TW200848032A - Novel therapeutic uses of 4-[2-(4-methylphenylsulfanyl)phenyl]piperidine - Google Patents

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九、發明說明： 基苯硫基）苯基]哌啶及其酸加 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於4-[2-(4-甲 成鹽之用途。 【先前技術】 上化合物4-[2-(4-甲基苯硫基）苯基]哌啶揭示於國際專利 申請案WO 03/029232中。據稱該化合物為血清素轉運體 之抑制劑，對血清素受體2C (SHU具有親和力，且^ 而適用於治療情感障礙，諸如嚴重抑鬱及焦慮。 然而，如實施例所示，該化合物具有寬廣藥理特徵， 使得化合物亦適用於對其他疾病之治療_有需要之治療。此 藥理特徵連同該化合物治療其他疾病之用途一起亦揭示於 WO 07/144006 中。 、 【發明内容】 發明概要 在一具體實例中，本發明係關於一種治療注意力不足 過動症（ADHD )、憂鬱症、頑抗型抑鬱或抑鬱之殘留症 狀的方法，該方法包含將治療有效量之4_[2气4_甲基苯硫 基）苯基]哌啶及其酸加成鹽（化合物D投予有需要之患者。 在一具體實例中，本發明係關於4-[2-(4-甲基苯硫基） 笨基]旅°疋及其酸加成鹽（化合物I )之用途，其係用於製 k冶療ADHD、憂鬱症、頑抗型抑鬱或抑鬱之殘留症狀之 藥物。 在一具體實例中，本發明係關於用於治療ADHD、憂 5 200848032 鬱症、頑抗型抑鬱或抑鬱之殘留症狀之4-[2-(4-甲基笨石京 基）苯基]哌啶及其酸加成鹽（化合物I)。 【實施方式】 發明詳述 本發明係關於化合物I之用途，該化合物I為‘[2 (4 甲基苯硫基）-苯基]哌啶及其醫藥學上可接受之鹽。4_[2<4 甲基苯硫基）-苯基]哌啶之結構為：

化合物I之藥理特徵描述於實施例中，但可如下概述。 該化合物抑制血清素及去甲腎上腺素再吸收；其抑制血清 素受體2A、2C及3 ;且其抑制d腎上腺素受體。/月 在一具體實例中，該等酸加成鹽為無毒之酸的鹽。該 等鹽包括由有機酸製成之鹽，該等有機酸為諸如順丁歸二 酸、反丁婦二酸、苯曱酸、抗壞血酸、丁二酸、草酸、雙 亞甲基水揚酸、甲烧績酸、乙烧二4酸、乙酸、丙酸、酒 石I尺揚酉夂、挣棣酸、葡萄糖酸、乳酸、蘋果酸、丙二 酸、爲桃酸、肉桂酸、曱基順丁稀二酸（咖識' 天冬胺酸、硬減、棕猶、衣㈣、乙醇酸、對胺基苯 甲酸、麵胺酸、苯項酸、乙酸茶驗（the〇phy出ne⑽化w)， 6 200848032 以及8-函命鹼（例如8_溴茶鹼）。該等鹽亦可由無機鹽製 成’諸如氫溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸及硝酸。 在一具體實例中，化合物I為HBr加成鹽。 在一具體實例中，化合物I為DL-乳酸加成鹽及尤其1:1 β靖 〇 在一具體實例中，化合物I為L-天冬胺酸加成鹽及尤 其1:1鹽。

在一具體實例中，化合物I為麩胺酸加成鹽及尤其1 : J 〇 在一具體實例中，化合物I為戊二酸加成鹽及尤其1 : i 繫j 〇 在一具體實例中，化合物〗為丙二酸加成鹽及尤其1 : i 鹽’發現其以兩種多晶型變型α及β存在，其中咸信P形 態基於較低溶解度而最穩定。 在一具體實例中，化合物I呈純化之形式。術語「純 化之形式」意欲指示化合物視情況基本上無其他化合物或 其他形態（亦即，該化合物之多晶型）。 口服劑型及尤其錠劑及膠囊由於投藥方便及隨之較佳 順應性，通常為患者及從業醫師所首選。對於錠劑及膠囊， 活性成份較佳為結晶。在一具體實例中，化合物丨為於曰。 本發明所使用之晶體可以溶劑合物之形式存在，亦即， 溶劑分子形成晶體結構之一部分的晶體。溶劑合物可由水 形成，在該狀況下溶劑合物通常稱作水合物。或者，溶劑 合物可由其他溶劑形成，該等溶劑為諸如乙醇、丙嗣或乙 7 200848032 酸乙s旨。溶劑合物之準確量通常視條件而定。舉例而言， 隨著溫度升高或隨著相對濕度降低，水合物典型地將釋放 水。當條件（諸如濕度）改變時不變化或僅極少變化之化 合物一般被視為更適於醫藥調配物。應注意，HBr酸加成 鹽在自水沈殿時不形成水合物，而諸如丁二酸鹽、蘋果酸 鹽及酒石酸鹽酸加成鹽之化合物形成水合物。 一些化合物為吸濕性，亦即，當暴露於濕度時其吸收 f 水。對於欲提供於醫藥調配物、尤其乾調配物（諸如錠劑 或膠囊）中之化合物而言，吸濕性一般被視為不合需要之 特性。在一具體實例中，本發明提供具有低吸濕性之晶體。 對於使用結晶活性成份之口服劑型而言，若該等晶體 經明確定義，财為有益的。在本發明情形中，術語「經 明確定義」尤其意謂化學計量經明確定義，亦#，形成鹽 之離子之間的比率為小整數之間的比率，諸如ι:ι、

2:1、、1:1:1等。在一具體實例中，本發明之化合物為經明 確定義之晶體。 活性成份之溶解度對於劑型選擇亦具重要性，此係由 於溶解度可能直接影響生物可用I對於口服劑型，4 咸信，活性成份之較高溶解度因使生物可用性增加而為有 =一些患者’例如老年患者，對於吞咽錠劑可能存在困 難，且口服滴液可能為避免需要吞咽錠劑之合適替代者。 為了限制口服滴液之體積，有必要 活性成份，…彳二： 具有高濃度之 攻伤其再4要化合物之高溶解度。如表 1乳酸、L·天冬胺酸、麵胺酸、戊二酸及丙二酸加成鹽 8 200848032 具有特別高的溶解度。 晶型影響化合物之過渡及處理特性。針型晶體在生產 壤境中傾向於更難以處理，此係由於過濾變得更為困難且 更耗時。特定鹽之準確晶型可視（例如）使該鹽沈澱之條 件而定。化合物^ HBr酸加成鹽在自乙醇、乙酸及丙醇 賴時生長成針型溶劑化晶體，但當HBr加成鹽自水沈澱 時生長成非針型之非水合形態晶體，提供較優過濾特性。

