TW200936138A - Enantiomerically pure (-) 2-[1-(7-methyl-2-(morpholin-4-yl)-4-oxo-4H-pyrido[1,2-a]pyrimidin-9-yl)ethylamino]benzoic acid, its use in medical therapy, and a pharmaceutical composition comprising it - Google Patents

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200936138 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於鏡像異構性純（-)2-[1_(7·甲基_2-(嗎啉_4· 基）-4-側氧基比啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸 或其醫藥學上可接受之鹽、鏡像異構性純㈠^[^(^，基· 2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-。比啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺 基]苯曱酸呈固態、其製備方法、其醫療用途、包含其之 醫藥組合物、其在製備適用於預防或治療疾病之方法的藥 物中之用途及其在預防或治療疾病之方法中的用途。本發 明例如係關於新穎抗血栓療法及適用於該新穎療法之鏡像 異構性純（-)2-[1·(7·甲基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-吡啶 并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸。更特定言之，本發明 係關於碟酸肌醇（PI)3-激酶β之選擇性抑制劑及該選擇性抑 制劑（亦即（-)2-[1-(7-曱基-2-(嗎琳-4·基）_4-側氧基-4Η-吡啶 并[l，2-a]喊啶-9-基）乙胺基]苯甲酸）在抗血栓療法中之用 途。 【先前技術】 血小板為在止也過程中起到基本作用之特定化黏著細 胞。在正常情況下，血小板既不黏著於血管内皮亦不藉由 血管内皮而活化。然而，内皮之損害或斑塊之破環使流動 之血液曝露於多種凝血酶原性元件。循環之血小板帶有此 等凝企酶原性元件之受體。一旦血管損傷，血小板即經由 畴蛋白GPIba受體黏著於在破裂斑塊之位點與膠原蛋白結 合之Von Willebrand因子（vWF)(血小板黏著性），變得活化 137748.doc 200936138 (a小板活化）且釋放許多預t得或一旦血小板活化即產生 之物質，包括腺苷二磷酸（ADP) '血清素及凝金脂素 Α2(ΤχΑ2)等’其所有充當血小板促效劑且因此加強初始微 弱之黏著性誘導血小板活化。另外，在損傷位點受刺激之 • 凝血級聯產生亦為有效血小板促效劑之凝血酶。所有此等 血小板促效劑之主要功能響應中一者為在血小板表面上將 • 整合素anbP3(GP Ilb/IIIa)轉化為其活性構形。呈其活性構 φ ㈣，此等整合素將充當將血小板連接在-起(血小板聚 集）及隨後形成血栓之血纖維蛋白原橋之受體。 因此，晚期動脈粥樣硬化斑之突然破裂或裂開導致擴大 之血小板黏著/聚集反應，其通常引起企管閉塞性血小板 血栓之形成。此等血栓在冠狀動脈或大腦循環中之形成分 • 別引起急性心肌梗塞及中風，其經組合代表工業化世界中 死亡之主導原因〇血小板血栓形成亦引起許多其他臨床狀 態，包括不穩定絞痛、猝死、短暫性缺血性發作、陣發性 φ 黑朦（amaurosis fugax)及四肢及内臟之急性局部缺血。促 進破裂斑塊之凝血酶原性潛能增大的許多因素包括（ι)斑塊 中黏著基質之高反應性，（2)病變中組織因子之存在，及 . (3)由血管内腔窄化（藉由動脈粥樣硬化血栓形成過程）引起 • 之南剪切之間接血小板活化效應。 現存抗血栓療法主要靶向血栓過程中之一或多個主要步 驟。亦即，經常將抗凝劑及抗血小板劑用以減輕血栓症。 可在許多情況下藉由投與包括香豆素衍生物（例如，殺鼠 靈（warfarin)及雙香豆素（dicumar〇i))或帶電聚合物（例如， I37748.doc 200936138 肝素、水蛭素或水蛵肽）中一或多者之合適抗凝劑，或經 由使用抗血小板劑（例如，阿司匹林（aspirin)、氣吡格雷 (clopidogrel)、噻氣匹定（ticlopidine)、雙嘧達莫 (dipyridimole)，或若干GPIIb/IIIa受體拮抗劑中一者）來最 小化或消除病理學血栓形成。然而’由於諸如出血、再閉 ψ 塞、"白色血塊"症候群、刺激、出生缺陷、血小板減少症 . 及肝功能障礙之副作用，因此抗凝劑及血小板抑制劑遭受 ❹ 顯著限制。此外，長期投與抗凝劑及血小板抑制劑可尤其 增大危脅生命之疾病或出血之風險。 因此，為避免現存抗血栓療法之上述缺點，存在開發選 擇性乾向對病理學血栓形成關鍵之過程而未干擾正常止血 - 的新賴抗血栓療法之需要。 . 流變干擾（高剪切及擾流）在促進病理學血栓症中起到主 要作用，且因此一種此策略將藉由靶向血小板中之機械减 知元件使尚剪應力之血小板活化效應衰減。在 〇 2004016607中，已識別對於剪切誘導血小板活化重要但對 於止丘並不重要之信號轉導事件》 此外，兩個主要血小板黏著受體，Gpib/V/Ix.蛋白複 . 合物中之GPIba及整合素aiIbP3具有與在流變干擾（高剪切 . &剪:刀之快加速)之條件下血小板活化有關之獨特機械感 知功能。在W〇 2〇〇4〇166〇7中，描述經由兩種受體之信號 轉導均藉由剪切率之快加速（Μγ)來調節，從而經由ρι 3_ 激酶依賴信號轉導過程誘導血小板活化。 另外在W〇 2004016607中，闊明在高剪切條件下調節血 137748.doc 200936138

