CN102223886A

CN102223886A - Erbb-3(her3)选择性组合疗法

Info

Publication number: CN102223886A
Application number: CN2009801447096A
Authority: CN
Inventors: 廖柏松; 张易贤
Original assignee: Santaris Pharma AS; Enzon Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Roche Innovation Center Copenhagen AS; Enzon Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2008-11-07
Filing date: 2009-11-05
Publication date: 2011-10-19
Also published as: TW201021803A; BRPI0921407A2; AU2009313510A1; US20120004285A1; EA201170660A1; WO2010054051A1; NZ592326A; IL212714A0; KR20110086844A; MX2011004869A; EP2376087A1; CA2741050A1; JP2012508244A; EP2376087A4

Abstract

本发明涉及目标为HER3的治疗方法和治疗药物组合物。本发明涉及的药物组合物包括细胞中目标为HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)mRNA的寡核苷酸，能降低HER3和可选HER2和/或EGFR的表达。包括对一个或多个酪氨酸激酶受体的小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂，能够抑制受体二聚体信号传输和/或进入细胞内在化。这种组合疗法是给许多内科疾病患者带来益处，比如增生过多症(如癌症)。本发明提供了一种用寡核苷酸和蛋白酪氨酸激酶抑制剂组合治疗增生症的方法。

Description

ERBB-3(HER3)选择性组合疗法

有关发明的相互参照

本申请要求2008年11月7日提交的临时专利申请，申请号为：61/112,549的专利申请的优先权，该内容在此全部纳入参考。

发明领域

本发明涉及到下调HER3(和可选的一个或多个表皮生长因子受体和HER2)在细胞内的表达和/或活性，包括对细胞使用有效量的低聚化合物(寡核苷酸)HER3 mRNA和有效量的蛋白质酪氨酸激酶(PTK)抑制剂，或药学上可接受的其衍生物。本发明还涉及到包括给有需求的患者使用有效量的寡核苷酸HER3和PTK抑制剂，或药学上可接受的其衍生物。另外本发明还涉及到医药组合物包括有效量的寡核苷酸HER3 mRNA和PTK抑制剂，或学上可接受其衍生物并且是药学上可接受的赋形剂形式。该化合物可有效下调HER3(和可选的一个或多个表皮生长因子受体(简称EGFR)和HER2)在细胞内的表达和/或活性，可以用于治疗多种疾病，如癌症。

本发明为药剂制备中锁核酸(简称“LNA”)寡核苷酸HER3，例如一个或多个所述寡核苷酸的用法，其中，该药剂是与一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂结合用于癌症治疗。本发明提供了一种药剂包含LNA寡核苷酸HER3，例如一个或多个所述寡核苷酸，其中该药剂与一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂相结合用于治疗癌症。

1.1.背景

HER3是ErbB受体酪氨酸激酶族中的一种，该族包括四个不同的受体：ErbB-1(EGFR，HER1)，ErbB-2(neu，HER2)，ErbB-3(HER3)和ErbB-4(HER4)(Yarden et al.，Nat.Rev.Mol.Cell.Biol，2001，2(2)：127-137)。这个家族的受体蛋白是由胞外配体结合域，一个单疏水跨膜结构域和一个酪氨酸激酶细胞质含域构成。EGF家族至少有12个结合一个或或多个ErbB受体的生长因子影响同源或异源二聚体。二聚化引发配体结合受体的内在化和再循环(或退化)，以及调节细胞内下游信号通路，尤其是细胞存活，死亡和增殖活性。在专业领域中HER3(ErbB3)被认为是缺乏酪氨酸激酶活性。

EGFR，HER2和最新的HER3都是肿瘤的成因。最近的研究表明，与人体正常相同部位组织相比，在许多癌变的组织中都存在EGFR超表达的现象。目前，在乳腺癌，肺癌，卵巢癌和肝癌中已经发现了大量的EGFR的超表达，扩增缺失和基因编码的结构重组等现象。EGFR在多形性胶质细胞瘤癌中的扩增是已知的最稳定的基因病变之一。EGFR的超表达在许多非小细胞肺癌病例中也有记录。在人类乳腺癌中HER3 mRNA已被检测出升高。

常规化疗方案，直接作用于细胞蛋白质或其他大分子并导致细胞死亡，但通常无法区分快速分裂的肿瘤细胞和快速的分裂正常细胞。正常细胞的死亡，如骨髓细胞和胃肠道的细胞，会导致毒副作用。而且，肿瘤对于细胞毒性化疗的反应是不可预测的。

最近，一些蛋白酪氨酸激酶抑制剂已经被开发作为某些癌症的治疗药剂，这些癌症中，蛋白酪氨酸激酶的表达都不正常。然而，这种疗法的功效有局限性，因为许多癌症对蛋白酪氨酸激酶抑制剂的治疗没有反应或随着时间的推移发展会对抑制剂产生抗药性。Arora et al.(2005)J.Pharmacol.and Exp.Therapies 315(3)：971-971-979.

这样就需要一个新的针对肿瘤细胞的癌症疗法，比传统的化疗毒性较低且更有效，而且比目有所使用的治疗方法有更高的响应速率。

1.2.概要

在某些实例中，本发明涉及一种药物组合物包括：(a)由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，相邻的单体间通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；(b)一种蛋白酪氨酸激酶抑制剂；及(c)药学上可接受的辅料剂。

在各种实例中，医学组合物包括一个由SEQ ID180中显示的顺序和蛋白酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼构成的寡核苷酸。

在另一些实例中，药学组合物包括：(a)由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；(a)一个蛋白酪氨酸激酶抑制剂；及(c)药学上可接受的辅料剂。

本发明还涉及一种抑制哺乳动物细胞增殖的方法，包括细胞接触用：(a)有效量的由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

在很多的实例中，抑制哺乳动物细胞的增殖的方法，包括用有效量的由SEQ ID180中显示的顺序和蛋白酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib)构成的接触细胞寡核苷酸。

在一些实例中，本发明包括抑制哺乳动物体内细胞增殖的方法，包含接触哺乳动物组织用：(a)有效量的由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

在某些实例中，抑制哺乳动物体内细胞增殖的方法，包括用有效量的由SEQ ID180中显示的顺序和蛋白酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼构成的接触细胞寡核苷酸。

在很多的实例中，抑制哺乳动物体内细胞增殖的方法，包括接触哺乳动物组织用：(a)有效量的由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶。

本发明还包括一种治疗哺乳动物癌症的方法，包括对哺乳动物使用：(a)有效量的由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

在某些实例中，治疗哺乳动物癌症的方法，包括对哺乳动物使用有效量的由SEQ ID180中显示的顺序构成的寡核苷酸和有效量的吉非替尼。

在很多的实例中，癌症是指肺癌，前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，上皮癌或胃癌。

在进一步的实例中，本发明包括一种治疗哺乳动物癌症的方法，包括对哺乳动物使用：(a)有效量的由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，其中至少有一个单体是核苷类似物，且第一区序列至少有80％和排列最整齐的哺乳动物HER3或哺乳动物HER3 mRNA基因目标区域的逆补相同；及(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

本发明的一个实例提供了以下药剂的使用方法：

(a)由10至50个相近单体组成的寡核苷酸，这些单体通过磷酸盐组或磷酸酰组以共价键结合，该寡核苷酸第一区至少由10个连续的单体组成，且其排列至少有80％和包含以下结构的化合物中至少10个连续单体区的序列相同：

5′-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC 3(SEQ ID号：169)和

5′-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID号：180)，其中，大写字母表示β-D-oxy-LNA单体，小写字母表示的DNA单体，下标“S”是指磷酸酰键，和^meC表示一个含有5-甲基胞嘧啶基的β-D-oxy-LNA单体，及

上述第一区至少有一个单体是核苷类似物，

上述寡核苷酸是反义抑制剂或者HER3；及

(b)EGFR(HER1)的蛋白酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼，埃罗替尼，拉帕替尼和卡奈替尼和/或VEGFR家族的蛋白质酪氨酸激酶抑制剂，如VEGFR2和VEGFR3，如索拉非尼，可以联合用于哺乳动物癌症治疗。

在其中一个实例中，第一区序列和至少有10个连续单体的区的序列在5′-5′-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC 3(SEQ ID号：169)或5′-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID号：180)相同。在另一个实例中，寡核苷酸为HER3反义寡核苷酸抑制剂5′-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC 3(SEQ ID号：169)或5′-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID号：180)。本发明还提供了有关使用方法的治疗方法实例。上述方法实例包括对治疗需要的哺乳动物，比如人类，同时或前后使用寡核苷酸和PKI抑制剂。

1.3.简要说明图

图1A-1C。图1A和1B显示了用低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合对A549肺癌细胞的抗增殖治疗效果。图1C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在A549细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。

图2A-2C。图2A和2B显示与低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合，在H1993前列腺癌细胞抗增生治疗中的效果。图2C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在H1993细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。

图3A-3C。图3A和3B显示与低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合，在15PC3前列腺癌细胞抗增生治疗中的效果。图3C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在15PC3细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。

图4A-4C。图4A和4B显示了与低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合，在DU145前列腺癌细胞抗增生治疗中的效果。图4C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在DU145细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。

图5A-5C。图5A和5B显示了与低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合，在SKBR3乳腺癌细胞抗增生治疗中的效果。图5C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在SKBR3细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。。

图6A-6C。图6A和6B显示了与低聚化合物(序列和设计同上述SEQ ID号：180)和吉非替尼相结合，在A431人类上皮癌细胞抗增生治疗中的效果。图6C阐述了采用SEQ ID号：180序列和设计的低聚化合物在A432细胞中对HER3 mRNA表达的抑制效果。

1.4.详细说明

在某些实例中，本发明提供了调节HER3(可选一个或多个的EGFR和HER2)表达和/或活性的药品和方法。特别是，本发明还提供了药品配方，包括有效量的以药学上可接受的辅料剂专门在细胞内部混合编码HER3的核酸(可选一个或多个EGFR和HER2)，和有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂，或药学上可接受的其衍生物的寡核苷酸。

在某些实例中，寡核苷酸会以蛋白酪氨酸激酶抑制剂，或药学上可接受的其衍生物的形式出现在相同的化合物中。在各种实例中，寡核苷酸会出现在与在含有蛋白质酪氨酸激酶抑制剂的化合物分离的化合物中。在某些实例中，寡核苷酸会出现在与蛋白质酪氨酸激酶抑制剂化合物分离的化合物中，这两个化合物会被结合在一起使用。

在某些实施，本发明包括治疗或预防疾病的方法，如癌症，给需要的病人使用本发明的药剂。

1.5.药物组合物

1.5.1.寡核苷酸

在一个方面，在本发明药物组合物及方法中使用的低聚化合物(此处指寡核苷酸)是有用的，例如在调节哺乳动物核酸分子编码HER3的功能。在某些实例中，哺乳动物核酸分子编码HER3包括核酸序列同SEQID No.：197，和自然发生的等位变体。本发明的寡核苷酸由共价键连接的单体组成。

术语“单体”指天然存在于核酸中不包含任何改良糖或改良核酸碱基的核苷和脱氧核苷(统称“核苷”)，也就是说，在“单体”的化合物中，核酸糖或脱氧核糖与自然发生的，未经改良的碱基(基)(即嘌呤，腺嘌呤，鸟嘌呤，胞嘧啶，胸腺嘧啶或尿嘧啶嘧啶杂环)和“核苷类似物”共价链接，“核苷类似物”为自然存在或非自然存在于核酸的核苷，其中糖基不是核糖就是脱氧核糖(如双环糖或2′改良糖，如2′取代糖)，或糖基被改良(例如，5-甲基胞嘧啶)，或两者兼而有之。

“RNA单体”是指含有核酸糖和未经改良的核苷。

“DNA单体”是含有脱氧核糖和未经改良的核苷碱基的核苷。

“锁核酸单体”，“锁定单体”或“LNA单体”是指有双环糖的核苷类似物，本文中进一步说明如下。

“对应的核苷类似物”和“对应的核苷”是指，核苷类似物与核苷成分是相同的。例如，当“核苷”包含2-脱氧糖链接到腺嘌呤，其“对应核苷类似物”则包含，例如，改良后的链接到糖基腺嘌呤。

在此处所述化合物和本发明方法中使用的寡核苷酸单体均通过连接组结合在一起。相应的，每个单体通过连接组与3′邻近单体结合。

“连接组”或“核苷间连接”是指能够共价连接两个相邻的单体。具体例子包括磷酸盐组(在相邻核苷单体间形成磷酸二酯)和磷硫酰组(在相邻核苷单体间形成磷硫酰连接)。

适合的连接组包括WO 2007/031091中所列，比如，在WO 2007/031091第34页第一段中所列的连接组名单(在此纳入参考)。

在一些实例中，连接组正常的磷酸二酯会被改良，对核酸酶侵袭更具抵抗力，如磷硫酰或甲硼烷磷酸盐，可由核糖核酸酶H裂解，允许核糖核酸酶介导对目标基因表达的反义抑制。

在发明的内容中，“寡核苷酸”，“低聚化合物”和“低聚核苷酸”等术语可以互换，是指通过磷酸盐组(在相邻核苷单体间形成磷酸二酯)和磷硫酰组(在相邻核苷单体间形成磷硫酰连接)与两个或两个以上邻近的单体共价形成的分子。寡核苷酸含有或由10-50单体组成，比如10-30单体。

在某些实例中，寡核苷酸包括核苷或核苷类似物，或其混合物。“LNA寡核苷酸”或“LNA低聚核苷酸”，是指包含一个或多个LNA单体的低聚核苷酸，如下第6.1.2节所定义。

核苷类似物，寡核苷酸中所含可选核苷类似物的作用等同于相应的核苷，或也可能有特别改进的功能。寡核苷酸中所含的一些单体或全部单体都是核苷类似物的，都往往优于其原始形式，因为他们渗透细胞膜的能力增加了，且对额外的和/或细胞内的核酸酶具有良好的抵抗性，对目标核酸有高亲和性。LNA单体在这方面更是首选。

在很多的实例中，存在于寡核苷酸中的一个或多个核苷类似物与和相应的天然核苷相比，其功能更“不明显”或“等效”的，也就是说，不会对寡核苷酸抑制目标基因表达有功效。但是这种“等效”核苷类似物还是很有用的，例如，它们更容易生产或成本更低廉，在生产或储存过程中性质更稳定，或者可以加上标签分类。但是，通常对于寡核苷酸对表达抑制，类似物会有功效，例如能增加与目标区域的目标核酸的亲和性和/或增加细胞内核酸的抵抗力和/或使其更容易进入细胞。