表3亦描述所得？11值，亦即，飽和鹽溶液之pH值。 此特丨生具重要性，此係由於在儲存期間決不能完全避免水 分且水分之積累將引起包含低所得pH值之鹽的錠劑中或 錠劑上之pH值下降，從而可能降低殼層壽命。此外，若 旋劑係藉由濕式造粒製成，則具有低所得pH值之鹽可能 引起處理設備腐蝕。表3中之數據表明HBr、HC1及己二 酸加成鹽在此方面可能較優良。 在一具體實例中，化合物I為呈結晶形態、尤其呈純 化之形式的HBr加成鹽。在又一具體實例中，該HBr鹽在 X射線粉末繞射圖（XRPD)中在約6.08。、14.81。、19.26。 及25.3 8。2Θ處具有峰，且詳言之，該HBr鹽具有如圖1 所描繪之XRPD。 在一具體實例中，化合物I為呈結晶形態、尤其呈純 化之形式的DL-乳酸加成鹽（1:1)。在又一具體實例中， 該DL-乳酸加成鹽在XRPD中在約5.30。、8.81。、9.44。及 17.24。2Θ處具有峰，且詳言之，該DL乳酸加成鹽具有如 圖4所描繪之XRpD。 9 200848032 在一具體實例中，化合物j為呈結晶形態、尤其呈純 化之形式的L-天冬胺酸加成鹽（}:丨）。在又一具體實例 中’戎L-天冬胺酸加成鹽為非溶劑化形式且在中在 約 11.05。、20.16。、20.60。、25.00。2Θ 處具有峰，且詳言 之，該L-天冬胺酸鹽、與L_天冬胺酸混合時具有如圖17所 描繪之XRPD。在一具體實例中，$ L_天冬胺酸加成鹽為 水合物，尤其呈純化之形式。在又一具體實例中，該^天 冬月女酸加成鹽水合物在XRPD中在約7.8〇。、η 8〇。、 14.10。、19·63° 2Θ處具有峰，且詳言之，豸L_天冬胺酸加 成鹽水合物與L-天冬胺酸混合時具有如圖18所描繪之 XRPD 〇 在-具體實例中，化合物ϊ為呈結晶形態、尤其呈純 化之形式的麩胺酸加成鹽（1:1) ^在又一具體實例中，該 麵胺酸加成鹽在XRPD中在約7.71。、14()1。、19.26。、22 2Θ處具有峰’且詳言之，該麵胺酸鹽與麩胺酸單水合物混 合時具有如圖19所描緣之XRPD。 在-具體實例中，化合物！為呈結晶形態、尤其呈純 化之形式的丙二酸加成鹽（1:1)。在又一具體實例中，該 丙二酸加成鹽為《形態且在XRPD中在約ι〇 77〇、ΐ67〇〇 / 19·93〇、24·(Π〇2θ處具有峰’或該丙二酸加成鹽為β形能 且在 XRPD 中在約 6.〇8。、1(M1。、18 25。、2〇26。Μ 處且 有峰，且詳言之，該丙二酸加成鹽具有如冑9或圖Μ 描繪之XRPD。 在-具體實例中，化合物！為呈結晶形態、尤其呈純 200848032 化之形式的戊二酸加成鹽（1 : 1 )。在又一具體實例中，該 戊一酸加成鹽在XRPD中在約9·39。、11.70。、14.05。及14.58。 2Θ處具有峰，且詳言之，該戊二酸加成鹽具有如圖8所描 繪之XRPD。 化合物I之獨特藥理特徵使其適合於治療除W〇 03/029232中所揭示之疾病以外之疾病。5-HT2c受體位於 (例如）多巴胺（dopaminergic )神經元上，於其處活化 對多巴胺釋放具有緊張性抑制作用（t〇nic inhibit〇ry influence)，且5_Η1^拮抗劑將實現多巴胺含量增加。實 鈀例2E中所呈現之數據顯示化合物j的確引起前額葉皮質 中之細胞外多巴胺含量的劑量依賴性增加。在此背景下， 可假設5-ΗΤ^拮抗劑尤其適於治療選擇性血清素再吸收抑 制剑所難冶癒之抑鬱户;如"，39， 2006]此假w又得到若干臨床研究之支持，該等臨床研究顯 示對於治療臨床反應不足（頑抗型抑鬱TRD或難治性抑 鬱）之抑鬱患者而言，米氮平（mirtazapine )與選擇性血 清素再吸收抑制劑（SSRI )之組合優於單獨心广 75, 139-153, 2006]。米氮平亦為 5_Ht2 及 5-Ht3 才口抗Μ表明與對5_ΗΤ2及5_ΗΤ3之拮抗作用結合而發揮 Τ清素再吸收抑制作用之化合物（諸如化合物〇適用於 /口療THE) ’亦即’將增加罹患頭抗^抑鬱之患者的緩解率。 貝軛例2F及2G中所呈現之數據顯示化合物j引起前 ❹皮質及腹側海馬體中之乙醯膽驗的細胞外含量增加。 對照乙醯膽鹼酯酶抑制劑治療阿兹海默氏病（AM—、 200848032 disease )之用途，有長久的臨床跡象表明增加腦中之乙醯 膽驗含量為一般治療阿茲海默氏病及認知障礙之方式。在 此背景下’咸信本發明之化合物適用於治療阿茲海默氏病 及認知障礙以及情感障礙，諸如與阿茲海默氏病及認知障 礙相關之抑繫。 自一部分抑鬱患者將在諸如MADRD及HAMD之臨床 相關抑鬱量表上有所改善，之角度而言，該等患者將對諸 如SSRI之抗抑鬱劑治療作出反應，但其中諸如睡眠紊亂 及 < 知障礙之其他症狀仍存在。在本發明情形中，將此等 患者稱作部分反應者。歸因於上文所討論之對乙醯膽鹼含 里的衫響，預期本發明之化合物除抑鬱以外還適用於治療 認知障礙。臨床研究已顯示作為心丨腎上腺素受體拮抗劑 之化合物哌唑嗪（praz〇sin )減少睡眠紊亂[万化/尸町以以化少， 61，928-934, 2007]。此外，亦咸信本發明之化合物對5_HTm 及5之拮抗作用具有鎮靜性睡眠改善作用 33，467-471, 1994]，因此化合物 I 適用 於冶療部分反應者，或換言之，用化合物〗治療抑鬱患者 將減少部分反應者之分數。 、,/主μ力不足過動症（ADHD )為最常見的神經行為異 系之。ADHD之特徵為存在伴有受限、重複或老套行為 之社交與溝通障礙之三合體。ADHD通常始於兒童期或青 春期，但症狀可能持續至成人期。托莫西汀（at〇m〇xetine) 為目前由美國食品與藥品管理局（FDA)批准用於adhd /口療之唯一非興奮劑（n〇nstimulant)[乃〜以，64， 12 200848032 2004]。托莫西汀為去甲腎上腺素再吸收抑制劑，其亦引起 則名員葉皮質中之多巴胺含量增加。已表明該等神經傳遞質 之含里增加介導托莫西汀在治療ADHD中之治療作用 [五wr.iV⑽〇州咖舰c〇厂，12，增刊％ 418，2〇〇2]。其 支持化合物I可用於治療ADHD之觀點。另外，本發明之 化合物歸因於上文所討論之對α-1腎上腺素受體及5_ΗΤ2 之拮抗作用而可具有鎮靜作用，從而有益於治療adhd。 , 如實施例3所示，大鼠中之研究顯示化合物丨減少過動、 " 衝動及注意力不足。 憂鬱症為通常與嚴重抑鬱相聯繫之抑鬱之特殊亞型； 此類型之抑鬱亦稱作憂鬱型抑鬱。憂鬱症與焦慮、害怕未 來、失眠及食慾喪失相關。已顯示抑制血清素與去甲腎上 腺素再吸收之化合物，諸如文拉法新（venlafaxine)，尤 其有效治療患有嚴重抑鬱及憂鬱症之患者」似化^， 12, 50-54, 2000]。如上文所討論，具有5-HT2c拮抗作用之 ( 化合物增加多巴胺含量，因此將預期該等化合物有效治療 憂 t症如//·，39，147-166, 2006]。另外，預 期本發明之化合物對α-l腎上腺素受體及5_Ητ22拮抗作 用有助於使睡眠正常化，因此該等化合物適用於治療憂鬱 症。 在一具體貫例中，本發明提供一種治療ADHD、憂鬱 症、頑抗型抑鬱或抑鬱之殘留症狀的方法，該方法包含將 冶療有效量之4-[2-(4-甲基苯硫基）苯基]哌啶及其酸加成鹽 (化合物I )投予有品要之患者。在一具體實例中，正對 13 200848032 上文所列疾症φ夕乂工 、 甲之任一者進行治療之該患者最初已確診患 有該疾病。 ^ 具' 體貝例中’本發明之化合物以約0.001至約100 毫克/公斤體重/天之量投予。 典型口服劑量處於約0.001至約100毫克/公斤體重/ 天t佺為約0·01至約50毫克/公斤體重/天之範圍内，分 π j夕人剤里（諸如丨至3次劑量）投予。準確劑量將視 f 二之’y員率及模式，所治療之個體之性別、年齡、體重及 一般狀況，所、;Λ :底#十& 、， α σ療之病狀之性質及嚴重性及待治療之任何 併舍症及熟習此項技術者顯而易見之其他因素而定。 成人之典型日劑量處於W00毫克/天之本發明化合物 1巳圍内，諸如UO毫克/天、5-25毫克/天或5-60毫克/ 天。其典型地可藉由每日一次或每日兩次投予0.1-60 mg :“勿1 來達成’諸如 Ο·1·50 mg、1_25 mg、1-35 mg，諸 5 1〇 、 15 、 20 、 25 、 30 、 35 、 40 、 45 、 50 、 55 或 60 mg 〇 如本文所用之化合物之「治療有效量」意謂在包含投 D亥化合物之治療干預中足以治癒、減輕或部分遏止特定 疾錢其併發症之臨床表現的量。適於實現此目的之量定 義為「治療有效量」。該術語亦包括在包含投予該化合物 中足以治癒、減輕或部分遏止特定疾病及其併發症 =表現的！。為達成各目的之有效量將視疾病或損傷 =重=以及個體之體重及一般狀況而定。應瞭解，可使 ㊉規貫驗法’藉由建構多個值之矩陣且測試矩陣中之不 14 200848032 同點來確定適當劑量，其皆處於受訓醫師之一般技術範圍 内。 如本文所用之術語「治療」意謂出於對抗病狀（諸如 疾病或病症）之目的而控制及照顧患者。該術語意欲包括 對患者正罹患之特定病狀的全方位治療，諸如投予活性化 合物以減輕症狀或併發症’延緩疾病、病症或病狀之進程， 減輕或緩解症狀及併發症及/或治癒或消除疾病、病症或病 狀以及預防病狀，其中預防應理解為出於對抗疾病、病狀 或病症之目的而控制及照顧患者且包括投予活性化合物以 預防症狀或併發症發作。儘管如此，預防性治療及治療性 治療仍為本發明之兩個獨立態樣。待治療之患者較佳為哺 乳動物、尤其人類。 “在一具體實财，本發明係關於4_[2_(4_甲基苯硫基） :基]哌啶及其酸加成鹽（化合物υ之用I，其用於製造 治療ADHD、憂鬱症、頑抗型抑鬱或抑蠻之殘留症狀之藥 ( 物。 / 4在^體男例中，本發明係關於用於治療ADHD、憂 =症頭抗型抑營或抑鬱之殘留症狀之4_[2♦甲基苯硫 基）苯基]哌啶及其酸加成鹽（化合物I)。 本^明之化合物可以純化合物之形式單獨或與醫藥學 上可接文之載劑或賦形劑組合以單次或多次劑量投予。可 才“康白知技術將本發明之醫藥組合物與醫藥學上可接受之 # :丨或稀釋別以及任何其他已知佐劑及賦形劑一起調配， _術諸如R，。…一…ractice of 15 200848032

