MX2011004869A - Terapia de combinacion selectiva de erbb-3 (her3). - Google Patents

Abstract

La invención se refiere a composiciones farmacéuticas y métodos de tratamiento con una terapia de combinación dirigida al HER3; la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden un oligómero que hace blanco en el ARNm de HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR) en una célula, lo que conlleva a reducir la expresión de HER3 y opcionalmente HER2 y/o EGFR, y un inhibidor de tirosina cinasa de proteína de molécula pequeña de una o más tirosina cinasas receptoras, lo que conlleva a inhibir la señalización y/o internamiento de los dímeros receptores en la célula; la terapia de combinación es conveniente para una gama de trastornos médicos tales como trastornos de hiperproliferación (por ejemplo, el cáncer); la invención provee métodos de tratamiento de trastornos de hiperproliferación con una combinación de un oligómero y un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

Description

TERAPIA DE COMBINACIÓN SELECTIVA DE ERBB-3 (HER3) INTERREFERENCIA CON SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud reclama la prioridad de la solicitud de patente provisional de EE. UU. No de serie 61/1 12,549, presentada el 7 de noviembre de 2008, que se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere a métodos de regulación negativa de la expresión o actividad de HER3 (y opcionalmente de uno o más de EGFR y HER2) en una célula, que comprenden administrar a la célula una cantidad eficaz de un compuesto oligomérico (oligómero) que hace blanco en el ARNm de HER3 en una célula, y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína (PTK), o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo. Además, la invención se refiere a métodos de tratamiento de una enfermedad, que comprenden administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad eficaz de un oligómero que hace blanco en el ARNm de HER3 en una célula, y una cantidad eficaz de un inhibidor de PTK o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo. Además, la invención se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un oligómero que hace blanco en el ARNm de HER3, y una cantidad eficaz de un inhibidor de PTK o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en un excipiente farmacéuticamente aceptable. Las composiciones son útiles para regular negativamente la expresión o actividad de HER3 (y opcionalmente uno o más de EGFR y HER2), y para tratar varias enfermedades tales como el cáncer.

La invención provee el uso de un oligómero de ácido nucleico cerrado ("LNA") que hace blanco en HER3, tal como uno o más de los oligómeros aquí descritos, para la preparación de un medicamento, en donde el medicamento es para usarse en el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de tirosina cinasa de proteína. La invención provee un medicamento que comprende un oligómero de LNA que hace blanco en HER3, tal como uno o más de los oligómeros aquí descritos, en donde el medicamento es para usarse en el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El HER3 es un miembro de la familia de tirosina cinasas receptoras ErbB que incluye 4 receptores diferentes: ErbB-1 (EGFR, HER1 ), ErbB-2 (neu, HER2), ErbB-3 (HER3) y ErbB-4 (HER4) (Yarden et a/., Nat. Rev. Mol. Cell. Biol, 2001 , 2(2): 127-137). Las proteínas receptoras de esta familia están compuestas de un dominio extracelular de unión de ligando, un solo dominio hidrofóbico de transmembrana y un dominio citoplásmico que contiene tirosina cinasa. Existen por lo menos 12 factores de crecimiento en la familia EGF que se unen a uno o más de los receptores ErbB y efectúan homodimerización o heterodimerización del receptor. La dimerización activa el internamiento y reciclado del receptor unido a ligando (o su degradación), y también rutas de señalización intracelular ulteriores que regulan, entre otras cosas, la supervivencia celular, apoptosis y actividad proliferativa. Los expertos en la materia entienden que el HER3 (ErbB3) carece de actividad de tirosina cinasa.

El EGFR, HER2, y recientemente el HER3, se han asociado con la formación de tumor. Estudios recientes han mostrado que el EGFR está sobreexpresado en varios tejidos humanos malignos en comparación con sus contrapartes de tejido normal. Se ha encontrado una incidencia alta de sobreexpresión, amplificación, supresión y rearreglo estructural del gen que codifica EGFR en tumores de la mama, pulmón, ovarios y riñon. La amplificación del gen de EGFR en tumores multiformes de gliobastoma es una de las alteraciones genéticas conocidas más consistentes. También se ha observado sobreexpresión de EGFR en muchos carcinomas de pulmón de célula no pequeña. Se han detectado concentraciones elevadas de ARNm de HER3 en carcinomas mamarios humanos.

Los regímenes convencionales de quimioterapia, que están dirigidos a proteínas celulares u otras macromoléculas y que producen apoptosis, típicamente no distinguen entre las células de tumor que se dividen rápidamente y las células normales que se dividen rápidamente. La muerte de células normales, tales como las células de la médula ósea y las células del tracto gastrointestinal, produce efectos secundarios tóxicos. Además, las respuestas del tumor a la quimioterapia citotóxica son impredecibles.

Recientemente se han probado varios inhibidores de tirosina cinasa de proteína como terapia selectiva para algunos tipos de cáncer en los que la expresión de la tirosina cinasa de proteína está descontrolada. Sin embargo, la eficacia de dichas terapias es limitada porque muchos tipos de cáncer no responden a un inhibidor tirosina cinasa de proteína, o con el tiempo se desarrolla una resistencia a los inhibidores; Arora et al. (2005) J. Pharmacol. and Exp. Therapies, 315 (3):971 -971-979.

Existe la necesidad de terapias para el cáncer que estén dirigidas a las células de tumor, que sean más eficaces y menos tóxicas que la quimioterapia convencional, y que tengan una tasa de respuesta más alta que las terapias selectivas actualmente disponibles.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCIÓN En algunas modalidades la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende: (a) un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos, en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde el oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de la primera - región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamifero o un ARNm de HER3 de mamífero; (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteína; y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En varias modalidades, la composición farmacéutica comprende un oligómero que consiste en la secuencia mostrada en el SEQ ID NO: 180, y el inhibidor de tirosina cinasa de proteína es el gefitinib.

En otras modalidades, la composición farmacéutica comprende: (a) un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos, en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde el oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos, en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteína; y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

Además, la invención se refiere a un método para inhibir la proliferación de una célula de mamifero, que comprende poner en contacto la célula con: (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde el oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleosido; y en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

En varias modalidades, el método de inhibición de la proliferación de una célula de mamífero comprende poner en contacto la célula con una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en la secuencia mostrada en el SEQ ID NO: 180, y una cantidad eficaz de gefitinib.

En algunas modalidades, la invención abarca métodos para inhibir la proliferación de células en el cuerpo de un mamífero, que comprende poner en contacto un tejido de mamífero con: (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde el oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleosido; y en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteina.

En algunas modalidades, el método de inhibición de la proliferación de células en el cuerpo de un mamífero comprende poner en contacto un tejido de mamífero con una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en la secuencia mostrada en el SEQ ID NO: 180, y una cantidad eficaz de gefitinib.

En varias modalidades, el método para inhibir la proliferación de células en el cuerpo de un mamífero comprende poner en contacto un tejido de mamífero con: (a) una cantidad eficaz de un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde el oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleósido; y en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

Además, la invención abarca un método de tratamiento del cáncer en un mamífero, que comprende administrar al mamífero: (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una c cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

En algunas modalidades, el método de tratamiento del cáncer en un mamífero comprende administrar al mamífero una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en la secuencia mostrada en el SEQ ID NO: 180, y una cantidad eficaz de gefitinib.

En varias modalidades el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer del pulmón, cáncer de la próstata, cáncer de la mama, cáncer del ovario, cáncer del colon, carcinoma epitelial y cáncer del estómago.

En modalidades adicionales, la invención abarca un método de tratamiento del cáncer en un mamífero, que comprende administrar al mamífero: (a) una cantidad eficaz de un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos, en donde por lo menos un monómero de la primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de la primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteina.

Una modalidad de la invención provee el uso de: (a) un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos, en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos que es por lo menos 80% idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presente en un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 5'-GsMeCsTscscsasgsasCsastscsasMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 169), y 5'-TsAsGsCscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA, y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina, y en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido, dicho oligómero siendo un inhibidor de antisentido de HER3; y (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteina de EGFR (HER1), tal como gefitinib, erlotinib, lapatinib y canertinib, o un inhibidor de tirosina cinasa de proteina miembro de la familia VEGFR, tal como VEGFR2 y VEGFR3, tal como por ejemplo sorafenib; en combinación, para el tratamiento del cáncer en un mamífero.

En una variación de la modalidad, la secuencia de la primera región es idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presente en 5'-GsMeCsTsCsCsasgsasCsastsCsasMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 169) o 5,-TsAsGsCsCstsgstsCsasCststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180). En otra variación de la modalidad, el oligómero es 5'-Gs eCsTsCsCsasgsasCsastsCsasMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 169) o 5'-TsAsGsCsCstsgstsCsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), que son inhibidores oligómeros de antisentido de HER3. La invención también provee modalidades de método de tratamiento que corresponden a estos usos. Dichas modalidades de método incluyen la administración a un mamífero, tal como un paciente humano en necesidad de tratamiento de cáncer, del oligómero y el inhibidor de PKI al mismo tiempo o casi al mismo tiempo.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figuras 1A-1 C. Las figuras 1A y 1 B muestran los efectos antiproliferativos sobre células de cáncer de pulmón A549 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y el diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 1C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células A549 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

Figuras 2A-2C. Las figuras 2A y 2B muestran los efectos a nti p rol ife rati vos sobre células del cáncer de próstata H1993 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 2C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células H1993 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

Figuras 3A-3C. Las figuras 3A y 3B muestran los efectos antiproliferativos sobre células de cáncer de próstata 15PC3 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 3C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células 15PC3 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

Figuras 4A-4C. Las figuras 4A y 4B muestran los efectos antiproliferativos sobre células de cáncer de próstata DU145 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 4C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células DU145 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

Figuras 5A-5C. Las figuras 5A y 5B muestran los efectos antiproliferativos sobre células de cáncer de mama SKBR3 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 5C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células SKBR3 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

Figuras 6A-6C. Las figuras 6A y 6B muestran los efectos antiproliferativos sobre células de carcinoma epitelial humano A431 del tratamiento con una combinación de un compuesto oligomérico (que tiene la secuencia y diseño indicados en el SEQ ID NO: 180) y gefitinib. La figura 6C muestra la inhibición de la expresión del ARNm de HER3 en las células A431 por el compuesto oligomérico que tiene la secuencia y diseño que se indican en el SEQ ID NO: 180.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN En algunas modalidades la invención provee composiciones y métodos para modular la expresión o actividad de HER3 (y opcionalmente uno o más de EGFR y HER2). En particular, la invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un oligómero que se híbrida específicamente bajo condiciones intracelulares con ácidos nucleicos que codifican HER3 (y opcionalmente uno o más de EGFR y HER2), y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, en un excipiente farmacéuticamente aceptable.

En algunas modalidades el oligómero está presente en la misma composición que el inhibidor de la tirosina cinasa de proteína o derivado farmacéuticamente aceptable del mismo. En varias modalidades el oligómero está presente en una composición que es separada de la composición que comprende el inhibidor de tirosina cinasa de proteina. En algunas modalidades el oligómero está presente en una composición separada de la composición del inhibidor de tirosina cinasa de proteina, y las dos composiciones se empacan para usarse en combinación.

En algunas modalidades la invención abarca métodos de tratamiento o prevención de un trastorno, tal como el cáncer, en un paciente, que comprende administrar al paciente en necesidad del mismo una cantidad eficaz de las composiciones farmacéuticas de la invención.

Composiciones farmacéuticas Oligómeros En un primer aspecto, los compuestos oligoméricos (llamados aquí oligómeros) para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención son útiles, por ejemplo, para modular la función de las moléculas de ácido nucleico que codifican el HER3 de mamífero. En algunas modalidades las moléculas de ácido nucleico que codifican el HER3 de mamífero incluyen ácidos nucleicos que tienen la secuencia de bases mostrada en el SEQ ID NO: 197, y variantes alélicas naturales de la misma.

Los oligómeros de la invención están compuestos de monómeros unidos covalentemente.

El término "monómero" incluye tanto nucleósidos como desoxinucleósidos (colectivamente, "nucleósidos"), que se presentan naturalmente en los ácidos nucleicos y que no contienen azúcares modificados ni nucleobases modificadas, esto es, compuestos en los cuales un azúcar de ribosa o azúcar de desoxirribosa está unido covalentemente a una porción de nucleobase (base) no modificada natural (esto es, los heterociclos de purina y pirimidina, adenina, guanina, citosina, timina o uracilo), y "análogos de nucleósido" que son nucleósidos que se presentan naturalmente en los ácidos nucleicos o no se presentan naturalmente en los ácidos nucleicos, en donde la porción de azúcar es diferente de un azúcar de ribosa o un azúcar de desoxirribosa (tales como azúcares bicíclicos o azúcares modificados en la posición 2', por ejemplo azúcares 2'-sustituidos), o la porción de base está modificada (por ejemplo, 5-metilcitosina), o ambos.

Un "monómero de ARN" es un nucleósido que contienen un azúcar de ribosa y una nucleobase no modificada.

Un "monómero del ADN" es un nucleósido que contiene un azúcar de desoxirribosa y una nucleobase no modificada.

Un "monómero de ácido nucleico cerrado", "monómero cerrado" o "monómero de LNA" es un análogo de nucleósido que tiene un azúcar bicíclico, como se describe adicionalmente más abajo.

Los términos "análogo de nucleósido correspondiente" y "nucleosido correspondiente" indican que la porción de base del análogo de nucleosido y la porción de base del nucleosido son idénticas. Por ejemplo, cuando el "nucleosido" contiene un azúcar de 2-desoxirribosa unido a una adenina, el "análogo de nucleosido correspondiente" contiene por ejemplo un azúcar modificado unido a una porción de base de adenina.

Los monómeros de los oligómeros aquí descritos para usarse en las composiciones y métodos de la invención se acoplan entre sí por medio de grupos de enlace. Convenientemente, cada monómero está unido al monómero adyacente en la posición 3' por medio de un grupo de enlace.

Los términos "grupo de enlace" o "enlace internucleósido" significan un grupo capaz de acoplar covalentemente dos monómeros contiguos. Los ejemplos específicos incluyen grupos fosfato (que forman un fosfodiéster entre los monómeros de nucleosido adyacentes) y grupos fosforotioato (que forman un enlace de fosforotioato entre los monómeros de nucleosido adyacentes).

Los grupos de enlace adecuados incluyen los listados en WO 2007/031091 , por ejemplo los grupos de enlace listados en el primer párrafo de la página 34 de WO 2007/031091 (que se incorpora aquí como referencia).

En algunas modalidades, el grupo de enlace se modifica de su fosfodiéster normal a uno que es más resistente al ataque de nucleasa, tal como fosforotioato o boranofosfato, que son escindibles por RNasa H, permitiendo la inhibición de antisentido mediada por RNasa de la expresión del gen objetivo.

Los términos "oligómero", "compuesto oligomérico" y "oligonucleótido" se utilizan intercambiablemente en el contexto de la invención, y se refieren a una molécula formada por el enlace covalente de dos o más monómeros contiguos, por ejemplo, por medio de un grupo fosfato (formando un enlace de fosfodiéster entre los nucleósidos), o un grupo fosforotioato (que forma un enlace de fosforotioato entre los nucleósidos). El oligómero comprende o consiste en 10-50 monómeros, por ejemplo 10-30 monómeros.

En algunas modalidades un oligómero comprende nucleósidos, o análogos de nucleósido, o mezclas de los mismos, como se refiere en la presente. Un "oligómero de LNA" u "oligonucleótido de LNA" se refiere a un oligonucleótido que contiene uno o más monómeros de LNA, como se define abajo en la sección 6.1.2.

Los análogos de nucleósido que están incluidos opcionalmente dentro de los oligómeros pueden funcionar de forma similar a los nucleósidos correspondientes, o pueden tener funciones mejoradas especificas. Muchas veces los oligómeros en donde algunos o todos los monómeros son análogos de nucleósido se prefieren sobre las formas nativas, debido por ejemplo a su mayor capacidad de penetrar una membrana celular, buena resistencia a las nucleasas extracelulares o intracelulares, y alta afinidad y especificidad por el ácido nucleico objetivo. Particularmente se prefieren los monómeros de LNA.

En varias modalidades, uno o mas de los análogos de nucleósido presentes dentro del oligómero son de función "silenciosa" o "equivalente" al nucleósido natural correspondiente, esto es, no tienen efecto funcional sobre la forma en que funciona el oligómero para inhibir la expresión del gen objetivo. No obstante, tales análogos de nucleósido "equivalentes" son útiles si, por ejemplo, son más fáciles o baratos de fabricar, o si son más estables bajo las condiciones de almacenamiento o fabricación, o pueden incorporar una marca o etiqueta. Sin embargo, típicamente los análogos tendrán un efecto funcional sobre la forma en la que funciona el oligómero para inhibir la expresión, por ejemplo, aumentando la afinidad de unión con la región objetivo del ácido nucleico objetivo, o aumentando la resistencia a las nucleasas intracelulares, o facilitando el transporte hacia la célula.

En varias modalidades, los oligómeros de acuerdo con la invención comprenden monómeros de nucleósido y por lo menos un monómero análogo de nucleósido, tal como un monómero de LNA u otro monómero análogo de nucleósido.

El término "por lo menos uno" comprende los enteros mayores o iguales que 1 , tales como 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, etcétera. En varias modalidades, por ejemplo al referirse al ácido nucleico o proteína objetivo de los compuestos de la invención, el término "por lo menos uno" incluye los términos "por lo menos dos", "por lo menos tres" y "por lo menos cuatro". Similarmente, en algunas modalidades, el término "por lo menos dos" comprende los términos "por lo menos tres" y "por lo menos cuatro".

En algunas modalidades el oligómero consiste en 10-50 monomeros contiguos, por ejemplo 10, 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 monomeros contiguos.

En algunas modalidades el oligómero consiste en 10-25 monomeros, o en 10-16 monomeros, o en 12-16 monomeros.

En varias modalidades los oligómeros comprenden 10-25 monomeros contiguos, 10-24 monomeros contiguos, 12-25 o 12-24 o 10-22 monomeros contiguos, por ejemplo 12-18 monomeros contiguos, por ejemplo 13-17 o 12-16 monomeros contiguos, por ejemplo 13, 14, 15, 16 monomeros contiguos.

En varias modalidades los oligómeros comprenden 10-22 monomeros contiguos, o 10-18, por ejemplo 12-18 o 13-17 o 12-16, por ejemplo 13, 14, 15 o 16 monomeros contiguos.

En algunas modalidades los oligómeros comprenden 10-16 o 12-16 o 12-14 monomeros contiguos. En otras modalidades los oligómeros comprenden 14-18 o 14-16 monomeros contiguos.

En varias modalidades los oligómeros comprenden 10, 1 1 , 12, 3, o 14 monomeros contiguos.

En varias modalidades los oligómeros para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención consisten en no más de 22 monomeros contiguos, por ejemplo no más de 20 monomeros contiguos, por ejemplo no más de 18 monomeros contiguos, por ejemplo 15, 16 o 17 monomeros contiguos. En algunas modalidades, el oligómero de la invención comprende menos de 20 monomeros contiguos.

En varias modalidades el oligómero de la invención no comprende monómeros de ARN.