板活化之關鍵信號轉導機制，且將们·激酶p識別為在 理學血流條件下誘導血小板活化之元#。在wo 病 ❹ ❹ 2004016607前，存在之阻斷特異性血小板 小板療法並不區分病理學與正常止錄血小板活化1 此，WO 2_〇166〇7中以下揭示内容向抗企栓療法提供新 穎且特異性方法(包括此療法之新穎化合物）：在不影響由 生理學促效劑誘導之企小板活化的情況下，ρι 3_激酶择之 選擇性抑制可簡由剪切率之病理學增大料之金小板活 化。另外’亦強調，因為剪切依賴性企小板黏著性且活化 在動脈血栓形成中為重要的 所以PI 3-激酶β —般為心血 管疾病中治療性介入之重要目標。 另外WO 2004016607提供一種破壞在高剪切條件下發生 之血小板聚集及黏著的方法，及一種抑制由剪切誘導之血 小板活化的方法，其中兩種方法均包含投與選擇性ρι 3-激 酶β抑制劑^ W02004016607亦提供一種抗血栓方法，其包 含投與有效量之選擇性ΡΙ 3_激酶ρ抑制劑。根據該方法， 血栓症之特異性抑制可藉由靶向對於剪切誘導血小板活化 重要之ΡΙ 3-激酶β在不影響正常止血之情況下達成。該抗 血栓方法因此並不涉及由正常止血破環引起之副作用（諸 如出血時間延長）。 此外，在WO 2004016607中，將”選擇性ΡΙ 3-激酶β抑制 劑"化合物視為對於ΡΙ 3-激酶β比習知且一般指定為ρΐ3_激 酶抑制劑之化合物（諸如LY294002或渥曼青黴素 卜〇1^〇^111^11))更具選擇性。較佳在评〇 2004016607中，在 137748.doc 200936138 生物化學檢定中，相對於其他㈣工3_激酶同功異型物， 選擇性PI 3-激酶β抑制劑箱％激酶p之抑制的選擇性為至 M>H)倍，更佳>20倍，更佳>3〇倍。此等其他㈣阳·激 酶包括PI3-激酶α、γ及δ。 在W〇 2004016607中描述化合物2仆(7-甲基·2_(嗎琳_4· 基Μ-側氧基.吼咬并[…]喷咬_9_基）乙胺基]苯甲酸 • (其為碌酸肌醇（PI)3_激酶β之選擇性抑制劑），制其他此 φ f抑制劑。如在而顧嶋们中進-步描述，化合物2_ Π -(7-甲基-2-(嗎琳-4-基）·4_側氧基_4H_。比咬并"，2_a]痛咬_ 9-基）乙胺基]苯甲酸可適用於療法，例如抗血检療法。化 σ物2-[1-(7·甲基_2-(嗎琳_4_基）-4-側氧基_4H-n比唆并[1，2_ . a]㈣冬基）乙胺基]苯甲酸具有不對稱中心，亦即該化合 • ㈣以兩種鏡像異構體之形式存在。期望獲得具有改良之 活性、藥物動力學及/或代謝特性的化合物。本發明提供 此化口物’其為2-[1-(7_甲基_2_(嗎琳冰基卜心側氧基_4H_ 〇 '•比咬并[l’2-a]喷咬_9_基）乙胺基]苯甲酸之單一鏡像異構 體。 【發明内容】 本發明提供一種新穎化合物，亦即鏡像異構性純㈠2 [1_ • (7_曱基-2-(嗎琳-4·基M-側氧基-4H-n比咬并[i，2-a]哺》定-9- 基）乙胺基]苯曱酸或其醫藥學上可接受之鹽。 【實施方式】 1 表述”鏡像異構性純”意謂大體上不含其他鏡像異構體（亦 即’ 2-[1-(7-甲基_2_(嗎琳_4基）_4側氧基_4H•吼。定并[a 137748.doc 200936138 a]咳淀-9-基）乙胺基]苯甲酸之（+)·鏡像異構體）之㈠2_[ι_(7_ 甲基-2-(嗎啦-4-基）-4·側氧基_4H-"比咬并[l，2-a]嘧啶-9-基） 乙胺基]苯曱酸。迄今未獲得2-[1-(7-甲基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-°比啶并[l，2-a]嘧啶基）乙胺基]苯甲酸之單一 鏡像異構體，包括本發明之（-)2-[ 1-(7-甲基-2-(嗎啉-4-基）-4-侧氧基-4H-"比啶并[l，2-a]嘧啶_9_基）乙胺基]苯曱酸。根 • 據本發明之一態樣，藉助於製備2-[1-(7-甲基-2-(嗎啉·4-基）·4-側氧基-4Η_°比啶并H，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸 之鏡像異構體的特定方法’可獲得本發明之純鏡像異構 體。表述"鏡像異構性純"意謂2-[1-(7-甲基-2_(嗎啉-4-基）_ 4-側氧基-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸之鏡 • 像異構體中一者之例如> 95%之鏡像異構過量（ee)。 . "鏡像異構性純"鏡像異構體相對於在pH 1 -14中之外消旋 作用為穩定的。 另外，藉助於該方法，本發明之2-[1-(7-曱基-2-(嗎啉-4-❹ 基）-4-側氧基·4Η-β比咬并Π，2-Μ喷啶_9·基）乙胺基]苯曱酸 之純鏡像異構體可以高鏡像異構純度獲得，例如> 99 8% 之鏡像異構過量（ee)，例如（_)2-[(1R)_(7_甲基_2_(嗎啉_4_ • 基）_4_側氧基比咬并Π ’2_a]喷咬-9-基）乙胺基]苯甲酸 . 之 99.9%ee。 此外，分別（-)2-[(lR)-l-(7-甲基_2_(嗎啉_4_基）_4側氧 基-4H-吡啶并n，2_a]嘧啶-9_基）乙胺基]苯甲酸及（+)2_ [(lS)-l-(7-曱基_2-(嗎啉-4-基）-4-侧氧基-4H-吼啶并[ija] 嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸，或其醫藥學上可接受之鹽可具 137748.doc -9- 200936138 備南鏡像異構純度。 2-[1-(7-甲基-2-(嗎啉-4-基）·4-側氧基-4Η-。比啶并[l，2-a] 嘴。定-9-基）乙胺基]苯甲酸之鏡像異構性純鏡像異構體 具有有利特性’例如其為如表2中所示之選擇性pi 3-激酶β 抑制劑。 Ο

另外’鏡像異構性純（-)2-[(lR)-l-(7-曱基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-。比咬并[l，2-a],咬-9-基）乙胺基]苯曱酸呈中 性形式。中性形式可較穩定，較易於處理及儲存，較易於 純化且較易於以可再現方式合成。 本發明另外係關於鏡像異構性純甲基_2_(嗎 啉-4-基）-4-側氧基-4H-n比啶并嘧啶_9_基）乙胺基]苯 甲酸，或其醫藥學上可接受之鹽（呈固態），其可為非晶 形，至少部分結晶或大體上結晶。結晶形式可較穩定，較 易於處理及儲存，且較易於純化且較易於以可再現方式合 成0 根據本發明之另一態樣’鏡像異構性純（-)2-[(lR)-l_(7· 甲基-2-(嗎啉·4-基）-4-側氧基-4H-吡啶并[丨，2_aJ嘧啶_9_基） 乙胺基]苯曱酸或其醫藥學上可接受之鹽可以固態存在， 其可為至少部分結晶或大體上結晶。結晶形式可較穩定， 較易於處理及儲存，且較易於純化且較易於以可再現方式 合成。 另外，藉助於根據本發明之另一態樣的特定方法，純鏡 像異構體，亦即2仆(7_甲基_2_(嗎琳.心基）·4_側氧基. 吼咬并定·9·基）乙胺基]苯甲酸之㈠-鏡像異構體 I37748.doc •10- 200936138 可以固態呈大體上結晶形式獲得。 2-[1-(7 -曱基-2-(嗎琳-4 -基）-4 -側氧基-4Η-π比咬并[1 2 a] 嘴唆-9-基）乙胺基]苯甲酸之（_)_鏡像異構體之特徵在於具 有X射線粉末繞射（XRPD)圖樣，該等圖樣具有表1中給出 之d值及相對強度。 表1 (-)2-[(lR)-l-(7-甲基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-祉啶并 [l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸 d值/A 強度 d值/A 強度 12.5 W 3.74 m 11.7 W 3.70 m 11.3 W 3.63 w 10.0 W 3.42 m 8.7 W 3.34 w 6.8 vs 3.31 w 6.2 w 3.22 m 6.1 m 2.95 w ~ 5.9 vs 2.89 w 5.7 w 2.75 vw 5.5 m 2.71 vw 5.3 w 2.65 w 5.24 m 2.62 -------- w 5.16 w 2.57 w 4.98 m 2.43 w 4.85 m 2.39 w 4.76 w 2.26 w 4.66 w 2.22 w 4.54 w 2.13 w 4.41 m 2.07 w 4.26 vs — 4.06 m 3.91 vs 此等者中之X射線粉末繞射（XRpD)圖樣係以Bragg-137748.doc -11· 200936138

Bretano幾何之形式獲得。絕對強度之精確性較小且因此以 相對強度替換： vs = 50-100，s=20-50，m=5-20，w=l-5，且 vw<l。 根據標準方法進行X射線繞射分析，該等標準方法可見 於例如 Kitaigorodsky, A.I· (1973)，Mo/ecw/ar and