Pharmacy，第 19 版，Gennaro 編，Mack Publishing Co.， Easton，PA，1995中所揭示之彼等技術。 可特疋調配醫藥組合物以藉由任何合適之途徑投藥， 該途徑諸如經口、經直腸、經鼻、經肺、局部（包括經頰 及經舌下）、經皮、池内、腹膜内、經陰道及非經腸（包 括經皮下、肌肉内、鞘内、靜脈内及皮内）途徑，經口途 徑為杈佳。應瞭解，較佳之途徑將視待治療之個體之一般 狀況及年齡、待治療之病狀之性質及所選活性成份而定。 t、紅口投藥之醫藥組合物包括固體劑型，諸如膠囊、 錠劑、糖衣藥丸、丸劑、口含劑 '散劑及顆粒。適當時， 其可製備以包衣。 供經口投藥之液體劑型包括溶液、乳液、懸浮液、糖 漿及酿劑。 供非經腸投藥之醫藥組合物包括無菌水性及非水性可 /主射心液、为散液、懸浮液或乳液以及有待於使用前復水 成無菌可注射溶液或分散液之無菌散劑。 ^其他合適之投藥形式包括栓劑、喷霧、軟膏、乳膏、 凝膠、吸入劑、經皮貼片、植入物等。 便利地，本發明之化合物以單位劑型投予，該單位劑 型含有約。以5〇mg之量的該等化合物，諸# 1 mg、5mg、 l〇mg^ 15mg.2〇mg,25mg^3〇^35mg^,^„I〇 …對於諸如靜脈内、鞘内、肌肉内及類似投藥之非經腸 述瓜而曰’劑！典型地為經口投藥所使用之劑量的約 左右。 16 200848032 對於非經腸投藥而言，可使用本發明之化合物於無菌 水溶液、丙二醇水溶液、維生素E水溶液或芝麻油或花生 油中之溶液。該等水溶液必要時應適當緩衝且液體稀釋劑 首先使得與足夠生理食鹽水或葡萄糖#張。水溶液尤其適 合於靜脈内、肌肉内、經皮下及腹膜内投藥。所使用之無 囷水性介質皆易於藉由熟習此項技術者已知之標準技術庐 得。 又 合適之醫藥載劑包括惰性@體稀釋劑或填充劑、無菌 水溶液及，種有機溶劑。固體載劑之實例為乳糖、白土（⑽& alb:)、蔗糖、環糊精、滑石、明膠、瓊脂、果膠、阿拉 伯私（acaCla )、硬脂酸鐫、硬脂酸及纖維素之低碳院基 醚。液體載劑之實例為糖漿 々俯水化生油、撖欖油、磷脂、脂 肪酸、脂肪酸胺、聚裊介 & 來虱化乙烯及水。藉由將本 物與醫藥學上可接香夕截切，人 ^ β $ 口 、 之載绡、、且&而形成之醫藥組合物隨後 易於以適合於所揭示之投華 仅杀迷瓜之多種劑型來投予。 適合於經口投藥之本發 ^ ^ ^ 之5周配物可呈現為離散單 元，諸如膠囊或錠劑，其各旦 早 . 有預疋罝之活性成份且可句 栝合、之賦形劑。此外，經口 ...LL ^ 用之调配物可呈散齋j或顆 粗、於水性或非水性液體中 =次顆 油包水液體乳液之形式。 戈心子液，或水包油或 若固體载劑用於經口投藥 散劑或小球形式或以口含錠或 謬囊中。固體載劑之量可改變 1 g ° ，則製劑可為錠劑，例如以 口含劑之形式置放於硬明膠 但通常將為約25 mg至约 17 200848032 ::用液體載劑，則製劑可呈糖製、乳液、軟明膠膠 性或非水性液體懸浮液或溶液之無菌可注射液 :劑可藉由將活性成份與一般佐劑及/或稀釋劑混合、 知製錠機中壓製混合物來製備。佐劑或稀釋劑之 玉米澱粉、馬輪粉、滑石、硬脂酸鎖、明 修、礼糖、膠及類似物。可偾用屮 .χ 使用出於該等目的通常所使用 等:劑或添加劑’諸如著色劑、調味劑、防腐劑 ，、限制條件為該等佐劑或添加劑與活性成份相容。 :含本發明之化合物之膠囊可藉由將包含該化合物之 政^ 微晶纖維素及硬脂酸鎂混 勝谬囊中來製備。視情況，⑼囊叮心劑4放於硬明 几β膠囊可错助於合適 以著色。典型地，膠囊將包含 … 望、曲& .0-16.0%之本發明化合物。此 專/辰度可用於便利地以單位劑型傳遞tu、u、 及25 mg之本發明化合物。 、20 注射用溶液可藉由將活性成份及可能存 解於一部分注射用溶劍、較佳為無菌水中，將溶:口 =溶 ::體積’對溶液殺菌且將其填充於合適之安瓶或；： 中=。可添加此項技術中習用之任何合適添加劑 如張力劑、防腐劑、抗氧化劑等。 A ^ 化合物！可單獨或與另一治療活性化合物 "中該兩種化合物可同時或相繼投予。予’ 1組合之治療活性化合物奮 ，、化合物 物之實例包括.鎮靜劑或催目民藥， 18 200848032 諸如苯并二氮呼（benzodiazepine );抗痙攣藥，諸如拉莫 三嗪（lamotrigine )、丙戊酸（valproic acid )、托吼酉旨 (topiramate )、加巴喷丁 （ gabapentin )、痛痙寧 (carbamazepine );情緒穩定劑，諸如經；多巴胺性藥物， 諸如多巴胺促效劑及左旋多巴（L-Dopa ) •，治療ADHD之 藥物，諸如托莫西汀；精神興奮劑，諸如莫達芬尼 (modafinil ) 、氣胺酮（ketamine ) 、略甲 6旨 (methylphenidate )及安非他明（amphetamine );其他抗 抑鬱劑’諸如米氮平、米安色林（mianserin )及丁胺苯丙 酮（buproprion);激素，諸如T3、雌激素、DHEA及睪 固酮（testosterone );非典型精神抑制藥，諸如奥氮平 (olanzapine )及阿立旅唾（aripipraz〇ie );典型精神抑 制藥’諸如氟哌啶醇（haloperidol );治療阿茲海默氏病 之藥物’堵如膽驗醋每抑制劑及美金剛胺（memantine )、 葉酉夂鹽’ S-腺普•甲硫胺酸（S-Adenosyl-Methionine );免 疫調節劑，諸如干擾素；鴉片劑，諸如丁丙諾啡 (bUprenorphin);血管緊張素„受體i拮抗劑（AT1拮 抗劑）；ACE抑制劑；斯達汀（statin);及α1腎上腺素 拮抗劑，諸如旅唾嗓。 化合物 I 可如 WO 2003/029232 或 WO 2007/144006 中 所概述來製備。不同的鹽可藉由將適當酸添加至游離鹼 中、接著沈澱來獲得。可藉由（例如）冷卻、移除溶劑、 添加另一溶劑或其混合物來引起沈澱。 本文中所引用之包括公開案、專利申請案及專利之所 19 200848032 有文獻藉此以引用的方式全部併入且程度如同各文獻係個 另J及特定地表不以引用的方式併入且於本文中全部陳述 (達法律所允許之最大程度）一般，而不管本文其他地方 所作出之特定文獻的任何獨立提供之併入。 除非本文另有指示或情形明顯抵觸，否則在描述本發 明之h形中使用術語「一」及「該」及類似對象被視為涵 盍早數與複數。舉例而言，除非另有指示，否則短語「該 化口物」應理解為指代本發明或特定描述態樣之各種「化 合物」。 除非另有指示，否則本文所提供之所有準確值代表相 應近似值（例如，關於特定因子或量測值所提供之所有準 確例不值可被視為亦提供相應近似量測值，適當時由「約」 修飾）。 ' 除非另有規定或情形明顯抵觸，否則關於元素使用諸 如包含」、「具有」、「包括」或「含有」之術語的本 文中任何態樣或本發明態樣之描述意欲提供對「由彼（彼 等）特定元素組成」、「基本上由彼（彼等）特定元素組 成」或「實質上包含彼（彼等）特定元素」之類似態樣或 本發明悲樣之支持（例如，除非另有規定或情形明顯抵觸， 否則本文中描述為包含特定元素之組合物應理解為亦描述 由彼元素組成之組合物）。 實施例 分析方法 X射線粉末繞射圖（XRpD )係於pANalytical X，pert PR〇 20 200848032 X射線繞射儀上使用CuKal輻射來量測。以反射模式在2Θ 範圍5-40。内使用X’celerator偵測器量測樣本。 元素組成（CHN )係於來自 Elementar 之 Elementar Vario EL儀器上量測。每次量測使用約4 mg樣本，且結果以兩 次量測之平均值給出。 實施例1 a化合物I之HBr鹽 將於 AcOH 中之 545 ml 33 重量 ％ HBr ( 5·7 Μ，2.5 當 罝）添加至442公克呈油狀之經攪拌及稍加熱（約45〇c ) 之4-(2-對甲苯硫基-苯基）_哌啶-甲酸乙酯中。此混合產 生i〇°c升溫。最後添加之後，將反應混合物加熱至80〇c 且保持18小時。抽取樣本並由HPLC分析，且若未完成， 則須添加更多於AcOH中之33重量％ HBr。否則，將混合 物冷卻至25°C，使產物4-(2-對甲苯硫基_苯基）_哌啶氫溴 酸鹽沈澱。於25 C下1小時後，將800 ml乙醚添加至稠 懸浮液中。再持續攪拌1小時，隨後藉由過濾分離產物， 用400 ml乙醚洗滌且在真空中於4〇它下乾燥隔夜。將化 合物I之氫溴酸鹽分離成白色固體。 實施例lb化合物I之HBr鹽 2-(4-甲苯硫基）-苯基溪 在攪拌式氮氣覆蓋反應器中，將N_甲基-吼咯啶酮 (NMP，4.5 L)用氮氣沖洗2〇分鐘。添加4_甲基苯硫酚 (90〇g’ 7.25 mol )且接著添加 ι，2_二漠苯（i7〇9g，7.25 m〇l)。最後添加第三丁醇鉀（813 g，7·25 m〇1)以作為 最後反應物。反應為放熱性，使得反應混合物之溫度升至 21 200848032 7〇°C。接著將反應混合物加熱至12(rc歷時2_3小時。將 反應混合物冷卻至室溫。添加乙酸乙酯（4 L)及氯化鈉水 浴液（15%，2.5 L)。將混合物攪拌2〇分鐘。使水相分離 且用另一份乙酸乙酯（2 L )萃取。使水相分離並將有機相 組合且用氯化鈉溶液（15%，2.5 L)洗滌。使有機相分離， 經石，1L酸納乾燥且在減壓下蒸發至含有2〇_3〇% NMP之紅色 油。用甲醇將該油稀釋至兩倍體積且使混合物回流。添加 更多甲醇直至獲得澄清紅色溶液。將溶液緩慢冷卻至室溫 同B才接種。產物結晶成奶白色晶體，藉由過濾分離並用甲 醇洗滌且在40°C下於真空烘箱中乾燥直至恆重為止。 4-私基-4-(2-(4-甲苯硫基）苯基）-旅。定_1-甲酸乙酯 在稅拌式反應器中於氮氣覆蓋下使2-(4-甲苯硫基）-笨 基溴（600 g，2.15 mol )懸浮於庚烧（4.5 L)中。在室溫 下經10分鐘添加於己烧中之1〇 M BuLi ( 235 mL，2_36 m〇l )。注意到僅少許升溫。將懸浮液在周圍溫度下擾拌i 小時且接著冷卻至-40°C。以不快於使反應溫度保持低於_4〇 C之速率添加溶解於THF ( 1.5 L)中之1-乙氧羰基_4_0底 咬酿1 ( 368 g，2.15 mol)。當反應完成時，使其升溫至〇 °C且在保持溫度低於1 〇°C下添加1 M HC1 ( 1 L )。使酸性 水相分離且用乙酸乙酯（1 L )萃取。將有機相組合且用氯 化鈉溶液（丨5%，1 L )萃取。經硫酸鈉乾燥有機相且蒸發 至半結晶塊。將其用乙醚（250 mL )製漿且濾出。在真空 供箱中於40°C下乾燥直至恆重為止。 1(2-(4-甲苯硫基）苯基）-哌啶-1-甲酸乙酯 22 200848032 將三氟乙酸（2.8 kg，24.9 mol)及三乙基矽烷（362 g， 3·1 mol)裝入具有高效攪拌器之反應器中。經由粉末漏斗 逐份添加4-羥基-4-(2-(4-甲苯硫基）苯基）-哌啶-1-甲酸乙醋 (462 g，1.24 mol)。反應稍放熱。溫度升至50°C。添加 完成後，使反應混合物升溫至60°c歷時1 8小時。將反應 混合物冷卻至室溫。添加曱苯（750 mL)及水（750 mL)。 使有機相分離且用另一份甲苯（75〇 mL )萃取水相。將有 f 機相組合且用氯化鈉溶液（15%，500 mL )洗滌且經硫酸 納乾餘。濾除硫酸鈉，將濾液在減壓下蒸發至紅色油，在 下一步驟中進一步處理。 4-(2-(4-甲苯硫基）苯基）_哌啶氫溴酸鹽 在攪拌式反應器中將來自實施例3之呈紅色油狀之粗 4-(2-(4-甲苯硫基）苯基）_哌啶u -甲酸乙酯與於乙酸中之氫 溴酸（40%，545 mL，3.11 mol)混合。將混合物在8〇〇c 下加熱1 8小時。將反應混合物冷卻至室溫。冷卻期間結 23 200848032 並在真空中於40°C下乾燥隔夜產生6·9公克（69%)化合 物I之HBr酸加成鹽。對於xrPd，參見圖i。元素分析： 3·92% N，59.3 6% C，6.16% Η (理論值：3.85% N，59.34% C， 6.09% Η) 實施例1 d游離鹼之儲備溶液製備 將50公克化合物I之HBr鹽添加至500 ml乙酸乙酯 與200 ml仏0之混合物中產生兩相漿料。將約25 ml濃 NaOH添加至此漿料中，形成澄清兩相溶液（pH值量測為 13 -14 )。將浴液劇烈攪拌丨5分鐘且使有機相分離。將有 機相用200 ml仏0洗滌，經Na2S〇4乾燥，過濾且在真空 中於60°C下蒸發產生38公克產量（99%)之呈幾乎無色 油狀之游離鹼。 使用乙酸乙酯溶解10公克油並將體積調整至15〇η^， 產生於乙酸乙酯中之0·235 Μ·備溶液，使用其中之l5mi 等分試樣（100 mg游離鹼）。 使用96體積％ EtOH溶解1〇公克油並將體積調整至 100 m卜產生於Et0H中之〇·353 M儲備溶液，使用其中 之1 ·0 ml等分試樣（1〇〇 mg游離鹼）。 實施例le使用游離鹼之儲備溶液形成鹽 將指定等分試樣置放於試管中且在授摔下如表i所指 示添加適當量之酸。若酸為液體，則以純形式添加，否則 在添加前將其溶解於指定溶劑中。混合且沈澱後，持續攪 ㈣夜且藉由過濾、收集沈澱物。在真空中⑨抓下乾燥之 前’抽取小參考樣本且在室溫下無真空之情況下乾燥。包 24 200848032 括此程序以針對溶劑合物進行測試。一些結果如表1中戶 示。XRPD繞射圖如圖1-22中所示，且所選峰位置列於所 2中。表3顯示本發明之化合物於水中之溶解戶以於表 飽和溶液之PH值。「沈澱物又夂所得 分離之沈澱物是否與所 又列疋後所 、/解之化合物相同，复# 一 是否形成。 j /、知不水合物 25 200848032

