JP2022506958A - Ｍｉｒ－１０ｂ活性を調節するためのマイクロｒｎａ化合物及び方法 - Google Patents

Abstract

ｍｉＲ－１０ｂ活性を阻害するための組成物及び方法が本明細書に記載される。組成物は、神経膠腫などのがんを有する対象に投与され得る。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月１３日に出願された米国仮出願第６２／７６０，５４６号の優先権の利益を主張し、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

ｍｉＲ－１０ｂ活性の調節のための方法及び組成物が本明細書に提供される。

「成熟マイクロＲＮＡ」としても知られるマイクロＲＮＡ（ＭｉｃｒｏＲＮＡ）（マイクロＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ））は小さく（約１８～２４ヌクレオチドの長さ）、植物及び動物のゲノムにコードされている非コードＲＮＡ分子である。特定の事例では、高度に保存され、内因的に発現したマイクロＲＮＡは、特定のｍＲＮＡの３’非翻訳領域（３’－ＵＴＲ）に結合することによって、遺伝子の発現を調節する。１０００を超える異なるマイクロＲＮＡが植物及び動物で同定されている。特定の成熟マイクロＲＮＡは、長さが数百ヌクレオチドであることが多い長い内因性一次マイクロＲＮＡ転写産物（ｐｒｉ－マイクロＲＮＡ、ｐｒｉ－ｍｉｒ、ｐｒｉ－ｍｉＲ、またはｐｒｉ－ｐｒｅ－マイクロＲＮＡとしても知られている）に由来するようである（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，２００２，２１（１７），４６６３－４６７０）。

マイクロＲＮＡの機能分析は、これらの小さな非コードＲＮＡが、発生タイミング、器官形成、分化、パターン形成、胚形成、成長制御、プログラム細胞死など、動物のさまざまな生理学的プロセスに寄与することを明らかにした。マイクロＲＮＡが関与する特定のプロセスの例には、幹細胞分化、神経新生、血管新生、造血、及びエキソサイトーシスが含まれる（Ａｌｖａｒｅｚ－Ｇａｒｃｉａ ａｎｄ Ｍｉｓｋａ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００５，１３２，４６５３－４６６２で概説される）。

マイクロＲＮＡはまた、腫瘍抑制因子を標的とすることによって発がんと関連付けられている（Ｇａｂｒｉｅｌｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１，７１（１０）：３５６３－３５７２を参照されたい）。例えば、ｍｉＲ－１０ｂは、様々ながんにおける予後不良と関連する強力な発がん性マイクロＲＮＡである（Ｔｅｐｌｙｕｋ Ｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１６，８（３），２６８－２８７）。がんの種類及び遺伝的背景に基づいて、ｍｉＲ－１０ｂは、様々な遺伝子を直接的に標的化することによって、腫瘍細胞の増殖、生存、及び遊走を促進することができる。特に、ｍｉＲ－１０ｂは、乳癌及び扁平上皮癌細胞の浸潤ならびに転移を調節することが報告されている。

ｍｉＲ－１０ｂの固有の特性は、それが神経膠腫（すなわち、神経膠細胞から成長する原発性脳癌）において高度に発現されるが、正常な神経膠細胞においては存在しないことである。培養した神経膠腫細胞では、ｍｉＲ－１０ｂは、標的遺伝子の細胞周期及び選択的スプライシングを調節する（Ｔｅｐｌｙｕｋ２０１６を参照されたい）。

グレードＩＶ星状細胞腫とも称され得る神経膠芽腫は、成人における最高グレードの悪性神経膠腫及び最も一般的な悪性原発性脳腫瘍である。神経膠芽腫患者は、有効な治療が欠如しているため、約１４ヶ月の生存期間中央値を有する。約９０％の神経膠芽腫症例が、ｍｉＲ－１０ｂの高発現を示し、腫瘍発達におけるその潜在的な役割を支持する。神経膠腫におけるｍｉＲ－１０ｂの高発現のプロファイル及び正常な神経膠腫細胞におけるその欠如は、ｍｉＲ－１０ｂを標的とする療法が神経膠腫の有効な治療であり得ることを示唆する。

実施形態１．修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_ＫＵ_ＥＵ_ＥＣ_ＥＵ_ＥＡ_ＥＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、化合物。

実施形態２．修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、「Ｃ」が、非メチル化シトシンであり、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態１に記載の化合物。

実施形態３．修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_ＫＵ_ＥＣ_ＥＧ_ＫＧ_ＥＵ_ＥＵ_ＫＣ_ＥＵ_ＥＡ_ＫＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、化合物。

実施形態４．修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＧ_ＫＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｋ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態３に記載の化合物。

実施形態５．９個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドが、以下の構造を含み：
５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、化合物。

実施形態６．修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「Ｃ」が、非メチル化シトシンであり、上付き文字「Ｏ」が、ホスホジエステル連結を示し、互いのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、実施形態７に記載の化合物。

実施形態７．化合物が、修飾オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩からなる、実施形態１～６のいずれか１つに記載の化合物。

実施形態８．薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩である、実施形態１～７のいずれか１つに記載の化合物。

実施形態９．実施形態１～８のいずれか１つに記載の化合物、及び薬学的に許容される希釈剤を含む、薬学的組成物。

実施形態１０．薬学的に許容される希釈剤が、水溶液である、実施形態９に記載の薬学的組成物。

実施形態１１．水溶液が、生理食塩水である、実施形態１０に記載の薬学的組成物。

実施形態１２．実施形態１～８のいずれか１つに記載の化合物を含み、それが凍結乾燥組成物である、薬学的組成物。

実施形態１３．生理食塩水中の実施形態１～８のいずれか１つに記載の化合物から本質的になる、薬学的組成物。

実施形態１４．神経膠腫を治療する方法であって、神経膠腫を有する対象に、実施形態１～６のいずれか１つに記載の化合物、または実施形態９～１１または１３のいずれか１つに記載の薬学的組成物を投与することを含む、方法。

実施形態１５．神経膠腫が、びまん性星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起神経膠腫、退形成性乏突起神経膠腫、びまん性正中線神経膠腫、または神経膠芽腫である、実施形態１４に記載の方法。

実施形態１６．化合物または薬学的組成物が、腫瘍内に投与される、実施形態１４または１５に記載の方法。

実施形態１７．びまん性星状細胞腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態１８．退形成性星状細胞腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態１９．乏突起神経膠腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異、及び染色体腕１ｐ及び１９ｑの欠失を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態２０．退形成性乏突起神経膠腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異、及び染色体腕１ｐ及び１９ｑの欠失を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態２１．びまん性正中線神経膠腫が、ヒストンＨ３（Ｈ３）Ｋ２７Ｍ変異を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態２２．神経膠芽腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含まない、実施形態１５に記載の方法。

実施形態２３．神経膠芽腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、実施形態１５に記載の方法。

実施形態２４．神経膠腫が、再発性神経膠腫である、実施形態１４～２３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２５．イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異が、ＩＤＨ１またはＩＤＨ２遺伝子変異である、実施形態１７、１８、１９、２０、２２、または２３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２６．化合物または薬学的組成物の投与後に、腫瘍サイズが減少し、及び／または腫瘍数が減少する、実施形態１４～２５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２７．化合物または薬学的組成物の投与が、対象の無増悪生存期間を増加させる、実施形態１４～２６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２８．化合物または薬学的組成物の投与が、対象の全生存期間を増加させる、実施形態１４～２７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態２９．化合物の投与が、対象の生活の質を改善する、実施形態１４～２８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３０．少なくとも１つの追加の抗がん療法を施すことを含む、実施形態１４～２９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３１．少なくとも１つの追加の療法が、外科的切除、放射線療法、腫瘍治療分野、及び１つ以上の化学療法剤から選択される、実施形態３０に記載の方法。

実施形態３２．化学療法剤が、カルムスチン、テモゾロミド、及びベバシズマブから選択される、実施形態３１に記載の方法。

実施形態３３．化学療法剤が、テモゾロミドである、実施形態３１に記載の方法。

実施形態３４．少なくとも１つの追加の抗がん療法が、外科的切除、放射線療法、及びテモゾロミドを含む、実施形態３０に記載の方法。

ＲＧ５５７９単独、テモゾロミド（ＴＭＺ）単独、またはＲＧ５５７９及びＴＭＺの組み合わせを投与した多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ）モデルマウスの生存率を示す。

別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。特別な定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、合成有機化学、ならびに医化学及び製薬化学に関連して用いられる命名法、ならびにそれらの手順及び技法は、当該技術分野において周知であり、一般的に使用されるものである。本明細書の用語に複数の定義がある場合は、本項の定義が優先される。標準的な技法が、化学合成、化学分析、薬学的調製、製剤化及び送達、ならびに患者の治療のために使用され得る。特定のそのような技法及び手順は、例えば、「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｓａｎｇｖｉ ａｎｄ Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４、及び「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０に見ることができ、これは、任意の目的のために、参照により本明細書に組み込まれる。許容される場合、本明細書の開示全体を通して参照されるすべての特許、特許出願、公開出願及び刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫシーケンス、ウェブサイト、ならびに他の公開された資料は、特に明記しない限り、それらの全体が参照により組み込まれる。ＵＲＬまたは他のそのような識別子またはアドレスを参照する場合、そのような識別子は変わる可能性があり、インターネット上の特定の情報は変わる可能性があることが理解されるが、同等の情報は、インターネットを検索することによって見つけることができる。それらへの参照は、そのような情報の入手可能性と一般への普及を証明するものである。

本発明の組成物及び方法を開示及び記載する前に、本明細書において使用される専門用語は、特定の実施形態を説明する目的のためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないことを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上、別途明確に指示されない限り、複数形の指示対象を含むことに留意されなければならない。

定義
「神経膠腫」とは、グリア細胞から成長する原発性脳腫瘍を意味する。特定の実施形態では、神経膠腫としては、これらに限定されないが、例えば、星状細胞腫などの星状細胞に由来するがん、例えば、乏突起神経膠腫などの乏突起膠細胞に由来するがん、及び乏突起星状細胞腫などの混合起源のがんが含まれる。「神経膠腫」という用語は、悪性神経膠腫である神経膠芽腫（または多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ））も含む。

「転移」とは、がんが原発性腫瘍として最初に生じた場所から体内の他の場所に広がるプロセスを意味する。原発性腫瘍の転移性進行は、隣接する原発性腫瘍細胞からの解離、循環における生存、及び二次位置における成長を含む、複数の段階を反映する。

「全生存期間」とは、対象が疾患の診断または治療後に生存する期間を意味する。特定の実施形態では、疾患は、がんである。いくつかの実施形態では、全生存時間は、診断後の生存である。いくつかの実施形態では、全生存時間は、治療開始後の生存である。

「無増悪生存期間」とは、疾患を有する対象が疾患が悪化することなく、生存する期間を意味する。特定の実施形態では、無増悪生存期間は、疾患を病期分類またはスコアリングすることによって評価される。特定の実施形態では、肝臓癌を有する対象の無増悪生存は、腫瘍サイズ、腫瘍数、及び／または転移を評価することによって評価される。

「さらなる進行を停止する」とは、病状の進行状態への移行を停止することを意味する。

「さらなる進行を遅延させる」とは、病状が進行状態に向かって移行する速度を低減することを意味する。

「平均余命を改善する」とは、対象における疾患の１つ以上の症状を治療することによって対象の寿命を延長することを意味する。

「生活の質」とは、対象の身体的、心理的、及び社会的機能が疾患及び／または疾患の治療によって損なわれる程度を意味する。

「抗ｍｉＲ」とは、マイクロＲＮＡに相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、抗ｍｉＲは、修飾オリゴヌクレオチドである。

「抗ｍｉＲ－１０ｂ」とは、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを意味する。特定の実施形態では、抗ｍｉＲ－１０ｂは、ｍｉＲ－１０ｂに完全に相補的である（すなわち、１００％相補的である）。特定の実施形態では、抗ｍｉＲ－１０ｂは、ｍｉＲ－１０ｂと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％相補的である。