在很多的实例中，依据本发明，寡核苷酸包括核苷单体和至少一个核苷类似物单体，如LNA单体，或其他核苷类似物单体。

“至少一个”指大于或等于1的整数，如1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20以此类推。在很多的实例中，比如当指的是本发明化合物的核酸或蛋白质标靶时，“至少一个”应包括“至少二个”，“至少三个”和“至少四个”。同样，在一些实例中，“至少两个”应包括“至少三个”和“至少四个”。

在一些实例中，寡核苷酸由10-50个相近单体组成如10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29或30个连续单体。

在一些实例中，寡核苷酸由10-25个单体，或10-16个或12-16单体组成。

在各种实例中，寡核苷酸包括10-25个连续的单体，10-24个连续的单体，12 25个或12-24个或10-22个连续的单体，比如12-18个连续单体，13 17个或12-16个连续的单体，如13，14，15，16个连续的单体。

在很多的实例中，寡核苷酸包括10-22个连续的单体或10-18个，比如12-18个或13-17个或12-16个，如13，14，15或16个连续的单体。

在一些实例中，寡核苷酸包括10-16个或12-16个或12-14个连续单体。在其它实例中，寡核苷酸包括14-18个或14-16个连续单体。

在很多的实例中，寡核苷酸包括10，11，12，13或14个连续的单体。

在很多的实例中，在本发明药学组合物和方法中使用的寡核苷酸由不超过22个连续单体组成，比如不超过20个连续单体，不超过18个连续单体，例如15，16或17个连续单体。在某些实例中，本发明寡核苷酸包括低于20个连续的单体。

在很多的实例中，本发明寡核苷酸不包括RNA单体。

在很多的实例中，寡核苷酸是线性分子或线性合成。在这样的实例中，寡核苷酸是一个单股分子，通常不包括类似至少有3，4或5范围的连续单体，与在同一寡核苷酸中的其他区域互补，这样，寡核苷酸就形成了一个内部双链体。在很多的实例中，大体上没有双股，即不是siRNA。

在一些实例中，寡核苷酸由连续的伸展单体组成，其排列同本文披露的SEQ ID No(见表1)。在其它实例中，寡核苷酸包括一个第一区域，该区域由邻近的伸展单体组成，还有一个或多个附加的区域，有至少一个另外的单体组成。在一些实例中，第一区序列同本文所披露的SEQ ID No。

1.5.2锁核酸(LNA)单体

“LNA单体”是指含有双环苷糖(即LNA糖)的核苷类似物。“LNA低聚核苷酸”和“LNA寡核苷酸”是指含有一个或多个LNA单体的寡核苷酸。

在某些实例中，本发明组合物和方法所使用的低聚核苷酸化合物中的LNA具有一般式I的结构：

其中X选自-O-，-S-，-N(R^N*)-，-C(R⁶R^6*)-；

B选自氢，任选取代的C1-4-烷氧基，可选C_1-4-烷氧基替代，可选C_1-4烷基替代，也可选酰氧基，核酸碱基，DNA嵌入剂，光化学活性基团，热化学活性基团，螯合物基团，信使基团和配体来替代；

P为随后的单体或5′-端基团指定了一个核苷间连结的基位置，这种核苷间连结或5′-端基团可选包括替代品R⁵或同样适用替代品R^5*；

P^*为随后的单体或3′-端基团指定一个核苷间连结；

R^4*和R^2*共同指定一个由选自-C(R^aR^b)-，-C(R^a)＝C(R^b)-，-C(R^a)＝N-，-O-，-Si(R^a)₂-，-S-，-SO₂-，-N(R^a)-，和＞C＝Z的1-4组/原子组成的双游离基。

其中Z选自-O-，-S-，and-N(R^a)-，R^a和R^b各自独立选自氢，可选C_1-12烷基替代，可选C_2-12链烯基替代，可选C_2-12-炔基，氢氧基，C_1-12-烷氧基和C_2-12-碱氧烷基和C_2-12-链烯氧基，羧基，C_1-12-烷氧羰基，C_1-12羰基烷基，甲酰，芳基，芳氧

羰基，芳氧基，羰基芳，杂芳基，杂芳氧-羰基，氧杂环，杂芳基，氨基酸，单和双(C_1-6烷基)氨基，氨基甲酰，单和双(C_1-6-烷基)氨基-羰基，氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，单和双(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，C_1-5-烷基-羰基氨，脲基，C_1-6链烷酰氧基，硫酸基，C_1-6-烷基磺酰氧基，硝基，叠氮，硫烷基，C_1-6-烷硫基，卤素，DNA嵌入剂，光化学活性基团，热化学活性基团，螯合组，信使基团和配体替代，其中芳基和杂芳基可选为替代，其中两个胺基替代R^a和R^b共同指定可选亚甲基(＝CH2)，如果其每一个替代物R^1*，R^2*，R^3*，R⁵，R^5*，R⁶和R^6*各自独立选自C_1-12-烷基替代，C_2-12-链烯基，C_2-12-炔基，氢氧基，C_1-12-烷氧基和C_2-12-碱氧烷基和C_2-12-链烯氧基，羧基，C_1-12-烷氧羰基，C_1-12羰基烷基，甲酰，芳基，芳氧-羰基，芳氧基，羰基芳，杂芳基，杂芳氧-羰基，氧杂环，杂芳基，氨基酸，单和双(C_1-6烷基)氨基，氨基甲酰，单和双(C_1-6-烷基)氨基-羰基，氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，单和双(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，C_1-6-烷基-羰基氨，脲基，C_1-6链烷酰氧基，硫酸基，C_1-6-烷基磺酰氧基，硝基，叠氮，硫烷基，C_1-6-烷硫基，卤素，DNA嵌入剂，光化学活性基团，热化学活性基团，螯合组，信使基团和配体替代，其中芳基和杂芳基可选替代，并两个胺基取代可共同指定氧，硫代，亚胺基，或选亚甲基，或共同形成一个由1-5个碳原子烯链组成的螺双游离基，该一个或多个杂原子/组选自-O-，-S-，和-(NR^N)-，其中R^N选自氢氧基和C1-4-烷基，并且两个相邻的(非胺基)替代物可指定一个额外的粘合剂，从而产生双键；当存在但不是存在于一个双游离基中，R^N*是选自氢氧基和C_1-4-烷基；和基本盐类和酸加成盐；

在某些实例中，R⁵*是选自H，-CH₃，-CH₂-CH₃，-CH₂-O-CH₃，和-CH＝CH₂。

在很多的实例中，R^4*和R^2*共同从-C(R^aR^b)-O-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-O-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-O-，-C(R^aR^b)-O-C(R^cR^d)-，-C(R^aR^b)-O-C(R^eR^d)-O-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-C(R^eR^f)-，-C(R^a)＝C(R^b)-C(R^cR^d)-，-C(R^aR^b)-N(R^c)-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-N(R^e)-，-C(R^aR^b)-N(R^c)-O-，and-C(R^aR^b)-S-，-C(R^aR^b)-C(R^cR^d)-S-中指定一个双游离基，其中R^a，R^b，R^c，R^d，R^e，和R^f各自独立从氢氧基，可选C_1-12烷基替代，可选C_2-12链烯基替代，可选C_2-12-炔基，氢氧基，C_1-12-烷氧基和C_2-12-碱氧烷基和C_2-12-链烯氧基，羧基，C_1-12-烷氧羰基，C_1-12羰基烷基，甲酰，芳基，芳氧

羰基，芳氧基，羰基芳，杂芳基，杂芳氧-羰基，氧杂环，杂芳基，氨基酸，单和双(C_1-6烷基)氨基，氨基甲酰，单和双(C_1-6-烷基)氨基-羰基，氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，单和双(C_1-6-烷基)氨基-C_1-6-烷基-氨羰基，C_1-6-烷基-羰基氨，脲基，C_1-6链烷酰氧基，硫酸基，C_1-6-烷基磺酰氧基，硝基，叠氮，硫烷基，C_1-6-烷硫基，卤素，DNA嵌入剂，光化学活性基团，热化学活性基团，螯合组，信使基团和配体替代，芳基和杂芳基可选替代并且两个氨基替代R^a和R^b可共同指定可选亚甲基(＝CH2)替代。

再进一步的实例中，在R⁴*和R²*可共同从-CH₂-O-，-CH₂-S-，-CH₂-NH-，-CH₂-N(CH₃)-，-CH₂-CH₂-O-，-CH₂-CH(CH₃)-，-CH₂-CH₂-S-，-CH₂-CH₂-NH-，-CH₂-CH₂-CH₂-，-CH₂-CH₂-CH₂-O-，-CH₂-CH₂-CH(CH₃)-，-CH＝CH-CH₂-，-CH₂-O-CH₂-O-，-CH₂-NH-O-，-CH₂-N(CH₃)-O-，-CH₂-O-CH₂-，-CH(CH₃)-O-，CH(CH₂-O-CH₃)-O-中指定一个双游离基。

对于所有的手性中心，不对称基团可能会是R或S去向。

在很多的实例中，根据公式(Ⅱ)或(Ⅲ)寡核苷酸中使用的LNA单体包括至少一个LNA单体：

其中Y是-O-，-O-CH₂-，-S-，-NH-，or N(R^H)；Z和Z*都是独立选自核苷间连结，端基组或一个保护组；B构成未经改良的基础基或改良的基础基，自然存在或不自然存在于核酸中，其中R^H选自氢氧基和C_1-4-烷基。

在本发明很多的实例中所使用的单体方程式(Ⅳ)-(Ⅷ)如下：

“硫代-LNA”指的是LNA单体中的Y，方程式如上图(Ⅱ)，选自S或-CH2-S-。硫代-LNA可在β-D或α-L的结构中。

“氨基-LNA”指的是LNA单体中的Y，方程式如上图(Ⅱ)，选自-N(H)-，N(R)-，CH₂-N(H)-，and-CH₂-N(R)-，其中R选自氢氧基和C_1-4-烷基＝。氨基-LNA，可在β-D或α-L结构中。

“氧-LNA”指的是LNA单体中的Y，方程式如上图(Ⅱ)，表示O-或-CH₂-O-。氧-LNA可在β-D或α-L结构中。

“ENA的”指的是LNA单体中的Y，方程式如上图(Ⅱ)，是-CH2-O(其中-CH2-O中的氧原子是附着在2′-的相对位置基乙)。

在某些实例中，LNA单体选自β-D-氧-LNA单体，α-L-氧-LNA单体，β-D-氨基-LNA单体和β-D-硫代-LNA单体，特别是β-D-氧-LNA单体。

在当前情况下，“C_1-4-烷基”是指直链或支链饱和烃链，其中该链有一至四个碳原子，如甲基，乙基，n-丙基，异丙基，N-丁基，异丁基，仲丁基和叔丁基。

含锁核酸(LNA)的寡核苷酸代表了新一代反义寡核苷酸。不同于以往的聚核苷酸，LNA单体中的核苷LNA单体其糖内有一個设计过的O2′到C4′键(见上图Ⅳ-Ⅷ)。在3’-内部结构的组成中，核酸糖的这种稳定或“锁定”更易与RNA结合。因此，与传统DNA寡核苷酸相比，LNA寡核苷酸与RNA具有更高的亲和性。此外，LNA的改良本质上提高了核酸酶抵抗力，并允许在长度上减少低核苷酸(见，例如，Vester B，et al.LNA(锁核酸)：高亲和性互补RNA和DNA。生物化学。2004.10.26；43(42)：13233-41；Laurit sen A，et al.膦酸甲酯LNA：锁核酸与膦酸甲酯结合。Bioorg Med Chem Lett.2003.1.20；13(2)：253-6)。

含有LAN单体的LNA单体和低核苷酸，可通过技术领域中已知的一些方法制成。在某些实例中，LNA单体和LNA低核苷酸，可以通过PCT公布号为WO 07/031081中所披露的程序来制成，该披露内容纳入此处参考。

1.5.3其他核苷类似物单体和结合

在很多的实例中，寡核苷酸中存在的单体至少有一个是核苷类似物，包含改良碱基，比如选自5-甲基胞嘧啶，异胞嘧啶，假异胞嘧啶，5-溴尿嘧啶，5-炔尿嘧啶，6-氨基嘌呤，2-氨基嘌呤，肌核苷，2氨基嘌呤，2-氯-6-氨基嘌呤，黄嘌呤和次黄嘌呤，和/或改良糖，如改良糖基以提供2′替代组，如2′-O-烷基-核酸糖，2′-氨基-脱氧核糖，2′-氟-脱氧核糖和2′-O-甲氧乙基-核酸糖(2′MOE)，或如上所述的LNA糖，阿拉伯糖(“ANA单体”)，或2′-氟-阿拉伯糖，或d-阿拉伯-已糖醇糖(“HNA单体”)。

此处所述的关于核苷类似物在寡核苷酸中效用的特别实例，在，比如，Freier &Altmann；Nucl.Acid Res.，1997，25，4429-4443 and Uhlmann；Curr.Opinion in DrugDevelopment，2000，3(2)，293-213中有描述，或在PCT公布号WO 2007/031091中有描述或参考，在此都纳入本文参考。

在很多的实例中，寡核苷酸中增强亲和性核苷类似物(即：核苷类似物提高了寡核苷酸/目标区域双链体的稳定性(Tm))，如LNA单体或含有2′-替代糖的单体，或增强核酸酶抵抗力的改良连接组。在很多的实例中，这种增强核苷亲和性的类似物的结合，使寡核苷酸的规模会有所减小，使较短的寡核苷酸排列更具特异性。当指特定的寡核苷酸的碱基序列时，在某些实例中，寡核苷酸由增强亲和性的核苷类似物组成，比如相应的LNA单体或其他相应的核苷类似物。

由核苷和/或核苷类似物单体组成的低核苷酸可在技术领域中已知的方法合成。在一些实例中，本发明的方法和化合物中使用的低核苷酸，可使用标准固相亚磷胺化学法用碘氧化通过DNA自动合成器合成。β-氢乙烷二异丙基-亚磷酰胺就可以在美国应用生物系统公司买到(加利福尼亚州福斯特城市)。在本发明的方法和化合物中用于制作寡核苷酸化合物的改良单体，可在技术领域已知的方法制成，比如Jones R.和Herdewi jn P在《Current Protocolsin Nucleic Acid Chemi stry》(John Wiley & Sons，Inc.，eds.2008)中所述。

在一些实例中，在寡核苷酸至少2个连续单体间的连结并非磷酸二酯连结。

在某些实例中，寡核苷酸包括至少一个含有改良碱基的单体，至少一个含有改良糖的单体(可能是相同的单体)，和至少一个非自然存在的除单体连结。

1.5.4空缺分子(Gapmer)设计

在某些实例中，本发明寡核苷酸是一个空缺分子。

“空缺分子”是一种包含能吸收RNAse的连续伸展单体的寡核苷酸(如RNAseH)，下文有进一步描述，比如至少有6或7个单体的区域，在此统称为B区域，在其两侧的5′和3′端区域分别与被称为A区域和C区域相连，区域A和C都含有核苷类似物，如增强亲和性的核苷类似物，如1-6增强亲和性类似物，例如LNA核苷酸。