Μ ffi r σ r r M -K a 〇 )—H 1— Q 雜 l· 繆 1' 1' l· l· Ajiv β μ μ H-^ β μ 審 薄 *·Τ*ν» TTSi Κί H—A % β 繆 b β \β r β r 1—* V — 00 — — Η—k V1 1' 繆 1—^ b： 9 Η-^ 1 簿 b h-H + )V — K) U) to 1 \ili« i§r to 1 sw 礅 M l· ά 1' l· 卜 r〇 , / 1 H-k 1' \ilif fgr , M β β β β 繆 β H l· 踝 — to I—^ to h—^ bO 1— H-A β 一 繆 P 14.7 M 2M 192.13 165.15 133.1 150.1 134.1 134.1 118.1 202.02 90.1 104.1 ] 132.12 116.01 1 146.14 146.14 90.1 256.42 MW (g/mol) Nj> 176.4 U) U) 58.3 U\ U) uj Lh U) 1—* U) σ\ to Lt\ Η-» UJ t—^ b VO 〇 o C3 U) bo b\ bo b\ bo ON bo Lh w 囚 tn W W 由 W w m W 〇 〇 o 〇 〇 1—Κ 〇 o 6 〇 〇 Ο 〇 o 〇 〇 > ffi > ffi ffi s X > o > o > O ffi > > ο ffi > o > > ο > o 逢 Lh On 〇> L/\ ^ \〇 s α\ to Os to Si 1—^ ON yi g； Lh On σ\ pi VO U) 呤^ ON νο 00 Lh •to OO 〇 •s 1—* bs bo oo L> On CHN (實驗值 ^v Os 6.88 過量 _ Os •私 Ον 〇\ o\ <1 Os On σ\ Os <1 <1 Ό ?〇 〇\ σ\ bo On bo ON 1—^ U) Jo >—» U) is) is) U) is> On 3.43 3.44 7.35 酸） H—k U) U) U) U) 3.58 U) U) U) U) U) K) U) ί° o ι—k Lk) to K) b\ i—k k) U) Oi bo to VO 00 l/l K) U\ On Os ON rr ^ a g On U) On U) Si h—^ £ ON On On ON Oj ON 00 On —夂 贜^ •^o k> k) r-s bo ° bo U) Lk) to •s h—k 私 l/i LkJ ο χ 2 p\ On On 6.28 a\ On <1 6.21 Q\ <1 <1 5 ^ Lh K) Lh to 二 3 bo 〇\ Lh s U) U) Lh k) p«J 濉 3.67 3.69 7.06 水合物，1:1) 6.73 3.23 3.36 3.36 3.49 鹽） 3.64 3.75 3.62 3.37 3.51 3.93 3.26 3.75 K) ON g 200848032 表2 :所選X射線峰位置（°2Θ)，2:1意謂2份鹼比1份酸。所有值士0.1° 棕櫊酸鹽 7.00 16.34 22.73 28.21 硬脂酸鹽 6.70 15.52 21.81 28.91 乳酸鹽 5.30 8.18 9.44 17.24 乳酸鹽水合物 11.67 16.70 18.25 21.76 羥基-異丁酸鹽 5.09 16.60 20.38 27.37 辛二酸鹽 7.18 12.53 21.11 24.19 己二酸鹽2:1 8.03 13.52 17.90 24.60 己二酸鹽1:1 α 9.33 14.01 18.72 20.63 己二酸鹽1:1 β 15.69 21.53 25.81 31.18 戊二酸鹽1:1 9.39 11.70 14.05 14.58 丁二酸鹽1:1 11.74 14.33 17.75 26.84 反丁烯二酸鹽1:1 8.90 11.47 19.25 22.33 反丁稀二酸鹽2:1 8.49 12.48 17.78 23.97 順丁烯二酸鹽1:1 12.11 15.51 17.48 22.53 順丁烯二酸鹽1:1水合物 12.81 18.76 20.53 27.31 丙二酸鹽(X 10.77 16.70 19.93 24.01 丙二酸鹽β 6.08 10.11 18.25 20.26 天冬胺酸鹽 11.05 20.1 20.60 25.00 天冬胺酸鹽水合物 7.80 13.80 14.10 19.63 麩胺酸鹽 7.71 14.01 19.26 22.57 草酸鹽 14.68 17.45 19.50 23.90 蘋果酸鹽1:1α 8.30 12.04 17.23 20.67 蘋果酸鹽1:1 β 10.91 12.87 14.14 26.16 蘋果酸鹽水合物 12.30 15.56 19.56 23.30 D-酒石酸鹽（自EtOH) 5.08 17.18 19.42 22.10 鹽酸鹽 12.44 16.72 19.45 25.02 氫溴酸鹽 6.08 14.81 19.26 25.38 氫溴酸鹽1 -PrOH溶劑合物 6.57 13.12 19.07 24.77 27 200848032 表3 酸（驗:酸） 溶解度 (mg/ml) 所得pH值 沈澱物 棕櫚酸，十六烷酸1:1 0.4 8.6 =開始 DL-乳酸，DL-2-羥基丙酸1:1 >150 6.1 =開始（蒸發德） 己二酸，1，6-己二酸1:1 2.5 4.0 部分2:1鹽 己二酸，1，6-己二酸2:1 1.0 7.8 =開始 反丁烯二酸1:1 0.2 3.3 =開始 戊二酸，1，5-戊二酸1:1 13 4.6 =開始 丙二酸1:1⑻ 5.2 4.0 =新形態（β) 草酸1:1 1.1 2.7 ’’ •si*· \ / =開始 辛二酸，1，8·辛二酸2:1 0.7 5.5 =開始 丁二酸，1，4-丁二酸 2:1 2.0 4.0 水合物 L-蘋果酸，L-2-羥基丁二酸 ΛΛ3 2.8 4.0 水合物 D-酒石酸，D-2,3-二羥基丁二酸 1:1 1.8 3.5 水合物 L-天冬胺酸1:1 39 4.3 水合物 麩胺酸1:1 >35 4.6 i檬酸2:1 0.5 4.7 =開始 磷酸1:1 6.0 2.0 ? nci 4.5 6.8 =開始 HBr — 2.4 7.0 =開始 實施例2A血清素（5-HT)及去甲腎上腺素（NE)再吸收 抑制作用 將等分試樣之測試化合物及大鼠皮質突觸體製劑在37 C下預培育10 min，且接著添加[3h]NE或[3H]5-HT (最終 濃度10 nM)。在10 μΜ他舒普侖（talsupram)或西它普 蘭（citalopram )存在下測定非特異性吸收且在緩衝液存在 下測定總吸收。將等分試樣在37°C下培育1 5分鐘。培育 後’使用Tomtec細胞收集器程式，經Unifilter GF/C (在 28 200848032 0· 1 % PEI中預浸泡3 0分鐘）過濾來分離突觸體所吸收之 [3Η]ΝΕ 或[3Η]5-ΗΤ。洗滌過濾器且在 Wallac MicroBeta 計 數器中計數。 於NET化合物I展示23 nM之IC5❹值。於SERT化合 物I展示8 nM之IC5G值。 實施例2B 5-HT^拮抗作用 測试化合物I對血清素受體之親和力且發現其展現對 5-HT2a受體具有親和力之拮抗特徵（& 54 nM)。根據γ = ioo/(i + i〇(wwc50))計算親和力，其中γ表示結合％且X 表示化合物濃度。使用5種濃度之化合物（1、1〇〇、 1000 nM)计异 IC5〇 值。根據 Cheng Prusoff 方程式 Ki == (IC5〇/(l + ([L]/Kd))計异 Ki。於 MDL Pharmaservices 目錄 號271650測定親和力。 在表現人類5-HT2a受體之哺乳動物細胞中，化合物I 展示競爭性拮抗特性。化合物以<10〇 nM之Ki與5-HT2A 受體結合且在功能檢定中化合物以67 nM之Kb拮抗由5-HT引發之細胞内儲存物之Ca2+釋放。希爾德分析（schild analysis)顯露Kb為1〇〇 nM之競爭性拮抗作用。 只驗如下進行。實驗前2或3天，以足以在實驗當天 付到早融合層之岔度塗佈表現250 fmol/mg人類5·ΗΤ2Α受 體之CHO細胞。在37°C下於5% c〇2恆溫箱中在95%濕度 下使細胞加載染料（來自Molecular Devices之Ca2 +套組） 60 刀 |里。在來自 Molecular Devices ( Sunnyvale，CA)之螢 光成像板讀取器或FLIPR384中以488 nm之激發波長及500 29 200848032 至560 nm之發射範圍監測基礎螢光。將雷射強度設定於 合適水平以獲得約8000-10000螢光單位之基礎值。基礎螢 光之變化應小於1〇%。使用覆蓋至少3個十進位之漸增濃 度之測試化合物評估EC”值。評估pA2值，用四種不同 濃度之化合物（150、400、1500及4000 nM)激發5-HT 之全劑量反應曲線。亦評估Kb值，用EC85之5-HT激發2 個十進位之濃度的測試物質。在5 之前5分鐘將測試 物質添加至細胞中。使用Cheng-Prusoff方程式計算Ki值。 例2C 5：^^受體拮抗作用 在表現人類同聚（human-homomeric ) 5-HT3A受體之 卵母細胞中，5-HT以2600 nM之EC50活化電流。可用諸 如昂丹司瓊（ondansetron )之經典5-HT3拮抗劑拮抗此電 流。在此系統中昂丹司瓊展示低於1 nM之Ki值。本發明 之化合物在低濃度（〇·1 nM-1〇〇 nM )下展現有力拮抗作用 (IC50〜1〇 nM/Kb〜2 nM)且當以較高濃度（100-100000 nM)應用時展現促效特性（Ec5〇〜26〇〇 nM)，達到由5-HT本身引發之最大電流之約70-80%的最大電流。在表現 大鼠同聚5-HT3A受體之卵母細胞中，5-HT以3.3 μΜ之EC50 活化電流。實驗如下進行。自以〇·4% MS-222麻醉10_ 15 min 之成熟雌性非洲爪蟾（手術移出卵母細胞。 接著用於 OR2 緩衝液（82.5 mN NaC 卜 2.0 mM KCM，1.0 mM MgCl2 及 5·〇 mM HEPES，pH 7·6 )中之 0.5 mg/ml 膠原酶 (型，Sigma-Aldrich )將卵母細胞在室溫下消化2-3小 日守。選擇無卵泡層之卵母細胞且在補充有2 mM丙酮酸鈉、 30 200848032 〇· 1 U/1 月儒女素（penicuHn)及 〇i gg/i 鍵徽素（strept〇inycin ) 之改良巴斯氏生理食鹽水緩衝液（Modified Barth，s Saline