「ｍｉＲ－１０ｂ」とは、核酸塩基配列ＵＡＣＣＣＵＧＵＡＧＡＡＣＣＧＡＡＵＵＵＧＵＧ（配列番号１）を有する成熟ｍｉＲＮＡを意味する。

「ｍｉＲ－１０ｂシード配列」とは、ｍｉＲ－１０ｂに存在する核酸塩基配列５’－ＡＣＣＣＵＧ－３’を意味する。

「それを必要とする対象」とは、療法または治療を必要とすると特定された対象を意味する。

「有することが疑われる対象」とは、疾患の１つ以上の臨床的指標を呈する対象を意味する。

「ｍｉＲ－１０ｂに関連する疾患」とは、ｍｉＲ－１０ｂの活性によって調節される疾患または状態を意味する。

「投与すること」とは、対象に医薬剤または組成物を提供することを意味し、これらに限定されないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。

「非経口投与」とは、注射または注入を介した投与を意味する。
非経口投与としては、これらに限定されないが、皮下投与、静脈内投与、及び筋肉内投与が挙げられる。

「皮下投与」とは、皮膚の直下への投与を意味する。

「静脈内投与」とは、静脈内への投与を意味する。

「同時に投与される」とは、両方の薬理学的効果が同時に患者に現れる、任意の方法での２つ以上の薬剤の共投与を指す。同時投与は、両方の薬剤が、単一の薬学的組成物で、同じ剤形で、または同じ投与経路によって投与されることを必要としない。両方の薬剤の効果は、同時にそれらが現れる必要はない。効果は、ある期間重なることのみを必要とし、同一の広がりを有する必要はない。

「期間」とは、活性または事象が継続している期間を意味する。特定の実施形態では、治療期間とは、医薬品の投薬期間である。

「療法」とは、疾患の治療方法を意味する。特定の実施形態では、療法としては、これらに限定されないが、化学療法、放射線療法、または医薬剤の投与が含まれる。

「治療」または「治療する」とは、疾患の治癒または改善のために使用される１つ以上の特定の手順を適用することを意味する。特定の実施形態では、特定の手順は、１つ以上の医薬剤を投与することである。

「改善する」とは、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度が低下することを意味する。特定の実施形態では、改善は、状態または疾患の１つ以上の指標の進行を遅延させることまたは減速させることを含む。指標の重症度は、当業者に既知である主観的尺度または客観的尺度によって決定され得る。

「発症のリスクがある」とは、対象が状態または疾患を発症する素因がある状態を意味する。特定の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクのある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、状態または疾患を有すると診断されるのに十分な数の症状を呈さない。特定の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクのある対象は、状態または疾患の１つ以上の症状を呈するが、状態または疾患を有すると診断される必要がある程度は低い。

「発生を予防する」とは、疾患または状態を発症するリスクのある対象において、状態または疾患の発症を予防することを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクのある対象は、疾患または状態をすでに有する対象が受ける治療と同様の治療を受ける。

「発生を遅延させる」とは、疾患または状態を発症するリスクがある対象において、状態または疾患の発症を遅延させることを意味する。特定の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクのある対象は、疾患または状態をすでに有する対象が受ける治療と同様の治療を受ける。

「用量」とは、単回投与で提供される医薬剤の特定の量を意味する。特定の実施形態では、用量は、２回以上のボーラス、錠剤、または注射で投与され得る。例えば、特定の実施形態では、皮下投与が所望される場合、所望の用量は、単回注射では容易に対応できない体積を必要とする。そのような実施形態では、２回以上の注射を使用して、所望の用量を達成し得る。特定の実施形態では、用量は、個体における注射部位反応を最小化するために、２回以上の注射で投与され得る。特定の実施形態では、用量は、緩徐な注入として投与される。

「投薬単位」とは、医薬剤が提供される形態を意味する。特定の実施形態では、投薬単位は、凍結乾燥されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態では、投薬単位は、再構成されたオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。

「治療有効量」とは、動物に治療的利益をもたらす医薬剤の量を指す。

「薬学的組成物」とは、個体への投与に好適な物質の混合物を意味し、医薬剤を含む。例えば、薬学的組成物は、滅菌水溶液を含み得る。

「医薬剤」とは、対象に投与される場合に治療的効果をもたらす物質を意味する。

「有効な薬学的成分」とは、所望の効果をもたらす薬学的組成物中の物質を意味する。

「薬学的に許容される塩」とは、本明細書に提供される化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ対象に投与される場合に望ましくない毒物学的効果を有さない塩を意味する。本明細書に提供される化合物の非限定的な例示的な薬学的に許容される塩としては、ナトリウム及びカリウムの塩形態が含まれる。本明細書で使用される場合、「化合物」、「オリゴヌクレオチド」、及び「修飾オリゴヌクレオチド」という用語は、特に明記しない限り、その薬学的に許容される塩を含む。

「生理食塩水」とは、塩化ナトリウムの水溶液を意味する。

「器官機能の改善」とは、正常な限界に向かう臓器機能の変化を意味する。特定の実施形態では、器官機能は、対象の血液または尿中に見出される分子を測定することによって評価される。例えば、特定の実施形態では、肝機能の改善は、血中の肝トランスアミナーゼレベルの低下によって測定される。特定の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の減少、タンパク尿の減少、アルブミン尿の減少などによって測定される。

「許容可能な安全性プロファイル」とは、臨床的に許容可能な制限内にある副作用のパターンを意味する。

「副作用」とは、所望の効果以外の、治療に起因する生理学的応答を意味する。特定の実施形態では、副作用としては、これらに限定されないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、及びミオパシーが含まれる。そのような副作用は、直接的または間接的に検出され得る。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。

本明細書で使用される場合、「血液」という用語は、血清及び血漿等の全血及び血液画分を包含する。

「標的核酸」とは、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。

「標的化」とは、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセスを意味する。

「を標的とする」とは、標的核酸へのハイブリダイゼーションが可能になる核酸塩基配列を有することを意味する。

「標的係合」とは、オリゴヌクレオチドがマイクロＲＮＡの活性、発現またはレベルを変化させる様式で、それが相補的であるマイクロＲＮＡとの相互作用を意味する。特定の実施形態では、標的係合とは、マイクロＲＮＡの活性が阻害されるように、それが相補的であるマイクロＲＮＡと相互作用する抗ｍｉＲを意味する。

「変調」とは、機能、量、または活性の摂動を意味する。特定の実施形態では、変調とは、機能、量、または活性の増加を意味する。特定の実施形態では、変調とは、機能、量、または活性の低下を意味する。

「発現」とは、遺伝子のコード化された情報が、細胞内に存在し、かつ細胞内で作動する構造に変換される任意の機能及びステップを意味する。

「核酸塩基配列」とは、オリゴマー化合物または核酸における隣接する核酸塩基の順序を意味し、典型的には、任意の糖、連結、及び／または核酸塩基の修飾とは関係なく、５’から３’の配向で列挙される。

「隣接する核酸塩基」とは、核酸内で互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。

「核酸塩基相補性」とは、２つの核酸塩基が水素結合を介して非共有結合的に対合する能力を意味する。

「相補的」とは、１つの核酸が別の核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができることを意味する。特定の実施形態では、相補的とは、標的核酸にハイブリダイズすることができるオリゴヌクレオチドを指す。

「完全に相補的」とは、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、標的核酸中の対応する各位置において、核酸塩基と対合できることを意味する。特定の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的（１００％相補的とも呼ばれる）であり、すなわち、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、マイクロＲＮＡ中の対応する位置において、核酸塩基に相補的である。修飾オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的であり得、かつマイクロＲＮＡの長さよりも短い複数の連結ヌクレオシドを有し得る。例えば、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基がマイクロＲＮＡ中の対応する位置において核酸塩基に相補的である、１６個の連結ヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡに完全に相補的である。

「パーセント相補性」とは、標的核酸の等長部分に相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の割合を意味する。パーセント相補性は、標的核酸中の対応する位置において核酸塩基に相補的であるオリゴヌクレオチドの核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチド中の核酸塩基の総数で割ることによって計算される。

「パーセント同一性」とは、第２の核酸中の対応する位置において核酸塩基と同一である第１の核酸中の核酸塩基の数を、第１の核酸中の核酸塩基の総数で割ったものを意味する。特定の実施形態では、第１の核酸は、マイクロＲＮＡであり、第２の核酸は、マイクロＲＮＡである。特定の実施形態では、第１の核酸は、オリゴヌクレオチドであり、第２の核酸は、オリゴヌクレオチドである。

「ハイブリダイゼーション」とは、核酸塩基の相補性によって起こる相補的な核酸のアニーリングを意味する。

「ミスマッチ」とは、第２の核酸の対応する位置において、核酸塩基とワトソンクリック対合することができない第１の核酸の核酸塩基を意味する。

核酸塩基配列の文脈における「同一」とは、糖、連結、及び／または核酸塩基修飾とは関係なく、かつ存在する任意のピリミジンのメチル化状態とは関係なく、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。

「マイクロＲＮＡ」とは、長さが１８～２５核酸塩基である内因性非コードＲＮＡを意味し、酵素ダイサーによるプレマイクロＲＮＡの切断の産物である。成熟マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅとして既知であるマイクロＲＮＡデータベースに見られる（ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡは、「ｍｉＲ」と略される。

「マイクロＲＮＡ制御転写物」とは、マイクロＲＮＡによって調節される転写物を意味する。

「シードマッチ配列」とは、シード配列に相補的であり、かつシード配列と同じ長さである、核酸塩基配列を意味する。

「オリゴマー化合物」とは、複数の連結モノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物としては、オリゴヌクレオチドが挙げられる。

「オリゴヌクレオチド」とは、各々が互いに独立して、修飾または非修飾であり得る、複数の連結ヌクレオシドを含む化合物を意味する。

「天然に存在するヌクレオシド間連結」とは、ヌクレオシド間の３’から５’へのホスホジエステル連結を意味する。

「天然糖」とは、ＤＮＡ（２’－Ｈ）またはＲＮＡ（２’－ＯＨ）に見られる糖を意味する。

「ヌクレオシド間連結」とは、隣接しているヌクレオシド間の共有結合を意味する。

「連結ヌクレオシド」とは、共有結合によって結合されたヌクレオシドを意味する。

「核酸塩基」とは、別の核酸塩基と非共有結合的に対合することができる複素環部分を意味する。

「ヌクレオシド」とは、糖部分に連結された核酸塩基を意味する。

「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合しているホスフェート基を有するヌクレオシドを意味する。

複数の連結ヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」とは、特定の数の連結ヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。したがって、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含み得る。特に明記しない限り、修飾オリゴヌクレオチドは、相補鎖にハイブリダイズされず、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのものを超える任意の追加のヌクレオシドを含まない。

「修飾オリゴヌクレオチド」とは、天然に存在する末端、糖、核酸塩基、及び／またはヌクレオシド間連結と比較して１つ以上の修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含み得る。

「修飾ヌクレオシド」とは、天然に存在するヌクレオシドからの任意の変化を有するヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び修飾核酸塩基を有し得る。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有し得る。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、非二環式ヌクレオシドである。

「修飾ヌクレオシド間連結」とは、天然に存在するヌクレオシド間連結からの任意の変化を意味する。

「ホスホロチオエートヌクレオシド間連結」とは、非架橋原子のうちの１つが硫黄原子であるヌクレオシド間の連結を意味する。

「修飾糖部分」とは、天然糖からの置換及び／または任意の変化を意味する。

「非修飾核酸塩基」とは、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然に存在する複素環式塩基を意味し、プリンは、アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）をベースとし、ピリミジンは、チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５－メチルシトシンなど）、及びウラシル（Ｕ）をベースとする。

「５－メチルシトシン」とは、５位に付着しているメチル基を含むシトシンを意味する。

「非メチル化シトシン」とは、５位に付着しているメチル基を有さないシトシンを意味する。

「５－メチルウラシル」とは、５位に付着しているメチル基を含むウラシルを意味する。５－メチルウラシルはまた、チミンとも称され得る。

「非メチル化ウラシル」とは、５位に付着しているメチル基を有さないウラシルを意味する。

「修飾核酸塩基」とは、非修飾核酸塩基ではない任意の核酸塩基を意味する。

「糖部分」とは、天然に存在するフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。

「修飾糖部分」とは、置換糖部分または糖代理物を意味する。

「２’－Ｏ－メチル糖」または「２’－ＯＭｅ糖」とは、２’位にＯ－メチル修飾を有する糖を意味する。

「２’－Ｏ－メトキシエチル糖」または「２’－ＭＯＥ糖」とは、２’位にＯ－メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。