En varias modalidades los oligómeros son moléculas lineales o son lineales como se sintetizan. En dichas modalidades, el oligómero es una molécula de una sola cadena, y típicamente no comprende una región corta de por ejemplo por lo menos 3, 4 o 5 monómeros contiguos, que son complementarios a otra región dentro del mismo oligómero de tal manera que el oligómero forma un dúplex interno. En varias modalidades, el oligómero sustancialmente no es de doble cadena, esto es, no es un ARNci.

En algunas modalidades los oligómeros consisten en un tramo contiguo de monómeros cuya secuencia está identificada por un SEQ ID NO: que se describe en la presente (véase, por ejemplo, el cuadro 1 ). En otras modalidades, los oligómeros comprenden una primera región, la región consistiendo en un tramo contiguo de monómeros, y una o más regiones adicionales que consisten en por menos un monómero adicional. En algunas modalidades, la secuencia de la primera región está identificada por un SEQ ID NO: que se describe en la presente.

Monómeros de ácido nucleico cerrado (LNA) El término "monómero de LNA" se refiere a un análogo de nucleósido que contiene un azúcar bicíclico (un "azúcar de LNA"). Los términos "oligonucleótido de LNA" y "oligómero de LNA" se refieren a un oligómero que contiene uno o más monómeros de LNA.

En algunas modalidades el LNA usado en los compuestos de oligonucleótido de las composiciones y métodos de la invención tienen la estructura de la fórmula general I: ) en donde X se selecciona de -O-, -S-, -N(R )-, -C (R6R6*)-¡ B se selecciona de hidrógeno, alcoxi de d-4 sustituido opcionalmente, alquilo de Ci-4 sustituido opcionalmente, aciloxi de C1-4 sustituido opcionalmente, nucleobases, intercaladores de ADN, grupos fotoquimicamente activos, grupos termoquimicamente activos, grupos quelantes, grupos reporteros, y ligandos; P designa la posición de radical para un enlace internucleósido con un monómero subsiguiente, o un grupo 5'-terminal, dicho enlace internucleósido o grupo 5'-terminal incluyendo opcionalmente el sustituyente R5, o igualmente aplicable el sustituyente R5 ; P* designa un enlace internucleósido con un monómero precedente, o un grupo 3'-terminal; RA y R2* designan juntos un birradical que consiste en 1 -4 grupos/átomos seleccionados de -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(R ), -C(Ra)=N-, -O-, - Si(Ra)2-, S-, -SO2-, -N(Ra)- y >C=Z, en donde Z se selecciona de -O-, -S- y -N(Ra)-, y Ra y Rb, cada uno independientemente, se selecciona de hidrógeno, alquilo de CM2 sustituido opcionalmente, alquenilo de C2-12 sustituido opcionalmente, alquinilo de C2-12 sustituido opcionalmente, hidroxi, alcoxi de C i2. alcoxialquilo de C2. 12, alqueniloxi de C2.12, carboxi, alcoxicarbonilo de C1.12, alquilcarbonilo de Ci_ 12, formilo, arilo, ariloxi-carbonilo, ariloxi, arilcarbonilo, heteroarilo, heteroariloxi-carbonilo, heteroariloxi, heteroarilcarbonilo, amino, mono- y di-(alquilo de Cí^amino, carbamoilo mono- y di-(alquilo de C^-amino-carbonilo, amino-alquilo de C 6-aminocarbonilo, mono- y di-(alquilo de 6)amino-alquilo de Ci.6-aminocarbonilo, alquilo de C1 -6-carbonilamino, carbamido, alcanoiloxi de Ci.6, sulfono, alquilsulfoniloxi de Ci-6, nitro, azido, sulfanilo, alquiltio de Ci.6, halógeno, intercaladores de ADN, grupos fotoquimicamente activos, grupos termoquímicamente activos, grupos quelantes, grupos reporteros, y ligandos, en donde el arilo y heteroarilo pueden estar sustituidos opcionalmente, y en donde dos sustituyentes gemínales Ra y Rb juntos pueden designar metileno (=CH2) sustituido opcionalmente, y cada uno de los sustituyentes Rr, R2, R3', R5, R5", R6 y R6*, si está presente, se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo de C^ 12 sustituido opcionalmente, alquenilo de C2-12 sustituido opcionalmente, alquinilo de C2-12 sustituido opcionalmente, hidroxi, alcoxi de Ci-i2, alcoxialquilo de C2.i2, alqueniloxi de C2-i2, carboxi, alcoxicarbonilo de Ci-12, alquilcarbonilo de Ci.12l formilo, arilo, ariloxi-carbonilo, ariloxi, arilcarbonilo, heteroarilo, heteroariloxi-carbonilo, heteroariloxi, heteroarilcarbonilo, amino, mono- y d¡-(alquilo de Ci-6)arnino, carbamoilo, mono- y di-(alquilo de C1.6)-amino-carbonilo, amino-alquilo de C, .6-aminocarbonilo, mono- y di-(alqu¡lo de C1-6)amino-alquilo de Ci.6-am¡nocarbonilo, alquilo de Ci-6-carbonilamino, carbamido, alcanoiloxi de C1 -6, sulfono, alquilsulfoniloxi de C1 -6, nitro, azido, sulfanilo, alquiltio de Ci-6, halógeno, intercaladores de ADN, grupos fotoquímicamente activos, grupos termoquímicamente activos, grupos quelantes, grupos reporteros, y ligandos, en donde el arilo y heteroarilo pueden estar sustituidos opcionalmente, y en donde dos sustituyentes gemínales juntos pueden designar oxo, tioxo, imino, o metileno sustituido opcionalmente, o juntos pueden formar un birradical espiro que consiste en una cadena de alquileno de 1 -5 átomos de carbono, que opcionalmente está interrumpida o terminada por uno o más heteroátomos/grupos seleccionados de -O-, -S- y -(NRN)-, en donde RN se selecciona de hidrógeno y alquilo de Ci. 4, y en donde dos sustituyentes adyacentes (no gemínales) pueden designar un enlace adicional que resulta en un enlace doble; y RN*, cuando está presente y no está involucrado en un birradical, se selecciona de hidrógeno y alquilo C T^; y las sales básicas y sales de adición de ácido de los mismos.

En algunas modalidades, R5' se selecciona de H, -CH3, -CH2- CH3, -CH2-O-CH3 y -CH=CH2.

En varias modalidades R y R2 juntos designan un birradical seleccionado de -C(RaRb)-0-, -C(RaRb)-C(RcRd)-0-, -C(RaR )-C(RcRd)- C(ReRf)-0-, -C(RaRb)-0-C(RcRd)-, -C(RaRb)-0-C(RcRd)-0-, -C(RaRb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-, -C(Ra)=C(Rb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-N(Rc)-, -C(RaRb)-C(RcRd)- N(Re)-, -C(RaRb)-N(Rc)-0-, y -C(RaRb)-S-, -C(RaRb)-C(RcRd)-S-, en donde Ra, Rb, Rc, Rd, Re y Rf, cada uno independientemente, se selecciona de hidrógeno, alquilo de C1-12 sustituido opcionalmente, alquenilo de C2-12 sustituido opcionalmente, alquinilo de C2-12 sustituido opcionalmente, hidroxi, alcoxi de CM2, alcoxialquilo de C2-12, alqueniloxi de C2-12, carboxi, alcoxicarbonilo de CM2, alquilcarbonilo de C1.12, formilo, arilo, ariloxi-carbonilo, ariloxi, arilcarbonilo, heteroarilo, heteroariloxi-carbonilo, heteroariloxi, heteroarilcarbonilo, amino, mono- y di-(alquilo de C -6)amino, carbamoilo, mono- y di-(alquilo de Ci.6)-amino-carbonilo, amino-alquilo de Ci-6-aminocarbonilo, mono- y di-(alquilo de Ci-6)amino-alquilo de C1-6-aminocarbonilo, alquilo de Cve-carbonilamino, carbamido, alcanoiloxi de C,.6, sulfono, alquilsulfoniloxi de C1-6, nitro, azido, sulfanilo, alquiltio de Ci-6, halógeno, intercaladores de ADN, grupos fotoquimicamente activos, grupos termoquimicamente activos, grupos quelantes, grupos reporteros y ligandos, en donde el arilo y heteroarilo pueden estar sustituidos opcionalmente, y en donde dos sustituyentes gemínales Ra y Rb juntos pueden designar metileno (=CH2) sustituido opcionalmente.

En modalidades adicionales R4 y R2' juntos designan un birradical seleccionado de -CH2-0-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-S-, -CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-0-, -CH2-CH2-CH(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -CH2-0-CH2-0-, -CH2-NH- O-, -CH2-N(CH3)-0-, -CH2-0-CH2-, -CH(CH3)-0-, -CH(CH2-0-CH3)-0-.

Para todos los centros quirales se pueden encontrar grupos asimétricos en la orientación R o S.

En las diversas modalidades el monómero de LNA utilizado en los oligómeros comprende por lo menos un monómero de LNA de acuerdo con la fórmula (II) o la fórmula (III): (II) (III) en donde Y es -O-, -0-CH2-, -S-, -NH-, o N(RH); Z y Z se seleccionan independientemente de entre un enlace intemucleósido, un grupo terminal o un grupo protector; B constituye una porción de base no modificada o una porción de base modificada que ocurre naturalmente en los ácidos nucleicos, o bien no ocurre naturalmente en los ácidos nucleicos, y RH se selecciona de hidrógeno y alquilo de Ci-4.

Los monómeros de LNA para usarse en varias modalidades de la invención se muestran en las fórmulas (IV) - (VIII) a continuación: a-L-oxi-LNA ß-D-oxi-LNA (V) (IV) ß-D-amino-LNA (VIII) El término "tio-LNA" se refiere a un monómero de LNA en el que Y en la fórmula (II) anterior se selecciona de S o -CH2-S-. El tio-LNA puede estar en la configuración beta-D o alfa-L.

El término "amino-LNA" se refiere a un monómero de LNA en el que Y en la fórmula (II) anterior se selecciona de -N(H)-, N(R)-, CH2-N(H)- y -CH2-N(R)-, en donde R se selecciona de hidrógeno y alquilo de d-4. El amino-LNA puede estar en la configuración beta-D o alfa-L.

El término "oxi-LNA" se refiere a un monómero de LNA en el que Y en la fórmula (II) anterior representa -O- o -CH2-O-. El oxi-LNA puede estar en la configuración beta-D o alfa-L.

El término "ENA" se refiere a un monómero de LNA en el que Y en la fórmula (II) anterior es -CH2-O- (en donde el átomo de oxígeno de -CH2-O- está unido en la posición 2' con respecto a la base B).

En algunas modalidades el monómero de LNA se selecciona de un monómero beta-D-oxi-LNA, un monómero alfa-L-oxi-LNA, un monómero beta-D-amino-LNA y un monómero beta-D-tio-LNA, en particular un monómero beta-D-oxi-LNA.

En el presente contexto, el término "alquilo de CiV significa una cadena de hidrocarburo saturado lineal o ramificado en donde la cadena tiene de uno a cuatro átomos de carbono, tales como el metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ter-butilo.

Los oligomeros que contienen ácido nucleico cerrado (LNA) representan una nueva generación de oligomeros de antisentido. A diferencia de los oligonucleótidos de la técnica anterior, los monómeros de nucleósidos de LNA en los oligomeros de LNA tienen un enlace 02' a C4' construido por ingeniería dentro del azúcar (véanse las fórmulas IV-VIII de arriba). Esto estabiliza o "cierra" la ribosa en la conformación estructural 3'-endo, que es favorecida para la unión con el ARN. Por lo tanto, los oligomeros de LNA tienen una afinidad de unión con el ARN excepcionalmente alta en comparación con los oligomeros convencionales de ADN. Además, la modificación de LNA mejora sustancialmente la resistencia a la nucleasa y permite reducir la longitud del oligonucleótido (véase, por ejemplo, Vester B, et al. "LNA (locked nucleic acid): high-affinity targeting of complementar/ RNA and DNA". Biochemistry, 26 de octubre de 2004; 43(42): 13233-41 ; Lauritsen A, et al. "Methylphosphonate LNA: a locked nucleic acid with a methylphosphonate linkage". Bioorg Med Chem Lett. 20 de enero de 2003; 13(2):253-6).

Los monómeros y oligómeros de LNA que comprenden monómeros de LNA se puede obtener mediante cualquier método conocido. En algunas modalidades los monómeros de LNA y los oligonucleótidos de LNA se pueden obtener mediante los procedimientos descritos en la publicación de PCT No. WO 07/031081 , y las referencias ahí citadas.

Otros monómeros análogos de nucleosido y enlaces En varias modalidades, por lo menos uno de los monómeros presentes en el oligómero es un análogo de nucleosido que contiene una base modificada, tal como una base seleccionada de 5-metilcitosina, isocitosina, pseudoisocitosina, 5-bromouracilo, 5-propiniluracilo, 6-aminopurina, 2-aminopurina, inosina, diaminopurina, 2-cloro-6-aminopurina, xantina e hipoxantina, o un azúcar modificado, por ejemplo una porción de azúcar modificada para proveer un grupo sustituyente 2', tal como azúcares de 2'-O-alquil-ribosa, azúcares de 2 -amino-desoxirribosa, azúcares de 2'-fluorodesoxirribosa, y azúcares de 2'-0-metoxietil-ribosa (2'MOE), o un azúcar de LNA como se describe arriba, o azúcares de arabinosa ("monómeros de ANA"), o azúcares de 2'-fluoro-arabinosa, o azúcares de d-arabino-hexitol ("monómeros de HNA").

Los ejemplos específicos de análogos de nucleósido útiles en los oligómeros aquí descritos se describen por ejemplo en Freier y Altmann, Nucí. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443, y Uhlmann, Curr. Opinión in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, o se describen o se citan en WO 2007/031091 , que se incorporan aquí como referencia en su totalidad.

En varias modalidades, la incorporación en el oligómero de análogos de nucleósido incrementadores de afinidad (esto es, análogos de nucleósido que elevan la estabilidad del dúplex (Tm) de oligómero/región objetivo), tales como monómeros de LNA o monómeros que contienen azúcares sustituidos en la posición 2', o la incorporación de grupos de enlace modificados, provee una mayor resistencia a la nucleasa. En varias modalidades la incorporación de dichos análogos de nucleósido incrementadores de afinidad permite reducir el tamaño del oligómero y permite una mayor especificidad de secuencia de oligómeros más cortos. Se reconocerá que al hacer referencia a una secuencia de bases de un oligómero particular, en algunas modalidades los oligómeros comprenden un análogo de nucleósido correspondiente incrementador de afinidad, por ejemplo un monómero de LNA correspondiente u otro análogo de nucleósido correspondiente.

Los oligonucleótidos que comprenden monómeros de nucleósido o análogos de nucleósido se pueden sintetizar mediante cualquier método conocido. En algunas modalidades los oligonucleótidos para usarse en los métodos y composiciones de la invención se pueden sintetizar usando un sintetizador automático de ADN, que usa química estándar de fosforamidita con oxidación por yodo. Las ß-cianoetildiisopropil-fosforamiditas se pueden comprar en Applied Biosystems (Foster City, California). Los monómeros modificados para usarse en la preparación de los compuestos oligoméricos usados en las composiciones y métodos de la invención se pueden obtener mediante cualquier método conocido, como los que se describen en Jones R. y Herdewijn P., "Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry" (John Wiley & Sons, Inc., eds. 2008).

En algunas modalidades el enlace entre por lo menos dos monómeros contiguos del oligómero es diferente de un enlace de fosfodiéster.

En algunas modalidades el oligómero incluye por lo menos un monómero que tiene una base modificada, por lo menos un monómero (que puede ser el mismo monómero) que tiene un azúcar modificado, y por lo menos un enlace intermonomérico que no ocurre naturalmente.

Diseño de "oliqómeros de hueco" (qapmer) En algunas modalidades el oligómero de la invención es un oligómero de hueco.

Un "oligómero de hueco" es un oligómero que comprende un tramo contiguo de monómeros capaces de reclutar una RNAsa (por ejemplo, RNAsa H), como se describe adicionalmente más abajo, tal como una región de por lo menos 6 o 7 monómeros de ADN, referida aquí como la región B, en donde la región B está flanqueada en su extremo tanto 5' como 3' por regiones denominadas respectivamente las regiones A y C, cada una de las regiones A y C comprendiendo análogos de nucleósido, tales como análogos de nucleósido incrementadores de afinidad, por ejemplo 1 -6 análogos incrementadores de afinidad, por ejemplo nucleótidos de LNA.

En algunas modalidades los análogos de nucleósido presentes en las regiones A y C comprenden porciones de azúcar modificadas, como se describe arriba, y todos los análogos de nucleósido en el oligómero o en una región del mismo comprenden la misma porción de azúcar modificada. En varias modalidades, los análogos de nucleósido contienen azúcares 2'-MOE, azúcares de 2 -fluoro-desoxirribosa o azúcares de LNA. Los análogos de nucleósido del oligómero se pueden seleccionar independientemente de estos tres tipos. En algunas modalidades de oligómero que contienen análogos de nucleósido, por lo menos uno de los análogos de nucleósido contiene un azúcar 2'-MOE. En varias modalidades por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 análogos de nucleósido en el oligómero contienen azúcares 2'-MOE-ribosa. En algunas modalidades por lo menos uno de los análogos de nucleósido contiene un azúcar de 2'-fluoro-desoxirribosa. En varias modalidades por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 análogos de nucleósido en el oligómero contienen azúcares de 2'-fluoro-desoxirribosa.

Típicamente, el oligómero de hueco comprende las regiones, de 5' a 3', A-B-C, u opcionalmente A-B-C-D o D-A-B-C, en donde la región A comprende por lo menos un análogo de nucleósido, por ejemplo por lo menos un monómero de LNA, por ejemplo 1-6 análogos de nucleósido tales como monómeros de LNA; y la región B comprende por lo menos cinco monómeros contiguos que son capaces de reclutar RNAsa (cuando se forman en un dúplex con una región objetivo complementaria de la molécula de ARN objetivo, por ejemplo el ARNm objetivo), por ejemplo monómeros de ADN; y la región C consiste o comprende por lo menos un análogo de nucleósido, por ejemplo por lo menos un monómero de LNA, por ejemplo 1-6 análogos de nucleósido, por ejemplo monómeros de LNA; y la región D, cuando está presente, comprende 1 , 2 o 3 monómeros, tales como monómeros de ADN.

En varias modalidades la región A consiste en 1 , 2, 3, 4, 5 o 6 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA, por ejemplo 2-5 análogos de nucleósido, por ejemplo 2-5 monómeros de LNA, por ejemplo 3 o 4 análogos de nucleósido, por ejemplo 3 o 4 monómeros de LNA; o la región C consiste en 1 , 2, 3, 4, 5 o 6 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA, por ejemplo 2-5 análogos de nucleósido, por ejemplo 2-5 monómeros dé LNA, por ejemplo 3 o 4 análogos de nucleósido, por ejemplo 3 o 4 monómeros de LNA. En algunas modalidades todos los análogos de nucleósido son monómeros de LNA.

En algunas modalidades la región B comprende 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 o 12 monómeros contiguos capaces de reclutar RNAsa, o 6-10, o 7-9, por ejemplo 8 monómeros contiguos que son capaces de reclutar RNAsa. En algunas modalidades, la región B comprende por lo menos un monómero de ADN, por ejemplo 1 -12 monómeros de ADN, o 4-12 monómeros de ADN, o 6-10 monómeros de ADN, por ejemplo 7-10 monómeros de ADN, u 8, 9 o 10 monómeros de ADN.