buffer) [88 mM NaC 卜 1 mM KCM，15 mM HEPES，2·4 mM

NaHC03» 0.41 mM CaCl2^ 0.82 mM MgS04^ 0.3 mM Ca(N03)2] 中培育24小時。鑑別IV_IV期卵母細胞且注射含有14_5〇pg 編碼人類5-HT3A受體之cRNA的12_48 nl無核酸酶水且 在1 8 C下培育直至其用於電生理學記錄（注射後丨_7天）

為止將具有人類5-HT3受體之表現的彡卩母細胞置放於1 ml 〆合槽中且灌注林格氏緩衝液（Ringer buffer )( 1 1 5 mM

NaCM’ 2.5 mM KC 卜 l〇 mM HEPES，1.8 mM CaCl2，0.1 福 = gCl2’ ΡΗ7·5)。用含有3MKC1之瓊脂堵塞之〇 5_ιμω 私極刺牙細胞且電壓藉由5〇〇β放大器固定於_ 90 mV用林袼氏緩衝液連續灌注卵母細胞且將藥物施加 方、灌庄液中。施加5_H丁促效劑溶液歷時1〇_3〇 sw。藉由 里、彳針對1〇 μΜ 5_HT刺激之濃度反應來檢測5_HT3受體 拮抗劑之效能。 ^則忒化口物I對αΐΑ受體之親和力且發現其展現對 受體具有中i 親和力之拮抗特徵（Ki = 34 nM )。 貝驗當天，將膜（ 緩衝液中使用均質器（ 濃度（5微克/孔〜5 止）。 參見下文之膜製備描述）解凍且在 ultra turrax )均質化且稀釋至所要 Pg/900 μΐ，儲存於冰上直至使用為 稭由將50 μΐ測試化合物 50 μΐ [3Η]-哌唑嗪及 9〇〇 μΐ 31 200848032 膜混合開始實驗，且將混合物在25 °C下培育20分鐘。在 1 0 μΜ WB-41 01存在下測定非特異性結合且在緩衝液存在 下測定總結合。培育後，使用Tomtec細胞收集器程式 (D4.2.4)，經 Unifilter GF/B (在 0.1 % PEI 中預浸泡 3〇 分鐘）過濾使經結合配位體與未經結合者分離。96孔。過 濾器用1 ml冰冷緩衝液洗條3次，在50°C下乾燥且將3 5 μ 1 閃燦液/孔添加至過濾器中。在Wallac ΟΥ 1450 MicroBeta 中對結合放射能計數。根據Y = 100/(1 + l〇(x-i〇gic5〇))計算 親和力，其中Y表示結合％且X表示化合物濃度。使用覆 蓋2個十進位之濃度的化合物計算IC5G值。根據cheng

Prusoff 方程式 Ki = (IC5()/(1 + ([L]/Kd))計算 Ki。 在功能檢定中’化合物I拮抗由腎上腺素引發之細胞 内儲存物之Ca2+釋放且功能檢定顯露化合物為拮抗劑。 此等實驗基本上如下所述進行。 在3 7°C下於5% C02中在補充有i〇〇/〇 BCS、4 mM L-麩胺酷胺（或在COS-7之狀況下，2 mM)及1〇〇單位/毫 升青黴素加上1〇〇 Kg/ml鏈黴素之DMEM培養基中培養所 有細胞。

檢定前24小時，將表現人類αΐΑ-7受體之ch〇細胞接 種至塗有聚-D-離胺酸之384孔黑壁微量滴定盤中。抽吸培 養基且在5% C〇2中於37°C下用於包含漢克氏平衡鹽溶液 (Hank’s Balanced Salt Solution) ( 138 mM NaCl，5 mM

KCn，1.3 mM CaCl2，0.5 mM MgCl2，0.4 mM MgS04，0.3 mM KH2P〇4，0·3 mM Na2HP04，5.6 mM 葡萄糖）力口上 20 mM 32 200848032

HEPES ( ρΗ 7·4 )、〇.〇5% BSA 及 2 $ 處叛苯墙胺 (Pr〇benicidX 50微升/孔）之檢定緩衝液中之i 5 _ Fiu〇_4 使細胞加載㈣i小時。摒棄過量染料後，將細胞於檢定 緩衝液中洗滌且分層，最終體積等於45微升/孔（或對於 拮抗劑較而言’ 3〇微升/孔）。對於拮抗劑評估，此時 以於含4% DMS0之緩衝液中以私最終濃度（最終膽8〇 = 1%)之15 μΐ等分試樣添加拮抗劑或媒劑，接著培育汕 min。在來自 Molecular Devices(Sunnyvale，CA)之螢光 成像板讀取器或FLIPRTM中以488 nm之激發波長及5〇〇 至560 nm之發射範圍監測基礎螢光。調整雷射激發能使 得基礎螢光頃數為約8,〇〇〇相對螢光單位（RFU )。接著 在至溫下用於檢定緩衝液（丨5 μ1 )中稀釋之促效劑刺激細 胞，且經2.5 min之時段以1 ·5秒時間間隔量測RFU。計 异各孔螢光之最大變化。藉由非線性回歸（希爾方程式（HU1 equation))分析自螢光之最大變化而得之濃度反應曲線。 對於拮抗測定而言，化合物培育（如上）2〇 min後，添加 固疋〉辰度之標準促效劑血清素。 例2E多巴胺_如 單次注射化合物I劑量依賴性地增加大鼠額葉皮質中 之細胞外多巴胺（DA)含量。如圖23所描繪，經皮下注 射之8.9 mg/kg及18 mg/kg之本發明化合物使DA含量分 別比基線含量提高約1 〇〇%及1 5〇%。以游離鹼之形式計算 量 ° 33 200848032 方法 使用初始重275-300 g之雄性斯普技_谐 喝木 C Sprague-