Molecules, Academic Press, New York; Bunn, C.W. (1948), CAewica/ O少Clarendon Press, London ;或 Klug，H.P.及 Alexander, L.E. (1974)，尤-7?叮 〇 尸roce山/res，John Wiley & Sons，New York。X射線粉末繞 射圖樣資料係藉由使用剛玉作為内部參考來修正且以可變 縫隙來量測。 . 本發明係關於具有在以下近似d值之XRPD峰的純鏡像異 . 構體（-)24(1 R)·1·。-曱基·2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基啶 并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸：6.8 A、5.9 A及3.91 A。 0 此外’本發明係關於具有在以下近似d值之XRPD峰的純 鏡像異構體（_)2-[(lR)-1-(7-甲基-2-(嗎琳_4-基）-4-側氧基_ 4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸：6 8 A、61 . A、5·9 A、4·98 A、4.41 A、4·2ό Λ及 3.91 Λ。 • 另外，本發明係關於具有大體上如圖丨中所示之又处仏繞 射圖的（-)2-[(1尺)-1-(7-甲基_2-(嗎啉_4-基）-4-側氧基 -4Η-吡 啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯曱酸。 在另一態樣中，本發明係關於製備2_π_(7_甲基_2_(嗎 淋_4_基）·4·側氧基_4ΗΚ并咬冬基）乙胺基]苯 137748.doc -12- 200936138 甲酸之純鏡像異構艘之方法，該等方法可包括分步結晶分 離或層析分離。 在實例中所述之製備2-π♦甲基·2_(嗎琳_4_基）_4側氧 基_4Η·°比咬并[1，2-a]喷咬冬基）乙胺基]苯甲酸之純鏡像異 . _之特定方法包含藉由對掌性層析，接著水解鏡像異構 性純甲醋及結晶來分離2_{[1_(7_甲基_2_嗎琳_4_基_4_侧氧 基-4H+定并[…]鳴咬冬基）乙基]胺基}苯甲酸甲醋之兩 種鏡像異構體。 本發月之目標亦在於提供一種藉由向有需要之患者投與 有效量之選擇性PI 3·激酶β抑制劑來預防或治療心企管疾 病之方法，該心血管疾病例如為冠狀動脈閉塞、中風、急 ' ㈣狀動脈症候群、急性心肌梗塞、再狹窄、動脈粥樣硬 • 化及/或不穩定絞痛。在此方法中，如藉由（例如）皮膚出血 時間之延長來量測，使用選擇性ρι 3_激酶ρ抑制劑使能夠 避免由正常止血作用破壞所引起的副作用。 ❹ 如本文中所述，純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽 可適用於療法，尤其附屬療法，尤其適用作：金小板活化 黏著/聚集及去顆粒之抑制劑、企小板解聚之促進劑、抗 • 血栓劑，或用於治療或預防血栓病症t。與血栓症或血栓 . 症風險提高相關之病症實例為不穩定絞痛、心肌梗塞、血 检或栓塞中風、短暫性缺血性發作、末稍血管疾病、出現 血栓/血小板消耗組份擴散之病狀，諸如散發性血管内凝 血、血栓血小板減少性紫癜、溶血尿毒癥症候群、敗血症 之血栓併發症、成人呼吸窘迫症候群、抗磷脂症候群、肝 137748.doc -13- 200936138 素誘導之血小板減少症及子癇前症（pre_eclampsia)/子癇， 或靜脈血栓症（諸如深部靜脈血栓症、肺栓塞、靜脈閉塞 疾病）、血液學病狀（諸如骨髓增生性疾病，包括血小板增 多症（thrombocythaemia)、鐮狀細胞病）、經皮冠狀動脈介 . 入（PCI)或其他血管中之介入、血管内支架置放（stent placement)、動脈内膜切除術、冠狀動脈及其他血管移植 手術、手術或機械損傷之血栓併發症，諸如在意外或手術 ❹ 外傷後之組織搶救、再造手術（reconstructive surgery)(包 括皮膚及肌瓣）、繼血管損傷/發炎之血栓症（諸如脈管炎、 動脈炎、絲球體腎炎）、發炎性腸道疾病及器官移植排 斥，諸如偏頭痛、雷諾現象（Raynaud，s phen〇men〇n)之病 ' 狀、因血小板引發血管壁炎性疾病過程之病狀，諸如粥樣 • 斑塊形成7進展、狹窄/再狹窄及在諸如哮喘及慢性阻塞性 肺病（COPD)中因企小板及由血小板衍生之因子涉及免疫 性疾病過程之發炎病狀。當血液與外來物表面在體内接觸 ❿ 時，例如在患者_生物或機械心瓣膜、留置永久導管接 觸’或當血液與外來物表面在體外接觸時（例如在血液透 析、血漿分離術、心_肺繞道（cardi〇_pulm〇nary bypass)及葉克 . 膜一體外循環維生系統中）之情況，或當於如心肌梗塞、中風、 • 肺栓塞、深靜脈血栓症及導管閉塞之病狀中採用血栓溶解 法有助於jk栓溶解或預防在血栓溶解之後再閉塞時。提高 血小板活化及聚集（活體外、機械式或藉由其他手段）的實 例（例如）為用於例如血小板濃縮物之血液製劑（bl〇〇d product)的保存。 137748.doc • 14 · 200936138 根據本發明’另外提供如本文中所述之純鏡像異構體或 其醫藥學上可接受之鹽在製造治療以上病症之藥物中之用 途。詳S之，如本文中所述之純鏡像異構體，或其醫藥學 上可接受之鹽可適用於治療上述病症。本發明亦提供一種 . /0療以上病症之方法，其包含向患有此病症之患者投與治 療有效量之如本文中所述之純鏡像異構體，或其醫藥學上 可接受之鹽。 ❹ 本發明另外係關於如本文所述之純鏡像異構體或其醫藥 學上可接受之鹽在製備適用於預防或治療心血管疾病之方 法的藥物中之用途。 本發明亦關於適用於預防或治療心血管疾病之方法（例 • 如’抗血栓症之方法）中的純鏡像異構體或其醫藥學上可 接受之鹽。 此外，本發明係關於一種抗血栓症之方法，其包括投與 如本文所述之純鏡像異構體，或其醫藥學上可接受之鹽。 〇 本發明亦關於一種預防或治療溫血動物之心血管疾病的 方法’其包含投與有效量之如本文所述之純鏡像異構體， 或其醫藥學上可接受之鹽。 * 本發明亦涵蓋一種抑制患者中磷酸肌醇3-激酶β之方 . 法’其包含向患者投與在抑制患者中磷酸肌醇3-激酶β方 面有效的一定量之如本文所述之純鏡像異構體，或其醫藥 學上可接受之鹽。 此外’本發明係關於如本文所述之純鏡像異構體，或其 醫藥學上可接受之鹽在製備適用於預防或治療呼吸道疾病 137748.doc -15- 200936138 之方法中的藥物中之用途。 本發明亦關於用於預防或治療呼吸道疾病之方法中的純 鏡像異構體，或其醫藥學上可接受之鹽。 本發明亦涵蓋一種預防或治療溫血動物之呼吸道疾病的 方法，其包含投與有效量之如本文所述之純鏡像異構體。 另外，亦已知PI 3 -激酶藉由介導癌症及其他細胞之增 殖、介導血管生成事件及介導癌細胞之活動性、遷移性 ❹ 及侵染性的效應中一或多者來促進致腫瘤性 (tumourigenesis)。本發明之純鏡像異構體可具有有效抗腫 瘤活性，咸彳§其藉由抑制以下各物中一或多者而獲得：工 類PI 3-激酶（諸如，13類1>1 3-激酶及/或比類pi 3-激酶）及/ • 或PI3激酶相關蛋白激酶（諸如，DNA-PK、ATM或 - mT0R)，該等激酶涉及雙股DNA-斷裂（DNA-PK及ATM)之 修復，及引起腫瘤細胞之增殖及存活及轉移中腫瘤細胞 (mTOR)之侵染及遷移能力之信號轉導步驟。 ❹ 因此，作為抗腫瘤劑，詳言之作為哺乳動物癌細胞之增 殖、存活、活動、散播及侵染之選擇性抑制劑，如本文所 述之純鏡像異構體可有價值，使得抑制腫瘤生長及存活且 . 抑制轉移性腫瘤生長。特定言之，作為在遏制及/或治療 .硬瘤疾病中之抗增殖及抗侵染藥劑，本發明之純鏡像異構 體可有價值。特定言之，如本文所述之純鏡像異構體可預 期適用於預防或治療對多種PI 3_激酶（諸如涉及引起腫瘤 細胞之增瘦及存活及轉移中腫瘤細胞之遷移能力及侵染性 的信號轉導步驟之la類PI 3-激酶及ib類pi 3-激酶）中一或多 137748.doc •16- 200936138 者之抑制敏感之彼等腫瘤。另外，本發明之純鏡像異構體 可預期適用於預防或治療由PI 3_激酶（諸如^類以3激酶 及lb類PI 3-激酶）之抑制單獨或部分介導之彼等腫瘤，亦 即如本文所述之純鏡像異構體可用以在需要此治療之溫血 動物中產生PI 3-激酶抑制作用。 另外，如本文所述之純鏡像異構體（為PI 3-激酶活性之 抑制劑）對於治療（例如）乳癌、結腸直腸癌、肺癌（包括小 細胞肺癌、非小細胞肺癌及支氣管肺泡癌）及前列腺癌， 以及膽管$、骨癌、膀胱癌、頭癌及頸癌、腎癌、肝癌、 胃腸組織癌、食道癌、卵巢癌、胰腺癌、皮膚癌、睪丸 癌、甲狀腺癌、子宮癌、子宮頸癌及女陰癌及白血病(包 括急性淋巴細胞白血病（ALL)及慢性骨髓性白血病 (CML))、多發性骨髓瘤及淋巴瘤可具有治療價值。 根據本發明，另外提供如本文所述之純鏡像異構體，或 其醫藥學上可接受之鹽在製造料所有本文所述之病症的 藥物中之用途。 本發明亦提供一種治療所有本文所述之病症的方法，其 i 3向〜有此病症之患者投與治療有效量之如本文中所述 之純鏡像異構體，或其醫藥學上可接受之鹽。 另外本發明係關於如本文所述之純鏡像異構體，或其 t藥學±可接受之鹽在製備適用於預防或治療癌症之方法 中的藥物中之用途。 另外，本發明亦關於適用於預防或治療癌症之方法中的 純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽。 I37748.doc 200936138 本發明亦涵蓋一種預防或治療溫血動物之癌症的方法， 其包含投與有效量之如本文所述之純鏡像異構體。 此外’本發明亦關於如本文所述之純鏡像異構體，或其 醫藥學上可接受之鹽在製備適用於預防或治療與白血球功 能失調有關之疾病的方法之藥物中之用途。 另外’本發明亦關於適用於預防或治療與白血球功能失 • 調有關之疾病之方法中的純鏡像異構體或其醫藥學上可接 受之鹽。

