TW202031268A - 用於調節mir-10b 活性之微小rna 化合物及方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述用於抑制miR-10b活性之組成物及方法。該等組成物可向患有癌症諸如神經膠質瘤之個體投與。

Description

用於調節MIR-10B活性之微小RNA化合物及方法
本文提供用於調節miR-10b活性之方法及組成物。
微小RNA(microRNA)亦稱為「成熟微小RNA」，為在植物及動物之基因組中編碼之小型(長約18-24個核苷酸)非編碼RNA分子。在某些情況下，高度保守的內源性表現之微小RNA藉由結合至特定mRNA之3'-非轉譯區(3'-UTR)來調控基因之表現。已在植物及動物中鑑別出超過1000種不同的微小RNA。某些成熟微小RNA似乎來源於長度通常為數百個核苷酸的長內源性初級微小RNA轉錄物(亦稱為初級微小RNA、初級mir、初級miR、或初級微小RNA前體)(Lee等人, EMBO J., 2002, 21(17), 4663-4670)。
對微小RNA的功能性分析揭示，此等小型非編碼RNA促進動物的不同生理過程，包括發育時序、器官發生、分化、成型(patterning)、胚胎發生、生長控制及計劃性細胞死亡。微小RNA參與之特定過程之實例包括幹細胞分化、神經生成、血管生成、造血作用、及胞吐作用(由Alvarez-Garcia及Miska, Development, 2005, 132, 4653-4662評述)。
微小RNA亦藉由靶向腫瘤抑制因子而與致癌作用相關(參見Gabriely等人, Cancer Res. 2011, 71(10): 3563–3572)。例如，miR-10b為與多種癌症中之不良預後相關之強力致癌微小RNA(參見Teplyuk N等人, EMBO Molecular Medicine, 2016, 8(3), 268-287)。基於癌症類型及遺傳情況，miR-10b可藉由直接靶向多種基因來促進腫瘤細胞之增殖、存活、及遷移。具體而言，已經報告miR-10b調控乳癌及鱗狀細胞癌細胞之侵入及轉移。
miR-10b之獨特性質為其在神經膠質瘤(亦即，自神經膠細胞生長之原發性腦癌)中被高度表現，但是不存在於正常神經膠質細胞中。在經培養之神經膠質瘤細胞中，miR-10b調控細胞週期及靶基因中之選擇性剪接(參見Teplyuk 2016)。
神經膠質母細胞瘤亦可被稱為IV級星形細胞瘤，為最高級別的惡性神經膠質瘤及成年人中之最常見的惡性原發性腦瘤。由於缺乏有效治療，神經膠質母細胞瘤患者具有約14個月之中值存活期。約90%之神經膠質母細胞瘤病例展現miR-10b之高表現，從而支持其在腫瘤發展中之潛在作用。miR-10b在神經膠質瘤中之高表現的概況及其在正常神經膠細胞中不存在表明靶向miR-10b之療法可有效治療神經膠質瘤。
實施例1.      一種包含經修飾寡核苷酸之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK UE UE CE UE AE CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例2.      如實施例1之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK m UE m UE m CE m UE AE m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶并且「C」為非甲基化胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例3.      一種包含經修飾寡核苷酸之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-CK AK AE AE UK UE CE GK GE UE UK CE UE AK CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例4.      如實施例3之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-CK AK AE AE UK m UE m CE GK GE m UE UK m CE m UE AK m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例5.      一種包含由9個連接之核苷組成之經修飾寡核苷酸的化合物，其中該經修飾寡核苷酸包含結構： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，並且繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例6.      如實施例7之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由9個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，並且繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷；其中「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「C」為非甲基化胞嘧啶；其中上標「O」指示磷酸二酯鍵聯並且各其他核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
實施例7.      如實施例1至6中任一項之化合物，其中該化合物由該經修飾寡核苷酸或其醫藥學上可接受之鹽組成。
實施例8.      如實施例1至7中任一項之化合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
實施例9.      一種醫藥組成物，其包含如實施例1至8中任一項之化合物及醫藥學上可接受之稀釋劑。
實施例10.    如實施例9之醫藥組成物，其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為水溶液。
實施例11.    如實施例10之醫藥組成物，其中該水溶液為鹽水溶液。
實施例12.    一種醫藥組成物，其包含如實施例1至8中任一項之化合物，該組成物為凍乾組成物。
實施例13.    一種醫藥組成物，其基本上由在鹽水溶液中之如實施例1至8中任一項之化合物組成。
實施例14.    一種治療神經膠質瘤之方法，其包含向患有神經膠質瘤之個體投與如實施例1至6中任一項之化合物，或如實施例9至11或13中任一項之醫藥組成物。
實施例15.    如實施例14之方法，其中該神經膠質瘤為瀰漫性星形細胞瘤、退行性星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、退行性寡樹突神經膠質瘤、瀰漫性中線神經膠質瘤、或神經膠質母細胞瘤。
實施例16.    如實施例14或15之方法，其中該化合物或醫藥組成物係腫瘤內投與。
實施例17.    如實施例15之方法，其中該瀰漫性星形細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
實施例18.    如實施例15之方法，其中該退行性星形細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
實施例19.    如實施例15之方法，其中該寡樹突神經膠質瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變以及染色體臂1p及19q之缺失。
實施例20.    如實施例15之方法，其中該退行性寡樹突神經膠質瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變以及染色體臂1p及19q之缺失。
實施例21.    如實施例15之方法，其中該瀰漫性中線神經膠質瘤包含組蛋白H3 (H3) K27M突變。
實施例22.    如實施例15之方法，其中該神經膠質母細胞瘤不包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
實施例23.    如實施例15之方法，其中該神經膠質母細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
實施例24.    如實施例14至23中任一項之方法，其中該神經膠質瘤為復發性神經膠質瘤。
實施例25.    如實施例17、18、19、20、22、或23中任一項之方法，其中該異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變為IDH1或IDH2基因突變。
實施例26.    如實施例14至25中任一項之方法，其中在投與該化合物或醫藥組成物之後，腫瘤大小減小及/或腫瘤數減少。
實施例27.    如實施例14至26中任一項之方法，其中該化合物或醫藥組成物之該投與增加該個體之無進展存活期。
實施例28.    如實施例14至27中任一項之方法，其中該化合物或醫藥組成物之該投與增加該個體之總體存活時間。
實施例29.    如實施例14至28中任一項之方法，其中該化合物之該投與改良該個體之生活品質。
實施例30.    如實施例14至29中任一項之方法，其包含投與至少一種另外的抗癌療法。
實施例31.    如實施例30之方法，其中該至少一種另外的療法選自手術切除、放射療法、腫瘤治療電場、及一或多種化學治療劑。
實施例32.    如實施例31之方法，其中該化學治療劑選自卡莫司汀(carmustine)、替莫唑胺(temozolomide)、及貝伐單抗(bevacizumab)。
實施例33.    如實施例31之方法，其中該化學治療劑為替莫唑胺。
實施例34.    如實施例30之方法，其中該至少一種另外的抗癌療法包含手術切除、放射療法、及替莫唑胺。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2018年11月13日提交之美國臨時申請案第62/760,546號之優先權益，該申請案出於任何目的以全文引用之方式併入本文。
除非另外定義，否則本文中所用的所有技術及科學術語具有與熟習本發明所屬技術者通常所瞭解相同的意義。除非提供明確定義，否則關聯本文所述之分析化學、合成有機化學以及醫學及醫藥化學使用之命名法及本文所述之分析化學、合成有機化學以及醫學及醫藥化學之程序及技術為此項技術中熟知且通常使用者。在本文中之術語存在複數個定義之情況下，以本部分中之定義為準。可使用化學合成、化學分析、醫藥製備、調配及遞送以及治療個體之標準技術。某些此類技術及程序可見於例如以下文獻中：「Carbohydrate Modifications in Antisense Research」, Sanghvi及Cook編, American Chemical Society, Washington D.C., 1994；及「Remington's Pharmaceutical Sciences」, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 第18版, 1990；且其出於任何目的以引用之方式併入本文中。除非另外指出，否則本文中之整篇揭露中提及之所有專利、專利申請案、公開申請案及公開案、GENBANK序列、網站、及其他公開材料在允許時均以全文引用之方式併入本文中。在提及URL或其他類似識別符或位址的情況下，應瞭解此類識別符可改變並且網際網路上之特定資訊可改變，但可藉由搜尋網際網路找到等效資訊。對其之提及證明該資訊之可用性及公開傳播。
在揭示及描述本發明之組成物及方法之前，應瞭解本文所用之術語僅出於描述特定實施例之目的而不欲具有限制性。須指出，除非上下文另外明確規定，否則如本說明書及隨附申請專利範圍中所用之單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數個參考物。定義
「神經膠質瘤」意謂自神經膠細胞生長之原發性腦癌。在某些實施例中，神經膠質瘤包括但不限於：由星形細胞產生之癌症，諸如，例如，星形細胞瘤；由寡樹突膠細胞引起之癌症，諸如，例如，寡樹突神經膠質瘤；及混合來源之癌症，諸如寡星形細胞瘤。術語「神經膠質瘤」亦包括神經膠質母細胞瘤(或多形性神經膠質母細胞瘤(GBM))，其為惡性神經膠質瘤。
「轉移」意謂癌症自其首先產生為原發性腫瘤之位置擴散至體內其他位置之過程。原發性腫瘤之轉移性進展反映多個階段，包括自相鄰原發性腫瘤細胞解離、在循環中存活、及在繼發位置生長。
「總體存活時間」意謂個體在診斷出疾病或治療疾病之後存活的時期。在某些實施例中，疾病為癌症。在一些實施例中，總體存活時間為診斷後之存活期。在一些實施例中，總體存活時間為治療開始後之存活期。
「無進展存活期」意謂患有疾病之個體在疾病沒有變得更差的情況下存活的時期。在某些實施例中，無進展存活期係藉由對疾病進行分期或評分來評估。在某些實施例中，患有肝癌之個體的無進展存活期係藉由評估腫瘤大小、腫瘤數、及/或轉移來評估。
「停止進一步進展」意謂阻止醫學病狀向晚期狀態移動。
「減緩進一步進展」意謂降低醫學病狀向晚期狀態移動之速率。
「提高預期壽命」意謂藉由治療個體之疾病之一或多種症狀來使個體壽命延長。