Dawley)大鼠。在12小時光照/黑暗週期下於常規室内、 度（21士2。〇及濕度（55±5%)之受控條件下圈養^物溫 食物及自來水隨意取用。對於三天處理實驗，使用渗透性 微泵（osmotic minipump ) ( Alzet，2ML1 )。户匕从 ^ 。在無囷條件 下填充泵且在七氟烧（sevoflurane )麻醉下經皮下植入 用所裝載之微果進行實驗。實驗結束時收集血樣以用於在 處理3天後量測測試化合物之血漿含量。 手術與微透析實驗 用芬太尼（hypnorm)/多美康（dormicum) (2mi/kg) 麻醉動物且將腦内引導管（CMA/12)立體定向植入海馬體 中’將透析探針尖端定位於腹側海馬體中（座標：前匈前 5·6 mm，侧向-5.0 mm，硬腦脊膜腹側7 〇 mm)或額葉皮 質中（座標：前囪前3.2 mm，侧向3·〇 mm，硬腦脊膜腹 側4.0 mm)。基礎螺栓及丙烯酸骨水泥用於固定引導管。 由直腸探針監測動物之體溫且將其維持於37<t下。使大鼠 自手術恢復2天，單獨圈養於籠中。實驗當天，經引導管 插入微透析探針（CMA/12，直徑〇·5 mm，長度3 mm)。 探針經由雙通道轉環（dual channel swivel)連接至微注射 泵。在將探針插入腦中前不久開始用經過濾之林格氏液 (Ringer soluti〇n)( 145 mm NaCl，3 mM KC1，1 mM MgCl2， 1·2 mM CaCl2)灌注微透析探針，且以i ( ι·3) 之恆定流動速率持續實驗之持續時間。穩定18〇 min後， 34 200848032 開始實驗。每隔20 ( 30 ) min收集透析液。 實驗後，藉由斷頭犧牲大鼠，摘出其腦，冷凍且切片 以供探針置放驗證（probe placement verification )。 透析液分析 藉助於HPLC以電化學偵測來分析透析液中之多巴胺 濃度。藉由逆相液相層析法（ODS 150 X 3 mm，3 μΜ)分 離單胺。多巴胺··移動相由90 mM NaH2P04、50 mM擰檬 酸鈉、367 mg" 1-辛烷磺酸鈉、5〇 μΜ EDTA及8°/。乙腈（pH 4.0 )組成，流動速率為0.5 ml/min。使用電量偵測器 (coulometric detector )完成電化學偵測；電位設定於250 mV (保喊細胞處於 350 mV) ( Coulochem II，ESA)。 實施例2F 乙醯膽給增加 設計實驗以評估化合物I對自由移動大鼠之前額葉皮 質中之乙醯膽驗之細胞外含量的影響。 本貝驗使用雄性準斯特大鼠（Wistar rat ) (280-350g; Hadan，Zeist，The Netherlands)。將大鼠個別圈養於塑膠 籠（30 X 30 X 40 cm)中且食物及水隨意取用。 使用異 l 烷（isoflurane ) ( 2%，400 mL/min N20，400 ml/min 02)麻醉大鼠。利多卡因（Lid〇cain) ( 1〇 % 用於局部麻醉。將各動物置於立體定位儀（K〇pf instruments， USA)中，且使用paxinos及watson ( 1982 )之大鼠腦圖 譜將自製I形探針（Hospal AN 69膜，4 mm暴露表面）插 入内側IT額葉皮質（mPFC )中。探針尖端之座標為mPFC： [Ap —3·4 mm，L — -〇.8mm，V = 5.〇 mm]。接著用牙科用水泥 35 200848032 及螺栓將探針固定至頭骨。投予氟尼克辛（Flunixin) (ι mg/kg，經皮下）以作為術後止痛劑。

手術後24-48小時進行實驗。實驗當天，用可撓性pEEK 管將大鼠連接至微灌注泵（CMAl〇2)，且用含有U7mM

NaC卜 3.0 mM KC卜 1.2 mM CaCl2 及 1·2 mM MgCl2 之林 格氏緩衝液以1.5 pL/min之流動速率灌注透析探針。以3〇 1Τ^η日寸間間隔將微透析樣本收集於含有55 pL 〇·〇2 Μ甲酸 之微量藥水瓶中以供乙醯膽鹼測定。由自動餾分收集器 (CMA 142)收集樣本且儲存於-80°Ct直至分析為止。實 驗完成後，犧牲大鼠。摘出腦且於三聚甲酸 (paraf0rmaldehyde)溶液（4〇/〇 m/v)中固化。根據 paxin〇s 及Watson ( 1982 )藉由製作腦冠狀切片來在組織學上驗證 各探針之定位。 將測試化合物溶解於10% 2_OH-丙基-β-環糊精中且藉 由經皮下注射不同劑之5 mL/kg體積進行投藥。 由HPLC以串聯質譜（MS/MS )偵測來測定乙醯膽鹼 之濃度。 由自動樣本注射器（PerkinElmer Instruments，200系 列）將等分試樣（25 μΙ〇注射至HPLC柱上。在受4 X 2.0 mm 保護柱（Phenomenex Synergy MAX-RP AJO-6073,

Bester )保護之逆相i5〇 χ 2.00 mm ( 4 μηι )分析柱 (Phenomenex Synergy MAX-RP，Bester)上進行層析分離， 兩柱均保持於30°C之溫度下。移動相（等度）由超純水 (UP)、乙腈（ACN)及三氟乙酸（TFA) ( UP：ACN:TFA 36 200848032 =95.0:0.5:0.1 v/v/v%)組成。藉由 ^11>1^泵（PerkinElmer Instruments，200 系列微泵），移動相以 0·300 mL/min 之 流動速率流過系統。

使用由 API 4000 MS/MS 伯測器及 Turbo Ion Spray 介 面（二者均來自 Applied Biosystems，Netherlands)組成 之API4〇0〇MS/MS系統進行LC/MS分析。以正電離模式、 以設定於5.5 kV之離子噴霧電壓、5〇 psig之噴霧器氣體 壓力（在0-90之SCIEX量表上）、以6〇(rc之探針溫度進 行擷取。以用於偵測乙醯膽鹼（前驅物1461Da，產物868 Da)之多反應監測（MRM)模式操作儀器。碰撞能為21〇 eV，且碰撞氣體（氮氣）壓力保持於7(在〇_12之％ΐΕχ 量表上）。使用Analyst加數據系統（AppHed Bi〇system， 1·2版）校準數據並定量。

將變化小於 且設定為100%。 基線之百分數。 50%之兩個連續微透析樣本作為基線水平 同個體内乙醯膽鹼濃度之變化表示成 要文稞如圖24中所示。 膽鹼，加

設計實驗以評估化合物I ^ ^ ^ ^ ^ 對自由移動大鼠之前額葉皮 “ τ《乙I膽鹼之細胞外含量的影響。 使用初始重275_300 §之 A 0本伞π /田* 丨所s拉-道來大鼠。在12 守先々/黑暗週期下於常 (55士5%、夕，上 至Ν，皿度(2l±2〇C )及濕度 用。 養動物’食物及自來水隨意取 37 200848032 f術與微透析實給 用芬太尼/多美康（2ml/kg)麻醉大鼠且將腦内料管 (cMA/12)立體；^向植人海馬體中，旨在將透析探針尖端 定位於腹側海馬體中（座標：前_後5 6 mm，侧向_5 〇 ， 硬腦脊膜腹侧7.G mm)或額葉皮質中（座標：前_前η mm，側向〇.8 mm，硬腦脊膜腹侧4 〇 mm)。基礎螺栓及 丙烯酸骨水泥用於固定引導管。自直腸探針監測動物:體 溫且將其維持於37tT。使大鼠自手術恢復2天，單獨圈 養於籠中。實驗當天，經引導管插入微透析探針（cMA/l2， 直從0·5 mm，長度3 mm)。

探針經由雙通道轉環連接至微注射泵。在將探針插入 腦中前不久開始用經過濾之林格氏液（145 mm NaC卜3 mM KC卜 1 mM MgCl2 ’ 1.2 mM CaCl2，含有 〇·5 μΜ 新斯的明 (neostigmine ))灌注微透析探針，且以1 μ1/ιηίη之恆定 流動速率持續實驗之持續時間。穩定丨8〇 min後，開始實 驗。每隔20 min收集透析液。實驗後，犧牲動物，摘出其 腦，冷凍且切片以供探針置放驗證。 透析液乙醯膽給合析 藉助於HPLC以電化學偵測使用由1〇〇 mM磷酸氫二 納、2.0 mM辛烷磺酸、〇.5mM氯化四甲基銨及0.005% MB (ESA) ( pH 8·0 )組成之移動相來分析透析液中乙醯膽 驗（ACh )之濃度。含有經固定之膽鹼氧化酶之柱前酶反 應器（ESA)除去注射樣本（10 μ丨）中之膽鹼，隨後在分 析柱（ESA ACH-250 )上分離 ACh;流動速率·· 0.35 ml/min， 38 200848032 服度· 35C。分析柱之後，樣本穿過含有經固定之乙醯膽 鹼酯酶及膽鹼氧化酶之柱後固相反應器（ESA)。後者反 應裔使ACh轉化成膽鹼且隨後膽鹼轉化成甜菜鹼及H2〇2。 藉由使用鉑電極（分析池·· ESA，型號5〇4〇 )電化學偵測 後者。 、、 數據呈現 在單次注射實驗中，投予化合物之前即刻3個連續ACh 樣本之平均值作為各個貫驗之基礎水平且將數據轉化成基 礎水平之百分率（平均基礎注射前值標準化至i 〇〇c/❶）。數 據如圖25a及圖25b中所示。 圖24中所呈現之數據顯示乙醯膽鹼含量意外下降（參 見，例如8 mg/kg)，其難以解釋且將其歸因於實驗不確定 ^生。總之，來自實施例2F及2(}之兩個數據組顯示相同， 亦P細中之細胞外乙醯膽鹼含量劑量依賴性增加。預期 b 床别舍現轉化為在適用於（例如）治療以認知障礙為 特敛之疾病（諸如阿茲海默氏病患者、部分反應者、認知 障礙等）之臨床配置中的認知改善。 物1支_自發性高血壓大鼠_adhD之動物楹 ADHD之核心症狀為注意力不足、過動及衝動增加。 自發性南血壓大鼠（SHr )用作注意力不足過動症（adhd ) 之動物模型，韋斯特克陀大鼠（Wistar Kyoto rat) ( SHR 之根部應變（root strain ))用作對照〜少^心少· 57, 123 9-47，2005]。為了評估此等症狀，利用涉及延遲食物獎 39 200848032 :::?任務量測注意力相關參數及衝動相關參數。、、主音 力不足篁測為錯誤一側槓桿壓力機之 一、 為無延遲獎賞之情況下在測試時期中關門增加。衝動量測 間及有延遲獎賞之情況下在測試時期中延遲日=F)狀態期 横桿壓力機及獎賞室檢查。過_由紅外線籠；2 = 錄（circadian recording)監測。