Jr 本發明亦涵蓋一種預防或治療溫血動物之與白血球功能 失調有關之疾病的方法，其包含投與有效量之如本文所述 之純鏡像異構體。 . 因此’本發明之又一目標在於提供一種抑制PI 3-激酶β • 之方法’其包含向患者投與一定量之如本文所述之純鏡像 異構體或其醫藥學上可接受之鹽，其中該量在抑制患者之 ΡΙ 3-激酶β方面為有效的。 ❿ 如本文所述之純鏡像異構體（為ΡΙ 3-激酶之抑制劑）亦在 多種其他疾病病況中具有潛在治療用途。舉例而言，ρι 3_ 激酶在促進在血管樹（亦即血管平滑肌細胞）(Thyberg， - I"8’ Jowwa/ 〇/·〇"仏 o/og；； 76(1):33-42)中及在 • 肺（乳管平滑肌細胞）（Krymskaya，V.P.，SioDrwgs, 2007. 21(2):85-95)中平滑肌增殖方面起到重要作用。血管平滑 肌細胞之過度增殖在動脈粥樣硬化斑之形成中及在新生血 管内膜增生之發展中（在侵染性血管程序之後）起到重要作 用，Scwartz 等人 ’ 1984，尸rogrew Car山 137748.doc •18- 200936138 D/seflse 26:355-372; Clowes 等人，1978， /«vesiigiziiows 39:141-150。此外，氣管平滑肌細胞之過度 增殖引起COPD在哮喘及慢性支氣管炎之環境中發展。PI 3-激酶活性之抑制劑因此可用以預防血管再狹窄、動脈粥 樣硬化及COPD。 PI 3-激酶亦在調節腫瘤細胞中及在此等細胞經受細胞凋 亡生長之傾向中起到重要作用（Sellers等人，1999，77ze •/owrwa/ o/C/i«ica/ /«veW/gaiiow 104:1655-1661)。另外， PI 3-激酶脂質產物PI(3,4,5)P3及PI(3,4)P2藉由脂質磷酸酶 ΡΤΈΝ之非受控調節在人類許多惡性腫瘤之進展中起到重 要作.用（Leevers 等人，Ί999，Current Opinion in Cell 价o/og少11:219-225)。因此，如本文所述之純鏡像異構體 (為PI 3-激酶之抑制劑）可用以治療人類之贅瘤。 PI 3-激酶亦在白血球功能（Fuller等人，19 9 9 , 77ze 〇/ /mmwwo/ogy 162(11):6337-6340; Eder 等人， 1998, The Journal of Biological Chemistry 273(43):28025-31)及淋巴細胞功能（Vicente-Manzanares等人，1999，77re «/owrwa/ σ/ 163(7):4001-4012)中起到重要作