「生活品質」意謂個體身體、心理、及社會功能受疾病及/或疾病治療損害之程度。
「抗miR」意謂具有與微小RNA互補之核鹼基序列的寡核苷酸。在某些實施例中，抗miR為經修飾寡核苷酸。
「抗miR-10b」意謂具有與miR-10b互補之核鹼基序列的經修飾寡核苷酸。在某些實施例中，抗miR-10b與miR-10b完全互補(亦即，100%互補)。在某些實施例中，抗miR-10b與miR-10b至少80%、至少85%、至少90%、或至少95%互補。
「miR-10b」意謂具有核鹼基序列UACCCUGUAGAACCGAAUUUGUG (SEQ ID NO: 1)之成熟miRNA。
「miR-10b種子序列」意謂存在於miR-10b中之核鹼基序列5'-ACCCUG-3'。
「有需要之個體」意謂被鑑別為需要療法或治療之個體。
「懷疑患有……之個體」意謂展現疾病之一或多種臨床指標的個體。
「與miR-10b相關之疾病」意謂由miR-10b之活性調節的疾病或病狀。
「投與」意謂向個體提供藥劑或組成物，且包括(但不限於)由醫學專業人員投與及自投與。
「腸胃外投與」意謂透過注射或輸注的投與。
腸胃外投與包括(但不限於)皮下投與、靜脈內投與、及肌肉內投與。
「皮下投與」意謂僅在皮膚以下投與。
「靜脈內投與」意謂投與至靜脈內。
「伴隨投與」係指二或更多種劑以其兩者之藥理學作用在患者體內同時表現之任何方式共同投與。伴隨性投與不需要兩種劑於單一醫藥組成物中、以相同劑型、或藉由相同投與途徑投與。兩種劑之作用本身無需同時顯現。該等作用僅需重疊一定時期而無需共同延長。
「持續時間」意謂活性或事件持續之時期。在某些實施例中，治療持續時間為醫藥之劑量之時期
「療法」意謂疾病治療方法。在某些實施例中，療法包括(但不限於)化學療法、放射療法、或投與藥劑。
「治療」意謂用於治癒或改善疾病之一或多個特定程序之應用。在某些實施例中，特定程序為投與一或多種藥劑。
「改善」意謂減輕病狀或疾病之至少一種指標的嚴重性。在某些實施例中，改善包括延遲或減緩病狀或疾病之一或多種指標的進展。指標之嚴重性可藉由熟習此項技術者已知之主觀或客觀量度來確定。
「處於發展……之風險中」意謂個體易於發展病狀或疾病之狀態。在某些實施例中，處於發展病狀或疾病之風險中的個體展現該病狀或疾病之一或多種症狀，但並不展現足以診斷為患有該病狀或疾病之數目的症狀。在某些實施例中，處於發展病狀或疾病之風險中的個體展現該病狀或疾病之一或多種症狀，但程度輕於診斷為患有該病狀或疾病所需之程度。
「預防……發作」意謂預防處於發展疾病或病狀之風險中的個體發展該病狀或疾病。在某些實施例中，處於發展疾病或病狀之風險中的個體接受與已患該疾病或病狀之個體所接受之治療類似的治療。
「延遲……發作」意謂延遲處於發展疾病或病狀之風險中的個體發展該病狀或疾病。在某些實施例中，處於發展疾病或病狀之風險中的個體接受與已患該疾病或病狀之個體所接受之治療類似的治療。
「劑量」意謂單次投與中所提供之藥劑之指定量。在某些實施例中，可以二或更多次推注、錠劑、或注射投與劑量。舉例而言，在某些實施例中，在需要皮下投與時，所要劑量需要不易由單次注射提供之體積。在此類實施例中，可使用二或更多次注射來達成所要劑量。在某些實施例中，可以二或更多次注射投與劑量以使個體之注射部位反應減至最小。在某些實施例中，劑量係以緩慢輸注形式投與。
「劑量單位」意謂提供藥劑時所採用之形式。在某些實施例中，劑量單位為容納凍乾寡核苷酸之小瓶。在某些實施例中，劑量單位為容納經復原寡核苷酸之小瓶。
「治療有效量」係指藥劑向動物提供治療益處之量。
「醫藥組成物」意謂包括藥劑的適於投與個體之物質之混合物。舉例而言，醫藥組成物可包含無菌水溶液。
「藥劑」意謂在向個體投與時提供治療作用之物質。
「活性醫藥成分」意謂醫藥組成物中提供所要作用之物質。
「醫藥學上可接受之鹽」意謂本文所提供之化合物之生理學上及醫藥學上可接受之鹽，亦即，保留化合物之所要生物活性並且在投與個體時不具有非所要毒理作用的鹽。本文所提供之化合物之非限制性示範性醫藥學上可接受之鹽包括鈉及鉀鹽形式。除非另外特別指示，否則如本文所用之術語「化合物」、「寡核苷酸」、及「經修飾寡核苷酸」包括其醫藥學上可接受之鹽。
「鹽水溶液」意謂氯化鈉於水中之溶液。
「器官功能改善」意謂器官功能朝向正常限度變化。在某些實施例中，藉由量測個體血液或尿液中存在之分子來評估器官功能。舉例而言，在某些實施例中，肝功能改善係藉由血液肝轉胺酶含量降低來量測。在某些實施例中，腎功能改善係藉由血液尿素氮降低、蛋白尿降低、白蛋白尿降低等來量測。
「可接受之安全性概況」意謂臨床上可接受之限度內的副作用模式。
「副作用」意謂除所要作用以外的歸因於治療之生理反應。在某些實施例中，副作用包括(但不限於)注射部位反應、肝功能測試異常、腎功能異常、肝毒性、腎毒性、中樞神經系統異常、及肌病。該等副作用可直接或間接偵測。舉例而言，血清中之轉胺酶含量增加可指示肝毒性或肝功能異常。舉例而言，膽紅素增加可指示肝毒性或肝功能異常。
如本文中所用之術語「血液」涵蓋全血及血液部分，諸如血清及血漿。
「目標核酸」意謂寡聚化合物經設計以雜交之核酸。
「定標」意謂設計及選擇將與目標核酸雜交之核鹼基序列的過程。
「靶向」意謂具有允許與目標核酸雜交之核鹼基序列。
「目標嚙合」意謂寡核苷酸同與其互補之微小RNA以改變該微小RNA之活性、表現、或含量之方式相互作用。在某些實施例中，目標嚙合意謂抗miR同與其互補之微小RNA相互作用，使得該微小RNA之活性受到抑制。
「調節」意謂功能、量、或活性之擾動。在某些實施例中，調節意謂功能、量、或活性增加。在某些實施例中，調節意謂功能、量、或活性降低。
「表現」意謂基因之經編碼資訊藉以轉化為細胞中存在及運轉之結構的任何功能及步驟。
「核鹼基序列」意謂寡聚化合物或核酸中連續核鹼基之次序，通常按5'至3'取向列出，且與任何糖、鍵聯、及/或核鹼基修飾無關。
「連續核鹼基」意謂核酸中彼此緊鄰之核鹼基。
「核鹼基互補性」意謂兩個核鹼基經由氫鍵結非共價配對之能力。
「互補」意謂一種核酸能夠與另一核酸或寡核苷酸雜交。在某些實施例中，互補係指寡核苷酸能夠與目標核酸雜交。
「完全互補」意謂寡核苷酸之各核鹼基皆能夠與目標核酸中各對應位置處之核鹼基配對。在某些實施例中，寡核苷酸與微小RNA完全互補(亦稱為100%互補)，亦即寡核苷酸之各核鹼基與微小RNA中對應位置處之核鹼基互補。經修飾寡核苷酸可與微小RNA完全互補，且具有許多小於微小RNA長度的經鍵聯核苷。舉例而言，寡核苷酸之各核鹼基與微小RNA中對應位置處之核鹼基互補的具有16個連接之核苷的寡核苷酸與微小RNA完全互補。
「互補性百分比」意謂寡核苷酸中與目標核酸之等長部分互補之核鹼基的百分比。互補性百分比係藉由將寡核苷酸中與目標核酸中對應位置處之核鹼基互補之核鹼基的數目除以寡核苷酸中核鹼基之總數來計算。
「一致性百分比」意謂第一核酸中與第二核酸中對應位置處之核鹼基相同之核鹼基的數目除以第一核酸中核鹼基之總數。在某些實施例中，第一核酸為微小RNA且第二核酸為微小RNA。在某些實施例中，第一核酸為寡核苷酸且第二核酸為寡核苷酸。
「雜交」意謂透過核鹼基互補性發生之互補核酸之黏著。
「失配」意謂第一核酸中之核鹼基不能與第二核酸中對應位置處之核鹼基進行沃森-克里克(Watson-Crick)配對。
在核鹼基序列之情況下，「相同」意謂具有相同核鹼基序列，與糖、鍵聯、及/或核鹼基修飾無關且與所存在之任何嘧啶之甲基化狀態無關。
「微小RNA」意謂長度在18與25個核鹼基之間的內源性非編碼RNA，其為由酶Dicer裂解微小RNA前體之產物。成熟微小RNA之實例可見於稱為miRBase之微小RNA資料庫中(microrna.sanger.ac.uk/)。在某些實施例中，微小RNA縮寫為「miR」。
「微小RNA調控之轉錄物」意謂受微小RNA調控之轉錄物。
「種子匹配序列」意謂與種子序列互補並且長度與種子序列相同的核鹼基序列。
「寡聚化合物」意謂包含複數個經鍵聯單體次單元的化合物。寡聚化合物包括寡核苷酸。
「寡核苷酸」意謂包含複數個連接之核苷的化合物，各核苷可彼此獨立地經修飾或未經修飾。
「天然存在之核苷間鍵聯」意謂核苷之間的3'至5'磷酸二酯鍵聯。
「天然糖」意謂DNA (2'-H)或RNA (2'-OH)中存在之糖。
「核苷間鍵聯」意謂相鄰核苷之間的共價鍵聯。
「經鍵聯核苷」意謂由共價鍵連接之核苷。
「核鹼基」意謂能夠與另一核鹼基非共價配對之雜環部分。
「核苷」意謂鍵聯至糖部分之核鹼基。
「核苷酸」意謂具有共價鍵聯至核苷之糖部分之磷酸酯基團的核苷。
「包含由多個經鍵聯核苷組成之經修飾寡核苷酸的化合物」意謂包括具有指定數目之經鍵聯核苷之經修飾寡核苷酸的化合物。因此，該化合物可包括另外取代基或綴合物。除非另外指示，否則該經修飾寡核苷酸未與互補股雜交且該化合物不包括除經修飾寡核苷酸之彼等核苷以外的任何另外核苷。
「經修飾寡核苷酸」意謂相對於天然存在之末端、糖、核鹼基、及/或核苷間鍵聯具有一或多個修飾之單股寡核苷酸。經修飾寡核苷酸可包含未經修飾核苷。
「經修飾核苷」意謂與天然存在之核苷相比具有任何變化之核苷。經修飾核苷可具有經修飾糖及未經修飾核鹼基。經修飾核苷可具有經修飾糖及經修飾核鹼基。經修飾核苷可具有天然糖及經修飾核鹼基。在某些實施例中，經修飾核苷為雙環核苷。在某些實施例中，經修飾核苷為非雙環核苷。
「經修飾核苷間鍵聯」意謂與天然存在之核苷間鍵聯相比存在任何變化。
「硫代磷酸酯核苷間鍵聯」意謂核苷之間一個非橋連原子為硫原子之鍵聯。
「經修飾糖部分」意謂與天然糖相比之取代及/或任何變化。
「未經修飾核鹼基」意謂RNA或DNA的天然存在之雜環鹼基：嘌呤鹼基腺嘌呤(A)及鳥嘌呤(G)；以及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)(包括5-甲基胞嘧啶)、及尿嘧啶(U)。
「5-甲基胞嘧啶」意謂包含連接於5位置之甲基的胞嘧啶。
「非甲基化胞嘧啶」意謂不具有連接於5位置之甲基的胞嘧啶。
「5-甲基尿嘧啶」意謂包含連接於5位置之甲基的尿嘧啶。5-甲基尿嘧啶亦可被稱為胸腺嘧啶。
「非甲基化尿嘧啶」意謂不具有連接於5位置之甲基的尿嘧啶。
「經修飾核鹼基」意謂不為未經修飾核鹼基的任何核鹼基。
「糖部分」意謂天然存在之呋喃醣基或經修飾糖部分。
「經修飾糖部分」意謂經取代糖部分或糖替代物。
「2'-O-甲基糖」或「2'-OMe糖」意謂在2'位置處具有O-甲基修飾之糖。
「2'-O-甲氧基乙基糖」或「2'-MOE糖」意謂在2'位置處具有O-甲氧基乙基修飾之糖。
「2'-氟」或「2'-F」意謂在2'位置處具有氟修飾之糖。
「雙環糖部分」意謂包含4至7員環之經修飾糖部分(包括(但不限於)呋喃醣基)，其包含連接該4至7員環之兩個原子之橋鍵以形成第二環，從而產生雙環結構。在某些實施例中，4至7員環為糖環。在某些實施例中，4至7員環為呋喃醣基。在某些此類實施例中，橋鍵連接呋喃醣基之2'-碳與4'-碳。非限制性示範性雙環糖部分包括LNA、ENA、cEt、S-cEt、及R-cEt。
「鎖核酸(LNA)糖部分」意謂包含4'與2'呋喃醣環原子之間之(CH2 )-O橋的經取代糖部分。
「ENA糖部分」意謂包含4'與2'呋喃醣環原子之間之(CH2 )2 -O橋的經取代糖部分。
「限制性乙基(cEt)糖部分」意謂包含4'與2'呋喃醣環原子之間之CH(CH3 )--O橋的經取代糖部分。在某些實施例中，CH(CH3 )--O橋式限制為S型取向。在某些實施例中，CH(CH3 )--O限制為R型取向。
「S-cEt糖部分」意謂在4'與2'呋喃醣環原子之間包含S型限制性CH(CH3 )--O橋的經取代糖部分。
「R-cEt糖部分」意謂在4'與2'呋喃醣環原子之間包含R型限制性CH(CH3 )--O橋的經取代糖部分。
「2'-O-甲基核苷」意謂具有2'-O-甲基糖修飾之2'位上經修飾核苷。
「2'-O-甲氧基乙基核苷」意謂具有2'-O-甲氧基乙基糖修飾之2'位上經修飾核苷。2'-O-甲氧基乙基核苷可包含經修飾或未經修飾核鹼基。
「2'-氟核苷」意謂具有2'-氟糖修飾之2'位上經修飾核苷。2'-氟核苷可包含經修飾或未經修飾核鹼基。
「雙環核苷」意謂具有雙環糖部分的2'位上經修飾核苷。雙環核苷可具有經修飾或未經修飾核鹼基。
「cEt核苷」意謂包含cEt糖部分之核苷。cEt核苷可包含經修飾或未經修飾核鹼基。
「S-cEt核苷」意謂包含S-cEt糖部分之核苷。
「R-cEt核苷」意謂包含R-cEt糖部分之核苷。
「β-D-去氧核糖核苷」意謂天然存在之DNA核苷。
「β-D-核糖核苷」意謂天然存在之RNA核苷。「LNA核苷」意謂包含LNA糖部分之核苷。
「ENA核苷」意謂包含ENA糖部分之核苷。
「個體」意謂選擇用於治療或療法之人類或非人類動物。概述
估計每年超過一百六十萬美國人被確診患有癌症。即使篩選及治療得到改良，癌症仍為美國繼心臟病之後的第二主要死因。
微小RNA可藉由靶向調控細胞週期及細胞凋亡之腫瘤抑制因子來促進致癌作用。舉例而言，miR-10b為可調控來自多種不同癌症之細胞之侵入、遷移、及轉移的致癌微小RNA。具體而言，miR-10b在所有神經膠質母細胞瘤亞型中高度表現，但是不存在於正常神經膠細胞中。miR-10b調控神經膠質瘤細胞中之細胞週期及選擇性剪接，並且miR-10b之抑制與此等細胞之增殖及存活削弱有關。
神經膠質瘤，並且尤其是神經膠質母細胞瘤，繼續具有相當大的未滿足之醫學需求。神經膠質母細胞瘤之當前治療與顯著毒性及非常高復發率有關。即使加強了治療，神經膠質母細胞瘤患者之中值存活期為大約14個月。因此，雖然所有癌症均存在未滿足的需求，但是神經膠質瘤尤其為具有相當大的負擔並且需要改良治療的癌症。因此，以抑制miR-10b為目標之治療對於治療神經膠質瘤而言為非常受關注的。