SHR與韋斯特克陀大鼠在獲得任務方面無明顯不同。 ，外’由所獲得之相等獎賞數反映，咖&韋斯特克陀大 鼠：兩個媒劑組顯示食物搜尋之_般動機相同。咖大鼠 ，韋斯特克陀大鼠相比展現輕微注意力不足。shr與韋: 特克陀大鼠相比衝動明顯增加且亦觀測到過動。 測試組：-組韋斯特克陀大鼠作為對照，一組媒劑處 理之SHR (陰性對照），兩組派甲酉旨（脱㈣咖心❿） 間歇處理之SHR ( 2 mg/kg及5 mg/kg，腹膜内，參考組）， 一組用哌甲酯經由飲用水長期處理（所達劑量：約1〇毫 克/ a斤/天）之SHR，及兩組經化合物κ 5 mg/kg及丨〇 mg/kg 游離驗）間歇處理之SHR。 方法··在20小時時期中進行操作測試，各自在具有兩 们核才干之操作行為诜（〇perant behavi〇ur eage )及槓桿面 板之右側及左侧上之鄰近獎賞室中進行。動物僅經由槓桿 壓力機得到食物，且流體自由取用。訓練及測試由以下階 段組成·· 獲得階段（無處理） (1 )兩個槓桿連續活動（由信號燈指示）。各槓桿壓 200848032 力機使得由單場燈發信號而在鄰近獎賞室中即刻呈現獎 賞。 、 (2 )同（1 )，不同之處在於在指定時間僅一個槓桿 活動，在左侧與右側之間以五分鐘節律切換。信號燈指示 正確一側。 (3)同（2)，不同之處在於將正確一側之槓桿設定 為每隔20秒非活動歷時2〇秒時段。正確一側之信號燈指 示槓桿狀態（開啟或關閉）。 測試階段（處理期間） (1 )同獲得（3 )。 女(2)同（1)，不同之處在於在活動槓桿之槓桿壓力 :之後’並非即刻、而是在5秒之延遲時間間隔後呈現獎 賞。在此期間，相應信號燈關閉且槓桿設定為非活動。 (3 )同（2 )，但延遲時間間隔為丨〇秒。 (4 )同（3 )，但延遲時間間隔為2〇秒。 在兩種劑量下測試（5及10 mg/kg，腹膜内，測試前 % nun注射）之化合物^ SHR大鼠中具有顯著作用。此 專作用不影響任務獲得或食物搜尋之—般動機，但注意力 不足及衝動與過動—起減少_在歷時i小時監測晝夜活動期 :自發活冑（locomotor aetivity )劑量依賴性地降低且無 之長作用。圖26提供顯示化合物1對SHR大鼠之注意力 不足及衝動之影響的代表圖。 ^ /辰甲_顯露對操作行為無—致影響；注意力不足或衝 動沒有減少。間歇投予哌甲酉旨明顯且劑量依賴性地加劇shr 41 200848032 之過動。影響持續數小時。長期投藥不改變活動之時程。 由此模型得到之結果表明，化合物I藉由不同於哌甲 酉旨之機制影響衝動及注意力。在此模型中哌甲酯之作用缺 乏可能歸因於已證實哌甲酯在青春期大鼠而非成年大氣中 有效所αα/o^y (Berl)，193(2)，215-23, 2007] 〇 【圖式簡單說明】 圖1顯示化合物Ϊ之HBr加成鹽之X射線繞射圖。 圖2顯示化合物Ϊ之HBr加成鹽溶劑合物之X射線繞 射圖。 圖3顯示化合物I之棕橺酸加成鹽之X射線繞射圖。 圖4顯示化合物I之DL-乳酸加成鹽之X射線繞射圖。 圖5顯示化合物I之己二酸加成鹽（1:1 )之X射線繞 射圖（α+β形態）。 圖6顯示化合物ί之己二酸加成鹽（2:1 )之X射線繞 射圖。 圖7顯示化合物I之反丁烯二酸加成鹽（ί:丨）之X射 線繞射圖。 圖8顯示化合物I之戊二酸加成鹽（1:1 )之X射線繞 射圖。 圖9顯示化合物I之丙二酸加成鹽（1:1 )之X射線繞 射圖，α形態。 圖1 0顯示化合物Ϊ之丙二酸加成鹽之X射線繞射圖， β形態。 圖1 1顯示化合物I之草酸加成鹽（1:1 )之X射線繞 42 200848032 射圖。 圖12顯示化合物I之辛二酸加成鹽（2:1 )之X射線 繞射圖。 圖13顯示化合物I之丁二酸加成鹽（2:1 )之X射線 繞射圖。 圖14顯示化合物I之L-蘋果酸加成鹽（1:1)之X射 線繞射圖’ α形態。 圖1 5顯示化合物I之L-蘋果酸加成鹽（1:1 )之X射 線繞射圖’ β形態。 圖1 6顯示化合物I之D-酒石酸加成鹽（1:1 )之X射 線繞射圖。 圖17顯示化合物I之L-天冬胺酸加成鹽（1:1)與L-天冬胺酸之混合物之X射線繞射圖。 圖1 8顯示化合物I之L-天冬胺酸加成鹽水合物（1:1 ) 與L-天冬胺酸之混合物之X射線繞射圖。 圖1 9顯示化合物I之麩胺酸加成鹽（1:1 )與麩胺酸 單水合物之混合物之X射線繞射圖。 圖20顯示化合物I之檸檬酸加成鹽（2:1 )之X射線 繞射圖。 圖2 1顯示化合物I之HC1酸加成鹽之X射線繞射圖。 圖22顯示化合物I之磷酸加成鹽（1:1 )之X射線繞 射圖。 圖23顯示投予化合物I後前額葉皮質中之多巴胺含 量 ° 43 200848032 圖24顯示投予化合物I後前額葉皮質中之乙醯膽鹼含 量。 圖25a+b顯示投予化合物I後前額葉皮質及腹側海馬 體中之乙醯膽鹼含量。 圖26顯示化合物I對SHR大鼠之注意力不足及衝動 的影響。 【主要元件符號說明】 無 44

Claims (1)

1. 200848032 十、申請專利範圍： 種’口療’主忍力不足過動症（ADHD )、憂鬱症、頑 :型抑營或抑懲之殘留症狀之醫藥組成物，該醫藥組成物 匕含4-[2-(4-甲基苯硫基)苯基]旅咬及其酸加成鹽“匕合物 I)。 、· ϋ料利範圍第1項之醫藥組成物，其中化合物工 為HBr加成鹽。

   申明專矛j 圍第2項之醫藥組成物，其中化合物工 之特徵為在XRPD中於約6.G8、14.81、19.26及25 38。2Θ 處之峰。 •士申明專利範圍帛3項之醫藥組成物，其中化合物I 之特徵為如圖1所描繪之XRPD。 5·如申請專利範圍帛1項至第4項中任一項之醫藥組 成物，其中化合物1係以5-60毫克/天投予。 6種4 甲基苯硫基）苯基]哌啶及其酸加成鹽 (化口物1 )之用途’其係用於製造、冶療ADHD、憂繁症、 頑抗型抑鬱或抑鬱之殘留症狀的藥物。 7·如申1專利规圍第6項之用途，其中化合物I為撕 加成鹽。 8 ·如申請專利範 徵為在XRPD中於約 峰。 圍第7項之用途，其中化合物j之特 6.08、14.81、19.26 及 25.38。2Θ 處之 I之特 …9.如申請專利範圍帛8項之用途，其中化合物 徵為如圖1所描繪之XRPD。 45 200848032 1 0 ·如申請專利範圍第6項至第9項中任一項之用途， 其中該藥物意欲以5-60毫克/天投予。 11· 一種甲基苯硫基）苯基]哌啶及其酸加成 鹽，其係用於治療ADHD、憂營症、頭抗型 殘留症狀。 窵I 卜12·如申請專利範圍帛11項之化合物，該化合物為HBr 加成鹽。 13·如申請專利範圍帛12項之化合物，該化合物之特 ^ 為在 XRPD 中於約 6.08、14.81、19 26 及 25 38〇2β 處之 I4·如申請專利範圍第π 轉去 貝之化合物，該化合物之牲 王為如圖1所描繪之XRPD。 寺 1 5·如申請專利範圍第η項至 物，盆中該化人物後 4項中任一項之化合 ，、〒 ϋ物係以5-60毫克/天投 k、圖式： 如次頁 46