「２’－フルオロ」または「２’－Ｆ」とは、２’位のフルオロ修飾を有する糖を意味する。

「二環式糖部分」とは、４～７員環の２個の原子を結合して第２の環を形成し、二環式構造をもたらす架橋を含む、４～７員環（これに限定されないが、フラノシルなど）を含む修飾糖部分を意味する。特定の実施形態では、４～７員環は、糖環である。特定の実施形態では、４～７員環は、フラノシルである。特定のそのような実施形態では、架橋は、フラノシルの２’－炭素と４’－炭素を結合する。非限定的な例示的な二環式糖部分としては、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ－ｃＥｔ、及びＲ－ｃＥｔが挙げられる。

「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」とは、４’と２’フラノース環原子との間に（ＣＨ_２）－Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「ＥＮＡ糖部分」とは、４’と２’フラノース環原子との間に（ＣＨ_２）_２－Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「拘束エチル（ｃＥｔ）糖部分」とは、４’と２’フラノース環原子との間にＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ架橋は、Ｓ配向に拘束されている。特定の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏは、Ｒ配向に拘束されている。

「Ｓ－ｃＥｔ糖部分」とは、４’と２’フラノース環原子との間にＳ拘束ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「Ｒ－ｃＥｔ糖部分」とは、４’と２’フラノース環原子との間にＲ拘束ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「２’－Ｏ－メチルヌクレオシド」とは、２’－Ｏ－メチル糖修飾を有する２’－修飾ヌクレオシドを意味する。

「２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシド」とは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖修飾を有する２’－修飾ヌクレオシドを意味する。２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。

「２’－フルオロヌクレオシド」とは、２’－フルオロ糖修飾を有する２’－修飾ヌクレオシドを意味する。２’－フルオロヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。

「二環式ヌクレオシド」とは、二環式糖部分を有する２’－修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を有し得る。

「ｃＥｔヌクレオシド」とは、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾または非修飾核酸塩基を含み得る。

「Ｓ－ｃＥｔヌクレオシド」とは、Ｓ－ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「Ｒ－ｃＥｔヌクレオシド」とは、Ｒ－ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「β－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド」とは、天然に存在するＤＮＡヌクレオシドを意味する。

「β－Ｄ－リボヌクレオシド」とは、天然に存在するＲＮＡヌクレオシドを意味する。「ＬＮＡヌクレオシド」とは、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「ＥＮＡヌクレオシド」とは、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「対象」とは、治療または療法のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。

概要
年間１６０万人以上のアメリカ人ががんと診断されていると推定されている。スクリーニング及び治療が改善されたとしても、がんは依然として米国で心臓病に次いで２番目に多い死因である。

マイクロＲＮＡは、細胞周期及びアポトーシスを調節する腫瘍抑制因子を標的とすることにより、発がんを促進することができる。例えば、ｍｉＲ－１０ｂは、様々な異なるがんからの細胞の浸潤、遊走、及び転移を調節することができる発がん性マイクロＲＮＡである。特に、ｍｉＲ－１０ｂは、神経膠芽腫のすべてのサブタイプにおいて高度に発現されるが、正常な神経膠細胞には存在しない。ｍｉＲ－１０ｂは、神経膠腫細胞における細胞周期及び選択的スプライシングを調節し、ｍｉＲ－１０ｂの阻害は、これらの細胞の増殖及び生存の障害と関連付けられる。

神経膠腫、特に神経膠芽腫は、重大な満たされていない医療ニーズを有し続けている。神経膠芽腫の現在の治療は、著しい毒性及び非常に高い再発率と関連している。集中治療であっても、神経膠芽腫患者の生存期間中央値は約１４ヶ月である。したがって、すべてのがんに対して満たされていないニーズが存在するが、特に神経膠腫は、著しい負担を伴うがんであり、改善された治療が必要である。したがって、ｍｉＲ－１０ｂを阻害することを目的とした治療は、神経膠腫の治療にとって非常に興味深いものである。

したがって、これらの化合物は、ｍｉＲ－１０ｂの活性によって促進される細胞プロセスの調節に有用である。さらに、かかる化合物は、ｍｉＲ－１０ｂに関連する疾患の治療、予防、及び／または発症の遅延に有用である。かかる疾患は、非疾患試料と比較して、ｍｉＲ－１０ｂの異常に高い発現を特徴とし得る。かかる疾患としては、これらに限定されないが、神経膠腫を含むがんが含まれる。

神経膠腫などのがんを有する対象に投与するのに十分に有効であり、便利であり、かつ安全である抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を同定するために、様々な長さ及び化学組成を有する、ｍｉＲ－１０ｂを標的とする約２１５個の修飾オリゴヌクレオチドが設計された。化合物の長さは、９～２３個の連結ヌクレオシドの範囲であり、化合物は、化学飾の数、種類、及び配置が異なる。薬理学として、薬物動態挙動及び安全性は、化合物の化学構造に基づいて単純に予測することができないため、好ましくない特性を有する化合物を排除するように設計された一連のアッセイにおいて、化合物を、効力、有効性、薬物動態挙動、安全性、及び代謝安定性を含む特徴について、インビトロ及びインビボの両方について評価した。本明細書に記載されるように、約２１５個の化合物を、より複雑なインビボアッセイ（例えば、薬物動態プロファイル、有効性、毒性）におけるさらなる試験に好適な化合物のより小さなセットを特定するために、いくつかのインビトロアッセイ（例えば、効力、毒性、代謝安定性）で最初に試験した。このスクリーニングプロセスにより、神経膠腫を含むがんの治療のための候補薬剤を特定した。

ｍｉＲ－１０ｂを標的とする特定の修飾オリゴヌクレオチド
ｍｉＲ－１０ｂを標的とする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物が本明細書に提供される。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_ＫＵ_ＥＵ_ＥＣ_ＥＵ_ＥＡ_ＥＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、「Ｃ」が、非メチル化シトシンであり、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドは、以下の構造を含み：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_ＫＵ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＧ_ＫＧ_ＥＵ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＣ_ＥＵ_ＥＡ_Ｋ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＧ_ＫＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｋ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドが、以下の構造を含み：
５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシドからなり、修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、各Ｕが、非メチル化ウラシルであり、各Ｃが、非メチル化シトシンであり、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である。

修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩が本明細書に提供される。特定の実施形態では、薬学的に許容される塩は、ナトリウム塩である。

いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、分子あたりのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル連結よりも少ないカチオン性対イオン（Ｎａ^＋など）を含む（すなわち、いくつかのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル連結は、プロトン化される）。いくつかの実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの薬学的に許容される塩は、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたり１７個未満のカチオン性対イオン（Ｎａ^＋など）を含む。すなわち、いくつかの実施形態では、薬学的に許容される塩は、平均して、修飾オリゴヌクレオチドの分子あたり１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のカチオン性対イオンを含み得、残りのホスホロチオエート及び／またはホスホジエステル基は、プロトン化されている。

本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチドのうちのいずれかを含む化合物がさらに提供される。

本発明の特定の用途
細胞内のｍｉＲ－１０ｂの活性を阻害するための方法が本明細書に提供され、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な核酸塩基配列を含む、本明細書に提供される化合物と細胞を接触させることを含む。特定の実施形態では、細胞は、がん細胞である。特定の実施形態では、細胞は、神経膠腫細胞である。

特定の実施形態では、がん細胞を本明細書に提供される化合物と接触させることは、がん細胞においてアポトーシスを誘導する。特定の実施形態では、がん細胞を本明細書に提供される化合物と接触させることは、細胞増殖を減少させる。

ｍｉＲ－１０ｂの活性を阻害するための方法が本明細書に提供され、本明細書に提供される薬学的組成物を対象に投与することを含む。特定の実施形態では、対象は、ｍｉＲ－１０ｂに関連する疾患を有する。特定の実施形態では、ｍｉＲ－１０ｂに関連する疾患は、神経膠腫である。

対象における神経膠腫を治療するための方法が本明細書に提供され、神経膠腫を有する対象に、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な核酸塩基配列を含む、本明細書に提供される化合物を投与することを含む。

神経膠腫は、膠細胞から生じる脳のがんである。膠細胞には、血液脳関門を維持することに加えて、一緒に神経細胞にエネルギー及び栄養素を提供するように機能する、星状細胞、乏突起膠細胞、小膠細胞、及び末梢細胞が含まれる。膠腫は、遺伝的及び／または組織学的特徴に基づいて分類される。遺伝的特徴としては、これらに限定されないが、染色体損失、染色体転座、染色体増幅、及び遺伝子変異が含まれる。例えば、神経膠腫は、染色体腕１ｐ及び１９ｑの欠失、及び／またはイソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子の変異によって特徴付けられ得る。組織病理学的特徴としては、起源の細胞型、系譜関連タンパク質の発現、超構造特徴付け、及び分化レベルが含まれる。例えば、神経膠腫は、びまん性（広範囲に広がる）または退形成性性（分化が不十分）として特定され得る。特定の事例では、神経膠腫は、例えば、不十分な遺伝情報である場合、特に定義された遺伝群に分類されない場合がある。そのような場合、神経膠腫には、「別段指定されない（ＮＯＳ）」という指定が与えられる。

神経膠腫は、神経膠腫瘍細胞がいかに迅速に分裂しているか、及び細胞が近くの組織に浸潤する可能性に基づいて、さらにグレード化され得る。神経膠腫には、攻撃性が最も低いものから最も高いものまで、Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのグレードが割り当てられる。

特定の実施形態では、神経膠腫は、世界保健機関（ＷＨＯ）分類システム及び中枢神経系の腫瘍のグレーディングシステムに基づいて分類される（Ｌｏｕｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈ，２０１６，１３１：８０３－８２０）。

特定の実施形態では、神経膠腫は、星状細胞から生じ、星状細胞腫として分類される。特定の実施形態では、神経膠腫は、乏突起膠細胞から生じ、乏突起神経膠腫として分類される。特定の実施形態では、神経膠腫は、星状細胞及び乏突起膠細胞から生じる混合起源であり、乏突起星状細胞腫として分類される。特定の実施形態では、神経膠腫は、上衣細胞から生じ、上衣腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、びまん性星状細胞腫である。特定の実施形態では、びまん性星状細胞腫は、ＩＤＨ遺伝子変異を含む。特定の実施形態では、びまん性星状細胞腫は、ＩＤＨ遺伝子変異を含む大円形細胞性星状細胞腫である。特定の実施形態では、びまん性星状細胞腫は、別途指定されないものとして分類される。びまん性星状細胞腫は、一般的にグレードＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、退形成性星状細胞腫である。特定の実施形態では、退形成性星状細胞腫は、ＩＤＨ遺伝子変異を含む。特定の実施形態では、退形成性星状細胞腫は、別途指定されないものとして分類される。退形成性星状細胞腫は、一般的にグレードＩＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、神経膠芽腫である。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、ＩＤＨ遺伝子変異を含まない。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、巨大細胞神経膠芽腫である。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、神経膠肉腫である。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、類上皮神経膠芽腫である。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、別途指定されないものとして分類される。特定の実施形態では、神経膠芽腫は、ＩＤＨ遺伝子変異を含む。神経膠芽腫は、一般的にグレードＩＶの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、びまん性正中線神経膠腫である。特定の実施形態では、びまん性正中線神経膠腫は、ヒストンＨ３（Ｈ３）Ｋ２７Ｍ変異を含む。びまん性正中線神経膠腫は、一般的にグレードＩＶ神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、乏突起神経膠腫である。特定の実施形態では、乏突起神経膠腫は、ＩＤＨ遺伝子変異、ならびに染色体腕１ｐ及び染色体腕１９ｑの欠失を含む。特定の実施形態では、乏突起神経膠腫は、別途指定されないものとして分類される。一般的に、乏突起神経膠腫は、グレードＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、退形成性乏突起神経膠腫である。特定の実施形態では、退形成性乏突起神経膠腫は、ＩＤＨ遺伝子変異、ならびに染色体腕１ｐ及び染色体腕１９ｑの欠失を含む。特定の実施形態では、退形成性乏突起神経膠腫は、別途指定されないものとして分類される。一般的に、退形成性乏突起神経膠腫は、グレードＩＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、乏突起星状細胞腫である。特定の実施形態では、乏突起星状細胞腫は、別途指定されないものとして分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、退形成性乏突起星状細胞腫である。特定の実施形態では、退形成性乏突起星状細胞腫は、別途指定されないものとして分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、毛様細胞性星状細胞腫である。特定の実施形態では、毛様細胞性星状細胞腫は、毛様類粘液性星状細胞腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、上衣下巨大細胞星状細胞腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、多形性黄色星状膠細胞腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、退形成性多形性黄色星状膠細胞腫である。毛様細胞性星状細胞腫は、一般的にグレードＩの神経膠腫に分類される。上衣下巨大細胞星状細胞腫は、一般的にグレードＩの神経膠腫に分類される。退形成性多形性黄色星状膠細胞腫は、一般的にグレードＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、上衣下腫である。上衣下腫は、一般的にグレードＩの神経膠腫に分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、退形成性上衣腫である。退形成性上衣腫は、一般的にグレードＩＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、上衣腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、粘液乳頭状上衣腫である。特定の実施形態では、上衣腫は、乳頭状上衣腫である。特定の実施形態では、上衣腫は、明細胞上衣腫である。特定の実施形態では、上衣腫は、伸長細胞性上衣腫である。特定の実施形態では、上衣腫は、ＲＥＬＡ融合（オープンリーディングフレームＣ１１ｏｒｆ９５及びＲｅｌＡ遺伝子を伴う融合）を含む。上衣腫は、一般的にグレードＩＩの神経膠腫として分類される。粘液乳頭状上衣腫は、一般的にグレードＩの神経膠腫に分類される。ＲＥＬＡ融合を含む上衣腫は、一般的にグレードＩＩまたはグレードＩＩＩの神経膠腫に分類される。