用。舉例而言，白血球對發炎内皮之黏著性包括藉由PI 3-激酶依賴性信號轉導過程使内源白血球整合素活化。此 外，嗜中性白血球中之氧化爆裂（Nishioka等人，1998, 尸五Leiiers 441(1):63-66及 Condliffe，A.M·，等人，5/ο〇ί/, 2005. 106(4):1432-40)及細胞支架重組（Kirsch等人，1999, Proceedings National Academy of Sciences USA 137748.doc -19- 200936138 96(11):6211-6216)似乎包括PI 3-激酶信號轉導。嗔中性白 血球遷移及定向運動亦視ΡΙ3Κ活性而定（Camps，Μ,，等人， MW，2005. 1 1(9):第 936-43 頁及 Sadhu，C·，等人，」 /所腿《σ/，2003. 170(5):2647-54)。因此，PI 3-激酶之抑制 劑可適用於在發炎位點降低白血球黏著性及活化且因此可 用以治療急性及/或慢性發炎病症^ ρ I 3 -激酶亦在淋巴細 胞增殖及活化中起到重要作用，Fruman等人，1999 283 (5400):393-397。假定淋巴細胞在自體免疫疾 病中之重要作用，PI 3-激酶活性之抑制劑可用於此等病症 之治療中。 例如本文所述之純鏡像異構體的化合物作為酶活性之抑 制劑的功效可（例如）藉由測定化合物至預定程度抑制活性 之》辰度且接著比較結果來確立。一般而言，較佳測定為在 生物化學檢定中抑制50%活性之濃度，亦即5〇%抑制濃度 或"ICso"。ICso可使用在此項技術中已知之習知技術來測 定。 另外，本發明亦關於包含如本文所述之純鏡像異構體或 其醫藥學上可接受之鹽及任何具有不同作用機制之抗血栓 劑的組合，其中該（該等）抗血栓劑可為（例如）以下各物中 一或多者：抗凝劑未經分離之肝素、低分子量肝素、其他 肝素衍生物、合成肝素衍生物（例如，方達轴魯 (foruiapadniix))、維生素K拮抗劑（例如殺鼠靈）、凝血因子 之合成或生物技術抑制劑（例如，合成凝血酶、FVIIa、 FXa、FXIa及FIXa抑制劑’及rNAPc2)、抗金小板劑乙酿 137748.doc -20· 200936138 水杨酸、雙嘴達莫、西洛他唾（cil〇staz〇l)、嗟氣匹定、氣 0比格雷、普拉格雷（prasugrel)、AZD6140、ADP/ATP受體 (P2X1、P2Y1、P2Y12)之其他抑制劑；凝血脂素受體及/或 合成S#抑制劑；替羅非班（tir〇fiban)、埃替菲巴狀 (eptifibatide)、阿昔單抗（abciximab)或其他 GPIIb/IIIa拮抗 劑如列環素模擬劑、鱗酸二醋酶抑制劑、蛋白酶活化受 體（PAR1或PAR4)之抑制劑，如pari拮抗劑SCH 530348、 P-選擇素拮抗劑（p-selectin antagonist)、GPVI拮抗劑、 GPIbtx-vWF-膠原蛋白相互作用抑制劑、EP3受體拮抗劑及 藉由抑制羧肽酶U(CPU或TAFIa)產生作用之纖維蛋白溶解 刺激劑或血漿素原活化劑抑制劑_1(PAi-i)。 此外’本發明係關於包含如本文所述之純鏡像異構體或 其醫藥學上可接受之鹽及例如以下各物中一或多者之溶血 栓劑的組合：組織血漿素原活化劑（天然、重組或經修 飾）、鍵球菌激酶（streptokinase)、尿激酶（urokinase)、尿 激酶原（prourokinase)、對曱氧苯曱醢基化（anisoylated)血 漿素原-鏈球菌激酶活化劑複合物（APSAC)、動物唾液腺血 漿素原活化劑、微纖維蛋白溶酶（micr〇plasmin)或其他纖 維蛋白溶酶變體。 在預防或治療疾病病狀之本發明方法中，有效量之如本 文所述之純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽可以劑量 之形式投與。在其他實施例中，劑量可呈鍵劑（例如，經 調配用於經口、舌下及頰内投與之錠劑）、膠囊（例如，含 有散劑、液體或受控釋放調配物之膠囊）、靜脈内調配 137748.doc -21 · 200936138 物、鼻内調配物、用於肌肉注射之調配物、糖漿、栓劑、 氣霧劑、頰内調配物、經皮調配物或子宮托之形式。另 外’劑量含有約5 mg至約500 mg之如本文所述之純鏡像異 構體或其醫藥學上可接受之鹽，且甚至另外含有約25 mg • 至約300 之如本文所述之純鏡像異構體或其醫藥學上可 接受之鹽。 本發明之另一態樣係關於含有如本文所述之純鏡像異構 ❹ 體或其醫藥學上可接受之鹽連同一或多種醫藥學上可接受 之載劑及/或稀釋劑的醫藥組合物。在下文，術語"活性成 份可為如本文所述之純鏡像異構體或其生理上可接受之 鹽、溶劑合物或官能衍生物。 • 此醫藥組合物之投與可藉由任何便利手段來進行。劑量 • 可每日、每週、每月或以其他合適時間間隔例如藉由經 口、靜脈内、腹膜内、肌肉内、皮下、皮内或栓劑途徑或 藉由植入（例如使用緩釋調配物）來投與。若如本文所述之 〇 純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽可以錠劑形式投 與’則錠劑可含有黏合劑，例如黃蓍、玉米澱粉或明膠； 崩解劑，例如褐藻酸；及潤滑劑，例如硬脂酸鎂。 • 適於可注射用途之醫藥組合物包括無菌水性溶液或分散 • 液’及用於現場製備無菌可注射溶液或分散液之無菌散 劑’或可呈乳膏之形式或其他適於局部施用之形式。載劑 可為含有（例如）水、乙醇、多元醇（例如，丙三醇、丙二醉 及液體聚乙二醇及其類似物）、其合適混合物及植物油之 溶劑或分散介質。例如可藉由使用包衣(例如卵磷脂），在 137748.doc -22· 200936138 分散液之情況下藉由保持所需粒度及藉由使用界面活性劑 來保持適當流動性。可藉由各種抗細菌劑及抗真菌劑(例 如，對羥基苯甲酸酯、氣丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或 其類似物）來防止微生物污染。可能包括等張性劑，例如 • 糖或氣化鈉。可藉由在組合物中使用延遲吸收之藥劑（例 如單硬脂酸鋁及明膠）來延長可注射性組合物之吸收性。 無菌可注射溶液製法為由所需量如本文所述之純鏡像異 ❹ 龍或其醫藥學上可接受之鹽併人含有各種如上文例示之 其他成份的適當溶劑中，接著進行過濾殺菌。一般而言， 分散液製法為將經殺菌之活性純鏡像異構體加至含有分散 基本介質及上述成份中一或多者之無菌媒劑中。製備用於 . 冑備無菌可注射溶液之無菌散劑時，該製備方法可為真空 . f燥及冷;東乾燥，產生如本文所述之純鏡像異構體或其醫 =學上可接受之鹽的散劑’加上來自其先前無菌過遽後之 溶液之任何額外所需成份。 Ο 醫藥組合物可使用例如惰性稀釋劑或使用可同化之可食 性載劑經口投與，可密封於硬殼或軟殼明膠膠囊中，可壓 縮成鍵劑或可與食物直接合併。經口投與時，如本文所述 之純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽可與賦形劑合 併且可呈可攝取之錠劑、頰内錠、口含鍵、膠囊、酏 劑、懸浮液、糖漿、糯米紙囊劑及其類似物之形式使用。 此等組合物及製劑可含有至重量％如本文所述之純鏡 像異構體或其醫藥學上可接受之鹽。組合物及製劑之百分 比可變化且可在約5重量％單位至約8〇重量％單位之間。在 137748.doc •23- ❹ ❹ 200936138 此等治療適用之組合物中， 其醫藥學上可接受域述之純鏡像異構體或 鍵劑、片劑可為將獲得合適劑量之量。 例如膠^ 膠囊及其類似物亦可含有黏合劑， 二〜：伯膠、玉米殿粉或明膠；賦形劑，例如鱗酸 镟“知朋1 ’例如玉米澱粉'馬鈴薯澱粉、褐萍酸及a 類似物；潤滑劑，例如硬_1一，构澡酸及其 薦糖、乳糖或糖精…劑，例如可添加 一精或調味劑，例如胡椒薄荷、久青1 櫻桃調味劑。杂罝布句⑴4 +月油或 冰甘劑型為膠囊時，除以上類型之物質 =:含有液體載劑。各種其他物質可以塗料形式存在 或另外修改劑量單元之物 形式。舉例^言，錠劑、丸劑 h可塗有蟲膠、糖或兩者。糖漿或酏劑可含有如本文 所述之純鏡像異構體或其醫藥學上可接受之鹽，例如作為 甜味劑之蔗糖、例如作為防腐劑之對經基苯〒酸甲醋或對 經基苯甲酸丙醋、例如染料及例如調味劑，例如櫻桃或橙 子香料β然’任何用於製備任何單位劑型，之物質應為 醫藥學上純且就所用量而言大體上無毒性。另外，可將活 性純鏡像異構體併人至持續釋放性製劑及調配物中。 實驗部分 縮寫. DIPEA Ν,Ν-, 一異丙基乙胺 DPPP 1，3_售 U二苯膦基）丙 DMF Ν，Ν-二甲基甲醯胺 HPLC 高效液相層析 137748.doc 24- 200936138 THF 四氫e夫喃 Ms 曱烷磺醯基 MTBE 曱基第三丁基醚 S 單峰 d 雙重峰 dd 兩個雙重峰 dt 兩個三重峰 t 三重峰 m 通用實驗程序 多重峰 ❹

在 298 K下在 Varian Unity Plus 400 mHz或 Varian Inova 500 MHz上獲得^ NMR及13C NMR光譜。以ppm給出化學 位移，以溶劑殘餘峰作為内標：CDCl3δH7.26;DMSO-ί/<ίδΗ 2.50 ; δ<： 39.5 ppm。在 20°C 下在 Perkin Elmer Model 341極化計上記錄旋光度。以Stuart Scientific SMP3溶點裝 置記錄熔點。藉由以MeOH/甲酸100/0.1溶離之4.6x250 mm Chiralpak AS管柱分析性對掌層析來測定標題化合物之 ee ° 在Bruker D8Advance X射線粉末繞射儀上在無内部參考 且具有可變縫隙之情況下量測X射線粉末繞射圖樣資料。 使用軟體八〇〇以&11^版本9.04產生化學名稱（11^入(：）。 如在W02004016607中所述製備9-溴-2-羥基-7-曱基-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-4-酮鹽酸鹽。 實例 137748.doc •25· 200936138 實例1 (-)2·【1-(7-甲基-2-(嗎啉_4_基）-4-側氧基-4H-吡啶并【l，2-a] 嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸，可能（-)2-{[(lR)_i_(7-甲基-2-嗎淋-4-基-4-側氧基_4Η-«Λ咬并丨l，2-a]嘧咬-9-基）乙基1胺 基}苯甲酸