En algunas modalidades la región A consiste en 3 o 4 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA; la región B consiste en 7, 8, 9 o 10 monómeros de ADN; y la región C consiste en 3 o 4 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA. Tales diseños incluyen (A-B-C) 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 3-9-3, 3-9-4, 4-9-3, 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 3-7-3, 3-7-4, 4-7-3, y además pueden incluir la región D, que puede tener uno o dos monómeros, por ejemplo monómeros de ADN.

En algunas modalidades el oligómero consiste en 10, 1 1 , 12, 13 o 14 monómeros contiguos, en donde las regiones del oligómero tienen el patrón (5'-3 ), A-B-C, u opcionalmente A-B-C-D o D-A-B-C, en donde la región A consiste en 1 , 2 o 3 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA; la región B consiste en 7, 8 o 9 monómeros contiguos que son capaces de reclutar RNAsa cuando se forman en un dúplex con una molécula de ARN complementaria (tal como un ARNm objetivo); y la región C consiste en 1 , 2 o 3 análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA. Cuando está presente, la región D consiste en un solo monómero de ADN.

En algunas modalidades la región A consiste en 1 monómero de LNA. En algunas modalidades la región A consiste en 2 monómeros de LNA. En algunas modalidades la región A consiste en 3 monómeros de LNA. En algunas modalidades la región C consiste en 1 monómero de LNA. En algunas modalidades la región C consiste en 2 monómeros de LNA. En algunas modalidades la región C consiste en 3 monómeros de LNA. En algunas modalidades la región B consiste en 7 monómeros de nucleósido. En algunas modalidades la región B consiste en 8 monómeros de nucleósido. En algunas modalidades la región B consiste en 9 monómeros de nucleósido. En algunas modalidades la región B comprende 1 -9 monómeros de ADN, por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 monómeros de ADN. En algunas modalidades la región B consiste en monómeros de ADN. En algunas modalidades la región B comprende por lo menos un monómero de LNA que está en la configuración alfa-L, por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 o 9 monómeros de LNA en la configuración alfa-L. En algunas modalidades la región B comprende por lo menos un monómero de alfa-L-oxi-LNA. En algunas modalidades todos los monómeros de LNA en la región B que están en la configuración alfa-L son monómeros de alfa-L-oxi-LNA. En algunas modalidades el número de monómeros presentes en las regiones A-B-C de los oligómeros se selecciona del grupo que consiste en: 1-8-1 , 1 -8-2, 2-8-1 , 2-8-2, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1 , 4-8-2, 1 -8-4, 2-8-4; o 1 -9-1 , 1 -9-2, 2-9-1 , 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 1 -9-3, 3-9-1 , 4-9-1 , 1 -9-4; o 1 -10-1 , 1 -10-2, 2-10-1 , 2-10-2, 1-10-3 y 3-10-1 (monómeros de análogo de nucleósido - región B - monómeros de análogo de nucleósido). En algunas modalidades el número de monómeros presentes en las regiones A-B-C de los oligómeros de la invención se selecciona del grupo que consiste en: 2-7-1 , 1-7-2, 2-7-2, 3-7-3, 2-7-3, 3-7-2, 3-7-4 y 4-7-3. En algunas modalidades cada región A y C consiste en dos monómeros de LNA, y la región B consiste en 8 o 9 monómeros de nucleósido, que en algunas modalidades son monómeros de ADN.

En varias modalidades, otros diseños de oligómero de hueco incluyen aquellas en donde las regiones A o C consisten en 3, 4, 5 o 6 análogos de nucleósido, tales como monómeros que contienen un azúcar de 2 -O-metoxietil-ribosa (2'MOE), o monómeros que contienen un azúcar de 2'-fluoro-desoxirribosa, y la región B consiste en 8, 9, 10, 1 1 o 12 nucleósidos, tales como monómeros de ADN, en donde las regiones A-B-C tienen 5-10-5 o 4-12-4 monómeros.

En algunas modalidades los oligómeros de hueco contienen grupos de enlace que contienen azufre como se provee en la presente. En varias modalidades los oligómeros de hueco contienen grupos de enlace de fosforotioato, particularmente en la región de hueco (B).

En algunas modalidades los enlaces de fosforotioato enlazan entre si monómeros en las regiones de flanqueo (A y C). En varias modalidades los enlaces de fosforotioato enlazan las regiones A o C con la región D, y enlazan entre si los monómeros dentro de la región D.

En varias modalidades las regiones A, B y C comprenden grupos de enlace diferentes de fosforotioato, tales como enlaces de fosfodiéster, particularmente, por ejemplo, cuando el uso de los análogos de nucleósido (por ejemplo, monómeros de LNA) protege a los grupos de enlace dentro de las regiones A y C de degradación por endonucleasa.

En varias modalidades los monómeros adyacentes del oligómero están unidos entre sí por medio de grupos fosforotioato.

Se reconoce que la inclusión de enlaces de fosfodiéster, por ejemplo uno o dos enlaces, en un oligómero con un esqueleto de fosforotioato, particularmente con grupos de enlace de fosforotioato entre los monómeros de análogo de nucleósido o adyacentemente a los mismos (típicamente en la región A o C), puede modificar la biodisponibilidad o biodistribución de un oligómero -véase WO 2008/053314, que se incorpora aquí como referencia.

En algunas modalidades como las modalidades anteriormente descritas, en donde sea adecuado y no se indique específicamente, todos los grupos de enlace restantes son de fosfodiéster o fosforotioato, o una mezcla de los mismos.

En algunas modalidades todos los grupos de enlace internucleósido son de fosforotioato.

Al hacer referencia a secuencias específicas de oligonucleótido de hueco como las provistas en la presente, se entenderá que, en varias modalidades, cuando los enlaces son enlaces de fosforotioato, se pueden usar enlaces alternativos como los que se describen en la presente, por ejemplo enlaces de fosfato (fosfodiéster), particularmente para enlaces entre análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA.

Se describen diseños adicionales de oligómeros de hueco en WO 2004/046160 y WO 2007/14651 1A2, que se incorporan aquí como referencia. La solicitud provisional de EE. UU. 60/977,409, que se incorpora aquí como referencia, se refiere a oligómeros de hueco "cortos". En algunas modalidades los oligómeros aquí presentados pueden ser dichos oligómeros de hueco cortos.

Secuencias y especificidades de los oligómeros Los oligómeros que se usan en las composiciones y métodos de la invención se hibridan con ácidos nucleicos que codifican polipéptidos de HER3 o HER2 o EGFR.

Los términos "ácido nucleico" y "polinucleótido" se usan aquí intercambiablemente y se definen como una molécula formada por enlace covalente de dos o más monómeros, como se describe arriba. Incluyendo dos o más monómeros, los "ácidos nucleicos" pueden ser de cualquier longitud y el término es genérico de "oligómeros", que tienen las longitudes aquí descritas. Los términos "ácido nucleico" y "polinucleótido" incluyen moléculas de una sola cadena, de doble cadena, de cadena parcialmente doble y circulares.

En varias modalidades, el término "ácido nucleico objetivo", como se usa aquí, se refiere al ácido nucleico (tal como el ADN o ARN) que codifica un polípéptido HER3 de mamífero (por ejemplo, como el ARNm de HER3 humano que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 197, o los ARNm de mamífero que tienen los Nos. de Registro GenBank NM 001005915, NM 001982, y las formas empalmadas alternativamente NP 001973.2 y NP_0010059 5.1 (humano); NM_017218 (rata); NM 010153 (ratón); NM 001 103105 (vaca); o las secuencias de ARNm predichas que tienen los Nos. de Registro GenBank XM_001491896 (caballo), XM_001 169469 y XM_509131 (chimpancé)).

En varias modalidades, "el ácido nucleico objetivo" también incluye un ácido nucleico que codifica un polipéptido HER2 de mamífero (por ejemplo, los ARNm de mamífero que tienen los Nos. de Registro GenBank NM_001005862 y NM_004448 (humano); NM_017003 y NM_017218 (rata); NM_001003817 (ratón); NM_001003217 (perro); y NM_001048163 (gato)).

En varias modalidades, "el ácido nucleico objetivo" también incluye un ácido nucleico que codifica un polipéptido EGFR de mamífero (por ejemplo, como los ARNm de mamífero que tienen los Nos. de Registro GenBank NM_201284, N _201283, NM_201282 y NM_005228 (humano); NM_007912 y N _207655 (ratón); NM_031507 (rata); y NM_214007 (cerdo)).

Se reconoce que los Nos. de Registro de GenBank anteriormente mencionados se refieren a las secuencias de ADNc y no a las secuencias de ARNm per se. La secuencia de un ARNm maduro se puede derivar directamente de la secuencia de ADNc correspondiente, reemplazando las bases de timina (T) con bases de uracilo (U).

En varias modalidades, "el ácido nucleico objetivo" también incluye ácidos nucleicos que codifican HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR), o variantes naturales de los mismos, y ácidos nucleicos de ARN derivados de los mismos, tales como pre-ARNm o ARNm maduro. Los oligómeros de acuerdo con la invención típicamente son capaces de hibridarse con el ácido nucleico objetivo.

El término "variante natural del mismo" se refiere a variantes de la secuencia de polipéptido o ácido nucleico de HER3 (o HER2 o EGFR), que existen naturalmente dentro del grupo taxonómico definido, tal como mamífero, por ejemplo ratón, mono y humano. Típicamente, cuando se hace referencia a "variantes naturales" de un polinucleótido, el término también puede abarcar cualquier variante alélica del ADN genómico que codifica HER3 (o HER2 o EGFR), que se encuentra en el cromosoma Chr 12:54.76-76-54.78 Mb, por translocalización cromosómica o duplicación, y el ARN, tal como el ARNm derivado del mismo. Cuando se hace referencia a una secuencia de polipéptido especifica, por ejemplo, el término también incluye las formas naturales de la proteína, que por lo tanto pueden ser procesadas por ejemplo mediante modificaciones conjuntas o posteriores a la traducción, tales como corte de péptido de señal, corte proteolítico, glicosilación, etc.

En algunas modalidades los oligómeros aquí descritos se unen a una región del ácido nucleico objetivo (la "región objetivo") por medio de apareamiento de bases de Watson-Crick, enlaces de hidrógeno de Hoogsteen, o enlaces de hidrógeno de Hoogsteen inversos, entre los monómeros del oligómero y los monómeros del ácido nucleico objetivo. Dicha unión también es conocida como "hibridación". A menos que se indique de otra manera, la unión es mediante apareamiento de bases complementarias de Watson-Crick (es decir, adenina con timina (ADN) o uracilo (ARN), y guanina con citosina), y el oligómero se une a la región objetivo porque la secuencia del oligómero es idéntica o parcialmente idéntica a la secuencia del complemento inverso de la región objetivo; para los propósitos de la presente, se dice que el oligómero es "complementario" o "parcialmente complementario" a la región objetivo, y el porcentaje de "complementariedad" de la secuencia del oligómero con la región objetivo es el porcentaje de "identidad" con el complemento inverso de la secuencia de la región objetivo.

A menos que se haga evidente de otra manera por el contexto, la "región objetivo" será la región del ácido nucleico objetivo que tiene la secuencia que se alinea mejor con el complemento inverso de la secuencia del oligómero especificado (o región del mismo), usando el programa de alineación y los parámetros que se describen más abajo.

Para determinar el grado de "complementariedad" entre los oligómeros para usarse en las composiciones y métodos de la invención (o regiones de los mismos), y la región objetivo del ácido nucleico que codifica el HER3 de mamífero (o HER2 o EGFR), como los que se describen en la presente, el grado de "complementariedad" (también "homología") se expresa como el porcentaje de identidad entre la secuencia del oligómero (o región del mismo) y el complemento inverso de la secuencia de la región objetivo que se alinea mejor con la misma. El porcentaje se calcula contando el número de bases alineadas que son idénticas entre las dos secuencias, dividiendo entre el número total de monómeros contiguos en el oligómero (o región del mismo), y multiplicando por 100. En dicha comparación, si existen huecos, es preferible que dichos huecos sean únicamente discordancias más que zonas en donde el número de monomeros dentro del hueco difiere entre el oligómero de la invención y la región objetivo.

Las alineaciones de aminoácidos y polinucleótidos, porcentaje de identidad de secuencia, y el grado de complementariedad, pueden ser determinados para los fines de la invención usando el algoritmo ClustalW, utilizando los parámetros estándares: véase http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html, Método: EMBOSS: water (local): Gap Open = 0.5, usando Blosum 62 (proteína), o DNAfull para secuencias de nucleótidos/nucleobases.

Como se entenderá, dependiendo del contexto, "discordancia" se refiere a una falta de identidad en la secuencia (como por ejemplo entre la secuencia de nucleobases de un oligómero y el complemento inverso de la región objetivo a la que se une; como por ejemplo entre la secuencia de bases de dos ácidos nucleicos que codifican HER3), o a la falta de complementariedad en la secuencia (como por ejemplo entre un oligómero y la región objetivo a la que se une).

Convenientemente, el oligómero (o conjugado, como se describe más abajo) es capaz de inhibir la expresión (regulándola negativamente) del gen de HER3 (y opcionalmente de uno o más de HER2 y EGFR).

En varias modalidades, los oligómeros usados en las composiciones y métodos de la invención inhiben la expresión del ARNm de HER3 (y opcionalmente de uno o más de HER2 y EGFR) en por lo menos 10% en comparación con el grado de expresión inmediatamente anterior al tratamiento, o por lo menos 20%, de preferencia por lo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 95%, en comparación con el grado de expresión inmediatamente antes del tratamiento. En varias modalidades los oligómeros de la invención inhiben la expresión de la proteína HER3 (y opcionalmente de uno o más de HER2 y EGFR) en por lo menos 10% en comparación con el grado de expresión inmediatamente antes del tratamiento, o por lo menos 20%, de preferencia por lo menos 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o 95%, en comparación con el grado de expresión inmediatamente antes del tratamiento. En algunas modalidades dicha inhibición se observa cuando se utiliza 1 nM del oligómero o conjugado de la invención. En varias modalidades dicha inhibición se observa cuando se utilizan 25 nM del oligómero o conjugado.

En varias modalidades la inhibición de la expresión del ARNm es menor de 100% (esto es, inhibición incompleta de la expresión), por ejemplo menos de 98% de inhibición, menos de 95% de inhibición, menos de 90% de inhibición, menos de 80% de inhibición, por ejemplo menos de 70% de inhibición. En varias modalidades, la inhibición de la expresión de la proteína es menor de 100% (esto es, inhibición incompleta de la expresión), por ejemplo menos de 98% de inhibición, menos de 95% de inhibición, menos de 90% de inhibición, menos de 80% de inhibición, por ejemplo menos de 70% de inhibición.

Alternativamente, la modulación del grado de expresión se puede determinar midiendo la cantidad de ARNm, por ejemplo por medio de Northern blotting o RT-PCR cuantitativa. Cuando el grado de inhibición se mide por las concentraciones de ARNm, cuando se usa una dosis apropiada como por ejemplo 1 nM y 25 nM en varias modalidades, típicamente la concentración del ARNm es 10-20% la concentración del ARNm en ausencia del compuesto de la invención.

La modulación (esto es, la inhibición o aumento) del grado de expresión también se puede determinar midiendo las concentraciones de proteina, por ejemplo mediante métodos tales como SDS-PAGE, seguido por Western blotting, usando los anticuerpos adecuados desarrollados contra la proteína objetivo.

En algunas modalidades la invención provee oligómeros que inhiben (por ejemplo, regulan negativamente) la expresión de una o más isoformas empalmadas alternativamente del ARNm de HER3 o proteínas derivadas del mismo. En algunas modalidades la invención provee oligómeros que inhiben la expresión de las isoformas empalmadas alternativamente de la proteína HER3 (Nos. de Registro de GenBank. NP 001973.2 y NP 001005915.1 ), o la expresión de los ácidos nucleicos que codifican las isoformas de la proteína HER3 (Nos. de Registro GenBank M_001982 y NM_001005915.1). En algunas modalidades el ARNm que codifica la isoforma 1 de HER3 es el ácido nucleico objetivo. En otras modalidades, el ARNm que codifica la isoforma 2 de HER3 es el ácido nucleico objetivo. En algunas modalidades los ácidos nucleicos que codifican la isoforma 1 de HER3 y la isoforma 2 de HER3 son los ácidos nucleicos objetivo, por ejemplo un oligómero que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 180.

En varias modalidades, la invención provee oligómeros, o una primera región de los mismos, que tienen una secuencia de bases que es complementaria a la secuencia de una región objetivo en un ácido nucleico de HER3, dichos oligómeros regulan negativamente el ARNm de HER3 o la expresión de la proteína HER3, y regulan negativamente la expresión del ARNm o proteina de uno o más de otros miembros de la familia de tirosina cinasas receptoras ErbB, tales como HER2 o EGFR. Los oligómeros, o una primera región de los mismos, que se unen eficientemente a las regiones objetivo de dos ácidos nucleicos diferentes de la familia de receptores ErbB (por ejemplo, el ARNm de HER2 y HER3) y que regulan negativamente la expresión del ARNm o proteina de ambos objetivos, se denominan "biespecificos". Los oligómeros, o una primera región de los mismos, que se unen a las regiones objetivo de tres miembros diferentes de la familia de receptores ErbB y son capaces de regular negativamente de forma eficiente los tres genes, se denominan "triespecíficos". En varias modalidades, un compuesto oligomérico de la invención puede ser poliespecífico, esto es, es capaz de unirse a regiones objetivo de ácidos nucleicos objetivo de múltiples miembros de la familia de tirosina cinasas receptoras ErbB y regulan negativamente su expresión. Como se usa aquí, se entiende que los términos "biespecifico" y "triespecifico" no están limitados de modo alguno. Por ejemplo, un "oligómero biespecifico" puede tener algún efecto sobre un tercer ácido nucleico objetivo, mientras que un "oligómero triespecifico" puede tener un efecto muy débil y por lo tanto insignificante sobre uno de sus tres ácidos nucleicos objetivo.

En varias modalidades, los oligómeros biespecificos, o una primera región de los mismos, son capaces de unirse a una región objetivo en un ácido nucleico de HER3 y una región objetivo en un ácido nucleico objetivo de HER2, y de regular negativamente de forma eficiente la expresión del ARNm o proteína de HER3 y HER2. En algunas modalidades los oligómeros biespecificos no regulan negativamente en la misma magnitud la expresión del ARNm o proteína de HER3 o del ARNm o proteína de HER2. En otras modalidades los oligómeros biespecificos de la invención, o de una primera región de los mismos, son capaces de unirse a una región objetivo en un ácido nucleico objetivo de HER3 y una región objetivo en un ácido nucleico objetivo de EGFR, y de regular negativamente de forma eficiente la expresión del ARNm o proteina de HER3, u del ARNm o proteína de EGFR. En varias modalidades, los oligómeros biespecificos no regulan negativamente en la misma magnitud la expresión del ARNm o proteína de HER3 y del ARNm o proteina de EGFR. En otras modalidades, los oligómeros thespecíficos, o una primera región de los mismos, son capaces de unirse a una región objetivo en un ácido nucleico objetivo de HER3, y a regiones objetivo en otros dos miembros de la familia ErbB de ácidos nucleicos objetivo de tirosina cinasas receptoras, y regulan negativamente de forma eficiente la expresión del ARNm o proteína de HER3 y del ARNm o proteína de los otros dos miembros de la familia ErbB de tírosína cinasas receptoras. En varias modalidades los oligómeros triespecíficos, o una primera región de los mismos, son capaces de regular negativamente de forma eficiente la expresión del ARNm o proteína de HER3, la expresión del ARNm o proteína de HER2, y la expresión del ARNm o proteína de EGFR. En varias modalidades los oligómeros triespecíficos no regulan negativamente en la misma magnitud la expresión del ARNm o proteína de HER3, del ARNm o proteína de HER2, y del ARNm o proteina de EGFR.