特定の実施形態では、神経膠腫は、第三脳室の脈絡膜神経膠腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、血管中心性神経膠腫である。特定の実施形態では、神経膠腫は、星状芽細胞腫である。血管中心性神経膠腫は、一般的にグレードＩの神経膠腫に分類される。第三脳室の脈絡膜神経膠腫は、一般的にグレードＩＩの神経膠腫として分類される。

特定の実施形態では、ＩＤＨ遺伝子変異は、ＩＤＨ１遺伝子変異である。特定の実施形態では、ＩＤＨ遺伝子変異は、ＩＤＨ２遺伝子変異である。

特定の実施形態では、神経膠腫は、ＴＥＲＴ、ＣＩＣ、ＦＵＢＰ１、ＮＯＴＣＨ１、ＴＰ５３、ＡＴＲＸ、ＥＧＦＲ、ＣＤＫＮ２Ａ、ＭＤＭ４、ＰＴＥＮ、及びＮＦ１遺伝子のうちの１つ以上から選択される遺伝子における変異を含む。

転移の治療、予防、改善、及び／または発症を遅延させるための組成物及び方法が本明細書に提供される。転移は、脳から体内の任意の二次位置への神経膠腫細胞の移動から生じ得る。特定の実施形態では、神経膠腫は、他の中枢神経系組織、例えば、脊髄に転移する。特定の実施形態では、神経膠腫は、中枢神経系の外側の組織、例えば、骨、リンパ節、肺、腺、及び他の軟組織に転移する。

マイクロＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡと結合し、その発現を抑制する。特定の事例では、マイクロＲＮＡの活性を阻害することは、１つ以上のメッセンジャーＲＮＡの抑制を解除することをもたらす、すなわち、メッセンジャーＲＮＡ発現は、ＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルで増加する。１つ以上のｍｉＲ－１０ｂ制御転写産物の発現を調節するための方法が本明細書に提供され、細胞を本発明の化合物と接触させることを含み、化合物は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。

特定の実施形態では、ｍｉＲ－１０ｂ制御転写産物は、Ｂｉｍ、ＴＦＡＰ２Ｃ、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）、またはＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６）であり、ｍｉＲ－１０ｂの阻害は、Ｂｉｍ、ＴＦＡＰ２Ｃ、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）、及び／またはＣＤＫＮ２Ａ（ｐ１６）ｍＲＮＡのレベルの増加をもたらす。

ｍｉＲ－１０ｂは、神経膠腫に加えて、多数の種類のがんに関連している。したがって、特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物は、神経膠腫以外のがんを治療、予防、改善、及び／または発症を遅延させるために使用される。特定の実施形態では、がんは、肝臓癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、骨癌、結腸癌、肺癌、脳癌、血液癌、膵臓癌、頭頸部癌、舌癌、胃癌、皮膚癌、甲状腺癌、神経芽腫、食道癌、中皮腫、神経芽腫、腎臓癌、精巣癌、直腸癌、子宮頸癌、または卵巣癌である。特定の実施形態では、肝臓癌は、肝細胞癌である。特定の実施形態では、肝臓癌は、身体の別の部分で発生したがん、例えば、骨癌、結腸癌、または乳癌の転移に起因するがんの転移に起因する。特定の実施形態では、血液癌は、急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性単球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫、または非ホジキンリンパ腫である。特定の実施形態では、皮膚癌は、黒色腫である。特定の実施形態では、腎臓癌は、腎細胞癌である。特定の実施形態では、乳癌は、非浸潤性乳管癌、浸潤性乳管癌、トリプルネガティブ乳癌、髄様癌、管状癌、及び粘液性癌である。特定の実施形態では、がんは、化学療法に抵抗性である。

特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物または方法の投与は、対象における１つ以上の臨床的に望ましい転帰をもたらす。そのような改善は、対象が治療に応答している程度を決定するために使用され得る。

特定の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、がんを有する対象における腫瘍数の減少及び／または腫瘍サイズの減少である。特定の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、がんを有する対象におけるがん細胞数の減少である。追加の臨床的に望ましい転帰としては、対象の全生存時間の延長、及び／または対象の無増悪生存時間の延長が含まれる。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、腫瘍サイズ及び／または腫瘍数の増加を防止する。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、転移性進行を防止する。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、転移性進行を遅延または停止させる。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、腫瘍の再発を防止する。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、腫瘍の再発を遅延させる。特定の実施形態では、本明細書に提供される化合物の投与は、腫瘍転移の再発を防止する。

本明細書に提供される治療方法のいずれかでは、化合物は、腫瘍内注入によって投与され得る。本明細書に提供される治療方法のいずれかでは、化合物は、脳室内注入によって投与され得る。

本明細書に記載される化合物のいずれかは、治療、例えば、本明細書に記載される治療方法のいずれかに使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、がんの治療に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、神経膠腫の治療に使用するためのものであり得る。

本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、治療、例えば、本明細書に記載される治療方法のいずれかに使用するためのものであり得る。本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、がんの治療に使用するためのものであり得る。本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、神経膠腫の治療に使用するためのものであり得る。

本明細書に提供される化合物のいずれかは、薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、本明細書に記載される治療方法のいずれかで使用するための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、神経膠腫の治療のための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、がんの治療のための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される化合物のいずれかは、神経膠腫の治療のための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。

本明細書に提供される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、本明細書に記載される治療方法のいずれかで使用するための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、がんの治療のための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される修飾オリゴヌクレオチドのいずれかは、神経膠腫の治療のための薬剤の調製に使用するためのものであり得る。

本明細書に提供される薬学的組成物のいずれかは、治療、例えば、本明細書に記載される治療方法のいずれかに使用するためのものであり得る。本明細書に提供される薬学的組成物のいずれかは、がんの治療に使用するためのものであり得る。本明細書に提供される薬学的組成物のいずれかは、神経膠腫の治療に使用するためのものであり得る。

特定の追加の療法
がん治療は、多くの場合、併用療法を含む。したがって、特定の実施形態では、本発明は、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を対象に投与することを含む神経膠腫を治療するための方法を提供し、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂに相補的であり、抗がん療法である少なくとも１つの追加の療法を施す。特定の実施形態では、抗がん療法は、放射線療法である。特定の実施形態では、抗がん療法は、腫瘍の外科的切除である。特定の実施形態では、抗がん療法は、１つ以上の化学療法剤である。特定の実施形態では、抗がん療法は、低強度、中間周波数交互電界（腫瘍治療分野、またはＴＴＦ）である。特定の実施形態では、抗がん療法は、生物学的療法である。特定の実施形態では、抗がん療法は、神経膠腫における１つ以上の遺伝子異常に基づいて選択される標的療法である。

特定の実施形態では、抗がん療法は、外科的切除、放射線療法、化学療法剤、ＴＴＦ、及び標的療法のうちの２つ以上の組み合わせを含む。

特定の実施形態では、神経膠腫を有する対象は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な修飾オリゴヌクレオチド、外科的切除、放射線療法、及び化学療法剤で治療される。特定の実施形態では、神経膠腫を有する対象は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な修飾オリゴヌクレオチド、外科的切除、放射線療法、ＴＴＦ、及び化学療法剤で治療される。特定の実施形態では、化学療法剤は、テモゾロミドである。特定の実施形態では、化学療法剤は、カルムスチンである。

特定の実施形態では、神経膠腫を有する対象は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な修飾オリゴヌクレオチド、及び外科的切除で治療される。特定の実施形態では、神経膠腫を有する対象は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な修飾オリゴヌクレオチド、放射線療法、及び外科的切除で治療される。特定の実施形態では、神経膠腫を有する対象は、ｍｉＲ－１０ｂに相補的な修飾オリゴヌクレオチド、放射線療法、外科的切除、及びＴＴＦで治療される。

いくつかの実施形態では、１つ以上の抗がん療法は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、１つ以上の抗がん療法は、連続して投与される。

特定の実施形態では、放射線療法は、陽子線療法である。特定の実施形態では、放射線療法は、定位放射線手術である。特定の実施形態では、放射線療法は、強度調節放射線療法である。特定の実施形態では、放射線療法は、３Ｄ原体照射である。

特定の実施形態では、ＴＴＦは、ＮｏｖｏＴＴＦ－１００Ａデバイス（Ｎｏｖｏｃｕｒｅ Ｌｔｄ，Ｈａｉｆａ，Ｉｓｒａｅｌ）を使用して投与される。特定の実施形態では、ＴＴＦは、２００Ｈｚの周波数及び１～２Ｖ／ｃｍの強度を有する。

特定の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、葉酸代謝拮抗剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、成長因子受容体阻害剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、血管新生阻害剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、キナーゼ阻害剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、抗微小管剤（アルカロイドとしても知られる）である。特定の実施形態では、化学療法剤は、アルキル化剤である。特定の実施形態では、化学療法剤は、抗代謝剤である。

特定の実施形態では、化学療法剤は、１，３－ビス（２－クロロエチル）－１－ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、及びトポテカンから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、メトトレキサート、アミノプテリン、チミジル酸シンターゼ、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ、フォリルポリグルタミルシンテターゼ、ｇ－グルタミルヒドロラーゼ、グリシンアミド－リボヌクレオチドトランスフォーマーゼ、ロイコボリン、アミノ－イミダゾール－カルボキサミド－リボヌクレオチドトランスフォーマーラーゼ、５－フルオロウラシル、及び葉酸トランスポーターから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、エルロチニブ及びゲフィチニブから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、ベバシズマブ、サリドマイド、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ－４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮ－α、血小板第４因子、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、軟骨由来の血管新生阻害因子、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、アンギオスタチン、エンドスタチン、２－メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、プロラクチン、及びリノミドから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、ＢＩＢＷ ２９９２、セツキシマブ、イマチニブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、Ｅ７０８０、パゾパニブ、ムブリチニブ、及びホスタマチニブから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、ドセタキセル及びビンブラスチンから選択される。

特定の実施形態では、化学療法剤は、メトトレキサート及びゲムシタビンから選択される。

追加の好適な抗がん療法としては、ｍｉＲ－１９、ｍｉＲ－２１、及びｍｉＲ－２２１が含まれるがこれらに限定されない、ｍｉＲ－１０ｂ以外の発がん性マイクロＲＮＡを標的とする修飾オリゴヌクレオチドが含まれる。

特定の実施形態では、追加の療法は、本発明の１つ以上の薬学的組成物の副作用を治療または改善するために選択される。かかる副作用としては、これらに限定されないが、悪心、注入部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝臓毒性、腎臓毒性、中枢神経系異常、及びミオパシーが含まれる。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。

追加の医薬品のさらなる例としては、免疫グロブリンが含まれるが、これらに限定されず、制吐剤、鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン）、サリチル酸、抗生物質、抗ウイルス剤、抗真菌剤、アドレナリン作動性修飾因子、ホルモン（例えば、タンパク質同化ステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、ソマトスタチン、及び甲状腺ホルモン）、免疫調節剤、筋弛緩剤、抗ヒスタミン剤、骨粗鬆症剤（例えば、ビスフォスフォネート、カルシトニン、及びエストロゲン）、プロスタグランジン、抗腫瘍剤、心理療法剤、鎮静剤、ウルシまたはウルシ毒製品、抗体、及びワクチンを含むがこれに限定されない。