在某些实例中，区域A和C中的核苷类似物，如上所述包含糖基改良，寡核苷酸或此处区域中所有核苷类似物也含有同样改良糖基。在各种实例中，核苷类似物包含2′-MOE糖，2′-氟-脱氧核糖或LNA糖。寡核苷酸中的核苷类似物，可以单独选择这三种类型。在某些含有核苷类似物的寡核苷酸实例中，寡核苷酸中至少有2，3，4，5，6，7，8，9或10个核苷类似物中含有2′MOE-糖。在某些实例中，至少有一个核苷类似物包含2′-氟-脱氧核糖。在很多的实例中，寡核苷酸中至少有2，3，4，5，6，7，8，9或10个核苷类似物含有2′-氟-脱氧核糖。

通常情况下，空缺分子包括的区域，从5′到3′，A-B-C，或有选择的A-B-C-D或D-A-B-C，其中：A区包括至少一个核苷类似物，如至少有一个LNA单体，如1-6核苷类似物，如LNA单体；区域B包括至少5个连续单体且能够吸收RNAse，(当与目标RNA分子的互补目标区域形成双链体，例如，目标mRNA)，如DNA单体；C区包含或由至少一个核苷类似物组成，如至少一个LNA单体，如1-6核苷类似物，如LNA单体；区域D，如果有，由1，2或3个单体构成，如DNA单体。

在很多的实例中，A区包含1，2，3，4，5或6个核苷类似物，如LNA单体，如2-5核苷类似物，如2-5LNA单体，如3个或由4个核苷类似物，如3个或4个LNA单体；和/或C区由1，2，3，4，5或6个核苷类似物组成，如LNA单体，如2-5核苷类似物，如2-5LNA单体，如3个或4个核苷类似物，如3个或4个LNA单体。在一些实例中所有核苷类似物都是LNA单体。

在某些实例中，B区由5，6，7，8，9，10，11或12个连续的单体组成，能吸收RNAse，或6-10或7-9，比如8个能够吸收RNAse的连续单体。在某些实例中，B区包括至少一个DNA单体，如1-12个DNA单体，或4-12个DNA单体，或6-10个DNA单体，如7-10DNA单体，或8，9或10个DNA单体。

在某些实例中，A区由3或4个核苷类似物组成，如LNA单体，B区由7，8，9或10个DNA单体组成，C区由3或4个核苷类似物组成，如LNA单体。这些设计包括(A-B-C)3-10-3，3-10-4，4-10-3，3-9-3，3-9-4，4-9-3，3-8-3，3-8-4，4-8-3，3-7-3，3-7-4，4-7-3，还可能进一步包括区域D，D区可能有一个或2个单体，如DNA单体。

在某些实例中，寡核苷酸由10，11，12，13或14个连续单体构成，其中，寡核苷酸区域具有模式(5′-3′)，A-B-C，或有选择性的A-B-C-D或D-A-B-C，其中A区由1，2或3个核苷类似物组成，如LNA单体；B区由7，8或9个连续单体组成，且可吸收RNAse，当与互补RNA分子(如目标mRNA)形成双链体时；C区由1，2或3个核苷类似物构成，如LNA单体。如果存在，区域D由单个DNA单体构成。

在某些实例中，A区由1个LNA单体构成。在某些实例中，A区由2个LNA单体构成。在某些实例中，A区由3个LNA单体构成。在某些实例中，C区由1个LNA单体构成。在某些实例中，C区由2个LNA单体构成。在某些实例中，C区由3个LNA单体构成。在某些实例中，B区由7个核苷单体构成。在某些实例中，B区由8个核苷单体构成。在某些实例中，B区由9核苷单体构成。在某些实例中，B区包含1-9个DNA单体，如2，3，4，5，6，7或8个DNA单体。在某些实例中，B区由DNA单体构成。在某些实例中，B区包含至少一个LNA单体，存在于α-L的结构中，如2，3，4，5，6，7，8或9个存在于α-L的结构中的LNA单体。在某些实例中，B区包括至少一个α-L型LNA氧基单体。在某些实例中，所有区域B中的LNA单体，都以α-L-氧LNA单体的形式存在于α-L的结构中。在某些实例中，寡核苷酸A-B-C区中存在的单体数量是选自如下组，包括(核苷类似物单体-B区-核苷类似物单体)：1-8-1，1-8-2，2-8-1，2-8-2，3-8-3，2-8-3，3-8-2，4-8-1，4-8-2，1-8-4，2-8-4，或；1-9-1，1-9-2，2-9-1，2-9-2，2-9-3，3-9-2，1-9-3，3-9-1，4-9-1，1-9-4，或；1-10-1，1-10-2，2-10-1，2-10-2，1-10-3和3-10-1。在某些实例中，本发明寡核苷酸A-B-C区存在的单体数量选自以下组，包括：2-7-1，1-7-2，2-7-2，3-7-3，2-7-3，3-7-2，3-7-4和4-7-3。在某些实例中，区域A和C，都是由2个LNA单体组成，区域B由8或9个核苷单体组成，在某些实例中都是由DNA单体组成。

在很多的实例中，其他空缺分子设计包括区域A和/或C由3，4，5或6个核苷类似物组成，如含有2′-O-甲氧乙基-核酸糖(2′MOE)或2′-氟-脱氧核糖的单体；和B区由8，9，10，11或12个核苷组成，如DNA单体，则A-B-C区有5-10-5或4-12-4个单体。

在一些实例中，空缺分子s含有本文所述含硫连结组。在各种实例中，空缺分子s含有硫代磷酯连接组，特别是在缺口区域(B)。

在某些实例中，硫代磷酯键在侧翼区(A和C)将单体连结在一起。在很多的实例中，硫代磷酯键将区域A或C连接到D区，在D区内将单体连结在一起。

在很多的实例中，区域A，B和C由连结组而不是硫代磷脂组成，比如磷酸二酯连结，特别是(例如，LNA单体)用核苷类似物保护区域A和C内的连结避免核酸内切酶降解。

在很多的实例中，由硫代磷酯连接组将寡核苷酸相邻的单体互相连结。

周所周知，诸如一个或两个连结，在寡核苷酸中的中心硫代磷酯，特别是在核苷类似物单体之间或毗邻的核苷类似物单体(通常在区域A和/或C)的硫代磷酯连结组等，此类磷酸二酯键的内涵物，可以改善生物利用度和/或寡核苷酸生物分布。见WO 2008/053314，已纳入参考。

在某些实例中，如上面提到的实例，适当的且没有明确表示，所有剩余的连结组是磷代二酯还是硫代磷酯，或其混合物。

在一些实施的所有核苷间连结组都是硫代磷酯。

提及具体空缺分子低核苷酸排列，如此处所述，会被理解为，在很多的实例中，当连结是硫代磷酯连结，可选连结如本文所披露，例如磷酸盐(磷代二酯)连结也可以使用，特别是核苷类似物之间的连结，如LNA单体。

附加空缺分子设计在WO 2004/046160和WO 2007/146511A2中披露，现予纳入参考。美国临时申请977/60,409，指“短分子(shortmer)”空缺分子寡核苷酸，现纳入参考。在一些实例中，低聚可能就是指短分子空缺分子。

1.5.5寡核苷酸排列及其特异性

本发明方法和组合物中所使用的寡核苷酸混合生成核酸HER3和/或HER2和/或EGFR多肽。

“核酸”和“多核苷酸”此处可以互换使用，并定义为如上所述，由两个或两个以上的单体共价连接形成的分子。“核酸”包括2个或更多的单体，可以是任意长度，类属于“寡核苷酸”，其长度此处有描述。“核酸”和“多核苷酸”包括单链，双链，部分双链和循环分子。

在很多的实例中，此处所指“目标核酸”，是指(如DNA或RNA)编码为哺乳动物HER3多肽的核酸。(例如，人类HER3mRNA，序列如SEQ ID 197，或哺乳动物mRNAs有基因库登录号NM_001005915，NM_001982和交替拼接形式NP_001973.2和NP_001005915.1(人类)；NM_017218(小鼠)；NM_010153(鼠)；NM_001103105(牛)，或预测mRNA序列基因库登录号XM_001491896(马)，XM_001169469和XM_509131(黑猩猩))。

在很多的实例中，“目标核酸”还包括编码为哺乳动物HER2多肽的核酸(例如，哺乳动物mRNAs基因库登录号为NM_001005862和NM_004448(人类)；NM_017003和NM_017218(小鼠)；NM_001003817(鼠)；NM_001003217(狗)和NM_001048163(猫))。

在很多的实例中，“目标核酸”还包括编码为哺乳动物EGFR多肽的核酸(例如，哺乳动物mRNAs基因库登录号NM_201284，NM_201283，NM_201282和NM_005228(人类)；NM_007912和NM_207655(鼠)；NM_031507(小鼠)和NM_214007(猪))。

众所周知，上述披露的基因库登录号是指cDNA序列，而不是mRNA本身序列。成熟的mRNA序列，可以直接由相应的cDNA序列衍生，用尿嘧啶盐基(U)代替胸腺嘧啶盐基(T)。

在很多的实例中，“目标核酸”还包括编码核酸HER3(和可选一个或多个HER2和EGFR)及其自然发生的变体，和由此衍生的RNA核酸，如成熟前mRNA或成熟的mRNA。根据本发明寡核苷酸通常有能力混合生成目标核酸。

所谓“其自然发生的变体”指的是HER3(或HER2或EGFR)多肽的变体或自然存在于分类群内的变体，如哺乳动物，老鼠，猴子和人类。通常，当提及多核苷酸的“自然发生的变体”也可能包含HER3(或HER2或EGFR)编码染色体的DNA的任何等位变体，其已经在染色体Chr 12：54.76-54.78Mb RNA中通过染色体易位或复制被发现，还可能包含如其衍生物mRNA。当涉及到特定的的多肽序列，例如，该术语也包括自然产生的蛋白质形式，该蛋白质可能经过诸如同期或后期转译改良，如信号肽裂解，裂解蛋白，糖基化等，

在某些实例中，此处所述寡核苷酸通过Watson-Crick碱基配对，Hoogsteen氢键结合(“目标区”)，或逆转Hoogsteen氢键结合，绑定到在寡核苷酸单体和目标核酸单体之间的目标核酸区。这种绑定也被称为“杂交”。除非另有说明，绑定即是通过Watson-Crick互补碱基(即胸腺嘧啶和腺嘌呤(DNA)或尿嘧啶(RNA)，鸟嘌呤和胞核嘧啶)配对，因为寡核苷酸序列与目标区域反向互补序列一致或部分一致，所以寡核苷酸要绑定目标区域；出于该目的，寡核苷酸对于目标区域而言被认为是“互补”或“部分补充”，寡核苷酸序列与目标区域“互补”的程度，就是与目标区域反向互补序列的一致程度。

除非另有明确说明，这里“目标区域”即目标核酸区，且拥有与具体寡核苷酸(或该区)反向互补序列最佳结合的序列，用如下所述的调整序列方案和参数。

为了确定本发明(或该区域)方法和组合物中使用的聚合物与包含有编码为哺乳动物的HER3(或HER2或EGFR)目标核酸区域的互补程度，此处所阐述的“互补”程度(也称“同源性”)表示为寡核苷酸(或该区域)与最佳结合的目标区域反向互补序列之间的的一致程度。该百分比的计算方法是计算两个序列一致的结合基数量，除以寡核苷酸(或该区域)中连续单体的总数，再乘以100。在这样的比较中，如果存在差别，有些是细微的不匹配，有些差别中单体的数量所在区域在本发明寡核苷酸和目标区域之间不同，两者相比较来说，细微的不匹配是可取的。

出于发明的目的，氨基酸和多核苷酸排列，相同序列比例源，以及互补程度应使用ClustalW运算法则确定，使用标准设置：见http://www.ebi.ac.uk/emboss/align/index.html，方法：EMBOSS::水(当地)：缺口＝10.0，缺口扩大＝0.5，使用Blosum 62(蛋白质)，或DNAfull核苷酸/核苷碱基序列。

根据上下文，“不匹配”是指序列的不同一性，(例如，寡核苷酸核苷碱基和目标区域绑定物的逆补之间；如例子所述，在编码为核酸的两个对准的HER3的碱基序列之间)，或非互补序列(例如，寡核苷酸和绑定的目标区域之间)。

寡核苷酸(或结合物，下文有进一步说明)有相称的能力抑制(例如，下调)HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)基因表达的能力。

在很多的实例中，在本发明方法和组合物中使用的寡核苷酸，比较治疗前水平，能达到至少10％的抑制HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)mRNA的作用，更好的情况下至少20％，比较治疗前表达水平，再好的情况下至少30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或95％。在很多的实例中，本发明聚合物，比较治疗前水平，能达到至少10％的抑制HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)蛋白质表达的作用，更好的情况下至少20％，比较治疗前表达水平，再好的情况下至少30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或95％。在一些实例中，当使用1nM本发明寡核苷酸或结合物时，这种抑制效果是可见的。在很多的实例中，当使用25nM寡核苷酸或结合物时，这种抑制是可见的。

在很多的实例中，对mRNA表达的抑制不足100％(即不能完全抑制表达)，如小于98％，低于95％，低于90％，低于80％，低于70％。在很多的实例中，对蛋白表达的抑制效果不足100％(即不能完全抑制表达)，如低于98％，低于95％，低于90％，低于80％抑，低于70％。

另外，表达水平的调制可以通过测量mRNA水平而定，例如：印迹法或定量RT-PCR。当采用mRNA水平测量时，抑制水平应使用适当的剂量，比如1和25nM，在很多的实例中，在不使用本发明化合物的情况下，通常可以达到10-20％的水平。

调节(即抑制或增加)表达水平也可通过测量蛋白质水平而定，如采用蛋白质低分子量标准然后用西方墨点法，培养合适的目标蛋白质抗体。

在一些实例中，本发明提供的寡核苷酸，可抑制(例如，下调)一个或多个交替拼接亚型HER3mRNA表达和/或由此衍生的蛋白质表达。在一些实例中，本发明提供的寡核苷酸可以抑制一个或多个HER3(基因库登录号为NP_001973.2和NP_001005915.1)的蛋白异构体表达，和/或编码为HER3蛋白异构体(基因库登录号为NM_001982和NM_001005915.1)的核酸表达。在一些实例中，编码为HER3异构体1的mRNA即是目标核酸。在其它实例中，编码为HER3异构体2的mRNA即是目标核酸。在某些实例中，编码为HER异构体1和HER3异构体2的核酸即是目标核酸，例如，寡核苷酸同SEQ ID序列号：180的序列。