a) 9-溴-7-甲基-2-嗎啉_4_基-4H-吡啶并[l,2-a】嘧啶-4-洞 在5C下在N2氣氛下歷經1〇 min向9_漠_2_經基·7_〒基_ 4Η_吡啶并[1，2_a]嘧啶-4-酮鹽酸鹽（407 g，1.40 mol)於無 水THF(4 L)中之攪拌漿料中添加三乙胺（259 g，2 % mol) » 歷經 30 min添加 MsC1(259 g，2.26 mol)且在 下將 Φ 所得混合物攪拌2.5 h 添加嗎啉（388 g，4.45 mol)且在 60 C下將所得混合物授拌6 h。添加水（8 2 L)且在下將 所得〃〇 s物搜拌3 h。在4 h期間將混合物冷卻至2〇°c且在 2〇C下攪拌隔夜。將產物濾出，以水洗滌（2.0 L+1.5 L)且 在真空下在0-1毫巴及4〇〇c下乾燥以產生426 g(94%)副標題 化合物。 H NMR (400 MHz 5.60 (s, 1H), 3.89-3 MHz, CDC13) δ 8.71 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 3.89-3.60 (m，8H)，2.34 (s, 3H)。 I37748.doc -26 - 200936138 b) 9 -乙酿基-7-甲基-2-嗎琳-4-基-4H_〇比咬并丨l，2-a】痛咬-4-酮 在40°C下在A氣氛下在10 L反應器中藉由抽空且以氮填 充反應將9->臭-7 -曱基-2 -嗎嚇^-4 -基-4H-D比咬并[1,2-a]喷 咬-4-酮（677 g 2,09 mol)、K2C〇3(375 g，2.71 mol)於 DMF(3.0 L)及水（400 mL)中之攪拌漿料脫氣。添加正丁基 乙稀基醚（1267 g，12.6 mol)且將所得混合物再一次脫氣。 添加 DPPP(69.0 g，0.17 mol)及 Pd(OAc)2(9.24 g，0.041 mol)於DMF(340 mL)中之懸浮液且在90°C下將所得混合物 攪拌2天《在真空下在90°C下將反應混合物濃縮至2.5 L之 總體積。添加H2〇(9 L)且將所得懸浮液在2(TC下攪拌2 h。 將固體濾出且轉移至25 L反應器中。添加水（15 L)及3.6 Μ HC1(5 L·)且在1 h期間將混合物緩慢加熱至37°C。過濾幾乎 澄清之溶液且使濾液回至25 L反應器。藉由添加45%

NaOH(950 mL)直至pH 6使產物沈澱’且在20°C下將所得 漿料授拌20°C隔夜》將產物濾出，以水洗滌（2x4 L)且在真 空下在40°C及0-1毫巴下乾燥以產生531 g(89%)副標題化合 物。 NMR (400 MHz，CDC13) δ 8.86 (s，1H)，7.84 (s，1H)， 5.66 (s，1Η)，3.83-3.75 (m，4Η)，3.66-3.59 (m，4Η)，2.77 (s， 3H)，2.36 (s，3H)。 c) 9-(1-經乙基）_7_甲基_2_嗎琳_4_*_4H_e比啶并【12·^嘧 咬-4-嗣 歷經1 h向9-乙醯基_7_甲基_2_嗎啉_4_基_4H_吡啶并n 137748.doc •27- 200936138 定-4-嗣（502 g，1.75 mol)於 MeOH(4.7 L)中之搜拌漿 料中添加NaBH4(64.9 g，1.72 mol)。將所得混合物搜拌1 h，添加H2〇(l L)且在真空下在70°C下餾出MeOH至2 L之 總體積。添加水（3 L)且在50°C下將所得漿料攪拌30 min , 在6 h期間冷卻至2°C且在2°C下攪拌隔夜。將產物遽出， 以冷水洗滌（2χ 1 L)且在真空烘箱中在40°C及0-1毫巴下乾 燥以得到404 g(80%)副標題化合物》 ]H NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.63 (s, 1Η), 7.50 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 5.23-5.16 (m, 1H), 3.82-3.75 (m, 4H), 3.63-3.55 (m，4H)，2.33 (s，3H)，1.60 (d, 3H)。 d) 2-{丨1-(7·甲基-2-嗎嘛-4_基-4-側氧基-4H-0比咬并【i，2-a】 嘧啶-9-基）乙基】胺基}苯甲酸 向9-(1-羥乙基）-7-甲基-2-嗎啉-4-基-4H-吡啶并[l，2-a]嘴 啶-4-酮（338 g，1.17 mol)於CH2C12(4.0 L)中之攪拌溶液中 添加ΡΒγ3(1 Μ於600 mL CH2C12中）。在40°C下將所得混合 物攪拌2.5 h。依次添加2-胺基苯曱酸（192 g，1,40 mol)及 二乙胺（0.66 L’ 4.74 mol)且在40C下將所得混合物搜拌隔 夜。添加水（2.0 L)，將混合物攪拌5 min且分離各相。將 有機相濃縮至約1.0 L之體積。在20°C下向攪拌殘餘物中添 加丙酮（3.5 L)及4 M HC1(800 mL)且將所得漿料攪拌隔 夜。將產物濾出，以丙酮（1.0 L)及水（2.0 L)洗滌且在真空 烘箱中在40°C、0-1毫巴下乾燥以得到330 g(69%)副標題化 合物。 *H NMR (400 MHz, DMSO-(/6) δ 8.54 (s, 1H), 8.40 (d, 1¾) 137748.doc -28- 200936138 7.80 (dd, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.23 (dt, 1H), 6.54 (t, 1H)} 6.37 (d, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.22 (m, 1H), 3.69 (m, 4H), 3.63 (m，4H)，2.24 (s，3H), 1.58 (d，3H) » e) (-)2-{[(1尺)-1-(7-曱基-2-嗎琳-4-基-4-側氧基_41|-*比咬并 【l，2-a】嘧啶-9-基）乙基]胺基}苯甲酸曱酯 向2-{[1-(7 -甲基-2-嗎琳-4 -基-4-側氧基_4H-D比0定并[1，2_ - a]嘧啶-9-基）乙基]胺基}苯甲酸（115.4 g，0.28 mol)於 DMF(1.0 L)中之攪拌漿料中添加DIPEA(80 mL，0 46 mol) ❹ 及Mel(25 mL，0.40 mol)。在室溫下將所得混合物撲拌隔 夜。添加MTBE(1 L)及H20(2 L)。將混合物攪拌3〇 min且 分離各相。將水層以MTBE(0.6+0.5 L)萃取兩次且將組合 * 之有機相以 〇.〇5 M NaHC03(2x〇.5 L)及 0·4 L H20洗務。濃