特定の核酸塩基配列
本明細書に記載されるヌクレオシドパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂ（配列番号１）に相補的な核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、ｍｉＲ－１０ｂの核酸塩基配列において各対応する位置で核酸塩基と塩基対形成することができる。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ－１０ｂまたは前駆体配列の核酸塩基配列に関して１つ以上のミスマッチ塩基対を有し得、その標的配列にハイブリダイズすることができる。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの長さに等しい多数の連結ヌクレオシドからなる。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結ヌクレオシド数は、ｍｉＲ－１０ｂの長さよりも短い。修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの長さよりも短い連結ヌクレオシドの数を有し、修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基は、ｍｉＲ－１０ｂの対応する位置で各核酸塩基に相補的であり、ｍｉＲ－１０ｂ配列の領域に対して完全に相補的（１００％相補的とも呼ばれる）な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドであると見なされる。例えば、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個の連結ヌクレオシドからなり、各核酸塩基は、２２個の核酸塩基の長さであるｍｉＲ－１０ｂの対応する位置に相補的であり、ｍｉＲ－１０ｂの１９－核酸塩基領域に完全に相補的である。そのような修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの１９－核酸塩基部分に対して１００％の相補性を有し、ｍｉＲ－１０ｂに対して１００％相補的であると見なされる。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂシード配列に相補的な核酸塩基配列を含み、すなわち、修飾オリゴヌクレオチドは、シードマッチ配列を含む。特定の実施形態では、シード配列は、六量体シード配列である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの核酸塩基配列に関して１つのミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの核酸塩基配列に関して２つのミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ－１０ｂの核酸塩基配列に関して２つ以下のミスマッチを有する核酸塩基配列を有する。特定のそのような実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は、連続的である。特定のそのような実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は、連続的でない。

実施例及び配列表に見られるものを含むがこれらに限定されない、本明細書に記載される核酸塩基配列は、核酸へのいかなる修飾からも独立している。したがって、配列番号によって定義される核酸は独立して、１つ以上の糖部分、１つ以上のヌクレオシド間連結、及び／または１つ以上の核酸塩基に対する１つ以上の修飾を含み得る。

本出願に添付される配列表は、必要に応じて、各核酸塩基配列を「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のいずれかとして特定するが、実際には、それらの配列は、本明細書に指定される化学修飾の組み合わせによって修飾され得る。当業者は、配列表において、修飾オリゴヌクレオチドを説明するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」などの指定がいくらか恣意的であることを容易に理解するであろう。例えば、２’－Ｏ－メトキシエチル糖部分及びチミン塩基を含むヌクレオシドを含む本明細書で提供される修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドが修飾されており、天然ＤＮＡヌクレオシドではない場合でも、配列表のＤＮＡ残基として記載され得る。

したがって、配列表に提供される核酸配列は、修飾核酸塩基を有するそのような核酸を含むがこれらに限定されない、天然または修飾ＲＮＡ及び／もしくはＤＮＡの任意の組み合わせを含有する核酸を包含することを意図する。さらなる例として、限定されないが、配列表の核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、これらに限定されないが、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものなどのＲＮＡ塩基、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの、ならびに^ｍｅＣが５－メチルシトシンを示す、「ＡＴ^ｍｅＣＧＡＵＣＧ」などの他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物を含む任意のオリゴヌクレオチドを包含する。同様に、配列表の核酸塩基配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有する修飾オリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾にかかわらず、これらに限定されないが、配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するものなどのＲＮＡ塩基、ならびに「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などのいくつかのＤＮＡ塩基及びいくつかのＲＮＡ塩基を有するもの、ならびに「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」などのＤＮＡ塩基を有するもの、ならびに^ｍｅＣが５－メチルシトシンを示す、「ＡＴ^ｍｅＣＧＡＵＣＧ」などの他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含むそのような化合物を含む任意のオリゴヌクレオチドを包含する。いくつかの実施形態では、５－メチルウラシル（^ｍｅＵ）は、典型的にチミン（Ｔ）と称される核酸塩基を指すために使用される。

特定の修飾
特定の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結に対する１つ以上の修飾を含み得、したがって、修飾オリゴヌクレオチドであり得る。修飾核酸塩基、糖、及び／またはヌクレオシド間連結は、例えば、細胞取り込みの増強、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の増強、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増大などの望ましい特性のために、非修飾形態よりも選択され得る。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。

特定の実施形態では、修飾ヌクレオシドは、糖修飾ヌクレオシドである。特定のそのような実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然もしくは修飾複素環式塩基部分をさらに含み得、及び／または天然もしくは修飾ヌクレオシド間連結を介して別のヌクレオシドに連結され得、及び／または糖修飾とは独立したさらなる修飾を含み得る。特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、２’－修飾ヌクレオシドであり、糖環は、天然リボースまたは２’－デオキシ－リボース由来の２’炭素で修飾される。

特定の実施形態では、２’－修飾ヌクレオシドは、二環式糖部分を有する。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、アルファ配置のＤ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、ベータ配置のＤ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、アルファ配置のＬ糖である。特定のそのような実施形態では、二環式糖部分は、ベータ配置のＬ糖である。

そのような二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡと称される。特定の実施形態では、二環式ヌクレオシドには、以下に示すように、（Ａ）α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ_２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ_２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ_３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも称される）、（Ｇ）メチレン－チオ（４’－ＣＨ_２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン－アミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’－ＣＨ_２－ＣＨ（ＣＨ_３）－２’）ＢＮＡ、（Ｊ）ｃ－ＭＯＥ（４’－ＣＨ（ＣＨ_２－ＯＭｅ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’－（ＣＨ_２）_３－２’）が含まれるが、これらに限定されない。

式中、Ｂｘは、核酸塩基部分であり、Ｒは独立して、Ｈ、保護基、またはＣ_１－Ｃ_１２アルキルである。

特定の実施形態では、２’－修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ_３、Ｏ－ＣＨ_３（「２’－ＯＭｅ」とも称される）、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３（「２’－Ｏ－メトキシエチル」または「２’－ＭＯＥ」とも称される）、２’－Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ－（ＣＨ_２）_２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ_３）_２、－Ｏ（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、及びＯ－ＣＨ_２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）ＣＨ_３から選択される２’－置換基を含む。

特定の実施形態では、２’－修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ－ＣＨ_３、及びＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される２’－置換基を含む。

特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、４’－チオ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、４’－チオ－２’－修飾ヌクレオシドである。４’－チオ修飾ヌクレオシドは、β－Ｄ－リボヌクレオシドを有し、４’－Ｏは、４’－Ｓに置き換えられる。４’－チオ－２’－修飾ヌクレオシドは、２’－置換基で置換された２’－ＯＨを有する４’－チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’－置換基としては、２’－ＯＣＨ_３、２’－Ｏ ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、及び２’－Ｆが含まれる。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上のヌクレオシド間修飾を含む。特定のそのような実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、修飾ヌクレオシド間連結である。特定の実施形態では、修飾ヌクレオシド間連結は、リン原子である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間連結を含む。特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。

特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、５－ヒドロキシメチルシトシン、７－デアザグアニン、及び７－デアザアデニンから選択される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン、及び２－ピリドンから選択される。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル、及び５－プロピニルシトシンを含む、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、ならびにＮ－２、Ｎ－６、及びＯ－６置換プリンから選択される。

特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、多環式複素環である。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、三環式複素環である。特定の実施形態では、修飾核酸塩基は、フェノキサジン誘導体である。特定の実施形態では、フェノキサジンは、Ｇクランプとして当技術分野で既知の核酸塩基を形成するようにさらに修飾され得る。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布、または細胞取り込みを増強する１つ以上の部分に複合される。特定のそのような実施形態では、部分は、コレステロール部分である。特定の実施形態では、部分は、脂質部分である。複合のための追加の部分としては、炭水化物、ペプチド、抗体または抗体断片、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、及び色素が含まれる。特定の実施形態では、炭水化物部分は、Ｎ－アセチル－Ｄ－ガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）である。特定の実施形態では、複合基は、オリゴヌクレオチドに直接結合される。特定の実施形態では、複合基は、アミノ、アジド、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和（例えば、二重または三重結合）、８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシンイミジル４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、６－アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、置換Ｃ１－Ｃ１０アルキル、置換または非置換Ｃ２－Ｃ１０アルケニル、及び置換または非置換Ｃ２－Ｃ１０アルキニルから選択される連結部分によって、修飾オリゴヌクレオチドに付着する。特定のそのような実施形態では、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、アジド、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル、及びアルキニルから選択される。

特定のそのような実施形態では、化合物は、例えば、ヌクレアーゼ安定性などの特性を増強するために、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に付着している１つ以上の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基には、キャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、修飾オリゴヌクレオチドをエキソヌクレアーゼ分解から保護し、細胞内の送達及び／または局在化を助けることができる。キャップは、５’末端（５’キャップ）に存在し得るか、または３’末端（３’キャップ）に存在し得るか、または両方の末端に存在し得る。キャップ構造としては、例えば、逆デオキシ脱塩基性キャップが含まれる。

特定の薬学的組成物
本明細書に提供される化合物及び薬学的に許容される希釈剤を含む薬学的組成物が、本明細書に提供される。特定の実施形態では、薬学的に許容される希釈剤は、水溶液である。特定の実施形態では、水溶液は、生理食塩水である。本明細書で使用される場合、薬学的に許容される希釈剤は、滅菌希釈剤であると理解される。好適な投与経路としては、これらに限定されないが、腫瘍内、頭蓋内、髄腔内、静脈内、及び皮下投与が含まれる。特定の実施形態では、頭蓋内投与は、本明細書に提供される薬学的組成物の放出を制御するために、化学療法剤及び生分解性コポリマーを含むデバイスの頭蓋内移植を含む。特定の実施形態では、移植可能なデバイスは、カルムスチンを含む。特定の実施形態では、移植可能なデバイスは、Ｇｌｉａｄｉｌ（登録商標）ウエハである。

特定の実施形態では、薬学的組成物は、投薬単位の形態で投与される。例えば、特定の実施形態では、投薬単位は、錠剤、カプセル、移植可能なデバイス、またはボーラス注入の形態である。

特定の実施形態では、医薬品は、好適な希釈剤で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０～９．０に調整され、次いで滅菌条件下で凍結乾燥されている、修飾オリゴヌクレオチドである。その後、凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドは、好適な希釈剤、例えば、水などの水溶液、または生理食塩水、ハンクス液、もしくはリンゲル液などの生理学的に適合性のある緩衝液で再構成される。再構成された生成物は、皮下注射または静脈内注入として投与される。凍結乾燥された医薬品は、２ｍＬのＩ型の透明なガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）にパッケージされ、ブロモブチルゴムクロージャーで栓をされ、アルミニウムのオーバーシールで密封され得る。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、それらの当該技術分野で確立された使用レベルで、薬学的組成物に従来見られる他の補助成分をさらに含有し得る。したがって、例えば、組成物は、例えば、鎮痒剤、収斂剤、局所麻酔薬、または抗炎症剤などの、追加の適合性のある薬学的に活性な材料を含有し得る。

いくつかの実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、色素、香味剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、増粘剤、及び安定剤などの、本発明の組成物の様々な剤形を物理的に製剤化するのに有用な追加の材料を含有し得、そのような追加の材料には、これらに限定されないが、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリドンなどの賦形剤も含まれる。様々な実施形態では、そのような材料は、追加される場合に、本発明の組成物の成分の生物学的活性を不当に妨害してはならない。製剤は、滅菌され、必要に応じて、製剤のオリゴヌクレオチド（複数可）と有害に相互作用しない補助剤、例えば、潤滑剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を与えるための塩、緩衝液、着色剤、香料及び／または芳香族物質などと混合することができる。注入のための特定の薬学的組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液または乳濁液であり、懸濁化剤、安定化剤、及び／または分散剤などの製剤を含有し得る。注入のための薬学的組成物での使用に好適な特定の溶媒としては、これらに限定されないが、親油性溶媒及び脂肪油、例えば、ゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルまたはトリグリセリド、ならびにリポソームが含まれる。水性注入懸濁液は、懸濁液の粘度を増加させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含有し得る。任意選択で、そのような懸濁液は、好適な安定剤、または好適な高度に濃縮された溶液の調製を可能にするための医薬品の溶解度を増加させる薬剤も含有し得る。