在很多的实例中，本发明提供的寡核苷酸或其第一区域，有一个与HER3核酸中目标区域的序列互补的列碱基序列，其中，寡核苷酸下调HER3mRN和/或HER3蛋白质表达和下调mRNA表达和/或一个或多个其他ErbB受体酪氨酸酶家族成员的蛋白质，比如HER2和/或EGFR。寡核苷酸或其第一区域，能有效地绑定两个不同的ErbB受体家族的核酸(如HER2和HER3mRNA)，下调mRNA和/或两个被称为“双特异性抗体”的目标蛋白。寡核苷酸或其第一区域，能绑定三个不同的ErbB受体家族成员的目标区域，能够有效地下调所有三个被称为“三元”的基因。在很多的实例中，本发明低聚化合物可能是多特异性的，即能绑定受体酪氨酸激酶ErbB家族多种成员的目标核酸的目标区域，并下调其表达。本文所指“双特异性”和“三元”应理解为不受任何方式限制。例如，“双特异性低聚体”可能对第三目标核酸有一些影响，而“三元寡核苷酸”可能对三个目标核酸其中之一有非常微弱影响甚至可忽略不计。

在很多的实例中，双特异性低聚体，或其第一区，能绑定HER3核酸的目标区域，和HER2目标核酸的目标区域，并能有效下调HER3表达和HER2 mRNA和/或蛋白质。在某些实例中，双特异性低聚体不能下调HER3 mRNA表达和/或蛋白质和HER2mRNA和/或相同程度的蛋白质。在其它实例中，本发明的双特异性低聚体或其第一区，能够绑定HER3目标核酸的目标区域和EGFR目标核酸的目标区域，并有效地下调HER3 mRNA表达和/或蛋白质和EGFR mRNA和/或蛋白质。在不同实例中，双特异性低聚体不能下调HER3 mRNA的表达和/或蛋白质和EGFRmRNA和/或相同程度的蛋白质。还有一些其他实例中，三元寡核苷酸或其第一区，能绑定HER3目标核酸的目标区域，和受体酪氨酸酶目标核酸的两个其他ErbB家族的目标区域，并有效下调HER3 mRNA表达和/或蛋白质和mRNA和/或受体酪氨酸酶的两个其他ErbB家族蛋白质。在很多的实例中，三元寡核苷酸或其第一区，能够有效下调HER3 mRNA表达和/或蛋白，EGFRmRNA表达和/或蛋白质。在很多的实例中，三元寡核苷酸不能下调HER3 mRNA的表达和/或蛋白质，HER2mRNA的表达和/或蛋白质和EGFR mRNA和/或相同程度的蛋白质。

本发明方法和药物组合物中使用的寡核苷酸，通常可绑定人类HER3和/或人类HER2和/或人类EGFR mRNA的目标区域，该寡核苷酸由与例如，SEQ ID No197，SEQ ID No：198和/或SEQ ID No：199序列互补或部分互补的碱基序列组成。在某些实例中，本发明药物组合物和方法中使用的寡核苷酸，与例如SEQ ID No：197，198或199的最佳结合目标区域相比，可选包括1，2，3，4或更多不匹配碱基。

在一些实例中，本发明方法和药物组合物中使用的寡核苷酸序列与SEQ ID NOs：200-227，1-140和228-233(见下文表1)。在其它实例中，本发明方法和药物组合物中使用的寡核苷酸序列，不同于一个，两个或三个碱基的序列，与SEQ ID No：200-227，1-140和228-233相比。在一些实例中，寡核苷酸包括10-16个连续的单体。以包含16个连续的单体的低聚体为例，其序列如SEQ ID No：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139和140。更短序列可由此衍生，例如，较短寡核苷酸序列可同等地存在于选自含有SEQ IDNos：200-227，1-140和228-233序列的寡核苷酸区域中。在很多的实例中，更长的寡核苷酸包括含有至少10个连续单体的序列，并同等地存在于SEQ ID No：200-227，1-140和228-233中。人类HER3 mRNA的目标区域与含有SEQ ID No：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139和140序列的寡核苷酸是互补的，如图1所示(粗体带下划线，与上述相应寡核苷酸SEQ ID Nos)。

在很多的实例中，寡核苷酸具有SEQ ID No：141-168显示的碱基序列。在某些实例中，寡核苷酸是LNA寡核苷酸，例如，那些具有SEQ ID Nos：169-196和234的序列，尤其是那些具有SEQ ID Nos：169，170，173，174，180，181，183，185，187，188，189，190，191，192和194碱基序列的。在各种实例中，寡核苷酸是LNA寡核苷酸，比如那些具有SEQ IDNos：169，170，172，174，175，176和179碱基序列的。在一些实例中，寡核苷酸或地区及其构成或组成一个碱基序列中的SEQ身份证号显示：169，180或234。在一些实施方案，本发明的结合物包括具有SEQ ID Nos：169，180或234碱基序列的寡核苷酸。

在某些实例中，本发明方法和使用的化合物中的寡核苷酸，可能由适当的区构成，该区有特定的序列，例如选自SEQ ID No：200-227的序列，同等地存在于较短的寡核苷酸中，该较短寡核苷酸也可能被用于本发明的方法和所使用的化合物中。在很多的实例中，该区包括10-16个单体。例如，寡核苷酸具有SEQ ID Nos：200-227的碱基序列，每个都包含一个区，且该区序列分别同等地存在于如具有SEQ ID Nos：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139和140序列的较短单体中。在一些实例中，少于16个单体的寡核苷酸，如10，11，12，13，14或15个单体，有至少8个区，至少有9个区，至少有10个区，至少有11个区，至少12个区，至少有13个区，至少有14个或15个区，连续单体的序列等同地存在于具有序列如SEQ ID NOS：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139或140的寡核苷酸中。因此，在很多的实例中，短寡核苷酸序列是来自于较长寡核苷酸的序列。在一些实例中，寡核苷酸含有此处披露的SEQ ID Nos的序列，或至少其10个连续单体的序列，都同等的存在于较长寡核苷酸中。在本发明制药成分和方法中使用的寡核苷酸，都包括第一区，且其序列等同存在于SEQ ID Nos：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139，或140，如果寡核苷酸长于第一区，那么等同存在于SEQID Nos：1，16，17，18，19，34，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，74，75，76，91，92，107，122，137，138，139，或140，寡核苷酸的侧翼区序列与目标核酸的侧翼目标区域是互补的。这样的两个寡核苷酸是SEQ ID No：1和SEQ ID No：54。

在很多的实例中，寡核苷酸包括单体序列组成或由单体序列组成，且单体序列与编码哺乳动物HER3目标核酸的目标区域是完全互补的(完美互补)。

然而，在一些实例中，与HER3目标核酸最佳结合区相比，寡核苷酸序列包括：1，2，3或4(个或更多)不匹配，但仍然足以绑定目标区域达到抑制HER3或蛋白表达的作用。不匹配对Watson-Crick氢键双链体的影响可能，例如，会通过增加寡核苷酸长度或增加核苷类似物数量来弥补，核苷类似物如存在于寡核苷酸中的LNA单体。

在很多的实例中，寡核苷酸碱基序列包括不超过3个，与目标核酸目标区最佳排列的碱基序列，例如编码为哺乳动物HER3的核酸相比不超过2个不匹配。

在很多的实例中，本发明组合物或方法中使用的寡核苷酸的碱基序列或其区域与选自SEQ ID NOS：200-227，1 140和228 233中的序列，至少有80％相同，如至少85％以，至少有90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，甚至100％相同。

在不同实例中，寡核苷酸碱基序列或其第一区与SEQ ID NOs：197，198和/或199序列，至少有80％的互补，如至少85％，至少有90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％，甚至100％的互补性。

在很多的实例中，寡核苷酸序列(或其第一区)，选自SEQ ID Nos：200-227，1-140和228-233，或选自SEQ ID Nos：200-227，1-140和228-233的至少连续10个单体。在其它实例中，当与选出的序列和其区优化排列时，本发明制药成分和方法中使用的寡核苷酸的序列或其第一区可选由不同于含有SEQ ID Nos：200-227，1-140和228 233序列的寡核苷酸的1，2或3个碱基根组成，或可选其至少10个连续的单体组成。

在某些实例中，单体区由11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28或29个连续的单体组成，如在10-15，12-25，12-22之间，如12-18个单体。在各种适当的实例中，该区与本发明寡核苷酸的长度相同。

在一些实例中，寡核苷酸包括额外的5′或3′端的单体，如1，2，3，4或5个额外的5′和/或3′端单体，这些非互补的目标区序列。在很多的实例中，可能相同也可能不同，1，2或3个DNA或RNA单体位于3′端之侧。在某些实例中，额外的5’或3′单体都是核苷，比如DNA或RNA单体。在很多的实例中，5′或3′单体可能出现在D区，参考空缺分子寡核苷酸中的描述。

对于空缺分子序列(SEQ ID Nos：141-196和234)，黑体大写字母表示核酸包含一个LNA糖和小写字母表示2′-脱氧核苷。下标“S”表示相邻核苷间的硫磷酰连结。LNA单体中的所有胞嘧啶碱基都是5-甲基胞嘧啶。对于有24个核苷(SEQ ID Nos：211-227)的寡核苷酸，黑体带下划线的字母如表1所示，表示较短低聚化合物的碱基序列已被吸收到较长的寡核苷酸。

1.5.6轭合物

根据上下文披露，“共轭”所表示的化合物是通过寡核苷酸共价键结(“共轭”)形成的，如本文所述的一个或多个根本身不是核酸或单体(“共轭基”)。此类共轭基例子包括大分子化合物，如蛋白质，脂肪酸链，糖残基，糖蛋白，聚合物，或其组合。通常情况下，蛋白质可能是目标蛋白的抗体。典型的聚合物可能是聚乙二醇。WO 2007/031091提供合适的基和结合物，现予纳入参考。

因此，在一些实例中，本发明组合物和方法，利用文中所述由低聚体构成的共轭，和至少一个不是核酸或单体的共轭基，共价键合到寡核苷酸。因此，在某些实例中，寡核苷酸由指定碱基序列的连续单体组成，如本文披露，共轭还包括至少一个共价结合到寡核苷酸的共轭基。

在很多的实例中，结合物可以增强寡核苷酸的活性，细胞分布或细胞吸收。这种基包括但不限于，抗体，多肽，脂类基，比如胆固醇成分，胆酸，硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫，硫代胆固醇，脂肪质链，如十二醇或十一烷基残余，脂类，如二-十六烷基-消旋-甘油或三乙基1，2-二-O-十六烷基-消旋-甘油-3h-膦酸酯，聚胺或聚乙二醇链，金刚烷乙酸，棕榈基，十八胺或己基氨-羰基-羟胆固醇。

在某些实例中，寡核苷酸会共轭能增加低聚化合物细胞摄取的成分。

在某些实例中，低聚体会共轭活性药物，例如阿司匹林，布洛芬，磺胺类药物，降血糖，抗菌或抗生素类药物。

在某些实例中，共轭基团是固醇，如胆固醇。

在很多的实例，共轭基团包括或由带正电的聚合物组成，如一个带正电的肽，例如长度1-50，如2-20，3-10个氨基酸残基，和/或聚亚烷基氧化物，如聚乙二醇(PEG)或聚丙烯乙二醇-见WO 2008/034123，现纳入此处参考。带正电荷的高分子，如聚亚烷基氧化物，可能通过连接器被附着在寡核苷酸上，如WO 2008/034123描述的连接。

1.5.6.1.1活性寡核苷酸

本文中提到的“活性低聚体”同上文所描述的一样，是指一种低聚体。它与至少一个功能基进行共价连接(如功能键)，而此功能基可以让低聚体与一个或多个共轭根共价连接，例如：与本身不是核酸或单聚体的共轭根相连接，以形成此处所到的轭合物。通常来说，功能基由能够与低聚体共价粘接的化学物质组成，例如，3’-羟基或者腺嘌呤的环外NH2组织，其间隔具有亲水性，且能连接共轭根(如，氨基，巯基或羟基)。在一些实例中，这种终端基不受保护，例如氨基组。而在另外一些实例中，这个终端基却是受保护的，比如Theodora WGreene和Peter G M Wuts在《有机合成中的保护基》第三版(John Wiley & Sons，1999)中所提到的合适的保护基。合适的羟基保护基的例子包括醋酸盐类的酯类、芳烷基，如苯甲基、二苯甲基或者三苯甲基，还有四氢吡喃。合适的氨基保护基例如苯甲基、甲基苯、二苯甲基、三苯甲基、苄氧羟基、叔丁氧羟基和酰基，如三氯乙酰氯或三氟乙酰基。

在一些实例中，功能性成分是自裂解。在其它实例中，功能性成分是生物所能降解。见，美国专利号7,087,229，已纳入此处参考。

在某些实例中，本发明组合物和方法中使用的寡核苷酸在5′端官能化，以便共轭基共价结合到寡核苷酸5′端。在其它实例中，寡核苷酸在3′端官能化。还有一些实例中，寡核苷酸可沿骨干官能化或杂环基部分。还有一些实例中，寡核苷酸可以在不止一个位置官能化，比如单独选自5′端，3′端，骨干和碱基。

在某些实例中，活性寡核苷酸合成是在合成过程中吸收一个或多个共价键连接到功能单体的单体。在其它实例中，本发明活性寡核苷酸是与那些尚未被功能化，和合成完成后官能化的寡核苷酸的单体合成的。

在一些实例中，寡核苷酸由含有氨烷基链接的阻碍酯官能化，其中烷基部分公式为(CH₂)_W，其中”_w”是一个从1到10的整数，比如6，其中烷基烷组的烷基部分可以是直链或支链，且功能组通过酯基组(-O-C(O)-(CH₂)_wNH)附着在寡核苷酸上。

在其它实例中，寡核苷酸由含有(CH₂)_W-巯基(SH)链接的阻碍酯官能化，其中“_w”是一个从1到10的整数，比如6，其中烷基烷组的烷基部分可以是直链或支链，且功能组通过酯基组(-O-C(O)-(CH₂)_wSH)附着在寡核苷酸上。在一些实例中，巯基活化低核苷酸的结合通过聚合体部分，如聚乙二醇或肽(通过二硫化物的形式)。

共价连接到至少一个功能成分的活性寡核苷酸可以被化合用领域内任何已知的方法，尤其是美国专利号7,595,304，WO 2008/034122和WO 2008/034119中所披露的方法，已纳入此处参考，并在Zhao et al.(2007)J.Controlled Release 119：143-152；and Zhaoet al.(2005)Bioconjugate Chem.16：758-766.