. 縮有機相且藉由以庚烷/EtOH 20:80溶離之Chiralpak AS HPLC管柱對掌性層析分離鏡像異構體。收集較慢溶離之 化合物以產生48 g(99.4% ee)副標題化合物。 ❹ lH NMR (400 MHz，CDC13) δ 8.64 (s，1H)，8.23 (d，1H)， 7.92 (dd，1Η)，7.50 (d，1Η)，7.19 (dt，1Η)，6.58 (t，1Η)， 6.27 (d，1H)，5.66 (s，1H)，5.30-5.22 (m，1H)，3.91 (s，3H)， . 3.83-3.78 (m, 4H), 3.69-3.63 (m, 4H), 2.24 (s, 3H), 1.63 (d, • 3H)。 Ό㈠2-{【（lR)-l_(7-甲基-2-嗎啉-4-基-4-側氧基-4H-吡啶并 【l，2-a】嘧啶_9_基）乙基】胺基}苯甲酸 向（_)2-{[(lR)-l-(7 -曱基-2-嗎嚇· -4 -基-4-側氧基-4H-0比咬 并[l，2-a]嘧啶-9·基）乙基]胺基}苯曱酸曱酯（5.22 g，12.4 137748.doc -29- 200936138 mmol)於THF(35 mL)及MeOH(35 mL)中之攪拌溶液中添加 溶解於H20(35 mL)中之NaOH(2.7 g，67.5 mmol)。在室溫 下3天之後’在真空下濃縮混合物直至剩餘約35 mL，以 H20(200 mL)稀釋且以CH2C12(50 mL)洗滌。將水層以1 M HC1(70 mL)酸化且以CH2C12(50 mL)萃取。將有機層以鹽 水洗蘇，以MgS〇4乾燥’過遽且濃縮至約5 mL。將丙_ • (15 mL)添加至殘餘物中且攪拌混合物隔夜。 ❹ 濾出結晶物質且以丙酮洗滌。藉由自EtOH/HzO額外再 結晶移除痕量丙酮及CHsCh以得到2.94 g(58%)標題化合 物。 'H NMR (500 MHz, DMSO-i/5) δ 8.53 (s, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.21 (dt, 1H), 6.52 (t, 1H), . 6.36 (d, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.21 (m, 1H), 3.68 (m, 4H), 3.62 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.57 (d, 3H)； 13C NMR (500 MHz，DMSO〇 δ 170.0，159.7，157.5, ❹ 149.4，146.9，136.6，135.5，134.5，131.7, 123.3，122.1， 114.7, 11 1.9, 110.4, 80.1, 65.8 (2C), 47.5, 44.2 (2C), 21.4, 17.6 ； • LC-MS [M+H]+ 409.19 . (99.9% ee) [a]D=-449，（c 0.2, CH3CN) mp 245.2-245.6〇C。 實例2 (+)2-[1-(7 -曱基-2-(嗎琳-4·基）-4_側氧基_4H-"比咬并【l，2-al 137748.doc -30- 200936138 嘧啶-9-基）乙胺基】苯甲酸，可能（+)2-{[(lS)_l-(7-曱基-2-嗎啉-4-基-4-側氧基-4H-吡啶并[l，2-al嘧啶-9-基）乙基】胺 基}苯甲酸

a) (+)2-{[(IS)-1-(7-甲基-2-嗎琳-4-基-4-側氧基-4H-口比咬并 【l，2-a】嘧啶-9·基）乙基】胺基}苯甲酸甲酯 收集自實例1中步驟e較快溶離之化合物以得到51 g (99.8% ee)副標題化合物。 b) (+)2-{[(lS)-l-(7-甲基-2-嗎琳-4-基-4-側氧基-4H·0比咬并 【l，2-a】嘧啶-9-基）乙基】胺基}苯甲酸 藉由與實例1中（參看lf))(-)2-{[(lR)-l-(7-曱基-2-嗎啉-4-¢ 基-4-側氧基-4H-吼啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙基]胺基}苯甲 酸相同之方法自（+)2-{[(lS)-l-(7-曱基-2-嗎啉-4-基-4-侧氧 基-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙基]胺基}苯甲酸曱酯 (11，9 g ’ 28 mmol)製備標題化合物以得到10.9 g(94%)標題 化合物。 NMR (400 MHz, OMSO-d6) δ 8.53 (s, 1Η), 8.39 (d, 1H), 7.79 (dd, 1H), 7.59 (d, 1H), 7.21 (dt, 1H), 6.52 (t, 1H), 6.36 (d, 1H), 5.65 (s, 1H), 5.21 (m, 1H), 3.68 (m, 4H), 3.62 137748.doc •31- 200936138 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.57 (d, 3H)； ,3C NMR (DMSO-i/tf) δ 170.0, 159.7, 157.5, 149.4, 146.9, 136.6, 135.5, 134.5, 131.7, 123.3, 122.1, 114.7, 111.9, 110.4, 80.1, 65.8 (2C), 47.5, 44.2 (2C), 21.4, 17.6 ； (99.8% ee) [a]D=+443，（c 0.2, CH3CN) mp 244.0-244.5〇C 0 酶抑制之檢定 在基於AlphaScreen之酶活性檢定中使用人類重組酶來 評估ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κγ及ΡΙ3Κδ之抑制。該檢定量測 ΡΙ3Κ介導之磷脂醯肌醇（4,5)雙磷酸酯（ΡΙΡ2)向磷脂醯肌醇 (3,4,5)參磷酸酯（？1?3)之轉化。生物素標記？1?3、08丁標 籤普列克底物蛋白（pleckstrin)同源（ΡΗ)域及兩種 AlphaScreen珠粒形成一旦在680 nm下雷射激發即引發信 號之複合物。在酶反應中形成之PIP3係與生物素標記PIP3 競爭與PH域結合，因此降低信號，酶產物增大。 測試十種不同化合物濃度，且相對於抑制劑濃度繪製以 最大活性之百分比表示的ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κγ及ΡΙ3Κδ 之抑制。 方法 將化合物溶解於DMSO中且添加至384孔板中。將 ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κγ 或 ΡΙ3Κδ 添加於 Tris緩衝液（50 mM Tris pH 7,6，0.05% CHAPS，5 mM DTT及 24 mM MgCl2)中 且允許與化合物一起預培育20分鐘，隨後添加含有PIP2及 137748.doc -32· 200936138 ATP之基質溶液。在20分鐘之後藉由添加含有EDTA及生物 素-PIP3之停止溶液接著添加含有GST-grpl PH及 AlphaScreen珠粒之彳貞測溶液來停止酶反應。將板置於黑暗 中至少5小時，隨後進行分析。在檢定中DMSO、ATP及 PIP2之最終濃度分別為0.8%、4 μΜ及40 μΜ。 資料分析 根據等式 y=(a+((b-a)/(l+(x/IC50)s)))計算 IC50 值，其中 y=%抑制；a=0% ; b=100% ; s=濃度-反應曲線之斜率；x= 抑制劑濃度。將資料呈現於表2中。 經洗滌血小板聚集物（WPA)之檢定 自健康志願者藉由靜脈穿刺使用Venflon針1.5*45 mm(17 GA，1.77 IN)來收集血液。丟棄前2 ml血液，隨後將等分 試樣收集至含有酸檸檬酸右旋糖（ACD)之管中。六體積血 液需要一體積ACD。 將抗凝化血液在24〇xg下離心15 min以獲得富含血小板 之血漿（PRP)。將PRP轉移至新管中且在220〇xg下離心15 min。丟棄上清液且將血小板小球再懸浮至200000><109/L 於含有1 μΜ水蛭素及0.02 U/mL三磷酸腺苷雙磷酸酶 (apyrase)之Tyrodes緩衝液（TB)中。在室溫下將企小板懸浮 液靜置30 min。就在檢定時間之前，添加CaCh至2 mM之 最終濃度。將化合物或渥曼青黴素溶解於DMSO中且添加 至96孔板中，隨後添加經洗滌之血小板懸浮液。將血小板 懸浮液與抑制劑一起預培養5 min。在5 min板震盪之前及 之後記錄在650 nm下之光吸收且稱為記錄0(R0)及R1。將 137748.doc -33- 200936138 小鼠抗人類CD9抗體（在供體比濃度下）添加至各孔中隨後 進行下一 1 〇 min板震盪及光吸收記錄；R2。 在各經洗滌血小板懸浮液中在不存在或存在1 μΜ渥曼青 黴素（完整ΡΙ3Κ抑制）之情況下進行CD9抗體誘導聚集之濃 度反應，隨後測試化合物。選擇具有最大ΡΙ3Κ抑制依賴性 之CD9抗體濃度用於測試。 資料分析 將所有讀數均減去具有ΤΒ之孔中之光吸收，隨後根據 ® 式[(Rl-R2)/Rl]xl00=%聚集來計算聚集百分比。藉由相同 式子[(R0-Rl)/R0]xl00=%聚集來評估抑制劑之自發聚集或 前聚集（pro-aggregatory)效應。 - 根據等式 y=(a+((b-a)/(l+(x/IC50)s)))計算 IC50值，其中 y= _ 經洗滌血小板聚集；a=最小聚集；b=最大聚集；s=濃度- 反應曲線之斜率；x=抑制劑濃度。將資料呈現於表2中。 表2. ΡΙ3Κβ、ΡΙ3Κα、ΡΙ3Κγ及PI3K6及在WPA中各鏡像異 g 構體，以及外消旋體之IC50 表2 化合物名稱 ΡΙ3Κρ ΡΪ3Κ„ pi3ky ΡΙ3Κδ 經洗滌血 小板聚集 -----------------μΜ--------------- ηΜ 實例1㈠2-[(lR)-l-(7-曱基-2-(嗎啉斗基)-4-側氧基-4H-吡啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙胺基] 苯曱酸 0.021 1.4 1,2 0.08 6 實例2 (+)2-[(lS)-l-(7-曱基-2-(嗎啉-4-基)-4-側氧基-4H-n比啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙胺基] 苯甲酸 4.4 23 23 8 1653 W02004016607 2-[1-(7-曱基-2-(嗎啉-4-基)-4-側氧基-4Η-»比 啶并[l，2-a]嘧啶-9-基)乙胺基]苯曱酸 0.110 6.8 3.7 0.8 10 137748.doc -34- 200936138 【圖式簡單說明】 圖1展示2-[ 1-(7-曱基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-吡啶并 [l，2-a]嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸之（-)-鏡像異構體，亦即 (-)2-[1-(7-曱基-2-(嗎啉-4-基）-4-側氧基-4H-吼啶并[l，2-a] 嘧啶-9-基）乙胺基]苯甲酸之X射線粉末繞射圖樣。 ❹ 137748.doc 35-