脂質部分は、様々な方法で核酸療法に使用されている。１つの方法では、核酸は、陽イオン性脂質及び中性脂質の混合物から作製された予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに導入される。別の方法では、単陽イオン性脂質または多陽イオン性脂質とのＤＮＡ複合体は、中性脂質の存在なしに形成される。特定の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞または組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。特定の実施形態では、脂質部分は、脂肪組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。特定の実施形態では、脂質部分は、筋肉組織への医薬品の分布を増加させるように選択される。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、核酸と複合体化されたポリアミン化合物または脂質部分を含む。特定の実施形態では、そのような調製物は、式（Ｚ）によって定義される構造またはその薬学的に許容される塩をそれぞれ個別に有する１つ以上の化合物を含み、

式中、各Ｘ^ａ及びＸ^ｂは、各出現に関して独立して、Ｃ_１－６アルキレンであり、ｎは、０、１、２、３、４、または５であり、各Ｒは独立して、Ｈであり、調製物中の式（Ｚ）の化合物の少なくとも約８０％の分子中の少なくともｎ＋２個のＲ部分は、Ｈではなく、ｍは、１、２、３、または４であり、Ｙは、Ｏ、ＮＲ^２、またはＳであり、Ｒ^１は、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、これらの各々は任意選択的に、１つ以上の置換基で置換され、Ｒ^２は、Ｈ、アルキル、アルケニル、またはアルキニルであり、これらの各々は任意選択的に、１つ以上の置換基で置換され、ただし、ｎ＝０の場合、少なくともｎ＋３個のＲ部分は、Ｈではない。そのような調製物は、脂質調製物の開示のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ公開ＷＯ／２００８／０４２９７３に記載されている。特定の追加の調製物は、Ａｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６，５６１－５６９（２００８年５月０１日）に記載されており、脂質調製物の開示のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、限定されないが、混合、溶解、造粒、糖衣形成、研和、乳化、封入、捕捉、または錠剤化プロセスを含む、既知の技術を使用して調製される。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、固体（例えば、粉末、錠剤、及び／またはカプセル）である。特定のそのような実施形態では、１つ以上のオリゴヌクレオチドを含む固体薬学的組成物は、これらに限定されないが、デンプン、糖、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、及び崩壊剤を含む当該技術分野で既知の成分を使用して調製される。

特定の実施形態では、本明細書で提供される薬学的組成物は、デポ調製物として製剤化される。特定のそのようなデポ調製物は、典型的には、非デポ調製物よりも長時間作用する。特定の実施形態では、そのような調製物は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注入によって投与される。特定の実施形態では、デポ調製物は、好適なポリマーもしくは疎水性材料（例えば、許容される油中の乳濁液）もしくはイオン交換樹脂を使用して、または難溶性誘導体として、例えば、難溶性塩として調製される。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、送達系を含む。送達系の例としては、これらに限定されないが、リポソーム及び乳濁液が含まれる。特定の送達系は、疎水性化合物を含むものを含む特定の薬学的組成物を調製するために有用である。特定の実施形態では、ジメチルスルホキシド等の特定の有機溶媒が使用される。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、本発明の１つ以上の医薬品を特定の組織または細胞型に送達するように設計された１つ以上の組織特異的送達分子を含む。例えば、特定の実施形態では、薬学的組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、持続放出系を含む。かかる持続放出系の非限定的な例は、固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスである。特定の実施形態では、持続放出系は、その化学的性質に応じて、数時間、数日、数週間、または数ヶ月にわたって医薬品を放出し得る。

注入のための特定の薬学的組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数回用量容器で提示される。

特定の実施形態では、本明細書に提供される薬学的組成物は、治療有効量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態では、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和、もしくは改善するか、または治療される対象の生存を延長するのに十分である。

特定の実施形態では、本明細書に提供される１つ以上の修飾オリゴヌクレオチドは、プロドラッグとして製剤化される。特定の実施形態では、インビボ投与時、プロドラッグは、オリゴヌクレオチドの生物学的、薬学的、または治療的により活性な形態に化学的に変換される。特定の実施形態では、プロドラッグは、対応する活性形態よりも投与しやすいため、有用である。例えば、特定の事例では、プロドラッグは、対応する活性形態よりも（例えば、経口投与を通じて）生物学的に利用可能であり得る。特定の例では、プロドラッグは、対応する活性形態と比較して改善された溶解度を有し得る。特定の実施形態では、プロドラッグは、対応する活性形態よりも水溶性が低い。特定の例では、そのようなプロドラッグは、水溶性が移動性に有害である場合、細胞膜を横断する優れた透過性を有する。特定の実施形態では、プロドラッグは、エステルである。特定のそのような実施形態では、エステルは、投与時にカルボン酸に代謝的に加水分解される。特定の例では、カルボン酸含有化合物は、対応する活性形態である。特定の実施形態では、プロドラッグは、酸基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。特定のそのような実施形態では、ペプチドは、投与時に切断され、対応する活性形態を形成する。

特定の実施形態では、プロドラッグは、活性化合物がインビボ投与時に再生されるように、薬学的に活性な化合物を修飾することによって産生される。プロドラッグは、薬物の代謝安定性または輸送特性を変更し、副作用または毒性を遮蔽し、薬物の風味を改善し、または薬物の他の特徴または特性を変更するように設計することができる。インビボでの薬物力学的プロセス及び薬物代謝の知識により、当業者は、薬学的に活性な化合物を認知すると、化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５）Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，３８８～３９２ページを参照されたい）。

追加の投与経路としては、これらに限定されないが、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、坐薬、吸入、髄腔内、心臓内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、腫瘍内、筋肉内、及び髄内投与が含まれる。特定の実施形態では、医薬品の髄腔内投与は、全身曝露ではなく、局所曝露を達成するために投与される。例えば、薬学的組成物は、所望の効果の領域に直接注入され得る。

特定のキット
本発明は、キットがさらに提供される。いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に開示される修飾オリゴヌクレオチドを含む１つ以上の化合物を含む。いくつかの実施形態では、キットは、化合物を対象に投与するために使用され得る。

特定の実施形態では、キットは、すぐに投与可能な薬学的組成物を含む。特定の実施形態では、薬学的組成物は、バイアル内に存在する。特定の実施形態では、薬学的組成物は、移植可能なデバイス内に存在する。１０個など複数のバイアルまたは移植可能なデバイスは、例えば、分配パック内に存在し得る。いくつかの実施形態では、バイアルは、シリンジで利用できるように製造されている。キットは、化合物を使用するための説明書も含むことができる。

いくつかの実施形態では、このキットは、バイアル内ではなく、事前に充填されたシリンジ（例えば、ニードルガードを有する２７ゲージ、１／２インチの針を有する単回投与シリンジなど）内に存在する薬学的組成物を含む。１０個など複数の事前に充填されたシリンジは、例えば、分配パック内に存在し得る。キットは、本明細書に開示される修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を投与するための説明書も含むことができる。

いくつかの実施形態では、キットは、凍結乾燥製剤として本明細書に提供される修飾オリゴヌクレオチド、及び薬学的に許容される希釈剤を含む。対象への投与の調整において、凍結乾燥された製剤が、薬学的に許容される希釈剤中で再構成される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物に加えて、キットは、シリンジ、アルコールスワブ、綿球、及び／またはガーゼパッドのうちの１つ以上をさらに含むことができる。

特定の実験モデル
特定の実施形態では、本発明は、実験モデルにおいて本発明の修飾オリゴヌクレオチドを使用及び／または試験する方法を提供する。当業者は、本発明の医薬品を評価するために、そのような実験モデルのプロトコルを選択及び修正することができる。

一般に、修飾オリゴヌクレオチドは、最初に培養細胞で試験される。好適な細胞型としては、修飾オリゴヌクレオチドのインビボ送達が所望される細胞型に関連するものが含まれる。例えば、本明細書に記載の方法の研究に好適な細胞型には、初代または培養細胞が含まれる。

特定の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドが、ｍｉＲ－１０ｂの活性を干渉する程度は、培養細胞で評価される。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡ活性の阻害は、マイクロＲＮＡのレベルを測定することによって評価され得る。代替的に、予測または検証されたマイクロＲＮＡ制御転写産物のレベルが測定され得る。マイクロＲＮＡ活性の阻害は、ｍｉＲ－１０ｂ制御転写産物、及び／またはｍｉＲ－１０ｂ制御転写産物によってコードされるタンパク質の増加をもたらし得る。さらに、特定の実施形態では、特定の表現型転帰が測定され得る。

ヒトの疾患のモデルにおけるｍｉＲ－１０ｂの研究のために、いくつかの動物モデルが当業者に利用可能である。例えば、ｍｉＲ－１０ｂの阻害剤は、同所性異種移植モデル、毒素誘発癌モデル、または遺伝子誘発癌モデルなどのがんのモデルにおいて研究され得る。そのようながんモデルでは、研究を行って、腫瘍サイズ、腫瘍数、全生存期間、及び／または無増悪生存期間に対するｍｉＲ－１０ｂの阻害剤の効果が評価され得る。好適な動物モデルとしては、これらに限定されないが、神経膠腫由来異種移植片モデル及び神経膠腫由来同所性モデルが含まれる。異種移植及び同所性モデルは、培養された神経膠腫細胞で、または外科用試料から単離された神経膠腫細胞で確立され得る。

特定の定量アッセイ
特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルは、インビトロまたはインビボで細胞または組織中で定量化される。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化は、マイクロアレイ分析によって測定される。特定の実施形態では、マイクロＲＮＡレベルの変化は、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡアッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）などのいくつかの市販のＰＣＲアッセイのうちの１つによって測定される。

抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物によるマイクロＲＮＡ活性の調節は、ｍＲＮＡのマイクロアレイプロファイリングによって評価され得る。抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物によって調節される（増加または減少のいずれか）ｍＲＮＡの配列は、マイクロＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節をマイクロＲＮＡの標的ではないｍＲＮＡの調節と比較するためにマイクロＲＮＡシード配列を検索する。このようにして、抗ｍｉＲとその標的マイクロＲＮＡ、またはマイクロＲＮＡ模倣物とその標的との相互作用を評価することができる。抗ｍｉＲの場合、発現レベルが増加するｍＲＮＡは、抗ｍｉＲが相補的であるマイクロＲＮＡとのシードマッチを含むｍＲＮＡ配列についてスクリーニングされる。

抗ｍｉＲ化合物によるマイクロＲＮＡ活性の調節は、マイクロＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ標的のレベルを測定することによって、メッセンジャーＲＮＡ自体のレベル、またはそこから転写されるタンパク質のいずれかを測定することによって評価され得る。マイクロＲＮＡのアンチセンス阻害は、概して、マイクロＲＮＡのメッセンジャーＲＮＡ及び／またはメッセンジャーＲＮＡ標的のタンパク質のレベルの増加、すなわち、抗ｍｉＲ治療は、１つ以上の標的メッセンジャーＲＮＡの抑制解除をもたらす。

以下の実施例は、本発明のいくつかの実施形態をより完全に例示するために提示されている。しかしながら、それらは、本発明の広い範囲を限定するものとして決して解釈されるべきではない。当業者は、本発明の趣旨から逸脱することなく、様々な化合物を設計するために、この発見の基礎となる原理を容易に採用するであろう。

実施例１：神経膠腫におけるｍｉＲ－１０ｂの役割
神経膠腫のマウスモデルにおける研究ツール抗ｍｉＲ－１０ｂ修飾オリゴヌクレオチド（ＭＯ）を使用した以前の研究は、ｍｉＲ－１０ｂの阻害が腫瘍成長を著しく低下させることを実証した。このモデルで試験した化合物は有効性を示したが、化合物の安全性、または神経膠腫を有するヒト対象での使用のためのその適合性に関連するデータは提供されなかった。一般に、医薬品としての安全性のための試験の欠如のために、研究ツール化合物は、神経膠腫を有するヒト対象に使用するのに適していない可能性が高い。これを考慮して、神経膠腫を有するヒト対象への投与に十分に有効であり、投与するのに便利であり、安全である抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を同定するためにスクリーニングを実施した。

様々な長さ及び化学組成を有する約２１５個の抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を設計した。化合物の長さは、９～２３個の連結ヌクレオシドの範囲であり、化合物は、化学飾の数、種類、及び配置が異なる。有効性及び安全性は化合物の化学構造に基づいて予測することができないため、好ましくない特性を有する化合物を排除するように設計された一連のアッセイにおいて、化合物を、効力、有効性、薬物動態挙動、安全性、及び代謝安定性を含む特徴について、インビトロ及びインビボの両方について評価した。特定のアッセイでは、ツール抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を、他の抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を比較するベンチマークとして使用した。約２１５個の化合物の各々を、より複雑なインビボアッセイ（例えば、薬物動態プロファイル、有効性、毒性）におけるさらなる試験に好適な化合物のより小さなセットを特定するために、いくつかのインビトロアッセイ（例えば、効力、毒性）で最初に試験した。