还有一些实例中，本发明药物组合物和方法中使用的寡核苷酸由通过功能试剂引入聚合物的巯基，氨基或羟基功能化，功能试剂见美国专利号4,962,029和4,914,210中所述，即有亚磷酰胺的线性试剂，通过亲水性间隔链在一端连接到由受保护或不受保护的巯基，氨基或羟基组成的另一端。这种试剂首先与寡核苷酸的羟基组发生反应。在一些实例中，这种活性寡核苷酸官能试剂能结合到寡核苷酸5′-羟基组。在其它实例中，这种活性寡核苷酸官能试剂可结合寡核苷酸的3′-羟基组。再进一步的实例中，寡核苷酸被多于一个的官能试剂官能化，如美国专利号为4,962,029和4,914,210中所描述，此处全部纳入参考。化合这种试剂并将其吸收入单体或寡核苷酸中的方法在美国专利号4,962,029和4,914,210中有披露。

在一些实例中，5′-末端的固相结合寡核苷酸是由二烯基亚磷酰胺衍生物功能化，然后通过Diels Alder环加反应，去保护寡核苷酸与例如：氨基酸或肽结合。

在很多的实例中，含2′-糖改良，如2′-氨基甲酸酯取代糖或2′-(O-戊烷基-N-苯二酰亚胺基)-脱氧核糖的寡核苷酸合并到低聚体，使共轭基更容易的共价键连接到寡核苷酸的糖。在其它实例中，在-个或多个单体的2′-位的具有氨基酸链接的寡核苷酸由试剂制备而成，例如，5′-二甲氧三苯甲基-2′-O-(e-酞亚胺氨基戊)-2′-脱氧腺苷-3′-N，N-二异丙基-氰基乙氧基-亚磷酰胺。例如，见Manoharan，et al.，Tetrahedron Letters，1991，34，7171。

在进一步实例中，寡核苷酸核苷碱基中具有含胺类功能部分，包括N6嘌呤氨基组中，鸟嘌呤环外N₂中，或胞核嘧啶的N4或5位中。在一些实例中，这些功能化可通过在寡核苷酸合成中使用已经功能化的商业试剂来实现。

一些功能性部分市场上有供应，例如，异型双官能和同型双官能连接基可从皮尔斯公司(罗克福德，伊利诺伊州)购买到。其他市场供应的连接组有5′-氨基-改性剂C6和3′-氨基-改性剂，都是由格伦研究公司(Sterling，弗吉尼亚州)供应。5′-氨基-改性剂C6也由ABI(应用生物系统公司，福斯特城，加利福尼亚州)作为氨基连接臂-2生产供应；3′-氨基-改性剂也由Clontech Laboratories公司(帕洛阿尔托，加利福尼亚州)生产供应。

在一些实例中，本发明的组合物由一个以上的寡核苷酸构成，把两个甚至三个目标核酸作为目标。在很多的实例中，本发明涉及的药物组合物包含HER3的目标寡核苷酸和能以HER2为目标并下调HER2表达的寡核苷酸。在其它实例中，可能相同也可能不同，本发明涉及的药物组合物，包括HER3的目标寡核苷酸，和另一种能以EGFR为目标并下调EGFR表达的寡核苷酸。

在某些实例中，以HER2和/或EGFRmRNA(或其结合物)为目标的寡核苷酸，与以HER3为目标的寡核苷酸有相同的设计(例如，空缺分子s，headmers，tailmers)。在很多的实例中，以HER2和/或EGFR(或其结合物)为目标的寡核苷酸，不于同与以HER3为目标的低聚体的设计。

在某些实例中，本发明药物组合物和方法中使用的寡核苷酸共价连接到共轭基，以达到寡核苷酸穿过细胞膜的运输。在共轭基例子中，寡核苷酸穿过细胞膜的运输是亲脂性成分完成的，如胆固醇。在很多的实例中，本发明药物组合物和方法中使用的寡核苷酸，是由脂质体中的脂质配方研究而成的，比如脂质体2000或脂质体RNAiMAX，这两者都是由Invitrogen生产。在一些实例中，寡核苷酸由一个或多个脂质类非天然存在小分子的混合物构成(“脂类物”)。脂类物可以由传统的化学合成方法合成，不同量的脂类物和脂类化合物可通过分析，选择注射路径，以达到作为载体有效运输特定大小的寡核苷酸到目标组织。合适的脂类物和化合物可以找到，比如在Akinc et al.(2008)Nature Biotechnol.中。在如下网站供应：http://www.nature.com/nbt/journal/vaop/ncurrent/abs/nbt1402.html，纳入本文参考。

1.6蛋白酪氨酸激酶抑制剂

此处可交替使用的“蛋白酪氨酸激酶抑制剂”，“PTK抑制剂”和“酪氨酸激酶抑制剂”是指可绑定并抑制一个或多个酪氨酸激酶区域活性的分子。该蛋白酪氨酸激酶抑制剂不是本文所述以HER3为目标的寡核苷酸。在一些实例中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂是一种单克隆抗体。在其他实例中，该蛋白质酪氨酸激酶抑制剂是一种小分子，分子量低于1000Da，如300700Da。

在某些实例中，PTK抑制剂绑定并抑制一个或多个EGFR家族成员的酪氨酸激酶。在各种实例中，PTk抑制剂结合并抑制一种或多种蛋白质的酪氨酸激酶，这些蛋白质能与一个或多个EGFR家族成员相互影响或受其调控，例如，含有源于一个或多个EGFR家族成员的一个或多个信号级联的蛋白质。在一些实例中，酪氨酸激酶是一种受体酪氨酸激酶，即较大的蛋白质区域内，含胞外配体结合域并通过一个或多个配体结合激活。在某些实例中，蛋白质酪氨酸激酶是一种非受体酪氨酸激酶。酪氨酸激酶的磷酸酶通过磷酸化一个或多个信号传导途径中的其他蛋白质从而调节他们的活性。

在很多的实例中，在本发明组合物和方法中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂非常有用，包括小分子抑制剂，能选择性地绑定一个EGFR家族成员的酪氨酸激酶域。在某些实例中，在本发明组合物和方法中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂非常有用，包括小分子抑制剂，能绑定并抑制酪氨酸激酶一个以上的EGFR族蛋白质的酪氨酸激酶域的活性。在其它实例中，在本发明组合物和方法中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂非常有用，包括激酶抑制剂不是选择性地绑定受体酪氨酸激酶的EGFR家族，而是绑定其他蛋白质家族的酪氨酸激酶域，例如VEGFR，PDGFR和/或Raf。在某些实例中，激酶抑制剂是可逆抑制剂，也就是说，他们绑定但并非不可逆地改变蛋白质。在很多的实例中，PTK抑制剂是不可逆的抑制剂，也就是说，他们通过共价交联PTK受体二聚物从而抑制PTKs。

在很多的实例中，本发明包括由药学上可接受的蛋白质酪氨酸激酶抑制剂的衍生物组构成的组合物。此处“药学上可接受的衍生物”包括任何药学上可接受的盐，前体药物，放射性同位素示踪形态，立体异构体，对映体，非对映体，其他形式的立体异构体，外消旋混合物，几何异构体，异构体，溶剂(如水化物)，PTK抑制剂的无定形固体和晶固体形式。在一个实例中，药学上可接受的衍生物是指药学上可接受的盐，放射性同位素示踪形式，立体异构体，对映体，非对映体，其他形式的立体异构体，外消旋混合物，几何异构体，和/或激酶抑制剂的互变异构体。在另一实例中，药学上可接受的衍生物是药学上可接受的一个PTK抑制剂的盐。

在某些实例中，本发明组合物和方法中使用的PTK抑制剂是一种无盐的形式(例如，无酸或无碱的形式)。在其它实例中，本发明组合物和方法中使用的PTK抑制剂是一种药学上可接受的盐的形式。此处“药学上可接受的盐”，是指该种盐保留所需的生物活性且毒性作用在可接受范围内。

酪氨酸激酶抑制剂的药学上可接受的盐的形式可以通过传统方法制备。如果PTK抑制剂含有一个酸基组，那么久可以通过化合物和合适的碱基反应而形成一个合适的碱基盐。这些碱基包括但不限于含有氢氧化钾，氢氧化钠和氢氧化锂碱金属氢氧化物的碱金属氢氧化物，如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱基，如哌啶，二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。

另外，PTK抑制剂的酸盐可通过处理化合物与药学上可接受的有机酸和无机酸来制备，例如氢卤化物，如氯化氢，溴化或碘化氢；其他无机酸及相应的盐类，如硫酸盐，硝酸盐或磷酸盐之类；和烷基-和单芳基磺酸盐，如乙磺酸盐，甲苯磺酸和苯磺酸盐；其他有机酸及其相应的盐类，如醋酸，三氟，酒石酸，马来酸，琥珀酸，柠檬酸，苯甲酸，水杨酸盐，水杨酸，抗坏血酸等等。因此，药学上可接受的PTK抑制剂酸盐，包括但不限于醋酸，己二酸，海藻酸钠，精氨酸，天门冬氨酸，苯甲酸，苯(氨氯地平)，硫酸氢钠，硫酸氢钠，溴，丁酸，芝，樟脑磺酸盐，辛酸，氯，氯苯甲酸，柠檬酸，丙环戊烷，葡糖酸盐，二氢，二硝基苯，十二烷基硫酸钠，乙磺酸盐，富马酸，galacterate(从穆齐奇酸)，半乳糖醛酸酯，葡庚糖酸盐半乳糖醛酸酯，葡萄糖，谷氨酸，甘油，半琥珠酸酯，脲硫酸盐，庚，己酸，马尿酸，盐酸，氢溴酸，氢碘化物，2羟基乙磺酸盐，碘化物，羟乙基磺酸盐，异丁酸，乳酸，乳糖，苹果酸，马来酸，丙二酸，扁桃酸盐，偏磷酸盐，甲基磺酸盐，苯甲酸甲酯，单磷酸氢盐，2-萘磺酸盐，烟酸，硝酸盐，草酸，油酸，扑酸盐，果胶盐，过硫酸盐，苯乙酸，三苯基磷酸盐，膦酸酯，邻苯二甲酸酯。

在本发明组合物和方法中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂非常有用，它包括但不限于吉非替尼(ZD-1839，Iressa

)，埃罗替尼(OSI-1774，Tarceva^TM)，卡奈替尼(CI-1033)，凡德他尼(ZD6474，Zactima

)，酪氨酸磷酸化抑制剂AG-825(CAS 149092-50-2)，拉帕替尼(GW-572016)，索拉非尼(BAY43-9006)，AG-494(CAS 133550-35-3)，RG-13022(CAS 149286-90-8)，RG-14620(CAS 136831-49-7)，BIBW 2992(Tovok)，与tyrphostin 9(中科院136831-49-7)，酪氨酸磷酸化抑制剂23(CAS 118409-57-7)，酪氨酸磷酸化抑制剂25(CAS 118409-58-8)，酪氨酸磷酸化抑制剂46(CAS 122520-85-8)，酪氨酸磷酸化抑制剂47(CAS 122520-86-9)，酪氨酸磷酸化抑制剂53(CAS 122520-90-5)，紫铆花素(1-(2，4-二羟基苯基)-3-(3，4-二羟基苯基-2-丙烯-1-1 2′，3，4，4′-四羟基查尔酮；CAS 487-52-5)，姜黄素((E，E)-1，7-二(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1，6-庚二烯-3，5-二酮；CAS 458-37-7)，N4-(1-苄基-1H-吲唑-5-基)-N6，N6-二甲基吡啶并[3，4-d]-嘧啶-4，6-二胺(202272-68-2)，AG-1478，AG-879，环丙烷羧酸-(3-(6-(3-三氟甲基-苯胺)-嘧啶-4-yl氨基)-苯基)-酰胺(CAS 879127-07-8)，N8-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(1-甲基哌啶-4-基)-嘧啶并[5，4-d]嘧啶-2，8-二胺，2HCl(CAS 196612-93-8)，4-(4-苄氧基苯胺)-6，7-二甲氧基(CAS 179248-61-4)，N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)吡啶并[3，4-d]嘧啶-6-基)2-布替那明(CAS 881001-19-0)，EKB-569，HKI-272和HKI-357。

在一些实例中，PTK抑制剂选自吉非替尼，埃罗替尼，拉帕替尼，卡奈替尼和索拉菲尼。

在某些实例中，酪氨酸激酶抑制剂是吉非替尼。

激酶抑制剂可通过任何领域内已知的方法获得。在一些实例中，激酶抑制剂可以从例如，Sigma-Aldrich

，及Cayman Chemical公司买到。在很多的实例中，PTK抑制剂由如阿斯利康，罗氏，葛兰素史克和拜耳制药供应。在其它实例中，PTK抑制剂可通过已知方法合成，例如，Rewcastle，G.W.et al.(1996)J.Med.Chem.39：918-928中所载的方法。

在很多的实例中，本发明组合物由一个以上的酪氨酸激酶抑制剂构成。在一些实例中，一个酪氨酸激酶抑制剂针对一个特定的受体酪氨酸激酶(如吉非替尼)，再一个酪氨酸激酶抑制剂相对是非选择性的(例如，索拉非尼)。在很多的实例中，再一个酪氨酸激酶抑制剂能绑定一个以上的EGFR家族成员的酪氨酸激酶域例如，拉帕替尼)。在另一些实例中，再一个酪氨酸激酶抑制剂能绑定不同家族(比如VEGFR)中PTK受体的酪氨酸激域。

1.6.1药学上可接受的辅料和剂型

在某些实例中，本发明的药物组合物包括至少一个低聚化合物，至少一个PTK抑制剂或药学上可接受的其衍生物，以及药学上可接受的适量辅料，从而形成适当的用于病人治疗的剂型。此处“病人”包括但不限于一个人或一个非人类的动物，如伴侣动物或牲畜，如牛，猴，狒狒，黑猩猩，马，羊，猪，鸡，火鸡，鹌鹑，猫，狗，小鼠，大鼠，兔子，几豚鼠。在各种实例中，该至少有一个低聚化合物和至少一个PTK抑制剂在一个单一的药物组合。在其它实例中，至少有一个低聚化合物和至少一个PTK抑制剂存在于不同的组合物中，在这样实例中，该组合物可以一起(组和包装)用于HER3为目标的治疗中。