因此，此等化合物可用於調節由miR-10b之活性促進之細胞過程。此外，此類化合物可用於治療、預防、及/或延遲與miR-10b相關之疾病之發作。此類疾病之特徵可在於相對於非疾病樣品異常高的miR-10b表現。此類疾病包括但是不限於癌症，包括神經膠質瘤。
為了鑑別出足夠有效、便利、及安全向具有癌症諸如神經膠質瘤之個體投與的抗miR-10b化合物，設計了大約215種靶向miR-10b之經修飾寡核苷酸，其具有不同長度及化學組成。化合物之長度範圍為9至23個連接之核苷，且化合物之化學修飾的數目、類型、及位置有所不同。因為藥理學、藥物動力學行為及安全性不能簡單地基於化合物的化學結構來預測，所以在一系列經設計以消除具有不利特性之化合物的檢定中在活體外及活體內評估化合物之特徵，包括效力、功效、藥物動力學行為、安全性、及代謝穩定性。如本文所述，首先在若干活體外檢定(例如效力、毒理學、代謝穩定性)中測試大約215種化合物，以鑑別適用於在更複雜的體內檢定(例如藥物動力學概況、功效、毒理學)中進一步測試之較小組的化合物。此篩選過程鑑別用於治療癌症包括神經膠質瘤之候選藥劑。靶向 miR-10b 之某些經修飾寡核苷酸
本文提供包含靶向miR-10b之經修飾寡核苷酸的化合物。在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK UE UE CE UE AE CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK m UE m UE m CE m UE AE m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶并且「C」為非甲基化胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成，其中經修飾寡核苷酸包含結構： 5'-CK AK AE AE UK UE m CE GK GE UE UK m CE UE AK m CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-CK AK AE AE UK m UE m CE GK GE m UE UK m CE m UE AK m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由9個連接之核苷組成，其中經修飾寡核苷酸包含結構： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由9個連接之核苷組成並且經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中各U為非甲基化尿嘧啶；其中各C為非甲基化胞嘧啶；並且各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
本文提供經修飾寡核苷酸之醫藥學上可接受之鹽。在某些實施例中，醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
在一些實施例中，與每分子存在的硫代磷酸酯及/或磷酸二酯鍵聯相比(亦即，一些硫代磷酸酯及/或磷酸二酯鍵聯為質子化的)，經修飾寡核苷酸之醫藥學上可接受之鹽包含較少陽離子相對離子(諸如Na+ )。在一些實施例中，經修飾寡核苷酸之醫藥學上可接受之鹽包含每個經修飾寡核苷酸分子少於17個陽離子相對離子(諸如Na+ )。亦即，在一些實施例中，經修飾寡核苷酸之醫藥學上可接受之鹽可包含每個經修飾寡核苷酸分子平均1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20個陽離子相對離子，其餘硫代磷酸酯及/或磷酸二酯基團為質子化的。
進一步提供包含本文所述之任何經修飾寡核苷酸的化合物。本發明之某些用途
本文提供用於抑制細胞中之miR-10b之活性的方法，其包含使細胞與本文所提供之化合物接觸，該化合物包含與miR-10b互補之核鹼基序列。在某些實施例中，細胞為癌細胞。在某些實施例中，細胞為神經膠質瘤細胞。
在某些實施例中，使癌細胞與本文所提供之化合物接觸誘導癌細胞中之細胞凋亡。在某些實施例中，使癌細胞與本文所提供之化合物接觸減少細胞增殖。
本文提供用於抑制miR-10b之活性的方法，其包含向個體投與本文所提供之醫藥組成物。在某些實施例中，個體患有與miR-10b相關之疾病。在某些實施例中，與miR-10b相關之疾病為神經膠質瘤。
本文提供用於治療個體中之神經膠質瘤的方法，其包含向患有神經膠質瘤之個體投與本文所提供之化合物，該化合物包含與miR-10b互補之核鹼基序列。
神經膠質瘤為自神經膠細胞產生之腦癌。神經膠細胞包括星形細胞、寡樹突膠細胞、小神經膠細胞、及室管膜細胞，其除了保持血腦障壁以外還一起發揮作用以向神經細胞提供能量及營養素。神經膠質瘤係基於遺傳及/或組織學特徵來分類。遺傳特徵包括但不限於染色體損失、染色體易位、染色體擴增、及基因突變。舉例而言，神經膠質瘤之特徵可在於染色體臂1p及19q之缺失及/或異檸檬酸去氫酶(IDH)基因之突變。組織病理學特徵包括起始細胞型、譜系相關蛋白之表現、超結構表徵、及分化水準。舉例而言，神經膠質瘤可經鑑別為瀰漫性(廣泛蔓延)或退行性(不佳分化)。在某些情況下，神經膠質瘤可不分類至具體界定之遺傳群組中，例如，在不可獲得充足遺傳資訊的情況下。在此等情況下，將神經膠質瘤命名為「未列名(NOS)」。
神經膠質瘤可基於神經膠質腫瘤細胞分裂之快速程度以及細胞浸潤相鄰組織之可能性來進一步分級。將神經膠質瘤指派為I級、II級、III級、或IV級，其範圍為最小侵襲性至最大侵襲性。
在某些實施例中，神經膠質瘤係基於世界衛生組織(WHO)針對中樞神經系統腫瘤之分類系統及分級系統來分類(Louis等人, Acta Neuropath,2016 , 131:803-820)。
在某些實施例中，神經膠質瘤自星形細胞產生，並且分類為星形細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤自寡樹突膠細胞產生，並且分類為寡樹突神經膠質瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤為混合來源，自星形細胞及寡樹突膠細胞產生，並且分類為寡星形細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤自室管膜細胞產生，並且分類為室管膜瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為瀰漫性星形細胞瘤。在某些實施例中，瀰漫性星形細胞瘤包含IDH基因突變。在某些實施例中，瀰漫性星形細胞瘤為包含IDH基因突變之肥胖型星形細胞瘤(gemistocytic astrocytoma)。在某些實施例中，瀰漫性星形細胞瘤分類為未列名。瀰漫性星形細胞瘤通常分類為II級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為退行性星形細胞瘤。在某些實施例中，退行性星形細胞瘤包含IDH基因突變。在某些實施例中，退行性星形細胞瘤分類為未列名。退行性星形細胞瘤通常分類為III級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為神經膠質母細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤不包含IDH基因突變。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤為巨細胞神經膠質母細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤為神經膠質肉瘤。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤為上皮樣神經膠質母細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤分類為未列名。在某些實施例中，神經膠質母細胞瘤包含IDH基因突變。神經膠質母細胞瘤通常分類為IV級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為瀰漫性中線神經膠質瘤。在某些實施例中，瀰漫性中線神經膠質瘤包含組蛋白H3 (H3) K27M突變。瀰漫性中線神經膠質瘤通常分類為IV級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為寡樹突神經膠質瘤。在某些實施例中，寡樹突神經膠質瘤包含IDH基因突變以及染色體臂1p及染色體臂19q之缺失。在某些實施例中，寡樹突神經膠質瘤分類為未列名。通常，寡樹突神經膠質瘤分類為II級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為退行性寡樹突神經膠質瘤。在某些實施例中，退行性寡樹突神經膠質瘤包含IDH基因突變以及染色體臂1p及染色體臂19q之缺失。在某些實施例中，退行性寡樹突神經膠質瘤分類為未列名。通常，退行性寡樹突神經膠質瘤分類為III級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為寡星形細胞瘤。在某些實施例中，寡星形細胞瘤分類為未列名。
在某些實施例中，神經膠質瘤為退行性寡星形細胞瘤。在某些實施例中，退行性寡星形細胞瘤分類為未列名。
在某些實施例中，神經膠質瘤為毛細胞星形細胞瘤(pilocytic astrocytoma)。在某些實施例中，毛細胞星形細胞瘤為毛細胞黏液樣星形細胞瘤(pilomyxoid astrocytoma)。在某些實施例中，神經膠質瘤為室管膜下巨細胞星形細胞瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤為多形性黃色星形細胞瘤(pleomorphic xanthoastrocytoma)。在某些實施例中，神經膠質瘤為退行性多形性黃色星形細胞瘤。毛細胞星形細胞瘤通常分類為I級神經膠質瘤。室管膜下巨細胞星形細胞瘤通常分類為I級神經膠質瘤。退行性多形性黃色星形細胞瘤通常分類為II級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為室管膜下瘤。室管膜下瘤通常分類為I級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為退行性室管膜瘤。退行性室管膜瘤通常分類為III級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為室管膜瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤為黏液乳突狀室管膜瘤(myxopapillary ependymoma)。在某些實施例中，室管膜瘤為乳突狀室管膜瘤。在某些實施例中，室管膜瘤為透明細胞室管膜瘤。在某些實施例中，室管膜瘤為伸長細胞型室管膜瘤(tanycytic ependymoma)。在某些實施例中，室管膜瘤包含RELA融合(涉及開放閱讀框C11orf95及RelA基因之融合)。室管膜瘤通常分類為II級神經膠質瘤。黏液乳突狀室管膜瘤通常分類為I級神經膠質瘤。包含RELA融合之室管膜瘤通常分類為II級或III級神經膠質瘤。
在某些實施例中，神經膠質瘤為第三腦室之脈絡叢神經膠質瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤為血管中心神經膠質瘤。在某些實施例中，神經膠質瘤為星形母細胞瘤。血管中心神經膠質瘤通常分類為I級神經膠質瘤。第三腦室之脈絡叢神經膠質瘤通常分類為II級神經膠質瘤。
在某些實施例中，IDH基因突變為IDH1基因突變。在某些實施例中，IDH基因突變為IDH2基因突變。
在某些實施例中，神經膠質瘤包含選自TERT、CIC、FUBP1、NOTCH1、TP53、ATRX、EGFR、CDKN2A、MDM4、PTEN、及NF1基因中之一或多者的基因中之突變。
本文提供用於治療、預防、改善、及/或延遲轉移之發作的組成物及方法。轉移可由神經膠質瘤細胞自腦部遷移至身體內之任何繼發位置而產生。在某些實施例中，神經膠質瘤轉移至其他中樞神經系統組織，例如，脊髓。在某些實施例中，神經膠質瘤轉移至在中樞神經系統之外的組織，例如，骨骼、淋巴結、肺部、腺體、及其他軟組織。
微小RNA結合至信使RNA並阻遏信使RNA表現。在某些情況下，抑制微小RNA之活性導致一或多種信使RNA之去阻遏，亦即信使RNA表現在RNA及/或蛋白之層級下增加。本文提供用於調節一或多種miR-10b調控之轉錄物之表現的方法，其包含使細胞與本發明化合物接觸，其中化合物包含具有與miR-10b互補之序列的經修飾寡核苷酸。
在某些實施例中，miR-10b調控之轉錄物為Bim、TFAP2C、CDKN1A (p21)、或CDKN2A (p16)，並且抑制miR-10b導致Bim、TFAP2C、CDKN1A (p21)、及/或CDKN2A (p16) mRNA之含量增加。