また、これらの各アッセイで試験したのは、研究ツール化合物ＲＧ３４８１２４、５’－ＣＡＣＡＡＡＴＴＣＧＧＴＴＣＴＡＣＡＧＧＧＴＡ－３’（配列番号３）であり、各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖部分を含み、各Ｃは、５－メチルシトシンであり、各ヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエートヌクレオシド間連結である。

スクリーニングカスケードの第１のステップとして、化合物を、生化学蛍光結合アッセイ（ＦＢＡ）を使用して潜在的な毒性について試験した。ＦＢＡは、蛍光色素を各化合物と共にインキュベートし、直ちに蛍光を測定することによって実行した。高蛍光化合物は、インビボで毒性を生じる可能性があり、さらなる試験には含まれない。

インビトロの効力を、ルシフェラーゼレポーターアッセイを使用して評価した。ｍｉＲ－１０ｂのためのルシフェラーゼレポータープラスミドを、ルシフェラーゼ遺伝子の３’－ＵＴＲ内に完全に相補的なｍｉＲ－１０ｂ結合部位を有するように設計した。このルシフェラーゼ構築物を発現する安定したＨｅｌａ細胞株を生成した。細胞をトランスフェクトして、レポーター構築物からのルシフェラーゼの発現を抑制するｍｉＲ－１０ｂを導入した。その後の活性抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物による細胞のトランスフェクションは、ｍｉＲ－１０ｂのその活性を阻害し、ルシフェラーゼｍＲＮＡ発現を増加させ、発光シグナルの増加をもたらす。細胞を、１ｎＭ、１０ｎＭ、及び１００ｎＭの濃度の抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物で処理した。それらのＥＣ_５０（半最大応答をもたらす濃度）が５ｎＭ以下である場合、より長い長さの化合物を好適に活性であると特定した。より短い化合物、例えば９量体は、典型的には、より長い化合物に使用される同じアッセイ条件において最大活性ではないため、より短い化合物は、適切な対照化合物と比較した最大阻害に基づいて選択した。このようにして、長さ及び化学組成の両方が多様な化合物をさらなる試験に含めた。

ルシフェラーゼアッセイ及びＦＢＡからのデータ、ならびに化学的多様性の考慮に基づいて、肝臓切片アッセイにおけるさらなる試験のために特定の化合物を選択した。毒性をもたらす可能性のある化合物を特定するために設計した肝臓切片アッセイを、ラット肝臓から単離したコア肝臓試料からの組織の切片と共に個々の化合物をインキュベートすることによって実行した。２４時間のインキュベーション後、ＲＮＡを肝臓切片から抽出し、ＩＦＩＴを含むいくつかの炎症促進性遺伝子の発現レベルを測定する。ＰＢＳ処理と比較した倍率変化のｌｏｇ２変換（Ｌｏｇ２－ＦＣ）を実行した。炎症促進性遺伝子発現の誘導は、インビボでの炎症促進性効果（すなわち、毒性）の可能性を示すため、これらの化合物をさらなる試験から除外した。

代謝安定性を、マウス肝臓または脳溶解物中で各抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物をインキュベートすることによって評価した。２４時間後、残存する無傷化合物の割合を計算する。２４時間のインキュベーション後に安定しない化合物は、インビボで安定しない可能性がある。

オリゴヌクレオチドは典型的には皮下注入を介して投与されるため、より低い粘度の化合物が好ましい。一般に、１５０ｍｇ／ｍｌの濃度で４０ｃＰ未満の粘度は、皮下注入による投与を意図した製剤に許容可能であると考えられる。より高い粘度は、例えば、移植可能なデバイスを静脈内注入するなどの他の方法によって投与される化合物では許容され得る。

これらのアッセイに基づいて、特定の化合物を、急性設定におけるカスパーゼ活性、細胞生存率、代謝安定性、粘度、及び毒性についてのアッセイにおいてさらなる試験のために選択した。表１に示されるこれらの化合物は、神経膠腫の治療のための候補治療剤である。

表１の化合物では、下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドは、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドは、２’－フルオロヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドは、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、「Ｕ」は、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」は、５－メチルウラシルであり、「^ｍＣ」は、５－メチルシトシンであり、「Ｃ」は非メチル化シトシンであり、「Ａ」は、アデニンであり、「Ｇ」は、グアニンであり、上付き文字「Ｏ」は、ホスホロジエステル連結を示し、互いのヌクレオシド間連結は、ホスホロチオエート連結である。

実施例２：さらなるアッセイにおける抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物試験
がんの治療のための候補治療剤を評価する際に、関連する細胞アッセイには、細胞生存率及びアポトーシス誘導アッセイが含まれる。これらのアッセイには、神経膠芽腫由来細胞株を使用した。

細胞生存率アッセイについては、約８，０００個の細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種した。翌日、トランスフェクション試薬としてＲＮＡｉＭＡＸ（商標）を使用して、細胞に２、４、８、１６、３１、６３、１２５、２５０、及び５００ｎＭの用量の抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物をトランスフェクトした。７２時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを使用して細胞生存率を決定した。各化合物についてＩＣ_５０を計算した。ＬＮ２２９、Ｕ８７、ＭＣＦ７、及びＨＣＮ２細胞の両方を使用してアッセイを行った。

カスパーゼ活性を、アポトーシスの誘導の指標として使用した。約８，０００個の細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種した。翌日、ＲＮＡｉＭＡＸ（商標）を使用して、細胞に抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物をトランスフェクトした。４８時間後、カスパーゼ３／７活性を、カスパーゼ－Ｇｌｏ３／７アッセイシステム（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して決定した。各化合物についてＥＣ_５０を計算した。ＬＮ２２９細胞をこのアッセイに使用した。

これらの機能アッセイに基づいて、３つの化合物を効力に基づいて選択した。より長い長さの化合物のうち、ＲＧ５５７９及びＲＧ５４６１は、生存率アッセイにおいてＩＣ_５０に従って最も高いランクであり、より短い長さの化合物のうち、ＲＧ５６５８は、生存率アッセイにおいてＩＣ_５０に従って最も高いランクであった。ルシフェラーゼ、生存能、及びカスパーゼアッセイの結果を表２に示す。研究ツール化合物は、様々なアッセイにおける活性のベンチマークとして含まれる。

機能アッセイにおいて最大の活性を示す化合物を、正常なＳｖ１２９マウスにおいてインビボアッセイを使用して、潜在的な全身毒性についても評価した。３００ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ－１０ｂの単回皮下用量を投与した。対照治療としては、ＰＢＳ、及びｍｉＲ－１７に関連しない２つの抗ｍｉＲが含まれ、１つは炎症促進性であり（陽性対照）、１つは炎症促進性ではない（陰性対照）ことが知られている。４日後、マウスを犠牲にした。腎臓及び肝臓組織を、ＲＮＡ抽出のために単離した。炎症応答中に誘導されることが知られている２つの遺伝子、ＩＦＩＴ及びＯＡＳＬ２のレベルを測定し、マウスＧＡＰＤＨに対して正規化した。ＰＢＳ処理と比較した倍率変化のｌｏｇ２変換（Ｌｏｇ２－ＦＣ）を実行した。

実施例１に記載のアッセイ、生存率及びカスパーゼアッセイ、ならびに全身毒性アッセイに基づいて、３つの化合物、ＲＧ５５７９、ＲＧ５４６１、及びＲＧ５６５８を、インビトロアッセイにおける効力及び潜在的な毒性の欠如に関して好適なプロファイルを有すると特定した。

実施例３：テモゾロミドとの併用におけるインビトロでの有効性
テモゾロミド（ＴＭＺ）の活性に対するｍｉＲ－１０ｂ阻害の効果を評価するために、ＬＮ２２９細胞を抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物及びＴＭＺで処理した。ＲＧ５５７９及びＲＧ５４６１を、このアッセイでの試験のために選択した。

約８，０００個の細胞を９６ウェルプレートの各ウェルに播種した。翌日、細胞を、０～２００ｕＭの範囲の濃度のＴＭＺに加えて、０、５、１０、または２０ｎＭの濃度のＲＧ５５７９またはＲＧ５４６１の抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物で処理した。７２時間後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）発光細胞生存率アッセイを使用して細胞生存率を決定した。抗ｍｉＲ－１０ｂ濃度の各濃度でのＴＭＺのＩＣ_５０を計算し、表３に示す。

表３に示すように、ＲＧ５５７９及びＲＧ５４６１はそれぞれ、ＬＮ２２９生存率アッセイにおいてＴＭＺのＩＣ_５０を減少させ、したがって、インビトロでＴＭＺの効力を有意に増強した。

実施例３：ＧＢＭモデルにおけるインビボ試験
ＭｉＲＮＡを標的とする修飾オリゴヌクレオチドが腫瘍成長に及ぼす影響を決定するために、神経膠腫のマウスモデルにおいて、腫瘍サイズ、腫瘍成長、及び生存に対する影響について抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物を評価した。

皮下異種移植モデル：
培養において成長しているヒト神経膠芽腫由来細胞を、トリプシン処理し、カウントし、培地：成長因子還元マトリゲルの１：１混合物中に再懸濁した。約１０^６個の細胞を、１００ｕｌの容量で、ヌードマウスの脇腹に皮下注入した。皮下腫瘍移植の１０日後、腫瘍サイズをノギスを使用して測定し、マウスを治療群に無作為化する。抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物の腫瘍内（例えば、５ｕｇ／３０ｍｍ^３腫瘍）、皮下（例えば、１００ｍｇ／ｋｇ）、または静脈内（例えば、８０ｍｇ／ｋｇ）投与を、移植後に開始する。腫瘍サイズを、週に３～５日測定した。最終的な腫瘍サイズ及び体重を、試験の終了時に測定した。

同所性モデル：
培養において成長しているヒト神経膠芽腫由来細胞を、トリプシン処理し、カウントし、ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、インビボ画像化システムを介して腫瘍成長及びサイズのモニタリングを可能にする蛍光マーカー及びルシフェラーゼ挿入を発現する。約５×１０^５個の細胞を、５ｕｌの容量で、ヌードマウスの脳に注入した。頭蓋内腫瘍移植後、ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｉｎ Ｖｉｖｏ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を使用して腫瘍量を測定し、マウスを治療群に無作為化する。抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物の腫瘍内（例えば、０．１～５００ｕｇ／腫瘍）、皮下（例えば、１００ｍｇ／ｋｇ）、または静脈内（例えば、８０ｍｇ／ｋｇ）投与を、移植後に開始する。腫瘍量を、画像化システムを使用して毎週測定した。最終的な腫瘍サイズ及び体重を、試験の終了時に測定した。

３つの候補治療剤、ＲＧ５５７９、ＲＧ５４６１、及びＲＧ５６５８を、皮下及び同所性神経膠腫モデルで試験した。インビトロ生存率アッセイにおける第３の最も強力な化合物であるＲＧ５５８０も試験した。これらの研究は、同所性モデルの皮下における皮下投与対腫瘍内投与、抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物単独及びＴＭＺとの組み合わせの有効性、ならびに抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物の単回注入対複数回注入の有効性を評価するように設計した。研究ツール化合物ＲＧ３８４１２４も試験した。

同所性神経膠芽腫モデルにおけるＲＧ５５７９及びＲＧ５５８０
ＲＧ５６５８及びＲＧ５４６１を、ＬＮ２２９細胞を用いて確立したＧＢＭの同所モデルで試験した。

培養において成長しているヒト神経膠腫芽細胞腫由来のＬＮ２２９細胞を、トリプシン処理し、カウントし、ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、治療中に腫瘍成長及びサイズのモニタリングを可能にする蛍光マーカーを発現する。約５×１０^５個の細胞を、５ｕｌの容量で、０日目にヌードマウスの脳に注入した。マウスを、（１）ＰＢＳ、（２）ＲＧ５５７９、（３）ＲＧ５５８０、及び（４）陰性対照の治療群に無作為化し、群あたり８匹のマウスを用いた。２９日目に、マウスに、ＰＢＳまたは５０μｇの抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物または陰性対照のいずれかの腫瘍内注入を与えた。４８日目に、マウスにＰＢＳまたは３０μｇの抗ｍｉＲ－１０ｂまたは陰性対照を与えた。生存をモニタリングし、全生存期間中央値を決定した。