制药辅料可以是一种稀释剂，悬浮剂，增溶剂，粘结剂，崩解剂，防腐剂，着色剂，润滑剂等等。制药辅料也可以是液体，例如水或油，包括石油，动物油，植物油或人工合成油，如花生油，豆油，矿物油，芝麻油等等。制药辅料还可以是生理盐水，阿拉伯胶，明胶，淀粉糊，滑石，角蛋白，胶体二氧化硅，尿素等等。此外，辅助剂，稳定剂，增稠剂，润滑剂和着色剂也可以使用。在一个实例中，向病人使用时，药学上可接受的辅料应是无菌处理的。当寡核苷酸或PTK抑制剂是静脉注射剂型时，水是一种特别有用的辅料。液体辅剂还包括盐溶液，葡萄糖水和甘油溶液，特别是当剂型是注射溶液时。适用的药用辅料还包括淀粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明胶，麦芽，大米，面粉，白垩，硅胶，硬脂酸钠，甘油硬脂酸，滑石粉，氯化钠，干脱脂牛奶，甘油，丙二醇，水，乙醇等等。如果需要，本发明组合物也可以加入少量润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。药学上可接受的、可用于配制口服剂型的药用辅料的具体范例见美国医药协会(1986)药用辅料手册中所述。

本发明药物组合物可以制成溶液，悬浮液，乳剂，片剂，丸剂，颗粒，胶囊，软胶囊，粉末，缓释制剂，栓剂，乳剂，气雾剂，喷雾剂，悬浮液或任何其他适用剂型。适用药用辅料的其他示例见子Remington′s Pharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R.Gennaroed.，19th ed.1995)中所述，此处纳入参考。

在很多的实例中，组合物按照适合人类口服的常规程序制备。口服的寡核苷酸或小分子PTK抑制剂，可以是，例如片剂，胶囊，软胶囊，锭，锭剂，水或油溶液，悬浮液，颗粒剂，粉剂，乳剂，糖浆或酏剂。当活性剂被纳入内服片，那么这些药片可以压缩成片剂，片剂研碎物(如粉状或粉碎片)，肠溶片，糖衣锭，膜衣锭，压缩片或多层片。制做固体口服剂型的技术与成分见《制药剂型》：由Marcel Dekker公司出版的《片剂》(Lieberman，Lachmanand Schwartz，eds.，2nd ed.)。制作片剂(压缩成型)，胶囊(硬，软)和药丸的技术和成分在Remington′s Pharmaceutical Sciences 1553-1593(Arthur Osol，ed.，16th ed.，MackPublishing，Easton，PA 1980)中也有描述。

口服液体剂型包括水和非水溶液，乳液，悬浮液，和溶液和/或非泡腾颗粒重组悬浮液，可选加入一种或多种合适的溶剂，防腐剂，乳化剂，悬浮剂，稀释剂，甜味剂，着色剂，调味剂等等。制作口服液体剂型的技术和成分见《制药剂型》：分散体系，由Marcel Dekker公司出版(Lieberman，Rieger and Banker，eds.)。

当本发明组合物肠外注射时，可以制成，例如无菌等渗溶液的形式。另外，当本发明组合物通过吸入给药时，可以制成干气溶胶，或水溶或部分水溶溶液。

口服组合物可包含一个或多个辅剂，例如果糖，阿斯巴甜或糖精等甜味剂；薄荷，冬青油，或樱桃等调味剂；着色剂；和保护剂，以提供药学上的可口制剂。此外，该药物组合物片剂或丸剂可以通过包衣技术，延缓胃肠到的分解和吸收，从而提供更长时间的持续效用。活性化合物周围可选用可渗透薄膜包裹，也同样适合组合物的口服剂型。在后一种平台上，活性化合物吸入胶囊周围的囊液，膨胀，从而通过缝隙取代辅剂或组合物成分。相对于尖刺型立即释放系统，这些传输平台可以提供一个必要的零阶传导系统。甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸盐都是延时材料。口服组合物可以加入标准辅料，如甘露醇，乳糖，淀粉，硬脂酸镁，糖精钠，纤维素，镁碳酸盐。在一个实例中，辅料都是药品级的。

在另一实例中，组合物可通过静脉注射给药。通常情况下，静脉注射给药包括无菌等渗缓冲液。如有必要，还可以加入增溶剂。组合物的静脉注射剂型可以选择加入如苯佐卡因或普鲁卡因的局部麻醉剂，以降低注射时的疼痛感。一般来说，这些成分可以单独用药或混合在单位剂型中使用，例如，作为干冻干粉或无水浓缩物在一个密封的容器(如安瓿或囊状器皿)中表明活性剂数量。当组合物通过输液用药时，可免除，因为输液瓶中已经含有无菌药品级水或生理盐水。当活性剂需注射用药时，可加入一安瓿瓶的无菌注射用水或生理盐水，这样就可以在给药前混合这些成分。

本发明的药物组合物，可通过控释或缓释手段或领域内已知的传导工具用药。举例包括但不限于，在美国专利号：3845770，3916899，3536809，3598123，4008719，5674533，5059595，5591767，5120548，5073543，5639476，5354556和5733566中诉述，此处都纳入参考。这些剂型对一个或多个活性成分的使用提供控释或缓释，例如，使用羟丙甲纤维素羟丙甲纤维素，其他聚合物矩阵，凝胶剂，渗透膜，渗透系统，多层包衣，微粒，多颗粒，脂质体，微球，或其化合物，能提供所需的不同比例的释放曲线。包括此处所述在内的领域内已知适用的控释或缓释制剂，可随时与本发明的活性成分共同选用。本发明包含单剂量的口服剂型，比如但不仅限于，片剂，胶囊，软胶囊，和适用于控释或缓释的锭剂。

此处所述的药物组合物的给药形式可以是口服，吸入，外用(如表皮，贴剂，眼药和粘膜包括阴道和直肠给药)，或肠外用药包括静脉，动脉，皮下，腹腔或肌肉注射或输液。在一个实例中，含有寡核苷酸的药物组合物是通过静脉注射(i.v)，腹腔注射(i.p)或为推注。肠外路径在本发明的许多方面都是首选。剂型取决于给药方式的选择，即局部还是全身治疗。在很多的实例中，上述至少一个寡核苷酸和至少一个PTK抑制剂存在于不同的组合物中，该药物组合物不必是相同的形式(例如，固体剂型，液体剂型，气雾剂)，也不必使用同样路径(如口服，肠外，局部用药)或在同时用药。例如，本发明药物组合物中的寡核苷酸，可制成单剂量口服剂型，如片剂，胶囊，口服糖浆之类，含PTK抑制剂的组合物则可制成静脉注射剂型或吸入剂型。

1.6.2给药

以HER3为目标的LNA寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EFGR)可以定期间隔进行用药(简称“剂量间隔”或“DI”)，间隔为3天至2周。在一些实例中，DI为4，5，6，7，8，9，0，11，12或13天。在不同实例中，DI约1星期。在另一些实例中，DI为6，7或8天。两个剂量之间至少要有一个DI，如3，4，5，6，7，8，9或10个剂量，每一个剂量与下一次LNA寡核苷酸之间要有一个DI。每剂之间的DI期限可以相同。在一些实例中，DI期范围从3天到两周不等。在其它实例中，DI期为4，5，6，7，8，9，10，11，12或13天。还有一些实例中，DI期为1周左右。在某些实例中，DI期为6，7或8天。

在一些实例中，每个目标位HER3的LNA寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)的剂量范围约从0.25mg/kg至体重约10mg/kg，如约0.5mg/kg，约1mg/kg或约2mg/kg，约3mg/kg，约4mg/kg，约5mg/kg，约6mg/kg，约7mg/kg，约8mg/kg，或约9mg/kg。在一些实例中，每以个目标为HER3的LNA寡核苷酸(可选的一个或多个HER2和EGFR)的剂量范围从大约2mg/kg到8mg/kg左右，或约4至6mg/kg，或约4mg/kg至5mg/kg。在一些实例中，每个目标为HER3的LNA寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)的剂量至少2mg/kg，如2，3，4，5，6，7或8mg/kg。在很多的实例中，每次剂量为6mg/kg。

LNA寡核苷酸用药通常都是肠外给药，如皮下，肌肉注射，静脉注射或腹腔注射。在某些实例中，是静脉注射用药。

在一些实例中，LNA寡核苷酸在初始给药方案后会重复给药。在不同实例中，为了预防或治疗疾病的恶化而重复给药方案是必要的。

在某些实例中，目标为HER3的LNA寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)是在一个相对短期的时间内用药，而不是连续用药。在很多的实例中，短期用药给病人的生活质量提供了明显改善，因为这样他们就不用长时间的呆在医院。因此，在很多的实例中，目标为HER3的LNA寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)不用持续输注用药。因此每个LNA寡核苷酸的剂量可以在不到12小时的时间内用药，比如少于8小时，少于4小时，如不到3小时。因此病人每个LNA寡核苷酸剂量可以在1至4小时内给药完毕，如2至4小时，3至4小时，或约2小时。对病人使用LNA寡核苷酸可以在至少30分钟的时间内完成，如至少1小时。这样用药可以通过，如静脉注射的方式。

在一些实例中，蛋白质酪氨酸激酶抑制剂的药用有效剂量可以在有效剂量的目标为HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)的LNA寡核苷酸之前，同时或相继用药。通常，使用一个或多个蛋白质酪氨酸激酶抑制剂的有效剂量，两者会同时对病人发挥治疗效用。

1.6.3组合装

本发明还提供了一种组合装，包括第一部分和第二部分。在很多的实例中，第一个部分包括至少一个寡核苷酸，它有抑制(例如下调)HER3的表达，或共轭和/或其药物组合物的能力，第二部分包括至少一个小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂，针对一个或多个EGFR家族成员。在其他实例中，该套件包括一个第三部分，它是一种治疗剂而不是寡核苷酸或PTK抑制剂，如化疗药物(如紫杉酚)。在一些实例中，本发明的套装用于治疗增生疾病，如癌症，其中包括向有需要的病人使用套件的有效量的第一部分和第二部分。在很多的实例中，第一和第二部分可同时或一起用药。在其它实例中，第一和第二部分是顺序和以其他任何顺序用药。

在一些实例中，该套件包括：第一部分，由本发明寡核苷酸构成，该寡核苷酸能抑制(例如，通过下调的方式)HER3表达，或共轭和/或其药物组合物；和第二部分，即蛋白质酪氨酸激酶抑制剂；和第三部分，即能抑制(例如，通过下调的方式)此处所述一个或多个HER2和EGFR表达的寡核苷酸，或共轭和/或其药物组合物的寡核苷酸。

本发明的一个实例提供了一个套装，其中包括至少一个低聚化合物和至少一个PTK抑制剂，并存在于套装不同的成分中。例如，本发明的一个套装实例中，包括一个如SEQ ID No：180的寡核苷酸化合物和PTK抑制剂吉非替尼，都单独存在套装的不同成分中。

1.7方法

在某些实例中，本发明包括抑制表达和/或细胞内HER3的活性的方法，通过连结细胞与有效量的低聚化合物(或其共轭物)及有效量的蛋白质酪氨酸激酶抑制剂，从而达到抑制(例如，下调)HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)表达和/或细胞内的活性。在某些实例中，能抑制HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)mRNA表达。在其它实例中，能抑制HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)蛋白质表达。还有一些实例中，能抑制(如下调)一个EGFR家族成员的酪氨酸激酶活性。在很多的实例中，HER3(可选一个或多个HER2和EGFR)的细胞内部化会受到抑制(例如，下调)。在很多的实例中，所述细胞是指哺乳动物细胞，如人体细胞。

在某些实施体例中，连结在体外发生。在其它实例中，该连结在体外会受到给哺乳动物使用本发明组合物的影响。在很多的实例中，本发明提供了一种抑制(例如，下调)HER3蛋白表达和/或mRNA，和/或HER3的细胞内部化，和HER2蛋白表达和/或细胞内的mRNA和/或HER2酪氨酸激酶的活性，和/或HER2的细胞化的方法。人类HER2mRNA的序列如SEQ ID No：199。在进一步又一些实例中，本发明提供了一种抑制(例如，通过下调)HER3蛋白质和/或细胞内mRNA的表达，和/或HER3的细胞内化，EGFR蛋白表达和/或细胞内mRNA表达，和/或EGFR酪氨酸激酶活性，和/或EGFR的细胞内部化的方法。人类EGFRmRNA的序列如SEQ ID No：198。在另一些实例中，本发明提供了一种抑制(如下调)HER3，HER2和EGFR mRNA表达和/或细胞内蛋白质的表达，和/或HER2和EGFR酪氨酸激酶的活性，和/或HER3，HER2和EGFR的细胞内部化的方法。

在某些实例中，本发明涉及一种治疗病人疾病的方法，包括向需要的病人使用药物组合物，该组合物包括有效量的该至少一个寡核苷酸，或其共轭物，有效量的该至少一个小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂和药学上可接受的辅料剂。本文中“治疗”和“治愈”是指治疗已患疾病(如疾病或此处下文所指的失调)，或防止疾病的产生，即预防。

在很多的实例中，本发明涉及一种治疗病人疾病的方法，其中所述寡核苷酸(或其共轭)和蛋白酪氨酸激酶抑制剂存在于不同的药物组合物中。在某些实例中，这两个组合物可以同时或者一起给药。在其它实例中，者两个组合物可以以任何顺序依次给药。在很多的实例中，两种组合物分别由寡核苷酸(或其共轭物)组成和由蛋白质酪氨酸激酶抑制剂组成，这两种组合物可以以不同的给药方案，不同的浓度，不同的剂型，并通过不同的给药途径进行用药。

用药方法包括但不限于皮内注射，肌肉注射，腹腔注射，胃肠外注射，静脉注射，皮下注射，鼻腔，硬脑膜外，口服，舌下含服，脑内，叶鞘内，贴剂，直肠给药，通过吸入，或外用，特别是耳朵，鼻子，眼睛或皮肤。给药方法由医生自行决定。

也可以通过肺部用药，例如，通过吸入器或喷雾器，和雾化剂，或通过在氟碳化合物或合成肺表面活性剂中灌注。在某些实例中，寡核苷酸(或其共轭)和/或蛋白质酪氨酸激酶抑制剂可以利用传统的粘合剂和辅料，如甘油三酯，制成栓剂。

当寡核苷酸(或其共轭)和/或蛋白质酪氨酸激酶抑制剂是通过静脉注射的方式用药(例如，连续滴注或推注)，那么肠外用药的剂型可以是悬浮液，溶液，以油或水为载体的乳状液体，这些剂型可添加药学上必要的添加剂，如一个或多个稳定剂，悬浮剂，分散剂等等。寡核苷酸(或其共轭)和/或蛋白酪氨酸激酶抑制剂，也可以制成粉状，重组后成可注射形式。

在其它实例中，寡核苷酸(或其共轭)和/或蛋白质酪氨酸激酶抑制剂可在一个泡囊中传导，特别是脂质体(见Langer，Science 249：1527-1533(1990)；和Treat et al，Liposomesin the Therapy of Infectious Disease and Cancer 317-327 and 353-365(1989))。