除神經膠質瘤以外，miR-10b還與許多癌症類型有關聯。因此，在某些實施例中，本文所提供之化合物用於治療、預防、改善、及/或延遲除神經膠質瘤以外之癌症之發作。在某些實施例中，癌症為肝癌、乳癌、膀胱癌、前列腺癌、骨癌、結腸癌、肺癌、腦癌、血液系統癌症、胰臟癌、頭頸部癌、舌癌、胃癌、皮膚癌、甲狀腺癌、神經母細胞瘤、食道癌、間皮瘤、神經母細胞瘤、腎癌、睾丸癌、直腸癌、子宮頸癌、或卵巢癌。在某些實施例中，肝癌為肝細胞癌。在某些實施例中，肝癌係歸因於起源於身體另一部分之癌症之轉移，例如癌症係歸因於骨癌、結腸癌或乳癌之轉移。在某些實施例中，血液系統癌症為急性髓細胞性白血病、急性淋巴細胞性白血病、急性單核細胞性白血病、多發性骨髓瘤、慢性淋巴細胞性白血病、慢性骨髓性白血病、霍奇金氏淋巴瘤(hodgkin's lymphoma)、或非霍奇金氏淋巴瘤(non-hodgkin's lymphoma)。在某些實施例中，皮膚癌為黑素瘤。在某些實施例中，腎癌為腎細胞癌。在某些實施例中，乳癌為原位乳腺管細胞癌、侵襲性乳腺管細胞癌、三重陰性乳癌、髓樣癌、管狀癌、及黏液癌。在某些實施例中，癌症對化學療法具有抗性。
在某些實施例中，投與本文所提供之化合物或方法在個體中產生一或多種臨床上合意之結果。該等改善可用於確定個體對治療產生反應之程度。
在某些實施例中，臨床上合意之結果為在患有癌症之個體中腫瘤數減少及/或腫瘤大小減小。在某些實施例中，臨床上合意之結果為在患有癌症之個體中癌細胞數減少。其他臨床上合意之結果包括個體之總體存活時間延長及/或個體之無進展存活時間延長。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物防止腫瘤大小及/或腫瘤數增加。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物預防轉移性進展。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物減緩或阻止轉移性進展。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物預防腫瘤復發。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物延遲腫瘤復發。在某些實施例中，投與本文所提供之化合物預防腫瘤轉移復發。
在本文所提供之任何治療方法中，化合物可藉由腫瘤內注射來投與。在本文所提供之任何治療方法中，化合物可藉由腦室內注射來投與。
本文所述之任何化合物可用於療法中，例如，用於本文所述之任何治療方法。本文所提供之任何化合物可用於治療癌症。本文所提供之任何化合物可用於治療神經膠質瘤。
本文所述之任何經修飾寡核苷酸可用於療法中，例如用於本文所述之任何治療方法。本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於治療癌症。本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於治療神經膠質瘤。
本文所提供之任何化合物可用於製備藥物。本文所提供之任何化合物可用於製備供在本文所述之任何治療方法中使用之藥物。本文所提供之任何化合物可用於製備供治療神經膠質瘤之藥物。本文所提供之任何化合物可用於製備供治療癌症之藥物。本文所提供之任何化合物可用於製備供治療神經膠質瘤之藥物。
本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於製備藥物。本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於製備供在本文所述之任何治療方法中使用之藥物。本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於製備供治療癌症之藥物。本文所提供之任何經修飾寡核苷酸可用於製備供治療神經膠質瘤之藥物。
本文所提供之任何醫藥組成物可用於療法中，例如，用於本文所述之任何治療方法。本文所提供之任何醫藥組成物可用於治療癌症。本文所提供之任何醫藥組成物可用於治療神經膠質瘤。某些另外的療法
癌症治療通常包含組合療法。因此，在某些實施例中，本發明提供用於治療神經膠質瘤之方法，其包含：向個體投與包含經修飾寡核苷酸之化合物，其中經修飾寡核苷酸與miR-10b互補；及投與至少一種作為抗癌療法之另外療法。在某些實施例中，抗癌療法為放射療法。在某些實施例中，抗癌療法為手術切除腫瘤。在某些實施例中，抗癌療法為一或多種化學治療劑。在某些實施例中，抗癌療法為低強度、中頻交流電場(腫瘤治療電場，或TTF)。在某些實施例中，抗癌療法為生物療法。在某些實施例中，抗癌療法為基於神經膠質瘤中之一或多種遺傳異常來選擇之靶向療法。
在某些實施例中，抗癌療法包含手術切除、放射療法、化學治療劑、TTF、及靶向療法中之二或更多者之組合。
在某些實施例中，用與miR-10b互補之經修飾寡核苷酸、手術切除、放射療法、及化學治療劑治療患有神經膠質瘤之個體。在某些實施例中，用與miR-10b互補之經修飾寡核苷酸、手術切除、放射療法、TTF、及化學治療劑治療患有神經膠質瘤之個體。在某些實施例中，化學治療劑為替莫唑胺。在某些實施例中，化學治療劑為卡莫司汀。
在某些實施例中，用與miR-10b互補之經修飾寡核苷酸及手術切除治療患有神經膠質瘤之個體。在某些實施例中，用與miR-10b互補之經修飾寡核苷酸、放射療法、及手術切除治療患有神經膠質瘤之個體。在某些實施例中，用與miR-10b互補之經修飾寡核苷酸、放射療法、手術切除、及TTF治療患有神經膠質瘤之個體。
在一些實施例中，同時投與一或多種抗癌療法。在一些實施例中，依序投與一或多種抗癌療法。
在某些實施例中，放射療法為質子束療法。在某些實施例中，放射療法為立體定位放射手術。在某些實施例中，放射療法為強度調節放射療法。在某些實施例中，放射療法為3-D順形放射。
在某些實施例中，使用NovoTTF-100A裝置(Novocure Ltd, Haifa, Israel)投與TTF。在某些實施例中，TTF具有200 Hz之頻率及1-2 V/cm之強度。
在某些實施例中，化學治療劑為烷化劑。在某些實施例中，化學治療劑為抗葉酸。在某些實施例中，化學治療劑為生長因子受體抑制劑。在某些實施例中，化學治療劑為血管生成抑制劑。在某些實施例中，化學治療劑為激酶抑制劑。在某些實施例中，化學治療劑為抗微管劑(亦稱為生物鹼)。在某些實施例中，化學治療劑為烷化劑。在某些實施例中，化學治療劑為抗代謝物。
在某些實施例中，化學治療劑選自1,3-雙(2-氯乙基)-1-亞硝基脲、白消安(busulfan)、卡鉑、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、順鉑、環磷醯胺、達卡巴嗪(dacarbazine)、道諾黴素(daunorubicin)、多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、依託泊苷(etoposide)、伊達比星(idarubicin)、依弗醯胺(ifosfamide)、伊立替康(irinotecan)、洛莫司汀(lomustine)、甲基二(氯乙基)胺(mechlorethamine)、美法侖(melphalan)、絲裂黴素C (mitomycin C)、米托蒽醌(mitoxantrone)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、及拓撲替康(topotecan)。
在某些實施例中，化學治療劑選自胺甲蝶呤(methotrexate)、胺基蝶呤(aminopterin)、胸苷酸合成酶、絲胺酸羥甲基轉移酶、葉酸聚麩胺醯基合成酶、g-麩胺醯基水解酶、甘胺醯胺-核糖核苷酸轉甲醯基酶、甲醯四氫葉酸、胺基-咪唑-甲醯胺-核糖核苷酸轉甲醯基酶、5-氟尿嘧啶、及葉酸轉運蛋白。
在某些實施例中，化學治療劑選自厄洛替尼(erlotinib)及吉非替尼(gefitinib)。
在某些實施例中，化學治療劑選自貝伐單抗(bevacizumab)、沙立度胺(thalidomide)、羧胺三唑(carboxyamidotriazole)、TNP-470、CM101、IFN-α、血小板因子-4、蘇拉明(suramin)、SU5416、血小板反應蛋白、VEGFR拮抗劑、軟骨源性血管生成抑制因子、基質金屬蛋白酶抑制劑、血管抑素(angiostatin)、內皮抑素(endostatin)、2-甲氧基雌二醇(2-methoxyestradiol)、替可加蘭(tecogalan)、四硫鉬酸鹽(tetrathiomolybdate)、催乳激素(prolactin)、及利諾米特(linomide)。
在某些實施例中，化學治療劑選自BIBW 2992、西妥昔單抗(cetuximab)、伊馬替尼(imatinib)、曲妥珠單抗(trastuzumab)、吉非替尼、雷珠單抗(ranibizumab)、哌加他尼(pegaptanib)、索拉非尼(sorafenib)、達沙替尼(dasatinib)、舒尼替尼(sunitinib)、厄洛替尼、尼羅替尼(nilotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、帕尼單抗(panitumumab)、凡德他尼(vandetanib)、E7080、帕唑帕尼(pazopanib)、莫比替尼(mubritinib)、及福他替尼(fostamatinib)。
在某些實施例中，化學治療劑選自多烯紫杉醇(docetaxel)及長春花鹼(vinblastine)。
在某些實施例中，化學治療劑選自胺甲蝶呤及吉西他賓(gemcitabine)。
另外合適的抗癌療法包括靶向除miR-10b以外之致癌微小RNA (包括但不限於miR-19、miR-21、及miR-221)的經修飾寡核苷酸。
在某些實施例中，另外的療法經選擇用於治療或改善本發明之一或多種醫藥組成物之副作用。此類副作用包括(不限於)噁心、注射部位反應、肝功能測試異常、腎功能異常、肝中毒、腎中毒、中樞神經系統異常、及肌病。舉例而言，血清中之轉胺酶含量增加可指示肝毒性或肝功能異常。舉例而言，膽紅素增加可指示肝毒性或肝功能異常。
另外藥劑之進一步實例包括(但不限於)：免疫球蛋白，包括(但不限於)止吐劑；鎮痛劑(例如，乙醯胺苯酚(acetaminophen))；水楊酸鹽；抗生素；抗病毒劑；抗真菌劑；腎上腺素調節劑；激素(例如，同化類固醇、雄激素、雌激素、降血鈣素、黃體激素、生長抑制素、及甲狀腺激素)；免疫調節劑；肌肉鬆弛劑；抗組胺；骨質疏鬆劑(例如，雙膦酸鹽、降血鈣素、及雌激素)；前列腺素、抗腫瘤劑；心理治療劑；鎮靜劑；毒葛或毒漆樹產物；抗體；及疫苗。某些核鹼基序列
具有本文所述之核苷模式之經修飾寡核苷酸具有與miR-10b (SEQ ID NO: 1)互補之核鹼基序列。在某些實施例中，經修飾寡核苷酸之各核鹼基能夠與miR-10b之核鹼基序列中之各對應位置處之核鹼基經歷鹼基配對。在某些實施例中，經修飾寡核苷酸之核鹼基序列可具有一或多個相對於miR-10b之核鹼基序列或前驅序列之失配鹼基對，並且仍能夠與其目標序列雜交。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸由與miR-10b之長度相等的數目之連接之核苷組成。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸之連接之核苷之數目少於miR-10b之長度。具有少於miR-10b之長度的數目之連接之核苷之經修飾寡核苷酸(其中經修飾寡核苷酸之各核鹼基與miR-10b之對應位置處之各核鹼基互補)被視為具有與miR-10b序列之區域完全互補(亦被稱為100%互補)之核鹼基序列的經修飾寡核苷酸。舉例而言，由19個連接之核苷組成之經修飾寡核苷酸(其中各核鹼基與長度為22個核鹼基之miR-10b之對應位置互補)與miR-10b之19-核鹼基區域完全互補。此經修飾寡核苷酸具有與miR-10b之19-核鹼基部分之100%互補性，並且被視為與miR-10b為100%互補。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含與miR-10b種子序列互補之核鹼基序列，亦即經修飾寡核苷酸包含種子匹配序列。在某些實施例中，種子序列為六聚體種子序列。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸具有相對於miR-10b之核鹼基序列具有一個失配的核鹼基序列。在某些實施例中，經修飾寡核苷酸具有相對於miR-10b之核鹼基序列具有兩個失配之核鹼基序列。在某些此類實施方案中，經修飾寡核苷酸具有相對於miR-10b之核鹼基序列具有不多於兩個失配的核鹼基序列。在某些此類實施例中，失配之核鹼基為連續的。在某些此類實施例中，失配之核鹼基為不連續的。
本文所述之核鹼基序列(包括(但不限於)見於實例及序列表中者)獨立於對核酸所進行之任何修飾。因此，由SEQ ID NO定義之核酸可獨立地包含對一或多個糖部分、一或多個核苷間鍵聯、及/或一或多個核鹼基所進行之一或多個修飾。
雖然隨附於此申請之序列表根據需要將各核鹼基序列鑑別為「RNA」或「DNA」，但實際上，彼等序列可用本文指定之化學修飾之組合修飾。熟習此項技術者將易於瞭解，在序列表中，諸如「RNA」或「DNA」之用以描述經修飾寡核苷酸之名稱多少有些隨意。舉例而言，本文所提供之包含有包含2' -O-甲氧基乙基糖部分及胸腺嘧啶鹼基之核苷的經修飾寡核苷酸可描述為序列表中之DNA殘基，儘管核苷為經修飾的並且不為天然DNA核苷。
