 其中大寫字母表示β-D-氧基-LNA單體且小寫字母表示 DNA單體，下標「s」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有5_ 5 201021803 甲基胞嘧啶鹼基之β-D-氧基-LNA單體； (b )吉非替尼；及 (c)醫藥學上可接受之賦形劑。 24_—種醫藥組成物，其包含： (a) 由10至50個連續單體組成之募聚物之結合物， 其中鄰近單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯， 其中該寡聚物包含具有至少個連續單體之第一區 城； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列至 少8 0 % —致； (b) 蛋白路胺酸激酶抑制劑；及 (c) 醫藥學上可接受之賦形劑。 25.如申請專利範圍第24項之醫藥組成物，其中該結合 物為由以下序列組成之寡聚物之結合物： 5 'TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMcC-3' ( SEQ ID Ν〇· 180)， 其中大寫字母表示p_D•氧基_LNA單體且小 DNA Μ. 分双不 趙’下標「S」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有5_ 甲基胞喷咬驗基之β-D-氧基-LNA單體；且 該蛋白路胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 ^ 6·種抑制哺乳動物細胞增殖之方法，該方法包含 該細胞與以下接觸： 201021803 (a)有效量之由1〇至50個連續單體組成之寡聚物， 其中鄰近單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵聯， 其中該募聚物包含具有至少1〇個連續單體之第一區 域； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列至 少80%—致；及 (b )有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑。 27.如申請專利範圍第26項之方法，其中該募聚物由以 下序列組成： 5'-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' ( SEQ ID NO: 180)，

   其中大寫字母表示師-氧基_LNA單體且小寫字母表示 DNA單體，下標「S」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有5_ 曱基胞嘧啶鹼基之心D_氧基_LNA單體；且 其中該蛋白酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 28.如申响專利範圍第26項之方法，其中當與同型未處 理細胞之增殖相比時，該細胞之增殖抑制至少約3〇%。 26項之方法，其申該細胞為選自 •刖列腺癌細胞、乳癌細胞、肺 29.如申請專利範圍第 由以下組成之群的癌細胞 癌細胞及上皮癌細胞。 30.-種抑制哺乳動物細胞增殖之方法，該方法包含使 該細胞與以下接觸： 7 201021803 (a)有效量之由l〇至50個連續單體組成之寡聚物之 結合物，其中鄰近單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價 鍵聯， 其中該寡聚物包含具有至少10個連續單體之第一區 域； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列至 少80%—致；及 (b )有效量之蛋白酿胺酸激酶抑制劑。 3 1 ·如申請專利範圍第30項之方法，其中該結合物為由 以下序列組成之寡聚物之結合物： 5 TsAsGscscstsgstscsascststs CsTs^e(3-3' ( SEQ id N〇! 180)， 其令大寫字母表示卢-D-氧基-LN A單體且小寫字母表示 DNA單體，下標rs」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有5· 甲基胞嘧啶鹼基之沒-D-氧基_LNA單體；且 其中該蛋白酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 32.—種抑制哺乳動物體内細胞增殖之方法，該方法包 含使喷乳動物組織與以下接觸： (a)有效量之由10至5〇個連續單體組成之寡聚物， 其中鄰近單體藉由磷酸酯基或硫代磷酸酯基共價鍵 其中該寡聚物包含具有至少10個連續單體之第一區 201021803 域； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列至 少80%—致；及 (b )有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑。 