还有一些实例中，寡核苷酸(或其共轭)和/或蛋白质酪氨酸激酶抑制剂可以通过控释系统或缓释系统传导(例如，见Goodson，″Dental Applications″(pp.115-138)in MedicalApplications of Controlled Release，Vol.2，Applications and Evaluation，R.S.Langerand D.L.Wise eds.，CRC Press(1984)；Langer，Science 249：1527-1533(1990))。在很多的实例中，控释或缓释系统会受到推注的影响(Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14：201(1987)；Buchwald et al.，Surgery 88：507(1980)；and Saudek et al.，N.Engl.J.Med.321：574(1989))，或控释系统聚合材料的影响(见Medical Applications of Controlled Release(Langer and Wise eds.，1974)；控制药品生物利用度，药物产品设计和功效(Smolen and Ball eds.，1984)；Ranger andPeppas，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23：61(1983)；Levy et al.，Science228：190(1985)；During et al.，Ann.Neurol.25：351(1989)；and Howard et al.，J.Neurosurg.71：105(1989))。

在某些实例中，本发明组合物能有效抑制细胞扩散。在很多的实例中，与未经治疗的细胞样本相比，细胞增殖至少减少10％，至少减少20％，至少减少30％，至少减少40％，至少减少50％，至少减少60％，至少减少70％，至少减少80％，或至少减少90％。在其它实例中，与单用低聚化合物或小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂治疗(简称“单一疗法”)的细胞样本相比，细胞增殖至少减少10％，至少减少20％，至少减少30％，至少减少40％，至少减少50％，至少减少60％，至少减少70％，至少减少80％，或至少减少90％。在很多的实例中，所述细胞是指癌症细胞。在一些实例中，癌细胞是指乳腺癌细胞，前列腺癌细胞，肺癌细胞和上皮细胞癌。

因此，本发明组合物能有效治疗增生类疾病，如癌症。在一些实例中，本发明目标为HER3的联合疗法治疗的癌症是指淋巴瘤和白血病(例如非霍氏淋巴瘤，霍氏淋巴瘤，急性白血病，急性淋巴细胞白血病，急性髓细胞白血病，慢性髓细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤)，结肠癌，直肠癌，上皮癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肾细胞癌，肝癌，胆道癌，绒毛膜癌，宫颈癌，睾丸癌，肺癌，膀胱癌，黑色素瘤，头颈部肿瘤，脑癌，不明原发部位，肿瘤癌症，周围神经系统癌症，中枢神经系统癌症，纤维肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，软骨肉瘤，骨肉瘤癌，脊索瘤，血管肉瘤，肉皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管内皮肉瘤，滑膜瘤，间皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，鳞状细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳头状癌，乳头状腺癌，囊腺癌，髓样癌，支气管癌，精原细胞瘤，胚胎癌，肾母细胞瘤，小细胞肺癌，上皮癌，神经胶质瘤，星形细胞瘤，髓母细胞瘤，颅咽管瘤，室管膜瘤，松果体瘤，血管母细胞瘤，听神经瘤，少突神经胶质瘤，脑膜瘤，神经母细胞瘤，视网膜母细胞瘤，重链病，转移瘤，由于不受控或不正常细胞生长导致的任何疾病或紊乱。

在某些实例中，所述疾病是指癌症，包括肺癌，前列腺癌，乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，上皮癌，胃癌。

在其他一些实例中，所述肺癌是指非小细胞肺癌。

如下面的例子所示，本发明的联合治疗方案可用于对单一疗法有抗药性的癌症的治疗，其中“单一疗法”如用吉非替尼或其他激酶抑制剂的治疗。

在很多的实例中，根据本发明，疾病的治疗可与一个或多个其他抗癌治疗联合进行，如放疗，化疗或免疫治疗。

在某些实例中，所述疾病与HER3(和/或HER2基因和/或EGFR基因)基因突变或受HER3影响或与其关联的基因的蛋白产物有关。在一些实例中，突变基因编码为蛋白质，同时突变也存在于酪氨酸激酶域。在很多的实例中，酪氨酸激酶域突变是在小分子PTK抑制剂和/或ATP结合处。因此，在各种实例中，目标mRNA是HER3(和/或HER2和/或EGFR)序列的变异形式，例如，它由一个或多个单点突变组成，如关联癌症的SNPs。

在某些实例中，所述疾病与HER3变异形式的异常水平相关。在某些实例中，所述疾病与HER3野生形式的异常水平相关。本发明的一个方面就是治疗罹患或易感HER3异常水平相关疾病的患者，包括对病人使用有效量的针对HER3的寡核苷酸或其共轭物，和有效量的小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂，该抑制剂能绑定EGFR家族成员的酪氨酸激酶域，或能绑定受一个或多个EGFR家族成员影响的蛋白质的酪氨酸激酶域。在一些实例中，寡核苷酸由一个或多个LNA单元组成。在很多的实例中，PTK抑制剂是吉非替尼。

在另一实例中，本发明可以治疗罹患或易感HER2异常水平或HER2野生形式异常水平相关疾病的患者，包括对病人使用有效量的针对HER3的寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)或其共轭物，和有效量的小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂，该抑制剂能绑定EGFR家族成员的酪氨酸激酶域，或能绑定受一个或多个EGFR家族成员影响的蛋白质的酪氨酸激酶域。在一些实例中，寡核苷酸由一个或多个LNA单元组成。在很多的实例中，PTK抑制剂是吉非替尼。

在另一实例中，本发明可以治疗罹患或易感EGFR异常水平或EGFR野生形式异常水平相关疾病的患者，包括对病人使用有效量的针对HER3的寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)或其共轭物，和有效量的小分子蛋白酪氨酸激酶抑制剂，该抑制剂能绑定EGFR家族成员的酪氨酸激酶域，或能绑定受一个或多个EGFR家族成员影响的蛋白质的酪氨酸激酶域。在一些实例中，寡核苷酸由一个或多个LNA单元组成。在很多的实例中，PTK抑制剂是吉非替尼。

在很多的实例中，所述本发明包括一种预防或治疗疾病的方法，即对患者使用有效量的这种疗法中能调节HER3的寡核苷酸，调节寡核苷酸(可选一个或多个HER2和EGFR)或其共轭物，和有效量的酪氨酸激酶抑制剂，该抑制剂能绑定EGFR家族成员的酪氨酸激酶域和/或能绑定受一个或多个EGFR家族成员影响的蛋白质的酪氨酸激酶域。

用于治疗或预防疾病的、有效量的、所述至少一个寡核苷酸和至少一个PTK抑制剂可以通过标准临床技术给药。一般来说，剂量范围可根据EC50所发现的在动物样本体外和体内的有效量。精确的剂量也取决于，例如，给药途径及疾病的严重性，也可根据根据医生的判断和/或每个病人自身的情况。在其他例子中，剂量要求肯定不同，尤其要考虑患者体重和身体状况(如肝，肾功能)，痛苦程度，症状的严重性，剂量间隔，副作用，以及使用的低核苷酸与PTK抑制剂的特殊性。

在很多的实例中，寡核苷酸用量约每公斤体重0.01μg至1g，可以每天，每周，每月或每年，甚至每2至10年一次或多次用药，或长达数月的连续输注。在某些实例中，PTK抑制剂每天用量为50mg至500mg。在很多的实例中，PTK抑制剂每天用量为100mg至400mg。在其它实例中，PTK抑制剂每天用量约150mg至300mg。在某些实例中，可根据测量的活性剂在体液或人体组织中的停留时间和浓度来决定重复使用剂量。继治疗成功后，病人可以用目标为HER3的联合疗法巩固治疗，以防止病情复发。

1.8范例

例1：ErbB-3(HER3)联合疗法减少肿瘤细胞扩散

实验步骤

1.细胞培养

在一些肿瘤细胞株中诊察寡核苷酸与吉非替尼和EGFR抑制剂的组合效果，其中寡核苷酸具有碱基的序列和设计如SEQ ID NO：180(以下简称“ON180”)所述。细胞在中如下所述的培养基中培养，温度保持在37℃，湿度为95％和CO2浓度为5％。细胞例行每周传代2-3次。

15PC-3(Santaris制药公司)：将人类前列腺癌细胞株15PC-3在DMEM(ATCC)+10％胎牛血清(简称FBS)+2mM Glutamax^TM I+庆大霉素(25μg/ml)中培养。

A549细胞(ATCC)：将人类肺癌细胞株A549在F12K培养基(ATCC)+10％FBS+2mM Glutamax^TM I+青霉素(100u/ml)/链霉素(100μg/ml)中培养。

DU145(ATCC)：将人类前列腺癌细胞株DU145在Eagle’s极限必需培养基(ATCC)+10％FBS+2mM Glutamax^TM I+青霉素(100u/ml)/链霉素(100μg/ml)中培养。

A431(ATCC)：将人类表皮癌细胞株A431在DMEM(ATCC)+10％FBS+2mM Glutamax^TM I+青霉素(100u/ml)/链霉素(100μg/ml)中培养。

SKBR-3(ATCC)：将人类乳腺癌细胞株SKBR3在McCoy’s5A改良基(ATCC)+10％FBS+2mMGlutamax^TM I+青霉素(100u/ml)/链霉素(100μg/ml)中培养。

H1993(ATCC)：将人类肺癌细胞株H1993在RPMI-1640(ATCC)+10％FBS+2mM Glutamax^TMI+青霉素(100u/ml)/链霉素(100μg/ml)中培养。

2.ON180和吉非替尼的联合治疗

用ON180或含LNA的换序碱基序列低核苷酸，该序列同SEQ ID No：236(以下简称“ONCONT”)使用阳离子脂质体-脂质体^TM-2000(Invitrogen^TM)作为转染载体。细胞接种在6孔板(NUNC^TM)，当50-60％汇合时被处理。ON180转染细胞如述被制造商用无血清OptiMEM

(Gibco^TM)和5μg/ml脂质体^TM-2000ONCONT作为阴性对照。经处理后的细胞在37℃下孵育4小时，然后用OptiMEM

清洗，再加入常规血清培养液。

在与低核苷酸(ON180或ONCONT)转染后24小时，用吉非替尼(Amfinecom公司)，和已上市的EGFR抑制剂(1μM到40μM的终浓度)治疗48小时。经处理后的细胞分别通过RT-PCR用MTS和ErbB3mRNA定量测量，都发生扩散(见下文)。每组实验至少进行两次。

3.细胞扩散分析(MTS分析)

扩散分析是通过利用一种溶剂CellTiter 96

水溶液(Promega，Cat#358B)并按照其制造商的说明书进行。简单地说，就是将MTS化合物添加到6孔板培养板，在温度为37°C，湿度为95％及CO₂浓度为5％的条件下孵育1-3小时。然后将培养基与MTS试剂转移到96孔板。使用酵素免疫分析仪(分子器件)测量吸光度为490参考值为650nm。分析背景是只从含孔培养基中测量然后从含孔细胞信号中减去。吸收率在490nm(OD490nm)是与培养中的细胞成活率成正比的。

4.通过RT-PCR检测ErbB3mRNA水平

如上所述，用Qiagen RNeasyPlus Mini Kit(Cat# 74134)，从治疗过的细胞中提取总的RNA。根据制造商的说明书，通过QuantiTect Probe RT-PCR kit(Cat#：204443；Qiagen)用一步法检测ErbB3mRNA水平。引物和探针的序列如下：

人类ErbB3PCR引物/探针组：

探针：CATTGCCCAACCTCCGCGTG(SEQ ID NO：250)

引物-1：TGCAGTGGATTCGAGAAGTG(SEQ ID NO：251)

引物-2：GGCAAACTTCCCATCGTAGA(SEQ ID NO：252)

人类GAPDH引物/探针组：

探针：ACTGGCGCTGCCAAGGCTGT(SEQ ID NO：253)

引物-1：CCACCCAGAAGACTGTGGAT(SEQ ID NO：254)

引物-2：TTCAGCTCAGGGATGACCTT(SEQ ID NO：255)

RT PCR在应用生物系统公司7500快速实时PCR系统上，使用120个总RNA样本完成。GAPDHmRNA作为内部控制。

结果

A549细胞对吉非替尼有抗药性。单用吉非替尼未能控制该细胞株(图1A)40微米的扩散。单独使用ON180却强有力的抑制了ErbB3mRNA的表达(IC50＜2nm，图1C)和细胞增长(IC50＜5nM)(图1A，1B)。用2nM ON180结合吉非替尼大大增强了吉非替尼对A549细胞的抗增生作用。(图1A，1B)。如图1B所示，与吉非替尼单一疗法比较，40μM吉非替尼和2nM ON180组合减少了A549细胞约50％的生长率。

H1993细胞对吉非替尼相对不敏感(IC₅₀＝40nM)(图2A，单独使用ON180能有效抑制ErbB3mRNA的表达(图2C)和细胞生长

(图2A，2B)。用1nM ON180与吉非替尼组合疗法增强了吉非替尼对H1993细胞的抗增殖作用(图2A，2B)。如图2B显示，与40nM吉非替尼单一疗法相比，用40μM吉非替尼和1nM ON180组合降低了超过50％的H1993细胞生长率。

15PC3细胞对吉非替尼有耐药性。吉非替尼未能控制该细胞株20μM的扩散。(图3A)单独使用ON180能强有效的抑制ErbB3mRNA的表达(图3C)和细胞增长(IC₅₀＜2nM)(图3A，3B)。与20μM的吉非替尼单一疗法(图3A，3B)相比，用1nM ON180和20μM吉非替尼组合治疗15PC3细胞大大增强了(接近70％)吉非替尼对15PC3细胞的抗增生效果。

DU145细胞对吉非替尼有抗药性。吉非替尼未能控制该细胞株40μM的扩散。(图4A)单独使用ON180能有效地抑制ErbB3mRNA的表达(图4C)和细胞增长(IC₅₀＜5nM)(图4A，4B)。与40μM吉非替尼单一疗法相比(图4A，4B)，用1nM ON180和40μM吉非替尼组合治疗DU145细胞大大增强了(约40％)吉非替尼对DU145细胞的抗增生效果。

SKBR3细胞对吉非替尼很敏感。(图5A)单独用ON180治疗SKBR3细胞能有效抑制ErbB3mRNA(图5c)的表达和细胞增长(IC₅₀＜5nM)(图5A，5B)。与20μm吉非替尼单一疗法(图5A治疗，5B)相比，用1nM ON180和20μM的吉非替尼组合治疗这些肿瘤细胞时，显著增强(即超过50％)了吉非替尼对SKBR3细胞抗增生效果。