Un oligómero para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención típicamente se une a una región objetivo del ARNm de HER3 humano o HER2 humano o EGFR humano, y por lo tanto, comprende o consiste en una región que tiene una secuencia de bases que es complementaria o parcialmente complementaria a la secuencia de bases de, por ejemplo, el SEQ ID NO: 197, SEQ ID NO: 198 o SEQ ID NO: 199. En algunas modalidades la secuencia de los oligómeros para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención comprende opcíonalmente 1 , 2, 3, 4 o más discordancias de bases cuando se comparan con la secuencia de la región objetivo mejor alineada de los SEQ ID NOs. 197, 198 o 199.

En algunas modalidades los oligómeros usados en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención tienen secuencias que son idénticas a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NOs: 200-227, 1 -140 y 228-233 (véase el cuadro 1 más abajo). En otras modalidades, los oligómeros usados en las composiciones y métodos de la invención tienen secuencias que difieren en una, dos o tres bases en comparación con una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NOs: 200-227, 1-140 y 228-233. En algunas modalidades los oligómeros comprenden 10-16 monómeros contiguos. Los ejemplos de las secuencias de oligómeros que consisten en 16 monómeros contiguos son los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139 y 140. De las mismas se pueden derivar secuencias más cortas, por ejemplo la secuencia del oligómero más corto puede estar presente idénticamente en una región de un oligómero seleccionado de los que tienen las secuencias de bases de los SEQ ID NOs: 200-227, 1 -140 y 228-233. En varias modalidades los oligómeros más grandes incluyen una región que tiene una secuencia de por lo menos 10 monómeros contiguos que están presentes idénticamente en los SEQ ID NOs: 200-227, 1 -140 y 228-233. Las regiones objetivo del ARNm de HER3 humano que son complementarias a los oligómeros que tienen las secuencias de los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58 , 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139 y 140 se muestran en el Cuadro 1 (en negritas y subrayado, indicándose arriba los SEQ ID NOs: del oligómero correspondiente).

En varias modalidades los oligómeros tienen las secuencias de bases mostradas en los SEQ ID NOs: 141 -168. En algunas modalidades los oligómeros son oligómeros de LNA, por ejemplo, los que tienen las secuencias de los SEQ ID NOs: 169-196 y 234, y en particular los que tienen las secuencias de bases de los SEQ ID NOs: 169, 170, 173, 174, 180, 181 , 183, 185, 187, 188, 189, 190, 191 , 192 y 194. En varias modalidades los oligómeros son oligómeros de LNA como los que tienen las secuencias de bases de los SEQ ID NOs: 169, 170, 172, 174, 175, 176 y 179. En algunas modalidades los oligómeros o una región de los mismos consisten en, o comprenden una secuencia de bases como la que se muestra en los SEQ ID NOs: 169, 180 o 234 En algunas modalidades los conjugados de la invención incluyen un oligómero que tiene una secuencia de bases como la que se muestra en los SEQ ID NOs: 169, 180 o 234.

En algunas modalidades el oligómero usado en las composiciones y métodos de la invención puede comprender, convenientemente, una región que tiene una secuencia particular, tal como una secuencia seleccionada de los SEQ ID NOs: 200-227, que está presente idénticamente en un oligómero más corto, que también se puede usar en las composiciones y métodos de la invención. En varias modalidades la región comprende 10-16 monómeros. Por ejemplo, los oligómeros que tienen las secuencias de base de los SEQ ID NOs: 200-227, comprenden, cada uno, una región en donde la secuencia de la región está presente idénticamente en oligómeros más cortos que tienen las secuencias de los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139 y 140, respectivamente. En algunas modalidades los oligómeros que tienen menos de 16 monómeros, por ejemplo 10, 11 , 12, 13, 14, o 15 monómeros, tienen una región de por lo menos 8, por lo menos 9, por lo menos 10, por lo menos 1 1 , por lo menos 12, por lo menos 13, por lo menos 14, o 15 monómeros contiguos, cuya secuencia está presente idénticamente en oligómeros que tienen las secuencias de los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139 o 140. Por lo tanto, en varias modalidades, las secuencias de oligómeros más cortos se derivan de las secuencias de oligómeros más largos. En algunas modalidades las secuencias de oligómeros que tienen los SEQ ID NOs descritos en la presente, o las secuencias de por lo menos 10 monómeros contiguos de las mismas, están presentes idénticamente en oligómeros más grandes. Típicamente, para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención, un oligómero comprende una primera región que tiene una secuencia que está presente idénticamente en los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139, o 140, y si el oligómero es más largo que la primera región que está presente idénticamente en los SEQ ID NOs: 1 , 16, 17, 18, 19, 34, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 74, 75, 76, 91 , 92, 107, 122, 137, 138, 139, o 140, las regiones flanqueadoras del oligómero tienen secuencias que son complementarias a las secuencias que flanquean la región objetivo del ácido nucleico objetivo. Dos de estos oligómeros son el SEQ ID NO: 1 y el SEQ ID NO: 54.

En varias modalidades el oligómero comprende o consiste en una secuencia de monómeros que es completamente complementaria (perfectamente complementaria) a una región objetivo de un ácido nucleico objetivo que codifica una HER3 de mamífero.

Sin embargo, en algunas modalidades, la secuencia del oligómero incluye 1 , 2, 3 ó 4 (o más) discordancias en comparación con la región objetivo mejor alineada de un ácido nucleico objetivo de HER3, y todavía se une a la región objetivo suficientemente para inhibir la expresión del ARNm o proteína de HER3. El efecto desestabilizador de las discordancias sobre el dúplex unido por hidrógeno de Watson-Crick, por ejemplo, puede ser compensado aumentando la longitud del oligómero o aumentando el número de análogos de nucleósido, tales como monómeros de LNA, presentes dentro del oligómero.

En varias modalidades la secuencia de bases del oligómero no comprende más de 3 discordancias, por ejemplo no más de 2 discordancias, en comparación con la secuencia de base de la región objetivo mejor alineada, por ejemplo de un ácido nucleico objetivo que codifica un HER3 de mamífero.

Las secuencias de bases de los oligómeros para usarse en las composiciones y métodos de la invención, o de una región de las mismas, son en varias modalidades por lo menos 80% idénticas a una secuencia seleccionada del grupo que consiste en los SEQ ID NOs. 200-227, 1-140 y 228-233, por ejemplo por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 91 %, por lo menos 92%, por lo menos 93%, por lo menos 94%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o incluso 100% idéntica.

Las secuencias de bases de los oligomeros o de una primera región de los mismos en varias modalidades son por lo menos 80% complementarias a una secuencia de una región objetivo presente en los SEQ ID NOs: 197, 198 o 199, por ejemplo por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 91 %, por lo menos 92%, por lo menos 93%, por lo menos 94%, por lo menos 95%, por lo menos 96%, por lo menos 97%, por lo menos 98%, por lo menos 99%, o incluso 100% complementaria.

En varias modalidades la secuencia del oligómero (o una primera región del mismo) se selecciona del grupo que consiste en los SEQ ID NOs: 200-227, 1-140 y 228-233, o se selecciona del grupo que consiste en por lo menos 10 monómeros contiguos de los SEQ ID NOs: 200-227, 1-140 y 228-233. En otras modalidades, la secuencia del oligómero usado en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención, o una primera región del mismo, comprende opcionalmente 1 , 2 o 3 porciones de base que difieren de los oligomeros que tienen secuencias de los SEQ ID NOs: 200-227, 1 -140 y 228-233, o las secuencias de por lo menos 10 monómeros contiguos de los mismos, cuando se alinea óptimamente con la secuencia o región seleccionada del mismo.

En algunas modalidades la región de monómero consiste en 1 1 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, o 29 monómeros contiguos, por ejemplo 10-15, 12-25, 12-22, por ejemplo, entre 12 y 18 monómeros. Convenientemente, en varias modalidades la región es de la misma longitud que el oligómero de la invención.

En algunas modalidades el oligómero comprende monómeros adicionales en los extremos 5' o 3', por ejemplo, independiente, 1 , 2, 3, 4 o 5 monómeros adicionales en el extremo 5' o 3' del oligómero, que no son complementarios a la secuencia de la región objetivo. En varias modalidades el oligómero de la invención comprende una región que es complementaria al objetivo, que está flanqueada en 5' o 3' por monómeros adicionales. En varias modalidades el extremo 3' de la región está flanqueado por 1 , 2 o 3 monómeros de ADN o ARN. Los monómeros 3'-ADN se usan frecuentemente durante la síntesis de oligómeros en fase sólida. En varias modalidades, que pueden ser iguales o diferentes, el extremo 5' del oligómero está flanqueado por 1 , 2 o 3 monómeros de ADN o ARN. En algunas modalidades los monómeros 5' o 3' adicionales son nucleósidos, tales como monómeros de ADN o ARN. En varias modalidades los monómeros 5' o 3' pueden representar la región D referida en el contexto de oligómeros de hueco de la presente.

CUADRO 1 Secuencias de oligómero Sitio Compl Compl SEQ ID NO: Secuencia (5'-3') Long. (bases) objetivo EGFR HER2 HER3 2866 - 100% 87.5% SEQ ID NO: 1 GCTCCAGACATCACTC 16 2881 SEQ ID NO: 2 GCTCCAGACATCACT 15 SEQ ID NO: 3 CTCCAGACATCACTC 15 SEQ ID NO: 4 GCTCCAGACATCAC 14 SEQ ID NO: 5 CTCCAGACATCACT 14 SEQ ID NO: 6 TCCAGACATCACTC 14 SEQ ID NO: 7 GCTCCAGACATCA 13 SEQ ID NO: 8 CTCCAGACATCAC 13 SEQ ID NO: 9 TCCAGACATCACT 13 SEQ ID NO: 10 CCAGACATCACTC 13 SEQ ID NO: 1 1 GCTCCAGACATC 12 SEQ ID NO: 12 CTCCAGACATCA 12 SEQ ID NO: 13 TCCAGACATCAC 12 SEQ ID NO: 14 CCAGACATCACT 12 SEQ ID NO: 15 CAGACATCACTC 12 16 2865 - 100% 93.8% SEQ ID NO. 16 CTCCAGACATCACTCT 2880 16 2862 - 100% 93.8% SEQ ID NO: 17 CAGACATCACTCTGGT 2877 16 2861 - 100% 93.8% SEQ ID NO: 18 AGACATCACTCTGGTG 2876 16 2869 - 93.8% 87.5% SEQ ID NO: 19 ATAGCTCCAGACATCA 2884 SEQ ID NO: 20 ATAGCTCCAGACATC 15 SEQ ID NO: 21 TAGCTCCAGACATCA 15 SEQ ID NO: 22 ATAGCTCCAGACAT 14 SEQ ID NO: 23 TAGCTCCAGACATC 14 SEQ ID NO: 24 AGCTCCAGACATCA 14 SEQ ID NO: 25 ATAGCTCCAGACA 13 SEQ ID NO: 26 TAGCTCCAGACAT 13 SEQ ID NO: 27 AGCTCCAGACATC 13 SEQ ID NO: 28 GCTCCAGACATCA 13 CUADRO 1 (Continuación) Sitio Long. Compl Compl SEQ ID NO: Secuencia (5'-3') objetivo (bases) EGFR HER2 HER3 SEQ ID NO: 29 ATAGCTCCAGAC 12 SEQ ID NO: 30 TAGCTCCAGACA 12 SEQ ID NO: 31 AGCTCCAGACAT 12 SEQ ID NO: 32 GCTCCAGACATC 12 SEQ ID NO. 33 CTCCAGACATCA 12 16 2876 - 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 34 TCACACCATAGCTCCA 2891 SEQ ID NO: 35 TCACACCATAGCTCC 15 SEQ ID NO: 36 CACACCATAGCTCCA 15 SEQ ID NO: 37 TCACACCATAGCTC 14 SEQ ID NO: 38 CACACCATAGCTCC 14 SEQ ID NO: 39 ACACCATAGCTCCA 14 SEQ ID NO: 40 TCACACCATAGCT 13 SEQ ID NO: 41 CACACCATAGCTC 13 SEQ ID NO: 42 ACACCATAGCTCC 13 SEQ ID NO: 43 CACCATAGCTCCA 13 SEQ ID NO: 44 TCACACCATAGC 12 SEQ ID NO: 45 CACACCATAGCT 12 SEQ ID NO: 46 ACACCATAGCTC 12 SEQ ID NO: 47 CACCATAGCTCC 12 SEQ ID NO: 48 ACCATAGCTCCA 12 16 3025 - 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 49 CATCCAACACTTGACC 3040 16 3024 - 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 50 ATCCAACACTTGACCA 3039 16 3029 - 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 51 CAATCATCCAACACTT 3044 16 3030 - 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 52 TCAATCATCCAACACT 3045 16 3004 - 87.5% 93.8% SEQ ID NO: 53 CATGTAGACATCAATT 3019 16 435 - 68.8% 75% SEQ ID NO: 54 TAGCCTGTCACTTCTC 450 16 530 - 68.8% 68.8% SEQ ID NO: 55 AGATGGCAAACTTCCC 545 16 1146 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 56 CAAGGCTCACACATCT 1 161 CUADRO 1 (Continuación) Sitio Long. Compl Compl SEQ ID NO: Secuencia (5'-3') objetivo (bases) EGFR HER2 HER3 16 1266 - 75% 75% SEQ ID NO: 57 AAGTCCAGGTTGCCCA 1281 16 1490 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 58 CATTCAAGTTCTTCAT 1505 16 1529 - 81.3% 68.8% SEQ ID NO: 59 CACTAATTTCCTTCAG 1544 SEQ ID NO: 60 CACTAATTTCCTTCA 15 SEQ ID NO: 61 ACTAATTTCCTTCAG 15 SEQ ID NO: 62 CACTAATTTCCTTC 14 SEQ ID NO: 63 ACTAATTTCCTTCA 14 SEQ ID NO: 64 CTAATTTCCTTCAG 14 SEQ ID NO: 65 CACTAATTTCCTT 13 SEQ ID NO: 66 ACTAATTTCCTTC 13 SEQ ID NO: 67 CTAATTTCCTTCA 13 SEQ ID NO: 68 TAATTTCCTTCAG 13 SEQ ID NO: 69 CACTAATTTCCT 12 SEQ ID NO: 70 ACTAATTTCCTT 12 SEQ ID NO: 71 CTAATTTCCTTC 12 SEQ ID NO: 72 TAATTTCCTTCA 12 SEQ ID NO: 73 AATTTCCTTCAG 12 16 1535 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 74 GCCCAGCACTAATTTC 1550 16 1673 - 75% 75% SEQ ID NO: 75 CTTTGCCCTCTGCCAC 1688 16 1679 - 68.8% 75% SEQ ID NO: 76 CACACACTTTGCCCTC 1694 SEQ ID NO: 77 CACACACTTTGCCCT 15 SEQ ID NO: 78 ACACACTTTGCCCTC 15 SEQ ID NO: 79 CACACACTTTGCCC 14 SEQ ID NO: 80 ACACACTTTGCCCT 14 SEQ ID NO: 81 CACACTTTGCCCTC 14 SEQ ID NO: 82 CACACACTTTGCC 13 SEQ ID NO: 83 ACACACTTTGCCC 13 SEQ ID NO: 84 CACACTTTGCCCT 13 SEQ ID NO: 85 ACACTTTGCCCTC 13 SEQ ID NO: 86 CACACACTTTGC 12 CUADRO 1 (Continuación) Sitio Long. Compl Compl SEQ ID NO: Secuencia (5'-3') objetivo (bases) EGFR HER2 HER3 SEQ ID NO: 87 ACACACTTTGCC 12 SEQ ID NO: 88 CACACTTTGCCC 12 SEQ ID NO: 89 ACACTTTGCCCT 12 SEQ ID NO: 90 CACTTTGCCCTC 12 16 2345 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 91 CAGTTCCAAAGACACC 2360 16 2636 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 92 TGGCAATTTGTACTCC 2651 SEQ ID NO: 93 TGGCAATTTGTACTC 15 SEQ ID NO: 94 GGCAATTTGTACTCC 15 SEQ ID NO: 95 TGGCAATTTGTACT 14 SEQ ID NO. 96 GGCAATTTGTACTC 14 SEQ ID NO: 97 GCAATTTGTACTCC 14 SEQ ID NO: 98 TGGCAATTTGTAC 13 SEQ ID NO: 99 GGCAATTTGTACT 13 SEQ ID NO: 100 GCAATTTGTACTC 13 SEQ ID NO: 101 CAATTTGTACTCC 13 SEQ ID NO. 102 TGGCAATTTGTA 12 SEQ ID NO: 103 GGCAATTTGTAC 12 SEQ ID NO: 104 GCAATTTGTACT 12 SEQ ID NO: 105 CAATTTGTACTC 12 SEQ ID NO: 106 AATTTGTACTCC 12 16 2848 - 75% 68.8% SEQ ID NO: 107 GTGTGTGTATTTCCCA 2863 SEQ ID NO: 108 GTGTGTGTATTTCCC 15 SEQ ID NO: 109 TGTGTGTATTTCCCA 15 SEQ ID NO: 110 GTGTGTGTATTTCC 14 SEQ ID NO: 1 11 TGTGTGTATTTCCC 14 SEQ ID NO: 1 12 GTGTGTATTTCCCA 14 SEQ ID NO: 113 GTGTGTGTATTTC 13 SEQ ID NO: 1 14 TGTGTGTATTTCC 13 SEQ ID NO: 1 15 GTGTGTATTTCCC 13 SEQ ID NO: 1 16 TGTGTATTTCCCA 13 SEQ ID NO: 1 17 GTGTGTGTATTT 12 SEQ ID NO. 1 18 TGTGTGTATTTC 12 SEQ ID NO: 1 19 GTGTGTATTTCC 12 SEQ ID NO: 120 TGTGTATTTCCC 12 SEQ ID NO: 121 GTGTATTTCCCA 12 16 3474 - 68.8% 68.8% SEQ ID NO: 122 CCCTCTGATGACTCTG 3489 SEQ ID NO: 123 CCCTCTGATGACTCT 15 SEQ ID NO: 124 CCTCTGATGACTCTG 15 CUADRO 1 (Continuación) Sitio Long. Compl Compl SEQ ID NO: Secuencia (5'-3') objetivo (bases) EGFR HER2 HER3 SEQID NO 125 CCCTCTGATGACTC 14 SEQ ID NO 126 CCTCTGATGACTCT 14 SEQID NO 127 CTCTGATGACTCTG 14 SEQ ID NO 128 CCCTCTGATGACT 13 SEQ ID NO 129 CCTCTGATGACTC 13 SEQ ID NO 130 CTCTGATGACTCT 13 SEQ ID NO 131 TCTGATGACTCTG 13 SEQ ID NO 132 CCCTCTGATGAC 12 SEQ ID NO 133 CCTCTGATGACT 12 SEQ ID NO 134 CTCTGATGACTC 12 SEQ ID NO 135 TCTGATGACTCT 12 SEQ ID NO 136 CTGATGACTCTG 12 16 3770 - 81.3% 81.3% SEQ ID NO 137 CATACTCCTCATCTTC 3785 16 1067 - 81.3% 68.8% SEQ ID NO: 138 CCACCACAAAGTTATG 1082 16 2858 - 93.8% 93.8% SEQ ID NO: 139 CATCACTCTGGTGTGT 2873 16 2860 - 93.8% 87.5% SEQ ID NO 140 GACATCACTCTGGTGT 2875 SEQID NO 141 GsCsTscscsas9sascsas,scsasCsTsC 16 SEQID NO 142 C sT sC sc a q a c a t c a c T C T s sMs s s s s s s s s s 16 SEQID NO 143 CsAsGsascsas,scsascs,scstsGsGs'r 16 SEQID NO 144 AsGsAscsastscsascs,scsts9sGsTsG 16 SEQID NO 146 s s s s s s s s s sas s s s s 16 SEQID NO 147 C A T c c a a c a c t t q A C C 16 SEQID NO 148 A sT sC sc a a c a c t t o a C C A s s s s s s s sss s s s 16 CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) CUADRO 1 (Continuación) Para las secuencias de oligómero de hueco (SEQ ID NOs: 141 - 196 y 234), las letras mayúsculas en negrita indican que el nucleósido contiene un azúcar de LNA y las letras minúsculas indican 2'-desoxinucleósidos. El subíndice "s" indica un enlace de fosforotioato entre los nucleósidos adyacentes. Todas las bases de citosina de los monómeros de LNA son 5-metilcitosinas. Para oligonucleótidos que tienen 24 nucleósidos (SEQ ID NOs: 21 1-227), las letras en negrita y subrayadas, como se muestra en el cuadro 1 , indican una secuencia de bases de un compuesto oligomérico más corto que ha sido incorporado en los nucleótidos más largos.