33·如申請專利範圍第32項之方法，其中該寡聚物由以 下序列組成： 〇 5'-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' ( SEQ id n〇. 180)， 其中大寫字母表示/3-D-氧基-LNA單體且小寫字母表示 DNA單體，下標「s」表示硫代磷酸酯鍵且Mec表示含有$ 甲基胞嘧啶鹼基之/3-D-氧基-LNA單體；且 其中該蛋白酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 34. —種治療哺乳動物癌症之方法，該方法包含向該哺 乳動物投予： 參 （a)有效量之由1〇至50個連續單體組成之寡聚物， 其中鄰近單體藉由鱗酸酷基或硫代碟酸醋基共價鍵聯， 其中該寡聚物包含具有至少10個連續單體之第_區 域； 其中該第一區域之至少一個單體為核苷類似物； 其中該第一區域之序列與哺乳動物HER3基因或哺乳 動物HER3 mRNA之最佳比對目標區域之反向互補序列至 少80%—致；及 9 201021803 (b )有效量之蛋白酪胺酸激酶抑制劑。 35.如申請專利範圍第34項之方法，其 下序列組成： μ泰聚物由以 gstsCswst’cn3’（ seq id n〇: 5 'TsAsGscscsts 180)， 其中大寫字母表示師·氧基·LNA單體 DNA单體，下標、」表示硫代鱗酸醋鍵且不 甲基胞_驗基之師·氧基-LNA單體；Α τ 3有5 其中該蛋白酪胺酸激酶抑制劑為吉非替尼。 幻 36_如中請專利範圍帛”項之方法，其中該癌症係選自 I以下組成之群：非霍奇金氏淋巴瘤'霍奇金氏淋巴瘤、 :生白血病、急性淋巴球性白血病、急性髓細胞性白血病、 a髄白血病、慢性淋巴球性白血病、多發性骨髓瘤、 結腸癌、直腸癌、上皮癌、胰腺癌、乳癌、卵巢癌、前列 腺癌f細胞癌、肝細胞瘤、膽管癌、絨膜癌、子宮頸癌、 睾丸癌肺癌、膀胱癌、黑色素瘤、頭頸癌、腦癌、原發 部位不明的轉移癌、贅瘤、周圍神經系統之癌症、中樞神 〇 、’二系、’’先之癌症、纖維肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉 瘤月原性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管 肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑臈瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平 滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、 汗腺癌、皮脂腺癌、乳突癌、乳突腺癌、囊腺癌、髓質癌、 支氣营癌 '精原細胞瘤、胚胎癌、威姆氏瘤、小細胞肺癌、 上皮癌、神經膠瘤、星形細胞瘤、神經管母細胞瘤、顱咽 10 201021803 .管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、 募樹突神經膠細胞瘤、腦脊 母：=、：神經瘤、 膜母細胞瘤。 瘤#經母細胞瘤及視網 37. 如申請專利範圍第34項 該蛋白路胺酸激酶抑制劑分別投予。其中將該寡聚物及 38. 如申請專利範圍第34項 該蛋白赂胺酸激酶抑制劑並行或同時投予、中將該寡聚物及 39. 如申凊專利範圍第34項 ©該蛋白赂胺酸激酶抑制劑依序投予。〆’、將5亥泰聚物及 40. 如申請專利範圍第34項之方法其中 蛋白路胺酸激酶抑制劑呈適用於口服投予之醫藥劑型/ 仏如_請專利範圍第34項之方法，其 :於靜脈内投予之醫藥劑型且該蛋白赂胺酸激酶抑= 適用於口服投予之醫藥劑型。 仰制齊丨呈 42.如申請專利範圍第36 由H貝〈万法，其中该癌症係選自 φ 占月'4腺癌、乳癌及上皮癌組成之群。 人類仏如令請專利範圍第34項之方法，其中該哺乳動物為 、44.一種乾向HER3之LNA寡聚物用於製傷 :瘩其中該藥物係與蛋白酪胺酸激酶抑制劑組合用於 冶療。 ’此 激二”請專利範圍第44項之用途，其，該蛋白酪胺醆 卡太替 選自由以下組成之群：吉非替尼、埃羅替尼、 匕凡德他尼、拉帕替尼、索拉非尼、AG-4 94、 11 201021803 RG-13022、RG-14620、BIBW 2992、替伏汀 AG-825、替伏 汀9、替伏汀23、替伏汀25、替伏汀46、替伏汀47、替伏 汀53 '紫鉚因、薑黃素、AG-1478、AG-879、環丙烷甲酸 -(3-(6-(3-三氟甲基-苯基胺基）_嘧啶_4_基胺基）_苯基）_醯 胺、N8-(3-氯-4-氟苯基）_N2-(1-甲基哌啶_4_基）·嘧啶并 [5,4-d]嘧啶-2,8-二胺、2HC1 (CAS 196612-93-8)、4-(4-苯 甲氧基苯胺基）-6,7-二甲氧基喹唑啉、;^_(4_((3_氯_4_氟苯基） 胺基）《·比啶并[3,4-d]嘧啶-6-基）2- 丁醯胺（CAS 88 1001 -19-0 )、EKB-569、HKI-272 及 HKI-357。 © 46. 如申請專利範圍第45項之用途，其中該蛋白酪胺酸 激酶抑制劑係選自由吉非替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、卡 奈替尼及索拉非尼組成之群。 47. 如申凊專利範圍第45項之用途，其中該蛋白酪胺酸 激酶抑制劑為吉非替尼。 —48.種包含靶向HER3之[NA寡聚物之藥物，其中該 藥物係與蛋白路胺酸激酶抑制劑組合用於癌症治療。 49·種用於癌症治療之套組，該套組包含蛋白酪胺酸 激酶及fe向HER3之LNA寡聚物。 八、圖式： (如次頁） 12