因此，在序列表中提供之核酸序列意欲涵蓋含有天然或修飾RNA及/或DNA之任何組合之核酸，包括但不限於具有經修飾核鹼基之此類核酸。經由進一步實例且不加限制，具有序列表中之核鹼基序列「ATCGATCG」之經修飾寡核苷酸涵蓋：具有此核鹼基序列之任何寡核苷酸，不論是經修飾還是未經修飾，包括但不限於包含RNA鹼基之此類化合物，諸如具有序列「AUCGAUCG」之化合物及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基諸如「AUCGATCG」之化合物；及具有其他經修飾鹼基之寡核苷酸，諸如「ATme CGAUCG」，其中me C指示5-甲基胞嘧啶。類似地，具有序列表中之核鹼基序列「AUCGAUCG」之經修飾寡核苷酸涵蓋：具有此核鹼基序列之任何寡核苷酸，不論是經修飾還是未經修飾，包括但不限於包含RNA鹼基之此類化合物，諸如具有序列「AUCGAUCG」之化合物及具有一些DNA鹼基及一些RNA鹼基諸如「AUCGATCG」之化合物及具有DNA鹼基諸如「ATCGATCG」之化合物；及具有其他經修飾鹼基之寡核苷酸，諸如「ATme CGAUCG」，其中me C指示5-甲基胞嘧啶。在一些實施例中，5-甲基尿嘧啶(me U)用於指代通常被稱為胸腺嘧啶(T)之核鹼基。某些修飾
在某些實施例中，本文所提供之寡核苷酸可包含一或多個核鹼基、糖、及/或核苷間連接之修飾，且因此為經修飾寡核苷酸。經修飾核鹼基、糖、及/或核苷間鍵聯可因諸如細胞吸收增強、對其他寡核苷酸或核酸目標之親和力提高及在核酸酶存在下之穩定性提高的合意特性而優先於未經修飾形式加以選擇。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含一或多個經修飾核苷。
在某些實施例中，經修飾核苷為糖修飾之核苷。在某些此類實施例中，糖修飾之核苷可進一步包含天然或經修飾之雜環鹼基部分，且/或經由天然或經修飾核苷間鍵聯連接至另一核苷，且/或可包括獨立於糖修飾之其他修飾。在某些實施例中，糖修飾之核苷為2'位上經修飾核苷，其中糖環在天然核糖或2'-去氧-核糖之2'碳上經修飾。
在某些實施例中，2'位上經修飾核苷具有雙環糖部分。在某些此類實施例中，雙環糖部分為呈α組態之D型糖。在某些此類實施例中，雙環糖部分為呈β組態之D型糖。在某些此類實施例中，雙環糖部分為呈α組態之L型糖。在某些此類實施例中，雙環糖部分為呈β組態之L型糖。
包含此類雙環糖部分之核苷稱為雙環核苷或BNA。在某些實施例中，雙環核苷包括但不限於(A) α-L-亞甲氧基(4'-CH2 -O-2')BNA；(B) β-D-亞甲氧基(4'-CH2 -O-2')BNA；(C)伸乙氧基(4'-(CH2 )2 -O-2')BNA；(D)胺基氧基(4'-CH2 -O-N(R)-2')BNA；(E)氧基胺基(4'-CH2 -N(R)-O-2')BNA；(F)甲基(亞甲氧基)(4'-CH(CH3 )-O-2')BNA(亦被稱為限制性乙基或cEt)；(G)亞甲基-硫基(4'-CH2 -S-2')BNA；(H)亞甲基-胺基(4'-CH2-N(R)-2')BNA；(I)甲基碳環(4'-CH2 -CH(CH3 )-2')BNA；(J) c-MOE(4'-CH(CH2 -OMe)-O-2')BNA；及(K)伸丙基碳環(4'-(CH2 )3 -2')BNA，如以下描述。
Figure 02_image001
Figure 02_image003
其中Bx為核鹼基部分並且R獨立地為H、保護基、或C1 -C12 烷基。
在某些實施例中，2'位上經修飾核苷包含2'-取代基，其選自F、OCF3, O-CH3 (亦被稱為「2'-OMe」)、OCH2 CH2 OCH3 (亦被稱為「2'-O-甲氧基乙基」或「2'-MOE」)、2'-O(CH2 )2 SCH3 、O-(CH2 )2 -O-N(CH3 )2 、-O(CH2 )2 O(CH2 )2 N-(CH3 )2 、及O-CH2 -C(=O)-N(H)CH3 。
在某些實施例中，2'位上經修飾核苷包含選自F、O-CH3 、及OCH2 CH2 OCH3 之2'-取代基。
在某些實施例中，糖修飾之核苷為4'-硫基修飾之核苷。在某些實施例中，糖修飾之核苷為4'-硫基-2'位上經修飾核苷。4'-硫基修飾之核苷具有其中4'-O被置換為4'-S的β-D-核糖核苷。4'-硫基-2'位上經修飾核苷為2'-OH被置換為2'-取代基的4'-硫基修飾核苷。合適的2'-取代基包括2'-OCH3 、2'-OCH2 CH2 OCH3 、及2'-F。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含一或多個核苷間修飾。在某些此類實施例中，經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯為經修飾核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾核苷間鍵聯包含磷原子。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含至少一個硫代磷酸酯核苷間鍵聯。在某些實施例中，經修飾寡核苷酸之各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸包含一或多個經修飾核鹼基。
在某些實施例中，經修飾核鹼基選自5-羥甲基胞嘧啶、7-去氮鳥嘌呤、及7-去氮腺嘌呤。在某些實施例中，經修飾核鹼基選自7-去氮-腺嘌呤、7-去氮鳥苷、2-胺基吡啶、及2-吡啶酮。在某些實施例中，經修飾核鹼基選自5位上取代之嘧啶、6-氮雜嘧啶以及N-2、N-6及O-6取代之嘌呤，包括2-胺基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶。
在某些實施例中，經修飾核鹼基包含多環雜環。在某些實施例中，經修飾核鹼基包含三環雜環。在某些實施例中，經修飾核鹼基包含啡噁嗪衍生物。在某些實施例中，啡噁嗪可經進一步修飾以形成此項技術中稱為G形夾(G-clamp)之核鹼基。
在某些實施例中，經修飾寡核苷酸與一或多個增強所得反義寡核苷酸之活性、細胞分佈或細胞吸收之部分綴合。在某些此類實施例中，該部分為膽固醇部分。在某些實施例中，該部分為脂質部分。用於結合之另外部分包括碳水化合物、肽、抗體或抗體片段、磷脂、生物素、啡嗪、葉酸鹽、啡啶、蒽醌、吖啶、螢光素、若丹明(rhodamine)、香豆素、及染料。在某些實施例中，碳水化合物部分為N-乙醯基-D-半乳胺糖(GalNac)。在某些實施例中，綴合基團直接連接於寡核苷酸。在某些實施例中，綴合基團藉由連接部分來連接至經修飾寡核苷酸，該連接部分選自胺基、疊氮基、羥基、羧酸、硫醇、不飽和度(例如，雙鍵或三鍵)、8-胺基-3,6-二氧雜辛酸(ADO)、4-(N-馬來醯亞胺甲基)環-己烷--1-甲酸琥珀醯亞胺酯(SMCC)、6-胺基己酸(AHEX或AHA)、經取代C1-C10烷基、經取代或未經取代C2-C10烯基、及經取代或未經取代C2-C10炔基。在某些此類實施例中，取代基選自羥基、胺基、烷氧基、疊氮基、羧基、苄基、苯基、硝基、硫醇、硫烷氧基、鹵素、烷基、芳基、烯基、及炔基。
在某些此類實施例中，化合物包含經修飾寡核苷酸，該寡核苷酸具有一或多個穩定基團連接於經修飾寡核苷酸之一端或兩端以增強諸如核酸酶穩定性之特性。在穩定基團中包括帽結構。此等末端修飾保護經修飾寡核苷酸免遭核酸外切酶降解，且可有助於遞送及/或定位於細胞內。帽可存在於5'末端(5'帽)或3'末端(3'帽)處，或可存在於兩端上。帽結構包括例如反轉去氧無鹼基帽。某些醫藥組成物
本文提供包含本文所提供之化合物及醫藥學上可接受之稀釋劑的醫藥組成物。在某些實施例中，醫藥學上可接受之稀釋劑為水溶液。在某些實施例中，水溶液為鹽水溶液。如本文所用，醫藥學上可接受之稀釋劑應瞭解為無菌稀釋劑。合適的投與途徑包括(但不限於)腫瘤內、顱內、鞘內、靜脈內、及皮下投與。在某些實施例中，顱內投與包含顱內植入裝置，該裝置包含化學治療劑及控制本文所提供之醫藥組成物之釋放的可生物降解共聚物。在某些實施例中，可植入裝置包含卡莫司汀。在某些實施例中，可植入裝置為Gliadil®晶圓。
在某些實施例中，醫藥組成物以劑量單位形式投與。舉例而言，在某些實施例中，劑量單位呈錠劑、膠囊劑、可植入裝置、或彈丸注射形式。
在某些實施例中，藥劑為經修飾寡核苷酸，其已經在合適的稀釋劑中製備，在製備期間用酸或鹼調節至pH 7.0至9.0，且接著在無菌條件下凍乾。凍乾之經修飾寡核苷酸隨後用合適的稀釋劑(例如水溶液，諸如水或生理學上相容之緩衝液，諸如鹽水溶液、漢克斯氏溶液或林格氏溶液)復原。復原之產物以皮下注射形式或以靜脈內輸注形式投與。凍乾之藥品可包裝於用溴丁基橡膠蓋塞住且用鋁頂封密封之2 mL I型透明玻璃小瓶(經硫酸銨處理)中。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物可另外含有此項技術中已確定之用量的習知見於醫藥組成物中之其他輔助組分。因此，例如，組成物可含有另外的相容性醫藥活性物質，諸如例如止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑、或消炎劑。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組成物可含有適用於物理調配本發明組成物之各種劑型的另外材料，諸如染料、調味劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、增稠劑、及穩定劑；此類另外的材料亦包括(但不限於)賦形劑，諸如乙醇、聚乙二醇、明膠、乳糖、澱粉酶、硬脂酸鎂、滑石、矽酸、黏性石蠟、羥甲基纖維素、及聚乙烯吡咯啶酮。在各種實施例中，此類材料在添加時應不會不當地干擾本發明組成物之組分之生物活性。調配物可經滅菌且必要時可與不會與調配物之寡核苷酸不利地相互作用之助劑混合，該等助劑為例如潤滑劑、防腐劑、穩定劑、濕潤劑、乳化劑、影響滲透壓之鹽、緩衝劑、著色劑、調味劑及/或芳香物質及其類似物。某些注射用醫藥組成物為油性或水性媒劑中之懸浮液、溶液或乳液，且可含有調配劑，諸如懸浮劑、穩定劑及/或分散劑。適用於注射用醫藥組成物之某些溶劑包括但不限於親脂性溶劑及脂肪油諸如芝麻油、合成脂肪酸酯諸如油酸乙酯或甘油三酯，及脂質體。水性注射懸浮液可含有增加懸浮液之黏度的物質，諸如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或聚葡萄糖。視情況，此類懸浮液亦可含有合適的穩定劑或增加藥劑之溶解度以允許製備高度濃縮溶液之試劑。
脂質部分已用於各種方法中之核酸治療劑中。在一種方法中，將核酸引入預成型之脂質體或由陽離子脂質與中性脂質之混合物製成之脂複合體(lipoplex)中。在另一方法中，在無中性脂質存在之情況下形成DNA與單陽離子脂質或聚陽離子脂質之複合體。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向特定細胞或組織之分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向脂肪組織之分佈。在某些實施例中，選擇脂質部分以增加藥劑向肌肉組織之分佈。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物包含與核酸複合之多元胺化合物或脂質部分。在某些實施例中，此類製劑包含一或多種各自個別地具有由式(Z)定義之結構的化合物或其醫藥學上可接受之鹽，
Figure 02_image005
其中各Xa 及Xb 在每次出現時獨立地為C1-6 伸烷基；n為0、1、2、3、4、或5；各R獨立地為H，其中製劑中之式(Z)化合物之至少約80%分子中之至少n+2個R部分不為H；m為1、2、3、或4；Y為O、NR2 、或S；R1 為烷基、烯基、或炔基；其中之各者視情況經一或多個取代基取代；並且R2 為H、烷基、烯基、或炔基；其中之各者視情況經一或多個取代基取代；限制條件為若n=0，則至少n+3個R部分不為H。此類製劑描述於PCT公開案WO/2008/042973中，其關於脂質製劑之揭露以全文引用方式併入本文。某些另外的製劑描述於Akinc等人,Nature Biotechnology 26 , 561-569 (2008年5月1日)中，其關於脂質製劑之揭露以全文引用的方式併入本文。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物係使用已知技術製備，該等技術包括(但不限於)混合、溶解、造粒、製糖衣藥丸、水磨、乳化、囊封、覆埋、或製錠製程。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物為固體(例如散劑、錠劑、及/或膠囊)。在某些此類實施例中，包含一或多種寡核苷酸之固體醫藥組成物係使用此項技術中已知之成分製備，此類成分包括(但不限於)澱粉、糖、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、黏合劑、及崩解劑。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物係調配成儲槽式製劑。某些此類儲槽式製劑之作用時間通常比非儲槽式製劑長。在某些實施例中，此類製劑藉由植入(例如皮下或肌肉內)或藉由肌肉內注射投與。在某些實施例中，儲槽式製劑係使用合適的聚合材料或疏水性材料(例如於可接受之油中之乳液)或離子交換樹脂製備，或製備成微溶性衍生物，例如製備成微溶性鹽。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物包含遞送系統。遞送系統之實例包括但不限於脂質體及乳液。某些遞送系統可用於製備某些醫藥組成物，包括包含疏水化合物之醫藥組成物。在某些實施例中，使用某些有機溶劑，諸如二甲亞碸。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物包含一或多種經設計以將本發明之一或多種藥劑遞送至特定組織或細胞類型的組織特異性遞送分子。舉例而言，在某些實施例中，醫藥組成物包括用組織特異性抗體包被之脂質體。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物包含持續釋放系統。該持續釋放系統之非限制性實例為固體疏水性聚合物之半通透性基質。在某些實施例中，持續釋放系統可視其化學性質而定在數小時、數天、數週或數月之時期內釋放藥劑。