Conjugados En el contexto de esta descripción, el término "conjugado" indica un compuesto formado por la unión covalente ("conjugación") de un oligómero como el que aquí se describe, con una o más porciones que no son por si solas ácidos nucleicos ni monómeros ("porción conjugada"). Los ejemplos de dichas porciones conjugadas incluyen compuestos macromoleculares tales como proteínas, cadenas de ácido graso, residuos de azúcar, glicoproteínas, polímeros, o combinaciones de los mismos. Típicamente, las proteínas pueden ser anticuerpos para una proteína objetivo. Los polímeros típicos pueden ser polietilenglicol. En WO 2007/031091 se proveen porciones y conjugados adecuados, que se incorpora aquí como referencia.

Por consiguiente, en algunas modalidades las composiciones y métodos de la invención utilizan un conjugado que comprende un oligómero como aquí se describe, y por lo menos una porción conjugada que no es un ácido nucleico ni monómero, unida covalentemente al oligómero. Por lo tanto, en algunas modalidades, cuando un oligómero consiste en monómeros contiguos que tienen una secuencia de bases especificada como aquí se describe, el conjugado también puede comprender por lo menos una porción conjugada que está unida covalentemente al oligómero.

En varias modalidades los conjugados pueden incrementar la actividad, la distribución celular o la incorporación celular de un oligómero. Tales porciones incluyen, sin limitación, anticuerpos, polipéptidos, porciones de lípídos tales como una porción de colesterol, ácido cólico, un tioéter, por ejemplo, hexil-s-tritiltiol, un tiocolesterol, una cadena alifática, por ejemplo, residuos de dodecandiol o undecilo, fosfolípidos, por ejemplo, di-hexadecil-rac-glicerol o trietilamonio, 1 ,2-di-o-hexadecil-rac-glicero-3-h-fosfonato, una poliamina o una cadena de polietilenglicol, un ácido adamantano acético, una porción de palmitilo, octadecilamina o una porción de hexilamino-carbonil-oxicolesterol.

En algunas modalidades el oligómero se conjuga con una porción que aumenta la incorporación celular de los compuestos oligoméricos.

En algunas modalidades los oligómeros se conjugan con sustancias farmacológicas activas, por ejemplo aspirina, ibuprofeno, una sulfa, un antidiabético, un antibacteriano o un antibiótico.

En algunas modalidades la porción conjugada es un esterol, como el colesterol.

En varias modalidades la porción conjugada comprende o consiste en un polímero cargado positivamente, por ejemplo un péptido cargado positivamente, por ejemplo de 1-50 residuos de aminoácido de longitud, por ejemplo 2-20, por ejemplo 3-10 residuos de aminoácido, u óxido de polialquileno tal como el polietilenglicol (PEG) o propilenglicol -véase WO 2008/034123, que se incorporan aquí como referencia. Convenientemente, el polímero cargado positivamente, tal como un óxido de polialquileno, se puede unir al oligómero por medio de un enlazador, tal como el enlazador liberable que se describe en WO 2008/034123.

Oligómeros activados El término "oligómero activado", como se usa aquí, se refiere a un oligómero, por ejemplo los oligómeros anteriormente descritos, que está unido covalentemente (esto es, funcionalizado) a por lo menos una porción funcional que permite el enlace del oligómero con una o más porciones conjugadas, esto es porciones que por sí solas no son ácidos nucleicos ni monómeros, para formar los conjugados aquí descritos. Típicamente, una porción funcional comprenderá un grupo químico que es capaz de unirse covalentemente al oligómero, por ejemplo por medio de un grupo 3'-hidroxilo o el grupo exociclico NH2 de la base de adenina, un espaciador que en algunas modalidades es hidrofilico, y un grupo terminal que es capaz de unirse a una porción conjugada (por ejemplo, un grupo amino, sulfhidrilo o hidroxilo). En algunas modalidades este grupo terminal no está protegido, por ejemplo, es un grupo H2. En otras modalidades el grupo terminal se protege, por ejemplo, por medio de cualquier grupo de protector adecuado, tal como los que se describen en "Protective Groups in Organic Synthesis" de Theodora W Greene y Peter G M Wuts, 3a edición (John Wiley & Sons, 1999). Los ejemplos de grupos protectores de hidroxilo adecuados incluyen ésteres tales como éster de acetato, grupos aralquilo tales como bencilo, difenilmetilo o trifenilmetilo, y tetrahidropiranilo. Los ejemplos de grupos protectores de amino adecuados incluyen los grupos bencilo, alfa-metilbencilo, difenilmetilo, trifenilmetilo, benciloxicarbonilo, ter-butoxicarbonilo, y acilo como tricloroacetilo o trifluoroacetilo.

En algunas modalidades la porción funcional es autoseparable.

En otras modalidades la porción funcional es biodegradable; véase, por ejemplo, la patente de EE. UU. No. 7,087,229, que se incorpora aquí como referencia en su totalidad.

En algunas modalidades, para usarse en las composiciones y métodos de la invención los oligómeros se funcionalizan en el extremo 5' para permitir la unión covalente de la porción conjugada al extremo 5' del oligómero. En otras modalidades los oligómeros se pueden funcionalizar en el extremo 3'. En otras modalidades los oligómeros se pueden funcionalizar a lo largo del esqueleto o sobre la porción de base heterocíclica. En otras modalidades los oligómeros se pueden ser funcionalizar en más de una posición seleccionada independientemente del extremo 5', el extremo 3', el esqueleto y la base.

En algunas modalidades los oligómeros activados se sintetizan incorporando durante la síntesis uno o más monómeros que están unidos covalentemente a una porción funcional. En otras modalidades los oligómeros activados de la invención se sintetizan con monómeros que no han sido funcionalizados, y el oligómero se funcionaliza hasta la terminación de la síntesis.

En algunas modalidades los oligómeros se funcionalizan con un éster impedido que contiene un enlazador de aminoalquilo, en donde la porción alquilo tiene la fórmula (CH2)W, donde w es un número entero que varía de 1 a 10, por ejemplo aproximadamente 6, en donde la porción alquilo del grupo alquilamino puede ser una cadena recta o ramificada, y en donde el grupo funcional está unido al oligómero por medio de un grupo éster (-O-C(O)-(CH2)WNH).

En otras modalidades los oligómeros se funcionalizan con un éster impedido que contiene un enlazador de (CH2)w-sulfhidrilo (SH), en donde w es un entero que varía de 1 a 10, por ejemplo aproximadamente 6, en donde la porción alquilo del grupo alquilamino puede ser de cadena recta ramificada, y en donde el grupo funcional está unido al oligómero por medio de un grupo éster (-0-C(0)-(CH2)wSH). En algunas modalidades los oligonucleótidos activados por sulfhidrilo se conjugan con porciones de polímero, tales como polietilenglicol o péptidos (mediante la formación de un enlace disulfuro).

Los oligómeros activados unidos covalentemente a por lo menos a una porción funcional se pueden sintetizar mediante cualquier método conocido, y en particular mediante los métodos descritos en la patente de EE. UU. No 7,595,304, WO 2008/034122 y WO 2008/034119, cada uno de las cuales se incorpora aquí como referencia en su totalidad, y en Zhao et al. (2007) J. Controlled Reléase 1 9:143-152; y Zhao et al. (2005) Bioconjugate Chem. 16:758-766.

En otras modalidades, para usarse en las composiciones farmacéuticas y métodos de la invención los oligómeros se funcionalizan introduciendo grupos sulfhidrilo, amino o hidroxilo en el oligómero por medio de un reactivo de funcionalización, sustancialmente como se describe en las patentes de EE. UU. Nos. 4,962,029 y 4,914,210, esto es, un reactivo sustancialmente lineal que tiene una fosforamídita en un extremo enlazada a través de una cadena espaciadora hidrofílica con el extremo opuesto que comprende un grupo sulfhidrilo, amino o hidroxilo protegido o no protegido.

Tales reactivos reaccionan principalmente con los grupos hidroxilo del oligómero. En algunas modalidades tales oligómeros activados tienen un reactivo de funcionalización acoplado con un grupo 5'-hidroxilo del oligómero. En otras modalidades, los oligómeros activados tienen un reactivo de funcionalización acoplado con un grupo 3'-hidroxilo. En otras modalidades los oligómeros activados tienen un reactivo de funcionalización acoplado con un grupo hidroxilo sobre el esqueleto del oligómero. En modalidades adicionales el oligómero se funcionaliza con más de un reactivo de funcionalización, como se describe en las patentes de EE. UU. Nos. 4,962,029 y 4,914,210, que se incorporan aquí como referencia en su totalidad. Los métodos para sintetizar dichos reactivos de funcionalización y su incorporación en monómeros u oligómeros se describen en las patentes de EE.UU. Nos. 4,962,029 y 4,914,210.

En algunas modalidades el extremo 5' de un oligómero unido a una fase sólida se funcionaliza con un derivado de dienil fosforamidita, seguido por conjugación del oligómero desprotegido, por ejemplo con un aminoácido o péptido por medio de una reacción de cicloadición de Diels-Alder.

En varias modalidades, la incorporación en el oligómero de monómeros que contienen modificaciones en la posición 2' del azúcar, tales como un azúcar sustituido con 2'-carbamato o un azúcar de 2'(0-pentil-N-ftalim¡do)-desoxirribosa, facilita la unión covalente de las porciones conjugadas a los azúcares del oligómero. En otras modalidades se prepara un oligómero con un enlazador que contiene amino en la posición 2' de uno o más monómeros, usando un reactivo tal como por ejemplo 5'-dimetoxitritil-2'-0-(e-ftalimidilaminopentil)-2'-desoxiadenosina-3'-N,N-diisopropil-cianoetoxi-fosforamidita; véase, por ejemplo, Manoharan, et al. , Tetrahedron Lefters, 1991 , 34, 7171.

En más modalidades, los oligómeros tienen porciones funcionales que contienen amina sobre la nucleobase, que incluye sobre los grupos amino N6 de la purina, sobre el N2 exocíclico de guanina, o sobre las posiciones N4 o 5 de la citosina. En algunas modalidades, tal funcionalización se puede lograr usando en la síntesis del oligómero un reactivo comercial que ya está funcionalizado.

Algunas porciones funcionales están disponibles comercialmente, por ejemplo, están disponibles porciones enlazadoras heterobifuncionales y homobifuncionales de Pierce Co. (Rockford, Illinois). Otros grupos enlazadores disponibles comercialmente son los reactivos 5'-Amino-Modifier C6 y 3'-Amino-Modifier, ambos disponibles de Glen Research Corporation (Sterling, Virginia). También está disponible el 5'-Amino-Modifier C6 de ABI (Applied Biosystems Inc., Foster City, California) como Aminolink-2, y también está disponible 3'-Amino-Modifier de Clontech Laboratories Inc. (Palo Alto, California).

En algunas modalidades, las composiciones de la invención comprenden más de un oligómero para hacer blanco en dos o incluso los tres ácidos nucleicos objetivo. En varias modalidades, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un oligómero dirigido a HER3, y un oligómero que hace blanco en HER2 y regula negativamente su expresión. En otras modalidades que pueden ser iguales o diferentes, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un oligómero dirigido a HER3 y un oligómero adicional que hace blanco en EGFR y regula negativamente su expresión.

En algunas modalidades, los oligómeros que hacen blanco en el ARNm de HER2 o EGFR (o conjugados de los mismos), tienen los mismos diseños (por ejemplo, oligómero de hueco (gapmer), oligómero de cabeza (headmer), oligómero de cola ({tailmer)) que los oligómeros que hacen blanco en HER3. En varias modalidades, los oligómeros que hacen blanco en el ARNm de HER2 o EGFR (o conjugados de los mismos), tienen diferentes diseños de los oligómeros que hacen blanco en HER3.

En algunas modalidades, un oligómero para usarse en las composiciones y métodos de la invención se une covalentemente a una porción conjugada para ayudar en el suministro del oligómero a través de las membranas celulares. Un ejemplo de una porción conjugada que ayuda al suministro del oligómero a través de las membranas celulares es una porción lipofílica, tal como el colesterol. En varias modalidades, un oligómero para usarse en las composiciones farmacéuticas de la invención se formula con preparados de lipido que forman liposomas, tales como Lipofectamine 2000 o Lipofectamine RNAiMAX, ambos disponibles comercialmente de Invitrogen. En algunas modalidades, los oligómeros se formulan con una mezcla de uno o más moléculas pequeñas no naturales semejantes a lípido ("lipidoides"). Se pueden sintetizar colecciones de lipidoides por medio de los métodos convencionales de síntesis química, y se pueden probar varias cantidades y combinaciones de los lipidoides para desarrollar un vehículo para el suministro eficaz de un oligómero de un tamaño particular a un tejido objetivo mediante la vía de administración elegida. Colecciones y composiciones de lipidoides adecuados se pueden encontrar por ejemplo en Akinc et al. (2008), Nature Biotechnol., disponible en http://www.nature.com/nbt/iournal/vaop/ncurrent/abs/nbt14Q2.html, que se incorpora aquí como referencia.

Inhibidores de tirosina cinasa de proteína Como se usa aquí intercambiablemente, los términos "inhibidor de tirosina cinasa de proteína", "inhibidor de PTK" e "inhibidor de tirosina cinasa" se refieren a moléculas que se unen a uno o más dominios de tirosina cinasa e inhiben su actividad. El inhibidor de tirosina cinasa de proteína no es el oligómero que hace blanco en HER3 que se describe en la presente. En algunas modalidades, el inhibidor de tirosina cinasa de proteina es un anticuerpo monoclonal. En otras modalidades, el inhibidor de tirosina cinasa de proteína es una molécula pequeña que tiene un peso molecular menor de 1000 Da, por ejemplo entre 300 Da y 700 Da.

En algunas modalidades, los inhibidores de PTK se unen e inhiben a las tirosina cinasas de uno o más miembros de la familia EGFR. En varias modalidades, los inhibidores de PTK se unen e inhiben a las tirosina cinasas de una o más proteínas que interaccionan con, o son reguladas por, uno o más miembros de la familia EGFR, por ejemplo las proteínas implicadas en una o más cascadas de señalización que se originan con uno o más miembros de la familia EGFR. En algunas modalidades, la tirosina cinasa es una tirosina cinasa receptora, esto es, es un dominio intracelular de una proteína más grande que tiene un dominio de unión de ligando extracelular y es activada por la unión de uno o más ligandos. En algunas modalidades, la tirosina cinasa de proteína es una tirosina cinasa no receptora. Las enzimas tirosina cinasas regulan la actividad de otras proteínas en una o más rutas de señalización, fosforilándolas.

En varias modalidades, los inhibidores de la tirosina cinasa de proteína que son útiles en las composiciones y métodos de la invención incluyen inhibidores de molécula pequeña que se unen selectivamente al dominio de tirosina cinasa de un miembro de la familia EGFR. En algunas modalidades, los inhibidores de tirosina cinasa de proteina útiles en las composiciones y métodos de la invención incluyen inhibidores de molécula pequeña que se unen a los dominios de tirosina cinasa de más de un miembro de la familia de proteínas EGFR, e inhiben su actividad. En otras modalidades, los inhibidores de tirosina cinasa de proteína útiles en las composiciones y métodos de la invención incluyen inhibidores de PTK que no se unen selectivamente a la familia EGFR de tirosina cinasas receptoras, sino que también se unen a los dominios de tirosina cinasa de otras familias de proteínas, tales como VEGFR, PDGFR, o Raf. En algunas modalidades, los inhibidores de PTK son inhibidores reversibles, esto es, se unen a la proteina pero no la alteran irreversiblemente. En varias modalidades, los inhibidores de PTK son inhibidores irreversibles, esto es, inhiben las PTK entrelazándose covalentemente a un dímero receptor de PTK.

En varias modalidades, la invención abarca composiciones farmacéuticas que comprenden un derivado farmacéuticamente aceptable de un inhibidor de tirosina cinasa de proteina. La frase "derivado farmacéuticamente aceptable", como se usa aquí, incluye cualquier sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, forma radiomarcada, estereoisómero, enantiómero, diasterómero, otra forma estereoisomérica, mezcla racémica, isómero geométrico, tautómero, solvato (por ejemplo, hidratos), formas sólidas amorfas y formas sólidas cristalinas, de los inhibidores de PTK. En una modalidad, el derivado farmacéuticamente aceptable es una sal farmacéuticamente aceptable, forma radiomarcada, estereoisómero, enantiómero, diasterómero, otra forma estereoisomérica, mezcla racémica, isómero geométrico o tautómero de los inhibidores de PTK. En otra modalidad, el derivado farmacéuticamente aceptable es una sal farmacéuticamente aceptable de un inhibidor de PTK.

En algunas modalidades, los inhibidores de PTK usados en las composiciones y métodos de la invención están en una forma diferente de sal (por ejemplo, en forma de un ácido libre o una base libre). En otras modalidades, los inhibidores de PTK usados en las composiciones y métodos de la invención están en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. Una "sal farmacéuticamente aceptable", como se usa aquí, se refiere a las sales que retienen la actividad biológica deseada y presentan un grado aceptable de efectos tóxicos indeseables.