A431细胞对吉非替尼很敏感。(图6A)单独使用ON180治疗这些肿瘤细胞能有效抑制ErbB3mRNA的表达(图6c)和细胞增长(IC₅₀＜1nM)(图6A，6B)。与20μm吉非替尼单一疗法相比(图6A，6B)，用1nM ON180和40μm的吉非替尼组合治疗A431细胞可显著增强(约50％)吉非替尼对A431细胞的抗增生效果。

结论

低聚化合物ON180能有效抑制诉述6个实验癌细胞株(A549，H1993，15PC3，DU145，A431和SKBR3)的ErbB3mRNA表达和细胞增长。其中两个细胞株，SKBR3和A431，对吉非替尼是敏感的，但其他四个细胞株A549，H1993，15PC3和DU145，对PTK抑制剂不敏感或有耐药性。然而，观察到ON180和吉非替尼的组合疗法对实验的六个肿瘤细胞株有很好的抗增生效果。ON180可以增加对低浓度(1～5nM)吉非替尼有耐药性的肿瘤细胞(A549，H1993，DU145和15PC3)的敏感度。

本申请中引用的所有公布，专利，专利申请及其他文件都特此纳入参考，目的与单独将其纳入参考时相同。

列举和描述的各项具体实例，在不违背本发明宗旨和范围的情况下，可以作出适当改变。

Claims

1.使用

(a)寡核苷酸包含10至50个连续单体，其中相毗邻的单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连接，

其中所述单体有一个含至少10个连续单体的第一区，该区至少80％的单体序列与由以下组组成的化合物中的至少10个连续单体的序列相同：

5′-G_s ^MeC_sT_sc_sc_sa_sg_sa_sc_sa_st_sc_sa_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID NO：169)；和

5′-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID NO：180)。

其中，大写字母表示β-D-氧-LNA单体，小写字母表示DNA单体，下标“S”磷硫酰连结， ^MeC表示一个含有5-甲基胞嘧啶基的β-D-氧-LNA单体，

其中所述第一区至少有一个单体是核苷类似物；及

(b)EGFR(HER1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂

组合用于治疗哺乳动物的癌症。

2.根据权利要求1，EGFR(HE R1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂选自吉非替尼，埃罗替尼，拉帕替尼和卡奈替尼。

3.根据权利要求2，EGFR(HER1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂是吉非替尼。

4.根据先前任何权利要求的用法中，第一区序列与出现在SEQ ID NO：169或180中的一个至少有10个连续单体的区的序列是相同的。

5.根据先前任何权利要求的用法中，所述寡核苷酸第一区至少包含10至18个连续单体。

6.根据先前任何权利要求的用法中，所述寡核苷酸第一区至少包含16个连续单体。

7.根据先前任何权利要求的用法中，每个核苷类似物都是单独从包含LNA单体，含有2′-O-烷基-核酸糖的单体，含有2′-O-甲基-核酸糖的单体，含有2′氨基脱氧核糖的单体和含有2′氟-脱氧糖的单体的组中选取。

8.根据权利要求7，其中核苷类似物是一个LNA单体。

9.根据权利要求1-3的用法，其中，聚物从以下组中选取：

5′-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3′(SEQ ID NO：180).

10.根据权利要求9的用法，其中寡核苷酸指

11.根据先前任何权利要求的用法中，该哺乳动物是指人类。

12.根据先前任何权利要求的用法中，癌症是指肺癌，前列腺癌，乳腺癌，上皮细胞癌和表皮细胞癌。

13.根据权利要求1-11中任何一条，其中癌症是指非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，急性白血病，急性淋巴细胞白血病，急性髓细胞性白血病，慢性粒细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤，结肠癌，直肠癌，上皮癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肾细胞癌，肝癌，胆道癌，绒毛膜癌，宫颈癌，睾丸癌，肺癌，膀胱癌，黑色素瘤，头颈部肿瘤，脑肿瘤，不明原发灶癌，肿瘤，周围神经系统癌症，中枢神经系统，纤维肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，软骨肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，肉皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管内皮肉瘤，滑膜瘤，间皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，鳞状细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳头状癌，乳头状腺癌，囊腺癌，髓样癌，支气管癌，精原细胞瘤，胚胎癌，肾母细胞瘤肿瘤，小细胞肺癌，上皮癌，神经胶质瘤，星形细胞瘤，髓母细胞瘤，颅咽管瘤，室管膜瘤，松果体瘤，血管母细胞瘤，听神经瘤，少突神经胶质瘤，脑膜瘤，神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。

14.药物组合物包括：

(a)由10至50个连续单体组成的寡核苷酸，其中毗邻单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连结，其中所述寡核苷酸包含一个至少含有10个连续单体的第一区；

其中该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

其中该第一区序列至少80％与哺乳动物HER3基因或哺乳动物HER3 mRNA的最佳对齐目标区域的逆补相同；

(b)蛋白酪氨酸激酶抑制剂；和

(c)药学上可接受的辅料剂。

15.权利要求14中所述组合物，其寡核苷酸第一区序列至少有80％等同于存在SEQ ID NO： 1-140和169-234中至少含10个连续单体的区的序列。

16.权利要求15中所述组合物，其寡核苷酸第一区序列至少有80％等同于存在SEQ ID NO：1，54，200或211中至少含10个连续单体的区的序列。

17.权利要求15中所述组合物，其寡核苷酸第一区序列至少有80％等同于存在SEQ ID NO：169或180中至少含10个连续单体的区的序列。

18.权利要求14中所述组合物，其蛋白酪氨酸激酶抑制剂是指吉非替尼，埃罗替尼，卡奈替尼，凡德他尼，拉帕替尼，索拉非尼，AG-494，RG-13022，RG-14620，BIBW 2992，酪氨酸磷酸化抑制剂AG-825，酪氨酸磷酸化抑制剂9，酪氨酸磷酸化抑制剂23，酪氨酸磷酸化抑制剂25，酪氨酸磷酸化抑制剂46，酪氨酸磷酸化抑制剂47，酪氨酸磷酸化抑制剂53，紫铆查尔酮，姜黄素，AG-1478，AG-879，环丙烷羧酸-(3-(6-(3-三氟甲基苯胺)-嘧啶-4-y1氨基)-苯基)-酰胺，N8-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(1-甲基哌啶-4-y1)-嘧啶并[5，4-d]嘧啶-2，8-二胺，2HCl(CAS 196612-93-8)，4-(4-苄氧基苯胺)-6，7-二甲氧基，N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)吡啶并

嘧啶-6-y1)2-布替那明(CAS 881001-19-0)，EKB-569，HKI-272和HKI-357。

19.权利要求18中所述组合物中蛋白质酪氨酸激酶抑制剂选自吉非替尼，埃罗替尼，拉帕，卡奈替尼和索拉菲尼。

20.权利要求14中所述组合物中，第一区中至少一个单体是核苷类似物，并选自LNA单体，含有2′-O-烷基-核酸糖的单体，含有2′-O-甲基-核酸糖的单体，含有2′-氨基-脱氧核糖的单体，含有2′氟-脱氧核糖的单体。

21.权利要求20中所述组合物中，其第一区至少有一个单体是LNA单体。

22.药物组合物包括：

(a)寡核苷酸序列：

5’-T_sA_sG_sc_sc_st_sg_st_sc_sa_sc_st_st_s ^MeC_sT_s ^MeC-3’(SEQ ID NO：180)，

其中，大写字母表示β-D-氧-LNA单体，小写字母表示DNA单体，下标“S”指硫磷酰连结， ^MeC表示含有5-甲基胞嘧啶碱基的β-D-氧-LNA单体；

(b)吉非替尼；及

(c)药学上可接受的辅料剂。

23.药物组合物包括：

(a)寡核苷酸的共轭由10至50个连续单体组成，其中毗邻的单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连接，

其中，该寡核苷酸由至少包含10个连续单体的第一区组成；

其中，该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

其中，其中该第一区序列至少80％与哺乳动物HER3基因或哺乳动物HER3 mRNA的最佳对齐目标区域的逆补相同；

(b)蛋白酪氨酸激酶抑制剂；和

(c)药学上可接受的辅料剂。

24.权利要求23所述组合物中，该共轭是寡核苷酸共轭，包含以下序列：

其中，大写字母表示β-D-氧-LNA单体，小写字母表示DNA单体，下标“S”指硫磷酰连结， ^MeC表示含有5-甲基胞嘧啶碱基的β-D-氧-LNA单体。

其中，所述蛋白质激酶抑制剂是吉非替尼。

25.一种抑制哺乳动物细胞增生的方法，包括连结该细胞与：

(a)有效量的包含10至50个连续单体的寡核苷酸，其中毗邻单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连结，

其中，所述寡核苷酸包括一个至少有10个连续单体的第一区；

其中，该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

其中，该第一区序列至少80％与哺乳动物HER3基因或哺乳动物HER3 mRNA的最佳对齐目标区域的逆补相同；及

(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

26.权利要求25所述的方法中，该寡核苷酸序列如下：

其中，所述蛋白质激酶抑制剂是吉非替尼。

27.权利要求25所述的方法中，与同类型的未经治疗的该细胞相比，对细胞的增生的抑制至少达到30％。

28.权利要求25所述的方法中，所述细胞是指以下癌细胞：前列腺癌细胞，乳腺癌细胞，肺癌细胞和上皮癌细胞。

29.抑制哺乳动物细胞增生的方法，包括连结该细胞与：

(a)有效量的包含10至50个连续单体的寡核苷酸共轭物，其中毗邻单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连结，

其中，该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

30.权利要求29所述的方法中，该共轭物是寡核苷酸共轭物由以下序列组成：

其中，所述蛋白质激酶抑制剂是吉非替尼。

31.抑制哺乳动物体内细胞增生的方法，包括连结哺乳动物组织与：

(a)有效量的10-50个连续单体组成的寡核苷酸

其中，相邻单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连接，

其中，该寡核苷酸由包括至少10个连续单体的第一区构成；

其中，该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

32.权利要求31所述的方法中，该寡核苷酸序列的构成如下：

其中，所述蛋白质激酶抑制剂是吉非替尼。

33.一种治疗哺乳动物癌症的方法，包括对该哺乳动物使用：

(a)有效量的10-50个连续单体组成的寡核苷酸，其中毗邻单体由磷酸盐组或磷硫酰组共价连接，

其中，该寡核苷酸由包括至少10个连续单体的第一区构成；

其中，该第一区至少有一个单体是核苷类似物；

(b)有效量的蛋白酪氨酸激酶抑制剂。

34.权利要求33所述的方法中，寡核苷酸序列的构成如下：

其中，所述蛋白质激酶抑制剂是吉非替尼。

35.权利要求34所述方法中，所指癌症是指非霍奇金淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，急性白血病，急性淋巴细胞白血病，急性髓细胞性白血病，慢性粒细胞白血病，慢性淋巴细胞白血病，多发性骨髓瘤，结肠癌，直肠癌，上皮癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，前列腺癌，肾细胞癌，肝癌，胆道癌，绒毛膜癌，宫颈癌，睾丸癌，肺癌，膀胱癌，黑色素瘤，头颈部肿瘤，脑肿瘤，不明原发灶癌，肿瘤，周围神经系统癌症，中枢神经系统，纤维肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，软骨肉瘤，骨肉瘤，脊索瘤，血管肉瘤，肉皮肉瘤，淋巴管肉瘤，淋巴管内皮肉瘤，滑膜瘤，间皮瘤，尤因氏瘤，平滑肌肉瘤，横纹肌肉瘤，鳞状细胞癌，基底细胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳头状癌，乳头状腺癌，囊腺癌，髓样癌，支气管癌，精原细胞瘤，胚胎癌，肾母细胞瘤肿瘤，小细胞肺癌，上皮癌，神经胶质瘤，星形细胞瘤，髓母细胞瘤，颅咽管瘤，室管膜瘤，松果体瘤，血管母细胞瘤，听神经瘤，少突神经胶质瘤，脑膜瘤，神经母细胞瘤和视网膜母细胞瘤。

36.权利要求33所述方法中，该寡核苷酸和该蛋白酪氨酸激酶抑制剂要分别用药。

37.权利要求33所述方法中，该寡核苷酸和该蛋白酪氨酸激酶抑制剂同时或一起用药。

38.权利要求33所述方法中，该寡核苷酸和该蛋白酪氨酸激酶抑制剂要顺序用药。

39.权利要求33所述的方法中，该寡核苷酸和蛋白酪氨酸激酶抑制剂是适合口服的药物剂型。

40.权利要求33所述方法中，该寡核苷酸为静脉注射的药品剂型，蛋白酪氨酸激酶抑制剂是适合口服的药品剂型。

41.权利要求35所述方法中，所指癌症是肺癌，前列腺癌，乳腺癌和上皮癌。

42.权利要求33所述方法中，该哺乳动物是指人类。

43.在制备药剂时对目标为HER3的LNA单体的用法中，该药剂是与蛋白酪氨酸激酶抑制剂组合用来治疗肿瘤的药剂。

44.根据权利要求43所述的用法中，蛋白酪氨酸激酶抑制剂是指吉非替尼，埃罗替尼，卡奈替尼，凡德他尼，拉帕替尼，索拉非尼，AG-494，RG-13022，RG-14620，BIBW 2992，酪氨酸磷酸化抑制剂AG-825，酪氨酸磷酸化抑制剂9，酪氨酸磷酸化抑制剂23，酪氨酸磷酸化抑制剂25，酪氨酸磷酸化抑制剂46，酪氨酸磷酸化抑制剂47，酪氨酸磷酸化抑制剂53，紫铆查尔酮，姜黄素，AG-1478，AG-879，环丙烷羧酸-(3-(6-(3-三氟甲基苯胺)-嘧啶-4-y1氨基)-苯基)-酰胺，N8-(3-氯-4-氟苯基)-N2-(1-甲基哌啶-4-y1)-嘧啶并[5，4-d]嘧啶-2，8-二胺，2HCl(CAS 196612-93-8)，4-(4-苄氧基苯胺)-6，7-二甲氧基，N-(4-((3-氯-4-氟苯基)氨基)吡啶并

嘧啶-6-y1)2-布替那明(CAS 881001-19-0)，EKB-569，HKI-272和HKI-357。

45.根据权利要求44所述的用法中，该蛋白酪氨酸激酶抑制剂选自吉非替尼，厄洛替尼，拉帕替尼，卡奈替尼和索拉菲尼。

46.根据权利要求44所述的用法中，该蛋白酪氨酸激酶抑制剂是吉非替尼。

47.在由目标为HER3的LNA寡核苷酸组成的药剂中，所述药剂是与蛋白酪氨酸激酶抑制剂组合用来治疗肿瘤的药剂。

48.癌症治疗的组合装中，该组合装包括酪氨酸蛋白激酶与目标为HER3的LNA寡核苷酸。