某些注射用醫藥組成物係以單位劑型存在於例如安瓿或多劑量容器中。
在某些實施例中，本文所提供之醫藥組成物包含治療有效量之經修飾寡核苷酸。在某些實施例中，治療有效量足以預防、減輕或緩解疾病之症狀或延長所治療個體之存活期。
在某些實施例中，本文所提供之一或多種經修飾寡核苷酸係調配成前藥。在某些實施例中，活體內投與後，前藥在化學上轉化為寡核苷酸之生物學上、醫藥學上或治療上更具活性之形式。在某些實施例中，前藥因其比相應活性形式更易投與而適用。舉例而言，在某些情況下，前藥之生物可用率(例如通過經口投與)可比相應活性形式高。在某些情況下，前藥相比於相應活性形式可具有改良之溶解度。在某些實施例中，前藥之水溶性低於相應活性形式。在某些情況下，此類前藥具有較佳之跨細胞膜遞送，其中水溶性不利於遷移。在某些實施例中，前藥為酯。在某些此類實施例中，酯在投與後代謝水解為羧酸。在某些情況下，含羧酸化合物為相應活性形式。在某些實施例中，前藥包含結合於酸基之短肽(聚胺基酸)。在某些此類實施例中，肽在投與後裂解以形成相應活性形式。
在某些實施例中，藉由對醫藥活性化合物進行修飾而產生前藥，以使得活性化合物在活體內投與後再生。前藥可經設計以改變藥物之代謝穩定性或轉運特徵、遮蔽副作用或毒性、改良藥物之風味或改變藥物之其他特徵或特性。藉助於對活體內藥效動力學過程及藥物代謝之瞭解，熟習此項技術者在已知醫藥活性化合物後即可設計該化合物之前藥(參見例如Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, 第388-392頁)。
另外的投藥途徑包括(但不限於)經口、直腸、經黏膜、經腸、腸內、局部、栓劑、經由吸入、鞘內、心內、心室內、腹膜內、鼻內、眼內、腫瘤內、肌肉內、及髓內投與。在某些實施例中，投與鞘內藥劑以達成局部暴露而非全身暴露。舉例而言，醫藥組成物可直接注射於合乎需要效應之區域中。某些套組
本發明亦提供套組。在一些實施例中，套組包含一或多種包含本文所揭示之經修飾寡核苷酸的化合物。在一些實施例中，套組可用於向個體投與化合物。
在某些實施例中，套組包含準備投與之醫藥組成物。在某些實施例中，醫藥組成物存在於小瓶內。在某些實施例中，醫藥組成物存在於可植入裝置中。複數個小瓶或可植入裝置(諸如10個)可存在於例如分配包裝中。在一些實施例中，小瓶經製造以便於注射器出入。套組亦可含有用於使用化合物之說明書。
在一些實施例中，套組包含存在於預填充之注射器(諸如具有例如具針套之27號½吋針的單次劑量注射器)而非小瓶中之醫藥組成物。複數個預填充之注射器(諸如10個)可存在於例如分配包裝中。套組亦可含有用於投與包含本文揭示之經修飾寡核苷酸的化合物的說明書。
在一些實施例中，套組包含作為凍乾藥品的本文所提供之經修飾寡核苷酸及醫藥學上可接受之稀釋劑。在準備向個體投與時，凍乾藥品在醫藥學上可接受之稀釋劑中復原。
在一些實施例中，除包含本文揭示之經修飾寡核苷酸的化合物之外，套組亦可包含以下中之一或多者：注射器、酒精棉簽、棉球及/或紗布墊。某些實驗模型
在某些實施例中，本發明提供在實驗模型中使用及/或測試本發明之經修飾寡核苷酸的方法。熟習此項技術者能夠選擇及修改此類實驗模型之方案以評估本發明之藥劑。
一般而言，首先在培養細胞中測試經修飾寡核苷酸。合適的細胞類型包括與需要在活體內遞送經修飾寡核苷酸之細胞類型相關的彼等細胞類型。舉例而言，適用於本文所述方法之研究的細胞類型包括初級細胞或培養細胞。
在某些實施例中，評估了培養細胞中經修飾寡核苷酸干擾miR-10b活性的程度。在某些實施例中，可藉由量測微小RNA之含量來評估對微小RNA活性之抑制。或者，可量測預測或確定之由微小RNA調控之轉錄物之含量。微小RNA活性之抑制可導致miR-10b調控之轉錄物及/或由miR-10b調控之轉錄物編碼之蛋白增加。此外，在某些實施例中，可量測某些表型結果。
熟習此項技術者可利用多種動物模型來研究人類疾病模型中之miR-10b。舉例而言，可在癌症模型，諸如正位異種移植物模型、毒素誘導癌症模型、或遺傳誘導癌症模型中研究miR-10b之抑制劑。在此類癌症模型中，可執行研究來評估miR-10b抑制劑對於腫瘤大小、腫瘤數、總體存活、及/或無進展存活之效應。合適的動物模型包括(但不限於)神經膠質瘤源性異種移植物模型及神經膠質瘤源性正位模型。異種移植及正位模型可使用培養神經膠質瘤細胞，或使用自手術樣品分離之神經膠質瘤細胞來建立。某些定量檢定
在某些實施例中，微小RNA含量係在體外或在體內細胞或組織中定量。在某些實施例中，微小RNA含量之變化係藉由微陣列分析來量測。在某些實施例中，微小RNA含量之變化係藉由多種商購PCR檢定中之一者，諸如TaqMan®微小RNA檢定(Applied Biosystems)來量測。
用抗miR或微小RNA模擬物調節微小RNA活性可藉由mRNA之微陣列圖譜來評估。搜尋由抗miR或微小RNA模擬物調節(增加或減少)之mRNA序列中的微小RNA種子序列，以比較對作為微小RNA之目標之mRNA的調節作用與對不為微小RNA之目標之mRNA的調節作用。以此方式，可評估抗miR與其目標微小RNA之相互作用或微小RNA模擬物與其目標之相互作用。在抗miR之情況下，篩選表現量增加之mRNA中包含與抗miR所互補之微小RNA匹配之種子的mRNA序列。
用抗miR化合物調節微小RNA活性可藉由量測微小RNA之信使RNA目標之含量或藉由量測信使RNA自身或由其轉錄之蛋白質之含量來評估。微小RNA之反義抑制通常導致信使RNA及/或微小RNA之信使RNA標靶之蛋白質之含量增加，亦即，抗miR治療導致一或多個目標信使RNA得以去阻遏。實例
提供以下實例以便更充分地說明本發明之一些實施例。然而，其決不應被視為限制本發明之寬範圍。此項技術中之一般技術人員將容易地採用本發明之基本原理來設計各種化合物而不背離本發明之精神。實例 1 ： miR-10b 在神經膠質瘤中之作用
先前在神經膠質瘤之小鼠模型中使用研究工具抗miR-10b經修飾寡核苷酸(MO)的研究證明，miR-10b之抑制顯著減少腫瘤生長。雖然在此模型中測試之化合物展示有效性，但是未提供與化合物之安全性或其用於患有神經膠質瘤之人類個體之適合性相關的資料。通常，歸因於缺少作為藥劑之安全性之測試，研究工具化合物不可能適用於患有神經膠質瘤之人類個體。鑒於此，執行篩選來鑑別對於向患有神經膠質瘤之人類個體投與來說足夠有效、便於投與、並且安全的抗miR-10b化合物。
設計了具有不同長度及化學組成之大約215種抗miR-10b化合物。化合物之長度範圍為9至23個連接之核苷，且化合物之化學修飾的數目、類型、及位置有所不同。因為效力及安全性不能基於化合物的化學結構來預測，所以在一系列經設計以消除具有不利特性之化合物的檢定中在活體外及活體內評估化合物之特徵，包括效力、功效、藥物動力學行為、安全性、及代謝穩定性。在某些檢定中，工具抗miR-10b化合物用作與其他抗miR-10b化合物進行比較的基準。首先在若干活體外檢定(例如，效力、毒理學)中測試大約215種化合物中之各者，以鑑別適用於在更複雜的體內檢定(例如藥物動力學概況、功效、毒理學)中進一步測試之較小組的化合物。
亦在此等檢定中之各者中測試研究工具化合物RG348124，5'-CACAAATTCGGTTCTACAGGGTA-3'(SEQ ID NO: 3)，其中各核苷包含2'-O-甲氧基乙基糖部分，各C為5-甲基胞嘧啶，並且各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯核苷間鍵聯。
作為篩選級聯中之第一步，使用生物化學螢光結合檢定(FBA)，測試化合物之潛在毒性。藉由將螢光染料與各化合物一起培育，並且立即量測螢光來執行FBA。高螢光化合物具有在體內產生毒性之潛力並且不包含在進一步測試中。
使用螢光素酶報告基因檢定評估體外效力。設計miR-10b之螢光素酶報告基因質體，其在螢光素酶基因之3'-UTR中具有完全互補miR-10b結合位點。產生表現此螢光素酶構築體之穩定的海拉細胞株。將細胞轉染以引入miR-10b，其阻遏來自報告基因構築體之螢光素酶之表現。隨後用活性抗miR-10b化合物轉染細胞可抑制miR-10b之活性，並且增加螢光素酶mRNA表現，從而導致螢光信號增加。用1 nM、10 nM、及100 nM濃度之抗miR-10b化合物處理細胞。若較長長度之化合物之EC50 (產生半最大反應之濃度)小於或等於5 nM，則該等化合物被鑑別為具有適當的活性。因為較短化合物(諸如9聚體)在用於較長化合物之相同檢定條件下通常不是最大活性的，所以基於相對於適當的對照化合物之最大抑制選擇較短化合物。以此方式，在進一步的測試中包括在長度及化學組成方面皆不同的化合物。
基於來自螢光素酶檢定及FBA之資料，並且考慮到化學多樣性，選擇某些化合物以供在肝切片檢定中進一步測試。被設計來鑑別具有導致毒性之潛力的化合物的肝切片檢定係藉由將個別化合物與自大鼠肝單離之核心肝樣品之組織切片一起培育來執行。培育24小時之後，自肝切片提取RNA，並且量測包括IFIT之若干促炎性基因之表現水準。進行相對於PBS處理之倍數變化的log2轉換(Log2-FC)。促炎性基因表現之誘導指示體內促炎性效應(亦即，毒性)之潛力，且因此將此等化合物自進一步測試中排除。
藉由將各抗miR-10b化合物在小鼠肝或腦裂解物中培育來評估代謝穩定性。24小時後，計算剩餘的完整化合物之百分比。在24小時培育後不穩定的化合物在體內可能不穩定。
因為寡核苷酸通常經由皮下注射來投與，所以較低黏度之化合物為較佳的。總體上，對於意欲藉由皮下注射來投與之調配物而言，在150 mg/ml之濃度下小於40 cP之黏度被視為可接受的。對於藉由其他方法諸如藉由靜脈內注射可植入裝置來投與之化合物而言，較高黏度可為可接受的。
基於此等檢定，選擇某些化合物用於在針對半胱天冬酶活性、細胞生存力、代謝穩定性、黏度、及急性情形下之毒性之檢定中進行進一步測試。表1所示之此等化合物為用於治療神經膠質瘤之候選治療劑。表 1 ：抗 miR-10b 化合物
化合物編號 核苷鹼基序列及化學(5' 至3') 長度 SEQ ID NO
RG5452 CK AK m CE AK AE AE UK TE m CE GK GE TE UK m CE TE AK m CE AE GE GE GE TE AE 23 15
RG5454 CK AK m CE AE AK AE TE UK m CE GK GE TE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 23 13
RG5455 m CE AE m CE AE AE AE UK TE m CE GK GE TE UK m CE TE AK m CE AE GE GE GE TE AE 23 15
RG5461 CK AK AE AE UK TE m CE GK GE TE UK m CE TE AK m CE AE GE GE GE TE AE 21 11
RG5470 AK AE UK TE m CE GK GE TE UK m CE TE AK m CE AE GE GE GE TE AE 19 7
RG5476 UK UK m CE GK GE TE UK m CE TE AK m CE AE GE GE GE TE AE 17 19
RG5552 CK AK CK AAK AK UK TCK GE GE TE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 23 14
RG5553 CK AK CK AK AAK UK UK CK GE GE TE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 23 16
RG5556 m CE AE AE AE TE TE m CE GE GE TE UK CTAK CAGK GGUK AK 21 8
RG5577 CK AK AAK TUK CGK GTE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 21 9
RG5578 CK AK AAK UK TCK GK GTE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 21 10
RG5579 CK AK AK AUK UK CK GGK TE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 21 12