Las formas de sal farmacéuticamente aceptable de los inhibidores de tirosina cinasa se pueden preparar mediante los métodos convencionales. Si el inhibidor de PTK contiene un grupo ácido, se puede formar una sal adecuada haciendo reaccionar el compuesto con una base adecuada para producir la sal de adición de base correspondiente. Tales bases incluyen, sin limitación, hidróxidos de metal alcalino que incluyen hidróxido de potasio, hidróxido de sodio e hidróxido de litio; hidróxidos de metal alcalinotérreo, tales como hidróxido de bario e hidróxido de calcio; alcóxidos de metal alcalino, por ejemplo, etóxido de potasio y propóxido de sodio; y varias bases orgánicas tales como piperidina, dietanolamina y N-metilglutamina.

Alternativamente se pueden formar sales de adición de ácido de los inhibidores de PTK, tratando los compuestos con ácidos orgánicos o inorgánicos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo halogenuros de hidrógeno, tales como cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno o yoduro de hidrógeno, otros ácidos minerales y sales correspondientes de los mismos, tales como sulfato, nitrato o fosfato, etcétera, y alquil- y monoaril-sulfonatos tales como etanosulfonato, toluenosulfonato y bencenosulfonato, y otros ácidos orgánicos y sus sales correspondientes, tales como acetato, trifluoroacetato, tartrato, maleato, succinato, citrato, benzoato, salicilato, ascorbato, etcétera. Por consiguiente, las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables de los inhibidores de PTK incluyen, sin limitación, acetato, adipato, alginato, arginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato (besilato), bisulfato, bisulfito, bromuro, butirato, alncanforato, alcanforsulfonato, caprilato, cloruro, clorobenzoato, citrato, ciclopentanopropionato, digluconato, fosfato diácido, dinitrobenzoato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, galacterato (de ácido múcico), galacturonato, glucoheptanoato, gluconato, glutamato, glicerofosfato, hemisuccinato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, hipurato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, yoduro, isetionato, isobutirato, lactato, lactobionato, malato, maleato, malonato, mandelato, metafosfato, metanosulfonato, metilbenzoato, fosfato monoácido, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, oleato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilacetato, 3-fenilpropionato, fosfato, fosfonato, ftalato.

Los inhibidores de PTK útiles en los métodos y composiciones de la invención incluyen, sin limitación, gefitinib (ZD-1839, Iressa®), eriotinib (OSI-1774, Tarceva™), canertinib (CI-1033), vandetanib (ZD6474, Zactima®), tirfostin AG-825 (CAS 149092-50-2), lapatinib (GW-572016), sorafenib (BAY43-9006), AG-494 (CAS 133550-35-3), RG-13022 (CAS 149286-90-8), RG- 4620 (CAS 136831-49-7), BIBW 2992 (Tovok), tirfostin 9 (CAS 136831 -49-7), tirfostin 23 (CAS 1 18409-57-7), tirfostin 25 (CAS 118409-58-8), tirfostin 46 (CAS 122520-85-8), tirfostin 47 (CAS 122520-86-9), tirfostin 53 (CAS 122520-90-5), buteína (2',3,4,4'-tetrah¡droxichalcona de 1-(2,4-dihidroxifenil)-3-(3,4-dihidroxifenil)-2-propen-1-ona¡ CAS 487-52-5), curcumina ((E,E)-1 ,7-bis(4-hidroxi-3-metoxifenil)-1 ,6-heptadien-3,5-diona; CAS 458-37-7), N4-(1-bencil-1H-indazol-5-il)-N6,N6-dimetil-pirido-[3,4-d]-pirimidin-4,6-diamina (202272-68-2), AG- 478, AG-879, ácido ciclopropanocarboxílico-(3-(6-(3-trifluorometil-fenilamino)-pirimidin-4-ilamino)-fenil)-amida (CAS 879 27-07-8), N8-(3-cloro-4-fluorofenil)-N2-(1-metilpiperidin-4-il)-pirimido[5,4-d]pirimidin-2,8-diamina, 2HCI (CAS 196612-93-8), 4-(4-benciloxianilino)-6,7-dimetoxiquinazolina (CAS 179248-61-4), N-(4-((3-cloro-4-fluorofenil)amino)-pirido[3,4-d]pirimidin-6-il)2-butinamida (CAS 881001 -19-0), EKB-569, HKI-272 y HKI-357.

En algunas modalidades, el inhibidor de PTK se selecciona de gefitinib, erlotinib, lapatinib, canertinib y sorafenib.

En algunas modalidades, el inhibidor de tirosina cinasa es el gefitinib.

Los inhibidores de PTK se pueden obtener mediante cualquier método conocido. En algunas modalidades los inhibidores de PTK están disponibles comercialmente, por ejemplo, de Sigma-Aldrich® y Cayman Chemical. En varias modalidades los inhibidores de PTK están disponibles por prescripción, por ejemplo, de AstraZeneca, Roche, GlaxoSmithKIine y Bayer Pharmaceuticals. En otras modalidades, los inhibidores de PTK se pueden sintetizar mediante los métodos conocidos, por ejemplo mediante los métodos que se exponen en Rewcastle, G.W. et al. (1996) J. Med. Chem. 39:918-928.

En varias modalidades las composiciones de la invención comprenden más de un inhibidor de tirosina cinasa. En algunas modalidades, un inhibidor de tirosina cinasa es selectivo para una tirosina cinasa receptora particular (por ejemplo, gefitinib), y un segundo inhibidor de tirosina cinasa es relativamente no selectivo (por ejemplo, sorafenib). En varias modalidades, un segundo inhibidor de tirosina cinasa se une a los dominios de tirosina cinasa de más de un miembro de la familia EGFR (por ejemplo, lapatinib). En modalidades adicionales, un segundo inhibidor de tirosina cinasa se une al dominio de tirosina cinasa de un receptor de PTK de una familia diferente, tal como VEGFR.

Excipientes farmacéuticamente aceptables y formas farmacéuticas En algunas modalidades las composiciones farmacéuticas de la invención comprenden por lo menos un compuesto olígomérico, por lo menos un inhibidor de PTK o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo, y una cantidad adecuada de un excipiente farmacéuticamente aceptable para proveer la forma adecuada para su administración al paciente. Como se usa aquí, el término "paciente " incluye, sin limitación, un humano o un animal no humano, tal como un animal doméstico o ganado, por ejemplo una vaca, babuino, chimpancé, caballo, oveja, cerdo, pollo, pavo, codorniz, gato, perro, ratón, rata, conejo o conejillo de Indias. En varias modalidades, el compuesto oligomérico y el inhibidor de PTK están en una sola composición farmacéutica. En otras modalidades, el compuesto oligomérico y el inhibidor de PTK están en composiciones farmacéuticas separadas. En tales modalidades en donde los ingredientes - activos están en composiciones separadas, las composiciones se pueden envasar juntas (coenvasar) para usarse en una terapia de combinación dirigida al HER3.

El excipiente farmacéutico puede ser un diluente, agente de suspensión, solubilizante, aglutinante, desintegrador, conservador, agente colorante, lubricante, etcétera. El excipiente farmacéutico puede ser un liquido, tal como agua o un aceite, incluso los de petróleo, de origen animal, vegetal o sintético, tales como aceite de cacahuate, aceite de soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí, etcétera. El excipiente farmacéutico puede ser solución salina, goma acacia, gelatina, pasta de almidón, talco, queratina, sílice coloidal, urea, etcétera. Además, se pueden usar agentes auxiliares, estabilizadores, espesantes, lubricantes y colorantes. En una modalidad, el excipiente farmacéuticamente aceptable es estéril cuando se le administra a un paciente. El agua es un excipiente particularmente útil cuando el oligómero o inhibidor de PTK se administra por vía intravenosa. También se pueden usar como excipientes líquidos las soluciones salinas y soluciones acuosas de dextrosa y glicerol, particularmente para soluciones inyectables. Los excipientes farmacéuticos adecuados también incluyen almidón, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, harina de arroz, greda, gel de sílice, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, talco, cloruro de sodio, leche descremada en polvo, glicerol, propilenglicol, agua, etanol, etcétera. Las composiciones de la invención, si se desea, también pueden contener cantidades menores de agentes de mojado o emulsionantes, o agentes amortiguadores de pH. Los ejemplos específicos de los excipientes farmacéuticamente aceptables que se pueden usar para formular formas farmacéuticas orales, se describen en el "Handbook of Pharmaceutical Excipients", American Pharmaceutical Association (1986).

Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden estar en forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, tabletas, pildoras, pellas, cápsulas, cápsulas que contienen líquidos, polvos, formulaciones de liberación sostenida, supositorios, emulsiones, aerosoles, preparados para atomizar, suspensiones o cualquier otra forma adecuada de uso. Otros ejemplos de excipientes farmacéuticos adecuados se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" 1447-1676 (Alfonso R. Gennaro ed., 19a ed. 1995), que se incorpora aquí como referencia.

En varias modalidades, las composiciones se formulan como una composición adaptada para su administración oral a los humanos de acuerdo con los procedimientos usuales. Un oligómero o un inhibidor de PTK de molécula pequeña se pueden suministrar por vía oral en forma de tabletas, cápsulas, gelcaps, capletas, pastillas, soluciones acuosas u oleosas, suspensiones, gránulos, polvos, emulsiones, jarabes o elixires, por ejemplo. Cuando un agente activo se incorpora en tabletas orales, estas tabletas pueden ser tabletas comprimidas, triturados de tableta (por ejemplo tabletas pulverizadas o trituradas), tabletas con recubrimiento entérico, tabletas grageadas, tabletas recubiertas con película, tabletas multicomprimidas o tabletas de multicapa. Las técnicas y composiciones para hacer formas farmacéuticas sólidas orales se describen en: "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets" (Lieberman, Lachman y Schwartz, eds., 2a ed.) publicada por Marcel Dekker, Inc. Las técnicas y composiciones para hacer tabletas (comprimidas y moldeadas), cápsulas (de gelatina dura y blanda) y pildoras también se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences" 1553-1593 (Arthur Osol, ed., 16a ed., Mack Publishing, Easton, PA 1980).

Las formas farmacéuticas líquidas orales incluyen soluciones acuosas y no acuosas, emulsiones, suspensiones y soluciones o suspensiones reconstituidas de granulos no efervescentes, que contienen opcionalmente uno o más disolventes adecuados, conservadores, agentes emulsionantes, agentes de suspensión, diluentes, edulcorantes, colorantes, saborizantes, etcétera. Las técnicas y composición para hacer formas farmacéuticas líquidas orales se describen en "Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems" (Lieberman, Rieger and Banker, eds ), publicado por Marcel Dekker, Inc.

Cuando las composiciones de la invención se van a inyectar por vía parenteral, pueden estar por ejemplo en forma de una solución isotónica estéril. Alternativamente, cuando las composiciones se van a inhalar, se pueden formular en un aerosol seco o se pueden formular en una solución acuosa o parcialmente acuosa.

Una composición para administración oral puede contener uno o más agentes para proveer un preparado farmacéutico apetecible, por ejemplo agentes edulcorantes como fructosa, aspartame o sacarina; agentes saborizantes como menta, aceite de gaulteria, o cereza; agentes colorantes; y agentes conservadores. Además, una forma de tableta o pildora de las composiciones farmacéuticas se puede recubrir para retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal, dando asi una acción sostenida durante un periodo prolongado. Las membranas selectivamente permeables que rodean un compuesto de impulso osmóticamente activo también son adecuadas para las composiciones de administración oral. En estas últimas plataformas, un fluido del medio que rodea la cápsula es absorbido por el compuesto de impulso, que se hincha para desplazar el agente o la composición de agente a través de una abertura. Las plataformas de suministro pueden proveer un perfil de suministro sustancialmente de orden cero, a diferencia de los perfiles de pico de las formulaciones de liberación inmediata. También se puede usar un material de retraso tal como monoestearato de glicerol o estearato de glicerol Las composiciones orales pueden incluir excipientes estándares tales como manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina de sodio, celulosa y carbonato de magnesio. En una modalidad, los excipientes son grado farmacéutico.

En otra modalidad, las composiciones se pueden formular para administración intravenosa. Típicamente, las composiciones para administración intravenosa comprenden un amortiguador acuoso isotónico estéril. Cuando es necesario, las composiciones también pueden incluir un agente solubilizante. Opcionalmente, las composiciones para administración intravenosa pueden incluir un anestésico local como benzocaina o prilocaina para disminuir el dolor en el sitio de la inyección. Generalmente los ingredientes se suministran separadamente o se mezclan en formas farmacéuticas unitarias, por ejemplo como un polvo seco liofilizado o un concentrado libre de agua, en un recipiente sellado herméticamente, tal como una ampolleta o bolsita que indica la cantidad del agente activo. Cuando una composición se va a administrar por infusión, se puede despachar por ejemplo con una botella de infusión que contiene agua grado farmacéutico o solución salina estéril. Cuando un agente activo se administra por inyección, se puede proveer una ampolleta de agua inyectable o solución salina estéril de modo que los ingredientes se puedan mezclar antes de la administración.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar por medios de liberación controlada o liberación sostenida, o mediante dispositivos de suministro que son conocidos. Los ejemplos incluyen, sin limitación, los que se describen en las patentes de EE. UU. Nos. 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; 4,008,719; 5,674,533; 5,059,595; 5,591 ,767; 5,120,548; 5,073,543; 5,639,476; 5,354,556; y 5,733,566, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Tales formas farmacéuticas se pueden usar para proveer liberación controlada o sostenida de uno o más ingredientes activos, usando por ejemplo hidroxipropilmetilcelulosa, otras matrices de polímero, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos de multicapa, microparticulas, multiparticulas, liposomas, microesferas, o una combinación de los mismos, para proveer el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Las formulaciones adecuadas de liberación controlada o sostenida conocidas, incluso las que se describen en la presente, se pueden seleccionar fácilmente para usarlas con los ingredientes activos de la invención. Asi, la invención abarca formas farmacéuticas de dosis unitarias para administración oral, tales como por ejemplo, sin limitación, tabletas, cápsulas, gelcaps y capletas, que están adaptadas para liberación controlada o sostenida.

La administración de las composiciones farmacéuticas aquí descritas puede ser por vía oral, pulmonar, tópica (por ejemplo, suministro epidérmico, transdérmico, oftálmico y por las membranas mucosas que incluyen vaginal y rectal), o parenteral que incluye inyección o infusión intravenosa, intraarterial, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular. En una modalidad, una composición farmacéutica que contiene oligómeros terapéuticos se administra por vía intravenosa (i.v.), intraperitoneal (i.p.), o como inyección de bolo. En muchos aspectos de la invención se prefieren las vías parenterales. La formulación adecuada depende de la vía de administración elegida, por ejemplo, si el tratamiento es local o sistémico. En varias modalidades en donde se formula por lo menos un oligómero y por lo menos un inhibidor de PT en composiciones separadas, no es necesario que las composiciones farmacéuticas estén en la misma forma física (por ejemplo, forma farmacéutica sólida, forma farmacéutica líquida, aerosol), y no es necesario que se administren por la misma vía (por ejemplo, oral, parenteral, tópica) o al mismo tiempo. Por ejemplo, la invención abarca composiciones farmacéuticas en donde el oligómero se formula en una forma farmacéutica para administración oral, por ejemplo una tableta, cápsula, jarabe, etcétera, y en donde el inhibidor de PTK se formula en una forma farmacéutica para administración intravenosa o administración por inhalación.

Regímenes de dosificación El oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EFGR) se puede administrar a intervalos regulares ("intervalos de dosis" o "ID") que varían de 3 días a dos semanas. En algunas modalidades, el ID es de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 0, 1 1 , 12, o 13 días. En varias modalidades, el ID es de aproximadamente 1 semana. En modalidades adicionales, el ID es de 6, 7 u 8 días. Convenientemente se proveen por lo menos dos dosis con ID entre las dos dosis, por ejemplo 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 dosis, cada una con un ID entre dosis sucesivas del oligómero de LNA. El ID entre cada dosis puede ser el mismo. En algunas modalidades, el ID varía de 3 días a dos semanas. En otras modalidades, el ID es de 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 1 1 , 12, o 13 días. En otras modalidades más, el ID es de aproximadamente 1 semana. En algunas modalidades, el ID es de 6, 7 u 8 días.

En algunas modalidades, cada dosis del oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR), varia de aproximadamente 0.25 mg/kg a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal, por ejemplo aproximadamente 0.5 mg/kg, aproximadamente 1 mg/kg, aproximadamente 2 mg/kg, aproximadamente 3 mg/kg, aproximadamente 4 mg/kg, aproximadamente 5 mg/kg, aproximadamente 6 < mg/kg, aproximadamente 7 mg/kg, aproximadamente 8 mg/kg, o aproximadamente 9 mg/kg. En algunas modalidades, cada dosis del oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR), varia de aproximadamente 2 mg/kg a aproximadamente 8 mg/kg, o de aproximadamente 4 mg/kg a aproximadamente 6 mg/kg, o de aproximadamente 4 mg/kg a aproximadamente 5 mg/kg. En algunas modalidades, cada dosis del oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR), es de por lo menos 2 mg/kg, por ejemplo 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 mg/kg. En varias modalidades, cada dosis es de 6 mg/kg.

Típicamente, la administración del oligómero de LNA se hace por vía parenteral, por ejemplo administración subcutánea, intramuscular, intravenosa o intraperitoneal. En algunas modalidades la administración es intravenosa.

En algunas modalidades el régimen de dosificación del oligómero de LNA se repite después de un régimen de dosificación inicial. En varias modalidades el régimen de dosificación se repite conforme sea necesario para tratar o prevenir el avance de la enfermedad.

En algunas modalidades, los oligómeros de LNA que hacen blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR) se administran durante un periodo relativamente corto en vez de hacerlo continuamente. En varias modalidades un tiempo de administración corto mejora notablemente la calidad de vida del paciente, ya que no se requiere que esté en el hospital durante periodos largos. Por lo tanto, en varias modalidades, el oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR) no se administra por infusión continua. Cada dosis del oligómero de LNA, por lo tanto, se puede administrar al paciente durante un periodo menor de 12 horas, por ejemplo menor de aproximadamente 8 horas, menor de aproximadamente 4 horas, por ejemplo menor de aproximadamente 3 horas. Por lo tanto, cada dosis del oligómero de LNA se puede administrar al paciente en un periodo que varia de aproximadamente 1 hora a aproximadamente 4 horas, por ejemplo de aproximadamente 2 horas a aproximadamente 3 horas, o en aproximadamente 2 horas. El oligómero de LNA se puede administrar al paciente en un periodo de por lo menos 30 minutos, por ejemplo por lo menos 1 hora. Tal administración se puede hacer, por ejemplo, por vía intravenosa.

En algunas modalidades, se puede administrar una dosis farmacéuticamente eficaz del inhibidor de tirosina cinasa de proteína antes, concurrentemente o subsiguientemente con la administración de una o más dosis farmacéuticamente eficaces del oligómero de LNA que hace blanco en el HER3 (y opcionalmente en uno o más de HER2 y EGFR). Típicamente se administran una o más dosis eficaces del inhibidor de tirosina cinasa de proteina de tal manera que tanto el oligómero de LNA como el inhibidor de tirosina cinasa de proteina provean beneficios terapéuticos concurrentes al paciente.