Claims (1)

1. 200936138 七、申請專利範圍： 1· 一種鏡像異構性純（-)2-[1-(7-甲基-2-(嗎啉_4_基）_4-侧氧 基-4H-°比唆并[1，2-&]喊咬-9-基）乙胺基]苯曱或其醫藥學 上可接受之鹽。 2·如凊求項1之純鏡像異構體’其特徵在於該鏡像異構.體 呈295。/。之鏡像異構過量（ee)。

   3. 如請求項1之純鏡像異構體’其特徵在於該鏡像異構體 呈299.8% ’例如99.9%之鏡像異構過量（ee)。 4. 如請求項1至3中任一項之純鏡像異構體，其特徵在於該 鏡像異構體呈固態。 5. 如請求項1至4中任 鏡像異構體呈部分結晶狀態 6. 如請求項1至5中任一項之純鏡像異構體，其特徵在於言 鏡像異構體呈大體上結晶狀態。 7. 如請求項1至6中任一項之純鏡像異構體，其特徵在於^ 有在以下近似d值之XRPD峰：6.8 A、5.9 A及3.91 A。 8’如請求項1至6中任一項之純鏡像異構體，其特徵在於, 有在以下近似d值之XRPD峰：68人、6丨A、59人^ 4.98 A、4.41 A、4.26 A及 3.91 A。 9.如請求項7或8之㈠2·[叫1·(7·甲基㈣·4_基）.4_侧 ft二：咬并[1，2·物·9_基)乙胺基]苯甲酸，其特 徵在於”有大體上如圖4所示之xRpD繞射圖。 10· —種製備如請求頂 .甘— 項至9令任一項之純鏡像異構體的方 法’其包括藉由對掌性届杯 層析接者水解f酯及結晶來分 137748.doc 200936138 離2-{[-1-(7-曱基-2-嗎啉-4-基-4-侧氧基-4H-吡啶并[1，2-a]嘯咬·9·基）乙基]胺基}苯曱酸甲酯之兩種鏡像異構體。 Π.如請求項1至9中任一項之純鏡像異構體，或其醫藥學上 可接受之鹽，其適用於醫療。 12. —種醫藥組合物，其包含如請求項1至9中任一項之純鏡 像異構體，或其醫藥學上可接受之鹽，與醫藥學上可接 受之稀釋劑或載劑。 ❹ 13· —種以如請求項丨至9中任一項之純鏡像異構體，或其醫 藥學上可接受之鹽在製備適用於預防或治療心血管疾病 之方法的藥物中之用途。 14. 種以如6月求項13之純鏡像異構體或其醫藥學上可接受 之鹽在製備適用於抗血栓症之方法的藥物中之用途。又 15. -種以如請求項⑴中任—項之純鏡像異構體，或其醫 樂學上可接受之鹽在製備適用於預防或治療呼吸道疾病 之方法的藥物中之用途。 ❹ 16. 一種以如請求項1至9中任一項 藥學上可接受之鹽在製備適用 的藥物中之用途。 之純鏡像異構體，或其醫 於預防或治療癌症之方法 禋以如請求項1至9中 1 / 藥學上可接受之鹽在製備適用_、，或其醫 能失調有關之疾病之方法的藥物 ”與白血球功 _、用途。 18·種預防或治療溫血動物之心血營 s疾病的方法，甘& , 投與有效量之如請求項丨至9中任一 ，、包括 或其醫藥學上可接受之鹽。 之純鏡像異構體’ 137748.doc 200936138 19. -種預防或治療溫血動物之啤吸道疾病的方法，其包括 投與有效量之如請求項⑴中任—項之純鏡像異構體， 或其醫藥學上可接受之鹽。 20. -種預mm動物之癌症的方法，其包括投與有 ，量之如請求項1至9中任一項之純鏡像異構體，或其醫 藥學上可接受之鹽。

   21. -種預防或治療溫血動物之與白血球功能失調有關之疾 病的方法，其包括投與有效量之如請求項1至9中任-項 之純鏡像異構體，或其醫藥學上可接受之鹽。 22· —種組合，其包含如請求項丨至9中任一項之純鏡像異構 體，或其醫藥學上可接受之鹽，及具有不同作用機制之 任何抗血栓劑，其中該（該等）抗血栓劑例如可為以下各 物中一或多者：抗凝劑未經分離之肝素、低分子量肝 素、其他肝素衍生物、合成肝素衍生物（例如方達珀魯 (fondaparinux))、維生素κ拮抗劑、凝血因子之合成或生 物技術抑制劑（例如’合成凝血酶、FVIIa、、FXla 及FIXa抑制劑’及rNAPc2)、抗血小板劑乙醯水楊酸、 雙嘧達莫（dipyridamole)、西洛他唑（cii〇staz〇u ;噻氣匹 疋（ticlopidine)、氣 β比格雷（ci〇pid〇grel)、普拉格雷 (prasugrel)、AZD6140、ADP/ATP 受體（P2X1、P2Y1、 P2Y12)之其他抑制劑；凝血脂素受體及/或合成酶抑制 劑；替羅非班（tirofiban)、埃替菲巴肽（eptifibatide)、阿 昔單抗（abciximab)或其他GPIIb/IIIa拮抗劑；前列環素模 擬劑（prostacyclin mimetic);鱗酸二醋酶抑制劑；蛋白 137748.doc 200936138 酶活化受體（PARI或PAR4)之抑制劑，如PARI拮抗劑 SCH 530348 ; p-選擇素拮抗劑（p-selectin antagonist); GPVI拮抗劑；GPIba-vWF-膠原蛋白交互作用抑制劑； EP3受體拮抗劑及藉由抑制羧肽酶U(CPU或TAFIa)產生 作用之纖維蛋白溶解刺激劑或血漿素原活化劑抑制劑-l(PAI-l)。 ' 23. —種組合，其包含如請求項1至9中任一項之純鏡像異構 體，或其醫藥學上可接受之鹽，及例如以下各物中一或 多者之溶血栓劑：組織血漿素原活化劑（天然、重組或經 修飾）、鏈球菌激酶（streptokinase)、尿激酶（urokinase)、 尿激酶原（prourokinase)、對曱氧苯曱醯基化血聚素原-- 鏈球菌激酶活化劑複合物（APSAC)、動物唾液腺血漿素 . 原活化劑、微纖維蛋白溶酶（microplasmin)或其他纖維蛋 白溶酶變體。 24. —種2-{[(1R)-1-(7-甲基-2-嗎啉-4-基-4-側氧基-4H-吡啶 & 并[l，2-a]嘧啶-9-基）乙基]胺基}苯曱酸，或其醫藥學上可 接受之鹽。 137748.doc