RG5580 CK AK AK AK TUK CK GK GK TE TE m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 21 9
RG5606 AK AK UK TCK GK GK TUK m CE TE AE m CE AE GE GE GE TE AE 19 7
RG5634 AE AK TE TE CK GE GE UK UM CM UK AM CM AK GM GM GK UK AK 19 5
RG5646 AE AE TE TE CK GGK TUK CM UK AM CK AM GK GM GK UK AE 19 4
RG5648 AE AE TE TE m CE GE GE UK UK CM UK AK CM AK GK GM GK UK AE 19 5
RG5650 AE AE UK TE m CE GK GE TE ToCoUK AK CM AfGF GF GM UK AK 19 6
RG5655 UK AK CM AF GF GF GM UK AK o Ao Ao UK AK CM AF GF GF GM UK AK 20 18
RG5656 CK UK AM CF AF GM GF GM UK AK o Ao Ao CK UK AM CF AF GM GF GM UK AK 22 17
RG5658 UK AK CM AF GF GF GM UK AK 9   
在表1中之化合物中，繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，「U」為非甲基化尿嘧啶，「m C」為5-甲基尿嘧啶，「m C」為5-甲基胞嘧啶，「C」為非甲基化胞嘧啶，「A」為腺嘌呤，「G」為鳥嘌呤；上標「O」指示磷酸二酯鍵聯並且各其他核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯。實例 2 ：進一步檢定中之抗 miR-10b 化合物測試
在評估用於治療癌症之候選治療劑中，相關細胞檢定包括細胞生存力及細胞凋亡誘導檢定。對於此等檢定，使用神經膠質母細胞瘤源性細胞株。
對於細胞生存力檢定，將大約8,000個細胞塗鋪在96孔板之各孔中。第二天，使用RNAiMAX™作為轉染試劑，以2、4、8、16、31、63、125、250、及500 nM之劑量之抗miR-10b化合物轉染細胞。72小時之後，使用CellTiter-Glo®發光細胞生存力檢定確定細胞生存力。計算各化合物之IC50 。使用LN229、U87、MCF7、及HCN2細胞執行檢定。
將半胱天冬酶活性用作誘導細胞凋亡之指標。將大約8,000個細胞塗鋪在96孔板之各孔中。第二天，使用RNAiMAX™，用抗miR-10b化合物轉染細胞。48小時之後，使用Caspase-Glo 3/7檢定系統(Promega)確定半胱天冬酶3/7活性。計算各化合物之EC50 。LN229細胞用於此檢定。
基於此等功能檢定，基於效力選擇三種化合物。在較長長度之化合物中，RG5579及RG5461根據生存力檢定中之IC50 排序最高；在較短長度之化合物中，RG5658根據生存力檢定中之IC50 排序最高。來自螢光素酶、生存力、及半胱天冬酶檢定之結果展示於表2中。研究工具化合物被包括在內作為各個檢定中之活性之基準。表 2: 前導抗 miR-10b 化合物之體外活性
檢定 RG384124 RG5579 RG5461 RG5658
螢光素酶(平均倍數變化) 1 nM 2.8 12.6 12.4 1.8
螢光素酶(平均倍數變化) 10 nM 29.5 39.1 49.8 3.7
螢光素酶(平均倍數變化) 100 nM 55.6 27.8 35.1 4.7
LN229生存力檢定IC50 43 nM 12.2 nM 13.2 nM 90.1 nM
U87生存力檢定IC50 31.3 nM 24.8 nM 10.1 nM 45.6 nM
LN229半胱天冬酶3活化檢定IC50 85.1 nM 13.1 nM 21.1 nM 589.7 nM
MCF7生存力檢定IC50 80.5 nM 65.5 nM 96.8 nM 928.6 nM
HCN2生存力檢定IC50 44.4 nM 85.9 nM 134 nM N.D.
亦在正常Sv129小鼠中使用體內檢定評估在功能檢定中具有最大活性之化合物之潛在全身毒性。投與300 mg/kg之單一皮下劑量之抗miR-10b。包括PBS及與miR-17無關的兩種抗miR作為對照處理，已知一種抗miR為促炎性的(陽性對照)，且一種不為促炎性的(陰性對照)。四天后，處死小鼠。單離出腎及肝組織以進行RNA提取。量測已知在炎性反應期間被誘導之兩種基因IFIT及OASL2之含量並且相對於小鼠GAPDH進行正規化。進行相對於PBS處理之倍數變化的log2轉換(Log2-FC)。
基於實例1中所述之檢定、生存力及半胱天冬酶檢定、及全身毒性檢定，三種化合物RG5579、RG5461、及RG5658被鑑別為具有關於在活體外檢定中之效力及缺少潛在毒性的合適概況。實例 3 ：與替莫唑胺組合之體外功效
為了評估miR-10b抑制對替莫唑胺(TMZ)活性之影響，用抗miR-10b化合物及TMZ處理LN229細胞。選擇RG5579及RG5461以供在此檢定中進行測試。
將大約8,000個細胞塗鋪在96孔板之各孔中。第二天，除在0至200 uM範圍內之濃度之TMZ以外，在0、5、10、或20 nM RG5579或RG5461之濃度下用抗miR-10b化合物處理細胞。72小時之後，使用CellTiter-Glo®發光細胞生存力檢定確定細胞生存力。計算抗miR-10b濃度之各濃度下TMZ之IC50 並且展示於表3中。表 3: 在抗 miR-10b 存在下 TMZ 之 IC50
抗miR-10化合物 抗miR-10b之濃度(nM) TMZ IC50 (uM)
RG5579 0 10.55
5 11.4
10 10.45
20 1.029
RG5461 0 10.5
5 10.85
10 9.335
20 4.27
如表3所示，RG5579及RG5461各自在LN229生存力檢定中使TMZ之IC50 減小，並且因此顯著增強體外TMZ之效力。實例 3 ： GBM 模型中之體內測試
為了確定靶向miRNA之經修飾寡核苷酸對腫瘤生長之效應，在神經膠質瘤之小鼠模型中評估抗miR-10b化合物之對腫瘤大小、腫瘤生長、及存活之效應。皮下異種移植物模型：
將在培養物中生長之人類神經膠質母細胞瘤源性細胞胰蛋白酶化、進行計數、並且重新懸浮於培養基:生長因子減量型Matrigel之1:1混合物中。將在100 ul體積中之大約106 個細胞皮下注射至裸鼠之側腹中。皮下腫瘤植入之後十天，使用卡尺量測腫瘤大小，並且將小鼠隨機化至處理組。在植入後開始抗miR-10b化合物之腫瘤內(例如，5 ug/30 mm3 腫瘤)、皮下(例如，100 mg/kg)、或靜脈內(例如，80 mg/kg)給藥。每週量測腫瘤大小三至五天。在研究結束時量測最終腫瘤大小及重量。正位模型：
將在培養物中生長之人類神經膠質母細胞瘤源性細胞胰蛋白酶化、進行計數、並且重新懸浮於PBS中。細胞表現螢光標記物及螢光素酶插入物，從而使得能夠經由體內成像系統來監測腫瘤生長及尺寸。將在5 ul體積中之大約5 × 105 個細胞注射至裸鼠之腦中。顱內腫瘤植入之後，使用IVIS Spectrum體內成像系統(PerkinElmer)來量測腫瘤負荷，並且將小鼠隨機化至處理組。在植入後開始抗miR-10b化合物之腫瘤內(例如，0.1-500 ug/腫瘤)、皮下(例如，100 mg/kg)、或靜脈內(例如，80 mg/kg)給藥。使用成像系統每週量測腫瘤負荷。在研究結束時量測最終腫瘤大小及重量。
在皮下及正位神經膠質瘤模型中測試三種候選治療劑RG5579、RG5461、及RG5658。亦測試在體外生存力檢定中之第三有效化合物RG5580。該等研究被設計來在皮下正位模型中評估皮下投與相比於腫瘤內投與；單獨及與TMZ組合之抗miR-10b化合物之功效；及單次注射抗miR-10b化合物相比於多次注射之功效。亦測試研究工具化合物RG384124。正位神經膠質母細胞瘤模型中之 RG5579 及 RG5580
在用LN229細胞建立之GBM之正位模型中測試RG5658及RG5461。
將在培養物中生長之人類神經膠質母細胞瘤源性LN229細胞胰蛋白酶化、進行計數、並且重新懸浮於PBS中。該等細胞表現螢光標記物，從而使得能夠在處理期間監測腫瘤生長及尺寸。在第0天，將在5 ul體積中之大約5 × 105 個細胞注射至裸鼠之腦中。將小鼠隨機化至以下處理組，每組8只小鼠：(1) PBS；(2) RG5579；(3) RG5580；及(4)陰性對照。在第29天，給予小鼠腫瘤內注射PBS或50 ug抗miR-10b化合物或陰性對照。在第48天，給予小鼠PBS或30 ug抗miR-10b或陰性對照。監測存活，並且確定總體中值存活期。
如表4所示，相對於PBS處理，用RG5579處理改良總體中值存活期14%。表 4: 抗 miR-10b 改良 GBM 模型中之中值存活期
處理 以天為單位之中值存活期 增加% ( 相對於PBS)
PBS 59.5 --
陰性對照 58 --
RG5580 57 --
RG5579 68 14%
正位神經膠質母細胞瘤模型中之 RG5461 及 RG5658
在用LN229細胞建立之GBM之正位模型中測試RG5658及RG5461。處理包含單獨或與TMZ組合之抗miR-10b化合物。
皮下及正位模型中之初步測試顯示腫瘤內投與之單一劑量之RG5668或RG5461一致地延遲腫瘤生長，但是不顯著改良總體存活期。
執行進一步測試來評估與TMZ組合之RG5658及RG5461處理之效應。將在培養物中生長之人類神經膠質母細胞瘤源性LN229細胞胰蛋白酶化、進行計數、並且重新懸浮於PBS中。該等細胞表現螢光標記物，從而使得能夠在處理期間監測腫瘤生長及尺寸。在第0天，將在5 ul體積中之大約5 × 105 個細胞注射至裸鼠之腦中。將小鼠隨機化至以下處理組，每組8只小鼠：(1) PBS；(2) RG5461；(3) RG5658；(4) RG5461 + TMZ；(5) RG5658 + TMZ；及(6) PBS + TMZ。在第21天，以20 ug之RG5658或50 ug之RG5461之劑量，腫瘤內投與單一劑量之抗miR-10b化合物。在第35天至第41天中之每一者每天投與TMZ。監測存活，並且確定總體中值存活期。如表5所示，相對於單獨TMZ或單獨抗miR-10b化合物，抗miR-10b化合物與TMZ之組合改良中值存活期。表 5: 抗 miR-10b + TMZ 改良 GBM 模型中之中值存活期
處理 以天為單位之中值存活期 增加% ( 相對於PBS)
PBS 55.5 --
RG5461 59 --
RG5658 56 --
TMZ 67.5 22%
RG5461 + TMZ 88 59%
RG5668 + TMZ 95 71%
正位神經膠質母細胞瘤模型中之 RG5579
在用LN229細胞建立之GBM之正位模型中測試RG5579。
將在培養物中生長之人類神經膠質母細胞瘤源性LN229細胞胰蛋白酶化、進行計數、並且重新懸浮於PBS中。該等細胞表現螢光標記物，從而使得能夠在處理期間監測腫瘤生長及尺寸。在第0天，將在5 ul體積中之大約5 × 105 個細胞注射至裸鼠之腦中。將小鼠隨機化至以下處理組，每組8只小鼠：(1) PBS；(2) RG5579；(3) PBS + TMZ；及(4) RG5579 + TMZ。在第21天，給予小鼠腫瘤內注射PBS或40 ug之RG5579。在第35天至第41天，每天投與TMZ。監測存活，並且確定總體中值存活期。
存活百分比曲線示於圖1中，並且總體存活之增加百分比示於表6中。此等結果證明相對於PBS處理，作為單一試劑處理之RG5579增加小鼠之中值存活期。用RG5579及TMZ兩者之處理可導致中值存活期之甚至更大增加。表 6: GBM 小鼠模型中之中值總體存活期
中值總體存活期
天 增加% (相對於PBS)
PBS 48.5 --
RG5579 57 18
TMZ 61.5 27
RG5579 + TMZ 125.5 159
體內研究之結果概述於表7中並且說明用抗miR-10b化合物及TMZ兩者處理之後的總體存活期之實質性改良。RG5461及RG5658與TMZ處理組合改良了總體中值存活期。RG5579處理作為單一試劑及與TMZ治療組合均增加了總體中值存活期。表 7: GBM 模型中之抗 miR-10b 功效
模型 處理 RG384124 RG5579 RG5461 RG5658
LN229正位模型 腫瘤內抗miR-10b 沒有存活益處 中值存活期增加14% 沒有存活益處 沒有存活益處
LN229正位模型 腫瘤內抗miR-10b + TMZ 未測試 中值存活期增加159% 中值存活期增加59% 中值存活期增加71%
在初步安全性檢定中，發現表7中之三種化合物中之各者在全身或腫瘤內投與之後均良好耐受。實例 4 ： miR-10b 下游基因之去阻遏
為了評估用抗miR-10b處理之中靶藥效動力學效應，藉由下一代測序來鑑別作為miR-10b之直接目標之18種基因，並且量測在抗miR-10b處理之後此等基因中之各者之表現。18種基因為：ATXN2、ATXN7、BCL6、BDNF、CRLF3、DAZAP1、DVL3、FXR2、GATAD2A、GCLM、GTF2H1、INO80D、MIEF1、NCOA6、NFE2L1、PDE4A、SMAD2、及TET2。