表４に示すように、ＲＧ５５７９による治療は、ＰＢＳ治療と比較して、全生存期間中央値を１４％改善した。

同所性神経膠芽腫モデルにおけるＲＧ５４６１及びＲＧ５６５８
ＲＧ５６５８及びＲＧ５４６１を、ＬＮ２２９細胞を用いて確立したＧＢＭの同所モデルで試験した。治療には、抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物単独、またはＴＭＺとの組み合わせが含まれる。

皮下及び同所性モデルにおける最初の試験では、腫瘍内投与したＲＧ５６６８またはＲＧ５４６１の単回投与は、腫瘍成長を一貫して遅延させたが、全生存期間を有意に改善しなかったことを明らかにした。

さらに、ＲＧ５６５８及びＲＧ５４６１治療とＴＭＺとの組み合わせの効果を評価するために、試験を行った。培養において成長しているヒト神経膠腫芽細胞腫由来のＬＮ２２９細胞を、トリプシン処理し、カウントし、ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、治療中に腫瘍成長及びサイズのモニタリングを可能にする蛍光マーカーを発現する。約５×１０^５個の細胞を、５ｕｌの容量で、０日目にヌードマウスの脳に注入した。マウスを、（１）ＰＢＳ、（２）ＲＧ５４６１、（３）ＲＧ５６５８、（４）ＲＧ５４６１＋ＴＭＺ、（５）ＲＧ５６５８＋ＴＭＺ、及び（６）ＰＢＳ＋ＴＭＺの治療群に無作為化し、群あたり８匹のマウスを用いた。２１日目に、抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物の単回投与は、ＲＧ５６５８については２０μｇ、またはＲＧ５４６１については５０μｇの投与量で腫瘍内投与した。ＴＭＺを、３５～４１日目のそれぞれで毎日投与した。生存をモニタリングし、全生存期間中央値を決定した。表５に示すように、抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物とＴＭＺとの組み合わせは、ＴＭＺ単独または抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物単独と比較して、生存期間中央値を改善した。

同所性神経膠芽腫モデルにおけるＲＧ５５７９
ＲＧ５５７９を、ＬＮ２２９細胞を用いて確立したＧＢＭの同所モデルで試験した。

培養において成長しているヒト神経膠腫芽細胞腫由来のＬＮ２２９細胞を、トリプシン処理し、カウントし、ＰＢＳに再懸濁した。細胞は、治療中に腫瘍成長及びサイズのモニタリングを可能にする蛍光マーカーを発現する。約５×１０^５個の細胞を、５ｕｌの容量で、０日目にヌードマウスの脳に注入した。マウスを、（１）ＰＢＳ、（２）ＲＧ５５７９、（３）ＰＢＳ＋ＴＭＺ、及び（４）ＲＧ５５７９＋ＴＭＺの治療群に無作為化し、群あたり８匹のマウスを用いた。２１日目に、マウスに、ＰＢＳまたは４０ｕｇのＲＧ５５７９のいずれかの腫瘍内注入を与えた。３５～４１日目に、ＴＭＺを毎日投与した。生存をモニタリングし、全生存期間中央値を決定した。

生存率曲線を図１に示し、全生存率の増加率を表６に示す。これらの結果は、単剤治療としてのＲＧ５５７９が、ＰＢＳ治療と比較してマウスの生存期間中央値を増加させることを示す。ＲＧ５５７９及びＴＭＺの両方での治療は、生存期間中央値のさらに大きな増加をもたらした。

インビボ試験の結果を表７に要約し、抗ｍｉＲ－１０ｂ化合物及びＴＭＺの両方での治療後の全生存期間の実質的な改善を例示する。ＲＧ５４６１及びＲＧ５６５８は、ＴＭＺ治療と組み合わせて、全生存期間中央値を改善した。ＲＧ５５７９治療は、単剤として、及びＴＭＺ治療との組み合わせの両方で、全生存期間中央値を増加させた。

予備的な安全性アッセイでは、表７の３つの化合物の各々は、全身投与または腫瘍内投与のいずれかの後でも十分に許容されることが見出された。

実施例４：ｍｉＲ－１０ｂ下流遺伝子の抑制解除
抗ｍｉＲ－１０ｂによる治療の標的薬物動態効果を評価するために、次世代配列決定によって、ｍｉＲ－１０ｂの直接的な標的である１８個の遺伝子を同定し、抗ｍｉＲ－１０ｂ治療後のこれらの遺伝子のそれぞれの発現を測定した。１８個の遺伝子は、ＡＴＸＮ２、ＡＴＸＮ７、ＢＣＬ６、ＢＤＮＦ、ＣＲＬＦ３、ＤＡＺＡＰ１、ＤＶＬ３、ＦＸＲ２、ＧＡＴＡＤ２Ａ、ＧＣＬＭ、ＧＴＦ２Ｈ１、ＩＮＯ８０Ｄ、ＭＩＥＦ１、ＮＣＯＡ６、ＮＦＥ２Ｌ１、ＰＤＥ４Ａ、ＳＭＡＤ２、及びＴＥＴ２である。

ＬＮ２２９細胞を、２～５００ｎＭの範囲の濃度のＲＧ５５７９で処理した。２４時間後、ＲＮＡを単離し、標的となる１８個の遺伝子のｍＲＮＡレベルを測定及び平均して、モックトランスフェクションと比較したＬｏｇ２倍数変化（Ｌｏｇ２ＦＣ）として表される薬力学的シグネチャスコア（ＰＤシグネチャスコア）を提供した。ＲＧ５５７９による処理は、ＬＮ２２９細胞におけるＰＤシグネチャの用量依存的な抑制解除をもたらした。同様に、同所性ＬＮ２２９ＧＢＭ腫瘍モデルでは、４０または８０ｕｇの用量でＲＧ５５７９での処置は、ＰＤシグネチャの抑制解除をもたらした。

同様の研究を、１０個の遺伝子のＰＤシグネチャ（上記の１８個の遺伝子のＰＤシグネチャと重複していない）を使用してＲＧ５４６１及びＲＧ５６５８で実施した。いずれかの化合物での治療は、ＬＮ２２９細胞における１０個の遺伝子ＰＤシグネチャの用量依存的抑制解除をもたらした。

これらのデータは、抗ｍｉＲ－１０ｂでの治療がｍｉＲ－１０ｂの直接的な標的を抑制解除することを示す。

本明細書に記載されているものに加えて、本発明の様々な改変が、前述の説明から当業者には明らかとなるであろう。また、そのような改変が、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることも意図されている。本出願に引用された各参考文献（ジャーナル記事、米国及び米国以外の特許、特許出願刊行物、国際特許出願刊行物、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受入番号などを含むがこれらに限定されない）は、その全体が参照により本明細書に詳細に組み込まれる。

Claims (34)

1. 修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
   ５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_ＫＵ_ＥＵ_ＥＣ_ＥＵ_ＥＡ_ＥＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
   下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、前記化合物。
2. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
   ５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＫＡＵ_ＫＵ_ＫＣ_ＫＧＧ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
   下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、「Ｃ」が、非メチル化シトシンであり、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
3. 修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
   ５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_ＫＵ_ＥＣ_ＥＧ_ＫＧ_ＥＵ_ＥＵ_ＫＣ_ＥＵ_ＥＡ_ＫＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
   下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字を伴わないヌクレオシドが、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、前記化合物。
4. 修飾オリゴヌクレオチドが、２１個の連結ヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
   ５’－Ｃ_ＫＡ_ＫＡ_ＥＡ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＵ_Ｅ ^ｍＣ_ＥＧ_ＫＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＵ_Ｋ ^ｍＣ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｋ ^ｍＣ_ＥＡ_ＥＧ_ＥＧ_ＥＧ_Ｅ ^ｍＵ_ＥＡ_Ｅ－３’（配列番号２）
   下付き文字「Ｅ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、「^ｍＵ」が、５－メチルウラシルであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「^ｍＣ」が、５－メチルシトシンであり、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、請求項３に記載の化合物。
5. ９個の連結ヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドが、以下の構造を含み：
   ５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
   下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、各Ｕが独立して、非メチル化ウラシル及び５－メチルウラシルから選択され、各Ｃが独立して、非メチル化シトシン及び５－メチルシトシンから選択され、各ヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、前記化合物。
6. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、９個の連結ヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの構造が、以下であり：
   ５’－Ｕ_ＫＡ_ＫＣ_ＭＡ_ＦＧ_ＦＧ_ＦＧ_ＭＵ_ＫＡ_Ｋ－３’
   下付き文字「Ｋ」が続くヌクレオシドが、Ｓ－ｃＥｔヌクレオシドであり、下付き文字「Ｍ」が続くヌクレオシドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオシドであり、下付き文字「Ｆ」が続くヌクレオシドが、２’－フルオロヌクレオシドであり、「Ｕ」が、非メチル化ウラシルであり、「Ｃ」が、非メチル化シトシンであり、上付き文字「Ｏ」が、ホスホジエステル連結を示し、互いのヌクレオシド間連結が、ホスホロチオエート連結であり、またはその薬学的に許容される塩である、請求項７に記載の化合物。
7. 前記化合物が、前記修飾オリゴヌクレオチド、またはその薬学的に許容される塩からなる、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物。
8. 前記薬学的に許容される塩が、ナトリウム塩である、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物。
9. 請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物、及び薬学的に許容される希釈剤を含む、薬学的組成物。
10. 前記薬学的に許容される希釈剤が、水溶液である、請求項９に記載の薬学的組成物。
11. 前記水溶液が、生理食塩水である、請求項１０に記載の薬学的組成物。
12. 請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物を含み、それが凍結乾燥組成物である、薬学的組成物。
13. 生理食塩水中の請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物から本質的になる、薬学的組成物。
14. 神経膠腫を治療する方法であって、神経膠腫を有する対象に、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物、または請求項９～１１または１３のいずれか１項に記載の薬学的組成物を投与することを含む、前記方法。
15. 前記神経膠腫が、びまん性星状細胞腫、退形成性星状細胞腫、乏突起神経膠腫、退形成性乏突起神経膠腫、びまん性正中線神経膠腫、または神経膠芽腫である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記化合物または薬学的組成物が、腫瘍内に投与される、請求項１４または１５に記載の方法。
17. 前記びまん性星状細胞腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、請求項１５に記載の方法。
18. 前記退形成性星状細胞腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、請求項１５に記載の方法。
19. 前記乏突起神経膠腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異、及び染色体腕１ｐ及び１９ｑの欠失を含む、請求項１５に記載の方法。
20. 前記退形成性乏突起神経膠腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異、及び染色体腕１ｐ及び１９ｑの欠失を含む、請求項１５に記載の方法。
21. 前記びまん性正中線神経膠腫が、ヒストンＨ３（Ｈ３）Ｋ２７Ｍ変異を含む、請求項１５に記載の方法。
22. 前記神経膠芽腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含まない、請求項１５に記載の方法。
23. 前記神経膠芽腫が、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異を含む、請求項１５に記載の方法。
24. 前記神経膠腫が、再発性神経膠腫である、請求項１４～２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記イソクエン酸デヒドロゲナーゼ（ＩＤＨ）遺伝子変異が、ＩＤＨ１またはＩＤＨ２遺伝子変異である、請求項１７、１８、１９、２０、２２、または２３のいずれか１項に記載の方法。
26. 前記化合物または薬学的組成物の投与後に、腫瘍サイズが減少し、及び／または腫瘍数が減少する、請求項１４～２５のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記化合物または薬学的組成物の前記投与が、前記対象の無増悪生存期間を増加させる、請求項１４～２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記化合物または薬学的組成物の前記投与が、前記対象の全生存期間を増加させる、請求項１４～２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記化合物の前記投与が、前記対象の生活の質を改善する、請求項１４～２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 少なくとも１つの追加の抗がん療法を施すことを含む、請求項１４～２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記少なくとも１つの追加の療法が、外科的切除、放射線療法、腫瘍治療分野、及び１つ以上の化学療法剤から選択される、請求項３０に記載の方法。
32. 前記化学療法剤が、カルムスチン、テモゾロミド、及びベバシズマブから選択される、請求項３１に記載の方法。
33. 前記化学療法剤が、テモゾロミドである、請求項３１に記載の方法。
34. 前記少なくとも１つの追加の抗がん療法が、外科的切除、放射線療法、及びテモゾロミドを含む、請求項３０に記載の方法。

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