Kits La invención también provee un kit que comprende un primer componente y un segundo componente. En varias modalidades, el primer componente comprende por lo menos un oligómero que es capaz de inhibir la expresión de HER3 (por ejemplo, regulándola negativamente), o un conjugado o composición farmacéutica del mismo, y el segundo componente comprende por lo menos un inhibidor de tirosina cinasa de proteina, de molécula pequeña, que es selectivo para uno o más miembros de la familia EGFR. En otras modalidades, el kit comprende un tercer componente que es un agente terapéutico diferente de un oligonucleótido o un inhibidor de PTK, tal como un agente quimioterapéutico (por ejemplo, taxol). En algunas modalidades, los kits de la invención se usan en los métodos de tratamiento de un trastorno hiperproliferativo, tal como el cáncer, que comprenden administrar a un paciente en necesidad del mismo una cantidad eficaz de un primer componente y un segundo componente del kit. En varias modalidades, el primer y segundo componente se administran concurrentemente o simultáneamente. En otras modalidades, el primer y segundo componente se administran secuencialmente y en cualquier orden.

En algunas modalidades, el kit comprende un primer componente que comprende un oligómero de la invención que es capaz de inhibir la expresión del HER3 (por ejemplo, regulándola negativamente), o un conjugado o composición farmacéutica del mismo, un segundo componente que es un inhibidor de tirosina cinasa de proteina, y un tercer componente que es un oligómero capaz de inhibir la expresión de uno o más de HER2 y EGFR (por ejemplo, regulándola negativamente), como se describe en la presente, o un conjugado o composición farmacéutica del mismo.

Una modalidad de la invención provee un kit que incluye el compuesto oligomérico y el inhibidor de PTK en composiciones separadas dentro del kit. Por ejemplo, una modalidad de kit de la invención comprende un compuesto oligomérico de acuerdo con la SEQ ID NO: 180 y el inhibidor de PTK gefitinib, cada uno como composiciones separadas dentro del kit.

Métodos En algunas modalidades, la invención abarca métodos de inhibición de la expresión o actividad de HER3 en una célula, que comprenden poner en contacto la célula con una cantidad eficaz de un compuesto oligomérico (o conjugado del mismo) y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína, a fin de inhibir la expresión o actividad (por ejemplo, regularla negativamente) del HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR) en una célula. En algunas modalidades, la expresión del ARNm de HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR) es inhibida. En otras modalidades, la expresión de la proteína de HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR) es inhibida. En otras modalidades más, la actividad de la tirosina cinasa de un miembro de la familia EGFR es inhibida (por ejemplo, regulada negativamente). En varias modalidades, el internamiento de HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR) en la célula es inhibido (por ejemplo, regulado negativamente). En varias modalidades, la célula es una célula de mamífero, tal como una célula de humano.

En algunas modalidades, el contacto ocurre in vitro. En otras modalidades, el contacto se efectúa in vivo administrando las composiciones de la invención a un mamífero. En varias modalidades, la invención provee un método de inhibición (por ejemplo de regulación negativa) de la expresión de la proteina o ARNm de HER3, o el internamiento de HER3 en una célula, y la expresión de la proteína o ARNm de HER2 en una célula, o la actividad de tirosina cinasa de HER2, o el internamiento de HER2 en una célula. La secuencia del ARNm de HER2 se muestra en la SEQ ID NO: 199. En modalidades adicionales, la invención provee un método de inhibición (por ejemplo, de regulación negativa) de la expresión de la proteína o ARNm de HER3 en una célula, o el internamiento de HER3 en una célula, y la expresión de la proteína o ARNm de EGFR en una célula, o la actividad de tirosina cinasa de EGFR, o el internamiento de EGFR en una célula. La secuencia del ARNm de EGFR humano se muestra en la SEQ ID NO: 198 En modalidades adicionales, la invención provee un método de inhibición (por ejemplo de regulación negativa) de la expresión del ARNm de HER3, HER2 y EGFR en una célula, o la actividad de tirosina cinasa de HER2 y EGFR, o el internamiento de HER3, HER2 y EGFR en una célula.

En algunas modalidades, la invención se refiere a un método de tratamiento de una enfermedad en un paciente, que comprende administrar al paciente en necesidad del mismo una composición farmacéutica que comprende una cantidad eficaz de por lo menos un oligómero, o un conjugado del mismo, una cantidad eficaz de por lo menos un inhibidor de tirosina cinasa de proteina de molécula pequeña, y un excipiente farmacéuticamente aceptable. Como se usan aquí, los términos "tratar" y "tratamiento" se refieren tanto al tratamiento de una enfermedad existente (por ejemplo una enfermedad o trastorno como los que se mencionan más abajo), como a la prevención de una enfermedad, esto es, la profilaxis.

En varias modalidades, la invención se refiere a un método de tratamiento de una enfermedad en un paciente, en donde el oligómero (o conjugado del mismo) y el inhibidor de tirosina cinasa de proteina están en composiciones farmacéuticas diferentes. En algunas modalidades, las dos composiciones se pueden administrar concurrentemente o simultáneamente. En otras modalidades, las dos composiciones se pueden administrar secuencialmente en cualquier orden. En varias modalidades, la composición que comprende el oligonucleótido (o conjugado del mismo) y la composición que comprende el inhibidor de tirosina cinasa de proteina, se pueden administrar en diferentes horarios de dosificación y en diferentes concentraciones, en diferentes formas farmacéuticas y por diferentes vías de administración.

Los métodos de administración incluyen, sin limitación, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, parenteral, intravenosa, subcutánea, intranasal, epidural, oral, sublingual, intracerebral, intravaginal, transdérmica, rectal, por inhalación, o tópica, particularmente en los oídos, nariz, ojos o piel. El método de administración se deja al criterio del médico.

También se puede usar la administración pulmonar, por ejemplo por medio de un inhalador o nebulizador, y formulación con un agente atomizador, o mediante perfusión en un fluorocarburo o agente tensoactivo sintético pulmonar. En algunas modalidades, un oligómero (o conjugado del mismo) o un inhibidor de tirosina cinasa de proteína, se pueden formular como un supositorio con los aglutinantes y excipientes tradicionales, tales como triglicéridos.

Cuando se incorpora un oligómero (o conjugado del mismo) o un inhibidor de tirosina cinasa de proteína para administración parenteral por inyección (por ejemplo, infusión continua o inyección de bolo), la formulación para administración parenteral puede estar en forma de una suspensión, solución o emulsión en un vehículo oleoso o acuoso, y dichas formulaciones pueden comprender también los aditivos farmacéuticos necesarios tales como uno o más agentes estabilizadores, agentes de suspensión, agentes dispersantes, etcétera. Un oligómero (o conjugado del mismo) o inhibidor de tirosina cinasa de proteína también pueden estar en forma de un polvo para reconstitución como una formulación inyectable.

En otras modalidades, un oligómero (o conjugado del mismo) o un inhibidor de tirosina cinasa de proteína se pueden suministrar en una vesícula, en particular en un liposoma (véase Langer, Science 249:1527-1533 (1990); y Treat et al., Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer 317-327 y 353-365 (1989)).

En otras modalidades, un compuesto oligomérico (o conjugado del mismo) o un inhibidor de tirosina cinasa de proteína se pueden suministrar en un sistema de liberación controlada o un sistema de liberación sostenida (véase por ejemplo Goodson, "Dental Applications" (p. 1 15-138) en "Medical Applications of Controlled Reléase", Vol. 2, "Applications and Evaluation", R.S. Langer y D.L. Wise eds., CRC Press (1984); Langer, Science 249:1527-1533 (1990)). En varias modalidades, el suministro de liberación controlada o liberación sostenida se puede efectuar por medio de una bomba (Langer, Science 249:1527-1533 (1990); Sefton, CRC Crit. Reí. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et ai, Surgery 88:507 (1980); y Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321 :574 (1989)), o usando materiales poliméricos (véase "Medical Applications of Controlled Reléase" (Langer y Wise, eds., 1974); "Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance" (Smolen y Ball, eds. , 1984); Ranger y Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 (1983), Levy et al., Science 228:190 (1985); During et al., Ann. Neurol. 25:351 (1989); y Howard et al., J. Neurosurg. 71 : 105 (1989)).

En algunas modalidades, las composiciones de la invención son útiles para inhibir la proliferación celular. En varias modalidades, el efecto antiproliferativo es una reducción de por lo menos 10%, una reducción de por lo menos 20%, una reducción de por lo menos 30%, una reducción de por lo menos 40%, una reducción de por lo menos 50%, una reducción de por lo menos 60%, una reducción de por lo menos 70%, una reducción de por lo menos 80%, o una reducción de por lo menos 90% de la proliferación celular, en comparación con una muestra de células no tratadas. En otras modalidades, el efecto antiproliferativo es una reducción de por lo menos 10%, una reducción de por lo menos 20%, una reducción de por lo menos 30%, una reducción de por lo menos 40%, una reducción de por lo menos 50%, una reducción de por lo menos 60%, una reducción de por lo menos 70%, una reducción de por lo menos 80%, o una reducción de por lo menos 90% de la proliferación celular, en comparación con una muestra de células tratadas con un compuesto oligqmérico o con un inhibidor de tirosina cinasa de proteína de molécula pequeña, solos ("monoterapia"). En varias modalidades, las células son células de cáncer. En algunas modalidades, las células de cáncer se seleccionan de células de cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer de pulmón y carcinoma epitelial.

Por consiguiente, las composiciones de la invención son útiles en el tratamiento de una enfermedad hiperproliferativa tal como el cáncer. En algunas modalidades, el cáncer tratado por la terapia de combinación de la invención dirigida al HER3 se selecciona del grupo que consiste en linfomas y leucemias (por ejemplo, linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemia aguda, leucemia linfocítica aguda, leucemia mielocítica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocitica crónica, mieloma múltiple), carcinoma del colon, carcinoma rectal, carcinoma epitelial, cáncer pancreático, cáncer de la mama, cáncer del ovario, cáncer de la próstata, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, cáncer cervical, cáncer testicular, carcinoma del pulmón, carcinoma de la vejiga, melanoma, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer del cerebro, cáncer de sitio primario desconocido, neoplasmas, cáncer del sistema nervioso periférico, cáncer del sistema nervioso central, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfoangiosarcoma, linfoangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, neuroblastoma y retinoblastoma, enfermedad de cadenas pesadas, metástasis, o cualquier enfermedad o trastorno caracterizado por crecimiento celular descontrolado o anormal.

En algunas modalidades, la enfermedad es un cáncer seleccionado del grupo que consiste en cáncer del pulmón, cáncer de la próstata, cáncer de la mama, cáncer del ovario, cáncer del colon, carcinoma epitelial y cáncer del estómago.

En algunas otras modalidades, el cáncer del pulmón es cáncer de pulmón de célula no pequeña.

Como se muestra en el ejemplo más abajo, los regímenes de terapia combinada de la invención permiten el tratamiento de los tipos de cáncer que son resistentes a la monoterapia, por ejemplo con gefitinib u otro inhibidor de PTK.

En varias modalidades, el tratamiento de una enfermedad de acuerdo con la invención se puede combinar con uno o más de otros tratamientos contra el cáncer, tales como radioterapia, quiomioterapia o inmunoterapia.

En algunas modalidades, la enfermedad está asociada con una mutación en el gen HER3 (o el gen HER2 o el gen EGFR), o con un gen cuyo producto de proteína se asocia o interacciona con HER3. En algunas modalidades el gen mutado codifica una proteína con una mutación en el dominio de tirosina cinasa. En varias modalidades, la mutación del dominio de tirosina cinasa es en el sitio de unión de un inhibidor de PTK de molécula pequeña o en el sitio de unión del ATP. Por lo tanto, en varias modalidades, el ARNm objetivo es una forma mutada de la secuencia de HER3 (o HER2 o EGFR); por ejemplo, comprende una o más mutaciones de un solo punto, tales como SNPs asociadas con el cáncer.

En algunas modalidades la enfermedad está asociada con concentraciones anormales de una forma mutada de HER3. En algunas modalidades la enfermedad está asociada con concentraciones anormales de una forma de tipo silvestre de HER3. Un aspecto de la invención está dirigido a un método de tratamiento de un paciente que padece o es susceptible de padecer afecciones asociadas con concentraciones anormales de HER3, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un oligómero dirigido a HER3, o un conjugado del mismo, y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteina de molécula pequeña que se une al dominio de tirosina cinasa de un miembro de la familia EGFR o de una proteína que interacciona con uno o más miembros de la familia EGFR. En algunas modalidades, el oligómero comprende una o más unidades de LNA. En varias modalidades el inhibidor de PTK es gefitinib.

En otra modalidad la invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que padece o es susceptible de padecer afecciones asociadas con concentraciones anormales de una forma mutada de HER2, o concentraciones anormales de una forma de tipo silvestre de HER2, que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de un oligómero dirigido a HER3 (y opcionalmente a uno o más de HER2 y EGFR), o un conjugado del mismo, y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de molécula pequeña que se une al dominio de tirosina cinasa de uno o más miembros de la familia EGFR, o de una proteína que interacciona con uno o más miembros de la familia EGFR. En algunas modalidades, el oligómero comprende una o más unidades de LNA. En varias modalidades el inhibidor de PTK es gefitinib.

En otras modalidades, la invención está dirigida a un método de tratamiento de un paciente que padece o es susceptible de padecer afecciones asociadas con concentraciones anormales de un EGFR mutado, o concentraciones anormales de un EGFR de tipo silvestre, que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un oligómero dirigido a HER3 (y opcionalmente a uno o más de HER2 y EGFR), o un conjugado del mismo, y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de molécula pequeña que se une al dominio de tirosina cinasa de un miembro de la familia EGFR, o de una proteina que interacciona con uno o más miembros de la familia EGFR. En algunas modalidades, el oligómero comprende una o más unidades de LNA. En varias modalidades el inhibidor de PTK es gefitinib.

En varias modalidades la invención descrita abarca un método de prevención o tratamiento de una enfermedad, que comprende administrar a un humano en necesidad de dicha terapia una cantidad terapéuticamente eficaz de un oligómero que modula el HER3 (y opcionalmente uno o más de HER2 y EGFR), o un conjugado del mismo, y una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa que se une al dominio de tirosina cinasa de un miembro de la familia EGFR o de una proteina que interacciona con uno o más miembros de la familia EGFR.

Las cantidades del oligómero (por lo menos uno) y del inhibidor de PTK (por lo menos uno) que son eficaces para el tratamiento o prevención de una enfermedad pueden ser determinadas mediante las técnicas clínicas normales. Generalmente las escalas de dosificación se pueden calcular basándose en la CE50 encontrada en modelos de animal in vitro e ¡n v/Vo. Las dosis precisas que se han de utilizar también dependen, por ejemplo, de la vía de administración y la seriedad de la enfermedad, y pueden ser determinadas de acuerdo con el criterio del médico o las circunstancias de cada paciente. En otros ejemplos necesariamente ocurrirán variaciones que dependen, entre otras cosas, del peso y condición física del paciente tratado (por ejemplo, su función hepática y renal), y la enfermedad tratada, la severidad de los síntomas, la frecuencia del intervalo de administración, la presencia de cualquier efecto secundario nocivo, y el oligonucleótido e inhibidor de PTK particulares utilizados.

En varias modalidades la dosis de un oligómero es de aproximadamente 0.01 pg a aproximadamente 1 g por kg de peso corporal, y se puede dar una o más veces al día, cada semana, cada mes o cada año, o incluso cada 2 a 10 años, o mediante infusión continua durante unas horas hasta varios meses. En algunas modalidades la dosis de un inhibidor de PTK es de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 500 mg por día. En varias modalidades la dosis de un inhibidor de PTK es de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 400 mg por día. En otras modalidades la dosis de un inhibidor de PTK es de aproximadamente 150 mg a aproximadamente 300 mg por día. En algunas modalidades se pueden calcular las frecuencias de repetición de las dosis basándose en los tiempos de residencia y las concentraciones de los agentes activos medidas en los fluidos o tejidos corporales. Después de un tratamiento exitoso, el paciente puede ser sometido a una terapia de mantenimiento con la terapia combinada dirigida al HER3 para impedir la reaparición de la enfermedad.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 La terapia combinada dirigida al ErbB-3 (HER3) disminuye la proliferación de células de cáncer Procedimientos experimentales 1 . Cultivo de células Se examinaron los efectos de la combinación del oligómero que tiene la secuencia de base y diseño indicados en la SEQ ID NO: 180 (en adelante llamada ??180") con gefitinib, un inhibidor de EGFR, en varias líneas de células de tumor. Las células se cultivaron en el medio que se describe abajo y se mantuvieron a 37 °C a 95% de humedad y 5% de CO2. Las células se pasaron rutinariamente 2-3 veces cada semana. 15PC-3 (Santaris Pharma): La línea de células de cáncer de próstata de humano 15PC-3 se cultivó en DMEM (ATCC) + 10% suero bovino fetal (FBS) + 2mM de Glutamax™ I + gentamicina (25 pg/ml).

A549 (ATCC): La linea de células de cáncer de pulmón de humano A549 se cultivó en medio F12K (ATCC) + 10% de FBS + 2mM de Glutamax™ I + penicilina (100u/ml) / estreptomicina (100 pg/ml).

DU145 (ATCC): La linea de células de cáncer de próstata de humano DU145 se cultivó en medio esencial mínimo de Eagle (ATCC) + 10% de FBS + 2mM de Glutamax™ I + penicilina (100u/ml) / estreptomicina (100 pg/ml).

A431 (ATCC): La línea de células de cáncer de epidermoide de humano A431 se cultivó en DMEM (ATCC) + 10% de suero bovino fetal (FBS) + 2mM de Glutamax™ I + penicilina (100u/ml) / estreptomicina (100 pg/ml).

SKBR-3 (ATCC): La línea de células de cáncer de mama de humano SKBR3 se cultivó en medio modificado 5A de McCoy (ATCC) + 10% de FBS + 2mM de Glutamax™ I + penicilina (100u/ml) / estreptomicina (100 pg/ml). 1993 (ATCCV La línea de células de cáncer de pulmón de humano H1993 se cultivó en RPMI-1640 (ATCC) + 10% de FBS + 2mM de Glutamax™ I + penicilina (100 u/ml) / estreptomicina (100 pg/ml). 2. Tratamiento combinado con QN180 y gefitinib Las células se trataron con ON180 o un oligonucleótído que contenia LNA que tiene una secuencia de base revuelta como se indica en la SEQ ID NO: 236 (en adelante llamada ONCONT"), usando la formulación de liposoma catiónico Lipofectamine™-2000 (Invitrogen™) como vehículo de transfección. Las células se sembraron en placas de 6 pocilios (NUNC™) y se trataron cuando su confluencia era de 50-60 %. La transfección de las células por ON180 se hizo como lo recomienda el fabricante usando OptiMEM® (Gibco™) libre de suero y 5 pg/ml de Lipofectamine™-2000. El ONCONT sirvió como control negativo. Las células tratadas se incubaron a 37°C durante 4 horas y después se lavaron con OptiMEM®, después de lo cual se agregó medio regular que contenia suero.