用在2至500 nM範圍內之濃度之RG5579處理LN229細胞。24小時之後，將RNA單離並且量測所靶向之18種基因之mRNA含量並取平均值以提供藥效動力學特徵評分(pharmacodynamic signature score；PD特徵評分)，其表示為相對於模擬轉染之Log2倍數變化(Log2FC)。用RG5579處理導致LN229細胞中之PD特徵之劑量依賴性去阻遏。類似地，在正位LN229 GBM腫瘤模型中，用40或80 ug劑量之RG5579處理導致PD特徵之去阻遏。
使用10種基因之PD特徵(不與上述18-基因PD特徵重疊)，用RG5461及RG5658進行類似研究。用任一化合物處理均導致LN229細胞中之10-基因PD特徵之劑量依賴性去阻遏。
此等資料證明用抗miR-10b處理使miR-10b之直接目標去阻遏。
除本文所述之彼等修改之外，本發明之各種修改亦將為熟習此項技術者根據以上描述顯而易知。該等修改亦意欲落入所附申請專利範圍的範圍內。本申請案中引用之各參考文獻(包括(但不限於)期刊文章、美國及非美國專利、專利申請公開案、國際專利申請公開案、GENBANK®寄存編號及其類似物)明確以全文引用之方式併入本文中。
圖1示出投與單獨RG5579、單獨替莫唑胺(TMZ)、或RG5579與TMZ之組合之多形性神經膠質母細胞瘤(GBM)模型小鼠的存活百分比。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008

Claims (34)

  1. 一種包含經修飾寡核苷酸之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK UE UE CE UE AE CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  2. 如申請專利範圍第1項之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'- CK AK AK AUK UK CK GGK m UE m UE m CE m UE AE m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶并且「C」為非甲基化胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  3. 一種包含經修飾寡核苷酸之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-CK AK AE AE UK UE CE GK GE UE UK CE UE AK CE AE GE GE GE UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，並且沒有下標之核苷為β-D-去氧核糖核苷酸；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  4. 如申請專利範圍第3項之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由21個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-CK AK AE AE UK m UE m CE GK GE m UE UK m CE m UE AK m CE AE GE GE GE m UE AE -3' (SEQ ID NO: 2) 其中繼之以下標「E」之核苷為2'-O-甲氧基乙基核苷，並且繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷；其中「m U」為5-甲基尿嘧啶并且「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「m C」為5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  5. 一種包含由9個連接之核苷組成之經修飾寡核苷酸的化合物，其中該經修飾寡核苷酸包含結構： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，並且繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷；其中各U獨立地選自非甲基化尿嘧啶及5-甲基尿嘧啶；其中各C獨立地選自非甲基化胞嘧啶及5-甲基胞嘧啶；並且其中各核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  6. 如申請專利範圍第7項之化合物，其中該經修飾寡核苷酸由9個連接之核苷組成並且該經修飾寡核苷酸之結構為： 5'-UK AK CM AF GF GF GM UK AK -3' 其中繼之以下標「K」之核苷為S-cEt核苷，繼之以下標「M」之核苷為2'-O-甲基核苷，並且繼之以下標「F」之核苷為2'-氟核苷；其中「U」為非甲基化尿嘧啶；其中「C」為非甲基化胞嘧啶；其中上標「O」指示磷酸二酯鍵聯並且各其他核苷間鍵聯為硫代磷酸酯鍵聯；或其醫藥學上可接受之鹽。
  7. 如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之化合物，其中該化合物由該經修飾寡核苷酸或其醫藥學上可接受之鹽組成。
  8. 如申請專利範圍第1項至第7項中任一項之化合物，其中該醫藥學上可接受之鹽為鈉鹽。
  9. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1項至第8項中任一項之化合物及醫藥學上可接受之稀釋劑。
  10. 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物，其中該醫藥學上可接受之稀釋劑為水溶液。
  11. 如申請專利範圍第10項之醫藥組成物，其中該水溶液為鹽水溶液。
  12. 一種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1項至第8項中任一項之化合物，該組成物為凍乾組成物。
  13. 一種醫藥組成物，其基本上由在鹽水溶液中之如申請專利範圍第1項至第8項中任一項之化合物組成。
  14. 一種治療神經膠質瘤之方法，其包含向患有神經膠質瘤之個體投與如申請專利範圍第1項至第6項中任一項之化合物，或如申請專利範圍第9項至第11項或第13項中任一項之醫藥組成物。
  15. 如申請專利範圍第14項之方法，其中該神經膠質瘤為瀰漫性星形細胞瘤、退行性星形細胞瘤、寡樹突神經膠質瘤、退行性寡樹突神經膠質瘤、瀰漫性中線神經膠質瘤、或神經膠質母細胞瘤。
  16. 如申請專利範圍第14項或第15項之方法，其中該化合物或醫藥組成物係腫瘤內投與。
  17. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該瀰漫性星形細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
  18. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該退行性星形細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
  19. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該寡樹突神經膠質瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變以及染色體臂1p及19q之缺失。
  20. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該退行性寡樹突神經膠質瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變及染色體臂1p及19q之缺失。
  21. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該瀰漫性中線神經膠質瘤包含組蛋白H3 (H3) K27M突變。
  22. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該神經膠質母細胞瘤不包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
  23. 如申請專利範圍第15項之方法，其中該神經膠質母細胞瘤包含異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變。
  24. 如申請專利範圍第14項至第23項中任一項之方法，其中該神經膠質瘤為復發性神經膠質瘤。
  25. 如申請專利範圍第17項、第18項、第19項、第20項、第22項、或第23項中任一項之方法，其中該異檸檬酸去氫酶(IDH)基因突變為IDH1或IDH2基因突變。
  26. 如申請專利範圍第14項至第25項中任一項之方法，其中在投與該化合物或醫藥組成物之後，腫瘤大小減小及/或腫瘤數減少。
  27. 如申請專利範圍第14項至第26項中任一項之方法，其中該化合物或醫藥組成物之該投與增加該個體之無進展存活期。
  28. 如申請專利範圍第14項至第27項中任一項之方法，其中該化合物或醫藥組成物之該投與增加該個體之總體存活時間。
  29. 如申請專利範圍第14項至第28項中任一項之方法，其中該化合物之該投與改良該個體之生活品質。
  30. 如申請專利範圍第14項至第29項中任一項之方法，其包含投與至少一種另外的抗癌療法。
  31. 如申請專利範圍第30項之方法，其中該至少一種另外的療法係選自手術切除、放射療法、腫瘤治療電場、及一或多種化學治療劑。
  32. 如申請專利範圍第31項之方法，其中該化學治療劑係選自卡莫司汀(carmustine)、替莫唑胺(temozolomide)、及貝伐單抗(bevacizumab)。
  33. 如申請專利範圍第31項之方法，其中該化學治療劑為替莫唑胺。
  34. 如申請專利範圍第30項之方法，其中該至少一種另外的抗癌療法包含手術切除、放射療法、及替莫唑胺。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110290794A (zh) 2016-11-01 2019-09-27 纽约州州立大学研究基金会 5-卤代尿嘧啶修饰的微rna及其在癌症治疗中的用途
US11236337B2 (en) 2016-11-01 2022-02-01 The Research Foundation For The State University Of New York 5-halouracil-modified microRNAs and their use in the treatment of cancer

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007303205A1 (en) 2006-10-03 2008-04-10 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Lipid containing formulations
AU2009283906A1 (en) * 2008-08-19 2010-02-25 Maine Institute For Human Genetics And Health Micro RNA and Neurofibromatosis Type 1 in diagnosis and therapy
ES2555057T3 (es) * 2009-06-12 2015-12-28 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Nuevos potentes compuestos antisentido anti-ApoB
US9364495B2 (en) * 2009-10-20 2016-06-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oral delivery of therapeutically effective LNA oligonucleotides
US9322016B2 (en) * 2011-09-07 2016-04-26 3-D Matrix Ltd. MicroRNA-based methods and assays for osteosarcoma
JP6322189B2 (ja) * 2012-04-25 2018-05-09 レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド Ｍｉｒ−２１活性を調節するためのマイクロｒｎａ化合物及び方法
MA46999A (fr) * 2016-12-05 2019-10-09 Regulus Therapeutics Inc Oligonucléotides modifiés pour traiter la polykystose rénale

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