Veinticuatro horas después de la transfección con los oligonucleótidos (ON180 u ONCONT), las células se trataron durante 48 horas con gefitinib (Amfinecom, Inc.), un fármaco inhibidor de EGFR comercializado (concentración final de 1 µ? a 50 µ?). Después, las células tratadas se sometieron a una prueba de proliferación por MTS y cuantificación de ARNm de ErbB3 por medio de qRT-PCR, respectivamente (véase más abajo). Cada experimento se hizo por lo menos dos veces. 3. Prueba de proliferación celular (prueba de MTS) La prueba de proliferación se hizo usando el reactivo en solución CelITiter 96® Aqueous One (Promega, No. Cat 358B) siguiendo las instrucciones del fabricante. Brevemente, el compuesto MTS se agregó al cultivo de la placa de 6 pocilios y se incubó a 37 °C, 95% de humedad y 5% de CO2 durante 1-3 horas, antes de la medición. El medio con el reactivo MTS se transfirió entonces a una placa de 96 pocilios. Se midió la absorbancia a 490 nm con una referencia de 650 nm usando una lectora de ELISA (Molecular Devices). El fondo para la prueba se midió de los pocilios que solo contenían medio y se restó de la señal de los pocilios que contenían células. La absorbancia a 490 nm (DO490nm) es proporcional al número de células viables en el cultivo. 4. Examen de la concentración de ARNm de ErbB3 por medio de qRT-PCR Se extrajo el ARN completo de las células tratadas como se describe arriba usando el kit Qiagen RNeasy Plus Mini Kit (No. Cat 74134). Se usó qRT-PCR de un paso para examinar las concentraciones de ARNm de ErbB3 en las células usando el kit QuantiTect Probé RT-PCR kit (No. Cat. 204443; Qiagen), de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Las secuencias de los iniciadores y las sondas fueron las siguientes: Serie de iniciador/sonda para la PCR de ErbB3 humano: Sonda: CATTGCCCAACCTCCGCGTG (SEQ ID NO: 250) Iniciador 1. TGCAGTGGATTCGAGAAGTG (SEQ ID NO. 251 ) Iniciador 2: GGCAAACTTCCCATCGTAGA (SEQ ID NO: 252) Serie de iniciador/sonda para GAPDH humano: Sonda: ACTGGCGCTGCCAAGGCTGT (SEQ ID NO: 253) Iniciador 1 : CCACCCAGAAGACTGTGGAT (SEQ ID NO: 254) Iniciador 2: TTCAGCTCAGGGATGACCTT (SEQ ID NO: 255) La qRT-PCR se hizo en el sistema de PCR Fast Real-Time 7500 de Applied Biosystems usando 120 ng de muestra de ARN completo. El ARNm de GAPDH sirvió como control interno.

Resultados Las células A549 fueron resistentes al gefitinib. En esta línea celular el gefitinib solo no afecta la proliferación a 40 µ? (figura 1A). El ON180, solo, inhibió potentemente la expresión de la producción de ARNm de ErbB3 (CI5o < nM; figura 1 C) y el crecimiento celular (CI50 < 5 nM, figuras 1A y 1 B). El tratamiento con 2 nM de ON180 en combinación con gefitinib aumentó significativamente el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células A549 (figuras 1A y 1 B). Como se muestra en la figura 1 B, la combinación de 40 µ? de gefitinib y 2 nM de ON180 redujo la tasa de crecimiento de las células A549 en aproximadamente 50%, en comparación con las células A549 tratadas con 40 µ? de gefitinib como monoterapia.

Las células H1993 son relativamente insensibles al gefitinib (CI50 = 40 nM; figura 2A). El ON180, solo, inhibió potentemente la expresión del ARNm de ErbB3 (figura 2C) y el crecimiento celular (Cl50= 1 nM; figuras 2A y 2B). El tratamiento con una combinación de 1 nM de ON180 y gefitinib aumentó el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células H1993 (figuras 2A y 2B). Como se muestra en la figura 2B, la combinación de 40 µ? de gefitinib y 1 nM de ON180 redujo la tasa de crecimiento de las células H1993 en más de 50%, en comparación con el tratamiento con 40 µ? de gefitinib como monoterapia.

Las células 15PC3 son resistentes al gefitinib. A 20 µ?, el gefitinib no afecta la proliferación de esta línea celular (figura 3A). El ON 80, solo, inhibió el ARNm de ErbB3 (figura 3C) y el crecimiento celular (Cl50 < 2nM; figuras 3A y 3B). El tratamiento de las células 15PC3 con una combinación de 1 nM de ON180 y 20 µ de gefitinib aumentó significativamente (esto es, casi en 70%) el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células 15PC3, en comparación con el tratamiento con 20 µ? de gefitinib como monoterapia (figuras 3A y 3B).

Las células DU145 son resistentes al gefitinib. A 40 µ?, el gefitinib no afecta la proliferación de esta línea celular (figura 4A). El ON180, solo, inhibió eficientemente la expresión del ARNm de ErbB3 (figura 4C) y el crecimiento celular (Cl50 < 5 nM; figuras 4A y 4B). El tratamiento de las células DU145 con una combinación de 1 nM de ON180 y 40 µ? de gefitinib aumentó significativamente (esto es, en aproximadamente 40%) el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células DU145, en comparación con el tratamiento con 40 µ? de gefitinib como monoterapia (figuras 4A y 4B).

Las células SKBR3 son sensibles al gefitinib (figura 5A). La exposición de las células SKBR3 al ON180 solo, inhibió eficientemente la expresión del ARNm de ErbB3 (figura 5C) y el crecimiento celular (Cl50 < 5 nM; figuras 5A y 5B). El tratamiento de estas células de tumor con una combinación de 1 nM de ON180 y 20 pm de gefitinib aumentó significativamente (esto es, en más de 50%) el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células SKBR3, en comparación con el tratamiento con 20 µ? de gefitinib como monoterapia (figuras 5A y 5B).

Las células A431 son sensibles al gefitinib (figura 6A). La exposición de estas células de tumor al ON180 solo, inhibió eficientemente el ARNm de ErbB3 (figura 6C) y el crecimiento celular (Cl50 < 1 nM; figuras 6A y 6B). El tratamiento de las células A431 con una combinación de 1 nM de ON 180 y 40 µ? de gefitinib aumentó significativamente (esto es, en aproximadamente 50%) el efecto antiproliferativo del gefitinib sobre las células A431 , en comparación con el tratamiento con 20 µ? de gefitinib como monoterapia (figuras 6C y 6B).

Conclusiones El compuesto oligomérico ON180 inhibió potentemente la expresión del ARNm de ErbB3 y la proliferación celular en las seis líneas de células de cáncer probadas (A549, H1993, 15PC3, DU145, A431 y SKBR3). Dos de las líneas celulares, SKBR3 y A431 , son sensibles al gefitinib, mientras que cuatro, A549, H1993, 15PC3 y DU145, son insensibles o resistentes al inhibidor de PTK. No obstante, en las seis líneas de células de tumor probadas se observaron efectos sobre la proliferación celular con el tratamiento combinado de O 180 y gefitinib. El tratamiento con O 180 aumentó la sensibilidad de las células de tumor resistentes al gefitinib (A549, H1993, DU145 y 15PC3), a una concentración baja (1-5 nM).

Todas las publicaciones, patentes, solicitudes de patente y otros documentos citados en esta solicitud se incorporan aquí como referencia en su totalidad para todo propósito, como si se indicara que cada publicación, patente, solicitud de patente u otro documento individual se incorporara como referencia para todo propósito.

Aunque se han ilustrado y descrito varias modalidades específicas, se apreciará que se pueden hacer varios cambios sin apartarse del espíritu y alcance de la invención.

Claims (50)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- El uso de (a) un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos que es por lo menos 80% idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presentes en un compuesto seleccionado del grupo que consiste en: 5'-Gs^CsTsCsCsasgsasCsastsCsas^CsTs^C-S' (SEQ ID NO: 169); y 5'-TsAsGscscstsgstsCsasCststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina, y en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; y (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteína de EGFR (HER1); en combinación, en la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer en un mamífero.

2 - El uso que se reclama en la reivindicación 1 , en donde el inhibidor de tirosina cinasa de proteína de EGFR (HER1 ) se selecciona del grupo que consiste en gefitinib, erlotinib, lapatinib y canertínib.

3. - El uso que se reclama en la reivindicación 2, en donde el inhibidor de tirosina cinasa de proteina de EGFR (HER1) es el gefitinib.

4. - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la secuencia de la primera región es idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presentes en la SEQ ID NO: 169 o 180.

5. - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la primera región de dicho oligómero consiste en 10 a 18 monómeros contiguos.

6 - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde la primera región de dicho oligómero consiste en 16 monómeros contiguos.

7 - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde cada análogo de nucleósido se selecciona independientemente del grupo que consiste en un monómero de LNA, un monómero que contiene un azúcar de 2'-O-alquil-ribosa, un monómero que contiene un azúcar de 2'-O-metil-ribosa, un monómero que contiene un azúcar de 2'-aminodesoxirribosa, y un monómero que contiene un azúcar de 2'-fluoro-desoxirribosa.

8.- El uso que se reclama en la reivindicación 7, en donde el análogo de nucleósido es un monómero de LNA.

9.- El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, en donde el oligómero se selecciona del grupo que consiste en: 5'- GsMeCsTscscsasgsascsastscsasMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 169); y 5'-TsAsGsCsCstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180).

10.- El uso que se reclama en la reivindicación 9, en donde el oligómero es: 5'-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180).

11.- El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el mamífero es un humano.

12. - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer del pulmón, cáncer de la próstata, cáncer de la mama, carcinoma epitelial y carcinoma epidermoide.

13. - El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1-1 , en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemia aguda, leucemia linfocitica aguda, leucemia mielocitica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocitica crónica, mieloma múltiple, carcinoma del colon, carcinoma rectal, carcinoma epitelial, cáncer pancreático, cáncer de la mama, cáncer del ovario, cáncer de la próstata, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, cáncer cervical, cáncer testicular, carcinoma del pulmón, carcinoma de la vejiga, melanoma, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer del cerebro, cáncer de sitio primario desconocido, neoplasma, cáncer del sistema nervioso periférico, cáncer del sistema nervioso central, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfoangiosarcoma, linfoangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, neuroblastoma y retinoblastoma.

14. - Una composición farmacéutica que comprende: (a) un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteina; y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque la secuencia de la primera región del oligómero es por lo menos 80% idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presente en las SEQ ID NOs: 1-140 y 169-234.

16. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada además porque la secuencia de la primera región del oligómero es por lo menos 80% idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presente en las SEQ ID NOs: 1 , 54, 200 o 211.

17. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada además porque la secuencia de la primera región del oligómero es por lo menos 80% idéntica a la secuencia de una región de por lo menos 10 monómeros contiguos presente en las SEQ ID NOs: 169 o 180.

18. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el inhibidor de tirosina cinasa de proteina se selecciona del grupo que consiste en gefitinib, erlotinib, canertinib, vandetanib, lapatinib, sorafenib, AG-494, RG-13022, RG-14620, BIBW 2992, tirfostin AG-825, tirfostin 9, tirfostin 23, tirfostin 25, tirfostin 46, tirfostin 47, tirfostin 53, buteina, curcumina, AG-1478, AG-879, ácido ciclopropanocarboxílico-(3-(6-(3-trifluorometil-fenilamino)-pirimidin-4-ilamino)-fenil)-amida, N8-(3-cloro-4-fluorofenil)-N2-( 1 -metilpiperidin-4-il)-pirimido[5,4-d]pirimidin-2,8-diamina, 2HCI (CAS 196612-93-8), 4-(4-benciloxianilino)-6,7-dimetoxiquinazolina, N-(4-((3-cloro-4-fluorofenil)amino)pirido[3,4-d]pirimidin-6-il)2-butinamida (CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272 y HKI-357.

19.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque el inhibidor de tirosina cinasa de proteína se selecciona del grupo que consiste en gefitinib, erlotinib, lapatinib, canertinib y sorafenib.

20.- La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque el monómero (por lo menos uno) de la primera región es un análogo de nucleósido seleccionado independientemente del grupo que consiste en un monómero de LNA, un monómero que contiene un azúcar de 2'-O-alquil-ribosa, un monómero que contiene un azúcar de 2'-0-metil-ribosa, un monómero que contiene un azúcar de 2'-amino-desoxirribosa, y un monómero que contiene un azúcar de 2'-f luoro-desoxirribosa .

21. - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque el monómero (por lo menos uno) de la primera región es un monómero de LNA.

22. - Una composición farmacéutica que comprende: (a) un oligómero que consiste en la secuencia: 5'-TsAsGsCsCstsgstsCsasCststsMeCsTsMeC -3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; (b) gefitinib; y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

23. - Una composición farmacéutica que comprende: (a) un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; (b) un inhibidor de tirosina cinasa de proteína; y (c) un excipiente farmacéuticamente aceptable.

24 - La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada además porque dicho conjugado es un conjugado de un oligómero que consiste en la secuencia: 5'-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína es el gefitinib.

25.- Un método ¡n vitro para inhibir la proliferación de una célula de mamífero, que comprende poner en contacto dicha célula con. (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

26.- El método in vitro de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque el oligómero consiste en la secuencia: 5'-TsAsGscscstsgstscsasCststsMeCsTs eC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y eC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína es el gefitinib.

27.- El método in vitro de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque la proliferación de dicha célula es inhibida por lo menos aproximadamente 30% en comparación con la proliferación de una célula no tratada del mismo tipo.

28.- El método in vitro de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado además porque la célula es una célula de cáncer seleccionada del grupo que consiste en una célula de cáncer de próstata, una célula de cáncer de mama, una célula de cáncer de pulmón y una célula de carcinoma epitelial.

29 - Un método in vitro para inhibir la proliferación de una célula de mamífero, que comprende poner en contacto dicha célula con: (a) una cantidad eficaz de un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

30.- El método in vitro de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado además porque dicho conjugado es un conjugado del oligómero que consiste en la secuencia: 5'-TsAsGsCsCstsgstscsascststs eCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-ox¡-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteina es el gefitinib.

31 - El uso de: (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína, en la preparación de un medicamento para inhibir la proliferación de células en el cuerpo de un mamífero.

32.- El uso que se reclama en la reivindicación 31 , en donde dicho oligómero consiste en la secuencia: 5'-TsAsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína es el gefitinib.

33 - El uso de. (a) una cantidad eficaz de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad eficaz de un inhibidor de tirosina cinasa de proteina, en la preparación de un medicamento para tratar cáncer en un mamífero.

34 - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero consiste en la secuencia: 5'-T5AsGscscstsgstscsascststsMeCsTsMeC-3' (SEQ ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteina es el gefitinib.

35.- El uso que se reclama en la reivindicación 34, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en linfoma no Hodgkin, linfoma de Hodgkin, leucemia aguda, leucemia linfocitica aguda, leucemia mielocitica aguda, leucemia mieloide crónica, leucemia linfocitica crónica, mieloma múltiple, carcinoma del colon, carcinoma rectal, carcinoma epitelial, cáncer pancreático, cáncer de la mama, cáncer del ovario, cáncer de la próstata, carcinoma de célula renal, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, cáncer cervical, cáncer testicular, carcinoma del pulmón, carcinoma de la vejiga, melanoma, cáncer de la cabeza y cuello, cáncer del cerebro, cáncer de sitio primario desconocido, neoplasma, cáncer del sistema nervioso periférico, cáncer del sistema nervioso central, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogénico, cordoma, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfoangiosarcoma, linfoangioendoteliosarcoma, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula basal, adenocarcinoma, carcinoma de glándulas sudoríparas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, carcinoma de pulmón de célula pequeña, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, neuroblastoma y retinoblastoma.

36 - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero y dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína están adaptados para ser administrables separadamente.

37 - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero y dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína están adaptados para ser administrables concurrentemente o simultáneamente.

38. - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero y dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteina están adaptados para ser administrables secuencialmente.

39. - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero y dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína están en formas farmacéuticas adecuadas para ser administrables oralmente.

40. - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde dicho oligómero está en una forma farmacéutica adecuada para ser administrable intravenosamente, y dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteína está en una forma farmacéutica adecuada para ser administrable oralmente.

41. - El uso que se reclama en la reivindicación 35, en donde el cáncer se selecciona del grupo que consiste en cáncer del pulmón, cáncer de la próstata, cáncer de la mama y carcinoma epitelial.

42 - El uso que se reclama en la reivindicación 33, en donde el mamífero es un humano.

43.- El uso de un oligómero de LNA que hace blanco en HER3 en la preparación de un medicamento para el tratamiento del cáncer, en donde el medicamento está adaptado para ser administrable en combinación con un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

44.- El uso que se reclama en la reivindicación 43, en donde el inhibidor de tirosina cinasa de proteina se selecciona del grupo que consiste en gefitinib, erlotinib, canertinib, vandetanib, lapatinib, sorafenib, AG-494, RG-13022, RG-14620, BIBW 2992, tirfostin AG-825, tirfostin 9, tirfostin 23, tirfostin 25, tirfostin 46, tirfostin 47, tirfostin 53, buteina, curcumina, AG-1478, AG-879, ácido ciclopropanocarboxilico-3(3-(6-(3-trifluorometil-fenilamino)-pirimidin-4-ilamino)-fenil)-amida, N8-(3-cloro-4-fluorofenil)-N2-(1-metilpiperidin-4-il)-pirimido[5,4-d]pirimidin-2,8-diamina, 2HCI (CAS 196612-93-8), 4-(4-benciloxianilino)-6,7-dimetoxiquinazolina, N-(4-((3-cloro-4-fluorofenil)amino)- pirido[3,4-d]pinmidin-6-il)2-butinamida (CAS 881001-19-0), EKB-569, HKI-272, y HKI-357.

45 - El uso que se reclama en la reivindicación 44, en donde el inhibidor de tirosina cinasa de proteina se selecciona del grupo que consiste en gefitinib, erlotinib, lapatinib, canertinib y soraíenib.

46.- El uso que se reclama en la reivindicación 44, en donde el inhibidor de tirosina cinasa de proteina es el gefitinib.

47 - Un medicamento que comprende un oligómero de LNA que hace blanco en HER3, en donde dicho medicamento es útil en el tratamiento del cáncer en combinación con un inhibidor de tirosina cinasa de proteína.

48. - Un kit para usarse en el tratamiento del cáncer, dicho kit comprendiendo un inhibidor de tirosina cinasa de proteina y un oligómero de LNA que hace blanco en HER3.

49. - El uso de: (a) una cantidad efectiva de un conjugado de un oligómero que consiste en 10 a 50 monómeros contiguos en donde los monómeros adyacentes están unidos covalentemente por un grupo fosfato o un grupo fosforotioato, en donde dicho oligómero comprende una primera región de por lo menos 10 monómeros contiguos; en donde por lo menos un monómero de dicha primera región es un análogo de nucleósido; en donde la secuencia de dicha primera región es por lo menos 80% idéntica al complemento inverso de la región objetivo mejor alineada de un gen de HER3 de mamífero o un ARNm de HER3 de mamífero; y (b) una cantidad efectiva de un inhibidor de tirosina cinasa de proteína, en la preparación de un medicamento para inhibir la proliferación de una célula de mamífero.

50.- El uso que se reclama en la reivindicación 49, en donde dicho conjugado es un conjugado del oligómero que consiste en la secuencia: 5'-TsAsGscscstsgstscsascststs eCsTsMeC-3' (SEO. ID NO: 180), en donde las letras mayúsculas denotan monómeros de beta-D-oxi-LNA y las letras minúsculas denotan monómeros de ADN, el subíndice "s" denota un enlace de fosforotioato, y MeC denota un monómero de beta-D-oxi-LNA que contiene una base de 5-metilcitosina; y en donde dicho inhibidor de tirosina cinasa de proteina es el gefitinib.